UA127545C2 - Сполука-агоніст фактора росту і диференціювання 15 (gdf15) та спосіб її застосування - Google Patents
Сполука-агоніст фактора росту і диференціювання 15 (gdf15) та спосіб її застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA127545C2 UA127545C2 UAA202005772A UAA202005772A UA127545C2 UA 127545 C2 UA127545 C2 UA 127545C2 UA A202005772 A UAA202005772 A UA A202005772A UA A202005772 A UAA202005772 A UA A202005772A UA 127545 C2 UA127545 C2 UA 127545C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- compound
- uvi
- compounds
- homodimer
- sequence
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title abstract description 131
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 19
- 229940124085 Growth differentiation factor 15 agonist Drugs 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 20
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 abstract description 18
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 abstract description 16
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 abstract description 16
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 7
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 abstract 1
- 101000893549 Homo sapiens Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 abstract 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 47
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 47
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 21
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 21
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 12
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 9
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 9
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 7
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 6
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- CUCUKLJLRRAKFN-UHFFFAOYSA-N 7-Hydroxy-(S)-usnate Chemical compound CC12C(=O)C(C(=O)C)C(=O)C=C1OC1=C2C(O)=C(C)C(O)=C1C(C)=O CUCUKLJLRRAKFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- SXTAYKAGBXMACB-UHFFFAOYSA-N methionine sulfoximine Chemical compound CS(=N)(=O)CCC(N)C(O)=O SXTAYKAGBXMACB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 4
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010004460 Gastric Inhibitory Polypeptide Proteins 0.000 description 3
- 102100039994 Gastric inhibitory polypeptide Human genes 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241001424341 Tara spinosa Species 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 3
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000004987 Macrophage activation syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 201000001853 McCune-Albright syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000005085 Meconium Aspiration Syndrome Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010042135 Stomatitis necrotising Diseases 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 244000111306 Torreya nucifera Species 0.000 description 2
- 235000006732 Torreya nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N molport-023-276-326 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N 0.000 description 2
- 201000008585 noma Diseases 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MFRCZYUUKMFJQJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione;1,3-dioxan-2-one Chemical compound O=C1OCCCO1.O=C1COC(=O)CO1 MFRCZYUUKMFJQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040439 Adenylate kinase 4, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108050004095 Adenylate kinase 4, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 229940123208 Biguanide Drugs 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 244000157795 Cordia myxa Species 0.000 description 1
- 235000004257 Cordia myxa Nutrition 0.000 description 1
- 241000611750 Coregonus kiyi Species 0.000 description 1
- 241001327708 Coriaria sarmentosa Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 244000019459 Cynara cardunculus Species 0.000 description 1
- 235000019106 Cynara scolymus Nutrition 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000632511 Daviesia arborea Species 0.000 description 1
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 101100289989 Drosophila melanogaster alpha-Man-Ia gene Proteins 0.000 description 1
- 101100460157 Drosophila melanogaster nenya gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 102000018711 Facilitative Glucose Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- 240000000731 Fagus sylvatica Species 0.000 description 1
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 description 1
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 description 1
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 1
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091052347 Glucose transporter family Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 101150018634 Heph gene Proteins 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 241000209027 Ilex aquifolium Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000015580 Increased body weight Diseases 0.000 description 1
- 241001026509 Kata Species 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101150021286 MAS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000286819 Malo Species 0.000 description 1
- 101100126878 Microcystis aeruginosa (strain NIES-88) kgpE gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100498160 Mus musculus Dach1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100460719 Mus musculus Noto gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000531207 Oxera splendida Species 0.000 description 1
- 102400000319 Oxyntomodulin Human genes 0.000 description 1
- 101800001388 Oxyntomodulin Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101100439727 Rattus norvegicus Cib1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000258044 Solanum gilo Species 0.000 description 1
- 235000018650 Solanum gilo Nutrition 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 1
- CCAZWUJBLXKBAY-ULZPOIKGSA-N Tutin Chemical compound C([C@]12[C@@H]3O[C@@H]3[C@@]3(O)[C@H]4C(=O)O[C@@H]([C@H]([C@]32C)O)[C@H]4C(=C)C)O1 CCAZWUJBLXKBAY-ULZPOIKGSA-N 0.000 description 1
- 101100187345 Xenopus laevis noto gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001539 anorectic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016520 artichoke thistle Nutrition 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 150000004283 biguanides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000015111 chews Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000005583 doda Nutrition 0.000 description 1
- 235000001159 dosh Nutrition 0.000 description 1
- 244000245171 dosh Species 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000019439 energy homeostasis Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- DIRFUJHNVNOBMY-UHFFFAOYSA-N fenobucarb Chemical compound CCC(C)C1=CC=CC=C1OC(=O)NC DIRFUJHNVNOBMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N incretin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920012128 methyl methacrylate acrylonitrile butadiene styrene Polymers 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 229910001453 nickel ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N protheobromine Chemical compound O=C1N(CC(O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 231100000272 reduced body weight Toxicity 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000009892 regulation of energy homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 150000001467 thiazolidinediones Chemical class 0.000 description 1
- 229940035289 tobi Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007473 univariate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Obesity (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Винахід стосується сполуки-агоніста фактора росту і диференціювання 15 (GDF15), яка викликає втрату маси і яка лікує діабет, дисліпідемію, неалкогольний стеатогепатит та/або ожиріння, фармацевтичної композиції, яка містить таку сполуку, і терапевтичного застосування такої сполуки і композиції.
Description
Цей винахід має відношення до біології та медицини, і, більш конкретно, стосується сполук та композицій, які містять сполуку-агоніст фактора росту і диференціювання 15 (5ОЕ15), які мають тривалий час дії та інші корисні властивості, а також способів їх застосування для викликання втрати маси та для лікування цукрового діабету, дисліпідемії, неалкогольного стеатогепатиту (МАЗН) та/або ожиріння.
СОЕ15 (також відомий як МІС-1, МАС-1) являє собою білок цистеїнових (Суз, С) вузлів, який належить до надродини трансформуючого фактора росту бета (ТОЕР). Концентрація циркулюючого білка пов'язана з різними біологічними функціями, такими як ракова кахексія і метаболізм (дивись Етітегхоп еї аїЇ. (2017) Маї. Мед. 23:1215-1219). Зрілий людський СОБЕ15 (послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1) являє собою пептид, який складається зі 112 амінокислот.
Циркулюючий СОРЕ15 утворює гомодимер зрілого білка (25 кДа), через що повідомлялося, що він має являти собою один міжланцюговий дисульфідний зв'язок між залишком Суз в положенні 77 послідовності 560 1Ю МО: 1 на кожному ланцюзі гомодимеру (яке відповідає положенню 316 в послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2). Вважається, що утворення гомодимерів є необхідним для біологічної активності СОРЕ15 (дивись публікацію міжнародної заявки на патент УУО 2017/147743).
Серед багатьох описаних біологічних функцій гомодимеру зрілого СОЕ15 регуляція енергетичного гомеостазу привернула увагу завдяки потенціалу лікування ожиріння та цукрового діабету другого типу (Т20). Зв'язок між активністю гомодимеру зрілого ЗОЕ15 та енергетичним гомеостазом базується на спостереженні, яке полягає у тому, що підвищення рівня зрілого СОЕ15 у сироватці крові корелює зі зниженням маси людей, хворих на задавнений рак передміхурової залози (Еттегзоп еї аї. (2017)).
Крім того, підвищення рівня ЗОР15 у мишей шляхом введення рекомбінантного СООЕ15 або шляхом його експресії та секреції з пухлинних ксенотрансплантатів продемонструвало, що
СОЕ15 викликає втрату маси завдяки здатності зменшувати споживання їжі та збільшувати енерговитрати. Крім того, трансгенні миші, які надекспресують СОБЕ15, були стійкими до ожиріння, спричиненого дієтою, і демонстрували поліпшену толерантність до глюкози, тоді як миші з "нокаутованим" геном СОЕ15 збільшували масу тіла та жирову масу. Крім того, було показано, що втрата маси, викликана СОЕ15, зменшує запальну реакцію та збільшує тривалість
Зо життя гризунів.
Альфа-подібний рецептор (СЕКАЇ) гліального нейротрофічного фактора (СОМЕ) був ідентифікований як ліганд-зв'язувальний рецептор СОЕ15. Втрата аноректичного ефекту ООЕ15 у СЕКАГ- дефіцитних мишей, а також у пацюків, яким вводили моноклональне антитіло, яке нейтралізує СЕКАЇ, продемонструвала, що СОЕКАЇ в основному відповідає за метаболічні ефекти СОР15 (Еттегзоп еї а. (2017).
Природний період напіввиведення (112) агоніста гомодимеру зрілого циркулюючого людського СОРЕ15 порівняно короткий (приблизно 2-3 год.). Однак публікація міжнародної заявки на патент УМО 2015/017710 загалом описує збільшення 1» агоністів СОЕ15 із застосуванням різних кон'югацій, включаючи кон'югацію з фрагментом, здатним до кристалізації (Ес).
Існує потреба у біологічно активних сполуках СОЕ15 з тривалим часом дії, які можуть бути застосовані в терапії для викликання зниження маси та для лікування 120, дисліпідемії, МА5Н та/або ожиріння. Терапевтично бажана сполука має бути агоністом рецептора ОЕБКАЇ і надавати корисні властивості. Однією з корисних властивостей було б викликання втрати маси.
Ще однією корисною властивістю була 6 стабільність терапевтичного діапазону іп мімо протягом тривалого періоду часу із забезпеченням сталого рівня сполуки в крові з дозуванням один раз на тиждень для досягнення бажаного терапевтичного ефекту. До інших бажаних властивостей також належать зниження імуногенності. Крім того, бажана сполука мала б корисні властивості фізичної та/або хімічної стабільності.
З огляду на викладене вище, в цьому описі розкриті біологічно активні сполуки-агоністи
СОГ15, які мають подовжений 1: та інші бажані властивості. Більш конкретно, сполуки за цим описом являють собою рекомбінантні злиті білки, які мають Ес-фрагмент безшарнірного мономерного (одна одиниця Ес на СОРЕ15) людського ІдО4, зв'язаний через жорсткий лінкер з аміно-(К)-кінцем сполуки-аналога СОРЕ15, в результаті чого ці сполуки утворюють ковалентно зв'язаний гомодимер через щонайменше один міжланцюговий дисульфідний зв'язок між частинами СОРЕ15 кожного з мономерів. Наведена як приклад сполука, Сполука 2, являє собою гомодимер з двох молекул Сполуки 1 (послідовність 5ЕОО ІЮ МО: 2) і неочікувано показала подовження ії» до приблизно 117 год., що може забезпечити тривалу ефективність і може дати можливість дозування сполуки один раз на тиждень. Сполуки за цим винаходом також мають підвищену фізичну стабільність. Наприклад, Сполука 2 має низький (4,1 95) вміст розчинного бо агрегату з високою молекулярною масою (НМУ) у пулі на іммобілізованому протеїні А. Сполука
2 також демонструє підвищену хімічну стабільність, наприклад, низьке (0,75 95) відсоткове зростання вмісту компонентів низької молекулярної маси (І МУМ) при концентрації 1 мг/мл після 4 тижнів зберігання при 40 "С у цитраті при рН 6,0.
За одним з варіантів здійснення цього винаходу надана сполука, яка містить послідовність
ЗЕО ІО МО: 2.
За іншим варіантом здійснення цього винаходу надана сполука, яка містить гомодимер, який містить два мономери, кожен з яких містить послідовність зЕО ІЮ МО: 2, причому згадані два мономери зв'язані через щонайменше один між ланцюговий дисульфідний зв'язок між залишком
Суб першого мономеру і залишком Су другого мономеру.
За іншим варіантом здійснення цього винаходу надана фармацевтична композиція, яка містить сполуку, яка має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 2, або гомодимер з двох мономерів, які мають послідовність 5ЕО І МО: 2, та один або декілька фармацевтично прийнятних наповнювачів.
За іншим варіантом здійснення цього винаходу наданий спосіб викликання втрати маси або лікування Т20, дисліпідемії, МАЗН та/або ожиріння у людини, який включає введення особі ефективної кількості сполуки, яка має послідовність ЗЕО ІО МО: 2, гомодимеру, який містить два мономери з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 2, або фармацевтичної композиції, яка містить сполуку, яка має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 2, або гомодимер, який містить два мономери, які мають послідовність ЗЕО ІЮ МО: 2.
За іншим варіантом здійснення цього винаходу надана сполука, яка містить послідовність
ЗЕО ІО МО: 2, або гомодимер, який містить два мономери з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 2, для застосування в терапії. Альтернативно надана сполука, яка містить послідовність зЕО ІЮО МО: 2, або гомодимер, який містить два мономери з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 2, для застосування з метою викликання втрати маси або для застосування в лікуванні 120, дисліпідемії, МАБ5Н та/або ожиріння.
За іншим варіантом здійснення цього винаходу надані варіанти застосування сполуки, яка містить послідовність 5ЕО ІО МО: 2, або гомодимеру, який містить два мономери з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2, у виробництві лікарського засобу для викликання втрати маси або для лікування Т20, дисліпідемії, МА5Н та/або ожиріння.
За іншими варіантами здійснення цього винаходу надана сполука, яка одержана шляхом культивування клітини ссавця, яка містить молекулу кДНК, яка кодує поліпептид, який містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 2, за таких умов, що згаданий поліпептид експресується, і виділення згаданої сполуки. Крім того, наданий спосіб викликання втрати маси у людини або для лікування 120, дисліпідемії, МА5Н та/або ожиріння, який включає введення індивідууму ефективної кількості сполуки за цим винаходом або композиції за цим винаходом один раз на тиждень.
У значенні, вживаному у цьому описі, термін "приблизно" означає в межах статистично значущого діапазону значення або значень, таких як, наприклад, заявлена концентрація, довжина, молекулярна маса, рн, ідентичність послідовності, часовий інтервал, температура, об'єм тощо. Таке значення або діапазон може бути в порядку величини, як правило, в межах 20 95, більш типово в межах 10 95, і навіть більш типово в межах 5 95 від заданого значення або діапазону. Допустиме відхилення, яке охоплюється терміном "приблизно", залежатиме від конкретної досліджуваної системи і може бути легко оцінене фахівцем у цій галузі.
У значенні, вживаному у цьому описі, термін "ефективна кількість" означає кількість, або дозу, сполуки за цим винаходом або фармацевтичної композиції, яка містить сполуку за цим винаходом, яка при одноразовому або багаторазовому введенні пацієнту або суб'єкту викликає біологічну або медичну відповідь чи чинить бажаний терапевтичний вплив на тканини, систему, тварину, ссавця або людину, яку визначає дослідник, ветеринар, лікар або інший клініцист.
Введення ефективної кількості сполуки або композицій, які містять сполуку за цим винаходом, пацієнту, який потребує цього, переважно призведе до загальної втрати маси тіла. Доза може означати більш високу початкову ударну дозу з подальшою нижчою дозою.
У значенні, вживаному у цьому описі, терміни "індивід", "пацієнт" і "суб'єкт" вживаються взаємозаміно і означають тварину, особливо людину. У разі людини, індивід характеризується захворюванням, розладом або станом, який би отримав користь від введення сполуки або композиції за цим винаходом.
У значенні, вживаному у цьому описі, термін "лікування" або "лікувати" означає надання допомоги та забезпечення догляду за особою, яка має стан, щодо якого введення СОЕ15 є показаним для подолання або полегшення симптомів і ускладнень цих станів. Лікування включає введення сполуки або композиції, яка містить сполуку за цим винаходом, особі, яка 60 потребує цього, для запобігання виникненню симптомів або ускладнень, полегшення симптомів або ускладнень, або усунення захворювання, стану або розладу. Зокрема, лікування включає введення сполуки або композиції, яка містить сполуку за цим винаходом, особі, яка потребує цього, щоб призвести до загальної втрати маси тіла. Індивідом, якого лікують, може бути тварина, зокрема, людина.
Фармацевтичні композиції за цим винаходом можуть бути введені особі, яка потребує такого лікування, парентеральним шляхом. Парентеральне введення можна здійснювати шляхом підшкірної, внутрішньо м'язової або внутрішньовенної ін'єкції із застосуванням шприца, факультативно шприц-ручки або механічного інжектора. Альтернативно парентеральне введення можна здійснювати із застосуванням інфузійного насоса. Крім того, фармацевтичні композиції можуть містити один або декілька фармацевтично прийнятних наповнювачів. Такі фармацевтичні композиції можуть бути приготовані будь-якими з численних різноманітних методів з використанням звичайних наповнювачів для фармацевтичних продуктів, які є добре відомими у цій галузі (дивись, наприклад, Кетіпдіоп'є Рпагтасешііса! Зсіепсе5, 2151 Еайоп,
Опіметейу ої Ше Зсівепсез іп РпйПаадеїрніа, Рпіаде!рНпіа, РА, ОА (2006)).
Сполуки та композиції за цим винаходом можуть бути застосовані одночасно, окремо або послідовно в комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами, корисними для викликання втрати маси та для лікування діабету, станів, пов'язаних з 120, дисліпідемією, МАБЗН та/"або ожирінням. До необмежувальних прикладів додаткових терапевтичних засобів, які можна комбінувати із заявленими сполуками, належать, але без обмеження ними, інсулін або аналоги інсуліну; бігуаніди; сульфонілсечовини; тіазолідиндіони; інгібітори дипептиділпептидази-4 ("ОРР-4"); інгібітори натрій залежного транспортеру глюкози (ЗОЇ 12); інкретинові сполуки, такі як глюкагоноподібний пептид-ї1 (СІ Р-1) або аналоги СІ Р-1, шлунковий інгібіторний поліпептид (СІР) або аналоги СІР, оксинтомодулін (ОХМ) або аналоги
ОХМ; або комбінації будь-якого з вищезазначених засобів. Сполуки за цим винаходом та додатковий терапевтичний агент або додаткові терапевтичні агенти можна вводити або разом через один і той самий шлях доставки та пристрій, такий як окремі драже, капсула, таблетка або придатний для впорскування лікарський засіб; або вводити окремо чи одночасно із застосуванням окремих пристроїв для доставки або роздільними шляхами; або вводити послідовно.
Зо Сполуки за цим винаходом можуть бути одержані різними методами, відомими фахівцю в даній галузі. Наприклад, сполуки можуть бути одержані шляхом продукування молекули білка або попередника білка з використанням методів рекомбінантних ДНК. ДНК, включаючи кДНК і синтетичну ДНК, може бути дволанцюговою або одно ланцюговою. Кодуючі послідовності, які кодують згадані сполуки, можуть варіюватись в результаті надмірності або виродження генетичного коду. ДНК може бути введена в клітину-хазяїна для продукування сполуки або її попередника. Клітинами-хазяями можуть бути бактеріальні клітини, такі як штами ЕзсНегісніа соїї К1Т2 або В, грибкові клітини, такі як клітини дріжджів, або клітини ссавців, такі як клітини яєчників китайського хом'яка ("СНО").
Відповідна клітина-хазяїн є тимчасово або стабільно трансфікованою або трансформованою із застосуванням експресійної системи, такої як експресійні вектори, для одержання сполуки за цим винаходом або її попередника. Експресійні вектори зазвичай реплікуються в організмах- хазяях або як епісоми, або як складова частина хромосомної ДНК хазяїна. Зазвичай експресійні вектори будуть містити селекційні маркери, такі як, наприклад, тетрациклін, неоміцин, глутамінсинтетаза та дигідрофолатредуктаза, щоб забезпечити можливість відбирання клітин, трансформованих бажаними послідовностями ДНК.
Сполуки за цим винаходом можуть бути одержані різними методами, відомими фахівцю в цій галузі, а також методами, описаними нижче. Конкретні біосинтетичні або синтетичні етапи для кожної з описаних стадій можуть використовуватись, не використовуватись або поєднуватись різними способами для одержання сполук, розкритих у цьому описі.
