KR20230095471A - 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 조성물 및 그의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학조성물이 제공된다. 이에 의하여, 인체에 부작용을 최소화하면서도 근육세포 생성 관련인자의 발현을 증가시키고, 근육세포 분해 관련인자의 발현은 감소시키며, 근육세포사멸을 최소화함으로써 근위축증, 근감소증 등 다양한 근육질환을 효과적으로 치료하고 근력을 개선할 수 있다.

Description

오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 조성물 및 그의 제조방법{Composition for improving muscle strength comprising fermented Schisandra chinensis fruit byproduct and method for preparing the same}
본 발명은 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 상황버섯균으로 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
근육은 인체에서 가장 구성량이 많은 조직으로서 인체의 기능적 능력(functional capacity)을 유지하고, 대사성 질환을 예방하기 위해서는 적정 근육량의 확보가 필수적으로 요구된다. 근육 크기는 근육 내에서 일어나는 동화작용이나 이화작용을 유도하는 세포 내 신호전달 과정에 의해 조절된다. 근육 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반응이 많이 일어날 경우 근육 단백질 합성이 증가되며, 결과적으로 근육의 크기가 증가하는 근 비대나 근섬유 수의 증가가 발생할 수 있다.
근육은 칼슘 유입을 촉진시켜 골 밀도를 높여 주기도 한다. 그러나 신체는 노화하면서 구성성분의 변화로써 체지방과 체단백질의 재분포가 일어나며, 약 50세가 되면 근세포 내 단백질의 합성속도가 분해속도보다 느려져 근육이 급격하게 퇴화를 시작하게 되며, 근육 감소 질환이 발생할 수 있다. 근육 감소 질환의 하나인 근육 감소증은 평소 자기 체질량의 약 13 내지 24%가 감소한 상태를 말하는 것으로, 단백질 함량, 섬유 직경, 근력 생산 및 피로 저항의 감소를 나타낸다. 근육 감소증은 패혈증, 암, 신부전증, 글루코코르티코이드의 과다, 신경제거, 근육의 미사용, 노화과정 등 다양한 원인에 의해 발생한다.
노화가 진행됨에 따라 일어나는 골격근의 양과 질의 점진적 감소 및 부적절한 식이에너지 섭취에 따른 지방과 체지방성분을 포함하는 체중감소 등을 원인으로 꼽을 수 있으며, 흔히 노화에 따른 것으로 연령과의 상관관계가 깊다. 근육 감소증은 단백질 합성 및 분해 사이의 불평형으로부터 발생한다. 근육 감소증은 생활의 만족도도 떨어뜨리고, 용이한 일상생활에서도 쉽게 부상을 입을 수 있다. 또한, 과도한 운동은 근육의 피로와 손상을 가져오고 운동 능력을 떨어뜨린다. 근육 손상에는 타박상, 열상, 국소 빈혈, 좌상 및 골격근에 대한 심각한 손상이 포함된다. 이러한 손상은 굉장한 통증을 유발 할 수 있다. 골격근에 심각한 손상이 있는 경우, 근육 손상을 감소시키거나 또는 근육 조직 회복을 빠르게 할 수 있는 처치는 운동 후 근력 발생 회복을 빠르게 할 가능성이 있다. 이는 또한 질병 후 근육 회복을 도울 수도 있다.
그러나 최근 다이어트에 관한 관심이 높아지면서 연령에 상관없이 급격한 체중감소로 근육 감소증이 유발될 수도 있고, 격한 운동으로 근육이 손상될 수 있다. 따라서, 일반적인 근육 감소 질환으로 인한 근육 감소를 치료하거나 근육을 증가시키기 위한 연구와 노력이 집중되고 있으며, 근육 질환의 치료와 근력강화에 대한 연구가 이루어지고 있다.
한국등록특허공보 제10-1616170호
본 발명의 목적은 상기 과제를 해결하기 위한 것으로 인체에 부작용을 최소화하면서도 근육세포 생성 관련인자의 발현을 증가시키고, 근육세포 분해 관련인자의 발현은 감소시키며, 근육세포사멸을 최소화함으로써 근위축증, 근감소증 등 다양한 근육질환을 효과적으로 치료할 수 있는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 과제를 해결하기 위한 것으로 인체에 부작용을 최소화하면서도 근육세포 생성 관련인자의 발현을 증가시키고, 근육세포 분해 관련인자의 발현은 감소시키며, 근육세포사멸을 최소화함으로써 근육량을 증가시키고 근육 감소를 최소화할 수 있는 근력개선용 식품 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 일 측면에 따르면,
상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학조성물이 제공된다.
상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것일 수 있다.
상기 고상발효시 오미자분말의 수분은 경도 80 내지 250 ppm의 해양심층수일 수 있다.
상기 오미자박 고상발효물은 추출용매에 의해 추출된 오미자박 고상발효물의 추출물일 수 있다.
