JP2002503685A

JP2002503685A - エリスロポイエチンのリポソーム分散物

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Publication number: JP2002503685A
Application number: JP2000532102A
Authority: JP
Inventors: ネフ，ライナー; デルメニコ，サンドロ; ベツター，アンドレ; フレター，フランク−ウルリヒ
Original assignee: シラグ・アクチエンゲゼルシヤフト・インターナシヨナル
Priority date: 1998-02-23
Filing date: 1999-02-12
Publication date: 2002-02-05
Anticipated expiration: 2019-02-12
Also published as: US20040052838A1; EP0937456B1; DE69825137D1; SI0937456T1; SK12222000A3; AU2180899A; PT937456E; US20020028236A1; IL137808A; AU750481B2; JP4613294B2; CN1298296A; HUP0101026A2; NO20004186D0; NZ506429A; WO1999042085A1; KR20010041152A; CN1184958C; DE69825137T2; CZ296415B6

Abstract

(57)【要約】本発明は、（ａ）有効量のエリスロポイエチン、（ｂ）（ｉ）レシチン又は水素化レシチン、（ii）場合により、荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物、及び（iii）コレステロールあるいは、コレステロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）及びコレステロールの有機酸誘導体から選択されるその誘導体、を含んでなる脂質相、並びに（ｃ）リン酸バッファー、を含んでなる、エリスロポイエチンのリポソームを基礎にした調製物、に関する。本発明の、リポソームを基礎にした非経口投与形態はエタノール注入法により製造される。本組成物はヒト血清アルブミンの使用の必要性を回避し、優れた安定性を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明はエリスロポイエチンの、リポソームを基礎にした調製物に関する。な
かでも、本発明は、優れた安定性を示す、エタノール注入法により調製されたエ
リスロポイエチンの、リポソームを基礎にした、非経口投与形態に関する。

【０００２】（発明の背景）エリスロポイエチン（ＥＰＯ）は赤血球細胞合成の調節に関与する主要な因子
として働く糖蛋白である。エリスロポイエチンは腎臓で生産され、骨髄内の前駆
細胞を刺激してそれらを分割させ、成熟赤血球細胞に分化させることにより作用
する。遺伝子組み換えにより生産された１６５アミノ酸の糖蛋白は、慢性腎不全
、ジドビジン(zidovidine)処置ＨＩＶ感染患者、化学療法中の癌患者に伴う貧血
を含む、様々な形態の貧血の処置における有効な治療剤として、ある期間入手可
能であった。糖蛋白は静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＣ）注射のどちらかとして非
経口的に投与される。

【０００３】現在使用されている非経口調製物は、担体としてヒト血清アルブミン（ＨＳＡ
）を含む、ＩＶ又はＳＣ注射用の通常の滅菌バッファー水溶液である。このよう
な調製物は商品名ＥＰＯＧＥＮ^(R)及びＰＲＯＣＲＩＴ^(R)として、米国内で市販
されている。これらの製品は保存剤を含まない１回投与量１ｍｌ中、又は２ｍｌ
の数回投与用保存バイアル中にエリスロポイエチンを含む。

【０００４】これらの調製物は著しく有効であることが証明されたが、担体としてのヒト血
清アルブミンの使用には幾つかの欠点が伴う。ＨＳＡは天然源から得られるので
、ＨＩＶ又は肝炎のような感染性疾患作用物質の担体としての潜在的な危険物で
あり得るので、材料の注意深いスクリーニングを実施しなければならない。更に
、適切な品質のＨＳＡの入手可能性がしばしば問題になる可能性がある。従って
、担体としてＨＳＡの使用を回避するようなエリスロポイエチンの注射可能な調
製物の必要性が存在する。

【０００５】従って、担体としてＨＳＡの使用を回避する、エリスロポイエチンの改善され
た調製物を提供する試みが実施されてきた。同時に、その調製物は安定で、長期
間の貯蔵寿命を提供しなければならない。更に、調製物は、それがその中に含ま
れるバイアルの表面に付着する活性成分に伴う問題を回避しなければならない。

