KR20060065579A

KR20060065579A - 배당체 함유 리포솜

Info

Publication number: KR20060065579A
Application number: KR1020057023076A
Authority: KR
Inventors: 신 야자와; 이즈미 다카이; 토요우 니시무라
Original assignee: 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2003-07-17
Filing date: 2004-07-15
Publication date: 2006-06-14
Also published as: CA2529992C; CN1822844A; US7465753B2; JP5295277B2; WO2005007172A1; CN1822844B; JPWO2005007172A1; AU2004257509A1; AU2004257509B2; EP1647277A1; JP4728805B2; CA2529992A1; KR101154442B1; US20060193903A1; JP2011102321A; EP1647277A4

Abstract

본 발명은 항종양제로서 유용한 콜레스타놀 배당체의 효과를 최대한으로 발휘 할 수 있는 제제를 제공하는 것이다.

즉, 본 발명은 항종양활성을 가지며, 당으로서 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal-Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 가지는 리포솜화 가능한 소수성 화합물의 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질을 함유하는 리포솜에 관한다.

Description

배당체 함유 리포솜 {GLYCOSIDE-CONTAINING LIPOSOME}

본 발명은 항암제로서 유용한 배당체를 함유하는 리포솜에 관한 것이다.

예를 들면 콜레스테롤의 B환의 이중결합이 포화된 콜레스타놀에 특정의 당 사슬을 결합시킨 하기의 콜레스타놀 배당체 (1)은 암세포의 증식 억제작용을 갖는 항암제로서 유용한 화합물이다(특허문헌 1 및 2 참조).

[식중, G는 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal-Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 나타낸다.]

콜레스타놀과 같은 소수성 화합물은 세포막에 친화성을 가지며, 세포에 용이하게 취입되므로, 이러한 배당체는 각종 암세포에 용이하게 취입되어 충분히 그의 효과를 발휘할 수 있는 것으로 고려되고 있었다. 그렇지만, 이 배당체는 용해성이 낮으므로 사용이 곤란하거나, 암종양에 따라서는 그의 효과를 충분히 발휘할 수 없는 경우가 있다.

특허문헌 1: 일본국 특개평 11-60592호 공보

특허문헌 2: 일본국 특개평 2000-191685호 공보

본 발명은 항종양활성을 가지는 배당체에 대하여 이 화합물이 본래 가지는 항종양효과를 보다 효율적으로 발휘하게 하는 제제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은 이러한 실정에 감안하여 항종양활성을 가지는 소수성 화합물의 배당체에 대해서 그의 투여 형태를 여러 가지 검토한 바, 막 지질로서 적어도 인지질을 이용하고, 또한 정전하 공여물질을 공존시켜 이 배당체를 리포솜화한 경우, 용해성이 낮기 때문에, 사용이 곤란했던 화합물의 사용이 가능하게 되고, 더욱이 배당체를 그대로 투여했을 경우에는 대부분 효과를 나타내지 않았던 종양주에 대해서도 강한 항종양활성을 나타내는 등, 이 화합물이 본래 가지는 항종양효과를 보다 효율적으로 발휘하게 하는 제제가 얻어질 수 있음을 발견하였다.

즉, 본 발명은 항종양활성을 가지며, 당으로서 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 가지는 리포솜화 가능한 소수성 화합물의 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질을 함유하는 리포솜을 제공하는 것이다

또한, 본 발명은 하기 식 (1)∼(3):

[식중, G는 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal-Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 나타내고, n은 12∼26의 정수를 나타낸다.]

에서 선택되는 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질을 함유하는 리포솜을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은 리포솜을 함유하는 항암제를 제공하는 것이다.

본 발명에 의하면, 항종양활성을 가지는 배당체의 용해성이 향상되어 배당체가 본래 가지는 항종양효과를 보다 효율적으로 발휘하게 하는 제제를 제공할 수 있다. 특히, 콜레스타놀 배당체 (1)을 이용한 제제는 그대로 투여했을 경우에는 항종양작용을 발휘하기 어려웠던 암세포에 대해서도 강한 항종양활성을 나타내어 이 화합물이 가지는 항종양 작용을 최대한으로 발휘하게 할 수 있다.

