KR20180098737A - 부처손 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 조성물은 농도의존적으로 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거하는 활성이 우수, 즉 항산화 효과가 우수하고, 세포 내에서 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생성을 저해하는 활성이 뛰어날 뿐만 아니라 염증성 사이토카인의 생성 저해 활성이 우수한 특징을 지니므로, 산화 작용 및 염증 작용에 의해 유발되는 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 화장품, 식품 및 의약품 등에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

부처손 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물{A composition having anti-oxidation or anti-inflammation comprising Selaginella tamariscina extracts, fractions thereof or compounds isolated therefrom as an active ingredient}
본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물에 관한 것이다.
산소는 생명유지를 위한 여러 대사반응에 필수요소이고, 인체 내 독극물질 해독을 위해서도 필요하지만 산소가 인체에 유익한 것만은 아니어서 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 광화학반응 등 각종 공해물질, 물리 화학적, 환경적 요인 등에 의해 수퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical), 하이드록시 라디칼(hydroxyl radical), 과산화수소(hydrogen peroxide), 일중항산소(singlet oxygen)와 같은 반응성이 매우 큰 자유라디칼(free radical)로 전환되면 생체에 치명적인 산소독성을 일으키는 양면성이 있다(Korea J. Biotechnol . Bioeng ., 2001, 16(6), 592-602). 이러한 활성산소를 제거하기 위한 합성 항산화제인 BHT(butylated hydroxy toluene)와 BHA(butylated hydroxy anisole) 등은 탁월한 항산화 효과와 경제성 때문에 지금까지 널리 사용되어 왔으나 간 비대, 체내 흡수물질의 독성화 및 발암 가능성 등의 문제가 제기되어 허용대상 식품이나 사용량이 엄격히 제한되고 있다. 또한 토코페롤(tocopherol)과 아스코르브산(ascorbic acid) 같은 천연 항산화제는 안전성은 높지만 단독으로는 연쇄반응 저지 능력이 낮고 가격이 비싼 단점이 있다. 이러한 이유로 최근에는 천연물로부터 보다 안전하고 경제적이며 효과가 뛰어난 항산화제를 분리, 이용하려는 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 특히 식물유래 물질로 식물의 2차 대사산물은 자유라디칼과 활성산소의 생성을 억제하거나 제거하여 산화를 방지하기 때문에 이에 대한 연구가 많이 이루어지고 있다(Korean Journal of Plant Res., 2011, 24(1), 30-39; J. Korean Soc . Food Sci . Nutr ., 2010, 39(9), 1249-1256).
염증반응은 상처나 감염, 또는 자가면역 기전 등에 의해 나타나는 생체반응으로서 염증발생 시 염증부위에 면역세포들이 침투되고 이들 세포들은 여러 종류의
화학물질 및 사이토카인을 생산 분비하여 생체방어 및 염증반응을 일으킨다(J. Korean Soc . Food Sci . Nutr., 2010, 39(7), 980-985). 내독소로 잘 알려진 LPS(lipopolysaccharide)는 그람-음성균의 세포외막에 존재하며, RAW 264.7과 같은 대식세포(macrophage) 또는 단핵구(monocyte)에서 TNF-α, IL-6, IL-1β와 같은 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)들을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한 이러한 염증매개 물질의 형성은 포스포리파아제 A2(phospholipase A2)의 활성으로 인해 아라키돈산(arachidonic acid)이 프로스타글란딘(prostaglandin)으로 바뀌는 과정 및 일산화질소(nitric oxide, NO) 형성 과정으로 이어지게 된다. 체내 염증과정에서는 과량의 NO 및 PGE2(prostaglandin E2) 등의 염증인자가 iNOS(inducible NO synthase) 및 COX-2(cyclooxygenase-2)에 의해 형성된다. 일반적인 NO 형성은 박테리아를 죽이거나 종양을 제거시키는 중요한 역할을 하지만, 염증상태에서 iNOS에 의해 과잉 생성된 NO는 혈관 투과성, 부종 등의 염증반응을 촉진시킬 뿐만 아니라 염증매개체의 생합성을 촉진하여 염증을 심화시키는 것으로 알려져 있다(Korean Soc . of Food Sci . Techn ., 2007, 39(4), 464-469).
한편, 염증반응은 정상적인 방어기전으로 병원성 자극원이 소실됨에 따라 빠르게 회복되는 것이 일반적이지만, 과도한 염증반응으로 인해 국소적인 과잉반응이 야기되거나 과도한 염증성 사이토카인과 활성산소에 의해 만성적인 염증반응으로 진행한다. 특히, 대식세포, 호중구, 다양한 면역 세포들의 지속적인 염증반응으로 인해 과다 생성된 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)과 활성질소종(reactive nitrogen species, RNS)는 조직의 손상이나 영구적인 유전자 변형을 야기하기도 한다. 게다가 염증이 발생하게되면 세포 내의 항산화 효소 활성이 감소되면서 산화적 스트레스에 노출되어 장기적으로는 세포의 기능을 저하시키게 된다.
또한 염증을 일으키는 원인은 무수히 많으나 세균, 진균, 바이러스와 같은 생물성 원인도 그 중 하나이다. 근래 염증분야 연구에서는 염증매개물질 생산 분비를 억제하는 천연소염물질을 찾는데 초점이 맞추어져 있는데 그 이유는 코티졸(cortisol) 합성제제와 같은 기존 소염제가 부작용이 많기 때문이다(Korean J. Medicinal Crop Sci ., 2010, 18(2), 105-112).