【０００６】リポソームは球状の二重層に配列された、両親媒性の脂質を含んでなる小胞で
ある。リポソームは水のチャンネルにより分離された多数の同心的脂質の二重層
（多重ラメラ小胞又はＭＬＶ）を含むか、又は代替的には小さい単ラメラ小胞（
ＳＵＶ）又は大きい単ラメラ小胞（ＬＵＶ）のどちらかの可能性がある、単一の
二重層（単ラメラ小胞）を含んでいてもよい。脂質の二重層は疎水性の「尾」部
分及び親水性の「頭」部分をもつ２種類の脂質の単一層からなる。膜の二重層中
で、脂質の単一層の「尾」は二重層の中心に向けて配向し、一方、親水性の「頭
」部は水相に向かけて配向する。

【０００７】リポソームは水の内側又は二重層の間に親水性化合物を捕捉すること、あるい
は二重層内に疎水性化合物を捕捉することにより様々な物質を封入するために使
用することができる。従って、それら、低い水溶性を示すか又は治療的用量にお
いて許容できない毒性を示す化合物を封入することにより生物学的に活性な物質
を送達するために特に有用である。

【０００８】単一の二重層のみをもつリポソームの製造の具体的な方法は欧州特許第２５３
６１９号に開示されている。様々な活性物質のリポソーム調製物が以前から知
られており、エリスロポイエチンのリポソーム調製物が提唱されてきた。例えば
、Ｍａｉｔａｎｉｅｔａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：４４０−４４
５（１９９６）は、逆相蒸発小胞法によりリポソームが調製される、経口投与を
意図されたリポソームのエリスロポイエチン調製物につき開示している。その調
製物は経口投与を目的としているので、リポソーム中へのＥＰＯの高率の取り込
みが好ましい。しかし、小さい小胞中への高率の封入を示すこのような調製物は
肝臓内への集中を示し、有毒症状をもたらす可能性がある。更に、そこで使用さ
れた製造法は特別な原料（例えばポリグリセリン・リン脂質）及び有機溶媒の使
用を必要とする。更に、その中で使用された逆相法は非封入ＥＰＯの高度の喪失
を被り、それは望ましくなく、高価である。

【０００９】従って本発明の目的は、担体としてのＨＳＡの使用を回避し、長期の貯蔵寿命
期間にわたる、許容できる長期の安定性を提供し、そして、大規模製造に耐える
工程により製造することができる、ＥＰＯに適した非経口調製物を提供すること
であった。

【００１０】（発明の要約）（ａ）エリスロポイエチン又は骨髄細胞に網状赤血球及び赤血球細胞の生産
を増加させる生物学的特性を有するエリスロポイエチンの製薬学的に許容できる
誘導体を含んでなる、有効量の活性成分、（ｂ）（ｉ）レシチン又は水素化レシチン、（ii）場合により、荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物
、及び（iii）コレステロールあるいは、コレステロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）、及びコレステロールの有機酸誘導体、から選択されるコレステロールの誘導体、を含んでなる脂質相、並びに（ｃ）リン酸バッファー水溶液、を含んでなる、リポソームを基礎にした非経口組成物。

【００１１】本発明に従う組成物は、脂質相のアルコール溶液を調製し、その溶液を、高速
度ホモジナイザー中に含まれたバッファー水溶液中に圧力下で注入することによ
り製造される単一の二重層リポソームを含んでなる。このように調製されたリポ
ソームをエリスロポイエチン活性成分とともにインキュベーションして、本発明
のリポソーム分散物を形成する。

【００１２】好ましくはその活性成分は、エリスロポイエチン及び骨髄細胞に網状赤血球及
び赤血球細胞の生産を増加させる生物学的特性をもつその誘導体である。ＥＰＯ
糖蛋白は天然源から得るか又は、引用により本明細書に取り込まれている、米国
特許第４，７０３，００８号、同第５，４４１，８６８号、同第５，５４７，９
３３号、同第５，６１８，６９８号及び同第５，６２１，０８０号に開示されて
いるような既知の方法を使用して、遺伝子組み換えにより製造することができる
。

