WO2014103846A1 - 親水性組換えタンパク質の抽出方法 - Google Patents
親水性組換えタンパク質の抽出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2014103846A1 WO2014103846A1 PCT/JP2013/083971 JP2013083971W WO2014103846A1 WO 2014103846 A1 WO2014103846 A1 WO 2014103846A1 JP 2013083971 W JP2013083971 W JP 2013083971W WO 2014103846 A1 WO2014103846 A1 WO 2014103846A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- protein
- solvent
- recombinant protein
- hydrophilic
- amino acid
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43513—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae
- C07K14/43518—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae from spiders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
<遺伝子合成>
(1)ADF3Kai-small-Mの遺伝子の合成
NCBIのウェブデータベースより、ニワオニグモの2つの主要なしおり糸タンパク質の一つであるADF3の部分的なアミノ酸配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:AAC47010、GI:1263287)を取得し、同配列のN末端に、開始コドン、His10タグ及びHRV3Cプロテアーゼ(Human rhinovirus 3Cプロテアーゼ)認識サイトからなるアミノ酸配列(配列番号3)を付加し、該配列の1残基目から136残基目までのアミノ酸配列(配列番号1)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号4に示す塩基配列からなるADF3Kai-small-Mの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、ADF3Kai-small-Mの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
NCBIのウェブデータベースより、ニワオニグモの2つの主要なしおり糸タンパク質の一つであるADF3の部分的なアミノ酸配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:AAC47010、GI:1263287)を取得し、同配列のN末端に、開始コドン、His10タグ及びHRV3Cプロテアーゼ(Human rhinovirus 3Cプロテアーゼ)認識サイトからなるアミノ酸配列(配列番号3)を付加し、該配列の1残基目から542残基目までのアミノ酸配列(配列番号2)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号5に示す塩基配列からなるADF3Kai-NNの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、ADF3Kai-NNの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
NCBIのウェブデータベースより、ニワオニグモの2つの主要なしおり糸タンパク質の一つであるADF4の部分的なアミノ酸配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:AAC47011、GI:1263289)を取得し、同配列のN末端に、開始コドン、His10タグ及びHRV3Cプロテアーゼ(Human rhinovirus 3Cプロテアーゼ)認識サイトからなるアミノ酸配列(配列番号3)を付加し、該配列の1残基目から318残基目までのアミノ酸配列(配列番号6)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号7に示す塩基配列からなるADF4Kai-Wの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、ADF4Kai-Wの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
NCBIのウェブデータベースから、アメリカジョロウグモの鞭毛状絹タンパク質の部分配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:AAF36090、GI:7106224)を入手し、該配列において、リピート部分及びモチーフに該当する1220残基目から1659残基目までのアミノ酸配列のN末端に、開始コドン、His10タグ及びHRV3Cプロテアーゼ認識サイトからなるアミノ酸配列(配列番号3)を付加したアミノ酸配列(配列番号8)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号9に示す塩基配列からなるFlag92-short2-UUの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、Flag92-short2-UUの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
NCBIのウェブデータベースより、レシリンの部分的なアミノ酸配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:NP_611157、GI:24654243)を取得し、該配列の87残基目のThrをSerに、95残基目のAsnをAspに置換し、置換した配列の19残基目から321残基目までを切り取り、切り取った配列のN末端に、開始コドンとHis6タグからなるアミノ酸配列(配列番号12)を付加したアミノ酸配列(配列番号10)からなるポリペプチド(Resilin-Kai)をコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号11に示す塩基配列からなるResilin-Kaiの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、Resilin-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
キイロショウジョウバエのレシリンの部分配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:Q9V7U0.1、GI:75026432)をNCBIのウェブデータベースから入手し、該配列において、リピート部分及びモチーフに該当する19残基目から321残基目までのアミノ酸配列のN末端に、開始コドンとHis6タグからなるアミノ酸配列(配列番号12)を付加したアミノ酸配列(配列番号13)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号14に示す塩基配列からなるDrosophila-Resilin-Kaiの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、Drosophila-Resilin-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
