JP2001064158A

JP2001064158A - リポソーム

Info

Publication number: JP2001064158A
Application number: JP2000190860A
Authority: JP
Inventors: Masayo Kondo; 真代近藤; Takashi Harikae; 貴志張替; Junji Kimura; 順治木村; Masashi Isozaki; 正史磯崎
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1999-06-25
Filing date: 2000-06-26
Publication date: 2001-03-13

Abstract

(57)【要約】【課題】薬物を封入し、酸性領域下で炎症部位や腫瘍部
位などのｐＨが低下した標的部位へのターゲッティング
性が非常に高い薬物運搬体を得る。【解決手段】構成成分が、塩基性化合物、リン酸モ
ノエステル誘導体またはカルボキシル基またはその塩を
有する化合物である酸性化合物、および他のリポソー
ム構成成分からなるリポソームにより達成される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、薬物を内包するリ
ポソームに関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、薬物、ＤＮＡ、ペプチドおよびタ
ンパク質を目的の部位、例えば癌、肺炎、肝炎、腎炎、
リンパ腫、血管内皮損傷部位などの病巣部位に確実に、
効率良くかつ安全に薬物のターゲッティングが行えるド
ラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が盛んにな
ってきている。

【０００３】例えば、リポソーム、エマルジョン、リピ
ッドマイクロスフェア、ナノパーテイクルなどの閉鎖小
胞を薬物運搬体として利用する方法、高分子合成ポリマ
−ミセルや多糖体等の高分子運搬体に薬物を包含または
結合させる方法、これら閉鎖小胞や高分子運搬体に抗
体、蛋白質等の高分子機能性分子や、特定の糖鎖、ペプ
チド等の低分子機能性分子で表面を修飾して標的指向性
を高める方法などが挙げられる。しかしながら、これら
薬物運搬体の実用化に際しては、克服すべき様々な問題
点があり、中でも生体側の異物認識機構からの回避や、
体内動態の制御の困難さが問題となっている。特に閉鎖
小胞は、血液中のオプソニン蛋白質や血しょう蛋白質と
の相互作用による凝集や、肝臓、脾臓等の細網内皮系組
織（ＲＥＳ）での捕捉のため、標的とする組織や細胞へ
の選択性の高い送達が困難な状況であった。

【０００４】この問題点を解決する手段として、これら
閉鎖小胞をはじめとする高分子運搬体の表面をポリエチ
レングリゴ−ル（ＰＥＧ）等の親水性高分子で被覆する
ことにより、血しょう蛋白やオプソニン蛋白質などの吸
着を防止して血中安定性を高め、ＲＥＳでの捕捉を回避
することが可能となってきた。リポソームのような閉鎖
小胞は、高い血中滞留性を得られることにより、腫瘍組
織や炎症部位などの血管透過性が亢進した組織に受動的
に集積させられるようになり、効率よく治療できるよう
になった。一方、上記の修飾に基づいた閉鎖小胞が、Ｒ
ＥＳを回避する性質を得た場合、リポソームと標的組織
との相互作用が低下する。これにより、閉鎖小胞の標的
組織への送達が向上する反面、標的組織における細胞に
よる閉鎖小胞の取り込みの効率が低下し、その結果該閉
鎖小胞に封入された薬物の細胞への送達の効率が低下し
たり、血液中の蛋白などの生体成分との相互作用により
引き起こされるリポソームの崩壊が抑制されその結果該
閉鎖小胞に封入された薬物の放出速度が低下するなどの
弊害がある。

【０００５】これまでに多くの塩基性化合物を膜成分と
して含有するリポソームが遺伝子を細胞内へ運搬するた
めのツールとして研究されている。各種の塩基性化合物
を膜に含むリポソームは陰性荷電を持つ物質との親和性
を持つが、特に細胞表面には、ヘパラン硫酸などの硫酸
化多糖類の様な陰性電荷の物質により構成されるため、
塩基性化合物を含有するリポソームは細胞膜との親和性
が強いことが期待される。しかし、このような塩基性化
合物を含有するリポソームは、血液中に投与されると、
血清中のタンパク質や赤血球膜表面などの陰性荷電の物
質と結合してしまうため、その表面電荷が変化してしま
うか、あるいは、血中で凝集を起こしてしまい、細胞膜
との親和性能が失われてしまうことが問題とされてい
た。従って、血流中ではタンパク質や細胞との相互作用
がなく安定に循環するが、病巣部位においてのみ細胞と
の相互作用が強まり、薬物を細胞へ送達できるようなド
ラッグデリバリーシステムが望まれる。

【０００６】これら問題を解決するため、各種の環境応
答性薬物運搬体、すなわち疾病に起因する環境変化、ま
たは、正常組織と病巣部位の環境の相違に応答して性質
が変化する薬物運搬体が検討されている。例えば、腫瘍
や炎症などの病巣部位では局所のｐＨが正常な組織より
も低下することが知られており（V.Menkin,Biochemical
Mechanism in Inflammation, Thomas, Spingfield, II
I, pp.69-7(1956)）、このような病変部位でのｐＨ変化
による環境に応答して薬物を放出したり、ターゲッティ
ングすることを目的とした検討が試みられている（Bioc
him Biophys Acta,1329(2),291-301(1997)、FEBS,421
(1),61-4(1998)）。しかしながら、ｐＨの変化に応答
し、その標的指向性が向上するリポソームの報告はされ
ていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、従来の標的
指向性リポソームの欠点を克服し、任意の環境変化に応
答する標的指向性リポソームを提供するためになされた
ものである。すなわち、本発明の目的は、薬物、ＤＮ
Ａ、ペプチドおよびタンパク質を病巣部位におけるｐＨ
変化により速やかに標的指向性能を発揮するリポソーム
を提供することである。

【０００８】本発明のリポソームは、循環血液中のよう
な生理的ｐＨ条件では、陰性電荷の物質との相互作用は
弱く、そのため、細胞やタンパク質などとの相互作用は
少ないため、血液中でも安定であるが、炎症部位や腫瘍
部位などのｐＨが低下した標的部位では、陰性荷電の物
質との相互作用が増強されて、細胞親和性が向上し、標
的部位に効率的に集積し、また、標的部位以外では集積
が抑えられる結果、副作用の軽減などの効果が期待され
る。

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記課題は以下の本発明
により解決される。（１）本発明は、治療および／または診断を目的とする
薬物を内包するリポソームであって、膜構成成分とし
て、塩基性化合物、リン酸モノエステル誘導体また
はカルボキシル基またはその塩を有する化合物から選択
される酸性化合物、および、以外のリポソーム膜
構成成分からなるリポソームである。（２）本発明は、治療および／または診断を目的とする
薬物を内包するリポソームであって、膜構成成分とし
て、塩基性化合物、リン酸モノエステル誘導体また
はカルボキシル基またはその塩を有する化合物から選択
される酸性化合物、および他のリポソーム膜構成成分
からなり、炎症部位や腫瘍部位などの病巣部位でｐＨが
５〜７の環境下において、能率的に集積するリポソーム
である。

【００１０】（３）本発明は、上記（１）に記載のリポ
ソームであって、塩基性化合物のモル比が全リポソーム
膜構成成分中１〜３０mol%であるリポソームである。（４）本発明は、上記（１）に記載のリポソームであっ
て、リン酸モノエステル誘導体またはカルボン酸誘導体
である酸性化合物のモル比が全リポソーム膜構成成分中
０．５〜３０mol%であるリポソームである。（５）本発明は、前記塩基性化合物が、下記式１から４
のいずれかに示される塩基性化合物である（１）に記載
のリポソームである。