이에 따라, 과도한 염증반응과 만성적 염증의 완화를 위해서는 염증성 사이토카인의 발현 억제를 비롯하여 직접적인 ROS의 제거를 통해 산화적 스트레스를 감소시키는 것이 중요한 명제이며, 이에 대한 많은 생물소재들이 제시되고 있는 실정이다.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 항산화 또는 항염증 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 예의 노력한 결과, 예로부터 토혈, 대변 출혈, 자궁 출혈 등 각종 출혈 증상에 처방되며, 월경통이나 타박상에 의한 통증 완화에 사용하는 것으로 알려져 있는 부처손(Selaginella tamariscina)의 메탄올 추출물로부터 수득한 에틸아세테이트 분획물이 우수한 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 자유라디칼(free radical) 소거 효과, 일산화질소(nitric oxide, NO) 생성 저해 효과 및 염증성 사이토카인 생성 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
Korea J. Biotechnol. Bioeng., 2001, 16(6), 592-602 Korean Journal of Plant Res., 2011, 24(1), 30-39 J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 2010, 39(9), 1249-1256 J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 2010, 39(7), 980-985 Korean Soc. of Food Sci. Techn., 2007, 39(4), 464-469 Korean J. Medicinal Crop Sci., 2010, 18(2), 105-112
본 발명의 목적은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공하기 위한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물, 상기 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "부처손(Selaginella tamariscina)"은 산지 양지 바른 바위 위에 생육하는 양치식물로, 예로부터 권백(卷柏)이라고 불리기도 한다. 부처손과(Selaginellaceae)에 속하는 약용 식물로서, 부처의 손을 닮은 독특한 생김새를 지니고 있으며, 학명은 Selaginella tamariscina (P.Beauv.) Spring이다.
구체적으로, 잎은 4줄로 밀생하고 난형이며 길이 1.5~2㎜로서 끝이 실 같은 돌기로 되고, 가장지리에 잔 거치가 있다. 포자엽은 난상 삼각형이며, 가에는 잔거치가 있고 가늘며, 포자낭은 큰 것과 작은 것이 있다. 포자낭수(胞子囊穗)는 잔가지 끝에 1개씩 달리며 네모가 지고, 길이 5-15㎜, 직경 2㎜이다. 줄기는 높이 20㎝에 달하며 가지는 평면으로 갈라져 퍼지고 표면은 짙은 녹색이며 뒷면은 흰빛이 도는 녹색이다. 습기가 많은 때는 가지가 사방으로 퍼지고 건조할 때는 안으로 말려서 공처럼 되며 습기가 있으면 다시 퍼진다. 뿌리는 많은 담근체(擔根體)와 뿌리가 엉겨 줄기처럼 형성된 끝에서 가지가 사방으로 퍼져서 자란다. 밑에서 파생된 근경은 단단하고 짧으며 밑에 많은 수염뿌리가 나는 특징을 지니고 있다.
우리나라 거의 전도에 나며, 일본, 대만, 중국, 만주 등지에도 분포하며, 주로 건조하고 서늘한 바위 또는 절벽 표면에서 자라는 상록다년초로서 한방에서 혈변, 혈뇨, 항문 탈장 등을 치료하기 위해 사용되어 왔고, 최근에는 혈당 강하 등이 알려지면서 권백의 효능 성분에 대한 관심이 높아지고 있다.
상기 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 부처손(Selaginella tamariscina)에 메탄올을 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 부처손 메탄올 추출물을 제조하는 단계; 및
4) 단계 3)의 부처손 메탄올 추출물을 추가적으로 에틸아세테이트로 추출하여 부처손 에틸아세테이트 분획물을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 부처손(Selaginella tamariscina)은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 단계 1)에서 이에 제한되지는 않으나, 부처손은 잎, 가지 또는 뿌리를 모두 포함하여 추출하는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 메탄올을 이용한 추출방법으로는 진탕추출, 속슬렛(Soxhlet) 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 메탄올을 파쇄한 부처손 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 60℃인 것이 더욱 바람직하고, 50℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 4 내지 24시간인 것이 바람직하며, 5 내지 12시간인 것이 더욱 바람직하고, 6시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 2 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 부처손 에틸아세테이트 분획물은 부처손 메탄올 추출물 분량에 에틸아세테이트(EtOAc)를 동량 첨가하여 분획하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 상기 부처손 메탄올 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
한편, 이에 제한되지는 않으나, 상기 에텔아세테이트(EtOAc) 분획물에는 리놀레산(linoleic acid), α-리놀렌산(α-linolenic acid), 팔미트산(palmitic acid), 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien) 및 구아이아콜(guaiacol) 화합물을 포함하는 것일 수 있다.
또한, 이에 제한되지는 않으나, 상기 화합물은 에틸아세테이트 분획물의 총 100 중량부에 대하여 리놀레산(linoleic acid)이 20 내지 25 중량부, α-리놀렌산(α-linolenic acid)이 5 내지 10 중량부, 팔미트산(palmitic acid)이 5 내지 10 중량부, 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien)이 1 내지 5 중량부, 및 구아이아콜(guaiacol)이 0.5 내지 4 중량부로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 용어 "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 발암 등을 초래하게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성질소종(reactive nitrogen species, RNS)은 염증 반응 시 대식세포 호중구 및 다른 면역 세포 들의 면역반응으로 인해 다량 생성되며, 이때 ROS도 같이 생성된다. 상기와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다. 따라서, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물, 특히 상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 화장품, 식품 또는 의약품 등에 포함시키면 항산화 효과를 달성함으로써, 노화 방지 및 건강증진에 기여할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, DPPH 자유라디칼 소거 활성 측정 및 금속이온촉매 산화억제 시험을 수행한 결과, 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 농도의존적으로 DPPH 자유라디칼의 소거 효과 및 단백질 보호 효과, 즉 강한 항산화 효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 3 및 도 4). 따라서, 본 발명의 항산화 효과는 자유라디칼(free radical) 소거 활성에 의해 달성되는 것일 수 있다.
