WO2016088968A1 - 피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

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WO2016088968A1
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정용지
김은미
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Definitions

  • the present invention relates to peptides having skin condition improving activity and uses thereof.
  • MMPs Matrix metalloproteinases
  • JS endopeptidase enzymes capable of breaking down large biomolecules such as collagen, proteoglycans and gelatin, and are largely classified into collagenase, gelatinase, stromelysin and membrane-type MMP.
  • MMPs are all expressed in the form of proenzymes and then activated by truncation (Bond, JS, et al., Int. J. Biochem ., 75, 565-574 (1985); Chen, JM, Chen, WT , Cell , 48, 193-203 (1987); Harris, ED et al., Coll Rel Res , 4, 493-512 (1984)).
  • Collagenase acts on triple helix interstitial collagen and gelatin, and three types of fibroblast collagenase, neutrophil collagenase and collagenase-3 are known, and collagen fibrils of type I, II and III ( Collagen fibrils) have been reported (Goldberg, GI, et al, J. Biol. Chem. , 261, 6600-6605 (1986); Fini, ME, et al., Biochemistry , 26, 6155-6165 ( 1987)). It is also known that these three collagenases have at least about 50% sequence identity with each other (Borkakoti, et al., Nature Struct. Biol. , 1, 106-110 (1994); EMBO, J. , 13, 1263). -1269 (1994).
  • MMPs are divided into subpeptide sites, catalytic sites and C-terminal buoys. After all MMPs are produced and secreted in an inactive manner, 80 amino acids of the N-terminal whole peptide region are cut and activated by removing the cysteine of the region having this PRCGVPD sequence (Van Wart, HE et al. , Proc. Natl. Acad . Sci . USA, 87, 5578-5582 (1990)). Activated MMPs are known to inhibit activity by binding to a natural inhibitor, the Missue Inhibitor of Matrix Metalloproteinase, which is regulated by catalytic sites (Murphy, et al., J. Niol. Chem).
  • MMPs have substrate specificities and are expressed in metabolism when normal cells need to degrade extracellular matrix or other collagen structures.
  • Diseases mediated by MMP include atherosclerosis, inflammatory diseases of the central nervous system, Alzheimer's disease, skin aging, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, corneal ulcers, bone diseases, proteinuria, abdominal aortic aneurysm, degenerative cartilage loss due to traumatic joint injury, Myelin deprivation diseases of the nervous system, cirrhosis, renal glomeruli, immature rupture of the embryonic membrane, inflammatory bowel disease, periodontal disease, aging-related macular degeneration, diabetic retinopathy, proliferative vitreoretinopathy, immature retinopathy, cone cornea, Sjogren syndrome , Myopia, ocular tumor, corneal graft rejection, angiogenesis, cancer infiltration and metastasis.
  • Rheumatoid arthritis and osteoarthritis are caused by autoimmune abnormalities, but as the disease progresses, the extracellular matrix of articular cartilage is destroyed.
  • stromelysin has been recognized as a major enzyme and has been shown to play an important role in converting procollagenase into active collagenase. Therefore, arthritis progression can be prevented by inhibiting MMP activity, which is reported to be derived from microorganisms infiltrating leukocytes or fibroblasts or externally.
  • collagenase secreted from stimulation of the inflammatory mediator and collagenase secreted from bacteria break down collagen, which is a substrate of periodontal tissue, cause gum retraction, and gradually progress to cause periodontal disease.
  • the activity of fibroblast collagenase and stromelysin isolated from inflamed gums was confirmed, and the level of enzyme was correlated with the degree of gingivitis observed (Overall, CM et al., J. Periodontal Res . 22, 81-88 (1987).
  • MMPs are associated with the development of several central nervous systems (CNS). MMPs are thought to be involved in the accumulation of amyloid beta proteins in Alzheimer's disease by introducing inflammatory monocytes into the central nervous system and destroying myelin or blood-brain barriers (Yong, VW, et al., Trends Neurosci 21 (2), 75-80 (1998). MMPs have also been reported to have higher concentrations in Alzheimer's disease than normal brains (Leake A, Morris CM, & Whateley J. Neurosci).
  • gelatinase B levels in cerebrospinal fluid are associated with multiple sclerosis and other neurological disorders (Miyazaki, K, et al., Nature 362,839-841 (1993)). It has also been reported to contribute to the degradation and accumulation of amyloid beta protein (Backstrom JR, et al., J neurosci 16 (24), 7910-9 (1996).
  • MMP induces skin aging, anti-wrinkle treatment and prevention can be expected, and MMP also promotes angiogenesis and cancer infiltration and metastasis by basal membrane degradation. Therefore, MMP plays an important role in the invasion and metastasis of cancer through the decomposition of the basement membrane, and there is a need for the development of a medicament capable of inhibiting the disease caused by a wide variety of diseases.
  • inhibitors need to be safely used for long-term use, and thus can be used as an ideal therapeutic agent. Therefore, there is a demand for the development of a low toxicity formulation as an inhibitor of MMP activity.
  • MMP inhibitors are being actively researched for the effective treatment of various diseases mediated by MMP, and the development of MMP inhibitors is effectively used for the treatment of various diseases.
  • peptides having amino acid sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 exhibit MMP2 inhibitory activity and collagen degradation inhibitory activity and are effective in improving skin condition.
  • the present invention has been completed by identifying that it can be usefully used.
  • Another object of the present invention to provide a composition for improving skin conditions.
  • Another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases.
  • Still another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating an inflammatory disease.
  • the present invention provides a peptide having skin condition improving activity consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 sequence.
  • peptides having amino acid sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 exhibit MMP2 inhibitory activity and collagen degradation inhibitory activity and are effective in improving skin condition. It was found that it can be usefully used.
  • the peptide of the present invention comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 sequence. Specifically, the peptide of the present invention consists essentially of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
  • peptide refers to a linear molecule formed by binding amino acid residues to each other by peptide bonds.
  • the peptides of the present invention may be prepared by chemical synthesis methods known in the art, in particular solid-phase synthesis techniques (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-54 (1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis , 2nd. Ed., Pierce Chem. Co .: Rockford, 111 (1984)) or liquid phase synthesis technology (US Pat. No. 5,516,891).
  • the peptides of the present invention can induce modifications at the N-terminus or C-terminus to select some sites of the amino acid sequence and increase their activity. Through such modifications, the peptides of the present invention may have a high half-life which increases the half-life when administered in vivo.