ヒトのコラーゲンタイプ4の部分配列(NCBIのGenebankのアクセッション番号:CAA56335.1、GI:3702452)をNCBIのウェブデータベースから入手し、該配列において、リピート部分及びモチーフに該当する301残基目から540残基目までのアミノ酸配列のN末端に、開始コドン、His6タグ及びSer-Ser-Gly-Ser-Serからなるアミノ酸配列(配列番号15)を付加したアミノ酸配列(配列番号16)からなるポリペプチドをコードする遺伝子を合成した。その結果、配列番号17に示す塩基配列からなるCollagen-type4-Kaiの遺伝子が導入されたpUC57ベクター(遺伝子の5’末端直上流にNde Iサイト、及び5’末端直下流にXba Iサイト有り)を取得した。その後、同遺伝子をNde I及びEcoR Iで制限酵素処理し、pET22b(+)発現ベクターに組み換え、Collagen-type4-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを得た。
ADF3Kai-small-Mの遺伝子が導入されたpET22b(+)発現ベクター、ADF3Kai-NNの遺伝子が導入されたpET22b(+)発現ベクターA、ADF4Kai-Wの遺伝子が導入されたpET22b(+)発現ベクター、Flag92-short2-UUの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクター、Resilin-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクター、Drosophila-Resilin-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクター及びCollagen-type4-Kaiの遺伝子が導入されたpET22b(+)ベクターを、それぞれ、大腸菌Rosetta(DE3)に形質転換した。得られたそれぞれのシングルコロニーを、アンピシリンを含む2mLのLB培地で15時間培養後、同培養液1.4mlを、アンピシリンを含む140mLのLB培地に添加し、37℃、200rpmの条件下で、培養液のOD600が3.5になるまで培養した。次に、OD600が3.5の培養液を、アンピシリンを含む7Lの2×YT培地に50%グルコース140mLとともに加え、OD600が4.0になるまでさらに培養した。その後、得られたOD600が4.0の培養液に、終濃度が0.5mMになるようにイソプロピル-β-チオガラクトビラノシド(IPTG)を添加してタンパク質の発現を誘導した。IPTG添加後2時間経過した時点で、培養液を遠心分離し、菌体を回収した。IPTG添加前とIPTG添加後の菌体から調製したタンパク質溶液を用い、一般的なプロトコールに従い、IPTG添加に依存して目的とするタンパク質(ADF3Kai-small-Mは約12.5kDa、ADF3Kai-NNは約47.5kDa、ADF4Kai-Wは約26.4kDa、Flag92-short2-UUは約36.9kDa、Resilin-Kaiは約28.5kDa、Drosophila-Resilin-Kaiは約28.5kDa、Collagen-type4-Kaiは約24.5kDa)が発現していることをSDS-PAGEで確認した。ADF3Kai-small-Mのタンパク質を発現している大腸菌と、ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌、ADF4Kai-Wのタンパク質を発現している大腸菌、Flag92-short2-UUのタンパク質を発現している大腸菌、Resilin-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌、Drosophila-Resilin-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌、Collagen-type4-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌を冷凍庫(-20℃)で保存した。
(1)ADF3Kai-small-Mのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、1MのLiClを含むDMSOを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置し、大腸菌(細胞)の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、ADF3Kai-small-Mのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、0.5MのLiClを含むDMSOを1mL添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置し、大腸菌の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が10質量%のエタノール水溶液(以下において、10%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が30質量%のエタノール水溶液(以下において、30%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が50質量%のエタノール水溶液(以下において、50%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が70質量%のエタノール水溶液(以下において、70%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が80質量%のエタノール水溶液(以下において、80%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて濃度が90質量%のむエタノール水溶液(以下において、90%エタノールと記す。)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、0.5MのLiClを含むDMSOを1mL添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置し、大腸菌の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて50mMTris緩衝液(pH3)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例9と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて50mMTris緩衝液(pH5)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例9と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて50mMTris緩衝液(pH7)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例9と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
