UA125847C2 - Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету - Google Patents

Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету Download PDF

Info

Publication number
UA125847C2
UA125847C2 UAA201611693A UAA201611693A UA125847C2 UA 125847 C2 UA125847 C2 UA 125847C2 UA A201611693 A UAA201611693 A UA A201611693A UA A201611693 A UAA201611693 A UA A201611693A UA 125847 C2 UA125847 C2 UA 125847C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
long
insulin
conjugate
acting
diabetes
Prior art date
Application number
UAA201611693A
Other languages
English (en)
Inventor
Чун Кук Кім
Чун Кук Ким
Те Чін Кім
Те Чин Ким
Юн Ха Хо
Ін Йон Чхой
Ин Йон Чхой
Сун Йоуп Чун
Се Чхан Квон
Original Assignee
Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ханмі Фарм. Ко., Лтд., Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Publication of UA125847C2 publication Critical patent/UA125847C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується фармацевтичної комбінації для попередження або лікування цукрового діабету, яка складаться з кон’югата аналога інсуліну довготривалої дії, в якому аналог інсуліну з'єднаний з Fc-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ); та кон’югата інсулінотропного пептиду довготривалої дії, в якому інсулінотропний пептид з’єднаний з Fc-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ), де аналог інсуліну характеризується заміщенням амінокислоти в положенні 14 ланцюга А на глутамінову кислоту або аспарагін, і де інсулінотропний пептид вибраний із групи, що складається з ексендину-4, або СА-ексендину-4 (імідазоацетилексендину-4). Винахід також стосується фармацевтичної комбінації для зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних із групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета-клітин підшлункової залози та зменшення маси бета-клітин підшлункової залози, у пацієнтів з діабетом, та cпособу попередження або лікування цукрового діабету, що передбачає введення даної комбінації суб'єкту, який страждає на цукровий діабет або має ризик виникнення цукрового діабету.

Description

діабетом, та способу попередження або лікування цукрового діабету, що передбачає введення даної комбінації суб'єкту, який страждає на цукровий діабет або має ризик виникнення цукрового діабету. хх щ н І. щу
Не ща : га КЗ . нки :
ВШ о. х ! що» в. о. : . ни пухкою хо ххх з З ОХ ОККО ОО ве п о ще ее ява ОО : : й й ---е 00 .С п. х : ОО о М хх З ХО хх ХО Од хе ве (8 Єередевніне-несій
ВИ КЖож'югтит на основі цохідної інсуліну додготриналої дії, В.Я моль
ШОЕ НО Кож Ї інсуліну ловко ВА
ОО Кон'югат пз основі СА ексенлнну- і довготривалої зй, 246 вмольку
КК Кон'югах ва основі вохічної нісуліну довготривалої дії, 2,3 нмольку, ве кон'югат вв основі СА ексендаину-д давготривазої лі. б вань ку
ЦП о оКон'югах пз основі похіння інсуліну зовготвивалої дії, 8,8 нмольку, - кон'ютах на основі СА ексенливу- З довгозвивалої й, 0.6 нмольлее
Фіг. 1
Галузь техніки.
Даний винахід стосується композиції для попередження або лікування діабету, яка містить кон'югат на основі інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, і до способу лікування діабету, що включає стадію введення композиції.
Крім того, даний винахід стосується фармацевтичної композиції для зменшення побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози у пацієнтів з цукровім діабетом, яка містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, та до способу зменшення побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози у пацієнтів з цукровім діабетом, що включає стадію введення композиції.
Зокрема, даний винахід характеризується зменшенням побічних ефектів, як наприклад порушенням функції бета-клітин підшлункової залози, асоційованих з розвитком діабету, зниженням кількості бета-клітин підшлункової залози та ліпотоксичністю або глюкотоксичністю.
Передумови створення винаходу.
Інсулін являє собою пептид, що секретується бета-клітинами підшлункової залози, та він відіграє важливу роль в регуляції рівня глюкози в крові в організмі. Діабетом називається захворювання обміну речовин, пов'язане з підвищеним рівнем глюкози в крові внаслідок недостатності секреції інсуліну або порушення функції інсуліну. Якщо підвищений рівень глюкози в крові виникає через недостатність секреції інсуліну підшлунковою залозою, то цей стан називають діабетом 1 типу, а якщо підвищений рівень глюкози в крові виникає через порушення секреції інсуліну чи порушення функції інсуліну, що секретується в організмі, то цей стан називають діабетом 2 типу. Пацієнтів з діабетом 2 типу зазвичай лікують за допомогою пероральних гіпоглікемічних засобів, у яких хімічні речовини є основним інгредієнтом, а в деяких випадках їм вводять інсулін, тоді як пацієнти з діабетом 1 типу головним чином потребують лікування інсуліном.
Найбільш типовою інсулінотерапією, що існує у даний час, є ін'єкція інсуліну до та/або після їжі. У даний час ін'єкційна форма інсуліну доступна на ринку, та зазвичай її вводять за допомогою підшкірної ін'єкції. Спосіб введення варіює в залежності від тривалості дії інсуліну.
Ін'єкція інсуліну демонструє більш швидке настання гіпоглікемічного ефекту, ніж пероральне введення, та її можна з упевненістю застосовувати, якщо неможливе пероральне введення.
Зо Також у випадку застосування інсуліну не існує межі дози. Однак застосування інсуліну три рази на день протягом довготривалого періоду може являти собою причину несприятливих станів, як наприклад прояву неприязні до голок, складності в поводженні з ін'єктором, гіпоглікемії та збільшення ваги тіла внаслідок довготривалого застосування інсуліну. Збільшення ваги тіла може підвищувати ризик появи серцево-судинних захворювань і появи побічного ефекту у вигляді інсулінорезистентності. Тим часом, було докладено багато зусиль для максимального підвищення ефективності шляхом підтримання довготривалості дії, підвищених рівнів лікарських засобів на основі інсулінового пептиду після абсорбції в організмі. Наприклад, для реалізації на ринку були розроблені склади інсуліну довготривалої дії, як наприклад І апіи5 (інсулін гларгін; Запоїї Амепії5) і І еметіг (інсулін детемір; Момо Могаї5К). На відміну від інсуліну
МРН (нейтрального протаміну Хагедорна), ці лікарські засоби довготривалої дії зменшують ризик появи гіпоглікемії в період сну, і, зокрема, ІГеметіг асоціювався з дещо меншим збільшенням ваги. Однак дані лікарські форми також мають недолік, що полягає в тому, що їх необхідно вводити раз або два рази на день.
Тим часом, один інсулінотропний пептид, глюкагон-подібний пептид-1 (СІ Р-1), являє собою гормон класу інкретинів, що секретується І-клітинами клубової та товстої кишки. Функція глюкагон-подібного пептиду-і проявляється в збільшенні викиду інсуліну та індукуванні глюкозозалежної секреції що таким чином попереджує напади гіпоглікемії. Завдяки цій властивості, він привернув увагу як перспективний вид лікування діабету 2 типу. Однак головною перепоною для застосування СІ Р-1 як терапевтичного засобу є його виключно короткий період напівжиття в крові, що складає менше 2 хвилин. У даний час ексендин-4 комерційно доступний як агоніст рецептора глюкагон-подібного пептиду-1, і він являє собою аналог глюкагон-подібного пептиду-1, виділений із слинної залози отрутозуба. Ексендин-4 характеризується стійкістю до ОРР ІМ (дипептидил-пептидази-4) і більш високою фізіологічною активністю, ніж глюкагон-подібний пептид-1. Таким чином, він має період напівжиття іп мімо від 2 до 4 годин, що більше, ніж у глюкагон-подібного пептиду-1 (патент США Мо 5424286). Однак при застосуванні способу підвищення стійкості тільки до ОРР ІМ не можна очікувати підтримання достатньої фізіологічної активності, та, наприклад, у випадку доступного на ринку ексендину-4 (ексенадину) все ще залишається проблема, яка полягає в тому, що його необхідно вводити пацієнту двічі на день, і що введення викликає побічні ефекти, як наприклад блювання та бо нудоту, які значно обтяжують пацієнта.
Такі захворювання, пов'язані з діабетом, хоча і в різний час, зазвичай ініціюють зниження маси бета-клітин підшлункової залози внаслідок втрати функції та апоптозу бета-клітин підшлункової залози.
Коли протягом довготривалого часу в крові підвищуються рівні глюкози, бета-клітини підшлункової залози підвищують секрецію інсуліну шляхом підвищення їхньої функції та збільшення маси бета-клітин для підтримання рівнів глюкози в крові іп-мімо, але така активність зі збільшенням секреції має межу. Тобто, якщо кількість інсуліну, необхідна для підтримання рівнів глюкози в крові іп-мімо, в нормі більше кількості інсуліну, яку здатні продукувати бета- клітини підшлункової залози, то внаслідок цього рівні глюкози в крові зрештою підвищуються, і тоді серйозно прогресує діабет 2 типу.
Клінічно діабет 2 типу прогресує в порядку виникнення інсулінорезистентності, зниження секреції інсуліну та порушення функції бета-клітин підшлункової залози, а також зниження маси бета-клітин підшлункової залози. Зокрема, порушенню функції бета-клітин і зниженню маси бета-клітин підшлункової залози сприяє підвищений рівень ліпідів і глюкози в крові.
Концентрація цих ліпідів і глюкози в крові буде індукувати ліпотоксичність та/або глюкотоксичність, та, отже, послаблювати як функцію бета-клітин, так і дії інсуліну, та зрештою буде погіршувати прогноз перебігу діабету 2 типу. Відповідно, пригнічення ліпотоксичності та глюкотоксичності може значною мірою обмежувати прогресування діабету 2 типу за допомогою збереження функції бета-клітин та їхньої маси, а також за допомогою зменшення інсулінорезистентності.
Інсулін являє собою пептид, що секретується бета-клітинами підшлункової залози, та він відіграє роль в регуляції рівнів глюкози в крові в організмі. Відповідно, порушення функції інсуліну та зниження маси бета-клітин тісно пов'язані з підвищенням рівнів глюкози в крові внаслідок зменшення кількості інсуліну в організмі. Таким чином, пацієнта з діабетом зі зниженою секрецією інсуліну можна піддати лікуванню із застосуванням екзогенного інсуліну.
Відповідно до попередніх досліджень відомо, що введення екзогенного інсуліну не тільки демонструє відмінні ефекти щодо корекції рівнів глюкози в крові, але також пригнічує виникнення стресу внаслідок надлишкової секреції інсуліну бета-клітинами підшлункової залози.
Однак введення екзогенного інсуліну має суттєвий недолік, що проявляється в індукуванні
Зо збільшення ваги тіла, а таке збільшення ваги тіла передбачає підвищення рівнів ліпідів у крові.
Відповідно, це може погіршити прогноз діабету.
Відомо, що агоніст рецептору глюкагон-подібного пептиду-! (СІ Р-1), який є різновидом інсулінотропного пептиду, що включає ексендин-4, характеризується ефектами регуляції рівнів глюкози в крові і зниженням ваги тіла у пацієнтів з діабетом 2 типу. Крім того, агоніст рецептору
СІ Р-1 може збільшувати масу бета-клітин шляхом регуляції відновлення, проліферації та диференціації бета-клітин, а також апоптозу бета-клітин.
Насправді, на моделі гризунів з індукованим діабетом 2 типу було підтверджено, що введення СІ Р-1 або ексендину-4 стимулює ріст і диференціацію бета-клітин, збільшуючи тим самим масу бета-клітин. Однак агоніст рецептору СР-1 протягом довготривалого часу стимулює секрецію інсуліну в бета-клітинах підшлункової залози, що таким чином передбачає можливість погіршення порушеної функції внаслідок підвищення стресу бета-клітин.
Для вирішення описаних вище проблем автори даного винаходу пропонують кон'югат на основі білку довготривалої дії, в якому фізіологічно активний поліпептид з'єднаний з Ес- ділянкою імуноглобуліну за участю непептидильного полімеру як лінкера за допомогою ковалентного зв'язку, підтримуючи тим самим активність та одночасно покращуючи стабільність лікарського засобу на основі білку (патент Південної Кореї Мо 10-0725315). Зокрема, вони встановили, що кожний із кон'югату на основі інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії проявляє значно підвищену ефективність іп мімо (патенти
Південної Кореї МоМо 10-1058209 і 10-1330868).
БО Однак все одно існують проблеми, пов'язані зі збільшенням ваги тіла або блюванням і нудотою, якщо інсулін або ексендин-4 вводять в кількості, яка підтримує стійкий рівень глюкози в крові. Таким чином, існує нагальна потреба в розробці терапевтичного способу, що демонструє відмінні терапевтичні ефекти щодо діабету при знижених дозах і меншій частоті застосування лікарського засобу. Крім того, дані дослідження були направлені на збільшення іп- мімо періоду напівжиття фізіологічно активного пептиду, а дослідження способу, який здатний звертати втрату функції бета-клітин підшлункової залози та/"або зменшення маси бета-клітин підшлункової залози внаслідок апоптозу бета-клітин підшлункової залози, які являють собою побічний ефект, що є причиною несприятливого прогнозу діабету у пацієнтів, не завершені.
Розкриття. 60 Технічна проблема.
Автори даного винаходу провели багато досліджень та експериментів для розробки засобу для терапії діабету, який характеризується довготривалою терапевтичною ефективністю та одночасно зменшує кількість побічних ефектів, як наприклад блювання та нудоти, і засобу для терапії діабету, який може зберігати та підвищувати функцію бета-клітин підшлункової залози та масу клітин, а також забезпечувати захист від можливого стресу бета-клітин. Вони здійснили спробу введення в комбінації кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії та кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії, які одночасно стимулюють рецептор глюкагон- подібного пептиду-1 та інсуліновий рецептор. У результаті вони встановили, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії збільшує тривалість ефекту та стабільність, і суттєво знижує дози даних двох лікарських засобів, що приводять до стійкого рівня глюкози в крові. Вони також встановили, що це введення зменшує побічні ефекти, як наприклад блювання та нудоту, індуковані агоністом глюкагон-подібного пептиду-! та ексендином-4 або їх похідними, і застосування кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії знижує збільшення ваги тіла, викликане застосуванням інсуліну. Крім того, вони встановили, що воно може значною мірою зменшувати ліпотоксичність і глюкотоксичність, які Є основною причиною зниженої функції та маси бета-клітин, а також може зменшувати прогресування діабету. Даний винахід було створено на основі цих даних.
Технічне рішення.
Метою даного винаходу є забезпечення фармацевтичної композиції для попередження або лікування діабету, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії.
Іншою метою даного винаходу є забезпечення способу попередження або лікування діабету, що включає введення композиції суб'єкту з діабетом або з ризиком виникнення діабету.
Ще однією метою даного винаходу є забезпечення фармацевтичної композиції для зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних з групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета- клітин підшлункової залози і зменшення бета-клітин підшлункової залози у пацієнтів з діабетом, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі
Зо інсулінотропного пептиду довготривалої дії.
Ще однією метою даного винаходу є забезпечення способу зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних з групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета-клітин підшлункової залози та зменшення маси бета-клітин, у суб'єкта з діабетом, який включає стадію введення композиції суб'єкту, який страждає на діабет, або з ризиком виникнення діабету.
Сприятливі ефекти.
Кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі ексендину-4 довготривалої дії за даним винаходом демонструють відмінні терапевтичні ефекти щодо діабету, та, зокрема, введення їх в комбінації одночасно стимулює інсулінові рецептори і рецептори глюкагон-подібного пептиду-ї з покращенням іп мімо тривалості її ефекту і стабільності, та суттєвим зниженням необхідних доз лікарських засобів, і стійко підтримує рівень глюкози в крові на постійному рівні, що приводить до зменшення гіпоглікемії та збільшення ваги тіла. Крім того, ця комбінація пригнічує блювання та нудоту, і характеризується покращеною комплаєнтністю лікарського засобу як засобу для терапії діабету. Зокрема, комбінація характеризується значно покращеною стабільністю в крові та іп мімо тривалістю ефекту, що забезпечує можливість зниження частоти введення і забезпечує зручність для пацієнта.
Крім того, кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії відповідно до даного винаходу проявляють відмінну ефективність у лікуванні діабету, особливо при введенні в комбінації, та одночасно стимулюють інсулінові рецептори та рецептори глюкагон-подібного пептиду-1, підвищуючи таким чином іп- мімо тривалість і стабільність, і додатково покращують функцію бета-клітин, а також підвищують їхню масу за допомогою зменшення ліпотоксичності і глюкотоксичності, що являють собою побічні ефекти, які є причиною прогресування діабету. Крім того, даний винахід може забезпечувати композицію, в якій недоліки препарату на основі інсуліну були зменшені за рахунок зменшення низьких рівнів глюкози в крові та збільшення ваги тіла.
Опис графічних матеріалів.
На фіг. 1 представлений графік, що показує рівні глікозильованого гемоглобіну (НБАТс), які вимірювали для оцінки контролю глюкози в крові, що здійснювали шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі 60 ексендину-4 довготривалої дії мишам ар/лаЬ ( Ре«е0,05, и" Ре0,01, и Ре«е0,001 шляхом множинного порівняння за тестом Даннета проти середовища-носія) (ТР«0,05, ТТ Р«0,01, ТІЇ
Р«0,001 шляхом множинного порівняння за тестом Даннета проти однократного введення кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії).
На фіг. 2 представлено графік, що показує зміни ваги тіла (ВМ/) після введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії мишам ар/лар ("Ре0,05, и Ре0,01, и РО, 001 шляхом множинного порівняння за тестом Даннета) (ТР«е0,05, 11 Р 0,01, Я Р«0,001 шляхом множинного порівняння за тестом
Даннета проти однократного введення кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії).
На фіг. З представлено графік, на якому чисельно показано ефект щодо збільшення маси бета-клітин, що здійснює введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії (кон'югату на основі похідної інсуліну довготривалої дії) і кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії мишам ар/ар (Ре0,05, и Р« 0,01, и Р«0,001 за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу проти середовища-носія).
На фіг. 4 представлений графік, на якому наведені показники тригліцеридів у сироватці крові на 12-ому тижні введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії мишам 4Б/аБ (7 Р-е0,05, и Ре 0,01, и Р-0,001 за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу проти середовища-носія).
На фіг. 5 представлений графік, що показує рівні глікозильованого гемоглобіну(НЬА1с), які вимірювали для оцінки контролю глюкози в крові, що здійснювали шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату ексендину-4 довготривалої дії мишам ар/аб.
Найкращий варіант.
Згідно з одним аспектом даний винахід забезпечує фармацевтичну композицію для попередження або лікування діабету, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, які мають однаковий період напівжиття іп мімо. Композиція за даним винаходом характеризується введенням в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії.
Більш детально, дана композиція може являти собою фармацевтичну композицію для
Зо попередження або лікування діабету, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії, в якій аналог інсуліну з'єднаний з біологічно сумісним матеріалом, який здатний пролонгувати тривалість його активності, за допомогою лінкера або ковалентного зв'язку; та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, в якому інсулінотропний пептид з'єднаний з біологічно сумісним матеріалом, що здатний пролонгувати тривалість його активності, за допомогою лінкера або ковалентного зв'язку.
Згідно з іншим аспектом даний винахід забезпечує фармацевтичну композицію для зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних з групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета- клітин підшлункової залози та зменшення маси бета-клітин підшлункової залози, у пацієнтів з діабетом, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, які мають однаковий період напівжиття іп мімо.
