WO2001001978A1

WO2001001978A1 - Compositions de medicaments servant a prevenir ou a traiter la myocardite virale

Info

Publication number: WO2001001978A1
Application number: PCT/JP2000/004286
Authority: WO
Inventors: Akira Matsumori
Original assignee: Mitsubishi Pharma Corporation
Priority date: 1999-06-30
Filing date: 2000-06-28
Publication date: 2001-01-11
Also published as: DE60030732D1; JP2001072585A; CN1162149C; EP1201236B1; DE60030732T2; KR20020016860A; ES2272293T3; CA2373833A1; EP1201236A4; JP4627356B2; ATE339198T1; EP1201236A1; CA2373833C; AU770495B2; US7902261B2; CN1359290A; KR100655251B1; EP1201236A8; US20050234133A1; AU5570300A

Description

明細書

ゥィルス性心筋炎の予防または治療用医薬組成物

技術分野

本発明は、 2—アミノー 2— ( 2 - ( 4一才クチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するウィルス性心筋炎またはウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用医薬組成物、更にはウィルス性の細胞傷害の改善または予防用医薬組成物に関する。本発明はまた、 2—ァミノ— 2— ( 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性心筋炎またはウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療方法に関する。本発明はさらに、ウィルス性心筋炎またはウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用医薬を製造するための 2—ァミノ一 2— ( 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 ， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の使用に関する。

景技你丁

従来、ウィルス性疾患の予防にはウィルスワクチンが主として用いられているが、ワクチンは各々のウィルスに特異的なもので個々のウィルスに対してのみ有効である。しかし、ウィルスの種類は多く、現在、極めて限られたウィルスに対してのみ実用化されている。また、ウィルスは変異株が多く、同一のウィルスに対してもワクチンが有効でないことも多い。さらに副作用の少ないワクチンを数多く閧発することは極めて困難である。

一方、種々の抗ウィルス剤（ァシクロビル、ガンシクロビル、ァラ Αなど）も開発され、実用化されているが、極めて限られたウィルス感染症にのみ有効で、広範なウィルス性疾患に有効な薬剤は見当たっていない。また、これらの抗ウイルス剤は副作用が強く、広く臨床に用いることは困難である。近年、イン夕一フ工ロンがウイルス性肝炎等の治療に応用されているが、発熱などの副作用が高頻度に出現している。また、インターフェロンはウィルスの増殖を抑制するが、細胞傷害を直接防御するとの報告はみられない。ガンマグロブリンは、広くウィルス性疾患の治療に用いられているが、その成績は必ずしも一定ではない。

2—ァミノ一 2— ( 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3 —ジオール '塩酸塩を含む 2—ァミノプロパン— 1， 3—ジオール化合物は、臓器または骨髄移植における拒絶反応の抑制剤として、また乾癬、ベーチェット病などの様々な自己免疫疾患およびリゥマチ疾患の治療薬であることが知られている（国際公開 W O 9 4 / 0 8 9 4 3号）。

しかし、先行技術には、 2—ァミノプロパン— 1， 3 —ジオール化合物が、ゥィルス性疾患の治療に有効であるとの記載はされていない。

発明の開示

前述のように、ウィルスには数多くの種類があり、各ウィルスに対する特異的な治療を行うのは困難である。従って、多くのウィルス性疾患において発生する種々の臓器における細胞傷害を予防または治療することが極めて重要である。ゥィルス性疾患における細胞傷害はウィルスの増殖による直接的な傷害のほか、ゥィルス感染によって引き起こされる種々の免疫反応が関与すると考えられている本発明は、ウィルスの種類にかかわらず種々の臓器における細胞傷害の発症予防および治療を行うことによりウィルス性心筋炎およびウィルス性心筋炎により惹起されるウイルス性疾患の予防または治療を行おうとするものである。

本発明者は、上記課題を解決するために、ウィルス性心筋炎またはウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療薬剤について鋭意研究を重ねてきたところ、意外にも 2—ァミノ一 2 _ ( 2— ( 4 —ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 , 3 —ジオールまたはその薬理学的に許容される塩が有効であることを見いだし、本発明を完成した。