본 발명의 용어 "항염증"은 염증를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 염증 반응의 조절은 대단히 복잡한 것으로 알려져 있는데, 이는 생체 내 복구체계의 증강 및 손상을 감소시키기 위한 것으로 알려져 있다. 그러나 반복되는 조직의 손상이나 재생에 의해 염증반응이 지속되면, 염증관련 세포에서 ROS와 RNS가 과다 생성되고 그 결과로 영구적인 유전자의 변형이 야기된다. 이처럼 ROS와 RNS는 생체 내 여러 가지 세포의 작용을 조절하는 염증 반응과 깊이 관련되어 있다. 염증 과정 중에는 많은 양의 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokines), 일산화질소(nitric oxide, NO) 그리고 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)이 유도성 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)와 사이클로옥시게나아제(cyclooxygenase-2, COX-2)에 의해 생성된다. 염증은 다양한 염증성 질환을 유발하는 원인으로써, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 포함하는 조성물은 항염증 작용을 통해 다양한 염증성 질환에 대한 예방 및 개선 효과를 가질 수 있다.
본 발명에서, "항염증"은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선, 치료 및 그러한 질환의 발병 억제/지연을 포함하는 의미이다. 상기 "염증성 질환"이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 어떠한 상태로서 정의될 수 있다. 이러한 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환은, 이에 제한되지는 않으나, 아토피피부염, 건선, 류마티스 관절염, 척추염, 요도염, 방광염, 신염, 혈관염, 동맥경화증, 심근염, 알러지 질환, 피부근염, 비염, 천식, 편도염, 급성통증, 만성통증, 패혈증, 치주염, 치은염, 염증성 장질환, 위궤양 및 췌장염 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 마우스 대식세포 세포주인 RAW 264.7(mouse macrophage cell line RAW 264.7)을 이용하여 일산화질소(nitric oxide, NO) 생성 저해 활성과 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS), 사이클로옥시게나아제(COX-2), 및 염증성 사이토카인인 IL-1β(interleukin-1β), IL-6(interleukin-6)의 생성 저해 활성을 측정한 결과, 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 세포독성 없이 농도의존적으로 NO 생성 저해 활성, 염증 매개 물질인 iNOS, COX-2, 및 염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6의 생성 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다(도 5 내지 도 8). 따라서, 본 발명의 항염증 효과는 NO 생성 저해, 염증 매개 물질인 iNOS, COX-2, 및 염증성 사이토카인 생성 억제 활성에 의해 달성되는 것일 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 항산화 효과 및 항염증 효과를 갖기 때문에 항산화 또는 항염증을 목적으로 화장료 조성물에 첨가할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 여드름, 아토피, 무좀, 건선, 습진 및 피부염을 포함하는 군에서 선택되는 어느 하나의 피부 질환을 예방 또는 개선하며, 피부의 노화, 주름 또는 탄력 소실을 예방 또는 개선하는 효과가 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 우수한 항산화 효과 및 항염증 효과를 보임을 확인하였다(도 3, 도 4, 도 7 및 도 8).
본 발명은 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 대식세포에서 염증 관련 사이토카인 IL-6, IL-1β를 억제시킴과 동시에 LPS 자극 후 대식세포에서 분비되는 NO 생성을 억제하는 우수한 항염증 효과가 있음을 제공한다. 테트라사이클린과 같은 항생제는 부작용 및 내성균의 출현 등 사용상의 한계점이 있는 반면, 본 발명에 따른 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 안전하고 부작용이 없어 화장료 조성물로 적합하다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등이 있다. 적합한 제형은 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 바이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태일 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래한 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.
본 발명의 용어 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.
본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물 및 이의 분획물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 자유라디칼(활성산소)을 소거하는 항산화 효과 및 항염증 효과를 갖기 때문에 약학 조성물로 활용하여 활성산소로 인해 발생하는 질환 및 염증성 질환을 예방, 개선 및 치료하기 위한 의약품에 포함시킬 수 있다.
상기 항산화에 대해서는 전술한 바와 같으며, 그에 따라 항산화를 목적으로 하는 약학 조성물에 포함될 수 있으며, 활성산소로 인해 발생하는 질환의 예방 또는 치료 효과를 가질 수 있다. 상기 활성산소로 인해 발생하는 질환들은 이에 제한되지는 않으나, 동맥경화증, 루게릭병, 파킨슨병, 알츠하이머, 근위축색경화증 및 헌팅톤병을 포함하는 퇴행성 신경질환, 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 허혈성 심장질환을 포함하는 심혈관 질환, 뇌졸중을 포함하는 허혈성 뇌질환, 당뇨병, 위염 및 위암을 포함하는 소화기계 질환, 암, 백혈병, 노화, 류마티스 관절염, 간염, 아토피성 피부염 등 다양한 질환을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 활성산소에 의해 발생되는 노화일 수 있다.
