KR20160103547A - 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 항산화조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 정제 봉독의 항산화 효과에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명의 15일령 이상의 일벌에게서 채집하여 정제한 정제 봉독은 멜리틴 함량이 40 내지 70%이며, 이는 산화 스트레스에 의한 LDH 유도 및 세포 사멸을 억제하므로 항산화 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 항산화조성물{Antioxidant composition containing purified bee venom}

본 발명은 특정 멜리틴 함량을 가지는 정제 봉독의 항산화 효과에 관한 것이다.

봉독(Bee Venom, 蜂毒)은 꿀벌의 산란관에서 나오는 독액으로서, 비중이 1.3, pH가 5.2, 쓴맛이 있고, 약한 방향성이 있다. 실온에서 증발시키면 약 30%의 건조물이 남으며 그 성분은 복잡하다. 봉독의 성분은 75%가 단백질이며, 그 주요 성분으로는 칼륨, 나트륨, 마그네슘, 인, 알라닌, 발린, 아르기닌, 트립토판, 메티오닌 및 히스티딘 등 다양한 물질이 함유되어 있다. 상기 봉독은 지금까지 류머티즘성 관절염을 조절하고 항암, 항염증(anti-inflammatory) 및 항통각(antinociceptive)의 효능을 가지는 것으로 알려져 있다. 봉독의 효능은 옛날부터 많이 알려져 왔다. 기원전 4세기경 히포크라테스가 사용했다는 기록이 있으며, 꿀벌의 뱃속에 있는 액은 사람에게 좋은 약으로 소개되고 있다. 우리나라에도 옛날부터 민간요법의 일종으로 벌침을 치료에 응용해 왔다. 봉독은 벌이 가진 독을 말하는 것으로 인체에 무해한 성분을 추출해내어 통증부위나 침을 놓는 경혈자리에 주입하여 인체의 면역력을 강화시켜 염증이나 이물질에 대해 스스로 이겨낼 수 있게끔 만드는 치료요법으로 사용되고 있다. 봉독의 주성분은 단백질의 일종인 멜리틴(melittin), 아파민(apamin), 아돌라핀(adolapin) 및 비반 세포 과립 감소 펩티드(mast cell degranulation peptide; MCD-peptide) 등으로 구성되어 있다. 봉독은 일단 몸속으로 들어가면 대사 작용을 활발히 하고, 면역작용을 극대화시켜 외부로부터 침입한 세균을 이겨낸다. 그러나 봉독의 주 약리작용인 면역기능의 활성화에 대한 정확한 기전은 아직 밝혀지지 않고 있다. 전통적으로 봉독을 가장 많이 응용해온 질환은 관절염, 결체조직과 기타 염증, 동통성 질환이다. 류마티스염, 급만성 관절염, 경추, 요추간판 탈충증, 척추관협착증, 섬유근통, 산후풍, 오십견, 만성염증등에 응용이 활발하다. 특히, 봉독의 항염 작용은 iNOS와 COX-2의 발현뿐만 아니라 TNF-a, NF-B의 활성을 억제하고, 프로스타글라딘E2(prostagladin E2)의 생성을 억제한다는 연구결과들이 다수 보고되고 있다. 최근 서구에서는 다발성 경화증에 봉약침을 응용하려는 시도가 이어지고 있는데, 치료 후 몸이 가벼워지고 근육의 운동성이 좋아졌다는 사례들이 있다. 브라질에서는 천식에 봉약침을 사용하고 있고, 중국에서는 근골격 질환 등의 치료에 사용되고 있다.

