UA126554C2 - Композиція і спосіб для ефективного націлювання трансгенів - Google Patents
Композиція і спосіб для ефективного націлювання трансгенів Download PDFInfo
- Publication number
- UA126554C2 UA126554C2 UAA201808061A UAA201808061A UA126554C2 UA 126554 C2 UA126554 C2 UA 126554C2 UA A201808061 A UAA201808061 A UA A201808061A UA A201808061 A UAA201808061 A UA A201808061A UA 126554 C2 UA126554 C2 UA 126554C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- mai
- plant
- rgo
- guz
- tug
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 title abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 151
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims abstract description 119
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 96
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims abstract description 85
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 369
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 160
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 claims description 153
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 claims description 153
- 108020001991 Protoporphyrinogen Oxidase Proteins 0.000 claims description 114
- 102000005135 Protoporphyrinogen oxidase Human genes 0.000 claims description 111
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 75
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 69
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 claims description 69
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 41
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 39
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 36
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 36
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 35
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 28
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 25
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 18
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 16
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 11
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- 101000951943 Stenotrophomonas maltophilia Dicamba O-demethylase, oxygenase component Proteins 0.000 claims description 8
- FOUWCSDKDDHKQP-UHFFFAOYSA-N flumioxazin Chemical compound FC1=CC=2OCC(=O)N(CC#C)C=2C=C1N(C1=O)C(=O)C2=C1CCCC2 FOUWCSDKDDHKQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- BGZZWXTVIYUUEY-UHFFFAOYSA-N fomesafen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)NS(=O)(=O)C)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 BGZZWXTVIYUUEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 claims description 6
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 claims description 6
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 claims description 6
- CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N lactofen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC(C)C(=O)OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 claims description 5
- GNHDVXLWBQYPJE-UHFFFAOYSA-N saflufenacil Chemical compound C1=C(Cl)C(C(=O)NS(=O)(=O)N(C)C(C)C)=CC(N2C(N(C)C(=CC2=O)C(F)(F)F)=O)=C1F GNHDVXLWBQYPJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N acifluorfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 claims description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 2
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 claims 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 abstract description 14
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 45
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 32
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 29
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 18
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 17
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 14
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 11
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 11
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 101100264174 Mus musculus Xiap gene Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 7
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 7
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 5
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 5
- 101150111036 arsB gene Proteins 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 5
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 230000026447 protein localization Effects 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 101100492787 Caenorhabditis elegans mai-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100029028 Protoporphyrinogen oxidase Human genes 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- -1 leader Proteins 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 3
- 229920013637 polyphenylene oxide polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000000734 protein sequencing Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- YHKBGVDUSSWOAB-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-{2-chloro-5-[4-(difluoromethyl)-3-methyl-5-oxo-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazol-1-yl]-4-fluorophenyl}propanoic acid Chemical compound O=C1N(C(F)F)C(C)=NN1C1=CC(CC(Cl)C(O)=O)=C(Cl)C=C1F YHKBGVDUSSWOAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 4,4-diethylpiperidine Chemical compound CCC1(CC)CCNCC1 DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTMSIVKCVBMPFF-UHFFFAOYSA-N 4-phenylisoindole-1,3-dione Chemical class O=C1NC(=O)C2=C1C=CC=C2C1=CC=CC=C1 YTMSIVKCVBMPFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQQTZCPKNZVLFF-UHFFFAOYSA-N 4h-1,2-benzoxazin-3-one Chemical class C1=CC=C2ONC(=O)CC2=C1 HQQTZCPKNZVLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVOODWOZJVJKQR-UHFFFAOYSA-N 5-tert-butyl-3-(2,4-dichloro-5-prop-2-ynoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-one Chemical group O=C1OC(C(C)(C)C)=NN1C1=CC(OCC#C)=C(Cl)C=C1Cl DVOODWOZJVJKQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150082201 ASIP gene Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002890 Aclonifen Substances 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 101150071434 BAR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000005484 Bifenox Substances 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O Chemical compound CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000188250 Idas Species 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 230000027311 M phase Effects 0.000 description 1
- SUSRORUBZHMPCO-UHFFFAOYSA-N MC-4379 Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC)=CC(OC=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=C1 SUSRORUBZHMPCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150104182 MOB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 229910020968 MoSi2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- CHNUNORXWHYHNE-UHFFFAOYSA-N Oxadiazon Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(C)C)=CC(N2C(OC(=N2)C(C)(C)C)=O)=C1Cl CHNUNORXWHYHNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000005590 Oxyfluorfen Substances 0.000 description 1
- OQMBBFQZGJFLBU-UHFFFAOYSA-N Oxyfluorfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 OQMBBFQZGJFLBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 1
- DDBMQDADIHOWIC-UHFFFAOYSA-N aclonifen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(N)=C(Cl)C(OC=2C=CC=CC=2)=C1 DDBMQDADIHOWIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- XOEMATDHVZOBSG-UHFFFAOYSA-N azafenidin Chemical compound C1=C(OCC#C)C(Cl)=CC(Cl)=C1N1C(=O)N2CCCCC2=N1 XOEMATDHVZOBSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- LVKBXDHACCFCTA-UHFFFAOYSA-N bencarbazone Chemical compound C1=C(C(N)=S)C(NS(=O)(=O)CC)=CC(N2C(N(C)C(=N2)C(F)(F)F)=O)=C1F LVKBXDHACCFCTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004182 chemical digestion Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011088 chloroplast localization Effects 0.000 description 1
- 238000011208 chromatographic data Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical class C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000024346 drought recovery Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- ZCNQYNHDVRPZIH-UHFFFAOYSA-N fluthiacet-methyl Chemical group C1=C(Cl)C(SCC(=O)OC)=CC(N=C2N3CCCCN3C(=O)S2)=C1F ZCNQYNHDVRPZIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N helium neon Chemical compound [He].[Ne] CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000004866 oxadiazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000001475 oxazolidinediones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000008048 phenylpyrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 210000000745 plant chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- OYJMHAFVOZPIOY-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl 2-chloro-5-[3-methyl-2,6-dioxo-4-(trifluoromethyl)pyrimidin-1-yl]benzoate Chemical compound C1=C(Cl)C(C(=O)OC(C)C)=CC(N2C(N(C)C(=CC2=O)C(F)(F)F)=O)=C1 OYJMHAFVOZPIOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKLQIONHGSFYJY-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl 5-[4-bromo-1-methyl-5-(trifluoromethyl)pyrazol-3-yl]-2-chloro-4-fluorobenzoate Chemical compound C1=C(Cl)C(C(=O)OC(C)C)=CC(C=2C(=C(N(C)N=2)C(F)(F)F)Br)=C1F FKLQIONHGSFYJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 229950003776 protoporphyrin Drugs 0.000 description 1
- UHSGPDMIQQYNAX-UHFFFAOYSA-N protoporphyrinogen Chemical compound C1C(=C(C=2C=C)C)NC=2CC(=C(C=2CCC(O)=O)C)NC=2CC(N2)=C(CCC(O)=O)C(C)=C2CC2=C(C)C(C=C)=C1N2 UHSGPDMIQQYNAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YXIIPOGUBVYZIW-UHFFFAOYSA-N pyraflufen Chemical compound ClC1=C(OC(F)F)N(C)N=C1C1=CC(OCC(O)=O)=C(Cl)C=C1F YXIIPOGUBVYZIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008512 pyrimidinediones Chemical class 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- OORLZFUTLGXMEF-UHFFFAOYSA-N sulfentrazone Chemical compound O=C1N(C(F)F)C(C)=NN1C1=CC(NS(C)(=O)=O)=C(Cl)C=C1Cl OORLZFUTLGXMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004867 thiadiazoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8221—Transit peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
- C12Y103/03—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with oxygen as acceptor (1.3.3)
- C12Y103/03004—Protoporphyrinogen oxidase (1.3.3.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/08—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a chloroplast localisation signal
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Physiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
ІЇОО0О1| У цій заявці заявлений пріоритет за попередньою заявкою на патент США мМоб2/270180, поданою 21 грудня 2015 року, і за попередньою заявкою на патент США
Моб2/364715, поданою 20 липня 2016 року, які включені в цей документ в повному обсязі за допомогою посилання.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД
ІЇ0002| Винахід в цілому відноситься до галузей сільського господарства, біотехнології рослин і молекулярної біології. Конкретніше, цей винахід відноситься до композицій і способів отримання трансгенних рослин, які демонструють толерантність або резистентність до гербіцидів.
Включення переліку послідовностей 0003) Перелік послідовностей у формі, що може бути зчитана машиною, поданий з цією заявкою в електронному форматі і включений в цю заявку за допомогою посилання в повному обсязі. Перелік послідовностей, що міститься у файлі під назвою МОМ5389УМО 5Т2541Х, розміром 122 кілобайт (виміряно в операційній системі М5 УМіпдом5), був створений 19 грудня 2016 року.
