KR102221579B1

KR102221579B1 - 신규 락토바실러스 부크너리 균주 및 이의 용도

Info

Publication number: KR102221579B1
Application number: KR1020190147874A
Authority: KR
Inventors: 백현동; 천민정; 이나경; 김기태; 임성민
Original assignee: 건국대학교 산학협력단; 주식회사 위드바이오
Priority date: 2019-11-18
Filing date: 2019-11-18
Publication date: 2021-03-02

Abstract

본 발명은 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P); 이를 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱 조성물; 및 퇴행성 신경질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

신규 락토바실러스 부크너리 균주 및 이의 용도{NOVEL STRAIN OF Lactobacillus buchneri AND USE THEREOF}

본 발명은 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는 신규 락토바실러스 부크너리 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.

인체 곳곳에는 인간 세포의 2배 이상의 미생물이 서식하고 있으며, 이들 미생물의 유전자 총합은 인간 유전자 개수의 100배 이상이다. 인체 여러 부위들 중에서 장에는 가장 많은 수의 미생물들이 서식하고 있으며, 장내 마이크로바이옴, 즉, 장내에서 서식하고 있는 미생물들과 그들의 유전정보 총합은 신경 질환에도 영향을 미치는 것으로 밝혀지고 있다. 장 및 뇌 사이의 복잡한 양방향 연결은 내분비계, 면역계, 자율신경계 및 장신경계 등 여러 기관의 상호작용으로 이루어지며, 이러한 상호작용을 조절하는데 있어서 장내 미생물총 및 미생물에서 유래한 분자가 영향을 미친다.

장내에서 유해한 균총이 증가하는 경우 장 내에서 산화 스트레스를 유발해 파킨슨 질환을 유발한다고 알려진 단백질 알파 시누클레인의 축적을 촉진하게 된다. 반면, 유익한 균총이 증가하면 장내 환경을 개선하고 유해균으로부터 유발되는 독소나 장내 염증을 감소시켜 파킨슨 질환을 비롯한 퇴행성 신경질환을 예방할 수 있다.

적정량을 섭취했을 시 장내 환경을 개선하고 숙주에게 이로운 영향을 주는 살아있는 미생물을 프로바이오틱스라고 한다. 프로바이오틱스로서 기능하기 위해서는 위장관의 높은 pH와 소장의 담즙산에서 살아남을 수 있어야 한다. 또한, 장내 상피세포에 대한 부착성이 우수해야 한다. 유산균은 대표적인 프로바이오틱스로 사용되며 특히 김치에서 분리한 김치 유래 유산균은 면역 증강, 항산화, 항당뇨, 항비만 등 여러 가지 건강기능성이 있는 것으로 보고되고 있다.

종래 연구에 따르면, 락토바실러스 부크러니(Lactobacillus buchneri) 균주가 발효에 사용된 예는 보고된바 있으나, 이의 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 직접적으로 확인한 예는 보고된바 없다.

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1. 한국등록특허 10-1917497 (2018.11.09. 공고)
2. 한국등록특허 10-1972236 (2019.04.24. 공고)

본 발명은 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P) 등을 제공하고자 한다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 제공한다.

상기 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과는 상기 균주 및 장세포 간 반응을 통해 생산된 대사산물의 작용으로 인한 것일 수 있다.

상기 균주는 하기 ⅰ) 내지 ⅲ)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특징을 추가로 가질 수 있다:

ⅰ) 내산성, 내담즙성 및 장부착능;

ⅱ) β-갈락토시다아제 생산능; 및

ⅲ) 항산화능.

상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA 염기서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱 조성물을 제공한다.