생체가 살아가기 위해서는 영양분의 섭취는 물론, 활발하게 호흡을 해야되는데 이 호흡을 통하여 들어간 산소가 영양성분을 연소시켜 에너지를 방출함으로써 육체적인 운동을 포함한 두뇌활동도 가능하게 되고, 이때 소량의 여러 가지 활성산 소종(¹ O ₂, O ₂ ^-, OH, H₂O₂, HOCl 등)들과 반응성이 큰 여러 가지 유리기가 생기는데, 나이를 먹는다든지 또는 여러 가지 내,외적인 요인에 의해서 활성산소나 유리기에 의한 조직손상이 증가한다. 활성산소는 단백질의 SH기와 반응해서 효소의 활성을 잃게하거나 가교결합의 형성, DNA, RNA, 효소 및 세포막을 구성하고 있는 불포화 지방산을 산화시켜 과산화지질을 형성하게 하는데, 과산화지질은 생체에 매우 유독하여 생체의 기능을 저하시켜서 결국에는 동맥경화, 혈액순환장애, 피로, 당뇨병, 심장병, 간장장애, 발암, 암전이 등과 같은 질병의 원인이 되고 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 이와 같이, 지질의 과산화를 막아주는 물질을 항산화 물질이라 한다. 노화는 일반적으로 대사과정 중의 산화적 손상(oxidative damage)에 의한 세포의 기능저하 및 항상성 조절이 회복되기 어려운 시점에서 개시된다고 볼 수 있다. 생물학적 노화경로(biological aging process)에 대해서는 여러 가설들이 검증되어 왔는데, 이중 growth retardation hypothesis나 glucocorticoid cascade hypothesis, metabolic rate hypothesis 등은 항노화 인터벤션(antiaging intervention)으로 가장 큰 효과를 나타내는 DR(dietary restriction)을 통해 이론적으로 미흡하다는 사실이 밝혀졌다. 현재까지 가장 많은 연구가 진행되었고 노화경로를 증명하는데 있어 가장 큰 명확성을 나타내는 이론은 oxidative stress hypothesis이다. Oxidative stress hypothesis에 의하면 생명체는 호흡을 통해서 산소가 영양성분을 연소하여 에너지를 얻게 되며, 이때 소량의 활성산소와 반응성이 큰 유리기가 생성되어 세포막을 공격하여 과산화지질을 만들게 되는데, 이 과산화 지질은 정상적인 대사과정에서 생성되어 동맥경화, 혈액순환 장애, 당뇨병, 심장병, 암 발생의 원인뿐만 아니라, 노화에도 큰 영향을 미치는 것으로 알려지고 있다.

이에, 본 발명자들은 서양종꿀벌의 일벌의 일령에 따라 멜리틴의 함량이 상이함을 확인하였으며, 특정 일령의 일벌에게서 수거한 특정 멜리틴 함량을 가지는 정제 봉독이 항산화 효과를 가지는 것을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 산화적 스트레스에 의해 야기되는 뇌신경 질환의 예방용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

아울러, 본 발명의 목적은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독을 제조하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 산화적 스트레스에 의해 야기되는 뇌신경 질환의 예방용 식품 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 특정 일령의 일벌에게서 수득된 봉독은 세포 독성이 적고 산화스트레스에 의한 뇌신경세포의 사멸을 억제하는 효과를 나타내었으므로, 항산화 조성물 및 항산화 식품 조성물로 이용될 수 있다.

