KR0142615B1 - 한국인 유아의 분변에서 분리해낸 내산성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균 및 그 사용방법 - Google Patents
한국인 유아의 분변에서 분리해낸 내산성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균 및 그 사용방법Info
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- A23V2400/533—Longum
Abstract
1. 청구범위에 기재된 발명이 속한 기술분야
본 발명은 새로운 비피도박테리아에 관한 것이다.
2. 발명이 해결하려고 하는 기술적 과제
스타아터로 사용하는 유산균이 인체에서 유용한 효과를 나타내려면 산과 담즙산등에 대한 내성이 뛰어나 섭취후 위(胃)와 같은 소화기관을 통과하면서 살아남아 소장에 도달해야 하며, 지속적인 유용효과를 발휘하려면 장내에 정착할수있어야 한다. 비피도박테리아의 경우 숙주특이적인 정착성이 있으므로 인체에서 유래한 비피도박테리아만이 인체에 정착이 가능하며, 식이습관이나 인종이 다른 것보다는 같은 것이 장내 정착율을 높일 수 있다.
따라서, 한국인의 장내에서 유래한 유산균을 스타아터로 사용하여 제조한 발효유를 섭취할 경우 유산균의 유용효과를 극대화시킬수 있다.
3. 발명의 해결방법의 요지
본 발명에 따른 균주는 한국인 모유영양아의 분변에서 분리하여 동정한 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 HY 8001(한국종균협회에 1995년 9월 7일자로 기탁 ; 기탁번호 제 KFCC 10870호)이다.
4. 발명의 중요한 용도
본 발명에 따른 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 HY8001은 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 분해능이 우수하여 유산균 발효유 및 발효제품 생산의 종균으로 사용할 수 있을뿐만아니라, 이를 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 정장제, 과채 발효유, 발효육, 및 빵을 제조할 수 있다.
Description
제1도는 탈지유에서의 배양곡선을 도시한 그래프.
제2도는 담즙산 농도에 따른 성장곡선을 도시한 그래프.
본 발명은 내산성과 담즙산내성이 우수하여 섭취시 인체의 소화기장내에서 생존력이 뛰어나고, 콜레스테롤 분해능력이 우수하여 인체에 유용한 효과를 나타내는 한국인 모유영양아의 분변에서 분리한 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 NHY8001 (한국종균협회에 1995년 9월 7일자로 기탁 ; 기탁번호 제 KFCC 10870호) 및 그 사용방법에 관한 것이다.
1899년 프랑스의 티셔(Tissier)에 의해서 모유 영양아의 분변에서 비피도박테리아가 처음 발견된 이후로 비피도박테리아에 대한 많은 연구가 진행되어 장내 유해 미생물 억제 및 감염 예방 효과등의 인체 유용효과가 밝혀지면서 발효유에 사용하려는 시도가 이루어지고 있다.
전통적으로 발효유의 제조에 사용되는 유산균 스타아터는 주로 락토바실러스 불가리쿠스와 스트렙토코거스 써모필러스가 사용되고 있으며, 최근에 장내-유래 미생물의 유용효과에 대한 연구가 진행되면서 락토바실러스 에시도필러스, 팍토바실러스 카제이, 비피도박테리아등을 발효유의 스타아터로 사용하기 위한 시도가 이루어지고 있다.
그러나 비피도박테리아의 경우, 기존의 발효유 스타아터로 사용되던 유산균에 비해서 성장에 필요한 영양소 요구조건이 까다롭고 우유에서의 배양이 어려우며 절대 혐기성균이라는 특성 때문에 다른 장내 유산균에 비해서 발효유 스타아터로서의 사용이 제한적이었다.
스타아터로 사용하는 유산균이 인체에서 유용한 효과를 나타내려면 산과 담즙산등에 대한 내성이 뛰어나 섭취후 위(胃)와 같은 소화기관을 통과하면서 살아남아 소장에 도달해야하며, 지속적인 유용효과를 발휘하려면 장내에 정착할 수 있어야한다. 비피도박테리아의 경우 숙주특이적인 정착성이 있으므로 인체에서 유래한 비피도박테리아만이 인체에 정착이 가능하며, 식이습관이나 인종이 다른것 보다는 같은 것이 장내 정착율을 높일 수 있다. 따라서, 한국인의 장내에서 유래한 유산균을 스타아터로 사용하여 제조한 발효유를 섭취할 경우 유산균의 유용효과를 극대화시킬 수 있다.
