WO2005027651A1

WO2005027651A1 - 動物プランクトン用飼料

Info

Publication number: WO2005027651A1
Application number: PCT/JP2004/013619
Authority: WO
Inventors: Takashi Kato; Eiji Kojima; Masashi Kojimoto; Noboru Isojima
Original assignee: The Nisshin Oillio Group, Ltd.; Nisshin Marinetech Co., Ltd.
Priority date: 2003-09-19
Filing date: 2004-09-17
Publication date: 2005-03-31
Also published as: JPWO2005027651A1; CN1852662A; HK1095491A1; JP4778792B2; KR20060065719A; CN100579388C

Abstract

　エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物および、ｎ−６ドコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸とを含む微生物、を含有する動物プランクトン用飼料を提供する。この飼料は、該飼料に含まれる脂質中に、エイコサペンタエン酸、ｎ−６ドコサペンタエン酸および、ドコサヘキサエン酸がバランス良く含まれていることを特徴の一つとする。この飼料は、仔稚魚等の種苗生産時に問題となっている低温ストレスおよびハンドリングストレスに強い種苗（仔稚魚等）を生産可能とする。

Description

明細書

動物プランクトン用飼料

技術分野

[0001] 本発明は、種苗生産が行われる魚介類の生物餌料となる動物プランクトン用の飼料並びに、該飼料を給餌させた動物プランクトンを用いる仔稚魚の生産方法に関する。

人工種苗生産技術の発展により、マダイ、ヒラメ、クロダイ、トラフグ、ァュ、カレイ、ォ -ォコゼ、ガザミ等の多くの水産動物の種苗生産が可能となった。さらに、近年の飛躍的な技術の向上により、従来生産が難しいとされていた、プリ、タエ、ァカアマダイ、マグロ、タコなどの種苗生産も可能となっている。

このような魚種の種苗生産が可能となった背景には、仔稚魚の摂餌するヮムシ、ァルテミアへの栄養強化用飼料の改良がある。

[0002] 海産魚介類の仔稚魚期または幼生期の脂肪酸要求に関しては、高度不飽和脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（以下、「EPA」という。）およびドコサへキサェン酸（以下、「DHA」という。）が特に重要であり、生産歩留まり向上や奇形の防除に必須の栄養成分であることが明らかにされた。

然るに EPAと DHAは、特に仔稚魚期の必須栄養素であり、餌であるヮムシ、アルテミア、ミジンコ等の動物プランクトンに EPAと DHAを栄養強化したものを給餌することが今日では通常的に行われている。

栄養強化を目的とする動物プランクトン用飼料には、（1)人工的に製造されたマイクロカプセルや培養した微生物中に魚油や EPA、 DHAを含む油脂分を後天的に添加した飼料と、（2)先天的に EPAや DHAを自己産生する微生物を培養したもの、の 2つのタイプが存在する。

(1)のタイプは、従来よりなされている古典的な方法である（例えば、特許文献 1参照）。一方、（2)のタイプである天然の微生物を用いた飼料では、 EPAまたは DHA を産生する微生物を培養し濃縮したものが両者それぞれ個別に商品として存在している (例えば、非特許文献 1参照)。

[0003] また、 EPAを含む微生物であるナンノクロロブシスも、多くの種苗生産機関で自家培養され栄養強化に使用されている。しかし、その細胞壁が硬いため、咀嚼器官の発達したヮムシには栄養強化できる力咀嚼器官が比較的未達であるアルテミアにはそのままでは栄養強化できな、と、う問題点があった。

そこで、現在では、高圧ホモジナイザーを用いた強制分散処理 (以下、「可消化処理」という。 )による細胞壁の破砕処理を用いることにより、 EPAを含む微生物であるナンノクロロブシスをアルテミアの養成及び栄養強化に用いている（例えば、特許文献 2参照)。

更に、最近では、 n— 6ドコサペンタエン酸（以下、「n— 6DPAJという。 )に注目とした仔稚魚用の飼料についても、種苗生産における奇形防止効果を有するとして広く実用化されている (例えば、特許文献 3参照)。

以上の通り、魚介類の仔稚魚期または幼少期における生産歩留まり向上や奇形の防除において、 EPAと DHAが重要な効果を示すことがわかり、現在使用され続けている。これらの効果を示すものとして、健康な種苗、すなわち魚の健苗性の評価基準としては、種苗の形、色、器官の発達具合等々、目で判断できる部分に重点が置かれていた。

しかし、近年ではさらに一歩進んで、魚の機能面の向上、例えば消化能、運動性、さらには遊泳行動、群れ行動にまで評価基準の範囲が拡大して、る。

機能面で重要な評価基準は、水槽換え、移送段階の物理的ストレス、例えば網による捕獲時のハンドリングストレスへの耐性、異なる水温への適応能等があげられる ( 例えば、非特許文献 2参照)。その中でも、特に栽培漁業における放流用種苗においては、低水温の海域へ放流する場合、放流後ストレスにより活力が低下すると、すぐさま大型魚に捕食されてしまうことが予測され、問題となっている。これを防ぐ試みとして魚礁近辺への放流など放流場所の様々な検討が行われて、る。

初期飼料の分野でも、健康な種苗を生産するために、従来力もなされている形態異常の改善とともに、新たにストレスへの耐性等々を評価基準に用いて、様々な栄養成分的アプローチが行われて、る。

ヨーロッパへダイのストレス耐性等に対するレシチンおよび EPAの効果についてされた研究においては、レシチン存在下 EPAの増加によりハンドリングや温度変化によるステレス耐性を改善することが示されて、る (非特許文献 3参照)。

マダイ仔稚魚の活力テスト (ノヽンドリング耐性）に対する EPAと DHAの効果についてされた研究においては、 EPAでは殆ど効果なぐ DHAでは比較的良好な効果を有することが示されてヽる (非特許文献 4参照)。

しかしながら、いずれの効果も十分とは言い難ぐ実際の種苗生産現場におけるストレス耐性や低水温適応能への効果を反映したものではな力つた。また、実際の現場にお、て十分な効果を奏するものではな力つた。

以上の通り、近年、種苗生産の指標として、網による捕獲時のハンドリングストレスへの耐性、異なる水温への適応能等が重要視されているが、これらを改善させる初期飼料の栄養成分的アプローチは予備検討に止まり、極めて不十分である。特に、

