ES2799327T3 - Método para diagnosticar asfixia - Google Patents

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Abstract

Un método para el diagnóstico precoz in vitro de la asfixia, caracterizado por la detección cuantitativa en al menos una muestra de sangre humana de tres o más compuestos endógenos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton, excepto lactato, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3 que comprende las etapas de: a) seleccionar dichos compuestos; b) medir al menos uno de los parámetros seleccionados del grupo que consiste en: concentración, nivel o cantidad de cada metabolito individual de dichos compuestos en dicha muestra; y usar y almacenar el conjunto de valores obtenido en una base de datos; c) calibrar dichos valores comparando los parámetros de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia; d) comparar dichos valores medidos en la muestra con los valores calibrados, para evaluar si el paciente es positivo para asfixia o negativo para asfixia.

Description

DESCRIPCIÓN
Método para diagnosticar asfixia
La presente invención se refiere a un método para diagnosticar in vitro la asfixia y trastornos relacionados con hipoxia de acuerdo con la reivindicación 1, a un método para estimar in vitro la duración de la hipoxia en un paciente de acuerdo con la reivindicación 10, y a un método para supervisar in vitro las condiciones hipóxicas de acuerdo con la reivindicación 11.
La invención se refiere, en general, a biomarcadores de asfixia como herramientas del diagnóstico clínico para la detección precoz de la asfixia, a la supervisión de las terapias y a métodos basados en dichos biomarcadores. Antecedentes, asfixia
En los países desarrollados técnicamente, la asfixia perinatal afecta a 3 - 5 de cada 1.000 nacidos vivos, produciéndose posteriormente una encefalopatía hipóxico-isquémica (EHI) moderada o grave en 0,5 - 1 de cada 1.000 nacidos vivos (Levene 1986). La EHI es un problema importante en todo el mundo ya que el 10 - 60 % de los bebés afectados mueren, y al menos un 25 % de los supervivientes tienen secuelas en el desarrollo neurológico a largo plazo (Vannucci 1990). Además, del 5 al 10 % de los recién nacidos requieren algún tipo de asistencia para empezar a respirar después del nacimiento. El objetivo de la resucitación y la supervisión de la resucitación mediante marcadores de diagnóstico apropiados es prevenir la muerte y el deterioro del desarrollo neurológico adverso a largo plazo.
Hasta hace poco tiempo, la terapia se limitaba a medidas preventivas y estrategias de soporte sintomático después de la asfixia. Sin embargo, la asfixia, la hipoxia y los trastornos relacionados son trastornos potencialmente tratables que pueden afectar a la memoria o a otras funciones mentales o a funciones físicas. Ciertos estudios clínicos y experimentales recientes demuestran claramente un efecto beneficioso de la hipotermia como maniobra clínicamente factible que mejora el pronóstico de los neonatos con EHI. Se ha demostrado que un retraso de la hipotermia reduce el potencial neuroprotector o que cuanto antes se inicie la terapia mayor es el efecto positivo. La investigación reciente ha demostrado que el uso de oxígeno extra para la resucitación de recién nacidos influirá negativamente tanto en la morbilidad como en la mortalidad. El oxígeno inhibe la síntesis de proteínas y/o aumenta su degradación y también es un potente activador y/o supresor de varios genes. Además, contribuye a la regulación del transporte a través de la membrana, la señalización intracelular y el inicio de la apoptosis.
Además, en el tratamiento de la enfermedad descompresiva en particular, que se produce después del buceo recreativo o profesional, es común tratar a los pacientes con oxígeno al 100 % en condiciones hiperbáricas en una cámara de presión, para eliminar el exceso de nitrógeno en forma de burbujas después de un accidente de descompresión, que produce síntomas que varían desde picor de la piel a una parálisis completa. En US Navy Treatment Table 6 se publica un protocolo de oxigenoterapia hiperbárica [HBO], que también se usa con ligeras modificaciones en las asociaciones médicas de buceo e hiperbáricas alemana (GTÜM) y austriaca (OGTH). En estos protocolos de tratamiento, un paciente que padece la enfermedad descompresiva se expone de forma intermitente a una presión máxima de 2,8 bares/2,4 bares (que corresponde a una profundidad de agua de 18 m/14 m) durante varias horas y se repiten los tratamientos durante varias semanas, si es necesario.
En el estado de la técnica, se sabe lo siguiente en vista del análisis metabolómico.
Chu et al., Clinical Biochemistry 39 (2006) 203-209 desvelan análisis metabolómicos y bioinformáticos de muestras de orina de neonatos con pruebas clínicas de asfixia severa. Los discriminadores metabolómicos entre un buen pronóstico del neonato y un mal pronóstico del neonato se establecieron usando un análisis de agrupamiento jerárquico. Las concentraciones de ocho ácidos orgánicos presentes en la orina de distintas rutas bioquímicas estaban elevadas y significativamente asociadas con el pronóstico de un problema de desarrollo neurológico con alta sensibilidad y especificidad; el etilmalonato, 3-hidroxi-3-metilglutarato, 2-hidroxi-glutarato y 2-oxo-glutarato se asociaron con un buen pronóstico del neonato, mientras que el glutarato, metilmalonato, 3-hidroxi-butirato y orotato se asociaron con un mal pronóstico.
El documento WO 2007/003343 desvela un método para el análisis de un perfil de fármaco y/o metabolito en una muestra biológica por medio de espectrometría de masas, que implica patrones internos para investigar múltiples metabolitos en muestras clínicas y la comparación de los datos obtenidos con bases de datos.
El documento US 2007/003965 desvela un aparato para el análisis cuantitativo de un perfil de fármaco y/o metabolito en una muestra biológica, que comprende un espectrómetro de masas y una base de datos para almacenar los resultados del análisis.
Mueller et al. “Mass Spectrometric Quantifications Of Organic Acids And Acylcamitines In Early Random Urine Specimens Of Newborns "With Perinatal Complications: Feasibility Study For The Prediction Of The Neuro-,developmental Outcome”, La revista de internet de pediatría y neonatología, vol. 7, n.° 2, 2007 desvela técnicas de GC/MS y MS/MS para la interpretación del metabolismo intermedio en neonatos con complicaciones perinatales (encefalopatía hipóxico-isquémica (EHI) producida por asfixia grave) basándose en 65 parámetros cuantitativos (42 ácidos orgánicos, 22 acilcarnitinas, carnitina libre) y 15 relaciones.
Actualmente, no se dispone de ninguna supervisión fiable de las lesiones inducidas por el oxígeno, en particular las lesiones cerebrales, durante la terapia HBO, sólo se dispone de los signos clínicos de la toxicidad del oxígeno en el SNC, tales como espasmos neuromusculares.
Por consiguiente, existe la necesidad urgente de un tratamiento oportuno y un diagnóstico precoz de la asfixia, en particular en recién nacidos y, como se ha indicado anteriormente, la necesidad urgente de la supervisión de la terapia dados, por ejemplo, los efectos perjudiciales que se producen después del tratamiento debidos a la administración de un exceso de oxígeno.
Estas necesidades se satisfacen mediante un método para diagnosticar in vitro la asfixia de acuerdo con la reivindicación 1, un método para estimar in vitro la duración de la hipoxia en un paciente sometido a asfixia de acuerdo con la reivindicación 10, y un método para supervisar in vitro las condiciones hipóxicas de acuerdo con la reivindicación 11.
En particular, la presente invención se refiere a un método para diagnosticar in vitro la asfixia, que comprende detectar cuantitativamente en al menos una sangre humana tres o más compuestos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton, excepto el lactato, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3, que comprende las etapas de:
a) seleccionar dichos compuestos;
b) medir al menos uno de los parámetros seleccionados del grupo que consiste en: concentración, nivel o cantidad de cada metabolito individual de dicha pluralidad de metabolitos en dicha muestra, y usar y almacenar el conjunto de valores obtenidos en una base de datos;
c) calibrar dichos valores comparando los parámetros de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia;
d) comparar dichos valores medidos en la muestra con los valores calibrados, para evaluar si el paciente es positivo para asfixia o negativo para asfixia.
En una realización preferida de la presente invención, el método se caracteriza porque dicha etapa de calibración se realiza
a) preprocesando matemáticamente dichos valores para reducir los errores técnicos intrínsecos a los procedimientos de medición usados en la reivindicación 1;
b) seleccionando al menos un algoritmo de clasificación adecuado del grupo que consiste en regresión logística, análisis discriminante (diagonal) lineal o cuadrático (LDA, QDA, DLDA, DQDA), perceptrón, análisis discriminante regularizado (RDA) de centroides reducidos, bosques aleatorios (RF), redes neurales (NN), redes Bayesianas, modelos ocultos de Markov, máquinas de vectores de soporte (SVM), mínimos cuadrados parciales generalizados (GPLS), repartición alrededor de meloides (PAM), programación lógica inductiva (ILP), modelos aditivos generalizados, procesos gausianos, regresión de mínimos cuadrados regularizados, mapas autorganizativos (SOM), particionamiento recursivo y árboles de regresión, clasificadores de los K vecinos más cercanos (K-NN), clasificadores difusos, técnica bagging, técnica boosting, y Bayesiano ingenuo; y aplicando dichos algoritmos clasificadores seleccionados a dichos datos preprocesados de la etapa a);
c) entrenándose dichos algoritmos clasificadores de la etapa b) en al menos un conjunto de datos de entrenamiento que contienen datos preprocesados procedentes de sujetos que se dividen en clases de acuerdo con sus condiciones patofisiológicas, fisiológicas, de pronóstico o de respuesta relacionadas con la asfixia, para seleccionar una función clasificadora para asignar dichos datos preprocesados a dichas condiciones;
d) aplicando dichos algoritmos clasificadores entrenados de la etapa c) a un conjunto de datos preprocesados de un sujeto con condiciones patofisiológicas, fisiológicas, de pronóstico o de respuesta relacionadas con la asfixia desconocidas, y usando los algoritmos clasificadores entrenados para predecir la etiqueta de clase de dicho conjunto de datos para diagnosticar el estado de asfixia del sujeto,
en donde dicha etapa de preprocesamiento matemático de la etapa 2 a) de dichos datos de partida obtenidos en la etapa 1 b) se realiza por un método estadístico seleccionado del grupo que consiste en:
en el caso de datos de partida obtenidos por espectroscopía óptica (UV, visible, IR, fluorescencia): corrección del efecto de fondo y/o normalización;
en el caso de datos de partida obtenidos por espectroscopia de masas o espectroscopia de masas acoplada a cromatografía líquida o gaseosa o electroforesis capilar, o por electroforesis en gel 2D, determinación cuantitativa con ELISA o RIA o determinación de concentraciones/cantidades por cuantificación de inmunotransferencias o cuantificación de cantidades de biomoléculas unidas a aptámeros: suavizado, corrección de la línea base, selección de picos y, opcionalmente, transformación adicional de otros datos tal como transformación en logaritmos para realizar una estabilización de las varianzas.
De acuerdo con la presente invención, el método incluye que la asfixia sea asfixia perinatal.
Además, se prefiere que después del preprocesamiento de la etapa 2 a), se introduzca una etapa adicional de selección de características, para encontrar un subconjunto de características de menor dimensión con el máximo poder discriminatorio entre clases;
y/o que dicha selección de características se realice mediante un enfoque de filtro y/o envoltorio;
y/o en donde dicho enfoque de filtro incluye rankers y/o métodos de evaluación de subconjuntos de características; y/o en donde se aplica dicho enfoque de envoltorio, en donde se usa un clasificador para evaluar subconjuntos de atributos.
En una realización preferida de la presente invención, dicho estado patofisiológico corresponde a la etiqueta “enfermo” y dicho estado fisiológico corresponde a la etiqueta “sano” o dicho estado patofisiológico corresponde a diferentes etiquetas de “grados de una enfermedad”, “subtipos de una enfermedad”, diferentes valores de una “puntuación para una enfermedad definida”; dicho estado de pronóstico corresponde a la etiqueta “bueno”, “medio”, “malo” o “que responde terapéuticamente” o “que no responde terapéuticamente” o “que responde mal terapéuticamente”.
Los datos metabólicos de la presente invención preferentemente se obtienen mediante datos de espectrometría de masas de alta resolución.
Además, se prefiere que dichos compuestos endógenos específicos de asfixia sean metabolitos endógenos específicos de asfixia.
Una aplicación útil particular del método de acuerdo con la presente invención es aquella en la que dicha asfixia es encefalopatía hipóxico-isquémica, en la que se imputan los datos que faltan; en la que los datos de partida de las concentraciones de metabolitos se preprocesan usando la transformación logarítmica;
en la que se usan modelos lineales de efectos mixtos para identificar metabolitos que están presentes de forma diferencial;
en la que se selecciona el bosque aleatorio como algoritmo de clasificación adecuado, el entrenamiento del algoritmo de clasificación que incluye concentraciones de metabolito preprocesadas se realiza con replicaciones bootstrap estratificadas, que aplican dicho clasificador de bosque aleatorio entrenado a dicho conjunto de datos de concentración de metabolitos preprocesado de un sujeto que se sospecha que tiene encefalopatía hipóxicoisquémica, y se usa el clasificador entrenado para diagnosticar encefalopatía hipóxico-isquémica.
El método además comprende la inclusión de parámetros de laboratorio convencionales usados comúnmente en química clínica y en unidades de cuidados críticos, en particular, gases sanguíneos, preferentemente oxígeno de sangre arterial, pH sanguíneo, estado basal y lactato, niveles en suero y/o plasma de compuestos bioquímicos de bajo peso molecular usados rutinariamente, enzimas, actividades enzimáticas, receptores de la superficie celular y/o recuentos celulares, en particular recuentos de glóbulos rojos y/o blancos, y recuentos de plaquetas.
Además, la presente invención se refiere a un método para estimar in vitro la duración de la hipoxia en un paciente sometido a asfixia, que comprende detectar cuantitativamente, en al menos una muestra de sangre humana, tres o más compuestos endógenos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton; calibrar los valores detectados preprocesados por medio de análisis de regresión con una duración de hipoxia conocida y aplicar la función de regresión obtenida al conjunto de datos de valores detectados preprocesados de un paciente con hipoxia; y usar la función de regresión para calcular la duración de la hipoxia, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3.
Además, con los métodos de la presente invención, por primera vez se proporciona un método para la supervisión in vitro de las condiciones hipóxicas. Dicho método se caracteriza por la detección cuantitativa en al menos una muestra de sangre humana de tres o más compuestos específicos de asfixia; y el calibrado de los valores detectados preprocesados por medio de entrenamiento de un clasificador de análisis discriminante lineal con conocimiento de las fases de oxigenación y/o lesiones inducidas por oxigeno de un sujeto mamífero y aplicación del clasificador entrenado a dicho conjunto de datos de valores preprocesados de un sujeto con terapia de oxígeno y uso del clasificador entrenado para determinar la fase de oxigenación y/o lesión inducida por oxígeno, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3.
Dicho método de supervisión se caracteriza adicionalmente por que dichas condiciones hipóxicas incluyen asfixia, en particular, asfixia perinatal.
Los métodos de diagnóstico usados actualmente requieren tiempo y un equipo apropiado (MRI; aEEG), con altos costes y a menudo con sensibilidades no satisfactorias. El diagnóstico actual en la rutina clínica se limita a a) información clínica (APGAR), b) uso de información bioquímica básica de pH, lactato y déficit de bases, c) uso de supervisión de la función cerebral (aEEG) o EEG. Sin embargo, este medio de diagnóstico usado tiene limitaciones importantes debido a la reducida área bajo la curva (AUC) y/o al retraso del diagnóstico o a los mayores costes a causa del equipo necesario.
Por lo tanto, existe una urgente necesidad de biomarcadores precoces (inmediatamente después de la asfixia) que permitan un diagnóstico precoz y fiable, la estratificación del riesgo de asfixia per se, la duración y la gravedad de la asfixia y la encefalopatía hipóxico-isquémica inducida por asfixia. Como las diferencias en las concentraciones de metabolitos en los fluidos biológicos y tejidos proporcionan asociaciones con las diversas respuestas fenotípicas, los metabolitos son candidatos de biomarcadores adecuados.
Un logro importante del tratamiento de diagnóstico es discriminar la asfixia transitoria leve y el estrés perinatal de la asfixia grave y/o moderada de larga duración con riesgo de trastornos inducidos por hipoxia.
En una exploración y diagnóstico clásico de pacientes, el médico usa varias herramientas de diagnóstico para diagnosticar en un paciente una cierta enfermedad. Entre estas herramientas, un enfoque de laboratorio de diagnóstico común es la medición de un conjunto de parámetros rutinarios individuales, por ejemplo, en una muestra de sangre. Estos parámetros individuales comprenden, por ejemplo, actividades enzimáticas y concentraciones de enzimas y/o la detección de indicadores metabólicos tales como glucosa y similares. Por lo que respecta a las enfermedades que pueden correlacionarse de forma fácil e inequívoca con un solo parámetro o un pequeño número de parámetros conseguidos por química clínica, estos parámetros han resultado ser herramientas indispensables en la medicina de laboratorio moderna y en el diagnóstico. Suponiendo que pueden proporcionarse valores límite validados de forma excelente, tal como en el caso de la diabetes, en el diagnóstico pueden usarse de forma fiable parámetros químicos clínicos tales como la glucosa en sangre.
En particular, cuando se investigan estados patofisiológicos subyacentes esencialmente a un mecanismo patofisiológico bien conocido del cual resulta el parámetro guía, tal como una alta concentración de glucosa en sangre típicamente refleja un defecto hereditario en el gen de la insulina, dichos parámetros individuales han resultado ser biomarcadores fiables de “sus” enfermedades.
Sin embargo, en situaciones patofisiológicas tales como cánceres o enfermedades desmielinizantes, tales como la esclerosis múltiple, que comparten la ausencia de un parámetro o marcador individual asignable de forma inequívoca, actualmente es difícil o imposible el diagnóstico diferencial a partir de muestras de sangre o de tejidos. La presente invención proporciona métodos para diagnosticar si un sujeto sufrió asfixia, así como la duración/gravedad inmediatamente después del acontecimiento. Dichos métodos comprenden las etapas de: analizar una muestra de sangre humana para determinar los niveles de tres o más biomarcadores para compuestos endógenos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton, excepto lactato, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de la tabla 2 y 3; y comparar los niveles de los compuestos endógenos específicos de asfixia - respectivamente un valor/puntuación compuesta generada sometiendo las concentraciones de compuestos endógenos específicos de asfixia presentes en la muestra a un método de clasificación de tal forma que se produce una ecuación que procesa valores de concentración individuales - para obtener una separación entre ambos grupos (enfermos y sanos).
Dichos métodos comprenden las etapas de: analizar una muestra de sangre humana para determinar los niveles de tres o más compuestos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton, excepto lactato, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de la Tabla 2 y 3; y comparar los niveles de los compuestos endógenos específicos de asfixia con niveles de referencia positivos para asfixia o negativos para asfixia de los compuestos endógenos específicos de asfixia para determinar si el sujeto está desarrollando asfixia.
La presente invención proporciona una solución al problema descrito anteriormente y, en general, se refiere al uso de datos metabolómicos, generados por cuantificación de metabolitos endógenos mediante, pero sin limitación, espectrometría de masas (MS), en particular tecnologías de MS tales como MALDI, ESI, ionización química a presión atmosférica (APCI), y otros métodos, la determinación de concentraciones de metabolitos mediante el uso de tecnologías de MS o métodos alternativos acoplados a separación (LC-MS, GC-MS, CE-MS), la posterior selección de características y/o la combinación de características en clasificadores incluyendo datos moleculares de al menos dos moléculas.
Las concentraciones de los marcadores individuales, analitos y metabolitos, por lo tanto, se miden y comparan con valores de referencia o datos combinados y procesados en puntuaciones, clasificadores, y se comparan con valores de referencia indicando de esta manera estados patológicos etc. con sensibilidades y especificidades superiores en comparación con los procedimientos, parámetros clínicos y biomarcadores conocidos.
Por ejemplo, en algunas realizaciones, la presente invención proporciona un método para diagnosticar asfixia y/o duración/gravedad que comprende: detectar la presencia o ausencia de tres o más (por ejemplo, 5 o más, 10 o más, etc. medidos juntos en un formato múltiple o de panel) metabolitos específicos de asfixia de acuerdo con las Tablas 2 y 3 en una muestra de sangre humana procedente de un sujeto; y diagnosticar la asfixia basándose en la presencia del metabolito específico de asfixia.
En algunas realizaciones, el metabolito específico está presente en muestras de individuos sometidos a asfixia, pero no en muestras de individuos no sometidos a asfixia. En algunas realizaciones, se detectan uno o más marcadores que asfixia adicionales (por ejemplo, en un formato de panel o múltiple) junto con los metabolitos específicos de asfixia.
La presente invención proporciona además un método para seleccionar compuestos, que comprende: poner en contacto un animal, un tejido o una célula que contiene un metabolito específico de asfixia con un compuesto de ensayo; y detectar el nivel del metabolito específico de asfixia. En algunas realizaciones, el método comprende además la etapa de comparar el nivel del metabolito específico de asfixia en presencia del compuesto de ensayo o intervención terapéutica en el nivel del metabolito específico de asfixia en ausencia del metabolito específico de asfixia. En algunas realizaciones, la célula está in vitro, en un mamífero no humano, o ex vivo. En algunas realizaciones, el compuesto de ensayo es una molécula pequeña o un ácido nucleico (por ejemplo, ácido nucleico antisentido, un ARNip o un ARNmi) u oxígeno/xenón o cualquier fármaco neuroprotector que inhiba la expresión de una enzima implicada en la síntesis o degradación de un metabolito específico de asfixia. En algunas realizaciones, el método es un método de alto rendimiento.
En una realización, el biomarcador es un clasificador generado a partir de las concentraciones de metabolito y analito indicadas en las Tablas 2 a 3.
Otros aspectos, ventajas y realizaciones de la presente invención serán evidentes por la descripción de ejemplos, de las secciones experimentales indicadas a continuación y por medio de los dibujos.
La Fig. 1 es un gráfico que muestra los cambios relativos en la concentración de metabolitos en comparación con el control (valor positivo) o con los animales tratados (valores negativos) después de la asfixia (naranja, inicio de asfixia (SA) vs final de asfixia (EA) y después del procedimiento de resucitación (final de resucitación ER) (verde, EA vs ER) para el conjunto seleccionado de derivados de acil carnitina.
* indica los niveles de significado después de la corrección para la multiplicidad de ensayo: valor de q menor de 10-3, ** 10-5 y *** 10-7;
la Fig. 2 es un gráfico que muestra los cambios relativos en la concentración de metabolitos en comparación con el control (valor positivo) o con los animales tratados (valores negativos) después de la asfixia (naranja, SA vs EA) y después del procedimiento de resucitación (verde, EA vs ER) para el conjunto seleccionado de metabolitos que no son derivados de acil carnitina. * indica los niveles de significado después de la corrección para la multiplicidad del ensayo: valor de q menor de 10-3, ** 10-5 y *** 10-7;
la Fig. 3 es un gráfico que muestra los cambios relativos en la concentración de metabolitos en comparación con el control (valor positivo) o con los animales tratados (valores negativos) después de la asfixia (naranja, SA vs EA) y después del procedimiento de resucitación (verde, EA vs ER) para una selección de relaciones de concentración entre metabolitos relacionados biológicamente. * indica niveles de significado después de la corrección para la multiplicidad del ensayo: valor de q menor de 10-3, ** 10-5 y *** 10-7;
la Fig. 4a muestra un mapa de las muestras (puntuaciones) sobre las dos primeras dimensiones de un análisis de componentes principales usando la lista completa de compuestos proporcionada en la Tabla 1. Esto ilustra que la fuente principal de variabilidad en los datos metabolómicos está relacionada claramente con el efecto de asfixia;
la Fig. 4b muestra un mapa de las muestras (puntuaciones) sobre las dos primeras dimensiones de un análisis de componentes principales después de retirar los 30 metabolitos clasificados como superiores de la lista proporcionada en la Tabla 2. Esto ilustra que la varianza asociada a la combinación lineal de los metabolitos más prominentes es necesaria para la detección precoz de asfixia en el sujeto. Esta declaración se confirma por medio de clasificación multivariante (véase también la Fig. 4c);
la Fig. 4c muestra una evaluación del comportamiento de clasificación por medio del método bootstrapping repetido usando el bosque aleatorio con diferente número de compuestos/metabolitos (analitos) clasificados como superiores excluidos del modelo. La exclusión de los metabolitos clasificados como superiores se traduce en una pérdida drástica de eficacia en la clasificación y una mayor varianza de sus estimaciones de error.
La Fig. 5 muestra curvas de características operativas del receptor: un parámetro clínico individual (ritmo cardiaco, HR), un metabolito predictivo de la Tabla 1 y la combinación de estos dos para discriminar sujetos sanos y sujetos sometidos a asfixia;
la Fig. 6 muestra un gráfico que demuestra que pueden usarse metabolitos para determinar el tiempo de hipoxia y, por lo tanto, la reoxigenación: duración de hipoxia real frente a ajustada (en minutos, escala logarítmica) para 26 animales a partir de modelos de regresión que implican el marcador usado comúnmente lactato (círculos negros), la relación Gly/BCAA (triángulos rojos) y una combinación de tres parámetros metabolómicos (cuadrados verdes).
La Fig. 7a muestra el efecto de un protocolo de resucitación con el metabolito decadienil-L-carnitina; y la Fig. 7b muestra el efecto de un protocolo de resucitación con el metabolito propionil-L-carnitina.
