WO2009142184A1 - 酵素を用いたビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の製造方法 - Google Patents

酵素を用いたビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の製造方法 Download PDF

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WO2009142184A1
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三晃 廣塚
冗二 佐々木
裕章 神山
もと子 押田
孝明 石井
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大正製薬株式会社
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    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
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    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/18—All rings being cycloaliphatic the ring system containing six carbon atoms

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a bicyclo [3.1.0] hexane derivative, which is a metabotropic glutamate receptor modulator useful as a medicine.
  • the present invention also relates to a novel intermediate compound produced in this production process.
  • Excitatory amino acids such as glutamate regulate various physiological processes in the mammalian central nervous system (CNS) such as long-term potentiation (learning and memory), development of synaptic plasticity, motor control, respiration, cardiovascular regulation and perception .
  • CNS central nervous system
  • Glutamate acts through at least two different classes of receptors.
  • One class is the ion channel glutamate (iGlu) receptor, which functions as a ligand-gated ion channel.
  • the second class is G protein or second messenger binding “metabolic” glutamate (mGluR) receptors.
  • iGlu ion channel glutamate
  • mGluR second messenger binding “metabolic” glutamate
  • mGluR modulators are schizophrenia, anxiety, depression, manic depression, epilepsy, drug addiction, cognitive impairment, Alzheimer's disease, Huntington's chorea, Parkinson's disease, movement disorders associated with muscular rigidity, brain imagination It is useful for the prevention or treatment of nervous system diseases such as blood, brain damage or head trauma.
  • 2-amino-6-fluorobicyclo [3.1.0] hexane derivatives represented by the following formula (IA) and pharmaceutically acceptable salts thereof are disclosed as mGluR agonists (see Patent Document 1). .
  • R 11 and R 12 are each (1) hydrogen; (2) a C 1-10 alkyl group; (3) a C 3-8 cycloalkyl group; and (4) a C 3-8 cycloalkyl-C 1-5 alkyl group.
  • Patent Document 1 describes that the compound of the present invention may be a racemate or an enantiomer.
  • Patent Document 1 a plurality of reports have been made on methods for preparing the above-mentioned mGluR modulators and intermediates on the laboratory scale (see Patent Document 2 and Non-Patent Document 3).
  • the mGluR modulator disclosed in Patent Document 1 is useful as a therapeutic agent, it can be easily scaled up and cost-effective and safe reagents can be used in the production method of these compounds. There is a need to develop methods that can be put into practical use and mass-produced.
  • the present invention A process for producing a bicyclo [3.1.0] hexane derivative represented by the formula (I) and a salt thereof,
  • R 1 is (1) -OH, (2) —O—R a or (3) —NR b R c
  • R a is a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is unsubstituted or one or more C 1-6 alkoxy groups) Substituted with a hydroxyl group, a halogen, an aryl group or a heteroaryl group).
  • R b and R c are the same or different and each represents hydrogen, halogen, a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is Unsubstituted or substituted with one or more hydroxyl groups, C 1-6 alkoxy groups, aryl groups or heteroaryl groups).
  • R b and R c together with the adjacent nitrogen atom form a 4- to 7-membered saturated heterocyclic ring bonded to each other (the saturated heterocyclic ring is unsubstituted or a hydroxyl group, a C 1-6 alkyl group or Substituted with a C 1-6 alkoxy group),
  • R 2 and R 3 are the same or different and each represents hydrogen, a C 1-6 alkyl group, a C 3-8 cycloalkyl group, or — (CH 2 ) m -phenyl group; m is 0, 1 or 2.
  • R 1 is as defined in Formula (I);
  • R 4 represents hydrogen, a C 1-6 alkyl group, a C 3-8 cycloalkyl group or — (CH 2 ) n -phenyl group (the C 1-6 alkyl group, C 3-8 cycloalkyl group or — (CH 2 ) n -phenyl group is unsubstituted or substituted with one or more halogen, hydroxyl group, C 1-6 alkyl group or C 1-6 alkoxy group).
  • n is 0, 1 or 2.
  • R 5 is hydrogen or Si— (R 6 ) (R 7 ) (R 8 ), R 6 , R 7 and R 8 are the same or different and are a C 1-6 alkyl group or a phenyl group. )
  • the present invention also provides: It is a production method comprising a step of converting a compound represented by the formula (II) into a compound represented by the formula (III).
  • the present invention also provides: A process for producing a compound represented by formula (VII) and a salt thereof,
  • R 1 is (1) -OH, (2) —O—R a or (3) —NR b R c
  • R a is a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is unsubstituted or one or more C 1-6 alkoxy groups) Substituted with a hydroxyl group, a halogen, an aryl group or a heteroaryl group).
  • R b and R c are the same or different and each represents hydrogen, halogen, a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is Unsubstituted or substituted with one or more hydroxyl groups, C 1-6 alkoxy groups, aryl groups or heteroaryl groups).
  • R b and R c together with the adjacent nitrogen atom form a 4- to 7-membered saturated heterocyclic ring bonded to each other (the saturated heterocyclic ring is unsubstituted or a hydroxyl group, a C 1-6 alkyl group or Substituted with a C 1-6 alkoxy group).
  • the present invention also provides: A process for producing a compound represented by formula (II) and a salt thereof, (A) reacting a compound represented by formula (VIII) with a compound represented by formula (IX) to obtain a mixture comprising a compound represented by formula (Xa) and a compound represented by formula (Xb);
  • R 9 and R 10 are the same or different, (1) -OH, (2) —O—R a or (3) —NR b R c
  • R a is a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is unsubstituted or one or more C 1-6 alkoxy groups) Substituted with a hydroxyl group, a halogen, an aryl group or a heteroaryl group).
  • R b and R c are the same or different and each represents hydrogen, halogen, a C 1-6 alkyl group or a C 3-8 cycloalkyl group (the C 1-6 alkyl group or C 3-8 cycloalkyl group is Unsubstituted or substituted with one or more hydroxyl groups, C 1-6 alkoxy groups, aryl groups or heteroaryl groups). Or R b and R c together with the adjacent nitrogen atom form a 4- to 7-membered saturated heterocyclic ring bonded to each other (the saturated heterocyclic ring is unsubstituted or a hydroxyl group, a C 1-6 alkyl group or Substituted with a C 1-6 alkoxy group). )
  • the present invention also provides: It comprises a step of reacting a compound represented by formula (VIII) with a compound represented by formula (IX) and converting it to a mixture comprising the compound represented by formula (Xa) and the compound represented by formula (Xb). It is a manufacturing method.
  • the present invention is also a compound represented by the formula (II), (III), (IV) and (VI) and a salt thereof.
  • the present invention also relates to a method for producing a compound represented by formula (III) and a salt thereof,
  • R 4 and R 4a are the same or different and each represents hydrogen, a C 1-6 alkyl group, a C 3-8 cycloalkyl group, or — (CH 2 ) n -phenyl group (the C 1-6 alkyl group, C 3-8 cycloalkyl group or — (CH 2 ) n -phenyl group is unsubstituted or substituted with one or more halogen, hydroxyl group, C 1-6 alkyl group or C 1-6 alkoxy group Has been.)
  • the compounds and salts thereof are intermediates prepared in the synthesis of bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR modulators and salts thereof of formula (IA).
  • a compound represented by the formula (IA) and a salt thereof can be produced from a compound represented by the formula (I) or a compound represented by the formula (VII) and a salt thereof by a method described in the literature (patent Reference 3, Non-Patent Documents 2 and 3).
  • a bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR regulator can be produced without using an expensive optically active transhydroxy ester as a raw material. That is, the compound of the formula (VIII) which is a starting material may be an optically active substance or a racemate, and an intermediate mesodiol body (a compound of the formula (II)) having no optical activity could be produced from this starting material. Then, it was found that the compound of formula (III) can be produced from the compound of formula (II) by an asymmetric acylation method using an enzymatic mesotric method using an enzyme derived from a specific microorganism. Asymmetric synthesis is now possible.
  • C 1-6 alkyl group refers to a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec A group such as -butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl or n-hexyl;
  • C 3-8 cycloalkyl group refers to a cyclic alkyl group having 3 to 8 carbon atoms, for example, a group such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, or cyclooctyl.
  • C 1-6 alkoxy group refers to a linear or branched alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, A group such as sec-butoxy, tert-butoxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, neopentyloxy or n-hexyloxy is shown.
  • Halogen means fluorine, chlorine and bromine.
  • Aryl group refers to an aromatic hydrocarbon substituent, which can be monocyclic or polycyclic (preferably monocyclic to tricyclic), and the rings in the polycyclic are fused or fused. It does not have to be. For example, a group such as phenyl, naphthyl or biphenyl is shown.
  • Heteroaryl group refers to an aromatic ring having at least one heteroatom (nitrogen, oxygen or sulfur) in the ring skeleton.
  • a heteroaryl group can be monocyclic or polycyclic (preferably monocyclic to tricyclic), and the rings in the polycyclic ring may or may not be fused.
  • groups such as pyrrole, pyrazole, imidazole, pyridine, pyrazine, pyrimidine, furan, pyran, oxazole, isoxazole, purine, benzimidazole, quinoline, isoquinoline, indole and the like are shown.
  • the substituent may be bonded to the carbon atom constituting the ring of the heteroaryl group, or bonded to the nitrogen atom constituting the ring. And may have a substitutable valence.
  • the substituent is preferably bonded to a carbon atom constituting the ring.
  • the “4- to 7-membered saturated heterocycle bonded to each other together with the adjacent nitrogen atom” refers to a group such as azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl or azepanyl.
  • microbe-derived enzyme refers to an enzyme derived from a microorganism such as a fungus or a bacterium, and can be obtained from an extract obtained by grinding these microorganisms or a culture supernatant of these microorganisms. Enzymes include lipase and acylase, but are not limited to one type, and a plurality of enzymes may coexist. Examples of fungi include Candida genus, Aspergillus genus, Thermomyces genus, Penicillium genus, Dietericum genus, Galactomyces genus and Humicola genus. Examples of bacteria include the genus Burkholderia.
  • the “carrier” is not particularly limited as long as it is a carrier capable of immobilizing an enzyme.
  • Celite which is diatomaceous earth calcined with sodium carbonate, or kaolin mineral under hydrochloric acid acidity.
  • toyonite which is a porous ceramic-based carrier obtained by granulating and firing it after hydrothermal treatment. Toyonite can easily modify the surface of its particles with various organic functional groups.
  • Various enzymes can be more selectively immobilized by changing the type of the organic functional group of the coupling agent used for modifying the surface of toyonite (methacryloyloxy group, phenylamino group, amino group, etc.). By immobilizing the enzyme on a simple substance such as celite or toyonite, the stability and reaction activity of the enzyme are increased.
  • Salt means, for example, a salt with an inorganic acid such as sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, nitric acid, acetic acid, oxalic acid, lactic acid, tartaric acid, fumaric acid, maleic acid, citric acid, benzenesulfonic acid , Methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, ethanesulfonic acid, glucoheptonic acid, gluconic acid, glutamic acid, glycolic acid, malic acid, malonic acid, mandelic acid, galactaric acid, naphthalene-2-sulfone
  • a salt with an organic acid such as an acid, a salt with one or more metal ions such as lithium ion, sodium ion, potassium ion, calcium ion, magnesium ion, zinc ion, aluminum ion, ammonia, arg
  • Enantiomerically pure means that the target enantiomer is at least 50% e. e. (Enantiomeric excess) or more, preferably 80% e.e. e. Or more, more preferably 90% e.e. e. That means it exists.
  • the bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR modulators and salts thereof represented by the formula (IA) can be produced from the compounds represented by the formula (I) by methods known in the prior art.
  • WO05 / 47215 describes a method for synthesizing a compound represented by formula (IA) using a compound represented by formula (I).
  • R 1 is a methoxy group, an ethoxy group or a benzyloxy group. More preferably, R 1 is a methoxy group or an ethoxy group, and particularly preferably, R 1 is a methoxy group.
  • R 2 and R 3 are selected from the group consisting of a methyl group and a phenyl group.
  • R 2 and R 3 are preferably the same substituent, and more preferably R 2 and R 3 are phenyl groups.
  • R 4 is a methyl group.
  • R 5 is hydrogen and a trimethylsilyl group.
  • the bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR modulators represented by the formula (IA) and salts thereof can be produced from the compound of the above formula (VII) by methods known in the prior art. For example, Nakazato et al., J. Med. Chem., 43, 4893-4909, (2000). Describes a method for synthesizing a compound represented by formula (IA) using a compound represented by formula (VII). ing.
  • R 1 is preferably a methoxy group, an ethoxy group, or a benzyloxy group, more preferably R 1 is a methoxy group or an ethoxy group, and particularly preferably R 1 is a methoxy group.
  • the R 4 group is a methyl group.
  • the bicyclo [3.1.0] hexane derivative represented by the formula (I) and the formula (VII) is obtained from the [3.1.0] hexane derivative represented by the formula (III) and a salt thereof using the above-described method. Can be manufactured.
  • R 1 is preferably a methoxy group, an ethoxy group, or a benzyloxy group, more preferably R 1 is a methoxy group or an ethoxy group, and particularly preferably R 1 is a methoxy group.
  • R 4 is a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a heptyl group, a monochloromethyl group, or a phenyl group. More preferably, R 4 is a methyl group.
  • R 1 is a methoxy group, an ethoxy group and a benzyloxy group, more preferably R 1 is a methoxy group or an ethoxy group, and particularly preferably R 1 is a methoxy group.
  • R 9 and R 10 are a methoxy group, an ethoxy group, or a benzyloxy group.
  • R 9 and R 10 are preferably the same substituent, and particularly preferably, R 9 and R 10 are methoxy groups.
  • R 1 , R 9 and R 10 are as defined above.
  • the compound represented by the formula (VIII) may be an optically active substance or a non-optically active substance.
  • the compound represented by formula (VIII) can be synthesized by oxidizing cyclopentadiene with a peracid such as peracetic acid (J. Am. Chem. Soc., 82, 4328, (1960). Org. Synth., 42, 50, (1962)., Org. Lett., 7, 4573, (2005).).
  • an optically active form of the compound represented by the formula (VIII) can be synthesized, for example, by asymmetric oxidation of cyclopentadiene in the presence of a metal catalyst (Synlett, 827, (1995)., Tetrahedron Letters, 37, 7131, ( 1996), JP 09-052887).
  • a mixture of the compound represented by formula (Xa) and the compound represented by formula (Xb) is obtained.
  • the base used in the reaction include alkali metal alkoxides such as sodium methoxide, sodium ethoxide and potassium tert-butoxide, alkali metal hydrides such as sodium hydride and potassium hydride, sodium hydroxide, potassium hydroxide and the like
  • alkali metal hydroxides organic amines such as 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene, and amine metal salts such as lithium diisopropylamide and lithium hexamethyldisilazide, preferably alkali metals.
  • Alkoxides are used, more preferably alkali metal methoxide or alkali metal ethoxide, and still more preferably sodium methoxide.
  • the amount of the base used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually in the range of 0.5 to 5 molar equivalents relative to the compound represented by the formula (VIII). Preferably in the range of 1 to 3 molar equivalents, more preferably in the range of 1 to 2 molar equivalents.
  • the amount of the compound represented by the formula (IX) used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but it is generally 0.5% relative to the compound represented by the formula (VIII). It can be used in the range of 5 to 5 molar equivalents, preferably in the range of 1 to 3 molar equivalents, more preferably in the range of 1 to 2.5 molar equivalents.
  • the solvent used in the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction, but the compound represented by the formula (Xa) and the formula (X Since the yield of the mixture of compounds shown in Xb) depends on the type of solvent, preferably alcohols are used, more preferably methanol as a solvent.
  • the amount of the reaction solvent to be used is generally 1 to 100 times by mass, preferably 5 to 30 times by mass with respect to the compound represented by the formula (VIII).
  • the reaction temperature is usually from ⁇ 80 ° C. to the boiling point of the solvent used, but is preferably in the range of ⁇ 20 to 60 ° C., more preferably in the range of 20 to 40 ° C. .
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the mixture of the compound represented by the formula (XIa) and the compound represented by the formula (XIb), which is a product, depends on the type of the solvent, preferably water and polar organic solvents, more preferably water and Dimethyl sulfoxide, more preferably water and dimethyl sulfoxide mixed in a range of 0: 5 to 1: 5 is used.
  • the reaction solvent can be used usually in an amount of 1 to 100 times by mass, preferably 1 to 20 times by mass of the mixture of the compound represented by the formula (Xa) and the compound represented by the formula (Xb). The range is more preferably 1 to 10 times mass.
  • the reaction temperature is usually from 80 ° C. to 200 ° C., preferably 90 to 160 ° C., more preferably 100 to 130 ° C.
  • the reaction can be carried out in a pressure-resistant vessel such as an autoclave.
  • this reaction is promoted by adding an additive.
  • the additive that can be used include salts, preferably lithium chloride, sodium chloride, potassium chloride, lithium bromide, sodium bromide, bromide.
  • Alkali metal halide salts such as potassium, lithium iodide, sodium iodide and potassium iodide, alkali metal cyanide salts such as sodium cyanide, tetra n-butylammonium chloride, tetra n-butylammonium bromide, tetraiodide Quaternary ammonium salts such as n-butylammonium and organic amine salts such as triethylamine hydrochloride or a mixture thereof.
  • alkali metal halide salts such as sodium chloride and an acid such as acetic acid may be used in combination.
  • the amount of the additive used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually a mixture of the compound represented by the formula (Xa) and the compound represented by the formula (Xb).
  • This reaction proceeds by adding an oxidizing agent such as tert-butyl hydroperoxide in the presence of a catalyst such as vanadyl acetylacetonate (VO (acac) 2 ).
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the mixture of the compound represented by the formula (XIIa) and the compound represented by the formula (XIIb), which is a product, depends on the type of the solvent, preferably aromatic hydrocarbons and halogenated hydrocarbons are used. More preferably, chlorobenzene or toluene is used, and still more preferably chlorobenzene is used.
  • reaction solvent With respect to the use amount of the reaction solvent, it can be used 3 to 100 times by mass, preferably 3 to 20 times by mass with respect to the mixture of the compound represented by the formula (XIa) and the compound represented by the formula (XIb). The range is more preferably 5 to 10 times mass.
  • the reaction temperature can usually be 0 ° C. to 100 ° C., preferably 30 to 80 ° C., more preferably 50 to 60 ° C.
  • the amount of the oxidizing agent to be used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually a mixture of the compound represented by the formula (XIa) and the compound represented by the formula (XIb). 1 to 3 molar equivalents can be used, preferably in the range of 1 to 2 molar equivalents.
  • the amount of the catalyst used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but it is usually a mixture of the compound represented by the formula (XIa) and the compound represented by the formula (XIb). It can be used in an amount of 0.01 to 1 molar equivalent, preferably 0.2 to 0.5 molar equivalent.
  • epoxidation of the mixture of the compound represented by the formula (XIa) and the compound represented by the formula (XIb) can be carried out by using N-bromosuccinimide, N-iodosuccinimide, etc. in an appropriate solvent (for example, a mixture of dimethyl sulfoxide and water). It can also be carried out by treatment with a base such as 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene, after making the halogenating agent act to make a halohydrin derivative.
  • the compound represented by the formula (II) is obtained by subjecting a mixture of the compound represented by the formula (XIIa) and the compound represented by the formula (XIIb) to an intramolecular cyclopropanation reaction involving ring opening of the epoxide. It is done. This reaction proceeds by adding a base in the presence of a Lewis acid.
  • a mixture of a compound represented by the formula (XIIa) and a compound represented by the formula (XIIb) is treated with a Lewis acid, and then a base is added.
  • the compound represented by the formula (II) is obtained as a desired stereoisomer.
  • Lewis acids examples include R 3 Al, R 2 AlX, RAlX 2 , Al (OR) 3 , Ti (OR) 4 , RTi (OR) 3 , R 2 Ti (OR) 2 , BF 3 ether complex, Et 2 Zn and Sc (OTf) 3 and the like are mentioned, and Et 3 Al, Al (OiPr) 3 , Ti (OiPr) 4 , BF 3 ether complex, Et 2 Zn and Sc (OTf) 3 and the like are preferable. More preferred are Et 3 Al, Et 2 AlCl and Et 2 Zn, and further preferred is Et 3 Al.