即ち、本発明は以下のとおりである。

① 2—アミノー 2— ( 2— （ 4 —ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性心筋炎の予防または治療用医薬組成物。

② 2—ァミノ一 2— ( 2— ( 4—ォクチルフヱニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性心筋炎により惹起されるウイルス性疾患の予防または治療用医薬組成物。

③ 2—ァミノ一 2— （2— （ 4—ォクチルフヱニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性の細胞傷害の改善または予防用医薬組成物。

④ 有効量の 2—ァミノ— 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエ二ル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性心筋炎の予防または治療方法。

⑤ 有効量の 2—ァミノ— 2 _ ( 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療方法。

⑥ 有効量の 2—ァミノ— 2— （2 — （4—ォクチルフヱニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性の細胞傷害の改善または予防方法。

⑦ ウィルス性心筋炎の予防または治療用医薬を製造するための 2—ァミノ一 2— （ 2— ( 4—才クチルフエニル）ェチル）プロパン— 1， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

⑧ ウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用医薬を製造するための 2—ァミノ— 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

⑨ ウィルス性の細胞傷害の改善または予防用医薬を製造するための 2—アミノ一 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

⑩ ①記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性心筋炎の予防または治療用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケージ。

⑪ ②記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケ一ジ。

⑫ ③記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性の細胞傷害の改善または予防用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケージ。

本発明において、ウィルス性心筋炎またはそれに惹起されるウィルス性疾患は、好適には R N Aウィルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるものである。本発明において、前記 R N Aウィルスは、好適にはオルトミクソウィルスまたはピコルナウィルスである。さらに本発明において、前記ウィルス性疾患は、好適にはウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T T V型）、アデノウィルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ゥィルス性腸炎またはウイルス性心膜炎である。

図面の簡単な説明

図 1は、試験例 2における生存率の結果を示すグラフである。—國—は対照群、 —秦一は C s A群、 —〇一は化合物 1群を示す。

図 2は、試験例 2における細胞浸潤のスコアを示すグラフである。

図 3は、試験例 2における心筋細胞壊死のスコアを示すグラフである。

図 4は、試験例 2における心臓のウィルス力価の結果を示すグラフである。図 5は、試験例 2における心臓サイトカインアツセィの I L一 2の結果を示すグラフである。

図 6は、試験例 2における心臓サイトカインアツセィの I L— 1 2の結果を示すグラフである。

図 7は、試験例 2における心臓サイトカインアツセィの I F N—ァの結果を示すグラフである。

図 8は、試験例 2における心臓サイトカインアツセィの T N F—ひの結果を示すグラフである。

図 9は、試験例 2における心臓内 N Oアツセィの結果を示すグラフである。

発明の詳細な説明

本発明における 2—ァミノ一 2— ( 2— ( 4—才クチルフエニル）ェチル）プ口パン— 1 , 3—ジオールは、公知化合物であり、例えば、国際公開 W O 9 4 / 0 8 9 4 3号に開示の方法等により製造することができる。

2—ァミノ一 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3 —ジオールは、必要に応じて適当な溶媒（水、メタノール、エタノール、ジェチルェ一テル、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど）中、酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、クェン酸、シユウ酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸、 1 0—カンファースルホン酸など）と処理することにより、上記の酸との塩などの薬理学的に許容される塩とすることができる。

本発明において、 2—ァミノ一 2— （ 2— （4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩は、低毒性で、動物とりわけ哺乳動物（例えば、ヒト、ィヌ、ゥサギ、マウス、ラットなど）に対するウィルス性心筋炎またはそれから惹起されるウィルス性疾患の予防または治療薬剤として有用である。本発明で対象とするウィルス性心筋炎、またはそれから惹起されるウィルス性疾患には、 D N Aウィルスあるいは R N Aウィルスのいずれに属する病原ウィルスによって引き起こされる疾患も含まれる。そのような病原ウィルスを以下に例示する。

