UA125166C2 - Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії - Google Patents

Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії Download PDF

Info

Publication number
UA125166C2
UA125166C2 UAA201612374A UAA201612374A UA125166C2 UA 125166 C2 UA125166 C2 UA 125166C2 UA A201612374 A UAA201612374 A UA A201612374A UA A201612374 A UAA201612374 A UA A201612374A UA 125166 C2 UA125166 C2 UA 125166C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
insulin
conjugate
glucagon
immunoglobulin
acting
Prior art date
Application number
UAA201612374A
Other languages
English (en)
Inventor
Сун Йоуп Чун
Сан Юн ХВАН
Сен Су Кім
Сен Су Ким
Ін Йон Чхой
Ин Йон Чхой
Се Чхан Квон
Original Assignee
Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54699312&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA125166(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ханмі Фарм. Ко., Лтд., Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Publication of UA125166C2 publication Critical patent/UA125166C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)

Abstract

Винахід стосується фармацевтичної композиції для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста GLP-1/глюкагону тривалої дії, де кон’югат інсуліну тривалої дії є кон’югатом, в якому аналог інсуліну складається з ланцюга В (SEQ ID NO: 38) та ланцюга А, що містить заміну 14-ї амінокислоти в ланцюгу А (SEQ ID NO: 37) на глутамінову кислоту, та Fc-ділянка імуноглобуліну зв’язана через ПЕГ; де кон’югат подвійного агоніста GLP-1/глюкагону тривалої дії є кон’югатом, в якому подвійний агоніст GLP-1/глюкагону зв’язаний з Fc-ділянкою імуноглобуліну через ПЕГ. Також винахід стосується способу профілактики або лікування діабету.

