KR20180098736A - 부처손 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항균용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항균용 조성물은 농도의존적으로 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거하는 활성이 우수, 즉 항산화 효과가 우수하고, 식중독(food poisoning), 피부염(dermatitis), 폐렴(pneumonia), 봉와직염(cellulitis) 등의 원인균에 대한 생장 저해 활성이 우수한 특징을 지니므로, 산화 작용 및 미생물 감염에 의해 유발되는 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 화장품, 식품 및 의약품 등에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

부처손 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물{A composition having anti-oxidation or anti-bacterial activity comprising Selaginella tamariscina extracts, fractions thereof or compounds isolated therefrom as an active ingredient}
본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항균용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다.
산소는 생명유지를 위한 여러 대사반응에 필수요소이고, 인체 내 독극물질 해독을 위해서도 필요하지만 산소가 인체에 유익한 것만은 아니어서 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 광화학반응 등 각종 공해물질, 물리 화학적, 환경적 요인 등에 의해 수퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical), 하이드록시 라디칼(hydroxyl radical), 과산화수소(hydrogen peroxide), 일중항산소(singlet oxygen)와 같은 반응성이 매우 큰 자유라디칼(free radical)로 전환되면 생체에 치명적인 산소독성을 일으키는 양면성이 있다(Korea J. Biotechnol . Bioeng ., 2001, 16(6), 592-602). 이러한 활성산소를 제거하기 위한 합성 항산화제인 BHT(butylated hydroxy toluene)와 BHA(butylated hydroxy anisole) 등은 탁월한 항산화 효과와 경제성 때문에 지금까지 널리 사용되어 왔으나 간 비대, 체내 흡수물질의 독성화 및 발암 가능성 등의 문제가 제기되어 허용대상 식품이나 사용량이 엄격히 제한되고 있다. 또한 토코페롤(tocopherol)과 아스코르브산(ascorbic acid) 같은 천연 항산화제는 안전성은 높지만 단독으로는 연쇄반응 저지 능력이 낮고 가격이 비싼 단점이 있다. 이러한 이유로 최근에는 천연물로부터 보다 안전하고 경제적이며 효과가 뛰어난 항산화제를 분리, 이용하려는 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 특히 식물유래 물질로 식물의 2차 대사산물은 자유라디칼과 활성산소의 생성을 억제하거나 제거하여 산화를 방지하기 때문에 이에 대한 연구가 많이 이루어지고 있다(Korean Journal of Plant Res., 2011, 24(1), 30-39; J. Korean Soc . Food Sci . Nutr ., 2010, 39(9), 1249-1256).
한편, 식품, 화장품, 섬유 및 의약품 등의 제품은 품질을 오랫동안 유지하기 위해서, 미생물에 의한 부패를 막아주는 방부제가 필수적이며, 특히 제품 특성상 유통기간이 비교적 길며 미생물 영양원이 많은 화장품의 경우는 더욱 방부제가 요구된다. 최근 '옥시 사건'을 통해 제기된 바와 같이 합성 원료의 경제성에 비해 위험요소는 항상 잠재해 있으며, 단순한 산술적 통계에 따른 이윤만을 평가하기에는 위험요소가 현실화되었을 때 야기되는 문제는 치명적이라고 할 수 있다.
기존의 방부제로서 화장품, 식품 및 의약품 등에 가장 범용적으로 사용되는 파라벤류의 방부제들은 피부 알러지 및 내성균 유발이라는 문제점이 제시되고 있으며, 이러한 문제점을 해결하고자 제품의 안전성과 경제성이 우수한 천연방부제에 대한 연구가 지속되고 있다. 천연 보존제(방부제)란 식품, 화장품 중의 장기보존 및 유통기한 연장을 위해 사용되는 첨가물로서 미생물에 의한 부패 방지에 사용되는 생물유래 소재를 의미하며, 화학 합성 보존제는 지속적인 사용시 위해성으로 인해 사용량과 이용범위를 엄격하게 제한하고 있는 실정임에도 불구하고 만성 및 급성 독성, 돌연변이, 발암 등 다양한 부작용의 우려가 끊임없이 제기되고 있다.
현재 보고된 천연 항균성 물질의 대부분은 색취, 안정성 저하, 좁은 항세균스펙트럼 및 제형상의 문제점 등으로 인하여 상용화되지 못하고 있으며, 편백추출물인 히노키티올(Hinokitiol), 목련추출물인 마그놀롤(Magnolol) 및 자몽종자추출물 DF-100 등 극히 일부만이 상용화되고 있다. 이 중에서 제품개발이 가장 앞선 DF-100의 경우 항균력은 DF-100에 포함된 유기산 및 합성보존료인 벤제토니움 클로라이드(benzethonium chloride) 때문인 것으로 알려져 있으며, 그 외 다른 천연항세균제 등은 경제성이 낮거나 좁은 항균스펙트럼 또는 물성에 의한 사용범위의 제한 등의 문제가 있어 보다 진보되고 제품화 개발이 가능한 천연항균제가 절실한 실정이다(한국등록특허 제10-1495272호).
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 인체에 부작용이 없으면서 항산화 또는 항균 작용이 우수한 천연물을 찾고자 예의 노력한 결과, 예로부터 토혈, 대변 출혈, 자궁 출혈 등 각종 출혈 증상에 처방되며, 월경통이나 타박상에 의한 통증 완화에 사용하는 것으로 알려져 있는 부처손(Selaginella tamariscina)의 메탄올 추출물로부터 수득한 수포화부탄올 분획물이 우수한 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 자유라디칼(free radical) 소거 효과, 피부염(dermatitis), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia)과 같은 질환 유발과 관련된 미생물 생장 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
한국등록특허 제10-1495272호
Korea J. Biotechnol. Bioeng., 2001, 16(6), 592-602 Korean Journal of Plant Res., 2011, 24(1), 30-39 J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 2010, 39(9), 1249-1256
본 발명의 목적은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공하기 위한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물, 상기 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "부처손(Selaginella tamariscina)"은 산지 양지 바른 바위 위에 생육하는 양치식물로, 예로부터 권백(卷柏)이라고 불리기도 한다. 부처손과(Selaginellaceae)에 속하는 약용 식물로서, 부처의 손을 닮은 독특한 생김새를 지니고 있으며, 학명은 Selaginella tamariscina (P.Beauv.) Spring이다.
