JP2001354639A - 複数のアミジノ基を有する化合物および製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】効率良くかつ安全にＤＮＡを細胞や病患部へ導
入できる製剤およびその構成成分を得る。 【解決手段】下記式（１）または（２）で示す、１価お
よび／または２価の基を２以上有する複数のアミジノ基
を有する化合物、およびそれを構成成分とする製剤。 【化１】 【化２】 （上記式（１）および（２）において、Ｘ、Ｙは−
（Ｏ）_i −（ＣＨ₂ ）_j −（Ｏ）_k −を表し、ｉ、ｋは
各々独立して０または１の整数を表し、ｊは０または１
〜２０までの整数である。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な複数のアミ
ジノ基を有する化合物およびそれを構成成分とする製剤
に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、遺伝子を用いて治療を行うことを
目的に様々な技術が開発されている。目的とする遺伝子
を発現させる方法としては、ウィルスベクター、非ウィ
ルスベクター、物理的導入法等が開発されているが、ウ
ィルスベクターは導入効率が高いが副作用が強く、非ウ
ィルスベクターと物理的導入法は副作用が少ないが導入
効率が低いという問題点を抱えている。そこで、非ウィ
ルスベクターあるいは物理的導入法の導入効率を向上さ
せるための手法としてＪ．ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌ
ｅａｓｅ ５２，１９１−２０３（１９９８）等の報告
があるが十分な効果は得られていない。

【０００３】このような目的のために、リポソーム、エ
マルジョン、リピッドマイクロスフェアなどの閉鎖小包
をＤＮＡの細胞内への移動、すなわち、トランスフェク
ションに応用しようとする研究が近年盛んに行われてい
る。これら閉鎖小包は一般的にリン脂質あるいはその誘
導体、またはステロールやリン脂質以外の脂質等を基本
膜構成成分として調製される。しかし、これら基本構成
成分のみを用いた手法では、閉鎖小包同士の凝集、体内
における滞留性の低下、トランスフェクションの低効
率、などの様々な障害が存在し、実用化が困難であっ
た。

【０００４】そこで、閉鎖小包の細胞接着性の向上、お
よび／またはトランスフェクションの促進を目的とし
て、ステアリルアミン等のカチオン性物質を少量配合す
ることにより、閉鎖小包体の表面を生理的ｐＨ範囲でカ
チオン化する試みも行われ、配合可能なカチオン性物質
としては米国特許第４８９７３５５号、米国特許第５３
３４７６１号、日本特許公報特開平２−２９２２４６
号、日本特許公報特開平４−１０８３９１号が報告され
ているが十分な効果は得られていない。

【０００５】また一方で、ポリリシン、ポリエチレンイ
ミン、コラーゲンなどとＤＮＡで形成した複合体を用い
てトランスフェクションを行なう、閉鎖小包の形態をと
らない手法の研究も行なわれている。しかしながら十分
な効果は得られていない。

【０００６】従って、効率良くかつ簡便、そして安全に
ＤＮＡを細胞内へ導入できる製剤や手法の開発が強く望
まれている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、核
酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体を細胞
へ効率良くかつ簡便、そして安全にトランスフェクショ
ンしうる製剤、およびそれらを形成しうる物質を提供す
ることである。また本発明の目的は、薬剤または核酸、
ポリヌクレオチド、遺伝子及びその類縁体等と複合体を
形成することによりそれらの細胞内の安定性を高めうる
化合物を提供することである。また本発明の目的は、非
ウィルスベクターや物理的導入法に上記複合体を組み合
わせ使用することで薬効または遺伝子発現効率を向上さ
せることである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上述した課題は以下の本
発明により解決される。 （ａ）下記式（１）または（２）で示される、１価およ
び／または２価の基を２以上有する複数のアミジノ基を
有する化合物またはその塩。

【化６】

【化７】 （式（１）および式（２）において、Ｘ、Ｙは同一でも
異なっていてもよい−（Ｏ）_i −（ＣＨ₂ ）_j −（Ｏ）
_k −を表し、ｉ、ｋは各々独立して０または１の整数を
表し、ｊは０または１〜２０までの整数である。） （ｂ）下記式（３）で示される（ａ）の複数のアミジノ
基を有する化合物またはその塩。

【化８】 （ただし、Ｘ、Ｙは同一でも異なっていてもよい−
（Ｏ）_i −（ＣＨ₂ ）_p −（Ｏ）_k −を表し、ｉ、ｋは
各々独立して０または１の整数を表し、ｐは０または１
〜７までの整数を表し、Ａは置換基を有してもよいベン
ゼン環である。） （ｃ）下記式（４）で示される（ａ）の複数のアミジノ
基を有する化合物またはその塩。

【化９】 （ここで、ｎは、２または３であり、Ａは、置換基を有
していてもよいベンゼン環である。） （ｄ）下記式（５）で示される（ａ）の複数のアミジノ
基を有する化合物またはその塩。

【化１０】 （ここで、ｊは、０または１〜２０までの整数であり、
ｍは、２〜５０までの整数であり、Ｒは、水素原子また
は炭素数１〜２０までのアルキル基であり、Ｒ’は、３
−アミジノ−５−ヒドロキシフェノキシ基または炭素数
１〜２０までのアルキル基である。） （ｅ）核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁
体から選択される少なくとも１つと（ａ）ないし（ｄ）
のいずれかの複数のアミジノ基を有する化合物またはそ
の製剤学的に許容される塩を有効成分として含有する複
合体。 （ｆ）（ｅ）の複合体に加えて、さらに脂質を含有する
脂質複合体。 （ｇ）（ｅ）または（ｆ）の複合体に加えて、さらに他
の薬剤を含有する製剤。 （ｈ）前記他の薬剤が、抗炎症剤、ステロイド剤、抗癌
剤、酵素剤、酵素阻害剤、抗生物質、抗酸化剤、脂質取
り込み阻害剤、ホルモン剤、アンジオテンシン変換酵素
阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の
増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、ケミカルメデイ
エーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖または抑制
剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖
阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦
活剤、抗ウイルス剤あるいはラジカルスカベンジャーで
ある（ｆ）の製剤。 （ｉ）前記他の薬剤が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標
識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内
診断薬である（ｆ）の製剤。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明の化合物は、新規化合物で
あり、実施例に示すように容易に合成することができ
る。但し、本発明は実施例に限定されるものでない。上
記式（１）ないし（５）で表される複数のアミジノ基を
有する化合物は、自体公知の分離・精製手段（例えば、
クロマトグラフィー、再結晶) などにより単離採取する
ことができる。

【００１０】上記式（１）ないし（５）で表される複数
のアミジノ基を有する化合物の好ましい塩としては、塩
酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸
塩、トルエンスルホン酸塩などが挙げられるが、本発明
はこれらに限定されるものではない。

【００１１】上記式（１）、式（２）および式（４）に
おけるＸ、Ｙにおいて、ｉ、ｋは各々独立して０または
１の整数を表し、ｊは０または１〜２０までの整数であ
る。すなわち、ＸおよびＹは、Ｏ、若しくは、メチル、
エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘ
キシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ
−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデ
シル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキ
サデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−オクタデシル、ｎ−
ノナデシル、ｎ−イコシル、若しくは一方の末端にカル
ボニル基を有する前記メチルないしｎ−ノナデシルのい
ずれか、または両方の末端にカルボニル基を有する前記
メチルないしｎ−オクタデシルのいずれかである。