Abreviaturas: C4 = butirilcarnitina / isobutirilcarnitina; BCAA=aminoácidos de cadena ramificada; Gly=glicina "Asfixia", en este contexto, se refiere a cualquier estado patológico asociado a la ausencia de oxígeno, saturación de oxígeno o hipoxia. La asfixia puede inducirse de forma pre/perinatal debido a una falta de suministro de oxígeno por el cordón umbilical o puede deberse a cualquier condición asociada con la incapacidad de respirar y/o una ventilación pulmonar inadecuada tal como ahogo, obstrucción respiratoria, choque eléctrico, lesión o la inhalación de gases tóxicos.
Como se usa en el presente documento, la expresión "metabolito específico de asfixia" se refiere a un metabolito que está presente de forma diferencial o concentrado de forma diferencial en organismos con asfixia en comparación con organismos sin asfixia. Por ejemplo, en algunas realizaciones, los metabolitos específicos de asfixia están presentes en muestras de sangre de individuos con asfixia, pero no en muestras de sangre de individuos sin asfixia.
En otras realizaciones, los metabolitos específicos de asfixia están ausentes en muestras de sangre de individuos con asfixia, pero están presentes en muestras de sangre de individuos sin asfixia. En otras realizaciones adicionales, los metabolitos específicos de asfixia están presentes a diferentes niveles (por ejemplo, superiores o inferiores) en las muestras de sangre de individuos con asfixia en comparación con las muestras de sangre de individuos sin asfixia. Por ejemplo, un metabolito específico de asfixia puede estar presente diferencialmente a cualquier nivel, pero generalmente está presente a un nivel que está aumentado en al menos un 10 %, en al menos un 15 %, en al menos un 20 %, en al menos un 25 %, en al menos un 30 %, en al menos un 35 %, en al menos un 40 %, en al menos un 45 %, en al menos un 50 %, en al menos un 55 %, en al menos un 60 %, en al menos un 65 %, en al menos un 70 %, en al menos un 75 %, en al menos un 80 %, en al menos un 85 %, en al menos un 90 %, en al menos un 95 %, en al menos un 100 %, en al menos un 110 %, en al menos un 120 %, en al menos un 130 %, en al menos un 140 %, en al menos un 150 % o más; o generalmente está presente a un nivel que está reducido en al menos un 5 %, en al menos un 10 %, en al menos un 15 %, en al menos un 20 %, en al menos un 25 %, en al menos un 30 %, en al menos un 35 %, en al menos un 40 %, en al menos un 45 %, en al menos un 50 %, en al menos un 55 %, en al menos un 60 %, en al menos un 65 %, en al menos un 70 %, en al menos un 75 %, en al menos un 80 %, en al menos un 85 %, en al menos un 90 %, en al menos un 95 % o en un 100 % (es decir, está ausente).
Un metabolito específico de asfixia preferentemente está presente de forma diferencial a un nivel que es estadísticamente significativo (por ejemplo, un valor de p menor de 0,001 y/o un valor de q menor de 0,01, según se determina usando Análisis de Varianza, la prueba t de Welch o sus versiones equivalentes no paramétricas). En las secciones de descripción detallada y experimental presentadas más adelante, se describen metabolitos específicos de asfixia ejemplares.
El término "muestra", en la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones, se usa en su sentido más amplio. Un "nivel de referencia" de un metabolito significa un nivel del metabolito que es indicativo de un estado patológico particular, fenotipo o ausencia del mismo, así como combinaciones de estados de enfermedad, fenotipos o ausencia de los mismos. Un nivel de referencia “positivo” de un metabolito significa un nivel que es indicativo de un estado patológico o fenotipo particular. Un nivel de referencia “negativo” del metabolito significa un nivel que es indicativo de la ausencia de un estado patológico o fenotipo particular. Por ejemplo, un “nivel de referencia positivo para asfixia” de un metabolito significa un nivel de metabolito que es indicativo de un diagnóstico positivo de asfixia en un sujeto y un “nivel de referencia negativo para asfixia” de un metabolito significa un nivel de un metabolito que es indicativo de un diagnóstico negativo de asfixia en un sujeto. Un “nivel de referencia” de un metabolito puede ser una cantidad o concentración absoluta o relativa del metabolito, la presencia o ausencia del metabolito, un intervalo de cantidades o concentraciones del metabolito, una cantidad o concentración mínima y/o máxima del metabolito, una cantidad o concentración media del metabolito y/o una cantidad o concentración mediana del metabolito; y, además, “los niveles de referencia” de combinaciones de metabolitos también pueden ser relaciones de cantidades o concentraciones absolutas o relativas de dos o más metabolitos entre sí o un valor/puntuación compuesta obtenida por clasificación.
Los niveles de referencia positivos y negativos apropiados de metabolitos para un estado patológico particular, fenotipo o ausencia del mismo pueden determinarse midiendo los niveles de metabolitos deseados en uno o más sujetos apropiados, y dichos niveles de referencia pueden adaptarse a poblaciones específicas de sujetos (por ejemplo, un nivel de referencia puede hacerse corresponder con edades de forma que puedan realizarse comparaciones entre niveles de metabolitos en muestras de sujetos de una cierta edad y niveles de referencia para un estado patológico particular, fenotipo o ausencia del mismo en un cierto grupo de edad). Dichos niveles de referencia también pueden adaptarse a técnicas específicas que se usan para medir niveles de metabolitos en muestras biológicas (por ejemplo, LC-MS, GC-MS, etc.), en donde los niveles de metabolitos pueden diferir basándose en la técnica específica que se use.
Como se usa en el presente documento, el término "célula" se refiere a cualquier célula eucariota o procariota (por ejemplo, células bacterianas tales como E. coli, células de levadura, células de mamífero, células de aves, células de anfibio, células vegetales, células de peces y células de insecto), localizadas in vitro o in vivo.
Como se usa en el presente documento, el término “procesador” se refiere a un dispositivo que realiza un conjunto de etapas de acuerdo con un programa (por ejemplo, un ordenador digital). Los procesadores, por ejemplo, incluyen Unidades de Procesamiento Central ("CPU"), dispositivos electrónicos o sistemas de recepción, transmisión, almacenamiento y/o manipulación de datos bajo un control programado.
Como se usa en el presente documento, la expresión "dispositivo de memoria" o "memoria de ordenador" se refiere a cualquier dispositivo de almacenamiento de datos que puede leerse por un ordenador, incluyendo, pero sin limitación, memoria de acceso aleatorio, discos duros, discos magnéticos (flexibles), discos compactos, DVD, cintas magnéticas, memoria flash y similares.
"Espectrometría de masas" (MS) es una técnica para medir y analizar moléculas, que implica la fragmentación de una molécula diana, después el análisis de los fragmentos basado en sus relaciones de masa/carga para producir un espectro de masas que sirva como “huella molecular”. La determinación de la relación de masa/carga de un objeto se realiza por medios de determinación de las longitudes de onda a las que se absorbe energía electromagnética por ese objeto. Hay varios métodos usados comúnmente para determinar la relación entre masa y carga de un ion, midiendo algunos de ellos la interacción de la trayectoria del ion con ondas electromagnéticas, y midiendo otros el tiempo que tarda un ion en desplazarse una distancia dada, o una combinación de ambas cosas. Los datos de estas mediciones de masas de fragmentos pueden buscarse en bases de datos para obtener identificaciones definitivas de moléculas diana. La espectrometría de masas también se usa ampliamente en otras áreas de la química tales como la petroquímica o el control de calidad farmacéutico, entre muchos otros.
Como se usa en el presente documento, el término “metabolito” indica compuestos orgánicos endógenos que están presentes en la sangre y en extractos obtenidos de la fuente mencionada anteriormente con un peso molecular típicamente por debajo de 1500 Dalton.
“Metabolómicos”, como se entiende dentro del alcance de la presente invención, designa la medición cuantitativa exhaustiva de varios metabolitos (dos mil) mediante métodos tales como, pero sin limitación, espectroscopía de masas, acoplamiento de cromatografía líquida, cromatografía gaseosa y otros métodos de separación, cromatografía con espectroscopía de masas.
El término "separación" se refiere a la separación de una mezcla compleja en sus proteínas o metabolitos componentes. Las técnicas de separación de laboratorio comunes incluyen electroforesis en gel y cromatografía. La expresión “electroforesis capilar” se refiere a una técnica analítica automática que separa moléculas en una solución aplicando voltaje a través de capilares rellenos de tampón. La electroforesis capilar generalmente se usa para separar iones, que se mueven a diferentes velocidades cuando se aplica el voltaje, dependiendo del tamaño y la carga de los iones. Los solutos (iones) se ven como picos según pasan a través de un detector y el área de cada pico es proporcional a la concentración de iones en el soluto, lo cual permite realizar determinaciones cuantitativas de los iones.
El término "cromatografía" se refiere a un método físico de separación en el que los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria (fase estacionaria), mientras que la otra (la fase móvil) se mueve en una dirección definida. Los datos obtenidos con una cromatografía pueden usarse para la manipulación por la presente invención.
Un "ion" es un objeto cargado formado por la adición de electrones o la retirada de electrones de un átomo.
Un “espectro de masas” es un gráfico de datos producidos por un espectrómetro de masas, que típicamente contiene valores m/z en el eje x y valores de intensidad en el eje y.
Un “pico” es un punto en un espectro de masas con un valor de y relativamente alto.
El término "m/z" se refiere a la cantidad sin dimensión formada dividiendo el número másico de un ion por su número de carga. Durante mucho tiempo se ha denominado la relación “masa a carga”.
El término "metabolismo" se refiere a los cambios químicos que se producen dentro de los tejidos de un organismo, incluyendo el “anabolismo” y el “catabolismo”. El anabolismo se refiere a la biosíntesis o a la construcción de moléculas y el catabolismo se refiere a la degradación de moléculas.
Como se usan en el presente documento, los términos "detectar" o "detección" pueden describir el acto general de descubrir o distinguir o la observación específica de una composición marcada de forma detectable.
Como se usa en el presente documento, el término "fallo clínico" se refiere a un resultado negativo después de un tratamiento de asfixia.
Un biomarcador, en este contexto, es una característica que comprende datos de al menos un metabolito que se miden y se evalúan como un indicador de procesos biológicos, procesos patogénicos o respuestas a una intervención terapéutica asociada con asfixia o relacionada con un tratamiento de asfixia. Un biomarcador combinado, como se usa en el presente documento, puede seleccionarse entre al menos dos moléculas endógenas pequeñas y metabolitos.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a marcadores de asfixia y su duración/gravedad, así como al efecto de las intervenciones terapéuticas. En realizaciones particulares, la presente invención proporciona metabolitos que están presentes de forma diferencial en la asfixia. Los experimentos realizados durante el transcurso del desarrollo de realizaciones de la presente invención identificaron una serie de metabolitos como metabolitos presentes de forma diferencial en la asfixia frente a la situación normal.
La Tabla 2 proporciona metabolitos adicionales presentes en plasma, suero u otros fluidos corporales. Los marcadores desvelados encuentran uso como dianas de diagnóstico y terapéuticas.
Aplicaciones de diagnóstico
En algunas realizaciones, la presente invención proporciona métodos para diagnosticar asfixia, incluyendo, pero sin limitación, la caracterización del riesgo de asfixia, la fase de asfixia, la duración y gravedad etc., basándose en la presencia de metabolitos específicos de asfixia o sus derivados, precursores, metabolitos, etc. Más adelante se describen métodos de diagnóstico ejemplares.
De esta manera, por ejemplo, un método de diagnóstico (o para ayudar al diagnóstico) de si un sujeto tiene asfixia, comprende (1) detectar en al menos una muestra de sangre humana la presencia o ausencia de un nivel diferencial de uno o más metabolitos específicos de asfixia seleccionados de las Tablas 2 y 3, y b) diagnosticar la asfixia basándose en la presencia, ausencia o nivel diferencial del metabolito específico de asfixia. Cuando se usa dicho método para ayudar en el diagnóstico de asfixia, los resultados del método pueden usarse junto con otros métodos (o sus resultados) útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene asfixia.
Cualquier muestra de mamífero que se sospecha que contiene metabolitos específicos de asfixia se ensaya de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento. La muestra es sangre o una fracción de la misma (por ejemplo, plasma, suero).
En algunas realizaciones, la muestra del paciente se somete a un procesamiento preliminar diseñado para aislar o enriquecer la muestra con respecto a los metabolitos específicos de asfixia. Para este fin, puede usarse una diversidad de técnicas conocidas para los expertos habituales en la materia incluyendo, pero sin limitación: centrifugación, inmunocaptura; y lisis celular.
Los metabolitos pueden detectarse usando cualquier método adecuado incluyendo, pero sin limitación, cromatografía de fase líquida y gaseosa, sola o acoplada a espectrometría de masas (véase, por ejemplo, la sección experimental mostrada más adelante), NMR, inmunoensayos, ensayos químicos, espectroscopía y similares. En algunas realizaciones, se utilizan sistemas comerciales para cromatografía y análisis de NMR.
En otras realizaciones, se detectan metabolitos (es decir biomarcadores y derivados de los mismos) usando técnicas de formación de imágenes ópticas tales como espectroscopía de resonancia magnética (MRS), obtención de imágenes por resonancia magnética (MRI), exploraciones CAT, ultrasonidos, formación de imágenes de tejidos basadas en MS o métodos de detección por rayos X (por ejemplo, detección de fluorescencia de rayos x por dispersión de energía).
Puede usarse cualquier método adecuado para analizar la muestra biológica con el fin de determinar la presencia, ausencia o nivel o niveles de los tres o más metabolitos en la muestra. Los métodos adecuados incluyen cromatografía (por ejemplo, HPLC, cromatografía gaseosa, cromatografía líquida), espectrometría de masas (por ejemplo, MS, MS-MS), ensayo de inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), asociación de anticuerpos, otras técnicas inmunoquímicas, reacciones o ensayos bioquímicos o enzimáticos, y combinaciones de los mismos. Además, el nivel(es) de los tres o más metabolitos pueden medirse indirectamente, por ejemplo, usando un ensayo que mide el nivel de un compuesto (o compuestos) que se correlaciona con el nivel del biomarcador o biomarcadores que se desean medir.
Los niveles de los tres o más metabolitos mencionados pueden determinarse en los métodos de la presente invención. Por ejemplo, en dichos métodos pueden determinarse y usarse los niveles de tres o más metabolitos, cuatro o más metabolitos, cinco o más metabolitos, seis o más metabolitos, siete o más metabolitos, ocho o más metabolitos, nueve o más metabolitos, diez o más metabolitos, etc., incluyendo una combinación de algunos o todos los metabolitos indicados en las Tablas 2 y 3.
La determinación de los niveles de combinaciones de los metabolitos puede permitir una mayor sensibilidad y especificidad en los métodos, tales como el diagnóstico de asfixia y la ayuda en el diagnóstico de asfixia, y puede permitir una mejor diferenciación o caracterización de la asfixia de otros cursos de lesiones cerebrales u otras asfixias que pueden tener metabolitos similares o parcialmente coincidentes con la asfixia (en comparación con un sujeto que no tiene asfixia). Por ejemplo, las relaciones de los niveles de ciertos metabolitos en muestras biológicas pueden permitir una mayor sensibilidad y especificidad en el diagnóstico de asfixia y ayudar en el diagnóstico de asfixia, y permitir una mejor diferenciación o caracterización de asfixia de otras asfixias u otros trastornos que pueden tener metabolitos similares o parcialmente coincidentes con la asfixia (en comparación con un sujeto que no tiene asfixia).
Análisis de los datos
En algunas realizaciones, se usa un programa de análisis basado en ordenador para traducir los datos de partida generados por el ensayo de detección (por ejemplo, la presencia, ausencia o cantidad de un metabolito específico de asfixia) en datos de valor predictivo para un médico. El médico puede acceder a los datos predictivos usando cualquier medio adecuado. De esta manera, en algunas realizaciones, la presente invención proporciona la ventaja adicional de que el médico, que probablemente no está entrenado en el análisis de metabolitos, no necesita comprender los datos de partida. Los datos se presentan directamente al médico en su forma más útil. El médico entonces puede utilizar inmediatamente la información para optimizar el cuidado del sujeto.
La presente invención contempla cualquier método capaz de recibir, procesar y transmitir la información hacia y desde los laboratorios que realizan los ensayos, los proveedores de la información, el personal médico y los sujetos. Por ejemplo, en algunas realizaciones de la presente invención, se obtiene una muestra de sangre a partir de un sujeto y se presenta en un servicio de perfilado (por ejemplo, laboratorio clínico en una instalación médica, etc.), localizado en cualquier parte del mundo (por ejemplo, en un país diferente del país en el que reside el sujeto o donde finalmente se usa la información) para generar datos de partida. El sujeto puede acudir a un centro médico para que se le extraiga la muestra y ésta puede enviarse al centro de perfilado, o los sujetos pueden recoger las muestras por sí mismos (por ejemplo, una muestra de plasma) y enviarla directamente a un centro de perfilado. Cuando la muestra comprende la información biológica determinada previamente, la información puede enviarse directamente al servicio de perfilado por el sujeto (por ejemplo, una tarjeta de información que contiene la información puede escanearse por un ordenador y los datos transmitirse a un ordenador del centro de perfilado usando sistemas de comunicación electrónica). Una vez recibida por el servicio de perfilado, la muestra se procesa y se produce un perfil (es decir, perfil metabólico), específico para la información de diagnóstico o pronóstico deseada para el sujeto.
Después se preparan los datos de perfil en un formato adecuado para la interpretación por el médico correspondiente. Por ejemplo, en lugar de proporcionar datos de partida, el formato preparado puede representar un diagnóstico o evaluación del riesgo (por ejemplo, probabilidad de que esté presente asfixia) para el sujeto, junto con recomendaciones para opciones de tratamiento particulares. Los datos pueden presentarse al médico por cualquier método adecuado. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el servicio de perfilado genera un informe que puede imprimirse por el médico (por ejemplo, en el punto de asistencia médica) o presentarse al médico en un monitor de ordenador.
En algunas realizaciones, la información primero se analiza en el punto de asistencia médica o en una instalación regional. Los datos de partida después se envían a una instalación de procesamiento central para el análisis adicional y/o para convertir los datos de partida en información útil para un médico o paciente. La instalación de procesamiento central proporciona la ventaja de la privacidad (todos los datos se almacenan en una instalación central con protocolos de seguridad uniformes), velocidad y uniformidad de análisis de los datos. La instalación de procesamiento central después puede controlar el destino de los datos después del tratamiento del sujeto. Por ejemplo, usando un sistema de comunicación electrónico, la instalación central puede proporcionar datos al médico, al sujeto o a los investigadores.
En algunas realizaciones, el sujeto puede acceder directamente a los datos usando el sistema de comunicación electrónica. El sujeto puede elegir una intervención adicional o asesoramiento basándose en los resultados. En algunas realizaciones, los datos se usan para uso en investigación. Por ejemplo, los datos pueden usarse para optimizar adicionalmente la inclusión o eliminación de marcadores como indicadores útiles de una condición o estadio particular de una enfermedad.
Cuando se determina(n) la(s) cantidad(es) o nivel(es) de los tres o más metabolitos en la muestra, la(s) cantidad(es) o nivel(es) pueden compararse con niveles de referencia de metabolitos de asfixia, tales como niveles de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia, para ayudar en el diagnóstico o para diagnosticar si el sujeto tiene asfixia. Los niveles de los tres o más metabolitos en una muestra que corresponde a los niveles de referencia positivos para asfixia (por ejemplo, niveles que son iguales que los niveles de referencia, sustancialmente iguales que los niveles de referencia, superiores y/o inferiores al mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) indican un diagnóstico de asfixia en el sujeto. Los niveles de los tres o más metabolitos en una muestra que corresponden a los niveles de referencia negativos para asfixia (por ejemplo, niveles que son iguales que los niveles de referencia, sustancialmente iguales que los niveles de referencia, superiores y/o inferiores al mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) indican un diagnóstico de ausencia de asfixia en el sujeto. Además, los niveles de los tres o más metabolitos que están presentes de forma diferencial (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra en comparación con los niveles de referencia negativos para asfixia, indican un diagnóstico de asfixia en el sujeto. Los niveles de los tres o más metabolitos que están presentes de forma diferencial (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra en comparación con los niveles de referencia positivos para asfixia indican un diagnóstico de ausencia de asfixia en el sujeto.
Los niveles de los tres o más metabolitos pueden compararse con los niveles de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia usando diversas técnicas, incluyendo una comparación sencilla (por ejemplo, una comparación manual) de los niveles de los tres o más metabolitos en la muestra biológica con niveles de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia. Los niveles de los tres o más metabolitos en la muestra biológica también pueden compararse con niveles de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia usando uno o más análisis estadísticos (por ejemplo, prueba t, prueba t de Welch, prueba de suma de rangos de Wilcoxon, bosque aleatorio).
Las realizaciones de la presente invención proporcionan ensayos multiplex o en panel que detectan simultáneamente tres o más marcadores de la presente invención representados en las Tablas 2 y 3, solos o en combinación con marcadores de asfixia adicionales conocidos en la técnica. Por ejemplo, en algunas realizaciones, se proporcionan ensayos en panel o ensayos en combinación que detectan 3 o más, 4 o más, 5 o más, 6 o más, 7 o más, 8 o más, 9 o más, 10 o más, 15 o más, o 20 o más, 30 o más, 40 o más marcadores en un solo ensayo. En algunas realizaciones, los ensayos son automáticos o de alto rendimiento.
La presente invención se refiere al uso de marcadores indicados en las Tablas 2 y 3 para el diagnóstico de asfixia y su duración/ gravedad cuando dicho sujeto mamífero es un ser humano, y dicha muestra biológica una muestra de sangre.
En algunas realizaciones, se incluyen marcadores de asfixia adicionales en ensayos múltiples o en panel. Los marcadores se seleccionan por su valor predictivo solos o en combinación con los marcadores metabólicos descritos en el presente documento.
Parte experimental
Los siguientes ejemplos se proporcionan para demostrar e ilustrar adicionalmente ciertos aspectos y realizaciones preferidas de la presente invención y no deben considerarse limitantes del alcance de la misma.
Analítica general:
Se realizaron análisis de preparación de muestras y metabolómicos en BIOCRATES life sciences AG, Innsbruck, Austria. Se usó una plataforma de metabolómica dirigida de alto rendimiento, sensible, muy robusta y de múltiples parámetros que consistía en métodos de análisis de inyección de flujo (FIA)-MS/MS y LC-MS/MS para la cuantificación simultánea de una amplia serie de intermedios endógenos, particularmente acilcarnitinas, esfingomielinas, hexosas, glicerofosfolípidos, aminoácidos, aminas biogénicas, ácidos biliares, eicosanoides y ácidos orgánicos pequeños (metabolismo de energía) en plasma. Todos los procedimientos (manipulación de muestras, analítica) se realizaron por colaboradores desconocedores de los grupos.
Acilcarnitinas, esfingomielinas, hexosas, glicerofosfolípidos (FIA-MS/MS)
Para determinar la concentración de acilcarnitinas, esfingomielinas y glicerofosfolípidos en homogeneizados cerebrales y en plasma, se preparó el kit Absolute IDQ p150 (Biocrates Life Sciences AG) como se describe en el protocolo del fabricante. En resumen, se añadieron 10 pl de homogeneizado cerebral al centro del filtro en la placa superior del kit de 96 pocillos, y las muestras se secaron usando un evaporador de nitrógeno (VLM Laboratories).
Posteriormente, se añadieron 20 |jl de una solución al 5 % de fenil-isotiocianato para la derivatización. Después de la incubación, las manchas del filtro se secaron de nuevo usando un evaporador. Los metabolitos se extrajeron usando 300 j l de una solución de acetato amónico 5 mM en metanol. Los extractos se obtuvieron por centrifugación en la placa inferior de 96 pocillos profundos seguido de una etapa de dilución con 600 j l de disolvente de proceso de MS del kit. Se realizó un análisis de espectrometría de masas en un instrumento de espectrometría de masas en tándem API4000 QTrap® (Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies) equipado con una fuente de ionización de electro-nebulización (ESI) usando el método de adquisición de análisis proporcionado en el kit Absolute IDQ. Se aplicó el método FIA-MS/MS convencional para todas las mediciones con dos inyecciones posteriores de 20 j l (una para el análisis en modo positivo y otra para el análisis en modo negativo). Se usó detección de monitorización de reacción múltiple (MRM) para la cuantificación aplicando el algoritmo de análisis de espectros integrado en el software MetlQ (Biocrates Life Sciences AG). Los valores de concentración para 148 metabolitos (todos los analitos determinados con los kit metabolómicos aparte de los aminoácidos, que se determinaron por un método diferente) obtenidos por calibración interna se exportaron para un análisis estadístico exhaustivo.
Aminoácidos, aminas biogénicas (LC-MS/MS)
Se analizaron cuantitativamente aminoácidos y aminas biogénicas por LC-MS/MS de fase inversa para obtener la separación cromatográfica de metabolitos isobáricos (con los mismos pares de iones por MRM) para la cuantificación individual realizada por calibración externa y mediante el uso de patrones internos. Se necesitan 10 j l de volumen de muestra (plasma, homogeneizado cerebral) para el análisis usando el siguiente procedimiento de preparación de muestras. Se añadieron muestras sobre manchas en filtro situadas en una placa de 96 pocillos solvinert (los patrones internos se pusieron y secaron con nitrógeno previamente), fijadas encima de una placa de 96 pocillos profundos (placa de captura). Se añadieron 20 j l de reactivo de derivatización de fenil-isotiocianato al 5 %. Las muestras derivatizadas se extrajeron después de la incubación por metanol acuoso en la placa de captura. Se analizaron los extractos de muestra por LC-ESl-MS/MS en modo de detección MRM positivo con un instrumento de espectrometría de masas en tándem API4000 QTrap® (Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies). Las concentraciones de metabolitos individuales analizadas (software Analyst 1.4.2, Applied Biosystems) se exportaron para un análisis estadístico exhaustivo.