Description

(54) ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ ДЛЯ ЛІКУВАННЯ ЦУКРОВОГО ДІАБЕТУ, ЩО ВКЛЮЧАЄ
КОН'ЮГАТ ІНСУЛІНУ ТРИВАЛОЇ ДІЇ ТА КОН'ЮГАТ ПОДВІЙНОГО АГОНІСТА а1І-Р-41/ГУЛЮКАГОНУ
ТРИВАЛОЇ ДІЇ
(57) Реферат:
Винахід стосується фармацевтичної композиції для лікування цукрового діабету, що включає кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії, де кон'югат інсуліну тривалої дії є кон'югатом, в якому аналог інсуліну складається з ланцюга В (ЗЕО ІО МО: 38) та ланцюга А, що містить заміну 14-ї амінокислоти в ланцюгу А (ЗЕО ІЮ МО: 37) на глутамінову кислоту, та Ес-ділянка імуноглобуліну зв'язана через ПЕГ; де кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії є кон'югатом, в якому подвійний агоніст (і Р- 1/глюкагону зв'язаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через ПЕГ. Також винахід стосується способу профілактики або лікування діабету. ї
РУ ферююрнюяя М ЕК сш М
ШІ ТІ
М ї | і ЗХ 5 . ща : мох і ЩЕ
ЕКЗ Н ХМК Я
Ся : т :
Бк | :
ВЕ во те
Ж - ї Н
БАХ вою
КО ве ща чсн'кн подвійну агенкиз ЗУ Нулхакаттну 3 Бо-фрагментом імуноговуліну Пі нМикгі
ОХ кеп'юч ат авалога еуквтх з Боскраємектом заулогойумйих 8 нм
ГУ ков'ютатанзнога інсупіки З ахураукехуом Мужотавуяту 117 КК . кун'юмзу поденнога зууифта СК кллузуону Кодуратномузм псумосоуям (1 ММК я . кан'югат анапота нсуміну З БеЕрраменуом імукогобутну 12,7 маукої
КО хан'ямау поданого гони та ОБ нку ову з Кофрагментом вмуноговуиу ПА4 нм
З кан'югат анзлегя інсупіку з Болфраємомтом імунсагабуюну об как уж кон югвт подеїнама агоніста і р.іняювкатону у Бедрраємемуок імуматовбуліму (Та ММК я а яснах анамога пвсуліму Ес рИамазитсм блуногобуціму ІЩЕ нМік
Фіг
Винахід стосується композиції для лікування цукрового діабету, яка містить інсулін та подвійний агоніст І Р-1/глюкагону та способу запобігання або лікування цукрового діабету, який полягає у введенні цієї композиції.
Інсулін є пептидом, який виробляють бета-клітини підшлункової залози, та який відіграє важливу роль у регулюванні цукру в крові в організмі. Цукровий діабет є різновидом метаболічного захворювання, в якому секреція інсуліну є недостатньою або виникає порушення здійснення нормального функціонування, що призводить до появи збільшених рівнів глюкози в крові. Цукровий діабет другого типу є випадком, в разі якого інсулін не виробляється належним чином або відсутня належна обробка такого виробленого інсуліну в організмі та контроль рівнів глюкози в крові є відсутнім, отже вони зростають. Традиційне лікування цукрового діабету другого типу звичайно полягає у застосуванні гіпоглікемічного засобу, що містить хімічний матеріал, як активний інгредієнт або, для деяких пацієнтів, у введенні інсуліну. З іншого боку, лікування цукрового діабету першого типу також суттєво потребує введення інсуліну.
На даний час широко застосованою інсуліновою терапією є ін'єкційне введення інсуліну перед та після вживання їжі. Зараз в продажу є ін'єкційний інсулін, який головним чином застосовують підшкірною ін'єкцією, та спосіб його введення відрізняється в залежності від часу дії. Введення інсуліну, здається, має більш швидку гіпоглікемічну дію, ніж вживання лікарських засобів та може бути безпечно застосовано навіть в таких умовах, в яких застосування лікарських засобів є неможливим. Хоча не існує обмеження кількості застосованої дози, все ж введення інсуліну необхідно здійснювати тричі на день, тому у цьому разі існують незручності, як-то страх хворого перед застосуванням голок, важкість введення, симптоми гіпоглікемії та збільшення ваги тіла, викликане тривалим введенням інсуліну. Наслідком збільшення ваги тіла може бути збільшення ризику виникнення серцево-судинних захворювань, які можуть призвести до побічної дії, тобто до зниження функції контролю цукру в крові.
Наразі вивчають дію подвійного агоніста, зв'язуючи як сі Р-1, так і два пептидні рецептори глюкагону, та яку можна застосувати, як механізм одночасного лікування діабету та ожиріння.
Подвійний агоніст глюкагону та с Р-1 пригнічує надходження (І Р-1 з їжею, сприяє пересиченню, виявляє ліполітичну функцію глюкагону, підтримує зменшення концентрації цукру в крові та має великий вплив на зменшення маси тіла, отже він має велику можливість бути
Зо застосованим у складі новітніх терапевтичних засобів.
Винахідники виявили, що незручність введення інсуліну та цього подвійного агоніста полягає в тому, що через малий час напівперіоду дії цих речовин воно повинно бути здійснено хворому щоденно та як засіб підтримання активності цих білкових ліків, досягнення їх покращеної стійкості та одночасного вирішення вищезазначених проблем, винахідниками було запропоновано білковий кон'югат тривалої дії в якому поєднано загальноприйнятний фізіологічно активний поліпептид та Ес-ділянку імуноглобуліну, які є ковалентно зв'язаними між собою з допомогою непептидильного полімерного лінкера (Патент Кореї Мо 10-0725315).
Зокрема, винахідники підтвердили наявність різкого зростання стійкості дії іп мімо кон'югату інсуліну тривалої дії та кон'югату подвійного агоніста тривалої дії (Патент Кореї Мо 10-1058290, патентна заявка Кореї Мо 10-2014-0022909 та опублікована патентна заявка Кореї Мо 10-2012- 0139579).
Однак існують проблеми, обумовлені виниканням побічних дій, як-то збільшення маси тіла після введення подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону, тому ще зберігається потреба у розробці терапевтичного засобу, призначеного для лікування діабету, який має зменшені побічні дії, частоту вживання та дозування.
Винахідниками здійснено багато спроб розробки терапевтичного засобу, призначеного для лікування діабету, здатного зменшувати підвищенні рівні глюкози в крові, пригнічувати збільшення маси тіла та знижувати ризик виникнення гіпоглікемії, що потрібно для лікування діабету. В результаті винахідники здійснили спробу спільного введення з одночасним застосуванням інсулінового рецептора та подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону та у зв'язку з цим виявили, що спільне введення інсуліну тривалої дії та агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії може максимізувати дотримання пацієнтом режиму лікування, зменшити дозування лікарського засобу, який містить інсулін, знизити ризик виникнення гіпоглікемії та може допомогти зменшити рівень глюкози в крові та маси тіла, тим самим завершуючи даний винахід.
Винахід стосується отримання композиції для лікування цукрового діабету, яка містить інсулін та подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону.
Також винахід стосується способу запобігання або лікування цукрового діабету, який полягає у введенні цієї композиції хворому з цукровим діабетом або з великим ризиком його виникнення. бо Інсулін тривалої дії або кон'югат його аналога та кон'югат агоніста СІ Р-1/глюкагону тривалої дії виявляє відмінну терапевтичну дію на діабет та зокрема спільне введення виявилося ефективним застосуванням терапевтичного антидіабетичного засобу, який може одночасно стимулювати два пептидних рецептори інсулінового рецептора та СІ Р-1 та глюкагону з покращенням тривалості дії та стійкості іп мімо та різким зменшенням потрібного для введення дозування, зменшенням гіпоглікемії та збільшення маси тіла завдяки стійкому контролю рівнів глюкози в крові, а також забезпечує комплаентність до цього лікарського засобу. Зокрема, винахід може різко покращити стійкість лікарського засобу в крові, забезпечує стійку лікувальну дію та зменшує частоту його введення, тим самим максимізуючи зручність для хворого.
Опис фігур.
Фіг. 1 є графіком АОС (площини під кривою), що показує зміну рівня глюкози в організмі натщесерце, виміряне під час застосування кон'югату подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону з Ес- фрагментом імуноглобуліну тривалої дії та кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну, підшкірно введених мишам ар/4б раз на два дні протягом чотирьох тижнів шляхом одиничного або спільного введення.
Фіг. 2 є графіком змінення маси тіла, виміряним перед та після застосування кон'югату подвійного агоніста І Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуногобуліну тривалої дії та кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну, підшкірно введених мишам абБ/аБЬ раз на два дні протягом чотирьох тижнів шляхом одиничного або спільного введення.
Для досягнення вищевказаних цілей, у одному аспекті, винахід стосується композиції, призначеної для лікування цукрового діабету, яка містить інсулін та подвійний агоніст С Р- 1/глюкагону.
Вищезазначений інсулін є кон'югатом тривалої дії, в якому інсулін та біосумісний матеріал або носій є зв'язаними ковалентним зв'язком або лінкером. Подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону є подвійним агоністом СІ Р-1/глюкагону тривалої дії та може бути кон'югатом подвійного агоніста
СІ Р-Т/глюкагону тривалої дії в якому подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону та біосумісний матеріал або носій є зв'язаними ковалентним зв'язком або лінкером. Композиція за винаходом відрізняється наявністю спільного введення інсуліну та подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону.
Цей інсулін та подвійний агоніст С Р-1/глюкагону винаходу відрізняються тим, що вони належать до типу сполук тривалої дії.
Зо Молярне відношення подвійного агоніста СІ Р-1/ глюкагону до інсуліну у композиції за винаходом може коливатися від 1: 0,05 до 1:50, але без обмеження, допоки ці сполуки будуть виявляти зазначену дію за винаходом. Переважно цей інсулін та подвійний агоніст сі рР- 1/глюкагону належать до типу сполук тривалої дії та можуть існувати у формі кон'югату, в якому біосумісний матеріал або носій є зв'язаними.
Застосований у винаході термін "інсулін" охоплює всі пептиди або модифіковані пептиди, які стимулюючим чином діють на інсулінові рецептори. Наприклад, інсулін може бути природним інсуліном, інсуліном короткої дії, базальним інсуліном, аналогом інсуліну, який є матеріалом, отриманим в результаті будь-якої дії, вибраної з заміщення, додавання, делеції та модифікації або може являти собою комбінацію деяких амінокислот природного інсуліну або може бути його фрагментом. Також за винаходом цей інсулін може бути інсуліном тривалої дії для подолання короткого часу напівперіоду дії. Переважно ця сполука може бути інсуліном тривалої дії або аналогом інсуліну тривалої дії, який може бути введено раз на тиждень. Деякі певні приклади інсуліну за винаходом включають інсулін або аналог інсуліну та типи цієї сполуки з тривалою дією, які описано у Патенті Кореї Мо 10-1058290 та у патентних заявках Кореї МоМо 10-2014- 0022909 та 10-2014-0006938, але не обмежуючись ними.
Як тут застосовано, термін "аналог інсуліну" стосується пептиду, який містить змінення однієї або кількох амінокислот у природній послідовності.
Аналог інсуліну може бути аналогом інсуліну, в якому змінено амінокислоту А-ланцюга або
В-ланцюга, вкорочуючи у порівнянні з природним інсуліном, інсуліновий поріг та знижуючи зв'язувальну спорідненість до інсулінового рецептора. Амінокислотні послідовності природного інсуліну наведено нижче.
А - ланцюг:
Спу-Пе-МаІ-Спіи-СтТп-Сув-Сув- Гиг-5ег-Пе-Сув-5ег-І еи- Гут-С1п-Ї ей-С1ПІи-Авп- Туг-Субз-Азп (ЗЕО І
Мо 37)
В - ланцюг:
Ріпе-МаІ-Азп-С1п-Нів-Ї еи-Сувз-Спу-5ег-Нів-І еи-МаІ-Спи-Аїа-Ї еи- Тук- еи-МаІ-Сув-Спту-сп1и-Ага- сСіу-Рпе-РНе-Туг- Тиг-Рго-І увз-Тиг (ЗЕО ІЮ Ме 38)
Хоча інсулін, застосований у втіленні винаходу є аналогом інсуліну, отриманим шляхом генетичної рекомбінації, винахід є не обмежується цією сполукою. Переважно цей інсулін також бо може бути інвертованим інсуліном, варіантами та фрагментами інсуліну тощо та способи його отримання полягають, але без обмеження, як у застосуванні генетичної рекомбінації, так і у застосуванні способу твердофазного синтезу.
Аналог інсуліну є пептидом, який має таку ж саме, як у природного інсуліну, функціональну здатність контролювати рівень глюкози в крові іп мімо. Такі пептиди включають агоністи, похідні, фрагменти, мутанти інсуліну тощо.
Агоніст інсуліну за винаходом є матеріалом, який виявляє таку ж саме біологічну активність, як і інсулін, зв'язуючись з інсуліновим рецептором іп мімо незалежно від структури інсуліну.
Аналог інсуліну за винаходом має гомологію амінокислотної послідовності, відповідно, з А- та В-ланцюгами природного інсуліну та принаймні один амінокислотний залишок цього аналогу може знаходитися у зміненій формі, вибраної з групи, яка складається з заміщення (наприклад; шляхом альфа-метилування, альфа-гідроксилування), делеції (наприклад, дезамінування) або модифікації (наприклад, М-метилування) та їх комбінацій та він може мати відношення до пептиду, здатного контролювати рівень глюкози в крові.
Як тут застосовано, аналог інсуліну може мати відношення до пептидоміметика та до низькомолекулярної або до полімерної сполуки, яку може бути зв'язано з інсуліновим рецептором для контролю рівнів глюкози в крові, хоча природний інсулін та амінокислотна послідовність не мають з ним гомології.
Фрагмент інсуліну за винаходом стосується фрагменту, який має одну або більше амінокислот, які було додано або видалено з інсуліну. Додана амінокислота може бути амінокислотою, якої не існує в природі (наприклад, амінокислотою ЮО-типу). Цей фрагмент інсуліну має функцію контролю рівнів глюкози в крові.
Варіант інсуліну за винаходом стосується пептиду, який має одну або більше амінокислотних послідовностей, які відрізняються від подібних амінокислотних послідовностей інсуліну та має функцію контролю рівнів глюкози в крові в організмі.
Способи отримання агоніста інсуліну, похідної, фрагменту та варіанту може бути застосовано окремо або в комбінації. Наприклад, винахід стосується пептиду, який має одну або більше амінокислот, які відрізняються від подібних амінокислот у природному пептиді, має дезамінування кінцевого амінокислотного залишку та має функцію контролю рівнів глюкози в крові в організмі.
Зо Зокрема аналог інсуліну може бути таким, в якому одну або більше амінокислот вибрано з групи, яка складається з амінокислоти у положенні 1, амінокислоти у положенні 2, амінокислоти у положенні 3, амінокислоти у положенні 5, амінокислоти у положенні 8, амінокислоти у положенні 10, амінокислоти у положенні 12, амінокислоти у положенні 16, амінокислоти. у положенні 23, амінокислоти у положенні 24, амінокислоти у положенні 25, амінокислоти у положенні 26, амінокислоти у положенні 27, амінокислоти у положенні 28, амінокислоти у положенні 29, амінокислоти у положенні 30 В-ланцюга; амінокислоти у положенні 5, амінокислоти у положенні 8, амінокислоти у положенні 10, амінокислоти у положенні 12, амінокислоти у положенні 14, амінокислоти у положенні 16, амінокислоти у положенні 17, амінокислоти у положенні 18, амінокислоти у положенні 19 та амінокислоти у положенні 21 А- ланцюга, заміщеної іншою амінокислотою та переважно заміщеної аланіном, глютаміновою кислотою, аспарагіном, ізолейцином, валіном, глютаміном, гліцином, лізином, гістидином, цистеїном, фенілаланіном, триптофаном, проліном, серином, треоніном або аспарагіновою кислотою. Додатково аналог інсуліну має делецію принаймні однієї амінокислоти та охоплюється обсягом цього винаходу, але до нього також може бути включено будь-який аналог інсуліну без обмеження.
Бажаним аналогом інсуліну є такий аналог інсуліну, який поєднано з біосумісним матеріалом або носієм для подовження часу напівперіоду дії у порівнянні з природним інсуліном та він може бути аналогом інсуліну, описаним у патентних заявках Кореї МоМо 10-2014-0022909 та 10-2014- 0006938, але не обмежуючись ними.
У винаході, подвійний агоніст І Р-1/глюкагону включає всі його пептиди або фрагменти, попередники, варіанти або похідні, які мають подвійну активність СІ Р-1/глюкагону, подібно до подвійної активності оксинтомодуліну, природного подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону. У цьому винаході, подвійний агоніст (І Р-1/глюкагону може бути подвійним агоністом сі Р- 1/глюкагону, якій має механізм пролонгованої дії, призначений для подолання короткого часу напівперіоду дії та переважно він є подвійним агоністом сі Р-1/глюкагону тривалої дії, який може бути введено раз на тиждень. Певні приклади подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону за винаходом зокрема включають, наприклад, подвійний агоніст І Р-1/глюкагону та його похідну та тип цієї сполуки тривалої дії, як описано у патентних заявках Кореї МоМео 10-2012-0137271 та 10-2012-0139579, повний вміст яких включено сюди шляхом посилання. 60 Як тут застосовано, під терміном "оксинтомодулін" мається на увазі пептид, отриманий від преглюкагону, який є попередником глюкагону та цей термін охоплює природний оксинтомодулін та його попередники, похідні, фрагменти та варіанти. Переважно цей пептид може мати амінокислотну послідовність ЕС ІЮ Ме 39 (НББОСТЕТЗОУЗКМІ 05 ККАООГМО
МІ МУТКАМАММІА). "Варіант оксинтомодуліну" є пептидом, який має одну або більше амінокислотних послідовностей, які відрізняються від амінокислотних послідовностей природного оксинтомодуліну та мається на увазі, що цей пептид зберігає функцію активування рецепторів
СИ Р-1 та глюкагону та його може бути отримано із застосуванням будь-якої з операцій заміщення, додавання, делеції та модифікації або поєднання цих операцій у частині амінокислотної послідовності природного оксинтомодуліну.
Термін "похідна оксинтомодуліну" включає пептиди, їх похідні або пептидоміметики, які було отримано шляхом додавання, делеції або заміщення амінокислот оксинтомодуліну для отримання високого, у порівнянні з природним оксинтомодуліном, рівня активування обох рецепторів, тобто рецептора СІ Р-1 та рецептора глюкагону. Переважно похідна оксинтомодуліну має амінокислотну послідовність ЗЕО І Мо 40 та більш переважно, її амінокислоти у 16 та 20 положеннях утворюють кільце.
Під терміном "фрагмент оксинтомодуліну" мається на увазі фрагмент, який має одну або більше амінокислот, яку було додано або видалено до / з М- або С-кінця природного оксинтомодуліну, до якого може бути додано амінокислоту штучного походження (наприклад, амінокислоту Ю-типу) та який має функцію активування обох рецепторів, тобто рецептора СІ Р-1 та рецептора глюкагону.
Кожен зі способів отримання варіантів, похідних та фрагментів оксинтомодуліну може бути застосовано окремо або у комбінації. Наприклад, винахід стосується пептиду, який має одну або більше амінокислот, які відрізняються від амінокислот природного пептиду, має дезамінування М-кінцевого амінокислотного залишку, а також має функцію активування обох рецепторів, тобто рецептора СІ Р-1 та рецептора глюкагону.
У втіленні за винаходом інсулін тривалої дії та подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону може існувати у формі кон'югату, в якому біосумісний матеріал або носій зв'язано з інсуліном або подвійним агоністом ковалентним зв'язком або лінкером. У іншому втіленні цей тип тривалої дії
Зо може існувати у формі, в якій біосумісний матеріал або носій може не бути безпосередньо зв'язаним з інсуліном або подвійним агоністом ковалентним зв'язком. Цей тип вищезазначеного інсуліну або подвійного агоніста (І Р-1/глюкагону з тривалою дією може покращувати час напівперіоду дії або біодоступність у порівнянні з формою, в якій послідовність інсуліну або подвійного агоніста не належить до типу з тривалою дією, але в іншому є такою ж саме.
