JPH1160592A - コレスタノール化合物及びこれを含有する医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 次の一般式（１） 【化１】 で表わされるコレスタノール化合物及びこれを有効成分
とする医薬。 【効果】 癌細胞増殖抑制効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗癌剤等の医薬と
して有用なコレスタノール化合物及びこれを有効成分と
する医薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、生命発生の過程に見られる発生・
分化において糖鎖が重要な役割を果していることが明ら
かになるに伴い、糖鎖の生理的意義について多くの研究
者の注目を集めている。一方、コレステロールは動物細
胞の形質膜、リソゾーム膜、ゴルジ膜などの主要構成脂
質の１つである他に、ステロイドホルモン、ビタミン
Ｄ、胆汁酸の前駆体としても重要な役割を担っている。

【０００３】従って、糖鎖とコレステロールを結合させ
た化合物は医薬等への応用が期待される。糖鎖とコレス
テロールとを結合させた化合物としては、シアル酸誘導
体としてコレステロールを用いた例（特開昭６１−２４
３０９６号公報）、シアロシルコレステロール（特開昭
６３−６３６９７号公報）、シアロシルラクトシルコレ
ステロール等のシアロシルコレステロールのアナログ体
（特開平３−１６１４９６号公報）などが提案されてい
る。糖鎖とコレステロールとを結合させた化合物は多彩
な薬理作用を有するものであり、例えばシアロコレステ
ロールを含有する神経障害疾患治療剤（特開昭６２−２
６５２２９号公報）、シアロコレステロールを含有する
脱髄性疾患治療剤（特開平１−９３５２９号公報）、シ
アロコレステロールを含有する抗痴呆薬（特開平３−８
１２８７号公報）などが提案されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、医薬等として有用な新規なコレステロール化合物を
提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】このような実情におい
て、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、コレステロー
ルのＢ環の二重結合が飽和されたコレスタノールに糖鎖
を結合させた下記一般式（１）で表わされる化合物が癌
細胞の増殖を抑制することを見出し本発明を完成した。

【０００６】すなわち本発明は、次の一般式（１）

【０００７】

【化２】

【０００８】で表わされるコレスタノール化合物及びこ
れを有効成分とする医薬を提供するものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明のコレスタノール化合物
（１）のうち、（Ｇ−１）の基をもつ３−β−コレスタ
ニル ３−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−
ガラクトピラノシド（１−１）は、例えば次の反応式に
従って製造することができる。

【００１０】

【化３】

【００１１】

【化４】

【００１２】〔式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｎはベンジ
ル基、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｃｈｏｌは、次の式
（７）

【００１３】

【化５】

【００１４】で表わされる基を示す〕

【００１５】すなわち、メチル β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシド（２）を原料とし、この水酸基の一つをベンジル
基で保護して化合物（３）とし、更に残りの水酸基をア
セチル基で保護して化合物（４）とした後、メトキシ基
をアセチルオキシ基とし（５）、このアセチルオキシ基
をハロゲン原子と置換して化合物（６）とし、これにβ
−コレスタノール（７）を反応せしめて化合物（８）を
得、このベンジル基を脱離することにより、化合物
（９）を得ることができる。一方、２，３，４−トリ−
Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノース（１０）の水酸
基をフェニルカルバモイルオキシ基とし（１１）、これ
に前記化合物（９）を反応させ化合物（１２）を得、こ
の水酸基の保護基を脱離することにより、目的とする化
合物（１−１）を得ることができる。なお、水酸基の保
護基は、アセチル基以外のアシル基であってもよく、ベ
ンジル基以外のアラルキル基であってもよい。

【００１６】また、本発明化合物（１）のうち、（Ｇ−
２）の基をもつ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−｛３−
Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グル
コピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−β−
Ｄ−グルコピラノシド（１−２）は、例えば次の反応式
に従って製造することができる。

【００１７】

【化６】

【００１８】

【化７】

【００１９】〔式中、Ａｃ、Ｂｎ及びＣｈｏｌは前記と
同じものを示し、ＡｇＯＴｆはトリフルオロメタンスル
ホン酸銀を示し、ＴＢＡＩはヨウ化テトラブチルアンモ
ニウムを示し、ＭｅＯＴｆは、メチルトリフラートを示
す〕

