KR20060065719A - 동물 플랑크톤용 사료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물 및, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다. 이 사료는 상기 사료에 포함되는 지질중에, 에이코사펜타엔산, n-6 도코사펜타엔산 및, 도코사헥사엔산이 균형적으로 포함되어 있는 것을 하나의 특징으로 한다. 이 사료는 자치어 등의 종묘생산시에 문제시되고 있는 저온 스트레스 및 핸들링 스트레스에 강한 종묘(자치어 등)를 생산가능하게 한다.

동물 플랑크톤, 사료, 자치어, 참돔

Description

동물 플랑크톤용 사료{FEEDSTUFF FOR ANIMAL PLANKTON}

본 발명은 종묘(種苗)생산이 이루어지는 어패류의 생물먹이가 되는 동물 플랑크톤용 사료, 및 상기 사료를 먹인 동물 플랑크톤을 사용하는 자치어(仔稚魚)의 생산방법에 관한 것이다.

인공종묘 생산기술의 발전에 따라, 참돔, 넙치, 감성돔, 자지복, 은어, 가자미, 쑤기미, 꽃게 등의 많은 수산동물의 종묘생산이 가능하게 되었다. 또한, 근래의 비약적인 기술 향상에 의해, 종래에는 어려웠던 방어, 그루퍼, 붉은 옥돔, 다랑어, 낙지 등의 종묘생산도 가능하게 되었다.

이와 같은 어종의 종묘생산이 가능하게 된 배경에는, 자치어가 먹는 로티퍼(rotifer), 아르테미아(artemia)를 영양강화시킨 사료의 개선이 있다.

해산 어패류의 자치어기 또는 유생기의 지방산 요구에 있어서는, 고도 불포화 지방산인 에이코사펜타엔산(이하, 'EPA'라고 함) 및 도코사헥사엔산(이하, 'DHA'라고 함)이 특히 중요하며, 생산 수율의 향상이나 기형 방제에 필수적인 영양성분인 것이 분명해졌다.

그런데 EPA와 DHA는 특히 자치어기의 필수영양소로, 먹이인 로티퍼, 아르테미아, 물벼룩 등의 동물 프랑크톤에 EPA와 DHA를 영양강화시킨 것을 먹이는 것이 오늘날에는 통상적으로 이루어지고 있다.

영양강화를 목적으로 하는 동물 플랑크톤용 사료에는, (1) 인공적으로 제조된 마이크로 캡슐이나 배양한 미생물 중에 어유나 EPA, DHA를 포함하는 유지분을 후천적으로 첨가한 사료와, (2) 선천적으로 EPA나 DHA를 자기생산하는 미생물을 배양한 것의 2가지 타입이 존재한다.

(1)의 타입은 종래부터 이루어지고 있는 전형적인 방법이다(예를 들어, 일본특허 제1992146호 참조). 한편, (2)의 타입인 천연 미생물을 사용한 사료에서는, EPA 또는 DHA를 생산하는 미생물을 배양하여 농축한 것이 양자 각각 개별적으로 상품으로서 존재하고 있다(예를 들어, 양식임시증간 '첨가상품 베스트가이드', 가부시키가이샤 미도리쇼보, 2000년3월10일, 제37권, 제4호, p186~191 참조).

또한, EPA를 포함하는 미생물인 난노클로로푸시스(Nannochloropsis)도 많은 종묘생산 기관에서 자가배양되어 영양강화에 사용되고 있다. 하지만, 그 세포벽이 딱딱하기 때문에, 저작(chewing)기관이 발달한 로티퍼의 경우 영양 강화가 가능하지만, 저작기관이 비교적 발달하지 못한 아르테미아의 경우에는 영양 강화가 불가능하다는 문제점이 있었다.

그래서, 현재는 고압 호모지나이저(homogenizer)를 사용한 강제분산 처리(이하,'가소화(可消化) 처리'라고 함)에 의한 세포벽 파쇄처리를 이용함으로써, EPA를 포함하는 미생물인 난노클로로푸시스를 아르테미아의 양성(養成) 및 영양강화에 사용하고 있다(예를 들어, 일본특허공고 평4-8021호 공보).

더욱이, 최근에는 n-6 도코사펜타엔산(이하, 'n-6DPA'라고 함)에 주목한 자 치어용 사료도, 종묘생산에서의 기형방지 효과를 가진다고 하여 널리 실용화되고 있다(예를 들어, 일본특허공개 평11-276091호 공보 참조).

이상과 같이, 어패류의 자치어기 또는 유소기에서의 생산수율의 향상이나 기형방제에 있어서, EPA와 DHA가 중요한 효과를 나타내는 것을 알게 되어, 현재 계속해서 사용되고 있다. 이 효과들을 나타내는 것으로서 건강한 종묘, 즉 어류의 건묘성(建苗性)을 평가하는 기준으로는, 종묘의 형태, 색, 기관의 발달정도 등 눈으로 판단할 수 있는 부분에 중점이 주어지고 있다.

하지만, 근래에는 한걸음 더 나아가, 어류의 기능면에서의 향상, 예를 들어, 소화능력, 운동성, 또한 유영(游泳) 행동, 무리행동에까지 평가기준의 범위가 확대되고 있다.

기능면에서 중요한 평가기준은 수조교체, 이송단계에서의 물리적 스트레스, 예를 들어, 망으로 포획할 때의 핸들링 스트레스에 대한 내성, 다른 수온에 대한 적응능력 등을 들 수 있다(예를 들어, 다카하시 타카유키 '종묘생산에서의 환경과 스트레스', 아쿠아네트, 소분샤, 2001년7월, 제4권, 제7호, p62~65 참조). 그 중에서도 특히 재배어업에서의 방류용 종묘에 있어서는, 낮은 수온의 해역으로 방류하는 경우, 방류후 스트레스에 의해 활력이 떨어지면, 곧 대형어에게 포식되어 버릴 것이 예측되어 문제시되고 있다. 이것을 방지하기 위한 시도로서, 어초 주변으로의 방류 등 방류장소에 대한 여러가지 검토가 이루어지고 있다.

초기사료의 분야에서도 건강한 종묘를 생산하기 위하여, 종래부터 이루어지고 있는 이상 형태의 개선과 함께, 스트레스에 대한 내성 등을 새롭게 평가기준으 로 사용하여, 여러가지 영양성분적인 접근이 이루어지고 있다.

청돔(Sparus aurata)의 스트레스 내성 등에 대한 레시틴 및 EPA의 효과에 대해 이루어진 연구에서는, 레시틴 존재하에서 EPA의 증가에 따라 핸들링이나 온도변화에 따른 스트레스 내성을 개선하는 것이 나타나 있다(JINGLE LIU외 6명, Necessity of dietary lecithin and eicosapentaenoic acid for growth, survival, stress resistance and lipoprotein formation in gilthead sea bream sparus aurata, 'FISHERIES SCIENCE', 일본, 일본수산학회지, 2002년, 제68권, p1165-1172 참조).

