WO2005007172A1

WO2005007172A1 - 配糖体含有リポソーム

Info

Publication number: WO2005007172A1
Application number: PCT/JP2004/010103
Authority: WO
Inventors: Shin Yazawa; Izumi Takai; Touyou Nishimura
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2003-07-17
Filing date: 2004-07-15
Publication date: 2005-01-27
Also published as: JPWO2005007172A1; KR20060065579A; JP4728805B2; EP1647277A1; JP5295277B2; CN1822844B; EP1647277A4; US20060193903A1; US7465753B2; CN1822844A; AU2004257509B2; KR101154442B1; AU2004257509A1; CA2529992C; CA2529992A1; JP2011102321A

Abstract

　本発明は、抗腫瘍剤として有用なコレスタノール配糖体の効果を最大限に発揮し得る製剤を提供するものである。　すなわち、本発明は、抗腫瘍活性を有し、糖としてＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−、ＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−Ｇｌｃ−、Ｆｕｃ−Ｇａｌ−、Ｇａｌ−Ｇｌｃ又はＧａｌ−を有するリポソーム化可能な疎水性化合物の配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質を含有するリポソームに関する。

Description

配糖体含有リボソーム

技術分野

[0001] 本発明は、抗癌剤として有用な配糖体を含有するリボソームに関する。

背景技術

[0002] 例えばコレステロールの B環の二重結合が飽和されたコレスタノールに特定の糖鎖を結合させた下記のコレスタノール配糖体（1)は、癌細胞の増殖抑制作用を有し、抗癌剤として有用な化合物である (特許文献 1及び 2参照)。

[0003] [化 1]

[0004] [式中、 Gは GlcNAc— Ga卜、 GlcNAc— Gal— Glc―、 Fuc— Ga卜、 Gal— Glc—又は G aトを示す。 ]

[0005] コレスタノールのような疎水性ィ匕合物は、細胞膜に親和性を有し、細胞に容易に取り込まれることから、それらの配糖体は種々の癌細胞に容易に取り込まれ十分にその効果を発揮できると考えられていた。しかしながら、当該配糖体は、溶解性の低さから使用が困難であったり、癌腫によってはその効果を充分に発揮できない場合があつた o

特許文献 1：特開平 11-60592号公報

特許文献 2 :特開平 2000-191685号公報

発明の開示

[0006] 本発明は、抗腫瘍活性を有する配糖体に対し、該化合物の本来有する抗腫瘍効果をより効率的に発揮せしめる製剤を提供することを目的とする。

[0007] 本発明者らは、斯かる実情に鑑み、抗腫瘍活性を有する疎水性化合物の配糖体について、その投与形態を種々検討したところ、膜脂質として少なくともリン脂質を用い、且つ正電荷供与物質を共存させて、当該配糖体をリボソーム化した場合に、溶解性の低さのために使用が困難であったィ匕合物の使用が可能になり、更に配糖体をそのまま投与した場合には殆ど効果を示さなカゝつた腫瘍株に対しても強い抗腫瘍活性を示す等、該化合物の本来有する抗腫瘍効果をより効率的に発揮せしめる製剤となり得ることを見出した。

[0008] すなわち本発明は、抗腫瘍活性を有し、糖として GlcNAc— Gal—、 GlcNAc— Gal— Glc—、 Fuc— Gal—、 Gal— Glc又は Gal—を有するリボソーム化可能な疎水性化合物の配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質を含有するリボソームを提供するものである

[0009] また、本発明は、下記の式（1)一（3)：

[化 2]

OH

I

G— OCH₂- CH—CH— CH=CH(CH₂)_nCH₃

NH

COCHOH(CH₂)_nCH₃

( 3 )

[式中、 Gは GlcNAc— Ga卜、 GlcNAc— Gal— Glc―、 Fuc— Ga卜、 Gal— Glc—又は G al—を示し、 nは 12— 26の整数を示す。 ]

から選ばれる配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質を含有するリボソームを提供するものである。 [0011] 更に本発明は、当該リボソームを含有する抗癌剤を提供するものである。