【００１１】

【化７】

【００１２】（式１中、Ａは芳香環を表す。Ｒ¹及びＲ
²は炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルニケル基
を表し、Ｒ¹およびＲ²は同一であっても異なっていて
もよい。Ｘ¹およびＸ²は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＮＨ−またはＮＨＣＯ−を表
し、Ｘ¹およびＸ²は同一であっても異なっていてもよ
い。ｍは０または１、ｎは０または１〜６の整数を表
す。）

【００１３】

【化８】

【００１４】（式２中、Ｒ³は水素または炭素数１〜８
のアルキル基もしくはアルニケル基を表す。Ｒ⁵および
Ｒ⁶は水素または炭素数１〜２５のアルキル基もしくは
アルニケル基を表し（但し、Ｒ⁵およびＲ⁶が共に水素
である場合を除く。）、Ｒ⁵およびＲ⁶は同一であって
も異なっていてもよい。Ｘ³は−Ｏ−または−Ｓ−を表
す。ｐは０または１、ｑは０または１〜１０の整数を表
す。）

【００１５】

【化９】

【００１６】

【化１０】

【００１７】（６）本発明は、前記塩基性化合物が、４
級アミン又は３級アミンを有する塩基性化合物である上
記（１）に記載のリポソームである。（７）本発明は、前記塩基性化合物が、下記式５から６
のグループから選ばれる上記（１）記載のリポソームで
ある。

【化１１】（式５中Ｒ⁷およびＲ⁸は、炭素数１〜８のアルキル基
またはアルケニル基を表し、Ｒ⁷およびＲ⁸は同一であ
っても異なってもよい。Ｘ⁴およびＸ⁵は−Ｏ−または
−ＯＣＯ−を表し、Ｘ⁴およびＸ⁵は同一であっても異
なってもよい。Ｒ ⁹およびＲ¹⁰は炭素数１０〜２０のア
ルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は
同一であっても異なってもよい。ｔは１〜６の整数を表
す。）

【化１２】（式６中、Ｒ⁷，Ｒ⁸およびＲ⁹は、炭素数１〜８のア
ルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ⁷、Ｒ⁸および
Ｒ⁹は同一であっても異なってもよい。Ｘ⁴およびＸ⁵
は−Ｏ−または−ＯＣＯ−を表し、Ｘ⁴およびＸ⁵は同
一であっても異なってもよい。Ｒ⁹およびＲ¹⁰は炭素数
１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ
⁹およびＲ¹⁰は同一であっても異なってもよい。ｔは１
〜６の整数を表す。）

【００１８】（８）本発明は、前記リン酸モノエステル
誘導体が、リン酸プレドニゾロン、リン酸リボフラビ
ン、ホスファチジン酸から選ばれる上記（１）に記載の
リポソームである。

【００１９】（９）本発明は、前記カルボキシル基また
はその塩を有する化合物である酸性化合物が、脂肪酸で
ある上記（１）に記載のリポソームである。（１０）本発明は、前記脂肪酸が、オレイン酸、ステア
リン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸である上記（９）
に記載のリポソームである。

【００２０】（１１）本発明は、前記他のリポソーム膜
構成成分が、リン脂質あるいはその誘導体、および／ま
たはステロールまたはその誘導体である上記（１）に記
載のリポソームである。（１２）本発明は、前記治療および／または診断を目的
とする薬物が、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、酵素阻害
剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎
症剤、ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変
換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋
細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤，抗凝固
剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細
胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メ
サンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、
免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反
応抑制剤，アミロイドーシス阻害剤、ＮＯＳ阻害剤、Ａ
ＧＥs 阻害剤あるいはラジカルスカベンチャーである上
記（１）に記載のリポソームである。

【００２１】（１３）本発明は、前記治療および／また
は診断を目的とする薬物が、核酸、ポリヌクレオチド、
遺伝子およびその類縁体である上記（１）に記載のリポ
ソームである。（１４）本発明は、前記治療および／または診断を目的
とする薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体
である上記（１）に記載のリポソームである。（１５）本発明は、前記治療および／または診断を目的
とする薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれ
らの誘導体である上記（１）に記載のリポソームであ
る。（１６）本発明は、前記治療および／または診断を目的
とする薬物が、タンパク質またはペプチドである上記
（１）に記載のリポソームである。（１７）本発明は、前記治療および／または診断を目的
とする薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学
診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬で
ある上記（１）に記載のリポソームである。（１８）治療および／または診断を目的とする薬物を
内包するリポソーム基質に、ｐＨ６．５とｐＨ７．４の
リン酸緩衝液中におけるリポソームへのコンドロイチン
硫酸Ｃの吸着量比が、ｐＨ６．５における吸着量／ｐＨ
７．４における吸着量≧１．５となるように塩基性化
合物とリン酸モノエステル誘導体またはカルボキシル
基またはその塩を有する化合物である酸性化合物とを添
加して、リポソームの病巣部位への集積率を高める方
法。

【００２２】本発明のリポソームには、表面修飾剤とし
て親水性高分子の脂質誘導体を必要に応じ加えることが
でき、その分子量は、１０００〜７０００が望ましい。
前記親水性高分子の脂質誘導体としては、ポリエチレン
グリコール誘導体が望ましく、特にポリエチレングリコ
ール鎖とジアシルグリセロールを一分子内に含む化合物
が望ましい。

【００２３】

【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明のリポソームの構成成分は、それ単
独で、膜に埋め込まれたときに、生理的ｐＨ付近から酸
性条件下では膜に正電荷を与える塩基性化合物と、それ
単独で膜に埋め込まれたときに生理的ｐＨでは陰電荷を
持つが、生理的ｐＨ付近から酸性側ではイオン化が抑制
されて陰電荷が減少するような酸性化合物と、その他の
リポソーム構成成分からなり、小球状の構造を形成し、
かつ安全性があれば特に限定せず使用することができ
る。

【００２４】ここで、生理的ｐＨ条件とは、生体内のｐ
Ｈ、すなわち７．４前後、概ね７．２から７．６の範囲
である。生理的ｐＨ付近より酸性側とは、ｐＨ７．４付
近より酸性側、概ねｐＨ６〜８の範囲で酸性側を指す。
この領域から解離が抑制される酸性化合物であれば塩基
性化合物との組み合わせにより性能を発揮することが期
待される。しかし、ｐＨ４以下のような極端な酸性領域
でのみ解離が抑制される化合物、例えばリン酸ジエステ
ル誘導体などはこのような作用を持たないため、本発明
の酸性化合物には含まれないことは後述する実施例によ
り明らかにされる。

【００２５】具体的な本発明のリポソームの膜構成成分
として、上記式１から６のいずれかに示される塩基性化
合物、およびリン酸モノエステル誘導体またはカルボキ
シル基またはその塩を有する化合物である酸性化合物、
およびその他のリポソーム膜構成成分があげられ、小球
状の構造を形成し、かつ安全性があるものであれば特に
限定せず使用することができる。