참돔 자치어의 활력 테스트(핸들링 내성)에 있어서 EPA와 DHA의 효과에 대해 이루어진 연구에서는, EPA에서는 거의 효과가 없고, DHA에서는 비교적 양호한 효과를 가지는 것이 나타나 있다(타케우치 토시로, '어류에서의 영양소 결핍증과 요구량', 재배어업 기술연수사업 기초이론코스 텍스트집V, 자치어기의 발육시리즈, 사단업인 일본재배어업협회, 1991년, 제4권, p20~23 참조).

하지만, 모두 효과가 충분하다고 하기 어렵고, 실제 종묘생산 현장에서의 스트레스 내성이나 저수온 적응능력에 대한 효과를 반영한 것이 아니었다. 또한, 실제 현장에서 충분한 효과를 나타내지 못하였다.

이상과 같이 근래 종묘생산의 지표로서, 망으로 포획할 때의 핸들링 스트레스에 대한 내성, 다른 수온에 대한 적응능력 등이 중요시되고 있는데, 이것들을 개선하는 초기사료의 영양성분적 접근은 예비검토에 그쳐 매우 불충분하다. 특히, EPA, n-6DPA 및 DHA를 중심으로 하는 종합적인 접근은 전혀 이루어지지 않았다.

본 발명의 목적은 어패류의 종묘생산에 있어서 여러가지 스트레스에 대한 내성이 부여된 종묘를 제공하는 것이다.

본 발명의 과제는 저온 스트레스 및 핸들링 스트레스에 강한 종묘를 생산할 수 있는 동물 플랑크톤용 사료를 제공하는데 있다.

본 발명자들은 이러한 문제점(과제)을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 에이코사펜타엔산(이하, 'EPA'라고 함)을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, n-6도코사펜타엔산(이하, 'n-6DPA'라고 함)과 도코사헥사엔산(이하, 'DHA'라고 함)을 포함하는 미생물을 함유한 것을 동물 플랑크톤용 사료로서 사용함으로써, 종묘생산에서의 저수온 노출이나 핸들링에 따른 스트레스 방지효과를 발휘하는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다. 따라서, 본 발명은 종묘생산에 있어서, 어패류 특히 자치어에게 저수온노출 내성이나 핸들링 스트레스 내성을 부여할 수 있는 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 에이코사펜타엔산 함량이 10~50 질량%인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물이, 진정안점 조류 난노클로로푸시스속(Nannochloropsis.sp)인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 n-6 도코사펜타엔산 함량이 10~60 질량%인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 도코사헥사엔산 함량이 20~80 질량%인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물이 시조키트륨속(Schizochytrium.sp) 또는 트라우스토키트륨속(Thraustochytrium.sp)인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물의 질량비율이 고체물로서 1:9~9:1인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, 동물 플랑크톤이 로티퍼, 아르테미아 및 물벼룩으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 있어서, 동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 에이코사펜타엔산 함량이 5~27 질량%이고, n-6 도코사펜타엔산 함량이 5~21 질량%이며, 또한 도코사헥사엔산 함량이 5~52 질량%인 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다. 이에 의해, 본 발명은 EPA, n-6DHA 및 DHA에 관하여, 특징있는 조성을 가지는 지질을 함유하는 동물 플랑크톤용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을, 자치어의 먹이로서 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어의 생산방법을 제공한다. 이에 의해, 저수온노출 내성이나 핸들링 스트레스 내성을 가지는 자치어의 생산방법을 제공한다. 또한, 바꿔말하면, 자치어에게 저수온 노출에 대한 내성이나 핸들링 스트레스 내성을 부여하는 자치어의 생산방법을 제공한다.

본 발명은 또한 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물, 및 n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 어패류를 위한 스트레스 내성부여제를 제공한다.

본 발명에서의 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물 및 n-6도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 것을 특징으로 하는 동물 플랑크톤용 사료란, 적어도 (1) 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, (2) n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 동물 플랑크톤용 사료를 말한다.

본 발명에서의 '에이코사펜타엔산(이하,'EPA'라고 함)을 포함하는 미생물'이란, 미생물 안에 EPA를 함유하고 있는 것 및/또는, 미생물을 배양하면 미생물 안에 EPA를 생산하는 것을 말한다. EPA는 'C20:5, n-3'이나 'C20:5'라고 표기되는 경우가 있다.

구체적으로는 진정안점 조류 난노클로로푸시스속(Nannochloropsis.sp), 프라시노 조류의 테트라셀미스(Tetraselmis.sp) 및 규조류의 키토세라스(Chaetoceros.sp) 등을 들 수 있다. 이 중에서도 바람직한 것은, 진정안점 조류 난노클로로푸시스속(Nannochloropsis.sp)이다.

이들 미생물을 다루는 방법은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 순수 배양한 배양액체 중으로부터 미생물 균체만을 분리한 것의 농축물 또는, 그 건조물로서 이용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서의 '미생물'이란, 미생물에 유래한 것을 널리 포함하며, 배양균체, 건조배양균체 및 처리배양균체 그리고 균체 및 배양상청을 포함하는 배양액을 포함한다. 구체적으로는 미생물 그 자체 외에, 예를 들어, 미생물의 농축물, 동결건조물, 스프레이 건조물 등을 포함한다.

본 발명에서의 'EPA를 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물'이란, EPA를 포함하는 미생물에 대하여 고압 호모지나이저 등을 사용하여 강제분산 처리하고, 실질적으로 상기 미생물의 세포벽을 파쇄처리한 것을 말한다(예를 들어, 일본특허공개 평11-276091호 공보 참조). 이 처리는 '가소화 처리'라고 불리는 경우도 있다. 해당 파쇄처리 공정은 미생물을 조정할 때 어느 시기든 한정되지 않으며, 예를 들어, 미생물을 배양하여 균체를 모은 상태에서 가소화 처리를 실시하여도 좋고, 또한 균체를 수집·건조하고, 그 후 해당 건조물을 임의의 액체에 녹이거나 또는 현탁시켜 가소화 처리를 실시하여도 좋다.

본 발명에서의 EPA를 포함하는 미생물의 EPA 함량은 특별히 한정되지 않지 만, 예를 들면, EPA를 포함하는 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 EPA 함량이 10질량% 이상이고, 바람직하게는 10~50질량%, 보다 바람직하게는 15~48질량%, 더욱 바람직하게는 20~45질량%, 특히 바람직하게는 23~43질량%, 가장 바람직하게는 28~38질량%이다.

본 발명에서의 '지질'이란, 일반적으로 '유지', '유분' 및 '기름'이라고 불리는 경우도 있으며, 예를 들어 Bligh-Day법에 의해 추출된 지질을 말한다. 사료 및 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 지방산 함량은, 종래방법에 의해 구해지며, 그 방법은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 분석 샘플링을 동결 건조하고, 상기 동결 건조물로부터 Bligh-Day법에 의해 지질을 추출하여 메틸에스테르화한 후, 가스 크로마토그래피로 지방산 조성을 산출하고, 해당하는 지방산의 양을 지질중의 지방산 전체의 양으로 나누어 구할 수 있다.