상기 추출용매는 물, 탄소수 1-4의 저급 알코올, 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산, 및 디에틸에테르 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 근육질환은 근위축증(muscular atrophy), 근감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근이영양증(muscular dystrophy), 중증근무력증(myasthenia gravis) 및 근위축성측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis) 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포생성 관련인자인 Myo-D, Myogenin, MEF2, Myf5 및 Myf6 중에서 선택된 1종 이상의 발현 증가용일 수 있다.
상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포분해 관련인자인 Atrogin-1, MuRF-1, FoxO3α 및 Myostatin 중에서 선택된 1종 이상의 발현 억제용일 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 측면에 따르면,
(a) 오미자박을 건조한 후 분쇄시켜 오미자박 분말을 제조하는 단계;
(b) 상기 오미자박 분말을 당류의 수용액과 혼합한 후 멸균시켜 멸균 오미자박 혼합물을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 멸균 오미자박 혼합물에 상황버섯균(Phellinus linteus, KCCM 60261)을 접종하여 고상발효시켜 오미자박 고상발효물을 제조하는 단계;를 포함하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법이 제공된다.
단계 (b)에서, 상기 당류 수용액의 혼합은 상기 멸균 오미자박 혼합물의 수분함량이 45 내지 60wt%가 되도록 할 수 있다.
단계 (b)에서, 상기 당류 수용액은 경도 80 내지 250 ppm의 해양심층수를 포함할 수 있다.
단계 (c)에서, 상기 상황버섯균은 멸균 오미자박 혼합물 100중량부에 대하여 2 내지 10중량부로 접종할 수 있다.
단계 (c)에서, 상기 고상발효는 20 내지 28℃에서 30 내지 40일 동안 수행될 수 있다.
단계 (c) 이후, (d) 상기 오미자박 고상발효물을 추출용매와 혼합하여 추출하고 여과시켜 오미자박 고상발효추출물을 제조하는 단계;를 추가로 수행할 수 있다.
본 발명의 다른 또 하나의 측면에 따르면,
상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 식품 조성물이 제공된다.
상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것일 수 있다.
상기 근력개선용 식품조성물은 근육량 증가 또는 근손실 억제용일 수 있다.
본 발명의 다른 또 하나의 측면에 따르면,
(a) 오미자박을 건조한 후 분쇄시켜 오미자박 분말을 제조하는 단계;
(b) 상기 오미자박 분말을 당류의 수용액과 혼합한 후 멸균시켜 멸균 오미자박 혼합물을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 멸균 오미자박 혼합물에 상황버섯균(Phellinus linteus, KCCM 60261)을 접종하여 고상발효시켜 오미자박 고상발효물을 제조하는 단계;를 포함하는 근력개선용 식품 조성물의 제조방법이 제공된다.
본 발명의 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 인체에 부작용을 최소화하면서도 근육세포 생성 관련인자의 발현을 증가시키고, 근육세포 분해 관련인자의 발현은 감소시키며, 근육세포사멸을 최소화함으로써 근위축증, 근감소증 등 다양한 근육질환을 효과적으로 치료할 수 있다.
본 발명의 근력개선용 식품 조성물은 인체에 부작용을 최소화하면서도 근육세포 생성 관련인자의 발현을 증가시키고, 근육세포 분해 관련인자의 발현은 감소시키며, 근육세포사멸을 최소화함으로써 근육량을 증가시키고 근육 감소를 최소화할 수 있다.
도 1은 실험예 1의 세포배양 기간에 따른 근관세포 분화정도에 대한 현미경 사진이다.
도 2는 실험예 1에 따른 세포배양 기간에 따른 근관세포 길이(lengh)(a)와 두께(width)(b)를 측정한 결과이다.
도 3은 근육세포를 6일간 분화시킨 후, 아토바스타틴을 농도별 처리한 결과 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)을 나타낸 것이다.
도 4는 실험예 1에 따라 아토바스타틴을 10 μM 농도로 24시간 처리 근관세포의 폭과 길이를 측정한 결과 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)을 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 1에 따라 아토바스타틴을 10 μM 농도로 48시간 처리 근관세포의 폭과 길이를 측정한 결과 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)을 나타낸 것이다.
도 6 및 도 7은 실험예 2에 따른 세포독성 평가 결과이다.
도 8은 실험예 3의 세포형태 분석에 따른 근위축증 개선 효과 검증을 위한 현미경 이미지이다.
도 9는 실험예 4의 고상발효추출물 종류에 따른 근육세포 생성 전사인자의 발현 분석을 위한 RT-qPCR 분석 결과이다.
도 10은 실험예 4의 실시예 1의 고상발효추출물 처리 농도에 따른 근육세포 생성 전사인자의 발현 분석을 위한 RT-qPCR 분석 결과이다.
도 11은 실험예 4의 실시예 1의 고상발효추출물 처리 농도에 따른 근육세포 분해성 전사인자의 발현 분석을 위한 RT-qPCR 분석 결과이다.
도 12는 실험예 5에 의한 ROS 및 글루타티온 생성정도를 나타낸 것이다.