Композиція за даним винаходом характеризується тим, що кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії вводять у комбінації.
Більш конкретно, композиція за даним винаходом може являти собою фармацевтичну композицію для зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних із групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета-клітин підшлункової залози та зменшення маси бета-клітин підшлункової залози, у пацієнтів з цукровим діабетом, яка містить: кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії, в якому аналог інсуліну з'єднаний з біологічно сумісним матеріалом, що здатний пролонгувати тривалість дії аналога інсуліну, за допомогою лінкера або ковалентного зв'язку, та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, в якому інсулінотропний пептид з'єднаний з біологічно сумісним матеріалом, що здатний пролонгувати тривалість дії інсулінотропного пептиду, за допомогою лінкера або ковалентного зв'язку.
Композиція за даним винаходом може одночасно знижувати ліпотоксичність, глюкотоксичність, порушення функцій бета-клітин підшлункової залози та знижувати масу бета- клітин підшлункової залози.
Оскільки інсулінотропні пептиди, як наприклад аналог інсуліну та глюкагон-подібний пептид- 60 1, контролюють рівні глюкози в крові за допомогою різних механізмів дії, проводили тільки ті дослідження їх застосування як терапевтичних засобів для контролю рівнів глюкози в крові, які грунтувалися на даних, що їхню ефективність можна максимально збільшити при введенні в комбінації. Однак не було досліджень, які підтверджували, що введення в комбінації покращує функцію та масу бета-клітин за допомогою зниження та взаємодоповнювальної дії на ліпотоксичність і глюкотоксичність, знижуючи тим самим побічні ефекти щодо бета-клітин підшлункової залози, які можуть виникати при окремому введені інсуліну або інсулінотропного пептиду. Нове застосування, що описане вище, було вперше розкрито авторами даного винаходу.
Композиція за даним винаходом характеризується тим, що вона може не тільки знижувати побічні ефекти щодо бета-клітин підшлункової залози, але також зменшувати концентрацію тригліцеридів у крові, зменшуючи тим самим токсичність ліпідів, контролювати функцію глюкози в крові, зменшуючи тим самим глюкотоксичність, і підтримувати та/або збільшувати масу бета- клітин підшлункової залози, пригнічуючи тим самим прогресування діабету. Відповідно, композиція за даним винаходом може зменшувати прогресування діабету.
Описана вище композиція характеризується тим, що вона поліпшує прогноз діабету у суб'єкта з діабетом, якому її вводили.
У даній композиції молярне співвідношення кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії: кон'юЮгату на основі аналога інсуліну може бути в діапазоні 1:0,01--1:50.
Прикладом кон'югату на основі інсулінотропного пептиду може бути кон'югат на основі ексендину, але не обмежуватися ним.
Варіант згідно з даним винаходом.
Вираз "кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії" або "кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії"? що використовується в даному документі, стосується кон'югату, в якому аналог інсуліну або інсулінотропний пептид з'єднаний з біологічно сумісним матеріалом або носієм за допомогою ковалентного зв'язку або нековалентного зв'язку, і утворення кон'югату пролонгує тривалість активності відповідного аналога інсуліну або інсулінотропного пептиду в порівнянні з некон'югованим аналогом або інсулінотропним пептидом.
Введення кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії знижує необхідні дози лікарських засобів, а також зменшує побічні ефекти, як наприклад збільшення ваги тіла, блювання та нудоту, в порівнянні з нативним інсуліном.
Згідно з даним винаходом засіб, що здатний підвищувати період напівжиття і біологічну доступність аналога інсуліну та інсулінотропного пептиду або підтримувати їхню активність, може являти собою носій, який безпосередньо зв'язаний з аналогом інсуліну та інсулінотропним пептидом за допомогою ковалентного зв'язку, або воно стосується засобу, що здатний підвищувати іп мімо активність аналога інсуліну навіть без прямого утворення ковалентного зв'язку.
Вираз "біологічно сумісний матеріал або носій", що використовується в даному документі, являє собою матеріал, який здатний пролонгувати тривалість активності аналога інсуліну або інсулінотропного пептиду, якщо він з'єднаний з відповідним аналогом або пептидом за допомогою ковалентного або нековалентного зв'язку з утворенням кон'югату. Наприклад, матеріал, що здатний пролонгувати іп мімо період напівжиття відповідного аналога або пептиду шляхом утворення кон'югату, може являти собою біологічно сумісний матеріал або носій відповідно даному винаходу. Біологічно сумісний матеріал, що здатний зв'язуватися з аналогом інсуліну та інсулінотропного пептиду, можна проілюструвати різними біологічно сумісними матеріалами, які включають поліетиленгліколь, жирну кислоту, холестерин, альбумін і його фрагмент, матеріали, що зв'язують альбумін, полімер з повторюваними ланками певної амінокислотної послідовності, антитіло, фрагменти антитіл, ЕсКп-зв'язувальний матеріал, сполучні тканини, нуклеотиди, фібронектин, трансферин, сахариди або полімери, що утворюють ковалентний або нековалентний зв'язок для пролонгування іп мімо періоду напівжиття. Крім того, зв'язок між аналогом інсуліну або інсулінотропним пептидом і біологічно сумісним матеріалом, що здатний пролонгувати іп мімо період напівжиття, включає генетичну рекомбінацію та іп міго кон'югацію із застосуванням високо- або низькомолекулярної сполуки, але не обмежена будь- яким способом зв'язування. ЕсКп-зв'язувальним матеріалом може бути Ес-ділянка імуноглобуліну.
Вираз "аналог інсуліну (або аналог)", що використовується в даному документі, означає пептид, який містить варіант з однією або декількома амінокислотами в нативній послідовності.
Аналог інсуліну може являти собою аналог інсуліну, який містить варіант амінокислоти в В- ланцюзі або А-ланцюзі інсуліну, та в порівнянні з нативним інсуліном характеризується бо зниженою концентрацією інсуліну талабо зниженою афінністю зв'язування з рецепторами інсуліну. Амінокислотна послідовність нативного інсуліну являє собою наступне.
А-ланцюг:
Спу-Пе-МаІ-Спіи-СтТп-Сув-Сув- Гиг-5ег-Пе-Сув-5ег-І еи- Гут-С1п-Ї ей-С1ПІи-Авп- Туг-Субз-Азп (ЗЕО І
МО: 37);
В-ланцюг:
Ріпе-МаІ-Азп-С1п-Нів-Ї еи-Сувз-Спу-5ег-Нів-І еи-МаІ-Спи-Аїа-Ї еи- Тук- еи-МаІ-Сув-Спту-сп1и-Ага- сСіу-Рпе-РНе-Туг- Тиг-Рго-І уз-Тиг (ЗЕО ІО МО: 38);
Інсулін, що використовується в прикладах за даним винаходом, може являти собою аналог інсуліну, одержаний за допомогою технології на основі генетичної рекомбінації, але даний винахід ним не обмежується. Даний інсулін включає всі види інсуліну, що мають понижений титр іп-міго та/(або понижену афінність зв'язування з рецепторами інсуліну. Переважно інсулін включає інвертовані види інсуліну, варіанти інсуліну, фрагменти інсуліну тощо, при цьому його можна одержати за допомогою твердофазного способу, а також способу генетичної рекомбінації, але не обмежуючись ними.
Аналог інсуліну являє собою пептид, який зберігає функцію контролю рівня глюкози в крові в організмі, яка відповідає такій активності інсуліну, при цьому такий пептид включає агоністи, похідні, фрагменти, варіанти інсуліну тощо.
Агоніст інсуліну за даним винаходом стосується сполуки, яка зв'язується з рецептором інсуліну для прояву біологічної активності, що відповідає такій активності у інсуліну, але яка не відповідає структурі інсуліну.
Аналог інсуліну за даним винаходом стосується пептиду, що характеризується гомологією за відповідними амінокислотними послідовностями з А-ланцюгом і В-ланцюгом нативного інсуліну, який може мати щонайменше один амінокислотний залишок, змінений за допомогою альтерації, вибраної з групи, яка складається із заміни (наприклад, альфа-метилювання, альфа-гідроксилювання), делеції (наприклад, дезамінування), модифікації (наприклад, М- метилювання) та їх комбінацій, і характеризується функцією регуляції рівня глюкози в крові в організмі.
Згідно з даним винаходом аналог інсуліну стосується пептиду-імітатора або низько- або високомолекулярної сполуки, яка зв'язується з інсуліновим рецептором для регуляції рівня глюкози в крові, навіть якщо його амінокислотна послідовність не має гомології з такою послідовністю нативного інсуліну.
Фрагмент інсуліну за даним винаходом означає фрагмент, що має одну або декілька амінокислот, доданих до інсуліну або делетованих в інсуліні, при цьому додані амінокислоти можуть являти собою амінокислоти, які не зустрічаються в природі (наприклад, амінокислота О- типу), і даний фрагмент інсуліну має функцію регулювання рівня глюкози в крові в організмі.
Варіант інсуліну за даним винаходом являє собою пептид, що має одну або декілька амінокислотних послідовностей, що відрізняються від таких послідовностей інсуліну, і він стосується пептиду, який зберігає функцію регулювання рівня глюкози в крові в організмі.
Кожний зі способів одержання агоністів, похідних, фрагментів і варіантів інсуліну за даним винаходом можна застосовувати окремо або в комбінації. Наприклад, даний винахід включає пептид, який має одну або декілька різних амінокислот і дезамінування по М-кінцевому амінокислотному залишку, а також характеризується функцією регулювання рівня глюкози в крові в організмі.
Більш конкретно, аналог інсуліну може характеризуватися заміною однієї або декількох амінокислот, вибраних з групи, що складається з амінокислот в положеннях 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 16, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 і 30 В-ланцюга і в положеннях 1, 2, 5, 8, 10, 12, 14, 16, 17, 18,19121
А-ланцюга, іншими амінокислотами, зокрема аланіном, глутаміновою кислотою, аспарагіном, ізолейцином, валіном, глутаміном, гліцином, лізином, гістидином, цистеїном, фенілаланіном, триптофаном, проліном, серином, треоніном, аспарагіновою кислотою. Крім того, аналог інсуліну, що характеризується делецією однієї або декількох амінокислот, може також охоплюватися об'ємом даного винаходу, але без обмеження по аналога інсуліну.
Аналог інсуліну може являти собою аналог інсуліну, що характеризується підвищеним періодом напівжиття, ніж нативний інсулін, коли його зв'язують з біологічно сумісним матеріалом або носієм. Аналог інсуліну може являти собою аналоги інсуліну, розкриті в патентах Південної Кореї МоМо 2014-0022909 і 2014-0006938, але не обмежений ними.
Вираз "кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії", що використовується в даному документі, означає інсулінотропний пептид, з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну за допомогою непептидильного лінкера.
Вираз "інсулінотропний пептид", що використовується в даному документі, означає пептид, бо який зберігає функцію вивільнення інсуліну і стимулює синтез або експресію інсуліну в бета-
клітинах підшлункової залози. Більш конкретно, інсулінотропний пептид являє собою сі Р (глюкагон-подібний пептид)-ї1, ексендин-3 або ексендин-4, але не обмежений ними.
Інсулінотропний пептид включає нативні інсулінотропні пептиди, їх попередники, їх агоністи, їх похідні, їхні фрагменти та їх варіанти.
Похідна інсулінотропного пептиду за даним винаходом може включати похідну дезаміно- гістидилу, де М-кінцева аміногрупа інсулінотропного пептиду делетована, похідну бета- гідроксиїмідазопропілу, де аміногрупа замінена гідроксильною групою, похідну диметил- гістидилу, де аміногрупа модифікована двома метильними групами, похідну бета- карбоксиімідазопропіонілу, де М-кінцева аміногрупа замінена карбоксильною групою, або похідну імідазоацетилу, де альфа-атом вуглецю М-кінцевого гістидинового залишку делетований для збереження тільки імідазоацетильної групи, та видалення, отже, позитивного заряду групи тощо. Інші похідні з мутацією в М-кінцевій аміногрупі включені в об'єм даного винаходу.
Згідно з даним винаходом похідна інсулінотропного пептиду може являти собою похідну ексендину-4, що характеризується М-кінцневою аміногрупою або амінокислотним залишком, в яких мутацію індукували хімічним шляхом, ще більш конкретно похідну ексендину-4, яке одержали шляхом видалення або заміни альфа-аміногрупи, що присутня на альфа-атомі вуглецю М-кінцевого залишку Нібх1 ексендину-4, або шляхом видалення або заміни альфа-атому вуглецю. Ще більш конкретно дезаміно-гістидил-ексендин-4 (ЮОА-ексендин-4) з видаленою М- кінцевою аміногрупою, бета-гідроксиімідазопропіл-ексендин-4 (НУ-ексендин-4), одержаний шляхом заміни гідроксильною групою, бета-карбоксиімідазопропіл-ексендин-4 (СХ-ексендин-4), одержаний шляхом заміни карбоксильною групою, диметил-гістидил-ексендин-4 (ОМ-ексендин- 4), одержаний шляхом модифікації двома метильними залишками, або імідазоацетил-ексендин- 4 (СА-ексендин-4) з видаленим альфа-атомом в М-кінцевому гістидиновому залишку, але не обмежується ними.
СІ Р-1 являє собою гормон, що секретується в тонкому кишечнику, та він зазвичай стимулює біосинтез і секрецію інсуліну, пригнічує секрецію глюкагону, та стимулює захоплення глюкози клітинами. У тонкому кишечнику попередник глюкагону розщеплюється на три пептиди, а саме, глюкагон, СІ Р-1 і СІ Р-2. У даному випадку СІ Р-1 означає СІ Р-1 (1-37), який у вихідній формі
Зо не має інсулінотропної функції, але потім процесується і перетворюється в активні форми СІ Р- 1 (7-37). Амінокислотна послідовність СІ Р-1 (7-37) є наступною: а Р-1(7-37):
НАЕСТ ЕТ5ОМ 55М1 Е ВОААК ЕРІАМУ/ І УКаВ а (5ЕО ІЮ МО: 39).
Похідна С Р-Івідноситься до пептиду, який проявляє щонайменше 8095 гомологію амінокислотної послідовності з амінокислотною послідовністю (СІ Р-1, може бути в хімічно модифікованій формі та проявляти інсулінотропну функцію, яка щонайменше еквівалентна такій функції СІ Р-1 або перевищує її.
Фрагмент СІ Р-1 стосується форми фрагмента, в якій одна або декілька амінокислот додані або делетовані на М-кінці або С-кінці нативного СІ Р-1, в якому додана амінокислота ймовірно являє собою амінокислоту, що не зустрічається в природі (наприклад, амінокислоту Ю-типу).
Варіант СІ Р-1 стосується пептиду, що має інсулінотропну функцію, який характеризується однією або декількома амінокислотними послідовностями, що відрізняються від таких послідовностей нативного СГ Р-1.
Ексендин-3 і ексендин-4 є інсулінотропними пептидами, що складаються з 39 амінокислот, які характеризуються 53 9о гомологією амінокислотної послідовності з СІ Р-1. Амінокислотні послідовності ексендину-3 і ексендину-4 являють собою наступні:
Ексендин-3:
НОТ ЕТ5ОІ ЗКОМЕ ЕЕАМВ І ГРІЄ І КМасії РОБИА РРРБ (5ЕО І МО: 40);
Ексендин-4:
НОаЕсСТ ЕТ50І 5КОМЕ ЕЕАМЕ І РІЕМУ І КМасії РОБИА РРРБ (ЗЕО ІЮ МО: 41);
Агоніст ексендину стосується сполуки, що зв'язує рецептори ексендину іп мімо та характеризується біологічною активністю, яка еквівалентна активності ексендину, що не пов'язана зі структурою ексендину, при цьому похідна ексендину стосується пептиду, що характеризується щонайменше 8095 гомологією амінокислотної послідовності з нативним ексендином, який може мати декілька груп в амінокислотному залишку, які хімічно замінені (наприклад, альфа-метилювання, альфа-гідроксилювання), делетовані (наприклад, дезамінування) або модифіковані (наприклад, М-метилювання), та характеризується інсулінотропною функцією.
Фрагмент ексендину стосується фрагмента, що має одну або декілька амінокислот, доданих 60 або делетованих на М-кінці або С-кінці нативного ексендину, в який можуть бути додані амінокислоти, що не зустрічаються в природі (наприклад, амінокислота ЮО-типу), та який характеризується інсулінотропною функцією.
Варіант ексендину стосується пептиду, який має щонайменше одну амінокислотну послідовність, відмінну від такої послідовності нативного ексендину, що характеризується інсулінотропною функцією, при цьому варіант ексендину включає пептиди, в яких лізин в положенні 12 ексендину-4 заміщений серином або аргініном.
Кожний зі способів одержання агоністів, похідних, фрагментів і варіантів ексендину за даним винаходом можна застосовувати окремо або в комбінації. Наприклад, даний винахід включає інсулінотропний пептид, що має амінокислотну послідовність, яка характеризується щонайменше однією відмінною амінокислотою, та характеризується амінокислотним залишком, дезамінованим на М-кінці.
Згідно з ілюстративним варіантом здійснення нативний інсулінотропний пептид і модифікований інсулінотропний пептид, що застосовуються в даному винаході, можна синтезувати із застосуванням способу твердофазного синтезу, і більшість нативних пептидів, зокрема нативний інсулінотропний пептид, можна одержати за допомогою технології на основі рекомбінації.
Кон'югат на основі аналога інсуліну і кон'югат на основі інсулінотропного пептиду можна представити наступною формулою: х-Г а-Е, де Х являє собою аналог інсуліну або інсулінотропний пептид, при цьому аналог інсуліну одержали за допомогою модифікації одної або декількох амінокислот В-ланцюзі або А-ланцюзі інсуліну, Ї являє собою лінкер, а являє собою 0 або натуральне число (якщо а дорівнює 2 або вище, кожний І є незалежним), Е вибраний з полієтиленгліколю, жирної кислоти, холестерину, альбуміну і його фрагмента, зокрема з амінокислотної послідовності, антитіла або його фрагмента, ЕсКп-зв'язувального матеріалу, фібронектину, сахариду тощо.
Ес-ділянка імуноглобуліну є безпечною для застосування як носія лікарського засобу, оскільки вона є біорозкладаним поліпептидом, який метаболізується в організмі. Крім того, Ес- ділянка імуноглобуліну характеризується відносно невеликою молекулярною масою у порівнянні з цілими молекулами імуноглобулінів та, отже, є переважною для одержання,
Зо очищення і виходу кон'югату. Ес-ділянка імуноглобуліну не містить Раб-фрагмента, який є значно неоднорідним внаслідок різних амінокислотних послідовностей відповідно підкласам антитіл, та, отже, можна очікувати, що Ес-ділянка імуноглобуліну може значно підвищувати однорідність речовин і бути менш антигенною.
Вираз "Рс-ділянка імуноглобуліну"? що використовується в даному документі, стосується білку, який містить константну ділянку 2 важкого ланцюга (СН) і константну ділянку З важкого ланцюга (СНЗ) імуноглобуліну, за винятком варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів, константної ділянки 1 важкого ланцюга (СНІ) і константної ділянки 1 легкого ланцюга (Сі) імуноглобуліну. Він може додатково містити шарнірну ділянку в константній ділянці важкого ланцюга. Також Ес-ділянка імуноглобуліну за даним винаходом може являти собою подовжену
Ес-ділянку, що містить частину або всю константну ділянку 1 важкого ланцюга (СНІ) та/або константну ділянку 1 легкого ланцюга (СІ1), крім варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюга, за умови, що він характеризується фізіологічною функцією, значною мірою подібною такій функції у нативного імуноглобуліну, або кращою, ніж така функція у нативного імуноглобуліну. Також Ес-ділянка імуноглобуліну може являти собою ділянку з делецією у відносно довгій частині амінокислотної послідовності СН2 та/або СНУ.
