WO2013140785A1 - 疾患サンプル分析装置、分析システム及び分析方法 - Google Patents

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WO2013140785A1
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amino acid
mice
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cysteine
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健司 浜瀬
洋介 東條
真史 三田
智恵子 水本
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国立大学法人九州大学
株式会社 資生堂
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Definitions

  • the present invention relates to a disease sample analyzer, an analysis system, and an analysis method based on a quantitative method in which stereoisomers of amino acids are distinguished.
  • a disease sample analyzer including a means for outputting the condition information of the subject based on the condition index value, a quantitative analysis unit for separating and quantifying the amino acid stereoisomer of the biological material of the subject, Substituting the quantitative value of the amino acid stereoisomer into a discriminant and calculating it, obtaining a disease state index value calculating unit, and a disease state information output unit outputting the patient state information based on the disease state index value
  • a disease sample analysis system including: a step of separating and quantifying amino acid stereoisomers of a biological material of a subject; and a quantitative value of the amino acid stereo
  • L-amino acids are components of biological proteins, and the amino acids contained in proteins are in principle L-amino acids.
  • D-amino acids are contained in some biologically active peptides of lower organisms, but many of them are biosynthesized through a post-translational modification process. Therefore, amino acids constituting proteins or peptides are mainly L-amino acids, and D-amino acids are exceptional.
  • D-amino acid is one of the components of peptidoglycan on the bacterial cell wall.
  • free D-amino acids that do not constitute peptides exist in lower animals such as aquatic animals and insects.
  • amino acids present in higher animals were L-forms and D-forms were not involved in physiological activities (Non-patent Document 1).
  • Non-patent Document 2 D-aspartic acid is localized in prolactin-producing cells in the rat pituitary gland by a double staining method using an anti-D-aspartic acid antibody.
  • prolactin secretion increased in a dose-dependent manner by giving D-aspartic acid to cells that synthesize and secrete prolactin in a rat pituitary-derived cell line. From the above, it is considered that D-aspartic acid controls the secretion of prolactin in prolactin-producing cells (Non-patent Document 3).
  • D-serine can stimulate neurotransmission by selectively stimulating the glycine-binding site of NMDA-type glutamate receptor, which is presumed to be related to schizophrenia, and enhancing the action of glutamate via this receptor. It has been reported (Non-Patent Document 5). It has been reported that schizophrenia is actually improved by administration of D-serine, and that the serum D-serine concentration in schizophrenic patients is lower than that in healthy subjects. Furthermore, it has recently been reported that D-serine is involved in motor nerve degeneration in amyotrophic lateral sclerosis (ALS) (Non-patent Document 6).
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • the present invention shows that the amount of D-amino acid and L-amino acid in the biological material of healthy subjects is maintained at a certain balance, and individual differences are small.
  • there was some imbalance in balance that could only be confirmed by separating and quantifying D-amino acids and L-amino acids in a patient's biological material.
  • the present invention has been conceived based on such an unexpected discovery.
  • the present invention provides a disease sample analyzer.
  • the disease sample analyzer of the present invention comprises a means for separating and quantifying amino acid stereoisomers in a biological material of a subject, and calculating the disease state index by substituting the amount of the amino acid stereoisomers into a discriminant. Means for obtaining a value, and means for outputting the condition information of the patient based on the condition index value.
  • the means for outputting the pathological condition information of the subject based on the pathological condition index value is such that when the pathological index value is 2.0 or more, the subject There is a case of means for outputting the condition information of the subject that he / she is suffering from.
  • the amino acid stereoisomer correlated with the disease is D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, allo D-threonine, D when the disease is kidney disease.
  • L-cysteine for acute myeloid leukemia L-cysteine for lymphoma, L-glutamate and L-cysteine for acute lymphoblastic leukemia, and L-arginine and L for psoriasis -Cysteine, which may be D-alanine, L-cysteine and L-glutamic acid in diabetes.
  • the present invention provides a disease sample analysis system.
  • the disease sample analysis system includes a quantitative analysis unit for separating and quantifying amino acid stereoisomers in a biological material of a subject, and calculating the amount of the amino acid stereoisomer by substituting it into a discriminant.
  • a pathologic index value calculating unit for obtaining a pathologic index value, and a pathologic information output unit for outputting the pathologic condition information of the patient based on the pathologic index value.
  • the pathological condition information output unit is configured such that when the pathological condition index value is 2.0 or more, the pathological condition of the subject that the subject is suffering from the disease. Information may be output.
  • the amino acid stereoisomer correlated with the disease is D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, allo D-threonine, D when the disease is kidney disease.
  • phenyl It is L-phenylalanine in the case of ketosis, L-valine, L-allo-isoleucine, D-isoleucine, L-isoleucine and L-leucine in the case of maple syrup urine, and L-in the case of rheumatoid arthritis. Glutamic acid, L-glutamine, and L-cysteine.
  • the present invention provides a disease sample analysis method.
  • the disease sample analysis method of the present invention comprises a step of measuring the amount of amino acid stereoisomers in a biological material of a subject, and calculating the disease state index by substituting the amino acid stereoisomer amount into a discriminant. Obtaining a value, and outputting the patient's pathological information based on the pathological index value.
  • the step of outputting the pathological condition information of the subject based on the pathological condition index value is such that when the pathological condition index value is 2.0 or more, the subject There is a case of outputting the pathological condition information of the subject that he / she is suffering from.
  • the amino acid stereoisomer correlated with the disease is D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, allo D-threonine, D when the disease is kidney disease.
  • L-cysteine for acute myeloid leukemia L-cysteine for lymphoma, L-glutamate and L-cysteine for acute lymphoblastic leukemia, and L-arginine and L for psoriasis -Cysteine, which may be D-alanine, L-cysteine and L-glutamic acid in diabetes.
  • the present invention provides a disease diagnosis method.
  • the disease diagnosis method of the present invention is based on the step of measuring the amount of amino acid stereoisomer in the biological material of a subject, the measured value of the amount of amino acid stereoisomer and the reference value of a healthy person. And diagnosing the disease.
  • the present invention provides a disease diagnosis method.
  • the disease diagnosis method of the present invention comprises a step of separating and quantifying amino acid stereoisomers in a biological material of a subject, and calculating by substituting the amount of the amino acid stereoisomers into a discriminant, Means for obtaining a value, and diagnosing the patient based on the disease state index value.
  • the step of outputting the pathological condition information of the subject based on the pathological condition index value is such that when the pathological condition index value is 2.0 or more, the subject There may be a step to diagnose suffering from.
  • the amino acid stereoisomer correlated with the disease is D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, allo D-threonine, D when the disease is kidney disease.
  • D-serine D-threonine, D-alanine, D-asparagine, allo D-threonine, D when the disease is kidney disease.
  • the amino acid stereoisomers of the present invention include 20 kinds of amino acids used for protein translation, 19 kinds of D-amino acids which are engineering isomers of 19 kinds of L-amino acids excluding glycine, and alloL -Threonine, allo D-threonine and allo D-isoleucine.
  • the disease sample analyzer of the present invention comprises means for measuring the amount of amino acid stereoisomers in a biological material, and means for obtaining a disease state index value by substituting the amino acid stereoisomer amount into a discriminant and calculating it. And means for outputting pathological condition information of the patient based on the pathological condition index value.
  • Means for measuring the amount of amino acid stereoisomers in the physical material are a sample auto-preparation part and a HPLC separation and peak detection part using a reverse phase column or the like.
  • a means for obtaining the pathological index value by substituting the amount of the amino acid stereoisomer into a discriminant and calculating the pathological condition index value a storage unit for storing data such as the standard value of a healthy person for each disease, and the data And an arithmetic unit that calculates a discriminant based on the calculation unit.
  • the means for outputting the patient's pathological information based on the pathological index value is a pathological information selection unit and a pathological information output unit.
  • the disease sample analyzer of the present invention includes a control unit such as a CPU for overall control, an input / output interface unit connected to the input device and the output device, and a communication interface unit connected to the network so as to be communicable. Is included.
  • biological materials include body fluids such as blood, plasma, serum, ascites, amniotic fluid, lymph, saliva, semen, urine, excrement such as feces, sweat, nasal discharge, body hair, nails, skin tissue, although it refers to a body tissue such as a visceral tissue, it is not limited thereto.
  • the discriminant may be an equation for calculating how many times the subject measurement value of the amount of amino acid stereoisomer is a reference value set in advance from the measurement value of a healthy person. Further, there may be a formula for calculating the ratio or percentage of the amount of the amino acid stereoisomer relative to the sum of the amount of the amino acid stereoisomer and the amount of the enantiomer of the isomer. Furthermore, there may be a formula for calculating a disease state index value from a combination of amounts of plural types of amino acid stereoisomers.
  • the plurality of amino acid stereoisomers may be a group of amino acids having common points such as being a substrate for D-amino acid oxidase or D-aspartate oxidase.
  • the amount of amino acids that correlate with disease may be normalized with the amount of amino acids that do not correlate with disease.
  • the reference value of the amino acid stereoisomer correlated with the disease in the biological material of a healthy person is the biological material of the healthy person with respect to the amino acid stereoisomer correlated with the disease, Amino acid stereoisomers are determined from the mean or median amount in either or both biological materials of other diseased patients whose correlates are unrelated.
  • the reference value may be set in advance, but may be a measured value of a biological material that is prepared as a control experiment in the practice of the present invention and tested at the same time, or an average value or a median value thereof.
  • the pathological index value calculated by the discriminant of the present invention when the pathological index value calculated by the discriminant of the present invention is 1.0 or in the vicinity thereof, it is output that the subject is a healthy person.
  • the disease state index value When the disease state index value is 2.0 or more, it may be output that the subject is likely to have a disease. However, even if the disease state index value is less than 2.0, it may be output that the subject may have the disease.
  • Quantitative data of amino acid stereoisomers in the biological material of the subject obtained by the disease sample analyzer, analysis system and analysis method of the present invention is used as an indicator for diagnosis and prevention of various diseases.
  • the quantitative data is used as an index of progression of the disease state of the disease.
  • the quantitative data is used as an index for judging the efficacy of a medicine for treatment and / or prevention of the disease.
  • the quantitative data is used to determine the effects of medicines, quasi-drugs, cosmetics, foods and other chemical substances on the living body, and other physical and / or biological environmental factors on the adult. Used as an indicator for
  • the table surface which put together the analysis result of the D-amino acid about each first sample of a healthy subject and various disease patients.
  • the vertical axis represents the D-serine concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the L-serine concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the total serine concentration (nanomol / mL).
  • % D Percentage of D-serine concentration relative to total serine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”) (% D) Average value and standard error bar graph. The vertical axis is% D. The significant difference between normal and disease was P less than 0.02 by Student's t-test. Bar graph of mean value and standard error of D-arginine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”) . The vertical axis represents the D-arginine concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the total arginine concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the D-glutamic acid concentration (nanomol / mL). The significant difference between normal and disease was P less than 0.02 by Student's t-test.
  • the vertical axis represents the L-glutamic acid concentration (nanomol / mL).
  • Urinary total glutamic acid concentration (D-glutamic acid concentration and L-glutamic acid concentration) of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”) A bar graph of the mean value and standard error of the sum of the concentrations.
  • the vertical axis represents the total glutamic acid concentration (nanomol / mL). Bar graph of the mean value and standard error of D-proline concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”) .
  • the vertical axis represents the D-proline concentration (nanomol / mL). As a significant difference between normal and disease, P was less than 0.01 by Student's t-test. Bar graph of mean value and standard error of L-proline concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”) .
  • the vertical axis represents the L-proline concentration (nanomol / mL).
  • Total proline concentration in urine (D-proline concentration and L-proline concentration) of 3 dilated cardiomyopathy model mice (hereinafter referred to as “disease”) and 4 control normal mice (hereinafter referred to as “normal”)
  • the vertical axis represents the total proline concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the D-lysine concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis represents the total lysine concentration (nanomol / mL). Twelve menopausal model mice (hereinafter referred to as “OVX”) from which ovaries were removed from 9-week-old HR-1 mice, and skin incisions and sutures without ovariectomy from female mice of the same age
  • the graph which shows the change of the average value and standard deviation of a body weight with six control mice (henceforth "sham") performed.
  • the vertical axis represents the weight (gram) of the mouse.
  • the black and black hatched bar graphs represent the 9-week-old mice before the treatment, the first week (10-week old), the second week (11-week old), the third week (12-week-old), 4 weeks after the treatment, respectively.
  • the mean values and standard deviations of the body weights of the menopausal model mice (OVX) and control mice (sham) at week (13 weeks of age) are shown.
  • the significant difference in body weight between the climacteric model mouse (OVX) and the control mouse (sham) was P less than 0.05 (*) or less than 0.01 (**) according to Student's t test.
  • the body weight increased significantly from the control mouse from the second week after the operation, indicating that the menopausal model mouse was successfully produced.
  • glycine Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention. Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low. As for cysteine, since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis. The table
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-aspartic acid was lower in climacteric model mice (OVX) than in control mice (sham), and the significant difference was P of 0.017 according to Student's t-test.
  • % D / D-Glu percentage of each D-amino acid concentration
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • surface which shows the total amino acid optical isomer content analysis result. Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • surface which shows the total amino acid optical isomer content analysis result. Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • surface which shows the analysis result of the content of all the amino acid optical isomers in the urine of the 1st (C3) out of three ICR type male 9-week-old mice individuals bred in the same environment as a control experiment of sarcoma transplanted mice. Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-asparagine and D-arginine tended to be higher in sarcoma-transplanted mice than in control mice, and the significant difference of D-arginine was 0.035 in Student's t-test. Comparison of percentage of each D-amino acid concentration (% D / D-Asn) to D-asparagine concentration in urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5) Table. D-asparagine was used as an indicator of urinary concentration correction because of its relatively high concentration in mammalian urine and its most stable ratio to total D-amino acid concentration.
  • D-arginine tended to be higher in sarcoma-transplanted mice than in control mice, and a significant difference was P of 0.016 in Student's t test.
  • Three Alzheimer's disease model mice transgenic mice with high expression of amyloid ⁇ precursor protein Tg2576 hemizygous male 8-week-old mice, hereinafter referred to as “hemi”) and control normal mice (C57BL, hereinafter referred to as “Wild”).
  • hemi amyloid ⁇ precursor protein
  • Wild control normal mice
  • the vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis is% D.
  • the relative ratio of D-serine to the urinary D-allo-threonine concentration and the relative ratio of D-serine to the urinary D-allo-isoleucine concentration were higher in the Alzheimer's disease model mice than in the control mice. In the Student's t test, both P were less than 0.01. Urinary D-alanine concentration (D-Ala), L-alanine concentration (L-Ala) and the sum of both (Ala) of three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild) Bar graph of mean and standard error of. The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the D-alanine concentration in urine was higher in Alzheimer's disease model mice than in control normal mice, and the significant difference was that P was less than 0.01 by Student's t-test.
  • the vertical axis is% D.
  • the percentage of D-alanine concentration (% D) relative to the total urine alanine concentration was higher in Alzheimer's disease model mice than in control normal mice, and the difference was significantly less than 0.01 in Student's t-test.
  • Urinary D-leucine concentration (D-Leu), L-leucine concentration (L-Leu), and the sum of both (Leu) of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) Bar graph of mean and standard error of.
  • the vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis is% D.