구체적으로, 잎은 4줄로 밀생하고 난형이며 길이 1.5~2㎜로서 끝이 실 같은 돌기로 되고, 가장지리에 잔 거치가 있다. 포자엽은 난상 삼각형이며, 가에는 잔거치가 있고 가늘며, 포자낭은 큰 것과 작은 것이 있다. 포자낭수(胞子囊穗)는 잔가지 끝에 1개씩 달리며 네모가 지고, 길이 5-15㎜, 직경 2㎜이다. 줄기는 높이 20㎝에 달하며 가지는 평면으로 갈라져 퍼지고 표면은 짙은 녹색이며 뒷면은 흰빛이 도는 녹색이다. 습기가 많은 때는 가지가 사방으로 퍼지고 건조할 때는 안으로 말려서 공처럼 되며 습기가 있으면 다시 퍼진다. 뿌리는 많은 담근체(擔根體)와 뿌리가 엉겨 줄기처럼 형성된 끝에서 가지가 사방으로 퍼져서 자란다. 밑에서 파생된 근경은 단단하고 짧으며 밑에 많은 수염뿌리가 나는 특징을 지니고 있다.
우리나라 거의 전도에 나며, 일본, 대만, 중국, 만주 등지에도 분포하며, 주로 건조하고 서늘한 바위 또는 절벽 표면에서 자라는 상록다년초로서 한방에서 혈변, 혈뇨, 항문 탈장 등을 치료하기 위해 사용되어 왔고, 최근에는 혈당 강하 등이 알려지면서 권백의 효능 성분에 대한 관심이 높아지고 있다.
상기 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 부처손(Selaginella tamariscina)에 메탄올을 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 부처손 메탄올 추출물을 제조하는 단계; 및
4) 단계 3)의 부처손 메탄올 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 부처손 분획물을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 부처손(Selaginella tamariscina)은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 단계 1)에서 이에 제한되지는 않으나, 부처손은 잎, 가지 또는 뿌리를 모두 포함하여 추출하는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 메탄올을 이용한 추출방법으로는 진탕추출, 속슬렛(Soxhlet) 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 메탄올을 세척, 건조 및 분말화 한 부처손 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 60℃인 것이 더욱 바람직하고, 50℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 4 내지 24시간인 것이 바람직하며, 5 내지 12시간인 것이 더욱 바람직하고, 6시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 2 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 유기용매는 노르말-헥산(n-Hexane), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 에틸아세테이트(ethyl acetate) 또는 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol)인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 부처손 메탄올 추출물을 물에 현탁시킨 후 노르말-헥산(n-Hexane), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol) 및 물(H2O)로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 노르말-헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol) 분획물 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하며, 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol) 분획물임이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 상기 부처손 메탄올 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 상기 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 부처손(Selaginella tamariscina)에 메탄올을 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 부처손 메탄올 추출물을 제조하는 단계; 및
4) 단계 3)의 부처손 메탄올 추출물을 추가적으로 수포화부탄올로 추출하여 부처손 수포화부탄올 분획물을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 부처손(Selaginella tamariscina)은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 단계 1)에서 이에 제한되지는 않으나, 부처손은 잎, 가지 또는 뿌리를 모두 포함하여 추출하는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 메탄올을 이용한 추출방법으로는 진탕추출, 속슬렛(Soxhlet) 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 메탄올을 세척, 건조 및 분말화 한 부처손 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 60℃인 것이 더욱 바람직하고, 50℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 4 내지 24시간인 것이 바람직하며, 5 내지 12시간인 것이 더욱 바람직하고, 6시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 2 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 부처손 수포화부탄올 분획물은 부처손 메탄올 추출물 분량에 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol)을 동량 첨가하여 분획하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 상기 부처손 메탄올 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 이에 제한되지는 않으나, 상기 수포화 n-부탄올은 부탄올과 초순수를 동량 혼합하고 격렬하게 흔들고 방치하여 완전히 층분리된 후 하층인 물층을 버리고, 상층을 회수하여 사용하는데, 사전에 미리 제조하여 준비하도록 한다.
한편, 이에 제한되지는 않으나, 상기 수포화부탄올 분획물에는 α-리놀렌산(α-linolenic acid), 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid), 구아이아콜(guaiacol) 및 부탄디올(butanediol) 화합물을 포함하는 것일 수 있다.
또한, 이에 제한되지는 않으나, 상기 화합물은 수포화부탄올 분획물의 총 100 중량부에 대하여 α-리놀렌산(α-linolenic acid)이 5 내지 10 중량부, 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid)이 3 내지 6 중량부, 구아이아콜(guaiacol)이 5 내지 10 중량부, 및 부탄디올(butanediol)이 0.1 내지 3 중량부로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 용어 "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 발암 등을 초래하게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성질소종(reactive nitrogen species, RNS)은 염증 반응 시 대식세포 호중구 및 다른 면역 세포 들의 면역반응으로 인해 다량 생성되며, 이때 ROS도 같이 생성된다. 상기와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다. 따라서, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물, 특히 상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 화장품, 식품 또는 의약품 등에 포함시키면 항산화 효과를 달성함으로써, 노화 방지 및 건강증진에 기여할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, DPPH 자유라디칼 소거 활성 측정 및 금속이온촉매 산화억제 시험을 수행한 결과, 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물이 농도의존적으로 DPPH 자유라디칼의 소거 효과 및 단백질 보호 효과, 즉 강한 항산화 효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 5 및 도 6). 따라서, 본 발명의 항산화 효과는 자유라디칼(free radical) 소거 활성에 의해 달성되는 것일 수 있다.