【００２６】上記式１から４のいずれかに示される塩基
性化合物としては、どれも適選使用できるが、特に、ア
ミジン誘導体、ピペリジン誘導体、１級アミン誘導体、
２級アミン誘導体、３級アミン誘導体、４級アミン誘導
体などが望ましい。塩基性化合物の量は、全リポソーム
膜構成成分中の１〜３０、さらには、５〜３０mol%であ
るのが好ましい。この範囲であると、ｐＨが５〜７の炎
症部位や腫瘍部位などの病巣部位への集積性が向上す
る。

【００２７】リン酸モノエステル誘導体とは、ホスホネ
ート基（phosphonato ）を有する化合物をいい、ホスホ
ネート基とは、

【００２８】

【化１３】Ｘ⁶、Ｘ⁷は水素またはナトリウム、カリウムなどの医
薬上許容されるカチオンを表わし、Ｘ⁶、Ｘ⁷は同一で
あっても異なっていてもよい。リポソームの構造安定を
損なうものでなければ特に限定されない。具体的には、
リン酸プレドニゾロンなどのステロイドのリン酸エステ
ル、リン酸リボフラビン、ホスファチジン酸などがあげ
られる。特に、リン酸モノエステル誘導体の酸性化合物
は、ｐＨ酸性領域下で、炎症部位や腫瘍部位などの病巣
部位に特異的に集積するため、本発明のリポソームの構
成成分として望ましい。

【００２９】カルボキシル基またはその塩を有する化合
物は、−ＣＯＯＸ⁸基を有する化合物であり、Ｘ⁸は水
素またはナトリウム、カリウムなどの医薬上許容される
カチオンを表わす。脂肪酸としては、リポソームの構造
安定を損なうものでなければ特に限定されない。具体的
には、天然または合成の、オレイン酸、パルミチン酸、
ステアリン酸、ミリスチン酸、リノレン酸等があげられ
る。リン酸モノエステル誘導体またはカルボン酸誘導体
である酸性化合物の量は、全リポソーム膜構成成分中の
０．５〜３０mol%であるのが好ましい。この範囲である
と、ｐＨが５〜７の炎症部位や腫瘍部位などの病巣部位
への集積性が向上する。

【００３０】本発明は、リポソーム膜構成成分として
塩基性化合物に加えて特定の酸性化合物を加えること
が特徴であり、従来、脂質として使用されているホスフ
ァチジルコリンはリン酸ジエステル化合物ではあるが、
１分子の中に酸性基と塩基性基を有する双性イオン性化
合物なので生理的ｐＨ付近で中性である。

【００３１】前記塩基性化合物および前記酸性化合物を
除く、他のリポソーム膜構成成分としては、リン脂質や
コレステロール等のステロールがあげられる。リン脂質
としては、例えばホスファチジルコリン（レシチン）、
ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノ
シトール、スフィアンゴミエリン、カルジオリピン等の
天然または合成のリン脂質、これらを常法に従って水素
添加したものが挙げられる。

【００３２】本発明のリポソーム膜は、さらに安定化剤
を含んでもよく、例えば、膜流動性を低下させるコレス
テロール等のステロール、グリセロール、シュクロース
等の糖類が挙げられる。酸化防止剤は、例えば、トコフ
ェロール同族体、即ち、ビタミンＥが挙げられる。トコ
フェロールにはα、β、γおよびδの４個が異性体で存
在するが、本発明にはいずれも用いることができる。

【００３３】リポソーム表面を修飾する親水性高分子の
脂質誘導体は、リポソームの構造安定を損なうものでな
ければ特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコー
ル、デキストラン、プルラン、フィコール、ポリビニル
アルコール、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペ
クチン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、カ
ラギーナン、及びこれらの誘導体が挙げられる。中でも
ポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコール
誘導体が望ましい。

【００３４】親水性高分子の脂質誘導体の分子量は、１
０００〜７０００であるのが好ましい。特に分子量１０
００〜７０００のポリエチレングリコールおよびポリエ
チレングリコール誘導体は、血中滞留性を向上させる効
果が顕著であり、好ましい。ポリエチレングリコール誘
導体は、特に限定されないが、ポリエチレングリコール
鎖とジアシルグリセロールを一分子内に有する化合物で
あるのが望ましい。

【００３５】リポソーム表面を親水性高分子により修飾
するには、様々な方式が挙げられ、特に限定されない
が、前記親水性高分子を長鎖脂肪族アルコール、ステロ
ール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリ
ン脂肪酸エステル、リン脂質等の疎水性化合物と結合さ
せて、前記疎水性化合物の部分をリポソーム表面へ挿入
する方式が好ましい。

【００３６】診断および／または治療のための薬物は、
目的に応じて、薬学的に許容し得る薬理的活性物質、生
理的活性物質および／または診断用物質を用いることが
できる。薬物の種類としては、リポソームの形成を損な
うものでなければ特に限定されない。

【００３７】具体的には、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、
抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症
剤、ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変換
酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細
胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤，抗凝固剤、
ケミカルメデイエーターの遊離阻害剤、血管内皮細胞の
増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メ
サンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、
免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反
応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、一酸化窒素合成阻
害剤、Advanced glycation endproducts阻害剤、ラジカ
ルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド、核酸、ポリ
ヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体などが挙げられ
る。

【００３８】例えば、抗癌剤の例としては、シクロホス
ファミド、イホスファミド、塩酸ナイトロジェンマスタ
ード−Ｎ−オキシド、チオテパ、ブルスファン、カルボ
コン、塩酸ニムスチン、ラニムスチン、メルファラン、
トシル酸インプロスルファン、ダカルバジン、塩酸プロ
カルバジン、シタラビン、シタラビンオクスファート、
エノシタビン、メルカプトプリン、チオイノシン、フル
オロウラシル、ドキシフルリジン、テガフール、メトト
レキサート、カルモフール、ヒドロキシカルバミド、硫
酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシ
ン、エトポシド、クロモマイシンＡ₃、塩酸ダウノルビ
シン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アラクルビシン、ピラ
ルビシン、塩酸エピルビシン、ダクチノマイシン、塩酸
ミトキサントロン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマ
イシン、マイトマイシンＣ、ネオカルノスタチン、Ｌ−
アスパラギナーゼ、アセグラトンミトプロニトール、デ
キストラン硫酸ナトリウム、酢酸オクトレオチド、シス
プラチン、カルボプラチン、クエン酸タモキシフェン、
酢酸メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチ
ンナトリウム、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリ
ン、塩酸イリノテカンなどが挙げられる。

