WO2001021182A1

WO2001021182A1 - Agents ameliorant la resistance physique et agents favorisant l'accumulation de glycogene

Info

Publication number: WO2001021182A1
Application number: PCT/JP2000/006400
Authority: WO
Inventors: Shigeo Takada; Yasukazu Nagato; Masaichi Yamamura; Masahiro Murakami; Suketsune Iwagaki; Toshihiro Arai; Tamotsu Terao
Original assignee: Amato Pharmaceutical Products, Ltd.; Tokai Education Instruments Co., Ltd
Priority date: 1999-09-20
Filing date: 2000-09-20
Publication date: 2001-03-29
Also published as: EP1224936A1; CN1391477A; KR20020068507A; AU7316800A; HK1047242A1; CA2383152A1

Description

明細書

体力増進剤及びグリコ一ゲン蓄積促進剤技術分野

本発明は、運動選手用の補助食品（supplement) 等として有用な体力増進剤およびグリコーゲン蓄積促進剤に関する。より詳細には本発明は、特定の縮合度を有するポリ乳酸混合物を有効成分として含む体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤に関する。背景技術

近年、運動生理学や栄養生理学等の分野において持久力、筋力、運動能力等の体力の向上を目的とした食事指導が各種スポーツ選手に行われるようになつてきている。例えば、蛋白質は筋力の強化に必要であり、脂肪や炭水化物は重要なェネルギ一源である。さらに骨強化にはカルシウム摂取が必要であり、へモグロビンの構成成分である鉄は、酸素の体内輸送に極めて重要な役割を果たしている。例えば、高脂肪食によってエネルギー産生能が向上し、効率の良いエネルギー代謝の確立を促すことができること、特に単価不飽和脂肪酸の有効性が報告されており、あるいは高蛋白食摂取時に高い運動能力が得られるといった報告などがある。

また近年、様々な成分が、免疫能や代謝機能の調節に関与することが知られるようになり、各種栄養剤に利用されるようになってきた。例えばアルギニンは、乳児にとって準必須アミノ酸といわれる成分であり、体内では蛋白質が代謝されて生成する有毒なアンモニアを解毒するのに必要であるほか、ポリアミンの前駆物質としても機能すること、筋肉代謝に関与すること、体内で窒素利用効率改善効果のあること及び免疫賦活作用等が知られている。

また、グルタミンは骨格筋アミノ酸プールの 5 0〜 6 0 %、血漿アミノ酸プ一ルの約 2 0 %を占めるアミノ酸であり、小腸上皮細胞では主要なエネルギー源であるといわれている。又、グルタミン欠乏は腸管萎縮の原因ともいわれ、免疫系への影響も示唆されている。このため、近年経腸栄養剤や輸液の分野で注目され、利用に関する技術が開示されている（特開平 2- 119762号公報、特開平 3-264525 号公報、特閧平 5-236909号公報）。さらに、スポーツ生理学の分野でもグルタミンが注目され、運動によって消費されたグリコーゲン補充や疲労時の免疫能の回復に効果のあることが示されている（吉田匡央、月刊フードケミカル、 1994- 10、 46)。

さらに、体力増進剤や疲労回復剤として、民間療法的に様々な動植物のエキス等を用いた健康食品が数多く出回っているが、日常に多食されているものは少なく、多量かつ長期的に摂つた場合の安全性については確認されていない。

また、医薬品としては、特定された有効成分を高度に濃縮したもの及び化学的に合成したものが使用され、治療効果は明確に現れるが、副作用の危険性も考えられる。健康食品や補助食品等では副作用の危険性よりも、長期摂取における安全性を優先させるべきである。

グリコ一ゲンは、グルコースから成るホモ多糖であるグルカンの一種であり、動物の貯蔵多糖としてほとんどの細胞に顆粒状態で広く分布しているが、特に肝臓および筋肉に豊富に存在している。肝臓のグリコ一ゲンは生体のエネルギー源となる一方、また筋肉のグリコーゲンは筋収縮のエネルギー供給源となり、両者の役割は異なる。

グリコーゲンの生合成経路では、グルコースから出発し、グルコース 6—リン酸、グルコース 1—リン酸を経て U D Pグルコースとなり、グリコーゲンシン夕 —ゼによってグリコ一ゲンのプライマ一に取り込まれ、その繰り返しにより糖鎖の伸長がなされ、またひ— 1 ， 4—グルカン分枝酵素によってひ 1→6結合の分枝の形成がなされる。

一方、グリコーゲンの代謝経路では、グルコースホスホリラ一ゼによってグリコ一ゲンから先ずグルコース 1 —リン酸が生じ、肝臓ではグルコース 6—リン酸を経てグルコースになつてから血液中に放出される。また、筋肉その他の組織ではグルコース 6—リン酸からフルクトース 6—リン酸に変換されて解糖系に入るか、あるいはグルコース 6—リン酸はペント一スリン酸回路にも入る。

上述のようにグリコーゲンの分解物は各器官のエネルギー源になることから、肝臓および Zまたは筋肉におけるグリコーゲンの蓄積量を増大させることは、疲労の回復、運動能力の向上などを含め、多様な観点から望ましいと言える。

従って、肝臓および/または筋肉におけるグリコーゲンの蓄積を促進させるのに有用な医薬を開発する必要があった。

これまでの研究により、縮合度 3〜2 0の環状及び/又は鎖状のポリ L—乳酸混合物は、抗悪性腫瘍剤として（特開平 9一 2 2 7 3 8 8号公報および特開平 1 0 - 1 3 0 1 5 3号公報)、また癌患者の Q O L改善剤として（特願平 1 1一 3 9 8 9 4号明細書；日本癌治療学会誌第 3 3卷第 3号第 4 9 3頁）有用であることが報告されている。しかしながら、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ L一乳酸混合物が運動選手に及ぼす影響については報告されていない。特に、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ L一乳酸混合物が、運動選手の持久力の向上、即ち、運動時の体力、持久力の向上に寄与するかどうか、並びに肝臓および/または筋肉におけるグリコーゲンの蓄積量を増大させることができるかどうかは全く不明であった。発明の開示

本発明の目的は、スポーツ愛好家又はスポーツ選手等の運動持久力の向上を目指す人の運動能力を高めるのに有効である体力増進剤、並びに上記体力増進剤を利用した補助食品を提供することである。

本発明の別の目的は、肝臓および/または筋肉内におけるグリコーゲンの蓄積量を増大することができる物質、並びに当該物質を含む医薬または補助食品を提供することである。

本発明のさらに別の目的は、生体適合性が高く、比較的安価な原料を用いた体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤を提供することである。本発明者らは、上記目的を達成することを目的として、縮合度 3 〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を、学生の長距離選手に一定期間投与し、各選手のトレーニング量、体重変化、並びに幾つかの生理学的パラメ一夕一を測定した。その結果、ポリ乳酸混合物を投与した選手の方が、持久性トレーニングに対する抵抗性が向上し、運動記録が向上することが判明した。さらに、本発明者らは、環状乳酸ォリゴマーをマウスに与えた場合に筋肉および肝臓におけるグリコ —ゲン蓄積量が有意に増大することを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。

即ち、本発明によれば、縮合度 3 〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む体力増進剤が提供される。

本発明の体力増進剤は、例えば、運動選手の持久力の維持又は向上のため、あるいは疲労回復のために使用される。

本発明の別の側面によれば、縮合度 3 〜 2 0の環状及び又は鎖状のポリ乳酸混合物を含むグリコーゲン蓄積促進剤が提供される。

本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、例えば、疲労回復、筋肉の運動能力の増進または患者の Q〇 L改善のため、あるいは肉質改善のために使用される。