Опис попереднього рівня техніки 0004 Продукування нових трансгенних рослин забезпечує можливість суттєвого вдосконалення сільськогосподарських культур, що демонструють корисні характеристики, як-от підвищена толерантність до гербіцидів, отримуючи таким чином ефективніші стратегій боротьби з бур'янами. Однак, при тому, що білки, придатні для отримання корисних характеристик сільськогосподарських культур, є відомими, ефективна субклітинна локалізація (відома як націлювання) і процесинг цих рекомбінантних білків в трансгенних клітинах рослин все ще представляють значні труднощі. Тому існує потреба в нових транзитних пептидах, здатних ефективно локалізувати рекомбінантні білки в клітинах рослин.
КОРОТКИЙ ОПИС СУТНОСТІ ВИНАХОДУ
0005) Один аспект винаходу відноситься до молекули рекомбінантної ДНК, яка містить послідовність ДНК, що кодує транзитний пептид хлоропласта (СТР), функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, що кодує дикамба-монооксигеназу (ОМО) або протопорфіриногеноксидазу (РРО), при цьому СТР містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1-3.
Зо У деяких варіантах реалізації цього винаходу послідовність ДНК, що кодує СТР, містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 7-14. В інших варіантах реалізації цього винаходу ОМО або РРО містить поліпептид, вибраний з групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 18-27 і 40-59. В одному варіанті реалізації цього винаходу послідовність ДНК ОМО або РРО містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕБО ІЮ МО: 28-37 і 61-102. У конкретних варіантах реалізації цього винаходу ОМО або РРО визначають як білок толерантності до гербіциду, який здатний надавати толерантність до гербіциду при експресії в клітині рослини. У конкретних варіантах реалізації цього винаходу білок толерантності до гербіциду являє собою білок ЮМО, а СТР містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3, або білок толерантності до гербіциду являє собою білок РРО, а
СТР містить обрану послідовність з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1 і 2.
І0006) В іншому аспекті цього винаходу пропонується конструкція ДНК, що містить молекулу рекомбінантної ДНК, як описано в цьому винаході, функціонально зв'язану з гетерологічним промотором, функціональним в клітині рослини.
ІЇ0007| У ще одному аспекті цього винаходу пропонується трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина, трансформовані рекомбінантною молекулою ДНК за цим винаходом. У конкретних варіантах реалізації цього винаходу рослина являє собою однодольну рослину. Однодольні рослини, які можна застосовувати в цьому винаході, включають, але не обмежуються ними, рослини кукурудзи чи пшениці. В іншому варіанті реалізації цього винаходу рослина являє собою дводольну рослину. Дводольні рослини, які можна застосовувати в цьому винаході, включають, але не обмежуються ними, рослини сої, бавовнику, або рослини роду Вгазвзіса (роду капусти). 0008) У ще одному аспекті пропонується молекула рекомбінантної ДНК за цим винаходом, яка присутня в неживому матеріалі рослини. В одному прикладі клітини рослини знаходяться в межах обсягу цього винаходу, коли вони містять рекомбінантний молекулу ДНК за цим винаходом. В одному варіанті реалізації цього винаходу такі клітини рослини можуть бути клітинами рослин, що регенеруються, або можуть бути клітинами рослин, що не регенеруються, та не можуть бути регенеровані в рослину. 0009) У ще одному аспекті цього винаходу пропонуються способи продукування товарних продуктів, які містять таку кількість молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом, яку можна бо виявити, включаючи продукти, отримані таким чином. У деяких варіантах реалізації цього винаходу товарні продукти, запропоновані в цьому винаході, включають нежиттєздатні насінини або їхні частини, зневоднену тканину рослини, заморожену тканину рослини, оброблену тканину рослини, борошно грубого помелу, борошно тонкого помелу, пластівці, висівки і волокна.
Товарні продукти можуть бути життєздатними або нежиттєздатними. Нежиттєздатні товарні продукти включають, але не обмежуються цим, нежиттєздатне насіння і зерна; оброблене насіння, частини насінин і частини рослин; зневоднену тканину рослини, заморожену тканину рослини і оброблену тканину рослини. Товарні продукти за цим винаходом містять таку кількість рекомбінантної молекули ДНК, яку можна виявити, як описано в цьому документі. Способи виявлення молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом добре відомі в цій галузі техніки. 00101 У наступному аспекті цього винаходу пропонується спосіб продукування толерантної до гербіцидів рослини, що включає наступні етапи: а) трансформація клітини рослини конструкцією ДНК за цим винаходом і р) регенерація рослини з трансформованої клітини рослини, що містить зазначену конструкцію ДНК. В одному варіанті реалізації способу регенерована рослина є толерантною до гербіциду, обраного з групи, що складається з дикамби та інгібітора РРО. 0011) У ще одному аспекті цього винаходу пропонується спосіб продукування толерантної до гербіциду рослини, що включає наступні етапи: а) схрещування батьківської рослини, що містить молекулу рекомбінантної ДНК за цим винаходом, з самою собою або з іншою рослиною для отримання однієї або більшої кількості рослин потомства; і БЮ) відбір рослини потомства, що містить зазначену молекулу ДНК. В одному варіанті реалізації способу рослина потомства є толерантною до гербіциду, обраного з групи, що складається з дикамби та інгібітора РРО. 0012) У ще одному аспекті цього винаходу пропонується спосіб експресії РРО або ОМО в клітині, що включає введення рекомбінантної молекули ДНК за цим винаходом в клітину рослини. В одному варіанті реалізації цього винаходу введення молекули рекомбінантної ДНК включає трансформацію клітини рослини. 0013) В іншому аспекті цього винаходу пропонується спосіб контролю за ростом бур'янів в середовищі вирощування сільськогосподарських культур, що включає наступні етапи: а) посадка рослини або насіння за цим винаходом в середовище вирощування сільськогосподарських культур; і Б) застосування в середовищі вирощування
Зо сільськогосподарських культур такої кількості гербіциду дикамба або інгібітора РРО, яка є ефективною для контролю за ростом бур'янів. У конкретних варіантах реалізації цього винаходу застосування гербіциду проводиться до або після сходів. В одному варіанті реалізації цього винаходу кількість гербіциду не уражає рослину або насінину. У деяких варіантах реалізації зазначеного способу рослина або насінина являють собою однодольні рослини або насінину, як-от рослина або насінина кукурудзи чи пшениці. В інших варіантах реалізації цього винаходу рослина або насінина являють собою дводольну рослину або насінину, як-от соя, бавовник або рослини роду Вгаззіса (роду капусти). В інших варіантах реалізації цього винаходу гербіцид являє собою дикамбу або інгібітор РРО.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
0014) Фігура 1. Трансгенні рослини кукурудзи Е1, які експресують Н М10 (ЗЕО ІЮО МО: 43), функціонально зв'язаний з АРОб (ЗЕО ІЮО МО: 1) або 125088600ТР (ЗЕО ІО МО: 38), після обробки гербіцидом в кількості 0,036 фунта активного інгредієнта 5-3100 на акр (фунт аї/акр), що застосовується в М2, потім - в М4, а потім - М8.
КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
0015) 5ЕО ІО МО: 1 являє собою амінокислотну послідовність СТР білого і блідо-зеленого
Агарідорзів Іпаійапа (АРОб). (0016 ЗЕО 10 МО: 2 являє собою амінокислотну послідовність аміноконцевого оптимізованого варіанту АРОб СТР 5ЕО ІЮО МО: 1.
І0017| 5ЕО ІО МО: З являє собою амінокислотну послідовність білка теплового шоку 90 кДа (СК88) СТР Агарідорзвіз Паїйіапа . 0018) 5ЕО ІО МО: 4 являє собою амінокислотну послідовність РА. ЗАКО-СТРА СТР.
І0019| БЕО ІО МО: 5 являє собою амінокислотну послідовність Р5. Крсо5-3С СТР. 002091 5ЕО ІО МО: 6 являє собою амінокислотну послідовність О5.УМаху СТР. 00211) ЗЕО ІО МО: 7-11 являють собою послідовності нуклеїнових кислот, що кодують АРОб
СТР 5ЕО ІО МО: 1, оптимізовані для однодольної або дводольної експресії.
І0022| 5ЕО ІЮ МО: 12 являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує АРОб СТР
ЗЕО ІЮ МО: 2.
І0023| 5ЕО ІО МО: 13 їі 14 являють собою послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують
А.С 88 СТР, оптимізовані для дводольної або однодольної експресії, відповідно. 60 (0024| 5ЕО ІО МО: 15-17 являють собою послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують ЗЕО
ІО МО: 4-6 відповідно. 00251) ЗЕО І МО: 18-27 являють собою амінокислотні послідовності, що кодують варіанти дикамба-монооксигенази (ОМО).
І0026| 5ЕО ІЮО МО: 28-37 являють собою послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують варіанти ОМО 5ЕО ІО МО: 18-27 відповідно.