본 발명에서 EPA를 포함하는 미생물 중의 지질량은 특별히 한정되지 않는다. 상기 지질량은 미생물의 배양방법에 따라 크게 영향을 받기 때문에 특정하는 것이 어렵지만, 예를 들어, 1질량% 이상이며, 바람직하게는 3질량% 이상이다.

본 발명에서의 EPA를 포함하는 미생물의 EPA의 존재상태는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 트리글리세리드, 디글리세리드, 모노글리세리드, 지방산, 지방산 메틸에스테르, 지방산 에틸에스테르, 인지질이나 당지질 등의 복합지질의 어느 것이어도 좋다.

본 발명에서의 'n-6 도코사펜타엔산(이하, 'n-6 DPA'라고 함)과 도코사헥사엔산(이하, 'DHA'라고 함)을 포함하는 미생물'이란, 미생물 중에 n-6 DPA와 DHA를 함유하고 있는 것, 및/또는 배양하면 미생물 안에 n-6DPA와 DHA를 산생(産生)시키는 것을 말한다. n-6DPA는 'C22:5, n-6'이나 'C22:5'로, DHA는 'C22:6, n-3'이나 'C22:6'으로 표기하는 경우가 있다.

구체적으로는 시조키트륨속(Schizochytrium.sp), 트라우스토키트륨속(Thraustochytrium.sp), 울케니아속(Ulkenia속) 및 알트리니아속(Althornia속) 등을 들 수 있다. 이 중에서도 바람직한 것은 시조키트륨속(Schizochytrium.sp) 또는 트라우스토키트륨속(Thraustochytrium.sp)이며, 보다 상세하게는 ATCC 20888, 20889, 20891, 24473, 28209, 28221, 34304 등을 들 수 있는데, 본 발명은 이것들로 한정되지 않는다.

이 미생물들을 다루는 방법은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 순수배양한 배양액체중으로부터 미생물 균체만을 분리한 것의 농축물, 및 그 건조물로서 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서의 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물중의 n-6DPA 함량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 n-6DPA 함량은 5질량% 이상이며, 바람직하게는 5~60질량%, 보다 바람직하게는 11~45질량%, 더욱 바람직하게는 11~30질량%, 특히 바람직하게는 11~25질량%, 가장 바람직하게는 13~20질량%이다.

본 발명에서의 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물중의 DHA 함량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물 지질중의 DHA 함량이 20질량% 이상이며, 바람직하게는 20~80질량%, 보다 바람직하게는 30~70질량%, 더욱 바람직하게는 30~60질량%, 특히 바람직하게는 30~50질량%, 가장 바람직하게는 33~43질량%이다.

본 발명에서의 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물의 n-6DPA와 DHA 함량의 비율은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물의 n-6DPA 함량과, 상기 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물의 DHA 함량의 임의의 비율(임의의 조합)을 이루는 미생물을 본 발명에서 사용할 수 있다. 구체적으로는 예를 들어, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 n-6DPA 함량이 10~30 질량%이며, 또한 DHA 함량이 30~70질량%인 것을 들 수 있다.

본 발명에서의 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물 중의 지질량은 특별히 한정되지 않는다. 상기 지질량은 미생물의 배양방법에 따라 크게 영향을 받기 때문에 특정하기가 어렵지만, 예를 들어, 5질량% 이상이며, 바람직하게는 30질량% 이상이다.

본 발명에서의 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물의 EPA의 존재상태는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 트리글리세리드, 디글리세리드, 모노글리세리드, 지방산, 지방산 메틸에스테르, 지방산 에틸에스테르, 인지질이나 당지질 등의 복합지질 중의 어느 것이면 좋다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료에서는 EPA를 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물과의 질량비율이 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 구체적으로는 고체물로서 1:9~9:1이며, 바람직하게는 고체물로서 1:1이다.

본 발명에서 사용하는 미생물의 존재는 통상 광학현미경에 의한 형상의 확인과, 그 유지중의 지방산 조성에 의해 동정할 수 있다. 예를 들어, n-6DPA를 가지는 시조키트륨속·트라우스토키트륨속 조류는, 클로로필(chlorophyll)을 가지지 않는 직경 6~7㎛의 구형 세포이다.

본 발명에서 고체물이란, 외관이 고형상(固形狀), 분말형상 또는 블록형상 등이면 좋고, 수분함량은 특별히 한정되지 않는다. 또한, 액상, 페이스트상, 현탁상은 아니다. 본 명세서에서는 고체물의 범주에 포함되는 것으로서, 특히 분말형상의 것을 '건조분말'이라고 하는 경우가 있다.

질량비율을 조정하는 경우, EPA를 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물은 상기와 같이 고체물이면 좋고, 수분함량이 한정되지는 않지만, 예를 들어, 수분함량은 10질량% 이하이며, 바람직하게는 9~0.1질량%, 보다 바람직하게는 8~0.1질량%이다.

질량비율을 조정하는 경우, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물은 상기와 같이 고체물이면 좋고, 수분함량이 한정되지는 않지만, 예를 들어, 수분함량은 10질량% 이하이고, 바람직하게는 8~0.1질량%, 보다 바람직하게는 7~0.1질량%, 더욱 바람직하게는 6~0.1질량%, 특히 바람직하게는 5~0.1질량%, 가장 바람직하게는 4~0.1질량%이다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료에 있어서 성상은 상관없으며, 어떠한 성상이어도 제공할 수 있다. 예를 들어, 고체(고형상, 분말형상), 페이스트, 액체(용액, 용액상) 또는 현탁액(현탁상)으로서 제공할 수 있다.

또한, 액체(용액, 용액상) 또는 현탁액(현탁상)으로 하는 경우에도, 그 수분에 대한 사료의 양은 한정되지 않으며, 농도는 불문한다. 예를 들어, 사료 1질량에 대하여 용액 0.1~100 질량을 혼합, 용해 또는 현탁시켜 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료의 제조방법의 일례를 나타낸다.

본 발명에서 질량비율을 조정할 때, 각각의 미생물을 분말형상으로 한 것을 혼합함으로써, 분말형상의 동물 플랑크톤용 사료를 제공할 수 있다. 예를 들어, EPA를 포함하는 미생물을 세포벽 파쇄처리한 것을 동결 건조한 수분함량 8질량% 이하의 건조분말 100g과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 스프레이 건조한 수분함량 4질량% 이하의 건조분말 100g을 혼합한 것을 들 수 있다. 각각의 미생물 유래의 건조분말의 혼합방법은 특별히 한정되지 않는다.

또한, 각각의 미생물을 분말형상으로 하고, 각각을 임의의 액체와 혼합하여 용액상 또는 현탁상으로 하며, 그 후 혼합할 수 있다. 이에 의해, 용액상 또는 현탁상의 동물 플랑크톤용 사료를 제공할 수 있다. 예를 들어, EPA를 포함하는 미생물을 동결 건조한 수분함량 8질량%의 건조분말 100g을 1리터의 증류수에 더하여 세포벽 파쇄처리한 현탁액과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 스프레이 건조한 수분함량 4질량%의 건조분말 100g을 1리터의 증류수에 더하여 교반한 현탁액을 혼합한 것을 들 수 있다. 각각의 미생물 유래의 용액 또는 현탁상으로 한 것의 혼합방법은 특별히 한정되지 않는다. 또한 상기 혼합 후 용액상 또는 현탁상인 것을 다시 건조물로 하여, 고형상 또는 분말상으로서 제공할 수도 있다.