本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物は好ましくは、下記一般式（ 1 )：

(式中、 nは 3〜 2 0の整数を示す）

で表される環状乳酸オリゴマーを含む。

好ましくは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸は実質的に L一乳酸から成る。本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物としては、例えば、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールおよびメタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ一に付し、 p H 2〜 3の 2 5 - 5 0重量％のァセトニトリル水溶液で溶離後、 p H 2〜 3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分を使用できる。脱水縮合は好ましくは窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行うことができ、逆相カラムクロマトグラフィ一は好ましくは Q D Sカラムクロマトグラフィ一により行うことができる。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤としては、縮合度 3〜 2 0の鎖状乳酸ォリゴマーを実質的に含まないものが好ましい。

本発明のさらに別の側面によれば、上記した本発明による体力増進剤またはグリコーゲン蓄積促進剤を含む健康食品または補助食品が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、体力増進剤、グリコーゲン蓄積促進剤、又はそれらを含む補助食品の製造における、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の使用が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の有効量をヒトなどの哺乳動物に投与することを含む、体力を増進するための方法またはグリコーゲンの蓄積を促進する方法が提供される。図面の簡単な説明

図 1は、本実施例で行った試験の実施方法を示す図である。

図 2は、 C P L投与 3週間のトレーニング量と体重の変化を示す図である。図 3は、体重の日内変化を示す図である。

図 4は、合宿 3 0日後の plasma lipidの変化を示す図である。

図 5は、赤血球脂質の変化を示す図である。

図 6は、 plasma particle imageを示す図である。

図 Ίは、対照群と C P L投与群における plasma particleの比較を示す図である。

図 8は、 C D 5 6による N K細胞の比率（％) を示す図である。

図 9は、運動中および回復期におけるエネルギー消費量の経時的変化を示す図である。

図 1 0は、運動中および回復期における呼吸商の経時的変化を示す図である。図 1 1は、 C P L投与の前後におけるエネルギー消費量の変化を示す図である。図 1 2は、タイムトライアル後の血中乳酸濃度の変化を示す図である。

図 1 3は、 C P L投与の前後におけるエネルギー消費量の変化を示す図である。図 1 4は、本明細書の製造例 1で得られたポリ乳酸混合物の質量スぺクトルを示す。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明の実施態様および実施方法について詳細に説明する。

本発明の体力増進剤およびグリコーゲン蓄積促進剤は、縮合度 3〜2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を有効成分として含むものである。

本発明の体力増進剤は、好ましくは、運動選手の持久力の維持又は向上のために、あるいは一般的に疲労回復のために広く使用することができる。

本発明の体力増進剤は、特に好ましくは長距離選手等の持久力を必要とする運動選手に投与することによつてその効果を発揮できる。長距離選手の持久性トレ —ニングは例えば 2 1 k m/日であるが、 2力月間の合宿期間等では 4 0〜6 0 k m/曰のトレーニングが負荷される。このようなトレーニングストレスに耐えられるか否かは長距離選手にとって重要な問題である。

例えばトレーニングストレスに対する抵抗性の指標の一つとして挙げられる体重変動では持久性能力（ 1 0 , 0 0 0 m) の高い選手では体重減少が少なく、体重変化量はこの指標となり得る。

本発明の縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む体力増進剤を摂取すると、トレーニング期間中における体重減少が少なく、体重回復も速いことから、運動選手の持久力の維持又は向上のために有用であると考えられる。

さらに、体力増進剤を摂取すると、体重減少が少なく体重回復も速いのみならず、ナチュラルキラー（N K ) 細胞の有意な増加が認められ、免疫系が賦活化されることが判明した。これらの結果より、本発明の体力増進剤は、疲労回復、特には運動選手の疲労回復のために使用することができる。

本発明のグリコーゲン蓄積促進剤の具体的な使用例としては、例えば、以下の ( 1 ) 〜（4 ) に記載するような利用が考えられる。しかし、以下の使用例は単なる例示にすぎず、グリコーゲンの蓄積の促進を目的とする限り、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤の使用目的は何ら限定されるものではない。

( 1 ) 疲労の原因の一つとして、筋肉および/または肝臓のグリコーゲンの枯渴が挙げられるので、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤を、例えば、ドリンク剤として日常的に摂取することによって体内のグリコーゲン蓄積量を増やすことができ、これにより疲労を軽減または回復することができる。即ち、本発明のグリコ —ゲン蓄積促進剤を摂取することにより、疲労を感じることなく働ける労働時間の延長が可能であり、また疲労により能率低下の軽減や事故の発生の防止を達成することができる。従って、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、疲労回復のために有用である。

( 2 ) 筋肉中のグリコ一ゲン蓄積量を増やすことは運動選手の記録向上に不可欠である。筋肉中のグリコーゲン蓄積量を増やすための方法として種々の方法が提案されているが、一般的には困難であった。本発明のグリコーゲン蓄積促進剤を摂取することによって、さらに好ましくは運動と併用して本発明のグリコ一ゲン蓄積促進剤を摂取することによって、容易、安全、且つ効果的に筋肉のグリコ一ゲンの蓄積量を増すことが可能であり、これにより運動選手の記録向上に貢献できる。特に本発明のグリコ一ゲン蓄積促進剤の有効成分である環状乳酸ォリゴマ一は生体適合性の高い乳酸を構成成分としているため、禁止薬物の使用に該当することなく安全に使用できることを特徴とする。従って、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、筋肉の運動能力の増進のために有用である。

( 3 ) 癌（特には末期癌）患者において悪液質を引き起こす物質の一つとしてィン夕一ロイキン 6が知られている。ィン夕ーロイキン 6は肝臓のグリコーゲン量を大きく減少させ、これにより患者の Q O L (Quality of Life)は低下していた。本発明のグリコ一ゲン蓄積促進剤をこれらの患者に投与することによって、肝臓グリコーゲンの蓄積量の増大、或いは少なくとも肝臓グリコーゲンの減少の抑制を達成することが可能であり、これにより患者の Q 0 Lの改善を達成できる。従つて、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、患者の Q O L改善のために有用である。

( 4 ) 新鮮な魚介類および畜産物ほどグリコーゲン含有量が多く、美味しいことが一般的に知られている。本発明のグリコーゲン蓄積促進剤を利用して繁殖魚介類や畜産物のグリコーゲン含有量を増すことによって養殖魚介類や畜産物の肉質を改善し、それにより味の向上を達成することが可能である。従って、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、肉質改善のために有用である。本発明の体力増進剤、グリコーゲン蓄積促進剤、並びにこれらを含む補助食品においては、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が有効成分として用いられる。

本明細書で言う「ポリ乳酸混合物」とは、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸が任意の割合で存在する混合物を意味する。即ち、「混合物」という用語は、縮合度 3〜2 0の何れかを有するポリ乳酸の混合物であることを意味すると同時に、環状および鎖状のポリ乳酸の混合物を含む概念としても用いられる。このような「ポリ乳酸混合物」は、本明細書中以下に述べるように、乳酸を脱水縮合し、適当な方法で精製することにより得ることができる。なお、本明細書では便宜上「ポリ乳酸混合物」という用語を用いたが、この中には一定の縮合度を有する環状のポリ乳酸または一定の縮合度を有する鎖状のポリ乳酸といった単一成分から成るポリ乳酸も含まれる。縮合度とは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸単位の数を意味する。例えば、環状のポリ乳酸は下記の構造式を有することが推測されるが、式中の nが縮合度を表す（即ち、 n二 3〜 2 0 )。

