ES2891088T3 - Métodos de diagnóstico, agentes terapéuticos y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Compuesto representado por la siguiente fórmula: **(Ver fórmula)** o una sal del mismo, en el que el compuesto es puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,5% o 99,9% en peso con respecto a los otros estereoisómeros.

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos de diagnóstico, agentes terapéuticos y usos de los mismos
Solicitud relacionada
Esta solicitud reivindica el beneficio de la fecha de presentación en virtud del 35 U.S.C. § 119(e), de la solicitud provisional estadounidense n.° 62/367.839, presentada el 28 de julio de 2016.
Antecedentes de la invención
Hay una necesidad clínica significativa no cubierta de una prueba sensible, precisa y conveniente para evaluar la función excretora de los riñones (tasa de filtración glomerular, GFR). La medida más precisa de la función renal es la tasa de filtración glomerular medida (mGFR), que requiere el uso de marcadores de filtración ideales (por ejemplo, inulina, iotalamato, iohexol). Debido a su complejidad, esta medición es cara, difícil de realizar en la práctica clínica rutinaria y normalmente sólo se usa en estudios de investigación o para posibles donantes de riñón. Por consiguiente, se usan medidas alternativas de la función renal basadas en marcadores tales como creatinina sérica en ecuaciones para derivar una GFR estimada (eGFR). Por ejemplo, las ecuaciones de MDRDcr, CKD-EPIcr y CKD-EPIcrcys actualmente en uso para derivar la eGFR usan creatinina sérica en combinación con información demográfica (por ejemplo, edad, género/sexo, raza). La ventaja de este enfoque es su facilidad de uso en la práctica clínica rutinaria para la evaluación de la función renal. Sin embargo, estos métodos de determinar la GFR tienen limitaciones en cuanto a la evaluación auténtica de la función renal; en algunos pacientes algunas ecuaciones subestiman algunas veces la GFR y en otros pacientes algunas veces sobreestiman la GFR, especialmente cuando está en el intervalo “normal”. Es probable que algunas de estas limitaciones se deban a la variabilidad de los niveles de creatinina sérica que pueden verse afectados por la masa muscular, dieta y algunos fármacos, incluyendo antibióticos, lo cual conduce a niveles variables entre individuos y a lo largo del tiempo. La consecuencia clínica de esta imprecisión conduce al diagnóstico erróneo de pacientes. En algunos casos, los individuos con enfermedad renal crónica (CKD) no se diagnostican mediante los métodos actuales y, por tanto, no reciben un tratamiento apropiado (falso negativo). En otros casos, puede diagnosticarse que los individuos tienen CKD cuando de hecho no tienen CKD (falso positivo); entonces se trata a estos individuos para una enfermedad que no tienen. Además, se necesita una detección temprana de función renal reducida debido a agentes tóxicos (por ejemplo, determinados antibióticos, agentes de quimioterapia, tóxicos, toxinas) para detectar lesión renal aguda (AKI) y tomar medidas para prevenir un daño renal adicional. Más recientemente, se han usado niveles séricos de cistatina C para evaluar la función renal, pero la utilidad de esta medida de la función renal está limitada por la variabilidad de los niveles séricos de cistatina C entre individuos. Por tanto, hay una necesidad de una prueba conveniente y más precisa que las pruebas de evaluación de la función renal actualmente disponibles para reducir el número de diagnósticos falsos negativos y falsos positivos.
Además, las evaluaciones actuales de la función renal (por ejemplo, creatinina sérica, cálculos de eGFR mediante cistatina C, BUN, albúmina en orina) no son lo suficientemente sensibles y/o precisas para detectar lesión renal aguda (AKI), enfermedad renal temprana o para monitorizar su progresión, especialmente en los estadios más iniciales de AKI y CKD cuando los individuos son asintomáticos. La detección temprana de una función renal en declive puede prevenir un deterioro significativo de la función renal que puede producirse antes de que se detecte el problema con los métodos actualmente disponibles. Una nueva prueba con una lectura sensible que evalúe y monitorice la función renal de un individuo permitiría una detección más temprana de AKI y/o CKD, antes de que puedan detectarse AKI y CKD con los métodos actuales. Como resultado, se reduciría el coste global del tratamiento y control de AKI y CKD y las complicaciones asociadas. Con la detección temprana de CKD, pueden tratarse más eficazmente o posiblemente incluso prevenirse complicaciones, incluyendo enfermedad cardiovascular, anemia, malnutrición y enfermedad ósea. La detección temprana de CKD permitiría modificaciones del estilo de vida tales como dieta saludable, dejar de fumar, pérdida de peso y tratamiento de alta tensión arterial, lo cual puede prevenir o reducir una lesión renal adicional, reduciendo de ese modo la necesidad de diálisis y trasplante de riñón que son desenlaces frecuentes asociados con la función renal reducida y CKD.
Por tanto, hay una necesidad no cubierta de una prueba basada en sangre u orina que pueda evaluar y/o monitorizar la función renal de un paciente midiendo el nivel de uno o más metabolitos biomarcadores en pacientes asintomáticos, en pacientes con factores de riesgo para CKD o AKI (por ejemplo, edad de más de 60, hipertensión, diabetes, enfermedad cardiovascular, historia familiar de CKD) y en pacientes en respuesta a una composición o intervención terapéutica. Por ejemplo, la prueba puede medir de manera cuantitativa el nivel de un panel de metabolitos biomarcadores mediante lo cual el aumento o la disminución del nivel de cada biomarcador en el panel con respecto a un nivel de referencia convencional son indicativos de la función renal. Tales paneles de prueba de biomarcadores pueden sustituir o complementar los resultados de pruebas de la función renal actuales y permitir a los médicos evaluar mejor inicialmente la función renal y/o monitorizar la función renal en pacientes a lo largo del tiempo. Una prueba de este tipo también puede ser útil en la evaluación del efecto de intervenciones terapéuticas para ralentizar el declive de la función renal.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona nuevos compuestos y composiciones y su uso en la evaluación y monitorización de la función renal y divulga métodos de diagnóstico para enfermedades renales.
En una realización, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula (I):
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o una sal del mismo, en el que el compuesto es puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,5% o 99,9% con respecto a los otros estereoisómeros.
En otra realización, la presente invención proporciona un método para determinar el nivel de un compuesto de fórmula (I) o sal del mismo, en un sujeto que comprende: (1) preparar una muestra analítica a partir de una muestra biológica obtenida a partir del sujeto; y (2) determinar el nivel del compuesto usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para evaluar la función renal en un sujeto que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de función renal reducida en el sujeto.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida en un sujeto que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de predisposición a desarrollar función renal reducida en el sujeto.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para clasificar a (o determinar el estadio de) un sujeto según el nivel (o estadio) de la función renal que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que el nivel del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia se usa en la clasificación del sujeto según el nivel de función renal.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para monitorizar la función renal en un sujeto que comprende:
(1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo; y
(2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento, y en el que el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos;
en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de un cambio en la función renal.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para diagnosticar enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de enfermedad renal crónica.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para monitorizar la progresión o regresión de enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto que comprende:
(1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo;
(2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento, en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de progresión o regresión de la enfermedad en el sujeto y en el que el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para diagnosticar lesión renal aguda (AKI) en un sujeto que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de enfermedad renal crónica.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para monitorizar la progresión o regresión de lesión renal aguda (AKI) en un sujeto que comprende:
(1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo;
(2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento,
en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de progresión o regresión de la enfermedad en el sujeto y en el que el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método de evaluación de la función renal en un sujeto en respuesta a una composición que comprende: determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir de un sujeto tratado con la composición, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con el nivel del compuesto en el sujeto sin el tratamiento con la composición es indicativo de función renal reducida (y puede indicar AKI).
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene enfermedad renal crónica (CKD) que comprende:
(1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos;
(2) administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar enfermedad renal crónica si el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto en comparación con un nivel de referencia.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene enfermedad renal crónica (CKD) que comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar enfermedad renal crónica, en el que el sujeto tiene un nivel elevado de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en comparación con un nivel de referencia.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene lesión renal aguda (AKI) que comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar a K i, en el que el sujeto tiene un nivel elevado de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en comparación con un nivel de referencia.
En otra realización, la presente divulgación proporciona método para tratar a un sujeto que tiene AKI que comprende:
(1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos;
(2) administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar AKI si el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto en comparación con un nivel de referencia.
En algunos casos la AKI puede deberse a tratamiento (por ejemplo, quimioterapia, tratamiento con un agente terapéutico). En tales casos la intervención terapéutica será interrumpir la quimioterapia o el tratamiento farmacológico o usar un fármaco sustituto o alternativo para el tratamiento.
En aún otra realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene lesión renal aguda (AKI) que comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar a K i, en el que el sujeto tiene un nivel elevado de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en comparación con un nivel de referencia.
En otra realización, la presente invención proporciona un método para calcularla tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) en un sujeto que comprende las etapas de:
1) determinar el nivel de un compuesto representado por la fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos; y
2) calcular la eGFR usando un algoritmo que usa el nivel determinado del compuesto.
La presente invención también proporciona kits que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo.
En otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) en una muestra biológica.
En otra realización, el kit incluye un patrón interno que comprende un compuesto marcado de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo en una muestra biológica.
En aún otra realización, el kit incluye un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, un compuesto marcado de fórmula (I) o una sal del mismo, e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) en una muestra biológica.
En una realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para clasificar a un sujeto según el nivel de función renal basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En aún otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para diagnosticar o monitorizar enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En aún otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para diagnosticar o monitorizar lesión renal aguda (AKI) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En otra realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para calcular la tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra espectro y cromatograma de CL/EM de compuesto A en muestra de plasma humano.
La figura 2 muestra espectro de iones producto (EM2) de compuesto A en muestra de plasma con expansiones. La figura 3 muestra espectro de iones producto (EM2) de compuesto A en muestra de plasma recogida en un espectrómetro de masas Q-Exactive.
La figura 4 muestra espectro de EM3 de m/z 142 de compuesto A.
La figura 5 muestra espectro de EM3 de m/z 170 de compuesto A.
La figura 6 muestra espectro de EM4 de m/z 114,09 de compuesto A.
La figura 7 muestra espectro de EM de barrido completo de compuesto A sometido a intercambio con deuterio. La figura 8 muestra espectro de EM2 de compuesto A sometido a intercambio con deuterio.
La figura 9 muestra espectro de EM3 de m/z 143 de compuesto A sometido a intercambio con deuterio. La figura 10 muestra cromatogramas de CL-EM/EM para el compuesto A en muestra de plasma (panel superior), TMAP sintética (panel central) y su inyección conjunta (panel inferior).
La figura 11 muestra espectros de EM2 para el compuesto A en muestra de plasma (panel izquierdo) y TMAP sintética (panel derecho).
La figura 12 muestra espectros de EM3 de ion hijo de m/z 142 para el compuesto A en muestra de plasma (panel izquierdo) y TMAP sintética (panel derecho).
La figura 13 muestra espectros de EM3 de ion hijo de m/z 170 para el compuesto A en muestra de plasma (paneles izquierdos) y TMAP sintética (paneles derechos).
La figura 14 muestra espectros de EM4 de ion hijo de m/z 114,09 para el compuesto A en muestra de plasma (panel superior) y TMAP sintética (panel inferior).
La figura 15 muestra espectros de EM de barrido completo sometidos a intercambio con deuterio de compuesto A en muestra de plasma (panel izquierdo) y TMAP sintética (panel derecho).
La figura 16 muestra espectros de EM2 sometidos a intercambio con deuterio de compuesto A en muestra de plasma (panel izquierdo) y TMAP sintética (panel derecho).
La figura 17 muestra espectros de EM3 sometidos a intercambio con deuterio de m/z 143 para el compuesto A (izquierda) y TMAP sintética (derecha).
Las figuras 18A y 18B muestran espectros de 13C-RMN de la TMAP sin marcar (figura 18A) y TMAP marcada con 13C (figura 18B).
Las figuras 19A y 19B muestran espectros de masas de la TMAP sin marcar (figura 19A) y TMAP marcada con 13C (figura 19B).
Descripción detallada de la invención
Definiciones
A menos que se especifique lo contrario, los siguientes términos usados en el presente documento se definen de la siguiente manera:
Los compuestos de la invención pueden estar presentes en forma de sales. En la presente invención se incluye cualquier sal orgánica o inorgánica adecuada. En determinadas realizaciones, las sales de los compuestos de la invención se refieren a “sales farmacéuticamente aceptables” no tóxicas. La expresión “farmacéuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para hacer referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico razonable, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación excesivos, y compatibles con una razón de beneficio/riesgo razonable.
Tal como se usa en el presente documento, “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto original se modifica produciendo sales de ácido o base del mismo. Las formas de sal farmacéuticamente aceptables incluyen sales ácidas/aniónicas o básicas/catiónicas farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales de álcali u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares.