  • the C-terminus of the peptide of the present invention is modified with a hydroxy group (-OH), an amino group (-NH 2 ), azide (-NHNH 2 ), etc.
  • the N-terminus of the peptide is an acetyl group, a fluorenyl methyl
  • a protecting group selected from the group consisting of a methoxy carbonyl group, formyl group, palmitoyl group, myristyl group, stearyl group and polyethylene glycol (PEG) may be bonded.
  • Modification of the above-mentioned amino acid serves to greatly improve the stability of the peptide of the present invention.
  • stability herein means not only in vivo stability but also storage stability (eg, room temperature storage stability).
  • the above protecting groups serve to protect the peptides of the present invention from the attack of protein cleavage enzymes in vivo.
  • the peptide of the present invention not only has a function of directly inhibiting the activity of matrix metalloproteinase-2 (MMP2), but also has a function of inhibiting collagen degradation by MMP2.
  • MMP2 matrix metalloproteinase-2
  • the peptide of the present invention has an excellent inhibitory effect on melanosome transfer involved in skin whitening.
  • a cosmetic composition for improving skin conditions comprising the peptide of the present invention as an active ingredient.
  • composition of the present invention includes the above-described peptide of the present invention as an active ingredient, the common content between the two is omitted in order to avoid excessive complexity of the present specification.
  • the improvement of the skin condition in the present invention is wrinkle improvement, skin elasticity improvement, skin aging prevention, skin moisturization improvement, wound removal, acne improvement, skin regeneration or whitening.
  • the peptide of the present invention has a much lower molecular weight than other proteins, the skin penetration rate is very good. Therefore, when the composition of the present invention is applied to the skin topically, the skin condition can be effectively improved.
  • the composition of the present invention comprises (a) a cosmetically effective amount of the above-described peptide of the present invention; And (b) a cosmetically acceptable carrier.
  • cosmetic effective amount means an amount sufficient to achieve the skin improving efficacy of the composition of the present invention described above.
  • Cosmetic compositions of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing , Oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays, and the like, but are not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide
  • cellulose derivatives polyethylene glycols
  • silicones bentonites
  • silicas talc or zinc oxide
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.
  • liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol
  • suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Soluble cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
  • the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide.
  • Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
  • the components included in the cosmetic composition of the present invention include components conventionally used in cosmetic compositions, in addition to the peptide and carrier components as active ingredients, and include, for example, conventional agents such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings. Adjuvants may be included.
  • the present invention is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of MMP-activity-related diseases comprising the peptide of the present invention, the MMP-activity-related diseases are arthritis, diabetic retinopathy, It provides a composition characterized in that it is hypertrophic scars, psoriasis, ulcers of mucous membranes and epithelial tissue, inflammation caused by autoimmunity, lupus, autoimmune neuropathy, muscle cell destruction, glaucoma or excessive angiogenesis associated with the degradation of the basement membrane.
  • the peptide of the present invention can be usefully used for treating diseases related to this by exhibiting various physiological activities such as inhibiting activity of MMP2, inhibiting collagen degradation, and inhibiting melanosomal migration.
  • the composition of the present invention comprises (a) a pharmaceutically effective amount of the above-described peptide of the present invention; And (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to achieve the efficacy or activity of the peptides described above.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical compositions of the present invention are those commonly used in the preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, Calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like It doesn't happen.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like.
  • a lubricant e.g., talc, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, a kaolin, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mann
  • composition of the present invention may be administered orally or parenterally, preferably parenterally, and in the case of parenteral administration, may be administered by intramuscular injection, intravenous injection, subcutaneous injection, intraperitoneal injection, topical administration, transdermal administration, or the like. Can be.
  • Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention may vary depending on factors such as the formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, condition of food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to response of the patient. Can be. On the other hand, the preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is 0.0001-1000 ⁇ g per day.
  • compositions of the present invention may be prepared in unit dose form by formulating with a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to methods which can be easily carried out by those skilled in the art. Or may be prepared by incorporating into a multi-dose container.
  • the formulation may be in the form of a solution, suspension or emulsion in an oil or an aqueous medium, or may be in the form of extracts, powders, granules, tablets or capsules, and may further include a dispersant or stabilizer.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases comprising the peptide of the present invention as an active ingredient.
  • the inflammatory disease to which the composition of the present invention can be applied is periodontitis, asthma, eczema, psoriasis, allergy, rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, atopic dermatitis, acne, atopic rhinitis Hay fever), allergic dermatitis (eczema), chronic sinusitis or seborrheic dermatitis.
  • the peptide of the present invention reduces the inflammatory response by inhibiting the expression of the pro-inflammatory cytokines Protease-activated receptor 2 (PAR2) and IL-1 ⁇ , which are involved in the inflammatory response, thereby preventing and treating inflammatory diseases related thereto. It can be usefully used.
  • the present invention provides a method for improving skin condition comprising administering a peptide of the present invention to a subject.
  • the present invention provides a method for preventing or treating an inflammatory disease comprising administering a peptide of the present invention to a subject.
  • the present invention provides a peptide having skin condition improving activity.
  • the peptide of the present invention exhibits very good efficacy in improving skin condition by inhibiting MMP2 activity, and the composition comprising the peptide of the present invention has excellent physiological activity such as inhibiting collagen degradation and inhibiting melanosomal migration. It can be used for wrinkle improvement, skin regeneration, skin elasticity improvement, skin aging inhibition, wound regeneration, acne improvement, skin regeneration or skin whitening.
  • composition comprising the peptide of the present invention can be used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of MMP-activity-related diseases and inflammatory diseases.
  • Figure 2 is a result of evaluating the effect of promoting the proliferation of human primary dermal fibroblasts (Human primary dermal fibroblast cells) by the peptide of the present invention.
  • Figure 3 shows the results of confirming the change in signaling by the peptide of the present invention in human primary dermal fibroblasts.
  • 6 and 7 are the results of evaluating the collagen degradation inhibitory effect by the peptide of the present invention.
  • Figure 9 is the result of evaluating the anti-inflammatory effect by CG-Noverin in the dental pulp stem cells (dental pulp stem cells).
  • chloro trityl chloride resin CTL resin, Nova biochem Cat No. 01-64-0021
  • MC methylene chloride
  • DMF dimethylformamide
  • 10 ml of dichloromethane solution was added to the reactor, 200 mmole of Fmoc-Gly-OH (Bachem, Swiss) and 400 mmole of diisopropyl ethylamine (DIEA) were added thereto, stirred to dissolve well, and reacted with stirring for 1 hour.