Ácidos biliares (LC-MS/MS)
Se aplicó un método de análisis LC-MS/MS de fase inversa altamente selectivo en modo de detección MRM negativo para determinar la concentración de ácidos biliares en muestras de plasma. Las muestras se extrajeron mediante la técnica de mancha en filtro secada en un formato de placa de 96 pocillos, que es muy adecuado para el análisis de alto rendimiento. Para conseguir una cuantificación de alta precisión, se aplicaron patrones internos y calibración externa. En resumen, se extrajeron patrones internos y un volumen de muestra de 20 j l situados sobre manchas de filtro y simultáneamente se precipitó la proteína con metanol acuoso. Estos extractos de muestra se midieron por LC-ESI-MS/MS con un instrumento de espectrometría de masas en tándem API4000 QTrap® (Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies). Los datos de los ácidos biliares se cuantificaron con el software Analyst 1.4.2 (Applied Biosystems) y finalmente se exportaron para un análisis estadístico exhaustivo.
Prostanoides, ácidos grasos oxidados (LC-MS/MS)
Se analizaron prostanoides - un término que resume las prostaglandinas (PG), tromboxanos (TX) y prostaciclinas -y metabolitos de ácidos grasos oxidados en extractos de plasma por LC-ESI-MS/MS [Unterwurzacher et al. Clin Chem Lab Med 2008; 46 (11): 1589-1597] y en extractos de homogeneizado cerebral mediante extracción en fase sólida (SPE)-LC-MS/MS en línea [Unterwurzacher et al. Rapid Commun Mass Spec submitted] con un instrumento de espectrometría de masas en tándem API4000 QTrap® (Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies) en modo de detección MRM negativo. La preparación de la muestra fue la misma para los homogeneizados tanto de plasma como de cerebro. En resumen, a manchas en filtro en una placa de 96 pocillos se le añadieron patrón interno; 20 j l de plasma u homogeneizados de tejido y se extrajeron con metanol acuoso; los extractos individuales después se analizaron. Los datos de los prostanoides y ácidos grasos oxidados se cuantificaron con el software Analyst 1.4.2 (Applied Biosystems) y finalmente se exportaron para el análisis estadístico.
Metabolismo de energía (Ácidos Orgánicos) (LC-MS/MS)
Para el análisis cuantitativo de los intermedios del metabolismo de energía (glicólisis, ciclo de citrato, ruta de pentosa fosfato, ciclo de urea) se usó el método de cromatografía líquida de interacción hidrófila (HILIC)-ESI-MS/MS en modo de detección MRM negativo altamente selectivo. La detección MRM se realizó usando un instrumento de espectrometría de masas en tándem API4000 QTrap® (Applied Biosystems/MDS Analytical Technologies). Se precipitaron las proteínas de un volumen de muestra de 20 j l (plasma, homogeneizado cerebral) y se extrajeron simultáneamente con metanol acuoso en un formato de placa de 96 pocillos. Se usaron patrones internos (relación de patrón externo a interno) y calibración externa para una cuantificación de alta precisión. Los datos se cuantificaron con el software Analyst 1.4.2 (Applied Biosystems) y finalmente se exportaron para el análisis estadístico.
Tabla 1a: nombre común y sistemático de compuestos
Código BC________________ Nombre común______________ Nombre sistemático
Suc.EM Ácido succínico (succinato) Ácido butanodioico
Lac.EM Lactato Ácido propanoico, 2-hidroxi-C4.K1 Butirilcarnitina / 3-butanoiloxi-4-trimetilamonio-butanoato (L) Isobutirilcarnitina
Fum.EM Ácido fumárico Ácido 2-butenodioico (E)-N-(3-alfa,7-alfa,12-alfatrihidroxicolan-24-oil)glicina
GCA.BA Ácido glicocólico
C16:2.K1 Hexadecadienoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
Putrescina.K2 Putrescina Putrescina (1,4-butanodiamina)
Glu/Gln
C16:1.K1 Hexadecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [Palmitoleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
Glu/Gln
C10:2.K1 Decadienoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
TCDCA.BA Ácido tauroquenodesoxicólico Ácido etanosulfónico, 2-(((3alfa,5beta,7alfa)-3,7-dihidroxi-24-oxocolan-24-il)amino)-GCDCA.BA Ácido glicoquenodesoxicólico Glicina, N-((3alfa,5beta,7alfa)-3,7-dihidroxi-24-oxocolan-24-il)-Spermidine.K2 Espermidina 1,4-butanodiamina, N-(3-aminopropil)-C18:2.K1 Octadecadienoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [Linoleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería (Z)-(E) de dobles enlaces
CA.BA Ácido cólico Ácido colan-24-oico, 3,7,12-trihidroxi-(3alfa,5beta,7alfa,12alfa)-C5.K1 Isovalerilcarnitina / 2- 3 ácidos grasos C5 con la misma masa que restos metilbutirilcarn itina/ (ramificado / no ramificado)
valerilcarnitina
Spermina.K2 Espermina 1,4-Butanodiamina, N,N'-bis(3-aminopropil)-Pyr OAA.EM Piruvato Oxaloacetato
C5:1-DC.K1 Triglilcarnitina / 3-metil- 2 ácidos grasos C5 con un doble enlace como Crotonilcarnitina restos
C3.K1 Propionilcarnitina Propionilcarnitina
Lys.K2 Lisina L-Lisina
alfa-KGA.EM Ácido alfa-cetoglutárico Ácido pentanodioico, 2-oxo
C18:1.K1 Octadecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [Oleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
C14:2.K1 Tetradecadienoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
Asp/Asn
(continuación)
Código BC Nombre común Nombre sistemático
Putrescine/Orn
Gln.K2 Glutamina L-Glutamina
UDCA.BA Ácido ursodesoxicólico Ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-,
(3alfa,5beta,7beta)-)
PC ae C40:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada
(2 restos)
Serotonin.K2 Serotonina indol-5-ol, 3-(2-aminoetil)-Orn/Cit
Ala. K2 C14.K1 Alanina Tetradecanoilcarnitina L-Alanina Requisito: ácido graso no ramificado: sólo es posible el ácido mirístico (CAS-n.°: 544-63-8) Ala/BCAA
His.K2 Histidina L-Histidina
lysoPC a C16:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
lysoPC a C17:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
C12.K1 Dodecanoilcarnitina Requisito: ácido graso no ramificado: sólo es [Laurilcarnitina] posible el ácido laúrico (CAS-n.°: 143-07-7) Pro.K2 Prolina L-Prolina
Serotonin/Trp Serotonina/T riptófano
C14:2-OH.K1 3- La longitud de la cadena y el número de dobles Hidroxitetradecadienoilcarnitina enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición del grupo OH y la posición de la isomería cis-trans de los dobles enlaces Glu.K2 Glutamato Ácido L-Glutámico
C16:2-OH.K1 3- La longitud de la cadena y el número de dobles hidroxihexadecadienoilcarnitina enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición del grupo OH y la posición de la isomería cis-trans de los dobles enlaces Histamine.K2 Histamina 2-imidazol-4-etilamina
PC ae C30:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C14:1.K1 Tetradecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [Miristoleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (en general los dobles enlaces son cis)
SumLyso Phe.K2 Fenilalanina L-fenilalanina
lysoPC a C18:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
PC aa C42:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC ae C38:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC aa C40:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
AA.PA Ácido Araquidónico Ácido 5,8,11,14-eicosatetraenoico,
C5:1.K1 Tiglilcarnitina / 3-Metil- 2 ácidos grasos C5 (todo-Z)-con un doble enlace crotonilcarnitina como restos
Met-SO.K2 Metionina-sulfóxido Ácido butírico, 2-amino-4-(metilsulfinil)-Espermina/Espermidina
C16+C18/C0
C16.K1 Hexadecanoilcarnitina Palmitoilcarnitina (requisito: ácido graso no [Palmitoilcarnitina] ramificado)
lysoPC a C16:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
PC aa C40:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
(continuación)
Código BC Nombre común Nombre sistemático
Asn.K2 Asparagina L-Asparagina
C9.K1 Nonanoilcarnitina Nonanoilcarnitina (requisito: ácido graso no [Pelargonilcarnitina] ramificado)
PC ae C42:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C6 (C4:1-DC).K1 Hexanoilcarnitina La masa de los restos posibles: ácido caproico y [Caproilcarnitina] ácido fumárico es similar (116.1)
PC aa C40:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
Val.K2 Valina L-Valina
SumSFA
Espermina/
Espermidina
C16+C18/C0
PC ae C40:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C42:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C40:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Leu.K2 Leucina L-Leucina
C2.K1 Acetilcarnitina 1-Propanaminio, 2-(acetiloxi)-3-carboxi-N,N,N-trimetil-, sal interna
PC aa C40:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC ae C42:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C40:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Asp.EM Ácido aspártico Ácido L-aspártico
CDCA.BA Ácido quenodesoxicólico Ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-,(3alfa,5beta,7alfa)-PC aa C38:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
SM (OH) C16:1.K1 Hidroxiesfingomielina con resto Hidroxiesfingomielina con composición química acilo, suma C16:1 estimada
PC ae C38:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C18:1-OH.K1 3-hidroxioctadecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [3-hidroxioleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición del grupo OH y la posición de la isomería cis-trans del doble enlace Orn/Arg
C16:1-OH.K1 3-hidroxihexadecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [3-hidroxipalmitoleilcarn itina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición del grupo OH y la posición de la isomería cis-trans de los dobles enlaces C18.K1 Octadecanoilcarnitina Estearilcarnitina (requisito: ácido graso no [Estearilcarnitina] ramificado))
PC aa C36:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo
SM C26:1.K1 Hidroxiesfingomielina con composición química estimada
PC aa C42:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
C14:1-OH.K1 3-hidroxitetradecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles [3-hidroximiristoleilcarnitina] enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
PC aa C38:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
(continuación)
Código BC______ Nombre común______________ Nombre sistemático____________________ SumPC+Lyso PC Glicerofosfocolina con composición química ae C36:4.K1 estimada (2 restos)
Hex.EM Hexosa Suma de aldohexosas y cetohexosas LCA.BA Ácido litocólico Ácido colan 24 oico, 3-hidroxi-, (3alfa,5beta)-Orn/Arg
PC aa C36:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SumPC
SumPUFA
PC aa C40:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
Met. K2 Metionina L-Metionina
PC ae C38:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C32.2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Cit.K2 Citrulina L-citrulina (L-Ornitina, N5-(aminocarbonil)-) PC ae C30:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C42:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Kyn/T rp
Orn.K2 Ornitina L-Ornitina
PC ae C38:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
lysoPC a C20:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
PC ae C40:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Asp.K2 Aspartato ácido L-aspártico
PC aa C30:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C28:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
Gly/BCAA
PC aa C38:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC ae C34:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC aa C38:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
C16-OH.K1 3-hidroxihexadecanolicarnitina La longitud de la cadena se determina por la masa [3-hidroxipalmitoilcarnitina] medida, pero no se especifica la posición del grupo
OH
SM (OH) C14:1.K1 Hidroxiesfingomielina con composición química estimada
PC ae C44:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C38:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SumSM
SumMUFA
PC ae C40:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
lysoPC a C24:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
OH-Kyn.K2 Hidroxikinurenina 3-Hidroxikinurenina
Gly/BCAA
(continuación)
Código BC______ Nombre común______________ Nombre sistemático________________________ SM (OH) C22:1.K1 Hidroxiesfingomielina con composición química estimada
PC ae C32:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SM C16:1.K1 La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
PC ae C30:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Ala/Lys
Tyr.K2 Tirosina L-Tirosina
PC ae C34:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C36:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SM (OH) C22:2.K1 Hidroxiesfingomielina con composición química estimada
lysoPC a C28:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
C12:1.K1 Dodecenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
PC aa C34:4.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
SM C26:0.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C26:0
SM (OH) C24:1.K1 Hidroxiesfingomielina con resto Hidroxiesfingomielina con composición química acilo, suma C24:1 estimada
SM C16:0.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C16:0
Ile.K2 Isoleucina L-Isoleucina
C5-DC (C6- Acilcarnitina con composición estimada; la masa de OH).K1 2 posibles restos es similar
PC aa C38:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C34:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
Cit/Arg
Ser.K2 Serina L-Serina
PC ae C36.5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C34:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C36:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C3-OH.K1 Hidroxipropionilcarnitina La longitud de la cadena se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición de grupo
OH
PC ae C42:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
H1.K1 Suma de aldohexosas y cetohexosas Cit/Arg
PC ae C36:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SM C22:3.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C22:3
(continuación)
Código BC Nombre común Nombre sistemático
SM C24:1.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C24:1
C4-OH (C3- 3-hidroxibutirilcarn itina Acilcarnitina con composición estimada: la masa de DC).K1 2 posibles restos es similar
PC aa C40:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C32:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C42:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C36:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C42:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
DHA.PA Ácido docosahexaenoico Ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico, (todo Z) SM C20:2.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C20:2
C4:1.K1 Butenoilcarnitina La longitud de la cadena se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición del doble enlace
SM C24:0.K1 Esfingomielina con resto acilo, Esfingomielina con composición química estimada suma C24:0
PC ae C38:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Kyn/OHKyn
Arg.K2 Arginina L-Arginina
DMA total.K2
PC aa C34:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC ae C38:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PUFA/MUFA
PC aa C42:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
SM C18:1.K1 Esfingomielina con composición química estimada PC aa C32:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
lysoPC a C18:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
PC ae C44:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC ae C40:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
Xle.K2 Leucina Isoleucina
PC aa C24:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C38:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
SM C18:0.K1 Esfingomielina con composición química estimada
PUFA/MUFA
PC aa C42:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
lysoPC a C20:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
PC ae C36:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C3:1.K1 Propenoilcarnitina
lysoPC a C18:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
(continuación)
Código BC Nombre común Nombre sistemático
C8:1.K1 Octenoilcarn itina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (en general los dobles enlaces son cis)
C8.K1 Octanoilcarnitina
[Caprililcarnitina]
PC aa C30:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC ae C44:5.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
lysoPC a C14:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
Creatinine.K2 Creatinina 4H-imidazol-4-ona, 2-amino-1,5-dihidro-1-metil-C0.K1 Carnitina (libre) Hidróxido de (3-carboxi-2-hidroxipropil)trimetilamonio, sal interna Thr.K2 Treonina L-treonina (ácido (2S,3R)-2-amino-3-hidroxibutanoico)
Phe/Tyr
Gly.K2 Glicina Glicina
PC aa C26:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
C5-OH (C3- 3-Hidroxiisovalerilcarnitina / 3- Acilcarnitina con composición estimada: la masa de DC-M).K1 hidroxi-2-meti lbuti rilo 2 posibles restos es similar
PC aa C34:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
lysoPC a C28:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
Met-SO/Met
C10:1.K1 Decenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (en general los dobles enlaces son cis)
PC aa C36:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
SDMA.K2 Dimetilarginina Simétrica N,N'-dimetil-L-arginina
Trp.K2 Triptófano L-triptófano
PC ae C34:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
PC aa C36:2.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
PC aa C36:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
Kyn.K2 Kinurenina Ácido alfa-2-diamino-gamma-oxobencenobutírico Met-SO/Met
PC aa C32:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C7-DC.K1 Pimelilcarnitina
SDMA/ADMA
PUFA/SFA
Arg.EM Arginina L-Arginina
PC aa C36:3.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos acilo)
13S-HODE.PA
Figure imgf000019_0001
PC ae C44:6.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
lysoPC a C6:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
(continuación)
Código BC Nombre común______________ Nombre sistemático___________________ ADMA.K2 Dimetilarginina asimétrica N,N-dimetil-L-arginina
PC aa C32:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
SumSMOH/
SumSM
MUFA/SFA
PC ae C42:0.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (2 restos)
C6:1.K1 Hexenoilcarnitina La longitud de la cadena y el número de dobles enlaces se determina por la masa medida, pero no se especifica la posición y la isomería cis-trans de los dobles enlaces (generalmente los dobles enlaces son cis)
lysoPC a C26:1.K1 Glicerofosfocolina con composición química estimada (1 resto acilo)
C12-DC.K1 Dodecanodioilcarnitina
C10.K1 Decanoilcarnitina La longitud de la cadena se determina por la masa [Caprilcarnitina] medida, la condición de ácido graso no ramificado:
ácido cáprico como resto
(Fumarilcarnitina)
Glicerofosfocolina con composición química lysoPC a C26:0.K1 estimada (1 resto acilo)
Tabla 1b: Números CAS y especies de compuestos con la misma estructura Código BC Número de Especies con la misma estructura:
_________ registro CAS________________________________________________________ Suc.EM 110-15-6
Lac.EM 50-21-5 Ácido (s)-2-hidroxipropanoico, N.° CAS:79-33-4; Ácido (r)-2-hidroxipropanoico, N.° CAS: 10326-41-7
C4.K1 25576-40-3 3-butanoiloxi-4-trimetilamonio-butanoato (D) N.° CAS: 25518-46-1 Fum.EM 110-17-8 Ácido (Z)-2-Butenodioico (ácido maleico), N.° CAS: 110-16-7 GCA.BA C16: 475-31-0
2.K1
Putrescina.K2 110-60-1
Glu/Gln
C16:1.K1
C10:2.K1
Glu/Gln
TCDCA.BA 516-35-8 Ácido tauroursodesoxicólico (Ácido etanosulfónico, 2-(((3-alfa,5-beta,7-beta)-3,7-dihidroxi-24-oxocolan-24-il)amino)-), N.° CAS: 14605-22-2
GCDCA.BA 640-79-9 Glicina, N-((3alfa,5beta,7beta)-3,7-dihidroxi-24-oxocolan-24-il)-, N.°
CAS: 2273-95-2
Espermidina.K2 124-20-9
C18:2.K1
CA.BA 81-25-4 (11 estereocentros = 2048 isómeros, uno es ácido cólico natural), ácido alocólico N.° CAS: 2464-18-8; ácido ursocólico N.° CAS:
2955-27-3
C5.K1
Espermina.K2 71-44-3
Pyr OAA.EM
C5:1-DC.K1
C3.K1
Lys.K2 56-87-1 DL-Lisina N.° CAS: 70-54-2; D-Lisina N.° CAS: 923-27-3 alfa-KGA.EM 328-50-7
C18:1.K1
C14:2.K1
Asp/Asn
(continuación)
Código BC Número de Especies con la misma estructura:
registro CAS
Putrescina/Orn
Gln.K2 56-85-9 DL-Glutamina N.° CAS: 6899-04-3; D-Glutamina N.° CAS: 5959-95­
5
UDCA.BA 128-13-2 Cenodiol (ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-, (3alfa,5beta,7alfa)-)
N.° CAS: 474-25-9; ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-,(3beta,5beta,7alfa)- N.° CAS: 566-24-5; ácido ursodesoxicólico (ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-, (3beta,5beta,7beta)-) N.° CAS:
78919-26-3
PC ae C40:3.K1
Serotonin.K2 50-67-9
Orn/Cit
Ala.K2 56-41-7 DL-Alanina N.° CAS: 302-72-7; D-Alanina N.° CAS: 338-69-2; beta-Alanina N.° CAS: 107-95-9
C14.K1
Ala/BCAA
His.K2 71-00-1 DL-Histidina N.° CAS: 4998-57-6; D-Histidina N.° CAS: 351-50-8 lysoPC a C16: La posición y el carácter de residuo (a/e) no son claros! (m(lysoPC 0.K1 a C16.0) = m(lysoPC e C17.0))
lysoPC a C17:
0.K1 C12.K1
Pro.K2 147-85-3
Serotonin/Trp
C14:2-OH.K1
Glu.K2 56-86-0 Ácido DL-glutámico N.° CAS: 617-65-2; Ácido D-glutámico N.° CAS:
6893-26-1
C16:2-OH.K1
Histanmina.K2 51-45-6
PC ae C30:0.K1
C14:1.K1
SumaLyso
Phe.K2 63-91-2 DL-Fenilalanina N.° CAS: 150-30-1; D-Fenilalanina N.° CAS: 673-
06-3
lysoPC a C18:
0.K1
PC aa C42:4.K1
PC ae C38:4.K1
PC aa C40:3.K1
Serotonina/Trp
AA.PA 506-32-1 Ácido 8,11,14,17-eicosatetranoico N.° CAS: 2091-26-1; Ácido 5,11,14,17-eicosatetranoico N.° CAS: 2271-31-0; Ácido 5,8,11,14-eicosatetranoico N.° CAS: 7771-44-0; teóricamente es posible como combinación de dobles enlaces E y Z.