Por ejemplo, tales sales incluyen las sales de acetato, ascorbato, bencenosulfonato, benzoato, bencilato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, etanodisulfonato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutamato, glicolato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroximaleato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, metanosulfonato, mesilato, bromuro de metilo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oxalato, pamoato, pantotenato, fenilacetato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, propionato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfamida, sulfato, tannato, tartrato, teoclato, tosilato, trietyoduro, amonio, benzatina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina y procaína. Pueden formarse sales farmacéuticamente aceptables adicionales con cationes a partir de metales tales como aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, cinc y similares (véase también Pharmaceutical salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1­ 19).
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad suficiente de la base o el ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo o una mezcla de los mismos.
Sales de otros ácidos distintos de los mencionados anteriormente que, por ejemplo, son útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (por ejemplo, sales de trifluoroacetato) también comprenden una parte de la invención.
Los compuestos de la invención pueden prepararse como isómeros individuales o bien mediante síntesis específica de isómero o bien resolverse a partir de una mezcla isomérica. Las técnicas de resolución convencionales incluyen formar la sal de una base libre de cada isómero de un par de isómeros usando un ácido ópticamente activo (seguido por cristalización fraccionada y regeneración de la base libre), formar la sal de la forma de ácido de cada isómero de un par de isómeros usando una amina ópticamente activa (seguido por cristalización fraccionada y regeneración del ácido libre), formar un éster o amida de cada uno de los isómeros de un par de isómeros usando un ácido, amina o alcohol ópticamente puro (seguido por separación cromatográfica y retirada del agente auxiliar quiral) o resolver una mezcla isomérica o bien de un material de partida o bien de un producto final usando diversos métodos cromatográficos bien conocidos.
Cuando se nombra o se representa mediante la estructura la estereoquímica de un compuesto divulgado, el estereoisómero nombrado o representado es puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o 99,9% en peso con respecto a los otros estereoisómeros. Cuando se nombra o se representa mediante la estructura un único enantiómero, el enantiómero representado o nombrado es ópticamente puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o 99,9% en peso. La pureza óptica en porcentaje en peso es la razón del peso del enantiómero con respecto al peso del enantiómero más el peso de su isómero óptico.
Cuando un compuesto divulgado se nombra o se representa mediante la estructura sin indicar la estereoquímica, y el compuesto tiene al menos un centro quiral, debe entenderse que el nombre o la estructura abarca un enantiómero del compuesto libre del isómero óptico correspondiente, una mezcla racémica del compuesto y mezclas enriquecidas en un enantiómero con respecto a su isómero óptico correspondiente.
Cuando un compuesto divulgado se nombra o se representa mediante la estructura sin indicar la estereoquímica y tiene al menos dos centros quirales, debe entenderse que el nombre o la estructura abarca un diastereómero libre de otros diastereómeros, un par de diastereómeros libres de otros pares de diastereómeros, mezclas de diastereómeros, mezclas de pares de diastereómeros, mezclas de diastereómeros en las que un diastereómero está enriquecido con respecto al/a los otro(s) diastereómero(s) y mezclas de pares de diastereómeros en las que un par de diastereómeros está enriquecido con respecto al/a los otro(s) par(es) de diastereómeros.
Cuando compuestos que tienen uno o más centros estereoméricos se representan con una estereoquímica particular para al menos un centro estereomérico, la presente invención también incluye compuestos que tienen la estereoquímica opuesta en el/los centro(s) estereomérico(s) correspondiente(s) y compuestos que no tienen ninguna estereoquímica específica en el/los centro(s) estereomérico(s) correspondiente(s).
“Tratar” un estado o una enfermedad se refiere a curar así como a mejorar al menos un síntoma del estado o la enfermedad.
Tal como se usa en el presente documento, el término “sujeto” significa cualquier animal, pero es preferiblemente un mamífero, tal como, por ejemplo, un humano, mono, primate no humano, rata, ratón, vaca, perro, gato, cerdo, caballo o conejo. Incluso más preferiblemente, el sujeto es un humano.
Tal como se usa en el presente documento, “cantidad eficaz” significa la cantidad de agente de compuesto activo que provoca la respuesta biológica deseada en un sujeto. Tal respuesta incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o el trastorno que está tratándose. La cantidad eficaz de un compuesto de la invención en un método terapéutico de este tipo es de desde aproximadamente 0,01 mg/kg/día hasta aproximadamente 1000 mg/kg/día o desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día hasta aproximadamente 100 mg/kg/día.
“Diabetes”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por altos niveles de azúcar (glucosa) en sangre que resultan de defectos en la secreción o la acción de insulina, o ambas.
“Diabetes tipo 2”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a uno de los dos tipos principales de diabetes, el tipo en el que las células beta del páncreas producen insulina, al menos en los estadios iniciales de la enfermedad, pero el organismo es incapaz de usarla eficazmente porque las células del organismo son resistentes a la acción de la insulina. En estadios posteriores de la enfermedad las células beta pueden dejar de producir insulina. La diabetes tipo 2 también se conoce como diabetes resistente a la insulina, diabetes no dependiente de insulina y diabetes de inicio en la edad adulta.
Tal como se usa en el presente documento, el término “biomarcador” significa un compuesto, preferiblemente un metabolito, que está presente de manera diferente (es decir, aumentado o reducido) en una muestra biológica a partir de un sujeto o un grupo de sujetos que tienen un primer fenotipo (por ejemplo, que tienen una enfermedad) en comparación con una muestra biológica a partir de un sujeto o grupo de sujetos que tienen un segundo fenotipo (por ejemplo, que no tienen la enfermedad). Un biomarcador puede estar presente de manera diferente a cualquier nivel, pero generalmente está presente a un nivel que está aumentado en al menos el 5%, en al menos el 10%, en al menos el 15%, en al menos el 20%, en al menos el 25%, en al menos el 30%, en al menos el 35%, en al menos el 40%, en al menos el 45%, en al menos el 50%, en al menos el 55%, en al menos el 60%, en al menos el 65%, en al menos el 70%, en al menos el 75%, en al menos el 80%, en al menos el 85%, en al menos el 90%, en al menos el 95%, en al menos el 100%, en al menos el 110%, en al menos el 120%, en al menos el 130%, en al menos el 140%, en al menos el 150% o más; o está generalmente presente a un nivel que está reducido en al menos el 5%, en al menos el 10%, en al menos el 15%, en al menos el 20%, en al menos el 25%, en al menos el 30%, en al menos el 35%, en al menos el 40%, en al menos el 45%, en al menos el 50%, en al menos el 55%, en al menos el 60%, en al menos el 65%, en al menos el 70%, en al menos el 75%, en al menos el 80%, en al menos el 85%, en al menos el 90%, en al menos el 95% o en el 100% (es decir, ausente). Un biomarcador está preferiblemente presente de manera diferente a un nivel que es estadísticamente significativo (por ejemplo, un valor de p de menos de 0,05 y/o un valor de q de menos de 0,10 tal como se determina usando o bien la prueba de la T de Welch o bien la prueba de suma de rangos de Wilcoxon). Alternativamente, los biomarcadores demuestran una correlación con la función renal. El intervalo de correlaciones posibles es entre negativa (-)1 y positiva (+)1. Un resultado de negativa (-)1 significa una correlación negativa perfecta y una positiva (+)1 significa una correlación positiva perfecta, y 0 significa que no hay ninguna correlación en absoluto. Una “correlación positiva sustancial” se refiere a un biomarcador que tiene una correlación de desde 0,25 hasta 1,0 con un trastorno o con una medida clínica (por ejemplo, mGFR), mientras que una “correlación negativa sustancial” se refiere a una correlación de desde -0,25 hasta -1,0 con un trastorno o medida clínica dado. Una “correlación positiva significativa” se refiere a un biomarcador que tiene una correlación de desde 0,5 hasta 1,0 con un trastorno o medida clínica dado (por ejemplo, mGFR), mientras que una “correlación negativa significativa” se refiere a una correlación con un trastorno de desde -0,5 hasta -1,0 con un trastorno o medida clínica dado.
El “nivel” del compuesto de la presente invención o uno o más biomarcadores adicionales significa la cantidad o concentración absoluta o relativa del biomarcador medida en la muestra.
“Muestra” o “muestra biológica” significa material biológico aislado a partir de un sujeto. La muestra biológica puede contener cualquier material biológico adecuado para detectar los biomarcadores deseados y puede comprender material celular y/o no celular a partir del sujeto. La muestra puede aislarse a partir de cualquier tejido o líquido biológico adecuado tal como, por ejemplo, tejido renal, sangre, plasma sanguíneo (plasma), suero sanguíneo (suero), orina, saliva o líquido cefalorraquídeo (CSF). Preferiblemente, la muestra biológica es sangre, plasma sanguíneo, suero, saliva u orina. En otra realización preferida, la muestra biológica es suero sanguíneo o plasma sanguíneo.
Un “nivel de referencia” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es) que es indicativo de un estado patológico, fenotipo particular o ausencia del mismo, así como combinaciones de estados patológicos, fenotipos o ausencia de los mismos. Un “nivel de referencia” puede ser una cantidad o concentración absoluta o relativa del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es), una presencia o ausencia del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es), un intervalo de cantidad o concentración del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es), una cantidad o concentración mínima y/o máxima del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es), una cantidad o concentración media del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es), y/o una mediana de la cantidad o concentración del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es); y, además, los “niveles de referencia” de combinaciones del compuesto de la presente invención y biomarcador(es) adicional(es) también pueden ser razones de cantidades o concentraciones absolutas o relativas de dos o más biomarcadores unos con respecto a otros. Los niveles de referencia apropiados del compuesto de la presente invención o biomarcador(es) adicional(es) para un estado patológico, fenotipo particular o ausencia del mismo pueden determinarse midiendo niveles del compuesto de la presente invención o biomarcadores deseados en uno o más sujetos apropiados, y tales niveles de referencia pueden ajustarse a medida para poblaciones específicas de sujetos (por ejemplo, un nivel de referencia puede hacerse corresponder con respecto a la edad de modo que pueden realizarse comparaciones entre niveles de biomarcador en muestras a partir de sujetos de una determinada edad y niveles de referencia para un estado patológico, fenotipo particular o ausencia del mismo en un determinado grupo de edad). Un nivel de referencia “positivo” significa un nivel que es indicativo de un estado patológico o fenotipo particular. Un nivel de referencia “negativo” significa un nivel que es indicativo de una ausencia de un estado patológico o fenotipo particular. Por ejemplo, un “nivel de referencia positivo para CKD” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador adicional que es indicativo de un diagnóstico positivo de CKD en un sujeto, y un “nivel de referencia negativo para CKD” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador adicional que es indicativo de un diagnóstico negativo de CKD en un sujeto (es decir, función renal normal, ausencia de CKD). Asimismo, un “nivel de referencia de la función renal” puede indicar el grado de función renal presente en un sujeto. Por ejemplo, un “nivel de referencia de función renal normal” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador adicional que es indicativo de función renal normal en un sujeto, un “nivel de referencia de función renal moderadamente reducida” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador adicional que es indicativo de función renal moderadamente reducida, y un “nivel de referencia de función renal gravemente reducida” significa un nivel del compuesto de la presente invención o biomarcador adicional que es indicativo de función renal gravemente reducida en un sujeto
Tal como se usa en el presente documento, una “muestra de referencia” se refiere a una muestra que contiene un nivel de referencia de un biomarcador. Por ejemplo, puede obtenerse una muestra de referencia a partir de un sujeto que no tiene una enfermedad, estado patológico o fenotipo particular, tal como CKD o lesión renal aguda.
“Compuesto distinto de biomarcador” significa un compuesto que no está presente de manera diferente en una muestra biológica a partir de un sujeto o un grupo de sujetos que tienen un primer fenotipo (por ejemplo, que tienen una primera enfermedad) en comparación con una muestra biológica a partir de un sujeto o grupo de sujetos que tienen un segundo fenotipo (por ejemplo, que no tienen la primera enfermedad). Sin embargo, tales compuestos distintos de biomarcador pueden ser biomarcadores en una muestra biológica a partir de un sujeto o un grupo de sujetos que tienen un tercer fenotipo (por ejemplo, que tienen una segunda enfermedad) en comparación con el primer fenotipo (por ejemplo, que tienen la primera enfermedad) o el segundo fenotipo (por ejemplo, que no tienen la primera enfermedad).
Tal como se usa en el presente documento, el término “metabolito” o “molécula pequeña” significa moléculas orgánicas e inorgánicas que están presentes en una célula. El término no incluyen macromoléculas grandes, tales como proteínas grandes (por ejemplo, proteínas con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000 ó 10.000), ácidos nucleicos grandes (por ejemplo, ácidos nucleicos con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000 ó 10.000) o polisacáridos grandes (por ejemplo, polisacáridos con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000 ó 10.000). Las moléculas pequeñas de la célula se encuentran generalmente libres en disolución en el citoplasma o en otros orgánulos, tales como las mitocondrias, en los que forman una combinación de productos intermedios que pueden metabolizarse adicionalmente o usarse para generar moléculas grandes, denominadas macromoléculas. El término “moléculas pequeñas” incluye moléculas de señalización y productos intermedios en las reacciones químicas que transforman energía derivada de alimentos en formas utilizables. Los ejemplos de moléculas pequeñas incluyen azúcares, ácidos grasos, aminoácidos, nucleótidos, productos intermedios formados durante procesos celulares y otras moléculas pequeñas encontradas dentro de la célula.