  • Cys-Gly-CTL resin was prepared by deprotection twice in the same manner as above with the deprotection solution. After sufficient washing with DMF and MC, once again Kaiser test was performed, and the following amino acid attachment experiment was performed as above. Fmoc-Ile, Fmoc-Trp, Fmoc-Lys (Boc), Fmoc-Glu (OtBu), Fmoc-Ser (tBu), Fmoc-Ser (tBu) and Fmoc-Glu (OtBu) based on the selected amino acid sequence The chain reaction was carried out. The Fmoc-protector was reacted twice with a deprotection solution twice for 10 minutes and then washed well.
  • Acetylation of acetic anhydride, DIEA and HoBt was performed for 1 hour, and then the prepared peptidyl resin was washed three times with DMF, MC, and methanol, and dried slowly by flowing nitrogen air, followed by vacuum under P 2 O 5 . After drying completely under reduced pressure, 30 ml of fugitive solution (Trifluroacetic acid 81.5%, distilled water 5%, Thianisole 5%, Phenol 5%, EDT 2.5%, and TIS 1%) 30 ml After putting in and shaking occasionally at room temperature to maintain a reaction for 2 hours. The resin was filtered off and the resin was washed with a small amount of TFA solution and then combined with the mother liquor.
  • Peptide molecular weight of the first sequence is 1041.2 (theoretical value: 1041.25) and the peptide molecular weight of the second sequence is 1072.2 (theoretical value: 1072.27) when measured using a molecular weight measuring instrument.
  • NIH3T3 epidermal growth factor
  • CG-Renoin or CG-Noverin peptides were concentrated (1-10 ⁇ g / ml) After treatment and incubation in an incubator for 30 minutes at 37 °C UVA (8 J) irradiated and incubated for 24 hours.
  • Cell lysis buffer was treated to ensure lysate and protein quantification.
  • Western blot was performed using anti-pERK (Santa Cruz Biotechnology, USA) and p38 (Santa Cruz Biotechnology, USA) antibodies to confirm the expression of cytoactive factors.
  • Example 3 CG- Renuin Or CG- To Noverin by rhMMP2 control
  • rhMMP2 and peptides were mixed by concentration (0.1 ⁇ g / ml, 1 ⁇ g / ml) and incubated at room temperature for 1 hour, followed by gelatin zymography to examine their expression.
  • gelatin (2 mg / ml) was used as a substrate for protein electrophoresis (SDS-PAGE). After electrophoresis, the gel was immersed in 2.5% Triton X-100 for 30 minutes, and again at 37 ° C. for 24 hours in a buffer composed of 50 mM Tris-HCl, 0.2 M NaCl, 5 mM CaCl 2 , 1% Triton X-100. Incubated at.
  • the gel was stained with Coo-massie Brilliant Blue R250 (Sigma) and destained with a solution composed of 5% methanol, 7.5% acetic acid and distilled water. In addition, the band appeared by gelatin hydrolysis was observed.
  • the active MMP-2 was found to be 66 kDa and pro-MMP-2 was found to be 72 kDa.
  • Fibroblasts were seeded in 24-well plates at a cell density of 3 ⁇ 10 4 cells / well. Incubate 24 hours in serum-free medium the next day and induce the expression and activation of MMP2 with TNF- ⁇ and then intensify CG-Renuin or CG-Noverin by concentration (10 ng / ml, 100 ng / ml, 1000 ng / ml), respectively. After treatment, the cells were incubated for 24 hours. The supernatant obtained by centrifugation at 14,000 xg for 10 minutes was subjected to gelatin zymography and then subjected to protein electrophoresis (SDS-PAGE) using gelatin (2 mg / ml) as a substrate.
  • SDS-PAGE protein electrophoresis
  • the gel was immersed in 2.5% Triton X-100 for 30 minutes, and again at 37 ° C. for 24 hours in a buffer composed of 50 mM Tris-HCl, 0.2 M NaCl, 5 mM CaCl 2 , 1% Triton X-100. Incubated at. After incubation, the gel was stained with Coo-massie Brilliant Blue R250 (Sigma) and destained with a solution composed of 5% methanol, 7.5% acetic acid and distilled water. In addition, the band appeared by gelatin hydrolysis was observed. Active MMP-2 was found to be 66 kDa and pro-MMP-2 was found to be 72 kDa.
  • Example 5 Inhibition of Collagen Degradation by CG-Renuin or CG-Noverin
  • HDF Human dermal fibroblast
  • HDF Human dermal fibroblast (HDF) cells (3x10 4 cells) were seeded in 24-well plates and replaced with 5% serum medium the next day and treated with IGF-1 (100 ng / ml) (Sigma / USA) for 44 hours. After treatment with MMP2 (20 ng / ml), CG-Noverin, CG-Renuin and incubated for 4 hours. The supernatant obtained by centrifugation at 14,000 xg for 10 minutes was analyzed using pro-collagen type I kit.
  • the HaCaT keratinocytes were used for the pagocytosis assay.
  • As a material for pagocytosis bioparticles with fluorescent materials were used.
  • 96-well tissue culture plates were allowed to be 3 x 10 3 cells per well for 24 hours, followed by 6 hours in serum-free medium. Thereafter, 1 ⁇ g / ml of trypsin and 1 ⁇ g / ml of peptide were treated for 48 hours to induce pagocytosis.
  • the live particles were pagocytosis into keratinocytes.
  • the peptides of the present invention were treated with a concentration of 1 ⁇ g / ml for 4 hours and then incubated for 4 hours.
  • mRNA was extracted from the cultured cells treated with the trigger and peptides, and reverse transcriptase polymerase chain reaction was performed using primers of PAR-2 and IL-1 ⁇ . The nucleotide sequence of each primer used is shown in Table 2.

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Abstract

본 발명은 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다. 본 발명의 펩타이드는 MMP2 활성을 억제하여 피부상태를 개선하는데 매우 우수한 효능을 발휘하며, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 콜라겐 분해를 억제하고 멜라노좀 이동을 억제하는 등의 우수한 생리활성을 나타내어 주름개선, 피부재생, 피부탄력 개선, 피부노화 억제, 상처 재생, 여드름 개선, 피부 재생 또는 피부 미백에 이용 가능하다. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 MMP-활성 관련 질환 및 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.

Description

피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
본 발명은 피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.
