WO2002055091A1

WO2002055091A1 - Antiallergic agents

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Publication number: WO2002055091A1
Application number: PCT/JP2002/000079
Authority: WO
Inventors: Masahiro Murakami; Shigekatsu Kohno; Takeshi Nabe
Original assignee: Amato Pharmaceutical Products,Ltd.; Tokai Education Instruments Co., Ltd.
Priority date: 2001-01-12
Filing date: 2002-01-10
Publication date: 2002-07-18
Also published as: JPWO2002055091A1; CA2434574A1; KR20030070102A; CN1496266A; EP1358885A1; US20040259935A1

Description

抗ァレルギ一剤技術分野

本発明は、抗アレルギー剤に関する。より'詳細には、本発明は、アレルギー性鼻炎などのアレルギー疾患に対して有効な医薬品、特定保健用食品、健康食品等として用いることができる抗ァレルギ一剤に関する。背景技術

アレルギー反応は、そのメカニズムの違いにより I型から I V型の 4つの型に分けられている。その中でアレルギー性鼻炎、気管支喘息及ぴ蓴麻疹などのァレルギー疾患は、通常 I型アレルギ一反応により起こる。 I型アレルギ一反応は、即時型ァレルギ一とも呼ばれ、組織内の肥満細胞や血中好塩基球表面のレセプタ一にアレルゲン特異的 I g E抗体が結合し、次いでアレルゲンが I g E抗体に結合することで、肥満細胞や好塩基球から過剰にヒスタミンやロイコトリェン等のケミカルメディエーターが放出され、様々なァレルギ一反応が励起される生体反応である。従って、 I型アレルギー疾患の治療には、抗ヒスタミン剤と肥満細胞からのケミカルメディエーターの遊離抑制作用を有する抗ァレルギ一剤が用いられている。し力し、このような抗ヒスタミン剤ゃ抗アレルギー剤には、副作用が認められる場合が多く、長期間に渡る連用には安全性の問題がある。

また、アレルギー性接触皮膚炎等の疾患は、通常遅延型アレルギーとも呼ばれる I V型アレルギー反応により起こる。 I V型アレルギー性疾患の治療にはステロイド剤が用いられる。ステロイド剤は、サイトカインの産生を抑制し、湿疹の治療には特に有効である力大量もしくは長期間使用する場合は重篤な副作用を引き起こす可能性が高く、安全性が問題となっている。

上記したアレルギー疾患の中でも、アレルギー性鼻炎は、くしゃみ、鼻汁分泌亢進およぴ鼻閉を三大主徴とする代表的な I型アレルギー疾患である。くしゃみおよび鼻汁分泌亢進は、抗原一抗体反応の結果遊離されるヒスタミンが大きく関与することが示唆されているのに対し、鼻閉は血管拡張および血管透過性の亢進に基づく浮腫に起因して発症することが推察されている。しかしながち、その詳細な機序は未だ不明な点が多い。

本発明者らは以前に、 A l (OH) ₃に吸着させたスギ花粉抽出抗原をモルモットの鼻腔内に投与するととにより経鼻的に感作し、以後スギ花粉粒子を反復吸入させることにより、ヒトの病態に類似すると考えられるアレルギー性鼻炎モデル動物を確立している。このモデル動物においては、主として反応惹起 1時間以内にくしゃみの発現が観察されるのみならず、鼻閉の指標とした specific airway resistance (sRaw)の上昇が反応惹起 1および 4時間後をピークとして二相性に認められる。さらに、このモデル動物においては、反応惹起の 4時間から 2日後にはヒスタミン及び leukotriene D ₄の点鼻に対し顕著に反応する鼻過敏性の亢進が認められる。

これまでの研究により、縮合度 3〜 2 0の環状及びノ又は鎖状のポリ L一乳酸混合物は、抗悪性腫瘍剤として有用であることが報告されている（特開平 9— 2 2 7 3 8 8号公報おょぴ特開平 1 0— 1 3 0 1 5 3号公報）。しかしながら、縮合度 3〜 2 0の環状及ぴ Z又は鎖状のポリ ¾酸混合物が有する抗ァレルギ一作用の評価については報告されていない。発明の開示 '

本発明は、例えばァレルギ一性鼻炎などのァレルギ一疾患の治療及び予防のために使用することができる新規な抗ァレルギ一剤を提供することを解決すべき課題とした。本発明はまた、上記抗アレルギー剤を利用した抗アレルギー飲食品を提供することを解決すべき課題とした。

本発明者らは、上記課題を解決することを目的とした検討を行うために、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物を、了レルギ一性鼻炎モデル動物に投与し、抗原抗体反応の惹起後に認められるくしゃみ、二相性の鼻閉およびヒスタミンに対する鼻過敏性の発現に及ぼす上記ポリ乳酸混合物の影響について検討を行なった。その結果、本発明で用いたポリ乳酸混合物は、二相性の鼻閉を抑制し、ヒスタミンに対する鼻過敏性の発現も抑制することが判明した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。 ' 即ち、本発明によれば、縮合度 3〜 2 0の環状及び又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む抗アレルギー剤が提供される。

本発明の抗アレルギー剤は、アレルギー疾患の治療剤又は予防剤として使用することができ、アレルギー疾患がとしては、例えば、アレルギー性鼻炎などの I 型ァレルギ一疾患が挙げられる。