Сполуки-аналоги СООР15 за цим винаходом можуть діяти як сполуки СЕКАГ. і продукуються в системі експресії клітин ссавців з використанням похідних клітин СНОКТ. Гени, які кодують білки
СОРЕ15, субклонують в каркасах експресійних плазмід, які містять глутамінсинтетазу (5) (плазміди на основі рЕЕ12.4). Послідовність КДНК (ЗЕО І МО: 16), яка кодує Сполуку 1 (5ЕО ІЮ
МО:2), наведений як приклад білок Ес-СОЕ15, лігується зі збереженням рамки зчитування з кодуючою послідовністю послідовності сигнального пептиду, МЕТОТ ГГ МУМ ГІР МУМРОБЗТО (5ЕО
ІЮО МО: 3) для посилення секреції бажаного продукту в живильне середовище для культури тканин.
Експресія стимулюється промотором цитомегаловірусу (СММ). Клітини СНОКІ15ЗМ стабільно трансфікують із застосуванням електропорації та відповідної кількості рекомбінантної бо експресійної плазміди, а трансфіковані клітини підтримують у суспензійній культурі при відповідній густині клітин. Відбір трансфікованих клітин здійснюється шляхом вирощування на 25 МКМ безсироватковому середовищі, яке містить метіоніну сульфоксимін (М5Х), та інкубування при приблизно 35-37 "С з приблизно 5-7 956 СО». Білки СОЕ15 або злиті білки Ес-
СОГ15 секретуються в живильні середовища з клітин СНО. Частини білків ЗОЕ15 асоціюються одна з іншою, створюючи гомодимери, які містять два біли СОЕ15 або гомодимери злитого білка Ес-СОНЕ15, з'єднані один з іншим через між ланцюговий дисульфідний зв'язок. Гомодимери
СОБ15 або Бо-СОР15 можуть бути очищені із застосуванням афінної хроматографії з використанням сорбентів на основі іммобілізованого протеїну А з подальшим аніонним обміном та гідрофобною хроматографією.
Гомодимери білка СОЕ15 зі зібраних середовищ захоплюють на смолу Саріо Віне (СЕ).
Гомодимери білка Ес-СОРЕ15 зі зібраних середовищ захоплюють на смолу Маб 5еїесі Ргоївіп А (СЕ). Потім смолу нетривало промивають проточним буфером, таким як забуферений фосфатом фізіологічний розчин (РВ5; рН 7,4), або проточним буфером, який містить трис- буфер, для видалення неспецифічно зв'язаного матеріалу. Білок елююється зі смоли із застосуванням розчину з низьким рівнем рН, такого як 10 мМ розчин лимонної кислоти, рН 3.
Фракції, які містять білки СОЕ15, об'єднуються і можуть утримуватись при низькому рН для інактивації потенційних вірусів. РН можна нейтралізувати, додаючи основу, таку як 0,1 М трис- буфер, рН 8,0. Білок ООР15 може бути додатково очищений із застосуванням аніонообмінної хроматографії з використанням смол, таких як Рого5 ХО (І Пе Тесппоіодіе5). Білок СОЕ15 елююється з колонки АЕХ, із використанням градієнта Масі від 0 мМ до 200 мМ в 50 мМ трис- буфері, рН 8,0, 15 об'ємами колонки.
Злитий білок Ес-СОЕ15 може бути додатково очищений гідрофобною хроматографією (НІС) із застосуванням колонки для хроматографії гідрофобних взаємодій Саріо Ріепуї! ІтрКез (СЕ
Неайкйсаге)о. Колонку готують шляхом доведення завантажувального розчину до рівня приблизно 0,5 М сульфату натрію та елюювання з використанням 10 об'ємів колонки (СМ) градієнта від 0,5 М до 0 М сульфату натрію в 20 мМ розчині трис-буфера, рН 8. Після гідрофобної хроматографії білок може бути додатково очищений гель-хроматографією за розміром молекул із завантаженням концентрованого пулу Саріо РПепуї ІптрКезх на зирегдех200 (СЕ Неайсаге) з ізократичним елююванням у РВ5, рН 7,4.
Зо Очищені сполуки ООРЕ15 можуть бути пропущені через фільтр для утримання вірусів, такий як Ріапома 20М (Азапйі Казеї Медісаї) з подальшим концентруванням/діафільтруванням в 10 мМ цитрат, 150 мМ Масі, рН 7, зі здійсненням ультрафільтрації в тангенціальному потоці на регенерованій целюлозній мембрані (МіїПроге).
Розчинний людський позаклітинний домен (ЕСО) СЕКАЇ. продукували в експресійній системі на основі клітинних ліній ссавців із використанням похідних клітин СНОКІ. Мічений полігістидином СЕКАЇ ЕСО зі зібраних середовищ захоплювали із застосуванням метал- афінної хроматографії на колонках з іммобілізованим іоном нікелю (ІМАС). Потім смолу нетривало промивали проточним буфером, таким як забуферений фосфатом фізіологічний розчин (РВ5; рН 7,4), або проточним буфером, який містить трис-буфер (рН 8,0, 500 мм Масі), для видалення неспецифічно зв'язаного матеріалу. Зв'язаний НібЗ-мічений СЕКАЇ ЕСО (послідовність 5ЕО ІЮ МО: 4) елюювали із застосуванням 0-250 мМ імідазолу в РВЗ або ТКІ5 (рН 8,0, 500 мМ Масі) 10 об'ємами колонки. Ніз-мічений СЕКАЇ ЕСО може бути додатково очищений із застосуванням гель-хроматографії за розміром молекул із завантаженням концентрованого пулу ІМАС на Зирегаех200 (СЕ НеайПсаге) з ізократичним елююванням у РВ5 (рН 7,4).
Експресія антитіл ссавцями призводить до глікозилювання. Зазвичай глікозилювання відбувається на Ес-ділянці антитіла на висококонсервативному сайті М-глікозилювання. М- глікани зазвичай приєднуються до аспарагіну. На типовій константній ділянці імуноглобулінів
Ід існує лише один сайт для М- зв'язаного глікозилювання. Однак цей сайт може бути модифікований для запобігання глікозилюванню або можуть бути додані додаткові сайти для додаткових або різноманітних структур глікозилювання. Крім того, глікозилювання подеколи відбувається на інших ділянках молекул, експресованих у клітинах ссавців.
Сполуки за цим винаходом одержували таким або аналогічним чином, який може бути легко визначений фахівцем у цій галузі.
ПРИКЛАДИ
Наведені нижче не обмежувальні приклади мають ілюстративний, а не обмежувальний характер.
Приклад 1: Афінність рецепторів іп міго
Параметри зв'язування іп міто гомодимеру людського 5ОЕ15 та наведеної як приклад бо Сполуки 2 з людським рецептором СЕКАЇ визначали із застосуванням поверхневого плазмонного резонансу (ЗРК). СЕКАЇ ЕСО має три домени, збагачені Су5 (01,02 і 03).
Афінність гомодимеру людського СОР15 (де5-АЕМ ЗЕО ІЮ МО: 1; тобто СОЕ15, якому бракує
Аа, Агд та Авр від М- кінця) та Сполуки 2, гомодимеру Сполуки 1 Ес-СОР15 (послідовність зЕО
ІО МО: 2), до НІ5- міченого ОЕКАЇ ЕСО людини, (послідовність ЗЕО ІЮ МО: 4), можна визначити із застосуванням 5РЕ. Кінетика узагальнена в Таблиці 1.
Для визначення зв'язування людського СОБ15 (де5-АКМ ЗЕО ІЮО МО: 1) або Сполуки 2 з людським СЕКАЇ. ЕСО використовували засіб Віасоге 7200 для визначення кінетики зв'язування гомодимеру людського СОРЕ15 (де5-АКМ 5ЕО ІО МО: 1) та Сполуки 2 з ОЕКАГЇ. ЕСО. Визначення проводили при 25 "С. Зразки розчиняли у НВЗ-ЕР'к, рН 7,4 (СЕ Неайвсаге; 10 мМ НЕРЕ5, рн 7,4-150 мМ МасСі-3 мМ ЕОТА-0,05 95 ПАР Р20). Козяче антитіло проти кролячого СОЕ15 (Ка) іммобілізували на проточних кюветах сенсорного чипа СМ5 з використанням хімії зв'язування амінів. Зразки ЗОБЕ15 готували в концентрації 25 мкг/мл шляхом розведення в проточному буфері.
Зразки людського СЕКАЇ ЕСО готували з кінцевими концентраціями 1000 нМ, 500 нМ, 250
НМ, 125 нМ, 62,5 нМ, 31,3 нМ, 15,6 нМ, 7,8 нМ, 3,9 нМ, 2,0 нМ та 0 нМ (контроль) шляхом розведення в проточному буфері. Експеримент з поверхневим плазмонним резонансом (5РК) включає такі етапи: (1) іммобілізація зразків ЗОР15 на окремих проточних кюветах (Ес2, Есз і
Ес4), (2) введення 200 мкл людського СЗЕКАЇ ЕСО у всі проточні кювети зі швидкістю 10Омкл/хв., (3) дисоціація протягом 600 с, (4) регенерація поверхні чипів шляхом впорскування 10 мкл гліцину протягом 30 с, рН 1,5, при 20мкл/хв., та (5) врівноваження поверхні чипів шляхом впорскування протягом 30 с 10 мкл НВ5З-ЕРж- при 20 мкл/хв. Кожну концентрацію людського
СЕКАЇГ ЕСО вводили з двома повтореннями.
Дані обробляли шляхом стандартного подвійного посилання та підгонки до моделі зв'язування 1:1 із застосуванням програми Віасоге Т200 Емаїчайоп Зоймжаге для визначення швидкості асоціації (Кол, М"с"), швидкості дисоціації (Кох, С") та максимальної відповіді (Атах; резонансні одиниці (КО)). Константу дисоціації у стані рівноваги (Ко) обчислювали за співвідношенням Ко--Кок/Коп (М).
Таблиця 1
Кінетика зв'язування гомодимеру людського СОЕ15 та гомодимеру Сполуки 2 з рецептором людського СЕКАГЇ. ЕСО (01-02-03-ЕСО) при 25 76.
Людський СОРЕ15 (гомодимер двох сполук,
Сполука 2 (гомодимер двох сполук, включаючи
Результати показали, що гомодимер людського ЗОЕ15 (дві сполуки, включаючи де5-АНМ
ЗЕО ІО МО: 1) мав афінність 7,2 нМ до людського СОЕКАЇ ЕСО, а гомодимер Сполуки 2 (дві сполуки, включаючи послідовність 5ЕО ІО МО: 2) мав афінність 8,3 нМ до людського СЕКАЇ.
ЕСО.
Приклад 2: Функціональна активність іп міо
СЕКАЇ, рецептор С0ОРЕ15, є членом родини рецепторів СОМЕ, містить єдиний трансмембранний домен і не має внутрішньоклітинного сигнального домену. Члени родини рецепторів ЗОМЕ, включаючи СЕКАЇ, використовують корецептор КЕТ для передавання сигналу. Відомо, що стимулювання комплексу рецепторів СЗОМЕ/КЕТ активує мережі передавання сигналу, які включають фосфорилювання ЕКК, АКТ та 5ТАТ.
Для оцінювання активності та відносної потенції зрілих варіантів людського СООРЕ15 клітини
НЕК293 (АТСС (Американська колекція типових культур)) трансфікували векторами експресії ссавців, стимульованими СМУМ (цитомегаловірус), які містять людський СЕКАЇ (еталонна послідовність МСВІ Ме МР 997293.2) та людський КЕТ51 (еталонна послідовність МСВІ Мо
МР 066124.1), і вирощували протягом трьох тижнів у присутності генетицину та пуроміцину (Те
Тесппоодіе5) для створення пулу клітин, які стабільно експресують обидва білки. Визначення фосфорилювання ЕКК1/2 вибирали як кінцеву точку для оцінювання активації КЕТ із застосуванням аналітичного набору АІрпаг ІЗА Зигейге ОКга Ріпозрпо-ЕВКТ/2 (Режкіп ЕІтег), відповідно до інструкцій виробника, та зчитувача мікропланшетів Еп Мізіоп Микйаре! Місгоріаїте
Веадег Моавеї 2102 (Реткіп ЕІтег).
Стисло, клітини НЕК293-ПОЕКАЇ/ІКЕТ, між пасажем 10-20, висівали з розрахунку 20000 клітин на лунку на 9б-лункові планшети, сенсибілізовані полі -0О- лізином, і вирощували протягом трьох днів при 37 "С у атмосфері 595 СО2/95595 О»2. Клітини інкубували у без сироватковому середовищі протягом 4 год., після чого обробляли, як зазначено, протягом 10 хв., лізували, і заморожували до проведення аналізу. Клітинні лізати розморожували шляхом інкубування протягом 1 год. при 4 "С, перемішували на ротаційному планшетному шейкері, і переносили на білий 384-лунковий планшет. Метод АїЇрпаг! І5А "2 планшети/1 інкубація" застосовували шляхом додавання до лізатів акцепторної і донорної сумішей, які постачалися разом з аналітичним набором, та інкубування при кімнатній температурі у темряві протягом 8 год., до вимірювання сигналу АїІрпа/ ІЗА із застосуванням планшет-рідера Еп Мізіоп.
Кожний планшет з клітинами, який використовували для дослідження, вміщує нативний зрілий людський СОЕ15 як еталонний стандарт для ефективності дослідження. Дані фосфорилювання ЕККІ1/2 (рЕКК1/2) з декількох планшетів збирали в один графік шляхом перетворення необроблених сигнальних даних АїЇІрпагІЗА на осі М на максимальний відсоток відносно еталонного стандарту людського СОЕ15, за такою формулою:
УоМахіта-1 0Ох(х-тіп)(тах-тіп), де тіп-О і відображає відсутність стимуляції, тах - 100 і відображає стимуляцію, яка спостерігається при насичувальній дозі сполуки, і х - будь-яка задана обробка. ЕСз5о для кожної сполуки визначали із застосуванням сигмоїдальної кривої залежності "доза-ефект" змінного нахилу з чотири параметричною логістичною регресією у сгарпРавй Ргіхт, версія 7.00. ЕСбво, які наведені для кожної сполуки в Таблиці 2, визначали шляхом генерування середнього геометричного ЕСзо для З незалежних досліджень кожної сполуки за такою формулою:
Сеотеап-- УХі« Х2» ХЗ
Клітини НЕК293, які експресують людський СЕКАЇ та людський КЕТ51, використовували для оцінювання активності Сполуки 2. Нативний зрілий людський СОРЕ15 (послідовність зЕО 10
МО:1), як гомодимер, використовували як еталонний стандарт на кожному планшеті з клітинами.
Досліджувані вироби випробовували в чотирьох оповтореннях у трьох незалежних експериментах.
Таблиця 2
Порівняння активності Сполуки 2 відносно людського СОБЕ15 помилка середнього)
Зрілий людський СОЕ15 (гомодимер двох сполук, включаючи послідовність 5ЕО ІЮ 27,9 2,9 З
МО: 1 включаючи послідовність 5ЕО ІЮ МО: 2) " "
Дані репрезентативного експерименту виражені як середнє ж 5Е (середня квадратична помилка)
М - кількість незалежних експериментів
Приклад 3: Ефективність іп мімо в нормальних пацючих моделях
Ожиріння є поширеним супровіднім захворюванням, пов'язаним з діабетом та інсулінорезистентністю. Були повідомлення, що СЗОРЕ15 пригнічує споживання їжі, викликає втрату маси та покращує гомеостаз глюкози. Отже, сполука СООЕ15 може бути ефективною у терапії для викликання втрати маси та корисною при таких станах, як Т20, дисліпідемія, МАЗН та/або ожиріння. Сполуку 2 вводили пацюкам-самцям лінії Зргадие Юаулеу протягом 15 днів із щоденним вимірюванням маси тіла та визначенням споживання їжі.
Нормальних пацюків-самців лінії зргадне-Оаулеу (Епмідо; віком 14 тижнів) після прибуття до закладу утримували на звичайній дієті (Т02014; ТеКіайд, Мадізоп, штат Вісконсін), і використовували у подальших дослідженнях. Тварин в індивідуальному порядку розміщували в приміщенні з контрольованою температурою (247) з 12-годинним циклом чергування світла/темряви (світло о 06.00) та вільним доступом до їжі (ТО2014) та води.
Після як мінімум одного тижня акліматизації до приміщення пацюків рандомізували відповідно до маси їх тіла таким чином, щоб кожна досліджувана група тварин мала однакову масу тіла. Маса тіла тварин коливалась у межах від 332 г до 369 г.
Усі групи складалися з п'яти пацюків. Нормальним пацюкам, які одержували їжу ай рішт, кожні З дні протягом 15 днів шляхом підшкірної (З5С) ін'єкції вводили носій або Сполуку 2, розчинені у носії (РВ5), у дозі 1 мл/кг (діапазон доз 0,01-0,3 мг/кг).
Підшкірні ін'єкції виконували в День 1, 4, 7, 10 та 13. Щоденні вимірювання маси тіла та визначення споживання їжі робили протягом усього періоду дослідження. Відсоткову масу тіла обчислювали щодня від початкової маси кожної тварини таким чином:
Відсоткова маса тіла - (щоденна маса тіла/початкова маса тіла) х 100.
Усі дані виражали як середнє значення ї ЗЕМ для п'яти тварин на групу. Ефективні концентрації дози для відсоткової втрати маси та сукупного споживання їжі визначали у
СгарпРай Ргізт із застосуванням засобу для нелінійної підгонки. Статистичний аналіз проводили із застосуванням дисперсійного аналізу з повторними вимірами з подальшим застосуванням критерію Даннета для множинних порівнянь. Значущі відмінності виявляли при х-р«е0,05, -р«е0,01, и -р«е0,001, 777 -р«0,0001.
Таблиця З
Вплив обробки Сполукою 2 на відсоткову масу тіла та сукупне споживання їжі у нормальних пацюків лінії зргадие-Оамеу
Всі дані виражені як середнє їх ЗЕМ 5 тварин на групу з 14-го дня. Статистичний аналіз проводили із застосуванням дисперсійного аналізу з повторними вимірами з подальшим застосуванням критерію Даннета для множинних порівнянь. Значущі відмінності виявлені при х-р«е0,05.
Тривале лікування Сполукою 2 нормальних пацюків-самців лінії зргадое-Оаулеу призводило до статистично значущого зниження споживання їжі та статистично значущого зниження відсоткової маси тіла після завершення дослідження у порівнянні з тваринами, яких обробляли носієм, дозо залежним чином. Сукупне споживання їжі знизилося з 264,48 г до 91,22 г при найвищій випробуваній дозі, а зниження маси тіла становить від 7 95 до 26 95. Дані, схоже, свідчать про те, що Сполука 2 чинить статистично значущий дозозалежний вплив на зменшення маси тіла та споживання їжі у нормальних пацюків лінії Зргадне-Оамеу.
З метою дослідження впливу Сполуки 2 на втрату маси, метаболізм, склад тіла та печінковий стеатоз, мишам лінії С57/816 БІО протягом тривалого періоду часу вводили Сполуку 2.
Мишей лінії С57/816 0ІО (Тасопіс) віком від 24 до 25 тижнів після прибуття до закладу утримували на висококалорійній дієті (1095217; ТекКіаа, Маадізоп, штат Вісконсін), і використовували у подальших дослідженнях. Тварин в індивідуальному порядку розміщували в приміщенні з контрольованою температурою (247) з 12-годинним циклом чергування
Зо світла/темряви (світло о 22.00) та вільним доступом до їжі (Т0952177) та води. Після як мінімум двох тижнів акліматизації до приміщення мишей рандомізували відповідно до маси їх тіла таким чином, щоб кожна експериментальна група тварин мала однакову масу тіла. Маса тіла тварин коливалася у межах від 40 г до 50 г.
Усі групи складалися з п'яти мишей. Носій або Сполуку 2 (0,002 мг/кг, 0,006 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,06 мг/кг та 0,2 мг/кг) розчиняли у носії (РВ5), і шляхом підшкірної ін'єкції (10 мл/кг) вводили мишам БІО, які одержували їжу ай Іріїшт, за 30-90 хв., до початку циклу темряви кожні З дні протягом 21 дня. Підшкірні ін'єкції виконували в День 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19 та 22. Щоденні вимірювання маси тіла та визначення споживання їжі робили протягом усього періоду дослідження.