도 1은 유리판 또는 철사에서의 봉독 채집방법을 나타낸 도이다.
도 2는 정제 전 봉독 및 정제 후 봉독을 현미경으로 확인한 도이다.
도 3은 채집한 봉독의 멜리틴 함량을 분석한 도이다.
도 4는 유리판 또는 철사에서 수거한 봉독의 성분을 액체크로마토그래피로 분석한 도이다.
도 5는 H₂O₂ 처리시 봉독의 멜리틴 함량에 따른 세포 독성을 확인한 도이다:
PBV: 봉독;
1: 봉독 번호 1의 봉독;
1: 봉독 번호 1의 봉독 처리 세포군; 및
2: 봉독 번호 2의 봉독 처리 세포군 (표 2 참조).
도 6은 H₂O₂ 처리에 의한 산화적 스트레스 유발 후 봉독의 멜리틴 함량에 따른 LDH 억제 효과를 확인한 도이다.
도 7은 H₂O₂에 의해 유발된 산화적 스트레스에 의한 신경세포 SH-SY5Y의 형태를 관찰한 사진이다;
위: 형광현미경;
아래: DAPI 염색된 세포들;
1: 봉독 번호 1의 봉독 처리 세포군; 및
2: 봉독 번호 2의 봉독 처리 세포군.
도 8은 H₂O₂에 의해 유발된 산화적 스트레스에 의한 신경세포 SH-SY5Y에서의 caspase-3 활성 및 발현을 확인한 도이다:
A: caspase-3 단백질 활성;
B: caspase-3 발현;
1: 봉독 번호 1의 봉독 처리 세포군; 및
2: 봉독 번호 2의 봉독 처리 세포군.
도 9는 본 발명의 H₂O₂에 의해 산화적 스트레스 유발시 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독에 의한 Bcl-2 및 Bax의 단백질 발현을 확인한 도이다:
A: Bcl-2의 단백질 발현 확인 밴드 및 이의 그래프;
B: Bax의 단백질 발현 확인 밴드 및 이의 그래프; 및
C: Bcl-2/Bax 단백질 발현 비율.
도 10은 본 발명의 H₂O₂에 의해 산화적 스트레스 유발시 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독에 의한 Bcl-2 및 Bax의 유전자 발현을 확인한 도이다:
A: Bcl-2의 유전자 발현 확인 밴드 및 이의 그래프;
B: Bax의 유전자 발현 확인 밴드 및 이의 그래프; 및
C: Bcl-2/Bax 유전자 발현 비율.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "봉독"은 꿀벌로부터 분리한 독을 말하며 "꿀벌독"과 혼용하여 기재하였다.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 산화적 스트레스(oxidative stress)에 의해 유발되는 뇌신경 손상을 포함하는 뇌신경 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.

본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 항산화 조성물을 제공한다.

상기 정제 봉독은 15일령 이상의 일벌로부터 유리판에서 수거한 봉독을 정제한 봉독인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 정제 봉독은 산화적 스트레스에 의해 증가한 LDH를 감소시키는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 정제 봉독은 산화적 스트레스에 의한 세포 사멸을 감소시키는 것이 바람직하며, 상기 세포는 신경세포인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 정제 봉독은 멜리틴 함량이 40 내지 75%인 것이 바람직하며, 45 내지 70%인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서는 멜리틴 함량이 45 내지 70%인 봉독을 15일령 이상의 일벌로부터 수득하였다.

본 발명에서 사용한 봉독은 서양종 벌꿀 이탈리안계통(Apis mellifera liguria)의 꿀벌로부터 분리한 봉독으로, 꿀벌의 종류는 일반적으로 서양종꿀벌(Apis mellifera), 동양종꿀벌(Apis cerana), 인도최대종(Apis dorsata), 인도최소종(Apis florea)의 4개의 종이 알려져 있다.

