UA127967C2 - АНТИТІЛО ДО TrkB - Google Patents

АНТИТІЛО ДО TrkB Download PDF

Info

Publication number
UA127967C2
UA127967C2 UAA201911908A UAA201911908A UA127967C2 UA 127967 C2 UA127967 C2 UA 127967C2 UA A201911908 A UAA201911908 A UA A201911908A UA A201911908 A UAA201911908 A UA A201911908A UA 127967 C2 UA127967 C2 UA 127967C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
mai
zeg
rgo
antibody
guz
Prior art date
Application number
UAA201911908A
Other languages
English (en)
Inventor
Рольф Германн
Ремко Александер Баккер
Себастіан Бандхольц
Себастиан Бандхольц
Петер Міхаель Бенц
Петер Михаель Бенц
Майкл Дзегелевскі
Майкл Дзегелевски
Лоре Флорін
Лоре Флорин
Сінтія Гесс Кенні
Синтия Гесс Кенни
Сара Лоу
Хольгер Розенброк
Санджая Сінгх
Санджая Сингх
Хайко Фрідріх Шталь
Хайко Фридрих Шталь
Сат'ядеві Венкатарамані
Сатьядеви Венкатарамани
Владімір Войнов
Владимир ВОЙНОВ
Хайгуан Сяо
Original Assignee
Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх
Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх, Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх filed Critical Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх
Publication of UA127967C2 publication Critical patent/UA127967C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Винахід стосується нового агоністичного антитіла до TrkВ і терапевтичного і діагностичного способу і композиції для її застосування.

Description

(54) АНТИТІЛО ДО ТіКквВ (57) Реферат:
Винахід стосується нового агоністичного антитіла до ТІкВ і терапевтичного і діагностичного способу і композиції для її застосування.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД
Даний винахід у цілому стосується агоністичних антитіл до ТткВ для діагностичного й терапевтичного застосування й особливо гуманізованих агоністичних антитіл до ТгКкВ. Більш специфічно, описані агоністичні антитіла до Т/КВ і способи застосування для лікування різних захворювань або порушень. Також описані фармацевтичні композиції й набори, що містять агоністичне антитіло до ТгКкВ.
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Тропоміозин-рецепторна кіназа В (ТІ/КкВ), також відома як тирозин- рецепторна кіназа В, або рецептор ВОМЕ/МТ-3 факторів росту або нейротрофічна тирозинкіназа, рецептор, типу 2, представляє собою білок, який у людей кодується геном МТКК2 (Сепрапк ІС: 4915). ТтКкВ представляє собою рецептор для нейротрофічного фактора із тканин головного мозку (ВОМЕ).
Нейротрофічний тирозин-кіназний рецептор В (ТІкВ; символ гена: МТКК2) експресується нейронами сітківки й гліальними клітинами. У нормальній сітківці, передача сигналів Т/кВ протидіє клітинному стресу й сприяє виживанню клітин. При захворюваннях ока, таких як при діабетичній ретинопатії або географічній атрофії, відбувається втрата й функціональні порушення нейронів сітківки й гліальних клітин, що викликає порушення зору й втрату зору.
Активація передачі сигналів Т"кКВ вище базального рівня (яка зменшена при діабетичній ретинопатії), може протидіяти втраті й функціональним порушенням нейронів і гліальних клітин, поліпшуючи, таким чином, зорову функцію. Крім того, активація ТІКВ мають потенціал регенерувати втрату синаптичних зв'язків у хворому оці, у такий спосіб сприяючи відновленню зорової функції. При зв'язуванні ліганду, ТІкВ зазнає гомодимеризації з наступним аутофосфорилуванням. Залежно від сайтів фосфорилування (516, М702, 706, 707 або
У817) активуються різні шляхи передачі сигналів, включаючи активність РІ Су! або різних підформ АКТ і ЕКК, які регулюють різні каскади передачі сигналів, що перекриваються, включаючи ріст аксонів/нейритів, збільшення синаптичної пластичності або збільшення виживання клітин.
Агоністичні антитіла до ТІКВ були описані в Ш520100196390 ії 0О520100150914, а також запропоноване їх застосування для лікування, наприклад, хвороби Шарко-марі-тута або діабету.
Проте, зберігається значна потреба в нових ефективних агоністичних антитілах до ТгКВ, які можна застосовувати для активування ТІкВ шляху й, таким чином, надається можливість їх застосування для терапевтичних втручань, наприклад, при нейродегенеративних і психічних розладах.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід забезпечує моноклональні антитіла, які специфічно зв'язуватися з Т/КкВ людини. В одному аспекті, антитіла згідно із даним винаходом мають агоністичну активність і індукують фосфорилування та/або активацію ТІ/КВ. В іншому аспекті, антитіла згідно із даним винаходом придатні, наприклад, для лікування захворювань ока й сітківки, таких як, географічна атрофія, викликана віковою дегенерацією жовтої плями, діабетична ретинопатія, глаукома та/або діабетичний набряк жовтої плями.
В іншому аспекті, даний винахід забезпечує антитіло до ТІКкВ, особливо гуманізоване антитіло до ТІКВ, що має одну або декілька властивостей, описаних у даній заявці нижче.
В іншому аспекті, антитіло до ТІкКВ згідно із даним винаходом зв'язується з високою афінністю з ТІкКВ людини. В одному варіанті здійснення, що стосується цього аспекту, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом зв'язується з ТІ"КВ людини при Ко-10 НМ. В іншому варіанті здійснення, антитіло до ТІКкВ згідно із даним винаходом зв'язується з ТІКВ людини при Ко«5 НМ.
В іншому аспекті, антитіло до ТІкВ згідно із даним винаходом активує ТІКВ з високою ефективністю. В одному варіанті здійснення, що стосується цього аспекту, антитіло до Т/КкВ згідно із даним винаходом активує ТІКВ людини з ЕСв5о«100 пМ. В подальшому варіанті здійснення, антитіло до ТгКВ згідно із даним винаходом активує ТІКВ людини з ЕСв5охА5О пМ.
В іншому аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом є більш ефективним для індукування активації нижчерозташованих ТІкВ шляхів передачі сигналів у порівнянні із природним ТІКкВ лігандом, ВОМЕ. В подальшому аспекті, антитіло до ТІкВ згідно із даним винаходом регулює експресію гена за допомогою ТІкВ-опосередкованого шляху передачі сигналів порівнянним чином відносно ВОМЕ.
В подальшому аспекті, антитіло до Т/КкВ згідно із даним винаходом зв'язує новий епітоп у позаклітинному домені ТІКВ людини. В подальшому аспекті, антитіло до ТІікВ згідно із даним винаходом перехресно не реагує з ТІ/КкВ з інших видів, особливо перехресно не реагує з Т/ткВ гризунів.
В одному аспекті, антитіло до ТІ/КкВ згідно із даним винаходом може бути приготовлене у 60 вигляді препарату у високих концентраціях для інтравітреальних ін'єкцій в очі.
В подальшому аспекті, антитіло до ТІКкВ згідно із даним винаходом має низький ризик імуногенності, як виміряно за допомогою способу, описаного в прикладі 5.
В іншому аспекті, СОК послідовності антитіла до Т/кВ згідно із даним винаходом мають низькі схильності послідовностей, як визначено за допомогою способу, описаного в прикладі 4.
У ще одному аспекті, антитіло до ТІкКВ згідно із даним винаходом не зменшує ВОМЕ індуковане ЕКК фосфорилування.
В подальшому аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом є специфічним для фосфорилування та/або активації ТІкВ і неспецифічно не фосфорилує /не активує ТІКА або
ТІКС. В іншому аспекті, антитіло до ТІКкВ не зв'язується неспецифічно з МЕСЕ людини.
Подальші аспекти охоплюють молекулу (и) полінуклеотидів, що кодують антитіла згідно із даним винаходом, експресійні вектори й вірусні вектори, а також клітини-хазяїни, що містять таку (ї) молекулу (и) полінуклеотидів, і способи приготування антитіл згідно із даним винаходом.
Даний винахід додатково забезпечує терапевтичні застосування антитіл згідно із даним винаходом, особливо для захворювань сітківки/очей.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, що містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 48 (І-СОКТ1); амінокислотну послідовність 5ЕБЕО І МО: 49 (1-СОК2); і амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 50 (І-СОКЗ); і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 51 (Н-СОК1); амінокислотну послідовність 5БО 10 МО: 52 (Н-СОК2); їі амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 53 (Н-СОКЗ), або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 55 (Н-СОК1); амінокислотну послідовність 5БО 10 МО: 56 (Н-СОК2); їі амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 57 (Н-СОКЗ), або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 58 (Н-СОК1); амінокислотну послідовність 5БО 10 МО: 59 (Н-СОК2); їі амінокислотну послідовність зЕО 10 МО: 60 (Н-СОВЗ).
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, що містить: варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2 і ЗЕО ІО МО: 12, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: З і ЗЕО ІО МО: 13, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 4 і БЕО ІО МО: 14, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 5 і БЕО ІО МО: 15, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 6 і ЗЕО ІО МО: 16, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 7 і ЗЕО ІО МО: 17, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 8 і ЗЕО ІО МО: 18, відповідно, варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності 5ЕО ІЮ МО: 9 і 5ЕО ІЮ МО: 19, відповідно, або варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 10 ії БЕО ІЮО МО: 20, відповідно.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його 5О антигензв'язувальний фрагмент, що містить: легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮ МО: 21 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 22 або 23, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 24 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 25 або 26, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 27 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 28 або 29, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 30 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 31 або 32, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 33 та важкий ланцюг, 60 що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 34 або 35,
легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕС ІЮО МО: 36 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 37 або 38, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 39 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 40 або 41, легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 42 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 43 або 44, або легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 45 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 46 або 47.
В особливо переважному варіанті здійснення антитіло до ТІкВ представляє собою гуманізоване антитіло до ТІКВ.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування в медицині.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування для лікування захворювань сітківки/очей.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування для лікування захворювань нейронного/неврального ока або сітківки.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування для лікування географічної атрофії.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент для застосування для лікування вікової дегенерації жовтої плями або діабетичної ретинопатії.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує фармацевтичну композицію, що містить антитіло до ТІКкВ або його антигензв'язувальний фрагмент і фармацевтично прийнятний носій.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент або фармацевтичну композицію, що містить антитіло до ТІК або його антигензв'язувальний фрагмент, де вказане антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять за допомогою парентерального шляху, внутрішньовенного шляху, інтравітреального шляху або підшкірного шляху введення.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує виділений (ї) полінуклеотид або полінуклеотиди, що містить (ять) послідовність, що кодує легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує експресійний вектор, що містить виділений (ї) полінуклеотид або полінуклеотиди, що кодує (ють) легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує вірусний вектор, що містить виділений (ї) полінуклеотид або полінуклеотиди, що кодує (ють) легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує клетку-хазяїн, що містить експресійний вектор або виділений (ї) полінуклеотид або полінуклеотиди, що кодує (ють) легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує спосіб одержання антитіла до ТІКВ або його антигензв'язувального фрагменту, що включає: 5О одержання клітини-хазяїна, що містить експресійний вектор або виділений (ї) полінуклеотид або полінуклеотиди, що кодує (ють) легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або її антигензв'язувальний фрагмент; і культивування клітини- хазяїна.
В одному варіанті здійснення, спосіб одержання антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту додатково включає відновлення й очищення антитіла до ТгткВ або його антигензв'язувального фрагменту.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним 60 залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143 та/або 205-219 позаклітинного домену ТТКкВ людини з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112 і 130-143; або 92-112 і 205-219; або 130-143 і 205-219; або 92-112 і 130-143 ї 205-219 позаклітинного домену ТІКкВ людини з послідовністю
ЗЕО І МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах будь-якої з вищевказаних комбінацій і додатково також із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 313-330 та/або 348-367 позаклітинного домену Тг/кВ людини з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143, 205-219, 313-330 і 348-367 позаклітинного домену Тг/кВ людини з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 54.
КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР
Фіг. 1: Картування епітопів ВОМЕ, 277-антитіла, С2 або С20 антитіл до позаклітинного домену ТТтКкВ людини.
Фіг. 2: Дані кПЛР експресії (вісь у) для регульованих генів (вісь Х) стосовно синаптичної пластичності на 5Н-5У5У клітинах після обробки із застосуванням ВОМЕ, контроль Ідс1 (анти- 2,4,6-тринітрофеніл, анти-ТМР) або 0О03 антитіло.
Фіг. 3: Графік концентрації 277-антитіла в компартментах ока, як вказано, і плазмі після івт ін'єкції 1 мг 277-антитіла в очі кроликам залежно від часу.
Фіг. 4: Розрахована очна ФК Ідс1 антитіл. На осі У показана вітреальна концентрація й на осі Х дні після івт застосування. Час після івт ін'єкції для досягнення вітреальної концентрації, еквівалентної до ЕСво, вказаний стрілками.
Фіг. 5: Загальна схема дослідження, включаючи групи тварин і часову динаміку. На тиждень 5, здійснювали оцінку вихідної ЕРГ (до івт застосування) для визначення ступеня індукованої гіперглікемією нейронної дисфункції в сітківці. Група 1 і Група 2 одержували івт ін'єкції Ідсе1 контрольного антитіла до 2,4,6-тринітрофенілу (анти-ТМР), яке не викликає яких-небудь ефектів на функцію сітківки. Очі групи З лікували із застосуванням С2 (анти-ТІ/КкВ агоністичне сурогатне антитіло). Функцію сітківки знову оцінювали на тиждень 7 (після івт).
Фіг. 6: Зміни латентності опосередкованої паличками р-хвилі відносно середньої латентності контрольної групи, на вихідному рівні (до івт) і через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-23 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (позначені точками, п-21 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного Іде1. Група З одержувала івт лікування із застосуванням
С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення - СПО. нд, недостовірно; 7, р«к0,05; и, р«0,015 их, р«0,001; відмінності до івт між гіперглікемічними групами 2 1 3 і контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі).
Фіг. 7: Світлочутливості, 5, опосередкованих паличками р-хвиль, нормовані до середніх світлочутливостей контрольної групи, Зконтрол,, На ВИХідномуУ рівні (до івт)у або через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-23 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-20 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного 951. Група З одержувала івт лікування із застосуванням С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення ї- СПС. нд, недостовірно; "7, р«0,05; и, р«0, 01; их, ре«0,001; відмінності до івт між гіпергліксемічними групами 2 і З ї контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно 5О не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Тюкі).
Фіг. 8: Відповіді опосередкованої паличками а-хвилі, викликані спалахом світла 0,1 кд-с/м,
Е, нормовані до середньої відповіді контролів, на вихідному рівні (до івт) або через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-23 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-20 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного (951. Група З одержувала івт лікування із застосуванням С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення ї- СПС. нд, недостовірно; "7, р«0,05; и, р«0, 01; их, ре«0,001; відмінності до івт між гіпергліксемічними групами 2 і З ї контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі). 60 Фіг. 9: Зміни латентності УФ опосередкованої колбочками Б-хвилі відносно середньої латентності контрольної групи, на вихідному рівні (до івт) і через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-24 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-22 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного Іде1. Група З одержувала івт лікування із застосуванням
С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення ж СПС. нд, недостовірно; 7, р«к0,05; и, р«0,017 и, р«0,001; відмінності до івт між гіперглікемічними групами 2 1 3 ї контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі).
Фіг. 10: Зміни латентності опосередкованої колбочками М-типу р-хвилі відносно середньої латентності контрольної групи, на вихідному рівні (до івт) і через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-24 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-22 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного Іде1. Група З одержувала івт лікування із застосуванням
С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення ж СПС. нд, недостовірно; 7, р«к0,05; и, р«0,015 и, р«0,001; відмінності до івт між гіперглікемічними групами 2 1 3 ї контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі).
Фіг. 11: Світлочутливості, 5, УФ опосередкованих колбочками р-хвиль, нормовані до середніх світочутливостей контрольних груп, Зконтрол?, На ВИХідному рівні (до івт) або через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-22 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-22 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного Ідс1. Група З одержувала івт лікування із застосуванням С2 (п-21 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення т СПО. нд, недостовірно; "7, р«е0,05; 7, р«к0,01;5 и, р«0,001; відмінності до івт між гіперглікемічними групами 2 і З і контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі).
Фіг. 12: Амплітуди насичувальних коливань, Ктах, опосередкованих колбочками М-типу р- хвиль, нормовані до середньої амплітуда насичувальних коливань, контролів, Клах, контроль, НА вихідному рівні (до івт)у або через 1 тиждень після івт введення (див. Фіг. 5 щодо загальної схеми дослідження). Недіабетична контрольна група 1 (чорні, п-24 досліджених очей) і гіперглікемічна група 2 (червоні, п-22 досліджених очей) одержували івт ін'єкції із застосуванням контрольного Ідс1. Група З одержувала івт лікування із застосуванням С2 (п-24 досліджених очей). Дані представляють собою середнє значення ї- СПС. нд, недостовірно; "7, р«0,055 и, р«0,01; и, р«еб, 001; відмінності до івт між гіперглікемічними групами 2 із шйїі контрольною групою 1 є достовірними (статистичні дані умовно не показані; однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння Т'юкі).
Фіг. 13: ЕКК-фосфорилування в СНО клітинах, які експресують рецептор ТІ/кВ людини після стимуляції із застосуванням (А) ВОМЕ, 277-антитіла, або комбінації 1 НМ ВОМЕ зі зростаючими концентраціями 277-антитіла або (В) ВОМЕ, С2 антитіла, або комбінації 1 нм ВОМЕ зі зростаючими концентраціями С2-антитіла. Дані (символи) представлені у вигляді середніх значень - СПС (для деяких точок, "вуса" похибок є більш короткими, ніж висота символу); сполучні лінії відображають нелінійну регресію (лог(агоніст) відн. відповіді (три параметри)).
Показано один з репрезентативних прикладів із серії із трьох експериментів з незалежними клітинними партіями; н.д., недостовірна відмінність між 1 НМ ВОМЕ окремо й 1 нм ВОМЕ із вказаними концентраціями 277-антитіла. Жр«0,001 1 нм ВОМЕ окремо відн. 1 нМ ВОМЕ із вказаними концентраціями С2-антитілах;х однофакторний дисперсійний аналіз із критерієм множинного порівняння.
Фіг. 14: Зв'язування 277-антитіла або С2 антитіла з МЕСЕ людини або щура в іп міго ЕГІ5А 5О аналізі. Дані (символи) представлені у вигляді середніх значень х СПС (примітка: "вуса" похибок
Є більш короткими, ніж висота символу); сполучні лінії відображають нелінійну регресію (лог(іагоніст) відн. відповіді (три параметри)). Показано один з репрезентативних прикладів із серії з п'яти незалежних експериментів. Жр«0,01 НМЕСЕ-с2 відн. ПМЕСБЕ-Ізотип ІДС при вказаних концентраціях (критерій Стьюдента для однієї вибірки).
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Визначення
Загальна структура антитіл або імуноглобуліну добре відома фахівцям у даній галузі, ці молекули представляють собою гетеротетрамерні глікопротеїни, як правило з молекулярною масою приблизно 150000 Да, що складаються із двох ідентичних легких (І) ланцюгів і двох 60 ідентичних важких (Н) ланцюгів. Кожний легкий ланцюг ковалентно зв'язаний з важким ланцюгом за допомогою одного дисульфідного зв'язку з утворенням гетеродимеру, і гетеротримерна молекула утворюється за допомогою ковалентного дисульфідного зв'язку між двома ідентичними важкими ланцюгами гетеродимерів. Хоча легкі й важкі ланцюги зв'язані з допомогою одного дисульфідного зв'язку, кількість дисульфідних зв'язків між двома важкими ланцюгами змінюється залежно від ізотипу імуноглобуліну. Кожний важкий і легкий ланцюг має також рівномірно розподілені внутрішньоланцюгові дисульфідні містки. Кожний важкий ланцюг має амінокінцеву варіабельну ділянку (МН - варіабельний важкий ланцюг), за якою розташовано три або чотири константні домени (СНІ, СН», СНз і СНі), а також шарнірна ділянка між СН. і
СНг. Кожний легкий ланцюг має дві ділянки, амінокінцеву варіабельну ділянку (МІ - варіабельний легкий ланцюг) і карбоксикінцевий константний домен (СІ). Мі-ділянка нековалентно зв'язана з Мн-ділянкою, а Сі-домен, як правило, ковалентно зв'язаний з СНі- доменом через дисульфідний зв'язок. Імовірно, певні амінокислотні залишки утворюють поверхню розділу між варіабельними ділянками легких і важких ланцюгів (Споїпіа та ін., У. Мої.
Віої. 186, 1985, стор. 651-663).
Певні ділянки у варіабельних ділянках значно відрізняються в різних антитіл, тобто вони є "гіперваріабельними". Ці гіперваріабельні ділянки містять залишки, які безпосередньо беруть участь у зв'язуванні й визначають специфічність кожного конкретного антитіла у відношенні специфічної для нього антигенної детермінанти. Гіперваріабельність у варіабельних ділянках, як легкого ланцюга, так і важкого ланцюга, концентрується в трьох сегментах, які позначають як ділянки, що визначають комплементарність (гіперваріабельні ділянки) (СОК) або гіперваріабельні петлі (НМ). СОК визначають шляхом порівняння послідовностей згідно з методом, описаним в (КаБбаї та ін., в: Зедиепсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегеві, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неайй Зегмісе, Майопаї Іпзійшевз ої Неакнй, Веїпезаа, Ма., 19911, а НМІ. структурно визначають на основі тривимірної структури варіабельної ділянки згідно з методом, описаним в
ІСпоїйпіа апа І езк, У. Мої. ВіоІ. 196, 1987, стор. 901-917)|. Якщо ці два методи приводять до деяких відмінностей при ідентифікації СОК, то переважним є визначення на основі структурі.
Згідно з номенклатурою Кебота СОК-І1 розташована приблизно на залишках 24-34, СОВ-12 приблизно на залишках 50-56 і СОК-І З приблизно на залишках 89-97 у варіабельній ділянці легкого ланцюга; СОВ-НІ розташована приблизно на залишках 31-35, СОВ-Н2 приблизно на залишках 50-65 і СОК-НЗ приблизно на залишках 95-102 у варіабельній ділянці важкого ланцюга. Таким чином, СОК!І, СОК2, СОКЗ важких і легких ланцюгів визначають унікальні й функціональні властивості, специфічні для даного антитіла.
Три СОК у кожному з важких і легких ланцюгів розділені каркасними ділянками (ЕК), які містять послідовності, що меншою мірою мають тенденцію до варіабельності. Починаючи з амінокінця в напрямку до карбоксикінця варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів ЕК і СОК упорядковані в такий спосіб: ЕК!1, СОМК1, ЕК2, СОМ2, ЕКЗ, СОКЗ і ЕК4. У значному ступені |Д- складчаста конформація ЕЕ дозволяє СОК у кожному з ланцюгів знаходитися безпосередньо близько одна до одної, а також до СОК з іншого ланцюга. Отримана конформація властива антигензв'язувальному центру (див. Кабаї та ін., МІН Рибрі. Мо 91-3242, т. І, 1991, стор. 647-669), хоча не є необхідною умова, щоб усі залишки СОК безпосередньо брали участь у зв'язуванні антигену.
Залишки ЕЕ і константні домени Ід не залучені безпосередньо у зв'язування антигену, але беруть участь у зв'язаній з антигеном та/або опосередковуваній антигеном ефекторній функції.
Деякі залишки ЕК, імовірно, впливають на зв'язування антигену принаймні трьеома шляхами: шляхом нековалентного зв'язування безпосередньо з епітопом, шляхом взаємодії з одним або декількома залишками СОК і шляхом впливу на поверхню розділу між важкими й легкими ланцюгами. Константні домени не беруть участь безпосередньо у зв'язуванні антигену, але опосередковують різні ефекторні функції Ід, такі як участь антитіла в антитілозалежній клітинної цитотоксичності (АЮСС), комплементзалежній цитотоксичності (СОС) і антитілозалежному 5О клітинному фагоцитозі (АОСР).
Легкі ланцюги імуноглобулінів хребетних тварин належать до одного або двох чітко відмітних класів, каппа (к) і лямбда (Х), на основі амінокислотної послідовності константного домену. Для порівняння, важкі ланцюги імуноглобулінів ссавців належать до одного з п'яти основних класів з урахуванням послідовності константних доменів: ІдА, дО, ІДЕ, дае і дм. до і
ІДА додатково поділяють на підкласи (ізотипи), наприклад, Ідс1, Ід2, ІдоЗ, Ідсая, ІдА: і ІддА», відповідно. Константні домени важких ланцюгів, які відповідають різним класам імуноглобулінів, позначають як а, б, є, у і н відповідно. Структури субодиниць і тривимірні конфігурації класів нативних імуноглобулінів добре відомі.
У контексті даного опису поняття "антитіло", "антитіло до ТІКкВ", "гуманізоване антитіло до 60 ТІКВ" і "варіант гуманізованого антитіла до ТгкВ" застосовують у найбільш широкому розумінні, і вони стосуються, зокрема, моноклональних антитіл (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла), мультиспецифічних антитіл (наприклад, біспецифічних антитіл), антитіл з незначними модифікаціями, такими як М- або С-кінцеві усікання, і фрагментів антитіл, таким як варіабельні ділянки й інші ділянки антитіл, які мають необхідну біологічну активність, наприклад, здатність зв'язуватися з ТІКВ.
Поняття "моноклональне антитіло" (тАБ) стосується антитіла з популяції практично гомогенних антитіл; тобто індивідуальні антитіла в вказаній популяції є ідентичними за винятком мутацій, що зустрічаються в природніх умовах, які можуть бути присутні у дуже невеликих кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними, їх мішенню є індивідуальна антигенна детермінанта, "епітоп". Таким чином, прикметник "моноклональні" є відмітною ознакою практично гомогенної популяції антитіл, мішенню яких є ідентичний епітоп, і поняття не обмежене вимогою до одержання антитіл за допомогою якого-небудь конкретного методу.
Повинно бути очевидно, що моноклональні антитіла можна одержувати за допомогою будь-якої техніки або методології, відомої в даній галузі; включаючи, наприклад, метод гібридом ІКопПіег та ін., Маїшге 256, 1975, стор. 495), або методи рекомбінантної ДНК, відомі в даній галузі Ідив., наприклад, 05 4816567|, або методи виділення моноклональних отриманих за допомогою рекомбінантної ДНК антитіл з використанням фагових бібліотек антитіл, які описані в (Сіаскзоп та ін., Маїиге 352, 1991, стор. 624-628 і в Магкз та ін., у. Мої. Віої. 222, 1991, стор. 581-597).
Химерні антитіла складаються з варіабельних ділянок важкого й легкого ланцюга антитіл з одного виду (наприклад, зі ссавця крім людини, такого як миша) і константних ділянок легкого й важкого ланцюга антитіла з інших видів (наприклад, людини), і їх можна одержувати шляхом з'єднання послідовностей ДНК, що кодують варіабельні ділянки антитіла з першого виду (наприклад, миші), з послідовностями ДНК константних ділянок антитіла із другого виду (наприклад, людини), і трансформації хазяїна експресійним вектором, що містять зв'язані послідовності, що дозволяє хазяїнові продукувати химерне антитіло. В альтернативному варіанті химерне антитіло може також представляти собою антитіло, у якому одна або декілька ділянок або доменів важкого та/або легкого ланцюга ідентичні, гомологічні або є варіантом відповідної послідовності в моноклональному антитілі з іншого класу або ізотипу імуноглобуліну або з консенсусної послідовності або послідовності зародкової лінії. Химерні антитіла можуть включати фрагменти вказаних антитіл за умови, що фрагмент антитіла має необхідну біологічну активність батьківського антитіла, наприклад здатністю зв'язуватися з тим самим епітопом (|див., наприклад, 05 4816567; і Моїтізоп та ін., Ргос. Маї)!. Асай. сі. ОБА 81, 1984, стор. 6851-6855).
Поняття "фрагмент антитіла", "антигензв'язувальний фрагмент", "ррагмент антитіла до тТІКВ", "фрагмент гуманізованого антитіла до ТІКкВ" і "фрагмент варіанта гуманізованого антитіла до ТІКВ" стосуються частини повнорозмірного антитіла до ТІКВ, у якому зберігається варіабельна ділянка або її функціональна здатність, наприклад, специфічність зв'язування з епітопом ТІКВ. Прикладами фрагментів антитіл є (але, не обмежуючись тільки ними) Раб-, Рар-,
Каб)г-, Ба-, Ем-, взсЕм- і 5сЕм-Ес-фрагмент, димерне антитіло (діабоді), лінійне антитіло, одноланцюгове антитіло, мінітіло, димерне антитіло, утворене із фрагментів антитіла, і мультиспецифічні антитіла, утворені із фрагментів антитіл.
Повнорозмірні антитіла можна обробляти ферментами, такими як папаїн або пепсин, з одержанням необхідних фрагментів антитіл. Розщеплення папаїном застосовують для одержання двох ідентичні антигензв'язувальних фрагментів, які називають "Рар"-фрагментами, кожний 3 одним антигензв'язувальним центром, при цьому частину, що залишилася, позначають як "Ес"-фрагмент. РГар-фрагмент містить також константний домен легкого ланцюга й СН:і-домен важкого ланцюга. Після обробки пепсином одержують Е(ар')»:-фрагмент, який несе два антигензв'язувальні центри й усе ще зберігає здатність до перехресного зшивання з антигеном.
Еаб'-ррагменти відрізняються від Еар-фрагментів присутністю додаткових залишків, 5О включаючи один або декілька залишків цистеїну із шарнірної ділянки антитіла на С-кінці СНІ- домену. Е(ар)»-фрагменти антитіл представляють собою пари ЕРар'-фрагментів, зв'язані з допомогою залишків цистеїну в шарнірній ділянці. Відомі інші хімічні комбінації фрагментів антитіл. "Ем'-фрагмент містить повний антиген-розпізнавальний і антиген-зв'язувальний центр, що складається з димеру, що включає варіабельну ділянку одного важкого й одного легкого ланцюга в тісній нековалентній асоціації. У цій конфігурації три СОК кожної варіабельної ділянки взаємодіють із певним антигензв'язувальним центром на поверхні димеру МН-МІ. У цілому, шість СОК обумовлюють специфічність антитіла відносно зв'язування антигену. "Одноланцюговий Ем" або "5сЕм"-фрагмент антитіла представляє собою одноланцюговий 60 Ем-варіант, що містить МН- і Мі-ділянки антитіла, при цьому ділянки присутні в одному поліпептидному ланцюзі. Одноланцюговий Ем має здатність розпізнавати антиген і зв'язуватися з ним. Поліпептид 5сЕм необов'язково може містити також поліпептидний лінкер, розташований між МН- ії Мі-ділялнками для полегшення утворення тривимірної структури, необхідної для зв'язування антигену за допомогою 5сЕм |див., наприклад, РійсКійип, в: Те РПагтасоіоду ої топосіопаї! Апііроаієв, т. 113, під ред. Козепригд і Мооге, вид-во Зргіпдег-мепад, Мем Могк, 1991, стор. 269-315).
Інші фрагменти антитіл, що мають здатність до розпізнавання, включають Фрагменти, які містять пари розташованих у вигляді тандему Ба-сегментів (Мн-Сні-Мн-Сні), що утворюють пари антигензв'язувальних ділянок. Вказані "лінійні антитіла" можуть бути біспецифічними або моноспецифічними, що описано, наприклад, в (гараїа та ін., Ргоївіп Епод. 8(10), 1995, стор. 1057- 10621.
Гуманізоване антитіло або фрагмент гуманізованого антитіла представляє собою специфічний тип химерного антитіла, яке включає варіант амінокислотної послідовності імуноглобуліну або його фрагменту, який має здатність зв'язуватися з попередньо визначеним антигеном і який містить один або декілька ЕК, який (ї) має (ють) амінокислотну послідовність, що практично відповідає послідовності людського імуноглобуліну, і один або декілька СОК, який () має (ють) амінокислотну послідовність, яка практично відповідає амінокислотній послідовності нелюдського імуноглобуліну. Вказану нелюдську амінокислотну послідовність, яку часто позначають як "імпортна" послідовність, як правило, одержують із "імпортної" ділянки антитіла, зокрема, варіабельної ділянки. У цілому, гуманізоване антитіло включає принаймні
СОК або НМ. нелюдського антитіла, вбудовані між ЕК варіабельного домену людської важкого або легкого ланцюга.
Даний винахід описаний специфічні гуманізовані антитіла до ТтКВ, які містять СОК, отримані з мишиного лідерного 0003, вбудовані між ЕК послідовностей варіабельних ділянок важкого й легкого ланцюга людської зародкової лінії. Повинно бути очевидно, що певні залишки мишиного
ЕК можна імпортувати для забезпечення функції гуманізованих антитіл, і отже, певні залишки послідовностей варіабельних ділянок важкого й легкого ланцюга людської зародкової лінії модифікують для того, щоб вони були такими ж, як у відповідній мишиній послідовності.
В одному аспекті, гуманізоване антитіло до Тг/КкВ містить практично всі із принаймні однієї й, як правило, двох варіабельних ділянок (таких, наприклад, як ті, що входять в Рар-, Раб'-, Е(аб»- ; Еабс- і ЕРм-фрагменти), у яких усі або практично всі СОМ відповідають СОК нелюдських імуноглобулінів, і згідно із даним винаходом СОМ представляють собою мишині послідовності лідерного ЮБО0ОЗ, і ЕК представляють собою ЕК, які мають консенсусну послідовність або послідовність зародкової лінії людського імуноглобуліну. В іншому об'єкті винаходу гуманізоване антитіло до ТІКВ включає також принаймні частину Ес-ділянки імуноглобуліну, як правило, людського імуноглобуліну. Як правило, антитіло повинно містити як легкий ланцюг, так і принаймні варіабельну ділянку важкого ланцюга. Антитіло може включати також при необхідності одну або декілька з наступних ділянок: СН':, шарнірна ділянка, СН», СНз та/або СНА важкого ланцюга.