본 발명의 용어 "항균"은 세균이나 진균 등의 미생물의 생장 및 증식을 억제 또는 제어하는 작용을 의미하는 것으로, 본 발명의 미생물은 이에 제한되지는 않으나, 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 또는 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)일 수 있다. 상기 피부 상재균인 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus)는 건강한 사람이나 가축의 피부와 비강표면에 일반적으로 존재하고 있으며, 내열성인 외독소를 생산하여 식중독을 일으키는 균으로 알려져 있다. 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)는 여드름균 감염 이후 2차 피부 감염균으로, 일반적으로 비병원성이나 패혈증, 요로감염, 심내막염 등도 일으킬 수 있는 균이다. 인플루엔자의 원인균인 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)는 세균성 뇌막염 또는 급성 후두개염(epiglottitis)을 일으키는 것으로 알려져 있다.
한편, 여러 종류의 피부 질환은 주로 피부상재균에 의해서 발생되며 여드름균, 비듬균 등이 대표적이다. 여드름의 발병은 여드름균이 염증 반응을 유발하는 주된 요인으로 보고되고 있으며, 비듬균은 등, 목덜미와 같은 피부에서 이상적으로 증식하여 지루성 피부염을 유발시킨다. 아토피성 피부염의 원인은 아직 정확히 밝혀지지 않았으나, 발병 원인균으로 포도상 구균으로 보고되고 있다. 이러한 피부상재균 및 기타 세균에 의한 피부질환의 발생을 감소시키고 피부를 보호하기 위해 방부제 및 항균제의 사용은 필수적이지만 기존에 사용되고 있는 합성물질들은 피부에 알러지를 유발할 수 있으므로 비교적 인체에 무해한 물질을 사용하는 것이 중요하다.
따라서, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물, 특히 상기 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 화장품, 식품 또는 의약품 등에 포함시키면 피부염(dermatitis)을 유발하는 미생물을 비롯하여 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia) 유발과 관련된 미생물 생장 억제 효과를 달성함으로써, 피부 질환을 비롯한 식중독, 폐렴과 같은 질환 예방 및 개선에 기여할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물의 항균 효과를 확인하기 위하여, 최소저해농도 측정법(Minimum inhibitory concentration assay)을 이용하여 피부염(dermatitis), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia) 유발과 관련된 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 총 3개의 균주에 대한 항균 활성을 측정한 결과, 부처손 수포화부탄올 분획물이 상기 3개의 균주에 대하여 생장 저해 활성이 우수함을 확인하였다(도 10 및 도 11). 따라서, 본 발명의 항균 효과는 피부 미생물을 비롯하여 식중독균 및 인플루엔자균에 대한 생장 억제 활성에 의해 달성되는 것일 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 항산화 효과 및 항균 효과를 갖기 때문에 항산화 또는 항균을 목적으로 화장료 조성물에 첨가할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 여드름, 아토피, 무좀, 건선, 습진 및 피부염을 포함하는 군에서 선택되는 어느 하나의 피부 질환을 예방 또는 개선하며, 피부의 노화, 주름 또는 탄력 소실을 예방 또는 개선하는 효과가 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물이 우수한 항산화 효과 및 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 균주의 생장을 억제하는 항균 효과를 보임을 확인하였다(도 5, 도 6, 도 10 및 도 11).
본 발명은 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물이 피부 미생물을 비롯하여 식중독균 및 인플루엔자균에 대한 생장 억제 활성이 우수한 항균 효과가 있음을 제공한다. 테트라사이클린과 같은 항생제는 부작용 및 내성균의 출현 등 사용상의 한계점이 있는 반면, 본 발명에 따른 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 안전하고 부작용이 없어 화장료 조성물로 적합하다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등이 있다. 적합한 제형은 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 바이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태일 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래한 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.
본 발명의 용어 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.
본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물 및 이의 분획물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 자유라디칼(활성산소)을 소거하는 항산화 효과 및, 피부염(dermatitis), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia) 유발과 관련된 미생물에 대한 항균 효과를 갖기 때문에 약학 조성물로 활용하여 활성산소로 인해 발생하는 질환 및, 비병원성 또는 병원성 미생물에 의해 유발될 수 있는 미생물 감염질환을 예방, 개선 및 치료하기 위한 의약품에 포함시킬 수 있다.
상기 항산화에 대해서는 전술한 바와 같으며, 그에 따라 항산화를 목적으로 하는 약학 조성물에 포함될 수 있으며, 활성산소로 인해 발생하는 질환의 예방 또는 치료 효과를 가질 수 있다. 상기 활성산소로 인해 발생하는 질환들은 이에 제한되지는 않으나, 동맥경화증, 루게릭병, 파킨슨병, 알츠하이머, 근위축색경화증 및 헌팅톤병을 포함하는 퇴행성 신경질환, 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 허혈성 심장질환을 포함하는 심혈관 질환, 뇌졸중을 포함하는 허혈성 뇌질환, 당뇨병, 위염 및 위암을 포함하는 소화기계 질환, 암, 백혈병, 노화, 류마티스 관절염, 간염, 아토피성 피부염 등 다양한 질환을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 활성산소에 의해 발생되는 노화일 수 있다.