MMP(Matrix metalloproteinase)는 콜라겐, 프로테오글리칸 및 젤라틴과 같은 거대 생분자들을 분해시킬 수 있는 엔도펩티다아제류 효소로, 크게 콜라게나제, 젤라티나제, 스트로멜리신 및 막형 MMP로 분류 된다. MMP는 모두 전구 효소의 형태로 발현된 후 일부분이 잘려나감으로써 활성화된다(Bond, J. S., et al., Int. J. Biochem., 75, 565-574(1985); Chen, J.M., Chen, W.T., Cell, 48, 193-203(1987); Harris, E.D. et al., Coll Rel Res, 4, 493-512(1984)).
콜라게나제는 삼중나선형 간질성 콜라겐과 젤라틴 등에 작용하며, 섬유아세포 콜라게나제, 호중구 콜라게나제 및 콜라게나제-3의 3종유가 알려져 있고, 제I, Ⅱ 및 Ⅲ 형의 콜라겐 소섬유(Collagen fibrils)들을 절단하는 것으로 보고 되어있다(Goldberg, G.I., et al, J. Biol. Chem., 261, 6600-6605(1986); Fini, M.E.,et al., Biochemistry, 26, 6155-6165(1987)). 또한 이들 세 가지 콜라게나제들은 서로 약 50% 이상의 서열 동일성을 가지는 것으로 알려져 있다(Borkakoti, et al., Nature Struct. Biol., 1, 106-110(1994); EMBO, J., 13, 1263-1269(1994)).
MMP는 전펩타이드 부위, 촉매성 부위 및 C-말단 부이의 세부위로 구분된다. MMP는 모두 활성이 없는 잠복형으로 생성 분비된 후, N-말단의 전펩타이드 부위의 80개의 아미노산이 잘려있고, 이 PRCGVPD 서열을 갖는 부위의 시스테인이 제거되면서 활성화 된다(Van Wart, H.E. et al., Proc. Natl. Acad . Sci . USA, 87, 5578-5582(1990)). 활성화된 MMP는 천연 억제제인 MMP 조직저해제(Tissue Inhibitor of Matrix Metalloproteinase)와 결합하여 활성이 억제되는 것으로 알려져 있는데, 이 결합은 촉매성 부위에 의해서 조절된다(Murphy, et al., J. Niol. Chem., 267, 9612-9618(1992)). 여러 가지 형태의 MMP는 기질특이성을 갖고 있으며, 정상적인 세포에도 세포외 매트릭스(extracellular matrix)나 다른 콜라겐 구조를 분해해야 할 필요성이 있을 때 대사과정에서 발현된다. MMP에 의해 매개되는 질환으로는 동맥경화증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머, 피부 노화, 류마티스성 관절염, 골관절염, 각막궤양, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시, 안과 종양, 각막이식 거부, 혈관신생, 암의 침윤과 전이 등이 있다. 류머티즘성 관절염과 골관절염은 자가면역 이상이 원인이지만, 병이 진행 되면서 관절 연골의 세포외 매트릭스가 파괴된다. 이러한 관절염 및 관절 외상에서 스트로멜리신이 주요한 효소로 인식되었으며, 프로콜라게나제를 활성 콜라게나제로 전환시키는데 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀져 있다. 따라서, MMP 활성을 억제함으로써 관절염 진행을 막을 수 있으며, 상기한 MMP는 침투성 백혈구 또는 섬유아세포 또는 외재적으로 미생물로부터 유래 되는 것으로 보고되어 있다.
또한 염증매개체의 자극에 의하여 분비된 콜라게나제 및 세균으로부터 분비된 콜라게나제는 치주조직의 기질인 콜라겐을 분해하여 잇몸 퇴축을 발생시키고, 점차 진행되어 치주 질환을 야기한다. 염증을 일으킨 잇몸에서 분리된 섬유아세포 콜라게나제 및 스트로멜리신의 활성이 확인 되었고, 효소의 수준은 관찰된 치은염의 정도와 상호 연관됨이 확인되었다(Overall, C.M. et al., J. Periodontal Res. 22, 81-88(1987)).
MMP는 여러 가지 중추신경계(CNS)의 발병과 관련이 있다. MMP는 염증성의 단핵구 세포를 중추신경으로 유입시켜 마이엘린을 파괴시키거나 혈액뇌 관문 (Blood-Brain Barrier)을 파괴시키며 알츠하아이머 질환에서는 아밀로이드 베타단백질의 축적에 관여하는 것으로 추정되고 있다(Yong, VW, et al., Trends Neurosci 21(2),75-80(1998)). 또한 MMP는 알츠하이머 질환의 뇌에서 정상의 뇌보다 그 농도가 높은 것으로 보고되고 있으며(Leake A, Morris CM, & Whateley J. Neurosci Lett 291(3),201-3(2000), 뇌척수액에서의 젤라티나제 B수준은 다발성 경화증 및 기타 신경성 질환과 관련되어 있으며(Miyazaki, K, et al., Nature 362,839~841(1993)), 아밀로이드 베타단백질을 분해하여 축적시키는 데도 기여하는 것으로 보고되고 있다(Backstrom JR, et al., J neurosci 16(24),7910-9(1996)).
또한, MMP는 피부 노화를 유도하므로, 이를 억제하면 주름 치료 및 예방작용을 기대할 수 있으며, MMP는 또한 기저막 분해작용으로 혈관신생, 암의 침윤과 전이를 촉진시킨다. 따라서, MMP는 기저막의 분해를 통하여 암의 침윤과 전이에 매추 중요한 역할을 할 뿐 아니라, 이에 의해 매개되는 질환이 매우 다양하므로 이를 억제할 수 있는 약제의 개발이 요구되고 있다. 그러나 이러한, 억제제는 장기간 사용시에 안전하게 사용할 수 있어야 이상적인 치료제로 사용할 수 있으므로 MMP활성 억제제로서 독성이 적은 제제의 개발이 요구되고 있다. MMP에 의해 매개되는 다양한 질환들의 효과적인 치료를 위해 MMP 억제제에 대한 연구가 활발히 진행 되고 있으며, MMP 억제제의 개발은 다양한 질환들의 치료에 효과적으로 사용된다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 생물학적으로 유효한 활성을 갖는 우수한 펩타이드를 개발하고자 노력한 결과, 서열목록 제1서열 및 서열목록 제2서열의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드가 MMP2 억제 활성 및 콜라겐 분해 억제 활성 등을 나타내며 피부상태 개선에 유용하게 이용될 수 있다는 것을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 피부 상태 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 MMP-활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 피부 상태 개선 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 염증 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제2서열의 아미노산 서열로 이루어진 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다.