好ましくは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸は実質的に L—乳酸から成る。

好ましくは、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物は、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールおよぴメタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィーに付し、 p H 2〜3の 2 5〜5 0重量％のァセトニトリル水溶液で溶離後、 p H 2〜3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である。

好ましくは、脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行う。好ましくは、逆相カラムクロマトグラフィーを、 O D Sカラムクロマトグラフィ一により行う。

本発明の別の側面によれば、上記した本発明の抗ァレルギ一剤を含む抗ァレルギー飲食品が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、抗ァレルギ一剤又は抗ァレルギ一飲食品の製造における、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物の使用が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、縮合度 3〜 2 0の環状及ぴノ又は鎖状のポリ乳酸混合物の有効量をヒトなどの哺乳動物に投与することを含む、ァレルギ一を抑制するための方法が提供される。図面の簡単な説明

図 1は、製造例 1で得られたポリ乳酸混合物の質量スぺクトルを示す。

図 2は、試験例 1の実験手順の流れ図を示す。図 2において、（A) はスギ花粉抽出物での鼻腔内吸入による感作（0. 蛋白質 Z0. 6mg A 1 (OH)

₃ノ動物）を示し、（B) はスギ花粉の吸入による投与ノ感作（約 3. 6mg/動物ノ回）を示し、（C) は CPL (100111 _§/ 21111 /k g)又はビヒクル（2 m l/k g) の経口投与を示し、（D) は 2群（A及ぴ B) に分割を示し、（E) は抗原投与により誘発された二相 '性鼻腔抵抗及びくしゃみに及ぼす C P Lの影響の評価を示し、（F)はヒスタミンに対する鼻過敏性の発現に及ぼす C P Lの評価を示す。

図 3は、感作モルモットにおいて 22回目のスギ花粉吸入投与により誘発され 7こ specific airway resistance (sRaw)の経時変ィ匕を不す。

図 4は、感作モルモットにおいて 23回目のスギ花粉吸入投与により誘発される specific airway resistance (sRaw)の二相性の増加に対する C P Lの影響を示す。

図 5は、感作モルモットにおいて 23回目のスギ花粉吸入投与により誘発されるくしゃみに対する C P Lの影響を示す。

図 6は、感作モルモットにおけるヒスタミンに対する鼻過敏性の発現に及ぼす C PLの影響を示す。 ' 発明を実施するための最良の形態

以下、本発明の実施態様おょぴ実施方法について詳細に説明する。

本発明の抗ァレルギ一剤は、縮合度 3〜 20の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物を有効成分として含むものであり、例えば、アレルギー性鼻炎などのァレルギー疾患の治療剤又は予防剤として使用することができる。

ァレルギ一疾患とは、外来性の抗原とそれに対応する特異抗体又は感作リンパ球との反応に基づく組織障害を病因とする疾患である。アレルギー反応は、その反応形態により I型、 I I型、. I I I型、及び I V型の 4型に分類されている。

I型アレルギーは I g E抗体が関与する反応で、即時型、 I g E依存型、あるいはアナフィラキシー型と呼ばれている。 I I型アレルギーは細胞障害型又は細胞融解型とも呼ばれ、不適合輸血、自己免疫溶血性貧血、特発性血小板減少症などの疾患発症に関与している。外来抗原や自己抗原に対して産生された I g G抗体あるいは I g M抗体が標的細胞に結合すると、補体系の活性化が引き起こされ標的細胞が障害される。 I I I 型アレルギーは、免疫複合体型又はァルサス型と呼ばれており、血清病、糸球体腎炎 > 全身性エリテマトーデス、過敏性月市臓炎などが主な疾患である。血液中の I g G抗体もしくは I g M抗体が、可溶性抗原と結合して免疫複合体を形成することで引き起こされる組織障害である。 I V型アレルギーは、遅延型あるいは細胞性免疫型とも呼ばれている。ッベルクリン反応に見られる様に抗原注射後 4 8 7 2時間後に紅斑、硬結を特徴とする炎症反応を呈する。

I型アレルギー反応では、発症前の生体内にハウスダスト、ダニ、花粉、真菌、動物の毛垢などが抗原となり、気道、消化管、皮膚などを経て体内に侵入し、 I g E抗体が産生される。 I g E抗体は、肥満細胞、好塩基球上の高親和性 I g E 受容体に結合し、それら細胞を感作する。その後再び抗原に暴露され、抗原が I g E抗体に結合すると、高親和性 I g E受容体の架橋、細胞の活性化が起こり、脱顆粒や細胞膜脂質からのケミカルメディター産生、遊離が生じる。顆粒からはヒスタミン、好酸球遊走因子、好中球遊走因子などが遊離し、新たにケミカメディターとしてプロスタグランジン、トロンポキサン、ロイコトリエン、血小板活性化因子などが産生される。これらケミカルメディタ一やサイトカィンにより炎症細胞が患部に移動 ·浸潤する。

I型アレルギー反応を病因とする疾患には、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、花粉症、蓴麻疹、アレルギー性鼻炎などといった一般的な疾患が多い。本発明の抗ァレルギ一剤は、ァレルギ一疾患の治療および予防に広く使用することができるが、特には I型アレルギー反応を病因とする疾患の治療おょぴ予防に使用することができる。

本発明の抗アレルギー剤またはそれを含む飲食品は、アレルギー症状の治療のみならず、ァレルギ一症状の発生の予防及ぴノ又は該症状の軽減を図るための予防的治療を含む用途で用いることができる。

本発明の抗アレルギー剤及ぴ抗アレルギー飲食品においては、縮合度 3〜 2 0 の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物が有効成分として用いられる。