도 13은 실험예 6에 따른 세포사멸 조절인자에 대한 RT-qPCR 분석 결과이다.
도 14는 실험예 6에 따른 세포사멸 관련 단백질에 대한 웨스턴블롯 분석 결과이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 발명의 근육질환 예방 또는 치료용 약학조성물은 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함한다.
상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 50 내지 55wt%인 상태에서 고상발효된 것일 수 있다. 이와 같은 수분함량에서 상황버섯균의 활성이 높아 발효가 효율적으로 수행될 수 있다.
고상발효법(SSF, Solid State Fermentation)은 액상발효공법에 비해 설비구축비용이 저렴하고 특별한 장비없이도 발효제품을 효율적으로 대량생산할 수 있어, 생산설비가 저렴한 발효산업 현장에서 널리 사용될 수 있다.
상기 오미자박 고상발효물은 추출용매에 의해 추출된 오미자박 고상발효물의 추출물일 수 있다.
상기 추출용매는 물, 탄소수 1-4의 저급 알코올, 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산, 및 디에틸에테르 중에서 선택된 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 물 또는 탄소수 1-4의 저급 알코올, 더욱 바람직하게는 물을 사용할 수 있다.
상기 근육질환은 근위축증(muscular atrophy), 근감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근이영양증(muscular dystrophy), 중증근무력증(myasthenia gravis) 및 근위축성측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis) 중에서 선택된 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 근위축증 또는 근감소증 일 수 있다.
상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포생성 관련인자인 Myo-D, Myogenin, MEF2, Myf5 및 Myf6 중에서 선택된 1종 이상의 발현 증가용일 수 있다.
상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포분해 관련인자인 Atrogin-1, MuRF-1, FoxO3α 및 Myostatin 중에서 선택된 1종 이상의 발현 억제용일 수 있다.
이하, 본 발명의 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법에 대해 설명하도록 한다.
먼저, 오미자박을 건조한 후 분쇄시켜 오미자박 분말을 제조한다(단계 a).
다음으로, 상기 오미자박 분말을 당류의 수용액과 혼합한 후 멸균시켜 멸균 오미자박 혼합물을 제조한다(단계 b).
상기 당류는 설탕, 포도당, 과당 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 설탕을 사용할 수 있다.
당류의 수용액 농도는 3 내지 10%인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 5 내지 7%인 것이 바람직하다.
상기 당류 수용액의 혼합은 상기 멸균 오미자박 혼합물의 수분함량이 45 내지 60wt%가 되도록 하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 50 내지 55wt%가 되도록 할 수 있다. 상기 범위 내에서 상황버섯균의 활성이 높고 고상발효가 효율적으로 수행될 수 있다.
당류 수용액은 경도 80 내지 250 ppm의 해양심층수를 이용하여 제조된 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 150 내지 220ppm의 해양심층수를 이용할 수 있다. 이와 같은 해양심층수를 사용한 경우 최종 발효산물의 베타글루칸 함량을 높일 수 있고, 경도가 80 보다 낮은 경우에는 베타글루칸 함량이 저하되고, 250ppm을 초과하는 경우 상황버섯균의 활성이 저하될 수 있다.
다음으로, 상기 멸균 오미자박 혼합물에 상황버섯균(Phellinus linteus, KCCM 60261)을 접종하여 고상발효시켜 오미자박 고상발효물을 제조한다(단계 c).
상기 상황버섯균은 멸균 오미자박 혼합물 100중량부에 대하여 2 내지 10중량부로 접종할 수 있고, 바람직하게는 3 내지 6중량부로 접종할 수 있다. 이와 같은 접종 농도에서 생성된 오미자박 고상발효물의 근육개선 활성이 나타나며, 상기 범위를 벗어나는 경우에는 근육개선 활성이 발효하지 않은 오미자와 비슷한 수준으로 나타나 효능이 현저히 저하될 수 있다.
상기 고상발효는 20 내지 28℃에서 30 내지 40일 동안 수행되는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 22 내지 26℃에서 33 내지 37일 동안 수행될 수 있다. 이와 같은 고상발효 조건에서 상황버섯균의 활성이 우수하다.
이후, 상기 오미자박 고상발효물을 추출용매와 혼합하여 추출하고 여과시켜 오미자박 고상발효추출물을 제조한다(단계 d).
상기 추출용매는 물, 탄소수 1-4의 저급 알코올, 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산, 및 디에틸에테르 중에서 선택된 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 물 또는 탄소수 1-4의 저급 알코올, 더욱 바람직하게는 물을 사용할 수 있다.
상기 오미자박 고상발효물은 동결건조 후 분쇄하여 분말상태에서 사용하는 것이 바람직하다.
상기 추출용매가 물인 경우 90 내지 100℃의 열수에 의해 추출하는 것이 바람직하다.