Відповідно за втіленням винаходу інсулін тривалої дії існує у формі, в якій Ес-ділянку імуноглобуліну з допомогою непептидильного полімерного лінкера приєднано до аналога інсуліну, в якому амінокислоти у положенні 14 А-ланцюга інсуліну заміщено молекулами глютамінової кислоти. Подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону тривалої дії може існувати у вигляді композиції, в якій Ес-ділянку імуноглобуліну з допомогою, але без обмеження, непептидильного полімерного лінкера приєднано до амінокислот у положенні 30 подвійного агоніста СІ рР- 1/глюкагону.
Винахідники виявили, що спільне введення інсуліну та подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону може запобігнути збільшенню маси тіла, яке пов'язано з окремим введенням інсуліну та шляхом зменшення цієї кількості інсуліну може бути зменшено ризик виникнення гіпоглікемії. Крім того, для появи більш покращеної дії на зменшення рівнів глюкози в крові, ніж дія, яка виникає внаслідок окремого введення подвійного агоніста, застосування спільного введення цих двох лікарських засобів може зменшити побічні дії та збільшити корисні дії у порівнянні з окремим введенням кожного лікарського засобу. Винахідники також підтвердили, що цю композицію для спільного введення може бути застосовано, як ефективний терапевтичний засіб з одночасним зменшенням побічної дії загальноприйнятного антидіабетичного терапевтичного засобу.
Як тут застосовано, термін "біосумісний матеріал" або "носій" стосується матеріалів, які можуть збільшувати тривалість активності інсуліну або аналога інсуліну або подвійного агоніста
СІ Р-Т/глюкагону у разі, якщо цей біосумісний матеріал та носій є безпосередньо або небезпосередньо, ковалентно або нековалентно зв'язаними з інсуліном або аналогом інсуліну або з подвійним агоністом СІ Р-1/глюкагону за винаходом з отриманням кон'югату. Наприклад, у разі утворення кон'югату, матеріал, який може збільшити час напівперіоду дії іп мімо інсуліну або аналога інсуліну або подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону може бути біосумісним матеріалом або носієм відповідно за винаходом. Тип біосумісного матеріалу або носія, який може бути застосовано для подовження часу напівперіоду дії може бути різним та приклади таких сполук бо включають полієтиленгліколь, жирні кислоти, холестерин, альбумін та його фрагмент, альбумін-
зв'язуючу речовину, полімер, який має ланокланки специфічної амінокислотної послідовності, які повторюються, антитіла, фрагменти антитіл, Ес-неонатальний рецептор (ЕсКп), в'язівники, сполучну іп мімо тканину, нуклеотиди, фибронектин, трансферин, сахариди, полімери тощо.
Зрозуміло, що їх може бути застосовано у поєднанні з двома або більше вищезазначеними носіями або біосумісними матеріалами. До біосумісного матеріалу або носія також відноситься біосумісний матеріал, який збільшує час напівжиття іп мімо завдяки ковалентному або нековалентному зв'язку.
Способи зв'язування біосумісного матеріалу або носія з інсуліном або подвійним агоністом за винаходом полягають у застосуванні, але без обмеження, способу генетичної рекомбінації та зв'язування іп мімо із застосуванням полімерних хімічних сполук або хімічних сполук з низькою молекулярною масою. Матеріалом, який зв'язує ЕсКп може бути Ес-ділянка імуноглобуліну.
Наприклад, у разі застосування поліетиленгліколю, як носія, може бути вжито спосіб перекодування від Атбгх Іпс., з допомогою якого можна здійснювати специфічне до певних положень прикріплення до поліетиленгліколю. Також може бути застосовано спосіб глікоПЕГілування від компанії Меозе, з допомогою якого можна здійснювати специфічне прикріплення до глікозилованої групи. Також може бути застосовано, але без обмеження, спосіб застосування ПЕГ з можливістю його подальшого вилучення, в якому поліетиленгліколь усувають шляхом делеції. Також може бути застосовано способи збільшення біодоступності із застосуванням ПЕГ. Додатково може бути застосовано включення полімерів, як-то поліетиленгліколю, поліетиленгліколь, поліпропіленгліколю, кополимеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахаридів, декстрану, полівінілового етеру, біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітину або гіалуронової кислоти.
У разі застосування альбуміну, як носія може бути застосовано спосіб, який полягає у безпосередньому ковалентному зв'язуванні альбумінів або фрагментів альбуміну з пептидами інсуліну для збільшення стійкості іп мімо. Навіть у разі відсутності безпосереднього зв'язування альбуміну може бути залучено спосіб, який полягає у застосуванні альбумін - зв'язуючих матеріалів, наприклад, антитіл або фрагментів антитіл, які специфічно зв'язуються з альбуміном, тобто у зв'язуванні цих матеріалів з пептгидами для подальшого зв'язування
Зо альбуміну. Також може бути залучено спосіб, який полягає у зв'язуванні з пептидами певного пептиду / білка, який має зв'язувальну спорідненість до альбуміну. Також може бути застосовано спосіб, який полягає у зв'язуванні з пептидами, але без обмеження ними, жирної кислоти зі зв'язувальною спорідненістю до альбуміну. До цієї групи способів може бути включено будь-який технічний прийом або спосіб зв'язування, який може збільшити стійкість іп мімо у разі застосування альбуміну.
Цей винахід також стосується способу зв'язування з пептидом із застосуванням антитіл або фрагментів антитіл, як носіїв, метою якого є подовження часу напівперіоду дії іп мімо. У цьому разі може бути застосовано антитіло або фрагмент антитіла, яке має сайт зв'язування ЕсКп та будь-який фрагмент антитіла, який має інший, ніж ЕсКп сайт зв'язування, як-то Бар. Також у винаході може бути застосовано технологію СомХ-Боду від компанії СомХ, яка полягає у вживанні каталітичних антитіл та призводить до подовження часу напівперіоду дії іп мімо із застосуванням Ес - фрагментів. У разі застосування Ес - фрагменту, лінкерне зв'язування з Ес - фрагментом та пептидом та спосіб такого зв'язування може полягати, але без обмеження, у застосуванні пептидного зв'язку або поліетиленгліколю тощо та тут може бути застосовано будь-який спосіб хімічного зв'язування. На додачу слід зазначити, що коефіцієнт зв'язування Ес - фрагменту та інсуліну за винаходом може складати, але без обмеження, 1:1 або 1:2.
З метою подовження часу напівперіоду дії іп мімо до винаходу може бути включено спосіб, який полягає у застосуванні пептидів або білкових фрагментів, як носіїв для зв'язування з аналогом інсуліну. Застосовані в цьому способі пептиди або білкові фрагменти можуть бути еластиноподібними поліпептидами (ЕЇР), які складаються з повторюванихваних ланок комбінації певних амінокислот. Також винахід стосується способу застосування штучного поліпептиду Хіеп від компанії Мегзагіі5, а також технологію структурно-індукуючого зонду (ЗІР) від компанії 7еаіапа, застосування якої збільшує час напівперіоду дії іп мімо із застосуванням мультилізину та технологію утворення злитих конструкцій від компанії РгоЇог. До винаходу також може бути включено застосування трансферину, який, як відомо, має великий рівень стійкості іп мімо або фібронектину та його похідних, які є компонентами сполучної тканини. Пептиди або білки, які зв'язуються з інсуліном винаходу не є обмеженою групою та обсяг винаходу охоплює будь-яких пептидів або білків, які збільшують час напівперіоду дії інсуліну іп мімо. Зв'язування інсуліну за винаходом та пептидів або білків, які збільшують час напівперіоду дії іп мімо може бо бути здійснено за рахунок ковалентного зв'язку. Застосованими типами лінкеру та способом зв'язування може бути, але без обмеження, пептидне зв'язування або застосування поліетиленгліколю тощо, але взагалі можливо застосування будь-якого способу хімічного зв'язування.
Слід також додати, що застосований для подовження часу напівперіоду дії іп мімо носій може бути непептидильним матеріалом, як-то полісахаридом або жирною кислотою.
Лінкерне зв'язування з носієм, метою якого є подовження часу напівперіоду дії іп мімо може полягати у застосуванні пептидів, поліетиленгліколів, жирних кислот, цукрів, полімерів, низькомолекулярних сполук, нуклеотидів та їх комбінацій та будь-якого хімічного зв'язку, як-то, але без обмеження, нековалентного або ковалентного хімічного зв'язку.
Композиція, яка може збільшити біодоступність або постійно зберігати активність може бути мікро- чи наночастинковою композицією з уповільненим вивільненням тощо, отриманою із застосуванням РІ СА, гіалуронової кислоти, хітозану тощо.
Крім того, композицію з різними аспектами, яка може збільшити біодоступність або постійно зберігати активність може бути вибрано з групи, яка складається з імплантів, інгаляційних композицій, композицій для трансназального застосування або пластирів.
У одному зразковому втіленні винаходу приклади інсуліну, призначеного для введення у комбінації з подвійним агоністом СІ Р-1/глюкагону можуть включати природний інсулін, аналог інсуліну, інсулін тривалої дії тощо (наприклад, може бути включено природний інсулін, як-то
Нитипїіп, Момоїїйп, інсулін короткої дії, як-то МомоЇод, Нитаї?!соод, Аріага та інсулін тривалої дії як-то
Іапіив, І еметіг, Тгевіва).
У іншому зразковому втіленні за винаходом, приклади подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону, який може бути введено у комбінації з інсуліном або аналогом інсуліну та їх композицією тривалої дії можуть містити природний подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону, як-то оксинтомодулін та його похідну та його композицію тривалої дії тощо.
Матеріал носія, який може бути застосовано у винаході може бути вибрано з групи, яка складається з антитіла, Ес-ділянки імуноглобуліну, альбуміну, жирної кислоти, вуглеводу, полімеру з повторюючимися пептидними складовими, а також трансферину та ПЕГ та переважно він є Ес-ділянкою імуноглобуліну. У зразковому втіленні винаходу подвійний агоніст
СІ Р-Т/глюкагону тривалої дії є зв'язаним з носієм непептидильним полімерним лінкером. У
Зо додатковому зразковому втіленні матеріал носія, який зв'язано з непептидильним полімерним лінкером є Ес - фрагментом імуноглобуліну.
Кон'югат інсуліну тривалої дії (або, для стислості, кон'югат інсуліну) або подвійний агоніст
СІ Р-1/глюкагону тривалої дії (або, для стислості, кон'югат подвійного агоніста) за винаходом є такою формою, в якій інсулін або подвійний агоніст зв'язано з Ес-ділянкою імуноглобуліну та яка
Є стійкою та безпечною. Зв'язування Ес-ділянки імуноглобуліну та інсуліну або подвійного агоніста може бути здійснено шляхом злиття в межах рамки зчитування без застосування лінкера або із застосуванням непептидильного полімерного лінкера. Ес-фрагмент імуноглобуліну у цьому винаході може бути застосовано взаємозамінно з фрагментами імуноглобуліну.
Термін "непептидильний полімер" стосується біосумісного полімеру, який має дві або більше повторюваних ланок, що зв'язані між собою будь-яким ковалентним зв'язком, виключаючи пептидний зв'язок. Непептидильний полімер у цьому винаході може бути застосовано взаємозамінно з непептидильним лінкером.
Корисний для винаходу непептидильний полімер може бути вибрано з групи, яка складається з біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації. Біорозкладаний полімер може бути поліетиленгліколем, поліпропіленгліколем, кополімером етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованим поліолом, полівініловим спиртом, полісахаридом, декстраном, полівініловим етиловим етером, полімолочною кислотою (РГА) або полілактид-ко-гліколідом (РІ СА) та переважно він є поліетиленгліколем. Крім того, винахід також стосується їх похідних, які є відомими у цій галузі та похідних, які може бути легко отримано із застосуванням відомого в цій галузі способу.
Пептидний лінкер, який застосовано у злитому білку, отриманому з допомогою загальноприйнятного способу злиття в межах рамки зчитування має недоліки через те, що він легко розщеплюється протеолітичним ферментом іп мімо, отже через те не може бути отримано викликаного носієм очікуваного та задовільного подовження часу сироваткового напівперіоду дії активного лікарського засобу. Однак, у цьому винаході, для підтримання сироваткового часу напівперіоду дії пептиду може бути застосовано полімер, який має стійкість до дії протеолітичного ферменту та є схожим до полімеру носія. Отже, у винаході може бути застосовано будь-який непептидильний полімер без обмеження, допоки він буде залишатися бо полімером, який має вищезазначену функцію, тобто полімером, який має стійкість до протеолітичного ферменту іп мімо. Цей непептидильний полімер має молекулярну масу в межах 1-100 кДа та переважно в межах 1-20 кДа. Непептидильний полімер за винаходом, який є зв'язаним з Ес-ділянкою імуноглобуліну може належати до одного типу або бути комбінацією різних типів полімерів. Застосований у винаході непептидильний полімер має реакційну групу, здатну до зв'язування з Ес-ділянкою імуноглобуліну та білковим лікарським засобом. Цей непептидильний полімер має реакційну групу, розташовану на обох кінцях, яка є переважно вибраною з групи, що складається з реакційної альдегідної групи, пропіональдегідної групи, бутиральдегідної групи, малеїімідної групи та сукцинімідної похідної. Сукцинімідна похідна може бути сукцинімідил пропіонатом, гідроксисукцинімідилом, сукцинімідил карбоксиметилом або сукцинімідил карбонатом. Зокрема, коли непептидильний полімер має на обох кінцях реакційну альдегідну групу, то він має здатність до ефективного зв'язування обох кінців з фізіологічно активним поліпептидом та імуноглобуліном з мінімальними неспецифічними реакціями.
Кінцевий продукт, отриманий шляхом відновного алкілування з допомогою альдегідного зв'язку є набагато стійкішим, ніж продукт, отриманий з допомогою амідного зв'язку. Альдегідна реакційна група вибірково реагує на М-кінці в умовах низького рН та зв'язується з лізиновим залишком, утворюючи ковалентний зв'язок в умовах високого рнН, як-то рН 9,0. Реакційні групи на обох кінцях непептидильного полімеру можуть бути однаковими або відрізнятися, наприклад, непептидильний полімер може мати малеіїмідну групу на одному кінці та альдегідну, пропіональдегідну або бутиральдегідну групу на іншому. У разі застосування поліетиленгліколю, який має реакційну гідроксигрупу на обох кінцях, як непептидильного полімеру, цю гідроксигрупу може бути активовано різними реакційними групами з допомогою відомих хімічних реакцій або для отримання кон'югату СІ Р-1/глюкагону тривалої дії за винаходом може бути застосовано поліетиленгліколь з модифікованою реакційною групою, яку можна придбати у приватних постачальників.
До того ж, Ес-ділянка імуноглобуліну надає переваги з точки зору отримання, очищення та кількості виходу кон'югату через те, що її молекулярна маса є відносно малою у порівнянні з загальною молекулярною масою, а також через значне збільшення гомогенності цих матеріалів та зниження можливості викликання антигенної відповіді в крові завдяки тому, що амінокислотні послідовності для кожного антитіла є різними та видаленню ЕРар-частини з високим рівнем
Зо гетерогенності.
Додатково термін "Бо-ділянка імуноглобуліну», як тут застосовано, стосується важколанцюгової сталої ділянки 2 (СН2) та важколанцюгової сталої ділянки З (СНЗ) імуноглобуліну, виключаючи змінні ділянки важкого та легкого ланцюгів, важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ1) імуноглобуліну. Додатково він може включати шарнірну ділянку важколанцюгової сталої ділянки. Також Ес-ділянка імуноглобуліну за винаходом може містити частину або всю Ес - ділянку, включаючи важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та/або легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ) за виключенням змінних ділянок важкого та легкого ланцюгів імуноглобуліну, допоки вона зберігає фізіологічну дію, суттєво подібну або кращу, ніж дія природного білка. Крім того, Ес-ділянка імуноглобуліну може бути фрагментом, який має делецію у відносно великій частині амінокислотної послідовності СН2 та/або СНЗ. Інакше кажучи, Ес-ділянка імуноглобуліну за винаходом може містити 1) домен
СНІ, домен СН2, домен СНЗ та домен СНЯА, 2) домен СНІ та домен СНІ, 3) домен СНІ та домен СНЗ, 4) домен СН2 та домен СНЗ, 5) комбінацію одного або більше доменів та шарнірну ділянку імуноглобуліну (або частину цієї шарнірної ділянки) та 6) димер кожного домену важколанцюгових сталих ділянок та легколанцюгової сталої ділянки. Також Ес-ділянка імуноглобуліну за винаходом має природні амінокислотні послідовності, а також послідовності, які є їх похідними (отриманими внаслідок мутації). Похідна амінокислотної послідовності має іншу, ніж "батьківська" послідовність, отриману внаслідок делеції, вставки, неконсервативного або консервативного заміщення або їх комбінацій, які зачіпають один або більше амінокислотних залишків природної амінокислотної послідовності. Наприклад відомо, що прийнятною мішенню для модифікації можуть бути важливі для зв'язування амінокислотні залишки Ес-ділянки до, розташовані у положеннях 214-238, 297-299, 318-322 або 327-331.
Також можливо застосування різних видів похідних, включаючи похідну, в якій видалено ділянку, здатну утворювати дисульфідний зв'язок або усунуто певні амінокислотні залишки на
М-кінці природної Ес - форми або до якої додано метіоніновий залишок. Також для усунення ефекторних функцій може бути здійснено делецію у сайті зв'язування комплементу, як-то у сайті зв'язування Сід та у сайті АЮОСС (залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності). Способи отримання цих похідних послідовності Ес-ділянки імуноглобуліну наведено у міжнародних патентних публікаціях У/О97/34631 та УМО 96/32478. бо У цій галузі добре відомо про амінокислотні заміщення у складі білків та пептидів, які не повністю змінюють активні властивості (Н. Мешгасй, К. С. НІЇЇ, Те Ргоїеїп5 ("Білки"), Асадетіс
Рге55, Мем МогКк, 1979). Найбільш часто мають місце заміщення типу АїЇа/5ег, мМаїІЛіє, Азр/сім,
Тпг/зег, АїІа/сіу, АїІа/ТНг, Зег/Авп, Аїа/Ма!ї, Зег/СсСіу, Тпу/РНе, АїІа/Рго, Гуз/Аго9, Авр/Авп, І ешІе,
І еим/маї, АІа/сіІм та Азр/сіу, які виникають в обох напрямках. Окрім того, якщо це бажано, Ес - ділянку може бути модифіковано шляхом фосфорилювання, сульфатування, акрилування, глікозилювання, метилування, фарнезилування, ацетилювання, амідування тощо. Вищеописані похідні Ес - ділянки є похідними, які виявляють біологічні активні властивості, ідентичні активним властивостям Ес - ділянки винаходу або мають покращену у порівнянні з Ес - ділянкою структурну стійкість, наприклад, стійкість до нагрівання, дії рН тощо.
Крім того, ці Ес - ділянки може бути отримано з природних форм, виділених з організму людини та інших тварин, як-то великої рогатої худоби, кіз, свиней, мишей, кролів, хом'яків, щурів та морських свинок або вони можуть бути рекомбінантами або похідними, отриманими з трансформованих тваринних клітин або мікроорганізмів. Зазначені тут Ес - ділянки може бути отримано з природного імуноглобуліну шляхом виділення цілих імуноглобулінів з організму людини або тварини та наступної їх обробки протеолітичним ферментом. Папаїн розщеплює природний імуноглобулін на ділянки Раб та Ес та обробка пепсином призводить до отримання фрагментів рЕс та Е(аб)2. Ці фрагменти може бути піддано, наприклад, ексклюзійній хроматографії для виділення фрагментів Ес або рЕс Переважно с - ділянка людського походження є рекомбінантною Ес-ділянкою імуноглобуліну, отриманою з мікроорганізму.