超純水に替えて50mMTris緩衝液(pH9)で大腸菌の溶解物を等倍希釈した以外は、実施例9と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
0.5MのLiClを含むDMSOに替えて、0.25MのLiClを含むDMSOを、ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに1mL添加した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
0.5MのLiClを含むDMSOに替えて、DMSOを、ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに1mL添加した以外は、実施例2と同様にして、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
ADF4Kai-Wのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gを用いた以外は、実施例2と同様にしてADF4Kai-Wのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)ADF3Kai-NNのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、0.5MのLiClを含むDMSOを1mL添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置し、大腸菌の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、ADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
大腸菌の溶解物を下記表5に示すリン酸緩衝液で等倍希釈した以外は、実施例17と同様にしてADF3Kai-NNのタンパク質を含む上清を回収した。
Flag92-short2-UUのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gを用いた以外は、実施例2と同様にしてFlag92-short2-UUのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)ADF3Kai-small-Mのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、1MのLiClを含むDMSOを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で40分間溶解させ、大腸菌の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、ADF3Kai-small-Mのタンパク質を含む上清を回収した。
1MのLiClを含むDMSOの代わりに、1MのLiClを含むDMFを用いた以外は、実施例23と同様にしてADF3Kai-small-Mのタンパク質を含む上清を回収した。
1MのLiClを含むDMSOの代わりに、1MのLiClを含むDMAを用いた以外は、実施例23と同様にしてADF3Kai-small-Mのタンパク質を含む上清を回収した。
1MのLiClを含むDMSOの代わりに、1MのLiClを含むNMPを用いた以外は、実施例23と同様にしてADF3Kai-small-Mのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)Resilin-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、DMSOを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で40分間溶解させ、大腸菌(細胞)の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、Resilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
DMSOの代わりに、1MのLiClを含むDMSOを用いた以外は、実施例27と同様にしてResilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
DMSOの代わりに、1MのLiClを含むDMFを用いた以外は、実施例27と同様にしてResilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
DMSOの代わりに、1MのLiClを含むNMPを用いた以外は、実施例27と同様にしてResilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
DMSOの代わりに、1MのLiClを含むDMIを用いた以外は、実施例27と同様にしてResilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)Resilin-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、1MのLiClを含むイソプロパノールを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で40分間溶解させ、大腸菌(細胞)の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、上清を回収した。
(1)Drosophila-Resilin-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、1MのLiClを含むDMSOを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置して溶解させ、大腸菌(細胞)の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離した。得られた大腸菌の溶解物の上清を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、Drosophila-Resilin-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
(1)Collagen-type4-Kaiのタンパク質を発現している大腸菌の乾燥菌体約0.1gに、1MのLiClを含むDMSOを1ml添加して菌体を分散させ、60℃で30分間静置して溶解させ、大腸菌(細胞)の溶解物を得た。
(2)得られた大腸菌の溶解物を遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離した。得られた大腸菌の溶解物の上清を超純水で等倍希釈し、得られた希釈液を、遠心分離機(トミー精工社製の「MX-305」)にて、20℃、11000×g、5分間遠心分離し、Collagen-type4-Kaiのタンパク質を含む上清を回収した。
配列番号4、5、7、9、11、14、17 塩基配列
Claims (9)
- 親水性組換えタンパク質を発現している宿主から親水性組換えタンパク質を抽出する方法であって、
前記親水性組換えタンパク質を発現している宿主に溶解用溶媒を添加し、宿主細胞の溶解物を得る溶解物取得工程と、
前記溶解物取得工程で得られた前記宿主細胞の溶解物に希釈用溶媒を添加し、得られた希釈液から不溶物を分離して、前記親水性組換えタンパク質を含む上清を回収する工程を含み、