본 명세서에서 사용되는 용어 ‘추출물’은 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함할 수 있다. 또한, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
한편, 본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 오미자박 발효물 또는 그의 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 조성물 내에서 오미자박 발효물은 예를 들어, 0.001 mg/kg 이상, 바람직하게는 0.1 mg/kg 이상, 보다 바람직하게는 10 mg/kg 이상, 보다 더 바람직하게는 100 mg/kg 이상, 보다 더욱 더 바람직하게는 250 mg/kg 이상, 가장 바람직하게는 0.1 g/kg 이상 포함된다. 오미자박 발효물 또는 그의 추출물은 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 오기피의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약학으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약학으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약학 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 처치 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏이다.
본 발명의 약학 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것일 수 있다.
상기 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물과 그의 추출물에 대한 설명은 상기 약학 조성물에서 설명한 바와 동일하므로 상세한 내용은 상술한 내용을 참조하기로 한다.
또한, 본 발명은 근력개선용 식품 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 근력개선용 식품 조성물이 제조방법은 상술한 근력질환 예방 또는 치료용 약학조성물의 제조방법과 동일하므로 구체적인 내용은 그 부분을 참조하기로 한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 빵류 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 오미자박 발효물 또는 그의 추출물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 오미자박 발효물 또는 그의 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명은 오미자박 발효물 또는 그의 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 오미자박 발효물 또는 그의 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 오미자박 발효물 또는 그의 추출물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
[실시예]
실시예 1: 상황버섯균을 이용한 오미자박 고상발효추출물
(1) 상황버섯균( Phellinus linteus )(KCCM 60261))에 의한 고상발효물 제조
오미자 추출물 제조 후 잔여하는 잔여물인 오미자박을 60℃에서 48시간 동안 열풍건조하고 건조된 오미자박을 분쇄기를 이용해 분쇄하였다. 분쇄된 오미자박을 고상발효 용기에 설탕과 물이 혼합된 5% 농도의 설탕물과 1:1의 비율로 혼합하고 이를 121℃에서 30분 동안 멸균시킨 후 7℃/min의 속도로 25℃까지 냉각시켰다. 냉각된 오미자박에 상황버섯균(Phellinus linteus, KCCM 60261) 5wt%를 접종하고 배양기 24±2℃에서 35일 동안 고상발효시켜 오미자 고상발효물을 제조하였다.
(2) 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균에 의한 오미자박 고상발효물을 121℃에서 30분 동안 멸균하고 균이 모두 사멸한 고상발효물을 -40℃에서 동결건조하고 분쇄기(분쇄기 파워 3000W)로 1분간 분쇄하였다. 오미자막 고상발효물의 분말 20g에 증류수 180g를 넣어 1:9 비율로 혼합한 후 100℃에서 2.5시간 동안 열수추출 하였다. 열수 추출액은 종이필터를 이용해 필터하고 여액을 다시 한번 0.45㎛ 필터하여 이를 -40℃로 동결건조하여 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
실시예 2: 상황버섯균과 해양심층수를 이용한 오미자박 고상발효추출물
5% 농도의 설탕물 제조시 물 대신에 경도 100ppm 인 해양심층수를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건에서 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
실시예 3: 상황버섯균과 해양심층수를 이용한 오미자박 고상발효추출물
5% 농도의 설탕물 제조시 물 대신에 경도 200ppm 인 해양심층수를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건에서 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 1: 동충하초균을 이용한 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균 대신에 동충하초균(Cordyceps militaris)(KCCM60304)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 2: 표고버섯균을 이용한 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균 대신에 표고버섯균을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 3: 영지버섯균을 이용한 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균 대신에 영지버섯균을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 4: 영지버섯균을 이용한 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균 대신에 낫토균을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 5: 영지버섯균을 이용한 오미자박 고상발효추출물 제조
상황버섯균 대신에 유산균(Lactobacillus plantarum)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자박 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 A: 상황버섯균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 B: 동충하초균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 비교예 1과 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 C: 표고버섯균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 비교예 2와 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 D: 영지버섯균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 비교예 3과 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 E: 낫토균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 비교예 4와 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
비교예 F: 유산균을 이용한 오미자 고상발효추출물
오미자박이 아닌 오미자를 재료로 사용한 것을 제외하고는 비교예 5와 동일한 조건으로 오미자 고상발효추출물을 제조하였다.
[실험예]
실험예 1: 근육세포 배양 및 근 손실 유도
근아세포(myoblast) C2C12는 37℃, 5% CO2 조건에서 10% FBS, 페니실린(100 U/㎖), 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's) 배지에서 배양되었다. C2C12 세포는 75 cm2 플라스크에서 충분히 증식된 후 근관세포(myotube)로 분화를 유도하기 위하여 2% 말혈청(horse serum) 및 1% 페니실린(penicillin)이 첨가된 DMEM 배지로 6일 동안 배양하고 2 일 간격으로 교체하여 유도하고, 세포배양 기간에 따른 근관세포 분화정도에 대한 현미경 사진을 도 1에 나타내었고, 근관세포 길이(lengh)(a)와 폭(width)(b)를 측정한 결과를 도 2에 나타내었다. 이에 따르면, 분화 시작 후 0, 2, 4, 6, 8일차에 근관세포가 형성되는 것을 관찰하였으며, 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)를 관찰함으로써 분화 정도를 파악하였다. 그 결과, 근육세포의 분화는 6일차와 8일차에 근육의 길이가 가장 길게 나타났으며, 근육의 폭은 6일차에 가장 크고, 8일차부터는 약간 감소하는 것으로 나타났다. 따라서 분화 유도 후 6일차에 근손실 분화 조건을 확립하고 이후 실험을 진행하였다.