EPA、 n— 6DPAおよび DHAを中心とする総合的なアポローチは全くなされて!/、ない。

[0005] 特許文献 1 :特許第 1992146号

特許文献 2：特公平 4 8021号公報

特許文献 3：特開平 11—276091号公報

非特許文献 1 :養殖臨時増刊「添加商品べストガイド」、株式会社緑書房、平成 12年 3月 10日、第 37卷，第 4号、 p. 186-191

非特許文献 2 :高橋隆行，「種苗生産における環境とストレス」，アクアネット，湊文社，平成 13年 7月，第 4卷，第 7号， p. 62-65

非特許文献 3： JINGLE LIU、外 6名， Necessity of dietary lecithin and ei cosapentaenoic acid for growth, survival, stress resistance and lipop rotein formation in gilthead sea bream spams aurata, FISHERIES

SCIENCEJ , 日本，日本水産学会誌， 2002年，第 68卷， p. 1165—1172 非特許文献 4 :竹内俊郎，「魚類における栄養素の欠乏症と要求量」，栽培漁業技術研修事業基礎理論コーステキスト集 V 仔稚魚期の発育シリーズ，社団法人日本栽培漁業協会，平成 3年，第 4卷， p. 20-23

発明の開示

[0006] 本発明の目的は、魚介類の種苗生産における種々のストレスへの耐性が付与された種苗を提供することである。

本発明の課題は、低温ストレスおよびノヽンドリングストレスに強い種苗を生産することができる動物プランクトン用飼料を提供することにある。

本発明者らは、これらの問題点 (課題)を解決するために鋭意努力した結果、エイコサペンタエン酸（以下、「EPA」という。）を含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 n— 6 ドコサペンタエン酸（以下、「n— 6DPA」という。）とドコサへキサェン酸（以下、「DHA 」という。）とを含む微生物を含有したものを、動物プランクトン用飼料として使用することにより、種苗生産における低水温暴露ゃノ、ンドリングによるストレス防止効果を発揮することを見出し、本発明を完成させた。よって、本発明は、種苗生産において、魚介類、特に仔稚魚に低水温暴露耐性や、ハンドリングストレス耐性を付与できる飼料を提供する。

[0007] また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、エイコサペンタエン酸を含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中のエイコサペンタエン酸含量が、 10— 50 質量％である動物プラン外ン用飼料を提供する。

また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、エイコサペンタエン酸を含む微生物が、真正眼点藻類ナンノクロロブシス属（Nannnochloropsis.sp)である動物プラン外ン用飼料を提供する。

また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の _n— 6ドコサぺンタエン酸含量が 10— 60質量％である動物プランクトン用飼料を提供する。

また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中のドコサへキサェン酸含量が 20— 80質量％である動物プランクトン用飼料を提供する。

[0008] また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物力シゾキトリウム属 (Schizochytrium.sp)またはトラウストキトリウム属（Thraustochytrium.sp)である動物プランクトン用飼料を提供するまた、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物との質量比率が、固体物として 1： 9一 9： 1である動物プランクトン用飼料を提供する。

また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、動物プランクトンが、ヮムシ、アルテミアおよびミジンコカもなる群より選ばれる 1種または 2種以上である動物プランクトン用飼料を提供する。

[0009] また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料において、動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中のエイコサペンタエン酸含量が 5— 27質量％であり、 n 6ドコサペンタエン酸含量が 5— 21質量％であり、かつ、ドコサへキサェン酸含量が 5— 52質量％である動物プランクトン用飼料を提供する。これにより、本発明は、 EP A、 n-6DHAおよび DHAに関して、特徴ある組成を有する脂質を含有する動物プランクトン用飼料を提供する。

また、本発明は、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランクトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プラン外ンを、仔稚魚の餌として用いることを特徴とする仔稚魚の生産方法を提供する。これにより、低水温暴露耐性やハンドリングストレス耐性を有する仔稚魚の生産方法を提供する。また、言い換えれば、仔稚魚に低水温暴露耐性やハンドリングストレス耐性を付与する、仔稚魚の生産方法を提供する本発明は、又、エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物、および n 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物、を含有する、魚介類へのストレス耐性付与剤を提供する。

発明を実施するための最良の形態

[0010] 本発明における、エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物および、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物、を含有することを特徴とする動物プランクトン用飼料とは、少なくとも、（1)エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 (2) n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物、を含有する動物プランクトン用飼料をいう。

本発明における「エイコサペンタエン酸 (以下、「EPA」という。）を含む微生物」とは、微生物中に EPAを含有しているものおよび Zまたは、微生物を培養すると微生物内に EPAを産生するものをいう。 EPAは、「C20 : 5, n— 3」や「C20 : 5」と表記される場合がある。

具体的には、真正眼点藻類ナンノクロロブシス属 (Nannnochloropsis.sp)、プラシノ藻類のテトラセルミス（Tetraselmis.sp)および、挂藻類のキートセラス（Chaetceros.sp)などが挙げられる。この中でも好ましいのは、真正眼点藻類ナンノクロロブシス属 (Nannnochloropsis.sp)である。

[0011] これらの微生物の取扱い方法は、特に限定されないが、例えば、純粋培養した培養液体中より微生物菌体のみを分離したものの濃縮物または、その乾燥物として用いるのが好ましい。

本発明における「微生物」とは、微生物に由来したものを広く含み、培養菌体、乾燥培養菌体および処理培養菌体ならびに菌体および培養上清を含む培養液を含む。詳しくは、微生物そのものの他、例えば、微生物の濃縮物、凍結乾燥物、スプレー乾燥物などを含む。

本発明における「EPAを含む微生物の細胞壁破砕処理物」とは、 EPAを含む微生物に対して高圧ホモジナイザー等を用いて強制分散処理し、実質的に該微生物の細胞壁を破砕処理したものをいう（例えば、特許文献 3参照)。この処理は、「可消化処理」と言われる場合がある。当該破砕処理の工程は、微生物を調整する際、いずれの時期にも限定されず、例えば、微生物を培養して菌体を集めた状態で可消化処理を施してもよぐまた、菌体を収集，乾燥し、その後、当該乾燥物を任意の液体に溶かし、または懸濁させ、可消化処理を施してもよい。

[0012] 本発明における EPAを含む微生物の EPA含量は、特に限定されないが、例えば、 EPAを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の EPA含量が、 10質量％以上であり、好ましくは 10— 50質量％、より好ましくは 15— 48質量％、さらに好ましくは 20 一 45質量％、特に好ましくは 23— 43質量％、最も特に好ましくは 28— 38質量％でめる。