【００１３】本発明に従うと、極めて予期せぬことには、本明細書に記載の穏やかな条件下
で調製されたリポソームのＥＰＯ組成物が改善された安定性を示す、すなわちリ
ポソーム自体が安定であり、同時に生物学的に有効な物質の化学的劣化及び凝集
が最小になることが発見された。更なる予期せぬ利点として、たとえＥＰＯがリ
ポソーム内に実質的には取り込まれておらず、その代わりに、本質的には、リポ
ソーム分散物として間隙液中に含まれているにもかかわらず、ＥＰＯ活性成分が
バイアル容器又はＩＶ管の表面に付着しない。

【００１４】（詳細な説明）本発明に使用される活性成分はエリスロポイエチン及び骨髄細胞に網状赤血球
及び赤血球細胞の生産を増加させる生物学的特性をもつエリスロポイエチンの誘
導体である。本発明のリポソーム分散物は、慢性腎不全、ジドビジン処置ＨＩＶ
感染患者、化学療法中の癌患者に伴う貧血を含む、様々な形態の貧血のような赤
血球細胞の生産低下又は障害を特徴とする血液障害の処置における非経口調製物
として有用である。それはまた、鎌状細胞疾患、ベータサラセミア、嚢胞性繊維
症、妊娠及び月経障害、早産の初期貧血、脊髄傷害、宇宙飛行、急性失血、老化
等、のような血液学的異常の、様々な疾病状態、障害及び症状の処置における適
用を有する可能性がある。好ましくは、本発明のＥＰＯ組成物は、非経口投与（
例えばＩＶ、ＩＭ、ＳＣ又はＩＰ）される。有効用量は処置される症状及び投与
経路に応じて著しく変動することが予期されるが、活性物質を０．１（〜７Ｕ）
ないし１００（〜７０００Ｕ）μｇ／体重１ｋｇの範囲内であると予期される。
貧血症状の処置に好ましい用量は毎週３回、約５０ないし約３００単位／ｋｇで
ある。

【００１５】本発明のＥＰＯリポソーム分散物は概括的に、組成物１００グラム当たり、約
２００，０００単位ないし約百万単位のＥＰＯ糖蛋白を含む。活性ＥＰＯ成分は
、（ａ）（ｉ）レシチン又は水素化レシチン、（ii）場合により、荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物、及び（iii）コレステロールあるいは、コレステロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）、及びコレステロールの有機酸誘導体、から選択されるコレステロールの誘導体、を含んでなる脂質相、並びに（ｂ）リン酸バッファー溶液、から形成されたリポソーム懸濁物中に分散される。

【００１６】特に、引用により本明細書に取り込まれている欧州特許第０２５３６１９
号に記載の方法に従って製造されたこのような調製物は、それを、従来の当該技
術分野の組成物を含むＨＳＡに対する適切な代替物にさせるような特徴を示す。

【００１７】レシチンは精製形態の天然のレシチンとして又は、好ましくは、より安定な水
素化レシチンとしてのどちらでも使用することができるが、後者の使用は安定剤
の濃度の減少を可能にする。レシチン成分は概括的に、組成物１００グラム当た
り約０．５ないし５．０グラムの量で存在する。好ましくは、水素化レシチンは
、ＥＰＯ及びリポソームの安定性に否定的な様態で影響を与える可能性がある、
検出可能な濃度の触媒を含まない、良質の物でなければならない。

【００１８】コレステロールは組成物１００グラム当たり、０．１ないし１．０グラムの範
囲の量でリポソーム安定剤として使用される。コレステロールに加えて、コレス
テロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−
コレステロール）、並びにコレステロールの有機酸誘導体、例えばヘミコハク酸
コレステロール、のようなその他のコレステロール誘導体を使用することができ
る。

【００１９】電気的に陽性又は電気的に陰性の脂質は陽性又は陰性に荷電した成分を有する
脂質化合物である。電気的に陽性の脂質はオレイルアミン又はステアリルアミン
である。電気的に陰性の脂質は、オレイン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸
（ＤＰＰＡ）、ジ−パルミトイルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホ
スファチジン酸（ＤＳＰＡ）、又はジミリスチルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）
のようなホスファチジン酸である。これらの荷電脂質の使用は、リポソームを沈
澱させない、蛋白光の分散物を確実に生成する荷電リポソームを生成させる。前
記のように、たとえ活性成分がリポソーム内に取り込まれず、単に荷電リポソー
ムを含む分散物として存在する場合ですら、活性エリスロポイエチン糖蛋白がそ
の投与のために使用された容器又はケイ素管のガラス壁に付着しないという結果
は極めて予想外のものである。