  • X is a halogen or an inorganic radical
  • R is a hydrocarbon group.
  • the amount of Lewis acid used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but usually a mixture of a compound represented by the formula (XIIa) and a compound represented by the formula (XIIb) Can be used in the range of 1 to 5 molar equivalents, preferably in the range of 1.5 to 3 molar equivalents, more preferably in the range of 2 to 2.5 molar equivalents.
  • Examples of the base include lithium hexamethyldisilazide and lithium diisopropylamide, preferably lithium hexamethyldisilazide.
  • the amount of the base used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but it is usually a mixture of the compound represented by the formula (XIIa) and the compound represented by the formula (XIIb). It can be used in the range of 1 to 5 molar equivalents, preferably in the range of 1.5 to 3 molar equivalents, more preferably in the range of 2 to 2.5 molar equivalents.
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the compound represented by the formula (II) as a product depends on the kind of the solvent, an ether solvent such as THF is preferably used. With respect to the use amount of the reaction solvent, it can be used 1 to 100 times by mass, preferably 3 to 20 times by mass with respect to the mixture of the compound represented by the formula (XIIa) and the compound represented by the formula (XIIb). The range is preferably 5 to 10 times by mass.
  • the reaction temperature can usually be from ⁇ 80 ° C. to 0 ° C., but is preferably performed at ⁇ 60 ° C. to ⁇ 40 ° C.
  • the reaction time is usually 0.5 to 6 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 11 and R 12 are as defined above.
  • the compound represented by the formula (III) is obtained by reacting the compound represented by the formula (II) with an acyl donor in the presence of an enzyme.
  • stereoselective acylation can be carried out by reacting the compound represented by formula (II) with an acyl group donor in an organic solvent or the like. It is also possible to use the enzyme as an immobilized enzyme in the reaction by immobilizing the enzyme on a carrier. In that case, after mixing the compound represented by the formula (II) with an acyl group donor in an organic solvent or the like, add the carrier on which the enzyme is immobilized in the mixed solution and stir, or the enzyme is immobilized. A stereoselective acylation reaction is carried out by filling the columnized carrier into the column and passing the mixture through the column.
  • the reaction can usually be performed at a temperature of ⁇ 20 ° C. to 60 ° C.
  • the organic solvent to be used is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield and optical purity of the compound represented by the formula (III), which is a product, depend on the type of solvent, organic compounds such as toluene, isopropyl ether, tetrahydrofuran, n-hexane, n-heptane, acetone, and chloroform are preferable.
  • Solvents and ionic fluids such as 1-butyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate and 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate (Org. Lett., 2, 4189, (2000)) is there.
  • acyl group donor examples include vinyl acetate, isopropenyl acetate, vinyl propionate, isopropenyl propionate, vinyl butyrate (vinyl butyrate), isopropenyl butyrate (isopropenyl butyrate), vinyl caproate, isocaproate Propenyl, vinyl caprate, isopropenyl caprate, vinyl caprylate, isopropenyl caprylate, vinyl chloroacetate, isopropenyl chloroacetate, vinyl pivalate, isopropenyl pivalate, etc. are preferred, with vinyl acetate being preferred.
  • the microorganism as the enzyme source is preferably a fungus or a bacterium. More preferably, the genera Candida, Aspergillus, Thermomyces, Penicillium, Humicola, Geotrichum, Galactomyces, and Burghol One or more fungi or bacteria selected from the group consisting of the genus Burkholderia, more preferably Candida antarctica, Aspergillus ger, Aspergillus ⁇ melleus, thermo Mrs.
  • the enzyme derived from a microorganism is preferably lipase or acylase, and particularly preferably lipase A derived from Candida antarctica.
  • the enzyme derived from a microorganism can be purified from an extract or culture supernatant obtained by grinding a microorganism according to a conventional method.
  • the microorganism-derived enzyme is not necessarily purified as a single product, and can be used as a crude enzyme. Enzymes can be used alone or in combination. Commercial products are also available.
  • NOVOZYM CALAL (trade name, obtained from Novozymes Japan)
  • NOVOZYM 735 (trade name, obtained from Novozymes Japan)
  • CHIRAZYME L-5 lyo (trade name, obtained from Roche Diagnostics) or Lipase A CLEA ( Product name, obtained from Sigma-Aldrich Japan) and the like.
  • NOVOZYM 435 (trade name, obtained from Novozymes Japan) and the like can be mentioned.
  • Lipase AS "Amano” (trade name, obtained from Amano Enzyme [a lipase derived from Aspergillus niger)]
  • Lipozym TL 100L IM (trade name, obtained from Novozymes Japan [Thermomyces ⁇ Immobilized lipase from Thermomyces langinosus])
  • Lipozym TL 100 (trade name, available from Novozymes Japan [lipase from Thermomyces langinosus])
  • CHIRAZYME L8 Lyo (trade name, Roche) ⁇ Obtained from Diagnostic (Humicola sp.
  • Lipase Lipase
  • Lipase G Lipase G "Amano” (trade name, obtained from Amano Enzyme [Penicillium camemberti lipase]) and Lipase PS "Amano” SD (trade name, obtained from Enzyme [Burkholderia cepacia lipase]) Etc.
  • acylase examples include Acylase 15000 “Amano” (trade name, obtained from Amano Enzyme [acylase derived from Aspergillus melleus]) and the like.
  • the microorganism-derived enzyme can be immobilized on a carrier and used as an immobilized enzyme.
  • the carrier used for enzyme immobilization include Celite or Toyonite (Toyonite 200, Toyonite 200P, Toyonite 200M, Toyonite 200A (available from Toyo Denka Kogyo Co., Ltd.)).
  • the specific microorganism is preferably, for example, Geotrichumumcandidum, Geotrichum ⁇ eriense, Geotrichum fermentans, or Galactomyces geotrichum.
  • the compound represented by the formula (IV) is obtained by reacting the compound represented by the formula (III) with an oxidizing agent in the presence of a catalyst.
  • a catalyst include RuCl 3 and 2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl (TEMPO).
  • the amount of the catalyst used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually in the range of 0.001 to 1 molar equivalent relative to the compound represented by the formula (III). In the range of 0.01 to 0.1 molar equivalent.
  • the oxidizing agent is sodium hypochlorite.
  • the amount of the oxidizing agent used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but it is usually within a range of 1 to 3 molar equivalents relative to the compound represented by the formula (III). It can be used and is preferably in the range of 1 to 1.5 molar equivalents.
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the compound represented by the formula (IV) as a product depends on the kind of the solvent, it is preferably dichloromethane, chloroform, chlorobenzene, acetonitrile or the like, more preferably dichloromethane.
  • the said solvent can be used individually by 1 type or in mixture of 2 or more types. With respect to the use amount of the reaction solvent, it can be used 1 to 100 times by mass, preferably 3 to 10 times by mass with respect to the compound represented by the formula (III).
  • the reaction temperature is usually from ⁇ 20 ° C. to 50 ° C., preferably from ⁇ 20 ° C. to 20 ° C., more preferably from ⁇ 10 ° C. to 0 ° C.
  • the reaction time is usually 0.5 to 6 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • the oxidation reaction of the hydroxyl group of the compound represented by the formula (III) can be performed by a method well known by those skilled in the art (for example, Swern oxidation) to obtain the compound represented by the formula (IV).
  • the compound represented by the formula (VI) is obtained by reacting the compound represented by the formula (IV) with the compound represented by the formula (V) in the presence of an acid catalyst.
  • the acid catalyst examples include trifluoromethanesulfonic acid and trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate.
  • the amount of the acid catalyst to be used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but usually 0.01 to 1 molar equivalent of the compound represented by the formula (IV). A range of 0.05 to 0.5 molar equivalents is preferable, and a range of 0.1 to 0.3 molar equivalents is more preferable.
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the compound represented by the formula (VI) as a product depends on the kind of the solvent, dichloromethane, toluene and the like are preferably used.
  • the said solvent can be used individually by 1 type or in mixture of 2 or more types. In some cases, an appropriate dehydrating agent or desiccant can be used as a non-aqueous solvent. With respect to the use amount of the reaction solvent, it can be used 1 to 100 times by mass, preferably 5 to 20 times by mass, the compound represented by the formula (IV).
  • the reaction temperature is usually from ⁇ 20 ° C. to 50 ° C., preferably from ⁇ 10 ° C. to 30 ° C., more preferably from ⁇ 10 ° C. to 0 ° C.
  • Examples of the compound represented by the formula (V) include (1S, 2S) -1,2-diphenylethane-1,2-diol, (4S, 5S) -2,2,7,7-tetramethyl-4 , 5-Diphenyl-3,6-dioxa-2,7-disilaoctane, (2S, 3S) -butane-2,3-diol and (4S, 5S) -2,2,4,5,7,7-hexamethyl -3,6-dioxa-2,7-disilaoctane.
  • the amount of the compound represented by the formula (V) is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction. It can be used in the range of 3 molar equivalents, preferably in the range of 1 to 2 molar equivalents.
  • the compound represented by the formula (I) is obtained by removing the protecting group of the hydroxyl group of the compound represented by the formula (VI) in the presence of a base.
  • the base examples include alkali metal carbonates such as sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate and potassium carbonate, alkali metal alkoxides such as sodium methoxide, sodium ethoxide and potassium tert-butoxide, sodium hydride, Alkali metal hydrides such as potassium hydride, alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide and potassium hydroxide, organic amines such as triethylamine and 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene
  • alkali metal carbonates such as sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate and potassium carbonate are used, and more preferably sodium hydrogen carbonate is used.
  • the amount of the base used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually in the range of 0.1 to 3 molar equivalents relative to the compound represented by the formula (VI). Preferably in the range of 0.5 to 1.5 molar equivalents.
  • the solvent used for the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction. Since the yield of the compound represented by the formula (VI), which is a product, depends on the type of solvent, alcohols such as methanol, ethanol and 2-propanol are preferably used, and methanol is more preferably used.
  • the said solvent can be used individually by 1 type or in mixture of 2 or more types. With respect to the use amount of the reaction solvent, it can be used 1 to 100 times by mass, preferably 5 to 20 times by mass, the compound represented by the formula (IV).
  • the reaction temperature is usually from 0 to 100 ° C., preferably 30 to 60 ° C., more preferably 40 to 50 ° C.
  • the reaction time is usually 0.5 to 10 hours, preferably 1 to 3 hours.
  • the bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR modulators represented by the formula (IA) and salts thereof can be produced from the compound of the formula (I) by methods known in the prior art. For example, in WO05 / 47215 and Yasuda et al., J. Org. Chem., 70, 8027, (2005). Using the compound shown in formula (I), the compound shown in formula (IA) was synthesized. How to do is described.
  • R 1 , R 4 , R 11 and R 12 are as defined above.
  • the method for producing the compound represented by the formula (IV) from the compound represented by the formula (II) is as described above.
  • the base examples include organic amines such as triethylamine and 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene.
  • the amount of the base used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually in the range of 0.5 to 3 molar equivalents relative to the compound represented by the formula (IV). Preferably in the range of 0.8 to 1.2 molar equivalents.
  • the acid examples include trifluoromethanesulfonic acid and silica gel.
  • the amount of the acid used is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction and does not cause a side reaction, but is usually in the range of 0.1 to 3 molar equivalents relative to the compound represented by the formula (IV). Can be used in
  • the solvent used in the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction.
  • dichloromethane or methanol is used.
  • the bicyclo [3.1.0] hexane derivative mGluR modulators represented by the formula (IA) and salts thereof can be produced from the compound of the above formula (VII) by methods known in the prior art. For example, Nakazato et al., J. Med. Chem., 43, 4893-4909, (2000). Describes a method for synthesizing a compound represented by formula (IA) using a compound represented by formula (VII). ing.
  • R 1 , R 4 and R 4a are as defined above.
  • This reaction gives the desired stereoisomer in the presence of a suitable enzyme.
  • the compound represented by the formula (XIII) is reacted with an acyl group acceptor in the presence of an enzyme as an acyl group donor to thereby produce two acyl groups of the compound represented by the formula (XIII). Only one of them is selectively eliminated to obtain a compound represented by the formula (III).
  • an enzyme having stereoselective transesterification ability produced by a microorganism is used. It is also possible to use the enzyme as an immobilized enzyme in the reaction by immobilizing the enzyme on a carrier. In that case, the compound represented by the formula (XIII) is mixed with an acyl group acceptor in an organic solvent or the like, and then the carrier on which the enzyme is immobilized is added to the mixture and stirred, or the enzyme is immobilized.
  • a stereoselective transesterification reaction is carried out by filling the formed carrier into a column and passing the mixture through the column. The reaction temperature is usually ⁇ 20 ° C. to 60 ° C.
  • the organic solvent used in the reaction is not particularly limited as long as it is stable under the reaction conditions and does not interfere with the target reaction.
  • an organic solvent such as toluene, isopropyl ether, tetrahydrofuran, n-hexane, n-heptane, acetone, chloroform, or 1-butyl-3- Ionic fluids (Org. Lett., 2, 4189, (2000)) such as methylimidazolium hexafluorophosphate and 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate.
  • Particularly preferred is isopropyl ether.
  • acyl group acceptor examples include methanol, ethanol, n-propanol, benzyl alcohol, cyclopentanol, 2-propanol (isopropanol), 2-butanol, etc., preferably cyclopentanol, 2-propanol ( Isopropanol), 2-butanol.
  • the most desirable compound for the enzymatic reaction is cyclopentanol.
  • the microorganism as the enzyme source is preferably a fungus or a bacterium. More preferably, a group consisting of the genus Candida, Aspergillus, Alkaligenes, Pseudomonas, Dipodascus, Penicillium or Burkholderia
  • fungi or bacteria selected from Candida rugosa, Aspergillus niger, Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas fluorescens , Pseudomonas ⁇ sp., Penicillium roqueforti, Dipodascus australiensis, Alkaligenes p. Or Burkholderia ce It is one or more fungi or bacteria selected from the group consisting of shea (Burkholderia cepacia).
  • the microorganism-derived enzyme is preferably lipase or esterase, particularly preferably Alkaligenes p., Burkholderia cepacia, Pseudomonas fluorescens and Candida rugosa. rugosa) -derived lipase.
  • the enzyme derived from a microorganism can be purified from an extract or culture supernatant obtained by grinding a microorganism according to a conventional method.
  • the microorganism-derived enzyme is not necessarily purified as a single product, and can be used as a crude enzyme. Enzymes can be used alone or in combination. Commercial products are also available. Examples of lipase products derived from Alkaligenes p.
  • Lipase QLM (trade name, obtained from the name sugar industry).
  • lipase products derived from Burkholderia cepacia include Lipase PS “Amano” SD (trade name, obtained from Amano Enzyme).
  • lipase products derived from Pseudomonas fluorescens include Lipase AK “Amano” 20 (trade name, obtained from Amano Enzyme).
  • lipase products derived from Candida rugosa include Lipase AY “Amano” 30G (trade name, obtained from Amano Enzyme).
  • Lipase R “Amano” (trade name, obtained from Amano Enzyme [Penicillium roqueforti lipase]
  • Lipase TL (trade name, obtained from the name sugar industry [Pseudomonas stutzeri (Lipase derived from Pseudomonas stutzeri)
  • Lipase AS “Amano” (trade name, obtained from Amano Enzyme [lipase derived from Aspergillus niger]) and the like.
  • esterases examples include CHE “Amano” 2 (sample name, obtained from Amano Enzyme [Esterase derived from Pseudomonas sp.)].
  • the microorganism-derived enzyme can be immobilized on a carrier and used as an immobilized enzyme.
  • the carrier used for enzyme immobilization include Celite or Toyonite (Toyonite 200, Toyonite 200P, Toyonite 200M, Toyonite 200A (available from Toyo Denka Kogyo Co., Ltd.)).
  • the immobilized enzyme obtained by immobilizing the above-mentioned commercially available lipase the culture solution obtained by culturing the microorganism Dipodascus australiensis NBRC (NBRC) 10805 Those having the enzyme immobilized by the action of the carrier can also be mentioned as enzymes having transesterification ability.
  • the starting materials and reagents may be commercially available products, those known in the literature, or those prepared by the methods described in the literature concerning similar compounds.
  • the reaction and purification of the product resulting from the reaction are by methods known to those skilled in the art. Purification methods include crystallization, distillation, normal phase or reverse phase chromatography.
  • Examples 1-4, 18 and 19 show the method of Scheme 1.
  • Examples 5-9 and 12-17 show the method of Scheme 2.
  • Examples 10 and 11 show the method of Scheme 3.
  • the concentrated residue was purified by flash silica gel column chromatography (eluent: toluene / ethyl acetate) to obtain 7.21 g of a mixture of the compound of formula 10a and the compound of formula 10b as a yellow oil.
  • IR 3506, 3032, 2959, 1758, 1639, 1440, 1408, 1364, 1288, 1226, 1098, 1077, 1012, 965, 917, 838, 802, 732, 668, 564, 444 cm -1 .
  • a 50 mL Sumilon tube (manufactured by Sumitomo Bakelite) was charged with 12.0 mL of NOVOZYM 735, 6.0 g of Toyonite 200M, and 30 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7), and shaken (100 rpm) at room temperature (25 ° C.) for 18 hours. After shaking, Kiriyama filter paper No. After filtration with 5B, the immobilized enzyme was obtained by drying under reduced pressure at room temperature for 4 days. 2.0 g of the obtained immobilized enzyme was packed in a 6 mL column (with Bond Elute Reservoir Frit: distributor GL Sciences).
  • a solution prepared by dissolving 3.1 g of the crystal of the compound of the formula 2 in 136.5 mL of vinyl acetate / acetone (10: 1) was attached to the column filled with the above-mentioned immobilized enzyme by attaching a silicon tube to a perista pump (Ato Co., Ltd.). Liquid).
  • the liquid feeding speed was 20 mL / hour.
  • 2.95 g (yield 79.05%) of the compound of formula 3 was obtained. e. I got it.
  • IR (KBr ): 3102, 2995, 1756, 1738, 1441, 1397, 1373, 1348, 1326, 1305, 1260, 1219, 1173, 1108, 1084, 1037, 1024, 1012, 983, 954, 907, 870, 829, 782, 738, 651, 640, 626, 474, 461 cm -1 .
  • TMSOTf trimethylsilyl
  • IR (KBr): 3456, 3068, 2964, 2916, 1737, 1606, 1497, 1456, 1442, 1359, 1330, 1258, 1238, 1197, 1133, 1102, 1053, 1024, 986, 936, 916, 870, 822, 791, 765, 755, 700, 683, 648, 608, 531, 466 cm -1 .
  • 0.1 mL (1.24 mmol) of pyridine was added and stirred at 0 ° C. for 20 minutes.
  • 1.6 mL of 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added, and the mixture was stirred at 0 ° C. for 20 minutes, followed by liquid separation.
  • the aqueous layer was re-extracted twice with 5 mL of dichloromethane, and the organic layers were combined and washed with 2 mL of water.
  • IR (KBr): 3568, 3065, 3030, 2957, 2888, 1737, 1607, 1497, 1446, 1379, 1324, 1306, 1230, 1145, 1111, 1055, 1026, 1012, 987, 913, 868, 824, 760, 699, 678, 647, 600, 540, 478 cm -1 .
  • Example 12 ⁇ Search for enzymes> 50 mg of the enzyme to be used for the test was put into a 10 mL test tube with a stopper, respectively, 2.7 mL of vinyl acetate, 0.3 mL of acetone, and 20 mg of the compound of formula 2 were added, and the mixture was stirred with a stirrer for 18 to 48 hours at 25 ° C 600 rpm). After completion of the reaction, the enzyme residue was removed by filtration using Excrodisc 25CR (Nippon Pole Co., Ltd., diameter 25 mm), the solution was dried under reduced pressure and dissolved in 1 mL of methanol, and a part thereof was taken for TLC analysis and HPLC analysis was performed. 41 kinds of enzymes described in Table 1, Table 2 and Table 3 were screened.
  • Example 13 ⁇ Enzyme immobilization study 1> Immobilization of NOVOZYM 735 (product name: manufactured by Novozymes Japan; derived from Candida antarctica Lipase A) by Toyonite Toyonite 200, Toyonite 200P, Toyonite 200M, Toyonite 200A 1g each of Sumilon tube (Sumitomo Bakelite) Into this, 18 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7) and 2 mL of NOVOZYME735 were added, and shaken at 120 ° C. for 15 hours at 10 ° C. After shaking, filter through Kiriyama funnel (using No.
