WO2014007427A1 - 효소전환과 유산균 발효를 이용한 화합물 k의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품 - Google Patents

효소전환과 유산균 발효를 이용한 화합물 k의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품 Download PDF

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라제현
윤병훈
박현준
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Definitions

  • the present invention relates to a method for preparing a fermented red ginseng concentrate enriched in the content of compound K using enzyme conversion and lactic acid bacteria fermentation, and a product containing the fermented red ginseng concentrate prepared by the method as an active ingredient.
  • Method of producing fermented red ginseng concentrate enriched in the content of compound K having high bioavailability of various functions by injecting alcohol into alcohol and converting the extract into a self-selected edible complex enzyme, and then inoculating and fermenting lactic acid bacteria isolated from kimchi and It relates to a product containing the fermented red ginseng concentrate prepared by the manufacturing method as an active ingredient.
  • Saponin of ginseng and red ginseng is a glycoside and has a unique chemical structure different from that found in other plants. Saponins of ginseng and red ginseng are called 'Ginsenoside', meaning ginseng glycosides to distinguish them from other plant-based saponins. With the recent development of analytical techniques, about 30 ginsenoside chemical structures have been identified so far. This is much higher than 14 species of Western Ginseng and 15 kinds of Jeonchisam in China.
  • Ginsenosides are classified into diol (PPD) and triol (PPT) ginsenosides depending on the number of sugars attached to the R1, R2, and R3 sites in the form of a glycoside having a dammarane skeleton. High pressures, enzyme additions, or heating of these ginsenosides during processing can cause some of the sugar to fall off, creating new double bonds, creating a unique ginsenoside. Therefore, products containing various ginsenosides have been released depending on the processing method of ginseng.
  • diol-based ginsenosides are 20 (S) -protopanaxadiol 20-O- ⁇ -D-glucopyranoside (20 (S) -protopanaxadiol 20-O- ⁇ -D- glucopyranoside, FGM 1, hereinafter referred to as 'Compound K') and triol ginsenosides are digested into 20 (S) -protopanaxatriol (20 (S) -protopanaxatriol, FGM 4) and then absorbed into the body. As it exerts efficacy, only a small amount is converted and absorbed by heat, acid, pressure, and digestive enzymes. Recent studies have shown that intestinal microorganisms are required to convert ginseng saponins to these end products.
  • Privotella oris is a representative bacterium that metabolizes ginsenosides to saponins.
  • various beneficial bacteria such as lactic acid bacteria are involved in saponin metabolism.
  • 30% of normal people had no bacterium capable of metabolizing saponin, and even though the remaining 70% of bacteria had a difference in their metabolic capacity, they were able to metabolize both diol and triol saponins normally. Only a few can do it.
  • saponin metabolism rate is lowered because the intestinal flora is not stable.
  • it is very desirable to develop fermented red ginseng so that anyone can benefit by converting it into a form that can absorb the active ingredients of ginseng regardless of the individual's physical condition by fermenting it into the intestinal microorganisms externally.
  • Fermented red ginseng also aids in the balanced metabolism of saponins.
  • Diol-based saponin stabilizes the body, boosts immunity and lowers excessive ones to normalize.
  • triol-based saponins it improves blood circulation, improves energy, and gives vitality to each other and has opposite effects.
  • the intestinal flora is unstable and metabolizes only one or both of the diol and triol saponins, there is an imbalance in the absorption of saponins, so taking ginseng may be less effective, and in some people, fever or frustration. You have an uncomfortable experience.
  • the metabolism of diol-based and triol-based saponins from the outside is absorbed into the body in a balanced manner, research results show that ginseng and red ginseng have all the natural benefits, and other side effects are significantly reduced.
  • the present invention provides a method for producing a fermented red ginseng concentrate enriched in the content of compound K through fermentation using enzyme conversion and kimchi-derived lactic acid bacteria from red ginseng and a product containing the fermented red ginseng concentrate prepared by the method as an active ingredient. It aims to do it.
  • the present invention comprises the steps of: a) preparing red ginseng alcohol extract by adding 50% alcohol ( ⁇ ) to 4 years old red ginseng; b) cooling the red ginseng alcohol extract of step a) and then filtering it; c) concentrating the filtrate of step b) to 25 to 30 brix to remove spirits; d) dilution of the concentrate of step c) to a combination concentration of 3 to 3 enzymes selected from the group consisting of Cytolase PCL5, Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL and Rapidase C80Max in the range of 48 ⁇ 72 at 50 °C Treating for time to convert saponin; e) inoculating and fermenting Lactobacillus sakei HY7802 strain to the enzyme reaction solution of step d); f) inactivating the enzyme of step d) by heating the fermentation broth of step e); g) concentrating the fermentation broth in which the enzyme of step f) is inactiv
  • Preparation of the red ginseng alcohol extract of step a) is preferably extracted three times for 6 hours at 80 °C using 50% alcohol of 20 times the weight of red rice ginseng.
  • red ginseng extract uses 10 to 20 times of alcohol, so it is extracted three times using 20 times of red ginseng weight to maximize the yield.
  • Cooling of the red ginseng alcohol extract of step b) is up to 40 ⁇ 50 °C, the filtration is preferably using a perlite (perlite).
  • Perlite filtration generally removes fine suspensions and colloidal particles because the ginsenoside component is unchanged by filtration.
  • the reason for cooling to 40 to 50 ° C is that the filtration effect is halved due to the solubility of the extract at 80 ° C, which is the extraction temperature.