  • Relative ratio of D-leucine to urinary D-allo-threonine concentration (D-Leu / D-allo-Thr) or urine of three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild)
  • the relative ratio of D-leucine to the urinary D-allo-threonine concentration and the relative ratio of D-leucine to the urinary D-allo-isoleucine concentration were higher in the Alzheimer's disease model mice than in the control mice.
  • P was less than 0.05 and less than 0.01, respectively.
  • the vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the urinary D-aspartic acid concentration was lower in the Alzheimer's disease model mice than in the control normal mice, and the significant difference was that the P was less than 0.05 by Student's t-test.
  • the vertical axis is% D.
  • Urinary D-phenylalanine concentration (D-Phe), L-phenylalanine concentration (L-Phe), and the sum of both (Phe) of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) Bar graph of mean and standard error of.
  • the vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the vertical axis is% D.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mouse ddY / DAO +, hereinafter referred to as “DAO + / +”
  • DAO + / + individual urine total amino acid optical isomer content analysis of three (3) individuals (DAO + / + 1) Table showing results. Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention.
  • Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mouse ddY / DAO +, hereinafter referred to as “DAO + / +”
  • DAO + / + D-amino acid oxidase
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild type mouse ddY / DAO +, hereinafter referred to as “DAO + / +”
  • DAO + / + D-amino acid oxidase
  • D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mouse ddY / DAO-, hereinafter referred to as “DAO-/-”.
  • glycine Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention. Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low. As for cysteine, since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice ddY / DAO-, hereinafter referred to as "DAO-/-"
  • the second urine (DAO-/-2) out of all three amino acid optical isomers in urine The table
  • D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice ddY / DAO-, hereinafter referred to as “DAO ⁇ / ⁇ ”) 3 out of 3 individuals (DAO ⁇ / ⁇ 3) all amino acid optical isomers in urine
  • surface which shows a content analysis result. Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention. Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low.
  • cysteine since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2, and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mice (DAO-/-1, Table comparing the percentage (% D) of D-isomer concentration with respect to the sum of the D-isomer concentration and L-isomer concentration of each amino acid in urine with DAO-/-2 and DAO-/-3).
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2, and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mice (DAO-/-1, Table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total L) with respect to the sum of the concentrations of all L-amino acids in urine (DAO-/-2 and DAO-/-3).
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2, and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mice (DAO-/-1, Table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total D) with respect to the sum of the concentrations of all D-amino acids in DAO-/-2 and DAO-/-3) and urine.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2, and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mice (DAO-/-1, Table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / D-Asn) with respect to D-asparagine concentration in DAO-/-2 and DAO-/-3) and urine.
  • FIG. 4 is a waveform diagram showing the results of analysis of the content of all amino acid optical isomers in urine of four D-aspartate oxidase (DDO) wild-type mice (DDO +) individuals.
  • the wave form diagram which shows the urine total amino acid optical isomer content analysis result of 2 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) wild type mice (DDO +) individuals.
  • FIG. 3 is a waveform diagram showing the results of analyzing the content of total urinary amino acid optical isomers in 3 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) wild-type mice (DDO +) individuals.
  • FIG. 4 is a waveform diagram showing the results of analyzing the content of total urinary amino acid optical isomers in 4 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) wild-type mice (DDO +) individuals.
  • FIG. 3 is a waveform diagram showing the results of analysis of the content of total amino acid optical isomers in urine of one of four D-aspartate oxidase (DDO) -deficient mice (DDO-) individuals.
  • FIG. 4 is a waveform diagram showing the results of analysis of the content of total amino acid optical isomers in urine of 2 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) deficient mice (DDO ⁇ ) individuals.
  • FIG. 3 is a waveform diagram showing the results of analysis of the total urinary amino acid optical isomer content analysis of 3 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) deficient mice (DDO ⁇ ) individuals.
  • FIG. 4 is a waveform diagram showing the results of analyzing the content of total urinary amino acid optical isomers in 4 out of 4 D-aspartate oxidase (DDO) deficient mice (DDO ⁇ ) individuals.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) D-valine concentration (nanomol / mL) ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black
  • control mice white) D-allo-isoleucine concentration (nanomol) in each of 5 mice / ML) and bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) D-isoleucine concentration (nanomol / mL) ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black
  • control mice white) D-leucine concentration (nanomol / mL) in each of 5 mice ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah eu2 , black) and control mice (white) D-phenylalanine concentration (nanomol / mL) in each of 5 mice ) And bar graph representing standard error. Significant difference is that p is less than 0.01. Phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) L-valine concentration (nanomol / mL) ) And bar graph representing standard error.
  • PAH phenylalanine hydroxylase
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah eu2 , black) and control mice (white)
  • L-isoleucine concentration (nanomol / mL) in the plasma of phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white)
  • bar graph representing standard error.
  • L-leucine concentration (nanomol / mL) in the plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) ) And bar graph representing standard error.
  • L-phenylalanine concentration (nanomol / mL) in the plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white)
  • Significant difference is that p is less than 0.01.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah eu2 , black) and control mice (white) D-valine concentration (nanomol / mL) in each of 5 mice ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black
  • control mice white) each containing 5 D-allo-isoleucine concentrations (nanomol) / ML) and bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) D-isoleucine concentration (nanomol / mL) in each urine ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) D-leucine concentration (nanomol / mL) in each urine ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) D-phenylalanine concentration in urine (nanomol / mL) ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black
  • control mice white) L-valine concentration (nanomol / mL) in each urine ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) L-allo-isoleucine concentration (nanomol) / ML) and bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white) L-isoleucine concentration (nanomol / mL) in each urine ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah eu2 , black) and control mice (white) L-leucine concentration (nanomol / mL) in each of 5 mice ) And bar graph representing standard error.
  • Phenylketonuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black
  • control mice white) L-phenylalanine concentration in urine (nanomol / mL)
  • bar graph representing standard error.
  • Significant difference is that p is less than 0.01.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) L-phenylalanine concentration in the plasma of each 5 mice ( (Nanomol / mL) and bar graph representing standard error.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white) D-isoleucine concentrations (nanomoles) in the plasma of each 5 mice / ML) and bar graph representing standard error.
  • Significant difference is that p is less than 0.01.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) each containing 5 D-valine concentrations in urine (white) (Nanomol / mL) and bar graph representing standard error.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) D-allo-isoleucine in each urine Bar graph showing concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • Maple syrup urine mice branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) D-phenylalanine concentration in urine (each 5) (Nanomol / mL) and bar graph representing standard error.
  • Maple syrup urine mice branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black
  • control mice white) L-valine concentration in urine of each 5 mice ( (Nanomol / mL) and bar graph representing standard error.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) L-phenylalanine concentration in urine of each 5 mice (Nanomol / mL) and bar graph representing standard error.
  • Maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white) D-isoleucine concentration (nanomol) in 5 mice each / ML) and bar graph representing standard error.
  • Significant difference is that p is less than 0.05.
  • Dementia patients were selected from four men who were diagnosed with Alzheimer's Disease Association's 7-grade severity stage 5 (a stage in which they need help from others in their daily lives).
  • Four men diagnosed with stage II were selected as colorectal cancer patients.
  • Breast cancer patients were selected from 4 women who had developed on only one side and were diagnosed with stage II.
  • Prostate cancer was diagnosed as stage II, and men who had not received hormone therapy or chemotherapy were selected.
  • Patients with liver damage were selected from women who developed on one side and were diagnosed with stage II. Women were selected for osteoporosis patients. Stage II women were selected for ovarian cancer patients. Smokers were excluded from the sample providers used in this analysis.
  • the sample was homogenized in a 20 times volume of methanol at 4 ° C., 3,500 rpm, 2 minutes with a microhomogenizing system (Micro Smash MS-100R, Tommy Seiko Co., Ltd.), Centrifugation was performed at 400 ⁇ g for 10 minutes.
  • 10 ⁇ L of the centrifugal supernatant was dried under reduced pressure at 40 ° C.
  • 20 ⁇ L of 200 mM sodium borate buffer (pH 8.0) and 40 mM NBD-F (4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole, Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) are used for the residue.
  • 5 ⁇ L of methyl solution was added and heated at 60 ° C. for 2 minutes.
  • methyl cyanide-trifluoroacetic acid-water (volume ratio 5: 0.05: 95) was used. The flow rate was 35 ⁇ L per minute.
  • the target NBD amino acid fraction was automatically transferred to an enantioselective column via a column switching valve equipped with a 150 ⁇ L loop.
  • a Sumichiral OA-2500S column (inner diameter 250 mm ⁇ 1.5 mm ID, self-packing, material is Sumika Chemical Analysis Co., Ltd.) using (S) -naphthylglycine as a chiral selector was used. Fluorescence detection was performed with an excitation wavelength of 470 nm and a detection wavelength of 530 nm.
  • FIG. 1 is a table summarizing the D-amino acid analysis results for the first samples of healthy subjects and patients with various diseases. Each row in the table represents the disease name of the sample provider, and each column represents the type of D-amino acid analyzed. In the table, ND represents that it was below the detection limit. The rough, right-up hatching of the tryptophan, cysteine and tyrosine rows indicates that these amino acids could not be quantified in this sample. An upward arrow indicates that the amino acid amount in this sample is higher than that of the healthy male sample in the first row, and a downward arrow indicates that this sample has a lower amino acid amount than the healthy male sample in the first row.
  • Fine upward hatching eg, asparagine in kidney disease samples
  • the ratio of the amino acid content of these samples to the amino acid content of the healthy male sample is more than twice (upward arrow), or less than 1/2 (Down arrow).
  • Roughly upward hatching eg, glutamine in kidney disease samples, etc.
  • the ratio of the amino acid content of these samples to the amino acid content of the healthy male sample is less than twice (upward arrow), or less than 1/2 (Down arrow).
  • D-amino acids whose serum concentration is higher in the kidney disease patient sample of FIG. 1 than in healthy male samples, serine, allo-D-threonine, threonine, alanine, proline and phenylalanine are substrates of D-amino acid oxidase, but asparagine. Acid and glutamine are substrates for D-aspartate oxidase.
  • histidine, arginine, methyl, valine, allo-D-isoleucine and isoleucine were judged to have no change in serum concentration between patients with kidney disease and healthy men.
  • Aspartic acid and glutamic acid are substrates of D-aspartic acid oxidase, but it was judged that there was no change in serum concentration between kidney disease patients and healthy men. Therefore, the kind of D-amino acid that has a serum concentration higher than that of a healthy male sample in a kidney disease patient sample cannot be explained only by the conventionally known specificity of the D-amino acid metabolic enzyme.
  • the D-amino acids whose serum concentration is higher in the prostate cancer patient sample than the healthy male sample are D-histidine and D-asparagine, and the D-amino acid whose serum concentration is higher in the osteoporosis patient sample than the healthy male sample is D.
  • D-amino acid metabolizing enzyme which has been conventionally known. Both D-amino acid oxidase and D-aspartate oxidase are known to localize in the proximal tubule of the kidney. Therefore, it can be predicted that these enzyme activities will decrease in patients with kidney disease. In this case, it is considered that the degradation of all D-amino acids serving as substrates for these enzymes is suppressed, and the amount in the body increases. However, in reality, not all D-amino acids but only some D-amino acids are increased in the body mass. The mechanism is unknown. It was suggested that changes in the serum concentration of these disease-specific D-amino acids can be used for disease diagnosis.
  • FIG. 2-1, FIG. 2-2, FIG. 2-3, FIG. 2-4, FIG. 2-5, and FIG. 2-6 respectively show D-serine, L-serine, D-threonine, L-threonine, D -Distribution of serum concentrations of alanine and L-alanine for each disease sample.
  • Sample 1 is a healthy male
  • sample 2 is a kidney disease patient
  • sample 3 is a dementia patient
  • sample 4 is a healthy woman
  • sample 5 is a colon cancer patient
  • sample 6 is a breast cancer patient.
  • the characteristic of the D-amino acid serum concentration that is apparent from FIGS. 2-1 to 2-6 is that the serum concentration of any D-amino acid is very low and the deviation is small in the healthy male and female samples. . This is the same for other D-amino acids (data not shown). Also, the serum concentration of the D-amino acid in the patient sample is a very low serum concentration for any D-amino acid, as in the case of healthy volunteers, when there are no fluctuations correlated with the disease. Deviation is small. This leads to fewer false positives at the time of diagnosis, and is an important basis for the usefulness of diagnosis based on the amount of D-amino acid.
  • FIG. 3-1, FIG. 3-2 and FIG. 3-3 show the distribution of percentage (% D) of the D-form amount to the sum of the D-form and L-form amounts of the serine, threonine and alanine samples, respectively.
  • FIG. 3-1 the percentage of serum concentration of D-serine in the total serum concentration of serine in healthy men and women and dementia, colon cancer and breast cancer is almost constant and low, whereas kidney disease The percentage of serum concentration of D-serine in the total serum concentration of serine in patients was shown to be more than 4 times higher than other samples.
  • the percentage of serum concentration of D-threonine in the total serum concentrations of threonine in healthy men and women and dementia, colon cancer and breast cancer is almost constant and low, whereas kidney disease
  • the percentage of the serum concentration of D-threonine in the total serum concentration of the patient's threonine was shown to be more than 4 times higher than the other samples.
  • the percentage of the serum concentration of D-alanine in the total serum concentration of alanine in healthy men and women and in dementia, colorectal cancer, and breast cancer is an almost constant low value.
  • the percentage of the serum concentration of D-alanine in the total serum concentration of alanine in patients with kidney disease was shown to be 4 times higher than the other samples in 3 out of 4 subjects.
  • mice used in this example are dilated cardiomyopathy model mice, ovariectomized climacteric model mice, sarcoma transplanted mice, Alzheimer's disease model mice, DAO-deficient mice, and DDO-deficient mice. . Each mouse will be described in detail below. Experiments using mice were conducted at the graduate School of Pharmaceutical Sciences, Kyushu University.
  • MLP-KO mice As a model mouse for cardiovascular disorders, MLP-KO mice (Arber, S. et al., Cell) lacking MLP (mouse LIM protein), which is one of myocardial constituent proteins. 88: 393 (1997)).
  • Urine sample of dilated cardiomyopathy model mice (MLP-KO mice, hereinafter referred to as “disease”) 3 male 8 weeks old and 4 normal control mice (hereinafter referred to as “normal”) 4 males And its total amino acid optical isomer content was analyzed.
  • menopausal model mice As menopausal model mice, ovaries were removed from 9-week-old females of HR-1 mice under anesthesia, and the skin was sutured. Control mice were also prepared from female mice of the same age, in which only skin incision and suture were performed without ovariectomy. The body weight was measured before and 1 to 4 weeks after the treatment. Individuals whose body weight was confirmed to be increased compared to control mice were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as menopausal model mice.
  • Alzheimer's disease model mouse As an Alzheimer's disease model mouse, hemizygous male 8-week-old of transgenic mouse Tg2576 (Hsiao, K. et al., Science 274: 99 (1996)) highly expressing amyloid ⁇ precursor protein Mice were subjected to urine total amino acid optical isomer content analysis. C57BL male 8-week-old mice were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as control normal mice.
  • D-Amino Acid Oxidase (DAO) Deficient mice As one of the D-amino acid metabolism-related enzyme activity change models, D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice (Konno, R. et al. Genetics 103: 277). (1983), ddY / DAO-, hereinafter referred to as "DAO-/-".) Male 8-week-old individuals were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis. D-amino acid oxidase (DAO) wild-type male male 8-week-old individuals were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as control mice.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type male male 8-week-old individuals were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as control mice.