Крім того, ЕРс-ділянка імуноглобуліну може існувати у формі, яка має природні цукрові ланцюги, цукрові ланцюги, які збільшено або зменшено у порівнянні з природною формою або може існувати у деглікозилованій формі. Збільшення, зменшення або усунення цукрових ланцюгів Ес-фрагменту імуноглобуліну може бути здійснено із застосуванням загальноприйнятних способів у цій галузі, як-то хімічного способу, ферментативного способу та генно-інженерних технологій із застосуванням мікроорганізму. Усунення цукрових ланцюгів з Ес - ділянки призводить до різкого зменшення зв'язувальної спорідненості до частини С1д першого компоненту комплементу (С1) та до зменшення або до втрати залежної від антитіл клітинно- опосередкованої цитотоксичності або комплемент-залежної цитотоксичності, не викликаючи таким чином небажаних імунних відповідей іп мімо. У цьому випадку більш прийнятним для
Зо здійснення мети винаходу може бути застосування Ес-ділянки імуноглобуліну у деглікозилованій або аглікозилованій формі, як носія лікарського засобу.
Як тут застосовано, термін "деглікозилування" стосується ферментативного усунення цукрових груп з Ес - ділянки та термін "аглікозилування" стосується утворення цих ділянок у неглікозилованій формі із застосуванням прокаріотів, переважно Е. соїї.
Слід зазначити, що Ес-ділянку імуноглобуліну може бути отримано від людини або інших тварин, включаючи велику рогату худобу, кіз, свиней, мишей, кролів, хом'яків, щурів та морських свинок та, переважно, від людини.
Також Ес-ділянка імуноглобуліну може бути Ес-ділянкою, отриманою від імуноглобулінів Ідс,
ІА, 940, ІДЕ та ІМ або із застосуванням їх комбінацій або гібридів. Переважно вона є отриманою від імуноглобулінів (9 або ІдМ, які є одними з найбільш поширених білків людської крові та більш переважно її отримують, але без обмеження, від імуноглобулінів Ідс, які, як відомо, збільшують час напівперіоду дії ліганд -зв'язуючих білків.
З іншого боку, під терміном "комбінація", як тут застосовано, мається на увазі, що поліпептиди, які кодують одноланцюгові Ес-ділянки імуноглобуліну однакового походження є зв'язаними з одноланцюговим поліпептидом іншого походження з утворенням димеру або мультимеру. Інакше кажучи, цей димер або мультимер може бути утворено з двох або більше фрагментів, вибраних з групи, яка складається з Ес - фрагментів імуноглобулінів Іде, ІдА, ДМ,
ІЧО та І9ЗЕ.
Як тут застосовано, під терміном "гібрид" мається на увазі, що у одноланцюговій Ес-ділянці імуноглобуліну присутня послідовність, яка відповідає принаймні двом Ес - фрагментам різного походження та у цьому винаході можливо застосування різних типів гібридів. Інакше кажучи, гібрид складається з 1-4 доменів, вибраних з групи, яка складається з доменів СНІ, СН2, СНЗ та СнаА Ес - фрагментів імуноглобулінів дос, ІдА, ІДМ, дО та ІДЧЕ, а також може містити шарнірну ділянку.
З іншого боку, клас імуноглобулінів Їд також може бути розділено на підкласи Ідс1, Іде,
ОЗ та Ідб54 та у цьому винаході можливо застосування їх комбінації або гібридизації.
Переважно це стосується підкласів Ідс2 та !дс4 та найбільш переважно Рс-ділянки імуноглобуліну Ідс4, яка має суттєву ефекторну функцію, як-то функцію комплемент - залежної цитотоксичності (СОС). 60 Інакше кажучи, призначена для носія лікарського засобу за винаходом РЕс-ділянка імуноглобуліну може бути, але без обмеження, наприклад, аглікозилованою Ес - ділянкою, яка походить від людського імуноглобуліну Ід04. Застосування Ес - ділянки людського походження
Є більш бажаним, ніж застосування Ес - ділянок іншого походження, які можуть викликати небажані імунні відповіді, наприклад, можуть діяти, як антиген в організмі людини з виробленням нових антитіл.
Спосіб отримання інсуліну тривалої дії за винаходом не є специфічно обмеженим. Підробиці цього способу отримання та його дії описано, наприклад, у Патентах Кореї МоМо 10-1330868, 10- 1324828, 10-1058290, у опублікованій патентній заявці Кореї Мо 10-2011-0111267 та у патентній заявці Кореї Мо 10-2014-0022909.
У втіленні за винаходом кон'югат аналога інсуліну тривалої дії було отримано шляхом монОоПЕГілування М-кінцевого положення Ес-ділянки імуноглобуліну та його змінення на фенілаланін у положенні 1 В-ланцюга інсуліну та аналога інсуліну (Приклад 8).
Спосіб отримання подвійного агоніста Сі Р-1/глюкагону тривалої дії за винаходом не є специфічно обмеженим. Підробиці цього способу отримання та його дії описано, наприклад, у патентній заявці Кореї Ме 10-2012-0139579. Кон'югат аналога інсуліну тривалої дії у втіленні за винаходом було отримано шляхом моноПЕГілування М-кінцевого положення Ес-ділянки імуноглобуліну та його змінення на залишок цистеїну у положенні 30 подвійного агоніста сі Р- 1/глюкагону.
У іншому аспекті, винахід стосується композиції, яка містить інсулін тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії.
У разі введення комбінації цього кон'югату інсуліну тривалої дії та подвійного агоніста сі р- 1/глюкагону тривалої дії, кон'югат інсуліну тривалої дії діє на інсуліновий рецептор та кон'югат подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону одночасно діє на рецептор глюкагоноподібного пептиду- 1 та на глюкагоновий рецептор зі зменшенням рівнів глюкози в крові у порівнянні з окремим введенням кожного з них та виявляє стійке змінення в бік покращення. До того ж спільне введення вищезазначених кон'югатів може зменшити небезпеку виникнення гіпоглікемії, яка може з'явитися після окремого введення інсуліну та зменшити загальне дозування інсуліну з допомогою пептиду секреції інсуліну. Застосування кон'югату інсуліну тривалої дії та подвійного агоніста (І Р-1/глюкагону тривалої дії має великі переваги, обумовлені кількістю введень
Зо лікарського засобу хворому з хронічною формою захворювання, що у іншому випадку потребує щоденних введень, тобто цю кількість можна буде різко зменшити завдяки збільшенню часу напівперіоду дії лікарського засобу з крові та стійкості іп мімо, що таким чином покращує якість життя хворого. Отже, застосування цього втілення за винаходом є дуже ефективним у лікуванні цукрового діабету. Фармацевтична композиція за винаходом має відмінну порогову дозу та стійкість іп мімо та значно зменшує застосоване у спільному введенні дозування.
Кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії може бути одночасно, послідовно або у зворотному порядку введено та одночасно введено у комбінації з прийнятною ефективною кількістю. Переважно кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону тривалої дії може бути одночасно, послідовно або у зворотному порядку введено після зберігання у окремих контейнерах.
Кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону тривалої дії, які складають композицію для спільного введення за винаходом може бути надано у формі набору для лікування цукрового діабету, який або включено до складу одного контейнера або може зберігатися в окремому контейнері. Цей набір може також містити фармацевтично прийнятний носій та інструкцію по застосуванню.
Термін "цукровий діабет" за винаходом стосується метаболічних захворювань, в яких секреція інсуліну є недостатньою або нормальні функції не працюють та які відрізняються збільшеними рівнями глюкози в крові. Спільне введення хворому композиції за винаходом може контролювати рівні глюкози в крові для лікування цукрового діабету.
Як тут застосовано, термін "запобігання" стосується всіх дій, які пригнічують або затримують розвиток цукрового діабету шляхом спільного введення композиції за винаходом. "Лікування" стосується всіх дій, які зменшують, послаблюють або пом'якшують симптоми цукрового діабету шляхом спільного введення композиції за винаходом. Це лікування цукрового діабету є застосовним до будь-якого ссавця, який може зазнати цього захворювання та приклади таких ссавців включають не тільки людину та приматів, а також, але без обмеження, свійську худобу, як-то корів, свиней, овець, коней, собак та кішок та переважно людину.
Як тут застосовано, термін "введення" стосується введення хворому кількості попередньо визначеної речовини із застосуванням прийнятного способу. Композицію за винаходом може бути введено будь-яким загальноприйнятним шляхом, допоки вона буде здатною досягати 60 бажаної тканини. Наприклад, може бути застосовано, але без обмеження, внутрішньочеревне,
внутрішньовенне, внутрішньом'язове, підшкірне, внутрішньошкірне, пероральне, місцеве, інтраназальне, внутрішньолегеневе або ректальне введення. Незважаючи на розчинення пептидів після перорального введення, активні інгредієнти композиції для такого введення повинні бути забезпеченими покриттям або отриманими із захистом від руйнування у шлунку.
Переважно зазначену композицію може бути введено у формі ін'єкцій. Додатково слід зазначити, що цю композицію тривалої дії може бути введено із застосуванням будь-якого пристрою, в якому активний матеріал може бути перенесено до клітини-мішені.
Дозу та частоту введення фармацевтичної композиції за винаходом визначають в залежності від типу активного інгредієнту та від інших факторів, як-то від призначеного для лікування захворювання, шляху введення, віку, статі та маси тіла хворого та тяжкості захворювання.
Фармацевтична композиція за винаходом може також містити фармацевтично прийнятний носій. Термін "фармацевтично прийнятний носій" за винаходом стосується розчинника або носія, який не пригнічує біологічної активності та властивостей введеної сполуки без стимулювання організму. Носій для перорального введення може включати в'язівник, мастило, розпушувач, наповнювач, солюбілізатор, диспергуючий засіб, стабілізатор, суспендуючий засіб, барвник та ароматизатор. Для ін'єкційних препаратів носій може включати буферний агент, консервант, знеболюючий засіб, солюбілизатор, ізотонічний агент та стабілізатор. Для препаратів для місцевого введення носій може включати основу, наповнювач, мастило та консервант.
Композицію за винаходом може бути отримано у вигляді різних лікарських форм у комбінації з вищезазначеними фармацевтично прийнятними носіями. Наприклад, для перорального введення цю фармацевтичну композицію може бути отримано у вигляді таблеток, драже, капсул, еліксирів, суспензій, сиропів або облаток. Для ін'єкційних препаратів цю фармацевтичну композицію може бути отримано в ампулі, як одиничну лікарську форму або у багатодозовому контейнері. Цю фармацевтичну композицію також може бути отримано у розчинах, суспензіях, таблетках, пігулках, капсулах та у вигляді композицій тривалої дії.
З іншого боку, приклади прийнятних для фармацевтичних композицій носія, наповнювача та розчинника включають лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбіт, маніт, ксиліт, еритрит, мальтит,
Зо крохмаль, гуміарабік, альгінат, желатин, фосфат кальцію, силікат кальцію, целюлозу, метилцелюлозу, мікрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, воду, метілгидроксибензоат, пропілгідроксибензоат, тальк, стеарат магнію та мінеральні оливи. Крім того, фармацевтичні композиції можуть додатково включати наповнювачі, анти-коагулянти, мастила, зволожувачі, ароматизатори та антисептики.
У іншому аспекті винахід стосується способу запобігання або лікування діабету, який полягає у введенні композиції, яка містить інсулін та подвійний агоніст (СІ Р-1/глюкагону хворому, який має великий ризик виникнення цукрового діабету або хворіє на цукровий діабет.
Ця композиція та неалкогольна жирова хвороба печінки є такими, як описано вище.
Операцію введення може бути здійснюють спільним введенням кон'югату інсуліну тривалої дії та кон'югату подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону тривалої дії, але без обмеження ними.
Кожну з цих сполук може бути введено одночасно, послідовно або у зворотному порядку та може бути одночасно введено у відповідній ефективній кількості.
Композиція за винаходом, яка містить як кон'югат інсуліну тривалої дії, так і кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії може значно зменшити рівні глюкози в крові та, незважаючи на те, що її застосовують раз на тиждень, вона не має жодної побічні дії, спрямованої до збільшення маси тіла, отже її може бути застосовано у запобіганні та лікуванні цукрового діабету.
Далі винахід буде більш детально описано з допомогою прикладів. Слід зазначити, що ці приклади призначено тільки для ілюстрації та не повинні тлумачитися, як обмеження обсягу цього винаходу.
Приклад 1
Отримання векторів експресії одноланцюгового аналога інсуліну.
Для отримання аналога інсуліну зі зміненою амінокислотою А- або В-ланцюга інсуліну із застосуванням вектора експресії природного інсуліну, як матриці, було синтезовано олігонуклеотиди у звичайній та зворотній орієнтації (Таблиця 2), після чого було здійснено ПЛР- реакцію та отримано ампліфікацію відповідного аналога гена.
Змінені послідовності амінокислот А- або В-ланцюга та назви їх аналогів наведено у Таблиці 1. Інакше кажучи, Аналог 1 є формою, в якій гліцин у положенні 1 А-ланцюга було заміщено аланіном та Аналог 4 є формою, в якій гліцин у положенні 8 В-ланцюга було заміщено аланіном. (510)
Таблиця 1
Праймери, призначені для ампліфікації аналога інсуліну наведено у Таблиці 2.
Таблиця 2
АСАаСАТТаТТоСАСААТСОСАСОЯСТТОоТаСАсСасАССС З ЗЕОІЮ Мо 2 5 аатТАсАдасАттаТаттосСАссасассАасасттотасдаааА з" ЗЕО ІЮ Мо 4 5 ааАТоСстТоАаттТАсСАСсасатттосАаастастАада з ЗЕО ІЮ Мо б 5 даСсТТсССАССАааатаТаАСаСАСАСАДаИта тат ТААсС З ЗЕО ІЮ Мо 8 5 сттасататаТтАСААспААсастоаТСсСССаТсСАСАСТАа 3" ЗЕО ІЮ Мо 10 5 сатттаесатататАапдАдс,ссасстоатссссСасАСАС з ЗЕО ІЮ Мо 12 5 асоссатсттессатататаСассдадасстосттосссасА з ЗЕО ІЮ Мо 14 5 -сдатаатстосдастаттсадсасаасСсАаАдтастаа-я ЗЕО ІЮ Мо 16 5 -атлаттстосдастаа т осдасадаСАаАтТаста-з" ЗЕО ІЮ Мо 18 5 Умови здійснення реакції ПЛР для ампліфікації аналога інсуліну були наступними: 30 сек. при температурі 950, 30 сек. при температурі 55"С та 6 хв. при температурі 6870 з повторенням цієї процедури 18 разів. Отриманий в цих умовах фрагмент аналога інсуліну було вставлено у вектор експресії РЕТ22бр для експресії у вигляді тілець включень всередині клітини та цей вектор експресії отримав назву рЕТ22Б-інсулінові аналоги 1-9. Цей отриманий вектор експресії містив нуклеїнову кислоту, що кодує амінокислотну послідовність аналогів 1-9 інсуліну під контролем промотора Т7 та було досягнуто експресію цього вектора у хазяїні у вигляді тілець включень.
Послідовності ДНК та послідовності білка кожного з аналогів інсуліну 1-9 наведено у Таблиці
З нижче.
оАпаюд |... фепсе і... 30 МО,
Ана ї ЦИМА ТТ ОТ ААС САА САС ОЗ ТОРС ТА САК СТО ОТАК ОС. ст ТАК ОСТА ст, Те сх АА СіАСМ ТТ ТИС ТАС АКА КС : | Ал АСМ ОСИ Ба АЮ УА АК САС ОК М АСЮ У С СА у іа АС СТО М Осбе сМУ СС ОТ ОА НМ АСУ СТО Со ! ' | жк Кт ОТ сим я б СТ КА вк аск АТ що : | уза СА ТО АСК АСУ Й ТО ТК КС ТАЄ СА Є оо по В о зн ! Реотеїй те Мо Аа ія Му де кома Ку кі Ва дна маку АЛ вика Ту бо хи ! : | пи бує сім си Акрил Гук Те бек рух Те Ле Аг св - ! (см ТУ іа се Ма су с М се емо єави Су См б Су Ак Су. у і ібок бюма схе Бу Гі ДО Бона М Сну бек укна бу ж Ану А Пе ун. ! їси са сих ку ве бе Не су бе бкну Бук сін бо ся йлня Те булі
Ат й рома її ТОСТИ САС ТУ УРОКИ ТАКА СТО СТ ААА ки) 1 ! : іє Те ОТАК СТА ТО ТС Кю» дАСОА ТММ ОТ ТК ТАС АСА ЄС ' ! | Але ЕКО Сом ло А сх АК СТО КАС С СИМО Є ще ! то сю Сто Км б Кт СТ А СИ АМС ТК САС ! ; | є РРО УК т АХ са Ох ха Але СТ б Є сі ; | и поАА АВТО ат АК У АТ ГО КК КК ТАКА щі о ттттттнтнтя и шк и ве иа НАНАН ННнн МАН і | Рисївій Мене У Ас сан ке ув бак но нь ка мк Ся й кжна Туг зе! Кк : і Та бив тав СУва Ат у Ми бі мк Тв бте бух Б Ал Ан ко у і | ою р б си МИ Си бю м Се ден блім бу су бр С Ах ще : Н Гб Ба лів Кесюкїхех Аа ен Сх бабу чер ча скін лих ву СУ Ай ма іс с бе сь Ти бек ее бук ливе ба Тук баб бю ба Аа мії щ кину жа пн ен ки тАС НИ НАТАН : іє ОТАК ТА лі БО С АЙ АС ТТ ТАС АСА сс І ; Але АОС Єна ол КА САС ЛАЄ СТО СА СУМУ Сем сло : та Кай Сех екв. со а КАТ СМАРТ ОКА СК АКОТ СА, ; Є ТК С АХ КС ТО СА АЙ с ак АТ етЕн ; ОА пАА ОК АС АТ ТК ТИ КС ТАКО СМ ТЕХ ом :
Реле іепе ММ Аз сн Би зач у С ки БЕ дн а НА А Кеме Ту» іон, Ки : : іУаі бу би сані Лис сну Ріня рю те ТВ бус и ТА Ан о що іє Бад ем СИ Май Се ка Май Схвх Кечбх сми СУ ху вка Ку АБ що ! і | Гу речи бува Река іа кю слі бу їм вені бан р ку хату Це ма ; ким кв в р ек юю и и фею Кук М вка; СН ви Аа сум і шілюсню стос долю - доню тя рнстсткост пеотжо стю нт отже тож лю ткож ткож ото тост люттю політ тот тост ото сто посюотоносю жопа ток тот оо пюотежот ри кт пяти ід: оз йу С. Ш ! Пе ГКЯ А АССАА САС ТС о САС СТО ТО А І Ка
І Є СТАЄ ТА ОО сх зо Ай сА ік АКА і Н ! б ля зм Е. | п Ше | : Н полку ще | | | | | но | я. ще лою, У / що о нг
Й | | т і: т, ще г. .
І с ОТ КІ я Кк я
Й | | сх З « Й т
І ї р де ї АК й ра Щ у і " ії Те ЗЕ із є - . "а ї і і полеюлнето і ; | : а й и їх Й ; : 1 | АНІ ї де шити ! Ш | | : і Е іга у хі мет | | ! ; що ЕІ Н 2 Ам ї у ге я зл ян й й | | | :
Апацм тися Гні- п Н М їх сенаджи тк й | / / ;
Н ї А ч ще : шо і | кі оці чу 5 й ; 1 п не ліз Н 1 нац. д-й гої ер їз що ї Мй 2 пеегнн Й т : 7 ї зав віх Уг ; 1" « полю | | | ; ї т. проУ - і їх ів з Ве ві вт тп р М кі Й ї А й «е г м У це ч ; пк | " : ; | Й тяж СА » |: і І: їж и ух Її КЕ ПЕж: ; У ї те ух | й осно
І ЩЕ с сте Зм з Са То й й згу і є ті : Її
І Е | міш. Ае щ я НІ Ж о ї с ! : АК - ої СА Тих Ух «1 У зер У ї й Й | й -- ї є у А т А А і Р бе т у | а | ай ри | ї і Є зга ге й І сх 1 ї : І ех 7 ге а ТТ ни А гм с БАНІ іпозлнн
І - пхжу» ї це с є ши бе м ї т ці їі Й у І в й я І ії - « г Е - і С Сь за се шк зе чі м
І | й м й " х С їзА ік. ї Й не їі У гу
І | те . м т Ас А й А У
Н рої вин Ал ї же ще НЕ М: А | св
СІЙ в яю ій НЕ сз ій й ї зи Ах с б жі 5 У : є | їй Аз тою Ас й Так т і Я ММА Та 1 АС їз ях й й «. ка СА
У. Кі пт тстюкочннт. ще й віенкі | я з евжаячеєтт | я зла не покотя нути ння вда виовню ся же кол
До 7 їси нят теки м. ' : : І х ше оп | | ; й І ся з. е віє не А ОТ З кох по й | с | і зії Бі соженн 6 їз ДА. ще 11 Ж . й о | І ся ' їе й вп пкт СЕ Нота же ї р
Її. ше псх н Н їі ен шк Ек й о ух пиенття ї 3 Е і. | не й вік Уа с їз і; 5 севжіжех - и ше я ще І: й КУ о в С ш ЖЕ п . "А А
ІА; заз! р МА ре» її У Є ВМ а й я: Бару бр ер Ажієх 15 зі Пе ; но й Я У у, у оз у лк бах. чЕ |: че з . норевдну С а на м 5 Шо і у» з! у а ї М її вчіть й - а | ши | ше | т
І І ТА А г донині сія й ; :
І А г т АД ри Й | х й ; ее онвекнетч 1 і зії ЕЕ т ОА, : дні іл алу Су й | І сте : ; я я с ТЕ тя пені чннвтя
І; пнеленсті ї іш т-е А й гц З, віз зі - доня Г- ; і я й й. пС,А тез То З ай зі : ж ТсА я на | ак яв, Е феенелтичнтні ! «А ще ие Се Й БЖ А і ї ув | | ! плетення САС А її Й 1 СО я у о1зА їз г д о ри о. є : еп всі її се с із я ОА « на Я ї. Ібн: Н ла ! Ї ї фени тА А: КЕ я їз де ЕН А з з Сі Аг : Е ї їх а - у ї Н ай есявкч її й зі її ; І 454 її | сг | ТУ і Е Й Б є Е - - 5 Я ев о х ж х тя ї у І КО Ей ше САС г Сай, в сек і 1 то кс (ві інет й АТ ТЗ хоть св й | с
Г ї де я їй Бе ее те У гу що І , ц :й С я 2 те
Й | й і ; А (1 псхикчдет ке вл г во: м
Й | | - Те 5 Ся й з У ух г нене ве шк т шою є с » я :
І | | еВ а ді; «Є я дялтнних 16 Й а як
І й З ЕД . З Ех ве зе т ТАЄ Й НА щи ' ка У . ЗБИВ їж з і «ли Дн ПУ НЕ смМи ліз і ї ) " «г ух їх Е гі ї те сл ї у У зле і я КЕ че іл пелятяя ях офис чнлю тя цен нуля ян | я | - - | - - спря клю сну й си і у ваг у і й й й ; " с й « | яку ут сепеттяяння Но й , ге лив й Щ я ТЕ , ; пляжюня; поллютял на пнохяуюн сонну чну нн пляжні по жню лі нля плн пяжюти; плттлюттон поет ння ня, пнтечнли стю по инив