용액상 또는 현탁상의 동물 플랑크톤용 사료를 제공하는 경우, 액체중의 미 생물 양은 특별히 한정되지 않지만, 통상 15질량% 이하로 사용되며, 바람직하게는 15~5질량%이고, 예를 들어 15, 12.5, 10, 7.5, 5질량%를 들 수 있다.

본 발명에서 말하는 동물성 플랑크톤이란, 로티퍼(해산 로티퍼;Brachionus plicatilis 등), 아르테미아(브라인 슈림프;Brine Shrimp), 물벼룩 등 일반적으로 종묘생산에서 생물먹이로서 이용되는 것을 말한다. 이것들은 동시에 1종 또는 2종 이상을 사용하여도 좋다.

본 발명에서 '동물 플랑크톤용 사료'란, 동물 플랑크톤에게 먹이기 위한 사료를 말한다. 상기 사료를 동물 플랑크톤에게 먹이는 주된 목적은 동물 플랑크톤 안에 영양소(예를 들어, EPA, n-6DAP 및 DHA 등)를 축적시키는 것(영양강화)이다.

본 발명에서 '영양강화 동물 플랑크톤'이란, 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써, 동물 플랑크톤 중의 영양소(예를 들어, EPA, n-6DPA 및 DHA 등)가 강화된 동물 플랑크톤을 말한다. 상기 영양강화 동물 플랑크톤은 종묘생산시에 자치어에게 먹여 사용하는 것이다.

본 발명에서 동물 플랑크톤의 1차 배양 및 영양강화에 따른 2차 배양의 조건은, 당업자들의 통상의 방법으로 할 수 있다. 구체적인 배양조건은 당업자의 지식의 범위에서 적절히 수정할 수 있다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 영양강화에 사용할 때, 상기 사료의 첨가량은 특별히 한정되지 않는다. 이는 당업자들의 통상의 방법으로 할 수 있다. 구체적인 농도는 당업자의 지식의 범위에서 적절히 수정하여 정할 수 있다. 예를 들어, 해당 사료의 고체물로서 0.2g/l로 첨가할 수 있다. 구체적으로는, EPA 를 포함하는 미생물의 고체물 100g을 1리터의 증류수에 더하여 세포파괴 처리를 한 것과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물의 고체물 100g을 1리터의 증류수에 더하여 교반한 것을 혼합한다(따라서, 사료 200g/2리터가 된다). 이어서, 상기 혼합액을 동물 플랑크톤의 배양액 안에 2ml/l의 농도로 사용한다(따라서, 사료 200mg/2ml/l 이기 때문에, 환산하면 사료 0.2g/l가 된다).

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료 중의 EPA, n-6DPA 및 DHA의 함량은 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료 중의 EPA 함량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 상기 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 EPA 함량이 5~35질량%이며, 바람직하게는 5~30질량%, 보다 바람직하게는 5~27질량%, 더욱 바람직하게는 5~25질량%, 특히 바람직하게는 5~20질량%, 가장 바람직하게는 10~20질량%이다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료중의 n-6DPA 함량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 상기 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 n-6DPA함량이 5~40질량%이며, 바람직하게는 5~30질량%, 보다 바람직하게는 5~21질량%, 더욱 바람직하게는 6~20질량%, 특히 바람직하게는 7~18질량%, 가장 바람직하게는 7~15질량%이다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료중의 DHA 함량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 상기 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 DHA 함량이 5~60질량%이며, 바람직하게는 5~55질량%, 보다 바람직하게는 5~52질량%, 더욱 바람직하게는 10~40질량%, 특히 바람직하게는 15~35질량%, 가장 바람직하게는 25~35질량%이 다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 EPA, n-6DPA 및 DHA 함량의 비율에 대해서는 특별히 한정하지 않는다. 예를 들어, 상기 동물 플랑크톤용 사료의 지질중의 총지방산에 대한 EPA, n-6DPA, 및 DHA 함량의 임의의 비율(임의의 조합)을 이루는 지질을 본 발명에서 사용할 수 있다. 구체적으로는 예를 들어, 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 지방산 함량이 EPA가 5~27질량%이고, n-6DPA가 5~21질량%이며, 또한 DHA가 5~52질량%인 동물 플랑크톤용 사료를 제공할 수 있다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료의 지질량은 특별히 한정되지 않는다. 상기 지질량은 각각의 미생물의 배양방법이나 혼합비율에 의해 크게 달라지는 것으로, 일괄적으로 함량을 표시할 수 없다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료의 지질의 존재상태는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 트리글리세리드, 디글리세리드, 모노글리세리드, 지방산, 지방산 메틸에스테르, 지방산 에틸에스테르, 인지질이나 당지질 등의 복합지질 중 어느 것이어도 좋다.

본 발명은 다른 관점에서 보면, EPA를 포함하는 미생물 또는 상기 세포벽 파소물과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물과의 혼합질량비율을 조정함으로써, EPA, n-6DPA 및 DHA의 함량을 조정하는 동물 플랑크톤용 사료 및 지질의 조정방법 또는 생산방법을 제공한다. 또한, 상기 조정방법 또는 생산방법에 의해 얻어지는 지질함량을 자치어의 종묘생산에 대하여 유효한 EPA, n-6DPA, 및 DHA의 함량으로 조정할 수 있다. 또한, 상기 조정방법 또는 생산방법에 의해, 자치어의 종묘생산에 대하여 유효한 EPA, n-6DPA, 및 DHA의 함량의 사료 및 유지를 제공할 수 있다.

본 발명은 다른 관점에서 보면, 지질의 총지방산중의 구성지방산 함량이 EPA가 5~27질량%이며, n-6DPA가 5~21질량% 이상이고, 또한 DHA가 5~52질량%인 지질을 제공할 수 있는 것이다.

이 지질들의 사용방법은 특별히 한정되지 않으며, 단독 또는 다른 것과 섞어서 사용할 수 있다. 이것들은 예를 들어, 동물 플랑크톤용 사료, 자치어의 생산방법 등, 모든 어패류의 종묘생산에 관한 것에 사용할 수 있는 동시에, 모든 의약품이나 식품에도 사용할 수 있다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 EPA, n-6DPA 및 DHA의 함량이 특정 비율인 지질 및, 상기 지질을 함유하는 사료는, EPA를 포함하는 미생물 및/또는 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 사용하지 않아도, 각 성분을 각각 준비하여 혼합하거나, 혹은 각각의 성분을 트리글리세리드, 디글리세리드, 모노글리세리드, 지방산, 지방산 메틸에스테르, 지방산 에틸에스테르, 인지질이나 당지질 등의 복합지질의 어느 하나로 하여 혼합함으로써 실현가능하다. 하지만, 본 발명에 따른 EPA를 포함하는 미생물 및, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 사용하는 쪽이 제조할 때 간단하며 공업적으로도 효율이 좋고, 저가로 제작가능하다.