前記親水性組換えタンパク質はハイドロパシーインデックスが0以下であり、前記溶解用溶媒は非プロトン性極性溶媒であり、前記希釈用溶媒は水系溶媒であることを特徴とする親水性組換えタンパク質の抽出方法。 - 前記溶解用溶媒は、環状構造を有しない非プロトン性極性溶媒である請求項1に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記溶解用溶媒は、双極子モーメントが3.0D以上である請求項1又は2に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記溶解用溶媒は、ジメチルスルホキシド、N,N-ジメチルホルムアミド、及びN,N-ジメチルアセトアミドからなる群から選ばれる一種以上の非プロトン性極性溶媒である請求項1~3のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記溶解用溶媒は、前記非プロトン性極性溶媒に無機塩を添加したものである請求項1~4のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記希釈用溶媒は、(1)水、(2)水とエタノールの混合液、及び(3)水溶性緩衝液からなる群から選ばれる一種の水系溶媒である請求項1~5のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記溶解用溶媒は、前記宿主の質量に対して、体積(mL)/質量(g)比として、0.5倍以上添加する請求項1~6のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記希釈用溶媒は、前記宿主細胞の溶解物に対して、体積比として、0.5倍以上添加する請求項1~7のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
- 前記親水性タンパク質は、組換えクモ糸タンパク質、組換えレシリン、及び組換えコラーゲンからなる群から選ばれる一つのタンパク質である請求項1~8のいずれか1項に記載の親水性組換えタンパク質の抽出方法。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201380068462.0A CN104884463B (zh) | 2012-12-27 | 2013-12-18 | 亲水性重组蛋白的提取方法 |
EP13867712.5A EP2940032B1 (en) | 2012-12-27 | 2013-12-18 | Extraction method for hydrophilic recombinant protein |
US14/655,017 US20150329587A1 (en) | 2012-12-27 | 2013-12-18 | Extraction method for hydrophilic recombinant protein |
JP2014554364A JP6077569B2 (ja) | 2012-12-27 | 2013-12-18 | 親水性組換えタンパク質の抽出方法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012285392 | 2012-12-27 | ||
JP2012-285392 | 2012-12-27 | ||
JP2013-093934 | 2013-04-26 | ||
JP2013093934 | 2013-04-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2014103846A1 true WO2014103846A1 (ja) | 2014-07-03 |
Family
ID=51020933
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2013/083971 WO2014103846A1 (ja) | 2012-12-27 | 2013-12-18 | 親水性組換えタンパク質の抽出方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20150329587A1 (ja) |
EP (1) | EP2940032B1 (ja) |
JP (1) | JP6077569B2 (ja) |
CN (1) | CN104884463B (ja) |
WO (1) | WO2014103846A1 (ja) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018030499A1 (ja) | 2016-08-10 | 2018-02-15 | Spiber株式会社 | 不溶性組換えタンパク質凝集体の製造方法 |
WO2018066558A1 (ja) | 2016-10-03 | 2018-04-12 | Spiber株式会社 | 組換えタンパク質の精製方法 |
EP3281948A4 (en) * | 2015-04-09 | 2018-08-29 | Spiber Inc. | Polar solvent solution and production method thereof |
US20180251501A1 (en) * | 2015-09-18 | 2018-09-06 | Spiber Inc. | Molded Article and Method for Producing Molded Article |
WO2018164195A1 (ja) * | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Spiber株式会社 | 精製されたタンパク質を製造する方法 |
WO2019189802A1 (ja) * | 2018-03-30 | 2019-10-03 | 独立行政法人国立高等専門学校機構 | 組換え構造タンパク質の製造方法、組換え構造タンパク質、タンパク質成形体及びタンパク質成形体の製造方法 |
JP2020122767A (ja) * | 2019-01-31 | 2020-08-13 | Spiber株式会社 | 組換え構造タンパク質の製造方法及び分析方法、並びにタンパク質成形体の製造方法 |
US10975206B2 (en) | 2015-04-09 | 2021-04-13 | Spiber Inc. | Polar solvent solution and production method thereof |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2940033B1 (en) * | 2012-12-27 | 2018-04-25 | Spiber Inc. | Partial purification method for hydrophilic recombinant protein |
WO2014175177A1 (ja) | 2013-04-25 | 2014-10-30 | スパイバー株式会社 | ポリペプチドヒドロゲル及びその製造方法 |
JP5796147B2 (ja) | 2013-04-25 | 2015-10-21 | Spiber株式会社 | ポリペプチド多孔質体及びその製造方法 |
CN108137814B (zh) * | 2015-09-18 | 2021-08-24 | 丝芭博株式会社 | 模压成形体和模压成形体的制造方法 |
EP3706712A1 (en) * | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Givaudan SA | Silk alcohol formulations |