【００１２】上記式（３）のＸ、Ｙにおいて、ｉ、ｋは
各々独立して０または１の整数を表し、ｐは０または１
〜７までの整数である。すなわち、ＸおよびＹは、Ｏ、
若しくは、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｎ
−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、若しくは一
方の末端にカルボニル基を有する前記メチルないしｎ−
ヘキシルのいずれか、または両方の末端にカルボニル基
を有する前記メチルないしｎ−ペンチルのいずれかであ
る。好ましくはＸ、Ｙはｉ、ｋ、ｐが０である単結合、
−ＣＨ₂ −Ｏ−、または−Ｏ−である。

【００１３】上記式（３）および式（４）において、Ａ
は置換基を有してもよいベンゼン環であって、置換基と
して、具体的には、アミジノ基、ニトロ基、アミジノフ
ェノキシ基、アミジノフェニル基からなる群から選択さ
れる置換基を１または複数有してよい。

【００１４】上記式（５）において、ｊは１〜２０まで
の整数であり、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチ
ル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−
オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、
ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ
−ペンタデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−ヘプタデシ
ル、ｎ−オクタデシル、ｎ−ノナデシル、ｎ−イコシル
のいずれかを表す。Ｒは水素原子、またはメチル、エチ
ル、プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシ
ル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デ
シル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシ
ル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキサ
デシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−オクタデシル、ｎ−ノ
ナデシル、ｎ−イコシルであり、Ｒ’は３−アミジノ−
５−ヒドロキシフェノキシ基、またはメチル、エチル、
プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、
ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシ
ル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシル、
ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキサデシ
ル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−オクタデシル、ｎ−ノナデ
シル、ｎ−イコシルである。

【００１５】本発明の化合物はこれに限定されるもので
はないが、好ましくは、薬剤または核酸、ポリヌクレオ
チド、遺伝子及びその類縁体等との複合体として供給す
る。本発明の化合物は、水等の生理学的に許容しうる溶
媒に溶解し、薬剤または核酸、ポリヌクレオチド、遺伝
子及びその類縁体等に添加することによって、それらと
複合体を形成することができる。また、本発明の化合物
は、複合体を形成することによって、それらの薬剤また
は核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子及びその類縁体等を
保護することができる。

【００１６】該複合体の細胞内での安定性の点から本発
明の複数のアミジノ基を有する化合物は、上記式
（１）、式（２）および式（４）のＸ、Ｙにおけるｊ、
および式（５）におけるｊは０または１〜２０であり、
好ましくは１〜１０であることが望ましい。より好まし
くは、上記式（１）、式（２）および式（４）のＸにお
けるｊ、および式（５）におけるｊは３〜８である。す
なわち、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−
ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチ
ル、ｎ−ノニル、ｎ−デシルであることが好ましく、プ
ロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ
−ヘプチル、ｎ−オクチルであることがより好ましい。
また、式（５）のｍは８〜１５であることが好ましい。
一方、式（３）において、Ｘ、Ｙは好ましくは、ｉ、
ｋ、ｐが０である単結合、−ＣＨ₂ −Ｏ−または−Ｏ−
である。そして、本発明の複数のアミジノ基を有する化
合物が核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子及びその類縁体
等と複合体を形成する場合に、両者の存在割合は、以下
に述べる投与形態あるいは薬剤の種類によって異なる
が、一般に、複数のアミジノ基を有する化合物のアミジ
ノ基１個に対して、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子及
びその類縁体等が包含する塩基に着目した場合に１０〜
１００塩基、好ましくは２０〜３０塩基となる割合で複
合体を調製することが発現効率の点から望ましい。

【００１７】本発明の化合物と、薬剤または核酸、ポリ
ヌクレオチド、遺伝子及びその類縁体等との複合体は、
例として以下のような投与形態をとることができるが、
本発明はこれらに限定されるものではない。

【００１８】（Ａ）非ウィルスベクターと組み合わせる
投与形態本発明の複合体の構造としては様々な形態が考
えられ、限定する必要はないが、特にその内部に薬物を
高濃度封入することのできる潜在的機能を有する、巨大
分子、微集合体、微粒子、微小球、ナノ小球、リポソー
ムおよびエマルジョンのうちより少なくとも一つ以上か
らなることが望ましく、その粒径は０．０２〜２５０μ
ｍ、とりわけ０．０５〜０．４μｍの大きさが好まし
い。

【００１９】本発明の複合体を上記形態で投与する場
合、細胞内への導入効率の面から、上記式（５）におい
ては、Ｒは好ましくは炭素数が１０〜１６のｎ−アルキ
ル基であることが好ましく、より好ましくは、炭素数が
１２〜１５のｎ−アルキル基である。すなわちｎ−デシ
ル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシル、
ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキサデシ
ルであることが好ましく、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシ
ル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシルであることが
より好ましい。一方、Ｒ’は、その炭素数とｊの和が１
〜２０となるｎ−アルキル、好ましくはその炭素数とｊ
との和が１０〜１６であるｎ−アルキル、より好ましく
はその炭素数とｊとの和が１２〜１５となるｎ−アルキ
ルである。

【００２０】上記複合体における本発明のアミジン化合
物とその他の構成成分、すなわち脂質との存在比は、以
下に述べる投与形態またはその他の構成成分の種類ある
いは内封する薬剤の種類によって異なるが、一般に、ア
ミジン化合物量が複合体中の１０〜５０ｍｏｌ％、好ま
しくは２０〜３０ｍｏｌ％であることが細胞内への導入
効率および複合体の安定性の面から望ましい。

【００２１】本発明において、複合体の構成成分として
は、上記の形態を形成できるものであれば特にその配合
に限定する必要はないが、その安全性や、生体内におい
て安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導体、
リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安定化
剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望まし
い。

【００２２】リン脂質としては、ホスファチジルコリン
（＝レシチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファ
チジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジル
イノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等
の天然あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法に
したがって水素添加したもの等を挙げることができる。
安定化剤としては、膜流動性を低下させるコレステロー
ルなどのステロール、あるいはグリセロール、スクロー
スなどの糖類が挙げられる。酸化防止剤としては、トコ
フェロール同族体すなわちビタミンＥなどが挙げられ
る。トコフェロールには、α、β、γ、δの４個の異性
体が存在するが本発明においてはいずれも使用できる。

【００２３】その他の表面修飾剤としては、親水性高分
子やグルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶
性多糖類の誘導体が挙げられる。前記親水性高分子とし
ては、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラ
ン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン- 無
水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル- 無水マ
レイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロー
ス、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキ
ストリン、ペクチン、カラギーナンなどが挙げられる。
その中でもポリエチレングリコールは血中滞留性を向上
させる効果が顕著である。なお、前記親水性高分子の分
子量は、１，０００〜７，０００であるのが好ましい。
また、前記親水性高分子は、長鎖脂肪族アルコール、ス
テロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリ
セリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結合させた誘
導体を用いることによって、疎水性化合物部位を複合体
（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入することができ
る。そのことにより、複合体表面に親水性高分子を存在
させることができる。本発明において具体的に用いるこ
とができる親水性高分子誘導体としては、ポリエチレン
グリコール−フォスファチジルエタノールアミン等が挙
げられる。

