WO2014035089A1 - 굴과 해조류의 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

굴과 해조류의 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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oyster
composition
extract
sleep disorders
fermentation
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이배진
강영미
심인섭
박현덕
서용배
김민영
이광덕
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(주)마린바이오프로세스
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for relieving stress or improving sleep disorders containing a large amount of natural Gabba by fermenting a mixture of oysters and seaweeds, and a method for preparing the same.
  • the world's sleep-related market is worth $ 20 billion, with a surge in sleep clinic and a growing market for sleep-related products such as functional mattresses and natural herb sleep aids.
  • sleep-related products such as functional mattresses and natural herb sleep aids.
  • the growth rate of sleeping pills is the highest among neuropharmaceuticals at about 20%.
  • the market is expanding not only in developed countries but also in developing countries.
  • about 70% of sleeping pills are currently consumed by long-term users and 50% by elderly people aged 60 or older. Long-term use of 4 weeks or more has a problem of dependency and side effects, and the intake of the elderly and pregnant women is limited. Therefore, the necessity of natural sleeping aids is emerging as a means of replacing the sleeping pills long-term users and limiters.
  • LOHAS lifestyles of health and substantiality
  • marine organisms are food ingredients that have all of the three functions of nutrition, nutritional characteristics, taste characteristics, and bioregulatory properties, and the palatability and consumption are increasing, and the production is also increasing.
  • Kelp and oyster used for the development of new materials derived from natural products are excellent marine biological resources widely used as natural health foods with safety and economy.
  • Kelp is higher in vitamins and minerals than magnesium, especially magnesium, calcium, iodine (more than 4000ppm) and iron, and contains a large amount of natural amino acids (glutamic acid and aspartic acid), which are representative taste ingredients, and have high functionality.
  • It is recognized as an ideal natural food because it contains abundant physiologically active polysaccharides such as fucoidan, a water-soluble dietary fiber that is spotlighted as a natural material, and recently, it is widely used as a functional material or a raw material of health food. .
  • Oyster contains a large amount of glutamic acid, a precursor to GABA, and also contains a large amount of taurine, a natural amino acid that has been reported as an antioxidant, improving liver function, and improving cardiovascular efficacy, as well as more than 18 kinds of glycogen, vitamins, proteins and tyrosine. Abundant in essential minerals such as amino acids, iron and iodine, it is widely used as the world's top 10 marine products.
  • GABA the main component obtained through fermentation, is a nonproteinaceous amino acid with a molecular weight of 103.2 daltons, also called piperiric acid. Boiling point is thermally stable at 202 ° C., has a molecular formula of C 4 H 9 NO 2 , and has high solubility in water.
  • GABA is produced by the decarboxylation of L-glutamic acid by the catalysis of glutamic acid decarboxylase (GAD), and its main function is the neurotransmitter in the brain or spine. It is known to improve the brain's oxygen supply and improve brain metabolism and improve brain memory.
  • GABA is known to inhibit neuronal activity, unlike glutamic acid that activates nerves, and this function has a profound effect on neuronal function and information processing.
  • the sensory brain is known to determine direction sensitivity, angular sensitivity response, and to coordinate the fine motor function.
  • it is known to be involved in controlling abnormally excessive activity by appropriately controlling the excitability of the brain, and there are neurons that deliver GABA in the spine and invertebrates, and epileptic seizures are suppressed when GABA is supplied to the neurons sufficiently.
  • GABA's effect on promoting brain blood flow and increasing oxygen supply is used as a medicine because it promotes metabolism of brain cells and improves the sequelae of stroke and cerebral atherosclerosis.
  • GABA GABA is a physiologically useful substance because it regulates growth hormone secretion, pain relief, mental nerve stabilization, blood pressure lowering, and ACE inhibitory activity.
  • the inventors of the present invention while studying a composition containing a large amount of taurine and GABA in marine organisms, oysters and kelp to increase the intake of taurine and GABA having a quantitative restriction in the natural intake up to the expected amount of physiological activity,
  • fermented extract mixture of oyster and kelp is fermented using a fermentation strain that converts glutamic acid present in GABA and does not affect functional substances such as taurine, it is confirmed that the effect of improving stress and sleep disorders is excellent.
  • the invention was completed.
  • An object of the present invention is to ferment a mixture of oyster and kelp to provide a composition for relieving stress or improving sleep disorders containing a large amount of natural GABA, a method for preparing the same, and a food comprising the same.
  • the present invention is a stress relief or sleep disorders comprising a fermented product fermented a mixture of any one selected from the group consisting of oyster hydrolyzate, oyster extract and combination thereof and kelp extract as an active ingredient It provides a composition for improvement and a method for producing the same.
  • the present invention provides a food for stress relief or sleep disorder improvement comprising the composition as an active ingredient.
  • composition prepared by fermenting the mixture of oyster and kelp extract according to the present invention contains a large amount of GABA without loss of taurine as compared to the composition before fermentation, and excellent stress inhibitory effect and sleep disorder improvement effect.
  • 1 is a diagram illustrating a process of preparing a composition using a mixture of oyster hydrolyzate and kelp extract.
  • Figure 2 is a diagram showing the manufacturing process of the composition using a mixture of oyster extract and kelp extract.
  • Figure 3 is a view showing the change in the content of taurine, GABA, glutamate according to before and after fermentation process of the composition.
  • Figure 4 is a diagram showing a comparison of the binding affinity activity of the composition according to an embodiment of the present invention and a typical neurostable receptor GABA A (gamma-aminobutyric acid type A) receptor.
  • GABA A gamma-aminobutyric acid type A
  • FIG. 5 is a diagram showing a comparison of the binding affinity activity of the composition according to an embodiment of the 5-HT-2c (5-hydroxytryptamine-2c) receptor, a representative neurostable receptor.
  • FIG. 6 is a diagram showing the relationship between sleep induction time and maintenance time in the sleep deprived animal model of the composition.
  • 6A is a oyster extract fermented product
  • FIG. 6B is a fermentation product of kelp extract and green tea extract mixture
  • FIG. 6C is a fermentation product of kelp extract and oyster extract mixture
  • FIG. 6D is a composition containing the kelp extract fermentation as an active ingredient, respectively.
  • the relationship between sleep induction time and retention time is shown.
  • the horizontal axis of each graph represents a control and a treatment treated with 200 mg and 400 mg of each composition
  • the vertical axis of each graph (a) represents sleep induction time (seconds) and (b) sleep retention time (seconds). do.
  • FIG. 7 is a diagram showing the neurostable efficacy in behavior deprivation animal model by the composition of caffeine.
  • 7A is a oyster extract fermented product
  • FIG. 7B is a fermentation product of kelp extract and green tea extract mixture
  • FIG. 7C is a fermentation product of kelp extract and oyster extract mixture
  • FIG. 7D is a composition containing a kelp extract fermentation as an active ingredient Neurostable efficacy is shown.
  • the horizontal axis of each graph means a negative control group (blank), a control group and a treatment group treated with 200 mg and 400 mg of each composition
  • the vertical axis of each graph means a moving distance (cm 2 ) of an experimental animal.
  • the present invention provides a composition for relieving stress or improving sleep disorders, including a fermented product obtained by fermenting a mixture of any one selected from the group consisting of oyster hydrolyzate, oyster extract, and combinations thereof and kelp extract.
  • the composition may be a food composition or a pharmaceutical composition.
  • the food composition may be a dietary supplement composition.
  • the fermentation product may be fermented into a strain belonging to any one of the fungi selected from the group consisting of Lactobacillus sp., Saccharomyces sp. And combinations thereof.
  • Lactobacillus brevis Lactobacillus brevis
  • Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae
  • the natural glutamic acid contained in the raw material solution can be converted into GABA with high efficiency without reducing the content of physiologically active substances such as taurine, seaweed oligosaccharide and seaweed mineral.
  • the fermented product may be fermented by inoculating the fermentation strain to 1 to 5% (v / w) of the total weight of the raw material solution.
  • the fermentation may be one containing 4500 to 5000ppm gamma (gamma-aminobutyric acid, GABA).
  • the Gaba may be a natural GABA in which the components contained in the oyster hydrolyzate, oyster extract and kelp extract are converted to GABA by the fermentation strain.
  • the stress includes all of the stresses that modern man receives in general life, but preferably the gamma-aminobutyric acid type A (GABA A) receptor and the 5-HT-2c (5-hydroxytryptamine-2c) receptor are involved. Include those caused by mechanisms.
  • GABA A gamma-aminobutyric acid type A
  • 5-HT-2c 5-HT-2c
  • the sleep disturbance refers to a disorder that complains of initiation of sleep, difficulty in maintaining sleep, or sleep that is not refreshed.
  • the sleep-related breathing disorder may be central sleep apnea syndrome or obstructive sleep apnea syndrome, and narcolepsy includes daytime hypersleepiness.
  • the sleep disorder is preferably selected from the group consisting of insomnia, abnormal movements and apneas during sleep, sleep disorders accompanied by hyperhydria, and pentobarbital amelioration of barbiturate-based anesthetics. There may be one or more sleep disorders.
  • Loss of taurine content as compared to before fermentation in the case of a composition comprising a fermented product fermented by mixing any one selected from the group consisting of oyster hydrolyzate, oyster extract and combinations thereof according to the present invention and the extract of kelp
  • the GABA content is remarkably improved compared to before fermentation, and the effect of suppressing stress and improving sleep disorder is excellent.