본 발명자들은 한국인 유래의 비피도박테리아를 발효유 제조에 사용하기 위하여 연구해 오던중, 모유영양아의 분변에서 내산성과 담즙산 내성이 뛰어난 비피도박테리아의 분리에 성공하였다.
본 발명의 목적은 한국인 모유영양아의 분변에서 분리하여 동정한 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 HY8001을 제공하는데 있다.
본 발명의 균주는 한국인 모유영양아의 분변에서 분리한 균주로 채취한 분변을 즉시 유동파라핀이 중층된 말혈액을 첨가하지 않은 비엘(blood-glucose-liver ; BL) 액체배지에 넣어 실험실로 이송하였다. 상기 시료를 연속적으로 혐기희석액을 사용하여 희석한 다음 엔피엔엘(NPNL) 한천배지에 도말하고 이산화탄소로 치환된 혐기자(anaerobic jar)를 사용하여 37℃에서 48시간 배양하여 형성된 균락들을 백금이로 접촉하여 유동파라핀이 증충된 말혈액을 첨가하지 않은 비엘 액체배지에 접종하여 37℃에서 18시간 배양하였다. 원심분리기를 이용하여 3,000 g에서 20분간 원심분리하여 회수된 균체를 생리적 식염수에 현탁하였다.
현탁한 균액을 생리적 식염수로 희석하여 10％ 염산으로 pH가 각각 pH 7.0, pH 4.0, pH 3.0, pH 2.0으로 조정된 0.05M 멸균 인산 완충액에 107cfu/ml이 되도록 접종한후 37℃에서 배양하면서 일정 시간마다 균액을 희석하여 비엘 한천배지를 사용하여 실험균주의 생존율을 측정하였다.
이때 실험에 사용한 균주중에서 내산성이 우수한 균주를 선발하여 동정하였다.
본 발명에 따른 비피도박테리움 롱검 HY8001의 특성은 다음과 같다.
균의 형태
비엘 한천평판배지에서 37℃, 2일간 혐기적으로 배양했을 때 균의 형태
세포의 크기 : 1.0∼2.0 m
세포의 형태 : 간균, Y자, 곤봉형태
운동성 : 없음
포자형성능 : 없음
그람염색 : 양성
균총의 형태
비엘 한천평판배지에서 37℃, 2일간 혐기적으로 배양했을때 균의 형태
형상 : 원형
크기 : 0.3∼1.0mm
융기 : 볼록
색조 : 유백색
표면 : 원활(smooth)
생리적 성질
생육온도 : 생장가능 생육온도 범위 : 25∼44℃
최적 생장온도 : 35∼40℃
생육 pH :생장가능 생육 pH : pH 4.5∼7.5
최적 pH : pH 6.0∼7.0
산소에 대한 영향 : 편성혐기성
카탈라제 : -
가스형성여부 : -
F 6PPK(Fructose-6-phosphate phosphoketolase) : +
20℃에서의 생육 : -
45℃에서의 생육여부 : -
인돌생산 : -
유산생산 : +
초산생산 : +
갈락토스 : +
과당 : +
글루코네이트 : -
글리세롤 : -
덱스트린 : +
두시톨 : -
라피노스 : +
락물로스 : +
람노스 : -
리보스 : -
만노스 :+
만니톨 : -
맥아당 : +
멜레지토스 : +
멜리비오스 : +
살리신 : -
셀로비오스 : -
소르보스 : -
소르비톨 : -
아도니톨 : -
아라비노스 :+
아미그달린 : -
에리스리톨 : -
에스큘린 : -
유당 : +
이눌린 : -
자당 : +
전분 : +
크실로스 : +
트레할로스 : -
포도당 : +
이상과 같이, HY8001 균주는 호기적으로 성장하지 못하고, 그람양성, 카탈라제 음성, F6PPK 양성이며 아도니톨, 두시톨, 에리스리톨, 글리세롤, 람노스, 소르보스로부터 산을 생성하지 않았으며, 유산과 초산을 1.51 : 1로 생성하였고, 현미경상으로도 간균, Y자, 곤봉형태를 나타내고 25개의 당발효실험을 실시한 결과, 리보스를 이용하지 않는 비피도박테리움 롱검으로 동정되었다.