【００２４】本発明の複合体は常法によって容易に得る
ことができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内に
上記式（１）ないし式（５）で示される複数のアミジノ
基を有する化合物およびリン脂質等の他の構成成分を、
クロロホルム等の有機溶媒により混合し、有機溶媒を留
去後真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄膜を形成
させる。次に、当該フラスコ内に薬物を加え、激しく攪
拌することにより、リポソーム分散液を得る。得られた
リポソーム分散液を遠心分離し、上清をデカンテーショ
ンし封入されなかった薬物を除去することにより、製剤
を分散液として得ることができる。また、上記の各構成
成分を混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させる
ことにより得ることもできる。

【００２５】（２）ハウジングと組み合わせる投与形態 本発明の複合体は生体親和材料を用いたハウジングと組
み合わせて使用することができる。生体親和材料として
は、例えば、コラーゲン、ゼラチン、フィブリン、ヒア
ルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、キチ
ン、キトサン、アガロース、りん酸カルシウム、ポリプ
ロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレー
ト、またはグリコール酸、乳酸もしくはアミノ酸の重合
体もしくはこれらの共重合体、またはこれら生体親和材
料の２種類以上の混合物が考えられる。

【００２６】（３）物理的導入法と組み合わせる投与形
態 物理的導入方法としては、シリンジ等による直接投与、
パーティクルガン、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９９，２
６１４−６（１９９９）等で発表されているエレクトロ
ポレーションに代表される電流を用いる方法、Ｈｕｍａ
ｎ ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ １１，１５２１−８（２
０００）等で発表されている超音波を用いる方法のほ
か、圧力、レーザー光等を用いる方法が考えられる。

【００２７】いずれの投与形態においても、本発明の複
合体は診断および／または治療の目的に応じて薬学的に
許容し得る他の薬剤を含めてもよい。このような薬剤と
しては、（例えば、抗炎症剤、ステロイド剤、抗癌剤、
酵素剤、酵素阻害剤、抗生物質、抗酸化剤、脂質取り込
み阻害剤、ホルモン剤、アンジオテンシン変換酵素阻害
剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖
・遊走阻害剤、抗凝固剤、血小板凝集阻害剤、ケミカル
メデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖また
は抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細
胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、
免疫賦活剤、抗ウイルス剤あるいはラジカルスカベンジ
ャー等が例示される。本発明の複合体にこれらの薬剤を
含めることにより、それらを効率よく目的部位へ投与す
ることも可能である。

【００２８】例えば、抗癌剤の例としては、シクロホス
ファミド、イホスファミド、塩酸ナイトロジェンマスタ
ード−Ｎ−オキシド、チオテパ、ブルスファン、カルボ
コン、塩酸ニムスチン、ラニムスチン、メルファラン、
トシル酸インプロスルファン、ダカルバジン、塩酸プロ
カルバジン、シタラビン、シタラビンオクスファート、
エノシタビン、メルカプトプリン、チオイノシン、フル
オロウラシル、ドキシフルリジン、テガフール、メトト
レキサート、カルモフール、ヒドロキシカルバミド、硫
酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシ
ン、エトポシド、クロモマイシンＡ₃ 、塩酸ダウノルビ
シン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アラクルビシン、ピラ
ルビシン、塩酸エピルビシン、ダクチノマイシン、塩酸
ミトキサントロン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマ
イシン、マイトマイシンＣ、ネオカルノスタチン、Ｌ−
アスパラギナーゼ、アセグラトンミトプロニトール、デ
キストラン硫酸ナトリウム、酢酸オクトレオチド、シス
プラチン、カルボプラチン、クエン酸タモキシフェン、
酢酸メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチ
ンナトリウム、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリ
ン、塩酸イリノテカンなどが挙げられる。

【００２９】抗生物質の例としては、ベンジルペニシリ
ンカリウム、ベンジルペニシリンベンザチン、フェノキ
シメチルペニシリンカリウム、フェネチシリンカリウ
ム、クロキサシリンナトリウム、フルクロキサシリンナ
トリウム、アンピシリン、トシル酸スルタミシリン、塩
酸バカンピシリン、塩酸タランピシリン、レナンピシリ
ン、ヘタシリンカリウム、シクラシリン、アモキシシリ
ン、塩酸ピブメシリナム、アスポキシシリン、カルベニ
シリンナトリウム、カリンダシリンナトリウム、スルベ
ニシリンナトリウム、チカルシリンナトリウム、ピペラ
シリンナトリウム、セファロリジン、セファロチンナト
リウム、セファゾリンナトリウム、セファピリンナトリ
ウム、セフラジン、セファレキシン、セファトリジンプ
ロピレングリコール、セフロキサジン、セファクロル、
セファドロキシル、塩酸セフォチアム、塩酸セフォチア
ムヘキセチル、セフロキシムナトリウム、セフロキシム
アキセチル、セファマンドールナトリウム、セフジニ
ル、塩酸セフェタメトピポキシル、セフチプテン、セフ
メタゾールナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セ
フォテタンナトリウム、セフミノクスナトリウム、セフ
プペラゾンナトリウム、セフピラミドナトリウム、セフ
スロジンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフ
ォペラゾンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、塩
酸セフメノキシム、セフトリアキソンナトリウム、セフ
タジジム、セフピミゾールナトリウム、セフィキシム、
セフテラムピポキシル、セフゾナムナトリウム、セフポ
ドキシプロキセチル、セフォジジム、硫酸セフピロム、
ラタモキセフナトリウム、フロモキセフナトリウム、イ
ミペネム、シラスタチンナトリウム、アズトレオナム、
カルモナムナトリウム、硫酸ステレプトマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸フラジオマイシン、硫酸アミカシ
ン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸パロモマイシン、硫酸ペ
カナマイシン、硫酸リポスタマイシン、硫酸ジベカシ
ン、トブラマイシン、硫酸シソマイシン、硫酸ミスロノ
マイシン、硫酸アストロマイシン、硫酸ネチルマイシ
ン、硫酸イセパマイシン、硫酸アルベカシン、エリスロ
マイシン、キタサマイシン、アセチルキタサマイシン、
リン酸オレアンドマイシン、ジョサマイシン、アセチル
スピラマイシン、ミデカマイシン、酢酸ミデカマイシ
ン、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロ
マイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸オキシテトラサ
イクリン、メタリン酸テトラサイクリン、塩酸デメチル
クロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、塩酸
ドキシサイクリン、塩酸ミノサイクリン、クロラムフェ
ニコール、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、
パルミチン酸クロラムフェニコール、チアンフェニコー
ル、塩酸アミノ酢酸チアンフェニコール、硫酸コリスチ
ン、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム、硫酸ポリ
ミキシンＢ、バシトラシン、塩酸バンコマイシン、塩酸
リンコマイシン、クリンダマイシン、塩酸スペクチノマ
イシン、ホスホマイシンナトリウム、ホスホマイシンカ
ルシウムなどが挙げられる。