  • Table 6 lists the production amount and optical purity of compounds in which the compound of formula 3 ′, which is an enantiomer different from the target product, was confirmed.
  • Lipase PS Amano SD was an enzyme that produces the compound of compound formula 3 ′ in Example 12, but the production of the compound of formula 3 was detected in this enzyme reaction in which the enzyme was immobilized.
  • no acetylation reaction was confirmed even when the enzyme was immobilized.
  • the target product of the formula 3 compound was remarkably obtained by immobilizing the enzyme. It was found in Table 5 that there was something to produce.
  • Example 15 ⁇ Immobilized enzyme study 3> 2 mL each of liquid enzyme (LIPOZYME TL100, NOVOZYM CALBL, NOVOZYM 735 (obtained from Novozymes Japan)) or 1 g of powder enzyme (Lipase AS “Amano” (obtained from Amano Enzyme)) in each Sumilon tube After mixing or dissolving in 10 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7), it was mixed with 1 g of Toyonite 200M or Toyonite 200P and shaken at 10 ° C. and 120 rpm for 22 hours. After shaking, each was filtered through Kiriyama filter paper No.
  • each immobilized enzyme 8 types.
  • 20 mg of each of the above 8 types of immobilized enzymes is put into a 10 mL test tube with a stopper, vinyl acetate 1.0 mL, acetone 0.1 mL, 20 mg of the compound of the formula 2 compound are added, 21 hours, 23 ° C., stirrer The reaction was carried out with stirring (600 rpm). After completion of the reaction, the immobilized enzyme was removed by filtration using Excrodisc 25CR (Nippon Pole Co., Ltd., diameter 25 mm), the solution was dried under reduced pressure, dissolved in 1 mL of methanol and analyzed by HPLC.
  • Table 7 shows the amount of the target product produced and the optical purity of the target product in which the compound of formula 3 was confirmed.
  • the compound of formula 3 and the compound of formula 3 ′ were not detected.
  • the compound of formula 3 was detected in all cases.
  • Candida antarctica Lipase A lyophilized enzyme, Chirazyme L-5 lyo (obtained from Roche Diagnostics) 12.5 mg, vinyl acetate / acetone (9: 1) solution 1.2 mL, crystals of compound of formula 2 54. 55 mg was put into a 10 mL sample tube with a lid, and the reaction was carried out by stirring with a stirrer at 570 rpm for 22 hours at 37 ° C. After completion of the reaction, the solid content was removed by filtration using Excrodisc 25CR (Nippon Pole Co., Ltd., diameter 25 mm), the solution was dried under reduced pressure, dissolved in 1 mL of methanol and analyzed by HPLC. As a result, the optical purity was 99.99% e.e. e. It was revealed that 47.78 mg of the compound of formula 3 was obtained.
  • Example 17 ⁇ Examination with immobilized enzyme packed in column> A 50 mL Sumilon tube (manufactured by Sumitomo Bakelite) was charged with 12.0 mL of NOVOZYM 735, 6.0 g of Toyonite 200M, and 30 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7), and shaken (100 rpm) at room temperature (25 ° C.) for 18 hours. After shaking, Kiriyama filter paper No. After filtration with 5B, the immobilized enzyme was obtained by drying under reduced pressure at room temperature for 4 days. 4.0 g of the obtained immobilized enzyme was packed into a 6 mL column (with Bond Elute Reservoir Frit: distributor GL Sciences, Inc.).
  • a solution obtained by dissolving 10.09 g of the crystal of the compound of formula 2 in 443 mL of vinyl acetate / acetone (10: 1) is attached to the column filled with the above-mentioned immobilized enzyme, and a peristaltic pump (manufactured by Atto Co., Ltd.) The liquid was sent.
  • the liquid feeding speed was 119 mL / hour.
  • 10.71 g (yield 88.34%) of the compound of Formula 3 was obtained and the optical purity was 97.58% e.e. e. Got in.
  • the immobilized enzyme-packed column after completion of the above liquid feeding was regenerated by drying under reduced pressure, and then stored at room temperature.
  • a solution prepared by dissolving 8.89 g of Compound 2 crystals in 356.5 mL of vinyl acetate / acetone (10: 1) was attached to the column filled with the immobilized enzyme, and a silicon tube was attached to the peristaltic pump (Ato Corporation). )).
  • the liquid feeding speed was 101 mL / hour.
  • 9.61 g (yield 89.90%) of the compound of Formula 3 was obtained and the optical purity was 98.54% e.e. e. I got it.
  • Example 18 ⁇ Preparation and search of immobilized enzyme: Analysis of conversion ability> 111 strains of filamentous fungi or yeast (strains derived from a total of 11 genera of Mucor, Rhizopus, Candida, Dipodascus, Galactomyces, Geotrichum, Kluyveromyces, Endomyces, Zygosaccharomyces, Pichia, Sporobolomyces) 3% defatted rice bran and corn stapler (Corn Steap liquor) 3%, soybean oil 1%, ammonium sulfate 0.2% (pH 6) In a 200 ml Erlenmeyer flask containing 40 ml of culture medium, the culture was aerated and stirred at 18 ° C.
  • each microorganism culture solution was individually transferred to a centrifuge tube, and the culture solution was centrifuged (8000 rpm, 12 to 15 minutes) into cells and cell supernatant using a centrifuge.
  • a centrifuge tube such as a Sumilon tube
  • 0.1 g of 1 M potassium phosphate buffer pH 7 and 0.5 g of carrier Toyonite 200M were added overnight at 25 ° C. (maximum 20 hours).
  • the target reaction was remarkably advanced when enzymes derived from the genera Geotrichum and Galactomyces were used.
  • Table 8 shows the strain, the production amount of the target product, and the optical purity of the target product in which a significant amount of the compound of Formula 3 was confirmed.
  • Example 19 ⁇ Continuous reaction experiment of immobilized enzyme>
  • a 500 mL plastic bottle with a lid add 100 mL of NOVOZYM CALAL (trade name: obtained from Novozymes Japan), 100 g of Toyonite 200M, 200 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7), and shake at room temperature (25 ° C.) for 18 hours. (160 rpm).
  • the immobilized enzyme was obtained by drying under reduced pressure at room temperature for 4 days.
  • 4.0 g of the obtained immobilized enzyme was packed into a 6 mL column (with Bond Elute Reservoir Frit: distributor GL Sciences, Inc.).
  • a solution was prepared by dissolving 81.00 g of the crystal of the compound of formula 2 in 2,700 mL of a solution containing 20% acetone in vinyl acetate.
  • the solution containing 81.0 g of the obtained formula 2 was fed to a column filled with the above immobilized enzyme using a silicon tube and a peristaltic pump (manufactured by Atto Co., Ltd.).
  • the liquid feeding speed was 102 mL / hour at maximum.
  • 86.73 g (yield: 89.1%) of the compound of Formula 3 was obtained and the optical purity was 97.14% e. e.
  • Lipase QLM, Lipase PS “Amano” SD, Lipase AK “Amano” 20, Lipase R “Amano”, Lipase AY “Amano” 30G and Lipase TL are commercially available in the same manner as in Example 14 and Toyonite 200M. Or it was used by immobilizing on Toyonite 200P. Further, the enzyme derived from the culture broth of the microorganism Dipodascus australiensis NBRC10805 was used by immobilizing it in Toyonite 200M by the method described in Example 18.
  • Dicyclopentadiene was placed in an eggplant-shaped flask and immersed in an oil bath set at 185 to 190 ° C. The component distilled at 39 to 41 ° C. was collected (trapped with a dry ice-acetone bath) to give cyclopentadiene as a colorless oil. 55.75 g (0.526 mol) of sodium carbonate was added to a solution of the obtained cyclopentadiene 19.041 g (0.288 mol) in dichloromethane (170 mL) and cooled to ⁇ 15 ° C. Peracetic acid (content 38.9%) 28.10 g (0.144 mol) was added. Meanwhile, the internal temperature was kept between -15 ° C and -10 ° C.
  • reaction solution was added to 265.08 g of 25% aqueous citric acid solution cooled to 5 ° C. over 20 minutes.
  • 270 mL of ethyl acetate was added to the reaction solution and stirred, followed by liquid separation. Extraction with 100 mL of ethyl acetate, the organic layers were combined, washed with 50 mL of water, and concentrated under reduced pressure to give methyl (1R, 2R, 4S, 5S, 6R) -2- ⁇ [tert-butyl ( 56.65 g of (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -6-fluoro-4-hydroxybicyclo [3.1.0] hexane-6-carboxylic acid (14a) was obtained.
  • a solution of the resulting compound of formula 14a in acetonitrile (185 mL) was cooled to 0 ° C. and 30 mL of 1N hydrochloric acid was added. After stirring at room temperature for 4.5 hours, 4% aqueous sodium hydrogen carbonate solution (95.845 g) and 450 mL of ethyl acetate were added. After stirring for 10 minutes, liquid separation was performed. After extracting three times with 400 mL of ethyl acetate, the organic layers were combined, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The concentrated residue was crystallized from a mixed solution of 108.58 g of ethyl acetate and 2.722 g of water to obtain 21.34 g of the compound of formula 2 as colorless crystals.
  • 6-Oxabicyclo [3.1.0] hex-2-ene 84.37 g (638.2 mmol) of dicyclopentadiene was placed in an eggplant-shaped flask and immersed in an oil bath set at 185 to 190 ° C. The component distilled at 39 to 41 ° C. was collected (trapped with a dry ice-acetone bath) to obtain 73.2 g of cyclopentadiene as a colorless oil. 176.0 g (1.66 mol) of sodium carbonate was placed in a solution of 73.2 g (1.17 mol) of cyclopentadiene in dichloromethane (732 mL), and immersed in an ice bath.
  • Metachloroperbenzoic acid (content 77%) 198.5 g (886 mmol) was added in portions over 30 minutes. Meanwhile, the internal temperature was kept between 3 ° C and 35 ° C. After stirring at room temperature for 15 hours, the solid was filtered off (washed with 532 mL of dichloromethane). Dichloromethane in the filtrate was roughly distilled off under reduced pressure, and then distilled under reduced pressure to obtain 14.08 g of epoxide 8 as a pale yellow oil.
  • the 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) measurement results of Epoxide 8 were consistent with those described in the literature (Org. Lett., 7, 4573, (2005)).
  • the diacetyl compound of formula 13 may be formed as a by-product.
  • the production amount of this by-product can be adjusted by controlling the rate at which the compound solution of Formula 2 is fed to the immobilized enzyme packed in the column. For example, in Example 19, the production yield of this diacetyl compound was 3.8% (4.35 g). This example was studied for the purpose of isolating by-products.
  • the production method of the present invention can be used for mass production of bicyclo [3.1.0] hexane derivatives useful as modulators of metabotropic glutamate receptors.

Abstract

式（II）に示される化合物を、微生物由来の酵素存在下でアシル基供与体を反応させることにより、式（III）に示される化合物に変換する工程を含む製造方法により、高価である光学活性なトランスヒドロキシエステルを原料とすることなく、また、超低温反応を必要とするフッ素化反応を経由することなく代謝型グルタミン酸受容体の調節物質として有用なビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の製造が可能となった。さらに、最終物により近い段階での不斉合成が可能となったことから、上記製造方法はビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体を大量生産できる製造方法として有用である。

Description

酵素を用いたビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の製造方法
　本発明は、医薬として有用な代謝型グルタミン酸受容体の調節物質であるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の製造方法に関する。また、本発明は、この製造工程で製造される新規な中間体化合物に関する。
　グルタミン酸等の興奮性アミノ酸は、哺乳類の中枢神経系（ＣＮＳ）において、長期増強（学習及び記憶）、シナプス可塑性の発生、運動制御、呼吸、心血管調節及び知覚といった種々の生理的プロセスを調節する。
　グルタミン酸は、少なくとも二つの異なるクラスの受容体を介して作用する。そのクラスの一つは、イオンチャネル型グルタミン酸（ｉＧｌｕ）受容体であって、リガンド依存性イオンチャネルとして機能する。第二のクラスは、Ｇタンパク質又は第二メッセンジャー結合性「代謝型」グルタミン酸（ｍＧｌｕＲ）受容体である。いずれのクラスの受容体も、興奮性経路に従って正常なシナプス伝達に介在しているようである。これらは、また、発生段階から生涯を通じてシナプス結合の修飾に関与しているようである（非特許文献１及び２参照）。
　種々のビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体化合物が、ｍＧｌｕＲの調節物質として認められている。ｍＧｌｕＲの調節物質は、統合失調症、不安症、うつ病、躁うつ病、てんかん、薬物依存症、認識力障害、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋硬直に付随する運動障害、脳虚血、脳障害又は頭部外傷といった神経系の疾病への予防又は治療に有用である。
たとえば、ｍＧｌｕＲアゴニストとして、下記式（IA）に示される２－アミノ－６－フルオロビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体及びその薬学上許容される塩が開示されている（特許文献１参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
式中、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ、
（１）水素；
（２）Ｃ1-10アルキル基；
（３）Ｃ3-8シクロアルキル基；及び
（４）Ｃ3-8シクロアルキル－Ｃ1-5アルキル基
からなる群から選択される。上記特許文献１には、当該発明の化合物が、ラセミ体であってもよく、また、エナンチオマーであってもよいことが記載されている。
　上記ｍＧｌｕＲの調節物質及びその中間体の実験室規模での調製法は、上記特許文献１以外にも複数の報告がなされている（特許文献２及び非特許文献３参照）。
　また、上記ｍＧｌｕＲの調節物質及びその中間体のより大きな規模での製造に対応可能な製造法についても報告がある（特許文献３及び非特許文献４参照）。
米国特許第６，３３３，４２８号明細書 米国特許第６，８２５，３７５号明細書 ＷＯ０５／４７２１５号明細書
Schoepp, Bockaert, and Sladeczek, Trends in Pharmacol. Sci., 11, 508, (1990). McDonald and Johnston, Brain Research Reviews, 15,41, (1990). Nakazatoら、J. Med. Chem., 43, 4893, (2000). Yasudaら、J. Org. Chem., 70, 8027, (2005).
