JP7022956B2 - イノシン酸を有効成分としたグリコーゲン蓄積促進用組成物 - Google Patents
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これまで,イノシン酸とグリコーゲンの関連性については,十分に解明されていなかった。
しかるに先行技術は,ウコギ科トチバニンジン属植物という比較的特殊な植物を用いるものであり,また,植物の酸処理などが必要な点において,加工を行うにも煩雑である。
本発明の第一の構成は,イノシン酸を有効成分として,筋グリコーゲン蓄積を促進することを特徴とするグリコーゲン蓄積促進用組成物である。
本発明の第二の構成は,前記グリコーゲン蓄積促進用組成物が,薬剤,サプリメント,食品,飲料として形成されていることを特徴とする第一の構成に記載のグリコーゲン蓄積促進用組成物である。
本発明の第三の構成は,イノシン酸を摂取することにより,筋グリコーゲン蓄積を促進することを特徴とする筋グリコーゲン蓄積促進方法である。
すなわち,イノシン酸は,鰹節等に含まれるうまみ成分として身近なものであり,これを利用するなどにより,イノシン酸を有効成分としたグリコーゲン蓄積促進用組成物の提供が可能となる。
(1) 筋芽細胞から筋管細胞への分化誘導において,イノシン酸は,筋管細胞への走行性を良好なものとするとともに,細胞数を増加させる。
(2) イノシン酸は,筋管細胞1個あたりのタンパク量には影響を及ぼさず,単位細胞あたりもしくは単位タンパク量あたりのグリコーゲン量を,有意に増加させる。
(3) さらにイノシン酸は,筋管細胞のミトコンドリア機能を高める可能性を有する。
(4) イノシン酸によるグリコーゲン蓄積促進効果は,インビボにおいても確認された。
本発明により,筋組織におけるグリコーゲン蓄積を促進することが可能となる。さらには,筋管細胞の走行性を良好なものとするとともに,細胞数を増加させることから,運動機能を向上させる効果が期待できる。
本発明のグリコーゲン蓄積促進用組成物は,好適には,健康飲料(スポーツドリンク)や健康食品として用いることができる。すなわち,持久力を必要とするスポーツにおいて,イノシン酸を有効成分として含む健康飲料や健康食品を事前に摂取することにより,カーボローディングをより効率良く行うことが可能であり,記録の向上などが期待できる。
すなわち,本発明の趣旨に鑑み,ヒト体内に摂取された際,生体内における代謝を受けてイノシン酸に変換される,いわゆるDDS化されたイノシン酸を含むものとして本発明においては定義されるものである。
マウス筋芽細胞(以下,「C2C12細胞」)は,培地中の血清濃度を下げると,筋管細胞への分化が誘導されることが知られている。ここでは,C2C12細胞の分化誘導にあたり,各種血清を用いるとともに,インスリン添加による分化誘導への影響を調べることを目的に検討を行った。
1.C2C12細胞について,ウシ胎児血清(FBS)もしくはウマ胎児血清(HS)をそれぞれ2%加えたDMEM培地中で筋管細胞への分化を誘導し,筋管細胞の様子を調べた。
2.同様に,2%ウマ胎児血清ならびにインスリン(50nM)存在下における筋管細胞の様子を調べた。
1.分化誘導4日目の細胞の様子を示した結果を図1に示す。
2.いずれの血清を用いた場合もC2C12細胞から筋管細胞への分化誘導は可能であったが(a,b),HSの方が分化効率の点において優れていた。
3.また,HSに加えて,インスリンを合わせて用いることにより,筋管細胞の走行性がより優れることが分かった(c)。
4.これらの検討から,以降の検討では,2% HSと50nM インスリンを含んだDMEM培地(以降,「検討培地」)を用いることとした。
C2C12細胞から筋管細胞への分化誘導において,イノシン酸がどのような影響を及ぼすかを調べることを目的に検討を行った。
検討培地に,各種濃度のイノシン酸を加えたうえで,C2C12細胞から筋管細胞への分化誘導を行い,筋管細胞の様子やグリコーゲン量,タンパク量を調べた。
1.分化誘導4日目の筋管細胞の様子を示した結果を図2に示す。
2.イノシン酸なし(d)と比較して,イノシン酸を添加した方(e,f,g)が,筋管細胞の走行性を,より良好なものとすることが分かった。
4.分化誘導開始以降,イノシン酸添加により,細胞数は,イノシン酸なしと比較して,より増加していた。
5.これより,イノシン酸添加により,細胞数が増加することが分かった。
7.分化誘導4日目,7日目,いずれにおいても,筋管細胞1個あたりのタンパク量は,イノシン酸の添加により,有意な差はなかった。
8.これより,イノシン酸添加は,細胞へのタンパク量には影響を及ぼさないことが分かった。
10.分化誘導4日目,7日目,いずれにおいても細胞1個あたりのグリコーゲン量は,イノシン酸添加群の方が,有意に増加していた。
11.また,タンパク1μgあたりのグリコーゲン量を調べた結果を図6に示す。