도 1은 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol 의 암세포 증식 저해효과를 나타내는 도이다. 도중, -Lipo는 리포솜인 것을 나타낸다.

도 2는 리포솜화 Fucα1, 3GalChol의 암세포 증식 저해효과를 나타내는 도이다. 도중, -Lipo는 리포솜인 것을 나타낸다.

도 3은 리포솜화 GalβChol의 암세포 증식 저해효과를 나타낸 도이다. 도중, Lipo는 리포솜인 것을 나타낸다.

도 4는 리포솜화 GlcNAcβ1, 3Galβ1, 1NM 및 리포솜화 GlcNAcβ1, 3Galβ1, 4Glcβ1, 1Ceramide의 암세포 증식 저해효과를 나타낸 도이다. 도중, Lipo는 리포솜인 것을 나타낸다.

도 5는 리포솜이 Fucα1, 3GalChol의 입자 지름의 차이에 의한 복막 파종 억제 효과를 나타낸 도이다.

도 6은 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol의 복막 파종 억제효과를 나타낸 것으로, 특히 종양형성수를 측정한 도이다.

도 7은 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol의 복막 파종 억제효과를 나타낸 것으로, 특히 종양중량(g)을 측정한 도이다.

도 8은 리포솜화 FucGalChol 및 FucGalChol 단독 투여에서의 복막 파종 억제효과를 비교한 것으로, 특히 종장 형성수를 측정한 도이다. 발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명 리포솜에 함유되는 배당체는 당으로서 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal- Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 가지며, 리포솜화 가능한 소수성 화합물을 아글리콘으로 하는 화합물이며, 또한 항종양활성을 가지는 것이다.

여기서, 리포솜화 가능한 소수성 화합물로서는, 예를 들면, 콜레스테롤, 세라미드, 소수성 아미노산, 지방산(올레인산, 리놀산, 리노레인산 등), 지용성 비타민 등의 생체 구성 성분이나, 예를 들면, 나프탈렌 유도체(예를 들면, 나프탈렌 메타놀) 등의 방향환을 가지는 화합물, 콜레스테롤 유도체(예를 들면, 콜레스타놀) 등을 들 수 있다. 이 중, 세라미드, 나프탈렌 유도체, 콜레스테롤 유도체가 바람직하고, 콜레스테롤의 B환의 이중결합이 포화된 콜레스타놀이 특히 바람직하다.

또한, 당부분이 GlcNAc-Gal-인 것은, 바람직하기로는 GlcNAcβ1, 3-Galβ- 또는 GlcNAcβ1, 4-Calβ-이고, GlcNAc-Cal-Glc-인 것은, 바람직하기로는 GlcNAcβ1, 3-Galβ1, 4-Glc이고, Fuc-Gal인 것은 바람직하기로는 Fucα1, 3Gal-이고, Gal-Glc-인 것은, 바람직하기로는 Galβ1, 4Glcβ-이고, Gal인 것은 바람직하기로는 Galβ이다.

더욱 바람직한 배당체로서 이하의 콜레스타놀 배당체 (1), 나프탈렌 메타놀 배당체 (2) 및 세라미드 배당체 (3)을 들 수 있다.

이들 중, 항암작용의 점에서, 콜레스타놀 배당체 (1)이 특히 바람직하고, 더욱이 식 (1) 중 바람직한 화합물로서 이하에 나타내는 것을 들 수 있다.