“Tasa de filtración glomerular” o “GFR” es el volumen de líquido filtrado a partir de los capilares glomerulares renales al interior de la cápsula de Bowman por unidad de tiempo. La GFR es una métrica de la función renal mediante la cual una GFR en o por encima de un determinado umbral indica una función renal normal y GFR por debajo del valor umbral indica una función renal que está comprometida o alterada. Generalmente, un valor de GFR alta indica una función renal mejor mientras que una GFR baja indica una alteración de la función renal (por ejemplo, enfermedad renal crónica, lesión renal aguda).
“Tasa de filtración glomerular medida” o “mGFR” significa la tasa de filtración glomerular real que se determina usando un marcador de filtración tal como inulina, iotalamato o iohexol. La mGFR se realiza en un entorno clínico y es la medida más precisa de la función renal.
“Tasa de filtración glomerular estimada” o “eGFR” significa una estimación calculada de la tasa de filtración glomerular real. El valor calculado puede basarse en el nivel de uno o más biomarcadores y puede incluir otras variables tales como información demográfica (por ejemplo, edad o género). Un método actual para calcular la eGFR es basándose en la concentración de creatinina sérica. Otros métodos actuales para calcular una eGFR usan la cantidad de cistatina C sola o en combinación con la cantidad de creatinina sérica. Generalmente, valores de eGFR baja están asociados con una función renal reducida.
“SrCr eGFR” o “eGFRscr, eGFRcr” significa la estimación de eGFR basada en niveles de creatinina sérica.
“CKD-EPI” o “colaboración de epidemiología de enfermedad renal crónica” derivó dos ecuaciones para calcular una eGFR. Una ecuación es: CKD-EPIcr GFR = 141 x mín(SCr/K,l)a X máx(SCr/K,l)'1209 x 0,993Edadx 1,018 [si es mujer] x 1,159 [si es de raza negra], donde SCr es la creatinina sérica (mg/dl), k es 0,7 para mujeres y 0,9 para hombres, a es -0,329 para mujeres y -0,411 para hombres, mín indica el mínimo de SCr/K o 1, y máx indica el máximo de SCr/K o 1. La segunda ecuación (CKD-EPIcrcys eGFR) incluye la cantidad de cistatina C además de la cantidad de SCr y variables demográficas.
“MDRD o “modificación de la dieta en eGFR con enfermedad renal” es otra ecuación para calcular la eGFR. La ecuación es: MDRDcr eGFR = 186 x (SCr)'1154x (Edad)'0203x (0,742 si es mujer) x (1,212 si es de raza negra), donde SCr es creatinina sérica (mg/dl). En la actualidad, normalmente se considera que MDRDcr eGFR es el método de referencia para calcular la eGFR.
“Albúmina en orina” es una prueba que mide la cantidad de albúmina en la orina y también se usa para detectar enfermedad renal.
“Creatinina sérica” o “SCr” se refiere a la medida de creatinina en suero y se usa habitualmente para estimar la GFR.
“Nitrógeno ureico en sangre” o “BUN” se refiere a la medición de la cantidad de nitrógeno en la sangre en forma de urea. BUN es una prueba usada para medir la función renal.
“Enfermedad renal crónica” o “CKD” incluye estados que dañan los riñones dando como resultado una capacidad reducida del riñón para eliminar residuos del organismo dando como resultado altos niveles de residuos en el organismo y conduciendo a un aumento del riesgo de enfermedad y desarrollo de complicaciones tales como alta tensión arterial, anemia, mala salud nutricional y daño nervios. A los pacientes con anomalías en la función renal durante al menos tres meses se les puede diagnosticar CKD. El daño renal debido a CKD es permanente.
“Lesión renal aguda” o “AKI” se refiere a un estado en el que hay una rápida pérdida de función renal. El daño renal debido a AKI puede ser reversible.
“Estadios de enfermedad renal crónica” o “estadios de CKD” significa el grado de daño renal tal como se evalúa actualmente usando la tasa de filtración glomerular medida o estimada (mGFR, eGFR). Desde el punto de vista clínico, generalmente se reconocen 5 estadios de CKD con función renal considerada como normal en el estadio 1 (GFR>90), mínimamente reducida en el estadio 2 (GFR de 60-89), moderadamente reducida en los estadios 3A y 3B (GFR de 30-59), gravemente reducida en el estadio 4 (GFR de 15-29) e insuficiencia renal muy grave o de estadio terminal, también denominada insuficiencia renal establecida en el estadio 5 (GFR <15, o con diálisis). Pueden usarse los estadios de función renal para referirse al daño renal presente durante cualquier cantidad de tiempo (es decir, daño renal debido a AKI o CKD).
La presente invención puede entenderse más completamente haciendo referencia a la siguiente descripción detallada y ejemplos, que se pretende que muestren a modo de ejemplo realizaciones no limitativas de la invención.
Compuestos y composiciones
La presente invención proporciona nuevos compuestos, composiciones y su uso en métodos de diagnóstico y métodos de tratamiento.
En una 1a realización, la presente invención proporciona un compuesto representado por la siguiente fórmula:
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o una sal del mismo, en el que el compuesto es puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,5% o 99,9% en peso con respecto a los otros estereoisómeros.
En determinadas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) en la 1a realización se representa por la siguiente fórmula:
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o una sal del mismo.
En una realización, el compuesto de fórmula (II) o una sal del mismo es ópticamente puro en al menos el 60%, ópticamente puro en al menos el 70%, ópticamente puro en al menos el 80%, ópticamente puro en al menos el 90%, ópticamente puro en al menos el 95% u ópticamente puro en al menos el 99%.
En diversas realizaciones, el compuesto de la presente invención descrito en el presente documento (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II) o una sal de los mismos) está sustancialmente libre de impurezas.
En diversas realizaciones, el compuesto de la presente invención descrito en el presente documento (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II), o una sal de los mismos) es puro en al menos el 60%, puro en al menos el 70%, puro en al menos el 80%, puro en al menos el 90%, puro en al menos el 95% o puro en al menos el 99%.
En determinadas realizaciones, el compuesto de la presente invención descrito en el presente documento (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II) o una sal de los mismos) está marcado de manera isotópica. En una realización, el compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal del mismo está radiomarcado, tal como con tritio (3H) o carbono 14 (14C). En otra realización, el compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal del mismo está marcado con deuterio, carbono 13 (13C) o nitrógeno 15 (15N) o una combinación de los mismos. Puede usarse cualquier método adecuado para el marcaje isotópico de los compuestos de la presente invención.
Tal como se usa en el presente documento, cuando un compuesto de la presente invención (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II) o una sal de los mismos) está marcado de manera isotópica, significa que la posición que porta el marcador isotópico tiene el isótopo designado en una abundancia que es al menos 10 veces, 50 veces, 100 veces o 1000 veces superior a la abundancia natural. Por ejemplo, cuando un compuesto de la presente invención (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II) o una sal de los mismos) está marcado con carbono 13 (13C), la posición que porta el marcador de 13C tiene una incorporación de 13C de al menos el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% en esa posición. De manera similar, cuando un compuesto de la presente invención (por ejemplo, compuestos representados por la fórmula (I) o (II) o una sal de los mismos) está marcado con deuterio, la posición que porta el deuterio tiene una incorporación de deuterio de al menos el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% en la posición.
Los compuestos descritos anteriormente, tales como los compuestos de formulas (I) o (II) o una sal (por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable) de los mismos, pueden usarse en cualquiera de los métodos descritos en el presente documento. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden usarse para evaluar la función renal en un sujeto, para calcular una estimación de la tasa de filtración glomerular en un sujeto, para monitorizar a un sujeto para detectar cambios en la función renal (por ejemplo, reducciones en la función que pueden indicar lesión renal aguda o CKD incipiente), para clasificar a sujetos según el grado de función renal (por ejemplo, normal, levemente reducida, moderadamente reducida, gravemente reducida, insuficiencia renal en estadio terminal) y para distinguir a sujetos que tienen CKD frente a sujetos de control a los que no se les ha diagnosticar CKD. Además, los compuestos pueden usarse para monitorizar cambios en la función renal a lo largo del tiempo o en respuesta a tratamiento farmacológico, enfermedad (por ejemplo, diabetes tipo II) o intervenciones en el estilo de vida (por ejemplo, dieta, ejercicio) y para identificar o descartar a sujetos como candidatos adecuados para terapias farmacológicas y/o trasplante de riñón.
También se incluyen en la presente divulgación anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se unen específicamente al compuesto descrito en el presente documento (por ejemplo compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal (por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable) del mismo). En la técnica se conocen métodos para generar anticuerpos que se unen específicamente a moléculas pequeñas. También se incluyen derivados de anticuerpos, tales como un polipéptido que comprende las secuencias de VH y VL del anticuerpo descrito anteriormente. En determinada realización, el polipéptido es una proteína de fusión. La presente divulgación también incluye células para producir los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos y los derivados de anticuerpo descritos en el presente documento. En una realización, la célula es una célula eucariota.
Métodos
En una 2a realización, la presente invención proporciona un método para determinar el nivel del compuesto de la presente invención (por ejemplo, compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal del mismo), en un sujeto que comprende: (1) obtener una muestra biológica a partir del sujeto; y (2) determinar el nivel del compuesto.
Puede usarse cualquier método adecuado para analizar la muestra biológica con el fin de determinar el nivel del compuesto de la presente invención (por ejemplo, compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal del mismo) en la muestra. Los métodos adecuados incluyen cromatografía (por ejemplo, HPLC, cromatografía de gases, cromatografía de líquidos), espectrometría de masas (por ejemplo, EM, EM-EM), ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otras técnicas inmunoquímicas y combinaciones de los mismos.
En un ejemplo, la muestra biológica puede someterse a cromatografía de líquidos (CL) antes de la espectrometría de masas. Los métodos de CL pueden incluir, por ejemplo, CL de ultra-alto rendimiento (UHPLC o UPLC). En algunos ejemplos, puede llevarse a cabo UPLC usando un sistema de cromatografía en columna de fase inversa, cromatografía de interacción hidrófila (HILIC), cromatografía de intercambio iónico o un sistema de cromatografía en columna de fase mixta.
La espectrometría de masas se realiza usando un espectrómetro de masas que incluye una fuente de iones para ionizar la muestra fraccionada y crear moléculas cargadas para su análisis adicional. La ionización de la muestra puede realizarse, por ejemplo, mediante ionización por electropulverización calentada (HESI-II). La muestra puede ionizarse en modo positivo o negativo.
Después de haberse ionizado una muestra, pueden analizarse los iones cargados de manera positiva o negativa para determinar una razón de masa con respecto a carga. Los analizadores adecuados a modo de ejemplo para determinar razones de masa con respecto a carga incluyen analizadores de cuadrupolo, analizadores de trampa de iones, analizadores de espectrometría de masas con transformada de Fourier (FTMs ) y analizadores de tiempo de vuelo.
Los resultados de análisis pueden incluir datos producidos mediante EM en tándem. En algunos ejemplos, la EM en tándem puede ser EM en tándem de masa precisa. Por ejemplo, la espectrometría de masas en tándem de masa precisa puede usar un analizador de tiempo de vuelo de cuadrupolo (QTOF). En otros ejemplos, la EM en tándem puede ser FTMS. La EM en tándem permite la creación de estructuras de datos que representan la relación de iones padre-hijo de constituyentes químicos en una mezcla compleja. Esta relación puede representarse mediante una estructura de tipo árbol que ilustra la relación de los iones padre e hijo entre sí, en la que los iones hijo representan subcomponentes del ion padre.
Además, el nivel del compuesto de la presente invención puede medirse indirectamente, por ejemplo, usando un ensayo que mide el nivel de un compuesto (o compuestos) que se correlaciona con el nivel del compuesto de la presente invención que se desea medir usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 3a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse para evaluar (o ayudar en la evaluación de) la función renal en un sujeto. Se entiende que los compuestos de la presente invención pueden usarse para evaluar a cualquier sujeto e incluye la evaluación de la función renal en un sujeto asintomático, en un sujeto en riesgo de CKD o AKI debido a la presencia de síntomas o factores de riesgo (por ejemplo, hipertensión, diabetes, historia familiar de CKD, exposición a determinadas condiciones químicas/ambientales, etc.) y en un sujeto en respuesta a una composición o a una intervención terapéutica (por ejemplo, trasplante de riñón, modificación del estilo de vida). Se entiende además que un sujeto puede someterse a una o más evaluaciones de la función renal.
En un método a modo de ejemplo, evaluar la función renal en un sujeto comprende determinar el nivel del compuesto de fórmula (I):
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o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de función renal reducida en el sujeto. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
Cuando se usa un método de este tipo para ayudar en la evaluación de la función renal, los resultados del método pueden usarse junto con otros métodos (o los resultados de los mismos) y/o metadatos de paciente útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene función renal normal o función renal alterada (que puede resultar de una lesión renal aguda (AKI) o CKD) así como el nivel de función renal (por ejemplo, normal, levemente alterada, moderadamente alterada, gravemente alterada, insuficiencia renal en estadio terminal).