Абсолютні зміни маси тіла обчислювали шляхом віднімання маси тіла тієї самої тварини до першої ін'єкції сполуки. На 17 день тварин залишали без їжі, о 06.00 годині та о 13.00 годині збирали кров для визначення рівня глюкози в крові та інсуліну натщесерце. Рівень глюкози в крові визначали із застосуванням глюкометрів АссиСпек? (Носпйє Оіареїєз Сагеє, Іпс.;
Іпаіапароїї5, штат Індіана). Рівень інсуліну вимірювали із застосуванням ЕГІЗА (М50, КосКміПШе, штат Меріленд). Індекс інсулінорезистентності обчислювали за формулою:
НОМА ІК - рівень інсуліну в плазмі крові натщесерце (мМоОд/л) х (рівень глюкози в плазмі крові натщесерце (ммоль/л)/22,5.
На 24 день тварин умертвляли перед періодом темряви, а печінку видаляли і заморожували. Тригліцериди печінки визначали з гомогенатів печінки, зібраних при умертвінні, а рівні плазмових аналітів визначали на клінічному аналізаторі Нііаспі Моашіаг Р.
Таблиця 4
Вплив обробки Сполукою 2 на масу тіла та сукупне споживання їжі у мишей лінії СІО на 16 день
Обробка Зміна маси тіла порівняно з Сукупне споживання початковим визначенням (г) їжі (г)
Носій (10 мл/кг, підшкірним шляхом) -0,68:0,14 41,30-0,94
Сполука 2 (0,002 мг/кг) -4,58:5-0,717 33,2250,997
Сполука 2 (0,006 мг/кг) -8,64-0,417 29,2451,41х
Сполука 2 (0,02 мг/кг) -11,8250,57"7 23,00-1,867
Сполука 2 (0,06 мг/кг) -9,02-0,577 23,8620,967
Сполука 2 (0,2 мг/кг) -9,08:5-0,597 27,5251,30х
Всі дані виражені як середнє х ЗЕМ 5 тварин на групу.
Значення виражені як середнє їх ЗЕМ з п-5. "-р«е0,05 у порівнянні з групою, яка одержувала носій; одно факторний дисперсійний аналіз з подальшим застосуванням критерію Даннета для множинних порівнянь.
Таблиця 5
Вплив обробки Сполукою 2 на рівні глюкози у сироватці крові, холестерину, аланін амінотрансферази (АГ Т) та тригліцеридів печінки у мишей лінії БІО на 24 день
Глюкоза Холестерин Тригліцериди печінки
Обробка (мг/дл) (мг/дл) ЛІТ (Моді/л) (мг/г тканини)
Носій (10 мл/кг, 339,18530,58 271,80412,02 | 310,80234,92 210,10411,82 підшкірним шляхом)
Сполука 2 (0,002 мг/кг) | 317,52217,95| 220,8054,897 231,60525,39 69,88:1-18,887
Сполука 2 (0,006 мг/кг) (261,00-20,43 | 177,00-7,827 | 159,60573,327 46,56ж213,857
Сполука 2 (0,02 мг/кг) |223,38--16,02 "| 172,80518,517 | 87,00ж2413,04" 24,8218,807
Сполука 2 (0,06 мг/кг) 1245,94ж2410,107| 199,20515,347 | 114,60522,727 58,90514,457
Сполука 2 (0,2 мг/кг) 241,02-8,887 | 167,40-8,727 | 112,80--19,157 34,62510,887
Значення виражені як середнє їх ЗЕМ з п-5. "-р«е0,05 у порівнянні з групою, яка одержувала носій; однофакторний дисперсійний аналіз з подальшим застосуванням критерію Даннета.
Таблиця 6
Вплив обробки Сполукою 2 на рівні глюкози, інсуліну та НОМА-ЇІЕ у мишей лінії БІО на 17 день
Рівень глюкози у сироватці Рівень інсуліну
Обробка крові натщесерце (ммоль/л) натщесерце НОМА-ІВ (мМОд/л/мл) підшкірним шляхом
Всі дані виражені як середнє х 5ЕМ 5 тварин на групу з 17 дня.
Статистичний аналіз був проведений із застосуванням дисперсійного аналізу з повторними вимірами з подальшим застосуванням критерію Даннета для множинних порівнянь.
Значущі відмінності були виявлені при р«е0,05.
Сполука 2 дозо залежним чином зменшує масу тіла та споживання їжі у мишей-самців лінії
РІО, що вказує на те, що вона може бути застосована для терапії для зниження маси та ожиріння (Таблиця 4). Сполука 2 також знижує рівень глюкози в сироватці крові, що свідчить про те, що вона може бути застосована в терапії діабету (Таблиця 5). Крім того, Сполука 2 знижує рівень холестерину, що вказує на те, що вона може бути застосована у терапії дисліпідемії (Таблиця 5). Сполука 2 покращує стан здоров'я печінки (що демонструється зниженням рівня сироваткової АЇ Т) та знижує рівень три гліцеридів печінки, що вказує на те, що вона може бути застосована у терапії МАЗН (Таблиця 5). Тестування на рівень глюкози та інсуліну в крові натщесерце, виконане на 17 день, демонструє підвищену чутливість до інсуліну та знижений індекс інсулінорезистентності, що додатково підтримує можливість використання Сполуки 2 у терапії діабету (Таблиця 6).
Приклад 5: Стабільність різних генно-інженерних конструкцій Ес-СОЕ15
Агрегація білка у фармацевтичному продукті небажана, оскільки вона знижує загальний вихід продукції і може викликати імунну відповідь при введенні людям. Таким чином, переважним є підтримування сполуки в мономерному стані, або, в даному випадку, у вигляді ковалентно зв'язаного гомодимеру.
З метою перевірки схильності різних злитих білків ЗОЕ15 до агрегації та/або деградації, різні злиті білки Ес-СОЕ15 можуть бути експресовані в клітинах СНО ссавців. Злиті білки Ес-СЩ40Е15 можуть бути захоплені на колонці Маб Зеїесі Ргоївіп А (СЕ; Різсаїаул"ау, штат Нью-Джерсі) з використанням РВ5 як проточний буфер (рН 7,4); нетривало можуть бути промиті проточним буфером для видалення неспецифічно зв'язаного матеріалу; і можуть бути елюйовані 20 мМ оцтової кислоти і 5 мМ лимонної кислоти, рН 3. Фракції, які містять білки Ес-СОРЕ15, об'єднували, і рН нейтралізували додаванням 1/10 об'єму 1 М розчину трис-буфера, рН 8,0.
Пул, захоплений протеїном А, потім аналізували із застосуванням гель-хроматографії за розміром молекул (ЗЕС) для визначення 95 високомолекулярного агрегату (НМУМ), який вказує на ступінь агрегації, яка відбулась. Метод відокремлення 5ЕС здійснювали на колонці То5оп
Віозсіепсе ЗО0О5МУХІ,, 5 мкм, з розмірами 30 см х 0,78 см. Рухома фаза являє собою РВ5 х 1,
Зо 350 мМ розчин Масі (рн 7,4) при швидкості потоку 0,5 мл/хв. Початкові зразки низької концентрації застосовували у вигляді 10 мкл впорскувань, і піддавали контролю при довжині хвилі поглинання 214 нм. 9о різновидів низької молекулярної маси (/МУМ) вказує на хімічну стабільність або продукти розкладу сполуки низької молекулярної маси.
Таблиця 7
Порівняння фізичної та хімічної стабільності різних злитих білків Ес-С00Е15
Генно-інженерна конструкція тандемного злитого білка Ес-ЗОБ15 (два однакові Ес- фрагменти антитіла, які містять шарнірну ділянку, приєднуються один до одного кінець-в-кінець, а потім приєднуються до молекули СОЕ15, де ділянки СОЕ15 потім самостійно асоціюються з утворенням димеру), Сполука З (гомодимер з двох молекул, кожна з яких містить послідовність
ЗЕО ІО МО: 5), має 60,8 96 НММУУ у порівнянні з 4,1 96 НММУ Сполуки 2. Це говорить про те, що
Сполука 2 має кращу фізичну стабільність, з меншою агрегацією і меншим утворення імуногенних агрегатів, аніж генно-інженерна конструкція тандемного злитого білка Ес-СОЕ15.
Гетеродимерний Ес-СОР15 (два різні Ес-фрагменти антитіла, які асоціюються один з іншим пліч-о-пліч, де один Ес-фрагмент (ланцюг В, послідовність «ЕО ІЮ МО: 17) асоціюється з іншим
Ес-фрагментом, який є приєднаним до молекули СОРЕ15 (ланцюг А, послідовність зЗЕО ІЮО МО: 6) і де ділянки СЗОЕ15 потім самостійно асоціюються з утворенням гомодимеру), Сполука 4 (гомодимер з двох молекул, де кожна молекула містить гетеродимер з послідовністю ЗЕО ІЮ
МО: 6 та 5ЕО ІЮ МО: 17), має високий (49,1 Фо) вміст різновидів ГМУМ у порівнянні зі Сполукою 2, яка має лише 2,395 І ММУ, що дозволяє припустити, що Сполука 2 має кращу хімічну стабільність та знижену схильність до хімічних чи протеолітичних розщеплень. Хімічна стабільність та уникнення деградації сприяє збереженню активності сполуки протягом тривалих періодів часу. Крім того, менша деградація мінімізує ризик того, що побічні продукти деградації спричинять подальші проблеми з активністю, перешкоджаючи діючій речовині в композиції, або того, що побічні продукти деградації агрегуватимуться і спричинятимуть проблеми з імуногенністю.
Приклад 6: Стабільність подвійних мутацій Ес-фрагменту проти одиночних мутацій Ес- фрагменту
Унікальна структура Ес-фрагмента сполук, розкритих у цьому описі, з двома специфічними мутаціями, несподівано демонструє кращу стабільність та більшу розчинність у високих концентраціях, аніж генно-інженерна конструкція Ес-фрагмента лише з будь-якою однією з мутацій. Два Рез з однією мутацією створюються для руйнування асоціації СНЗ/СНЗ в Ідс4-Ес і для створення мономерної генно-інженерної конструкції Ес. Перший одиночний мутант являє собою Сполуку 7 з глутаміном, заміщеним фенілаланіном у положенні 405 у важкому ланцюзі непроцесованого людського Ідс4, яке відповідає положенню 173 в послідовності з«ЕО ІЮ МО: 2
Зо (положення 175 в послідовності БЕО ІЮ МО: 9). Другий утворений одиночний мутант являє собою Сполуку 8, Бс з глутаміновою кислотою, заміщеною тирозином у положенні 407 у важкому ланцюзі непроцесованого людського /д054, яке відповідає положенню 175 в послідовності зЗЕО ІЮ МО: 2 (положення 177 в послідовності ЗЕО ІЮ МО: 10). Утворюється також подвійний Ес- мутант, Сполука 5 (послідовність ФЕО ІЮО МО: 7), і він містить обидві мутації Ес зі
Сполук 7 і 8. Сполука 5 має таку саму послідовність, що і Сполука 2, за винятком додаткових двох амінокислот, АР, присутніх на М- кінці Ес- фрагменту у Сполуці 5. Сполукам 2, 5, 7 і 8 бракує шарнірної ділляики ЕЗКУСРРСОСРРСР (послідовність 5ЕО ІЮО МО: 8) для забезпечення утворення мономерного Ідс4 Ес.
Сполуки за цим прикладом експресували в клітинах СНО ссавців, а зібрані середовища захоплювали на колонці Маб Зеїесі Ргоївіп А (СЕ) з використанням РВЗ5 як проточний буфер (рН 7,4); нетривало можуть бути промиті проточним буфером для видалення неспецифічно зв'язаного матеріалу; і можуть бути елюйовані 20 мМ оцтової кислоти і 5 ММ лимонної кислоти, рН 3. Фракції, які містять білюи ЗОРЕ15, об'єднували, і рН нейтралізували додаванням 1/10 об'єму 1 М розчину трис-буфера, рН 8,0.
Нейтралізовані пули, захоплені протеїном А, у подальшому піддавали буферному обміну в 10 мМ цитратному розчині, рН 5,0, в віддентровому концентраторі Атісоп Ойга 0,5 мл з 10
МУУСО (смуга пропускання молекулярної маси). Далі намагалися концентрувати одиночні та подвійні мутанти Бо-ЗОЕ15 до 10 мг/мл або більше із застосуванням відцентрового концентратора Атісоп га 0,5 мл з 10 МУУСО.
Таблиця 8
Максимальна розчинність гібридів ЗОРЕ15 при рН 5,0
Максимальна
Сполука розчинність при рН Візуальні спостереження 5,0 (мг/мл)
ЗЕО ІЮ МО:9 " концентрації спостерігалось випадіння осад
ЗЕО І МО: 10 " концентрації спостерігалось випадіння осаду
Гомодимер Сполуки 5 Прозорий розчин 5ЕО ІЮ МО: 7 розорий р лише контроль
Результати показали, що одиничні мутанти Ес, гомодимери Сполуки 7 та Сполуки 8, мали знижену розчинність у порівнянні з подвійним мутантом Ес, гомодимером Сполуки 5. Гомодимер
Сполуки 7 не зміг досягти Юмг/мл унаслідок утворення осаду та втрати матеріалу. Гомодимер
Сполуки 8 демонстрував покращену розчинність у порівнянні з гомодимером Сполуки 7; однак він не в змозі досягти 10 мг/мл через втрати матеріалу в процесі концентрації. Гомодимер
Сполуки 5, з новою подвійною мутацією Ес, зберігав розчинність у 9,8 мг/мл. Лише контрольний мономерний досі Ес був розчинним до 12 мг/мл.
Приклад 7: Порівняння хімічної стабільності для гнучких або жорстких лінкерів
Для перевірки хімічної стабільності сполук СОЕ15, розкритих у цьому описі, такі сполуки можуть бути діалізовані протягом ночі при 4 "С у такі буфери: 10 мМ цитрат, рнНб (Сб), 10 мМ цитрат, РА 7 (С7), 10 мМ трис-буфер, рН 7,0 (17), 10 мМ трис-буфер, рН 8,0 (18) або 1 х РВ5, рН 7,4 (РВ5). Для оцінювання довготривалої стабільності гібридів Ес-ЗОЕ15, 1,0 мг/мл білкові розчини у відповідних буферах можуть бути збережені при 4 "С, 25 "С та 40 "С протягом 4 тижнів з визначенням 95 І МУУ із застосуванням аналітичної ЗЕС.
Метод відокремлення 5ЕС здійснювали на колонці То5оп Віобзсіепсе ЗО0О5МУУХІ, 5 мкм, з розмірами 30 см х 0,78 см. Рухома фаза являє собою РВ5, 350 мМ Масі, рн 7,4, при швидкості потоку 0,5 мл/хв. Початкові зразки низької концентрації застосовували у вигляді 10 мкл впорскувань, і контролювали при довжині хвилі поглинання 214 нм.
Зміни хімічної стабільності, визначені за 95 І МММ, оцінювали відносно зразків, взятих у час 0.
Як визначено дослідженнями, проведеними по суті так, як описано вище, відсоток приросту
ММ для сполук СОР15 підсумований у Таблиці 9.
Випробуваними сполуками є Сполука 2, гомодимер Сполуки 1 (ЗЕО ІЮ МО: 2) з жорстким лінкером с4-АРІ10-54, гомодимер Сполуки 5 (ЗБО ІЮО МО: 7) з гнучким лінкером 59 (ввовОовоовОовоовОвоосОсвОоОовО (5БО ІЮО МО: 12)) та гомодимер Сполуки 6 (ЗЕО ІЮ
МО: 11) з жорстким лінкером 545-АР10-Сс45.
Таблиця 9
Зростання 95 І МУМ для сполук СООЕ15 при 1 мг/мл, як визначено із застосуванням аналітичної ЗЕС
Цитрат, рН 7,0 або трис-| Трис-буфер, рН 8,0 або 000000ощитатенво рондо ввнт 11111111 фас і|25'Є|40 сі ас і|25су| ос | 4 | 25 у 40
Сполука 2 Лінкер: ссавасц-АР10- 0,75 0,36 3,45 015 7,09 савас
Гомодимер
Сполуки 5 Лінкер: 0,37 | 0,81 3,99 | 0,56 1,8 6,63 0,71 2,6 10,5
Таблиця 9
Зростання 95 І МУМ для сполук СООЕ15 при 1 мг/мл, як визначено із застосуванням аналітичної ЗЕС
Зростання 95 І. ММУ при 1 мг/мл після 4 тижнів зберігання при 4 "С, 25 "С та 40 "С
Цитрат, рН 7,0 або трис-| Трис-буфер, рН 8,0 або 11111111 фас і|25'Є|40 сі ас і|25су| ос | 4 | 25 у 40
Гомодимер
Сполуки 6 Лінкер:
СеСО9-АРІО- 1,65 | 0,76 2,7 1,52 12 5,76 1,83 1,52 5,65 савасо
Лінкер Г50 має більш високий 95 І МУМ після зберігання при 25 "С і 40 "С, аніж будь-який з лінкерів АР1О, що говорить про більш високу схильність до хімічної деградації злитих білків
СОЕ15, які містять гнучкі лінксери 50), аніж білка, який містить жорсткий лінкер АР1О0 (АРАРАРАРАРАРАРАРАРАР; 5ЕО ІО МО: 13). Також гомодимер Сполуки б з лінкером, який містить 545 (5050055; 5ЕО ІЮО МО: 14), має більш високий 95 І ММУ, аніж Сполука 2 з лінкером, який містить 54 (5000; ЗЕО ІЮО МО: 15), у більшості умов, що говорить про більшу хімічну стабільність Сполуки 2 з її лінксером 54-АР10-С4.
Хімічна та фізична стабільність сполук СОЮОЕ15 з жорсткими (Сполука 2 та Сполука 6) та гнучкими (Сполука 5) лінкерами можуть бути оцінені при високій концентрації 10 мг/мл. Сполуки можуть бути спочатку діалізовані О/М при 4 "С у такі буфери: (а) 10 мМ цитрат, рН 6,5; (6) 10 мМ цитрат, рН 6,5, 150 мМ Масі; та (с) 10 мМ цитрат, рН 6,5, 0,02 95 полісорбату 80. До складу згаданої композиції додавали наповнювачі, такі як 150 мМ Масі та 0,02 95 полісорбату, для перевірки їх впливу на хімічну та фізичну стабільність гібридів СОРЕ15. Далі, сполуки можуть бути концентровані до 10 мг/мл із застосуванням 10000 МУУСО, 15 мл спін-концентратора
МійПіроге. Після концентрування можуть бути визначені 95 НМММУ і 95 | ММУ із застосуванням ЗЕС з використанням концентрованого білка (1-0).
Метод відокремлення 5ЕС здійснювали на колонці То5оп Віобзсіепсе ЗО0О5МУУХІ, 5 мкм, з розмірами 30 см х 0,78 см. Рухома фаза являє собою РВ5, 350 мМ Масі, рн 7,4, при швидкості потоку 0,5 мл/хв. 10 мг/мл зразки розбавляли до 1 мг/мл в їх відповідних буферах, після чого застосовували у вигляді 10 мкл впорскувань, і контролювали при довжині хвилі поглинання 214 нм. 10 мг/мл композиції можна інкубувати протягом 4 тижнів при 4 С, 25"С та 40"С для оцінювання довготривалої стабільності в умовах стресу. 96 ІММУМ ідо НММУУ можуть бути визначені знову через 4 тижні (1-4м/) із застосуванням ЗЕС. Зміни хімічної стабільності (95 І МУ) можуть бути оцінені відносно зразків, взятих у час 0.