本発明における「脂質」とは、一般的に、「油脂」、「油分」および「油」と言われる場合もあり、例えば、 Bligh— Dyer法により抽出された脂質をいう。飼料および微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の脂肪酸含量は、従来方法により求められ、その方法は特に限定されない。例えば、分析サンプルを凍結乾燥し、該凍結乾燥物より Bligh— Dyer法で脂質を抽出してメチルエステルイ匕した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を算出し、該当する脂肪酸の量を、脂質中の脂肪酸全体の量で除して求めることがでさる。

本発明における EPAを含む微生物中の脂質量は、特に限定されない。該脂質量は、微生物の培養方法により大きく影響をうけるものなので、特定することが難しいが、例えば、 1質量％以上であり、好ましくは 3質量％以上である。

本発明における EPAを含む微生物の EPAの存在状態は、特に限定されない。例えば、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、脂肪酸、脂肪酸メチルエステル、脂肪酸ェチルエステル、リン脂質や糖脂質等の複合脂質の 1、ずれであってもよ、。

[0013] 本発明における「n— 6ドコサペンタエン酸（以下、「n— 6DPA」と!、う。）とドコサへキサェン酸（以下、「DHA」という。）とを含む微生物」とは、微生物中に n-6DPAと DH Aを含有しているものおよび Zまたは、培養すると微生物内に n— 6DPAと DHAを産生するものをいう。 n— 6DPAは「C22 : 5、 n— 6」や「C22 : 5」と、 DHAは「C22 : 6、 n— 3」や「C22： 6」と表記される場合がある。

具体的には、シゾキトリウム属（Schizochytrium.sp)、トラウストキトリウム属（ Thraustochytrium.sp)、ウルケニア属 (Ulkenia属)および、アルトリニア属 (Althornia属 )などが挙げられる。この中でも好ましいのは、シゾキトリウム属（Schizochytrium.sp)またはトラウストキトリウム属（Thraustochytrium.sp )であり、より詳細には、 ATCC 208 88、 20889、 20891、 24473、 28209、 28221、 34304等力 S挙げ、られる力本発明はこれらに限定されるものではない。

これらの微生物の取扱い方法は、特に限定されないが、例えば、純粋培養した培養液体中より微生物菌体のみを分離したものの濃縮物および、その乾燥物として用いるのが好ましい。

[0014] 本発明における n— 6DPAと DHAとを含む微生物中の n— 6DPA含量は、特に限定されないが、例えば、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6DPA含量は、 5質量％以上であり、好ましくは 5— 60質量％、より好ましくは 11一 45質量％、さらに好ましくは 11一 30質量％、特に好ましくは 11一 25質量％、最も特に好ましくは 13— 20質量％である。

本発明における n— 6DPAと DHAを含む微生物中の DHA含量は、特に限定されないが、例えば、 n— 6DPAと DHAを含む微生物の脂質中の DHA含量力 20質量 %以上であり、好ましくは 20— 80質量％、より好ましくは 30— 70質量％、さらに好ましくは 30— 60質量％、特に好ましくは 30— 50質量％、最も特に好ましくは 33— 43 質量％である。

本発明における n— 6DPAと DHAとを含む微生物の n— 6DPAと DHA含量との割合については、特に限定されない。例えば、上記の n— 6DPAと DHAとを含む微生物の n— 6DPA含量と、上記の n— 6DPAと DHAとを含む微生物の DHA含量との任意の割合 (任意の組み合わせ)をなす微生物を、本発明で用いることができる。詳しくは、例えば、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6 DPA含量が 10— 30質量％であり、かつ、 DHA含量が 30— 70質量％のものが挙げられる。

本発明における n— 6DPAと DHAを含む微生物中の脂質量は、特に限定されない。該脂質量は、微生物の培養方法により大きく影響をうけるものなので、特定することが難しいが、例えば、 5質量％以上であり、好ましくは 30質量％以上である。

本発明における n— 6DPAと DHAを含む微生物の EPAの存在状態は、特に限定されない。例えば、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、脂肪酸、脂肪酸メチルエステル、脂肪酸ェチルエステル、リン脂質や糖脂質等の複合脂質のいずれであつてもよい。

本発明に力かる動物プランクトン用飼料にぉ、ては、 EPAを含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物との質量比率は、特に限定されないが、例えば、具体的には、固体物として 1 : 9一 9 : 1であり、好ましくは、固体物として 1 : 1である。

本発明で用いる微生物の存在は、通常、光学顕微鏡による形状の確認と、その油脂中の脂肪酸組成により同定することができる。例えば、 n— 6DPAを持つシゾキトリゥム属 'トラウスキトリウム属藻類は、クロロフィルを持たず、直径 6— 7 mの球形の細胞である。

本発明において、固体物とは、外観が固形状、粉末状またはブロック状等であればよぐ水分含量は特に限定されない。また、液状、ペースト状、懸濁状ではない。本明細書中では、固体物の範疇に含まれるものとして、特に粉末状のものを「乾燥粉末」という場合がある。

[0016] 質量比率を調整する場合、 EPAを含む微生物の細胞壁破砕処理物は、上記のように固体物であればよぐ水分含量が限定されないが、例えば、水分含量は、 10質量％以下であり、好ましくは 9一 0. 1質量％、より好ましくは 8— 0. 1質量％である。質量比率を調整する場合、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物は、上記のように固体物であればよぐ水分含量が限定されないが、例えば、水分含量は、 10質量％以下であり、好ましくは 8— 0. 1質量％、より好ましくは 7— 0. 1質量％、さらに好ましくは 6 一 0. 1質量％、特に好ましくは 5— 0. 1質量％、最も特に好ましくは 4一 0. 1質量％である。

本発明にかかる動物プランクトン用飼料は、性状は問わず、いかなる性状でも提供できる。例えば、固体（固形状、粉末状)、ペースト、液体 (溶液、溶液状)または懸濁液 (懸濁状)として提供できる。

また、液体 (溶液、溶液状)または懸濁液 (懸濁状)する場合でも、その水分に対する飼料の量は、限定されず、濃度は問わない。例えば、飼料 1質量に対して、溶液 0 . 1一 100質量を混合、溶解または懸濁させ用いることができる。

[0017] 本発明にかかる動物プランクトン用飼料の製造方法の一例を示す。

本発明にお！ヽて質量比率を調整するとき、それぞれの微生物を粉末状としたものを混合することにより、粉末状の動物プランクトン用飼料を提供できる。例えば、 EPAを含む微生物を細胞壁破砕処理したものを凍結乾燥した水分含量 8質量％以下の乾燥粉末 100gと、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物をスプレー乾燥した水分含量 4質量％以下の乾燥粉末 100gを混合したものが挙げられる。それぞれの微生物由来の乾燥粉末の混合方法は、特に限定されない。