상기 균주는 생균체, 사균체 또는 배양여액으로 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예로, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 퇴행성 신경질환은 파킨슨 질환, 알츠하이머 질환, 루게릭 질환, 헌팅턴 질환, 근위축성 측석 경화증, 다발성 경화증, 면역계이상 뇌기능 부전, 진행성 신경퇴행질환, 대사성 뇌질환, 니만-픽병, 뇌 허혈 및 뇌출혈로 인한 치매로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)는 안정적이고 안전한 프로바이오틱 특성(특히, 월등히 우수한 장부착능)을 가지면서, 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는바, 프로바이오틱 조성물 뿐만 아니라, 퇴행성 신경질환(특히, 파킨슨병 질환, 알츠하이머 질환) 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 신규 Lactobacillus buchneri 200793 균주(KCCM 12593P)의 계통도를 보여주는 그림이다.
도 2는 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주의 장부착능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 유래 CM의 인간 유래 신경 세포의 보호 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 유래 CM의 인간 유래 대장암 세포의 BDNF 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 유래 CM의 인간 유래 신경 세포의 BDNF 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 6은 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 유래 CM의 인간 유래 신경 세포의 Bax/Bcl-2 발현량 비율을 나타낸 그래프이다.

본 발명자들은 프로바이오틱 특성을 가지는 Lactobacillus buchneri 균주 중에서도, 특히, 장부착능이 월등히 우수한 Lactobacillus buchneri 200793 균주를 분리 및 동정하여, 그 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 평가함으로써, 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

상기 균주(KCCM 12593P)는 락토바실러스 부크너리의 아종으로 볼 수 있다. 종래 알려진 락토바실러스 부크너리는 발효 과정에서 젖산 및 아세트산을 생산하는 헤테로 젖산균의 일종으로서, 공기에 노출된 후 가열 및 부패를 방지하는 용도로 사용되는데, 상기 균주(KCCM 12593P)는 락토바실러스 부크너리 중에서도, 특히, 장부착능이 월등히 우수하고, 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과가 우수한 특징을 가진다.

상기 균주(KCCM 12593P)의 계통도는 도 1에 도시한 바와 같으며, 배추김치로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 분리된 균주를 동정하기 위해 16S rRNA 서열을 분석한 결과, 상기 균주(KCCM 12593P)는 서열번호 1의 16S rRNA 염기서열을 가지는 것으로 확인되며, 2019년 9월 30일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 수탁번호 KCCM 12593P를 부여받았다.

먼저, 상기 균주(KCCM 12593P)는 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

구체적으로, 상기 신경세포 사멸에 대한 보호 효과는 상기 균주(KCCM 12593P) 및 장세포 간 반응을 통해 생산된 대사산물의 작용으로 인한 것일 수 있다. 상기 균주(KCCM 12593P)는 장세포와 반응을 하여 대사산물을 생산하는데, 이와 같이 생산된 대사산물은 신경 세포에 대해 세포 독성을 유발하지 않으면서, 신경 독소에 대한 세포 보호 효과를 가질 수 있다. 또한, 이와 같이 생산된 대사산물을 신경 세포에 처리했을 때, 신경 독소에 의해 감소된 BDNF 발현양을 다시 증가시킬 수 있고, 신경 독소에 의해 증가된 Bax/Bcl-2 발현양 비율을 크게 감소시킬 수 있다.

그밖에, 상기 균주(KCCM 12593P)는 하기 ⅰ) 내지 ⅲ)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특징을 추가로 가질 수 있다:

ⅰ) 내산성, 내담즙성 및 장부착능;

ⅱ) β-갈락토시다아제 생산능; 및

ⅲ) 항산화능.

구체적으로, ⅰ) 내산성, 내담즙성 및 장부착능과 관련하여, 상기 균주(KCCM 12593P)의 내산성은 pH 2.5 조건에서 3시간 반응시, 균주의 생존율이 100 % 이상일 수 있고, 상기 균주(KCCM 12593P)의 내답즙성은 0.3% oxgall 조건에서 24시간 반응시, 균주의 생존율이 90% 이상일 수 있다. 특히, 상기 균주(KCCM 12593P)의 장부착능은 상업용 프로바이오틱스로 알려진 Lactobacillus rhamnosus LGG 균주, Lactobacillus fermentum 200060 균주 및 Lactobacillus delbrueckii 200171 균주 등에 비해, 월등히 우수한 것을 특징으로 한다.

ⅱ) β-갈락토시다아제 생산능과 관련하여, 상기 균주(KCCM 12593P)는 β-갈락토시다아제(β-Galactosidase)를 생산함으로써, 유당불내증 예방, 개선 또는 치료 용도로 활용할 수 있다. 아울러, 상기 균주(KCCM 12593P)는 암 유발 효소로 분류되는 β-글루쿠로니다아제(β-Glucuronidase)를 생산하지 않음으로써, 인체 안전성을 구현할 수 있다.