【００３０】酵素剤の例としては、キモトリプシン、結
晶トリプシン、ストレプトキナーゼ、ストレプトドルナ
ーゼ、ヒアルロニダーゼ、ウロキナーゼ、ナサルプラー
ゼ、アルテプラーゼ、塩化リゾチーム、セミアルカリプ
ロティナーゼ、セラペプターゼ、チソキナーゼ、デュテ
プラーゼ、バトロキソビン、プロナーゼ、プロメライン
などが挙げられる。

【００３１】抗酸化剤の例としては、トコフェロール、
アスコルビン酸、尿酸などが挙げられる。

【００３２】抗炎症剤の例としては、サリチル酸コリ
ン、サザピリン、サリチル酸ナトリウム、アスピリン、
ジフルニサル、フルフェナム酸、メフェナム酸、フロク
タフェニン、トルフェナム酸、ジクロフェナクナトリウ
ム、トルメチンナトリウム、スリンダク、フェンブフェ
ン、フェルビナクエチル、インドメタシン、インドメタ
シンファルネシル、アセメタシン、マレイン酸プログル
メタシン、アンフェナクナトリウム、ナブメトン、イブ
プロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェン
アキセチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、プロチジ
ン酸、プラノプロフェン、フェノプロフェンカルシウ
ム、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ロキソプロフ
ェンナトリウム、アルミノプロフェン、ザルトプロフェ
ン、フェニルブタゾン、クロフェゾン、ケトフェニルブ
タゾン、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカ
ム、塩酸チアラミド、塩酸チノリジン、塩酸ベンジダミ
ン、エピリゾール、エルモファゾンなどが挙げられる。

【００３３】ステロイド剤の例としては酢酸コルチゾ
ン、ヒドロコルチゾン（リン酸エステル、酢酸塩）、酪
酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリ
ウム、プレドニゾロン（アセテート、サクシネート、第
三級ブチル酢酸エステル、リン酸エステル）、メチルプ
レドニゾロン（アセテート）、コハク酸メチルプレドニ
ゾロンナトリウム、トリアムシノロン、トリアムシノロ
ンアセトニド（酢酸トリアムシノロン）、デキサメタゾ
ン（リン酸エステル、酢酸塩、リン酸ナトリウム塩、硫
酸エステル）、パルミチン酸デキサメタゾン、ベタメタ
ゾン（リン酸塩、２ナトリウム塩）、酢酸パラメタゾ
ン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸ハロプレドン、プロ
ピオン酸クロベタゾール、ハルシノニド、プロピオン酸
ベクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾ
ン、酢酸コルチゾンなどが挙げられる。

【００３４】アンジオテンシン変換酵素阻害剤の例とし
ては、アラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸テモカプ
リル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリ
ル、シラザプリル、マレイン酸エナラプリル、リシノプ
リルなどが挙げられる。血管拡張剤の例としては、テオ
フィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、アミノ
フィリン、コリンテオフィリン、プロスタグランジン、
プロスタグランジン誘導体、アルプロスタジルアルファ
デクス、アルプロスタジル、リマプロストアルファデク
ス、パパベリン、シクランデラート、シンナリジン、フ
マル酸ベンシクラン、マレイン酸シネパジド、塩酸ジラ
ゼプ、トラピジル、塩酸ジフェニドール、ニコチン酸、
イノシトールヘキサニコチネート、クエン酸ニカメター
ト、酒石酸ニコチニックアルコール、ニコチン酸トコフ
ェロール、ヘプロニカート、塩酸イソクスプリン、硫酸
バメタン、塩酸トラリゾン、メシル酸ジヒドロエルゴト
キシン、酒石酸イフェンプロジル、塩酸モキシシリト、
ニセルゴリン、塩酸ニカルジピン、ニルバジピン、ニフ
ェジピン、塩酸ベニジピン、塩酸ジルチアゼム、ニソル
ジピン、ニトレンジピン、塩酸マニジピン、塩酸バルニ
ジピン、塩酸エホニジピン、塩酸ベラパミル、塩酸トリ
メタジジン、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、
アラセプリル、塩酸デラプリル、シラザプリル、リシノ
プリル、塩酸ベナゼプリル、塩酸ヒドララジン、塩酸ト
ドララジン、ブドララジン、カドララジン、インダパミ
ド、塩酸カルボクロメン、エフロキサート、塩酸エタフ
ェノン塩酸オキシフェドリン、ニコランジル、亜硝酸ア
ミル、硝酸イソソルビドなどが挙げられる。

【００３５】平滑筋細胞遊走・増殖抑制剤の例として
は、ヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低
分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫
酸などが挙げられる。

【００３６】血小板凝集阻害剤の例としては、塩酸チク
ロピジン、シロスタゾール、イコサペント酸エチル、ベ
ラプロストナトリウム、塩酸サルプグレラート、バトロ
キソビン、ジピリダモールなどが挙げられる。

【００３７】抗凝固剤の例としては、ヘパリンナトリウ
ム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパ
リンカルシウム、デキストラン硫酸、ワルファリンカリ
ウム、アルガトロバンなどが挙げられる。

【００３８】ケミカルメディエーター遊離抑制剤の例と
しては、トラニラスト、フマル酸ケトフェチン、塩酸ア
ゼラスチン、オキサトミド、アンレキサノクス、レピリ
ナストなどが挙げられる。

【００３９】免疫抑制剤の例としては、シクロスポリン
などが挙げられる。

【００４０】抗ウイルス剤の例としては、アシクロビ
ル、ガンシクロビル、ジダノシン、ジドブジン、ソリブ
ジン、ビダラビンなどが挙げられる。

【００４１】また、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核
医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断
薬も同様に目的部位へ投与することも可能である。

【００４２】例えば、Ｘ線造影剤の例としては、アミド
トリゾ酸メグルミン、イオタラム酸ナトリウム、イオタ
ラム酸メグルミン、ガストログラフィン、ヨーダミドメ
グルミン、リピオドールウルトラフルイド、アジピオド
ンメグルミン、イオキサグル酸、イオトロクス酸メグル
ミン、イオトロラン、イオパノ酸、イオパミドール、イ
オヘキソール、イオベルソール、イオポダートナトリウ
ム、イオメプロール、イソペーク、ヨードキサム酸など
が挙げられる。

【００４３】

【実施例】次に実施例、試験例を挙げて本発明をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に
限定されるものではない。 （実施例１） １，２，３−トリス（４−アミジノフェニル）ベンゼン
の合成 ４−シアノアセトフェノン３．００ｇを無水エタノール
２０ｍＬに溶解し、これに四塩化シラン１０ｍＬを加え
室温で３時間撹拌した後、水を加えて反応を停止させ、
塩化メチレンで抽出してこの溶液を硫酸マグネシウム上
で乾燥した。溶媒を減圧下留去した後、四塩化炭素およ
びエタノールで洗浄し１，２，３−トリス（４−シアノ
フェニル）ベンゼン０．８８ｇを得た。１，２，３−ト
リス（４−シアノフェニル) ベンゼン０．８５ｇを無水
メタノール２０ｍＬに懸濁させ、これに塩化水素ガスを
２時間導入し、室温で２４時間撹拌した。メタノールと
塩化水素を減圧下留去して、得られた固体をメタノール
−ジエチルエーテルで再結晶した。ついでこの結晶をメ
タノール２０ｍＬに懸濁させ、アンモニアガスを２時間
導入し、室温で４８時間撹拌した。メタノールとアンモ
ニアを減圧下留去して、得られた固体をメタノール−ジ
エチルエーテルで再結晶し、１，２，３−トリス（４−
アミジノフェニル) ベンゼン０．１０ｇを得た。このも
のの機器分析データは式（６）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ８．３１−７．３７（ｍ，２４Ｈ）