また、それぞれの微生物を粉末状とし、それぞれを任意の液体と混合して、溶液状または懸濁状にし、その後、混合することができる。これにより、溶液状または懸濁状の動物プランクトン用飼料を提供できる。例えば、 EPAを含む微生物を凍結乾燥した水分含量 8質量％の乾燥粉末 lOOgを 1リットルの蒸留水に加え細胞壁破砕処理した懸濁液と、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物をスプレー乾燥した水分含量 4質量％の乾燥粉末 lOOgを 1リットルの蒸留水に加え攪拌した懸濁液を、混合したものが挙げられる。それぞれの微生物由来の溶液または懸濁状としたものの混合方法は、特に限定されない。また、上記の混合後の溶液状または懸濁状のものを、再度、乾燥物として、固形状または粉末状として提供することもできる。

溶液状または懸濁状の動物プランクトン用飼料を提供する場合、特に液体中の微生物量は限定されないが、通常 15質量％以下で用いられ、好ましくは 15— 5質量％であり、例えば、 15、 12. 5、 10、 7. 5、 5質量％が挙げられる。

[0018] 本発明で、う動物性プランクトンとは、ヮムシ (シォミズッボヮムシなど）、アルテミア（ブラインシュリンプ）、ミジンコなどの一般に種苗生産において生物餌料として利用されているものをいう。これらは、同時に 1種または 2種以上用いても良い。

本発明にお、て「動物プランクトン用飼料」とは、動物プランクトンに給餌させるための飼料をいう。該飼料を動物プランクトンに給餌させる主な目的は、動物プランクトンの中に栄養素（例えば、 EPA、 n— 6DPAおよび DHAなど）を蓄積させること (栄養強ィ匕)である。

本発明において、「栄養強化動物プランクトン」とは、動物プランクトン用飼料を動物プランクトンに給餌させたことにより、動物プランクトン中の栄養素（例えば、 EPA、 n— 6DPAおよび DHAなど）が強化された動物プランクトンをいう。該栄養強化動物ブランクトンは、種苗生産時に、仔稚魚に給餌して用いるものである。

本発明において動物プランクトンの一次培養および、栄養強化を伴う二次培養の条件は、当業者において通常の方法で行うことができる。具体的な培養条件は、当業者の知識の範囲で、適時修正して行うことができる。

[0019] 本発明において、力かる動物プランクトン用飼料を栄養強化に使用するとき、該飼料の添加量は、特に限定されない。これは、当業者において通常の方法で行うことができる。具体的な濃度は、当業者の知識の範囲で、適時修正して行うことができる。例えば、当該飼料の固体物として、 0. 2gZリットルで添加することができる。詳しくは、 EPAを含む微生物の固体物 1 OOgと 1リットルの蒸留水にカ卩えて細胞破壊処理をなしたものと、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物の固体物 100gを 1リットルの蒸留水に加えて攪拌したものを混合する（従って、飼料 200gZ2リットルとなる)。次いで、該混合液を、動物プランクトンの培養液の中に、 2mlZリットルの濃度で使用する（従って、飼料 200mgZ2mlZリットルなので、換算すると、飼料 0. 2gZリットルとなる)。本発明において、力かる動物プランクトン用飼料中の EPA、 n— 6DPAおよび DHA の含量は、特に限定されるものではない。

本発明において、力かる動物プランクトン用飼料中の EPA含量は、特に限定されないが、例えば、該飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の EPA含量が 5— 35質量％であり、好ましくは 5— 30質量％、より好ましくは 5— 27質量％、さらに好ましくは 5— 25 質量％、特に好ましくは 5— 20質量％、最も特に好ましくは 10— 20質量％である。本発明において、力かる動物プランクトン用飼料中の n— 6DP A含量は、特に限定されないが、例えば、該飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6DPA含量が 5— 4 0質量％であり、好ましくは 5— 30質量％、より好ましくは 5— 21質量％、さらに好ましくは 6— 20質量％、特に好ましくは 7— 18質量％、最も特に好ましくは 7— 15質量％である。

本発明において、力かる動物プランクトン用飼料中の DHA含量は、特に限定されないが、例えば、該飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の DHA含量が 5— 60質量％であり、好ましくは 5— 55質量％、より好ましくは 5— 52質量％、さらに好ましくは 10— 40質量％、特に好ましくは 15— 35質量％、最も特に好ましくは 25— 35質量％である。

本発明において、力かる動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の E PA、 n— 6DPAおよび DHA含量の割合については、特に限定されるものでない。例えば、上記動物プランクトン用飼料の脂質中の総脂肪酸に対する EPA、 n— 6DPA および DHA含量の任意の割合 (任意の組み合わせ)をなす脂質を、本発明で用いることができる。詳しくは、例えば、力かる動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の脂肪酸含量力 EPAが 5— 27質量％であり、 n— 6DPAが 5— 21質量％であり、かつ、 DHAが 5— 52質量％である動物プランクトン用飼料を提供することができる。

[0021] 本発明において、力かる動物プランクトン用飼料の脂質量は、特に限定されない。

該脂質量は、それぞれの微生物の培養方法や混合比率により大きく異なるものであり、一概に含量を示すことはできない。

本発明において、力かる動物プランクトン用飼料の脂質の存在状態は、特に限定されない。例えば、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、脂肪酸、脂肪酸メチルェステル、脂肪酸ェチルエステル、リン脂質や糖脂質等の複合脂質のいずれであってちょい。

本発明は、別の観点カゝらすれば、 EPAを含む微生物または該細胞壁破砕物と、 n —6DPAと DHAとを含む微生物との混合質量比率を調整することにより、 EPA、 n— 6 DPAおよび DHAの含量を調整する動物プランクトン用飼料および脂質の調整方法または生産方法を提供する。また、該調整方法または生産方法により得られる脂質含量を、仔稚魚の種苗生産に対して有効な EPA、 n— 6DPAおよび DHAの含量に調整することができる。さらに、該調整方法または生産方法により、仔稚魚の種苗生産に対して有効な EPA、n— 6DPAおよび DHAの含量の飼料および油脂を提供できる。

本発明は、別の観点力すれば、脂質の総脂肪酸中の構成脂肪酸含量が、 EPA 力一 27質量％であり、 n— 6DPAが 5— 21質量％以上であり、かつ、 DHAが 5— 5 2質量％である脂質を提供できるものである。