  • step b) it is preferable to remove the spirit ( ⁇ ) by concentrating the filtrate of step b) to 25 to 30 Brix (Brix). If you do not concentrate to at least 25 Brix, the remaining alcohol may inhibit the enzyme reaction.
  • the combination of the three enzymes of step d) is preferably an enzyme combination of Cytolase PCL5, Sumizyme AC and Rapidase C80Max.
  • Inactivation of the enzyme of step f) is preferably carried out at 90 °C for 10 minutes. This is to inactivate the enzyme to eliminate the potential of lactic acid bacteria growth during the next stage of fermentation of lactic acid bacteria.
  • Sterilization in step h) is preferably carried out at 90 °C for 2 hours.
  • the functional beverage containing the fermented red ginseng concentrate enriched with the compound K of the present invention as an active ingredient is homogenized at 150 bar by combining the fermented red ginseng concentrate enriched with the compound K of the present invention with mixed fruit juice syrup and water at a constant ratio. After cooling to 10 ° C. or less, the product is packaged in a small packaging container such as a glass bottle or a plastic bottle.
  • the health functional food containing the fermented red ginseng concentrate enriched in compound K of the present invention as an active ingredient, vitamin B 1 , B 2 , B 5 , B 6 , E and acetate esters, nicotinic acid amides, oligosaccharides and the like may be added and other food additives may be added.
  • the functional cosmetic composition containing a fermented red ginseng concentrate enriched in compound K of the present invention as an active ingredient is prepared by adding a fermented red ginseng concentrate enriched in compound K to a conventional cosmetic composition preparation method.
  • the fermented red ginseng concentrate enriched with the compound K of the present invention can be utilized as a health functional food or food material containing a large amount of the compound K having increased digestion absorption in the human body by converting ginsenosides through enzymatic conversion and lactic acid bacteria fermentation. have.
  • Figure 1 is a photograph of the TLC development of the reaction to select an enzyme having a conversion activity of compound K in the present invention.
  • Figure 2 is a photo TLC development of the reaction to select strains showing ginsenoside converting ability among the strains showing beta-glucosidase (beta-glucosidase) activity in the present invention.
  • Figure 3 is a process chart showing a preferred embodiment of the fermentation red ginseng concentrate production method by the enzyme conversion and lactic acid bacteria fermentation of the present invention.
  • red ginseng 100 g 6 g of red ginseng 100 g, 6 g of red ginseng 100 g, 4 g of red ginseng 100 g, and 4 year red ginseng 100 g of 2 g of 70% ethanol were added and refluxed at 80 ° C, followed by freeze drying.
  • the reaction was performed by adding 0.05 ml of 5% of the total volume of 1 ml of each of 13 enzymes to 1 ml of 1% (w / v) ginsenoside Rbl aqueous solution and reacting at 50 rpm at 200 rpm for 24 hours. Ginsenosides were extracted with an equivalent volume of saturated butanol (butanol) of 1 ml, followed by dropping and developing on thin layer chromatography (TLC) to confirm the formation of compound K.
  • TLC thin layer chromatography
  • C-K on the vertical axis represents “Compound K”.
  • AC stands for “Sumizym AC”.
  • Cytolase PCL5 (manufacturer: DSM, enzyme type: pectinase, pectin lyase, polygalacturonase and endoarabinase, enzyme producing microorganism: Aspergillus niger), Multifect Pectinase FE (manufacturer: Genencor, enzyme type: pectinase, cellulase , henmicellulase and beta-glucosidase, enzyme producing microorganism: Aspergillus niger), Sumyzyme AC (manufacturer: ShinNippon, enzyme type: cellulase, beta-glucosidase and hemicellulase, enzyme producing microorganism: Aspergillus niger), Cellulase KN (manufacturer: ShinNippon, enzyme type : Cellulase, hemicellulase, pretease and naring
  • Multifect Pectinase FE was excluded because it was not applicable to product production due to the discontinuance of Genencor, and a total of five enzymes Cytolase PCL5 were selected by selecting Rapidase C80Max from Rapidase TF and Rapidase C80Max. , Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL and Rapidase C80Max.
  • reaction conditions were determined as 4 years root red ginseng alcohol extract 5%, enzyme combination concentration 3% and reaction time 72 hours.
  • the first 108 strains selected through the above method were the ones showing the highest conversion and growth ability through beta-glucosidase activity, ginsenoside conversion ability and growth ability in red ginseng extract. Lactobacillus was finally selected.
  • 0.2 ml of p-Nitrophenyl ⁇ -D-glucoside solution was added to 0.2 ml of the primary selected lactic acid bacteria culture (including bacteria) so that the final concentration was 10 mM.
  • the reaction was carried out at 37 ° C. for 1 hour.
  • the reaction was terminated by adding 1.6 ml of 0.5 M sodium carbonate (Na 2 CO 3 ) and the absorbance was measured at 420 nm to select eight strains having an OD 420 value of 1.5 or more.
  • ginsenoside Rb1 In order to measure the conversion ability of ginsenoside Rb1 in 8 strains of Table 4, 1 ml of each of the 8 lactic acid bacteria cultures was added to 1 ml of 1% (w / v) ginsenoside Rbl aqueous solution. Four strains showing ginsenoside conversion were selected after the reaction was performed at 37 ° C. at 200 rpm for 24 hours to instill and develop onto TLC.
  • the selected four strains were inoculated into 10% red ginseng extract and then grown for 48 hours at 37 ° C.
  • the selected strain # 35 of 5-1 was cultured in MRS medium, and genomic DNA was isolated.
  • the 16rDNA site was amplified using a polymerase chain reaction (PCR) as a primer.
