RU2275899C2 - Структурированная эмульсия амфотерицина b с низкой токсичностью для парентерального введения и способ ее получения - Google Patents
Структурированная эмульсия амфотерицина b с низкой токсичностью для парентерального введения и способ ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2275899C2 RU2275899C2 RU2003101391/04A RU2003101391A RU2275899C2 RU 2275899 C2 RU2275899 C2 RU 2275899C2 RU 2003101391/04 A RU2003101391/04 A RU 2003101391/04A RU 2003101391 A RU2003101391 A RU 2003101391A RU 2275899 C2 RU2275899 C2 RU 2275899C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amphotericin
- oil
- composition
- emulsion
- aqueous phase
- Prior art date
Links
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims abstract description 221
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 11
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 title description 7
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 title description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 126
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims abstract description 105
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims abstract description 104
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 74
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims abstract description 60
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 55
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 54
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 37
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 claims abstract description 4
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 293
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims description 288
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims description 288
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 99
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 45
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 27
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 27
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 27
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 19
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 14
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 13
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 8
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 59
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 59
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 57
- 239000000047 product Substances 0.000 description 51
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 48
- 229940025953 amphotericin b injection Drugs 0.000 description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 35
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 31
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 31
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 description 27
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 23
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 21
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 20
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 16
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 16
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 15
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 14
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 14
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 13
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 11
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 11
- 230000007681 cardiovascular toxicity Effects 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 9
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 9
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 9
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 9
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 8
- 238000013461 design Methods 0.000 description 8
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- OEBRKCOSUFCWJD-UHFFFAOYSA-N dichlorvos Chemical compound COP(=O)(OC)OC=C(Cl)Cl OEBRKCOSUFCWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 7
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000010408 film Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 5
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 5
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 5
- 231100000313 clinical toxicology Toxicity 0.000 description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 4
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 4
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 4
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 4
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 4
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 3
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100347605 Arabidopsis thaliana VIII-A gene Proteins 0.000 description 3
- 101100347612 Arabidopsis thaliana VIII-B gene Proteins 0.000 description 3
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 3
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 3
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 3
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 3
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 3
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 231100000191 repeated dose toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 1-monopalmitoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000003307 reticuloendothelial effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000010913 used oil Substances 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 1-oleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 1
- 206010019670 Hepatic function abnormal Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 210000000883 ear external Anatomy 0.000 description 1
- 229940068998 egg yolk phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 231100000853 glomerular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N glycerol monolinoleate Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)CO RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000009775 high-speed stirring Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 231100001141 mammalian cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940074096 monoolein Drugs 0.000 description 1
- 210000003365 myofibril Anatomy 0.000 description 1
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012875 nonionic emulsifier Substances 0.000 description 1
- 231100001140 nonselective cytotoxic interaction Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000004533 oil dispersion Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002459 polyene antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 231100000004 severe toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005060 thrombophlebitis Diseases 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000003663 ventricular fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 229920006163 vinyl copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
Abstract
Описан парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, содержащий (а) масляную фазу (до 30 мас./об.% состава), выбранную из группы растительных масел, таких как соевое масло, сезамовое масло, сафлоровое масло; (b) амфотерицин В (0,05-1 мас./об.% состава), диспергированный в масляной фазе; (с) воду водной фазы; (d) модифицирующие тоничность агенты, выбранные из группы соединений, таких как глицерин, маннит, декстроза, растворенные в водной фазе; (е) эмульгатор, такой как натуральные фосфатиды (до 3 мас./об.% состава), диспергированный в водной фазе. Состав позволяет достичь LD50 не менее 400 мг/кг при одном вводе дозы и не менее 40 мг/кг при повторном вводе дозы у мышей. Также описан способ получения этого состава. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 11 ил., 20 табл.
Description
Область изобретения
Изобретение относится к композиции амфотерицина В с низкой токсичностью. В частности, изобретение относится к композиции амфотерицина В с низкой токсичностью в структурированной эмульсии типа масло в воде для парентерального введения.
Предпосылки для создания изобретения
Амфотерицин В является макроциклическим полиеновым антибиотиком, продуцируемым Streptomycetes nodosus. Он эффективен по отношению к широкому кругу грибов, дрожжей и некоторым представителям простейших.
Первоначально амфотерицин В был доступен для внутривенного введения в обычной коллоидной форме. Даже в настоящее время, спустя 35 лет после его разработки, он широко используется как жизненно важное противогрибковое средство из-за его надежной терапевтической эффективности. Сообщается о низкой толерантности лекарственного средства ввиду количества неблагоприятных эффектов при клиническом использовании. Почти у всех пациентов, получавших обычный амфотерицин В внутривенно, наблюдалась нефротоксичность. Другие неблагоприятные эффекты включают в себя гипертензию, гипотензию, сердечную аритмию, в том числе фибрилляцию желудочков, остановку сердца, нарушения функции печени. Наблюдали и тубулярное, и гломерулярное повреждения и существование риска постоянного снижения почечной функции. Растворы амфотерицина В раздражают венный эндотелий и могут вызывать боль и тромбофлебит на участке инъекции из-за использования синтетического поверхностно-активное вещества, дезоксихолата, при приготовлении, чтобы солюбилизировать амфотерицин В.
Для снижения токсичных эффектов амфотерицин В приготовляли с использованием различных систем доставки лекарственного средства к участку действия, таких как липидные комплексы, липосомы и эмульсия. Эти композиции имеют более высокую эффективность, более низкую токсичность по сравнению с лекарственным средством, используемым в свободной форме. И липидные комплексы, и липосомальные готовые препаративные формы амфотерицина В в настоящее время доступны на рынке и одобрены в различных странах по всему миру.
Основной недостаток липидных готовых препаративных форм на основе липидных комплексов и липосом - высокая стоимость лечения. Амфотерицин В является липофильным лекарственным средством, которое связывается со стеринами и интеркалирует в липидные двойные слои, и следовательно, амфотерицин В особенно пригоден для использования в липидной системе доставки лекарственного средства.
Была предпринята попытка в этой лаборатории приготовить амфотерицин В в форме эмульсии на основе липида, преимущества которой состоят в низкой токсичности при более низкой стоимости лечения.
Volker Heinemann et al. допускают (Antimicrobial agents and chemotherapy 1997, 41 (4); 728-732), что липидные эмульсии уменьшают количество олигомерного амфотерицина В и тем самым уменьшают взаимодействие амфотерицина В с холестерином клеточных мембран человека. Остаточный мономерный амфотерицин В, однако, сохраняет потенциал связывания с эргостерином грибковых клеточных мембран.
Kirsh R, Goldstein R, Tarloff J, et al. сообщают (J. Infect. Dis. 1988, 158; 1065-1070), что липидная эмульсионная композиция амфотерицина В, полученная смешиванием с жировой эмульсией, проявляет меньшую токсичность без потери противогрибковой активности. Однако найдено, что физическая стабильность такой липидной эмульсии, несущей амфотерицин В, невысока.
Moreau P, et al. сообщают (J. Antimicro. Chemother. 1992, 30, 535-541), что у пациентов, проходящих лечение жировой эмульсией, смешанной с инъекционным раствором амфотерицина В, происходит значительное снижение связанной с инфузией токсичности и почечной дисфункции.
Применение амфотерицина В, смешанного с жировой эмульсией парентерального питания, возрастает и в Европе, и в Соединенных Штатах.
Известные способы получения эмульсии амфотерицина В обсуждаются ниже.
Патент США 5364632 (1994) / Патент Японии JP 2290809 (1990)
Способ получения эмульсии по изобретению описан в типичном примере следующим образом:
Амфотерицин В растворяли в метаноле (0,8 мг/мл) с использованием ультразвука (15 мин). Фосфолипиды Е-80 (содержащие, в основном, 80% фосфатидилхолина и 8% фосфатидилэтаноламина) растворяли в хлороформе. Оба раствора смешивали и фильтровали через комбинированную фильтровальную систему, имеющую предварительный стекловолокнистый фильтр и мембранный фильтр 0,45 мкм из регенерированной целлюлозы (RC 5) (GF92), для удаления пирогенов и агрегаций. Полученный прозрачный липидный раствор осаждали в виде тонкой пленки на стенки круглодонной колбы с использованием роторного испарения при пониженном давлении и 40°С. Водную фазу, содержащую полоксамер (poloxamer), дезоксихолат натрия и глицерин, фильтровали через Millepore фильтр 0,22 мкм, заливали в колбу и подвергали дисперсию воздействию ультразвука до образования гомогенной липосомной смеси.
Масло МСТ (триглицерид со средней длиной цепи), отфильтрованное через Millepore фильтр 0,22 мкм и содержащее α-токоферол, нагревали до 70°С и затем подмешивали в липосомную смесь, нагретую до 45°С, и диспергировали в ней с использованием магнитной мешалки.
Эмульгирование осуществляли, поддерживая такую же температуру, с использованием смесителя с высоким усилием среза, Polytron. Полученную грубую эмульсию быстро охлаждали. Тонкую монодисперсную эмульсию получали в двухступенчатом гомогенизаторе.
Окончательно регулировали рН эмульсии и фильтровали через Millepore фильтр 0,45 мкм, чтобы отделить крупные капли и продукты распада, образующиеся в процессах эмульгирования и гомогенизации.
Все операции обработки проводили в асептических условиях.
Относительные количества различных ингредиентов в конечных эмульсиях в примере и диапазоны, данные в описании, приведены ниже:
Амфотерицин В 0,075% (0,015-0,15%), масло МТС 20% (3-50%), фосфолипид Е80 0,5% (0,5-20%), полоксамер 2% (0,3-10%), дезоксихолат натрия 1% (0,5-5%), глицерин 2,25%, α-токоферол 0,02% и дважды дистиллированная вода 200%.
Недостатки процесса патента США 5364632 (1994)/патента Японии JP 2290809(1990):
i. Так как растворимость амфотерицина В в метаноле невысока, то необходимо использовать большое количество метанола, чтобы растворить требуемое количество амфотерицина В. Это ограничивает уровень лекарственного средства в конечной композиции.
ii. В этом способе сначала необходимо было сформировать тонкую пленку лекарственного средства, амфотерицина В и фосфолипидов и затем гидратировать эту пленку с использованием водной фазы. Водная фаза содержит неионогенный эмульгатор - полоксамер, поверхностно-активное вещество - дезоксихолат натрия и глицерин.
iii. Использованной масляной фазой является масло МСТ с добавленным α-токоферолом. Эмульсию получали добавлением масляной фазы, поддерживаемой при 70°С, в водную фазу, поддерживаемую при 45°С. Это не гарантировало, что амфотерицин В сохраняется в масляной фазе. Способ не использует весь потенциал снижения токсичности амфотерицина В, если он находится в масляной фазе.
iv. Продукт по способу патента США 5364632 (1994) получали в асептических условиях для придания ему стерильности. Предпочтительный способ стерилизации, установленный в фармакопее, - это обработка продукта в конечной емкости в автоклаве. Так как амфотерицин В обычно вводят внутривенно, то конечная стерилизация является предпочтительной единственной альтернативой, которая предлагает более высокую гарантию соблюдения стерильности.
v. Эмульсионный продукт, хотя стоек к механическому напряжению, все же не был исследован на токсичность. Следовательно, токсичность продукта не известна. Однако сравнительные исследования in vivo были осуществлены с мышами Balb/c для сравнения с Fungizone, который является промышленной готовой препаративной формой амфотерицина В, содержащей дезоксихолат натрия. Эти исследования показали, что продукт менее токсичен, чем Fungizone.
vi. Применение масла МСТ и полоксамера увеличивает концентрацию лекарственного средства в плазме из-за снижения поглощения лекарственного средства ретикулоэндотелиальной системой (RES). В случае грибковой инфекции необходимо, чтобы амфотерицин В распределялся в ретикулоэндотелиальной системе, которая является местоположением инфекции.