(l) G=GlcNAc-Gal-:

3-β-콜레스타닐 3-O-(2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실)-β-D 갈락토피라노시드,

3-β-콜레스타닐 4-O-(2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실)-β-D 갈락토피라노시드

(2) G=GlcNAc-Gal-Glc-:

3-β-콜레스타닐 4-O-{3-O-(2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실)-β-D-갈락토피라노실}-β-D-글루코피라노시드

(3) G=Fuc-Gal-:

3-β-콜레스타닐-3-O-( α-L-푸코피라노실)-β-D-갈락토피라노시드

(4) G=Gal-Glc-:

3-β-콜레스타닐-4-O-(β-D-갈락토피라노실)-β-D-글루코피라노시드

(5) G=Gal-:

3-β-콜레스타닐-β-D-갈락토피라노시드

본 발명의 배당체는 생체내에서 추출, 공지의 화학반응, 또는 이들을 조합하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 상기 콜레스타놀 배당체 (1)에 대해서는 일본국 특개평 11-60592호 공보 또는 일본국 특개평 2000-191685호 공보에 기재된 방법에 따라서 제조할 수 있으며, 나프탈렌메타놀 배당체 (2)에 대해서는 J. Biol. Chem. 272(41) 25608, 1997 기재된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 세라미드 배당체 (3)에 대해서는 사람 적혈구, 간장, 소화관 점막, 태변 등을 추출하여 얻을 수 있다.

이 배당체는 항종양활성을 가지는 것이지만, 여기서 항종양활성을 가진다는 것은 인 비보에 대해서는 적어도 1종의 암종에 대해서 항종양효과를 발휘할 수 있는 것을 의미하며, 인 비트로에 있어서는 적어도 1 종의 암세포주에 대해서 증식 저해활성 또는 증식 억제활성을 가지는 것을 의미한다.

본 발명 리포솜에 있어서, 배당체는 인지질 1몰에 대해서, 0.3∼2.0몰, 바람직하기로는 0.8∼1.5몰 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 리포솜에 있어서는 막 성분 지질로서 적어도 인지질이 이용된다. 이러한 인지질로서는 디라우로일포스파티딜콜린, 디미리스토일포스파티딜콜린, 디팔르미토일포스파티딜콜린, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜콜 린, 디리놀레오일포스파티딜콜린, 미리스토일팔미토일포스파티딜콜린, 미리스토일스테아로일포스파티딜콜린, 팔미토일아라키도일포스파티딜콜린 등의 포스파티딜콜린류, 포스파티딜에타놀아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딘산 등을 들 수 있으며, 이들은 천연, 또는 반합성 또는 전합성에 의해 얻을 수 있다. 또한, 수소 첨가 인지질 등의 가공 인지질을 이용할 수도 있다. 이러한 인지질은 단독으로 이용해도 좋고, 2종 이상을 혼합해 이용해도 괜찮다.

이들 중, 전기적 중성에서 안정한 리포솜을 형성할 수 있는 점으로부터, 포스파티딜콜린류를 이용하는 것이 바람직하고, 특히, 1α디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC)을 이용하는 것이 바람직하다.

정전하 공여물질은 지질막의 표면을 정(正)으로 하전시키기 때문에 첨가되는 물질이다. 리포솜의 표면을 정으로 하전시킴으로서 막 표면이 부(負)의 하전상태로 있는 세포와 무리 없이 접촉하는 것을 기대할 수 있다.

정전하 공여물질로서는 스테아릴아민, 올레일아민 등의 지방족아민, 플루오렌에틸아민 등의 방향족 아민을 들 수 있으며, 이들 중 지방족 아민이 바람직하고, 특히 스테아릴아민을 이용하는 것이 바람직하다.

정전하 공여물질은 인지질 1몰에 대해서, 0.04∼0.15몰, 바람직하기로는 0.1∼0.15몰 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 리포솜에는 상기 성분 이외에 막 구조 안정제로서 콜레스테롤, 지방산, 디아세틸포스페이트 등을, 필요에 따라 첨가할 수 있다.

막 성분을 분산시키는 수용액으로서는 물, 생리 식염수, 각종 완충액, 당류 의 수용액 및 이들의 혼합물을 이용하는 것이 바람직하다. 완충액으로서는 유기계, 무기계를 불문하고, 체액수소이온농도 부근에서 완충작용을 가지는 완충액이 바람직하게 이용되며, 예를 들면, 인산 완충액을 들 수 있다.