Таблиця 10
Хімічна стабільність, виражена як приріст у 95 ГММУУ для Сполук СООРЕ15 при 10 мг/мл
Приріст 95 І МУУ при 10 мг/мл після 4 тижнів зберігання при 4 "С, 25 "С та 407С
Цитрат, рН 6,54-150 мм Цитрат, рН 6,5--0,02 Фо
Цитрат, рН 6,5 Масі полісорбату 80 11111111 4 |25'с|40с| 4 | 25'сі| 40 | 4 | 25 | 40
Гомодимер
Сполуки 5 Лінкер: 0,52 1,03 6,39 0,25 0,66 511 0,27 1,04 62
Гомодимер
Сполуки 6 Лінкер:
СеСО8-АРІО- 0,2 2,73 0,3 2,52 0,31 2,8 савасо
Таблиця 11
Фізична стабільність, виражена як приріст у 96 НМУУ для Сполук СОЕ1Т5прп 10 мг/мл
Приріст 95 НММУ при 10 мг/мл після 4 тижнів зберігання при 4 "С, 25 С та 40"С
Цитрат, рН 6,54-4150 мм Цитрат, рН 6,502 95
Цитрат, рН 6,5 Масі полісорбату 80 11111111 рас |25'с|4а0с о ас і|о5'сі| дос 4 | 25 у ос
Гомодимер Сполуки
Лінкер: 50 0,23 | 3,04 | 0,05 0,19 7,3 0,1 0,24 313
Гомодимер Сполуки 6 Лінкер: ОБОО5- 0,1 2,98 0,33 7,18 2,85
АРІоО-сСсІ5
Як показано в Таблиці 10, гомодимер Сполуки 5 при 10 мг/мл, який містить гнучкий лінкер, показав більш високий рівень 95 І ММУМ, аніж гомодимер Сполуки б з жорстким лінкером, при 5 2576 і 40 "С, що свідчить про нижчу хімічну стабільність.
Як показано в Таблиці 11, гомодимер Сполуки 5 при 10 мг/мл, який містить гнучкий лінкер, показав більш високий рівень 96 НМУМ, аніж гомодимер Сполуки б з жорстким лінкером, що вказує на нижчу фізичну стабільність. Низька хімічна та/(або фізична стабільність може спричинити випадіння осаду та можливі проблеми з імуногенністю.
Приклад 8: Фармакокінетична поведінка сполук ЗОБ15
Фармакокінетичну поведінку Сполуки 2 перевіряли на мавпах. Плазмові концентрації сполук
СОГЕ15 визначали за методом ЕГІЗА компанії ЕїЇї Шу апа Сотрапу (Іпаіапароїї5, штат Індіана). В сендвіч-ЕГІЗА як реагент для захоплення використовували поліклональне козяче антитіло проти людського ЗОБЕ15 (КО Зузіетв5/АБ957) або моноклональне мишаче антитіло проти
СОрЕ15 людей/приматів (КО Зубіет5/МАВО57) із сенсибілізацією 1 мкг/мл або З мкг/мл. Потім сполуку СООЕ15 виявляли із застосуванням мишачого антитіла проти людського ІдД54 рес-НАР (бБошйегтп Віоїесп/9190-05), або мишачого антитіла проти людського Ід Ес-НАР (5ошнНегтп
Віоїесп/9200-05). Планшети проявляли із застосуванням тетраметилбензидинової субстратної системи (ТМВ) (ЗегаСаге/5120), і ферментативну реакцію гасили стоп-розчином ТМВ (КРІ /50- 85-04).
Самцям макак-крабоїдів вводили разову підшкірну дозу (0,3 мг/кг) Сполуки 2 в РВЗ (рН 7,4) в об'ємі 0,5 мл/кг. Кров відбирали у кожної тварини перед введенням дози та через 6 год., 24 год., 48 год., 72 год., 96 год., 168 год., 240 год., 336 год., 408 год. та 504 год. після введення дози для визначення фармакокінетичних характеристик.
Таблиця 12
Індивідуальні та середні фармакокінетичні параметри після одноразової підшкірної дози 0,3 мг/кг у самців макак-крабоїдів
Сполука (Доза)! Тварина | і» (год.) | Ттах (год.) | Стах (МКГ/МЛ) АОСочт СІУ/Е (мл/год./кг)
І І (год. х мкг/мл) ! ми
Скорочення: АШсСої - площа під кривою з часу 0 год. до нескінченності, Сі/РЕ - кліренс/біодоступність, Ттах - час до максимальної концентрації, Стах - максимальна спостережувана концентрація в плазмі, 11» - період напіввиведення.
Дані Таблиці 12 показують, що ії» у мавп становить 117 год. Це несподівано довгий ії; для мономерної молекули Ес. Крім того, фармакокінетичний профіль у мавп залишався стабільним протягом тривалого періоду часу, що говорить про те, що фармакокінетичний профіль Сполуки
Зо 2 у людини також може бути безсумнівно стабільним протягом тривалого періоду часу в терапевтичному діапазоні, щоб забезпечити стабільний рівень лікарського засобу у кров'яному руслі при дозуванні один раз на тиждень.
ПОСЛІДОВНОСТІ
Нуклеїнові та/або амінокислотні послідовності, які згадуються в цьому описі, наведені нижче до відома.
ЗЕО ІО МО: 1 - Зрілий людський СОЮОЕ15
АКМСОНСВСРОВБССВЕН ТУКА СК АБУ ГОРЕКУВУТМСТОСАСРБОБАААКМ в НАШЕТУНЕ КРОТУРАРОССУРАВУМРМУМОЄТОТО УВО ТУ ОВС АКОСНОССЇ
ЗЕО ІО МО: 2 - Штучна послідовність
ТААСОСРУУВГСЕРРЕКРЕТ ТО МІЗКТРЕУ КУ УВУЗОВОРКУ СЕУ УУКУНМАВТЕ
ВЕКБОКМОТУКУУВУ СТ УСНО ВУК ЧК КОСУ ВМКОСРОМЕКТВКАКОСОРКЕРОУ Є
ТЕРРЗОБЕ М ТЕМОУМЛОСОСУКОР УРЕ НА УВО У КТ УСОБОСОГ ЕЕ
СТУК У ОБ УКОСУ МНЕАТ НН ТОК ЗК КТАРАВАРАРАТАВАРВАРА
ВАВ КООВИСТ ОРОКССКСНТ УВА ЕВ А ОМ РЕ БУУ ТМСЮАСРБОГВА
АММНАСОКТК НЕ КРОТУВАРССУВАВУМАЕМУСЮКТОТСУЗ ОТ У ПОС АКЕСНСЇ
ЗЕО ІО МО: З - Лідерна послідовність
МЕТУ А УВО
ЗЕО ІО МО: 4 - Штучна послідовність
СПТКМСТУГВЕОСТКОВАВОСКНА Ж КУМЕВАСМОЗОРОЮРОЮМАМЯ У СМ У КВ
МЕОБКАЕСТСТОВЕУСТУККТ ОККСІКОПМУКЕОКЕКУМІ ТТ ВАНН ОВКОМУВС Я
УАЕАСУЧОВУУСМАОССА У КАСТАНОМЕСОС КСО АРЕАЛОМ АКСОЄ
АОБЕНРСООМБКСАСНАКТОАЛУММУВЕР ТС ЗУ КСОМІОЧ СЕКТ ВОЗКСУСВВУТК
КСВЕПВЕКСТ ТТ КОТ ТСВО БЕН КААКННЦТ У СОМОСТСЕ ТОБ СК ОММИ,
НККСЕКТУВПОМУКОМАКУТВНАМКНННеНИ
ЗЕО ІО МО: 5 - Штучна послідовність
ТЕКУ ЕСТРСРТАРРУАСРЯУУКЕРЕКРКОТЕ МІК ТРЕУТСУУУЮВУЗНЕВРЕУСЕМНУТУ
ПВОУВУНМАКТКРКЕСОВМЧАТТК У УВУ ТУУ НОСА МОКЕУ СКУ ТАМ
КТКССОРКЕРОУ УТ РРЗКБЕМТКМОУ КМ ТС УКОКУРЕНА УВУ ЮРЕММУКТІРЕ
МІП ВОСБЕК УВК УСКВЕ У ОСЧУВСВУМНЕАЛІНУНУ ТОК ВЕНИ
СО НН НО ЗОН НО ЕК ОЗУКСРРСРАРРУАОРВУВІ КЕР
КРКЕТЕМІБКТРЕУТСУУУВУЗНЕОРЕУ КНУ ВИ ВУНМАКТКРЕЕВОКМЯТЕВУУ
ЗУТТУУНОЗ АТ МОКЕУКСКУЗМКСІ РАРІЕКТІЗКТКЕООРЕВРОУУТІ ЕЕАКЕЕМТКМО
УЧЛТСІАУКПЕУРВІМАУЮЄХТЕМООРЕММУ КТ ТРЕМООЗОВОБЕКС УВК СТ УК ВЕК
МУКБСВУМНВАСНМНУТОКЕ Я АРОСОСВОООСАЗАВМОВНСВЕОРОВОССВСНТУВА
ЕОМ АГТТАЛ ТТ ЗРЕЕУВУ ТМСІТАСРХОТВАА ММ АСКТЕСНЕ КРУГ УРАРССУР
АБУМРМУМОКТОТОСУЗО ТУ АКОТ
ЗЕО ІО МО: 6 - Штучна послідовність
СТИ ТСРРСВАВАСООРБУВЕРРКРКОТСОМІЕКТРЕУ СУ УУПУЗНЕОРЕУКЕНУ ТУЮ
СОУБУНМАКТКРЕВЕС МЕТУ УВУ ТУСНОСВУТ МОКЕТКСКУБМКАТРАМЕКТІК
АКОСОРККЕРОУЄТ РВЕ МТ МОУ УС УКОВУ РИН АУВАКВЕМСЮРЕММ КТ
УПОР УК УрКВА КС МУЗУМНЕА МНС ТОКВ БЗРОКООСВОЄ
ООН ВОНООВОСНЧО Т НСТЧ ОРОКССКБНТУВАВЕЕЕН ХМ АБУ УТ ЯРКБУВУ
ТМСЮАСТЮВЕКААММНАСНКТЬНКЕЕРОТУРАРОССУРАБУ КРИМУ МІЮОКТОТО ЧНО
ТВЕН ЛАКИОЄСНСЇ
ЗЕО ІО МО: 7 - Штучна послідовність
АРКААССРЕУКЕРЕКЕКОТ МІВ ТРУ ТС У УВУ ОРЕУЄВНУ У УРОСУВУНКАК
ТКРКЕБВОСКА ГКУ СТІНУ МОБ КОСУ МКК РЗК КТК АКНЕ РО
УЖ РМОБЕМТКМОУ МТС КОСВГУ РМ АВАКОВ МУ КТ ТЕР БОС
ЕБВІЛУВКаВЖОВБИМУКОСВУМНІВАСНИНУТОКВІ ВСІ СОССКНОЮООССОЮОСОНЮЮСЮЮЮ
ОК НН СТО БОКС НТ УКАЗ СО УА УГУРКЕУСУТМСТСАЄСР
ЗКЕКААММНАСІЕ ТЕ НЕ КРОТУРАРОСУ РА МЕМ У ОКО ТУ ОТ У ВО АК ренс
ЗЕО ІЮ МО: 8-Ес-фрагмент
БАКУСВРОСРАСВ
ЗЕО ІО МО: 9 - Штучна послідовність
АРЕААСИРОУВКЕРЕКРКОГПОМІБКТРЕУТСУУУВУБОКОРЕУОВКУТУСУВУНМАК
ТКЕРЕЕВОВМУТУ КУ УВУСТ УСНО СЧОКЕУ КУМ РАКА ТІУКАКОСОРКЕРО
УЖТЕРЕОКЕМТКМОУ ВІ ТСТ У КС РБАУЄУВКГЕММУКТТРРУГОБОЮБЕОЇ.
АСУ ТОБОМУВБСЯУМНЕА СНУ ТОК ІА КОНЦ ОН КНООСОССКСЮ вас ОСОдцОнСе ОВС НТУ КАЗОК АПУ УТАРЕВУЮТІМОСА
СРЕОВБКААММНАСНКТЯ НЕ КВОТУРАРССУРАЗУМЕМУЦОКТОТО УК ОГО КА
КОКС
ЗЕО ІО МО: 10 - Штучна послідовність
АРЕААОСаРКУКІЕЕРКРКОТОМІБАТРЕУ ТУ У У ПУСКУ УТ УЮСУВУНКАК
ТКС КУ УВУСТ УСНО ЧЕТ ЕСКУЗМЕСП. РМК ТОК АКСОСТКЕРО
УЖТРРУОВЕМІТКМОУ МТ СТУКОТУРЧЛАУ КУМ ОСЕЕМУ КТ У СОВБОСБЕНІ,
БЕК УПВЕЗВЖОВОМУКВСЯУМИНВА ТНК УТОВА З ОСС НКИ ЮСОССОЮЮ
ННІ СР ОРОС КССКСНТУВАВ ЕН ОА ВУ УТ ЯЕВУВУТМСІСАСЕ
ОКА АММНАСНКТЯУ НВ КРІТУРАРОСУРА З УМРМУСЦОКТОТСУВОТУ АК
СНО
ЗЕО ІО МО: 11 - Штучна послідовність
АРЕАДАССОСТВУКЕВЕРКАЕСС ТТ УМА ТРВУ ТСУУУПУВОВОРЕУЄВ МАУ ТУБСУВУНКАК
ТЕРКЕСОСМВТ УВУ УВУ УСНО ЖЕКу РУЧНЕ ТУ КАКСОРКЕРО
УЖТСРРІОКЕМТЕМОУБОТССУКОИВУВЧЛА УВУ ММУ КТ ВУС БЕО
ЗНМ УЮКВК КОГО МУКОЄ БУМНЕАСНМНУТОКААЯ ЗМК ВАРАТАРАРАРАРА
РАРАГАРСООООЗОЮНСВ ОРОС ТУКА ТУ АТАКУ ТР ЕТ УТМСЮАСВ
ЗОЕКААММНАСНЕТУНЕКЕВТУРАРОСУРАВУ ЧЕМ У ОКО СУ КАТ ОВС АК
ВСеНе
ЗЕО ІО МО: 12 - Штучна послідовність се НК
ЗЕО ІО МО: 13 - Штучна послідовність
АРАРАРАРАРАРАРАРАРАВ
ЗЕО ІО МО: 14 - Штучна послідовність
ТО
ЗЕО ІО МО: 15 - Штучна послідовність с
ЗЕО ІО МО: 16 - Штучна послідовність ваекссвоснсккеассвісн сно несососяааасссваннисвсісістівіскосирарсост ве сірасине
МІВ НВВОоВІданссавованасоєсьввіесинноавсівщасвівеві весні пав сів иссазонсванноскю кЕкаеварсаєкисавсавсастисовів пив свієсісвосютьстсвесвоюниресіввасвесаннварівсаЗииє азвдктосвясвавивесіюссюиюстснасанаановювснайнооваанвнсивсоссвнцанссвси щи івсвоосї воссссавссянвавваввкаосва св ассвевісвносіввос косі кісанарри се оссансвасвісносвіссаві кЕКваздевнісевсвросввавнасвастасавнвосаєсніюостостинсісовасви осі ссвомюрвиваврсяорої аасодіввасванарови В нсвевав винесе Вс еа висі іровсавОосітясВсВсвеВавВе освлосеци екв нсве ввів авсіссавссосвоосівсюєсівевосвосвостестсонововвсвиоовсвсо веарвненинисв наст осс винисвоси ве нвсанитвевіасна сиве о тн сіриине кксявБаннВ сао твеввавИс ана вас ас ссоос пи ссіювсва ново вовосв сао осе вязісанавсстоєстистосивонавнсовавмнст ово ле тв соавсаюсівсвавоссвів і ссіпвісовов. зквооенасанне рі всиствеа ва аа ово ост всснавввн исове ве
ЗЕО ІО МО: 17 - Штучна послідовність
ДКТНТЕСРРСВТАРАТАСОРУУ КЕ РЕКРКОТ МЕТРУ ТСУУУЮУЗНЕЙВРЕУКЕМКУУ
ТО УВУНМАКТЕРЕЕВОЄУТУВУУКУТ ТУНІС МОККУКСКЕУЗМКАГРАРІЕК ТІВ
КАКСОРАЕБЕРОУУ П.РРУКЕЕМТКМОУВ СА УКОСЕУВО ЛА УВУ М ОМРЕММУКЕТРР
УГОБООБЕВ УТ УВК УСС СМУЕКСВУМНЕАСЦНМНУ ТОКАР
«110» Елі Ліллі енд Компані Й «120» СПОЛУКИ-АГОНІСТИ ФАКТОРА РОСТУ І ДИФЕРЕНЦІЮВАННЯ 15 ТА СПОСОБИ ІХ
ЗАСТОСУВАННЯ
«130» Х21678 -1405 05 16/369,096 -1415» 2019-03-29 -1505 05 62/653,759 -1515» 2018-04-06 -1605 17 «170» Раїепінп мегвіоп 3.5
-2105 1 «2125» РАТ «213» Ното зарієп5 «4005 1 шо их шк КЗ хо Мах БР пет Жанях Тодія в ху Жду їм 3» ДЩожкню бах лю СД уче лів Ако Ав обіу дронів Су РКО Бей Сіу БЖО піу Аа Сув СУ ДЕ й хх я ЗЕ ї 5 10 і15
Фо ВХ 2 2 хо ин Тк ЛО Ж Фе дк п ТУ оку» Ко щі тю ОО Ту ку, С же їеий нів Твх Уві вхо Вів Бе ее ба бер це) БУ ТЕ вла ев ТК -о 25 зо жу хе «ох ж ту їду: Су них В узи СІ і: я СКУ 3 2 кт тю сує Машу бю хе ТМ хх В 1 - гоже
Ущі Пец бек РЕЖ Ака фія Уві бів Узі ЇВБЕ Меж СУуз бе лу Ав Су 35 о а де й МО я т ок ос Олю рух Жан їх -ш-о Ою У я ТО Ж ке у пе ЖИ шою
БкКо дек пій Бе Ага іа дів баз Меї Ніж Азїв ів Ті Мув ТОЖ БЕХ й т ява
Зо 5 БИ пошу Т1х «хх леж о я Е руси люк т-жооу жк У Ж РА Жах Тк хіх тю. тїщ Ки їеви Ніз Ач ел був Бр вою ТЕ Уві хо Ада Ко Ста СУ Уві Ко в ср ср не 5О зв та що мл тек Тр у Жук А их» ЧНІ Зоошкик ши тою стук че Можу СтУх яті Жжох аів чежЖ ТУуК АБИ хе Меб Уві ей бів сСат БУ ТВЕиЕ АБО ЖЕ Са УВУ
У и з
Ким З оизач а же чу. ж ТМ - ки Ту ке Може Ток МО ла Жожу У с у» сх ЩЕ ох й дк ТЕО тк іш сі" ЛВ тує Аве» АБО бе) Бей вів СУБ аз о Сбув Мів Се Ті з ша чо Зо 190 АМКУ ща -21052 «2115 351 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «40052 ех я В а щира у ит схо де кл Кр то пуху Ж Ж Ж да ди як