【００３９】抗生物質の例としては、ベンジルペニシリ
ンカリウム、ベンジルペニシリンベンザチン、フェノキ
シメチルペニシリンカリウム、フェネチシリンカリウ
ム、クロキサシリンナトリウム、フルクロキサシリンナ
トリウム、アンピシリン、トシル酸スルタミシリン、塩
酸バカンピシリン、塩酸タランピシリン、レナンピシリ
ン、ヘタシリンカリウム、シクラシリン、アモキシシリ
ン、塩酸ピブメシリナム、アスポキシシリン、カルベニ
シリンナトリウム、カリンダシリンナトリウム、スルベ
ニシリンナトリウム、チカルシリンナトリウム、ピペラ
シリンナトリウム、セファロリジン、セファロチンナト
リウム、セファゾリンナトリウム、セファピリンナトリ
ウム、セフラジン、セファレキシン、セファトリジンプ
ロピレングリコール、セフロキサジン、セファクロル、
セファドロキシル、塩酸セフォチアム、塩酸セフォチア
ムヘキセチル、セフロキシムナトリウム、セフロキシム
アキセチル、セファマンドールナトリウム、セフジニ
ル、塩酸セフェタメトピポキシル、セフチプテン、セフ
メタゾールナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セ
フォテタンナトリウム、セフミノクスナトリウム、セフ
プペラゾンナトリウム、セフピラミドナトリウム、セフ
スロジンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフ
ォペラゾンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、塩
酸セフメノキシム、セフトリアキソンナトリウム、セフ
タジジム、セフピミゾールナトリウム、セフィキシム、
セフテラムピポキシル、セフゾナムナトリウム、セフポ
ドキシプロキセチル、セフォジジム、硫酸セフピロム、
ラタモキセフナトリウム、フロモキセフナトリウム、イ
ミペネム、シラスタチンナトリウム、アズトレオナム、
カルモナムナトリウム、硫酸ステレプトマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸フラジオマイシン、硫酸アミカシ
ン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸パロモマイシン、硫酸ペ
カナマイシン、硫酸リポスタマイシン、硫酸ジベカシ
ン、トブラマイシン、硫酸シソマイシン、硫酸ミスロノ
マイシン、硫酸アストロマイシン、硫酸ネチルマイシ
ン、硫酸イセパマイシン、硫酸アルベカシン、エリスロ
マイシン、キタサマイシン、アセチルキタサマイシン、
リン酸オレアンドマイシン、ジョサマイシン、アセチル
スピラマイシン、ミデカマイシン、酢酸ミデカマイシ
ン、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロ
マイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸オキシテトラサ
イクリン、メタリン酸テトラサイクリン、塩酸デメチル
クロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、塩酸
ドキシサイクリン、塩酸ミノサイクリン、クロラムフェ
ニコール、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、
パルミチン酸クロラムフェニコール、チアンフェニコー
ル、塩酸アミノ酢酸チアンフェニコール、硫酸コリスチ
ン、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム、硫酸ポリ
ミキシンＢ、バシトラシン、塩酸バンコマイシン、塩酸
リンコマイシン、クリンダマイシン、塩酸スペクチノマ
イシン、ホスホマイシンナトリウム、ホスホマイシンカ
ルシウムなどが挙げられる。

【００４０】酵素剤の例としては、キモトリプシン、結
晶トリプシン、ストレプトキナーゼ・ストレプトドルナ
ーゼ、ヒアルロニダーゼ、ウロキナーゼ、ナサルプラー
ゼ、アルテプラーゼ、塩化リゾチーム、セミアルカリプ
ロティナーゼ、セラペプターゼ、チソキナーゼ、デュテ
プラーゼ、バトロキソビン、プロナーゼ、プロメライン
などが挙げられる。

【００４１】抗酸化剤の例としては、トコフェロール、
アスコルビン酸、尿酸などが挙げられる。

【００４２】抗炎症剤の例としては、サリチル酸コリ
ン、サザピリン、サリチル酸ナトリウム、アスピリン、
ジフルニサル、フルフェナム酸、メフェナム酸、フロク
タフェニン、トルフェナム酸、ジクロフェナクナトリ
ム、トルメチンナトリウム、スリンダク、フェンブフェ
ン、フェルビナクエチル、インドメタシン、インドメタ
シンファルネシル、アセメタシン、マレイン酸プログル
メタシン、アンフェナクナトリウム、ナブメトン、イブ
プロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェン
アキセチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、プロチジ
ン酸、プラノプロフェン、フェノプロフェンカルシウ
ム、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ロキソプロフ
ェンナトリウム、アルミノプロフェン、ザルトプロフェ
ン、フェニルブタゾン、クロフェゾン、ケトフェニルブ
タゾン、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカ
ム、塩酸チアラミド、塩酸チノリジン、塩酸ベンジダミ
ン、エピリゾール、エルモファゾンなどが挙げられる。

【００４３】ステロイド剤の例としては酢酸コルチゾ
ン、ヒドロコルチゾン（リン酸エステル、酢酸塩）、酪
酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリ
ウム、プレドニゾロン（アセテート、サクシネート、第
三級ブチル酢酸エステル、リン酸エステル）、メチルプ
レドニゾロン（アセテート）、コハク酸メチルプレドニ
ゾロンナトリウム、トリアムシノロン、トリアムシノロ
ンアセトニド（酢酸トリアムシノロン）、デキサメタゾ
ン（リン酸エステル、酢酸塩、リン酸ナトリウム塩、硫
酸エステル）、パルミチン酸デキサメタゾン、ベタメタ
ゾン（リン酸塩、２ナトリウム塩）、酢酸パラメタゾ
ン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸ハロプレドン、プロ
ピオン酸クロベタゾール、ハルシノニド、プロピオン酸
ベクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾ
ン、酢酸コルチゾンなどが挙げられる。

【００４４】アンジオテンシン変換酵素阻害剤の例とし
ては、アラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸テモカプ
リル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリ
ル、シラザプリル、マレイン酸エナラプリル、リシノプ
リルなどが挙げられる。血管拡張剤の例としては、テオ
フィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、アミノ
フィリン、コリンテオフィリン、プロスタグランジン、
プロスタグランジン誘導体、アルプロスタジルアルファ
デクス、アルプロスタジル、リマプロストアルファデク
ス、パパベリン、シクランデラート、シンナリジン、フ
マル酸ベンシクラン、マレイン酸シネパジド、塩酸ジラ
ゼプ、トラピジル、塩酸ジフェニドール、ニコチン酸、
イノシトールヘキサニコチネート、クエン酸ニカメター
ト、酒石酸ニコチニックアルコール、ニコチン酸トコフ
ェロール、ヘプロニカート、塩酸イソクスプリン、硫酸
バメタン、塩酸トラリゾン、メシル酸ジヒドロエルゴト
キシン、酒石酸イフェンプロジル、塩酸モキシシリト、
ニセルゴリン、塩酸ニカルジピン、ニルバジピン、ニフ
ェジピン、塩酸ベニジピン、塩酸ジルチアゼム、ニソル
ジピン、ニトレンジピン、塩酸マニジピン、塩酸バルニ
ジピン、塩酸エホニジピン、塩酸ベラパミル、塩酸トリ
メタジジン、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、
アラセプリル、塩酸デラプリル、シラザプリル、リシノ
プリル、塩酸ベナゼプリル、塩酸ヒドララジン、塩酸ト
ドララジン、ブドララジン、カドララジン、インダパミ
ド、塩酸カルボクロメン、エフロキサート、塩酸エタフ
ェノン塩酸オキシフェドリン、ニコランジル、亜硝酸ア
ミル、硝酸イソソルビドなどが挙げられる。

【００４５】平滑筋細胞遊走・増殖抑制剤の例として
は、ヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低
分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫
酸などが挙げられる。

【００４６】血小板凝集阻害剤の例としては、塩酸チク
ロピジン、シロスタゾール、イコサペント酸エチル、ベ
ラプロストナトリウム、塩酸サルプグレラート、バトロ
キソビン、ジピリダモールなどが挙げられる。

【００４７】抗凝固剤の例としては、ヘパリンナトリウ
ム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパ
リンカルシウム、デキストラン硫酸、ワルファリンカリ
ウム、アルガトロバンなどが挙げられる。