Патент Японии 11-60491 (1989)
В патенте Японии описана лекарственная препаративная форма, содержащая амфотерицин В в форме эмульсии. Эмульсия содержит:
i) Амфотерицин В (1-10 мг/мл готовой эмульсии)
ii) Масляную фазу - масляная фаза содержит растительные масла, рыбий жир или триглицериды (1-50%, предпочтительно 5-30%). Предпочтительным используемым маслом является соевое масло или сезамовое масло.
iii) Эмульгаторы - использованные эмульгаторы представляют собой фосфолипиды. Дополнительно также применяли нетоксичные эмульгаторы. Используемыми фосфолипидами являлись фосфолипиды яичных желтков, фосфолипиды соевых бобов или гидрогенизированный продукт, полученный из этих материалов. Фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидилсерин, фосфатидная кислота, фосфатидилглицерин также можно использовать. Рекомендованное количество 1-50 мас.% масляного компонента, предпочтительно 10-30 мас.% масляного компонента или 1-10 мас./об.%, предпочтительно 4-6 мас./об.% эмульсии.
Применяли также неионогенные эмульгаторы, такие как полиалкиленгликоль (мол. масса 1000-10000, предпочтительно 4000-6000); или полимер - полиоксиэтилен или полиоксипропилен (мол. масса 1000-20000, предпочтительно 2000-10000), полиоксиалкиленовые производные гидрогенизированного касторового масла, такие как полиоксиэтилен-20-эфир, -40-эфир, -100-эфир гидрогенизированного касторового масла, в количестве менее 5 мас./об.%, предпочтительно менее 1 мас./об.%. Также можно использовать сочетания двух неионогенных эмульгаторов.
iv) Жирные кислоты и их соли (фармацевтически приемлемые) - до 1%, предпочтительно 0,5 мас./об.%.
v) стабилизаторы - менее 5 мас./об.%, предпочтительно менее 1 мас./об.%, которые включают в себя
а) высокомолекулярные полимерные вещества, такие как альбумин человеческого происхождения, виниловый сополимер, например поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, алифатические амины.
b) желатин, гидроксиэтилированный крахмал, разновидности холестерина.
vi) изотонические агенты - менее 5 мас./об.%, предпочтительно менее 1 мас./об.%;
vii) глицерин или его моноэфиры типа моноолеина, монопальмитина;
viii) сахариды, такие как моно- и дисахариды, сорбит, ксилит, менее 5 мас./об.%, предпочтительно менее 1 мас./об.%;
ix) антиоксиданты, такие как токоферол, менее 5 мас./об.%, предпочтительно менее 1 мас./об.%;
х) агенты регулирования рН, такие как кислоты, щелочи и буферы.
О способе получения, изложенном ниже, уже сообщалось ранее. Способ предусматривает сначала формирование эмульсии типа вода в масле (w/o) и затем превращение ее в эмульсию типа масло в воде (o/w) разбавлением водой. В способе соевое масло, фосфолипид, амфотерицин В и некоторое количество воды, а также другие добавки (если их использовали) смешивали вместе и нагревали при необходимости. Смесь затем гомогенизировали в гомогенизаторе высокого давления. Добавляли еще воды в требуемом количестве, чтобы превратить эмульсию w/o в эмульсию o/w, которую снова гомогенизировали.
В типичном примере 200 г соевого масла, 50 г фосфолипида и 2,5 г амфотерицина В и 750 мл воды обрабатывали, как указано выше.
В другом примере в приведенный выше состав вводили глицерин в количестве 2,2 мас./об.% композиции.
Средний размер капли эмульсии 0,1-0,2 мкм. Эмульсия и размер капель сохраняются вплоть до 10 дней в условиях охлаждения.
Недостатки способа по патенту Японии 11-69491 (1989):
Известно, что амфотерицин В в эмульсионной готовой препаративной форме менее токсичен, чем обычный препарат амфотерицина В. Однако готовые препаративные формы патента Японии 11-69491 (1989) не используют полного потенциала снижения токсичности, обусловленного идеей использования эмульсии, из-за способа получения эмульсии в этом патенте.
i. Из-за того, что средний размер частицы эмульсии, получаемой в патенте Японии 11-69491 (1989), составляет 0,1-0,2 мкм, невозможно использовать хорошо известное преимущество предпочтительного поглощения ретикулоэндотелиальной системой частиц большего размера. Требуется предпочтительное поглощение амфотерицина В ретикулоэндотелиальной системой, так как она является местоположением большинства грибковых инфекций.
ii. Стабильность исследуемой эмульсии до 10 дней в холодильнике.
iii. Для добавления в эмульсионный препарат предложено большое количество добавок, в том числе поддерживающих эмульгирование агентов, таких как алифатические амины, высокомолекулярные полимеры, неионогенные природные поверхностно-активные вещества, разновидности холестерина, сахариды, такие как моно- и дисахариды, антиоксиданты.
iv. Технологическая стадия придания продукту стерильности не оговаривается.
В патенте Японии 4-173736 (1992) описан продукт, содержащий 0,005-5% амфотерицина В, 0,5-25% фосфолипида, предпочтительно яичного лецитина. Композиция имеет средний размер диаметра частиц 100 нм. Композиция не является эмульсией и не содержит масляной фазы.
В патенте США 5389373 (1995) описан способ получения эмульсии слаборастворимых лекарственных средств типа масло в воде (o/w). Способ предусматривает растворение амфотерицина В в водном растворе с высоким или низким рН, добавление полученного раствора с концентрацией не более чем 100 мг/мл к предварительно приготовленной эмульсии, добавление к эмульсии некоторого количества кислоты, основания или буфера, пригодного для нейтрализации и регулирования рН продукта до нужного значения.
Недостатки способа по патенту США 5389373 (1995):
Основной недостаток способа состоит в ограничении низкой концентрации амфотерицина В в эмульсии. В этом способе концентрация амфотерицина В составляет порядка 100 мг/мл. Исходя из этого необходимо инъектировать большие объемы композиции, что является недостатком для лечения.
В патенте США 5534502 (1996) амфотерицин В декристаллизуют с помощью кислоты и этанола и затем гомогенно диспергируют в липиде с последующим эмульгированием. В этом способе необходимо растворять амфотерицин В в этаноле, наиболее предпочтительное количество этанола 400-600 мл/г амфотерицина В. Основной недостаток способа состоит в том, что амфотерицин В не стабилен в кислой области рН.
Европейский патент 0700678 (1996) описывает липидную эмульсию, которая, в основном, содержит лимонную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один элемент, выбранный из группы, включающей в себя метионин, фенилаланин, серин, гистидин и их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что эмульсия не содержит одновременно и метионин и фенилаланин.
Существенным требованием является одновременное использование лимонной кислоты и по меньшей мере одной из указанных аминокислот. Способ приготовления эмульсии в соответствии с этим изобретением описан следующим образом.
Фосфолипиды и вспомогательные агенты для эмульгирования, такие как олеиновая кислота, растворяли в подходящем органическом растворителе, таком как гексан, и затем растворитель отгоняли при пониженном давлении, чтобы получить липидную пленку. К полученной липидной пленке добавляли масляный компонент и воду и смесь предварительно эмульгировали энергичным перемешиванием путем встряхивания. Полученную жидкость эмульгировали с использованием применяемых в настоящее время эмульгаторов. По завершении эмульгирования значение рН полученной эмульсии регулировали до заданного уровня добавлением хлористоводородной кислоты или гидроксида натрия. Лимонную кислоту и аминокислоты добавляли к эмульсии, чтобы получить липидную эмульсию. В варианте липидную эмульсию получали таким же образом, добавляя масляный компонент и водный раствор лимонной кислоты и аминокислоты к липидной пленке, полученной согласно указанной выше процедуре, и затем подвергали полученную смесь эмульгированию.
Недостатки способа по европейскому патенту 0700678 (1996):
Способ получения эмульсии амфотерицина В подробно не описан. Амфотерицин В является одним в перечне примерно из 70 лекарственных средств, на которое указывается как на средство, которое «может быть приготовлено в липидной эмульсии».
i) Способ получения липидной эмульсии предусматривает растворение фосфолипидов в подходящем органическом растворителе, таком как гексан.
ii) В примерах патента аминокислоты и лимонную кислоту добавляли к предварительно полученной липидной эмульсии и исследовали стабильность при 60°С на обесцвечивание.
Требуется, чтобы внутривенные эмульсии были стабильны при температурах стерилизации в автоклаве.
iii) Способ стерилизации, представленный в одном из примеров, предусматривает нагревание при 60°С в течение 1 час и повторение процесса стерилизации три раза каждые 24 часа. Этот способ не подходит для получения внутривенных инъекционных растворов.
Главная задача настоящего изобретения -создать способ получения эмульсии амфотерицина В, пригодной для парентерального введения и имеющей очень низкую токсичность, а также преодоление недостатков и пробелов известных способов, приведенных выше.
Таким образом, основная часть главной задачи - разработать способ покрытия маслом твердого порошка амфотерицина В и размещения покрытого маслом твердого порошка амфотерицина В в масляной фазе эмульсии типа масло в воде при условии сохранения амфотерицина В, внедренного в масляную фазу эмульсии, в течение всего способа получения, в том числе при стерилизации обработкой в автоклаве и в течение последующего срока хранения и использования.
Другая часть главной задачи - разработать способ получения такой структурированной эмульсии типа масло в воде со средним размером капель масла в эмульсии, регулируемым в оптимальном диапазоне, чтобы происходило преимущественное распределение в ретикулозндотелиальной системе при низкой концентрации в плазме. Таким образом, для более успешного выполнения инъекций такая эмульсия действует подобно эмульсии с водной внешней фазой, несущей масляные глобулы, содержащие покрытый маслом амфотерицин В.
Следующая часть главной задачи - разработать способ получения такой структурированной эмульсии амфотерицина В, который требует только минимума добавок, необходимых для получения эмульсии типа масло в воде.
Краткое изложение сущности изобретения
Соответственно этому, настоящее изобретение относится к парентеральному составу покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, имеющему LD50 по меньшей мере 400 мг/кг у мышей и содержащему:
а) масляную фазу (вплоть до 30 мас./об.% состава), выбранную из группы растительных масел, таких как соевое масло, сезамовое масло, сафлоровое масло;
b) амфотерицин В (0,05% до 1 мас./об.% состава), диспергированный в масляной фазе;
c) воду водной фазы;
d) модифицирующие тоничность агенты, выбранные из группы соединений, таких как глицерин, маннит, декстроза, растворенные в водной фазе, и;
e) эмульгатор, такой как натуральные фосфатиды (вплоть до 3 мас./об.% состава), диспергированный в водной фазе.
В другом примере осуществления изобретение относится к способу получения парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, имеющего LD50 по меньшей мере 400 мг/кг у мыши, предусматривающему диспергирование амфотерицина В в масляной фазе, получение водной фазы растворением модифицирующего тоничность агента в воде; диспергирование эмульгатора в водной фазе; регулирование рН водной фазы приблизительно до 8-11; добавление масляной фазы в водную фазу при перемешивании, чтобы получить грубо структурированную эмульсию; гомогенизирование грубо структурированной эмульсии до размера частиц менее 2 мкм, фильтрование, заливку гомогенизированной структурированной эмульсии в стеклянные емкости в атмосфере азота; закрывание стеклянных емкостей, герметизацию закрытых стеклянных емкостей и стерилизацию герметизированных заполненных емкостей обработкой в автоклаве. Важно соблюдать порядок выполнения стадий способа. Изменение порядка стадий приводит к изменению структуры эмульсии, как показано исследованиями токсичности.