En determinadas realizaciones, una evaluación precisa de la función renal en un sujeto que es un posible donante de riñón ayudará a un médico a determinar si el posible donante es adecuado para donar un riñón.
En una 4a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método de determinación de la predisposición a desarrollar función renal reducida en un sujeto. En una realización, el método comprende determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de predisposición a desarrollar función renal reducida en el sujeto. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 5a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método de clasificación de un sujeto según el nivel de función renal (por ejemplo, normal, levemente reducida, moderadamente reducida, gravemente reducida, insuficiencia renal en estadio terminal). En una realización, el método comprende determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, en el que el nivel del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia se usa en la clasificación del sujeto según el nivel de función renal. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 6a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método de monitorización de la función renal en un sujeto. En una realización, el método comprende: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (1) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo; y (2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento, y en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de un cambio en la función renal. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
El cambio (si lo hay) en el/los nivel(s) del compuesto a lo largo del tiempo (es decir, en una primera muestra a partir de un sujeto en un primer punto de tiempo en comparación con una segunda muestra obtenida a partir del sujeto en un segundo punto de tiempo) puede ser indicativo de función renal alterada en el paciente a lo largo del tiempo. Para caracterizar la función renal de un sujeto a lo largo del tiempo, el/los nivel(s) del compuesto en la primera muestra, el/los nivel(s) del compuesto en la segunda muestra y/o los resultados de la comparación de los niveles del compuesto en la primera y la segunda muestras pueden compararse con niveles de referencia del compuesto. Si las comparaciones indican que el/los nivel(s) del compuesto están aumentando o disminuyendo a lo largo del tiempo (por ejemplo, en la segunda muestra en comparación con la primera muestra) para volverse más similares a los niveles de referencia de la función renal baja (o menos similares a los niveles de referencia de la función renal alta), entonces los resultados son indicativos de una función renal en declive. Si las comparaciones indican que el/los nivel(s) del compuesto están aumentando o disminuyendo a lo largo del tiempo para volverse más similares a los niveles de referencia de la función renal alta (o menos similares a los niveles de referencia de la función renal baja), entonces los resultados son indicativos de función renal normal. Por ejemplo, un sujeto puede tener una función renal normal en un primer punto de tiempo (por ejemplo, el nivel del compuesto es similar al nivel de referencia de la función renal alta o diferente del nivel de referencia de la función renal baja) y permanece en el intervalo normal en un segundo punto de tiempo (por ejemplo, permanece similar al/a los nivel(es) de referencia de la función renal alta o diferente al/a los nivel(es) de referencia de la función renal baja), indicando que no hay ningún cambio en la función renal. En otro caso, la función renal puede ser normal en un primer punto de tiempo (por ejemplo, el nivel del compuesto es similar al/a los nivel(es) de referencia de la función renal alta o diferente del/de los nivel(es) de referencia de la función renal baja) y después disminuye en un segundo punto de tiempo pero permanece en el intervalo normal de la función renal, lo que indica que, aunque todavía está en el intervalo normal, la función renal disminuyó. En otra ilustración, a un sujeto con función renal en el límite de lo normal en un primer punto de tiempo se le puede diagnosticar CKD basándose en el/los nivel(s) del biomarcador(s) en el segundo punto de tiempo que indican un empeoramiento de la función renal en el sujeto.
También puede usarse la diferencia entre la cantidad relativa del compuesto y el nivel de referencia para evaluar la función renal a lo largo del tiempo. Por ejemplo, si las comparaciones indican que hay una diferencia mayor entre el nivel del compuesto y los niveles de referencia de la función renal alta (o una diferencia menor entre el/los nivel(s) del compuesto y los niveles de referencia de la función renal baja) a lo largo del tiempo, entonces los resultados son indicativos de que el paciente está desarrollando función renal en declive.
Después de obtenerse la primera muestra pueden obtenerse una o más muestras adicionales a partir del sujeto en un punto posterior en el tiempo. En un aspecto, la una o más muestras adicionales se obtienen 1,2, 3, 4, 5, 6 o más días después de la primera muestra. En otro aspecto, la una o más muestras se obtienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más semanas después de la primera muestra o después del inicio del tratamiento con la composición. En otro aspecto, la una o más muestras adicionales pueden obtenerse 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o más meses después de la primera muestra o después del inicio del tratamiento con la composición.
En determinadas realizaciones, el nivel del compuesto puede usarse para monitorizar la función renal en receptores de trasplante de riñón.
En una 7a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto. Se entenderá que los compuestos de la presente invención pueden usarse para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de CKD en cualquier sujeto, incluyendo sujetos asintomáticos, los sujetos que presentan uno o más síntomas compatibles con la presencia de CKD y/o los sujetos en los que CKD es probable (por ejemplo, enfermedad crónica, tratamientos farmacológicos, uso de agentes de obtención de imágenes por contraste, etc.). En una realización, el método comprende determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de enfermedad renal crónica. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En determinadas realizaciones, el compuesto de la presente invención permite la evaluación de (o ayuda en la evaluación de) la función renal para detectar CKD incipiente antes de que pueda diagnosticarse CKD usando las normas actuales para determinar la función renal (por ejemplo, mediciones de SCr, MDRDcr-eGFR, CKD-EPIcr-eGFR, cistatina C, albúmina en orina y/o BUN). Las medidas clínicas pueden no ser lo suficientemente sensibles para detectar cambios tempranos en la función renal o pueden ser imprecisas en determinados sujetos debido, por ejemplo, a enfermedad crónica, obesidad, edad avanzada, dieta vegetariana y/o masa muscular generalmente reducida. Por ejemplo, en un sujeto con diabetes tipo 2, el compuesto de la presente invención puede usarse para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de CKD. El diagnóstico preciso y temprano de CKD puede permitir una intervención terapéutica más temprana, lo que puede retrasar o prevenir el desarrollo de daño renal adicional y CKD más grave.
En determinadas realizaciones, después de determinarse el/los nivel(s) del compuesto de la fórmula (I) o (II) y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales en la muestra, se compara(n) el/los nivel(s) con niveles de referencia positivo para CKD y/o negativo para CKD para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de si el sujeto tiene CKD. El/los nivel(s) del compuesto de la fórmula (I) o (II) y opcionalmente niveles de referencia de uno o más biomarcadores adicionales (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, ligeramente por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de un diagnóstico de CKD en el sujeto. Los niveles del compuesto de fórmula (I) o (II) y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales en una muestra que coinciden con los niveles de referencia negativos para CKD (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, ligeramente por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de un diagnóstico de ausencia de CKD en el sujeto. Además, los niveles del compuesto de la fórmula (I) o (II) y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales que están presentes de manera diferente (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra en comparación con niveles de referencia negativos para CKD son indicativos de un diagnóstico de CKD en el sujeto. Los niveles del compuesto de la fórmula (I) o (II) y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales que están presentes de manera diferente (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra en comparación con niveles de referencia positivos para CKD son indicativos de un diagnóstico de ausencia de CKD en el sujeto.
El/los nivel(s) del compuesto de la fórmula (I) o (II) y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales puede(n) compararse con niveles de referencia positivos para CKD y/o negativos para CKD usando diversas técnicas, incluyendo una simple comparación (por ejemplo, una comparación manual) del/de los nivel(s) del uno o más biomarcadores en la muestra biológica con niveles de referencia positivos para CKD y opcionalmente negativos para CKD. El/los nivel(s) del compuesto de la fórmula (I) o (II) y/o uno o más biomarcadores adicionales en la muestra biológica también puede(n) compararse con niveles de referencia positivos para CKD y/o negativos para CKD usando uno o más análisis estadísticos (por ejemplo, prueba de la t, prueba de la T de Welch, prueba de suma de rangos de Wilcoxon, análisis de correlación, bosque aleatorio, puntuación T, puntuación Z) o usando un modelo matemático (por ejemplo, algoritmo, modelo estadístico).
Por ejemplo, puede usarse un modelo matemático que comprende un único algoritmo o múltiples algoritmos para evaluar la función renal en un sujeto. Puede usarse un modelo matemático para calcular una tasa de filtración glomerular estimada (eGFR). También puede usarse un modelo matemático para determinar si un sujeto tiene CKD. También puede usarse un modelo matemático para distinguir entre estadios de CKD. Un modelo matemático a modo de ejemplo puede usar los niveles medidos del compuesto de la presente invención y/o cualquier número de biomarcadores adicionales que son relevantes en la evaluación de funciones renales (por ejemplo, 2, 3, 5, 7, 9, etc.) a partir de un sujeto para determinar, usando un algoritmo o una serie de algoritmos basándose en relaciones matemáticas entre los niveles de los biomarcadores medidos, si un sujeto tiene función renal normal o CKD, si un sujeto tiene predisposición a desarrollar CKD, si la CKD está progresando en un sujeto, si un sujeto tiene CKD de estadio alto (reducción de la función renal grave o muy grave), de estadio medio (función moderadamente reducida) o de estadio bajo (función levemente reducida), etc. Un modelo matemático a modo de ejemplo diferente puede usar los niveles medidos del compuesto de presente invención y/o cualquier número de biomarcadores adicionales (por ejemplo, 2, 3, 5, 7, 9, etc.) a partir de un sujeto para clasificar a un sujeto basándose en el nivel o estadio de la función renal (por ejemplo, alto, moderado, bajo). En un ejemplo, el modelo matemático generado para estimar la GFR se usa para evaluar la función renal, monitorizar la función renal, determinar si un sujeto tiene CKD o AKI, distinguir entre estadios de CKD y/o determinar la predisposición a CKD o AKI.
En determinadas realizaciones, los métodos de la presente divulgación permiten el diagnóstico de CKD en un sujeto al que no se le ha diagnosticado CKD anteriormente. Por ejemplo, en un sujeto con factores de riesgo para CKD (por ejemplo, edad de más de 60 años, hipertensión, diabetes, enfermedad cardiovascular y/o una historia familiar de c Kd , etc.), pueden usarse los biomarcadores descritos en el presente documento para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de CKD.
En determinadas realizaciones, los métodos de la presente divulgación permiten una detección y diagnóstico temprano antes de que pueda diagnosticarse CKD usando las normas actuales para determinar la función renal (por ejemplo, mediciones de SCr, MDRDcr-eGFR, CKDEPIcr-eGFR, CKD-EPIcrcys, albúmina en orina, cistatina C y/o BUN). El diagnóstico temprano de CKD puede permitir una intervención terapéutica más temprana, lo que puede retasar o prevenir el desarrollo de daño renal adicional y CKD más grave.
En determinadas realizaciones, los métodos de la presente divulgación pueden usarse para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de CKD en pacientes en los que las normas actuales para determinar CKD (por ejemplo, mediciones de SCr, MDRDcr-eGFR, CKD-EPIcr-eGFR, CKD-EPIcrcys, albúmina en orina, cistatina C y/o BUN) en sujetos son imprecisas debido, por ejemplo, a enfermedad crónica, obesidad, edad avanzada, dieta vegetariana y/o masa muscular generalmente reducida en el sujeto. Por ejemplo, en un sujeto con diabetes tipo 2, pueden usarse los biomarcadores descritos en el presente documento para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de CKD.
Cuando se usa el método descrito anteriormente para ayudar en el diagnóstico de CKD, los resultados del método pueden usarse junto con otros métodos y medidas (o los resultados de los mismos) y/o metadatos de paciente útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene CKD. En la técnica se conocen métodos útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene CKD. Por ejemplo, los métodos útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene CKD incluyen, por ejemplo, SCr, BUN, eGFR, mGFR, albúmina en orina y cistatina C. Otras medidas útiles en determinar si un sujeto tiene CKD incluyen, por ejemplo, p-2-microglobulina, p-TRACE y/o 2-C-manopiranosil-triptófano. Los metadatos de paciente útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene c Kd incluyen, por ejemplo, edad, peso, género y raza.
En una 8a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método para monitorizar la progresión o regresión de enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto. En una realización, el método comprende: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo; y (2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento, y en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de progresión o regresión de la enfermedad en el sujeto. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 9a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de lesión renal aguda (AKI) en un sujeto. El método comprende determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con un nivel de referencia es indicativo de AKI. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 10a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método para monitorizar la progresión o regresión de AKI en un sujeto. En una realización, el método comprende: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una primera muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un primer punto de tiempo; y (2) determinar el nivel del compuesto o una sal del mismo en una segunda muestra biológica obtenida a partir del sujeto en un segundo momento, en el que el segundo momento es posterior al primer momento, y en el que un cambio en el nivel del compuesto en la segunda muestra biológica con respecto al nivel en la primera muestra biológica es indicativo de progresión o regresión de la enfermedad en el sujeto. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 11a realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un método de evaluación de la función renal en un sujeto en respuesta a una composición o a una intervención terapéutica (por ejemplo, trasplante de riñón, modificación del estilo de vida). En una realización, el método comprende: determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir de un sujeto tratado con la composición o una intervención terapéutica, en el que un nivel elevado del compuesto en la muestra biológica en comparación con el nivel del compuesto en el sujeto sin el tratamiento con la composición o la intervención terapéutica es indicativo de función renal reducida. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
La composición puede ser cualquier composición, fármaco o agente terapéutico administrado a un sujeto para tratar cualquier enfermedad o estado. La composición puede ser adicionalmente cualquier composición administrada a un paciente que tiene una enfermedad o estado. En una realización, la composición es un agente de obtención de imágenes por contraste. En otra realización, la composición es un agente terapéutico, tal como un agente quimioterápico. En otra realización, la composición es un antibiótico.