　特許文献３及び非特許文献４に開示された製造方法では、最初の工程であるフッ素化反応において、大量生産には適さない超低温条件（－６５℃以下）とＮ－フルオロベンゼンスルホンイミドのような高価なフッ素化剤を必要としている点に問題があった。また、この製造方法では、光学活性なトランスヒドロキシエステルを原料としているが、その合成には高価な試薬が必要とされ、また大きな反応熱の制御が容易でない点が、大量生産する上で不利であった。
　特許文献１に開示されたｍＧｌｕＲ調節物質は、治療薬として有用であるから、これらの化合物の製造方法において、容易にスケールアップでき、費用効果があって安全な試薬を用いることができ、これにより、実用化して大量生産できる方法の開発が必要とされている。
　本出願の発明者らは、鋭意努力した結果、あらかじめフッ素原子を含む原料を用いることによりフッ素化反応を回避し、また、酵素を用いた不斉アシル化反応を行うことにより、光学活性なトランスヒドロキシエステルの使用を回避し、より実用的な鏡像異性的に純粋なビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体の新規な製造方法及び新規な中間体化合物を見出した。
　すなわち本発明は、
式（Ｉ）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体及びその塩の製造方法であって、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 （式（Ｉ）中、Ｒ1は、
（１）－ＯＨ、
（２）－Ｏ－Ｒa、又は
（３）－ＮＲbＲc
であり、
Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）m－フェニル基であり、
ｍは０、１又は２である。）
（Ａ）式（II）に示される化合物を式（III）に示される化合物に変換する工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 （式（II）中のＲ1は、式（Ｉ）中で定義したとおりである。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
（式（III）中、Ｒ1は、式（Ｉ）中で定義したとおりであり、
Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
ｎは０、１又は２である。）
（Ｂ）前記式（III）に示される化合物を、式（IV）に示される化合物に変換する工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 （式（IV）中のＲ1及びＲ4は、式（Ｉ）及び式（III）中で定義したとおりである。）
（Ｃ）前記式（IV）に示される化合物を式（V）に示される化合物と反応させて、式（VI）に示される化合物を得る工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 （式（V）中、、Ｒ2及びＲ3は式（Ｉ）中で定義したとおりであり、
Ｒ5は、水素又はＳｉ－（Ｒ6）（Ｒ7）（Ｒ8）であり、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一又は異なって、Ｃ1-6アルキル基又はフェニル基である。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 （式（VI）中のＲ1、Ｒ2、及びＲ3は式（Ｉ）中で定義したとおりであり、Ｒ4は、式（III）中で定義したとおりである。）
（Ｄ）前記式（VI）に示される化合物を、式（Ｉ）に示される化合物に変換する工程、
からなる製造方法である。
　また、本発明は、
式（II）に示される化合物を前記式（III）に示される化合物に変換する工程からなる製造方法である。
　また、本発明は、
式（VII）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 （式（VII）中、Ｒ1は、
（１）－ＯＨ、
（２）－Ｏ－Ｒa、又は
（３）－ＮＲbＲc
であり、
Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
（Ａ）式（II）に示される化合物を式（III）に示される化合物に変換する工程と、
（Ｂ）前記式（III）に示される化合物を、式（IV）に示される化合物に変換する工程と、
（Ｃ）前記式（IV）に示される化合物を、式（VII）に示される化合物に変換する工程、
からなる製造方法である。
　また、本発明は、
式（II）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
（Ａ）式（VIII）に示される化合物を式（IX）に示される化合物と反応させて、式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物からなる混合物を得る工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 （式（IX）中、Ｒ9及びＲ10は、同一又は異なって、
（１）－ＯＨ、
（２）－Ｏ－Ｒa、又は
（３）－ＮＲbＲc
であり、
Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 （式（Xa）及び（Xb）中のＲ9及びＲ10は、式（IX）中で定義したとおりである。）
（Ｂ）前記式（Xa）に示される化合物と前記式（Xb）に示される化合物からなる混合物を、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 （式（XIa）及び（XIb）中のＲ1は、式（II）中で定義したとおりである。）
（Ｃ）前記式（XIa）に示される化合物と前記式（XIb）に示される化合物からなる混合物を、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程と、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 （式（XIIa）及び（XIIb）中のＲ1は、式（II）中で定義したとおりである。）
（Ｄ）前記式（XIIa）に示される化合物と前記式（XIIb）に示される化合物からなる混合物を式（II）に示される化合物に変換する工程、
からなる製造方法である。
　また、本発明は、
式（VIII）に示される化合物を式（IX）に示される化合物と反応させて、前記式（Xa）に示される化合物と前記式（Xb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程からなる製造方法である。
　また、本発明は式（II）、（III）、（IV）及び（VI）に示される化合物及びその塩である。
　また、本発明は、式（III）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
式（XIII）に示される化合物を前記式（III）に示される化合物に変換する工程からなる製造方法である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
（式（XIII）中、Ｒ4及びＲ4aは、同一又は異なって、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）
　式（Ｉ）、（II）、（III）、（IV）、（VI）、（VII）、(Xa）、（Xb）、（XIa）、(XIb)、 (XIIa) 及び(XIIb)に示される化合物及びその塩は、式（IA）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質類及びその塩の合成において調製される中間体である。式（IA）に示される化合物及びその塩は、式（Ｉ）に示される化合物又は式（VII）に示される化合物及びそれらの塩より、文献に記載された方法により製造することができる（特許文献３、非特許文献２及び３参照）。
　本発明の製造方法を用いることにより、高価である光学活性なトランスヒドロキシエステルを原料とすることなく、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質の製造が可能となった。すなわち、出発物質である式（VIII）の化合物は光学活性体でもラセミ体でもよく、この出発物質から光学活性の無い中間体メソジオール体（式（II）の化合物）を製造することができた。そして、特定の微生物由来の酵素を利用した酵素的メソトリック法による不斉アシル化法により、上記式（II）の化合物から式(III)の化合物を製造できることを見出し、最終物により近い段階での不斉合成が可能となった。
さらに、本願製造方法ではフッ素原子を含む原料（式IXの化合物）を用いることが可能であるため、超低温反応を必要とするフッ素化反応を経由することなくビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質の製造が可能となった。
　「Ｃ1-6アルキル基」とは、炭素数１～６個の直鎖状又は分枝状のアルキル基を示し、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル又はｎ－ヘキシル等の基を示す。
　「Ｃ3-8シクロアルキル基」とは、炭素数３～８個の環状のアルキル基を示し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチル等の基を示す。
　「Ｃ1-6アルコキシ基」とは、炭素数１～６個の直鎖状又は分枝状のアルコキシ基を示し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ又はｎ－ヘキシルオキシ等の基を示す。
　「ハロゲン」とは、フッ素、塩素及び臭素である。
　「アリール基」とは、芳香族炭化水素置換基を指し、単環又は多環（好ましくは単環から３環）とすることができ、多環中の環は融合していても融合していなくてもよい。例えば、フェニル、ナフチル又はビフェニル等の基を示す。
　「ヘテロアリール基」とは、環骨格中に少なくとも一つのヘテロ原子（窒素、酸素又は硫黄）を有する芳香環のことをいう。ヘテロアリール基は、単環又は多環（好ましくは単環から３環）とすることができ、多環中の環は融合していても融合していなくてもよい。例えば、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、フラン、ピラン、オキサゾール、イソオキサゾール、プリン、ベンズイミダゾール、キノリン、イソキノリン、インドール等の基を示す。ここで定義されるヘテロアリール基が置換されている場合、置換基は、ヘテロアリール基の環を構成する炭素原子に結合していてもよいし、また、環を構成する窒素原子に結合していてもよく、置換可能な原子価を有する。置換基は、好ましくは環を構成する炭素原子に結合する。
　「隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環」とは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル又はアゼパニル等の基を示す。
　「微生物由来の酵素」とは、例えば真菌又は細菌等の微生物由来の酵素を示し、これら微生物をすりつぶした抽出液又はこれら微生物の培養上清より得ることができる。酵素としてはリパーゼやアシラーゼ等があるが、１種類に限定されるものではなく、複数の酵素が共存しても良い。真菌としては、カンジダ属、アスペルギルス属、サーモミセス属、ペニシリウム属、ジエトリカム属、ガラクトミセス属及びフミコラ属等が挙げられる。細菌としてはブルクホルデリア属等が挙げられる。
　「担体」とは、酵素を固定化することが可能な担体であれば特に制限はないが、例えば、炭酸ナトリウムとともに焼成した珪藻土であるセライト（商品名）や、カオリン鉱物を塩酸酸性のもとで水熱処理した後、それを造粒、焼成して得られる多孔質セラミックス系の担体であるトヨナイト（商品名）等が挙げられる。トヨナイトは、その粒子の表面を色々な有機官能基で容易に修飾することが可能である。トヨナイトの表面の修飾に用いているカップリング剤の有機官能基の種類を変えることで（メタクリロイロキシ基、フェニルアミノ基、アミノ基等）、各種酵素をより選択的に固定化できる。酵素をセライトやトヨナイト等の単体に固定化することにより、酵素の安定性や反応活性等が増大する。
　「塩」とは、例えば、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸などの無機酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、エタンスルホン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、ガラクタル酸、ナフタレン－２－スルホン酸などの有機酸との塩、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオンなどの１種又は複数の金属イオンとの塩、アンモニア、アルギニン、リシン、ピペラジン、コリン、ジエチルアミン、４－フェニルシクロヘキシルアミン、２－アミノエタノール、ベンザチンなどのアミンとの塩が含まれる。
　「鏡像異性的に純粋な」とは、目的とするエナンチオマーが、目的としないエナンチオマーに対して、少なくとも５０％ｅ．ｅ．（鏡像体過剰率）以上、好ましくは８０％ｅ．ｅ．以上、さらに好ましくは９０％ｅ．ｅ．以上存在することを意味する。
　式（IA）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質類及びその塩は、式（Ｉ）で示した化合物から、従来技術において知られた方法により製造することができる。例えばＷＯ０５／４７２１５号明細書には、式（Ｉ）に示した化合物を用いて式（IA）に示した化合物を合成する方法が記載されている。
　本発明における式（Ｉ）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態は、式（II）の化合物を出発原料とするものである。好ましくは、Ｒ1がメトキシ基、エトキシ基又はベンジルオキシ基である。さらに好ましくは、Ｒ1がメトキシ基又はエトキシ基であり、特に好ましくは、Ｒ1がメトキシ基である。
　本発明における式（Ｉ）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態において、Ｒ2及びＲ3は、メチル基及びフェニル基からなる群から選択される。また、Ｒ2及びＲ3は同一の置換基であることが好ましく、さらに好ましくは、Ｒ2及びＲ3がフェニル基である。
　本発明における式（Ｉ）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態においては、Ｒ4は、メチル基である。
　本発明における式（Ｉ）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態においては、Ｒ5は、水素及びトリメチルシリル基である。
　式（IA）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質類及びその塩は、上記式（VII）の化合物より、従来技術において知られた方法により製造することができる。たとえばNakazatoら、J. Med. Chem., 43, 4893-4909, (2000).には、式（VII）に示した化合物を用いて式（IA）に示した化合物を合成する方法が記載されている。
　本発明における式（VII）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態は、式（II）に示される化合物を出発原料とするものである。好ましくは、Ｒ1がメトキシ基、エトキシ基、ベンジルオキシ基であり、さらに好ましくはＲ1がメトキシ基又はエトキシ基であり、特に好ましくは、Ｒ1がメトキシ基である。
　本発明における式（VII）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態においては、Ｒ4基はメチル基である。
　式（Ｉ）及び式（VII）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体は、式（III）に示される［３．１．０］ヘキサン誘導体及びその塩より、上述の方法を用いて製造することができる。
　本発明における式（III）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態は、式（II）に示される化合物を出発原料とするものである。好ましくは、Ｒ1がメトキシ基、エトキシ基、ベンジルオキシ基であり、さらに好ましくはＲ1がメトキシ基又はエトキシ基であり、特に好ましくは、Ｒ1がメトキシ基である。
　本発明における式（III）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態においては、Ｒ4は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ヘプチル基、モノクロロメチル基、フェニル基である。さらに好ましくは、Ｒ4は、メチル基である。
　本発明における式（II）に示した化合物の製造方法の好ましい実施形態は、式（VIII）及び式（IX）に示される化合物を出発原料とするものである。好ましくは、Ｒ1がメトキシ基、エトキシ基及びベンジルオキシ基であり、さらに好ましくはＲ1がメトキシ基又はエトキシ基であり、特に好ましくは、Ｒ1がメトキシ基である。好ましくは、Ｒ9及びＲ10がメトキシ基、エトキシ基、ベンジルオキシ基である。Ｒ9及びＲ10は、同一の置換基であることが好ましく、特に好ましくは、Ｒ9及びＲ10がメトキシ基である。
　本発明の製造方法の一実施形態は、下記スキーム１及びスキーム２に示される。
（スキーム１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
式中、Ｒ1、Ｒ9及びＲ10は、前述の定義通りである。
　式（VIII）に示される化合物は、光学活性体であっても非光学活性体であってもよい。式（VIII）に示される化合物は、シクロペンタジエンを例えば過酢酸のような過酸により酸化することで合成することができる(J. Am. Chem. Soc., 82, 4328, (1960). 、Org. Synth., 42, 50, (1962). 、Org. Lett., 7, 4573, (2005).)。また、式（VIII）に示される化合物の光学活性体は、例えば金属触媒存在下シクロペンタジエンを不斉酸化することで合成できる（Synlett, 827, (1995).、Tetrahedron Letters, 37, 7131, (1996).、特開平09-052887）。
　塩基存在下、式（VIII）に示される化合物と式（IX）に示される化合物とを反応させることにより、式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物の混合物が得られる。
　反応に使用する塩基を例示すれば、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド等アルカリ金属アルコキシド類、水素化ナトリウム、水素化カリウム等水素化アルカリ金属類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等アルカリ金属水酸化物類、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン等有機アミン類、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラジド等アミン金属塩類等があげられるが、好ましくはアルカリ金属アルコキシド類を、より好ましくはアルカリ金属メトキシド又はアルカリ金属エトキシドを、さらに好ましくはナトリウムメトキシドを用いる。
　塩基の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（VIII）に示される化合物に対して０．５～５モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１～３モル当量の範囲であり、より好ましくは１～２モル当量の範囲である。
　式（IX）に示される化合物の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（VIII）に示される化合物に対して０.５～５モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１～３モル当量の範囲であり、より好ましくは１～２．５モル当量の範囲である。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、かつ、目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はないが、生成物である式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物の混合物の収率が溶媒の種類に依存するため、好ましくはアルコール類を、さらに好ましくはメタノールを溶媒として使用する。
　反応溶媒の使用量としては、通常式（VIII）に示される化合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは、５～３０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、－８０℃から使用する溶媒の沸点まで可能であるが、好ましくは－２０～６０℃の範囲であり，より好ましくは２０～４０℃の範囲である。
。
　続いて、式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物の混合物を添加物存在下で加熱することにより式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物が得られる。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。溶媒の種類に生成物である式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物の収率が依存するため、好ましくは水及び極性有機溶媒類を、より好ましくは水及びジメチルスルホキシドを、更に好ましくは水とジメチルスルホキシドを０：５から１：５の範囲で混合したものを用いる。
　反応溶媒の使用量としては、通常式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物の混合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは１～２０質量倍の範囲であり，より好ましくは１～１０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、８０℃～２００℃まで可能であるが、好ましくは９０～１６０℃の範囲で行うのがよく、さらに好ましくは１００～１３０℃の範囲がよい。
　反応温度が、使用する溶媒の沸点を超える場合はオートクレーブ等の耐圧力容器中で反応させることができる。
　また、本反応は添加物を加えることにより促進されるが、使用できる添加物を例示すれば塩類が挙げられ、好ましくは塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化リチウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化リチウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム等のアルカリ金属ハロゲン化物塩類、シアン化ナトリウム等のアルカリ金属シアン化物塩類、塩化テトラｎ－ブチルアンモニウム、臭化テトラｎ－ブチルアンモニウム、ヨウ化テトラｎ－ブチルアンモニウム等の四級アンモニウム塩類およびトリエチルアミン塩酸塩等の有機アミン塩類あるいはそれらの混合物である。また、塩化ナトリウムなどのアルカリ金属ハロゲン化物塩類等と酢酸等の酸を組み合わせて使用することもできる。
　添加物の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物の混合物に対して０．５～５モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１～４モル当量の範囲であり、より好ましくは１～３モル当量の範囲である。
　続いて、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物を添加物存在下で酸化することにより式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物が得られる。
　本反応はバナジルアセチルアセトネート（ＶＯ（ａｃａｃ）2）などの触媒の存在下でｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシドなどの酸化剤を添加することにより進行する。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。溶媒の種類に生成物である式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物の収率が依存するため、好ましくは芳香族炭化水素類やハロゲン系炭化水素類などを、より好ましくはクロロベンゼンやトルエンを、更に好ましくはクロロベンゼンを使用する。
　反応溶媒の使用量としては、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物に対して３～１００質量倍使用することができ、好ましくは、３～２０質量倍の範囲であり，より好ましくは５～１０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、０℃～１００℃まで可能であるが、好ましくは３０～８０℃の範囲で行うのがよく、さらに好ましくは５０～６０℃の範囲がよい。
　酸化剤の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物に対して１～３モル当量使用することができ、好ましくは、１～２モル当量の範囲である。
　触媒の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物に対して０．０１～１モル当量使用することができ、好ましくは、０．２～０．５モル当量の範囲である。
　また、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物の混合物のエポキシ化は、適当な溶媒（たとえばジメチルスルホキシドと水の混合物）中でＮ－ブロモスクシンイミドやＮ－ヨードスクシンイミド等のハロゲン化剤を作用させハロヒドリン誘導体とした後、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセンなどの塩基で処理することにより行うこともできる。
　続いて、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物を、エポキシドの開環を伴う分子内シクロプロパン化反応に供することにより式（II）に示される化合物が得られる。
　この反応はルイス酸の存在下で塩基を添加することにより進行する。
　好ましい実施形態においては、まず、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物をルイス酸で処理した後、塩基を添加する。式（II）に示される化合物は所望の立体異性体として得られる。
　ルイス酸を例示すれば、Ｒ3Ａｌ、Ｒ2ＡｌＸ、ＲＡｌＸ2、Ａｌ（ＯＲ）3、Ｔｉ（ＯＲ）4、ＲＴｉ（ＯＲ）3、Ｒ2Ｔｉ（ＯＲ）2、ＢＦ3エーテル錯体、Ｅｔ2Ｚｎ及びＳｃ（ＯＴｆ）3などが挙げられるが、好ましくはＥｔ3Ａｌ、Ａｌ（ＯｉＰｒ）3、Ｔｉ（ＯｉＰｒ）4、ＢＦ3エーテル錯体、Ｅｔ2Ｚｎ及びＳｃ（ＯＴｆ）3などであり、より好ましくはＥｔ3Ａｌ、Ｅｔ2ＡｌＣｌ及びＥｔ2Ｚｎであり、更に好ましくはＥｔ3Ａｌである。ここで、Ｘはハロゲン又は無機ラジカルであって、Ｒはそれぞれ炭化水素基である。
　ルイス酸の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物に対して１～５モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１．５～３モル当量の範囲であり、より好ましくは２～２．５モル当量の範囲である。
　塩基を例示すれば、リチウムヘキサメチルジシラジド及びリチウムジイソプロピルアミドなどであり、好ましくはリチウムヘキサメチルジシラジドである。
　塩基の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物に対して１～５モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１．５～３モル当量の範囲であり、より好ましくは２～２．５モル当量の範囲である。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。溶媒の種類に生成物である式（II）に示される化合物の収率が依存するため、好ましくはＴＨＦなどのエーテル系溶媒を使用する。
　反応溶媒の使用量としては、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは、３～２０質量倍の範囲であり、好ましくは、５～１０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、－８０℃～０℃まで可能であるが、好ましくは－６０℃～－４０℃で行う。
　反応時間は、通常、０．５時間～６時間であり、好ましくは１～３時間である。
また、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物の混合物の水酸基をｔｅｒｔ-ブチルジメチルシリル基などで保護した後、シクロプロパン化反応に供してもよい。シクロプロパン環を構築した後、保護基を外すことにより、式（II）に示される化合物が得られる。
（スキーム２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
　式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ11及びＲ12は、前述の定義通りである。
　式（II）に示される化合物の２つの水酸基のうち一方のみを保護することにより、式（III）に示される化合物が得られる。
　本反応は適切な酵素存在下で所望の立体異性体を与える。
　本反応の好ましい実施形態においては、式（II）に示される化合物を酵素存在下でアシル基供与体と反応させることにより、式（III）に示される化合物が得られる。
　酵素としては、微生物が生産する立体選択的アシル化能を有する酵素を用いる。この酵素存在下で、式（II）に示される化合物とアシル基供与体を有機溶媒等の中で反応させることにより立体選択的アシル化を行うことができる。また、上記酵素を担体に固定することにより固定化酵素として反応に使用することも可能である。その場合、式（II）に示される化合物を有機溶媒等の中でアシル基供与体と混合した後、上記混合液中に酵素が固定化された担体を加えて撹拌するか、又は酵素が固定化された担体をカラムに充填し上記混合液を当該カラムに通すことで立体選択的アシル化反応を行う。反応温度は、通常－２０℃～６０℃で反応できる。使用する有機溶媒等は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。生成物である式（III）に示される化合物の収率や光学純度が溶媒の種類に依存するため、好ましくはトルエン、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、n-ヘキサン、n-ヘプタン、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒や、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムヘキサフルオロフォスフェートや１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボレートなどのイオン性流体（Org. Lett., 2, 4189, (2000).）である。
　アシル基供与体を例示すれば、酢酸ビニル、酢酸イソプロペニル、プロピオン酸ビニル、プロピオン酸イソプロペニル、酪酸ビニル（ブチリル酸ビニル）、酪酸イソプロペニル（ブチリル酸イソプロペニル）、カプロン酸ビニル、カプロン酸イソプロペニル、カプリン酸ビニル、カプリン酸イソプロペニル、カプリル酸ビニル、カプリル酸イソプロペニル、クロロ酢酸ビニル、クロロ酢酸イソプロペニル、ピバリン酸ビニル、ピバリン酸イソプロペニルなどが挙げられるが、好ましくは酢酸ビニルである。
　酵素源としての微生物は、好ましくは真菌又は細菌である。より好ましくは、カンジダ（Candida）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、サーモミセス（Thermomyces）属、ペニシリウム（Penicillium）属、フミコラ（Humicola）属、ジエトリカム（Geotrichum）属、ガラクトミセス（Galactomyces）属及びブルクホルデリア（Burkholderia）属からなる群より選ばれる１種以上の真菌又は細菌であり、更に好ましくは、カンジダ・アンタークチカ（Candida antarctica）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・メレウス（Aspergillus melleus）、サーモミセス・ランジノサス（Thermomyces langinosus）、ペニシリウム・カメンベルティ（Penicillium camemberti）、フミコラ エスピー（Humicola sp.）、ジエトリカム・キャンディダム（Geotrichum candidum）、ジエトリカム・エリエンス（Geotrichum eriense）、ジエトリカム・ファーメンタンス（Geotrichum fermentans）、ガラクトミセス・ジエトリカム（Galactomyces geotrichum）及びブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）からなる群より選ばれる１種以上の真菌又は細菌である。