【００２０】エタノール注入法の使用により調製される組成物中には概括的に、組成物１０
０グラム当たり、約０．５ないし約５．０グラムの範囲の量の、メタノール、エ
タノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等のような１
ないし６個の炭素原子の低級アルカノールからなるアルコール成分が含まれる。
エタノールが好ましい。

【００２１】水性バッファーの成分は非経口組成物中のバッファーとして通常使用される典
型的な酸の塩から選択される。その例はクエン酸、酢酸及びリン酸塩を含む。リ
ン酸塩バッファーが好ましい。その例は、リン酸二水素ナトリウム二水和物、又
はリン酸水素二−ナトリウム二水素物及びそれらの混合物を含む。好ましくは、
０ないし２．０ｇ／１００ｇの範囲の量のリン酸二水素ナトリウム二水和物及び
リン酸水素二−ナトリウム二水素物の混合物が使用される。

【００２２】凝集物の形成を防止するために、場合によっては、組成物にグリシンのような
安定剤を添加することができる。しかし、殆どの場合に、リポソームは組成物中
で担体としてのみならず、安定剤として働くので、このような安定剤は必要では
ない。

【００２３】本発明のリポソームを基礎にした組成物は、引用により本明細書に取り入れら
れている、欧州特許第２５３６１９号に記載の、リポソーム組成物製造のための
当該技術分野で既知の方法を適用することにより調製される。この方法において
は、単一の二重層リポソームは、リン脂質及び活性成分のエタノール溶液を調製
し、この溶液を、高速ホモジナイザー中に含まれたバッファー水溶液中に圧力下
で注入することにより調製される。リポソームは自然に形成されて、１μｍ未満
の直径をもつリポソームを提供する。なかでも、本発明の方法に従うリポソーム
は精製水中でバッファー水溶液を形成することにより製造される。それとは別に
、レシチン、コレステロール及び荷電脂質成分をエタノールのようなアルコール
溶液に溶解する。水溶液を高性能ホモジナイザーに接続して、循環させ、アルコ
ール溶液をホモジナイザーに直接注入する。１μｍ未満のリポソームが自然に形
成される。次いで、このように形成されたリポソームをＥＰＯ活性成分とともに
インキュベーションすると、本発明のリポソーム分散物が形成される。

【００２４】厳密に規定された直径をもつリポソームを含む透明なリポソーム分散物を得る
ためには、約８０〜１００ｎｍの直径をもつリポソームをもたらす、約０．０５
〜０．０８ｍｍの孔をもつフィルターを通してリポソームを押し出すことが好ま
しい。この追加的な粉末度調節段階は、あらゆる凝集物を容易に検出し、血液中
の循環時間を延長するために、透明な溶液を確実に生成するために使用される。

【００２５】前記のように、最近発売されたエリスロポイエチン組成物は、安定性を維持し
限定された貯蔵寿命をもつために、Ｔｗｅｅｎｓ、アミノ酸等のような安定剤を
含むか又は凍結乾燥して貯蔵されている。本発明のリポソーム組成物は優れた安
定性を示す、すなわち、リポソーム自体が安定で、同時に、生物学的に有効な物
質の分解及び凝集が最小にされることが判明した。産業的適用にとって非常に重
要な、２年までの貯蔵寿命が達せられた。この改善された安定性は、本発明の優
れた、穏やかな製造技術並びに調製物の成分及び組成に起因する可能性がある（
文献に記載の調製物と比較されると、定性的及び定量的観点の両方から）。

【００２６】組成物の安定性は更に、トコフェロール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチ
ル化ヒドロキシアニソール、パルミチン酸アスコルビル、あるいは、例えばエデ
ト酸二ナトリウムのようなエデト酸塩（ここで、エデト酸塩は更に、存在する可
能性のある重金属と結合している）のような抗酸化剤の添加により増強され得る
。安定性は更に、安息香酸及びパラベン、例えばメチルパラベン及び／又はプロ
ピルパラベン、のような保存剤の添加により増強され得る。

