KR102147103B1 - 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 포함하는 면역 증강용 약학 조성물 - Google Patents
홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 포함하는 면역 증강용 약학 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 세포 독성이 없고 비장세포 증식 효과 및 NK 세포 활성 효과가 우수하여, 면역 증강용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 포함하는 면역 증강용 약학 조성물에 관한 것이다.
면역(immunity)은 인체의 주요 방어 기전으로, 외부 물질의 침입이나 감염 작용에 대해 다양한 면역세포가 작용하여 인체를 방어하는 기능을 지칭한다. 면역은 태어날 때부터 가지고 있는 선천면역(innate immunity)과 후천적으로 생활 등에 적응되어 얻어지는 후천면역(acquired immunity)로 구분된다.
선천면역은 항원에 대하여 비특이적으로 반응하며 특별한 기억작용은 보이지 않으며, 선천면역 체계로는 항원의 침입을 차단하는 피부, 점액조직, 상산성의 위산, 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식균작용을 담당하는 대식세포(macrophage), 백혈구 등과 같은 식세포 등이 있다. 이러한 선천면역은 실제 대부분의 감염을 방어한다. 한편, 후천면역은 처음 침입한 항원에 대한 기억작용이 있어, 다시 침입이 발생하였을 때, 특이적으로 반응하여 효과적으로 항원을 제거하는 특징이 있다.
면역 기능 조절이란 환경오염물질, 의약품의 부작용, 질병 및 노화로 인하여 유발되거나 생체의 정상적인 면역 기능의 변화를 조정하여 정상으로 회복시키거나 이러한 변화를 경감시키는 작용을 말한다. 면역 기능 조절은 바람직하지 않게 증가한 면역반응을 억제시키는 조절작용인 면역 억제 작용과 감소된 면역반응을 증가시키는 조절작용인 면역 증강 작용으로 분류된다.
면역 증강은 암, 염증 질환 등과 같은 다양한 질환에 대해 신체 방어 기전을 보강하는 중요한 치료학적 전략중 하나로서, 면역세포의 활성을 증가시켜 면역반응을 자극하여 면역증강 효과를 얻을 수 있다. 예컨데, 대식세포들은 면역반응에서 주요한 역할을 수행하는데, 주요 역할인 식세포 작용은 미생물 및 기타 발열성 입자들을 흡수하고, 또한 TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12와 같은 다수의 사이토카인(cytokine) 및 NO(nitric oxide)과 같은 세포독성 및 염증성 물질을 분비함으로써 면역 반응을 자극시킨다. 따라서 대식세포 활성을 증가시키는 것이 면역 증강을 위한 하나의 수단이 될 수 있다.
모유는 유아에게 필수적인 영양소를 제공하는 것뿐 아니라, 단순한 영양소의 개념을 넘어 다양한 건강상의 이익을 제공한다. 모유올리고당은 기능성 성분으로 구성되어 있고, 우유보다 100-200배 많은 1L당 5-10g의 올리고당을 포함하며, 지금까지 130 종류 이상의 모유올리고당이 확인되었다. 올리고당의 함유량과 구조적 다양성은 우유와 달리 모유에 있어서 매우 특이적이다. 모유올리고당 중, 시알릴 올리고당인 3′-및 6′-시알릴락토스는 우유보다 5-10배 가량 많이 포함되어 있으며, 구체적으로, 0.1-0.3g/L의 3′-시알릴락토스 및 0.3-0.5g/L의 6′-시알릴락토스를 모유의 초유에 포함한다.
시알릴 올리고당의 인체 내 기능을 살펴보면, 첫 번째로 갱글리오사이드(ganglioside)인 GM1(Gal-GalNAc-3′-sialyllactose-ceramide), GM2(GalNAc-3′-sialyllactose-ceramide) 및 GM3(3′-sialyllactose-ceramide)의 형태로 신경조직에서 생체 내 신호전달의 수용체로서 작용하여, 뇌의 발달과 기억력 형성에 관여한다. 두 번째로는, 백혈구 또는 골수구 등에서 시알릴 루이스 X 및/또는 시알릴 루이스 A(Sialyl-Lewis X, sialyl-Lewis A)의 형태로 염증 부위로 백혈구를 유도하여 치료를 촉진하는 역할을 한다. 세 번째로는, 박테리아나 바이러스의 초기 감염 과정에서의 숙주세포의 상피표면에 부착을 막는 저해제로서 역할을 하는 연구가 진행되어왔다. 시알릴 올리고당 중, 시알산이 α-2,3와 α-2,6로 연결된 시알릴락토스는 각각 조류와 인간 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(hemagglutinin)에 대한 인식 물질이 될 수 있어, 바이러스가 숙주세포 표면의 당과 결합하여 침입하는 것을 경쟁적으로 저해할 수 있다. 이에 시알릴락토스의 다양한 기능에 관해 활발히 연구되고 있다.