D N Aウィルス：ボックスウィルス、ヘルぺスウィルス（単純へルぺスウィルス、サイトメガロウィルス、 E Bウィルスなど）、アデノウイルス、パルボウイルス R N Aウィルス：レオウィルス、トガウィルス、コロナウィルス、ラブドウィルス、パラミクソウィルス、オルトミクソウィルス、ブンャウィルス、ァレナウィルス、レトロウイルス、ピコルナウィルス、力リシウィルス

とりわけ、本発明の薬剤は、 R N Aウィルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるウイルス性心筋炎またはそれから惹起されるウィルス性疾患に罹患した患者の治療または予防に好ましく適用し得る。ここで、特に R N Aウィルスとしてオルトミクソウィルスあるいはピコルナウィルスが挙げられる。

ウィルス性心筋炎から惹起されるゥィルス性疾患の疾患名としては、具体的には、ウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T T V型）、アデノウィルス感染症、インフルエンザ、ウィルス性肺炎、ウィルス性気管支炎、ヘルぺス感染症（単純ヘルぺス、 E Bウィルス（伝染性単核症）、帯状疱疹）、ポリオ、エイズ（H I V感染症）、成人 T細胞白血病（A T L )、パピ口一マ、麻疹、風疹、突発性発疹、伝染性紅斑、ウィルス性脳炎、ウィルス性髄膜炎、サイトメガロウイルス感染症、流行性耳下腺炎、水痘、狂犬病、ウィルス性腸炎、ウィルス性心膜炎、コクサツキ一ウィルス感染症、エコーウィルス感染症、腎症候性出血熱、ラッサ熱などが挙げられる。

さらに上記に挙げたウィルス性疾患の中でも、ウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T T V型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルべス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎、ゥィルス性心膜炎に対して好ましく適用可能である。

2—ァミノ一 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3 —ジオールまたはその薬理学的に許容される塩は、経口的に、非経口的に、吸入法、直腸投入、あるいは局所投与により用いることができ、医薬品組成物あるいは製剤（例えば、粉末、顆粒、錠剤、ビル剤、カプセル剤、注射剤、シロップ剤、ェマルジヨン剤、エリキシル剤、懸濁剤、溶液剤など）として用いることができ、それらは本発明の 2—アミノー 2— ( 2— （4—ォクチルフエニル）ェチル）プ口パン— 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を単独で、あるいは医薬として許容される担体（アジュバント剤、賦形剤、補形剤及び/又は希釈剤など）と混合して用いることができる。医薬用の組成物は通常の方法に従って製剤化することができる。

本発明明細書において、非経口とは、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射あるいは点滴法などを含むものである。注射用調剤、例えば無菌注射用水性懸濁物あるいは油性懸濁物は、適当な分散化剤または湿化剤及び懸濁化剤を用いて当該分野で知られた方法で調製されうる。その無菌注射用調剤は、また、例えば水溶液などの製剤上許容される非経口投与可能な希釈剤あるいは溶剤中の無菌の注射のできる溶液または懸濁液であってもよい。使用することのできるベヒクルあるいは溶剤として許されるものとしては、水、リンゲル液、等張食塩液などが挙げられる。さらに、通常溶剤または懸濁化溶媒として無菌の不揮発性油も用いられうる。このためには、いかなる不揮発性油も脂肪酸も使用でき、天然あるいは合成あるいは半合成の脂肪油または脂肪酸、そして天然あるいは合成あるいは半合成のモノあるいはジあるいはトリグリセリド類も包含される。

直腸投与用の座剤は、その薬物と適当な低刺激性の補形剤、例えばココアバタ一やポリエチレングリコール類といった常温では固体であるが腸管の温度では液体で、直腸内で融解し、薬物を放出するものなどと混合して製造できる。