본 발명자들은 생물학적으로 유효한 활성을 갖는 우수한 펩타이드를 개발하고자 노력한 결과, 서열목록 제1서열 및 서열목록 제2서열의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드가 MMP2 억제 활성 및 콜라겐 분해 억제 활성 등을 나타내며 피부상태 개선에 유용하게 이용될 수 있다는 것을 규명하였다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제2서열의 아미노산 서열을 포함한다. 구체적으로는, 본 발명의 펩타이드는 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제2서열의 아미노산 서열로 필수적으로 구성되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “펩타이드”는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다. 본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques; Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)) 또는 액상 합성 기술(US 등록특허 제5,516,891호)에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 아미노산 서열의 일부 부위를 선정하고 그 활성을 증가시키기 위해 N-말단 또는 C-말단에 변형을 유도할 수 있다. 이러한 변형을 통해 본 발명의 펩타이드는 생체내 투여시의 반감기를 증가시킨 높은 반감기를 가질 수 있다.
또한, 본 발명의 펩타이드의 C-말단은 히드록시기(-OH), 아미노기(-NH2), 아자이드(-NHNH2) 등으로 변형되어 있으며, 펩타이드의 N-말단은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 결합될 수 있다.
상술한 아미노산의 변형은 본 발명의 펩타이드의 안정성을 크게 개선하는 작용을 한다. 본 명세서에서 용어 “안정성”은 인 비보 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미한다. 상술한 보호기는 생체 내의 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 작용을 한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 MMP2(matrix metalloproteinase-2)의 활성을 직접적으로 억제 하는 기능을 가질 뿐 아니라, MMP2에 의한 콜라겐 분해를 억제하는 기능을 갖는다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 피부 미백에 관여하는 멜라노좀 이동(melanosome transfer)에 대한 억제 효과가 뛰어나다. 이러한 결과는 본 발명의 펩타이드가 피부상태 개선에 매우 우수한 효능을 가진다는 것을 의미한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부상태(skin conditions) 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 상술한 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명에 있어서 피부 상태의 개선은 주름개선, 피부탄력 개선, 피부노화 방지, 피부보습 개선, 상처 제거, 여드름 개선, 피부재생 또는 미백이다.
본 발명의 펩타이드는 다른 단백질 보다 분자량이 훨씬 작기 때문에, 피부 침투율이 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 조성물을 국소적으로 피부에 도포하는 경우 피부상태를 효과적으로 개선할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 펩타이드의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount); 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 화장품 조성물이다.
본 명세서에서 용어 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 피부 개선 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 펩타이드와 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 MMP-활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로서, 상기 MMP-활성 관련 질환은 관절염, 당뇨병성 망막증, 비대성 반흔, 건선, 점막 및 상피 조직의 궤양, 자가면역에 의한 염증, 기저막의 분해와 관련된 질병인 낭창, 자가 면역성 신경장애, 근세포 파괴, 녹내장 또는 과다한 혈관신생인 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 펩타이드는 MMP2의 활성 억제, 콜라겐 분해 억제 및 멜라노좀 이동 억제 등의 다양한 생리활성을 나타냄으로써 이와 관련된 질병 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 펩타이드의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 펩타이드의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구, 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 근육 주입, 정맥내 주입, 피하 주입, 복강 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 1일 당 0.0001-1000 ㎍이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물이 적용될 수 있는 염증 질환은 치주염, 천식, 습진, 건선, 알러지, 류마티스 관절염, 건선 관절염(psoriatic arthritis), 아토피성 피부염, 여드름, 아토피성 비염(건초열), 알레르기성 피부염(습진), 만성 부비동염 또는 지루성 피부염(seborrheic dermatitis)이다.
본 발명의 펩타이드는 염증반응에 관여하는 친-염증성(pro-inflammatory) 사이토카인 PAR2(Protease-activated receptor 2) 및 IL-1β의 발현을 억제시켜 염증반응을 감소시킴으로써 이와 관련된 염증질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 대상(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 피부 상태 개선 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 대상(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다.
(b) 본 발명의 펩타이드는 MMP2 활성을 억제하여 피부상태를 개선하는데 매우 우수한 효능을 발휘하며, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 콜라겐 분해를 억제하고 멜라노좀 이동을 억제하는 등의 우수한 생리활성을 나타내어 주름개선, 피부재생, 피부탄력 개선, 피부노화 억제, 상처 재생, 여드름 개선, 피부 재생 또는 피부 미백에 이용 가능하다.
(c) 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 MMP-활성 관련 질환 및 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 펩타이드에 대한 HPLC 분석 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 2는 본 발명의 펩타이드에 의한 인간 1차 진피 섬유아세포(Human primary dermal fibroblast Cells)의 증식 촉진 효능을 평가한 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 3은 인간 1차 진피 섬유아세포에서 본 발명의 펩타이드에 의한 신호전달 변화를 확인한 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 4는 본 발명의 펩타이드에 의한 MMP2 활성 억제 효과를 평가한 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 5는 섬유아세포에서 본 발명의 펩타이드에 의한 MMP2 활성 억제 효과를 평가한 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 6 및 도 7은 본 발명의 펩타이드에 의한 콜라겐 분해 억제 효과를 평가한 결과이다.
(a) CG-Renuin, (b) CG-Noverin
도 8은 CG-Renuin에 의한 멜라노좀 이동(melanosome transfer) 억제 효과를 평가한 결과이다.