또한, 본 발명에 따른 EPA를 포함하는 미생물 및, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 사용하여 동물 플랑크톤용 사료로 한 것과, 각 성분을 각각 준비하여 본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 EPA, n-6DPA 및 DHA 함량과 마찬가지의 비율로 한 것에서는, 전자가 효과 면에서도 바람직하다.

종묘생산이란, 어류의 경우, 일반적으로 부화자어에서 치어까지 키우는 공정을 말한다. 이 종묘생산에 의해 얻어진 치어는 그 후, 방류나 양식에 사용된다. 따라서, 종묘생산이 잘 이루어져 생존율이 높고 활력이 큰 치어, 더욱이 여러 스트레스에 대한 내성을 가진 치어를 만들 수 있다면, 그 후의 양식 등에 큰 도움이 된다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤이 제공된다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤의 생산방법이 제공된다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을 얻는 동물 플랑크톤에 대한 먹이공급 방법이 제공된다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을, 자치어의 먹이로서 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어가 제공된다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을, 자치어의 먹이로서 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어의 먹이공급방법이 제공된다.

본 발명에서 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을 자치어의 먹이로서 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어의 생산방법을 제공한다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 자치어의 종묘생산에 사용하여 얻어지는 자치어를 제공한다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 자치어의 종묘생산에 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어의 종묘생산방법을 제공한다.

본 발명에서 다른 관점에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 자치어의 종묘생산에 사용하는 것을 특징으로 하는 자치어의 생산방법을 제공한다.

또한, 본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료에는, 해당 사료 이외의 사료성분을 혼합하여 사용할 수 있다. 해당 사료 이외의 사료성분은 특별히 한정되지 않으며, 통상의 동물 플랑크톤용 사료로서 이용되고 있는 것을 사용할 수 있다. 예를 들어, 담수 클로렐라, 효모, 어유, 인지질 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료는 해당 사료와, 해당 사료 이외의 사료성분을 동시 또는 개별 독립하여, 어패류에 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료를 사용하여 종묘생산이 가능한 어패류는 특별히 한정되지 않으며, 동물 플랑크톤을 사용하여 종묘생산을 하는 모든 것에 대하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 참돔, 넙치, 감성돔, 자지복, 가자미, 쏨뱅이, 볼락, 은어, 쑤기미, 방어, 그루퍼, 붉은 옥돔, 다랑어 등의 어류, 꽃게, 보리새우 등의 갑각류나, 낙지, 오징어 등의 두족류 등이다. 이 중에서도 바람직하게는 참 돔, 넙치, 감성돔, 자지복, 가자미이며, 더욱 바람직하게는 참돔, 넙치이다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료는 어패류의 생산수율 향상(생존율 향상)이나 기형 방제 등의 종래의 시각에서 인식할 수 있는 작용을 유지하면서, 어패류의 기능면에서의 향상이라는 뛰어난 효과를 가지는 것이다. 어패류의 기능면에서의 향상이란, 시각적으로 인식할 수는 없지만, 어패류의 내적인 기능면에서의 향상을 말한다. 예를 들어, 수조교환시의 스트레스, 이송단계에서의 물리적 스트레스, 망에 의한 포획시의 핸들링 스트레스 및, 다른 수온으로 옮겨졌을 때의 스트레스 등에 대한 내성의 향상을 말한다. 종래, 어패류의 기능적인 면이 낮으면, 이들 공정에 의해 어패류의 생존률이 떨어져버려, 종묘생산이 제대로 진행되지 않는 경우가 있었다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료의 효과는, 보다 상세히는 해당 사료를 동물 플랑크톤에 먹여 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을 자치어의 먹이로서 사용하여 자치어를 종묘생산함으로써, 자치어의 상기 스트레스 내성이 향상되기 때문에, 자치어의 수조교환시, 이송시, 망에 의한 포획시, 다른 수온의 수조로 옮겨질 때에, 자치어의 생존율이나 활성이 떨어지는 것을 방지할 수 있다. 이에 의해, 결과적으로 종묘생산이 지금보다 더욱 양호해지는 것이다.

본 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료의 효과는, 일반적으로 생산수율 향상(생존율의 향상)이나 기형 방제 등의 효과를 가진다고 보이는 (a) 비교적 EPA를 많이 포함하고, DPA나 DHA를 거의 포함하지 않는 미생물, (b) 비교적 DPA 및 DHA를 많이 포함하고, EPA를 미량(지질중의 총지방산에 5질량% 이하) 포함하는 미생물과 비교하여, 큰 효과를 가지고 있다. 특히, 해당 사료는 이들과 비교하여 자치어의 공중노출에 대한 내성 및, 저수온 노출에 대한 내성에 대하여 현저한 효과를 가지고 있다.

공중노출 시험에서는, 본 명세서에서 말하는 '핸들링 스트레스 내성', '핸들링에 의한 스트레스 방지효과'를 측정한다. 상기 시험은 예를 들어, 일정 기간 사육후의 자치어를 망 위에 올리고, 일정 시간(예를 들어, 120초) 공중에 노출시킨 후, 수온이 같은 다른 곳으로 옮겨, 일정 기간(예를 들어, 24시간) 후의 생존율로 측정함으로써 이루어진다. 이에 의해, 활력이 유지되고 자치어의 생존율이 높으면(죽지 않으면), 당연히 자치어를 종묘생산할 때의 핸들링시에도 죽는 경우가 적어져, 결과적으로 종묘생산이 잘 이루어지고, 수산업에 커다란 도움을 주게 되는 것이다.

저수온 노출시험에서는, 본 명세서에서 말하는 '저수온 노출내성(저온 스트레스 내성)', '저수온 노출에 의한 스트레스 방지효과'를 측정한다. 상기 시험은 예를 들어, 수온 21℃에서 일정 시간 사육한 후의 자치어를 수온 12℃, 13℃, 14℃ 또는 15℃의 다른 수조로 옮겨, 일정 기간(예를 들어, 30분) 후의 생존율로 측정함으로써 이루어질 수 있다. 이에 의해, 활력이 유지되고, 자치어의 생존율이 높으면(죽지 않으면), 당연히 자치어를 종묘생산할 때의 핸들링시에도 죽는 경우가 적어져, 결과적으로 종묘생산이 잘 이루어지고, 수산업에 커다란 도움을 주게 되는 것이다.

본 발명에 따르면, EPA를 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물을 함유한 것을 동물 플랑크톤용 사료로서 사용함으로써, 종묘생산에 있어서 자치어의 저수온 노출이나 핸들링에 대한 스트레스 방지효과를 나타낸다.

즉, 본 발명에 따르면, 이러한 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을 자치어의 먹이로서 사용함으로써, 상기 자치어의 저수온노출 내성(저온 스트레스 내성)이나 핸들링 스트레스 내성을 향상시키는 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명의 동물 플랑크톤용 사료를 준 아르테미아나 로티퍼 등의 동물 플랑크톤에서는 그 활력이 떨어지지 않는다는 이점이 있다.