Іллю ввмА коп лАСтААСАС ТО Ток сос бе СААОСТ Я і СТАЄ СТА СТУ НУ ОБ ОСАА ОА ССС ТС ОСП ТАСАСАСТС . ; (Ам АСЄ СОС СОЮ УМО ОСА ОАЄ ОАЄ СТО САС ОТО ОК СА те сбосто сбс обо СОТ КАН АС Ух сло ! : сс тт осю стахьмасоотос сто слОААВССТ ОК АТ ОТО : ! : ААСААТЮЄ НУ АСС А САТ ТО ТС СТ ТАЄ САЙТ САС ; Ргохтеїп ірве Ма Ат ів не іо суму бю ів Тез; м а Ал бе Ту іги| й ! гм Су біжи Аа су Ріє Аза Туга бек іме ТЕ Ага Арх іх і ! дів Дер бек М баБи свя Ман са їхня зу СУ таж Б Су АВ з ' ! св са і го є: Або Ті сим бек ен іл Бує Атор се Бе ха. ; о сін осух Сух Тобою Ню Су бо ен Ту нею Ми Ла Гук бух ! ; Є ТТ ААС СААСАС ТО ОТ ИНН ТА САС СТИ БТ АЛ й х3 ! і ЛЕ ТАССТА ОТО ОС ОБО ОАА ОАЄ ТИ ТТ ТАЄ АСА КС і і і слаб АС С ОВ АС СА САС ПАС СТО САС ТО НУ САС ! дао Е МА ко слаб сто ни осо сти ОпАИН АСК СТО СА і нах тає сто АІС ТО СТО СА АС СОТ СС АЛЕ ОТО ! і | АХ САКАЛОС ОТ АКЕ АС АТ МИ С СТО САЛА СТЬ Ол ! | (риє У Ас бан Мі йну думи ек Нв Гео Мане АБ бяна Би жена за п сум сю Ас рве ре Тек Те бу бух Ну АЛ Аа оо ло. ! | рготеїп м Ар жна ін Уа! Му Сів Май со вве Му Су су Ро Су лі спр ' І Тена Ух Ре Бена АД Бе са єму Заг Се се бує Лекрему Пе мн) , і | пли сі уз уж Пе бек Не бух бегіюо Фа с бе сб Ач Ту Суві і ПСО ААС КАКАО НУ СС ТАСАЄ СТО ТО САА ості о : ЛАЄ СТА ОТО М Об ФАК СОА ЄС ТС ТС РАС АСА СЕ с
Ал АС ООЄ Ко ОА ІЖА АС А СТО САС ОТО ОО гАЄ гАнмос з дячА о АТО МІС УСНУ СТ ОСА СИ АК ТО А ! с паоссстаомисос сто сАвААЛО СОТ ОО АТ ОТО
І і ГаААСАА ОС ТОРА АСК АРОТО ПИСТО МАЄ САС ЛО МУ ! | че МА) дви кю Мох М Суб смужок М ів Мо Ото Ав ві Пи як яв ! | Гм Си му бів гару бе бно Бує Ту Без ув Ту ве Арі що ! ргоїевіп ам йо ем в й ту гзів ма Б ік сіу у сліж чо су що о і рен сна бах Ре важно іа бе ме су зе сю рих Атереи Ве уві ! (в сів уч уч Тк За Не сухе бю деп сб Бер йо деп Ге як ! ! і |до
Приклад 2: Експресія злитого поліпептиду рекомбінантного аналога інсуліну.
Експресію рекомбінантного аналога інсуліну було здійснено під контролем промотора 17.
Бактерії Е. сої ВІ21-ОЕЗ (Е соїї В Е-дст отр Нзаз (гВ-тВ-) да! ОЕ3.); Мома 7еп) було трансформовано вектором експресії рекомбінантного аналога інсуліну та цю трансформацію було здійснено із застосуванням способу, рекомендованого компанією Момадепе. Було здійснено відбір окремих одиничних колоній, в яких відбулася трансформація кожного рекомбінантного вектора експресії, відібраним матеріалом інокулювали середовище 2ХІі игіа ргоїйп (18), яке містило ампіцилін (50/мл) та інкубували його 15 год. при температурі 37 70.
Культуру рекомбінантного штаму перемішали з 2Х середовищем І В, яке містило 30 95 гліцерин у відношенні 1:1 (за об'ємом), після чого по 1 мл з культури розлили у кріопробірки та зберігали при температурі -140 "Сб. Це зберігання було здійснено для утворення базового клітинного матеріалу з метою отримання рекомбінантного злитого білка.
Для експресії аналога рекомбінантного інсуліну вміст кожної пробірки з базовим клітинним матеріалом було розчинено шляхом інокуляції у 500 мл 2Х середовища І В та отриману суміш культивували з перемішуванням при температурі 37 "С протягом 14-16 год. При досягненні значення оптичної густини 00600 у 5,0 або вище культивування було припинено та отриману культуру було застосовано, як культуру для посіву. Цю культуру для посіву інокулювали у 17 л ферментаційного середовища із застосуванням ферментеру на 50 л. (М5ОУ-0О2, ВЕМАВИОВІЗНІ,
Уарап), тим самим розпочавши ферментацію головної партії при температурі 37 "С, з об'ємом повітря 20 л/хв. (1 об/об/хв), швидкістю перемішування у 500 об/хв та підтриманням рн 6,70 із застосуванням 30 95 аміачної води. Після досягнення обмеження кількості поживних речовин у культуральному середовищі внаслідок розвитку ферментації було здійснено підживлення культури шляхом додавання підживлюючого розчину. Моніторинг росту штамів здійснювали шляхом вимірювання значень оптичної густини (00) та введення розчину ІРТО з кінцевою концентрацією 500 М у разі досягнення значень ОО у 100 або більше з інкубуванням культури ще протягом 23-25 год. після введення. Після закінчення культивування було здійснено збір рекомбінантного штаму шляхом центрифугування, який потім зберігали при температурі -80 70 до застосування.
Приклад 3: Підрахунок кількості та рефолдинг аналога рекомбінантного інсуліну
Для перетворення аналогів рекомбінантного інсуліну, отриманих шляхом експресії у
Прикладі 2 у розчинну форму, клітини було зруйновано та матеріал піддано рефолдингу. 100 г (вага у вологому стані) клітинних гранул було ресуспендовано у 1 л лізуючому буфері (50 мМ
Ттів-НСІ (рН 9,0), 1 мМ ЕОТА (рн 8,0), 1 мМ ЕОТА (рн 8,0), 0,2 М Масі та 0,5 5 Тийоп Х-100).
Руйнування клітин було здійснено із застосуванням мікрофлюідайзеру Місгойшіділег Ргосев55ог
М-110ЕН (АС Тесппоіоду Согр. Моде! М1475С) з тиском 15000 фунтів / кв. дюйм (103,42 МПа).
Зруйнований клітинний лізат було піддано центрифугуванню зі швидкістю 7000 об/хв при температурі 4 "С протягом 20 хв. з відокремленням супернатанту та його ресуспендованням у буфері для промивання (3 л; 0,5 95 Тйоп Х-100 та 50 мМ Тгтгі5-НСЇІ (рН 8,0), 0,2 М Масі, 1 мМ
ЕОТА). Отриманий осад було піддано центрифугуванню зі швидкістю 7000 об/хв при температурі 4"С протягом 20 хв. та ресуспендовано у дистильованій воді з наступним центрифугуванням у таких саме умовах. Потім отриманий осад було вилучено, суспендовано у 400 мл буферного розчину (1 М гліцин, 3,78 г цистеїн-НСЇІ, рН 10,6) та піддано перемішуванню з кімнатною температурою протягом години. Для збору ресуспендованого рекомбінантного
Зо аналога інсуліну було додано 400 мл 8М сечовини та потім суміш піддали перемішуванню при температурі 40 "С протягом години. Для рефолдингу солюбілізованого рекомбінантного аналога інсуліну його було піддано центрифугуванню зі швидкістю 7,000 об/хв при температурі 4 "С протягом 30 хв. Потім було зібрано супернатант та до нього з допомогою перистальтичної помпи було додано 2 л дистильованої води зі швидкістю потоку у 1000 мл / год. та отриманий розчин було піддано перемішуванню при температурі 4 "С протягом 16 год.
Приклад 4: Катіон-зв'язувальне хроматографічне очищення.
Зоазок після рефолдінгу було поєднано на колонці Зоцгсе 5 (СЕ Пеаксаге, Іпс., врівноваженої 20 мМ цитрату натрію в сайті, врівноваженому 4595 етаноловим (рн 2,0) буфером, який містив 4 95 етанолу. Потім було здійснено елюювання білка аналога інсуліну лінійним градієнтом (10 об'ємів колонки) із застосуванням 20 мМ буферу цитрату натрію (рн 2,0), який містив 45 95 етанолу та 0,5 М хлориду калію зі зміненням концентрації від О до 100 95.
Приклад 5: Обробка трипсином та карбоксипептидазою В.
Сіль було відокремлено від елюйованого на знесолюючій колонці зразка та перенесено у буферний розчин (10 мМ Тгі5-НСЇ, рН 8,0), до якого потім додали трипсин в кількості, відповідній 1000 М концентрації білка отриманого зразка та карбоксипептидазу В в кількості, відповідній 2000 М концентрації та потім отриману суміш було піддано перемішуванню при температурі 16 С протягом 16 год. Для закінчення реакції рН було знижено до 3,5 із застосуванням 1 М цитрату натрію (рН 2,0).
Приклад 6: Хроматографічне очищення шляхом катіонного з'єднання.
Отриманий внаслідок попередньої реакції зразок знову було піддано зв'язуванню на колонці бЗоцгсе 5 (СЕ Пеайсаге, Іпс.), врівноваженій 20 мМ буфером цитрату натрію (рН 2,0), який містив 4595 етанол. Потім білок аналога інсуліну було піддано елююванню з лінійним градієнтом (10 об'ємів колонки) із застосуванням буферу з 20 мМ цитратом натрію (рН 2,0), який містив 45 Фо етанолу та 0,5 М хлориду калію зі зміненням концентрації від О до 100 95.
Приклад 7: Аніон-зв'язувальне хроматографічне очищення.
Сіль було відокремлено від елюйованого на знесолюючій колонці зразка та перенесено у буферний розчин (10 мМ Тгтгі5-НСІ, рН 7,5). Для відокремлення чистого аналога інсуліну від отриманого у Прикладі 6 зразка, цей зразок нанесли на аніонообмінну колонку (Зоцйгсе 0): ЗЕ
Ппеанвсаге, Іпс.) врівноважену 10 мМ буферним розчином Тті5 (рН 7,5). Потім білок аналога бо інсуліну було піддано елююванню лінійним градієнтом (10 об'ємів колонки) із застосуванням 10
ММ буферного розчину Тті5 (рН 7,5), який містив 0,5 М хлориду калію зі зміненням концентрації від О до 100 95.
Аналіз чистоти очищеного аналога інсуліну було здійснено із застосуванням електрофорезу білка (505-РАСЕ) та ВЕРХ-хроматографії (НРІ С) та наявність амінокислотних заміщень було підтвержено шляхом пептидного картування та аналізу молекулярної маси кожного піку.
В результаті було підтверджено наявність змінення амінокислотної послідовності відповідно до бажаного призначення аналога інсуліну за винаходом.
Приклад 8: Отримання кон'югату інсуліну тривалої дії.
У цьому прикладі було отримано кон'югат інсуліну тривалої дії аналога послідовності (см у положенні 14 А-ланцюга) аналога природного інсуліну, який є типовим аналогом інсуліну.
Для ПЕГілування М-кінця бета-ланцюга аналога інсуліну із застосуванням 3,4К АГО2 ПЕГ (МОБ, дарап), було здійснено реакцію аналога інсуліну та ПЕГ між собою з молярним відношенням цих сполук, як 1:4, концентрацією аналога інсуліну у 5 мг/ мл при температурі 4 - 8 "С, яка тривала приблизно 2 год. у 50 мМ цитраті натрію, рН 6,0 та 40 - 60 95 ізопропанолі.
Реакція відбувалася шляхом додавання 3,0-20,0 мМ концентрації відновника (ціаноборгідрид натрію). Реакційний розчин очистили із застосуванням колонки 5Р-НР (СЕ Неайпсаге, О5А), яка містила етанол у цитраті натрію (рН 3,0).
Для отримання кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну було здійснено реакцію очищеного моно-ПЕГілованого аналога інсуліну та Ес-фрагмента імуноглобуліну між собою з молярним відношенням цих сполук, як 1:1-1:2 з загальною концентрацією білка у 20 мг/ мл, яка відбувалася приблизно 12-16 год. при температурі 25 "С. Реакційний буфер містив 100
ММ НЕРЕЗ, рН 8,2, до якого для отримання ПЕГ-модифікованого на М- кінці Ес - фрагмента кон'югату аналога інсуліну було додано 20 мМ відновника (ціаноборгідрид натрію).
Після закінчення реакції реакційний розчин нанесли на колонку О НР (СЕ Неакїсаге, О5А) та кон'югат аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну спочатку очистили із застосуванням буферу Тгіб5-НСЇІ (рн 7,5) з градієнтом концентрації Масі, а потім піддали другому очищенню на колонці боцигсе 15І5О0 (СЕ Неакрсаге, ОБА), під час якого було застосовано елюювання з градієнтом концентрації сульфату амонію, який містив Тгі5-НСЇ (рН 7,5).
Приклад 9: Синтез похідних оксинтомодуліну.
Зо У цьому прикладі було здійснено синтез похідних оксинтомодуліну з наступними амінокислотними послідовностями (Таблиця 4).
Таблиця 4
ЗЕОІО Мме39 |НБЗОСТЕТЗрУЗКУ ОЗАВАООРУСМММТКАМАММАЇ ЇЇ
ЗЕОІО Ме41|СА-ЗОСТЕТЗОУЗКУІОЕЕАУВІРІЕМСММТКАМАММА ЇЇ
ЗЕОІО Ме42|САЗОСТРТЗОУЗКМІОЕВВАООРУАУКМТОРЗЗОАРРР./З | :/
ЗЕОІО Ме43|САСОСТЕТЗОУЗВУЕЕЕАУВІРІЕУЛКМОСРОБСАРРРЗ З | 4: Ф
ЗЕОІО Ме44 |САСОСТЕТЗОУЗВОМЕЕЕАУВІРІЕМІКМОСРОБЗОАРРРУ | С
ЗЕОІО Ме45|САСЕСТРТЗОІЗВОМЕЕЕАУВІРІЕМААНЗОСТЕТЗрУЗКМО | 7ИсЙ72щ
ЗЕОІО Ме46|САЗОСТРТЗОУЗАМІОЕЕАУВІРІЕМСММІКЇ 7777/1111
ЗЕОІО Ме47 |СА-ЗОСТЕТЗОІЗАОСЕЕЕАУВІРІЕМСММКО 77777771 111111
ЗЕОІО Мме48|САСОСТЕТ5ОУЗВУ ОЕЕАУХІРІЕМЬММТКАМАММА 77771771
ЗЕОІО Ме49|САЗОСТРТЗОУЗНОМЕЕЕАМУВІРІЕМІ ММООРБЗОАРРРУК. | С/Г
ЗЕОІО Ме5о|САСЕСТЕРТЗОІЗВОМЕЕЕАУВІРІЕМААНЗОсСТЕТЗрУЗАМ ОК. | сс;
ЗЕОІО Ме51|СА-ЗОСТРТ5ОУЗАУ ООСОНОЕОТЕТЗРІЗКОМЕЕЕАУКЇд/З | 4:
ЗЕОІО Ме52 |СА-ЗОСТРТЗОУЗАМІОХЕАУХІРЕМСММІК ЇЇ 77777711
ЗЕОІО Ме53|САСОСТЕТЗОУЗВУ ОЕЕАУХІРІХУУММТКАМАММА ЇЇ
ЗЕОІО Ме54 САСОСТЕТЗОУЗВУ ОЕЕАУВІРІХУУММТКАМАММАЇд ЇЇ
ЗЕОІО Ме55|САЗОСТРТ5ОІ ЗВО ЕссОНеОсТЕТЗріЗВОЕК.Ї 777777 Ї171
ЗЕОІО Ме56|СА-ЗОСТРТЗОУЗАМІОЕЕАУВІРІЕМЛАМТКАМАММА ЇЇ 77777771
ЗЕОІО Ме57|СА-ЗОСТРТЗОУЗНАМОЕЕАУВІРІЕМЛАМОСРБОЗОАРРРЗК.Д/ | 777772
Таблиця 4
ЗЕОІО Мебо|СА-ЗОСТЕТ5ОУЗАСІЕЕЕАУВІРІЕМУВМТКАМАММА ЇЇ 77777771
ЗЕОІО Меб2 |НАРОСТЕТ5ОУЗКМІОЕКВАКЕРМСМЕММТЇ 77777171
ЗЕОІО Мебз |НАОСТЕТ5ОУЗКМОЕКВАКЕЕМОМІММІС Я //77777777777717Ї11111
ЗЕОІО Ммебб |НАОСТЕТ5ОУЗКМІОЕКВАКЕЕМОМММТЇ 77717777771111Ї111111
ЗЕОІО Ммеб7 |Н(5ОСТЕТЗОУЗКУ ОЗАВАООРУСУМММТКАМАММАЇ ЇЇ 77
ЗЕОІО Ммеб8|СА-ОСТЕТ5ОУ5ЗКУІОЗВВАООРУСУУСММТКАМАММА ЇЇ 7777
ЗЕОІО Меб69 |СА(а)5ОСТЕТ5ОУ5КУО5ВВАООРУСУМУСММТКАМАММА | щ
Амінокислоти, які було виділено жирним шрифтом та підкреслено у Таблиці 4 в кожній з послідовностей ЗЕО ІО МоМо 19, 20, 22, 25, 26, 27, 32, 33 та 34 разом утворюють кільце та амінокислоти, позначені, як Х означають амінокислоту штучного походження, тобто альфа- метил-глютамінову кислоту. Скороченням СА позначено 4-імідазоацетил та скороченням БА позначено дезаміно-гістидил.
Приклад 10: Отримання кон'югату подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону тривалої дії.
У цьому прикладі було отримано кон'югат тривалої дії варіанту природного оксинтомодуліну, який був типовим подвійним агоністом СІ Р-1/глюкагону.
Спочатку для ПЕГілування МАГ-10К-АГО ПЕГ у цистеїновому залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону та (ЗЕБЕО ІЮО Мо 40:
НАЇБОСТЕТЗОУЗКМУ ОЕККАКЕРМОУМ ММТС, виділені жирним амінокислоти вказують на утворення кільця, скороченням АїЇб позначено 2-метилаланін), було здійснено реакцію між подвійним агоністом С Р-1/глюкагону та ПЕГ МАГ-10К-АСГО (МОБ, дЧарап) з молярним відношенням 1:1-1:3 та концентрацією білка у 3-5 мг/ мл при кімнатній температурі, яка тривала приблизно З год. в середовищі, в якому до 50 мМ буферу Ттгіз (рН 8,0) було додано ізопропанол.
Після закінчення реакції реакційний розчин було нанесено на колонку 5Р НР (СЕ, ОА) та моно-
ПЕГілований по цистеїну подвійний агоніст І Р-1/г'люкагону було очищено із застосуванням буферу цитрату натрію, рН 3,0, який містив етанол та градієнта концентрації хлориду калію.
Потім було здійснено реакцію очищеного моно-ПЕГілованого подвійного агоніста сі рР- 1/глюкагону та Ес-фрагменту імуноглобуліну між собою з молярним відношенням приблизно 1:2-1:5 та концентрацією білка приблизно 20 мг/мл при температурі 4-8 "С, яка тривала 12-16 год. в середовищі, в якому до 100 мМ калій-фосфатного буферу (рН 6,0) було додано 20 мМ відновника (ціаноборгідрид натрію (ЗСВ)). Після закінчення реакції отриманий реакційний розчин спочатку було нанесено на колонку ЗОШШЕСЕ О (СЕ, ОА) для першого етапу очищення кон'югату подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну, яке було здійснено із застосуванням 20 мМ бів-Тгіз буферу, рН 6,8 та градієнта концентрації хлориду натрію. Потім кон'югат подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну було піддано кінцевій операції очищення із застосуванням колонки Зо!цгсе ІЗО та 20 мМ буферу
Зо Тгів5 рН 7,5, який містив М сульфат амонію та градієнта концентрації 20 мМ буферу Ттгів рН 7,5.
Приклад 11: Оцінка дії спільного введення кон'югату подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону з
Ес-фрагментом імуноглобуліну та кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну.
Цю перевірку було здійснено для визначення змінення рівня глюкози в крові та маси тіла після спільного введення кон'югату подвійного агоніста с Р-1/глюкагону тривалої дії та кон'югату аналога інсуліну тривалої дії, отриманих у Прикладах 9 та 10. Лабораторних тварин (42 щури аБ/дь у віці 7 тижнів) було піддано двотижневій акліматизації без доступу до води та харчування, та потім їх було розподілено на 7 груп по б тварин у кожній. Відповідно за матеріалами введення ці 7 груп включали групу тварин, яким було введено носій, кон'югат подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну (1,4 нМ/кг) або окремо введено кон'югат аналога інсуліну з Есе-фрагментом імуноглобуліну (8,8 та 17,6 нМ/кг) та спільно введено кон'югат подвійного агоніста С Р-1/глюкагону тривалої дії з Ес-фрагментом імуноглобуліну (2,2, 4,4 та 8,8 нМ/кг). Всі досліджувані матеріали вводили підшкірно двічі на день. Вимірювання рівнів глюкози в крові здійснювали із застосуванням глюкометру натщесерце протягом 4-х годин випадковим чином два рази на тиждень, виключаючи день введення. Порівняння рівня глюкози в крові для кожної групи було здійснено шляхом дослідження графіку АОС (площини під кривою), на якому було наведено змінення рівнів глюкози в крові натщесерце протягом чотирьох тижнів у порівнянні з результатами дослідження групи, якій було введено тільки носій (Фіг. 1). Порівняння змінень маси тіла відносно показників, виміряних перед початком введення лікарського засобу було здійснено у кожній групі протягом чотирьох тижнів після цього введення (Фіг. 2)
Як показано у Фіг. 1, на відміну від групи з одиничним введенням кон'югату подвійного агоніста І Р-1/ глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну (1,4 нМ/кг) або кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну (8,8 нМ/кг), у разі групи зі спільним введенням такої ж кількості цих двох матеріалів (1,4 нМ/кг кон'югату подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону з Ес- фрагментом імуноглобуліну або 8,8 нМ/кг кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну) було відмічено наявність синергічної дії. Також в групі тварин, які отримали спільне введення цих засобів було виявлено зменшення рівня глюкози в крові, подібне до зменшення, викликаного введенням більш великої дози кон'югату аналога інсуліну з Ес- фрагментом імуноглобуліну (17,6 нМ/кг).
У дослідженнях змінення маси тіла (Фіг. 2), застосування кон'югату аналога інсуліну з Ес- фрагментом імуноглобуліну шляхом повторюваних введень протягом чотирьох тижнів призвело до збільшення маси тіла, тоді як у групах зі спільним введенням та з одиничним введенням кон'югату подвійного агоніста СІ Р-1/ глюкагону тривалої дії з Ес-фрагментом імуноглобуліну було виявлено зменшення маси тіла.
Також, у порівнянні з групою з одиничним введенням кон'югату аналога інсуліну з Ес- фрагментом імуноглобуліну, членам якої було введено таку ж саме кількість аналога інсуліну з імуноглобуліном з групою спільного введення кон'югату подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону з
Зо Ес-фрагментом імуноглобуліну / інсуліну було виявлено, що з допомогою спільного введення кон'югату подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну можна запобігти збільшенню маси тіла внаслідок введення інсуліну. Крім того, навіть у разі порівняння групи з одиничним введенням кон'югату аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну (17,6 нМ/кг) з групою зі спільним введенням (кон'югат подвійного агоніста І Р-1/глюкагону з Ес-фрагментом імуноглобуліну (1,44 нМ/кг), кон'югат аналога інсуліну з Ес-фрагментом імуноглобуліну (8,8
НМ/кг)), можна також було побачити дію цих сполук на зменшення маси тіла.
Отримані результати свідчать про те, що композиція, яка містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії має відмінну здатність до контролювання рівнів глюкози в крові, не має побічних дій, які полягають у збільшенні маси тіла внаслідок введення інсуліну, а також виявляє набагато кращу терапевтичну дію, ніж група, в якій було відповідно введено загальноприйнятний інсулін та лкарський засіб подвійного агоніста.
З наведеного вище опису фахівцеві в цій галузі буде зрозуміло, що цей винахід може бути втілено в інших специфічних формах без зміни технічного духу або істотних характеристик. У зв'язку з цим слід розуміти, що описані вище втілення у кожному аспекті скоріше мають ілюстративний, а не обмежувальний характер. Обсяг винаходу слід скоріше тлумачити відповідно до значення та обсягу доданої Формули Винаходу, ніж до детального опису та всі отримані від еквівалентних концепцій змінення або варіанти знаходяться в межах обсягу винаходу.
ЗМІНЕНИЙ ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«Мох НАММІВНАКМО СС, СТО «а Хомпозицій дпя вікування цукрового діету яка істите нсулім та подвійний агоміст ССР Цеиюкатону «ТО ОРАТБОНА СТ : «1» КАНВА ПОБУ «ІВ» зат1-поаа «4 ОК» 78 «Те Кораепна 20 «Ох я «їх за «й днк «ах здтучна поптдовність «ри Це «вай праймер «хх Її шою є вовацстає дапоашова сваеві ЗВ
«0» т
«ит ЗЗ
«іх ДК «їх штучна послідовність сао чако» праймер :
«ЗО» 2 зовасайоі госовсявоо своей соду ще ах З
«Ті» З вчи днк
«Ве штучна послідевністіх
«ех
«Де праймер
«ах 3 ївесшщюозов здоцододе ссоцнаса рощасо З