Характерно для способа настоящего изобретения, что яичный фосфатид диспергируют в водной фазе, в то время как порошок амфотерицина В диспергируют в масляной фазе, и следовательно, продукт обозначается как покрытый маслом амфотерицин В в форме структурированной эмульсии.
В следующем примере осуществления изобретение относится к парентеральному составу покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, полученному приведенным выше способом.
Приготовление амфотерицина В в форме структурированной эмульсии типа масло в воде по способу настоящего изобретения приводит к значительному снижению его токсичности и гарантирует стерильность состава без изменения его противогрибковой активности. Состав настоящего изобретения, будучи менее токсичным, создает возможности для увеличения уровней доз при лечении определенных инфекций.
Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии настоящего изобретения является менее токсичным и отличается тем, что
a) имеет LD50 по меньшей мере 400 мг/кг массы тела при исследовании токсичности однократной дозы и по меньшей мере 40 мг/кг массы тела при исследовании токсичности повторной дозы у мышей;
b) имеет LD50 по меньшей мере 150 мг/кг массы тела при исследовании токсичности однократной дозы у крыс;
c) проявляет не менее чем в 20 раз меньшее гемолитическое воздействие на эритроциты человека по сравнению с обычным составом, содержащим дезоксихолат натрия;
d) имеет преимущественное распределение в тканях ретикулоэндотелиальной системы и имеет не менее двойного t1/2 в органах ретикулоэндотелиальной системы по сравнению с обычным составом, содержащим дезоксихолат натрия, при исследовании однократной дозы у мышей.
e) не имеет токсических симптомов кардиальной токсичности после инъекции у мышей, таких как тяжелый респираторный дистресс-синдром, местное раздражение, абдоминальный дистресс и возбуждение.
Подробное описание примеров осуществления изобретения
Содержание амфотерицина В в парентеральном составе покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии изобретения находится в широком диапазоне от 0,05% до 1 мас./об.% состава. Предпочтительно, от 0,1 до 0,5 мас./об.% и, в частности, приблизительно 0,5% или приблизительно 0,25 мас./об.% состава.
В способе настоящего изобретения амфотерицин В диспергируют в масляной фазе перед эмульгированием. Амфотерицин В используют как таковой или очень тонко размельчают перед диспергированием в масляной фазе. Масляная фаза присутствует в количестве, составляющем вплоть до 30 мас./об.% состава, предпочтительно от 5 до 25 мас./об.% и более предпочтительно 10-20 мас./об.%, в частности, приблизительно 10 мас./об.% или приблизительно 20 мас./об.%. Обычно используемая масляная фаза представляет собой растительное масло и может быть одним из растительных масел, таких как соевое масло, сезамовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, подсолнечное масло, арахисовое масло, кукурузное масло, касторовое масло или оливковое масло.
Предпочтительным растительным маслом является соевое масло.
В изобретении эмульгатор растворяют в водной фазе. Пригодными эмульгаторами являются натуральные фосфатиды и модифицированные фосфатиды. Предпочтительными эмульгаторами являются фосфатиды натурального происхождения, такие как яичные фосфатиды и соевые фосфатиды. Эмульгатор, используемый в изобретении, может представлять собой смесь двух или более упомянутых выше эмульгаторов. Предпочтительным натуральным фосфатидом является очищенный яичный фосфатид.
Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии настоящего изобретения приготовляют для диапазона рН 6,0-8,5. В способе настоящего изобретения рН водной фазы регулируют между 8 и 11 щелочью, такой как раствор гидроксида натрия или гидроксида калия в воде, так что рН состава настоящего изобретения после обработки в автоклаве сохраняется в диапазоне 6-8,5.
Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии настоящего изобретения приготовляют изотоническим относительно крови введением модифицирующего тоничность агента, такого как глицерин, маннит, декстроза или их сочетания. Предпочтительный модифицирующий тоничность агент-глицерин. Глицерин присутствует в количестве от 2-3 мас./об.% состава. Предпочтительно используемое количество глицерина приблизительно 2,25 мас./об.% состава.
Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии настоящего изобретения содержит, в частности, стерильные эмульсии типа масло в воде, приготовленные согласно процедуре получения в регулируемых условиях и подвергаемые конечной стерилизации в автоклаве. Когда эмульгирование осуществляют при высоких температурах, то водную фазу, или масляную фазу, или обе фазы поддерживают при температуре до 75°С.
Средний размер частиц состава изобретения преднамеренно поддерживают вплоть до 2 мкм, так чтобы создать распределение амфотерицина В, предпочтительно в ретикулоэндотелиальной системе, и тем самым обеспечить низкую концентрацию в плазме.
Настоящее изобретение описывается в типичном примере, где структурированную эмульсию, содержащую амфотерицин В (0,5 мас./об.%), масляную фазу - соевое масло (20 мас./об.%), эмульгатор - очищенный яичный фосфатид (1,2 мас./об.%), модифицирующий тоничность агент-глицерин (2,25 мас./об.%) и воду (сколько понадобиться до 100% по объему), получают способом, предусматривающим диспергирование амфотерицина В в соевом масле; приготовление водной фазы добавлением глицерина к воде; последующее диспергирование очищенного яичного фосфатида в водной фазе; регулирование рН водной фазы до 10,8; добавление соевого масла, содержащего амфотерицин В, к водной фазе при перемешивании с целью получения грубой эмульсии; гомогенизирование полученной эмульсии до размера частиц менее 2 мкм; фильтрование через фильтр 2 мкм, заливку в стеклянные емкости в атмосфере азота; закрывание стеклянных емкостей; герметизацию закрытых стеклянных емкостей и стерилизацию герметизированных заполненных емкостей обработкой в автоклаве.
Структурированная эмульсия парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной типа масло в воде эмульсии настоящего изобретения имеет низкую токсичность и небольшой размер частиц и пригодна для парентерального применения. Стерильность состава изобретения обеспечена благодаря стерилизации продукта конечной обработкой в автоклаве без значительной потери активности амфотерицина В и без дестабилизации эмульсии. Состав настоящего изобретения легко использовать, так как продукт может быть разбавлен инъекционным 5%-ным раствором декстрозы или физиологическим раствором, чтобы получить требуемую концентрацию для парентерального введения. Состав изобретения также имеет длительный срок хранения и, следовательно, пригоден как готовый рыночный продукт.
Был исследован профиль токсичности эмульсий, полученных по способам, в которых были сделаны изменения, касающиеся добавления амфотерицина В и очищенного яичного фосфатида. Результаты исследований приведены в примерах в следующей ниже таблице.
Пример | Амфотерицин В | Яичный лецитин | Токсичность |
I | В масляной фазе | В водной фазе | Не показывает симптомов кардиальной токсичности |
IV | В водной фазе | В водной фазе | Показывает симптомы кардиальной токсичности |
V | В водной фазе | В масляной фазе | Показывает симптомы кардиальной токсичности |
VI | В масляной фазе | В масляной фазе | Показывает симптомы кардиальной токсичности |
В способе настоящего изобретения наблюдали при суспендировании амфотерицина В в водной фазе образование продукта, который при инъецировании мышей вызывает симптомы кардиальной токсичности, такие как тяжелый респираторный дистресс-синдром, местное раздражение, абдоминальный дистресс и возбуждение. Однако эти токсичные симптомы не наблюдаются, когда амфотерицин В суспендируют в масляной фазе. Это может происходить благодаря резервуарному эффекту как масляных капель эмульсии, так и клеток Купфера. Такое медленное высвобождение может привести к наличию мономерного амфотерицина В в плазме после инъекции эмульсионного состава, тем самым к снижению токсичности [Ref. Antimicrobial agents and chemotherapy, 1997; Vol.41 (4): Pg.728-732].
Найдено, что состав, приготовленный добавлением эмульгатора - яичного лецитина в масляную фазу, также вызывает симптомы кардиальной токсичности, как упоминалось выше. После проведения обширных опытов эта проблема была преодолена добавлением яичного лецитина в водную фазу. Исследования этих процессов описаны в примерах I-VI. Пример II и пример III, которые являются вариантами примера I, все представляют настоящее изобретение, в то время как примеры IV, V и VI не входят в сферу изобретения. В примере VII приведено исследование in-vitro токсичности по отношению к эритроцитам человека. Пример VIII и пример XI описывают исследование токсичности у мышей, крыс и собак. Пример IX описывает фармакокинетическое исследование у кроликов и пример Х описывает исследование распределения в органах у мышей.
Наблюдение, что амфотерицин В, диспергированный в масле, и яичный лецитин, диспергированный в воде, дает эмульсию с очень низкой токсичностью, предполагает сильное взаимодействие между каплями масла и амфотерицином В. Следовательно, эмульсию амфотерицина В можно рассматривать как резервуар мономерной формы амфотерицина В, и вследствие высокой стабильности состава только ограниченное количество свободного амфотерицина В будет постепенно высвобождаться. Мономерная форма амфотерицина В способна связываться с эргостеролом грибковых клеток, но инертна к холестерину клеток хозяина-млекопитающего и, следовательно, вызывает меньшую токсичность. В случае обычного состава амфотерицина В высвобождение высоких уровней свободного амфотерицина В в плазме приводит к наличию самоассоциированных олигомеров в системе кровообращения. Эти олигомерные формы взаимодействуют с содержащими холестерин хозяйскими клеточными мембранами и, следовательно, вызывают большую токсичность. Это объясняет механизм низкой токсичности эмульсии амфотерицина В настоящего изобретения по сравнению с обычным составом. Более низкие пиковая концентрация и значения AUC в сыворотке (пример IX) и соответственно более быстрое отложение амфотерицина В в тканях (пример Х-А) также объясняют причину более низкой токсичности эмульсии амфотерицина В настоящего изобретения. Низкая токсичность подтверждается данными, приведенными в примерах VIII-A, VIII-B и VIII-C.
Эти исследования токсичности показывают, что хотя парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии продукта изобретения, по-видимому, аналогичен продукту, приведенному в патенте Японии 11-60491 (1989), продукт настоящего изобретения имеет характерную биологическую низкую токсичность благодаря способу получения.
Способ настоящего изобретения обеспечивает эмульсионный продукт, который содействует образованию мономеров из-за медленного высвобождения амфотерицина В в плазме при инъекционном применении, что не происходит с продуктом, полученным по способу, приведенному в патенте Японии 11-60491 (1989). Таким образом, структура эмульсии настоящего изобретения отличается от той, которая получена по патенту Японии, как характеризуется исследованиями токсичности. Следовательно, эмульсию настоящего изобретения обозначают как структурированную эмульсию.
В основном примере осуществления изобретения амфотерицин В диспергируют в масляной фазе, так что порошок амфотерицина В покрывается маслом. Яичный лецитин, используемый как эмульгатор, диспергируют в водной фазе.
В другом примере осуществления изобретения гомогенизирование осуществляют в ходе повторяющихся циклов, чтобы достичь распределения частиц по размеру менее 2 мкм.
В следующем примере осуществления изобретения конечный парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии стерилизуют обработкой в автоклаве на конечной стадии процесса получения.
Отличия от известного уровня техники:
Можно увидеть из следующего ниже, что способ настоящего изобретения отличается от указанных патентов.
а) Способ настоящего изобретения отличается от патента США 5364632 (1994) тем, что в нем не используют растворитель для амфотерицина В; не осуществляют процесса приготовления пленки амфотерицина В и фофсолипида с последующей гидратацией; не используют масло МСТ с добавленным α-токоферолом; регулируют рН водной фазы, содержащей яичный фосфатид, до 8-11; осуществляют конечную стадию стерилизации с образованием продукта, который имеет низкую токсичность и хорошее распределение в ретикулоэндотелиальной системе (RES).