또한, 상기 항염증에 대해서는 전술한 바와 같으며, 그에 따라 항염증, 즉 염증성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물에 포함될 수 있다. 상기 염증성 질환은 염증을 주병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 이에 제한되지는 않으나, 알러지성 천식, 알러지성 비염, 알러지성 점막염, 두드러기 및 아나필락스(anaphylax)를 포함하는 알러지성 질환, 경피증(systemic sclerosis), 피부근염(dermatomyositis) 및 포함체 근육염(inclusion body myositis)을 포함하는 근병증, 관절염, 아토피성 피부염, 건선, 천식, 다발성 경화증, ssRNA 및 dsRNA 바이러스 감염증, 패혈증, 다발성 연골염, 경피증, 습진, 통풍, 치주질환, 베체트 증후군, 부종, 맥관염, 가와사키병, 당뇨병성 망막염, 자가 면역 췌장염, 혈관염, 사구체 신염, 급성 및 만성 기관지염, 및 인플루엔자 감염증일 수 있다.
상기 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한없이 사용할 수 있다.
또한 본 발명의 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
한편, 본 발명의 약학조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 용어 "개체"란 는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 바람직하게는, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 천연 약용식물을 원료로 하므로 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로 안전하게 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 단리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 조성물은 농도의존적으로 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거하는 활성이 우수, 즉 항산화 효과가 우수하고, 세포 내에서 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생성을 저해하는 활성이 뛰어날 뿐만 아니라 염증성 사이토카인의 생성 저해 활성이 우수한 특징을 지니므로, 산화 작용 및 염증 작용에 의해 유발되는 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 화장품, 식품 및 의약품 등에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물(STME) 및 이의 에틸아세테이트 분획물(STEA) 제조 공정을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물의 GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer) 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물의 농도의존적 DPPH 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, Asc는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산이며, Veh는 부처손 에틸아세테이트 분획물 용해시 사용한 용매인 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 4는 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물의 농도별 처리에 따른 금속이온촉매 산화억제(BSA 분해) 효과, 즉, 단백질 보호 효과를 나타낸 전기영동 사진이다. 여기에서, Asc는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산이며, Veh는 부처손 에틸아세테이트 분획물 용해시 사용한 용매인 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 5는 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물 농도별 처리에 따른 세포 활성 저해 실험 결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, Ctrl(control)은 무처리군이며, Veh는 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 6은 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물 농도별 처리에 따른 마우스 비장세포(splenocyte)에 대한 세포 독성 시험(LDH assay) 결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서, 음성대조군으로서 강한 세포 저해를 유도하는 과산화수소(H2O2)를 사용하였으며, Ctrl(control)은 무처리군, Veh는 DMSO(dimethyl sulfoxide) 처리군이다.
도 7은 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물 농도별 처리에 따른 NO(nitric oxide) 생성 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 부처손 에틸아세테이트 분획물 농도별 처리에 따른 주요 염증 유도 사이토카인(proinflammatory cytokine)의 발현 저해 효과를 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 부처손 메탄올 추출물 및 이의 에틸아세테이트 분획물 제조
파쇄한 부처손(Selaginella tamariscina) 100 g을 1 ℓ의 메탄올(methanol)에 3회 침지하여 50℃에서 6시간 동안 추출하였으며, 필터 페이퍼(filter paper; Whatmann International Ltd., Maidstone, UK)로 여과한 뒤 용매를 증발시켜(Rotary evaporator, N-1110, Eyela, Tokyo, Japan) 추출물을 확보하였다. 메탄올 추출물(STME; Selaginella tamariscina metanol extract)은 약 12.9%의 수율로 확인되었으며, 메탄올 추출물과 에틸아세테이트(ethyl acetate)를 1:1의 비율로 분획하여 확보된 분획물(STEA)은 메탄올 추출물의 9.77% 비율을 보였다(도 1).
실시예 2: 부처손 에틸아세테이트 분획물의 주요 성분 동정 및 함량 분석
상기 실시예 1에서 수득한 부처손 에틸아세테이트 분획물 내에 함유되어 있는 주요 구성 성분과 함량을 분석하기 위해, CTC CombiPAL autosampler system(Palo Alto, CA, USA)이 장착되어 있는 GC/MS(gas chromatograph-mass spectrometer; Agilent Technologies 5975C)를 사용하여 분석하였다. 이때, 시료 분석에 사용된 컬럼은 HP-5 컬럼(HP-5 column; Agilent Technologies, 250 ㎛ × 0.25 ㎛ × 30 m)이며, 분석 조건은 50℃에서 5분간 정지(holding) 시킨 후 분당 10℃씩 상승시키고, 310℃에서 5분간 정지(holding) 시켜 분석하였다. 시료(Sample)는 에탄올을 이용하여 10 ㎎/㎖로 용해한 후 5 ㎕씩 비분할 주입(splitless injection) 하였다.
GC/MS 분석 결과, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 함유되어 있는 주요 성분으로는 리놀레산(linoleic acid; syn. 9,12-Octadecadienoic acid)이 22.66%, α-리놀렌산(α-linolenic acid; syn. 9,12,15-Octadecatrienoic acid)이 8.82%, 팔미트산(palmitic acid; syn. Hexadecanoic acid)이 8.63%, 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien)이 3.95%, 구아이아콜(guaiacol)이 1.99% 함유되어 있는 것으로 확인되었다(표 1 및 도 2).
No. R.T
(retention time, min)		 Area % Library ID Qual.
(qualitative)
1 24.72 13.15 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)- 99
2 24.22 9.51 9,12-Octadecadienoic acid, methyl ester 99
3 24.28 8.82 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester 98
4 24.08 6.41 Tricyclo[5.2.1.0(2,6)]decane, 4-methyl- 70
5 26.25 5.71 (1R,2R)-1-[(Z)-hex-1-enyl]-2-hydroxymethylcyclopropan 49
6 23.09 4.68 Hexadecanoic acid 99
7 22.63 3.95 Hexadecanoic acid, methyl ester 99
8 31.99 3.95 Stigmastan-3,5-dien 78
9 12.96 1.99 Phenol, 2-methoxy-
(Guaiacol)		 95
실시예 3: 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 효과 분석
DPPH 라디칼 소거효능 시험 및 금속이온촉매 산화억제 시험을 통해 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 효과를 분석하였다.