【００２０】すなわち、４−Ｏ−（２，３，４，６−テ
トラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−
１，２，３，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グル
コピラノース（１４）を原料とし、これにβ−コレスタ
ノールを反応せしめて、化合物（１５）とし、化合物
（１５）のガラクトピラノシル基の３位にベンジル基を
導入し、ベンジルオキシ基とし化合物（１６）を得、化
合物（１６）のベンジルオキシ基を脱離し、水酸基とす
れば化合物（１７）を得ることができる。次いで、化合
物（１７）にエチル ３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル
−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ
−グルコピラノシド（１８）を反応せしめ、化合物（１
９）を得、化合物（１９）の保護基を変換することによ
り化合物（２０）とし、最後にアセチル基を脱離するこ
とにより目的とする化合物（１−２）を得ることができ
る。

【００２１】前記反応式において、ベンジル基の導入反
応は、例えば糖類にヨウ化テトラｎ−ブチルアンモニウ
ム等の第４級アンモニウム塩の存在下、ベンジルブロミ
ド等を反応させることにより行なわれる。また、Ｏ−ア
セチル化反応は、糖類にピリジン等の塩基の存在下、無
水酢酸を反応させることにより行なわれる。また、Ｏ−
フェニルカルバモイル化反応は、糖類に塩基の存在下に
イソシアン酸フェニルを反応させることにより行なわれ
る。また、ブロミドの導入反応は、糖類に酢酸及び臭化
水素を反応させることにより行なわれる。また、コレス
タノール基（７）の導入反応は、糖類にモレキュラーシ
ーブ、テトラメチル尿素の存在下にコレスタノールを加
えて、次いでトリフルオロメタンスルホン酸銀で処理す
ることにより行なわれる。

【００２２】また、アセチル基の脱離反応は、ナトリウ
ムアルコキシド、炭酸アルカリ、水酸化アルカリ等の塩
基の存在下に加水分解することにより行なわれる。ま
た、ベンジル基の脱離反応は、接触還元、例えばパラジ
ウム−炭素等の存在下に水素添加することにより行なわ
れる。

【００２３】このようにして得られる化合物（１）は癌
細胞増殖抑制効果を有し、しかも安全性が高いので、抗
癌剤等の医薬の成分として有用である。

【００２４】化合物（１）は、常法に従って薬学的に許
容される担体とともに種々の剤型の医薬組成物とするこ
とができる。また投与形態も特に限定されず治療目的に
応じて適宜選択でき、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、
軟膏剤、貼付剤等のいずれでも良く、これらの投与形態
は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造でき
る。経口用固形製剤を調製する場合は、化合物（１）に
賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色
剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被
覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することが
できる。そのような添加剤としては、当該分野で一般的
に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、乳
糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸
カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等を、
結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シ
ロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボ
キシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、
エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポ
リビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプ
ン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナト
リウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ス
テアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては
精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレング
リコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、
酒石酸等を例示できる。

【００２５】経口用液体製剤を調製する場合は、化合物
（１）に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて
常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製
造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙
げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウ
ム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、
ゼラチン等が挙げられる。

【００２６】注射剤を調製する場合は、化合物（１）に
pH調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等
を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤
を製造することができる。この場合のpH調節剤及び緩衝
剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン
酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜
硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳
酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイ
ン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤として
は、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が例示できる。坐剤を
調製する場合は、化合物（１）に当業界において公知の
製剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリ
ン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等を、更に必要
に応じてツイーン（登録商標）のような界面活性剤等を
加えた後、常法により製造することができる。軟膏剤を
調製する場合は、化合物（１）に通常使用される基剤、
安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常
法により混合、製剤化される。基剤としては、流動パラ
フィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデ
シルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤と
しては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香
酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられ
る。貼付剤を製造する場合は、通常の支持体に前記軟
膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すれ
ば良い。支持体としては、綿、スフ、化学繊維からなる
織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウ
レタン等のフィルムあるいは発泡体シートが適当であ
る。本発明の化合物（１）の投与量は、患者の症状、体
重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できな
いが、通常成人１日あたり本発明化合物（１）として約
０．０１〜２００mg／kg、好ましくは約０．１〜５０mg
／kgとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に
分けて投与するのが好ましい。