本明細書で単に「乳酸」と称する場合、この乳酸には L一乳酸、 D—乳酸またはこれらの任意の割合の混合物の全てが包含される。本発明においては好ましくは、乳酸は実質的に L _乳酸から成る。ここで言う「実質的に」とは、ポリ乳酸混合物中における L一乳酸単位の比率 [即ち、（ L一乳酸単位数/ L一乳酸単位数 + D—乳酸単位数） X I 0 0 ] が、例えば 7 0 %以上、好ましくは 8 0 %以上、より好ましくは 8 5 %以上、さらに好ましくは 9 0 %以上、特に好ましくは 9 5 % 以上であることを意味する。なお、ポリ乳酸混合物中における L一乳酸単位の比率は、出発物質として使用する乳酸中に存在する L一乳酸と D _乳酸の比率に依存する。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤は、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含むことを特徴とし、好ましくは環状のポリ乳酸混合物を少なくとも含むものである。鎖状のポリ乳酸混合物を含有する場合、その含有量は特に限定されるものではないが、全ポリ乳酸混合物に対して、好ましくは 5 0重量％以下、より好ましくは 4 0重量％以下、さらに好ましくは 3 0 重量％以下、さらに好ましくは 2 0重量％以下、例えば 1 0重量％以上 2 0重量％である。

また、本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤は鎖状乳酸オリゴマーを実質的に含まない場合もある。本明細書で言う「実質的に含まない」とは、鎖状のポリ乳酸混合物の含有量が、全ポリ乳酸混合物に対して 1 0重量％未満、より好ましくは 5重量％未満、さらに好ましくは 3重量％未満であることを意味する。

縮合度 3 ~ 20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の製造方法は、特に限定されるものではないが、例えば、特開平 9— 227388号公報、特開平 10 - 130 153号公報、または特願平 1 1— 39894号明細書（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）などに記載の製造方法により得ることができる。

より具体的には、例えば、縮合度 3 ~ 20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物は、下記の方法 Aにより得ることができる。方法 A：

先ず、乳酸（好ましくは、実質的に L一乳酸から成る乳酸）を不活性雰囲気下で脱水縮合させる。不活性雰囲気としては、例えば、窒素ガス、アルゴンガスなどが挙げられるが、窒素ガスを用いるのが好ましい。

脱水縮合反応は、常圧〜 lmmHg程度の減圧下、 1 10〜210°C、好ましくは 130〜190°Cの温度で行われるが、段階的減圧および段階的昇温によつて行うのが特に好ましい。反応時間は適宜設定できるが、例えば 1~20時間反応を行うことができる。段階的減圧および段階的昇温を用いる場合には、反応時間を 2以上から成る部分的な反応時間に分け、それそれの部分において圧力と温度を設定して反応を行う。段階的減圧を用いる場合は、例えば、常圧→150m mHg→ 3 mmHgと減圧することができ、段階的昇温を用いる場合は、例えば、 145 °C→ 1 55 °C→ 185 °Cと昇温することができる。実際には、これらを組み合わせて、例えば、 145°Cで常圧で 3時間、 145°Cで 15 OmmHgで 3 時間、 155°Cで 3mmH gで 3時間そして 185°Cで 3mmHgで 1. 5時間反応を行うことができる。

次いで、この脱水縮合反応により得られた反応混合物にエタノールおよびメタノールを加え、濾過して濾液を乾燥してエタノールおよびメ夕ノ一ル可溶分が得られる。即ち、本明細書で言う「エタノールおよびメタノール可溶分」とはエタノールとメタノールの混合液に可溶な画分を意味する。なお、エタノールおよびメタノール可溶分を得る際には、脱水縮合反応の反応混合物をエタノールおよびメ夕ノールと混合するが、その際のエタノールとメ夕ノールの比率は適宜設定することができ、例えばエタノール：メタノール = 1 ： 9である。なお、反応混合物にエタノールとメタノールを添加する順番、方法などは限定されず、適宜選択することができ、例えば、脱水縮合反応の反応混合物に先ずエタノールを添加し、次いでメタノールを添加することができる。

上記で得られたエタノール ·メタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ ―、特にォク夕デシルシラン（O D S ) カラムを用いたクロマトグラフィーに付し、まず p H 2〜3の 2 5〜5 0重量％のァセトニトリル水溶液で溶離する画分を除去し、次いで p H 2〜 3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液、好ましくは 9 9重量％以上のァセ卜ニトリル水溶液で溶離してくる画分を採取すると、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が得られる。

上記のようにして得られた環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物は、水酸化ナトリウムなどのアルカリ物質で中和し、減圧乾燥後、常法により下記に述べるような所望の形態に製剤化することができる。

本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を製造するための別法としては、例えば、特願平 1 1— 2 6 5 7 1 5号明細書に記載された方法（方法 Bとする）または特願平 1 1— 2 6 5 7 3 2号明細書に記載された方法（方法 Cとする）を挙げることができる（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）。以下、方法 Bおよび方法 C について具体的に説明する。方法 B ：

この方法は、ラクチド（3 , 6—ジメチル一 1 , 4 _ジォキサン一 2， 5—ジオン）を R Y M e (式中、 Rは脂肪族基、芳香族基、置換又は未置換のシリル基、又は乳酸アミド基（― CH ( C H ₃ ) C O N H ₂基を示し、 Yは酸素原子、ィォゥ原子、又は N R ' を示し、ここで R ' は水素原子、脂肪族基または芳香族基を示し、 M eはアルカリ金属）で表されるアルカリ金属化合物の存在下で重合させることによって環状乳酸オリゴマーを製造する方法である。

本明細書において脂肪族炭化水素基は、直鎖状、分枝鎖状、環状またはこれらの組み合わせの何れでもよく、また飽和でも不飽和のものでもよく、炭素数は 1 〜1 2、好ましくは 1〜6である。脂肪族炭化水素基の例としては、メチル、ェチル、プロピル、プチル、才クチル、ドデシル等の鎖状（直鎖および分枝鎖の両方を含む）のアルキル基、並びにシクロアルキル基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシルなど）を挙げることができる。本明細書において芳香族炭化水素基は、アルキル基などの置換基を有していてもよぃァリール基、ァリールアルキル基が包含され、炭素数は 6〜 1 2、好ましくは 6 ~ 1 0である。アルキル基などの置換基を有していてもよいァリール基としては、フエニル、トリル、ナフチル等が挙げられ、ァリールアルキル基としては、ベンジル、フエネチル、ナフチルメチル等が挙げられる。

置換又は未置換のシリル基における置換基としては、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基などが挙げられ、置換シリル基の具体例としては、トリメチルシリル基、トリフエニルシリル基又は t 一プチルジメチルシリル基などが挙げられる。

M eで表されるアルカリ金属としては、リチウム、ナトリウムまたはカリウムなどが挙げられ、好ましくはリチウムである。

R YM eで表されるアル力リ金属化合物は、 n—ブチルリチウム等のアルキルアルカリ金属に R ' — Y H (式中、 R，は脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を示し、 Yは酸素原子又はィォゥ原子を示す)を反応させることによって得ることができる。

具体的には、 R， —Y Hで表されるアルコール化合物またはチオール化合物を適当な溶媒（例えば、無水テトラヒドロフランまたは無水ジェチルエーテルなどのエーテル系溶媒など）に溶解した溶液に、アルコール化合物またはチオール化合物とほぼ等しい当量の n—ブチルリチウム等のアルキルアルカリ金属を添加し、撹拌することで反応を行うことができる。

反応は低温（例えば— 7 8 °C) で数分〜 1時間程度行えばよい。

ラクチド（3， 6 _ジメチルー 1， 4—ジォキサン一 2 , 5—ジオン）を、ァルカリ金属化合物（R Y M e ) の存在下で反応させて本発明で用いる環状乳酸ォリゴマ一を製造する際には、上記で得たアル力リ金属化合物を含む反応混合物に、適当な溶媒（例えば、無水テトラヒドロフランなど）中のラクチド溶液を添加して、撹拌することによって環状乳酸ォリゴマ一を製造することができる。

アルカリ金属化合物（R Y M e ) とラクチドの使用量はモル比で 1 ： 1〜 1 ： 1 0、好ましくは 1 ： 2〜 1 ： 5程度であり、例えば、 1 ： 3または 1 ： 4である。