«их 4 «и» Зо «ей» 0 ДНК «й штучна послідовність «ШИХ и, еф ту Й сих праймер «КЕ» 4 досекаце щчсовссо сдсосасдсуЯ сусадлче за «1 5 «2 зв ха12» ДНК . ша вУНся штучна послідовність «ие «вих тлаймей хАО» В сіовесацю дзаваооо ціоівасіда дає За
«я 6
«Ш» ЗВ
«Й» днк
«ваг штучна поспідсвністі сейдх сукух праймер
«ад» 5 сдевяссіюва пзоасяоці ІНссадою діода Зо се цу 7
«ої 039
«вій» 0 ДНК
«18» 00 тучни послідовність І
«ЕК»
«ний праймер ках У піавосаво зсцціцює дісвсжоюію піддавокі З нки В «12 Ко -а1йх днк «15х штучна послідовність ав
Хей повер «АН» КІ васйссовноє ваціюїавсо свсасевою Мода за «яд: КУ си За
Ей» днЕ «Ве штучна послідОоВНють кап» «ВУ праймей «ох 9 зеацюшез зддадозвоає зи нас зсасесава за
«Ну о «ее за «Ей дик «ої іштучна послідовність
КУКА
«ух праймер се ЕТ спдоокио іноаедавоя мозносоє дповеасівй За «10» и «їх З «їй» днк «й» штучна послідовність «ал ах ЩІ песо васозодсос знсівсаса сосаацасє 38
«30 12 кої» За
1 днк
«ЙРх штучна послідовність
«яйОух
«Зх працмер
«АК та зщснасцє спіяцваса сессієоне сссосвояе 39 чих 13 І
«3» а
«вій» днк
«13 штучна послідовність
-й0х чий праймер ка ІЗ шесоддоовас дадосиоде дівсасвосс вадаєсоде За
«105 І
«11» за І І
«їди дк
«15 зитУчна посліДОВНІСТЬ
«ШУд2 .
«ие праймер
«ЩКх 14 асозено часу оцавцосоз йсссодов 35
«їде ї8
«11 37
«1» днк
-г15» штучна послідовність
«пад «Ей» праймер
«ад ТВ : :
ссацювмета сісссюозая овосщовов асо ЗУ
«Й» 16
«ШЛіх ку
«тійх 0 ДНК
«де штучна послід
«вих коаа» праймею І
«ак» 18 саспіванеї ссацоіюце зазодвосає аасда ЗУ
«их 17
«ф1х За хай» 00 ДЯК хЕіЗ» 0 тучна послідовність еиЕКУх хар ам праймер ке 17 своасетеєю юсстюансо засіддаова сі І ха 18 ка З «ду» днк «ДУ» штучна послідовність дей «ва ух прайшщею хх 18
Фадйсю: адсідоанца даозосаон дод а ках 19 кат 58 «Вих Дек «й» штучна послідовність хе «ваг Ану каре 15 псойзаєє васасног шосезсво сдіопвац смешню агосзсооа БО чазсиваВо інораюво всосввувоє сусовродаво сарасоассї дслуціноо 120 сесія асавоєа сосідцюв уасвоссю адюссбоюю ссієвачоя тво ісссдовов водсцюоцф еоовасаа сеіаосав дово ссолвосаю з півоадвасі воосаве 258 «вх о «Р 5 ситах лок «ТІМ 0 штучна послідовність «Де «ЕЕ Аналог 1
АНУ 2
Бе ув Ав Сп МНів і ем був СПУ Же Нів без Уві СТО Аа Гу Ту і З 12 15
Беца сув У Бі Аг Су ле пе тує ТВ то Був ТП Агу Аг
КВ АВ ОВ Авр це СМ ма ЗВ ОМ Маг ер СТу Му Ну Ро
З чі Ак
СНУ Ав су Баг бен Сіл Ро бе Ав ви СНО Ту Бег бен іп ув
НОВ Бо ло Ага Несж єЗ С Су ув ТВгЗегце був Бегтец Туг сн І то 75 ва
МЕНЕ АБИ ТИС бував ве «ЕТО К! «В» ня «ей днк ка15» штучна постідеаність «ех «пи» Аналог о й кад» т
Ноднавосо засвойцю ідосієвсяс сода сіовосї адідїсоцо | 5 увасдводе Мйсвово зосовадаос сдсодоовоо свовацасоі дсезосЗая 159
Зо садоцшюває юрасздаво солодюся додсацесідо восостодє ссодеацачу 30 ісссіщеноя зоодіцосоє офідовасяз снився дес союгаєсво 240 сідаадавои вощеаає ОВ каное ах «ої» ВВ «ей 0 Бук «а о вітучна послідОВНІСТЬ» «ие Анапог й «Юм за
Рре Уа Ав Св Бе Кец ув Су Беє Ні цею УВІ С Ама Ге Туг ї З 10 18 цез ма сув Лу Б АННУ Рнае не Ту Тв Ро Бу ТНГАНЯ Аг
СЯс Аа ЗНгАО Се с мае СУ си Ма СИМ ему СПУ ЗУ то
Зк «й «5 сих яма СНУ ет ем СЯ Ера Бей вда бен Сяу слу Берг ез біт ув
В) 5 що
Аг січ Ага уві СИ Оп Сук Сує Тег Баг Ма Сув Бе бе Ту СИ а 7 т я емо Ав Туг Су Ані ие ке. «й БА «ат 0 ДНК «В13» штучна послідовність «ие й І І ке в й
Ксонавос аасаспцю ізосієвсво сеюцевав сіно аціюоЗаЗ 5 пазсцдвоац но(еово асосвеадаєв соссодоувац сададовосї девоцівово 129 своаціюовоє щодсацзаою сесірюієв досвусеве адооссндоє ссщавого їва іссекювог здоров киоовасва зснасся повіє сокувосяо «40 сідчвузасо спосазе ЗБЕ «йо а же як «1» 0 Вілок І «182 0 штучна послідовність «ВО «кад Авалог З «м да
Ре Ави Сп Ні Бец був бу Баг Ні ви УВО Аїв бе Тук
ШЕ В за 15 зе ма сув Ом Си Агу іх Рне бле Тук Тв Рго зу Те АТ АТ 23 КІ
Св Ма СЮ Авр цеу Сни ма СУ іп уд СИ ем іх Су СНУ Ро
КК 40 ча су Аа Су Зег бе Сб Рг без іа Мей ВА у Бег ев Сп Був 2 що що що дру песмаі Св Сива Су Суз ТВ ен Не був бере Туг Ст во т тв я
Май ни АБИ Аа ув Ав 85 «м 00 «ії» 8 «їй ДНК «1 зтучна послідавнить сИШИх «их Аналог 4
А» 25 поциваєс засасто юроїєзово подолав сіеось ази єдоє що зазосивоце неасао вососававос соссодоаачО сазазеос дсзодідой 120 сезащчаає щадозачно сесовіуса ядсадесцю адосовоцо ссдаоцов 190 їссоідсовав засув ідодвасва деоівосеа чес ссідіасона 2 віддедаасі асідсаае ІБН «1 25 «ах ве й «ИТЕе: ВОВК «ЯРУ. зитучнВ пюслуювисть ех «ак ух Авзлог я вав ха ре мві АБЗ Ні ец ув Аа Бе Ні у еи уві Спю Ав Сец тує 1 З ча 15 іо був Ом АТО У СБЕ еВ Ту Тит Рго був ТНгЕ АПА
З
БРАВ С Ар во Сни ма Ом Земан вен сх СНУ Су ето
ЗА 40 45
Сну дів Му Вега у бта ев а ен біли іу Вег ву сна уз 56 55 що а Сх Пе мі спа с су оув Твг Зег Не уз хегівм Ту 2 то ТУ на ре со Ав тує Сув Ап
«аа и «Вії» ОВ «вій» 00 ДНК хо цтучна послідовНнить «о «во ДАнапог 5 «Ох 87 подйавос васасиоі крісасаєс сіодаво сірсіяос здіосоаою 5О даасдадсоі осяє зоосазаасс сзссоодвою сзоводдас садова 20 садвіддаце шазсоюодєо соссбуєюєса досадесюе азсссцвоє ссідововод Т8О сснюзов зосоївосві реа зсав Шсіівося довісюоє соїсівосад ре сюфозлазеї асідсаає 258
«й» 00 хв . «вії» Зв «Вій» 0 білох «Ве 0 зтучна послідеавнть «ВД: «дай» днапог й т
Вте КВ Дол єни Ні Без ув Сну Баг із бе зі Об АВ бе Тут 7 2 10 ї5
ЕКем мві був СТУ СНІ Ата ліз Ре ее Туг ТВ Бгто ув Те ле Агоу га 25 За
МУ АВ у Ар ем в ма слу НА Уа СЕ; ред ку СНУ СВУ Рез 3: о 45
СУ Ав СУ Зегі и ій Різ ен Аа бе СМ СМу Бегіви си ув в 5 Ба ва у Не Уа 3) нг ув був мг баг в Сув бе бе Тук Сп 70 та во ід сни Ав Тут Су Аа чиї 58 «іа» 0 ДНК «1 злрчна послідов» «ий «вед Анапог 6 «с 25 коесивасс засаспціу сісасево сідла сісїлає ва есоза 50 чазвозадоєз сойсіасає всссавовес соссадовод садводассі садове 120 саспщовою кдосяцоює сссиюютоса зосаоссідо восесицає ссівовацца 1 михлцевов засущусв одазсве с всса девеією ссіассво 240 сідоаовасї илосазс 28 «ах З
«дії» во «іх 0 Мпок «13 0 цпучна посліддвмісте І соаИх сих Аналог 8 ах За рве уві Авп З Ні іє був Су Бає Ні без маг ОВ Ав Цео Те 1 5 13 15 зер Сув ОРЕ СИ Ага СЯУ Аа пе Туг Те Бго ув ТЕ АТО Аг за
СВ Ав спо Ар зм іп уві Сну п уд спо без слу бу Чу Ро 80 85 сЯу Ав сму бак іви сі Ето бе Дід ем с Су бага іп ув
Ат сту бе ма! Со сбп ув був ТИ Бех Це Суз Бе і ец Тук ІЙ іви СМ Ав Ту? уз Ав 85
«йо Кс «а 28 «1 днк «в» штучна послідовністі» ков -аУ» йивлогої «Юм З коцпааес ваоженЗю мрссасво січ зио сне ВЗКНОоСадОо що
Заводацдеасі ісосціасяс асссзздаєє пуссоовао слозодаия зевоавівоца то сажа асо сосни цеа пасадесює асо сова що ікон ов ос е осв міддавсгва сю: вес зовісіюю ссіівосад ра сідацавсьснлосаво ги «ее за «Дії» вв «ак 0 білок
«Віа» 0 штучна поспідовність «де ха лнапог 7
Це З
Ро Уві Ав Мп Ні оц ув СУ Заг Мі ец Маг Сни А я Туг 1 5 10 їв їв мВ був Су ін Агу у вне Ав Ту Ті Ето ув Пг Ак Ага
КО 25 Зо
ОКЕАНОМ Аврбеі СПА М СНУ СМ МВ См ем Му Ох Су Кто
За 40 чх
СЛУ Дів Му 5ег ен біп то ви Арія ле СО СУ Бен рев Зі Ту н. З 50
Ар у Не мн Зв СНИ Су уз Ти ЗебПе бує Хегіво Туббій
БО то Та КТ
Ми с Ази Туг Суз Ази 85
«и а «й» Ин «12» 0 ДНК 213» штучна посли «рих «ИЗ2 Анзлок 8 «кю 83
Кс ваце авсасгціюв осювсяс с долаз смс афосоцо 80 цдазсозуЧсі ксівово аосоовадвос сосорооавво свозоєцвосї пеевцідоо 12 падає дузсозЗао ссесюеююв соовчєстє адооонодю осіцдаоою Во
Ммсосщевнвз адсотодев гіосвасає зеціаесся доаіюєю сссовасад «40 сідовоавас всдовасю в ТО «о» 58 «112 Ве «Ву» 0 бле «ай» 0 штучна послідовність
«иа «аку» Аналог Є ад» 34 ре мві Авп сип Нів і ец Суз Су бен Ніз Бе а ЗіЬ Аз ео Тут 1 З 30 15 ео ма був у СЯ Аг СЧУ Ре бе Туєб ін Ріо уз Тк Ага Лу ва 25 Ко
СВ Ав Ом Аз еміми ма Су Сн Уа СМ іез СПу СПУ СМу та 35 суму маг іеціниа то без катемю су ет ец і уз
БО 55 О
Ага сту Ве ма! СИМ Сб Сувімє Тн Зак Це ув Зах Ма см СА їн АБИ тує Суз Ал б5 «Ве З «112 я
«вій» 00 ДНК «1» Млучна поспідсвність . «идух «ПОЗ» 0 Аналог 8 йоущає засасно шасісвсяс сіціздаво сивсо асцізеовча 5о звасдаццєї Млісїасяс воссзвавос соосроцаоо свздеццаєсої зозоціозац 12 свзоідувос мозсододоа сосоюса пдоасязоехмоє засосводю осдацода 180 їссосаза гаоцідцс ідовасав шогассз зсаклосіє ссовассав 40 сіддвоваєі зсїщеавою я век ка 35 «іі» Ве «ал» 0 блок «ВУ» 0 штучна послідовність : «23» «23 Амапог 8 хай А
Бне ув Ав о Ме каи був Су Заг Ні бе ММ ОВ Ав ви Тут 1 В т 15
Ге ма був у Со Ага СЯу Бе Ре Тут Те Ро Бу ТЕ АГА 2 75 Зо
Фіра біз Авр цем сти мар Су Сн ув СМЬ беи СпуУ Сну МУ чо
ЗВ | й 45 су діву щегіео ми го беи вів Се сти су у Бе мА ув ща Бе до думу Ме мар сп 3 Сук бує Тебе Пе буз Ваг бе Ан СНИ як та 7 КО іевОвшАВВ ТУ СукАвА «ах Кий «Ех у. ех щЛлОок екі3» штузна послідовність
«ее «ее 00 А-панцют інсуліну «Му» З
Су Бе мМаі Сви Зп був Су Ту Бег Не Суз бе ем Ту Ул і ен
З 5 10 15
СінАвп Туг дув Авп
НН я «ее В си» ЗО «ай БІЛОК. І сеі1йх 0 штучна послідовність «аа» кеша В -- панцює інсуліну «Ом ре мар Ави ів Ні і ев був Су Бек ів Ме Мі (ти Аа Бей Туг з 5 10 45 їви Уа Су СОУ Ям Аго Су рів Не Туг Ті Му ув тн 23 25 За «дід» За «дїї» 37 «й» 0 Бток «15 0 ото харюпа «ух окоинтомодуВ «ох За
Вк Бе си СПУ ТА? не Тр бегАвор Тугбегіув тугі ви Азов баг 4 5 з ї5 ду Аг Ар АВр ене ма М то сво Ме Ас Тнг ув Аго Ав и! 25 Зо
Аг Ав Акп Не Дів «ВНУує 45 «Дії З «ви» 0 щЧлоК
«в13» 0 штучна послідавність кощує «Фа» 00 похідна оксинтомоуутну я «жа» 00 ВАРІАНТ кати (й «ай Хла г аміноізомаопяна кислота «ДеОе вЕї ВАРІАНТ «а 00 СВО «ай змінокислоги у положенні 16 та о утаорюють кільце «00 40
Нв Хща сп Слу ТЖ пе ТВ Бен Ар Тук Зегіує Гугіяи Авр СИ
З 5 Но то іу« Ага Дів і ув СА Ре М і Тріо Мега Ти Сув то 25 за «их 4 «із 00 ЗУ | :
«вій бок «и18 0 цугучнайнея Бецду кре «ої похідна зкосинтоводуліну «Оу зе кос» ВАРІАНТ «ВІЙ п «РІЗ» Хаз х а мідазавцетил. «Яд я
Хаз бегЗіп Су Тік ена Ті ЗегАво Ту Бег уз Тут дуеи Аве СИ
А 5 о 15 сш Аа ув А ви не пе Со Зтріви Ме Аза ТЕ ув Аг АВи «о 25 З.
Аа АЗИ Не лів «и» з «Те КІ «12 бок
«1» штучна прогндошнєть «яку» «си похідна оксинтомодуліму еЯВО «хі» ВАРІАНТ «кю в: «их Хаз х замідвазаацетал, «АК 5.
Хва Бех бій Счу Те Ве Твг без Ар Тут Зекіуз Тег Цво Авю ї Б то 15 за Ап Аа п Аво Ре ма Аа Ттрі єн ув дви ТВ Оу Бео ет 2о 75 Зо ет Ру Ав та то Рго шет 55 сад З «ві» За свй 00 щИоК «Я 00 штучнаневі Зв
«а» «дух похідма оксинтомодулну 2. ще тех «Ех БАРІАНТ «до» НЕ «В Хда х з мідазовценчАи. «опа 43
Ха Су Сп СНУ Тк РНе Тв Бег Ар тус Зег Аг ТУ був с ОВ
З 5 15 15 со іа УА Ге ве Нею Тер іє вуз Ави Сну СПу Бгто Бе з) Зо ет Оу А Рто Ето Ро м «10 44 «ох Зо «ей» 0 лок «13 тучна послідовність
«ВВО «рейх похідна оксимнтомодутну «Іо кає «ех БАРАНТ «дом І «кюах Ха е фімідазовцетил.
Ж ва
Хав зва су те Ре твг Баг Азо Туг бегАго Суп ме (ін су
Н 5 10 15
Ов АВ УВІ Атрі ен Ре Це НН Тер ен уз Аква СПУ СНУ Бгто Має о 2 ЗО мегізіу Ав то Ро Рг Заг а «Ок 45 «11» 48 «1» 0 білок «ВІ» 0 щУчна поблідовність «Іо»
«Ех похідна оксинтоводувіну «лих «ейяїх ВАРАНТ «рий» НЕ «Ех хХаз х замідазрацетил. са Я
Ха імма сну Пе ме Тиг БегАБО без Бег Агро М СТЬ СИ
З 5 їй 15
ОА Уві Ат ео ре Не С Тр Ада Ара Нів бесбсби МУ ТТ; за ие З впеТвеБеслеріур зе ух тугі во Аво
Зо «0 хиіб» 45 ках З «дій» бітж «8155 втучна послідюевність «дае вени похідна вксинтомодуліну аг «її» 0 ВАРІАНТ «ой якаийх 0 Хапоз й імідазовцетня «ЦЮ За
Хвз Бек сла СПУ ТВ Кве Те бЗеслер тує бен Аго Туг і ец Кер См 4 Кк ЕІ 15
Сі АТ а Аруба Ре Не со Тробви МебАвл Тік ув о 5 ЗО «ам у «а ий «еїйх Щлок «Їм 0 мтручнанвс Веди каш «еВ» похідна оксинтомодувіну «Вк «сві» ВАРІАНТ ходах ГІ
«Дух Ха д-1мідваоацетил. чек 47
Хаа бегоьМу Пн бле Тег бегАвр гео ЗеєАго Сі без ін СТ і : 5 | за 15 св Аа яж Аг цем Ра Пе З тр ред Мер Асі уз го ге кан «і «вів 0037 «2122 Щлюх «АТМ 0 втчнаййеня веди «ух «ех похідна окосинтомодуліму «пиши «їх ВАРАНТ «й Ех (В «523» Хав х фівідазодуатил.
«Ійїх ВАРІАНТ хто» (З ня Хав х зльфа-матил-тпютавмінова хислата «НО» 48
Хаз'ізу ів Ту ТВ еРне ТР? Бек Авр Ту БегАру Тугієц дво ї КІ КО че
СІ АВ УВІ Хаз іа не пе ло то ео Ме Ав ТВ ув Аг Ави
Кв; 25 З.
Ага Ав Авп Це Дід
З5 «в» 45 «вії» 30 ей 0 Щщлох «ЕТО 0 штучна ном Зецу «Йо «Фо 00 похідна оксинтомодуліну «ох «тої» ВАРІАНТ сани» с «РУД» Каа хх ві мідазавцетии. «айв 048
Хва его сЯу Пе бе Трек ще Авр тує Ваг Арго бій Має С і Б 10 15 (ів Аза Ма Ага Гец Ре Ме Си Тур і ец Меї Ап Му Спу то Зег жи Ки З кет МУ Аів Ро его то бен ув
КЕ в «їх БО Й «ії? З «12» 0 білок «13 0 цтучналнісіві Бод «Ей «Ти похідна зксинтомодитну «ТЦ «ої ВАРГАНТ «рий»
Хей» Хва х Мімідазоацетил. «ему БО
Жав у З Су ТВЕР не Тр ЗегАвр ви Зах Ага Сл Мей СВ і 5 10 15
СИ АСВ Уві лез ви ле Не СНО тов іа Ада Не его (у ТВ го 25 Кб;
Не вк ен АО Туга Аг Ту ви Ар ув
Ко 43 й
ЕК 51 «ах За : «йіят бнюжк «1-0 штучнагрстві ецю «ей - ях похідна охоинтамодулну «Ву» ой ВАРІАНТ сади» у «ВУ» Хвах 4чміпрлОодЦцетив.
кад» 5
Хаво авг сна У ТНК бле Те сн Аво Буг Бас Ат Тугіво Авр єму 1 5 уз) 15
Су Су Ні Оу СТ Су Пе Рвестрх Яку Дер бе бе і ув Сім Мей 23 Міс 30 сли ав сно АВ Уа ух «я 082 «ве М «Вій» 0 білок «БУЄ зНтучна. послідавинУуг» ха жа похідна охсвитомодулну ке «же 0 ВАРІАНТ ке НЯ
Ки жав х З імідазенцетий,
«ДО» «раї» 0 ВАРІАНТ хара В «ваЗ» 0 Жаа х вірна-глецьу діціантно нє «ах хигї» 0 ВАРІАНТ хрря» 20) «дея» Хва х апьфа-метил-ютамінева кмевота «400х 0053
Хда мес ему Пе рве Твг шегАвр Гуг Заг Ар Туг бе Авр жав
З ге 15 18 сли АВ Уві Ха ец Ве Че ій Та ес Мег Аза Ту» 2 З Зо «вір» 53 «Й х її кій» 0 (лок каз» АН сів! Кезцапосе бо
«ан» «ВЕ похідна оксмнтводувну кое «дві» ВАРІДНТ «ай 1) «Яе Хва т 4 мідазодцетим, «оо «Ік1х ВАРІДНТ «Тих ії28 «ак» хХав х апьфа-метил-тлютамінова хиспота «Ви «гої ВАРІАНТ «од» їй сеш Хва сх влпьфиаюетитувютамінова кислота как 53
Хазв слу Сн З Тік Ре Те ЗетАво Туг бат Ах Тут і зи Авр Си
З Б їа 15
Фо Ав Ма Хав іво Бра Пе хХаз Тр ее МесАви Тік і ує Ага Ав
- йо яв за
Ану Аво Аква Не Ада «ех а «и» 57 «иа 0 білок кжі3» 0 штучнагінсів! Беди ай х «ий ах похідна вксинтомодуліну сао «ва» ВАРІАНТ сойй» ЦЕ «о Кав е Я-зміджвцетий «ВИ» «ВЕ» 0 ВАРІАНТ «вах (4 хау» Хза: альфу-метил-глиупамічова кислота
«дО» 5
Хава су єна слу ргере г Бен Аво Тут Бег Ага Туг би Ав Зю 1 й 15 т: со Аа УВЕАго бе Бе Не Ха Тр бе Ме Ав г) ув Агу ви го о вв
А Аби Адв Не Аа «Ех - «Війк білок «Ще 0 штучна пе хай похідна вксимтомодуіну «Ах «паї х ВАТАНТ «Ед» ПК ки Хва х З-імідззоацетил. «Ох 55
Хав зе (п ЗУ ТйгеВе її Заг Азев Ге дет Аг са ем ми Му ! 5 та 15
Су ЗХ Мне Бе Ми Су ТВг еве ТИг ше Азрі ви Бе Ап і бе сСиміув І хаб» що. «де 37 ке 0 бірюх крій» дише зедцялев «Фор: «ие похідна скскчуомодулну «ВеЦУ «в1» ВАРІАНТ «ох ГО «ШК2 Хав хх амідвювцетил.
Хва бегбіп СЛУ Тік РНе Ту Баг Авр Туг Баг Аг Ту Ме Дар Од і В 10 т
Сі Аа ув АТО ее йе Сн Тто Пе Ду Аве Тв Гук Аг Авт ва Ав лав Ме Ах
ЗБ
«ве БК «фії» «й хе1йк 0 Білок «13 0 зутучнаційсе Зеди едЦ «их похідна оксинтомодувіну кад» хе» ВАРІАНТ «АВ 2) «ЕЙ Хай : 4-мідазодуєтий. ках 5?
Хаз бег оп З тні Вве Тк ЗегАзр Туг 5ег Аг Тут без Аво СНИ 1 З 13 ій сСЯю Ав уві Ат бен Ве не сц їто Пе Ар Ал У СЯХ Ро ще ще СНР АВ Кто Кто ро баг ув кох а «т» 37 «йїй» 0 білок «152 0 штузнатйове Бецдю : «Й «ие похідна оксимтомадулнну кайіх ВАРІАНТ сли» О) сах Хав се а лмідажнхени «кім ВАРІАНТ саше ва . «дай амінокислоти у положенні 15 та положенні 20 утворююте кільце кас 5
Хаа Зюгізі Оу ТВ бе Тпг зе Аврогуг заг Ал гг ев Ар 1 Би І: 15
СЯ Ав Ма Туз без ве Це 1; Тер Не Ав Аза Тк ув Аго Ав за 5 Зо
Аг Авп Ада Не Аа
За «в 0058 «ві» а «ай 0 щлок «аа 0 штучнатнйсів! Зеду «ей» ' ке» похідна пкомнумеууунну «ЕЕ «ЯОїх ВАРІАНТ . . «ТВйх НЕ «и Хазв х злмідазввцетии «ДО» кийіх ВАРІАНТ
«ррше 8 кад змінстислоте у положенні 15 та положенні 20 утворюють клюце «АК а
Хаз Бога Су ТК Ре Пк Бен Ар ТуєБегАга Туг без Ар Су
І: 5 10 І
СМАЇВ У уз ее ле Це Си Тр Пе Аго Аза Ту сЯх Бо баг Я багону лів Рг го го єм ув
За 40 хе 50 хат» 37 чеше лок еі3х 0 деучнанйнеїв вон «Роде
ВЕ похідна оксинтомодиліну ко «ад ВАРІАНТ «р (В сих Хавх йімідазовцетия. . «ох о
Хаз ваг ам тя РВе Те Бер Агро Ти ех Аа ій ев дО)
З 5 10 15
МАВ ОВ АТ еи ве Пе МО Тр Уві Агава Те ух Агар Ави що 35 За
АТ Аза АВи Це ід я Ві «ат» З «ие» 0 біг «132 штучналйсіві Зеди «дО «ра похідна оксинтомодуліну каЕе хТйїз ВАРІАНТ куди НЕ хуй Хвщ х дезаміво-пстидил,
ке «аЕї2 ВАРІАНТ -З30е ТЕ), 20) «аку мінокиелоти у положенні 19 за полеженні 20 утеорювють кільце «ох 5
Кава Св Те ре тв БегАво Туг Бе 1іуз ТУ ев дев СИ
З 5 15 15 ув Ар АН ув ту Епе мен Зв Ттрією Ме Ап Твг вує
КІ 78 КВ) «Ех 0028 тет білою «й13к 0 влучнаноспідовність чекц
Би вохідна окосимтомецуміну ня «ої ВАРІАНТ «228к І)
ха» Ха є зміноівовасєтяна кислота хар ще
Не Хаз Спа Оу Ті бе Тім ЗегАзр Туг Зегіув Туті зи Аво Ю і НЕ: Не 15 іув АГА Кув НІ РВЕ Ме ув Ттріви МегАзи тт «Це ца «аїі» За «їй 0 білок «33 0 шеручмапййсіві ези и хе» похідна оксинтамодупіну «ее хеЕ1? ВеРІАНТ «ож» (8 кое Ха є явчноізомаслява кислота ах 3
Ні Хай зп М Тк Ре Пе БегАвю Туг бе суб Тук Кез Авр ій 1 5 13 те іув Аг АВ ув сів вна уві спів трізи МегАва Те Сув о 2 Ко «310» 00 в «іх Ко «ТЯ» 0 блок «я 0 тучнайнка: зе «аж «ди похідна оксмнтомодувіву «аж «У ВАРІАНТ «ай» (І «ТЕ» Хащ ех амімоіїзомаєтяна кислота «ПИ зм «вд ВАРІАНТ «вай 0 ЗЕБІВ кед» змінокислога у попоженні 12 ув положенні 18 утворюють кільме
«мн Бе ів Хза Ма у 1 Біле ПМ Зв дер Ту баггі ув Бе ев АОС 1 З т 15 ув Ат Аза ук СОи тн У А тре МебАва Те Сув ро З «Ах 55 хвіїх 28 «12» ЗНиХ еВ 0 штечнайикнаі еци кед «Та похідне дкоик смугу као» «ав БАРІДНТ «аййх іду «еВ» Хаа х амінсюамасляна кислота й как яйдім ВАВАНТ даю Гб (2 І ен вмінокиснлоти у положенні 16 па поноженні 20 упорювють кільце ее 55 зав хваєсти су ВЕ ене ти ЗегАВИ туге уз ТуУг Еец Ар 1 В 10 15
Сапа Аа Ав уз се пе Не був р ео МеБАВАЛТНЕ «оце що «ої 28 «1» 0 щМок «1 0 зутумнаймев Безу кеш сере похідна оксинтомодулну «ай» ВАРІАНТ «Вих Пи кош Хад х аміноїзомасляна кислота «КІ ЕС
НівХав'іп і Пн бе Тіт БебАво ТугЗегіув Тугі ви дво Оу ї 5 т 5
Туз Аг Ав ув СЯ Не УВЕСЯи Ттрівоу МеєАои Тв ща рез «и нцух Вт кезїк З «юіїй» біл «а штучнаційсів! Зеди «ЙО» «ев похідна оксвктомодуліну «ЯДОх «ай ВАРІАНТ «ий? Це «ай Хай з оорин, «ад 7
Не Ха си СВУ ТР ене Тебе Авр Туг Заг ує Тут ем Авр дес 1 5 та 15 ла АтрАа Аво РА УВІ сте Тріо Мег Ази ТВі ує Аг Авт
УБ тв;
дра Ави Аг в Аз «ЯН ВВ «ит зу «18 0 щлоК ке132 штучна поопідовність «Ех ких похідна оксимтомоду ну «Дух «ах ВАРІАНТ й «ие г и Хав «з д-імідвлорацитил
Ох ва жав зесізнь єму Те пе Тр БагАвр'гугБегіує Тут Меу АБр У 1 й ІН) 15
АРКА АВ З Аво пе мВ си Тр бе Ме Ав Тек уз Ага Авп
За
Ат Аз Азп Не Дів ка «1 59 «ах 37 «Вій» Блек «й 0 зртучнанисе хеду «ВВ похідна скосинтомодулну «од кеш» ВАРІАНТ «ВИЙ ЕІ «ев хХац хх з-імідазовцетий «УВО» ей» ВАРІАНТ «ВАДИ» С «а Хан х ери «ай» ВО
Хва Хва зніму пелет Бе Ав Туг Зегіув Тугісс Авр Бег 1 но юю 15
Ага Ага від (зп Акр Ме МВ сна ТПрісс МегАвл ТУ ув ага А що ме сш Зо
Ак Ав Ав ЦЕ діа
За «од» 70 «діїх Зо хаїй» дню «1» 0 днучна послізовністів «ва похідна схринтомодиіну «ВВ» чі» 00 БАРІДНТ «Ід»
ЖК Ха х 4чмідазавцетия. ке І «а ВАРІДНУ вия Не
«Вих Май т амінемюмаоляна кислота «ее «Ех ВАРІАНТ «вх С и ких амінокислоти у положенні 16 та положенні 20 утаврюють кільце «вод То
Хав Хва Ср Оу Пе Ре Пе БегАвр Туббегіує тугі ер Ар СМ
З о На 15 і уа Ага Ада ув Су Ре У и Тгр ес МегАєи Тк Су хо 25 А «Ве 7 . «вх За «В1Й» 0 лок «1» 0 штучна послідовність «ЯІО кед похідна оксинтомодувіну ке краї БАРІАНТ сих Не ка» кав аміновомаєпама кислота «ай» «фе ВАРІАНТ «й» дмінокистоти у положенні: 16 та положенні 2о утворюють кільце оо їі
На Хав (м су ТР Рне Тв БегАзор Туг А ув Тугі ви Азю СНИ 1 5 т0 15
ТувАла А ув СЕ РНа У сій Прі ем МегАви Те Сув що ТВ за ках 72 «ої Зо йТам о щлОоКоО с с 132 0 штучна поспідовністе хека «вет похідна оксинтомодуліву
«оо «раї» ВАРІАНТ «ЙЙш» (8 «го23» Хай х аміноїхомаолява кмелота «ді» ВАРІДНІ «ой 008) 20)
ВИ вмінокиєпоти у полюженні 15 та положенні 20 утворюють кільце кад Те
ТРи Хав Са су Пн бле Те Бог Авр Тут Зегі ув Тут і ви Аво Св ї 5 10 15 іув Ап Аа уз СА Ве і С тв в ео МеїАви таг Сув Я зе що