【化１１】

【００４４】（実施例２） ３，４−ビス（４−アミジノベンジルオキシ) ベンズア
ミジン三メシル酸塩の合成 ６０％水素化ナトリウム０．８９ｇとＤＭＦ１０ｍＬの
混合物に３，４−ジヒドロキシベンゾニトリル１．００
ｇのＤＭＦ溶液２０ｍＬを滴下した後、α−ブロモ−ｐ
−トルニトリル２．９０ｇのＤＭＦ溶液２０ｍＬを滴下
した。室温で３０分撹拌した後、水を加えて反応を停止
させ、生じた結晶を濾過、水洗し、塩化メチレンに溶解
して硫酸マグネシウム上で乾燥した。ｎ−ヘキサンを加
えて結晶化させ、これを濾取して３，４−ビス（４−シ
アノベンジルオキシ) ベンゾニトリル１．０１ｇを得
た。３，４−ビス（４−シアノベンジルオキシ) ベンゾ
ニトリル１．００ｇを出発物質として、実施例１と同様
にしてアミジノ化を行なったのち、メシル酸で処理し
て、３，４−ビス（４−アミジノベンジルオキシ) ベン
ズアミジン三メシル酸塩０．７１ｇを得た。このものの
機器分析データは式（７）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．３４（ｄ，Ｊ＝２３．１Ｈｚ，８Ｈ），９．２１
（ｄ，Ｊ＝２６．８Ｈｚ，４Ｈ），８．０２−７．２２
（ｍ，１１Ｈ），５．４３（ｓ，４Ｈ），２．５４
（ｓ，９Ｈ）

【化１２】

【００４５】（実施例３） ３，５−ビス［（４−アミジノフェノキシ) メチル] ベ
ンズアミジン三塩酸塩の合成 ５−ブロモ−ｍ−キシレン５．００ｇと青酸銅（Ｉ）
２．８３ｇをＤＭＦ５ｍＬ中で４時間加熱還流した後、
水を加えて反応を停止させ、生じた固体を濾取した。こ
れにエチレンジアミン６ｍＬ及び水２０ｍＬを加えた
後、ベンゼンで抽出を行ない、水洗後シリカゲルカラム
クロマトグラフィーを用いて３，５−ジメチルベンゾニ
トリル２．５３ｇを単離した。３，５−ジメチルベンゾ
ニトリル１．００ｇ，Ｎ−ブロモコハク酸イミド２．７
２ｇ及び過酸化ベンゾイル０．０９ｇを四塩化炭素中で
２時間加熱還流した後濾過して、濾液を減圧下濃縮し
た。これに４−シアノフェノール１．８２ｇ及び炭酸カ
リウム５．２６ｇを加え、アセトン中で１７時間加熱還
流した後濾過し、濾液をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーで処理して３，５−ビス［（４−シアノフェノキ
シ) メチル] ベンゾニトリル０．２７ｇを単離した。
３，５−ビス［（４−シアノフェノキシ) メチル] ベン
ゾニトリル０．２７ｇを出発物質として、実施例１と同
様にしてアミジノ化を行なったのち、塩酸で処理して、
３，５−ビス［（４−アミジノフェノキシ) メチル] ベ
ンズアミジン三塩酸塩０．１８ｇを得た。このものの機
器分析データは式（８）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．３０（ｂｓ，１２Ｈ），８．０５−７．８０（ｍ，
７Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），５．
３７（ｓ，４Ｈ）

【化１３】

【００４６】（実施例４） １，３，５−トリス（４−アミジノフェノキシ) ベンゼ
ン三塩酸塩の合成 フロログルシノール２水和物０．４５ｇ、４−フルオロ
ベンゾニトリル１．００ｇ及び炭酸カリウム２．８５ｇ
をＤＭＦ２０ｍＬ中で２２時間加熱還流した後、水を加
えて反応を停止させ、ジエチルエーテルで抽出を行なっ
た。減圧下乾固し、ついで塩化メチレンとｎ−ヘキサン
で再結晶を行なって淡黄色の結晶として１，３，５−ト
リス（４−シアノフェノキシ) ベンゼン０．０８ｇを得
た。１，３，５−トリス（４−シアノフェノキシ) ベン
ゼン０．０８ｇを出発物質として、実施例１と同様にし
てアミジノ化を行なったのち、塩酸で処理して、１，
３，５−トリス（４−アミジノフェノキシ) ベンゼン三
塩酸塩０．０２ｇを得た。このものの機器分析データは
式（９）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．２７（ｄ，Ｊ＝２５．６Ｈｚ，１２Ｈ），７．９９
−６．６４（ｍ，１５Ｈ）

【化１４】

【００４７】（実施例５） α, α’−ビス（４−アミジノフェノキシ）−５−ニト
ロ−ｍ−キシレン二塩酸塩の合成 炭酸カリウム２．２ｇとα, α’−ジブロモ−５−ニト
ロ−ｍ−キシレン１．００ｇ、４−シアノフェノール
０．７７ｇをアセトン中で２２時間加熱還流した後、水
を加えて反応を停止させ、析出した結晶を濾取した。こ
れを塩化メチレンに溶解し、硫酸マグネシウムで乾燥し
た後、ｎ−ヘキサンを加えて結晶を析出させた。これを
濾取し、α, α’−ビス（４−シアノフェノキシ）−５
−ニトロ−ｍ−キシレン０．５３ｇを得た。α, α’−
ビス（４−シアノフェノキシ）−５−ニトロ−ｍ−キシ
レン０．５２ｇを出発物質として、実施例１と同様にし
てアミジノ化を行ない、塩酸で処理してα, α’−ビス
（４−アミジノフェノキシ）−５−ニトロ−ｍ−キシレ
ン二塩酸塩０．１４ｇを得た。このものの機器分析デー
タは式（１０）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．１９（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，６Ｈ），８．２７−
７．１３（ｍ，１１Ｈ），５．４０（ｓ，４Ｈ）