【００２７】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。

【００２８】実施例１ 化合物（１−１）の合成： １． メチル ３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシド（３）の合成：メチル β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシド（２）２０．０ｇにベンゼン７００ml及びジ−ｎ
−ブチルすずオキシド２８．２ｇを加えて、１１０℃で
加熱還流した。３日後、ヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアン
モニウム４１．９ｇ及びベンジルブロミド２８．３mlを
加えて、再度１００℃で４時間加熱還流した。反応液を
室温に戻してから減圧濃縮し、水３００ml及びフッ化カ
リウム３０．０ｇを加えて、室温で１時間攪拌した。こ
れに酢酸エチル２００ml及びフッ化カリウム２０．０ｇ
を加えて、酢酸エチル抽出を行なった。抽出液を硫酸マ
グネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ
−３００（トルエン：アセトン ２：１，８０φ−３１
５mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると
化合物（３）が粗精製物として３５．１ｇ得られた。

【００２９】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.39
-7.26,m,aromatic-H; 4.75,m,2H,benzyl-H;4.20,d,1H,g
al-1,J_1,2=7.8; 4.04,bt,1H,gal-4,J_3,4=3.5;3.97,m,1
H,gal-6a; 3.85,m,1H,gal-6b;3.79,m,1H,gal-2,J_1,2=7.
8,J_2,3=9.5;3.57,s,3H,-OMe;3.51,dd,1H,gal-5; 3.45,d
d,1H,gal-3,J_2,3=9.5,J_3,4=3.5

【００３０】２． メチル ２，４，６−トリ−Ｏ−ア
セチル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド（４）の合成：化合物（３）の粗精製物３５．１ｇを
ピリジン３００mlに溶かし、氷冷下３０分間攪拌した。
これに無水酢酸２００mlを加えて、室温で４時間攪拌し
た。反応液を減圧濃縮後、更にトルエンを加えて、酢酸
臭がなくなるまで減圧濃縮を繰り返した。得られた残渣
をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン ２０：
１，８０φ−３３０mm）を用いるカラムクロマトグラフ
ィーで精製すると化合物（４）が２１．５ｇ得られた。

【００３１】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.35
-7.15,m,aromatic-H; 5.51,t,1H,gal-4,J_3,4=2.6,J_4,5=
1.5;5.11,dd,1H,gal-2,J_1,2=8.3,J_2,3=10.1;4.70,d,1H,
benzyl-H,J=12.2; 4.40,d,1H,benzyl-H,J=12.2;4.30,d,
1H,gal-1,J_1,2=8.3; 4.18,d,2H,gal-6a,gal-6b;3.80,m,
1H,gal-5,J_4,5=1.5; 3.54,dd,1H,gal-3,J_2,3=10.1,J_3,4
=2.6;3.48,s,3H,-OMe; 2.15,s,-OAc; 2.08,s,-OAc; 2.0
3,s,-OAc

【００３２】３． １，２，４，６−テトラ−Ｏ−アセ
チル−３−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノース
（５）の合成：化合物（４）２１．５ｇを無水酢酸３０
０mlに溶かし、氷冷下３０分間攪拌した。これに硫酸
３．０mlを加えて、室温で１６時間攪拌した。反応液を
減圧濃縮後、水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和
し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネ
シウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３
００（トルエン：アセトン ２０：１，５０φ−３２５
mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化
合物（５）が１２．２ｇ得られた。

【００３３】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.35
-7.14,m,aromatic-H; 6.35,d,1H,gal-1,J_1,2=3.8;5.62,
dd,1H,gal-4,J_3,4=3.5; 5.26,dd,1H,gal-2,J_1,2=3.8,J
_2,3=10.7;4.73,d,1H,benzyl-H,J=11.6; 4.47,d,1H,benz
yl-H,J=11.6;4.26,m,1H,gal-5; 4.15,dd,1H,gal-6a;4.0
7,dd,1H,gal-6b; 3.92,dd,1H,gal-3,J_2,3=10.7,J_3,4=3.
5;2.13,s,-OAc; 2.10,s,-OAc; 2.06,s,-OAc; 2.01,s,-O
Ac