【００４８】ケミカルメディエーター遊離抑制剤の例と
しては、トラニラスト、フマル酸ケトフェチン、塩酸ア
ゼラスチン、オキサトミド、アンレキサノクス、レピリ
ナストなどが挙げられる。

【００４９】免疫抑制剤の例としては、シクロスポリン
などが挙げられる。

【００５０】抗ウイルス剤の例としては、アシクロビ
ル、ガンシクロビル、ジダノシン、ジドブジン、ソリブ
ジン、ビダラビンなどが挙げられる。

【００５１】また、封入する診断するための薬剤の種類
としては、薬物担体の形成を損ねない限り特に限定され
るものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、放射性同位
元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等が挙
げられる。

【００５２】例えば、Ｘ線造影剤の例としては、アミド
トリゾ酸メグルミン、イオタラム酸ナトリウム、イオタ
ラム酸メグルミン、ガストログラフィン、ヨーダミドメ
グルミン、リピオドールウルトラフルイド、アジピオド
ンメグルミン、イオキサグル酸、イオトロクス酸メグル
ミン、イオトロラン、イオパノ酸、イオパミドール、イ
オヘキソール、イオベルソール、イオポダートナトリウ
ム、イオメプロール、イソペーク、ヨードキサム酸など
が挙げられる。

【００５３】本発明のリポソームは、常法によって容易
に得ることができる。その一例を以下に示す。塩基性化
合物、酸性化合物、およびその他のリン脂質、安定化
剤、酸化防止剤等の構成成分を、フラスコ内のクロロホ
ルム等の有機溶媒中で混合し、有機溶媒を留去した後、
真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄膜を形成させ
る。次に前記フラスコ内に薬物を加え、激しくかくはん
することにより、リポソーム分散液を得る。得られたリ
ポソーム分散液を遠心分離し、上製をデカンテーション
して封入されなかった薬物を除去する。必要に応じ、更
に、親水性高分子の脂質誘導体の溶液を加えて加温する
ことにより、本発明のリポソームが得られる。

【００５４】なお、親水性高分子の脂質誘導体の溶液を
構成成分の混合時に加えることによっても、本発明のリ
ポソームが得られる。親水性高分子の脂質誘導体の溶液
を添加する方法は、いずれのときでも特に問題はない
が、構成成分の混合時に添加する方法ではリポソーム内
部にも親水性高分子の脂質誘導体が入ることとなり、実
質的な表面修飾率の低下と内封容積の低下を招く場合が
ある。

【００５５】また、別の方法として、上記の構成成分を
混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させることに
より本発明のリポソームを得ることもできる。

【００５６】本発明のリポソームの投与方法としては、
特に限定せず、溶液として静脈投与することなどで行わ
れる。本発明のリポソームは、生体内に投与すると炎症
部位や腫瘍部位などのｐＨ酸性の領域に特異的に集積
し、他の領域では集積が抑えられることから、抗炎症剤
や抗腫瘍剤などの運搬体として適しており、これらの薬
剤の効力を効果的に発揮させ、かつ副作用を軽減するな
どの効果がある。

【００５７】

【実施例】以下、実施例を示して本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらに限られるものではない。（実施例１）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（塩
基性化合物）およびミリスチン酸（脂肪酸）を構成成分
とするリポソームの調製（１−）まず、ホスファチジルコリン４．６２mmo
l、コレステロール４．６２mmol、３，５−ジペンタデ
シロキシベンズアミジン塩酸塩０．７６mmolをｔ−ブチ
ルアルコール１００mlに溶解させた脂質混合溶液を氷浴
で凍結し、一晩凍結乾燥を行い脂質混合物を得た。

【００５８】（１−）（１−）の手法により得ら
れた脂質混合物０．０６mmolを容量５０mlのナス型フラ
スコにはかり取り、１．１４mMのミリスチン酸／クロロ
ホルム溶液を２ml加えた。クロロホルムを除去した後、
一晩真空乾燥することによりフラスコ内壁に脂質薄膜を
形成した。これに生理食塩水６mlを加え、５５℃で５分
間超音波処理することにより、リポソーム分散液を得
た。これを孔径０．４μm のポリカーボネートフィルム
を用いて圧送し、ついで０．２μm 、０．１μm のポリ
カーボネートフィルムを用いて圧送することによって整
粒を行い、平均粒子径が９０〜２００nmの標記のリポソ
ーム分散液を得た。本発明の塩基性化合物が７．３mo
l%、本発明の酸性化合物が３．７mol%である標記のリ
ポソーム分散液を得た。得られたリポソームの平均粒子
径は１２５．５nmであった。

【００５９】（実施例２）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩およ
びホスファチジン酸（リン酸モノエステル誘導体）を構
成成分とするリポソームの調製上記（１−）の手法により得られた脂質混合物０．０
６mmolを容量５０mlのナス型フラスコにはかり取り、
１．１４mMのホスファチジン酸／クロロホルム溶液を
０．５ml加えた。クロロホルムを除去した後、一晩真空
乾燥することによりしフラスコ内壁に脂質薄膜を形成し
た。これに生理食塩水６mlを加え、５５℃で５分間超音
波処理することにより、リポソーム分散液を得た。以
下、上記（１−）と同様の方法により、平均粒子径が
９０〜２００nmで本発明の塩基性化合物が７．５mol
%、本発明の酸性化合物が０．９mol%である標記のリ
ポソーム分散液を得た。得られたリポソームの平均粒子
径は１３０．７nmであった。

【００６０】（実施例３）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（塩
基性化合物）およびリン酸プレドニゾロンナトリウム
（リン酸モノエステル誘導体）を構成成分とするリポソ
ームの調製上記（１−）の手法により得られた脂質混合物０．６
mmolに７５mMリン酸プレドニゾロンナトリウム水溶液１
０mlを加え、５５℃で５分間超音波処理することによ
り、リポソーム分散液を得た。これを孔径０．４μm の
ポリカーボネートフィルムを用いて圧送し、ついで０．
２μm 、０．１μm のポリカーボネートフィルムを用い
て圧送することによって整粒を行った。得られたリポソ
ーム分散液をカラム（Sepharose ４ Φ３cm X２０cm、
溶離液：生理食塩水）にかけてリポソーム画分を回収
し、粒子径が９０〜２００nm（平均粒子径１３０．７n
m）の標記のリポソーム分散液を得た。

【００６１】（実施例４）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（塩
基性化合物）およびリン酸リボフラビンナトリウム（リ
ン酸モノエステル誘導体）を構成成分とするリポソーム
の調製上記（１−）の手法により得られた脂質混合物０．６
mmolに７５mMリン酸リボフラビンナトリウム水溶液１０
mlを加え、５５℃で５分間超音波処理することにより、
リポソーム分散液を得た。以下、実施例３と同様に操作
し、標記のリポソーム分散液を得た。得られたリポソー
ムの平均粒子径は１１７．９nmであった。