І(0027| ЗЕО ІЮ МО: 38 являє собою амінокислотну послідовність транзитного пептиду хлоропласта 125088600ТР бавовнику, оптимізовану для дводольної експресії. (0028) ЗЕО ІЮО МО: 39 являє собою послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують 5ЕО ІЮ
МО: 38.
І0029| БЕО ІО МО: 40 являє собою амінокислотну послідовність Н МО0. 0030 5ЕО ІО МО: 41 являє собою амінокислотну послідовність Н М20. 00311 БЕО ІО МО: 42 являє собою амінокислотну послідовність Н Мб0О. 00321 5ЕО ІО МО: 43 являє собою амінокислотну послідовність Н. М10. 00331) 5ЕО ІО МО: 44 являє собою амінокислотну послідовність Н М30.
І0034| 5ЕО ІО МО: 45 являє собою амінокислотну послідовність Н М40. 00351) 5ЕО ІО МО: 46 являє собою амінокислотну послідовність Н М50. 0036) 5ЕО ІО МО: 47 являє собою амінокислотну послідовність Н. М70.
І0037| 5ЕО ІО МО: 48 являє собою амінокислотну послідовність Н М100. 0038) 5ЕО ІО МО: 49 являє собою амінокислотну послідовність Н. М110.
І(0039| ЗЕО ІО МО: 50-56 являють собою амінокислотні послідовності, що не містять стартовий метіонін, який відповідає 5ХЕО ІЮ МО: 40, 41, 43, 44, 45, 46 і 48 відповідно. 00401) 5ЕО І МО: 57-58 являють собою амінокислотні варіанти ЗЕО ІЮО МО: 50. (0041 БЕО ІО МО: 59 являє собою амінокислотний варіант ЗЕО ІО МО: 56. 00421) ЗЕО ІЮ МО: 60 являє собою амінокислотну послідовність протопорфіриногеноксидази з Атагапійиз (шрегсціатз5 (щириця) (М/Н. РРО). 0043) ЗЕО ІЮ МО: 61-70 являють собою нуклеотидні послідовності, що кодують ЗЕО ІЮ МО: 40-49 відповідно, кодон-оптимізовані для експресії Е. соїї. (0044) ЗЕО ІО МО: 71-80 являють собою нуклеотидні послідовності, що кодують ЗЕО ІЮ МО: 40-49 відповідно, кодон-оптимізовані для дводольної експресії.
Зо (00451) ЗЕО ІЮ МО: 81-87 являють собою нуклеотидні послідовності, що кодують 5ЕО ІЮ МО: 50-56 відповідно, кодон-оптимізовані для дводольної експресії. (0046 5ЕО ІС МО: 88 і 91 являють собою нуклеотидні варіанти ЗЕО ІО МО: 50 ї 51 відповідно. (0047) 5ЕО ІЮ МО: 89, 90 і 92 являють собою нуклеотидні послідовності, що кодують ЗЕО ІЮ
МО: 57-59 відповідно. (0048| ЗЕО ІЮ МО: 93-102 являють собою нуклеотидні послідовності, що кодують 5ЕО ІЮ
МО: 40-49 відповідно, кодон-оптимізовані для однодольної експресії.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС
І0049| Транзитні пептиди хлоропласта (СТР), що локалізують білки толерантності до гербіцидів в клітинах, відомі в цій галузі техніки, але ступінь ефективної субклітинної локалізації і процесингу для будь-якої комбінації СТР і білка толерантності до гербіциду важко спрогнозувати. Локалізація і процесинг визначають рівень експресії і функцію білка толерантності до гербіциду і, таким чином, впливають на фенотип толерантності до гербіциду трансгенної клітини, рослини або насінини, що містять зазначений білок. У трансгенних рослинах були проаналізовані різні СТР із застосуванням придатних білків толерантності до гербіцидів, включаючи дикамба-монооксигенази (ОМО) і протопорфіриногеноксидази (РРО).
Однак часто спостерігали слабкий або неповний процесинг і локалізацію білка. 0050) Цей винахід долає зазначені перешкоди, забезпечуючи нові молекули рекомбінантної
ДНК, здатні забезпечити поліпшену локалізацію і процесинг хлоропласта, а також композиції і способи їх застосування. Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом містять послідовність
ДНК, що кодує СТР, ї є функціонально зв'язаною з послідовністю ЮОМО або РРО. Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом забезпечують локалізацію хлоропласта ОМО або РРО і підвищену толерантність до гербіциду дикамба або РРО в рослинах, що містять молекули рекомбінантної ДНК. 0051 У деяких варіантах реалізації цього винаходу пропонуються молекули рекомбінантної
ДНК, що містять послідовність ДНК, яка кодує СТР, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1-3, ї функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, що кодує білок толерантності до гербіциду. У деяких варіантах реалізації цього винаходу пропонуються молекули рекомбінантної ДНК, що містять послідовності ДНК, які кодують СТР, як-от СТР, що 60 мають послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3, і функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, яка кодує білок ЮМО, наприклад, білок ЮМО, що має послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 18-27. У додаткових варіантах реалізації цього винаходу пропонуються молекули рекомбінантної ДНК, що містять послідовності ДНК, які кодують СТР, як-от СТР, що мають послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1-3, і функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, яка кодує білок
РРО, як-от білок РРО, що має послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 40- бо.
Молекули рекомбінантної ДНК 0052) В цьому контексті термін «рекомбінантний» відноситься до неприродної (-ого) ДНК, поліпептиду, білка, клітини, насінини або рослини, яка (-ий) є результатом генної інженерії і як така (-ий) зазвичай не зустрічається в природі, і яка (-ий) була створена в результаті втручання людини. «Рекомбінантна молекула ДНК» являє собою молекулу ДНК, що містить послідовність
ДНК, яка не зустрічається в природі, і як така є результатом втручання людини, наприклад, молекула ДНК, що складається з комбінації щонайменше двох молекул ДНК, гетерологічних одна одній. Прикладом рекомбінантної молекули ДНК є молекула ДНК, що кодує СТР, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3, ії функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, що кодує білок ОМО, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО : 18-27. Приклади білків ОМО наведені в Таблиці 1 нижче.
Таблиця 1
Дикамба-монооксигенази (МО)
БІЛОК
5ЕОІЮ ДНК 5ЕО ІЮ Довжина Прогнозоване | Прогнозоване | Прогнозоване Використання
МО Мо білка положення 2 | положення 3 |положення 112 кодонів 0053) Іншим прикладом рекомбінантної молекули ДНК є молекула ДНК, що кодує СТР, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3, і функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, що кодує білок РРО, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО : 40-60. Рекомбінантною клітиною, насіниною або рослиною є клітина, насінина або рослина, що містить трансгенну ДНК, наприклад, трансгенна клітина, насінина, рослина або частина рослини, що містить рекомбінантну молекулу ДНК за цим винаходом. Приклади білків РРО наведені в Таблиці 2 нижче.
Таблиця 2
Протопорфіриногеноксидази (РРО)
Білок Бактеріальна ДНК Дводольна Однодольна 5ЕО Ір МО: 5ЕО Ір МО оптимізована ДНК 5ЕО) оптимізована ДНК 5ЕО
І МО ІО МО нм | 453552 | - 64 1777777 /с783 17777171 96с1С нм | 45554 | 66 2 ющ РФ 76685... | --:/( .: 98 щ ЖР нм5о | 46,55 | (67 5 щ | 7786 | 9 нм Ї 47 | .ЮрД768 2 ющ | (78 | щ-Б мо Є ном | 48,56,59, | (6 (| 75687,92 | --:/. Л нМмлоЇ 49 ЇЇ 77771770. ї1..777171717178077177717171717111л021
МУНОРРОЇ 60 Ї 7777 нід//// | 77777 нд | 77 нд
ІЇ0054| Приклади послідовностей СТР, які можна застосовувати відповідно до цього винаходу, наведені в Таблиці З нижче.
Таблиця З
Транзитні пептиди хлоропласта (СТР) 11178,9 1 дводольний/
Ов ммМахуї /77777777771111111111Ї77171717171717611117171717171711717171717117 11111111 однодольний/
І0055| В цьому контексті термін «виділена молекула ДНК» означає, що молекула ДНК присутня окремо або в комбінації з іншими композиціями, але не знаходиться в своєму природному середовищі. Наприклад, молекула рекомбінантної ДНК, що містить послідовність, що кодує білок, і гетерологічну послідовність СТР, являє собою виділену молекулу ДНК, коли вона присутня в геномі трансгенної рослини, клітини або насінини, оскільки компоненти цієї молекули рекомбінантної ДНК знаходяться не в їхньому природному середовищі (тобто геномі організму, в якому кожен компонент був вперше виявлений). Молекула рекомбінантної ДНК, яка присутня в геномі трансгенної рослини, являє собою виділену молекулу ДНК за тієї умови, що молекула рекомбінантної ДНК не була природним чином виявлена в цьому геномі рослини і тому є виділеною з її природного навколишнього середовища.