Інакше кажучи, Ес-ділянка імуноглобуліну за даним винаходом може включати 1) СНІ1- домен, СН2-домен, СНЗ-домен і СН4-домен, 2) СН1-домен і СН2-домен, 3) СНІ1-домен і СНЗ- домен, 4) СН2-домен і СНЗ-домен, 5) комбінацію одного або декількох доменів і шарнірну ділянку імуноглобуліну (або частину шарнірної ділянки), та 6) димер з кожного домену константних ділянок важкого ланцюга і константної ділянки легкого ланцюга.
Ес-ділянка імуноглобуліну за даним винаходом включає нативну амінокислотну послідовність і варіант цієї послідовності (мутантний). Варіант амінокислотної послідовності являє собою послідовність, яка відрізняється від нативної амінокислотної послідовності внаслідок делеції, вставки, неконсервативної або консервативної заміни або їх комбінації одного або декількох амінокислотних залишків. Наприклад, в Ес до амінокислотні залишки, які, як відомо, відіграють важливу роль у зв'язуванні, в положеннях 214-238, 297-299, 318-322 або 327-331 можна застосовувати як придатні мішені для модифікації.
Також можливі інші різноманітні варіанти, зокрема один, в якому делетована ділянка, що здатна утворювати дисульфідний зв'язок, або певні амінокислотні залишки видалені на М-кінці бо нативної форми Ес або в неї додано залишок метіоніну. Крім того, для усунення ефекторних функцій може мати місце делеція в сайті зв'язування з комплементом, як наприклад С1а4- зв'язувальному сайті та сайті АОСС (антитілозалежної клітиноопосередкованої цитотоксичності). Методики одержання таких похідних послідовностей /Ес-ділянки імуноглобуліну розкриті в публікаціях міжнародних заявок УМО 97/34631 і УМО 96/32478.
У даній галузі техніки відомі амінокислотні заміни в білках і пептидах, які зазвичай не змінюють активності молекул (Н. Меигасй, К. Ї. Ні, Те Ргоїеіп5, Асадетіс Ргез5, Мем/ мок, 1979). Частіше за все зустрічаються заміни Аїа/Зег, маіІЛІе, Азр/СіІм, Тпг/Зег, АІа/зіІу, Аа/ТНг,
Зег/Авп, Аіа/Маї, бег/Сіу, Тну/РНе, Аїа/Рго, І уз/Ага, Азр/Азп, І ешЛіе, І еи/маї, АІа/сІм, А5р/ЗІу, в обох напрямках.
Крім того, Ес-ділянку, якщо це необхідно, можна модифікувати фосфорилюванням, сульфатуванням, акрилюванням, глікозилюванням, метилюванням, фарнезилюванням, ацетилюванням, амідуванням тощо.
Вищевказані Ес-варіанти є варіантами, які характеризуються біологічною активністю, ідентичною такій активності Ес-ділянки за даним винаходом, або покращеною структурною стабільністю, наприклад, щодо тепла, рН тощо.
Крім того, ці Ес-ділянки можна одержати з нативних форм, виділених з людей та інших тварин, зокрема з корів, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, пацюків і кавій, або вони можуть бути рекомбінантами або їх похідними, одержаними з трансформованих клітин тварин або мікроорганізмів. У даному документі їх можна одержувати з нативного імуноглобуліну шляхом виділення цілих імуноглобулінів з організму людини та тварин та їхної обробки протеолітичним ферментом. Папаїн розщеплює нативний імуноглобулін в Рар- і Ес-ділянких, а обробка пепсином приводить до одержання рес і Е(аб)». Ці фрагменти можна піддавати ексклюзійній хроматографії з виділенням Ес або ре'с.
Ес-ділянка імуноглобуліну може являти собою рекомбінантну Ес-ділянку імуноглобуліну, яка являє собою людську Ес-ділянку, одержану з мікроорганізму.
Крім того, Ро-ділянка імуноглобуліну може бути в формі з наявністю ланцюгів нативних цукрів, збільшених ланцюгів цукрів у порівнянні з нативною формою або зменшених ланцюгів цукрів у порівнянні з нативною формою, або може бути в деглікозильованій формі. Збільшення, зменшення або видалення ланцюгів цукрів Ес-ділянки імуноглобуліну можна досягнути за допомогою способів, загальноприйнятих в даній галузі, як наприклад хімічного способу, ферментативного способу та способу генетичної інженерії із застосуванням мікроорганізму.
У даному документі видалення ланцюгів цукрів із Ес-ділянки приводить до різкого зниження афінності зв'язування з комплементом (с14) і зниження або втрати антитілозалежної клітиноопосередкованої цитотоксичності або комплементзалежної цитотоксичності, не індукуючи тим самим небажаних імунних відповідей іп мімо. У цьому відношенні Ес-ділянка імуноглобуліну в деглікозильованій або аглікозильованій формі може бути більш придатною для мети даного винаходу як носія лікарського засобу.
Термін деглікозилювання, що використовується в даному документі, означає ферментативне видалення фрагментів цукрів із Ес-ділянки, а аглікозилювання означає, що Ес- ділянку одержують в неглікозильованій формі із застосуванням прокаріота, зокрема Е. соїї.
Тим часом, Ес-ділянку імуноглобуліну можна одержувати від людей або інших тварин, зокрема з корів, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, пацюків і кавій, але головним чином від людей. Крім того, Ес-ділянка імуноглобуліну може являти собою Ес-ділянку, яку одержують із
Ід, ІДдЧА, дО, ЧЕ і ІМ, або яка утворюється в результаті їх комбінацій або їх гібридів. Зокрема, її одержують із (9 або ІДМ, які входять в число найбільш чисельних білків крові людини, і переважніше, з до, що, як відомо, подовжує періоди напівжиття ліганд-зв'язувальних білків.
З іншого боку, комбінація, що використовується в даному документі, означає зв'язок між поліпептидом, який кодує Ес-ділянку одноланцюгового імуноглобуліну того самого походження, та одноланцюговим поліпептидом іншого походження з утворенням димеру або мультимеру.
Інакше кажучи, димер або мультимер можна одержати з двох або більше фрагментів, вибраних із групи, що складається з фрагментів Ес до, Ес ІдДА, Ес ІДМ, Ес до і Ес ІЧЗЕ.
Термін "гібрид", що використовується в даному документі, означає присутність послідовностей, які кодують два або більше фрагментів Ес-ділянок імуноглобулінів різного походження, в Ес-ділянці одноланцюгового імуноглобуліну. Згідно з даним винаходом можливі різноманітні типи гібридів. Інакше кажучи, гібриди доменів можуть складатися з одного - чотирьох доменів, вибраних із групи, що складається з СНІ, СН2, СНЗ і СНА Ес Ідб, Ес ІОМ, Ес
ІДА, Ес ІЗЕ і Ес ІдО, і можуть включати шарнірну ділянку.
З іншого боку, дос розділений на підкласи Ідс1, Ідс2, доз і Ідся4, і даний винахід включає їх комбінації і гібриди. Можна застосовувати підкласи ІдсС2 і Ідс4, а конкретніше можна бо застосовувати Ес-ділянку 9054, яка дуже рідко має ефекторні функції, як наприклад комплементзалежну цитотоксичність (СОС). Інакше кажучи, як носій лікарського засобу за даним винаходом може виступати неглікозильована Ес-ділянка, одержана з людського Ідс4, що можна застосовувати як Ес-ділянку імуноглобуліну. Ес-ділянка, одержана від людини, є більш переважною, ніж Ес-ділянка іншого походження, яка може виступати в ролі антигену в організмі людини та викликати небажані імунні відповіді, як наприклад утворення нового антитіла до антигену.
Згідно з даним винаходом непептидильний полімер означає біологічно сумісний полімер, що включає дві або більше повторювані одиниці, зв'язані одна з одною будь-яким ковалентним зв'язок, крім пептидного зв'язку. Такий непептидильний полімер може мати два кінця або три кінця.
Непептидильний полімер, що застосовують у даному винаході, може бути вибраний із групи, що складається з біорозкладаного полімеру, як наприклад поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, сополімеру етиленгліколю і пропіленгліколю, поліоксиетильованого поліолю, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, полімолочної кислоти (РГА) і полімолочно-гліколевої кислоти(РІ СА), ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації, та, зокрема, поліетиленгліколю. Крім того, в обсяг даного винаходу можна включити відомі в даній галузі техніки їх похідні та похідні, які легко одержують за допомогою відомого в даній галузі способу.
Пептидильний лінкер, який застосовують в білку злиття, одержаному за допомогою стандартного способу злиття зі збереженням рамки зчитування, має недоліки, які проявляються в тому, що він легко розщеплюється в організмі протеолітичним ферментом та, отже, неможливо одержати достатній ефект збільшення періоду напівжиття активного лікарського засобу за рахунок носія, як очікується. Однак згідно з даним винаходом непептидильний лінкер, а також пептидильний лінкер можна застосовувати для одержання кон'югату.
У непептидильному лінкері можна застосовувати полімер, стійкий до протеолітичного ферменту, для підтримання періоду напівжиття пептиду, що є подібним періоду напівжиття носія. Таким чином, без обмеження можна застосовувати будь-який непептидильний полімер, за умови, що він являє собою полімер з вищевказаною функцією, тобто полімер, стійкий до протеолітичного ферменту іп-мімо. Непептидильний полімер характеризується молекулярною масою, яка знаходиться в діапазоні від 1 до 100 кДа, а переважно від 1 до 20 кДа.
Непептидильний полімер за даним винаходом, зв'язаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну, може являти собою один полімер або комбінацію різних типів полімерів.
Непептидильний полімер, що застосовується в даному винаході, має реакційноздатну групу, яка може зв'язуватися з Ес-ділянкою імуноглобуліну і білковим лікарським засобом.
Непептидильний полімер має реакційноздатну групу на обох кінцях, яку переважно вибирають із групи, що складається з реакційноздатної альдегідної групи, пропіональдегідної групи, бутиральдегідної групи, малеїмідної групи і похідної сукциніміду. Похідна сукциніміду може являти собою сукцинімідилпропіонат, гідроксисукцинімідил, сукцинімідилкарбоксиметил або сукцинімідилкарбонат. Зокрема, якщо непептидильний полімер має реакційноздатну альдегідну групу на обох своїх кінцях, він є ефективним у зв'язуванні на обох кінцях з фізіологічно активним поліпептидом та імуноглобуліном при мінімальних неспецифічних реакціях. Кінцевий продукт, одержаний при відновлювальному алкілуванні альдегідного зв'язку, є набагато стабільнішим, ніж продукт, зв'язаний амідним зв'язком. Альдегідна реакційноздатна група вибірково зв'язується з М-кінцем при низькому значенні рн, і зв'язується із залишком лізину з утворенням ковалентного зв'язку при високому значенні рН, як наприклад рН 9,0.
Реакційноздатні групи на обох кінцях непептидильного полімеру можуть бути однаковими або відрізнятися один від одного. Наприклад, непептидильний полімер може мати малеїмідну групу на одному кінці та альдегідну групу, пропіональдегідну групу або бутиральдегідну групу на іншому кінці Якщо як непептидильний полімер застосовується поліеєтиленгліколь з реакційноздатною гідроксигрупою на його обох кінцях, то гідроксигрупу можна активувати до різних реакційноздатних груп за допомогою відомих хімічних реакцій, або можна застосовувати комерційно доступний поліетиленгліколь з модифікованою реакційноздатною групою для того, щоб одержати кон'югат за даним винаходом.
Різновид і спосіб одержання кон'югату на основі секреторного пептиду довготривалої дії докладно описані в патентах Південної Кореї МоМо 10-1058290, 10-1231431 і 10-1058315.
Згідно з одним варіантом здійснення даного винаходу лізин (Гу5) в імідазо-ацетил- ексендині-4(СА ексендині-4) модифікували за допомогою РЕС, і РЕсО-модифікований ексендин- 4 був з'єднаний з ЕРсо-ділянкою імуноглобуліну, одержавши таким чином кон'югат на основі ексендину-4 довготривалої дії (приклад 9). бо Такий кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії за даним винаходом значно збільшують тривалість ефективності іп мімо та проявляють схожий період напівжиття іп мімо. Таким чином, їх введення в комбінації є ефективним у лікуванні діабету.
Введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії за даним винаходом може демонструвати виняткову ефективність в контролі рівня глюкози в крові та поліпшувати ліпідний профіль в крові порівняно з окремим введенням. Згідно з одним варіантом здійснення даного винаходу було підтверджено, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії (тобто ексендину-4) може послаблювати ліпотоксичність і глюкотоксичність, зберігаючи таким чином масу бета-клітин і додатково пригнічуючи прогресування діабету. Такі результати вказують на те, що комбінована композиція кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії відповідно даному винаходу, або введення в комбінації даних кон'югатів може суттєво знижувати ліпотоксичність, що асоційована з підвищенням рівнів ліпідів в крові, та глюкотоксичність, асоційовану з підвищенням рівнів глюкози в крові, внаслідок недостатнього контролю рівнів глюкози в крові, які Є побічними ефектами, що виникають у деяких пацієнтів з діабетом при окремому введенні інсуліну або інсулінотропного пептиду, і крім цього, можна значно сповільнити прогресування діабету за рахунок попередження порушення функції бета-клітин підшлункової залози та/або збільшення маси бета-клітин підшлункової залози, що таким чином приводить до поліпшення стану, лікування діабету та попередження виникнення діабету, а також поліпшує прогноз при діабеті.
Композиція за даним винаходом характеризується введенням в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії.
Якщо здійснюють введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії за даним винаходом, то одночасно кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії виявляє дію на інсулінові рецептори, а кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії виявляє дію на рецептор глюкагон-подібного пептиду-ї1, викликаючи таким чином зниження рівня глюкози в
Зо крові та підтримуючи стабільний рівень глюкози в крові порівняно з їх окремим введенням.
Введення кон'югатів в комбінації викликає ефекти, які проявляються в зниженні ризику виникнення гіпоглікемії та збільшенні ваги тіла, що може бути індуковано при окремому введені інсуліну, а також знижує дозу загального інсуліну, завдяки дії інсулінотропного пептиду. Також перевага полягає в тому, що дозу інсулінотропного пептиду, як наприклад ексендину-4, також можна знизити для попередження побічних ефектів, як наприклад нудоти або блювання, які виникають при окремому введенні ексендину-4. Застосування кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії значно збільшує період напівжиття в крові та іп мімо тривалість ефекту, що таким чином знижує частоту застосування лікарського засобу з поліпшенням якості життя у хронічних хворих, які зазнають незручності через щоденні ін'єкції. Таким чином, дане застосування є винятково корисним для лікування діабету. Крім того, фармацевтична композиція за даним винаходом демонструє відмінну тривалість ефекту іп мімо і титри, при цьому дозу можна суттєво знизити при введені в комбінації.
Більш того, на відміну від стандартних складів, композиція за даним винаходом характеризується тим, що вона може зменшувати втрату функції бета-клітин підшлункової залози і зниження маси бета-клітин підшлункової залози внаслідок апоптозу бета-клітин підшлункової залози, який виникає у пацієнтів з діабетом. Ця композиція може зменшувати зниження функції та маси бета-клітин за допомогою зменшення і взаємодоповнювальної дії щодо ліпотоксичності та глюкотоксичності, пригнічуючи таким чином прогресування діабету.
Тим самим композиція за даним винаходом може зменшувати побічні ефекти щодо клітин підшлункової залози у пацієнтів з діабетом.
Кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії можна вводити одночасно, послідовно або в оберненому порядку, іможна вводити одночасно при відповідній комбінації ефективних доз. Зокрема, кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії можна зберігати окремо в індивідуальних контейнерах, а потім вводити одночасно, послідовно або в зворотному порядку.
Крім того, кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії як композиція для введення в комбінації за даним бо винаходом може бути в формі набору для терапії діабету, який містить кон'югати в одному контейнері або окремо в індивідуальних контейнерах. Набір може включати фармацевтично придатний носій та інструкцію для застосування набору.
Крім того, кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії можна вводити в комбінації з інсулінотропним пептидом та інсуліном, відповідно. Кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії можна вводити в комбінації з інсулінотропним пептидом, як наприклад агоністами СІ Р-1 (наприклад, ексенатид, ліраглутид, ліксисенатид), а кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії можна вводити в комбінації з інсуліном і аналогом інсуліну, базальним інсуліном.
Термін "діабет" або "цукровий діабет", що використовується в даному документі, стосується захворювання обміну речовин, яке викликається недостатністю секреції інсуліну або порушенням функції інсуліну. Введення суб'єкту в комбінації композиції за даним винаходом здійснюють для контролю рівнів глюкози в крові, отже, для лікування діабету. Також композицію за даним винаходом можна застосовувати як засіб для терапії діабету, який може підтримувати і підвищувати функцію та клітинну масу бета-клітин підшлункової залози, і забезпечувати захист від побічних ефектів, як наприклад можливого стресу бета-клітин. Крім того, композиція за даним винаходом може значно зменшувати ліпотоксичність і глюкотоксичність, які викликають зниження функції та маси бета-клітин, а також може зменшувати прогресування діабету.
Відповідно, композиція за даним винаходом може значно зменшувати побічні ефекти традиційних лікарських засобів.
Вираз "попередження", що використовується в даному документі, означає всі дії, за рахунок яких виникнення діабету або побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози затримується або сповільнюється при введенні в комбінації композиції за даним винаходом, а вираз "лікування" означає всі дії, за рахунок яких симптоми діабету або побічні ефекти щодо бета-клітин підшлункової залози були поліпшені або позитивно змінені при введені в комбінації композиції за даним винаходом. Лікування діабету і попередження або лікування побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози можна застосовувати щодо будь-якого ссавця з діабетом, та їх приклади включають людей і приматів, а також домашніх тварин, як наприклад без обмеження корову, свиню, вівцю, коня, собаку та кішку, і, зокрема, людину.
Зо Вираз "введення", що використовується в даному документі, означає введення пацієнту завчасно визначеної кількості речовини за допомогою певного придатного способу. Композицію можна вводити за допомогою будь-якого з відомих шляхів, за умови, що вона зможе досягти необхідної тканини. Розглядається багато шляхів введення, в тому числі інтраперитонеальний, внутрішньовенний, внутрішньом'язовий, підшкірний, внутрішньошкірний, пероральний, місцевий, інтраназальний, внутрішньолегеневий і ректальний, але даний винахід не обмежується цими ілюстративними шляхами введення. Разом з тим, оскільки пептиди розщеплюються при пероральному введені, активні інгредієнти композиції для перорального введення необхідно покривати або складати для захисту від розпаду в шлунку. Зокрема, композицію за даним винаходом можна вводити в ін'єкційній формі. Крім того, засіб довготривалої дії можна вводити за допомогою певного пристрою, що здатний транспортувати активні інгредієнти в клітину- мішень.
Крім того, фармацевтичну композицію за даним винаходом можна визначати декількома пов'язаними факторами, в том числі типами захворювань, що підлягають лікуванню, шляхами введення, віком, статтю та вагою пацієнта, важкістю хвороби, а також типами лікарського засобу, який застосовується як активний компонент.