反応温度は一 7 8 °C〜室温である。反応は、 — 7 8 °Cの温度で開始し、徐々に室温にまで昇温させるように実施するのが好ましい。また、反応圧力は特に限定されず、好ましくは常圧である。

上記したようにこの反応は、好ましくは溶媒の存在下で実施される。反応溶媒としては、反応に不活性な溶媒が好ましく、例えば、エーテル系溶媒（無水テトラヒドロフランまたは無水ジェチルェ一テルなど）等を用いることができる。

反応は、窒素ガスやアルゴンガス等の不活性ガス雰囲気下で行うのが好ましい。上記した本発明で用いる環状乳酸オリゴマーの生成反応のメカニズムについて、以下において更に説明する。但し、本発明はこの理論に拘束されることはなく、本発明においてはこのメカニズムとは異なる反応で生成した環状乳酸オリゴマーを使用してもよい。

前記反応（以下、アルカリ金属が L iである場合を例にして説明する）では、先ず、リチウム化合物とラクチドとが反応して、下記一般式 0 L i CH₃ O CH,₃

1 I II I

CHa-C-C-O-C—— C-O-C-C-YR

I . I! I I II

H O H H O

(式中、 Y及び Rは前記と同じ意味を有する）

で表される鎖状乳酸誘導体が生成し、この化合物にラクチドが反応して、下記- 般式：

(式中、 mは 1から 21の数を示す、 Y及び Rは前記と同じ意味を有する）で表される鎖状乳酸オリゴマーが生成し、この化合物は、それから： YLiが脱離し、環化し、これにより、前記一般式（1) の環状乳酸オリゴマーが生成するものと考えられる。

前記のようにして得られる乳酸オリゴマーの組成（即ち、環状乳酸オリゴマーと鎖状乳酸オリゴマーの混合比率）は、反応助剤として用いるアルカリ金属化合物によって変動する。アル力リ金属化合物として炭素数 1〜3のアルキルアルコールのアルカリ金属化合物（ROMe) (式中、 Rは炭素数 1〜3のアルキル基を示し、 Meはアルカリ金属を示す）を用いる場合には、環状乳酸オリゴマーと鎖状オリゴマーとの混合物（環状乳酸オリゴマーの割合： 80〜85重量％) が得られる。一方、アルカリ金属化合物として t_ブチルアルコール等の炭素数 4以上のアルキルアルコールのリチウム化合物や、チオフ： ϋノール化合物を用いるときには、実質的に環状乳酸ォリゴマーのみを選択的に得ることができる。

本発明で用いる環状乳酸ォリゴマーの重合度は 3〜 20であり、好ましくは 3 〜 17である。この重合度は、使用するアルカリ金属化合物の種類、反応温度、反応時間によって変動する。

また、上記したアル力リ金属化合物の存在下におけるラクチドの重合反応の反応生成物の中には、異なる重合度の環状の（さらに場合によっては鎖状の）乳酸オリゴマーの混合物が存在するものと考えられる。本発明では、異なる重合度の乳酸オリゴマーから成る混合物を用いることができるが、上記した異なる重合度の乳酸オリゴマーを含む反応混合物から異なる分子量の化合物を分離するのに適した手段（例えば、ゲル濾過、 HPLCなど）によって一定の重合度を有する単一の乳酸オリゴマーを精製し、これを用いてもよい。

前記した環状乳酸オリゴマーの製造方法において、アル力リ金属化合物として、乳酸ァミドのアル力リ金属化合物（特にはリチウム化合物）（即ち、 Rが— CH ( C H₃) CONH₂基である化合物）を用いる以外は前記と同様にして反応を行うことによっても、実質的に環状乳酸オリゴマーのみを選択的に得ることができる。方法 C：

この方法は、（ i )乳酸を 350〜40 OmmH gの圧力条件で 120〜 140°C の範囲の温度に加熱し、脱水縮合反応させるとともに、ラクチドを留出させずに副生水のみを留出除去する第 1加熱工程、

(i i)該第 1加熱工程終了後、反応生成物を 150〜160°Cの温度に加熱し、該反応圧力を降圧速度 0. 5〜： LmmHg/分で 15〜2 OmmHgまで降下させるとともに、その降圧に際し、ラクチドの留出を回避させながら副生水のみを留出除去し、該反応圧力が 15 ~2 OmmH gに降下後、同圧力条件及び反応温度 150〜 160°Cにおいてさらに反応を継続して鎖状乳酸オリゴマーを主成分とする脱水縮合物を生成させる第 2加熱工程、

( i i i) 該第 2加熱工程終了後、 0. l〜3mmHgの圧力条件で 150〜1 60°Cで加熱して該鎖状乳酸オリゴマーを環化させ、環状オリゴマーを生成させる第 3加熱工程、

からなることを特徴とする方法である。この方法では先ず、第 1加熱工程において、減圧下において乳酸を加熱し、脱水縮合反応させる。この場合の反応時間は 3〜 12時間、好ましくは 5~6時間である。この第 1加熱下での反応は、その反応を円滑に進行させるために、乳酸の脱水縮合により生成する副生水を留去させるが、この場合、乳酸 2分子の脱水縮合物であるラクチドが留去しないように実施する。このためには、反応圧力を減圧、好ましくは 300~ 500mmHg、より好ましくは 350〜 400 mm Hgに保持し、この圧力条件下において、 100〜140°C、好ましくは 130 〜 140°Cの範囲に加熱するのがよい。この第 1加熱工程での反応により、主に、乳酸の 3〜 23分子の脱水縮合物を主成分とする反応生成物が生じる。

上記第 1加熱工程の終了後、第 2加熱工程において、高められた平均重合度のオリゴマーが得られるように、前記第 1加熱工程における反応温度よりも高められた温度、好ましくは 145〜 180°C、より好ましくは 150〜 160 °Cの温度に加熱するとともに、反応圧力を 10〜50mmHg、好ましくは 15〜2◦ mm H gの圧力に降下させてさらに脱水縮合反応を継続する。

この反応も、前記第 1加熱工程の反応の場合と同様に、反応を円滑に進行させるために副生水を留去させるが、ラクチドが留去しない条件で実施する。反応圧力を前記範囲の圧力にまで降下させる速度（降圧速度）は、ラクチドの留出を回避し、且つ反応効率を高めるためには、 0. 25〜5mmHg/分、好ましくは 0. 5~ lmmHg/分の範囲に保持することが通常は必要である。前記範囲より低い降圧速度では、その所定圧まで降圧させるのに必要な時間が長くなるため好ましくなく、一方、前記範囲より高い降圧速度では、ラクチドが副生水とともに留去するようになるので好ましくない。

反応圧力が所定圧力にまで降下後、この反応圧力において、さらに反応を継続する。この場合の加熱時間は、 3~12時間、好ましくは 5〜 6時間である。前記第 2加熱工程での反応により、平均重合度が 3〜 30、好ましくは 3〜2 3の乳酸ォリゴマーが得られるが、この場合のォリゴマ一中の環状ォリゴマーの割合は、通常、 70〜8 Owt %程度である。上記第 2加熱工程終了後、第 3加熱工程において、反応圧力を 0 . 2 5〜5 m mH g、好ましくは 0 . 5〜： I mm H gに保持し、 1 4 5〜 1 8 0 °C、好ましくは 1 5 0〜 1 6 0 °Cの温度でさらに反応を継続する。反応時間は 3〜 1 2時間、好ましくは 5〜6時間である。この場合に生じる副生水も留去させる。この場合、ラクチドの留去も回避させることが好ましいが、反応生成物にはラクチドは殆んど含まれないので、その降圧速度を格別遅くする必要はない。

