CN1280856A - 一组稳定生物活性物质组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一组稳定生物活性物质的组合物及其制备方法,现有技术中至今没有人提到用物质凝胶态的三维网状结构稳定蛋白质、多肽的生物活性。本发明是把生物活性的物质加入到水凝胶中,使之稳定保存活性。该方法简单、经济、适用,可以制成不同的剂型。

Description

一组定生物活性物质组合物及其制备方法

本发明涉及一组组合物及其制备方法，具体地说涉及一组稳定生物活性物质的组合物及其制备方法。

随着现代生物技术的发展，特别是分离纯化技术的提高，生产得到高纯度的生物技术药物已成为现实，但由于开发生物技术药物中的另一大难题，即生物活性药物不稳定的问题仍未很好解决，使得生物技术药物的制剂十分单调，现阶段大多为冻干制剂。

生物技术药物由于本身固有的物理化学性质、结构复杂，易受外界物理和化学的因素及酶等因素的影响，致使在分离、纯化、制剂、分析、释放、贮存过程中广泛存在着不稳定问题。目前的研究表明：该类物质不稳定的主要表现有(1)化学不稳定，如水解、氧化、二硫键的断裂或交换、脱酰胺作用和β-消去等，(2)物理不稳定，如变性、聚集、沉淀、吸附等。因此。该类物质在生产和贮存中，根据不同的生物活性物质，通常采用不同的稳定比方法以保持活性，并常需低温保存。目前常采取的稳定化方法有：1、化学修饰用以提高结构稳定性；2、加入稳定剂如：糖、多元醇、氨基酸、盐、聚合物、金属离子、螯合剂、表面活性剂和缓冲溶液等，用以提高活性物质在非天然条件的稳定性；3、固化，采取冷冻干燥、喷雾干燥等工艺脂水，以提高液体活性物质的稳定性。这些方法，在多种生物活性物质的制剂中已应用，但这些方法仍存在缺点：如化学修饰特异性强，适应性不大，成本提高，有时毒副作用增加，疗效降低：某些添加剂有潜在的副作用，如液体蛋白质制剂常用的人血清白蛋白(HAS)，存在病毒污染的危险和抗体的形成：干燥固化工艺降低生物活性等。尤其是这些方法的特异性较大，对不同的活性物质需要筛选不同种类的稳定剂。

现有技术中，有人用1％的明胶溶液提高蛋白质药物尿激酶溶液的稳定性(Mark C．Manning，et al．Biotechno1ogy and Bioengineering 48：506，1995)。也有人用常用的甘油明胶阴道栓剂基质作为赋形剂制备多种药物的栓剂。Yogesh Sadhale等人也曾应用单油酸甘油酯(GMO)凝胶来降低胰岛素的聚集，保持胰岛素的活性(Yogesh Sadhale，Jaymin C．Shah．Intemational Jourmal of Pharmaceutics191(1999)51-74)。但上述目的均不是应用明胶、胶原蛋白凝胶来提高蛋白质、多肽药物的稳定性。

本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一组稳定生物活性物质组合物和简单、经济、非特异性的方法，以及该组合物与药剂学可接受的一种或一种以上赋形剂和／或附加剂制备的各种凝胶型制剂。

本发明通过以下措施来实现：

一组稳定生物活性物质的组合物，含有：

(a)生物活性物质

(b)水凝胶

(a)和(b)的重量比例为(a)和(b)形成的组合物仍为凝胶态的所有比例。

生物活性物质是蛋白质、多肽、核酸类药物。水凝胶是a明胶与亲水性介质形成的水凝胶；或b胶原蛋白与亲水性介质形成的水凝胶；或c、明胶、胶原蛋白的混合物与亲水性介质形成的水凝胶。形成水凝胶的亲水性介质可以为水、磷酸盐缓冲液或其它生理相容的亲水性的液体物质。稳定生物活性物质的方法是：将生物活性物质溶解或分散于水凝胶中。