  • the oyster hydrolyzate may be prepared according to a conventional manufacturing method for manufacturing fish and fish hydrolyzate, and preferably may be prepared by hydrolysis using an enzyme.
  • the pretreated oysters washed with water, desalted and pulverized are mixed with water and reacted with an enzyme. After the reaction is completed, the enzyme is inactivated (deactivated) and then the insolubles are removed. It may be prepared by the method of obtaining the hydrolyzate removed or by concentrating or drying the hydrolyzate.
  • Mixing the pretreated oyster with water may be a mixture of water and the pretreated oyster in a volume ratio of 1: 0.1 to 2.0, preferably a mixture of oysters in a volume ratio of 1: 0.8 to 1.2. Can be.
  • the enzyme includes all enzymes commonly used for hydrolysis of food ingredients, and may preferably be alcalase (2%).
  • the hydrolysis step of adding and reacting the enzyme may be appropriately performed according to the type of enzyme, and preferably, may be performed by hydrolysis while stirring at 50 to 70 ° C. for 60 to 120 minutes.
  • the deactivation step of inactivating the enzyme may be performed by a conventional method appropriately selected according to the type of enzyme, and preferably, while stirring the mixture of the hydrolyzed oyster and water at 90 to 120 ° C. for 60 to 120 minutes. This can be done by inactivating the method.
  • the filtration step of removing the insoluble matters can be carried out using any filtration method commonly used in filtration of food.
  • the oyster residue may be removed using a sieve of 40 to 200 mesh (127 ⁇ m to 635 ⁇ m), and the remaining oyster hydrolyzate may be obtained.
  • the oyster extract may be prepared by concentrating the extract prepared by extracting the oyster with the extraction solvent or extracted with the extraction solvent.
  • the oyster extract may be prepared according to a conventional method for preparing fish and shellfish extracts, and more specifically, may be performed by adding an extraction solvent to the oyster from which impurities are removed and performing an extraction process.
  • the extraction process may be cold extraction, hot extraction, pressure extraction or ultrasonic grinding extraction.
  • the extraction solvent may be at least one selected from the group consisting of water and an organic solvent, the organic solvent may be an alcohol having 1 to 5 carbon atoms, preferably water.
  • the oyster extract is preferably a filtration step of removing the residue from the extract obtained in the extraction step, the extract obtained in the extraction step by extracting water by the extraction solvent to the pretreated by washing with water, desalting and crushed, to obtain the oyster extract from which the residue was removed It may be prepared by a method comprising a.
  • the extraction step may be carried out by a conventional method appropriately selected according to the type of the extraction solvent, preferably the pretreated oyster is mixed with water in a volume ratio of 1: 10 to 20, and 60 to 90 at 70 to 90 °C This can be done by stirring for minutes.
  • the filtration step can be carried out using any filtration method commonly used in the filtration of food.
  • the oyster residue may be removed using a sieve of 40 to 200 mesh (127 ⁇ m to 635 ⁇ m), and the remaining oyster hydrolyzate may be obtained.
  • the oyster extract may be concentrated or removed from the solvent by performing a filtration process under reduced pressure, or by performing additional concentration and / or freeze-drying.
  • the oyster extract may be prepared by a method of concentrating to reduce the brix concentration to 20 to 40% by reducing the pressure at 30 to 50 °C.
  • the obtained extract, hydrolyzate or concentrate of the extract can be stored in a deep freezer until use.
  • the kelp extract may be prepared by concentrating an extract prepared by extracting the kelp with an extraction solvent or by extracting with an extraction solvent.
  • the kelp extract may be prepared according to a conventional seaweed extract preparation method, and more specifically, may be performed by adding an extraction solvent to the kelp from which impurities are removed and performing an extraction process.
  • the extraction process may be cold extraction, hot extraction, pressure extraction or ultrasonic grinding extraction.
  • the extraction solvent may be at least one selected from the group consisting of water and an organic solvent, the organic solvent may be an alcohol having 1 to 5 carbon atoms, preferably 50% ethanol.
  • the kelp extract is preferably prepared by a method comprising a filtration step of obtaining an filtered kelp extract by filtering the extract obtained by adding alcohol to the extraction solvent and extracting the kelp, which is pretreated by washing with water and desalting. It can be done.
  • the extraction step may be carried out by a conventional method appropriately selected according to the type of the extraction solvent, preferably the pre-treated kelp is mixed with 50% ethanol in a volume ratio of 1:10 to 20, 60 at 70 to 90 °C It may be carried out by stirring for 120 minutes.
  • the filtration step may be performed by using all the filtration methods commonly used in the filtration of food, for example by using a pressure filter (filter press) to remove the residue of kelp, and to obtain the remaining kelp extract Can be done.
  • a pressure filter filter press
  • the kelp extract is subjected to an extraction process, followed by performing a filtration under reduced pressure or further concentrated and. Or lyophilization to concentrate or remove solvent.
  • the kelp extract may be prepared by a method of concentrating the brix concentration to 20% to 30% by reducing the pressure at a temperature of 30 to 50 ° C.
  • the composition including the fermented product as an active ingredient may include 0.001 part by weight to 100 parts by weight of the fermentation based on 100 parts by weight of the composition.
  • composition containing the fermented product as an active ingredient may further include a suitable carrier, excipient and diluent commonly used in the preparation thereof.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose , Microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • compositions can be used in oral formulations, such as powders, granules, tablets, suspensions, emulsions, syrups, etc. according to conventional methods.
  • the oral formulation is meant to include a solid preparation and a liquid preparation for oral administration
  • the solid preparation for oral administration may include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc.
  • the solid preparation is At least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like may be prepared in the digested product.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like may be prepared in the digested product.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc can also be used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solvents, emulsions, and serums.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have.
  • the present invention is a pre-treatment step of mixing any one selected from the group consisting of oyster hydrolyzate, oyster extract and a combination of kelp extract in a volume ratio of 1: 0.1 to 2.0, the pre-treated raw material is 10 to 30 of the total volume To the water (v / v) is mixed, the sterilization step of heat treatment for 10 to 20 minutes at 100 to 140 °C, the cooling step to cool the sterilized raw material solution to 30 to 37 °C, to the cooled raw material solution Inoculate fermentation strains, fermentation step of fermentation for 2 to 7 days, re-sterilization step of treating the fermented fermented product at 100 to 140 °C for 10 to 20 minutes, and filtering the re-sterilized fermented product, filtered It provides a method for producing a composition for relieving stress or improving sleep disorders, including a filtration step of obtaining a fermented product.
  • the pretreatment step may be performed by mixing any one selected from the group consisting of oyster hydrolyzate, oyster extract, and combinations thereof in a volume ratio of 1: 0.8 to 1.2.
  • the sterilization step may be preferably performed at 115 to 125 °C for 10 to 20 minutes.
  • the fermentation strain in the fermentation step may be a strain belonging to any one selected from the group consisting of Lactobacillus sp., Saccharomyces sp. And combinations thereof.
  • Lactobacillus brevis Lactobacillus brevis
  • Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae
  • the natural glutamic acid contained in the raw material solution can be converted into GABA with high efficiency without reducing the content of physiologically active substances such as taurine, seaweed oligosaccharide and seaweed mineral.
  • the fermentation step may be inoculated with the fermentation strain by selecting the appropriate content according to the type of the fermentation strain, preferably inoculated to be 1 to 5% (v / w) of the total weight of the raw material solution.
  • the filtration step may be performed by using all the filtration methods commonly used in the filtration of food, for example by using a pressure filter (filter press) to remove the residue of the fermentation, and to obtain the remaining fermentation Can be done.
  • a pressure filter filter press
  • the fermented product may be concentrated or removed by performing a filtration under reduced pressure or by further performing concentration and / or lyophilization.
  • the fermented product may be prepared by a method of concentrating to reduce the brix concentration to 20 to 30% by reducing the pressure.
  • the method for preparing the composition for relieving stress or improving sleep disorders may further include drying the obtained fermented product or concentrate of the fermented product by spray drying or lyophilization and then pulverizing the powder.
  • the method of preparing the composition for relieving stress or improving sleep disorders may further include a step of including the obtained fermented product, a concentrate of fermented product or a composition comprising the fermented product.
  • the present invention provides a food for stress relief or sleep disorder improvement comprising the composition as an active ingredient.
  • the food means a natural product or processed product containing one or more nutrients, and preferably means a state in which it can be directly eaten through a certain processing process. It is meant to include both health foods and beverages.
  • the food includes various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and functional foods.
  • the food in the present invention includes special nutritional products (e.g., prepared oils, infants, baby food, etc.), processed meat products, fish products, tofu, jelly, noodles (e.g. ramen, noodles, etc.), health supplements, seasoned foods ( For example, soy sauce, miso, red pepper paste, mixed soy sauce), sauces, confectionery (e.g. snacks), dairy products (e.g.
  • fermented milk, cheese, etc. other processed foods
  • kimchi, pickles various kimchi, pickles, etc.
  • beverages examples include, but are not limited to, fruit, vegetable drinks, soy milk, fermented beverages, etc.), natural seasonings (eg, ramen soup).
  • the food, beverage or food additives may be prepared by a conventional manufacturing method.
  • composition of the present invention contained in the food may be 0.01 parts by weight and 100 parts by weight based on 100 parts by weight of the total food.
  • Functional food in the present invention is the control of biological defense rhythm, disease prevention and recovery of food groups or food compositions that have added value to the food by using physical, biochemical, biotechnological techniques, etc. It means a food processed and designed to fully express the gymnastics function related to the living body.