経口投与用の固形投与剤型としては、上記した粉剤、顆粒剤、錠剤、ピル剤、カプセル剤などが挙げられる。そのような剤型において、活性成分化合物は、少なくとも一つの添加物、例えばショ糖、乳糖、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン類、寒天、アルギネート類、キチン類、キトサン類、ぺクチン類、トラガントガム類、アラビアゴム類、ゼラチン類、コラ —ゲン類、カゼイン、アルブミン、合成または半合成のポリマー類またはグリセリド類と混合することができる。そのような剤型物は、通常の剤型のようにさらに別の添加物を含んでもよい。別の添加物としては、例えば不活性希釈剤、マグネシゥムステアレートなどの滑沢剤、パラベン類、ソルビン酸などの保存剤、ァスコルビン酸、ひ—トコフエロール、システィンなどの抗酸化剤、崩壊剤、結合化剤、増粘剤、緩衝化剤、甘味付与剤、フレーバー付与剤、パフューム剤などが挙げられる。錠剤およびピル剤は、さらにェンテリックコーティングすることもできる。

経口投与用の液剤としては、医薬として許容されるシロップ剤、ェマルジヨン剤、エリキシル剤、懸濁剤、溶液剤などが挙げられる。これらは、当該分野で普通用いられる不活性希釈剤、例えば水を含んでいてもよい。

ある特定の患者の投与量は、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、排泄速度、薬物の組み合わせ、患者のその時に治療を行っている病状の程度に応じ、それらあるいはその他の要因を考慮して決められる。 2— アミノー 2— （2— （4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジォールまたはその薬理学的に許容される塩は、低毒性で安全に使用することができる。当該化合物の 1日の投与量は、患者の状態や体重、投与経路などによって異なるが、例えば成人のウィルス性心筋炎またはそれから惹起されるウィルス性疾患の治療薬剤として投与する場合、経口投与では、一日量約◦ . 0 1〜 150m g、好ましくは 0. 1〜； L 00mg、静注では、一日量約 0. 0 1〜50mg、好ましくは 0. 0 1〜2 0mgを 1回または 2回ないし 3回に分けて投与するのが好ましい。

実施例

以下に、試験例によって本発明の効果を明らかにするが、これらは単なる例示であり、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。

試験例 1

ウィルス性心筋炎に対する効果

化合物 1 ： 2—ァミノ一 2— (2— (4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオール塩酸塩

( 1 ) 生存率

方法

4週齢 D BA/ 2マウスを 3グループに分け、 EMC (Encephalomyocarditis) ウィルス 1 O p f uを腹腔内接種し、接種後から、対照として蒸留水（溶媒）（グループ A、 n= 1 1 )、化合物 1を 1 mg/k g/日（グループ B、 n= 1 0)、 3mgZkg/曰（グループ C、 n= 10) を、連日 14日後までゾンデを用いて強制経口投与した。 14日後の各グループの生存率は、 Kap l an— Me i e r法によって比較した。対照群（グループ A、 n= l l ) は、 8日後までに全て死亡した（生存率 0%) が、化合物 1投与群の 14日後の生存率は、グループ B ( 11= 10) で 1匹（生存率 1 0%)、グループ C (n = 10) で 3匹（生存率 30%) であり、 3mg/ kg/日群で統計的に有意な生存率の改善がみられた（p< 0. 05)。

(2) 心臓の病理組織学的所見

方法

4週齢 D BAZ 2マウスを 3グループに分け、 EMC (Encephalomyocarditis) ウィルス 1 O p f uを腹腔内接種し、接種後から、対照として蒸留水（溶媒）（n = 9)、化合物 1を 3mgZkg/日（n=8)、 1 OmgZkg/日（n= 8) を、連日 5日後までゾンデを用いて強制経口投与した。 5日後に心臓を採取し、ホルマリン固定後へマトキシリン—ェォジン染色を行い、心臓壊死、細胞浸潤の 2項目につき、以下のようにスコア化した。

0 ;病変なし、 1 +；心臓の 25%以下の病変、 2 + ; 25 %より多く、 50% 以下の心臓の病変、 3+ ; 50%より多く、 75%以下の心臓の病変、 4+ ; 7 5%より多く、 100%以下の心臓の病変心臓の病理組織学的所見の結果を表 1に示す。表 1

平均土 SEM，*pく 0.05 (vs.対照群) 表 1より、 EMCウィルス接種 5日後の心臓の心筋細胞壊死、細胞浸潤は 10 mg/k g/日投与群で用量依存的に改善がみられた。