  • the primer sequences were 5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 ′ (forward) and 5′-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3 ′ (reverse).
  • PCR polymerase chain reaction
  • 50 ng of extracted genomic DNA, 100 ⁇ M of each dNTPs, 0.2 ⁇ M of each primer, 1 ⁇ enzyme buffer, and 2 units of Taq polymerase were added and added to the total volume of 50 ⁇ l with distilled water.
  • the amplification reaction was initially denatured at 94 ° C.
  • PCR products were separated from 1.5% agarose gel, eluted, and sequencing was performed by Cosmojintech Co., Ltd. to obtain the results. As a result of analyzing the obtained result through BLSAT Search, it showed more than 99% homology with Lactobacillus sakei strains that were previously uploaded to the database.
  • the characteristics of the lactic acid bacteria according to the present invention are as follows.
  • the new strain of the present invention was found in Lactobacillus sakei ( Lactobacillus sakei ) I could see that it belongs. Therefore, the present inventors named the new strain of the present invention as Lactobacillus sakei HY7802, and deposited it on December 6, 2011 at the Korea Institute of Bioscience and Biotechnology (Accession No .: KCTC 12097BP).
  • the extract was cooled to 50 ° C. and then filtered using perlite.
  • the filtrate was concentrated under reduced pressure to 30 Brix.
  • Purified water was added to the vacuum concentrate to dilute to 5 Brix, and the total volume of 0.8% Cytolase PCL5, Sumizyme AC and Rapidase C80Max enzyme combinations were added thereto and reacted at 50 ° C. for 72 hours.
  • the fermentation broth was heated at 90 ° C. for 10 minutes to inactivate the enzymes Cytolase PCL5, Sumizyme AC and Rapidase C80Max.
  • the enzyme-inactivated fermentation broth was concentrated under reduced pressure to 75 Brix.
  • the concentrate was sterilized at 90 ° C. for 2 hours and then packaged to prepare a fermented red ginseng concentrate enriched with Compound K of the present invention.
  • Compound K of the present invention is a method for producing a functional beverage consisting of fermented red ginseng concentrate and mixed juice syrup enhanced as follows.
  • mixed fruit syrup is 13% by weight of liquid fructose, 2.5% by weight of white sugar, 2.5% by weight of brown sugar, 56% by weight of mixed juice concentrate 56Brix o , 1.0% by weight pectin, 0.1% by weight of fresh fruit mix essence and 70% by weight of purified water
  • UHT heat treatment sterilized for 2 seconds at 135 °C
  • the mixture was prepared by the above method, and 30.4% by weight of the mixed juice syrup and 0.1% by weight of the fermented red ginseng concentrate enriched in Compound K of Example 6 and 69.5% by weight of the remaining purified water were homogenized at 150 bar, and then cooled to 10 ° C. or lower. Thereafter, the resultant was packaged in a small packaging container such as a glass bottle or a plastic bottle to prepare a functional beverage containing the fermented red ginseng concentrate enriched with Compound K of the present invention as an active ingredient.
  • a small packaging container such as a glass bottle or a plastic bottle to prepare a functional beverage containing the fermented red ginseng concentrate enriched with Compound K of the present invention as an active ingredient.
  • Example 6 In the 0.1% by weight of the fermented red ginseng concentrate enriched in compound K of Example 6, nutritional supplements (vitamins B 1 , B 2 , B 5 , B 6 , E and acetate esters, nicotinic acid amides) and oligosaccharides were prepared in Example 6 Compound K was added to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of the fermented red ginseng concentrate enriched and mixed in a high speed rotary mixer. 10 parts by weight of sterile purified water was added and mixed with respect to 100 parts by weight of the mixture, and molded into granules having a diameter of 1 to 2 mm.
  • the molded granules were dried in a vacuum dryer at 40 to 50 ° C., and then uniformly prepared granules were passed through 12 to 14 mesh.
  • the granules prepared as described above were extruded by appropriate amounts into tablets or powders or filled into hard capsules to produce hard capsule products.
  • the functional cosmetic composition containing the fermented red ginseng concentrate enriched with the compound K of the present invention as an active ingredient is in the form of a cream, which is stored at 70 ° C. by heating 5% by weight of propylene glycol and then 8% by weight of stearyl alcohol and 2% by weight of stearic acid.
  • a functional cosmetic composition containing fermented red ginseng concentrate as an active ingredient was prepared.

Abstract

본 발명은 홍삼을 효소전환과 유산균 발효를 이용한 발효홍삼농축액의 제조방법에 관한 것으로서 4년 홍미삼 주정 추출물과 식용가능효소인 Cytolase PCL5, Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL 및 Rapidase C80Max 중 3종의 효소를 사용하며, 김치로부터 분리한 유산균 Lactobacillus sakei HY7802를 이용하여 발효하여 홍삼으로부터 소화율 및 흡수율이 증대된 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 얻을 수 있다.

Description

효소전환과 유산균 발효를 이용한 화합물 K의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품
본 발명은 효소전환과 유산균 발효를 이용한 화합물 K의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 홍미삼을 주정으로 추출하고 그 추출물을 자체 선정한 식용 가능한 복합효소로 전환한 후, 김치에서 분리한 유산균을 접종, 발효시킴으로서 다양한 기능의 생체유효성이 높은 화합물 K의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품에 관한 것이다.
