KR101746388B1 - 쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물 - Google Patents

쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 쑥부쟁이(Aster yomena, AY) 추출물의 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 쑥부쟁이의 디클로로메탄(CH2Cl2), 에탄올(EtOH), 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH) 분획물의 면역 활성을 측정한 결과, 디클로로메탄 분획물이 세포 독성이 없으며, 다른 분획물과 비교하여 대식세포 증식 효과가 가장 우수하였고, 면역관련 사이토카인인 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 생성량이 양성대조군(LPS; lipopolysaccharide)의 50% 정도의 값을 나타냈으며, 또한, Fc 수용체의 발현량 증가를 측정한 결과, 쑥부쟁이의 디클로로메탄 분획물이 대조군보다 Fc 수용체 I의 발현량이 약 2.5배 증가하였고, 용매 분획물 중 가장 높은 발현량을 나타냄을 확인함으로써, 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물은 면역증진용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물{Phamaceutial composition comprising of dichloromethane fraction of Aster yomena for immune enhancing}
본 발명은 쑥부쟁이(Aster yomena, AY) 추출물의 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물에 관한 것이다.
면역계는 생체 내에서 자연적으로 발생하거나 외부인자들에게 기인한 각종 이상 현상을 제거하여 신체의 항상성(homeostasis)을 유지시키는 생명현상이다. 면역반응은 태어날 때부터 가지고 있는 선천면역(innate immunity)과 후천적으로 생활 등에 적응되어 얻어지는 후천면역(acquired immunity)로 구분된다. 선천면역은 항원에 대하여 비특이적으로 반응하며 특별한 기억작용은 보이지 않는다. 선천면역 체계로는 항원의 침입을 차단하는 피부, 점액조직, 상산성의 위산, 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식균작용을 담당하는 대식세포(macrophage), 백혈구 등과 같은 식세포 등이 있다. 이러한 선천면역은 실제 대부분의 감염을 방어한다. 한편, 후천면역은 처음 침입한 항원에 대한 기억작용이 있어, 다시 침입이 발생하였을 때, 특이적으로 반응하여 효과적으로 항원을 제거하는 특징이 있다.
선천면역계에서 생체방어 기구의 초기 반응을 담당하는 대식세포는 lysosome이 발달한 단핵 세포로서 조직 내에서 탐식작용이 왕성하고, 선천면역과 후천면역 모두 관여하는 면역세포이다. 대식세포 방어 기전과 관련된 수용체는 미생물을 인식하고 살해하는 탐식 패턴 인식 수용체(endocytic pattern-recognition receptors) 및 면역계의 활성화를 조절하는 신호 패턴 인식 수용체(signaling pattern-recognition receptors)로 나눌 수 있다. 즉, 탐식 패턴 인식 수용체에 인식된 외래 물질은 식세포(phagocytes)에 의하여 살해되고, 신호 패턴 인식 수용체에 인식된 물질들은 TNF-α, IL-1β, IL-6 및 IL-12와 같은 다양한 cytokine들을 생산함으로써 선천면역 및 적응면역계에 항원 제시를 하는 작동 세포의 활성화에 관여한다. 이러한 면역 반응은 항원을 포함한 항원 제시 세포(antigen presenting cell; APC)가 생산하는 사이토카인(cytokine) 및 항원 제시 세포로부터 항원을 제시받은 보조 T세포가 생산하는 항원 특이적 cytokine에 의하여 조절된다.
면역기능이 저하되면, 천식, 비염, 아토피성 피부염, 적혈구의 용혈, 급성 사구체 신염, 감기, 만성 피로 및 암 등 다양한 면역질환과 노화, 생활습관병 등이 발생할 수 있다. 이러한 질환은 치료보다 예방이 중요한데, 현재 시판되고 있는 치료제는 예방을 위하여 복용하기에는 어려운 것이 현실이다. 면역계 강화에 의한 면역질환, 노화, 생활습관병 등의 질병을 예방하는데 관심이 집중되고 있지만, 질환 예방학적 측면에서 부작용이 적은 식품성분에 의한 면역조절연구는 현재 매우 제한적이라 체계적인 면역세포활성 조절 관련 연구 및 기능성 소재 개발이 요구되고 있다. 이를 위하여, 부작용이 적은 천연물로부터 면역 활성을 조절할 수 있는 성분을 발굴하고, 이를 이용하여 면역 활성을 조절할 수 있는 제제를 개발하기 위한 연구가 지속적으로 이루어지고 있다.