Крім того, фармацевтична композиція згідно з даним винаходом може містити фармацевтично прийнятний носій. Вираз "фармацевтично прийнятний носій", що використовується в даному документі, стосується носія або розріджувача, які не викликають суттєвого подразнення в організмі та не пригнічують біологічну активність і властивості сполуки, яку вводять. Для перорального застосування фармацевтично прийнятний носій може включати зв'язувальну речовину, змащувальну речовину, розпушувач, допоміжний засіб, розчинник, диспергувальний засіб, стабілізатор, суспендувальний засіб, барвник або ароматизатор. Для ін'єкційних форм фармацевтично прийнятний носій може включати буферний засіб, консервант, анальгетик, розчинник, ізотонічний засіб і стабілізатор. Для форм для місцевого застосування фармацевтично прийнятний носій може включати основу, допоміжний засіб, змащувальну речовину та консервант. Фармацевтичну композицію за даним винаходом можна складати у вигляді багатьох лікарських форм в комбінації з вищевказаними фармацевтично прийнятними носіями. Наприклад, для перорального введення фармацевтичну композицію можна створювати у вигляді таблеток, пастилок, капсул, еліксирів, суспензій, сиропів або облаток. Для бо ін'єкційних форм фармацевтичну композицію можна складати у вигляді ампули з разовою дозою або багатодозового контейнеру. Фармацевтичну композицію можна також складати у вигляді розчинів, суспензій, таблеток, пігулок, капсул і препаратів довготривалої дії.
З іншої сторони, приклади носіїв, допоміжного засобу та розріджувача для складення включають лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбіт, маніт, ксиліт, еритрит, мальтит, крохмаль, аравійську камедь, альгінат, желатин, фосфат кальцію, силікат кальцію, целюлозу, метилцелюлозу, мікрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, воду, метилгідроксибензоат, пропілгідроксибензоат, тальк, стеарат магнію та мінеральні масла. Крім того, фармацевтичні склади можуть додатково включати наповнювачі, антикоагулянти, змащувальні речовини, зволожувачі, ароматизуючі речовини та антисептики.
Згідно з іншим аспектом даний винахід забезпечує спосіб попередження або лікування діабету, що включає стадію введення композиції, яка містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, суб'єкту з діабетом або з ризиком виникнення діабету.
Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід забезпечує спосіб зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета-клітин підшлункової залози, вибраних з групи, що складається з ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета-клітин підшлункової залози та зменшення маси бета-клітин підшлункової залози, у пацієнтів з діабетом, який включає стадію введення композиції, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, пацієнтам, які страждають на діабет.
Стадію введення можна здійснювати без обмеження шляхом одночасного, послідовного введення або введення в оберненому порядку в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, та кон'югати можна вводити одночасно при відповідному поєднанні ефективних доз.
Незважаючи на введення тільки один раз на тиждень, композиція, що містить як кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії, так і кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії згідно з даним винаходом, може проявляти виняткове зменшення рівнів глюкози в крові та не викликає побічних ефектів у вигляді збільшення ваги тіла, та, отже, дану композицію можна застосовувати для попередження або лікування діабету.
Ко) Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід забезпечує спосіб зменшення та/або зниження ліпотоксичності та/або глюкотоксичності у пацієнтів з діабетом, що включає стадію введення вказаної композиції, яка місить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, пацієнту, який страждає на діабет.
Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід забезпечує спосіб покращення функції бета-клітин підшлункової залози та/або збереження, та/або підвищення маси бета-клітин підшлункової залози, що включає стадію введення вказаної композиції, яка місить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії, пацієнтам, які страждають на діабет.
Далі в даному документі даний винахід буде описаний більш детально з посиланням на приклади. Однак дані приклади призначені тільки для ілюстративних цілей, і не передбачається обмеження даного винаходу даними прикладами.
Приклад 1. Одержання вектору, що експресує одноланцюговий аналог інсуліну
Для одержання аналогів(аналога) інсуліну кожний аналог з варіантом однієї амінокислоти в
А-ланцюгу або В-ланцюгу синтезували із застосуванням як матриці вектору, що експресує інсулін, прямих і зворотніх олігонуклеотидів (таблиця 2), а потім проводили ПЛР для ампліфікації гену відповідного аналога.
Кожну амінокислотну послідовність модифікували в А-ланцюзі або В-ланцюзі, та назву кожному аналога давали згідно наступній таблиці 1. Тобто, аналог 1 характеризувався заміною гліцину на аланін у положенні 1 А-ланцюга, а аналог 4 характеризувався заміною гліцину на аланін у положенні 8 В-ланцюга.
Таблиця 1 ї У ї і Анапог ; Модифікована послідовність : ! і :
ПН
: Аналог 1 і ї ї - х , | АО- А : Анапог2 . 7
АТ» А : пн пн нн по нн ев вн нав нн нн
Анапог З | Ду» д . Аналог 4 | ВС - А : і Аналог 5 .
Во А : : ї ; Анапог 6 | дмЕ-з Д і Анапог 7 : ; | Е
ВЕ А пи о о нн оп п пн : ї :
Аналог 8 ДМУу ЕЕ ;
ВН
Анапог З ду - М .
Праймери для ампліфікації генів аналогів інсуліну наведені в наступній таблиці 2.
Таблиця 2
Аналог 7 ООСТОССтосАСААОС ВТ ОО ВАРТОВСТВАСММТТВ З" Із МО1, дналого | 2 ТОССТОСАВКАВССТОВОЗСОБТОЗАВСАЕТО ВА Я ЗІ МО 3, днапог3 | 7 СтСТМСМОСТООВАЮЬСВОЄТТЬКОТОАОВАТЄС В 5010 МО 5
Об озима Ост ХО МО б. дналога | 27 ОТТАВОСВАСЬСТТОТОТ СВТ АСВОСТОВТМАВОСТ В 5010 МО 7
ШЕ ве в ве я ШК ЗМО
Аналог й специ аво е «ОЮ МО 9. днапогб б ВТОТЕОСОООЛАССЛССООИТТСТАСАСАСССаВ В ЗО Ю МО 11) дналог? | 7 ТОПОСААЛОВОВСТТОВОСТАСАСАСССААВМСВ М ЗО Ю МО 13. дналога | КВОСАТОТУ ТО ТООВАСАОСТОВАНАВСТАСТЬНИ 5ЕО Ю МО 15;
Аналог9 | смт ТОВВсАСС ТО ОВАСТІСУ 5ЕО Ю МО 171
Реакцію ПЛР для ампліфікації генів аналогів інсуліну проводили за умов 95 "С протягом 30 секунд, 55 "С протягом 30 секунд і 68 "С протягом 6 хвилин протягом 18 циклів. Для експресії генів фрагментів аналогів інсуліну, одержаних за умов у вигляді внутрішньоклітинних тілець- включень, кожний з них вбудовували у вектор рЕТ22Б, і одержані таким чином вектори експресії позначали як рЕТ22Б-аналоги інсуліну 1-9, відповідно. Відповідні вектори експресії включали нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності аналогів інсуліну 1-9 під контролем промотора 17, і експресовані аналоги інсуліну у вигляді тілець-включень в клітинах-господарях, відповідно.
Послідовності ДНК і білкові послідовності аналогів інсуліну 1-9 наведені в наступній таблиці 3.
фут КнкукКких і пен ! п в о
А ! пккжніжя кжтя жаху ; вовк знаки чех й сл довність | ЗЕ В) МО ! ши й " камін к жк Кажан кання МІК, і ло 1 і днк ЖЕ тоук пи - ! Юм, ! Н 3 Басай ЖК Ж АСК А ща "ЗХ р дна же кох вка ; 3 Н НЕ ру Ж . зе ха БУКея СА є. КІ У КА ях прин пи ма : ї їх ре ЗК ТАКУ Т ся жу жу хори и КИ ЕВ їх щшда. КЕН. х Шо ! у, сек ТЕ Ко я кі й с х со - й з, ВАК ЕМ ж г
Я ї дме ее в яЕя КАМ айс ТЕ ТА | о і су аг ее се Ко -коЯ ке Ж щи де ще ж БК з УК КК ї Е ке КУ ЗБК БАКУ СРОЯ ЖК т хай тк ді й . ки мене нш : БЕЖ. А ау Я КЕ Же вки - ІЗ
Я Її : Б ЗААХ Ж З с ЗУ Гете У зш зни и уча ко д ША й м с т ї : іржу рих в ЗК У А С Ки гою с .
ІЯ хо Кок ван ол им й ши ак Сх З. ! Н їх КО ща КО КУ ОА ач ІК у пед й щи Щі ї : Ти й я ВОМЗАа Кол К ГУ З пу у щ ; ї ТКУ ай жри е ие ь ся МАУ жука жиди секс: ІЗ :
У Ка те КЗЗ ЕКЗ ВЕ сис дже Усі Кк КМ УА ХЕ НЕ .
Со ї ід Ех В ж КМ КУ У що те ие тА г г вш ї Не Е АК ва ха з о їд З МК ня хо ї ! ша НН ан во СЕ Є; яз І й в хе що ху ще ,
Я - 7. Ак й КТ У КТК ВКЛ КК КЛ УК КК КВК ї ; сде я и и щ конем ен як . . у кі «ВУ іво ух УМ сок вк З кв В ї 1 Н пу ь у о УМ ЗБЕ КН ех ЗАВ ЗНА ан Які ШИ . ї ще и у їзБх ММЕЕХ МКУ ре Кох їх ма. х х Ж НК МА зуК їжа Ех ї 1 ї АННИ я з ММ ЗК ОК Учні КЗ га | Щ ї ЕК Ж нео Ж ль КІВ я ТРАК. Гая хх ж щу Сена щі о
Е У па ва бе ЗОНА Я Му Св Ук й АН Я с АБИ : ї да: і сх ЩО З т Ук Ов ее МУ ККУ ТІВ ; ї і | ЕЕ іш сів їзеуЖу че ді ся і у й му а ху, МЕ ЯЕЕЕ СУ Же Їх й ї і ЖУК ки МАЕ Ся І о щі і 1 Е 3 ТО ож БК КИ Бе бук В жх 53 Ж ! я
Я : МУ са є МК ЗТ АЖ У їз ах Аа Не і : т В ж ЗУ Що З У АБ яз» ха е : ї : й хи ож Те ее х Ме гак сег З км ж Є іх о Ав З ща :
МН Е їж як ую у Бема БУХ: ЕН ідей Же Е їх скляні чия квквких До й ї Ах тм у с З Б КК ях пкт КЕ ї нн и в Ш
Ь. А нал З 2 « МЛ ти Кит Су Ул» ГУ | Щ , ; є ! днк ЕТ АВС пи ооо ооо .
Ї ї і Мо Ж СК МА май стру ЗЕут у пов кою де схоже о ; ї Н ЕЕ: СУ я х У х Ї хз Ми ХМ З як СЕМ сти кукк пониннн ин і Е ух. УА с Я ХЕ ОЖЕд кн пк ще Ак Б : і КК КОН ЕВ дач 35, пи й й ці шик 7
Її Н вав Є сова В АК АКАКХ ї і і г ВАХ А СКК Се АБУ НН ММ Є ОС ТАКОАКЯ КУ Її
Н : іш вкх вуж є ЕК КАК ож ММК БАС ОСТ АВ ТУ х : ! Н га г А НЕ У Не ЕМО ке : й лиш ії т б що ВАЄ
Й Н ї ем С НН Ж ЕН ші ї : ЕЙ ЖК, дим я Кк МН КОЮ КУ КО гене сек КЕ д ; ї Е її ви СК ОЖЖЖ Гжя Ко КО то м в ЕЙ Ук КАж КОН ї- ЕК С га ї ї ! р жу ОК «А їх ша БЕК т КО Бех шк 1 Н тх ТК АЛЬ жа вих дж кр ев КМ о со Гея 5 КО ЗЕ : Е 1 Кезе есе пу ІК АС АТ АТЕ ТК КІ МУК КТ : рееннеюнюм Н аа АС ТАЄ | й сб й АТС КН ТС сраки я и ; ви нн о йо К вч х КЕ Ка А їх Ж ше Кия МК КМУ. с ж ї о Е " ее Пон В ЩІ ; ре Ах во он вн ! і с ї ТОЖ ох ЕЯЯ мк о ех їх їв Ех промо ва . ; і ї ЕІ фткз КК о ОТ Ж АХ МК ма щх га зай ч у нини ник ! ІЗ 5 ТУ ГО Кк Фу ЧУ Бізе» ве з ж ї5 м лама ву ММ КЕ феї кл З
Ї Н іно й сі У ре йне те Пр Бе бхх їБЕ аж А роя Й ії у ху ум КЕ - КАЛУ «ІК ЖК ЕХ ЕНН я ї ї ; : що А о їн -і су ЕЖОЯ чі Ух бо КУ ; й Є с. ' : Н іс ска ЖОМУ КМ ОН КО Оу се БУ ач у Віз . ! квкіни ач | Ту сиЖ у ж, щі хх З ЕЗ : ! НЕ Ге г ана з їх їх КУ е я МКУ ВК я і3. ще ОК
Н Кир вкрив, ія ХВ; КМУ Хек ік кі вх у вів У з .
ЗК Суї ой кока Є ре ін М КВ КАК Але Ж Бу : щі: . : т КЕ я го ТЕ ох їке Гая Жук у . - Бе КЗ хх Б й ї; дії З жен ї їі - Ме ую м я іме 5 ща о В о ; нн нн я ж ГАК а ЕК МЕ Жук жор :
З фену кек тях кнюккККК кю Кк кн Ш і 157 жит ке посксеное ее ех ясна . д З | ДІ ІК ЕКЗ КУ й кА св ї Еж Бу її її ти А АК С З : 7 Е Ту ко ж Ві їж жа ЗИ. ТК СЯ таж г Ех ропи зн : і шк ШО я еВ ЩО хз У о. Ум М джек У ,
К ге Кл ще тА с ТИН сх я пкт Ка хх Кх Як МЕ ї х яку ї і ї ї жи В Ак КОХ А ї я ок те Вч й є. Ка ї ї І - Аа КК Ж ге шхожори шк УЖ Х т є! ія ТА А шиї
Я о ОКУ КЕ КОВІ КИ КОРМ КИ ОВ | : ! р ї Н її їх їй же у уж косу кож Й Й ОК в т МелКх ЕВ КУ хх є гу У - і . ! ГЕ ЛО Є ї їх я КЕ щу я ве сеещк люк ККУ СОКУ СН : Н Грея тре ще УНН в а Км ве ІВ : : : ЕЕ и БЕ деко кре в ко ШО ще сте кає че т м т си їх в с теж дея «Ж р ЖАКА Я ЗХ хе ї ї ги а ух чуж КК й КУ ху. .
Е т ІК ж пр вх бю Ко Я Яку Хо сет АТ ; і
І ШАКСАА ДС ТОТАССАЄ чани І ТКУ І. Її і Е : У М А А ЕН КК ХА Ж м не
Для тянкннння ї іже ту т Жй Щі ТОК ТЕ ТАС Є ев ниж нн вх А ех А Кк ЗУ МУКА ЕЙ ЇХ ба ї . й ма я ПИТ нітентн яння І : вне ШІ т паянтляінлннляняя ятки жняннтяя ок жо ад кв Ве БЕ: бе "М хар нумо не зи Е : ї Е їхав КЗ Я І ГАЗ ЕЯ У ЧК ие ромен ня : ї ІЧ Ї Ех ХУ сере дю т, о й - МКК «В ЗаАцЕ сі Зк КБ З ї ше
М 23. їу Ху хі ГКУ Мо ку НЕ вве Бе зе ще фе 3 г Щ пав Ка Б ї ге хз Ве
Н ї ІгУ; во і хх пе НО ух Б Пе Ка : шо . ' Ме вер іні сі ві сі тех са шкик, Х ще як Ат ГУ КІ ї ! гівно вив й з ів Ум би СК Ме У ве СМ Ма ї ; г т фу ку ха а Ах їх «У КУ. су с Я доку ЖК Му і їх ЕКО ї
В г їі ді ; Б АМЕБОМ с Ту см іс КМ ї У Е . ї Ех Тана «Унх УЧИ сх х Мох Ме ана Бе ІЗ же й Пе У ! я М ХМ бю НІХ Св се Ж ху ВЗ -Я ее Ж у і ММ Її хну А КК НЕ КК ЖЕ сх їн сх: дну ї сек ю и НН | І ШИ й І й о кі винен Щ ' оо ння : . скЕНЖК КК ек МК темними :
Таблиця З (продовження)
Її : Крофт ую кових вок омодох Ще КЕ оку Ж де км и м о вм спкхе І і Анапог4 ДНК Оп ВАС кААКАСТН ВИ ОА САС ОВО Я.
З) ї їх у І 1 : ї . й . х ї
Н ї уктрух паж ут а и НЯ ши й жу КОДУ Кожоех реж УКХ ї і і НОТА ТАС ЖК ХО АЕН ЕТ АЄ АСК !