실시예 3-1: DPPH 라디칼 소거효능 시험( DPPH radical scavenging assay)을 통한 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성 분석
부처손 에틸아세테이트 분획물의 직접적인 라디칼 소거능을 확인하기 위해, DDPH 라디칼 소거효능 시험을 실시하였다. 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH, Sigma-Aldrich, MO, USA)은 화학적으로 안정화된 수용성 프리 라디칼(free radical)로서 517nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라색 화합물로 알코올 등의 유기 용매에서 매우 안정하며, 항산화 활성이 있는 물질과 만나면 전자를 내어주면서 라디칼(DPPH)이 소멸되어 최초 용액의 보라색 빛깔에서 노란색으로 색깔이 변화되어 산화 활성을 육안으로도 쉽게 관찰할 수 있어 항산화 활성 실험에 활용되고 있는 대표적인 물질이다.
구체적으로, 0.3 mM 농도의 DPPH를 함유한 메탄올(methanol) 용액을 제조하여 100 ㎍부터 1.56 ㎍까지 2배 비율로 단계 희석(serial dilution)한 부처손 에틸아세테이트 분획물을 혼합한 후, 실온(room temperature)에서 10분간 반응 후 517nm에서 흡광도를 측정하여 라디칼 소거능을 비교 분석하였다. 이때, 양성대조군으로서 항산화 효과가 우수한 아스코르브산(ascorbic acid, 10 mM)을 사용하였다.
DPPH 라디칼 소거효능 시험 수행 결과, 부처손 에틸아세테이트 분획물의 최저 시험 농도인 1.56 ㎍부터 농도의존적으로 높은 라디칼 소거능이 관찰되었으며, 특히 50 ㎍ 이상의 시험 농도에서는 양성대조군으로 사용된 아스코르브산(ascorbic acid)과 비교하여 동등 이상의 효과를 보였다(도 3).
따라서 상기 결과를 통해, 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성이 우수함을 확인하였으며, 이를 토대로 염증 반응에 관여하는 활성산소종(ROS: reactive oxygen species)을 제거하는데 부처손 에틸아세테이트 분획물이 우수한 효과를 지닐 것으로 예측할 수 있었다.
실시예 3-2: 금속이온촉매 산화억제 시험(Protein protection test)을 통한 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성 분석
강한 산화작용은 직·간접적인 조직 손상을 야기하므로, 이를 효과적으로 제거할 수 있는 효능은 항염증 작용에 중요하다. 금속이온촉매 산화억제 시험은 활성산소종(ROS; reactive oxygen species)에 의한 손상으로부터 단백질이나 효소를 보호하는 항산화 물질의 효과를 금속이온촉매반응을 이용해 확인하는 방법이다.
구체적으로, 타겟 단백질(Target protein)로는 0.5 ㎍/㎖의 BSA(bovine serum albumin)을 사용하였고, 1차 반응으로서 Cu2 +(100 μM)와 H2O2(1 mM)를 첨가하여 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical)을 생성한 뒤 BSA와 각 농도별(0.625 ㎍, 1.25 ㎍, 2.5 ㎍, 5 ㎍, 10 ㎍)로 희석한 부처손 에틸아세테이트 분획물을 혼합한 후 2차 반응을 수행하였다. 반응이 종료된 각 농도별 실험군은 10% SDS 폴리아크릴아마이드겔(sodium dedoxyl sulfate polyacrylamide gel)에 전기영동하여 각 농도별 부처손 에틸아세테이트 분획물에 의한 BSA 단백질 분해(degradation) 저해 수준을 확인하였다. 이때, 양성대조군으로서 아스코르브산(ascorbic acid, 10 μM)을 사용하였다.
금속이온촉매 산화억제 시험 결과, 2.5 ㎍의 매우 낮은 농도의 부처손 에틸아세테이트 분획물과 BSA를 혼합한 반응에서도 유의한 단백질 보호 효과가 확인되었으며, 5 ㎍ 이상의 시험 농도로 부처손 에틸아세테이트 분획물과 BSA를 혼합한 반응에서는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산(ascorbic acid)과 비교하여 동등 이상의 효과를 갖는 것으로 나타났다. 이에 따라, 부처손 에틸아세테이트 분획물이 강한 항산화 효과를 지님을 확인하였다(도 4).
따라서 상기 결과를 통해, 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었으며, 이와 더불어 부처손 에틸아세테이트 분획물이 조직 손상에 대한 높은 보호 작용이 가능할 것으로 예측할 수 있었다.
실시예 4: 부처손 에틸아세테이트 분획물에 의한 세포 활성(cell viability) 저해 및 세포 독성( cytotoxicity ) 평가
천연물 유래 추출물의 경우 강한 효능과 수반되는 독성으로 인해 소재 개발이 어려운 경우가 종종 발생할 수 있다. 이에 따라, 세포생존율(CCK) 및 세포독성(LDH) 여부를 확인하여 부처손 에틸아세테이트 분획물이 세포에 미치는 영향을 평가하였다.