І0О56) В цьому контексті термін «генна інженерія» відноситься до створення ДНК, білка або організму, які зазвичай не зустрічаються в природі, за допомогою втручання людини. Генну інженерію можна використовувати для отримання ДНК, поліпептиду, білка, клітини, насінини або рослин, які були сконструйовані і створені в лабораторії із застосуванням одного або більшої кількості методів біотехнології, як-от молекулярна біологія, біохімія білків, бактеріальна трансформація і трансформація рослин. Наприклад, генну інженерію можна використовувати для створення химерного гена, що містить молекулу ДНК, яка кодує СТР, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3, і функціонально зв'язану з білком ОМО, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 18-27, і необов'язково може додатково містити гетерологічний промотор, функціональний в клітині рослини. В іншому прикладі, генну інженерію можна використовувати для створення химерного гена, що містить молекулу ДНК, яка кодує СТР, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 1-3, і функціонально зв'язану з білюом РРО, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 40-60, і необов'язково може додатково містити гетерологічний промотор, функціональний в клітині рослини. Такий химерний ген може бути отриманий за допомогою одного або більшої кількості методів молекулярної біології, як-от клонування генів, лігування ДНК і синтез ДНК.
І0057| Термін «трансгени» відноситься до молекули ДНК, штучно вбудовується в геном організму в результаті втручання людини, наприклад, за допомогою способів трансформації рослин. В цьому контексті термін «трансгенний» означає, що включає трансген, наприклад, термін «трансгенна рослина» відноситься до рослини, що містить трансгени в своєму геномі, а термін «трансгенна ознака» відноситься до характеристики або фенотипу, вираженому або наданому присутністю трансгена, вбудованого в геном рослини. В результаті таких геномних змін трансгенна рослина є чимось значно відмінним від спорідненої рослини дикого типу, а трансгенна ознака являє собою ознаку, яка природним чином не виявляється у рослини дикого типу. Трансгенні рослини за цим винаходом містять рекомбінантну молекулу ДНК, запропоновану в цьому винаході. 0058) В цьому контексті термін «гетерологічний» відноситься до взаємозв'язку між двома або більше матеріалами, отриманими з різних джерел і, таким чином, зазвичай, не пов'язаними в природі. Наприклад, білок ОМО є гетерологічним по відношенню до функціонально зв'язаного
СТР, якщо така комбінація зазвичай не зустрічається в природі. В іншому прикладі рекомбінантна молекула ДНК, що кодує СТР, функціонально зв'язаний з білююм ЮОМО, є гетерологічною по відношенню до функціонально зв'язаного промотору, який є функціональним в клітині рослини, якщо така комбінація зазвичай не зустрічається в природі. Конкретна рекомбінантна молекула ДНК також може бути гетерологічною по відношенню до клітини, насінини або організму, в який вона вставлена, коли вона не буде зустрічатися в природному середовищі в цій конкретній клітині, насінині або організмі. 0059) В цьому контексті термін «молекула ДНК, що кодує білок» або «молекула ДНК, що кодує поліпептид» відноситься до молекули ДНК, що кодує білок або поліпептид, як-от білок або поліпептид, для забезпечення толерантності до гербіцидів або боротьби з комахами. Термін «послідовність ДНК, що кодує білок» або «послідовність, що кодує поліпептид» означає послідовність ДНК, яка кодує білок або поліпептид. «Послідовність» означає послідовне розташування нуклеотидів або амінокислот. Межі послідовності, що кодує білок, або послідовності, що кодує поліпептид, зазвичай визначаються стартовим кодоном трансляції на
Б-кінці і стоп-кодоном трансляції на 3'-кінці. Молекула, що кодує білок, або молекула, що кодує поліпептид, може містити послідовність ДНК, що кодує білкову або поліпептидну послідовність.
В цьому контексті термін «експресія трансгена», «експресування трансгена», «експресія білка», «експресія поліпептиду», «експресування білка» і «експресування поліпептиду» означає продукування білка або поліпептиду в процесі транскрипції молекули ДНК в матричну РНК (МРНК) і трансляції мРНК в поліпептидні ланцюги, які можуть бути насамкінець згорнуті в білки.
Молекула ДНК, що кодує білок, або молекула ДНК, що кодує поліпептид, може бути функціонально зв'язана з гетерологічним промотором в конструкції ДНК, для застосування в експресії білка або поліпептиду в клітині, трансформованій рекомбінантною молекулою ДНК. В цьому контексті термін «функціонально зв'язаний» означає дві молекули ДНК, зв'язані таким чином чином, що одна молекула може впливати на функцію іншої. Функціонально зв'язані молекули ДНК можуть бути частиною однієї безперервної молекули і можуть бути чи не бути суміжними. Наприклад, промотор є функціонально зв'язаним з молекулою ДНК, що кодує білок, або молекулою ДНК, що кодує поліпептид, в конструкції ДНК, де дві молекули ДНК розташовані таким чином, що промотор може впливати на експресію трансгена.
І0060| Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом включають послідовність ДНК, що кодує ЮМО, і є функціонально зв'язаною з послідовністю СТР. В цьому контексті термін «дикамба-монооксигеназа» або «ЮОМО» означає оксигеназу, здатну ферментативно каталізувати деградацію дикамби (3,б-дихлор-о-анізинова кислота) до 3,б-дихлорсаліцилової кислоти (3,6-ОС5А), як-от дикамба-монооксигеназу, що кодується геном деметилази (МО) з іепоїгорпотопах5 тайорпїййа. Дикамба-монооксигенази відомі в цій галузі техніки і включають білкові послідовності, представлені як ЗЕО ІЮ МО: 18-27, та ідентифіковані в Таблиці 1.
І0061| Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом включають послідовність ДНК, що кодує РРО, і є функціонально зв'язаною з послідовністю СТР. В цьому контексті термін «протопорфіриногеноксидаза» або «РРО» означає оксидазу, здатну ферментативно перетворювати протопорфіриноген ІХ в протопорфірин ІЇХ. Протопорфіриногеноксидази відомі в 60 цій галузі техніки і включають білкові послідовності, представлені у вигляді 5ЕО ІЮ МО: 40-60, та ідентифіковані в Таблиці 2.
І0062| Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом включають послідовність ДНК, що кодує послідовність СТР, і є функціонально зв'язаною із запропонованими в цьому винаході молекулами ДНК, що кодують білок, за допомогою чого СТР полегшує локалізацію рекомбінантної білкової молекули всередині клітини. СТР також відомі в цій галузі техніки як сигнальні послідовності, послідовності націлювання, пептиди націлювання та послідовності локалізації. Хлоропласти також відомі в цій галузі техніки як пластиди. Сприяючи локалізації білка всередині клітини, СТР забезпечує локалізацію білка в хлоропласті для оптимальної активності ферменту і може збільшити накопичення рекомбінантного білка і захистити білок від протеолітичного розщеплення. Процес, при якому СТР типово відщеплюється від білка при транслокації в хлоропласт, також називається процесингом. Процесинг СТР може бути повним (це означає, що повний СТР в ідщеплюється від амінотермінального кінця білка), неповним (це означає, що одна або більша кількість амінокислот СТР залишаються на амінотермінальному кінці білка), або призводить до видалення однієї або більшої кількості амінокислот з амінотермінального кінця білка. Повний процесинг СТР з білка МО підвищує рівень накопичення білка, тим самим підвищуючи толерантність до дикамби і знижуючи рівні ураження в трансгенних клітинах, насінні або організмі після застосування гербіциду. СТР представлені як
ЗЕО ІЮ МО: 1-6 і 38 та ідентифіковані в Таблиці 3. Послідовність ДНК, що кодує кожний СТР, оптимізований для експресії в дводольних і однодольних, представлена як 5ЕО ІЮ МО: 7-17 і 39. 0063) Рекомбінантні молекули ДНК відповідно до цього винаходу можуть бути синтезовані і модифіковані за допомогою способів, відомих в цій галузі техніки, повністю або частково, особливо там, де бажано отримати послідовності, придатні для маніпуляцій з ДНК (як-от сайти розпізнавання рестрикційних ферментів або сайти клонування на основі рекомбінації), послідовності, які більш бажані по відношенню до рослини (наприклад, використання кодонів рослин або консенсусних послідовностей Козак), або послідовності, придатні для конструювання конструкції ДНК (як-от спейсерні або лінкерні послідовності). Молекули рекомбінантної ДНК за цим винаходом включають вироджені послідовності ДНК, які кодують ту ж амінокислотну послідовність, що і послідовність ДНК, представлена в цьому винаході.