一组稳定生物活性物质的组合物，加入一种或一种以上的药剂学中可接受剂型赋形剂和／或附加剂制成各种凝胶型的剂型。例如：凝胶型的注射剂、软膏剂、眼膏剂。如组合物注射剂中，注射用水为水性介质、加入甘油或NaCl等作为渗透压调节剂、缓冲液，稳定溶液的pH；软膏剂或眼膏剂中加入苄醇作为抑菌剂，甘油等为保湿剂、卡波沫940用三乙醇胺中和后作为软膏剂的基质。

形成水凝胶的亲水性介质可以为水、磷酸盐缓冲液或其它亲水性的液体物质。

本发明相比现有技术具有以下优点：本发明利用生理相容性的水凝胶的三维立体结构来稳定蛋白质、多肽等生物活性物质的空间立体构象，从而稳定其生物活性，因此，该方法适用于多种生物活性物质，包括蛋白质、多肽、核酸、疫苗类药物，该方法简单、经济、适用。特别是凝胶型注射剂具有缓释作用。

该方法已成功的应用于干扰素(包括：人白干扰素，α、β、γ干扰素的各种亚型)。

在申请本专利的同时，也申请了另一发明专利，发明名称为“组凝胶型脂质体及其组合物与应用”。

本发明所用的IU为国际单位

下面8个实施例对本发明作详细说明

实旋例1

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)组合物组成                   每100克rhIFNα-2b             0．5-30×10⁸IU10％的明胶凝胶         加至100克制备方法：

(1)．10％明胶凝胶的制备：无菌条件下，将灭菌明胶20克溶胀于180mL注射用水中。40℃水浴加热溶解，补加入注射用水至200克，趁热滤过(0．8μm滤膜)。

(2)．组合物制备：取上述明胶凝胶80克，40℃水浴加热使成溶胶，搅拌下快速加入rhIFN-α-2b，补加上述明胶凝胶至100克，混合匀匀，趁热用0．22μm滤膜过滤，滤液冷却至凝胶态，即得。

实施例2

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(注射剂型)组成                  每100克rhIFNα-2b            0．5-30×10⁸IU明胶                  2．5克NaCl                 0．425克Na₂HPO₄           0．129克NaH₂PO₄           0．022克注射用水              加至100克制备方法：

无菌条件下，将NaCl、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄溶于3／4量的注射用水中，将灭菌的明胶溶胀于上述盐溶液中。40℃加热溶解，搅拌下快速加入rhIFNα-2b，加入注射用水调节至处方全量，混合均匀，趁热0．22μm微孔滤膜过滤，分装于2ml的玻璃安瓶中，冷却至凝胶态，即得。

实施例3

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(注射剂)组成                 每100克rhIFNα-2b           0．5-30×10⁸IU明胶                 2克甘油                 2．5克注射用水             加至100克生产方法：

无菌条件下，将灭菌的明胶溶胀于3／4注射用水中。40℃水浴加热溶解，加入甘油，搅拌下加入rhIFNα-2b，加入注射用水调节至处方全量，混合均匀，趁热0．22μm微孔滤膜过滤，分装于2ml的玻璃安瓶中，冷却至凝胶态，即得。

实施例4

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(软膏剂)组成                每100克rhIFNα-2b          0．5-30×10⁸IU明胶                15克甘油                15克苄醇                1克注射用水            加至100克制备方法：

无菌条件下，将灭菌的明胶溶胀于3／4量的注射用水中。40℃加水浴热溶解，加入灭菌甘油，搅拌下加入rhIFN-2b，加入苄醇和注射用水调节至100克，混合均匀，冷却至凝胶态，即得。

实施例5

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(软膏剂)组成                  每100克rhIFNα-2b            0．5-30×10⁸IU明胶                  2克甘油                  15克卡波沫940             1克三乙醇胺              1．35克苄醇                  1．0克注射用水              加至100克生产方法：

卡波沫940溶于50mL注剩用水中，加入三乙醇胺形成基质，115℃30分灭菌，无菌条件下将灭菌的明胶溶胀于注射用水中，40℃水浴加热溶解，加入灭菌甘油，混合均匀，，搅拌下加入rhIFNα-2b，与卡波沫凝胶混匀，加入苄醇、注射用水调节至处方全量，混合均匀，即得。