ⅲ) 항산화능과 관련하여, 상기 항산화 활성은 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 양이온 소거능 그리고 베타 카로틴 및 레놀레산 산화 억제능 실험을 통해 평가될 수 있다. 따라서, 상기 균주(KCCM 12593P)는 노화방지, 독소 제거(디톡스) 등에 큰 도움이 될 수 있다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱 조성물을 제공한다.

상기 균주(KCCM 12593P)에 대해서는 전술한 바와 같으며, 상기 생균체, 사균체 또는 배양여액으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 균주(KCCM 12593P)의 용량은 1Х10⁶ CFU/mL 내지 1Х10¹⁰ CFU/mL인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, 상기 균주(KCCM 12593P)의 용량이 상기 범위 미만인 경우, 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 발휘하기 어려운 문제점이 있고, 상기 균주(KCCM 12593P)의 용량이 상기 범위를 초과하는 경우, 세포독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다.

본 명세서 내 "퇴행성 신경질환"이라 함은 신경 세포가 퇴행하는 병태 전부를 포함하는 의미로, 파킨슨 질환, 알츠하이머 질환, 루게릭 질환, 헌팅턴 질환, 근위축성 측석 경화증, 다발성 경화증, 면역계이상 뇌기능 부전, 진행성 신경퇴행질환, 대사성 뇌질환, 니만-픽병, 뇌 허혈 및 뇌출혈로 인한 치매로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함할 수 있고, 파킨슨 질환 또는 알츠하이머 질환을 포함하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

그밖에, 본 발명은 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)를 포함하는 발효용 스타터, 종균 조성물 또는 발효 식품을 제공할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.

상기 담체 또는, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리게이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제는 상기 균주(KCCM 12593P)에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용하는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등을 사용할 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(Tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 균주(KCCM 12593P)를 건강기능식품의 첨가물로 사용하는 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 예방, 건강 또는 치료 등의 각 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.

건강기능식품의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.

상기 식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 균주(KCCM 12593P)는 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.

본 발명에 따른 건강기능식품 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.

상기 외에 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물 100 중량부 대비 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 균주(KCCM 12593P)는 안정적이고 안전한 프로바이오틱 특성(특히, 월등히 우수한 장부착능)을 가지면서, 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는바, 프로바이오틱 조성물 뿐만 아니라, 퇴행성 신경질환(특히, 파킨슨병 질환, 알츠하이머 질환) 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

<실시예>

실시예 1: Lactobacillus buchneri 200793 균주 분리 및 동정

신규 균주를 분리하기 위해, 집에서 담근 배추김치 국물을 샘플링하여 시료로 사용하였다. 배추김치 국물을 10배 희석법을 사용하여 LBS 한천 배지에 도말하고 여러 차례 획선 도말하고 배양한 후 콜로니 형태를 관찰하여 신규 균주를 분리하였다. 분리된 신규 균주의 동정을 위해 Bionics(Seoul, Korea)에 16S rRNA 서열분석을 의뢰하였다. 구체적으로, 16S rRNA 서열분석을 수행하였고, 16S rRNA 유전자를 27F와 1492R 프라이머(primer)를 이용하여 PCR을 진행하였다. 염기서열을 분석하여 나온 결과를 토대로 BLAST 프로그램을 이용하여 Genbank의 데이터베이스에 등록된 다른 표준균주와 상동성을 비교하였다. 신규 균주는 Lactobacillus buchneri 200793 균주로 확인되었고, 유사성은 99%로 나타났다. 또한, Mega 7 program을 이용하여 상동성을 분석하고 계통도를 얻었다(도 1). 이때, Lactobacillus buchneri 200793 균주는 2019년 9월 30일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 수탁번호 KCCM 12593P를 부여받았다.

