发明内容
发明所要解决的课题
需要通过氨基酸立体异构体的全分析,使氨基酸立体异构体量、变化与疾病的关系明确,开发新的疾病诊断方法和实行该疾病诊断方法的新的疾病诊断装置。
用于解决课题的方法
本发明提供疾病样品分析装置。本发明的疾病样品分析装置包括下述机构:将被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体进行分离、定量的机构;将该氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的机构;和基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的机构。
本发明的疾病样品分析装置中,有下述情况:上述判别式为:
病态指标值=(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/(健常者的生物材料中的与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值),或者
病态指标值=[(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/{(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)+(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的测定值)}]÷[(健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)/{(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)+(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的基准值)}]。
本发明的疾病样品分析装置中,有下述情况:基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的机构是,当上述病态指标值为2.0或2.0以上时,输出上述被检者罹患上述疾病的上述被检者的病态信息的机构。
本发明的疾病样品分析装置中,有下述情况:在上述疾病为肾脏病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为选自D-丝氨酸、D-苏氨酸、D-丙氨酸、D-天冬酰胺、D-别苏氨酸、D-谷氨酰胺、D-脯氨酸和D-苯基丙氨酸中的1种或2种以上的氨基酸,在上述疾病为前列腺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-组氨酸和/或D-天冬酰胺,在上述疾病为骨质疏松症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺,在上述疾病为扩张型心肌病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、L-精氨酸、D-谷氨酸和D-脯氨酸,在上述疾病为更年期障碍时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-组氨酸、L-苯基丙氨酸和D-天冬氨酸,在上述疾病为肉瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-精氨酸,在上述疾病为阿尔茨海默病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-别异亮氨酸、D-丝氨酸、D-丙氨酸、D-蛋氨酸、D-亮氨酸、D-天冬氨酸、D-苯基丙氨酸和L-苯基丙氨酸,在上述疾病为DAO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,在上述疾病为DDO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺、D-天冬氨酸和D-精氨酸,在上述疾病为苯丙酮酸尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-苯基丙氨酸,在上述疾病为枫糖尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-缬氨酸、L-别异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-异亮氨酸和L-亮氨酸,在上述疾病为类风湿性关节炎时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸、L-谷氨酰胺和L-半胱氨酸,在上述疾病为肾脏癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和D-丙氨酸,在上述疾病为肺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸,在上述疾病为心血管疾病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-谷氨酸,在上述疾病为多发性硬化症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为急性骨髓性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为淋巴瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为急性淋巴性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为银屑病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为糖尿病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸、L-半胱氨酸和L-谷氨酸。
本发明提供疾病样品分析系统。本发明的疾病样品分析系统包括:将被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体进行分离、定量的定量分析部;将该氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的病态指标值演算部;和基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的病态信息输出部。
本发明的疾病样品分析系统中,有下述情况:上述判别式为:
病态指标值=(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/(健常者的生物材料中的与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值),或者
病态指标值=[(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/{(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)+(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的测定值)}]÷[(健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)/{(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)+(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的基准值)}]。
本发明的疾病样品分析系统中,有下述情况:上述病态信息输出部是,当上述病态指标值为2.0或2.0以上时,输出上述被检者罹患上述疾病的上述被检者的病态信息。
本发明的疾病样品分析系统中,有下述情况:在上述疾病为肾脏病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为选自D-丝氨酸、D-苏氨酸、D-丙氨酸、D-天冬酰胺、D-别苏氨酸、D-谷氨酰胺、D-脯氨酸和D-苯基丙氨酸中的1种或2种以上的氨基酸,在上述疾病为前列腺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-组氨酸和/或D-天冬酰胺,在上述疾病为骨质疏松症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺,在上述疾病为扩张型心肌病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、L-精氨酸、D-谷氨酸和D-脯氨酸,在上述疾病为更年期障碍时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-组氨酸、L-苯基丙氨酸和D-天冬氨酸,在上述疾病为肉瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-精氨酸,在上述疾病为阿尔茨海默病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-别异亮氨酸、D-丝氨酸、D-丙氨酸、D-蛋氨酸、D-亮氨酸、D-天冬氨酸、D-苯基丙氨酸和L-苯基丙氨酸,在上述疾病为DAO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,在上述疾病为DDO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺、D-天冬氨酸和D-精氨酸,在上述疾病为苯丙酮酸尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-苯基丙氨酸,在上述疾病为枫糖尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-缬氨酸、L-别异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-异亮氨酸和L-亮氨酸,在上述疾病为类风湿性关节炎时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸、L-谷氨酰胺和L-半胱氨酸,在上述疾病为肾脏癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和D-丙氨酸,在上述疾病为肺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸,在上述疾病为心血管疾病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-谷氨酸,在上述疾病为多发性硬化症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为急性骨髓性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为淋巴瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为急性淋巴性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为银屑病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为糖尿病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸、L-半胱氨酸和L-谷氨酸。
本发明提供疾病样品分析方法。本发明的疾病样品分析方法包括下述步骤:测定被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体的量的步骤;将该氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的步骤;和基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的步骤。