前記第 3加熱工程での反応により、平均重合度 3 ~ 3 0、好ましくは 3〜 2 3 で、かつ環状ォリゴマ一の割合が 9 0重量％以上、好ましくは 9 9重量％以上の乳酸ォリゴマ一が生成される。

なお、上記方法 A、 Bおよび Cは本発明で用いるポリ乳酸混合物の製造方法の具体例の一部を示したものにすぎず、本発明においては他の方法で製造されたポリ乳酸混合物を用いることもできる。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤の形態は特に限定されず、経口投与又は非経口投与用の製剤形態の中から目的に最も適した適宜の形態のものを選択することが可能であり、好ましくは経口投与用の製剤である。

経口投与に適した製剤形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、ドリンク剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤、チユアブル剤などを挙げることができ、非経口投与に適する製剤形態としては、例えば、注射剤 (皮下注射、筋肉内注射、又は静脈内注射など)、点滴剤、吸入剤、噴霧剤、座剤、ゲル剤若しくは軟膏剤などが挙げられるが、これらに限定されることはない。経口投与に適当な液体製剤、例えば、溶液剤、乳剤、又はシロップ剤などは、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコ一ル類、ごま油、ォリーブ油、大豆油などの油類、 p —ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、ストロベリーフレーバー、ぺパ一ミントなどのフレーバー類などを用いて製造することができる。また、カプセル剤、錠剤、散剤、又は顆粒剤などの固体製剤の製造には、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニヅトなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いることができる。

非経口投与に適当な注射用又は点滴用の製剤は、好ましくは、受容者の血液と等張な滅菌水性媒体に有効成分である上記の物質を溶解又は懸濁状態で含んでいる。例えば、注射剤の場合、塩溶液、ブドウ糖溶液、又は塩水とブドウ糖溶液との混合物からなる水性媒体などを用いて溶液を調製することができる。腸内投与のための製剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪、又は水素化カルボン酸などの担体を用いて調製することができ、座剤として提供される。また、噴霧剤の製造には、有効成分である上記の物質を微細な粒子として分散させることができ、受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ有効成分の吸収を容易ならしめる担体を用いることができる。担体としては、具体的には、乳糖又はグリセリンなどが例示される。有効成分である物質及び使用する担体の性質に応じて、エアロゾル又はドライパウダーなどの形態の製剤が調製可能である。これらの非経口投与用製剤には、グリコール類、油類、フレーバー類、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される 1種又は 2種以上の補助成分を添加することもできる。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤は、栄養ドリンク剤などのドリンク剤に配合したり、食品添加物として健康食品に配合することもできる。本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤を含む製品の具体例としては、医薬品のみならず、清涼飲料、ドリンク剤、健康食品、特定保健用食品、機能性食品、機能活性型食品、栄養補助食品、サブレメント、飼料、飼料添加物などと一般に呼称される、飲料を含む健康食品または補助食品が挙げられる。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤の投与量及び投与回数は、投与目的、投与形態、投与対象の年齢、体重または健康状態、運動選手の場合には負荷される運動量などの条件などの種々の要因により適宜設定することができるが、一般的には、有効成分の投与量として一日当り 1 0〜2 0 0 O mg/kg, 好ましくは 1 0〜 2 0 O mg/kg, より好ましくは 5 0〜； L 5 O mg/kgである。上記投与量の製剤を一日 1〜 4回程度、好ましくは 2〜 4回程度に分けて投与することが好ましい。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤の投与時期は特に限定されず、例えば、運動選手の場合には運動の前、運動中又は運動後などを含む任意の時期並びに任意の期間に渡って投与することができる。

本発明の体力増進剤及びグリコーゲン蓄積促進剤は、ヒトを含む任意の動物に投与することができるが、好ましくはヒト、食用動物（例えば、養魚貝類、または豚、牛もしくは鶏などの畜産動物)、競走馬、ィヌゾリ用犬、闘犬などに投与される。

本発明はさらに、縮合度 3〜2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む補助食品にも関する。即ち、本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物はまた、上記したような単独の製剤の形態で投与されるのみならず、飲食品の中に配合して用いることができる。ポリ乳酸混合物を配合できる飲食品の具体例としては、例えば、チューインガム、チョコレート、キャンディ一、錠菓、ゼリー、クッキ一、ビスケット、ヨーグルト等の菓子類、アイスクリーム、氷菓等の冷菓類、茶、清涼飲料（ジュース、コーヒー、ココア等を含む）、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の飲料、パン、ハム、スープ、ジャム、スパゲティ一、冷凍食品など全ての飲食物を挙げることができる。あるいは、本発明で用いるポリ乳酸混合物は調味料、食品添加剤などに添加して用いることもできる。本発明の上記飲食品（補助食品）を用いることにより、体力増進効果を発揮でき、実質的に有害な副作用を示さない安全な飲食品を提供することができる。

本発明の補助食品はあらゆる形態の飲食品を包含するものであり、その種類は特に制限されず、上記したような各種飲食物、あるいは各種栄養組成物、例えば各種の経口又は経腸栄養剤や飲料等に、本発明の体力増進剤またはグリコーゲン蓄積促進剤を配合して補助食品として提供することができる。このような補助食品の組成としては、縮合度 3〜 20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の他に、蛋白質、脂質、糖質、ビタミン及び又はミネラル類などを含めることができる。補助食品の形態は特に限定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。

補助食品中におけるポリ乳酸混合物の含有量は特には限定されないが、一般的には 0. 1〜20重量％、より好ましくは 0. 1〜10重量％程度である。

補助食品に含まれるポリ乳酸混合物の量は、本発明の目的とする運動時の持久力並びに体力の向上を発揮できる程度に含まれることが好ましく、好ましくは運動前或いは運動時に摂取される飲食物 1食中に 0. 1 から 10 程度、より好ましくは 0. 5 gから 3 g程度である。

以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によつていかなる点においても限定されることはない。実施例

製造例 1 ：ポリ乳酸混合物（以下、 CP Lとも称する）の製造

マントルヒーターに収めたセパラブルフラスコに L—乳酸（D—乳酸も混入しているもの） 500mlを入れた。窒素ガス 300ml/分の流入及び撹拌を行い、溜出水は保温した下降型接続管を経て還流冷却器付フラスコに導きながら、 145 °Cで 3時間加熱した。更に 150 mm H gに減圧して同温度で 3時間加熱した後、 311111111 の減圧下155°(で3時間、最後に 3 mm H gの減圧下 18 5°Cで 1. 5時間加熱し、反応生成物であるポリ乳酸を得た。

得られたポリ乳酸は 100°Cに保ち、エタノール 100mlに続いてメタノ一ル 400mlをそれそれ加えた後放冷した。これをメタノール 500ml中に加え、よく撹拌して静置した後濾過して精製した。その濾液を減圧乾燥してァセト二トリルに溶解し、全量を 200ml (原液）とした。

この原液を、予め平衡化した逆相 OD Sカラム（TSK ge l ODS— 80TM) にかけ、 0. 01M塩酸を含む 30%、 50%および 100%ァセトニトリル（p H 2. 0) でステップワイズに溶離し、ァセトニトリル 100 %溶出画分であるポリ乳酸（縮合度 3〜20) を得た。得られた物質の質量スぺクトルを図 14に示す。図 14中の規則的なフラグメントイオンピークから明らかなように、得られたポリ乳酸の混合物は、環状縮合体を主体とし、直鎖状縮合体が少量混在した状態になっている。

試験例 1 ：

(試験方法）

試験の実施方法を図 1に示す。。？投与群（11= 10) と対照群（n= 10) に分け、夏期合宿期間（60日）とその後 30日間を中心に、トレーニング量、体重変化、血液検査、血清脂質分析 '定量、 NK細胞数、 plasma particle images について検討した。