Ззізп дів Віа бі Бу КЕОо сеї Уві пе БемМм спе схо Ко Був Ко ув 4 с З ї 5 ї З 18 ї5 дошк Пс, о Зап СЛ ау бив В уки Пі же Ж уя її хни иа жим ХК кс кл
Авшж ОТИХ Темл Мас Бі бек хз Таж о бко Фо УвУ Тв Су Уві Уа) Мах ї-5вУ -ккх ж и в и огстю ж хною з Ля жому Жди до чию З КЕ. оч ЖЕ жд Таж Зо ух ав оУшІ зе ош їй Бач дво БЖО Сл уд, ій бпе ша ТЕ ш УК У АЩЕ п як Кк «5 15 пу 5 "7 «4 З ху УФ Зою хи Ох ее ХЕ а, ї ххсх ТК ж хх Тєх г 7 14 КТ КЬ с січ Уаді біс Уві Мів дав дів Був ТВ був Ехо Ахеа Біб сів бБію РИєе що А Кі ве 5 Би
Ту ХУ ще Є ча Му мує В у хи их 1 их с по шен лю ну ВІ ко Ж од
Аяп Бех ТпЕ ТУК йха Уві аз бех чЗві без жло Уві бе Ніз БМ Аве р. жу пу її по 15 75 чо я Жах Тоня тю Може п х бух Та УЗ кх Жук МА ім ж у божу Зх З оаерч їх іїшжн Авп о сіу БУВ сім ТУЮ ПУ СУш Був Уаї Бек дви Сея Бі бе й ЗО З их Ся и хх їх пу т Хе Ток сь жахи (Ту них Щури хо ех Беж ді са Се ЩбпжЖ бі бек сш Аза Був сіу БІВ СК АК я вк ятух ху ї0о Мо зо її 34 0 ША ух р Ж ваухю пт АЖ Фхасяко Жуему Мова Ка ит. Карі б вне Ж Ух ща ЕКюЮ сао МЕ їх о бей РЕс бо бек бів Біб шій Меї ТЕ 5 а як я сук чую ща й Бо пошу КЛ 2. ит Тов сах Жука Жонхіа ЖЕ Жах хх Жах см Шен дЖекю Ту дУмх
Ав ошув Уві Бех Бей жЖпх Сув Бей Уяь був зе Ре о тТУЮК БЕО ЗК Ав я оре ре я я
І 155 34 таку Ві 2 ер тре гл току уе сухі Ж ках фік баз ак ту; бек тод їі Віза чаї біо Тко бів сек Адт осі ж ме БД їй вва Ав тую БУ зак тк ие чЕЩ
А 150 З Я
НУ т хе Кл оухх: Те шк щ бохо ук КИ схою жк Кк КИюх Ух 8 пох су
ТІ ТпПЖ схо РІЗ УВІ мем вБ5росех вв ові ОК Ре ша вел Сі ов рт нт трек ї55 17 ТВ
Же Там аз А б у де Ме с ут люк: шт б ху М каув чу Хі ев
БЕ а Тк ові йо Був се Ах ч Же За зл Сееу ша зві спе цех зей т чав
ФМ 3. му 5 Б та м бе Жбуме їі ую ця що в, Ат Товуїту фо озух М шо сараю сі о Гу бух -Ув МК ВХ МеК нів 'Єзи іа цев нів щи ніш бух ТИЖ сп МУ ОК «чек суругх ак
МО ш «Ми он лх Сік СТ дат Фа ния ги лю Вл ек КУ ах Р Її - ОХ ах, Ок Хот, МО Фу их 2 ошЕ МмшО зе мий ша ша ЗКУ ЗМУ ї У ла Кто ага кос аа Со сл т скл ха ЮК ях А кове
Мо ее МР о тн М що юну Ж ружа З що Жуки ВО тен ВТ що фунех дя ті хх діа гке ді а КкКО мій росі КО Ах 3 ав 'яЖжЕКОа мив ІЗ ВАВ КС У ца У
ОКА, СХ реве А дк Жисми уй Ак чи м
Тл зх ж ху ОВ о ІА сх бах рю ик ие і Каже й па ик їх о ух Я ше г її Ко р хх Я що її хх Се У ж: ех щі хе Є ї о КІ Ж Ж ша Ж юю їх тА нів у в'ЕжЖОе Бе ці У КЕ ФК У ТЕ З -Уув Оу а зак те грек, ки ем ОН
Яд бу її схо ДОБ Має Тата 1: Дохту Те Фі тик Міо бю фа щі
Нів Тв Уві Аха Авіа Бех бе ЗіЗ; во без бі Тр олів йво кр Уві лет пак хатки «І кВ КОНКУ;
Ж ХХ ком Хм я є т Ж тож жа поує да тк ши МО ухжхо шок їи Щеж без дуб ів чаї сій Уві ТВ Мет Сбечз її осо вів У БО тал, С зак я М «ЖИ
Фквух Й ко Урни х уче я За окт Маю Я шо пл ю И кх ох Пан лу Ж одх ех бла Бпе АхО Аїз вів вав Мес й3зз Аз Бан бів БУ Тв зек це» са хх сг хви ех о о 305
Мі ше дих изд «хек ач чі я Тіт, ЗУ уче ко чл я бе Ж в
Ніз Ах Ме) був БкоО Ав 6 'тпж Уві КО зів БЮ Сук о СУув ожщі БЖОо ВІВ
ЗИ 3 о я«Вожй «жу о
Жде Мк учи дух юю де жи оса ж аж М я тка чую ех ПЗ кт Сх ех
Шек тую Аза Рхш Меб бі Пес с1іе бів Був ТЕ ав Ель сьУ УВА ОвЕ «ув пуху ик сухий яз Б 33
Том р жу Ше ще Лак Що Вже ви ж з тост тк - Ж богу. (ху їх її ТхІхУ жу їец бій Тахо ТУЮ АБ од о сви СПеб Діз був дар осСув пів Сув 11 га ик якіх
КЕ за У Ус -2105 З «2115 20 «2125 РВТ
«4005 З жав спід Же ую То Б ЯЗ нії будую р фо Ж Фо суч Я ВАО жу
Мек сій Твх аз ТЕ без Бей ів Тер оУзі Ббев о без евоте воУщО жа 4 Кк щи я і 5 19 15 жк Кп В и у біт бек Тк сє1уУ о «21054 «2115» 325 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005» 4 г о Трах ля У хм Кб УВУ у кум ому Зоучуж КМТ Р дю тя Кк ЗМ одун Дозку М кя Ко шт Зх АЙ а по У в'юнВЕ У У осн му що ІБ У ОН Б У ще яна 7 В от З ії 3 ке з дж о ху тк ох ї 5 Дів бек Дж щі Має й ща Щі що Зк Мед й ошхух в зу ув дув Вів А шва Уща СВК сам ваг ів СВ аа ЛАВ о ж ЗО стямср. о ТМ ж ом Ех Тк 0 КХ кх хм ко дію Ту чи М хх тех екю ті З шк
Є ТК Бл г т вв ЕХО СУБ »УшШ МЕС вхо аапоЗжК -еЕ Дух Су вт сеї й пт
Беж САН НУ
ЖЖ т. жо МО ую стан ок 1. ті ки ня ув та Ка Ж ок а фа їж ЩщаеК Бі ЗІЗ ТУЄ і Уді січ Оеє дв біз бій бе У БІ СУ
Ж йхатг Фу Во босу Ж их Жуля еку Урі 52 хх семи Же СК духа М у ток бе) Сув жЖл»х Во дво о Бпе їх був ТВ Узі АБ о Був ім о бем Бі БУВ ке та ЕЕ, І
Фа ЕН зх ММ ся» му її дою фл бю щу Ж ЩА їжа Уж бе Тра Ер їв пе
Мув Сув їле ау. ж меж А ав Уші ве Ба аЕш ву КИ МУ КЕ и ца В
КК АХ АХ
Жогхмх жом га о Жук ор шк ТУ ех Ул оо М в Шуби Хо ож Ми тб им КО хх дал оБМмео ТИС ТВ ве бек Мі Ні бе Бе був Сам Мебє ТЖКко Бех був й ж - х т х т - Р ке «я
МО 5 А я т я я ЯКЕ ту хі Кр ЕХкхах тр КЗ ша Ж ж ук жи Модем с ке М щит їм пі УВІ Аїв оз Ав Су УВО Сі Лв о Уві Уа Су Ав оАла с т дууа СА о да ух За ває Ж ді т шк ВЗ хи бамаю У су жу Кк Хі фуяхим би Тех у ей жа ши УК ве зуш вх СУуФ Пеж вл Ах Зам ВОМ вуз Є Де да ю нення Ше ях
КО 335 148 вар БУ біт бо діб дів дій Із Дке ВЕ Шню Тек йіз Яви їі ко іа Буш пат Су сам дів з ів Аз ве бле тТУКЖ Са ля Щі ко за Бод хх з ше Зоя їх ї3О БО 155
БШБиє йчт їі йід ів Ме Бе) Ві Ваш обою йо бесх Від 33 Сезк о дшу пе Акоп о Тіє Вів Сів Меж Бей Аза ге Сув йзр Су Віа о Зів ЗеЕ Ащо о, ау тр
МО АХ М
СеИе Ком я их МО кн М ще со Ж жа Та Ж оз віха ГУ дмоще Тож ТУ ус шк Ж то
ЕК Хот хх Ок ї Кк А УК ЕКМ ОО хі БІК. Мох ЗЕ Я же ХЕ ХО
А КЕ ЖК МАХ АЮ Ха у 5 ща В ШИ БА сис МКУ ш Ех КУ щу зе кову й т 180 У їз щи хз Жак ху Фулюитю 00 Ждня Пемими нм де пд о я у у лту КС ча Фе букс зві вшАв Ме УА бхОа ЕКО Є ВХ С У ве зе ча за вищ ше Су «оку ш сут сут
МО КН «ККУ
КОЖ ую уж що я Чо ошжуию моди т - боже ки Уго Є дек СТУК, Ем я Ка ечи ФМ жи ху : їх до гоєхучо ої хх їдиш Ск вк км. 5 я 2 ох Хор Кожух ТЕС ух дізі МЛ - . НІ зі вп овшюо солі ес; дув КО АхОо Нв оїТУЄ кб жбпх бе соб ей Ух хе КЕ, сЕлю гу т І Ой я хо ев Уж о Жиож 3 я але Тло дк я що їЗ153 Ву ря й га Мі ж ТЕ щобАРТ А УЮ Ї КОЛЕ УЖ Мф КА Я ЛЮ ех ОВК СОУ АЖ з-ту пах ту ЗА
В о ЖІ 4 т г тут г М . тео сь - о сага п - пух. я лі м м ех Кая "А с КУ т їх
Пес бу іл Ше отТоую ТЗ е бат Тодхт бух бари Я чан суха В зла Демі бус
Бек їх пев Бек Був Біб АБО Бей ТВх Су: Бех бі Зех бше дю Сув я т зве я я и ди ж я шо л- Уккухю Ж і я Хом Коні ож уко ті ; Фа й «вит ку
Ток і щ ох - у ї их хо отож вм Ту Кох її Тож КМ ЖЖ скл У у ж ехУсх
ШтУв пів вів БУК їзш й св бе су ТВ УВО м Бій Уві іт Є У яву я я ячтрик
ВИ юр ТЕ
МУ я КЕ ке М еру тк де бр ею т ду АБ ю Лю ху т хз Ж сну т хх су Жага Ж в п еВ ВЕК Іл ще жБЖ біт бек п.м баб леж ЗВО Сую Був їі спе стик, ел "Ух
ОТ ми ХРТЕ Й тру Я шо ЯНВ тая Мі йно Тлую бро гуущо їду одіж ї3Уеях бра Торт ек пів ів МОЄ Сей Бі Ах щч ша се у ЕК ОХ пох ЖК ЕК їМпЖх бе БЕК сут чаш а
ЗЕ З Б
Дах У току хх ам 5 сх Жоджхя о бю ЗИ ку Кониж о Т ктю ВА Аз бах Ж жу Ж ю два Уві був бі Мес вів Бей Тук ТВвЕ ЗкЗ Су Нівз пів Ай був НІВ па г т тт ща СЯ «АЙ ей аз Ма шо Між ів МА шЬАУАХ ОО АМлЛОХУ ТКА КБАОХМ Ух ХХ лк
Ка к Х «-2105 5 «2115 616 «2125» РАТ «220» «4005 5
Кт т ом Ж ХХ м ж «бах ин Я фу хг Між Ба Ти поедх хуеи У Ка юх и Ле хлї я у У хх же жу Ж ААУ У в шов ЕК АМ ха оКсоОо щі, хх ях А КЕ з ту її І
КЯ хЙ я Я лю я пет юю Ж ож пухкої Те зок Ух Жфачух бан сода Ж Дж МУМмоух С та віз бБіУу Руб беж Уві Бе Гем Ре Бк Рез Бу Бо бу АЮ бо бе хута її г х хх і ї У хи ОХ кяЯихів ОСЖ Он Є оує Дрю іо ни КТ ЖЖ ж рем фах. Ху її Хулуї дамух ХК бук
Мет іл ек йо ах шо їзіЗз ща б Ста зу жа хо еВ Ущо се Е ска пі лк «ХХ «хі тр.
Я зх за ж Булах ЇХ ж ХК фл жу ТУЮ Мах ху Пк бич що см СМ ху ХХ, хх ША БЕ ЕЖО м що ет ше БМ шу УХ ЩА ЗК КАМ ЖК сю щлЕ щи ха Між жо В Жак як жук фев уч Віа ім пл ж ви дея бах вує чаА Ммиш ШЕ ла БУВ МЕ зу КО ВЖЕ АК БКЦ ке шт ММ ОХ ЖЕНЕ кох св тк оч п ВЕ З щи функ Джек ау ях лакто ЖЖ вух пл же ду ле а що КУ. Пе бух нив щи спе о Аха Уві Чаї БЩех Уві бе ТИХ Узі Уві Кі: Сів) де МОЖ КИМ АХ
По а ща як то нт її ож, таж Ж ож КАТ о шт І Зодуте Же у т їх х чий з Пухах б хи баку ох т ЖЕ ак - їди Таві Бкух ід І
Ах у в отв УК У еУш ОУв щаМ сшК в ї. У А МН ШТ я : В. Х З З З Я ох ку щоку очи 1-й ШЕ ЯНеЯ НУ ї ше «КИ й ОО -ї ам У ту я пи - УТУ У пе ди Са за - т пт
У - ОВО е Тофах их ок Ура Ха 14 2 ко аю Тим КИ Мк їі сів Мк АК АКОКУККО ОМ КХ ОВ КК о НУ ее МАХ ЖК ТАМ МАК КОХ Ії "че З огукх Зх їх я Но ке Мк (дики ух АТ Ук сок жо ту Уч 2 ек хо о я я що Мод мошки
БИ бів вро т омі3 3 Шу дк их жу 1111 13 Мідур Тк ща ем Крім ді ча УК БЕЖ ев Ехо КО зви АТХ і ЗАЛІ ОЦ т Км Бум шо шаТ хВ я ре : - п те з тк зок
Іо СЯ 1 ре - - ак - ве тм т ша ше т ох фесянко Ж зе жо з и Ку рюх хек У ої МУ їі МЕ Ай Оті Іжа М 11 ІТ дО ІК чек ша Вп Су мМ ЩА вуУБ А Уу Де УЖ КО ЗшЕ МЕ АЛ Мпа щу й дж я ех т 3х о ту хх Кі АХ хх ж М соч ж ко
Тр ол уки КТ жя икух Мшжжі 7 ж Ж маних уч Важ боту Жююи Фокс Му Ком
МОХ вШомАМм ОМ АК ЗА КЗ оБкОа бла де дат т я Ж БЖ ШК КО з жо прту д вух х ІК, ТЕХ у
КУ Кт 1755
Ж жу Мі щи ях ро ее То лах се «ух у МУ жк Я кох Сх з ж Тож ЧУВ ою. жу сх ТУ вже ТУ У Маму ЩО ху Уха УЖ з їх ж сих ох Тк :
КО Ме Тер д що «ЕК МЮУ ЕК Ж а ЕП ба 1 ЖК ех їх В Ми лм Е іно 155 За
ЖЖ ока «зе ХО шу лих кх РЕ с у сон Ко - А чи: зу по Ж ди хм С. - ж т
Р Хкїкх Тех Ух Доти хек СМ ж хх Дом Тл УЗИ Кох ; тк Жах жк ЗАМ Му ХА ох КК сш мМ КАХ у льш УА ОК Ве шк с ях мк ОКА тщк лат тег
АОЖМО ях я ХУ и їх ач ол ск. с ХА з Ка А У те гот их т : ро У Кк п
Яд ле 2155 Ух тІдм БА у ж Оу джу Ку ж ї з Кіш СТ ЕхУуХ Миру лохм
Мас ків Бі Азівн бе Бі АБЕМ Вів отТУЮ ТНИХ САУ їх У хи їжа ше М Це склоих у кю ши М я. я М се - таня їх тою тю ЕМ ех Хо ил М дк ик ге ках ду ТМ я міт з у яких ї і ї Ох їм : 7 1 хх ї 1 г ою М ж пк и тк хї - її ; ХВ ї- Її Я 1: ло ЕЕ ск КЖш ЗАМ ау Ам ААУ Б АМ ХВЮ шАШ жАУ АХ А ОКЖЖ У Я М ЗА У ху ях ж сг тут сх Аг ших З о З о ке їх код у Кі х я ціх ко ех ох хо сем І шви т якшо жу у
ТТ чх Ки Оу аг Її їЕ ее КЕ ХХ гі у ра вх х 55: М і в КшСЮ їм БЕХ ЗКУ аю ААУ ша ВЕ КУ зАУ шоу зу зшвЕ мБауУ су му му у як їх т шк й ЗК КК «от «ЗМ «о
Ск Греки 215» їх її І зво Жду їх, ік ух» Кі х» СЕ (315 бе т Му дк аж ААУ МУ ї У АЖ СЕК ЗАМ ша а КА У ОХ АВ м п-ш ОВ кю ОшЕ
Я . 4 З З Я З і З ль тк тут «ЇМ «х К ж тбаї Він був Ве Вкро бе Бро діа Без» Бк) ді бів Щі Бр бер ді ч-оа ша СУБ шо КО ую кул дів Бо РКО УЗі дів я КЕ ше У в зал зах
МІВ и ку іє їде бе бу фе Ток бр Тож Де Тве Тв Мев Тіб5 деу дея ТвЕ
Бе о бжех Впбвж о бтз Кт був ВЕ гУує ДЗ ТБЕ Б Меб біс бе дич ТИХ ак зе Зла я хо А Я су 73 дк р їх ху У ха докум їгш і шШеюю щу ЕР йду фу Їх же цім Ущі тТвЕ о о У о Уща вА УА ВИ Уві Беж Нів Сів да БЕ с АК зт с ух та туз ех