Вироджені послідовності ДНК можна отримати за допомогою способів, відомих в цій галузі техніки, і таблиці кодонів ДНК. Цей винахід включає в себе рекомбінантні молекули ДНК і білки, що мають щонайменше 8595 ідентичності послідовності, щонайменше 9095 ідентичності послідовності, щонайменше 9595 ідентичності послідовності, щонайменше 9695 ідентичності послідовності, щонайменше 9795 ідентичності послідовності, щонайменше 9895 ідентичності послідовності, і щонайменше 9995 ідентичності послідовності з будь-якою з рекомбінантних молекул ДНК або поліпептидних послідовностей, представлених в цьому винаході. Наприклад, молекула рекомбінантної ДНК за цим винаходом може містити послідовність ДНК, що має щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97965, щонайменше 9895, щонайменше 9995, або 10095 ідентичності послідовності з послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 7-14 або послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 28-37 і 61-102. Молекула рекомбінантної ДНК за цим винаходом може кодувати послідовність білка, що має щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895, щонайменше 9995 або 10095 ідентичності послідовності з послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕЕО ІЮО МО: 1-3; або з послідовністю, обраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 18-27 і 40-59. (0064) В цьому контексті термін «відсоток ідентичності послідовності» або «95 ідентичності послідовності» відноситься до відсотку ідентичних нуклеотидів або амінокислот в еталонній ( «запит») лінійній полінуклеотидній або поліпептидній послідовності (або її комплементарному ланцюці) в порівнянні з тестовою ( «суб'єкт») послідовністю (або в її комплементарному ланцюзі), коли дві послідовності оптимально вирівняні (з відповідними нуклеотидними або амінокислотними вставками, делеціями або пробілами, що становлять менше 20 процентів еталонної послідовності у вікні порівняння). Оптимальне вирівнювання послідовностей для вирівнювання вікна порівняння добре відоме фахівцям в цій галузі техніки і може бути виконане за допомогою таких інструментів, як алгоритм локальної гомології Сміта і Уотермана, алгоритм вирівнювання гомології Нідлмана і Вунша, спосіб пошуку схожості Пірсона та Ліпмана, а також за допомогою комп'ютеризованих реалізацій цих алгоритмів, як-от ЗАР, ВЕ5ТРЇІТ, ЕА5ЗТА і
ТЕА5ТА, які доступні в складі пакету програмного забезпечення бедциепсе Апаїубії ССОФ
УмМі5сопзіп РасКадефФ (Ассеїгу5 Іпс., Сан-Дієго, Каліфорнія), МЕ САЇїЇЇдп (ОМАзаг, Іпс., 1228 5.
Рагк 51, Мадізоп, У 53715), і МОСС Е (версія 3. 6) (Еддаг, Мисієвїс Асіаз Кезеагсп 32 (5): 1792- бо 7, 2004) з параметрами за замовчуванням. «Частка ідентичності» для вирівняних сегментів тестової послідовності та еталонної послідовності являє собою кількість ідентичних компонентів, які є загальними для двох вирівняних послідовностей, поділену на загальну кількість компонентів в сегменті еталонної послідовності, тобто всю еталонну послідовність або меншу певну частину еталонної послідовності. Відсоток ідентичності послідовності представлений як частка ідентичності, помножена на 100. Порівняння однієї або більшої кількості послідовностей може проводитися з повнорозмірною послідовністю або її частиною, або довшою послідовністю. 0065) В цьому контексті термін «конструкція ДНК» являє собою рекомбінантну молекулу
ДНК, що містить дві або більшу кількість гетерологічних послідовностей ДНК. Конструкції ДНК є придатними для експресії трансгена і можуть бути включені у вектори і плазміди. Конструкції
ДНК можуть бути застосовані у векторах з метою трансформації, що являє собою введення гетерологічної ДНК в клітину-хазяїна, для отримання трансгенних рослин і клітин, і як такі можуть також міститися в пластидній ДНК або геномній ДНК трансгенної рослини, насінини, клітини або частини рослини. В цьому контексті термін «вектор» означає будь-яку рекомбінантную молекулу ДНК, яку можна застосувати для трансформації рослини.
Рекомбінантні молекули ДНК, як зазначено в переліку послідовностей, можуть бути, наприклад, вставлені у вектор як частина конструкції, що має рекомбінантну молекулу ДНК, функціонально зв'язану з елементом експресії гена, який функціонує в рослині, з метою впливу на експресію білка, кодованого рекомбінантною молекулою ДНК . Способи конструювання конструкцій ДНК і векторів добре відомі в цій галузі техніки. Компоненти конструкції ДНК або вектора, що містить конструкцію ДНК, зазвичай включають, але не обмежуються ними, один або більшу кількість з наступних елементів: промотор для експресії функціонально зв'язаної ДНК, функціонально зв'язану молекулу ДНК, що кодує білок, і 3''область, що не транслюється. Елементи експресії генів, придатні для реалізації цього винаходу, включають, але не обмежуються ними, один або більшу кількість елементів наступного типу: промотор, 5'-область, що не транслюється, енхансер, лідер, елемент, який діє у цис-положенні, інтрон, 3'єобласть, що не транслюється, і один або більшу кількість селективних маркерних трансгенів.
І006б| Зазначені конструкції ДНК за цим винаходом можуть включати промотор, функціонально зв'язаний з молекулою ДНК, що кодує білок і запропонована в цьому винаході,
Зо за допомогою чого промотор стимулює експресію молекули рекомбінантного білка. Промотори, які застосовуються при реалізації цього винаходу, включають ті, які функціонують в клітині для експресії функціонально зв'язаного полінуклеотиду, наприклад, промотор бактерії або рослини.
Промотори рослини різноманітні і добре відомі в цій галузі техніки і включають ті, які є індуцибельними, вірусними, синтетичними, конститутивним, регульованими за часом, регульованими в просторі і/або регульованими за часом і в просторі.
І0067| В цьому контексті термін «негативний контроль» і «позитивний контроль» означає експериментальний контроль, призначений для цілей порівняння. Наприклад, рослина з групи негативного контролю або рослина з групи позитивного контролю в аналізі трансгенної рослини може являти собою рослину того ж типу, що й експериментальна рослина (рослина, що тестується), але яка не містить трансгенної вставки, рекомбінантної молекули ДНК або конструкції ДНК експериментальної рослини. Прикладом контрольної рослини, придатної для порівняння з трансгенними рослинами кукурудзи, є нетрансгенна кукурудза І Н244 (патент США
Моб252148), або нетрансгенна кукурудза 010КО2 (патент США Ме7166779); для порівняння з трансгенними рослинами сої - нетрансгенна соя АЗ555 (патент США Мо7700846), або нетрансгенна соя АЗ244 (патент США Мо5659114, РМР 9600246); для порівняння з трансгенними рослинами каноли або Вгах5зіса пари5 - різновид 65037 лінії Кев5іогег нетрансгенної Вгаввзіса пари5; для порівняння з трансгенними рослинами пшениці - зародкова плазма затвзоп (РУР 1994) різновиду нетрансгенної пшениці; а для порівняння з трансгенними рослинами бавовнику - нетрансгенна ОРЗ393 (патент США Мо6930228 РУР 200400266).
Трансгенні рослини
І0068| Аспект цього винаходу включає трансгенні рослинні клітини, трансгенні рослинні тканини, трансгенні рослини і трансгенне насіння, що містять рекомбінантні молекули ДНК, запропоновані в цьому винаході. Ці клітини, тканини, рослини і насіння, що містять рекомбінантні молекули ДНК, демонструють толерантність до гербіцидів.
І0069)| Вставку трансгенної ДНК (відомої як «трансген») в геном рослини можна здійснити шляхом трансформації рослини, що призводить до створення нової трансгенної геномної молекулярної послідовності, відомої як «трансформант». Кожен трансформант є унікальним, і певна послідовність ДНК трансформанта є специфічною для певного трансформанта.