또한, 상기 항균에 대해서는 전술한 바와 같으며, 그에 따라 항균을 목적으로 하는 약학 조성물에 포함될 수 있으며, 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)와 같은 피부염(dermatitis), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia) 유발과 관련된 미생물 감염질환의 예방 또는 치료 효과를 가질 수 있다.
상기 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한없이 사용할 수 있다.
또한 본 발명의 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
한편, 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 용어 "개체"란 는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 바람직하게는, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 천연 약용식물을 원료로 하므로 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로 안전하게 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항균용 조성물은 농도의존적으로 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거하는 활성이 우수, 즉 항산화 효과가 우수하고, 식중독(food poisoning), 피부염(dermatitis), 폐렴(pneumonia), 봉와직염(cellulitis) 등의 원인균에 대한 생장 저해 활성이 우수한 특징을 지니므로, 산화 작용 및 미생물 감염에 의해 유발되는 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 화장품, 식품 및 의약품 등에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 순차 용매 분획에 따른, 본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물(STME) 및 이의 용매 분획물 제조 공정을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 2는 순차 용매 분획에 따라 수득한, 본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물(STME) 및 이의 용매 분획물의 GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer) 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물(STME) 및 이의 수포화부탄올(water saturated n-butanol) 분획물 제조 공정을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 부처손 수포화부탄올 분획물의 GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer) 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 5은 본 발명의 부처손 메탄올 추출물(STME) 및 이의 수포화부탄올 분획물의 농도의존적 DPPH 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, Asc는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산이며, Veh는 부처손 수포화부탄올 분획물 용해시 사용한 용매인 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 6은 본 발명의 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물의 농도별 처리에 따른 금속이온촉매 산화억제(BSA 분해) 효과, 즉, 단백질 보호 효과를 나타낸 전기영동 사진이다. 여기에서, Asc는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산이며, Veh는 부처손 수포화부탄올 분획물 용해시 사용한 용매인 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 7은 본 발명의 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물 농도별 처리에 따른 세포 활성 저해 실험 결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, Ctrl(control)은 무처리군이며, Veh는 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 8은 본 발명의 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물 농도별 처리에 따른 마우스 비장세포(splenocyte)에 대한 세포 독성 시험(LDH assay) 결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, 음성대조군으로서 강한 세포 저해를 유도하는 과산화수소(H2O2)를 사용하였으며, Ctrl(control)은 무처리군, Veh는 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 9는 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 경구 투여에 따른 급성독성클래스시험 흐름을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 10은 본 발명의 부처손 수포화부탄올 분획물 농도별 처리에 의한 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대한 항균활성을 최소저해농도 측정법(Minimum inhibitory concentration assay)을 이용하여 측정한 그래프이다.
도 11은 최소저해농도 측정법에 의한, 본 발명의 부처손 수포화부탄올 분획물 농도별 처리에 의한 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대한 항균 효과를 나타낸 사진이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 용매 분획물 제조
다양한 추출 성분 확보를 위해, 세척, 건조 및 분말화한 부처손(Selaginella tamariscina) 100 g을 50% 메탄올 1 ℓ에 침지하여 6시간씩 3회 추출하여 부처손 메탄올 추출물을 확보하였으며, 상기 메탄올 추출물은 약 10.34% 수율로 확인되었다. 상기 수득한 부처손 메탄올 추출물을 필터링 및 감압 증발하여 메탄올을 제거하고, 메탄올이 증발 제거된 부처손 메탄올 추출물(STME; Selaginella tamariscina metanol extract)에 부피비 1:1로 순차적 용매 분획을 수행하였다. 구체적으로, 순차적 용매 분획은 부처손 메탄올 추출물에 n-헥산(n-hexane)을 가하여 분획 추출하고, 부처손 헥산 분획물 수득 과정에서 얻은 물층(water layer; aqueous residue)에 메틸렌 클로라이드(methylene chloride)를 가하여 분획 추출하였다. 상기 부처손 메틸렌 클로라이드 분획물 수득 과정에서 얻은 물층에 에틸아세테이트(ethyl acetate)를 가하여 분획 추출하고, 부처손 에틸아세테이트 분획물 수득 과정에서 얻은 물층에 수포화 n-부탄올(water saturated n-butanol)을 가하여 분획 추출을 하였으며, 상기 부처손 n-부탄올 분획물 수득 과정에서 얻은 물층도 수득하였다(도 1).
실시예 2: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 용매 분획물의 활성성분 분석
상기 실시예 1에서 수득한 부처손 메탄올 추출물 및 이의 각 용매 분획층(헥산(hexane) 분획층, 메틸렌 클로라이드(methylene chloride) 분획층, 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획층, 수포화-n-부탄올(water saturated n-butanol) 분획층 및 나머지 물 잔류물(residue))의 활성성분을 분석하기 위해, GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer) 분석을 수행하였다.
GC/MS 분석은 CTC CombiPAL autosampler system(Palo Alto, CA, USA)이 장착되어 있는 GC/MS(Agilent Technologies 5975C)를 사용하여 분석하였다. 이때, 시료 분석에 사용된 컬럼은 HP-5 컬럼(HP-5 column; Agilent Technologies, 250 ㎛ × 0.25 ㎛ × 30 m)이며, 분석 조건은 50℃에서 5분간 정지(holding) 시킨 후 분당 10℃씩 상승시키고, 310℃에서 5분간 정지(holding) 시켜 분석하였다. 모든 시료(Sample)는 GC/MS 분석을 위해 각각 메탄올 추출물은 메탄올과 물을 1:1로 혼합한 용액, 헥산 분획물은 에탄올, 메틸렌 클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 수포화부탄올 분획물은 메탄올을 용매로 사용하여 10 ㎎/㎖로 용해한 후 5 ㎕씩 비분할 주입(splitless injection) 하였다.