【化１５】

【００４８】（実施例８）ポリ（５−アミジノ−１，３
−ジオキシフェニレンペンタメチレン) の合成 フラスコ中に６０％水素化ナトリウム０．３０ｇおよび
ジメチルホルムアミド１０ｍＬを入れ、これに３，５−
ジヒドロキシベンゾニトリル０．５０ｇをジメチルホル
ムアミド５ｍＬに溶解した溶液を滴下した。さらに１，
５−ジブロモペンタン０．８５ｇをジメチルホルムアミ
ド５ｍＬに溶解した溶液を滴下し、室温で一夜撹拌した
のち、反応混合物に水を加えた。生成物をクロロホルム
で抽出し、水洗後硫酸ナトリウム上で乾燥させた。この
クロロホルム溶液にノルマルヘキサンを加えて析出した
固体を除去し、黄色の油状物として式（１１）で表され
るポリ（５−シアノ−１，３−ジオキシフェニレンペン
タメチレン）０．２６ｇを得た。この際、式（１２）の
構造を有する副生成物において、酸素の結合したアルキ
ル基炭素に結合しているプロトン数と臭素の結合したア
ルキル基炭素に結合しているプロトン数を機器分析によ
って比較することで、そのポリマー単位構造繰り返し数
が１１と求められた結果から、本実施例のポリ（５−シ
アノ−１，３−ジオキシフェニレンペンタメチレン) の
ポリマー単位構造繰り返し数は１１から１２であると考
えることができる。このポリ（５−シアノ−１，３−ジ
オキシフェニレンペンタメチレン）０．２６ｇをクロロ
ホルム１０ｍＬに溶解し、メタノール８ｍＬを加え、氷
冷下塩化水素ガスを２０分間導入した。室温に戻して１
１時間撹拌した後、減圧下溶媒および塩化水素を留去し
て得られたゲル状物をメタノール−クロロホルム−ノル
マルヘキサン溶媒で洗浄して淡黄色の固体を得た。この
固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し淡
黄色アモルファス０．１１ｇを得た。このアモルファス
に２ｍｏｌ／Ｌアンモニアメタノール溶液２０ｍＬを加
え、一夜加熱還流した。反応混合物から減圧下メタノー
ルおよびアンモニアを留去して淡橙色のアモルファスと
してポリ（５−アミジノ−１，３−ジオキシフェニレン
ペンタメチレン) 塩酸塩０．０６ｇを得た。原料である
ポリ（５−シアノ−１，３−ジオキシフェニレンペンタ
メチレン) のポリマー単位構造繰り返し数が１１から１
２であることから、このポリ（５−アミジノ−１，３−
ジオキシフェニレンペンタメチレン) 塩酸塩のポリマー
単位構造繰り返し数も１１から１２であると考えること
ができる。このものの機器分析データは式（１３）の構
造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．３０，８．９３，７．０１，６．９３，４．００，
１．７６，１．５３

【化１６】 式１１中、ｎは約１１〜１２である。

【化１７】 式１２中、ｎは１１である。

【化１８】 式１３中、ｎは１１〜１２である。

【００４９】（実施例９） ポリ（５−アミジノ−１，３−ジオキシフェニレンオク
タメチレン）の合成 フラスコ中に６０％水素化ナトリウム０．３０ｇおよび
ジメチルホルムアミド１０ｍＬを入れ、これに３，５−
ジヒドロキシベンゾニトリル０．５０ｇをジメチルホル
ムアミド５ｍＬに溶解した溶液を滴下した。さらに１，
８−ジブロモオクタン１．０１ｇをジメチルホルムアミ
ド５ｍＬに溶解した溶液を滴下し、室温で一夜撹拌した
のち、反応混合物に水を加えた。生成物をクロロホルム
で抽出し、水洗後硫酸ナトリウム上で乾燥させた。この
クロロホルム溶液にノルマルヘキサンを加えて固体を析
出させた。この固体をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーで精製し、ポリ（５−シアノ−１，３−ジオキシフ
ェニレンオクタメチレン）０．０５ｇを得た。このポリ
（５−シアノ−１，３−ジオキシフェニレンオクタメチ
レン）０．０５ｇをクロロホルム１５ｍＬに溶解し、１
０ｍＬを加え一夜撹拌した後、減圧下溶媒および塩化水
素を留去して固体を得た。この固体にクロロホルム１５
ｍＬおよび２ｍｏｌ／Ｌアンモニアメタノール溶液２０
ｍＬを加え、一夜加熱還流した。反応混合物から減圧下
メタノールおよびアンモニアを留去し、塩化水素メタノ
ール溶液を加えた。減圧下溶媒を留去し、残分をジエチ
ルエーテルで洗浄し、橙色の固体としてポリ（５−アミ
ジノ−１，３−ジオキシフェニレンオクタメチレン) 塩
酸塩０．０２ｇを得た。このものの機器分析データは式
（１４）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ₆ ）δ（ｐｐｍ） ９．３１，８．９６，７．１０，６．９４，４．０２−
３．９７，１．９６，１．４０−１．３４

【化１９】

【００５０】（実施例１０） １，３−ビス（３−アミジノ−５−ペンタデカノキシフ
ェノキシ) プロパン二塩酸塩の合成 フラスコ中に３−ヒドロキシ−５−ペンタデカノキシベ
ンゾニトリル０．２００ｇ、１，３−ジブロモプロパン
０．０５８ｇ、炭酸カリウム０．１２０ｇおよびジメチ
ルホルムアミド１０ｍＬを入れ、８０℃の油浴で３日間
加熱還流した。反応混合物に水を加え、ジエチルエーテ
ルで抽出した。抽出物から溶媒を留去し、その残渣をク
ロロホルム- メタノールで再結晶することによって淡橙
色粉末として１，３−ビス（３−シアノ−５−ペンタデ
カノキシフェノキシ) プロパン０．０９１３ｇを得た。
これをクロロホルム２０ｍＬに溶解し、メタノール１０
ｍＬを加え、氷冷下塩化水素ガスを１５分間バブリング
したのち室温で１日間撹拌した。反応混合物にジエチル
エーテルを加え、濾過することで無色の結晶として１，
３−ビス（３−メトキシイミノメチル−５−ペンタデカ
ノキシフェノキシ)プロパン０．０７４５ｇを得た。こ
れにクロロホルム１０ｍＬと２ｍｏｌ／Ｌアンモニアメ
タノール溶液１０ｍＬを加え、８０℃の油浴で１日間加
熱還流した。減圧下溶媒を留去したのち、メタノールに
溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えて塩酸塩を形成させ、
さらに水を加えることで固体を析出させ、無色の粉末と
して１，３−ビス（３−アミジノ−５−ペンタデカノキ
シフェノキシ) プロパン二塩酸塩０．０５５１ｇを得
た。このものの機器分析データは式（１５）の構造を支
持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ） ６．９５（ｓ，２Ｈ），６．９３（ｓ，２Ｈ）, ６．８
４（ｓ，２Ｈ）, ４．２６（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）,
４．０３（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）, ２．３０（ｑｕｉ
ｎｔ，２Ｈ），１．７９（ｔ，４Ｈ），１．４８−１．
２８（ｍ，４８Ｈ，０．８９（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）