[0012] 本発明によれば、抗腫瘍活性を有する配糖体の溶解性が向上し、当該配糖体が本来有する抗腫瘍効果をより効率的に発揮せしめる製剤が提供できる。特に、コレスタノール配糖体（1)を用いた製剤は、そのまま投与した場合には抗腫瘍作用を発揮しづらかった癌細胞に対しても強ヽ抗腫瘍活性を示し、当該化合物の持つ抗腫瘍作用を最大限に発揮せしめることができる。

図面の簡単な説明

[0013] [図 1]リボソーム化 GlcNAc β 1, 4GalCholの癌細胞増殖阻害効果を表した図である。図中、 Lipoはリボソームであることを示す。

[図 2]リボソーム化 Fuc a l, 3GalCholの癌細胞増殖阻害効果を表した図である。図中、 Lipoはリボソームであることを示す。

[図 3]リボソーム化 Gal |8 Choiの癌細胞増殖阻害効果を表した図である。図中、 -Lip oはリボソームであることを示す。

[図 4]リボソーム化 GlcNAc j8 1, 3Gal j8 1, 1NMおよびリボソーム化 GlcNAc j8 1, 3Gal j8 1, 4G1_{C J}8 1, ICeramideの癌細胞増殖阻害効果を示した図である。図中、 Lipoはリボソームであることを示す。

[図 5]リボソーム化 Fuc o; 1, 3GalCholの粒子径の違いによる腹膜播腫抑制効果を表した図である。

[図 6]リボソーム化 GlcNAc |8 1, 4GalCholの腹膜播腫抑制効果を表したもので、特に腫瘍形成数を測定した図である。

[図 7]リボソーム化 GlcNAc |8 1, 4GalCholの腹膜播腫抑制効果を表したもので、特に腫瘍重量 (g)を測定した図である。

[図 8]リボソーム化 FucGalChol及び FucGalChol単独投与での腹膜播種抑制効果を比較したもので、特に腫瘍形成数を測定した図である。

発明を実施するための最良の形態

[0014] 本発明リボソームに含有される配糖体は、糖として、 GlcNAc— Ga卜、 GlcNAc— G al— Glc—、 Fuc-Gal-, Gal— Glc又は Ga卜を有し、リボソーム化可能な疎水性化合物をァグリコンとする化合物であり、且つ抗腫瘍活性を有するものである。ここで、リボソーム化可能な疎水性ィ匕合物としては、例えばコレステロール、セラミド、疎水性アミノ酸、脂肪酸 (ォレイン酸、リノール酸、リノレイン酸等）、脂溶性ビタミン等の生体構成成分や、例えばナフタレン誘導体 (例えばナフタレンメタノール)等の芳香環を有する化合物、コレステロール誘導体 (例えばコレスタノール)等が挙げられる。このうち、セラミド、ナフタレン誘導体、コレステロール誘導体が好ましぐコレステロールの B環の二重結合が飽和されたコレスタノールが特に好ましい。

[0015] また、糖部分が GlcNAc— Ga卜であるものは、好ましくは GlcNAc β 1 , 3-Gal β - 又は GlcNAc j8 1 , 4 Gal j8—であり、 GlcNAc— Gal— Glc—であるものは、好ましくは GlcNAc j8 1 , 3-Gal j8 1 , 4 Glc—であり、 Fuc— Ga卜であるものは、好ましくは Fuc a 1 , 3Gal—であり、 Gal— Glc—であるものは、好ましくは Gal j8 1 , 4Glc j8—であり、 G al-であるものは、好ましくは Gal β -である。

[0016] 更に好適な配糖体として、以下のコレスタノール配糖体（1)、ナフタレンメタノール配糖体 (2)及びセラミド配糖体 (3)が挙げられる。

[化 3]

(CH₂)_nCH₃

( 3 )

[0017] [式中、 Gは GlcNAc— Gaト、 GlcNAc— Gal— Glc―、 Fuc— Gaト、 Gal— Glc—又は G al を示し、 nは 12— 26の整数を示す。 ]

[0018] 中でも、抗癌作用の点から、コレスタノール配糖体（1)が特に好ましぐ更に式（1) 中の好ましい化合物として、以下に示すものが挙げられる。

(1) G = GlcN Ac-Gal-:

3— βーコレスタニノレ 3-0- ( 2—ァセタミドー 2—デ才キシー β—D—グノレコビラノシノレ） —j8— D—ガラタトピラノシド、

3— βーコレスタニノレ 4-0- ( 2—ァセタミドー 2—デ才キシー β—D—グノレコビラノシノレ） —j8— D ガラク卜ビラノシド

( 2) G = GlcNAc-Gal-Glc-：

3- βーコレスタ-ル 4—0— { 3— Ο— (2 ァセトアミドー 2—デォキシー β D—ダルコピラノシノレ) - β—D ガラク卜ビラノシノレ }— β D—グノレコピラノシド

(3) G=Fuc-Gal-:

3— j8—コレスタニノレ 3— O— ( α L フコピラノシノレ)一 j8— D—ガラタトビラノシド

(4) G = Gal-Glc-:

3- βーコレスタニノレ 4 Ο— ( β—D—ガラクトピラノシノレ） β D—グノレコピラノシド

(5) G = Gal-:

3 βーコレスタニノレ β D ガラクトピラノシド

[0019] 本発明の配糖体は、生体内からの抽出、公知の化学反応、或いはこれらを組み合わせて製造することができる。例えば、上記コレスタノール配糖体（1)については、特開平 11 60592号公報又は特開平 2000— 191685号公報に記載の方法により、ナフタレンメタノール配糖体（2)については、 J. Biol. Chem. 272 (41) 25608. 1997 記載の方法により製造することができ、セラミド配糖体 (3)については、ヒト赤血球、肝臓、消化管粘膜、胎便など力の抽出により得ることができる。

[0020] 当該配糖体は、抗腫瘍活性を有するものであるが、ここで抗腫瘍活性を有するとは、インビボにおいては、少なくとも 1種の癌種に対して抗腫瘍効果を発揮し得ることを意味し、インビト口にあっては、少なくとも 1種の癌細胞株に対して増殖阻害活性又は

、増殖抑制活性を有することを意味する。

[0021] 本発明リボソームにおいて、配糖体は、リン脂質 1モルに対して、 0. 3-2. 0モル、好ましくは 0. 8-1. 5モル含有するのが好ましい。

[0022] 本発明のリボソームにおいては、膜成分脂質として少なくともリン脂質が用いられる斯カゝるリン脂質としては、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジォレオイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ミリストイルパルミトイルホスファチジルコリン、ミリストイルステアロイルホスファチジルコリン、ノレミトィルァラキドイルホスファチジルコリン等のホスファチジルコリン類、ホスファチジルェタノールァミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸等が挙げられ、これらは天然、又は半合成若しくは全合成により得ることができる。また、水素添加リン脂質等の加工リン脂質を用いることもできる。斯カるリン脂質は、単独で用いてもよぐ 2種以上を混合して用いてもよい。

このうち、電気的中性で安定なリボソームを形成し得る点から、ホスファチジルコリン類を用いるのが好ましぐ特に 1 αジパルミトイルフォスファチジルコリン（DPPC)を用いるのが好ましい。

[0023] 正電荷供与物質は、脂質膜の表面を正に荷電させるために添加される物質である

。リボソームの表面を正に荷電させることにより、膜表面が負の荷電状態にある細胞との無理のな!、接触が期待できる。

[0024] 正電荷供与物質としては、ステアリルァミン、ォレイルァミン等の脂肪族ァミン、フルオレンェチルァミン等の芳香族ァミンが挙げられ、このうち脂肪族ァミンが好ましぐ特にステアリルアミンを用いるのが好まし、。

正電荷供与物質は、リン脂質 1モルに対して、 0. 04-0. 15モル、好ましくは 0. 1 一 0. 15モル含有するのが好ましい。

[0025] 本発明のリボソームには、上記成分の他に、膜構造の安定剤としてコレステロール

、脂肪酸、ジァセチルホスフェート等を必要に応じて加えることができる。

[0026] 膜成分を分散させる水溶液としては、水、生理食塩水、各種緩衝液、糖類の水溶液及びこれらの混合物が好ましく用いられる。緩衝液としては、有機系、無機系を問わず体液水素イオン濃度付近に緩衝作用を有する緩衝液が好適に用いられ、例えばリン酸緩衝液を挙げることができる。