이 효과들은 종래에는 없었던 매우 유효한 효과이며, 어패류의 종묘생산, 특히 자치어의 종묘생산에 커다란 도움을 주는 것이다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이것들에 의해 한정되는 것은 아니다.

(실시예 1)

[동물 플랑크톤용 사료의 조정 및, 영양강화 동물 플랑크톤의 조정]

(1-1) 동물 플랑크톤용 사료의 조정

동물 플랑크톤용 사료의 원료로서, 시조키트륨 ATCC20891주의 배양액 100리터로부터 약 3kg의 균체를 분리하였다. 이어서 균체를 동결건조 처리한 후, 분쇄하여 1.2kg의 건조분말을 얻었다. 이 건조분말 100g에 증류수를 더하여 1리터로 하고, 호모지나이저로 분리한 시험사료 A를 얻었다.

시험사료 A는 n-6DPA와 DHA를 포함하는 미생물에 상당한다.

또한, 난노클로로푸시스 배양액 5000리터로부터 4kg의 균체를 얻고, 그것을 스프레이 건조하였다. 이 건조분말 100g을 증류수에 더하여 1리터로 하고, 고압 호모지나이저에 의해 세포벽 파쇄처리를 하여 시험사료 B를 얻었다.

시험사료 B는 EPA를 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄물에 상당한다.

또한, 별도로 A의 사료 500ml와 B의 사료 500ml를 작성하여 각각을 혼합하고, 시험사료 C를 얻었다.

시험사료 C는 해당 발명에 따른 동물 플랑크톤용 사료에 상당한다.

시험사료 A~C를 각각 지방산 분석샘플로 하였다.

시험사료의 지방산 조성을 표 1에 나타낸다. 지방산 조성은 지방산 분석 샘플을 동결 건조한 후, Bligh-Dyer법으로 지질을 추출하여 메틸에스테르화한 후, 가스 크로마토그래피로 분석하였다. 구성지방산의 비율(질량%)은 면적백분율로부터 구하였다.

시험사료 A에 사용한 균체의 동결 건조품인 건조분말의 수분은 3.7%, 유분은 58.5%였다. 또한, 시험사료 B에 사용한 스프레이 건조품인 건조분말의 수분은 7.0%, 유분은 7.5%였다.

(1-2) 영양강화 동물 플랑크톤의 조정

시험사료를 첨가하여 영양강화하는 동물 플랑크톤 배양액은, 로티퍼를 담수 클로렐라로 배양하여 1000개체/ml로 조정하고, 아르테미아는 100개체/ml로 각각 조정하며, 모두 수온을 25℃로 유지하였다 거기에 각종 시험사료를 각각 2ml/리터의 농도가 되도록 첨가한 후, 2시간 이상 경과한 것(영양강화 동물 플랑크톤)을 지방산 분석 샘플로 제공하는 동시에, 시험 물고기의 먹이로서 사용하였다. 여기서, 영양강화한 로티퍼 및 아르테미아를 각각 로티퍼 A~C, 아르테미아 A~C라고 한다.

영양강화 로티퍼의 지방산 조성을 표 2에, 영양강화 아르테미아의 지방산 조성을 표 3에 나타낸다. 지방산 조성은 지방산 분석 샘플을 동결 건조한 후, Bligh-Dyer법으로 지질을 추출하여 메틸에스테르화한 후, 가스 크로마토그래피로 분석하였다. 구성지방산의 비율(질량%)은 면적백분율로부터 구하였다.

이들로부터 시험사료의 지방산조성이, 영양강화한 동물 플랑크톤의 지방산 조성에 반영되는 것을 알 수 있다.

이상과 같이 하여 영양강화된 로티퍼, 아르테미아를 사용하여, 실시예 2 및 3에서 각각 참돔으로 사육시험을 하였다.

표 1은 각종 시험사료의 지방산 분석치를 나타낸다. 단위는 질량%이다. 표에서 'ND'는 미검출을 의미한다.

표 2는 각종 사료로 영양강화된 로티퍼의 지방산 분석치를 나타낸다. 단위는 질량%이다. 표에서 'ND'는 미검출을 의미한다.

표 3은 각종 사료로 영양강화된 아르테미아의 지방산 분석치를 나타낸다. 단위는 질량%이다.

표 1

지방산＼시험구	시험사료 A	시험사료 B	시험사료 C
C14:0	0.5	3.6	0.4
C16:0	12.4	19.3	13.7
C16:1	0.3	17.8	4.3
C18:0	27.6	0.3	18.4
C18:1	0.4	3.4	0.7
C18:2	0.3	0.1	0.2
C20:4	0.8	5.9	1.0
C20:5(EPA)	1.5	32.3	15.0
C22:5(n-6DPA)	14.1	ND	10.6
C22:5(n-3DPA)	0.1	ND	ND
C22:6(DHA)	37.8	ND	29.1
기타	4.2	17.3	6.6
합계	100.0	100.0	100.0

표 2

지방산＼시험구	시험사료 A (영양강화 로티퍼 A)	시험사료 B (영양강화 로티퍼 B)	시험사료 C (영양강화 로티퍼 C)
C14:0	3.0	2.5	2.5
C16:0	21.0	20.9	18.4
C16:1	3.4	8.2	3.5
C18:0	3.2	3.7	3.4
C18:1	0.9	1.7	1.0
C18:2	24.4	25.5	20.6
C20:4	2.0	3.6	2.5
C20:5(EPA)	0.1	19.8	9.8
C22:5(n-6DPA)	10.2	ND	6.6
C22:5(n-3DPA)	0.5	1.7	0.4
C22:6(DHA)	22.5	ND	17.8
기타	8.8	12.4	13.5
합계	100.0	100.0	100.0

표 3

지방산＼시험구	시험사료 A (영양강화 아르테미아 A)	시험사료 B (영양강화 아르테미아 B)	시험사료 C (영양강화 아르테미아 C)
C14:0	1.7	0.8	1.3
C16:0	13.7	12.7	13.1
C16:1	4.6	7.5	5.6
C18:0	4.1	5.2	4.4
C18:1	27.9	34.3	26.6
C18:2	3.2	4.3	3.6
C20:4	2.9	4.2	2.6
C20:5(EPA)	5.5	20.4	11.4
C22:5(n-6DPA)	5.8	ND	4.5
C22:5(n-3DPA)	0.2	ND	0.1
C22:6(DHA)	19.1	0.1	16.9
기타	11.3	10.5	9.9
합계	100.0	100.0	100.0

(실시예 2)

[영양강화 로티퍼를 사용한 참돔의 사육시험 및 공중노출시험]

(2-1) 영양강화 로티퍼를 사용한 참돔의 사육시험

실시예 1에서 얻어진 시험사료 A~C를 먹인 로티퍼(영양강화 로티퍼 A~C)를 각각 A~C구로 사용하고, 공시(供試)어로 참돔을 사용하여 사육시험을 실시하였다.