C5:1.K1
Met-SO.K2 62697-73-8 S-Óxido de metionina (sulfóxido de L-metionina) N.° CAS: 3226-65-1; ácido butanoico, 2-amino-4-(metilsulfinilo)-, (S-(R*,S*))- N.°
CAS:50896-98-5
Espermina/
Espermidina
C16+C18/C0
C16.K1 1935-18-8 Palmitoil-D(+)-carnitina N.° CAS: 2364-66-1; Palmitoil-L-(-)-carnitina
N.° CAS: 2364-67-2
lysoPC a C16:
1.K1 PC aa C40:
4.K1
Asn.K2 70-47-3 DL-Asparagina N.° CAS: 3130-87-8; D-Asparagina N.° CAS: 2058-
58-4
C9.K1
PC ae C42:5.K1
C6 (C4:1-DC).K1
PC aa C40:6.K1
Val.K2 72-18-4 DL-Valina N.° CAS: 516-06-3; D-Valina N.° CAS: 640-68-6 SumaSFA
(continuación)
Código BC Número de Especies con la misma estructura:
registro CAS_______________________________
PC ae C40:5.K1
PC ae C42:4.K1
PC ae C40:6.K1
Leu.K2 61-90-5 DL-Leucina N.° CAS: 328-39-2; D-Leucina N.° CAS: 328-38-1 C2.K1 14992-62-2 R-Acetilcarnitina N.° CAS:3040-38-8
PC aa C40:5.K1
PC ae C42:3.K1
PC ae C40:4.K1
Asp.EM 56-84-8 Ácido aspártico N.° CAS: 617-45-8; Ácido D-aspártico N.° CAS:
1783-96-6
CDCA.BA 474-25-9 8 isómeros posibles (3a,5a,7a; 3a,5a,7b; 3a,5b,7a; 3a,5b,7b;
3b,5a,7a; 3b,5a,7b; 3b,5b,7a; 3b,5b,7b); encontrado con números CAS: ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-, (3alfa,5beta,7beta)-(ácido ursodesoxicólico) N.° CAS: 128-13-2; ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-, (3beta,5beta,7alfa)- N.° CAS: 566-24-5;ácido colan-24-oico, 3,7-dihidroxi-, (3beta,5beta,7beta)-(ácido isoursodesoxicólico)
N.° CAS: 78919-26-3
PC aa C38:6.K1
SM (OH) C16:
1.K1
PC ae C38:5.K1
C18:1-OH.K1
Orn/Arg
C16:1-OH.K1
C18.K1
PC aa C36:6.K1
SM C26:1.K1
PC aa C42:5.K1
C14:1-OH.K1
PC aa C38:4.K1
SumaPC+Lyso
PC ae C36:4.K1
Orn/Arg
Hex.EM 8 Aldohexosas (Forma D) más comunes en la naturaleza: D-Glucosa, D-Galactosa y D-Manosa, 4 Cetohexosas (Forma D): D-Psicosa, D-Fructosa, D-Sorbosa, D-Tagatosa
LCA.BA 434-13-9 Ácido Colan-24-oico, 3-hidroxi-, (3beta,5beta)- (ácido isolitocólico)
N.° CAS: 1534-35-6; ácido colan-24-oico, 3-hidroxi-, (3beta,5alfa)-(9CI) (ácido Aloisolitocólico) N.° CAS:2276-93-9
PC aa C36:4.K1
SumaPC
SumaPUFA
PC aa C40:2.K1
Met. K2 63-68-3 DL-Metionina N.° CAS:59-51-8; D-Metionina N.° CAS: 348-67-4 PC ae C38:3.K1
PC ae C32:2.K1
Cit.K2 372-75-8 Ácido DL-2-amino-5-ureidovalérico N.° CAS:627-77-0
PC ae C30:1.K1
PC ae C42:2.K1
Kyn/Trp
Orn.K2 70-26-8 DL-Ornitina N.° CAS: 616-07-9; D-Ornitina N.° CAS: 348-66-3 PC ae C38:6.K1
lysoPC a C20:
4.K1
PC ae C40:1.K1
Asp.K2 56-84-8 Ácido D,L-aspártico N.° CAS: 617-45-8; Ácido D-aspártico N.° CAS:
1783-96-6
PC aa C30:2.K1
PC aa C28:1.K1
Gly/BCAA
PC aa C38:5.K1
PC ae C34:1.K1
PC aa C38:3.K1
(continuación)
Código BC Número de Especies con la misma estructura:
registro CAS_______________________________
C16-OH.K1
SM (OH) C14:
1.K1
PC ae C44:4.K1
PC ae C38:1.K1
SumaSM
SumaMUFA
PC ae C40:2.K1
lysoPC a C24:
0. K1
OH-Kyn.K2 484-78-6 L-3-hidroxiquinurenina N.° CAS: 606-14-4; 5-hidroxiquinurenina N.°
CAS: 720-00-3
SM (OH) C22:
1. K1
PC ae C32:1.K1
SM C16:1.K1
PC ae C30:2.K1
Ala/Lys
Tyr.K2 60-18-4 DL-Tirosina N.° CAS: 556-03-6; D-Tirosina N.° CAS: 556-02-5 PC ae C34:0.K1
PC ae C36:0.K1
Ala/Lys
SM (OH) C22:
2. K1
lysoPC a C28:
0. K1
C12:1.K1
PC aa C34:4.K1
SM C26:0.K1
SM (OH) C24:
1. K1
SM C16:0.K1
Ile.K2 73-32-5 DL-Isoleucina N.° CAS: 443-79-8; Alo-L-Isoleucina N.° CAS: 1509­
34-8; Alo-D-Isoleucina N.° CAS: 1509-35-9; Alo-DL-Isoleucina N.°
CAS: 3107-04-8
C5-DC (C6-OH).K1
PC aa C38:0.K1
PC aa C34:2.K1
Cit/Arg
Ser.K2 56-45-1 DL-Serina N.° CAS: 302-84-1; D-Serina N.° CAS: 312-84-5 PC ae C36:5.K1
PC ae C34:2.K1
PC ae C36:3.K1
C3-OH.K1
PC ae C42:1.K1
H1.K1 8 Aldohexosas (Forma D) más comunes en la naturaleza: D-Glucosa, D-Galactosa y D-Manosa, 4 Cetohexosas (Forma D): D-Psicosa, D-Fructosa, D-Sorbosa, D-Tagatosa
PC ae C36:2.K1
SM C22:3.K1
SM C24:1.K1
C4-OH (C3-DC).K1
PC aa C40:1.K1
PC aa C32:3.K1
PC aa C42:1.K1
PC aa C36:5.K1
PC aa C42:6.K1
DHA.PA 6217-54-5 No se especifica la isomería cis-trans de los dobles enlaces: N.°
CAS: 25167-62-8;
SM C20:2.K1
C4:1.K1
(continuación)
Código BC Número de Especies con la misma estructura:
registro CAS_______________________________
SM C24:0.K1
PC ae C38:0.K1
Kyn/OHKyn
Arg.K2 74-79-3 DL-Arginina N.° CAS: 7200-25-1; D-Arginina N.° CAS:157-06-2 total DMA.K2
PC aa C34:3.K1
PC ae C38:2.K1
PUFA/MUFA
PC aa C42:0.K1
SM C18:1.K1
PC aa C32:2.K1
PUFA/MUFA
lysoPC a C18:
2. K1
PC ae C44:3.K1
PC ae C40:0.K1
Xle.K2
PC aa C24:0.K1
PC aa C38:1.K1
SM C18:0.K1
PC aa C42:2.K1
lysoPC a C20:
3. K1
PC ae C36:1.K1
C3:1.K1
lysoPC a C18:
1.K1
C8:1.K1
C8.K1
PC aa C30:0.K1
PC ae C44:5.K1
lysoPC a C14:
0.K1
Creatinina.K2 60-27-5
C0.K1 461-06-3 DL-Carnitina N.° CAS: 406-76-8; D-Carnitina N.° CAS: 541-14-0 Thr.K2 72-19-5 DL-Treonina N.° CAS: 80-68-2; D-Treonina N.° CAS: 632-20-2; Alo-DL-Treonina (ácido (2S,3S)-2-amino-3-hidroxibutanoico) N.° CAS:
144-98-9
Phe/Tyr
Gly.K2 56-40-6
PC aa C26:0.K1
C5-OH (C3-DC-M).K1
PC aa C34:1.K1
lysoPC a C28:
1.K1
Met-SO/Met
C10:1.K1
PC aa C36:0.K1
SDMA.K2 30344-00-4
Trp.K2 73-22-3 DL-Triptófano N.° CAS: 54-12-6; D-Triptófano N.° CAS: 153-94-6 PC ae C34:3.K1
PC aa C36:2.K1
PC aa C36:1.K1
Kyn.K2 343-65-7
PC aa C32:1.K1
C7-DC.K1
SDMA/ADMA
PUFA/SFA
Arg.EM 74-79-3 DL-Arginina N.° CAS: 7200-25-1; D-Arginina N.° CAS:157-06-2 PC aa C36:3.K1
13S-HODE.PA Ácido 13-hidroxioctadecadienoico N.° CAS: 5204-88-6; Ácido 9,11-octadecadienoico, 13-hidroxi-, (R-(E,Z))- N.° CAS: 10219-69-9 (continuación)
Código BC Número de Especies con la misma estructura:
_________________________ registro CAS________________________________________
SDMA/ADMA
PUFA/SFA
PC ae C44:6.K1
lysoPC a C6:
0. K1
ADMA.K2 30315-93-6 N,N-Dimetil-L-Arginina N.° CAS: 102783-24-4
PC aa C32:0.K1
SumaSMOH/
SumaSM
MUFA/SFA
PC ae C42:0.K1
C6:1.K1
lysoPC a C26:
1. K1
C12-DC.K1
C10.K1
lysoPC a C26:
0.K1
Las tablas 1a y 1b resumen los metabolitos analizados y las abreviaturas respectivas; los glicerofosfolípidos se diferencian adicionalmente con respecto a la presencia de enlaces éster (a) y éter (e) en el resto de glicerol, en que dos letras (aa, ea o ee) denotan que la primera y la segunda posición del armazón de glicerol están unidas a un resto de ácido graso, mientras que una sola letra (a o e) indica un enlace con únicamente un resto de ácido graso; por ejemplo, PC_ea_33:1 denota una fosfatidilcolina plasmalógena con 33 carbonos en las dos cadenas laterales de ácidos grasos y un solo doble enlace en una de ellas.
Tabla 1c: Compuestos y familias químicas
Nombre en series de
datos Nombre de lab. Nombre explícito Familia química C0.K1 C0 Carnitina (libre) ac.carnitinas Decanoilcarnitina [Capril
C10.K1 C10(C4:1-DC) carnitina] (Fumarilcarnitina) ac.carnitinas C10:1.K1 C10:1 Decenoilcarnitina ac.carnitinas C10:2.K1 C10:2 Decadienoilcarnitina ac.carnitinas Dodecanoilcarnitina
C12.K1 C12 [Laurilcarnitina] ac.carnitinas C12-DC.K1 C12-DC Dodecanodioilcarnitina ac.carnitinas C12:1.K1 C12:1 Dodecenoilcarnitina ac.carnitinas Tetradecanoilcarnitina
C14.K1 C14 [Miristilcarnitina] ac.carnitinas Tetradecenoilcarnitina
C14:1.K1 C14:1 [Miristoleilcarnitina] ac.carnitinas
3-Hidroxitetradecenoilcarnitina
C14:1-OH.K1 C14:1-OH [3-Hidroximiristoleilcarnitina] ac.carnitinas C14:2.K1 C14:2 Tetradecadienoilcarnitina ac.carnitinas
3-
C14:2-OH.K1 C14:2-OH Hidroxitetradecadienoilcarnitina ac.carnitinas Hexadecanoilcarnitina
C16.K1 C16 [Palmitoilcarnitina] ac.carnitinas
3-Hidroxihexadecanoilcarnitina
C16-OH.K1 C16-OH [3-Hidroxipalmitoilcarnitina] ac.carnitinas Hexadecenoilcarnitina
C16:1.K1 C16:1 [Palmitoleilcarnitina] ac.carnitinas
3-Hidroxihexadecenoilcarnitina
C16:1-OH.K1 C16:1-OH [3-Hidroxipalmitoleilcarnitina] ac.carnitinas C16:2.K1 C16:2 Hexadecadienoilcarnitina ac.carnitinas
Figure imgf000026_0001
Nombre en series de
datos Nombre de lab. Nombre explícito Familia química
3-
C16:2-OH.K1 C16:2-OH Hidroxihexadecadienoilcarnitina ac.carnitinas Octadecanoilcarnitina
C18.K1 C18 [Estearilcarnitina] ac.carnitinas Octadecenoilcarnitina
C18:1.K1 C18:1 [Oleilcarnitina] ac.carnitinas 3-Hidroxioctadecenoilcarnitina
C18:1-OH.K1 C18:1-OH [3-Hidroxioleilcarnitina] ac.carnitinas Octadecadienoilcarnitina
C18:2.K1 C18:2 [Linoleilcarnitina] ac.carnitinas C2.K1 C2 Acetilcarnitina ac.carnitinas C3.K1 C3 Propionilcarnitina ac.carnitinas C3-OH.K1 C3-OH Hidroxipropionilcarnitina ac.carnitinas C3:1.K1 C3:1 Propenoilcarnitina ac.carnitinas Butirilcarnitina /
C4.K1 C4 Isobutirilcarnitina ac.carnitinas C4-OH (C3-DC).K1 C4-OH (C3-DC) 3-Hidroxibutirilcarnitina ac.carnitinas C4:1.K1 C4:1 Butenoilcarnitina ac.carnitinas Isovalerilcarnitina / 2-Metilbutirilcarnitina /
C5.K1 C5 Valerilcarnitina ac.carnitinas C5-DC (C6-OH).K1 C5-DC (C6-OH) Glutarilcarnitina ac.carnitinas C5-OH (C3-DC- 3-Hidroxiisovalerilcarnitina / 3-M).K1 C5-OH (C3-DC-M) Hidroxi-2-meti l b utirilo ac.carnitinas Tiglilcarnitina / 3-Metil-C5:1.K1 C5:1 crotonilcarnitina ac.carnitinas Glutaconilcarnitina /
Mesaconilcarnitina
C5:1-DC.K1 C5:1-DC (Undecanoilcarnitina ) ac.carnitinas Hexanoilcarnitina
C6 (C4:1-DC).K1 C6 [Caproilcarnitina] ac.carnitinas C6:1.K1 C6:1 Hexenoilcarnitina ac.carnitinas C7-DC.K1 C7-DC Pimelilcarnitina ac.carnitinas Octanoilcarnitina
C8.K1 C8 [Caprililcarnitina] ac.carnitinas C8:1.K1 C8:1 Octenoilcarnitina ac.carnitinas Nonanoilcarnitina
C9.K1 C9 [Pelargonilcarnitina] ac.carnitinas H1.K1 H1 Hexosas azúcares Hidroxiesfingomielina con resto acilo
SM (OH) C14:1.K1 SM (OH) C14:1 suma C14:1 esfingolípidos Hidroxiesfingomielina con resto acilo
SM (OH) C16:1.K1 SM (OH) C16:1 suma C16:1 esfingolípidos Hidroxiesfingomielina con resto acilo
SM (OH) C22:1.K1 SM (OH) C22:1 suma C22:1 esfingolípidos Hidroxiesfingomielina con resto acilo
SM (OH) C22:2.K1 SM (OH) C22:2 suma C22:2 esfingolípidos Hidroxiesfingomielina con resto acilo
SM (OH) C24:1.K1 SM (OH) C24:1 suma C24:1 esfingolípidos SM C16:0.K1 SM C16:0 esfingomielina con resto acilo suma C16:0 esfingolípidos SM C16:1.K1 SM C16:1 esfingomielina con resto acilo suma C16:1 esfingolípidos SM C18:0.K1 SM C18:0 esfingomielina con resto acilo suma C18:0 esfingolípidos SM C18:1.K1 SM C18:1 esfingomielina con resto acilo suma C18:1 esfingolípidos SM C20:2.K1 SM C20:2 esfingomielina con resto acilo suma C20:2 esfingolípidos SM C22:3.K1 SM C22:3 esfingomielina con resto acilo suma C22:3 esfingolípidos SM C24:0.K1 SM C24:0 esfingomielina con resto acilo suma C24:0 esfingolípidos SM C24:1.K1 SM C24:1 esfingomielina con resto acilo suma C24:1 esfingolípidos (continuación)
Nombre en series de
datos Nombre de lab. Nombre explícito Familia química SM C26:0.K1 SM C26:0 esfingomielina con resto acilo suma C26:0 esfingolípidos SM C26:1.K1 SM C26:1 esfingomielina con resto acilo suma C26:1 esfingolípidos PC aa C24:0.K1 PC aa C24:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C24:0 glicerofosfolípidos PC aa C26:0.K1 PC aa C26:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C26:0 glicerofosfolípidos PC aa C28:1.K1 PC aa C28:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C28:1 glicerofosfolípidos PC aa C30:0.K1 PC aa C30:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C30:0 glicerofosfolípidos PC aa C30:2.K1 PC aa C30:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C30:2 glicerofosfolípidos PC aa C32:0.K1 PC aa C32:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C32:0 glicerofosfolípidos PC aa C32:1.K1 PC aa C32:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C32:1 glicerofosfolípidos PC aa C32:2.K1 PC aa C32:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C32:2 glicerofosfolípidos PC aa C32:3.K1 PC aa C32:3 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C32:3 glicerofosfolípidos PC aa C34:1.K1 PC aa C34:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C34:1 glicerofosfolípidos PC aa C34:2.K1 PC aa C34:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C34:2 glicerofosfolípidos PC aa C34:3.K1 PC aa C34:3 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C34:3 glicerofosfolípidos PC aa C34:4.K1 PC aa C34:4 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C34:4 glicerofosfolípidos PC aa C36:0.K1 PC aa C36:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:0 glicerofosfolípidos PC aa C36:1.K1 PC aa C36:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:1 glicerofosfolípidos PC aa C36:2.K1 PC aa C36:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:2 glicerofosfolípidos PC aa C36:3.K1 PC aa C36:3 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:3 glicerofosfolípidos PC aa C36:4.K1 PC aa C36:4 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:4 glicerofosfolípidos PC aa C36:5.K1 PC aa C36:5 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:5 glicerofosfolípidos PC aa C36:6.K1 PC aa C36:6 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C36:6 glicerofosfolípidos PC aa C38:0.K1 PC aa C38:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:0 glicerofosfolípidos PC aa C38:1.K1 PC aa C38:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:1 glicerofosfolípidos PC aa C38:3.K1 PC aa C38:3 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:3 glicerofosfolípidos PC aa C38:4.K1 PC aa C38:4 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:4 glicerofosfolípidos PC aa C38:5.K1 PC aa C38:5 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:5 glicerofosfolípidos PC aa C38:6.K1 PC aa C38:6 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C38:6 glicerofosfolípidos PC aa C40:1.K1 PC aa C40:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:1 glicerofosfolípidos PC aa C40:2.K1 PC aa C40:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:2 glicerofosfolípidos PC aa C40:3.K1 PC aa C40:3 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:3 glicerofosfolípidos PC aa C40:4.K1 PC aa C40:4 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:4 glicerofosfolípidos PC aa C40:5.K1 PC aa C40:5 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:5 glicerofosfolípidos PC aa C40:6.K1 PC aa C40:6 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C40:6 glicerofosfolípidos PC aa C42:0.K1 PC aa C42:0 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:0 glicerofosfolípidos PC aa C42:1.K1 PC aa C42:1 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:1 glicerofosfolípidos PC aa C42:2.K1 PC aa C42:2 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:2 glicerofosfolípidos PC aa C42:4.K1 PC aa C42:4 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:4 glicerofosfolípidos PC aa C42:5.K1 PC aa C42:5 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:5 glicerofosfolípidos PC aa C42:6.K1 PC aa C42:6 Fosfatidi lcolina con resto diacilo suma C42:6 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acil-alquilo suma
PC ae C30:0.K1 PC ae C30:0 C30:0 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C30:1.K1 PC ae C30:1 C30:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C30:2.K1 PC ae C30:2 C30:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C32:1.K1 PC ae C32:1 C32:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C32:2.K1 PC ae C32:2 C32:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C34:0.K1 PC ae C34:0 C34:0 glicerofosfolípidos PC ae C34:1.K1 PC ae C34:1 Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma glicerofosfolípidos (continuación)
Nombre en series de
datos Nombre de lab Nombre explícito Familia química
C34:1
Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C34:2.K1 PC ae C34:2 C34:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C34:3.K1 PC ae C34:3 C34:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:0.K1 PC ae C36:0 C36:0 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:1.K1 PC ae C36:1 C36:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:2.K1 PC ae C36:2 C36:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:3.K1 PC ae C36:3 C36:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:4.K1 PC ae C36:4 C36:4 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C36:5.K1 PC ae C36:5 C36:5 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:0.K1 PC ae C38:0 C38:0 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:1.K1 PC ae C38:1 C38:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:2.K1 PC ae C38:2 C38:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:3.K1 PC ae C38:3 C38:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:4.K1 PC ae C38:4 C38:4 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:5.K1 PC ae C38:5 C38:5 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C38:6.K1 PC ae C38:6 C38:6 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:0.K1 PC ae C40:0 C40:0 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:1.K1 PC ae C40:1 C40:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:2.K1 PC ae C40:2 C40:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:3.K1 PC ae C40:3 C40:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:4.K1 PC ae C40:4 C40:4 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:5.K1 PC ae C40:5 C40:5 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C40:6.K1 PC ae C40:6 C40:6 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:0.K1 PC ae C42:0 C42:0 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:1.K1 PC ae C42:1 C42:1 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:2.K1 PC ae C42:2 C42:2 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:3.K1 PC ae C42:3 C42:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:4.K1 PC ae C42:4 C42:4 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C42:5.K1 PC ae C42:5 C42:5 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C44:3.K1 PC ae C44:3 C44:3 glicerofosfolípidos Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma
PC ae C44:4.K1 PC ae C44:4 C44:4 glicerofosfolípidos PC ae C44:5.K1 PC ae C44:5 Fosfatidilcolina con resto acilalqui o suma glicerofosfolípidos (continuación)
Nombre en series de
datos Nombre de lab. Nombre explícito Familia química
C44:5
Fosfatidilcolina con resto acilalquilo suma
PC ae C44:6.K1 PC ae C44:6 C44:6 glicerofosfolípidos lysoPC a C14:0.K1 lysoPC a C14:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C14:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C16:0.K1 lysoPC a C16:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C16:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C16:1.K1 lysoPC a C16:1 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C16:1 glicerofosfolípidos lysoPC a C17:0.K1 lysoPC a C17:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C17:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C18:0.K1 lysoPC a C18:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C18:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C18:1.K1 lysoPC a C18:1 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C18:1 glicerofosfolípidos lysoPC a C18:2.K1 lysoPC a C18:2 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C18:2 glicerofosfolípidos lysoPC a C20:3.K1 lysoPC a C20:3 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C20:3 glicerofosfolípidos lysoPC a C20:4.K1 lysoPC a C20:4 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C20:4 glicerofosfolípidos lysoPC a C24:0.K1 lysoPC a C24:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C24:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C26:0.K1 lysoPC a C26:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C26:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C26:1.K1 lysoPC a C26:1 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C26:1 glicerofosfolípidos lysoPC a C28:0.K1 lysoPC a C28:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C28:0 glicerofosfolípidos lysoPC a C28:1.K1 lysoPC a C28:1 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C28:1 glicerofosfolípidos lysoPC a C6:0.K1 lysoPC a C6:0 Lisofosfatidilcolina con resto acilo C6:0 glicerofosfolípidos Gly.K2 Gly Glicina aminoácidos Ala.K2 Ala Alanina aminoácidos Ser.K2 Ser Serina aminoácidos Pro.K2 Pro Prolina aminoácidos Val.K2 Val Valina aminoácidos Thr.K2 Thr Treonina aminoácidos Xle.K2 Ile Isoleucina aminoácidos Leu.K2 Leu Leucina aminoácidos Ile.K2 Ile Isoleucina aminoácidos Asn.K2 Asn Asparagina aminoácidos Asp.K2 Asp Ácido aspártico aminoácidos Gln.K2 Gln Glutamina aminoácidos Glu.K2 Glu Glutamato aminoácidos Met. K2 Met Metionina aminoácidos His.K2 His Histidina aminoácidos Phe.K2 Phe Fenilalanina aminoácidos Arg.K2 Arg Arginina aminoácidos Cit.K2 Cit Citrulina aminoácidos Tyr.K2 Tyr Tirosina aminoácidos Trp.K2 Trp Triptófano aminoácidos Orn.K2 Orn Ornitina aminoácidos Lys.K2 Lys Lisina aminoácidos ADMA.K2 ADMA Dimetilarginina asimétrica amina biogénica SDMA.K2 SDMA Dimetilarginina simétrica amina biogénica DMA total.K2 totalDMA Dimetilarginina total amina biogénica Histamina.K2 Histamine Histamina amina biogénica Met-SO.K2 Metionina-Sulfóxido Metionina-Sulfóxido aminoácidos Kyn.K2 Quinurenina Quinurenina amina biogénica OH-Kyn.K2 Hidroxiquinurenina Hidroxiquinurenina amina biogénica Putrescina.K2 Putrescina Putrescina amina biogénica Espermidina.K2 Espermidina Espermidina amina biogénica Espermina.K2 Espermina Espermina amina biogénica Serotonina.K2 Serotonin Serotonina amina biogénica (continuación)
Nombre en series de
datos Nombre de lab. Nombre explícito Familia química Creatinina.K2 Creatinine Creatinina amina biogénica Lac.EM Lac Lactato ácido Fum.EM Fum Ácido fumárico ácido Asp.EM Asp Ácido aspártico aminoácidos Arg.EM Arg Arginina aminoácidos Pyr OAA.EM Pyr+OAA Piruvato Oxaloacetato ácido Suc.EM Suc Ácido succínico ácido alfa-KGA.EM alfa-KGA Ácido alfa-cetoglutárico ácido Hex.EM Hex Hexosa (p.ej., Glucosa) azúcares TCDCA.BA TCDCA Ácido taurochenodeoxicólico ácido biliar GCA.BA GCA Ácido Glicocólico ácido biliar CA.BA CA Ácido cólico ácido biliar UDCA.BA UDCA Ácido ursodeoxicólico ácido biliar CDCA.BA CDCA Ácido quenodeoxicólico ácido biliar GCDCA.BA GCDCA Ácido glicoquenodeoxicólico ácido biliar LCA.BA LCA Ácido litocólico ácido biliar 13S-HODE.PA 13S-HODE Ácido 13(S)-hidroxi-9Z, 11 E-octadecadienoico prostaglandina DHA.PA DHA Ácido docosahexaenoico prostaglandina AA.PA AA Ácido araquidónico prostaglandina Compuesto de 22ROHC 22-R-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,22-diol, (3beta,22R)- colesterol Compuesto de 24SOHC 24-S-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,24-diol, (3beta,24S)- colesterol Compuesto de 25OHC 25-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3beta,25-diol colesterol Compuesto de 27OHC 27-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,26,diol, (3beta,25R)- colesterol Compuesto de 20aOHC 20a-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3beta,20-diol, (20S)- colesterol Compuesto de 22SOHC 22S-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,22-diol, (3beta,22S)- colesterol Compuesto de 24,25EC 24,25-Epoxicolesterol Colestan-3-ol, 24,25-epoxi-, (3alfa,5beta)- colesterol 3l3,5a,6l3- Compuesto de 3B,5a,6BTHC Trihidroxicolestano Colestan-3beta,5alfa,6beta-triol colesterol Compuesto de 7aOHC 7a-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,7-diol, (3beta,7alfa)- colesterol Compuesto de 7KC 7-Cetocolesterol Colest-5-en-7-ona, 3-hidroxi-, (3-beta)- colesterol Colestan-3-ol, 5,6-epoxi-, Compuesto de 5B,6B,EC 513,613-Epoxicolesterol (3beta,5beta,6beta)- colesterol Compuesto de 5a,6a,EC 5a,6a-Epoxicolesterol Colestan-3-ol, 5,6-epoxi-, (3beta,5alfa,6alfa)- colesterol Compuesto de 4BOHC 413-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,4-diol, (3beta,4beta)- colesterol Compuesto de Desmosterol Desmosterol Colesta-5,24-dien-3-ol, (3beta)- colesterol Compuesto de 7DHC 7-Dehidrocholesterol Colesta-5,7-dien-3-ol, (3beta)- colesterol Compuesto de Colestenona Colestenona Colest-5-en-3-one colesterol Compuesto de Lanosterol Lanosterol Lanosta-8,24-dien-3-ol, (3beta)- colesterol Compuesto de 24DHLan 24-Dihidrolanosterol (3beta)-Lanost-8-en-3-ol colesterol Ejemplos
Se sometieron lechones a asfixia. Para “imitar” la asfixia en el nacimiento, se expuso la sangre entera a hipoxia sometiendo a los lechones a ventilación con oxígeno al 8 % y CO2 añadido para conseguir hipercarbia. Se usó hipotensión para producir lesiones isquémicas y se produjeron como resultado de la hipoxia hipercárbica.
Procedimiento experimental:
La National Animal Research Authority, (NARA), aprobó el protocolo experimental. Los animales de cuidaron y se manejaron de acuerdo con las Directrices Europeas para el Uso de Animales Experimentales. El Consejo Noruego para Investigación Animal aprobó el protocolo experimental. Los animales se cuidaron y se manejaron de acuerdo con las Directrices Europeas para el Uso de Animales Experimentales, certificado por FELASA (Federación de la Asociación Científica Europea de Animales de Laboratorio). En el estudio se incluyeron treinta y cuatro cerdos Noroc recién nacidos (LYxLD) (de 12-36 h de edad). Además, se tenía un grupo de referencia que consistía en 6 cerdos recién nacidos que se sometieron a todos los procedimientos.