봉독은 꿀벌의 산란관에서 나오는 독액으로서, 생봉독, 건조봉독, 봉독추출물 및 정제 봉독을 포함하는 것이다. 봉독에는 멜리틴(Melittin), 아파민(Apamin), 비만세포 과립감소 펩티드(MCD-Peptide, Mast Cell Degranulation Peptide, Op), 단백효소 억제제(Protease Inhibitor), 세카르핀(Secarpin), 터치아핀(Tertiapin), 프로카민(Procamine) 등 다양한 펩타이드를 함유하고 있는 것으로 알려져있다. 생봉독은 건조 또는 정제과정을 거치지 않은 것으로서 비중이 1.1 내지 1.3이고, 산도(pH)가 5.2 내지 5.5 범위이며, 70~80중량%는 단백질 또는 펩타이드로 이루어진다. 봉독 추출물은 당 업계에 공지된 다양한 추출방법을 이용하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 이러한 저급알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸렌글리콜을 추출용매로 하여 얻을 수 있다. 보다 바람직하게는 봉독을 물로 현탁하고, 에틸 아세테이트를 용매로 수회 추출하여 분리된 수층을 다시 부탄올(butanol)로 추출하며, 각 층을 감압 농축하여 얻는 것이다. 정제 봉독은 상술한 추출용매에 의한 추출물 이외에 통상적인 정제 과정을 거쳐 얻거나, 다양한 추출방법 및 정제방법을 이용하여 얻을 수 있으며, 가장 바람직하게는 대한민국 등록 특허 제10-0758814에 기재된 봉독 정제방법을 통해 얻을 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 정제 봉독을 포함하는 조성물은 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체 내 전달에 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc. 에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 이용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(Mack Publishing Company, Easton PA, 18th, 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물은 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 단백질을 0.0001 내지 10 중량 %로, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량 %를 포함한다. 또한, 본 발명의 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19thed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 봉독 정제물을 함유하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태, 바람직하게는 현탁제, 동결건조제제, 비수성 주사제, 또는 수성 주사용액의 형태, 보다 더 바람직하게는 멸균 주사용액제제로 제형화하여 사용될 수 있으며, 봉독 정제물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 당업계에서 통상적으로 사용하는 용제, 용해보조제, 완충제, 등장화제, 안정제, 항산화제, 무통화제, 현탁화제 등을 사용하여 조제가능하며, 상기 용제, 첨가제 및 희석제로는 멸균증류수, 생리식염수, pH 조절제, 알부민, 염화나트륨, 만니톨, 링겔주사액, 포도당 등을 들 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 개체에 비 경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용), 경구 투여하거나 피하 주입 또는 피부를 통한 국소 투여(경피 투여) 또는 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피내, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사를 통할 수 있다. 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 조성물의 경구 투여량은 바람직하게는 1일 당 0.001 ~ 100 mg/kg(체중)이 바람직하고, 0.01 ~ 10 mg/kg(체중)이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 그러나, 가장 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 봉독으로부터 분리된 봉독 정제물은 1일 8 마이크로그램 내지 5 밀리그램, 바람직하게는 8 마이크로그램 내지 2 밀리그램, 보다 바람직하게는 16 마이크로그램 내지 1 밀리그램의 투여량으로, 바람직하기로는 주사제, 보다 더 바람직하기로는 근육내 주사법으로 투여하는 것이 바람직할 것이다. 투여 회수는 1일 1회, 1일 수회, 2일 내지 1주일간 1회 등으로 투여가능하나, 그 투여횟수에는 그 제한이 없다. 상기 투여량, 투여횟수 및 투여방법은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 내지 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은

1) 15일령 이상의 일벌의 봉독을 유리판에서 수거하는 단계;

2) 상기 단계 1)의 봉독을 정제하는 단계; 및

3) 상기 단계 2)에서 정제한 봉독의 멜리틴 함량을 40 내지 70%으로 조절하는 단계를 포함하는 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독을 제조하는 방법 제공한다.

또한, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 산화적 스트레스에 의해 야기되는 뇌신경 질환의 예방용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다. 본 발명의 식품 조성물에서 포함할 수 있는 필수 성분으로서 상기 봉독을 포함하는 조성물 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품 보조 첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 또한, 식품보조첨가제를 추가로 첨가할 수도 있는바 식품보조첨가제는 당업계에 통상적인 식품보조첨가제, 예를 들어 향미제, 풍미제, 착색제, 충진제, 안정화제 등을 포함한다. 상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 식품 조성물은 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다. 또한, 본 발명은 봉독을 포함하는 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물로 제공될 수도 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물에는 pH 조절제, 향료, 유화제, 방부제 등을 필요에 따라 부가하여 통상의 화장료 제조방법으로 화장수, 젤, 수용성 파우더, 지용성 파우더, 수용성 리퀴드, 크림 또는 에센스 등으로 제형화될 수 있다.