도 9는 치수줄기세포(dental pulp stem cells)에서 CG-Noverin에 의한 항염증 효과를 평가한 결과이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
합성예 1: 펩타이드 합성
클로로 트리틸 클로라이드 레진(Chloro trityl chloride resin; CTL resin, Nova biochem Cat No. 01-64-0021) 700 mg을 반응용기에 넣고 메틸렌 클로라이드(MC) 10 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름 아마이드(DMF) 10 ml를 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 반응기에 10 ml의 디클로로메탄용액을 넣고 Fmoc-Gly-OH(Bachem, Swiss) 200 mmole 및 디이소프로필 에틸아민(DIEA) 400 mmole을 넣은 후 교반하여 잘 녹이고, 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 후 세척하고 메탄올과 DIEA(2:1)를 DCM(dichloromethane)에 녹여 10분간 반응시키고 과량의 DCM/DMF(1:1)로 세척하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름 아마이드(DMF)를 10 ml 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 탈보호 용액(20%의 피페리딘(Piperidine)/DMF) 10 ml를 반응용기에 넣고 10분간 상온에서 교반한 후 용액을 제거하였다. 동량의 탈보호 용액을 넣고 다시 10분간 반응을 유지한 후 용액을 제거하고 각각 3분씩 DMF로 2회, MC로 1회, DMF로 1회 세척하여 Gly-CTL 레진(Resin)을 제조하였다. 새로운 반응기에 10 ml의 DMF 용액을 넣고 Fmoc-Cys(Bachem, Swiss) 200 mmole, HoBt 200 mmole 및 Bop 200 mmole을 넣은 후 교반하여 잘 녹였다. 반응기에 400 mmole DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣은 후 모든 고체가 녹을 때까지 최소한 5분간 교반하였다. 녹인 아미노산 혼합용액을 탈보호된 레진이 있는 반응용기에 넣고 1시간 동안 상온에서 교반하면서 반응시켰다. 반응액을 제거하고 DMF 용액으로 3회 5분씩 교반한 후 제거하였다. 반응 레진을 소량 취하여 카이저 테스트(Nihydrin Test)를 이용하여 반응 정도를 점검하였다. 탈보호 용액으로 상기와 같이 동일하게 2번 탈보호 반응시켜 Cys-Gly-CTL 레진을 제조하였다. DMF와 MC로 충분히 세척하고 다시 한 번 카이저 테스트를 수행한 다음 상기와 동일하게 아래의 아미노산 부착 실험을 수행하였다. 선정된 아미노산 서열에 의거하여 Fmoc-Ile, Fmoc-Trp, Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Glu(OtBu), Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Ser(tBu) 및 Fmoc-Glu(OtBu) 순으로 연쇄반응을 시켰다. Fmoc-보호기를 탈보호 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 제거하였다. 무수초산과 DIEA, HoBt를 넣어 한시간 동안 아세틸화를 수행한 뒤 제조된 펩티딜 레진을 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3번을 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P2O5 하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조한뒤 탈루 용액[트리플로로화 초산(Trifluroacetic acid) 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸(Thioanisole) 5%, 페놀(Phenol) 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%] 30 ml을 넣은 후 상온에서 가끔 흔들어주며 2시간 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 거르고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제 전 NH2-Cys-Thr-Lys-Ile-Tyr-Asp-Pro-Val-Cys-COOH 서열목록 제1서열의 펩타이드를 0.5 g(수율: 95%), NH2-Cys-Pro-Arg-His-Phe-Asn-Pro-Val-Cys-COOH 서열목록 제2서열의 펩타이드를 0.7 g 합성(수율: 95%)하였다. 분자량 측정기를 이용하여 측정시 서열목록 제1서열의 펩타이드 분자량은 1041.2(이론값 :1041.25), 서열목록 제2서열의 펩타이드 분자량은 1072.2(이론값 :1072.27)이다.
펩타이드 아미노산 서열 분석값(질량분석기)
분석치 이론치
서열 1 CTKIYDPVC 1041.2 1042.25
서열 2 CPRHFNPVC 1072.2 1072.27
실시예 1: 인간 진피 섬유아세포의 증식 촉진
인간 1차 진피 섬유아세포(human primary dermal fibroblast cells)에 CG-Renuin(서열목록 제1서열의 펩타이드) 또는 CG-Noverin(서열목록 제2서열의 펩타이드)을 농도별(1 ng/ml - 1 μg/ml)로 처리하고 세포 배양기에서 72시간 동안 배양한 다음, 펩타이드 처리에 의한 세포 증식 변화를 SRB 어세이(OD 590 nm)를 통해 분석하였다. CG-Renuin 또는 CG-Noverin 처리 양에 의존적으로 인간 1차 진피 섬유아세포의 증식이 증가되었다(도 2a-2b).
실시예 2: 인간 섬유아세포에서 CG-Renuin 또는 CG-Noverin의 신호전달
2 x 105 세포/웰의 세포 밀도로 6-웰 플레이트에 NIH3T3(표피세포주)를 시딩하고 하룻밤 동안 배양한 후, CG-Renuin 또는 CG-Noverin 펩타이드를 농도별(1-10 μg/ml)로 처리하고 30분 동안 37℃ 배양기에서 배양 후 UVA(8 J)를 조사하고 24시간 배양하였다. 세포 용해 버퍼를 처리하여 용해물을 확보한 후 단백질을 정량하였다. 세포활성 인자의 발현 확인을 위해 anti-pERK(Santa Cruz Biotechnology, USA), p38(Santa Cruz Biotechnology, USA) 항체를 사용하여 웨스턴 블롯을 실시하였다.
CG-Renuin 또는 CG-Noverin을 처리하는 경우, 세포의 증식, 이동 및 생존에 관여하는 ERK 및 P38의 인산화 증가가 확인되었다(도 3a-3b).
실시예 3: CG- Renuin 또는 CG- Noverin에 의한 rhMMP2의 억제
rhMMP2와 펩타이드를 농도별(0.1 μg/ml, 1 μg/ml) 로 혼합하여 상온에서 1시간 배양 후 젤라틴 자이모그라피(gelatin zymography)를 시행하여 그의 발현을 알아보기 위해 먼저, 젤라틴(2 mg/ml)을 기질로 하여 단백질 전기영동(SDS-PAGE)을 시행하였다. 전기영동 후 겔을 2.5% Triton X-100에 30분간 담가두었다가, 다시 50 mM Tris-HCl, 0.2 M NaCl, 5 mM CaCl2, 1% Triton X-100을 조성으로 하는 완충제에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 배양 후 겔은 Coo-massie Brilliant Blue R250(Sigma)으로 염색하였고, 5% 메탄올과 7.5% 아세트산, 증류수로 조성된 용액으로 탈 염색 하였다. 그리고 젤라틴 가수분해에 의하여 나타나는 밴드를 관찰하였는데 활성(active) MMP-2는 66 kDa, pro-MMP-2는 72 kDa 밴드를 찾아 관찰하였다.
CG-Renuin 및 CG-Noverin에 의해 MMP2의 활성이 직접적으로 억제되는 것을 젤라틴 자이모그라피를 통해 확인하였다(도 4a-4b).