본 발명에 따른 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 HY8001은 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 분해능이 우수하여 유산균 발효유 및 발효제품 생산의 종균으로 사용할 수 있을뿐만아니라, 이를 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 정장제, 과채 발효유, 발효육, 및 빵을 제조할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명하고자 한다.
[실시예 1]
내산성 균주의 분리
건강한 모유영양아의 분변을 배변 즉시 유동파라핀이 중층된 말혈액을 첨가하지 않은 비엘 액체배지에 넣어 실험실로 이송하였다. 상기 시료를 연속적으로 혐기희석액을 사용하여 희석한다음 엔피엔엘(NPNL) 한천배지에 도말하고 이산화탄소로 치환된 혐기자(anaerobic jar)를 사용하여 37℃에서 48시간 배양하여 형성된 균락들을 백금이로 접촉하여 유동파라핀이 중층된 말혈액을 첨가하지 않은 비엘 액체배지에 접종하여 37℃에서 18시간 배양하였다. 원심분리기를 이용하여 3,000 g에서 20분간 원심분리하여 회수된 균체를 생리적 식염수에 현탁하였다.
현탁한 균액을 생리적 식염수로 희석하여 10％ 염산으로 pH가 각각 pH 7.0, pH 4.0, pH 3.0, pH 2.0으로 조정된 0.05M 멸균 인산완충액에 107cfu/ml이 되도록 접종한후 37℃에서 배양하면서 일정 시간마다 균액을 희석하여 비엘 한천배지를 사용하여 실험균주의 생존율을 측정하였다.
또한, 실험에 사용한 균주중에서 생존률이 우수한 균주를 선발하여 공시 균주인 비피도박테리움 롱검 ATCC 15707, 비피도박테리움 비피덤 ATTC 11863과 생존률 비교실험을 실시한 결과 표 1과 같이 공시균주에 비해 실험균주인 HY 8001의 내산성이 우수하게 나타났다.
이때 사용된 비엘 한천배지와 엔피엔엘 한천배지의 조성은 다음과 같다.
* 비엘배지의 조성
염화시스테인 0.5 g
포도당 10.0 g
육추출물 3.0 g
간추출물용액1) 150 ml
피톤(phytone) 3.0 g
프로테오스펩톤 No.3 10.0 g
용액 A2) 10ml
용액 B2) 5 ml
수용성 전분 0.5 g
트윈 80 1.0 g
트립톤 5.0 g
효모추출물 5.0 g
증류수 815 ml
1)간 추출물 용액 : 10g 의 간 분말을 170ml의 증류수에 넣고 50-60℃의 온도에서 1시간 동안 정치시킨후 10분 끓인 다음 거름종이로 걸러낸다.
2) 용액 A :
인산칼륨(monobasic) 25.0 g
인산칼륨( dibasic) 25.0 g
증류수 250.0 ml
3) 용액 B :
황산철(FeSO4·7H2O) 0.5 g
황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 10 g
황산망간(MnSO4·4H2O) 0.33 g
염화나트륨 0.5 g
증류수 250 ml
* 엔피엔엘 한천배지
비엘배지 100 ml
한천 1.5 g
엔피엔엘 용액1) 5 ml
1) 엔피엔엘 용액
염화리튬(LiCi) 6 g
날리딕스산(nalidixic acid) 0.03 g
황산네오마이신 0.4 g
황산파로모마이신 0.4 g
증류수 100 ml
[실시예 2]
우유에서의 배양
12％의 멸균환원 탈지유에 비피도박테리움 롱검 HY8001 및 공지된 2 균주를 각각 1％ 접종하여 37℃에서 24시간 배양한 결과는 제1도와 같이 공시균주에 비하여 산생성 능력이 우수하여 상업용 종균으로서의 사용가능성이 있다.