  • D-aspartate Oxidase (DDO) deficient mice As one of the D-amino acid metabolism-related enzyme activity change models, D-aspartate oxidase (DDO) deficient mice (Huang, AS et al., J. Neurosci., 2: 2814 (2006), hereinafter referred to as “DDO-”.) Male 8-week-old individuals were subjected to analysis of urinary total amino acid optical isomer content. D-aspartate oxidase (DDO) wild type (hereinafter referred to as “DDO +”) male 8-week-old individuals were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as control mice.
  • DDO- D-aspartate oxidase
  • Phenylketonuria Disease Model Mice As one of the amino acid metabolism disorder model mice, phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah eu2 , Shedlovsky, A Et al., Genetics 134: 1205 (1993)), five 25-35 week old males subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis. Five 25-35 week old males bred under wild-type allele homozygous SPF conditions of the same genetic background were subjected to urinary total amino acid optical isomer content analysis as control mice.
  • PAH phenylalanine hydroxylase
  • FIG. 4-1 shows 3 dilated cardiomyopathy model mice (MLP-KO mice, hereinafter referred to as “disease”) and control normal mice (hereinafter referred to as “normal”). .) A bar graph of the mean value and standard error of D-serine concentration in urine of 4 animals. The vertical axis represents the D-serine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-2 shows a bar graph of the mean value and standard error of L-serine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. The vertical axis represents the L-serine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-3 is a bar graph of the mean value and standard error of total urine concentration (sum of D-serine concentration and L-serine concentration) in 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is. The vertical axis represents the total serine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-4 shows a bar graph of the mean value and standard error of the percentage (% D) of D-serine concentration relative to the total serine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. . The vertical axis is% D. The significant difference between normal and disease was P less than 0.02 by Student's t-test.
  • FIG. 4-3 is a bar graph of the mean value and standard error of total urine concentration (sum of D-serine concentration and L-serine concentration) in 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is. The vertical axis represents the total serine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-5 is a bar graph of the mean value and standard error of D-arginine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents the D-arginine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-6 is a bar graph of the mean value and standard error of L-arginine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents the L-arginine concentration (nanomol / mL).
  • P was less than 0.01 by Student's t-test.
  • FIG. 4-7 is a bar graph of the mean value and standard error of the total arginine concentration (sum of D-arginine concentration and L-arginine concentration) in 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is. The vertical axis represents the total arginine concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-8 is a bar graph of the mean value and standard error of D-glutamic acid concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. The vertical axis represents the D-glutamic acid concentration (nanomol / mL). The significant difference between normal and disease was P less than 0.02 by Student's t-test.
  • FIG. 4-7 is a bar graph of the mean value and standard error of the total arginine concentration (sum of D-arginine concentration and L-arginine concentration) in 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is. The vertical axis represents the total arginine concentration (
  • FIG. 4-9 is a bar graph of the mean value and standard error of L-glutamic acid concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents the L-glutamic acid concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-10 is a bar graph of the mean value and standard error of the total glutamic acid concentration (sum of D-glutamic acid concentration and L-glutamic acid concentration) in 3 urine cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is.
  • the vertical axis represents the total glutamic acid concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-11 is a bar graph of the mean value and standard error of D-proline concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • FIG. 4-12 is a bar graph of the mean value and standard error of L-proline concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents the L-proline concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 4-13 is a bar graph of the mean value and standard error of the total proline concentration (sum of D-proline concentration and L-proline concentration) in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is.
  • FIG. 4-14 shows a bar graph of the mean value and standard error of D-lysine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents the D-lysine concentration (nanomol / mL).
  • P was less than 0.01 by Student's t-test.
  • FIG. 4-15 shows a bar graph of the mean value and standard error of L-lysine concentration in urine of 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice.
  • the vertical axis represents L-lysine concentration (nanomol / mL).
  • 4-16 is a bar graph of the mean value and standard error of the total urine lysine concentration (sum of D-lysine concentration and L-lysine concentration) in 3 dilated cardiomyopathy model mice and 4 control normal mice. It is. From these results, the D-serine concentration tended to be lower in the disease group than in the normal group, but no significant difference was observed. However, when evaluated by% D, the% D of D-serine was significantly lower in the disease group than in the normal group. The L-arginine concentration was significantly lower in the disease group than in the normal group. The D-glutamic acid concentration was significantly higher in the disease group than in the normal group. The D-proline concentration was significantly lower in the disease group than in the normal group. The D-lysine concentration was significantly lower in the disease group than in the normal group.
  • FIG. 5-1 shows 12 menopausal model mice from which ovaries were removed from 9-week-old HR-1 mice (hereinafter referred to as "OVX") and female mice of the same age. It is a graph which shows the change of the average value and standard deviation of a body weight with six control mice (henceforth "sham") which performed only incision and suture of the skin without performing extraction. The vertical axis represents the weight (gram) of the mouse.
  • the black and black hatched bar graphs represent the 9-week-old mice before the treatment, the first week (10-week old), the second week (11-week old), the third week (12-week-old), 4 weeks after the treatment, respectively.
  • the mean values and standard deviations of the body weights of the menopausal model mice (OVX) and control mice (sham) at week (13 weeks of age) are shown.
  • the significant difference in body weight between the climacteric model mouse (OVX) and the control mouse (sham) was P less than 0.05 (*) or less than 0.01 (**) according to Student's t test.
  • the body weight increased significantly from the control mouse from the second week after the operation, indicating that the menopausal model mouse was successfully produced.
  • Figures 5-2, 5-3 and 5-4 show the first (OVX-3), second (OVX-4) and third (OVX-) of three menopausal model mice (OVX), respectively.
  • surface which shows the urine total amino acid optical isomer content analysis result of 5). Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention. Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low. As for cysteine, since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • FIG. 5-5, 5-6, 5-7 and 5-8 show the first (Sham-16), second (Sham-17) and third of the four control mice (sham), respectively.
  • FIG. 10 is a table showing the results of analyzing the content of total amino acid optical isomers in urine of (Sham-19) and the fourth animal (Sham-20).
  • FIG. 5-9 is a table comparing the D-amino acid content in urine of 3 menopausal model mice (OVX) and 4 control mice (sham). D-aspartic acid was lower in control mice (sham) than in climacteric model mice (OVX), and the significant difference was P of 0.015 in Student's t test.
  • FIG. 5-10 is a table comparing the L-amino acid contents in the urine of three year model mice (OVX) and four control mice (sham). L-histidine and L-phenylalanine were lower in climacteric model mice (OVX) than in control mice (sham), and significant differences were P of 0.017 and 0.037, respectively, by Student's t-test.
  • FIG. 5-11 shows the percentage (%) of the D-form concentration relative to the sum of the D-form concentration and L-form concentration of each amino acid in the urine of 3 menopausal model mice (OVX) and 4 control mice (sham). It is the table
  • FIG. 5-12 shows the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total L) with respect to the sum of the concentrations of all L-amino acids in the urine of three menopausal model mice (OVX) and four control mice (sham). It is the table compared.
  • FIG. 5-13 shows the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total D) relative to the sum of the concentrations of all D-amino acids in the urine of three menopausal model mice (OVX) and four control mice (sham). It is the table compared. D-aspartic acid was lower in climacteric model mice (OVX) than in control mice (sham), and the significant difference was P of 0.017 according to Student's t-test.
  • 5-14 is a table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / D-Glu) with respect to the D-glutamic acid concentration in urine of three menopausal model mice (OVX) and four control mice (sham). It is. Since D-aspartic acid is an acidic D-amino acid, it was evaluated after correction with the concentration of D-glutamic acid considered to undergo similar metabolism. Even in% D / D-Glu, D-aspartate was lower in climacteric model mice (OVX) than control mice (sham), and the significant difference was P of 0.006 in Student's t-test.
  • FIGS. 6-1, 6-2 and 6-3 are ICR male 6-week-old mice transplanted with 2 ⁇ 10 7 sarcoma cells, respectively, and were explanted 3 weeks after transplantation. It is a table
  • FIGS. 6-4, 6-5 and 6-6 show the first (C3) and 2 of 3 ICR male 9-week-old mice kept in the same environment as a control experiment of sarcoma transplanted mice, respectively. It is a table
  • FIG. 6-7 is a table comparing the D-amino acid content in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5).
  • FIGS. 6-8 are tables comparing the L-amino acid contents in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5).
  • FIG. 6-9 shows the sum of the D- and L-body concentrations of each amino acid in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5).
  • 6 is a table comparing D-body concentration percentage (% D).
  • FIG. 6-10 shows the percentage of each D-amino acid concentration relative to the sum of the total L-amino acid concentrations in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5). It is the table
  • 6-11 shows the percentage of each D-amino acid concentration relative to the sum of the total D-amino acid concentrations in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5).
  • 5 is a table comparing (% D / total D). D-asparagine and D-arginine tended to be higher in sarcoma-transplanted mice than in control mice, and the significant difference of D-arginine was 0.035 in Student's t-test.
  • 6-12 shows the percentage (% D /%) of each D-amino acid concentration relative to the D-asparagine concentration in the urine of three sarcoma transplanted mice (S3, S4 and S5) and three control mice (C3, C4 and C5).
  • 4 is a table comparing (D-Asn).
  • D-asparagine was used as an indicator of urinary concentration correction because of its relatively high concentration in mammalian urine and its most stable ratio to total D-amino acid concentration.
  • D-arginine tended to be higher in sarcoma-transplanted mice than in control mice, and a significant difference was P of 0.016 in Student's t test.
  • FIG. 7-1 shows three Alzheimer's disease model mice (transgenic mouse Tg2576 hemizygous male 8-week-old mouse, hereinafter referred to as “hemi”) that highly expresses amyloid ⁇ precursor protein; Mean value of urinary D-serine concentration (D-Ser), L-serine concentration (L-Ser) and total of both (Ser) with three control normal mice (C57BL, hereinafter referred to as “Wild”) And a standard error bar graph. The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 7-1 shows three Alzheimer's disease model mice (transgenic mouse Tg2576 hemizygous male 8-week-old mouse, hereinafter referred to as “hemi”) that highly expresses amyloid ⁇ precursor protein; Mean value of urinary D-serine concentration (D-Ser), L-serine concentration (L-Ser) and total of both (Ser) with three control normal mice (C57BL, hereinafter
  • FIG. 7-2 shows the mean value and standard error of the percentage (% D) of the D-serine concentration relative to the total serine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild). It is a bar graph. The vertical axis is% D.
  • FIG. 7-3 shows the relative ratio of D-serine to D-allo-threonine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) (D-Ser / D- (allo-Thr) or the relative ratio of D-serine to D-allo-isoleucine concentration in urine (D-Ser / D-allo-Ile).
  • FIG. 7-4 shows urinary D-alanine concentration (D-Ala), L-alanine concentration (L-Ala) and three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild). It is a bar graph of the mean and standard error of both sums (Ala). The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 7-5 shows the average value and standard error of the percentage (% D) of D-alanine concentration relative to the total alanine concentration in urine of three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild). It is a bar graph. The vertical axis is% D. The percentage of D-alanine concentration (% D) relative to the total urine alanine concentration was higher in Alzheimer's disease model mice than in control normal mice, and the difference was significantly less than 0.01 in Student's t-test.
  • FIG. 7-6 shows the urinary D-methionine concentration (D-Met), L-methionine concentration (L-Met), and 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild).
  • 2 is a bar graph of the mean and standard error of both totals (Met).
  • the vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • the urinary D-Met concentration tended to be higher in Alzheimer's disease model mice than in control normal mice.
  • FIG. 7-7 shows the mean value and standard error of the percentage (% D) of the D-methionine concentration relative to the total serine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild). It is a bar graph.
  • the vertical axis is% D.
  • FIG. 7-8 shows the relative ratio of D-methionine to the D-allo-threonine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) (D-Met / D ⁇ (allo-Thr) or the relative ratio of D-methionine to urinary D-allo-isoleucine concentration (D-Met / D-allo-Ile).
  • the relative ratio of D-methionine to the urinary D-allo-threonine concentration and the relative ratio of D-methionine to the urinary D-allo-isoleucine concentration were higher in the Alzheimer's disease model mice than in the control mice. In the Student's t-test, both P were less than 0.05.
  • FIG. 7-10 shows urinary D-leucine concentration (D-Leu), L-leucine concentration (L-Leu) and 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild).
  • Figure 6 is a bar graph of the mean and standard error of both sums (Leu). The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 7-10 shows the mean value and standard error of the percentage (% D) of the D-leucine concentration relative to the total serine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild). It is a bar graph.
  • FIG. 7-11 shows the relative ratio of D-leucine to D-allo-threonine concentration in urine of three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild) (D-Leu / D- (allo-Thr) or the relative ratio of D-leucine to D-allo-isoleucine concentration in urine (D-Leu / D-allo-Ile).
  • the relative ratio of D-leucine to the urinary D-allo-threonine concentration and the relative ratio of D-leucine to the urinary D-allo-isoleucine concentration were higher in the Alzheimer's disease model mice than in the control mice.
  • P was less than 0.05 and less than 0.01, respectively.
  • FIG. 7-12 shows urinary D-aspartic acid concentration (D-Asp), L-aspartic acid concentration (L-Asp) in three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild). ) And the sum of both (Asp) and standard error bar graphs. The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL). The urinary D-aspartic acid concentration was lower in the Alzheimer's disease model mice than in the control normal mice, and the significant difference was that the P was less than 0.05 by Student's t-test.
  • D-Asp urinary D-aspartic acid concentration
  • L-Asp L-aspartic acid concentration
  • FIG. 7-13 shows the average value of the percentage (% D) of D-aspartate concentration relative to the total aspartate concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) It is a bar graph of standard error. The vertical axis is% D.
  • FIG. 7-14 shows urinary D-phenylalanine concentration (D-Phe), L-phenylalanine concentration (L-Phe), and three Alzheimer's disease model mice (hemi) and three control normal mice (Wild). 2 is a bar graph of the mean and standard error of both sums (Phe). The vertical axis represents the concentration (nanomol / mL).
  • FIG. 7-15 shows the mean value and standard error of the percentage (% D) of D-phenylalanine concentration relative to the total phenylalanine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild). It is a bar graph.
  • FIG. 7-16 shows the relative ratio of D-phenylalanine to D-allo-threonine concentration in urine of 3 Alzheimer's disease model mice (hemi) and 3 control normal mice (Wild) (D-Phe / D ⁇ (allo-Thr) or a relative ratio of D-phenylalanine to D-allo-isoleucine concentration in urine (D-Phe / D-allo-Ile).
  • the relative ratio of D-phenylalanine to urinary D-allo-isoleucine concentration was higher in Alzheimer's disease model mice than in control mice, and the difference was significantly less than 0.05 in Student's t-test.
  • FIGS. 8-1, 8-2 and 8-3 show D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (ddY / DAO +, hereinafter “DAO + / +”).