본 발명 리포솜의 조제는 특히 한정되지 않으며, 통상의 방법에 따라 행하면 좋다. 예를 들면, 일본국 특개소 57-82310호 공보, 일본국 특개소 60-12127호 공보, 일본국 특개소 60-58915호 공보, 일본국 특개평 1-117824호 공보, 일본국 특개평 1-167218호 공보, 일본국 특개평 4-29925호 공보, 일본국 특개평 9-87168호 공보, Methods of Biochemical Analysis (1988) 33, p337, 또는 「리포솜」(南江堂)에 기재의 방법에 준하여 행하면 좋다.

이하에, 일본국 특개평 9-87168호 공보에 기재된 방법에 준한 본 발명 리포솜의 조제 순서에 관하여 기술한다.

우선, 본 발명의 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질에 유기용매 및 물을 가하여 혼합한 후, 로타리 이베포레이터 등을 이용하여 완전히 유기용매를 제거하고, 이어서 수분을 제거한다. 여기서, 막 성분 물질, 정전하 공여물질 및 배당체의 혼합 비율은, 예를 들면, 52:8:20(몰비)을 예시할 수 있지만, 그 부근의 혼합비율이면 특히 문제는 없다. 배당체의 혼합비율이 작은 경우는 콜레스테롤로 대표되는 막 구조 안정제를 필요에 따라서 첨가할 수가 있지만, 이 혼합비율이 높아지면, 반드시 막 구조 안정제를 첨가할 필요가 있는 것은 아니다.

유기용매는 물에 대해 불용성의 휘발성 유기용매이면 특히 제한은 없고, 예를 들면, 클로로포름, 클로로메탄, 벤젠 및 헥산 등을 이용할 수 있으며, 용해성을 고려하는 경우는 에타놀 또는 메타놀 등의 비교적 극성의 높은 유기용매를 적당 첨가하여 조제한 혼합 유기용매를 사용할 수가 있다. 이 혼합 유기용매와 물과의 혼합 비율은 균일하게 되는 비율이면, 특히 제한은 없다.

또한, 수분을 첨가하여 조제했을 경우, 수분 제거법으로서는 동결건조법이 매우 일반적으로 이용되지만, 이에 한정되는 것은 아니고, 감압 데시케이터 중에서 건조해도 좋다. 수분 제거 후, 전술한 분산 수용액을 첨가하고, 보텍스(Vortex) 믹서 등으로 침투시켜 리포솜화를 달성한다.

본 발명 리포솜의 입자 지름은 종양 억제효과의 점으로부터 10㎛ 이하인 것이 바람직하고, 3㎛ 이하인 더욱 바람직하다.

리포솜의 사이즈를 정돈하는 경우는, 예를 들면, 초음파 처리, 다공질 멤브레인 필터에 대한 압출처리, 고압 분사 유화 장치에 의한 처리, 또는 이들을 조합함으로서 사이즈의 균일화가 가능하다. 또한, 보다 작은 리포솜 입자를 얻고자 하는 경우는, 예를 들어 초음파 처리 시간을 길게 함으로써 달성할 수가 있다.

이렇게 조제된 본 발명 리포솜은 후기 실시예에 나타난 바와 같이, 매우 우수한 암세포의 증식 저해작용을 가진다. 특히, 콜레스타놀 배당체 (1)에 대해서는 그대로 투여했을 경우에는 항종양 작용을 발휘하기 어려웠던 암세포에 대해서도 강 한 항종양 활성을 나타낸다. 리포솜은 일반적으로 인지질 이중막을 형성한 소포구(小胞球)이며, 약제를 내부에 감싸는 형태로 분산시켜, 세포막과의 융합에 의해 약제를 세포내에 도달하게 하는 것을 목적으로 하여 제작되는 것이므로, 약제 자체의 성질은 리포솜화에 의해 변하는 것은 아닌 것으로 생각된다. 따라서, 이 콜레스타 놀 배당체를 리포솜화 함으로써이 화합물의 항종양활성이 비약적으로 향상된 것은 완전히 의외이었다.

이렇게, 이 리포솜을 함유하는 제제는 배당체의 본래 가지는 항종양효과를 효율적으로 발휘하게 하는 항암제로서 유용하다.