실시예 4-1: 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리에 따른 세포활성도 분석(cell viability assay)
천연물 유래 추출물의 경우 강한 효능과 수반되는 독성으로 인해 소재 개발이 어려운 경우가 종종 발생하므로, 부처손 에틸아세테이트 분획물에 대한 세포 활성 시험을 실시하였다. 이때, 세포는 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7(mouse macrophage cell line RAW 264.7)을 사용하였다. 상기 Raw 264.7 세포는 10% FBS(fetal bovine serum)가 포함된 DMEM 컴플리트 배지(DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) complete medium; Hyclone, Logan, UT, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2로 조정된 CO2 인큐베이터(incubator)에서 배양하였다.
세포는 미토콘드리아의 전자전달계 과정을 통해서 필요한 에너지를 생산하게 되는데 이 과정에서 전자전달계내의 숙신산탈수소효소(SDH, succinate dehydrogenase)가 테트라졸리움 염(tetrazolium salt)을 분해하여 불용성(insoluble)의 포르마잔(formazan)을 생성하게 된다. 이와 같은 원리에 따라 Cell counting kit-8(CCK-8; Dojindo, Kumamoto, Japan)을 이용하여 포르마잔(formazan)의 생성량을 측정함으로써 세포 생존율을 측정하였다.
구체적으로, 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7 세포에 농도별(1.56 ㎍/㎖, 3.12 ㎍/㎖, 6.25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖)로 부처손 메탄올 추출물(STME)로부터 분리한 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리한 후, 24시간 이내 CCK 용액을 1:10으로 첨가하여 세포의 미토콘드리아 활성을 분석하였다.
그 결과, 음성대조군으로서 강한 세포 저해를 유도하는 과산화수소(H2O2) 처리군과 비교하여 부처손 에틸아세테이트 분획물을 최고 처리 농도인 100 ㎍/㎖로 처리한 경우에서도 세포 활성에 변화가 관찰되지 않아 강한 항산화 효능을 보이는 높은 농도에서도 세포에 미치는 영향은 없는 것으로 확인되었다(도 5).
실시예 4-2: 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리에 따른 세포 독성 평가((Lactate dehydrogenase(LDH) release assay)
불멸화된 대식세포로서 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7에 대한 세포 생존률 저해 여부 뿐만 아니라, 1차 배양세포(primary cell)에 대한 직접적인 세포 독성 여부를 판단하기 위해, 마우스 비장을 적출한 뒤 비장세포(splenocyte)를 분리하여 세포 독성 시험을 실시하였다. 세포 독성 시험은 손상된 세포로부터 방출되는 LDH의 함량을 측정하는 것으로 non-radioactive LDH assay kit, CytoTox 96®(Promega, Madison, WI, USA)를 사용하였다.
세포 독성시험은 상기 실시예 4-1의 세포 활성도 분석과 동일하게 1.56 ㎍/㎖, 3.12 ㎍/㎖, 6.25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 부처손 에틸아세테이트 분획물을 비장세포에 처리하여 측정하였다.
구체적으로, 마우스에서 적출한 비장세포(splenocytes)에 농도별로 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리한 후, 24시간 이내 LDH 용액을 1:1로 첨가하여 사멸하는 세포에서 유출되는 LDH의 수준을 분석하였다.
그 결과, 부처손 에틸아세테이트 분획물을 가장 고농도인 100 ㎍/㎖로 처리한 경우에서도 직접적인 세포 독성을 유발하지 않는 것으로 확인되어 부처손 에틸아세테이트 분획물은 세포 독성이 매우 낮은 것으로 확인되었다(도 6).
실시예 5: 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항염증 효과 분석
상기 실시예 2에서 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 함유되어 있는 주요 성분으로 동정된 리놀레산(linoleic acid; syn. 9,12-Octadecadienoic acid, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 22.66% 함유), α-리놀렌산(α-linolenic acid; syn. 9,12,15-Octadecatrienoic acid, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 8.82% 함유), 팔미트산(palmitic acid; syn. Hexadecanoic acid, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 8.63% 함유), 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 3.95% 함유), 구아이아콜(guaiacol, 부처손 에틸아세테이트 분획물 내 1.99% 함유) 등은 문헌 검색 결과, 모두 염증 완화에 유효한 효과를 보이는 것으로 공지되어 있었다(Apama et al., Chem Biol Drug Des., 2012; Azuma et al., J Dent Res., 1986; Park et al., Inflammation, 2016; Reifen et al., J Nutr Biochem ., 2015).
이에 따라, 부처손 에틸아세이트 분획물에 함유되어 있는 성분 중 46.05%에 해당하는 물질이 항염증 효과를 가지는 것이며, 상기 실시예 3 및 실시예 4를 통해 부처손 에틸아세테이트 분획물은 세포 생존율에는 영향을 미치지 않으면서 우수한 항산화 활성을 지니고 있음을 확인한 바, 이를 기반으로 고효능의 항염증 소재로 개발할 수 있을 것으로 판단하고, 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리에 따른 NO 생성 저해 활성 및 염증유도 사이토카인 발현 억제 효과를 분석함에 따라 부처손 에틸아세테이트 분획물의 항염증 효과를 확인하였다.
실시예 5-1: 부처손 에틸아세테이트 분획물의 NO 생성 저해 활성 측정
일산화질소(NO, nitric oxide)는 NOS(nitric oxide synthase)에 의해 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 만들어지며, 혈관 이완 인자인 EDRF(endothelium derived relaxing factor)로서 혈관의 항상성 외에 발기유도, 항혈전, 항균, 기억력 증진 등 다양한 생리악용을 나타낸다. 그러나 염증반응과정에서는 iNOS(inducible NOS)로부터 다량으로 유리된 NO가 세포 및 조직손상을 야기하게 된다.