ОО АК БА а
Мф ТЕ т я т ше Що Я ум ок че и - панк хх. т ТМ я и жд Холм, ом жим хх ЩО т Тука ТУекж люк хх кое Кі Тон у Мох ГУК 1 А ОжКдХ а м БЕ КК УК У Аа о-аУ ха Се ва мМплАшЖ мил овІАа Оу сут и хх чу их іх я
АХ го чай - хх ях -2 се
К-т Я - . у я тел де ка х. фон т же о. «БАЗ жжщо У
Фе їх Шу Й І Кі: т їх ІЗ 2 х т КАТ й ку о куду що тї Хі щі ух Хе хх Я шо Кут АЖ їм с зало кгпЕ дай зе п лока ва Ма ЗХ рок ак сто
Бе Я Я че т те шк жя фе кі ко тихо - 4 - « ях ще Фі т тома пліч аю Хтщ туї Х що тт ж беж дя хі и о Жокко ЖУЛЯ ах раю ох чаї ей СВ Уві ві Мід піз Аве СТЕ Бооем вага Її у ву вам УЮ ПЦуд
Ек кут ЖК «Б ли ЛЮШО я с зве ож. т я хх ше - пи их хв. зво пт меч чо Жкжчсяв, їв ше УЖ, -о о і же са їхав біс М Маму Дал 7 чи 3 хо боці ТХат й що Бук Її пе 15 хх г Ї Її кх шу шнек жМе М ак му мАу ша БЕ ЛАК кю Яе зів Був ТлЕ Те сркт ві суч су аз 35 530 сх ск т вх ОБУ У уч фо ДИ ж У м жди точи меш пою я у КАВООк мо УЖ т с тх ду Ту пу то іх МК м КИ уех хе Ех 113 Дух 1 : їі: Пе тику ії КУ
МЕ у В Ооглпо Бу шо Аж АЮ ЖЕО ЛАКЧч АЙ ОКУ с паї Ж АК Ме ОККО зак зо зи5 Аг «ЮО ше ШО жу
Ту Фу ори ЕЕ Т34 іх Ма р Я хі ух М но їі аю Ж ххх б кн тюки То орхя й 1ха - Е а ї ж ї ИН. ї ТЕ а їх т з КЕ Я ж дм га ЯНВ
Ехо сшЖш АК За шо Мм ВшК ЛК Буш ямі БА З Зах а ак У ве
ТК, ща жк
Еш З і З я шт кю тм ек х Ток й що Тк зо шк, т ОА Я їж з. -
Ех тю ТИ ху чу бере їухх ск ат та й а ях ти т Жилуюо Ксух чаї ум маму хін: УК вКш щех ва м Але дав ВХ Ам ЗК ОМ шк АВ 4 дл 38
Зх ко чаю
У ши ж - - из; Щоки яки Ух У - тех ок У ч- « мож -х КУ туф їла фах У Р.уУ; ох й Міка тк ТРК їн Зуб Ма То ше бат м-аУ Сопко бій бео деп оТУХ Буш ТаЕ ТВ вхо брхо МеЄ беви АБросех я ль й КУ дак
Оу БА аз як -к ж км. л т жу - «у дя вхо -х -ко шк що ба їі ж Ха ту І ду Тоді) Сп К Фан Ж Те рф гу ку Ток Су Тож
Аве ща ек шлшж кг ем УК ЗК о шШУш Ой ЖЕ о УЗЕ о ОмУБ ошІ ХО а жи тХ як жк ам 455 ФУ
ТЕХ дих уч жу як ит Я р. т їх мо шк Її" А т г ха --х т. чо що базу Кт ех з Мк т ше пу у Жтазт у З Мік Щі хх - ВЗ сті
КжЖю о шіт ЗІ баУу аа УВІ КБлв о Бек СОУ о У Ії Мет нНтід сін омЛій бе о дв зх, кам
ОХ ЕІ 5 СА
Ух С «14 стику На Иь схо х їх кот пт Шк дя ше мет Кг 4-х шт бі шо спав З ко г т7хх пе Жов Бас о бум аю у ет КЗ ко ТЛ, цш ЕТ пів УК ПК а БУВ зх Вей о мМ зе ко БУ зАШ АХ а су й х
Не ЗУ 135 я ду й я дю и і уи ух Вл т по х шок пої с між Є лк Маю 14 її я 3 і п В ния й Тк я Сіл чу Ух маеу Ззшш М ЗАМ БУ зу дАщ шк Мій ДКЗ вл о Сіу вав онук о сСуво КК тот ке по, зо ЗВ З оку ат тю Ж ря ої Ж же ки лах п же Іл «пі хи Жоояєух ОТ Сх жосх
ТЯ сю жу жу, То Ктжж її ка ТЕ т з хх Пре х МюТк щ о ча Уу К.І їжи пі Ро біт Ах См є УвоАкщч ле нав ВЕК УФ МАХ вла ка еВ подоте коту шо му - БІ ОК
Я 1 во «З ей Кс
КО ху бу кшем Ж км її і я бух ВО су кума ТИ чех її Жак їм у Ху Можу БТ У УЮ Б у
А ЕІ Я НК м АУД А БОБ У За А КЕ Е о ТА мА А ЗАВ 53 вв і й Тех А й ев жа З ку А су баку я бак Ж му их Що ся М що Ж иуу чаї тр Ме Є чо сі Вів СУ ко меж за шле ли дів Ві ЛЕВ
З5О за НУ
Миті Я ла чо М нм я Шоу Її ві Я кю футмй Ж дя Тіз діюкух Дж сб
Ме нНіз вів св хі був ТВХУ Бех Бей Нів ЛУ їз БУ ККо АЮ тах
Бо що ТК
ЗКУ жо З
ЯКЩО зач я їх тв ж Ж Жкучех С у лока Мюкух хуя Жзяки жа Кт ох хх ї ВІ ЦІ песен ї їж и шх хх сх 12 А ду о несе ЗЕ ее 2 ча Еш в ЕКО У шоу ЮК кХ В ее ї У Ж ЯН КК М Ма ОО покх шко шо що за о жи її їжи ТИМ аю ач Й Ж о ху бака т яхай М юс Ск аех Мом Їм Тому
АЖ АЖ У Твх дв ОО м 15 Уві цех ше А За ше в ле ее а кт шт В 938 БО ТЗ ак, о жк т а . т. ях КЕ ош м й ле
Голі Х на Кожух Том тік лом ко т 2 ви Азбв овУв дар су іш Сея ів щк до
ОЗ 2 У 5 ї М КИ «21056 «2115 361 5 «2125» РАТ «220» «400» 6
: ке для В те що Хол тк ур»
З ФТехе М у їх ях ку Ух Тех їтякш Шут : пух сек ше пк су
Берозув тах Кі Та! Су ро ро Су КЕхо Віа РКО Аз спец М ку
Я в ТО а -х м У
Я г Ж хх Лежкух боюхдх Зедовч Мр То вузі Жак ТЯ ку зно шк Уві Бібе о їєм3і ва Бе Бус Бей о БкОо бле дат ТЛЬуУ Тдмі ВУ Ті
Тпго хек ві спе ем бле ржОо гео М У КК му І АТХ З у ; де зи о и Зо ха жеслм ; тк птн ор » пущі чх МАО аеуум ЖЖ жЖикує Б що в
Сх уч аю ен их жу бра тк ух з т ахух Зк ке Я чес йхч бле КО Біб пі дп Суд УІ Уві Уві др Уві ек ів уц
Те до жк 4 ах
Фі ; зу ху те ЖЖ Жду БЖ дк КАХ ЯТЬ я ЖЕ Ша
Моз бач 5 рі Тир Бі б жу бок вд Зщгту гяї хх Мащаї чи и шлх
ЕМ КЖЄ 53 УВА У ке дип їм УЖ УВА й біт жва сх 4
І т КК вх Бон їх ме я жи ; ко : ВІ нт тех Язхежж йав бамю ю ххю Докох доку дл те фври бою Шереу Доу (74 бух З кю ат ще те Ток Аж
ЕЕ КВ А ЇВ в У ЖК лажХ м М з КК ОВ ХА МАХ у о 7 І пу ж тах хо ко -Е НВ я їж го о
БУ г о ; : ч т та п Ух у бука МШачуу то Дошку гак Тк
Уві Уві Бвт Уво бе; ТВх Уві ем нев Фів А про зем зшт сь шу ув У ви ЕЕ Уві ши ах Ух Те МО ТьАЖ ЗАВ лю: Ко ом « ве; У о сл речео
ЛУ Зо М щи Ко - - тов не три Ж що Тулею тте . й шо к х Є пзля 0 БМкрахж их лк Зх гу Тл
СЗки ТуУух дув Св Був Уві Бех Ап о БУВ Аза їм Бко Лів ко Ті 10 м АХ мУш Оу зу ща М А В Ах ше КК АХ : з і
То З мо
КУ Ка -. ті рот ж як, труси Ж сао сах - тет -- гео, У ложки Я жк ЕВ хе пет» вк щі кт її ді ЕЕ вп тів оозажЖ Пов Аа ша А зів км але ЗА ККО ЗАВ УМА У; їх У в'пЕ а ех хх УВО мух ААУ ї4 ї Х. з т с чо хм зх ех 115 Її ш М ой
МА п . зі : УЖ -к Му т ню ку Шик пу т. пее шк му жу 015 сТу15; Ме пу ІК щу кА І Ом Е А КЕ МАЯ п пи рел КЕ о Ес ши АХ вк ОМ А БМ ТМ їх ж ша се м ОО Тдим о ОО соя я ух ій Тх
СНІ о не ; - нка мх А ки щи Фе Ж Воду шт ОЇ ТЕ у їх 7 ЗТ Киї щи ЗК бюро Круз бдУєю дежу шт АЛ щі щі ти тЧіжшух хі є ї 11 З: Туш гу Мо Те Ху МІЖ Х ще кох їв щі 54 ЕЕ жо Су ем Уві бу пі Ве ТУЮ Ко Бах дя офі ВІВ у Е 7 7 о з ж щ то зах ха ІЗ Ко
Коли ЯМ
К -- сті хх Тех т -х Б ле - - сн Жах жу заду Тохуо Ме у уч ФУ их хх З м ях. У Я мех САН З Ух т ії -е- ух ит їх і 2 т мі вом т х Кей М АКА Х 5. з А Ки. Ах ою МО ж
СеЄкм о ж АБИ БАУ Бай ОЖО Ба аа ОАЕ ЗУЄ СУ у : 7 ок о их з
МО го Не 5 А : шої А т 5 уж Тавшо Темі Фр ба дез
У - Фон Ж слух по ях бе ех Ех Там чу ср зм БУ гри щі. КЕ їни дк Ю явЕ АЮ З ї У сеї пе кКцпе Сем ЗУуК сшХ ОБЖ дахах в ХЬ ХА Кк ве я і щи Є, Б
ІЩИ 185 М
КО МХ лк, - - дк Ч ж Б ук ху до шо Фет жи Дима ЖЖ сх у о ке То жк ТІ зх КЗ я: 7 жу ль хх г Піко бак б Ех хм мі М
Бе век Ако Тов бій Біб бі йавз Уві бе ес Су цес Уві Мес ніг т кої сх их се
З ЗТ КБ іа кі й м АК труу що тії (4 ще вм БА шо спін бою ВУ бек ща буті их То гузу Жим бак аа ваш шви опо ці воТУш тп ів Уж С щем ше КО у «зх Кк и ту хо КІ ТК «М шо ск М о ко ях є; кхй. вті, н мі се мі То ся ХМ кож Кг их м
Я жу З ожжию 1 су 2 з сл ю ЖИ з Єамує М Кх Так ка с їх ке тк Ск вх М і шо му ААУ У шк ЗУ ОК ААУ ваАУ іш зі ЗВ ба ау мам ау
УК лют ск за шкода аку ху У « о їх А -х ях ща т ОК. хо у тт ши до а як . ча ТО. хе Я дл те Ки ТЕ ї щи 10 сіни КІ и ЖК жк їх цк Кік ях У. ТК у ни хх
КА МУ ї У шу ше м А І мА КУ Я. М маш ДІ лем КК ТК У - и УК туш
АІС их КАХ я
Ти зи пі ка; пі ду Сую Сов Дт їбши Нів Тве ві дра Дія бах го ем обі БЕЗ БІ ВАХ щоешш Бук щі мшш Мам ж хв ЗК ль ме ти ух дя пкеж ж КЕ ЕЕ ке же кит жк ж их ля хо ч г ит т 5 Он ож ун п я «7 х ж и ст - їх тк. ази чт х
Таз ії щу Талі Ще так й сушу: перу 3251 Ж апр; ую ку уже тая 3 оедошат я Мом АКА У ї Мк ЯМ и с Іо кА ОХ ЗА вв Бе КО ВК ри ВХ ут уж сут
КЕ я У
Моб я УМ ЕЕ тл жа ТИ дію бут СТ бік М шо ххх Жзичех Жов їжу ЇМ Може І М с
ТІЛ ях ту па ких ххх ТЗ 01 А я бла Ху и пд Шум о Мур я МІ
АТ ЖЕБА КК МИ ЗУБ дж мА лав УВК ЖК їАЖЬ ІНВ БЖ ФВ із сх тугі туге
ЖІ 5 ЗО
Зап Меї Ні дід 314 Ж ду фот ТИ Кох Жидков Ві о уучиу Ток тітку Дххкх
Іа ОК зи ваАщ оса є му ТИХ ок Мей кв ке ве еожя КЕс А
ЗЕ чів ще зол «ККУ МОУ НЕО «Мк зх ож кА а - вх соя З чо Ух зо т отих У ту Кк дк ву же і щі Шк ДІ Щі лм их хксх : каф Муюжу Ву сх Птухи З ут ї хі
ТаЗзх Уаї ко Аів вхо Сув Су Уві Бу віз пет тТух Ав ко Ме Уві сі ек Ул з Е
Зк З ЗЕ «ж и шк
Мооепю чл т мож М кум Тож Мою СИ щу й жк «ик ї м аа дев Ж Моту ву катати, ки Тож 7 Тож, х Я : у Є ду ЕТ ла Ж хх З Еш З КУКх маш АЖ А ую м ЗзЮЕ АЛ ам жа ех М а БЛЕК БУК МЕ яю ал ак Зх
З аа ау п. ш Моя м. Можу ж Може ЖК ж ке ЖК. жяа пк Я ух т ху о їх Во яр Хі шо гар их
МУ АН УМ шум Кк ОМА Ал
Чт реа
ЗК АК
-2105 7 «2115 353 «2125» РАТ «220» «4005 7 пря бучини Мія що М ху фрак Траси ефе ж Зв бомім ММНак о ЛРасу Беремо То са паща ЕЕОо Са во ла жу ау БК ех ж же Шамо жа Есе ко вУМ
А ще чех -Е 4 ш м в
ТУ х У жшуУ Мох ЯКУ Ток Аді хх Ск Ко тпекоко КК Б Зк Чув блю їх т
ЕЖЕ м шт ве ів Мет 18 Бех АЖ ч жтІ ж ша й У КОСУ Ух
Ех тк а ех 4 еле лк НВ М суку у Якою Я 0 ДК ждкух пам и УМ та Ту ух уже ТО хх ча тА ЗЕ тал хеЖ АТ с-м жо шо БІ ві зі кла з КК МУ Х - кох ке
За о а їх. З міч к. я вже УЛ, жу ше Де ГК ТЕ і пу ж Зоо н: жа их ХХ сук, и ж я 53 ї Тк Її ху Хо ж Ху є «ку: лу Ух г Ток ик У Туя 15 чаї дав щіУу Уві бій Уві Нів АБ оАтТа Бе ЖАЄ вУш РЕО АЖ бій Би шо ж ок ших, щої Ку их
М З пи ик УК ох Сн ТА баках оцю ху Хек чиє Кн Ко тла хе 7 З Жов ЩІ
Ті жх Мк вх ще КО тмроу 7 Жде р хх КС хг т. 13 ІК хг: МЗС ві ій Сбпе Ашп паж ТЕБЕ чж вжтч УТ УЩщА ЗЕ Ух мем ЛЕ УВА мшОа пу
ОМ ткух У щих мА т шо щи
СО ТК ЕІ ХО. пух А ТЕ аю ех, не ту сх її бжжю т «00 Жт п тує їз. Ух токах хг ії СХивкУух Макух ої у» ох хх У їд т Тиск 1 То т. У т х ху м шок ам БЕ їсо бен два іє Бе бій Теж Був С ЖЖ зав Ущь шк БВ мух пе г аа
У Ж дк, ФЛ як ро сх тро й ЦЕ т ке ЛУК ж о М лом т е Тло т же ГУМУ Їх то «х шо зак баках и Бах Ж рія «рю ПН Би дя Тов іо Тек гак й х ха Я У їз БЕЖжОо Зв ж жЖХ її с ії мом СЮ А МК м У шо М ау ЩО У чт І Її чав зак "а
АБУ КЗ АХ
ІЗ ким Щожчию СУЯ С дух У ок Пе ХК дя жо пулютаєю 0 Ден их КЛ є ТО за БІТ 5 Жах
ЕС АЖ ОО ке Сов о бух ЖИЖ їецй бе БКо аж ща с ка Мах
Зо трбкеух Зх
Я жк Хе ту т чим Вовчі ху лу Єиуе Ж фік ау стопі 32. я оюжеж ДМ ку СКУ Єр Жук
ТХх БУуБ Аз» зай УщА дек Ме) Тйх сб о ен Уві бує Фі КББе БбУую Бо - Ху 4 чу як
НВ 135 15
Шекат будач іш Ал о лящ ЕХ фрасуу КЗ умах фо ИМЯ ун УЗ ух бю. МУЗ Щшау В щт
Бех дк Тіжв йів ві бай тТКю ЗО бе Аео о сіУу ЗМ хо Зі Авах Ав
З де ях З ко той зах ї5О і 55 15 трак Жорж Чиї рю Шеюкї Фет у За сіті оз кі Фу бі хх ува буку УЗ СТ
УЖ о вУщ пЖ оп ЕХО Кг УЗА їх::и дв ос ВХ о ї У ЖЕ КІМш АВ Гм
Зх доку прот, 15 о ВТ її ши пе Те тою ва фуюєю Жосуку уч ою ой ех ха піки В с с-м Бех йхб ей ТМйх Уві вер о пуш Щек Ажко ТЕО бій Фів Бі ап уві же чї-»Е 4 вк но МО МО ме ШУ плели ж у, дою ню пд клю- 4 "7 по прооикая ее З. в Зх т - ЖИ п шк шу семи дк її ах 1ї15 м 7 з їх о мох ух Х ду Плу м ям чн ж
КУМ о НМ о ЗК УА Ве нНіз бла вів цей нав дао нів от КОЖ ЖЬК 15 аг В «яку жа жи ших жу.