[0027] 本発明リボソームの調製は、特に限定されず常法に従って行えばよい。例えば特開昭 57— 82310号公報、特開昭 60— 12127号公報、特開昭 60— 58915号公報、特開平 1—117824号公報、特開平 1—167218号公報、特開平 4—29925号公報、特開平 9— 87168号公報、 Methods of Biochemical Analysis (1988) 33, p3 37、或いは「リボソーム」（南江堂）に記載の方法に準じて行えばよい。

[0028] 以下に、特開平 9— 87168号公報に記載された方法に準じた本発明リボソームの調製手順について述べる。

[0029] まず、本発明の配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質に有機溶媒及び水を加え混合した後、ロータリーェヴアポレーター等を用い完全に有機溶媒を除去し、次いで水分除去を行なう。ここで、膜成分物質、正電荷供与物質及び配糖体の混合比率は、例えば、 52 : 8 : 20 (モル比）を例示できる力その近辺の混合比率であれば特に問題はなヽ。配糖体の混合比率が小さ、場合はコレステロールに代表される膜構造安定剤を必要に応じて添加することができるが、該混合比率が高くなれば必ずしも膜構造の安定剤の添加を必要とはしな、。

[0030] 有機溶媒は、水に対し不溶性の揮発性有機溶媒であれば特に制限はなぐ例えばクロ口ホルム、クロルメタン、ベンゼン及びへキサン等を用いることができ、溶解性を考慮する場合は、エタノールある、はメタノール等の比較的極性の高、有機溶媒を適宜添加調製した混合有機溶媒を使用することができる。該混合有機溶媒と水との混合比率は、均一になる比率であれば、特に制限はない。

[0031] また、水分を添加調製した場合、水分除去法としては凍結乾燥法がごく一般に用いられるが、これに限定されるものではなぐ減圧デシケーター中で乾燥してもよい。水分除去後、前述の分散水溶液を添加し、 Vortexミキサー等で浸透することによりリポソーム化が達成される。

[0032] 本発明リボソームの粒子径は、腫瘍抑制効果の点から 10 μ m以下であるのが好ましく、 3 m以下であるのがより好ましい。

リボソームのサイズを揃える場合は、例えば超音波処理、多孔質メンブレンフィルタ一に対する押出し処理、高圧噴射乳化装置による処理、あるいはこれらを組み合わせることによってサイズの均一化が可能である。また、より小さいリボソーム粒子を得たい場合は、たとえば超音波処理時間を長くすることにより達成することができる。 [0033] 斯くして調製された本発明リボソームは、後記実施例に示すように、極めて優れた癌細胞の増殖阻害作用を有する。特に、コレスタノール配糖体（1)については、そのまま投与した場合には抗腫瘍作用を発揮しづらかった癌細胞に対しても強い抗腫瘍活性を示す。リボソームは、一般にリン脂質二重膜を形成した小胞球であり、薬剤を内部に包み込む形で分散させ、細胞膜との融合により薬剤を細胞内に到達せしめることを目的として作製されるものであることから、薬剤自体の性質はリボソーム化によつて変わるものではないと考えられていた。従って、当該コレスタノール配糖体をリポソーム化することにより、当該化合物の抗腫瘍活性が飛躍的に向上したことは、全く意外であった。

かように、当該リボソームを含有する製剤は、配糖体の本来有する抗腫瘍効果をより効率的に発揮せしめる抗癌剤として有用である。

[0034] 本発明の抗癌剤は、治療部位、治療目的に応じて適宜剤形を選択でき、リボソーム形状の安定性を損う添加剤等の使用がない限り、公知の調製方法に従い、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等とすることができる。

[0035] 経口用固形製剤を調製する場合は、本発明リボソームに、賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。そのような添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものでよぐ例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩ィ匕ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セル口ース、珪酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセノレロース、ヒドロキシプロピノレスターチ、メチノレセノレロース、ェチノレセノレロース、シエラック、リン酸カルシウム、ポリビュルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クェン酸、酒石酸等を例示できる。

[0036] 経口用液体製剤を調製する場合は、本発明リボソームに、矯味剤、緩衝剤、安定ィ匕剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙げられたもので良ぐ緩衝剤としてはクェン酸ナトリウム等力安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。

[0037] 注射剤を調製する場合は、本発明リボソームに、 pH調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。この場合の pH調節剤及び緩衝剤としてはクェン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、 EDTA、チォグリコール酸、チォ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロ力イン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩ィ匕ナトリウム、ブドウ糖等が例示できる。