本明細書で言う「ポリ乳酸混合物」とは、縮合度 3〜2 0の環状及ぴ Z又は鎖状のポリ乳酸が任意の割合で存在する混合物を意味する。即ち、「混合物」という用語は、縮合度 3〜 2 0の何れかを有するポリ乳酸の混合物であることを意味すると同時に、環状およぴ鎖状のポリ乳酸の混合物を含む概念としても用いられる。このような「ポリ？ L酸混合物」は、本明細書中以下に述べるように、乳酸を脱水縮合し、適当な方法で精製することにより得ることができる。なお、本明細書では便宜上「ポリ乳酸混合物」という用語を用いたが、この中には一定の縮合度を有する環状のポリ乳酸または一定の縮合度を有する鎖状のポリ乳酸といつた単一成分から成るポリ乳酸も含まれる。

縮合度とは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸単位の数を意味する。例えば、環状のポリ乳酸は下記の構造式を有することが推測されるが、式中の nが縮合度を表す（即ち、 n = 3〜2 0 )。

本明細書で単に「乳酸」と称する場合、この乳酸には L一乳酸、 D—乳酸またはこれらの任意の割合の混合物の全てが包含される。本発明においては好ましくは、乳酸は実質的に L—乳酸から成る。ここで言う「実質的に」とは、ポリ乳酸混合物中における L一乳酸単位の比率 [即ち、（L一乳酸単位数/ L—乳酸単位数 + D— ¾酸単位数） X 1 0 0 ] 力例えば 7 0 %以上、好ましくは 8 0 %以上、より好ましくは 8 5 %以上、さらに好ましくは 9 0 %以上、特に好ましくは 9 5 % 以上であることを意味する。なお、ポリ乳酸混合物中における L一乳酸単位の比率は、出発物質として使用する乳酸中に存在する L一乳酸と D—乳酸の比率に依存する。

縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の製造方法は、特に限定されるものではないが、例えば、特開平 9— 2 2 7 3 8 8号公報、特開平 1 0 - 1 3 0 1 5 3号公報、または特願平 1 1一 3 9 8 9 4号明細書（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）などに記載の製造方法により得ることができる。

より具体的には、例えば、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物は、下記の方法 Aにより得ることができる。方法 A：

先ず、乳酸（好ましくは、実質的に L一乳酸から成る乳酸）を不活性雰囲気下で脱水縮合させる。不活性雰囲気としては、例えば、窒素ガス、アルゴンガスなどが挙げられるが、窒素ガスを用いるのが好ましい。

'脱水縮合反応は、常圧〜 1 mmH g程度の減圧下、， 1 1 0〜 2 1 0 °C、好ましくは 1 3 0〜 1 9 0 °Cの温度で行われるが、段階的減圧および段階的昇温によつて行うのが特に好ましい。反応時間は適宜設定できるが、例えば 1〜2 0時間反応を行うことができる。段階的減圧および段階的昇温を用いる場合には、反応時間を 2以上から成る部分的な反応時間に分け、それぞれの部分において圧力と温度を設定して反応を行う。段階的減圧を用いる場合は、例えば、常圧→1 5 0 m mH g→3 mniH gと減圧することができ、段階的昇温を用レヽる場合は、例えば、 1 4 5 °C→1 5 5 °C→1 8 5 °Cと昇温することができる。実際には、これらを組み合わせて、例えば、 1 4 5 °Cで常圧で 3時間、 1 4 5でで 1 5 0 mmH gで 3 時間、 1 5 5 °Cで 3 mmH gで 3時間そして 1 8 5 °Cで 3 mmH gで ί . 5時間反応を行うことができる。

次いで、この脱水縮合反応により得られた反応混合物にエタノールおよびメタノールを加え、濾過して濾液を乾燥してェタノ一ルおよびメタノール可溶分が得られる。即ち、本明細書で言う「エタノールおよびメタノール可溶分」とはエタノールとメタノールの混合液に可溶な画分を意味する。なお、エタノールおよびメタノール可溶分を得る際には、脱水縮合反応の反応混合物をエタノールおよびメタノールと混合するが、その際のエタノールとメタノールの比率は適宜設定することができ、例えばエタノール：メタノール = 1 ： 9である。なお、反応混合物にエタノールとメタノールを添加する順番、方法などは限定されず、適宜選択することができ、例えば、脱水縮合反応の反応混合物に先ずエタノールを添加し、次いでメタノールを添加することができる。

上記で得られたエタノール 'メタノール可溶分を逆相力ラムクロマトグラフィ一、特にォクタデシルシラン (O D S ) カラムを用いたクロマトグラフィーに付し、まず ρ Η 2〜3の 2 5〜5 0重量％のァセトニトリル水溶液で溶離する画分を除去し、次いで ρ Η 2〜3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液、好ましくは 9 9重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離してくる画分を採取すると、縮合度 3〜 2 0の環状及ぴ Ζ又は鎖状のポリ乳酸混合物が得られる。

上記のようにして得られた環状及び/又は鎖状のポリ季し酸混合物は、水酸化ナトリウムなどのアルカリ物質で中和し、減圧乾燥後、常法により下記に述べるような所望の形態に製剤化することができる。

本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び Ζ又は鎖状のポリ乳酸混合物を製造するための別法としては、例えば、特願平 1 1一 2 6 5 7 1 5号明細書に記載された方法（方法 Βとする）または特願平 1 1一 2 6 5 7 3 2号明細書に記載された方法（方法 Cとする）を挙げることができる（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）。以下、方法 Βおよび方法 C について具体的に説明する。