【化２０】

【００５１】（実施例１１） １、５−ビス（３−アミジノ−５−ペンタデカノキシフ
ェノキシ) ペンタン二塩酸塩の合成 フラスコ中に３−ヒドロキシ−５−ペンタデカノキシベ
ンゾニトリル０．２００ｇ、１，５−ジブロモペンタン
０．０６６ｇ、炭酸カリウム０．１２０ｇおよびジメチ
ルホルムアミド１０ｍＬを入れ、８０℃の油浴で３日間
加熱還流した。反応混合物に水を加え、ジエチルエーテ
ルで抽出した。抽出物から溶媒を留去し、その残渣をク
ロロホルム−メタノールで再結晶することによって淡橙
色粉末として１，５−ビス（３−シアノ−５−ペンタデ
カノキシフェノキシ）ペンタン０．１３５８ｇを得た。
これをクロロホルム２０ｍＬに溶解し、メタノール１０
ｍＬを加え、氷冷下塩化水素ガスを１５分間バブリング
したのち室温で１日間撹拌した。反応混合物にジエチル
エーテルを加え、濾過することで無色の結晶として１，
５−ビス（３−メトキシイミノメチル−５−ペンタデカ
ノキシフェノキシ)ペンタン０．１０５０ｇを得た。こ
れにクロロホルム１０ｍＬと２ｍｏｌ／Ｌアンモニアメ
タノール溶液１０ｍＬを加え、８０℃の油浴で１日間加
熱還流した。減圧下溶媒を留去したのち、メタノールに
溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えて塩酸塩を形成させ、
さらに水を加えることで固体を析出させ、無色の粉末と
して１，５−ビス（３−アミジノ−５−ペンタデカノキ
シフェノキシ) ペンタン二塩酸塩０．０６１５ｇを得
た。このものの機器分析データは式（１６）の構造を支
持する。¹ Ｈ−ＮＨＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ） ９．２３（ｓ），８．７５（ｓ），６．９３（ｓ，２
Ｈ）, ６．９２（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｔ，４Ｈ，Ｊ
＝６Ｈｚ），４．０４（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．
８９−１．１９（ｍ，５８Ｈ），０．８９（ｔ，６Ｈ，
Ｊ＝６Ｈｚ）

【化２１】

【００５２】（実施例１２） １，８−ビス（３−アミジノ−５−ペンタデカノキシフ
ェノキシ) オクタン二塩酸塩の合成 フラスコ中に３−ヒドロキシ−５−ペンタデカノキシベ
ンゾニトリル０．２００ｇ、１，８−ジブロオクタン
０．０７９ｇ、炭酸カリウム０．１２０ｇおよびジメチ
ルホルムアミド１０ｍＬを入れ、８０℃の油浴で３日間
加熱還流した。反応混合物に水を加え、ジエチルエーテ
ルで抽出した。抽出物から溶媒を留去し、その残渣をク
ロロホルム- メタノールで再結晶することによって淡橙
色粉末として１，８−ビス（３−シアノ−５−ペンタデ
カノキシフェノキシ）オクタン０．１２００ｇを得た。
このうち０．０９６６ｇをクロロホルム２０ｍＬに溶解
し、メタノール１０ｍＬを加え、氷冷下塩化水素ガスを
１５分間バブリングしたのち室温で1 日間撹拌した。反
応混合物にジエチルエーテルを加え、濾過することで淡
黄色の結晶として１，８−ビス（３−メトキシイミノメ
チル−５−ペンタデカノキシフェノキシ）オクタン０．
０８３９ｇを得た。これにクロロホルム１０ｍＬと２ｍ
ｏｌ／Ｌアンモニアメタノール溶液１０ｍＬを加え、８
０℃の油浴で１日間加熱還流した。減圧下溶媒を留去し
たのち、メタノールに溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え
て塩酸塩を形成させ、さらに水を加えることで固体を析
出させ、淡黄色の粉末として１，８−ビス（３−アミジ
ノ−５−ペンタデカノキシフェノキシ) オクタン二塩酸
塩０．０５８８ｇを得た。このものの機器分析データは
式（１７）の構造を支持する。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ） ６．９０（ｓ，４Ｈ）, ６．７９（ｓ，２Ｈ）, ４．０
４（ｍ，８Ｈ）, １．７９（ｍ，８Ｈ），１．５０−
１．２８（ｍ，５６Ｈ），０．８９（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６
Ｈｚ）

【化２２】

【００５３】（試験例１） １．細胞 大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ−１細胞（Ａ
ＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５０）を１０％牛胎児血清
（ＦＣＳ）を含むＩｓｃｏｖｅ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｄｅ
ｄ Ｄａｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）
を用いて５％ＣＯ₂ ，３７℃のインキュベーター中で継
代培養した。 ２．リポソーム調製 カチオン化脂質（３, ５−ジウンデシロキシベンズアミ
ジン）を１０μｍｏ１、ジラウロイルホスファチジルコ
リン（ＤＬＰＣ）を２０μｍｏｌ、ジオレオイルホスフ
ァチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を２０μｍｏｌ
を秤り取り、１ｍＬのクロロホルムに溶解した。これを
クロロホルム溶液Ａとする。クロロホルム溶液Ａの２０
μＬを容量１０ｍＬのナス型フラスコに取りさらに１ｍ
Ｌのクロロホルムを加えた。エバポレーターによりクロ
ロホルムを減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形成し
た。次いで、８０℃度の蒸留水１ｍＬを加え激しく振と
う攪拌することによりリポソームを調製した。 ３．脂質ＤＮＡ複合体調製 実施例１の化合物０．０２５ｍｏｌを蒸留水１ｍＬに溶
解した後、β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの遺伝子を
組み込んだプラスミドｐｃ ＤＮＡ／Ａｍｐ（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ社）２０μｇを加え、ボルテックスミキサ
ーにて２分間攪拌し、ＤＮＡ複合体を調製した。これと
前記リポソームを体積比１：１の割合でボルテックスミ
キサーにより混合し、脂質ＤＮＡ複合体を調製した。同
様に実施例２の化合物についても、脂質ＤＮＡ複合体を
調製した。また、本発明の化合物を含まない点以外は同
一の条件で、すなわち上記ＤＮＡとリポソームのみを同
一条件で混合してＤＮＡ含有リポソームを調製し、比較
例１を得た。 ４．トランスフェクション方法 １０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地（２ｍＬ）を添加した、6
穴マルチウェルプレートに２×１０⁴ のＣｏｓ−１細胞
を播き細胞培養を行った。約２４時間培養後、０．２μ
ｇのＤＮＡが含まれるような量で前記脂質ＤＮＡ複合体
または比較例１のＤＮＡ含有リポソームを加え、３７℃
で１時間培養した。培養後、遺伝子導入時の培地を新し
いものと交換し更に４８時間培養を続けた。 ５．β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ検出方法 トランスフェクションから４８時間後、細胞を溶解し、
発現しているβ−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの量をＰ
ｒｏｍｅｇａ社のキット（β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａ
ｓｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ) を用
い測定した。また総タンパク質量をＰｉｃｒｃｅ社のキ
ット（ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇ
ｅｎｔ）を用いて測定した。結果を表１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】（試験例２） １．細胞 大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ−１細胞（Ａ
ＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５０）を１０％牛胎児血清
（ＦＣＳ）を含むＩＭＤＭを用いて５％ＣＯ₂，３７℃
のインキュベーター中で継代培養した。 2 ．リポソーム調製 試験例１で調製したクロロホルム溶液Ａを９０μＬを容
量１０ｍＬのナス型フラスコに取り、さらに１ｍＬのク
ロロホルムを加えた。エバポレーターにてクロロホルム
を減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。脂質
薄膜を６０℃の蒸留水１ｍＬを用い水和し、さらにボル
テックスミキサーで攪拌してエマルジョンとした。この
エマルジョンを６０℃にて超音波処理してリポソームを
形成した。 ３．脂質ＤＮＡ複合体調製 ＤＮＡ（プラスミドｐＣＭＶ−Ｌａｃｚ）と実施例８の
化合物を１２×７５ｍｍのポリスチレンチューブでボル
テックスミキサーにより体積比１：１の割合で混合し、
複数のアミジノ基を有する化合物ＤＮＡ複合体を形成し
た。この複数のアミジノ基を有する化合物ＤＮＡ複合体
とリポソームを１２×７５ｍｍのポリスチレンチューブ
でボルテックスにより体積比１：１の割合で混合し、脂
質ＤＮＡ複合体を形成した。また、本発明の化合物を含
まない点以外は同一の条件で、すなわち、ＤＮＡとリポ
ソームのみを同一の条件で混合してＤＮＡ含有リポソー
ムを調製し、比較例２とした。 4 ．トランスフェクション 細胞を２４穴プレートに撒き１０％血清を含むＩＭＤＭ
にて培養した。トランスフェクションは細胞が８０％コ
ンフルエントになった状態でおこなった。前記脂質ＤＮ
Ａ複合体または比較例２のＤＮＡ含有リポソームを加え
た１０％血清を含む培地で３７℃にて３０分間培養し
た。培養後、遺伝子導入時の培地を新しいものと交換し
さらに４８時間培養を続けた。 5 ．β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ検出 トランスフェクション後、発現しているβ−Ｇａｌａｃ
ｔｏｓｉｄａｓｅの量をＰＲｏｍｅｇａ社のキット（β
−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ＥｎｚｙｍｅＡｓｓａ
ｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を用い測定した。また総タンパク質
量をＰｉｅｒｃｅ社のキット（ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて測定した。結
果を表２に示す。