以上の結果から、 2—ァミノ— 2— ( 2 - (4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 , 3—ジオール塩酸塩は、 EMCウィルス感染によるマウスの死亡率を改善し、ウィルス性心筋炎を改善し、ウィルス感染に有効であることが明らかになつた。

上記拡張型心筋症の動物モデルについては、 Circulation.65:1230-1235， 1982 または Circulation. 66:355-360, 1982に記載されている。

試験例 2

化合物 1と免疫抑制剤であるシクロスポリン A (以下、 C sAという）とのゥィルス性心筋炎に対する効果を比較した。化合物 1は滅菌蒸留水に溶解して投与し、 C s Aはォリーブ油に溶解したものを投与した。

( 1) 生存率

方法

4週齢雄性 DBAZ 2マウスを 3グループに分け、 EMCウィルス l O p f u を腹腔内接種し、接種後から、対照として蒸留水（溶媒）（対照群、 n= 2 1)、。 3八を40111 /1^ /日（C s A群、 n = 9)、化合物 1を 1 Omg/kg/ 日（化合物 1群、 n= 22) の投与量で、連日 14日後まで Vンデを用いて強制経口投与した。 14日後の各グループの生存率は、 K ap 1 an— Me i e r法によって比較した。結果を図 1に示す。対照群（一画—）は、 1 0日目までに全て死亡した（生存率 0%)。 C sA群（—像—）は 7日目までに全て死亡し、対照群と比べて生存率が有意に悪化した。これに対して、化合物 1群（―〇—）の 14日後の生存率は 27% (22匹中 6匹生存）であった。 C s A群と対照群との生存率には有意差があった（*p< 0. 05)。

(2) 心臓の病理組織学的所見

方法

4週齢雄性 D BA/ 2マウスを 3グループに分け、 EMCウィルス l O p f u を腹腔内接種し、接種後から、対照として蒸留水（溶媒）（n= 9)、 C sAを 4 Omg/k g/日（n = 6 )、化合物 1を 10mg/kg/日（n=8)の投与量で、連日 5日後までゾンデを用いて強制経口投与した。 5日後に心臓を採取し、ホルマリン固定後へマトキシリンーェォジン染色を行い、心筋細胞壊死、細胞浸潤の 2項目につき、試験例 1に記載した基準に従ってスコア化した。

心筋細胞壊死および細胞浸潤のスコアは、 2人の観察者によって独立して評価し、平均した。統計学的分析は one way analysis of variance (AN0VA)、 Fisher's protected least significant difference testにより行った。結果を図 2 (細胞浸潤）、図 3 (心筋細胞壊死）および表 2に示す ₍

表 2

平均士 SEM, NS:有意差なし， **p<0.01, *p<0.05 (vs.対照群）

C s A群における細胞浸潤のスコアは対照群のスコアと比べて低かったが、有意差はなかった。 C s A群における心筋細胞壊死のスコアは対照群のスコアよりわずかに高かったが、有意差はなかった。これに対して、化合物 1群においては、細胞浸潤、心筋細胞壊死のスコアはともに対照群のスコァと比べて有意に低かつた。従って、化合物 1の投与により心筋細胞壊死、細胞浸潤について有意な改善効果が認められた。

(3) 心臓のウィルス力価

方法

4週齢雄性 D BA/ 2マウスを 3グループに分け、 EMCウィルス l O p f u を腹腔内接種し、接種後から、対照として蒸留水（溶媒）（n=8)、 C sAを 4 Omg/k g/日（n = 5 )、化合物 1を 10mg/kg/日（n = 7)の投与量で、連日 5日後までゾンデを用いて強制経口投与した。 5曰後にマウスから無菌的に採取した心室の重量を測定し、リン酸緩衝食塩水（PB S, 1 ml) 中でホモジナイズした。 4°C、 1， 500 gにて 1 5分間遠心分離した後、上清から 0. lmlをとり、ヒト羊膜 F L細胞単層に接種し、 5 %C0₂中、 37°Cで 60分間培養した。この細胞を、 4%ゥシ胎児血清および 1%メチルセルロースを含有する培地（ 3ml) でおおった。 5 %C〇₂含有湿潤雰囲気下、 37 °Cにて 20 時間培養後、細胞を酢酸—メタノール（ 1 ： 2) で固定し、 1 %クリスタルバイォレットで染色し、倒立顕微鏡下でプラーク数をカウントした（Circulation. 89:846-851, 1994)。プラーク数が多すぎてカウントできない場合は、上清をダルべッコ変法イーグル培地（DMEM) により適当に希釈した後、同様のアツセィを繰り返した。試験を 2回行い、その平均を算出した。ウィルス力価は p f u/ g心臓として表した。統計学的分析は one way AN0VA、 Fisher' s protected least significant difference testにより'仃つた。結果を図 4および表 3に示す。表 3

