WO2014181980A1 - 프로존 효과를 회피할 수 있는 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트 - Google Patents

프로존 효과를 회피할 수 있는 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to an immunochromatography strip and a kit including the same, and specifically, controls an amount of an analyte used or reacts with a conjugate of a conjugate pad in an analyte applied to an immunochromatography strip.
  • the present invention relates to an immunochromatography strip and a kit comprising the same, which enables the conjugate in the pad to be shifted in time, thereby avoiding the prozone phenomenon.
  • Rapid diagnostic test is called various names such as immunochromatography analysis, rapid kit analysis, etc., and its main composition is immunochromatography including support, sample pad, conjugate pad, signal detection pad, and absorption pad.
  • an analytical method by strip the user can simply detect analyte from a biological or chemical sample in 2-30 minutes with a sample of 1-100 microliters without special skills or equipment. Rapid diagnostics is a method that allows you to qualitatively and quantitatively test analytes in a short time by utilizing the properties of biological or chemical substances that are specifically attached to each other.
  • An immunochromatography kit in which the same immunochromatography strip is mounted inside a plastic housing is used. When using an immunochromatography strip, a container containing a sample is required separately, but the immunochromatography kit embedded in the housing is easy to use because it does not need a separate experimental container by directly inserting the sample into the inlet prepared in the housing.
  • the rapid diagnostic test is one of the most advanced assay kits developed in recent years in terms of simplicity and promptness, and is useful for diagnosing various disease agents such as antigens or antibodies of infectious pathogens, cancer factors, and heart markers.
  • hepatitis C Through analysis using an immunochromatography strip or an immunochromatography kit including the same, hepatitis C, using samples such as whole blood, plasma, serum, tears, saliva, urine, runny nose, and body fluids of humans or animals, Hepatitis A Hepatitis B, Influenza Virus, Avian Influenza Virus, Rota Virus, AIDS, Syphilis, Chlamydia, Malaria, Typhoid, Gastric Ulcer, Tuberculosis, SARS, Dengue, Leprosy etc. have.
  • they can be used to confirm the presence of pregnancy, ovulation, cancer markers, heart disease indicators, etc., and can be used to confirm the administration of drugs such as cannabis methamphetamine, hiropon, opium, amphetamines, morphine, cocaine, etc. And furthermore can be used to identify bioterrorism by detection of lysine, anthrax, burcellella, botulinum, bexonia, salmonella, cholera, Staphylococcal enterotoxin B, tullaemia, etc., from foods such as Salmonella, Vibrio campylobacter, enterohemorrhagic It can be used for rapid testing and diagnosis in various fields, such as those that can be used to identify food poisoning bacteria such as E. coli and Yexinia.
  • Patent Document 1 is a cross-sectional view showing a representative example of an immunochromatography kit according to the prior art (Patent Documents 1 and 2).
  • the immunochromatography kit 10A of FIG. 1 includes an immunochromatography strip 10, wherein the immunochromatography strip 10 comprises an adhesive plastic support 11; And a sample pad 12a on the upper surface of the adhesive plastic support, receiving a liquid sample to be analyzed, and having a buffer and a sample single injection portion 15a on an upstream side thereof.
  • Conjugate pad 12b which is located in contact with the sample pad at a downstream end of the sample pad, contains a conjugate specifically binding to the analyte contained in the liquid sample introduced from The conjugate pad includes a signal detector 13b for detecting whether a substance is present and a control unit 13a for confirming whether a liquid sample has moved to the absorbent pad regardless of the presence of an analyte.
  • the signal detection pad absorbs the signal detection pad 12c positioned in contact with the conjugate pad at the downstream end, and the liquid sample in which the signal detection reaction is completed. And an absorbent pad 12d positioned at a downstream end of the exit pad, the absorbent pad being located in contact with the signal detection pad.
  • the sample pad 12a absorbs a liquid sample (or analyte) to be analyzed and ensures a uniform flow of the liquid sample.
  • the conjugate pad 12b includes a fluid conjugate that specifically binds to an analyte contained in the liquid sample, so that the liquid sample introduced through the sample pad 12a is used to connect the conjugate pad 12b. As it passes, specific binding between the analyte and the flow conjugate occurs.
  • the signal detection pad 12c disposed at a position next to the sample pad 12a and the conjugate pad 12b includes a signal detection unit 13b and a matching unit 13a, which are spaced apart from each other at some distance from each other. .
  • the signal detector 13b is an area for checking whether an analyte is present in the liquid sample
  • the control unit 13a is an area for checking whether the liquid sample has normally passed through the signal detector 13b.
  • the absorbent pad 12d absorbs the liquid sample passed through the signal detection pad 23 and assists in capillary flow of the liquid sample on the immunochromatography strip.
  • the immunochromatography strip 10 has a sample pad 12a, a conjugate pad 12b, a signal detection pad 12c, and an absorption pad 12d attached to the support 11 from an upstream side to a downstream side. The liquid sample is moved from the sample pad 12a through the signal detection pad 12c to the absorption pad 12d, and an immunoassay is performed through signal detection on the signal detection pad 12c.
  • analyte If an appropriate amount of analyte is present in the liquid sample, a complex in which the conjugate and the analyte are specifically bound flows, and a specific substance attached to the signal detector 13b reacts specifically with the analyte and is fixed in the detection region.
  • the conjugate is a gold particle
  • the color may be identified by the manufacturer's method in purple, red, or black, and visually confirmed by forming a band. If no analyte is present in the sample, the detector displays no indication.
  • the ultimately expressed result is a complex of (gold particle-specific reactant conjugate) + analyte + (specific reactant in signal detector), each analyte combined with a specific reactant to bridge the reaction. .
  • the analyte fails to bridge and the conjugate is not connected to the detector. In spite of the presence of the substance, no indication or weakness appears in the detector. This phenomenon is called the prozone or hook effect.
  • the immunochromatographic strip shown in FIG. 1 is applied to a sample having a relatively low concentration of analyte, and in order to apply a high concentration sample that causes prozone, an excessive amount of specific reactant and conjugate in the detection region must be added, but the cost is high. Not only does this increase, but the structural addition of the strip cannot be raised indefinitely.
  • buffers, dilution vessels, pipettes, etc. must be provided separately, and the user is cumbersome because the sample must be diluted by adding several experiments and the dilution concentration and method must be remembered.
  • the immunochromatography kits shown in FIGS. 2 and 3 have been developed.
  • FIGS. 2 and 3 are cross-sectional views showing representative examples of immunochromatography kits for blocking prozone effects in the related art (SD BIOLINE Dengue IgG / IgM, Standard diagnostic, inc, Korea).
  • the sample injection unit 25a " is positioned after the downstream side of the conjugate pad, so that the buffer is immediately supplied after the sample is injected into the sample injection unit 25a".
  • the sample first arrives at the signal detector 23b, after which the conjugate arrives, and an immune response can be made.
  • the sample is first introduced into the sample input unit 25a ", and the analyte of the sample is present in the free state by spreading on the signal detection pad before contacting the conjugate, among which the analyte reaches the signal detection unit 23b.
  • the conjugate is fluidized by the buffer and moved to the signal detection pad 22c. At this time, a large amount of the conjugate reacts with and flows with many free analytes present between the conjugate pad 22b and the signal detector 23b, but passes through and disappears without reacting with the specific reactant of the signal detector 23b. Because only the conjugate that did not react with the analyte reacts with the analyte bound to the specific reactant of the signal detector 23b, thereby generating a signal.
  • the color development time is late and is still not free of prozone phenomena due to excessive free analyte, so that the color is not developed or weakly developed, and the immunochromatography kit of Fig. 2 can not use whole blood but only plasma and serum.
  • Fig. 3 shows a filter 32e for filtering blood cells on a signal detection pad located at the sample input part 35a "of the immunochromatography kit in Fig. 2. With such a filter, whole blood other than plasma and serum is mounted. There is an advantage that can be used for.
  • the immunochromatography kits shown in FIGS. 2 and 3 are more advanced than the immunochromatography kits shown in FIG. 1, but have the following problems.
  • the initially flowing conjugate becomes obsolete due to the reaction with free analyte spread in the signal detection pad, and only the resulting conjugate does not completely overcome the prozone effect and shows results.
  • the time is very slow, 15-30 minutes.
  • the present inventors have studied intensively for the development of a more preferable immunochromatography strip that can avoid the prozone effect, and as a result, it is possible to effectively control the amount of the analyte used, thereby avoiding the prozone effect,
  • the present invention has been completed by focusing on immunochromatography strips that can be simultaneously tested in one immunochromatography kit in samples in which both high and low concentrations of analytes are present.
  • an object of the present invention is to provide an immunochromatography strip and an immunochromatography kit comprising the same, which can block the prozone effect by controlling the amount of analyte used to react with the conjugate in the conjugate pad in a sample.
  • Another object of the present invention is not only to block the prozone effect by controlling the amount of analyte used to react with the conjugate in the conjugate pad in the sample, but also to enable two-stage immunodetection reactions in high to low concentrations. It is to provide an immunochromatography strip and a kit comprising the same or two or more different substances that need to detect a wide range over one possible immunochromatography strip.
  • Another object of the present invention is to provide a cost-competitive immunochromatography strip and a kit including the same, by reducing the amount of specific reactants used as raw materials for the test, thereby avoiding the prozone effect.
  • Positioning the pads “fold” means that they are located adjacent to each other, but the distal ends of each pad are located overlapped.
  • the "upstream side” refers to a site that arrives first in time in the movement of the buffer, and means a site near the buffer input section.
  • downstream refers to a part which arrives later in time in the movement of the buffer, and means a part farther from the buffer input part.
  • “Midstream side” means an intermediate portion between the upstream side and the downstream side.
  • Analyte used means the analyte actually used in the experimental reaction among the analytes injected into the sample inlet.
  • Insoluble analyte means an analyte that is not used for an experimental reaction and is isolated in a specific area among the analytes injected at the sample inlet.
  • conjugate pad located downstream of the sample pad, the conjugate pad containing a conjugate specifically binding to an analyte contained in the liquid sample introduced from the sample pad;
  • an immunochromatography strip comprising an absorbent pad positioned at a downstream end of the signal detecting pad, the absorbing pad being positioned to absorb the liquid sample from which the signal detecting reaction is completed,
  • the overlapping length of the conjugate pad and the control tape provides an immunochromatographic analysis strip, which can be controlled by the amount of the sample injected into the conjugate pad to be used as an analyte.
  • the liquid sample introduced into the sample input unit by the introduction of the control tape becomes an insoluble analyte present in the downstream side of the sample pad in which a predetermined amount is present at the upper end of the control tape, and the remaining amount of the conjugate pad and the control tape are It spreads through the non-overlapping part to the conjugate pad and becomes an analyte used.
  • the buffer is immediately added to the buffer input unit after the liquid sample is added, the buffer is moved to the downstream side of the sample pad through the sample pad, and the insoluble analyte present in the downstream side is fixed to the downstream end of the sample pad.
  • the buffer passed through the sample pad to the conjugate pad facilitates the movement of the analyte used in the conjugate pad to the signal detection pad.
  • a first sample pad containing a liquid sample to be analyzed and having a buffer inlet upstream and a sample inlet downstream;
  • an immunochromatographic strip comprising an absorbent pad located downstream of said signal detection pad, said liquid absorbing sample having completed the signal detection reaction;
  • the first control tape serves to block the conjugate present on the upstream side of the conjugate pad from reacting with the liquid sample introduced into the sample input unit.
  • the immunodetection reaction of the first low analyte present in the injected sample is carried out first, followed by the detection reaction of the second high analyte high, and the first analyte and the second analyte are the same or different from each other.
  • Another material, immunochromatography assay strip, is provided.
  • the immunochromatographic assay strip is an immunochromatographic assay strip required when all liquid samples used in the primary immunodetection reaction need to be used without controlling the amount of the sample.
  • the entire sample is diffused toward the conjugate pad as an analyte used.
  • a portion of the buffer immediately added after the sample is added to the sample input unit moves the used analyte and the conjugate to the signal detector, and the first immunodetection reaction proceeds to detect the first analyte.
  • the second analyte is in a state in which the second analyte is coupled to the specific reactant of the signal detection unit in a form not bound to the conjugate.
  • the secondary immunodetection reaction bridged by the second analyte coupled to proceeds to detect the second analyte in the signal detector.
  • the first analyte and the second analyte may be the same or different from each other.
  • the second analyte is higher in concentration than the first analyte, even if the immunodetection reaction is not expressed by the prozone effect during the immunodetection reaction of the first analyte, the second reaction is a conjugate that does not react with the analyte. Since the immune detection reaction is performed by moving to the signal detector, the expression of the second analyte may appear in the signal detector.
  • the immunochromatographic analysis strip further comprises a second control tape of a material which is positioned between the sample injection portion of the first sample pad and the downstream side of the conjugate pad, and which does not pass the liquid sample. 2
  • the injected sample is moved to the conjugate pad to control the amount of analyte used, and the immunodetection reaction of the first analyte having a low concentration in the injected sample is performed first.
  • the immunodetection reaction of the second analyte with high is performed later, and the first analyte and the second analyte may be immunochromatographic strips that are the same or different from each other.
  • the liquid sample introduced into the sample input unit is partially spread by the second control tape toward the conjugate pad as an analyte used. Then, the buffer immediately added after the sample is added to the sample input part of the moving part of the analyte and conjugate used to the signal detector, the first immunodetection reaction proceeds to detect the first analyte.
  • the second analyte is in a state in which the second analyte is not bound to the conjugate and is coupled to the specific reactant of the signal detector.
  • the second analyte coupled with the specific reactant of the second immunodetection reaction proceeds to detect the second analyte.
  • the first analyte and the second analyte may be the same or different from each other.
  • the second analyte is higher in concentration than the first analyte and is not expressed by the prozone effect in the immunodetection reaction of the first analyte, the secondary reaction is later moved to the signal detection unit where the conjugate does not react with the analyte. Since the secondary immunodetection reaction is already bridged by the second analyte coupled with the specific reactant of the signal detector, the expression of the second analyte may appear in the signal detector.
  • the immunochromatographic analysis strip may be formed by passing the liquid sample through the conjugate pad located under the first control tape and below the first conjugate pad and the second control tape where the liquid sample does not reach. It is separated into two conjugate pads, and the separation is performed by inserting a conjugate separation pad between the first conjugate pad and the second conjugate pad, and the conjugate separation pad has a flow rate of the liquid sample compared to the conjugate pad. May be a strip for immunochromatography, a significantly late pad. By introducing the conjugate separation pad, the introduction of the liquid sample into the sample inlet can prevent the possibility that the liquid sample may diffuse to the first conjugate pad and react with the conjugate present in the first conjugate pad. .
  • the sample may be used, such as whole blood, plasma, serum, tears, saliva, urine, feces, runny nose, body fluids such as human and animal-derived materials, plant-derived materials, environmental substances, culture and culture-derived materials.
  • the analyte may be a protein such as peptides, antibodies, antigens, carbohydrates, chemicals, and the like.
  • the first sample pad and the second sample pad may be polymers, peptides, proteins, carbohydrates, soaps, or the like, to further improve the selectivity of the analyte or to minimize the influence of interference materials that may be included in the liquid sample. It can be processed as, and has the function of filtering additionally. For example, when whole blood is used as a liquid sample, a more compact pad may be used to filter out red blood cells, or may contain additional aids to help filter them out. If necessary, an auxiliary pad may be further provided on the upstream side of the sample pad, which may include a material that can increase the reaction between the analyte and the conjugate or eliminate the influence by the interference material.
  • the sample pad may be made of cellulose, acrylic fiber, rayon, polyester fiber, glass fiber, wool fiber, silk fiber, cotton yarn, flax fiber or pulp, or one or more kinds thereof may be mixed.
  • the second sample pad should be able to slow down the flow rate of the buffer compared to the first sample pad.
  • the second sample pad may have a higher density, a finer particle size, stronger hydrophobicity, or a thinner thickness. Can be.
  • the first sample pad and the second sample pad may be made of the same material, and the second sample pad may slow down the flow rate of the buffer compared to the first sample pad, for example, bovine serum albumin, orb.
  • the above substances can be prepared by mixing and treating the eluting solution substance.
  • the second sample pad may be replaced with an extended conjugate pad. However, the conjugate should be contained only on the downstream side of the conjugate pad.
  • the sample may be used, such as whole blood, plasma, serum, tears, saliva, urine, feces, runny nose, body fluids such as human and animal-derived materials, plant-derived materials, environmental substances, culture and culture-derived materials.
  • the analyte may be a protein such as peptides, antibodies, antigens, carbohydrates, chemicals, and the like.
  • the conjugate pad may be made of glass fiber, polyethylene fiber, or the like.