  • the functional food may include food acceptable food additives, and may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of functional foods.
  • the beverage of the present invention is a generic term for drinking to quench thirst or to enjoy a taste, and includes a functional beverage.
  • the functional beverage is a physical defense, biochemical and biotechnological techniques, such as the use of physical beverages or beverages that have added value added to the function and expression of the function of the beverage to a specific purpose, control of biological defense rhythm, disease prevention and recovery, etc. It refers to a beverage that is designed and processed to fully express the gymnastics function related to the living body.
  • the beverage may contain various flavors, natural carbohydrates, and the like as additional components, as in general beverages.
  • the natural carbohydrates are glucose, monosaccharides such as fructose, malsaccharides, disaccharides such as sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • sweetening agent natural sweetening agents such as tautin and stevia extract, synthetic sweetening agents such as saccharin and aspartame, and the like can be used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 20 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • oysters and kelp are subjected to the same pretreatment process as washing, desalting, grinding, and the like, while oysters are used to increase the yield of minerals including taurine, GABA, and oligosaccharides in the final composition.
  • Decomposition and oyster extracts were used, and kelp was used as an extract.
  • FIG. 1 A process for preparing a composition through mixing oyster hydrolyzate and kelp extract of the present invention is shown in FIG. 1, and will be described in detail below.
  • the kelp was pretreated to facilitate extraction through washing and desalting, and the kelp extract was prepared by mixing 10 to 20 times 50% ethanol (alcohol) to the pretreated kelp while stirring at 70 to 90 ° C. for 60 to 120 minutes. .
  • the residue was removed from the extracted kelp extract using a pressure filter to obtain the remaining kelp extract.
  • the kelp extract obtained above was decompressed at a temperature of 30 to 50 ° C., concentrated under reduced pressure so as to have a brix concentration of 25%, and then packaged and stored.
  • the oysters were washed with water, desalted and pulverized, and pretreated to facilitate hydrolysis by enzymes.
  • the pretreated oysters and water were mixed at a weight ratio of 1: 1, and stirred at 50 to 70 ° C. for 60 to 120 minutes, followed by 0.2% (v / Hydrolysis was performed by addition of alcalase, which is a hydrolase of v).
  • alcalase which is a hydrolase of v.
  • the hydrolyzed oyster hydrolyzate was removed at 90 to 120 ° C. for 60 to 120 minutes to remove the activity of the added alcalase, and a vibrating body of 40 to 200 mesh (127 ⁇ m to 635 ⁇ m) was used.
  • the insoluble oyster residue was removed, the oyster hydrolyzate was obtained, and then packaged and stored.
  • Example 1-3 Preparation of Composition Using Mixture of Kelp Extract and Oyster Hydrolyzate
  • the kelp extract and the oyster hydrolyzate prepared in each of ⁇ Example 1-1> and ⁇ Example 1-2> are mixed in a volume ratio of 1: 1 and pretreated, and the pretreated raw liquid is about 10 to about 10 vol. Water was mixed so as to be 30% (v / v), and then sterilized at 121 ° C for 15 minutes. After cooling the sterilized main raw material solution to about 30 to 37 °C of the optimum temperature of fermentation, Lactobacillus brevis BJ-20 or Saccharomyces cerevisiae MBP ( Saccharomyces cerevisiae MBP) as a fermentation strain -27) inoculated and fermented.
  • Saccharomyces cerevisiae MBP Saccharomyces cerevisiae MBP
  • the fermented strains were inoculated to be 1 to 5% (v / v) of the total volume, and fermented for about 2 to 7 days so that the fermentation occurred sufficiently.
  • the fermented fermented product was re-sterilized to kill fermented microorganisms grown during the fermentation period by pressing at high temperature at 121 ° C. for 15 to 20 minutes.
  • the resterilized fermentation was decanted using a filter press and the remaining fermentation was collected.
  • the collected fermented product was dried by a method such as spray drying or freeze drying, and then pulverized and powdered.
  • the powdered composition was packaged to dose.
  • the oysters were washed with water, desalted and pulverized to be pre-treated to facilitate extraction.
  • the pre-treated oysters were mixed with 10-20 times of water and stirred at 70-90 ° C. for 60-90 minutes to extract them.
  • the residue of the extracted oyster was removed using a vibrating body of 40 to 200 mesh (127 ⁇ m to 635 ⁇ m) (127 ⁇ m to 635 ⁇ m) to obtain a remaining oyster extract.
  • the resulting oyster extract was concentrated under reduced pressure so as to reduce the brix concentration to 20 to 40% by reducing the pressure at a temperature of 30 to 50 °C, and then packaged and stored.
  • Example 2-2 Preparation of Composition Using Mixture of Kelp Extract and Oyster Extract
  • the kelp extract and the oyster extract prepared in ⁇ Example 1-1> and ⁇ Example 2-1>, respectively, are mixed in a weight ratio of 1: 1 and pretreated, and the pretreated raw liquid is about 10 to 30 of the total volume. After mixing water so that it may become% (v / v), it sterilized for 15 minutes at 121 degreeC. After cooling the sterilized main raw material solution to about 30 to 37 °C of the optimum temperature of fermentation, Lactobacillus brevis BJ-20 or Saccharomyces cerevisiae MBP ( Saccharomyces cerevisiae MBP) as a fermentation strain -27) inoculated and fermented.
  • Saccharomyces cerevisiae MBP Saccharomyces cerevisiae MBP
  • the fermented strains were inoculated to be 1 to 5% (v / v) of the total volume, and fermented for about 2 to 7 days so that the fermentation occurred sufficiently.
  • the fermented fermented product was re-sterilized to kill fermented microorganisms grown during the fermentation period by pressing at high temperature at 121 ° C. for 15 to 20 minutes.
  • the resterilized fermentation was decanted using a filter press and the remaining fermentation was collected.
  • the collected fermented product was dried by a method such as spray drying or freeze drying, and then pulverized and powdered.
  • the powdered composition was packaged to dose.
  • the taurine was 2347.45ppm and 2589.38ppm, respectively, before fermentation of the mixture of oyster hydrolyzate and kelp extract and the oyster extract and kelp extract mixture. It was 4582.14ppm and 4786.66ppm before the fermentation of the mixture of lysate and kelp extract and the mixture of oyster extract and kelp extract, respectively, but almost after fermentation. It was confirmed that the content of GABA, which was not present, increased significantly to 4451.76ppm and 4726.55ppm after fermentation, respectively.
  • fermented products of oyster hydrolyzate fermented products of kelp extract and green tea extract, and fermented products of kelp extract were used as controls, and when treated with each composition, [ 3 H] -flumazenyl ( RO 15-1788) and the binding value of the receptor is shown in FIG.
  • Decreased binding of GABA A receptor in FIG. 4 means that the binding of the radiolabeled GABA and the receptor contained in the extract or fermentation product of the invention is not [ 3 H] -flumagenyl, but FIG. As shown in Fig. 4, the binding degree of each composition to the GABA A receptor was increased in proportion to the concentration, and especially at 10 mg / mL showed a 20% inhibitory effect. From these results, it was confirmed that the fermentation product of the mixture of the mixture of oyster hydrolyzate and kelp extract and the fermentation product of the mixture of oyster extract and kelp extract with respect to SD-rat have a stress inhibitory effect.
  • the lower the degree of binding of the 5-HT-2c receptor is not [ 3 H] -Mesulergine, but the binding of the 5-HT-2c receptor with the radiolabeled active ingredient included in the extract or fermentation product of the invention is increased.
  • the 5-HT 2C receptor binding affinity increased with concentration, especially in the case of 10 mg / mL treatment containing the oyster fermentation. It showed an inhibitory effect of%. From these results, it was confirmed that the fermentation product containing the concentrate of the oyster hydrolyzate and extract has a stress inhibitory effect.
  • the composition comprising the fermented products prepared in Examples 1-3 and 2-2 were stabilized for 30 minutes after oral administration of 200 mg and 400 mg to ICR mice, respectively.
  • Pentobarbital (40% / kg) of barbiturate-based anesthetics was administered to measure and analyze time to sleep and time to sleep.
  • fermented products of oyster hydrolyzate, fermented products of kelp extract and green tea extract, and fermented products of kelp extract were orally administered in the same manner as the above composition, and after administration of saline, pentobarbital (Pentobarbital) was used as the sleep latency measurement value of the baseline (baseline) in the elevation, and the results are shown in FIG.
  • the sleep start time and the maintenance time were 413.5 ⁇ 18.5 seconds and 2854.1 ⁇ 12.4 seconds, respectively, in the case of the control group, but the composition 400 of the present invention compared to the pentobarbital-treated group alone.
  • the sleep start time was significantly decreased, and the sleep maintenance time was also increased. From these results, it was confirmed that the composition shortens the sleep start time and helps to take a good night's sleep.
  • Caffeine-induced locomotor alteration experiments were also conducted to investigate the induction of motor activity changes through chemical stimuli that interfere with sleep. Specifically, eight weeks-old male SD rats were orally administered with the composition, and then stabilized for 30 minutes, followed by administration of caffeine (10 mg / kg), and gaitability was measured through a video tracking method through SMART-program. At this time, the fermented product of oyster hydrolyzate, fermented product of kelp extract and green tea extract and fermented product of kelp extract were measured by oral administration in the same manner as the composition of the present invention as a control, and the results are shown in FIG. It was.