본 발명의 항암제는 치료 부위, 치료 목적에 따라 제형을 적당히 선택할 수 있으며, 리포솜 형상의 안정성을 해치는 첨가제 등의 사용이 없는 한, 공지의 조제 방법에 따라, 예를 들면, 경구제, 주사제, 좌제, 연고제, 첨부제 등으로 할 수 있다.

경구용 고형 제제를 조제하는 경우는 본 발명 리포솜에, 부형제, 필요에 따라서 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미제, 교취제 등을 가한 후, 통상의 방법에 따라, 정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다. 그와 같은 첨가제로서는 이 분야에서 일반적으로 사용되는 것이면 좋고, 예를 들면, 부형제로서는 락토오즈, 백당, 염화나트륨, 포도당, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 미결정 셀루로오즈, 규산 등을 들 수 있고, 결합제로서는 물, 에타놀, 프로파놀, 단시럽, 포도당액, 전분액, 젤라틴액, 카르복시메틸 셀루로오즈, 히드록시프로필셀루로오즈, 히드록시프로필스타치, 메틸셀루로오즈, 에틸셀루로오즈, 쉘락, 인산칼슘, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있고, 붕괴제로서는 건조 전분, 알긴산나트륨, 칸텐말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 라우릴황산나트륨, 스테아린산모노글세라이드, 락토오즈 등을 들 수 있고, 활택제로서는 정제 탈크, 스테아린산염, 붕사, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있고, 교미제로서는 백당, 귤피, 시트르산, 타르타르산 등을 예시할 수 있다.

경구용 액체 제제를 조제하는 경우는 본 발명 리포솜에, 교미제, 완충제, 안정화제, 교취제 등을 가하고, 통상의 방법에 따라 내복액, 시럽제, 에릭실제 등으로 제조할 수 있다. 이 경우, 교미제로서는 전술한 것으로 좋고, 완충제로서는 시트르산나트륨 등을 들 수 있으며, 안정화제로서는 트라간트, 아라비아 검, 젤라틴 등을 들 수 있다.

주사제를 조제하는 경우는 본 발명 리포솜에, pH 조절제, 완충제, 안정화제, 등장화제, 국소 마취제 등을 첨가하고, 통상의 방법에 따라 피하, 근육내 및 정맥내용 주사제를 제조할 수 있다. 이 경우의 pH 조절제 및 완충제로서는 구연산나트륨, 아세트산나트륨, 인산나트륨 등을 들 수 있다. 안정화제로서는 피로아황산나트륨, EDTA, 티오글리콜산, 티오황산 등을 들 수 있다. 국소 마취제로서는 염산프로카인, 염산 리도카인 등을 들 수 있다. 등장화제로서는 염화나트륨, 포도당 등을 예시할 수 있다.

좌제를 조제하는 경우는 본 발명 리포솜에 공지의 제제용 담체, 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜, 라놀린, 카카오지방, 지방산 트리글리세라이드 등을 들 수 있으며, 더욱이 필요에 따라, 트인(등록상표)과 같은 계면활성제 등을 가한 후, 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다.

연고제를 조제하는 경우는 본 발명 리포솜에, 통상 사용되는 기제, 안정제, 습윤제, 보존제 등을 필요에 따라서 배합하해 통상의 방법에 따라 혼합, 제제화할 수 있다. 기제로서는 유동 파라핀, 백색 바셀린, 경랍, 옥틸도데실알코올, 파라핀 등을 들 수 있으며, 보존제로서는 메틸 파라옥시벤조에이트, 에틸 파라옥시벤조에이트, 프로필 파라옥시벤조에이트 등을 들 수 있다.

첩부제를 제조하는 경우는 통상의 지지체에 전기 연고, 크림, 겔, 페이스트 등을 통상의 방법에 따라 도포하면 좋다. 지지체로서는 솜, 스프, 화학 섬유로 된 직포, 부직포나 연질 염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리우레탄 등의 필름 혹은 발포체 시트가 적당하다.