이후, Lactobacillus buchneri 200793 균주를 lactobacilli MRS broth에서 37℃, 12시간 동안 배양하여 초기 균수를 10⁷ CFU/mL로 조절한 후 원심분리(5,000Хg, 10분)하여 침전물(균체)과 상층액(배양여액)으로 분리하였고. 침전물을 동결건조시킨 후 생균체를 제조하였고, 여기에 추가적인 열처리(121℃, 15 분)를 통하여 사균체를 제조하였다. 그다음, 사균체를 0.1% 펩톤수로 3번 세척 및 재현탁하여 실험에 사용하였다.

비교예 1: Lactobacillus rhamnosus LGG 균주 준비

상업용 프로바이오틱스로 알려진 Lactobacillus rhamnosus LGG 균주를 준비하였다. 배양 조건은 Lactobacillus buchneri 200793 균주와 동일하게 하였다.

비교예 2: Lactobacillus fermentum 200060 균주 준비

상업용 프로바이오틱스로 알려진 Lactobacillus fermentum 200060 균주를 준비하였다. 배양 조건은 Lactobacillus buchneri 200793 균주와 동일하게 하였다.

비교예 3: Lactobacillus delbrueckii 200171 균주 준비

상업용 프로바이오틱스로 알려진 Lactobacillus delbrueckii 200171 균주를 준비하였다. 배양 조건은 Lactobacillus buchneri 200793 균주와 동일하게 하였다.

실험예 1: 균주의 생리적 특성 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주의 생리적 특성으로서, 내산성, 내담즙성 및 장부착능을 평가하였다.

(1) 내산성 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 24시간 배양하였다. pH 2.5로 조절한 배양액 실험관에 pepsin 3 mg/mL를 첨가하고, 미리 배양된 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 각 실험관에 1 mL씩 접종하였다. 0시간을 대조군으로 사용하였고, 0 시간 및 3시간 후의 총 균수를 확인하여 내산성을 평가하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

(2) 내담즙성 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 24시간 배양하였다. 배양액 실험관에 Oxgall 3.0 mg/mL를 첨가하고, 미리 배양된 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 각 실험관에 1 mL씩 접종하였다. 0시간을 대조군으로 사용하였고, 0 시간 및 24시간 후의 총 균수를 확인하여 내담즙성을 평가하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

실험내용		균수(Log CFU/mL; %)
실험내용		비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
내산성 및 내담즙성	초기 균수	8.55 ± 0.01	8.26 ± 0.01	7.39 ± 0.01	8.31 ± 0.01
	pH 2.5, 0.3% (w/v) pepsin	8.51 ± 0.05	8.29 ± 0.01	4.64 ± 0.02	8.47 ± 0.07
	0.3% (w/v) Oxgall	8.58 ± 0.03	7.41 ± 0.01	7.56 ± 0.08	7.56 ± 0.09

표 1에 나타난 바와 같이, 내산성 평가 결과, 실시예 1에서 분리된 균주는 초기 균수와 비교하여 pH 2.5의 환경에서도 균수가 약 0.16 Log CFU/mL 증가하여 우수한 내산성을 가지는 것으로 확인된다. 반면, 비교예 1에서 분리된 균주는 초기 균수와 비교하여 균수가 약 0.04 Log CFU/mL 감소하였고, 비교예 2에서 분리된 균주는 초기 균수와 비교하여 균수가 약 0.03 Log CFU/mL만 증가하였으며, 비교예 3에서 분리된 균주는 초기 균수와 비교하여 약 2.75 Log CFU/mL 감소하였다.

또한, 내담즙성 평가 결과, 실시예 1에서 분리된 균주는 초기 균수와 비교하여 균수가 다소 감소하였지만, 우수한 내답증성을 가지는 것으로 확인된다.

(3) 장부착능 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 샘플로 준비하여, HT-29 cells (human colon adenocarcinoma cell line, KCLB 30038)를 1Χ10⁵cell/mL 농도로 1 mL씩 넣은 후 24시간 배양하였다. 준비된 샘플을 100 μL(1Χ10⁸CFU/mL)씩 넣은 후 2 시간 동안 배양한 후, 부착된 cells를 1% Triton × 100 용액을 이용하여 떼어준 후 부착 균수를 확인하여 장부착능을 하기와 같이 평가하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다:

장부착능 = (부착 균수(Log CFU/mL)/접종 균수(Log CFU/mL)) × 100.