  • caffeine-infused SD-rat increased overall locomotor activity compared to normal SD-rat.
  • the caffeine-infused SD rats had an increased walking distance compared to the normal SD-rats treated with nothing, but when caffeine was added to 200 mg and 400 mg of the composition of the present invention. It can be seen that the moving distance is significantly reduced than that of the SD-rat injected. From these results, it was confirmed that the composition of the present invention has an effect of significantly reducing walking, that is, improving sleep disorders.
  • composition comprising the fermentation product of the present invention was added to 100 parts by weight of the whole flour, and bread, cake, cookies, crackers and noodles were prepared using this mixture.
  • composition comprising the fermentation product of the present invention was added 0.1 to 5.0 parts by weight to the soup and broth with respect to 100 parts by weight of the whole soup and broth to prepare a health-producing meat products, soup and noodles of noodles.
  • a health promotion ground beef was prepared by adding 10 parts by weight of the composition including the fermented product of the present invention to 100 parts by weight of the ground beef.
  • composition comprising the fermentation product of the present invention was added to 100 parts by weight of whole milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
  • Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh using a grinder.
  • Black beans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the composition of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, and the dried product obtained by spraying and drying with a hot air dryer was pulverized with a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder.
  • the grains, seeds and compositions prepared above were prepared by blending in the following ratios.
  • Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight, barley 20 parts by weight), seed seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame), ECDK (3 parts by weight) Parts), ganoderma lucidum (0.5 parts by weight), sulfuric acid (0.5 parts by weight) and 19 parts by weight of the dry powder composition of the present invention was prepared.
  • a composition comprising an ingredient such as liquid fructose (0.5% by weight), oligosaccharide (2% by weight), sugar (2% by weight), salt (0.5% by weight), water (75% by weight) and a fermentation product of the present invention. It was prepared by homogeneously blending and sterilizing instantaneously and then packing it in a small packaging container such as a glass bottle or a plastic bottle.
  • composition including the fermented product of the present invention was added to 1,000 ml of tomato or carrot juice to prepare vegetable juice.
  • 1 g of the composition comprising the fermentation product of the present invention was added to 1,000 ml of apple or grape juice to prepare a fruit juice.

Abstract

본 발명은 굴과 해조류의 혼합물을 발효시켜 다량의 천연 GABA를 함유하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 발효 전의 조성물과 비교하여 타우린의 손실이 없으면서도 GABA를 다량으로 포함하고, 스트레스 억제 효과 및 수면장애 개선효과가 우수하다.

Description

굴과 해조류의 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법
본 발명은 굴과 해조류의 혼합물을 발효시켜 다량의 천연 가바를 함유하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
최근 식습관 변화(고에너지, 포화지방, 식염)로 인해 비만 및 대사증후군 성인 질환의 유병률이 높아지고 있고, 수면장애 및 스트레스가 동반되면서 각종 질병을 직·간접적으로 유발하는 등 국민 보건상 스트레스 해소 및 수면증진이 국가적 차원에서 그 중요성이 대두되고 있다. 최근의 연구조사에 따르면 세계 인구의 1/4이 불면증을 경험하고 있으며 이 중 약 10%는 만성불면증을 겪고 있을 정도로 수면 장애로 인한 문제가 확대되고 있다.
세계의 수면 관련 시장 규모는 200억 달러로 수면클리닉(sleep clinic)이 급증하고 있으며, 기능성 매트리스, 천연 수면보조제(herbal Sleep aids) 등의 수면 관련 제품의 시장이 확대되고 있다. 현재 신경의약품 중 수면제의 성장률이 약 20%로 가장 높게 나타났으며, 최근에는 선진국뿐 아니라 개발도상국에서도 시장이 확대되고 있다. 그러나, 수면제의 경우 현재 약 70%가 장기복용자, 50%가 60세 이상의 고령층에서 소비되고 있는데 4주 이상의 장기복용은 의존성 및 부작용의 문제를 가지며, 노인 및 임산부 등은 섭취가 제한되기도 한다. 따라서 수면제 장기복용자 및 제한자의 경우 이를 대체할 수 있는 수단으로 천연 수면보조제의 필요성이 대두되고 있다.
또한, 현대인의 삶에 대한 질 개선에 관한 관심이 급증하면서 웰빙(well-being)을 넘어 LOHAS(lifestyles of health and substantiality)를 추구함으로써 건강기능식품에 대한 관심이 증대하고 있고, 원료 안전성 등에 대한 우려를 포함하여 안전한 먹거리에 대한 관심이 증대하고 있다. 이러한 점에서 해양생물은 식품의 3차적인 기능인 영양적 특성, 기호적 특성 및 생체조절 특성을 모두 갖춘 식품 원료로 기호도와 소비량이 증가하고 있으며, 생산량 또한 증가하고 있는 추세이다.
따라서 천연물 유래의 신소재 개발을 위하여 사용되는 다시마와 굴은 안전성과 경제성이 확보된 천연 건강식품으로 널리 식용되고 있는 훌륭한 해양생물자원이다. 다시마는 육상식물에 비해 비타민 및 미네랄, 특히 마그네슘, 칼슘, 요오드(4000ppm 이상) 및 철 등의 함량이 높고, 대표적인 정미성분인 천연의 아미노산(글루탐산 및 아스파르트산)을 다량으로 함유하고 있으며, 고기능성 천연소재로 각광을 받고 있는 수용성 식이섬유인 후코이단(fucoidan) 등과 같은 생리활성이 강한 다당류를 풍부하게 포함하고 있어 이상적인 천연식품으로써 인식되고 있으며, 최근에는 기능성 소재 또는 건강식품의 원료로 많이 이용되고 있다. 최근 다시마의 생리활성에 관한 국내외 전문가들의 활발한 연구 수행 결과, 다시마가 다이어트 효과, 정장 작용에 의한 변비 치료, 중금속 및 방사능 물질의 체외 배출 작용 등에 깊이 관여하는 것으로 밝혀졌다. 그리고 후코이단으로 통칭되는 황-함유 다당류의 경우는 항균, 항산화, 항바이러스, 항암활성을 비롯하여 동맥경화, 심근경색, 고혈압, 협심증, 뇌졸중 등의 성인병 예방에 효과적이라고 보고된바 있다. 굴은 GABA의 전구물질인 글루탐산이 다량으로 포함하고, 항산화능, 간기능 개선 및 심혈관계 효능 개선 물질로서 보고되어온 천연아미노산인 타우린 역시 다량 함유할 뿐만 아니라 글리코겐, 비타민, 단백질 및 타이로신 등 18종 이상의 아미노산과 철분, 요오드 등 필수 무기질이 풍부하여 세계 10대 수산물로서 널리 이용되고 있다.
발효를 통해 얻어지는 주요 성분인 GABA는 비단백질성 아미노산으로 분자량이 103.2달톤(dalton)으로 피페리인산이라고도 불린다. 끓는점이 202 ℃로 열 안정성이 있고, C4H9NO2의 분자식을 가지며 물에 대한 용해성이 크다. GABA는L-글루탐산(L-Glutamic acid)이 글루탐산 데카르복실라제(Glutamic acid decarboxylase, GAD)의 촉매작용에 의해 탈탄산되어 생성되고, 주요기능으로는 뇌 또는 척추에 존재하는 신경전달물질로 혈류를 개선하며 뇌의 산소공급을 증가시켜 뇌의 대사촉진 및 뇌 기억을 증진시키는 뇌의 영양제로 알려져 있다. GABA는 글루탐산이 신경을 활성화시키는 것과는 달리 신경활성을 억제하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 기능은 신경세포의 기능과 정보처리에 지대한 영향을 미치게 된다. 특히, 감각 뇌에서 방향 민감성, 각도 민감성 반응 등을 결정하며 정교한 운동기능도 조율하는 것으로 알려져 있다. 아울러 뇌의 흥분을 적절히 제어하여 비정상적으로 과도한 활성을 제어하는데 관여하는 것으로 알려져 있으며, 척추와 무척추동물 중에는 GABA를 전달하는 뉴런이 존재하며, 이 뉴런에 GABA가 충분히 공급되면 간질발작이 억제된다고 보고된 바 있다. GABA의 뇌혈류 촉진효과와 산소공급 증가효과는 뇌세포의 대사를 촉진시킴으로써 뇌졸중의 후유증 및 뇌동맥경화증 등을 개선하는 효과가 있어 의약품으로 사용되고 있고, 이와 반대로 뇌혈액 중에 GABA 및 GAD 농도가 낮으면 간질병, 파킨슨씨병, 정신분열증 등의 질병이 발병하는 것과 매우 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있으며, 알코올 중독자들은 정상인에 비해 상대적으로 GABA 농도가 낮은 것으로 알려져 있다. 이외에도 GABA는 성장호르몬의 분비조절, 통증완화, 정신신경 안정작용, 혈압강하작용, ACE 활성저해작용 등이 있어 생리학적으로 아주 유용한 물질이다.
그러나 일반적으로 식품 등을 통하여 섭취되는 타우린과 GABA의 양은 제한적이며 약리작용을 발휘하기 위한 필요량을 식품으로 섭취하는 것이 용이하지 않다. 이처럼 우리 몸에 유용한 타우린과 GABA를 충분히 섭취할 수 있는데 문제가 있으며, 이를 극복하기 위해 기능성분을 극대화한 추출법을 통해 다시마와 굴의 전처리를 하고, 이들 성분 중 글루탐산을 GABA로 전환하되 기타 기능성분(해조올리고당, 해조 미네랄, 타우린, 펩타이드, 등)의 손실없는 발효공정 및 균주를 이용하여, 해양생물 특유의 이미, 이취를 제거함으로써 기호성 및 기능성을 확보한 조성물의 제조방법에 대한 연구를 통한 해양생물의 1차적 소비 행태를 벗어난 고부가가치의 소재의 개발이 필요하게 되었다.