平均士 SEM, NS:有意差なし， *p<0.05 (vs. 対照群）

C s Aは心臓におけるウィルス複製を対照群と比べて約 20倍増加させた。これに対して、化合物 1は C s Aのようなウィルス複製を増加させる効果を示さなかった。

(4) 心臓サイトカインアツセィ

方法

上記（3) で 5日目に採取したマウス心室を、超音波ホモジナイザーを用いて PB S (lml) 中でホモジナイズし、 4°C、 14， O O O rpmにて 20分間遠心分離し、上清を I L— 2、 I L一 12、 I FN—ァおよび TNF—ひのアツセィの試料として使用した。各サイトカインの蛋白濃度は、市販のキットを使用して E L I S Aにより測定した（Circulation. 100:1102-1108, 1999)。マウス I L— 2および I FN—ァの EL I SAキットは GENZYME Corporation, Cambridge, U.S. A.から、マウス I L— 12および TNF—ひの EL I SAキッ卜は END0GEN Inc., Cambridge, U.S.A.から購入した。

各上清中の総蛋白濃度は、ビシンコニン酸（BCA) 法により測定し、総蛋白濃度に対するサイト力イン濃度の割合を算出した（J. Am. Coll. Cardiol. 33:1400-1407, 1999)。各サイトカイン蛋白濃度は p g/mg総蛋白または n g/ mg総蛋白として表した。統計学的分析は one way AN0VA、 Fisher's protected least significant difference testにより行った。結果を図 5〜 8および表 4に示す。表 4

平均士 SEM， #p<0.001 (vs. 対照群）

*pく 0.05 (vs. 対照群）

**p<0.01 (vs. CsA群)

T細胞増殖に関連することが知られている I L— 2濃度は、 C s Α群および化合物 1群の両方において抑制された。しかし、化合物 1群における I L— 2抑制の程度は、 C s A群と比べて弱かった。ウィルス複製を阻害する効果を有する I FN—ァの濃度（Jpn. Circ. J. 51:661-664, 1987)は、 C sA群では著しく減少したが、化合物 1群では減少の程度が少ない。同様に、 Th l ( 1型ヘルパー T 細胞）特異的サイトカインである I L— 1 2の濃度は、 C s A群では著しく減少しているが、化合物 1群では減少の程度が少ない。これとは逆に、炎症性サイトカインの一つである TNF—ひの濃度は、 C s A群では対照群と比べて上昇しているが、化合物 1群では影響がなかった。

( 5) 心臓内一酸化窒素（NO) アツセィ

心臓内 NO含量を、サイトカインアツセィに使用したのと同じ上清を使用して、 Griess 法の変法（J. Am. Coll. Cardiol. 33:1400-1407, 1999; Anal. Biochem. 224:502-508, 1995)により測定した。簡単に説明すると、上清または標品亜硝酸塩（ 5 0〃 1) を 1 0 /M ?NAD PH ( 1 0〃 1) と混合し、予め混合しておいたマスターミックス（ 5 00〃Mグルコース一 6 _ホスフェート、 1 6 0 U /1グルコース一 6—ホスフエ一トデヒドロゲナ一ゼ、 80 U/1二トレートレダク夕一ゼ、 0. 2 mMリン酸緩衝液）（40〃 1) を添加して、 20 で45分間インキュベートした。 5 %H₃ P 0₄中の 1 %スルファニルアミド（ 50〃 1 ) および 0. 1 %ナフチルエチレンジァミン二塩酸塩（50 1)をさらに添加し、 20°Cで 10分間インキュベートした。 540 nmにおける光学密度を、マイク口プレートリーダ一を用いて測定した。標品に基づいて各サンプルの亜硝酸塩濃度を算出した。各サンプルと標品の測定を 2回ずつ行った。心臓内 NO含量の値は、各亜硝酸塩濃度を各上清中の総蛋白濃度で割ることにより決定し、〃M/m g総蛋白として表す。統計学的分析は one way AN0VA、 Fisher' s protected least significant difference testにより行った。