En determinadas realizaciones, el método descrito en la 11a realización permite la evaluación de la respuesta del sujeto a una composición que altera la función renal así como la evaluación de la respuesta relativa del paciente a dos o más composiciones que alteran la función renal. Pueden usarse tales evaluaciones, por ejemplo, para seleccionar composiciones para tratar cáncer para determinados sujetos o para seleccionar sujetos para un ciclo de tratamiento o inclusión en ensayo clínico. Pueden usarse tales evaluaciones para monitorizar la función renal en respuesta a una composición antes, durante y/o después (es decir, tras el lanzamiento) del procedimiento de desarrollo de fármaco.
En determinadas realizaciones, los métodos de la presente divulgación permiten la evaluación de (o ayudar en la evaluación de) la función renal en pacientes que se someten a pruebas de obtención de imágenes usando agentes de contraste en los que los agentes de obtención de imágenes por contraste pueden ser tóxicos y, como resultado, pueden provocar lesión renal. Por ejemplo, en un paciente con función renal reducida (por ejemplo, CKD en estadio 2 o CKD en estadio 3 o en estadio 3A), una medida precisa de la función renal ayudará a los pacientes y médicos a evaluar la razón de riesgo-beneficio de las pruebas de obtención de imágenes y permitirá tomar decisiones más informadas.
En una 12a realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene enfermedad renal crónica (CKD) que comprende: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto; y (2) administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar enfermedad renal crónica si el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto en comparación con un nivel de referencia. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 13a realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que tiene enfermedad renal crónica (CKD) que comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar enfermedad renal crónica, en el que el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo, en comparación con un nivel de referencia. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
La enfermedad renal crónica está con frecuencia provocada por enfermedad(es) o estado(s) subyacente(s). Por ejemplo, una alta tensión arterial (hipertensión) o diabetes puede conducir a enfermedad renal crónica. Otras causas de enfermedad renal crónica pueden incluir: (1) enfermedades e infecciones renales, tales como enfermedad renal poliquística, pielonefritis y glomerulonefritis; (2) una arteria renal estrechada o bloqueada; (3) obstrucción prolongada del tracto urinario, debido a estados tales como hipertrofia prostática, cálculos renales y cánceres; (4) reflujo vesicoureteral, un estado que provoca que la orina vuelva a entrar en el riñón; y (5) uso a largo plazo de medicamentos (por ejemplo, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), tales como celecoxib e ibuprofeno) que pueden dañar los riñones.
La enfermedad renal crónica se trata con frecuencia con tratamientos eficaces para el estado o enfermedad subyacente que provocó la CKD. En determinadas realizaciones, la CKD está provocada por diabetes y el método de tratamiento de CKD en la 12a o 13a realización comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar diabetes. La diabetes puede tratarse con un agente antidiabético. Los agentes antidiabéticos a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, metformina, pioglitazona, rosiglitazona, acarbosa, tetrahidrolipstatina, fentermina/topiramato, bupropión/naltrexona, lorcaserina, liraglutida y canagliflozina. En determinadas realizaciones, la diabetes puede tratarse mediante modificación del estilo de vida. La modificación del estilo de vida a modo de ejemplo incluye, pero no se limita a, modificación de la dieta y/o un aumento de la actividad o ejercicio. La modificación de la dieta puede incluir, por ejemplo, limitar la ingesta de calorías, tamaños de raciones, contenido en azúcar e hidratos de carbono de almidón y/o elegir alimentos que tienen bajo contenido en grasa y calorías y alto contenido en fibra.
En determinadas realizaciones, la CKD está provocada por alta tensión arterial (hipertensión) y el método de tratar la CKD en la 12a o 13a realización comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar la alta tensión arterial. En determinadas realizaciones, el método descrito en la 12a o 13a realización comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un agente terapéutico para reducir la tensión arterial. Los agentes terapéuticos a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (ACE) o bloqueadores del receptor de angiotensina II (ARB). Los inhibidores de ACE adecuados incluyen, pero no se limitan a, benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, perindopril, quinapril, ramipril y trandolapril. Los ARB adecuados incluyen, pero no se limitan a, candesartán, eprosartán, irbesartán, losartán, olmesartán, telmisartán y valsartán. En determinadas realizaciones, también se usan diuréticos y/o dieta con bajo contenido en sal para reducir la tensión arterial.
En determinadas realizaciones, el tratamiento de CKD descrito en la 12a o 13a realización incluye modificación del estilo de vida, tal como modificación de la dieta y/o un aumento de la actividad o ejercicio. La modificación de la dieta puede incluir dieta con bajo contenido en sal, elegir alimentos con bajo contenido en potasio y/o limitar la cantidad de ingesta de proteínas diaria.
En determinadas realizaciones, el tratamiento de CKD descrito en la 12a o 13a realización incluye suplemento(s) alimenticio(s), tales como vitamina D, hierro, calcio, potasio o una combinación de los mismos.
En determinadas realizaciones, la CKD puede progresar a insuficiencia renal en estadio terminal, lo cual puede tratarse mediante diálisis o trasplante de riñón.
En una 14a realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que padece una lesión renal aguda que comprende: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto; y (2) administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar la lesión renal aguda si el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto en comparación con un nivel de referencia. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En una 15a realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar a un sujeto que padece una lesión renal aguda que comprende administrar al sujeto una terapia eficaz adecuada para tratar la lesión renal aguda, en el que el sujeto tiene un nivel elevado del compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo, en comparación con un nivel de referencia. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
La lesión renal aguda (AKI) puede estar provocada por diversos estados, tales como un estado que ralentiza el flujo de sangre al riñón, daño directo al riñón y/o uréteres bloqueados. Los estados que alteran el flujo de sangre a los riñones incluyen, pero no se limitan a, pérdida de sangre o líquido, medicamentos para la tensión arterial, ataque cardíaco, enfermedad cardíaca, infección, insuficiencia hepática, uso de aspirina, ibuprofeno (Advil, Motrin IB, otros), naproxeno (Aleve, otros) o fármacos relacionados, reacción alérgica grave (anafilaxia), quemaduras graves y deshidratación grave. Las enfermedades, estados y agentes que pueden provocar daño directo a los riñones incluyen, pero no se limitan a, coágulos de sangre en las venas y arterias en y alrededor de los riñones, depósitos de colesterol que bloquean el flujo de sangre en los riñones, glomerulonefritis, inflamación de los filtros diminutos en los riñones (glomérulos), síndrome urémico hemolítico, un estado que resulta de la destrucción prematura de glóbulos rojos, infección, lupus, un trastorno del sistema inmunitario que provoca glomerulonefritis, medicamentos, tales como determinados fármacos quimioterápicos, antibióticos, tintes usados durante pruebas de obtención de imágenes y ácido zoledrónico (Reclast, Zometa), usado para tratar la osteoporosis y altos niveles de calcio en sangre (hipercalcemia), mieloma múltiple, un cáncer de las células plasmáticas, esclerodermia, un grupo de enfermedades raras que afectan a la piel y los tejidos conjuntivos, púrpura trombocitopénica trombótica, un trastorno raro de la sangre, toxinas, tales como alcohol, metales pesados y cocaína, y vasculitis, una inflamación de vasos sanguíneos. Las enfermedades y los estados que pueden provocar bloqueo urinario y conducir a AKI incluyen, pero no se limitan a, cáncer de vejiga, coágulos de sangre en el tracto urinario, cáncer de cuello uterino, cáncer de colon, hipertrofia prostática, cálculos renales, daño nervioso que implica a los nervios que controlan la vejiga y cáncer de próstata.
AKI se trata con frecuencia con una terapia eficaz para las causas subyacentes. En determinadas realizaciones, AKI está provocada por medicamentos, tales como agentes quimioterápicos, y el método de tratar la AKI en un sujeto comprende detener la administración del medicamento al sujeto o reducir la dosificación del medicamento (por ejemplo, agente quimioterápico) administrado al sujeto.
En determinadas realizaciones, la AKI está provocada por hipertensión o diabetes y el método de tratar la AKI en un sujeto comprende administrar una terapia eficaz para hipertensión o diabetes descrita anteriormente en la 12a o 13a realización.
En determinadas realizaciones, el método de tratar la AKI en un sujeto comprende modificación del estilo de vida, tal como modificación de la dieta y/o un aumento de la actividad o ejercicio. La modificación de la dieta puede incluir dieta con bajo contenido en sal, elegir alimentos con bajo contenido en potasio y/o limitar la cantidad de ingesta de proteínas diaria.
En determinadas realizaciones, la AKI se trata mediante diálisis o trasplante de riñón.
En una 16a realización, la presente invención proporciona un método para calcular la tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) en un paciente que comprende las etapas de: (1) determinar el nivel del compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto; y (2) calcular la eGFR usando un algoritmo que usa el nivel medido del compuesto, en el que el algoritmo se desarrolla usando GFR medida usando un marcador de filtración exógeno. Puede usarse cualquier método adecuado para determinar el nivel del compuesto. En una realización, el nivel del compuesto se determina usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
En determinadas realizaciones, la eGFR se calcula usando uno o más biomarcadores adicionales relevantes para la evaluación de la función renal. En una realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetilserina, N-acetil-alanina, N6-carbamoiltreoniladenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, N1-metiladenosina, 3-metilglutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetil-lisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol. En otra realización, el algoritmo de eGFR usa además niveles séricos de cistatina C. En aún otra realización, el algoritmo de eGFR usa además uno o más parámetros demográficos seleccionados del grupo que consiste en edad, sexo y raza.
En una 17a realización, para métodos descritos en las 2a-16a realizaciones, el compuesto de fórmula (I) está representado por la fórmula (II):
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o una sal del mismo.
En una 18a realización, para métodos descritos en las 2a-16a realizaciones, el nivel del compuesto se determina mediante cromatografía de líquidos-espectrometría de masas en tándem (CL-EM/EM).
En una 19a realización, los métodos descritos en las 2a-18a realizaciones comprenden además usar el nivel determinado del compuesto en un modelo matemático para evaluar la función renal.
En una 20a realización, los métodos descritos en las 2a-19a realizaciones comprenden además analizar la muestra biológica para determinar el nivel de uno o más biomarcadores adicionales relevantes para la evaluación de la función renal. El uno o más biomarcadores pueden seleccionarse del grupo que consiste en los siguientes biomarcadores: pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetilserina, N-acetilalanina, N6-carbamoiltreoniladenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, N1-metiladenosina, 3-metil-glutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetillisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol y combinaciones de los mismos.
En determinadas realizaciones, se determinan los niveles de dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o más biomarcadores adicionales en el método descrito en la 20a realización.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina, 2-C-manopiranosil-triptófano, quinurenina, myo-inositol y creatinina.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, 2-C-manopiranosil-triptófano, triptófano, N-acetiltreonina y creatinina
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina y creatinina.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en N-acetiltreonina, myo-inositol, 2-C-manopiranosil-triptófano y creatinina.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en N-acetiltreonina, myo-inositol, quinurenina y creatinina.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetiltreonina y myo-inositol.
En determinadas realizaciones, para el método descrito en la 20a realización, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, myo-inositol y creatinina.
En determinadas realizaciones, el método descrito en la 20a realización comprende además analizar la muestra biológica para determinar el nivel de pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina y creatinina.
Determinar niveles del compuesto de la presente invención y uno o más biomarcadores adicionales puede permitir una mayor sensibilidad y especificidad en los métodos descritos. Por ejemplo, un análisis por parejas de dos biomarcadores o razones de los niveles de determinados biomarcadores (y compuestos distintos de biomarcador) en muestras biológicas puede permitir una mayor sensibilidad y especificidad en la evaluación de la función renal y ayudar en la evaluación de la función renal.
El/los nivel(s) del compuesto de fórmula (I) o (II) y/o el uno o más biomarcadores adicionales pueden compararse con niveles de referencia de la función renal usando diversas técnicas, incluyendo una simple comparación (por ejemplo, una comparación manual). El/los nivel(s) del compuesto de fórmula (I) o (II) y/o el uno o más biomarcadores adicionales en la muestra biológica también pueden compararse con niveles de referencia usando uno o más análisis estadísticos (por ejemplo, prueba de la t, prueba de la T de Welch, prueba de suma de rangos de Wilcoxon, análisis de correlación, bosque aleatorio, puntuación T, puntuación Z) o usando un modelo matemático (por ejemplo, algoritmo, modelo estadístico). Por ejemplo, puede usarse un modelo matemático que comprende un único algoritmo o múltiples algoritmos para evaluar la función renal en un sujeto.