본 발명자들은 해양생물을 중에서 다량의 타우린 및 GABA를 함유하는 조성물에 관하여 연구하던 중, 자연섭취로는 양적 제한을 가진 타우린과 GABA를 생리활성이 기대되는 양까지 높여 섭취할 수 있도록, 굴과 다시마 내에 존재하는 글루탐산을 GABA로 전환하면서도 타우린과 같은 기능성 물질에는 영향을 주지 않는 발효 균주를 이용하여, 굴과 다시마의 추출 혼합액을 발효시킬 경우, 스트레스 억제 및 수면장애 개선효과가 우수함을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 굴과 다시마의 혼합물을 발효시켜 다량의 천연 GABA를 함유하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 식품을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 굴 가수분해물, 굴 추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마 추출물의 혼합물을 발효시킨 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 식품을 제공한다.
본 발명에 따른 굴과 다시마 추출물의 혼합물을 발효시켜 제조한 조성물은 발효 전의 조성물과 비교하여 타우린의 손실이 없으면서도 GABA를 다량으로 포함하고, 스트레스 억제 효과 및 수면장애 개선효과가 우수하다.
도 1은 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조과정을 나타낸 도이다.
도 2는 굴 추출물과 다시마 추출물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조과정을 나타낸 도이다.
도 3은 조성물의 발효과정에서 발효 전·후에 따른 타우린, GABA, 글루타메이트(glutamate)의 함량 변화를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물과 대표적인 신경안정 수용체인 GABA A(gamma-aminobutyric acid type A) 수용체의 결합 친화도 활성의 비교를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물과 대표적인 신경안정 수용체인 5-HT-2c(5-hydroxytryptamine-2c) 수용체의 결합 친화도 활성의 비교를 나타낸 도이다.
도 6은 조성물의 수면 박탈 동물모델에서 수면 유도시간 및 유지시간과의 관계를 나타낸 도이다. 도 6A는 굴 추출물 발효물, 도 6B는 다시마 추출물과 녹차 추출물 혼합액의 발효물, 도 6C는 다시마 추출물과 굴 추출물 혼합액의 발효물 그리고 도 6D는 다시마 추출물 발효물을 각각 유효성분으로 포함하는 조성물에 대한 수면 유도시간 및 유지시간의 관계를 나타낸 것이다. 각 그래프의 가로축은 대조군(control)과 각 조성물을 200mg 및 400mg으로 처리한 처리구를 의미하고, 각 (a) 그래프의 세로축은 수면유도시간(초) 및 (b) 수면유지시간(초)를 의미한다.
도 7은 조성물의 카페인에 의한 행동박탈 동물모델에서 신경안정 효능에 대해 나타낸 도이다. 도 7A는 굴 추출물 발효물, 도 7B는 다시마 추출물 및 녹차 추출물 혼합액의 발효물, 도 7C는 다시마 추출물 및 굴 추출물 혼합액의 발효물 그리고 도 7D는 다시마 추출물 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 대한 신경안정 효능에 대해 나타낸 것이다. 각 그래프의 가로축은 음성대조군(blank), 대조군 그리고 각 조성물을 200mg 및 400mg으로 처리한 처리구를 의미하고, 각 그래프의 세로축은 실험동물의 이동거리(cm2)를 의미한다.
본 발명은 굴 가수분해물, 굴 추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마 추출물의 혼합물을 발효시킨 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 식품 조성물 또는 의약 조성물 일 수 있다. 상기 식품 조성물은 건강기능 식품 조성물 일 수 있다.
상기 발효물은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 사카로미세스 속(Saccharomyces sp.) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균 속에 속하는 균주로 발효된 것 일 수 있다. 바람직하게는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 사카로미세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균주로 발효된 것 일 수 있고, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 브레비스 BJ20(Lactobacillus brevis BJ20, KCTC11377BP), 사카로미세스 세레비시애 MBP-27(Saccharomyces cerevisiae MBP-27) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균주로 발효된 것 일 수 있다. 상기 균주를 이용하는 경우 타우린, 해조올리고당, 해조미네랄 등의 생리활성물질의 함량을 감소시키지 않으면서 원료액에 포함된 천연 글루탐산을 고효율로 GABA로 전환할 수 있다.
상기 발효물은 발효균주를 원료액 전체 중량의 1 내지 5%(v/w)가 되도록 접종하여 발효시킨 것 일 수 있다.
상기 발효물은 가바(gamma-aminobutyric acid, GABA)가 4500 내지 5000ppm 포함된 것 일 수 있다. 상기 가바는 굴 가수분해물, 굴 추출물 및 다시마 추출물에 포함된 성분이 발효균주에 의하여 GABA로 전환된 천연 GABA 일 수 있다.
상기 스트레스는 현대인이 일반생활에서 받는 스트레스 모두를 포함하나, 바람직하게는 스트레스 관련 수용체인 GABA A(gamma-aminobutyric acid type A) 수용체와 5-HT-2c(5-hydroxytryptamine-2c) 수용체가 관여하는 기작에 의해 유발되는 것을 포함한다.
상기 수면장애(sleep disturbance)는 수면의 시작이나 수면 유지의 어려움 또는 원기 회복이 되지 않는 수면을 호소하는 장애를 의미하는 것으로 일차성 불면증(primary insomnia), 불면증, 수면 관련 호흡장애, 기면증, 하지불안증후군 및 신경안정제(barbiturate)계 마취제인 펜토바르비탈(pentobarbital)로 개선 가능한 수면장애 등을 포함한다.
상기 수면 관련 호흡장애는 중추수면무호흡증후군 또는 폐쇄수면무호흡증후군 일 수 있고, 상기 기면증은 주간과다졸림증을 포함한다.
상기 수면장애는 바람직하게는 불면증, 수면 중 이상한 움직임 및 무호흡증, 주간과다졸림증을 동반하는 수면장애, 및 신경안정제(barbiturate)계 마취제인 펜토바르비탈(pentobarbital)로 개선 가능한 수면장애로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수면장애 일 수 있다.
본 발명에 따른 굴 가수분해물, 굴 추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마의 추출물을 혼합하여 발효시킨 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 경우, 발효전과 비교하여 타우린 함량의 손실이 없고, GABA의 함유량이 발효전과 비교하여 현저히 향상되고, 스트레스 억제 효과 및 수면장애 개선효과가 우수하다.
본 발명에 있어서, 굴 가수분해물은 어폐류 가수분해물 제조를 위한 통상의 제조방법에 따라 제조된 것 일 수 있으며, 바람직하게는 효소를 이용한 가수분해에 의해 제조된 것일 수 있다.
더욱 바람직하게는 수세, 탈염 및 분쇄하여 전처리한 굴을 물과 혼합하고, 효소를 첨가하여 반응시킨 후, 상기 반응이 끝나면 효소를 불활성화(실활) 시킨 후에 불용물을 제거하고, 상기 불용물이 제거된 가수분해물 또는 상기 가수분해물을 농축하거나 건조한 것을 수득하는 방법으로 제조된 것 일 수 있다.
상기 전처리한 굴을 물과 혼합하는 단계는 물과 상기 전처리한 굴을 1 : 0.1 내지 2.0의 부피비로 혼합한 것 일 수 있고, 바람직하게는 굴을 1 : 0.8 내지 1.2의 부피비로 혼합한 것 일 수 있다.
상기 효소는 식품원료의 가수분해에 통상적으로 사용되는 모든 효소를 포함하고, 바람직하게는 알칼라제(alcalase, 2%)일 수 있다. 상기 효소를 첨가하여 반응시키는 가수분해단계는 효소의 종류에 따라 적절하게 수행될 수 있고, 바람직하게는 50 내지 70 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 가수분해하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 효소를 불활성화 시키는 실활단계는 효소의 종류에 따라 적절하게 선택된 통상의 방법으로 수행될 수 있고, 바람직하게는 상기 가수분해된 굴과 물의 혼합물을 90 내지 120 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 실활시키는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 불용물을 제거하는 여과단계는 식품의 여과에 있어서 통상적으로 사용되는 모든 여과 방법을 이용하여 수행할 수 있다. 일 예로 40 내지 200메쉬(127㎛ 내지 635 ㎛)의 체를 사용하여 굴의 잔사를 제거하고, 남은 굴 가수분해물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.
본 발명에 있어서, 굴 추출물은 굴을 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물을 농축하여 제조할 수 있다.
상기 굴 추출물은 통상의 어폐류 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있고, 보다 구체적으로는 불순물을 제거한 상기 굴에 추출용매를 가하고, 추출과정을 수행하는 방법으로 수행한 것 일 수 있다. 상기 추출과정은 냉침추출법, 온침추출법, 가압추출법 또는 초음파 분쇄 추출법일 수 있다.
상기 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 일 수 있고, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올 일 수 있으며, 바람직하게는 물 일 수 있다.
상기 굴 추출물은 바람직하게는 수세, 탈염 및 분쇄하여 전처리한 굴에 물을 추출용매로 가하여 추출하는 추출단계, 추출단계에서 얻어진 추출물에서 잔사를 제거하고, 상기 잔사가 제거된 굴 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것 일 수 있다.