  • DAO + / + D-amino acid oxidase
  • FIGS. 8-4, 8-5 and 8-6 show one of three D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice (ddY / DAO-, hereinafter referred to as “DAO ⁇ / ⁇ ”), respectively.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • FIG. 6 is a table showing the results of analysis of total amino acid optical isomer content in urine of eyes (DAO ⁇ / ⁇ 1), animals (DAO ⁇ / ⁇ 2) and animals (DAO ⁇ / ⁇ 3). Since glycine has no optical isomer, it is listed in the L-form column. All amino acids were fluorescently derivatized with NBD-F and analyzed using the total amino acid optical isomer content analyzer of the present invention. Tryptophan was determined to be nd in this analysis because the sensitivity of the NBD derivative is low. As for cysteine, since cystine is generated by air oxidation, its content as cysteine is extremely low. Therefore, it was set to nd in this analysis.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice DAO + / + 1, DAO + / + 2 and DAO + / + 3
  • D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice 3 is a table comparing DAO-/-1, DAO-/-2 and DAO-/-3) with D-amino acid content in urine.
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice DAO + / + 1, DAO + / + 2 and DAO + / + 3
  • D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice 3 is a table comparing DAO-/-1, DAO-/-2 and DAO-/-3) with L-amino acid content in urine.
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • DAO D-amino acid oxidase
  • DAO D-amino acid oxidase
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • DAO 8-10 shows three D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2 and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice ( DAO-/-1, DAO-/-2 and DAO-/-3) and a table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total L) to the sum of the concentrations of all L-amino acids in urine is there.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • FIG. 8-11 shows three D-amino acid oxidase (DAO) wild-type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2 and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) -deficient mice ( DAO-/-1, DAO-/-2 and DAO-/-3) and a table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / total D) with respect to the sum of the concentrations of all D-amino acids in urine is there.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • DAO 8-12 shows three D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice (DAO + / + 1, DAO + / + 2 and DAO + / + 3) and three D-amino acid oxidase (DAO) deficient mice ( 3 is a table comparing the percentage of each D-amino acid concentration (% D / D-Asn) with respect to D-asparagine concentration in DAO-/-1, DAO-/-2 and DAO-/-3) and urine.
  • DAO D-amino acid oxidase
  • D-serine, D-allo-threonine, D-alanine, D-proline, D-leucine and D-phenylalanine were significantly higher in DAO enzyme-deficient mice than in D-amino acid oxidase (DAO) wild type mice.
  • FIGS. 9-1, 9-2, 9-3 and 9-4 are D-aspartate oxidase (DDO) wild type mice (DDO +) individuals, respectively. It is a wave form diagram which shows the urine total amino acid optical isomer content analysis result of the 1st, 2nd, 3rd and 43rd of 4 animals. Figures 9-5, 9-6, 9-7 and 9-8 show the first, second, and third of the four D-aspartate oxidase (DDO) deficient mice (DDO-) individuals, respectively. It is a wave form diagram which shows the urine total amino acid optical isomer content analysis result of the eyes and the 4th animal.
  • DDO D-aspartate Oxidase
  • D-asparagine was higher than that of wild-type mice, and the concentrations of D-aspartic acid and D-arginine were also higher.
  • D-glutamic acid which is a good substrate for the DDO enzyme, was hardly observed in the urine of DDO-deficient mice.
  • FIG. 10-1 shows a phenylketonuria disease model mouse (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mouse, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and a control mouse (white) ) Bar graph showing D-valine concentration (nanomol / mL) and standard error in the plasma of 5 animals each.
  • FIG. 10-2 shows D--D in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). 2 is a bar graph showing allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • PAH phenylalanine hydroxylase
  • Fig. 10-3 shows D--D in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-4 shows D--D in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-3 shows D--D in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing leucine concentration (nanomol /
  • FIG. 10-5 shows D--D in the plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing phenylalanine concentration (nanomol / mL) and standard error. The D-phenylalanine concentration was higher in the phenylketonuria disease model mice than in the control mice, and the significant difference was that p was less than 0.01.
  • FIG. 10-6 is a graph showing L-L in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white).
  • FIG. 10-7 shows the results of L ⁇ in plasma of 5 mice each of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white).
  • PHA phenylalanine hydroxylase
  • FIG. 10-8 shows L-- concentrations in plasma of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white).
  • FIG. 10-9 shows phenyl-ketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white) with L- It is a bar graph showing leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • PAH phenylalanine hydroxylase
  • phenyl ketoneuria disease model mice phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu 2 / Pah eu 2 , black
  • control mice white
  • phenylalanine concentration nanomol / mL
  • the concentration of L-phenylalanine was higher in the phenylketonuria disease model mice than in the control mice, and the significant difference was that p was less than 0.01.
  • FIG. 10-11 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white) each with D- in 5 urine. It is a bar graph showing a valine concentration (nanomol / mL) and a standard error.
  • FIG. 10-12 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) each with D- in 5 urine. 2 is a bar graph showing allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-11 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white) each with D- in 5 urine. It is a bar graph showing
  • FIG. 10-13 shows phenotypes in 5 urine of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-14 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu 2 , black) and control mice (white) each with D- in 5 urine. It is a bar graph showing leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-13 shows phenotypes in 5 urine of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white). It is a bar graph showing isoleucine concentration (
  • FIG. 10-10 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu2 / Pah enu2 , black) and control mice (white) each with D ⁇ It is a bar graph showing phenylalanine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-16 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu 2 , black) and control mice (white) in 5 urine L- It is a bar graph showing a valine concentration (nanomol / mL) and a standard error.
  • FIG. 10-16 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu 2 , black) and control mice (white) in 5 urine L- It is a bar graph showing a valine concentration (nanomol
  • FIG. 10-17 shows phenotypes of phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu 2 / Pah eu 2 , black) and control mice (white) of L- 2 is a bar graph showing allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-18 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu 2 , black) and control mice (white) in each urine. It is a bar graph showing isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-18 shows phenyl- urineuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu 2 , black) and control mice (white) in each urine. It is a bar graph showing isoleucine concentration (n
  • FIG. 10-19 shows phenylketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah enu 2 / Pah eu 2 , black) and control mice (white) each of L- It is a bar graph showing leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 10-20 shows phenyl-ketonuria disease model mice (phenylalanine hydroxylase (PAH) mutant mice, Pah nu2 / Pah nu2 , black) and control mice (white) in each of 5 urine samples . It is a bar graph showing phenylalanine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • the L-phenylalanine concentration was higher in the phenylketonuria disease model mice than in the control mice, and the significant difference was that p was less than 0.01.
  • FIG. 11-1 shows maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (White coat) Bar graph showing D-valine concentration (nanomol / mL) and standard error in plasma of 5 animals each.
  • FIG. 11-2 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 11-3 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched chain alpha-keto acid dehydrogenase
  • 2 is a bar graph showing the D-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error. Plasma D-isoleucine concentrations were higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p was less than 0.05.
  • FIG. 11-3 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • 2 is a bar graph showing the D-isoleucine concentration (nanomol / mL)
  • FIG. 11-4 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • 2 is a bar graph showing the D-leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 11-5 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • FIG. 2 is a bar graph showing the D-phenylalanine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 11-6 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white). Is a bar graph showing the L-valine concentration (nanomol / mL) and standard error. Plasma L-valine concentrations are higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p is less than 0.01. FIG.
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • 11-7 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • 2 is a bar graph showing the L-allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error. The plasma L-allo-isoleucine concentration was higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p was less than 0.01.
  • 11-8 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • 11-9 shows in plasma of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • the plasma L-leucine concentration was higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p was less than 0.05.
  • FIG. 11-10 shows the plasma in 5 each of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white). Is a bar graph showing the L-phenylalanine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 11-11 shows the plasma of 5 maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white).
  • BCKDH branched chain alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 11-12 shows the plasma of maple syrup urine mouse intermediate type (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mouse, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mouse (white), 5 mice each.
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 11-13 shows the plasma of maple syrup urine mouse intermediate type (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mouse, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mouse (white) each 2 is a bar graph showing the concentration of L-allo-isoleucine in the solution (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 11-14 shows the plasma of maple syrup urine mouse intermediate type (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mouse, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mouse (white) each 2 is a bar graph showing the concentration of L-isoleucine in the solution (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 11-15 shows the plasma of maple syrup urine mouse intermediate type (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mouse, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mouse (white), 5 mice each.
  • 2 is a bar graph showing the concentration of L-leucine in the solution (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 12-1 shows the urine of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • 2 is a bar graph showing the D-valine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 12-2 shows that in maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) in urine.
  • BCKDH branched chain alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 12-3 shows that in maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) in urine.
  • BCKDH branched chain alpha-keto acid dehydrogenase
  • 2 is a bar graph showing the D-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error. The concentration of D-isoleucine in urine was higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p was less than 0.05.
  • FIG. 12-3 shows that in maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) in urine.
  • 2 is a bar graph showing the D-isoleucine concentration (nanomol
  • FIG. 12-4 shows in urine of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched chain alpha-keto acid dehydrogenase
  • 2 is a bar graph showing the D-leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 12-5 shows the urine of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • FIG. 12-6 shows in urine of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • the urinary L-valine concentration was higher in maple syrup urine mice than in control mice, with a significant difference that p was less than 0.01.
  • FIG. 12-6 shows in urine of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • FIG. 12-7 shows in urine of maple syrup urine mice (branched chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white).
  • 2 is a bar graph showing the L-allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error. The concentration of L-allo-isoleucine in urine was higher in maple syrup urine mice than in control mice, and a significant difference was that p was less than 0.01.
  • FIG. 12-9 shows in maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, Dbt tm1Geh / Dbt tm1Geh , black) and control mice (white) in urine.
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 12-11 shows the urine of maple syrup urine mouse intermediate type (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mouse, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mouse (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 12-12 shows the urine of 5 each of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • FIG. 12-13 show in maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white) in each urine.
  • 2 is a bar graph showing L-allo-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • FIG. 12-14 shows in urine of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white).
  • 3 is a bar graph showing L-isoleucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • 12-15 shows the urine of 5 each of maple syrup urine mice (branched alpha-keto acid dehydrogenase (BCKDH) mutant mice, + / Dbt tm1Geh , gray) and control mice (white).
  • BCKDH branched alpha-keto acid dehydrogenase
  • 2 is a bar graph showing L-leucine concentration (nanomol / mL) and standard error.
  • the cardiovascular disease sample was from a 43 year old white male.
  • the multiple sclerosis sample was from a relapsing-remitting 33 year old white male.
  • the acute myeloid leukemia sample was from a 16 year old male.
  • the lymphoma sample was from a 49 year old Vietnamese woman.
  • the psoriasis sample was from a 40 year old white male.
  • the diabetes sample was from a 50 year old white male.
  • the systemic lupus erythematosus sample was from a 38 year old white woman.
  • Example 3 results The analysis results of the disease samples of Example 3 are summarized in FIG. 13-1 for L-amino acids and in FIG. 13-2 for D-amino acids.
  • each row in the table represents the sample provider's disease name and each column represents the type of D-amino acid analyzed.
  • ND represents that it was below the detection limit.
  • An upward arrow indicates that the amino acid amount in this sample is higher than that of the healthy male sample in the first row, and a downward arrow indicates that this sample has a lower amino acid amount than the healthy male sample in the first row.
  • the fine upward hatching indicates whether the ratio of the amino acid content of these samples to the amino acid content of the healthy male sample is twice or more (upward arrow) or 1/2 or less (downward arrow).
  • the rough leftward hatching indicates whether the ratio of the amino acid content of these samples to the amino acid content of the healthy male sample is less than twice (upward arrow) or less than 1/2 (downward arrow).
  • L-glutamic acid had a higher serum concentration than control healthy male samples, but L-glutamine and L-cysteine decreased.
  • D-serine had a higher serum concentration than healthy male samples, but D-alanine had a lower serum concentration.
  • lung cancer the serum concentration of D-alanine was lower than in healthy male samples.
  • the serum concentration of L-arginine decreased from the healthy male sample, but L-glutamic acid increased.
  • the serum concentration of D-serine was higher than that of healthy male samples, but the serum concentration of L-cysteine was decreased.
  • acute myeloid leukemia the serum concentration of L-cysteine was lower than in healthy male samples.
  • lymphoma the serum concentration of L-cysteine was lower than in healthy male samples.
  • acute lymphoblastic leukemia the serum concentration of L-glutamic acid was higher than that of healthy male samples, but the L-cysteine concentration was decreased.
  • the serum concentrations of L-arginine and L-cysteine were lower than in healthy male samples.
  • diabetes the serum concentrations of D-alanine and L-cysteine were lower than in healthy male samples, but the serum concentration of L-glutamic acid was increased.
  • systemic lupus erythematosus no change was observed.
  • each amino acid has been quantified as the sum of all the stereoisomers.
  • the stereoisomers can be distinguished and quantified as different substances.
  • FIGS. 3-1 to 3-3 when the amount of D-isomer is expressed as a percentage (% D) of the sum of the amount of D-isomer and L-isomer, D-serine of colorectal cancer patients is expressed.
  • the% D of serine in the colorectal cancer patient (FIG. 3-1) is less variable.
  • the% D of alanine in patients with kidney disease (FIG.
  • the amount of D-amino acid correlated with the disease may be correlated with the amount of other substances.
  • a parameter for example,% D for normalizing the amount of the D-amino acid by the amount of the other substance is prepared. Diagnostic characteristics can be further improved.