한편, 근육세포의 분화에 따른 근손실 모델을 확립하기 위하여 근육세포의 단백질 분해를 통해 근손실을 야기하는 것으로 알려진 스타틴(Statin) 계열 약물인 아토바스타틴(Atorvastatin)으로 근손실을 유발하였다. 먼저, 근육세포를 6일간 분화시킨 후, 아토바스타틴을 5, 10, 20 μM 농도별 처리한 결과 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)을 도 3에 나타내었다. 이에 따르면, 근관세포의 폭과 길이가 아토바스타틴 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다.
또한, 아토바스타틴을 10 μM 농도로 24시간 처리 근관세포의 폭과 길이를 측정한 결과 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)를 도 4에 나타내었고, 48시간 처리시 현미경 사진(a), 근관세포 길이(lengh)와 폭(width)(b)를 도 5에 나타내었다. 이에 따르면, 아토바스타틴을 10 μM의 24시간 처리군과 48시간 처리군간 차이는 거의 없었다. 따라서 C2C12 세포의 분화 6일차에 아토바스타틴을 10 μM을 처리하여 24시간 배양함으로써 근손실을 유도하여 근손실 모델을 구축하였다.
실험예 2: 세포독성 평가
세포독성을 알아보기 위해 MTT assay 방법을 이용하였다. 배양한 C2C12 세포를 96웰 플레이트에 1×105 cell/㎖ 농도로 200 ㎕씩 분주하여 24시간 동안 배양하였다. C2C12 세포에 실시예 1, 비교예 1 내지 5, 및 비교예 A 내지 F의 고상발효추출물 시료를 0.25, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10 ㎎/㎖ 농도별로 처리한 후 24시간 반응시켜고, 5 ㎎/㎖ (DPBS)의 MTT 시약을 배지에 5배 희석한 용액을 100 ㎕/well씩 분주한 후 1시간 인큐베이터에서 반응시켰다. 상층액을 제거 후 포르마잔을 DMSO 100 ㎕씩 처리해 용해시킨 후, 마이크로 판독기를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 도 6 및 도 7에 나타내었다.
이에 따르면, 모든 실험군에서 최고농도인 10 ㎎/㎖에서는 대부분 독성을 보였다. 일반적으로 추출물을 세포에 처리할 시, 최고농도 1.0 ㎎/㎖을 감안할 때, C2C12 근관세포의 생존율에는 세포 생존율이 90% 이상을 나타내는 것으로 보아 세포독성은 거의 없는 것으로 판단하였다. 따라서 이후의 실험에서는 최대 200 ㎍/㎖까지 시료를 사용하였다.
실험예 3: 세포형태 분석에 따른 근위축증 개선 효과 평가
실시예 1의 오미자박 고상발효추출물과 비교예 A의 오미자 고상발효추출물을 분화된 각각 C2C12 근관세포에 200 ㎍/㎖ 농도로 처리하여 근위축증(muscle atrophy)에 대한 효능을 세포를 현미경 관찰한 결과를 도 8에 나타내었다. 이에 따르면 상황버섯균을 이용하여 동일한 조건으로 고상발효되었으나 오미자박을 재료로 사용한 실시예 1의 고상발효추출물 처리군은 근위축 개선효과가 있는 것으로 나타났으나, 비교예 A의 고상발효추출물 처리군은 근위축 개선효과가 거의 없는 것으로 나타났다.
실험예 4: 근육세포 생성 또는 분해 관련인자의 발현 분석
실시예 1, 비교예 1 내지 5, 및 비교예 A 내지 F의 고상발효추출물을 200 ㎍/㎖ 농도로 근위축 유도 세포에 처리하여 근육세포 생성 전사인자에 관련된 미오게닌(myogenin)과 Myo-D의 mRNA의 발현 분석을 위하여 Quantitative RT-PCR 분석을 수행하였다.
상술한 바와 같이 근위축을 유도한 후 배지를 제거한 뒤 PBS를 이용하여 세척하고 RNeasy*?* mini kit(Aiagen, Hilden, Gerbany)를 이용하여 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA를 Spectrophotometer(Nanodrop)을 통하여 정량하고, 1 ㎍ RNA를 Maxima frist strand cDNA synthesis kit for RT-qPCR를 이용하여 cDNA를 합성하였다. PCR bio syGreen blue Mix(PCR Biosystems, Pennsylvania, USA) 10 ㎕와 primer 2 ㎕가 포함된 혼합물 19 ㎕와 cDNA 1 ㎕를 PCR 사이클 40회 수행하였다. 중합 효소 반응에 쓰인 프라이머의 정보는 아래의 표 1에 정리하였다.