【００３４】４． ３−β−コレスタニル ２，４，６
−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシド（８）の合成：化合物（５）２．０６
ｇに酢酸４．０ml及び３０％臭化水素酢酸溶液４．０ml
を加えて遮光条件下室温で４５分間攪拌した。反応液を
水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホル
ム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥
後、減圧濃縮すると残渣が得られ、これを単離、精製す
ることなく化合物（６）として次の反応へ用いた。この
残渣にβ−コレスタノール（７）１．８３ｇ及びモレキ
ュラシーブス３Ａ１．５ｇを加えて３時間減圧乾燥した
後、塩化メチレン１００ml及びテトラメチル尿素６７６
μｌを加えて、アルゴン雰囲気中−２０℃で遮光条件下
３０分間攪拌した。これにトリフルオロメタンスルホン
酸銀１．４５ｇを加えて、室温で１８時間攪拌した。反
応液を水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロ
ロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで
乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（ト
ルエン：アセトン ４０：１，３５φ−２９０mm）を用
いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物
（８）が４３４mg得られた。

【００３５】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.34
-7.13,m,aromatic-H; 5.49,d,1H,gal-4;5.08,dd,1H,gal
-2,J_1,2=7.9; 4.69,d,1H,benzyl-H,J=12.3;4.44,d,1H,g
al-1,J_1,2=7.9; 4.39,d,1H,benzyl-H,J=12.3;4.16,m,2
H,gal-6a,gal-6b; 3.77,dd,1H,gal-5;3.51,m,2H,gal-3,
cholestanol-H; 2.14,s,-OAc; 2.06,s,-OAc;2.02,s,-OA
c; 1.97-0.59,m,cholestanol-H

【００３６】５． ３−β−コレスタニル ２，４，６
−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド
（９）の合成：化合物（８）７．３５ｇをメタノール２
００ml、酢酸エチル５０ml、ギ酸５０mlの混合液に溶か
し、アルゴン雰囲気中１０％パラジウム−炭素６．５０
ｇを加えて、室温で５時間攪拌した。反応液をフィルタ
ー濾過後、濾液を減圧濃縮すると残渣が得られた。この
残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン １
０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグ
ラフィーで精製すると化合物（９）が１．９７ｇ得られ
た。

【００３７】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：5.3
1,d,1H,gal-4; 4.93,dd,1H,gal-2,J_1,2=7.9;4.51,d,1H,
gal-1,J_1,2=7.9; 4.14,d,2H,gal-6a,gal-6b;3.82,m,2H,
gal-3,gal-5; 3.55,m,1H,cholestanol-H;2.17,s,-OAc;
2.12,s,-OAc; 2.05,s,-OAc;1.97-0.60,m,cholestanol-H

【００３８】６． ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−
１−Ｏ−フェニルカルバモイル−β−Ｌ−フコピラノー
ス（１１）の合成：２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−
α−Ｌ−フコピラノース（１０）４．００ｇを塩化メチ
レン１００mlに溶かし、イソシアン酸フェニル１．２１
ml、４−ジメチルアミノピリジン２２５mgを加えて、ア
ルゴン雰囲気中室温で２時間攪拌した。反応液を水中に
あけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出
を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧
濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセ
トン ２０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムク
ロマトグラフィーで精製すると化合物（１１）が２．９
７ｇ得られた。

【００３９】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.39
-7.06,m,20H,aromatic-H; 6.44,s,1H,-NH-;5.56,d,1H,f
uc-1,J_1,2=8.1; 5.01-4.69,m,6H,benzyl-H;3.96,dd,1H,
fuc-2,J_1,2=8.1; 3.63,m,3H,fuc-3,fuc-4,fuc-5;1.19,
d,3H,fuc-Me

【００４０】７． ３−β−コレスタニル ３−Ｏ−
（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラ
ノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−
ガラクトピラノシド（１２）の合成：化合物（１１）９
８１mgと化合物（９）１．００ｇを塩化メチレン１００
mlに溶かし、モレキュラシーブス３Ａ２．００ｇを加え
て、アルゴン雰囲気中室温で１０分間攪拌した。これに
トリメチルシリルトリフラート４００μｌを加えて、室
温で４５分間攪拌した。反応液を水中にあけて炭酸水素
ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽
出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を
ワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン ２０：
１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフ
ィーで精製すると化合物（１２）が９７５mg得られた。