아울러, 본 발명은 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 로션 및 바디클린저의 제형이 포함될 수 있다. 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있고, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 해당되는데, 예를 들어, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 포함될 수 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있으며, 상기 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등의 다른 성분을 배합할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 통상 화장료 조성물이 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 클렌저, 모발 화장료 등이 될 수 있다.

본 발명의 조성물은 점안제 또는 접안제 및 피하주사제로 제조하여 이를 생체에 접종할 수 있고, 점안제나 주사제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

*본 발명은 하기의 실시예 및 제조예에 의하여 보다 구체적으로 이해될 수 있으며, 하기의 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

< 실시예 1> 봉독 정제 및 성분 확인

<1-1> 꿀벌의 일령에 따른 봉독의 멜리틴 함량 비교

본 발명자들은 서양종 꿀벌(Apis mellifera L.)의 일벌의 일령에 따른 봉독의 멜리틴 함량을 확인하기 위하여, 10 내지 15일령의 일벌 및 15일령 이상의 일벌로부터 봉독을 채집하였다. 봉독 채집은 유리판 또는 철선으로부터 수행되었다 (도 1). 봉독 채집장치를 사용하여 채취한 봉독으로부터 이물질을 제거하여 품질을 균일하게 유지하기 위하여 봉독을 정제하여 “정제봉독‘을 얻었다. 그 후, 얻은 정제봉독을 현미경으로 확인하였다 (도 2). 도 3과 같이 O.D 값을 측정하여 하기의 수학식 1으로 멜리틴의 함량을 분석하였다.

그 결과, 15일령 이상의 일벌의 봉독이 멜리틴 함량이 높은 것으로 확인되었다 (표 1).

일령	10일 ~ 15일령	15일령 이상
멜리틴 함량(%)	35~42	45 ≤

<1-2> 봉독 채집 방법에 따른 봉독의 주요 성분 함량 비교

또한, 유리판 또는 철사로부터 수거한 봉독의 주요성분 함량을 액체크로마토그래피 분석 방법을 통해 확인하였다.

그 결과, 유리판에서 수거한 봉독의 주요 성분 함량은 꿀벌의 봉독 고유의 성분 함량 범위내에 존재하나, 철사로부터 분리한 봉독은 멜리틴(Melittin), 아파민(Apamin), 포스포리아제(Phospholipase A2, PLA2) 성분 함량이 모두 미달되는 것을 알 수 있었다 (도 4 및 표 2).

성분	멜리틴(Melittin)	아파민(Apamin)	PLA2
유리판	68.10 %	2.13 %	11.07 %
철사	34.22 %	0.95 %	5.90 %

따라서, 15일령 이상의 일벌의 봉독을 유리판에서 채집한 경우 멜리틴 함량이 45 내지 75%인 것을 알 수 있었다.

< 실시예 2> 멜리틴 함량에 따른 정제 봉독의 세포 독성 평가

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 처리하였다. 확인하였다. 구체적으로, 24시간 후 배지를 걷어내고 PBS로 세포를 세척한 뒤 50 ㎕의 MTT(3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2-5-diphenytetrazolium bromide) 용액을 첨가하여 4시간 동안 배양하였다. MTT 용액을 환원시킨 뒤에 상층액을 제거하고 DMSO 200 ㎕를 분주하여 570 nM에서 흡광도를 측정하여 인간 SH-SY5Y 세포의 생존력을 측정하였다.

멜리틴 함량	< 45%	45 ≤ 멜리틴 함량 < 70%	≥ 70%
봉독 번호	1	2	3

그 결과, 멜리틴 함량이 70% 미만인 봉독은 세포독성을 유발하지 않았으나,멜리틴 함량이 70% 이상인 봉독은 세포독성을 초래하였다 (도 5).