[0038] 坐剤を調製する場合は、本発明リボソームに公知の製剤用担体、例えば、ポリェチレンダリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等を、更に必要に応じてッィーン (登録商標）のような界面活性剤等を加えた後、常法により製造することができる。

[0039] 軟膏剤を調製する場合は、本発明リボソームに、通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等を必要に応じて配合し、常法により混合、製剤化することができる。基剤としては、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オタチルドデシルアルコール、ノラフィン等が挙げられ、保存剤としては、パラォキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ェチル、パラォキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。

[0040] 貼付剤を製造する場合は、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すれば良い。支持体としては、綿、スフ、化学繊維力もなる織布、不織布や軟質塩化ビュル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体シートが適当である。

[0041] 本発明抗癌剤の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、ー概には決定できないが、通常成人 1日あたり、コレスタノール配糖体（1)として約 0. 01 一 200mgZKg、好適には 0. 1— 50mgZKgとすれば良ぐこれを 1日一回又は 2 一 4回程度に分けて投与するのが好ま U、。実施例

[0042] 次に、本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例 1 コレスタノール配糖体のリボソーム化

コレスタノール配糖体として、前記式（1)中の Gが GlcNAc jS 1 , 4Galである「GlcN Ac j8 1 , 4GalCholJ、 Gが Fuc a 1 , 3Galである「Fuc a 1 , 3GalCholJ、 Gが Gal β である「Gal β Chol」及び比較として Gが Hである「Chol」を用い、これらの 20 μ mol /ml (クロ口ホルム Zメタノール = 5Z1, vZvに溶解)溶液を出発物質とした。

1 αジパルミトイルフォスファチジルコリン、ステアリルアミン及び上記のコレスタノ一ル配糖体を 52Ζ8Ζ20 (モル比）の割合で 700 μ 1となるように混合し、次、で有機溶媒 (クロ口ホルム Ζメタノール =2Zl, V/V) 300 1及び蒸留水 lmlを添加混合した。その後、ロータリーェヴアポレーターにて有機溶媒を完全に除去した後、凍結乾燥操作を行ない、水分を完全に除去した。該凍結乾燥品は、 PBS lml中に溶解し、超音波処理（15W, 15分)を行なうことによりリボソームを粒子径 2— 4 m程度に均一化し、実施例 2及び 3に供した。

[0043] 実施例 2 ナフタレンメタノール配糖体のリボソーム化

ナフタレンメタノール配糖体として、前記式（2)中の Gが GlcNac β 1 , 4 Gal j8 1 , 1—である「GlcNAc j8 1 , 4Gal j8 1 , 1NM」（NM :ナフタレンメタノール）を用い、コレスタノール配糖体のリボソーム化と同様の条件にてリボソーム化を行なった。

[0044] 実施例 3 セラミド配糖体のリボソーム化

セラミド配糖体として、前記式（3)中の Gが GlcNac j8 1 , 3— Gal j8 1 , 4— Glc—である「GlcNA_{C j}8 1 , 3Gal j8 1 , 4Gl_{C j}8 1 , ICeramideJを用い、コレスタノール配糖体のリボソーム化と同様の方法にてリボソーム化を行なった。但し、該リボソーム化の場合は安定化剤としてコレステロールを添加した。

[0045] 実施例 4 リボソーム化コレスタノール配糖体による細胞増殖阻害効果

培養癌細胞株（colon26 wild)を 96穴プレートに、 1 X 10⁴cells/100 μ 1/well となるように幡種した後、コレスタノール配糖体（GlcN Ac β 1 , 4GalChol、 Fuc a 1 , 3GalChol、 Gal j8 Choi, Choi)及び実施例 1で得られたリボソーム化コレスタノール配糖体を添カロし、 3日間 37°Cにてインキュベートした。その後、 MTTアツセィを行ない細胞数を決定した。なお、増殖抑制率は以下の式に従って求めた。

[0046] 細胞増殖阻害率 (CPI率）（％)

= ( 1-処理細胞における ODZ未処理細胞における OD) X 100

[0047] その結果、単独ではほとんど効果を示さなかった Fuc a 1 , 3GalCholは、リポソ一ム化することによって著しい細胞増殖抑制効果を示した。また、従来より細胞増殖阻害効果を示していた GlcNAc jS 1 , 4GalCholは、リボソーム化することにより更に強 V、細胞増殖阻害効果を示すことが判明した (図 1、 2及び 3)。