한편, 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 포함하는 면역 증강용 조성물과 관련된 종래기술로서, 선행논문 [현선희 등, J Korean Soc Food Sci Nutr., 43(11), 1665-1673, 2014]에는 홍삼의 분획에 따른 면역활성을 개시하고 있으며, 선행논문 [손은화 등, Korean J. Plant Res., 25(5), 578-585, 2012]에는 홍삼의 생체 내 사이토카인 분비에 대한 면역조절효과를 개시하였고, 선행논문 [ten Bruggencate, S. J. et al., Nutr Rev., 72(6), 377-389, 2014]에는 시알릴락토스의 기능적 역할 및 기전에 대해 개시하고 있으며, 한국등록특허 제10-1773066호 및 제10-1773067호에는 3'-시알릴락토스 또는 6'-시알릴락토스를 유효성분으로 함유하는 퇴행성관절염의 예방 또는 치료용 조성물을 개시하였다. 그러나, 본 발명과 같이 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 혼합된 조성물이 홍삼 추출물 또는 시알릴락토스 단독 조성물에 비해 면역 증강 효과가 현저하게 우수하였음을 확인한 이전 보고는 아직 없다.
현선희 등, 홍삼의 분획에 따른 면역활성 비교, J Korean Soc Food Sci Nutr., 43(11), 1665-1673, 2014.
손은화 등, 홍삼의 생체 내 사이토카인 분비에 대한 면역조절효과, Korean J. Plant Res., 25(5), 578-585, 2012.
ten Bruggencate, S. J. et al., Functional role and mechanisms of sialyllactose and other sialylated milk oligosaccharides, Nutr Rev., 72(6), 377-389, 2014.
본 발명의 목적은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 약학 조성물, 면역 증강용 건강기능식품 또는 면역 증강용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 홍삼 추출물은 진세노사이드 Rg1, Rb 및 Rg3을 유효성분으로 포함하며, 바람직하게는 상기 진세노사이드 Rg1, Rb 및 Rg3를 5.5㎎/g이상 함유하는 농축물을 포함한다.
상기 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 1:0.001~1의 중량비로 혼합된 것이다. 그러나, 상기 중량비를 벗어나서 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 혼합하는 경우, 면역 증강 효과가 낮아 바람직하지 않거나 또는 면역을 증강시키는 효과 상승 폭이 크지 않아 경제적이지 않으므로 바람직하지 않다.
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 또는 6′-시알릴락토스에서 선택되는 1종 이상이며, 바람직하게는 3′-시알릴락토스 및 6′-시알릴락토스가 1:1~6의 중량비로 혼합된다.
상기 용어 "면역 증강"은 면역세포의 초기활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대해 면역반응을 촉진하는 기능, 또는 면역계의 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 기능을 의미한다.
본 발명의 면역 증강용 조성물은 다양한 질환에 적용될 수 있으며, 장기능, 위장병, 변비, 위궤양, 위염, 위암, 호흡기 감염, 피부질환, 조류독감, 각종 염증질환, 인지능력, 퇴행성 뇌질환, 당뇨·비만 등 대사성 질환 및 각종 암과 관련된 질병의 예방 또는 치료에 이용되나, 특별히 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 일반적으로 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 적합한 형태로 제형화될 수 있다. “약학적으로 허용 가능”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
또한, 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로즈, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아라비아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산프로필, 탈크, 스테아르산마그네슘 및 광물유를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 안정화제, 결합제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 개시된 면역 증강용 조성물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여시간, 투여경로, 약물의 흡수, 분포 및 배설률, 사용되는 다른 약물의 종류 및 처방자의 판단 등에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001㎎/㎏/일 내지 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 건강기능식품에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 홍삼 추출물, 시알릴락토스 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 면역 증강용 건강기능식품을 제공하며, 상기 건강기능식품은 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 또는 가공한 식품을 지칭하는 것으로, 예를 들어 건강보조식품, 기능성 식품, 영양제, 보조제 등을 모두 포함한다.