< 실시예 3> 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독의 항산화 효과

<3-1> 산화적 스트레스에 의해 유도된 LDH(Lactate dehydrogenase ) 형성 확인

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 24시간 처리하였다. LDH releases는 Cytotoxicity Cell Death Kit (Takara Bio, Shiga, Japan)를 이용하여 측정하였다. 상층 100ul는 새로운 96 well plate에 옮긴 다음, 반응 시약 100ul를 각각 well에 첨가하였다. 37℃에서 30분간 반응시킨 후 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포에 2% Triton X-100을 처리한 샘플을 high control로 하였으며 배지만 처리한 샘플은 low control로 하였다. 계산식은 다음과 같다: Cytotoxicity (%) = (exp.value-low control)(high control-low control) x 100.

그 결과, H₂O₂에 의한 산화적 스트레스에 의해 유도된 LDH가 봉독에 의해 감소됨을 확인하였다 (도 6).

<3-2> 산화적 스트레스에 의한 세포 형태

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 24시간 처리한 후 DAPI 염색을 수행하여 세포의 세포사멸(apotosis)을 확인하였다 (세포독성이 있는 70%이상의 멜리틴 함량을 갖는 봉독은 실험에서 제외하였다)

그 결과, 산화적 스트레스에 의해 신경세포 SH-SY5Y의 형태가 비정형적이고, 핵이 응축되고, DNA 분절화(fragmentation)된 전형적인 세포사멸이 확인되었으나, 봉독을 처리했을 경우엔 정상 세포의 형태로 확인되었다. 특히, 45 ≤ 멜리틴 함량 < 70%의 멜리틴 함량을 갖는 봉독에서 가장 세포 형태가 정상에 가까운 것으로 확인되었다 (도 7).

<3-3> 산화적 스트레스에 의한 Caspase -3 활성 및 발현 확인

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 24시간 처리한 후 Caspase-3 활성 및 Caspase-3 단백질 발현을 웨스턴 블롯으로 확인하였다. Caspase-3 활성은 Caspase-3 assay kit (R&D Systems, Inc, MN, USA)를 이용하였다. 배지는 제거하고 세포는 lysis 하여 교반 후 상층을 획득하였다. 상층에 Dithiothreitol과 caspase-3 substrate 이 함유된 반응 시약을 첨가하여 37℃에서 2시간 반응시킨 후 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 산화적 스트레스로 인해 Caspase-3 활성이 63% 가량 증가하였으나, 봉독 처리로 인해 41% 이하로 감소되었으며 (도 8A), Caspase-3 단백질 발현을 봉독이 억제하였다 (도 8B).

< 실시예 4> 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독의 세포사멸 관련 단백질 억제 확인

<4-1> 산화적 스트레스에 의한 단백질 발현 억제 확인

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 6시간 동안 처리한 후 anti-apoptotic 효소인 Bcl-2 및 pro-apototic 효소인 Bax의 발현을 웨스턴 블롯으로 확인하였다.

그 결과, 산화적스트레스가 유도된 뇌신경세포(SH-SY5Y)에서 멜리틴 함량이 조정된 정제 봉독이 Bcl-2 효소 발현이 감소된 세포에서 봉독을 처리했을 경우 정상 수준으로까지 Bcl-2 효소 및 단백질 발현을 활성화시켰으며, 반면 Bax 효소의 발현은 억제하여 세포의 생존을 유도하는 것을 확인하였다 (도 9).

<4-2> 산화적 스트레스에 의한 pro- apoptotic 유전자 발현 억제 확인

인간 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y를 DMEM배지를 사용하여 배양한 후 <실시예 2>에서와 같이 표 3의 멜리틴 함량이 < 45%인 봉독 (봉독 번호 1), 멜리틴 함량이 45 ≤ 내지 < 70%인 봉독 (봉독 번호 2) 또는 멜리틴 함량이 ≥ 70%인 봉독 (봉독 번호 3)을 1/100 비율로 희석한 다양한 비율의 멜리틴 함량을 갖는 정제봉독을 1시간 처리한 후 100 uM의 H₂O₂를 24시간 동안 처리한 후 anti-apoptotic 효소인 Bcl-2 및 pro-apototic 효소인 Bax의 발현을 웨스턴 블롯으로 확인하였다.