US11178934B2 (en) * | 2018-07-18 | 2021-11-23 | Bolt Threads Inc. | Resilin material footwear and fabrication methods |
CN112752765A (zh) | 2018-09-28 | 2021-05-04 | 丝芭博株式会社 | 蛋白质组合物的制造方法 |
KR20220083662A (ko) * | 2019-09-16 | 2022-06-20 | 볼트 쓰레즈, 인크. | 고전단 가용화를 통한 거미 실크 단백질의 단리 방법 |
WO2021065794A1 (ja) | 2019-09-30 | 2021-04-08 | Spiber株式会社 | タンパク質成形体の製造方法 |
CN114555108A (zh) | 2019-09-30 | 2022-05-27 | 丝芭博株式会社 | 肌肉组织再生剂 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004503204A (ja) | 2000-01-20 | 2004-02-05 | メロ、シャーリーン、エム. | クモの生糸と他の構造タンパク質の精製法と水性繊維紡糸法 |
JP2011504374A (ja) * | 2007-11-26 | 2011-02-10 | イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティー オブ エルサレム リミテッド | 繊維状ポリペプチドおよび多糖を含む組成物 |
WO2011133886A2 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4448750A (en) * | 1981-06-05 | 1984-05-15 | Fuesting Michael L | Sterilization method |
JPS61200996A (ja) * | 1985-03-04 | 1986-09-05 | Agency Of Ind Science & Technol | 有機導電体結晶の製造方法 |
CA2349434A1 (en) * | 1999-09-03 | 2001-03-15 | Ramot University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. | Agents and compositions and methods utilizing same useful in diagnosing and/or treating or preventing plaque forming diseases |
AU7494701A (en) * | 2000-05-23 | 2001-12-03 | Cenes Pharmaceuticals Inc | Nrg-2 nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods |
AUPR522501A0 (en) * | 2001-05-25 | 2001-06-14 | Proteome Systems Ltd | Increased solubilisation of hydrophobic proteins |
RU2500301C1 (ru) * | 2009-12-18 | 2013-12-10 | Стукли-Ван Кэмп, Инк. | Белковый восстанавливающий напиток |
JP2012012332A (ja) * | 2010-06-30 | 2012-01-19 | Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd | 新規アザインドール誘導体 |
JP5427322B2 (ja) * | 2011-11-02 | 2014-02-26 | スパイバー株式会社 | ポリペプチドの溶液とこれを用いた人造ポリペプチド繊維の製造方法及びポリペプチドの精製方法 |
US9439972B2 (en) * | 2012-09-10 | 2016-09-13 | Ad Lunam Labs, Inc. | Antifungal serum |
US10875024B2 (en) * | 2014-07-10 | 2020-12-29 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions for paper-based and hybrid microfluidic devices integrated with nucleic acid amplification for disease diagnosis |
-
2013
- 2013-12-18 WO PCT/JP2013/083971 patent/WO2014103846A1/ja active Application Filing
- 2013-12-18 CN CN201380068462.0A patent/CN104884463B/zh active Active
- 2013-12-18 US US14/655,017 patent/US20150329587A1/en not_active Abandoned
- 2013-12-18 EP EP13867712.5A patent/EP2940032B1/en active Active
- 2013-12-18 JP JP2014554364A patent/JP6077569B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004503204A (ja) | 2000-01-20 | 2004-02-05 | メロ、シャーリーン、エム. | クモの生糸と他の構造タンパク質の精製法と水性繊維紡糸法 |
JP2011504374A (ja) * | 2007-11-26 | 2011-02-10 | イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティー オブ エルサレム リミテッド | 繊維状ポリペプチドおよび多糖を含む組成物 |
WO2011133886A2 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
"Solvent Handbook", 2007, KODANSHA SCIENTIFIC LTD. |
CHRISTOPHER M. ELVIN; ANDREW G. CARR; MICKEY G. HUSON; JANE M. MAXWELL; ROGER D. PEARSON; IBNY VUOCOLO; NANCY E. LIYOU; DARREN C.;: "Synthesis and properties of crosslinked recombinant pro-resilin", NATURE, vol. 437, 13 October 2005 (2005-10-13), pages 999 - 1002 |