【００２７】好ましい組成物は次の概括的処方、ｇ／１００ｇＥＰＯ又は類似化合物２００，０００Ｕ−４百万単位水素化レシチン（大豆）０．５〜５．０００コレステロール０．１〜１．０００荷電脂質０．０５〜０．５エタノール０．５〜５．０００グリシン０．０〜１．００バッファー０ないし２．０その他の、場合による添加剤及び水適量、全１００．０、のものである。

【００２８】本発明の具体的な利点を次の実施例により更に具体的に示す。

【００２９】

【実施例】

（実施例１）リポソームを基礎にした分散物次の組成、ｇ／１００ｇエリスロポイエチン百万単位水素化レシチン（大豆）０．５００コレステロール０．１００薬局法非変性エタノール０．５００リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１１６４リン酸水素二ナトリウム二水和物０．２２２５塩化ナトリウム０．５８４精製水９７．９７７１、のリポソームを基礎にした分散物を欧州特許第０２５３６１９号に記載の方
法に従って製造した。方法リポソームを８０℃で、注射用水中の、リン酸二水素ナトリウム二水和物、リ
ン酸水素二−ナトリウム二水和物及び塩化ナトリウムの電解質水溶液（バッファ
ー）を形成することにより製造する。別に、レシチン及びコレステロールを５５
℃〜７０℃で、エタノールのようなアルコール溶液中に溶解する。水溶液を高性
能ホモジナイザーに接続して、循環をもたらし（ケトル１）、アルコール溶液（
ケトル２）をホモジナイザー中に直接注入する。全工程中、エタノール溶液に窒
素をパージした。１μｍ未満のリポソームが自然に形成される。厳密に規定され
た直径をもつリポソームを形成するために、リポソーム分散物を規定された孔（
例えば０．８と０．５μｍ）をもつ核膜孔フィルターを通して押し出した。エリ
スロポイエチンをリポソーム分散物とともに温置し、後に１回滅菌濾過した。滅
菌条件下でバイアルの充填を実施した。技術的データホモジナイザー速度、１３，０００ｒｐｍまでエタノール溶液の流速、２０〜１００ｍｌ／ｓ（実施例２）リポソームを基礎にした分散物組成ｇ／１００ｇエリスロポイエチン百万Ｉ．Ｕ．水素化レシチン（大豆）０．５００コレステロール０．１００ＤＰＰＡ−Ｎａ０．０４０薬局法非変性エタノール０．５００リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１１６４リン酸水素二ナトリウム二水和物０．２２２５塩化ナトリウム０．５８４精製水９７．９３７１方法実施例２のリポソーム分散物は、ＤＰＰＡ−Ｎａが、エタノール注入実施前に
レシチン及びコレステロールとともにエタノール溶液に添加されることを除いて
実施例１の方法に従って調製される。（実施例３）リポソームを基礎にした分散物組成ｇ／１００ｇエリスロポイエチン百万Ｉ．Ｕ．水素化レシチン（大豆）０．５００コレステロール０．１００ＤＰＰＡ−Ｎａ０．０５０薬局法非変性エタノール０．５００リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１１６４リン酸水素二ナトリウム二水和物０．２２２５塩化ナトリウム０．５８４精製水９７．９２７１方法実施例３のリポソーム分散物は実施例２の方法に従って調製される。（実施例４）安定性試験２バッチのリポソームのエリスロポイエチン調製物を実施例１及び２に従って
製造した。そのバッチを様々な時間において安定性を測定した。使用されたイン
ビトロ及びインビボの生物検定方法は以下に示される。その結果は表１及び２に
示される。

【００３０】

【表１】

【００３１】

【表２】

【００３２】インビボ生物検定前以て低酸素症にさせた赤血球増加症のマウスのエリスロポイエチン生物検定
、マウスを１８時間、減圧下に置く。次の６時間、マウスを外気圧下に置く。こ
の方法を次の１４日間繰り返す。３日後に、外気圧下でマウスにエリスロポイエ
チンを投与する。１日後に⁵⁹ＦｅＣｌ₃を含む溶液を注射する。更に２日後に、血液を分析し、赤血球中への⁵⁹ＦｅＣｌ₃の取り込みを測定する。インビトロ生物検定インビトロの生物検定はエポエチンアルファの生物学的活性を正確に定量する
ことを目的とした、細胞を基礎にした生物検定である。