인삼 및 홍삼의 효능성분으로 알려진 것은 사포닌(saponin)이다. 인삼 및 홍삼의 사포닌은 배당체의 일종으로 다른 식물에서 발견되는 사포닌과는 다른 특이한 화학구조를 가지고 있으며, 그 효능도 큰 차이가 난다. 인삼 및 홍삼의 사포닌은 타 식물계 사포닌과 구별하기 위해서 인삼(ginseng) 배당체(glycoside)란 의미로 '진세노사이드(Ginsenoside)'라고 부른다. 최근 분석기술의 발달에 따라 지금까지 30여종의 진세노사이드 화학구조가 밝혀졌다. 이는 서양삼 14종, 중국의 전칠삼 15종에 비해 월등히 많은 종류가 들어있다. 진세노사이드는 dammarane 골격을 갖는 배당체에 일종의 화학구조상 R1, R2, R3자리에 어떤 종류의 당이 몇 개 붙느냐에 따라 디올계(PPD)와 트리올계(PPT)의 진세노사이드 등으로 분류된다. 가공과정 중 이러한 진세노사이드에 높은 압력을 가하거나 효소 첨가, 또는 가열을 하면 당이 일부 떨어져 나가기도 하고 새로운 이중결합이 생기면서 특이한 진세노사이드가 만들어진다. 따라서 인삼의 가공방법에 따라 여러 가지 특이 진세노사이드가 함유된 제품들이 출시되고 있다.
인삼 사포닌이 체내에 흡수되기 위해서는 디올계 진세노사이드는 20(S)-프로토파낙사디올 20-O-β-D-글루코피라노사이드(20(S)-protopanaxadiol 20-O-β-D-glucopyranoside, FGM 1, 이하, '화합물 K'라 함)으로 그리고 트리올계 진세노사이드는 20(S)-프로토파낙사트리올 (20(S)-protopanaxatriol, FGM 4)로 분해된 후 체내에 흡수되면서 효능을 발휘하는데 열이나 산, 압력, 소화효소 등에 의해서는 소량만 전환, 흡수될 뿐이다. 최근 연구결과에 따르면 인삼 사포닌이 이러한 최종산물로 전환할 때 장내미생물이 필요하다고 밝혀졌다.
경구 복용한 사포닌이 흡수되려면 장내 미생물에 의해 분해되어야 하는데 Privotella oris균이 진세노사이드를 사포닌을 대사하는 대표적 균이며 이외에 유산균 등의 여러 가지 유익균이 사포닌 대사에 관여한다. 일반인들 중 인분을 조사해 추정한 연구에서 정상인 중 30%는 사포닌을 대사할 수 있는 균이 전혀 없고, 비록 균이 있는 나머지 70% 중에도 대사 능력에 차이가 있어 디올계와 트리올계 사포닌을 모두 정상적으로 대사할 수 있는 사람은 소수에 지나지 않는다. 특히 지속적인 항암치료나 약제를 복용하는 경우에는 장내균총이 안정적이지 않으므로 사포닌 대사율이 더 떨어짐이 보고되었다. 이런 면에서 이미 외부에서 장내 미생물로 발효하여 개인의 신체 상황에 관계없이 인삼의 효능성분을 흡수할 수 있는 형태로 전환하여 누구나 효과를 볼 수 있도록 발효 홍삼을 개발하는 것은 매우 바람직하다고 볼 수 있다.
지금까지 언급한 바와 같이 모든 인삼사포닌은 장내 미생물의 분해를 통해 최종 대사물로 대사되어야 흡수된다. 그러나 사람의 장내 미생물 균총은 균일하지도 않고 시시각각 변하는 것이어서 개인에 따라 인삼 사포닌 흡수율이 다름이 밝혀졌다. 따라서 이것을 극복할 수 있는 방법이 바로 인삼 및 홍삼을 장내 미생물로 발효시켜 직접 체내에 흡수시키는 방안이 있다. 발효 홍삼은 이러한 장내미생물의 차이로 인한 흡수와 효능의 차이를 줄이기 위해 홍삼을 미리 특유 미생물로 발효시킴으로써 흡수가 용이한 유용 사포닌으로 전환하여 개인차 민족차를 극복하여 인삼 효능의 표준화를 이룰 수 있다는 장점이 있다. 이러한 이유 때문에 국내에서 최근 발효 홍삼에 대한 제품이 출시되고 있으며, 이에 대한 효능이 연구되고 있다.
발효 홍삼은 사포닌의 균형적인 대사에도 도움을 준다. 디올계 사포닌은 신체를 안정화 시키고 면역력을 높이며 지나친 것은 낮추어 정상화시키는 작용이 있다. 트리올계 사포닌의 경우 혈액순환을 좋게 하고 원기를 높이며 활력을 주는 서로 보완하며 상반되는 작용을 가지고 있다. 만약 장내 균총이 불안정하여 디올계와 트리올계 사포닌을 한 쪽만 대사시키거나 둘 다 대사시키지 못하면 사포닌 흡수에 불균형이 오고, 따라서 인삼을 복용하여도 효과가 떨어질 수 있으며 일부 사람에서는 열이 나거나 답답함 등의 불편한 경험을 하게 된다. 그러나 외부에서 디올계와 트리올계 사포닌을 균형적으로 대사시켜 신체에 흡수시켰을 경우에는 인삼 및 홍삼이 가지고 있는 본연의 효능을 모두 볼 수 있으며 그 외 부작용 등이 현저히 줄어든다는 연구결과들이 보고되고 있다.