[0048] 実施例 5 リボソーム化ナフタレンメタノール配糖体及びリボソーム化セラミド配糖体による細胞増殖阻害効果

培養癌細胞株（colo201)を 96穴プレートに、 lX10⁴cells/100 μ lZwellとなるように播種した後、実施例 2及び 3で得られたリボソーム化ナフタレンメタノール配糖体およびリボソーム化セラミド配糖体を添加し、 3日間 37°Cにてインキュベートした。その後、 MTTアツセィを行ない細胞数を決定した。なお、増殖抑制率は実施例 4にと同様にして求めた。

その結果、単独では不溶性のため殆ど効果を示さない GlcNAc iS 1 , 3Gal |8 IN Mおよび GlcNAc jS 1 , 3Gal j8 1 , 4Gl_{C j}8 1 , ICeramideが、リボソーム化することによって著しい細胞増殖阻害効果を示すことが判明した (図 4)。

[0049] 実施例 6 リボソーム化コレスタノール配糖体による腹膜播腫抑制効果

( 1)リボソーム化 Fuc a 1 , 3GalCholの粒子径による影響

BalbZcマウス（8週齢、雌）に対し、癌細胞株 (colon26 wild, 5 X 10⁴cells/20 O /z l)を腹空内投与した。次いで、 12時間、 24時間及び 48時間後に異なる超音波処理時間（15W X 5, 10, 15分）により調製したリボソーム化 Fuc a l , 3GalChol (2 μ mol/100 μ 1)を腹腔内投与した。 10日後、腸間膜における腫瘍数を測定した。超音波処理時間を長くしリボソーム粒子径を小さくするほど、腹膜播腫抑制効果示すことが判明した（図 5)。

[0050] (2)リボソーム化 GlcNAc β 1 , 4GalCholの腹膜播腫抑制効果

BalbZcマウス（8週齢、雌）に対し、癌細胞株 (colon26 wild, 5 X 10⁴cells/20 O /z l)を腹腔内投与した。次いで、 24時間及び 48時間後、超音波処理（15W、 15分間）により調製したリボソーム化 GlcNAc β 1, 4GalChol (2 μ mol/100 μ 1)を腹腔内投与した。 10日後、腸間膜における腫瘍数を、 21日後に大網及び腸間膜において形成した腫瘍重量を測定した。その結果、リボソーム化 GlcNAc iS 1, 4GalChol 投与により良好な腹膜播腫抑制効果を示すことが判明した (図 6及び 7)。

(3)リボソーム化 FucGalChol及び FucGalChol単独投与での腹膜播種抑制効果の比較

BalbZcマウス（8週齢、雌）に対し、癌細胞株 (colon26 wild, 5 X 10⁴cells/20 0 /z l)を腹腔内投与した。次いで、 0、 24及び 48時間後に超音波処理（15W、 15分間）により調製したリボソーム化 FucGalChol及び FucGalCholの腹腔内投与を行つた ( ヽずれも 2 mol/100 1)。 10日後、腸間膜に形成された腫瘍数を測定した。その結果、無処理、 FucGalChol投与群に比べて、リボソーム化 FucGalChol投与群では、腫瘍の形成が強く抑制されていることが判明した（図 8)。

Claims

請求の範囲

[1] 抗腫瘍活性を有し、糖として GlcNAc— Gal—、 GlcNAc— Gal— Glc―、 Fuc— Gal—、 Gal— Glc又は Gal—を有するリボソーム化可能な疎水性ィ匕合物の配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質を含有するリボソーム。

[2] 下記の式（1)一（3) :

[化 1]

OH

G― OCH₂- CH— CH— CH= CH(CH₂)„CH₃

NH

COCHOH(CH₂)_nCH₃

( 3 )

から選ばれる配糖体、リン脂質及び正電荷供与物質を含有するリボソーム。

[3] 正電荷供与物質が、脂肪族ァミンである請求項 1又は 2に記載のリボソーム。

[4] 請求項 1一 3のいずれか 1項記載のリボソームを含有する抗癌剤。