본 발명 항암제의 투여량은 환자의 증상, 체중, 연령, 성별 등에 따라서 달라, 일률적으로는 결정할 수 없지만, 통상 성인 1일당, 콜레스타놀 배당체 (1)로서 약 0.01∼200mg/Kg, 바람직하기로는 0.1∼50mg/Kg으로 하면 좋고, 이를 1 일 1회 또는 2∼4회 정도로 나누어 투여하는 것이 바람직하다.

실시예

다음에, 본 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명한다.

실시예 1 콜레스타놀 배당체의 리포솜화

콜레스타놀 배당체로서 상기 식 (1) 중의 G가 GlcNAcβ1, 4Gal인 "GlcNAcβ1, 4GalChol", G가 Fucα1, 3Gal인 "Fucα1, 3GalChol", G가 Galβ인 "GalβChol" 및 비교로서 G가 H인 "Chol"을 이용하고, 이들의 20 ㎛ol/㎖(클로로포름/메타놀=5/1, v/v로 용해) 용액을 출발물질로 했다.

1α디팔미토일포스파티딜콜린, 스테아릴아민 및 상기 콜레스타놀 배당체를 52/8/20 (몰비)의 비율로 700 ㎕가 되도록 혼합하고, 이어서 유기용매 (클로로포름/메타놀=2/1, v/v) 300㎕ 및 증류수 1 ㎖를 첨가하여 혼합했다. 그런 다음, 로타리 이베포레이터에서 유기용매를 완전히 제거한 후, 동결건조 조작을 행하여, 수분을 완전하게 제거했다. 이 동결건조품을 PBS 1 ㎖에 용해하고, 초음파 처리(15W, 15분)하여 리포솜을 입자 지름 2∼4 ㎛ 정도로 균일화하여 실시예 2 및 3에 제공했다.

실시예 2 나프탈렌 메타놀 배당체의 리포솜화

나프탈렌 메타놀 배당체로서 상기 식 (2)중의 G가 GlcNAcβ1, 4-Galβ1, 1-인"GlcNAcβ1, 4Galβ1, 1NM"(NM: 나프탈렌 메타놀)를 이용해 콜레스타놀 배당체의 리포솜화와 동일 조건에서 리포솜화를 행했다.

실시예 3 세라미드 배당체 리포솜화

세라미드 배당체로서 상기 식 (3) 중의 G가 GlcNAcβ1, 3-Galβ1, 4-Glc인 "GlcNAcβ1, 3Galβ1, 4Glcβ1, 1Ceramide"를 이용하여 콜레스타놀 배당체의 리포솜화 동일한 방법에서 리포솜화를 행했다. 단, 이 리포솜화의 경우는 안정화제로서 콜레스테롤을 첨가했다.

실시예 4 리포솜화 콜레스타놀 배당체에 의한 세포 증식 저해효과

배양 암세포주(colon26 wild)를 96웰 플레이트에, 1×10⁴cells/100 ㎕/well이 되도록 파종한 후, 콜레스타놀 배당체(GlcNAcβ1, 4GalChol, Fucα1, 3GalChol, GalβChol, Chol) 및 실시예 1에서 얻어진 리포솜화 콜레스타놀 배당체를 첨가하고, 3일간 37℃에서 인큐베이트했다. 그런 다음, MTT 앗세이를 행하여 세포수를 결정했다. 또, 증식 억제율은 이하의 식에 따라서 구했다.

세포 증식 저해율 (CPI율) (%)

=(1-처리 세포의 OD/ 미처리 세포의 OD) × 100

그 결과, 단독으로는 거의 효과를 나타내지 않았던 Fucα1, 3GalChol은, 리포솜화 함으로써 현저한 세포 증식 억제효과를 나타냈다. 또한, 종래부터 세포 증식 저해효과를 나타내고 있던 GlcNAcβ1, 4GalChol, 리포솜화 함으로써 더욱 강한 세포 증식 저해효과를 나타내는 것이 판명되었다 (도 1, 2 및 3).