Е : З ! : т х не НК Км НН НК НН АН : : АК АСК СМС КО МАЄ СА БАКА ЄВ СА СУМ ОО КАК : 1 т х х Е х ї ї Ех : я: ї с х Тех шко ДМ дат дж ку. ий су док пев дих на ї і і ЯМОК СЕ а ОКА ак НУ СА і 1 ї ї й х : ! ак их жетр дх ке дит хор ких кут ж де жк ковот ток отой дк сивої : і Я цит К теавОов С піКА САЛО КВН АТ ОК Н ї Я х й х Ї і ! пив АК и ОТ А НК АВС НМ КТ ТАК М С КАК : 3 Її х ї ІЗ і 1 Ба тає вуц ж ї : і З ІВ ТАКО БК А ! : нн нн кн в в в п п кн ВП НК В п В ПН
Н : та ках щу БОС щу кт п КЕ ж о Ж шк тд 1 ) "Белок Бе УВЕАєВ СІВ КО Мих ів Ук НІ Кен а В АНЯ баво ТуК Бе «іх і с ї ї Бі х ї ї
З : ї : :
З : ХЕ я кв Ко КМ б ЖД ки КК жо фо їх : ! ї Уа Кух і сни ар ому Бе БВ тує ТВЕР ех БУХ Пе Ак ау ке АХ :
Я : З і Н і і НМи зви З М НУ НН ЖЕ ХМ бу МУ КУ Ну Ж Ко МВ КМУ ; ї ї ї і; їх х ЗХ х МЕ ї ї х х х 1 і і Тек іа км Бе я; а ке ям по мк БО НН Іжа Я Ну Бе уд Н : З З : В : : т шо шу ши Ж ЯК кт Вон ох КК шоу ЖЕК, са Кк Ко ї : ЗОВ НУ Ук ку те У ІК Су бе бою тує СН ГБО ма Ав Тек С : і І ! ЖК З Ж : 1 : Ка 1 ї і З іа і : о КК КК і ї іде дк а ву ди мс ЖИМ ЖЖ руки кує фсді МеУЄ ЖЕ ЖК кокос ах : з Аналог ДНК Ту ААССААКАС ОТО А САСЄНЬИСОАА
Н 1 х ї ї і : ї : : ї Трек ЕК ДЕ ве меж пф ЮК ж Ку ви другі :
З ші ме А АВІА АК : ї ї ї : і і : АНУ ВК ЖК КИ БАС КА А АК КТК САС СКУ «Кия ЛО :
Я : ї й ї Її : ї їх роту ЕХ КК фот фу фиеех іх хек дже дк о ЗК ої :
Е : ПИКА КТ Є МН Я АК КВУ КА Ж ВОК КК ОВ : 1 : ї Й - Й ї Н і Ї КОН Ко КБУ КАСІ КВОТ КОМУ КА Ам КО а АНЯ КОХ, і ї ї 2 й ІЗ ї і : ПАЛАКАА ТОК ПОТ АСК АСК АТ ВО НОТ ТАК КАК ТО КА ; і ї ї : : х Божок сус пк що ї ї
Е : ІААС ТАС МУ ААК ! ;
Н : ж Как. ОД жо я кА я ка і сх с с ії суду : і о Білок ге ж Аха ма вів Ух Ка Біо аа А ев тек фе я :
Н І Е 7 7 ї : ї ЗАЙ я я я я кое св . ї :
З м хх ту КІЗ у у Ух «жна В ри В ко Кук ці жи ау і ; Ї ТММ СУ СІ А АН РЕ РН тує ВК ре Є МК Аво АБ ЕКЕАНЬ ! 1 1 ї 7 і - З Кк У З ї ї 1 В ї ї ї 3 Ї и АК ЖК о ВК и В ЕЕ Б у ох у у М Ку. лу В ВА : і : СО бо бо Сб; УВЕ КНУ КМ МАЕ Зх вх ЕМ тя Ме Бах Ку Аа ст, ; ї ї І ї ІЗ ї ї х ч я а Є З ї Жди дитя в ую Кох а З о НК : ; печін ке НО як Му ер рем БУ Зк МНЕ КНУ НЕ МІ і : ї - й ми : :
З : х - ї :
З ї Жиче у ж ше ок Кок Ж ЖЕ со ие Жони Жни Кю Ж кію ло Колекк Мк Кок ї ; ! ІОВ: ВР У КК В Же Пе СУЯ З Яна БР АНИ СВ СВ ВКА ТОК ; і Е Ж У 5 ЯК ; х х х ІЗ : ки Н Н нн п пп т п КП ОК ПК КПК ТОК
Аналогб ДНК ПСО ЛАСКА КАСУ ВО АКА КОН ОА АЖ. : х ї : і і Тука дифе цик тещею мх Ж Шк фо о тк хи КК в дено : і : ТЕ ТАКА УНЬ ТОС ККУ ЮА Кей ак о С А АКА СК ; ї х х ї ї
Я В Жожож фш рію шко ди п шт ки М ви кни и жу ка ут : і : АС АСК М КН А КА ОО МАС СТ СА БУ МОН КАК : 1 х : : 5 ї т ІЗ х
З ї КК уМ. ж М М уми ам ку ом дм ДМ шим Кук шко ї і і ЧУВ се І я п НК КО ОК ВЕ Її ма і і : ! : і і ; На ТНК КТК КИ ВОК КС КВ А КН ЕК АЕН : 1 ї х - ї ї 1 І х . ї ї
Ї туп ж г жо о НК ОК ус жи мих чим фе ем им шт ї ! ОААСАА НИ ЗИ АСК КИ АТ МУ БСК СТ ТАЄ СУК КЛ і ї їх ї ї 1 : х х мод пе ї ї і і АТАК ААС Е і
Ь : г: ? ;
З ї ж і УК ка чо КВ, Клео В оожуую ки хек ою КУ М нич и КВУ селкк ожив й ня : ХЕ ї і іБілок Ге УАНМ о У вАВів вів ВО. 1 Я ї і : з Н ТЕ ххх у Ж ко ст. ЖЕ. Ку Ж обох ак Ви М ко Ко В. лк ї і : ПЕД Сук ке ку без Су АВ М НХ Тек ЄБК БНО Бех НУ Ал ле ОБ М і 3 ї ІЗ 1 Н ї 1 Ж Ко 5 КН НК А. ха Ж ос уж и Не ті ші Ск: АК Х ІЗ і ! пу Ас ен Усі Ки Се Уа м Бен НУ Ср У Бех КН АВ КИ і і : ї ї : с у БУ . че я ри сеї сша - сеї : се с. ЩА: : ; ! ікрі ЦІВ че С; А Ов КОН Не НЯ БО МН БК Аа ЯН В : і ; Е ; У ; ЕК ; і : ї Ід. хг ж туш КЕ В ши МК т о пт си КВ фот юн Коха ти ї і ; ПНР КА КАК Кр ПК он ПВ КО ВЕБ Тр ЕНН ЗЕ ПЕ АК ТУ КА : і : у Е :
Е ! ІДЕ Е :
Ж Ж ї і ! Е Е і ї х ї :
З : ї ї :
ри 1258 ї нин і Ан ан 47 і а я (Ф. і пог тегекує 2 х І ие
З ІЗ ил і ї Д т і : НК ї кн зд
Н і ТЕ песуя
Н ї ІЗ Ж Х кт і ї З ій КК тен і : В ТС СМ Ма
Н : А СТА ща У : х СУК КУНУ ДК пеня і Уж Кх - їх ких ря п, пнчккх
Н Я ХНУ ОСТ ХО ТК пилтих
Е ї у їх й я «2 з КИ Ем мана т ме Н Кк. СО ЖЕ Ох Е ЗЕМ Ма аб кожен ї І гу УК Ж Ми ща л і пою ї ЕЕ хе жа ХА хх тих и
Ї я ї ї ша: ВЕК п Ку ЗА ШК пам ця щк : : "ка Я Я ще ху Хе сотих, ко ом есеттх сек вв дети спи одо ! рен | кед че ОЕМ С ТАТ ОО Па ЖК гук. вж і Е я І де ОА х СН п СА я: АКБ ще ен : ві ШК т 3 ща УЗН ше ОАА зх ня : | о тк кут Ку де З їж їй ож ЖАХ жд яаХ 5 ) ї ї ях КО ке Ж г 5 же х ЕЕ 15 яке х А, й ї шк і Н НЕ днесь де ТУТ А ма : Б С ВКМ пе те ! в лк пе т А Ех - дк х ОК в М х ком ! : : їде е ; 5 в ГЕ ЩА а ре х Ж я У В Кох щи ї в / ГН не ДОЦ ще До У дх й ПИ . - ЕС К ОА 7 і В кг КЗ дення КОХ пою ій кої ше й ся : В : : їх УЖЕ хек ех схккнняю ОЛЕ З АК СВ :
І | я же це мене ОО хе о п ! і ї КВ УЖ ЖЖ п їх ї- ЩЕ Я як. ФК У І: : : : А о У що ке хоекннх МК «Я 5 я Е : с ї Її хз ІІ ЕК тууккнк О Сай Й тА В я ї 1: З Бк ей У пхкке З се Ж Е
І: пу Н ЕЕ х БЕ й ЛЕ у пу Щі Ж - сонне Ка й Я Є Ще : : ххх ї 7 їж х КУН с І ж ЯМ шкі: Ж т Н : і шк і, має Зв Ж зе Бе А ме НІ тк КА па Е і нк : Тещ гу їх Й Се І ке - ді; ЗЕ ї Ух: ус ж: Ех х і Ме ше те З щи У їж ТЕВОКЖЕ пкт В й : ! Кене ї ЯН ві НЕ Ух аг ТЕ ЕВ ткжнкя АК ; : і ї зовн і ее їв Ай ох м ТЕ ТО КЗ Хкуккюкю ЗАХЕ Е ! і шо і зей з я м а ще Кк В і | ші У іі КЕ че о А ов і : : Ї а с ТЕ ай МЕ вікі КцкЕ Шк | : і ї В еж ех ЖК Ж Ко КТ о кВ КУ Ко ВК кВ он : ; ї Ес ке НЕ та є же и ЇВЕ ява В коненнї, : ї на 3 х Те лк ВЕК св СК щі Ме ІК УК я Бі тир» ї і ло ! ІК Ії мн в їв яКиЖ м я Кк ЕК й і нашій і г В ще ху ВДЕ ще ЗУ що. Ж СЕ їв Х «ще В К: кое її ЗАВ вен :
ІЗ ї З мо хе жу хх й ххх ХК ї ще с Ще: їн хх ЯКЕ че : З сон ї і В же й с - о ХХ їй . КЕ вх МЕ щі ї ЩЕ їоя : | їж МК х - Я зе ше ЕЕ ск. ЖІ З МК х 5 Й сво 7- і і іде хв І жа ку ЗХ НЕ їх Ле в ЩІ Е і : ї Н т хг в ах х дез пк я БМ хуй У ві і І
Н І ' К ї я ВЕ хх Ж Му ік ххх я г ви де Ух и : ;
Н ї ї КЗЯЗИ як Ку те ММК ма й Я : Е
Н і ТЕ еїю - МЕ от - Ежя сих пекх То і55 я ЩІ й т. : . е те Й секЕ ще" ї очах вк Ж Кк Оу ще ЖІ Е ї Її З ІІ о х КО як СХ роках чех ям Кк м : : - ; г І пАТТЯ те УКХ Ех де ще пк УНІ Де бе Мі ї В пек щен х ке З ве я век Ії Н і пли : : я: хж т З А ЗК НК жк ЗЕ : : і пох ! і. ге ВЕК ЗАКО АКА А КАЄ ток у : ' ще ї шо ее што: Зоя щи С З М й ЕЕ ех й Б В
Ї плей НОАА Е Є с «Ж. ди я 25 Со КОЖ Мк ЗЕ кох Ж ; ! я ук се Ех ІК а: де с ЕЕ ме : : рення : ККЗ в о Не ОА ще ОТ похуккккх ї Е і ря : "ве БУ ЦЯ Же ЗКУ ЗІ йо Я В : ! си ще ЗА ши АК Є ОЕ вОлАСЕ | :
Н ї пд ее То Ах кое: хх я я ЕЗУНЄ НЕ АЖ зе» : і : ше х у зна ЗЕМ БУХ АСВ ке : ! ! ве як те УА ЗЕ М КА С АКА що на : : Пе стек То кА ЕН - се: тА я А і шо В і ! щі А з А АК ху ОКХ ие є в й
Н НІ Тай я й дод А А ше КУ У оди 7 ї
Біл Ас АшУКИ А ТА А А ще пах Її : ок я НЕ тонн п УА чн СА і : , о й Х їх ке її где кити х щ г КК га, лю т Ж ; ї ї ЕЕ ІК у Я ско ххх ЖЖ Мх ро я с з : В
Інк ! 1 ух ще і де ка їжЖя и МТК А ще ях «ВЕ Е ! : ше і М З НЕ КМ СЕМ ВІ НУ кун САД 5 А Мк ї ! ї пенвання і 5 Й ЩЕ хх со Її вк У НЕ Б й ЯКУ Кк НО їх АВ І І. не і ІК А В у ве В ме Б сок ОВ УНУ Н і я і Ва ЗМ х «5. ска У Зк З УЖЕ гу снхх я КЕ Кі В / що : Сен в й ЗМ в СХ їз ЩО Мч я ІОВА ен хе її де ї : : рн ї З ід с ЯЗ шо Е ТУ Щ ТЕ ЖЕ су, М во х пери й в ї і ї ЕКкнАккк, і ее ія М У ЖЕНЕ ге ж па о ! : я хі СЯ ше МЕ УК ОК ЖАХ ї хи ї і и се ія ах щі сук за іви ! '
Е ал | ЦИ ся ще В МЕЖ Її 5 ВЕДЕ я ТУ пер : ї о ї і СЯ ох це пок В яму Ей Ук р Е ! г : їх Ж - З ж зе У СЕН ЯН шк В : шк ЖАСГАХ Чиж зок ів Бур а сш
ЕІ 0 їх шкі й я МН: Й ів ту вк й Ж са МК :ї Б я і ! дн 14 ЕХаК с виш ках з і сК КУ а А, Ши Її і ! вжи ТАЄ Аг ТЕ НО Ме а Те Ві Щі : : | г дея ГА с ТЕ піде м ів ЗЕ А ЩЕ га : ї ; і їх Е ще й ЕЕ щ я вони Зх Ж ку с ї і ї НЕ хе се Тр Ж Ме Ка ж я в г АВ - Хї Е і: З ТУ ПУ Кей ТКА Вр ТУ хх ск я пев Що Е і ! : А з ние Сен; с В у й : нклнх: ї их р У З АХ шо в : ТУ Якккх М КУ і ! шк | : щі но пер ще да АГАКЄВ цей Ї ! : повені кА ТЕЖ 0 а МАК ЕТО с я :
Н охдая КЕ УЗИ ох пох Ух В ре ВЕБ ух "з нин : В рен я ж "СВ ОМ КО кір М З КВ ке і : ше дж "ва ТЕ КЕЙ М кА ТК ЯН Є що ! '
Н : А . ОВЕН С м ди ЕВ З Ся улвже ї :
Н і ун таз ще Я, ЖК ЗИ ЖЕ: ше ГАК А М : і ! ре ТАЄ ЕЕ Ух о ше БЕ ТАК С ЩІ . | ве ша чер пу де: М тех ех ху тА Це век 5.3: пдддиккя ї ї ся Зі «Е хін З с. Кк х я ХК Ко щ- У СЕ Я лу ЕОЖ Ко ї- ЩЕ х Мав :
Е і і я полях ваг я ВО ОКХ СА ДЕ У АНЯ й ву 55 що : Б; віз і Ах кто тих зе ате ОП СВО я яка Ж ше : ї хи КУ сек о ЗК а М М с : : : ! їло і ах Кох сш ха Зі кн Ах г те й ЯК да я го ВЕ ше ЯК ди ї В ! : Кк Ох Ж Нв сотки МО ек о КОН ії ! і І НМ с ЗЕ Ей ТК поши ЕЕ чо сек, й : і жі ЗЕ т Уже кох ке ГЕ ЗК ке ж ТЕ ї я і 15 Ек ее хе за сою «їх В сщЄ Ко тн | Ге їж хх щ в я ЕІ в й З Кай похххтн ке ще те їй щі т шив : : шк ! їх Зх 2 ЕЕ зна ві Бек тех КАЄ Га ' палка. 3 У ІЗ В ке БОМ ві їенжхх АЦКТО с : не Н ін ЗЕ іхиУ ін Бе х ке ща НУЄ Е : п мито їх КЗЗ п ре З ТЕ МА хх що ЖЕ Б що БУК ах М щАК : ри Шк, Бук іх КЕ вві МН Мо. в я :
Е кла М Ук КК АБ В В її Я АК М ! :
КСП д 2 мили, Сай Те я їх кк Я Х ж ЖЕ же я пр же ї і ресі «Ек ще іже Еш зе Та ів вішннї :
СІЮ спр сотттння саке ТК БУ о Ту нка й я рих : ре есі ще НКУ ЩЕ міх т де ЧА 7 ів неежх В
Ко ІЯ нн мук Я У у й ща БЕ на ; мбі рек шипи х ЖЕК ІЗ КЕ - ЛЕ бує Тк ЕН ві ї ХК пхонккнї нант омбі пон хе А щі Кто ще їй ЩЕ 5 1 ин, її; с кіх о а і МК Е ни іна со ах СЕ А ж: Ї ' х нт -- У де А уже шк : ана ни сист чн г. Кс кя д 7 щх З : погі х пе ппледнння зі у ЕСЕ Ж : ів і птиді - сдвАШЬ шві : нсулі ДІВ З У ХАН, м ; іну п литт петесне КТК ! ров я потен КУ ! (о) ; ЩО - і Ї дил яв Що . : и пі ля соус і Е шия х І
ІД ють не і оть собою шк 18 лем пом ненні
МП ап не: ром ог ін в) с тор улін а 17 у - сої
ВІ 21-ОЕЗ (Е. соїї В Е-дст отр нзаз(тВ-тВ-) да! ОЕЗ; Момадеп) трансформували кожним із векторів, що експресують рекомбінантні аналоги інсуліну. Трансформацію проводили відповідно до процедур, що рекомендовані Момадеп. Окремі колонії, трансформовані відповідними рекомбінантними векторами експресії, висіювали в середовище на основі 2Х бульйону Лурія (ІВ), що містить ампіцилін (50 /мл), і культивували при 37 "С протягом 15 годин. Кожну бульйонну культуру з рекомбінантним штамом і 2Х середовище І В, що містить 30 95 гліцерину, змішували в співвідношенні 1:1 (0б./06.), і по 1 мл цієї суміші вносили в кріопробірку та зберігали при -140 С. Дані зразки застосовували як вихідний клітинний матеріал для одержання рекомбінантних білків злиття.
Для експресії рекомбінантних аналогів інсуліну кожний 1 флакон вихідного клітинного матеріалу розморожували та інокулювали в 500 мл 2Х бульйону Лурія, а потім культивували за струшування при 37 "С протягом 14-16 годин. Якщо значення 00600 досягало 5,0 або вище, культивування закінчували та бульйонну культуру застосовували як культуру для посіву. Цю культуру для посіву інокулювали у ферментер об'ємом 50 л (М59У-02, В.Е.МАКОВІЗНІ, Японія), що місить 17 л ферментаційного середовища, та починали ферментацію першої партії. Умови культивування підтримували за температури 37 "С, швидкості потоку повітря 20 л/хв.(1 ммт - одиниця об'єму на об'єм за хвилину), швидкості перемішування 500 об./хв. і за значення рн 6,70 із застосуванням аміаку. Ферментацію здійснювали в режимі періодичного культивування з підживленням за допомогою додаткового додавання поживного розчину, коли запас поживних речовин в бульйонній культурі виснажувався. Ріст клітин контролювали за вимірюванням 00.
Згідно з значення ОО більше 100 або вище ІРТО вводили в кінцевій концентрації 500 М. Після введення культивування додатково проводили протягом приблизно 23-25 годин. Після завершення культивування рекомбінантні штами збирали шляхом центрифугування та зберігали при -80 "С до застосування.
Приклад 3. Вилучення та рефолдінг рекомбінантних аналогів інсуліну
Для перетворення рекомбінантних аналогів інсуліну, що експресують в прикладі 2 в розчинні форми, клітини руйнували з наступним рефолдінгом. 100 Г (вага у вологому стані) клітинної маси ресуспендували в 1 л лізувального буферу (50 мМ Ттгі5-НСЇІ (рН 9,0), 1 мМ ЕОТА (рН 8,0), 0,2 М Масі ї 0,5 95 Тип Х-100). Клітини руйнували за допомогою мікрофлюїдайзера М-110ЕН
Зо (АС Тесппоїоду Согр., модель М1475С) за робочого тиску 15000 фунтів/кв. дюйм. Зруйнований таким чином клітинний лізат центрифугували при 7000 об./хв. і 4 "С протягом 20 хвилин.
Супернатант зливали та масу ресуспендували в З л відмивного буферу (0,5 95 ТИйоп Х-100 і 50 мМ Тті5-НОЇ (рн 8,0), 0,2 М Масі, 1 мМ ЕОТА). Після центрифугування при 7000 об./хв. і 4 "С протягом 20 хвилин клітинну масу ресуспендували в дистильованій воді с наступним центрифугуванням подібним способом. Одержану таким чином масу ресуспендували в 400 мл буферу (1 М гліцин, 3,78 г цистеїну-НСІ, рН 10,6) і перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. Для вилучення ресуспендованих таким чином рекомбінантних аналогів інсуліну додавали 400 мл 8 М сечовини та перемішували при 40 "С протягом 1 години. Для рефолдінгу розчинних рекомбінантних аналогів інсуліну проводили центрифугування при 7000 об./хв. і 4 "С протягом 30 хвилин, і збирали супернатант. До нього додавали 2 л дистильованої води за допомогою перистальтичного насосу за швидкості потоку 1000 мл/год. за перемішування при 4 "С протягом 16 годин.