Гуманізоване антитіло до ТІКВ може бути вибране за будь-якого класу імуноглобулінів, включаючи ІМ, Ід, дО, ДА і ІдЕ, ії будь-якого ізотипу, включаючи Ідси, Іда2, ІДСз, аа, ІДА: і
ІдАг. Наприклад, константний домен може представляти собою комплементзв'язувальний константний домен, де є бажаним, щоб гуманізоване антитіло проявляло цитотоксичну активність, і ізотип типово представляв собою Ідс:і. У тих випадках, коли така цитотоксична активність не є бажаною, то константний домен може представляти собою інший ізотип, наприклад, ІдО2. Альтернативне гуманізоване антитіло до ТІкКВ може містити послідовності з більше ніж одного класу або ізотипу імуноглобулінів, і вибір конкретних константних доменів для оптимізації необхідних ефекторних функцій знаходиться в компетенції звичайного фахівця в даній галузі. Конкретними варіантами здійснення даного винаходу є антитіла, які представляють собою антитіла ізотипу Ідс1 і більш конкретно антитіла ізотипу Ідс:, у яких "виключені" ефекторні функції.
ЕК і СОК або НУ. гуманізованого антитіла до ТІКкВ не обов'язково повинні точно відповідати батьківським послідовностям. Наприклад, один або декілька залишків в імпортному СОМ або
НМ. або в консенсусній послідовності або послідовності зародкової лінії ЕК можна змінювати (наприклад, за допомогою мутагенезу) шляхом заміни, інсерції або делеції, у результаті чого отриманий амінокислотний залишок стає не ідентичним до вихідних залишків у відповідному положенні будь-якої батьківської послідовності, але, проте, антитіло зберігає функцію, таку як здатність зв'язуватися з Т/кВ. Вказана зміна, як правило, не повинна бути великою і повинна представляти собою консервативні зміни. Як правило, принаймні 75 905 залишків, частіше 60 принаймні на 9095 і найбільш часто більше 9595 або більше 9895 або більше 99 95,
гуманізованого антитіла повинне відповідати залишкам батьківської консенсусної послідовності або послідовності зародкової лінії ЕК і імпортних послідовностей СОК.
Залишки імуноглобуліну, які впливають на поверхню розділу між варіабельними ділянками важкого й легкого ланцюга ("поверхня розділу МІ -МН"), представляють собою залишки, які впливають на близькість або орієнтацію двох ланцюгів відносно один одного. Конкретними залишками, які можуть брати участь у взаємодіях між ланцюгами, є залишки МІ. 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96 і 98 і залишки МН 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100 ї 103 (згідно із системою нумерації, запропонованою КанрБаї та ін., зедиепсез ої Ргоїеіпз ої Іттипо!одісаї Іпегезі (Маїопаї
Іпвійшев ої Неайй, Веїйезаа, Ма., 19871). В 05 6407213 обговорюється також, що у вказаній взаємодії можуть брати участь такі залишки як залишки МІ. 43 їі 85 і залишки МН 43 і 60. Хоча вказані залишки вказані тільки для людського Ідс, їх можна розглядати й для інших видів.
Важливі залишки антитіла, які, як очікується, можуть брати участь у взаємодіях між ланцюгами, відбирають для заміни в консенсусній послідовності.
Поняття "консенсусна послідовність" і "консенсусне антитіло" стосуються амінокислотної послідовності, яка містить амінокислотний залишок, що найчастіше зустрічається, у кожному положенні у всіх імуноглобулінах будь-якого класу, ізотипу або в будь-якій субодиничній структурі, наприклад, варіабельній ділянці людського імуноглобуліну. Консенсусна послідовність може базуватися на імуноглобулінах конкретних видів або багатьох видів. Під "консенсусною/консенсусним" послідовністю, структурою або антитілом мають на увазі консенсусну людську послідовність, вказану в конкретних варіантах здійснення винаходу, і поняття стосується амінокислотної послідовності, яка містить залишки, що найчастіше зустрічаються в кожному положенні у всіх людських імуноглобулінах конкретного класу, ізотипу або субодиничній структурі. Таким чином, консенсусна послідовність містить амінокислотну послідовність, яка має в кожному положенні амінокислоту, яка присутня в одному або декількох відомих імуноглобулінах, але яка може не представляти собою точну копію повної амінокислотної послідовності будь-якого індивідуального імуноглобуліну. Варіабельну ділянку консенсусної послідовності не одержують із якого-небудь антитіла, що зустрічається в природніх умовах, або імуноглобуліну (Кабраї та ін., Зедцепсе5 ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї
Іптегеві, 5-е вид., вид-во Рибіїс Неакй Зегмісе, Майопаї Іпзійшевз ої Неанй, ВеШезаа, мМа., 1991) і його варіантів. Консенсусні послідовності ЕК важкого й легкого ланцюга і їх варіанти представляють собою цінні послідовності для одержання гуманізованих антитіл до ТІ/КкВ (Ідив., наприклад, 05 6037454 і 6054297).
Людські послідовності зародкової лінії присутні в природніх умовах у популяції людських антитіл. Комбінація цих генів зародкової лінії створює різноманітність антитіл. Послідовності зародкової лінії антитіла легкого ланцюга антитіла одержують із консервативних людських м- генів і і-генів зародкової лінії каппа або лямбда. Аналогічно до цього послідовності важкого ланцюга одержують із м-, а- і |-генів зародкової лінії (Геїапс М-Р і Геїгтапс б, "Тпе Іттиподіориїїп
ЕРасів ВоокК", вид-во Асадетіс Ргез5, 20011. "Виділене" антитіло представляє собою антитіло, яке ідентифіковане й відділене та/або очищене від компонента його природнього оточення. Забруднюючі компоненти природнього оточення антитіла представляють собою субстанції, які можуть впливати на діагностичне або терапевтичне застосування антитіла й можуть представляти собою ферменти, гормони або інші білкові або небілкові розчинені речовини. В одному з об'єктів винаходу виділене антитіло повинне представляти собою антитіло, очищене до ступеня, що перевищує 95 мас. 95.
Виділене антитіло представляє собою антитіло іп 5йш усередині рекомбінантних клітин, у яких воно продуковано, якщо в ньому не присутній жоден компонент природнього оточення антитіла. Однак, як правило, виділене антитіло одержують за допомогою принаймні однієї стадії очищення, під час якої видаляють рекомбінантний клітинний матеріал.
Поняття "характеристика антитіла" стосується факторів/(властивостей, які описують 5О розпізнавання антитілом антигену або ефективність антитіла іп мімо. Зміни в амінокислотній послідовності антитіла можуть впливати на властивості антитіла, такі як фолдинг, і можуть впливати на фізичні фактори, такі як початкова швидкість зв'язування антитіла з антигеном (Ка), константа дисоціації антитіла від антигену (Ка), константа афінності антитіла до антигену (Ка), конформація антитіла, стабільність білка й час напівжиття антитіла.
У контексті даного опису поняття "іодентичний" або "відсоток ідентичності" відносно двох або більшої кількості нуклеотидних або поліпептидних послідовностей стосується двох або більшої кількості послідовностей або підпослідовностей, які є однаковими або мають певний відсоток однакових нуклеотидів або амінокислотних залишків при порівнянні й вирівнюванні для максимальної відповідності. Для визначення відсотка ідентичності послідовності вирівнюють 60 для оптимального порівняння (наприклад, можна інтродукувати проломи в послідовність першої амінокислотної або нуклеотидної послідовності для оптимального порівняльного аналізу первинної структури із другою амінокислотною або нуклеотидною послідовністю). Потім порівнюють амінокислотні залишки або нуклеотиди у відповідних положеннях амінокислот або положеннях нуклеотидів. Коли в положенні в першій послідовності знаходиться такий же амінокислотний залишок або нуклеотид, що й у відповідному положенні в другій послідовності, то молекули є ідентичними у вказаному положенні. Відсоток ідентичності між двома послідовностями є функцією від кількості ідентичних положень у послідовностях (тобто 95 ідентичності - кількість ідентичних положень/загальна кількість положень (наприклад положень, що перекриваються)х100). У деяких варіантах здійснення винаходу дві порівнювані послідовності мають однакову довжину після інтродукції при необхідності проломів у послідовності (наприклад, крім додаткової послідовності, що розташована за послідовностями, що підлягають порівнянню). Наприклад, коли порівнюють послідовності варіабельних ділянок, то лідерні та/або послідовності константних доменів не розглядаються. При порівнянні послідовностей двох послідовностей, "відповідна" СОЖК стосується СОК, розташованій в однаковому положенні в обох послідовностях (наприклад, СОБ-НІ1 кожної послідовності).
Визначення відсотка ідентичності або відсотка подібності між двома послідовностями можна здійснювати за допомогою математичного алгоритму. переважним прикладом математичного алгоритму, який можна застосовувати для порівняння двох послідовностей, є (але не обмежуючись тільки ними) алгоритм І(Кагіїп і Айб5спиї, Ргос. Маї!. Асайд. сі. ОБА 87, 1990, стор. 2264-2268), модифікований відповідно описаному в І(Кагіїп ії Ай5спи!, Ргос. Май. Асад. 5сі. ОБА 90, 1993, стор. 5873-5877|Ї. Вказаний алгоритм включений у програми МВГАБТ і ХВГІА5Т, описані в (Ай5апиЇ та ін., у. Мої. Віої. 215, 1990, стор. 403-410). Аналіз нуклеотидів за допомогою
ВГА5Т можна здійснювати за допомогою програми МВГАЗТ, у якій бал - 100, довжина слова - 12, для одержання нуклеотидних послідовностей, гомологічних до нуклеїнової кислоти, що кодує білок, який представляє інтерес. Аналіз білків за допомогою ВІ А5Т можна здійснювати за допомогою програми ХВІАБТ, у якій бал - 50, довжина слова - 3, для одержання амінокислотних послідовностей, гомологічних до білка, що представляє інтерес. Для здійснення порівняльних аналізів первинної структури, що включає проломи, можна застосовувати програму Сарреа ВГ А5Т, описану в (АїЇї5спиЇ! та ін., Мисівїс Асіав, 25, 1997, стор. 3389-3402). В іншому варіанті можна застосовувати Рзі-біавзі для здійснення ітераційного пошуку, що дозволяє визначати віддалені взаємозв'язки між молекулами (І4.). При застосуванні програм ВІ А5Т,
Сарреа ВГАБЗТ і Рзі-Біазї можна застосовувати параметри відповідних програм, що задаються за замовчуванням (наприклад, ХВГА5БТ і МВГА5ЗТ). Іншим переважним прикладом (але, не обмежуючись тільки ним) математичного алгоритму, який можна застосовувати для порівняння послідовностей, є алгоритм, описаний в Муег5 і МіШег, САВІО5, 1989. Вказаний алгоритм включений у програму АГІСМ (версія 2.0), яка є частиною пакета програм для порівняльного аналізу первинної структури послідовностей (СО. Коли програму АСОМ застосовують для порівняння амінокислотних послідовностей, то можна застосовувати таблицю зважених залишків РАМ120, штраф за довжину проломи 12 і штраф за пролом 4. Додаткові алгоритми для аналізу послідовностей відомі в даній галузі й включають АОМАМСЕ і АБАМ, описані в
ІГогеїййї5 і Короці, Сотриї. Аррі. Віозсі. 10, 1994, стор. 3-5; і ЕА5ТА, описаний в Реаггоп і Гіртап,
Ргос. Маї!. Асад. Зсі. ОБА 85, 1988, стор. 2444-2448). У програмі ЕА5ЗТА параметр Кір позначає контрольний параметр, який задає чутливість і швидкість пошуку. Якщо Кіир-2, то подібні ділянки у двох послідовностей, що підлягають порівнянню, виявляють шляхом перегляду пар вирівняних залишків; якщо Кішр-ї1ї, то оцінюють індивідуальні вирівняні амінокислоти. Для білкових послідовностей можна задавати значення Кіпр, що дорівнює 2 або 1, а для послідовностей ДНК значення в межах від 1 до 6. В альтернативному варіанті порівняльний аналіз первинної структури білкових послідовностей можна здійснювати за допомогою алгоритму СІ О5ТАГ. МУ, описаного в ІНіддіп5 та ін., Меїтоаз Епгутої. 266, 1996, стор. 383-402. 5О Послідовність нуклеїнової кислоти "функціонально зв'язана", якщо вона розташована у функціональному взаємозв'язку з іншою послідовністю нуклеїнової кислоти. Наприклад, передпослідовність нуклеїнової кислоти або секреторна лідерна послідовність функціонально зв'язана з нуклеїновою кислотою, що кодує поліпептид, якщо вона експресується у вигляді білка-попередника, який бере участь у секреції поліпептиду; промотор або енхансер функціонально зв'язаний з кодувальною послідовністю, якщо він впливає на транскрипцію послідовності; або сайт зв'язування рибосоми функціонально зв'язаний з кодуючою послідовністю, якщо він позиціонований таким чином, що полегшує трансляцію. У цілому, "функціонально зв'язана" означає, що послідовності ДНК, які зв'язані, є дотичними, і, у випадку секреторної лідерної послідовності, дотикаються й у рамці зчитування. Однак енхансери не 60 необов'язково є дотичними. Зв'язування може здійснюватися шляхом лігування в підходящих сайтах рестрикції. Якщо такі сайти не існують, то можна використовувати синтетичні олігонуклеотидні адаптори або лінкери.
Як використовується в даній заявці, вираз "клітина", "клітинна лінія" і "культура клітин" використовуються взаємозамінно й усі такі позначення охоплюють їх потомство. Таким чином, "трансформанти" і "трансформовані клітини" включають первинні розглянуті клітини й культури, що мають походження з них, незалежно від кількості переносів.
Поняття "ссавець", що підлягає лікуванню, стосується будь-якої тварини, яка належить до класу ссавців, включаючи людей, домашніх і сільськогосподарських тварин, а також тварин, що живуть у зоопарку, призначених для спорту або кімнатних тварин, таких як собаки, коні, кішки, корови і т.д. переважний ссавець представляє собою людину. "Порушення", як використовується в даній заявці, представляє собою будь-який стан, який буде одержувати перевагу від лікування із застосуванням гуманізованого антитіла до ТгКВ, описаного в даній заявці. Він включає хронічні й гострі порушення або захворювання, включаючи ті патологічні стани, які викликають схильність ссавця до вказаного порушення.
Необмежуючі приклади або порушення, що піддаються лікуванню відповідно до даної заявки, включають очні порушення або порушення сітківки.
Як використовується в даній заявці, термін "порушення, зв'язане з ТІКкВ" або "захворювання, зв'язане з ТІКВ" стосується стану, при якому показана модифікація або активація клітин, які експресують ТІК. Порушення, зв'язане з ТІКкВ, включає захворювання й порушення, такі як вікова дегенерація жовтої плями, географічна атрофія, діабетична ретинопатія, діабетичний набряк жовтої плями, пігментна дистрофія сітківки, спадкова дистрофія сітківки, спадкова макулодистрофія, міопічна дегенерація, оклюзії вени сітківки, оклюзії артерії сітківки, ендофтальміт, увеїт, кистозний макулярний набряк, хороїдальна неоваскулярна мембрана внаслідок будь-якого із захворювань сітківки, оптичні нейропатії, глаукома, відшарування сітківки, токсична ретинопатія, променева ретинопатія, і травматична ретинопатія, а також продромальна й від легкої до помірної хвороба Альцгеймера, затримка прогресування захворювання в пацієнтів із хворобу Альцгеймера, хвороба Хантинітона, хвороба Паркінсона, великий депресивний розлад, шизофренія, когнітивне порушення, зв'язане із шизофренією, запобігання першого приступу психозу в індивідуумів з ослабленим психозним синдромом, запобігання повторення в пацієнтів із шизофренією, терапевтично резистентна депресія, і метаболічні захворювання, такі як гіперфагія, ожиріння або метаболічний синдром.
Термін "інтравітреальна ін'єкція" має загальноприйняте значення в даній галузі техніки й стосується інтродукції антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту в склоподібне тіло пацієнта.
Термін "підшкірне введення" стосується інтродукції антитіла до ТТкВ або його антигензв'язувального фрагменту під шкіру хворої тварини або людини, переважно в кишеню між шкірою й нижче розташованою тканиною, шляхом відносно повільного пролонгованого введення з резервуара, що містить лікарський засіб. Пощипування або відтягування шкіри нагору вниз від нижче розташованої тканини може створювати кишеня.
Поняття "підшкірна інфузія" стосується інтродукції лікарського засобу під шкіру хворої тварини або людини, переважно в кишеню між шкірою й нижче розташованою тканиною, шляхом відносно повільного пролонгованого введення з резервуара, що містить лікарський засіб протягом періоду часу, що становить (але, не обмежуючись тільки вказаним) 30 хв або менше або 90 хв або менше. Необов'язково інфузію можна здійснювати шляхом підшкірної імплантації насоса для введення лікарського засобу, імплантованого під шкіру хворої тварини або людини, при цьому насос забезпечує введення лікарського засобу в попередньо визначеній кількості протягом попередньо певного періоду часу, що становить 30 хв, 90 хв або періоду часу, відповідного до тривалості схеми лікування.
Поняття "підшкірний болюс" стосується введення лікарського засобу під шкіру хворої тварини або людини, при цьому тривалість введення лікарського засобу у вигляді болюсу становить менше приблизно 15 хв; в іншому об'єкті винаходу менше 5 хв, а ще в одному об'єкті винаходу протягом менше 60 с. У наступному об'єкті винаходу введення здійснюють у кишеню між шкірою й нижче розташованою тканиною, де кишеню можна створювати шляхом пощипування або відтягування шкіри нагору вниз від нижче розташованої тканини.
Термін "т-ерапевтично ефективна кількість" використовується по відношенню до кількості антитіла до Т/КкВ або його антигензв'язувального фрагменту, при використанні якої відбувається ослаблення або полегшення одного або декількох симптомів порушення, що підлягає лікуванню. Діючу речовину застосовують таким чином, що у вказаній кількості вона виявляла сприятливу дію на пацієнта. В одному аспекті, терапевтично ефективна кількість має 60 нейрозахисний або нейрорегенеративний ефект. В іншому аспекті, терапевтично ефективна кількість стосується цільової концентрації в сироватці пацієнта, при якій вона проявляється як ефективна, наприклад, відносно вповільнення прогресування захворювання. Ефективність можна оцінювати загальноприйнятими шляхами залежно від стану, що підлягає лікуванню.
Наприклад, при захворюваннях або порушеннях ока/ сітківки, які характеризуються клітинами, що експресують ТІ/КВ, ефективність може бути виміряна шляхом визначення частоти відповідей, наприклад, відновлення зору або шляхом оцінки часу затримки до прогресування захворювання.
Терміни "лікування" і "терапія" і подібні, як використовуються в даній заявці, стосуються терапевтичних, а також профілактичних або супресивних заходів відносно захворювання або порушення, які приводять до будь-якої клінічно важливої або сприятливої дії, включаючи (але, не обмежуючись тільки ними) полегшення або ослаблення одного або декількох симптомів, регрес, уповільнення або припинення розвитку захворювання або порушення. Таким чином, наприклад, під поняття "лікування" підпадає введення антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту до або після початку прояву симптому захворювання або порушення, що приведе до попередження або усунення одного або декількох ознак захворювання або порушення. В іншому прикладі поняття стосується введення антитіла до ТгткВ або його антигензв'язувального фрагменту після клінічного прояву хвороби для боротьби із симптомами хвороби. Крім того, у контексті даного опису поняття "лікування" або "терапія" стосуються введення антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту після виникнення й після розвитку клінічних симптомів, де введення впливає на клінічні параметри захворювання або порушення, такі як ступінь ушкодження тканини або кількість і поширення метастазів, незалежно від того приводить чи ні лікування до полегшення захворювання. Крім того, якщо застосування композицій, запропонованих у винаході, або індивідуально, або в комбінації з іншим терапевтичним засобом знімає або полегшує принаймні один із симптомів порушення, що підлягає лікуванню, в порівнянні із вказаним симптомом без застосування композиції, що містить антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, результат слід розглядати як ефективне лікування необхідного порушення незалежно від того, відбувається чи не відбувається полегшення всіх симптомів порушення.
Термін "листівка-вкладиш в упаковці" стосується інструкцій, які прийнято включати в призначені для продажу упаковки терапевтичних продуктів, які містять інформацію про покази, методи застосування, введення, протипоказаннях та/або запобіжні заходи при застосуванні вказаних терапевтичних продуктів.
Антитіла
Описані й розкриті в даній заявці антитіла представляють собою антитіла до Т/КкВ, особливо гуманізовані антитіла до ТІКВ, а також композиції й вироби, що містять антитіла до ТгКВ згідно із даним винаходом. Також описані антигензв'язувальні фрагменти антитіла до ТІКВ. Антитіла до
ТІКВ і їх антигензв'язувальні фрагменти можна застосовувати для лікування різних захворювань або порушень, які характеризуються зменшеною активністю ТІКВ шляхи. Антитіло до ТІКВ і його антигензв'язувальний фрагмент кожний включає принаймні компонент, який специфічно розпізнає ТгКВ епітоп.
При вихідній характеристиці, вибраний анти-Т"КВ мишиний лідерний 0003 на основі його набагато кращої ефективності функціонування антитіла. Створювали бібліотеку варіантів шляхом розташування СОК мишиної лідерної послідовності в ЕК консеснусних варіабельних доменів важкого й легкого ланцюга людини, а також, шляхом конструювання ЕК з різними змінами.
Це приводило до одержання різних гуманізованих варіабельних послідовностей важкого й легкого ланцюга, як показано нижче:
МІ ПОСЛІДОВНОСТІ рооз мі (мишиний лідерний), варіабельний легкий ланцюг, 5ЕО ІЮО МО: 1
РІММ5О5РБЗБІ АУМОЕКУТ МОСКОВІЇ УБЗМОКММІ АММООКРООБЗРКІ ПИУМАЗТВЕВЗИаМ
РОвЕТаЗазатОвТтІ ТІЗЗУКАЕРІ АУУУСООУУ5УРУТЕРСИаИТКІ БІК 277-9г МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮО МО: 2
РІММТО5РОБІ АУМ5І СЕВАТІМСКЗОБІ ЇЇ УЗЗМОКММ АМУМООКРООРРКІ ПИУМАЗТАВЕБОаМР рагЕзазавзаторЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕСОСТКІ БІК 2717-33 МІ: (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: З
РІММТО5РОБІ АУБІ СЕВАТІЗСКОБЗОБІ І УЗЗМОКММІ АМУМООКРЕООРРКОИ ТММ АЗТВЕБОМУР рагЕзазавзатоЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕСааТткКіІ БІК 2777-35 МІ: (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, 5ЕО ІЮ МО: 4
РІММТО5РОБІ АУБІ СЕВАТІЗСКОБЗОБІ І УЗЗМОКММІ АМУМООКРЕООРРКОИ ТММ АЗТВЕБОМУР 60 рагЕзазавзатоЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕСааТткКіІ БІК
2717-42 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 5
РІММТО5РОБІ АМ5І аЕВАТІМСКЗЗОБИЇ МБЗМОКММ АММООКРООРРКО МУ АЗТАЕБОМР рагЕзазавзатоЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕСааТткКіІ БІК 2717-44 У, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 6
РІММТО5РОБІ АМ5І аЕВАТІМСКЗЗОБИЇ МБЗМОКММ АММООКРООБРКОТМУМАЗТАЕБИаМР рагЕзазавзаторЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕаОИТКІ БІК 2717-48 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, 5ЕО ІЮ МО: 7
РІММТО5РОБІ АМ5І аЕВАТІМСКЗЗОБИЇ МБЗМОКММ АММООКРООРРКОМУАЗТАЕБИаМР рагЕзазавзаторЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕаОИТКІ БІК 2777-51 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 8
РІММТО5РОБІ АМ5І ЕВАТІЗСКЗОБІИ УЗЗМОКММІ АМУООКРИОРРКІ ГИ АЗТАЕБОМР рагЕзазавзатоЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕСааТткКіІ БІК 277-684 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 9
РІММТО5РОБІ АМ5І ЕВАТІЗСКЗЗОБІ ЇЇ МЗЗМОКММІ АМУООКРЕОРРКО ІТ МУМАЗТАЕБОМР рагЕзазавзаторЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООМУУУРУТЕСОСТКІ БІК 277-687 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 10
РІММТО5РОБІ АМ5І аЕВАТІМСКЗЗОБИЇ МБЗМОКММ АММООКРООБРКОТМУМАЗТАЕБИаМР рагЕзазавзаторЕтІ Ті ОАЕОМАУУУСООУУ5УРУТЕаОИТКІ БІК
МН ПОСЛІДОВНОСТІ роз Мн, (мишиний лідерний) варіабельний важкий ланцюг, 5ЗЕО ІЮ МО: 11
ОМОГ ОО5САЕЇ АКРОАЗБУКМЗСКАБахУТЕТаММУМНУУКОАРИООСІ ЕМИМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОКАТІ ТАОКЗЗЗТАММОЇ 551 ТЗЕОЗБАУУУСАВЗА Там аОоСстті ТУ 277-дг МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 12
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИУ ТЕ Там МНУМАОАРИООСІ ЕМ МОамМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОАУТМТАОТЗТЗТУУМЕЇІ 551 В5ЕОТАУУУСАВЗА ТОМУ СпИОСТІ МТУ 277-33 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, ЗЕО ІЮО МО: 13
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОУТЕ Там МНУМВОВРОаСИЇ ЕУЛОМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОАМТІТАОТЗТЗТУУМЕЇ 551 ТЕО ТАУУУСАНЗА ТОМУ СОС УТУЗ5 277-35 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, 5ЗЕО ІЮ МО: 14
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОУТЕ Там МНУМВОВРОаСИЇ ЕУЛОМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОАМТІТАОТЗТЗТУУМЕЇ 551 ВЗЕОТАУУУСАВЗН ТОМУУуУСОЮСТТУТУБо 2717-42 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, ЗЕО ІЮО МО: 15
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОУТЕ Там МНУМВОВРОаСИЇ ЕУЛОМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОАМТІТАОТЗТЗТУУМЕЇ 551 ВЗЕОТАУУУСАВЗН ТОМУУуУСОЮСТТУТУБо 2777-44 УН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, 5ЗЕО ІЮО МО: 16
ОМОЇ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМУ ТЕ Там МНУМАОАРИОСІЇ ЕМ МІМРЗТОМ ТЕММОК
ЕКОВУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 5511 Т5ЕОТАУУУСАВЗА Та МУ ССОСТТУТУЗо 2777-48 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 17
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОУТЕ Там МНУМВОВРОаСИЇ ЕУЛОМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОАУТМТАОТЗТЗТУУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАВЗА ТОМУ С2ИОСТ ТУГУ 277-51 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, 5ЕО ІЮ МО: 18
ОМОГ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИОУТЕ Там МНУМВОВРОаСИЇ ЕУЛОМІМРЗТОМТЕММО
КЕКОВАТІ ТАОТЗТЗТУУМЕЇ 551 В5ЕОТАУУУСАВЗНТОМУУСОЮСТТУТУБО 277-684 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, 5ЗЕО ІЮО МО: 19
ОМОЇ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИахТЕТаММУМНУуУМУВОАРИаСаі ЄМІаМІМРЗТОМТЕММОК
ЕКОВУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 ВЗЕОТАУУУСАВЗАТОМУМУСОСТТУТУ55 277-687 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг, ЗЕО ІЮ МО: 20
ОМОЇ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМУ ТЕ Там МНУМАОАРИОСІЇ ЕМ МІМРЗТОМ ТЕММОК
ЕКОВУТМТАОТЗТЗТУММЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАНЗА ТОМУ СОСТТУТУБ
Підкреслені послідовності відповідали СОК ділянкам варіабельних ділянок легких і важких ланцюгів.
Гуманізовані антитіла до ТІКкВ згідно із даним винаходом представляють собою антитіла, які мають послідовності легких і важких ланцюгів, як представлено в таблиці нижче. Були створені
Ід21-КО мутанти шляхом інтродукції двох мутацій в Ес ділянку, І еи232Аїа і І еи233АЇа для зменшення ефекторної функції.
Таблиця 1:
РІММТО5РОБІ АУ5І ЕВАТІМСКЗЗОБІ І УБЗМОКММІ АМУ
УООКРИООРРКІ ПУ АЗТАВЕЗОаУРОВЕЗОаЗавзаИтонтіІ ТІ 277-9г (Легкий БІ ОЗАЕОМАУУУСООМУ5УРУТРИОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЄ 24 ланцюг, Ідс1) РРБОЕОЇ КБатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМКМОМА О5ИаМ
ЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО а 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОІ МОБОАЕУККРОАБУКУЗСКАВСИУТЕТамМУМнУМУНО
АРСОСІ ЕМ МОамМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВУТМТАОТТТУ
УМЕГ 55І АВА5БЕОТАУУУСАНЗНТОаМУМУСОСТІ МТГУЗЗАЗТК
СРОЗМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТАА ас МУКОМЕРЕРУТУЗУ МЗС 277-дг (Важкий А Т5ОУНТЕРАМІ О55О1 У5І 55 МУРБЗББІаТОТМІСМУМ ланцюг, ІДС) НКРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСОРРСОРАРЕЇ ! сСаРБЗМНІ ЕР 22 ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУМУрамМЕМ
НМАКТКРАЕЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОУЛІ МСОКЕУКСКУ
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМБ5І Т
СІ УКаЕМРООІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраИБЗЕРІ М
ЗКІТМОКЗАМООССММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ І РО
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
АРСОСІ ЕМ МОамМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВУТМТАОТТТУ
УМЕГ 55І АВА5БЕОТАУУУСАНЗНТОаМУМУСОСТІ МТГУЗЗАЗТК
СРОЗМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСТАА ас МУКОМЕРЕРУТУЗУ МЗС 277-дг (Важкий А Т5ОУНТЕРАМІ О55О1 У5І 55 МУРБЗББІаТОТМІСМУМ ланцюг, І9С1-КО) НКРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОИРБЗУРНІ Е 23 ' РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамЕ
МНМАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВАУУМІ ТМ НОУМІ МЕОКЕУКСКМ
ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І.
ТС УКагМРЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ.
УЗКТУОКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАЇІНМНУТОКОІ 5І РИ
РІММТО5РОБІ АУБІ СЕВАТІЗСКОБЗОБІ І ЗЗМОКММІ АМУ
УООКРИООРРКІ ПУ АЗТАВЕЗОаУРОВЕЗОаЗавзаИтонтіІ ТІ 2717-33 (Легкий БІ ОЗАЕОМАУУУСООМУ5УРУТРа,И,ИтКІ ЕІКАТМААРЗУРІЄ 24 ланцюг, Ідс1) РРБОЕОЇ КБатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМКМОМА О5ИаМ
ЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО а 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
ВАРИ ЕМІИМІМРЗТОМТЕММОКЕКО ВМТ ТАТУ
МЕ! 55І ТЗЕОТАУУУСАВЗА ТОМУ ССОСТТУТУ5ЗАВЗТКО
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА 277-33 (Важкий ТЗамНтТЕРАМІ О55О011 51 55 УРЗБІ аТОТМІСМУМН ланцюг, ІДС) КРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСОРРОРАРЕГ І. СОаРБЗМУБГЕРР 25 ' КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамЕМУН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКагуУРБОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБраБЗЕРІ 5
КЕТМОКЗАМООаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І РИ
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
ВАРИ ЕМІИМІМРЗТОМТЕММОКЕКО ВМТ ТАТУ
МЕ! 55І ТЗЕОТАУУУСАВЗА ТОМУ ССОСТТУТУ5ЗАВЗТКО
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА 277-33 (Важкий ТЗамНтТЕРАМІ О55О011 51 55 УРЗБІ аТОТМІСМУМН ланцюг, І9С1-КО) КРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОРБЗУНІ ЕР 26 ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОУЛІ МСОКЕУКСКУ
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМБ5І Т
СІ УКаЕМРООІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраИБЗЕРІ М
ЗКІТМОКЗАМООССММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ І РО
РІММТОБРОБІ АМ5І ЧЕВАТІЗСКЗБОВІ І МБЗМОКММІ АМ/
ХООКРИООРРК ПИМАЗТАЕЗОМРОВЕЗОаЗОБОТОНТІ ТІ 2717-35 (Легкий 5 ОЗАЕОМАУУУСООУУБУРУТРаСИаИТтТКІ БІКАТМААРЗМУРІЄ 27 ланцюг, Ідс1) РРЗОБОЇ Ка ТАЗМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБОМ
ЗОЕБЗМТЕООЗКОБЗТУВІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
І 55РУТКЗЕМНСЕС
СОМОЇ МОБЕАЕУККРИАБУКУЗСКАЗОМТЕТамМ Мн
АРЕИОСІ ЕУМЛИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВМТІ ТАТУ
МЕ! 55І В5ЕОТАМУУСАВЗНТОМУМ ПОСТ УТУБЗАВТКОИа
РЗМЕРІГАРБЗКОТЗИСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗОАЇ. 277-35 (Важкий Т5ОМНТЕРАМІ ОББИЇ БІ БУМ РІЗІ Я ТОГМІСМММН ланцюг, І9С1) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГ І. СОаРБМУБГЕРР 28 ' КРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУУМОМЗНЕОРЕУМКЕМУ У СРОМЕМН
МАКТКРАЕєЄОММЗТУАУУЗМІТМ НОВУ МаКЕУКСКУМ
КАГРАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРОАЕЕМТКМОМІ ТО
ГУКагМРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБрОИЗЕРІ М
КСТМОКЗАУМООСІММЕЗСЗММНЕАЇ!І НМНУТОКБІ 5І РИ
СОМОЇ МОБЕАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗОМТЕТИамУ Мн
АРЕИОСІ ЕУМЛИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВМТІ ТАТУ
МЕ! 55І В5ЕОТАМУУСАВЗНТОМУМ ПОСТ УТУБЗАВТКОИа
РЗМЕРІГАРБЗКОТЗИСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗОАЇ. 277-35 (Важкий Т5ОМНТЕРАМІ ОББИЇ БІ БУМ РІЗІ Я ТОГМІСМММН ланцюг, Ід51-КО) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСОРРСОРАРЕАДАСОРБЗМУНІ ЕР 29 ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕМУМ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОУМО ГИАУМЗМІТМІ НОБРУЛ МОКЕУКСКУ
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РРОВЕЕМТКМОМБІ Т
СГ УКагуУРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ М
ЗКІ ТМОКЗАМООСММЕЗСЗММНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
РІММТОБРОБІ АМ5І ЧЕВАТІМСКЗЗОВІ І УЗЗМОКММІ АМУ
ХООКРИООРРК ПИМАЗТАЕЗОМРОВЕЗОаЗОБОТОНТІ ТІ 2717-42 (Легкий 5 ОЗАЕОМАУУУСООУУБУРУТРаСИаИТтТКІ БІКАТМААРЗМУРІЄ 30 ланцюг, Ідс1) РРЗОБОЇ Ка ТАЗМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМАГОБОМ
ЗОЕБЗМТЕООЗКОБЗТУВІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
І 55РУТКЗЕМНСЕС
СОМОЇ МОБЕАЕУККРИАБУКУЗСКАЗОМТЕТамМ Мн
АРЕИОСІ ЕУМЛИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВМТІ ТАТУ
МЕ! 55І В5ЕОТАМУУСАВЗНТОМУМ ПОСТ УТУБЗАВТКОИа
РЗМЕРІГАРБЗКОТЗИСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗОАЇ. 277-42 (Важкий Т5ОМНТЕРАМІ ОББИЇ БІ БУМ РІЗІ Я ТОГМІСМММН ланцюг, І9С1) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГ І. СОаРБМУБГЕРР З1 ' КРКОТІ МІЗАТРЕМУТСМУУМОМЗНЕОРЕУМКЕМУ У СРОМЕМН
МАКТКРАЕєЄОММЗТУАУУЗМІТМ НОВУ МаКЕУКСКУМ
КАГРАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРОАЕЕМТКМОМІ ТО
ГУКагМРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБрОИЗЕРІ М
КСТМОКЗАУМООСІММЕЗСЗММНЕАЇ!І НМНУТОКБІ 5І РИ
СОМОЇ МОБЕАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗОМТЕТИамУ Мн
АРЕИОСІ ЕУМЛИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВМТІ ТАТУ
МЕ! 55І В5ЕОТАМУУСАВЗНТОМУМ ПОСТ УТУБЗАВТКОИа
РЗМЕРІГАРБЗКОТЗИСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗОАЇ. 277-42 (Важкий Т5ОМНТЕРАМІ ОББИЇ БІ БУМ РІЗІ Я ТОГМІСМММН ланцюг, Ід51-КО) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСОРРСОРАРЕАДАСОРБЗМУНІ ЕР За ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕМУМ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОУМО ГИАУМЗМІТМІ НОБРУЛ МОКЕУКСКУ
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РРОВЕЕМТКМОМБІ Т
СГ УКагуУРБОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ М
ЗКІ ТМОКЗАМООСММЕЗСЗММНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
РІММТОБРОБІ АМ5І ЧЕВАТІМСКЗЗОВІ І УЗЗМОКММІ АМУ 2717-44 (Легкий ХООКРОЕОБРКОИ МУ АЗТАВЕЗаМРОНЕЗаБОЗаИтТОгТтІ ТІ 33 ланцюг, Ідс1) ЗІ ОАЕОМАМУУСООУУЗУРУТРаОСТКІ ЕІКАТМААРЗМРІЕ
РРЗОЕОЇ Ка ТАЗУМСІ І ММЕМРВЕАКМОМ/КМОМАГ ОБО М
7 ролееееяеитннненковтня
СІ 55РУТКЗЕМАОЕС
ОМОЇ МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТОМУММНУУпНО
АРСОСІ ЕМЛОМІМРОТОМ ТЕУМОКЕКОНУТМТАОТТ5ТМУ
МЕГ55І.1Т5ЕОТАМУУСАНЗАТОаМУУСОСТТУТУБЗАЗТКО
РЗМЕРІГАРББОК5ОТЗОСТААГ СЕСІЇ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАЇ. 277-44 (Важкий Т5ОМНТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55УМТУРБББІ ЕТО ГМІСМУМН ланцюг, ІдДС1) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГІ ССОРБЗМУЕГЕРР 34 ' КРКОТ-МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУ УМСОМЕМН
МАКТКРАЕЄОУМТУАУМЗМІСТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУМ
КАГРАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММТІ РРЗАЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКИаРУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМЛОБОСБЗЕРІ МБ
КТМОКБАМООСМУЕ5СЗММНЕАІ-НМНУТОКБІ БІ ЗРО
ОМОЇ МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТОМУММНУУпНО
АРСОСІ ЕМЛОМІМРОТОМ ТЕУМОКЕКОНУТМТАОТТ5ТМУ
МЕГ55І.1Т5ЕОТАМУУСАНЗАТОаМУУСОСТТУТУБЗАЗТКО
РЗМЕРІГАРББОК5ОТЗОСТААГ СЕСІЇ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАЇ. 277-44 (Важкий Т5ОМНТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55УМТУРБББІ ЕТО ГМІСМУМН ланцюг, ІДс1-КО) КРОЬМТКМОКАУЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕААССРБЗУНІ ЕР 35 ' РКРКОТІ-МІЗАТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУМ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОУМО ГУАУМЗМІТМІ НОБУЛА-МОКЕУКОКМУ
МКАГРАРІЕКТІЗКАКЕОРАЕРОММУ ТІ РРУЬВЕЕМТКМОМБІ Т
СІ УКОаРУРБОІАМЕМ/ЕЗМООРЕММУКТТРРМІОБОСЗЕРІ М
ЗКТУОК5АМООСММЕЗСЗММНЕАС-НМНУТОКБІ 5І.5РО
РІММТО5РОБІ АМБІ СЕВАТІМСКОБІ ЇЇ УБЗМОКММІ АМУ
ХУООКРООРРКІМУМАЗБТАЕЗОУРОНЕЗОБОЗОТОЕТІ ТІ
2177-48 (Легкий БІОАЕОМАУУУСООМУБУРУТЕСОСТКІ БЕІКАТМААРБЗУРІЕ зв ланцюг, Ідас1) РРБЗБОЕОЇ КЗОТАЗУМС І ММЕУРАБЕАКМОУМУКМОМАГООМ
ЗОЕБМТЕООЗКОБТУБІ 55 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАОЕС
ОМОЇ МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТОМУММНУУпНО
АРООСІ ЕМЛОМІМРЗТОМТЕММОКЕКОАУТМТАОТТ5ТМУ
МЕГ55ІІ АВА5ЕОТАМУУСАНЗ НА ТОМУУУСОСТТМТУБЗАЗТКО
РЗМЕРІГАРББОК5ОТЗОСТААГ СЕСІЇ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАЇ. 277-48 (Важкий Т5ОМНТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55УМТУРБББІ ЕТО ГМІСМУМН ланцюг, ІДС1) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТОСРРОРАРЕГІ ССОРБЗМУЕГЕРР 37 ' КРКОТ-МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУМКЕМУ УМСОМЕМН
МАКТКРАЕЄОУМТУАУМЗМІСТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУМ
КАГРАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММТІ РРЗАЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКИаРУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМЛОБОСБЗЕРІ МБ
КТМОКБАМООСМУЕ5СЗММНЕАІ-НМНУТОКБІ БІ ЗРО
ОМОЇ МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТОМУММНУУпНО
АРООСІ ЕМЛОМІМРЗТОМТЕММОКЕКОАУТМТАОТТ5ТМУ
МЕГ55ІІ АВА5ЕОТАМУУСАНЗ НА ТОМУУУСОСТТМТУБЗАЗТКО
РЗМЕРІГАРББОК5ОТЗОСТААГ СЕСІЇ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗОАЇ. 277-48 (Важкий Т5ОМНТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55УМТУРБББІ ЕТО ГМІСМУМН ланцюг, ІДс1-КО) КРОЬМТКМОКАУЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕААССРБЗУНІ ЕР З8 ' РКРКОТІ-МІБЗАТРЕМТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМО МЕМ
НМАКТКРАЕЄОУМО ГУАУМЗМІТМІ НОБУЛА-МОКЕУКОКМУ
МКАГРАРІЕКТІЗКАКЕОРАЕРОММУ ТІ РРУЬВЕЕМТКМОМБІ Т
СІ УКОаРУРБОІАМЕМ/ЕЗМООРЕММУКТТРРМІОБОСЗЕРІ М
ЗКТУОК5АМООСММЕЗСЗММНЕАС-НМНУТОКБІ 5І.5РО
РІММТО5РОБІ АМБІ СЕВАТІЗСКЗЗОБИ УЗЗМОКММІ АМ/
ХУООКРООРРКІМУМАЗБТАЕЗОУРОНЕЗОБОЗОТОЕТІ ТІ
2177-51 (Легкий БІОАЕОМАУУУСООМУБУРУТРОСОИТКІ БЕІКАТМААРБЗУРІЕ 39 ланцюг, Ідас1) РРБЗБОЕОЇ КЗОТАЗУМС І ММЕУРАБЕАКМОУМУКМОМАГООМ
ЗОЕБМТЕООЗКОБТУБІ 55 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУТКЗЕМАОЕС
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
ВАРИ ЕМІИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВАТІ ТАОТ5ТЗТУУ
МЕ! 551 А5БЕОТАУУУСАНЗА ТОМУ ОСТ ТУТ УЗЗАЗТКОИ
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА 277-514 (Важкий Т5амНтТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ЕТОГМІСМУМН ланцюг, ІДС) КРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСОРРОРАРЕГ І. СОаРБЗМУБГЕРР 40 ' КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУ УУрамМЕМН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКагуУРБОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБраБЗЕРІ 5
КЕТМОКЗАМООаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І РИ
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
ВАРИ ЕМІИМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВАТІ ТАОТ5ТЗТУУ
МЕ! 551 А5БЕОТАУУУСАНЗА ТОМУ ОСТ ТУТ УЗЗАЗТКОИ
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА 277-514 (Важкий Т5амНтТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ЕТОГМІСМУМН ланцюг, І9С1-КО) КРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОРБЗУНІ ЕР А ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОУЛІ МСОКЕУКСКУ
МКАГРАРІЕКТІЗКАКИІОРАВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМБІ Т
СІ УКаЕМРООІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраИБЗЕРІ М
ЗКІТМОКЗАМООССММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКБІ І РО дімтідзразіамзідегаїізск55авіуззпаКпуїамудаКрадррКІйумав 2717-64 (Легкий) ігездуранзазазайнівззідаєдмамуусаддуузурунададікІєїкИмаа до ланцюг, Ідо1) реміїррзаєдікодіазумсіпптургеакудиКмапаІдздапздезміедавзк авітузіззІвКадуеєекиКмуасеміпадівзрміквіпгдес
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
АРСОСІ ЕМІСМІМРОТОМТЕУМОКЕКОвУТМТАОТОТОТУУ
МЕ! 551 А5БЕОТАУУУСАНЗА ТОМУ ОСТ ТУТ УЗЗАЗТКОИ
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА
Т5амНтТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ЕТОГМІСМУМН 277-64 (Важкий КРОМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ І ССОРБЗМУБІ ЕРР 43 ланцюг, Ідс1) КРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕМКЕМУУУрамЕМУН
МАКТКРАЕЄЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОМ МСОКЕУКСКУЗМ
КАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКагуУРБОІАМЕМЕЗМИООРЕММУКТТРРМІ ОБраБЗЕРІ 5
КІТМОКЗАМООаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО
АРСОСІ ЕМІСМІМРОТОМТЕУМОКЕКОвУТМТАОТОТОТУУ
МЕ! 551 А5БЕОТАУУУСАНЗА ТОМУ ОСТ ТУТ УЗЗАЗТКОИ
РБЗБУМЕРІГ АРОЗКОТЗОаИТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБММЗИА
Т5амНтТЕРАМГ ОБОЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ЕТОГМІСМУМН 277-64 (Важкий КРОМТІКМОКАМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕААСОИРБУРБІ ЕР 44 ланцюг, Ід1-КО) РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕУКЕМУ МУрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЄЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОУЛІ МСОКЕУКСКУ
МКАГРАРІЕКТІЗКАКИІОРАВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМБІ Т
СІ УКаЕМРООІАМЕЖМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраИБЗЕРІ М
ЗК ТУОКЗАМООСММУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РО
РІММТО5РОБІ АМ5І ЕВАТІМСКЗЗОБИЇ МБЗМОКММІ АМУ
УООКРОИООБРКІ ПУ АЗТАВЕЗОаУРОВЕЗОаЗавзаИтонтіІ ТІ 2717-67 (Легкий БІ ОЗАЕОМАУУУСООМУ5УРУТРИОСТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЄ 45 ланцюг, Ідс1) РРБОЕОЇ КБатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМКМОМА О5ИаМ
ЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО сг 55РУТКЗЕМАНИаЕС
ОМОІ МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗОУТЕ Та МУ МНУУНО 2717-67 (Важкий АРПОСІ ЕМІСМІМРЗТОМТЕММОКЕКОВУТМТ ОТТО 46 ланцюг, Ідс1) МЕ! 55 А5ЕОТАМУУСАВнЗА ТОМУ ОСТ ТУТ УЗАЗТКа
РЗОУМЕРІГАРЗЗКОТЗСаСТААГ ас МкОМЕРЕРУТУБМУМЗСИАЇ.
Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 РОБ аТОТМІСМУМН
КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ І ССРБОМБЕЇ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУММОУМ5НЕОРЕМКЕМУ УМРИаМЕМН
МАКТКРАЕЕОУМОТМАМУ5БМІ ТМ НОМ МОКЕМКСКУ5М
КАГРАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТО
ГУКаЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5раИБЕРІ М
КОТМОКЗАМОССИММЕ5СЗУМНЕАЇІНМНУТОКОІ 5І ЗРО
ОМОЇ МОБСАЕУККРИАБУКУВСКАБЗОУТЕ Там МНУУВО
АРСОСІ ЕММІСМІМРЗ ТОМ ТЕММОКЕКОоАУТМТВОТ5Т5ТМУ
МЕ! 55ІІ В5ЕОТАУУУСАНЗЗ НН ТОМУ ОСТ ТУТУ5БЗАВТКОИ
РОМЕРІ АРББКОТЗОСТААЇ асІі МКОМЕРЕРУТУБМУМИАЇ. 277-867 (Важкий Т5ОаМНТЕРАМІ 055021 М5І 55 РОБ аТОТМІСМУМН ланцюг, Ід51-КО) КРОЬМТКМОКАМЕРКЗСОКТНТОРРОРАРЕАДАСОРБМУРІ ЕР 47 ' РКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМрИаМЕМ
НМАКТКРЕЕЕОУМЗТУВУМ5МІ ТМ НОСОМ МЕОКЕУКСКМУ5
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І Т
СІ УКОаЕМРБОІАМЕМ ЕБМООРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕРІ М
ЗК ТУОКО5РАУМОССММ Е5СЗУМНЕАЇНМНУТОКОІ 5І ЗРО 277н-совз(Чота) (ЗЄЗВТОММЇГ/::(/ ССС
Представлені вище СОК згідно з нумерацією Сотршіпуд Сгоир (ССО) підкреслені |АІтадго та ін., Ргоївіп5 2011; 79:3050-3066 і Маїег та ін., Ргоївіп5 2014; 82:1599-1610). Послідовності, визначені згідно з номенклатурою Кебота, виділені жирним шрифтом, а визначені згідно із системою нумерації Чотіа, виділені курсивом.
В одному аспекті, антитіло до ТгКВ згідно із даним винаходом зв'язується з ТІКВ людини при
Ко«10 нМ. В подальшому аспекті, антитіло до ТгКВ згідно із даним винаходом зв'язується з Т/кВ людини при Ко«5 НМ. У ще подальшому аспекті, антитіло до ТІ/КкВ згідно із даним винаходом зв'язується з ТТІКВ людини при Ко приблизно 1 нМ. Афінності зв'язування антитіл до ТТ"кКВ можуть бути визначені згідно зі способом, описаним у прикладі 6.
В іншому аспекті, антитіло до ТІкВ згідно із даним винаходом індукує фосфорилування та/або активацію ТІкВ з високою ефективністю. В одному аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом фосфорилує ТІкВ людини з ЕСзо«100 пМ. В подальшому аспекті, антитіло до
ТІКВ згідно із даним винаходом фосфорилує ТтКкВ людини з ЕС5о«50 пМ. В подальшому аспекті, антитіло до ТІкВ згідно із даним винаходом фосфорилує ТІКВ людини з ЕСвзо«40 пМ. В подальшому аспекті, антитіло до ТІкВ згідно із даним винаходом фосфорилує ТткВ людини з
ЕСзо«30 пМ. В подальшому аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом фосфорилує
ТІКВ людини з ЕСзо приблизно 20 пМ.
В іншому аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом є більш ефективним для індукування активації нижчерозташованих ТІкВ шляхів передачі сигналів у порівнянні із природним ТІКВ лігандом ВОМЕ. Ефективність антитіл до ТІкКВ може бути визначено в диференційованих 5Н-5У5У клітинах згідно зі способом, описаним у прикладі 8.
В подальшому аспекті, антитіло до ТІКВ згідно із даним винаходом індукує експресію генів, порівнянну із природним ТІіКкВ лігандом ВОМЕ. Стимуляція за допомогою агоністичних антитіл до
ТІКВ збільшує експресію мрнк АКС, МОЕ, ЕСКТ, які є маркерами для підвищеної синаптичної пластичності й, отже, індикаторами, що антитіла до ТІ/КВ діють подібно до придатного ліганду
ВОМЕ на модуляцію функції нейронів, тобто, підвищення виживання нейронів та/або синаптичну пластичність. Картини експресії генів можуть бути визначені згідно зі способом, описаним у прикладі 10.
У ще подальшому аспекті антитіло до ТІ/кВ згідно із даним винаходом захищає нейрони, гліальні клітини та/або нейроваскулярну одиницю в сітківці пацієнтів, наприклад, з віковою дегенерацією жовтої плями, географічною атрофією або діабетичною ретинопатією шляхом стимуляції ТІКВ-залежних шляхів передачі сигналів виживання й забезпечуючи, таким чином, нейропротективну дію.
В іншому аспекті антитіло до ТІ/КкКВ згідно із даним винаходом регенерує аксони/дендрити та/або синапси в сітківці після початку захворювання, наприклад, при віковій дегенерації жовтої плями, географічній атрофії або діабетичній ретинопатії й забезпечуючи в такий спосіб нейрорегенерацію.
В подальшому аспекті, антитіло до ТІКкВ згідно із даним винаходом має низький ризик імуногенності й низьку схильність послідовностей стосовно його СОК послідовностей.
Імуногенність і гетерогенність є двома важливими аспектами терапевтичного антитіла.
Вимірювання таких аспектів можна здійснити за допомогою способів, як описано в Прикладах 4 і 5. Антитіла згідно із даним винаходом були обережно сконструйовані, що мати мінімальну або не мати імуногенності та/або гетерогенності.
У ще одному аспекті, антитіло до ТІкКВ згідно із даним винаходом не зменшує ВОМЕ індуковане ЕКК фосфорилування. Для цього, ЕКК фосфорилування може бути виміряне, наприклад, в СНО клітинах, які експресують ТІКкВ людини, як описано в Прикладі 13. Це може означати, що ЕКК фосфорилування, індуковане ендогенно експресованим ВОМЕ, не зменшується при введенні антитіла до ТгкВ згідно з винаходом. Це також може означати, що антитіло до ТІкВ згідно з винаходом не зменшує ЕКК фосфорилування при введенні перед, одночасно або згодом після екзогенно введеного ВОМЕ. У деяких випадках, антитіло до Т/кВ не конкурує з або знижує ВОМЕ індуковане ЕКК фосфорилування в порівнянні з індукцією ВОМЕ окремо.
В подальшому аспекті, антитіло до ТІКкВ згідно із даним винаходом є специфічним для фосфорилування та/або активації Т/кВ і неспецифічно не фосфорилує та/або не активує ТІКА або ТКС.
В іншому аспекті, антитіло до ТІКВ не зв'язується неспецифічно з МЕСЕ людини та/або
МЕСЕ щура. Зв'язування неспецифічно в даному контексті означає, що антитіло до ТгКВ згідно з винаходом не зв'язується з МЕСЕ людини, як виміряно, наприклад, за допомогою ЕГІЗА, як описано в Прикладі 14. В одному варіанті здійснення, відсутність неспецифічного зв'язування антитіла до ТІКВ може бути визначене шляхом вимірювання статистично значима відмінність (наприклад, критерій Стьюдента для однієї вибірки, р«е0,05) при зв'язуванні з МЕСЕ людини між антитілом до ТІ/КВ і підходящим до ізотипним контрольним антитілом. Особливо, відсутність неспецифічного зв'язування антитіла до Т/КкВ згідно з винаходом може бути виміряне шляхом визначення будь-яких відмінностей при зв'язуванні з МЕСЕ людини між антитілом до ТтгКВ і дсс1 ізотипним контрольним антитілом. Антитіло до ТІКВ згідно з винаходом суттєво не відрізняється стосовно відсутності зв'язування з МЕСЕ людини в порівнянні з аналогічною концентрацією Ідс1 ізотипного контрольного антитіла аж до концентрації приблизно 0,3 НМ, 0,4 нМ, 0,5 нМ, 0,6 нМ, 0,7 НМ, 0,8 НМ, 0,9 нМ, 1 нМ, 5 нМ, 10 нМ, 20 нМ, 30 нМ, 40 нМ, 50 нМ, 60 нМ, 70 нМ, 80 нм, 90
НМ, 100 нМ, 110 нМ, 120 нМ, 130 нМ, 140 нМ, 150 нМ, 160 нМ, 170 нМ, 180 нМ, 190 нм або 200
НМ. В альтернативному варіанті здійснення, відсутність неспецифічного зв'язування антитіла до
ТІКВ згідно з винаходом може бути виміряне шляхом визначення значення ІСвхо зв'язування антитіла до ТІкВ за будь-яким одним з МЕСЕ людини або щура. Особливо, антитіло до Т/кВ згідно з винаходом буде проявляти значення ІСво зв'язування з МЕСЕ людини або щура приблизно вище 0,9 мкМ, переважно вище 1 мкМ, вище 2 мкМ, вище З мкМ, вище 5 мкМ, вище 10 мкМ, вище 20 мкМ, вище 30 мкМ, вище 40 мкМ, вище 50 мкМ, вище 100 мкМ, вище 150 мкМ, вище 200 мкМ, вище 250 мкМ, вище 300 мкМ, вище 350 мкМ, вище 400 мкМ, вище 450 мкм, вище 500 мкМ, вище 550 мкМ, вище 600 мкМ, вище 650 мкМ, вище 700 мкМ, вище 750 мкМ, 5О вище 800 мкМ, вище 850 мкМ, або вище 900 мкМ.
Гуманізація й варіанти амінокислотної послідовності
Подальші варіанти антитіл до ТІкВ і фрагментів антитіл можуть бути сконструйовані на основі набору СОК, ідентифікованих у мишиному лідерному БО03. Мається на увазі, що у вказаних варіантах амінокислотних послідовностей антитіл до ТІкВ і фрагментів антитіл СОК залишаються незміненими, але навколишні ділянки, наприклад, ЕК ділянки, можуть бути сконструйовані. Варіанти амінокислотної послідовності антитіла до ТІкВ можна одержувати шляхом інтродукції відповідних нуклеотидних змін у ДНК антитіла до Тг"кВ або за допомогою пептидного синтезу. Вказані варіанти включають, наприклад, делеції та/або інсерції та/або заміни залишків в амінокислотних послідовностях антитіл до ТІкВ, представлених як приклад у 60 даному описі. Для одержання кінцевої конструкції застосовують будь-яку комбінацію делецій,
інсерцій і замін за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики. Амінокислотні зміни можуть також змінювати пост-трансляційний процесинг гуманізованого антитіла до Т/кВ або його варіанта, наприклад, зміна кількості або положення сайтів глікозилування.
У деяких варіантах здійснення, даний винахід включає антитіла до ТІкВ або їх фрагменти антитіл, що мають варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, де амінокислотна послідовність варіабельного легкого ланцюга й амінокислотна послідовність варіабельного важкого ланцюга є принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 95 95, принаймні на 9895, або принаймні на 9995 ідентичні до амінокислотних послідовностей, представлених в 5ЕО ІЮО МО: 2 і 12, або 3і13, або 4114, або 5115, або б і 16, або 7 і17, абові 18, або 9 і 19, або 10 і 20, відповідно.
У деяких варіантах здійснення, даний винахід включає антитіла до Т/кВ або їх фрагменти антитіла, що мають легкий ланцюг і важкий ланцюг, де амінокислотна послідовність легкого ланцюга й амінокислотна послідовність важкого ланцюга є принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 9595, принаймні на 9895, або принаймні на 9995 ідентичні до амінокислотних послідовностей, представлених в 5ЕО ІЮО МО: 21 і 22 або 23; 24 і 25 або 26;27 і 28 або 29; 30 ї 31 або 32; 33 і 34 або 35; 36 і 37 або 38; 39 і 40 або 41; 42 і 43 або 44; 45 і 46 або 47, відповідно.
В подальшому варіанті здійснення, даний винахід включає антитіла до ТгІКВ, які конкурують за зв'язування з ТІ/КВ з будь-яким з наступних антитіл:
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 21 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 22 або 23,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 24 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 25 або 26,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 27 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 28 або 29,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 30 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 31 або 32,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 33 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 34 або 35,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 36 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 37 або 38,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 39 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 40 або 41,
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 42 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 43 або 44, або
Антитіло, що має легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 45 та важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 46 або 47.
Іншим типом одержання амінокислотного варіанта антитіла є зміна вихідної схеми глікозилування антитіла. Термін "зміна" у контексті даної заявки означає делецію одного або декількох вуглеводних фрагментів, що присутні в антитілі, талабо додавання одного або декількох сайтів глікозилування, які раніше не були присутні в антитілі.
У деяких аспектах, даний винахід включає молекули нуклеїнових кислот, які кодують варіанти амінокислотних послідовностей антитіл до ТІКкВ, описаних у даній заявці. Молекули нуклеїнових кислот, що кодують варіанти амінокислотних послідовностей антитіла до ТІКВ, готують за допомогою різних методів, відомих у даній галузі техніки. Ці методи включають, але не обмежуючись тільки ними, виділення із природного джерела (у випадку варіантів амінокислотних послідовностей, що зустрічаються в природі) або одержання за допомогою мутагенезу з використанням олігонуклеотидів (або сайтнаправленого мутагенезу), ПлЛр- мутагенезу й касетного мутагенезу отриманого раніше варіанта або версії, що не є варіантом, антитіла до ТІКВ.
У певних варіантах здійснення, антитіло до Т'кКВ представляє собою фрагмент антитіла.
Існують техніки, які були розроблені для одержання фрагментів антитіл. Фрагменти можна одержувати шляхом протеолітичного розщеплення інтактних антитіл (див., наприклад, Могітоїо та ін., Уоигпа! ої Віоспетіса! апа Віорпузіса! Меїподз» 24, 1992, стор. 107-117 і Вгеппап та ін.,
Зсіепсе 229, 1985, с. 81). В альтернативному варіанті фрагменти можна одержувати безпосередньо в рекомбінантних клітинах-хазяїнах. Наприклад, Рар''5Н-фрагменти можна виділяти безпосередньо з Е. соїї і хімічно зшивати з одержанням Е(аб')2-фрагментів (див., наприклад, Сагіег та ін., Віо/Тесппооду 10, 1992, стор. 163-167). Згідно з іншим підходом К(аб»2- фрагменти можна виділяти безпосередньо з культури рекомбінантної клітини-хазяїна. Інші 60 методики одержання фрагментів антитіл повинні бути очевидні фахівцеві в даній галузі.
Антитіла до ТтгКВ і їх антигензв'язувальні фрагменти можуть включати модифікації.
У певних варіантах здійснення, може бути бажаним застосовувати фрагмент антитіла до
ТІКВ, а не інтактне антитіло. Може бути бажаним модифікувати фрагмент антитіла для підвищення його часу напівжиття в сироватці крові. Це можна здійснювати, наприклад, шляхом інкорпорування епітопу зв'язування рецептора реутилізації у фрагмент антитіла. В одному способі підходяща ділянка фрагменту антитіла може бути змінена (наприклад, мутований), або епітоп може бути інкорпорований у пептидну мітку, яку потім зливають із фрагментом антитіла на будь-якому кінці або в середині, наприклад, шляхом синтезу ДНК або пептидного синтезу.
Див., наприклад, УМО 96/32478.
В інших варіантах здійснення, даний винахід включає ковалентні модифікації антитіл до
ТІКВ. Ковалентні модифікації включають модифікацію цистеїнильних залишків, гістидильних залишків, лізинільних і амінокінцевих залишків, аргінільних залишків, тирозильних залишків, карбоксильних бічних груп (аспартил або глутаміл), глутамінільних і аспарагінільних залишків, або серильних, або треонільних залишків. Інший тип ковалентної модифікації включає хімічне або ферментативне зшивання глікозидів з антитілом. Вказані модифікації можна здійснювати за допомогою хімічного синтезу або шляхом ферментативного або хімічного розщеплення антитіла, якщо це можливо. Для інтродукції інших типів ковалентних модифікацій у молекулу антитіла можна застосовувати взаємодію мічених амінокислотних залишків антитіла з органічним дериватизуючим агентом, який може взаємодіяти з вибраними бічними ланцюгами або амінокінцевими або карбоксикінцевими залишками.
Видалення будь-яких вуглеводних фрагментів, що присутні на антитілі, можна здійснювати хімічним або ферментативним шляхом. Хімічне деглікозилування описане в |ІНакКітиадаїп та ін.,
Агосп. Віоспет. Віорпу5. 259, 1987, с. 52 і в Едде та ін., АпаїЇ. Віоспет., 118, 1981, с. 1311.
Ферментативне відщіплення вуглеводних фрагментів на антитілах можна здійснювати за допомогою ендо- і екзоглікозидаз згідно з методом, описаним в |ТПпоїакига та ін., Мей. Еп7утої., 138, 1987, с. 3501.
Інший тип придатної ковалентної модифікації передбачає зв'язування антитіла з одним із численних небілкових полімерів, таких, наприклад, як поліетиленгліколь (ПЕГ),, поліпропіленгліколь або поліоксіалкілени, за допомогою методів, описаних в одному або декількох ОЗ 4640835, 05 4496689, 05 4301144, 05 4670417, 005 4791192 і 05 4179337.
Зв'язування епітопу
Антитіла згідно з винаходом специфічно зв'язується з нативним або рекомбінантним ТІК людини. Антитіла згідно із даним винаходом розпізнають специфічні "епітоп Т/кВ антигену" і "ТІКВ епітоп". Особливо, антитіла згідно з винаходом зв'язуються з епітопом у позаклітинному домені ТгКкВ людини з послідовністю 5ЕО ІО МО: 54.
Позаклітинний домен Тг/кВ людини по суті включає наступну послідовність (ЗЕО ІЮ МО.54):
СРТЗСКОЗАЗАМСЗОРБРОЇМАЕРВІ ЕРМЗМОРЕМІТЕІРІАМОКАГЕПМЕВВОМЕАУМаї АМІТІМ рзаї КЕМАНКАРІ КМЗМІ ОНІМЕТАМКІТ5І ЗАКНЕВНІ ОЇ ЗЕ МаМРЕТСЗСОІМУУ ІКТ ОБАКЗ5
РОТООІ МСІЇ МЕЗЗКМІРІ АМІОІРМССЇ РІОАМІ ААРМІ ТМЕЕСК5БІТІ БСЗБМАСОРУРММУМУ ОУС МІ М
ЗКНММЕТЗНТОИБІ ВІТМІЗБООЗаКОІЗСМАЄМІ МСЕВООЗУМІТУНЕАРТІТЕ ЕБРТЗОННУУСІРЕ
ТУКОаМРКРАЇ ОМУЕУМСИ А МЕЗКМІСТКІНМТМНТЕУНИсі ОЇ ОМРТНМЯМаОМ ПАКМЕМОаКОЕКО
ІЗАНЕМОМУ РЕИВОСАМРМУРОМІМЕОМИатААМОІСОТТМАЗМЕІРЗТОУТОКТаВЕН
Як використовується в даній заявці, терміни "епітоп ТІкВ антигену" і "ТІКВ епітоп" стосуються молекули (наприклад, пептиду) або фрагменту молекули, здатної (ому) зв'язуватися з антитілом до ТІкВ або його антигензв'язувальним фрагментом. Ці терміни додатково включають, наприклад, ТІКкВ антигенну детермінанту, яка розпізнається будь-якими з антитіл або фрагментів антитіл згідно із даним винаходом, яка має комбінацію СОМ легкого й важкого ланцюгів, вибрану з СОК легкого ланцюга, представлених в 5ЕО ІЮ МО 48-50, і СОК важкого ланцюга, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 51-53.
Епітопи Т/КкВ антигену можуть бути включені в білки, фрагменти білків, пептиди або подібні.
Епітопи найчастіше представляють собою білки, короткі олігопептиди, олігопептидні імітатори (тобто, органічні сполуки, які імітують антитілозв'язувальні властивості Т/кВ антигену), або їх комбінації.
Було виявлено, що антитіла або фрагменти антитіл згідно із даним винаходом зв'язуються з унікальними епітопами в позаклітинному домені ТІКВ людини. Переважно, антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143 та/або 205-219 позаклітинного домену ТІКкВ людини з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкВ або його 60 антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112 і 130-143; або 92-112 і 205-219; або 130-143 і 205-219; або 92-112 ії 130-143 ї 205-219 позаклітинного домену ТІКВ людини з послідовністю
ЗЕО ІО МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах будь-якої з вищевказаних комбінацій амінокислотних ділянок і додатково також із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 313-330 та/або 348-367 позаклітинного домену ТІКВ людини з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143, 205-219, 313-330 і 348-367 позаклітинного домену Тг/кВ людини з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 54.
Таким чином, у контексті зв'язування епітопу, вираз "зв'язується в межах амінокислотних ділянок Х-У...» означає, що антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотної ділянки, вказаної в послідовності.
Якщо, наприклад, антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92-112 або 130- 143, то це означає, що антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком або в межах амінокислотних ділянок 92-112 або 130-143.
В подальшому прикладі, якщо антитіло до Т"кВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотних ділянок 92- 112 ї 130-143, то це означає, що антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотної ділянки 92- 112 ї також зв'язується із принаймні одним амінокислотним залишком у межах амінокислотної ділянки 130-143 5БЕО ІО МО: 54.