Preparación quirúrgica y anestesia
La anestesia se indujo administrando Sevofluran 5 % (Sevorane, Abbott); se canuló una vena de la oreja, los lechones recibieron pentobarbital sódico 15 mg/kg y Fentanyl 50 pg/kg por vía intravenosa como una inyección en embolada. Los lechones se intubaron por vía oral y después se pusieron sobre su lomo y se lavaron para realizar procedimientos estériles. La anestesia se mantuvo por infusión continua de Fentanyl (50 pg ■ kg-1 h-1) y Midazolam (0,25 mg ■ kg-1 h-1) en mezclas, dando 1 ml/kg/h para cada fármaco aplicado por una bomba de infusión IVAC P2000. Cuando fue necesario, se añadió una embolada de Fentanyl (10 pg/kg), Midazolam (1 mg/kg) o Pentobarbital (2,5 mg/kg) (definiéndose la necesidad de la medicación como estremecimiento, activación en el respirador, aumento de tono evaluado por movimientos pasivos de las extremidades, aumento de la presión sanguínea y/o pulso). Se administró una infusión IV continua (Salidex: solución salina al 0,3 % y glucosa al 3,5 %, 10 ml ■ kg-1 ■ h-1) hasta la hipoxia y a partir de 15 minutos después del inicio de la resucitación y a lo largo de todo el experimento. Los lechones se ventilaron con un ventilador controlado por presión (Babylog 8000+; Dragerwerk, Lübeck, Alemania). Se consiguieron la normoventilación (tensión arterial de dióxido de carbono (PaCO2) 4,5-5,5 kPa) y un volumen tidal de 6-8 ml/kg ajustando la presión de inspiración máxima o el ritmo de ventilación. El ritmo de ventilación fue de 15-40 respiraciones/min. A lo largo de todo el experimento, se mantuvo constante el tiempo de inspiración de 0,4 s y una presión espiratoria final positiva de 4,5 cm de H2O. La fracción inspirada de O2 y el valor tidal final de CO2 se controló de forma continua (Datex Normocap Oxy; Datex, Helsinki, Finlandia).
La arteria femoral izquierda se canuló con catéteres de polietileno (Porex PE-50, diámetro interno 0,58 mm; Porex Ltd Hythe, Kent, Reino Unido). La presión sanguínea arterial media (MABP) se midió continuamente en la arteria femoral izquierda usando sistemas MP150-CE de BioPac. La temperatura rectal se mantuvo entre 38,5 y 39,5 °C con una manta calefactora y una lámpara de calor radiante. Se dejó una hora de estabilización después de la cirugía. Al final del experimento, a los lechones se les administró una sobredosis de 150 mg/kg de pentobarbital por vía intravenosa. (Enucleación del ojo a 15 (30 Gr 3) y 60 min)
Protocolo experimental:
Se consiguió hipoxemia por ventilación con una mezcla de gas de O2 al 8 % en N2 hasta que la presión sanguínea arterial media se redujo a 20 mm Hg o el exceso de base (BE) alcanzó -20 mM. Se añadió CO2 durante la hipoxemia con la intención de conseguir una PaCO2 de 8,0 - 9,5 kPa, para imitar la asfixia perinatal. Antes de iniciar la resucitación, los lechones hipóxicos se distribuyeron aleatoriamente en bloques para la resucitación con oxígeno al 21 % o al 100 % durante 15 min y después ventilación con aire ambiente durante 45 min (grupos 1 y 2), o para recibir oxígeno al 100 % durante 60 min (grupo 3). Después de iniciar la reoxigenación, los lechones se mantuvieron normocápnicos (PaCO2 4,5 - 5,5 kPa). A lo largo de todo el experimento, hubo una vigilancia continua de las mediciones de presión sanguínea, saturación, pulso, temperatura y gases en sangre. La hemoglobina se midió en un HemoCue Hb 201+ (HemoCue AB, Angelholm, Suecia) en el punto inicial y al final. El estado ácido/base arterial corregido con respecto a la temperatura y la glucosa se midieron regularmente a lo largo del experimento en un Blood Gas Analyzer 860 (Ciba Corning Diagnostics, Midfield, Mass., Estados Unidos). Se extrajeron muestras de sangre para Metabolómica antes de iniciar la hipoxia, al final de la hipoxia y 60 min después de iniciar la reoxigenación, y se manipularon de acuerdo con el protocolo de Biocrates. Se prepararon plasma o suero de acuerdo con un protocolo estándar y después se almacenaron a menos 70 °C hasta el análisis posterior. Todas las muestras de sangre obtenidas del catéter de la arteria femoral se reemplazaron por solución salina a 1,5 veces el volumen extraído. Una hora después del final de la hipoxia, los animales recibieron una sobredosis de pentobarbital (150 mg/kg iv). El personal del estudio y el personal del laboratorio desconocían el porcentaje de oxígeno administrado por resucitación.
Analítica:
El perfil de metabolitos establecidos como diana por ESI MS/MS se realizó en Biocrates Life Sciences, Austria. La técnica se describe con detalle por la patente de Estados Unidos 20070004044 (accesible online en http://www.freepatents online.com/20070004044.html). En resumen, se usa un esquema de perfilado dirigido para seleccionar cuantitativamente metabolitos de molécula pequeña conocidos usando monitorización de reacción múltiple, pérdida neutra y exploraciones de iones precursores. La cuantificación de los metabolitos de la muestra biológica se consigue por referencia a patrones internos apropiados. El método ha resultado estar de acuerdo con el título 21 del Código de Regulaciones Federales, parte 11, y se ha usado en el pasado en diferentes aplicaciones académicas e industriales (2, 17). Se usó un método LC-MS/MS e inyección de flujo metabolómico dirigida de alto rendimiento sensible, muy robusta y multiparamétrica, para la cuantificación simultánea de intermedios endógenos, particularmente aminoácidos, aminas biogénicas, acilcarnitinas, esfingomielinas, hexosas, glicerofosfolípidos, ácidos orgánicos pequeños y eicosanoides en muestras cerebrales, lo que permitió la determinación de una amplia serie de analitos diana. Todos los procedimientos (manipulación de muestras, analíticas) se realizaron por colaboradores desconocedores de los grupos.
Determinación y cuantificación de oxisteroles en muestras biológicas por LC-MS/MS
Los oxisteroles se determinan por HPLC-espectrómetro de masas en tándem (HPLC-API-MS/MS) en modo de detección positiva usando un modo de reacción múltiple (MRM).
Se pusieron muestras de 20 pl, calibradores o mezcla de patrón interno en una placa de captura y se precipitaron las proteínas por la adición de 200 pl de acetonitrilo y centrifugación. Se transfirieron 180 pl de los sobrenadantes apropiados a una nueva placa de filtro con manchas de filtro de 7 mm y se secaron bajo una corriente de nitrógeno. Los analitos se hidrolizaron por la adición de 100 pl de KOH 0,35 M en EtOH al 95 % seguido de una incubación de 2 h en la oscuridad. La mezcla de reacción se secó y se lavó tres veces con 200 pl de agua. Los oxisteroles se extrajeron con 100 pl de MeOH acuoso al 90 %. Se inyectaron 20 pl de la muestra extraída en el sistema de HPLC-MS/Ms . La separación cromatográfica y la detección se realizan usando una columna de HPLC Zorbax Eclipse XDB C18, 150 x 2,0 mm, 3,5 pm a un caudal de 0,3 ml/min seguido de ionización de electronebulización en el espectrómetro de masas en tándem API4000. Para la cuantificación, se usó el software Analyst Quantitation de Applied Bioystems.
Análisis estadístico:
Todos los cálculos estadísticos se han realizado usando el software estadístico R (R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team, R Foundation for Statistical Computing, Viena, Austria, 2008, ISBN 3-900051-07-0).
Los analitos que se detectaron en al menos el 15 % de las muestras se seleccionaron para análisis adicionales dando como resultado una lista de 213 compuestos/metabolitos junto con 28 sumas y relaciones de compuesto/metabolito conocidas (Tabla 2).
Los datos metabólicos están censurados por el lado izquierdo debido a que el umbral de los datos del espectrómetro de masas hace que no se detecten algunos picos/señales. Por una combinación de dinamismo de rutas metabólicas, interacción molecular de muestras complejas y eficacia global del protocolo analítico, el reemplazo de datos ausentes por medio de un algoritmo multivariante se prefiere a una imputación ingenua por un valor preespecificado similar tal como, por ejemplo, cero. En este caso, las concentraciones de metabolito ausentes se reemplazan por el valor medio de las 6 muestras más parecidas a aquella en la que está ausente la medición (impute: imputation for microarray data, Hastie T., Tibshirani R., Narasimhan B. y Chu G., R, versión del paquete 1.14.0).
A excepción de la determinación del cambio en veces (FC), todos los análisis estadísticos se realizan sobre datos preprocesados - es decir, transformados en logaritmos. Se usa la función gls en el paquete nlme (nlme: Linear and Nonlinear Mixed Effects Models, Pinheiro J., Bates D., DebRoy S., Sarkar D. y the R Core team, 2008, R, versión del paquete 3.1-90) para calcular los modelos lineales que especifican dentro del grupo de tratamiento la estructura de heteroscedasticidad y en caso contrario los parámetros por defecto. Los valores de p resultantes se ajustan por el método descrito en Benjamini y Hochberg (Benjamini Y. y Hochberg Y., Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing, Journal of the Royal Statistical Society Series B, 1995, 57, 289­ 300) conduciendo a los denominados valores de q.
Los resultados para comparar la asfixia con ausencia de asfixia se proporcionan en la Tabla 2. Los resultados de las comparaciones SA (inicio de la asfixia) vs. EA (final de la asfixia) y eA vs ER (final de la resucitación) se presentan en las Figuras 1 a 3, en donde se establece un valor de q umbral de 0,001 para seleccionar analitos. Los cambios en veces representados se calculan a partir de la concentración original de relación media entre dos puntos de tiempo y se presentan como cambios en comparación con el grupo de control (valores positivos) o con el grupo tratado (valores negativos).
Las propiedades de sensibilidad/especificidad de un clasificador que comprende un analito o una combinación de analitos se resumen en términos de área bajo la curva (AUC) de características operativas del receptor. La función colAUC (caTools: Tools: moving window statistics, GIF, Base64, ROC AUC, etc., Tuszynski J., 2008, R, versión del paquete 1.9) se usa para calcular y representar curvas ROC. El comportamiento de marcadores individuales, así como de combinaciones de marcadores se evalúa por clasificación mediante bosque aleatorio a través del paquete R aportado de bosque aleatorio (Classification and Regression by randomForest, Liaw A. y Wiener M., R News, 2002 2(3): 18-22). Las capacidades predictivas de los modelos se calculan usando el método boostrap estratificado (B=20) que se repitió 5 veces para obtener una estimación de comportamiento y su varianza asociada (FIEmspro: Flow Injection Electrospray Mass Spectrometry Processing: data processing, classification modelling and variable selection in metabolite fingerprinting, Beckmann M., Enot D. y Lin W., 2007, R versión del paquete 1.1-0).
En la Tabla 2, los analitos y metabolitos individuales se clasifican de acuerdo con su poder discriminativo en términos de AUC para distinguir la asfixia de la ausencia de asfixia.
La Tabla 2 representa los rangos de los analitos y metabolitos individuales en términos de AUC para distinguir la asfixia de la ausencia de asfixia. Además, se proporcionan valores de p, valores de q (es decir, valores de p ajustados) y cambios en veces. Si se desea información adicional, véanse también las Figs. 1-3.
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces AUC 1 Suc 0,00E+00 0,00E+00 -5696,32 1,00 2 C4 0,00E+00 0,00E+00 -414,86 1,00 3 Lac 0,00E+00 0,00E+00 -1192,31 1,00 4 C16:1 2,66E-15 2,66E-14 -217,65 1,00 5 C16:2 5,55E-16 1,11 E-14 -280,00 0,99 6 Putrescina 5,45E-13 5,99E-12 -360,57 0,99 7 C10:2 2,55E-15 2,66E-14 90,20 0,99 8 Espermina 1,07E-11 3,93E-11 -175,44 0,99 9 Pyr OAA 7,12E-11 7,12E-11 -177,05 0,99 10 C5:1-DC 1,37E-12 9,11 E-12 -112,50 0,98 11 Glu/Gln 2,06E-13 5,77E-12 298,09 0,98 12 Espermidina 6,11 E-12 3,36E-11 -337,86 0,98 13 Gln 7,87E-08 1,44E-06 -112,10 0,97 14 C18:2 3,18E-14 2,54E-13 -225,18 0,97 15 alfa-KGA 5,01 E-11 6,26E-11 -187,63 0,96 16 C5 3,03E-12 1,73E-11 -248,87 0,96 17 PC ae C40:3 3,63E-09 3,34E-07 57,58 0,96 18 Asp/Asn 1,70E-08 1,58E-07 191,33 0,95 19 C14:2 7,71E-1 1 3,85E-10 -203,03 0,95 20 Lys 2,36E-06 9,82E-06 -277,31 0,95 21 Fum 0,00E+00 0,00E+00 -852,86 0,94 22 C3 1,31 E-10 5,74E-10 -286,23 0,94 23 Orn/Cit 1,52E-08 1,58E-07 -100,98 0,94 24 lysoPC a C16:0.K1 1,98E-08 9,11E-07 80,78 0,93 25 C18:1.K1 1,43E-10 5,74E-10 -277,89 0,93 26 C14:2-OH.K1 9,66E-08 2,97E-07 -39,73 0,92 27 Ala.K2 1,56E-07 1,44E-06 -155,53 0,92 28 Pro.K2 1,73E-07 1,44E-06 -85,34 0,92 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces 29 Ala/BCAA 3,95E-08 2,77E-07 -102,36 30 C16:2-OH.K1 5,14E-07 1,37E-06 -30,77 31 lysoPC a C17:0.K1 8,11E-08 2,49E-06 98,90 32 His.K2 7,51 E-07 3,82E-06 -114,09 33 PC ae C30:0.K1 2,70E-06 6,21 E-05 58,30 34 SumLiso 5,75E-07 2,68E-06 31,94 35 Putrescina/Orn 8,86E-08 4,96E-07 -250,65 36 Phe.K2 7,64E-07 3,82E-06 -55,79 37 C12.K1 2,09E-08 7,61 E-08 -68,63 38 TCDCA.BA 4,69E-07 1,64E-06 -507,88 39 lysoPC a C18:0.K1 6,00E-06 6,39E-05 72,70 40 PC ae C42:5.K1 5,50E-06 6,39E-05 27,28 41 SumSFA 9,69E-06 3,39E-05 26,85 42 GCDCA.BA 1,17E-06 2,73E-06 -706,02 43 Asn.K2 2,18E-05 6,80E-05 -54,57 44 C6 (C4:1-DC).K1 2,23E-06 5,58E-06 -27,10 45 PC aa C40:3.K1 1,26E-05 1,16E-04 74,34 46 PC ae C38:4.K1 5,92E-06 6,39E-05 73,56 47 C9.K1 4,06E-06 9,56E-06 -38,05 48 Leu.K2 2,11E-04 5,26E-04 -35,04 49 Val.K2 3,45E-05 9,59E-05 -46,32 50 lysoPC a C16:1.K1 3,78E-06 6,39E-05 48,21 51 C14.K1 7,65E-08 2,55E-07 -161,22 52 Espermina/Espermidina 4,86E-06 1,95E-05 77,81 53 PC aa C40:4.K1 2,57E-05 1,97E-04 69,07 54 C18:1-OH.K1 4,32E-05 9,09E-05 -31,10 55 C5:1.K1 2,70E-07 7,72E-07 -39,33 56 C2.K1 8,46E-05 1,69E-04 -51,90 57 Glu.K2 1,75E-05 6,27E-05 112,21 58 PC ae C38:5.KI 3,72E-04 1,43E-03 39,85 59 AA.PA 2,31 E-04 6,92E-04 88,68 60 PC aa C42:4.K1 6,25E-06 6,39E-05 86,78 61 PC aa C38:6.K1 7,04E-05 4,99E-04 47,20 62 SumPC+Liso 9,62E-05 2,69E-04 28,81 63 PC ae C40:6.K1 2,46E-04 1,08E-03 58,76 64 PC ae C40:4.K1 2,43E-05 1,97E-04 50,81 65 SM C26:1.K1 3,75E-05 5,63E-04 30,27 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces 66 PC aa C40:6.K1 1,42E-04 7,68E-04 70,46 67 SM (OH) C16:1.K1 6,24E-04 4,68E-03 54,87 68 PC ae C40:5.K1 1,23E-04 7,68E-04 65,13 69 PC ae C42:4.K1 1,31 E-04 7,68E-04 66,61 70 Orn/Arg 1,52E-04 3,54E-04 -50,90 71 PC ae C36:4.K1 4,39E-04 1,61 E-03 43,98 72 PC aa C40:5.K1 3,11E-04 1,30E-03 68,04 73 PC aa C40:2.K1 1,41 E-04 7,68E-04 19,89 74 GCA.BA 5,07E-08 3,55E-07 -1090,38 75 SumPUFA 2,46E-04 5,29E-04 30,54 76 SumPC 2,77E-04 5,54E-04 31,55 77 C14:1-OH.K1 3,40E-04 5,95E-04 -49,02 78 PC aa C38:4.K1 2,22E-04 1,05E-03 43,70 79 Serotonin/Trp 8,72E-05 2,69E-04 172,55 80 C14:1.K1 3,35E-05 7,44E-05 -105,36 81 PC aa C36:6.K1 1,73E-04 8,85E-04 51,15 82 PC ae C30:1.K1 6,69E-04 2,30E-03 38,62 83 C16:1-OH.K1 1,13E-04 2,15E-04 -49,02 84 PC ae C38:3.K1 3,35E-04 1,34E-03 36,15 85 PC ae C38:6.K1 1,90E-03 4,73E-03 38,08 86 Orn.K2 3,78E-04 8,58E-04 -33,69 87 PC ae C32:2.K1 2,09E-03 4,85E-03 39,84 88 SumSM 1,39E-03 2,16E-03 16,91 89 PC ae C38:1.K1 8,82E-04 2,80E-03 23,52 90 PC ae C34:1.K1 8,62E-04 2,80E-03 30,70 91 PC aa C36:4.K1 2,29E-04 1,05E-03 38,45 92 PC aa C30:2.K1 1,42E-03 4,16E-03 35,49 93 C16-OH.K1 3,42E-04 5,95E-04 -15,56 94 SumMUFA 7,92E-04 1,48E-03 19,84 95 PC ae C30:2.K1 2,99E-03 6,26E-03 18,49 96 PC aa C28:1.K1 2,61 E-03 5,58E-03 36,44 97 lysoPC a C24:0.K1 1,45E-03 4,16E-03 16,81 98 PC ae C42:3.K1 1,61 E-03 4,34E-03 71,88 99 Kyn/Trp 1,11 E-03 1,82E-03 38,72 00 Serotonina.K2 6,15E-04 1,69E-03 226,02 01 C12:1.K1 2,04E-03 3,26E-03 -13,07 02 Met-SO.K2 9,96E-04 2,08E-03 104,16 03 lysoPC a C28:0.K1 2,04E-03 4,85E-03 13,52 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces 04 PC ae C40:2.K1 1,44E-03 4,16E-03 27,36 05 C16+C18/C0 1,42E-04 3,54E-04 -99,53 06 PC aa C38:5.K1 1,75E-03 4,46E-03 36,62 07 PC ae C36:0.K1 2,39E-03 5,23E-03 24,93 08 UDCA.BA 1,01 E-03 1,77E-03 -269,98 09 SM (OH) C22:1.K1 1,81 E-03 4,91 E-03 27,15 10 PC aa C42:5.K1 6,74E-04 2,30E-03 57,93 11 Cit.K2 1,05E-02 1,38E-02 48,41 12 SM (OH) C22:2.K1 2,59E-03 5,55E-03 27,12 13 SM (OH) C24:1.K1 1,56E-03 4,91 E-03 15,39 14 C16.K1 5,45E-04 9,08E-04 -97,85 15 PC ae C34:0.K1 2,32E-03 5,20E-03 28,79 16 PC aa C38:3.K1 1,67E-03 4,39E-03 37,57 17 Asp.EM 1,08E-03 2,09E-03 78,57 18 Gly/BCAA 9,57E-04 1,68E-03 36,18 19 PC aa C42:1.K1 3,25E-03 6,50E-03 13,03 20 PC ae C36:5.K1 7,76E-03 1,27E-02 26,17 21 lysoPC a C20:4.K1 1,58E-03 4,34E-03 44,44 22 PC ae C36:3.K1 3,82E-03 7,32E-03 25,64 23 PC ae C36:2.K1 5,88E-03 1,02E-02 20,16 24 PC ae C32:1.K1 3,19E-03 6,50E-03 32,59 25 Met.K2 2,21E-03 3,69E-03 51,90 26 PC aa C38:0.K1 3,51 E-03 6,88E-03 27,68 27 SM (OH) C14:1.K1 1,84E-02 1,97E-02 38,66 28 C5-DC (C6-OH).K1 4,17E-03 6,18E-03 -28,57 29 SM C22:3.K1 3,70E-03 6,16E-03 23,10 30 Asp.K2 5,09E-03 7,96E-03 46,91 31 SM C26:0.K1 1,31 E-03 4,91 E-03 15,09 32 PC ae C40:1.K1 4,91 E-03 9,22E-03 48,11 33 PC aa C40:1.K1 2,11E-03 4,85E-03 9,62 34 PUFA/MUFA 1,00E-02 1,34E-02 7,80 35 C18.K1 1,84E-02 2,54E-02 -70,54 36 C3-OH.K1 2,34E-03 3,60E-03 -21,05 37 Tyr.K2 6,81 E-03 9,52E-03 -34,18 38 PC aa C36:5.K1 6,94E-03 1,16E-02 22,53 39 Ser.K2 1,83E-03 3,27E-03 -18,88 40 PC ae C42:2.K1 5,45E-03 1,00E-02 50,72 41 SM C24:1.K1 1,96E-03 4,91 E-03 14,69 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces 42 SM C16:1.K1 4,62E-03 6,31 E-03 34,79 43 PC ae C38:2.K1 9,29E-03 1,42E-02 15,20 44 Ala/Lys 3,30E-03 4,86E-03 33,04 45 PC ae C40:0.K1 8,10E-03 1,29E-02 13,45 46 Histamina.K2 1,56E-02 2,45E-02 119,64 47 C4-OH (C3-DC).K1 1,76E-02 2,52E-02 -28,30 48 PC ae C44:4.K1 2,49E-02 3,18E-02 40,91 49 Xle.K2 6,86E-03 9,52E-03 -11,85 50 SM C24:0.K1 3,11E-03 5,84E-03 13,86 51 PC ae C34:2.K1 6,59E-03 1,12E-02 29,21 52 SM C18:1.K1 1,85E-02 1,97E-02 19,23 53 C8.K1 2,62E-02 3,38E-02 -7,69 54 SM C16:0.K1 4,37E-03 6,31 E-03 29,12 55 C8:1.K1 2,16E-02 2,88E-02 8,09 56 PC aa C42:0.K1 1,46E-02 2,03E-02 18,21 57 PC aa C42:2.K1 8,09E-03 1,29E-02 8,94 58 DMA total.K2 1,29E-02 2,45E-02 -21,58 59 PC aa C32:3.K1 1,18E-02 1,78E-02 27,73 60 PC ae C42:1.K1 1,23E-02 1,82E-02 30,08 61 PC ae C36:1.K1 1,96E-02 2,57E-02 16,68 62 PC aa C42:6.K1 5,71E-03 1,01 E-02 25,85 63 24,25,EPC 7,99E-01 8,07E-01 12,79 64 SM C20:2.K1 1,97E-02 1,97E-02 27,85 65 Cit/Arg 1,80E-02 2,29E-02 31,23 66 lysoPC a C20:3.K1 8,27E-03 1,29E-02 12,94 67 PC ae C38:0.K1 1,25E-02 1,83E-02 26,76 68 Kyn/OHKyn 6,67E-03 9,34E-03 -20,64 69 PC aa C30:0.K1 1,87E-02 2,50E-02 12,41 70 PC aa C32:2.K1 1,53E-02 2,09E-02 20,96 71 PC aa C34:2.K1 1,30E-02 1,87E-02 31,29 72 PC aa C38:1.K1 5,70E-03 1,01 E-02 9,65 73 PC ae C44:3.K1 2,75E-02 3,42E-02 23,94 74 PC aa C34:4.K1 1,61E-02 2,18E-02 34,70 75 Hex.EM 4,11 E-01 4,94E-01 -58,08 76 PC aa C24:0.K1 1,98E-02 2,57E-02 23,18 77 DHA.PA 4,14E-01 4,14E-01 29,63 78 Desmosterol 6,94E-02 3,39E-01 27,78 79 PC aa C26:0.K1 1,23E-01 1,37E-01 3,05 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces 80 Ile.K2 7,40E-02 8,89E-02 34,37 81 C5-OH (C3-DC-M).K1 1,25E-01 1,52E-01 7,30 82 OH-Kyn.K2 1,55E-02 2,45E-02 36,61 83 24SOHC 7,83E-02 3,39E-01 -14,88 84 C3:1.K1 3,81 E-02 4,76E-02 20,00 85 lysoPC a C18:2.K1 2,87E-02 3,52E-02 26,65 86 lysoPC a C18:1.K1 2,73E-02 3,42E-02 18,24 87 PC ae C44:5.K1 2,34E-01 2,53E-01 17,90 88 SM C18:0.K1 1,92E-02 1,97E-02 22,56 89 Creatinina.K2 6,20E-01 6,20E-01 -17,92 90 lysoPC a C14:0.K1 1,39E-02 1,97E-02 4,70 91 H1.K1 4,94E-01 4,94E-01 -32,61 92 5a,6a,EPC 2,58E-01 4,79E-01 17,09 93 lysoPC a C28:1.K1 9,06E-02 1,06E-01 5,15 94 24DHLan 7,05E-01 8,07E-01 -48,05 95 27OHC 3,37E-01 5,31 E-01 8,09 96 4BOHC 2,07E-01 4,78E-01 6,74 97 C0.K1 2,50E-01 2,94E-01 14,29 98 Met-SO/Met 1,71 E-01 2,09E-01 5,92 99 PC aa C34:1.K1 5,28E-02 6,30E-02 7,59 00 25OHC 1,81 E-01 4,78E-01 -7,93 01 PUFA/SFA 2,83E-01 3,30E-01 5,28 02 SDMA.K2 1,18E-01 1,62E-01 -4,80 03 5B,6B,EPC 4,66E-01 6,06E-01 6,39 04 C7-DC.K1 3,24E-01 3,60E-01 -7,14 05 Trp.K2 7,47E-02 8,89E-02 -0,48 06 PC aa C34:3.K1 1,04E-01 1,19E-01 27,33 07 PC aa C32:1.K1 1,12E-01 1,26E-01 4,43 08 PC ae C34:3.K1 1,05E-01 1,19E-01 4,96 09 CDCA.BA 3,81 E-01 3,81 E-01 -81,76 10 PC aa C36:2.K1 1,31 E-01 1,44E-01 7,07 11 Colestenona 5,20E-02 3,39E-01 17,96 12 PC aa C36:3.K1 2,89E-01 3,05E-01 6,38 13 LCA.BA 2,05E-01 2,40E-01 -57,99 14 Gly.K2 4,32E-01 4,70E-01 14,56 15 PC ae C44:6.K1 2,52E-01 2,69E-01 2,62 16 13S-HODE.PA 2,15E-01 3,23E-01 -3,40 17 7aOHC 3,68E-01 5,31 E-01 7,07 (continuación)
N.° Analito valor de p valor de q cambio en veces AUC 218 CA.BA 4,71E-03 6,60E-03 -581,92 0,57 219 PC aa C36:1.K1 7,48E-02 8,82E-02 1,18 0,57 220 C10:1.K1 3,18E-01 3,60E-01 9,43 0,57 221 7DHC 2,21 E-01 4,78E-01 15,98 0,57 222 C4:1.K1 3,98E-01 4,31 E-01 30,36 0,57 223 SumSMOH/SumSM 6,05E-01 6,28E-01 -3,64 0,56 224 Kyn.K2 5,90E-01 6,20E-01 12,50 0,56 225 Phe/Tyr 8,25E-01 8,25E-01 16,64 0,56 226 lysoPC a C26:1.K1 5,91 E-01 6,05E-01 1,56 0,56 227 PC aa C32:0.K1 3,93E-01 4,11 E-01 -0,61 0,56 228 PC ae C42:0.K1 4,01 E-01 4,14E-01 -0,46 0,55 229 PC aa C36:0.K1 4,85E-02 5,87E-02 0,77 0,55 230 MUFA/SFA 4,20E-01 4,71E-01 1,34 0,55 231 Lanosterol 8,07E-01 8,07E-01 -3,53 0,55 232 Arg.K2 9,53E-01 9,53E-01 29,91 0,54 233 lysoPC a C26:0.K1 9,87E-01 9,87E-01 1,56 0,54 234 SDMA/ADMA 5,49E-01 5,92E-01 12,14 0,54 235 ADMA.K2 3,78E-01 4,62E-01 1,32 0,53 236 C12-DC.K1 4,22E-01 4,44E-01 1,12 0,53 237 C6:1.K1 6,12E-01 6,12E-01 3,57 0,52 238 lysoPC a C6:0.K1 6,14E-01 6,20E-01 -7,69 0,52 239 Arg.EM 8,76E-01 9,13E-01 -12,65 0,51 240 Thr.K2 2,52E-01 2,87E-01 15,28 0,51 241 C10.K1 5,87E-01 6,02E-01 1,77 0,51
Debido al alto poder predictivo para distinguir entre asfixia y ausencia de asfixia de varios analitos y metabolitos considerados individualmente (véase la Tabla 2), que se confirma por el análisis de componentes principales (PCA) con y sin los 30 metabolitos clasificados como superiores (véanse las Figs. 4a y 4b), se emplea una estrategia hacia atrás (backward) para decidir sobre una subserie de características óptimas. Se construyen modelos sucesivos mediante la eliminación iterativa de metabolitos de acuerdo con una puntuación de relevancia calculada por medio de una prueba t; es decir, mediante un denominado método filtro/ranker. En cada etapa, la precisión de la clasificación se calcula por bootstrapping (véase la Fig. 4c).