  • the conjugate separation pad may be made of any material that can slow the diffusion through the conjugate pad of the liquid sample, for example, cellulose, acrylic fiber, rayon, polyester fiber, It may be made of glass fiber, wool fiber, silk fiber, cotton yarn, flax fiber or pulp, or one or more kinds thereof may be mixed. Also, these materials include proteins such as bovine serum albumin and ovalbamine, amino acids, peptides, polyethylene glycol, polyvinylalcohol, polyvinylpyrrolidone, glycerol, polysorb One or more materials selected from the group consisting of bait surfactants (Polysorbate detergents) may be prepared by mixing with the eluent material, but are not limited thereto.
  • bait surfactants Polysorbate detergents
  • the signal detection pad is composed of a porous membrane pad, and may be made of nitrocellulose, cellulose, polyethylene, polyethersulfone, nylon, or the like. One or more signal detectors may be included.
  • the absorbent pad may be any pad capable of promoting the movement of the buffer, and may be made of, for example, pulp, cellulose, cotton fibers, or the like.
  • control tape including the first control tape and the second control tape may be made of any material that does not penetrate the liquid sample.
  • acetate, polyester Polyolefin, polypropylene, polystyrene, vinyl, polyimide, aluminum foil, or retro-reflective film, one side Or both sides may be a rubber, acrylic, or silicone-based adhesive is applied, but is not limited thereto.
  • the immunochromatographic analysis strip may be used as an immunochromatography strip as a form in which a front portion except for a sample inlet and a signal detection region is attached with a protective tape.
  • the protective tape may be any tape that is transparent, translucent, or opaque. The protective tape can stably maintain the structure of the immunochromatographic analysis strip.
  • the signal detection area may attach a signal protection tape. The signal protection tape serves to protect a certain time without damaging the signal shown in the signal detection area, and it is preferable to use a transparent tape to check the signal.
  • an immunochromatography strip comprising an absorbent pad positioned at a downstream end of the signal detecting pad, the absorbing pad being positioned to absorb the liquid sample from which the signal detecting reaction is completed,
  • the sample pad has a form in which the downstream side is branched into an upper layer and a lower layer
  • g) further comprising a control tape of a material which is located between branched gaps of the upper and lower layers of the sample pad and does not pass the liquid sample;
  • the control tape serves to block the liquid sample introduced into the branched upper layer of the sample pad from entering the conjugate pad, so that the injected sample is moved to the conjugate pad to control the amount of analyte used.
  • the immunochromatographic assay strip may be added with a liquid sample in a single input and then a buffer, or a mixture of a liquid sample and a buffer, and the liquid sample may be dispersed in both the branched upper and lower layers of the sample pad.
  • the liquid sample dispersed in the upper layer is blocked from entering the conjugate pad by the control tape, so that only the liquid sample that has moved to the lower pad is used for the immunodetection reaction, thereby preventing the prozone effect.
  • immunochromatography kit consisting of a lower housing for receiving the immunochromatographic analysis strip, and an upper housing complementary to the lower housing, immunochromatography housed in the kit
  • An immunochromatography kit is provided wherein the strip is one of the immunochromatographic strips according to all aspects of the invention enumerated above.
  • the selection of the conjugate of the immunochromatography strip and kit comprising the same according to the present invention may be appropriately selected according to the type of analyte.
  • the conjugate may be labeled with metal particles, in particular gold particles, latex particles, fluorescent materials, radioactive materials or enzymes.
  • the detection of signal detection of the immunochromatography strip according to the present invention and the kit including the same may be performed by visual reading or optical, electrochemical, or electrical conductivity according to the type of conjugate labeled.
  • the immunochromatography strip and kit including the same according to the present invention are prepared by using a sample of human or animal whole blood, plasma, serum, tear, saliva, urine, runny nose, body fluid, hepatitis C, hepatitis A, Hepatitis B, Influenza Virus, Avian Influenza Virus, Rota Virus, AIDS, Syphilis, Chlamydia, Malaria, Typhoid, Gastric Ulcer, Tuberculosis, SARS, Dengue Fever, Leprosy, Parvo, Distemper, Foot and Mouth Disease, Brussela, Newcastle, Heartworm, Sight It can be applied to the presence of a pathogen and an antibody, such as a disease.
  • drugs such as amphetamines, morphine, and cocaine are administered, lysine, anthracite, burcellella, botulinum, bexonia, Salmonella, cholera, Staphylococcal enterotoxin B, Tularemia, etc. It can be used for a variety of rapid diagnosis, such as identifying food poisoning bacteria, viruses, antibiotics, food additives such as campylobacter, intestinal hemorrhagic Escherichia coli, and cycinia.
  • the immunochromatography and kit according to the present invention introduces a control tape of a material through which a liquid sample does not pass between a sample input portion and a conjugate pad in a sample pad, and moves to a conjugate pad to use an analyte. This can be controlled to block the Pro Zone effect. Further, further comprising a first control tape and a second control tape of a material that does not pass the liquid sample on the downstream side of the conjugate pad and the upstream side of the conjugate pad, and the second sample pad on the upstream side of the first sample pad.
  • FIG. 1 is a cross-sectional view showing a representative example of an immunochromatography kit according to the prior art.
  • FIG. 2 is a cross-sectional view showing a representative example of an immunochromatography kit for blocking prozone effects according to the prior art.
  • Figure 3 is a cross-sectional view showing a representative example of an immunochromatography kit that can be applied whole blood while blocking the prozone effect according to the prior art.
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip that can prevent a prozone effect further comprising a control tape, in accordance with an embodiment of the present invention.
  • 5A is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip capable of preventing a prozone effect further comprising a first conditioning tape and a second sample pad, in accordance with an embodiment of the present invention.
  • FIG. 5B is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip capable of preventing a prozone effect further comprising a first conditioning tape, a second conditioning tape, and a second sample pad, in accordance with an embodiment of the invention.
  • FIG. 5C is a cross-sectional view schematically illustrating a transfer pattern of a sample and a buffer during the rapid test in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5B.
  • FIG. 5C is a cross-sectional view schematically illustrating a transfer pattern of a sample and a buffer during the rapid test in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5B.
  • FIG. 5D illustrates an immunochromatographic analysis strip capable of preventing a prozone effect further comprising a first control tape, a second control tape, a third control tape, and a second sample pad, according to an embodiment of the present invention. It is a cross section.
  • FIG. 5E is a cross-sectional view of an immunochromatography kit containing the immunochromatographic assay strip of FIG. 5B in an upper housing and a lower housing.
  • FIG. 5E is a cross-sectional view of an immunochromatography kit containing the immunochromatographic assay strip of FIG. 5B in an upper housing and a lower housing.
  • FIG. 5F illustrates a method in which an immunochromatographic assay strip in which a front portion except for the sample input portion and the signal detection region of the immunochromatographic assay strip of FIG. It is a cross section.
  • FIG. 6A is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip further comprising a conjugate separation pad in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5A according to one embodiment of the present invention.
  • FIG. 6B is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip further comprising a conjugate separation pad in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5B according to one embodiment of the present invention.
  • 6C is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip further comprising a conjugate separation pad in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5C according to one embodiment of the present invention.
  • FIG. 7A is an immunochromatographic analysis method having a form in which a downstream side of a specimen pad is divided into an upper layer and a lower layer according to an embodiment of the present invention, and further comprising a control tape between the branched gaps. Cross section of the strip.
  • FIG. 7B is a cross-sectional view of the immunochromatography kit containing the immunochromatographic assay strip of FIG. 8A in the upper housing and the lower housing.
  • FIG. 7B is a cross-sectional view of the immunochromatography kit containing the immunochromatographic assay strip of FIG. 8A in the upper housing and the lower housing.
  • w / v%) is a concentration of hemoglobin Alc in the liquid sample according to the length overlapping with the downstream end of the conjugate pad of the control tape in the kit comprising an immunochromatography strip corresponding to FIG. 4 according to an embodiment of the present invention ( w / v%) is a graph showing the result of detection.
  • control part 13a, 23a, 33a, 43a, 53a, 63a, 73a control part
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of an immunochromatographic assay strip capable of preventing a prozone effect further comprising a control tape, according to one embodiment of the invention.
  • the immunochromatographic strip of FIG. 4 contains an adhesive plastic support 41 and a liquid sample to be analyzed, which is arranged on the upper surface of the adhesive plastic support from the upstream side to the downstream side, and on the upstream side ⁇ .
  • a sample pad 42a having a sample injection section 45a "at the buffer injection section 45a 'and a downstream side gamma; and specifically binding to an analyte contained in the liquid sample introduced from the sample pad.
  • Conjugate pad 42b located below the downstream side ⁇ of the sample pad containing the conjugate, and a signal detector 43b for detecting whether an analyte is present in the liquid sample and the presence of the analyte.
  • a shin positioned with the conjugate pad at the downstream end of the conjugate pad, including a control portion 43a for confirming whether or not the liquid sample has moved to the absorbent pad, with or without a sample.
  • Immunochromatography strip 40 comprising a detection pad 42c and an absorption pad 42d positioned to be in contact with the signal detection pad at a downstream end of the signal detection pad to absorb the liquid sample from which the signal detection reaction is completed.
  • the apparatus further includes a control tape 42f of a material which does not pass the liquid sample, which is located between the sample injection part 45a "and the conjugate pad 42b of the sample pad.
  • the amount of the injected sample is moved to the conjugate pad to be used as an analyte, thereby preventing a prozone effect.
  • the liquid sample introduced into the sample input portion by introduction of the adjusting tape becomes an insoluble analyte present in the downstream side ⁇ of the sample pad 42a in which a predetermined amount is present at the upper end of the adjusting tape 42f, and the remaining predetermined The amount is diffused into the conjugate pad through the portion where the conjugate pad 42b and the control tape 42f do not overlap to form an analyte for use.
  • the buffer when the buffer is immediately added to the buffer input part 45a 'after the liquid sample is added, the buffer moves to the downstream side ⁇ of the sample pad through the sample pad 42a, and the insoluble analysis present in the downstream side is performed.
  • the material is fixed to the downstream end of the sample pad, and the buffer passed through the sample pad to the conjugate pad 42b facilitates the movement of the analyte used to the signal detection pad 42c diffused into the conjugate pad. .
  • the adjusting tape 42f can adjust the amount of the analyte to be used in the sample introduced into the sample input unit, and thus the prozone effect can be avoided.
  • the buffer is divided and moved in the direction of the signal detection pad while passing through the sample pad downstream end and the conjugate pad by the control tape 1, and the buffer moving downstream of the sample pad moves the insoluble analyte downstream of the sample pad. Push to the side end to enhance isolation and stop movement. Most of the remaining buffer is transferred to the conjugate pad and mixed with the analyte used in the conjugate pad to dissolve the conjugate, to help the reaction between the specific substance attached to the conjugate and the analyte used, and to the signal detection pad 42c. It moves to react with the specific substance attached to the signal detector 43b.
  • the prozone effect can be obtained by simply diluting the sample with the control tape 42f by disabling only a part of the analyte for the immunodetection reaction and not using the rest of the analyte. Can be controlled.
  • the longer the overlapping length of the conjugate pad 42b and the control tape 42f may reduce the amount of analyte used, and the shorter the amount of analyte used, the greater the amount of analyte.
  • an appropriate adjustment tape length capable of avoiding the prozone effect can be selected by adjusting the overlapping length of the conjugate pad and the control tape.
  • FIG. 5A is an immunochromatin which can further prevent a prozone effect, further comprising a first control tape and a second sample pad positioned upstream of the conjugate pad in contact with the first sample pad, according to an embodiment of the present invention.
  • the immunochromatographic analysis strip of FIG. 5A contains an adhesive plastic support 51 and a liquid sample to be analyzed attached to an upstream surface of the adhesive plastic support, and a buffer injection portion upstream ( ⁇ ). And a first sample pad 52a ′ having a sample input portion on the downstream side ⁇ and below the midstream side ⁇ of the first sample pad 52 a ′. At the second sample pad downstream end, the second sample pad 52a "having a slow flow rate, and a conjugate specifically binding to an analyte contained in the liquid sample introduced from the first sample pad; A conjugate pad 52b starting with the second sample pad and being located below the downstream side ⁇ of the first sample pad, and a signal detector 53b for detecting whether an analyte is present in the liquid sample.
  • a signal detection pad which is positioned in contact with the conjugate pad at a downstream end of the conjugate pad 52b, includes a control portion 53a for checking whether the liquid sample has moved to the absorption pad, with or without a liquid sample ( 52c) and an immunochromatography strip 50a comprising an absorbent pad 52d positioned downstream of the signal detection pad 52c, which absorbs the liquid sample from which the signal detection reaction is completed, wherein the conjugate pad is provided. It further comprises a first control tape (52f ') of the material located in the upstream side of the contact with the first sample pad does not pass the liquid sample.
  • the first control tape 52f serves to block the conjugate present upstream of the conjugate pad 52b from reacting with the liquid sample introduced into the sample injection section 55a ", thereby present in the injected sample.
  • the immunodetection reaction of the first analyte having a low concentration may be performed first, followed by the detection reaction of the second analyte having a high concentration, and the first analyte and the second analyte may be the same or different. have.
  • the immunodetection reaction in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5A is performed by separating the first and second immunodetection reactions.
  • the principle of the primary immunodetection reaction and the secondary immunodetection reaction is that in the primary immunodetection reaction, the amount of the liquid sample is not controlled by the control tape, and the entire liquid sample injected into the sample injection unit 55a "is first immunized. This is used when the amount of analyte to be detected in the primary immunodetection reaction is so small that the entire liquid sample should be used without controlling the amount of the liquid sample.
  • the primary immune detection reaction the sample introduced through the sample injection unit 55a "enters the conjugate pad without interfering with the control tape, reacts with the specific reactant of the conjugate, and passes through the first sample pad. It is mixed with the introduced buffer and moved to the signal detection pad 53c to perform an immunodetection reaction with a specific reactant coupled to the signal detection unit 53b, where a low concentration of analyte is detected but shows a prozone effect. The high concentration of the analyte is combined with the specific reactant of the signal detector and the first reaction is completed.
  • the analyte does not react with the conjugate in the conjugate pad 52b in advance, and only reacts with the specific reactant in the signal detection pad, so that the prozone phenomenon occurs even if the concentration is very high in the liquid sample. Does not appear Therefore, an unfinished reaction that is not signaled by the prozone phenomenon in the first immunodetection reaction is completed by the conjugate of the secondary reaction, thereby overcoming the prozone effect.
  • the first analyte which is present at a very low concentration and is not concerned with prozone effects, is first detected, and the second, which must be present at a relatively high concentration to block prozone effects. The analyte can be detected.
  • FIG. 5B is a cross-sectional view of an immunochromatographic analysis strip capable of preventing a prozone effect including a first control tape, a second control tape, and a second sample pad according to an embodiment of the present invention.
  • the immunochromatographic strip 50 of FIG. 5B contains a plastic support 51 and a liquid sample to be analyzed, arranged from an upstream side to a downstream side on an upper surface of the adhesive plastic support and buffered upstream.
  • a first sample pad 52a ' having a sample input portion at the lower and downstream sides, and a second sample pad below the midstream side ⁇ of the first sample pad, and having a slower flow rate than the first sample pad.
  • a second sample pad 52a "downstream side ( ⁇ ) containing a sample pad 52a" and a conjugate specifically binding to an analyte contained in the liquid sample introduced from said first sample pad Detects whether an analyte is present in the liquid sample, starting with the second sample pad, the conjugate pad 52b positioned below the downstream side ⁇ of the first sample pad 52a '.
  • Signal detection unit 53b A signal detection pad which is positioned in contact with the conjugate pad at the downstream end of the conjugate pad, including a control unit 53a for checking whether the liquid sample has moved to the absorption pad regardless of the presence of an analyte.
  • an immunochromatography strip comprising an absorbent pad (52d) which is located in a position adjacent to the signal detection pad at a downstream end of the signal detection pad, which absorbs the liquid sample from which the signal detection reaction is completed.
  • the material is positioned between the sample injection portion 55a ′′ of the first sample pad and the downstream side of the conjugate pad 52b and does not pass the liquid sample.
  • the difference is that it further includes a second adjusting tape 52f ".
  • the second control tape is additionally included to control the amount of the analyte used in the first immunodetection reaction, thereby preventing the prozone phenomenon from the first immunodetection reaction.
  • the amount of the injected sample is moved to the conjugate pad to be used as an analyte, and the first control tape 52f 'is adjusted.
  • the first analyte having a low concentration present in the injected sample serves to block the conjugate present on the upstream side of the conjugate pad 52b to react with the liquid sample introduced into the sample injection section 55a ".
  • the immunodetection reaction of is performed first, followed by the immunodetection reaction of the second analyte with high concentration, and the first analyte and the second analyte may be the same or different.
  • a liquid sample undergoes an immunodetection reaction as follows.
  • the immunochromatographic analysis strip 50b of FIG. 5B further includes a second sample pad and a second control tape on the immunochromatographic analysis strip of FIG. 4, and uses the second control tape to relatively use the analyte.
  • the conjugate pad 50b is separated and protected by the first adjusting tape and the second adjusting tape, and then the conjugate and the sample protected by the second adjusting tape react with the signal detecting pad.