상기 추출단계는 추출용매의 종류에 따라서 적절하게 선택된 통상의 방법으로 수행될 수 있고, 바람직하게는 전처리한 굴을 물과 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하고, 70 내지 90 ℃에서 60 내지 90분 동안 교반하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 여과 단계는 식품의 여과에 있어서 통상적으로 사용되는 모든 여과 방법을 이용하여 수행할 수 있다. 일 예로 40 내지 200메쉬(127㎛ 내지 635 ㎛)의 체를 사용하여 굴의 잔사를 제거하고, 남은 굴 가수분해물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 굴 추출물은 추출과정을 수행한 이후, 감압 여과과정을 수행하거나 추가로 농축 및/또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거한 것 일 수 있다. 바람직하게는 상기 굴 추출물을 30 내지 50℃에서 감압하여 brix 농도가 20 내지 40%가 되도록 농축하는 방법으로 제조한 것 일 수 있다.
상기 수득한 추출물, 가수분해물 또는 추출물의 농축물은 사용시까지 급속 냉동 냉장고(deep freezer)에 보관할 수 있다.
본 발명에 있어서, 다시마 추출물은 다시마를 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물을 농축하여 제조할 수 있다.
상기 다시마 추출물은 통상의 해조류 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있고, 보다 구체적으로는 불순물을 제거한 다시마에 추출용매를 가하고, 추출과정을 수행하는 방법으로 수행한 것 일 수 있다. 상기 추출과정은 냉침추출법, 온침추출법, 가압추출법 또는 초음파 분쇄 추출법일 수 있다.
상기 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 일 수 있고, 상기 유기 용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올 일 수 있고, 바람직하게는 50% 에탄올 일 수 있다.
상기 다시마 추출물은 바람직하게는 수세 및 탈염하여 전처리한 다시마에 알코올을 추출용매로 가하여 추출하는 추출단계, 상기 추출단계에서 얻어진 추출물을 여과하여 여과된 다시마 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것 일 수 있다.
상기 추출단계는 추출용매의 종류에 따라서 적절하게 선택된 통상의 방법으로 수행될 수 있고, 바람직하게는 전처리한 다시마를 50% 에탄올과 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하고, 70 내지 90 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 여과단계는 식품의 여과에 있어서 통상적으로 사용되는 모든 여과 방법을 이용하여 수행할 수 있고, 일 예로 압력여과기(filter press)를 사용하여 다시마의 잔사를 제거하고, 남은 다시마 추출물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 다시마 추출물은 추출과정을 수행한 이후, 감압 여과과정을 수행하거나 추가로 농축 및. 또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거한 것 일 수 있다. 바람직하게는 상기 다시마 추출물을 30 내지 50 ℃의 온도에서 감압하여 brix 농도가 20% 내지 30%가 되도록 농축하는 방법으로 제조한 것 일 수 있다.
상기 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 상기 조성물 100 중량부에 대하여 상기 발효물을 0.001 중량부 내지 100 중량부로 포함할 수 있다.
상기 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 그 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 중 1종 일 수 있다.
상기 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 현탁제, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형물로 사용될 수 있다.
상기 경구형 제형물은 경구투여를 위한 고형제제와 액상제제를 포함하는 의미이며, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형제제는 상기 가수분해물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럼제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한 본 발명은 굴 가수분해물, 굴추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마 추출물을 1 : 0.1 내지 2.0의 부피비로 혼합하는 전처리단계, 상기 전처리 된 원료액이 전체 부피의 10 내지 30%(v/v)가 되도록 물을 혼합하고, 100 내지 140 ℃에서 10 내지 20분 동안 열처리하는 멸균단계, 상기 멸균된 원료액을 30 내지 37 ℃로 냉각하는 냉각단계, 상기 냉각된 원료액에 발효균주를 접종하고, 2 내지 7일간 발효하는 발효단계, 상기 발효된 발효물을 100 내지 140 ℃에서 10 내지 20분 동안 처리하는 재멸균단계, 및 상기 재멸균된 발효물을 여과하고, 여과된 발효물을 수득하는 여과단계를 포함하는, 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.
상기 전처리단계는 바람직하게는 굴 가수분해물, 굴추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마 추출물을 1 : 0.8 내지 1.2의 부피비로 혼합하여 수행할 수 있다.
상기 원료액의 함량이 전체 부피의 10 내지 30%(v/v) 범위를 벗어나는 경우 굴과 다시마의 염분에 의하여 최종적으로 제조되는 발효물을 포함하는 조성물의 맛에 영향을 미칠 수 있어 상기 범위를 만족하도록 혼합하는 것이 바람직하다.
상기 멸균단계는 바람직하게는 115 내지 125 ℃에서 10 내지 20분 동안 수행할 수 있다.
상기 발효단계에서 발효균주는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 사카로미세스 속(Saccharomyces sp.) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균속에 속하는 균주로 일 수 있다. 바람직하게는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 사카로미세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균주로 발효된 것 일 수 있고, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 브레비스 BJ20(Lactobacillus brevis BJ20, KCTC11377BP), 사카로미세스 세레비시애 MBP-27(Saccharomyces cerevisiae MBP-27) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균주로 발효된 것 일 수 있다. 상기 균주를 이용하는 경우 타우린, 해조올리고당, 해조미네랄 등의 생리활성물질의 함량을 감소시키지 않으면서 원료액에 포함된 천연 글루탐산을 고효율로 GABA로 전환할 수 있다.
상기 발효단계는 상기 발효균주의 종류에 따라서 적절한 함량을 선택하여 발효균주를 접종할 수 있고, 바람직하게는 원료액 전체 중량의 1 내지 5%(v/w)가 되도록 접종할 수 있다.
상기 재멸균단계를 통해서 발효물을 다시 멸균함으로써 발효기간 중에 증식한 발효미생물을 사멸시켜 과발효가 일어나지 않도록 할 수 있다.
상기 여과단계는 식품의 여과에 있어서 통상적으로 사용되는 모든 여과 방법을 이용하여 수행할 수 있고, 일 예로 압력여과기(filter press)를 사용하여 발효물의 잔사를 제거하고, 남은 발효물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 발효물은 감압 여과과정을 수행하거나 추가로 농축 및/또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거한 것 일 수 있다. 바람직하게는 상기 발효물을 감압하여 brix 농도가 20 내지 30%가 되도록 농축하는 방법으로 제조한 것 일 수 있다.
상기 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법은 수득한 발효물 또는 발효물의 농축물을 분무건조 또는 동결건조의 방법으로 건조한 후, 분쇄하여 분말화하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법은 수득한 발효물, 발효물의 농축물 또는 상기 발효물을 포함하는 조성물을 포함하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 식품을 제공한다.
상기 식품은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하고, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의미이다.
상기 식품은 일 예로, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
상기 식품에 포함되는 본 발명의 조성물은 전체 식품 100 중량부에 대하여 0.01 중량부 및 100 중량부 일 수 있다.
본 발명에서 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있고, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 음료는 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것을 총칭하는 의미하고, 기능성 음료를 포함한다. 상기 기능성 음료는 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
상기 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 슈크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01 내지 20g, 바람직하게는 약 0.02 내지 0.03g 이다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물의 제조 시, 굴과 다시마를 수세, 탈염, 분쇄 등의 전처리 과정을 동일하게 수행하되, 최종 조성물의 타우린과 GABA 및 올리고당을 비롯한 미네랄의 수율을 최대로 증대하기 위하여 굴은 가수분해물 및 굴 추출물을 사용하고, 다시마는 추출물을 사용하였다.
<실시예 1> 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조
본 발명의 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합을 통한 조성물의 제조과정에 대해 도 1 에 나타내었으며, 이하 단계마다 구체적으로 설명한다.
실시예 1-1. 다시마 추출물의 제조
다시마를 수세 및 탈염을 통해 추출이 용이하도록 전처리하고, 상기 전처리한 다시마에 10 내지 20배수의 50% 에탄올(주정)을 혼합하여 70 내지 90 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 다시마 추출물을 제조하였다. 상기 추출된 다시마의 추출물에서 압력여과기(filter press)를 사용하여 잔사를 제거하고 남은 다시마 추출물을 수득하였다. 상기 수득한 다시마 추출물을 30 내지 50 ℃의 온도에서 감압하여 brix 농도가 25%가 되도록 감압농축하고 포장하여 보관하였다.
실시예 1-2. 굴 가수분해물의 제조
굴을 수세, 탈염, 분쇄하여 효소에 의한 가수분해가 용이하도록 전처리하고, 상기 전처리한 굴과 물을 1:1의 중량비로 혼합하여 50 내지 70 ℃에서 60 내지 120분간 교반하면서 0.2%(v/v)의 가수분해효소인 알카라제(alcalase)를 첨가하여 가수분해하였다. 상기 가수분해한 굴 가수분해물을 90 내지 120 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 첨가된 알카라제(alcalase)의 활성을 제거하고, 40 내지 200메쉬(127㎛ 내지 635 ㎛)의 진동체를 사용하여 불용된 굴의 잔사를 제거하고, 굴 가수분해물을 수득 한 다음, 포장하여 보관하였다.