부처손 에틸아세테이트 분획물의 NO 생성 억제 효능을 확인하기 위해, 먼저 마우스 대식세포 세포주인 Raw 264.7(mouse macrophage cell line RAW 264.7)에 대식세포 자극인자인 LPS(lipopolysaccharide)를 처리하여 염증물질인 NO 생성을 유도하고, 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 농도의 부처손 에틸아세테이트 분획물을 24시간 처리하였다. 이후, 그리스 시약(Griess reagent)을 첨가하여 10분간 반응시킨 다음 마이크로플레이트-ELISA 리더(microplate-ELISA reader)를 이용하여 540 nm 파장에서 NO 생성을 측정하였다.
그 결과, 10 ㎍/㎖ 이상의 농도로 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리한 경우부터 유의한 NO 생성 억제 효과가 확인되었으며, 100 ㎍/㎖의 농도로 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리한 경우에는 대조군으로서 무처리군인 정상 세포군과 동등한 수준의 NO 생성 수준을 보이는 것으로 나타났다.
따라서, 상기 결과를 통해 부처손 에틸아세테이트 분획물이 NO 생성을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 5-2: 부처손 에틸아세테이트 분획물의 염증 매개 물질 발현 억제 효과 분석
부처손 에틸아세테이트 분획물을 세포에 처리하였을 때, 염증 매개 물질로서 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 및 iNOS(inducible nitric oxide synthase), COX-2(Prostaglandin-endoperoxide synthase 2)의 발현 정도를 확인하기 위해 RT-PCR(Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction)법을 토대로 정량 분석을 실시하였다. RNA는 TRIzol법을 이용하였으며, 정량 후 10 × Topscrip buffer 2 ㎕, RTase 0.8 ㎕, dNTP 2 ㎕, RNase 저해제(RNase inhibitor) 0.5 ㎕, 증류수(distilled water, DW) 10 ㎕로 cDNA를 합성하였다. cDNA와 ReddyMixPCR master mix(Thermo scientific, USA)를 이용하여 β-액틴(β-actin; 52℃, 20 cycle)의 프라이머(primer)로 DNA를 증폭시켰으며, 1.0% 아가로오스 젤(agarose gel)로 전기영동 후 EtBr(Ethidium bromide; Amresco, USA)를 이용해 발현 정도를 확인하였다. PCR 실험에는 ReddyMixPCR master mix를 이용하여 증폭한 뒤 1.0% 아가로오스 젤(agarose gel)로 전기영동 후 EtBr(Ethidium bromide)를 이용해 유전자 발현 수준을 확인하고, 증폭된 염증 관련 유전자 발현 수준은 β-액틴(β-actin) 발현 수준을 바탕으로 비교하여 표준화하였다. 실험에 사용된 프라이머(primer)는 하기 표 2와 같다.
PCR(polymerase chain reaction)에 사용된 프라이머(primer) 서열
유전자(gene) 프라이머(primer) 서열(sequence), 5'→3' 서열번호
β-액틴
(β-actin)		 정방향 tacagcttcaccaccacagc 1
역방향 aaggaaggctggaaaagagc 2
IL-1β
 정방향 gtgtctttcccgtggacctt 3
역방향 atgggaacgtcacacaccag 4
IL-6 정방향 tccatccagttgccttcttg 5
역방향 ccacgatttcccagagaaca 6
iNOS 정방향 tgcccctggaagtttctctt 7
역방향 actgccccagtttttgatcc 8
COX-2 정방향 ttgctgtacaagcagtggca 9
역방향 gcagccatttccttctctcc 10
구체적으로, RAW 264.7 세포주에 염증 반응을 유도하기 위해 LPS에 의한 자극을 유도하였으며, LPS 처리 전에 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리하여 염증 관련 mRNA 유전자 발현 양상을 비교하였다. 처리 농도는 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖로 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리 1시간 후 LPS를 처리하여 염증반응을 유도하였고, LPS 처리 후 20시간 동안 배양하여 나타나는 유전자 발현 수준을 정량 분석하였다.
주요 염증 매개 물질 중 iNOS(inducible nitric oxide synthase)와 COX-2(Prostaglandin-endoperoxide synthase 2)는 NO와 PGE2(Prostaglandin E2)의 분비를 촉진하여 염증 반응의 가속화를 야기하는 요소로 알려져 있는데(Posadas et al., Naunyn - Schmiedeberg's Arch. Pharmacol ., 2000), 부처손 에틸아세테이트 분획물을 처리함에 따라 iNOS와 COX-2 모두 유의하게 억제하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 NO 생성 억제 시험에서 확인된 농도의존적인 NO 생성 억제 현상과 동일 결과이며, iNOS와 COX-2의 유전적 조절을 통해 NO의 생성이 조절되는 것임을 알 수 있었다(도 8의 A 및 B). 또한, 전염증성 사이토카인인 IL-1β는 염증반응에 따른 면역세포의 활성을 비롯하여 분화, 확산 등에 영향을 미치게 되는데, 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리군에서 현저하게 낮은 발현 양상을 보임을 확인하였다(도 8의 C). 아울러, IL-6의 경우 급성 염증반응에 주요 사이토카인일 뿐만 아니라 T-세포(T-cell)와 B-세포(B-cell)의 자극을 야기하여 만성 면역반응의 진행 유도에도 영향을 미치는 것으로 알려져 있는데(Gabay, Arthritis Res Ther ., 2006), IL-6 역시 부처손 에틸아세테이트 분획물 처리에 의해 분명한 발현 억제 양상이 확인되었다(도 8의 D).