본 발명은 홍미삼으로부터 효소전환과 김치유래 유산균을 이용한 발효를 통하여 화합물 K의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액을 제조하는 방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 a)4년근 홍미삼에 50% 주정(酒精)을 첨가하여 홍미삼 주정추출물을 제조하는 단계; b)상기 a)단계의 홍미삼 주정추출물을 냉각한 후 여과하는 단계; c)상기 b)단계의 여과액을 25~30브릭스(Brix)까지 농축하여 주정(酒精)을 제거하는 단계; d)상기 c)단계의 농축액을 희석하여 Cytolase PCL5, Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL 및 Rapidase C80Max로 이루어진 군으로부터 선택된 3종의 효소의 조합농도 1~3%의 범위로 50℃에서 48~72시간 동안 처리하여 사포닌을 전환시키는 단계; e)상기 d)단계의 효소 반응액에 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) HY7802 균주를 접종하여 발효시키는 단계; f)상기 e)단계의 발효액을 가열하여 d)단계의 효소를 불활성화 시키는 단계; g)상기 f)단계의 효소가 불활성화 된 발효액을 70~80브릭스(Brix)까지 감압 농축하는 단계; 및 h)상기 g)단계의 농축액을 살균하는 단계를 포함하는 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법을 제공하는 것을 특징으로 한다.
상기 a)단계의 홍미삼 주정추출물의 제조는 홍미삼 무게의 20배의 50% 주정을 이용하여 80℃에서 6시간 동안 3회 추출하는 것이 바람직하다. 일반적으로 홍삼 추출시 10~20배의 주정을 사용한다고 알려져 있어 수율을 최대로 하기 위해서 홍삼 무게의 20배로 사용하여 3회 추출한다.
상기 b)단계의 홍미삼 주정추출물의 냉각은 40~50℃까지 하며, 여과는 퍼라이트(perlite)를 이용하는 것이 바람직하다. 퍼라이트 여과는 일반적으로 미세한 현탁물이나 콜로이달 입자를 제거하기 위함으로 진세노사이드 성분은 여과에 의해서 함량의 변화가 없기 때문이다. 40~50℃로 냉각하는 이유는 추출온도인 80℃에서는 추출물의 용해도 등의 원인으로 여과 효과가 반감되기 때문이다.
또한 상기 b)단계의 여과액을 25~30브릭스(Brix)까지 농축하여 주정(酒精)을 제거하는 것이 바람직하다. 최소한 25브릭스(Brix)까지 농축을 하지 않으면 남아 있는 주정이 효소반응을 저해할 수 있다.
또한 상기 d)단계의 3종의 효소의 조합은 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max의 효소 조합인 것이 바람직하다.
상기 f)단계의 효소의 불활성화는 90℃에서 10분 동안 실시하는 것이 바람직하다. 효소를 불활성화 해서 다음 단계인 유산균 발효 시 유산균의 생육저해의 가능성을 없애기 위함이다.
상기 h)단계의 살균은 90℃에서 2시간 동안 실시하는 것이 바람직하다.
한편, 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료는 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액과 혼합과즙시럽 및 물을 일정한 비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조한다.
또한, 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품은 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 포함하는 것 이외에 영양보조성분으로서 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있으며 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.
또한, 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 화장료 조성물은 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 통상적인 화장료 조성물 제조방법에 첨가하여 제조된다.
본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액은 효소전환과 유산균 발효과정을 통하여 진세노사이드를 변환시킴으로써 인체 내에서 소화 흡수율이 증대된 화합물 K를 다량 함유하고 있는 건강기능식품 또는 식품소재로서 활용할 수 있다.
도 1은 본 발명에서 화합물 K의 전환 활성을 가지는 효소를 선발하기 위해서 반응물을 TLC 전개한 사진이다.
도 2는 본 발명에서 베타-글루코시다아제(beta-glucosidase) 활성을 보이는 균주들 중 진세노사이드 전환능을 보이는 균주를 선발하기 위해서 반응물을 TLC 전개한 사진이다.
도 3은 본 발명의 효소전환 및 유산균 발효에 의한 발효홍삼 농축액 제조방법의 바람직한 실시예를 보인 공정도이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 다음의 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.
<실시예 1>
홍삼 원료의 선정
풍기인삼농협으로부터 구입한 6년근 본삼, 6년근 미삼, 4년근 본삼, 4년근 미삼을 구입하여 사용하였다.
6년근 홍삼의 본삼 100g, 6년근 홍삼의 미삼 100g, 4년근 홍삼의 본삼 100g, 4년근 홍삼의 미삼 100g 각각에 70% 주정 2ℓ를 넣고 80℃에서 환류추출하여 감압농축 후 동결건조하였다.
상기 방법에 의해 얻어진 주정추출물에서 진세노사이드(ginsenoside) Rb1 및 Rg1의 함량을 측정하여 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
표 1
홍삼(년근/부위) Rg1 함량(㎎/g) Rb1 함량(㎎/g)
6년/본삼 10.2 15.8
6년/미삼 8.0 43.2
4년/본삼 9.1 14.0
4년/미삼 8.0 45.8
상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본삼에 비해서 미삼에 화합물 K의 주요 기질이 되는 Rb1의 함량이 많았으며, 6년근 보다 4년근에서 함량이 더 많았다. 따라서, 화합물 K의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 원료로써 4년근 홍미삼을 선택하였다.
<실시예 2>
사용 효소의 선정
화합물 K의 주요 기질이 되는 진세노사이드 Rb1을 사용한 효소반응을 통하여 식용 가능한 효소 13종(Sumizym AC, TG-B, Lumicell YX1, Cellulase KN, Rapidase TF, Pectinase UltraSP, Cytolase PCL5, Filtrase Premium, Multifect Pectinase FE, Crystalzyme APXL, Rapidase C80MAx, GC220, Multifect CXXL)으로부터 화합물 K를 생성하는 효소 7종을 선별하였다.