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Abstract

【課題】アミノ酸立体異性体の全分析により、アミノ酸立体異性体量、変化と疾患との相関を明かにして、新規な疾患診断方法と、該疾患診断方法を実行する新規な疾患診断装置とを開発する。 【解決手段】本発明の疾患サンプル分析装置は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体を分離・定量する手段と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する手段とを含む。前記判別式は、病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の基準値）等の場合がある。本発明の疾患サンプル分析方法は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定するステップと、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得るステップ等とを含む。

Description

疾患サンプル分析装置、分析システム及び分析方法
　本発明は、アミノ酸の立体異性体を区別した定量法に基づく疾患サンプル分析装置、分析システム及び分析方法に関する。具体的には、被検者の生物学的材料のアミノ酸立体異性体を分離・定量する手段と、該アミノ酸立体異性体の定量値を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力する手段とを含む疾患サンプル分析装置と、被験者の生物学的材料のアミノ酸立体異性体を分離・定量する定量分析部と、該アミノ酸立体異性体の定量値を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る病態指標値演算部と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する病態情報出力部とを含む疾患サンプル分析システムと、被検者の生物学的材料のアミノ酸立体異性体を分離・定量するステップと、該アミノ酸立体異性体の定量値を判別式に代入して計算し、病態指標値を得るステップと、前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を得るステップとを含む疾患サンプル分析方法とに関する。
　グリシン以外の全てのアミノ酸にはＤ－体とＬ－体という２種類の立体異性体が存在する。Ｌ－アミノ酸は生物のタンパク質の構成要素であり、タンパク質に含まれるアミノ酸は原則的にＬ－アミノ酸である。これに対してＤ－アミノ酸は下等生物の一部の生理活性ペプチドに含まれるが、その多くは翻訳後修飾のプロセスを経て生合成される。そこで、タンパク質又はペプチドを構成するアミノ酸は主にＬ－アミノ酸であり、Ｄ－アミノ酸は例外的な存在である。
　Ｄ－アミノ酸は細菌の細胞壁のペプチドグリカンの構成成分の１つである。また、ペプチドを構成しない遊離のＤ－アミノ酸については、水棲動物や昆虫などの下等な動物において存在することは以前から報告されていた。しかし、高等動物に存在するアミノ酸はＬ体であって、Ｄ体は生理活動に関与しないと信じられていた時代があった（非特許文献１）。
　しかし、ヒトを含む哺乳類におけるＤ－アミノ酸の存在とその役割については、近年の分析技術の進歩による分解能・感度の向上に伴いようやく明らかになってきた（非特許文献２）。Ｄ－アスパラギン酸は抗Ｄ－アスパラギン酸抗体を用いた二重染色法などにより、ラット下垂体においてプロラクチン産生細胞に局在することが明らかになった。また、ラット下垂体由来の細胞株でプロラクチンを合成、分泌する細胞にＤ－アスパラギン酸を与えることによりプロラクチン分泌が用量依存的に増加した。以上のことからプロラクチン産生細胞においてＤ－アスパラギン酸がプロラクチンの分泌を制御していると考えられている（非特許文献３）。
　一方、ラット精巣の静脈では他の静脈血よりも常に高濃度のＤ－アスパラギン酸が検出されていることに加え、ラット精巣から単離、精製したＬｅｙｄｉｇ細胞にＤ－アスパラギン酸を加えることによりテストステロンの合成及び分泌が用量依存的に促進されることが報告されている（非特許文献４）。
　Ｄ－セリンは統合失調症に関連すると推察されているＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体のグリシン結合部位を選択的に刺激し、グルタミン酸の本受容体を介する作用を増強することで神経伝達を促進することが報告されている（非特許文献５）。実際にＤ－セリンの投与により統合失調症が改善することや、統合失調症患者では血清中のＤ－セリン濃度が健常者よりも低いことが報告されている。さらにＤ－セリンは筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）における運動神経の変性に関与することも最近報告された（非特許文献６）。
　財津らは、Ｄ、Ｌ－アミノ酸一斉高感度分析システム（特許文献１、非特許文献７－９）を開発し、アミノ酸立体異性体の一斉高感度分析技術を実用化した。これにより、ヒトの生物学的材料に含まれる極微量のＤ－アミノ酸と、比較的大量に存在するＬ－アミノ酸とを同一サンプルから網羅的に分離・定量することが可能になった。
　本発明は、各種疾患患者のアミノ酸立体異性体の定量分析結果から、健常者の生物学的材料中のＤ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸の量は一定のバランスを保っていること、個体差が小さいこと、及び、患者の生物学的材料中のＤ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸を分離・定量することによってはじめて差を確認することができるバランスの崩れが一部にあることを発見した。本発明はかかる予想外の発見に基づいて想到された。
特許第４２９１６２８号
Ｃｏｒｒｉｇａｎ　Ｊ．Ｊ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ　１６４：１４２（１９６９） Ｈａｍａｓｅ　Ｋ，　Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ａ，　ａｎｄ　Ｚａｉｔｓｕ　Ｋ．　、　Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ｂ　７８１：　７３（２００２） Ｄ’Ａｎｉｅｌｌｏ　Ａら、ＦＡＳＥＢ　Ｊ　１４：　６９９（２０００） Ｎａｇａｔａ　Ｙら、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．　４４４：１６０（１９９９） Ｎｉｓｈｉｋａｗａ　Ｔ、Ｂｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ．　２８：　１５６１（２００５） Ｓａｓａｂｅ，Ｊ．、ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．　１０９：６２７（２０１２） Ｈａｍａｓｅ　Ｋ．、ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ，　１１４３：１０５（２００７） ＨａｍａｓｅＫ．、ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ，　１２１７：１０５６（２０１０） ＭｉｙｏｓｈｉＹ．、ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ，　８７９：３１８４（２０１１）
　アミノ酸立体異性体の全分析により、アミノ酸立体異性体量、変化と疾患との相関を明かにして、新規な疾患診断方法と、該疾患診断方法を実行する新規な疾患診断装置とを開発する必要がある。
　本発明は疾患サンプル分析装置を提供する。本発明の疾患サンプル分析装置は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体を分離・定量する手段と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する手段とを含む。
　本発明の疾患サンプル分析装置において、前記判別式は、
病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かの場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析装置において、前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力する手段は、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力する手段の場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析装置において、前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸の場合がある。
　本発明は疾患サンプル分析システムを提供する。本発明の疾患サンプル分析システムは、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体のを分離・定量する定量分析部と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る病態指標値演算部と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する病態情報出力部とを含む。
本発明の疾患サンプル分析システムにおいて、前記判別式は、
病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かの場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析システムにおいて、前記病態情報出力部は、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力する場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析システムにおいて、前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸の場合がある。
　本発明は疾患サンプル分析方法を提供する。本発明の疾患サンプル分析方法は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定するステップと、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得るステップと、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力するステップとを含む。
　本発明の疾患サンプル分析方法において、前記判別式は、
病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かの場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析方法において、前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力するステップは、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力するステップの場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析方法において、前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸の場合がある。
　本発明は疾患の診断方法を提供する。本発明の疾患の診断方法は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定するステップと、該アミノ酸立体異性体の量の測定値と健常者の基準値とに基づいて前記疾患の診断をするステップとを含む。
　本発明は疾患の診断方法を提供する。本発明の疾患の診断方法は、被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体を分離・定量するステップと、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者を診断するステップとを含む。
　本発明の疾患の診断方法において、前記判別式は、
病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かの場合がある。
　本発明の疾患の診断方法において、前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力するステップは、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患している診断するステップの場合がある。
　本発明の疾患の診断方法において、前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンの場合がある。
　本発明のアミノ酸立体異性体とは、タンパク質の翻訳に用いられる２０種類のアミノ酸と、該アミノ酸のうちグリシンを除く１９種類のＬ－アミノ酸の工学異性体であるＤ－アミノ酸１９種類と、アロＬ－スレオニン、アロＤ－スレオニン及びアロＤ－イソロイシンとをいう。
　本発明の疾患サンプル分析装置は、生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定する手段と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する手段とを含む。前記物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定する手段は、サンプルの自動分取部と、逆相カラム等によるＨＰＬＣ分離及びピーク検出部である。前記アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段は、前記判別式、疾患ごとの健常者の基準値等のデータを格納する記憶部と、該データに基づいて判別式の計算を行う演算部とである。前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する手段は、病態情報選択部及び病態情報出力部である。この他、全体を統括的に制御するＣＰＵ等の制御部と、入力装置及び出力装置に接続する入出力インターフェース部と、ネットワークに通信可能に接続する通信インターフェース部とが本発明の疾患サンプル分析装置には含まれる。
　本発明において生物学的材料とは、血液、血漿、血清、腹水、羊水、リンパ液、唾液、精液、尿等の体液と、糞便、汗、鼻汁等の排泄物と、体毛、爪、皮膚組織、内臓組織等の体組織とをいうが、これらに限定されない。
　本発明において、判別式とは、アミノ酸立体異性体量の被検者測定値が、予め健常者の測定値から設定される基準値の何倍であるかを算出する式の場合がある。また、アミノ酸立体異性体の量と、該異性体のエナンチオマーの量との和に対する前記アミノ酸立体異性体の量の割合又は百分率を算出する式の場合がある。さらに、複数種類のアミノ酸立体異性体の量の組み合わせから病態指標値を算出する式の場合がある。前記複数のアミノ酸立体異性体は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素又はＤ－アスパラギン酸酸化酵素の基質となる等の共通点があるアミノ酸のグループの場合がある。例えば、同一の酵素の基質となるアミノ酸立体異性体のうち、疾患と相関するアミノ酸の量を疾患と相関しないアミノ酸の量で正規化される場合がある。
　本発明の判別式において、健常者の生物学的材料中の疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値とは、疾患と相関するアミノ酸立体異性体について、健常者の生物学的材料と、該アミノ酸立体異性体が相関性がない他の疾患患者の生物学的材料とのうちいずれか又は両方の生物学的材料中の量の平均値又は中央値から決定される。前記基準値は、予め設定される場合があるが、本発明の実施の際に対照実験として用意され、同時に試験される生物学的材料の測定値か、その平均値又は中央値の場合もある。
　本発明の病態情報として、本発明の判別式で算出される病態指標値が１．０又はその近傍のとき、被検者は健常者であると出力される。前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、被検者は疾患に罹患している可能性が大と出力される場合がある。しかし、前記病態指標値が２．０未満でも、被検者が前記疾患に罹患している可能性があると出力される場合がある。
　本発明の疾患サンプル分析装置、分析システム及び分析方法により得られる被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の定量データは、さまざまな疾患の診断及び予防の指標として用いられる。また、前記定量データは、前記疾患の病状の進行の指標として用いられる。さらに、前記定量データは、前記疾患の治療及び／又は予防のための医薬の薬効を判断するための指標として用いられる。さらに、前記定量データは、医薬、医薬部外品、化粧料、食品その他の化学物質の生体への影響や、その他の物理的及び／又は生物学的な環境要因の成体への影響を判断するための指標として用いられる。
　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
健常者及び各種疾患患者のそれぞれ最初のサンプルについてのＤ－アミノ酸の分析結果をまとめた表。 Ｄ－セリンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 Ｌ－セリンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 Ｄ－スレオニンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 Ｌ－スレオニンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 Ｄ－アラニンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 Ｌ－アラニンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図。 セリンのサンプルのＤ－体及びＬ－体の量の和に対するＤ－体量の百分率（％Ｄ）の分布図。 スレオニンのサンプルのＤ－体及びＬ－体の量の和に対するＤ－体量の百分率（％Ｄ）の分布図。 アラニンのサンプルのＤ－体及びＬ－体の量の和に対するＤ－体量の百分率（％Ｄ）の分布図。 拡張型心筋症モデルマウス（ＭＬＰ－ＫＯマウス、以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－セリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｄ－セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＬ－セリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｌ－セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全セリン濃度（Ｄ－セリン濃度及びＬ－セリン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、全セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－セリン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０２未満であった。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－アルギニン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｄ－アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＬ－アルギニン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｌ－アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全アルギニン濃度（Ｄ－アルギニン濃度及びＬ－アルギニン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、全アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－グルタミン酸濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｄ－グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０２未満であった。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＬ－グルタミン酸濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｌ－グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全グルタミン酸濃度（Ｄ－グルタミン酸濃度及びＬ－グルタミン酸濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、全グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－プロリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｄ－プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＬ－プロリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｌ－プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全プロリン濃度（Ｄ－プロリン濃度及びＬ－プロリン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、全プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－リジン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｄ－リジン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＬ－リジン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、Ｌ－リジン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 拡張型心筋症モデルマウス（以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中の全リジン濃度（Ｄ－リジン濃度及びＬ－リジン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、全リジン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 ９週齢ＨＲ－１マウスから卵巣が摘出された更年期モデルマウス（以下、「ＯＶＸ」という。）１２匹と、同じ週齢の雌マウスから、卵巣摘出を行わずに、皮膚の切開及び縫合のみを行った対照マウス（以下、「ｓｈａｍ」という。）６匹との体重の平均値及び標準偏差の変化を示すグラフ。縦軸はマウスの体重（グラム）を示す。黒塗り及び斜線ハッチングの棒グラフは、それぞれ、施術前の９週齢マウスと、施術後１週目（１０週齢）、２週目（１１週齢）、３週目（１２週齢）、４週目（１３週齢）の更年期モデルマウス（ＯＶＸ）及び対照マウス（ｓｈａｍ）の体重の平均値及び標準偏差を示す。更年期モデルマウス（ＯＶＸ）及び対照マウス（ｓｈａｍ）との体重の有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満（＊）又は０．０１未満（＊＊）であった。卵巣が摘出された更年期モデルマウスでは術後２週目から体重が対照マウスより有意に増加し、更年期モデルマウス作製に成功したことを示す。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹のうち１匹目（ＯＶＸ－３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹のうち２匹目（ＯＶＸ－４）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹のうち３匹目（ＯＶＸ－５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 対照マウス（ｓｈａｍ）４匹のうち１匹目（Ｓｈａｍ－１６）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 対照マウス（ｓｈａｍ）４匹のうち２匹目（Ｓｈａｍ－１７）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 対照マウス（ｓｈａｍ）４匹のうち３匹目（Ｓｈａｍ－１９）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 対照マウス（ｓｈａｍ）４匹のうち４匹目（Ｓｈａｍ－２０）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表。Ｄ－アスパラギン酸は更年期モデルマウス（ＯＶＸ）よりも対照マウス（ｓｈａｍ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１５であった。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表。Ｌ－ヒスチジン及びＬ－フェニルアラニンは対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがそれぞれ０．０１７及び０．０３７であった。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表。スレオニン及びイソロイシンについては、生体内でのＤ－体がアロ体となるため、％Ｄは、Ｄ－アロ体濃度及びＬ－体濃度の和に対するＤ－アロ体濃度の百分率として評価された。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００２であった。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００５であった。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１７であった。 更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＤ－グルタミン酸濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ｇｌｕ）を比較した表。Ｄ－アスパラギン酸は酸性Ｄ－アミノ酸なので、同様の代謝を受けると考えられるＤ－グルタミン酸濃度で補正後評価された。