[실시예 3]
담즙산에 대한 저항성
유동파라핀이 중층된 말혈액을 첨가하지 않은 비엘 액체배지에 옥스갈을 최종농도 0.1％, 0.2％, .03％, 및 0.5％가 되도록 첨가한후 비피도박테리움 롱검 HY8001을 1％ 접종하여 37℃에서 24시간 배양하면서 성장여부를 620nm에서 흡광도로 측정하였다. 그 결과는 제2도와 같다.
[실시예 4]
콜레스텔롤 분해능 실험
0.3％의 옥스갈과 0.2％의 티오콜린산 및 콜레스테롤(100㎍/㎖)이 함유된 엠알에스(MRS) 액체배지에 비피도박테리움 롱검 HY8001과 비피도박테리움 롱검ATCC15707 및 콜레스테롤 분해능이 우수하다고 보고된 락토바실러스 에시도필러스 ATCC43121을 각각 1％ 접종하여 37℃에서 24시간 배양한후 배지내에 남아있는 콜레스테롤의 함량을 측정하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.
Claims (7)
- 한국인 모유영양아의 분변에서 분리한 내산성과 담즙산 내성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균인 비피도박테리움 롱검 HY 8001(한국종균협회에 1995년 9월 7일자로 기탁 ; 기탁번호 제 KFCC 10870호)
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 발효유를 제조하는 방법.
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 유산균 분말을 제조하는 방법.
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 정장제를 제조하는 방법.
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 과채 발효유를 제조하는 방법.
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테롤 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 발효육을 제조하는 방법.
- 비피도박테리움 롱검 HY8001을 이용하여 내산성과 담즙산내성 및 콜레스테로 저해능이 우수한 유산균 및 그 배양물을 함유한 빵을 제조하는 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019950030301A KR0142615B1 (ko) | 1995-09-16 | 1995-09-16 | 한국인 유아의 분변에서 분리해낸 내산성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균 및 그 사용방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019950030301A KR0142615B1 (ko) | 1995-09-16 | 1995-09-16 | 한국인 유아의 분변에서 분리해낸 내산성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균 및 그 사용방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR970015728A KR970015728A (ko) | 1997-04-28 |
| KR0142615B1 true KR0142615B1 (ko) | 1998-07-01 |
Family
ID=66615501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019950030301A KR0142615B1 (ko) | 1995-09-16 | 1995-09-16 | 한국인 유아의 분변에서 분리해낸 내산성 및 콜레스테롤 분해능이 우수한 새로운 유산균 및 그 사용방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR0142615B1 (ko) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100865363B1 (ko) * | 2002-09-16 | 2008-10-24 | 매일유업주식회사 | 비피도박테리움 인팬티스 ｍａｅｉｌ－ｋ９ 비피더스유산균 및 그를 함유하는 건강기능성 식품 |
| KR100930251B1 (ko) * | 2009-05-15 | 2009-12-09 | 삼육대학교산학협력단 | 혈중 콜레스테롤 저하능을 갖는 비피도박테리움 롱검 균주 |
| US10918679B2 (en) | 2012-08-03 | 2021-02-16 | Life Well Lived, Llc | Compositions and methods for reducing blood alcohol content |
-
1995
- 1995-09-16 KR KR1019950030301A patent/KR0142615B1/ko not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100865363B1 (ko) * | 2002-09-16 | 2008-10-24 | 매일유업주식회사 | 비피도박테리움 인팬티스 ｍａｅｉｌ－ｋ９ 비피더스유산균 및 그를 함유하는 건강기능성 식품 |
| KR100930251B1 (ko) * | 2009-05-15 | 2009-12-09 | 삼육대학교산학협력단 | 혈중 콜레스테롤 저하능을 갖는 비피도박테리움 롱검 균주 |
| US10918679B2 (en) | 2012-08-03 | 2021-02-16 | Life Well Lived, Llc | Compositions and methods for reducing blood alcohol content |
| US11771724B2 (en) | 2012-08-03 | 2023-10-03 | Life Well Lived, Llc | Compositions and methods for reducing blood alcohol content |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR970015728A (ko) | 1997-04-28 |
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