В іншому аспекті, антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні 1095, 20 96, ЗО Зо, 40 95, 50 95, 60 Зо, 70 96, 80 96, 8595, 90 90, 95 95, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143 та/або 205-219 позаклітинного домену Тг/кВ людини з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні 10 95, 20 95, 30 Фо, 40 У, 50 о, боб, 7095, 8095, 8595, 9095, 9595, або 10095 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 92-112 і 130-143; або 92-112 і 205-219; або 130-143 і 205-219; або 92- 112 ї 130-143 їі 205-219 позаклітинного домену ТікВ людини з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні 10 95, 20 95, 30 Фо, 40 У, 50 о, бо бо, 70 95, 80 95, 8595, 90 95, 95 95, або 100 95 амінокислотних залишків у межах будь-якої з вищевказаних комбінацій амінокислотних ділянок і додатково також із принаймні 10 95, 20 95,
ЗО бо, 40 96, 50 95, 60 Зо, 70 95, 80 95, 85 95, 90 95, 95 95, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 313-330 та/або 348-367 позаклітинного домену ТІКВ людини з послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 54.
В одному варіанті здійснення, даний винахід забезпечує антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) зв'язується із принаймні 10 95, 20 95, 30 Фо, 40 У, 50 о, боб, 7095, 8095, 8595, 9095, 9595, або 10095 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 92-112, 130-143, 205-219, 313-330 і 348-367 позаклітинного домену Т/КкВ людини з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 54.
Якщо, наприклад, антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні 1095, 20965, З0 96, 40 95, 50 90, 60 о, 7096, 80 95, 8595, 90 95, 9595, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 92-112 або 130-143, то це означає, що антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується з принаймні 10 95, 20 9о, 30 9, 40 9о, 50 90, 60 Фо, 70 о, 80 Уо, 85 У, 90 9, 95 95, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотної ділянки 92-112 або зв'язується із принаймні 10 95, 20 95, ЗО Фо, 40 Об,
БО, 6095, 70905, 8095, 85595, 90 95, 9595, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотної ділянки 130-143.
В подальшому прикладі, якщо антитіло до Т"кКВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується із принаймні 10 9», 20 90, 30 У, 40 95, 50 95, 60 Зо, 70 95, 80 90, 85 ФУ, 90 Фо, 95 9о, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотних ділянок 92-112 і 130-143, то це 60 означає, що антитіло до ТІ/кКВ або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язується с принаймні
10 то, 20 то, Зо то, 40 то, 50 то, 6о0 то, 70 то, 80 то, 85 то, 90 то, 95 Фо, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотної ділянки 92-112 і також зв'язується із принаймні 10 95, 20 95,
ЗО бо, 40 96, 50 95, 60 Зо, 70 95, 80 95, 85 95, 90 95, 95 95, або 100 95 амінокислотних залишків у межах амінокислотної ділянки 130-143.
Не бажаючи обмежуватися якою-небудь теорією, вважають, що завдяки зв'язуванню з новими епітопами ТгКВ антитіло проявляє свої набагато кращі властивості в активації Т/КВ.
Полінуклеотиди, вектори, клітини-хазяїна й рекомбінантні методи
Інші варіанти здійснення охоплюють виділені полінуклеотиди, які включають послідовність, що кодує антитіло до ТІкВ, вектори й клітини-хазяїна, що містять полінуклеотиди, і рекомбінантні методики для одержання антитіла. Виділені полінуклеотиди можуть кодувати будь-яку бажану форму антитіла до Т/кВ, включаючи, наприклад, повнорозмірні моноклональні антитіла, баб, Бар", К(ар)», і Ем фрагменти, діатіла, лінійні антитіла, одноланцюгові молекули антитіл і мультиспецифічні антитіла, утворені із фрагментів антитіл.
Полінуклеотид (и), який (ї) містить (ять) послідовність, що кодує антитіло до ТІкВ або його фрагмент або ланцюг, може (уть) бути спряжений (ї) з однією або декількома регуляторними або контролюючими послідовностями, як відомо в даній галузі техніки, і можуть утримуватися в підходящих експресійних векторах або клітинах-хазяїнах, як відомо в даній галузі техніки. Кожна з полінуклеотидних молекул, що кодують варіабельні домени важкого або легкого ланцюга, може бути незалежно спряжена з полінуклеотидною послідовністю, що кодує константний домен, такий як константний домен людини, що надає можливість продукувати інтактні антитіла. Альтернативно, полінуклеотиди, або їх частини, можуть бути спряжені спільно, забезпечуючи матрицю для одержання одноланцюгового антитіла.
Для рекомбінантного одержання, полінуклеотид, що кодує антитіло, вставлений у реплікований вектор для клонування (ампліфікації ДНК) або для експресії. Доступні різні підходящі вектори для експресії рекомбінантних антитіло. Компоненти вектора звичайно включають, але не обмежуючись тільки ними, один або декілька наступних компонентів: сигнальна послідовність, початок реплікації, один або декілька маркерних генів, енхансерний елемент, промотор, і послідовність термінації транскрипції.
Антитіла до Т/тКкВ також можуть бути отримані у вигляді злитих поліпептидів, у яких антитіло злите з гетерологічним поліпептидом, таким як сигнальна послідовність або інший поліпептид, що має специфічний сайт розщеплення на амінокінці зрілого білка або поліпептиду.
Гетерологічну сигнальну послідовність типово вибирають із послідовності, яка розпізнається й процесується (тобто, розщеплюється сигнальною пептидазою) клітиною-хазяїном. Для прокаріотичних клітин-хазяїн, які не розпізнають і не процесують сигнальну послідовність антитіла до ТІКВ, сигнальна послідовність може бути замінена прокаріотичною сигнальною послідовністю. Сигнальна послідовність може представляти собою, наприклад, лужну фосфатазу, пеніциліназу, ліпопротеїн, лідерні послідовності термостабільного ентеротоксину | і подібні. Для секреції дріжджами, нативна сигнальна послідовність може бути замінена, наприклад, лідерною послідовністю, отриманою з інвертази альфа-фактора дріжджів (включаючи лідерні послідовності с-факторів Засспаготусе5з і Кішнумеготусев5), кислою фосфатазою, глюкоамілазою С. аірісапе або сигнальною послідовністю, описаною в
УМО90/13646. У клітинах ссавців, можна використовувати сигнальні послідовності ссавців, а також вірусні секреторні лідерні послідовності, наприклад, да сигнальну послідовність простого герпесу. ДНК для такої ділянки-прекурсору лігують у рамці зчитування із ДНК, що кодує гуманізоване антитіло до ТІКВ.
Експресійні й клонуючі вектори містять нуклеотидну послідовність, яка надає можливість вектору реплікуватися в одній або декількох вибраних клітинах-хазяїнах. У цілому, у клонуючих векторах ця послідовність представляє собою послідовність, яка надає можливість вектору реплікуватися незалежно від хромосомної ДНК хазяїна, і включає початки реплікації або послідовності, які реплікуються автономно. Такі послідовності добре відомі для різних бактерій, дріжджів і вірусів. Початок реплікації із плазміди рбг322 є підходящим для більшості грам- негативних бактерій, початок реплікації 2-// Плазміди є підходящими для дріжджів, і різні вірусні початки реплікації (540, поліома, аденовірус, М5М, і ВРМ) придатні для клонуючих векторів у клітинах ссавців. У цілому, компонент початку реплікації не є необхідним для експресійних векторів ссавців (початок реплікації 5440 типово можна використовувати тільки тому, що він містить ранній промотор).
Експресійні й клонуючі вектори можуть містити ген, який кодує селектований маркер для полегшення ідентифікації експресії. Типові селектовані маркерні гени кодують білки, які надають резистентність до антибіотиків або інших токсинів, наприклад, ампіциліну, неоміцину, 60 метотрексату або тетрацикліну, або альтернативно, є комплементами аксотрофних дефіцитів,
або в інших альтернативних варіантах, заповнюють специфічні живильні речовини, які не присутні в комплексних живильних, середовищах наприклад, ген, що кодує Ю-аланін рацемат для Васійії.
В одному із прикладів схеми селекції використовується лікарський засіб для зупинки росту клітини-хазяїна. Ті клітини, які успішно трансформовані гетерологічним геном, продукують білок, що надає резистентність до лікарського засобу, і, отже, виживають у схемі селекції. Прикладами такої домінантної селекції є використання лікарських засобів неоміцин, мікофенолова кислота й гігроміцин. Загальноприйнятими селектованими маркерами для клітин ссавців є ті, які надають можливість ідентифікації клітин, компетентних за прийняття нуклеїнової кислоти, що кодує гуманізоване антитіло до ТІкВ, такі як ОНЕК (дигідрофолатредуктаза), тимідинкіназа, металотіонеїн-і і -МП (такі як гени металотіонетну приматів), аденозиндеаміназа, орнітиндекарбоксилаза, і інші. Клітини, що трансформуються за допомогою ОЮНЕК- селектованого гена, спочатку ідентифікують шляхом культивування всіх трансформантів у культуральному середовищі, яке містить метотрексат (Міх), конкурентний антагоніст ОНЕК.
Застосовувана підходяща клітина-хазяїн, якщо використовують ОНЕК дикого типу, представляє собою клітинну лінію яєчників китайського хом'ячка (СНО) з дефіцитом активності ОНЕЄ (наприклад, ОС44).
Альтернативно, клітини-хазяїна (переважно хазяї дикого типу, які містять ендогенний рНЕК), трансформовані або ко-трансформовані послідовностями ДНК, що кодують антитіло до
ТІКВ, білок ОНЕК дикого типу, і інший селектований маркер, такий як аміноглікозид 3'- фосфотрансфераза (АРН), можуть бути селектовані шляхом росту клітин у середовищі, що містить селектований агент для селектованого маркера, такий як аміноглікозидний антибіотик, наприклад, канаміцин, неоміцин, або 5418. див., наприклад, патент Ш5 4,965,199.
Коли рекомбінантне одержання здійснюють у дріжджовій клітині як клітині-хазяїні, то як селектований маркер можна використовувати ген ТКРІ1, присутній у дріжджовий плазміді Утр7 (З(іпспсото та ін., 1979, Маїшге 282: 39). Ген ТКРІ забезпечує селекційний маркер для мутантного штаму дріжджів, у якого відсутня здатність рости в триптофані, наприклад, (Мо АТСС 44076 або РЕР4-1 (допе5, 1977, Сепеїйіс5 85:12)|. Згодом присутність їгрі ураження в геномі дріжджової клітини-хазяїна забезпечує ефективне оточення для виявлення трансформації шляхом росту при відсутності триптофану. Аналогічно до цього, штами дріжджів з дефіцитом
І ецгр, такі як АТСС 20,622 і 38,626 доповнюються відомими плазмідами, що несуть ген ГЕШ2.
Додатково, вектори, що мають походження з кільцевої плазміди 1,6 мкм рКО1, можна використовувати для трансформації дріжджів Кісумеготусе5. Альтернативно, була описана експресійна система для промислового одержання рекомбінантного телячого хімозину для К.
Іасіїв |Мап деп Вего, 1990, Віо/Тесппоіоду 8:135). Також були описані стабільні багатокопійні експресуючі вектори для секреції зрілого рекомбінантного сироваткового альбуміну людини за допомогою промислових штамів Кіпсумеготусез (Ріеег та ін., 1991, Віо/ГесппоЇІоду 9:968-975).
Експресійні й клонуючі вектори звичайно містять промотор, який розпізнається організмом- хазяїном і функціонально зв'язаний з молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує антитіло до
ТІКВ або його поліпептидний ланцюг. Промотори, що підходять для застосування із прокаріотичними хазяями, включають рпоа промотор, В-лактамазну й лактозну промоторні системи, лужну фосфатазу, триптофанову (ігр) промоторну систему, і гібридні промотори, такі як їас промотор. Підходящими також є інші відомі бактеріальні промотори. Промотори для застосування в бактеріальних системах також будуть містити послідовність Шайна-дальгамо (Зпіпе-даідато, 5.0), функціонально зв'язану із ДНК, що кодує гуманізоване антитіло до ТІКкВ.
Відомі багато еукаріотичних промоторних послідовностей. Фактично, усі еукаріотичні гени мають Аг-збагачену ділянку, розташовану на приблизно 25-30 пар проти ходу транскрипції від сайту ініціації транскрипції. Інша послідовність, у якій 70-80 основ проти ходу транскрипції від старту транскрипції багатьох генів, представляє собою СМСААТ ділянку, де М може 5О представляти собою будь-який нуклеотид. На 3' кінці більшості еукаріотичних генів присутня
ААТААДА послідовність, яка може бути сигналом для додавання полі-а хвоста до 3' кінця кодуючої послідовності. Усі ці послідовності підходяще вставлені в експресійні вектори.
Приклади підходящих промоторних послідовностей для застосування із дріжджами- хазяїнами, включають промотори для 3-фосфогліцерат кінази або інших гідролитичних ферментів, таких як енолаза, гліцеральдегід З-фосфат дегідрогеназа, гексокіназа, піруват декарбоксилаза, фосфофруктокіназа, глюкозо-6-фосфат ізомераза, 3З-фосфогліцерат мутаза, піруват кіназа, триозофосфат ізомераза, фосфоглюкозоїізомераза, і глюкокіназа.
Індуцибельні промотори мають додаткові переваги транскрипції під контролем умов росту.
Вони включають промоторні ділянки дріжджів для алкогольдегідрогенази 2, ізоцитохрому С, 60 кислої фосфатази, похідних ферментів, зв'язаних з метаболізмом азоту, металотіонеїну,
гліцеральдегід-3-фосфатдегідрогенази, і ферментів, що відповідають за утилізацію мальтози й галактози. Підходящі вектори й промотори для застосування для експресії в дріжджах додатково описані в ЕР 73,657. Дріжджові енхансери також сприятливо використовуються із дріжджовими промоторами.
Транскрипція антитіла до ТІКкВ з векторів у клітинах-хазяїнах ссавців контролюється, наприклад, промоторами, отриманими з геномів вірусів, таких як вірус поліоми, вірус віспи курей, аденовірус (такий як Аденовірус 2), вірус папіломи великої рогатої худоби, вірус саркоми птахів, цитомегаловірус, ретровірус, вірус гепатиту В і вірус мавп 40 (5М40), з гетерологічних промоторів ссавців, наприклад, актиновий промотор або імуноглобуліновий промотор, або із промоторів теплового шоку, за умови, що такі промотори сумісні із системами клітин-хазяїв.
Ранні й пізні промотори вірусу 5М40 легко одержують у вигляді рестрикційного фрагменту
ЗМ40, який також містить початок реплікації вірусу 5М40. Негайно-ранній промотор цитомегаловірусу людини легко одержують у вигляді рестрикційного фрагменту Ніпаїйїй Е.
Система для експресії ДНК у ссавців-хазяїнах, використовуючи вірус папіломи великої рогатої худоби як вектора, описаний у І(патенті О5 Мо 4,419,446)|. Модифікація цієї системи описана в патенті ОБ (Мо 4,601,978. Див. також Кеуев5 та ін., 1982, Маїште 297:598-601|, де описана експресія кднк п-інтерферону людини в мишиних клітинах під контролем тимідинкіназного промотору з вірусу простого герпесу. Альтернативно, як промотор можна використовувати довгий кінцевий повтор вірусу саркоми Рауса.
Іншим корисним елементом, який може використовуватися в рекомбінантному експресійному векторі, є енхансерна послідовність, яку використовують для посилення транскрипції ДНК, що кодує антитіло до ТІкВ, вищими еукаріотами. У цей час відомі багато енхансерних послідовностей з генів ссавців (наприклад, глобін, еластаза, альбумін, а- фетопротеїн і інсулін). Проте, типово використовують енхансер з вірусу еукаріотичної клітини.
Приклади включають 5М40 енхансер на пізній стороні початку реплікації (по 100-270), енхансер раннього промотору цитомегаловірусу, енхансер поліоми на пізній стороні початку реплікації й аденовірусний енхансери. Також див. Хапім, 1982, Маїшге 297:17-18 щодо опису енхансерних елементів для активації еукаріотичних промоторів. Енхансер може бути сплайсований у вектор у положенні 5' або 3 до антитіла до ТІкВ-кодуючої послідовності, але переважно він розташований на 5' сайті від промотору.
Експресійні вектори, використовувані в еукаріотичних клітинах-хазяїнах (дріжджі, гриби, комахи, рослини, тварини, люди або ядровмісних клітинах з інших багатоклітинних організмів) також можуть містити послідовності, необхідні для термінації транскрипції й для стабілізації мрнк. Такі послідовності є загальнодоступними 3 5' їі, іноді 3, нетрансльованих ділянок еукаріотичних або вірусних ДНК або кднк. Ці ділянки містять нуклеотидні сегменти, транскрибовані у вигляді поліаденілованих фрагментів у нетрансльованій частині мрнк, що кодує антитіло до ТІкВ. Одним із придатних компонентів термінації транскрипції є ділянку поліаденілування бичачого гормону росту. Див. М/О94/11026 і експресійний вектор, описаний у цьому документі. У деяких варіантах здійснення, антитіла до ТІКВ можуть бути експресовані, використовуючи СНЕРЕ систему. |Див., наприклад, патент 05 Мо 5888809); вміст якого включено в дану заявку як посилання.)
Підходящі клітини-хазяїна для клонування або експресування ДНК у векторах згідно із даним винаходом представляють собою клітини прокаріот, дріжджів або вищих еукаріот, описані вище. Підходящі прокаріоти для цієї мети включать еубактерії, такі як грам-негативні або грам-позитивні організми, наприклад, (Епіегобасієгіасеає, такі як ЕхсПегіспіа, наприклад, Е. соїї, Епіегорасіег, Егміпіа, КіІерзіеМа, Ргоїеи5, ЗаІтопеїа, наприклад, зЗаЇІтопеїїа їурпітигічт,
Зеїтайа, наприклад, Зеггайа тагсезсап5, і Зпідейа, а також Васіїйї, такі як В. 5и!,Ббійй і В.
Іспепітогіті5 (наприклад, В. Іспепітогтів 41 Р, розкриті в БО 266,710, опублікованому 12 квітня 1989 р.), Рзендотопав, такі як Р. аегидіпоза, і Зігеріотусе5. Одним із переважних хазяїв для клонування Е. соїї є Е. соїї 294 (АТСС 31,446), хоча придатні також інші штами, такі як Е. соїї В,
Е. соїї Х1776 (АТСС 31,537), і Е. соїї М/3110 (АТС 27,325)). Ці приклади є ілюстративними, а не обмежувальними.
Додатково до прокаріотів, еукаріотичні мікроорганізми, такі як нитчасті гриби або дріжджі є підходящими хазяями для клонування або експресування векторів, що кодують антитіло до
ТІКВ. Засспаготусев5 сегемізіае, або загальнопоширені хлібопекарські дріжджі найчастіше використовуються серед нижчих еукаріотичних мікроорганізмів-хазяїнів. Проте, різні інші роду, види й штами є загальнодоступними й придатними в даній заявці, такі як (Зспі7озасспаготусев ротрбе; хазяї Кіпумеготусев, такі як, наприклад, (К. Іасії5, К. їтадіїйв "(АТС 12,424), К. риїдатісив (АТС 16,045), К. місКегатії (АТО 24178), К. жшаші (АТСС 56,500), К. агозорніагит (АТСС 60 36,906), К. (ШепгтоїоіІегап5, і К. тагхіапи5; уагом/а (ЕР 402,226); Ріспіа разіог5 (ЕР 183,07);
Сапаїда; Тгісподепта геевзіа (ЕР 244234); Меийговзрога осгазза; Зспмаппіотусев5, такі як
Зспмаппіотусев оссідепіаїйє; і нитчаті гриби, такі як, наприклад, Меигозрога, Репісійшт,
Тоїуросіадіт, і хазяї АзрегоіПи5, такі як А. підшапз і А. Мідегі|.
Підходящі клітини-хазяїна для експресії глікозилованого антитіла до Тт"кВ мають походження з багатоклітинних організмів. Приклади безхребетних клітин включають клітини рослин і комах, включаючи, наприклад, різні бакуловірусні штами й варіанти й відповідні дозволені комахи клітини-хазяїна з таких організмів, як Зродоріега їидірегада (гусениця), Аедез5 аедурії (комар),
Аедез аІрорісси5 (комар), Огозорпйа теїІаподавіег (плодова мушка), і Вотбрух тогі (шовковичний хробак). Загальнодоступні різні вірусні штами для трансфекції, наприклад, 1-1 варіант
Ашодгарна саїїогпіса МРМ ії Вт-5 штам Вотбрух тогі МРУ, і такі віруси можна використовувати, особливо, для трансфекції клітин 5родоріега їгидірегаа.
Також як хазяї можуть використовуватися культури рослинних клітин бавовнику, кукурудзи, картоплі, сої, петунії, томату й тютюну.
Антитіла до ТІ/кВ або їх антигензв'язувальні фрагменти згідно з винаходом також можуть бути інкорпоровані у вірусні вектори, тобто, полінуклеотид, що кодує антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний Фрагмент, інтродукують у вірусний вектор і потім експресують в організмі пацієнта після інфікування вірусом.
В іншому аспекті, експресію антитіл до Т/КкВ здійснюють у клітинах хребетних. Розмноження клітин хребетних у культурі (тканинна культура) стало звичайною процедурою й техніки є широкодоступними. Прикладами придатних ліній клітин-хазяїн ссавців є лінія нирок мавп СМ1, трансформована за допомогою 540 (СбО5-7, АТСС СК 1651), ліній нирки ембріона людини (293 або 293 клітини, субклоновані для росту в суспензійній культурі, (Сгапат та ін., 1977, 9.
Сеп Мігої. 36: 59), клітини нирки новонародженого хом'яка (ВНК, АТСС СС 10), клітини яєчника китайського хом'ячка/-ЮОНЕКІ1 |СНО, Опгіаицб та ін., 1980, Ргос. Май. Асай. зЗсі. ОБА 77: 4216; наприклад, 0044), клітини Сертоли мишей |ТМа4, МаїНетг", 1980, Вісі. Рергод. 23:243-2511, клітини нирки мавп (СМ! АТСС СС 70), клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76, АТОС
СВІ -1587), клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА, АТСС СС 2), клітини нирки собаки (МОСК, АТСС СС 34), клітини нирки щура лінії Вийаю (ВК ЗА, АТОС СЕ 1442), клітини легень людини (МУ138, АТСС ССІ 75), клітини печінки людини (Нер 52, НВ 8065), пухлина молочної залози мишей (ММТ 060562, АТСС СС 51), ТК1 клітини (МашШег та ін., 1982, Аппаї5
М.У. Асад. 5сі. 383: 44-68), МКС 5 клітини, Е54 клітини, і лінія гепатоми людини (Нер 2).
Клітини-хазяїни трансформують за допомогою вищеописаних експресійних або клонуючих векторів для продукції антитіла до ТІ/КкКВ і культивують у підходящому живильному середовищі, модифікованому, якщо це є підходящим, для індукування промоторів, відбору трансформантів, або ампліфікації генів, що кодують бажані послідовності.
Клітини-хазяїни, використовувані для продукування антитіла до ТгКВ, описані в даній заявці, можуть культивуватися в різних живильних середовищах. Комерційно доступні середовища, такі як Нат Е10 ІбЗідта-Аїйагісп Со., 5. І оці5, Мо.|, мін мальне живильне середовище (МЕМ), |Зідта-
Аїдгісн Со.|, АВРМІ-1640 (Зідта-Аїйагіспй Со.), і модифіковане за способом Дульбеко середовище
Ігла ФОМЕМ), зідта-Аїагісй Со.| є підходящими для культивування клітин-хазяїн. Додатково, будь-яке із середовищ, описаних в одному або декількох джерелах: ІНат та ін., 1979, Ме. Епз. 58: 44, Вагпе5 та ін., 1980, АпаїЇ. Віоспет. 102: 255, патент ОБ Мо 4,767,704, патент О5 Мо 4,657,866, патент О5 Мо 4,927,762, патент ОЗ Мо 4,560,655, патент 5 Мо 5,122,469, МО 90/103430, ії УМО 87/001951), може використовуватися як культуральне середовище для клітин- хазяїн. Будь-які із цих середовищ можуть бути доповнені, за необхідності, гормонами та/або іншими факторами росту (такими як інсулін, трансферин або фактор росту епідермісу), солями (такими як хлорид натрію, кальцію, магнію, і фосфат), буферами (такими як НЕРЕФ5), нуклеотидами (такими як аденозин і тимідин), антибіотиками (такими як гентаміцин), мікроелементами (що визначаються як неорганічні сполуки, звичайно присутні в кінцевих 5О концентраціях у мікромолярному діапазоні), і глюкозою або еквівалентним джерелом енергії.
Інші добавки також можна включати в підходящих концентраціях, що є очевидним для кваліфікованого фахівця в даній галузі техніки. Умови культивування, такі як температура, рН і інші, представляють собою умови, які раніше використовувалися для клітини-хазяїна, вибраної для експресії, і будуть зрозумілими кваліфікованому фахівцеві в даній галузі техніки.
При використанні рекомбінантних технік, антитіло може продукуватися внутрішньоклітинно, у периплазматичний простір, або безпосередньо секретується в живильне середовище. Якщо антитіло продукується внутрішньоклітинно, то клітини можуть бути зруйновані для вивільнення білка як перша стадія. Відходи у вигляді частинок, або клітини-хазяїна або лізовані фрагменти, можуть бути вилучені, наприклад, шляхом центрифугування або ультрафільтрації. В Сагпег та 60 ін., 1992, Віо/ТесппоЇІоду 10:163-167 описана процедура для виділення антитіл, які секретуються в периплазматичний простір Е. соїї. Коротко, клітинну масу розморожують у присутності ацетату натрію (рН 3,5), ЕОТА, ії фенілметилсоульфонилфторид (РМ5Е) приблизно протягом 30 хвилин.
Клітинний дебрис може бути вилучений шляхом центрифугування. Якщо антитіло секретується в живильне середовище, то супернатанти з таких екпресуючих систем у цілому спочатку концентрують, використовуючи комерційно доступний фільтр для концентрації білка, наприклад, ультрафільтаційний блок Атісоп або Міїйїроге РеїЇїсоп. Інгібітор протеази, такий як РМ5Е, може бути включений у будь-яку з вищевказаних стадій для інгібування протеолізу й антибіотики можуть бути включені для запобігання росту випадкових забруднювачів. Для виділення антитіла із клітини-хазяїна можна використовувати різні методи.
Композиція антитіла, приготовлена із клітин, може бути очищена, наприклад, шляхом хроматографії з гідроксіапатитом, гель-електрофорезу, діалізу й афінної хроматографії, де типовою технікою очищення є афінна хроматографія. Придатність білка А як афінного ліганду залежить від видів і ізотипу будь-якого домену Ес імуноглобуліну, який присутній в антитілі.
Білок А можна використовувати для очищення антитіла, які грунтуються на важких ланцюгах гамма, гамма2, або гамма4 людини |(див., наприклад, І іпатагКк та ін., 1983 9. Іттипої. мМеїй. 6б2:1-13Ї. Білок З рекомендується для всіх мишиних ізотипов і для гаммаЗз людини |див., наприклад, бЗи55 та ін., 1986 ЕМВО 3. 5:1567-1575). Матрицею, до якої приєднаний афінний ліганд, найчастіше представляє собою агарозу, але доступні також інші матрикси. Механічно стабільні матриці, такі як скло із заданим розміром пор або полі(стиролдивініл/бензол надають можливість більших швидкостей потоків і більш короткого часу обробки, якого можна досягти з агарозою. Якщо антитіло включає СНз домен, то смола ВаКегропа АВХ'"М |. Т. Вакег,
РийШірзбиго, М.УД є підходящою для очищення. Також доступні інших технології для очищення білків, такі як фракціонування на іоно-обмінній колонці, осадження з етанолом, ВЕРХ із оберненою фазою, хроматографія на діоксиді кремнію, хроматографія на гепарин
ЗЕРНАКОЗЕ"М хроматографія на аніон- або катіон-обмінній смолі (такій як колонка з поліаспарагіновою кислотою), хроматофокусування, 505-РАСЕ, і осадження із сульфатом амонію, залежно від відновлюваного антитіла.
Після будь-якої (их) підготовчої (их) стадії (й) очищення, суміш, що містить антитіло, яке представляє інтерес, і забруднювачі, можна піддавати хроматографії з гідрофобною взаємодією при низьких рН, використовуючи елююючий буфер при рН у діапазоні 2,5-4,5, типово здійснюють при низьких концентраціях солі (наприклад, від приблизно 0-0,25 М солі).
Винахід також стосується нуклеїнових кислот, які гібридизуються в розслаблених, помірних або строгих умовах, як вказано в даній заявці, з усією або частиною (наприклад, частиною, яка кодує варіабельну ділянку) нуклеотидної послідовності, яка представляє собою виділену (Її) полінуклеотидну (ії) послідовність (ї), що кодує (ють) антитіло до ТІкВ або фрагмент антитіла.
Гібридизуюча ділянка гібридизуючої нуклеїнової кислоти, як правило, складається із принаймні 15 (наприклад, 20, 25, 30 або 50) нуклеотидів. Гібридизуюча ділянка гібридизуючої нуклеїнової кислоти ідентична принаймні на 80 95, наприклад, принаймні на 90 95, принаймні на 95 95, або принаймні на 98 95, до послідовності ділянки або всієї нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид до ТІКВ (наприклад, варіабельну ділянку важкого ланцюга або легкого ланцюга), або її комплементу. Гібридизуючі нуклеїнові кислоти описаного в даній заявці типу можна використовувати, наприклад, як зонд для клонування, праймер, наприклад, ПЛр-праймер або діагностичний зонд.
У деяких варіантах здійснення, даний винахід включає виділений (ї) полінуклеотид (и), що включає (ють) послідовності, які кодують антитіло або фрагмент антитіла, що має варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, де амінокислотна послідовність варіабельного легкого ланцюга й амінокислотна послідовність варіабельного важкого ланцюга є принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 95 95, принаймні на 98 95, або принаймні на 99 95 ідентичні до амінокислотних послідовностей, представлених в ЗЕО ІЮ МО: 2 і 12, або З і 13, або 4114, або51і15,абобі16, або 7 і 17, або 8 і 18, або 9 і 19, або 10 і 20, відповідно.
У деяких варіантах здійснення, даний винахід включає виділений (ї) полінуклеотид (и), що включає (ють) послідовності, які кодують антитіло або фрагмент антитіла, що має легкий ланцюг і важкий ланцюг, де амінокислотна послідовність легкого ланцюга й амінокислотна послідовність важкого ланцюга є принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 95 95, принаймні на 9895, або принаймні на 9995 ідентичні до амінокислотних послідовностей, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 21 і 22 або 23; 24 і 25 або 26; 27 і 28 або 29; 30 ї 31 або 32; 33 і 34 або 35; 36 і 37 або 38; 39 і 40 або 41; 42 і 43 або 44; 45 і 46 або 47, відповідно.
Мається на увазі, що в вказаних антитілах до ТІкВ і фрагментах антитіл послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує СОЖК, залишаються незміненими (незміненими стосовно 60 амінокислоти, яку вони кодують, можливі еквіваленти ДНК послідовності внаслідок виродженості генетичного коду), але навколишні ділянки, наприклад, ЕК ділянки, можуть бути сконструйовані.
Нетерапевтичні застосування
Антитіла, представлені в даному описі, можна застосовувати як засоби, використовувані для очищення на основі афінності. При здійсненні цього процесу антитіла іммобілізують на твердій фазі, такій як смола, що містить білок А, за допомогою методів, добре відомих у даній галузі.
Іммобілізоване антитіло приводять у контакт зі зразком, що містять білок ТІКВ (або його фрагмент), який підлягає очищенню, і потім основу відмивають прийнятним розчинником, який повинен видаляти практично весь матеріал у зразку, крім білка ТІКкКВ, зв'язаного з іммобілізованим антитілом. І, нарешті, основу відмивають іншим прийнятним розчинником, який повинен відокремлювати білок ТгКВ від антитіла.
Антитіла до ТТткВ можна застосовувати також у діагностичних аналізах для виявлення та/або кількісної оцінки білка ТІКВ, наприклад, шляхом визначення експресії ТІкВ у конкретних клітинах, тканинах або сироватці.
Згідно з деякими варіантами здійснення винаходу доцільно, наприклад, для діагностичних цілей, мітити антитіло за допомогою фрагменту, що виявляється. Відомі й доступні численні мітки, що виявляються, такі як радіоїзотопи, флуоресцентні мітки, мітки, що представляють собою субстрати для ферментів і т.п. Мітку можна опосередковано кон'югувати із антитілом за допомогою різних відомих методик. Наприклад, антитіло можна кон'югувати із біотином, і будь- яку із вказаних вище міток, що належать до трьох широких категорій, можна кон'югувати із авідіном, або навпаки. Біотин вибірково зв'язується з авідином і тому мітку можна кон'югувати із антитілом опосередкованим способом. В альтернативному варіанті для досягнення опосередкованої кон'югації мітки з антитілом антитіло можна кон'югувати із невеликим гаптеном (таким як дигоксин) і одну з різних типів вказаних вище міток кон'югувати із антитілом до гаптену (наприклад, антитілом до дигоксину). У такий спосіб можна здійснювати опосередковану кон'югацію мітки з антитілом.
Прикладами радіоіїзотопних міток є 355, 7190, 125І1, ЗН і 7. Антитіло можна мітити радіоїзотопом за допомогою методик, описаних, наприклад, в (Ситепі Ргоїосої5 іп Іттипо!оду, т. 1 ї 2, 1991, під ред. Соїїдеп та ін., вид-во Уміеу-іпівегесіепсе, Мем/ мок, М.МУ., 19911.
Радіоактивність можна вимірювати, наприклад, за допомогою сцинтиляційного лічильника.
Прикладами флуоресцентних міток є відомі мітки, отримані на основі хелатів рідкісноземельних металів (хелати європію), або мітки на основі флуоресцеїну і його похідних, родаміну і його похідних, дансилу, лісаміну, фікоеритрину й техаського червоного.
Флуоресцентні мітки можна кон'югувати із антитілом за допомогою відомих методик, наприклад, описаних в Сигтепі Ргоїосої5 іп Іттипоїоду, вище. Флуоресценцію можна оцінювати кількісно за допомогою флуориметра.