Target Primer Sequences
MyoD Forward 5’-GATGGCATGATGGATTACAG-3’
Reverse 5’-CTCCACTATGCTGGACAGG-3’
Myogenin Forward 5’-AGTACATTGAGCGCCTACAG-3’
Reverse 5’-GACGTAAGGGAGTGCAGATT-3’
Atrogin-1 Forward 5’-CTGCCTGTGTGCTTACAACT-3’
Reverse 5’-TGCTCTCTTCTTGGGTAACA-3’
Myf5 Forward 5’-TGAGGGAACAGGTGGAGAAC-3’
Reverse 5’-AGCTGGACACGGAGCTTTTA-3’
Myf6 Forward 5’-ATTCTTGCGGGTGCGGATTT-3’
Reverse 5’-ACGTTTGCTCCTCCTTCCTT-3’
MEF2 Forward 5’-TCCATCAGCCATTTCAACAA-3’
Reverse 5’-GTTACAGAGCCGAGGTGGAG-3’
FoxO3 Forward 5’-ACAAACGGCTCACTTTGTCC-3’
Reverse 5’-GTGCCGGATGGAGTTCTTC-3’
Myostatin Forward 5’-CTGTAACCTTCCCAGGACCA-3’
Reverse 5’-GCAGTCAAGCCCAAAGTCTC-3’
MuRF1 Forward 5’-TGCCTACTTGCTCCTTGTGC-3’
Reverse 5’-CACCAGCATGGAGATGCAGT-3’
실시예 1, 비교예 1 내지 5, 및 비교예 A 내지 F에 대한 미오게닌(myogenin)(a)과 Myo-D(b) 발현정도를 비교하는 RT-qPCR 분석 결과를 도 9에 나타내었다(1: 비교예 A, 2: 비교예 B, 3: 비교예 C, 4: 비교예 D, 5: 비교예 E, 6: 비교예 F, 7: 실시예 1, 8: 비교예 1, 9: 비교예 2, 10: 비교예 3, 11: 비교예 4, 12: 비교예 5). 이에 따르면, 근육세포 생성 전사인자에 관련된 myogenin과 Myo-D의 발현은 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물 처리군이 다른 비교예들의 처리군에 비하여 현저히 높게 나타남을 확인할 수 있다. 다시 말해, 본원발명의 상황버섯균에 의한 오미자 고상발효추출물은 근육세포 생성을 촉진하여 근위축을 개선하는 효과가 있음을 알 수 있다. 한편, 실시예 1의 상황버섯에 의한 오미자박 고상발효추출물 추출물을 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도별 처리에 따른 근육세포 생성 관련인자 및 분해 관련인자의 발현 정도를 분석하기 위하여 RT-qPCR 분석을 수행하였다.
분석 후 근육세포생성 관련인자인 Myo-D, Myogenin, MEF2, Myf5, Myf6에 대한 RT-qPCR 분석 결과를 도 10에 나타내었다. 이에 따르면, 100 ㎍/㎖ 농도 이상에서는 대부분 농도의존적으로 발현양이 증가됨을 알 수 있다.
또한, 근육세포 분해 관련인자인 Atrogin-1, MuRF-1, FoxO3α 및 Myostatin에 대한 RT-qPCR 분석 결과를 도 11에 나타내었다. 이에 따르면, 아토바스타틴 처리에 의해 모든 인자에서 발현양이 증가됨을 확인할 수 있었으며, 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물 처리시 mRNA 발현량이 농도 의존적으로 감소되는 것을 확인할 수 있었다( **p<0.01 and ***p<0.001 vs. CTL ; #p<0.05, ##p<0.01 and ###p<0.001 vs. ATV group).
실험예 5: Glutathione(GSH) 및 ROS 생성 분석
근력이 약화되는 근감소증은 근육세포에 활성산소가 생성되고 이로 인하여 산화스트레스가 유발되어 노화를 촉진하게 된다. 글루타티온(Glutathione)은 여러 활성증가물질과 결합(conjugation)을 이루어 GST와 같은 효소의 작용으로 소변으로 배설되게 함으로써 체내의 독성물질을 제거하는 역할을 하고 근감소증을 개선하는 역할을 할 수 한다. 또한, ROS는 정상 세포의 기능 수행을 위한 중요한 신호전 달분자이지만, 비정상적으로 증가된 ROS는 근육세포의 기능장애 및 근세포의 손상을 일으킴으로써 세포사멸을 일으킬 수 있다.