实施例6

基因重组人α-2b干扰素(rhIFN-α-2b)凝胶组合物(眼膏剂)组成                   每100克rhIFNα-2b             0．5-30×10⁸IU明胶                   1．5克NaCl                  0．425克Na₂HPO₄            0．129克NaH₂PO₄            0．022克苄醇                   0．5克注射用水               加至100克制备方法：

无菌条件下，将NaCl、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄溶于3／4量的注射用水中，将灭菌的明胶溶胀于上述盐溶液中。40℃加热溶解，搅拌下快速加入rhIFN-α-2b，加入苄醇、注射用水调节至处方全量，混合均匀，趁热0．22μm微孔滤

实施例7

基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(注射剂)组成                   每100克rhIFNα-2b             0．5-30×10⁸IU2％胶原蛋白             70mL0．1N NaOH           适量NaCl                  0．425克Na₂HPO₄             0．129克NaH₂PO₄             0．022克注射用水               加至100mL制备：将NaCl、Na₂HPO₄和NaH₂PO₄溶于注射用水中，加入胶原蛋白溶液，混合均匀，用0．1N NaOH调节溶液的pH7．2，加入rhIFNα-2b，混合均匀，过滤除菌，无菌分装入5mL的一次性注射器中，每支1mL，置于37℃保温20min，即得

实施例8基因重组人α-2b干扰素(rhIFNα-2b)凝胶组合物(注射剂)组成                 每100克rhIFNα-2b           0．5-30×10⁸IU1％胶原蛋白           50mL0．1N NaOH         适量明胶              2．0克注射用水         加至100mL制备：将明胶溶胀于注射用水中，40℃溶解，胶原蛋白溶液，用0．1N NaOH调节溶液的pH7．2，加入rhIFNα-2b，混合均匀，不断搅拌下，快速加入30℃的明胶溶胶中，搅拌均匀，过滤除菌，无菌分装入5mL的一次性注射器中，每支1mL，冷却至凝胶态，即得

按实施例2和4的处方及制备方法分别制备含rhIFN-α-2b 0．5×10⁶IU／g，18×10⁶IU／g，30×10⁶IU／g的凝胶型注射和软膏剂，置于4、20℃的条件下贮藏，12月取样，用细胞毒抑制法(中国生物制品规程)(1995版)检测干扰素的生物活性。结果列于表1表1

                       活性(×10⁶IU／g)实施例号(×10⁶IU／g)         4℃          20℃2(0．5)                      0．5         0．42(18)                        18．3        17．12(30)                        28．6        25．04(0．5)                      0．4         0．44(18)                        17．5        17．14(30)                        29．2        24．5

为比较的目的，照实施例1的方法制备3×10⁶IU／g，18×10⁶IU／g，30×10⁶IU／g的rhIFNα-2b凝胶组合物。另制备rhIFNα-2b的溶液剂，4℃存放3个月测定生物活性。结果列于表2rhIFNα-2b的溶液剂的组成rhIFNα-2b                      5×10⁸IU人血白蛋白                      1克0．15M的磷酸盐缓冲液(pH7．2)    加至100mL表2组别                           4℃存放3个月活性3×10⁶IU／g，          2．8×10⁶IU／g，组合物18×10⁶IU／g            18．1×10⁶IU／g30×10⁶IU／g            28．7×10⁶IU／g溶液剂5×10⁶IU／ml            1．1 ×10³IU／mL

Claims (5)

1、一组稳定生物活性物质的组合物，其特征在于它含有：

(a)生物活性物质；

(b)水凝胶；

(a)和(b)的重量比例为(a)和(b)形成的组合物仍为凝胶态的所有比例。

2、根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：生物活性物质是蛋白质、多肽、核酸类药物。

3、根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：水凝胶是

a、明胶与亲水性介质形成的水凝胶；或

b、胶原蛋白或亲水性介质形成的水凝胶；或

c、明胶、胶原蛋白的混合物与亲水性介质形成的水凝胶。

4、根据权利要求1的组合物，其特征在于该组合物和与一种或一种以上药剂学中可接受的剂型赋形剂和／或附加剂制备的各种凝胶型的制剂：凝胶型的注射剂、软膏剂、眼膏剂。

5、一组稳定生物活性物质的方法，其特征在于：将生物活性物质溶解或分散于水凝胶中。