方法 B ：

この方法は、ラクチドを R Y L i (式中、 Rは脂肪族基又は芳香族基を示し、 Yは酸素原子又はィォゥ原子を示す）で表されるリチウム化合物の存在下で重合させることによつて環状乳酸ォリゴマ一を製造する方法である。重合反応を実施する場合、リチウム化合物（R Y L i ) の使用割合は、ラクチド 1モル当たり、 1〜 0 . 1モル、好ましくは 0 . 2〜 0 . 3モルの割合である。反応温度は一 1■ 0 0〜0 ° (：、好ましくは一 7 8〜一 5 0 °Cである。反応は、一 7 8〜一 5 0 °Cの温度で開始し、徐々に室温にまで昇温させるように実施するのが好ましい。反応は、好ましくは反応溶媒の存在下で実施される。反応溶媒としては、テトラヒド口フラン等の環状エーテルの他、ジェチルエーテル、ジメトキシェタン等を用いることができる。反応雰囲気としては、窒素ガスやアルゴン等の不活性ガス雰囲気が用いられる。反応圧力は特に制約されず、好ましくは常圧である。

なお、上記のようにして得られる乳酸オリゴマーの組成（即ち、環状乳酸オリゴマーと鎖状乳酸オリゴマーの混合比率）は、反応助剤として用いるリチウム化合物によって変動する。リチウム化合物として炭素数 1〜 3のアルキルアルコールのリチウム化合物（： R O L i ) (式中、 Rは炭素数 1〜 3のアルキル基）を用いる場合には、環状乳酸オリゴマーと鎖状オリゴマーとの混合物（環状乳酸オリゴマーの割合： 8 0〜8 5重量％) が得られる。一方、リチウム化合物として t 一ブチルアルコール等の炭素数 4以上のアルキルアルコールのリチウム化合物や、チオフヱノール化合物を用いるときには、実質的に環状乳酸オリゴマーのみを選択的に得ることができる。方法 C ：

この方法は、（ i ) 乳酸を 3 5 0〜 4 0 0 mmH gの圧力条件で 1 2 0〜 1 4 0 °Cの範囲の温度に加熱し、脱水縮合反応させるとともに、ラクチドを留出させずに副生水のみを留出除去する第 1加熱工程、

( i i )該第 1加熱工程終了後、反応生成物を 150〜 160°Cの温度に加熱し、該反応圧力を降圧速度 0. 5〜： LmmHgZ分で 15〜2 OmmHgまで降下させるとともに、その降圧に際し、ラクチドの留出を回避させながら副生水のみを留出除去し、該反応圧力が 15〜 20 rnmH gに降下後、同圧力条#及び反応温度 150〜160°Cにおいてさらに反応を継続して鎖状乳酸オリゴマーを主成分とする脱水縮合物を生成させる第 2加熱工程、

( i i i ) 該第 2加熱工程終了後、 0. 1〜 3 mmH gの圧力条件で 150〜 1 60。Cで加熱して該鎖状 ¾酸オリゴマーを環化させ、環状オリゴマーを生成させる第 3加熱工程、

からなることを特徴とする方法である。

この方法では先ず、第 1加熱工程において、減圧下において乳酸を加熱し、脱水縮合反応させる。この場合の反応時間は 3〜 12時間、好ましくは 5〜 6時間である。この第 1加熱下での反応は、その反応を円滑に進行させるために、乳酸の脱水縮合により生成する副生水を留去させるが、この場合、乳酸 2分子の脱水縮合物であるラクチドが留去しないように実施する。このためには、反応圧力を減圧、好ましくは 300〜 500 mmH g、より好ましくは 350〜 400 mm Hgに保持し、この圧力条件下において、 100〜 140°C、好ましくは 130 〜140°Cの範囲に加熱するのがよい。この第 1加熱工程での反応により、主に、乳酸の 3〜 23分子の脱水縮合物を主成分とする反応生成物が生じる。

上記第 1加熱工程の終了後、第 2加熱工程において、高められた平均重合度のオリゴマーが得られるように、前記第 1加熱工程における反応温度よりも高められた温度、好ましくは 145〜180°C、より好ましくは 150〜 160 °Cの温度に加熱するとともに、反応圧力を 10〜 50 mmH g、好ましくは 15〜 20 mmH gの圧力に降下させてさらに脱水縮合反応を継続する。

この反応も、前記第 1加熱工程の反応の場合と同様に、反応を円滑に進行させるために副生水を留去させるが、ラクチドが留去しない条件で実施する。反応圧力を前記範囲の圧力にまで降下させる速度（降圧速度）は、ラクチドの留出を回避し、且つ反応効率を高めるためには、 0 . 2 5〜5 mmH g /分、好ましくは 0 . 5〜l mmH g /分の範囲に保持することが通常は必要である。前記範囲より低い降圧速度では、その所定圧まで降圧させるのに必要な時間が長くなるため好ましくなく、一方、前記範囲より高い降圧速度では、ラクチドが副生水とともに留去するようになるので好ましくない。

反応圧力が所定圧力にまで降下後、この反応圧力において、さらに反応を継続する。この場合の加熱時間は、 3〜 1 2時間、好ましくは 5〜 6時間である。前記第 2加熱工程での反応により、平均重合度が 3〜 3 0、好ましくは 3〜 2 3の乳酸オリゴマーが得られるが、この場合のオリゴマ一中の環状オリゴマーの割合は、通常、 7 0〜8 0重量％程度である。