실시예 1이 오미자박 고상발효추출물의 ROS 및 글루타티온(GSH) 생성에 대한 영향을 살펴보기 위하여 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물을 50, 100, 200 ㎍/㎖을 근위축 유도 세포에 처리한 후 글루타티온(a) 및 ROS(b)의 대조군에 대한 상대적인 생성량을 측정하여 그 결과를 도 12에 나타내었다.
이에 따르면, 글루타티온(GSH) 생성량을 보면 아토바스타틴 처리군에서는 대조군과 비교하였을 때, GSH 농도가 40% 감소하는 것으로 나타났고, 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물의 100 ㎍/㎖ 처리군에서는 67.60±2.32%, 200 ㎍/㎖ 처리군에서는 73.67±4.59%로 회복되는 것을 확인하였다. 또한 ROS의 생성량은 아토바스타틴 처리군에서는 대조군과 비교하였을 때, ROS의 수치가 178.56±5.16%로 증가하는 경향을 나타내었으며, 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물 50 ㎍/㎖ 처리군에서는 140.28±2.82%, 100 ㎍/㎖ 처리군에서는 108.35±7.50%, 200 ㎍/㎖ 처리군에서는 105.67±6.26%로 추출물의 농도 의존적으로 유의하게 ROS의 생성량을 억제하는 것으로 나타났다.
실험예 6: 세포사멸 인자 발현 분석
일반적으로 노화 골격근에서 활성산소는 근감소증을 유발하는데 핵심적인 원인으로 이는 근육세포의 미토콘드리아의 기능을 저하시키고, 결국에는 세포사멸을 유발하게 된다. 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물이 근육세포의 세포사멸에 미치는 영향을 알아보기 위하여 세포사멸과 관련된 주요한 조절인자인 bax, Bcl-2, caspase-3, 의 mRNA 발현양을 측정하기 위하여 상술한 방법과 동일하게 RT-qPCR 분석을 수행하여 그 결과를 도 13에 나타내었다. 이에 따르면, 아토바스타틴 처리군에서는 caspase-3 및 Bax의 mRNA 발현양이 증가되었으며, Bcl-2의 발현은 감소하는 것으로 나타났다. 또한, Bax/Bcl-2의 비율은 mRNA의 발현양이 농도의존적으로 감소하는 것으로 나타났다. 따라서 실시예 1이 오미자박 고상발효추출물은 근육세포의 세포사멸을 방지하는 효과가 있음을 알 수 있다.
또한, 실시예 1이 오미자박 고상발효추출물의 세포사멸과 관련된 단백질의 발현양을 살펴보기 위하여 C2C12 근관세포에 실시예 1이 오미자박 고상발효추출물과 아토바스타틴을 처리한 후, 세포사멸 관련 bax, bcl-2, caspase-3, cleaved-caspase-3 단백질을 웨스턴 블롯(western blot)을 통하여 발현 정도를 측정하였다. 구체적으로, C2C12 세포에 시료를 200 ㎍/㎖ 농도로 처리한 후 근 손실을 유도하기 위하여 아토바스타틴을 24시간 처리하였다. 각 세포를 1× PBS로 3회 세척 후 lysis buffer(50 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 ㎍/ml aprotinin) 0.1 ㎖로 lysis시켰다. 이를 12,000 rpm에서 20 분 원심분리함으로써 단백질을 분리하고, 분리된 각 단백질의 농도를 단백질 분석 용액을 정량한 다음, 30 ㎍ 단백질을 5×sample buffer와 섞어 8-15% SDS-PAGE를 통해 분리하였다. 분리된 겔상의 단백질을 NC 멤브레인으로 이동시키고 각 멤브레인은 5% BSA로 실온에서 1시간 블록하였다. 멤브레인에 분화 및 세포사멸, 근손실 관련 일차항체를 넣어 4℃에서 하룻밤 반응시킨 후 0.05% Tween이 들어간 TBS로 3회 세척하였다. 멤브레인에 다시 anti-IgG conjugated HRP 항체를 넣은 후 1시간 동안 실온에서 반응시키고 0.05% Tween이 포함된 TBS(1×TBS)로 3회 세척하여 ECL용액을 이용하여 ChemiDocTM touch imaging system(BioRad, California, USA)를 이용하여 분석하여 그 결과를 도 14에 나타내었다.
이에 따르면, 아토바스타틴 처리군에서는 cleaved-caspase-3의 발현양과 caspase-3의 발현양 및 Bax/Bcl-2의 발현양을 대조군과 비교하였을 때, 세포사멸과 관련된 단백질의 발현양을 유의하게 증가시켰으며, 실시예 1의 오미자박 고상발효추출물 처리군에서는 추출물 처리군에서 유의하게 회복되는 것을 확인할 수 있었다(***p<0.001 vs. CTL ; ##p<0.01 and ###p<0.001 vs. ATV 처리군).
실험예 7: 베타글루칸 함량 분석
비교예 A, 실시에 1, 2 및 3에 따라 각각 제조된 상황버섯균에 의해 고상발효시킨 오미자 고상발효추출물의 베타글루칸 함량을 분석한 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.