Los resultados del método pueden usarse junto con otros métodos y medidas (o los resultados de los mismos) útiles en la evaluación de la función renal en un sujeto. Por ejemplo, pueden usarse parámetros clínicos tales como mediciones de BUN, SCr y/o albúmina en orina; marcadores de la función renal tales como p-2-microglobulina, p-TRACE, 2-C-manopiranosil-triptófano; así como información de paciente tal como, por ejemplo, historia familiar de CKD u otros factores de riesgo, con los biomarcadores.
En determinadas realizaciones, el nivel del compuesto de la presente invención y/o uno o más biomarcadores adicionales puede usarse en un modelo o fórmula matemático o estadístico para proporcionar a un médico una puntuación numérica (“puntuación de función renal”) que indica el nivel de función renal y/o la probabilidad de que un sujeto tenga una función renal comprometida que puede indicar AKI o CKD. La puntuación se basa en nivel(es) de referencia significativamente cambiados desde el punto de vista clínico para un biomarcador y/o combinación de biomarcadores. El nivel de referencia puede derivarse de un algoritmo o calcularse a partir de índices para GFR alterada. Los métodos para determinar la puntuación de función renal de un sujeto pueden comprender comparar el/los nivel(s) del uno o más biomarcadores de la función renal en la muestra con niveles de referencia de la función renal del uno o más biomarcadores con el fin de determinar la puntuación de función renal del sujeto. El método puede emplear cualquier número de biomarcadores seleccionados de la siguiente lista: pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetilserina, N-acetilalanina, N6-carbamoiltreoniladenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, Nl-metiladenosina, 3-metil-glutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetil-lisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol. Pueden correlacionarse múltiples biomarcadores con la función renal, mediante cualquier método, incluyendo métodos estadísticos tales como análisis de regresión.
La puntuación de función renal puede usarse para colocar al sujeto en el intervalo de función renal desde normal (es decir sin alteración de la función renal) hasta levemente reducida, moderadamente reducida, gravemente reducida o insuficiencia renal en estadio terminal. Los usos de ejemplos no limitativos de la puntuación de función renal incluyen: evaluación de la función renal; estimación de GFR; clasificación de la función renal; propensión a desarrollar CKD; propensión a desarrollar AKI; diagnóstico y estadio de CKD; monitorización de la progresión de CKD mediante determinación periódica y monitorización de la puntuación de función renal; monitorización del estado de función renal de receptores de trasplante de riñón; determinación de una respuesta a intervención terapéutica; evaluación de eficacia de fármaco; y determinación de tolerancia de agentes de obtención de imágenes por contraste y/o terapéuticos.
En determinadas realizaciones, para los métodos descritos en el presente documento, la muestra biológica es sangre, plasma sanguíneo, suero, saliva u orina. En una realización, la muestra biológica es plasma sanguíneo. En otra realización, la muestra biológica es suero.
En determinadas realizaciones, para los métodos descritos en el presente documento, la muestra biológica se obtiene a partir del sujeto antes del tratamiento con un agente que permite la medición directa de la tasa de filtración glomerular.
En determinadas realizaciones, para los métodos descritos en el presente documento, el sujeto es un humano.
En determinadas realizaciones, para los métodos descritos en el presente documento, el sujeto no tiene ningún síntoma de función renal alterada o no tiene ningún factor de riesgo conocido para función renal alterada. En otras realizaciones, el sujeto muestra factores de riesgo para desarrollar enfermedad renal crónica (por ejemplo, edad de más de 60, hipertensión, diabetes, enfermedad cardiovascular, historia familiar de CKD). En determinadas realizaciones, al sujeto se le ha diagnosticado anteriormente hipertensión o diabetes. En determinadas realizaciones, el sujeto tiene una historia familiar de enfermedad renal crónica. En determinadas realizaciones, el sujeto tiene síntomas de función renal alterada. En determinadas realizaciones, el sujeto es uno para el que la evaluación de la función renal usando métodos convencionales es difícil.
En determinadas realizaciones, el sujeto se selecciona del grupo que consiste en los siguientes: obeso, muy delgado, vegetariano, con enfermedad crónica y anciano.
En determinadas realizaciones, el sujeto es un candidato para ser un donante de riñón.
En determinadas realizaciones, el sujeto se ha tratado con o está considerándose para el tratamiento con un agente que puede tener un efecto tóxico en los riñones. En una realización, el agente es agente de obtención de imágenes por contraste. En otra realización, el agente es un agente terapéutico para tratar una enfermedad o estado, tal como un agente quimioterápico. En aún otra realización, el agente es un antibiótico.
En determinadas realizaciones, los métodos pueden usarse para monitorizar la función renal en sujetos que tienen CKD o sujetos que se sospecha que tienen predisposición a desarrollar CKD (por ejemplo, sujetos en riesgo debido a historia familiar de CKD, terapia farmacológica, enfermedad crónica, etc.). En un ejemplo, el compuesto de la presente invención puede usarse para monitorizar la función renal en sujetos que no tienen CKD. Por ejemplo, en un sujeto que se sospecha que tiene predisposición a desarrollar CKD, pueden usarse los biomarcadores descritos en el presente documento para monitorizar el desarrollo de CKD.
Kits
La presente invención incluye kits para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) o fórmula (II) en una muestra biológica.
Los kits de la presente invención pueden usarse para evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto, determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida, clasificar a un sujeto según el nivel de función renal, diagnosticar o monitorizar la enfermedad renal crónica, estimar la GFR en un sujeto.
En determinadas realizaciones, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo. En una realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (II) o una sal del mismo.
En determinadas realizaciones, el kit de la presente invención comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) en una muestra biológica. En una realización, el kit comprende un compuesto de fórmula (II) o una sal del mismo e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (II) en una muestra biológica.
En determinadas realizaciones, el kit de la presente invención puede comprender un compuesto marcado (por ejemplo, un patrón interno) o un agente capaz de detectar el compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica.
En determinadas realizaciones, el kit de la presente invención puede comprender un compuesto marcado (por ejemplo, un patrón interno) o un agente capaz de detectar el compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica.
En una realización, el patrón interno en el kit descrito anteriormente es un compuesto marcado de fórmula (I) o fórmula (II). En otra realización, el patrón interno en el kit descrito anteriormente es N,N,N-trimetil-L-alanil-L-prolina- 13C3 (13C3-L,L-TMAP).
En una realización, el kit de la presente invención comprende compuesto no marcado de fórmula (I) o una sal del mismo, un compuesto marcado de fórmula (I) como patrón interno e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (I) en una muestra biológica.
En otra realización, el kit de la presente invención comprende compuesto no marcado de fórmula (II) o una sal del mismo, un compuesto marcado de fórmula (II) como patrón interno e instrucciones para medir el nivel del compuesto de fórmula (II) en una muestra biológica. En una realización, el compuesto marcado de fórmula (II) es N,N,N-trimetil-13C3-L-alanil-L-prolina (13C3-L,L-TMAP).
En otra realización, la 13C3-L,L-TMAP descrita en el presente documento está representada por la siguiente fórmula:
Figure imgf000021_0001
En determinadas realizaciones, el kit de la presente invención puede comprender un compuesto marcado (por ejemplo, un patrón interno) o un agente capaz de detectar el compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica y medios para determinar la cantidad del compuesto en la muestra (por ejemplo, un anticuerpo contra el compuesto de fórmula (I) o (II)).
En determinadas realizaciones, la cantidad del compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica puede determinarse mediante cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos usando el kit de la presente invención descrito en el presente documento. En determinadas realizaciones, la cantidad del compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica puede determinarse mediante cromatografía, espectrometría de masas o una combinación de las mismas. En determinadas realizaciones, la cantidad del compuesto de fórmula (I) o (II) en una muestra biológica puede determinarse mediante CL-EM usando el kit de la presente invención.
El kit también puede comprender, por ejemplo, un agente de tamponamiento, un conservante o un agente estabilizante. El kit también puede contener una muestra de control o una serie de muestras de control que pueden someterse a ensayo y compararse con la muestra de prueba. Cada componente del kit está habitualmente encerrado dentro de un recipiente individual y la totalidad de los diversos recipientes están dentro de un único envase junto con instrucciones para determinar si el sujeto sometido a prueba padece o corre el riesgo de desarrollar un trastorno asociado con la molécula pequeña relevante.
En una 21a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 22a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 23a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para clasificar a un sujeto según el nivel de función renal basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 24a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para diagnosticar o monitorizar enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 25a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para diagnosticar o monitorizar lesión renal aguda (AKI) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 26a realización, el kit de la presente invención comprende un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal del mismo), e instrucciones para estimar la GFR en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En determinadas realizaciones, para el kit descrito en las 2ia-26a realizaciones, el compuesto de fórmula (I) o (II) está marcado de manera isotópica. En una realización, el compuesto de fórmula (I) o (II) está radiomarcado, por ejemplo, con tritio (3H) o carbono 14 (14C). En otra realización, el compuesto de fórmula (I) o (II) está deuteriado, marcado con carbono 13 (13C) o nitrógeno 15 (15N) o una combinación de los mismos. En un ejemplo, el compuesto marcado de fórmula (II) es N,N,N-trimetil-13C3-L-alanil-L-prolina (13C3-L,L-TMAP), que puede usarse como patrón interno.
La presente invención también proporciona kits que comprenden anticuerpos o fragmentos de anticuerpo que se unen específicamente al compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal (por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable) del mismo descrito anteriormente para evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto, determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida, clasificar a un sujeto según el nivel de función renal, diagnosticar o monitorizar la enfermedad renal crónica, estimar la GFR en un sujeto. En determinadas realizaciones, los kits de la presente invención comprenden derivados de anticuerpo, tales como un polipéptido que comprende las secuencias de VH y VL del anticuerpo descrito anteriormente. En una realización, el polipéptido es una proteína de fusión.
En una 27a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 28a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para determinar la predisposición a desarrollar función renal reducida en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 29a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para clasificar a un sujeto según el nivel de función renal basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 30a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para diagnosticar o monitorizar enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 31a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para diagnosticar o monitorizar lesión renal aguda (AKI) en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En una 32a realización, el kit de la presente invención comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o un derivado de anticuerpo descrito anteriormente, e instrucciones para estimar la g Fr en un sujeto basándose en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
En determinadas realizaciones, el kit descrito anteriormente (por ejemplo, el kit descrito en las 2ia-26a realizaciones) comprende uno o más biomarcadores adicionales distintos del compuesto, en el que el uno o más biomarcadores adicionales son relevantes para la evaluación de la función renal. Cualquier biomarcador descrito en el presente documento puede usarse en los kits de la presente invención.
En determinadas realizaciones, el kit descrito anteriormente (por ejemplo, el kit descrito en las 27a-32a realizaciones) comprende uno o más biomarcadores adicionales, en el que el uno o más biomarcadores adicionales son relevantes para la evaluación de la función renal. Cualquier biomarcador descrito en el presente documento puede usarse en los kits de la presente invención.
En diversas realizaciones, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetilserina, N-acetilalanina, N6-carbamoiltreoniladenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, N1-metiladenosina, 3-metilglutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetil-lisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol. En una realización, los biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina, 2-C-manopiranosil-triptófano, quinurenina, myo-inositol y creatinina. En otra realización, los biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina y creatinina.
En determinadas realizaciones, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en N-acetiltreonina, myo-inositol, 2-C-manopiranosil-triptófano y creatinina.
En determinadas realizaciones, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en N-acetiltreonina, myo-inositol, quinurenina y creatinina.
En determinadas realizaciones, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetiltreonina y myo-inositol.
En determinadas realizaciones, el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, myo-inositol y creatinina.
En determinada realización, los kits de la presente invención comprenden un compuesto de la presente invención descrito anteriormente (compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal del mismo), pseudouridina, N-acetiltreonina, triptófano, fenilacetilglutamina y creatinina.
Métodos de preparación
Puede hacerse referencia a las siguientes referencias para métodos adecuados de síntesis tal como se describe en March, Advanced Organic Chemistry, 3a edición, John Wiley & Sons, 1985 o Greene and Wuts Protective groups in organic synthesis, 2a edición, John Wiley & sons 1991 y en Richard Larock, comprehensive organic transformations, 4a edición, VCH publishers Inc, 1989.
En una realización, el compuesto de fórmula (I) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (III):
Figure imgf000023_0001
o una sal del mismo, con un reactivo de metilación.
En otra realización, la presente invención proporciona un método de preparación de un compuesto de fórmula (II) que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV):
Figure imgf000023_0002
o una sal del mismo, con un reactivo de metilación.
En otra realización, el compuesto de fórmula (I) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (V):
Figure imgf000023_0003
o una sal del mismo, con un reactivo de mutilación, en la que Ri es H, y R2 es CH3; o R1 y R2 son ambos CH3.