  • the conjugate protected on the first control tape is mixed with the buffer to move to the signal detection pad to perform the secondary immunodetection reaction.
  • FIG. 5c For better understanding, the arrangement of the analyte and the insoluble analyte and the moving direction of the buffer in the immunochromatographic assay strip of FIG. 5b are shown in FIG. 5c.
  • the liquid sample containing the analyte when the liquid sample containing the analyte is introduced through the sample input unit, the liquid sample penetrates into the sample input unit 55a "of the first sample pad, and at this time, the second control tape 52f" directly below At the boundary, the liquid sample reacts specifically with the conjugate and moves to the signal detection pad to move to the signal detecting pad, and to be used at the end of the first sample pad 52a ', which is not used in the test and is not used in the test. Divided into "insoluble analytes". The liquid sample is blocked from entering the conjugate pad existing under the first control tape by the presence of the first control tape 52f '. Therefore, the analyte used does not react with the conjugate in the conjugate pad existing under the first control tape 52f ', and the conjugate in the conjugate pad under the second control tape 52f ". You can only react with.
  • the injected buffer moves in the direction of the conjugate pad by capillary reaction.
  • the first sample pad 52a 'and the second sample pad 52a' are moved in two directions.
  • the buffer moving along the downstream ( ⁇ ) direction of the first sample pad is an analyte used in the injected analyte.
  • the buffer that moves to the downstream end of the first sample pad to move intensifies the isolation of the insoluble analyte and stops moving at the downstream end of the first sample pad.
  • Adjuster Move to the gap between the tape and the second control tape to help the reaction with the conjugate protected by the second control tape and move to the signal detection pad 52c to react with the specific substance of the signal detection unit 53b. An immunodetection reaction takes place.
  • Control Tape 2 By adjusting Control Tape 2 so that a relatively large amount of analyte in the liquid sample is used, relatively low concentrations of the analyte in the liquid sample may show results in the primary immunodetection reaction, but relatively high concentrations of the analyte still have a prozone effect. It does not show the detection result and waits for the second immunodetection reaction in which the specific reaction material and the analyte are combined.
  • the flow rate of the buffer moved toward the second sample pad 52a "in the administered buffer is significantly slower than that of the first sample pad 52a '.
  • Second sample pad 52a When the buffer moving at a delayed speed reaches the conjugate pad 52b, which is located at the second sample pad, the conjugate protects the conjugate protected from the buffer moving to the first sample pad by the adjusting tape 1 52f '. After thawing, the analyte and conjugate used in the primary immunodetection reaction move to the signal detection pad and then to the signal detection pad 52c.
  • the conjugate which was protected by the buffer and the control tape 1 moved to the signal detection pad, was subjected to the secondary immunodetection reaction by the bridge reaction by the analyte, which had previously been combined with the specific reaction material of the signal detection part, Even at very high concentrations, Prozone does not appear. Therefore, an unfinished reaction that is not signaled by the prozone phenomenon in the first immunodetection reaction is completed by the conjugate of the secondary reaction, thereby overcoming the prozone effect.
  • this two-step immunodetection reaction relatively high concentrations of analytes can be detected first, and relatively high concentrations of analytes can be detected later.
  • FIG. 5D is a cross-sectional view of an immunochromatographic analysis strip capable of preventing a prozone effect including a first control tape, a second control tape, and a third control tape, and a second sample pad according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 5D is a cross-sectional view of an immunochromatographic analysis strip capable of preventing a prozone effect including a first control tape, a second control tape, and a third control tape, and a second sample pad according to an embodiment of the present invention.
  • the immunochromatographic strip 50d of FIG. 5D further includes a third conditioning tape 52f '′ in the immunochromatographic strip 50b of FIG. 5B, and the first conditioning tape 52f'.
  • the second adjusting tape 52f "' are connected by the third adjusting tape 52f"', and the third adjusting tape includes a hole or a gap through which the liquid sample can pass. The amount to be made can be further controlled.
  • the process of immunodetection of the liquid sample using the immunochromatography strip 50d of FIG. 5d is performed by the immunoassay reaction of the liquid sample using the immunochromatography strip 50b of FIG. 5b. Same as the process. However, the liquid sample passes through the third control tape including a hole or a gap, the amount of the analyte to be used is further adjusted, thereby blocking the prozone effect. The amount of analyte used may be adjusted by adjusting the size or density of the hole or gap included in the third control tape.
  • the third adjustment tape may be connected to the first adjustment tape and the second adjustment tape by folding, but may also be present as a single piece.
  • the immunochromatographic assay strips of FIGS. 5A, 5B, and 5D may be used for rapid diagnosis, and are immunochromatography kits containing the immunochromatographic assay strips in upper and lower housings. Can also be used. A cross-sectional view of the immunochromatography kit containing the immunochromatographic analysis strip of FIG. 5B in the upper housing 54b and the lower housing 54a is shown in FIG. 5E.
  • FIG. 5F is a cross-sectional view of the immunochromatographic assay strip in which the immunochromatographic assay strip is attached to the buffer container in a buffer container to perform a sample assay reaction. Immediately after the liquid sample is added to the sample, a buffer input unit is immersed in the buffer in the buffer container to perform an immunodetection reaction.
  • the protective tape and the signal protective tape can be used in the conventional immunochromatography strips, for example, acetate (acetate), polyester (polyester), polyolefin (polyolefin), polypropylene (polypropylene), polystyrene ( polystyrene, vinyl, polyimide, aluminum foil, or retro-reflective film, wherein a tape coated with an adhesive such as rubber, acrylic, or silicone It may be used, but is not limited thereto.
  • the analyte used in the liquid sample introduced into the sample input portion of the first sample pad is diffused to the conjugate pad portion protected by the first control tape. It may occur that the conjugate that is introduced and protected by the first conditioning tape is not protected as a result.
  • immunochromatographic assay strips according to one embodiment of the present invention with conjugated connection pads are shown in FIGS. 6A, 6B and 6C, respectively.
  • the conjugate pad 62b is positioned below the first control tape 62f 'and the first conjugate pad 62b' and the sample through which the liquid sample does not pass. Located below the input portion 65a ", it is separated into the second conjugate pad 62b" through which the liquid sample passes, and the separation is performed by the first conjugate pad 62b 'and the second conjugate pad 62b ". Conjugate separation pad (62g) is inserted between the), the conjugate separation pad (62g) is a immunochromatography analysis strip that is a pad with a slower buffer flow rate than the conjugate pad.
  • the conjugate pad 62b is positioned below the first control tape 62f ', and the first conjugate pad 62b' and the liquid sample do not pass. 2 is separated into a second conjugate pad 62b "positioned below the control tape 62f" and through which the liquid sample passes, and the separation is performed by the first conjugate pad 62b 'and the second conjugate pad 62b.
  • Conjugate separation pad 62g is inserted between "), and the conjugate separation pad 62g is an immunochromatographic analysis strip that is a pad having a slower buffer flow rate than the conjugate pad.
  • FIG. 6C shows that the immunochromatographic strip 60c of FIG. 6B further includes a third conditioning tape 62f ′′ ′ in the immunochromatographic assay strip 60b of FIG. 6B, and the first conditioning tape 62f 'and the second adjusting tape 62f "are connected by the third adjusting tape 62f"', and the third adjusting tape includes holes or gaps through which the liquid sample can pass. The amount of material can be further controlled.
  • the process of immunodetection of the liquid sample using the immunochromatography strip 60c of FIG. 6c is performed by the immunoassay reaction of the liquid sample using the immunochromatography strip 60b of FIG. 6b. Same as the process. However, the liquid sample passes through the third control tape including a hole or a gap, the amount of the analyte to be used is further adjusted, thereby blocking the prozone effect. The amount of analyte used may be adjusted by adjusting the size or density of the hole or gap included in the third control tape.
  • the third adjustment tape may be connected to the first adjustment tape and the second adjustment tape by folding, but may also be present as a single piece.
  • 7A is an immunochromatographic analysis capable of preventing a prozone effect in which a downstream side of a sample pad is branched into an upper layer and a lower layer according to an embodiment of the present invention, and further comprising a control tape between the branched gaps. Sectional view of the strip.
  • the immunochromatographic strip 70 of FIG. 7A contains an adhesive plastic support 71 and a liquid sample to be analyzed attached to an upper surface of the adhesive plastic support and is single upstream ( ⁇ ).
  • a sample pad 72a having an inlet area and a conjugate that specifically binds to an analyte contained in the liquid sample introduced from the sample pad, and is folded with the sample pad at a downstream end of the sample pad.
  • the conjugate pad 72b is positioned, a signal detector 73b that detects whether an analyte is present in the liquid sample, and whether the liquid sample has moved to the absorbent pad regardless of the presence or absence of an analyte.
  • a signal detection pad 72c which is located in contact with the conjugate pad at a downstream end of the conjugate pad, including a control portion 73a, and a signal detection
  • An immunochromatography strip 70 comprising an absorbent pad 72d positioned at a downstream end of the signal detecting pad, the absorbing pad 72 d absorbing a liquid sample after completion of the reaction, wherein the sample pad 72a.
  • the downstream side has a form branched into the upper layer (72a ') and the lower layer (72a "), located between the branched gap of the upper layer (72a') and lower layer (72a") of the sample pad 72a It further includes a control tape 72f of the material that does not pass through.
  • the control tape 72f serves to block the liquid sample introduced into the branched upper layer 72a 'of the sample pad from entering the conjugate pad 72b, and the injected sample is moved to the conjugate pad 72b.
  • the amount of analyte used can be controlled.
  • a mixture of the liquid sample and the buffer is first introduced into the buffer and the single input portion 75a of the sample in the sample pad 72a of the immunochromatographic assay strip 70 of FIG. 7A.
  • the injected liquid sample is divided into an upper layer basin and a lower layer basin of the sample pad 72a, and the liquid sample transferred to the upper layer basin 72a 'is controlled by an adjustment tape 72f located between the upper layer basin and the lower layer basin.
  • the sample pad 72a does not flow into the conjugate pad 72b which is located in contact with the sample pad 72a, and stays in the branched upper layer 72a 'of the sample pad.
  • the liquid sample moved to the lower layer basin 72a "is introduced into the conjugate pad 72b which is located in contact with the end of the sample pad, thereby performing an immunodetection reaction.
  • the branched sample pad 72a Substantially the amount of the sample to be used analyte is reduced compared to the amount of the liquid sample injected into the sample input, so that the high concentration of the analyte shows the effect of dilution, the prozone effect can be blocked.
  • FIG. 7B A cross-sectional view of the immunochromatography kit containing the immunochromatographic assay strip of FIG. 7A in the upper housing 74b and the lower housing 74a is shown in FIG. 7B.
  • Mouse anti-hemoglobin A1c monoclonal antibody, mouse anti-hemoglobin monoclonal antibody, and goat anti-rabbit IgG antibody were diluted with phosphate buffer containing trehalose and then injected into the signal detection portion of the nitrocellulose pad (signal detection pad). It sprayed in the test
  • the signal detection pad (25X300 mm) 42c prepared in step A was attached and absorbed pad (18X300) 42d at a distance of 15 mm from the downstream end of the adhesive-coated polypropylene plate support (60X300 mm) 41.
  • the conjugate pad 42b prepared in step B is attached to the upstream direction to overlap 2 mm with the signal detection pad 42c and the adjustment tape (Scotch Magic Tape, 3M) cut into 5X300, 6X300, 7X300, 8X300, 9X300 mm, 10X300 mm, 11X300 mm and cut them downstream of the conjugate pad 42b and 0 mm, 1 mm, 2 mm, 3 5 mm, 4 mm, 5 mm, 6 mm and 5 mm upstream of the signal detection pad are covered, and a sample pad (0.5X22X300 mm) is attached from the upstream end of the support to the downstream end of the conjugate pad 42b.
  • An immunochromatographic strip was prepared.
  • An immunochromatography kit was prepared by cutting the laminated sheet to 4 ⁇ 6 mm and mounting it in a housing having respective openings at the portions corresponding to the buffer loading section 45a 'and the sample loading section 45a ".
  • Test kits adjusted to 0 mm, 1 mm, 2 mm, 3 mm, 4 mm, 5 mm, and 6 mm were prepared using 5 microliters of standard blood containing 8% hemoglobin A1c. After administration to 100 microliters of buffer was added to the buffer input unit (45a ') 20 minutes after the results were read with a rapid diagnostic test reader, the results are shown in FIG.
  • Figure 9 shows the concentration (w / v%) of hemoglobin Alc in the liquid sample according to the length overlapping with the downstream end of the conjugate pad of the control tape in the kit comprising an immunochromatography strip according to an embodiment of the present invention It is a graph showing the result of detection.
  • the rapid diagnostic test reader was used to quantify the density of the band formed as a result of the experiment, and was adjusted to indicate the relative percentage of the hemoglobin A1c band based on the band density of normal hemoglobin 100%.
  • the portion where the adjusting tape overlaps the downstream side of the conjugate pad 42b is 0 mm, 1 mm 2 mm, 3 mm 4
  • the concentrations of Alc were found to be 150%, 60.4%, 27.6%, 17.3% 13.7%, 9.5% and 8.2%.
  • the conjugate pad 42b was not superimposed by the control tape 1 (0 mm)
  • normal hemoglobin was overdosed, and the normal band density was weaker than that of hemoglomine A1c due to the prozone effect.
  • the value was lowered, and when the conjugate was protected and controlled at 6 mm, 8.2% was similar to 8% of the standard product.
  • the signal detection pad (25X300 mm) 42c prepared in step A was attached at a downstream end of the adhesive-coated polypropylene plate support (60X300 mm) at a distance of 15 mm, and the absorbent pads 18X300 and 42d were signaled. Attached in the downstream direction to overlap with the detection pad 42c, the conjugate pad 42d prepared in step B was attached in the upstream direction so as to overlap 2 mm with the signal detection pad 42c, and the adjustment tape 11X300 mm. , Scotch Magic Tape, 3M), cover the conjugate pad downstream and 6 mm and the upstream side of the signal detection pad 5 mm, respectively, and the sample pad (0.5X22X300 mm) from the upstream end to the conjugate pad 42b.
  • Immunochromatography kit was prepared by cutting the finished strip to 4 ⁇ 6 mm and mounted in a housing having a respective inlet to the portion corresponding to the buffer inlet (45a ') and the sample inlet (45a ").
  • a conjugate pad was prepared by dispensing mouse monoclonal anti-human IgG, IgM antibody and goat anti-rabbit IgG antibody into nitrocellulose pads and conjugating inactivated dengue virus to gold particles in the same manner as in Example 1.
  • the signal detecting pad 52c, the absorbing pad 52d, and the conjugate pad 52b are attached to the support 51, and the conjugate pad is formed with a second adjusting tape 52f " Cover the downstream end 2 mm of 52b and the upstream end 5 mm of the signal detection pad 52c, and attach the second sample pad of 0.2 X 9 X 300 mm 1 mm overlapping the upstream end of the conjugate.
  • Immunochromatography kit was prepared by cutting the finished strip to 4 ⁇ 6 mm and mounted in a housing having a respective inlet to the portion corresponding to the buffer inlet (55a ') and the sample inlet (55a ").
  • Example 2 In the same manner as in Example 1, a mouse monoclonal anti-heartworm antiantibody antibody and a goat anti-rabbit IgG antibody were dispensed onto nitrocellulose pads, and another mouse monoclonal anti-heartworm antiantibody antibody was conjugated to gold particles to prepare a conjugate pad. It was. As in Example 1, the signal detecting pad 52c, the absorbing pad 52d, and the conjugate pad 52b are attached to the support 51, and the second sample pad 52a "of 0.2 X 9 X 300 is conjugated.
  • Immunochromatography kit (50a) was prepared by cutting the completed strip to 4 X 6 mm and mounted in a housing having respective inlets at the portions corresponding to the buffer inlet (55a ') and the sample inlet (55a "). .

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Abstract

본 발명은 접착성 플라스틱 지지체, 검체패드, 컨쥬게이트 패드, 신호검출패드, 및 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서, 상기 검체패드의 검체투입부와 컨쥬게이트 패드 사이에 위치하는, 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프를 더 포함하며, 상기 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절될 수 있는, 면역크로마토그래피 분석용 스트립 및 그 스트립이 장착된 키트를 제공한다.

Description

프로존 효과를 회피할 수 있는 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트
본 발명은 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트에 관한 것으로서, 구체적으로는 면역크로마토그래피 스트립에 가해지는 분석물질 중 컨쥬게이트 패드의 컨쥬게이트와 반응하여 사용분석물질이 되는 양을 조절하거나, 컨쥬게이트 패드 중의 컨쥬게이트가 시간차를 두고 이동되는 것을 가능하게 하여, 프로존 현상을 회피할 수 있는 면역크로마토그래피 스트립 및 그것을 포함하는 키트에 관한 것이다.