C PL投与群では、 1日当たり 10 gの量の CP Lを 60日間に渡り摂取させた。

(結果）

1. トレーニング量に対する対照群並びに CP L投与群の体重変化

最初の 3週間におけるときのトレーニング量（kg/日）と各群の体重変化を図 2に示した。対照群に比べ、 C PL投与群では平均的な体重減少が少なく、特に合宿後半にその傾向が強く認められた。

2. 体重の日内変動における差

トレーニング量の多い曰（30〜40km) について、体重の曰内変化を図 3 に示した。早朝、朝練習後、本練習前、本練習後、夕食前、翌日と 6回に渡る体重測定では、その日の練習の影響が認められる。しかし、合宿最後になると、 C P L投与群と対照群との間に差が認められるようになった。対照群では体重の回復が翌日まで遅延するが、 C PL投与群では、体重回復が早いことが分かる。この結果から、 CP Lを投与することによりトレーニングに対する耐久性が強く出現していることが分かる。 3 . 血液検査結果

最初の 3週間にわたるトレーニング前後の血液検査結果を表 1に示す。トレーニング前後での血液検査結果には、何れの測定値においても有意な差は認められなかった。

CK GOT 6PT LDH T-ch TG HDL BS Fe

Control

B.T. 232i103 29.819.1 24^1119 213i 3 · 168i34 60*20 76i17 85i6 104i35 A.T. .2201111 3X9*92 3l1l1i5 215*48 179*15 115*45 72l8 85i7 10O-24

CPし

B.T. 188*120 26.915^ 19.7i33 204i42 175l25 65*25 72i11 85±5 97+26 A.丁. 240*191 38. i20.7 36.8230^ 216i31 193*22 109ίθ0 7H12 87i5 136i41 BC RBC _ Hgb Hct MCY CH MCHC Pit

Control

IT. 5t9i10.0 478.9138.8 1i2il1 4. 3.0 93.8ί3.5 318ί12 33.910.5 16.8ί3.1 A.T. 59-01113 «9.0*36.4 15.0 1 '45.4tl0 ;92Βί3.1 30.8H4 33.1iOi 18ϋ3.6

CPL

5&9i8.8 4β0.0ί317 1i2iOi 9 6 4.3 317ί11 33.8ί05 ,17.4123 ん T. 63.913.8 mit 1i2iOi 45iil2 93.0l3.1 30.9il0 33J10.5 ,19.5*25

表 1 3週間にわたるトレーニング前後の血液検査結果

4. Plasma lipidに対する影響

合宿 30日後の plasmalipidの結果を図 4に示した。 C P L投与群では plasma FFAが極めて高まり、 plasmaCE、並びに総リン脂質（TPL)にも増加が起きた。しかし、 plasmaTGには増加はなかった。

5. 赤血球脂質の変化

合宿期間終了 1力月ごとに赤血球脂質を分析 '定量した（図 5)。 1mlの赤血球脂質として表示したが、 PE (ホスファチジルエタノールァミン）、 PC (ホスファチジルコリン）、 PS (ホスファチジルセリン）について、それそれ CP L投与群での脂肪酸組成率の有意な変化が認められた。量的に多い P Cではリノール酸の増加があった。

6. Plasma particle image

AL TR A-E P I C Sを用いて、 plasma particle imageを作成した（図 6)。典型的例では、 C P L投与群の plasmaには小さな particleが多く出現していることが分かる。この結果を図 7にまとめた。統計学的にも CPL投与により全体的に plasma particleが小さくなつていることが分かる。

7. NK細胞

AL T A-EP I C Sを用いて、 CD 56による NK細胞（％) を表示した。図 8はその結果を示す。 CP L投与により、 NK細胞の有意な増加が認められた。

8. 10000 m走の記録の更新

合宿 2力月後に 10000m走の記録会を実施した。トレーニングに耐える身体とともに、持久性能力の向上をテストする方法である。

対照群では 10名中の 3名が記録を更新したのに対して、 CP L投与群では 9 名中の 6名が記録を更新した。 C PL投与群では対照群に比べ、約 2倍の記録更新者が出現した。

9. まとめ

上記結果をまとめると以下の通りである。

( 1) C PL投与群では体重減少が少なく、体重回復も速い。

(2) C PL投与群では plasma lipidsの plasma CE、 FFA、 TPLに有意な増加が認められた。

(3) 赤血球脂質では PE (ホスファチジルエタノールァミン）に増加が認められた。

(4) Plasma particle imageには有意な変化が生じていた。

(5) CD 56による NK細胞は CP L投与により増加が生じていた。

(6 ) 10, 000m走記録の更新では、 CPL投与群で 2倍となった。

これらの結果から、 C PL投与は単に体重、脂肪組織に限定されず、生体全体のストレス対応システムに影響しているものと考えられる。また、 CPL投与によりトレーニングに対する耐久性が増大することから、補助食品等として有用である。試験例 2 ：

(方法）

対象は、健常な成人男子 3名（平均年齢 45歳）とした。運動負荷強度は、血中乳酸濃度 4mMレベルを指標とした持久的運動を用いた。この 4mMレベルの負荷強度を求める方法は、トレッドミル（傾斜角を 8%に固定）を用い、 4〜5 種類の異なつた速度を各個人の運動能力に応じて選び、低速度からそれそれ 6分間のランニングを行わせた。各運動の間には、 6分間の休息時間を入れた。血中乳酸濃度は、各 6分間の運動終了直後に指先から微量の採血を行って測定した。血中乳酸 4mMレベルの判定は、トレッドミル速度に対して血中乳酸濃度をプロットして、乳酸濃度が 4mmo 1/1に相当する速度を内挿法にて算出した。本試験では、この 4mMレベルに相当するトレッドミル速度で 20分間の持久走を C PL投与 12日、 20日および 40日後にそれそれ負荷して、その時のエネルギー代謝の変動を比較検討した。運動時の環境条件は、気圧 760mmHg、室温 20°C、相対湿度 55%に保持するように環境制御を行った。なお、 CPLの 1日投与量は 10 とした。

測定項目および測定方法は、血中乳酸濃度がグルコース ·ラクテートアナライザ一 2300 STAT (YS I社）、エネルギー代謝量がテレメトリ一式呼吸代謝計測装置 K 4 (Cosmed社）をそれそれ用いて求めた。

(結果）

各投与条件下での運動中および回復期（10分間）におけるエネルギー消費量の経時的変化（図 9) は、運動中、 C PL投与 40日後が CPL投与 12日および 20日後に比較して低値を示していた。なお、運動中の全エネルギー消費量は、 CP L投与 12日後が 300kcal、投与 20日後が 306kcal、投与 4 0日後が 286 k c a 1であった。

図 10に示した各条件下での運動中および回復期における呼吸商の経時的変化は、運動中および回復期とも投与 40日後が投与 12日および投与 20日後に比して、高値を維持していた。呼吸商より推定した脂肪および糖質からのエネルギ —消費量は、運動中、投与 12日後で脂肪が 188 k c a 1、糖質が 112 k c a 1、投与 20日後で脂肪が 172 k c a 1、糖質が 135kcalとなり、さらに、投与 40日後では脂肪のエネルギー消費量が 66 kc a 1に低下したのに対して、糖質が 220 k c a 1に上昇した。

上記した通り、試験例 2では、運動中、 CPL投与 12日および 20日後の呼吸商と比較して、 CP L投与 40日後では顕著な呼吸商の上昇が見られた。これらの結果は、運動習慣を有していないヒトでは長期間、 CP L投与を継続すると、運動のエネルギーが主として糖代謝に依存してくる可能性を示唆している。試験例 3 ：