У даній галузі відомі різні добре охарактеризовані фермент-субстратні мітки (див., наприклад, огляд, наведений в 05 4275149). Фермент, як правило, каталізує хімічну зміну хромогенного субстрату, яке можна оцінювати за допомогою різних методик. Наприклад, зміна може представляти собою зміна цвіту субстрату, яке можна оцінювати спектрофотометрично. В іншому варіанті фермент може змінювати флуоресценцію або хемілюмінесценцію субстрату.
Методики кількісної оцінки флуоресценції описані вище. У результаті хімічної реакції в хемілюмінесцентному субстраті виникає електронно-збуджений стан, внаслідок чого він може випромінювати світло, яке можна оцінювати, наприклад, за допомогою хемілюмінометра, або він є донором енергії для флуоресцентного акцептора.
Прикладами ферментативних міток є люциферази, такі як люцифераза світляка й бактеріальна люцифераза (О5ЙЖЩ (4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, малатдегідрогеназа, уреаза, пероксидаза, наприклад, пероксидаза із хріну (НКРО), лужна фосфатаза, В-галактозидаза, глюкоамілаза, лізоцим, оксидази сахаридів (такі як оксидаза глюкози, оксидаза галактози й глюкозо-6-фосфатдегідрогеназа), оксидази гетероциклічних сполук (такі як уриказа й оксидаза ксантину), лактопероксидаза, мікропероксидаза і т.п.
Методики кон'югації ферментів з антитілами описані, наприклад, в (О'5ціїмап та ін., Мемшоаз Тог
Ше Ргерагайоп ої Епгуте-апіїоду Сопіндаїе5 Тог ибе іп Еплуте Іттипоавззау, в: Меїйпод5 іп
Епгут., під ред. у). Гапдопе і Н. Мап МипакКі5, вид-во Асадетіс рге55, М.У., 73, 1981, стор. 147- 1661.
Прикладами комбінацій фермент-субстрат є, наприклад: пероксидаза із хріну (НЕРО) і гідрогенпероксидаза як субстрат, при цьому гідрогенпероксидаза окислює барвник-попередник, такий як ортофенілендіамін (ОРО) або гідрохлорид 3,3',5,5'-тетраметилбензидину (ТМВ); лужна фосфатаза (АР) і пара -нітрофенілфосфонат як хромогенний субстрат і В-Ю-галактозидаза (В-а- 60 да) і хромогенний субстрат, такий, наприклад, як пара-нітрофеніл-В-О-галактозидаза, або флуорогенний субстрат, такий як 4-метилумбеліферил-рВ-а-галактозидаза.
Фахівцям у даній галузі відомі численні інші комбінації фермент-субстрат. Загальний огляд представлений, наприклад, в (05 4275149 ї 05 43189801.
В інших варіантах здійснення винаходу антитіло до ТІ/кВ застосовують у неміченому вигляді й виявляють за допомогою міченого антитіла, зв'язаного з антитілом до ТІ/КВ.
Антитіла, представлені в даному описі, можна застосовувати в будь-якому відомому методі аналізу, такому як конкурентні аналізи зв'язування, прямі й непрямі сендвіч-аналізи й аналізи на основі імунопреципітації І(див., наприклад, 20Їа, Мопосіопа! Апіїбодієх: А Мапиаї ої Тесппідцев, вид-во СКС Ргезв5, Іпс., 1987, стор. 147-158.
Діагностичні набори
Можна застосовувати антитіло до ТІКВ, що входить до складу діагностичного набору, що представляє собою упаковку, яка містить комбінацію реагентів, узятих у попередньо визначених кількостях, у комбінації з інструкціями зі здійснення діагностичного аналізу. Якщо антитіло мічене ферментом, то набір може включати необхідні для ферменту субстрати й кофактори, такі як субстрат- попередник, що утворює хромофор або флуорофор, який виявляється. Крім того, можна включати інші добавки, такі як стабілізатори й буфери (наприклад, блокуючий буфер або лізуючий буфер) і т.п. Відносні кількості різних реагентів можуть змінюватися в широких межах, забезпечуючи концентрації реагентів у розчині, які в значній мірі оптимізують чутливість аналізу. Реагенти можуть представляти собою сухі порошки, як правило, ліофілізовані, включаючи ексципієнти, які при розчиненні повинні утворювати розчин реагенту, що має відповідну концентрацію.
Терапевтичні застосування й ТІкВ-зв'язані порушення
В іншому варіанті здійснення, антитіло до ТІКкВ (або його функціональний фрагмент), описані в даній заявці, придатне для лікування різних порушень, зв'язаних з експресією ТіКкВ, як описано в даній заявці.
Антитіло до ТІКкВ або його антигензв'язувальний фрагмент вводять будь-якими прийнятними шляхами, включаючи інтравітреальний, пероральний, парентеральний, підшкірний, внутрішньоочеревинний, внутрішньолегеневий і внутрішньоносовий. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньоочеревинне або підшкірне введення. Додатково, антитіло до ТІКВ підходяще вводять шляхом пульсуючої інфузії, насамперед з понижувальними дозами антитіла. В одному аспекті, дозування здійснюють шляхом ін'єкцій, найбільш переважно внутрішньовенних або підшкірних ін'єкцій, у тому числі залежно від того чи є обробка короткочасною або пролонгованою.
Переважно, антитіло до ТІКкВ вводять шляхом інтравітреальної ін'єкції в очі.
Для запобігання або лікування захворювання відповідна доза антитіла повинна залежати від ряду факторів, таких як тип захворювання, що підлягає лікуванню, серйозність і процес перебігу захворювання, чи вводять антитіло для профілактичних або терапевтичних цілей, попередня терапія, історія хвороби пацієнта й відповідь на антитіло, а також від призначення лікаря.
Антитіло можна вводити пацієнтові однократно або шляхом серій обробок.
У контексті даного опису поняття "пригнічення" має таке ж значення, що й поняття "полегшення" і "купірування", і стосується ослаблення або зниження однієї або декількох характеристик захворювання.
Композицію антитіла можна включати в препаративну форму, дозувати й вводити відповідно до належної клінічної практики. Важливі в цьому плані фактори включають конкретне порушення, що підлягає лікуванню, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину порушення, ділянку введення агента, метод введення, схему введення й інші фактори, відомі практикуючим медикам. У цьому зв'язку "т-ерапевтично ефективну кількість" антитіла, що підлягає введенню, регулюють таким чином, щоб вона представляла собою мінімальну кількість, необхідну для попередження, полегшення або лікування порушення, асоційованого з 5О експресією ТгКВ.
Антитіло необов'язково, але в певних випадках, включають у препаративну форму в комбінації з одним або декількома агентами, застосовуваними в цей час для попередження або лікування розглянутого порушення. Ефективна кількість вказаних інших агентів залежить від кількості антитіла до ТІКВ, присутнього в препаративній формі, типу порушення або лікування й інших вказаних вище факторів. Їх, як правило, застосовують у такі ж дозах і з використанням таких же шляхів введення, у яких їх застосовували раніше, або з використанням у дозі, що становить приблизно від 1 до 99 95 від їх прийнятих для застосування доз.
Агоністичні антитіла до ТІКВ згідно із даним винаходом стимулюють передачу сигналів ТгКВ.
Не бажаючи обмежуватися якою-небудь теорією, вважають, що передача сигналів Т/КкВ 60 сприятлива для захисту фоторецепторів, інших нейронів сітківки, включаючи гангліозні клітини й клітин пігментного епітелію сітківки від клітинної загибелі в сітківці. Отже, агоністичні антитіла до
ТІКВ можуть захищати нейрони сітківки, такі як фоторецептори від дегенерації, тобто, запобігати нейро-дегенерації, і також підвищувати виживання та/або пластичність нейронів, в остаточному підсумку протидіючи втраті зору, зв'язаної або зі зменшеною активністю Т/КВ та/або підвищеному клітинному стресу або апоптотичної активності. Таким чином, антитіла придатні для лікування захворювання око або захворювань сітківки, особливо нейродегенеративних захворювань сітківки або захворювань ока. Такі захворювання включають, але не обмежуючись тільки ними, вікову дегенерацію жовтої плями, географічну атрофію, діабетичну ретинопатію, діабетичний набряк жовтої плями, пігментну дистрофію сітківки, спадкову дистрофію сітківки, спадкову макулодистрофію, міопічну дегенерацію, оклюзії вени сітківки, оклюзії артерії сітківки, ендофтальміт, увеїт, кистозний макулярний набряк, хороїдальну неоваскулярну мембрану внаслідок будь-якого із захворювань сітківки, оптичні нейропатії, глаукому, відшарування сітківки, токсичну ретинопатію, променеву ретинопатію й травматичну ретинопатію.
Антитіла також придатні для лікування захворювань центральної нервової системи, таких як продромальна й від легкої до помірної хвороба Альцгеймера, затримка прогресування захворювання в пацієнтів із хворобою Альцгеймера, хвороба Хантинітона, хвороба Паркінсона, великий депресивний розлад, шизофренія, когнітивне порушення, зв'язане із шизофренією, запобігання першого приступу психозу в індивідуумів з ослабленим психозним синдромом, запобігання повторення в пацієнтів із шизофренією або терапевтично резистентна депресія.
В іншому варіанті здійснення антитіла можуть застосовуватися для лікування втрати слуху, особливо індукованої цисплатином втрати слуху, а також втрати слуху від впливу шуму й вікової втрати слуху.
Особливо, агоністичні антитіла до ТІ/КкВ згідно із даним винаходом показані для лікування непроліферативної та/або проліферативної діабетичної ретинопатії та/або діабетичного набряку жовтої плями додатково до стандартного лікування: Дисфункція нейронів сітківки й нейродегенерація є однією із серйозних патологічних подій при діабетичній ретинопатії й діабетичному набряку жовтої плями (на всіх стадіях захворювання), які в остаточному підсумку викликають втрату зору й зорову дисфункцію. Активація ТІкВ буде протидіяти втраті й функціональним порушенням нейронів сітківки й, таким чином, допомагати підтримувати нормальний зір, зменшувати втрату зорової функції при захворюванні й потенційно допомагати відновлювати зорову функцію.
Крім того, існує потенційне застосування активації ТІКВ як додаткове до анти-МЕСЕ лікування, яке буде суттєво підсилювати терапевтичні переваги останнього, оскільки анти-МЕСЕ націлене тільки на судинну дисфункцію в оці, але не на систему нейрони /гліальні клітини; додатково, тривале анти-МЕСЕ лікування може викликати нейродегенеративні побічні ефекти.
Підхід активації ТІКВ як доповнення до анти-МЕСЕ буде зменшувати такі нейродегенеративні побічні ефекти.
Антитіла до ТІКВ або їх антигензв'язувальні фрагменти особливо придатні для лікування або запобігання порушень сітківки, таких як діабетична ретинопатія, діабетичний набряк жовтої плями, географічна атрофія й глаукома.
В подальшому аспекті, антитіла до ТІКВ або їх антигензв'язувальні фрагменти також придатні для лікування метаболічних захворювань, таких як гіперфагія, ожиріння й метаболічний синдром.
В іншому аспекті, антитіла до ТІКВ згідно із даним винаходом можуть застосовуватися в способі лікування та/або запобігання порушення, зв'язаного з ТІкВ, особливо географічної атрофії, який включає введення терапевтично ефективної кількості антитіла до ТІ/КкВ згідно з винаходом індивідуумові, що страждає від географічної атрофії, у такий спосіб послабляючи один або декілька симптомів географічної атрофії. 5О У ще подальшому аспекті, агоністичні антитіла до ТІКВ можуть застосовуватися в способі лікування та/або запобігання географічної атрофії який включає введення терапевтично ефективної кількості агоністичного антитіла до ТгКкВ індивідуумові, що страждає від географічної атрофії, у такий спосіб послабляючи один або декілька симптомів географічної атрофії.
Фармацевтичні композиції і їх введення
Композиція, що містить антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент, може вводитися суб'єктові, який страждає від або має ризик розвитку захворювання око або сітківки.
Винахід додатково забезпечує застосування антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту для приготування лікарського засобу для запобігання або лікування ТІкВ захворювання. Термін "суб'єкт", як використовується в даній заявці, позначає будь-якого 60 пацієнта-ссавця, якому можна вводити антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний
Зо фрагмент, включаючи, наприклад, людей і ссавців, що відрізняються від людини, таких як примати, гризуни й собаки. Суб'єктів, включаючи людей, зокрема, можна лікувати з використанням способів, представлених у даному описі. Антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент можна вводити або окремо або в комбінації з іншими композиціями.
Кращими антитілами для застосування в таких фармацевтичних композицій є антитіла, що представляють собою гуманізоване антитіло або фрагменти антитіл, що має (ють) варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, представленою в 5ЕО ІЮ МО: 2 і 12, або З і 13, або 4 і 14, або 5 і 15, або 6 і 16, або 7 і 17, або 8 і 18, або 9 і 19, або 10 і 20, відповідно.
Також охоплюються антитіла для застосування в таких фармацевтичних композиціях, що представляють собою гуманізоване антитіло або фрагменти антитіл, що має (ють) варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 95 95, принаймні на 98 95, або принаймні на 99 95 ідентичну до амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮО МО: 2 і 12, або З і 13, або 4 і 14, або 5 і 15, або б і 16, або 7 і 17, або 8 і 18, або 9 і 19, або 10 і 20, відповідно.
Подальшими переважними антитілами для застосування в таких фармацевтичних композиціях є антитіла, що представляють гуманізоване антитіло або фрагменти антитіл, що має (ють) амінокислотну послідовність легкого ланцюга й важкого ланцюга ЗЕО ІО МО: 21 і 22 або 23; 24 і 25 або 26; 27 і 28 або 29; 30 і 31 або 32; 33 і 34 або 35; 36 і 37 або 38; 39 і 40 або 41; 42 і 43 або 44; 45 і 46 або 47, відповідно.
Подальші переважні антитіла для застосування в таких фармацевтичних композиціях, які представляють собою гуманізоване антитіло або фрагменти антитіл, що має (ють) амінокислотну послідовність легкого ланцюга й важкого ланцюга принаймні на 80 95, принаймні на 90 95, принаймні на 9595, принаймні на 9895, або принаймні на 9995 ідентичну до амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО: 21 і 22 або 23; 24 і 25 або 26; 27 і 28 або 29; 30 і 31 або 32; 33 і 34 або 35; 36 і 37 або 38; 39 і 40 або 41; 42 і 43 або 44; 45 і 46 або 47, відповідно.
Мається на увазі, що у вказаних антитілах до ТІкВ і фрагментах антитіл, амінокислотна послідовність СОК залишається незміненою, але навколишні ділянки, наприклад, ЕК ділянки, можуть бути сконструйовані.
Відомі різні системи доставки й вони можуть використовуватися для введення антитіла до
ТІКВ або його антигензв'язувального фрагменту. Спосіб введення включають, але не обмежуючись тільки ними, інтравітреальний, очні краплі, внутрішньошкірний, внутрішньом'язовий, внутрішньоочеревинний, внутрішньовенний, підшкірний, внутрішньоносовий, епідуральний і пероральний шляхи. Антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент можуть вводитися, наприклад, шляхом інфузії, болюса або ін'єкції, і можуть вводитися разом з іншими біологічно активними агентами. Введення може бути системним або місцевим. У переважних варіантах здійснення, введення здійснюють шляхом інтравітреальної ін'єкції. Препарати для таких ін'єкцій можуть бути приготовлені, наприклад, у попередньо заповнених шприцах.
Антитіло до ТІкКВ або його антигензв'язувальний фрагмент можна водити у вигляді фармацевтичних композицій, що містять терапевтично ефективну кількість антитіла до ТІ/кВ або його антигензв'язувального фрагменту й один або декілька фармацевтично сумісних інгредієнтів.
Згідно з типовими варіантами здійснення винаходу фармацевтичну композицію готують згідно із загальноприйнятими процедурами з одержанням фармацевтичної композиції, придатної для внутрішньовенного або підшкірного введення людині. Як правило, композиції для введення шляхом ін'єкції представляють собою розчини в стерильному ізотонічному водному буфері. При необхідності фармацевтичний засіб може містити також солюбілізуючий агент і місцевий анестетик, такий як лідокаїн, для зняття болю в місці ін'єкції. Як правило, інгредієнти поставляються або окремо, або їх змішують із одержанням стандартної дози лікарського засобу, наприклад, у вигляді сухого ліофілізованого порошку або концентрату, що не містить воду, в герметично закритому контейнері, такому як ампула або саше, із вказівкою кількості діючої речовини. У тих випадках, коли фармацевтичний засіб призначений для введення шляхом інфузії, то його можна розливати по флаконах для інфузій, що містять стерильну воду або фізіологічний розчин фармацевтичного ступеня чистоти. У тих випадках, коли фармацевтичний засіб вводять за допомогою ін'єкції то можна використовувати ампулу зі стерильною водою для ін'єкцій або фізіологічним розчином для того, щоб інгредієнти можна було перемішувати перед введенням. 60 Крім того, фармацевтичну композицію можна включати у фармацевтичний набір, який містить (а) контейнер, що містить антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент у ліофілізованій формі й (б) другий контейнер, що містить фармацевтично прийнятний розріджувач (наприклад, стерильну воду) для ін'єкцій. Фармацевтично прийнятний розріджувач можна використовувати для відновлення або розведення ліофілізованого антитіла до ТІКкВ або його антигензв'язувального фрагменту. Необов'язково до вказаного (их) контейнеру (ів) можна додавати повідомлення у формі, затвердженій офіційним агентством, що дозволяють виробництво, застосування або продаж фармацевтичних препаратів або біологічних продуктів, де в повідомленні відображений дозвіл агентства на виробництво, застосування або продаж з метою введення людям.
Кількість антитіла до ТІкКВ або його антигензв'язувального фрагменту, яка ефективна для лікування або запобігання порушення, зв'язаного з ТІкВ, можна визначати звичайними методами клінічних досліджень. Крім того, необов'язково можна використовувати аналізи іп мійго, результати яких можуть сприяти визначенню оптимальних меж доз. Точна доза для застосування в препаративній формі також повинна залежати від шляху введення й стадії порушення, і вона повинна ухвалюватися на основі рекомендацій лікаря й обставин, характерних для кожного пацієнта. Ефективні дози можна визначати шляхом екстраполяції на основі кривих дозової залежності, отриманих за результатами дослідів іп міго або на модельних тест-системах з використанням тварин.
Наприклад, токсичність і терапевтичну ефективність антитіла до ТІКВ або його антигензв'язувального фрагменту можна визначити в клітинних культурах або на експериментальних тварин стандартними фармацевтичними методами, використовуваними для визначення ЕЮво (терапевтично ефективна доза для 50905 популяції). Переважним є антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент, яке (ий) проявляє високий терапевтичний індекс.
Дані, отримані за результатами аналізів на клітинних культурах і досліджень на тваринах, можна використовувати при визначенні межі доз, призначених для застосування на людині. Як правило, доза антитіла до ТІКкВ або його антигензв'язувального фрагменту знаходиться в межах концентрацій у кровотоці, які включають ЕЮО5О, маючи при цьому низьку токсичність або не проявляючи токсичності. Дозу можна змінювати в вказаних межах залежно від використовуваної лікарської форми й застосовуваного шляху введення. Для будь-якого антитіла до ТгкВ або його антигензв'язувального фрагменту, використовуваного згідно зі способом, терапевтично ефективну дозу можна спочатку встановлювати за результатами аналізів на клітинних культурах. Дозу можна визначити, виходячи з даних, отриманих на тваринних моделях, досягаючи меж концентрацій у плазмі крові, які включають ІСво (тобто концентрацію тестованої сполуки, при якій досягається інгібування симптомів, що становить половину від максимальної) за даними, отриманим на культурі клітин. Таку інформацію можна використовувати для більш точного визначення придатних доз для людини. Можна визначати концентрації в плазмі крові, наприклад, за допомогою рідинної хроматографії високого розділення, ЕЇГ І5А і т.п.
Для інтравітреальної ін'єкції антитіла до ТІ/кВ, як правило, переважними є більш тривалі інтервали між лікуваннями. Завдяки їх поліпшеній ефективності, антитіла до ТІКВ згідно із даним винаходом можуть вводитися з більш тривалими інтервалами.
В одному варіанті здійснення, антитіло до ТІкВ вводять кожні б тижнів, переважно кожні 7 тижнів, також переважно кожні 8 тижнів, в подальшому переважно кожні 9 тижнів, більш переважно кожні 10 тижнів, в подальшому переважно кожні 11 тижнів, і більш переважно кожні 12 тижнів. В подальшому переважному варіанті здійснення, антитіло до ТІкВ вводять один раз кожні З місяці.
В одному варіанті здійснення, антитіло до ТІкВ вводять суб'єктові, який цього потребує, у початковій дозі 1-2000 мг. В іншому варіанті здійснення, необов'язково вводять одну або декілька наступних доз, кожна з яких містить 1-2000 мг антитіла до ТгКкВ.
У зв'язку з тим, що об'єм, які може вводитися в око, суттєво обмежений, то надзвичайно важливим є те, що антитіло до ТІКВ може бути приготовлене у вигляді препарату у високих концентраціях. Крім того, ефективність антитіла до ТІКВ є надзвичайно важливою, оскільки ефективне антитіло може проявляти свій ефект навіть у дуже низьких дозах і, отже, пролонгує активність, а також інтервали між лікуваннями.
Антитіла згідно із даним винаходом можуть бути приготовлені у вигляді препаратів у надзвичайно високих дозах, які включають, але не обмежуючись тільки ними, 20 мг/мл, 30 мг/мл, 40 мг/мл, 50 мг/мл, 60 мг/мл, 70 мг/мл, 80 мг/мл, 90 мг/мл або 100 мг/мл.
Типове дозування, яке може вводитися пацієнтові, становить приблизно З мг/око. Типові буферні компоненти, які можна застосовувати для такого препарату, містять, наприклад, ацетат 60 натрію, РБ20О і дигідрат трегалози.
В одному варіанті здійснення, антитіло до Т/"кВ приготовлене у вигляді препарату з 10 мт гістидиновим буфером, 240 міт сахарозою, 0,02 мас./ об. 96 полісорбату 20 при рН 5,5 з кінцевою концентрацією білка 60 мг/мл.
У деяких варіантах здійснення, фармацевтичні композиції, що містять антитіло до ТІ/кВ або його антигензв'язувальний фрагмент можуть додатково включати терапевтичний засіб, кон'югований або некон'югований із зв'язувальним агентом. Антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент можна спільно вводити в комбінації з одним або декількома терапевтичними засобами для лікування або запобігання захворювання, зв'язаного з ТІКВ.
Наприклад, комбінована терапія може включати анти-МЕСЕ, анти-РОСЕ або анти-апаг.
Така комбінована терапія може мати адитивну або синергетичну дію відносно ознак захворювання (наприклад, тяжкість прояву симптому, кількості симптомів або частоти рецидивів).
При застосуванні схем лікування при комбінованому введенні в конкретному варіанті здійснення винаходу, антитіло до ТІКВ або його антигензв'язувальний фрагмент вводять одночасно з терапевтичним засобом. В іншому конкретному варіанті здійснення винаходу, терапевтичний засіб вводять до або після введення антитіла до ТІкВ або його антигензв'язувального фрагменту, протягом від 1 години до декількох місяців, наприклад, принаймні, протягом 1 години, 5 годин, 12 годин, доби, тижня, місяця або трьох місяців до або після введення антитіла до ТгКкВ або його антигензв'язувального фрагменту.
Вироби
Іншим об'єктом винаходу є виріб, що містить речовини, придатні для лікування порушень, описаних вище. Виріб включає контейнер і етикетку. Прийнятними контейнерами є, наприклад, бутлі, флакони, шприци й лабораторні пробірки. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластик. Контейнер містить композицію, яка є ефективною для лікування конкретного стану, і може мати стерильний отвір для доступу. Наприклад, контейнер може представляти собою мішок або флакон для внутрішньовенного розчину, що має замикаюче обладнання, проникне для ін'єкційної голюи для підшкірного введення. Діюча речовина в композиції представляє собою антитіло до ТІкВ або його антигензв'язувальний фрагмент. На етикетці на контейнері або зв'язаній з ним вказується, що композиція використовується для лікування вибраного стану. Виріб може додатково включати другий контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як забуферений фосфатом фізіологічний розчин, розчин Рінгера й розчин декстрози. Він може додатково включати інші речовини, присутність яких бажана з комерційної й споживчої точки зору, включаючи інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки, шприци й вкладиші в упаковці з інструкціями із з5 застосування.
Винахід описаний нижче за допомогою представлених прикладів, які не спрямовані на обмеження обсягу винаходу.
ПРИКЛАДИ
1. Створення антитіла (імунізація)
В-клітини від мишей при здійсненні комплексу імунізації піддавали скринінгу, використовуючи власну розроблену технологію платформу одиничних В-клітин. Анти-Т/кВ зв'язувачі мінімізували після тестування для визначення активності, ефективність і дієвості в дослідженні фосфорилування ТІКВ іп-міїго. 2. Одержання гуманізованих антитіл
Мишиний лідерний 0003 відбирали для подальшої оптимізації. Мишиний лідерний компонент мав варіабельний легкий ланцюг, що відповідає ЗЕО ІЮ МО: 1 і варіабельний важкий ланцюг, що відповідає 5ЕО ІЮ МО: 11.
Для оптимізації послідовності Т"'КВ мишиного лідерного 0003, відбирали найбільш подібні послідовності антитіл зародкової лінії людини, ІЗКМ4-1501, КО2 для легкого ланцюга й ІЗНМ1- 5О 46703, НОб для важкого ланцюга. Створювали бібліотеку варіантів. Це приводило до одержання гуманізованих варіабельних послідовностей легкого ланцюга, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 2- 10, і варіабельних послідовностей важкого ланцюга, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 12-20.
Таблиця 2:
Типові гуманізовані антитіла згідно із даним винаходом представляють собою антитіла, які мають послідовності легкого й важкого ланцюга, як вказано в таблиці нижче. Ід1-КО має дві мутації в Ес ділянці, І ец234АЇа і І еи235АЇа для зменшення ефекторної функції.
Таблиця 3:
3. Інформація про епітоп
Матеріали
Вода (Зідта АПагісі, номер за каталогом 37877-41)
Ацетонітрил (Зідта Аїагісп, номер за каталогом 34998-41)
Мурашина кислота (РіпКа, номер за каталогом 94318)
Сечовина (Зідта Аїагісі, номер за каталогом 51456-5002)
ТСЕР-НСЇ - 10 г (Тнегто 5сіепійіс-Ріегсе, номер за каталогом 20491)
Двохосновний фосфат натрію (бідта Аїагісп, номер за каталогом 57907-1002)
Одноосновний фосфат натрію (Зідіта Аїдгісп, номер за каталогом 58282 - 5002)
Передколонка АСОШІТУ ОРІ С ВЕН С18 Мапдиага, 130А, 1,7 мкм, 2,1 мм Х 5 мм (УМаїег5
Тесппоіодієз Согр, 186003975)
Картридж із іммобілізованим пепсином Рого527утеф І, 2,1 мм х 30 мм (І їе ТесппоЇодіев5 Согр, 2313100)
Колонка Асдийу ОРІ С ВЕН С18 1,7 мкм, 1 мм Х 50 мм (УмМаїег5, 186002344)
Розчинник А: 0,1 96 Мурашина кислота /99 95 вода /1 95 ацетонітрил
Розчинник В: 0,1 96 Мурашина кислота /5 95 вода /95 95 ацетонітрил
Водний буфер: НгО 10 мМ фосфат натрію рН 7,4
Дейтерієвий буфер: 020 10 мМ фосфат натрію рН 7,4
Загартовуючий буфер: Вода 8 М Сечовина, 0,4М ТСЕР-НСЇІ
У контрольних зразках для картування епітопів, антиген проганяли з антитілом і без нього.
Для визначення переліку антигенних пептидів, у цьому проколі спочатку здійснювали перший прогін, використовуючи водний буфер замість дейтерієвого буфера. 4 мкл зразка змішували з 40 мкл дейтерієвого буфера. Цю суміш інкубували при 20 "С для декількох часових точок (1,2 і 4 хвилини). Після цього 40 мкл суміші переносили в 40 мкл 4 "С загартовуючого буфера (4М
Сечовина, 0,4М ТСЕР-НСІ) і змішували. Ін'єкували 60 мкл загартовуючого білка, де він розщеплюється на пепсиновій колонці протягом 2 хвилин шляхом промивання 200 мкл/мл розчинника А: 0,1 90Мурашина кислота /99595 вода /195 ацетонітрил. Наступні пептиди знесолювали на передколонці Мапдцагй протягом З хвилин. Розщеплені пепсином пептиди відправляли на колонку зі оберненою фазою ВЕН С18 усередині колонки /клапана терморегульованого компартмента. Використовували градієнт системи розчинників, що складається з: розчинник А: 0,1 99Мурашина кислота /99 95 вода /1 95 ацетонітрил і розчинник В: 0,195 Мурашина кислота /5 95 вода /95595 ацетонітрил. Процентний вміст розчинника В підвищували від 10 95 до 15 95 через 5,1 хвилини, до 50 95 через 11 хвилин, до 90 95 через 11,5 хвилини, витримуючи до 12,5 хвилин, до 0 95 В через 13 хвилин, витримуючи до 14 хвилин.
Хроматографічне розділення відбувався при 4 "С при швидкості потоку 180 мкл/хв. Після хроматографічного розділення зразок надходив на ТПпепто зЗсіепійс Огрйгар ЕРизіоп мас- спектрометр, що працює в режимі позитивної електророзпилювальної іонізації.
Використовуваний метод включав активаційні типи СІЮ ії ЕТО при ідентифікації контрольних пептидів, використовуючи розділення 120 тис., мінімальний сигнал 10 тис., ширину виділення 1,0 ї нормовану енергію зіткнень 35,0 В. КЕ рівень 5-лінз встановлювали на 60 95. Для контрольних пептидів тип збору даних являв собою профілі для повного МС сканування й центроїд для СІЮ МС/мс даних. Для дейтерованих зразків, не збирали МС /мс. Дані збирали для масового діапазону 280-1800 Да. Для аналізу необроблених даних РХ-МС /мс фрагментації, контрольні зразки (з СІЮ і ЕТО МсС/мс) аналізували, використовуючи Ргоївоте Оізсомег 1.4 (Тпепто Зсіепійс) і Рті Вуопіс (Ргоївіп Меїгіс5) стосовно заданої послідовності для створення переліку пептидів і часу утримання. Файли з необробленими даними попередньо обробляли й перетворювали в АБЗСІЇ формат, використовуючи власне розроблене програмне забезпечення
ЗНАКС. Після цього відзначали ідентифіковані пептиди й узагальнювали отримані дані, 5О використовуючи власне розроблене програмне забезпечення ЗНАЕТ. Епітопи визначали на основі відмінностей зсуву середньої маси, індукованого зв'язуванням після мічення дейтерієм.
На рівні пептиду, захист більше 0,4 Да розглядався як достовірна.
Результати картування епітопів показано для ВОМЕ, 277-антитіл, (С2) (0520100196390), і (Сб20) (0520100150914) на Фіг. 1. Специфічні зв'язувальні сайти для кожної молекули з позаклітинним доменом ТІКВ людини з ЗЕО ІО МО: 54 виділені темно-сірим кольором. У порівнянні із природним лігандом ВОМЕ, 277-антитіла зв'язуються з іншими новими епітопами. 4. Схильності послідовностей в СОК
Послідовності СОК перевіряли щодо наявності будь-яких потенційних схильностей, таких як сайти М-глікозилування, мотиви сильного дезамідування (МО, Ме, МН, МА, МО, МТ, ММ), мотиви ізомеризації аспартату (00), мотиви фрагментації (00, ОБ), цистеїн. Ці амінокислот або мотиви можуть піддаватися хімічній реакції й надавати продукту небажану гетерогенність, також з можливістю негативного впливу на цільове зв'язування й функціонування. Із цих міркувань, є переважним видаляти такі амінокислоти або мотиви (якщо вони присутні) з СОК.
СОК мишиної лідерної і гуманізованих послідовностей не містили таких потенційних мотивів схильності.
Таблиця 4 (Схильностії | (БО Її 2 | з її 6 щ К 5. Імуногенність
Імуногенність послідовностей оцінювали іп 5іїсо за допомогою алгоритму за ліцензією від компанії Ерімах. Шкала Ерітаїйгіх Тгед-ад| враховує епітопи Т-клітин і Тгед епітопи. Чим більш низька оцінка імуногенності, тим менша ймовірність того, що послідовність буде імуногенною. У цілому, негативна оцінка розглядається як низький ризик імуногенності, у той час як позитивний оцінка розцінюється як вказівка на потенційну імуногенність.
Таблиця 5: 6. Афінність:
Використовували технологію поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК) для визначення афінності зв'язування 277-антитіл, С2 (0520100196390), ії 020 (0520100150914) ії ТАМ-163 (М/О2015173756) з Ни-Ти/КкВ-Ніз. Експеримент здійснювали на приладі РгоїеОп ХРЕЗ6.
Метод: Рухомий буфер для цього експерименту й усі розведення (за винятком тих випадків, коли конкретно вказано) здійснювали в РВ5-Т-ЕОТА з 0,01 96 Тмееп20 (100 мкл 100 95 Туееп2го додавали до 2 л РВБЗ-І-ЕОТА для одержання кінцевої концентрації Тмеєп 20 0,01 орі.
Сенсорний чіп БМ нормували й установлювали попередні умовах згідно з інструкціями виробника. Сенсорний чіп активували із застосуванням урівноваженої суміші ЕОС/5-МН5 у горизонтальному напрямку протягом 300 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв і іммобілізували з Рекомбінантним білком А/5 (60 мкг/мл в 10 мМ ацетаті рН 4,5) у горизонтальному напрямку протягом 300 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв, що приводило до -« 7100-7130 ЕО Білка
А/5З на поверхні. Сенсорний чіп деактивували із застосуванням 1М етаноламіну Нсі! у горизонтальному напрямку протягом 300 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв. Сенсорний чіп стабілізували протягом 18 секунд із 0,85 95 фосфорною кислотою при швидкості потоку 100 мкл/хв З рази горизонтально й З рази вертикально. 277-антитіло (0,6 мкг/мл), С2 (2,1 мкг/мл), б20 (1,2 мкг/мл), і ТАМ-163 (5 мкг/мл) захоплювали на поверхню Білка А/З вертикально протягом 70 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв, що приводило до рівнів захоплення «615, 1390, 780 ії 3380 ЕС, відповідно. Вихідний рівень стабілізували шляхом ін'єкування РВЗ-Т-ЕОТА протягом 60 секунд при швидкості потоку 100 мкл/хв горизонтально й потім другої ін'єкції РВ5-Т-
ЕОТА протягом 60 секунд при швидкості потоку 100 мкл/хв і дисоціації 120 секунд горизонтально. Аналіт (Ни-ТикВ-Ніз) ін'єкували горизонтально над захопленим антитілом протягом 600 секунд при швидкості потоку 30 мкл/хв і дисоціації протягом 1800 секунд.