자가채란한 참돔 수정란을 각 구 12500알로 500리터용 폴리카보네이트 수조에 수용하고, 산란 수온에서 부화시킨 후에 서서히 수온을 높여 21℃로 하였다. 부화율은 각 구 모두 98% 이상으로 차이가 없었다.

영양강화 로티퍼 A~C의 첨가는 각 구에서 부화후 3일째부터 로티퍼의 양을 5개체/ml를 유지하도록 조정하여 1일 1회 먹였다. 부화후 10일째부터 8개체/ml 유지, 15일째부터 10개체/ml를 유지하도록 로티퍼의 양을 조정하여 아침 저녁 2차례 먹이고, 부화후 20일째에 사육시험을 종료하였다.

사육 종료후의 어체를 지방산 분석 샘플로 하였다.

사육 종료후, 어체의 지방산 조성을 분석, 각 구의 생존율과 평균 전체 길이를 산정하였다.

(2-2) 영양강화 로티퍼를 사용한 참돔의 공중노출시험

또한, 공중노출시험으로서, 사육 종료후의 참돔 100마리를 망으로 60초간 공중에 노출시킨 후, 수온이 같은 다른 수조로 옮겨 24시간 후의 생존율을 보았다.

사육시험후의 어체의 지방산 조성을 표 4, 사육후의 평균 전체길이, 생존율, 공중 노출후의 생존율의 결과를 표 5에 나타낸다. A구는 영양강화 로티퍼A 투여군, B구는 영양강화 로티퍼B 투여군, C구는 영양강화 로티퍼C 투여군을 가리킨다. 지방 산 조성은 지방산 분석 샘플을 동결 건조한 후, Bligh-Dyer법으로 지질을 추출하여 메틸에스테르화하고 가스 크로마토그래피로 분석하였다. 구성지방산의 비율(질량%)은 면적백분율로부터 구하였다.

표 4에서, A구에서는 다른 구와 비교하여 DHA 조성이 가장 높고, B구에서는 EPA 조성이 가장 높고, C구에서는 EPA, n-6DPA 및 DHA 조성 모두가 균형적으로 포함되어 있는 것을 알 수 있다. 이들로부터 시험사료 및 영양강화 로티퍼의 지방산 조성이 사육시험후 어체안의 지방산 조성에 반영되는 것을 알 수 있다.

표 5에서 각 구의 평균 전체 길이에는 커다란 차이가 보이지 않으며, 생존율은 B구가 떨어지고, A구와 C구는 거의 동등하였다. 공중노출시험(핸들링 스트레스 시험)에서는, C구에서 95.3%로 생존율이 가장 높았고, 이어서 A구, B구의 순서였다. 즉, EPA, n-6DPA 및 DHA 조성 모두 균형적으로 포함되어 있는 사료를 사용한 군이 효과가 가장 높았다.

표 4는 로티퍼를 먹인 시험 후의 참돔 어체의 지방산 조성을 나타낸다. 단위는 질량%이다.

표 5는 각종 영양강화된 로티퍼를 먹인 참돔의 시험결과를 나타낸다. 단위는 질량%이다.

표 4

지방산＼시험구	A구 (영양강화 로티퍼 A 투여군)	B구 (영양강화 로티퍼 B 투여군)	C구 (영양강화 로티퍼 C 투여군)
C14:0	1.7	2.3	1.8
C16:0	20.7	23.0	22.7
C16:1	3.4	5.7	5.0
C18:0	10.0	10.8	10.6
C18:1	11.8	11.4	10.2
C18:2	13.8	18.3	15.0
C20:4	3.5	4.1	3.6
C20:5(EPA)	1.5	10.5	7.6
C22:5(n-6DPA)	4.1	0.1	3.8
C22:5(n-3DPA)	1.2	2.9	1.3
C22:6(DHA)	18.7	1.8	14.3
기타	9.6	9.1	4.1
합계	100.0	100.0	100.0

표 5

평가방법＼시험구	A구 (영양강화 로티퍼 A 투여군)	B구 (영양강화 로티퍼 B 투여군)	C구 (영양강화 로티퍼 C 투여군)
사육 종료시(생존율%)	69.3	55.7	65.5
전체 길이(mm)	7.2	6.5	6.5
공중노출(생존율%)	78.5	50.3	95.3

(실시예 3)

[영양강화 아르테미아를 사용한 참돔의 사육시험, 공중노출시험, 및 저수온 노출시험]

(3-1) 영양강화 아르테미아를 사용한 참돔의 사육시험

실시예 1에서 얻은 시험사료 A~C를 먹인 아르테미아(영양강화 아르테미아 A~C)를 각각 A~C구로 사용하고, 공시어로 참돔을 사용하여 사육시험을 실시하였다.

자가채란한 참돔 수정란을 각 구 어란 추출유로 영양강화한 로티퍼에 의해 부화한 후 20일째까지 사육한 참돔을 사용하였다. 각 구의 수조에 2000마리씩을 500리터용 폴리카보네이트 수조에 수용하고, 수온을 21℃로 하였다. 부화율은 각 구 모두 98% 이상으로 차이가 없었다.

부화후 30일째까지는 어란 추출유로 영양강화한 로티퍼와, 각 구 시험사료로 영양강화한 아르테미아(영양강화 아르테미아 A~C)를 같이 사용하고, 그 이후 36일째까지는 영양강화 아르테미아 A~C만을 먹였다.

어란 추출유로 영양강화한 로티퍼는 아침 저녁 2차례, 사육 수중에서 10개체/ml가 되는 양으로 조정하여 주고, 영양강화 아르테미아 A~C는 아침 저녁 2시간 이내에 전부 먹을 수 있는 양을 주어, 서서히 먹이의 양을 증가시켰다.

사육 종료후의 어체를 지방산 분석 샘플로 하였다.

사육 종료후, 어체의 지방산 조성을 분석하여, 각 구의 생존율과 평균 전체 길이를 산정하였다.

(3-2) 영양강화 아르테미아를 사용한 참돔의 공중노출시험

또한, 공중노출시험으로서 사육 종료후의 참돔 100마리를 망으로 120초간 공중에 노출시킨 후, 다른 수조로 옮겨 24시간 후의 생존율을 보았다.

(3-3) 영양강화 아르테미아를 사용한 참돔의 저수온 노출시험

더욱이, 저수온 노출시험으로서, 사육 종료후의 참돔 100마리를 12℃, 13℃, 14℃, 15℃의 저수온에 노출시켜 30분후의 생존율을 보았다.

사육 종료후의 어체의 지방산 조성을 표 6에, 사육후의 평균 전체 길이, 생존율, 공중노출시험, 저온노출시험의 생존율을 표 7에 나타낸다. A구는 영양강화 아르테미아A 투여군, B구는 영양강화 아르테미아B 투여군, C구는 영양강화 아르테미아C 투여군을 가리킨다. 지방산 조성은 지방산 분석 샘플을 동결 건조시킨 후, Blihg-Dyer법으로 지질을 추출하여 메틸에스테르화한 후, 가스 크로마토그래피로 분석하였다. 구성지방산의 비율(질량%)은 면적백분율로부터 구하였다.