上記第 2加熱工程終了後、第 3加熱工程において、反応圧力を 0 . 2 5〜5 m mH g、好ましくは 0 . 5〜l mmH gに保持し、 1 4 5〜 1 8 0 °C、好ましくは 1 5 0〜 1 6 0 °Cの温度でさらに反応を継続する。反応時間は 3〜 1 2時間、好ましくは 5〜 6時間である。この場合に生じる副生水も留去させる。この場合、ラクチドの留去も回避させることが好ましいが、反応生成物にはラクチドは殆んど含まれないので、その降圧速度を格別遅くする必要はない。

前記第 3加熱工程での反応により、平均重合度 3〜3 0、好ましくは 3〜 2 3 で、かつ環状オリゴマーの割合が 9 0重量％以上、好ましくは 9 9重量％以上の乳酸オリゴマーが生成される。

なお、上記方法 A、 Bおよび Cは本発明で用いるポリ乳酸混合物の製造方法の具体例の一部を示したものにすぎず、本発明においては他の方法で製造されたポリ乳酸混合物を用いることもできる。

本発明の抗アレルギー剤は、前記の必須成分に加えてさらに必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲内で、医薬品類、医薬部外品類、化粧品類などの製剤に使用される成分や添加剤を任意に選択 ·併用して製造することができる。本発明の抗アレルギー剤は、単独の医薬品類として使用できる以外に、医薬品類、医薬部外品類、皮膚 ·.頭髪用化粧品類などに配合して用いることもできる。

本発明の抗アレルギー剤の形態は特に限定されず、経口投与又は非経口投与用の製剤形態の中から目的に最も適した適宜の形態のものを選択することが可能であ _G

_経口投与に適した製剤形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、ドリンク剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤、チュアプル剤などを挙げることができ、非経口投与に適する製剤形態としては、例えば、注射剤

(皮下注射、筋肉内注射、又は静脈'内注射など）、外用剤、点滴剤、吸入剤、噴霧剤、点鼻剤、点眼剤などが挙げられるが、これらに限定されることはない。経口投与に適当な液体製剤、例えば、溶液剤、乳剤、又はシロップ剤などは、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのダリコール類、ごま油、オリープ油、大豆油などの油類、 p ーヒドロキシ安息香酸エステノレ類などの防腐剤、ストロベリーフレーパー、ぺパ一ミントなどのフレーバー類などを用いて製造することができる。また、カプセル剤、錠剤、散剤、又は顆粒剤などの固体製剤の製造には、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニットなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ソ一ダなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシゥム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプ口ピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いることができる。

非経口投与に適当な注射用又は点滴用の製剤は、好ましくは、受容者の血液と等張な滅菌水性媒体に有効成分である上記の物質を溶解又は懸濁状態で含んでいる。例えば、注射剤の場合、塩溶液、ブドウ糖溶液、又は塩水とプドウ糖溶液との混合物からなる水性媒体などを用いて溶液を調製することができる。腸内投与のための製剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪、又は水素化カルボン酸などの担体を用いて調製することができ、座剤として提供される。また、噴霧剤の製造には、有効成分である上記の物質を微細な粒子として分散させることができ、受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ有効成分の吸収を容易ならしめる担体を用いることができる。担体としては、具体的には、乳糖又はグリセリンなどが例示される。有効成分である物質及び使用する担体の性質に応じて、エアロゾル又はドライパウダーなどの形態の製剤が調製可能である。これらの非経 P投与用製剤には、グリコール類、油類、フレーパー類、防腐剤、賦形剤、崩壌剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される 1種又は 2種以上の飲食品を添加することもできる。

本発明の抗ァレルギ一剤をァレルギ一性鼻炎の治療又は予防のために使用する場合には、点鼻剤の形態で使用することもできる。本発明の点鼻剤には、上記した有効成分であるポリ乳酸混合物の他に通常点鼻剤に用いられる物質、例えば抗炎症剤（グリチルリチン酸二力リウム、サリチノレ酸メチル、ァセトァミノフェン、ァセチノレサリチル酸、サリチル酸グリコール、インドメタシン等）、局所麻酔剤

(リドカイン塩酸リドカイン、ジブ力イン、塩酸ジブ力イン、ベンゾカイン、ァミノ安息香酸ェチル等）、殺菌剤（アタリノール、塩ィヒセチルピリジニゥム、塩化べンゼトニゥム、塩化ベンザルコニゥム、塩酸クロルへキ、ジン、ダルコン酸クロルへキシジン等）、ビタミン類（ビタミン A、ビタミン C、ビタミン B ₁₂ 等）、清涼化剤（メントール、カンフル、ユーカリ油等）、増粘剤（ゼラチン、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸ソーダ、ポリビュルアルコール、ポリビュルピ口リドン、ポリエチレンォキサイド、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルカルポキシ共重合体、ポリビュルピロリドン . ビュルァセテ一ト共重合体、メチルビュルエーテル ·無水マレイン酸共重合体、天然ガム等）、安定化剤等を本発明の効果を損なわない範囲で配合することができる。

本発明の抗アレルギー剤の投与量及び投与回数は、投与の目的、投与形態、摂取者の年齢、体重又は性別などの条件などを含む種々の要因により適宜設定することができるが、一般的には、有効成分の投与量として一日当り 1〜1 0， 0 0 0 m gノ k g、好ましくは 1 0〜2 0 0 0 m g Z k g、より好ましくは 1 0〜 2 0 O m g / k gである。上記投与 *の製剤を一 B 1〜4回程度に分けて投与することが好ましい。