％Ｄ／Ｄ－Ｇｌｕでも、Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００６であった。 ２×１０７個の肉腫細胞を移植されたＩＣＲ系雄６週齢マウスで、移植３週間後に外植された腫瘍の成長が確認された個体３匹のうち１匹目（Ｓ３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 ２×１０７個の肉腫細胞を移植されたＩＣＲ系雄６週齢マウスで、移植３週間後に外植された腫瘍の成長が確認された個体３匹のうち２匹目（Ｓ４）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 ２×１０７個の肉腫細胞を移植されたＩＣＲ系雄６週齢マウスで、移植３週間後に外植された腫瘍の成長が確認された個体３匹のうち３匹目（Ｓ５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 肉腫移植マウスの対照実験として同環境で飼育されたＩＣＲ系雄９週齢マウス個体３匹のうち１匹目（Ｃ３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 肉腫移植マウスの対照実験として同環境で飼育されたＩＣＲ系雄９週齢マウス個体３匹のうち２匹目（Ｃ４）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 肉腫移植マウスの対照実験として同環境で飼育されたＩＣＲ系雄９週齢マウス個体３匹のうち３匹目（Ｃ５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表。Ｄ－アルギニンは対照マウスよりも肉腫移植マウスが高く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００８であった。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表。肉腫移植マウスのセリンの％Ｄは対照マウスより低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１６であった。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表。Ｄ－アスパラギン及びＤ－アルギニンは対照マウスよりも肉腫移植マウスが高い傾向があり、Ｄ－アルギニンの有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０３５であった。 肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＤ－アスパラギン濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ａｓｎ）を比較した表。Ｄ－アスパラギンは哺乳類尿中に比較的高濃度に存在すること、及び、全Ｄ－アミノ酸濃度に対する比率が最も安定していたことのために、尿中濃度の補正の指標として用いられた。Ｄ－アルギニンは対照マウスよりも肉腫移植マウスが高い傾向があり、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１６であった。 アルツハイマー病モデルマウス（アミロイドβ前駆体タンパク質高発現トランスジェニックマウスＴｇ２５７６ヘミ接合体雄８週齢マウス、以下、「ｈｅｍｉ」という。）３匹と、対照正常マウス（Ｃ５７ＢＬ、以下、「Ｗｉｌｄ」という。）３匹との尿中のＤ－セリン濃度（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｌ－セリン濃度（Ｌ－Ｓｅｒ）及び両方の合計（Ｓｅｒ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－セリン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－セリンの相対比（Ｄ－Ｓｅｒ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－セリンの相対比（Ｄ－Ｓｅｒ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフ。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－セリンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－セリンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがともに０．０１未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アラニン濃度（Ｄ－Ａｌａ）、Ｌ－アラニン濃度（Ｌ－Ａｌａ）及び両方の合計（Ａｌａ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－アラニン濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全アラニン濃度に対するＤ－アラニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。尿中の全アラニン濃度に対するＤ－アラニン濃度の百分率（％Ｄ）は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－メチオニン濃度（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｌ－メチオニン濃度（Ｌ－Ｍｅｔ）及び両方の合計（Ｍｅｔ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－Ｍｅｔ濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高い傾向があった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－メチオニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比（Ｄ－Ｍｅｔ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比（Ｄ－Ｍｅｔ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフ。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがともに０．０５未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－ロイシン濃度（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｌ－ロイシン濃度（Ｌ－Ｌｅｕ）及び両方の合計（Ｌｅｕ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－ロイシン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比（Ｄ－Ｌｅｕ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比（Ｄ－Ｌｅｕ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフ。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが、それぞれ、０．０５未満及び０．０１未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アスパラギン酸濃度（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｌ－アスパラギン酸濃度（Ｌ－Ａｓｐ）及び両方の合計（Ａｓｐ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－アスパラギン酸濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより低く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満であった。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全アスパラギン酸濃度に対するＤ－アスパラギン酸濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｌ－フェニルアラニン濃度（Ｌ－Ｐｈｅ）及び両方の合計（Ｐｈｅ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全フェニルアラニン濃度に対するＤ－フェニルアラニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフ。縦軸は、％Ｄである。 アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比（Ｄ－Ｐｈｅ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比（Ｄ－Ｐｈｅ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフ。尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満であった。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ＋、以下、「ＤＡＯ＋／＋」という。）個体３匹のうち１匹目（ＤＡＯ＋／＋　１）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ＋、以下、「ＤＡＯ＋／＋」という。）個体３匹のうち２匹目（ＤＡＯ＋／＋　２）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ＋、以下、「ＤＡＯ＋／＋」という。）個体３匹のうち３匹目（ＤＡＯ＋／＋　３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ－、以下、「ＤＡＯ－／－」という。）個体３匹のうち１匹目（ＤＡＯ－／－　１）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ－、以下、「ＤＡＯ－／－」という。）個体３匹のうち２匹目（ＤＡＯ－／－　２）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ－、以下、「ＤＡＯ－／－」という。）個体３匹のうち３匹目（ＤＡＯ－／－　３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表。 Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＤ－アスパラギン濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ａｓｎ）を比較した表。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型マウス（ＤＤＯ＋）個体４匹のうち１匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型マウス（ＤＤＯ＋）個体４匹のうち２匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型マウス（ＤＤＯ＋）個体４匹のうち３匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型マウス（ＤＤＯ＋）個体４匹のうち４匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（ＤＤＯ－）個体４匹のうち１匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（ＤＤＯ－）個体４匹のうち２匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（ＤＤＯ－）個体４匹のうち３匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（ＤＤＯ－）個体４匹のうち４匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０５未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０５未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０５未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０５未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０１未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。有意差は、ｐが０．０５未満。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフ。 各種疾患患者のそれぞれ最初のサンプルについてのＤ－アミノ酸の分析結果をまとめた追加の表。 各種疾患患者のそれぞれ最初のサンプルについてのＬ－アミノ酸の分析結果をまとめた追加の表。
　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
　以下の実施例は、アメリカ国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ））のガイドラインに従って資生堂リサーチセンターの倫理委員会によって承認された後に実施された。
　各種疾患患者由来のサンプルのアミノ酸立体異性体の全分析（１）
　１．材料及び方法
　（１）サンプル
　健常人及び各種疾患由来の血清サンプルは、米国バイオサーブ社（ＢｉｏＳｅｒｖｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｌｔｄ、米国、メリーランド州、Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ）から入手された。前記サンプルは、現在バイオサーブ社に買収されたＧｅｎｏｍｉｃＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｉｎｃ．社によって採取された。採血は患者の医師による管理の下で行われ、米国の医療保険の相互運用性及び説明責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）に沿った書類による採血者の同意が確認済みである。今回の分析に用いられたサンプルの提供者のうち健常者は、男女各４名全員が５０歳の白人で、検討対象疾患の既往歴のない者が選ばれた。腎臓病患者は糖尿病を併発していない者が選ばれた。認知症患者は、アルツハイマー病協会による７段階の重症度のステージ５（日々の生活に他人の補助が必要となり始める段階）と診断された男性４名が選ばれた。大腸がん患者はステージＩＩと診断された男性４名が選ばれた。乳がん患者は、片側のみで発生しステージＩＩと診断された女性４名が選ばれた。前立腺がんはステージＩＩと診断され、ホルモン療法及び化学療法を受けていない男性が選ばれた。肝障害患者は、片側のみで発生しステージＩＩと診断された女性が選ばれた。骨粗鬆症患者は女性が選ばれた。卵巣がん患者はステージＩＩの女性が選ばれた。今回の分析に用いられたサンプルの提供者には喫煙者は除外された。
　（２）アミノ酸立体異性体の全分析
　前記サンプルは、財津らが開発したＤ、Ｌ－アミノ酸一斉高感度分析システム（特許第４２９１６２８号）によるアミノ酸立体異性体の全分析に供された。各アミノ酸の分析条件の詳細は、Ｈａｍａｓｅ　Ｋ．ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ，　１１４３：１０５（２００７）、ＨａｍａｓｅＫ．、ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ，　１２１７：１０５６（２０１０）、ＭｉｙｏｓｈｉＹ．、ら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ，　８７９：３１８４（２０１１）に説明される。簡潔には、サンプルは、その２０倍の容積のメタノール中で、４°Ｃ、３，５００ｒｐｍ、２分間マイクロホモジナイジングシステム（Ｍｉｃｒｏ　Ｓｍａｓｈ　ＭＳ－１００Ｒ、株式会社トミー精工）でホモジナイズされ、２０，４００×ｇで１０分間遠心された。遠心上清１０μＬは、４０°Ｃで減圧乾燥された。残渣に２０μＬの２００ｍＭホウ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８．０）と、４０ｍＭ　ＮＢＤ－Ｆ（４－フルオロ－７－ニトロ－２，１，３－ベンゾオキサジアゾール、東京化成工業株式会社）の無水シアン化メチル溶液の５μＬとが添加され、６０°Ｃ、２分間加熱された。反応後、７５μＬの２％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸水溶液が添加された。この混合液の２μＬがＨＰＬＣシステム（ＮＡＮＯＳＰＡＣＥ　ＳＩ－２、株式会社資生堂、Ｓａｓａｂｅ，Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１０９：６２７（２０１２）の補足情報を参照せよ。）に供された。簡潔には、逆相分離用分析カラムは、４０°Ｃに保温された自社製のモノリシックＯＤＳカラム（内径７５９ｍｍ×０．５３ｍｍ、石英ガラス毛管に装填）が用いられた。移動相は、シアン化メチル－トリフルオロ酢酸－水（容積比５：０．０５：９５）が用いられた。流速は毎分３５μＬであった。逆相分離の後、１５０μＬループが装着されたカラム切り替えバルブを経由して、目的のＮＢＤ化アミノ酸分画は自動的にエナンチオ選択性カラムに移された。エナンチオマー分離には、キラルセレクターとして（Ｓ）－ナフチルグリシンを用いるスミキラルＯＡ－２５００Ｓカラム（内径２５０ｍｍ×１．５ｍｍＩ．Ｄ．、自家充填、材料は株式会社住化分析センター製）が使用された。蛍光検出は、励起波長４７０ｎｍ、検出波長５３０ｎｍで実行された。
　２．結果
　図１は、健常者及び各種疾患患者のそれぞれ最初のサンプルについてのＤ－アミノ酸の分析結果をまとめた表である。表の各行はサンプル提供者の疾患名を表し、各列は分析されたＤ－アミノ酸の種類を表す。表の中でＮＤは検出限界以下であったことを表す。トリプトファン、システイン及びチロシンの列の粗い右上がりのハッチングはこれらのアミノ酸は今回のサンプルでは定量できなかったことを表す。上向き矢印はこのサンプルでは第１行の健常男性のサンプルよりアミノ酸量が高いことを表し、下向き矢印は第１行の健常男性のサンプルよりこのサンプルのアミノ酸量が低いことを表す。細かい右上がりのハッチング（例えば、腎臓病サンプルのアスパラギン等）は、これらのサンプルのアミノ酸量の前記健常男性のサンプルのアミノ酸量に対する割合が２倍以上（上向き矢印）か、あるいは、１／２以下（下向き矢印）かを表す。粗い左上がりのハッチング（例えば、腎臓病サンプルのグルタミン等）は、これらのサンプルのアミノ酸量の前記健常男性のサンプルのアミノ酸量に対する割合が２倍未満（上向き矢印）か、あるいは、１／２未満（下向き矢印）かを表す。
　図１の腎臓病患者サンプルで健常男性サンプルより血清濃度が高くなるＤ－アミノ酸のうち、セリン、アロＤ－スレオニン、スレオニン、アラニン、プロリン及びフェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素の基質であるが、アスパラギン酸及びグルタミンはＤ－アスパラギン酸酸化酵素の基質である。また、同じＤ－アミノ酸酸化酵素の基質でも、ヒスチジン、アルギニン、メチル、バリン、アロＤ－イソロイシン及びイソロイシンは腎臓病患者と健常男性とで血清濃度に変化がないと判断された。また、アスパラギン酸及びグルタミン酸はＤ－アスパラギン酸酸化酵素の基質であるが、腎臓病患者と健常男性とで血清濃度に変化がないと判断された。そこで、腎臓病患者サンプルで健常男性サンプルより血清濃度が高くなるＤ－アミノ酸の種類は従来知られてきたＤ－アミノ酸の代謝酵素の特異性だけでは説明ができない。前立腺がん患者サンプルで健常男性サンプルより血清濃度が高くなるＤ－アミノ酸がＤ－ヒスチジン及びＤ－アスパラギンであること、及び、骨粗鬆症患者サンプルで健常男性サンプルより血清濃度が高くなるＤ－アミノ酸がＤ－アスパラギンであることについても従来知られてきたＤ－アミノ酸の代謝酵素の特異性だけでは説明ができない。Ｄ－アミノ酸酸化酵素及びＤ－アスパラギン酸酸化酵素はともに腎臓の近位尿細管に局在することが知られている。そこで、腎臓病の患者ではこれらの酵素活性が低下することは予測できる。その場合、これらの酵素の基質となるＤ－アミノ酸すべての分解が抑制され、体内量が上昇すると考えられる。しかし、実際には全てのＤ－アミノ酸ではなく、一部のＤ－アミノ酸だけの体内量が上昇するに留まる。その機序は不明である。これらの疾患特異的なＤ－アミノ酸の血清濃度の変化は、疾患の診断に利用できることが示唆された。
　図１から、大半の種類のＤ－アミノ酸は、健常男性と各種疾患患者とで差がないが、一部のアミノ酸では健常男性と比較して２倍以上高いか１／２以下低いものがみられた。そこでまず、比較的多くのＤ－アミノ酸で健常男性サンプルと比較して大きい変化がみられた腎臓病に注目して、同じ疾患について４名の提供者のサンプルが詳しく調べられた。
　図２－１、図２－２、図２－３、図２－４、図２－５及び図２－６は、それぞれ、Ｄ－セリン、Ｌ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｌ－スレオニン、Ｄ－アラニン及びＬ－アラニンの血清濃度の疾患サンプルごとの分布図である。サンプル１は健常男性、サンプル２は腎臓病患者、サンプル３は認知症患者、サンプル４は健常女性、サンプル５は大腸がん患者、そして、サンプル６は乳がん患者である。図２－１では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのＤ－セリンの血清濃度はほぼ一定で低いのに対し、腎臓病患者のＤ－セリンの血清濃度は他のサンプルより少なくとも２倍以上高いことが示された。図２－３では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのＤ－スレオニンの血清濃度はほぼ一定で低いのに対し、腎臓病患者のＤ－スレオニンの血清濃度は他のサンプルより少なくとも２倍以上高いことが示された。同様に図２－５では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのＤ－アラニンの血清濃度はほぼ一定で低いのに対し、腎臓病患者のＤ－アラニンの血清濃度は４名のうち３名については他のサンプルより少なくとも２倍以上高いことが示された。これに対し図２－２、図２－４及び図２－６では、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン及びＬ－アラニンのいずれも、健常者と今回調べた４種類の疾患患者とのアミノ酸量の分布は個体差により分布範囲が広がった。そして腎臓病患者のサンプルでは健常者の男女と、他の疾患患者とのサンプルに比べてやや低い傾向はあるが、全体として、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン及びＤ－アラニンのような顕著な相違は認められなかった。
　図２－１ないし図２－６から明らかになるＤ－アミノ酸血清濃度の特徴は、健常者の男性及び女性のサンプルではいずれのＤ－アミノ酸の血清濃度が非常に低く、偏差も小さい点である。この点は他のＤ－アミノ酸についても同じである（データは示されない）。また、患者サンプルのＤ－アミノ酸の血清濃度は、疾患と相関する変動が認められない場合には、健常者の場合と同様に、いずれのＤ－アミノ酸についても血清濃度が非常に低い量で、偏差も小さい。これは診断の際に偽陽性が少ないことにつながるので、Ｄ－アミノ酸量による診断の有用性の重要な根拠となる。また、疾患特異的に変化するＤ－アミノ酸量を他の因子と組み合わせたパラメーターで表すとき、該他の因子そのものが前記Ｄ－アミノ酸量より疾患との相関が低い場合には、実質的に前記Ｄ－アミノ酸量だけに基づいて診断するのと同じ診断特性しか得られない。
　図３－１、図３－２及び図３－３は、それぞれ、セリン、スレオニン及びアラニンのサンプルのＤ－体及びＬ－体の量の和に対するＤ－体量の百分率（％Ｄ）の分布図である。図３－１では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのセリンの全血清濃度に占めるＤ－セリンの血清濃度の百分率はほぼ一定で低いのに対し、腎臓病患者のセリンの全血清濃度に占めるＤ－セリンの血清濃度の百分率は他のサンプルより４倍以上高いことが示された。図３－２では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのスレオニンの全血清濃度に占めるＤ－スレオニンの血清濃度の百分率はほぼ一定で低いのに対し、腎臓病患者のスレオニンの全血清濃度に占めるＤ－スレオニンの血清濃度の百分率は他のサンプルより４倍以上高いことが示された。同様に図３－３では、健常者の男性及び女性と、認知症、大腸がん及び乳がんとのアラニンの全血清濃度に占めるＤ－アラニンの血清濃度の百分率はほぼ一定な低い値であるのに対し、腎臓病患者のアラニンの全血清濃度に占めるＤ－アラニンの血清濃度の百分率は、４名のうち３名については、他のサンプルより４倍以上高いことが示された。
　マウス疾患モデルでの由来のサンプルのアミノ酸立体異性体の全分析
１．材料と方法
１．１　アミノ酸立体異性体の全分析
　アミノ酸立体異性体の全分析は、実施例１で説明されたＤ、Ｌ－アミノ酸一斉高感度分析システムと同様のシステムが用いられたが、送液ポンプにダンパーを有さないＭＳを用いたこと、ＭＰＳと低用量デガッサーとの採用により、２次元目の移動相を幅広く選択できるようになったことが異なる。
　１．２　マウス疾患モデル
　本実施例で用いられたマウス疾患モデルは、拡張型心筋症モデルマウス、卵巣摘出による更年期モデルマウス、肉腫移植マウス、アルツハイマー病モデルマウス、ＤＡＯ欠損マウス及びＤＤＯ欠損マウスである。以下に詳しくそれぞれのマウスについて説明する。マウスを用いる実験は九州大学大学院薬学研究院にて行われた。
　１．２．１　拡張型心筋症モデルマウス
　心血管障害のモデルマウスとして、心筋構成タンパク質の１種である、ＭＬＰ（ｍｕｓｃｌｅ　ＬＩＭ　ｐｒｏｔｅｉｎ）が欠損した、ＭＬＰ－ＫＯマウス（Ａｒｂｅｒ，　Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ、８８：３９３（１９９７））が用いられた。拡張型心筋症モデルマウス（ＭＬＰ－ＫＯマウス、以下、「疾病」という。）雄８週齢３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）雄８週齢４匹との尿サンプルを得て、その全アミノ酸光学異性体含量が分析された。
　１．２．２　更年期モデルマウス
　更年期モデルマウスとして、ＨＲ－１マウス９週齢雌から麻酔下で卵巣が摘出され、皮膚が縫合された。同じ週齢の雌マウスから、卵巣摘出を行わずに、皮膚の切開及び縫合のみを行った対照実験のマウスも用意された。施術前と、施術後１週間目ないし４週間目の体重が測定された。対照マウスと比較して体重が増大することが確認された個体が更年期モデルマウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．３　肉腫移植マウス