표 6에서, A구에서는 다른 구와 비교하여 DHA 조성이 가장 높았고, B구에서는 EPA 조성이 가장 높았으며, C구에서는 EPA, n-6DPA 및 DHA 조성 모두가 균형적으로 포함되어 있는 것을 알 수 있다. 이들로부터 시험사료 및 강화 아르테미아의 지방산 조성이, 사육시험후의 어체안에서의 지방산 조성에 반영되는 것을 알 수 있다.

표 7에서 각 구의 평균 전체 길이에는 커다란 차이가 보이지 않고, 생존율에도 차이가 보이지 않았다. 한편, 공중노출시험에서는 A구와 B구는 거의 변함없고, C구에서 가장 높은 생존율을 보였다. 즉, EPA, n-6DPA 및 DHA 조성 모두가 균형적으로 포함되어 있는 사료를 사용한 군이 효과가 컸다.

또한, 저수온 노출에 의한 생존율은, 12℃에 노출한 경우, C구에서 가장 높은 생존율, 이어서 A구, B구의 순이었다. 13℃에서도 마찬가지의 순서였다. 14℃, 15℃에서는 B구에서 특히 낮은 생존율을 나타내었지만, A구, C구의 사이에서는 차이가 보이지 않았다. B구는 12~15℃의 모든 노출시험에서 A구 및 C구와 비교하여 특히 낮은 생존율을 나타내었다. 즉, EPA, n-6DPA 및 DHA 조성 모두가 균형적으로 포함되어 있는 사료를 사용한 군이 가장 효과가 컸다.

공중노출시험에서 DHA가 공중노출시험의 내성향상에 효과가 있는 것은 지금까지의 보고와 일치하는 결과였다(타케우치 토시로, '어류에서의 영양소 결핍증과 요구량', 재배어업기술연수사업 기초이론코스 텍스트집V, 자치어기의 발육시리즈, 사단업인일본재배어업협회, 1991년, 제4권, p20~23 참조). 하지만, 청돔에서는 레 시틴 존재하에서 EPA의 증가에 의해 저수온 스트레스 내성이 개선되는 것으로 보고되고 있지만(JINGLE LIU외 6명, Necessity of dietary lecithin and eicosapentaenoic acid for growth, survival, stress resistance and lipoprotein formation in gilthead sea bream sparus aurata, 'FISHERIES SCIENCE', 일본, 일본수산학회지, 2002년, 제68권, p1165-1172 참조), 이번 결과에서는 어체에 EPA가 단독 존재하는 것만으로는 저수온 내성의 개선 효과가 없고, 어체에 n-6DPA와 DHA가 존재함으로써 약간 개선되며, 어체에 EPA와 n-6DPA와 DHA가 균형적으로 존재함으로써 현저한 효과가 있는 것이 분명해졌다.

표 6은 아르테미아에 의한 사육 시험후의 참돔 어체의 지방산 조성을 나타낸다. 단위는 질량%이다.

표 7은 각종 영양강화한 아르테미아를 먹인 참돔의 시험결과를 나타낸다. 단위는 질량%이다.

표 6

지방산＼시험구	A구(영양강화 아르테미아 A 투여군)	B구(영양강화 아르테미아 B 투여군)	C구(영양강화 아르테미아 C 투여군)
C14:0	0.8	0.5	0.7
C16:0	15.7	16.2	16.6
C16:1	3.5	5.3	4.1
C18:0	7.4	9.0	8.1
C18:1	24.1	33.9	26.1
C18:2	3.1	3.3	3.4
C20:4	4.6	4.9	4.6
C20:5(EPA)	3.8	14.4	8.7
C22:5(n-6DPA)	6.9	0.2	5.2
C22:5(n-3DPA)	0.4	1.3	0.6
C22:6(DHA)	19.3	2.2	16.5
기타	10.4	8.8	5.4
합계	100.0	100.0	100.0

표 7

평가방법＼시험구	A구(영양강화 아르테미아 A 투여군)	B구(영양강화 아르테미아 B 투여군)	C구(영양강화 아르테미아 C 투여군)
사육 종료시(생존율%)	73.2	70.3	75.1
전체 길이(mm)	15.8	15.5	16.5
공중노출(생존율%)	78.3	2.5	100.0
저수온 노출12℃(생존율%)	25.0	5.0	70.0
저수온 노출13℃(생존율%)	80.0	0	90.0
저수온 노출14℃(생존율%)	100.0	10.0	100.0
저수온 노출15℃(생존율%)	100.0	35.0	100.0

본 명세서 내용 중에 포함됨.

Claims (16)

1. 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물, 및 n-6도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 동물 플랑크톤용 사료.
2. 제 1 항에 있어서,

   에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물에 포함되는 지질의 총지방산중의 에이코사펜타엔산의 함량이 10~50 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물이, 진정안점 조류 난노클로로푸시스속(Nannochloropsis.sp)인 동물 플랑크톤용 사료.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

   n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 n-6 도코사펜타엔산 함량이 5~60 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,

   n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 도코사헥사엔산 함량이 20~80 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

   n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 n-6 도코사펜타엔산 함량이 5~60 질량%, 도코사헥사엔산 함량이 20~80 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

   n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물에 함유되는 지질의 총지방산중의 n-6 도코사펜타엔산 함량이 10~30 질량%, 도코사헥사엔산 함량이 30~70 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

   n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물이 시조키트륨속(Schizochytrium.sp) 또는 트라우스토키트륨속(Thraustochytrium.sp)인 동물 플랑크톤용 사료.
9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,

   에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물과, n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물의 질량비율이 고체물로서 1:9~9:1인 동물 플랑크톤용 사료.
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,

    동물 플랑크톤이 로티퍼, 아르테미아 및 물벼룩으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상인 동물 플랑크톤용 사료.
11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,

    동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 에이코사펜타엔산 함량이 5~35 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,

    동물 플랑크톤용 사료에 포함되는 지질의 총지방산중의 에이코사펜타엔산의 함량이 5~27 질량%이고, n-6 도코사펜타엔산의 함량이 5~21 질량%이며, 또한 도코사헥사엔산의 함량이 5~52 질량%인 동물 플랑크톤용 사료.
13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 기재된 동물 플랑크톤용 사료를 동물 플랑크톤에게 먹임으로써 영양강화된 영양강화 동물 플랑크톤을, 자치어의 먹이로서 사용하는 것을 포함하는 자치어의 생산방법.
14. 에이코사펜타엔산을 포함하는 미생물의 세포벽 파쇄처리물, 및 n-6 도코사펜타엔산과 도코사헥사엔산을 포함하는 미생물을 함유하는 어패류를 위한 스트레스 내성부여제.
15. 제 14 항에 있어서,

    스트레스 내성이 핸들링 내성인 스트레스 내성부여제.
16. 제 14 항에 있어서,

    스트레스 내성이 저수온노출 내성인 스트레스 내성부여제.