구분 재료 고상발효시 수분성분 베타글루칸 함량 (wt%)
비교예 A 오미자 물 5.08
실시예 1 오미자박 물 9.95
실시예 2 오미자박 해양심층수 경도 100ppm 10.87
실시예 3 오미자박 해양심층수 경도 200ppm 12.34
이에 따르면, 베타글루칸 함량은 오미자를 재료로 사용한 경우보다 오미자박을 재료로 사용한 경우 더 높게 나타났다. 또한, 오미자박 발효시 물을 사용한 경우보다 해양심층수를 사용한 경우 베타글루칸 함량이 높게 나타났으며, 특히 경도 200ppm의 해양심층수를 사용한 경우 가장 높은 베타글루칸 함량을 측정되었다.
이상, 본 발명의 실시예들에 대하여 설명하였으나, 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서, 구성 요소의 부가, 변경, 삭제 또는 추가 등에 의해 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있을 것이며, 이 또한 본 발명의 권리범위 내에 포함된다고 할 것이다.
<110> GLUCAN CORPORATION <120> Composition for improving muscle strength comprising fermented Schisandra chinensis fruit byproduct and method for preparing the same <130> HPC-10313 <160> 18 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyoD Forward <400> 1 gatggcatga tggattacag 20 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyoD Reverse <400> 2 ctccactatg ctggacagg 19 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myogenin Forward <400> 3 agtacattga gcgcctacag 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myogenin Reverse <400> 4 gacgtaaggg agtgcagatt 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin-1 Forward <400> 5 ctgcctgtgt gcttacaact 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin-1 Reverse <400> 6 tgctctcttc ttgggtaaca 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myf5 Forward <400> 7 tgagggaaca ggtggagaac 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myf5 Reverse <400> 8 agctggacac ggagctttta 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myf6 Forward <400> 9 attcttgcgg gtgcggattt 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myf6 Reverse <400> 10 acgtttgctc ctccttcctt 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MEF2 Forward <400> 11 tccatcagcc atttcaacaa 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MEF2 Reverse <400> 12 gttacagagc cgaggtggag 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FoxO3 Forward <400> 13 acaaacggct cactttgtcc 20 <210> 14 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FoxO3 Reverse <400> 14 gtgccggatg gagttcttc 19 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myostatin Forward <400> 15 ctgtaacctt cccaggacca 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Myostatin Reverse <400> 16 gcagtcaagc ccaaagtctc 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MuRF1 Forward <400> 17 tgcctacttg ctccttgtgc 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MuRF1 Reverse <400> 18 caccagcatg gagatgcagt 20

Claims (14)

  1. 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 고상발효시 오미자분말의 수분은 경도 80 내지 250 ppm의 해양심층수인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 오미자박 고상발효물은 추출용매에 의해 추출된 오미자박 고상발효물의 추출물인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 추출용매는 물, 탄소수 1-4의 저급 알코올, 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산, 및 디에틸에테르 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 근육질환은 근위축증(muscular atrophy), 근감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근이영양증(muscular dystrophy), 중증근무력증(myasthenia gravis) 및 근위축성측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis) 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포생성 관련인자인 Myo-D, Myogenin, MEF2, Myf5 및 Myf6 중에서 선택된 1종 이상의 발현 증가용인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 근육세포분해 관련인자인 Atrogin-1, MuRF-1, FoxO3α 및 Myostatin 중에서 선택된 1종 이상의 발현 억제용인 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. (a) 오미자박을 건조한 후 분쇄시켜 오미자박 분말을 제조하는 단계;
    (b) 상기 오미자박 분말을 당류의 수용액과 혼합한 후 멸균시켜 멸균 오미자박 혼합물을 제조하는 단계; 및
    (c) 상기 멸균 오미자박 혼합물에 상황버섯균(Phellinus linteus, KCCM 60261)을 접종하여 고상발효시켜 오미자박 고상발효물을 제조하는 단계;를 포함하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서,
    단계 (b)에서, 상기 당류 수용액의 혼합은 상기 멸균 오미자박 혼합물의 수분함량이 45 내지 60wt%가 되도록 하는 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법,
  11. 제9항에 있어서,
    단계 (b)에서, 상기 당류 수용액은 경도 80 내지 250 ppm의 해양심층수를 포함하는 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
  12. 제9항에 있어서,
    단계 (c) 이후,
    (d) 상기 오미자박 고상발효물을 추출용매와 혼합하여 추출하고 여과시켜 오미자박 고상발효추출물을 제조하는 단계;를 추가로 수행하는 것을 특징으로 하는 근육질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
  13. 상황버섯균(Phellinus linteus, 기탁번호: KCCM 60261)에 의해 발효된 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 식품 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 오미자박 발효물은 오미자박 고상발효물이고, 상기 오미자박 고상발효물은 오미자분말의 수분함량이 45 내지 60wt%인 상태에서 고상발효된 것을 특징으로 하는 근력개선용 식품 조성물.
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