GC/MS 분석 결과, 부처손 메탄올 추출물(STME; Selaginella tamariscina metanol extract) 및 이의 분획물(헥산(hexane) 분획물, 메틸렌 클로라이드(methylene chloride, MC) 분획물, 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물 및 수포화-n-부탄올(water saturated n-butanol) 분획물)에 올레인산(Oleic Acid; 9-Octadecenoic acid) 및 부탄디올(Butanediol; BDO)이 존재하는 것으로 확인되었으며, 상기 각 분획물에서 높은 함량으로 포함되어 있음을 확인하였다(도 2).
한편, 상기 부처손 메탄올 추출물 및 이의 분획물 내 함유되어 있는 올레인산(Oleic Acid; 9-Octadecenoic acid) 및 부탄디올(Butanediol; BDO)과 같은 활성성분은 항균 활성을 갖는 화합물로 알려져 있다.
따라서 상기 결과를 통해, 부처손 메탄올 추출물 및 이의 용매 분획물(헥산(hexane) 분획물, 메틸렌 클로라이드(methylene chloride, MC) 분획물, 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물 및 수포화-n-부탄올(water saturated n-butanol) 분획물)을 항균 활성을 가지는 소재로 활용 가능함을 알 수 있었다.
실시예 3: 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 제조 및 추출 공정 확립
상기 실시예 1 및 실시예 2의 결과를 바탕으로 추출 공정의 조건별 수율을 확보하여, 분획의 모추출물인 부처손 메탄올 추출물에 대한 추출 표준화를 구축하고자 하였다. 구체적으로, 부처손(Selaginella tamariscina) 100 g을 실온(room temperature), 35℃, 50℃의 각각의 온도 조건과, 30%, 50%, 70%의 각각의 메탄올 용매 농도 조건에서 6시간씩 3회 추출하여 최적 수율 추출법을 확인하였다.
결과적으로, 하기 도 3에 나타낸 바와, 용매는 70% 메탄올, 추출온도는 50℃로 선정하여, 모추출물인 부처손 메탄올 추출물에 대한 추출 표준화 구축을 통해 부처손 메탄올 추출물로부터 직접 수포화부탄올 용매 분획을 수득할 수 있는 추출 공정을 확립하였다. 이에 따라, 용매는 70% 메탄올, 추출온도는 50℃의 표준 추출법을 적용하여 12.9%의 수율로 부처손 메탄올 추출물을 수득하였다.
실시예 4: 부처손 수포화부탄올 분획물의 주요 성분 동정 및 함량 분석
상기 실시예 3에서 최종적으로 확립한 추출 공정을 통해 수득한 부처손 수포화부탄올 분획물 내에 함유되어 있는 주요 구성 성분과 함량을 분석하기 위해, GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer; Agilent Technologies 5975C) 분석을 수행하였다.
구체적으로, 부처손(Selaginella tamariscina) 100 g을 50℃의 추출 온도 조건에서 1 ℓ의 70% 메탄올(methanol)에 침지하여 6시간씩 3회 추출하여 부처손 메탄올 추출물을 확보하였다. 메탄올 추출 후, 이로부터 부처손 수포화부탄올 분획물을 수득하였으며, 이의 수율은 27.4%로서, 부처손 분말 100 g 대비 약 3.5%의 수율을 나타내었다. 상기 수득한 부처손 수포화부탄올 분획물을 이용하여 GC/MS 분석을 수행하였다.
GC/MS 분석 결과, 부처손 수포화부탄올 분획물 내에는 α-리놀렌산(α-linolenic acid; syn. 9,12,15-Octadecatrienoic acid), 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid), 부탄디올(butanediol) 및 구아이아콜(guaiacol)이 함유되어 있는 것으로 확인되었다(표 1 및 도 4). 상기 부처손 수포화부탄올 분획물 내 함유되어 있는 α-리놀렌산(α-linolenic acid; syn. 9,12,15-Octadecatrienoic acid), 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid), 부탄디올(butanediol) 및 구아이아콜(guaiacol)과 같은 활성성분은 항균 및/또는 항염 효능을 가지는 화합물로 알려져 있다.
따라서 상기 결과를 통해, α-리놀렌산(α-linolenic acid; syn. 9,12,15-Octadecatrienoic acid), 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid), 부탄디올(butanediol) 및 구아이아콜(guaiacol)을 포함하고 있는 부처손 수포화부탄올 분획물을 항균 활성 및 항염증 효능을 가지는 소재로 활용 가능함을 알 수 있었다.
No. R.T
(retention time, min)		 Area % Library ID Qual.
(qualitative)
1 31.71 11.19 2,4,6-Cycloheptatrien-1-one,3,5-bis-trimethylsilyl- 43
2 24.26 7.78 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester, (Z,Z,Z)- 99
3 13.07 7.37 Guaiacol 93
4 20.06 4.93 3-Deoxy-d-mannoic acid 43
5 23.46 0.37 1,2-Butanediol, 1-(2-furyl)-2,3-dimethyl- 22
실시예 5: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물의 항산화 효과 분석
DPPH 라디칼 소거효능 시험 및 금속이온촉매 산화억제 시험을 통해 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물의 항산화 효과를 분석하였다.
실시예 5-1: DPPH 라디칼 소거효능 시험( DPPH radical scavenging assay)을 통한 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물의 항산화 활성 분석
부처손 메탄올 추출물(STME; Selaginella tamariscina metanol extract) 및 이의 수포화부탄올 분획물(BuOH fraction of STME)의 직접적인 라디칼 소거능을 확인하기 위해, DDPH 라디칼 소거효능 시험을 실시하였다. DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 화학적으로 안정화된 수용성 프리라디칼(free radical)로서 517nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라색 화합물로 매우 안정하며 항산화 활성이 있는 물질과 만나면 전자를 내어주면서 라디칼(DPPH)이 소멸되어 최초 용액의 보라색 빛깔에서 노란색으로 색깔이 변화하여 산화 활성을 육안으로도 쉽게 관찰할 수 있는 대표적인 항산화 활성 실험에 활용되고 있는 대표적인 물질이다.