실시예 1-3. 다시마 추출물 및 굴 가수분해물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조
상기 <실시예 1-1>과 <실시예 1-2>에서 각각 제조한 다시마 추출물과 굴 가수분해물을 1:1의 부피비로 배합하여 전처리하고, 상기 전처리한 원료액을 전체 부피의 약 10 내지 30%(v/v)가 되도록 물을 혼합한 후, 121 ℃에서 15분간 멸균하였다. 상기 멸균한 주원료액을 발효의 적정온도인 약 30 내지 37 ℃까지 냉각한 후, 발효균주로 락토바실러스 브레비스 BJ-20(Lactobacillus brevis BJ-20) 또는 사카로미세스 세레비시애 MBP-27(Saccharomyces cerevisiae MBP-27)를 접종하여 발효하였다. 이때 발효균주는 전체 부피의 1 내지 5%(v/v)가 되도록 접종하며, 발효가 충분히 일어날 수 있도록 약 2 내지 7일간 발효하였다. 상기 발효된 발효물을 121 ℃에서 15 내지 20분 동안 고온가압 하여 발효기간 중에 증식한 발효미생물을 사멸시키도록 재멸균하였다. 상기 재멸균된 발효물을 압력여과기(filter press)를 사용하여 잔사를 제거하고 남은 발효물을 수거하였다. 상기 수거된 발효물을 분무건조 또는 동결건조 등의 방법으로 건조한 후, 분쇄하여 분말화하였다. 상기 분말화된 조성물을 용량에 맞게 포장하였다.
<실시예 2> 굴 추출물과 다시마 추출물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조
본 발명의 굴 추출물과 다시마 추출물의 혼합을 통한 조성물의 제조과정에 대해 도 2에 나타내었으며, 이하 단계마다 구체적으로 설명한다.
실시예 2-1. 굴 추출물의 제조
굴을 수세, 탈염, 분쇄하여 추출이 용이하도록 전처리하고, 상기 전처리한 굴에 10 내지 20배수의 물을 혼합하여 70 내지 90 ℃에서 60 내지 90분 동안 교반하여 추출하였다. 상기 추출된 굴의 잔사를 40 내지 200메쉬(127㎛ 내지 635 ㎛) (127㎛ 내지 635 ㎛)의 진동체를 이용하여 제거하고 남은 굴 추출물을 수득하였다. 상기 수득한 굴 추출물을 30 내지 50 ℃의 온도에서 감압하여 brix 농도가 20 내지 40%가 되도록 감압농축하고 포장하여 보관하였다.
실시예 2-2. 다시마 추출물 및 굴 추출물의 혼합물을 이용한 조성물의 제조
상기 <실시예 1-1>과 <실시예 2-1>에서 각각 제조한 다시마 추출물과 굴 추출물을 1:1의 중량비로 배합하여 전처리하고, 상기 전처리한 원료액을 전체 부피의 약 10 내지 30%(v/v)가 되도록 물을 혼합한 후, 121 ℃에서 15분간 멸균하였다. 상기 멸균한 주원료액을 발효의 적정온도인 약 30 내지 37 ℃까지 냉각한 후, 발효균주로 락토바실러스 브레비스 BJ-20(Lactobacillus brevis BJ-20) 또는 사카로미세스 세레비시애 MBP-27(Saccharomyces cerevisiae MBP-27)를 접종하여 발효하였다. 이때 발효균주는 전체 부피의 1 내지 5%(v/v)가 되도록 접종하며, 발효가 충분히 일어날 수 있도록 약 2 내지 7일간 발효하였다. 상기 발효된 발효물을 121 ℃에서 15 내지 20분 동안 고온가압 하여 발효기간 중에 증식한 발효미생물을 사멸시키도록 재멸균하였다. 상기 재멸균된 발효물을 압력여과기(filter press)를 사용하여 잔사를 제거하고 남은 발효물을 수거하였다. 상기 수거된 발효물을 분무건조 또는 동결건조 등의 방법으로 건조한 후, 분쇄하여 분말화하였다. 상기 분말화된 조성물을 용량에 맞게 포장하였다.
<실험예 1> 발효에 의한 발효물의 타우린 및 GABA의 함량의 변화
본 실험에서는 해양생물의 발효에 의한 타우린 및 GABA의 함량의 변화에 대하여 알아보기 위해, 상기 <실시예 1-3> 및 <실시예 2-2>에서 제조한 조성물에 효과적인 함량 변화를 관찰하기 위해 발효로 인해 GABA로 전환되는 전구물질인 글루타메이트를 추가로 첨가하였으며, 발효 전과 후에 타우린, 글루타메이트 및 GABA의 함량을 HPLC(model U1tiMate 3000 HPLC system)를 이용하여 측정하였다.
상기 <실시예 1-3> 및 <실시예 2-2>에서 제조된 발효물을 포함하는 조성물에서 아미노산을 OPA(O-phthaldealdehyde) 유도체로 치환하기 위해서 자동샘플러 유저 프로그램 반응 프로토콜 측정 방법을 이용하였고, 주입 프로그램(inject program)에 따라 샘플은 OPA-3MPA(O-phthaldealdehyde-3-mercaptopropionic acid)로 유도하였다. 이때, HPLC에 사용된 검출기와 컬럼은 각각 자외부 흡광 광도검출기(UV detector)와 Dionex Bonded Silica C18(4.6㎜ I.D×250㎜, 5㎛, 120Å)를 사용하여 측정하였다. HPLC를 이용한 분석조건은 하기 표 1에 나타내었고, 결과는 도 3에 나타내었다.
표 1
항목 조건
주입량 10㎕
컬럼온도 40 ℃
이동상 A용매-50mM 아세트산 나트륨, pH 6.5
B용매-아세토니트릴:메탄올:증류수=45:45:10(부피비)
유속 1㎖/min
검출기 파장 338㎚
도 3에 나타낸 바와 같이, 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물 및 굴 추출물과 다시마 추출물 혼합물의 발효 전에 각각 타우린은 2347.45ppm, 2589.38ppm이었으나 발효에 의해 거의 변화가 없는 것을 확인할 수 있었고, 글루타메이트는 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물 및 굴 추출물과 다시마 추출물의 혼합물의 발효 전에 각각 4582.14ppm, 4786.66ppm이었으나 발효 후에는 거의 없는 것으로 확인되었으며, 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물 및 굴 추출물과 다시마 추출물 혼합물의 발효 전에 없었던 GABA의 함량이 발효 후에는 각각 4451.76ppm, 4726.55ppm으로 현저히 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 글루탐산은 발효균주에 의해 모두 GABA로 전환되었고, 굴 가수분해물과 다시마 추출물의 혼합물 및 굴 추출물과 다시마 추출물의 혼합물은 발효에 의하여 다량의 타우린과 천연 GABA를 함유하고 있음을 확인하였다.
<실험예 2> 조성물의 스트레스 억제 효능
상기 <실시예 1-3>에서 다시마 추출물과 굴 가수분해물의 혼합물을 발효시켜 제조한 조성물의 스트레스 억제능을 알아보기 위해, 스트레스 관련 수용체인 GABA A(gamma-aminobutyric acid type A) 수용체와 5-HT-2c(5-hydroxytryptamine-2c) 수용체를 이용하였다. 구체적으로, 8주된 수컷 SD-랫트의 내뇌 피질막의 GABA A 수용체를 이용하여 방사성 동위원소가 결합되어 있는 [3H]-플루마제닐(RO 15-1788)과 추출발효물간 경합결합측정법(competitive binding assay)으로 측정하였다. 효과적인 측정을 위해, 굴 가수분해물의 발효물, 다시마 추출물과 녹차 추출물의 혼합물의 발효물, 및 다시마 추출물의 발효물을 대조구로 하였고, 각 조성물과 함께 처리한 경우 [3H]-플루마제닐(RO 15-1788)과 수용체의 결합값을 도 4에 나타내었다.
도 4에서 GABA A 수용체의 결합도가 낮아지는 것은 [3H]-플루마제닐이 아니라 발명의 추출물 또는 발효물에 포함된 방사성원소 비표지된 GABA와 수용체의 결합이 증가하였음을 의미하고, 도 4에 나타낸 바와 같이 각 조성물과 GABA A 수용체와의 결합도는 농도에 비례하여 증가하였고, 특히 10mg/mL의 경우에는 20%의 억제효과를 보였다. 이러한 결과로부터, SD-랫트에 대하여 굴 가수분해물및 다시마 추출물을 혼합한 혼합물의 발효물과 굴 추출물및 다시마 추출물을 혼합한 혼합물의 발효물이 스트레스 억제효과가 있음을 확인하였다.
또한, 사람의 세로토닌 5-HT-2c 수용체(serotonin 5-HT-2c receptor)를 이용하여 방사성 동위원소가 결합되어 있는 [3H]-Mesulergine 와 추출발효물간 경합결합측정법(competitive binding assay)으로 측정하였다. 효과적인 측정을 위해, 굴 가수분해물의 발효물, 다시마 추출물 및 녹차 추출물의 혼합물의 발효물, 그리고 다시마 추출물의 발효물을 대조구로 하였고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 5-HT-2c 수용체의 결합도가 낮아지는 것은 [3H]-Mesulergine이 아니라 발명의 추출물 또는 발효물에 포함된 방사성원소 비표지된 유효성분과 5-HT-2c 수용체의 결합이 증가하였음을 의미하고, 도 5에서 나타낸 바와 같이, 대조구를 포함한 모든 시료에서 5-HT2C 수용체 결합 친화도의 경우 농도에 따라 증가하였고, 특히 굴의 발효물을 포함한 10mg/mL의 처리구의 경우 약 40%의 억제효과를 보였다. 이러한 결과로부터, 굴 가수분해물과 추출물의 농축물을 포함하는 발효물은 스트레스 억제효과가 있음을 확인하였다.