本发明的疾病样品分析方法中,有下述情况:上述判别式为:
病态指标值=(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/(健常者的生物材料中的与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值),或者
病态指标值=[(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/{(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)+(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的测定值)}]÷[(健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)/{(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)+(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的基准值)}]。
本发明的疾病样品分析方法中,有下述情况:基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的步骤是,当上述病态指标值为2.0或2.0以上时,输出上述被检者罹患上述疾病的上述被检者的病态信息的步骤。
本发明的疾病样品分析方法中,有下述情况:在上述疾病为肾脏病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为选自D-丝氨酸、D-苏氨酸、D-丙氨酸、D-天冬酰胺、D-别苏氨酸、D-谷氨酰胺、D-脯氨酸和D-苯基丙氨酸中的1种或2种以上的氨基酸,在上述疾病为前列腺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-组氨酸和/或D-天冬酰胺,在上述疾病为骨质疏松症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺,在上述疾病为扩张型心肌病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、L-精氨酸、D-谷氨酸和D-脯氨酸,在上述疾病为更年期障碍时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-组氨酸、L-苯基丙氨酸和D-天冬氨酸,在上述疾病为肉瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-精氨酸,在上述疾病为阿尔茨海默病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-别异亮氨酸、D-丝氨酸、D-丙氨酸、D-蛋氨酸、D-亮氨酸、D-天冬氨酸、D-苯基丙氨酸和L-苯基丙氨酸,在上述疾病为DAO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,在上述疾病为DDO缺损时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺、D-天冬氨酸和D-精氨酸,在上述疾病为苯丙酮酸尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-苯基丙氨酸,在上述疾病为枫糖尿症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-缬氨酸、L-别异亮氨酸、D-异亮氨酸、L-异亮氨酸和L-亮氨酸,在上述疾病为类风湿性关节炎时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸、L-谷氨酰胺和L-半胱氨酸,在上述疾病为肾脏癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和D-丙氨酸,在上述疾病为肺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸,在上述疾病为心血管疾病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-谷氨酸,在上述疾病为多发性硬化症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丝氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为急性骨髓性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为淋巴瘤时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-半胱氨酸,在上述疾病为急性淋巴性白血病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-谷氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为银屑病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为L-精氨酸和L-半胱氨酸,在上述疾病为糖尿病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-丙氨酸、L-半胱氨酸和L-谷氨酸。
本发明提供疾病的诊断方法。本发明的疾病的诊断方法包括下述步骤:测定被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体的量的步骤;和基于该氨基酸立体异构体的量的测定值与健常者的基准值进行上述疾病的诊断的步骤。
本发明提供疾病的诊断方法。本发明的疾病的诊断方法包括下述步骤:将被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体进行分离、定量的步骤;将该氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的步骤;和基于上述病态指标值诊断上述被检者的步骤。
本发明的疾病的诊断方法中,有下述情况:上述判别式为:
病态指标值=(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/(健常者的生物材料中的与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值),或者
病态指标值=[(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)/{(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的测定值)+(上述被检者的生物材料中的测定值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的测定值)}]÷[(健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)/{(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值)+(上述健常者的基准值中与上述疾病相关的氨基酸立体异构体的对映异构体的基准值)}]。
本发明的疾病的诊断方法中,有下述情况:基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的步骤是,当上述病态指标值为2.0或2.0以上时,诊断上述被检者罹患上述疾病的步骤。
本发明的疾病的诊断方法中,有下述情况:在上述疾病为肾脏病时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为选自D-丝氨酸、D-苏氨酸、D-丙氨酸、D-天冬酰胺、D-别苏氨酸、D-谷氨酰胺、D-脯氨酸和D-苯基丙氨酸中的1种或2种以上的氨基酸,在上述疾病为前列腺癌时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-组氨酸和/或D-天冬酰胺,在上述疾病为骨质疏松症时,与上述疾病相关的氨基酸立体异构体为D-天冬酰胺。
本发明的所谓氨基酸立体异构体,是指蛋白质的翻译所用的20种氨基酸、该氨基酸中除了甘氨酸以外的19种L-氨基酸的光学异构体D-氨基酸19种、以及L-别苏氨酸、D-别苏氨酸和D-别异亮氨酸。
本发明的疾病样品分析装置包括下述机构:测定生物材料中的氨基酸立体异构体的量的机构;将该氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的机构;和基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的机构。测定上述生物材料中的氨基酸立体异构体的量的机构为样品的自动分取部、和利用反相柱等的HPLC分离和峰检测部。将上述氨基酸立体异构体的量代入判别式进行计算,获得病态指标值的机构为存储上述判别式、各疾病的健常者的基准值等数据的存储部、和基于该数据进行判别式的计算的演算部。基于上述病态指标值输出上述被检者的病态信息的机构为病态信息选择部和病态信息输出部。此外,本发明的疾病样品分析装置中包括将全体总括地控制的CPU等控制部、与输入装置和输出装置连接的输入输出接口部、和能够与网络通信连接的通信接口部。
在本发明中所谓生物材料,是指血液、血浆、血清、腹水、羊水、淋巴液、唾液、精液、尿等体液,粪便、汗、鼻涕等排泄物,和体毛、指甲、皮肤组织、内脏组织等身体组织,但不限定于此。
在本发明中,所谓判别式,有为算出氨基酸立体异构体量的被检者测定值是预先由健常者的测定值设定的基准值的多少倍的式子的情况。此外,有为算出上述氨基酸立体异构体的量相对于氨基酸立体异构体的量与该异构体的对映异构体的量之和的比例或百分率的式子的情况。此外,有为由多种氨基酸立体异构体的量的组合算出病态指标值的式子的情况。有上述多个氨基酸立体异构体为具有成为D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的底物等共同点的氨基酸组的情况。例如,有在成为同一酶的底物的氨基酸立体异构体中,将与疾病相关的氨基酸的量以与疾病不相关的氨基酸的量进行标准化的情况。
本发明的判别式中,所谓健常者的生物材料中的与疾病相关的氨基酸立体异构体的基准值,对于与疾病相关的氨基酸立体异构体,由健常者的生物材料、该氨基酸立体异构体没有相关性的其它疾病患者的生物材料中的任一方或两方的生物材料中的量的平均值或中心值决定。有上述基准值被预先设定的情况,但也有为在本发明的实施时作为对照实验被准备,同时被试验的生物材料的测定值、或其平均值或中心值的情况。
作为本发明的病态信息,有下述情况:由本发明的判别式算出的病态指标值为1.0或其附近时,输出被检者为健常者。在上述病态指标值为2.0或2.0以上时,输出被检者罹患疾病的可能性大。然而,有下述情况:即使上述病态指标值小于2.0,也输出被检者有罹患上述疾病的可能性。
通过本发明的疾病样品分析装置、分析系统和分析方法获得的被检者的生物材料中的氨基酸立体异构体的定量数据,作为各种疾病的诊断和预防的指标来使用。此外,上述定量数据作为上述疾病病情的进展的指标来使用。此外,上述定量数据作为用于判断用于上述疾病的治疗和/或预防的药物的药效的指标来使用。此外,上述定量数据作为用于判断药物、准药品、化妆品、食品其它化学物质对生物体的影响、其它物理和/或生物学环境因素对成体的影响的指标来使用。
本说明书中所提及的全部文献,其整体通过引用并入本说明书中。
附图说明
图1为将对于健常者和各种疾病患者的各个最初样品的D-氨基酸的分析结果归纳而得的表。