실시예 4: 섬유아세포에서 CG-Renuin 또는 CG-Noverin에 의한 rhMMP2의 억제
3 x 104 세포/웰의 세포 밀도로 24웰 플레이트에 섬유아세포(NIH3T3)를 시딩하였다. 다음 날 무혈청 배지로 24시간 배양하고 TNF-α로 MMP2의 발현 및 활성화를 유도한 후 CG-Renuin 또는 CG-Noverin을 각각 농도(10 ng/ml, 100 ng/ml, 1000 ng/ml) 별로 처리한 후 24시간 배양하였다. 14,000 x g로 10분간 원심 분리해 얻은 상층액을 배양 후 젤라틴 자이모그라피를 시행하여 그의 발현을 알아보기 위해 젤라틴(2 mg/ml)을 기질로 하여 단백질 전기영동(SDS-PAGE)을 시행하였다. 전기영동 후 겔을 2.5% Triton X-100에 30분간 담가두었다가, 다시 50 mM Tris-HCl, 0.2 M NaCl, 5 mM CaCl2, 1% Triton X-100을 조성으로 하는 완충제에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 배양 후 겔은 Coo-massie Brilliant Blue R250(Sigma)으로 염색하였고, 5% 메탄올과 7.5% 아세트산, 증류수로 조성된 용액으로 탈 염색 하였다. 그리고 젤라틴 가수분해에 의하여 나타나는 밴드를 관찰하였는데, 활성 MMP-2는 66 kDa, pro-MMP-2는 72 kDa 밴드를 찾아 관찰하였다.
MMP2의 활성을 관찰한 결과, CG-Renuin 및 CG-Noverin에 의해 MMP2의 활성이 억제되는 것을 확인하였다(도 5a-5b).
실시예 5: CG-Renuin 또는 CG-Noverin에 의한 콜라겐 분해 억제
HDF(Human dermal fibroblast) 세포(3x104 세포)를 24웰 플레이트에 시딩하였다. 다음 날 5% 혈청 배지로 42시간 배양한 후 MMP2(20 ng/ml)(SIGMA/USA)과 CG-Noverin, CG-Renuin을 각각 처리한 후 6시간 배양하였다. 14,000 x g로 10분간 원심 분리해 얻은 상층액을 pro-collagen type I kit(RnD system/USA)를 이용하여 분석하였다.
HDF(Human dermal fibroblast) 세포(3x104 세포)를 24웰 플레이트에 시딩하고 다음 날 5% 혈청 배지로 교체 후 IGF-1(100 ng/ml)(Sigma/USA)를 처리하여 44시간 배양한 후 MMP2(20 ng/ml)와 CG-Noverin, CG-Renuin을 처리한 후 4시간 배양하였다. 14,000 x g로 10분간 원심 분리해 얻은 상층액을 pro-collagen type I kit를 이용하여 분석하였다.
CG-Renuin 및 CG-Noverin이 MMP2에 의해 유도되는 콜라겐 분해를 억제하는 기능을 갖는지에 대해 실험을 실시한 결과, MMP2를 처리하였을 때 세포 내 콜라겐 분해가 대조군과 비교하여 증가되며 CG-Renuin 또는 CG-Noverin와 동시에 처리하였을 경우, 콜라겐 분해 유도가 억제 되는 것을 확인하였다(도 6a-6b 및 도 7a-7b).
실시예 6: CG-Noverin, CG-Renuin에 의한 멜라노좀 이동(melanosome transfer) 억제
멜라노좀 이동을 관찰하기 위해서 HaCaT 각질 세포를 이용하여 파고사이토시스 시험(Phagocytosis assay)을 진행 하였다. 파고사이토시스를 위한 물질로는 형광(fluoroscence)물질이 붙은 생입자(bioparticle)를 이용하였다. 96-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 3 x 103 세포가 되도록 하여 24시간 동안 배양 후 무혈청 배지로 6시간 동안 배양하였다. 이후 파고사이토시스를 유도하기 위해 1 ㎍/㎖ 의 트립신을 처리하고 1 ㎍/㎖의 펩타이드들을 48시간 동안 처리하였다. 그 결과, 현광 현미경을 통해 생입자가 각질 세포내로 파고사이토시스되는 것을 확인하였다. 파고사이토시스 유도군, 즉 트립신 처리군을 100%로 하여 데이터 관찰하였을 때 CG-Noverin, 과 CG-Renuin 처리군에서 파고사이토시스가 억제되는 것을 확인하였다.
실시예 7: CG-Noverin의 항-치주질환(anti-periodontal) 기능
합성 펩타이드에 의한 치주염세포에서의 항염증 효과
상기 합성예에서 합성된 펩타이드들에 치주염 세포에서의 항염증 효과를 관찰하기 위해 인간 치근막 섬유아세포(Human periodontal ligament fibroblast cell)(ATCC, USA)를 이용하여 실험을 진행하였다. 인간 치근막 섬유아세포를 6-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 5 x 101 세포가 되도록 하여 24시간동안 배양하였다. 치주 세포에 염증을 유도하기 위해 10 μg/ml 의 농도로 트립신(시그마, USA)를 처리한 후 본 발명의 펩타이드들을 1 μg/ml 의 농도로 같이 처리하여 4시간동안 배양한 후 대조군과 유발 물질 그리고 유발물질과 펩타이드를 처리한 배양세포로부터 mRNA를 추출하여 PAR-2, IL-1β의 프라이머를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 사용한 각 프라이머의 뉴클레오타이드 서열은 표 2와 같다.
IL-1β 정방향 5’-CCGTGGACCTTCCAGGATCA-3’
역방향 5’-GATCCACACTCTCCAGCTGC-3’
PAR2 정방향 5’-GGGTTTGCCAAGTAACGGC-3’
역방향 5’-GGGAACCAGATGACAGAGAGG-3’
도 9에서 볼 수 있듯이, 인간 치근막 섬유아세포에 트립신을 처리하여 염증을 유도하였을 때 염증성 사이토카인인, PAR-2, IL-1β의 발현이 증가하는 것을 관찰할 수 있었으며, 본 발명의 펩타이드를 동시에 처리하였을 때에는 위 2가지의 염증성 사이토카인의 발현이 현저하게 억제되는 것을 확인하였다(도 9).