KYTE, J.; DOOLITTLE, R. F.: "A simple method for displaying the hydropathic character of a protein", J. MOL. BIOL., vol. 157, 1982, pages 105 - 132, XP024014365, DOI: doi:10.1016/0022-2836(82)90515-0 |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3281948A4 (en) * | 2015-04-09 | 2018-08-29 | Spiber Inc. | Polar solvent solution and production method thereof |
US10975206B2 (en) | 2015-04-09 | 2021-04-13 | Spiber Inc. | Polar solvent solution and production method thereof |
US11668024B2 (en) | 2015-04-09 | 2023-06-06 | Spiber, Inc. | Polar solvent solution and production method thereof |
US20180251501A1 (en) * | 2015-09-18 | 2018-09-06 | Spiber Inc. | Molded Article and Method for Producing Molded Article |
WO2018030499A1 (ja) | 2016-08-10 | 2018-02-15 | Spiber株式会社 | 不溶性組換えタンパク質凝集体の製造方法 |
WO2018066558A1 (ja) | 2016-10-03 | 2018-04-12 | Spiber株式会社 | 組換えタンパク質の精製方法 |
CN109843905A (zh) * | 2016-10-03 | 2019-06-04 | 丝芭博株式会社 | 重组蛋白的纯化方法 |
WO2018164195A1 (ja) * | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Spiber株式会社 | 精製されたタンパク質を製造する方法 |
WO2019189802A1 (ja) * | 2018-03-30 | 2019-10-03 | 独立行政法人国立高等専門学校機構 | 組換え構造タンパク質の製造方法、組換え構造タンパク質、タンパク質成形体及びタンパク質成形体の製造方法 |
JP2020122767A (ja) * | 2019-01-31 | 2020-08-13 | Spiber株式会社 | 組換え構造タンパク質の製造方法及び分析方法、並びにタンパク質成形体の製造方法 |
JP7308507B2 (ja) | 2019-01-31 | 2023-07-14 | Spiber株式会社 | 組換え構造タンパク質の製造方法及び分析方法、並びにタンパク質成形体の製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2940032A4 (en) | 2016-10-12 |
JP6077569B2 (ja) | 2017-02-08 |
CN104884463B (zh) | 2018-09-18 |
JPWO2014103846A1 (ja) | 2017-01-12 |
EP2940032A1 (en) | 2015-11-04 |
EP2940032B1 (en) | 2018-04-25 |
CN104884463A (zh) | 2015-09-02 |
US20150329587A1 (en) | 2015-11-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6077569B2 (ja) | 親水性組換えタンパク質の抽出方法 | |
JP6077570B2 (ja) | 親水性組換えタンパク質の粗精製方法 | |
JP5427322B2 (ja) | ポリペプチドの溶液とこれを用いた人造ポリペプチド繊維の製造方法及びポリペプチドの精製方法 | |
JP5796147B2 (ja) | ポリペプチド多孔質体及びその製造方法 | |
JP5782580B2 (ja) | ポリペプチドヒドロゲル及びその製造方法 | |
JP6081908B2 (ja) | 不溶性の標的タンパク質の分離 | |
JP2012531889A (ja) | スパイダーシルクタンパク質の重合体を産生する方法 | |
JP2004503204A (ja) | クモの生糸と他の構造タンパク質の精製法と水性繊維紡糸法 | |
JPH09510349A (ja) | クモの小吐糸管絹糸蛋白質をコードするcDNA | |
JPWO2017094722A1 (ja) | タンパク質溶液を製造する方法 | |
CN104936979B (zh) | 多肽颗粒及其制造方法 | |
Yang et al. | Biosynthesis and characterization of a non-repetitive polypeptide derived from silk fibroin heavy chain | |
Mhuka et al. | Chemical, structural and thermal properties of Gonometa postica silk fibroin, a potential biomaterial | |
JP6856828B2 (ja) | 極性溶媒溶液及びその製造方法 | |
WO2018123953A1 (ja) | タンパク質の回収方法 | |
JP5771833B2 (ja) | 核酸、核酸によりコードされるタンパク質、核酸が導入された組換え生物、及び組換え生物により作られるタンパク質 | |
WO2018164195A1 (ja) | 精製されたタンパク質を製造する方法 | |
WO2018216779A1 (ja) | ポリペプチド溶液及びこれを製造する方法、並びにポリペプチド成形体を製造する方法 | |
US20190002529A1 (en) | Assembly of Intermediate Filament Proteins in to Filamentous Materials | |
WO2018207827A1 (ja) | ポリペプチド溶液、及びポリペプチド繊維の製造方法、並びに人造ポリペプチド | |
WO2020158947A1 (ja) | ポリペプチド | |
JP2020122767A (ja) | 組換え構造タンパク質の製造方法及び分析方法、並びにタンパク質成形体の製造方法 | |
CN114292322A (zh) | 一种水溶性重组蛛丝蛋白的制备方法及应用 | |
Pan | Regulation of heat-shock-protein 47 (Hsp47) and procollagen by TGF-beta in avian tendon cells. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 13867712 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 2014554364 Country of ref document: JP Kind code of ref document: A |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 14655017 Country of ref document: US |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2013867712 Country of ref document: EP |