도 2에 나타난 바와 같이, 장부착능 평가 결과, 실시예 1에서 분리된 균주의 장부착능은 약 14.10 ± 0.77%로 아주 뛰어난 것으로 확인된다. 반면, 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주의 장부착능은 각각 약 2.34 ± 0.26%, 약 1.18 ± 0.08%, 약 1.83 ± 0.17% 정도로 미미한 수준에 불과하였다.

즉, 실시예 1에서 분리된 균주는 생리적 특성이 모두 우수하므로, 인체에 유익한 유산균으로 볼 수 있다.

실험예 2: 균주의 효소 생산능 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주의 효소 생산능을 평가하였다.

구체적으로, 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주를 10⁶ CFU/mL로 조절한 후, API ZYM kit를 이용하여 효소 생산능을 확인하였고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

효소	비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
Control	0	0	0	0
Alkaline phosphatase	0	0	0	0
Esterase	2	1	0	0
Esterase lipase	1	1	0	0
Lipase	0	0	0	0
Leucine arylamidase	3	2	4	3
Valine arylamidase	3	0	3	2
Cystine arylamidase	0	0	0	0
Trypsin	0	0	0	0
α-Chymotrypsin	0	0	0	0
Acid phosphatase	1	1	1	0
Naphthol-AS-BI-phosphohydrolase	2	1	2	1
α-Galactosidase	0	4	0	0
β-Galactosidase	0	5	0	4
β-Glucuronidase	0	0	0	0
α-Glucosidase	3	1	0	0
β-Glucosidase	4	0	0	1
N-Acetyl-β-glucosaminidase	0	0	0	2
α-Mannosidase	0	0	0	0
α-Fucosidase	0	0	0	0

* 0, 1, 2, 3, 4 및 5는 효소 생산능을 의미하는 것으로, 0은 0　nmol; 1은 5　nmol; 2는 10　nmol; 3은 20　nmol; 4는 30　nmol; 및 5는 40　nmol 이상을 의미한다.

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 분리된 균주는 암 유발 효소인 β-글루쿠로니다아제(β-Glucuronidase)를 생산하지 않음으로써, 생체 안전성이 확보된 것으로 확인된다. 또한, β-갈락토시다아제(β-Galactosidase) 생산능이 뛰어나 유용성을 가지는 것으로 확인된다.

실험예 3: 균주 사균체에 대한 항산화능 평가

실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 사균체에 대한 항산화능을 평가하였다.

(1) 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) 라디칼 소거능

DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 에탄올에 0.4 mM 농도가 되도록 녹여 제조하였다. DPPH 용액 0.5 mL에 균주 사균체(1×10⁹CFU/mL) 0.5 mL을 넣어 37℃ 암실에서 30분간 배양하였다. 이후 14,240×g, 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 517nm에서 상등액의 흡광도를 측정하여 항산화능을 평가하였고, 그 결과는 표 3에 나타내었다.

(2) 2,2'-Azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid(ABTS) 양이온 소거능

ABTS(2,2'-Azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid) 용액을 제조한 뒤 안정화시키기 위해 최대 16시간 실온에 보관하였다. ABTS 시약의 흡광도를 734nm 에서 0.7 수준으로 희석하기 위해서 20 M sodium phosphate buffer(pH 7.4)를 사용하였다. 이후 균주 사균체 0.1 mL 및 ABTS 용액 0.9 mL을 섞어서 37℃ 암실에서 10분간 반응시켰다. 이후 14,240×g, 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 734 nm에서 상등액의 흡광도를 측정하여 항산화능을 평가하였고, 그 결과는 표 3에 나타내었다.

(3) 베타 카로틴 및 리놀레산 산화 억제능

리놀레산(Linoleic acid) 66 μL, 베타 카로틴(β-carotene) 3 mg, 트윈80 300 mL 및 클로로포름 10 mL을 혼합하여 감압기를 사용하여 농축한 뒤 멸균 증류수 75 mL 넣어 시약을 제조하였다. 균주 사균체 0.2 mL 및 시약 4 mL을 혼합한 뒤 항온수조에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝나면 470 nm에서 흡광도를 측정하였고, 그 결과는 표 3에 나타내었다.