　微生物由来の酵素としては、好ましくはリパーゼ又はアシラーゼ、特に好ましくは、カンジダ　アンタークチカ（Candida antarctica）由来のリパーゼＡ（Lipase A）である。微生物由来の酵素は、微生物をすりつぶした抽出液又は培養上清から常法に従って精製することが可能である。微生物由来の酵素は、必ずしも単品として精製される必要はなく、粗酵素としても使用可能である。酵素は単独若しくは複数種類を混ぜて使用できる。また、市販品の入手も可能である。
　カンジダ　アンタークチカ（Candida antarctica）由来のリパーゼＡの商品としては
NOVOZYM CALAL（商品名、ノボザイムズジャパンより入手)、NOVOZYM 735（商品名、ノボザイムズジャパンより入手)、CHIRAZYME L-5 lyo（商品名、ロシュ・ダイアグノスティクスより入手)又はLipase A CLEA（商品名、シグマアルドリッチジャパンより入手)等が挙げられる。
カンジダ　アンタークチカ（Candida antarctica）由来のリパーゼＢの商品としてはNOVOZYM 435（商品名、ノボザイムズジャパンより入手)等が挙げられる。
　その他のリパーゼとしては、Lipase AS"Amano"（商品名、天野エンザイムより入手[アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）由来のリパーゼ])、Lipozym TL 100L IM（商品名、ノボザイムズジャパンより入手[サーモミセス・ランジノサ（Thermomyces langinosus）由来の固定化リパーゼ])、Lipozym TL 100（商品名、ノボザイムズジャパンより入手[サーモミセス・ランジノサ（Thermomyces langinosus）由来のリパーゼ]）、CHIRAZYME L8 Lyo（商品名、ロシュ・ダイアグノスティクスより入手[フミコラ エスピー（Humicola sp.）由来のリパーゼ])、Lipase G"Amano"（商品名、天野エンザイムより入手[ペニシリウム・カメンベルティ（Penicillium camemberti）由来のリパーゼ])及びLipase PS"Amano"SD（商品名、天野エンザイムより入手[ブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）由来のリパーゼ]）等が挙げられる。
　アシラーゼとしてはAcylase 15000"Amano"（商品名、天野エンザイムより入手[アスペルギルス・メレウス（Aspergillus melleus）由来のアシラーゼ])等を挙げることができる。
　微生物由来の酵素は、担体に固定化して固定化酵素として使用することも可能である。酵素の固定化に用いる担体としてはセライト又はトヨナイト類（Toyonite 200、 Toyonite 200P、Toyonite 200M、 Toyonite 200A（東洋電化工業株式会社より入手））等が挙げられる。上記市販のリパーゼを固定化して得られた固定化酵素の他に、特定の微生物を培養して得られた培養液菌体上清液に上記担体を作用させて酵素を固定化したものをリパーゼ活性を有する酵素として用いることができる。特定の微生物とはジエトリカム・キャンディダム（Geotrichum candidum）、ジエトリカム・エリエンス（Geotrichum eriense）、ジエトリカム・ファーメンタンス（Geotrichum fermentans）、ガラクトミセス・ジエトリカム（Galactomyces geotrichum）などが好ましい。
続いて、式（III）に示される化合物の水酸基を酸化することにより、式（IV）に示される化合物が得られる。
　本反応の好ましい実施形態においては、式（III）に示される化合物を触媒存在下で酸化剤と反応させることにより、式（IV）に示される化合物が得られる。
　触媒を例示すれば、ＲｕＣｌ3及び2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）などである。
　触媒の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（III）に示される化合物に対して０．００１～１モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは０．０１～０．１モル当量の範囲である。
　酸化剤を例示すれば、次亜塩素酸ナトリウムなどである。
　酸化剤の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（III）に示される化合物に対して１～３モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１～１．５モル当量の範囲である。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。生成物である式（IV）に示される化合物の収率が溶媒の種類に依存するため、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン又はアセトニトリルなどであり、更に好ましくはジクロロメタンである。
　上記溶媒は一種単独で又は二種以上混合して用いることができる。
　反応溶媒の使用量としては、式（III）に示される化合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは、３～１０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、－２０℃～５０℃まで可能であるが、好ましくは－２０℃～２０℃で行うのがよく、さらに好ましくは－１０℃～０℃で行うのがよい。
　反応時間は、通常、０．５時間～６時間であり、好ましくは１～３時間である。
また、式（III）に示される化合物の水酸基の酸化反応は、当業者によりよく知られた方法（たとえばＳｗｅｒｎ酸化など）により行うことができ、式（IV）に示される化合物が得られる。
　続いて、式（IV）に示される化合物を酸触媒存在下で式（V）に示される化合物と反応させることにより、式（VI）に示される化合物が得られる。
　酸触媒を例示すれば、たとえばトリフルオロメタンスルホン酸及びトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートなどである。
　酸触媒の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（IV）に示される化合物に対して０．０１～１モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは０．０５～０．５モル当量の範囲であり、より好ましくは０．１～０．３モル当量の範囲である。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。溶媒の種類に生成物である式（VI）に示される化合物の収率が依存するため、好ましくはジクロロメタン及びトルエンなどを使用する。
　上記溶媒は一種単独で又は二種以上混合して用いることができる。
　また場合によっては、適当な脱水剤や乾燥剤を用いて非水溶媒として用いることもできる。
　反応溶媒の使用量としては、式（IV）に示される化合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは、５～２０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、－２０℃～５０℃まで可能であるが、好ましくは－１０℃～３０℃で行うのがよく、さらに好ましくは－１０℃～０℃で行うのがよい。
　式（Ｖ）に示される化合物としては、例えば、(1S,2S)-1,2-ジフェニルエタン-1,2-ジオール、(4S,5S)-2,2,7,7-テトラメチル-4,5-ジフェニル-3,6-ジオキサ-2,7-ジシラオクタン、(2S,3S)-ブタン-2,3-ジオール及び(4S,5S)-2,2,4,5,7,7-ヘキサメチル-3,6-ジオキサ-2,7-ジシラオクタンが挙げられる。
　式（Ｖ）に示される化合物の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（IV）に示される化合物に対して１～３モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは１～２モル当量の範囲である。
　続いて、塩基存在下で式（VI）に示される化合物の水酸基の保護基を外すことにより、式（Ｉ）に示される化合物が得られる。
　塩基を例示すれば、たとえば炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩類、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、水素化ナトリウム、水素化カリウム等の水素化アルカリ金属類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物類、トリエチルアミン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン等の有機アミン類などが挙げられるが、好ましくは、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩類を、更に好ましくは炭酸水素ナトリウムを用いる。
　塩基の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（VI）に示される化合物に対して０．１～３モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは０．５～１．５モル当量の範囲である。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。溶媒の種類に生成物である式（VI）に示される化合物の収率が依存するため、好ましくはメタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール類を、より好ましくはメタノールを使用する。
　上記溶媒は一種単独で又は二種以上混合して用いることができる。
　反応溶媒の使用量としては、式（IV）に示される化合物に対して１～１００質量倍使用することができ、好ましくは、５～２０質量倍の範囲である。
　反応温度は、通常、０～１００℃まで可能であるが、好ましくは３０℃～６０℃で行うのがよく、さらに好ましくは４０℃～５０℃で行うのがよい。
　反応時間は、通常、０．５時間～１０時間であり、好ましくは１時間～３時間である。
　式（IA）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質類及びその塩は、式（Ｉ）の化合物から、従来技術において知られた方法により製造することができる。例えばＷＯ０５／４７２１５号明細書及びYasudaら、J. Org. Chem., 70, 8027, (2005).には、式（Ｉ）に示した化合物を用いて式（IA）に示した化合物を合成する方法が記載されている。
　本発明の製造方法の他の実施形態は、下記スキーム３に示される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
　式中、Ｒ1、Ｒ4、Ｒ11及びＲ12は前述の定義通りである。また、式（II）に示される化合物から式（IV）に示される化合物を製造する方法は上記の通りである。
　式（IV）に示される化合物に塩基又は酸を作用させると式（VII）に示される化合物が得られる。
　塩基を例示すれば、たとえばトリエチルアミン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン等の有機アミン類などが挙げられる。
　塩基の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（IV）に示される化合物に対して０．５～３モル当量の範囲で使用することができ、好ましくは０．８～１．２モル当量の範囲である。
　酸を例示すれば、たとえばトリフルオロメタンスルホン酸及びシリカゲルなどである。
　酸の使用量としては、反応を阻害せず、且つ副反応を引き起こさない量であれば特に限定されないが、通常、式（IV）に示される化合物に対して０．１～３モル当量の範囲で使用することができる。
　反応に使用する溶媒は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。好ましくはジクロロメタン、メタノールを使用する。
　式（IA）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体ｍＧｌｕＲ調節物質類及びその塩は、上記式（VII）の化合物から、従来技術において知られた方法により製造することができる。たとえばNakazatoら、J. Med. Chem., 43, 4893-4909, (2000).には、式（VII）に示した化合物を用いて式（IA）に示した化合物を合成する方法が記載されている。
　本発明の製造方法の他の実施形態は、下記スキーム４に示される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 式中、Ｒ１、Ｒ４及びR４ａは前述の定義どおりである。
　本反応は適切な酵素存在下で所望の立体異性体を与える。
　本反応の好ましい実施形態においては、式（XIII）に示される化合物をアシル基供与体として酵素存在下でアシル基受容体と反応させることにより、式（XIII）に示される化合物の２つのアシル基のうち一方のみが選択的に脱離され、式（III）に示される化合物が得られる。
　酵素としては、微生物が生産する立体選択的エステル交換反応能を有する酵素を用いる。また、上記酵素を担体に固定することにより固定化酵素として反応に使用することも可能である。その場合、式（XIII）に示される化合物を有機溶媒等の中でアシル基受容体と混合した後、上記混合液中に酵素が固定化された担体を加えて撹拌するか、又は酵素が固定化された担体をカラムに充填し上記混合液を当該カラムに通すことで立体選択的エステル交換反応を行う。反応温度は、通常－２０℃～６０℃である。反応に使用する有機溶媒等は、当該反応条件下において安定であり、且つ目的とする反応を妨げないものであれば特に制限はない。式（III）に示される化合物の収率や光学純度の点から、好ましくはトルエン、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、n-ヘキサン、n-ヘプタン、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒や、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムヘキサフルオロフォスフェートや１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボレートなどのイオン性流体（Org. Lett., 2, 4189, (2000).）である。特に好ましくは、イソプロピルエーテルである。
　アシル基受容体を例示すれば、メタノールやエタノール、ｎ－プロパノール、ベンジルアルコール、シクロペンタノール、２－プロパノール（イソプロパノール）、２－ブタノールなどが挙げられるが、好ましくはシクロペンタノール、２－プロパノール（イソプロパノール）、２－ブタノールである。最も酵素反応に望ましい化合物はシクロペンタノールである。
酵素源としての微生物は、好ましくは真菌又は細菌である。より好ましくは、カンジダ（Candida）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、アルカリゲネス（Alkaligenes）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、ディポダスカス（Dipodascus）属、ペニシリウム（Penicillium）属又はブルクホルデリア（Burkholderia）属からなる群より選ばれる１種以上の真菌又は細菌であり、更に好ましくは、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、シュードモナス・スツツェリ（Pseudomonas stutzeri）、シュードモナス・フルオレスセンス（Pseudomonas fluorescens）、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）、ペニシリウム・ロクエフォルティ（Penicillium roqueforti）、ディポダスカス・アウストラリエンシス（Dipodascus australiensis）、アルカリゲネス・エスピー（Alkaligenes p.）又はブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）からなる群より選ばれる１種以上の真菌又は細菌である。
　微生物由来の酵素としては、好ましくはリパーゼ又はエステラーゼ、特に好ましくはアルカリゲネス・エスピー（Alkaligenes p.）、ブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）、シュードモナス・フルオレスセンス（Pseudomonas fluorescens）およびカンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）由来のリパーゼである。微生物由来の酵素は、微生物をすりつぶした抽出液又は培養上清から常法に従って精製することが可能である。微生物由来の酵素は、必ずしも単品として精製される必要はなく、粗酵素としても使用可能である。酵素は単独若しくは複数種類を混ぜて使用できる。また、市販品の入手も可能である。
アルカリゲネス・エスピー（Alkaligenes p.）由来のリパーゼ商品としてはLipase QLM（商品名、名糖産業より入手）等が挙げられる。ブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）由来のリパーゼ商品としてはLipase PS"Amano" SD（商品名、天野エンザイムより入手）等が挙げられる。シュードモナス・フルオレスセンス（Pseudomonas fluorescens）由来のリパーゼ商品としてはLipase AK"Amano"20（商品名、天野エンザイムより入手）等が挙げられる。カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）由来のリパーゼ商品としてはLipase AY"Amano"30G（商品名、天野エンザイムより入手）等が挙げられる。
　その他のリパーゼとしては、Lipase R"Amano"（商品名、天野エンザイムより入手[ペニシリウム・ロクエフォルティ（Penicillium roqueforti）由来のリパーゼ]）、Lipase TL（商品名、名糖産業より入手[シュードモナス・スツツェリ（Pseudomonas stutzeri）由来のリパーゼ]）、Lipase AS"Amano"（商品名、天野エンザイムより入手[アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）由来のリパーゼ]）等が挙げられる。
　エステラーゼとしてはCHE "Amano"2（試供品名、天野エンザイムより入手[シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）由来のエステラーゼ]）等を挙げることができる。
　微生物由来の酵素は、担体に固定化して固定化酵素として使用することも可能である。酵素の固定化に用いる担体としてはセライト又はトヨナイト類（Toyonite 200、 Toyonite 200P、Toyonite 200M、 Toyonite 200A（東洋電化工業株式会社より入手））等が挙げられる。上記市販のリパーゼを固定化して得られた固定化酵素の他に、微生物ディポダスカス・アウストラリエンシス（Dipodascus australiensis）エヌビーアールシー（NBRC）10805株を培養して得られた培養液菌体上清液に上記担体を作用させて酵素を固定化したものもエステル交換能を有する酵素として挙げることができる。
　ここで、出発材料及び試薬は市販品、文献で公知のもの、類似化合物に関する文献記載の方法により調製されたもののいずれであってもよい。反応及び反応の結果得られた生成物の精製は、当業者に知られた方法による。精製方法としては、結晶化、蒸留、順相又は逆相クロマトグラフィーが挙げられる。
　以下、さらに具体的な実施例を示すが、本発明の開示はこれに限定されない。実施例１～４、１８及び１９に、スキーム１の方法を示す。実施例５～９及び１２～１７に、スキーム２の方法を示す。実施例１０及び１１に、スキーム３の方法を示す。
　（実施例１）
　フルオロ[(1R,5R)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]プロパン二酸ジメチル (１０a)及びフルオロ[(1S,5S)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]プロパン二酸ジメチル (１０b)の混合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
　フルオロプロパン二酸ジメチル（９）１８．１９ｇ（１２１．２ｍｍｏｌ）のメタノール（９０．４ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシドの２５ｗ／ｗ％メタノール溶液２３．８１ｇ（１１０．２ｍｍｏｌ）を３分間にわたって添加した。その間、内部の温度を２５℃から３８℃の間に保った。得られた溶液を１５分間攪拌した後、６－オキサビシクロ[３．１．０]ヘキサ－２－エン（８）４．５２ｇ（５５．１ｍｍｏｌ）を２分間にわたって添加した。その間、内部の温度を２５℃から３８℃の間に保った。室温下で１時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液４５ｍＬを１０分間にわたって添加した。その間、内部の温度を２６℃から３５℃の間に保った。反応混合物を減圧下濃縮し、メタノールを概ね留去し、固形物を含む褐色溶液１０８ｇを得た。酢酸エチル１３６ｍＬで２回抽出した後、水４５ｍＬで洗浄した。有機層を減圧下濃縮した後、トルエン１００ｍＬを加え再び減圧下濃縮した。濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：トルエン／酢酸エチル）により精製することにより、黄色の油状物として式１０ａの化合物及び式１０ｂの化合物の混合物７．２１ｇを得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ2.13-2.17 (m, 1H), 2.56 (dddd, J= 2.2, 4.3, 7.1, 17.2 Hz, 1H), 3.32-3.40 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 4.20 (m, 1H), 5.04 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 5.47 (ddd, J= 2.1, 4.3, 6.1 Hz, 1H), 5.85 (ddd, J= 2.2, 4.4, 6.1 Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ41.93, 53.39 (d, J= 19.5 Hz), 58.70 (d, J= 20.8 Hz), 70.43 (d, J= 2.6 Hz), 93.55, 95.14, 125.59, 133.32, 165.42 (d, J= 15.6 Hz), 165.62 (d, J= 14.3 Hz).19F NMR (470 MHz, DMSO-d6): δ-172.43, -172.36. HRMS(ES)m/z: [M+Na]+calcd for C10H13O5FNa; 255.0645, found 255.0635. IR (neat) 3528, 3408, 2960, 1755, 1438, 1284, 1253, 1173, 1111, 1068, 1031, 936, 838, 787, 722, 668, 415 cm-1．
　（実施例２－１）
　フルオロ[(1R,5R)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ａ)及びフルオロ[(1S,5S)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ｂ)の混合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
　式１０ａの化合物及び式１０ｂの化合物の混合物１７．２７ｇ（７４．５０ｍｍｏｌ）にジメチルスルホキシド１７２．５１ｇと水２５．９２gを加えた。この溶液に塩化リチウム９．６５ｇ(２２７．６５ｍｍｏｌ)を加えて１３０℃で２時間加熱攪拌した。放冷後、酢酸エチル５００ｍＬで３回反応液を抽出した後、有機層を減圧濃縮し、濃縮残渣を得た。この濃縮残渣をフラッシュカラムシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）により精製することにより、黄色の油状物として式１１ａの化合物及び式１１ｂの化合物の混合物３．６７４ｇを得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ2.11-2.17 (m, 1.6H), 2.53-2.60 (m, 1.6H), 2.87-2.96 (m, 1.6H), 3.71 (s, 1.8H), 3.73 (s, 3H), 4.23-4.28 (m, 1.6H), 4.93 (d, J= 5.0 Hz, 0.6H), 5.07 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.11 (dd, J= 4.2, 48.3 Hz, 0.6H), 5.17 (dd, J= 3.8, 48.5 Hz, 1H), 5.42-5.45 (m, 1H), 5.55-5.58 (m, 0.6H), 5.78-5.80 (m, 1.6H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ41.29, 41.83, 51.95, 52.13, 56.80 (d, J= 20.8 Hz), 57.06 (d, J= 19.5 Hz), 70.49 (d, J= 5.2 Hz), 71.90 (d, J= 2.6 Hz), 88.36 (d, J= 184.3 Hz), 88.48 (d, J= 184.3 Hz), 125.93 (d, J= 5.2 Hz), 127.28 (d, J= 3.9 Hz), 131.76, 132.13, 169.05 (d, J= 24.7 Hz), 169.21 (d, J= 24.7 Hz). 19F NMR (470 MHz, DMSO-d6): δ-197.87 (dd, J= 29.2, 47.5 Hz), -194.53 (dd, J= 25.7, 47.8 Hz). HRMS(ES)m/z: [M+Na]+calcd for C8H11O3FNa; 197.0590, found 197.0578. IR (neat) 3410, 3060, 2956, 2851, 1747, 1440, 1357, 1288, 1228, 1127, 1097, 1067, 1048, 1025, 952, 856, 724, 584, 450 cm-1.
（実施例２－２）
　フルオロ[(1R,5R)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ａ)及びフルオロ[(1S,5S)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ｂ)の混合物
　式１０ａの化合物及び式１０ｂの化合物の混合物７０．０２ｇ（０．３０１５ｍｍｏｌ）にジメチルスルホキシド７０．０６ｇとトリエチルアミン塩酸塩４５．６４ｇ(３３．１６ｍｏｌ)を加えて１１０～１２０℃で５時間加熱攪拌した。放冷後、水３５０．９ｇを加え、メチルイソブチルケトン３５０ｇで２回反応液を抽出した。有機層を減圧濃縮することにより、式１１ａの化合物及び式１１ｂの化合物の混合物４６．７８ｇ（ガスクロマトグラフによる定量値）を含む褐黄色の油状物６５．４０ｇを得た。
（実施例２－３）
　フルオロ[(1R,5R)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ａ)及びフルオロ[(1S,5S)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]酢酸メチル (１１ｂ)の混合物
　式１０ａの化合物及び式１０ｂの化合物の混合物０．２３２ｇ（１．００ｍｍｏｌ）にジメチルスルホキシド１ｍＬと塩化ナトリウム０．０７３ｇ(１．２５ｍｍｏｌ)及び酢酸０．０６１ｇ（１．００ｍｍｏｌ）を加えて１１０～１２０℃で５時間加熱攪拌した。放冷後、高速液体クロマトグラフで分析したところ、式１１ａの化合物及び式１１ｂの化合物の混合物０．１４６ｇ（高速液体クロマトグラフによる定量値）を得た。
（実施例３）
フルオロ[(1R,2S,3R,5S)-3-ヒドロキシ-6-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-イル]酢酸メチル (１２ａ)及びフルオロ[(1S,2R,3S,5R)-3-ヒドロキシ-6-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-イル]酢酸メチル (１２ｂ)の混合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
　式１１ａの化合物及び式１１ｂの化合物の混合物３．６４４ｇ（２０．９２ｍｍｏｌ）のクロロベンゼン（１８．３７ｇ）溶液に、バナジルアセチルアセトナート（ＶＯ(ａｃａｃ)2）０．１１７６ｇ（０．４４４ｍｍｏｌ）を室温下加えた。６０℃に加熱し、ｔｅｒｔｅｒｔ-ブチルヒドロペルオキシド（tＢｕＯＯＨ）の７０％トルエン溶液５．４４５ｇ（４２．２９ｍｍｏｌ）を１０分間にわたって添加した。その間、内部の温度を５５℃から６０℃の間に保った。５５℃で４時間攪拌した後、室温まで放冷した。２０％チオ硫酸ナトリウム水溶液２２ｇを加えて３０分間攪拌した後、酢酸エチル５０ｍＬで４回抽出した。有機層を合わせ、減圧濃縮することにより濃縮残渣を得た。この濃縮残渣をフラッシュカラムシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル＝２：１～１：１）により精製することにより、黄色の油状物として式１２ａの化合物及び式１２ｂの化合物の混合物２．４０２ｇを得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ.1.76 (s, 0.6H), 1.79 (s, 1H), 1.99 (dt, J= 7.6, 1.5 Hz, 1H), 2.02 (dt, J= 7.6, 1.5 Hz, 0.6H), 2.42-2.44 (m, 0.6H), 2.48-2.51 (m, 1H), 3.38 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 3.55-3.56 (m, 1.6H), 3.59 (m, 0.6H), 3.75 (s, 1.8H), 3.77 (s, 3H), 4.08 (t, J= 6.9 Hz, 0.6H), 4.18 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 4.41 (d, J= 6.5 Hz, 0.6H), 4.49 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 5.32 (dd, J= 4.0, 47.0 Hz, 1H), 5.35 (dd, J= 3.0, 48.0 Hz, 0.6H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ37.37, 37.88, 51.87 (d, J= 19.5 Hz), 51.93 (d, J= 18.2 Hz), 52.34, 52.42, 56.83 (d, J= 7.8 Hz), 57.73, 57.84, 58.20 (d, J= 2.6 Hz), 70.85 (d, J= 5.2 Hz), 72.65 (d, J= 2.6 Hz), 125.93 (d, J= 181.7 Hz), 127.28 (d, J= 183.0 Hz), 168.63 (d, J= 23.4 Hz), 168.71 (d, J= 24.7 Hz). 19F NMR (470 MHz, DMSO‐d6): δ-198.56 (dd, J= 32.9, 47.5 Hz), -198.20 (dd, J= 32.9, 48.0 Hz).  HRMS (ES)m/z: [M+Na]+ calcd for C8H11O4FNa; 213.0539, found 213.0530. IR (neat) 3506, 3032, 2959, 1758, 1639, 1440, 1408, 1364, 1288, 1226, 1098, 1077, 1012, 965, 917, 838, 802, 732, 668, 564, 444 cm-1.