그 결과, 상기 실시예 <4-1>의 단백질 발현에서와 유사한 경향으로 Bcl-2 및 Bax을 유전자 발현 단계에서부터 봉독이 관여하는 것을 확인되었다 (도 10).

따라서, 본 발명에 따른 정제 봉독이 신경 세포를 산화적 스트레스로부터 보호하는 것을 알 수 있었다.

< 제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 정제 봉독 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명의 정제 봉독 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 정제 봉독 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

*<1-4> 환의 제조

본 발명의 정제 봉독 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

<1-5> 과립의 제조

본 발명의 정제 봉독 50 ㎎

대두추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

<1-6> 질 세정제 조제

본 발명의 정제 봉독 20.0 mg

코코글루코시드(코코넛유 유래 계면활성제) 15.0 g

코코암포아세테이트나트륨(코코넛유 유래 계면활성제) 5.0 g

에데트산나트륨 100.0 mg

정제수 79.88 g

상기 원료를 칭량하여 조제 용기에 넣은 다음 액 온도를 80 ℃로 가온하면서, 교반하여 완전 용해시켰다. 완전 용해되면 액 온도를 40 ℃로 냉각한 다음, 진공 탈포하여 100 g의 질 세정제를 제조하였다.

<1-7> 겔제의 제조

본 발명의 정제 봉독 2.5 mg

에데트산나트륨 50.0 mg

글리시리진산칼륨 50.0 mg

부틸렌글리콜 3.0 g

포비돈 K30 1.0 g

카보머 300.0 mg

트리에탄올아민 400.0 mg

정제수 95.19875 g

상기 원료를 칭량한 다음 조제 용기에 넣고 액 온도를 80 ℃ 가온 교반하면서 완전 용해하고, 40 ℃ 냉각한 다음 진공 탈포하여 100 g의 겔제를 제조하였다.

<1-8> 좌제의 제조

본 발명의 정제 봉독 5.0 mg

폴리에틸렌글리콜 1500 49.995 g

폴리에틸렌글리콜 4000 50.0 g

상기 원료를 칭량한 다음 조제 용기에 넣고 액 온도를 80 ℃ 가온 교반하면서 완전 용해하고, 40 ℃ 냉각한 다음 진공 탈포하여 100 g의 좌제를 제조하였다.

<1-9> 에어로졸제의 제조

본 발명의 정제 봉독 5.0 mg

부틸렌글리콜 3.5 g

에탄올 3.0 g

글리세린 0.5 g

피이지-60하이드로제네이트카스터오일 0.3 g

구연산 20.0 mg

구연산나트륨 80.0 mg

에데트산나트륨 50.0 mg

글리시리진산암모늄 10.0 mg

글리시리진산이칼륨 50.0 mg

정제수 92.485 g

상기 원료를 칭량한 다음 조제 용기에 넣고 액 온도를 80℃ 가온 교반 하면서 완전 용해하고, 40 ℃ 냉각한 다음 진공 탈포하여 100 g의 액을 제조한 후 압력용기에 충전한 다음 질소가스를 충전하고 밀봉하여 에어로졸제를 제조하였다.

< 제조예 2> 식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 정제 봉독 0.01~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

*본 발명의 정제 봉독 0.01~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 정제 봉독 1 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 정제 봉독 1~5 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 정제 봉독 분말을 준비하였다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 정제 봉독 분말를 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명의 정제 봉독(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

< 제조예 3> 음료의 제조

<3-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(94.5%)과 같은 부재료와 본 발명의 정제 봉독(0.5 %)을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<3-2> 야채 주스의 제조

본 발명의 정제 봉독 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<3-3> 과일 주스의 제조

본 발명의 정제 봉독 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

< 제조예 4> 화장료 조성물의 제조

<4-1> 지용성(W/O 제형) 연고제제의 제조 (중량%)