Приклад 4. Очищення катіонообмінною хроматографією
Підданий рефолдінгу зразок завантажували в колонку БЗоцгсе З (СЕ Пеаїсаге), урівноважену за допомогою 20 мМ цитратного (рН 2,0) буферу, що містить 45 95 етанолу, а потім білки, які являють собою аналоги інсуліну, елюювали в лінійному градієнтному режимі в 10 об'ємах колонки від 0 95 до 100 95 20 мМ цитратного (рН 2,0) буферу, що містить 0,5 М хлорид натрію та 45 95 етанол.
Приклад 5. Обробка трипсином і карбоксипептидазою В
Солі видаляли з елюйованих зразків за допомогою колонки для демінералізації та проводили заміну буфера на буфер (10 мМ Ттгі5-НСІ, рН 8,0). До одержаного зразка білку додавали трипсин, що відповідає молярному співвідношенню 1000, і карбоксипептидазу В, яка відповідає молярному співвідношенню 2000, а потім перемішували за 16 "С протягом 16 годин.
Для завершення реакції застосовували 1 М цитрат натрію (рН 2,0) для зниження значення рн до 3,5.
Приклад 6. Очищення катіонообмінною хроматографією
Підданий таким чином реакції зразок завантажували в колонку ЗБойгсе З (СЕ Ппеаййсаге), врівноважену за допомогою 20 мМ цитратного (рН 2,0) буферу, що містить 45 95 етанолу, а потім білки, які являють собою аналоги інсуліну, елюювали в лінійному градієнтному режимі в 60 10 об'ємах колонки від 0 95 до 100 95 20 мМ цитратного (рН 2,0) буферу, що містить 0,5 М хлорид натрію та 45 95 етанол.
Приклад 7. Очищення аніонообмінною хроматографією
Солі видаляли з елюйованого зразка за допомогою колонки для демінералізації, та проводили заміну буферу на буфер (10 мМ Ттгіб5-НСІ, рН 7,5). Для виділення чистих аналогів інсуліну зі зразка, одержаного в прикладі 6, зразок завантажували в аніонообмінну колонку (Бошгсе 0: СЕ Неайсаге), врівноважену 10 мМ буфером Тгтгіз (рН 7,5), і білок, що являє собою аналог інсуліну, елюювали в 10 об'ємах колонки лінійним градієнтом від 0 95 до 100 95 10 мМ буфера Ттгіз (рН 7,5), який містить 0,5 М хлорид натрію.
Чистоту очищеного таким чином аналога інсуліну аналізували за допомогою електрофорезу білків (ЗО5-РАСЕ) і хроматографії високого тиску (НРІС), а модифікації амінокислот ідентифікували за допомогою пептидного картування та аналізу молекулярної маси кожного піку.
У результаті було знайдено, що кожний аналог інсуліну мав необхідну зміну в своїй амінокислотній послідовності.
Приклад 8. Одержання аналога інсуліну довготривалої дії
У даному прикладі одержали кон'югат довготривалої дії на основі послідовності аналога (Сни в положенні 14 А-ланцюга) нативного інсуліну як зразка аналога інсуліну.
Для пегілювання М-кінця бета-ланцюга аналога інсуліну за допомогою 3,4К АГ 02 РЕС (МОРЕ,
Японія) проводили реакцію аналога інсуліну і РЕС за молярного співвідношення 1:4 за концентрації аналога інсуліну 5 мг/мл при 4-8 С протягом приблизно 2 годин. При цьому реакцію проводили в 50 мМ цитраті натрію при рН 6,0 ї 40-60 95 ізопропанолі. Як відновлювальний засіб додавали 3,0-20,0 мМ ціаноборогідриду натрію та проводили реакцію.
Реакційний розчин очищали на колонці ЗР-НР (СЕ Неаййсаге, США) із застосуванням буферу, що містить цитрат натрію (рН 3,0) і етанол, а також градієнт концентрації КСІ.
Для одержання кон'югату на основі аналога інсуліну і Ес-фрагмента імуноглобуліну проводили реакцію з очищеним монопегільованим аналогом інсуліну і Ес-фрагментом імуноглобуліну за молярного співвідношення 1:1-1:2 і при 25 "С протягом 16 годин, за загальної концентрації білку приблизно 20 мг/мл. При цьому умови реакційного буферу складали 100 мМ
НЕРЕЗ5 при рн 8,2, а як відновлювальний засіб до нього додавали 20 мМ ціаноборогідриду
Зо натрію. Таким чином, одержували кон'югат на основі аналога інсуліну, пегільований на М-кінці
Ес-фрагмента.
Після завершення реакції реакційний розчин завантажували в колонку О НР (СЕ Неайсаге,
США) з буфером Тгтгі5-НСЇІ (рН 7,5) і градієнтом концентрації Масі для здійснення первинного очищення кон'югату на основі аналога інсуліну та Ес-фрагмента імуноглобуліну.
Після чого застосовували Боигсе 15150 (СЕ НеайПпсаге, США) як вторинну колонку для одержання кон'югату на основі аналога інсуліну та Ес-фрагмента імуноглобуліну. При цьому кон'югат на основі аналога інсуліну та Ес-фрагмента імуноглобуліну елюювали із застосуванням градієнта концентрацій сульфату амонію, що містить Тгіз-НСЇІ (рН 7,5).
Приклад 9. Одержання кон'югату довготривалої дії на основі ексендину-4
Проводили реакцію 3.4К РгоріопАГО (2) РЕСб з лізином (Гуз) СА ексендину-4 із застосуванням імідазо-ацетил-ексендину-4 (СА ексендину-4, АР, США). Серед двох піків, що відповідають ізомерам Гу, пік останнього ізомеру (позиційний ізомер Гуз27), який більше вступав в реакцію та який було легше відрізнити від піків, які відповідають М-кінцевим ізомерам, застосовували для реакції зв'язування.
Реакцію проводили за молярного співвідношення пептид:Ес-фрагмент імуноглобуліну 1:8 і загальній концентрації білків 60 / при 4 "С протягом 20 год. Реакцію проводили в розчині 100 мМ
К-Р (рН 6,0), і додавали 20 мм 5СВ як відновлювальний засіб. Розчин для реакції зв'язування очищали за допомогою двох колонок для очищення. Спершу застосовували БОШКСЕ О (ХК 16 мл, Атегейпат Віозсіепсе5) для видалення великої частини Ес-фрагмента імуноглобуліну, що не брав участь в реакції зв'язування. Згідно з застосування 20 мМ Ттгів (рН 7,5) і 1 М Масі з градієнтами солей першим елюювали Ес-фрагмент імуноглобуліну, що характеризується відносно слабкою силою зв'язування, а потім одразу після нього елюювали ексендин-4-Ес- фрагмент імуноглобуліну. У ході даного першого процесу очищення Ес-фрагмент імуноглобуліну видаляли до деякої міри, але оскільки Ес-фрагмент імуноглобуліну і ексендин-4-
Ес-фрагмент імуноглобуліну характеризуються аналогічною силою зв'язування один з одним в іонообмінній колонці, було неможливо повністю відокремити їх один від одного. Відповідно, друге очищення проводили виходячи з відмінностей в гідрофобності між двома матеріалами.
Використовуючи 20 мМ Тті5 (рН 7,5) і 1,5 М сульфату амонію в БОШКСЕ ІЗО (НЕК 16 мл,
АтегзПпат Віозсіепсе5), зв'язували перші очищені зразки та елюювали суміш зразків із бо поступовим зниженням концентрації сульфату амонію. У колонці НІС Ес-фрагмент імуноглобуліну, що характеризується слабкою силою зв'язування, елюював першим, а після нього елюював зразок ексендин-4-Ес-фрагмента імуноглобуліну, який характеризується високою силою зв'язування. Оскільки вони характеризуються гідрофобністю, що помітно відрізняється, їх можна легше відокремити один від іншого, ніж в іонообмінній колонці.
Колонка: БООКСЕ О (ХК 16, Атегепат Віозсіепсев)
Швидкість потоку: 2,0 /хв.
Градієнт: АО --25 95 70 хв. В (А: 20 мМ Тті5, рН 7,5, В: А-1 М Масі)
Колонка: ФБОШКСЕ 1ІЗО (НЕ 16, Атегепат Віозсіепсев)
Швидкість потоку: 7,0 /хв.
Градієнт: В 100--0 95 60 хв. В (А: 20 мМ Ттгі5, рН 7,5, В: Ан1,5 М сульфат амонію)
Приклад 10. Ефективність контролю рівня глюкози крові та змін ваги тіла (А ваги тіла) у мишей з діабетом 2 типу шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії
Для дослідів іп мімо ефективності шляхом введення композицій, що містять кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югат на основі ексендину-4 довготривалої дії, одержаних в прикладах 8 і 9, або шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії застосовували мишей абБ/аь з діабетом 2 типу. Оскільки миша абБ/аБЬ з мутацією в гені рецептору лептину (миша
ВК5.Са--ї ерів/- І еріУб/бІіаНза) проявляла симптоми діабету, подібні таким симптомам у людини, її застосовували в цьому прикладі.
Із хвостової вени 8-тижневої миші аБ/46 відбирали 1-2 краплі крові за допомогою шприца 26
Сб, і рівень глюкози в крові вимірювали із застосуванням глюкозиметра (ОпеТоисп ШкКга,
ІїезЗсап, Іпс., США). Індукцію діабету визначали шляхом вимірювання рівня глюкози в крові(350-600 /). Мишей з індукованим діабетом розділяли на п'ять груп 1, 52, 53, (4 і 55, при цьому в кожній групі було п'ять або шість мишей.
Групи розділяли на контрольну групу, що не обробляють (середовище-носій), групу, яку обробляють кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії (8,8 нмоль/кг), групу, що обробляють кон'югатом на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг), групу, яку обробляють кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії (2,2 нмоль/кг) і кон'югатом
Зо на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг), і групу, що обробляють кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії (8,8 нмоль/кг) і кон'югатом на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг). Після повторного введення вищевказаних матеріалів, що досліджуються протягом 5 тижнів, в кожній групі вимірювали рівні глікозильованого гемоглобіну (НБАТс). У нормі глікозильований гемоглобін утворюється в еритроцитах за допомогою реакції глюкози з гемоглобіном. Якщо рівні глюкози в крові зберігаються високими, рівні глікозильованого гемоглобіну також збільшуються. У миші рівень глікозильованого гемоглобіну відображає середній рівень глюкози в крові за 4-5 тижнів, та, отже, являє собою ефективний показник здатності матеріалу, що досліджується контролювати рівень глюкози в крові. Крім того, розраховували зміни ваги тіла (АВУМ) дослідної тварини до обробки лікарським засобом і в останній день експерименту.
У результаті, введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендина-4 довготривалої дії продемонструвало зниження рівня глікозильованого гемоглобіну (фіг. 1), що є значним покращенням порівняно з окремим введенням кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії або кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії. Крім того, хоча дозу, яку вводять, кон'югату на основі аналога інсуліну знизили на 1/4, ефект введення в комбінації зберігся.
Результати вимірювання Аваги тіла показали, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії продемонстрували ефект зменшення збільшення ваги, порівняно з окремим введенням кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії (фіг. 2). Крім того, коли дозу, яку вводять, кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії знижували на 1/4, ефект зменшення збільшення ваги значно підвищувався.
Ці результати показують, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії згідно з даним винаходом проявляє винятковий ефект у контролюванні рівнів глюкози в крові порівняно з їх окремим введенням. Крім того, ефект контролювання рівня глюкози в крові при введенні їх в комбінації зберігався, навіть при знижені дози, яку вводять, кон'югату на основі аналога інсуліну. Крім того, оскільки дозу, яку вводять, кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії знижували на 1/4, збільшення ваги значно знижувалося, що свідчить про те, що введення в комбінації бо кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії значно знижує ризик виникнення гіпоглікемії, а також збільшення ваги за рахунок зниження дози інсуліну.
Приклад 11. Ефективність підтримання маси бета-клітин у мишей з діабетом 2 типу шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії
Для дослідження іп мімо ефективності шляхом введення композиції, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії (кон'югат на основі похідної інсуліну довготривалої дії) та кон'югат на основі ексендину-4 довготривалої дії (приклад інсулінотропного пептиду довготривалої дії), або шляхом введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії застосовували мишей ар/дьЬ з діабетом 2 типу.
У даному прикладі як аналог інсуліну застосовували кон'югат на основі похідної інсуліну довготривалої дії, аналог 8 (А"7У -» Е) в таблиці 1 застосовували як інсулінотропний пептид довготривалої дії та як інсулінотропний пептид довготривалої дії застосовували кон'югат на основі ексендину-4 довготривалої дії, що включає імидазо-ацетил-ексендин-4 (СА ексендин-4).
Лізин в ексендині-4 модифікували за допомогою РЕС, і РЕС-модифікований ексендин-4 з'єднували з Ес-фрагментом імуноглобуліну з одержанням кон'югату ексендину-4 довготривалої дії. Зокрема, реакцію між СА ексендином-4 і аналогом інсуліну 8 проводили за молярного співвідношення від 1,01 до 1: 50 з одержанням їх кон'югату.
Оскільки миша ар/аЬБ з мутацією в гені рецептора лептину (миша ВК5.Са--ї ергеб/4
І ергі/ОІанза) проявляла симптоми діабету, подібні таким симптомам у людей з мутацією в гені рецептора лептину, дану мишу застосовували в цьому прикладі.
Із хвостової вени 12-тижневої миші аБ/4р відбирали 1-2 краплі крові за допомогою шприца 260, і рівень глюкози в крові вимірювали із застосуванням глюкозиметра (ОпеТГоисп Шпга,
Іїезсап, Іпс., США). Індукцію діабету визначали шляхом вимірювання рівня глюкози в крові (нормальний діапазон за відсутності діабету складав приблизно 100-150 мг/дл, тому мишей з рівнем глюкози в крові більше 350 мг/дл відбирали та застосовували для точності прикладу).
Мишей з індукованим діабетом розділяли на сім груп С1, 52, (53, 54, 55, Об і 7, при цьому в кожній групі було сім або вісім мишей.
Зо Групи розділяли на контрольну групу, яку не обробляли (середовище-носій), дві групи, що обробляли кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії (4,2 нмоль/кг, 8,4 нмоль/кг), групу, яку обробляли кон'югатом на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг), групу з введенням в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії (4,2 нмоль/кг) і кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг), і групу з введенням в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії (8,4 нмоль/кг) і кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії (0,36 нмоль/кг).
Після повторного введення вищевказаних матеріалів, що досліджуються в дозі, описаній вище, з дводенними інтервалами протягом 12 тижнів, рівні глікозильованого гемоглобіну (НБАТс) вимірювали вв кожній групі. Глікозильований гемоглобін являє собою форму гемоглобіну, яка в нормі присутня в еритроцитах, з якою зв'язана глюкоза. Якщо рівні глюкози в крові зберігаються високими, рівні глікозильованого гемоглобіну також збільшуються. У миші рівень глікозильованого гемоглобіну відображає середній рівень глюкози в крові за 4-5 тижнів, та, отже, являє собою ефективний показник здатності матеріалів, що досліджуються, контролювати рівень глюкози в крові. Після 12 тижнів повторюваного введення лікарського засобу кров відбирали у мишей з очної вени та вимірювали концентрацію сироваткових тригліцеридів у зібраній сироватці крові. Після автопсії кожного суб'єкта відбирали підшлункову залозу для вимірювання маси бета-клітин.
У результаті, введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії продемонструвало зниження рівня глікозильованого гемоглобіну (фіг. 5), що є значним покращенням порівняно з введенням кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії або кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії окремо.
Вимірювали концентрацію тригліцеридів в сироватці крові, та результати показали, що в групі введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії концентрація тригліцеридів знижувалася в залежності від дозування (фіг. 4).
Результати порівняння маси бета-клітин в кожній групі, обробленій лікарським засобом, підтвердили, що група, яку обробляли окремо кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії, група, яку обробляли окремо кон'югатом на основі ексендину-4 довготривалої 60 дії, та група, якій водили в комбінації два кон'югати, проявляли підвищення маси бета-клітин,
порівняно з контрольною групою (фіг. 3). Крім того, порівняно з групою, яку обробляли окремо кон'югатом на основі аналога інсуліну довготривалої дії або кон'югатом на основі ексендину-4 довготривалої дії, група, яку обробляли введенням в комбінації двох лікарських засобів, демонструвала синергічний ефект. З даних результатів випливає, що ліпотоксичність і глюкотоксичність зменшувались при комбінованому введені кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії.
Ці результати показують, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4 довготривалої дії згідно з даним винаходом проявляє відмінний ефект в контролюванні рівнів глюкози в крові та поліпшенні ліпідного профілю в крові порівняно з їх введенням окремо. Результати свідчать про те, що введення в комбінації кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі ексендину-4, який являє собою інсулінотропний пептид довготривалої дії, може зберігати масу бета-клітин і пригнічувати прогресування діабету, що випливає зі зменшення ліпотоксичності та глюкотоксичності. Крім того, ці результати вказують на те, що комбінована композиція кон'югату на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'югату на основі інсулінотропного пептиду довготривалої дії відповідно даному винаходу, або введення в комбінації двох кон'югатів може суттєво знижувати ліпотоксичність, що асоційована з підвищенням рівнів ліпідів в крові, та глюкотоксичність, асоційовану з підвищенням рівнів глюкози в крові, внаслідок недостатнього контролю рівнів глюкози в крові, які Є побічними ефектами, що виникають у деяких пацієнтів з діабетом при окремому введенні інсуліну або інсулінотропного пептиду, і крім цього, можна значно сповільнити прогресування діабету за рахунок попередження порушення функції бета- клітин підшлункової залози та/або збільшення маси бета-клітин підшлункової залози, що таким чином приводить до поліпшення стану, лікування діабету та попередження виникнення діабету, а також поліпшує прогноз при діабеті.
Виходячи з наведеного вище опису спеціалістам в даній галузі буде зрозуміло, що даний винахід можна реалізувати в іншій конкретній формі без змін технічної суті або його суттєвих характеристик. Таким чином, слід розуміти, що вищеописаний варіант здійснення не є обмежувальним, але ілюстративним в усіх аспектах, і що всі зміни та модифікації, які виникли з об'єкта, визначеного в формулі винаходу, або їх еквіваленти, призначені для включення в об'єм даного винаходу.
«110» ХАНМІ ФАРМ.