Концентрації аналітів становили 0 нМ, 1,23 нМ, 3,7 НМ, 11,11 нМ, 33,33 нМ ї 100 нм. Поверхню регенерували шляхом ін'єкування 0,85 96 фосфорної кислоти протягом 18 секунд при швидкості потоку 100 мкл/хв один раз горизонтально й один раз вертикально. РВ5-Т-ЕОТА ін'єкували протягом 60 секунд при швидкості потоку 100 мкл/хв один раз вертикально. Взаємні перешкоди (взаємодії з поверхнею сенсора) і холості дані (РВЗ-Т-ЕОТА з 0,01 95 Тмееп20 або 0 нм аналіту) віднімали з необроблених даних. Після цього сенсограми підганяли глобально до 1:1 зв'язування Ленгмюра, одержуючи значення асоціації (Ка), дисоціації (Ка) і афінності (Кб). 277-антитіла зв'язуються з Ни-ТІКкВ-Нів з Ка 1,93х105 1/мс, Ка 3,51х107 1/3, і Ко 1,2 нМ. С2 зв'язується з Ни-ТІКВ-Нів з Ка 2,32х104 1/мс, Ка 3,39х10- 1/з, і Ко 10,5 нМ. С20 зв'язується з Ни-
ТІКВ-Нів з Ка 1,29х105 1/мс, Ка 6,13х103 1/3, і Ко 47,7 нМ. ТАМ-163 не зв'язується з 100 нМ Ни- тТІкВ-НІів.
Таблиця 6: 11111111 фткВлюдини.д//////////777777777111111СсСсСсС 7. Неспецифічне зв'язування:
Розробляли аналіз неспецифічного зв'язування, використовуючи технологію біосенсора, для визначення, чи будуть кандидати нових біологічних сполук (МВЕ) мати істотне зв'язування з неспорідненими зарядженими білками. У цьому аналізі, антитіла проходили над двома 5РЕ. поверхнями, одна з них була покрита неспорідненим негативно зарядженим білком, а друга покрита неспорідненим позитивно зарядженим білком. Коли МВЕ кандидат демонструє істотне неспецифічне зв'язування із цими поверхнями, то, імовірно, що причиною зв'язування є присутність позитивно або негативно заряджених поверхневих ділянок на кандидатові.
Неспецифічне зв'язування МВЕ кандидатів можуть приводити до поганих фармакокінетики (ФК) і біорозподілу й також може негативно впливати на наступну виробничу технологічність.
Результати цього аналізу використовували в контексті оцінки ризику за даним проектом. Метою цього дослідження було зменшення ризику поганої ФК, відсутності розподілу в цільовій тканині й складності наступної виробничої технологічності.
Завданням було визначення, чи будуть 277-антитіла проявляти неспецифічне зв'язування або не будуть проявляти неспецифічного зв'язування шляхом збору сенсограм зв'язування 277- антитіл і порівняння їх із сенсограмами контролів для визначення категорії неспецифічного зв'язування як сприятливе (зелене), прийнятне (жовте) або несприятливе (червоне).
Метод:
Експеримент здійснювали на Віасоге 17200. Розведення, приготування поверхні й експерименти зв'язування здійснювали при 25 "С в 1ТХ НВ5З-ЕР буфері, приготовленому з 10Х
НВ5-ЕР. Швидкість потоку для обох протоколів, як протоколу іммобілізації, так і експерименту зв'язування, становила 5 мкл/хв.
Для приготування поверхні для експерименту неспецифічного зв'язування, білий лізоцим курячих яєць і інгібітор трипсину типу 1-5 із сої зв'язували вручну із серіями 5 СМ5 чіпу із щільністю поверхні 3000-5000 ЕО, використовуючи набір для іммобілізації за аміно-групою згідно з інструкціями виробника. ЕСІ1 і ЕС2 активували шляхом ін'єкування 1:1 суміші ЕОС і МН протягом 7 хвилин. Поверхнею білого лізоциму курячих яєць готували на ЕС2 шляхом ін'єкування 150 мкг/мл білого лізоциму курячих яєць в 10 мМ МабАс, рН 5,5 протягом 5 хвилин.
ЕС1 ї ЕС2 дезактивували шляхом ін'єкування 1 М етаноламін-НСІ протягом 7 хвилин. ЕС1 використовували як еталонну поверхню. ЕСЗ активували шляхом ін'єкування 1:11 суміші ЕОС і
НМ5 протягом 7 хвилин. Поверхню інгібітору трипсину типу 1-5 із сої готували на ЕСЗ3 шляхом ін'єкування 300 мкг/мл інгібітору трипсину типу 1-5 із сої в 10 мМ МабАс, рН 4,0 буфера протягом 20 хвилин з наступною 7 хв. ін'єкцією 1 М етаноламін-НСІ для дезактивації проточного гнізда. Поліклональне антитіло до лізоциму, антитіло до інгібітору трипсину, і ВІ негативний контроль використовували як контролі в аналізі. Контролі й антитіла готували в 1 мкМ в 1Х НВ5З-
ЕР буфері. Зразки ін'єкували над ЕС1, ЕС2 і ЕСЗ поверхнями з 10 хв. асоціацією й 15 хв. 5О дисоціацією. Поверхні регенерували між кожним циклом зв'язування шляхом ін'єкування 1 хв. 0,85 95 фосфорної кислоти й 30 з 50 мМ Маон при швидкості потоку 50 мкл/хв із наступним періодом стабілізації 2 хв. з ЇХ НВ5З-ЕР буфером, що течуть через усі поверхні. Поліклональне антитіло до лізоциму й антитіло до інгібітору трипсину ін'єкували над ЕС1, ЕС2 і ЕСЗ на початку й кінці експерименту. Дані збирали, використовуючи Віасоге Т200 Сопіго! Зоїтмаге версія 2.0.1, і аналізували, використовуючи Віасоге 1200 ЕмаІцайоп Зоймаге версія 3.0.
Сенсограми зв'язування антитіл порівнювали із сенсограмами ВІ негативного контролю для визначення рівня неспецифічного зв'язування з поверхнями білого лізоциму курячих яєць і інгібітору трипсину типу 1-5 із сої.
Отримані дані показали, що 277-антитіло не зв'язується суттєво з неспорідненими зарядженими білками; специфічно білим лізоцимом курячих яєць і інгібітором трипсину типу 1-5 із сої. 277-антитіло класифіковане як сприятливе (зелене) у порівнянні з відповіддю зв'язування й формою кривих у порівнянні з контролями. Отже, можна припустити, що 277-антитіло буде мати незначний ризик щодо фармакокінетики, біорозподілу й приготування на основі нецільових заряджених видів.
Таблиця 7: разок : вх
Лізоцим Інгібітор трипсину 8. Активність (5У5У) і ефективність
Диференціація БН-5У5У клітин до нейронного фенотипу
Клітини 5БН-5У5У (АТССФ СІ -2266"7М) культивували в ОМЕМ:Е12 (Г0пла Мо ВЕ12-719Б) з 1595 фетальною бичачою сироваткою в колбі для культивування тканини 175 см? (Сопіпд
Ме353112). Для висівання клітин колбу промивали один раз за допомогою Ю-РВЗ (І опла Мо 17- 5122) і клітини від'єднували із застосуванням 37 "С попередньо нагрітого розчину акутази (АбО64 5ІОМА). Після інкубувания протягом 3 хвилин при кімнатній температурі клітини приєднані за допомогою піпетки 10 мл і перенесені в пробірку фірми РаїЇсоп обсягом 15 мл.
Клітини підраховували й 6000 клітин в 100 мкл ОМЕМ:Е12 з 1595 ЕВ5 на лунку висівали в покриті колагеном-І планшети на 96 лунок (ВО Віозсіепсе5 Ме 354407). Клітини підтримували у вологому інкубаторі при 37 "С, 5 95 СО». Через 8 годин, у кожну лунку додавали 100 мкл б мкМ розчину ретиноєвої кислоти (Зідта Мо К2625). Кінцева концентрація ретиноєвої кислоти становила З мкМ. Через 48 годин і 96 годин, необхідна стимуляція з додатковою кількістю ретиноєвої кислоти. Для цього, видаляли 100 мкл середовища на лунку й додавали 100 мкл свіжого середовища з 6 мкМ ретиноєвої кислоти. Після диференціації протягом 7 днів 5Н-5У5У клітини мали допамінергічно-подібний фенотип і були готові до використання.
Стимуляція й лізис диференційованих клітин ЗН-5У5У
Середовище з лунок заміняли на 80 мкл попередньо нагрітої ОМЕМ-Е12 з 0,2 95 В5БА.
Планшет інкубували при кімнатній температурі протягом 15 хвилин. Пептиди й антитіла розводили в ОМЕМ-Е12 з 0,2 95 В5БА. Усі розведення готували з наконечниками, пробірками й планшетами з низьким зв'язуванням. Клітини стимулювали шляхом додавання 20 мкл відповідного пептиду/антитіла протягом 45 хвилин при кімнатній температурі. Під час інкубувания готували буфер для лізису клітин у пробірці фірми Раїсоп об'ємом 15 мл на льоді: 1 мл 10х Ттйоп Х-100 лізуючий буфер 8,7 мл НО 1 таблетка повна міні, інгібітор протеази 100 мкл коктейль інгібіторів фосфатаз 2 100 мкл коктейль інгібіторів фосфатаз З 100 мкл 1 мМ РМ5Б.
Після стимуляції клітин середовище видаляли й на кожну лунку додавали 30 мкл охолодженого на льоді лізуючого буфера. Планшет покривали верхнім ущільненням і інкубували на льоді протягом 20 хвилин. Після цього вміст планшета перемішували на струшувачі для планшетів епендорфа при 500 об./хв. протягом 5 хвилин.
Для цієї стадії всі матеріали й розчини зберігали на льоді. Планшет на 96 лунок з лізованими клітинами центрифугували при 235 д протягом 10 с і зберігали на льоді. Буфер для
АІрпагІЗА імуноаналізу (Ре кіпЕІтег МеАГО00С) готували шляхом розведення 260 мкл 10х маточного розчину в 2340 мкл НгО. рМТККаО акцепторні кульки (РегкіпЕітег Мо СО5М81822; кульки, покриті РегКіп ЕІтег з антитілом від СеїЇЗідпаїйпуд С5Т Мо 4621 клон С5ОЕЗ) розводили в буфері для АїЇрпагІЗА імуноаналізу до кінцевої концентрації 10 мкг/мл. МТЕК2 біотинове 5О антитіло (РегкіпЕітег Мо СО5БМ81820; мічене з РегКіп ЕІтег з антитілом від СеїзЗідпаїйпу
С5Т-Мо4609 клон С17Е1) розводили в буфері для АїІрпа/!І5А імуноаналізу до кінцевої концентрації 1 нМ і стрептавідин-донорні кульки (РегкіпЕІтег Мо 67600025) розводили в буфері для АїІрпагІ5зА імуноаналізу до кінцевої концентрації 20 мкг/мл. 5 мкл рМТКК2 акцепторних кульок і 2,5 мкл клітинного лізату на лунку переносили в білий планшет невеликого об'єму на 384 лунки (ОСгеіпег Мо 784075) із плоским дном і центрифугували при 235 9 протягом 10 с і зберігали протягом 45 хвилин при кімнатній температурі в темряві. Після інкубувания додавали 2,5 мкл МТККаО біотинового антитіла на лунку й планшет центрифугували при 235 д протягом 10 с і зберігали протягом 45 хвилин при кімнатній температурі в темряві. На завершення, додавали 2,5 мкл стрептавідин-донорних кульок на лунку й планшет центрифугували при 235 д протягом с і зберігали протягом 30 хвилин при кімнатній температурі в темряві. Відразу після цього планшет аналізували за допомогою планшет-рідера Епмізіоп, використовуючи протокол
АІрпазсгееп (фільтр 570 нм Мо 244 і дзеркало Мо 444).
Визначення ЕКК1/2 Фосфорилування
Вимірювання ЕКК 1/2 (Тпг202/Туг204) фосфорилування здійснювали із застосуванням 8 мкл 10 клітинного лізату згідно з інструкціями виробника (АІрпазЗсгееп БигеБіе р-ЕВК 1/2 (Тпг202/ГТуг204) набору (РегкіпЕІтег МУТОКЕЗ10ОК))
Визначення АКТ1/2/3 Фосфорилування
Вимірювання АКІ 1/2/3 (Тпг308) фосфорилування здійснювали із застосуванням 8 мкл клітинного лізату згідно з інструкціями виробника (АїІрпазсгееп ЗигерРіге р-АКЕ 1/2/3 (Тпг308) набору (РегкіпЕІтег Мо ТОКАЗ51ОК)).
Декілька антитіл до ТІ/кВ згідно з винаходом аналізували для визначення їх потенційної активності активувати ТІКВ, а також ініціювати нижчерозташовані сигнали. Також у дослідження включали природний ліганд ВОМЕ і антитіла С2 і С20. Антитіла до ТІкВ згідно із даним винаходом в середньому вдесятеро більш активні щодо активації ТІкВ у порівнянні із природним лігандом ВОМЕ. При порівнянні з антитілами С2 і С20, антитіла до ТІКкВ згідно з винаходом у середньому в три рази - у п'ятнадцять раз більш ефективними.
Нижчерозташована передача сигналів р-ЕКК і АКТІ1/2/3 повністю узгоджується із цими вимірюваннями щодо активації Т"кВ і проявляє подібну поліпшену активність антитіл до ТІК згідно з винаходом.
Таблиця 8: 0000000 11111111 1РЕВК 2 (ТпгбЛугоюд.ЇГ///777111111111111111111111111111 11111111 АКТ М2/3АРОТЗОЮЇГГ//1111111111111111111111111111111111111 9. Експресія генів
Здійснювали аналіз секвенування наступного покоління (дані не показані) для диференційованих 5Н-5У5У клітин після стимуляції із застосуванням декількох ТІ/КВ агоністів.
Для підтвердження результатів, вибирали більшість регульованих генів стосовно синаптичної пластичності й потім аналізували зміни за допомогою кПЛР. АКС, МОБ, ЕСК1 представляють собою відомі маркери для синаптичної пластичності. Синаптична пластичність представляє собою процес, за допомогою якого специфічні патерни синаптичної активності приводять до змін синаптичної сили. На Фіг. 2 стимуляція диференційованих ЗН-5У5У клітин за допомогою
ВОМЕ або агоністичних антитіл підвищує кількість експресії мронк АКС, МОБ, ЕСК1, що може бути маркером для збільшеної синаптичної пластичності. На експресію мрнк МТККІ2 не впливає стимуляція із застосуванням ВОМЕ або агоністичних антитіл. Зміни картин експресії, індуковані
ВОМЕ і 0003, у цілому є дуже подібними. Ці результати підтверджують дані, отримані при аналізі секвенування наступного покоління.
Специфічно, ЗН-ЗУ5У клітини диференціювали протягом 7 днів у культуральному планшеті на б лунок (ЗІСМА Мо Сотіпуд СІ 53516). Після диференціації, клітини стимулювали в безсироватковій ОМЕМ:Е12 з 0,2 95 ВБА з контрольним Ід (10 нм, ВОМЕ (10 нМі|І і 0003 (10 нМ протягом 6 годин у вологому інкубаторі при 37 "С, 5 95 СО». Після цього клітини промивали один раз за допомогою попередньо нагрітої їх О-РВ5 і здійснювали виділення мрнк згідно з інструкціями виробника |Оіадеп Мо 74104 Кпеазу Міпі КщЩ. Транскрипцію мрнк до кднк здійснювали згідно з інструкціями виробника (Оіадеп Мо 205310 Оцапійесі Кем. Набір для транскрипції|Ї. кднк використовували для аналізів ТадМап ПЛР у режимі реального часу на основі 5' - нуклеазних зондів (Пептоїїзспег зсіепійіс) на 7900ОНТ Рабі системі ПЛР у реальному часі (Арріїей Віозузіетв5). Значення дельта СТ розраховували на основі значення СТ для АСТВ (Ст-18,18).
Аналізи Тадмап експресії генів від Тпептоїїзспег Зсіепійіс:
АСТВ - актин бета: Не501060665 91; Мо кат. 4331182
МТ АКа - нейротрофічна рецепторна тирозинкіназа 2: Н500178811 т1; Мо кат. 4331182
АВС - зв'язаний із цитоскелетом білок з регульованою активністю: Н»50О1045540 д1; Мо кат. 4331182
УСЕ - індуцибельний фактор росту нервів: Н»50О0705044 51, Мо кат. 4331182
ЕС - рання ростова відповідь 1: НеО0152928 ті; Мо кат. 4331182 10. Фармакокінетичне дослідження інтравітреального введення (івт) на кроликах
Самки новозеландських білих кроликів (вага тіла 1,7-2 кг) акліматизували » 15 днів до початку дослідження. Антитіло 277 готували стерильним у концентрації 20 мг/мл і 1 мг (в 50 мкл буфера: 60 мМ ацетат натрію, 150 мМ масі, рн 5,0) ін'єкували білатерально в склоподібне тіло анестезованих тварин. У різні часові точки, 2 тварин піддавали евтаназії й збирали тканини ока, що складаються із внутрішньоочної рідини, склоподібного тіла й сітківки, і заморожували аж до проведення аналізів. Зразки крові відбирали в різні часові точки (Фіг. 3), центрифугували й плазму заморожували аж до проведення аналізів.
Кількісне визначення антитіла здійснювали за допомогою ЕГГІЗА. Для кожного типу тканини, готували калібровану криву антитіла (у трьох повторах у діапазоні 0,5-100 нг/мл) в ідентичному буфері як зразки і включали в кожний планшет. Поглинання вимірювали при 405 нм, використовуючи фотометр Зресігатах 340РС-384 і аналіз даних здійснення за допомогою
ЗойМахРгоб.5.
Концентрація 277-антитіла представлено на Фіг. З, демонструючи концентрацію в різних компартментах ока, як вказано, і плазмі після івт ін'єкції 1 мг 277-антитіла в очі кроликам залежно від часу. Розрахований час напівжиття в оці й плазмі представлені в Таблиці нижче.
Таблиця 9:
Іі» (дні)
Розрахований час напівжиття становив 4,9, 4,8, 5,2 і 7,0 днів у склоподібному тілі, внутрішньоочній рідині, сітківці й плазмі, відповідно. Ці часи напівжиття подібні до тих, які описані в літературі для клінічно використовуваного рекомбінантного гуманізованого моноклонального ІдДс1 антитіло Авастин (анти-МЕСЕ, бевацизумаб, Вакгі та ін., ОріпаІтоїоду, 2007), які також були підтверджені експериментально у власних умовах. Ці результати відповідали передбачуваним, оскільки інтравітреальний кліренс повнорозмірних ДО головним 5О чином залежить від їх молекулярного розміру, який подібний для нашого антитіла 277 і
Авастину. Таким чином, вважають, що ФК для людини, включаючи час напівжиття в оці антитіла 277 і Авастину, є подібною. Описаний час напівжиття в оці людини для Авастину становить 9,73--1,48 дня (Нийоп-5тій, 2016). 11. Частота івт ін'єкції І(Дс1 антитіла
На основі даних іп мімо, отриманих у фармакокінетичному дослідженні (Приклад 10), а також даних активності, отриманих в 5Н-5У5У клітинах, досліджували очну ФК для людини (вітреальну концентрацію в динаміку) ДО1 антитіл і розраховували на основі однокамерних моделей кінетики, що добре зарекомендували себе, щодо очного кліренсу біомолекул. Для розрахунків, використовували наступні параметри: час напівжиття в оці людини 11722-10 днів, як описано для Авастину, а також підтверджується наведеними даними іп мімо у прикладі 10; молекулярна вага 149 кДа як для повнорозмірних ІдДС1 антитіл, і кількість івт ін'єкованого антитіла 1 мг (див. Фіг. 4). Оскільки очна ФК головним чином залежить від молекулярної ваги, то ідентичний графік очний ФК одержували для всіх п'яти антитіл.
Для оцінки частоти івт ін'єкції, слід прийняти в увагу, що ефективність іп мімо може підтримуватися при вітреальних концентраціях 2 клітинним ЕС»о, як визначено на основі аналізів ТІкКВ-фосфорилування в ЗН-ЗУ5БУ клітинах (Приклад 8). Час після івт ін'єкції для досягнення вітреальної концентрації, еквівалентної ЕСво, вказаний стрілками на Фіг. 4. На основі цього аналізу, час до досягнення такої вітреальної концентрації після ін'єкції 1 мг антитіла узагальнене в наступній таблиці для кожного антитіла:
Таблиця 10:
Наприклад, після ін'єкування 1 мг С2 в око людині, вітреальна концентрація, що відповідає
ЕСзо для С2 (ТАБЛИЦЯ 10), досягається через 136 днів (тобто, через 136 днів, необхідна наступна івт ін'єкція). Для порівняння, у випадку з 277-64 (ІдДС1), цей час буде подовжений до 150 днів після івт ін'єкції. У цьому випадку, наступна івт ін'єкція буде необхідна на 14 днів пізніше в порівнянні з С2. Беручи до уваги, що мінімальна ефективна доза значень в 10 раз вище, ніж ЕСзо, буде знижувати час між ін'єкціями, однак, часова відмінність у частоті ін'єкції між
С2 і іншими антитілами, перерахованими ТАБЛИЦІ 10 вище, буде залишатися ідентичним.
Ін'єкований об'єм, який можна вводити в око, сильно обмежений. У той же час, повторні ін'єкції в очі необхідні для лікування очних станів. Поліпшення часу напівжиття антитіла є одним зі способів збільшення часу між інтервалами ін'єкцій, але, як вказано, головним чином залежить від молекулярної ваги молекули. Як було показано іп мімо у прикладі 10 і на 5Н-5У5У клітинах у прикладі 8, шляхом забезпечення поліпшеного й більш ефективного антитіла інтервали ін'єкцій можна подовжити, що для пацієнтів означає можливість менш часто одержувати ін'єкції в очі. 12. Нейрозахисний і нейрорегенеративний ефекти агоністичного антитіла ТІКВ в 512- індукованих діабетичних щурів
Жодне з 277-антитіл не є перехресно реактивним у гризунів, отже, дослідження для підтвердження концепції й ефективності іп мімо здійснювали із застосуванням ТІкВ активуючого антитіла С2 як антитіла сурогатних засобів для тестування гіпотези про те, що ТІКВ активуючий підхід І) забезпечує нейропротективну дію ("нейрозахисний підхід"), і Ії) забезпечує реактивацію дисфункціональних нейронів/сукупностей ("регенераційний підхід'). Обидва підходи розглядаються в декількох дослідженнях. Як моделі хвороб тварин, використовували модель діабету, індукованого стрептозотоцином (517) у щурів, яка характеризується втратою бета- клітин підшлункової залози, низькими рівнями інсуліну, стабільною гіперглікемією й наступної нейронної дисфункцією у сітківці.
Дослідження на тварин
Самців сірих щурів (ВМ щурі) одержували від Спагіе5 Кімег (Німеччина). Тварин містили в групах по 2 в ЇМС в умовах контрольованої температури й вологості, з 12-ти годинним циклом день /ніч (світло було виключено в період від 18 год. до б год. ранку). Вони одержували харчування ай Ірішт із гранульованим раціоном Мо 3438 від Ргоміті Кіїба (Швейцарія) і мали вільний доступ до питної води. Тварин акліматизували до їх навколишнього середовища протягом одного тижня перед початком дослідження. Вік щурів становив 6-8 тижнів на початок прижиттєвої фази дослідження. Гіперглікемію індукували шляхом в/о ін'єкції 512 (65 мг/кг вага тіла; Бідта Мо 50130-105). Тварин, які не відповідають, або погано відповідають, не включали в дослідження, тобто, тварин з концентраціями глюкози в крові «20 мМ у день 5 після застосування 517. За вагою тіла й рівнями глюкози в крові спостерігали регулярно. Тваринам вводили дозу шляхом однократної івт ін'єкції С2 (50 мкг в 4,6 мкл) або контрольного антитіла до 2,4,6-тринітрофенілу (анти-ТМР) (50 мкг в 4,5 мкл) у день 36 після застосування 517. Функція сітківки оцінювали за допомогою записів електроретинографії (ЕРГ),, і тварин умертвляли після останнього запису за допомогою смертельної дози в/о введення фенобарбіталу.
Дозування й інтравітреальні ін'єкції
Загальна схема дослідження представлена на Фіг. 5. Для івт ін'єкції, щурів анестезували із застосуванням 2,5-390 ізофлурану (Богепе; АбБрміє). Вводили краплю 4 мг/мл оксибупрокаїнгідрохлориду (Момевзіпе; Отпімізіоп) як місцеву локальну анестезію. 4,6 мкл С2 маточного розчину (10,9 мг/мл; буфер: 20 мМ цитрат натрію, 115 мм масі, рн 6,0) ін'єкували івт у кожне око гіперглікемічних щурів (група 3, п-24 ока, Фіг. 5), що приводило до ін'єкованої дозі -50 мкг/око. Як контроль, 4,5 мкл анти- анти-2,4,6-тринітрофенільного маточного розчину (11,2 мг/мл; буфер 20 мМ цитрат натрію, 115 мМ Масі, рН 6,0) ін'єкували івт в очі не-діабетичних і діабетичних контрольних щурів (група 1, п-24 ока, і група 2, п-22 ока, Фіг. 5), що приводило до ін'єкованої дозі 50 мкг/око. Івт ін'єкції здійснювали під препарувальною лупою. Розчин Антитіла доставляли за допомогою голки 34 калібру (насадженої на скляний шприц Гамільтона об'ємом 10 мкл) у склоподібне тіло відразу за лімбом, і загальну якість ін'єкції контролювали за допомогою фундоскопії (використовуючи Місгоп ІМ Кеїїіпаї! Ітадіпуд Місго5соре, Рпоепіх Кезеагсп
Ї абз).
Електроретинографія
Електроретинографія (ЕРГ) представляє собою неінвазивну електрофізіологічну техніку для оцінки індукованої світлом електричної активності різних нейронів сітківки, і надає можливість кількісного визначення різних аспектів функції сітківки, таких як зір при низькому рівні освітленості або кольоровий зір. ЕРГ вимірювали як зміну потенціалу між рогівковим і еталонним електродом, використовуючи систему запису Езріоп ЕЗ ЕРГ (Оіадпозуз ІІ С). Перед записами ЕРГ, тварин адаптували до темряви протягом принаймні 2 годин, і анестезували шляхом в/о ін'єкції кетаміну (Кеїапеві, прибл. 100 мг/кг) і ксилазину (Котрип, прибл. 5 мг/кг).
Тварин поміщали на столик з підігрівом для підтримки постійної температури тіла при 37 "С.
Зіниці розширювали за допомогою 1 95 циклопентолат-НСІ ї 2,595 фенілефрину. Краплю розчину Мейїпосеї 2 95 (Отпімівіоп) капали на рогівку для захисту ока від висушування й розвитку катаракти під час записів. Записи здійснювали одночасно для обох очей за допомогою золотих петлевих електродів. Еталонний електрод являв собою беззубий затиск типу крокодил, зволожений Меїпосеї, і прикріплений до щоки тварини. Для електричного заземлення, затиск приєднували до хвоста тварини. ЕРГ сигнали заміряли при 1 кГу і записували із граничними режимами 0,15 Гц низької частоти й 500 Гц високої частоти. Світлові стимули складалися з коротких спалахів з повним полем, що доставляються за допомогою набору світловипромінювальних діодів (тривалість, «4 мс). Усі спалахи продукували за допомогою стимулятора Саплеїа (СоІогдоте; Оіадпозузх), або в темряві або на немиготливому зеленому або червоному фоновому світлі.
ЕРГ Протоколи
ЕРГ відповіді спочатку записували від адаптованих до темряви тварин (для виділення опосередкованих паличками відповідей), після цього записували від тварин, адаптованих до червоного фонового світла (50 кд/м2, для виділення УФ опосередкованих колбочками ЕРГ відповідей) і потім адаптованих до зеленого фонового світла (25,5 кд/м-, для виділення опосередковані колбочками М-типу відповіді). У випадку адаптованих до темряви ЕРГ, відповіді викликали серіями спалахів у діапазоні від 1-10 до 0,1 кд-"с/м-. Для спалахів з люмінесценцією 1-105 и 3-105 кд.с/ме, відповіді 20 дослідів були усереднені. Для спалахів в діапазоні от 1-10 аж до 0,05 кд-с/м, відповіді 10 дослідів були усереднені, и для кінцевого спалаху 0,1 кд:с/м-, 8 дослідів були усереднені. Інтервали між індивідуальними спалахами вибирали таким чином, щоб забезпечити повне відновлення сітківки від кожного спалаху (нема ознак індукованого 5О спалахом зменшення амплітуд відповідей або скорочення латентності). На основі цього критерію, інтервали між спалахами становили 2 с для 11075 и 3-10 кд-с/м?7 спалахів, 5 с для спалахів в діапазоні от 1-10 аж до 0,05 кд-с/м, і 10 с для спалаху 0,1 кд:"с/м-".
Для записів УФ опосередкованих колбочками відповідей, тварини були адаптовані до світла для червоного фонового світла протягом 2 хвилин. Світлові відповіді викликали за допомогою
УФ спалахів 0,02, 0,04, 0,08, 0,17, 0,35, 0,83, 1,66, 2,90, і 4,15 мкВт/м7. Для записів опосередкованих колбочками М-типу відповідей, тварини були адаптовані до світла для зеленого фонового світла протягом 2 хвилин. Світлові відповіді викликали за допомогою зелених спалахів 0,25, 0,1, 1,0, 5,0, 50, і 150 кд-с/м-. Для Уф и зелених спалахів, відповіді 10 дослідів були усереднені с інтервалами між спалахами З с. 60 Аналіз даних
Для визначення ЕРГ амплітуд Б-хвиль (позитивна реакція деполяризації, що має походження головним чином з біполярних клітин), записували дані ЕРГ і аналізували з використанням програмного забезпечення МАТІ АВ (версія К2014а; МаїйуогКк5). Осциляторні потенціали (невеликі високочастотні хвилі, що накладаються на р-хвилю) видаляли від сигналів шляхом 55 Гц швидкого перетворення Фур'є фільтрації низьких частот, оскільки осциляторні потенціали можуть впливати на амплітуду й положення піка р-хвилі, особливо в адаптованих до світла умовах. Амплітуду р-хвилі обчислювали від нижнього рівня відповіді а-хвилі (негативне відхилення, що виникає головним чином внаслідок активності фоторецептора) до піка піка р- хвилі. Латентність бБ-хвилі вимірювали як час після стимуляції спалахом, необхідне для досягнення піка р-хвилі.
Амплітуди р-хвиль залежно від інтенсивності стимулу підганяли за допомогою наступного рівняння, використовуючи процедуру вирівнювання методом найменших квадратів (сгарпРай
Ргізюо, вевдія 8.01): п п (ню) (Рівняння 1) де К представляє собою амплітуду відповіді Ктах представляє собою амплітуду насичувальних коливань, І інтенсивність спалаху, Ін напівнасичувальну інтенсивність спалаху і п коефіцієнт Хіла.
Світлочутливість, 5, визначали як співвідношення між амплітудою насичувальних коливань,
Втах, і напівнасичувальною інтенсивністю спалаху, Ін. 5 Ї Ктах значення нормували до середніх значень не-діабетичних контролів, отриманих для тижня 5, до івт, і для тижня 7, після івт лікування, відповідно.
Для аналізу латентності опосередкованої паличками р-хвилі, визначали середню латентність не-діабетичних контрольних тварин для Бр-хвилі, викликуваних спалахами 1:105, 3105, 1-10 и 2-10 кд-с/м2 (відповідна латентність є дуже подібною). Для кожної досліджуваної групи, розраховували відносну зміну для середнього значення контролів для інтенсивностей спалахів, вказаних вище, і усереднювали, отримуючи середню відносну зміну латентності Б- хвилі.
Для аналізу УФ опосередкованої колбочками латентності р-хвилі, розраховували відносні зміни латентності до середнього значення контролів для бБ-хвилевих відповідей, що викликаються інтенсивностями спалахів 0,042, 0,083, 0,166 і 0,348 мкВт/см", і усереднювали.
Для аналізу латентності опосередкованої колбочками М-типу бБ-хвилі, розраховували відносні зміни латентності до середнього значення контролів для р-хвилевих відповідей, що викликаються інтенсивностями спалахів 1, 5, 50 і 150 кд-с/м-, и усереднювали.
Відповідь опосередкованої паличками а-хвилі визначали на піку а-хвилі (негативне відхилення сигналу відразу після світлового стимулу), що викликається спалахом 0,1 кд:с/м7.
Результати
На тиждень 5 після індукції діабету, здійснювали записи вихідних ЕРГ для кількісного визначення ступеня нейронної дисфункції в сітківці перед івт лікуванням (див. також Фіг. 5). На основі цих результатів ЕРГ, було встановлено, що дві діабетичні (гіперглікемічні) групи проявляли подібний розподіл дисфункції сітківки (які одержували наступне івт лікування або із застосуванням контрольного Ідс1 до 2,4,6-тринітрофенілу - група 2 - або ТІКВ агоністичне Ідс1 б2 - група 3). У цілому, усі івт лікування добре переносилися й не спостерігали побічних ефектів. Глюкоза в крові була стабільною на рівні «5 мМ у не-діабетичних контрольних щурів (група 1, п-12) у період здійснення дослідження. В 512-індукованих діабетичних тварин (група 2 і 3, кожна п-12), концентрації глюкози в крові досягали рівнів 220 мМ через «4 дня після 517 обробки, і не знижувалися нижче 20 мМ у період здійснення дослідження. Івт лікування із застосуванням С2 або контрольного ІДС! до 2,4,б-тринітрофенілу не виявляє яких-небудь впливів на рівні глюкози в крові.