【００６２】（実施例５）１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム
プロパン（塩基性化合物）およびミリスチン酸（脂肪
酸）を構成成分とするリポソームの調製ホスファチジルコリン２５μmol 、コレステロール２５
μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアン
モニウムプロパン２５μmol 、ミリスチン酸２５μmol
を１０ｍｌのクロロホルムに溶解させてから、エバポレ
ーターでクロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥する
ことによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに
生理食塩水５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理する
ことにより、リポソーム分散液を得た。以下、上記（１
−）と同様の方法により、平均粒子径が９０〜２００
nmでリポソーム分散液を得た。０．４mMポリエチレング
リコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体生食
溶液とリポソーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０
分加温することによって、本発明の塩基性化合物が２
５mol%、本発明の酸性化合物が２５mol%、ポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
２mol%である標記のリポソーム分散液を得た。

【００６３】（実施例６）１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム
プロパン（塩基性化合物）およびミリスチン酸（脂肪
酸）を構成成分とするリポソームの調製ホスファチジルコリン２０μmol 、コレステロール２０
μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアン
モニウムプロパン３０μmol 、ミリスチン酸３０μmol
を１０ｍｌのクロロホルムに溶解させてから、エバポレ
ーターでクロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥する
ことによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに
生理食塩水５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理する
ことにより、リポソーム分散液を得た。以下、上記（１
−）と同様の方法により、平均粒子径が９０〜２００
nmでリポソーム分散液を得た。０．４mMポリエチレング
リコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体生食
溶液とリポソーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０
分加温することによって、本発明の塩基性化合物が３
０mol%、本発明の酸性化合物が３０mol%、ポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
２mol%である標記のリポソーム分散液を得た。なお、ホ
スファチジルコリン１０μmol 、コレステロール１０μ
mol 、１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモ
ニウムプロパン４０μmol 、ミリスチン酸４０μmol で
同様に調製を試みたが、リポソーム分散液を得ることは
できなかった。

【００６４】（実施例７）１，２−ジパルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプ
ロパン（塩基性化合物）およびパルミチン酸（脂肪酸）
を構成成分とするリポソームの調製ホスファチジルコリン３５μmol 、コレステロール３５
μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−ジメチルアンモ
ニウムプロパン２０μmol 、パルミチン酸１０μmol を
１０ｍｌのクロロホルムに溶解させてから、エバポレー
ターでクロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥するこ
とによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに生
理食塩水５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理するこ
とにより、リポソーム分散液を得た。以下、上記（１−
）と同様の方法により、平均粒子径が９０〜２００nm
でリポソーム分散液を得た。０．４mMポリエチレングリ
コール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体生食溶
液とリポソーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０分
加温することによって、本発明の塩基性化合物が２０
mol%、本発明の酸性化合物が１０mol%、ポリエチレン
グリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体２
mol%である標記のリポソーム分散液を得た。

【００６５】（実施例８）１，２−ジパルミトイル−３−ジメチルアンモニウムプ
ロパン（塩基性化合物）およびパルミチン酸（脂肪酸）
を構成成分とするリポソームの調製ホスファチジルコリン３０μmol 、コレステロール３０
μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−ジメチルアンモ
ニウムプロパン２０μmol 、パルミチン酸２０μmol を
１０ｍｌのクロロホルムに溶解させてから、エバポレー
ターでクロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥するこ
とによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに生
理食塩水５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理するこ
とにより、リポソーム分散液を得た。以下、上記（１−
）と同様の方法により、平均粒子径が９０〜２００nm
でリポソーム分散液を得た。０．４mMポリエチレングリ
コール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体生食溶
液とリポソーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０分
加温することによって、本発明の塩基性化合物が２０
mol%、本発明の酸性化合物が２０mol%、ポリエチレン
グリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体２
mol%である標記のリポソーム分散液を得た。

【００６６】（実施例９）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（塩
基性化合物）およびホスファチジン酸を構成成分とする
リポソームの調製ホスファチジルコリン４４μmol 、コレステロール４４
μmol 、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩
酸塩１０μmol 、ホスファチジン酸２μmol を１０ｍｌ
のクロロホルムに溶解させてから、エバポレーターでク
ロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥することにより
フラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに生理食塩水
５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理することによ
り、リポソーム分散液を得た。以下、上記（１−）と
同様の方法により、平均粒子径が９０〜２００nmでリポ
ソーム分散液を得た。ポリエチレングリコール−ホスフ
ァチジルエタノールアミン誘導体生食溶液とリポソーム
分散液を等容量加えた後６０℃で３０分加温することに
よって、本発明の塩基性化合物が１０mol%、本発明
の酸性化合物が２mol%、０．１２mMポリエチレングリコ
ール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体０．６mo
l%である標記のリポソーム分散液を得た。

【００６７】（比較例１）上記（１−）の手法により
得られた脂質混合物０．６mmolに生理食塩水１０mlを加
え、５５℃で５分間超音波処理することにより、リポソ
ーム分散液を得た。これを、上記（１−）と同様の方
法により平均粒子径が９０〜２００nmの標記のリポソー
ム分散液を得た。得られたリポソームの平均粒子径は１
１０．５nmであった。

【００６８】（比較例２）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩およ
びホスファチジルグリセロールを構成成分とするリポソ
ームの調製上記（１−）の手法により得られた脂質混合物０．０
６mmolを容量５０mlのナス型フラスコにはかり取り、
１．１４mMのホスファチジルグリセロール／クロロホル
ム溶液を２ml加えた。クロロホルムを除去した後、一晩
真空乾燥することによりしフラスコ内壁に脂質薄膜を形
成した。これに生理食塩水６mlを加え、５５℃で５分間
超音波処理することにより、リポソーム分散液を得た。
上記（１−）と同様の方法により、平均粒子径が９０
〜２００nmである標記のリポソーム分散液を得た。得ら
れたリポソームの平均粒子径は１３８．８nmであった。

【００６９】（比較例３）３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩およ
びポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノール
アミン誘導体を構成成分とするリポソームの調製比較例１により得られたリポソーム分散液の脂質濃度を
２０mMに調整した。このリポソーム分散液にポリエチレ
ングリコール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体
溶液（分子量約６０００、濃度１．２１４mg/ml ）を等
容量加えた後６０℃で３０分加温することによって、粒
子径が９０〜２００nm（平均粒子径１１７．４nm）であ
る標記のリポソーム分散液を得た。

【００７０】（比較例４）１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム
プロパン（塩基性化合物）を構成成分とするリポソーム
の調製ホスファチジルコリン３７．５μmol 、コレステロール
３７．５μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−トリメ
チルアンモニウムプロパン２５μmol を１０mlのクロロ
ホルムに溶解させてから、エバポレーターでクロロホル
ムを除去した後、一晩真空乾燥することによりフラスコ
内壁に脂質薄膜を形成した。これに生理食塩水５mlを加
え、５５℃で５分間超音波処理することにより、リポソ
ーム分散液を得た。以下、上記（１−）と同様の方法
により、平均粒子径が９０〜２００nmでリポソーム分散
液を得た。０．４mMポリエチレングリコール−ホスファ
チジルエタノールアミン誘導体２mol%生食溶液とリポソ
ーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０分加温するこ
とによって、標記のリポソーム分散液を得た。