Відповідні способи трансформації клітин рослини-хазяїна для застосування в цьому винаході 60 включають практично будь-який спосіб, за допомогою якого ДНК може бути введена в клітину
(наприклад, коли конструкція рекомбінантної ДНК стабільно інтегрується в хромосому рослини) і який добре відомий в цій галузі техніки. Конструкція рекомбінантної ДНК, що застосовується в ілюстративних способах введення конструкції рекомбінантної ДНК в рослини, включає системи трансформації Адгорасієегішт і бомбардування частинками ДНК, обидві з яких добре відомі фахівцям ов цій галузі техніки. Іншим ілюстративним способом введення конструкції рекомбінантної ДНК в рослини є вбудовування конструкції рекомбінантної ДНК в геном рослини у заздалегідь визначеному місці за допомогою способів сайт-спрямованої інтеграції. Сайт- спрямована інтеграція може бути виконана за допомогою будь-якого способу, відомого в цій галузі техніки, наприклад, із застосуванням нуклеаз із цинковими пальцями, сконструйованих або нативних мегануклеаз, ТАЇ Е-ендонуклеаз або ендонуклеаз з РНК-управлінням (наприклад, системи СКІЗРЕ/Са59). Трансгенні рослини потім можуть бути регенеровані з трансформованої рослинної клітини за допомогою методів культивування рослинних клітин. Трансгенна рослина, гомозиготна за трансгеном (тобто має дві алельних копії певного трансгена), може бути отримана шляхом самозапилення (самозапліднення) трансгенної рослини, яка містить єдиний алель трансгена, наприклад, рослина КО, з метою отримання насіння КІ. Одна четверта частина отриманого насіння К1 буде гомозиготною за трансгеном. Рослини, вирощені з насіння
К1, що проростає, можуть бути протестовані на зиготність, як правило, за допомогою аналізу
ЗМР, секвенування ДНК або аналізу термічної ампліфікації, що дозволяє розрізняти гетерозиготи і гомозиготи, і називається аналізом зиготності. 0070) Рослини, насіння, частини рослин, тканини рослин і клітини, запропоновані в цьому винаході, виявляють толерантність до гербіциду дикамба. Дикамбу можна вносити на ділянку проростання рослин, що містить рослини і насіння, запропоновані в цьому винаході, як спосіб боротьби з бур'янами, включаючи запобігання росту бур'янів. Рослини і насіння, запропоновані в цьому винаході, містять ознаку толерантності до гербіциду, і як такі є толерантними до застосування дикамби. Може бути рекомендовано застосування гербіциду в комерційній кількості (1Х), або в будь-якій її частині, або в будь-якій її кратності, як-от в два рази більше ніж рекомендована комерційна кількість (2Х). Кількість дикамби, що застосовується, може бути виражена у вигляді кислотного еквівалента на фунт на акр (фунт к.е./акр) або кислотного еквівалента на грам на гектар (грам к.е./га). Ділянка проростання рослин може містити або не
Зо містити бур'яни під час застосування гербіциду. Гербіцидно-ефективна доза дикамби для застосування на ділянці з метою боротьби з бур'янами повинна становити від близько 0,1Х до близько ЗОХ кількості, зазначеної на етикетці, протягом вегетаційного періоду. 1Х кількість, вказана на етикетці дикамби, становить 0,5 фунта к.е./акр. Кількості гербіцидів можуть бути перетворені між англійським і метричних виміром наступним чином: (фунт аї/акр) " 1,12 - (кг аі/га) і (кг аі/га) 7 0,89 - (фунт аї/акр).
І0071| Рослини, насіння, частини рослин, тканини рослин і клітини можуть проявляти толерантність до одного або більшої кількості інгібіторів РРО, що називаються гербіцидами
РРО. Один або більшу кількість гербіцидів РРО можна вносити на ділянку проростання рослин, що містить рослини і насіння, запропоновані в цьому винаході, як спосіб боротьби з бур'янами, включаючи запобігання росту бур'янів. Рослини і насіння, запропоновані в цьому винаході, містять ознаку толерантності до гербіциду, і як такі є толерантними до застосування одного або більшої кількості гербіцидів РРО. Може бути рекомендовано застосування гербіциду в комерційній кількості (1Х), або в будь-якій її частині, або в будь-якій її кратності, як-от в два рази більше ніж рекомендована комерційна кількість (2Х). Ділянка проростання рослин може містити або не містити бур'яни під час застосування гербіциду. Гербіцидно-ефективна доза гербіциду
РРО для застосування на ділянці з метою боротьби з бур'янами повинна становити від близько 01Х до близько ЗОХ кількості, зазначеної на етикетці, протягом вегетаційного періоду.
Гербіциди РРО добре відомі в цій галузі техніки і є комерційно доступними. Приклади гербіцидів
РРО включають, але не обмежуються ними, дифенілові ефіри (як-от адифлуорфен, його солі та складні ефіри, аклоніфен, біфенокс, його солі та складні ефіри, етоксифен, його солі та складні ефіри, фторнітрофен, фурілоксифен, галогенофен, хлометоксифен, фторглікофен , його солі та складні ефіри, лактофен, його солі та складні ефіри, оксифлуорфен і фомеафен, його солі та складні ефіри); тіадіазоли (як-от флутіацет-метил і тидіазимін); піримідиндіони або фенілурацили (як-от бензфендізон, бутафенацил, етил (|З-2-хлор-4-фтор-5- (1-метил-6- трифторметил-2,4- діоксо-1,2,3,4-тетрагідропірімідін-З-іл)у фенокси| -2-піридилокси| ацетат (має реєстраційний номер СА5 353292-31-6 і згадується в цьому документі як 5-3100), рлупропацил, сафлуфенацил і тіафенацил); фенілпіразоли ( як-от флюазолат, пірафлуфен і пірафлуфен- етил); оксадіазоли (як-от оксадіаргіл і оксадіазон); тріазолінони (як-от азафенідин, бенкарбазон, карфентразон, його солі та складні ефіри і сульфантразон); оксазолідиндіони (як-от бо пентоксиназон); М-фенілфталіміди (як-от цінідон-етил, флумікларат, флуміхлорак-пентил і флуміоксазин); похідні бензоксазинону (як-от 1,5-диметил-б-тіоксо-3- (2,2,7-трифлуоро-3,4- дигідро-3-оксо-4-проп-2-ініл-2ІН-1,4-бензоксазин-б-іл) -1,3,5-триазин-2,4-діон); флуфенпір і флуфенпір-етил; піраклоніл; і профлуазол. 0072) Застосування гербіцидів може бути послідовним або гербіцид може бути змішаний в цистерні з одним, двома або комбінацією декількох гербіцидів або будь-яким іншим сумісним гербіцидом. Багаторазове застосування одного гербіциду, або двох або більше гербіцидів, в комбінації або окремо, може бути використано протягом вегетаційного періоду на ділянках, що містять трансгенні рослини згідно з цим винаходом, для боротьби з широким спектром дводольних бур'янів, однодольних бур'янів або тих і тих, наприклад, два застосування (як-от застосування перед посадкою рослин і застосування після появи сходів, або застосування перед появою сходів і застосування після появи сходів), або три застосування (як-от застосування для перед посадкою рослин, застосування перед появою сходів і застосування після появи сходів, або застосування перед появою сходів і два застосування після появи сходів). 0073) В цьому контексті термін «толерантність» або «толерантність до гербіцидів» означає здатність рослини, насінини або клітини протистояти токсичному впливу гербіциду при його внесенні. Толерантність до гербіциду рослини, насінини, тканини рослини, частини рослини або клітини можна виміряти, порівнюючи рослину, насінину, тканину рослини, частину рослини або клітину з відповідним експериментальним контролем. Наприклад, толерантність до гербіцидів можна виміряти або оцінити шляхом нанесення гербіциду на рослину, що містить рекомбінантну молекулу ДНК, що кодує білок, здатний надавати толерантність до гербіциду (рослина, що тестується), і на рослина того ж виду, що не містить рекомбінантну молекулу ДНК, що кодує білок, здатний надавати толерантність до гербіциду (рослина з групи негативного контролю), а потім порівняти ураження двох рослин, при цьому на толерантність до гербіциду рослини, що тестується, вказує зниження показника ураженості в порівнянні з показником ураженості рослини з групи негативного контролю. Гербіцидно-толерантна рослина, насінина, тканина рослини, частина рослини або клітини виявляють зменшену відповідь на токсичні ефекти гербіциду в порівнянні з рослиною, насіниною, тканиною рослини, частиною рослини або клітиною з групи негативного контролю. В цьому контексті термін «ознака толерантності до
Зо гербіциду» являє собою трансгенну ознаку, що надає рослині поліпшену толерантність до гербіциду в порівнянні з рослиною з групи негативного контролю.
І0074| Трансгенні рослини, потомство, насіння, клітини рослин і частини рослин згідно з цим винаходом можуть також містити одну або більшу кількість додаткових трансгенних ознак.
Додаткові трансгенні ознаки можуть бути внесені шляхом схрещування рослини, що містить трансген, який містить рекомбінантні молекули ДНК, запропоновані в цьому винаході, з іншою рослиною, що містить додаткову трансгенну ознаку (ознаки). В цьому контексті термін «схрещування» означає розмноження двох окремих рослин для отримання потомства рослин.
Таким чином, дві трансгенних рослини можуть бути схрещені для отримання потомства, яке містить трансгенні ознаки. В цьому контексті термін «потомство» означає потомство будь-якого покоління батьківської рослини, при цьому трансгенне потомство містить конструкцію ДНК, запропоновану в цьому винаході, успадковану, щонайменше, від однієї батьківської рослини. В альтернативному варіанті, додаткова трансгеннаознака (ознаки) може бути введена шляхом спільної трансформації конструкції ДНК для цієї додаткової трансгенної ознаки (ознак) з конструкцією ДНК, що містить рекомбінантні молекули ДНК, запропоновані в цьому винаході (наприклад, з усіма конструкціями ДНК, представленими як частина того ж вектора, що застосовується для трансформації рослин) або шляхом введення додаткової ознаки (ознак) в трансгенну рослину, що містить конструкцію ДНК, запропоновану в цьому винаході, або навпаки (наприклад, застосовуючи будь-який зі способів трансформації рослин до трансгенних рослин або клітини рослини). Такі додаткові трансгенні ознаки включають, але не обмежуються ними: підвищену резистентність до комах, підвищену ефективність використання води, підвищену врожайність, підвищену стійкість до посухи, підвищену якість насіння, поліпшені поживні якості, продукцію насіння гібрида, а також толерантність до гербіцидів, при цьому ознака вимірюється в порівнянні з рослиною дикого типу. Такі додаткові трансгенні ознаки відомі фахівцям в цій галузі техніки; наприклад, перелік таких ознак надається Службою інспекції здоров'я тварин і рослин (АРНІЗ) Міністерства сільського господарства США (О5ОА).