Además, las curvas de características operativas del receptor (ROC) representadas en la Fig. 5 proporcionan pruebas de que la combinación de un metabolito predictivo (por ejemplo, Leu) de la Tabla 1 con un parámetro clínico individual (por ejemplo, el ritmo cardiaco) proporciona una forma de aumentar la sensibilidad y especificidad para distinguir la asfixia de la ausencia de asfixia.
Para evaluar la duración de la hipoxia, se usan modelos de regresión (como se ha descrito anteriormente). En la Tabla 4 se proporciona una lista completa de los resultados. En la Fig. 6 se representa la duración de hipoxia real frente a la ajustada que implica el marcador usado comúnmente lactato (asteriscos grises), la relación Gly/BCAA y una combinación de tres parámetros metabolómicos. Como los resultados de la Fig. 6 demuestran, el poder predictivo de la relación Gly/BCAA y la combinación de tres parámetros metabolómicos claramente es mayor que la del lactato. En particular, la combinación de los tres parámetros metabolómicos conduce a un ajuste casi perfecto de la duración de la hipoxia.
Para probar la eficacia de la reoxigenación, se seleccionaron tres grupos de animales después de inducir asfixia experimentalmente como se ha descrito anteriormente:
Grupo 1: 21 % O2, 15 min
Grupo 2: 100 % O2, 15 min, seguido de 45 min con 21 % O2
Grupo 3: 100 % O2, 60 min.
Los análisis de regresión se continuaron por análisis post hoc usando el método de diferencia significativa honesta de Tukey. Los resultados de la Tabla 5, por ejemplo, indican que las relaciones de concentración C10:2 en el grupo 3 son significativamente mayores que en el grupo 1 y que las relaciones de concentración C3 son significativamente mayores en el grupo 2 que en el grupo 1 (véanse las Figs. 7a y 7b, Tabla 5). Sin conseguir un significado estadístico adecuado, el comportamiento de C3 puede prolongarse a varios compuestos análogos a C3 parcialmente debido a un grado relativo de correlación entre concentraciones y/o relación metabólica. En la Tabla 5 se proporciona una lista de todos los resultados de los análisis post hoc.
Finalmente, se realizan análisis discriminantes lineales (LDA). Debido al pequeño tamaño de muestra (de 7 a 10 lechones por grupo), se examinan modelos que incluyen no más de dos características para limitar el sobreajuste y, por consiguiente, evitar la interpretación excesivamente optimista. Los modelos se comparan de acuerdo con el bootstrap .632+, la precisión (con B=20) se promedia en 5 ensayos independientes. Las precisiones de los clasificadores construidos usando sólo C10:2 o sólo C3 son del 58 % y 48 % respectivamente. Estas precisiones pueden aumentarse a un 73 % combinando C3 y C10:2. Estos resultados demuestran que las combinaciones de analitos ofrecen una descripción significativa de diferencias en el grupo de resucitación con una mayor potencia discriminativa que los analitos individuales.
Tabla 3: Analitos derivados de colesterol
Número de Código BC Nombre común Nombre sistemático Registro CAS 22ROHC 22-R-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,22-diol, (3beta,22R)- 17954-98-2 24SOHC 24-S-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,24-diol, (3beta,24S)- 474-73-7 25OHC 25-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3beta,25-diol 2140-46-7 27OHC 27-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,26,diol, (3beta,25R)- 20380-11-4 20aOHC 20a-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3beta,20-diol, (20S)- 516-72-3 22SOHC 22S-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,22-diol, (3beta,22S)- 22348-64-7 24,25EC 24,25-Epoxicolesterol Colestan-3-ol, 24,25-epoxi-, (3alfa,5beta)- 68138-65-8 3B,5a,6BTHC 3l3,5a,6l3-Trihidrox¡colestano Colestan-3beta,5alfa,6beta-triol 1253-84-5 7aOHC 7a-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,7-diol, (3beta,7alfa)- 566-26-7 7KC 7-Cetocolesterol Colest-5-en-7-ona, 3-hidroxi-, (3-beta)- 566-28-9 5B,6B,EC 513,613-Epoxicolesterol Colestan-3-ol, 5,6-epoxi-, (3beta,5beta,6beta)- 4025-59-6 5a,6a,EC 5a,6a-Epoxicolesterol Colestan-3-ol, 5,6-epoxi-, (3beta,5alfa,6alfa)- 2953-38-0 4BOHC 413-Hidroxicolesterol Colest-5-eno-3,4-diol, (3beta,4beta)- 17320-10-4 Desmosterol Desmosterol Colesta-5,24-dien-3-ol, (3beta)- 313-04-2 7DHC 7-Dehidrocolesterol Colesta-5,7-dien-3-ol, (3beta)- 434-16-2 Colestenona Colestenona Colest-5-en-3-ona 601-54-7 Lanosterol Lanosterol Lanosta-8,24-dien-3-ol, (3beta)- 79-63-0 24DHLan 24-Dihidrolanosterol (3beta)-Lanost-8-en-3-ol 79-62-9
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Tabla 3 La numeración de los compuestos de colesterol en la tabla 3 es evidente a partir de la fórmula estructural numerada de más arriba. Los compuestos enumerados en la tabla 3 son particularmente útiles para evaluar la duración de la hipoxia y/o para evaluar el estado de oxigenación de los sujetos después y/o durante la resucitación (véanse las tablas 4 y 5)
Tabla 4: Duración de la hipoxia: se proporcionan los valores de p y valores de q (es decir, valores ajustados de p) de los análisis de regresión.
Duración de la hipoxia Efecto del género Interacción N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 1 C0.K1 1,20E-01 3,42E-01 4,06E-01 7,11 E-01 6,50E-01 8,76E-01 2 C10.K1 4,45E-04 2,54E-03 2,64E-01 5,48E-01 9,96E-01 9,96E-01 3 C10:1.K1 3,67E-01 6,56E-01 8,79E-01 9,50E-01 7,96E-01 9,22E-01 4 C10:2.K1 1,93E-02 7,99E-02 4,35E-01 7,20E-01 9,79E-01 9,88E-01 5 C12.K1 2,50E-10 5,00E-09 2,25E-01 5,06E-01 4,95E-01 7,61 E-01 6 C12-DC.K1 5,73E-01 8,19E-01 5,07E-01 7,61 E-01 8,73E-01 9,50E-01 7 C12:1.K1 8,39E-02 2,72E-01 9,22E-01 9,70E-01 8,72E-01 9,50E-01 8 C14.K1 4,55E-05 2,87E-04 2,65E-01 5,48E-01 8,87E-01 9,50E-01 9 C14:1.K1 2,93E-07 2,71E-06 4,31E-01 7,20E-01 2,08E-01 4,81 E-01 10 C14:1-OH.K1 1,27E-01 3,45E-01 7,73E-01 9,09E-01 3,30E-01 6,09E-01 11 C14:2.K1 1,37E-11 3,29E-10 4,09E-01 7,11 E-01 7,87E-02 2,62E-01 12 C14:2-OH.K1 8,50E-05 5,10E-04 2,55E-01 5,48E-01 8,55E-01 9,50E-01 13 C16.K1 1,50E-09 1,64E-08 2,01E-01 4,72E-01 7,16E-01 8,91E-01 14 C16-OH.K1 6,72E-03 3,10E-02 8,93E-02 2,75E-01 9,34E-01 9,70E-01 15 C16:1.K1 1,27E-11 3,29E-10 1,61 E-01 4,04E-01 3,02E-01 6,04E-01 16 C16:1-OH.K1 3,88E-05 2,59E-04 2,58E-01 5,48E-01 7,21 E-01 8,91 E-01 17 C16:2.K1 7,57E-10 1,14E-08 4,71E-02 1,61 E-01 5,70E-03 2,74E-02 18 C16:2-OH.K1 3,13E-05 2,21 E-04 6,45E-01 8,76E-01 6,35E-01 8,75E-01 19 C18.K1 2,31 E-07 2,31 E-06 2,28E-01 5,06E-01 8,01 E-01 9,22E-01 20 C18:1.K1 7,52E-10 1,14E-08 7,26E-01 8,91 E-01 3,30E-01 6,09E-01 21 C18:1-OH.K1 9,40E-04 4,90E-03 1,03E-01 3,01 E-01 6,33E-01 8,75E-01 22 C18:2.K1 2,31E-13 9,25E-12 4,42E-01 7,20E-01 4,60E-02 1,61 E-01 23 C2.K1 5,82E-06 4,66E-05 8,88E-02 2,75E-01 5,14E-01 7,61 E-01 24 C3.K1 1,10E-09 1,47E-08 6,99E-01 8,91 E-01 9,38E-01 9,70E-01 25 C3-OH.K1 1,94E-01 4,72E-01 2,58E-02 1,00E-01 1,61 E-01 4,04E-01 26 C3:1.K1 3,28E-01 6,09E-01 5,00E-01 7,61 E-01 7,03E-01 8,91 E-01 27 C4.K1 1,11 E-16 1,33E-14 3,14E-01 6,09E-01 2,80E-01 5,70E-01 28 C4-OH (C3-DC).K1 8,26E-01 9,35E-01 3,27E-01 6,09E-01 7,50E-01 8,91 E-01 29 C4:1.K1 2,35E-02 9,42E-02 7,41 E-01 8,91 E-01 7,48E-01 8,91 E-01 30 C5.K1 8,76E-14 5,26E-12 5,13E-01 7,61 E-01 5,51 E-01 7,96E-01 31 C5-DC (C6-OH).K1 6,34E-04 3,46E-03 6,64E-01 8,85E-01 1,23E-01 3,44E-01 32 C5-OH (C3-DC-M).K1 1,84E-02 7,90E-02 1,33E-01 3,54E-01 7,23E-01 8,91 E-01 33 C5:1.K1 7,94E-06 5,96E-05 7,38E-01 8,91 E-01 2,00E-01 4,72E-01 34 C5:1-DC.K1 1,36E-09 1,63E-08 8,07E-01 9,22E-01 5,49E-01 7,96E-01 35 C6 (C4:1-DC).K1 1,07E-06 9,15E-06 4,47E-01 7,20E-01 9,80E-01 9,88E-01 36 C6:1.K1 4,60E-02 1,61E-01 6,20E-01 8,75E-01 4,26E-01 7,20E-01
Figure imgf000042_0001
N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 37 C7-DC.K1 4,62E-01 7,30E-01 9,02E-01 9,58E-01 7,31 E-01 8,91 E-01 38 C8.K1 1,06E-02 4,71E-02 3,50E-01 6,37E-01 8,74E-01 9,50E-01 39 C8:1.K1 4,50E-01 7,20E-01 1,03E-01 3,01 E-01 9,80E-01 9,88E-01 40 C9.K1 4,35E-03 2,17E-02 1,47E-01 3,83E-01 4,01 E-02 1,50E-01 41 H1.K1 7,56E-01 7,56E-01 6,85E-01 7,56E-01 9,38E-02 1,88E-01 42 SM (OH) C14:1.K1 6,56E-01 9,83E-01 8,53E-02 2,74E-01 8,62E-01 9,83E-01 43 SM (OH) C16:1.K1 7,23E-01 9,83E-01 2,50E-02 1,28E-01 7,19E-01 9,83E-01 44 SM (OH) C22:1.K1 9,49E-01 9,83E-01 2,63E-02 1,28E-01 8,25E-01 9,83E-01 45 SM (OH) C22:2.K1 7,18E-01 9,83E-01 1,71E-02 1,28E-01 7,63E-01 9,83E-01 46 SM (OH) C24:1.K1 9,44E-01 9,83E-01 3,98E-02 1,49E-01 5,66E-01 9,83E-01 47 SM C16:0.K1 8,55E-01 9,83E-01 1,13E-02 1,27E-01 6,25E-01 9,83E-01 48 SM C16:1.K1 9,87E-01 9,87E-01 2,77E-02 1,28E-01 9,04E-01 9,83E-01 49 SM C18:0.K1 6,78E-01 9,83E-01 3,22E-03 7,26E-02 6,72E-01 9,83E-01 50 SM C18:1.K1 6,68E-01 9,83E-01 3,23E-03 7,26E-02 7,82E-01 9,83E-01 51 SM C20:2.K1 2,45E-01 7,36E-01 5,15E-02 1,78E-01 7,36E-01 9,83E-01 52 SM C22:3.K1 3,88E-01 9,70E-01 3,41 E-01 9,34E-01 7,30E-01 9,83E-01 53 SM C24:0.KI 6,33E-01 9,83E-01 1,05E-02 1,27E-01 9,61 E-01 9,83E-01 54 SM C24:1.K1 9,22E-01 9,83E-01 3,73E-02 1,49E-01 8,22E-01 9,83E-01 55 SM C26:0.K1 3,53E-01 9,34E-01 2,84E-02 1,28E-01 8,05E-01 9,83E-01 56 SM C26:1.K1 9,05E-01 9,83E-01 1,97E-02 1,28E-01 7,54E-01 9,83E-01 57 PC aa C24:0.K1 5,00E-01 9,34E-01 5,18E-01 9,34E-01 4,05E-01 9,09E-01 58 PC aa C26:0.K1 5,02E-01 9,34E-01 9,24E-01 9,72E-01 3,51 E-01 8,72E-01 59 PC aa C28:1.K1 8,74E-01 9,72E-01 3,64E-02 6,32E-01 7,57E-01 9,72E-01 60 PC aa C30:0.K1 1,75E-01 6,99E-01 6,74E-02 6,32E-01 8,89E-01 9,72E-01 61 PC aa C30:2.K1 9,40E-01 9,72E-01 9,56E-03 6,32E-01 7,30E-01 9,72E-01 62 PC aa C32:0.K1 2,77E-01 8,25E-01 4,08E-01 9,09E-01 6,77E-01 9,72E-01 63 PC aa C32:1.K1 6,07E-02 6,32E-01 1,31 E-01 6,89E-01 5,88E-01 9,49E-01 64 PC aa C32:2.K1 9,12E-02 6,43E-01 6,88E-02 6,32E-01 5,52E-01 9,46E-01 65 PC aa C32:3.K1 1,10E-01 6,43E-01 4,36E-02 6,32E-01 5,15E-01 9,34E-01 66 PC aa C34:1.K1 1,02E-01 6,43E-01 7,20E-01 9,72E-01 8,46E-01 9,72E-01 67 PC aa C34:2.K1 1,93E-01 7,39E-01 7,46E-01 9,72E-01 8,37E-01 9,72E-01 68 PC aa C34:3.K1 7,32E-02 6,32E-01 5,99E-01 9,51 E-01 8,79E-01 9,72E-01 69 PC aa C34:4.K1 3,80E-02 6,32E-01 5,39E-01 9,46E-01 8,16E-01 9,72E-01 70 PC aa C36:0.K1 2,83E-01 8,25E-01 5,80E-01 9,49E-01 8,57E-01 9,72E-01 71 PC aa C36:1.K1 3,22E-01 8,25E-01 5,33E-01 9,46E-01 8,63E-01 9,72E-01 72 PC aa C36:2.K1 2,94E-01 8,25E-01 7,88E-01 9,72E-01 9,20E-01 9,72E-01 73 PC aa C36:3.K1 2,99E-01 8,25E-01 7,65E-01 9,72E-01 1,00E+00 1,00E+00
Figure imgf000043_0001
N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 74 PC aa C36:4.K1 1,46E-01 6,89E-01 4,50E-01 9,14E-01 9,20E-01 9,72E-01 75 PC aa C36:S.K1 6,47E-02 6,32E-01 7,99E-01 9,72E-01 9,66E-01 9,87E-01 76 PC aa C36:6.K1 7,10E-02 6,32E-01 2,20E-01 7,68E-01 9,04E-01 9,72E-01 77 PC aa C38:0.K1 9,22E-01 9,72E-01 4,12E-02 6,32E-01 7,63E-01 9,72E-01 78 PC aa C38:1.K1 5,56E-01 9,48E-01 1,03E-01 6,43E-01 9,94E-01 9,98E-01 79 PC aa C38:3.K1 4,04E-01 9,09E-01 1,51 E-01 6,89E-01 8,42E-01 9,72E-01 80 PC aa C38:4.K1 1,41E-01 6,89E-01 2,99E-01 8,25E-01 8,55E-01 9,72E-01 81 PC aa C38:5.K1 2,68E-01 8,25E-01 1,57E-01 6,89E-01 8,19E-01 9,72E-01 82 PC aa C38:6.K1 6,80E-02 6,32E-01 1,68E-01 6,89E-01 8,87E-01 9,72E-01 83 PC aa C40:1.K1 8,29E-01 9,72E-01 6,76E-02 6,32E-01 2,18E-01 7,68E-01 84 PC aa C40:2.K1 5,45E-01 9,46E-01 3,17E-01 8,25E-01 8,81 E-01 9,72E-01 85 PC aa C40:3.K1 4,30E-01 9,09E-01 1,67E-01 6,89E-01 9,39E-01 9,72E-01 86 PC aa C40:4.K1 9,83E-02 6,43E-01 9,00E-02 6,43E-01 7,72E-01 9,72E-01 87 PC aa C40:5.K1 1,24E-01 6,84E-01 1,55E-01 6,89E-01 9,08E-01 9,72E-01 88 PC aa C40:6.K1 1,14E-01 6,43E-01 7,60E-02 6,36E-01 7,06E-01 9,72E-01 89 PC aa C42:0.K1 8,02E-01 9,72E-01 2,59E-02 6,32E-01 4,33E-01 9,09E-01 90 PC aa C42:1.K1 9,22E-01 9,72E-01 2,17E-01 7,68E-01 4,92E-01 9,34E-01 91 PC aa C42:2.K1 5,88E-01 9,49E-01 5,93E-01 9,50E-01 6,37E-01 9,67E-01 92 PC aa C42:4.K1 7,69E-01 9,72E-01 3,32E-02 6,32E-01 9,13E-01 9,72E-01 93 PC aa C42:5.K1 3,40E-01 8,53E-01 2,93E-02 6,32E-01 6,68E-01 9,72E-01 94 PC aa C42:6.K1 3,04E-01 8,25E-01 1,15E-02 6,32E-01 5,75E-01 9,49E-01 95 PC ae C30:0.K1 6,22E-01 9,60E-01 4,99E-02 6,32E-01 9,08E-01 9,72E-01 96 PC ae C30:1.K1 5,44E-01 9,46E-01 1,09E-01 6,43E-01 9,71E-01 9,89E-01 97 PC ae C30:2.K1 3,20E-01 8,25E-01 5,14E-01 9,34E-01 4,41 E-01 9,09E-01 98 PC ae C32:1.K1 2,78E-01 8,25E-01 8,16E-02 6,43E-01 7,74E-01 9,72E-01 99 PC ae C32:2.K1 3,08E-01 8,25E-01 6,41 E-02 6,32E-01 8,00E-01 9,72E-01 00 PC ae C34:0.K1 2,18E-01 7,68E-01 4,90E-01 9,34E-01 8,41 E-01 9,72E-01 01 PC ae C34:1.K1 2,10E-01 7,68E-01 1,62E-01 6,89E-01 7,94E-01 9,72E-01 02 PC ae C34:2.K1 4,93E-01 9,34E-01 1,64E-01 6,89E-01 8,12E-01 9,72E-01 03 PC ae C34:3.K1 6,45E-01 9,71E-01 1,13E-01 6,43E-01 9,39E-01 9,72E-01 04 PC ae C36:0.K1 6,07E-01 9,53E-01 2,77E-01 8,25E-01 8,38E-01 9,72E-01 05 PC ae C36:1.K1 4,45E-01 9,10E-01 2,66E-01 8,25E-01 7,32E-01 9,72E-01 06 PC ae C36:2.K1 5,72E-01 9,49E-01 3,60E-01 8,72E-01 7,19E-01 9,72E-01 07 PC ae C36:3.K1 5,84E-01 9,49E-01 1,79E-01 7,06E-01 9,09E-01 9,72E-01 08 PC ae C36:4.K1 4,41 E-01 9,09E-01 6,99E-02 6,32E-01 7,69E-01 9,72E-01 09 PC ae C36:5.K1 5,95E-01 9,50E-01 4,74E-02 6,32E-01 9,08E-01 9,72E-01 10 PC ae C38:0.K1 4,90E-02 6,32E-01 1,97E-01 7,43E-01 6,29E-01 9,60E-01 (continuación)
Duración de la hipoxia Efecto del género Interacción N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 11 PC ae C38:1.K1 8,91 E-01 9,72E-01 9,21 E-02 6,43E-01 7,85E-01 9,72E-01 12 PC ae C38:2.K1 4,27E-01 9,09E-01 1,70E-01 6,89E-01 9,83E-01 9,94E-01 13 PC ae C38:3.K1 5,04E-01 9,34E-01 8,04E-02 6,43E-01 7,62E-01 9,72E-01 14 PC ae C38:4.K1 2,40E-01 8,16E-01 2,99E-01 8,25E-01 9,90E-01 9,97E-01 15 PC ae C38:5.K1 4,13E-01 9,09E-01 1,38E-01 6,89E-01 9,82E-01 9,94E-01 16 PC ae C38:6.K1 6,77E-01 9,72E-01 1,29E-01 6,89E-01 8,81 E-01 9,72E-01 17 PC ae C40:0.K1 4,12E-02 6,32E-01 3,70E-01 8,74E-01 8,74E-01 9,72E-01 18 PC ae C40:1.K1 3,08E-01 8,25E-01 7,33E-01 9,72E-01 9,16E-01 9,72E-01 19 PC ae C40:2.K1 7,50E-01 9,72E-01 5,36E-02 6,32E-01 6,90E-01 9,72E-01 20 PC ae C40:3.K1 5,43E-01 9,46E-01 7,38E-01 9,72E-01 6,76E-01 9,72E-01 21 PC ae C40:4.K1 4,36E-01 9,09E-01 6,20E-02 6,32E-01 7,60E-01 9,72E-01 22 PC ae C40:5.K1 3,64E-01 8,73E-01 1,86E-01 7,24E-01 8,68E-01 9,72E-01 23 PC ae C40:6.K1 4,39E-01 9,09E-01 3,18E-02 6,32E-01 9,15E-01 9,72E-01 24 PC ae C42:0.K1 5,02E-01 9,34E-01 4,39E-01 9,09E-01 6,30E-01 9,60E-01 25 PC ae C42:1.K1 5,07E-01 9,34E-01 5,49E-01 9,46E-01 6,78E-01 9,72E-01 26 PC ae C42:2.K1 3,23E-01 8,25E-01 2,96E-01 8,25E-01 8,31 E-01 9,72E-01 27 PC ae C42:3.K1 5,11 E-01 9,34E-01 3,39E-01 8,53E-01 8,72E-01 9,72E-01 28 PC ae C42:4.K1 7,50E-01 9,72E-01 8,97E-02 6,43E-01 5,88E-01 9,49E-01 29 PC ae C42:5.K1 8,73E-01 9,72E-01 1,38E-01 6,89E-01 9,05E-01 9,72E-01 30 PC ae C44:3.K1 8,55E-01 9,72E-01 2,43E-01 8,16E-01 3,15E-01 8,25E-01 31 PC ae C44:4.K1 4,18E-01 9,09E-01 3,55E-01 8,72E-01 5,68E-01 9,49E-01 32 PC ae C44:5.K1 7,46E-01 9,72E-01 2,55E-01 8,25E-01 9,29E-01 9,72E-01 33 PC ae C44:6.K1 4,55E-01 9,18E-01 3,14E-01 8,25E-01 8,37E-01 9,72E-01 34 lysoPC a C14:0.K1 5,48E-01 9,46E-01 3,73E-01 8,74E-01 4,15E-01 9,09E-01 35 lysoPC a C16:0.K1 1,99E-01 7,43E-01 1,14E-01 6,43E-01 6,84E-01 9,72E-01 36 lysoPC a C16:1.K1 2,75E-01 8,25E-01 2,28E-01 7,88E-01 6,48E-01 9,71E-01 37 lysoPC a C17:0.K1 1,07E-01 6,43E-01 1,64E-01 6,89E-01 9,61 E-01 9,86E-01 38 lysoPC a C18:0.K1 7,28E-02 6,32E-01 2,61E-01 8,25E-01 6,22E-01 9,60E-01 39 lysoPC a C18:1.K1 1,41 E-01 6,89E-01 5,71E-01 9,49E-01 4,72E-01 9,34E-01 40 lysoPC a C18:2.K1 1,92E-02 6,32E-01 6,55E-01 9,71E-01 4,88E-01 9,34E-01 41 lysoPC a C20:3.K1 1,63E-01 6,89E-01 2,91E-01 8,25E-01 4,15E-01 9,09E-01 42 lysoPC a C20:4.K1 2,97E-02 6,32E-01 4,10E-01 9,09E-01 6,07E-01 9,53E-01 43 lysoPC a C24:0.K1 6,28E-01 9,60E-01 5,06E-01 9,34E-01 3,57E-01 8,72E-01 44 lysoPC a C26:0.K1 8,58E-01 9,72E-01 4,20E-02 6,32E-01 3,07E-04 8,49E-02 45 lysoPC a C26:1.K1 8,58E-01 9,72E-01 3,74E-01 8,74E-01 2,71E-01 8,25E-01 46 lysoPC a C28:0.K1 9,40E-01 9,72E-01 6,54E-01 9,71E-01 7,03E-01 9,72E-01 47 lysoPC a C28:1.K1 1,09E-01 6,43E-01 1,54E-01 6,89E-01 3,32E-02 6,32E-01 (continuación)