	비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
DPPH 라디칼 소거능 (%)	23.76 ± 1.53^a	21.81 ± 1.62^a	17.20 ± 0.48^b	23.04 ± 0.88^a
ABTS 양이온 소거능(%)	90.92 ± 1.91^a	91.87 ± 3.27^a	68.33 ± 1.91^b	90.05 ± 3.27^a
베타 카로틴 및 리놀레산 산화 억제능 (%)	33.63 ± 2.60^ab	28.49 ± 2.79^b	16.09 ± 2.13^c	38.42 ± 3.56^a

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 분리된 균주 사균체는 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 양이온 소거능 그리고 베타 카로틴 및 레놀레산 산화 억제능 실험 결과, 모두 뛰어난 항산화능을 가지는 것으로 확인된다. 반면, 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 사균체는 베타 카로틴 및 레놀레산 산화 억제능 실험 결과, 그 효과가 미미한 수준이였다.

실험예 4: 균주 유래 대사산물의 신경 세포 사멸 보호 평가

먼저, 인간 유래 대장암 세포인 HT-29 세포주를 6-well plate에 접종하여 (5×10⁵ cells/mL) 단일층을 형성할 때까지 배양한 후 균주 사균체를 200 μL (1×10⁹CFU/mL) 접종하여 24시간 동안 배양하였다. 이후 상등액을 수거하여 13,000Хg, 4℃에서 5분 동안 원심분리 후 0.45 μM 필터를 사용해 필터링하여 균주 유래 대사산물(conditioned medium; CM)을 제조하였다.

균주 유래 CM의 인간 유래 신경 세포인 SH-SY5Y 세포주에 대한 세포 독성 유발 여부와 신경 독소인 MPP⁺(1-methyl -4-phenylpyridinium)에 대한 세포 보호 효과를 측정하기 위해 MTT(methylthizol-2-yl-2,5-diphenyl tetrazoliumbromide) 어세이를 실시하였다. 96 well-plate에 DMEM에 현탁한 SH-SY5Y 세포주를 0.1 mL 넣어 24시간 동안 배양하였다. 균주 유래 CM의 세포독성 여부를 측정하기 위해서는 균주 유래 CM을 24시간 동안 처리하며 신경 독소에 대한 세포 보호 효과를 측정하기 위해서는 균주 유래 CM을 4시간 동안 미리 처리한 다음 MPP+ 1 mM을 처리하여 20시간 배양하였다. 이후 배지를 제거한 후 well에 MTT(5 mg/mL)을 20 μL 첨가하여 1시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도한 후 배양액을 제거하고 0.1 mL의 DMSO(Dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 15분간 반응시켜 생성된 결정을 녹여 주었다. 이후 흡광도를 540 ㎚ 측정하였으며 세포 생존률에 관한 식은 다음과 같고, 그 결과는 도 3에 나타내었다:

.

도 3에 나타난 바와 같이, 대조군의 세포 생존률을 100%로 설정했을 때 MPP⁺만 처리한 세포의 세포 생존률은 약 61.34±0.70%로 나타났으며, 순서대로 비교예 1 내지 3 및 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM을 처리하고 세포 독성을 유발했을 때 세포 생존률은 각각 약 71.96±0.98%, 약 69.20±0.71%, 약 66.81±3.86% 및 약 73.37±0.89%인 것으로 확인된다.

실험예 4: 균주 유래 대사산물의 인간 유래 대장암 세포 및 인간 유래 신경 세포에 대한 유전자 발현 조사

균주 사균체를 인간 유래 대장암 세포에 처리했을 때 신경 성장 촉진인자인 BDNF(brain derived neurotrophic factor) 증감 여부와 균주 유래 CM을 인간 유래 신경 세포에 처리했을 때 BDNF와 세포사멸에 관련된 인자인 Bax(Bcl-2 associated protein X) 및 Bcl-2(B-cell lymphoma 2) 증감 여부를 real time PCR으로 측정하였다. 인간 유래 대장암 세포인 HT-29 세포주와 인간 유래 신경 세포인 SH-SY5Y 세포주를 5Х10⁵cells/well 로 6-well plate에 배양한 후 HT-29 세포주에는 24시간 동안 균주 사균체를 처리하고 SH-SY5Y 세포주에는 4시간 동안 균주 유래 CM을 처리한 후 MPP⁺를 20시간 동안 처리하였다. 이후 각 세포들을 수거하여 RNA를 추출한 후 cDNA로 전환하여 real time PCR을 통해 BDNF와 세포사멸 관련 인자의 변화를 측정하였다. 이때, 사용된 BDNF, BAX, Bcl-2 및 GAPDH의 유전자 염기 서열은 표 4에 나타내었고, 그 결과는 도 4 내지 도 6에 나타내었다.