본 발명의 정제 봉독 0.01-10.0%

스테아릴 알콜 7.0%

스테아린산 2.2%

스쿠알렌 3.4%

옥틸두오데칸올 5.0%

올리브유 6.0%

글리세린모노하우릴 지방산 에스텔 10.0%

이소프로필 아디페이트 2.0%

테고 0.3%

카복실비닐폴리머 3.0%

프로필렌 글리콜 5.0%

코직산 0.05%

알파-케토글루타민산 0.2%

시스테인 0.2%

파라벤류 0.3%

멸균 정제수 또는 0.02M 인산 또는 완충용액 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 지용성 연고를 제조하였다.

<4-2> 친수성(O/W형) 연고제제의 제조 (중량%)

본 발명의 정제 봉독 0.01-10.0%

백색바세린 25.0%

스테아릴알콜 20.0%

프로필렌글리콜 12.0%

프로필렌미스스틴산 0.1%

소디움 글리세린 모노라우렐 0.2%

폴리옥시에틸렌경화피마자유 4.0%

베타인 함유 양이온성 유화제 0.2%

모노스테아린산글리세린에스텔 0.1%

파라옥시안식향산프로필 0.1%

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 친수성 연고를 제조하였다.

<4-3> 영양화장수의 제조 (중량%)

글리세린 8.0 %

부틸렌글리콜 4.0 %

히알루론산 추출물 5.0 %

베타글루칸 7.0 %

카보머 0.1 %

본 발명의 정제 봉독 0.05 %

카프필릭/카프릭 트리글리세라이드 8.0 %

스쿠알란 5.0 %

세테아릴 글루코사이드 1.5 %

소르비탄 스테아레이트 0.4 %

세테아릴 알콜 1.0 %

트리에탄올 아민 0.1 %

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.

<4-4> 영양크림의 제조 (중량%)

글리세린 3.0 %

부틸렌글리콜 3.0 %

유동파라핀 7.0 %

베타글루칸 7.0 %

카보머 0.1 %

본 발명의 정제 봉독 3.0 %

카프필릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0 %

스쿠알란 5.0 %

세테아릴 글루코사이드 1.5 %

소르비탄 스테아레이트 0.4 %

폴리솔베이트 60 1.2 %

트리에탄올 아민 0.1 %

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.

<4-5> 마시지 크림의 제조 (중량%)

글리세린 8.0 %

부틸렌글리콜 4.0 %

유동파라핀 45.0 %

베타글루칸 7.0 %

카보머 0.1 %

본 발명의 정제 봉독 1.0 %

카프필릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0 %

밀납 4.0 %

세테아릴 글루코사이드 1.5 %

세스퀴 올레인산 소르비탄 0.9 %

바세린 3.0 %

파라핀 1.5 %

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 마사지 크림을 제조하였다.

<4-6> 팩의 제조 (중량%)

글리세린 4.0 %

폴리비닐알콜 15.0 %

히알루론산 추출물 5.0 %

베타글루칸 7.0 %

알란토인 0.1 %

본 발명의 정제 봉독 0.5 %

노닐 페닐에테르 0.4 %

폴리솔베이트 60 1.2 %

에탄올 6.0 %

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 팩을 제조하였다.

Claims (3)

1. 멜리틴 함량을 45 내지 70 중량%로 포함하는 정제 봉독을 유효성분으로 함유하는, 산화적 스트레스(oxidative stress)에 의해 유발되는 알츠하이머의 예방용 식품 조성물로,
   상기 정제 봉독은 이탈리안계통의 서양종 꿀벌(Apis meliffera Liguria )의 15일령 이상된 일벌로부터 유리판에서 수거한 봉독을 정제한 봉독인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 정제 봉독은 산화적 스트레스에 의한 LDH를 감소시키는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 정제 봉독은 산화적 스트레스에 의한 세포 사멸을 감소시키는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
   

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