따라서, 상기 결과를 통해 부처손 에틸아세테이트 분획물이 IL-1β, IL-6와 같은 전염증성 사이토카인의 발현 억제를 비롯하여, 염증 관련 매개체인 iNOS와 COX-2의 발현량 또한 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
따라서 상기 일련의 결과를 통해, 부처손 에틸아세테이트 분획물은 강한 활성산소종(ROS; reactive oxygen species) 소거능과 단백질 보호능을 비롯하여 염증유도 사이토카인의 발현을 억제하여 NO 생성을 억제하는 동시에 타 면역세포로의 신호 전달을 조절하는 것으로 검증되었으며, 이에 급성 및 만성 염증에 유효한 천연 생물 소재로 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
제조예 1: 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 화장료의 제조
제조예 1-1: 유연 화장수의 제조
상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 표 3과 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 10.00
1,3-부틸렌글리콜 1.00
디소듐이디티에이 0.05
알란토인 0.10
디포타슘글리시리제이트 0.05
시트릭애씨드 0.01
소듐시트레이트 0.02
글리세레스-26 1.00
알부틴 2.00
하이드로제네이티드캐스터오일 1.00
에탄올 30.00
보존제 미량
착색제 미량
착향제 미량
정제수 잔량
제조예 1-2: 영양 크림의 제조
상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연 영양 크림은 하기 표 4의 조성과 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 10.0
1,3-부틸렌글리콜 7.0
글리세린 1.0
D-판테놀 0.1
식물 추출물 3.2
마그네슘알루미늄실리케이트 0.3
PEG-40 스테아레이트 1.2
스테아릭애씨드 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
친유형글리세릴스테아레이트 2.0
소르비탄세스퀴올리에이트 1.5
세테아릴알코올 3.0
미네랄오일 4.0
스쿠알란 3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 2.8
식물성 오일 1.8
디메치콘 0.4
디포타슘글리시리제이트 미량
알란토일 미량
소듐 히아루로네이트 미량
토코페릴아세테이트 적량
트리에탄올아민 적량
보존제 적량
착향제 적량
정제수 잔량
제조예 2: 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 식품의 제조
제조예 2-1: 밀가루 식품의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
제조예 2-2: 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
제조예 2-3: 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
제조예 2-4: 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제조예 2-5: 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다:
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부).
제조예 2-6: 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
제조예 2-7: 야채 주스의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
제조예 2-8: 과일 주스의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
제조예 3: 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 약학 조성물의 제조
제조예 3-1: 산제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 2 g에 유당 1 g을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제조예 3-2: 정제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제조예 3-3: 캡슐제의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제조예 3-4: 환의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 1 g, 유당 1.5 g, 글리세린 1 g 및 자일리톨 0.5 g을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
제조예 3-5: 과립의 제조
본 발명의 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 150 ㎎, 대두추출물 50 ㎎, 포도당 200 ㎎ 및 전분 600 ㎎을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<110> GANGNEUNG WONJU NAT UNIVERSITY INDUSTRY ACADEMY COOPERATION GROUP <120> A composition having anti-oxidation or anti-inflammation comprising Selaginella tamariscina extracts, fractions thereof or compounds isolated therefrom as an active ingredient <130> P17U12C0222 <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin_F <400> 1 tacagcttca ccaccacagc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin_R <400> 2 aaggaaggct ggaaaagagc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1beta_F <400> 3 gtgtctttcc cgtggacctt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1beta_R <400> 4 atgggaacgt cacacaccag 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6_F <400> 5 tccatccagt tgccttcttg 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6_R <400> 6 ccacgatttc ccagagaaca 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS_F <400> 7 tgcccctgga agtttctctt 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS_R <400> 8 actgccccag tttttgatcc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2_F <400> 9 ttgctgtaca agcagtggca 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2_R <400> 10 gcagccattt ccttctctcc 20

Claims (9)

  1. 부처손(Selaginella tamariscina) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염증용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항산화 효과는 자유라디칼(free radical) 소거 활성에 의해 달성되는 것인 항산화 또는 항염증용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항염증 효과는 일산화질소(nitric oxide, NO) 생성 저해, 사이클로옥시게나아제(COX-2), 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 또는 염증성 사이토카인(proinflammatory cytokines)의 발현 억제에 의해 달성되는 것인 항산화 또는 항염증용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 리놀레산(linoleic acid), α-리놀렌산(α-linolenic acid), 팔미트산(palmitic acid), 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien) 및 구아이아콜(guaiacol) 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것인 항산화 또는 항염증용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 화합물은 부처손 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 총 100 중량부에 대하여 리놀레산(linoleic acid)이 20 내지 25 중량부, α-리놀렌산(α-linolenic acid)이 5 내지 10 중량부, 팔미트산(palmitic acid)이 5 내지 10 중량부, 스티그마스탄-3,5-디엔(Stigmastan-3,5-dien)이 1 내지 5 중량부, 및 구아이아콜(guaiacol)이 0.5 내지 4 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 것인 항산화 또는 항염증용 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 항염증은 아토피피부염, 건선, 류마티스 관절염, 척추염, 요도염, 방광염, 신염, 혈관염, 동맥경화증, 심근염, 알러지 질환, 피부근염, 비염, 천식, 편도염, 급성통증, 만성통증, 패혈증, 치주염, 치은염, 염증성 장질환, 위궤양 및 췌장염으로 구성된 군에서 선택된 염증성 질환의 개선, 치료, 발병 억제 또는 발병 지연인 것을 특징으로 하는 것인 항산화 또는 항염증용 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 식품 조성물.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항산화 또는 항염증용 조성물을 포함하는 약학 조성물.



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