구체적으로, 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물을 각각 100 ㎍부터 1.56 ㎍까지 2배 비율로 단계 희석(serial dilution)하여 DPPH와 반응시킨 후, 517nm에서 흡광도를 측정하여 라디칼 소거능을 비교 분석하였다. 이때, 양성대조군으로서 항산화 효과가 우수한 아스코르브산(ascorbic acid, 50 μM)을 사용하였다.
DPPH 라디칼 소거효능 시험 수행 결과, 부처손 메탄올 추출물의 경우 12.5 ㎍ 이상의 시험 농도에서 농도의존적으로 유의한 라디칼 소거능이 확인되었으며, 부처손 수포화부탄올 분획물의 경우에도 6.25 ㎍ 이상의 시험 농도에서 농도의존적으로 유의한 라디칼 소거능이 확인되었다. 특히, 50 ㎍ 이상의 시험 농도로 부처손 수포화부탄올 분획물과 DPPH를 반응시킨 결과, 현저하게 우수한 항산화 효과를 보임을 확인하였다(도 5).
따라서 상기 결과를 통해, 부처손 메탄올 추출물을 비롯하여 이로부터 분리된 부처손 수포화부탄올 분획물의 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었다.
실시예 5-2: 금속이온촉매 산화억제 시험(Protein protection test)을 통한 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물의 항산화 활성 분석
금속이온촉매 산화억제 시험은 활성산소종(ROS; reactive oxygen species)에 의한 손상으로부터 단백질이나 효소를 보호하는 항산화 물질의 효과를 금속이온촉매반응을 이용해 확인하는 방법이다.
구체적으로, 산화억제효과 검증을 위한 타겟 단백질(Target protein)로 BSA(bovine serum albumin, Sigma-Aldrich, MO, USA)를 사용하였으며, 1차 반응으로서 Cu2 +(100 μM)와 H2O2(2.5 mM)를 첨가하여 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical)을 생성한 뒤 BSA와 각 농도별(6.25 ㎍, 12.5 ㎍, 25 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍)로 희석한 부처손 메탄올 추출물 또는 부처손 수포화부탄올 분획물을 혼합한 후 2차 반응을 수행하였다. 반응이 종료된 각 농도별 실험군은 10% SDS 폴리아크릴아마이드겔(sodium dedoxyl sulfate polyacrylamide gel)에 전기영동하여 각 농도별 부처손 메탄올 추출물 또는 부처손 수포화부탄올 분획물에 의한 BSA 단백질 분해(degradation) 저해 정도를 확인하였다. 이때, 양성대조군으로서 아스코르브산(ascorbic acid, 50 μM)을 사용하였다.
금속이온촉매 산화억제 시험 결과, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물 모두 최저 시험 농도인 6.25 ㎍로 BSA를 혼합한 반응에서도 유의한 단백질 분해(protein degradation) 보호 효과가 확인되었다. 또한, 양성대조군으로 사용한 아스코르브산(ascorbic acid)과 비교하여 동등 이상의 효과를 갖는 것으로 나타났다. 이에 따라, 부처손 메탄올 분획물 및 부처손 수포화부탄올 분획물이 강한 항산화 효과를 지님을 확인하였다(도 6).
따라서 상기 결과를 통해, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물의 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었으며, 이와 더불어 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물이 라디칼 공격으로부터 단백질을 보호하는 효능이 있음을 알 수 있었다.
실시예 6: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물의 독성 평가
천연물 유래 추출물의 경우 강한 효능과 수반되는 독성으로 인해 소재 개발이 어려운 경우가 종종 발생할 수 있다. 이에 따라, 세포생존율(CCK) 및 세포독성(LDH) 여부를 확인하여 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물이 세포에 미치는 영향을 평가하였다. 또한, 동물 실험을 통해 부처손 메탄올 추출물의 경구 투여에 따른 급성 독성 여부를 확인하였다.
실시예 6-1: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물 처리에 따른 세포활성도 분석(cell viability assay)
천연물 유래 추출물의 경우 강한 효능과 수반되는 독성으로 인해 소재 개발이 어려운 경우가 종종 발생하므로, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물에 대한 세포 활성 시험을 실시하였다. 이때, 세포는 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7(mouse macrophage cell line RAW 264.7)을 사용하였다. 상기 Raw 264.7 세포는 10% FBS(fetal bovine serum)가 포함된 DMEM 컴플리트 배지(DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) complete medium; Hyclone, Logan, UT, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2로 조정된 CO2 인큐베이터(incubator)에서 배양하였다.
세포는 미토콘드리아의 전자전달계 과정을 통해서 필요한 에너지를 생산하게 되는데 이 과정에서 전자전달계내의 숙신산탈수소효소(SDH, succinate dehydrogenase)가 테트라졸리움 염(tetrazolium salt)을 분해하여 불용성(insoluble)의 포르마잔(formazan)을 생성하게 된다. 이와 같은 원리에 따라 Cell counting kit-8(CCK-8; Dojindo, Kumamoto, Japan)을 이용하여 포르마잔(formazan)의 생성량을 측정함으로써 세포 생존율을 측정하였다.
구체적으로, 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7 세포에 농도별(1.56 ㎍/㎖, 3.12 ㎍/㎖, 6.25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖)로 부처손 메탄올 추출물(STME) 및 이로부터 분리한 부처손 수포화부탄올 분획물을 각각 처리한 후, 24시간 이내 CCK 용액을 1:10으로 첨가하여 세포의 미토콘드리아 활성을 분석하였다.