Использование такого большого количества растворителя затрудняет промышленное применение способа. Оказалось, что размер частиц в различных примерах менее 100 нм, однако нет сообщений о токсичности состава.
В способе настоящего изобретения низкая токсичность сохраняется даже при 5 мг/мл, что является преимуществом при лечении, так как требуется небольшой инъецируемый объем.
b) Способ настоящего изобретения отличается от патента Японии 11-60491 (1989) тем, что размер глобулы/частицы эмульсии составляет 0,1-0,2 мкм в патенте Японии, а в настоящем изобретении до 2 мкм.
В способе настоящего изобретения яичный фосфатид добавляют в водную фазу и регулируют рН водной фазы до 8-11.
Срок хранения продукта настоящего изобретения свыше 2 лет, а продукта патента Японии - порядка 10 дней или нескольких недель.
Большое число поддерживающих эмульсию агентов необходимо использовать в способе патентов Японии, что не требуется для лекарственной эмульсии настоящего изобретения.
Способ настоящего изобретения создает стерильный продукт, стерилизуемый на конечной стадии процесса в автоклаве, тогда как продукт по патенту Японии не стерилизуется.
c) Продукт, полученный по способу патента Японии 4-173736 (1992), не содержит частиц, имеющих диаметр более 1 мкм, и этот продукт не содержит масляного компонента и, следовательно, отличается от состава настоящего изобретения.
d) В патенте США 5389373 (1995) амфотерицин В добавляли в предварительно полученную эмульсию, тогда как в способе настоящего изобретения амфотерицин В диспергируют в масляной фазе.
e) В европейском патенте ЕР 0700678 (1996) эмульсия амфотерицина В как таковая не описана. Одно лекарственное средство приблизительно из 70 лекарственных средств определено в патенте как средство, которое «может быть приготовлено как липидная эмульсия».
Эмульсия, приведенная в этом патенте, по существу должна содержать аминокислоты и лимонную кислоту или их соли, которые вообще не требуются в способе настоящего изобретения.
Способ получения эмульсии в данном патенте, в основном, начинается с получения фосфолипидной пленки с лекарственным средством или без него. Эта процедура совсем не нужна в способе настоящего изобретения.
В способе получения эмульсии процедура предусматривает различные схемы добавления эмульгатора, тогда как в способе настоящего изобретения процедура устанавливает добавление эмульгатора только в водную фазу.
Целью изобретения, упоминаемой в европейском патенте ЕР 0700678 (1996), является, в основном, преодоление проблемы обесцвечивания липидной эмульсии с использованием лимонной кислоты и аминокислот, тогда как задачей настоящего изобретения является создание структурированной типа масло в воде эмульсии покрытого маслом амфотерицина В, имеющей низкую токсичность, характеризуемую LD50 по меньшей мере 400 мг/кг у мышей.
Хотя настоящее изобретение описано относительно конкретных примеров осуществления, специалистам в данной области техники понятно, что могут быть внесены различные изменения и модификации, не выходящие за пределы существа и объема изобретения.
Примеры
Изобретение далее поясняется посредством примеров. Примеры являются только иллюстрацией и не ограничивают объем изобретения.
Все исходные материалы, использованные в примере, имели чистоту, пригодную для парентерального введения. Было использовано обычного типа оборудование. Всю обработку осуществляли в зоне с контролируемой средой. Защитную азотную атмосферу применяли при обработке проб.
Амфотерицин В, использованный в примерах и пригодный для парентерального введения, получен от Alpharma и удовлетворяет спецификации USP (фармакопея США).
Очищенный яичный лецитин, использованный в примерах и пригодный для парентерального введения, был получен из липоидов.
Промышленно доступный инъекционный раствор амфотерицина В, содержащий дезоксихолат, обозначается как обычный инъекционный раствор амфотерицина В повсюду в фармакокинетических исследованиях, исследованиях распределения в органах и исследованиях токсичности. Только один сорт обычного состава используют в ходе всех исследований.
Пример 1
Масляную фазу получают диспергированием 1 г амфотерицина В в 40 г соевого масла.
Водную фазу получают добавлением 4,5 г глицерина в 150 мл воды и затем диспергируют в ней 2,4 г яичного фосфатида. Регулируют рН до 10,6 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Масляную фазу, полученную, как указано выше, добавляют в водную фазу при перемешивании с высокой скоростью. Объем доводят до 200 мл водой. Полученную эмульсию пропускают через гомогенизатор высокого давления. Гомогенизацию повторяют до получения размера глобул/частиц менее 2 мкм. Продукт охлаждают приблизительно до 20°С сразу после каждого цикла гомогенизации.
Гомогенизированную эмульсию фильтруют через 2-микронный фильтр и заливают в емкости в атмосфере азота, герметизируют и стерилизуют в автоклаве.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности для |
регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Полученный стерилизованный продукт подвергают исследованиям на токсичность у мышей, крыс и собак (примеры VIII-A, VIII-B, VIII-C, VIII-D), фармакокинетическим исследованиям (пример IX), исследованиям распределения в органах (пример Х-А, Х-В). Исследование стабильности проводили путем хранения продукта в пробирках при 2-8°С, и результаты представлены ниже
ДАННЫЕ СТАБИЛЬНОСТИ ПРОДУКТА ПРИМЕРА I
Период | Внешний вид | Содержание Амфотерицина В |
исходный | Желто окрашенная однородная эмульсия | 104,6% |
6 месяцев | Желто окрашенная однородная эмульсия | 101,3% |
1 год | Желто окрашенная однородная эмульсия | 99,4% |
Исследования токсичности ясно показывают, что эмульсия, полученная по способу изобретения, является синергическим составом.
Пример II
Порошок амфотерицина В тонко размельчают с использованием струйной мельницы до частиц размером менее 10 мкм.
Масляную фазу получают диспергированием 1 г амфотерицина В (размельченного) в 40 г соевого масла.
Водную фазу получают добавлением 4,5 г глицерина в 150 мл воды и затем диспергируют в ней 2,4 г яичного фосфатида. Регулируют рН до 10,8 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Масляную фазу, полученную, как указано выше, добавляют в водную фазу при перемешивании с высокой скоростью. Объем доводят до 200 мл водой. Полученную эмульсию пропускают через гомогенизатор высокого давления. Гомогенизацию повторяют до получения глобул/частиц размером менее 2 мкм. Гомогенизированную эмульсию фильтруют через 2-микронный фильтр и заливают в емкости в атмосфере азота, герметизируют и обрабатывают в автоклаве.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В (размельченный) | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности |
для регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Пример подтверждает, что охлаждение во время гомогенизации не требуется, если используют тонко размельченный амфотерицин В.
Пример III
Масляную фазу получают диспергированием 1 г амфотерицина В в 40 г соевого масла, предварительно нагретого до 70°С.
Водную фазу получают добавлением 4,5 г глицерина в 150 мл воды, предварительно нагретой до 65°С, и затем диспергируют в ней 2,4 г яичного фосфатида. Регулируют рН до 10,8 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Масляную фазу при 70°С добавляют в водную фазу при 65°С при перемешивании с высокой скоростью. Объем доводят до 200 мл водой. Полученную эмульсию пропускают через гомогенизатор высокого давления. Гомогенизацию повторяют до получения глобул/частиц размером менее 2 мкм. Продукт охлаждают приблизительно до 20°С сразу после каждого цикла гомогенизации.
Гомогенизированную эмульсию фильтруют через 2-микронный фильтр и заливают в емкости в атмосфере азота, герметизируют и стерилизуют в автоклаве при 110°С в течение 40 мин.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности |
для регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Содержание амфотерицина В в полученном продукте анализировали и нашли его удовлетворительным и свидетельствующим о том, что эмульгирование можно проводить при повышенной температуре.
Пример IV
Масляная фаза - 40 г соевого масла
Водную фазу получают добавлением 4,5 г глицерина в 150 мл воды и затем диспергируют в ней 2,4 г яичного фосфатида. 1 г амфотерицина В диспергируют в этом растворе яичного фофсфатида и регулируют рН до 10,8 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Масляную фазу добавляют в водную фазу при перемешивании с высокой скоростью. Объем доводят до 200 мл водой. Полученную эмульсию пропускают через гомогенизатор высокого давления. Гомогенизацию повторяют до получения глобул/частиц размером менее 2 мкм. Продукт охлаждают приблизительно до 20°С сразу после каждого цикла гомогенизации.
Гомогенизированную эмульсию фильтруют через 2-микронный фильтр и заливают в емкости в атмосфере азота, герметизируют и стерилизуют в автоклаве.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности |
для регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Стерилизованный продукт был подвергнут исследованиям на токсичность согласно деталям, приведенным в примере XI, и оказалось, что продукт вызывает токсичные симптомы кардиальной токсичности. Следовательно, добавление амфотерицина В в водную фазу не рекомендуется.
Пример V
Масляную фазу получают растворением 2,4 г очищенного яичного фосфатида при перемешивании в 40 г соевого масла, предварительно нагретого до 70°С.
Водную фазу получают добавлением 4,5 г глицерина в 150 мл воды, предварительно нагретой до 65°С, и затем диспергируют в ней 1 г амфотерицина В. Регулируют рН до 11,0 с использованием водного раствора гидроксида натрия.
Масляную фазу при 70°С добавляют в водную фазу при 65°С при перемешивании с высокой скоростью. Объем доводят до 200 мл водой. Полученную эмульсию пропускают через гомогенизатор высокого давления. Гомогенизацию повторяют до получения глобул/частиц размером менее 2 мкм. Продукт охлаждают приблизительно до 20°С сразу после каждого цикла гомогенизации.
Гомогенизированную эмульсию фильтруют через фильтр 2 мкм и заливают в емкости в атмосфере азота, герметизируют и стерилизуют в автоклаве.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности для |
регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Стерилизованный продукт был подвергнут исследованиям на токсичность согласно деталям, приведенным в примере XI, и оказалось, что продукт вызывает токсичные симптомы кардиальной токсичности. Следовательно, добавление очищенного яичного фосфатида в масляную фазу и добавление амфотерицина В в водную фазу не рекомендуются.
Пример VI
40 г соевого масла нагревают до 75°С и растворяют в нем 2,4 г яичного лецитина при перемешивании. 1 г амфотерицина В диспергируют при перемешивании в масляной фазе с образованием однородной дисперсии амфотерицина В в масляной фазе. Масляную фазу продувают азотом в течение 15 мин.
150 мл нагревают до 65°С. Добавляют в нее 4,5 г глицерина при перемешивании. Регулируют рН до 10,65 с использованием разбавленного раствора гидроксида натрия. Масляную дисперсию амфотерицина В добавляют в водную фазу при высокоскоростном перемешивании с образованием грубой эмульсии. Объем доводят до 200 мл водой. Грубую эмульсию гомогенизируют с использованием APV-гомогенизатора высокого давления до получения гомогенизированного продукта, фильтруемого через стекловолокнистый 2-микронный фильтр. Продукт охлаждают приблизительно до 20°С сразу после каждого цикла гомогенизации. Фильтрованный продукт заливают в стеклянные емкости в атмосфере азота, герметизируют и стерилизуют в автоклаве.