신속진단검사(Rapid diagnostic test, DRT)는 면역크로마토그래피 분석, 래피드 키트 분석 등 다양한 명칭으로 불리며, 주된 구성이 지지체, 검체패드, 컨쥬게이트 패드, 신호검출패드, 및 흡수패드를 포함하는 면역 크로마토그래피 스트립에 의한 분석방법으로서, 사용자가 생물학적 또는 화학적 샘플로부터 분석 물질을 특별한 기술이나 장비 없이 1-100 마이크로 리터의 샘플로 2-30분 사이에서 간단하게 검출할 수 있다. 신속진단검사는 생물학적 물질 또는 화학적 물질이 서로 특이적으로 부착하는 성질을 이용하여 분석 물질을 단시간에 정성 및 정량적으로 검사할 수 있는 방법으로, 신속진단검사는 단순히 면역 크로마토그래피 스트립을 사용하거나, 이와 같은 면역 크로마토그래피 스트립을 플라스틱 하우징 내부에 장착한 형태의 면역 크로마토그래피 키트가 사용된다. 단순히 면역 크로마토그래피 스트립을 사용할 때는 시료를 담은 용기가 별도로 필요하지만 하우징에 내장된 면역 크로마토그래피 키트는 하우징에 준비된 투입구에 시료를 직접 투입함으로서 별도의 실험용기가 필요 없어 사용하기 간편하다.
신속진단검사는 간편성 및 신속성 측면에서 최근까지 개발된 검출 방법 중 가장 진보된 분석 키트 중 하나로서 감염성 병원체의 항원 또는 항체, 암 인자, 심장 마커 등 다양한 질병원인 물질을 진단하는데 유용하게 사용한다.
이와 같은 면역크로마토그래피 스트립 또는 이를 포함하는 면역크로마토그래피 키트를 이용한 분석을 통해, 사람 또는 동물의 전혈, 혈장, 혈청, 눈물, 침, 소변, 콧물, 체액 등의 검체를 이용하여, C형 간염, A형 간염 B형 간염, 인플루엔자바이러스, 조류독감 바이러스, 로타 바이러스, 에이즈, 매독, 클라미디아, 말라리아, 장티프스, 위궤양 원인균, 결핵, 사스, 뎅기열, 나병 등의 원인 병원체 및 항체의 유무 등을 검사할 수 있다. 또한, 이들은 임신, 배란, 암 표지자, 심장병 표시자, 등의 존재를 확인하는 용도로 이용될 수 있으며, 대마초 필로폰, 히로뽕, 아편, 암페타민류, 모르핀류, 코카인 등의 마약류 투여 여부를 확인하는데 이용될 수 있고, 나아가 리신, 탄저, 부루셀라, 보툴리늄, 벡시니아, 살모넬라, 콜레라, Staphylococcal enterotoxin B, 툴라레미아 등의 검출에 의한 생물 테러 확인에 이용될 수 있으며, 식품으로부터 살모넬라, 비브리오 캠필로박터, 장출혈성 대장균, 여시니아 등의 식중독균을 확인하는데 이용될 수 있는 등의 다양한 분야에서의 신속한 검사와 진단에 사용될 수 있다.
도 1은 종래기술에 따른 면역크로마토그래피 키트의 대표적인 예를 도시한 단면도이다(특허문헌 1 및 2).
도 1의 면역 크로마토그래피 키트(10A)은 면역 크로마토그래피 스트립(10)을 포함하며, 면역 크로마토그래피 스트립(10)은 접착성 플라스틱 지지체(11); 및 상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 배열되는, 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼 및 검체 단일투입부(15a)를 구비하는 검체패드(12a), 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측 말단에서 검체패드와 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드(12b), 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부(13b)와, 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부(13a)를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드(12c), 및 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드(12d)를 포함한다.
상기 검체패드(12a)는 분석대상이 되는 액상 검체(또는 분석시료)를 흡수하고 액상 검체의 균일한 유동을 보장한다. 상기 컨쥬게이트 패드(12b)는 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 유동성 컨쥬게이트를 포함하고 있으며, 따라서 검체패드(12a)를 통해 도입된 액상 검체가 컨쥬게이트 패드(12b)를 통과하면서 분석물질과 유동성 컨쥬게이트 사이의 특이적 결합이 일어난다. 검체패드(12a) 및 컨쥬게이트 패드(12b) 다음의 위치에 배치되는 신호검출패드(12c)는 통상 서로 어느 정도의 거리를 갖도록 떨어져 위치하는 신호검출부(13b)와 대조부(13a)을 포함한다. 신호검출부(13b)은 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 확인하기 위한 영역이며, 대조부(13a)은 액상 검체가 신호검출부(13b)를 정상적으로 통과하였는지의 여부를 확인하기 위한 영역이다. 흡수패드(12d)는 신호검출패드(23)를 통과한 액상 검체를 흡수하며, 면역 크로마토그래피 스트립 상에서 액상 검체의 모세관 유동을 도와준다. 정리하면, 면역 크로마토그래피 스트립(10)는 지지체(11) 상에 상류측에서 하류측으로 검체패드(12a), 컨쥬게이트 패드(12b), 신호검출패드(12c) 및 흡수패드(12d)가 부착되어 있으며, 액상 검체를 검체패드(12a)로부터 신호검출패드(12c)를 경유해, 흡수패드(12d)까지 이동시키고, 신호검출패드(12c)에서의 신호검출을 통해 면역분석을 수행한다.
액상검체에 적당량의 분석물질이 존재하면 컨쥬게이트와 분석물질이 특이적으로 결합한 복합체가 유동하면서 신호 검출부(13b)에 부착되어있는 특이적 물질이 분석물질과 특이적으로 반응하여 검출영역에 고정되어 결과를 보여준다, 이때 컨쥬게이트가 금 입자인 경우는 보라색, 빨간색 또는 검정색으로 제조자의 방식에 따라 색깔이 구별되게 밴드를 형성하여 육안으로 확인할 수 있다. 검체에 분석물질이 존재하지 않으면 검출부는 아무런 표시가 나타나지 않는다. 궁국적으로 표현된 결과는 (금입자-특이반응물질 컨쥬게이트)+분석물질+(특이반응물질 in 신호검출부)의 복합체로로서, 분석물질 각각은 특이반응 물질과 결합하여 반응의 브릿지 역할을 한다. 그러나, 검체에 분석물질이 고농도로 존재하여 모든 컨쥬게이트의 특이반응물질과 반응하고 그래도 남아서 검출영역의 모든 특이반응물질도 포화시키면 분석물질이 브릿지 역할에 실패하여 컨쥬게이트와 검출부가 연결되지 않아 분석물질이 존재함에도 불구하고 검출부에 아무런 표시가 나타나지 않거나 미약하게 나타난다. 이러한 현상을 프로존(prozone) 또는 훅크(hook) 효과라 한다.
따라서, 도 1에 도시된 면역 크로마토그래피 스트립은 비교적 낮은 농도의 분석물질을 가진 샘플에 적용되며 프로존을 일으키는 고농도의 샘플을 적용하려면 검출영역의 특이반응물질과 컨쥬케이트를 과량 첨가해야하나 비용이 증가할 뿐만 아니라 스트립의 구조상 첨가량를 무한정 올릴 수도 없다. 다른 방법으로 별도로 완충용액과 희석용기, 파이펫 등이 제공되어야 하며 사용자는 여러 번의 실험 동작을 추가하여 샘플을 희석해야 하고 또한 희석농도 및 방법 등을 기억해야하므로 사용에 번거로움이 있다. 이러한 프로존 효과를 회피하기 위한 것으로서, 도 2 및 도 3에 도시한 면역 크로마토그래피 키트가 개발되었다.
도 2 및 도 3은 종래에 프로존 효과를 차단하기 위한 면역 크로마토그래피 키트의 대표적인 예를 도시한 단면도이다(SD BIOLINE Dengue IgG/IgM, Standard diagnostic, inc, Korea).
도 2의 면역 크로마토그래피 키트는 검체 투입부(25a")를 컨쥬게이트 패드의 하류측 이후에 위치시킴으로써, 검체 투입부(25a")에 검체를 투입한 후 바로 버퍼를 버퍼투입부(25a')에 가하면, 검체가 먼저 신호검출부(23b)에 도착하고 그 후에 컨쥬게이트가 도착하여 면역반응이 이루어질 수 있다. 이와 같이 하면, 검체 투입부(25a")에 먼저 검체를 투입하여 검체의 분석물질이 컨쥬게이트와 접촉하기 전에 신호검출패드에 퍼져 자유로운 상태로 존재하고 이들 중 신호검출부(23b)에 도달한 분석물질은 검출영역의 특이반응물질과 반응하여 고정되고 컨쥬게이트와 브릿지 반응하기를 기다린다. 버퍼 투입부(25a')에 버퍼를 투입하면 버퍼에 의해 컨쥬게이트가 유동화 되고 신호검출패드(22c)로 이동하는데 이때 컨쥬게이트 중 많은 량이 컨쥬게이트 패드(22b)와 신호검출부(23b) 사이에 존재하는 많은 자유로운 분석물질과 반응하여 유동하지만 신호검출부(23b)의 특이반응물질과 반응하지 못하고 통과하여 소실된다. 자유로운 분석물질과 반응하지 않은 컨쥬게이트만이 신호검출부(23b)의 특이반응물질에 결합된 분석물질과 반응하여 신호가 발생되기 때문에 발색시간이 늦고 아직도 과량의 자유로운 분석물질에 의해 프로존 현상에 자유롭지 못하여 발색되지 않거나 약하게 발색된다. 또한, 도 2의 면역 크로마토그래피 키트는 전혈은 사용할 수 없고 혈장과 혈청만 사용할 수 있다.
도 3은 도 2에 면역 크로마토그래피 키트의 검체 투입부(35a")에 위치한 신호 검출패드 위에 혈구를 거를 수 있는 필터(32e)를 장착시켜 놓은 것이다. 이러한 필터에 의해, 혈장, 혈청 이외에 전혈에 대해서도 사용할 수 있는 장점이 있다.
도 2 및 도 3에 도시한 면역크로마토그래피 키트는 도 1에 도시한 면역크로마토그래피 키트보다 진일보한 키트이지만 다음과 같은 문제점을 지니고 있다.
첫째, 초기에 유동하는 컨쥬게이트가 신호검출패드 중에 퍼져 있는 자유로운 분석물질과의 반응으로 인해 무용지물이 되어 뒤따르는 컨쥬게이트 만이 결과를 나타내기 때문에 프로존 효과를 완전히 극복하지 못 할 뿐만 아니라 결과를 보여주는 시간이 15-30분으로 매우 느리다. 둘째, 분석물질이 두 개 이상이고 그중 고농도 분석물질과 저농도 물질이 혼합되어 있을 경우, 고농도 분석 물질은 문제가 되지 않지만 저농도의 분석물질은 버퍼에 포함된 감도 증강물질의 도움을 받지 못하여 진단에서 검출해야하는 최저 검출한계를 검출하지 못하여 다중검사가 불가능하다. 셋째, 특정 분석물질이 고농도인 검체가 투여된 신호검출패드에 컨쥬게이트가 도달하면 분석물질과 컨쥬게이트가 빠른 속도로 반응하여 커다란 네트워크를 형성하며 거대 분자가 되어 다공성인 신호검출패드를 통과하지 못하고 신호검출부에 도달하지 못하여 분석물질이 없는 것처럼 결과를 보여준다.
따라서, 프로존 효과를 효과적으로 회피할 수 있으면서도, 분석 속도가 빠르며 다중 검사가 가능한 면역크로마토그래피 스트립 및 키트의 개발이 필요하다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
1. US 5,714,389
2. US 5,075,078
이에 본 발명자들은, 프로존 효과를 회피할 수 있는 보다 바람직한 면역크로마토그래피 스트립의 개발을 위해 예의 연구한 결과, 사용분석물질이 되는 양을 효과적으로 조절할 수 있어 프로존 효과를 회피할 수 있을 뿐만 아니라, 고농도와 저농도의 분석물질이 동시에 존재하는 검체에서 하나의 면역 크로마토그래피 키트에서 동시에 검사가 가능하도록 하는 면역크로마토그래피 스트립을 착안하게 되어 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 검체 중에 컨쥬게이트 패드 중의 컨쥬게이트와 반응하게 되는 사용분석물질의 양을 조절함으로써 프로존 효과를 차단할 수 있는, 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 면역크로마토그래피 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 검체 중에 컨쥬게이트 패드 중의 컨쥬게이트와 반응하게 되는 사용분석물질의 양을 조절함으로써 프로존 효과를 차단할 수 있을 뿐만 아나라, 2 단계의 면역검출반응이 가능하여 고농도 내지 저농도에 걸친 넓은 범위를 검출할 필요가 있는 동일 물질이나, 서로 다른 물질 2 가지 이상을 하나의 면역크로마토그래피 스트립에서 가능한 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트를 제공하는 것이다.
본 발병의 또 다른 목적은 검사에 원료물질로 사용되는 특이 반응 물질의 양을 줄여도 프로존 효과를 회피할 수 있게 하여 가격 경쟁력이 높은 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트를 제공하는 것이다.
본 명세서에서 사용된 용어의 정의는 다음과 같다.
패드가 "인첩"하여 위치한다는 것은 서로가 인접하여 위치하되, 각각의패드의 말단부가 중첩하여 위치한다는 것을 의미한다.
"상류측"이란 버퍼의 이동에 있어서 시간적으로 먼저 도달하는 부위를 말하는 것으로서, 버퍼 투입부에 가까운 쪽의 부위를 의미하는 것이다.
"하류측"이란 버퍼의 이동에 있어서 시간적으로 나중에 도달하는 부위를 말하는 것으로서, 버퍼 투입부에서 멀리 떨어진 쪽의 부위를 의미하는 것이다.
"중류측"이란 상류측과 하류측의 중간 부위를 의미하는 것이다.
"사용분석물질"이란 검체투입구에 투입된 분석물질 중 실험반응에 실제적으로 사용된 분석물질을 의미하는 것이다.
"불용분석물질"이란 검체투입구에 투입된 분석물질 중 실험반응에 사용되지 않고 특정지역에 고립된 분석물질을 의미하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 측면은
a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 배열되는,
b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼투입부 및 하류측에 검체투입부를 구비하는 검체패드,
c) 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측의 하방에 위치하는 컨쥬게이트 패드,
d) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
e) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
f) 상기 검체패드의 검체투입부와 컨쥬게이트 패드 사이에 위치하는, 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프를 더 포함하며,
상기 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절될 수 있는, 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 제공한다.
상기 조절 테이프의 도입으로 검체투입부에 투입된 액상 검체는 소정의 양이 조절 테이프의 상단에 존재하는 검체패드 하류측에 존재하는 불용분석물질이 되고, 나머지 소정의 양이 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 겹치지 않는 부분을 통해 컨쥬게이트 패드로 확산되어 사용분석물질이 된다. 또한, 액상 검체의 투입 후 바로 버퍼투입부에 버퍼를 투입하게 되면, 검체패드를 통해 버퍼가 검체패드의 하류측으로 이동하여 상기 하류측에 존재하는 불용분석물질이 검체패드의 하류측 말단으로 고정되며, 검체패드를 통과해 컨쥬게이트 패드로 통과한 버퍼는 상기 컨쥬게이트 패드로 확산된 사용분석물질의 신호검출패드로의 이동을 촉진시킨다. 이와 같은 원리에 의해, 조절 테이프는 검체 투입부에 투입된 검체 중에 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있으며, 따라서 프로즌 효과를 회피할 수 있게 된다.