[0022] これらの脂質の使用方法は、特に限定されず、単独または他のもの混ぜて使用することができる。これらは、例えば、動物プランクトン用飼料、仔稚魚の生産方法など、あらゆる魚介類の種苗生産に関することに使用できるとともに、あらゆる医薬品や食品にち使用することがでさる。

本発明において、力かる動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の E PA、 n - 6DPAおよび DHA含量が特定の比率である脂質および、該脂質を含有する飼料は、 EPAを含む微生物および Zまたは、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物を用いなくても、各成分をそれぞれ用意して混合したり、もしくはそれぞれの成分をトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、脂肪酸、脂肪酸メチルエステル、脂肪酸ェチルエステル、リン脂質や糖脂質等の複合脂質のいずれにして、混合することによっても、実現可能である。しかしながら、本発明に力かる EPAを含む微生物および、 n— 6 DPAと DHAを含む微生物を用いることが、製造する際に簡単であり、工業的にも効率がよぐ安価に作製可能である。

また、本発明にカゝかる EPAを含む微生物および、 n— 6DPAと DHAを含む微生物を用いて動物プランクトン用飼料としたものと、各成分をそれぞれ用意して本発明に力かる動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中の EPA、n— 6DPAおよび DHA含量を同様の比率としたものでは、前者の方が、効果の面でも好ましい。

[0023] 種苗生産とは、魚類の場合、一般に、孵化仔魚から稚魚まで育てる工程を!ヽぅ。これら種苗生産により得られた稚魚は、その後、放流や養殖に用いられる。よって、種苗生産がうまくいき、生残率が高ぐ活力が大きい稚魚、さらに種々のストレス耐性を備えた稚魚ができれば、その後の養殖等に大いに役立つこととなる。

本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランタトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プラン外ンを提供する。本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランタトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンの生産方法を提供する。

[0024] 本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランタトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンを得る動物ブランクトンの給餌方法を提供する。

本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランタトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンを、仔稚魚の餌として用いることを特徴とする仔稚魚を提供する。

本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランタトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンを、仔稚魚の餌として用いることを特徴とする仔稚魚の給餌方法を提供する。

本発明にお、て、力かる動物プランクトン用飼料を動物プランクトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンを、仔稚魚の餌として用いることを特徴とする仔稚魚の生産方法を提供する。

[0025] 本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を、仔稚魚の種苗生産に用いて得られる仔稚魚を提供する。

本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を、仔稚魚の種苗生産に用いることを特徴とする仔稚魚の種苗生産方法を提供する。

本発明において、別の観点によれば、力かる動物プランクトン用飼料を、仔稚魚の種苗生産に用いることを特徴とする仔稚魚の生産方法を提供する。

また、本発明による動物プランクトン用飼料には、当該飼料以外の飼料成分を混合して用いることができる。当該飼料以外の飼料成分は、特に限定されず、通常の動物プランクトン用飼料として用いられているものを使用できる。例えば、淡水クロレラ、酵母、魚油、リン脂質などが挙げられる。さらに、本発明による動物プランクトン用飼料は、当該飼料と、当該飼料以外の飼料成分を同時または別個独立して、魚介類に用いることがでさる。

[0026] 本発明による動物プランクトン用飼料を用いて種苗生産を行うことができる魚介類は、特に限定されるものではなぐ動物プランクトンを使用して種苗生産を行うすべてのものに対して用いることができる。例えば、マダイ、ヒラメ、クロダイ、トラフグ、カレイ、力サゴ、メバル、ァュ、ォ-ォコゼ、ブリ、タエ、ァカアマダイ、マグロ等の魚類、ガザミ、クルマエビ等の甲殻類やタコ、イカ等の頭足類などである。この中でも、好ましくはマダイ、ヒラ入クロダイ、トラフグ、カレイであり、さらに好ましくは、マダイ、ヒラメである本発明による動物プランクトン用飼料は、魚介類の生産歩留まり向上 (生残率の向上)や奇形の防除等の従来の視覚で認識できる作用を保持しつつ、魚介類の機能面の向上という優れた効果を有するものである。魚介類の機能面の向上とは、視覚で認識できないが、魚介類の内的な機能面の向上をいう。例えば、水槽換えにおけるストレス、移送段階の物理的ストレス、網による捕獲時のハンドリングストレスおよび、異なる水温へ移送した時のストレスなどの耐性向上をいう。従来、魚介類の機能面が低いと、これらの工程により、魚介類は生残率が落ちてしまい、種苗生産がうまくいかない場合があった。本発明による動物プランクトン用飼料の効果は、より詳細には、当該飼料を動物プラン外ンに給餌させ栄養強化された栄養強化動物プラン外ンを、仔稚魚の餌として用い、仔稚魚の種苗生産をすることにより、仔稚魚に対して上記ストレス耐性が向上されるため、仔稚魚の水槽換え時、移送時、網による捕獲時、異なる水温の水槽へ移送した時に、仔稚魚の生存率や活性が落ちるのを防ぐことができる。これにより、結果として、種苗生産が現状よりも、さらに良好になるものである。

[0027] 本発明による動物プランクトン用飼料の効果は、一般に、生産歩留まり向上 (生残率の向上)や奇形の防除等の効果を有するとされている、（a)比較的 EPAを多く含み、 DP Aや DHAをほとんど含まない微生物、（b)比較的 DPAおよび DHAを多く含み、 EPAを微量 (脂質中の総脂肪酸に 5質量％以下)含む微生物、と比較して、大きな効果を有している。特に、当該飼料は、これらと比して、仔稚魚の空中暴露に対する耐性および、低水温暴露に対する耐性について、顕著な効果を有している。

空中暴露試験では、本明細書中で言われる「ノヽンドリングストレス耐性」、「ハンドリングによるストレス防止効果」を測定する。該試験は、例えば、一定期間飼育後の仔稚魚を網の上に乗せ、一定時間（例えば、 120秒）、空中に露出させた後、他の同水温へ移送して、一定期間（例えば、 24時間）後の生残率で測定することにより行うことができる。これにより、活力が維持され、仔稚魚の生残率が高ければ (死ななければ）、当然、仔稚魚の種苗生産時における取扱い時にも、死ぬことが少なくなり、結果として、種苗生産がうまくいき、水産業に大いに役立つものである。