(方法）対象は、主に糖代謝が中心の競技で、日常、激しいトレーニングを行っている競艇選手 3名（平均年齢 19歳）とした。運動負荷方法は、 CPL投与前、 CP L投与 14日および 30日後にローイングエルゴメ一夕一を用い、試験例 2と同様に、血中乳酸濃度を指標とした運動を 20分間に渡り行い、その後、 10分間の休息を挟み、 1000mタイムトライアルを負荷して、エネルギー代謝及びパフォーマンステストを比較検討した（エネルギー代謝に関しては、 CPL投与前と投与 14日後の比較）。なお、 CP Lの 1日投与量は 6 gとした。

(結果）

図 1 1に示した血中乳酸濃度を指標とした運動時（20分間）の全エネルギー消費量、糖質および脂肪からのエネルギー消費量は、 C PL投与前および投与 1 4日後のいずれもほぼ同値であった。次に、休息後の 100 Omタイムトライァルは、投与前が 3分 26秒 5であったのに対して、投与 14日後で 3分 23秒 6、さらに、投与 30日では 3分 20秒 7と顕著な短縮が認められた。タイムトライアル後の血中乳酸濃度（図 12) は、 CPL投与 14日および 30曰後のいずれも投与前に比して、高値を示した。図 13に示した全エネルギー消費量は、 CP L投与 14日後（67 k c a 1) では投与前（78 k c a 1) に比較して、低値が認められた。

上記した通り、糖代謝が中心の競技で、日常、激しいトレーニングを行っているスポーツ選手では、 C PL投与により糖質の嫌気性および好気性代謝を改善させながら、より効率的なエネルギー利用が行われ、パフォーマンスを向上できる可能性が示唆される。製造例 2

窒素雰囲気下、 5 Omlの二口ナス型フラスコに 0. 033 g ( l . 03 mm o 1) のメタノールを溶かした THF溶液（2ml) を加え、ァセトンバスで一 78°Cまで冷却し、 0. 64ml ( 1. O Ommo l) の n—ブチルリチウムを加え 15分攪拌した。さらに 0. 576 g (4. O Ommo l) の（3R, 6 R) 一（+ ) —3, 6—ジメチルー 1 , 4—ジォキサン一 2, 5—ジオンを溶かした THF溶液（2ml) を加え攪拌し、室温まで 4時間かけて徐々に昇温した。攪拌終了後、窒素雰囲気を保ちながら飽和塩化アンモニゥムを 2 ml加え、さらに水 10mlを加えた。その後クロ口ホルムと飽和食塩水で抽出、洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加え、一晩乾燥した。これを減圧濃縮し、真空ポンプで溶媒を完全に除去した。その結果、生成物を 0. 55 l g (回収率 90. 5%)、環状オリゴ乳酸と鎖状オリゴマーの重量比率が 84 ： 16で得た。製造例 3

窒素雰囲気下、 50mlの二口ナス型フラスコに 0. 054 g ( l . 17 mm o 1) のエタノールを溶かした THF溶液（2ml) を加え、ァセトンバスで一 78°Cまで冷却し、 0. 64ml ( 1. 00 mm o 1 ) の n—ブチルリチウムを加え 15分攪拌した。さらに 0. 576 g (4. O Ommo l) の（3R， 6R) - (+ ) —3, 6—ジメチル一 1, 4—ジォキサン一 2， 5—ジオンを溶かした THF溶液（2ml) を加え 30分攪拌した。

攪拌終了後、窒素雰囲気を保ちながら飽和塩化アンモニゥムを 2 ml加え、さらに水 10mlを加えてァセトンバスをはずし室温に戻した。その後エーテル 2 0mlで 8回抽出し、エーテル層を飽和食塩水 30mlで洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加え、 1時間攪拌乾燥した。これを減圧濃縮し、真空ポンプで溶媒を完全に除去した。その結果、生成物として 0. 535 g (回収率 84. 9)、環状ォリゴ乳酸と鎖状オリゴマーの重量比率が 82 ： 18で得た。製造例 4

窒素雰囲気下、 50mlの二口ナス型フラスコに 0. 062 g ( l . 03 mm o 1) の 2—プロパノールを溶かした THF溶液（2ml) を加え、アセトンバスで— 78 °Cまで冷却し、 0. 64ml ( 1. 00 mm o 1 ) の n—ブチルリチゥムを加え 15分攪拌した。さらに 0. 576 g (4. 0 01111110 1)の（31 ， 6 R) - ( + ) - 3 , 6—ジメチル一 1， 4—ジォキサン一 2， 5—ジオンを溶かした THF溶液（2 ml) を加えて攪拌し、室温まで 4時間かけて徐々に昇温した。

攪拌終了後、窒素雰囲気を保ちながら飽和塩化アンモニゥムを 2 ml加え、さらに水 10mlを加えた。その後クロ口ホルムと飽和食塩水で抽出、洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加え、一晩乾燥した。これを減圧濃縮し、真空ポンプで溶媒を完全に除去した。その結果、生成物として 0. 589 g (回収率 92. 3%)、環状ォリゴ乳酸と鎖状ォリゴマ一の重量比率が 80 : 20で得た。製造例 5

窒素雰囲気下、 25mlの二口ナス型フラスコに 0. 074 g ( 1. 00 mm o 1) の t e r t—プ夕ノールを溶かした THF溶液（2ml) を加え、ァセトンバスで一 78°Cまで冷却し、 0. 64ml ( 1. 00 mm o 1 ) の n—ブチルリチウムを加え加え 15分攪拌した。さらに 0. 434 g (3. 0 lmmo 1) の（3R， 6 R) - ( + ) - 3 , 6—ジメチル一 1， 4—ジォキサン一 2, 5— ジオンを溶かした THF溶液（2ml) を加え攪拌し、室温まで 2. 5時間かけて徐々に昇温した。

攪拌終了後、窒素雰囲気を保ちながら飽和塩化アンモニゥムを 2 ml加え、さらに水 10mlを加えた。その後、クロ口ホルムと飽和食塩水で抽出、洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加え、一晩乾燥した。これを減圧濃縮し、真空ポンプで溶媒を完全に除去した。その結果、全ての不斉炭素が R配置を有する環状オリゴ乳酸が 0. 537 g (回収率 82. 5 %), [a]=+ 125. 1°、 mp = 132. 5 〜 133. 4°Cで得た。製造例 6

窒素雰囲気下、 50mlの二口ナス型フラスコに 0 · 1 17 g ( l . 06 mm o 1) のチオフエノ一ルを溶かした THF溶液（2ml) を加え、アセトンバスで—78°Cまで冷却し、 0. 64ml ( 1. 00 mm o 1 ) の n—ブチルリチウムを加え 1 5分問攪拌した。さらに 0. 576 g (4. 0011111101)の（31 ， 6 R) - ( + ) — 3, 6—ジメチル一 1， 4一ジォキサン _ 2， 5—ジオンを溶かした THF溶液（2ml) を加え攪拌し、 4時間かけて室温まで徐々に昇温した。

攪拌終了後、窒素雰囲気を保ちながら飽和塩化アンモニゥムを 2ml加え、さらに水 1 0 mlを加えた。その後クロ口ホルムと飽和食塩水で抽出、洗浄し、無水硫酸ナトリウムを加え、一度乾燥した。これを減圧濃縮し、真空ポンプで溶媒を完全に除去した。その結果、生成物を 0. 6 1 2 （回収率88. 3%)、 NM Rの解析により環状オリゴ乳酸と鎖状オリゴマーが 96 ： 4の重量比率で得た。生成物のうち 0. 238 gをシリカゲルクロマトグラフィー（溶媒；へキサン：エーテル = 1 : 2) を用いて単離精製を行い 5つの留分（f r a c t i o n N 0. 10— 1〜 10— 5) を得た。製造例 7