본 발명의 다른 일 측면은
a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 부착되어 있는,
b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼투입부 및 하류측에 검체투입부를 구비하는 제 1 검체패드,
c) 상기 제 1 검체패드의 중류측의 하방에 존재하고, 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도가 늦은 제 2 검체패드,
d) 상기 제 1 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 제 2 검체패드 하류측 말단에서 제 2 검체패드와 인첩하여 시작하여 상기 제 1 검체패드의 하류측의 하방에까지 위치하는 컨쥬게이트 패드,
e) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
f) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측에 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
g) 상기 컨쥬게이트 패드의 상류측이 제 1 검체패드와 접하는 부분에 위치하여 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 1 조절 테이프를 더 포함하며,
상기 제 1 조절 테이프는 컨쥬게이트 패드의 상류측에 존재하는 컨쥬게이트가 검체투입부에 투입된 액상 검체와 반응하는 것을 차단하는 역할을 하여,
투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제 1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제 2 분석물질의 검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질인 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 제공한다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 상기 1 차 면역검출반응에 사용되는 액상 검체가 검체의 양이 조절될 필요 없이 모두 사용되어야 하는 경우에 필요한 면역크로마토그래피 분석용 스트립이다. 상기 검체 투입부에 투입된 액상 검체는 검체 전체가 사용분석물질로서 컨쥬게이트 패드 쪽으로 확산된다. 검체 투입부에 검체를 투입한 후 바로 투입된 버퍼의 일부는 사용분석물질 및 컨쥬게이트를 신호검출부까지 이동시켜 1차 면역검출반응이 진행되어 제 1 분석물질의 검출이 이루어진다. 이때, 제 2 분석물질은 컨쥬게이트와 결합하거나/하지 않은 형태로 신호검출부의 특이반응물질과 결합된 상태가 된다. 그런 다음, 샘플패드 2의 존재로 인해 느리게 확산되는 나머지 일부 버퍼에 의해, 조절테이프의 하방에 존재하여 컨쥬게이트 패드 중에 보호되었던 컨쥬게이트가 신호검출패드 쪽으로 진행하게 되어, 이미 신호 검출부의 특이반응물질과 결합된 제 2 분석물질에 의해 브릿지되는 2차 면역검출반응이 진행되어 신호검출부에서 제 2 분석물질의 검출이 이루어진다. 상기 제 1 분석물질 및 제 2 분석물질은 서로 동일하거나 다를 수 있다. 제 2 분석물질이 제 1 분석물질에 비해 농도가 높아 제 1 분석물질의 면역검출반응 시 면역검출반응이 프로존 효과에 의해 발현되지 않아도, 추후 2차 반응은 분석물질과 반응하지 않은 컨쥬게이트가 신호검출부로 이동하여 면역검출반응이 이루어지므로 신호검출부에서 제 2 분석물질의 발현이 나타날 수 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 상기 제 1 검체패드의 검체투입부와 컨쥬게이트 패드 하류측 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 2 조절 테이프를 더 포함함으로써, 상기 컨쥬게이트 패드와 제 2 조절테이프가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절되고, 투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제 1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제2 분석물질의 면역검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질인 면역크로마토그래피 분석용 스트립일 수 있다.
상기 검체투입부에 투입된 액상 검체는 제 2 조절 테이프에 의해 일부가 사용분석물질로서 컨쥬게이트 패드 쪽으로 확산된다. 그런 다음, 검체투입부에 검체를 투입한 후 바로 투입된 버퍼는 그중 일부가 사용분석물질 및 컨쥬게이트를 신호검출부까지 이동시키며 1차 면역검출반응이 진행되어 제 1 분석물질의 검출이 이루어진다. 이때, 제 2 분석물질은 컨쥬게이트와 결합하지 않은 형태로 신호검출부의 특이반응물질과 결합된 상태가 된다. 그런 다음, 제 2 검체패드의 존재로 인해 느리게 확산되는 나머지 일부의 버퍼에 의해, 제 1 조절 테이프의 하방에 존재하여 컨쥬게이트 패드 중에 보호되었던 컨쥬게이트가 신호검출패드 쪽으로 진행하게 되어, 이미 신호 검출부의 특이반응물질과 결합되어 있는 제 2 분석물질과 2차 면역검출반응이 진행되어 제 2 분석물질의 검출이 이루어진다. 상기 제 1 분석물질 및 제 2 분석물질은 서로 동일하거나 다를 수 있다. 제 2 분석물질이 제 1 분석물질에 비해 농도가 높아 제 1 분석물질의 면역검출반응 시 프로존 효과에 의해 발현되지 않아도, 추후 2차 반응은 분석물질과 반응하지 않은 컨쥬게이트가 신호검출부로 이동하여 이미 신호검출부의 특이반응물질과 결합된 제 2 분석물질에 의해 브릿지되는 2차 면역검출반응이 이루어지므로 신호검출부에서 제 2 분석물질의 발현이 나타날 수 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은, 상기 컨쥬게이트 패드가 제 1 조절 테이프의 하방에 위치하여 액상 검체가 도달하지 않는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 제 2 조절 테이프의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하는 제 2 컨쥬게이트 패드로 분리되며, 상기 분리는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 제 2 컨쥬게이트 패드 사이에 컨쥬게이트 분리패드가 삽입되어 이루어지며, 상기 컨쥬게이트 분리패드는 컨쥬게이트 패드에 비해 액상 검체의 유동속도가 현저히 늦은 패드인 면역크로마토그래피 분석용 스트립일 수 있다. 상기 컨쥬게이트 분리패드의 도입으로, 검체 투입부에 액상 검체를 도입 시 액상 검체가 제 1 컨쥬게이트 패드 쪽으로 확산되어 제 1 컨쥬게이트 패드에 존재하는 컨쥬게이트와 반응할 수도 있게 되는 우려를 막을 수 있다.
상기 검체는 전혈, 혈장, 혈청, 눈물, 침, 소변, 대변, 콧물, 체액 등 사람 및 동물 유래 물질, 식물 유래 물질, 환경물질, 배양액 및 배양액 유래물질 등이 사용될 수 있다. 분석물질은 펩타이드, 항체, 항원 등의 단백질, 탄수화물, 화학물질 등이 사용될 수 있다.
상기 제 1 검체패드 및 제 2 검체패드는 분석물질에 대한 선택성을 보다 향상시키기 위해 또는 상기 액상 검체에 포함될 수 있는 간섭 물질에 의한 영향을 최소화하기 위해 폴리머, 펩다이드, 단백질, 탄수화물, 또는 비누 등으로 처리할 수 있고, 필터링의 기능을 추가로 가질 수 있다. 예를 들면, 전혈을 액상 검체로 사용할 경우 적혈구를 걸러주는 역할을 할 수 있는 좀 더 조밀한 패드를 쓰거나, 이들을 걸러주는 역할을 돕는 보조물질을 추가로 함유할 수 있다. 필요할 경우, 상기 검체패드의 상류측에 분석물질과 컨쥬게이트 사이의 반응을 증가시키거나 또는 간섭물질에 의해 영향을 배제할 수 있는 물질을 함유하는 보조패드를 추가로 구비할 수 있다. 상기 검체패드는 셀룰로오스, 아크릴 섬유, 레이온, 폴리에스터 섬유, 유리섬유, 울섬유, 실크섬유, 면사, 아마섬유 또는 펄프로 제조되거나 한 종류 이상이 혼합되어 제조될 수 있다.
상기 제 2 검체패드는 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도를 늦출 수 있어야 하며, 이를 위해 사용된 소재의 조밀도가 높거나 입자의 크기가 더 세밀하거나 소수성 성질이 강하거나 두께가 얇은 것을 선택할 수 있다. 이러한 선택 이외에, 상기 제 1 검체패드 및 제 2 검체패드를 동일한 소재로 하면서, 제 2 검체패드를 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도를 늦출 수 있는 물질, 예를 들어 소혈청알브민, 오브알브민 등의 단백질, 아미노산, 펩타이드, 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리비닐알콜(Polyvinylalcohol), 폴리비닐피롤리돈(Polyvinylpyrrolidone), 글리세롤(Glycerol), 폴리소르베이트(polysorbate)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 물질을 용출용액 물질과 혼합하여 처리함으로써 제조될 수 있다. 상기 제 2 검체패드는 연장된 컨쥬게이트 패드로 대용할 수 있다. 다만, 컨쥬게이트 패드의 하류측에만 컨쥬게이트가 함유되어 있어야 한다.
상기 검체는 전혈, 혈장, 혈청, 눈물, 침, 소변, 대변, 콧물, 체액 등 사람 및 동물 유래 물질, 식물 유래 물질, 환경물질, 배양액 및 배양액 유래물질 등이 사용될 수 있다. 분석물질은 펩타이드, 항체, 항원 등의 단백질, 탄수화물, 화학물질 등이 사용될 수 있다.
상기 컨쥬게이트 패드는 유리섬유, 폴리에틸렌섬유 등으로 제조될 수 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립에서, 상기 컨쥬게이트 분리패드는 액상 검체의 컨쥬게이트 패드를 통한 확산을 늦출 수 있는 임의의 소재로 이루어질 수 있으며, 예를 들어 셀룰로오스, 아크릴 섬유, 레이온, 폴리에스터 섬유, 유리섬유, 울섬유, 실크섬유, 면사, 아마섬유 또는 펄프로 제조되거나 한 종류 이상이 혼합되어 제조될 수 있다. 또한 이들 소재에 소혈청알브민, 오브알브민 등의 단백질, 아미노산, 펩티드, 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리비닐알콜(Polyvinylalcohol), 폴리비닐피롤리돈(Polyvinylpyrrolidone), 글리세롤(Glycerol), 폴리소르베이트 계면활성제(Polysorbate detergents)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 물질을 용출용액 물질과 혼합하여 처리함으로써 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 신호검출패드는 다공성 멤브레인패드로 구성되며, 니트로셀룰로오스, 셀룰로오즈, 폴리에틸렌, 폴리에테르설폰, 또는 나일론 등으로 제조될 수 있다. 신호 검출부는 1 개 이상 포함될 수 있다.
상기 흡수패드는 버퍼의 이동을 촉진시킬 수 있는 임의의 패드일 수 있으며, 예를 들어 펄프, 셀룰로즈, 또는 면섬유 등으로 제조될 수 있다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립에서 상기 제 1 조절테이프 및 제 2 조절 테이프를 포함한 상기 조절 테이프는 액상 검체를 투과하지 않는 임의의 소재로 이루어질 수 있으며, 예를 들어 아세테이트(acetate), 폴리에스테르(polyester), 폴리올레핀(polyolefin), 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리스타이렌(polystyrene), 비닐(vinyl), 폴리이미드(polyimide), 알루미늄 포일(aluminum foil), 또는 반사 필름(retro-reflective film) 일 수 있고, 일면 또는 양면이 고무, 아크릴, 또는 실리콘 계열 등의 점착제가 도포된 것이 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 검체투입구 및 신호검출영역을 제외한 전면부를 보호 테이프로 부착시킨 형태로서, 면역크로마토그래피 분석용 스트립으로 사용될 수 있다. 상기 보호 테이프는 투명, 반투명, 또는 불투명의 임의의 테이프가 이용될 수 있다. 상기 보호 테이프에 의해 면역크로마토그래피 분석용 스트립의 구조를 안정하게 유지할 수 있다. 추가로, 상기 신호검출영역은 신호보호테이프를 부착시킬 수 있다. 상기 신호보호 테이프는 신호검출영역에 나타난 신호를 훼손시키지 않고 일정 시간 보호하기 위한 역할을 수행하며, 신호를 확인하기 위해 투명 테이프를 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 일 측면은
a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 부착되어 있는,
b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼 및 검체 단일 투입부를 구비하는 검체패드,
c) 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측 말단에서 검체패드와 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드,
d) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
e) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
f) 상기 검체패드는 하류측이 상부층과 하부층으로 분지된 형태를 가지며,
g) 상기 검체패드의 상부층과 하부층의 분지된 틈 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프를 더 구비하며,
상기 조절 테이프는 검체패드의 분지된 상부층으로 유입된 액상 검체가 컨쥬게이트 패드로 유입되는 것을 차단하는 역할을 하여, 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절될 수 있는 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 제공한다.
상기 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 단일 투입부에 액상 검체를 투입한 후 버퍼를 투입하거나, 액상 검체 및 버퍼의 혼합물을 투입할 수 있으며, 그 액상 검체는 검체패드의 분지된 상부층 및 하부층 모두로 분산되며, 상부층으로 분산된 액상 검체는 조절 테이프에 의해 컨쥬게이트 패드로 유입되는 것이 차단되어, 결국 하부패드로 이동한 액상 검체만이 면역검출반응에 이용되어, 프로존 효과가 차단될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 수납하는 하부 하우징과, 상기 하부 하우징과 상보적으로 결합하는 상부 하우징으로 구성된 면역크로마토그래피 키트에 있어서, 상기 키트에 수납된 면역크로마토그래피 스트립이 상기 열거한 본 발명의 모든 측면에 따른 면역크로마토그래피 스트립 중 하나인 것을 특징으로 하는 면역크로마토그래피 키트를 제공한다.
상기 본 발명들에 따른 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트의 컨쥬게이트의 선택은 분석물질의 종류에 따라 적절히 선택할 수 있다. 상기 컨쥬게이트는 금속입자, 특히 금입자, 라텍스 입자, 형광물질, 방사선물질 또는 효소 등에 의해 라벨링 될 수 있다.
상기 본 발명들에 따른 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트의 신호검출의 판독은 라벨링되는 컨쥬게이트의 종류에 따라 육안으로 판독하거나 광학, 전기화학, 또는 전기전도도 등의 방법으로 수행할 수 있다.
상기 본 발명들에 따른 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트는 사람 또는 동물의 전혈, 혈장, 혈청, 눈물, 침, 소변, 콧물, 체액 등의 검체를 이용하여, C형 간염, A형 간염, B형 간염, 인플루엔자바이러스, 조류독감 바이러스, 로타 바이러스, 에이즈, 매독, 클라미디아, 말라리아, 장티프스, 위궤양 원인균, 결핵, 사스, 뎅기열, 나병, 파보, 디스템퍼, 구제역, 부루셀라, 뉴캐슬, 심장사상충, 광경병 등의 원인 병원체 및 항체의 유무 등에 적용될 수 있다. 또한, 이들은 임신, 배란, 당뇨병 마커, 효소, 암 표지자, 심장병 표시자, 질병표시자, C 반응단백질, 대사물질, 지질, 탄수화물, 또는 단백질 등의 존재를 확인하며, 대마초 필로폰, 히로뽕, 아편, 암페타민류, 모르핀류, 코카인 등의 마약류 투여 여부, 리신, 탄저, 부루셀라, 보툴리늄, 벡시니아, 살모넬라, 콜레라, Staphylococcal enterotoxin B, 툴라레미아 등의 검출에 의한 생물 테러 확인하며, 식품으로부터 살모넬라, 비브리오 캠필로박터, 장출혈성 대장균, 여시니아 등의 식중독균, 바이러스, 항생제, 식품 첨가물을 확인하는 등의 다양한 신속 진단에 사용될 수 있다.
앞서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 면역크로마토그래피 및 키트는 검체패드 중의 검체 투입부와 컨쥬게이트 패드 사이에 액상 검체가 통과하지 않는 소재의 조절 테이프를 도입하여, 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있어 프로존 효과를 차단할 수 있다. 또한, 컨쥬게이트 패드의 하류측과 컨쥬게이트 패드 상류측 각각에 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프를 더 포함시키고, 제 1 검체패드의 중류측에 제2검체패드를 도입하여, 검사키트의 원료로 사용되는 특이 반응물질의 적은 량으로도 프로존 효과를 예방함과 동시에 농도의 범위가 다른 두가지 물질의 2 단계의 면역검출반응을 가능하게 할 수 있다.
도 1은 종래기술에 따른 면역 크로마토그래피 키트의 대표적인 예를 도시한 단면도이다.
도 2는 종래 기술에 따른 프로존 효과를 차단하기 위한 면역 크로마토그래피 키트의 대표적인 예를 도시한 단면도이다.
도 3은 종래 기술에 따른 프로존 효과를 차단하면서 전혈을 적용할 수 있는 면역 크로마토그래피 키트의 대표적인 예를 도시한 단면도이다.
도 4는 본 발명의 일 구현예 따른, 조절 테이프를 추가로 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5a는 본 발명의 일 구현예 따른, 제 1 조절 테이프 및 제 2 검체패드를 추가로 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5b는 본 발명의 일 구현예 따른, 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 및 제 2 검체패드를 추가로 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5c는 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서의 신속검사 시 검체 및 버퍼의 이동 양상을 모식적으로 나타낸 단면도이다.
도 5d는 본 발명의 일 구현예 따른, 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 제 3 조절 테이프, 및 제 2 검체패드를 추가로 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5e는 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 상부 하우징 및 하부 하우징에 수납한 면역 크로마토그래피 키트의 단면도이다.
도 5f는 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 검체 투입부 및 신호 검출영역을 제외한 전면부를 보호 테이프로 부착시킨 형태의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 버퍼 용기에 담가 검체 분석반응을 수행하는 형태의 단면도이다.
도 6a는 본 발명의 일 구현예 따른 도 5a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서 컨쥬게이트 분리패드를 더 포함하는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 6b는 본 발명의 일 구현예 따른 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서 컨쥬게이트 분리패드를 더 포함하는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 6c는 본 발명의 일 구현예 따른 도 5c의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서 컨쥬게이트 분리패드를 더 포함하는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 7a는 본 발명의 일 구현예 따른 검체패드의 하류측이 상부층과 하부층으로 분지된 형태를 갖고, 그 분지된 틈 사이에 조절 테이프를 더 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 7b는 도 8a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 상부 하우징 및 하부 하우징에 수납한 면역 크로마토그래피 키트의 단면도이다.
도 8은 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 도 4에 해당하는 면역크로마토그래피 스트립을 포함하는 키트에서 조절테이프의 컨쥬게이트 패드의 하류 말단과 중첩되는 길이에 따라, 액상 검체 중의 헤모글로빈 Alc의 농도(w/v%)를 검출한 결과를 도시한 그래프이다.