（実施例４）
(1R,2R,4S,5S,6R)-6-フルオロ-2,4-ジヒドロキシビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸メチル(２)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
　式１２ａの化合物及び式１２ｂの化合物の混合物２．３３４ｇ（１２．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（脱水、２０ｍＬ）溶液を、－５０℃に冷却し、０．９４ｍｏｌ／Ｌトリエチルアルミニウムヘキサン溶液２９．０ｍＬ（２７．２６ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって添加した。その間、内部の温度を－６０℃から－５０℃の間に保った。－５０℃で３０分間攪拌した後、１ｍｏｌ／Ｌリチウムヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）ヘキサン溶液２３．６ｍＬ（２３．６０ｍｍｏｌ）を４５分間にわたって添加した。その間、内部の温度を-５０℃から-４０℃の間に保った。－５０℃で２時間攪拌した後、５℃に冷却した２５％クエン酸水溶液４４．３ｇの中へ反応液を３０分間にわたって添加した。この反応液を酢酸エチル５０ｍＬで４回抽出し、減圧濃縮した。濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル）により精製することにより、黄色の油状物を得た。この油状物を酢酸エチル３．０ｇと水０．５ｇの混合液から晶析させることにより、無色結晶として式２の化合物を１．０２７ｇ得た。
mp 73.9－76.5℃、1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ1.64 (dd, J= 4.4, 15.3 Hz, 1H), 1.96 (m, 1H), 2.17 (s, 2H), 3.72 (br s, 3H), 4.18 (d, J= 5.0 Hz, 2H), 4.93 (br s, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ38.03 (d, J= 11.7 Hz), 45.76 (d, J= 7.8 Hz), 52.64, 71.53, 77.52, 79.42, 168.78 (d, J= 26.0 Hz). 19F NMR (470 MHz, DMSO-d6): δ-216.827. HRMS (ES)m/z: [M+Na]+ calcd for C8H11O4FNa; 213.0539, found 213.0537． IR (KBr) 3549, 3413, 3295, 3246, 2964, 2922, 1732, 1616, 1467, 1442, 1381, 1336, 1285, 1265, 1235, 1198, 1181, 1130, 1078, 1041, 994, 947, 890, 805, 777, 733, 646, 566, 537, 480 cm-1.
（実施例５）
(1R,2R,4S,5S,6R)-2-(アセチルオキシ)-6-フルオロ-4-ヒドロキシビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸メチル(３)
５０ｍＬスミロンチューブ（住友ベークライト製）にNOVOZYM 735を１２．０ｍＬ、Toyonite 200Mを６．０ｇ、100mMリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）を３０ｍＬ入れ室温（２５℃）、で１８時間振盪（１００ｒｐｍ）した。振盪終了後桐山濾紙Ｎｏ．５Ｂで濾過後、４日間室温で減圧乾燥して固定化酵素を得た。得られた固定化酵素の２．０ｇを６ｍＬ容カラム（ボンドエルートリザーバーフリット付き：発売元ジーエルサイエンス（株））に充填した。
式２の化合物の結晶３．１ｇを酢酸ビニル／アセトン（１０：１）１３６．５ｍＬに溶解した溶液を、上記の固定化酵素を充填したカラムにシリコンチューブを付してペリスタポンプ（アトー（株）製）で送液した。送液速度は２０ｍＬ／時間であった。
送液終了後、溶出液をＴＬＣ法とＨＰＬＣ法で分析した結果、式３の化合物を２．９５ｇ（収率７９．０５％）光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．で得た。溶出液を減圧濃縮後、濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色油状物として式３の化合物を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ1.96 (dd, J= 4.6, 16.1 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.28 (ddd, J= 6.1, 13.4, 16.4 Hz, 1H), 2.37 (br s, 1H), 2.41 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.44 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.45 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 5.29 (d, J= 6.1 Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ21.17, 34.96 (d, J= 10.4 Hz), 37.93 (d, J= 11.7 Hz), 42.44 (d, J= 9.1 Hz), 52.91, 72.90, 75.49, 79.33, 168.55 (d, J= 25.9 Hz), 170.28. 19F NMR (470MHz, CDCl3): δ-217.73. HRMS (ES) m/z: [M+Na]+calcd for C10H13O5FNa; 255.0645, found 255.0628. IR (neat): 3451, 2960, 1738, 1442, 1373, 1318, 1232, 1115, 1074, 1045, 1016, 993, 950, 867, 800, 788, 736, 654, 629, 608, 573, 473 cm-1.
（実施例６）
(1R,2R,5S,6S)-2-(アセチルオキシ)-6-フルオロ-4-オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸メチル(４)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
　式３の化合物 １．１０ｇ（４．７４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、５ｍＬ）溶液を、－１０℃に冷却し、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）１５．１ｍｇ（０．０９７ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム１０９．２ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）、水２．２ｍＬを順次添加した後、１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液４．２３０ｇ（５．６８ｍｍｏｌ）を添加した。この間、内部の温度を－１０から０℃の間に保った。－１０から０℃で１時間攪拌した後、分液した。水層をトルエン１０ｍＬで再抽出し、ジクロロメタン層、トルエン層をそれぞれ水１ｍＬで洗浄した。有機層を合わせて減圧濃縮後、トルエン１０ｍＬを加えて、再度減圧濃縮し、淡黄色の油状物９７２ｍｇを得た。トルエンから晶析させることにより、無色結晶として式４の化合物を５１２．５ｍｇ得た。
mp: 88.4-88.9℃, 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.12 (s, 3H), 2.37 (dd, J= 3.8, 19.5 Hz, 1H), 2.66 (dt, J= 19.5, 5.9 Hz, 1H), 2.73 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 2.93 (dd, J= 1.5, 6.1 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 5.50 (d, J= 6.1 Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ20.86, 38.18 (d, J= 10.4 Hz), 38.99 (d, J= 14.3 Hz), 43.48 (d, J= 3.9 Hz), 53.41, 69.09 (d, J= 2.5 Hz), 79.26, 166.42 (d, J= 25.9 Hz), 170.02, 204.35. 19F NMR (470MHz, CDCl3): δ-210.68. MS m/z 230.0 [M]+. IR (KBr): 3102, 2995, 1756, 1738, 1441, 1397, 1373, 1348, 1326, 1305, 1260, 1219, 1173, 1108, 1084, 1037, 1024, 1012, 983, 954, 907, 870, 829, 782, 738, 651, 640, 626, 474, 461 cm-1.
（実施例７）
(1S,4R,4'S,5R,5'S,6S)-4-(アセチルオキシ)-6-フルオロ-4',5'-ジフェニルスピロ[ビシクロ[3.1.0]ヘキサン-2,2-[1,3]ジオキソラン]-6-カルボン酸メチル(６)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
(1S,2S)-1,2-ジフェニルエタン-1,2-ジオール５．００ｇ（２３．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、１９ｍＬ）溶液を３０℃に加熱し、ヨウ素１．５ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）、1,1,1-トリメチル-N-（トリメチルシリル）シランアミン（ＨＭＤＳ）４．５４ｇ（２８．１３ｍｍｏｌ）を順次添加した後、３５℃で１時間攪拌した。室温まで放冷した後、減圧濃縮した。濃縮残渣にトルエン２５ｍＬを加えて再度減圧濃縮した。これを２回繰り返した後、トルエン５ｍＬを加えて、(4S,5S)-2,2,7,7-テトラメチル-4,5-ジフェニル-3,6-ジオキサ-2,7-ジシラオクタン（５）のトルエン溶液１３．６６ｇを得た（溶液１）。
式４の化合物の結晶４０１ｍｇ（１．７４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、３ｍＬ）溶液に溶液１を１．２８３ｇ（１．９７ｍｍｏｌ）添加し、この溶液を－１０℃に冷却した後、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）３５．７ｍｇ（０．１６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、１ｍＬ）溶液を添加した。－１０℃で３．５時間攪拌した後、上記溶液１を１．２３８ｇ（１．８９ｍｍｏｌ）追加した。－１０℃でさらに３時間攪拌した後、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）３９．６ｍｇ（０．１７８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、１ｍＬ）溶液を追加した。－１０℃で一晩攪拌した後、ピリジン０．０３ｍＬ（０．３７１ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で２０分間攪拌した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液１ｍＬを添加し、０℃で２０分間攪拌した後、分液した。水層をジクロロメタン２ｍＬで２回再抽出し、有機層を合わせて水１ｍＬで洗浄した。減圧濃縮後、濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製したのち、メタノールから晶析させることにより、無色結晶として式６の化合物を３２６．４ｍｇ得た。
mp: 123.5-123.7℃, 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.11 (s,3H), 2.46 (dd, J= 4.3, 15.2 Hz, 1H), 2.47 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.56 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.60 (dt, J= 15.9, 6.3 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 4.79 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.88 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 7.19-7.21 (m, 2H), 7.26-7.31 (m, 5H), 7.33-7.35 (m, 3H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ21.20, 34.85 (d, J= 11.3 Hz), 37.26 (d, J= 12.6 Hz), 43.95 (d, J= 7.4 Hz), 53.05, 72.91, 78.80, 85.67, 86.19, 117.52, 126.22, 126.83, 128.32, 128.47, 128.54, 128.60, 136.08, 136.82, 168.51 (d, J= 24.9 Hz), 170.56. 19F NMR (470MHz, CDCl3): δ-216.72. MS m/z: 449.1 [M+Na]+. IR (KBr): 3456, 3068, 2964, 2916, 1737, 1606, 1497, 1456, 1442, 1359, 1330, 1258, 1238, 1197, 1133, 1102, 1053, 1024, 986, 936, 916, 870, 822, 791, 765, 755, 700, 683, 648, 608, 531, 466 cm-1.
（実施例８）
(1S,4R,4'S,5R,5'S,6S)-4-(アセチルオキシ)-6-フルオロ-4',5'-ジフェニルスピロ[ビシクロ[3.1.0]ヘキサン-2,2-[1,3]ジオキソラン]-6-カルボン酸メチル(６)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
　式３の化合物 １．００３ｇ（４．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、５ｍＬ）溶液を、－１０℃に冷却し、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）１４．５ｍｇ（０．０９３ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム９９．２ｍｇ（１．１８ｍｍｏｌ）、水２ｍＬを順次添加した後、１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液３．８５４ｇ（５．１８ｍｍｏｌ）を添加した。この間、内部の温度を－１０～０℃の間に保った。－１０～０℃で１時間攪拌した後、分液した。有機層を水１ｍＬで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、黄色油状物として式４の化合物を１．０５ｇ得た。得られた式４の化合物のジクロロメタン（１８ｍＬ）溶液に、(1S,2S)-1,2-ジフェニルエタン-1,2-ジオール１．１１１ｇ（５．１９ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を－５℃に冷却した後、トリフルオロメタンスルホン酸１３１．８ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、２ｍＬ）溶液を添加した。－５℃で２時間、室温で２０時間攪拌した後、ピリジン０．１ｍＬ（１．２４ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で２０分間攪拌した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液１．６ｍＬを添加し、０℃で２０分間攪拌した後、分液した。水層をジクロロメタン５ｍＬで２回再抽出し、有機層を合わせて水２ｍＬで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、減圧濃縮し、濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、アモルファス状の式６の化合物を１．３８８ｇ得た。メタノールから晶析させることにより、無色結晶９４７ｍｇを得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ2.12 (s, 3H), 2.43-2.49 (m, 2H), 2.56-2.65 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 4.80 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.39 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 7.18-7.39 (m, 10H). MS m/z: 449.2 [M+Na]+. 
（実施例９）
(1S,4R,4'S,5R,5'S,6S)-6-フルオロ-4-ヒドロキシ-4',5'-ジフェニルスピロ[ビシクロ[3.1.0]ヘキサン-2,2-[1,3]ジオキソラン]-6-カルボン酸メチル(１)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
　式６の化合物の結晶２０１．３ｍｇ（０．４７２ｍｍｏｌ）にメタノール（脱水、２ｍＬ）を加えて、５０℃に加熱し、結晶を溶解させた。この溶液に炭酸水素ナトリウム４０．４ｍｇ（０．４８１ｍｍｏｌ）を添加し、４５から５０℃で１．５時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム１９．９ｍｇ（０．２３７ｍｍｏｌ）を追加し、更に２時間攪拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、メタノールを概ね留去して得られた固形物に、トルエン４ｍＬを加えて５０℃に加熱し、水１ｍＬを加えて攪拌分液した。水層をトルエン４ｍＬで再抽出し、有機層を合わせて減圧濃縮し、白色固体１９４．７ｍｇを得た。ヘプタン／酢酸エチル（３／２）混合溶媒から晶析させることにより、無色結晶として式１の化合物を１０１．３ｍｇ得た。
mp: 120.3-120.7℃, 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.35 (dd, J= 4.0, 15.5 Hz, 1H), 2.38 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.48 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.51 (dt, J= 15.3, 5.7 Hz, 1H), 2.61 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 4.48 (dd, J= 5.4, 9.6 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.18 (dd, J= 3.1, 6.5 Hz, 2H), 7.26 (dd, J= 2.9, 6.7 Hz, 2H), 7.29-7.31 (m, 3H), 7.34-7.36 (m, 3H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ36.76 (d, J= 13.0 Hz), 37.56 (d, J= 11.7 Hz), 45.89 (d, J= 7.8 Hz), 52.99, 70.90, 79.67, 85.96, 86.09, 117.71, 126.29, 126.85, 128.35, 128.44, 128.59, 128.68, 135.79, 136.45, 168.82 (d, J= 25.9 Hz). 19F NMR (470 MHz, CDCl3): δ-216.52. MS m/z: 407.2 [M+Na]+. IR (KBr): 3568, 3065, 3030, 2957, 2888, 1737, 1607, 1497, 1446, 1379, 1324, 1306, 1230, 1145, 1111, 1055, 1026, 1012, 987, 913, 868, 824, 760, 699, 678, 647, 600, 540, 478 cm-1.
（実施例１０）
(1S,5S,6S)-6-フルオロ-4-オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-エン-6-カルボン酸メチル(７)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
　式３の化合物１０６．２ｍｇ（０．４５７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液を、－５℃に冷却し、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）１．９ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム１１．５ｍｇ（０．１３７ｍｍｏｌ）、水０．２ｍＬを順次添加した後、１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液０．４ｍＬ（０．５３７ｍｍｏｌ）を添加した。この間、内部の温度を－１０から０℃の間に保った。－１０から０℃で４時間攪拌した後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、攪拌分液した。水層をトルエン５ｍＬで３回再抽出し、有機層を合わせて減圧下濃縮した。濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、式７の化合物を無色油状物として３８．６ｍｇ得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ2.79 (m, 1H), 3.23 (dd, J=3.0, 5.7 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 6.07 (dd, J=0.6, 5.6 Hz, 1H), 7.42 (m, 1H). MS m/z 170.0 [M]+. 