【００３３】試料を最初に、組織培養培地中に希釈し、次いでＨＥＰ．Ｇ２の細胞培養物で
処理する。この粘着性細胞系はシアル酸除去蛋白を除去するその能力において、
肝臓組織のその能力を保持する。同様な代謝過程がインビボで起こり、シアル酸
除去エリスロポイエチンの活性減少をもたらすことが知られている。ＨＥＰ．Ｇ
２細胞による処理は培地からのエポエチンアルファ中のシアル酸含有エリスロポ
イエチンを除去しないであろう。従ってインビトロの生物検定はマウスのインビ
ボ検定を模倣している。

【００３４】第２の段階において、残りのエリスロポイエチンをＨＥＰ．Ｇ２細胞から分離
し、Ｂ６ＳＵｔＡ細胞系を使用して細胞の増殖の測定を実施した。これらの細胞
はエリスロポイエチンの存在下で成長し、成長の度合はエリスロポイエチンの量
に比例する。次いで、細胞の成長をＭＴＴが細胞に添加される時に生成される色
素の量により測定する。発色された色は細胞数及びＢ６ＳＵｔＡ細胞の減少して
いる活性に正比例する。結論データは両調製物に対する２４カ月までの良好な安定性を示す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年２月１８日（２０００．２．１８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【請求項７】荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物が、ジパ
ルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジ−パルミトイルグリセロール（Ｄ
ＰＰＧ）、オレイルアミン及びステアリルアミンから選択される、請求項１ない
し請求項６のいずれか１項記載のリポソームを基礎にした調製物。

【請求項８】バッファーがリン酸二水素ナトリウム二水和物、リン酸水素
二ナトリウム二水和物、及びそれらの混合物から選択される、請求項１ないし請
求項７のいずれか１項に記載の、リポソームを基礎にした調製物。

【請求項９】それが更に保存剤を含んでなることを特徴とする、請求項１
ないし請求項８のいずれか１項に記載の、リポソームを基礎にした調製物。

【請求項１０】それが更に抗酸化剤を含んでなることを特徴とする、請求
項１ないし請求項９のいずれか１項記載の、リポソームを基礎にした調製物。

【請求項１１】それが更に錯体形成剤を含んでなることを特徴とする、請
求項１ないし請求項１０のいずれか１項記載の、リポソームを基礎にした調製物
。

【請求項１２】それが次の組成、ｇ／１００ｇＥＰＯ又は類似化合物２００，０００Ｕ〜百万単位水素化レシチン（大豆）０．５〜５．０００コレステロール０．１〜１．０００荷電脂質０．０５〜０．５エタノール０．５〜５．０００グリシン０．０〜１．００バッファー０ないし２．０その他の、場合による添加剤及び水適量、全１００．０、をもつことを特徴とする、請求項１ないし請求項１１のいずれか１項に記載の、
リポソームを基礎にした調製物。

【請求項１３】それが次の組成、ｇ／１００ｇエリスロポイエチン百万単位水素化レシチン（大豆）０．５００コレステロール０．１００ＤＰＰＡ−Ｎａ０．０４０薬局法非変性エタノール０．５００リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１１６４リン酸水素二ナトリウム二水和物０．２２２５塩化ナトリウム０．５８４精製水９７．９３７１、をもつことを特徴とする、請求項１ないし請求項８及び請求項１２のいずれか１
項に記載の、リポソームを基礎にした調製物。

【請求項１４】貧血の処置のための製薬学的調製物としての使用のための
請求項１ないし請求項１３のいずれか１項に記載の、リポソームを基礎にした調
製物。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１５】本発明のＥＰＯリポソーム分散物は概括的に、組成物１００グラム当たり、約
２００，０００単位ないし約百万単位のＥＰＯ糖蛋白を含む。活性ＥＰＯ成分は
、（ａ）（ｉ）レシチン又は水素化レシチン、（ii）場合により、荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物、及び（iii）コレステロールあるいは、コレステロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）、及びコレステロールの有機酸誘導体、から選択されるコレステロールの誘導体、並びに（ｉｖ）１ないし６個の炭素原子の低級アルカノールからなるアルコール成分、を含んでなる脂質相、並びに（ｂ）バッファー水溶液、から形成されたリポソーム懸濁物中に分散される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ベツター，アンドレスイス・シーエイチ−8207シヤフハウゼン・シユロスシユトラーセ85 (72)発明者フレター，フランク−ウルリヒスイス・シーエイチ−8207シヤフハウゼン・ホーベルク39 Ｆターム(参考） 4C076 AA19 CC27 CC35 DD26Z DD37A DD51Q DD63F DD70F EE23F FF12 FF16 4C084 AA01 BA50 CA31 DB56 MA05 MA24 MA55 NA14 ZA811 ZB261 ZB331