<도면의 주요부분에 대한 부호의 설명>
10A, 20A, 30A, 50A, 70A : 면역크로마토그래피 키트
40, 50a, 50b, 50d, 60a, 60b, 60c, 70 :면역크로마토그래피 스트립
11, 21, 31, 41, 51, 61, 71 : 접착성 플라스틱 지지체
12a, 22a, 32a, 42a : 검체패드
52a', 62a', 72a': 제 1 검체패드
52a", 62a", 72a": 제 2 검체패드
12b, 22b, 32b, 42b, 52b, 72b : 컨쥬게이트 패드
62b':제 1 컨쥬게이트 패드 62b" : 제 2 컨쥬게이트 패드
62g: 컨쥬게이트 분리패드
12c, 22c, 32c, 42c, 52c, 62c, 72c : 신호검출패드
12d, 22d, 32d, 42d, 52d, 62d, 72d : 흡수패드
32e : 필터
42f, 72f : 조절 테이프
52f', 62f' : 제 1 조절 테이프
52f", 62f" : 제 2 조절 테이프
52f"', 62f"' : 제 3 조절 테이프
13a, 23a, 33a, 43a, 53a, 63a, 73a : 대조부
13b, 23b, 33b, 43b, 53b, 63b, 73b : 신호검출부
14a, 24a, 34a, 54a, 74a: 하부 하우징
14b, 24b, 34b, 54b, 74b: 상부 하우징
15a, 75a : 버퍼 및 검체 단일 투입부
25a', 35a', 45a',55a', 65a': 버퍼 투입부
25a", 35a", 45a",55a", 65a" : 검체 투입부
15b, 25b, 35b, 45b, 55b, 65b, 75b : 신호검출영역
α: 검체패드의 상류측
β: 검체패드의 중류측
γ: 검체패드의 하류측
이하에서, 첨부된 도면들을 참조하여 본 발명의 일 구현예를 예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
도 4는 본 발명의 일 구현예에 따른, 조절 테이프를 추가로 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 4의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립은 접착성 플라스틱 지지체(41), 및 상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 배열되는, 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측(α)에 버퍼투입부(45a') 및 하류측(γ)에 검체투입부(45a")를 구비하는 검체패드(42a), 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측(γ)의 하방에 위치하는 컨쥬게이트 패드(42b), 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부(43b)와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부(43a)를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드(42c), 및 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드(42d)를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립(40)으로서, 상기 검체패드의 검체투입부(45a")와 컨쥬게이트 패드(42b) 사이에 위치하는, 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프(42f)를 더 포함한다.
상기 컨쥬게이트 패드(42b)와 조절 테이프(42f)가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절되어, 프로존 효과를 예방할 수 있다. 컨쥬게이트 패드(42b)와 조절 테이프(42f)가 중첩하는 길이가 길수록 사용분석물질이 되는 양이 줄어들 수 있으며, 짧을수록 사용분석물질이 되는 양이 많아질 수 있다. 따라서, 사용분석물질이 되는 양이 많아 프로존 효과가 나타나는 경우, 컨쥬게이트 패드(42b)와 조절 테이프(42f)가 중첩하는 길이를 늘림으로써 프로존 효과를 예방할 수 있다.
상기 조절 테이프의 도입으로 검체투입부에 투입된 액상 검체는 소정의 양이 조절 테이프(42f)의 상단에 존재하는 검체패드(42a) 하류측(γ)에 존재하는 불용분석물질이 되고, 나머지 소정의 양이 컨쥬게이트 패드(42b)와 조절 테이프(42f)가 겹치지 않는 부분을 통해 컨쥬게이트 패드로 확산되어 사용분석물질이 된다. 또한, 액상 검체의 투입 후 바로 버퍼투입부(45a')에 버퍼를 투입하게 되면, 검체패드(42a)를 통해 버퍼가 검체패드의 하류측(γ)으로 이동하여 상기 하류측에 존재하는 불용분석물질이 검체패드의 하류측 말단으로 고정되며, 검체패드를 통과해 컨쥬게이트 패드(42b)로 통과한 버퍼는 상기 컨쥬게이트 패드로 확산된 사용분석물질의 신호검출패드(42c)로의 이동을 촉진시킨다. 이와 같은 원리에 의해, 조절 테이프(42f)는 검체 투입부에 투입된 검체 중의 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있으며, 따라서 프로존 효과를 회피할 수 있게 된다.
도 4의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정을 살펴보면 다음과 같다.
우선, 고농도의 분석물질을 함유하는 액상 검체를 검체투입부(45a")에 투입하면 검체투입부(45a")에 스며들어 퍼지는데 이때 바로 하방에 존재하는 조절테이프(42f)의 상류측 말단을 경계로 액상 검체가, 컨쥬게이드와 특이적 반응을 하고 신호검출패드로 이동하여 시험에 사용되는 "사용분석물질"과 시험에서 사용되지 못하고 검체패드(42a)의 하류측 말단에 고립되어 불용되는 "불용분석물질"로 나누어진다. 상기 액상 검체를 투입 후 연속적인 실험동작으로 버퍼투입부(45a')에 소정 양의 버퍼를 투입하면, 투입된 버퍼는 모세관 반응으로 검체패드(42a)의 하류측(γ) 말단 및 컨쥬게이트 패드(42b) 방향으로 이동한다. 그리하여, 버퍼는 조절테이프 1에 의해 검체패드 하류측 말단 방향과 컨쥬게이트 패드를 통과하면서 신호검출패드 방향으로 나누어져 이동하는데, 검체패드 하류측 말단 방향으로 이동하는 버퍼는 상기 불용분석물질를 검체패드 하류측 말단으로 밀어 고립을 강화시키고 이동이 정지된다. 나머지 대부분의 버퍼는 컨쥬게이트 패드로 이동하여 컨쥬게이트 패드 중에 존재하는 상기 사용분석물질과 혼합되어 컨쥬게이트를 녹이고 컨쥬게이트에 부착된 특이물질과 사용분석물질의 반응을 돕고 신호검출패드(42c)로 이동하여 신호검출부(43b)에 부착되어 있는 특이물질과 반응을 도모하게 된다.
이와 같은 원리로, 결국 투입된 액상 검체에서 분석물질의 일부만 면역검출반응에 사용되고 나머지 분석물질은 사용되지 못하도록 함으로서 조절테이프(42f)로 간단하게 검체를 희석한 효과를 볼 수 있기 때문에, 프로존 효과를 제어 할 수 있다. 앞서 설명한 바와 같이, 컨쥬게이트 패드(42b)와 조절 테이프(42f)가 중첩하는 길이가 길수록 사용분석물질이 되는 양이 줄어들 수 있으며, 짧을수록 사용분석물질이 되는 양이 많아질 수 있으므로, 분석물질의 종류에 따른 프로존 효과의 경중에 따라 프로존 효과를 회피하기 위해서, 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 중첩하는 길이를 조절함으로써 프로존 효과를 회피할 수 있는 적절한 조절 테이프의 길이를 선택할 수 있다.
도 4의 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 헤모글로빈 A1c 분석과 같이 분석물질인 헤모글로빈이 혈액 내에 고농도로 존재하지만 농도의 높고 낮음이 비교적 일정하여 상기 방법만으로도 충분한 희석효과를 보여 프로존 효과를 차단할 수 있는 경우에 사용될 수 있다.
그러나, 특정물질의 항 IgM과 IgG 같이 검체에서 농도의 높고 낮음이 다양한 특정 분석물질은 상기 도 4에 면역크로마토그래피 분석용 스트립으로 면역검출반응을 하기에는 완전하지 않은 면이 있다. 왜냐하면, 사용분석물질이 적어지도록 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 중첩하는 길이를 조절하면 고농도 분석물질에 대해서는 프로존 효과의 회피가 가능해지지만 저농도 분석물질에 대해서는 결과를 보여주기에는 너무 적은 사용분석물질이 이용되어서 위음성 결과를 나타낼 수 있기 때문이다. 반대로 사용분석물질의 양을 늘리면 저농도 검체에서는 결과를 보이겠지만 고농도 검체에서는 프로존 효과를 보여 위음성 결과를 보일 수 있다. 따라서, 도 4의 면역크로마토그래피 분석용 스트립은 검출해야할 농도 범위가 넓은 경우, 이용하기 부적절할 수 있다. 이를 보완한 본 발명의 일 구현예에 따른 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 도 5a, 도 5b 및 도 5d에 나타내었다.
도 5a는 본 발명의 일 구현예에 따른 컨쥬게이트 패드의 상류측이 제 1 검체패드와 접하는 부분에 위치하는 제 1 조절 테이프 및 제 2 검체패드를 더 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립은 접착성 플라스틱 지지체(51), 및 상기 접착성 플라스틱 지지체의 상류측 표면에 부착되어 있는, 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측(α)에 버퍼투입부 및 하류측(γ)에 검체투입부를 구비하는 제 1 검체패드(52a'), 상기 제 1 검체패드(52a')의 중류측(β)의 하방에 존재하고, 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도가 늦은 제 2 검체패드(52a"), 상기 제 1 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 제 2 검체패드 하류측 말단에서 제 2 검체패드와 인첩하여 시작하여 상기 제 1 검체패드의 하류측(γ)의 하방에까지 위치하는 컨쥬게이트 패드(52b), 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부(53b)와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부(53a)를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드(52b)의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드(52c), 및 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드(52c)의 하류측에 위치하는 흡수패드(52d)를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립(50a)으로서, 상기 컨쥬게이트 패드의 상류측이 제 1 검체패드와 접하는 부분에 위치하여 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 1 조절 테이프(52f')를 더 포함한다.
상기 제 1 조절 테이프(52f')는 컨쥬게이트 패드(52b)의 상류측에 존재하는 컨쥬게이트가 검체투입부(55a")에 투입된 액상 검체와 반응하는 것을 차단하는 역할을 하여, 투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제 2 분석물질의 검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제 2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질일 수 있다.
상기 도 5a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정을 살펴보면 다음과 같다.
상기 도 5a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서의 면역검출반응은 1차 면역검출반응 및 2차 면역검출반응으로 분리되어 일어난다. 1 차 면역검출반응 및 2 차 면역검출반응이 일어나는 원리는, 1차 면역검출반응에서 액상 검체의 양이 조절 테이프에 의해 조절되지 않고 검체투입부(55a")에 투입된 액상검체 전체가 1 차 면역검출반응에 이용된다. 이는 1차 면역검출반응에서 검출하고자 하는 분석물질의 양이 매우 적어서, 액상 검체의 양을 조절할 필요 없이, 액상 검체 전체가 이용되어야 하는 경우에 이용된다.
1차 면역검출반응을 보다 구체적으로 설명하면, 검체투입부(55a")을 통해 투입된 검체가 조절 테이프의 방해 없이 컨쥬게이트 패드로 진입하여 컨쥬게이트의 특이반응물질과 반응하고 제 1 검체패드를 통해 유입된 버퍼와 혼합되고 신호검출패드(53c)로 이동하여 신호검출부(53b)에 결합된 특이반응물질과 면역검출반응이 이루어진다. 이때 낮은 농도의 분석물질은 신호검출이 이루어지지만 프로존 효과를 보이는 높은 농도의 분석물질은 신호검출부의 특이반응 물질과 결합한 상태로 1 차 반응이 완료된다.
2차 면역검출반응에서는, 제 2 검체패드(52a")를 통해 지연된 속도로 이동하던 버퍼가 제 2 검체패드(52a")와 인첩하여 위치한 컨쥬게이트 패드(52b)에 도달 시, 제 1 조절테이프(52f')에 의해 제 1 검체패드(52a')로 이동하는 버퍼로부터 보호된 컨쥬게이트를 녹이고, 1 차 면역검출반응에서의 사용분석물질과 컨쥬게이트가 신호검출패드로 이동한 후 뒤따라 신호검출패드로 이동한다. 그리하여, 신호검출패드로 이동된 버퍼 및 조절테이프에 의해 보호되었던 컨쥬게이트는 앞서 신호검출부의 반응특이물질과 결합한 분석물질과 2 차 면역검출반응이 이루어진다. 2차 반응에서는 분석물질이 컨쥬게이트 패드(52b)에서 컨쥬게이트와 미리 반응하지 못하고, 단지 신호검출패드에서 특이반응물질과 반응하여 대기하고 있기 때문에, 액상 검체에서 농도가 매우 높다고 하더라도 프로존 현상이 나타나지 않는다. 따라서 1 차 면역검출반응에서 프로존 현상에 의해 신호를 나타내지 못한 미완성 반응이 2 차 반응의 컨쥬게이트에 의해서 반응이 완성됨으로써, 프로존 효과를 극복할 수 있다. 이와 같은 2 단계의 면역검출반응에 의해, 매우 낮은 농도로 존재하여 프로존 효과의 우려가 없는 1차 분석물질을 먼저 검출하고, 상대적으로 매우 높은 농도로 존재하여 프로존 효과를 차단해야 하는 2차 분석물질을 검출할 수 있게 된다.
도 5b는 본 발명의 일 구현예 따른 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 및 제 2 검체패드를 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50)은 플라스틱 지지체(51), 및 상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 배열되는, 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼투입부 및 하류측에 검체투입부을 구비하는 제 1 검체패드(52a'), 상기 제 1 검체패드의 중류측(β)의 하방에 존재하고, 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도가 늦은 제 2 검체패드(52a"), 상기 제 1 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 제 2 검체패드(52a") 하류측(γ) 말단에서 제 2 검체패드와 인첩하여 시작하여 상기 제 1 검체패드(52a')의 하류측(γ)의 하방에 까지 위치하는 컨쥬게이트 패드(52b), 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부(53b)와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부(53a)를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드(52c), 및 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드(52d)를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립(50)으로서, 상기 컨쥬게이트 패드의 상류측이 제 1 검체패드와 접하는 부분에 위치하여 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 1 조절 테이프(52f') 및 상기 제 1 검체패드의 검체투입부(55a")와 컨쥬게이트 패드(52b) 하류측 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 2 조절 테이프(52f")를 더 포함한다. 즉, 상기 도 5a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50)에서, 제 1 검체패드의 검체투입부(55a")와 컨쥬게이트 패드(52b) 하류측 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 2 조절 테이프(52f")를 더 포함한다는 점에 있어서 차이가 있다. 제 2 조절테이프가 추가적으로 포함되어 제 1 면역검출반응에서 사용분석물질이 되는 양이 조절되어, 제 1 면역검출반응에서도 프로존 현상을 차단할 수 있는 효과가 있다.
상기 컨쥬게이트 패드(52b)와 제 2 조절테이프(52f")가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절되고, 상기 제 1 조절테이프(52f')에 의해 컨쥬게이트 패드(52b)의 상류측에 존재하는 컨쥬게이트가 검체투입부(55a")에 투입된 액상 검체와 반응하는 것을 차단하는 역할을 하여, 투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제 1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제2 분석물질의 면역검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질일 수 있다.
도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50b)을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정을 살펴보면 다음과 같다.
도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50b)은 도 4의 면역크로마토그래피 분석용 스트립에 제 2 샘플패드와 제 2 조절테이프를 추가로 구비하고, 제 2 조절테이프를 이용하여 사용분석물질을 비교적 많이 투입되도록 조정하고, 컨쥬게이트 패드(50b)를 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프에 의해 분리해서 보호되도록 한 다음, 제 2 조절 테이프에 의해 보호된 컨쥬게이트와 검체가 반응하여 신호검출패드로 이동하여 1 차 면역검출반응이 이루어진 후 제 1 조절 테이프에 보호된 컨쥬게이트가 버퍼와 혼합되어 신호검출패드로 이동하여 2 차 면역검출반응이 이루어지도록 하는 것을 특징으로 한다.
이해를 돕기 위해, 상기 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서의 액상 검체의 사용분석물질 및 불용분석물질의 배치 및 버퍼의 이동방향을 도 5c에 나타내었다.
보다 구체적으로는, 분석물질을 함유한 액상 검체를 검체 투입부를 통해 투입하면 제 1 검체패드의 검체 투입부(55a")에 스며들어 퍼지는데 이때 바로 하방 있는 제 2 조절테이프(52f")의 말단을 경계로 액상 검체가, 컨쥬게이트와 특이적 반응을 하고 신호검출패드로 이동하여 시험에 사용되는 "사용분석물질"과 시험에서 사용되지 못하고 제 1 검체패드(52a') 말단에 고립되어 불용되는 "불용분석물질"로 나누어진다. 액상 검체는 제 1 조절테이프(52f')의 존재에 의해 제 1 조절 테이프의 하방에 존재하는 컨쥬게이트 패드 중으로의 유입이 차단된다. 따라서, 상기 사용분석물질은 제 1 조절테이프(52f') 하방에 존재하는 컨쥬게이트 패드 중의 컨쥬게이트와는 반응하지 않게 되고, 제 2 조절 테이프(52f") 하방에 존재하는 컨쥬게이트 패드 중의 컨쥬게이트와만 반응할 수 있게 된다.