Duración de la hipoxia Efecto del género Interacción N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 48 lysoPC a C6:0.K1 9,54E-01 9,82E-01 2,95E-01 8,25E-01 5,09E-01 9,34E-01 49 Gly.K2 1,01 E-01 2,91 E-01 5,08E-01 8,75E-01 4,91 E-01 8,75E-01 50 Ala.K2 1,73E-09 1,30E-07 6,32E-01 8,79E-01 1,56E-01 4,05E-01 51 Ser.K2 7,38E-05 1,12E-03 8,45E-02 2,54E-01 5,43E-01 8,79E-01 52 Pro.K2 5,49E-04 3,43E-03 8,23E-01 8,79E-01 5,50E-01 8,79E-01 53 Val.K2 3,74E-04 3,43E-03 8,32E-01 8,79E-01 8,61 E-01 8,97E-01 54 Thr.K2 9,93E-06 2,48E-04 4,89E-02 1,53E-01 3,71E-01 7,52E-01 55 Xle.K2 7,48E-05 1,12E-03 6,99E-01 8,79E-01 7,22E-01 8,79E-01 56 Leu.K2 4,46E-04 3,43E-03 8,11 E-01 8,79E-01 5,13E-01 8,75E-01 57 Ile.K2 5,16E-04 3,43E-03 2,69E-01 6,50E-01 7,86E-01 8,79E-01 58 Asn.K2 1,02E-04 1,27E-03 5,68E-01 8,79E-01 4,61 E-01 8,75E-01 59 Asp.K2 2,97E-02 1,11 E-01 7,88E-01 8,79E-01 4,86E-02 1,53E-01 60 Gln.K2 7,86E-07 2,95E-05 4,44E-01 8,75E-01 8,04E-01 8,79E-01 61 Glu.K2 8,31 E-04 4,79E-03 6,28E-01 8,79E-01 7,27E-01 8,79E-01 62 Met. K2 1,08E-01 2,99E-01 7,97E-01 8,79E-01 7,75E-01 8,79E-01 63 His.K2 1,15E-03 6,19E-03 7,81E-01 8,79E-01 7,14E-01 8,79E-01 64 Phe.K2 9,99E-03 4,16E-02 6,48E-01 8,79E-01 5,99E-01 8,79E-01 65 Arg.K2 4,72E-01 8,75E-01 9,99E-01 9,99E-01 6,71E-01 8,79E-01 66 Cit.K2 4,39E-04 3,43E-03 4,31E-02 1,47E-01 6,61 E-01 8,79E-01 67 Tyr.K2 3,96E-03 1,98E-02 2,69E-01 6,50E-01 6,36E-01 8,79E-01 68 Trp.K2 8,19E-03 3,61 E-02 3,25E-01 7,18E-01 7,28E-01 8,79E-01 69 Orn.K2 2,58E-02 1,02E-01 7,83E-01 8,79E-01 9,33E-01 9,51 E-01 70 Lys.K2 4,85E-04 3,43E-03 9,38E-01 9,51 E-01 2,99E-01 7,01 E-01 71 ADMA.K2 5,07E-01 6,03E-01 1,37E-01 5,67E-01 3,95E-01 6,03E-01 72 SDMA.K2 3,17E-01 5,77E-01 4,32E-01 6,03E-01 2,94E-01 5,77E-01 73 DMA total.K2 5,78E-02 2,73E-01 2,83E-01 5,77E-01 3,04E-01 5,77E-01 74 Histamina.K2 2,53E-01 5,77E-01 2,22E-02 1,46E-01 8,06E-01 8,10E-01 75 Met-SO.K2 3,62E-01 7,52E-01 3,46E-01 7,41 E-01 1,31 E-01 3,52E-01 76 Kyn.K2 4,95E-01 6,03E-01 7,10E-01 7,56E-01 2,55E-01 5,77E-01 77 OH-Kyn.K2 1,19E-02 9,83E-02 1,73E-01 5,72E-01 2,47E-01 5,77E-01 78 Putrescina.K2 3,21 E-12 1,06E-10 1,58E-01 5,72E-01 2,04E-01 5,77E-01 79 Espermidina.K2 1,42E-11 2,34E-10 4,52E-01 6,03E-01 4,43E-01 6,03E-01 80 Espermina.K2 4,25E-07 4,68E-06 8,10E-01 8,10E-01 5,12E-01 6,03E-01 81 Serotonina.K2 5,51 E-01 6,27E-01 2,83E-02 1,55E-01 5,74E-01 6,32E-01 82 Creatinina.K2 4,92E-01 6,03E-01 3,45E-01 5,77E-01 3,50E-01 5,77E-01 83 Lac.EM 5,52E-08 1,66E-07 8,67E-01 9,27E-01 7,86E-01 9,07E-01 84 Fum.EM 4,66E-15 3,50E-14 1,12E-03 2,80E-03 3,64E-03 7,80E-03 85 Asp.EM 4,83E-03 2,27E-02 4,25E-02 1,47E-01 6,82E-01 8,79E-01 (continuación)
Duración de la hipoxia Efecto del género Interacción N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 86 Arg.EM 3,25E-01 7,18E-01 4,93E-01 8,75E-01 5,98E-01 8,79E-01 87 Pyr OAA.EM 3,37E-09 1,26E-08 5,44E-01 6,80E-01 2,50E-02 4,69E-02 88 Suc.EM 0,00E+00 0,00E+00 5,27E-01 6,80E-01 4,74E-01 6,80E-01 89 alfa-KGA.EM 3,24E-12 1,62E-11 9,27E-01 9,27E-01 4,07E-01 6,79E-01 90 Hex.EM 5,80E-01 7,56E-01 1,64E-02 9,82E-02 8,89E-02 1,88E-01 91 TCDCA.BA 8,54E-02 3,60E-01 3,33E-01 7,29E-01 7,79E-01 8,18E-01 92 GCA.BA 6,18E-04 1,30E-02 3,46E-01 7,29E-01 6,70E-02 3,60E-01 93 CA.BA 3,94E-03 4,13E-02 4,57E-01 7,29E-01 2,71E-01 7,29E-01 94 UDCA.BA 4,86E-01 7,29E-01 6,03E-01 8,18E-01 4,60E-01 7,29E-01 95 CDCA.BA 4,18E-01 7,29E-01 7,58E-01 8,18E-01 7,33E-01 8,18E-01 96 GCDCA.BA 8,56E-02 3,60E-01 2,36E-01 7,29E-01 7,24E-01 8,18E-01 97 LCA.BA 7,55E-01 8,18E-01 9,15E-01 9,15E-01 4,26E-01 7,29E-01 98 13S-HODE.PA 8,87E-03 2,66E-02 3,93E-01 5,89E-01 6,88E-01 7,56E-01 99 DHA.PA 4,37E-05 3,93E-04 3,27E-01 5,89E-01 6,86E-01 7,56E-01 00 AA.PA 3,50E-03 1,57E-02 2,84E-01 5,89E-01 7,56E-01 7,56E-01 01 Orn/Cit 5,23E-05 5,49E-04 2,75E-01 7,00E-01 7,15E-01 9,60E-01 02 Orn/Arg 1,12E-01 4,29E-01 7,96E-01 9,60E-01 4,99E-01 8,50E-01 03 Cit/Arg 9,27E-04 7,08E-03 1,31 E-01 4,45E-01 8,44E-01 9,60E-01 04 Glu/Gln 9,06E-09 1,90E-07 7,53E-01 9,60E-01 5,93E-01 8,90E-01 05 Asp/Asn 6,21 E-06 1,04E-04 8,31E-01 9,60E-01 9,16E-02 3,85E-01 06 Ala/Lys 2,45E-02 1,21E-01 8,99E-01 9,60E-01 9,03E-01 9,60E-01 07 Phe/Tyr 7,58E-01 9,60E-01 3,46E-02 1,61 E-01 1,53E-01 4,60E-01 08 Serotonin/Trp 9,58E-01 9,81 E-01 2,13E-02 1,12E-01 5,52E-01 8,75E-01 09 Kyn/T rp 1,01 E-02 6,52E-02 3,57E-01 7,37E-01 5,06E-01 8,50E-01 10 Kyn/OHKyn 3,96E-05 4,75E-04 1,50E-01 4,60E-01 3,19E-01 7,06E-01 11 Putrescina/Orn 7,74E-09 1,90E-07 5,42E-01 8,75E-01 2,90E-01 7,06E-01 12 Espermina/Espermidina 3,14E-10 1,32E-08 8,99E-01 9,60E-01 6,67E-01 9,33E-01 13 SDMA/ADMA 3,77E-01 7,37E-01 9,18E-01 9,64E-01 4,17E-01 7,62E-01 14 Met-SO/Met 1,36E-03 9,55E-03 1,15E-04 1,07E-03 1,58E-02 9,49E-02 15 Ala/BCAA 2,93E-05 4,10E-04 5,85E-01 8,90E-01 2,98E-01 7,06E-01 16 Gly/BCAA 2,29E-04 1,93E-03 8,01E-01 9,60E-01 9,92E-01 9,92E-01 17 SumLiso 1,92E-01 5,04E-01 6,93E-01 9,54E-01 6,10E-01 8,98E-01 18 SumPC+Liso 3,15E-01 7,06E-01 1,72E-01 4,91 E-01 8,92E-01 9,60E-01 19 SumPC 3,67E-01 7,37E-01 1,32E-01 4,45E-01 8,07E-01 9,60E-01 20 SumSM 9,87E-01 9,92E-01 1,79E-02 1,00E-01 8,99E-01 9,60E-01 21 SumSMOH/SumSM 6,55E-01 9,33E-01 5,63E-01 8,76E-01 6,43E-01 9,31 E-01 22 C16+C18/C0 3,66E-13 3,07E-11 7,48E-01 9,60E-01 3,76E-01 7,37E-01 (continuación)
Duración de la hipoxia Efecto del género Interacción N.° Analito valor de p valor de q valor de p valor de q valor de p valor de q 223 SumMUFA 4,11 E-01 7,62E-01 8,22E-02 3,64E-01 8,15E-01 9,60E-01 224 SumPUFA 3,54E-01 7,37E-01 1,18E-01 4,31 E-01 8,53E-01 9,60E-01 225 SumSFA 4,72E-01 8,44E-01 1,81 E-01 4,91 E-01 9,31 E-01 9,65E-01 226 PUFA/SFA 3,0 -01 7,06E-01 1,48E-01 4,60E-01 5,48E-01 8,75E-01 227 PUFA/MUFA 1,81 E-01 4,91 E-01 8,41E-01 9,60E-01 8,47E-01 9,60E-01 228 MUFA/SFA 4,84E-01 8,46E-01 9,72E-02 3,89E-01 4,08E-01 7,62E-01 229 24SOHC 7,72E-03 3,01E-01 2,70E-01 7,32E-01 7,79E-01 9,40E-01 230 250HC 1,96E-01 7,32E-01 2,83E-01 7,32E-01 8,43E-01 9,40E-01 231 270HC 9,35E-02 6,60E-01 7,55E-01 9,40E-01 3,05E-01 7,32E-01 232 24,25,EPC 8,07E-01 9,40E-01 9,78E-01 9,78E-01 8,80E-01 9,53E-01 233 7aOHC 5,26E-01 8,20E-01 7,71E-01 9,40E-01 5,20E-01 8,20E-01 234 5B,6B,EPC 3,79E-02 6,37E-01 8,27E-01 9,40E-01 7,84E-01 9,40E-01 235 5a,6a,EPC 4,90E-02 6,37E-01 2,42E-01 7,32E-01 3,64E-01 7,48E-01 236 4BOHC 2,53E-01 7,32E-01 4,84E-01 8,20E-01 2,78E-01 7,32E-01 237 Desmosterol 4,51 E-01 8,20E-01 3,37E-01 7,32E-01 3,27E-01 7,32E-01 238 7DHC 9,67E-01 9,78E-01 8,06E-01 9,40E-01 9,85E-02 6,60E-01 239 Colestenona 1,50E-01 7,32E-01 1,61 E-01 7,32E-01 9,32E-01 9,78E-01 240 Lanosterol 3,38E-01 7,32E-01 4,61 E-01 8,20E-01 1,02E-01 6,60E-01 241 24DHLan 8,05E-01 9,40E-01 5,02E-01 8,20E-01 7,60E-01 9,40E-01
Tabla 5: Eficacia de la reoxigenación; se presentan los valores de p obtenidos por los análisis post hoc a través de la diferencia significativa honesta de Tukey y cambios en veces (FC).
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 1 C0.K1 5,97E-01 3,69 9,45E-01 2,03 5,85E-01 -1,63 2 C10.K1 3,58E-02 -13,23 1,96E-01 -19,82 3,23E-01 -5,82 3 C10:1.K1 9,82E-02 -16,54 1,18E-01 -9,49 8,95E-01 6,43 4 C10:2.K1 7,47E-02 -10,34 5,50E-05 -35,89 1,43E-02 -23,15 5 C12.K1 1,81 E-01 -18,26 2,14E-01 -11,95 7,38E-01 5,63 6 C12-DC.K1 1,24E-02 -11,02 3,70E-01 -1,67 4,45E-02 9,20 7 C12:1.K1 1,91 E-01 -32,41 4,66E-01 -29,57 3,94E-01 2,19 8 C14.K1 2,54E-01 -10,73 5,20E-01 -11,26 4,05E-01 -0,48 9 C14:1.K1 1,20E-01 -18,98 3,27E-01 -16,79 3,83E-01 1,87 10 C14:1-OH.K1 3,14E-01 -21,43 5,58E-01 -19,58 7,40E-01 1,55 11 C14:2.K1 8,47E-01 -9,02 9,64E-01 -11,17 7,50E-01 -1,97 12 C14:2-OH.K1 2,17E-01 -18,97 5,81 E-02 -31,91 4,79E-01 -10,88 13 C16.K1 3,48E-02 -20,63 3,31 E-01 -16,32 2,11 E-01 3,71 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 14 C16-OH.K1 4,31 E-03 -27,27 9,38E-01 5,63 2,55E-02 34,44 15 C16:1.K1 8,39E-02 -48,01 6,82E-01 3,49 1,11 E-01 53,17 16 C16:1-OH.K1 1,17E-03 -33,94 4,52E-02 -26,51 4,32E-01 5,87 17 C16:2.K1 3,22E-01 -22,45 1,96E-01 -13,72 9,02E-01 7,67 18 C16:2-OH.K1 3,22E-01 -12,50 7,80E-01 10,25 1,32E-01 24,03 19 C18.K1 7,08E-02 -8,90 5,61 E-01 -3,52 3,74E-01 5,20 20 C18:1.K1 1,09E-01 -15,69 4,42E-01 -1,86 3,05E-01 13,58 21 C18:1-OH.K1 4,31 E-01 -3,13 4,07E-01 0,56 8,16E-02 3,70 22 C18:2.K1 2,64E-02 -68,58 5,23E-01 4,02 3,39E-02 75,36 23 C2.K1 6,70E-02 -20,30 8,78E-01 -0,81 7,91 E-02 19,33 24 C3.K1 6,77E-05 -57,28 8,73E-02 -18,34 9,21 E-02 32,91 25 C3-0H.K1 1,89E-01 18,68 7,75E-01 1,64 8,43E-02 -16,77 26 C3:1.K1 1,28E-02 -33,33 9,42E-03 -44,29 7,85E-01 -8,22 27 C4.K1 1,63E-03 -38,40 2,62E-01 -10,63 7,16E-02 25,10 28 C4-OH (C3-DC).K1 4,55E-02 -26,53 3,98E-01 -5,44 1,81 E-01 20,00 29 C4:1.K1 3,09E-02 -37,28 2,28E-02 -38,70 6,70E-01 -1,03 30 C5.K1 9,51 E-03 -25,60 8,32E-01 5,69 2,60E-02 32,74 31 C5-DC (C6-OH).K1 3,29E-01 -12,50 7,62E-01 -5,05 3,15E-01 7,09 32 C5-OH (C3-DC-M).K1 5,76E-01 -2,88 5,30E-01 1,60 1,93E-01 4,52 33 C5:1.K1 5,30E-02 -5,00 5,80E-02 -10,46 9,23E-01 -5,20 34 C5:1-DC.K1 2,07E-01 -14,29 4,84E-01 -1,19 5,45E-01 12,94 35 C6 (C4:1-DC).K1 2,58E-02 -5,33 1,62E-01 -8,29 7,87E-01 -2,81 36 C6:1.K1 5,45E-01 -18,13 4,85E-01 -13,19 8,69E-01 4,36 37 C7-DC.K1 2,97E-01 -25,06 5,93E-01 -13,33 6,46E-01 10,34 38 C8.K1 3,14E-01 -4,50 4,07E-02 -8,43 6,04E-01 -3,76 39 C8:1.K1 6,09E-01 6,20 6,47E-01 -2,41 9,26E-01 -8,77 40 C9.K1 5,34E-01 -3,24 1,46E-01 -33,99 5,25E-02 -29,79 41 H1.K1 5,96E-02 -30,86 1,21 E-01 -28,48 3,60E-01 1,85 42 SM (OH) C14:1.K1 2,18E-01 -13,25 7,03E-01 -5,82 5,75E-01 7,02 43 SM (OH) C16:1.K1 8,88E-01 3,79 5,24E-01 0,19 5,16E-01 -3,60 44 SM (OH) C22:1.K1 3,64E-01 -9,63 2,79E-01 -10,07 6,60E-01 -0,40 45 SM (OH) C22:2.K1 1,76E-01 -12,55 7,68E-01 -4,62 2,98E-01 7,58 46 SM (OH) C24:1.K1 6,53E-03 -9,97 3,14E-01 -1,87 2,65E-01 7,95 47 SM C16:0.K1 8,51 E-01 -1,91 6,16E-01 2,84 5,47E-01 4,81 48 SM C16:1.K1 1,50E-01 -12,17 5,36E-01 0,11 5,99E-01 12,30 49 SM C18:0.K1 3,23E-01 -12,17 5,96E-01 -3,10 8,79E-01 -3,10 50 SM C18:1.K1 1,29E-01 -8,62 5,47E-01 -3,60 6,56E-01 4,85 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 51 SM C20:2.K1 8,29E-01 3,95 7,57E-01 2,84 6,69E-01 -1,08 52 SM C22:3.K1 2,12E-01 -5,77 1,84E-02 -18,67 4,13E-01 -12,19 53 SM C24:0.KI 3,40E-02 -15,31 2,54E-01 -6,48 6,26E-01 8,29 54 SM C24:1.K1 6,55E-02 -9,89 9,01 E-02 -6,74 6,96E-01 2,95 55 SM C26:0.K1 4,60E-01 -8,98 4,30E-01 -6,01 9,94E-01 2,80 56 SM C26:1.K1 2,34E-01 -14,78 2,05E-01 -5,84 8,88E-01 8,45 57 PC aa C24:0.KI 3,84E-01 -15,71 2,09E-02 -28,59 1,72E-01 -11,13 58 PC aa C26:0.K1 4,06E-01 -6,93 3,39E-01 -5,17 9,52E-01 1,67 59 PC aa C28:1.K1 3,20E-01 -5,36 4,89E-01 -0,11 7,47E-01 5,24 60 PC aa C30:0.K1 6,67E-01 4,73 9,89E-01 0,62 6,31 E-01 -4,09 61 PC aa C30:2.K1 7,55E-02 -13,43 6,59E-01 -6,99 3,59E-01 6,03 62 PC aa C32:0.K1 7,76E-01 10,58 9,73E-01 1,26 8,07E-01 -9,20 63 PC aa C32:1.K1 7,13E-01 2,50 5,42E-01 -2,05 4,48E-01 -4,60 64 PC aa C32:2.K1 9,51 E-01 -0,42 3,79E-01 -11,20 3,99E-01 -10,73 65 PC aa C32:3.K1 6,84E-01 4,65 4,71E-01 1,70 8,49E-01 -2,90 66 PC aa C34:1.K1 8,05E-01 8,71 8,50E-01 1,26 7,13E-01 -7,36 67 PC aa C34:2.K1 8,35E-01 3,84 4,01 E-01 -4,76 7,14E-01 -8,78 68 PC aa C34:3.K1 9,70E-01 10,93 5,05E-01 -6,99 5,55E-01 -18,69 69 PC aa C34:4.K1 5,73E-01 8,62 5,77E-01 0,29 3,23E-01 -8,30 70 PC aa C36:0.K1 6,59E-01 2,93 2,08E-01 -6,14 4,59E-01 -9,25 71 PC aa C36:1.K1 7,98E-01 5,27 3,39E-01 -2,95 5,72E-01 -8,37 72 PC aa C36:2.K1 7,19E-01 0,95 5,12E-01 -6,01 8,70E-01 -7,02 73 PC aa C36:3.K1 6,90E-01 -0,33 1,29E-01 -14,05 4,89E-01 -13,67 74 PC aa C36:4.K1 7,58E-01 1,58 6,37E-02 -9,08 4,14E-01 -10,81 75 PC aa C36:5.K1 9,29E-01 8,56 1,09E-01 -8,28 2,10E-01 -17,55 76 PC aa C36:6.K1 7,29E-01 1,20 3,95E-01 -5,64 6,73E-01 -6,91 77 PC aa C38:0.K1 6,14E-01 -1,84 1,56E-01 -6,71 3,98E-01 -4,78 78 PC aa C38:1.K1 9,51 E-01 -4,41 9,08E-01 -2,59 9,32E-01 1,77 79 PC aa C38:3.K1 3,39E-01 -0,24 2,32E-01 -6,52 8,60E-01 -6,27 80 PC aa C38:4.K1 8,37E-01 2,06 2,72E-01 -2,55 4,58E-01 -4,67 81 PC aa C38:5.K1 6,82E-01 -2,13 2,39E-01 -9,70 4,91 E-01 -7,41 82 PC aa C38:6.K1 8,58E-01 -0,51 3,32E-01 -5,70 6,30E-01 -5,16 83 PC aa C40:1.K1 4,36E-01 7,80 5,34E-01 -2,02 2,39E-01 -9,98 84 PC aa C40:2.K1 3,07E-01 0,24 5,16E-01 -5,48 8,16E-01 -5,72 85 PC aa C40:3.K1 1,83E-01 -3,37 1,53E-01 -8,86 7,13E-01 -5,31 86 PC aa C40:4.K1 9,88E-01 0,16 6,91 E-01 -4,25 7,68E-01 -4,42 87 PC aa C40:5.K1 6,79E-01 4,03 7,96E-01 0,35 6,05E-01 -3,67 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 88 PC aa C40:6.K1 8,44E-01 6,89 4,16E-01 -3,43 4,62E-01 -10,56 89 PC aa C42:0.K1 3,49E-01 -9,67 3,85E-01 -11,90 8,93E-01 -2,03 90 PC aa C42:1.K1 2,53E-01 -3,22 1,40E-01 -8,46 5,85E-01 -5,08 91 PC aa C42:2.K1 1,75E-01 -0,92 1,32E-02 -16,95 3,15E-01 -15,88 92 PC aa C42:4.K1 7,62E-01 -2,84 6,98E-01 -4,76 9,00E-01 -1,87 93 PC aa C42:5.K1 8,23E-01 -4,68 1,46E-01 -3,06 3,65E-01 1,57 94 PC aa C42:6.K1 4,21 E-01 5,75 9,48E-01 3,27 4,35E-01 -2,41 95 PC ae C30:0.K1 1,23E-02 -17,00 4,61 E-03 -12,79 7,98E-01 3,74 96 PC ae C30:1.K1 6,85E-01 -2,72 5,23E-01 -7,48 7,25E-01 -4,63 97 PC ae C30:2.K1 4,65E-02 -10,18 1,27E-01 -5,99 6,50E-01 3,94 98 PC ae C32:1.K1 9,51 E-01 2,66 5,70E-01 1,04 6,99E-01 -1,60 99 PC ae C32:2.K1 6,40E-01 -1,76 4,07E-01 -1,33 2,91 E-01 0,42 100 PC ae C34:0.K1 9,93E-01 7,76 1,03E-01 -5,20 2,84E-01 -13,36 101 PC ae C34:1.K1 5,29E-01 -9,08 4,01 E-01 -4,86 7,81 E-01 4,02 102 PC ae C34:2.K1 7,25E-01 0,26 6,04E-01 1,51 8,50E-01 1,24 103 PC ae C34:3.K1 3,24E-01 -5,08 2,80E-01 -0,89 9,11 E-01 4,15 104 PC ae C36:0.K1 8,66E-01 0,37 6,26E-01 -3,43 8,01 E-01 -3,81 105 PC ae C36:1.K1 7,81 E-01 3,56 6,38E-01 -1,89 8,46E-01 -5,52 106 PC ae C36:2.K1 5,68E-01 -6,67 2,28E-01 -8,67 6,77E-01 -1,87 107 PC ae C36:3.K1 4,77E-01 -6,30 1,23E-01 -5,15 4,69E-01 1,09 108 PC ae C36:4.K1 2,76E-01 -2,68 1,55E-01 -6,92 6,44E-01 -4,13 109 PC ae C36:5.K1 5,90E-01 -3,89 6,26E-01 -2,83 9,64E-01 1,02 110 PC ae C38:0.K1 5,91 E-01 0,79 2,15E-01 -9,00 5,21 E-01 -9,86 111 PC ae C38:1.K1 3,09E-01 -1,76 2,20E-01 -11,73 7,06E-01 -9,79 112 PC ae C38:2.K1 9,16E-01 1,65 4,51 E-01 -3,24 5,84E-01 -4,95 113 PC ae C38:3.K1 5,73E-01 -2,21 6,05E-01 -4,80 9,90E-01 -2,54 114 PC ae C38:4.K1 6,87E-01 1,95 4,54E-02 -5,50 2,09E-01 -7,56 115 PC ae C38:5.K1 4,93E-01 2,56 7,84E-02 -6,69 3,15E-01 -9,42 116 PC ae C38:6.K1 5,96E-01 -0,81 1,05E-01 -5,68 3,48E-01 -4,83 117 PC ae C40:0.K1 2,93E-01 1,69 4,40E-01 -1,82 1,20E-01 -3,55 118 PC ae C40:1.K1 2,17E-01 -8,35 3,00E-02 -14,06 4,49E-01 -5,27 119 PC ae C40:2.K1 8,52E-01 -1,50 3,82E-01 -10,33 4,28E-01 -8,70 120 PC ae C40:3.K1 1,44E-01 -6,44 2,98E-02 -16,15 2,69E-01 -9,13 121 PC ae C40:4.K1 8,50E-01 -0,05 9,89E-02 -5,93 3,18E-01 -5,87 122 PC ae C40:5.K1 7,99E-01 -1,71 3,46E-01 -3,68 4,75E-01 -1,94 123 PC ae C40:6.K1 4,63E-01 3,96 8,68E-01 3,15 6,50E-01 -0,79 124 PC ae C42:0.K1 6,04E-01 -1,91 7,65E-01 -0,59 7,57E-01 1,31 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 125 PC ae C42:1.K1 3,43E-01 -4,77 4,93E-02 -12,84 5,00E-01 -7,70 126 PC ae C42:2.K1 4,85E-01 9,84 2,72E-01 -1,05 9,16E-01 -10,99 127 PC ae C42:3.K1 1,73E-01 -2,97 5,52E-01 -2,03 5,10E-01 0,92 128 PC ae C42:4.K1 3,21 E-01 -5,97 9,07E-01 1,50 5,38E-01 7,56 129 PC ae C42:5.K1 2,03E-02 -8,84 2,94E-02 -11,09 8,12E-01 -2,06 130 PC ae C44:3.K1 1,95E-01 -16,11 2,31 E-01 -11,48 8,62E-01 4,16 131 PC ae C44:4.K1 8,93E-01 -4,44 6,69E-02 -13,79 1,11 E-01 -8,95 132 PC ae C44:5.KI 8,50E-01 -0,72 2,71E-01 -8,89 2,91 E-01 -8,12 133 PC ae C44:6.K1 3,94E-01 