图2-1为D-丝氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图2-2为L-丝氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图2-3为D-苏氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图2-4为L-苏氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图2-5为D-丙氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图2-6为L-丙氨酸的血清浓度的每个疾病样品的分布图。
图3-1为丝氨酸的样品的D-体量相对于D-体和L-体的量之和的百分率(%D)的分布图。
图3-2为苏氨酸的样品的D-体量相对于D-体和L-体的量之和的百分率(%D)的分布图。
图3-3为丙氨酸的样品的D-体量相对于D-体和L-体的量之和的百分率(%D)的分布图。
图4-1为扩张型心肌病模型小鼠(MLP-KO小鼠,以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-丝氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-2为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的L-丝氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-3为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的总丝氨酸浓度(D-丝氨酸浓度和L-丝氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-4为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-丝氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.02。
图4-5为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-精氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-6为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的L-精氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。
图4-7为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的总精氨酸浓度(D-精氨酸浓度和L-精氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-8为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-谷氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.02。
图4-9为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的L-谷氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-10为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的总谷氨酸浓度(D-谷氨酸浓度和L-谷氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-11为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-脯氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。
图4-12为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的L-脯氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-13为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的总脯氨酸浓度(D-脯氨酸浓度和L-脯氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-14为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-赖氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-赖氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。
图4-15为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的L-赖氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-赖氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图4-16为扩张型心肌病模型小鼠(以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的总赖氨酸浓度(D-赖氨酸浓度和L-赖氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总赖氨酸浓度(纳摩尔/mL)。
图5-1为表示从9周龄HR-1小鼠摘出卵巢后的更年期模型小鼠(以下,称为“OVX”。)12只、与对相同周龄的雌小鼠不进行卵巢摘出而仅进行了皮肤的切开和缝合的对照小鼠(以下,称为“sham”。)6只的体重的平均值和标准偏差的变化的图。纵轴表示小鼠的体重(克)。涂黑和斜线影线的棒图分别表示施行手术前的9周龄小鼠、与施行手术后第1周(10周龄)、第2周(11周龄)、第3周(12周龄)、第4周(13周龄)的更年期模型小鼠(OVX)和对照小鼠(sham)的体重的平均值和标准偏差。关于更年期模型小鼠(OVX)和对照小鼠(sham)的体重的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05(*)或小于0.01(**)。对于摘出卵巢后的更年期模型小鼠,从术后第2周起体重与对照小鼠相比显著地增加,显示出更年期模型小鼠制作成功了。
图5-2为表示更年期模型小鼠(OVX)3只中的第1只(OVX-3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-3为表示更年期模型小鼠(OVX)3只中的第2只(OVX-4)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-4为表示更年期模型小鼠(OVX)3只中的第3只(OVX-5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-5为表示对照小鼠(sham)4只中的第1只(Sham-16)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-6为表示对照小鼠(sham)4只中的第2只(Sham-17)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-7为表示对照小鼠(sham)4只中的第3只(Sham-19)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-8为表示对照小鼠(sham)4只中的第4只(Sham-20)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图5-9为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与更年期模型小鼠(OVX)相比对照小鼠(sham)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.015。
图5-10为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。关于L-组氨酸和L-苯基丙氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P分别为0.017和0.037。
图5-11为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。关于苏氨酸和异亮氨酸,生物体内的D-体成为别体,因此%D作为D-别体浓度相对于D-别体浓度和L-体浓度之和的百分率来评价。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.002。
图5-12为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.005。
图5-13为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.017。
图5-14为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-谷氨酸浓度的百分率(%D/D-Glu)进行比较的表。D-天冬氨酸为酸性D-氨基酸,因此以被认为受到同样的代谢的D-谷氨酸浓度进行校正后评价。即使是%D/D-Glu,关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.006。
图6-1为表示移植了2×107个肉瘤细胞的ICR系雄6周龄小鼠中,移植3周后确认了外植的肿瘤的生长的个体3只中的第1只(S3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-2为表示移植了2×107个肉瘤细胞的ICR系雄6周龄小鼠中,移植3周后确认了外植的肿瘤的生长的个体3只中的第2只(S4)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-3为表示移植了2×107个肉瘤细胞的ICR系雄6周龄小鼠中,移植3周后确认了外植的肿瘤的生长的个体3只中的第3只(S5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-4为表示作为肉瘤移植小鼠的对照实验而在相同环境下饲养的ICR系雄9周龄小鼠个体3只中的第1只(C3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-5为表示作为肉瘤移植小鼠的对照实验而在相同环境下饲养的ICR系雄9周龄小鼠个体3只中的第2只(C4)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-6为表示作为肉瘤移植小鼠的对照实验而在相同环境下饲养的ICR系雄9周龄小鼠个体3只中的第3只(C5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图6-7为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。关于D-精氨酸,与对照小鼠相比肉瘤移植小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.008。
图6-8为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。
图6-9为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。肉瘤移植小鼠的丝氨酸的%D比对照小鼠低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.016。