本発明の抗ァレルギ一剤の投与時期は特に限定されず、抗原が体内に侵入する前でも後でもよく、また体内に侵入した抗原による抗原抗体反応（アレルギー反応）の反応前、反応中または反応後の何れでもよく、これらの期間の二つ以上にまたがって連続的に投与してもよい。

本発明はさらに、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む抗アレルギー飲食品にも関する。即ち、本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物は、上記したような単独の製剤の形態で使用するのみならず、飲食品の中に配合して用いることができる。

本発明の抗ァレルギ一飲食品は、ポリ乳酸混合物を分解させることなく配合し得るものであれば、その配合形態には特に制限はない。

本発明による抗アレルギー飲食品の製品の具体例としては、清涼飲料、ドリンク剤、健康食品、特定保健用食品、機能性食品、機能活性型食品、栄養補助食品、サブレメント、飼料、飼料添加物などと一般に呼称される、飲料を含む健康食品または補助食品が挙げられる。

飲食品の具体例としては、例えば、チューインガム、チョコレート、キャンディー、錠菓、ゼリー、クッキー、ビスケット、ヨーグルト等の菓子類、アイスクリーム、氷菓等の冷菓類、茶、清涼飲料（ジュース、コーヒー、ココア等を含む）、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の飲料、パン、ハム、スープ、ジャム、スパゲティー、冷凍食品など任意の食品を挙げることができる。あるいは、本発明で用いるポリ乳酸混合物は調味料又は食品添加剤などに添カ卩して用いることもできる。本発明の抗ァレルギ一飲食品を摂取することにより抗ァレルギ一効果が発揮され、実質的に有害な副作用を示さなレ、安全な飲食品を提供することができる。本発明の抗アレルギー飲食品は、ポリ乳酸混合物を、食品に使われる一般的な原料に直接混合、分散したのち、公知の方法により所望の形態に加工することによって得ることができる。

本発明の抗ァレルギ一飲食品はあらゆる形態の飲食品を包含するものであり、その種類は特に制限されず、上記したような各種飲食物、あるいは各種栄養組成物、例えば各種の経口又は経腸栄養剤や飲料等に、本発明の抗アレルギー剤を配合して飲食品として提供することができる。このような飲食品の組成としては、縮合度 3〜 2 0の環状及ひン又は鎖状のポリ乳酸混合物の他に、蛋白質、脂質、糖質、ビタミン及び Z又はミネラル類などを含めることができる。飲食品の形態は特に限定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。

飲食品中におけるポリ乳酸混合物の含有量は特には限定されないが、一般的には 0 . 1〜2 0重量％、より好ましくは 0 . 1〜 1 0重量％程度である。

飲食品に含まれるポリ乳酸混合物の量は、本発明の目的とする抗ァレルギ一作用を発揮できる程度に含まれることが好ましく、好ましくは摂取される飲食物 1 食中に 0 . 1 gから 1 0 g程度、より好ましくは 0 . 5 gから 3 g程度である。なお、本出願が主張する優先権の基礎となる日本特許出願である特願 2 0 0 1 - 4 8 2 3号の明細書に記載の内容は全て、本明細書の開示の一部として本明細書中に引用するものとする。

以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によつていかなる点においても限定されることはない。実施例

製造例 1 ：ポリ乳酸混合物（以下、 C P Lとも称する）の製

マントルヒーターに収めたセパラブルフラスコに L—¾酸（D—乳酸も混入しているもの） 5 0 0 m lを入れた。窒素ガス 3 0 0 m l Z分の流入及び撹拌を行い、溜出水は保温した下降型接続管を経て還流冷却器付フラスコに導きながら、 1 4 5 °Cで 3時間加熱した。更に 1 5 0 mmH gに減圧して同温度で 3時間加熱した後、 3 mmH gの減圧下 1 5 5 °Cで 3時間、最後に 3 mmH gの減圧下 1 8 5でで1 . 5時間加熱し、反応生成物であるポリ乳酸を得た。

得られたポリ乳酸は 1 0 0 °Cに保ち、エタノール 1 0 0 m lに続いてメタノール 40 Om 1をそれぞれカ卩えた後放冷した。これをメタノール 500ml中にカロえ、よく撹拌して静置した後濾過して精製した。その濾液を減圧乾燥してァセト二トリルに溶解し、全量を 200m l (原液）とした。

この原液を、予め平衡化した逆相 OD Sカラム（TSK g e 1 ODS- 8 OTM) にかけ、 0. 01 M塩酸を含む 30 %、 50 %および 100 %ァセトニトリル（_p H2. 0) でステップワイズに溶離し、ァセトニトリル 100%溶出画分であるポリ乳酸（縮合度 3〜20) を得た。得られた物質の質量スペクトルを図 1に示す。図 1中の規則的なフラグメントイオンピークから明らかなように、得られたポリ乳酸の混合物は、環状縮合体を主体とし、直鎖状縮合体が少量混在した状態になっている。試験例 1 ：

(試験方法）

1. 実験動物

4週齢の Ha r t 1 e y系雄性モルモット（日本エスエルシ一）を使用した。

2. 薬物

使用した薬物は製造例 1で製造したポリ轧酸混合物（CPL) である。 CPL は 10 OmgZm 1 となるようにグリセリンを用いて溶解させた後、精製水を添加し、 10 Omg/2m 1とした。