상기 액상 검체의 투입 후 연속적인 실험동작으로 버퍼투입부(55a')에 소정양의 버퍼를 투입하면, 투입된 버퍼는 모세관 반응으로 컨쥬게이트 패드 방향으로 이동하는데 조절테이프 1(52f')에 의해 제 1 검체패드(52a')와 제 2 검체패드(52a")의 두 개의 방향으로 나뉘어 이동한다. 제 1 검체패드의 하류측(γ) 방향을 따라 이동하는 버퍼는 상기 투입된 분석물질중 사용분석물질과 만나 혼합되어 제 1 조절테이프에 의해 제 1 검체패드 하류측(γ) 말단과 제 1 조절테이프(52f')와 제 1 조절 테이프(52f') 사이의 컨쥬게이트 패드(52b) 방향으로 나누어져 이동하는데 제 1 검체패드의 하류측 말단으로 이동하는 버퍼는 불용분석물질의 고립을 강화시키고 제 1 검체패드의 하류측 말단에서 이동이 정지된다. 나머지 대부분의 버퍼는 사용분석물질과 혼합되어 제 1 조절테이프와 제 2 조절테이프사이의 틈으로 이동하여 제 2 조절테이프에 의해 보호되고 있던 컨쥬케이트와의 반응을 돕고 신호검출패드(52c)로 이동하여 신호검출부(53b)의 특이물질과 반응하는 1 차 면역검출반응이 이루어진다.
액상 검체의 분석물질 중 비교적 많은 량이 사용되도록 조절테이프 2를 조절함으로서 액상 검체에서 상대적으로 낮은 고농도 분석물질은 1 차 면역검출반응에서 결과를 보여줄 수 있으나 상대적으로 높은 고농도의 분석물질은 여전히 프로존 효과를 보여 검출 결과를 보이지 못하고 신호검출부의 특이반응물질과 분석물질이 결합된 상태로 2 차 면역검출반응을 기다리게 된다.
2차 면역검출반응에서는, 상기 투여된 버퍼 중 제 2 검체패드(52a") 방향으로 이동한 버퍼의 유동속도는 제 1 검체패드(52a')에서 보다 현저히 늦다. 제 2 검체패드(52a")를 통해 지연된 속도로 이동하는 버퍼는 제 2 검체패드와 인첩하여 위치한 컨쥬게이트 패드(52b)에 도달 시, 조절테이프 1(52f')에 의해 제 1 검체패드로 이동하는 버퍼로부터 보호된 컨쥬게이트를 녹이고, 상기 1 차 면역검출반응에서의 사용분석물질과 컨쥬게이트가 신호검출패드로 이동한 후에 뒤따라 신호검출패드(52c)로 이동한다. 그리하여, 신호검출패드로 이동된 버퍼 및 조절테이프 1에 의해 보호되었던 컨쥬게이트는 앞서 신호검출부의 특이반응물질과 결합했던 분석물질에 의한 브릿지 반응에 의해 2 차 면역검출반응이 이루어지기 때문에, 액상 검체에서 농도가 매우 높다고 하더라도 프로존 현상이 나타나지 않는다. 따라서 1 차 면역검출반응에서 프로존 현상에 의해 신호를 나타내지 못한 미완성 반응이 2 차 반응의 컨쥬게이트에 의해서 반응이 완성됨으로써, 프로존 효과를 극복할 수 있다. 이와 같은 2 단계의 면역검출반응에 의해, 상대적으로 낮은 고농도의 분석물질을 먼저 검출하고, 상대적으로 높은 고농도의 분석물질을 나중에 검출할 수 있게 된다.
도 5d는 본 발명의 일 구현예 따른 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 및 제 3 조절 테이프, 및 제 2 검체패드를 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 5d의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50d)은 상기 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50b)에서 추가적으로 제 3 조절 테이프(52f"')를 더 포함하며, 상기 제 1 조절 테이프(52f') 및 제 2 조절 테이프(52f"')가 제 3 조절 테이프(52f"')에 의해 연결되어 있으며, 상기 제 3 조절 테이프는 액상 검체를 투과시킬 수 있는 구멍 또는 틈을 포함하여 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절될 수 있다.
상기 도 5d의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50d)을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정은 상기 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(50b)을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정과 동일하다. 다만, 액상 검체가 구멍 또는 틈을 포함하는 제 3 조절 테이프를 통해 통과하여, 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절되어, 프로존 효과를 차단할 수 있다. 상기 제 3 조절 테이프가 포함하는 구멍 또는 틈의 크기 또는 밀도를 조절함으로써 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있다. 상기 제 3 조절 테이프는 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프와 인첩하여 연결될 수도 있으나, 일체형으로서 존재할 수도 있다.
상기 도 5a, 도 5b, 및 도 5d의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립은 그 자체를 신속진단검사에 사용할 수도 있으며, 상기 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 상부 하우징 및 하부 하우징에 수납한 면역 크로마토그래피 키트로서 사용할 수도 있다. 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 상부 하우징(54b) 및 하부 하우징(54a)에 수납한 면역 크로마토그래피 키트의 단면도를 도 5e에 나타내었다. 도 5a, 도 5b 및 도 5d의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 이를 수납하는 하우징 없이, 스트립으로서 사용하는 경우 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 검체 투입부(55a") 및 신호검출영역(55b)을 제외한 전면부를 보호 테이프로 부착시키고/거나, 신호검출영역(55b)을 신호 보호 테이프로 부착할 수도 있다. 상기 도 5b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 검체 투입부 및 신호 검출영역을 제외한 전면부를 보호 테이프로 부착시킨 형태의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 버퍼 용기에 담가 검체 분석반응을 수행하는 형태의 단면도를 도 5f에 나타내었다. 도 5f의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립은 우선 검체 투입부(55a")에 액상 검체를 투입한 후, 바로 버퍼 용기 중에 버퍼에 버퍼 투입부를 담가 면역검출반응을 수행할 수 있다. 상기 보호 테이프 및 신호 보호 테이프는 종래 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서 사용되었던 것을 사용할 수 있으며, 예를 들어 아세테이트(acetate), 폴리에스테르(polyester), 폴리올레핀(polyolefin), 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리스타이렌(polystyrene), 비닐(vinyl), 폴리이미드(polyimide), 알루미늄 포일(aluminum foil), 또는 반사 필름(retro-reflective film) 일 수 있고, 여기에 고무, 아크릴, 실리콘 계열 등의 점착제가 도포된 테이프가 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
도 5a, 도 5b 및 도 5d의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립에서, 제 1 검체패드의 검체 투입부에 투입되는 액상 검체 중 사용분석물질이 제 1 조절 테이프가 보호하는 컨쥬게이트 패드 부위로 확산에 의해 유입되어 제 1 조절 테이프가 보호하는 컨쥬게이트가 결과적으로 보호되지 못하는 경우가 발생할 수도 있다. 이러한 우려를 불식시키기 위해, 컨쥬게이트 연결패드를 도입한 본 발명의 일 구현예에 따른 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 각각 도 6a, 도 6b 및 도 6c에 나타내었다.
도 6a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60a)은 컨쥬게이트 패드(62b)가 제 1 조절 테이프(62f')의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하지 않는 제 1 컨쥬게이트 패드(62b') 및 검체 투입부(65a")의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하는 제 2 컨쥬게이트 패드(62b")로 분리되며, 상기 분리는 제 1 컨쥬게이트 패드(62b') 및 제 2 컨쥬게이트 패드(62b") 사이에 컨쥬게이트 분리패드(62g)가 삽입되어 이루어지며, 상기 컨쥬게이트 분리패드(62g)는 컨쥬게이트 패드에 비해 버퍼 유동속도가 늦은 패드인 면역크로마토그래피 분석용 스트립이다.
도 6b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60b)은 컨쥬게이트 패드(62b)가 제 1 조절 테이프(62f')의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하지 않는 제 1 컨쥬게이트 패드(62b') 및 제 2 조절 테이프(62f")의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하는 제 2 컨쥬게이트 패드(62b")로 분리되며, 상기 분리는 제 1 컨쥬게이트 패드(62b') 및 제 2 컨쥬게이트 패드(62b") 사이에 컨쥬게이트 분리패드(62g)가 삽입되어 이루어지며, 상기 컨쥬게이트 분리패드(62g)는 컨쥬게이트 패드에 비해 버퍼 유동속도가 늦은 패드인 면역크로마토그래피 분석용 스트립이다.
도 6c는 도 6b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60c)는 상기 도 6b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60b)에서 추가적으로 제 3 조절 테이프(62f"')를 더 포함하며, 상기 제 1 조절 테이프(62f') 및 제 2 조절 테이프(62f")가 제 3 조절 테이프(62f"')에 의해 연결되어 있으며, 상기 제 3 조절 테이프는 액상 검체를 투과시킬 수 있는 구멍 또는 틈을 포함하여 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절될 수 있다.
상기 도 6c의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60c)을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정은 상기 도 6b의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(60b)을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정과 동일하다. 다만, 액상 검체가 구멍 또는 틈을 포함하는 제 3 조절 테이프를 통해 통과하여, 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절되어, 프로존 효과를 차단할 수 있다. 상기 제 3 조절 테이프가 포함하는 구멍 또는 틈의 크기 또는 밀도를 조절함으로써 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있다. 상기 제 3 조절 테이프는 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프와 인첩하여 연결될 수도 있으나, 일체형으로서 존재할 수도 있다.
도 7a는 본 발명의 일 구현예에 따른 검체패드의 하류측이 상부층과 하부층으로 분지된 형태를 작고, 그 분지된 틈 사이에 조절 테이프를 더 포함하는 프로존 효과를 예방할 수 있는 면역 크로마토그래피 분석용 스트립의 단면도이다.
도 7a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(70)은 접착성 플라스틱 지지체(71), 및 상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 부착되어 있는, 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측(α)에 단일 투입구 영역을 구비하는 검체패드(72a), 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측 말단에서 검체패드와 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드(72b), 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는 지의 여부를 검출하는 신호검출부(73b)와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부(73a)를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드(72c), 및 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드(72d)를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립(70)으로서, 상기 검체패드(72a)는 하류측이 상부층(72a')과 하부층(72a")으로 분지된 형태를 가지며, 상기 검체패드(72a)의 상부층(72a')과 하부층(72a")의 분지된 틈 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프(72f)를 더 포함한다. 상기 조절 테이프(72f)는 검체패드의 분지된 상부층(72a')으로 유입된 액상 검체가 컨쥬게이트 패드(72b)로 유입되는 것을 차단하는 역할을 하여, 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드(72b)로 이동하여 사용분석물질이 되는 양을 조절할 수 있다.
도 7a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 이용하여 액상 검체가 면역검출반응이 일어나는 과정을 살펴보면 다음과 같다.
도 7a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립(70)의 검체패드(72a)에서의 버퍼 및 검체의 단일 투입부(75a)에 우선 액상 검체 및 버퍼의 혼합물을 투입한다. 투입된 액상 검체는 검체패드(72a)의 상부층 분지와 하부층 분지로 나누어 이동하게 되고, 상부층 분지(72a')로 이동된 액상 검체는, 상부층 분지와 하부층 분지 틈 사이에 위치한 조절 테이프(72f)에 의해 검체패드(72a)의 하류측 말단에서 검체패드(72a)와 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드(72b)로 유입되지 못하고, 검체패드의 분지된 상부층(72a')에 머무르게 된다. 대신, 하부층 분지(72a")로 이동된 액상 검체는 검체패드 말단과 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드(72b)로 유입되어, 면역검출반응이 이루어진다. 이와 같이, 분지된 검체패드(72a) 의해, 실질적으로 사용분석물질이 되는 검체의 양은 검체 투입부에 투입된 액상 검체의 양에 비해 줄어들게 되므로, 고농도의 분석물질이 희석되는 효과를 나타내게 되므로, 프로존 효과가 차단될 수 있다.
도 7a의 면역 크로마토그래피 분석용 스트립을 상부 하우징(74b) 및 하부 하우징(74a)에 수납한 면역 크로마토그래피 키트의 단면도를 도 7b에 나타내었다.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
면역크로마토그래피 스트립 및 키트를 이용한 헤모글로빈 A1c 검사
(A) 항체 고정화 니트로셀룰로오스패드(42c)
마우스 항 헤모글로빈 A1c 단클론항체, 마우스 항 헤모글로빈 단클론 항체, 및 산양 항-토끼 IgG 항체를 트레할로즈가 포함된 인산 완충액으로 희석한 다음, 분사기를 이용하여 니트로셀룰로오스패드(신호검출패드)의 신호검출부에 해당하는 검사선 1과 검사선 2 및 대조부 위치에 각각 분사하고, 37℃ 항온기에서 건조하여 고정화시켰다.
(B) 항체-골드 컨쥬게이트 패드(42b)의 제조
콜로이달 골드 수용액 1 ml에 헤모글로빈에 대한 단클론 항체를 첨가해 표면흡착시킨 후, 1중량% 소혈청 알부민으로 봉쇄하였다. 상기 컨쥬게이트 용액을 원심분리기에서 12,000 rpm으로 원심분리하여 상층액을 제거하고, 0.7중량% 소혈청 알부민 및 5중량% 수크로오스를 함유한 인산염 완충액으로 흡광도가 1이 되도록 재 부유하였다. 같은 방법으로 토끼 IgG 항체를 컨쥬게이트 하여 헤모글로빈 항체와 혼합한 다음 유리섬유패드에 80 μl/25mm2 비율로 분주하였다. 상기 금 콜로이드 항체 컨쥬게이트를 함유한패드를 제습실에서 5 시간 건조하고, 건조된패드를 7 x 300 mm 크기로 절단하였다.
(C) 조절테이프(42f)를 조절한 면역크로마토그래피 스트립(40) 및 키트의 제조
접착제가 발라진 폴리프로필렌 플레이트 지지체(60X300 mm)(41)의 하류측 말단에서 15 mm 간격을 두고 상기 A 단계에서 제조된 신호검출패드(25X300 mm)(42c)를 첩착시키고 흡수패드(18X300)(42d)를 신호검출패드(42c)와 중첩되게 하류측 방향에 부착하고, B 단계에서 제조된 컨쥬게이트 패드(42b)를 신호검출패드(42c)와 2 mm 중첩되게 상류측 방향에 부착하고, 조절테이프(스카치 매직테이프, 3M)를 5X300, 6X300, 7X300, 8X300, 9X300 mm, 10X300 mm, 11X300 mm로 절단하고 이들을 컨쥬겐이트패드(42b)의 하류측과 0 mm, 1 mm, 2 mm, 3 mm, 4 mm, 5 mm, 6 mm 및 신호검출패드의 상류측 5 mm를 각각 덮어 붙이고, 검체패드(0.5X22X300 mm)를 지지체의 상류측 말단으로부터 컨쥬게이트 패드(42b) 하류측 말단까지 부착하여, 면역크로마토그래피 스트립을 제조하였다. 합지된 쉬트를 4 X 6 mm 되게 절단하고 버퍼 투입부(45a') 및 검체 투입부(45a")에 해당하는 부위에 각각의 투입구를 가진 하우징에 장착하여 면역크로마토그래피 키트를 제조하였다. 조절 테이프 0 mm, 1 mm, 2 mm, 3 mm, 4 mm, 5 mm, 및 6 mm로 조절되어 제조된 검사 키트를 8%의 헤모글로빈 A1c를 포함하는 표준혈액 5 마이크로리터를 검체투입부(45a")에 투여한 후 버퍼 100 마이크로리터를 버퍼 투입부(45a')에 투입하고 20분 후에 신속진단검사 리더기로 결과를 판독하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
도 9는 본 발명의 일 구현예에 따른 면역크로마토그래피 스트립을 포함하는 키트에서 조절테이프의 컨쥬게이트 패드의 하류 말단과 중첩되는 길이에 따라, 액상 검체 중의 헤모글로빈 Alc의 농도(w/v%)를 검출한 결과를 도시한 그래프이다.
(D) 조절테이프의 길이에 따른 유용성 확인
사용한 신속진단검사 리더기는 실험결과 형성된 밴드의 밀도를 수치화 한 것으로 정상적인 헤모글로빈의 밴드 밀도 100%를 기준으로 하여 헤모글로빈 A1c 밴드의 진하기를 상대 퍼센트로 표시하도록 조절된 것이다.
도 9에 따르면, 조절 테이프가 컨쥬겐이트패드(42b)의 하류측과 겹쳐진 부분(즉, 조절 테이프의 검체 투입부와 중첩되는 부분의 길이)이 0 mm, 1 mm 2 mm, 3 mm 4 mm, 5 mm, 6 mm로 각각 조절된 키트에서, Alc의 농도가 150%, 60.4 %, 27.6%, 17.3% 13.7%, 9.5 %, 8.2%인 것으로 나타났다. 컨쥬게이트패드(42b)가 조절테이프 1에 의해 중첩되지 않은 ( 0 mm) 키트에서는 정상적인 헤모글로빈이 과량투여되어 프로존 효과에 의해 정상 밴드밀도가 헤모글로민 A1c의 밴드밀도 보다 약하게 나타나 헤모글로빈 A1c 150%로 나타났으나 혈액 투여량이 조절되어 적어짐에 따라 수치가 낮아지고 6 mm로 컨쥬게이트가 보호되고 조절되었을 때 표준품의 8%과 비슷한 8.2%를 보여 진단키트로 유용성을 확인할 수 있었다.