图6-10为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。
图6-11为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。关于D-天冬酰胺和D-精氨酸,有与对照小鼠相比肉瘤移植小鼠高的倾向,关于D-精氨酸的显著性差异,在Student的t检验中P为0.035。
图6-12为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-天冬酰胺浓度的百分率(%D/D-Asn)进行比较的表。由于D-天冬酰胺在哺乳类尿中较高浓度地存在,以及相对于总D-氨基酸浓度的比率最稳定,因此作为尿中浓度的校正的指标使用。关于D-精氨酸,有与对照小鼠相比肉瘤移植小鼠高的倾向,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.016。
图7-1为阿尔茨海默病模型小鼠(淀粉样β前体蛋白质高表达转基因小鼠Tg2576半合子雄8周龄小鼠,以下,称为“hemi”。)3只、与对照正常小鼠(C57BL,以下,称为“Wild”。)3只的尿中的D-丝氨酸浓度(D-Ser)、L-丝氨酸浓度(L-Ser)和两者合计(Ser)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。
图7-2为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丝氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。
图7-3为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丝氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Ser/D-allo-Thr),或尿中的D-丝氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Ser/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-丝氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比,尿中的D-丝氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P都小于0.01。
图7-4为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丙氨酸浓度(D-Ala)、L-丙氨酸浓度(L-Ala)和两者合计(Ala)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-丙氨酸浓度,阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。
图7-5为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丙氨酸浓度相对于总丙氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。关于尿中的D-丙氨酸浓度相对于总丙氨酸浓度的百分率(%D),阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。
图7-6为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸浓度(D-Met)、L-蛋氨酸浓度(L-Met)和两者合计(Met)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-Met浓度,有阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高的倾向。
图7-7为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。
图7-8为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Met/D-allo-Thr)或尿中的D-蛋氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Met/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-蛋氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比、尿中的D-蛋氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P都小于0.05。
图7-9为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸浓度(D-Leu)、L-亮氨酸浓度(L-Leu)和两者合计(Leu)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。
图7-10为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。
图7-11为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Leu/D-allo-Thr)或尿中的D-亮氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Leu/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-亮氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比、尿中的D-亮氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P分别为小于0.05和小于0.01。
图7-12为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-天冬氨酸浓度(D-Asp)、L-天冬氨酸浓度(L-Asp)和两者合计(Asp)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-天冬氨酸浓度,阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠低,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05。
图7-13为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-天冬氨酸浓度相对于总天冬氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。
图7-14为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(D-Phe)、L-苯基丙氨酸浓度(L-Phe)和两者合计(Phe)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。
图7-15为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度相对于总苯基丙氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。
图7-16为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Phe/D-allo-Thr)或尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Phe/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05。
图8-1为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠(ddY/DAO+,以下,称为“DAO+/+”。)个体3只中的第1只(DAO+/+1)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-2为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠(ddY/DAO+,以下,称为“DAO+/+”。)个体3只中的第2只(DAO+/+2)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-3为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠(ddY/DAO+,以下,称为“DAO+/+”。)个体3只中的第3只(DAO+/+3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-4为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠(ddY/DAO-,以下,称为“DAO-/-”。)个体3只中的第1只(DAO-/-1)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-5为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠(ddY/DAO-,以下,称为“DAO-/-”。)个体3只中的第2只(DAO-/-2)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-6为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠(ddY/DAO-,以下,称为“DAO-/-”。)个体3只中的第3只(DAO-/-3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。
图8-7为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比,DAO酶缺损小鼠显著地高。
图8-8为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。
图8-9为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比,DAO酶缺损小鼠显著地高。
图8-10为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比,DAO酶缺损小鼠显著地高。
图8-11为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。
图8-12为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-天冬酰胺浓度的百分率(%D/D-Asn)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比,DAO酶缺损小鼠显著地高。