쑥부쟁이(Aster yomena, AY)는 국화과에 속하는 다년초로서 한국, 일본, 중국, 시베리아 등지에 널리 분포하며, 전국각지 산야지의 약간 습기 있는 곳에 흔히 자생한다. 쑥부쟁이는 어린순을 데쳐서 나물로 먹거나 기름에 볶아먹기도 한다. 잎은 정유가 함유되어 있고, 비타민 C가 풍부하며, 그 외 생리활성 성분이 많이 함유되어 있다. 동의보감에서는 해열제, 이뇨제로 이용하며, 민간요법에서는 기침, 천식 등에 쓰이고 있으며, 잎에서 즙을 내어 벌레 물린 데에도 사용하기도 한다. 우리나라의 대표적인 국화과 산채인 쑥부쟁이는 그 자원이 풍부하나 지금까지의 과학적 검증을 통하여 암 예방, 항균활성, 항산화활성 등이 보고된 정도이며 그 밖의 효능검증 및 성분에 관한 연구는 전무한 실정이다.
이에, 본 발명자들은 부작용을 최소화하면서 면역기능 장애를 예방 및 치료할 수 있는 면역증강활성을 나타내는 제제를 천연물로부터 개발하고자 노력하던 중, 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄(CH2Cl2), 에탄올(EtOH), 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH) 분획물의 면역 활성을 측정한 결과, 디클로로메탄 분획물이 세포 독성이 없으며, 다른 분획물과 비교하여 대식세포 증식 효과가 가장 우수하였고, 면역관련 사이토카인인 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 생성량이 양성대조군(LPS; lipopolysaccharide)의 50% 정도의 값을 나타냈으며, 또한, Fc 수용체의 발현량 증가를 측정한 결과, 쑥부쟁이의 디클로로메탄 분획물이 대조군보다 Fc 수용체 I의 발현량이 약 2.5배 증가하였고, 용매 분획물 중 가장 높은 발현량을 나타냄을 확인함으로써, 상기 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물은 면역증진용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 쑥부쟁이(Aster yomena, AY) 추출물의 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
1) 쑥부쟁이(Aster yomena, AY)에 C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 n-헥산 및 디클로로메탄 순으로 계통 분획하여 수득한 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에서 쑥부쟁이(Aster yomena, AY) 추출물의 디클로로메탄(CH2Cl2), 에탄올(EtOH), 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH) 분획물의 면역 활성을 측정한 결과, 디클로로메탄 분획물이 세포 독성이 없으며, 다른 분획물과 비교하여 대식세포 증식 효과가 가장 우수하였고, 면역관련 사이토카인인 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 생성량이 양성대조군(LPS; lipopolysaccharide)의 50% 정도의 값을 나타냈으며, 또한, Fc 수용체의 발현량 증가를 측정한 결과, 쑥부쟁이의 디클로로메탄 분획물이 대조군보다 발현량이 약 2.5배 증가하였고, 용매 분획물 중 Fc 수용체 I을 가장 높게 발현시키는 효과를 확인하여, 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물은 면역증진용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 쑥부쟁이(Aster yomena, AY) 용매 분획물의 제조 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 쑥부쟁이 용매 분획물 처리에 따른 대식세포의 생존율을 나타낸 도이다:
PBS: 대조군,
LPS: 양성대조군,
CH2Cl2:디클로로메탄 분획물,
EtOH: 에탄올 분획물,
Hexane: 헥산 분획물,
EtOAc: 에틸아세테이트 분획물, 및
BuOH: 부탄올 분획물.