Латентність опосередкованої паличками б-хвилі:
Латентність Б-хвилі представляє собою критерій для швидкості індукованої світлом електричної відповіді в сітківці (головним чином на рівні біполярних клітин і синаптичної трансмісії фоторецептор-на-біполярні клітини). Латентність визначається як час, необхідне для досягнення амплітуди відповіді після стимуляції спалахом світла. Впливу гіперглікемії й івт лікування узагальнено на Фіг. б. Розраховували зміни латентності відносно середньої латентності, вимірюваних від контрольних щурів, для даних, отриманих до івт лікування (оцінка вихідного стану ЕРГ)., і після івт лікування. Існує сильне збільшення латентності на «14 мс у дві гіперглікемічних групах до івт лікування, вказуючи на індуковане гіперглікемією вповільнення кінетики відповіді р-хвилі, тобто, зменшена швидкість опосередкованого паличками процесингу в сітківці. Івт ін'єкція контрольного їдС1 до 2,4,6-тринітрофенілу не виявляла яких-небудь істотних впливів на латентність у недіабетичній контрольній групі й гіперглікемічній групі (група 1, чорні стовпчики, і група 2, позначені точками стовпчики на Фіг. 6, після івт, відповідно). Однак, івт лікування із застосуванням ТІкВ активатора С2 очевидно приводить до зменшеної затримки латентності (група З, сірий стовпчик на Фіг. 6, після івт). У середньому, івт лікування із застосуванням С2 викликає істотне прискорення відповідей р-хвилі на «9 мс (тобто, затримка латентності скорочується від 14 мс аж до 5 мс).
Світлочутливість опосередкованої паличками бБ-хвилі:
ЕРГ відповіді світлочутливості опосередкованої паличками р-хвилі є показником кількості нейронів, що беруть участь в опосередкованих паличками шляхах передачі сигналів у сітківці, і їх чутливість до світлових стимулів для утворення деполяризуючих світлових відповідей.
Світлочутливості нормували до середніх світочутливостей контрольних щурів (група 1, до й після івт лікування) і графічно представляли на Фіг. 7. Нормовані світлочутливості знижувалися на «40-50 95 у гіперглікемічних тварин (до івт лікування, група 2 і 3). Івт ін'єкція контрольного (901 не виявляла яких-небудь істотних впливів на світлочутливості контрольних щурів (група 1) або гіперглікемічних щурів (група 2). Надзвичайно важливим є той факт, що івт лікування із застосуванням Т/кВ активатора С2 суттєво підвищувало світлочутливість на «30 Фо (група 3, сірі, після івт у порівнянні з до івт).
Відповіді опосередкованої паличками а-хвилі:
Відповідь опосередкованої паличками а-хвилі є показником для розміру світлових відповідей паличкового фоторецептора, викликаних спалахом світла. Відповіді опосередкованої паличками а-хвилі нормували до середніх значень, отриманих від контрольні щури (група 1, до й після івт лікування) і графічно представляли на Фіг. 8. Нормовані амплітуди насичувальних коливань, знижувалися на «17 95 у гіперглікемічних тварин (група 2 ії 3, до івт лікування). Івт ін'єкція контрольного ЇдДО1 не виявляла яких-небудь істотних впливів на нормовані відповіді а- хвилі в контрольних щурів (група 1, чорні) або гіперглікемічних щурів (група 2, позначені точками), де в останньої групи проявляється подальше зниження відповіді а-хвилі під час проведення дослідження. Однак, івт лікування із застосуванням Т/КкВ активатора С2 (група 3, сірі) може повністю запобігати подальшому зниженню відповідей а-хвилі, що спостерігається для гіперглікемічної групи 2.
Уф і Латентність опосередкованої колбочками М-типу р-хвилі:
Розраховували зміни латентності відносно середньої латентності, виміряної для контрольних щурів, для даних, отриманих до івт лікування (оцінка вихідного стану ЕРГ) і після івт лікування. Цей аналіз здійснювали для УФ латентності опосередкованої колбочками р-хвилі (Фіг. 9) ії латентності опосередкованої колбочками М-типу Б-хвилі (Фіг. 10). У випадку УФ опосередкованих колбочками відповідей, існує сильне збільшення латентності на «8 мс у дві гіперглікемічних групах до івт лікування, у той час як збільшення опосередкований колбочками
М-типу латентності становить «5 мс для гіперглікемічних щурів. Ці статистично достовірні ефекти вказують на індуковане гіперглікемією вповільнення кінетики відповідей Б-хвилі й зменшує швидкість опосередкованого колбочками процесингу в сітківці. Івт ін'єкції контрольного
ІДС1 не виявляв яких-небудь істотних впливів на латентність у недіабетичної контрольної групи (група 1, чорні) або гіперглікемічної групи (група 2, позначені точками), для обох УФф і
Латентності опосередкованої колбочками М-типу р-хвилі. Івт лікування із застосуванням С2 (група 3, сірі) скорочує латентність на 5 мс у випадку УФ колбочок (що відповідає «50 95 нормалізації кінетики відповідей р-хвилі), і практично повне відновлення кінетики нормальних відповідей р-хвилі у випадку опосередкованих колбочками М-типу р-хвиль.
Світлочутливість УФ опосередкованої колбочками б-хвилі:
ЕРГ відповіді світлочутливості УФ опосередкованої колбочками р-хвила оцінювали, як описано для опосередкованої паличками ЕРГ. Світлочутливості нормували до середніх 5О світочутливостей контрольних щурів (група 1, до й після івт лікування) і графічно представляли на Фіг. 11. Нормовані світлочутливості знижувалися на -50 95 у гіперглікемічних тварин на вихідному рівні (до івт). Івт ін'єкція контрольного ЇдДС1 не виявляла яких-небудь істотних впливів на світлочутливості, у той час як івт лікування із застосуванням С2 суттєво підвищувало світлочутливість до рівня, спостережуваного в здоровіших контрольних щурів (група 3, сірі).
Амплітуда відповіді опосередкованої колбочками М-типу насичувальної р-хвилі
Вплив гіперглікемії на світлочутливість опосередкованої колбочками М-типу р-хвилі є менш вираженим, ніж для УФ опосередкованої колбочками Бб-хвилі (у досліджувані часові точки).
Проте, можна спостерігати істотне погіршення амплітуди насичувальних коливань, опосередкованих колбочками М-типу Б-хвиль на тиждень 5 після початку гіперглікемії (415 95 60 зменшення в порівнянні з не-діабетичними контрольними щурами, Фіг. 12). Івт лікування із застосуванням С2 може відновлювати амплітуду насичувальних коливань, до рівня контролів (група 3, сірі), у той час як лікування із застосуванням контрольного ЇДС1 не виявляло яких- небудь істотних впливів (група 2, позначені точками).
Основні результати досліджень узагальнені нижче:
Активація ТІкВ викликає нейропротективну дію й зберігає функцію сітківки.
Нейропротективну дію було показано на моделі 5Т2-індукованого діабету в щурів, що відображає індуковану гіперглікемією нейронну дисфункцію. Було показано, що активація ТІК запобігає дисфункції фоторецепторів.
Активація ТІКкВ індукує відновлення /поліпшення функції нейронів у сітківці на моделі 512- індукованого діабету в щурів після пролонгованої гіперглікемії, наприклад, поліпшену латентність світлової відповіді (тобто, скорочення ЕРГ латентності р-хвилі), або поліпшення опосередкованих паличками й колбочками світлочутливостей.
Підводячи підсумок, слід зазначити, що фармакологічні дані забезпечують підтвердження терапевтичної концепції про те, що активація ТІКВ може поліпшувати /відновлювати функцію різних типів нейронних клітин в оці при різних хворобливих стану.
Активація ТІкВ також захищає фоторецептори й зовнішню сітківку, як показано за допомогою аналізу ЕРГ а-хвилі, яка є показником світлових відповідей фоторецепторів. Подібно до результатів, отриманих для ЕРГ а-хвилі, контрастна чутливість очей діабетичних щурів знижується під час триваючої гіперглікемії, у той час як івт лікування із застосуванням Т/кВ активатора С2 повністю зберігає контрастну чутливість. Крім того, поліпшення ЕРГ світлочутливості світлових відповідей опосередкованих паличками й колбочками б-хвилі, як описано вище (що відображає світлочутливості синаптичної трансмісії фоторецепторів на біполярні клітини) додатково підсилює концепцію про те, що активація ТІКВ може поліпшувати/захищати функцію зовнішньої сітківки, включаючи фоторецептори. 13. ВОМЕ функція при комбінованих лікуваннях
Культивування СНО клітин, які експресують ТІтКВ рецептор людини
СНО клітини, що експресують ТІКВ рецептор людини (пТ/КВ) (ТпегтоРізпег Зсіепійіс, Мо
К1491) культивували в ОМЕМ (Гопла, Мо ВЕ12-604Р), доповненій 10 95 фетальною бичачою сироваткою, глутамаксом, замінними амінокислотами, 20 мМ НЕРЕФ5, 5 мкг/мл бластицидину й 200 мкг/мл зеоцину. За двадцять чотири години до стимуляції, 5000 клітин (30 мкл) висівали в кожну порожнину прозорого планшета для культивування тканин на 384 лунки (ВО Раїсоп, Мо 353963) і інкубували в зволоженому інкубаторі при 37 "С і 5 95 СО».
Аналіз ЕКК фосфорилування в СНО клітинах за допомогою пТКкВ рецептора
Через двадцять чотири години після висівання, супернатант СНО/пТтКВ клітин заміняли на мкл ОМЕМ кімнатної температури з 0,1 95 В5А, але без інших додаткових компонентів. Через 15 хвилин, додавали 10 мкл ОМЕМ/О,1 95 ВА зі зростаючими концентраціями ВОМЕ (1Е-13 до
ЗЕ-8 моль/л), 277-антитіла (1Е-13 до 2,025Е-8 моль/л), або С2-антитіла (12-13 до 2,025Е-8 моль/л) окремо або комбінації з 1 нм ВОМЕ зі зростаючими концентраціями 277- або С2- антитіла (обидва 1Е-13 до 2,025Е-8 моль/л) у трьох повторах для стимуляції ЕКК 40 фосфорилування. Після інкубувания протягом 45 хвилин при кімнатній температурі, супернатанти видаляли й клітини лізували протягом 20 хвилин на рідкому льоді в 20 мкл лізуючого буфера на лунку (їх Тгуїоп лізуючий буфер (СеїЇІЗідпаійпуд Мо 9803-5), доповненим таблетками повного міні протеазного інгібітору (Коспе Мо 04693124001) і коктейлями інгібіторів фосфатаз 2 (бідта Мо Р5726) і З (бідта Мо РОО44), і 1 мМ РМ5Е (Зідта Мо 93482)). П'ять мікролітрів отриманого лізату використовували для кількісного визначення ЕКК1/2 фосфорилування в 1202/7204, використовуючи комерційно доступний аналіз (РегКіп ЕІтег Мо
ТОКЕ5500), згідно з інструкціями виробника. Випромінювання світла акцепторних кульок, що відображає ЕКК фосфорилування, записували при 570 нм на мікропланшет-рідері Регкіпд ЕІтег
Епмізіоп і підготовляли для презентації за допомогою СсгарпРаай Ргіз5т (версія 7), включаючи 5О необроблені дані (середнє - СПС) і нелінійну регресію (лог(агоніст) відн. відповіді (три параметри)).
Як показано на Фіг. 13, 277-антитіло не зменшує ВОМЕ індуковане ЕКК фосфорилування.
Зростаючі концентрації С2 антитіла приводять до зменшення ВОМЕ індукованого ЕКК фосфорилування аж до рівня С2 індукованого ЕКК фосфорилування. Це може впливати на дозування антитіла до ТтгКВ в очі, де антитіла вводяться у високих насичувальних концентраціях для пролонгування часу, необхідного до наступного введення. 277-антитіло може вводитися у високих дозах без конфліктування з існуючим ВОМЕ індукованим ЕКК фосфорилуванням, у той час як С2 антитіло зменшує існуюче ВОМЕ індуковане ЕКК фосфорилування аж до рівня антитіла. 60 14. Зв'язування з МЕСЕ людини іп міго аналіз ЕГІЗА
Для аналізу зв'язування іп міго, Махізогр планшети на 96 лунок (Мипс Мо 437111) покривали протягом ночі при 4 "С за допомогою 500 нг/мл МЕСЕ людини (КО Зузієт5 Мо 293-МЕ-050) або
МЕСЕ щура (К80О0 Бузієт5 Мо 564-НУ-050) у карбонатному/бікарбонатному буфері (3,03 г/л
Маг2бОз і 6,00 г/л Майсоз, рН 9,6). Планшети промивали три рази за допомогою РВЗ-Т (фосфатно-сольовий буферний розчин (Іпмігодеп Мо 70011-036) з 0,05 95 Тмееп20 (Зідта Мо
Р7949)) і потім інкубували з 195 ВЗА (Зідта Мо АЗ059) в РВ5З-Т протягом трьох годин при кімнатній температурі для блокування неспецифічного зв'язування. Планшети промивали три рази за допомогою РВЗ-Т і потім інкубували з 1:4 серійним розведенням 1 мкМ Авастину (Коспе сіїпіс раскадеє), С2-антитіла, 277-антитіла або людського ІдО1 ізотипного контрольного антитіла в РВБЗ-Т протягом ночі при 4 "С. Планшети промивали разу за допомогою РВ5З-Т їі потім інкубували з 1:2000 розведенням АЇеха йЙног 647 козячого анти-людського дО (Іпмйгодеп Мо
А21445) протягом двох годин при кімнатній температурі. Після трьох додаткових циклів промивання за допомогою РВ5-Т, записували випромінювання світла при 647 нм (зв'язування, що відображає, антитіла з МЕСЕ) на мікропланшет-рідері РегКкіпуд ЕІтег Епмізіоп. Дані готували для презентації за допомогою СгарпРаай Ргізт (версія 7), включаючи необроблені дані (середнє - СПО) і нелінійну регресію (лог(агоніст) відн. відповіді (три параметри)).
Як показано на Фіг. 14 відсутня статистично значима відмінність для зв'язування МЕСЕ людини між 277 антитілом до ТІКВ і ЇдО1 ізотипним контрольним антитілом при концентраціях антитіла аж до 0,25 мкМ (критерій Стьюдента для однієї вибірки, р»0,05). На відміну від цього, статистично значима відмінність для зв'язування МЕСЕ людини між С2 і ізотипним контрольним антитілом уже спостерігається при концентрації антитіла 0,24 нМ (критерій Стьюдента для однієї вибірки, ""р«О0,01).
Таке неспецифічне зв'язування з МЕСЕ може викликати, наприклад, небажані побічні ефекти, утрудняти контроль дозування для активації Т/КкВ, або підвищувати кількість антитіла, необхідну для досягнення бажаного ефекту.
Перелік послідовностей «110» Военгіпдег ІпдеІНнеїт Іпіегпайопа! сСтрн «120» Антитіла до ТгкВ -1305» 01-3274 -160» 60 -170» ВІЗ55АР 1.3.6 -2105 1 «2115113 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220» «223» 0003 Мі (мишиний лідерний), варіабельний легкий ланцюг «4005 1
Азр Іе Маї Меї Зег Сп Зег Рго Зег Зег І еи Аїа Маї Зег Ма! СПу 1 5 10 15
Сім Гуз Маї Тниг Меї 5ег Суз І уз бег бег Сп 5ег І єи І єи Туг Зег 20 25 зо зЗег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгтр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Сп 35 40 45
Зег Рго Гуз І еи І еи Пе Туг Тгр Аа 5ег ТАг Ага Сім Зег Спу Ма! 50 55 бо
Рго Авр Агу Ріє Тнг Спу бег Сіу Зег Сіу ТНг Азр Ре ТНиг Гей ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег Ма! Гуз Аа Спи Азр І еи Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 60 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рне Спу Спу Спу Тиг Гуз Гей Спи Пе 100 105 110
Гуз 2 -21052 «2115113 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-дг МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «40052
Азр Іе Ма! Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56ег І єи Аа Ма! б5ег І ви Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег
Зо го Зег Авп Сп Гуз Авп Туг Геи Айа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 25. 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз «2105 З «2115113 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2777-33 МІ: (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «4005» З
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Айа ТАг Пе Зег Суз Г ув 5ег 5ег Сп Зег І єи Геи Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Тут Туг Зег Туг Рго Туг Тиг Рпе Спіу Спу Спу ТАг Гуз І еи Спи Пе 100 105 110
Гуз 60 «2105 4
«212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-35 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «400» 4
Азр Іе Ма! Меї Тнг Сіп бег Рго Авр 5ег І еи Аа Маї 5ег І ви Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тниг Пе Бег Суз Гуз Зег 5ег Сп Бег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Ме Зег Зег І єи Сп Аа Сім Азвр Маї Аїа Маї Туг Туг Сув Сп Сп 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Си Пе 100 105 110
Гуз «21055 «2115113 «212» білок «213» Штучна послідовність «220» «223» 2717-42 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «4005» 5
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег І еи І еи Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Ттр Аа 5ег ТНг Агу Спи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Азвр Маї Аїа Маї Туг Туг Суз Сип Сіл 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Си Пе 100 105 110
Гуз «2105 6 «2115113 «212» білок 213» Штучна послідовність 60 «220»
«223» 2717-44 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «400» 6
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Агу Айа Тиг Пе Авп Суз Гуз бег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Бег Рго Гуз І єи Геи Іе Туг Тгр Аа бЗег ТНг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз -2105 7 «2115113 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2717-48 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «4005 7
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег 20 25 Зо з5 Зег Авп Сп Гуз Авп Туг Геи Айа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 4065 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110 45 Гуз «2105» 8 «2115113 50 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 55 «223» 2717-51 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «400» 8
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15 60 Сі Аг9у Авіа ТНг Пе 5бег Суз І уз 5ег бег Сіп 5егі єи І єи Туг Зег
20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рне Сіу Спу Спу Тиг Гуз Геи Си Пе 100 105 110
Гуз «2105 9 «2115113 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2777-64 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг «400» 9
Авр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Азвр 5ег І єи Аа Маї Зег І ей Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тниг Пе Бег Суз Гуз Зег 5ег Сп Бег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зЗег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгтр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Сп
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу 5Зег СПу ТНиг Авр РНе Тнг Геи Тиг 65 70 75 80 35 Пе Зег Зег І єи Сп Аа Сім Авр Маї Аїа Маї Туг Туг Сувз Сп Сп 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Стпу Сип Спу Тиг Гуз Гей Сіи Пе 100 105 110
Гуз 40 2105 10 «2115113 «212» білок 45 213» Штучна послідовність «220» «223» 2717-67 МІ, (гуманізований) варіабельний легкий ланцюг 50 «4005 10
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег 55 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45 зЗег Рго Гуз І еи І еи Пе Туг Тгр Аа 5ег ТАг Ага Сім Зег Спу Маї 50 55 60 60 Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг
65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз «2105 11 «2115115 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220» «223» 0003 МН, (мишиний лідерний) варіабельний важкий ланцюг «4005 11
Сп Маї Стій Ї ви Сп Сіпй бег Спу Аа Сі І єи Аа Гуз Рго Сіпу Аа 201 5 10 15 зЗег Ма! Гу Меї 5ег Суз Гуз Аіа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Гуз Сіп Ага Рго Спу Сіп СПу І еи См Тр Пе 35 40 45 25 Сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Авр Гуз Аа ТНг І єи ТНиг Аа Авр Гуз Зег Зег Зег ТНг Аа Туг 65 70 75 80
Меї ап І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр 5ег Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Агу 5ег Агу Тпг Сіпу Авп Туг Ттр Сіу Сп СЧу ТАг Тег Ге ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115
Зо «2105 12 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність 40 «220» «223» 277-дг МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг 45 «4005 12
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аіа Зег Спу Туг Тит Рпе Тиг Спу Туг 20 25 Зо 50 Тр Меї Ніз Ттр Маї Аго ап Аа Рго Спу Сіп СПУ Гей Спи Тгр Меї
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Азп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 55 6565 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Агу 5ег Агу Тпг Сіпу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАг ГГ еи Маї ТНг 100 105 110 60 Маї Зег Бег
«2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-33 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «4005 13
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15
Зег Маї Гуз Ма! бЗег Суз Гуз Аіа Зег Спу Туг Тиг Ре Тниг Сіу Туг
Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 20 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 25 Аа Агу бег Агу ТПг Стпу Авп Туг Ттр Спу Сіп Спу Тик Тнг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115 «2105 14 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» 277-35 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «400» 14
Сп Маї Сип І єи Маї Сп Зег Спіу Аіа Спи Маї Гуз Гув Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80 50 Меї Сіш І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Сіпу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї Тиг 100 105 110 маї Зег Зег 55 115 «210515 «2115115 «212» білок 60 213» Штучна послідовність
«223» 2717-42 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг 2 «4005 15
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бег Спу АІа Спи Маї І уз І ув Рго Стпу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Аго Сп Ага Рго Спу Спіп Спу ГГ еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Авр Аг Маї ТНг І єи Тнг Агу Авр Тйг 5ег ТНг Зег ТНг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Ага Тпиг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115 «210516 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2717-44 УН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «4005 16
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115 «210517 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність о «220» «223» 277-48 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг 60 00 «4005 17
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Стпу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ні Тгр Маї Аг Сп Агу Рго Спу СПп Спу Геи Спи Тгр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Азп Сп Гу5 Рпе 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 1065 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110
Маї Зег Зег 115 2105 18 «2115115 20. «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 25 «223» 2777-51 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «4005 18
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зо Зег Ма! Гуз Маї Зег Суз ГГ уз Аа бЗег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг
Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 35 50 55 60
Гуз Ар Аго Аа ТНг І єи ТНиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95 40 Аа Агу бег Агу ТПг Спу Авп Туг Ттр Спу Сіп Спу Тик Тнг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115 45 «2105 19 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-684 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «4005» 19
Сп МаїЇ Сип І єи Маї Сп Зег Спіу Аіа Спи Маї Гуз Гув Рго Спу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 60 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сіш І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег 115 «-2105» 20 «2115115 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-687 МН, (гуманізований) варіабельний важкий ланцюг «400» 20
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Спіу Аа Си Маї Гуз І ув Рго Сіпу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Су Сіп Спу Геи Си Тгр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60 з0 Гуз Авр Ага Маї Тиг Меї Тпг Агу Авр Тнг Зег Тнг 5ег ТНг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Агу 5ег Агу Тпг Сіу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАК ТАг Маї ТНг 35 100 105 110 маї Зег Зег 115 «2105 21 40 «2115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність 45 «220» «223» 27 7-дг (Легкий ланцюг, Ідс1) «4005» 21
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 501 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45 55 Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 60 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Сіш Сіп і ей Гуз бег Спіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І єи І єи Авп Авп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205
Бег Рго Маї Тиг Гуз Зег РНе Авп Ага Стпіу Сім Сув 210 215 220 «2105 22 «2115 444 20. «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 25 «223» 27 7-удг (Важкий ланцюг, Ід1) «4005 22
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зо Зег Ма! Гуз Маї Зег Суз Гуз Аіа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг
Зо
Тер Меї Ніз Тгр Маї Ага Сп Аа Рго Сіу Сіп Сіу Геи Спи Тур Меї
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег Тпг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 35 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 40 Аа Агу бег Агу ТНг Стпу Авп Туг Ттр Спу Сіп Спу Тит Ге Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 45 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
І єи ТугзегГ еи Зег Зег Маї Ма! Тиг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 60 Ма! Тиг Суз Маї Маї Маї Азр Маї Зег Ні Сім Авр Рго Спи Ма! Гуз
260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Спи Рго Сіп Маї Туг ТАг І еи Рго Рго 5ег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «2105 23 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» 277-дг (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «4005» 23
Сп Маї Сіп І єи Маї Сіп Зег Сіу Аіа Спи Маї Гуз Гув Рго Су Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! І уз Ма! бег Суз І уз Аа Зег Сіу Туг Тиг Рне Тнг Стпу Тут 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгр Маї Ага Сп Аа Рго Сіу Сіп Сіу Геи Спи Тур Меї 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Ар Агу Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Агу 5ег Агу Тпг Сіпу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАг ГГ еи Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
І еи ТНг Зег Сіпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 60 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 320
Маї Бег Авп Гуз Аїа І єи Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТАг Пе Зег Гуз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400
Зег Рпе Ре Геи Туг 5ег Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 -2105» 24 «2115 220 «212» білок «213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-33 (Легкий ланцюг, Ідос1) «400» 24
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Айа Тнг Пе 5ег Суз Гуз Зег 5ег Сп 5ег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 60 50 Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Си Пе 55 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Сі іп Гей Гуз Зег Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І ви Геи Авп Авп 130 135 140 60 Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи
145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 «2105 25 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-33 (Важкий ланцюг, Ід1) «4005» 25
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп 5ег Сіу Аа Спи Маї І уз І ув Рго Стпу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Пр Меї Ніз Тгтр Маї Агу ап Агу Рго Стпу Сп Спу Геи Спи Тгр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І еи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг зо 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 35 Маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Спу Рго 5ег Маї Рне Рго І єи Аа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг Аїа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 40145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190 45 Тег аСіп ТНг Тут Ше Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго Зег Авп ТНг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 50 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270 55 Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув во 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Сім Спи Меї Тнг Гуз Азп ап Маї Зег І еи ТНг Суз Геи Маї Г ув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Туг Тиг Сп Гуз 5ег І єи 5ег І єи Зег Рго Спу 435 440 «-2105 26 «2115 444 20. «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 25 «223» 277-33 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «400» 26
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зо Зег Маї Гуз Маї Зег Суз ГГ уз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг
Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 35 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 40 Аа Агу бег Агу ТПг Спу Авп Туг Ттр Спу Сіп Спу Тик Тнг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 45 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
І єи ТугЗегГ еи Зег Зег Маї Ма! Тиг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 60 Ма! Тиг Суз Маї Маї Маї Азр Маї Зег Ні Сім Авр Рго Спи Ма! Гуз
260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Спи Рго Сіп Маї Туг ТАг І еи Рго Рго 5ег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 -2105» 27 «2115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» 27 7-35 (Легкий ланцюг, Ідос1) «4005» 27
Авр Іе Маї Меї Тнг Сип Зег Рго Авр зе" І єм Аа Маї 5ег ГГ еи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тниг Пе Бег Суз Гуз Зег 5ег Сп Бег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Ме Зег Зег І єи Сп Аа Сім Авр Маї Аїа Маї Туг Туг Сувз Сп Сп 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Си Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Спи Сій І єи Гуз Зег Спіу ТНг Аа 5Зег Маї Маї Суз І єи І єи Азп Авзп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Сп Авр зег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 60 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 -2105» 28 5000 «й115» 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-35 (Важкий ланцюг, Ід1) «400» 28
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 151 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг
Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе го сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи бег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 25 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег 5ег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125 зо Зег ЗегІ ув 5ег Тиг Зег Спу Спу ТНг Аа Аа І єи Стпу Суз І ви Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 35 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 40 Маї Авр Гуз Аг Маї Сім Рго Гуз Зег Суз Авр Гуз ТАг Ні Тиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 45 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285 50 Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 55 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365 60 Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп
370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «2105» 29 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-35 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «400» 29
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Пр Меї Ніз Тгтр Маї Аг ап Агу Рго Спу Сп Спу Геи Спи Тгр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг зо 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 35 Маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Спу Рго 5ег Маї Рне Рго І єи Аа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 40145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190 45 Тег аСіп ТНг Тут Ше Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго Зег Авп ТНг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 50 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270 55 Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув во 305 з10 315 320 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Сім Спи Меї Тнг Гуз Азп ап Маї Зег І еи ТНг Суз Геи Маї Г ув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Туг Тиг Сп Гуз 5ег І єи 5ег І єи Зег Рго Спу 435 440 «210» 30 «2115 220 20. «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 25 «223» 27 7-42 (Легкий ланцюг, Ідос1) «400» 30
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15 з0 Си Ага Аа ТАг Пе Авп Суз Гуз 5ег 5ег Сп 5ег Геи І ви Туг Зег
Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 35 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95 40 Тут Туг Зег Туг Рго Туг Тиг Рпе Спіу Спу Спу ТАг Гуз І еи Спи Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Спи Сій І єи Гуз Зег Спіу ТНг Аа 5Зег Маї Маї Суз І єи І єи Азп Авзп 45 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175
Зег ТАг Тут Зегі єи бег Зег ТАг І еи ТНг Гей Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 -2105 31 «2115 444 «212» білок 60 213» Штучна послідовність
223» Синтетичний поліпептид 2 «400» 31
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бег Спу АІа Спи Маї І уз І ув Рго Стпу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Аго Сп Ага Рго Спу Спіп Спу ГГ еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Авр Аг Маї ТНг І єи Тнг Агу Авр Тйг 5ег ТНг Зег ТНг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Ага Тпиг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сіп Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз 5ег ТНиг Зег Спіу Спіу Тнг Аа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Авр Туг РПє Рго Спи Рго Маї Тниг Маї Зег Тгтр Авп Зег Сіпу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
Те Маї Г еи Ніз Сіп Авр Тр І єи Азп Су Гуз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп бо 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «-2105 32 5000 «й115» 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2777-42 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «4005 32
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 151 5 10 15 зЗег Ма! І уз Маї бег Суз І уз Аа Зег Сіу Туг Тиг Рне Тнг Стпу Тут
Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе го сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї ТНг І єи Тиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 25 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125 зо Зег ЗегІ ув 5ег Тиг Зег Спу Спу ТНг Аа Аа І єи Стпу Суз І ви Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 35 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 40 Маї Авр Гуз Аг Маї Сім Рго Гуз Зег Суз Авр Гуз ТАг Ні Тиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 45 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285 50 Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 55 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365 60 Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп
370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «2105» 33 «2115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-44 (Легкий ланцюг, Ідос1) «4005» 33
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег 20 25 Зо
Зег Авп Сп Гуз Авп Туг Геи Айа Тгр Туг Сп Сп Гув Рго Спу Сип зЗег Рго Гуз І еи І еи Пе Туг Тгр Аа 5ег ТАг Ага Сім Зег Спу Маї 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг зо 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110 35 І уз Агу ТНг Маї Аа Аа Рго 5ег Маї РНе Іе Рне Рго Рго 5ег Ар 115 120 125
Спи Сій І єи Гуз Зег Спіу ТНг Аа 5Зег Маї Маї Суз І єи І єи Азп Авзп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 40145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190 45 Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 50 «210» 34 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність о «220» «223» 27 7-44 (Важкий ланцюг, Ід1) «400» 34 60 Сп Маї Сіп І єи МаїЇ Сіп Зег Сіу Аіа Спи Маї Гуз Гув Рго Спу Аа
1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег Тиг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі Гей бЗег ЗегІ еи Тиг Зег Сіи Авзр ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег 5ег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго ГІ єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Гей Тиг Зег Сіпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
РНе Ро Рго Гуз Рго І уз Азр ТНг І еи Меї Пе 5ег Ага Тнг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20
Маї Зег Азп Гуз Аїа Г еи Рго Аа Рго Іе Спи Гув ТНг Пе 5ег Гув 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400
Зег Рпе Ре Геи Туг 5ег Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «2105» 35 «2115 444 «212» білок 60 «213» Штучна послідовність
«223» 2777-44 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) 2 «400» 35
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп Зег Спіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Авр Аг Маї Тиг Меї Тнг Агу Авр Тнг 5ег Тиг 5ег Тиг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Авр Туг РПє Рго Спи Рго Маї Тниг Маї Зег Тгтр Авп Зег Сіпу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Сув Рго Аа Рго Сі Аа Аїа Сну Спу Рго 5ег Ма! Рне Г єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
Те Маї Г еи Ніз Сіп Авр Тр І єи Азп Су Гуз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 320 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 60 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «210» 36 500 «й115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-48 (Легкий ланцюг, Ідос1) «400» 36
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 151 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг Пе Авп Суз Гуз 5ег Зег Сп 5ег Ге І ви Туг Зег
Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 20 Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 25 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125 з0 Си Сіп ей Гуз бег Спіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І єи І єи Авп Авп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 35 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 40 Зег Рго Ма! Тиг Гуз Зег Рне Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 -2105 37 «2115 444 45 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 5О «223» 27 7-48 (Важкий ланцюг, Ід1) «400» 37
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Спіу Аа Спи Маї І уз Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 55 Зег Ма! Гуз Маї Бег Суз ГГ уз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Спіп Спу ГГ еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Агу Бег Агу Тпг Спу Авп Туг Тгтр Спу Сп Спу ТНг Тиг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг Зег Спіу Спіу Тнг Аа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ге ТугЗегі ви Зег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег Зег 5ег ГГ еи Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255
Ма! Тниг Суз Маї Маї Маї Азр Маї Зег Ні Сім Авр Рго Спи Ма! Гуз 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Айа Гуз Спу Сип Рго Аго Сім Рго Сп Маї Тук ТНг Гей Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сп Спіу Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аїа І єи Ні Авзп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 -2105» 38 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність о «220» «223» 277-48 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «400» 38 60 Сп Маї Сіп І єи МаїЇ Сіп Зег Сіу Аіа Спи Маї Гуз Гув Рго Спу Аа
1 5 10 15 зЗег Маї Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тр Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Сіп Спу І еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І еи 5ег 5ег І еи Агу бег СІш Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Гей Тиг Зег Сіпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І еи Сп 5ег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
РНе Ро Рго Гуз Рго І уз Азр ТНг І еи Меї Пе 5ег Ага Тнг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 з20
Маї Зег Азп Гуз Аїа Г еи Рго Аа Рго Іе Спи Гув ТНг Пе 5ег Гув 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400
Зег Рпе Ре Геи Туг 5ег Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «210» 39 «2115 220 «212» білок 60 «213» Штучна послідовність
«223» 2717-51 (Легкий ланцюг, Ідос1) 2 «400» 39
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тниг Пе Бег Суз Гуз Зег 5ег Сп Бег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Ре Сіу Спу Спу Тиг Гуз Гей Си Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Спи Сій І єи Гуз Зег Спіу ТНг Аа 5Зег Маї Маї Суз І єи І єи Азп Авзп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220
Зо 2105» 40 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність 40 «220» «223» 2717-51 (Важкий ланцюг, Ід1) 45 «400» 40
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Зег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо 50 Тр Меї Ніз Тгтр Маї Аг ап Агу Рго Спу Сп Спу Геи Спи Тгр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Аа ТНг І єи ТНиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 55 6565 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 60 Маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Спу Рго 5ег Маї Рне Рго І єи Аа Рго
115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
ТНгаїп Тнг Туг Пе Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5Зег Авзп ТНг ГГ ув 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув
ЗО05 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350 з0 Аг Сім СПи Меї Тнг Гуз Авзп ап Маї 5ег І еи Тнг Суз Геи Маї Г ув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Нів Туг Тнг Сп Гуз 5ег І еи 5ег І єи 5ег Рго Сіу 435 440 «2105 41 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 5О «223» 277-51 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «4005 41
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15
Зег Ма! Гуз Маї Бег Суз ГГ уз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тниг Спу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Ага Рго Спу Спіп Спу І еи См Тр Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60 50 55 60
Гуз Ар Аго Аа ТНг І єи ТНиг Агу Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Агу Зег Агу Тпг Спу Авп Туг Тгтр Спу Сп Спу ТНг Тиг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ге ТугЗегі ви Зег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег Зег 5ег ГГ еи Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255
Ма! Тниг Суз Маї Маї Маї Азр Маї Зег Ні Сім Авр Рго Спи Ма! Гуз 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи зо 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 з10 315 320 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Айа Гуз Спу Сип Рго Аго Сім Рго Сп Маї Тук ТНг Гей Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Айа Маї Сім Тгр Спи Зег Авп Спу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сп Спіу Азп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аїа І єи Ні Авзп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 5О «2105» 42 «2115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність о «220» «223» 27 7-64 (Легкий ланцюг, Ідос1) «400» 42 60 Авр Ге Маї Меї Тнг Сп 5бег Рго Азвр 5ег І єи Аа Маї 5ег І ей Спу
1 5 10 15
Сім Ага Аа Тниг Пе Бег Суз Гуз Зег 5ег Сп Бег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45
Рго Рго Гуз І єи Г еи Пе Туг Тгтр Аа 5ег ТАиг Агу Сіи Зег Спіу Маї 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Сіши Авр Маї Аїа Маї Туг Туг Сув Сіп Сип 85 90 95
Туг Туг Зег Туг Рго Туг ТАг Рпе Сіу Сп Сіу Тиг Гуз Геи Спи Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Сі іп Гей Гуз Зег Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І ви Геи Авп Авп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сп бег Сіу Азп бег Сіп Сі бег Ма! Тиг Спи Спіп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175 зЗег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 5ег ТАг І ви ТНг Ге Зег Гуз Аа Авр Туг 180 185 190
Сім Гуз Ні Гуз Маї Туг Аіа Суз Сім Маї ТАг Ні Сип Спу Гей Зег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 2105» 43 3000 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 27 7-64 (Важкий ланцюг, Ід1) «400» 43
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп Зег Спіу Аа Спи Маї І уз Гуз Рго Спу Аа 401 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Ма! Бег Суз Гуз Аа Зег Спу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Агу Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 50 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125 55 ЗегзЗегІ ув 5ег Тиг Зег СПу Спу ТНг Аа Аа І єи Стпу Суз І ви Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 60 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205
Маї Авр І уз Агу Маї Спи Рго І уз 5ег Суз Авр І уз ТНг Нів ТНиг Суб 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 310 315 320 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 410 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440
Зо «210» 44 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність 40 «220» «223» 2777-64 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) 45 «400» 44
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! І уз Ма! бег Суз І уз Аа Зег Сіу Туг Тиг Рне Тнг Стпу Тут 20 25 Зо 50 Тр Меї Ніз Ттр Маї Аго ап Аїа Рго Сіу Сіп С1у І еи См Ттр Пе
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 55 6565 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 60 Маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Спу Рго 5ег Маї Рне Рго І єи Аа Рго
115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
ТНгаїп Тнг Туг Пе Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5Зег Авзп ТНг ГГ ув 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув
ЗО05 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350 з0 Аг Сім СПи Меї Тнг Гуз Авзп ап Маї 5ег І еи Тнг Суз Геи Маї Г ув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Си Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї Геи Авр 5ег Ар Спу 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Нів Туг Тнг Сп Гуз 5ег І еи 5ег І єи 5ег Рго Сіу 435 440 2105» 45 «2115 220 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» 5О «223» 2777-67 (Легкий ланцюг, Ідос1) «400» 45
Азр Іе Маї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 56"! І єи Аа Маї 5ег І єи Спу 1 5 10 15
См Ага Аа ТАг Пе Авп Суз Гуз 5ег 5ег Сп 5ег Геи І ви Туг Зег 20 25 Зо зег Авп Сп Гуз Авп Туг Гей Айїа Тгр Туг Сп Сіп Гув Рго Спу Сип 35 40 45 зЗег Рго Гуз І еи І еи Пе Туг Тгр Аа 5ег ТАг Ага Сім Зег Спу Маї 60 50 55 60
Рго Авр Аг Ріє 5ег Спіу Зег СПу Зег Сіу Тиг Авр Рпе ТНг Геи ТНг 65 70 75 80
Пе Бег Зег І єи Сп Аа Си Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув Сіпп Сип 85 90 95
Тут Туг Зег Туг Рго Туг Тиг Рпе Спу Сип СТу ТАг Гуз Гей Спи Пе 100 105 110
Гуз Агу ТНг Маї Аа Аїа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго Зег Азр 115 120 125
Спи Сій І єи Гуз Зег Спіу ТНг Аа 5Зег Маї Маї Суз І єи І єи Азп Авзп 130 135 140
Ре Туг Рго Аго Си Аа Гуз Маї Сп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи 145 150 155 160
Сіп Зег Сіу Авп Зег Сіп Спи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр 5ег Гуз А5р 165 170 175
Бег Тит Туг ЗегГеи Зег Зег Тиг І єи ТАгГ еи Зег Гуз Аа Азр Туг 180 185 190
Спи Гуз Нів І уз Ма! Туг АІа Суз Сіи Маї Тнк Нів Сип Спу Ї єи 5ег 195 200 205 зЗег Рго Ма! Тиг Гуз Зег РНе Азп Аго Сіпу Спи Сув 210 215 220 «2105» 46 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 2777-67 (Важкий ланцюг, Ід1)
Зо «400» 46
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Маї Зег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг Тиг Рпе Тиг Сіу Туг 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу Тут Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг Тиг См Туг Авп Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз Авр Ага Маї Тиг Меї Тпг Агу Авр Тнг Зег Тнг 5ег ТНиг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125
Зег Бег І уз Зег Тиг 5ег Спіу Спіу ТНнг АЇа Аїйа І єи Спіу Суз І єи Маї 130 135 140
Гуз Азр Туг Рнеє Рго Сі Рго Маї Тнг Маї Зег Ттр Азп бег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205 маї Азвр Гуз Ага Маї Си Рго Гуз бЗег Сув Авр Гуз Тнг Ні ТАиг Сув 210 215 220 бо Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи І еи ЇЇ еи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи
225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 оо
ТНгМаї Геши Ні Сіп Авр Тр Гей Авп Су Гуз СИП Туг Гуз Сув І уз 305 з10 315 з20 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440 «2105 47 3000 «2115 444 «212» білок 213» Штучна послідовність «220» «223» 277-67 (Важкий ланцюг, Ідсе1-КО) «400» 47
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Сіу АІа Спи Маї Гуз Гуз Рго Сіу Аа 401 5 10 15 зЗег Ма! І уз Ма! бег Суз І уз Аа Зег Сіу Туг Тиг Рне Тнг Стпу Тут 20 25 Зо
Тер Меї Ніз Тгтр Маї Ага Сп Аїа Рго Стпу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Сіу ТугПШе Авп Рго Зег ТНг Авр Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз Рпе 60
Гуз Ар Аго Маї Тниг Меї Тнг Аг Авр ТНг Зег ТНг Зег Тниг Ма! Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 50 85 90 95
Аа Аг 5ег Агу Тпг Спу Авп Туг Ттр Сіу Сип Спу ТАг ТАг Маї ТНг 100 105 110 маї Зег Зег Аа 5ег Тпг Гуз Сіу Рго Зег Маї РНе Рго Г єи АЇа Рго 115 120 125 55 ЗегзЗегІ ув 5ег Тиг Зег СПу Спу ТНг Аа Аа І єи Стпу Суз І ви Маї 130 135 140
Гуз Ар Туг Рне Рго Сі Рго Маї Тнг Ма! Зег Ттр Авп 5ег Сіу Аа 145 150 155 160
Ї еи Тиг Зег Сіу Ма! Ні Тнг Ріє Рго Аїа Маї І ви Сип бег Зег Спу 60 165 170 175
Ї еи Туг Зег І еи 5ег 5ег Маї Маї Тниг Маї Рго 5ег Зег Зег І ви Спу 180 185 190
Тиг ап Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Авп ТАг Гуз 195 200 205
Маї Авр І уз Агу Маї Спи Рго І уз 5ег Суз Авр І уз ТНг Нів ТНиг Суб 210 215 220
Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім Аа Аа Спу Спіу Рго 5бег Ма! РНе І єи 225 230 235 240
Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Іе Зег Агу Тиг Рго Си 245 250 255 маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Ніз Спи Ар Рго Сім Маї Гув 260 265 270
Рпє Авп Тр Туг Ма! Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз Тнг Гуз 275 280 285
Рго Агд Сім Спи Сіп Туг Азп Зег ТНг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! І еи 290 295 00
ТАг Маї І еи Ні Сіп Авр Тр І єи Авп ау І уз Спи Туг Гуз Суз І ув 305 310 315 320 маї Зег Авп І уз АїПа І єм Рго Аа Рго Пе Спи Гуз ТНк Пе Зег І уз 325 330 335
Аа Гуз Спу Сп Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Зег 340 345 350
Агу Си Сім Меї Тнг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І єи Маї Гув 355 360 365
Спу Рне Туг Ро 5ег Азр Іе Аа Ма! Спи Тер Спи бег Азп Спіу Сп 370 375 380
Рго Сі Авзп Авзп Тут Гуз Тне Тнг Рго Ріо Маї І єи Авр Зег Авр Су 385 390 395 400 зЗег Рпе РНе ГГ еи Туг 5ег Гуз І еи Тиг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп 405 до 415
Сіп Спу Авп Маї Рне 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аа І єи Ніб Авп 420 425 430
Ні Тут Тиг Сп Гув 5ег Геи 5ег І еи Зег Рго Спу 435 440
Зо «2105» 48 «211517 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220» «23» 277 1-СОВІ1 «400» 48
Гуз Зег 5ег Сп Зег І єи Гей Туг Зег 5ег Авп ап Гуз Авп Туг І єи 1 5 10 15
Аа «2105» 49 «21157 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» о «220» «223» 2711-С6О082 60 «400» 49
Тр Ага 5ег Тиг Агу Сім Бег 1 5 «2105» 50 «21159 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220» «223» 277 1-СОВЗ «400» 50
Сіп Сп Туг Туг Зег Туг Рго Тут ТНг 1 5 «2105 51 -211510 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «2020» «223» 277 Н-СОВІ1 «400» 51
Сіу Туг Тиг РНе Тнг Сіу Туг Ттр Меї Нів 1 5 10 «2105 52 -211517 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «2020» «223» 277 Н-СОВ2 «400» 52
ТупПе Авп Рго 5ег Тиг Ар Туг Тиг Спи Туг Авп Сп Гуз РНе ГГ ув 1 5 10 15
А5р 2105 53 -21155 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «2020» «223» 277 Н-СОВЗ «400» 53
Зег Агу ТАг Спу Азп Туг 1 5 «210» 54 «211» 399 60 «212» білок
«213» Ното зарієп5 «223» Позаклітинний домен ТІКкВ людини «4005» 54
Сув Рго Тниг бег Суз І уз Суз бег Аа 5ег Ага Іе Ттр Сувз бег Азр 1 5 10 15
Рго 5ег Рго Спу Пе Маї Аа Рпє Рго Ага І єи Сім Рго Авп 5ег Маї 20 25 Зо
Азр Рго Си Авп Пе Тиг Спи Пе Ре Пе Ага Авп ап Гуз Агу Гей 35 40 45
Сі Пе Пе Авп Сім Азр Авр Маї Сіи Аїа Туг Ма! Спу Геи Аг Авп 50 55 бо
Ї еи Тит Пе Маї Авр 5ег С1іу І єи Гуз РНе Маї Ага Нів Гуз Аіа Ріе 65 70 75 80
Ї еи Гуз Азп 5ег Авп І єи Сп Ні Пе Азп Рне Тнг Агу Азвп І уз І еи 85 90 95
Те Зегі ви Бег Агоу Гуз Нів РНе Ага Ніз І еи Авр Геи Зег Сім І еи 100 105 110
Пе Г еи Маї Спу Азп Рго Рпе Тнг Суз бег Сувз Авр Пе Меї Тр Іе 115 120 125
Гуз Тиг Гей Сіп Спи Ага Гуз Зег 5ег Рго Ар ТНг Сп Авр ГГ еи Туг 130 135 140
Суз І єи Авп Сім бег 5ег І уз Авп Пе Рго І єи Аа Авп І єи СіІп Пе 145 150 155 160
Рго Авп Суз Су І єм Рго 5ег Аа Авп І еи Аа Аа Рго Авп І еи ТНг 165 170 175 зо Маї Сіи Сі Сіу Гуз Зег Пе Тиг Геи бег Суз Зег Маї Аа Спу Авр 180 185 190
Рго Маї Рго Авп Меї Туг Тр Авр Маї ау Авп Геи Маї Зег Гуз Ніб 195 200 205
Меї Авп Си Тнг Зег Нів Тиг Сп СТу Зег І ви Аго Пе Тиг Авп Пе 210 215 220
Зег 5ег Азр Авр 5ег Су І уз Сп Пе бег Суз Маї АІа Си Авп І єи 225 230 235 240 маї сСпу Сім Авр Сп Авр 5ег Маї Авп ГГ еи Тнг Маї Ні5 РНе Аа Рго 245 250 255
ТиПШе Ти Рне Геи Сім 5ег Рго ТНг Зег Авр Нів Ніз Тр Суз Пе 260 265 270
Рго Ріе ТНг Маї Гуз Сіу Авп Рго Гуз Рго Аїа І єи Сп Ттр РНе Туг 275 280 285
Ап Сіу Аїйа Іе І єи Азп Спи Зег Гуз Тут Пе Суз ТНг Гуз Ге Нів 290 295 00 маї Тиг Авп Ні Тнг Сім Туг Ні Спу Суз Геи Сп Гей Авр Авп Рго 305 з10 315 з20
Тиг Ні Меї Авп Авп ау Азр Туг Тпг Геи Іе Аїа Гу Авп Сім Туг 325 330 335
Спу Гуз Авр Си Гуз Стій Пе бег Айїа Ні5 Рнє Меї Су Тр Рго Сіу 340 345 350
Пе Ар Авр ау Аїа Авп Рго Авп Туг Рго Авр Маї Пе Туг Спи Авр 355 360 365
Тугачу Тниг Аїа Аа Авп Авр Іе Спу Авр ТНг ТАг Авп Агу 5ег Авп 370 375 380
Сіш Пе Рго 5ег ТАг Азр Маї Тниг Авр Гуз Тиг Сіу Аг Сім Нів 385 390 395 «2105 55 60 «21155
«212» білок «213» Ното зарієп5 «400» 55
Сіу Туг Тер Меї Ніб 1 5 «2105» 56 -211517 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220» «223» 277 Н-СОВ2 «400» 56
Тугп Пе Авп Рго 5ег ТНг Авр Туг ТНг Сім Туг Авп ап Гуз Рпє Гуз 1 5 10 15
А5р «2105» 57 «21156 «212» білок «213» Ми5з «мишиний, родовий» «220» «223» 277 Н-СОВЗ «400» 57 зег Ага ТАг Спу Азп Туг 1 5 «2105» 58 -21157 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «2020» «223» 277 Н-СОВІ1 «400» 58
Сіу Тут Тиг Рпе Тнг Спу Туг 1 5 «210» 59 -21155 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «2020» «223» 277 Н-СОВ2 «400» 59 60 //Авп Рго бег ТНг Авр Туг
1 5 2105» 60 «21156 «212» білок 213» Ми5 «мишиний, родовий» «220»
«223» 277 Н-СОВ8З СпоШтіа «4005» 60 зег Ага ТАг Спу Азп Туг

Claims (15)

1 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Антитіло до ТІКВ, що містить: варіабельний легкий ланцюг і варіабельний важкий ланцюг, що містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 9 ії БЕО ІО МО: 19, відповідно.
2. Антитіло до ТІКВ за п. 1, де антитіло містить: легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗХЕО ІЮ МО: 42, і важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 43 або 44.
3. Антитіло за п. 1 або 2 для застосування в медицині.
4. Антитіло для застосування за п. 3, де застосування призначене для лікування захворювань ока або сітківки або нейродегенеративних захворювань.
5. Антитіло для застосування за п. 4, де застосування призначене для лікування захворювань нейронного/неврального ока або сітківки.
6. Антитіло для застосування за п. 4, де застосування призначене для лікування географічної атрофії.
7. Антитіло для застосування за п. 3, де застосування призначене для лікування вікової дегенерації жовтої плями, діабетичної ретинопатії, діабетичного набряку жовтої плями, пігментної дистрофії сітківки, спадкової дистрофії сітківки, спадкової макулодистрофії, міопічної дегенерації, оклюзій вени сітківки, оклюзій артерії сітківки, ендофтальміту, увеїту, кистозного макулярного набряку, хороїдальної неоваскулярної мембрани внаслідок будь-якого із захворювань сітківки, оптичних нейропатій, глаукоми, відшарування сітківки, токсичної ретинопатії, променевої ретинопатії і травматичної ретинопатії, продромальної і від легкої до помірної хвороби Альцгеймера, затримки прогресування захворювання в пацієнтів із хворобою Альцгеймера, хворобою Хантингтона, хворобою Паркінсона, великого депресивного розладу, шизофренії, когнітивного порушення, зв'язаного із шизофренією, запобігання першого приступу психозу в індивідуумів з ослабленим психозним синдромом, запобігання повторенню в пацієнтів із шизофренією, терапевтично резистентної депресії, гіперфагії, ожиріння або метаболічного синдрому.
8. Антитіло для застосування за п. З, де зазначене антитіло вводять за допомогою парентерального шляху, внутрішньовенного шляху, інтравітреального шляху або підшкірного шляху введення.
9. Фармацевтична композиція для лікування захворювань ока та сітківки, таких як географічна атрофія, викликана віковою дегенерацією жовтої плями, діабетична ретинопатія, глаукома та/або діабетичний набряк жовтої плями, яка містить антитіло за будь-яким з пп. 1-2 і фармацевтично прийнятний носій.
10. Виділений полінуклеотид або полінуклеотиди, що містять послідовність, що кодує легкий ланцюг або варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла, і важкий ланцюг або варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла за будь-яким з пп. 1-2.
11. Експресійний вектор, що містить виділений полінуклеотид або полінуклеотиди за п. 10.
12. Вірусний вектор, що містить виділений полінуклеотид або полінуклеотиди за п. 10.
13. Клітина-хазяїн, що містить виділений полінуклеотид або полінуклеотиди за п. 10 або експресійний вектор за п. 11.
14. Спосіб одержання антитіла до ТТКкВ, що включає: одержання клітини-хазяїна за п. 13; та культивування клітини-хазяїна. 60 15. Спосіб за п. 14, який додатково включає відновлення та очищення антитіла.
ЗК ВК КВК КВК КМ А КВ КК КВК КК КК КВК КЕКВ КК ВЕК КК КВК Я КВК КВК ККУ ЖОМУ ВІ иа по Уа вігзкікОогхм тої Аніс Іуда Мт тив занжатій важити х ММК г юку УМ Уха І аг гідом хх хі осуд хування восівіюхюих МЕНІ ФФК АХ ХХ ХАХУМІ УМО ІФ І АВДХХІКОІХУМКУВ УФВ ХВ УКУХАККАХУККМУМІ ТИ В МОН Фо 2стст с мк скххм хАУУХМІВІУМІСТОВМІ В ІХ ХУ ОЛИХКО ХУ сті Во УКУхАККАХУІКМУМІИТЯ ВИК НН ЕЕ ОМВК ВОК ЕКО КВ ЕК КВК ВК Ех - зов хів агтхксхкИМ ЖЖ хе кіло вВІ В зе ККАСКХАХМУХ МАХ КІСКИ ГІВІ кто кКИХ ВЕК Х ккцзгіісво кю МО с сістілахах в ккд ховав цІкКх У ОО пс ж ХУ ЦЕХУ: Іі в ккд хв ках вових ХВО осі усікюуккихсхх У МУХХХТ ІВ ХУ І КАХ ХХКпУХХУУ МІ МІУ во вот ххх АХУХАУХІ ВХ ВЕН НЕВВЕ НЕ НЕВНННЕКНККНЕНБННКНЕНЕНЕКНННННкнекеек: МАМУ ткьхххУхкихУУ моток совет кісок асчкххухлихУ мо хо М г чех ПИ хохихххххххУхУ ММ хо ес ОО схіссогітктслккоюуххух ку хх хе жк ІЕскХ ет ШЕ ті? слдУФоОТтТк уж У ХІМІЯ Кф пи Е НІ : Узі тка ОО МЕЖІ: істо тк ж жи МІ хМо І піІдос ЮХИМ УУВ УМІСТ сс осУСУкчкМАМУУ ХУ: ТІК нн нн нн не нн ж КМ хяхекуУх ут хомі із: тк Вк ху Же КО зозмегсзяхмЕхххиук цим саги нтх ЗМЕОКОММ ик пк жиму хомісвогет Кік юки ХУ 05 5 Дехххеухиху ов ьу ХУ о в в АН о пкт ток хккМХшЖшУ ВІ Вих УВК: тготтсаесоо с ко: тттомсхх ху ММК озхесттктккахяккохжу хі кмха тя ВЕН ВК ВК КЕКВ ЕК КВ МКМ ХХ КЕ ХУНУААХЗВІХВІУОМІОС І ІС ОХ КВХУХМЕХАХЕВВХХИОВЕ ШИК Хе УЖІХАХНІ:ІАСУУКІВІІ І ВуОхІХКІХХаХАНХХУМИ МНН ко шк Ук КУ КУВТі гг гуз ох ккиххахАНХХУНА МЕ оМеі відо ов хоч мКкУХКТУХУМУУВІІ годе ноюМКиК
Фіг. 1 ШИ зн ГРО МИ ВОМЕ ПО нМО ХХ чол ія ов З в Що гою зо мі г "а ЗУ 3 З
- Я. -і с . БК г ї- 4 й . т а . ГК з Я. о: Ко 5 з вн . ро . Кия .
: і. Я. Я.
й . . Кая . тя І, - хі . ще . її С ко Кая с. че ооо
Фіг. 2 пп. екловидне тіло ; з Фе є Шш Ше щі д Внутринньосчна х 1000. нн А рідина Ж : кі З | ток що пен б ї он Ж : 1 : : 0 10 20 Зо Час (день)
Фіг. Я Очна ФК ес антитія по-- « Х«ЮЮ , , уд о клітнані значення КС пох " ня 420 ' «ех ТУ ВА ПДСИ-КОЇ СВ че - УТА ВН Е Ж й ш- ДТ7-аиЙВ-КОЇ ж ; т їх. - ВТ ВДС за -- 3 Е ; т Ж м і до Вар 777777 « ли 0 50 То 15 Дніпкляівт введення
Фіг. 4
Гіперклікемія «7 ЕРГО т ЕРГ їжо вт! (пісня івті Група 1: Контроль і недіабетичні, Ів 5 мкганти- МР коптрольне ЦЯ) Грувза 3: Гіперглікемія орабетичні, Інт 50 мкг анти- МЕ (контрожене ВС Група З: Ріперелікемія діабет чні, Ів: а мкг 3 банти. ТК
Фіг. 5 зміна латентності опосеренкованої паличками б-хинлі Ж вк жк ШИ Група с Контроль їв іх і Група 2: Плерглікеміх -- п З Кк; ! зага ТЕ З Лк . о Є чі т ка ії я Я йо І З КН з ЗЕ ту а й Ей Ф «
Фіг. 6
Світлочутливість опосередкованої паличками Б-хвилі ї ШИ рупа б Контроль | Б Група З Гіперглікемія Е щЕ ЩО Грена 2: іперглікемів г ж шк ! но с о с кт хх за тащ ЕН ші. ще а Ку
Фіг. 7 Амплітуда коливань опосередкованої паличками а-хвилі 1 ШИ Гроепхі: Контропв А 1 -52 г ЕМ Група хх Гіверотікемів ь КА -- в . Щ Готна 3: Гзерглікомів я ск З . - Кк х пе її | хз ша ї . .
б. се хі хі ій НВ Кз я «Е
Фіг. 8 зміна патентності УФ опосередкованої копбочками в-хвилі 7 --щт Ш Гоупз 2 Контроль о НА ЩІ ЕЕ гоупа з Гіроргснікемія т й в ЩО зна Зх Гіверглікемія
НИ. я г Б
Фіг. 9 Зміна латентності опасередкованої колбочками М-типу Б-хвилі в вд ї ко ШИ рупа б Контроль - с: Група: Гроергенікеміх т 4 з її ЩО ря з ря -ь ІК Оз з Я. че з 131 ШО
Фіг. 10
Світпочутливість УФ впосередкованої копбочками Б-хвипі 12 | - ШО Гоа б Контлоль
М с. що : : 10 З ЕЕ Група 2: Гіперглікемія ва М грта З: Гіперрікомів - а на 5 ке кова
Щ.? Ко
Фіг. Амплітуда опосередкованої колбочками М-типу насичувальної Б-хвипі я п 12 лк ШО Гоупа с Конитооль в ОЗ - з. Кк сок ши . ЕЕ Гра хх Пперглікемня :
15 Т вдо ФВ Гееяза 3: Гнергнкемівя : || Я. СЕ во се В. та В ЯКО. І НО
Фіг. 12 бносфо-БЕК після стимулянії за понпомогою 277-антнтіла талао ВІК й зобоб яд м т т -- ВОМЕ в жиж в-б І - 1 нм ВСЕ - зху-антики че 15006 ж х ж с зд судо о з Щ я -е яко хУт-антита 7 Жов "З зва Мвлать - 50 шк в т «14 «ІЕ «В -8 «Ж жог коннонтванй Фіг 13 А Ффосфе ЕВК сля сенмужнні за допомогою Єо-знтнитіла та/аво ВЕНМЕ т дово В «ово і сачщ ща -- НА ВЕКМЕ з Со-антитілеа Ф Айва -ко С-автнтілю че обов ду ще «їх й «ЕЕ з : КЗ вто а що жк -т4 -22 «й «В «Ех яот коннеткрани ріг. 13
UAA201911908A 2017-06-09 2018-06-08 АНТИТІЛО ДО TrkB UA127967C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17175122 2017-06-09
PCT/EP2018/065107 WO2018224630A1 (en) 2017-06-09 2018-06-08 Anti-trkb antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA127967C2 true UA127967C2 (uk) 2024-02-28

Family

ID=59034551

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201911908A UA127967C2 (uk) 2017-06-09 2018-06-08 АНТИТІЛО ДО TrkB

Country Status (22)

Country Link
US (3) US10793634B2 (uk)
EP (1) EP3635004A1 (uk)
JP (2) JP7267208B2 (uk)
KR (1) KR20200017421A (uk)
CN (1) CN110719916B (uk)
AR (1) AR112602A1 (uk)
AU (1) AU2018279184B2 (uk)
BR (1) BR112019023742A2 (uk)
CA (1) CA3063965A1 (uk)
CL (1) CL2019003557A1 (uk)
CO (1) CO2019013718A2 (uk)
EA (1) EA201992883A1 (uk)
IL (1) IL271067B2 (uk)
MA (1) MA49257A (uk)
MX (1) MX2019014714A (uk)
MY (1) MY202315A (uk)
PE (1) PE20200173A1 (uk)
PH (1) PH12019502694A1 (uk)
SG (1) SG11201911814UA (uk)
TW (2) TWI808086B (uk)
UA (1) UA127967C2 (uk)
WO (1) WO2018224630A1 (uk)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200013231A (ko) * 2017-06-02 2020-02-06 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항암 조합 요법
CA3156452A1 (en) 2019-11-11 2021-05-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh NPY2 RECEPTOR AGONISTS
JP2023546229A (ja) * 2020-10-21 2023-11-01 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 眼の疾患の処置のためのアゴニスト性ＴｒｋＢ結合分子
WO2023125485A1 (en) * 2021-12-28 2023-07-06 4B Technologies (Beijing) Co., Limited TrkB ANTIBODY AND APPLICATION THEREOF

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
EP0435911B1 (en) 1988-09-23 1996-03-13 Cetus Oncology Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US6037454A (en) 1996-11-27 2000-03-14 Genentech, Inc. Humanized anti-CD11a antibodies
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
CA2610771A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Anti-trkb monoclonal antibodies and uses thereof
WO2008058127A2 (en) * 2006-11-09 2008-05-15 Irm Llc Agonist trkb antibodies and uses thereof
JP2010513461A (ja) 2006-12-20 2010-04-30 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 自己免疫障害を治療するためのＴｒｋＢアゴニスト
EP2205071B1 (en) 2007-10-11 2015-07-22 Biogen MA Inc. Lingo-1 antagonists and trkb agonists for use in the treatment of glaucoma
KR20100089851A (ko) * 2007-10-23 2010-08-12 노파르티스 아게 호흡기 질환의 치료를 위한 ｔｒｋｂ 항체의 용도
MX2010007841A (es) * 2008-01-17 2010-09-28 Irm Llc Anticuerpos anti-trkb mejorados.
EA021284B1 (ru) * 2008-02-04 2015-05-29 Лей Лайн Дженомикс С.П.А. Антитела и их производные
CA2732266A1 (en) 2008-07-28 2010-02-04 Emory University Treating various disorders using trkb agonists
WO2010086828A2 (en) * 2009-02-02 2010-08-05 Rinat Neuroscience Corporation Agonist anti-trkb monoclonal antibodies
WO2011103667A1 (en) * 2010-02-26 2011-09-01 6452728 Canada Inc. Agonistic antibodies to trkb receptors and uses thereof
CN103108633B (zh) 2010-06-09 2016-01-27 爱默蕾大学 TrkB激动剂及其用途
US9200080B2 (en) 2010-09-03 2015-12-01 Horacio Uri Saragovi Agonistic antibodies to TrkC receptors and uses thereof
GB2491106A (en) 2011-05-18 2012-11-28 Univ Basel Antibodies against tropomyosin-related kinase B receptors
JP6868394B2 (ja) 2014-05-16 2021-05-12 ファイザー・インク 二重特異性抗体
EP3328898B8 (en) 2015-07-28 2024-04-10 6452728 Canada Corp. Trkb or trkc agonist compositions and methods for the treatment of otic conditions
US11078287B2 (en) 2015-11-17 2021-08-03 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Binding agonist for treatment of neurological and other disorders
SG11202002665UA (en) 2017-11-30 2020-04-29 Regeneron Pharma Anti-trkb monoclonal antibodies and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
US20240101689A1 (en) 2024-03-28
CA3063965A1 (en) 2018-12-13
MX2019014714A (es) 2020-02-07
JP2020522270A (ja) 2020-07-30
US20200399378A1 (en) 2020-12-24
PH12019502694A1 (en) 2020-07-13
CO2019013718A2 (es) 2020-01-17
TW202342100A (zh) 2023-11-01
US10793634B2 (en) 2020-10-06
AU2018279184B2 (en) 2024-08-01
EA201992883A1 (ru) 2020-05-08
BR112019023742A2 (pt) 2020-06-09
SG11201911814UA (en) 2020-01-30
WO2018224630A1 (en) 2018-12-13
PE20200173A1 (es) 2020-01-24
CN110719916A (zh) 2020-01-21
JP7505084B2 (ja) 2024-06-24
TW201920271A (zh) 2019-06-01
MA49257A (fr) 2020-04-15
KR20200017421A (ko) 2020-02-18
JP7267208B2 (ja) 2023-05-01
CN110719916B (zh) 2024-05-31
CL2019003557A1 (es) 2020-05-04
US20180355046A1 (en) 2018-12-13
EP3635004A1 (en) 2020-04-15
IL271067A (en) 2020-01-30
MY202315A (en) 2024-04-23
JP2023093621A (ja) 2023-07-04
TWI808086B (zh) 2023-07-11
AU2018279184A1 (en) 2019-11-21
IL271067B1 (en) 2024-02-01
US11866501B2 (en) 2024-01-09
AR112602A1 (es) 2019-11-20
IL271067B2 (en) 2024-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA127967C2 (uk) АНТИТІЛО ДО TrkB
JP3906314B2 (ja) カルジオトロフィンおよびその使用
CN103649114B (zh) 新的免疫缀合物
JP6306605B2 (ja) Ｅｐｏを標的とする抗体のための組成物および方法
US11180551B2 (en) Humanized monoclonal antibodies that target VE-PTP (HPTP-beta)
CN109069638A (zh) 用于癌症治疗的三特异性抑制剂
UA118749C2 (uk) Конструкція антитіла до cdh19 і cd3
CN108136218A (zh) 用于治疗轻链淀粉样变性及其它cd38阳性血液恶性肿瘤的抗cd38抗体
CN108779171A (zh) 抗补体因子c1q的fab片段及其应用
CN107207591A (zh) 血脑屏障受体抗体及使用方法
CN106715467A (zh) 涉及经工程改造的cd16的多肽、细胞和方法
UA123773C2 (uk) ВИДІЛЕНЕ АНТИТІЛО ПРОТИ HtrA1 ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ ПРИ ЛІКУВАННІ ПОВ'ЯЗАНОГО З HtrA1 ПОРУШЕННЯ АБО ХВОРОБИ ОКА
JP2021530960A (ja) 抗ソルチリン抗体及びその使用方法
UA128330C2 (uk) Конструкція на основі біспецифічного антитіла, спрямована на muc17 і cd3
SA519410598B1 (ar) طريقة علاج أو تخفيف الاضطرابات الأيضية باستخدام بروتينات الربط لمستقبل ببتيد التثبيط المعوي في توليفة مع مساعدات بولي بيبتيدات شبيه بالجلوكاجون-1
EP4286412A1 (en) Novel binding molecule and use thereof
TWI429656B (zh) 改良之ｎｏｇｏ－ａ結合分子及其醫藥用途
CN108136006A (zh) 针对胰岛素受体的抗体片段和其治疗低血糖的用途
JP2022529502A (ja) 抗ｃｄ３８抗体および製剤
WO2023125485A1 (en) TrkB ANTIBODY AND APPLICATION THEREOF
EA043771B1 (ru) Антитела к trkb
CN108822212A (zh) 选择性识别致癌性突变体kit itd的单克隆抗体及其应用