【００４１】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：7.36
-7.23,m,aromatic-H; 5.26,d,1H,gal-4;5.21,dd,1H,gal
-2,J_1,2=7.9; 5.00,d,1H,fuc-1,J_1,2=3.7;4.95-4.60,m,
benzyl-H; 4.46,d,1H,gal-1,J_1,2=7.9;4.10,m,2H,sacch
aride-H; 4.00,dd,1H,fuc-2,J_1,2=3.7;3.94,dd,1H,fuc-
5; 3.86-3.78,m,3H,gal-3,fuc-3,saccharide-H;3.63,b
s,1H,saccharide-H; 3.51,m,1H,cholestanol-H;2.06,s,
-OAc; 2.04,s,-OAc,; 1.97-0.59,m,-OAc,fuc-Me,choles
tanol-H

【００４２】８． ３−β−コレスタニル ３−Ｏ−
（α−Ｌ−フコピラノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１３）の合
成：化合物（１２）９７５mgをメタノール３０ml、酢酸
エチル１０ml、ギ酸１０mlの混合液に溶かし、アルゴン
雰囲気中１０％パラジウム−炭素１．００ｇを加えて、
室温で４時間攪拌した。反応液をフィルター濾過後、濾
液を減圧濃縮すると残渣が得られた。この残渣をワコー
ゲルＣ−３００（トルエン：アセトン １：１，３５φ
−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製
し、更にエタノールで再結晶すると化合物（１３）が２
９８mg得られた。

【００４３】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＴＭＳ）：5.3
2,d,1H,gal-4; 5.15,dd,1H,gal-2,J_1,2=7.5; 4.91,d,1
H,fuc-1;4.52,d,1H,gal-1,J_1,2=7.5; 4.13,d,saccharid
e-H; 4.08,dd,fuc-5;3.85,m,gal-3,saccharide-H; 3.7
7,bs,fuc-4; 3.72,dd,fuc-2;3.56,m,2H,fuc-3,cholesta
nol-H; 2.15,s,-OAc; 2.10,s,-OAc;2.06,s,-OAc; 1.97-
0.58,m,fuc-Me,cholestanol-H

【００４４】９． ３−β−コレスタニル ３−Ｏ−
（α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シド（１−１） 化合物（１３）４１２mgをメタノール２０ml、クロロホ
ルム２０mlの混合液に溶かし、ナトリウムメトキシド１
０８mgを加えて、室温で２時間攪拌した。反応液を酸性
イオン交換樹脂アンバーリスト１５で中和し、濾過後、
濾液を減圧濃縮すると結晶が得られた。この結晶をワコ
ーゲルＣ−３００（クロロホルム：メタノール＝１０：
１，２２φ−２６５mm）を用いるカラムクロマトグラフ
ィーで精製すると化合物（１−１）が２７５mg得られ
た。

【００４５】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆／ＴＭＳ）：
4.92,d,1H,fuc-1,J_1,2=4.3; 4.27,d,1H,gal-1,J_1,2=7.
4;4.08,dd,1H,fuc-5; 3.80,s,1H,saccharide-H;3.65,d
d,1H,saccharide-H; 3.57-3.34,m,saccharide-H,choles
tanol-H;1.94-0.63,m,fuc-Me,cholestanol-H