Полученный по этому процессу продукт имеет следующий состав, г:
a) Амфотерицин В | 1,0 |
b) Соевое масло | 40,0 |
c) Очищенный яичный фосфатид | 2,4 |
d) Глицерин | 4,5 |
e) Гидроксид натрия | по потребности |
для регулирования рН | |
f) Вода | по потребности до 200 мл |
Стерилизованный продукт подвергают исследованиям на токсичность согласно деталям, приведенным в примере XI, и обнаруживают, что продукт вызывает токсичные симптомы кардиальной токсичности. Следовательно, добавление очищенного яичного фосфатида в масляную фазу не рекомендуется.
Парентеральный состав структурированной типа масло в воде эмульсии покрытого маслом амфотерицина В в следующих примерах обозначается как эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл).
Пример VII
Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, подвергают испытанию in-vitro на токсичность по отношению к эритроцитам человека (RBCs) наряду с обычным составом амфотерицина В, содержащим дезоксихолат натрия.
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: RBCs от обыкновенных доноров-мужчин.
Тест-материал: Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл), полученная согласно процессу и прописи примера I.
Сравнительный материал: обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл).
Планирование исследования: Кровь собирают в гепаризированные пробирки. Эритроциты (RBCs) выделяют центрифугированием при 450 g в течение 10 мин при 4°С. Плазму и лейкоцитную пленку удаляют и эритроциты (RBCs) промывают 3 раза фосфатно-солевым буферным раствором (PBS, рН 7,4) при 4°С перед диспергированием в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS). Затем подсчитывают на счетчике клеток Sysmex KX-21 и используют в день сбора. Для определения чувствительности эритроцитов (RBC) к амфотерицину В 2 мл клеточной суспензии (5×107 клеток/мл) в PBS инкубируют в течение 1 часа при 37°С с эмульсией амфотерицина В или обычным инъекционным раствором амфотерицина В (см.табл.1). Эритроциты (RBCs) центрифугируют в течение 5 мин при 1500 g и промывают 3 раза PBS. Осадок эритроцитов (RBCs) в пробирке, лизированный 2 мл воды, перемешивают и центрифугируют (1500 g, 5 мин), чтобы удалить оболочки. Гемоглобин измеряют на счетчике клеток. Высвобождение рассчитывают как разность между контрольными и обработанными клетками и выражают в процентах от содержания общего гемоглобина.
ТАБЛИЦА 1. Дозы составов амфотерицина В, исследованные in-vitro на токсичность по отношению к эритроцитам человека (RBCS) |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/л) |
1 | Контрольная | |
2 | Обычный состав (5 мг/мл) | 5, 50, 100, 200 |
3 | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 5, 50, 100, 200 |
Статистический анализ:
Полученные данные были проанализированы сравнением обработанных групп с негативной контрольной группой при использовании теста Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 2 Содержание гемоглобина в г/дл для составов амфотерицина В |
||
Доза (мг/л) | Процент гемолиза | |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | Эмульсия | |
5 | 77,5±0,0 | 2,04±0,0 |
50 | 100±0,0 | 4,08±0,0 |
100 | 100±0,0 | 4,18±0,82 |
200 | 100±0,0 | 9,49±4,48 |
Утечка гемоглобина увеличивается с увеличением концентраций амфотерицина В в обычном инъекционном растворе амфотерицина В и эмульсии (см. фиг.1). Для обычного инъекционного раствора амфотерицина В средняя утечка составляла 77,55% для 5 мг/л и 100% для 50 мг/л, 100 мг/л, 200 мг/л. Для эмульсии средняя утечка составляла 2,04% для 5 мг/л, 4,08% для 50 мг/л, 4,18% для 100 мг/л и 4,49% для 200 мг/л. Эмульсия амфотерицина В значительно менее токсична, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В при исследованных дозах (Р<0,05), см.табл.2.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, данные in vitro токсичности ясно указывают на то, что эмульсия амфотерицина В, приготовленная в примере I, менее токсична, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В, когда клетками-мишенями являются эритроциты человека (RBCs).
Пример VIII
Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), приготовленную согласно процессу и прописи примера I, подвергают исследованию in vitro токсичности у мышей наряду с обычным инъекционным раствором амфотерицина В, содержащим дезоксихолат натрия.
Исследование проводили со следующими целями:
Чтобы установить значения LD50 для указанных выше двух составов на основании исследований однократной дозы.
Чтобы определить влияние на токсичность для указанных выше 2 составов на основании исследований повторной дозы.
VIII-A) ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ОДНОКРАТНОЙ ДОЗЫ У МЫШЕЙ
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали женские особи мышей Swiss albino массой 20-22 г, полученные из питомника от Bharat & Vaccines Ltd (BSLV). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 8 животных в каждой группе, а именно на группы 1 и 2. Группа 1 получала различные дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В, группа 2 получала дозы эмульсии амфотерицина В.
ТАБЛИЦА 3 Дозы исследуемых составов амфотерицина в для исследования токсичности однократной дозы у мышей |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1 | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) | 5, 7, 5, 10, 15, 20 |
2 | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 375 |
Все группы получали инъекции внутривенно. Всех животных наблюдали в течение 72 часов, чтобы обнаружить признаки клинической токсичности и смертность. Процент смертности рассчитывали для всех доз.
Статистический анализ: Использовали способ анализа Probit для определения значений LD50 для всех составов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 4 Процент смертности для различных доз двух составов |
||
Группа | Доза (мг/кг) | Процент смертности |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 2,5 | 33,33 |
5 | 50 | |
7,5 | 66,67 | |
10 | 83,33 | |
15 | 100 | |
20 | 100 | |
Эмульсия амфотерицина В | 50 | 0 |
100 | 0 | |
150 | 0 | |
200 | 0 | |
250 | 16,67 | |
300 | 16,67 | |
350 | 33,33 | |
375 | 42,85 |
Из таблицы 4 видно, что обычный состав обычного инъекционного раствора амфотерицина В более токсичен, чем эмульсия амфотерицина В. Процент смертности для составов увеличивается в зависимости от дозы. Значения LD50 для 2 составов определяли способом анализа Probit. На фиг.2 представлен график зависимости процента смертности от дозы Vs для двух составов.
Состав | Определенный LD50 (мг/кг) |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 5 |
Эмульсия амфотерицина В | 432,62 |
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Эмульсия амфотерицина В, приготовленная в примере 1, имеет более высокое значение LD50 и менее токсична, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В.
VIII-B) ИССЛЕДОВАНИЯ ТОКСИЧНЫХ ПОВТОРНЫХ ДОЗ У МЫШЕЙ
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали женские особи мышей Swiss albino массой 20-22 г, поступившие из питомника от Bharat & Vaccines Ltd (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на три группы по 6 животных в каждой группе, а именно на группы 1, 2 и 3. Группа 1 получала чистый носитель эмульсии (контрольная), группа 2 получала различные дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В, группа 3 получала различные дозы эмульсии амфотерицина В.
ТАБЛИЦА 5 Дозы обычного состава амфотерицина В и исследуемой эмульсии амфотерицина в для исследования токсичности повторной дозы у мышей |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1 | Контрольная | носитель |
2 | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) | 1,5, 2,5 |
3 | Эмульсия амфотерицина (5 мг/мл) | 10, 20, 40 |
Все группы получали инъекции согласно таблице 5 ежедневно внутривенно. Контрольные группы получали максимальный объем носителя. Всех животных наблюдали, чтобы обнаружить признаки клинической токсичности. Массу тела регистрировали каждый второй день в течение 14 дней. Также животных наблюдали на смертность в течение 14 дней. Процент смертности рассчитывали для всех доз.
Статистический анализ: Полученные данные анализировали для сравнения изменения массы тела во время исследования. Такие изменения сравнивали между обработанными группами.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 6 Процент смертности для различных доз двух составов |
||
Группа | Доза (мг/кг) | Процент смертности |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 1,5 | 20 |
2,5 | 80 | |
Эмульсия амфотерицина В | 10 | 0 |
20 | 0 | |
40 | 30 | |
Контрольная | носитель | 0 |
Из таблицы 6 видно (см. также фиг.3), что обычный инъекционный раствор амфотерицина В более токсичен, чем эмульсия амфотерицина В. Процент смертности для составов увеличивался в зависимости от дозы. Для группы, обработанной носителем в течение 14 дней, наблюдалось отсутствие смертности. Для эмульсии амфотерицина В характерна меньшая токсичность, чем для обычного инъекционного раствора амфотерицина В даже при более высоких дозах.
ТАБЛИЦА 7 Средние массы тела при различных дозах для исследования токсичности при повторных дозах у мышей |
||||||||||
Группа | Доза мг/кг | Средняя масса тела±SDEV в GNS за 14 дней | ||||||||
D0 | D2 | D4 | D6 | D8 | D9 | D11 | D12 | D14 | ||
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 1,5 | 19,56±2,74 | 19,01±2,83 | 18,64±3,81 | 21,33±14,38 | 18,92±4,57 | 19,71±4,36 | 19,94±4,15 | 22,88±4,25 | 19,82±5,014 |
2,5 | 17,54±3,14 | 15,72±2,92 | 16,88±3,43 | 18,85±1,76 | 16,35±1,62 | 16,05±1,06 | 17,3±1,27 | 19,15±1,34 | 17,7±1,83 | |
Эмульсия амфотерицина В | 10 | 16,3±1,19 | 17±2,01 | 14,46±1,83 | 19,57±3,04 | 17,51±2,61 | 17,96±2,87 | 19,01±2,59 | 21,21±2,45 | 19,76±2,79 |
20 | 16,95±2,33 | 17,42±1,87 | 16,96±1,99 | 20,61±2,53 | 17,54±2,8 | 17,91±3,03 | 18,83±3,06 | 19,29±3,46 | 19,03±3,78 | |
40 | 19,87±2,83 | 18,96±3,36 | 16,43±2,19 | 19,95±2,56 | 17,23±2,75 | 17,53±2,83 | 17,93±2,65 | 19,38±3,01 | 17,88±3,00 | |
Контрольная | 0 | 18,74±1,97 | 17±2,11 | 16,42±3,12 | 16,98±2,87 | 20,86±3,96 | 20,08±4,56 | 21,24±4,39 | 22,6±4,90 | 22,74±4,97 |
D: указывает день наблюдения; SDEV указывает стандартное отклонение. |
В группе, обработанной обычным инъекционным раствором амфотерицина В, зарегистрировано снижение массы тела животных при 1,5 мг/кг и 2,5 мг/кг, а для эмульсии амфотерицина В - снижение массы тела животных от 20 мг/кг и 40 мг/кг (см. фиг.4). На шестой и восьмой дни масса тела мышей, обработанных дозой 20 мг/кг и 40 мг/кг эмульсии амфотерицина В, значительно меньше, чем у мышей, обработанных дозой 10 мг/кг эмульсии амфотерицина В (табл.7).
Гистопатологическое исследование показало, что имели место некоторые дегенеративные изменения в паренхиматозных клетках печени и почек, которые могут происходить из-за общего метаболизма у мышей. Старческие миофибриллы, вероятно, были результатом гипоксии при умерщвлении. В основном изменения были обратимого типа. Действие амфотерицина В больше проявлялось на печени и почках и в некоторой степени на сердце, вызывая очень резкие поражения. Интенсивность в основном зависит от дозы. Для обычного инъекционного раствора амфотерицина В поражения проявлялись при более низких уровнях доз.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Эмульсия амфотерицина В показала меньшую токсичность, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В.
VIII-C) ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ОДНОКРАТНОЙ ДОЗЫ У КРЫС
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали крыс любого пола Wistar albino массой 140-160 г, полученных из питомника от Bharat Serums Ltd & Vaccines (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 6 животных в каждой группе, а именно на группы 1 и 2. Группа 1 получала различные дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В, группа 2 получала дозы эмульсии амфотерицина В.