도 3은 쑥부쟁이 용매 분획물 처리에 따른 IL-6 및 TNF-α의 생성량을 나타낸 도이다.
도 4는 쑥부쟁이 용매 분획물 처리에 따른 Fc 수용체 I 및 II의 발현량을 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은
1) 쑥부쟁이(Aster yomena, AY)에 C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 n-헥산 및 디클로로메탄 순으로 계통 분획하여 수득한 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 쑥부쟁이는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하며, 40% 내지 60%의 에탄올을 사용하는 것이 보다 바람직하고, 50% 에탄올을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 쑥부쟁이 분말 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 4 내지 6배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 40℃인 것이 더욱 바람직하고, 실온인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하고, 24시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 조성물은 IL-6 및 TNF-α의 생성을 증가시키고, Fc 수용체 I 및 II의 발현을 증가시키는 것이 바람직하다.
또한, 상기 조성물은 세포 독성이나 부작용을 거의 나타내지 않으므로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 장 기능, 위장병, 변비, 위궤양, 위염, 위암 증상, 호흡기 감염, 피부질환, 조류독감 및 각종 암으로 이루어진 군 중 1종 이상의 질병을 예방 또는 치료하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 조성물은 소화기질병 예방, 치료 또는 면역증강 효과를 갖는 약학 조성물, 건강기능식품 조성물, 사료 조성물, 또는 인간을 제외한 동물의 소화기질병 예방, 치료 또는 면역증강 방법에 적용할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄(CH2Cl2), 에탄올(EtOH), 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH) 분획물의 면역 활성을 측정한 결과, 디클로로메탄 분획물이 세포 독성이 없으며(도 2 참조), 다른 분획물과 비교하여 대식세포 증식 효과가 가장 우수하였고, 면역관련 사이토카인인 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 생성량이 양성대조군(LPS; lipopolysaccharide)의 50% 정도의 값을 나타냈으며(도 3 참조), Fc 수용체의 발현량 증가를 측정한 결과, 쑥부쟁이의 디클로로메탄 분획물이 대조군보다 발현량이 약 2.5배 증가하였고, 용매 분획물 중 Fc 수용체 I을 가장 높게 발현시키는 효과를 확인하였다(도 4 참조).
따라서, 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물은 면역증진용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정체, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 우성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마르네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.
본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 mg의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100 mg의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
아울러, 본 발명은
1) 쑥부쟁이(Aster yomena, AY)에 C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 n-헥산 및 디클로로메탄 순으로 계통 분획하여 수득한 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에서 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물이 세포 독성이 없으며, 다른 분획물과 비교하여 대식세포 증식 효과가 가장 우수하였고, 면역관련 사이토카인인 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 생성을 증가시켰으며, Fc 수용체의 발현량을 증가시킴을 확인하였으므로, 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물은 면역증진용 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 명세서의 "건강기능식품"이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (기능성 원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품으로 식품의약품안전처장이 정한 것을 의미하나, 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 배제하는 의미로 사용된 것이 아니다.
본 발명의 건강기능식품은 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함한다. 본 발명에 이용될 수 있는 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제는 포도당, 과당, 말토스, 슈크로스, 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올과 같은 천연 탄수화물, 타우마틴, 스테비아 추출물 등의 천연 향미제, 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제, 착색제, 펙트산 또는 그의 염, 알긴산 또는 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산화제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등) 등을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 쑥부쟁이 추출물의 디클로로메탄 분획물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해서 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 실험예에 의해서 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 쑥부쟁이의 다양한 용매 분획물의 준비
본 발명에 사용한 쑥부쟁이는 전라남도 구례군 농업기술센터에서 구입하여 사용하였다. 쑥부쟁이 용매 분획물은 다음과 같은 방법으로 분획하였다.