상기의 반응은 1%(w/v)의 진세노사이드 Rbl 수용액 1㎖에 13종의 효소 각각을 총 반응 부피 1㎖의 5%인 0.05㎖를 첨가하여 50℃에서 200rpm으로 24시간 반응하여 총 반응 부피 1㎖의 동량의 수포화 부탄올(butanol)로 진세노사이드를 추출한 후 TLC(thin layer chromatography)에 점적 및 전개하여 화합물 K의 생성여부를 확인하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
세로축의 "C-K"는 "화합물 K"를 나타낸다. "AC"는 "Sumizym AC"를 나타낸다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, Cytolase PCL5(제조사: DSM, 효소 종류: pectinase, pectin lyase, polygalacturonase and endoarabinase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger), Multifect Pectinase FE(제조사: Genencor, 효소종류: pectinase, cellulase, henmicellulase and beta-glucosidase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger), Sumyzyme AC(제조사: ShinNippon, 효소 종류: cellulase, beta-glucosidase and hemicellulase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger), Cellulase KN(제조사: ShinNippon, 효소 종류: cellulase, hemicellulase, pretease and naringinase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger), Rapidase TF(제조사: DSM, 효소 종류: pectinase and hemicellulase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger), Crystalzyme APXL(제조사: DSM, 효소 종류: pectin esterase, pectin depolymerase, cellulase and hemicellulase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger) 및 Rapidase C80Max(제조사: YC International, 효소 종류: pectinase, 효소 생산 미생물: Aspergillus niger)의 총 7종의 화합물 K로의 전환 효소를 선별하였다.
<실시예 3>
선별 효소의 최적 조합 선정
선별된 상기 실시예 2의 7종의 효소 중 Multifect Pectinase FE는 Genencor사의 단종으로 인해 제품 생산에 적용이 불가능하여 제외하였으며, Rapidase TF와 Rapidase C80Max 중 Rapidase C80Max를 선정함에 따라 총 5종의 효소 Cytolase PCL5, Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL 및 Rapidase C80Max를 가지고 최적 조합을 찾는 실험을 진행하였다.
상기 실시예 1의 10%(w/v)의 4년근 홍미삼 주정추출물 10㎖에 상기 5종류의 효소 중 3종류의 효소의 조합을 각각 1%씩 4년근 홍미삼 주정추출물 총 부피 10㎖의 3%인 0.3㎖ 첨가하여 50℃에서 200rpm으로 24시간 반응하여 반응물의 화합물 K를 HPLC를 통하여 정량하였다.
그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
표 2
효소의 조합 화합물 K의 함량(mg/g)
Crystalzyme APXL Cytolase PCL5 Sumizym AC 1.32
Crystalzyme APXL Cytolase PCL5 Cellulase KN 1.17
Crystalzyme APXL Cytolase PCL5 Rapidase C80Max 1.19
Crystalzyme APXL Sumizym AC Cellulase KN 1.32
Crystalzyme APXL Sumizym AC Rapidase C80Max 1.40
Crystalzyme APXL Cellulase KN Rapidase C80Max 0.68
Cytolase PCL5 Sumizym AC Cellulase KN 1.52
Cytolase PCL5 Sumizym AC Rapidase C80Max 1.86
Cytolase PCL5 Cellulase KN Rapidase C80Max 0.86
Sumizym AC Cellulase KN Rapidase C80Max 1.00
상기 표 2에서 확인할 수 있는 바와같이, 화합물 K의 생성능이 가장 좋은 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max의 효소조합을 선정하였다.
<실시예 4>
선별 효소 조합의 최적 조건 결정
상기 실시예 3에서 선별된 3종 효소조합, Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max의 최적 전환조건을 설정하기 위하여 기질인 상기 실시예 1의 4년근 홍미삼 주정추출물의 농도를 5%, 10% 및 15%, 상기 3종 효소 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max의 조합 농도를 1%(Cytolase PCL5 0.33%, Sumizyme AC 0.33% 및 Rapidase C80Max 0.34%), 2%(Cytolase PCL5 0.67%, Sumizyme AC 0.66% 및 Rapidase C80Max 0.67%) 및 3%(Cytolase PCL5 1%, Sumizyme AC 1% 및 Rapidase C80Max 1%), 반응시간을 24시간, 48시간 및 72시간 중 선택된 조건으로 50℃에서 200rpm으로 진행하였으며 반응표면분석법(response surface methology)을 이용하여 하기 표 3과 같이 최적전환 조건을 결정하였다.
표 3
Sample 반응조건(4년근 홍미삼 주정추출물/반응시간/3종 효소조합 농도) 화합물 K 생성량(mg/g)
1 10%/3d/3% 2.59
2 5%/2d/3% 7.21
3 15%/1d/2% 0.3
4 10%/1d/3% 0.9
5 15%/2d/3% 1.7
6 5%/2d/1% 2.63
7 10%/1d/1% 0.36
8 10%/2d/2% 0.43
9 10%/2d/2% 0.66
10 10%/3d/1% 0.56
11 5%/3d/2% 5.19
12 15%/2d/1% 0.33
13 15%/3d/2% 1.43
14 10%/2d/2% 1.07
15 5%/1d/2% 2.76
상기의 표 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 4년근 홍미삼 주정추출물 5%, 효소조합농도 3% 및 반응시간 48시간(샘플 2)의 경우에 최대의 화합물 K의 생성량을 보였다.