Жсжвшх сл Галі дУдеує Токзля жує Тур; Буї хе та; ші ху СХ ляу «У Ух у у ха ФС кю 271 ху
ХУ ще Б хи им ОК еВ зм НУ СХ У шах ї ж Троазю А У ще
Я : Я З 4 А Я з роя т «М кА м штук ву рю их уетріу ві еруіх дхжоу це кої стр кк сер я 2-8 АК 4 ГТ ди др» хи Іл У Віхи щі хх іх КИ т я ТК хх жу і хи Кл щу мА МУ М і хх А ЗА У ЗАТ ОСАМ ла у Ам ши и МАЛЕ А УАДУ У сту
М, са ск сайт «шия ких он жи
Том УЗ же їх аз си ря УТ» Мекку 4 єю їз Ж утих Соя БО хх їх і ану їх буду
АТ КУ М м Ту -заАУ ваш наз СУБ КК зей Бі КЕ шу вк См Ох -я пуд т вк ко Ух х ому
ХУ ше кис
М оусм ок Іі 2 стр аю кет яр Тл Хома М я4 0 Му жо з На Тож, Ту ху гума ше іш дл Уа АЖ міх ак Мем сем ФМ БИ АЖ ККЮ БВ КВЕ ту ЕХ та
КІ я КІЗ хо
Фрі б - а (аж ХХ я Уход я - з Ж жи п у хг: сту ВД я чн вх у м ва мед зе Еш мА о шеУМ Уа АК ж ЮЛш ОВК Су АЖ ЗАМ АВ
Та а йежечея ко ше ех ЖИ АХ йо ХХ, Єхдуч й жу 0 ЖУК Що Ме Он Хек Миті сх Щі ЕТ НуІ ду охук Кку
ШУ ЖЕО ВМ АТ ке АЖ БА ЖЖ даММ Ме НЕ Аз оса о ліє ув ЖпТЕ яку и се тку аа ЗУ ОО
Фета Ж ХХ ву щу їх Пожке же бач ія їх Фан ВО лу же їїхжхк Є"4г щі зЗежш Ей Ва жо М шу ко Аве їв ві Бк вів жо Сжа СУ УЗ за: ВАК т о зп ЗО ТЗ Ек
Жуля я ФХ шу М ки Ж м Нкя еко Хжн У лк СК о У пак ТО дк Пк г
Бко ів Бех ТУЮ Аза БЕС Мет Уві Без їТї6е співа Був ТИХ дво ТЕ сіу оз в ЕІ "3 х «ЕІ «М Ока де паю Ж ому ун Туя хе буру Ж шу Ж, між току Я оукя 5 хо КУ пк що хх
Ма Кк мя Тр оОКпЖ ЯК гр ЗМО ам Ж АФ Був вав уз НІВ СУ од «ж дО ТЕ 340 345 ї5О «-2105 8 «211512 «2125» РАТ «220» «4005» 8
Ж ач Хосюя Жоттк У их хх ТУ т М с. дк а м ї ж тя ух то МЗузуи ТЛ ох Ж мту ЇХ тчв ЖУжич фкюриу тку буде с-м шжех був ТК бі ха во Сув БО Бк сСув Рхо з є з 4 ме М 2105 9 «2115 353 «2125» РАТ «220» «4005» 9
Ж лю ЯЗ амиц 2135 А М рах Ел хх чну му у Ук лякало ХР ан Муєим ця У доку да РІО ший і Аза Бім сіу БЖжО бпех Ул Біне ей Бра КО сг Буз я - в «Ек ї й ММ и роман и и юю жо дж я У щ тех - сх ст щи ти зе ет. То Кк Тіват кі Мід» Тв Жлую о Вм пк уУ чи ЕХ 34 х- їз ах Кум у кжЖУ му сю ЛК веМ ом зл -аК вп ах го БА УВА ПС СУК ХВ хи сх сх
У ОЗ ЗИ її шві вам лк Кут ім тях Вау їз гі її Кья 3На Ва ж я же ми. ЖУЗЕ Му. ша М АТ А АВМ Ж щук с хе А КТ БУХ
ЕЕ я а їх 4 45
ЯН т хх ха У Н ска ек пі х зу ЛИ оах Ж дух ТУ Щи 3335 (т -ща га СУ Уща Ай Ух Б ОА ОРМЛ ї, УА АХ ШТ КК 5 ша ЗАВ С вхо щ-от хх
ЗИ ув; ви ке та т о ду міо ує ше Клея УЖ кі Стаж ХЕ оселя У нн т З ша ЕХ хх
КИ Ух З пух КК Тк еум им п М КЕ сю мл : хх р сл МЕ хх бів Ба Ази пах тво ТУЮ Аа Уді Уві зе Узі Шев ТЕ Уаї Би нів ше ях сх сут
БУ 70 їв За и. ж и ТР З ля Коля я ї я й | щ- Ух т дак І еух ж де ЕМ ех чи Помя ок ж піт ЩБеоу т їх дії зх щілх хх ля хх СК Ід сх ше хі к.е
А ге Ю АК ОО Е дае Во У ау вим Ки й ХО У вБ''шЖшА ки АБЕ ОДУВ
Ен ке Го
ТО За 55 ик г АНЯ кт опи ях чол пах, У со Ж уж Ж ж ТК хо Кк тк Же Тюдиеея Шлуує Шу їх ях се Пре Ті аж Ж ох «хх їх - пу Бе КО зе зем Баш БМ М У вВ'спК зів еВ ому км ям Км а
ЕЕ чкк ча ї т У що -О КО тлу Жозе ух жк и У ї чу хх Ї Угод ЛЖУМ; укосу Му р жи Жим ет їх Ме гЕОо вка Би жо зі ча УЮ ЖНК бею о ЕжКО Ж с ЗАТ СС Б ГК щож яті я ще 115 НЕ 155 тОбаче Жук оваю її я ЗК ду Том Враз ббжкю Ж ніч За божу Є хи ік бек Ше їх ПУ лаб сій У Бех меха ж Су Бей Уа зе б Ме СеУє КК зх що чок 13 135 148 би Вахух тії в хх ХЛ я оузух 35 ан Мем г і «в У жу у йо й хх ших ввю ААМш пьв ям У ю ТЕ М жа ОБЖ БІ у Сп ЕЖОо Зі АшОУ ЛЕМ за Бу ЕК жа 155 А З Іо
Тек Був ТЕХ Тв бкоз бко бі Тед дюб бек йо іє бах Се Щі їец
АЖ СУБ з Чо мое ко а а ОО зве мам сам за ле со Се - Я х х Ж. з жу зок их ї - її я Ж ї ї жошж
ТУ яю о
Філ Мр мих їх ма я ху т сіхю Жак А леих пух. ШК у чу ау
З УК ж ви Бей отлдх а де Б омув шк люк АК сеКЯЮ Ме ЗКУ ЕМ Ух жа зв тах 185 135 150
За дет обов праве Уві Меб Мі Зіз дів їй Нів дви Нів Тек ТВ щі: пе о зеК СУув ЗеК жі мес мих за ва Сей п оса НА КУМ Хо си чих ку х ТК ою Бк С
ОК кА шк М дош ее тю Ж оо ТУ чи жо ую Оки кис. шк єю ж шк Ух у ат г хх КТ Мі у Кт 3 квт ї і - ії г тек Є ей ї і я я їх як НЕННЯ їн
ГУ - ШК мем ЕК мем шк зе за ША аку МАУ шу ІВ шу у шу хх закш оч «о ши я т ха ВЛ у лк стю хр жк току стр чу БЕ, УЕтаї: ті ху Ж б кю їв Зх фу ХЕ
МАМ ЗАВ у жу мож ЩЕ У мА У шу зу ЗУ мАТ шу Беж МАУ У жор хр Отх пу ту В ху шу
ЗК же ОВ а жо «я ЇЇ кун А ех -чо, ші нач ше іх че сх ще п ск т сякт в --х не їв лік ТТ іх їі Доу Ма шо їла Зуби ат Ох зи Тік кет їі їх
А МІ Ж мя АЖ ЛУ ЖАХ ія УЖ КІ КК ЕМ у у Жак су ТЕ й хх що У ту тую ше ке кл «й ож жошн Те Мі м ха Її вх я ВО Я о о ит кожи ж х ех ТО дум т к мн дори щі Ка що ск ких до ие дії ТУ дж «33 Ук АЗК да
ХК м Ї почала яЕч аа жи со м БЕ БМ У М г ТКА ОКХ ВЕ
ЗЕ сш: тру я чо Ж кт З
ТІ хе жи жо роя дже пек ке чи У аю Ум ща яЯжж стю ке их КУшКие жу т ше Ки Кут Кз й у лу І о Тв дяк птж щу ї ке Їх М щ
ЖЕ ж ше Ж АЖ см аа АВ ВА КПУ Ме Кк че маш ЗКУ ма
ЕЕ тай ЕК шо Бл жи М «З с е Ж ує Ж ля у ук г Я ожнуєу щі - Я Уошоу: Я МІ КОЮ ка ие У «ге. Кк -
Її" їжи. ЩО пі Ме оку і Гч Мокія М ку 1-х 7 у 1 ху Кот ку ку
Ст Вко Бек сій пе акЗ дів йіа два о Ме Мів Аїд іп сТіе БУ КВК зе т Зла
Карен я- ред
Си вк я яко докт т км Том ШЕ Бех Ка її Тем ДЯ о Ж їжу уз 2 ек ша кіш КК це ву КК єю АЛлЖК Уа Ко доза ко Оу СУуВ МВ тую тре Зах пихи за5 310 315 з ту що тини ем, ке соч мал Вр що -ж їж сх вх. с тезу В ба є дачу ких Мав а ся ду ж Жан Девух Ку КУ ху
КМ яма М КУЖ в ЕКО мМеї Уві Бей сів сів Був ЇТВк Ада оп БА тки во ен
ХЕ хх 5 -А шу «КК «ДЯ жк хх жо шт «5 у: Я жк Ф с з 1 жов Тони хи ям и тиші вт ПМ їз з пе Ту у Ач ха ТІ К.І Х К.М УАЗ ї Б з Уч НУ ча зи М АВ ВЕ Її Х Хо М УЖ ШшМ М ХВ Я г х В БАК С ХО ат А зт си а за чн
КОМ
210510 «2115 353 «2125» РАТ «220» «4005 10
Ж що уж из ке о що у вх жи тку 2-7 жу ху бодуї: Мч иМ Дек Хутуу Ж ох
Аіа Кжхо Бій Аза дів о сьУу БУ Бюро бек Уві Ре ої вне БЕ вкО Був
З 5 1 о дк хх сок СКК х Жолжт ек Кн « о Ж жах УВУ я пен з прудко у
Бо їв вже ТЕ їм мес фіз мех АкЗ ТвЕ БЕО Бій ва Так Сех УВУ ск ту як ко я Хо хх хо вою їі додаю лою Я у юна Кожен МУТ «во БУ Мн Ще Же Між ча Ум ВМ ща ще с іа ВА МЕЖ хе Уа. БЖ ІН АТ уКЕОО У Е
Ж доку ах 5 аг ща ста дода й ху ду хи ж шо шт 3 тлу ву ятки ануу бок Ж я ШшлЛ р ча гЮ ша У Ум мА Ні Влт Аа Її. Уш ЖК Буш жо вис зі си п й их ща ке
Зо меж м т жх Кия Мк Фе З их стека оди кю ха «Же 1 Фа паю хи Т оду Я сх вав орпе ви Бех тах УЖ КЕ її ча чщі зак тА Мей Ж УщЩА ве пив ж «ух "в ех 5 143 Не У тех ож гу : т о я ду тю с Тр хи ок плюмим Ку вич Так Ще боже
У жк ту ре Тож Уж хх жим 14 паз Її хх тк їкх бл Її ак Ту се тост ска Аве жхв ем Аше су оУуй сі РГУЮЖ ву СЕ ув ча зак аа ух вит вотх ще що хг че век ж З р кж о Же буту Еш Сію тих В тем Лю Тих Ж Тазк 3 Її а іх ік
ЗіАш Бей БІ сни ЖЕ їі б3м БУВ Зп іє ше БУВ біз Буш Се Сів й я тк ясвіх 1 2; Кх її ще Ал КА о щ шу тех Уж і я - р ст р раю М Ти Б'є фе» Щлую 31 що 21 аз 1; Ма
МК Ї СЕ Пр ЕЕ ї НК М що ГА це т С и ОК КХ я МКК кН А ЯКЕ
М де Фо шк АТ М Ж кт К о АВ шо Ко Ко а пот жщ З Ух чх
КА Я Ж сі в х з м лу ХУ уе УК Кк ух ер ї ех їх Фах Ж му бі бю ХХ ххух її Тиск 3 Ко Тех ж у Ех т тв Сея бат. ів Уві щеЖ Бе то Кт НЕ У БМВ У Кл УЮ КК їпо ве бат ав ові ЗеЖ Бе їлЕ Ст Без Ущі У У У Х - хх ще зх з в ЗВ тай
Дю Ми Я, х. п х м ер уми Ул ію шу щі х ї тт Ал вх ЛЯ Кт (33313 дек дфви; о КО КІ Б 5 й Двт
ЗЕ дО НН Тай ХХ КУ ії шо г щ3З ЕК ІВ У І ОКХ Хлор ОВК АХ . - ж ух ЗЕ З су г 145 м АОАК КО
КАХ о ур Ех пре ХК у дея ау вк 145 бра Їх Шіде о тод тТУк БУ Тк твжЖ вго Бк Уві Бей ду Бех ау баіш Вей фе Епя селу
МУ мед МЕ АХА. ЖАХ Кл ОСА У 3 - З т 7 ето з жд мя ЕМ Ко ; хто Ту Как дк обет щі бін щіє дат ді м сту Можчеж От ж их вуж ит Мам Акт ту ЩІ М пін щі кам ві пам ошек АКе ме ДК У, Да Ю Я ту ТО ОЛУЖКК Я КТК АЖ Є ОМА Є й 7 ще сових ау ЗК Р
Ж КЛІ Му с 4 с ч ж зи г Тк ЩІ є кухню У ях г Я їх дж ел бе М кт ї іх хо «дае І кх ха Таж г ре Деу СУ5 Бех УЗЬ Мей Ніз Зіч Аза Ббец Нів Ав Нізв от УК Ул й ях гук що пп ца
Но; 5 а кажеш х т сх х іє біб іє біб біб (зів біб біш 3 ж яе Ф изе Жодх С дих дн ЗАД, ка и х чи АХ по ДЖ ли ДК КУ че юю меш еж ем екс БНО же Се Се ААУ ХУ хау ше і; У У т о ще «у во БІВ вк
У Же х -д суч, я пк я ноя сх ро арх хаб Ех З т БУ та КУБ ХІ ит У ди Б хх РУ Кк; 211435 ху Б 4 їх ї ЧУ ТУ пі БіУу КУ Піх сі ів бі ші спі Бі БІБ зі у БІ СЕУ Є х х УА - т якостях зЗлиои І зак яса я як
Жак ши и ня вх пт ре й ців беж Бе ге пі Бк щіб два ово тов тобі ою о КЕ У вв опоВ зу яшшо Бей СУ Кб ОБУ ЕФ Оу мух я ск Я Бо ех п - дого щу --. уж п
З я бо «- с те ох с
З ;; я с г тая Мох тот хе т пох с п У вка, Уж у же ук хв лу ек ЩЕ ли МИ я ОгУДЬЮ ху Сей Ніз Тв Уві АкаЗ Ада век Ббеюв са бер пев ос» ролів Е т я Му моя туту лат треї о І Е
Я «и КУ Оу де М : су їз х Зп ді ів За) тТвк о Мех був Ті ія Дід бСЄйкажа ві Ти Кех о бжо дка стіп ді МАЛО ЕРА КО МО МОМ ХМ АК, х МО
МА о жаам зем шк КО КО МАМО залу " КО в - . че тухух тив, В КОСУ шо КК «У
Я
:- х я - я. ї15 жо нош жду Ж ую СЬО ях с хх Сея ко Ша» бе а Кл дат мат ніш о А щі їі ке МИ КХ пев 'ЕКО ща Ж ат Кп: ду су ві ща АВ ЩЕ ГРА я І ФОМА ОК ку й ХК сх : 7 - сих,
А тушу і 2 оку Зо
У я «ой 5 - ; ; т «те ен у Шу бек бек тлу н - ск - ж Я окжих ух Мем ПЗ; тк тес А Мже се КІ щХ їх х сла Я ек 23 жу а же у ОВ КО хі КК Ом - я ЖК ся ех їжи НіВ вВшО БеМм БУ ККО др ОТВх Уві КО діа Ех що Ах сх «ж вч ак Зв
ЖЕ х, 1 Мох ж
ТЮИя «й дю : г з се х їт- ях ; г ї ; гу т я г З бокрк їВку бу ру їх с кх «Фдхоею хе Що ті о ин Мі худ ххх їли ЦІ 1. ТТ тив БЕК ха у
КкхБ5 Ада Беж Кук мя о БжОо Ме У О0еб фа Бар вує ЖпХ ВЕ х У 7 зму т зи о Зх ; ч і у я т дз тТама Вшеу сїб Шіщо бчхв жом ї тк я Ж у Зі аю Пд жу М сю щоку Тех Тіз т х Ти М ж нНід св
Уві век Гей осів ТВж ТУ дар двро бе бе бів ПУ Алр СУ Ні сх : хх а ак зт
ЗО 45 Бо
МА
-2105 11 5 «2115 355 «2125» РВТ «220» «4005 11 ща - Ха юне голе ЧК ну ца. їм ж МА як жи чн ху а Модні Му Хна ХХ е я їх діва ко щі Віз вів їі Бі ро беж УЗ Ба З Бе ЮБко Бко Бек ї й; : і; ч їх 4 в ях я 5 ЇМ же ан ом ух мін Сахно Жди Ск сту Моди ЦІЙ ях яму я АЛ ев ях жи
Тк У я соку Фк СТ оди У бару доку ; ко жучки хе гало я кт Ех ж зшЖш ве ЕМ лей мес здає зек вже лвЕ Ко Со Уві ЇЛпю о шУВ Ух зе ук за
ОМ мя м
Ул тю Зк у жу Єнноує КО ущи мя Тех Лук й ІЧ я ему М лу Ух ж чай Уа. Аврожю же ша БАЗ Ав ко ім Заі бів бБбпе Ав) о ТюКЮ ТУує х їх ї В
ЗЕ я ко
ТУ що дз
Уві Ве ші» Уві бій беі ців дви діа був ТЕ бух Втб дк бій пів ча шо ша Уві САМ о УЩщК нів о дай БІВ в»мУуБ КОиК Був вгжшс вк ЗАМ ОБ ка кох
ТИ пи хо які зеУдд ї- сг с - . з ху г хх т. с т 1ї- т та піт КЕ Мет буву бе сте фут Зі пі Бек щі без 'твнеЕ Уд 151 3
ЗАЛ ще Комі ее ІЛ ХК ях КМ КА ох щі см УЮ и СТ УВА ь іа подо кету Ек я
НЕ В во
Тл ую щи сну Тонуха фряуєю (У Ж хх оку її Між Жоззкхо бекежю о Жорж ему Ж охух їз3 пл ДАІ ТЖОе ма МАЕ 50 У ум ба См МУ ма УВО ча. щих АВТ МУ в се т 7 оо ех й. СЯ Ще их их.
З тк й
БУ З ЗУ
У т Ж с г Хе ит УМ и ж - ТТ ет ач я Може В од, У ща ОВТ ї 2 вм ух Куди ум ух Ех вало Тов аз З ши Куди Том щук хх ТЛ ам м ЕКО ем У В му ЗЕ я СЗШ У мА Ла М У миАХ
Я х Бе З 4 за зтук, зла що КУ о о г о . ех ї дк ЖЖ лю я МК ох ж Фа ху и я. Же Дюк ж у Ме г, УЛ я ех М ЧЕ пу их Лія уче БИ ух ВІ Тир т че ТЕ ок Уч Ки їж Б КІ з М кА Я АХ ЖЖ. АТХ ОКХ У Ж оп У о КО ХК т сш КАХ ЖК
Зх г ЛЕК,
Я Х Мо АХ хх
Те іїса дв бів чУЩії беж їв Тв Сув ї У ці Бр Щі бБа Же бух
Му чЕ КОЖ КУ їх У и у хи ї те Кк Сх я Ке їх нки У хи т Мт уп і. У мМ ЗІБ в ше Аа дп Є Ух Бе МОЖ ад МОУ ше МАМ и я ху ц чаї
МУ ОС ша де ре ех до п Я пох ик Ух то кої дет я дим - ох оваєо фан Ж хх хх шефаз Піч (05; бю щу ЕЕ» Б ж Тююия їх В ау ще
Зах йо бів Віа Уві шів т р о зАц Бех мВт ААУ пай ЕЕ БАЙМ ВАВ АВ
За ЗЕ ЕЕ ше 145 155 155 15
Ті уж Тодор ТК, ху Тк ЕЕ ту дк ен жа т. а лк с с "М, ск Ух ФС зн жд ч Тож
Піх ха ї ї х чвж іже Ул ода их Те ІМх Ох» ст зткх рот ощії ї Ух Мч ЛЕ ЛЕ КЕ ОКО УК А АЮ НК АХ у Ж ІЕМ са ТР
Я х т - шо по що
ЕК хг СЕК, «кА ОХ о ті т сю. т Мк жд осли жк до ча - - я пт Ух ди чу чт
Тк др ою то ву жд бак їв Сдую жено й ач ЕЛ у Кая ху ххх 12 сій бе» дже Бев ТЕ Уві дв Бозув ак дж ТЕ Моб жим се МН УМХ я хр рек з гру ма МО шу
М о Сени б Св хлщі меж М з ім йіщ тознм Мія йог ц оо ту ЗИ Кри, 3 г пе сх Був -зшкЕ ща щЩеЄ га ма во Бей опа ВІ Зп зує МУ ЗАЗ я т меж тут
ЛК 0 М т М т- о о Є сяом Оо Кк т Ач г У хек ж ть ОО жокию ие ОО ж Ух і п чо Ка ОТ Хек Темі Мам Там : іх фут Зх Фі сф» іа пт Ді
У хв І БЕК ше ВЕК НМ Ам і У А У У с-» У ж ОО Ко
Но 4 З Я я ке ск ку хе ї г гум ру рі і; ле мя ки чт, жін Му
Хати ЩО лю чу дл Хе рН хо хх Фк ою Жим ох ж ля З ду 7 3 з а В а В» Сх що дути ді их що сх АД Ху СУ Ху х
Б діа еко із Бо Аза РКО Аа Бо дів хз дів вхо дів бхо лів яр су их ху гуясех ик їЗа ЕХ З ї кт «о я р й М г я І и ху ж еф жу Ж жк -ї їх р т ж ; п т У т ;
А хх ; їх Жак її щу Я о їли бно о Тоюмр їж фекух сл 49 Мугх
Ж БУ СО У Оп Її С КО Не ще міш оо ЕКС і У КО ра У Кг
В: Я : З х ВУ х - У ях уттох шк
ВЯ ЕЕ льна «лу Аз дО
Сев Сув Ар їм Нівз ТВ Уаії Аку дів бек ей са Аве о беви ЗіУ ТЕр віз Ввроїхр уві Гей беж Ро АкУу бін Уві бів Уві Тв Меб Сувз Т18
Но ВЕ сіт вів Сую ВБко Чек сів Бе вх Аїз Аїш йо Меє ів Аза їз Ще
МО а Зо
Пте ТВ шЩех Сей Ні Ах Се Бу БкО Ав» отТвЕ Уві Рро дів Бк ев
ЗИ 310 315 зво сСжа Уві бко Аіа Бек ТУЮ дви ко Мек Уві Пе)» Її6е бів Був ТБ Аз5е 225 зо 305 тах піу Маї йежЖ Тео; бій ТвЕ Тух Ар Аввобев Бен віз був АввоСув 340 345 Я5О
Ніз Суд Ті
За «210512 «2115 25 5 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005 12 пі пі с0іу Бі піп (1у біу бі бі Пів Бі сі БУ бу СП ШХУУу 1 5 І 5
Бі бі БіУ бів сіє щі бБіу бію Си 210513 «2115» 20 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005 13
Аів Бхе із БК Аз Бк дів Бго ліз БкЗ да бу дів Брко Дів РІ ї в 15 ї5 іа вх піз хо тут хи «2105» 14 «-21155 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «400» 14
Біу бі пі піу бак "7 Кк о зай «210515 «21154
«2125» РАТ 213» Штучна послідовність «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005 15
ГІ ж хи КТ ке УТ 42 ау ЗА БАУ Уу т
З
«2105 16 «2115 1053 «2125 ОМА 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005 16 пасопсецесєюч зоапозвссамо ес Ес ав ансссваща спас опеВя Зо аесЕсосоа ссстесаеЗє свое ко пе севою бевосасма воно 1 теми до дю оці дими епі сг тео ддІудіІї дит Б ша си моду М Зо ен МИ А МН МК ФА АК ЕХ пад КАН алу спинний свех псззовасає зпаосЗ сФсоносвееє МшмимиеЕ сс оссВІ Я тифі ех уми жу Ер ви ХУ І ги лі жін уми ув У ІК У КИ кзихуя вже их М их гам «ЗЗссвНен пса неа са осеаи соКосепавса зо щеУсе шах ЗцО захи вл т вом хи пр жу Хепх хх учи вики кути умих щі грец цик ую УМ тм Ки и плющ
ЧФаслчашв ХТО ЦИХ шина Ії шпишлслчачаВим сон ги Чи шило пи ж повсзссжесє вззупвивозас сезузвссаз зЗсозасозаха сота сох свавашОеКюх й висо восзвосчиН чор поса усним нав са ВІ яке песо іт сим узор т жиму со рЕХЕх Кок і бсмемі ЕІ ти дріт т ща
МЕМ МЕ ую о Мити Му КИМ ХУ КАХ ві мини о нн ВЕ в о о ВО У ее рр м ик ке ях и п вті РУЖИН М Мои Фо им и у ж жи Вик фе и м и Кл часшачесцоз сс оце «(сиза піс сас сеоптчачовВ Кави виє «есавсовиї всвасасвоав оеоюсокосїм: зем мІ збе бошасовосв о йхухомо іо кг кхе і умо уфИих МИ Ме Ж Мити 0 газу хехож можу и сх ще Ів ех ии ми суки же их тА
МЕЖА и КЕКВ я ДУМЕКОХАКЕ КК и М ее Ма я ЕЕ Вот «МО ІМЕНАХ хм сбесбмоессч воском осспосеюнии сс с в х зов баса 7 пранні і НН НН и НН долу жссссоСтсоя вацасссоЗо скпасовазе более сасошесЗоов зобов ко а зосабатов сгтзодасост сооскозова сестоссосал сотовсебияса сзооссаовко ще пр т вро р ірис аауу хів Су ти еу 0 пихи ух дати дою пи жк хи ті пд хааашсКеє пусассаек певаспччеЄ зош попе солоссецеми ЗІ и си ух ди щ Малу ут життів ВІ сучИирМ цеховож ІуєютТ ВИ из сут ії Уж мл щити і ЗАТ коствосаває свічок пиассосечао всоазча сво сторо пса вишх пастасоссо соЗссзаасла СКЗосВокаК по Тож а «210517 «2115 227 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична генно-інженерна конструкція «4005 17
Жозе Зожжх т пк Її сх троє бл их Тк Му ЄЗЗкуп Єжи пвх ати щі т Пот ре Шен Ту
Зв обув ТВх із ТВвК Су РжО Бро Суш БкКоОо дів Ко іа БЕ дів суку . е че хе ї їх ІВ КЗ кх- їх Кк ях ч У ; усю 0 ня тюки Жах у Жожук Мі с оз А дю пі БЕО Зеву Уді Бе Бей Бе Бко БЕЗ був Бк МБув Аве Твах ем Мет их хх. люІх ши хи й ЗИ ох ях . моди п о. мо ту «АХ тд адек З до «ек пк хм- ЄХ ку ух 114.