【００４６】化合物（１−２）の合成： １． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−（２，３，４，
６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グル
コピラノシド（１５） ４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，６−テトラ
−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース（１４）
８．６４ｇを酢酸５ml及び無水酢酸５mlの混合液に溶か
し、３０％臭化水素酢酸溶液１５mlを加えて室温で１．
５時間攪拌した。反応液を水にあけ、炭酸水素ナトリウ
ムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムを
加えて乾燥した。固形分を濾去後減圧濃縮し、コレスタ
ノール５．９４ｇ、モレキュラーシーブＡＷ−３００
５ｇ、塩化メチレン１００ml及びテトラメチル尿素１．
２２mlを加えて室温で１０分攪拌した。これをドライア
イス−アセトニトリル浴に浸して充分攪拌した後、トリ
フルオロメタンスルホン酸銀３．９３ｇを加えて反応液
を室温にもどし１夜攪拌した。反応液を水にあけ炭酸水
素ナトリウムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグ
ネシウムを加えて乾燥した後固形分を濾去し減圧濃縮し
た。残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマ
トグラフィー（ベンゼン：アセトン＝１０：１，３５φ
−２６０mm）で精製し、化合物（１５）を３．３９ｇ得
た。

【００４７】２． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−
（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル
−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３，６−トリ−
Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１６）

【００４８】化合物（１５）３．３９ｇをメタノール２
００mlに溶かし、ナトリウムメトキシド１．２７ｇを加
えて室温で４時間攪拌した。反応液を酸性イオン交換樹
脂アンバーリスト１５で中和後、固形分を濾去し減圧濃
縮した。残渣にジブチル錫オキシド１．０７ｇ及びメタ
ノール１５０mlを加えて、２夜加熱還流した。反応液を
減圧濃縮後ベンゼン１５０ml、ベンジルブロミド０．８
０ml及びヨウ化テトラブチルアンモニウム１．８７ｇを
加えて１夜加熱還流した。反応液を減圧濃縮後残渣にピ
リジン９０ml及び無水酢酸６０mlを加えて、室温で４時
間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、トルエンを加えて酢
酸臭が無くなるまで繰り返し減圧濃縮した。残渣を、ワ
コーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー
（ベンゼン：アセトン＝１９：１，３５φ−２６０mm）
で精製し化合物（１６）を２．２２ｇ得た。

【００４９】３． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−
（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−グルコピラノシド（１７）

【００５０】化合物（１６）２．２２ｇにメタノール２
００ml、ギ酸２０ml及び１０％パラジウム炭素４ｇを加
えて、室温で１時間攪拌した。固形分を濾去後減圧濃縮
し、残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマ
トグラフィー（ベンゼン：アセトン＝４：１，３５φ−
２６０mm）で精製し、化合物（１７）を１．０２ｇ得
た。

【００５１】４． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−
｛３−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デ
オキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル｝−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−
β−Ｄ−グルコピラノシド（１９）

【００５２】エチル ３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル
−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ
−グルコピラノシド（１８）１．２５ｇ及び化合物（１
７）０．９６７ｇを塩化メチレン３０mlに溶かし、モレ
キュラーシーブＡＷ−３００１ｇを加えて室温で１０分
攪拌した。次いで反応容器を氷水浴に浸けて充分攪拌し
た後、メチルトリフラート１．１３mlを加えて室温にも
どし、更に１時間攪拌した。反応液を水にあけ炭酸水素
ナトリウムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグネ
シウムを加えて乾燥した後、固形分を濾去し減圧濃縮し
た。残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマ
トグラフィー（ベンゼン：アセトン＝２０：１，３５φ
−２８０mm）で精製し、化合物（１９）を０．７０９ｇ
得た。

【００５３】５． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−
｛３−Ｏ−（２−アセトアミド３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）
−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル｝−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−グルコピラノシド（２０）

【００５４】化合物（１９）７００mgをメタノール７５
mlに溶かし、ギ酸７．５ml及び１０％パラジウム炭素１
ｇを加えて室温で１時間攪拌した。固形分を濾去し減圧
濃縮後、残渣にエタノール１００ml及びヒドラジン１水
和物５mlを加えて１．５時間加熱還流した。反応液を減
圧濃縮し、残渣にピリジン６０ml及び無水酢酸４０mlを
加えて室温で３時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、ト
ルエンを加えて酢酸臭が無くなるまで繰り返し減圧濃縮
した。残渣を、ワコーゲルＣ−３００を用いるカラムク
ロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝５：１，２２
φ−２６０mm）で精製し、化合物（２０）を２９８mg得
た。

【００５５】６． ３−β−コレスタニル ４−Ｏ−
｛３−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ
−グルコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝
−β−Ｄ−グルコピラノシド（１−２）