【００７１】（比較例５）１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウム
プロパン（塩基性化合物）を構成成分とするリポソーム
の調製ホスファチジルコリン３５μmol 、コレステロール３５
μmol 、１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアン
モニウムプロパン３０μmol を１０mlのクロロホルムに
溶解させてから、エバポレーターでクロロホルムを除去
した後、一晩真空乾燥することによりフラスコ内壁に脂
質薄膜を形成した。これに生理食塩水５mlを加え、５５
℃で５分間超音波処理することにより、リポソーム分散
液を得た。以下、上記（１−）と同様の方法により、
平均粒子径が９０〜２００nmでリポソーム分散液を得
た。０．４mMポリエチレングリコール−ホスファチジル
エタノールアミン誘導体生食溶液とリポソーム分散液を
等容量加えた後６０℃で３０分加温することによって、
標記のリポソーム分散液を得た。

【００７２】（比較例６）ホスファチジルコリン５０μ
mol 、コレステロール５０μmol を１０mlのクロロホル
ムに溶解させてから、エバポレーターでクロロホルムを
除去した後、一晩真空乾燥することによりフラスコ内壁
に脂質薄膜を形成した。これに生理食塩水５mlを加え、
５５℃で５分間超音波処理することにより、リポソーム
分散液を得た。以下、上記（１−）と同様の方法によ
り、平均粒子径が９０〜２００nmでリポソーム分散液を
得た。ポリエチレングリコール−ホスファチジルエタノ
ールアミン誘導体０．１２mM生食溶液とリポソーム分散
液を等容量加えた後６０℃で３０分加温することによっ
て、本発明の塩基性化合物と本発明の酸性化合物を
含まないリポソーム分散液を得た。

【００７３】（比較例７）ホスファチジルコリン４５μ
mol 、コレステロール４５μmol 、３，５−ジペンタデ
シロキシベンズアミジン塩酸塩１０μmol を１０mlのク
ロロホルムに溶解させてから、エバポレーターでクロロ
ホルムを除去した後、一晩真空乾燥することによりフラ
スコ内壁に脂質薄膜を形成した。これに生理食塩水５ml
を加え、５５℃で５分間超音波処理することにより、リ
ポソーム分散液を得た。以下、上記（１−）と同様の
方法により、平均粒子径が９０〜２００nmでリポソーム
分散液を得た。ポリエチレングリコール−ホスファチジ
ルエタノールアミン誘導体０．１２mM生食溶液とリポソ
ーム分散液を等容量加えた後６０℃で３０分加温するこ
とによって、リポソーム分散液を得た。

【００７４】（比較例８）ホスファチジルコリン４９μ
mol 、コレステロール４９μmol 、ホスファチジン酸２
μmol を１０mlのクロロホルムに溶解させてから、エバ
ポレーターでクロロホルムを除去した後、一晩真空乾燥
することによりフラスコ内壁に脂質薄膜を形成した。こ
れに生理食塩水５mlを加え、５５℃で５分間超音波処理
することにより、リポソーム分散液を得た。以下、上記
（１−）と同様の方法により、平均粒子径が９０〜２
００nmでリポソーム分散液を得た。ポリエチレングリコ
ール−ホスファチジルエタノールアミン誘導体０．１２
mM生食溶液とリポソーム分散液を等容量加えた後６０℃
で３０分加温することによって、アニオニック脂質を含
むリポソーム分散液を得た。

【００７５】（試験例１）各種リポソームのプロテオグ
リカンとの親和性この試験の目的は酸性下および中性付近において、リポ
ソームと炎症部位や腫瘍部位などで過剰産生しているプ
ロテオグリカンとの親和性を調べたものである。

【００７６】（方法）プロテオグリカンに含まれるアニ
オン性糖鎖高分子であるグリコサミノグリカンを各実施
例および各比較例のリポソームと混合したときに、各リ
ポソームに吸着するグリコサミノグリカンの量を測定し
た。グリコサミノグリカンとしてコンドロイチン硫酸Ｃ
（分子量：３万〜６万）をｐＨ７．４であるリン酸緩衝
液に溶解させ０．１mg/ml となるよう調製し、さらに６
ＮＨＣｌによってｐＨ６．０、あるいはｐＨ６．５に調
整した。得られたｐＨ７．４あるいはｐＨ６．０の０．
１mg/ml コンドロイチン硫酸Ｃ溶液０．３mlと、脂質濃
度を生理食塩水によって１０mMに調整した各リポソーム
分散液０．３mlを混合し、３７℃で１時間加温した。冷
却後、１０００００ｇで１時間超遠心し、上清を採取し
た。上清中のコンドロイチン硫酸Ｃを Blyscan proteog
lycan assay kit により定量し、各リポソームへのコン
ドロイチン硫酸Ｃの吸着量を算出した。

【００７７】（結果）結果を図１〜３に示す。酸性化合
物を含まない比較例１、及び酸性化合物がリン酸ジエス
テル誘導体である比較例２〜５と７のリポソームは、ｐ
Ｈ６．０あるいは６．５とｐＨ７．４でコンドロイチン
硫酸Ｃの吸着量は同じであった。塩基性化合物を含まな
い比較例６と８のリポソームはｐＨ６．５でもｐＨ７．
４でもコンドロイチン硫酸Ｃが吸着しなかった。本発明
にかかる実施例１〜９のリポソームは、ｐＨ６．０ある
いは６．５とｐＨ７．４ではコンドロイチン硫酸Ｃの吸
着量は差があり、ｐＨ７．４においては吸着量が抑えら
れることが確認された。すなわち、本発明のリポソーム
は中性付近ではプロテオグリカンに対する親和性が抑え
られるのに対して酸性環境では高い親和性を有すること
が示された。

【００７８】（試験例２）各種リポソームの細胞に対す
る親和性の評価（方法）ヒト大動脈平滑筋初代細胞(Clonetics社製）を
３．８×１０⁺⁴ cells/well となるように12-well cult
ure plate （Falcon,Becton Dikinson社製）にまき、24
時間培養した。RPMI1640（シグマ社製）/10% FBS(pH
６．０またはpH７．４) の培地に変えて(1ml/well)、実
施例９と比較例６〜８のリポソームを50μg PC/well ず
つ添加し、２４時間反応させた（ｎ＝３）。PBS(-)で２
回洗浄後、細胞溶解剤（50mM Tris(pH 8.0)/150mM NaCl
/0.5% DOC/1% NP-40/0.1% SDS)で細胞を溶解し、蛍光強
度測定した。蛍光強度からPC濃度を換算し、蛋白量で補
正後、各リポソームの細胞への結合量を算出した。

【００７９】（結果）結果を図４に示す。比較例７のリ
ポソームは、ｐＨ６．０とｐＨ７．４で細胞への結合量
はほぼ同じであった。比較例６と８のリポソームはｐＨ
６．０でもｐＨ７．４でも細胞に結合しなかった。本発
明にかかる実施例９のリポソームは、ｐＨ６．０あるい
は６．５とｐＨ７．４では細胞への結合量は差があり、
ｐＨ７．４においては結合量が抑えられることが確認さ
れた。すなわち、本発明のリポソームは中性付近では細
胞に対する親和性が抑えられるのに対して酸性環境では
高い親和性を有することが示された。

【００８０】（試験例３）急性毒性この試験の目的は、本発明のリポソームの毒性が、従来
のものの毒性と比較してどの程度であるかを知ることで
ある。そのために、本発明のリポソームのラットに対す
る致死毒性試験を行った。