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 일 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. 서열목록 제1서열 또는 서열목록 제2서열의 아미노산 서열로 이루어진 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 MMP2(matrix metalloproteinase-2)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 콜라겐 분해를 억제하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 멜라노좀 이동(melanosome transfer)을 억제하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 피부 상태 개선은 주름개선, 피부재생, 피부탄력 개선, 피부노화 억제, 상처 재생, 여드름 개선, 피부 재생 또는 피부 미백인 것을 특징으로 펩타이드.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 MMP-활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로서, 상기 매트릭스 MMP-활성 관련 질환은 관절염, 당뇨병성 망막증, 비대성 반흔, 건선, 점막 및 상피 조직의 궤양, 자가면역에 의한 염증, 기저막의 분해와 관련된 질병인 낭창, 자가 면역성 신경장애, 근세포 파괴, 녹내장 또는 과다한 혈관신생인 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 염증 질환은 치주염, 천식, 습진, 건선, 알러지, 류마티스 관절염, 건선 관절염(psoriatic arthritis), 아토피성 피부염, 여드름, 아토피성 비염(건초열), 알레르기성 피부염(습진), 만성 부비동염 또는 지루성 피부염(seborrheic dermatitis)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 대상(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 피부 상태 개선 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 대상(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019188491A1 (ja) * 2018-03-29 2019-10-03 森永乳業株式会社 抗老化用組成物

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101943081B1 (ko) * 2017-08-31 2019-01-29 (주)케어젠 주름 개선 활성을 나타내는 펩타이드 및 이의 용도
KR102065171B1 (ko) * 2019-02-20 2020-01-13 (주)케어젠 대기오염물질에 의한 피부 손상 방지 및 항노화용 펩타이드와 이의 용도
EP3763725A1 (en) 2019-07-08 2021-01-13 TCI Co., Ltd. Biomimetic peptides derived from biological source and their uses in retarding aging and improving skin
KR102265430B1 (ko) * 2019-08-20 2021-06-15 주식회사 케어젠 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
TW202132327A (zh) * 2019-11-08 2021-09-01 日商大正製藥股份有限公司 具有ｍｍｐ２阻礙作用之多肽
KR20230046874A (ko) * 2021-09-30 2023-04-06 (주)케어젠 항노화 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
KR20230047690A (ko) * 2021-10-01 2023-04-10 (주)케어젠 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
WO2024011300A1 (en) * 2022-07-13 2024-01-18 L'oreal Modified peptides, composition, method for inhibiting contraction of muscle cells, method for improving the skin and use of a modified peptide

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040023708A (ko) * 2001-08-16 2004-03-18 킴벌리-클라크 월드와이드, 인크. 노화 방지 및 상처 치유를 위한 화합물
KR20120058371A (ko) * 2008-02-29 2012-06-07 리포텍 에스.에이. 금속단백분해효소 억제제를 포함하는 화장품 또는 약학적 조성물
US20120156150A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Keimyung University Industry Academic Cooperation Foundation Composition for Improving Skin Condition Comprising Extract from Black Tea as Active Ingredient
KR20130104114A (ko) * 2012-03-13 2013-09-25 미원상사주식회사 테트라펩타이드 및 이를 함유하는 피부노화 방지 및 항염효능의 화장료 조성물
KR101363455B1 (ko) * 2011-09-09 2014-02-21 (주)케어젠 매트릭스 메탈로프로테아제 활성 억제 펩타이드 및 이의 용도

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6427473A (en) * 1987-07-23 1989-01-30 Mochida Pharm Co Ltd Human pancreas-secreting trypsin inhibitor and production thereof
DE3938971A1 (de) * 1989-11-24 1991-05-29 Biotechnolog Forschung Gmbh Leukozytenelastase und kathepsin g blockierendes peptid, dna, vektor, wirtsorganismus und verfahren zu seiner gewinnung sowie pharmazeutisches praeparat
US5516891A (en) 1992-06-16 1996-05-14 Kinerton, Ltd. Liquid phase synthesis of peptides and peptide derivatives
JP3570558B2 (ja) * 1993-05-01 2004-09-29 持田製薬株式会社 Ｄｎａ断片およびそれを含むベクター、該ベクターによって形質転換された形質転換体、該ベクターを用いる蛋白質の産生方法
US5858710A (en) * 1996-11-06 1999-01-12 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Tumor-associated kazal inhibitor-like polypeptides and encoding polynucleotides
EP1167522A4 (en) * 1999-03-10 2002-05-15 Ajinomoto Kk BIOMOLECULE ACTIVITY REGULATOR SCREENING METHOD
CA2393825A1 (en) * 1999-12-17 2001-06-21 Versicor, Inc. Novel succinate compounds, compositions and methods of use and preparation
EP1726643A1 (en) 2005-05-27 2006-11-29 Direvo Biotech AG Method for the provision, identification and selection of proteases with altered sensitivity to activity-modulating substances
KR101629702B1 (ko) * 2007-02-12 2016-06-13 체에스엘 베링 게엠베하 카잘-형 세린 프로테아제 억제제의 치료학적 적용
US8221984B2 (en) * 2007-03-27 2012-07-17 Vermillion, Inc. Biomarkers for ovarian cancer
CN101353696A (zh) * 2007-07-24 2009-01-28 财团法人工业技术研究院 包括肝纤维化和/或肝硬化的肝纤维损伤的生物标志及其检测方法
JP5582433B2 (ja) * 2009-03-24 2014-09-03 国立大学法人名古屋大学 機能性ペプチドを表すルールの抽出法、機能性ペプチドの設計法及び調製法、ポリペプチド又はポリペプチド含有組成物の評価法、並びに機能性ペプチド
US20110206697A1 (en) * 2010-02-19 2011-08-25 The Regents Of The University Of Michigan Spink1 targeted therapy
KR101285263B1 (ko) * 2011-08-04 2013-07-11 (주)케어젠 Ｅｄａｒ 리간드 유래 펩타이드 및 이의 용도
EP2623110A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-07 CSL Behring GmbH Factor XII inhibitors for the treatment of neurological inflammatory disorders
TW201410709A (zh) * 2012-08-08 2014-03-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 肽庫及其利用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040023708A (ko) * 2001-08-16 2004-03-18 킴벌리-클라크 월드와이드, 인크. 노화 방지 및 상처 치유를 위한 화합물
KR20120058371A (ko) * 2008-02-29 2012-06-07 리포텍 에스.에이. 금속단백분해효소 억제제를 포함하는 화장품 또는 약학적 조성물
US20120156150A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Keimyung University Industry Academic Cooperation Foundation Composition for Improving Skin Condition Comprising Extract from Black Tea as Active Ingredient
KR101363455B1 (ko) * 2011-09-09 2014-02-21 (주)케어젠 매트릭스 메탈로프로테아제 활성 억제 펩타이드 및 이의 용도
KR20130104114A (ko) * 2012-03-13 2013-09-25 미원상사주식회사 테트라펩타이드 및 이를 함유하는 피부노화 방지 및 항염효능의 화장료 조성물

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019188491A1 (ja) * 2018-03-29 2019-10-03 森永乳業株式会社 抗老化用組成物
JPWO2019188491A1 (ja) * 2018-03-29 2021-04-01 森永乳業株式会社 抗老化用組成物

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