【００５６】化合物（２０）２９８mgをメタノール１０
０mlに溶かし、ナトリウムメトキシド１２０mgを加えて
室温で３０分攪拌した。反応液を酸性イオン交換樹脂ア
ンバーリスト１５で中和した後、固形分を濾去後減圧濃
縮し、化合物（１−２）を２００mg得た。

【００５７】試験例１ 合成糖脂質による細胞増殖抑制： （細胞培養）肺腺癌細胞株“Ａ５４９”は１０％ＦＣＳ
添加ダルベッコのモディファイドイーグル培地（Ｄ−Ｍ
ＥＭ）で培養した。胃腺癌細胞株“ＭＫＮ４５”、食道
扁平上皮癌細胞株“ＥＳ−２”は、１０％ＦＣＳ添加Ｒ
ＰＭＩ−１６４０培地で培養した。無血清培地は“ＳＦ
−０２”（三光純薬株式会社）を用いた。無血清培養に
は、それぞれの培養培地への添加ＦＣＳ量を１０％→５
％→１％と段階的に減少させ３継代目より無血清培地
“ＳＦ−０２”へ交換した。更に、３継代の培養を行な
い増殖抑制、形態変化のない事を確認しアッセイに用い
た。細胞の継代は５日毎に行ない、０．０５％トリプシ
ン，１mM ＥＤＴＡ ４Ｎａ ｉｎ ＰＢＳ（Ｃａフリ
ー）を用いて剥がし、ＦＣＳ添加培地で一度洗浄後２×
１０⁵個／mlの濃度で蒔いた。

【００５８】（合成糖脂質の細胞への処理）培養細胞
を、培地を用いて２×１０⁵個／mlに調整し、９６ウエ
ル平底プレートに１００μｌ／well蒔いた。更に培地８
０μｌを加え３７℃ ５％ＣＯ₂インキュベーターで一
晩培養した。化合物（１−１）、（１−２）とそのアグ
リコンを１００％ＥｔＯＨを用いて、任意の濃度（２
０．０，１０．０，６．０，３．０，２．０，１．０，
０．６，０．３mM）に調整し、その２０μｌを最終濃度
２００、１００、６０、３０、２０、１０、６、３μＭ
になるように各ウエル（ｎ＝３）に添加した。また、２
０μｌの１００％ＥｔＯＨ（最終ＥｔＯＨ濃度１％）を
添加したものを対照（０μＭ）として示した。３７℃
５％ＣＯ₂インキュベーターで３日間培養後ＭＴＴアッ
セイを行なった。

【００５９】（ＭＴＴアッセイ）３−（４，５−ジメチ
ル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テ
トラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を培地で２．５mg／ml
となるように超音波洗浄槽中で溶解、０．４５μｍのメ
ンブランフィルターを通しＭＴＴ試薬とした。化合物
（１−１）、（１−２）を添加後３日間培養した９６ウ
エルプレートを５００×ｇで１０分間遠心し、その上清
１００μｌを静かに除いた。ＭＴＴ試薬２０μｌを加え
３７℃ ５％ＣＯ₂インキュベーターで２時間培養し
た。更に、２０％ＳＤＳ ０．０１Ｎ ＨＣｌを１００
μｌ添加し、３７℃で一晩インキュベートした。プレー
トリーダーを用い６９０nmをｒｅｆｅｒｅｎｃｅとして
５７０nmの吸光度を測定した。結果を図１〜６に示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ａ５４９細胞をＳＦ−０２培地で培養した場合
の結果を示す図である。

【図２】Ａ５４９細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１
６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。

【図３】ＭＫＮ４５細胞をＳＦ−０２培地で培養した場
合の結果を示す図である。

【図４】ＭＫＮ４５細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−
１６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。

【図５】ＥＳ−２細胞をＳＦ−０２培地で培養した場合
の結果を示す図である。

【図６】ＥＳ−２細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１
６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 金谷 一司 群馬県佐波郡境町大字保泉1912番地７号 (72)発明者 足立 正一 群馬県高崎市石原町3493番地９号

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の一般式（１） 【化１】 で表わされるコレスタノール化合物。
2. 【請求項２】 請求項１記載のコレスタノール化合物を
   有効成分とする医薬。