【００８１】（方法）実施例１〜９のリポソーム分散液
を限外ろ過膜を用いて濃縮し、さらに必要に応じて注射
用滅菌蒸留水で希釈して被験液とした。検疫した５週齢
のマウスを１群５匹に区分し、尾静脈より上記の被験液
を１００ml/kg 投与した。一方、溶媒対照群は、生理食
塩水を１００ml/kg 投与した。被験液投与後、７日間に
わたって少なくとも１日１回、注意深く一般状態を観察
して毒性徴候、死亡状況を記録した。また、７日後に剖
検し、各臓器を摘出した。各臓器について病理切片を作
成し観察を行った。

【００８２】（結果）本発明のリポソームはいずれも、
観察期間中、死亡例を認めなかった。また、７日後の各
臓器の病理観察においては、問題となるような病理所見
は認められなかった。即ち、本発明のリポソームは、極
めて毒性が低く、安全性の高いものであることが確認さ
れた。

【００８３】

【発明の効果】本発明のリポソームは、酸性領域下で炎
症や腫瘍などのｐＨが低下した病巣部位へのターゲッテ
ィング性が非常に高い。また、安全性も非常に高い。従
って、診断および／または治療を目的とする薬物を運搬
する本発明のリポソームは、炎症や腫瘍病変を起こした
組織および／または臓器における診断及び治療という目
的に対して非常に効果的である。

【図面の簡単な説明】

【図１】各リポソームとプロテオグリカン（コンドロ
イチン硫酸Ｃ）との親和性を表したグラフである。

【図２】各リポソームとプロテオグリカン（コンドロ
イチン硫酸Ｃ）との親和性を表したグラフである。

【図３】各リポソームとプロテオグリカン（コンドロ
イチン硫酸Ｃ）との親和性を表したグラフである。

【図４】各リポソームとヒト大動脈平滑筋初代細胞と
の親和性を表したグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 37/06 Ａ６１Ｐ 37/06 43/00 １０５ 43/00 １０５１１１１１１Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者木村順治神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地テルモ株式会社内 (72)発明者磯崎正史神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地テルモ株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】治療および／または診断を目的とする薬物
を内包するリポソームであって、リポソーム膜構成成分
として、塩基性化合物、リン酸モノエステル誘導体
またはカルボキシル基またはその塩を有する化合物であ
る酸性化合物、および、以外のリポソーム膜構成
成分を含有し、ｐＨが５〜７の病巣部位に集積するリポ
ソーム。
【請求項２】前記塩基性化合物のモル比が、全リポソー
ム膜構成成分中の１〜３０mol%である請求項１記載のリ
ポソーム。
【請求項３】前記酸性化合物のモル比が、全リポソーム
膜構成成分中の０．５〜３０mol%である請求項１または
２に記載のリポソーム。
【請求項４】前記塩基性化合物が、下記式１から４のい
ずれかで示される塩基性化合物である請求項１ないし３
のいずれかに記載のリポソーム。【化１】（式１中、Ａは芳香環を表す。Ｒ¹及びＲ²は炭素数１
０〜２５のアルキル基またはアルニケル基を表し、Ｒ¹
およびＲ²は同一であっても異なっていてもよい。Ｘ¹
およびＸ²は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ
−、−ＣＯＮＨ−またはＮＨＣＯ−を表し、Ｘ¹および
Ｘ²は同一であっても異なっていてもよい。ｍは０また
は１、ｎは０または１〜６の整数を表す。）【化２】（式２中、Ｒ³は水素または炭素数１〜８のアルキル基
もしくはアルニケル基を表す。Ｒ⁵およびＲ⁶は水素ま
たは炭素数１〜２５のアルキル基もしくはアルニケル基
を表し（但し、Ｒ⁵およびＲ⁶が共に水素である場合を
除く。）、Ｒ⁵およびＲ⁶は同一であっても異なってい
てもよい。Ｘ³は−Ｏ−または−Ｓ−を表す。ｐは０ま
たは１、ｑは０または１〜１０の整数を表す。）【化３】【化４】
【請求項５】前記塩基性化合物が、４級アミン又は３級
アミンを有する塩基性化合物である請求項１ないし４の
いずれかに記載のリポソーム。
【請求項６】前記塩基性化合物が、下記式５から６のグ
ループから選ばれる請求項１ないし５のいずれかに記載
のリポソーム。【化５】（式５中Ｒ⁷およびＲ⁸は、炭素数１〜８のアルキル基
またはアルケニル基を表し、Ｒ⁷およびＲ⁸は同一であ
っても異なってもよい。Ｘ⁴およびＸ⁵は−Ｏ−または
−ＯＣＯ−を表し、Ｘ⁴およびＸ⁵は同一であっても異
なってもよい。Ｒ ⁹およびＲ¹⁰は炭素数１０〜２０のア
ルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は
同一であっても異なってもよい。ｔは１〜６の整数を表
す。）【化６】（式６中、Ｒ⁷，Ｒ⁸およびＲ⁹は、炭素数１〜８のア
ルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ⁷、Ｒ⁸および
Ｒ⁹は同一であっても異なってもよい。Ｘ⁴およびＸ⁵
は−Ｏ−または−ＯＣＯ−を表し、Ｘ⁴およびＸ⁵は同
一であっても異なってもよい。Ｒ⁹およびＲ¹⁰は炭素数
１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を表し、Ｒ
⁹およびＲ¹⁰は同一であっても異なってもよい。ｔは１
〜６の整数を表す。）
【請求項７】前記リン酸モノエステル誘導体が、リン酸
プレドニゾロン、リン酸リボフラビン、ホスファチジン
酸から選ばれる請求項１ないし６のいずれかに記載のリ
ポソーム。
【請求項８】前記カルボキシル基またはその塩を有する
化合物が、脂肪酸である請求項１ないし７のいずれかに
記載のリポソーム。
【請求項９】前記脂肪酸が、オレイン酸、ステアリン
酸、パルミチン酸、ミリスチン酸である請求項１ないし
８のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１０】前記以外のリポソーム膜構成成分
が、リン脂質あるいはその誘導体、および／またはステ
ロールあるいはその誘導体である請求項１ないし９のい
ずれかに記載のリポソーム。
【請求項１１】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、酵素阻害剤、抗
酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、
ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素
阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の
増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミ
カルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖
または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウ
ム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制
剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制
剤、アミロイドーシス阻害剤、ＮＯＳ阻害剤、ＡＧＥs
阻害剤あるいはラジカルスカベンチャーである請求項１
ないし１０のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１２】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその
類縁体である請求項１ないし１０のいずれかに記載のリ
ポソーム。
【請求項１３】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体であ
る請求項１ないし１０のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１４】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの
誘導体である請求項１ないし１０のいずれかに記載のリ
ポソーム。
【請求項１５】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、タンパク質またはペプチドである請求項１な
いし１０のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１６】前記治療および／または診断を目的とす
る薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断
薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である
請求項１ないし１０のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１７】治療および／または診断を目的とする薬
物を内包するリポソーム膜構成成分に、ｐＨ６．５とｐ
Ｈ７．４のリン酸緩衝液中におけるリポソームへのコン
ドロイチン硫酸Ｃの吸着量比が、ｐＨ６．５における吸
着量／ｐＨ７．４における吸着量≧１．５となるように
塩基性化合物とリン酸モノエステル誘導体またはカ
ルボキシル基またはその塩を有する化合物である酸性化
合物とを添加して、リポソームの病巣部位への集積率を
高める方法。