이후 72시간 동안 반응하여 화합물 K의 생성량을 측정한 결과 48시간 반응과 비교했을 때 그 생성량이 7.43 mg/g으로 다소 증가하는 결과를 나타내었다.
따라서 발효홍삼농축액 제조시에 반응 조건을 4년근 홍미삼 주정추출물 5%, 효소조합농도 3% 및 반응시간 72시간으로 결정하였다.
<실시예 5>
5-1. 김치유산균으로부터 진세노사이드 전환 유산균의 분리
여러 지역의 가정집 및 음식점으로부터 여러 종의 김치를 수집하여 각 김치의 김치액을 멸균수를 이용하여 희석한 후 MRS Agar 배지에 도말하여 30℃에서 배양한 후 균주모양, 색, 투명도, 크기, 외형구조 등을 육안으로 관찰하여 김치 유산균을 1차 선발하였다.
상기의 방법을 통하여 1차 선발된 108 종의 균주를 베타-글루코시다아제(β-glucosidase) 활성, 진세노사이드 전환능 및 홍삼 추출액에서의 성장능을 통하여 최고의 전환능 및 성장능을 보이는 1종의 유산균을 최종 선발하였다.
먼저, 베타-글루코시다아제 활성을 갖는 유산균을 선발하기 위하여 1차 선발된 유산균 배양물(균체포함) 0.2㎖ 각각에 최종 농도가 10mM이 되도록 p-Nitrophenyl β-D-glucoside 용액 0.2㎖를 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 반응하였다. 1.6㎖의 0.5M 탄산나트륨(Na2CO3)을 첨가하여 반응을 종료하고 420nm에서 흡광도를 측정하여 OD420 값이 1.5 이상인 균주 8종을 선발하였다.
그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
표 4
유산균 beta-glucosidase 활성(OD420)
#8 2.085
#25 1.683
#31 1.682
#35 2.052
#39 1.990
#66 2.652
#87 1.659
#92 1.970
상기 표 4의 균주 8종을 대상으로 진세노사이드 Rb1의 전환능을 측정하기 위하여 1%(w/v)의 진세노사이드 Rbl 수용액 1㎖에 1㎖의 상기 8종의 유산균 배양물 각각을 첨가하여 37℃에서 200rpm으로 24시간 반응하여 TLC에 점적 및 전개한 후 진세노사이드 전환능을 보인 4종의 균주를 선발하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 진세노사이드 전환능을 보인 4종의 균주는 #25, #31, #35, #66임을 알 수 있었다.
상기 선발된 4종의 균주를 10% 홍미삼 추출물에 접종한 후 37℃에서 48시간 배양 후 성장능을 관찰하였다.
그 결과를 하기의 표 5에 나타내었다.
표 5
유산균 cfu/㎖
#25 6.7 ×106
#31 2.4 ×107
#35 1.8 ×109
#66 9.1 ×106
상기 표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 최고의 성장능을 보인 균주 1종 #35을 최종 선발하였다.
5-2. 분리된 김치유산균의 동정
상기 5-1의 선별된 균주 #35를 MRS 배지에서 배양한 후 게놈 DNA를 분리하였다. 16rDNA 부위는 시발체(primer)로 PCR(polymerase chain reaction)을 이용하여 증폭시켰다. 시발체 서열은 5`-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3`(순방향)과 5`-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3`(역방향)을 사용하였다. PCR 반응을 위하여 추출한 게놈 DNA 50ng, 각 dNTPs 100μM, 시발체 각 0.2μM, 1× enzyme buffer, Taq polymerase 2unit를 넣고 증류수로 전체 50μl 부피가 되도록 추가하였다. 증폭반응은 초기 94℃에서 90초 동안 변성한 후, 28사이클로 94℃에서 30초, 42℃에서 60초, 72℃에서 60초 실시하였고, 추가로 72℃에서 5분 연장하였다. PCR 산물은 1.5% 아가로스 겔(agarose gel)에서 분리한 후, 용출하여 (주)코스모진텍에 염기 서열 분석을 의뢰하여 결과를 얻었다. 그 얻은 결과를 BLSAT Search를 통하여 분석할 결과 기존에 데이터베이스(Data Base)에 올려져 있는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 균주들과 99% 이상의 상동성을 나타내었다.
본 발명에 따른 유산균의 특성은 다음과 같다.
1)균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균의 특성
① 세포의 형태: 간균
② 운동성: 없음
③ 포자형성능: 없음
④ 그람(Gram) 염색: 양성
2)균락의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균락의 형태
① 형상: 원형
② 융기: 볼록
③ 표면: 매끈(smooth)
3)생리적 성질
① 최적 생육온도: 36~38℃
② 최적 생육 pH: 5.0~7.0
③ 산소에 대한 영향: 통성혐기성
4)카탈라제: -
5)가스형성여부: -
6)15℃에서 생육: -
7)45℃에서 생육: +
8)인돌생산: -
9)젖산생산: +
이상에서와 같은 본 발명의 신균주의 형태학적 특성, 생리적 및 생장 특성과 16S rDNA 분석을 통한 분자유전학적인 방법에 근거하여 동정한 결과, 본 발명의 신균주는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)에 속한다는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 발명자들은 본 발명의 신균주를 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) HY7802로 명명하고, 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2011년 12월 6일자로 기탁하였다(기탁번호:KCTC 12097BP).
<실시예 6>
발효홍삼 농축액의 제조
도 3의 공정도에서와 같이 본 발명의 발효홍삼 농축액의 제조방법은 다음과 같다.