유전자	정방향 (5’→3’)	역방향(3’→5’)
Brain derived neurotrophic factor (BDNF)	CAAACATCCGAGGACAAGGTGG	TCTACGACGTTTGTACAGGTACTC
Bcl-2 associated protein X (BAX)	GTGGTTGCCCTCTTCTACTTTGC	GTAGAAACACCGACCTCAGGAG
B-cell lymphoma 2 (Bcl-2)	CGGCTGAAGTCTCCATTAGC	TGTGTGGTCTTGAAGGGACC
Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH) normalizing internal standard	GAGTCAACGGATTTGGTCGT	GACTCTTGCCCTTCGAACAG

도 4에 나타난 바와 같이, 인간 유래 대장암 세포의 BDNF 발현량을 살펴본 결과, HT-29 세포주에 실시예 1에서 분리된 균주 사균체를 처리했을 경우 대조군에 비해 약 5.77배 증가한 BDNF 발현량을 보였는바, 실시예 1에서 분리된 균주 사균체는 장세포와 반응하여 뛰어난 뇌 유래 신경영양인자인 BDNF 생성능을 보이는 것으로 확인된다. 반면, HT-29 세포주에 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 사균체를 처리한 경우 대조군에 비해 각각 약 4.55배, 약 1.24배 및 약 1.36배 증가한 BDNF 발현량을 보인 것에 불과하였다.

도 5에 나타난 바와 같이, MPP⁺로 세포 독성이 유도된 인간 유래 세포의 BDNF 발현량을 살펴본 결과, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺만 처리했을 경우 BDNF 발현량이 대조군에 비해 약 0.5배로 감소하였으나, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺및 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM을 처리했을 경우 대조군에 비해 약 1.33배 증가한 BDNF 발현량을 보였는바, 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM은 MPP⁺의 BDNF 감소 작용을 완화하는 것으로 확인된다. 반면, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺및 비교예 1에서 분리된 균주 유래 CM을 처리했을 경우에는 대조군에 비해 약 1.17배 증가한 BDNF 발현량을 보인 것에 불과하였고, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺및 비교예 2 및 3에서 분리된 균주 유래 CM을 처리했을 경우에는 대조군에 비해 BDNF 발현량을 오히려 감소하는 것으로 확인된다.

도 6에 나타난 바와 같이, MPP⁺로 세포 독성이 유도된 인간 유래 세포의 Bax /Bcl-2 발현량 비율을 살펴본 결과, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺만 처리했을 경우 Bax /Bcl-2 발현량 비율이 대조군에 비해 약 2.25배로 증가하였으나, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺및 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM을 처리했을 경우 대조군에 비해 약 1.02배만 증가한 Bax /Bcl-2 발현량 비율을 보였는바, 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM은 Bax /Bcl-2 발현량 비율을 대조군 수준까지 낮추었는바, 실시예 1에서 분리된 균주 유래 CM은 MPP⁺의 세포 사멸 유도 작용을 완화하는 것으로 확인된다. 반면, SH-SY5Y 세포주에 MPP⁺및 비교예 1 내지 3에서 분리된 균주 유래 CM을 처리했을 경우에는 대조군에 비해 약 1.49배 이상 증가한 Bax /Bcl-2 발현량 비율을 보였다.

하기에 본 발명의 균주를 유효성분으로 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1: 산제의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 20 mg

유당수화물 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

제제예 2: 정제의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당수화물 100 mg

스테아르산마그네슘 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 3: 캅셀제의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

미결정셀룰로오스 3 mg

유당수화물 14.8 mg

스테아르산마그네슘 0.2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캅셀제의 제조방법에 따라서 젤라틴캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조하였다.