图9-1为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型小鼠(DDO+)个体4只中的第1只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-2为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型小鼠(DDO+)个体4只中的第2只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-3为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型小鼠(DDO+)个体4只中的第3只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-4为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型小鼠(DDO+)个体4只中的第4只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-5为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(DDO-)个体4只中的第1只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-6为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(DDO-)个体4只中的第2只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-7为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(DDO-)个体4只中的第3只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图9-8为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(DDO-)个体4只中的第4只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。
图10-1为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-2为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-3为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-4为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-5为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图10-6为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-7为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-8为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-9为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-10为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图10-11为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-12为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-13为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-14为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-15为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-16为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-17为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-18为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-19为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图10-20为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图11-1为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-2为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-3为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.05。
图11-4为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-5为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-6为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图11-7为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图11-8为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图11-9为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.05。
图11-10为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-11为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图11-12为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-13为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-14为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图11-15为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-1为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-2为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-3为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.05。
图12-4为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-5为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-6为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图12-7为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图12-8为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.05。
图12-9为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.01。
图12-10为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-11为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于显著性差异,p小于0.05。
图12-12为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-13为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-14为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-15为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图13-1为将对于各种疾病患者的各个最初样品的D-氨基酸的分析结果归纳而得的追加的表。
图13-2为将对于各种疾病患者的各个最初样品的L-氨基酸的分析结果归纳而得的追加的表。
实施例2
小鼠疾病模型来源的样品的氨基酸立体异构体的全分析
1.材料和方法
1.1氨基酸立体异构体的全分析
氨基酸立体异构体的全分析使用与实施例1中说明的D、L-氨基酸同步高灵敏度分析系统同样的系统,但不同点在于,输送泵使用了不具有缓冲器(ダンパー)的MS,通过采用MPS和低用量脱气器,可以大范围地选择第二维的流动相。
1.2小鼠疾病模型
本实施例中使用的小鼠疾病模型为扩张型心肌病模型小鼠、卵巢摘出后的更年期模型小鼠、肉瘤移植小鼠、阿尔茨海默病模型小鼠、DAO缺损小鼠和DDO缺损小鼠。以下对于各个小鼠详细地说明。使用小鼠的实验在九州大学大学院药学研究院进行。
1.2.1扩张型心肌病模型小鼠
作为心血管障碍的模型小鼠,使用了作为心肌构成蛋白质的1种的MLP(muscleLIM protein)缺损了的MLP-KO小鼠(Arber,S.等,Cell,88:393(1997))。获得扩张型心肌病模型小鼠(MLP-KO小鼠,以下,称为“疾病”。)雄8周龄3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)雄8周龄4只的尿样品,分析了其全部氨基酸光学异构体含量。
1.2.2更年期模型小鼠
作为更年期模型小鼠,在麻醉下从HR-1小鼠9周龄雌摘出卵巢,缝合皮肤。也准备了对相同周龄的雌小鼠不进行卵巢摘出而仅进行了皮肤的切开和缝合的对照实验的小鼠。测定施行手术前、和施行手术后第1周~第4周的体重。与对照小鼠进行比较,将确认了体重增大的个体作为更年期模型小鼠而供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.3肉瘤移植小鼠
作为肉瘤移植小鼠,准备移植了2×107个肉瘤细胞的ICR系雄6周龄小鼠。移植3周后确认了外植的肿瘤的生长的个体供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。作为肉瘤移植小鼠的对照实验,在相同环境下饲养的ICR系雄9周龄小鼠个体供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.4阿尔茨海默病模型小鼠
作为阿尔茨海默病模型小鼠,淀粉样β前体蛋白质高表达转基因小鼠Tg2576(Hsiao,K.等,Science,274:99(1996))的半合子雄8周龄小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。C57BL雄8周龄小鼠作为对照正常小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.5D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠
作为D-氨基酸代谢相关酶活性变化模型之一,D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠(Konno,R.等,Genetics 103:277(1983),ddY/DAO-,以下,称为“DAO-/-”。)雄8周龄的个体供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠雄8周龄的个体作为对照小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.6D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠
作为D-氨基酸代谢相关酶活性变化模型之一,D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(Huang,A.S.等,J.Neurosci.,2:2814(2006),以下,称为“DDO-”。)雄8周龄的个体供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型(以下,称为“DDO+”。)雄8周龄个体作为对照小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.7苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠
作为氨基酸代谢障碍模型小鼠之一,苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,Shedlovsky,A.等,Genetics 134:1205(1993))在SPF条件下饲养的25-35周龄的雄5只供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。同一遗传背景的野生型等位基因的纯合子在SPF条件下饲养的25-35周龄的雄5只作为对照小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
1.2.8枫糖尿症疾病模型小鼠
作为氨基酸代谢障碍模型小鼠之一,(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,Homanics G.E.等,BMC Med Genet,7:33(2006)在SPF条件下饲养的8-10周龄的雄5只供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。同一遗传背景的野生型等位基因的纯合子在SPF条件下饲养的8-10周龄的雄5只作为对照小鼠供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。在一部分实验中,+/Dbttm1Geh的杂合子在SPF条件下饲养的8-10周龄的雄5只作为中间型供于尿中全部氨基酸光学异构体含量分析。
2.结果
2.1扩张型心肌病模型小鼠
图4-1为扩张型心肌病模型小鼠(MLP-KO小鼠,以下,称为“疾病”。)3只、与对照正常小鼠(以下,称为“正常”。)4只的尿中的D-丝氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-2表示扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的L-丝氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-3为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的总丝氨酸浓度(D-丝氨酸浓度和L-丝氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总丝氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-4表示扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的D-丝氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.02。图4-5为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的D-精氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-6为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的L-精氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。图4-7为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的总精氨酸浓度(D-精氨酸浓度和L-精氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总精氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-8为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的D-谷氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.02。图4-9为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的L-谷氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-10为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的总谷氨酸浓度(D-谷氨酸浓度和L-谷氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总谷氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-11为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的D-脯氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。图4-12为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的L-脯氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-13为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的总脯氨酸浓度(D-脯氨酸浓度和L-脯氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为总脯氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-14表示扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的D-赖氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为D-赖氨酸浓度(纳摩尔/mL)。关于正常与疾病的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。图4-15表示扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的L-赖氨酸浓度的平均值和标准误差的棒图。纵轴为L-赖氨酸浓度(纳摩尔/mL)。图4-16为扩张型心肌病模型小鼠3只、与对照正常小鼠4只的尿中的总赖氨酸浓度(D-赖氨酸浓度和L-赖氨酸浓度之和)的平均值和标准误差的棒图。由这些结果可知,D-丝氨酸浓度有在疾病群中比正常群低的倾向,但未确认到显著性差异。然而如果以%D进行评价,则D-丝氨酸的%D在疾病群中比正常群显著地低。L-精氨酸浓度在疾病群中比正常群显著地低。D-谷氨酸浓度在疾病群中比正常群显著地高。D-脯氨酸浓度在疾病群中比正常群显著地低。D-赖氨酸浓度在疾病群中比正常群显著地低。
2.2更年期模型小鼠
图5-1为表示从9周龄HR-1小鼠摘出卵巢后的更年期模型小鼠(以下,称为“OVX”。)12只、与对相同周龄的雌小鼠不进行卵巢摘出而仅进行了皮肤的切开和缝合的对照小鼠(以下,称为“sham”。)6只的体重的平均值和标准偏差的变化的图。纵轴表示小鼠的体重(克)。涂黑和斜线影线的棒图分别表示施行手术前的9周龄小鼠、与施行手术后第1周(10周龄)、第2周(11周龄)、第3周(12周龄)、第4周(13周龄)的更年期模型小鼠(OVX)和对照小鼠(sham)的体重的平均值和标准偏差。关于更年期模型小鼠(OVX)和对照小鼠(sham)的体重的显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05(*)或小于0.01(**)。对于摘出卵巢后的更年期模型小鼠,从术后第2周起体重与对照小鼠相比显著地增加,显示出更年期模型小鼠制作成功了。
图5-2、5-3和5-4为分别表示更年期模型小鼠(OVX)3只中的第1只(OVX-3)、第2只(OVX-4)和第3只(OVX-5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。图5-5、5-6、5-7和5-8为分别表示对照小鼠(sham)4只中的第1只(Sham-16)、第2只(Sham-17)、第3只(Sham-19)和第4只(Sham-20)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。图5-9为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与更年期模型小鼠(OVX)相比对照小鼠(sham)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.015。图5-10为将年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。关于L-组氨酸和L-苯基丙氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P分别为0.017和0.037。图5-11为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。关于苏氨酸和异亮氨酸,生物体内的D-体成为别体,因此%D作为D-别体浓度相对于D-别体浓度和L-体浓度之和的百分率进行评价。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.002。图5-12为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于总L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.005。图5-13为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.017。图5-14为将更年期模型小鼠(OVX)3只和对照小鼠(sham)4只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-谷氨酸浓度的百分率(%D/D-Glu)进行比较的表。D-天冬氨酸为酸性D-氨基酸,因此以被认为是经受同样的代谢的D-谷氨酸浓度进行校正后评价。即使是%D/D-Glu,关于D-天冬氨酸,与对照小鼠(sham)相比更年期模型小鼠(OVX)也低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.006。
2.3肉瘤移植小鼠