구체적으로, 건조된 쑥부쟁이 분말 100 g에 50% 에탄올을 가하여 상온에서 24시간 추출한 후, 원심분리하여 상등액을 1차적으로 회수하고 남은 침전물을 재추출한 뒤 원심분리하였고, 이의 상등액을 회수하여 상기의 1차 상등액과 혼합한 후 감압농축기로 농축한 다음, 에탄올 용매를 증발시켜 제거한 농축액을 제조하였다.
위에서 제조한 농축액에 헥산과 물이 혼합된 혼합용매를 가하여, 헥산 분획층 농축액과 수용성 에탄올 분획 농축액으로 분획한 후, 수용성 에탄올 분획 농축액을 다시 물과 디클로로메탄을 가하여, 디클로로메탄 분획층 농축액을 수득하였으며, 상기에서 수용성 분획층에 물과 에틸아세테이트를 가한 뒤 에틸아세테이트 분획층 농축액을 수확하였고, 그런 다음 수용성 농축액에 물과 부탄올을 가한 뒤, 부탄올 분획층 농축액과 수용성 층으로 분리하였다(도 1). 모든 과정은 3회 반복 실시하였다.
< 실험예 1> 쑥부쟁이의 다양한 용매 분획물의 대식세포에 대한 독성 확인
상기 <실시예 1>에서 준비된 쑥부쟁이의 다양한 용매 분획물의 대식세포에 대한 독성을 측정하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 마우스 백혈성 단핵구 대식세포(Mouse leukaemic monocyte macrophage) 유래 세포주인 RAW264.7 세포는 한국 세포주은행에서 분양받아 10% FBS를 함유한 DMEM 배지를 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하여 실험에 사용하였다. RAW 264.7세포를 5×104 세포/㎖의 농도로 조정한 후, 96-well microplate에 180 ㎕씩 분주하고, 50 ㎍/ml 농도의 쑥부쟁이 용매 분획물을 20 ㎕씩 처리하여 24시간 배양하였다. 그런 다음, 대식세포의 증식을 측정하기 위하여, 상기 배양액에 MTT (4,5-디메틸디아졸-2-일-2,5-데페닐테르라졸리움 프로미드)용액(5 mg/㎖) 10㎕를 가하고 4시간 동안 반응시킨 다음, 반응물을 원심분리하여 침전물을 회수하고, 상기 회수한 침전물에 DMSO 150 ㎕를 가하여 침전물에 포함된 세포에서 생성된 포르마잔 결정을 용해시킨 다음, 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 쑥부쟁이 용매 분획물이 RAW264.7 세포에 미치는 영향을 확인한 결과, 모든 용매분획물 50 ㎍/㎖에서 RAW 264.7 세포독성 독성이 없음을 확인하였고, 디클로로메탄 분획물이 가장 높은 대식세포 증식 효과를 나타냄을 확인하였다(도 2).
< 실험예 2> 쑥부쟁이 용매 분획물의 사이토카인 생성능 확인
쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물의 면역관련 사이토카인(cytokine)의 생성능을 측정하기 위하여, 상기 <실험예 1>의 방법으로 세포를 배양하고, 쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물을 처리한 후, 24시간 배양한 뒤 세포 배양액을 회수하여 배양액의 사이토카인 생성능을 확인하였다. 세포 배양액 내의 TNF-α, IL-1β, IL-6는 ELISA kit를 이용하여 제조사(R&D systems, Inc., MN, 미국)의 지침에 따라 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 대식세포에서 분비된 IL-6 생성량은 무처리군에서 11.7 pg/ml, 양의 대조군 LPS에서는 239.3 pg/ml로, 유의적으로 양의 대조군에서 IL-6 생성량이 높았다. 또한, 쑥부쟁이 용매 분획물을 처리하였을 때, 디클로로메탄(CH2Cl2), 에탄올(EtOH), 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH) 분획물은 각각 76.5, 111.1, 135.0, 110.1, 55.6 pg/ml의 IL-6 생성량을 확인하였다(도 3). 쑥부쟁이의 모든 용매 분획물이 IL-6 생성을 촉진하였고, 특히 쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물이 가장 많은 양을 생성하였다.