제제예 4: 주사제의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

인산일수소나트륨 26 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1앰플당(2 mL) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.

제제예 5: 액제의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

레몬향 적량

상기의 성분을 통상의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 정제수를 가하여 전체 100 mL로 조절한 후 멸균시켜 갈색병에 충진하여 액제를 제조한다.

제제예 6: 건강기능식품의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7: 건강음료의 제조

Lactobacillus buchneri 200793 균주 10 mg

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B1 0.25 g

비타민 B2 0.3g

정제수 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85

에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

한국미생물보존센터(국외)

KCCM12593P

20190930

<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp <120> NOVEL STRAIN OF Lactobacillus buchneri AND USE THEREOF <130> 2019-I360 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1487 <212> RNA <213> Lactobacillus buchneri <400> 1 gcagtgggcg gcatgctata catgcagtcg aacgcgtctc cgttgatgat tttaggtgct 60 tgcacttgaa agatttaaca ttgagacgag tggcgaactg gtgagtaaca cgtgggtaac 120 ctgcccttga agtaggggat aacacttgga aacaggtgct aataccgtat aacaaccaaa 180 accacctggt tttggtttaa aagacggctt cggctgtcac tttaggatgg acccgcggcg 240 tattagcttg ttggtaaggt aacggcctac caaggcgatg atacgtagcc gacctgagag 300 ggtaatcggc cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtagg 360 gaatcttcca caatggacga aagtctgatg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaagggttt 420 cggctcgtaa aactctgttg ttggagaaga acaggtgtca gagtaactgt tgacatcttg 480 acggtatcca accagaaagc cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg 540 tggcaagcgt tgtccggatt tattgggcgt aaagcgagcg caggcggttt tttaggtctg 600 atgtgaaagc cttcggctta accggagaag tgcatcggaa accgggagac ttgagtgcag 660 aagaggacag tggaactcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca 720 gtggcgaagg cggctgtctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagca tgggtagcga 780 acaggattag ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg agtgctaagt gttggagggt 840 ttccgccctt cagtgctgca gctaacgcat taagcactcc gcctggggag tacgaccgca 900 aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat 960 tcgatgctac gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatctt ctgccaacct aagagattag 1020 gcgttccctt cggggacaga atgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga 1080 gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttattg ttagttgcca gcattcagtt 1140 gggcactcta gcaagactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca 1200 tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gacggtacaa cgagtcgcga 1260 aaccgcgagg tcaagctaat ctcttaaagc cgttctcagt tcggattgta ggctgcaact 1320 cgcctacatg aagttggaat cgctagtaat cgtggatcag catgccacgg tgaatacgtt 1380 cccgggcctt gtacaacacc gcccgtcaca ccatgagaag tttgtaacaa cccaaagccg 1440 gtggaaggta aaccttcggg gaccagccgt ctaagtgaca gagttgg 1487

Claims

신경 세포 사멸에 대한 보호 효과를 가지는, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793 균주(KCCM 12593P).
제1항에 있어서,
상기 신경 세포 사멸에 대한 보호 효과는 상기 균주 및 장세포 간 반응을 통해 생산된 배양액의 작용으로 인한 것을 특징으로 하는, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793균주(KCCM 12593P).
제1항에 있어서,
상기 균주는 하기 ⅰ) 내지 ⅲ)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특징을 추가로 가지는 것을 특징으로 하는, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793균주(KCCM 12593P):
ⅰ) 내산성, 내담즙성 및 장부착능;
ⅱ) β-갈락토시다아제 생산능; 및
ⅲ) 항산화능.
제1항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA 염기서열을 포함하는, 락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793균주(KCCM 12593P).
락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는, 프로바이오틱 조성물.
제5항에 있어서,
상기 균주는 생균체, 사균체 또는 배양여액으로 제조되는 것인, 프로바이오틱 조성물.
삭제
삭제
락토바실러스 부크너리(Lactobacillus buchneri) 200793균주(KCCM 12593P)를 유효성분으로 포함하는 신경세포 보호용 건강기능식품조성물.