低水温暴露試験では、本明細書中で言われる「低水温暴露耐性 (低温ストレス耐性)」、「低水温暴露によるストレス防止効果」を測定する。該試験は、例えば、水温 2 1°Cで一定期間飼育後の仔稚魚を、水温 12°C、 13°C、 14°Cまたは 15°Cの他の水槽に移送して、一定期間（例えば、 30分)後の生残率で測定することにより行うことができる。これにより、活力が維持され、仔稚魚の生残率が高ければ (死ななければ)、当然、仔稚魚の種苗生産時における取扱い時にも、死ぬことが少なくなり、結果として、種苗生産がうまく!/、き、水産業に大いに役立つものである。

[0028] 本発明によれば、 EPAを含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物を含有したものを、動物プランクトン用飼料として使用することにより、種苗生産における仔稚魚の低水温暴露やハンドリングによるストレス防止効果を奏する。

すなわち、本発明によれば、力かる動物プランクトン用飼料を、動物プランクトンに給餌させることにより栄養強化された栄養強化動物プランクトンを仔稚魚の餌として用いることにより、該仔稚魚の低水温暴露耐性 (低温ストレス耐性)やハンドリングストレス耐性を向上させる効果を奏する。又、本発明の動物プランクトン用飼料を与えたアルテミアゃヮムシなどの動物プランクトンでは、その活力が低下しないとの利点がある。

これらの効果は、従来にない、とても有効な効果であり、魚介類の種苗生産、特に仔稚魚の種苗生産に大いに役立つものである。

以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明する力本発明はそれらによつて限定されるものではない。

実施例 1

[動物プランクトン用飼料の調整および、栄養強化動物プランクトンの調整]

(1 1)動物プランクトン用飼料の調整

動物プランクトン用飼料の原料として、シゾキトリウム ATCC20891株の培養液 100 リットル力も約 3kgの菌体を分離した。次いで菌体を凍結乾燥処理した後、粉砕し、 1

. 2kgの乾燥粉末を得た。この乾燥粉末 lOOgに蒸留水を加え 1リットルにし、ホモジナイザーで分散した試験飼料 Aを得た。

試験飼料 Aは、 n— 6DPAと DHAとを含む微生物に相当する。

また、ナンノクロロブシス培養液 5000リットルから 4kgの菌体を得て、それをスプレ一乾燥した。その乾燥粉末 lOOgを蒸留水に加え 1リットルとし高圧ホモジナイザーにより細胞壁破砕処理を行!ゝ試験飼料 Bを得た。

試験飼料 Bは、 EPAを含む微生物の細胞壁破砕物に相当する。

さらに、別に Aの飼料 500mlと Bの飼料 500mlを作成しそれぞれを混合し、試験飼料 Cを得た。

試験飼料 Cは、当該発明にかかる動物プランクトン用飼料に相当する。

試験飼料 A— Cを、それぞれ脂肪酸分析サンプルとした。試験飼料の脂肪酸組成を表 1に示す。脂肪酸組成は、脂肪酸分析サンプルを凍結乾燥後、 Bligh— Dyer法で脂質を抽出してメチルエステルイ匕後、ガスクロマトグラフィ一で分析した。構成脂肪酸の割合 (質量％)は、面積百分率より求めた。

試験飼料 Aに用いた菌体の凍結乾燥品たる乾燥粉末の水分は 3. 7%、油分は 58 . 5%であった。また、試験飼料 Bに用いたスプレー乾燥品たる乾燥粉末の水分は 7. 0%、油分は 7. 5%であった。

[0030] (1 2)栄養強化動物プランクトンの調整

試験飼料を添加して栄養強化する動物プランクトン培養液は、ヮムシを淡水クロレラにて培養し 1000個体 Zmlに調整、アルテミアは 100個体 Zmlにそれぞれ調整し、 V、ずれも水温を 25°Cに維持した。そこに各種試験飼料をそれぞれ 2ml/リットルの濃度になるように添加した後、 2時間以上経過したもの（栄養強化動物プランクトン)を脂肪酸分析サンプルに供するとともに試験魚の餌として用いた。ここで、栄養強化したヮムシおよびアルテミアを、それぞれヮムシ A— C、アルテミア A— Cという。

栄養強化ヮムシの脂肪酸組成を表 2に、栄養強化アルテミアの脂肪酸組成を表 3に示す。脂肪酸組成は、脂肪酸分析サンプルを凍結乾燥後、 Bligh - Dyer法で脂質を抽出してメチルエステルイ匕後、ガスクロマトグラフィーで分析した。構成脂肪酸の割合 (質量％)は、面積百分率より求めた。

これらから、試験飼料の脂肪酸組成が、栄養強化した動物プラン外ンの脂肪酸組成に反映してヽることがわかる。

以上のようにして栄養強化したヮムシ、アルテミアを用いて、実施例 2および 3にて、それぞれマダイにより飼育試験を行った。

[0031] 表 1は、各種試験飼料の脂肪酸分析値を示す。単位は、質量％である。表中の「N D」は、未検出を意味する。

表 2は、各種飼料で栄養強化したヮムシの脂肪酸分析値を示す。単位は、質量％である。表中の「ND」は、未検出を意味する。

表 3は、各種飼料で栄養強化したアルテミアの脂肪酸分析値を示す。単位は、質量 %である。

[0032] 表 1 脂肪酸 \試験区試験飼料 A 試験飼料 B 試験飼料 C

C 14 0 0. 5 3. 6 0.4

C 16 0 1 2. 4 1 9. 3 1 3. 7

C 16 1 0. 3 1 7. 8 4. 3

C 18 0 2 7. 6 0. 3 1 8.4

C 18 1 0. 4 3. 4 0. 7

C 18 2 0. 3 0. 1 0. 2

C20 4 0. 8 5. 9 1. 0

C20 5 (E P A) 1. 5 3 2. 3 1 5. 0

C22 5 ( n - 6 D P A) 1 4. 1 ND 1 0. 6

C22 5 ( n - 3 D P A) 0. 1 ND N D

C22 6 (D H A) 3 7. 8 ND 2 9. 1 その他 4. 2 1 7. 3 6. 6

Λ

ct、 = aiT 1 0 0. 0 1 0 0. 0 1 0 0. 0 表 2

表 3

W ^B^I料 A 飼料し gt^ g-t- \ ¾^ t T

^木丧 5虫 1 木丧5虫 1 木丧 5虫 1 τ¾ 广、ノ u Ί . .