3. 抗原およびアジュパント

感作には、既報 (Takeshi Nabe他, Jpn. J. Pharmacol. 75： 243- 251 (1997)；及ぴ Takeshi Nabe他， Inflamm. Res.47:369- 374(1998)) に従って作製したスギ花粉抽出抗原を用いた。抗原吸入による反応惹起にはスギ花粉をそのまま用いた。ァジュパントは、以前の報告（Takeshi Nabe他， Allergol. Intl. 46:261-267 (1997)) に従って作製した aluminum hydroxide gel (A 1 (OH) _a) を使用した。

スギ花粉抽出抗原と A l (OH) ₃の吸着は既報（Takeshi Nabe他， Jpn. J. Pharmacol. 75： 243-251 (1997)；及ぴ Takeshi Nabe 他， Inf la塵. Res.47 :369-374 (1998)) に従い、攪拌下の A 1 (OH) ₃の生理食塩水懸濁液（200mgZm l ) にスギ花粉抽出抗原（ 200 μ gタンパク質/ m l ) の生理食塩水溶液を同量滴下することにより行なつた。

4. 感作および反応惹起

感作および抗原吸入による反応惹起は図 2に示す方法で行なった。すなわち、 A 1 (OH) ₃に吸着させたスギ花粉抽出抗原をモルモットの両鼻孔に 1ョ 2回、 7曰間連続で点鼻することにより感作を行い、以後、 1週間に 1回、定量的な花粉吸入器（Takeshi Nabe他， Jpn. J. Pharmacol. 75： 243 - 251 (1997)に記載したもの）を用いて、自発呼吸下のモルモットにスギ花粉粒子を反復吸入させることにより、反応惹起を 2 3回目まで繰り'返した。

5. くしゃみの測定

くしゃみ回数は、スギ花粉吸入直後から 1·時間後まで、モルモットの症状を観察することにより測定した。なお、くしゃみの発現は 1時間以降においてはほとんど認められないことは既報の通りである（Takeshi Nabe他， Infla腿. Res. 47 :369-374 (1998) )₀

6. 呼吸機能の測定

スギ花粉吸入による反応惹起後の鼻腔抵抗の指標とした specific airway resistance (sRaw)の測定は、 two- chambered, doub丄 e - f low plethysmograph法を利用した多機能呼吸測定装置（Pulmos- 1, M. LP. S) を用いて行なった。

7. ヒスタミンの点鼻に対する反応性の測定

ヒスタミンの点鼻に対する反応性の測定は、既報（Nobuaki, Mizutani他， Eur. Respir. J. , 14， 1368-1375 (1999)) に準じて行なった。すなわち、 2 3回目の反応惹起 2日後に、 1 0— ⁴および 1 0— ²Μのヒスタミン溶液を 1 0 /ζ 1 Z nostril (2 0 μ 1 /animal) で両鼻腔内に 20分間隔で順次点鼻した。反応の指標とした sRawは、それぞれの点鼻 1 0分後に測定した。

8. 薬物の投与（図 2)

C P L (1 0 0mg/2m 1 /k g) は反応惹起 2 3回目の 6日前から 1日 1 回連日経口投与した。最終投与は、 23回目の反応惹起の 2時間前とした。なお、コントロール群には 50%グリセリン溶液を同様に経口投与した。 ' なお、コントローノレ群および CP L投与群は、 22回目の反応惹起時後の sRaw の上昇の程度を観察することにより、反応の程度が同程度になるように 2群に分けた（表 1およぴ図 3)。図 3において、各点は、 1 5又は 1 6頭のモデル動物の平均士 S. E. を示す。表 1 ：感作モルモットにおける 22回目の抗原投与後の前期（ 0〜 3時間）および後期（ 3〜 6時間）における spedfic airway resistance (sRaw)の上昇の反応曲線下面積（AUC)

s R a wの増加

群動物数前期 _ 後期

[AUC— (0〜3時間）] [AUC (3〜6時間）]

A 16 2. 27±0. 36 2. 01 ±0. 43

B 1 5 2. 30±0. 46 1. 99±0. 46

各値は 1 5又は 16頭のモデル動物の平均土 S . E. を示す。

9. 統計学的解析

統計学的解析には、 Bonferroni' s multiple testを用い、危険率 5%未満を有意とした。

(評価の結果）

1. 二相性の鼻腔抵抗の上昇に及ぼす C P Lの影響

図 4は、反応惹起後の鼻腔抵抗の指標とした sRawの上昇に及ぼす C P Lの影響についての成績を示す。図 4において、 C P L (10 Omg/k gノ回ノ日) を 7日間に渡り連続的に経口投与した。最後の投与は 23回目の抗原吸入投与の 2 時間前に行なった。各点は、 15又は 16頭のモデル動物の平均土 S. E. を示す。コントロールからの有意差は、星印 1個は pく 0. 05、星印 2個は pく 0. 01である。