0,56 1,48E-02 -19,11 1,60E-01 -19,78 134 lysoPC a C14:0.K1 1,52E-01 0,82 1,39E-01 -1,03 9,17E-01 -1,85 135 lysoPC a C16:0.K1 1,79E-01 -8,36 1,38E-01 -17,69 6,94E-01 -8,61 136 lysoPC a C16:1.K1 4,57E-01 -2,29 1,56E-01 -17,42 4,47E-01 -14,79 137 lysoPC a C17:0.K1 7,21 E-01 -4,83 3,73E-01 -32,79 5,33E-01 -26,68 138 lysoPC a C18:0.K1 5,14E-02 -13,17 2,85E-02 -26,65 6,09E-01 -11,91 139 lysoPC a C18:1.K1 4,43E-01 -10,48 1,47E-01 -13,27 4,60E-01 -2,53 140 lysoPC a C18:2.K1 5,70E-01 -1,41 2,85E-01 -8,20 7,45E-01 -6,70 141 lysoPC a C20:3.K1 3,12E-01 -21,77 3,79E-01 -9,00 8,15E-01 11,72 142 lysoPC a C20:4.K1 5,08E-01 -25,92 2,16E-01 -24,53 5,87E-01 1,12 143 lysoPC a C24:0.KI 9,82E-02 -6,30 2,99E-02 -18,39 9,75E-01 -11,37 144 lysoPC a C26:0.K1 1,87E-01 -8,04 5,80E-01 -6,59 2,44E-01 1,36 145 lysoPC a C26:1.K1 8,21 E-01 1,12 3,68E-01 -2,90 5,49E-01 -4,05 146 lysoPC a C28.0.K1 1,34E-01 -9,33 7,46E-01 -5,50 3,10E-01 3,63 147 lysoPC a C28:1.K1 8,53E-02 -12,56 7,90E-01 5,34 1,31 E-01 18,57 148 lysoPC a C6:0.K1 8,36E-02 -59,18 4,60E-02 -173,79 5,89E-01 -72,00 149 Gly.K2 6,91 E-01 -3,90 3,46E-01 -19,98 6,46E-01 -15,48 150 Ala.K2 6,84E-01 -5,15 8,34E-01 3,21 7,75E-01 8,52 151 Ser.K2 6,55E-01 -13,56 1,28E-01 -25,39 2,88E-01 -10,42 152 Pro.K2 1,52E-01 -3,22 3,82E-01 -4,89 4,49E-01 -1,62 153 Val.K2 1,95E-01 -3,82 4,52E-01 -4,01 4,53E-01 -0,19 154 Thr.K2 3,40E-01 -9,40 4,40E-01 -10,53 8,99E-01 -1,03 155 Xle.K2 1,60E-01 -5,31 4,77E-01 -19,90 4,91 E-01 -13,86 156 Leu.K2 2,12E-01 -15,34 4,12E-01 -26,01 6,35E-01 -9,25 157 Ile.K2 1,41 E-01 -10,99 2,92E-01 -19,53 6,99E-01 -7,69 158 Asn.K2 2,18E-01 2,98 4,24E-01 -7,78 5,77E-01 -10,99 159 Asp.K2 6,89E-02 -70,92 9,15E-01 -26,93 7,11 E-02 34,66 160 Gln.K2 8,28E-01 -5,18 9,06E-01 -4,29 8,99E-01 0,86 161 Glu.K2 1,70E-01 -16,38 2,99E-01 -19,80 5,71E-01 -2,94 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 162 Met. K2 2,42E-02 -46,09 3,18E-02 -59,04 7,54E-01 -8,86 163 His.K2 9,82E-01 3,35 7,02E-01 -9,02 7,23E-01 -12,67 164 Phe.K2 1,64E-01 -8,75 4,82E-01 -6,79 3,20E-01 1,83 165 Arg.K2 3,61 E-01 -9,48 3,27E-01 -18,87 9,80E-01 -8,57 166 Cit.K2 1,44E-01 -12,89 1,73E-01 -18,41 9,39E-01 -4,89 167 Tyr.K2 1,98E-01 -8,33 2,31 E-01 -6,08 8,79E-01 2,12 168 Trp.K2 6,26E-01 -4,96 9,67E-01 -1,61 6,64E-01 3,30 169 Orn.K2 6,17E-01 2,27 1,61E-01 -18,38 1,11 E-01 -21,07 170 Lys.K2 3,21 E-01 -12,76 8,22E-01 9,28 2,57E-01 23,23 171 ADMA.K2 4,97E-02 -26,79 1,48E-01 -17,95 4,23E-01 7,49 172 SDMA.K2 2,45E-01 -5,59 3,35E-01 -15,63 6,03E-01 -9,51 173 DMA total.K2 2,31 E-01 -33,17 2,31 E-01 -17,06 7,57E-01 13,77 174 Histamina.K2 3,53E-01 -35,36 2,38E-01 -27,19 9,89E-01 6,42 175 Met-SO.K2 2,36E-01 -41,82 6,31 E-01 -18,47 4,92E-01 19,71 176 Kyn.K2 7,91 E-01 3,17 8,30E-01 1,58 6,78E-01 -1,57 177 OH-Kyn.K2 1,53E-01 -11,26 3,29E-01 -16,21 7,25E-01 -4,45 178 Putrescina.K2 4,78E-01 -14,07 7,29E-01 -0,93 2,58E-01 13,02 179 Espermidina.K2 5,72E-01 -3,47 5,35E-02 40,24 9,52E-02 45,12 180 Espermina.K2 3,75E-01 -9,70 2,79E-01 63,28 1,85E-03 79,12 181 Serotonina.K2 2,61 E-01 -83,99 1,77E-01 -74,22 9,73E-01 5,61 182 Creatinina.K2 1,55E-01 -16,47 4,39E-01 -13,49 4,74E-01 2,62 183 Lac.EM 8,43E-01 -18,46 9,11 E-01 -14,73 6,68E-01 3,25 184 Fum.EM 7,20E-02 -214,43 8,16E-02 -101,23 5,13E-01 56,25 185 Asp.EM 1,75E-01 -19,83 1,18E-01 -82,39 7,62E-01 -52,21 186 Arg.EM 3,47E-01 -5,31 5,73E-01 -22,10 8,39E-01 -15,94 187 Pyr OAA.EM 9,13E-02 -19,37 7,31 E-01 5,96 1,28E-01 26,49 188 Suc.EM 6,12E-02 -191,05 1,83E-01 -76,47 2,76E-01 64,92 189 alfa-KGA.EM 1,88E-01 -83,12 1,17E-02 -92,84 7,30E-01 -5,31 190 Hex.EM 1,08E-01 -13,33 1,96E-01 -10,36 3,88E-01 2,69 191 TCDCA.BA 6,44E-01 10,96 3,79E-02 114,26 1,84E-01 93,09 192 GCA.BA 5,37E-01 -12,87 2,44E-01 49,49 4,11 E-02 68,73 193 CA.BA 2,40E-02 -117,69 3,36E-01 -57,06 6,52E-02 38,60 194 UDCA.BA 3,72E-01 -35,25 9,26E-01 -16,69 2,75E-01 15,90 195 CDCA.BA 3,30E-02 -187,92 2,24E-01 -63,25 2,57E-01 76,36 196 GCDCA.BA 6,70E-01 1,14 2,00E-01 41,56 4,46E-01 39,97 197 LCA.BA 6,02E-01 -16,44 9,35E-01 3,86 3,66E-01 20,93 198 13S-HODE.PA 9,42E-01 -2,53 2,18E-01 72,20 2,09E-01 76,56 199 DHA.PA 9,31 E-01 -5,99 9,31 E-01 -4,42 8,59E-01 1,50 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 200 AA.PA 1,04E-01 28,00 6,09E-01 11,97 2,41 E-01 -14,31 201 Orn/Cit 1,10E-01 31,05 8,38E-01 -0,80 1,46E-01 -32,10 202 Orn/Arg 1,34E-01 25,38 7,82E-01 8,07 6,30E-02 -16,02 203 Cit/Arg 6,85E-01 -17,97 7,05E-01 -12,25 9,48E-01 5,09 204 Glu/Gln 2,91 E-01 6,21 4,42E-01 -2,87 6,66E-01 -9,26 205 Asp/Asn 1,02E-01 -30,37 6,26E-01 21,61 6,92E-02 58,55 206 Ala/Lys 5,10E-01 -7,97 5,38E-01 -4,50 2,06E-01 3,32 207 Phe/Tyr 5,62E-01 -7,44 3,12E-01 4,31 1,97E-01 12,06 208 Serotonin/Trp 3,14E-01 -110,30 1,97E-01 -71,38 9,79E-01 22,71 209 Kyn/T rp 8,00E-01 -2,32 8,81 E-01 1,70 9,06E-01 4,07 210 Kyn/OHKyn 1,30E-01 17,62 2,21 E-01 30,22 8,28E-01 10,71 211 Putrescina/Orn 4,32E-01 -39,18 3,45E-01 9,58 1,06E-01 52,52 212 Espermina/Espermidina 5,14E-02 -39,58 1,48E-01 -35,59 4,12E-01 2,94 213 SDMA/ADMA 3,48E-01 15,88 3,77E-01 5,59 7,98E-01 -9,74 214 Met-SO/Met 4,28E-01 -3,63 1,12E-02 20,89 2,42E-01 25,29 215 Ala/BCAA 2,60E-01 18,55 3,57E-01 10,57 6,82E-01 -7,21 216 Gly/BCAA 2,28E-01 21,97 6,82E-01 15,36 3,67E-01 -5,73 217 SumLiso 4,74E-02 -20,90 2,82E-02 -21,95 8,18E-01 -0,87 218 SumPC+Liso 2,70E-01 -3,76 8,26E-02 -10,76 5,53E-01 -6,75 219 SumPC 4,77E-01 1,00 1,40E-01 -7,31 5,40E-01 -8,39 220 SumSM 1,50E-01 -7,55 3,73E-01 -4,99 8,18E-01 2,43 221 SumSMOH/SumSM 5,94E-01 -0,27 8,18E-01 0,16 5,92E-01 0,44 222 C16+C18/C0 9,39E-02 -29,71 4,59E-01 -3,61 2,30E-01 25,20 223 SumMUFA 2,47E-01 -2,35 1,90E-01 -5,80 7,79E-01 -3,36 224 SumPUFA 3,28E-01 -2,39 1,28E-01 -8,94 6,30E-01 -6,39 225 SumSFA 7,68E-02 -8,94 3,66E-02 -14,46 5,93E-01 -5,07 226 PUFA/SFA 2,71E-01 6,76 2,00E-01 5,69 9,72E-01 -1,01 227 PUFA/MUFA 9,54E-01 -0,89 3,17E-01 -0,83 3,70E-01 0,05 228 MUFA/SFA 1,80E-01 0,32 5,74E-02 4,47 6,54E-01 4,13 229 24SOHC 6,91 E-02 -24,12 2,19E-04 -70,17 8,62E-03 -37,11 230 250HC 5,60E-02 -18,40 8,37E-04 -59,28 9,86E-02 -34,53 231 27OHC 3,32E-02 -22,36 1,61 E-02 -22,72 8,30E-01 -0,29 232 24,25,EPC 3,06E-01 -37,01 2,45E-03 -92,73 9,73E-03 -40,67 233 7aOHC 7,83E-02 24,50 1,28E-01 36,14 7,20E-01 9,36 234 5B,6B,EPC 1,67E-01 14,26 2,04E-02 49,53 1,65E-01 30,87 235 5a,6a,EPC 4,59E-01 16,71 6,71E-02 31,18 1,94E-01 12,40 236 4BOHC 4,96E-02 -17,82 2,26E-02 -22,85 4,57E-01 -4,26 (continuación)
Grupo 2 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 1 Grupo 3 vs Grupo 2 N.° Analito valor de p FC valor de p FC valor de p FC 237 Desmosterol 9,73E-01 30,36 8,19E-01 18,46 7,87E-01 -10,05 238 7DHC 2,55E-01 51,11 9,03E-01 1,48 2,49E-01 -48,91 239 Colestenona 4,96E-01 5,98 7,89E-01 29,61 6,26E-01 22,30 240 Lanosterol 9,61 E-01 2,92 7,67E-03 -109,37 4,04E-03 -115,49 241 24DHLan 6,89E-01 -3,62 6,57E-01 -142,35 2,32E-01 -133,88

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un método para el diagnóstico precoz in vitro de la asfixia,
caracterizado por la detección cuantitativa en al menos una muestra de sangre humana de tres o más compuestos endógenos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton, excepto lactato, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3
que comprende las etapas de:
a) seleccionar dichos compuestos;
b) medir al menos uno de los parámetros seleccionados del grupo que consiste en: concentración, nivel o cantidad de cada metabolito individual de dichos compuestos en dicha muestra; y usar y almacenar el conjunto de valores obtenido en una base de datos;
c) calibrar dichos valores comparando los parámetros de referencia positivos para asfixia y/o negativos para asfixia;
d) comparar dichos valores medidos en la muestra con los valores calibrados, para evaluar si el paciente es positivo para asfixia o negativo para asfixia.
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que dicha etapa de calibración se realiza
a) preprocesando matemáticamente dichos valores para reducir los errores técnicos intrínsecos a los procedimientos de medición usados en la reivindicación 1;
b) seleccionando al menos un algoritmo de clasificación adecuado del grupo que consiste en regresión logística, análisis discriminante (diagonal) lineal o cuadrático (LDA, QDA, DLDA, DQDA), perceptrón, análisis discriminante regularizado (RDA) de centroides reducidos, bosques aleatorios (RF), redes neurales (NN), redes Bayesianas, modelos ocultos de Markov, máquinas de vectores de soporte (SVM), mínimos cuadrados parciales generalizados (GPLS), repartición alrededor de meloides (PAM), programación lógica inductiva (ILP), modelos aditivos generalizados, procesos gausianos, regresión de mínimos cuadrados regularizados, mapas autorganizativos (SOM), particionamiento recursivo y árboles de regresión, clasificadores de los K vecinos más cercanos (K-NN), clasificadores difusos, técnica bagging, técnica boosting, y Bayesiano ingenuo; y aplicando dicho algoritmo clasificador seleccionado a dichos datos preprocesados de la etapa a);
c) entrenándose dichos algoritmos clasificadores de la etapa b) en al menos un conjunto de datos de entrenamiento que contiene datos preprocesados procedentes de sujetos que se dividen en clases de acuerdo con sus condiciones patofisiológicas, fisiológicas, de pronóstico o de respuesta relacionadas con la asfixia, para seleccionar una función clasificadora para asignar dichos datos preprocesados a dichas condiciones;
d) aplicando dichos algoritmos clasificadores entrenados de la etapa c) a un conjunto de datos preprocesados de un sujeto con una condición patofisiológica, fisiológica, de pronóstico o de respuesta relacionada con la asfixia desconocida, y usando los algoritmos clasificadores entrenados para predecir la etiqueta de clase de dicho conjunto de datos para diagnosticar el estado de asfixia del sujeto,
en donde dicha etapa de preprocesamiento matemático de la etapa 2 a) de dichos datos de partida obtenidos en la etapa 1 b) se realiza por un método estadístico seleccionado del grupo que consiste en:
en el caso de datos de partida obtenidos por espectroscopía óptica (UV, visible, IR, fluorescencia): corrección del efecto de fondo y/o normalización;
en el caso de datos de partida obtenidos por espectroscopía de masas o espectroscopía de masas acoplada a cromatografía líquida o gaseosa o electroforesis capilar, o por electroforesis en gel 2D, determinación cuantitativa con ELISA o RIA o determinación de concentraciones/cantidades por cuantificación de inmunotransferencias o cuantificación de cantidades de biomoléculas unidas a aptámeros: suavizado, corrección de la línea base, selección de picos y, opcionalmente, transformación adicional de otros datos tal como transformación en logaritmos para realizar una estabilización de las varianzas.
3. Método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que dicha asfixia es asfixia perinatal.
4. Método de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, caracterizado por que después del preprocesamiento de la etapa 2 a) se inserta una etapa adicional de selección de características, para encontrar un subconjunto de características de menor dimensión con el máximo poder discriminatorio entre clases; y/o
dicha selección de características se realiza mediante un enfoque de filtro y/o envoltorio; y/o
en donde dicho enfoque de filtro incluye rankers y/o métodos de evaluación de subconjuntos de características; y/o en donde se aplica dicho enfoque de envoltorio, en que se usa un clasificador para evaluar subconjuntos de atributos.
5. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que dicha condición patofisiológica corresponde a la etiqueta “enfermo” y dicha condición fisiológica corresponde a la etiqueta “sano” o dicha condición patofisiológica corresponde a diferentes etiquetas de “grados de una enfermedad”, “subtipos de una enfermedad”, diferentes valores de una “puntuación para una enfermedad definida”; dicha condición de pronóstico corresponde a una etiqueta “bueno”, “medio”, “malo” o “que responde terapéuticamente” o “que no responde terapéuticamente” o “que responde mal terapéuticamente”.
6. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que dichos datos metabólicos son datos de espectrometría de masas de alto rendimiento.
7. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que dichos compuestos endógenos específicos de asfixia son metabolitos endógenos específicos de asfixia.
8. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado por que dicha asfixia es encefalopatía hipóxicoisquémica,
en donde se imputan los datos que faltan;
en donde los datos de partida de las concentraciones de metabolitos se preprocesan usando la transformación logarítmica;
en donde se usan modelos lineales de efectos mixtos para identificar metabolitos que están
presentes de forma diferencial;
en donde se selecciona el bosque aleatorio como algoritmo de clasificación adecuado, el entrenamiento del algoritmo de clasificación que incluye concentraciones de metabolitos preprocesadas se realiza con replicaciones bootstrap estratificadas, aplicando dicho clasificador de bosques aleatorios entrenado a dicho conjunto de datos de concentración de metabolitos preprocesado de un sujeto que se sospecha que tiene encefalopatía hipóxicoisquémica, y usando el clasificador entrenado para diagnosticar encefalopatía hipóxico-isquémica.
9. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado por que el método comprende además la inclusión de parámetros de laboratorio convencionales usados comúnmente en la química clínica y en unidades de cuidados críticos, en particular gases sanguíneos, preferentemente oxígeno de sangre arterial, pH de la sangre, estado base, y lactato, niveles en suero y/o plasma de compuestos bioquímicos de bajo peso molecular usados rutinariamente, enzimas, actividades enzimáticas, receptores de la superficie celular y/o recuento de células, en particular recuentos de glóbulos rojos y/o blancos, y recuentos de plaquetas.
10. Método para estimar in vitro la duración de hipoxia en un paciente sometido a asfixia, caracterizado por la detección cuantitativa en al menos una muestra de sangre humana de 3 o más compuestos endógenos específicos de asfixia que tienen un peso molecular menor de 1.500 Dalton; y el calibrado de los valores detectados preprocesados por medio de análisis de regresión con una duración de hipoxia conocida y aplicación de la función de regresión obtenida al conjunto de datos de valores detectados preprocesados de un paciente con hipoxia; y uso de la función de regresión para calcular la duración de la hipoxia, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3.
11. Método para supervisar in vitro las condiciones hipóxicas, caracterizado por la detección cuantitativa en al menos una muestra de sangre humana de 3 o más de compuestos endógenos específicos de asfixia; y el calibrado de los valores detectados preprocesados por medio de entrenamiento de un clasificador de análisis discriminante lineal con conocimiento de las fases de oxigenación y/o lesiones inducidas por oxigeno de un sujeto humano y aplicación del clasificador entrenado a dicho conjunto de datos de valores detectados preprocesados de un sujeto con terapia de oxígeno y uso del clasificador entrenado para determinar la fase de oxigenación y/o lesión inducida por oxígeno, en donde los compuestos endógenos específicos de asfixia se seleccionan de las Tablas 2 y 3.
12. Método de acuerdo con la reivindicación 11, caracterizado por que dichas condiciones hipóxicas incluyen asfixia, en particular asfixia perinatal.
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