КО, ЛТД. «1202 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат на основі аналога інсуліну довготривалої дії та кон'ютат на основі знапога інсулінотропного пептиду довготривалої дії «130» ОРА15054 «150» КА10-2015-0055077 «їі» 0 2014-05-99 «о» а «17 Кора 2.0 «210» 1 «р 39 «122 днк «213» Штучна послідовність «рейх «де Праймер «ЦЮ» 1 здасссюе здазадсофос зайоодаз сзасіої 39
«10» 2 «11» 39 «Р12» днк «13» Штучна послідовність ко» «923» Праймер «до» 2 асздсайці іссасавіся сасосісю свдддасос за ой» З «1» 39 «ій» ДНК «13» Штучна поспідовність «Рад» «вах Праймер кА» З їсссюсаза адсоізасос дідоавсаа їдсідіасс за «10» (4
І «11» Кк
«212» днк «213» Штучна послідовність «220» «2232 Праймер «400» 4 ддіасадсаї нссассо сдссасосії сідсаддоа 39 «ЛЮ» Б «21» зв «2122» ДНК «2132 Штучна послідовність «220» «223» Праймер «400» 5 сістассадс ддаазасас дідіаасіда доавісс Зб «210» 6 «2112 зб «212» днк «2132 Штучна послідовність
«223» Праймер «400» 6 учаїссісад Касасосоаї шШссадсю чадад 36 «210» 7 «2112 39 «212» днк «213» Штучна послідовність «220» «2232 Праймер «400» 7 унаассаас асідідюс дісасассід дюдаадсї 39 «2102 8 «2112 9 «2122 ДНК ! : «2132 Штучна послідовність «220»
«923» Праймер. «4002 8 адсНссасс аддідідасо сасасаацід бдднаас ос 9 210» 9 «2112 39 «9122 днк 213» Штучна послідовність «20» «223» Праймер «4002 с; сіадідідса дддаасдадс дксцеас асасссаай 39 «210» 10 «2112 39 «2122» днк -213» Штучна послідовність «920» «23» Праймер споді тасааудаасо сісднсоссс дсасасіад за «210» 11 : «1» 39 «2122 днк «213» Штучна послідовність «220» «2232 Праймер «400» 11 чЧідідсдд99 аасдаддсудс дісіасаса сссаадасс 39 «210» 12 «2112 39 «212» днк «2132» Штучна послідовність «220» 2232 Праймер «400» 12 заіснуоці зідіаудвасу соссісойс сесодсарає За «е10х ї3 «йі» За «Д1й» днк «1» Штучна поспідовність «ре» «823» Праймер «0» 13 ішсоддозаєс язазснсос шасвовосо авдвссодо Кв «во» 14 «|» За кхиїй» ДНК кі Штучна послідовність «ех «ра» Праймер «МК 14 чсяецзаісто вугнасо сввацесіюд йКороодов З
Зо
«Ох 15 «вх 37 «12» днк «9135 Штучна поспідовність «ДИ «і» Праймер «00» 15 осадсавто сісосієдаа садсюдада асіаою 37 «Ро» 18 «щі» 37 «122 днк «13» Штучна послідовність «рад» «2232 Праймер «ад» 18 сацфацне ссазсіюно аводавосад відсіч 37 «10» 17
«0112 34 «19» днк «2132 Штучна послідовність . . «2202 «223» Праймер «400» 17 садсасідс ісссісаасс адсюддавоаа сіас 34 «2105 18 «2112 34 «212» ДНК «2132 Штучна послідовність «220» «9932 Праймер «А0О» 18 ч«аднсісс адстадіда додадсазчаї дсід 34 «210» 19 «2112 258 «2122 днк
«2132 Штучна послідовність «рад» «232 Аналог! «айО» їв псойаасс аасасівід юосісасас сіодіюддаао ссїтасої адівідсова 80 зЗавсовдосі ісйегасас асссавдасс сдссддавод садапвоассї удсвадівча 720 сеавафодаде дазсовова сссіддюса досадссідо адсссводе сствададава 180 ісссідсада азсоідсоаї юіддавсва деасса зсаїсідсю сеіссассад 240 сіддаозвасі апосавс 258 «2105 20 «11» 86 «12» Білок «15» Штучна послідовність «20» «33» Аналог 7 «А» 20
Ре ма! Авп Сіп Нів Геи Сув Су Зег Нів І еи Ма! Сн Аа Гец Туг 1 5 10 15
Геи ма! Суз СІуУ Сі Ага Су Рпе Рпе Туг Ти Рго Гуз ТнгАго Аг зо
Сів Аза СІ Авр Геш ЗіІп Ма! СІу біп Ма! Сіс еи Су Су Сіу Рго су АІа Сіу Зегі еч Сп Рго Гени Аа І ви Сію Су Бег І еи Сп (ув бо
Аго Аіа Пе Ма! Сли СіІп Сув Сув Тиг Зег Пе Сув Бег І еи Туг СіІп 65 70 75 во
Ге бій Авп Туг Суб Авп 85 «210» 21 «ви» 258 «212» днк «2132» Штучна послідовність «220» «223» Аналог2 .
«4002 21 нсонаасс аасаснодію (досісасас сюдіоцдаао сісісіассії адідюсодо 60
Чдаасоаадасі Іспстасас асссаадасс сассаддаадо сададдассі дсаддаідаад 120 садощоадс юрдоасодооо9о сссіддідса ддсадссідс адссоспдас ссіддадада 180
Ісссдсача адсущосос дчюдаасаа (дсідасса дсаїсідосіс ссістассад 240 сюдаздаасі асідсаас , 258 «210» 22 «2112 86 «212» Біпок «913» Штучна послідовність «920» «223» Аналог2 «400» 22
Ріе ма! Авп Зіп Нів І еи Сув Сіу Зег Ні Ге Ма! Сім Аа Ге Туг 1 5 10 15
Ї ви ма! Сув Сіу Сі Ага Сіу Ре Рне Туг ТНг Рго Гу Тиг Ага Агу
Зо
ОІн Аза Си Авр Гео Сп Ма) СУ Сіп Маї Сію еи Су пу Спу Рго 4 45
Су АІа Сіу Зегі еи Сп Рго Ген Аа Гео іо Зіу бегіІ ео Сіп ув бо
Аго Су Аа маі( бій іп Суз Сув Тиг Зег Пе Суз Зег Геи Туг Сіп 65 70 75 во іеи бій Азп Туг Сув Авп 85 «10» 23 «2112 238 «212» днк «2132 Штучна послідовність «2202 «223» Анапог З «400» 23 нсонаасс аасасною гддсісасас сіддіддаад сісістасеї аоіяїдсода бо уаасодадосі (сцсіасас асссаадасс сассдудаду сададцассії дсадатоова 120 садощаоадс дасодада сссіддіаса ддсадссюс адссснодас ссідчадада 180
Зб
Ісссідсада зодсодоса! (дддаасгза ідсідіасса дсаїсіюсіс ссісассад 240 сіддадааса соїдсаас 258 «г» 24 «211» 86 «12» Білок «Р132 Штучна послідовність «00 «223» Аналог З «400» 24
Рне Ма Авп Сп Нів Ген Су Су Зег Ні І ей ма! сін Авіа Гец Тук 1 5 т 15
Ї еи Ма! Суз СІуУ СІ Ага СЯу Ре Ре Туг Тиг Рго ув Тіг Ага Ага
Зо
Он Авіа СіІц Ар ГГ еи Сіп Ма! Су Сп ма! Сім Семи Су Сіу Сіу Рго
Су Аіа Сіу бег Геи Сп Рго І ец Аа Гец Си Су Бег І еи іп І ув бо
Ага Сіу Пе ма! Сіш СіІп Сув Суб Тнг бег Пе Сув 5ег І ви Туг Сп 65 70 75 во
Геш іш Авп Аа Сув Авп 85 «9102 25 «11» 258 «2192 днк «213» Штучна послідовність «220» «Рг» Анапог 4 «400» 25
Нсонаасс аасасндіюд (дсцісасас сіддодааа сісісіассі адічідсода 60 ааасдадасі Ісбсіасас асссаадасс сассаоуада сададсасеї дсаасідадо 120 садаюддадс юоасдадод сссіддчідса ддсадссідс адссснодс ссіддадчоачо 180 ісссідсада адсоїдоса! щдріодаасаа їдсідїасса дсаїсідсіс ссістассад 240 сюдадаасі асідсвас 258
«210» 26 «112 86 «9122 Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Аналог 4 «400» 26
Рпе маї Авп Сіп Ні Ге Сув Аа Зег Нів І ес Ма! СІ Аа Гец Туг 1 5 10 15
ІЇ ви Ма! Сув Сіу Сі Агд Су Рпе Ре Туг ТНнг Рго (ув Тиг Аго Ага зо
Сн Аа Сх Азр Се Сіп Ма! СІу Сп Мао бен сту Сіу Су Рго
Су Аа Сіу бег Гец Сп Рго Ге Аіа Ге Сію Су Зегі ви Сіп г ув 5 60
Аг су Пе Маі СЛ Сій Суз Суз Тиг Зег Ме Суз Зег еи Туг СіІп 85 70 75 во
Ге СО Авп Туг Суб Аби 85
«2102 21 «2112 258 «212» днк «2132 Штучна послідовність «220» «23» Аналог 5 «400» 27
Ксунаасс аасасноід (ддсісасас сіддддазву сісєсіассі здідіосааод 60 чаасдадсоі (сцсіасас асссаадасс сдссоддада сададоассії дсадаадча 120 садаюдардс додсододо сссіюдіоса ддсадссідс адсссндас ссіддаодоЯ 180 їсссідсада адсоідадсаї (адаасаа юсідасса дсасідсіс ссістассад 240 сіддадаасі асюсаас 258 «2102 28 «211 86 «2122 Білок «9132 Штучна послідовність «220»
«223» Аналог 5 «ДАО» 28
Рпе Ма! Авп Сп Нів Гец Суб Сіу бег Нів І ви Ма! Си Айва І ви Туг 1 5 10 15
Гец Ма! Суб Су СІ Аго Аа Ріє Ре Туг Тпг Рго Суб ТНг Ага Ага
Зо
Сн Аа Сію Ар І еи Сіп Уа! Су СіІп Ма! Сі ви Су Су Сіу Рго
Сіу Авіа Сіу Зег Гецу Сіп Рго Гец Аа Геш Сід СіІу Зег Ге Сп Гуз во 55 во
Ага Оу Пе Ма! СІ сіп Сувз Сув ТНг Зег Ме Сув Зег І еи Туг Сіп 685 70 75 80
Гей Сіш Авп Туг Суб Азп в5 «2105 29 «2112 255 «2122 днк «213» Штучна послідовність . :
ри3» Аналог 6 «400» 28
Ксойаасс аасасндід Юодсісасас сідд(одава сісісассї заїдідсода бо даасдаддсу сойстасас асссавдасс сдссоддааду садарддассї асадатдчоа 120 садашщоаде юдосодадо сеосіддідса аддсадссе адсссйодс ссіодавдвада 180 їсссідсацча аздсаїдасаї дріодаасаа (дзсідтасса дсаїсдсіс ссісіассад А содадаасі асюсвас 258 «102 ЗО «11» 86 «2125 Білок «213» Штучна послідовність «0» «ВЗ» Аналог 6 «400» св,
РНе маі Ап Сп Ніз і ви був Сіу ет Ніз Гец Маї СІ Аа Сей Туг
І 5 18 15
Ї еи Маі Суб СПУ СМ Аго Су Авіа Рпе Тут Тиг Рго і уз ТигАго Ага
Зо сію Аа Сію Авр Гей іп Маг (у Сп Ма! СІ бе су Сіу Су Рго
Су АІа Сіу бег Геи Сп Рго Гей Аіа Се Си Су Зег Сей іп (ув 85 60
Аго Оу їе Ма! Сн Сіп Суб Суб Тиг Зег Пе Суб зег і ей Тук бій 85 70 75 во
Меп Сій Авп Туг Суз Авп 85 «210» 31 «2112 258 с«812» днк «2132 Штучна послідовність «220» «2232» Аналог 7 «400» З1
Нсойаасс аасасноію ддсісасас сіддчіддаао сісісіассї адіотдсооа бо даасчадасі ісдсоіасас асссаадасс сдассдодадо сададдассї дсаддаідчдаа 120 садаюааос (дадсадоао ссосіддідса ддсадссюдс адсссндос ссіддадода 180 ісссдсада адсоїюддсай щіодаасаа (дсідіасса дсасідсіс ссісіассад 240 сюдадаасі асідсавас 258 «210» 32 «2112 86 «12» Білок «213» Штучна послідовність 220» «923» Аналог 7 «400» 32
РНе Ма! Авп Сіп Нів Ген Суз Су зег Ні І еи Маі СіІш Аа Геи Туг 1 5 10 15
І еи Ма! Суз СІуУ СІ Ага Су Ре Айва Туг Тниг Рго І уз Тиг Ага Ага сш АІа СІ Авр ї еи СіІп Ма! Су СіІп Ма) Сіш ее Су Сіу Сіу Рго
Оу Ага СіІу бегі ви Сп Рго і ей Аа Ге Сію Су бег І еи Сіп Гуз 50 55 58)
Аго су Пе мак сі Сіп Суз Сув Тнг Бег Ме Суз 5ег І еи Туг Сп 85 70 75 во ігеи бій Авп Туг Суб Авп 85 «210» 33 «9115 261 «2195» днк «13» Штучна послідовність «220» «223» Аналог 8 «400» 33 нсойаасс аасасндід Іддсісасас сіддіддааа сісісіассії арічідсода 60 даасодводсі Існегасас асссаадасс сдссдоддада сададодассї асадаівоаа 120 саччощдазаос ддодсоддо9о сссідаідса дасадссюе адссспдос ссіддададо 180
Ісссюсацда здсодіддсаї дЧіддаасаа юсідіасса дсаісідсіс ссісдаасад 240 сіддадаасі асідсаасю а 261 «210» 34 «11 86 «2122 Білок «2132» Штучна послідовність «220» «223» Анапог 8 «400» 34
Ріе Ма! Авп іп Нів І ви Суз Сіу Зег Ніз ем Маї сію Аа Сец Туг 1 5 10 15
Геци ма! Суз Сіу Сі Акуд Су Ре РНе Туг Тиг Рго Гуз Тк Ага Ага зо
Сім Авіа СіІц Авр І еи іп Ма! сту сій Ма! Сіш Гео Сі Зіу Сіу Рго до 45
Су Авіа Су Бег І еи Сіп Рго Гец Аа І ец СІШ Су Бег і еи Сп ув
Б бо
Ага су Пе Ма! СІ Сіл Суг Сув Тнг Зег Пе Су 5егІ еи Сі Сг 65 70 75 80 і еи біб Авп Туг Суз Авп
210» 5 «112 261 «2192 днк «213» Штучна послідовність «20» «реЗ» Анапог 9 кад» 35 несуйаасс засасцогю юдесісасас сідчіодааво сісісіассї азідідсоЗУ бо даасчадчосі Існсіасає асссзадаєс соссдддадо сачвацдассї дсзддічоад 120 садчіададс дасододо сссіддідса досавдссідс зассснодс ссівддадада 186 їсссідсада засощасаї іддзасаа дсідіасса дсвістсіс ссісазссао 240 сіддадаасі асюсвасюа 281 «210» 36 «2112 86
«2122 Білок «2132 Штучна послідовність «220» «23» Анапог З «4300» 36
РНне ма! Авп ій Нів І еи був Су Зег Нів І еи Уві Си Ав ГГ ец Туг 1 5 10 15
Гец Ма! Сув Су СВ Аго Су Рпе Ре Туг Тиг Рго (ув ТНг Ага Ага
ЗО
ОШ Ага СіІн Авр Сем іп Маі Су Сіп Ма! біпі ей Су Су Су Рго
Су Ага Су Зег ец іп Рго І во Аа ії ви Си Су бегі ви Зп | ув 60
Аго Сіу Че Ма! Сім Сіп Суз Сув Тпг Бег Пе Сув Зег Гей Авп іп 55 70 75 во
Гей Сі Авп Тут Суз Авп 85 «210» 37
«2112 21 «212» Біпок «913» Штучна послідовність «220» «8232 А-панцюг інсуліну «400» 37
Су Ме Ма! Сію Сіп Сув Сувз Тнг Бек Пе Сув Бегі еи Туг Сіпі ви 1 5 10 15
ОШ Авп Туг Суб Абп «б» Зв «1» Зо «912» Білок «Р13» Штучна послідовність «920» «ва3» В-панцюг інсуліну «400» 38
Рпе МаїЇ Азп біп Нів ес Суз Сіу зег Ні Гец Маї Сію Аа Ге Туг 1 5 10 15
Гец ма! Сув Сіу Сію Агуд ЗУ Ре Рне Ту" ТАг его Гуз Трг
Зо «10» 9 «211» 31 «2122 Білок «2132 Штучна послідовність 920» «9232 СГ РА1(7-37) «400» за
Нів Аіа Січ Су Тіг Рне ТНг Зег Авр Ма! Зег ЗегТугіец СІ СУ 1 5 10 15
Сп Аза Аа буз Сіш Рне Пе Ага Тгр Геи ма! І уз Су Аго СіІу 20 25 зо «210» 40 «2112 КІ «2122 Білок «213» Штучна послідовність
«23» ексендин-3 «400 40
Нів Бег Авр Су Трг Ре ТНг ЗегАвріеуц Зег і ує Сіп Меї Сі Сі 1 . 5 10 15
Си Аа ма! Ага Гей Ре Пе СіШ Ттріец і уз Азп Су Сіу Рго бег 29 95 зо
Бег Оу Аів Рго Рго Рго Баг «10» 41 «різ 39 «рій» Білок «2132 Штучна послідовність «ВО» «923» ексендин-ї «400» 41
Нів Спу Спи Су ТАг Рпе Тег ЗегАвріец бегіув іп Меб о 1 5 10 15
Сі Аза Ма Агу Ге Рпе Ме ЗІ Тр Ге ув Авп сну Су Рго Зег 29 25 кв) зег Су Авіа Рго Рго Рго бег

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
    1. Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету, яка складається з: кон'югата аналога інсуліну довготривалої дії, в якому аналог інсуліну з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ); та кон'югата інсулінотропного пептиду довготривалої дії, в якому інсулінотропний пептид з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ), де аналог інсуліну характеризується заміщенням амінокислоти в положенні 14 ланцюга А на глутамінову кислоту або аспарагін, і де інсулінотропний пептид вибраний із групи, що складається з ексендину-4 або СА-ексендину-4 (імідазоацетилексендину-
    4).
    2. Фармацевтична комбінація для зменшення одного або декількох побічних ефектів щодо бета- клітин підшлункової залози, вибраних із групи, що складається 3 ліпотоксичності, глюкотоксичності, порушення функції бета-клітин підшлункової залози та зменшення маси бета- клітин підшлункової залози, у пацієнтів з діабетом, яка складається з: кон'югата аналога інсуліну довготривалої дії, в якому аналог інсуліну з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ); та кон'югата інсулінотропного пептиду довготривалої дії, в якому інсулінотропний пептид з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну через поліетиленгліколь (ПЕГ), де аналог інсуліну характеризується заміщенням амінокислоти в положенні 14 ланцюга А на глутамінову кислоту або аспарагін, і де інсулінотропний пептид вибраний із групи, що складається з ексендину-4 або СА-ексендину-4 (імідазоацетилексендину-4).
    3. Комбінація за п. 1 або п. 2, де кон'югат аналога інсуліну довготривалої дії характеризується тим, що аналог інсуліну, в якому амінокислоту в положенні 14 ланцюга А інсуліну замінено глутаміновою кислотою, з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну за допомогою ПЕГ як лінкера, а кон'югат інсулінотропного пептиду довготривалої дії характеризується тим, що імідазоацетилексендин-4 як інсулінотропний пептид з'єднаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну за допомогою ПЕГ як лінкера.
    4. Комбінація за п. 1 або п. 2, де кожний кінець ПЕГ відповідно зв'язується з Ес-ділянкою імуноглобуліну та аміно- або тіоловою групою аналога інсуліну або інсулінотропного пептиду.
    5. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну є аглікозилованою.
    6. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну складається з одного-чотирьох доменів, вибраних із групи, що складається з доменів СНІ, СН2, СНЗ і СНА.