窒素雰囲気下、室温で 50m 1の二口ナス型フラスコに S— （一） —乳酸アミド 0. 089 g ( lmmo 1) の THF 3ml溶液を加え、 — 78°Cで n_プチルリチウム 0. 64ml ( 1. 00mmo l)を作用させ 1 5分間かき混ぜた後、 L- (一） —ラクチド 0. 576 g (4 mm o l) の THF 2 ml溶液を加え 3 0分間反応させ、一 78°Cから 0°Cまで昇温して 1. 5時間反応させた。次いで、飽和塩化アンモニゥム水溶液を 5 m 1加え室温に戻した後、クロ口ホルム抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮し（NM R s a 0 140)、残さをシリカゲルクロマトグラフィー（溶媒；エーテル：へキサン =2 ： 1) により 3つに分離した。試験例 4

( 1 ) 実験方法ウィスター系ラット（体重 150 g、雄）を A、 B、 Cの 3群（各群 6匹）に分けた。 A群には CE— 2標準固形食（日本クレア（株）製）を与え、 B， C群にはグリコーゲン蓄積促進剤を含む特別食を与えた。飲料水は自由摂取させた。 C群は、飼育開始後 1週間は 1日 10分の水泳を毎日、次の 1週間は 1日 20分の水泳を毎日、それ以後は 1日 30分の水泳を毎日行なわせた。

グリコーゲン蓄積促進剤を含む特別食は日本クレァ社に委託して作製したが、グリコーゲン蓄積促進剤（製造例 2で得たもの）を 1重量％含む点を除けば、それ以外の全ての栄養成分は C E 2標準固形食と同じである。

飼育開始後 32日で半日間の絶食の後、全ての動物をエーテル麻酔で安楽死させ、脱血後筋肉を取り出し、含まれているグリコーゲン量を定量分析した。実験結果は平均値士標準偏差で表示し、有意検定には Studentの t—検定を用いた。 ( 2 ) 実験結果

得られた結果を以下の表 2に示す。表 2 ：筋肉グリコーゲン量に対するグリコ一ゲン蓄積促進剤の影響群（n) グリコーゲン量（mg/ff組織湿重量）

ヒラメ筋足底筋

A (n=6) 1·72±0.47 5.28±0.74

B (n= 6) 2.09±0.38

C し n=6)_ 7.08±1.38²)' ³)

1) 群 Aに比べて有意差有り（P<0. 05)。

2) 群 Aに比べて有意差有り（P<0. 01)。

3) 群 Bに比べて有意差有り（P<0. 05)。表 2の結果から明らかなように、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤を含む特別食で飼育することによって足底筋のグリコーゲン含有量が有意に増大（P< 0. 05) した。特別食による飼育と水泳とを併用させるとヒラメ筋及び足底筋のグリコーゲン含有量が共に有意に増大（P<0. 05、 P<0. 01) した。試験例 5

( 1 ) 実験方法

I CR系マウス（体重 10 g、雄）を D、 Eの 2群（各群 6匹）に分けた。 D 群には C E— 2標準固形食を与え、 E群にはグリコーゲン蓄積促進剤を含む特別食（試験例 4で用いたものと同じもの）を与えた。飲料水は自由摂取させた。飼育開始後 14日で動物をエーテル麻酔下に安楽死させ、脱血後肝臓を取り出し、含まれているグリコーゲン量を定量分析した。実験結果は平均値土標準偏差で表示し、有意検定には Studentの t—検定を用いた。

( 2 ) 実験結果

得られた結果を以下の表 3に示す。表 3 ：肝臓グリコ一ゲン量に対するグリコ一ゲン蓄積促進剤の影響群（n) 肝臓グリコーゲン量（mg/s組織湿重量）

D (n= 6 ) 24.9±11·2

Ε (η= 6 ) 65.7±7.19^η

1) 群 Dに比べて有意差有り（Ρ<0. 001) 表 3の結果から明らかなように、マウス肝臓のグリコーゲン蓄積量が有意に増大（Ρ< 0. 001) していた。

(実験結果の評価）

試験例 4及び試験例 5の結果から、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤を含む特別食で飼育することにより肝臓や筋肉のグリコ一ゲン蓄積量が増し、運動を併用することにより筋肉のグリコーゲン含有量がさらに増大した。顎歯類に属するラットとマウスという種の異なる 2種類の動物において本発明のグリコーゲン蓄積促進剤がグリコーゲンの蓄積を有意に促進したことから、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤の摂取によって、ヒ卜においても筋肉及び肝臓のグリコーゲン促進量を増大させると期待できる。産業上の利用の可倉性

本発明の体力増進剤は、例えば、運動選手の持久力の維持又は向上のために使用したり、疲労回復のために使用することができる。本発明の体力増進剤を運動選手に投与することによりトレーニングに対する耐久性が増大することから、本発明の体力増進剤は、例えば、競技力の向上のための補助的な手段として有効である。また、本発明のグリコーゲン蓄積促進剤は、疲労回復、筋肉の運動能力の増進または患者用の Q O L改善のために有用であり、あるいは肉質改善のためにも有用であり、これらの目的に対して優れた効果を発揮できる。さらに、本発明において有効成分として用いられるポリ乳酸混合物は、生体成分に由来する乳酸の低縮合体であることから、生体適合性が高く、副作用が少なく、また原料が比較的安価であるという利点を有する。

Claims

請求の範囲

1 . 縮合度 3〜 2 0の環状及びノ又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む体力増進剤。

2 . 運動選手の持久力の維持又は向上のために使用する、請求項 1に記載の体力増進剤。

3 . 疲労回復のために使用する、請求項 1に記載の体力増進剤。

4 . 縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が、下記一般式 ( 1 )：

(式中、 nは 3〜2 0の整数を示す）

で表される環状乳酸ォリゴマーを含む、請求項 1から 3のいずれか 1項に記載の体力増進剤。

5 . ポリ乳酸中における反復単位である乳酸が実質的に L -乳酸から成る、請求項 1から 4の何れか 1項に記載の体力増進剤。

6 . 縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のェタノールおよびメ夕ノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ一に付し、 p H 2〜3の 2 5〜5 0重量％のァセトニトリル水溶液で溶離後、 p H 2〜3の 9 0重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である、請求項 1から 5の何れか 1項に記載の体力増進剤。

7 . 脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行う、請求項 6に記載の体力増進剤。

8 . 逆相カラムクロマトグラフィーを、〇D Sカラムクロマトグラフィーにより行う請求項 6又は 7に記載の体力増進剤。

9. 縮合度 3〜20の鎖状乳酸オリゴマーを実質的に含まない、請求項 1から 8の何れか 1項に記載の体力増進剤。

10. 請求項 1から 9の何れかに記載の体力増進剤を含む補助食品。

1 1. 縮合度 3〜20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含むグリコ一

12. 疲労回復、筋肉の運動能力の増進または患者の QOL改善に用いるための、請求項 1 1に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

13. 肉質改善に用いるための、請求項 1 1に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

14. 縮合度 3〜 20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が、下記一般式 ( 1)：

(式中、 nは 3〜20の整数を示す）

で表される環状乳酸オリゴマーを含む、請求項 1 1から 13の何れか 1項に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

15. ポリ乳酸中における反復単位である乳酸が実質的に L—乳酸から成る、請求項 1 1から 14の何れか 1項に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

16. 縮合度 3〜 20の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールぉよびメ夕ノ一ル可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ一に付し、 pH2~3の 25〜50重量％のァセトニトリル水溶液で溶離後、 pH2~3の 90重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である、請求項 1から 15の何れか 1項に記載のグリコーゲン

17. 脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行う、請求項 16に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

18. 逆相カラムクロマトグラフィーを、 OD Sカラムクロマトグラフィーにより行う請求項 16又は 17に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

19. 縮合度 3〜20の鎖状乳酸オリゴマーを実質的に含まない、請求項 1 1 から 18の何れか 1項に記載のグリコーゲン蓄積促進剤。

20. 請求項 1 1から 19の何れかに記載のグリコーゲン蓄積促進剤を含む健康食品または補助食品。