图6-1、6-2和6-3分别为表示移植了2×107个肉瘤细胞的ICR系雄6周龄小鼠,且移植3周后确认了外植的肿瘤的生长的个体3只中的第1只(S3)、第2只(S4)和第3只(S5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。图6-4、6-5和6-6分别表示作为肉瘤移植小鼠的对照实验而在相同环境下饲养的ICR系雄9周龄小鼠个体3只中的第1只(C3)、第2只(C4)和第3只(C5)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。图6-7为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。图6-8为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。图6-9为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。肉瘤移植小鼠的丝氨酸的%D比对照小鼠低,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.016。图6-10为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。图6-11为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。关于D-天冬酰胺和D-精氨酸,有与对照小鼠相比肉瘤移植小鼠高的倾向,关于D-精氨酸的显著性差异,在Student的t检验中P为0.035。图6-12为将肉瘤移植小鼠3只(S3、S4和S5)和对照小鼠(C3、C4和C5)3只的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-天冬酰胺浓度的百分率(%D/D-Asn)进行比较的表。D-天冬酰胺较高浓度地存在于哺乳类尿中,以及相对于总D-氨基酸浓度的比率最稳定,因此作为尿中浓度的校正的指标使用。关于D-精氨酸,有与对照小鼠相比肉瘤移植小鼠高的倾向,关于显著性差异,在Student的t检验中P为0.016。
2.4阿尔茨海默病模型小鼠
图7-1为阿尔茨海默病模型小鼠(淀粉样β前体蛋白质高表达转基因小鼠Tg2576半合子雄8周龄小鼠,以下,称为“hemi”。)3只、与对照正常小鼠(C57BL,以下,称为“Wild”。)3只的尿中的D-丝氨酸浓度(D-Ser)、L-丝氨酸浓度(L-Ser)和两者合计(Ser)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。图7-2为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丝氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。图7-3为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丝氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Ser/D-allo-Thr)或尿中的D-丝氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Ser/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-丝氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比、尿中的D-丝氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P都小于0.01。图7-4为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丙氨酸浓度(D-Ala)、L-丙氨酸浓度(L-Ala)和两者合计(Ala)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-丙氨酸浓度,阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。图7-5为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-丙氨酸浓度相对于总丙氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。关于尿中的D-丙氨酸浓度相对于总丙氨酸浓度的百分率(%D),阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.01。图7-6为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸浓度(D-Met)、L-蛋氨酸浓度(L-Met)和两者合计(Met)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-Met浓度,有阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠高的倾向。图7-7为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。图7-8为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-蛋氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Met/D-allo-Thr)或尿中的D-蛋氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Met/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-蛋氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比、尿中的D-蛋氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P都小于0.05。图7-9为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸浓度(D-Leu)、L-亮氨酸浓度(L-Leu)和两者合计(Leu)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。图7-10为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸浓度相对于总丝氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。图7-11为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-亮氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Leu/D-allo-Thr)或尿中的D-亮氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Leu/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-亮氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比、尿中的D-亮氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,都是阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P分别小于0.05和小于0.01。图7-12为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-天冬氨酸浓度(D-Asp)、L-天冬氨酸浓度(L-Asp)和两者合计(Asp)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。关于尿中的D-天冬氨酸浓度,阿尔茨海默病模型小鼠比对照正常小鼠低,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05。图7-13为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-天冬氨酸浓度相对于总天冬氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为%D。图7-14为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(D-Phe)、L-苯基丙氨酸浓度(L-Phe)和两者合计(Phe)的平均值和标准误差的棒图。纵轴为浓度(纳摩尔/mL)。图7-15为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度相对于总苯基丙氨酸浓度的百分率(%D)的平均值和标准误差的棒图。图7-16为阿尔茨海默病模型小鼠(hemi)3只、与对照正常小鼠(Wild)3只的尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别苏氨酸浓度的相对比(D-Phe/D-allo-Thr)或尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比(D-Phe/D-allo-Ile)的图。关于尿中的D-苯基丙氨酸相对于D-别异亮氨酸浓度的相对比,阿尔茨海默病模型小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,在Student的t检验中P小于0.05。
2.5D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠
图8-1、8-2和8-3分别为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠(ddY/DAO+,以下,称为“DAO+/+”。)个体3只中的第1只(DAO+/+1)、第2只(DAO+/+2)和第3只(DAO+/+3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。图8-4、8-5和8-6分别为表示D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠(ddY/DAO-,以下,称为“DAO-/-”。)个体3只中的第1只(DAO-/-1)、第2只(DAO-/-2)和第3只(DAO-/-3)的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的表。甘氨酸由于不存在光学异构体,因此记载于L体的栏中。氨基酸全部通过NBD-F而被荧光衍生物化,使用本发明的全部氨基酸光学异构体含量分析装置进行了解析。色氨酸由于NBD衍生物的灵敏度低,因此在这次解析中设为nd。关于半胱氨酸,由于通过空气氧化而生成胱氨酸,因此作为半胱氨酸的含量极其低。因此在这次解析中设为nd。图8-7为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的D-氨基酸含量进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比DAO酶缺损小鼠显著地高。图8-8为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的L-氨基酸含量进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比DAO酶缺损小鼠显著地高。图8-9为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各氨基酸的D-体浓度相对于D-体浓度和L-体的浓度之和的百分率(%D)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比DAO酶缺损小鼠显著地高。图8-10为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部L-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总L)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比DAO酶缺损小鼠显著地高。图8-11为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于全部D-氨基酸的浓度之和的百分率(%D/总D)进行比较的表。图8-12为将D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠3只(DAO+/+1、DAO+/+2和DAO+/+3)、与D-氨基酸氧化酶(DAO)缺损小鼠3只(DAO-/-1、DAO-/-2和DAO-/-3)的尿中的各D-氨基酸浓度相对于D-天冬酰胺浓度的百分率(%D/D-Asn)进行比较的表。关于D-丝氨酸、D-别苏氨酸、D-丙氨酸、D-脯氨酸、D-亮氨酸和D-苯基丙氨酸,与D-氨基酸氧化酶(DAO)野生型小鼠相比DAO酶缺损小鼠显著地高。