상기 홍삼 추출물 및 시알릴락토스는 전체 식품 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001중량% 내지 50중량%, 더 바람직하게는 0.001중량% 내지 30중량%, 가장 바람직하게는 0.001중량% 내지 10중량%로 하여 첨가될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 과자, 초콜릿, 각종 음료, 껌, 젤리, 차, 비타민 복합제, 에너지바, 영양제 등이 있다.
또한, 본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 전체 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001중량% 내지 50중량%, 더 바람직하게는 0.001중량% 내지 40중량%, 가장 바람직하게는 0.001중량% 내지 30중량%로 하여 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 유탁액, 현탁액, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 파우더, 스프레이, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 비누, 액체세정료, 입욕제, 파운데이션, 메이크업베이스, 에센스, 화장수, 폼, 팩, 유연수, 선 스크린 크림 또는 선오일로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 화장료 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스 이외에, 화장료에 일반적으로 이용되는 성분 모두를 포함할 수 있다. 예를 들면, 유화제, 점증제, 유제, 계면활성제, 윤활제, 알코올류, 수용성 고분자제, 겔화제, 안정화제, 비타민, 무기염류, 유화제, 향료 같은 일반적인 보조 성분을 포함할 수 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용목적에 따라 그 첨가량을 화장료 고유의 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 함유된 화장료 조성물은 매일 사용할 수 있으며 또한 정해지지 않은 기간 동안에도 사용할 수 있고, 바람직하게는 사용자의 연령, 피부상태 또는 피부타입, 상기 홍삼 추출물 및 시알릴락토스의 농도에 따라 사용량, 사용횟수 및 기간을 조절할 수 있다.
본 발명은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 세포 독성이 없고 비장세포 증식 효과 및 NK 세포 활성 효과가 우수하여, 면역 증강용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 RAW 264.7 세포에서의 실시예 1 및 비교예 1의 처리에 따른 세포 생존율을 확인한 결과 그래프이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 함유하는 면역 증강용 조성물의 제조>
하기 표 1의 혼합 조건을 참고하여, 홍삼 추출물(KGC 인삼공사, 홍삼정 에브리타임, Rg1+Rb1+Rg3가 5.5㎎/g이상 함유된 농축물), 3′-시알릴락토스 및 6′-시알릴락토스를 혼합함으로써, 본 발명 실시예의 면역 증강용 조성물을 제조하였다.
조건 | 혼합 중량비 | ||
홍삼 추출물 | 3′-시알릴락토스 | 6′-시알릴락토스 | |
실시예 1 | 1 | 0.0005 | 0.0005 |
실시예 2 | 1 | 0.005 | 0.005 |
실시예 3 | 1 | 0.05 | 0.05 |
실시예 4 | 1 | 0.5 | 0.5 |
실시예 5 | 1 | 0.004 | 0.006 |
실시예 6 | 1 | 0.002 | 0.008 |
실시예 7 | 1 | 0.0015 | 0.0085 |
실시예 8 | 1 | 0.04 | 0.06 |
실시예 9 | 1 | 0.02 | 0.08 |
실시예 10 | 1 | 0.015 | 0.085 |
<
비교예
1. 비교대상 면역 증강용 조성물의 제조>
상기 실시예 1과 동일하게 제조하되 하기 표 2를 참고하여 비교대상 면역 증강용 조성물을 제조하였다.
조건 | 혼합 중량비 | ||
홍삼 추출물 | 3′-시알릴락토스 | 6′-시알릴락토스 | |
비교예 1 | 1 | - | - |
비교예 2 | - | 0.5 | 0.5 |
비교예 3 | - | 1 | - |
비교예 4 | - | - | 1 |
<
실험예
1. 세포 생존율 확인>
본 발명 실시예 1의 면역 증강용 조성물에 대한 세포 생존율을 측정하기 위해 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 어세이를 실시하였다.
RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 3×104cells/well로 분주하고, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 실시예 1 또는 비교예 1을 각각 처리하고 37℃에서 24시간 반응한 후, 각 웰에 5㎎/㎖의 MTT 시약 50㎕를 더한 뒤 37℃에서 4시간 동안 추가 반응하였다. MTT 시약이 더해진 배양액을 버리고 생성된 포마잔 결정을 200㎕의 DMSO에 용해한 다음 570㎚에서 흡광도를 측정하여, 이를 도 1에 나타내었다.