12.分化誘導4日目,7日目,いずれにおいてもタンパク1μgあたりのグリコーゲン量は,イノシン酸添加群の方が,有意に増加していた。
13.これらの結果から,イノシン酸添加により,筋管細胞内のグリコーゲン量が,有意に増加することが分かった。
実験2の結果を踏まえ,検討培地に含まれるインスリンの影響を確認することを目的に検討を行った。
2%HS-DMEM培地に各濃度のインスリンもしくはイノシン酸を添加したうえで,C2C12細胞から筋管細胞への分化誘導を行い,筋管細胞の様子やグリコーゲン量,タンパク量を調べた。
1.インスリンのタンパク発現への影響を調べた結果を図7に示す。
2.インスリンの濃度を10nM,50nMと変化させても,単位細胞あたりのタンパク量は,インスリンを添加しない場合と比較して,変化はなかった。
3.これより,インスリン添加によるタンパク量への影響がないことが確認された。
5.図8において,インスリンの濃度を10nM,50nMと変化させても,単位細胞あたりのグリコーゲン量は,インスリンを添加しない場合と比較して,変化はなかった。
6.また,図9において,インスリンの濃度を10nM,50nMと変化させても,単位タンパク量あたりのグリコーゲン量は,インスリンを添加しない場合と比較して,変化はなかった。
7.これらの結果から,インスリン添加によるグリコーゲン量への影響がないことが確認された。
ミトコンドリア機能の指標である酸素消費速度(OCR)を調べ,イノシン酸が細胞機能に及ぼす影響を調べることを目的に検討を行った。
イノシン酸を各濃度添加し,実験2の方法に準じて検討を行った。OCRについては,分化誘導4日目に,細胞外フラックスアナライザーを用いて測定を行った。
1.結果を図10に示す。
2.イノシン酸を添加しない場合と比較して,イノシン酸を添加した方がOCRの値が高い傾向にあった。
3.これより,イノシン酸添加は,筋管細胞のミトコンドリア機能を向上させる可能性があることが分かった。
インビトロにおいて,C2C12細胞で観察されたイノシン酸添加によるグリコーゲン蓄積促進効果が,インビボでみられるかを調べることを目的に検討を行った。
1.被験動物として,C57BL/6Jマウス(4週齢,雄性20匹)を用いた。これらを下記の4群に分けた。
実験例1;自発運動なし,イノシン酸なし
実験例2;自発運動なし,イノシン酸あり
実験例3;自発運動あり,イノシン酸なし
実験例4;自発運動あり,イノシン酸あり
2.被験動物を,下記に従い,グリコーゲン量の測定を行った。
(1) 1週間の予備飼育後,自発運動なしの群と自発運動ありの群に分類した。自発運動ありの群には,3週間の自発運動(回転ホイールを飼育ゲージに設置)を実施した。
(2) 3週間後,4群すべてを,回転ホイールのない飼育ゲージへ移行した。その際,イノシン酸が体重1gあたり0.2mgとなるように調整したイノシン酸溶液,あるいは生理食塩水を腹腔内投与した。その後は24時間ごとに投与し,投与は合計3回,行った。
(3) 3回目のイノシン酸溶液あるいは生理食塩水の投与24時間後に解剖を行い,骨格筋(足底筋)を採取し,骨格筋のグリコーゲン量を測定した。
1.結果を,図11に示す。図中,各実験例のカッコ書きは,イノシン酸投与の有無を示す。
(1) マウス足底筋のグリコーゲン量は,コントロールである実験例2と比較して,実験例4において,有意な増加を示した。
(2) なお,自発運動が無い場合は,イノシン酸の有無によって有意な差は確認できなかった。
2.この結果から,イノシン酸を有効成分とするグリコーゲン蓄積促進作用は,自発運動を課したマウスの骨格筋において認められた。
これらの結果より,下記の知見が得られた。
(1) 筋芽細胞から筋管細胞への分化誘導において,イノシン酸は,筋管細胞への走行性を良好なものとするとともに,細胞数を増加させる。
(2) イノシン酸は,筋管細胞1個あたりのタンパク量には影響を及ぼさず,単位細胞あたりもしくは単位タンパク量あたりのグリコーゲン量を,有意に増加させる。
(3) イノシン酸は,筋管細胞のミトコンドリア機能を高める可能性を有する。
(4) イノシン酸によるグリコーゲン蓄積促進効果は,インビボにおいても確認された。
Claims (1)
- イノシン酸のみからなるグリコーゲン蓄積促進剤又はグリコーゲン蓄積促進サプリメント。
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調理科学,1969年,Vol.2, No.4,p.231-237 |
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JP2018203713A (ja) | 2018-12-27 |
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