실시예 5 리포솜화 나프탈렌 메타놀 배당체 및 리포솜화 세라미드 배당체에 의한 세포 증식 저해효과

배양 암세포주(colo201)를 96웰 플레이트에, 1×10⁴cells/100 ㎕/well이 되도록 파종한 후, 실시예 2 및 3에서 얻어진 리포솜화 나프탈렌 메타놀 배당체 및 리포솜화 세라미드 배당체를 첨가하고, 3일간 37℃에서 인큐베이트했다. 그런 다음, MTT 앗세이를 행하여 세포수를 결정했다. 또, 증식 억제율은 실시예 4와 동일하게 하여 구했다.

그 결과, 단독으로는 불용성이기 때문에 거의 나타내지 않는 GlcNAcβ1, 3Galβ1NM 및 GlcNAcβ1, 3Galβ1, 4Glcβ1, 1Ceramide가 리포솜화 함으로써 현저한 세포 증식 저해효과를 나타내는 것이 판명되었다(도 4).

실시예 6 리포솜화 콜레스타놀 배당체에 의한 복막 파종 억제효과

(1) 리포솜화 Fucα1, 3GalChol의 입자 지름에 의한 영향

Balb/c 마우스(8주령, 암컷)에 대해, 암세포주(co1on26 wild, 5× 10⁴cells/200 ㎕)를 복강내 투여했다. 이어서, 12시간, 24시간 및 48시간 후에 상이한 초음파 처리 시간(15W×5, 10, 15분)에 의해 조제한 리포솜화 Fucα1, 3GalChol(2 ㎛o1/100 ㎕)을 복강내 투여했다. 10일 후, 장간막에 있어서의 종양수를 측정했다. 초음파 처리 시간을 길게 하여 리포솜 입자 지름을 작게 할수록, 복막파종 억제효과 나타내는 것이 판명되었다(도 5).

(2) 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol의 복막 파종 억제효과

Balb/c 마우스(8주령, 암컷)에 대해, 암세포주(co1on26 wild, 5×10⁴cells/200 ㎕)를 복강내 투여했다. 이어서, 24시간 및 48시간 후, 초음파 처리(15W, 15분간)하여 조제한 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol(2 ㎛ol/100 ㎕)을 복강내 투여했다. 10일 후, 장간막에서의 종양수를, 21일 후에 대망(大網) 및 장간막에 형성된 종양 중량을 측정했다. 그 결과, 리포솜화 GlcNAcβ1, 4GalChol 투여에 의해 양호한 복막파종 억제효과를 나타내는 것이 판명되었다(도 6 및 7).

(3) 리포솜화 FucGalChol 및 FucGalChol 단독 투여에서의 복막 파종 억제 효과의 비교

Balb/c 마우스(8주령, 암컷)에 대해, 암세포주(colon26 wild, 5×10⁴cells/200 ㎕)를 복강내 투여했다. 이어서, 0, 24 및 48시간 후에 초음파 처리(15W, 15분간)에 의해 조제한 리포솜화 FucGalChol 및 FucGalChol의 복강내 투여를 행하였다(모두 2 ㎛ol/100㎕). 10일 후, 장간막에 형성된 종양수를 측정했다.

그 결과, 무처리, FucGalChol 투여군에 비해, 리포솜화 FucGalChol 투여군에서는 종양의 형성이 강하게 억제되고 있는 것이 판명되었다(도 8).

Claims

항종양활성을 가지며, 당으로서 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal-Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 가지는 리포솜화 가능한 소수성 화합물의 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질을 함유하는 리포솜.
하기 식 (1)∼(3):

[식중, G는 GlcNAc-Gal-, GlcNAc-Gal-Glc-, Fuc-Gal-, Gal-Glc- 또는 Gal-를 나타내고, n은 12∼26의 정수를 나타낸다.]

으로부터 선택되는 배당체, 인지질 및 정전하 공여물질을 함유하는 리포솜.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 정전하 공여물질이 지방족아민인 리포솜.
청구항 1∼3의 어느 1항기재의 리포솜을 함유하는 항암제.