Claims (9)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат подвійного агоніста Сі Р-1/глюкагону тривалої дії, де кон'югат інсуліну тривалої дії є кон'югатом, в якому аналог інсуліну складається з ланцюга В (ЗЕО ІО МО: 38) та ланцюга А, що містить заміну 14-ї амінокислоти в ланцюгу А (ЗЕО ІЮ МО: 37) на глутамінову кислоту, та Ес-ділянка імуноглобуліну зв'язана через ПЕГ; де кон'югат подвійного агоніста сі Р-1/глюкагону тривалої дії є кон'югатом, в якому подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону зв'язаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через ПЕГ, і де подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагон включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з амінокислотних послідовностей, представлених у ЗЕО ІЮ МО: 40, 63 та 64 і одночасно активує рецептор СІ Р-1 і рецептори глюкагону.
2. Композиція за п. 1, де подвійний агоніст рецептора глюкагоноподібного пептиду-! (С Р- Туглюкагону тривалої дії має послідовність амінокислот 5ЕБЕО ІЮ МО: 40 і амінокислоти в положенні 16 і 20 утворюють кільце.
3. Композиція за п. 1, де Ес-ділянка імуноглобуліну є аглікозильованою.
4. Композиція за п. 3, де Ес-ділянка імуноглобуліну містить від однієї до чотирьох ділянок, вибраних із групи, що складається з СНІ, СН2, СНЗ та СНА доменів.
5. Композиція за п. 4, де Ес-ділянка імуноглобуліну додатково містить шарнірну ділянку.
6. Композиція за п. 5, де Ес-ділянка імуноглобуліну є Ес-ділянкою, одержаною з Ідс, ІдА, дО, ІЗЕ або дм.
7. Композиція за п. 6, де кожен домен Ес-ділянки імуноглобуліну є гібридом доменів, що мають різне походження, і вибраний із групи, що складається з Ід, ІдДА, дО, ІДЕ та І9М.
8. Композиція за п. 7, де Ес-ділянка імуноглобуліну є димером або мультимером, що складається з одноланцюгових імуноглобулінів, що складаються з доменів однакового походження.
9. Композиція за п. 1, де композиція додатково містить фармацевтично прийнятний носій. Зо 10. Спосіб профілактики або лікування діабету, що включає введення композиції за будь-яким з пп. 1-9 суб'єкту, який має високий ризик або хворіє на цукровий діабет.
Ж Ж Х 5 В орнеетс уоввюн «же с ще ЕК кре в ке МО я хх 1 -- ВЕ М МОХ З УЗ їх і м УК Б ЗВ : ЗО М УК . З З с І дО хх Мох ЕК У БЕ 0004 М му її і: хе ї КК ЗУ ям жи М ТЕЗ і х ОО М СХ Зх і У ї КК ах : 0 ЖЕК : ех Ж ЕХ І ЕЕ у Ве М ЙО ГАНОК хе ВО В БАХ ї ВУЗ ВО 5 в: : ЖЖ 1 х ГУ ї «ее ї й хх ! : лу ще 4. Ей і жив : ж а : Я «КЗ 5 В го г ногій З хон'ютех подвійного атункла ЗМО Пепканатану х Ки фрагментоюм імуноговутну 03, ВМ ЩЕ кон'кюняу аналоги інсуліну з Кефратаентою нгумогобумну (88 МН Буд юн'юта зналога інажліку з Беафраиментм Мукогобулну (76 МОЖ . кен'ютят поданого дгокіста ОБР йлюкатому з Кочзмдагментом імунотанувіну (Я ящат конзогатанатгя івлуну З Козврагментом імумногобуліну 12. намиті ЩО вон'натау подвійного згоністе іо -Пемекатвну з Борнео МУНОГЗШУВНУ ГБ Муки МОХ кем'ютах вклала інсуніну з Ге-фраиментом іувстобуліку (44 НМ З вен ютаз поданого аучнісз С роєм зну з Бочвиа авта імуноегабувіну 254 нки я Ж кон'ютах знана інсутну з Росррагувмума Науворобульну (В ная Фіг їх г 5 БО ї ха Мих КУ МКК ах х Мам Укея -х Я ее КО їх меНтя Ж и а ! сх ре е З і Ве ке К ех 83 Вовком кнододосодовоовюх В її 1 и ши й К:Я Де Ме М 5 Ж БУ х в З носій МЖК кон'ютат попвійного агоніста ЗМВ-нтвюватонму з оф метом івукогоєутну З ен нЗ Що кан'югат аналог інсуліну з Ке-йтраиментом імукогобуліну (88 ню гу кон'юга ананна інсуліну з Бе-фрагєментом імумогобуніну (17.5 ММІКгі заногат подвійного агоніста Дикі лювкатвну з Косфрагментом Вауноговулі і нм е хан'югат налог івсуліну з Ге враумантам імуногобуліниу (5,5 ваг С конзогат поднійного агоністя ЗІР Непюкагому з Кочвраимантом імумоговуніну і днк ЩО з комзогат змалоа інсуміму з Босфрагіяннім Бжунолбуліну А манки кі хонкназу поданого згеніста ЗР лтвакагону з Ке-фрагментою вакуолі ант щі з кон'нцзат мали іаувВу З Кофрагиантом імукогобуліну ІВ кМик
Фіг.2
UAA201612374A 2014-05-30 2015-06-01 Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії UA125166C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20140066554 2014-05-30
PCT/KR2015/005455 WO2015183054A1 (en) 2014-05-30 2015-06-01 Composition for treating diabetes mellitus comprising insulin and a glp-1/glucagon dual agonist