2.6D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠
图9-1、9-2、9-3和9-4分别为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)野生型小鼠(DDO+)个体4只中的第1只、第2只、第3只和第4只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。图9-5、9-6、9-7和9-8分别为表示D-天冬氨酸氧化酶(DDO)缺损小鼠(DDO-)个体4只中的第1只、第2只、第3只和第4只的尿中全部氨基酸光学异构体含量分析结果的波形图。显示在DDO缺损小鼠的尿中,与野生型小鼠的尿中相比D-天冬酰胺浓度高,D-天冬氨酸和D-精氨酸的浓度也高。作为DDO酶的良好底物的D-谷氨酸在DDO缺损小鼠的尿中几乎未确认到。
由以上的2.5和2.6的结果可知,由于作为D-氨基酸代谢酶的DAO和DDO的缺损,特异性的D-氨基酸的浓度分别发生变化。即可以认为,通过控制它们的酶活性,可以控制特异性的D-氨基酸的浓度。
2.7苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠
图10-1为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-2为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-3为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-4为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-5为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于D-苯基丙氨酸浓度,与对照小鼠相比苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图10-6为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-7为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-8为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-9为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-10为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于L-苯基丙氨酸的浓度,与对照小鼠相比苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。
图10-11为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-12为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-13为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-14为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-15为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-16为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-17为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-18为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-19为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图10-20为表示苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠(苯基丙氨酸羟化酶(PAH)突变小鼠,Pahenu2/Pahenu2,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于L-苯基丙氨酸浓度,与对照小鼠相比苯丙酮酸尿症疾病模型小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。
2.8枫糖尿症疾病模型小鼠
图11-1为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-2为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-3为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的D-异亮氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,p小于0.05。图11-4为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-5为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-6为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的L-缬氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,p小于0.01。图11-7为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的L-别异亮氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图11-8为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的L-异亮氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图11-9为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的L-亮氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,p小于0.05。图11-10为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-11为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于血浆中的D-异亮氨酸浓度,枫糖尿症小鼠比对照小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图11-12为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-13为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-14为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图11-15为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的血浆中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。
图12-1为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-2为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-3为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的D-异亮氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠高,关于显著性差异,p小于0.05。图12-4为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-5为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-苯基丙氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-6为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的L-缬氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图12-7为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的L-别异亮氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图12-8为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的L-异亮氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠高,关于显著性差异,p小于0.05。图12-9为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,Dbttm1Geh/Dbttm1Geh,涂黑)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的L-亮氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠高,关于显著性差异,P小于0.01。图12-11为表示枫糖尿症小鼠中间型(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的D-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。关于尿中的D-异亮氨酸浓度,与对照小鼠相比枫糖尿症小鼠中间型高,关于显著性差异,p小于0.05。图12-12为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-缬氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-13为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-别异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-14为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-异亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。图12-15为表示枫糖尿症小鼠(支链α-酮酸脱氢酶(BCKDH)突变小鼠,+/Dbttm1Geh,涂灰)和对照小鼠(涂白)各5只的尿中的L-亮氨酸浓度(纳摩尔/mL)和标准误差的棒图。