ti . U I d , i i ΰ

A a

ο

ΰ . υ O . Δ

Δ Ό . Ό o . q ■¾ . Q ο . a υ q ZL

C20 ： 5 (E P A) 5. 5 2 0 , 4 1 1. 4

C22 ： 5 ( n - 6 D P A) 5. 8 N D 4. 5

C22 ： 5 ( n - 3 D P A) 0. 2 N D 0. 1

C22 : 6 (D H A) 1 9. 1 0. 1 1 6. 9 その他 1 1. 3 1 0. 5 9. 9 斗 1 0 0. 0 1 0 0. 0 1 0 0. 0

[0035] 実施例 2

[栄養強化ヮムシを用いたマダイにおける飼育試験および、空中露出試験] (2-1)栄養強化ヮムシを用いたマダイにおける飼育試験

実施例 1で得られた試験飼料 Α— Cを給餌させたヮムシ (栄養強化ヮムシ A— C)をそれぞれ A— C区に用いて、供試魚にマダイを使用して飼育試験を実施した。

自家採卵したマダイ受精卵を、各区 12500粒にて 500リットル容ポリカーボネート水槽に収容し、産卵水温で孵化させた後に、徐々に水温を上げ 21°Cにした。ふ化率は各区とも 98%以上であり、差異はなかった。

栄養強化ヮムシ A— Cの添カ卩は、各区において、ふ化後 3日目よりヮムシの量を 5個体 Zmlを維持するように調整し、 1日 1回給餌した。ふ化後 10日目より 8個体 Zml維持、 15日目より 10個体 Zml維持するようにヮムシの量を調整して朝夕 2回給餌し、ふ化後 20日目で飼育試験を終了した。

飼育終了後の魚体を脂肪酸分析サンプルとした。

飼育終了後、魚体の脂肪酸組成を分析、各区の生残率と平均全長を算定した。

[0036] (2— 2)栄養強化ヮムシを用いたマダイにおける空中露出試験

さらに、空中露出試験として、飼育終了後のマダイ 100尾を網により 60秒間空中に露出した後、他の同水温の水槽へ移送、 24時間後の生残率をみた。

飼育試験後の魚体の脂肪酸組成を表 4、飼育後の平均全長、生残率、空中露出後の生残率、の結果を表 5に示す。 A区は栄養強化ヮムシ A投与群、 B区は栄養強化ヮムシ B投与群、 C区は栄養強化ヮムシ C投与群をさす。脂肪酸組成は、脂肪酸分析サンプルを凍結乾燥後、 Bligh— Dyer法で脂質を抽出してメチルエステルイ匕後、ガスクロマトグラフィーで分析した。構成脂肪酸の割合 (質量％)は、面積百分率より求めた。

表 4中、 A区では他区と比較して最も DHA組成が高ぐ B区では EPA組成が最も高ぐ C区では EPA、 n— 6DPAおよび DHA組成ともにバランス良く含まれていることがわかる。これらから試験飼料および栄養強化ヮムシの脂肪酸組成が、飼育試験後の魚体中の脂肪酸組成に反映していることがわかる。

[0037] 表 5より、各区の平均全長には大きな差は見られず、生残率では B区が劣り、 A区と C区は、ほぼ同等であった。空中露出試験 (ノ、ンドリングストレス試験)では、 C区では 95. 3%と生残率が最も高ぐ次いで A区、 B区の順であった。すなわち、 EPA、 n— 6 DPAおよび DHA組成ともにバランス良く含まれてヽる飼料を用いた群が最も効果が大きかった。

表 4は、ヮムシ給餌試験後のマダイ魚体の脂肪酸組成を示す。単位は、質量％でめる。

表 5は、各種栄養強化したヮムシを給餌したマダイの試験結果を示す。単位は、質量％である。

[0038] 表 4

A区 B区 C区脂肪酸 \試験区 (栄赛強化 (栄養強化〔栄養強化ヮムシ A ヮムシ B ヮムシ C 投与群) 投与群）投与群）

C 14 0 1. 7 2. 3 1. 8

C 16 0 2 0. 7 2 3. 0 2 2. 7

C 16 1 3. 4 5 , 7 5 , 0

C 18 0 1 0. 0 1 0. 8 1 0. 6

C 18 1 1 1. 8 1 1. 4 1 0. 2

C 18 2 1 3. 8 1 8. 3 1 5. 0

C20 4 3. 5 4. 1 3. 6

C20 5 ( E P A) 1. 5 1 0. 5 7 , 6

C22 5 ( n - 6 D P A) 4. 1 0. 1 3. 8

C22 5 ( n - 3 D P A) 1. 2 2 , 9 1 , 3

C22 6 (DH A) 1 8. 7 1. 8 1 4. 3 その他 9. 6 9. 1 4. 1 a口 T 1 0 0. 0 1 0 0. 0 1 0 0. 0 表 5

A区 B区 C区評価方法 \試験区 (栄養強化 (栄養強化 (栄養強化ヮムシ A ヮムシ B ヮムシ C 投与群）投与群）投与群）飼育終了時（生残率％) 6 9. 3 5 5. 7 D 5. 5 全長 (mm) 7. 2 6. 5 6. 5 空中露出（生残率％) 7 8. 5 50. 3 9 5. 3 実施例 3

[栄養強化アルテミアを用いたマダイにおける飼育試験、空中暴露試験および、低水

(3-1)栄養強化アルテミアを用いたマダイにおける飼育試験

実施例 1で得られた試験飼料 A— Cを給餌させたアルテミア (栄養強化アルテミア A 一 C)をそれぞれ A— C区に用いて、供試魚にマダイを使用して飼育試験を実施した自家採卵したマダイ受精卵を、各区魚卵抽出油で栄養強化したヮムシにより孵化後 20日目まで飼育したマダイを用いた。各区の水槽に 2000尾づつ、 500リットル容ポリカーボネート水槽に収容し、水温を 21°Cとした。ふ化率は各区とも 98%以上であり、差異はなかった。

孵化後 30日目までは魚卵抽出油で栄養強化したヮムシと、各区試験飼料で栄養強化したアルテミア (栄養強化アルテミア A— C)を併用し、それ以降 36日目まで強化アルテミア A— Cのみの給餌とした。

魚卵抽出油で栄養強化したヮムシは、朝夕 2回、飼育水中で 10個体 Zmlになるような量に調整して給餌し、栄養強化アルテミア A— Cは、朝夕 2時間以内に食べきる量を給餌し、徐々に給餌量を増加させた。