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125166C2 true UA125166C2 (uk) 2022-01-26

Family

ID=54699312

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201612374A UA125166C2 (uk) 2014-05-30 2015-06-01 Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії

Country Status (21)

Country Link
US (1) US10188703B2 (uk)
EP (1) EP3148571B1 (uk)
JP (2) JP6749845B2 (uk)
KR (1) KR102429920B1 (uk)
CN (1) CN106604739A (uk)
AR (1) AR100695A1 (uk)
AU (2) AU2015268199B2 (uk)
CA (1) CA2950718C (uk)
CL (1) CL2016003069A1 (uk)
EA (1) EA201692282A1 (uk)
ES (1) ES2897732T3 (uk)
IL (1) IL249264B (uk)
MX (1) MX2016015669A (uk)
MY (1) MY175421A (uk)
PE (2) PE20231199A1 (uk)
PH (1) PH12016502390A1 (uk)
SG (2) SG11201609872YA (uk)
TW (1) TWI684458B (uk)
UA (1) UA125166C2 (uk)
WO (1) WO2015183054A1 (uk)
ZA (1) ZA201608764B (uk)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
ES2897935T3 (es) * 2014-03-31 2022-03-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Método para mejorar la solubilidad de proteína y péptido mediante el uso del enlace a un fragmento Fc de inmunoglobulina
US11135271B2 (en) 2014-12-30 2021-10-05 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivatives with improved stability
AR105616A1 (es) 2015-05-07 2017-10-25 Lilly Co Eli Proteínas de fusión
EP3322437B1 (en) 2015-06-30 2024-01-17 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
BR112018013525A2 (pt) 2015-12-31 2018-12-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. conjugado de longa atuação de agonista de receptor de glucagon/glp-1/gip triplo e composição farmacêutica
WO2017155288A1 (ko) * 2016-03-07 2017-09-14 한미약품 주식회사 폴리에틸렌 글리콜 유도체 및 이의 용도
EP3463423A4 (en) * 2016-06-02 2019-05-08 Indiana University Research & Technology Corporation GLUCAGON-T3 CONJUGATES
SG11201811697SA (en) 2016-06-29 2019-01-30 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same and therapeutic use thereof
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
KR102645064B1 (ko) * 2017-02-03 2024-03-08 한미약품 주식회사 지속성이 증가된 생리활성 물질의 결합체 및 이의 용도
CA3054899A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
KR20190038456A (ko) * 2017-09-29 2019-04-08 한미약품 주식회사 효력이 향상된 지속성 단백질 결합체
CN115109166A (zh) * 2017-11-24 2022-09-27 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的多结构域活性蛋白
CN116143939A (zh) * 2017-11-24 2023-05-23 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的多重活性蛋白
WO2020017916A1 (en) * 2018-07-19 2020-01-23 D&D Pharmatech Inc. Pharmaceutical composition comprising polypeptide
CN108949669A (zh) * 2018-08-02 2018-12-07 遵义医学院附属医院 一种用于治疗i型糖尿病的细胞组合制剂的制备方法及应用
CN109180819A (zh) * 2018-09-14 2019-01-11 苏州康宇生物科技有限公司 一种胰岛素衍生物的制备方法
WO2020130751A1 (ko) * 2018-12-21 2020-06-25 한미약품 주식회사 인슐린 및 글루카곤을 포함하는 약학 조성물
CN113453703A (zh) * 2018-12-21 2021-09-28 韩美药品株式会社 包括胰岛素和对胰高血糖素和glp-1和gip受体均具有活性的三重激动剂的药物组合物
CN113278060B (zh) * 2020-05-29 2022-03-25 东莞云璟生物技术有限公司 Glp-1/胰高血糖素双重激动剂融合蛋白
CN114788876B (zh) * 2022-02-24 2024-07-05 北京医院 治疗糖尿病的mRNA药物制剂及其制备方法与应用
CN114591416B (zh) * 2022-03-03 2022-11-18 河北科技大学 一种n-聚糖修饰的胰高血糖素样肽-1类似物及其制备方法和应用
CN116284433B (zh) * 2022-07-04 2023-09-12 北京惠之衡生物科技有限公司 一种胰岛素和glp-1的缀合物及其应用
WO2024038067A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy comprising long acting glp-1/glucagon and npy2 receptor agonists

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5175145A (en) * 1988-08-26 1992-12-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of diabetes mellitus with amylin agonists
US5422339A (en) 1991-03-19 1995-06-06 Joslin Diabetes Center, Inc. Peptides having insulin autoantibody but not insulin receptor binding capacity
US5424286A (en) 1993-05-24 1995-06-13 Eng; John Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
AU762351B2 (en) 1999-01-06 2003-06-26 Genentech Inc. Insulin-like growth factor (IGF) I mutant variants
AR036711A1 (es) * 2001-10-05 2004-09-29 Bayer Corp Peptidos que actuan como agonistas del receptor del glp-1 y como antagonistas del receptor del glucagon y sus metodos de uso farmacologico
DE10227232A1 (de) 2002-06-18 2004-01-15 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität
AU2004234345A1 (en) 2003-04-29 2004-11-11 Eli Lilly And Company Insulin analogs having protracted time action
SI1648933T1 (sl) 2003-07-25 2010-01-29 Conjuchem Biotechnologies Inc Dolgo delujoäś inzulinski derivat in metoda zanj
WO2005047334A1 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Hanmi Pharmaceutical. Co., Ltd. Igg fc fragment for a drug carrier and method for the preparation thereof
US7790677B2 (en) 2006-12-13 2010-09-07 Elona Biotechnologies Insulin production methods and pro-insulin constructs
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
CN101743252A (zh) * 2007-07-16 2010-06-16 诺沃-诺迪斯克有限公司 蛋白酶稳定化的、peg化的胰岛素类似物
EP2017288A1 (en) 2007-07-16 2009-01-21 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, pegylated insulin analogues
JP2009019027A (ja) 2007-07-16 2009-01-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体
CA2705821A1 (en) 2007-11-16 2009-05-22 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical compositions containing insulin and an insulinotropic peptide
AU2009203810B2 (en) 2008-01-09 2013-07-25 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile
DE102008003568A1 (de) 2008-01-09 2009-07-16 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil
DE102008025008A1 (de) 2008-05-24 2009-11-26 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil
AU2009203809B2 (en) 2008-01-09 2013-07-25 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Novel insulin derivatives having an extremely delayed time-action profile
US8993516B2 (en) 2008-04-14 2015-03-31 Case Western Reserve University Meal-time insulin analogues of enhanced stability
EP3228320B1 (de) 2008-10-17 2019-12-18 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Kombination von einem insulin und einem glp-1-agonisten
JP5789515B2 (ja) 2008-12-19 2015-10-07 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ インスリン類似体
US8697632B2 (en) 2008-12-19 2014-04-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based insulin prodrugs
JP2012521971A (ja) 2009-03-27 2012-09-20 グラクソ グループ リミテッド 薬物融合体および複合体
US20120184488A1 (en) 2009-09-01 2012-07-19 Case Western Reserve University Insulin analogues of enhanced receptor-binding specificity
US8703701B2 (en) * 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
KR101058209B1 (ko) 2009-12-30 2011-08-22 전자부품연구원 Ｏｆｄｍ 방식의 디지털 방송 시스템의 빠른 동기 방법
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
KR101324828B1 (ko) 2010-06-08 2013-11-01 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 단쇄 인슐린 아날로그 약물 결합체
KR101330868B1 (ko) 2010-06-08 2013-11-18 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 인슐린 유도체 약물 결합체
KR101382593B1 (ko) * 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
JP2013535467A (ja) 2010-07-28 2013-09-12 スマートセルズ・インコーポレイテツド 組換えにより発現されたインスリンポリペプチドおよびその使用
US20140011733A1 (en) 2011-01-20 2014-01-09 Zealand Pharma A/S Combination of acylated glucagon analogues with insulin analogues
US9528180B2 (en) 2011-03-02 2016-12-27 Oerlikon Surface Solutions Ag, Pfaffikon Sliding component coated with metal-comprising carbon layer for improving wear and friction behavior by tribological applications under lubricated conditions
CN102675452B (zh) 2011-03-17 2015-09-16 重庆富进生物医药有限公司 具持续降血糖和受体高结合的人胰岛素及类似物的偶联物
EP2705325B1 (en) 2011-05-03 2015-04-08 Teijin Aramid B.V. Antiballistic panel
UA113626C2 (xx) 2011-06-02 2017-02-27 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії
BR112013030933A2 (pt) * 2011-06-02 2018-04-24 Prolor Biotech Inc agonistas do receptor de glp-1/glucágon de ação prolongada
EP3434687B1 (en) * 2011-06-10 2021-03-10 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
CN109306015B (zh) * 2011-06-17 2022-04-26 韩美科学株式会社 包括泌酸调节肽和免疫球蛋白片段的结合物以及其应用
WO2013089463A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Lg Innotek Co., Ltd. Method for deposition of silicon carbide and silicon carbide epitaxial wafer
WO2013110069A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 Case Western Reserve University Glutamic acid-stabilized insulin analogues
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR091902A1 (es) * 2012-07-25 2015-03-11 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de insulina de accion prolongada
AR094821A1 (es) 2012-07-25 2015-09-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada
AR092862A1 (es) 2012-07-25 2015-05-06 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de insulina de accion prolongada y un peptido insulinotropico y metodo de preparacion
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
CA2890324C (en) * 2012-11-06 2021-02-23 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
EP3616727B1 (en) 2013-02-26 2021-03-31 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog conjugates and use thereof
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
KR101676542B1 (ko) 2014-12-30 2016-11-16 건국대학교 산학협력단 프로인슐린의 면역학적 용도

Also Published As

Publication number Publication date
CN106604739A (zh) 2017-04-26
EP3148571B1 (en) 2021-08-18
US10188703B2 (en) 2019-01-29
SG11201609872YA (en) 2016-12-29
IL249264B (en) 2019-09-26
EP3148571A1 (en) 2017-04-05
NZ727871A (en) 2024-02-23
JP6749845B2 (ja) 2020-09-02
KR20150138119A (ko) 2015-12-09
WO2015183054A1 (en) 2015-12-03
TWI684458B (zh) 2020-02-11
PE20231199A1 (es) 2023-08-17
AU2015268199B2 (en) 2020-12-10
ES2897732T3 (es) 2022-03-02
ZA201608764B (en) 2017-07-26
EP3148571A4 (en) 2017-12-20
AU2020277290B2 (en) 2024-05-30
PH12016502390A1 (en) 2017-02-20
CL2016003069A1 (es) 2017-05-12
EA201692282A1 (ru) 2017-10-31
MX2016015669A (es) 2017-02-27
AU2015268199A1 (en) 2017-01-12
CA2950718C (en) 2023-10-03
AR100695A1 (es) 2016-10-26
AU2020277290A1 (en) 2021-01-07
CA2950718A1 (en) 2015-12-03
US20170196943A1 (en) 2017-07-13
PE20170087A1 (es) 2017-03-09
JP2020164534A (ja) 2020-10-08
SG10202106042QA (en) 2021-07-29
KR102429920B1 (ko) 2022-08-09
IL249264A0 (en) 2017-02-28
BR112016028076A2 (pt) 2017-10-24
NZ764889A (en) 2024-02-23
JP2017518298A (ja) 2017-07-06
TW201625292A (zh) 2016-07-16
MY175421A (en) 2020-06-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125166C2 (uk) Фармацевтична композиція для лікування цукрового діабету, що включає кон’югат інсуліну тривалої дії та кон’югат подвійного агоніста glp-1/глюкагону тривалої дії
AU2018267648B2 (en) Novel insulin analog and use thereof
US10159715B2 (en) Method for treating diabetes comprising long-acting insulin analogue conjugate and long-acting insulinotropic peptide conjugate
US9072794B2 (en) Long-acting glucagon conjugate and pharmaceutical composition comprising the same for the prevention and treatment of obesity
CN110536692B (zh) 用于治疗糖尿病的含有atpif1的药物组合物
TW201340981A (zh) 用於預防或治療非酒精性脂肪肝疾病之醫藥組合物
TWI798209B (zh) 對胰島素受體有降低親和性之胰島素類似物之接合物及其用途
BR112016028076B1 (pt) Composição para o tratamento de diabetes mellittus que compreende insulina e um agonista dual glp-1/glucagon
EA040348B1 (ru) Фармацевтическая комбинация и способ для лечения или предупреждения сахарного диабета
NZ751062B2 (en) Novel insulin analog and use thereof
NZ710882B2 (en) Novel insulin analog and use thereof
UA116522C2 (uk) Спосіб лікування метаболічного розладу мутантним fgf21