ТАБЛИЦА 8 Дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В и исследуемой эмульсии амфотерицина в для исследования токсичности однократной дозы у крыс |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1 | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (мг/мл) | 1,25; 2,5; 5 |
2 | Эмульсия амфотерицина В (мг/мл) | 50, 100, 150 |
Все группы получали инъекции внутривенно согласно таблице 8. Всех животных наблюдали в течение 72 часов, чтобы обнаружить признаки клинической токсичности и смертность. Процент смертности рассчитывали для всех доз.
Статистический анализ: Использовали способ анализа Probit для определения значений LD50 для всех составов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 9 Процент смертности для различных доз двух составов |
||
Группа | Доза (мг/кг) | Процент смертности |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 1,25 | 0 |
2,5 | 33,33 | |
5 | 100 | |
Эмульсия амфотерицина В | 50 | 0 |
100 | 0 | |
150 | 16,67 - через 24 ч 33,33 - через 48 ч 50 - через 72 ч |
Из таблицы 9 видно (см. также фиг.5), что обычный инъекционный раствор амфотерицина В более токсичен, чем эмульсия амфотерицина В. Процент смертности для составов увеличивается в зависимости от дозы. Значения LD20 для 2 составов определяли способом анализа Probit. Для эмульсии амфотерицина В 50%-ную смертность наблюдали через 72 часа. После 72 часов изменений массы тела не обнаружено.
Состав | Определенный LD50 (мг/кг) |
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 2,5-5 |
Эмульсия амфотерицина В | >100 |
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Эмульсия амфотерицина В менее токсична, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В.
VIII-D) ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ОДНОКРАТНОЙ ДОЗЫ У СОБАК
Данное исследование проводили с целью оценить токсичность и безопасность эмульсии амфотерицина В у собак.
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали двенадцать здоровых собак любого пола средней массы 10-15 кг. Животных содержали в стандартных условиях в Kennel с доступом к корму и воде, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 6 животных в каждой группе, а именно на группы 1 и 2. Группа 1 получала обычный инъекционный раствор амфотерицина В, группа 2 получала эмульсию амфотерицина В, приготовленную в примере I.
ТАБЛИЦА 10 Подробные данные о дозах обычного инъекционного раствора амфотерицина в и исследуемой эмульсии амфотерицина в для исследования токсичности однократной дозы у собак |
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1 | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) | 1 |
2 | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 1 |
Все группы получали инъекции согласно таблице 10, растворенные в 6-20 мл 5%-ной декстрозы внутривенно. Всех животных наблюдали на признаки клинической токсичности и в течение 21 дня после инъекций. Животных взвешивали при посещениях V0, V2, V4, V6 и V8. Кровь отбирали для гематологического и биохимического исследований (анализ функции печени и функции почек) при V0, V4 и V8.
График посещений:
V0 базисное посещение | V5 через 12 дней после V0 | |||||||||
V1 через 2 дня после V0 | V6 через 15 дней после V0 | |||||||||
V2 через 3 дня после V0 | V7 через 18 дней после V0 | |||||||||
V3 через 6 дней после V0 | V8 через 21 день после V0 | |||||||||
V4 через 9 дней после V0 | ||||||||||
Посещение | V0 | V1 | V2 | V3 | V4 | V5 | V6 | V7 | V8 | |
Введение | Х | Х | Х | Х | Х | Х | Х | Х | ||
лекарственного | ||||||||||
средства | ||||||||||
Гематология и | Х | Х | Х | |||||||
биохимия |
Статистический анализ:
Полученные данные анализировали для сравнения изменений параметров от базисной линии во время исследования. Изменения сравнивали между обработанными группами.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 11 Среднепроцентное изменение гематологических параметров от базисной линии при различных посещениях у собак |
|||||||||||
Группа | Процентное изменение гематологических параметров ±SD | ||||||||||
Посещение | RBC | Гемог лобин | CV | Гемат окрит | WBC (Общ,) | Нейтр офил | Лимф оцит | Моноцит | Эозин офил | Базофил | |
Обычный инъекционный раствор | V4 | -6,61±2,58 | -9,37±5,26 | -4,29-±3,75 | -10,46±4,77 | -14,68±16,77 | -11,37±4,07 | -26,86 ±10,81 |
-9,36±33,46 | 23,33±49,15 | 0,0±0,0 |
амфотерицина В | V8 | -10,24±2,38 | -21,68±2,15 | -7,31±4,29 | -16,91±4,95 | -13,66±6,93 | -15,07±6,23 | -30,02±13,96 | -23,13±37,5 | 6,11±4,83 | 0,0±0,0 |
Эмульсия амфотерицина В | V4 | -8,69±3,4 | -16,28±8,24 | -10,31±13,92 | -18,13±11,51 | -34,91±6,96 | -5,65±3,44 | -22,23±14,68 | 13,39±25,39 | 67,85±68,57 | 0,0±0,0 |
V8 | -14,7±5,63 | -10,9±4,77 | -12,57±6,26 | -25,45±13,77 | -32,7±8,52 | -9,21±7,65 | -21,84±18,71 | 0,69±2,95 | 25,19±52,32 | 0,0±0,0 | |
SD обозначает стандартное отклонение. |
Обнаружено, что все гематологические параметры показывают изменения от значений базисной линии в обеих группах (табл.11). Процентное падение количества лейкоцитов для эмульсии значительно выше, чем у обычного состава, но находится в пределах стандартного диапазона и, следовательно, не имеет клинического значения.
SD указывает стандартное отклонение.
Параметр функции печени (см. фиг.6 и табл.12), AST, показал увеличение 334,38% при V8 в группе обычного инъекционного раствора амфотерицина В, тогда как в группе эмульсии амфотерицина В параметр ограничен только 108,86%. Подобные результаты наблюдали для ALT и общего билирубина. Увеличение для обычной группы статистически значимо по сравнению с эмульсией.
Параметры функции почек (см. также фиг.7) значительно различались для группы обычного инъекционного раствора амфотерицина В. Отклонения для эмульсии амфотерицина В значительно меньше, чем у группы обычного инъекционного раствора амфотерицина В.
Нефротоксичность, первичная токсичность амфотерицина В, возникает в результате неселективного цитотоксического взаимодействия между амфотерицином В обычного инъекционного раствора амфотерицина В (содержащего дезоксихолат натрия) и холестерином клеток млекопитающего. Цитотоксичность млекопитающего ослабляется введением амфотерицина В в форме эмульсионного состава на основе липида. Это изменяет сродство амфотерицина В и уменьшает его селективный перенос в содержащие холестерин клетки млекопитающего.
ТАБЛИЦА 13 Средняя масса тела при различных дозах для исследования токсичности однократной дозы у собак |
||||||
Группа | Доза (мг/кг) | Средняя масса тела±SD В GMS для 14 дней V0 V2 V4 V6 V8 | ||||
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В | 1 | 15,0±3,85 | 14,33±3,38 | 14,0±3,17 | 13,66±3,12 | 13,166±3,12 |
Эмульсия амфотерицина В (BSVL) | 1 | 15,5±2,96 | 15,0±3,01 | 15,0±2,774 | 14,5±2,68 | 14,16±2,639 |
SD указывает стандартное отклонение |
Группа получавшая обычный инъекционный раствор амфотерицина В показала большее уменьшение массы тела у животных по сравнению с животными, получавшими эмульсию амфотерицина В (см. фиг.8 и табл.13).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Эмульсия амфотерицина В создает значительную защиту против гепатотоксичности и нефротоксичности по сравнению с обычным инъекционным раствором амфотерицина В.
Пример IX
Использовали эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, для оценки фармакокинетических параметров у кроликов по сравнению с обычным инъекционным раствором амфотерицина В.
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали мужские особи белых кроликов New Zealand массой 1,5-2,0 кг, полученных из питомника от Bharat Serum & Vaccines Ltd (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 3 животных в каждой группе, а именно на группы 1 и 2. Группы 1 и 2 получали обычный инъекционный раствор амфотерицина В и эмульсии амфотерицина В соответственно. Пробы крови отбирали на 5, 15, 30, 45 и 60 минутах и через 1, 2, 3, 4, 5, 24 и 48 часа после внутривенного введения однократной инъекции ударной дозы. Пробы центрифугировали при 3000-4000 об/мин для отделения плазмы. Плазму хранили при -20°С до анализа.
Способ введения: через вену наружного уха кролика
ТАБЛИЦА 14 Дозы составов амфотерицина в для фармакокинетических исследований у кроликов |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1 | Обычный инъекционный раствор амфотерицина | 1 |
В (5 мг/мл) | ||
2 | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 5 |
Анализ содержания амфотерицина В
Содержание амфотерицина В в плазме анализировали способом фазовой ВЭЖХ (HPLC) с использованием колонки С-18. Амфотерицин В выделяли из плазмы с использованием HPLC чистоты диметилсульфоксида и ацетонитрила в соотношении 1:3:1. Пробы центрифугировали при 3000 об/мин и супернатант инжектировали в колонку.
Статистический анализ:
Полученные данные анализировали для сравнения обработанных групп испытанием по t-тесту Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 15 Приведены фармакокинетические параметры двух составов |
|||
Время (час) | Концентрация плазмы (мкг/мл) | ||
Эмульсия амфотерицина В (5 мг/кг) | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (1 мг/кг) | ||
0,083 | 0,387±0,176 | 0,499±0,133 | |
0,25 | 0,196±0,101 | 0,274±0,076 | |
0,5 | 0,119±0,018 | 0,313±0,118 | |
0,75 | 0,103±0,0065 | 0,463±0,0 | |
1 | 0,099±0,0078 | 0,245±0,007 | |
2 | 0,099±0,0 | 0,216±0,0035 | |
3 | 0,094±0,0 | 0,365±0,159 | |
4 | 0,093±0,0 | 0,24±0,081 | |
5 | 0,092±0,0 | 0,175±0,012 | |
24 | 0,0±0,0 | 0,173±0,155 | |
48 | 0,0±0,0 | 0,066±0,0 | |
Параметры | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (1 мг/кг) | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/кг) | |
СМАХ (мкг/мл) | 0,576±0,006 | 0,387±0,176 | |
Тmax(Ч) | 0,083±0,0 | 0,083±0,0 | |
T1/2 (Ч) | 1,89±0,728 | 6,622±10,63 | |
AUC (мкг-ч/мл) | 1,851±0,836 | 1,115±1,558 | |
Vd(л) | 1,47±1,26 | 26,144±18,522 | |
Cl (мл/ч) | 540,25±28,01 | 16062,31±12510,82 |
Не обнаружено значительной разницы в значениях СМАХ, Tmax, T1/2, Vd между двумя составами. Что касается выведения, то эмульсию выводили из плазмы со значительно более высокой скоростью, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В (Р<0,05). Это указывает на то, что распределение эмульсии в тканях происходит более быстро, чем обычного инъекционного раствора амфотерицина В (см. табл.15 и фиг.9).
Пример X
Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, использовали для исследования распределения в органах у мышей по сравнению с обычным инъекционным раствором амфотерицина В.
Настоящее исследование осуществляли со следующими целями:
Чтобы установить характер распределения в органах у мышей для двух составов из исследований однократной дозы.
Чтобы определить характер распределения в органах у мышей для двух составов из исследований повторной дозы.
Х-А) ИССЛЕДОВАНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ В ОРГАНАХ ОДНОКРАТНОЙ ДОЗЫ У МЫШЕЙ
МАТЕРИАЛ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали женские особи мышей Swiss albino массой 20-22 г, полученных из питомника от Bharat Serums & Vaccines Ltd (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Способ введения: внутривенно
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 20 животных в каждой группе, а именно на группы 1 и 2. Группа 1 получала обычный инъекционный раствор амфотерицина В в дозе 1 мг/кг, а группа 2 получала эмульсию амфотерицина В в дозе 5 мг/кг (табл.16). Каждый раз пробу брали у 4 мыши. Образцы органов, а именно печени, легких, почек, селезенки и мозга, иссекали в конце соответствующих временных периодов, т.е. 0,5, 1, 2, 4, 24 часа. Органы сразу замораживали, чтобы прекратить ферментативные реакции. Органы взвешивали и добавляли трехкратный объем воды. Затем гомогенизировали.
ТАБЛИЦА 16 Дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В и исследуемой эмульсии амфотерицина в для исследования распределения в органах однократной дозы у мышей. |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1. | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) | 1 |
2. | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 5 |
Анализ содержания амфотерицина В
Метанол добавляли к гомогенату в соотношении 3:1. Затем центрифугировали при высокой частоте оборотов 13000-14000 об/мин. Супернатант затем инжектировали в колонку ВЭЖХдля анализа амфотерицина В.
Статистический анализ:
Полученные данные анализировали для сравнения обработанных групп по способу t-теста Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 17 Приведены параметры распределения в органах для двух составов |
|||
Орган | Параметр | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (1 мг/кг) | Эмульсия (5 мг/кг) |
Печень | СМАХ (мкг/мл) | 3,53 | 26,95 |
Тmax (ч) | 1,0 | 24 | |
Т1/2 (ч) | 14,5 | 34,61 | |
AUC (мкг-ч/мл) | 79,97 | 1227,68 | |
Cl (мл/ч) | 12,51 | 4,07 | |
Селезенка | СМАХ (мкг/мл) | 2,02 | 29,3 |
Тmax (ч) | 0,5 | 24 | |
T1/2 (ч) | 48,98 | -113,88* | |
AUC (мкг-ч/мл) | 88,58 | 1836 | |
Cl (мл/ч) | 11,29 | -2,72* | |
Легкие | СМАХ (мкг/мл) | 1,29 | 1,64 |
Тmax (ч) | 2,0 | 4 | |
Tl/2 (ч) | 48,87 | 212,63 | |
AUC (мкг-ч/мл) | 89,69 | 510,93 | |
Cl (мл/ч) | 11,15 | 9,786 | |
Почка | СМАХ (мкг/мл) | 1,15 | 0,437 |
Тmax (ч) | 0,5 | 4 | |
T1/2 (ч) | 59,27 | 6,69 | |
AUC (мкг-ч/мл) | 75,45 | 0,632 | |
Cl (мл/ч) | 13,26 | 7911,39 | |
Знак * указывает накопление амфотерицина В в тканях. |
По сравнению с обычным инъекционным раствором амфотерицина В эмульсия амфотерицина В показывает более высокие уровни во всех органах за исключением почек (см. фиг.10а-10d и табл.17). Более высокие значения полупериода существования и низкие скорости выведения эмульсии дополнительно подтверждают эти данные. Таким образом, обнаружено, что поглощение органами амфотерицина В из эмульсии выше, чем из обычного инъекционного раствора амфотерицина В, что статистически существенно для селезенки (Р<0,05).
Нефротоксичность является основным недостатком, ассоциированным с лечением амфотерицином В, и из-за высоких уровней амфотерицина В в почках. Из AUC(0-∞) очевидно, что эмульсия достигает значительно более низких уровней амфотерицина В, чем обычный инъекционный раствор амфотерицина В (Р<0,05). Также эмульсия быстрее выводится из почек, что объясняет низкую токсичность и более высокие значения LD50 по сравнению с составом обычного инъекционного раствора амфотерицина В.
Несмотря на уменьшение концентрации в плазме, уровни в печени и селезенке продолжают увеличиваться. Были сообщения о таких наблюдениях для липосом, а это позволяет предположить, что липосомальные лекарственные средства в ретикулоэндотелиальных тканях не находятся в свободном равновесии с плазмой, как нелипосомальные лекарственные средства (Feilding, RM, et al, 1998). Это, возможно, объясняет высокую степень удерживания амфотерицина В в ретикулоэндотелиальных тканях в случае эмульсии по сравнению с обычным инъекционным раствором амфотерицина В.
Х-В) ИССЛЕДОВАНИЯ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВТОРНОЙ ДОЗЫ В ОРГАНАХ У МЫШЕЙ
МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБ
Тест-система: Для исследования использовали женские особи мышей Swiss albino массой 20-22 г, полученные из питомника от Bharat Serums & Vaccines Ltd (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно процессу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Планирование исследования: Животных разделяли на две группы по 24 животных в каждой группе, на группы 1 и 2. Группа 1 получала дозу 1 мг/кг обычного инъекционного раствора амфотерицина В, а группа 2 получала дозу 5 мг/кг эмульсии амфотерицина В. (табл.18) 12 животным вводили дозы в течение 7 дней и другим 12 животным - в течение 14 дней. Печень, легкие, почки и селезенку иссекали через 6 час после последней дозы. Органы сразу замораживали, чтобы прекратить какие-либо ферментативные реакции. Органы взвешивали и добавляли трехкратный объем воды относительно массы органов. Затем гомогенизировали.
Способ введения: внутривенно
ТАБЛИЦА 18 Дозы обычного инъекционного раствора амфотерицина В и исследуемой эмульсии амфотерицина В для исследования распределения однократной дозы в органах у мышей |
||
№ группы | Группа | Доза (мг/кг массы тела) |
1. | Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (5 мг/мл) | 1 |
2. | Эмульсия амфотерицина В (5 мг/мл) | 5 |
Анализ содержания амфотерицина В
Содержание амфотерицина В в плазме анализировали способом ВЭЖХ (HPLC) с использованием колонки С-18. Амфотерицин В выделяли из плазмы с использованием метнола HPLC чистоты при соотношении плазмы и метанола 1:3. Образцы центрифугировали при 3000 об/мин и супернатант инжектировали в колонку.
Статистический анализ:
Полученные данные анализировали для сравнения обработанных групп испытанием по t-тесту Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ТАБЛИЦА 19 приведены параметры распределения в органах для двух составов |
||||
Орган | Концентрация в органах (мкг/г) | |||
Обычный инъекционный раствор амфотерицина В (1 мг/кг) | Эмульсия (5 мг/кг) | |||
7 дней | 14 дней | 7 дней | 14 дней | |
Печень | 15,22±4,34 | 15,33±3,45 | 65,34±16,14 | 63,45±9,86 |
Селезенка | 4,79±1,04 | 5,05±0,51 | 109,08±15,5 | 75,4±11,32 |
Почки | 2,21±0,27 | 2,53±0,39 | 2,71±0,5 | 1,97±0,65 |
Легкое | 3,66±0,75 | 3,03±0,65 | 18,12±6,96 | 11,32±3,08 |
Представляет интерес наблюдение, что концентрация в тканях незначительно увеличивается от 7-й дозы до 14-й дозы (см. фиг.11а и 11b), и это согласуется с приведенными в литературе данными (Olsen SJ. et al, 1991). В противоположность этому не наблюдается случаев смерти в обработанной эмульсией амфотерицина В группе несмотря на повышенные уровни амфотерицина В в тканях. Обычный инъекционный раствор амфотерицина В показывал случаи смерти в период исследования.
Как можно увидеть, уровни амфотерицина В в почках одинаковы для обычного инъекционного раствора амфотерицина В и эмульсии несмотря на большую наблюдаемую разницу в нефротоксичности (см.табл.19). Возможная причина этого может заключаться в том, что амфотерицин В определяли в органах независимо от того, присутствует ли он как комплекс с липидами или как свободное лекарственное средство. В случае обычного инъекционного раствора амфотерицина В амфотерицин В присутствует преимущественно в свободной форме и, следовательно, нефротоксичен. Но в случае эмульсии на основе липида амфотерицин В, возможно, существует как комплекс с липидами, который не проявляет токсичности в тканях.
Амфотерицин В, будучи амфифильным лекарственным средством, существует как растворимый мономер или как самоассоциированные олигомеры, и при концентрации выше критической он образует мицеллы. Любые факторы, модифицирующие равновесие между различными видами амфотерицина В в водной среде, могут изменять его общую активность и токсичность. Tabosa Do Egito (1996) рассматривает эмульсию амфотерицина В, действующую как резервуар мономерной формы амфотерицина В. Этот высокостабильный состав легко высвобождает только ограниченные количества мономера свободного амфотерицина В. Эта форма, вероятно, может связываться только с эргостеролом грибковых клеток и проявлять пониженное взаимодействие с холестерином клеток млекопитающего (Tabosa Egito, et al., 1996). Следовательно, эмульсия хотя и показывает уровни, аналогичные обычному инъекционному раствору амфотерицина В, не столь сильно токсична.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Эмульсию амфотерицина В приготовляли с целью:
1. Улучшить профиль безопасности
2. Обеспечить рентабельную стоимость
Исследования токсичности показали, что безопасная граница эмульсии в действительности превышает таковую у обычного инъекционного раствора амфотерицина В. Это можно объяснить формой, в которой эмульсия сама по себе присутствует в грибковых клетках-мишенях. Обычный инъекционный раствор амфотерицина В высвобождает амфотерицин В в очень больших количествах и высвобождающиеся мономеры ассоциируются, образуя олигомеры, которые связываются с клетками млекопитающего, также приводя к тяжелой токсичности. Эмульсия, напротив, не способна достичь таких высоких концентраций в плазме вследствие быстрого фагоцитоза ретикулоэндотелиальной системой (RES) и показывает медленное постепенное высвобождение мономеров. Это объясняет селективное действие эмульсии на грибковые клетки и, следовательно, низкую токсичность (Tabosa Do Egito, ES, et al., 1996). Низкие уровни в плазме и быстрое распределение эмульсии амфотерицина В в органах также составляет преимущество над обычным инъекционным раствором амфотерицина В с точки зрения возможного достижения требуемой цели. Кроме того, эмульсия амфотерицина В является рентабельным по стоимости продуктом по сравнению с другими составами на основе липидов, типа препаратов липидного комплекса и липосомных.
Таким образом, эмульсия амфотерицина В настоящего изобретения представляет собой многообещающий состав для целевого лечения грибковых инфекций.
Пример XI
Эмульсию амфотерицина В, приготовленную в примере IV, примере V и примере VI, исследовали in-vivo на токсичность у мышей.
Исследование токсичности однократной дозы у мышей
Тест-система: Для исследования использовали женские особи мышей Swiss albino массой 20-22 г, полученные из питомника Bharat Serums & Vaccines Ltd (BSVL). Животных обеспечивали стандартным кормом и водой Aquaguard™, по желанию.
Тест-материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную в примере IV, примере V и примере VI, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Сравнительный материал: Эмульсию амфотерицина В (5 мг/мл), полученную согласно способу и прописи примера I, вводили внутривенно как инъекцию ударной дозы.
Все группы получали инъекции внутривенно. Всех животных наблюдали на признаки клинической токсичности и смертности в течение 72 часов. Процент смертности рассчитывали для всех доз.
Наблюдения:
Группы, которые получали пробы из примера IV, примера V и примера VI, обнаружили симптомы кардиальной токсичности, такие как тяжелый респираторный дистресс-синдром, локальное поражение, абдоминальный дистресс и возбуждение. Однако эти токсические симптомы не наблюдались в группе, которая получала пробы, приготовленные согласно способу и прописи примера I.
Преимущества изобретения:
Приготовление амфотерицина В как структурированной эмульсии типа масло в воде для парентерального введения по способу настоящего изобретения значительно снижает его токсичность и обеспечивает стерильность без изменения его противогрибковой активности.