En otra realización, el compuesto de fórmula (II) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (VI):
Figure imgf000024_0001
o una sal del mismo, con un reactivo de metilación, en la que R1 es H, y R2 es CH3; o R1 y R2 son ambos CH3.
En determinadas realizaciones, el reactivo de metilación en los métodos descritos anteriormente es CH3X o (CH3)2SO4, en el que X es Cl, Br, I u OSO2CF3. En otra realización, el reactivo de metilación es yodometano (CH3I).
En determinadas realizaciones, la reacción de metilación en los métodos descritos anteriormente se lleva a cabo en presencia de una base. Puede usarse cualquier base adecuada. Las bases a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, carbonato de potasio, carbonato de sodio e hidróxido de sodio.
En una realización, la reacción de metilación en los métodos descritos anteriormente se lleva a cabo en presencia de óxido de plata.
En otra realización, la reacción de metilación en los métodos descritos anteriormente se lleva a cabo en presencia de carbonato de potasio.
En determinadas realizaciones, la reacción de metilación para los métodos descritos anteriormente se lleva a cabo en una mezcla de agua y un disolvente orgánico o en agua al 100%. Puede usarse cualquier disolvente orgánico adecuado, que puede incluir, pero no se limita a, metanol, etanol, acetona, acetonitrilo, diclorometano, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido, etc. Por ejemplo, la reacción de metilación se lleva a cabo en una mezcla de metanol y agua. La razón en volumen de metanol con respecto a agua puede ser de desde 1:10 hasta 10:1, de 1:5 a 5:1; de 5:1 a 1:1, de 4:1 a 1:1. En una realización, la razón en volumen de metanol con respecto a agua es de aproximadamente 4:1.
Ejemplos
Material y métodos
REACTIVOS E INSTRUMENTOS
Se obtuvieron óxido de plata, carbonato de potasio, yodometano y ácido fórmico de calidad para espectrometría de masas (98%) de Sigma-Aldrich; metanol de calidad para HPLC y agua de Fisher Scientific; óxido de deuterio (99,8%) de Acros; L-alanil-L-prolina de Tokyo Chemical Industry. Se usó una mezcladora de vórtice de Fisher Scientific para mezclar y se usó una microcentrífuga Sorvall Legend Micro 21R para la centrifugación de tubos de Eppendorf de 1,5 ml. Se usó un agitador de Corning Laboratory para mezclar reacciones químicas. Se obtuvo plasma humano (K2-EDTA) de Bioreclamation y se almacenó a -80°C. Se usó un evaporador Argonaut SPE DRY™ 96 DUAL para la evaporación de disolvente.
CROMATOGRAFÍA
Se usó un sistema de Waters Acquity UPLC equipado con un gestor de disolventes binarios, un gestor de muestras refrigeradas (ajustado a 12°C) y un gestor de columna (ajustado a 40°C) para la cromatografía de líquidos con una columna de fase inversa (Waters ACQUITY UPLC® BEH C18, 1,7 |im, 2,1x100 mm). La fase móvil A era ácido fórmico al 0,1% en agua y la fase móvil B era ácido fórmico al 0,1% en metanol. Para experimentos de intercambio con deuterio, la fase móvil A era en vez de eso ácido fórmico al 0,1% en óxido de deuterio. Se llevó a cabo la elución en gradiente lineal con una condición inicial del 0% de fase móvil B, que se mantuvo durante 2,00 min. Después se aumentó la fase móvil B hasta el 98% en 0,50 min y se mantuvo durante 0,90 min. Se devolvió la fase móvil B hasta el 0% en 0,10 min para el equilibrado para la siguiente inyección. La velocidad de flujo era de 350 pl/min y el tiempo de ejecución total era de 4,50 min. Se inyectó una alícuota fijada en bucle de 5,0 |il de la disolución de muestra final para cada muestra. Se introdujo el eluyente directamente en la fuente de electropulverización de un espectrómetro de masas. El lavado de aguja fuerte era metanol puro y el lavado de aguja débil era una mezcla de metanol y agua (0,5:99,5). El lavado de sello era una mezcla de metanol y agua (10:90).
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
Se usó un espectrómetro de masas Thermo Scientific Orbitrap Elite equipado con una sonda de ionización por electropulverización calentada (HESI-II) en modo positivo para este estudio. Se controló el instrumento mediante el software Orbitrap Elite™ 2.7 y XCalibur™ 2.2. Se ajustó la fuente de electropulverización calentada con una temperatura de calentador a 430°C, gas de protección a 30 y velocidades de flujo de gas auxiliar a 12, gas de barrido a 0, tensión de pulverización iónica a 4,20 kV, temperatura de capilar a 350°C y nivel de RF de lente S al 65%. Se usó una resolución de 30.000 para recopilar espectros de FTMS (espectrometría de masas con transformada de Fourier) de barrido completo con un intervalo de masa de entre m/z 100 y 300. Para todos los experimentos de fragmentación de EM, se usó una resolución de 15.000 junto con activación Q de 0,250 y tiempo de activación de 10,0 ms. La energía de colisión normalizada para el experimento de EM2 era de 31,0 eV con una anchura de aislamiento de 1,0 m/z y un intervalo de barrido de entre m/z 60 y 240. Para el experimento de EM3 de m/z 229,1547/142,0860 (o 230,1610/143,0925 para intercambio con deuterio), la energía de colisión normalizada era de 31,0 y 25,0 eV para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente, con una anchura de aislamiento de m/z 2,0 para ambas etapas y un intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240. Para el experimento de EM3 de m/z 229,1547/170,0810 (o 230,1610/171,0878 para intercambio con deuterio), la energía de colisión normalizada era de 31,0 y 30,0 eV para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente. La anchura de aislamiento era de m/z 3,0 y 2,0 para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente, y el intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240. Para el experimento de EM4 de m/z 229,1547/142,0860/114,0911 (o 230,1610/143,0925/115,0976 para intercambio con deuterio), la energía de colisión normalizada era de 31,0, 20,0, y 20,0 eV para la fragmentación de primera a tercera etapa. La anchura de aislamiento era de m/z 2,0 para las tres etapas y el intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240.
Ejemplo 1. Síntesis de N,N,N-trimetil-L-alanil-L-prolina (TMAP)
Método 1. En un vial de vidrio de 4 ml con una barra de agitación magnética se añadieron L-alanil-L-prolina (20,0 mg, 0,108 mmol), óxido de plata (100 mg, 0,432 mmol) y 1,0 ml de metanol/agua (4:1). Se agitó la mezcla con un agitador magnético a temperatura ambiente y se añadieron 75 |il de yodometano (171 mg, 1,2 mmol). Se tapó ligeramente el vial y se agitó la mezcla durante la noche a temperatura ambiente en la oscuridad. Se evaporó la mezcla resultante hasta sequedad en una corriente suave de nitrógeno a 40°C. Se añadió agua (1,0 ml) al residuo y se sometió la mezcla a sonicación durante 2 min. Después se transfirió la mezcla a un tubo Eppendorf de 1,5 ml y se centrifugó a temperatura ambiente durante 10 min a 14.000 rpm. Se diluyó el sobrenadante transparente 10.000 veces con ácido fórmico al 0,1% en agua y se transfirió a un vial de muestra para análisis por CL/EM. Para sintetizar N,N,N-trimetil-13C3-L-alanil-L-prolina (13C3-L,L-TMAP), se usó el mismo procedimiento de síntesis excepto porque se sustituyó yodometano por yodometano-13C.
Figure imgf000025_0001
Las figuras 18A y 18B muestran espectros de 13C-RMN de la TMAP marcada con 13C (13C3-L,L-TMAP) en comparación con la TMAP sin marcar. Las figuras 19A y 19B muestran espectros de masas de la TMAP marcada con 13C (13C3-L,L-TMAP) en comparación con la TMAP sin marcar.
Método 2. En un vial de vidrio de 4 ml con una barra de agitación magnética se añadieron L-alanil-L-prolina (20,0 mg, 0,108 mmol), carbonato de potasio (50,0 mg, 0,362 mmol) y 1,0 ml de metanol/agua (4:1). Se agitó la mezcla en disolución con un agitador magnético a temperatura ambiente y se añadieron 75 |il de yodometano (171 mg, 1,2 mmol). Se tapó ligeramente el vial y se agitó la mezcla durante la noche a temperatura ambiente en la oscuridad. Se evaporó la mezcla resultante hasta sequedad en una corriente suave de nitrógeno a 40°C. Se disolvió el residuo en 1,0 ml de agua. Se diluyó la disolución 10.000 veces con ácido fórmico al 0,1% en agua y se transfirió a un vial de muestra para análisis por CL/EM.
Método 3. A continuación se representa una estrategia general para un tercer enfoque de síntesis. Puede usarse un dipéptido con el grupo carboxilo protegido como molécula de partida. Puede usarse cualquier grupo protector de carboxilo adecuado (T. W. Green, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience, Nueva York, 1999). En una realización, el grupo protector X puede ser un grupo alquilo, tal como grupos metilo, etilo, tercbutilo o bencilo. En otra realización, el grupo protector es un grupo sililo, tal como grupo triaquilsililo (por ejemplo trimetilsililo). La retirada del grupo protector X depende de la naturaleza del grupo protector X. En una realización, el grupo protector puede retirarse mediante el tratamiento con un ácido.
En un ejemplo de esta estrategia general, puede usarse un dipéptido con el grupo carboxilo protegido mediante un éster t-butílico. Una reacción de metilación seguida por retirada del grupo protector generará TMAP tal como se muestra a continuación. Este método puede ser ventajoso para un mejor rendimiento de reacción y una pureza de producto superior porque la polaridad inferior del material de partida puede facilitar el proceso de reacción.
Figure imgf000026_0001
Método 4. A continuación se representa una estrategia general para un cuarto método de síntesis. Se usan N,N,N-trimetil-L-alanina y una L-prolina con el grupo carboxilo protegido como moléculas de partida. Puede usarse cualquier grupo protector de carboxilo adecuado descrito anteriormente. La reacción de acoplamiento puede lograrse activando el grupo carboxilo con un agente de activación. En una realización, el agente de activación es una carbodiimida, un uronio, un éster activo, un fosfonio, 2-alquil-1-alquilcarbonil-1,2-dihidroquinolina, 2-alcoxi-1-alcoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o alquilcloroformiato. En una realización específica, el agente de activación es una carbodiimida, tal como diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) o diisopropilcarbodiimida (DIC). En otra realización, el grupo carboxilo puede activarse mediante formación de haluro de acilo usando, por ejemplo, SOCl2, cloruro de oxalilo u otros reactivos adecuados. La retirada del grupo protector X depende de la naturaleza del grupo protector X. En una realización, el grupo protector se retira mediante el tratamiento con un ácido.
Figure imgf000026_0002
En un ejemplo de esta estrategia general, pueden usarse una N,N,N-trimetil-L-alanina y una L-prolina con el grupo carboxilo protegido mediante un éster t-butílico. El acoplamiento de la N,N,N-trimetil-L-alaninay la L-prolina con grupo carboxilo protegido puede lograrse mediante EDC o cualquier otro agente de activación adecuado descrito anteriormente. La retirada del grupo protector generará TMAP.
Figure imgf000026_0003
Método 5. En otro ejemplo, el material de partida puede ser N-metil-L-alanil-L-prolina (R-i = H y R2 = CH3) o N,N-dimetil-L-alanil-L-prolina (R1 = R2 = CH3) y pueden usarse las condiciones de reacción descritas en el método 1.
Figure imgf000026_0004
Ejemplo 2. Esclarecimiento de la estructura de compuesto A de metabolito en plasma
Preparación de muestra
En un tubo Eppendorf de 1,5 ml se añadieron 100 | l de plasma humano (descongelado sobre hielo) y 500 | l de metanol. Se agitó la mezcla con vórtex durante 2 min y se centrifugó a temperatura ambiente durante 5 min a 14.000 rpm. Se transfirió el sobrenadante a un tubo nuevo y se secó en una corriente suave de nitrógeno a 40°C. Al residuo se le añadieron 200 | l de agua con ácido fórmico al 0,1% y se agitó la mezcla con vórtex durante 1 min y se centrifugó a temperatura ambiente durante 10 min a 14.000 rpm. Después se transfirió el sobrenadante a un vial de muestra para análisis por CL/EM.
Esclarecimiento de la estructura
Se usó un espectrómetro de masas de Orbitrap Elite para la adquisición de espectros de masas de alta resolución. Anteriormente se determinó que la fórmula del ion pseudomolecular protonado era C11H2iO 3N2+ mediante medición de masas precisa. El estudio actual empezó optimizando las condiciones de cromatografía para lograr una retención más larga para el compuesto A de metabolito (1,48 min) sin gran énfasis en su forma de pico tal como se muestra en el cromatograma de iones extraídos (figura 1). La disociación inducida por colisión (CID) del ion pseudomolecular produjo siete iones hijo tal como se muestra en la figura 2, que son m/z 170, 142, 126, 124, 114,09, 114,05 y 70 (todos recogidos con masa precisa, pero omitidos por simplicidad a continuación). Un espectro de iones producto (EM2) del metabolito anteriormente recogido en un espectrómetro de masas Q-Exactive mostró dos iones hijo adicionales de m/z 96 y 58 (figura 3). La fragmentación adicional (EM3, figura 4) del ion predominante de m/z 142 generó m/z 70, 114,09, y el ion m/z 96, que no se detectó en el espectro de EM2 de Orbitrap CID. El ion de m/z 114,05 no se detectó a partir de la fragmentación de m/z 142, sino que en vez de eso se formó mediante fragmentación de m/z 170 (EM3, figura 5). El ion de m/z 70 se detectó cuando se fragmentó m/z 114,09 adicionalmente (EM4, figura 6).