Їіе бЗеї Ака ТЕ Бко Біб Уві Тих Сув Уві Умі УЗЕ др УЗА всех пі 35 40 «5 то моля 4 даю трюк ие око же х с ТУ бажаю хуст мож хх Ст за хх бьиш Аве хо бі Ма бе Бе Авпоїжо бух Уві Дер оЗзАУу Уві Зм в ї як кі що ще СХ БО
Хо туя ру нишке Жде хе ох ак ою ж ЗА АН т мо А су ШХоля ум КБУ Ук т.
Ніз Ав оАіз пев Ти був Бго Аха бід Біч сів Тук АБь Зак оТВЕ Ту п Ух -ц т ду о їй во скажи Ж ши Се ХУ Жоодяжя яру ХК То ХУ ох З у їх де пр то З ке ще Ше
Ага Узі Уві ех Уві Пец Тих Уві без Бій бій Або ТкКр Без Ав щу
В ЗИ 5 іх ГУ Удвио Жора жів очко га ба йо тд ої у ток у Що и Тл пу Біб ТУЮ ув СУБ бук Уаї сех дво УЗ Ада беви бго Аза РкОЗ тів 105 115 сім був ТЕ Тіз бек був йів Був іу бій» вхо АкЗз сі) Бо бів Уві 115 їво їй
УКХ кое Тк оч сек ян Ян сих Пе пут ож же ч ту же Содлвих Федя у МН се СЯ
ТУК ТвЕ їси Бу БсоО ек Аго (піз Зо Меє Тл бю Даю сів ві шШех яд дк зам
ЗМ А З - Х й Ми ей ек сув діа Уві Буш ЗУ рпе ТуУш ро пет Аз їзе вів УК хи 150 155 їБО
ТЕ улу ех ЧАН Ж ду дум Из ч ос ух коти якою ож де Уха СК пд ск, їх; зі бек АзпобАу Бі Бго Зі Дан ов ТЕ Був ЖК Тв РЕОо Вхо п моя чи
Ах РОЮ Же ві їжи йзвроБек Ар пі Бек Бе Бе без Уаї йек був Ге ТВЕ Уві іо 185 ізо аз о бУуз ек Акоз Тв о Бі бів Бі» Ав» Уаї Бе бек СУуз щекх Уаї Ме ва 00 КО нів сі Віз пе) Нів шва нів Тех ТтвХх пів оЗУув Ше бе Бех бебр беж мч лк сут жо я кА:
Вк сіу Суз т
Же ик 1. Сполука, яка містить ХЕО ІЮО МО: 2. 2. Сполука, яка складається з ЗЕО ІО МО: 2. лий : . ' .
З. Гомодимер, який містить дві сполуки за п. 1 або 2, при цьому згадані сполуки зв'язан о : . , : . . щонайменше одним міжланцюговим дисульфідним зв'язком між цистеїновим залишком згаданої 10 першої сполуки та цистеїновим залишком згаданої другої сполуки. 4. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким з пп. 1-3 і один або декілька фармацевтично прийнятних наповнювачів.
5. Спосіб викликання втрати маси у пацієнта, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4. 6. Спосіб лікування цукрового діабету 2 типу у пацієнта, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4. 7. Спосіб лікування ожиріння у пацієнта, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4. 8. Спосіб лікування неалкогольного стеатогепатиту у пацієнта, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4. 9. Спосіб лікування дисліпідемії у пацієнта, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4. 10. Сполука за пп. 1-3 для застосування в терапії. 11. Сполука за пп. 1-3 для застосування в викликанні втрати маси. 12. Сполука за пп. 1-3 для застосування в лікуванні діабету 2 типу. 13. Сполука за пп. 1-3 для застосування в лікуванні ожиріння. 14. Сполука за пп. 1-3 для застосування в лікуванні дисліпідемії. 15. Сполука за пп. 1-3 для застосування в лікуванні неалкогольного стеатогепатиту. 16. Застосування сполуки за пп. 1-3 для виготовлення лікарського засобу для викликання втрати маси. 17. Застосування сполуки за пп. 1-3 для виготовлення лікарського засобу для лікування діабету 2 типу. 18. Застосування сполуки за пп. 1-3 для виготовлення лікарського засобу для лікування ожиріння. 19. Застосування сполуки за пп. 1-3 для виготовлення лікарського засобу для лікування дисліпідемії. 20. Застосування сполуки за пп. 1-3 для виготовлення лікарського засобу для лікування неалкогольного стеатогепатиту. 21. Сполука, одержана шляхом культивування клітини ссавця, яка містить молекулу кКДНК, яка кодує поліпептид, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 2, за таких умов, що згаданий поліпептид експресується, і виділення даної сполуки.
Зо 22. Спосіб викликання втрати маси у пацієнта, лікування цукрового діабету 2 типу, ожиріння, неалкогольного стеатогепатиту та/або дисліпідемії, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполук за пп. 1-3 або композиції за п. 4 один раз на тиждень.
Комп'ютерна верстка М. Шамоніна
ДО "Український національний офіс інтелектуальної власності та інновацій", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862653759P | 2018-04-06 | 2018-04-06 | |
| PCT/US2019/024756 WO2019195091A1 (en) | 2018-04-06 | 2019-03-29 | Growth differentiation factor 15 agonist compounds and methods of using the same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA127545C2 true UA127545C2 (uk) | 2023-10-04 |
Family
ID=66630339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA202005772A UA127545C2 (uk) | 2018-04-06 | 2019-03-29 | Сполука-агоніст фактора росту і диференціювання 15 (gdf15) та спосіб її застосування |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11104711B2 (uk) |
| EP (1) | EP3774860B1 (uk) |
| JP (1) | JP7064618B2 (uk) |
| KR (1) | KR102501922B1 (uk) |
| CN (1) | CN112004821B (uk) |
| AR (1) | AR115021A1 (uk) |
| AU (1) | AU2019248535B2 (uk) |
| BR (1) | BR112020017256A2 (uk) |
| CA (1) | CA3096375C (uk) |
| CL (1) | CL2020002564A1 (uk) |
| CO (1) | CO2020012403A2 (uk) |
| CR (1) | CR20200454A (uk) |
| DO (1) | DOP2020000157A (uk) |
| EA (1) | EA202092084A1 (uk) |
| EC (1) | ECSP20062930A (uk) |
| ES (1) | ES2937049T3 (uk) |
| IL (1) | IL276980A (uk) |
| JO (1) | JOP20200252B1 (uk) |
| MA (1) | MA52228A (uk) |
| MX (1) | MX2020010370A (uk) |
| NZ (1) | NZ767242A (uk) |
| PE (1) | PE20212133A1 (uk) |
| PH (1) | PH12020551656A1 (uk) |
| SA (1) | SA520420287B1 (uk) |
| SG (1) | SG11202009853VA (uk) |
| TW (1) | TWI724392B (uk) |
| UA (1) | UA127545C2 (uk) |
| WO (1) | WO2019195091A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA202005385B (uk) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2832581C (en) | 2011-04-08 | 2022-08-23 | Yumei Xiong | Method of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15) |
| EP3763734A1 (en) | 2013-07-31 | 2021-01-13 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (gdf-15) constructs |
| CN111954537A (zh) | 2018-04-09 | 2020-11-17 | 美国安进公司 | 生长分化因子15融合蛋白 |
| US20230210950A1 (en) | 2019-10-04 | 2023-07-06 | Amgen Inc. | Use of gdf15 for treating cardiometabolic syndrome and other conditions |
| CN114555792A (zh) | 2019-10-15 | 2022-05-27 | 伊莱利利公司 | 重组改造的、脂肪酶/酯酶缺陷型哺乳动物细胞系 |
| WO2023025129A1 (zh) | 2021-08-24 | 2023-03-02 | 广东东阳光药业有限公司 | Gdf15融合蛋白及其用途 |
| CN116478298A (zh) | 2021-12-31 | 2023-07-25 | 广东东阳光药业有限公司 | Glp-1和gdf15的融合蛋白及其用途 |
| WO2023154953A1 (en) | 2022-02-14 | 2023-08-17 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Gdf15 polypeptides for treating and preventing autoimmune diseases |
| CN118580334A (zh) * | 2023-03-03 | 2024-09-03 | 北京志道生物科技有限公司 | 一种多肽分子 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5288931A (en) * | 1991-12-06 | 1994-02-22 | Genentech, Inc. | Method for refolding insoluble, misfolded insulin-like growth factor-I into an active conformation |
| GB9912350D0 (en) * | 1999-05-26 | 1999-07-28 | European Molecular Biology Lab Embl | Modified cytokine |
| FI117667B (fi) * | 2001-07-05 | 2007-01-15 | Univ Zuerich | Farmaseuttinen koostumus, joka soveltuu käytettäväksi ortopediassa ja hammaslääketieteessä |
| WO2005113585A2 (en) | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Acceleron Pharma Inc. | Modified tgf-beta superfamily polypeptides |
| US20060074225A1 (en) | 2004-09-14 | 2006-04-06 | Xencor, Inc. | Monomeric immunoglobulin Fc domains |
| EP2571510B1 (en) * | 2010-05-21 | 2018-08-08 | XL-protein GmbH | Biosynthetic proline/alanine random coil polypeptides and their uses |
| AU2012212047A1 (en) * | 2011-02-03 | 2013-08-22 | Xoma Technology Ltd. | Methods and materials for enhancing functional protein expression in bacteria |
| WO2013113008A1 (en) | 2012-01-26 | 2013-08-01 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (gdf-15) polypeptides |
| EP2830646B1 (en) | 2012-03-27 | 2018-03-07 | NGM Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods of use for treating metabolic disorders |
| EP2934584B1 (en) * | 2012-12-21 | 2020-02-19 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Anti-gdf15 antibodies |
| JP6272907B2 (ja) | 2013-01-30 | 2018-01-31 | エヌジーエム バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 代謝障害の処置における組成物及び使用方法 |
| EP3763734A1 (en) | 2013-07-31 | 2021-01-13 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (gdf-15) constructs |
| IL243690B (en) | 2013-07-31 | 2022-09-01 | Amgen Inc | Stabilization of polypeptides involving fc |
| WO2015198199A1 (en) | 2014-06-23 | 2015-12-30 | Novartis Ag | Hsa-gdf-15 fusion polypeptide and use thereof. |
| EP3851445A1 (en) | 2014-06-23 | 2021-07-21 | Novartis AG | Site specific protein modifications |
| US9272019B2 (en) | 2014-06-24 | 2016-03-01 | Novo Nordisk A/S | MIC-1 fusion proteins and uses thereof |
| KR20170065026A (ko) | 2014-07-30 | 2017-06-12 | 엔지엠 바이오파마슈티컬스, 아이엔씨. | 대사 장애 치료용으로 이용되는 조성물 및 방법 |
| JP6663428B2 (ja) | 2014-10-30 | 2020-03-11 | アクセルロン ファーマ， インコーポレイテッド | Ｇｄｆ１５ポリペプチドを使用する、赤血球を増加させるための方法および組成物 |
| MY186702A (en) | 2014-10-31 | 2021-08-11 | Ngm Biopharmaceuticals Inc | Compositions and methods of use for treating metabolic disorders |
| WO2016131893A1 (en) | 2015-02-18 | 2016-08-25 | Medimmune Limited | Incretin fusion polypeptides |
| WO2016161100A1 (en) | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Janssen Biotech, Inc. | Protoxin-ii variants and methods of use |
| EP3393494A1 (en) | 2015-12-22 | 2018-10-31 | Novartis Ag | Methods of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15) |
| US11105818B2 (en) | 2016-01-15 | 2021-08-31 | Novo Nordisk A/S | MIC-1 receptor and uses thereof |
| BR112018076290A2 (pt) | 2016-02-29 | 2019-11-12 | Huawei Tech Co Ltd | método de otimização de video, equipamento do usuário, dispositivo de rede e meio legível por computador |
| EP3423094A4 (en) | 2016-02-29 | 2019-11-06 | Eli Lilly and Company | GFRAL RECEPTOR THERAPIES |
| US20170299608A1 (en) | 2016-03-04 | 2017-10-19 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating body weight |
| US10336812B2 (en) | 2016-05-10 | 2019-07-02 | Janssen Biotech, Inc. | GDF15 fusion proteins and uses thereof |
-
2019
- 2019-03-26 TW TW108110400A patent/TWI724392B/zh active
- 2019-03-27 AR ARP190100774A patent/AR115021A1/es unknown
- 2019-03-29 CA CA3096375A patent/CA3096375C/en active Active
- 2019-03-29 MA MA052228A patent/MA52228A/fr unknown
- 2019-03-29 MX MX2020010370A patent/MX2020010370A/es unknown
- 2019-03-29 CR CR20200454A patent/CR20200454A/es unknown
- 2019-03-29 KR KR1020207027912A patent/KR102501922B1/ko active IP Right Grant
- 2019-03-29 US US16/369,096 patent/US11104711B2/en active Active
- 2019-03-29 CN CN201980024748.6A patent/CN112004821B/zh active Active
- 2019-03-29 WO PCT/US2019/024756 patent/WO2019195091A1/en active Application Filing
- 2019-03-29 JO JOP/2020/0252A patent/JOP20200252B1/ar active
- 2019-03-29 SG SG11202009853VA patent/SG11202009853VA/en unknown
- 2019-03-29 PE PE2020001334A patent/PE20212133A1/es unknown
- 2019-03-29 JP JP2020554477A patent/JP7064618B2/ja active Active
- 2019-03-29 EP EP19725879.1A patent/EP3774860B1/en active Active
- 2019-03-29 EA EA202092084A patent/EA202092084A1/ru unknown
- 2019-03-29 UA UAA202005772A patent/UA127545C2/uk unknown
- 2019-03-29 NZ NZ767242A patent/NZ767242A/en unknown
- 2019-03-29 ES ES19725879T patent/ES2937049T3/es active Active
- 2019-03-29 BR BR112020017256-1A patent/BR112020017256A2/pt unknown
- 2019-03-29 AU AU2019248535A patent/AU2019248535B2/en active Active
-
2020
- 2020-08-17 DO DO2020000157A patent/DOP2020000157A/es unknown
- 2020-08-27 IL IL276980A patent/IL276980A/en unknown
- 2020-08-28 ZA ZA2020/05385A patent/ZA202005385B/en unknown
- 2020-10-01 CO CONC2020/0012403A patent/CO2020012403A2/es unknown
- 2020-10-02 CL CL2020002564A patent/CL2020002564A1/es unknown
- 2020-10-05 EC ECSENADI202062930A patent/ECSP20062930A/es unknown
- 2020-10-06 SA SA520420287A patent/SA520420287B1/ar unknown
- 2020-10-06 PH PH12020551656A patent/PH12020551656A1/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA127545C2 (uk) | Сполука-агоніст фактора росту і диференціювання 15 (gdf15) та спосіб її застосування | |
| JP7184866B2 (ja) | Ｐｄ１および／またはｌａｇ３結合性物質 | |
| EP3694529B1 (en) | Trispecific proteins and methods of use | |
| CN102822198B (zh) | Ctla4蛋白和其用途 | |
| EP3565579B1 (en) | A pd1-41bbl fusion protein and methods of use thereof | |
| UA126280C2 (uk) | Біспецифічні конструкції антитіл, які залучають т-клітини | |
| CN101415439A (zh) | Glp-1激动剂、组合物、方法和用途 | |
| UA126275C2 (uk) | Конструкція антитіла для cd70 та cd3 | |
| JP6987136B2 (ja) | 抗ｉｇｆ−ｉ受容体抗体 | |
| UA125166C2 (uk) | Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії | |
| US11066471B2 (en) | Antibodies to MICA and MICB proteins | |
| CN103068399A (zh) | 用于治疗多发性硬化、类风湿性关节炎以及其他自身免疫病症的c1orf32 | |
| UA125847C2 (uk) | Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету | |
| CN110229834A (zh) | M971嵌合抗原受体 | |
| JP2009120583A (ja) | 上皮成長因子受容体アンタゴニストによる難治性ヒト腫瘍の処理 | |
| US9394362B2 (en) | IL-21 antibodies and methods of making or using the antibodies | |
| CN105939727A (zh) | 抗体及其使用方法 | |
| CN107207591A (zh) | 血脑屏障受体抗体及使用方法 | |
| CN104066845A (zh) | 可溶性IGF受体Fc融合蛋白和其用途 | |
| EP2012814B1 (en) | Methods of treating autoimmune diseases | |
| CN103476800A (zh) | 融合蛋白 | |
| WO2018124011A1 (ja) | 運動調節機能向上剤 | |
| CN102548573B (zh) | Nkg2d抑制剂在治疗心血管和代谢疾病如2型糖尿病中的用途 | |
| US11059888B2 (en) | Regulatory T cell activator and use thereof | |
| EP3895732A1 (en) | Anti-igf-i receptor humanized antibody |