<실험예 3> 조성물의 수면장애 개선 효능
상기 <실시예 1-3> 및 <실시예 2-2>에서 제조된 조성물의 수면장애 개선능을 알아보기 위해, 수면 관련 동물모델로서 8주령 수컷을 이용하여 펜토바르비탈(pentobarbital)을 이용하여 최면 실험을 수행하였다.
구체적으로는, 상기 <실시예 1-3> 및 <실시예 2-2>에서 제조된 발효물을 포함한 조성물을 ICR 마우스에 각각 200㎎과 400㎎을 경구투여 후 30분간 안정화시키고, 신경안정제(barbiturate)계 마취제인 펜토바르비탈(pentobarbital) 40㎎/㎏을 투여하여 수면에 이르는 시간과 수면을 유지하는 시간을 측정 및 분석하였다. 이때, 대조군으로 굴 가수분해물의 발효물, 다시마 추출물과 녹차 추출물의 혼합물의 발효물, 및 다시마 추출물의 발효물을 상기 조성물과 동일한 방식으로 경구투여 하였고, 식염수(saline)를 투여한 후 펜토바르비탈(pentobarbital)에 의해 입면에 든 기준치(baseline)의 수면잠복기(sleep latency) 측정값으로 하였고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 수면 시작시간 및 유지시간이 대조군의 경우 각각 413.5± 18.5초 및 2854.1± 12.4초로 나타났으나, 단독으로 펜토바르비탈(pentobarbital)을 처리한 군에 비해 본 발명의 조성물 400㎎을 먹인 경우 수면시작시간이 유의하게 감소하였고, 또한 수면 유지시간은 증가하는 것을 알 수 있다. 이러한 결과로부터 조성물의 경우 수면시작시간을 단축시키고, 숙면을 취하는데 도움을 주는 것을 확인하였다.
또한, 수면을 방해하는 화학적 자극을 통한 운동활성 변화 유도에 대해 알아보기 위해 카페인에 의해 유도된 운동활성 변화(Caffeine-induced locomotor alteration) 실험을 실시하였다. 구체적으로, 8주령 수컷 SD-랫트에 조성물을 경구투여 후 30분간 안정화시킨 후 카페인(10mg/kg)을 투여하고, SMART-program을 통한 비디오 추적(video tracking)방법을 통해 보행성을 측정하였다. 이때, 대조군으로 굴 가수분해물의 발효물, 다시마 추출물과 녹차 추출물의 혼합물의 발효물 및 다시마 추출물의 발효물을 상기 본 발명의 조성물과 동일한 방식으로 경구투여하여 측정하고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에서 나타낸 바와 같이, 카페인을 주입한 SD-랫트가 정상 SD-랫트와 비교하여 전체 운동활성이 증가하였다. 또한, 카페인에 유발된 보행성 변화를 관찰한 결과 카페인만 주입한 SD-랫트의 경우 아무것도 처리하지 않은 정상 SD-랫트에 비해 보행 거리가 증가하였으나, 본 발명의 조성물 200mg과 400mg을 첨가하였을 때 카페인만 주입한 SD-랫트보다 현저히 이동거리가 감소함을 알 수 있다. 이러한 결과로부터, 본 발명의 조성물은 보행성을 현저히 감소시키는 즉, 수면 장애를 개선하는 효과가 있음을 확인하였다.
하기에 본 발명의 건강기능식품을 제조하기 위한 제조예를 예시한다.
<제조예 1> 식품의 제조
제조예 1-1 : 밀가루 식품의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물을 전체 밀가루 100 중량부에 대하여 0.5 내지 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
제조예 1-2 : 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물을 전체 스프 및 육즙 100 중량부에 대하여 0.1 내지 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
제조예 1-3 : 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물을 전체 그라운드 비프 100 중량부에 대하여 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
제조예 1-4 : 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물을 전체 우유 100 중량부에 대하여 5 내지 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제조예 1-5 : 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 조성물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 조성물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다. 전체 선식 100 중량부에 대하여, 곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), ECDK(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부) 및 본 발명의 조성물 건조분말 19 중량부를 포함하여 선식을 제조하였다.
<제조예 2> 음료의 제조
제조예 2-1 : 건강음료의 제조
액상과당(0.5 중량%), 올리고당(2 중량%), 설탕(2 중량%), 식염(0.5 중량%), 물(75 중량%)과 같은 부재료와 본 발명의 발효물을 포함하는 조성물 5g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
제조예 2-2 : 야채 주스의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물 5g을 토마토 또는 당근 주스 1,000ml에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
제조예 2-3 : 과일 주스의 제조
본 발명의 발효물을 포함하는 조성물 1g을 사과 또는 포도 주스 1,000ml에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims (14)

  1. (a) 굴 가수분해물, 굴 추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 (b)다시마 추출물의 혼합물을 발효시킨 발효물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 발효물은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 균주로 발효되고, 가바(gamma-aminobutyric acid, GABA)가 4500 내지 5000ppm 포함된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 스트레스는 GABA A(gamma-aminobutyric acid type A) 수용체와 5-HT-2c(5-hydroxytryptamine-2c) 수용체가 관여하는 기작에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는, 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 수면장애는 불면증, 수면 중 이상한 움직임 및 무호흡증, 주간과다졸림증을 동반하는 수면장애, 및 신경안정제(barbiturate)계 마취제인 펜토바르비탈(pentobarbital)로 개선 가능한 수면장애로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 굴 가수분해물은
    굴을 수세, 탈염 및 분쇄하는 전처리단계;
    물과 상기 전처리 된 굴을 1 : 0.1 내지 2.0의 부피비로 혼합하고, 효소를 첨가하여 50 내지 70 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하는 가수분해단계;
    상기 가수분해된 굴과 물의 혼합물을 90 내지 120 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하는 효소 실활단계; 및
    상기 실활된 굴과 물의 혼합물을 여과하고, 여과된 굴 가수분해물을 수득하는 여과단계;
    를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 굴 추출물은
    굴을 수세, 탈염 및 분쇄하는 전처리단계;
    상기 전처리 된 굴과 물을 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하여 70 내지 90 ℃에서 60 내지 90분 동안 교반하면서 추출하는 추출단계; 및
    상기 추출단계에서 얻어진 추출물을 여과하고, 여과된 굴 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 다시마 추출물은
    다시마를 수세 및 탈염하는 전처리단계;
    상기 전처리 된 다시마와 알코올을 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하고 70 내지 90 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 추출하는 추출단계; 및
    상기 추출단계에서 얻어진 추출물을 여과하고, 여과된 다시마 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물.
  8. 굴 가수분해물, 굴추출물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나와 다시마 추출물을 1 : 0.1 내지 2.0의 부피비로 혼합하는 전처리단계;
    상기 전처리 된 원료액이 전체 부피의 10 내지 30%(v/v)가 되도록 물을 혼합하고, 100 내지 140 ℃에서 10 내지 20분 동안 열처리하는 멸균단계;
    상기 멸균된 원료액을 30 내지 37 ℃로 냉각하는 냉각단계;
    상기 냉각된 원료액에 발효균주를 접종하고, 2 내지 7일간 발효하는 발효단계;
    상기 발효된 발효물을 100 내지 140 ℃에서 10 내지 20분 동안 처리하는 재멸균단계; 및
    상기 재멸균된 발효물을 여과하고, 여과된 발효물을 수득하는 여과단계를 포함하는, 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 여과단계에서 수거된 발효물을 분무건조 또는 동결건조의 방법으로 건조하는 건조단계를 더 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 굴 가수분해물은
    굴을 수세, 탈염 및 분쇄하는 전처리단계;
    물과 상기 전처리 된 굴을 1 : 0.1 내지 2.0의 부피비로 혼합하고, 효소를 첨가하여 50 내지 70 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하는 가수분해단계;
    상기 가수분해된 굴과 물의 혼합물을 90 내지 120 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하는 효소 실활단계; 및
    상기 실활 된 굴과 물의 혼합물을 여과하고, 여과된 굴 가수분해물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  11. 제8항에 있어서,
    상기 굴 추출물은
    굴을 수세, 탈염 및 분쇄하는 전처리단계;
    상기 전처리 된 굴과 물을 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하여 70 내지 90 ℃에서 60 내지 내지 90분 동안 교반하면서 추출하는 추출단계; 및
    상기 추출단계에서 얻어진 추출물을 여과하고, 여과된 굴 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  12. 제8항에 있어서,
    상기 다시마 추출물은
    다시마를 수세 및 탈염하는 전처리단계;
    상기 전처리 된 다시마와 알코올을 1 : 10 내지 20의 부피비로 혼합하고 70 내지 90 ℃에서 60 내지 120분 동안 교반하면서 추출하는 추출단계; 및
    상기 추출단계에서 얻어진 추출물을 여과하고, 여과된 다시마 추출물을 수득하는 여과단계를 포함하는 방법으로 제조된 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  13. 제8항에 있어서,
    상기 발효균주는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나의 균주이고, 상기 발효균주를 상기 원료액 전체 부피에 대하여 1 내지 5%(v/v)가 되도록 접종하는 것인 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 조성물의 제조방법.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 유효성분으로 포함하는 스트레스 해소 또는 수면장애 개선용 식품.
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