【００５６】

【表２】

【００５７】（試験例３） 1 ．細胞 大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ−１細胞（Ａ
ＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５０) を１０％牛胎児血清
（ＦＣＳ）を含むＩＭＤＭを用いて５％ＣＯ₂，３７℃
のインキュベーター中で継代培養した。 2 ．リポソーム調製 試験例１で調製したクロロホルム溶液Ａを９０μＬを容
量１０ｍＬのナス型フラスコに取り、さらに１ｍＬのク
ロロホルムを加えた。エバポレーターにてクロロホルム
を減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。脂質
薄膜を６０℃の蒸留水１ｍＬを用い水和し、さらにボル
テックスミキサーで攪拌してエマルジョンとした。この
エマルジョンを６０℃にて超音波処理してリポソームを
形成した。さらに、カチオン化脂質に、本発明の化合物
の代わりに３，５−ジドデカノキシベンズアミジン塩酸
塩を用いて同様にしてリポソームを調製し、これを比較
例３とした。 ３．脂質ＤＮＡ複合体調製 ＤＮＡ（プラスミドｐＣＭＶ−ＬａｃＺ）と上記のリポ
ソームを１２×７５ｍｍのポリスチレンチューブでボル
テックスミキサーにより体積比１：１の割合で混合し、
脂質ＤＮＡ複合体を形成した。 4 ．トランスフェクション 細胞を２４穴プレートに撒き１０％血清を含むＩＭＤＭ
にて培養した。トランスフェクションは細胞が８０％コ
ンフルエントになった状態でおこなった。脂質ＤＮＡ複
合体を加えた１０％血清を含む培地で３７℃にて３０分
間培養した。培養後、遺伝子導入時の培地を新しいもの
と交換しさらに４０時間培養を続けた。 5 ．β−Ｇａｌａｔｏｓｉｄａｓｅ検出 トランスフェクション後、発現しているβ−Ｇａｌａｔ
ｏｓｉｄａｓｅの量をＰｒｏｍｅｇａ社のキット（β−
Ｇａｌａｔｏｓｉｄａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍ) を用い測定した。また総タンパク質量をＰｉｅｒｃ
ｅ社のキット（ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ
Ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて測定した。結果を表３に示
す。

【表３】

【００５８】（急性毒性)ＩＣＲ系雄性マウス（５週
齢）を用いて経口および静脈内投与により急性毒性試験
を行った結果、本発明の化合物のＬＤ５０は３２０ｍｇ
／ｋｇ以上であり有効性に比べて高い安全性が確認され
た。

【００５９】

【発明の効果】上述した通り、本発明により新規アミジ
ン化合物が供給される。本発明のアミジン化合物を構成
成分とする製剤は、試験例に示されるように、従来の製
剤に比べ細胞への導入効率が高いことが明らかとなっ
た。よって、本発明の製剤は、トランスフェクションと
いう目的に対して非常に効果的である。本発明のアミジ
ン化合物を構成成分とするＤＮＡ複合体は、試験例に示
されるように、本発明の化合物を含まないＤＮＡ複合体
に比べ細胞への導入効率が有意に高いことが明らかとな
った。よって、本発明のＤＮＡ複合体は、トランスフェ
クションという目的に対して非常に効果的である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｋ 48/00 Ｆターム(参考） 4C076 CC50 DD15 DD48 DD63 EE56 FF34 FF67 4C084 AA13 MA05 NA06 NA11 NA13 4C086 AA01 EA16 MA02 MA05 NA06 NA11 NA13 4H006 AA01 AB20

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式（１）または（２）で示される、１
   価および／または２価の基を２以上有する複数のアミジ
   ノ基を有する化合物またはその塩。 【化１】 【化２】 （式（１）および式（２）において、Ｘ、Ｙは同一でも
   異なっていてもよい−（Ｏ）_i −（ＣＨ₂ ）_j −（Ｏ）
   _k −を表し、ｉ、ｋは各々独立して０または１の整数を
   表し、ｊは０または１〜２０までの整数である。）
2. 【請求項２】下記式（３）で示される請求項１に記載の
   複数のアミジノ基を有する化合物またはその塩。 【化３】 （ただし、Ｘ、Ｙは同一でも異なっていてもよい−
   （Ｏ）_i −（ＣＨ₂ ）_p −（Ｏ）_k −を表し、ｉ、ｋは
   各々独立して０または１の整数を表し、ｐは０または１
   〜７までの整数を表し、Ａは置換基を有してもよいベン
   ゼン環である。）
3. 【請求項３】下記式（４）で示される請求項１に記載の
   複数のアミジノ基を有する化合物またはその塩。 【化４】 （ここで、ｎは、２または３であり、Ａは、置換基を有
   していてもよいベンゼン環である。）
4. 【請求項４】下記式（５）で示される請求項１に記載の
   複数のアミジノ基を有する化合物またはその塩。 【化５】 （ここで、ｊは、０または１〜２０までの整数であり、
   ｍは、２〜５０までの整数であり、Ｒは、水素原子また
   は炭素数１〜２０までのアルキル基であり、Ｒ’は、３
   −アミジノ−５−ヒドロキシフェノキシ基または炭素数
   １〜２０までのアルキル基である。）
5. 【請求項５】核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびそ
   の類縁体から選択される少なくとも１つと、請求項１な
   いし４のいずれかに記載の複数のアミジノ基を有する化
   合物または製剤学的に許容される塩を有効成分として含
   有する複合体。
6. 【請求項６】請求項５に記載の複合体に加えて、さら
   に、脂質を含有する脂質複合体。
7. 【請求項７】請求項５または６のいずれかの複合体に加
   えて、さらに他の薬剤を含有する製剤。