　肉腫移植マウスとして、２×１０７個の肉腫細胞を移植されたＩＣＲ系雄６週齢マウスが用意された。移植３週間後に外植された腫瘍の成長が確認された個体が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。肉腫移植マウスの対照実験として、同環境で飼育されたＩＣＲ系雄９週齢マウス個体が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．４　アルツハイマー病モデルマウス
　アルツハイマー病モデルマウスとして、アミロイドβ前駆体タンパク質高発現トランスジェニックマウスＴｇ２５７６（Ｈｓｉａｏ、Ｋ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７４：９９（１９９６））のヘミ接合体雄８週齢マウスが尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。Ｃ５７ＢＬ雄８週齢マウスが対照正常マウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．５　Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス
　Ｄ－アミノ酸代謝関連酵素活性変化モデルの１つとして、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス（Ｋｏｎｎｏ、　Ｒ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１０３：２７７（１９８３）、ｄｄＹ／ＤＡＯ－、以下、「ＤＡＯ－／－」という。）雄８週齢の個体が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス雄８週齢の個体が、対照マウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．６　Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス
　Ｄ－アミノ酸代謝関連酵素活性変化モデルの１つとして、Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（Ｈｕａｎｇ、Ａ．Ｓ．ら、Ｊ．　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２：２８１４（２００６）、以下、「ＤＤＯ－」という。）雄８週齢の個体が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型（以下、「ＤＤＯ＋」という。）雄８週齢個体が、対照マウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．７　フェニルケトン尿症疾患モデルマウス
　アミノ酸代謝障害モデルマウスの１つとして、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙ、Ａ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１３４：１２０５（１９９３））のＳＰＦ条件で飼育された２５－３５週齢の雄５匹が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。同一遺伝背景の野生型アレルのホモ接合体のＳＰＦ条件で飼育された２５－３５週齢の雄５匹が、対照マウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　１．２．８　メープルシロップ尿症疾患モデルマウス
　アミノ酸代謝障害モデルマウスの１つとして、（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、Ｈｏｍａｎｉｃｓ　Ｇ．Ｅ．ら、ＢＭＣ　Ｍｅｄ　Ｇｅｎｅｔ、７：３３（２００６）のＳＰＦ条件で飼育された８－１０週齢の雄５匹が尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。同一遺伝背景の野生型アレルのホモ接合体のＳＰＦ条件で飼育された８－１０週齢の雄５匹が、対照マウスとして尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。一部の実験では、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈのヘテロ接合体のＳＰＦ条件で飼育された８－１０週齢の雄５匹が中間型として尿中全アミノ酸光学異性体含量分析に供された。
　２．結果
　２．１　拡張型心筋症モデルマウス
　図４－１は、拡張型心筋症モデルマウス（ＭＬＰ－ＫＯマウス、以下、「疾病」という。）３匹と、対照正常マウス（以下、「正常」という。）４匹との尿中のＤ－セリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｄ－セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－２は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＬ－セリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフを示す。縦軸は、Ｌ－セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－３は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全セリン濃度（Ｄ－セリン濃度及びＬ－セリン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、全セリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－４は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－セリン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフを示す。縦軸は、％Ｄである。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０２未満であった。図４－５は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＤ－アルギニン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｄ－アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－６は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＬ－アルギニン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｌ－アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。図４－７は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全アルギニン濃度（Ｄ－アルギニン濃度及びＬ－アルギニン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、全アルギニン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－８は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＤ－グルタミン酸濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｄ－グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０２未満であった。図４－９は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＬ－グルタミン酸濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｌ－グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－１０は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全グルタミン酸濃度（Ｄ－グルタミン酸濃度及びＬ－グルタミン酸濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、全グルタミン酸濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－１１は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＤ－プロリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｄ－プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。図４－１２は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＬ－プロリン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、Ｌ－プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－１３は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全プロリン濃度（Ｄ－プロリン濃度及びＬ－プロリン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、全プロリン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－１４は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＤ－リジン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフを示す。縦軸は、Ｄ－リジン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。正常と疾病との有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。図４－１５は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中のＬ－リジン濃度の平均値及び標準誤差の棒グラフを示す。縦軸は、Ｌ－リジン濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図４－１６は、拡張型心筋症モデルマウス３匹と、対照正常マウス４匹との尿中の全リジン濃度（Ｄ－リジン濃度及びＬ－リジン濃度の和）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。これらの結果から、Ｄ－セリン濃度は疾病群で正常群より低い傾向はあったが、有意差は認められなかった。しかし％Ｄで評価すると、Ｄ－セリンの％Ｄは、疾病群で正常群より有意に低かった。Ｌ－アルギニン濃度は、疾病群で正常群より有意に低かった。Ｄ－グルタミン酸濃度は、疾病群で正常群より有意に高かった。Ｄ－プロリン濃度は疾病群で正常群より有意に低かった。Ｄ－リジン濃度は疾病群で正常群より有意に低かった。
　２．２　更年期モデルマウス
　図５－１は、９週齢ＨＲ－１マウスから卵巣が摘出された更年期モデルマウス（以下、「ＯＶＸ」という。）１２匹と、同じ週齢の雌マウスから、卵巣摘出を行わずに、皮膚の切開及び縫合のみを行った対照マウス（以下、「ｓｈａｍ」という。）６匹との体重の平均値及び標準偏差の変化を示すグラフである。縦軸はマウスの体重（グラム）を示す。黒塗り及び斜線ハッチングの棒グラフは、それぞれ、施術前の９週齢マウスと、施術後１週目（１０週齢）、２週目（１１週齢）、３週目（１２週齢）、４週目（１３週齢）の更年期モデルマウス（ＯＶＸ）及び対照マウス（ｓｈａｍ）の体重の平均値及び標準偏差を示す。更年期モデルマウス（ＯＶＸ）及び対照マウス（ｓｈａｍ）との体重の有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満（＊）又は０．０１未満（＊＊）であった。卵巣が摘出された更年期モデルマウスでは術後２週目から体重が対照マウスより有意に増加し、更年期モデルマウス作製に成功したことを示す。
　図５－２、５－３及び５－４は、それぞれ、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹のうち１匹目（ＯＶＸ－３）、２匹目（ＯＶＸ－４）及び３匹目（ＯＶＸ－５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。図５－５、５－６、５－７及び５－８は、それぞれ、対照マウス（ｓｈａｍ）４匹のうち１匹目（Ｓｈａｍ－１６）、２匹目（Ｓｈａｍ－１７）、３匹目（Ｓｈａｍ－１９）及び４匹目（Ｓｈａｍ－２０）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。図５－９は、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表である。Ｄ－アスパラギン酸は更年期モデルマウス（ＯＶＸ）よりも対照マウス（ｓｈａｍ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１５であった。図５－１０は、年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表である。Ｌ－ヒスチジン及びＬ－フェニルアラニンは対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがそれぞれ０．０１７及び０．０３７であった。図５－１１は、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表である。スレオニン及びイソロイシンについては、生体内でのＤ－体がアロ体となるため、％Ｄは、Ｄ－アロ体濃度及びＬ－体濃度の和に対するＤ－アロ体濃度の百分率として評価された。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００２であった。図５－１２は、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表である。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００５であった。図５－１３は、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表である。Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１７であった。図５－１４は、更年期モデルマウス（ＯＶＸ）３匹及び対照マウス（ｓｈａｍ）４匹の尿中のＤ－グルタミン酸濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ｇｌｕ）を比較した表である。Ｄ－アスパラギン酸は酸性Ｄ－アミノ酸なので、同様の代謝を受けると考えられるＤ－グルタミン酸濃度で補正後評価された。％Ｄ／Ｄ－Ｇｌｕでも、Ｄ－アスパラギン酸は対照マウス（ｓｈａｍ）よりも更年期モデルマウス（ＯＶＸ）が低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．００６であった。
　２．３　肉腫移植マウス
　図６－１、６－２及び６－３は、それぞれ、２×１０７個の肉腫細胞を移植されたＩＣＲ系雄６週齢マウスで、移植３週間後に外植された腫瘍の成長が確認された個体３匹のうち１匹目（Ｓ３）、２匹目（Ｓ４）及び３匹目（Ｓ５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。図６－４、６－５及び６－６は、それぞれ、肉腫移植マウスの対照実験として同環境で飼育されたＩＣＲ系雄９週齢マウス個体３匹のうち１匹目（Ｃ３）、２匹目（Ｃ４）及び３匹目（Ｃ５）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。図６－７は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表である。図６－８は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表である。図６－９は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表である。肉腫移植マウスのセリンの％Ｄは対照マウスより低く、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１６であった。図６－１０は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表である。図６－１１は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表である。Ｄ－アスパラギン及びＤ－アルギニンは対照マウスよりも肉腫移植マウスが高い傾向があり、Ｄ－アルギニンの有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０３５であった。図６－１２は、肉腫移植マウス３匹（Ｓ３、Ｓ４及びＳ５）及び対照マウス（Ｃ３、Ｃ４及びＣ５）３匹の尿中のＤ－アスパラギン濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ａｓｎ）を比較した表である。Ｄ－アスパラギンは哺乳類尿中に比較的高濃度に存在すること、及び、全Ｄ－アミノ酸濃度に対する比率が最も安定していたことのために、尿中濃度の補正の指標として用いられた。Ｄ－アルギニンは対照マウスよりも肉腫移植マウスが高い傾向があり、有意差は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１６であった。
　２．４　アルツハイマー病モデルマウス
　図７－１は、アルツハイマー病モデルマウス（アミロイドβ前駆体タンパク質高発現トランスジェニックマウスＴｇ２５７６ヘミ接合体雄８週齢マウス、以下、「ｈｅｍｉ」という。）３匹と、対照正常マウス（Ｃ５７ＢＬ、以下、「Ｗｉｌｄ」という。）３匹との尿中のＤ－セリン濃度（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｌ－セリン濃度（Ｌ－Ｓｅｒ）及び両方の合計（Ｓｅｒ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図７－２は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－セリン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、％Ｄである。図７－３は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－セリンの相対比（Ｄ－Ｓｅｒ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－セリンの相対比（Ｄ－Ｓｅｒ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフである。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－セリンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－セリンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがともに０．０１未満であった。図７－４は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アラニン濃度（Ｄ－Ａｌａ）、Ｌ－アラニン濃度（Ｌ－Ａｌａ）及び両方の合計（Ａｌａ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－アラニン濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。図７－５は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全アラニン濃度に対するＤ－アラニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、％Ｄである。尿中の全アラニン濃度に対するＤ－アラニン濃度の百分率（％Ｄ）は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０１未満であった。図７－６は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－メチオニン濃度（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｌ－メチオニン濃度（Ｌ－Ｍｅｔ）及び両方の合計（Ｍｅｔ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－Ｍｅｔ濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより高い傾向があった。図７－７は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－メチオニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、％Ｄである。図７－８は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比（Ｄ－Ｍｅｔ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比（Ｄ－Ｍｅｔ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフである。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－メチオニンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰがともに０．０５未満であった。図７－９は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－ロイシン濃度（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｌ－ロイシン濃度（Ｌ－Ｌｅｕ）及び両方の合計（Ｌｅｕ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図７－１０は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全セリン濃度に対するＤ－ロイシン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。図７－１１は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比（Ｄ－Ｌｅｕ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比（Ｄ－Ｌｅｕ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフである。尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比も、尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－ロイシンの相対比も、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが、それぞれ、０．０５未満及び０．０１未満であった。図７－１２は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アスパラギン酸濃度（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｌ－アスパラギン酸濃度（Ｌ－Ａｓｐ）及び両方の合計（Ａｓｐ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。尿中のＤ－アスパラギン酸濃度は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照正常マウスより低く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満であった。図７－１３は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全アスパラギン酸濃度に対するＤ－アスパラギン酸濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、％Ｄである。図７－１４は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｌ－フェニルアラニン濃度（Ｌ－Ｐｈｅ）及び両方の合計（Ｐｈｅ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。縦軸は、濃度（ナノモル／ｍＬ）である。図７－１５は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中の全フェニルアラニン濃度に対するＤ－フェニルアラニン濃度の百分率（％Ｄ）の平均値及び標準誤差の棒グラフである。図７－１６は、アルツハイマー病モデルマウス（ｈｅｍｉ）３匹と、対照正常マウス（Ｗｉｌｄ）３匹との尿中のＤ－アロ－スレオニン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比（Ｄ－Ｐｈｅ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｔｈｒ）又は尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比（Ｄ－Ｐｈｅ／Ｄ－ａｌｌｏ－Ｉｌｅ）のグラフである。尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度に対するＤ－フェニルアラニンの相対比は、アルツハイマー病モデルマウスのほうが対照マウスよりも高く、有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定でＰが０．０５未満であった。
　２．５　Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス
　図８－１、８－２及び８－３は、それぞれＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ＋、以下、「ＤＡＯ＋／＋」という。）個体３匹のうち１匹目（ＤＡＯ＋／＋　１）、２匹目（ＤＡＯ＋／＋　２）及び３匹目（ＤＡＯ＋／＋　３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。図８－４、８－５及び８－６は、それぞれ、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス（ｄｄＹ／ＤＡＯ－、以下、「ＤＡＯ－／－」という。）個体３匹のうち１匹目（ＤＡＯ－／－　１）、２匹目（ＤＡＯ－／－　２）及び３匹目（ＤＡＯ－／－　３）の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す表である。グリシンは光学異性体が存在しないので、Ｌ体の欄に記載された。アミノ酸はすべてＮＢＤ－Ｆにより蛍光誘導体化され、本発明の全アミノ酸光学異性体含量分析装置を用いて解析された。トリプトファンはＮＢＤ誘導体の感度は低いため、今回の解析ではｎｄとされた。システインについては、空気酸化によりシスチンが生成するため、システインとしての含量は極めて低い。そこで今回の解析ではｎｄとされた。図８－７は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＤ－アミノ酸含量を比較した表である。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。図８－８は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＬ－アミノ酸含量を比較した表である。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。図８－９は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の各アミノ酸のＤ－体濃度及びＬ－体の濃度の和に対するＤ－体濃度の百分率（％Ｄ）を比較した表である。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。図８－１０は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の全Ｌ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｌ）を比較した表である。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。図８－１１は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中の全Ｄ－アミノ酸の濃度の和に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／ｔｏｔａｌ　Ｄ）を比較した表である。図８－１２は、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウス３匹（ＤＡＯ＋／＋　１、ＤＡＯ＋／＋　２及びＤＡＯ＋／＋　３）と、Ｄ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）欠損マウス３匹（ＤＡＯ－／－　１、ＤＡＯ－／－　２及びＤＡＯ－／－　３）と尿中のＤ－アスパラギン濃度に対する各Ｄ－アミノ酸濃度の百分率（％Ｄ／Ｄ－Ａｓｎ）を比較した表である。Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンはＤ－アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）野生型マウスよりもＤＡＯ酵素欠損マウスが有意に高かった。
　２．６　Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス
　図９－１、９－２、９－３及び９－４は、それぞれ、Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）野生型マウス（ＤＤＯ＋）個体４匹のうち１匹目、２匹目、３匹目及び４３匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図である。図９－５、９－６、９－７及び９－８は、それぞれ、Ｄ－アスパラギン酸酸化酵素（ＤＤＯ）欠損マウス（ＤＤＯ－）個体４匹のうち１匹目、２匹目、３匹目及び４匹目の尿中全アミノ酸光学異性体含量分析結果を示す波形図である。ＤＤＯ欠損マウスの尿中には野生型マウスの尿中よりＤ－アスパラギン濃度が高く、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンの濃度も高いことが示された。ＤＤＯ酵素の良好な基質であるＤ－グルタミン酸は、ＤＤＯ欠損マウスの尿中にはほとんど認められなかった。
　以上の２．５及び２．６の結果から、Ｄ－アミノ酸代謝酵素であるＤＡＯ及びＤＤＯの欠損によりそれぞれ、特異的なＤ－アミノ酸の濃度が変化した。すなわち、これらの酵素活性を制御することにより、特異的なＤ－アミノ酸の濃度を制御することができると考えられる。
　２．７　フェニルケトン尿症疾患モデルマウス
　図１０－１は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－２は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－３は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－４は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－５は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。Ｄ－フェニルアラニン濃度は対照マウスよりフェニルケトン尿症疾患モデルマウスで高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１０－６は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－７は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－８は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－９は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１０は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。Ｌ－フェニルアラニンの濃度は、対照マウスよりフェニルケトン尿症疾患モデルマウスが高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。
　図１０－１１は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１２は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１３は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１４は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１５は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１６は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１７は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１８は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－１９は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１０－２０は、フェニルケトン尿症疾患モデルマウス（フェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）突然変異マウス、Ｐａｈｅｎｕ２／Ｐａｈｅｎｕ２、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。Ｌ－フェニルアラニン濃度は、対照マウスよりフェニルケトン尿症疾患モデルマウスで高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。
　２．８　メープルシロップ尿症疾患モデルマウス
　図１１－１は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－２は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－３は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＤ－イソロイシン濃度は、メープルシロップ尿症マウスで対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０５未満であった。図１１－４は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－５は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－６は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＬ－バリン濃度は、メープルシロップ尿症マウスのほうが対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０１未満である。図１１－７は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度はメープルシロップ尿症マウスのほうが対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１１－８は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＬ－イソロイシン濃度は、メープルシロップ尿症マウスのほうが対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１１－９は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＬ－ロイシン濃度は、メープルシロップ尿症マウスのほうが対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０５未満であった。図１１－１０は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－１１は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。血漿中のＤ－イソロイシン濃度は、メープルシロップ尿症マウスのほうが対照マウスより高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１１－１２は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－１３は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－１４は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１１－１５は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の血漿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。
　図１２－１は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－２は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－３は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＤ－イソロイシン濃度は対照マウスよりメープルシロップ尿症マウスで高く、有意差は、ｐが０．０５未満であった。図１２－４は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－５は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－フェニルアラニン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－６は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＬ－バリン濃度は対照マウスよりメープルシロップ尿症マウスで高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１２－７は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度は、対照マウスよりメープルシロップ尿症マウスで高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１２－８は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＬ－イソロイシン濃度は対照マウスよりメープルシロップ尿症マウスで高く、有意差は、ｐが０．０５未満であった。図１２－９は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、黒塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＬ－ロイシン濃度は対照マウスよりメープルシロップ尿症マウスで高く、有意差は、ｐが０．０１未満であった。図１２－１１は、メープルシロップ尿症マウス中間型（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＤ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。尿中のＤ－イソロイシン濃度は対照マウスよりメープルシロップ尿症マウス中間型で高く、有意差は、ｐが０．０５未満であった。図１２－１２は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－バリン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－１３は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－アロ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－１４は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－イソロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。図１２－１５は、メープルシロップ尿症マウス（分岐鎖アルファ－ケト酸脱水素酵素（ＢＣＫＤＨ）突然変異マウス、＋／Ｄｂｔｔｍ１Ｇｅｈ、灰色塗り）及び対照マウス（白塗り）各５匹の尿中のＬ－ロイシン濃度（ナノモル／ｍＬ）及び標準誤差を表す棒グラフである。
　各種疾患患者由来のサンプルのアミノ酸立体異性体の全分析（２）
１．材料と方法
　（１）サンプル
　実施例１と同様に、各種疾患由来の血清サンプルは、米国バイオサーブ社（ＢｉｏＳｅｒｖｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｌｔｄ、米国、メリーランド州、Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ）から入手された。前記サンプルは、現在バイオサーブ社に買収されたＧｅｎｏｍｉｃＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｉｎｃ．社によって採取された。採血は患者の医師による管理の下で行われ、米国の医療保険の相互運用性及び説明責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）に沿った書類による採血者の同意が確認済みである。関節リウマチサンプルは、多少可動な疾患状態の４９才の白人男性由来であった。腎臓がんサンプルは、ステージＩの４７才のベトナム人男性由来であった。肺がんサンプルは、ステージＩの６５才のベトナム人男性由来であった。心血管疾患サンプルは、４３才の白人男性由来であった。多発性硬化症サンプルは、再発寛解型の３３才の白人男性由来であった。急性骨髄性白血病サンプルは、１６才男性由来であった。リンパ腫サンプルは、４９才ベトナム人女性由来であった。乾癬サンプルは、４０才の白人男性由来であった。糖尿病サンプルは、５０才白人男性由来であった。全身性エリテマトーテスサンプルは３８才白人女性由来であった。
　（２）アミノ酸立体異性体の全分析
　前記サンプルのアミノ酸立体異性体の全分析は実施例１と同様に実施された。
　２．結果
　実施例３の疾患サンプルの解析結果のうちＬ－アミノ酸については図１３－１に、Ｄ－アミノ酸については図１３－２にそれぞれ分析結果をまとめた。実施例１と同様に、表の各行はサンプル提供者の疾患名を表し、各列は分析されたＤ－アミノ酸の種類を表す。表の中でＮＤは検出限界以下であったことを表す。上向き矢印はこのサンプルでは第１行の健常男性のサンプルよりアミノ酸量が高いことを表し、下向き矢印は第１行の健常男性のサンプルよりこのサンプルのアミノ酸量が低いことを表す。細かい右上がりのハッチングは、これらのサンプルのアミノ酸量の前記健常男性のサンプルのアミノ酸量に対する割合が２倍以上（上向き矢印）か、あるいは、１／２以下（下向き矢印）かを表す。粗い左上がりのハッチングは、これらのサンプルのアミノ酸量の前記健常男性のサンプルのアミノ酸量に対する割合が２倍未満（上向き矢印）か、あるいは、１／２未満（下向き矢印）かを表す。関節リウマチでは、Ｌ－グルタミン酸は対照の健常男性サンプルより血清濃度が上がったが、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインは下がった。腎臓がんでは、Ｄ－セリンは健常男性サンプルより血清濃度が上がったが、Ｄ－アラニンは血清濃度が下がった。肺がんでは、Ｄ－アラニンの血清濃度が健常男性サンプルより下がった。心血管疾患では、Ｌ－アルギニンの血清濃度が健常男性サンプルより下がったが、Ｌ－グルタミン酸は上がった。多発性硬化症では、Ｄ－セリンの血清濃度が健常男性サンプルより上がったが、Ｌ－システインの血清濃度は下がった。急性骨髄性白血病では、Ｌ－システインの血清濃度は健常男性サンプルより下がった。リンパ腫では、Ｌ－システインの血清濃度は健常男性サンプルより下がった。急性リンパ性白血病では、Ｌ－グルタミン酸の血清濃度は健常男性サンプルより上がったが、Ｌ－システイン濃度は下がった。乾癬では、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインの血清濃度は健常男性サンプルより下がった。糖尿病では、Ｄ－アラニン及びＬ－システインの血清濃度は健常男性サンプルより下がったが、Ｌ－グルタミン酸の血清濃度は上がった。なお、全身性エリテマトーテスでは、変化が認められなかった。
　従来のアミノ酸定量分析では、立体異性体が区別できないので、各アミノ酸はそのすべての立体異性体の和として定量されてきた。しかし本発明の診断方法では、立体異性体をそれぞれ別の物質として区別して定量できる。図３－１ないし図３－３に示されるように、Ｄ－体の量をＤ－体及びＬ－体の量の和の百分率（％Ｄ）で表現すると、大腸がん患者のＤ－セリン量（図２－１）と比較して大腸がん患者のセリンの％Ｄ（図３－１）はばらつきが少なくなる。同様に、腎臓病患者のＤ－アラニン量（図２－５）と比較して腎臓病患者のアラニンの％Ｄ（図３－３）はばらつきが少なくなる。これは、Ｄ－アミノ酸量は疾患と相関するとともに、ラセミ化を通じてＬ－体量との相関がありうるので、Ｄ－体及びＬ－体の和で正規化することでＬ－体量の変動の影響を除外することができることが理由として考えられる。このように、疾患と相関性のあるＤ－アミノ酸の量が他の物質の量とも相関性が認められることがある。ここで該他の物質の量そのものは前記疾患との相関性はない場合には、前記Ｄ－アミノ酸の量を前記他の物質の量で正規化するパラメーター（例えば％Ｄ）を作成することでより診断特性を向上させることができる。
　今後多数の疾患についてＤ－アミノ酸量との相関関係の研究が大規模に展開される。これによりさらに多くの疾患でＤ－アミノ酸量に基づく診断技術の開発が期待される。

Claims (12)

  1. 　被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体を分離・定量する手段と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する手段とを含むことを特徴とする、疾患サンプル分析装置。
  2. 　前記判別式は、
    病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
    病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かであることを特徴とする、請求項１に記載の疾患サンプル分析装置。
  3. 　前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力する手段は、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力する手段であることを特徴とする、請求項２に記載の疾患サンプル分析装置。
  4. 　前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸であることを特徴とする、請求項２又は３に記載の疾患サンプル分析装置。
  5. 　被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体を分離・定量する定量分析部と、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る病態指標値演算部と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力する病態情報出力部とを含むことを特徴とする、疾患サンプル分析システム。
  6. 　前記判別式は、
    病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
    病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かであることを特徴とする、請求項５に記載の疾患サンプル分析システム。
  7. 　前記病態情報出力部は、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力することを特徴とする、請求項６に記載の疾患サンプル分析システム。
  8. 　前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸であることを特徴とする、請求項６又は７に記載の疾患サンプル分析システム。
  9. 　被検者の生物学的材料中のアミノ酸立体異性体の量を測定するステップと、該アミノ酸立体異性体の量を判別式に代入して計算し、病態指標値を得る手段と、前記病態指標値に基づいて前記患者の病態情報を出力するステップとを含むことを特徴とする、疾患サンプル分析方法。
  10. 　前記判別式は、
    病態指標値＝（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／（健常者の生物学的材料中の前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）か、
    病態指標値＝［（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）／｛（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の測定値）＋（前記被検者の生物学的材料中の測定値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの測定値）｝］÷［（健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）／｛（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体の基準値）＋（前記健常者の基準値のうち前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体のエナンチオマーの基準値）｝］かであることを特徴とする、請求項９に記載の疾患サンプル分析方法。
  11. 　前記病態指標値に基づいて前記被検者の病態情報を出力するステップは、前記病態指標値が２．０又はこれ以上のとき、前記被検者は前記疾患に罹患しているとの前記被検者の病態情報を出力するステップであることを特徴とする、請求項１０に記載の疾患サンプル分析方法。
  12. 　前記疾患と相関するアミノ酸立体異性体は、前記疾患が腎臓病のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、アロＤ－スレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択される１種類又は２種類以上のアミノ酸であり、前記疾患が前立腺がんのとき、Ｄ－ヒスチジン及び／又はＤ－アスパラギンであり、前記疾患が骨粗鬆症のとき、Ｄ－アスパラギンであり、前記疾患が拡張型心筋症のとき、Ｄ－セリン、Ｌ－アルギニン、Ｄ－グルタミン酸及びＤ－プロリンであり、前記疾患が更年期障害のとき、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－フェニルアラニン及びＤ－アスパラギン酸であり、前記疾患が肉腫のとき、Ｄ－アルギニンであり、前記疾患がアルツハイマー病のとき、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－メチオニン、Ｄ－ロイシン、Ｄ－アスパラギン酸、Ｄ－フェニルアラニン及びＬ－フェニルアラニンであり、ＤＡＯ欠損のとき、Ｄ－セリン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－ロイシン及びＤ－フェニルアラニンであり、ＤＤＯ欠損のとき、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン酸及びＤ－アルギニンであり、フェニルケトン尿症のとき、Ｌ－フェニルアラニンであり、メープルシロップ尿症のとき、Ｌ－バリン、Ｌ－アロ－イソロイシン、Ｄ－イソロイシン、Ｌ－イソロイシン及びＬ－ロイシンであり、関節リウマチのとき、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－グルタミン及びＬ－システインであり、腎臓がんのとき、Ｄ－セリン及びＤ－アラニンであり、肺がんのとき、Ｄ－アラニンであり、心血管疾患のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－グルタミン酸であり、多発性硬化症のとき、Ｄ－セリン及びＬ－システインであり、急性骨髄性白血病のとき、Ｌ－システインであり、リンパ腫のとき、Ｌ－システインであり、急性リンパ性白血病のとき、Ｌ－グルタミン酸及びＬ－システインであり、乾癬のとき、Ｌ－アルギニン及びＬ－システインであり、糖尿病のときＤ－アラニン、Ｌ－システイン及びＬ－グルタミン酸であることを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の疾患サンプル分析方法。
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