Амфотерицин В, введенный в масляную фазу эмульсии, полученной по способу настоящего изобретения, сохраняет стабильность в течение всего процесса приготовления, в том числе при стерилизации в автоклаве и после этого в процессе срока хранения или использования.
Средний размер масляной капли в парентеральном составе структурированной типа масло в воде эмульсии покрытого маслом амфотерицина В, приготовленном по способу настоящего изобретения, регулируют в оптимальной степени, так что состав преимущественно распределяется в ретикулоэндотелиальной системе, создавая низкую концентрацию в плазме.
Claims (14)
1. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, имеющий LD50 не менее 400 мг/кг при одном вводе дозы и не менее 40 мг/кг при повторном вводе дозы у мышей, содержащий
a) масляную фазу (до 30% мас./об. состава), выбранную из группы растительных масел, таких как соевое масло, сезамовое масло, сафлоровое масло;
b) амфотерицин В (0,05-1% мас./об. состава), диспергированный в масляной фазе;
c) воду водной фазы;
а) модифицирующие тоничность агенты, выбранные из группы соединений, таких как глицерин, маннит, декстроза, растворенные в водной фазе, и
е) эмульгатор, такой как натуральные фосфатиды (до 3% мас./об. состава), диспергированный в водной фазе.
2. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по п.1, отличающийся тем, что масляная фаза составляет приблизительно 10-20% мас./об. состава.
3. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.1 и 2, отличающийся тем, что использованным растительным маслом является соевое масло.
4. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по п.3, отличающийся тем, что содержание соевого масла составляет приблизительно 20% мас./об. состава.
5. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что содержание амфотерицина В составляет приблизительно 0,5% мас./об. состава.
6. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что использованным натуральным фосфатидом является очищенный яичный фосфатид.
7. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по п.6, отличающийся тем, что содержание очищенного яичного фосфатида составляет приблизительно 1,2% мас./об. состава.
8. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что использованным модификатором тоничности является глицерин.
9. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по п.8, отличающийся тем, что содержание глицерина составляет приблизительно 2,25% мас./об. состава.
10. Парентеральный состав покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что эмульсия содержит амфотерицин В (0,5% мас./об. состава), масляную фазу - соевое масло (20% мас./об. состава), эмульгатор - очищенный яичный фосфатид (1,2% мас./об. состава), модифицирующий тоничность агент - глицерин (2,25% мас./об. состава) и воду (до 100% по объему состава).
11. Способ получения парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии, имеющего LD50 по меньшей мере 400 мг/кг у мышей, по любому из пп.1-10, предусматривающий
i) диспергирование амфотерицина В в масляной фазе;
ii) растворение модифицирующего тоничность агента в воде водной фазы;
iii) диспергирование эмульгатора в водной фазе;
iv) регулирование рН водной фазы до приблизительно 8-11;
v) добавление масляной фазы в водную фазу при перемешивании для получения грубой структурированной эмульсии;
vi) гомогенизацию грубой структурированной эмульсии до частиц размером менее 2 мкм;
vii) фильтрование, заполнение гомогенизированной структурированной эмульсией стеклянных емкостей в атмосфере азота, закрывание стеклянных емкостей, герметизацию закрытых стеклянных емкостей и стерилизацию герметизированных заполненных емкостей в автоклаве.
12. Способ получения парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по п.11, отличающийся тем, что масляную фазу и/или водную фазу поддерживают при температуре до 75°С в течение процесса эмульгирования.
13. Способ получения парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.11-12, отличающийся тем, что для регулирования между 8 и 11 рН водной фазы, содержащей эмульгатор - яичный фосфатид, добавляют раствор гидроксида натрия в воде.
14. Способ получения парентерального состава покрытого маслом амфотерицина В в форме структурированной эмульсии по любому из пп.11-13, отличающийся тем, что он предусматривает диспергирование амфотерицина В в соевом масле; получение водной фазы добавлением глицерина в воду; последующее диспергирование очищенного яичного фосфатида в водной фазе; регулирование рН водной фазы до 10,8; добавление соевого масла, содержащего диспергированный амфотерицин В, в водную фазу, содержащую диспергированный яичный фосфатид, при перемешивании для получения грубой структурированной эмульсии; гомогенизацию грубой структурированной эмульсии до частиц размером менее 2 мкм; фильтрование через 2-микронный фильтр, заполнение гомогенизированной структурированной эмульсией стеклянных емкостей в атмосфере азота, закрывание стеклянных емкостей, герметизацию закрытых стеклянных емкостей и стерилизацию герметизированных заполненных емкостей в автоклаве.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IN223/MUM/2000 | 2000-06-22 | ||
IN223MU2000 IN188843B (ru) | 2000-06-22 | 2000-06-22 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003101391A RU2003101391A (ru) | 2004-05-10 |
RU2275899C2 true RU2275899C2 (ru) | 2006-05-10 |
Family
ID=11097226
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003101391/04A RU2275899C2 (ru) | 2000-06-22 | 2001-06-19 | Структурированная эмульсия амфотерицина b с низкой токсичностью для парентерального введения и способ ее получения |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7053061B2 (ru) |
EP (1) | EP1313449B1 (ru) |
JP (1) | JP4804702B2 (ru) |
KR (1) | KR100812764B1 (ru) |
CN (1) | CN100502834C (ru) |
AT (1) | ATE355825T1 (ru) |
AU (2) | AU8008401A (ru) |
DE (1) | DE60127140T2 (ru) |
ES (1) | ES2283423T3 (ru) |
IN (1) | IN188843B (ru) |
RU (1) | RU2275899C2 (ru) |
WO (1) | WO2001097778A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200300330B (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BRPI0515181A (pt) * | 2004-09-13 | 2008-07-22 | Bharat Serums & Vaccines Ltd | composição de óleo-em-água estéril para administração intravenosa, uso de um monoglicerìdeo e processo de preparação de uma composição para administração intravenosa |
KR20100017928A (ko) * | 2007-05-25 | 2010-02-16 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 치료제의 경구 투여를 위한 제제 및 관련 방법 |
EP2344198B1 (en) * | 2008-09-27 | 2020-11-04 | Jina Pharmaceuticals Inc. | Lipid based pharmaceutical preparations for topical application |
US20100209512A1 (en) * | 2009-02-13 | 2010-08-19 | Stable Solutions Llc | Particle size-structured parenteral dispersions |
WO2011050457A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | The University Of British Columbia | Stabilized formulation for oral administration of therapeutic agents and related methods |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4707470A (en) * | 1985-05-17 | 1987-11-17 | Smithkline Beckman Corporation | Polyene antibiotic emulsion formulation |
GB8714652D0 (en) * | 1987-06-23 | 1987-07-29 | Davis S S | Drug emulsion |
US5364632A (en) * | 1989-04-05 | 1994-11-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Medicinal emulsions |
CA2013755C (en) * | 1989-04-05 | 1993-11-30 | Simon Benita | Medicinal emulsions |
GB8919172D0 (en) * | 1989-08-23 | 1989-10-04 | Univ Nottingham | Useful composition |
JPH04173736A (ja) * | 1990-11-06 | 1992-06-22 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 乳化剤 |
US5534502A (en) * | 1990-11-06 | 1996-07-09 | Nippon Shinyaku Co. Ltd. | Process for producing fat emulsion |
GB9426104D0 (en) * | 1994-12-23 | 1995-02-22 | Merck Sharp & Dohme | Use of surfactants and emulsions |
JPH1160491A (ja) * | 1997-08-25 | 1999-03-02 | Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd | アムホテリシンb含有製剤 |
DE10036871A1 (de) * | 2000-07-28 | 2002-02-14 | Pharmasol Gmbh | Dispersionen zur Formulierung wenig oder schwer löslicher Wirkstoffe |
-
2000
- 2000-06-22 IN IN223MU2000 patent/IN188843B/en unknown
-
2001
- 2001-06-19 WO PCT/IN2001/000119 patent/WO2001097778A2/en active IP Right Grant
- 2001-06-19 US US10/312,298 patent/US7053061B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-19 JP JP2002503255A patent/JP4804702B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-19 EP EP01958366A patent/EP1313449B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-19 AU AU8008401A patent/AU8008401A/xx active Pending
- 2001-06-19 DE DE60127140T patent/DE60127140T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-19 ES ES01958366T patent/ES2283423T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-19 AU AU2001280084A patent/AU2001280084B2/en not_active Ceased
- 2001-06-19 KR KR1020027017441A patent/KR100812764B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-06-19 CN CNB018143318A patent/CN100502834C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-19 AT AT01958366T patent/ATE355825T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-06-19 RU RU2003101391/04A patent/RU2275899C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-01-13 ZA ZA200300330A patent/ZA200300330B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2001097778A8 (en) | 2003-06-26 |
EP1313449B1 (en) | 2007-03-07 |
AU8008401A (en) | 2002-01-02 |
JP4804702B2 (ja) | 2011-11-02 |
DE60127140T2 (de) | 2007-12-13 |
CN1447682A (zh) | 2003-10-08 |
KR100812764B1 (ko) | 2008-03-12 |
IN188843B (ru) | 2002-11-09 |
ATE355825T1 (de) | 2007-03-15 |
KR20030039331A (ko) | 2003-05-17 |
EP1313449A2 (en) | 2003-05-28 |
ES2283423T3 (es) | 2007-11-01 |
JP2004525068A (ja) | 2004-08-19 |
AU2001280084B2 (en) | 2005-11-17 |
DE60127140D1 (de) | 2007-04-19 |
WO2001097778A3 (en) | 2002-05-30 |
US20030206929A1 (en) | 2003-11-06 |
WO2001097778A2 (en) | 2001-12-27 |
CN100502834C (zh) | 2009-06-24 |
US7053061B2 (en) | 2006-05-30 |
ZA200300330B (en) | 2004-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tamilvanan | Oil-in-water lipid emulsions: implications for parenteral and ocular delivering systems | |
US11446247B2 (en) | Liposome composition and pharmaceutical composition | |
EP0260811B1 (en) | Phospholipid particles encapsulating polyene antibiotics for the treatment of systemic fungal infections | |
EP1059941B1 (en) | Pharmaceutical compositions and their use | |
CA2442539C (en) | Method and composition for solubilising a biologically active compound with low water solubility | |
EP0225130A2 (en) | Liposome composition | |
AU2002312777A1 (en) | Method and composition for solubilising a biologically active compound with low water solubility | |
JP2006508126A (ja) | 薬学的製剤のタンパク質安定化されたリポソーム製剤 | |
JPH08511245A (ja) | 薬剤搬送ビヒクルとしての固体脂肪ナノエマルジョン体 | |
WO2009091894A1 (en) | Ophthalmic preparations | |
US20110020428A1 (en) | Gel-stabilized liposome compositions, methods for their preparation and uses thereof | |
CN111867562A (zh) | 不溶性药物的水性制剂 | |
JP2019510048A (ja) | 週1回又は隔週1回の投与に適したリラグルチドの粘弾性ゲル | |
RU2275899C2 (ru) | Структурированная эмульсия амфотерицина b с низкой токсичностью для парентерального введения и способ ее получения | |
US6288113B1 (en) | Angiogenesis promoters | |
EP0598116B1 (en) | Fat emulsion | |
US20140212477A1 (en) | Hemoglobin-containing liposome and method for producing same | |
MX2012012855A (es) | Emulsion inyectable de un agente hipnotico sedante. | |
AU2001280084A1 (en) | Amphotericin B structured emulsion | |
Fire | Development of liposomal nanoencapsulation of lumefantrine with phosphatidylcholine/Tweens system | |
JPS63501569A (ja) | アルファトコフェロ−ルをベ−スとした小胞体 | |
JPH04173736A (ja) | 乳化剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190620 |