(1)원료삼 계량
풍기인삼농협에서 구입한 4년근 홍미삼 100kg을 사용하였다.
(2)추출
상기 홍미삼에 식품원료로 사용할 수 있는 50% 주정 2000ℓ씩(주정 1000ℓ+정제수 1000ℓ) 첨가하여 80℃에서 6시간 동안 3회 추출하였다.
(3)여과
상기 추출물을 50℃로 냉각한 후 퍼라이트(perlite)를 이용하여 여과하였다.
(4)농축
상기 여과액을 30브릭스(Brix)로 감압농축하였다.
(5)효소전환
상기 감압농축액에 정제수를 첨가하여 5브릭스(Brix)가 되게 희석한 후 여기에 총 부피 0.8%의 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max 효소조합을 첨가하여 50℃에서 72시간 동안 반응하였다.
(6)유산균발효
상기 효소 반응액에 김치유래 유산균 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) HY7802를 접종하여 37℃에서 발효하였다.
(7)효소실활
상기 발효액을 90℃에서 10분 동안 가열하여 상기 효소 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max를 불활성화 하였다.
(8)농축
상기 효소가 불활성화된 발효액을 75브릭스(Brix)가 되게 감압농축하였다.
(9)살균 및 포장
상기 농축액을 90℃에서 2시간 동안 살균한 후 포장하여 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 제조하였다.
<실시예 7>
화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료의 제조
본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액과 혼합과즙시럽으로 구성된 기능성 음료를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 2.5중량%, 갈색설탕 2.5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그리고 상기의 방법으로 제조된 혼합과즙시럽 30.4중량%와 상기 실시예 6의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액 0.1중량% 및 나머지 정제수 69.5중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료를 제조하였다.
<실시예 8>
화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품의 제조
상기 실시예 6의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액 0.1중량%에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드) 및 올리고당을 상기 상기 실시예 6의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액 100중량부에 대하여 10중량부가 되도록 첨가하여 고속회전 혼합기에서 혼합하였다. 상기 혼합물 100중량부에 대하여 멸균 정제수 10중량부를 첨가, 혼합하고 직경 1~2mm의 과립상으로 성형하였다. 상기 성형된 과립은 40~50℃의 진공건조기에서 건조시킨 후 12~14 메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하였다. 상기와 같이 제조된 과립은 적당량씩 압출 성형되어 정제 또는 분말로 되거나 경질캡슐에 충전되어 경질캡슐제품으로 제조하였다.
<실시예 9>
화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 제조
본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 화장료 조성물은 크림 형태로서, 프로필렌글리콜 5중량%를 가열하여 70℃에 보존한 다음 스테아릴 알콜 8중량%, 스테아린산 2중량%, 스테아린산 콜레스테롤 2중량%, 스쿠알란 4중량%, 2-옥틸도데실알콜 6중량%, 폴리옥시에틸렌 알콜에스테르 3중량%, 글리세릴모노스테아린산 아스테르 2중량%의 혼합물을 가한 다음 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각한 다음 45℃에서 상기 실시예 6의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액 6중량% 및 잔량의 정제수를 첨가하여 32℃까지 냉각하여 본 발명의 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 화장료 조성물을 제조하였다.
Figure PCTKR2012007053-appb-I000001

Claims (9)

  1. a)4년근 홍미삼에 50% 주정(酒精)을 첨가하여 홍미삼 주정추출물을 제조하는 단계;
    b)상기 a)단계의 홍미삼 주정추출물을 냉각한 후 여과하는 단계;
    c)상기 b)단계의 여과액을 25~30브릭스(Brix)까지 농축하여 주정(酒精)을 제거하는 단계;
    d)상기 c)단계의 농축액을 희석하여 Cytolase PCL5, Sumizyme AC, Cellulase KN, Crystalzyme APXL 및 Rapidase C80Max로 이루어진 군으로부터 선택된 3종의 효소의 조합 농도 1~3%의 범위로 50℃에서 48~72시간 동안 처리하여 사포닌을 전환시키는 단계;
    e)상기 d)단계의 효소 반응액에 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) HY7802 균주(기탁번호: KCTC 12097BP)를 접종하여 발효시키는 단계;
    f)상기 e)단계의 발효액을 가열하여 d)단계의 효소를 불활성화 시키는 단계;
    g)상기 f)단계의 효소가 불활성화 된 발효액을 70~80브릭스(Brix)까지 감압 농축하는 단계; 및
    h)상기 g)단계의 농축액을 살균하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 a)단계의 홍미삼 주정추출물의 제조는 홍미삼 무게의 20배의 50% 주정(酒精)을 이용하여 80℃에서 6시간 동안 3회 추출하는 것을 특징으로 하는 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 b)단계의 홍미삼 주정추출물의 냉각은 40~50℃까지 하며, 여과는 퍼라이트(perlite)를 이용하는 것을 특징으로 하는 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 d)단계의 3종의 효소의 조합은 Cytolase PCL5, Sumizyme AC 및 Rapidase C80Max의 효소 조합인 것을 특징으로 하는 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 f)단계의 효소의 불활성화는 90℃에서 10분 동안 실시하는 것을 특징으로 하는 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 h)단계의 살균은 90℃에서 2시간 동안 실시하는 것을 특징으로 하는 발효홍삼 농축액의 제조방법.
  7. 제1항의 방법으로 제조된 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 포함하는 기능성 음료.
  8. 제1항의 방법으로 제조된 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품.
  9. 제1항의 방법으로 제조된 화합물 K가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물.
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