(E) 조절테이프(42f)를 조절한 면역크로마토그래피 스트립(40) 및 키트의 제조
접착제가 발라진 폴리프로필렌 플레이트 지지체 (60X300 mm)의 하류측 말단에서 15 mm 간격을 두고 상기 A 단계에서 제조된 신호검출패드(25X300 mm) (42c)를 첩착시키고 흡수패드(18X300)(42d)를 신호검출패드(42c)와 중첩되게 하류측 방향에 부착하고, B 단계에서 제조된 컨쥬게이트 패드(42d)를 신호검출패드(42c)와 2 mm 중첩되게 상류측 방향에 부착하고, 조절 테이프(11X300 mm, 스카치 매직테이프, 3M)로 컨쥬겐이트패드 하류측과 6 mm 및 신호검출패드의 상류측 5 mm를 각각 덮어 붙이고, 검체패드(0.5X22X300 mm)를 상류측 말단으로부터 컨쥬게이트 패드(42b) 하류측 말단까지 부착하여, 면역크로마토그래피 스트립을 제조하였다. 완성된 스트립을 4 X 6 mm 되게 절단하고 버퍼 투입부(45a') 및 검체 투입부(45a")에 해당하는 부위에 각각의 투입구를 가진 하우징에 장착하여 면역크로마토그래피 키트를 제조하였다.
(F) 실험 및 결과
헤모글로빈 A1c가 5%, 6%, 8%, 10% 12% 인 전혈 표준검체 5 마이크로리터를 각각 검체 투입구에 투입하고 버퍼 (PBS, 0.5% Triton X100, 0.12 % EDTA, 1% BSA 0.8% tween ) 0.1 ml을 퍼버투입구에 투입하고, 약 20 분 후에 나타난 검출영역의 밴드 농도를 신속진단검사 리더기로 결과를 판독하였다. 검사는 각각 5회 진행하여 검사결과를 평균한 결과 각각 5.1%, 6.2%. 7.9%, 10.2% 11.8%인 것으로 나타났고, CV(변동계수) 값은 모두 10% 이내를 보여 상기 제작된 헤모글로빈 A1c 신속진단검사 키트는 검사키트로 유효성이 있는 것으로 확인되었다.
실시예 2
면역크로마토그래피 스트립 및 키트를 이용한 뎅기 IgG/IgM 검사 키트제조
상기 실시예 1에서와 같은 방법으로 마우스 단클론 항 사람 IgG, IgM 항체와 산양 항-토끼 IgG 항체를 니트로셀룰로오스패드에 분주하고 불활화된 뎅기 바이러스를 골드입자에 컨쥬게트시켜 컨쥬게이트 패드를 제조하였다. 상기 실시예 1과 같이 지지체(51)에 신호검출패드(52c), 흡수패드(52d), 컨쥬게이트 패드(52b)를 붙이고 7 X 300 mm 크기의 제 2 조절테이프(52f")로 컨쥬게이트 패드(52b)의 하류측 말단 2 mm와 신호검출패드(52c)의 상류측 말단 5 mm를 덮어 붙이고, 0.2 X 9 X 300 mm의 제 2 검체패드를 컨쥬게이트의 상류측 말단에서 1 mm 중첩되게 붙이고 양면에 접착제가 도포된 7 X 300의 제 1 조절테이프(52f')로 컨쥬게이트 패드(52b) 3 mm와 제 2 검체패드(52a")의 하류측 말단 5 mm를 덮어 붙이고, 제 1 검체패드 0.5 X 22 X 300 mm를 지지체의 상류측 말단에서 컨쥬게이트 패드(52b) 하류측 말단까지 덮어 붙였다. 완성된 스트립을 4 X 6 mm 되게 절단하고 버퍼 투입부(55a') 및 검체 투입부(55a")에 해당하는 부위에 각각의 투입구를 가진 하우징에 장착하여 면역크로마토그래피 키트를 제조하였다.
종래 신속진단분석 방법으로 검출을 하지 못하거나 검출강도가 약했던 20개의 뎅기 IgG 및 IgM 혈청 검체를 5 마이크로리터 씩 검체 투입부(55a")에 투여하고 버퍼 투입부(55a')에 120 마이크로리터의 버퍼를 투입하고 결과를 관찰하였다. 20개의 모든 검체에서 3 분에서 10 분까지 IgG와 IgM이 검출됨을 육안으로 확인됨을 확인하였다. 따라서, 2가지의 분석물질이 하나의 면역크로마토그래피 키트에서 프로존 효과를 회피하고 비교적 낮은 농도의 분석물질도 검출하였다.
실시예 3
면역크로마토그래피 스트립 및 키트를 이용한 심장사상충 검사
실시예 1에서와 같은 방법으로 마우스 단클론 항 심장사상충항원 항체와 산양 항-토끼 IgG 항체를 니트로셀룰로오스패드에 분주하고 또 다른 마우스 단클론 항 심장사상충항원 항체를 골드입자에 컨쥬게이트시켜 컨쥬게이트 패드를 제조하였다. 실시예 1과 같이, 지지체(51)에 신호검출패드(52c), 흡수패드(52d), 컨쥬게이트 패드(52b)를 붙이고, 0.2 X 9 X 300의 제 2 검체패드(52a")를 컨쥬게이트의 상류측 말단에서 1 mm 중첩되게 붙이고 양면에 접착제가 도포된 7 X 300의 제 1 조절테이프(52f')로 컨쥬게이트패드(52b) 3 mm와 제 2 검체패드(52a")의 하류측 말단 5 mm를 덮어 붙이고, 제 1 검체패드 0.5 X 22 X 300 mm를 지지체(51)의 상류측 말단에서 컨쥬게이트패드(52b) 하류측 말단까지 덮어 붙였다. 완성된 스트립을 4 X 6 mm 되게 절단하고 버퍼 투입부(55a') 및 검체 투입부(55a")에 해당하는 부위에 각각의 투입구를 가진 하우징에 장착하여 면역크로마토그래피 키트(50a)를 제조하였다.
프로존 효과로 인하여 기존 방법으로 결과를 얻지 못했던 30 마리의 심장사상충에 감염된 개와 한 마리의 심장사상충에 감염된 개에서 채취한 혈액 검체 15 마이크로리터를 각각 검체 투입부(55a")에 투입하고, 버퍼 투입부(55a')에 120 마이크로리터의 버퍼를 투입하고 결과를 관찰하였다. 두 검체 모두에서 7 분에서 10분까지 결과가 육안으로 확인되는 것으로 나타났다.
이상으로 본 발명을 설명하였는데, 본 발명의 기술적 범위는 상술한 실시예에 기재된 내용으로 한정되는 것은 아니며, 해당 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 수정 또는 변경된 등가의 구성은 본 발명의 기술적 사상의 범위를 벗어나지 않는 것임은 명백하다.

Claims (21)

  1. a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
    상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 배열되는,
    b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼투입부 및 하류측에 검체투입부를 구비하는 검체패드,
    c) 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측의 하방에 위치하는 컨쥬게이트 패드,
    d) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
    e) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
    f) 상기 검체패드의 검체투입부와 컨쥬게이트 패드 사이에 위치하는, 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프를 더 포함하며,
    상기 컨쥬게이트 패드와 조절 테이프가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절될 수 있는, 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  2. a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
    상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 부착되어 있는,
    b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼투입부 및 하류측에 검체투입부를 구비하는 제 1 검체패드,
    c) 상기 제 1 검체패드의 중류측의 하방에 존재하고, 제 1 검체패드에 비해 버퍼의 유동속도가 늦은 제 2 검체패드,
    d) 상기 제 1 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 제 2 검체패드 하류측 말단에서 제 2 검체패드와 인첩하여 시작하여 상기 제 1 검체패드의 하류측의 하방에까지 위치하는 컨쥬게이트 패드,
    e) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
    f) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측에 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
    g) 상기 컨쥬게이트 패드의 상류측이 제 1 검체패드와 접하는 부분에 위치하여 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 1 조절 테이프를 더 포함하며,
    상기 조절 테이프는 컨쥬게이트 패드의 상류측에 존재하는 컨쥬게이트가 검체투입부에 투입된 액상 검체와 반응하는 것을 차단하는 역할을 하여,
    투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제 1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제 2 분석물질의 검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 제 1 검체패드의 검체투입부와 컨쥬게이트 패드 하류측 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 제 2 조절 테이프를 더 포함하며,
    상기 컨쥬게이트 패드와 제 2 조절테이프가 중첩하는 길이에 따라 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절되고,
    투입된 검체 중에 존재하는 농도가 낮은 제 1 분석물질의 면역검출반응이 먼저 수행되고, 농도가 높은 제2 분석물질의 면역검출반응이 후에 수행되며, 상기 제 1 분석물질 및 제2 분석물질은 서로 같거나 다른 물질인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프가 제 3 조절 테이프에 의해 연결되어 있으며, 상기 제 3 조절 테이프는 액상 검체를 투과시킬 수 있는 구멍 또는 틈을 포함하여 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절될 수 있는 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 및 제 3 조절 테이프는 일체형인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  6. 제 2 항에 있어서, 상기 컨쥬게이트 패드가 제 1 조절 테이프의 하방에 위치하는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 검체 투입부의 하방 위치하여 액상 검체가 통과하는 제 2 컨쥬게이트 패드로 분리되며, 상기 분리는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 제 2 컨쥬게이트 패드 사이에 컨쥬게이트 분리패드가 삽입되어 이루어지며, 상기 컨쥬게이트 분리패드는 컨쥬게이트 패드에 비해 버퍼 유동속도가 늦은 패드인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  7. 제 3 항에 있어서, 상기 컨쥬게이트 패드가 제 1 조절 테이프의 하방에 위치하는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 제 2 조절 테이프의 하방에 위치하여 액상 검체가 통과하는 제 2 컨쥬게이트 패드로 분리되며, 상기 분리는 제 1 컨쥬게이트 패드 및 제 2 컨쥬게이트 패드 사이에 컨쥬게이트 분리패드가 삽입되어 이루어지며, 상기 컨쥬게이트 분리패드는 컨쥬게이트 패드에 비해 버퍼 유동속도가 늦은 패드인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 제 1 조절 테이프 및 제 2 조절 테이프가 제 3 조절 테이프에 의해 연결되어 있으며, 상기 제 3 조절 테이프는 액상 검체를 투과시킬 수 있는 구멍 또는 틈을 포함하여 사용분석물질이 되는 양이 더욱 조절될 수 있는 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 제 1 조절 테이프, 제 2 조절 테이프, 및 제 3 조절 테이프는 일체형인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조절 테이프, 제 1 조절테이프, 제 2 조절테이프, 또는 제 3 조절테이프는 각각 독립적으로 아세테이트(acetate), 폴리에스테르(polyester), 폴리올레핀(polyolefin), 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리스티렌(polystyrene), 비닐(vinyl), 폴리이미드(polyimide), 알루미늄 포일(aluminum foil), 또는 반사 필름(retro-reflective film) 테이프로서 일면 또는 양면이 점착제로 도포된 테이프인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  11. 제10항에 있어서, 상기 점착제는 아크릴, 고무, 또는 실리콘 계열의 점착제인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  12. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 2 검체패드는 셀룰로오스, 아크릴 섬유, 폴리에스테르 섬유, 레이온, 유리섬유, 울섬유, 실크섬유, 면사, 아마섬유 또는 펄프로서, 단백질, 아미노산, 펩티드, 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리비닐알콜(Polyvinylalcohol), 폴리비닐피롤리돈 (Polyvinylpyrrolidone), 글리세롤(Glycerol), 및 폴리소르베이트(polysorbate)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 물질로 처리하여 제조된 것인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  13. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 컨쥬게이트 분리패드는 폴리에틸렌, 레이온, 유리섬유, 셀룰로즈, 또는 펄프로서, 단백질, 아미노산, 펩티드, 폴리에틸렌글리콜(Polyethylene glycol), 폴리비닐알콜(Polyvinylalcohol), 폴리비닐피롤리돈(Polyvinylpyrrolidone), 글리세롤(Glycerol), 및 폴리소르베이트(polysorbate)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 물질로 처리하여 제조된 것인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 검체투입부 및 신호검출영역을 제외한 전면부가 보호 테이프로 부착된 형태의 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  15. a) 접착성 플라스틱 지지체, 및
    상기 접착성 플라스틱 지지체의 상부 표면에 상류측으로부터 하류측으로 부착되어 있는,
    b) 분석하고자 하는 액상 검체를 수용하고 상류측에 버퍼 및 검체 단일 투입부를 구비하는 검체패드,
    c) 상기 검체패드에서 유입된 액상 검체에 함유되어 있는 분석물질과 특이적으로 결합하는 컨쥬게이트를 함유하는, 상기 검체패드의 하류측 말단에서 검체패드와 인첩하여 위치하는 컨쥬게이트 패드,
    d) 상기 액상 검체에 분석물질이 존재하는지 여부를 검출하는 신호검출부와 분석물질의 존재 유무와 관계없이 액상 검체가 흡수패드로 이동하였는지의 여부를 확인하는 대조부를 포함하는, 상기 컨쥬게이트 패드의 하류측 말단에서 컨쥬게이트 패드와 인첩하여 위치하는 신호검출패드, 및
    e) 신호검출반응이 종료된 액상 검체를 흡수하는, 상기 신호검출패드의 하류측 말단에서 신호검출패드와 인첩하여 위치하는 흡수패드를 포함하는 면역크로마토그래피 스트립으로서,
    f) 상기 검체패드는 하류측이 상부층과 하부층으로 분지된 형태를 가지며,
    g) 상기 검체패드의 상부층과 하부층의 분지된 틈 사이에 위치하며 액상 검체를 통과시키지 않는 소재의 조절 테이프를 더 구비하며,
    상기 조절 테이프는 검체패드의 분지된 상부층으로 유입된 액상 검체가 컨쥬게이트 패드로 유입되는 것을 차단하는 역할을 하여, 투입된 검체가 컨쥬게이트 패드로 이동하여 사용분석물질이 되는 양이 조절될 수 있는 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  16. 제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 컨쥬게이트는 금속입자, 라텍스 입자, 형광물질 또는 효소로 라벨링된 것인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  17. 제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신호검출은 육안, 광학, 전기화학, 또는 전기전도도에 의해 판독하는 것인 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
  18. 면역크로마토그래피 분석용 스트립을 수납하는 하부 하우징과, 상기 하부 하우징과 상보적으로 결합하는 상부 하우징으로 구성된 면역크로마토그래피 키트에 있어서, 상기 키트에 수납된 면역크로마토그래피 스트립이 제1항 내지 제9항 및 제15항 중 어느 한 항에 따른 면역크로마토그래피 스트립인 것을 특징으로 하는 면역크로마토그래피 키트.
  19. 제 18 항에 있어서, C형 간염, A형 간염, B형 간염, 인플루엔자, 조류독감, 로타 바이러스, 에이즈, 매독, 클라미디아, 말라리아, 장티프스, 위궤양 원인균, 결핵, 사스, 뎅기열, 나병, 파보, 디스템퍼, 구제역, 부루셀라, 뉴캐슬, 심장사상충, 광경병, 항원, 항체, 임신, 배란, 당뇨병 마커, 효소, 암 표지자, 심장병 표시자, C 반응 단백질, 대사물질, 지질, 탄수화물, 단백질, 마약 투약, 리신, 탄저, 부루셀라, 보툴리늄, 벡시니아, 살모넬라, 콜레라, Staphylococcal enterotoxin B, 툴라레미아, 살모넬라, 비브리오 캠필로박터, 장출혈성 대장균, 또는 여시니아의 검출을 위한 면역크로마토그래피 키트.
  20. 제 18 항에 있어서, 상기 신호검출은 육안, 광학, 전기화학, 또는 전기전도도에 의해 판독하는 것인 면역크로마토그래피 키트.
  21. 제 1 항 내지 제 9 항 및 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, C형 간염, A형 간염, B형 간염, 인플루엔자, 조류독감, 로타 바이러스, 에이즈, 매독, 클라미디아, 말라리아, 장티프스, 위궤양 원인균, 결핵, 사스, 뎅기열, 나병, 파보, 디스템퍼, 구제역, 부루셀라, 뉴캐슬, 심장사상충, 광경병, 항원, 항체, 임신, 배란, 당뇨병 마커, 효소, 암 표지자, 심장병 표시자, C 반응 단백질, 대사물질, 지질, 탄수화물, 단백질, 마약 투약, 리신, 탄저, 부루셀라, 보툴리늄, 벡시니아, 살모넬라, 콜레라, Staphylococcal enterotoxin B, 툴라레미아, 살모넬라, 비브리오 캠필로박터, 장출혈성 대장균, 또는 여시니아의 검출을 위한 면역크로마토그래피 분석용 스트립.
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