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）エリスロポイエチン又は骨髄細胞に網状赤血球及び
赤血球細胞の生産を増加させる生物学的特性を有するその製薬学的に許容できる
誘導体を含んでなる、有効量の活性成分、（ｂ）（ｉ）レシチン又は水素化レシチン、（ii）場合により、荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物
及び（iii）コレステロールあるいは、コレステロールエステル、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）、及びコレステロールの有機酸誘導体、から選択されるコレステロールの誘導体、を含んでなる脂質相、並びに（ｃ）リン酸バッファー、を含んでなる、リポソームを基礎にした非経口組成物。
【請求項２】組成物が、アルコール性溶媒で脂質相の溶液を調製し、高速
ホモジナイザー中に含まれたバッファー水溶液中に圧力下で溶液を注入すること
により製造される単一の二重層リポソームを含んでなる、請求項１記載の組成物
。
【請求項３】それが更に安定剤を含んでなる、請求項１又は請求項２記載
のリポソームを基礎にした調製物。
【請求項４】安定剤がグリシンである、請求項３記載のリポソームを基礎
にした調製物。
【請求項５】レシチンが水素化レシチンである、請求項１ないし請求項４
のいずれか１項に記載のリポソームを基礎にした調製物。
【請求項６】荷電された電気的陽性又は電気的陰性の脂質化合物が、ジパ
ルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジ−パルミトイルグリセロール（Ｄ
ＰＰＧ）、オレイルアミン及びステアリルアミンから選択される、請求項１ない
し請求項５のいずれか１項記載のリポソームを基礎にした調製物。
【請求項７】バッファーがリン酸二水素ナトリウム二水和物、リン酸水素
二ナトリウム二水和物、及びそれらの混合物から選択される、請求項１ないし請
求項６のいずれか１項に記載のリポソームを基礎にした調製物。
【請求項８】それが更に保存剤を含んでなることを特徴とする、請求項１
ないし請求項７のいずれか１項に記載の、リポソームを基礎にした調製物。
【請求項９】それが更に抗酸化剤を含んでなることを特徴とする、請求項
１ないし請求項８のいずれか１項記載のリポソームを基礎にした調製物。
【請求項１０】それが更に錯体形成剤を含んでなることを特徴とする、請
求項１ないし請求項９のいずれか１項記載の、リポソームを基礎にした調製物。
【請求項１１】それが次の組成、ｇ／１００ｇＥＰＯ又は類似化合物２００，０００Ｕ〜百万単位水素化レシチン（大豆）０．５〜５．０００コレステロール０．１〜１．０００荷電脂質０．０５〜０．５エタノール０．５〜５．０００グリシン０．０〜１．００バッファー０ないし２．０その他の、場合による添加剤及び水適量、全１００．０、をもつことを特徴とする、請求項１ないし請求項１０のいずれか１項に記載のリ
ポソームを基礎にした調製物。
【請求項１２】それが次の組成、ｇ／１００ｇエリスロポイエチン百万単位水素化レシチン（大豆）０．５００コレステロール０．１００ＤＰＰＡ−Ｎａ０．０４０薬局法非変性エタノール０．５００リン酸二水素ナトリウム二水和物０．１１６４リン酸水素二ナトリウム二水和物０．２２２５塩化ナトリウム０．５８４精製水９７．９３７１、をもつことを特徴とする、請求項１ないし請求項７及び請求項１１のいずれか１
項に記載の、リポソームを基礎にした調製物。
【請求項１３】貧血の処置のための製薬学的調製物としての使用のための
請求項１ないし請求項１２のいずれか１項に記載の、リポソームを基礎にした調
製物。