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結果を図 9および表 5に示す。

表 5

平均 ±SEM, #p<0.001 (vs. CsA群）

C s A群では対照群と比較して心臓内 NO含量が有意に増加したが、化合物 1 群では対照群と有意な差はなかった。

上記の結果をまとめると、心臓における I L— 2、 I L— 12、 I FN—ァの発現は化合物 1群および C s A群の両方において対照群と比べて抑制されるが、化合物 1群においては抑制の程度が弱かった。 TNF—ひおよび NOは C s A群で有意に増加したが、化合物 1群では対照群と有意差はなかった。 1 ー2は丁細胞増殖に関連し、 T細胞、 NK細胞からの I FN—ァの産生を誘導する作用を有する。 Th 1特異的サイト力インである I L一 12は T細胞、 NK細胞からの I FN—ァの産生を誘導する作用を有する。 I FN—ァはマクロファージを活性化することによりウィルス増殖阻害作用を示す。従って、 I L— 2、 I L_ 12、 I FN—ァの発現抑制の程度が、化合物 1群に比べて、 Cs A群において高いという上記の結果は、 Cs Aはウィルス複製を増加させるが、化合物 1にはそのような作用がなかったという上記（3) の結果と一致する。また炎症性サイトカインである TNF—ひは細胞傷害活性があり、 NOは心筋損傷を引き起こすことが知られている。上記の結果から、 CsAは TNF— ひ、 NOを増加させるが、ィ匕合物 1は TNF— a、 NOを増加させないことが判明した。従って、化合物 1はウィルス性の細胞傷害の改善に有効である。

以上の結果から、化合物 1 (2—ァミノ— 2— (2—（4—ォクチルフエ二ル）ェチル）プロパン— 1, 3—ジオール塩酸塩）は、ウィルス複製を誘導することなく、ウィルス性心筋炎の治療に有効であることが明らかになった。

シクロスポリンなどの免疫抑制剤は、臓器移植または骨髄移植後の免疫抑制療法に使用されているが、サイトメガロウィルスなどのウィルスによる重篤な感染症を引き起こすことが問題となっている。上記の試験結果から明らかなように、本発明に係る 2—アミノー 2— (2— (4—ォクチルフエ二ル）ェチル）プロパン— 1， 3—ジオールは、従来の免疫抑制剤と異なり、ウィルス増殖を誘導する作用がないため、臓器移植または骨髄移植後の免疫抑制療法においても、サイトメガロウィルスのようなウィルスによる感染症を誘発する可能性が極めて低いと考えられる。

処方例

( 1 ) 錠剤

下記組成物の化合物 1含有錠剤を製造する。

化合物 1 1 m g

乳糖 90mg

結晶セルロース 25 mg

ステアリン酸マグネシゥム 4 m g

( 2 ) ソフトカプセル剤（ 1カプセル中）化合物 1 30mg

ポリエチレングリコ一ルー 300 300 mg

ポリソルベート 80 20 mg

製造方法

化合物 1にポリエチレングリコール— 300およびポリソルべ一ト 80を加え、ソフトカプセルに充填して製造する。

( 3 ) 注射剤（ 1アンプル 1 0 m 1中）

化合物 1 0. 3% (3 Omg) ポリエチレングリコール一 3◦ 0 20 % ( 2 g)

エタノール 60% (6 g)