    7. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну додатково включає шарнірну ділянку.
    8. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну являє собою Ес-ділянку, одержану з Іяс, ЧА, дО, ЧЕ або дм.
    9. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну являє собою гібрид з доменів різного походження, вибраний з групи, що складається з Ід, ІДА, дО, ЧЕ і дм.
    10. Комбінація за п. 1 або п. 2, де Ес-ділянка імуноглобуліну являє собою димер або мультимер, який складається з одноланцюгових імуноглобулінів, що складаються з доменів одного і того самого походження.
    11. Комбінація за п. 1 або п. 2, що додатково містить фармацевтично прийнятний носій.
    12. Комбінація за п. 1 або п. 2, де кон'югат інсуліну довготривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду довготривалої дії вводять одночасно, послідовно або в зворотному порядку.
    13. Комбінація за п. 2, де комбінація пригнічує прогресування діабету.
    14. Комбінація за п. 2, де комбінація поліпшує прогноз перебігу діабету у суб'єкта, який страждає на цукровий діабет.
    15. Спосіб попередження або лікування цукрового діабету, що передбачає введення комбінації за п. 1 суб'єкту, який страждає на цукровий діабет або має ризик виникнення цукрового діабету. Кк Ту Й н (Я Е ване о: ШЕ . . Н Е хе . Е зо ЕЕ : - В, . по: з . У : : о : : що з о ден - зак сш 5. оо я : А о МО Е НВ З Де Б, З ЗХ ОО КОКО ухкккюа - у ООН ча аа: ОЇ3 Єереловнюше-нній ЩО ЇВ Кон'ютгат наз основі похізної інсуліну довготривалої ДЯ, Ж нмольку ЗО Коп'югах на ослові СА ексевлину- Я ловкоатонвалої я, 06 пмольке «ЦО о Кег'югат ва всвов похідної інсуліну довиуєрнньної дії, З, нмольк, - хен'ютях пз основі СА ексеванну- Я довгатривалої дії, 4.46 моль ТЯ Жев'югєзт на зеноні похідної інсуліну ловуотривзалиї дії, 8,8 моль ку, Ж кеп'ютгат внз основі СА екеенадниу Я довготривалої ді, 46 моль
    Фіг. 1 ши ЕЕ Е «в о. : ВО о. шк че | ОО ї МО В Же В ВОМ їж ЩА шо ОК хомивхх НИ я їж п пе хво в моб ЕЗ ПККНННН СЕ З КК ЗК щУЯ х Я М З ПОПИ ИН ск Мод ОК З КН Х о ПЕВ
    «В. о с пенею с й о. 000 шт о ке ТУ : ОО З ОО Ор Мк: ОКХ ХО Е : я Б ва: ба Середевннмечнїй зі; Конп'югат ва основі похінну суліну ловготривасня ай, ЗХ вмольтку ща бер Кеов'югат на основі СА ексендину Я давготрнавлнм з, 46 ямельку а: о Ков'югит на основі похідної інселіну зовготринаої й, 5.2 моль, Во) Кон'юкат я цахі Улату ви; ЯН ж. : ков'ютат ва нноні СА ексенлвну- З довготвняваої Зі, Вб нмолькух ШЕ Кончогат ва основі нехідної інФсуліну девготривалн ай Ба моль, Ка кон'ютат на основі (А ексевдяну- і довготвивалеї ан. Вб вмельку
    Фіг. 2
    : : : Ж х ; ї : де ж ї : : ; З З Х : : « Х х х Я : й х
    Е. : : : ї : : : ! :; о М ЖЕ : у з ВО ЗО ом. її : а х ООБОБ ЗО пд х ї ЕЗ ї ї ХК МОХ -к Її жу й ї х : п. с. Ж, х . : ше. : : ох в 7 З г ях ОХ з - щ ії х ШО одкнкххкйкккжхки, ХХ 8» Ж: І ХО ОС - - З ор у ; - ОО 0 Зх Бій ЕЕ ї сеї Аа Ж хо дебют ОВО ОО ся ЕЕ ї С: ЕН: 5 на її ЗБ ЗО я х З сх: ШЕ: їх ЩІ бо ОО МОЄ ще ЕН ї Ж 3 їх 55 я т: ВО МОХ С ЩЕ ї мае г їх 51: ОС х 1 х її ї Х хх й їх ХЕ НКИ як щі ї . її її і. : її І зо «31 х Ж ше: ї її х: МКК КН се ШЕ о. 5 її її їх: С ЕН З о. х і їх 5: пе ОО Ох Її : УЖ хх ш х Ж хх ШІ: ПОМ КОНКНЕНВ 31 із її ї х ЖЕ Ж ОО ОККО 3 ЕЗ Е У ї х Ж Ж МО ОКО щі і ж хї Бі жи ШИ Є і. З --- пиши ни х 1 х З. НЯ я: Ж БА ЕЗ У ї Же ше МО ЕЕ ї о . шани КИМ т: М КЗ «Вхофоххохохкоюов охо о нак нн пн ок яю З ЖОВ ї5У Серелевниечносі сне ДВІ Бум нмну не ві яохіввої неудіве ев амваьвої лій; Я, ногу а х і- Же сеї Ков'ютант ва снозві вохізня інсудіву зажеотвнваляї нії З, маних мем УК Е де Я хх. пи чи У мух уз шще - Шосе ВОК Же живе вКек зВежноХ КА, ееосевююу-й дез рхевх 3 З.Я6 ванаавіку В (2 Жож'югвит на оєсвові вохізнох івуклаіу деовзгривалої дії, ЗА вмельиг кон'ютвиї на оспов СА ексонлану- й довготрвевлої ді. ПИ я жеькх ; М) Конп'ютганму ва основі вахіжної інсуліву завтекрваної ді Ву земальк г ВОМ ЗОН ЗЕ ОЖЕЕЕ КО время аю ке ровзакої щі, о вавуюь ке
UAA201611693A 2014-05-29 2015-05-29 Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету UA125847C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20140065072 2014-05-29
PCT/KR2015/005424 WO2015183038A1 (ko) 2014-05-29 2015-05-29 지속형 인슐린 아날로그 결합체 및 지속형 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 당뇨병 치료용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125847C2 true UA125847C2 (uk) 2022-06-22

Family

ID=54699297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201611693A UA125847C2 (uk) 2014-05-29 2015-05-29 Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету

Country Status (26)

Country Link
US (1) US10159715B2 (uk)
EP (1) EP3156066B1 (uk)
JP (2) JP7014515B2 (uk)
KR (2) KR20150138101A (uk)
CN (1) CN106559984A (uk)
AR (1) AR100639A1 (uk)
AU (1) AU2015268183B2 (uk)
BR (1) BR112016027469A2 (uk)
CA (1) CA2950266A1 (uk)
CL (1) CL2016003075A1 (uk)
CR (1) CR20160582A (uk)
DK (1) DK3156066T5 (uk)
DO (1) DOP2016000302A (uk)
EA (1) EA038431B1 (uk)
EC (1) ECSP16096962A (uk)
ES (1) ES2949553T3 (uk)
IL (1) IL249246B (uk)
MX (1) MX2016015516A (uk)
MY (1) MY181539A (uk)
PE (1) PE20170195A1 (uk)
PH (1) PH12016502391A1 (uk)
SG (1) SG11201609564TA (uk)
TN (1) TN2016000500A1 (uk)
TW (3) TW202140065A (uk)
UA (1) UA125847C2 (uk)
WO (1) WO2015183038A1 (uk)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX369656B (es) 2014-01-20 2019-11-15 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma.
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
AR105616A1 (es) 2015-05-07 2017-10-25 Lilly Co Eli Proteínas de fusión
PE20180449A1 (es) 2015-06-30 2018-03-05 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivado de glucagon y una composicion que comprende un conjugado de accion prolongada del mismo
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
HRP20220995T1 (hr) 2015-12-31 2022-11-11 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Trostruki aktivator koji aktivira glukagonski, glp-1 i gip receptore
TN2018000452A1 (en) 2016-06-29 2020-06-15 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same and therapeutic use thereof
KR20180033105A (ko) * 2016-09-23 2018-04-02 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
EP3578204A4 (en) * 2017-02-03 2021-01-06 Hanmi Pharm. Co., Ltd. BIOACTIVE SUBSTANCE CONJUGATE WITH ENHANCED DURABILITY AND ITS USE
EP3604328A4 (en) * 2017-03-23 2021-01-06 Hanmi Pharm. Co., Ltd. REDUCED INSULIN ANALOGUE COMPLEX FOR INSULIN RECEPTOR AND ITS USE
WO2019014552A1 (en) * 2017-07-14 2019-01-17 University Of Southern California INSULIN-TRANSFERRIN FUSION PROTEIN AND PRO-INSULIN-TRANSFERRIN PRODRANT, FOR OVERCOMING INSULIN RESISTANCE
WO2019066603A1 (ko) * 2017-09-29 2019-04-04 한미약품 주식회사 효력이 향상된 지속성 단백질 결합체
KR20220146656A (ko) * 2017-11-21 2022-11-01 일라이 릴리 앤드 캄파니 둘라글루티드를 함유하는 조성물 및 사용 방법
KR102666154B1 (ko) 2018-08-08 2024-05-20 주식회사 대웅제약 지속형 인슐린 아날로그 및 그 복합체
KR102646845B1 (ko) * 2018-08-08 2024-03-14 주식회사 대웅제약 클로스트리파인을 이용한 지속형 인슐린 아날로그 복합체의 활성형 제조방법
WO2020053815A1 (en) * 2018-09-12 2020-03-19 Quiapeg Pharmaceuticals Ab Releasable glp-1 conjugates
MX2021006972A (es) * 2018-12-11 2021-08-16 Sanofi Sa Conjugados de insulina.
KR102193211B1 (ko) * 2019-11-27 2020-12-18 (주)디앤디파마텍 비오틴 모이어티가 결합된 폴리펩티드 및 이를 포함하는 경구 투여용 약학적 조성물
CN114075275A (zh) * 2020-08-17 2022-02-22 成都奥达生物科技有限公司 一种长效胰岛素类似物
CN114478744A (zh) * 2020-11-13 2022-05-13 成都奥达生物科技有限公司 一种长效glp-1拮抗剂
CN113801242B (zh) * 2021-09-17 2024-05-17 南通大学 一种长效胰岛素及其体外细胞生产加工方法
CN113929762B (zh) * 2021-12-16 2022-04-26 清华大学 3-羟基丁酰化和/或3-羟基戊酰化修饰胰岛素及其应用

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5175145A (en) 1988-08-26 1992-12-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of diabetes mellitus with amylin agonists
US5422339A (en) 1991-03-19 1995-06-06 Joslin Diabetes Center, Inc. Peptides having insulin autoantibody but not insulin receptor binding capacity
US5424286A (en) 1993-05-24 1995-06-13 Eng; John Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
PT1141014E (pt) 1999-01-06 2005-04-29 Genentech Inc Variante mutante do factor de crescimento semelhante a insulina (igf-i)
CA2452044A1 (en) * 2001-08-28 2003-03-13 Eli Lilly And Company Pre-mixes of glp-1 and basal insulin
AR036711A1 (es) 2001-10-05 2004-09-29 Bayer Corp Peptidos que actuan como agonistas del receptor del glp-1 y como antagonistas del receptor del glucagon y sus metodos de uso farmacologico
JP2005508360A (ja) * 2001-10-19 2005-03-31 イーライ・リリー・アンド・カンパニー Ｇｌｐ−１およびインスリンの二相混合物
US7737260B2 (en) 2003-11-13 2010-06-15 Hanmi Pharm. Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
DE10227232A1 (de) 2002-06-18 2004-01-15 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität
BRPI0409600A (pt) 2003-04-29 2006-04-18 Lilly Co Eli análogo de insulina, composição, método de tratamento de hiperglicemia, e, análogo de pró-insulina
ES2328579T3 (es) 2003-07-25 2009-11-16 Conjuchem Biotechnologies Inc. Derivados de insulina de larga duracion y procedimientos asociados.
JP5864834B2 (ja) * 2006-09-22 2016-02-17 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ耐性のインスリンアナログ
US7790677B2 (en) 2006-12-13 2010-09-07 Elona Biotechnologies Insulin production methods and pro-insulin constructs
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
JP2009019027A (ja) 2007-07-16 2009-01-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体
EP2017288A1 (en) 2007-07-16 2009-01-21 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, pegylated insulin analogues
CN101743252A (zh) * 2007-07-16 2010-06-16 诺沃-诺迪斯克有限公司 蛋白酶稳定化的、peg化的胰岛素类似物
JP5241849B2 (ja) 2007-11-16 2013-07-17 ノボ・ノルデイスク・エー／エス インスリン及びインスリン分泌性ペプチドを含む薬学的組成物
BRPI0907119A2 (pt) 2008-01-09 2015-07-14 Sanofi Aventis Deutschland Derivados de insulina tendo um perfil de ação de tempo extremamente retardado
DE102008003568A1 (de) 2008-01-09 2009-07-16 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil
DE102008025008A1 (de) 2008-05-24 2009-11-26 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue Insulinderivate mit extrem verzögertem Zeit-/ Wirkungsprofil
KR20100111682A (ko) 2008-01-09 2010-10-15 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 극히 지연된 시간-작용 프로필을 갖는 신규 인슐린 유도체
US8993516B2 (en) 2008-04-14 2015-03-31 Case Western Reserve University Meal-time insulin analogues of enhanced stability
KR101820024B1 (ko) * 2008-10-17 2018-01-18 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 인슐린과 ｇｌｐ－1 효능제의 병용물
AU2009335715B2 (en) 2008-12-19 2016-09-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
US8481485B2 (en) * 2008-12-19 2013-07-09 Indiana University Research And Technology Corporation Insulin analogs
CA2756853A1 (en) * 2009-03-27 2010-09-30 Christopher Herring Drug fusions and conjugates
US20120184488A1 (en) 2009-09-01 2012-07-19 Case Western Reserve University Insulin analogues of enhanced receptor-binding specificity
ES2534191T3 (es) * 2009-11-13 2015-04-20 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Composición farmacéutica que comprende un agonista de GLP-1, una insulina y metionina
KR101058209B1 (ko) 2009-12-30 2011-08-22 전자부품연구원 Ｏｆｄｍ 방식의 디지털 방송 시스템의 빠른 동기 방법
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
KR101324828B1 (ko) 2010-06-08 2013-11-01 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 단쇄 인슐린 아날로그 약물 결합체
KR101330868B1 (ko) 2010-06-08 2013-11-18 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 인슐린 유도체 약물 결합체
KR101382593B1 (ko) * 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
CA2806399A1 (en) 2010-07-28 2012-02-02 Smartcells, Inc. Recombinantly expressed insulin polypeptides and uses thereof
EP2665487A1 (en) 2011-01-20 2013-11-27 Zealand Pharma A/S Combination of acylated glucagon analogues with insulin analogues
BR112013021804A2 (pt) 2011-03-02 2017-03-28 Oerlikon Trading Ag Trübbach "componente corrediço compreendendo revestimento previsto para ficar em contato pelo menos parcialmente com lubrificante, seu sistema tribológico e seu uso"
CN102675452B (zh) 2011-03-17 2015-09-16 重庆富进生物医药有限公司 具持续降血糖和受体高结合的人胰岛素及类似物的偶联物
US9341445B2 (en) 2011-05-03 2016-05-17 Teijin Aramid Bv Antiballistic panel with first and second laminates having fibers of different tensile modulus
UA113626C2 (xx) * 2011-06-02 2017-02-27 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії
EA201391764A1 (ru) 2011-06-02 2014-07-30 Пролор Байотек Инк. Агонисты рецептора glp-1/глюкагона длительного действия
EP3434687B1 (en) 2011-06-10 2021-03-10 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
WO2012171994A1 (en) * 2011-06-15 2012-12-20 Novo Nordisk A/S Multi substituted insulins
TR201901402T4 (tr) 2011-06-17 2019-02-21 Hanmi Science Co Ltd Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı.
WO2013089463A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Lg Innotek Co., Ltd. Method for deposition of silicon carbide and silicon carbide epitaxial wafer
CA2898730A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 Case Western Reserve University Glutamic acid-stabilized insulin analogues
KR101665009B1 (ko) * 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
AR091902A1 (es) 2012-07-25 2015-03-11 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de insulina de accion prolongada
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR094821A1 (es) * 2012-07-25 2015-09-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada
AR092862A1 (es) * 2012-07-25 2015-05-06 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de insulina de accion prolongada y un peptido insulinotropico y metodo de preparacion
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
PH12018501454A1 (en) 2012-11-06 2020-02-17 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglubin fragment
WO2014133324A1 (ko) 2013-02-26 2014-09-04 한미약품 주식회사 신규한 인슐린 아날로그 및 이의 용도
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
KR101676542B1 (ko) 2014-12-30 2016-11-16 건국대학교 산학협력단 프로인슐린의 면역학적 용도

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017521377A (ja) 2017-08-03
KR20220061057A (ko) 2022-05-12
TW202140065A (zh) 2021-11-01
ES2949553T3 (es) 2023-09-29
AR100639A1 (es) 2016-10-19
DK3156066T3 (da) 2023-07-24
PE20170195A1 (es) 2017-03-19
CL2016003075A1 (es) 2017-05-26
TW201607553A (zh) 2016-03-01
CN106559984A (zh) 2017-04-05
TWI784914B (zh) 2022-11-21
IL249246B (en) 2020-01-30
EP3156066A1 (en) 2017-04-19
US10159715B2 (en) 2018-12-25
KR20150138101A (ko) 2015-12-09
AU2015268183B2 (en) 2020-09-17
DOP2016000302A (es) 2016-12-15
TW202235101A (zh) 2022-09-16
SG11201609564TA (en) 2016-12-29
EP3156066A4 (en) 2017-12-13
US20170143802A1 (en) 2017-05-25
BR112016027469A2 (pt) 2017-10-17
PH12016502391A1 (en) 2017-02-20
MX2016015516A (es) 2017-03-29
AU2015268183A1 (en) 2016-12-22
TN2016000500A1 (en) 2018-04-04
IL249246A0 (en) 2017-02-28
JP2020143155A (ja) 2020-09-10
KR102449145B1 (ko) 2022-09-30
NZ726959A (en) 2023-09-29
EP3156066B1 (en) 2023-04-26
JP7014515B2 (ja) 2022-02-01
MY181539A (en) 2020-12-26
EA038431B1 (ru) 2021-08-27
WO2015183038A1 (ko) 2015-12-03
CA2950266A1 (en) 2015-12-03
DK3156066T5 (da) 2024-06-10
ECSP16096962A (es) 2018-04-30
EA201692159A1 (ru) 2017-06-30
CR20160582A (es) 2017-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125847C2 (uk) Фармацевтична комбінація для попередження або лікування цукрового діабету
AU2020277290B2 (en) Composition for treating diabetes mellitus comprising insulin and a GLP-1/glucagon dual agonist
AU2018267648B2 (en) Novel insulin analog and use thereof
CN110536692B (zh) 用于治疗糖尿病的含有atpif1的药物组合物
AU2018239037B2 (en) Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
UA116522C2 (uk) Спосіб лікування метаболічного розладу мутантним fgf21
NZ726959B2 (en) Composition for treating diabetes comprising long-acting insulin analogue conjugate and long-acting insulinotropic peptide conjugate
NZ751062B2 (en) Novel insulin analog and use thereof