또한, TNF-α 생성량의 경우, 무처리군에서 490.9 pg/ml, 양의 대조군 LPS에서는 2653.4 pg/ml로 측정되었다. 쑥부쟁이 용매 분획물에 따른 TNF-α 생성량은 디클로로메탄(CH2Cl2)>에틸아세테이트(EtOAc) >헥산(Hexane)> 에탄올(EtOH)>부탄올(BuOH) 순으로 나타났으며, 쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물 처리시 1292.6 pg/ml의 TNF-α를 생성하였다. 모든 쑥부쟁이 용매 분획물은 양의 대조군인 LPS를 첨가에 의한 사이토카인 생성량보다 유의적으로 낮은 수치를 나타내었다. 따라서 본 연구에서 처리한 쑥부쟁이 용매 분획물은 과도한 염증반응을 유도하는 것이 아닌 것으로 판단되며, 쑥부쟁이 디클로로메탄 분획물에서 효과적인 면역 증진 반응을 기대할 수 있다.
< 실험예 3> 쑥부쟁이 용매 분획물의 Fc 수용체 유전자 발현 확인
쑥부쟁이 용매분획물은 대식세포를 활성화시켜 사이토카인의 생성을 유도할 뿐만 아니라, 대식세포의 Fc수용체의 발현량을 증가시켜 탐식작용을 유도할 것이라 생각되어 쑥부쟁이 용매분획물이 Fc 수용체 유전자의 발현에 대한 영향을 하기 실험으로 확인하였다.
구체적으로, 대식세포(Raw 264.7 cells)에 상기 <실시예 1>의 용매 분획물을 처리하여 Fc 수용체 I, Fc 수용체 II 발현량을 RT-PCR로 측정하여 확인하였다. 총 RNA는 RNeasy mini kit(Qiagen, Valencia, CA, 미국)을 사용하여 추출하였으며, 추출한 500 ng의 RNA에 Reverse Transcription System (Promega, 미국)을 사용하여 cDNA를 합성한 다음, SYBR Green mix (Qiagen, Valencia, CA, 미국)를 사용하여 mRNA 발현 정도를 Real-Time PCR Detection System (CFX96TM, Bio-rad, 미국)으로 분석하였다. 실험값 보정을 위한 내재적인 대조군(Endogenous control)은 GAPDH를 사용하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 쑥부쟁이 용매 분획물이 Fc 수용체 발현량 증가 측정 시, Fc 수용체 I(FcR I) 경우, 부탄올을 제외한 모든 용매 분획물이 FcR I의 발현량을 유의적으로 증가시켰고, 특히, 디클로로메탄 분획물은 대조군보다 약 2.5배 증가시켰으며 분획물 중 Fc 수용체 I을 가장 높게 발현시키는 효과를 확인하였다. 또한 Fc 수용체 II(FcR II)의 발현량에 대해서도 디클로로메탄 분획물에서 유의적인 증가를 확인하였다(도 4).

Claims (8)

1) 쑥부쟁이에 C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 n-헥산 및 디클로로메탄 순으로 계통 분획하여 수득한 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 IL-6 및 TNF-α의 생성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 면역증강용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 Fc 수용체 I 및 II의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 면역증강용 약학적 조성물.
삭제
1) 쑥부쟁이에 C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 물에 녹인 후 n-헥산 및 디클로로메탄 순으로 계통 분획하여 수득한 디클로로메탄 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 건강기능식품.
제 5항에 있어서, 상기 건강기능식품은 IL-6 및 TNF-α의 생성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 면역증강용 건강기능식품.
제 5항에 있어서, 상기 건강기능식품은 Fc 수용체 I 및 II의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 면역증강용 건강기능식품.
삭제
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KR20190080001A (ko) 2017-12-28 2019-07-08 호남대학교 산학협력단 쑥부쟁이 에탄올 추출물을 유효성분으로하는 항비만 조성물
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