注射用蒸留水で全量 10 m 1とする。

製造方法

化合物 1にエタノールおよびポリエチレングリコール— 300を加えて溶解し、注射用蒸留水を加えて全量 1 Omlとする。

1アンプル中化合物 1を 3 Omg含有した注射剤を得る。

産業上の利用可能性

本発明によると、ウィルスに起因する細胞傷害に対して 2 _アミノー 2— ( 2 一（4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の投与によって改善効果が認められ、ウィルス性心筋炎またはウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の治療効果があり、また該疾患の予防にも有効である。本出願は、日本で出願された平成 1 1年特許願第 185 297号を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1 . 2—ァミノ一 2— ( 2 _ ( 4 —ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性心筋炎の予防または治療用医薬組成物。

2 . 2—ァミノ一 2— （ 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 ,

3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用医薬組成物。

3 . ウィルス性心筋炎またはそれに惹起されるウィルス性疾患が R N Aウィルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるものである請求項 1または 2記載の予防または治療用医薬組成物。

4 . R N Aウィルスがオルトミクソウィルスまたはピコルナウィルスである請求項 3記載の予防または治療用医薬組成物。

5 . ウィルス性疾患がウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T T V型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎またはウィルス性心膜炎である請求項 2記載の予防または治療用医薬組成物。

6 . 2—ァミノ一 2— ( 2— （ 4 —ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含有するウィルス性の細胞傷害の改善または予防用医薬組成物。

7 . 有効量の 2—アミノー 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1， 3 _ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性心筋炎の予防または治療方法。

8 . 有効量の 2—ァミノ— 2 _ ( 2— ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン— 1 , 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療方法。

9 . ウイルス性心筋炎またはそれに惹起されるウイルス性疾患が R N Aウィルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるものである請求項 7または 8記載の方法。

10. RN Aウィルスがオルトミクソウィルスまたはピコルナウィルスである請求項 9記載の方法。

1 1. ウィルス性疾患がウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T TV型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎またはウィルス性心膜炎である請求項 8記載の方法。

12. 有効量の 2—ァミノ— 2— (2— (4—ォクチルフエ二ル）ェチル）プ口パン— 1， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩を投与することを含むウィルス性の細胞傷害の改善または予防方法。

13. ウィルス性心筋炎の予防または治療用医薬を製造するための 2—ァミノ - 2 - ( 2 - (4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3 _ジォ一ルまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

14. ウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用医薬を製造するための 2—ァミノ— 2— (2— (4—才クチルフエニル）ェチル）プロパン— 1， 3—ジオールまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

15. ウィルス性心筋炎またはそれに惹起されるウィルス性疾患が RN Aウイルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるものである請求項 13または 1 4記載の使用。

16. RN Aウィルスがオルトミクソウィルスまたはピコルナウィルスである請求項 1 5記載の使用。

17. ウィルス性疾患がウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T TV型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎またはウィルス性心膜炎である請求項 14記載の使用。

18. ウィルス性の細胞傷害の改善または予防用医薬を製造するための 2—ァミノ一 2— ( 2 - ( 4—ォクチルフエニル）ェチル）プロパン一 1 , 3—ジォ一ルまたはその薬理学的に許容される塩の使用。

1 9 . 請求項 1記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性心筋炎の予防または治療用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケージ。

2 0 . 請求項 2記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性心筋炎により惹起されるウィルス性疾患の予防または治療用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケージ。

2 1 . ウィルス性心筋炎またはそれに惹起されるウィルス性疾患が R N Aウイルスまたは肝炎ウィルスによって引き起こされるものである請求項 1 9または 2 0記載の商業パッケージ。

2 2 . R N Aウィルスがオルトミクソウィルスまたはピコルナウィルスである請求項 2 1記載の商業パッケージ。

2 3 . ウィルス性疾患がウィルス性肝炎（A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 T T V型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎またはウィルス性心膜炎である請求項 2 0記載の商業パッケージ。

2 4 . 請求項 6記載の医薬組成物、および該医薬組成物をウィルス性の細胞傷害の改善または予防用途に使用することができる、または使用すべきであることを記載した該医薬組成物に関する記載物を含む商業パッケージ。