그 결과, 음성대조군으로서 강한 세포 저해를 유도하는 과산화수소(H2O2) 처리군과 비교하여 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물을 최고 처리 농도인 100 ㎍/㎖로 처리한 경우에서도 세포 활성에 변화가 관찰되지 않아 강한 항산화 효능을 보이는 높은 농도에서도 세포에 미치는 영향은 없는 것으로 확인되었다(도 7).
실시예 6-2: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 수포화부탄올 분획물 처리에 따른 세포 독성 평가((Lactate dehydrogenase ( LDH ) release assay)
불멸화된 대식세포로서 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7에 대한 세포 생존률 저해 여부 뿐만 아니라, 1차 배양세포(primary cell)에 대한 직접적인 세포 독성 여부를 판단하기 위해, 마우스 비장을 적출한 뒤 비장세포(splenocyte)를 분리하여 세포 독성 시험을 실시하였다. 세포 독성 시험은 손상된 세포로부터 방출되는 LDH의 함량을 측정하는 것으로 non-radioactive LDH assay kit, CytoTox 96®(Promega, Madison, WI, USA)를 사용하였다.
세포 독성시험은 상기 실시예 6-1의 세포 활성도 분석과 동일하게 1.56 ㎍/㎖, 3.12 ㎍/㎖, 6.25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물을 각각 비장세포에 처리하여 측정하였다.
구체적으로, 마우스에서 적출한 비장세포(splenocytes)에 농도별로 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물을 처리한 후, 24시간 이내 LDH 용액을 1:1로 첨가하여 사멸하는 세포에서 유출되는 LDH의 수준을 분석하였다.
그 결과, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물을 가장 고농도인 100 ㎍/㎖로 처리한 경우에서도 직접적인 세포 독성을 유발하지 않는 것으로 확인되어 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물은 세포 독성이 매우 낮은 것으로 확인되었다(도 8).
실시예 6-3: 부처손 메탄올 추출물의 경구 투여에 따른 급성 독성 여부 평가
단회투여독성시험은 식품의약품안전처 가이드라인에 따라 수행하였으며, 부처손 메탄올 추출물은 경구투여 방법을 통해 위장에 직접 투여하였고, 투여 전에 4시간 동안 금식을 실시하였다. 부처손 메탄올 추출물의 농도는 식품의약품안전처 가이드라인에 의거하여 최초 300 ㎎/㎏·bw(body weight)의 농도로 투여한 후 투여 후 30분 동안 이상 징후를 관찰한 후 첫 24시간 동안은 4시간, 이후에는 8시간 간격으로 7일 동안 관찰하였다. 이상 징후가 없을 경우, 2000 mg/kg·bw 농도의 부처손 메탄올 추출물을 추가적으로 투여한 뒤 7일 동안 관찰한 후 부검을 통해 이상 요인을 분석하였다(도 9)(화장품 독성시험 동물대체시험법 가이드라인 Ⅱ, 식품의약품안정청, 2008; 화장품 독성시험 동물대체시험법 가이드라인 Ⅶ, 식품의약품안전평가원, 2015). 동물실험은 강릉원주대학교 실험동물운영위원회(Gangneung-Wonju National University Animal Care and Use Committee; Approval no.: GWNU-R2016-29)의 승인을 거쳐 수행되었다.
부처손 메탄올 추출물 경구투여 직후 24시간 동안 특별한 이상징후는 확인되지 않았으며, 이후 14일 동안 주기적으로 관찰한 결과에서도 특이점은 나타나지 않았다(표 2). 각 개체의 체중의 변화도 대조군과 비교했을 때 차이를 보이지 않았으며, 사료 및 물의 섭취량 역시 각 개체간에 큰 차이를 보이지 않고 정상적인 활동을 보였다(표 3). 14일 동안 관찰한 결과 특별한 이상징후가 나타나지 않아 안락사 후 내부 장기의 울혈 또는 위축 현상 여부를 확인한 결과, 시험에 사용된 모든 개체에서 장기의 변화 또는 변형은 발견하지 못하였으며, 각 장기의 무게 역시 대조군과 차이를 보이지 않아 장기의 손상은 없는 것으로 확인되었다. 또한, 외부로 확인되지 않은 독성 여부를 검토하기 위해 부처손 메탄올 추출물 시험군에 대해 혈액생화학적 검사를 수행한 결과에서도 모든 항목에서 대조군과 유의한 차이를 보이지 않았다(표 4).
Figure pat00001
Figure pat00002
Figure pat00003
상기 실시예 6의 결과를 통해, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물 모두 세포활성 억제 또는 세포 독성을 유발하지 않는 것으로 나타나 직접적인 세포독성을 나타내지 않음을 알 수 있었으며, 뿐만 아니라, 부처손 메탄올 추출물의 경구 투여에 따른 급성독성클래스시험에서도 대조군과 유의한 차이를 보이지 않음을 확인하였다. 이에 따라, 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물은 in vitro 및 in vivo 실험을 통해 독성이 없는 안전한 소재로 활용 가능함이 검증되었다.
실시예 7: 부처손 수포화부탄올 분획물의 항균 효과 분석
상기 실시예 2 및 실시예 4를 통해 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물에 활성성분으로서 올레인산(Oleic Acid; 9-Octadecenoic acid), 부탄디올(Butanediol; BDO), 구아이아콜(guaiacol)과 같은 항균 및/또는 항염 효능을 가지는 화합물이 포함되어 있음을 확인하였으며, 상기 실시예 5 및 실시예 6을 통해 부처손 메탄올 추출물 및 부처손 수포화부탄올 분획물은 세포 및 실험동물에 대한 독성은 지니고 있지 않으면서 우수한 항산화 활성을 지니고 있음을 확인한 바, 이를 기반으로 독성유무 검증의 중요성이 대두되고 있는 항균·보존제의 소재로 개발할 수 있을 것으로 판단하고, 부처손 메탄올 추출물로부터 수득한 부처손 수포화부탄올 분획물 농도별 처리에 의한 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대한 항균 효과를 확인하였다.