[0041] 飼育終了後の魚体を脂肪酸分析サンプルとした。

(3— 2)栄養強化ヮムシを用いたマダイにおける空中露出試験

また、空中暴露試験として、飼育終了後のマダイ 100尾を網により 120秒間の空中露出後別水槽へ移送、 24時間後の生残率をみた。

(3-3)栄養強化アルテミアを用いたマダイにおける低水温暴露試験

さらに、低水温暴露試験として、飼育終了後のマダイ 100尾を 12°C、 13°C、 14°C、 1 5°Cの低水温に暴露し 30分後の生残率をみた。

飼育終了後の魚体の脂肪酸組成を表 6に、飼育後の平均全長、生残率、空中露出試験、低温暴露試験の生残率を表 7に示す。 A区は栄養強化アルテミア A投与群、 B 区は栄養強化アルテミア B投与群、 C区は栄養強化アルテミア C投与群をさす。脂肪酸組成は、脂肪酸分析サンプルを凍結乾燥後、 Bligh— Dyer法で脂質を抽出してメチルエステル化後、ガスクロマトグラフィーで分析した。構成脂肪酸の割合 (質量％) は、面積百分率より求めた。

[0042] 表 6中、 A区では他区と比較して最も DHA組成が高ぐ B区では EPA組成が最も高ぐ C区では EPA、 n— 6DPAおよび DHA組成ともにバランス良く含まれているのことがわかる。これらから試験飼料および強化アルテミアの脂肪酸組成が、飼育試験後の魚体中の脂肪酸組成に反映していることがわかる。

表 7より、各区の平均全長には大きな差は見られず、生残率にも差は見られなかつた。一方、空中露出試験では、 A区と B区はほぼ変らず、 C区で最も高い生残率が見られた。すなわち、 EPA、 n— 6DPAおよび DHA組成ともにバランス良く含まれている飼料を用いた群が最も効果が大き力つた。

また、低水温暴露による生残率は、 12°Cに暴露した場合、 C区で最も高い生残率、次いで A区、 B区の順であった。 13°Cでも同様の順であった。 14°C 15°Cでは B区で特に低い生残率であった力 A区、 C区の間には差は見られなかった。 B区は、 12 15°Cのすベての暴露試験において、 A区および C区と比較して特に低い生残率であった。すなわち、 EPA n— 6 DP Aおよび DHA組成ともにバランス良く含まれて V、る飼料を用いた群が最も効果が大き力つた。

[0043] 空中露出試験で DHAが空中露出試験の耐性向上に効果があることはこれまでの報告と一致した結果であった (非特許文献 4参照)。しかし、ヨーロッパへダイではレシチン存在下で EPAの増加により低水温ストレス耐性が改善することが報告されている (非特許文献 3参照）が、今回の結果では、魚体に EPAが単独存在しただけでは低水温耐性改善効果はなぐ魚体に n— 6DPAと DHAが存在することで若干改善され、魚体に EPAと n— 6DPAと DHAがバランスよく存在することによって著しく効果のあることが明らかになった。

表 6は、アルテミア給餌試験後のマダイ魚体の脂肪酸組成を示す。単位は、質量％である。

表 7は、各種栄養強化したアルテミアを給餌したマダイの試験結果を示す。単位は、質量％である。

[0044] 表 6

[0045] 表 7 A区 B区 C区評価方法 \試験区 (栄養強化 (栄養強化 (栄養強化アルテミァ A アルテミア B アルテミア C 投与群）投与群）投与群）飼育終了時（生残率％) 7 3. 2 7 0 . 3 7 5 . 1 全 (mm) 1 5. 8 1 5 . 5 1 6 . 5 空中露出（生残率％) 7 8 . 3 2 . 5 1 0 0 . 0 低水温暴露 1 2 °C (生残率％) 2 5. 0 5 . 0 7 0 . 0 低水温暴露 1 3 °C (生残率％) 8 0. 0 0 9 0 . 0 低水温暴露 1 4 °C (生残率％) 1 0 0. 0 1 0 . 0 1 0 0 . 0 低水温暴露 1 5 °C (生残率％) 1 0 0. 0 3 5 . 0 1 0 0 . 0

Claims

請求の範囲

[1] エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物、および n— 6ドコサペンタェン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物、を含有する動物プランクトン用飼料。

[2] エイコサペンタエン酸を含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中のエイコサペンタエン酸含量が、 10— 50質量％である請求項 1に記載の動物プランクトン用飼料。

[3] エイコサペンタエン酸を含む微生物が、真正眼点藻類ナンノクロロブシス属（

Nannnochloropsis.sp)である請求項 1または 2に記載の動物プランクトン用飼料。

[4] n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6ドコサペンタエン酸含量が 5— 60質量％である請求項 1から 3のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[5] n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中のドコサへキサェン酸含量が 20— 80質量％である請求項 1から 4のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[6] n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6ドコサペンタエン酸含量が 5— 60質量％で、ドコサへキサェン酸含量が 20— 80質量％である請求項 1から 5のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[7] n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物に含まれる脂質の総脂肪酸中の n— 6ドコサペンタエン酸含量が 10— 30質量％で、ドコサへキサェン酸含量が 30— 70質量％である請求項 1から 6のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[8] n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物力シゾキトリウム属（ Schizochytrium.sp)またはトラウストキトリウム属（Thraustochytrium.sp)である請求項 1 力 7のいずれか 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[9] エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物と、 n— 6ドコサペンタエン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物との質量比率力固体物として 1： 9一 9： 1である請求項 1から 8のいずれか 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[10] 動物プランクトン力ヮムシ、アルテミアおよびミジンコカもなる群より選ばれる 1種または 2種以上である請求項 1から 9のいずれか 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[11] 動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中のエイコサペンタエン酸含量力一 35質量％である請求項 1から 10のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[12] 動物プランクトン用飼料に含まれる脂質の総脂肪酸中のエイコサペンタエン酸含量力一 27質量％であり、 n— 6ドコサペンタエン酸含量が 5— 21質量％であり、かつ、ドコサへキサェン酸含量が 5— 52質量％である請求項 1から 11のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料。

[13] 請求項 1から 12のいずれ力 1項に記載の動物プランクトン用飼料を動物プランクトンに給餌させることにより栄養強化した栄養強化動物プランクトンを、仔稚魚の餌として用いることを含む仔稚魚の生産方法。

[14] エイコサペンタエン酸を含む微生物の細胞壁破砕処理物、および n— 6ドコサペンタェン酸とドコサへキサェン酸とを含む微生物、を含有する、魚介類へのストレス耐性付与剤。

[15] ストレス耐性がハンドリング耐性である請求項 14記載のストレス耐性付与剤。

[16] ストレス耐性が低水温暴露耐性である請求項 14記載のストレス耐性付与剤。