도 1을 참고하면, 본 발명 실시예 1 및 비교예 1의 면역 증강용 조성물은 세포 사멸을 일으키지 않아 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다.
<실험예 2. 면역 증강 활성 확인>
본 발명 실시예의 면역 증강용 조성물에 대한 면역 증강 활성을 확인하기 위해, 비장세포 증식 확인, 비장세포 사이토카인 분비량 확인 및 NK 세포(Natural killer cell) 증식 확인을 실시하였다.
실험예 2-1. 비장세포 증식 확인
비장세포는 항체의 형성을 돕고 혈구세포를 제거하며, 항원에 대한 초기면역반응을 담당한다. 특히, 비장세포는 세포성 면역과 체액성 면역반응을 조절하는 중요한 기관이며, IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-5 및 IL-6 등의 사이토카인을 분비하여 면역세포들 간의 활성을 조절하고 면역체계를 조절한다.
BALB/c 수컷 마우스를 일주일 동안 순응시킨 후 본 발명 실시예 1 또는 비교예 1을 14일 동안 100㎎/㎏/day로 경구 투여하여 비장을 적출하였다. 적출한 비장을 RPMI 1640 배지로 세척하고 분쇄한 다음 원심 분리하여 Tris-buffered ammonium chloride(0.87% NH4Cl, pH 7.2)에 5분 간 현탁하고 비장의 적혈구를 제거하였다. 세포를 100×105cells/㎖로 희석하여 비장세포액을 제조한 다음 비장세포 증식능 확인에 이용하였다.
상기 세포를 96웰 플레이트에 100×105cells/well로 분주하고 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 이후, 각 웰에 5㎎/㎖의 MTT 시약 50㎕를 더한 뒤 37℃에서 4시간 동안 추가 반응하였다. MTT 시약이 더해진 배양액을 버리고 생성된 포마잔 결정을 200㎕의 DMSO에 용해한 다음 570㎚에서 흡광도를 측정하여, 이를 표 3에 나타내었다.
조건 | 비장세포 증식(fold of 1) |
실시예 1 | 4.5 |
비교예 1 | 1.5 |
대조군(무처리군) | 1 |
상기 표 3을 참고하면, 본 발명 실시예 1을 투여한 군의 경우 가장 높은 비장세포 증식능을 나타내어, 홍삼 추출물과 시알릴락토스를 혼합 사용하는 것이 면역 증강 효과에 효과적임을 알 수 있었다.
실험예 2-2. 혈청 내 사이토카인 분비량 확인
BALB/c 수컷 마우스를 일주일 동안 순응시킨 후 본 발명 실시예 1 또는 비교예 1을 14일 동안 100㎎/㎏/day로 경구 투여하였다. CO2를 통하여 마취하여, 마우스 복대정맥으로부터 혈액을 채취하였다. 상기 혈액을 상온에서 1시간 동안 방치한 다음, 2500rpm에서 15분 동안 원심분리하여 혈청(상층액)을 얻었다. 분리한 혈청은 ELISA 키트를 사용하여 IL-6(R&D Systems, Inc.; Minneapolis, MN)의 분비량을 측정하여, 이를 표 4에 나타내었다.
조건 | IL-6 발현량(fold of 1) |
실시예 1 | 5.72 |
비교예 1 | 1.4 |
대조군(무처리군) | 1 |
상기 표 4를 살펴보면, 본 발명 실시예 1은 비교예 1에 비해 면역 반응을 활성화시키는 IL-6의 발현량이 5배 이상 우수함을 확인할 수 있었다.
실험예 2-3. NK 세포 활성 확인
NK 세포 활성은 NK 세포가 암세포의 일종인 YAC-1 세포(Natural killer cell sensitive cell line)를 공격하여 파괴된 YAC-1 세포로부터 유리된 LDH를 측정하는 방법을 이용하였다.
마우스의 비장을 무균적으로 취하고, 아이스에서 HBSS를 넣어 비장을 파쇄한 후 부유액을 만들었다. 이후 ACK 버퍼를 첨가하여 적혈구를 제거하고, 원심분리 및 세척한 다음 PBS로 일정한 농도가 되도록 조절하였다. 비장세포 현탁액에서 비장세포의 NK세포를 분리하였다.