La racionalización de estos fragmentos y sus rutas de formación permitió la propuesta de una estructura química para el compuesto A tal como se muestra a continuación:
Figure imgf000027_0001
Se realizó un análisis de estereoquímica con compuesto A y se determinó que la fórmula estaba representada por la siguiente estructura:
Figure imgf000027_0002
Se propone una posible ruta de fragmentación a partir del ion pseudomolecular protonado del compuesto A tal como se muestra en el esquema 1.
Esquema 1. Posible ruta de fragmentación
Figure imgf000027_0003
Verificación de la estructura mediante intercambio con deuterio
En primer lugar se verificó la estructura propuesta para el compuesto A mediante un experimento de intercambio con deuterio. En resumen, se cambió la fase móvil de cromatografía por disolvente deuteriado y se analizó de nuevo el extracto de plasma. Se adquirió un espectro de masas de barrido completo yse detectó un nuevo ion de m/z 230,16079 (-0,7 ppm con respecto al valor calculado de CiiH2oDN2O3+) como especie principal para el compuesto A deuteriado (figura 7), compatible con un único protón intercambiable de la estructura propuesta. En las figuras 8 y 9 se muestran el espectro de iones producto (EM2) del ion de m/z 230 y un espectro de Em 3 del ion de m/z 143 correspondiente. Se detectaron los fragmentos deuteriados correspondientes a 171, 143, 127, 115,09, 115,06 y 71, mientras que los fragmentos de 124 y 96 permanecieron sin cambiar. Todos estos iones pueden racionalizarse satisfactoriamente en la ruta de fragmentación originalmente propuesta (véase el esquema 2), proporcionando evidencias convincentes de la validez de la estructura propuesta del compuesto A.
Esquema 2. Posible ruta de fragmentación de análogo deuteriado.
Figure imgf000028_0001
Se confirmó adicionalmente la estructura propuesta mediante comparación directa con un patrón de síntesis (véase el ejemplo 1). La TMAP sintética preparada tanto mediante el método 1 como el método 2 generada eluye a 1,44 minutos con un ion molecular de m/z 229,15415 (-2,3 ppm con respecto al valor calculado) y 229,15403 (-2,8 ppm con respecto al valor calculado) mediante CL/EM, respectivamente. Se seleccionó el producto preparado mediante el método 1 para una comparación adicional con el compuesto A.
El tiempo de retención de la TMAP sintética (panel central en la figura 10) coincidió perfectamente con el del compuesto A (panel superior) dado que eluyeron conjuntamente (panel inferior) en las condiciones de cromatografía. Como beneficio inesperado, la asimetría del pico característico de la TMAP sintética también se pareció a la del compuesto A. El espectro de iones producto (EM2) de TMAP sintética concordó notablemente bien con el del compuesto A en cuanto a fragmentos y su intensidad relativa (figura 11). La fragmentación adicional de los iones hijo de 142 y 170 de TMAP sintética produjo espectros de EM3, que fueron esencialmente idénticos a los del compuesto A mediante comparación unos al lado de otros en las figuras 12 y 13, respectivamente. Un espectro de EM4 de la TMAP sintética en el ion de m/z 114 mostró un fragmento de m/z 70, compatible con el del compuesto A (figura 14). Además, se analizó la TMAP sintética después del intercambio con deuterio y los espectros de EM, EM2 y EM3 resultantes también coincidieron muy bien con los del compuesto A tal como se muestra en las figuras 15-17. Todos estos datos de espectros de EM y cromatografía respaldan fuertemente que el compuesto A es TMAP.
Ejemplo 3. Compuesto A como biomarcador para la función renal
Se llevó a cabo un extenso estudio analizando un gran número de muestras de plasma y suero a partir de individuos sanos y enfermos (véase el documento WO 2014/186311). Los resultados muestran que el nivel sérico de compuesto A se correlaciona con la tasa de filtración glomerular (GFR) con significación estadística (véanse, por ejemplo, las tablas 1, 2 y 4 en el documento WO 2014/186311), particularmente en pacientes con eGFR intermedias. Para pacientes con eGFR intermedia, la evaluación de la función renal y el diagnóstico de CKD son inciertos usando métodos de diagnóstico tradicionales.
La correlación de TMAP con CKD-EPIcr eGFR es de -0,648 y la correlación con MDRDcr eGFR es de -0,582. La correlación de creatinina sérica con CKD-EPIcr eGFR es de -0,673 y con MDRDcr eGFR es de -0,632.
Ejemplo 4. Medición mediante CL-EM/EM del compuesto A
Se realizó cromatografía de líquidos de fase inversa para medir el compuesto A. Se usó un sistema de Waters Acquity UPLC equipado con un gestor de disolventes binarios, un gestor de muestras refrigeradas (ajustado a 12°C) y un gestor de columna (ajustado a 40°C) para la cromatografía de líquidos con una columna de fase inversa (Waters ACQUITY UPLC® BEH C18, 1,7 |im, 2,1x100 mm). La fase móvil A era ácido fórmico al 0,1% en agua y la fase móvil B era ácido fórmico al 0,1% en metanol. Se llevó a cabo una elución en gradiente lineal con una condición inicial del 0% fase móvil B, que se mantuvo durante 2,00 min. Después se aumentó la fase móvil B hasta el 98% en 0,50 min y se mantuvo durante 0,90 min. Se devolvió la fase móvil B hasta el 0% en 0,10 min para el equilibrado para la siguiente inyección. La velocidad de flujo era de 350 pl/min y el tiempo de ejecución total era de 4,50 min. Se inyectó una alícuota fijada en bucle de 5,0 |il de la disolución de muestra final para cada muestra. Se introdujo el eluyente directamente en la fuente de electropulverización de un espectrómetro de masas. El lavado de aguja fuerte era metanol puro y el lavado de aguja débil era una mezcla de metanol y agua (0,5:99,5). El lavado de sello era una mezcla de metanol y agua (10:90).
Se realizó la espectrometría de masas usando un espectrómetro de masas Thermo Scientific Orbitrap Elite equipado con una sonda de ionización por electropulverización calentada (HESI-II) que se hizo funcionar en modo positivo. Se controló el instrumento mediante software Orbitrap Elite™ 2.7 y XCalibur™ 2.2. Se ajustó la fuente de electropulverización calentada con una temperatura de calentador a 430°C, gas de protección a 30 y velocidades de flujo de gas auxiliar a 12, gas de barrido a 0, tensión de pulverización iónica a 4,20 kV, temperatura de capilar a 350°C y nivel de RF de lente S al 65%. Se usó una resolución de 30.000 para recopilar espectros de FTMS (espectrometría de masas con transformada de Fourier) de barrido completo con un intervalo de masa de entre m/z 100 y 300. Para todos los experimentos de fragmentación de EM, se usó una resolución de 15.000 junto con activación Q de 0,250 y tiempo de activación de 10,0 ms. La energía de colisión normalizada para el experimento de EM2 del ion padre era de 31,0 eV con una anchura de aislamiento de 1,0 m/z y el intervalo de barrido de entre m/z 60 y 240. Para el experimento de EM3 de m/z 229,1547/142,0860, la energía de colisión normalizada era de 31,0 y 25,0 eV para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente, con una anchura de aislamiento de m/z 2,0 para ambas etapas y el intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240. Para el experimento de EM3 de m/z 229,1547/170,0810, la energía de colisión normalizada era de 31,0 y 30,0 eV para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente. La anchura de aislamiento era de m/z 3,0 y 2,0 para la fragmentación de primera y segunda etapa, respectivamente, y el intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240. Para el experimento de EM4de m/z 229,1547/142,0860/114,0911, la energía de colisión normalizada era de 31,0, 20,0 y 20,0 eV para la fragmentación de primera a tercera etapa. La anchura de aislamiento era de m/z 2,0 para las tres etapas y el intervalo de barrido de entre m/z 50 y 240.

Claims (17)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000030_0001
    o una sal del mismo, en el que el compuesto es puro en al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,5% o 99,9% en peso con respecto a los otros estereoisómeros.
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto está representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000030_0002
    o una sal del mismo.
  3. 3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que el compuesto está marcado de manera isotópica.
  4. 4. Método de determinación del nivel de un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000030_0003
    o una sal del mismo, en un sujeto que comprende:
    (1) preparar una muestra analítica a partir de una muestra biológica obtenida a partir del sujeto;
    (2) determinar el nivel del compuesto usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos.
  5. 5. Método según la reivindicación 4, que comprende además comparar el nivel del compuesto en la muestra analítica a partir de una muestra biológica obtenida a partir del sujeto con el nivel del compuesto en una muestra de referencia.
  6. 6. Método según la reivindicación 4 ó 5, en el que el método comprende además usar el nivel determinado del compuesto en un modelo matemático para evaluar la función renal.
  7. 7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que el método comprende además analizar la muestra analítica preparada a partir de la muestra biológica para determinar el nivel de uno o más biomarcadores adicionales relevantes para la evaluación de la función renal, en el que los biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosiltriptófano, N-acetilserina, N-acetilalanina, N6-carbamoiltreonil-adenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, N1-metiladenosina, 3-metilglutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetil-lisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol.
  8. 8. Método para calcular la tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) en un sujeto que comprende las etapas de:
    (1) determinar el nivel de un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000031_0001
    o una sal del mismo, en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto, usando cromatografía, espectrometría de masas, ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), unión de anticuerpos, inmunotransferencia, inmunohistoquímica (IHC), otros métodos inmunoquímicos o una combinación de los mismos; y
    (2) calcular la eGFR usando un algoritmo que usa el nivel determinado del compuesto.
  9. Método según la reivindicación 8, en el que la eGFR calculada se usa para evaluar la función renal en el sujeto.
  10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en el que el compuesto está representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000031_0002
    o una sal del mismo.
  11. Kit que comprende un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000031_0003
    o una sal del mismo, e instrucciones para medir el nivel del compuesto en una muestra biológica.
  12. Kit que comprende un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000031_0004
    (i) evaluar o monitorizar la función renal en un sujeto,
    (ii) determinar la predisposición a desarrollar una función renal reducida en un sujeto,
    (iii) clasificar a un sujeto según el nivel de función renal,
    (iv) diagnosticar o monitorizar enfermedad renal crónica (CKD) en un sujeto,
    (v) diagnosticar o monitorizar lesión renal aguda (AKI) en un sujeto, o
    (vi) calcular la tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) en un sujeto,
    en el que las instrucciones en (i)-(vi) se basan en el nivel del compuesto detectado en una muestra biológica obtenida a partir del sujeto.
  13. 13. Kit según la reivindicación 11 ó 12, en el que el compuesto está representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000032_0001
    o una sal del mismo.
  14. 14. Kit según la reivindicación 13, en el que (i) el compuesto está marcado de manera isotópica; o (ii) el compuesto es N,N,N-trimetil-13C3-L-alanil-L-prolina.
  15. 15. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 12-14, en el que el kit comprende además uno o más biomarcadores adicionales relevantes para la evaluación de la función renal, en el que el uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en pseudouridina, N-acetiltreonina, 2-C-manopiranosil-triptófano, N-acetilserina, N-acetilalanina, N6-carbamoiltreonil-adenosina, 4-acetamidobutanoato, eritritol, myo-inositol, eritronato, urea, arabitol, N2,N2-dimetilguanosina, N1-metiladenosina, 3-metilglutarilcarnitina, S-adenosilhomocisteína, N-acetilmetionina, N6-acetil-lisina, quinurenina, arabonato, succinilcarnitina, ribosa, xilonato, N-formilmetionina, sulfato de O-metilcatecol, 2-metilbutirilcarnitina, fenilacetilglutamina, N2,N5-diacetilornitina, triptófano, creatinina, urato, 3-indoxilsulfato y sulfato de p-cresol.
  16. 16. Método para preparar un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000032_0002
    o una sal del mismo, que comprende hacer reaccionar un compuesto representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000032_0003
    o una sal del mismo, con un reactivo de metilación CH3X o (CH3)2SO4, en el que X es Cl, Br, I u OSO2CF3.
  17. 17. Método según la reivindicación 16, en el que el compuesto está representado por la siguiente fórmula:
    Figure imgf000032_0004
    o una sal del mismo, y el método comprende hacer reaccionar L-alanil-L-prolina con CH3X o (CH3)2SO4, en el que X es Cl, Br, I u OSO2CF3.
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