І0075| Трансгенні рослини і потомство, які містять трансгенну ознаку, запропоновану в цьому винаході, можуть бути використані з будь-якими способами схрещування, які широко відомі в цій галузі техніки. У лініях рослин, що містять дві або більшу кількість трансгенних ознак, трансгенні ознаки можуть бути незалежно сегрегуючими, зчепленими або комбінацією бо обох в лініях рослин, що містять три або більшу кількість трансгенних ознак. Розглядається також зворотне схрещування з батьківською рослиною, і схрещування з нетрансгенною рослиною, а також вегетативне розмноження. Описи способів схрещування, які зазвичай застосовуються для різних ознак і культур, добре відомі фахівцям в цій галузі техніки. Для підтвердження присутності трансгенас-ів) в конкретній рослині або насінині може бути виконано безліч аналізів. Такі аналізи включають, наприклад, молекулярно-біологічні аналізи, як-от саузерн- і нозерн- блотинги, ПЛР та секвенування ДНК; біохімічні аналізи, як-от виявлення присутності білкового продукту, наприклад, імунологічними способами (ІФА і вестерн-блоти) або за допомогою ферментної функції; аналізи частини рослин, як-от аналіз листя або коріння; а також аналіз фенотипу всієї рослини. Для аналізу процесингу СТР в конкретній трансгенній рослині або насінині аналізи, як-от розщеплювальне секвенування за Едманом або аналіз мас- спектрометрії, можуть бути виконані на рекомбінантному біль»л- ОМО або РРО, отриманому з трансгенної клітини, рослини або насінини, а отримані в результаті дані послідовності порівнювали з даними білка ОМО або РРО, відповідно.
І0076) Інтрогресія трансгенної ознаки в генотип рослини досягається в результаті процесу конверсії зворотного схрещування. Генотип рослини, в який була інтрогресована трансгеннай ознака, можна назвати перетвореним за допомогою зворотного схрещування генотипом, лінією, інбредом або гібридом. Генотип рослини, в який була інтрогресована трансгеннай ознака, можна назвати не перетвореним за допомогою зворотного схрещування генотипом, лінією, інбредом або гібридом.
І0077| В цьому контексті термін «що містить» означає «що включає, але не обмежується цим».
Приклади 0078) Наступні приклади включені для демонстрації варіантів реалізації цього винаходу.
Фахівцям в цій галузі техніки повинно бути зрозуміло, в світлі цього опису, що в конкретних запропонованих варіантах реалізації цього винаходу можна зробити багато змін, при цьому як і раніше буде отриманий подібний або аналогічний результат, без відхилення від обсягу і концепції винаходу. Більш конкретно, буде очевидно, що деякі агенти, які є хімічно або фізіологічно спорідненими, можуть бути замінені на описані в цьому документі агенти з отриманням такого ж або подібного результату. Всі такі подібні заміни і модифікації, очевидні
Зо фахівцям в цій галузі техніки, вважаються такими, що виходять за межі обсягу і концепції цього винаходу.
Приклад 1. Експресія СТР-ОМО і локалізація в протопластах сої
І0079| Аналіз протопластів сої застосовували для оцінки відносної ефективності націлювання хлоропласта рекомбінантного білка, що містить один з п'яти СТР, функціонально зв'язаних з послідовністю ОМО (5БО ІЮ МО: 27). Для контролю розподілу цитозоля і хлоропласта рекомбінантного білка, в касету, що кодує рекомбінантну комбінацію СТР ії ОМО (позначену в цьому документі як СТР-ОМО), додавали послідовність, що кодує зелений флуоресцентний білок, в результаті чого зелений флуоресцентний білок зливався з карбокситермінальним кінцем ОМО.
І0080| Протопласти отримували із сім'ядоль бобів (зародкова плазма АЗ3244). Збирали незрілі насіннєві стручки сої, і насіння (довжиною 4-6 мм) видаляли за допомогою стерильних методик. Сім'ядолі з кожної насінини видаляли вручну, поперечно нарізали на шматочки товщиною 1 мм та інкубували в буфері СРУМ (рН 5,8) з 0,7 М маніту протягом 1 години при 24- 26( С в темряві при струшуванні при 40 об/хв. Потім буфер видаляли і замінювали на ферментний буфер (495 целюлаза ополиКка" К-10, 295 геміцелюлаза, 0,395 макерозим К-10, в буфері СРУМ (рН 5,8, з 0,49 М маніту). Тканину сім'ядолі інкубували на ротаційному шейкері при об / хв при 24-26(С протягом 2 годин. В кінці цієї інкубації протопласти сої вивільняли з тканини сім'ядолей, вручну здійснюючи вихрові рухи пластинки і фільтруючи суспензію через подвійний шар з нейлонової сітки 60 мкм в конічну пробірку об'ємом 50 мл. Протопласти 50 обережно один раз промивали з подальшим ресуспендування і центрифугуванням. Кінцевий осад ресуспендували в буфері (4 мМ МЕЗ5, рн 5,7, 150 мМ Масі, 5 мм Сасіг, 0,5 М маніту) і залишали на 1 годину на льоду. Потім протопласти центрифугировали, а осад ресуспендували в буфері для трансформації (0,4 М манітолу, 15 мМ МосСі2, 4 мМ МЕ5, рН 5,7). Об'єм коректували для отримання 1 х 10 000 000 протопластів / мл. Трансформацію здійснювали шляхом змішування 12,5 мкг ДНК для кожної конструкції. ДНК акуратно об'єднували з 1,5 х 1 000 000 протопластів з подальшим додаванням еквівалентного об'єму ПЕГ-буфера. Суміш інкубували протягом 5 хвилин, потім повільно розбавляли 300 мкл буфера М/5 (154 мМ Масі, 125 мм Сасіг; 5 мМ КС; 2 мМ МЕЗ5, рН 5,7). Суміш інкубували 5-10 хвилин і потім повільно додавали 900 мкл буфера УУ5. Протопласти осаджували і ресуспендували в буфері УМІ (0,5 М бо маніту, 4 мМ МЕЗ (рН 5,7), 20 мМ КС) і інкубували при температурі 24-26(С в темряві.
Мікроскопічний аналіз проводили із застосуванням лазерного скануючого мікроскопа 27еїі55
ІЇ5М510 МЕТА (Сагі 7еїв5 МісгоІтадіпд, Іпс., Торнвуд, штат Нью-Йорк), оснащеного криптон- аргоновим іонним (458, 488 нм) лазером, зеленим (543 нм) гелій-неоновим лазером і набором червоних фільтрів РІТС і Теха5. Отримання і аналіз зображень виконували за допомогою 2ЕМ 2012 м. 8. 1 (Сап 7евів5 МісгоІтадіпо, Іпс., Торнвуд, штат Нью-Йорк) і 40Х водного 1.2 світлосильного об'єктива. Довжини хвиль збудження, що використовувалися, становили 488 нм (СЕР) їі 543 нм (автофлуоресценція хлоропласта), а емісійні фільтри були 500-530 нм (СЕР) і 630-700 нм (автофлуоресценція хлоропласта). У кожній конструкції оцінювали щонайменше 50 окремих клітин на предмет локалізації конструкції: цитозоль, пластида, або і цитозоль і пластида. Результати, які реєструвалися як відсоток клітин, що мають білок, локалізований в цитоплазмі або пластиді (або і в цитоплазмі і в пластиді) від загальної кількості проаналізованих клітин, наведені в Таблиці 4.
Таблиця 4
Аналіз націлювання на протопласти сої підрахованих клітин
АРОб(ЗЕОІЮ МОЇ) | 777777758.. | 0 1 юЮюж БМ 0 -.7.7ю717С| 10095
АІСВВВ(ЗЕОІр МОЗ) | 7777771753777717 110 777171717171с6б 117179
А 11111111 1771111175311171 11101 711111г1о6 | 7996 в ' 77777771 171171171754117 11017771 | 995
Є 11111171111111156111171 11011771 | 86 немає Ї7171717171755 | лоб6 | юю 077 ЇЇ о 0081) З п'яти проаналізованих комбінацій СТР-ОМО тільки АРОб СТР (ЗЕО ІЮ МО: 1) обумовлювала наявність 10095 клітин, що демонструють локалізацію білка виключно в пластиді.