図 4から分かるように、コントロール群では、反応惹起 1時間後において sRaw の上昇を示す即時性の鼻閉が認められ、 3〜 4時間後に再び sRawの上昇を示す遅発性反応が認められた。この二相性の鼻閉に対し、 C P Lは即時性おょぴ遅発性反応のいずれに対しても、全時間帯にわたって抑制もしくはその傾向を示した。表 2は、図 3の成績を反応惹起の直後〜 3時間後ならぴに 3〜 10時間後におけるそれぞれの鼻腔抵抗の上昇の反応曲線下面積（AUC) で表示した成績を示す。 C P Lは即時相および遅発相の鼻閉に対し、それぞれ約 60 %および 50 % の有意な（Pく 0. 01) 抑制を示した。表 2 ：感作モルモットにおける 23回目の抗原吸入投与後の前期（ 0〜 3時間）およぴ後期（3〜： L 0時間）における specific airway resistance (sRaw)の反応曲線下面積（AUC) の増加に及ぼす CP Lの影響

s R a wの増力 Π

動物数前期

[AUC (0〜3時間）] [AUC (3〜10時間）]

3ン卜ロール 16 1. 79± 0. 23 2. 55±0. 27

CPL 15 0. 76±0. 19** 1. 31±0. 29**

CPL (10 OmgZk g/回 Z日）を 7日間連続的に経口投与した。最後の投与は 23回目の抗原吸入投与の 2時間前に行なった。各値は、 1 5又は 16頭のモデル動物の平均土 S. E. を示す。コントロールからの有意差は、星印 2個は p < 0. 01である。

2. くしゃみの発現に及ぼす C PLの影響

感作モルモットの反応惹起直後から 1時間後までのくしゃみの発現に及ぼす C PLの影響についての成績を図 5に示す。図 5において、 CPL (10 Omg/ k g/回日）を 7日間連続的に経口投与した。最後の投与は 23回目の抗原吸入投与の 2時間前に行なった。各棒は、 15又は 16頭のモデル動物の平均士 S. E. を示す。

図 5から分かるように、コントロール群では、反応惹起 0〜1 0分および 10 分〜 1時間においていずれも約 6回のくしゃみの発現が認められた。これに対し、 C P L投与群では、若干の抑制傾向を示すにすぎなかった。

3. ヒスタミンに対する鼻過敏性の発現に及ぼす C P Lの影響 .

図 6は、ヒスタミンに対する鼻過敏性の発現に及ぼす CP Lの影響についての成績を示す。実験は 23回目の花粉吸入投与の 2日後に行なった。 C P L (10 OmgZk gZ回/日）を 7日間に渡り連続的に経口投与した。最後の投与は 2 3回目の抗原吸入投与の 2時間前に行なった。各点は、 1 1〜 1 6頭のモデル動物の平均土 S. E. を示す。非感作群からの有意差は、星印 1個は p<0. 05、星印 2個は p<0. 01であることを示し、十字印はコントロール群からの有意差が pく 0. 05であることを示す。

図 6から分かるように、非感作モルモットでは、ヒスタミンの点鼻に対し、 1 0一² Mで若干の sRawの上昇を示すにすぎなかったが、感作ー惹起モルモットでは 10— ⁴Mより濃度依存的な sRawの上昇を示した。この鼻過敏性の亢進に対し、 C PLは 10— ⁴Mにおける反応を有意に（p<0. 05) 抑制し、 10一² Mの反応に対しても抑制傾向を示した。

(試験例のまとめ） .

C PLのモルモットアレルギー性鼻炎モデルにおけるくしゃみ、二相性の鼻閉並びにヒスタミンの点鼻に対する鼻過敏性の発現に及ぼす影響を検討した。 C P L (100mg/2m 1 /k g, p o) の 7日間連続投与はくしゃみの発現に対して明らかな抑制を示さなかったが、二相性の鼻閉に対しては即時性おょぴ遅発性のいずれも明らかに抑制し、ヒスタミンに対する鼻過敏性の発現も抑制 Uた。産業の利用の可能性

本発明の抗ァレルギ一剤は、ァレルギ一性鼻炎などのァレルギ一疾患の治療及ぴ予防のために使用することができる。

また、本発明において有効成分として用いられるポリ乳酸混合物は、生体成分に由来する乳酸の低縮合体であることから、生体適合性が高く、アレルギー症の治療に従来から用いられている抗ヒスタミン剤、肥満細胞からのケミカルメディエーターの遊離抑制作用を有する抗アレルギー剤、あるいはステロイドホルモン等に見られる副作用がない。

Claims

請求の範囲

1 . 縮合度 3〜 2 0の環状及ぴ Z又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む抗ァレルギ一剤。

2 . ァレルギ一疾患の治療剤又は予防剤として使用する、請求項 1に記載の抗ァレノレギー剤。

3 . ァレルギ一疾患が I型ァレルギ一疾患である、請求項 2に記載の抗ァレルギー剤。

4 . ァレルギ一疾患がァレルギ一性鼻炎である、請求項 2又は 3に記載の抗ァレルギ一剤。

5 . ポリ乳酸中における反復単位である乳酸が実質的に L—乳酸から成る、請求項 1から 4の何れか 1項に記載の抗ァレルギ一剤。

6 . 縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物が、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールおよびメタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィーに付し、 p H 2〜3の 2 5〜5 0重量⁰ /₀のァセト二トリル水溶液で溶離後、 p H 2〜3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である、請求項 1から 5の何れか 1項に記載の抗ァレルギ一剤。

7 . 脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行う、請求項 6 に記載の抗ァレルギ一剤。

8 . 逆相カラムクロマトグラフィーを、 O D Sカラムクロマトグラフィーにより行う請求項 6又は 7に記載の抗ァレルギ一剤。

9 . 請求項 1力ら 8の何れかに記載の抗ァレルギ一剤を含む抗ァレルギ一飲食

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