구체적으로, 부처손 수포화부탄올 분획물의 직접적인 항균효과를 확인하기 위해 식중독(food poisoning), 피부염(dermatitis), 폐렴(pneumonia), 봉와직염(cellulitis) 등의 원인균으로 알려진 공시균주 3종, 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대한 항균활성을 최소저해농도 측정법(Minimum inhibitory concentration assay, MIC assay)을 이용하여 확인하였다.
최소저해농도 측정법에 사용한 상기 균주들은 Mcfarland 표준탁도(Mcfarland standard)에 준하여 각각 108 CFU(colony forming unit)/㎖이 되도록 사전준비를 하였으며, 부처손 수포화부탄올 분획물의 경우 최대농도를 1,000 ㎍/㎖로 하여 2배 비율로 62.5 ㎍/㎖까지 단계 희석(serial dilution)하여 준비하였다. 상기 준비된 공시균주 3종은 Mcfarland 표준탁도(Mcfarland standard)를 충족시키는 농도로서 1:100의 비율로 접종한 후 부처손 수포화부탄올 분획물을 각 농도별로 처리하고 배양하여 항균활성을 관찰하였다.
그 결과, 부처손 메탄올 추출물로부터 수득한 부처손 수포화부탄올 분획물의 처리 농도 의존적으로 공시균주 3종, 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대해 유의한 세균 억제 효과가 관찰되었다. 구체적으로, 부처손 수포화부탄올 분획물을 250~500 ㎍/㎖ 이상의 농도로 처리한 경우부터 농도 의존적으로 상기 3종 균주에 대해 세균 생장이 두드러지게 저해됨을 확인하였으며, 특히 1,000 ㎍/㎖ 이상의 시험 농도에서는 양성대조군인 암피실린(ampicillin)과 비교하여 동등한 항균 효과를 보임을 확인하였다(도 10 및 도 11).
따라서 상기 일련의 결과를 통해, 순차적 용매분획 수행 없이 부처손 메탄올 추출물로부터 직접 추출된 부처손 수포화부탄올 분획물은 강한 활성산소종(ROS; reactive oxygen species) 소거능과 단백질 보호능을 비롯하여, 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)에 대한 항균 효과가 있음이 검증되었으며, 이에 합성 보존제 및 항균제를 대체할 수 있는 안전한 천연 소재로 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
제조예 1: 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 화장료의 제조
제조예 1-1: 유연 화장수의 제조
상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 표 5와 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 10.00
1,3-부틸렌글리콜 1.00
디소듐이디티에이 0.05
알란토인 0.10
디포타슘글리시리제이트 0.05
시트릭애씨드 0.01
소듐시트레이트 0.02
글리세레스-26 1.00
알부틴 2.00
하이드로제네이티드캐스터오일 1.00
에탄올 30.00
보존제 미량
착색제 미량
착향제 미량
정제수 잔량
제조예 1-2: 영양 크림의 제조
상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연 영양 크림은 하기 표 6의 조성과 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 10.0
1,3-부틸렌글리콜 7.0
글리세린 1.0
D-판테놀 0.1
식물 추출물 3.2
마그네슘알루미늄실리케이트 0.3
PEG-40 스테아레이트 1.2
스테아릭애씨드 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
친유형글리세릴스테아레이트 2.0
소르비탄세스퀴올리에이트 1.5
세테아릴알코올 3.0
미네랄오일 4.0
스쿠알란 3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 2.8
식물성 오일 1.8
디메치콘 0.4
디포타슘글리시리제이트 미량
알란토일 미량
소듐 히아루로네이트 미량
토코페릴아세테이트 적량
트리에탄올아민 적량
보존제 적량
착향제 적량
정제수 잔량
제조예 2: 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 식품의 제조
제조예 2-1: 밀가루 식품의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
제조예 2-2: 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
제조예 2-3: 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
제조예 2-4: 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제조예 2-5: 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다:
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부).
제조예 2-6: 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
제조예 2-7: 야채 주스의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
제조예 2-8: 과일 주스의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
제조예 3: 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 약학 조성물의 제조
제조예 3-1: 산제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 2 g에 유당 1 g을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제조예 3-2: 정제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제조예 3-3: 캡슐제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제조예 3-4: 환의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 1 g, 유당 1.5 g, 글리세린 1 g 및 자일리톨 0.5 g을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
제조예 3-5: 과립의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물 150 ㎎, 대두추출물 50 ㎎, 포도당 200 ㎎ 및 전분 600 ㎎을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

Claims (8)

  1. 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항균용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항산화 효과는 자유라디칼(free radical) 소거 활성에 의해 달성되는 것인 항산화 또는 항균용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항균 효과는 스타필로코커스 오우러스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물에 대한 생장 억제 활성에 의해 달성되는 것인 항산화 또는 항균용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물은 α-리놀렌산(α-linolenic acid), 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid), 구아이아콜(guaiacol) 및 부탄디올(butanediol) 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것인 항산화 또는 항균용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 화합물은 부처손 메탄올 추출물의 수포화부탄올 분획물의 총 100 중량부에 대하여 α-리놀렌산(α-linolenic acid)이 5 내지 10 중량부, 3-디옥시-디-마논산(3-Deoxy-d-mannoic acid)이 3 내지 6 중량부, 구아이아콜(guaiacol)이 5 내지 10 중량부, 및 부탄디올(butanediol)이 0.1 내지 3 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 것인 항산화 또는 항균용 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 식품 조성물.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항균용 조성물을 포함하는 약학 조성물.
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