（実施例１１）
(1S,5S,6S)-6-フルオロ-4-オキソビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-エン-6-カルボン酸メチル(７)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
　式３の化合物の結晶９８３ｍｇ（４．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水、５ｍＬ）溶液を、－１０℃に冷却し、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）１３．７ｍｇ（０．０８９ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム１０１．６ｍｇ（１．２１ｍｍｏｌ）、水２ｍＬを順次添加した後、１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液３．８４４ｇ（５．１６ｍｍｏｌ）を添加した。この間、内部の温度を－１０～０℃の間に保った。－１０～０℃で１時間攪拌した後、分液した。有機層を水１ｍＬで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、黄色油状物として式４の化合物を１．０８２４ｇ得た。得られた式４の化合物のジクロロメタン（１８ｍＬ）溶液に、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン０．６３ｍＬ（４．０７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１時間攪拌した後、１Ｎ塩酸４．２ｍＬを添加し、攪拌分液した。水層をジクロロメタン５ｍＬで再抽出した後、有機層を飽和食塩水５ｍＬで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、減圧濃縮し、濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、式７の化合物を無色油状物として５６７ｍｇ得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.78-2.79 (m, 1H), 3.24 (dd, J= 3.0, 6.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 6.06 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.43 (dd, J= 2.8, 5.8 Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ34.00 (d, J= 14.3 Hz), 34.42 (d, J= 13.0 Hz), 53.15, 89.77 (d, J= 259.2 Hz), 133.26, 152.34 (d, J= 2.6 Hz), 166.03 (d, J= 26.0 Hz), 198.54. 19F NMR (470MHz, CDCl3): δ-214.93. MS m/z: 169.0 [M-H]-
　以下、実施例１２～１９においては、種々の微生物由来の酵素を用いて、式２の化合物を不斉アセチル化し、式３の化合物を得るためのそれぞれの反応条件検討の結果を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
　原料である式２の化合物、目的物である式３の化合物及びそのエナンチオマーである式３’の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３及び式３’の化合物＝０．４０
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；メタノール／０．１％リン酸水溶液＝３８／６２
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；
式２の化合物：  ３．８分
式３の化合物：　１０．３分
式３’の化合物：９．０分
（実施例１２）
＜酵素の探索＞
　試験に供する酵素５０ｍｇをそれぞれ共栓付き１０ｍＬ容試験管に入れ、酢酸ビニル２．７ｍＬ、アセトン０．３ｍＬ、式２の化合物２０ｍｇを添加し、１８～４８時間、２５℃、スターラーで撹拌した（６００ｒｐｍ）。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲ（日本ポール（株）製　径２５ｍｍ）を用いた濾過で酵素残渣を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後、その一部をとり、ＴＬＣ分析及びＨＰＬＣ分析を行った。表１、表２及び表３に記される４１種類の酵素をスクリーニングした。
　ＴＬＣ分析の結果、表１及び表２に挙げた酵素を使用した反応では、ＴＬＣ上のＲｆ値がラセミ標準品（式３の化合物及び式３’の化合物）のＲｆ値（０．４０）と一致し、かつ同じ呈色（褐色）を示したスポットを検出した。ＴＬＣ分析でアセチル化体の検出が顕著であった酵素のうち、ＨＰＬＣ分析によって目的生成物である式３の化合物が確認されたものについて、目的生成物の生成量と光学純度を表１に示す。また、ＴＬＣ分析でアセチル化体の検出が顕著であった酵素のうち、ＨＰＬＣ分析によって目的生成物とは異なる光学異性体の式３’の化合物が確認されたものについて、その生成量と光学純度を以下の表２に挙げる。
　なお、本実施において式３の化合物及び式３’の化合物のいずれの生成も検出出来なかった酵素を表３に挙げる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000066
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000067
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000068
（実施例１３）
＜酵素固定化検討その１＞
　トヨナイト（Toyonite）によるNOVOZYM 735（製品名：ノボザイムズジャパン製；Candida antarctica Lipase A由来） の固定化検討
　Toyonite 200、 Toyonite 200P、Toyonite 200M、 Toyonite 200Aの各１ｇを５０ｍＬ容のスミロンチューブ（住友ベークライト（株）製）に入れ、これに100mMリン酸カリウム緩衝液（pH７）１８ｍＬとNOVOZYME735 ２ｍＬを加え１０℃、１５時間、１２０ｒｐｍで振盪した。振盪終了後、桐山漏斗（No.６濾紙使用）で濾過し１０ｍＬの100mMリン酸カリウム緩衝液（pH７）で洗浄濾過後、１０分間風乾しさらに減圧デシケーター中で４時間室温乾燥してそれぞれの固定化酵素４種類すなわちNOVOZYM 735/Toyonite 200、 NOVOZYM 735/Toyonite 200P、NOVOZYM 735/Toyonite 200M、 NOVOZYM 735/Toyonite 200Aを得た。
　上記４種類の固定化酵素それぞれ１０ｍｇをそれぞれ共栓付き１０ｍＬ容試験管に入れ、酢酸ビニル１ｍＬ、アセトン０．２ｍＬ、２の結晶５０ｍｇを添加して、２０時間、３７℃、スターラーで撹拌（５７０ｒｐｍ）して反応を行った。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲ（日本ポール（株）製　径２５ｍｍ）を用いた濾過で固定化酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後ＨＰＬＣ分析した。目的生成物である式３の化合物の生成量と光学純度を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000069
（実施例１４）
＜酵素固定化検討その２＞
　１０種類の酵素（Lipase AS "Amano"、Acylase 1500"Amano"、Lipase PS Amano SD、Lipase G"Amano"50、Lipase AYS　"Amano"、Lipase R"Amano"、Lipase AY"Amano"30G、Lipase AK "Amano"20（天野エンザイム（株）より入手）、豚膵臓由来リパーゼII型（シグマアルドリッチジャパン（株）より入手）、Chirazyme L8 lyo（ロシュダイアグノスティクスより入手））それぞれ１～１０ｇを３０ｍＬの100mMリン酸カリウム緩衝液（pH７）に懸濁し桐山濾紙No.5Bで濾過後、その濾液を５０ｍＬ容のスミロンチューブ中それぞれToyonite 200M １ｇと混ぜて、室温（２５℃）、１７時間４０分間、１２０ｒｐｍで振盪した。振盪後、それぞれ桐山濾紙No.5Bで濾過後さらに室温下で５日間減圧乾燥して各固定化酵素を得た。
　上記１０種類の固定化酵素各２０ｍｇをそれぞれ共栓付き１０ｍＬ容試験管に入れ、酢酸ビニル１．０ｍＬ、アセトン０．１ｍＬ、式２の化合物の結晶を２０ｍｇ添加、２１時間、２３℃、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して反応を行った。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲ（日本ポール（株）製　径２５ｍｍ）を用いた濾過で固定化酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後ＨＰＬＣ分析した。目的生成物である式３の化合物が確認されたものについて、目的生成物の生成量と光学純度を表５に示す。また、目的生成物とは異なるエナンチオマーの式３’の化合物が確認されたものについて、その生成量と光学純度を表６に挙げる。Lipase PS Amano SDは、実施例１２では化合物式３’の化合物を生成する酵素であったが、酵素を固定化した本酵素反応では式３の化合物の生成が検出されるようになった。また、豚膵臓由来リパーゼII型については、酵素を固定化してもアセチル化反応は確認されなかった。
　実施例１２ではアセチル化反応が検出できなかった酵素や異なるエナンチオマーの式３’の化合物を生成していた酵素の中でも、酵素を固定化することにより目的生成物である式３の化合物を顕著に生成するものがあることが表５に見出された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000070
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000071
（実施例１５）
＜固定化酵素検討その３＞
液状酵素（LIPOZYME TL100、NOVOZYM CALBL、NOVOZYM 735（ノボザイムズジャパン（株）より入手））それぞれ２ｍＬ又は粉末酵素（Lipase AS "Amano"（天野エンザイム（株）より入手））１ｇをそれぞれスミロンチューブ中１０ｍＬの100mMリン酸カリウム緩衝液（pH７）に混合又は溶解した後、１ｇのToyonite 200M又はToyonite 200Pと混ぜ、１０℃１２０ｒｐｍで２２時間振盪した。振盪後、それぞれ桐山濾紙No.5Bで濾過後さらに室温下で５日間減圧乾燥して各固定化酵素（８種類）を得た。
上記８種類の固定化酵素各２０ｍｇをそれぞれ共栓付き１０ｍＬ容試験管に入れ、酢酸ビニル１．０ｍＬ、アセトン０．１ｍＬ、式２の化合物の結晶２０ｍｇを添加し、２１時間、２３℃、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して反応を行った。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲ（日本ポール（株）製　径２５ｍｍ）を用いた濾過で固定化酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後ＨＰＬＣ分析した。目的生成物である式３の化合物が確認されたものについて、目的生成物の生成量と光学純度を表７に示す。表７に示した組み合わせ以外の固定化酵素による酵素反応では、式３の化合物及び式３’の化合物は未検出であった。
　NOVOZYM 735の固定化酵素による酵素反応ではいずれも式３の化合物が検出された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000072
（実施例１６）
　Candida antarctica Lipase Aの凍結乾燥酵素であるChirazyme L-5 lyo（ロシュ・ダイアグノスティクスより入手）１２．５ｍｇ、酢酸ビニル／アセトン（９：１）溶液１．２ｍＬ、式２の化合物の結晶５４．５５ｍｇを１０ｍＬの蓋付きサンプルチューブに入れスターラーにて５７０ｒｐｍ、２２時間、３７℃で撹拌して反応を行った。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲ（日本ポール（株）製　径２５ｍｍ）を用いた濾過で固形分を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後ＨＰＬＣ分析した。その結果、光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．の式３の化合物が４７．７８ｍｇ得られたことが明らかとなった。
（実施例１７）
＜カラムに充填した固定化酵素での検討＞
　５０ｍＬスミロンチューブ（住友ベークライト製）にNOVOZYM 735を１２．０ｍＬ、Toyonite 200Mを６．０ｇ、100mMリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）を３０ｍＬ入れ室温（２５℃）、で１８時間振盪（１００ｒｐｍ）した。振盪終了後桐山濾紙Ｎｏ．５Ｂで濾過後、４日間室温で減圧乾燥して固定化酵素を得た。得られた固定化酵素の４．０ｇを６ｍＬ容カラム（ボンドエルートリザーバーフリット付き：発売元ジーエルサイエンス（株））に充填した。
　式２の化合物の結晶１０．０９ｇを酢酸ビニル／アセトン（１０：１）４４３ｍＬに溶解した溶液を、上記の固定化酵素を充填したカラムにシリコンチューブを付してペリスタポンプ（アトー（株）製）で送液した。送液速度は１１９ｍＬ／時間であった。送液終了後、溶出液をＴＬＣ法とＨＰＬＣ法で分析した結果、式３の化合物を１０．７１ｇ（収率８８．３４％）光学純度９７．５８％ｅ．ｅ．で得た。
　上記の送液終了した固定化酵素充填カラムを減圧乾燥して再生した後、室温保管した。化合物２の結晶８．８９ｇを酢酸ビニル／アセトン（１０：１）３５６．５ｍＬに溶解した溶液を、上記保管していた固定化酵素を充填したカラムにシリコンチューブを付してペリスタポンプ（アトー（株）製）で送液した。送液速度は１０１ｍＬ／時間であった。
　送液終了後、溶出液をＴＬＣ法とＨＰＬＣ法で分析した結果、式３の化合物を９．６１ｇ（収率８９．９０％）光学純度９８．５４％ｅ．ｅ．で得た。以上の結果はCandida antarctica 由来Lipase AをToyonite 200Mに固定化した固定化酵素が再生後繰り返し使用できることを示唆した。
（実施例１８）
＜固定化酵素の調製と探索：変換能の分析＞
糸状菌または酵母の１１１菌株（Mucor、Rhizopus、Candida、Dipodascus、Galactomyces、Geotrichum、Kluyveromyces、Endomyces、Zygosaccharomyces、Pichia、Sporobolomycesの計１１属に由来する菌株）をそれぞれ脱脂米糠３％、コーンステープリカー（Corn steap liquor）３％、大豆油１％、硫酸アンモニウム０．２％（pH6）からなる培地４０ｍｌを含む２００ｍｌ三角フラスコで３日間、１８℃～２８℃で通気撹拌培養した。培養終了後、各微生物培養液を個別に遠心管に移し、遠心器により培養液を菌体と菌体上清液に遠心分離（８０００ｒｐｍ、１２～１５分間）した。得られたそれぞれの微生物菌体上清液（スミロンチューブなど遠心管中）に各０．１容の１Ｍリン酸カリウム緩衝液pH7および担体Toyonite 200Mを０．５ｇ加えて２５℃で一晩（最大２０時間）振盪した。振盪終了後、５分間静置の後、担体Toyonite 200Mが遠心管の底に沈んだ後、上層の溶液をデカンテーションで除いてからこれに０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液pH7～pH7.5を15ml加えて撹拌再懸濁した。これを合計２回繰り返した後、桐山濾紙No.5B（商品名）を付した桐山漏斗（商品名）を用いて減圧濾過して濾紙上に各微生物培養液上清由来の固定化酵素を得た。各固定化酵素は濾紙上で数分間減圧濾過乾燥の後、減圧乾燥デシケータ（乾燥シリカゲル入り）に入れ、一晩（最大２０時間）乾燥した。乾燥を終了した各固定化酵素を以下の酵素反応に用いた。
　上記の操作により得られた１１１種類の固定化酵素各２０ｍｇを、それぞれネジ蓋付き３．５ｍＬ容のサンプルチューブに入れ、酢酸ビニル１．０ｍＬ、アセトン０．１ｍＬ、式２の化合物の結晶を２０ｍｇ添加、２１時間、２５℃、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して反応を行った。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲを用いた濾過で固定化酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後、前述のＨＰＬＣ法で分析した。
　上記１１属に分類される菌株（１１１株）のうちジエトリカム（Geotrichum）属及びガラクトミセス（Galactomyces）属の菌株由来の酵素を使用した場合に目的の反応が顕著に進んだ。目的生成物である式３の化合物が著量確認されたものについて、菌株、目的生成物の生成量及び光学純度を表８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000073
（実施例１９）
＜固定化酵素の連続反応実験＞
５００ｍＬ容の蓋付きプラスチックビンにNOVOZYM ＣＡＬＡＬ（商品名：ノボザイムズ・ジャパンより入手）を１００ｍＬ、Toyonite 200Mを１００ｇ、100mMリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）を２００ｍＬ入れ室温（２５℃）、で１８時間振盪（１６０ｒｐｍ）した。振盪終了後桐山濾紙Ｎｏ．５Ｂで濾過後、４日間室温で減圧乾燥して固定化酵素を得た。得られた固定化酵素の４．０ｇを６ｍＬ容カラム（ボンドエルートリザーバーフリット付き：発売元ジーエルサイエンス（株））に充填した。
　次に式２の化合物の結晶８１．００ｇを酢酸ビニルにアセトン２０％を含む溶液２，７００ｍＬに溶解した溶液を調製した。得られた式２を８１．０ｇ含む溶液をシリコンチューブとペリスタポンプ（アトー（株）製）を用いて、上記の固定化酵素を充填したカラムに送液した。送液速度は最大１０２ｍＬ／時間であった。
送液終了後、溶出液をＴＬＣ法とＨＰＬＣ法で分析した結果、式３の化合物を８６．７３ｇ（収率８９．１％）光学純度９７．１４％ｅ．ｅ．～９８．０６％ｅ．ｅ．で得た。
　すなわち固定化酵素４．０ｇを用いて８１．００ｇの式２の化合物から少なくとも８６．７３ｇの式３の化合物を光学純度９７．１４％ｅ．ｅ．～９８．０６％ｅ．ｅ．で得られることを確認する事が出来た。
（実施例２０）
＜ヘキサン酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
式２の化合物２０１．７ｍｇを７．２ｍｌのヘキサン酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素１５０ｍｇを加え、２５℃で２１時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
　反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲを用いた濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－１の化合物１５．５ｍｇ（光学純度７６．６５％ｅ．ｅ．）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ0.90 (t, J= 6.5 Hz, 3H), 1.33 (m, 2H), 1.64 (m, J= 7.0, 8.0 Hz, 2H), 1.94 (ddd, J=4.5, 16.0Hz 1H), 2.28 (ddd, J= 5.5, 6.0, 13.0 Hz, 1H), 2.34 (dt, J= 7.5 Hz, 2H), 2.42 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.43 (dt,J=6.5Hz, 1H), 5.31 (dt,J=6.0Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ13.86, 22.26, 24.56, 31.22, 34.38, 35.04 (d,J=11.7Hz), 37.97(d, J=10.3Hz), 42.53(d, J=9.1Hz), 52.97, 73.17, 75.33, 168.49, 168.69, 173.0. MS (Shimadzu LCMS-210EV ESI/APCI Dual positive) m/z: [M+Na]+311.1
なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－１の化合物及びそのエナンチオマーである式３－１’の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－１及び３－１’の化合物＝０．６７
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；（メタノール：アセトニトリル＝１：１）／０．１％リン酸水溶液＝５２／４８
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；
式３－１の化合物：　７．３分
式３－１’の化合物：８．３分
（実施例２１）
＜安息香酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
 式２の化合物１９９．０ｍｇを７．２ｍｌの安息香酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素１５０ｍｇを加え、２５℃で２１時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
　反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲによる濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－２の化合物１８．０ｍｇ（光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.13 (ddd, J= 4.5, 16.5Hz, 1H), 2.40 (ddd, J=3.0, 7.0, 10.0Hz, 1H), 2.47 (dd, J= 6.5Hz, 1H), 2.59 (dd, J=6.5Hz 1H), 3.82(s, 3H), 4.51 (dt, J= 6.0 Hz, 1H), 5.53 (dt, J=5.5Hz 1H), 7.46 (t, J=8.0Hz, 2H), 7.59 (t, J=8.0Hz, 1H), 8.04 (d, J=8.5Hz, 1H), 8.05 (d, J=8.0Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ35.11(d, J=10.3Hz), 38.08(d, J=11.7Hz), 42.73(d, J=9.1Hz), 52.99, 73.19, 76.25, 128.49, 129.65, 133.35, 165.80, 168.46, 168.67. MS (Shimadzu LCMS-210EV ESI/APCI Dual positive) m/z: [M+Na]+317.0, [α] D 24=－11.0deg
なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－２の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－２の化合物＝０．５８
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；（メタノール：アセトニトリル＝１：１）／０．１％リン酸水溶液＝５２／４８
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；式３－２の化合物：　８．１分
（実施例２２）
＜ピバリン酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
式２の化合物２００．３ｍｇを７．２ｍｌのベンゾイル酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素１５０ｍｇを加え、２５℃で２１時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
　反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲによる濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－３の化合物８．６ｍｇ（光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ1.22 (s, 9H), 1.91 (ddd, J=4.5, 16.0Hz, 1H), 2.29 (ddd, J= 5.5, 13.0Hz, 1H), 2.41 (dd, J=6.5Hz 1H), 2.41(dd, J=6.0Hz, 1H), 3.82(s, 3H), 4.45 (dt, J= 5.0, 17.5Hz, 1H), 5.28(dt, J=6.0Hz 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ27.06, 34.90(d, J=11.3Hz), 37.94(d, J=11.2Hz), 38.65, 42.53(d, J=8.8Hz), 53.00, 73.22, 75.48, 168.54, 177.55. MS (Shimadzu LCMS-210EV ESI/APCI Dual positive) m/z: [M+Na]+297.1, [α] D 25=+6.0deg
　なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－３の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－３の化合物＝０．６９
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；（メタノール：アセトニトリル＝１：１）／０．１％リン酸水溶液＝５２／４８
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；式３－３の化合物：　５．０分
（実施例２３）
＜モノクロロ酢酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
式２の化合物２０１．４ｍｇを７．２ｍｌのモノクロロ酢酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素１５０ｍｇを加え、２５℃で２１時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
　反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲによる濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－４の化合物２０１．２ｍｇ（光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.00 (ddd, J=4.5, 16.5Hz, 1H), 2.31 (ddd, J=6.0, 13.0, 16.5Hz, 1H), 2.43 (dd, J= 7.0Hz, 1H), 2.47 (dd, J=7.0Hz 1H), 3.82 (s, 3H), 4.14 (s, 2H), 4.47(dt, J=5.5Hz, 1H), 5.36(dt, J=6.5Hz 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ34.56(d, J=11.2Hz), 37.87(d, J=11.2Hz), 40.82, 42.27(d, J=8.7Hz), 52.92, 72.43, 79.07, 166.65, 168.24, 168.45. MS (Shimadzu LCMS-210EV ESI/APCI Dual positive) m/z: [M+Na]+289.0, [α] D 25=+10.2deg
　なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－４の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－４の化合物＝０．５３
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；（メタノール：アセトニトリル＝１：１）／０．１％リン酸水溶液＝５２／４８
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；式３－４の化合物：　４．４分
（実施例２４）
＜ブタン酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
式２の化合物２０９．０ｍｇを７．２ｍｌのモノクロロ酢酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素５０ｍｇを加え、２５℃で１５時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲによる濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－５の化合物（光学純度８９．８６％ｅ．ｅ．）を得た。
　なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－５の化合物及びそのエナンチオマーである式３－５’の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－５の化合物＝０．５５
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；（メタノール：アセトニトリル＝１：１）／０．１％リン酸水溶液＝５２／４８
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；
式３－５の化合物：　４．２分
式３－５’の化合物：　４．５分
（実施例２５）
＜プロピオン酸ビニルの反応＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
 式２の化合物２０２．４ｍｇを７．２ｍｌのモノクロロ酢酸ビニルおよび０．８ｍｌのアセトン混合溶液に溶解し、これに実施例２１で調製したものと同じ固定化酵素５０ｍｇを加え、２５℃で１５時間、スターラーで撹拌（６００ｒｐｍ）して酵素反応を行った。
反応終了後、反応液をエキクロディスク２５ＣＲによる濾過で固定化酵素を除いた後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、無色固形物として式３－６の化合物（光学純度９９．９９％ｅ．ｅ．）を得た。
　なお、原料である式２の化合物、目的物である式３－６の化合物及びそのエナンチオマーである式３－６’の化合物の生成状況は、以下に示すＴＬＣ法、及びＨＰＬＣ法により確認した。
（ＴＬＣ法：ＴＬＣ プレート；シリカゲルＳｉ６０（メルク社製、Art 1.5715））
展開溶媒；ｎ－ヘキサン/酢酸エチル＝１０/１
発色　　；アニスアルデヒド/濃硫酸/酢酸＝１/２/１００
Ｒｆ値　；式２の化合物＝０．２０、　式３－６の化合物＝０．５０
（ＨＰＬＣ法：カラム　ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ－ＲＨ　
　４．６ｍｍ ID×１５０ｍｍ Ｌ（ダイセル社製））
移動相　；メタノール／０．１％リン酸水溶液＝４４／５６
流速　　；０．８ｍＬ/ｍｉｎ
温度　　；３５℃
検出　　；ＵＶ　１９５ｎｍ
保持時間；
式３－６の化合物：　１８．１分
式３－６’の化合物：　１５．０分
（実施例２６）
＜ジアセチル化合物からの合成１＞　
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
アシル基受容体のシクロペンタノール０．０５ｍｌをイソプロピルエーテルに加えて２．０ｍｌとしたものに、式１３の化合物を５０ｍｇおよび表９に示した各酵素５０ｍｇを加え、室温（２４℃）にてスターラー（６００ｒｐｍ）で９４時間撹拌した。なお、式１３の化合物は、下記の参考例２に示した方法で製造した。
　表９に示した酵素のうち、Lipase AK"Amano" 20、Lipase PS"Amano"SD、CHE"Amano"2、Lipase AS"Amano"は市販のものを用いた。また、Lipase QLM、Lipase PS"Amano"SD、Lipase AK"Amano" 20、Lipase R"Amano"、Lipase AY"Amano"30GおよびLipase TLは、市販のものを実施例１４と同様の方法でToyonite 200MまたはToyonite 200Pに固定化して使用した。また、微生物Dipodascus australiensis NBRC10805の培養液上清由来の酵素は、実施例１８に記載の方法によりをToyonite 200Mに固定化して使用した。
　反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲを用いた濾過で酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後、前述の式３の化合物のＨＰＬＣ法で分析した。
表９に各酵素で反応させた後の式３の化合物の生成量と光学純度を示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000081
（実施例２７）
＜ジアセチル化合物から標品の合成２＞
　使用酵素としてLipase QLM、Lipase OF、Lipase PL及びNovozym CALALの各固定化酵素を用いて以下の酵素反応を行った。
　アシル基受容体のシクロペンタノール０．０５ｍｌをトルエンに加えて２．０ｍｌとしたもの、アシル基受容体のシクロペンタノール０．０５ｍｌをイソプロピルエーテルに加えて２．０ｍｌとしたもの、アシル基受容体の２－ブタノール０．０５ｍｌをトルエンに加えて２．０ｍｌとしたもの、アシル基受容体の２－ブタノール０．０５ｍｌをイソプロピルエーテルに加えて２．０ｍｌとしたもの、アシル基受容体の２－プロパノール０．０５ｍｌをトルエンに加えて２．０ｍｌとしたもの、およびアシル基受容体の２－プロパノール０．０５ｍｌをイソプロピルエーテルに加えて２．０ｍｌとしたものをそれぞれ用意し、それぞれに表１０に示した各酵素５０ｍｇと式１３の化合物５０ｍｇを加え室温（２１℃～２４℃）にてスターラー（６００ｒｐｍ）で１９時間撹拌した。反応終了後、エキクロディスク２５ＣＲを用いた濾過で固定化酵素を除き、溶液を減圧乾固してメタノール１ｍＬに溶解後、前述の式３の化合物のＨＰＬＣ法で分析した。
　表１０に各酵素で反応させた後の式３の化合物の生成量と光学純度を示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000082
（実施例２８）
フルオロ[(1R,5R)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]プロパン二酸ジメチル (１０a)及びフルオロ[(1S,5S)-5-ヒドロキシシクロペンタ-2-エン-1-イル]プロパン二酸ジメチル (１０b)の混合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
 　ジシクロペンタジエンをナス形フラスコに入れ、１８５から１９０℃に設定した油浴に浸した。３９から４１℃で留出する成分を集める（ドライアイス-アセトン浴でトラップ）ことにより無色油状物としてシクロペンタジエンを得た。得られたシクロペンタジエン１９．０４１ｇ（０．２８８ｍｏｌ）のジクロロメタン（１７０ｍＬ）溶液に、炭酸ナトリウム５５．７５ｇ（０．５２６ｍｏｌ）を入れ、－１５℃に冷却した。過酢酸（含量３８．９％）２８．１０ｇ（０．１４４ｍｏｌ）を添加した。その間、内部の温度を－１５℃から－１０℃の間に保った。－１５℃で３．５時間攪拌した後、過酢酸１６．８０ｇ（０．０８６ｍｏｌ）を追加し、－１５℃で１５時間、室温で４．５時間攪拌した後、固形物を濾去した。濾液を硫酸マグネシウム１０ｇで乾燥することにより、６－オキサビシクロ[３．１．０]ヘキサ‐２－エン（８）のジクロロメタン溶液２５０．６３ｇを得た。
フルオロプロパン二酸ジメチル（９）３９．９９ｇ（０．２６６ｍｏｌ）のメタノール（１２０ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシドの２５ｗ／ｗ％メタノール溶液５２．１７０ｇ（０．２４１ｍｏｌ）を５分間にわたって添加した。その間、内部の温度を２０℃から３０℃の間に保った。得られた溶液を２０分間攪拌した後、式８の化合物のジクロロメタン溶液２００．４３２ｇ（０．１１７ｍｏｌ）を８分間にわたって添加した。その間、内部の温度を２５℃から３５℃の間に保った。室温下で１７時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液１５３ｍＬを添加した。１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液２９ｇを添加し、攪拌した後、分液した。ジクロロメタン３０ｍＬで抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水５０ｍＬで洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、黄色の油状物として式１０ａの化合物及び式１０ｂの化合物の混合物１７．５８２ｇを得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3: δ2.32-2.39 (m, 1H), 2.45 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 2.75-2.84 (m, 1H), 3.47-3.58 (m, 1H), 3.87 (s, 6H), 4.54-4.60 (m, 1H), 5.46-5.49 (m, 1H), 5.87-5.89 (m, 1H).