RPMI 1640배지에 NK 세포와 YAC-1 세포를 30:1이 되도록 분주하고 세포배양기에서 37℃, 4시간 동안 배양하였다. NK 세포에 의해 파괴된 YAC-1 세포로부터 방출되는 LDH의 발생량(cytotoxicity LDH detection kit, Sigma)을 측정하여 이를 표 5에 나타내었다.
YAC-1 cell killing(%) | |
실시예 1 | 60 |
실시예 2 | 65 |
실시예 3 | 68 |
실시예 4 | 80 |
실시예 5 | 62 |
실시예 6 | 65 |
실시예 7 | 67 |
실시예 8 | 72 |
실시예 9 | 75 |
실시예 10 | 77 |
비교예 1 | 30 |
비교예 2 | 38 |
비교예 3 | 35 |
비교예 4 | 32 |
대조군(무처리군) | 5 |
상기 표 5를 참고하면, 본 발명 실시예 1 내지 10의 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 혼합된 조성물은 홍삼 추출물 또는 시알릴락토스 단독 조성물인 비교예 1 내지 4에 비해 YAC-1 세포 사멸 효과가 높아, NK 세포 활성이 우수함을 알 수 있었다. 따라서, 홍삼 추출물과 시알릴락토스의 혼합물은 면역 증강용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
<제제예 1. 약학적 제제>
제제예 1-1. 정제의 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 20g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
제제예 1-2. 캡슐제의 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 100㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2㎎을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 1-3. 주사제의 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 1g, 염화나트륨 0.6g 및 아스코르브산 0.1g을 증류수에 용해시켜서 100㎖를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.
<제제예 2. 건강기능식품의 제조>
제제예 2-1. 건강기능식품의 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 20g, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70㎍, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2㎍, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10㎍, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50㎍, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎, 염화마그네슘 24.8㎎을 섞어 과립으로 제조하였으나, 용도에 따라 다양한 제형으로 변형시켜 제조할 수 있다. 또한, 상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 제조할 수 있다.
제제예 2-2. 건강기능성 음료의 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 1g, 구연산 0.1g, 프락토올리고당 100g, 정제수 900g을 섞어 통상의 음료 제조방법에 따라 교반, 가열, 여과, 살균, 냉장하여 음료를 제조하였다.
<제제예 3. 화장료 조성물의 제조>
제제예 3-1. 크림 제조
본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 5g에 시토스테롤 4g, 폴리글리세릴 2-올레이트 3g, 세라마이드 0.7g, 세테아레스-4 2g, 콜레스테롤 3g, 디세틸포스페이트 0.4g, 농글리세린 5.0g, 선플라우어오일 22g, 카르복시비닐폴리머 0.5g, 트리에탄올아민 0.5g, 방부제 및 향료 미량 및 정제수를 총 무게가 100g이 되도록 혼합하였고, 통상의 크림 제조 방법에 따라 영양 크림을 제조하였다.
제제예 3-2. 화장수 제조
95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 화장수를 제조하였다.
제제예
3-3. 유액 제조
세틸알코올 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 본 발명의 면역 증강용 조성물(실시예 1) 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
Claims (15)
- 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 홍삼 추출물은 진세노사이드 Rg1, Rb 및 Rg3을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 1:0.001~1의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 약학 조성물. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 또는 6′-시알릴락토스에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 약학 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 및 6′-시알릴락토스가 1:1~6의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 약학 조성물. - 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 건강기능식품.
- 제6항에 있어서,
상기 홍삼 추출물은 진세노사이드 Rg1, Rb 및 Rg3을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 건강기능식품. - 제6항에 있어서,
상기 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 1:0.001~1의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 건강기능식품. - 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 또는 6′-시알릴락토스에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 건강기능식품. - 제9항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 및 6′-시알릴락토스가 1:1~6의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 건강기능식품. - 홍삼 추출물 및 시알릴락토스를 유효성분으로 포함하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 화장료 조성물.
- 제11항에 있어서,
상기 홍삼 추출물은 진세노사이드 Rg1, Rb 및 Rg3을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 화장료 조성물. - 제11항에 있어서,
상기 조성물은 홍삼 추출물 및 시알릴락토스가 1:0.001~1의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 화장료 조성물. - 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 또는 6′-시알릴락토스에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 화장료 조성물. - 제14항에 있어서,
상기 시알릴락토스는 3′-시알릴락토스 및 6′-시알릴락토스가 1:1~6의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 비장세포 증식능 및 NK 세포 활성능을 갖는 면역 증강용 화장료 조성물.
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