（実施例２９）
(1R,2R,4S,5S,6R)-6-フルオロ-2,4-ジヒドロキシビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸メチル(２)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
式１１ａの化合物３０．００ｇ（１７２．２５ｍｍｏｌ）のクロロベンゼン（１４３．７８ｇ）溶液に、バナジルアセチルアセトナート（ＶＯ(ａｃａｃ)2）０．９１４ｇ（３．４４７ｍｍｏｌ）を室温下加えた。６０℃に加熱し、ｔｅｒｔ-ブチルヒドロペルオキシド（tＢｕＯＯＨ）の７０％トルエン溶液４４．９１ｇ（３４８．８３ｍｍｏｌ）を２５分間にわたって添加した。その間、内部の温度を５５℃から６０℃の間に保った。５５℃で５時間攪拌した後、室温まで放冷した。２０％チオ硫酸ナトリウム水溶液７３．６５ｇを加えて３０分間攪拌した後、酢酸エチル１３３ｍＬで２回抽出した。有機層を合わせ飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮することにより黄色の油状物として式１２ａの化合物を４７．７１ｇ得た。
　得られた式１２ａの化合物のＤＭＦ（６３ｍＬ）溶液に、イミダゾール２３．１９３ｇ（３４０．６７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロライド（ＴＢＳＣｌ）３２．６８２ｇ（２１６．８２ｍｍｏｌ）を添加し、室温下で２．５時間攪拌した。トルエン１７０ｍＬ、水１５０ｍＬを加えて１０分間攪拌した後、分液した。トルエン１３６ｍＬで抽出し、有機層を合わせ水３０ｍＬで洗浄した後、減圧濃縮することにより褐色の油状物としてメチル[(1R,2R,3R,5S)-3-{[ｔｅｒｔ-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-6-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-イル](フルオロ)酢酸（１３ａ）を５５．９１ｇ得た。
　得られた式１３ａの化合物のＴＨＦ（２７０ｍＬ）溶液を、－５０℃に冷却し、０．９４ｍｏｌ／Ｌトリエチルアルミニウムヘキサン溶液２１０ｍＬ（１９７．４０ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって添加した。その間、内部の温度を－５５℃から－５０℃の間に保った。－５０℃で３０分間攪拌した後、１．６ｍｏｌ／Ｌリチウムヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）ヘキサン溶液１４３ｍＬ（２２８．８０ｍｍｏｌ）を１０分間にわたって添加した。その間、内部の温度を－５０℃から－４０℃の間に保った。－５０℃で２時間攪拌した後、５℃に冷却した２５％クエン酸水溶液２６５．０８ｇの中へ反応液を２０分間にわたって添加した。この反応液に酢酸エチル２７０ｍＬを加えて攪拌した後、分液した。酢酸エチル１００ｍＬで抽出し、有機層を合わせ水５０ｍＬで洗浄した後、減圧濃縮することにより、褐色の油状物としてメチル(1R,2R,4S,5S,6R)-2-{[ｔｅｒｔ-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-6-フルオロ-4-ヒドロキシビシクロ[3.1.0]ヘキサン-6-カルボン酸（１４ａ）を５６．６５ｇ得た。
　得られた式１４ａの化合物のアセトニトリル（１８５ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、１Ｎ塩酸３０ｍＬを添加した。室温下で４．５時間攪拌した後、４％炭酸水素ナトリウム水溶液（９５．８４５ｇ）、酢酸エチル４５０ｍＬを加えた。１０分間攪拌した後、分液した。酢酸エチル４００ｍＬで３回抽出した後、有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。濃縮残渣を酢酸エチル１０８．５８ｇと水２．７２２ｇの混合液から晶析させることにより、無色結晶として式２の化合物を２１．３４ｇ得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ1.66 (dd, J= 4.6, 14.8 Hz, 1H), 1.97 (m, 1H), 2.17 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 4.18 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 4.93 (d, J= 5.0 Hz, 2H). MS m/z: 213.1 [M+Na]+. IR (KBr): 3548, 3413, 3295, 3239, 2922, 2751, 1732, 1616, 1467, 1442, 1381, 1336, 1285, 1265, 1235, 1198, 1181, 1130, 1078, 1041, 994, 947, 890, 805, 777, 733, 646, 566, 540, 480, 446 cm-1. Anal. Calcd for C8H11FO4・H2O: C, 46.15; H, 6.29; F, 9.13. Found: C, 46.11; H, 6.18; F, 9.09.
（参考例１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
6-オキサビシクロ[3.1.0]ヘキサ-2-エン(８)
　ジシクロペンタジエン ８４．３７ｇ（６３８.２ｍｍｏｌ）をナス形フラスコに入れ、１８５から１９０℃に設定した油浴に浸した。３９から４１℃で留出する成分を集める（ドライアイス-アセトン浴でトラップ）ことにより無色油状物としてシクロペンタジエン７３．２ｇを得た。得られたシクロペンタジエン７３．２ｇ（１．１０７ｍｏｌ）のジクロロメタン（７３２ｍＬ）溶液に、炭酸ナトリウム１７６．０ｇ（１．６６ｍｏｌ）を入れ、氷浴に浸した。メタクロロ過安息香酸（含量７７％）１９８．５ｇ（８８６ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって分割して添加した。その間、内部の温度を３℃から３５℃の間に保った。室温下で１５時間攪拌した後、固形物を濾去した（ジクロロメタン５３２ｍＬで洗浄）。濾洗液中のジクロロメタンを概ね減圧留去した後、減圧蒸留することにより淡黄色油状物としてエポキシド８を１４．０８ｇ得た。エポキシド８の1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)測定結果は文献（Org. Lett., 7, 4573, (2005)）記載のものと一致した。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ2.30-2.39 (m, 1H), 2.45-2.53 (m, 1H), 3.80-3.83 (m, 1H), 3.88-3.90 (m, 1H), 5.94-5.98 (m, 1H), 6.12-6.16 (m, 1H).
（参考例２）
＜ジアセチル化合物の調製＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
　実施例１２～１９で示した酵素反応によって式２の化合物から式３の化合物を調製する際に式１３のジアセチル化合物が副生成物として生じる場合がある。この副生成物の産生量はカラムに充填した固定化酵素に式２の化合物溶液を送液する速度を制御することにより調節することができる。例えば実施例１９ではこのジアセチル化合物の生成収率は３．８％（４．３５ｇ）であった。本実施例は副生成物を単離する目的で検討した。
先ず実施例１７と同様の方法でNOVOZYM 735とToyonite 200Mから固定化酵素を調製して得られた固定化酵素の４．０ｇを６ｍＬ容カラム（ボンドエルートリザーバーフリット付き：発売元ジーエルサイエンス（株））に充填した。
　次に式２の化合物の結晶１８．２８ｇを酢酸ビニル／アセトン（１０：１）８０４ｍＬに溶解し、その溶液を上記の固定化酵素を充填したカラムにシリコンチューブを付してペリスタポンプ（アトー（株）製）で送液した。送液速度は１２９ｍＬ／時間であった。送液終了後、溶出液をＴＬＣ法とＨＰＬＣ法で分析した結果、式３の化合物を１９．０２ｇ（収率８６．５６％）光学純度９６．０１％ｅ．ｅ．で得ると共に式１３のジアセチル化合物２．８１ｇ（収率１０．９％）で得ることが出来た。式３の化合物と式１３のジアセチル化合物は酵素反応溶出液を減圧濃縮後、濃縮残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）により精製することにより、分離することができた。式１３のジアセチル化合物を酢酸エチルに溶解した後再結晶して無色固形物として得ることが出来た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ2.02 (dd, J=5.0, 16.5Hz, 1H), 2.11 (s, 6H), 2.35 (ddd, J=7.0, 16.5Hz, 1H), 2.45 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 5.27(d, J=6.5Hz 1H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ21.14, 35.27(d, J=9.9Hz), 39.99(d, J=8.7Hz), 52.99, 74.72, 76.74, 168.12, 168.31, 170.34. MS (Shimadzu LCMS-210EV ESI/APCI Dual positive) m/z: [M+Na]+297.0


　以下の略語が本文全体で用いられる。
Ｍｅ：メチル
Ｅｔ：エチル
Ａｃ：アセチル
Ｐｈ：フェニル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＥＭＰＯ：2,2,6,6-テトラメチルピペリジン 1-オキシル
ＴＭＳ：トリメチルシリル
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＴｆＯＨ：トリフルオロメタンスルホン酸
ＴＭＳＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル
ＬｉＨＭＤＳ：リチウムヘキサメチルジシラジド
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
　本発明の製造方法は、代謝型グルタミン酸受容体の調節物質として有用なビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体を大量生産するために使用することができる。

Claims (29)

  1. 式（Ｉ）に示されるビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式（Ｉ）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）m－フェニル基であり、
    ｍは０、１又は２である。）
    （Ａ）式（II）に示される化合物を式（III）に示される化合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式（II）中のＲ1は、式（Ｉ）中で定義したとおりである。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式（III）中、Ｒ1は、式（Ｉ）中で定義したとおりであり、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
    （Ｂ）前記式（III）に示される化合物を、式（IV）に示される化合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     （式（IV）中のＲ1及びＲ4は、式（Ｉ）及び式（III）中で定義したとおりである。）
    （Ｃ）前記式（IV）に示される化合物を式（V）に示される化合物と反応させて、式（VI）に示される化合物を得る工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     （式（V）中、Ｒ2及びＲ3は式（Ｉ）中で定義したとおりであり、
    Ｒ5は、水素又はＳｉ－（Ｒ6）（Ｒ7）（Ｒ8）であり、
    Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一又は異なって、Ｃ1-6アルキル基又はフェニル基である。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （式（VI）中のＲ1、Ｒ2、及びＲ3は式（Ｉ）中で定義したとおりであり、Ｒ4は、式（III）中で定義したとおりである。）
    （Ｄ）前記式（VI）に示される化合物を、式（Ｉ）に示される化合物に変換する工程、
    からなる製造方法。
  2. 式（III）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     （式（III）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
    式（II）に示される化合物を前記式（III）に示される化合物に変換する工程からなる製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     （式（II）中のＲ1は、式（III）中で定義したとおりである。）
  3. 式（VII）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     （式（VII）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
    （Ａ）式（II）に示される化合物を式（III）に示される化合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    （式（II）中のＲ1は、式（VII）中で定義したとおりである。）

    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    （式（III）中、Ｒ1は、式（VII）中で定義したとおりであり、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
    （Ｂ）前記式（III）に示される化合物を、式（IV）に示される化合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
     （式（IV）中のＲ1及びＲ4は、式（VII）及び式（III）中で定義したとおりである。）
    （Ｃ）前記式（IV）に示される化合物を、式（VII）に示される化合物に変換する工程、
    からなる製造方法。
  4. Ｒ2及びＲ3が、同一又は異なって、フェニル基又はメチル基である、請求項１記載の製造方法。
  5. Ｒ5が水素又はトリメチルシリル基である、請求項１又は４記載の製造方法。
  6. Ｒ1がメトキシ基又はエトキシ基である、請求項１～５のいずれか１項記載の製造方法。
  7. Ｒ4がメチル基である、請求項１～６のいずれか１項記載の製造方法。
  8. 式（II）に示される化合物に、微生物由来の酵素存在下でアシル基供与体を反応させることにより、式（III）に示される化合物を製造する、請求項１～７いずれか１項記載の方法。
  9. 微生物が、カンジダ属、アスペルギルス属、サーモミセス属、ペニシリウム属、フミコラ属、ジエトリカム属、ガラクトミセス属及びブルクホルデリア属からなる群より選ばれる１種以上からなる、請求項８記載の製造方法。
  10. 微生物由来の酵素が、リパーゼ又はアシラーゼである、請求項８又は９記載の製造方法。
  11. 微生物由来の酵素が、カンジダ・アンタークチカ由来のリパーゼＡである、請求項１０記載の製造方法。
  12. 酵素が担体に固定化されていることを特徴とする、請求項８～１１のいずれか１項記載の製造方法。
  13. アシル基供与体が酢酸ビニルである、請求項８～１２のいずれか１項記載の製造方法。
  14. 式（II）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
     （式（II）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
    （Ａ）式（VIII）に示される化合物を式（IX）に示される化合物と反応させて、式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物からなる混合物を得る工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
     （式（IX）中、Ｒ9及びＲ10は、同一又は異なって、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
     （式（Xa）及び（Xb）中のＲ9及びＲ10は、式（IX）中で定義したとおりである。）
    （Ｂ）前記式（Xa）に示される化合物と前記式（Xb）に示される化合物からなる混合物を、式（XIa）に示される化合物と式（XIb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
     （式（XIa）及び（XIb）中のＲ1は、式（II）中で定義したとおりである。）
    （Ｃ）前記式（XIa）に示される化合物と前記式（XIb）に示される化合物からなる混合物を、式（XIIa）に示される化合物と式（XIIb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程と、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
     （式（XIIa）及び（XIIb）中のＲ1は、式（II）中で定義したとおりである。）
    （Ｄ）前記式（XIIa）に示される化合物と前記式（XIIb）に示される化合物からなる混合物を式（II）に示される化合物に変換する工程、
    からなる製造方法。
  15. 式（Xa）に示される化合物と式（Xb）に示される化合物からなる混合物及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
     （式（Xa）,（Xb）中、Ｒ9及びＲ10は、同一又は異なって、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
    式（VIII）に示される化合物を式（IX）に示される化合物と反応させて、前記式（Xa）に示される化合物と前記式（Xb）に示される化合物からなる混合物に変換する工程からなる製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
     （式（IX）中のＲ9及びＲ10は、式（Xa）及び式（Xb）中で定義したとおりである。）
  16. Ｒ9及びＲ10がメトキシ基又はエトキシ基である、請求項１４又は１５に記載の製造方法。
  17. Ｒ1、Ｒ9及びＲ10がメトキシ基又はエトキシ基である、請求項１４に記載の製造方法。
  18. 式（II）に示される化合物及びその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
     （式（II）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成する（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）。）
  19. 式（III）に示される化合物及びその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
     （式（III）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
  20. 式（IV）に示される化合物及びその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
     （式（IV）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
  21. 式（VI）に示される化合物及びその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
     （式（VI）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ2及びＲ3は、同一又は異なって、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）m－フェニル基であり、
    ｍは０、１又は２であり、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基である（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）。
  22. 式（III）に示される化合物及びその塩の製造方法であって、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
    （式（III）中、Ｒ1は、
    （１）－ＯＨ、
    （２）－Ｏ－Ｒa、又は
    （３）－ＮＲbＲc
    であり、
    Ｒaは、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上のＣ1-6アルコキシ基、水酸基、ハロゲン、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    Ｒb及びＲcは、同一又は異なって、水素、ハロゲン、Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基であり（該Ｃ1-6アルキル基又はＣ3-8シクロアルキル基は、無置換又は一以上の水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、アリール基若しくはヘテロアリール基で置換されている。）、
    又はＲb及びＲcは、隣接する窒素原子と一緒になって互いに結合した４～７員の飽和複素環を形成し（該飽和複素環は、無置換又は水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）、
    ｎは０、１又は２である。）
    式（XIII）に示される化合物を前記式（III）に示される化合物に変換する工程からなる製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
    （式（XIII）中、Ｒ4及びＲ4aは、同一又は異なって、水素、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基であり（該Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基又は－（ＣＨ2）n－フェニル基は、無置換又は一以上のハロゲン、水酸基、Ｃ1-6アルキル基若しくはＣ1-6アルコキシ基で置換されている。）
  23. Ｒ1がメトキシ基又はエトキシ基であり、Ｒ4及びＲ4aがそれぞれメチル基である、請求項２２記載の製造方法。
  24. 式（XIII）に示される化合物に、微生物由来の酵素存在下でアシル基受容体を反応させることにより、式（III）に示される化合物を製造する、請求項２２又は２３記載の方法。
  25. 微生物が、カンジダ属、アスペルギルス属、アルカリゲネス属、シュードモナス属、ディポダスカス属、ペニシリウム及びブルクホルデリア属からなる群より選ばれる１種以上からなる、請求項２４記載の製造方法。
  26. 微生物由来の酵素が、リパーゼ又はエステラーゼである、請求項２４又は２５記載の製造方法。
  27. 微生物由来の酵素が、アルカリゲネス・エスピー、ブルクホルデリア・セパシア、シュードモナス・フルオレスセンス及びカンジダ・ルゴサからなる群より選ばれる１種以上に由来するリパーゼであるである、請求項２４記載の製造方法。
  28. 酵素が担体に固定化されていることを特徴とする、請求項２４～２７のいずれか１項記載の製造方法。
  29. アシル基受容体がシクロペンタノールである、請求項２４～２８のいずれか１項記載の製造方法。
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