АїСК88 СТР (ЗЕБЕО 10 МО: 3) обумовлювала наявність 9495 клітин, що демонструють локалізацію білка виключно в пластиді, і б9о клітин, що демонструють локалізацію білка в цитоплазмі і пластиді "А СТР обумовлювала наявність 7995 клітин, що демонструють локалізацію білка виключно в пластидах, і 2195 клітин, що демонструють локалізацію білка в цитоплазмі і пластиді "В СТР обумовлювала наявність 995 клітин, що демонструють локалізацію білка виключно в пластидах, і 9195 клітин, що демонструють локалізацію білка в цитоплазмі і пластидах. "С СТР обумовлювала наявність 1895 клітин, що демонструють локалізацію білка виключно в пластидах, і 8295 клітин, що демонструють локалізацію білка в цитоплазмі і пластидах. Без СТР, білок був присутній тільки в цитоплазмі. Ці результати вказують на те, що комбінація АРОбЄ СТР є ефективною для націлювання СТР-ОМО на пластиди на 10095, а Л.СК88 СТР є ефективною для націлювання СТР-ОМО на пластиди на 9496.
Приклад 2. Процесинг СТР-ОМО в трансгенній пшениці
Зо (0082) Трансгенні рослини пшениці, трансформовані конструкцією ДНК, що містить молекулу рекомбінантної ДНК, що кодує один з чотирьох окремих СТР, функціонально зв'язану з ОМО, застосовували для оцінки експресії білка і для визначення процесингу СТР.
І0083| Трансгенні рослини пшениці отримували за допомогою чотирьох різних векторів трансформації рослин, кожен з яких містив конструкцію ДНК, що містить один з чотирьох різних
СТР, функціонально зв'язану з ОМО, функціонально зв'язаного з промотором. Попередньо культивовані незрілі ембріони з пшениці зародкової плазми бЗатзоп (РМР 1994) трансформували із застосуванням Адгобрасіегішт їштеїасіеєп5 для отримання трансгенних паростків за допомогою способів, відомих фахівцям в цій галузі техніки. Зразки листя відбирали для молекулярного аналізу з метою підтвердження кількості копій трансгена в геномі кожного унікального трансформанта, при цьому рослини КО з однією копією трансгена самозапилювалися, після чого збирали насіння К1. (0084) Насіння (50 г) подрібнювали в порошок, який потім додавали в 250 мл екстракційного буфера (1 х ТВЕ (89 мм Тріс-борат, 2 мМ ЕДТК, рН 8,4), 200 мМ Масі, 1095 гліцерин, 1 мМ фенілметилсульфонілфторид ( РМ5БЕ), 5 мМ бензамідину, 2 мМ дитиотреїтолу (ОТТ), інгібітори протеази сОтрієїетМ (Коспе Оіадповійс5 Согрогайоп, Індіанаполіс, штат Індіана)) і гомогенізували за допомогою РоїуїгопФ (/М/К, Раднор, штат Пенсільванія) протягом близько 20 секунд, потім інкубували при струшуванні при 4(С протягом 1-2 годин. Суміш центрифугували при 4(С протягом 25 хв при 9000 об / хв і супернатант осаджували послідовно за допомогою
1095 ї 5595 насиченого сульфату амонію (А5Б), причому кожну стадію осадження центрифугировали при 18000 об / хв протягом 20 хвилин. Згусток з осаду 1095 А5 видаляли. 00851 Згусток з 10-5595 фракції розчиняли в 30 мл ФСБ (0,1 М фосфату натрію, 0,15 М Масі) з 1 таблеткою інгібіторів протеази сОтрієїеТМ. Розчинений згусток центрифугировали і супернатант фільтрували через мембрану 0,22 мкм. Сироватки з козячим поліклональним антитілом проти ЮОМО змішували з 1:1 суспензією білкової А/З агарозної смоли Ріегсе тм (Тпегтогєізспег Зсіепіййс, Гранд-Айленд, штат Нью-Йорк), через 1,5 години білкову А/5 агарозну смолу, навантажену анти-ЮСМО АБ, промивали З рази ФСБ і додавали до близько 30 мл 1095 - 5595 А5 фільтрованої фракції. Після інкубації смолу центрифугували і промивали З рази ФСБ, потім ресуспендували в 1 мл ФСБ і переносили в мікроцентрифужну пробірку і знову осаджували за допомогою центрифугування. (0086) Кінцевий згусток ресуспендували в буфері 2х І аеттії, кип'ятили протягом 5 хвилин і зразки проганяли в 1095 гелі ДСН-ПААГ в трис-гліциновому буфері при 185 В (постійний струм).
Білки в гелі ДСН-ПААГ переносили на РМУМОЕ-мембрану за допомогою буфера для перенесення
САРЗ протягом 30 хв при 4(С і 100 В. Білки, зв'язані з мембраною РОМЕ, фарбували блакитним
Кумассі протягом близько 30 секунд, а смугу, що відповідає кожному з білків ОМО в 1095 -5595
АБ фракції, вирізали з плями (блоту) РМОБ і застосовували для аналізу амінокінцевої послідовності білка. Амінокінцеве секвенування білка проводили за допомогою автоматизованого хімічного аналізу розщеплення за Едманом, причому кожен аналіз проводили протягом 15 циклів з використанням автоматизованого хімічного аналізу розщеплення за
Едманом. Для аналізу і контролю за допомогою програмного забезпечення Ргосізе Сопігої (версія 2. 1) (ТпегтоРізспег Зсіепійс, Гранд-Айленд, штат Нью-Йорк) застосовували систему секвенування Арріїеїй Віозубзієт5 494 РгосізеФ (Арріїей Віозузіет5 494 РгосізеФ Зедиепсіпд зузіет) з мікроградіентним насосом 140С і детектором РегКкіп ЕІтег серії 200 ОМЛ/5 (РегкКіп
ЕІтег бЗегіез 200 ШМЛ/і5 Реїесіог). Хроматографічні дані збирали за допомогою програмного забезпечення для аналізу секвенування білка бедцпепсеРгоФ (версія 2. 1). Ідентичність констатували для кожного білка, якщо спостерігали щонайменше 8 амінокислот, які узгоджуються з прогнозованою послідовністю очікуваного білка. Результати амінокінцевого секвенування наведені в Таблиці 5.
Таблиця 5
Амінокінцеве секвенування рекомбінантного білка що тестується
І0087| Ідентифікатори ОМО, ОМО «1, ОМО ч-- 10 їі ОМО «12 застосовували для позначення того, що в результаті секвенування білка на амінотермінальному кінці ОМО після процесингу залишалося 0, 1, 10 або 12 амінокислот СТР, відповідно. Ідентифікатор ОМО-1 застосовували для позначення того, що перший метіонін ОМО видалявся після процесингу. Два унікальних трансформанта тестували на предмет СТР АРОб (5ЕО ІЮО МО: 1), функціонально зв'язаної з
РМО (5ЕБЕО ІО МО: 18). Обидва зразки продемонстрували одну амінокислоту СТР, що залишилася на амінотермінальному кінці ОМО після процесингу (ОМО « 1). Два унікальних об'єкта аналізували на предмет АІ.С88 СТР (5ЕО ІЮ МО: 3), функціонально зв'язаної з ОМО (ЗЕО ІО МО: 18). Всі три зразки продемонстрували або відсутність, або одну амінокислоту СТР, що залишилася на амінотермінальному кінці ЮМО після процесингу (МО і ОМО я«1).
Трансформант, протестований з СТРА (5ЕО ІЮ МО: 4), функціонально зв'язаного з ОМО (5ЕО І
МО: 19), продемонстрував дванадцять амінокислот СТР, що залишилися на амінотермінальному кінці ОМО після процесингу (ОМО - 12). Два унікальних трансформанта тестували на предмет О5.УМаху СТР (ЗЕБЕО ІЮО МО: 6), функціонально зв'язаної з ОМО (5ЕО 10
МО: 18). Один зразок продемонстрував десять амінокислот СТР, що залишилися на амінотермінальному кінці ОМО після процесингу (ОМО « 10), ї один зразок продемонстрував видалення першого метіоніну ОМО після процесингу (ОМО-1). Ці результати вказують на те, що
СТР АРОб і АІ.СМК88 СТР ефективно процесуються з ЮМО при експресії в трансгенних рослинах.
Приклад 3. Експресія СТР-ОМО в трансгенній Вгаззіса пари (0088) Здатність конструкцій ДНК, що містять рекомбінантну молекулу ДНК, що кодує один з трьох окремих СТР, функціонально зв'язаний з ОМО, забезпечувати толерантність до дикамби, оцінювали за допомогою трансгенних рослин Вгаззіса парив.
І0089| Трансгенні рослини Вгаззіса париз отримували за допомогою трьох різних векторів трансформації рослин, кожен з яких містив конструкцію ДНК, що містить один з трьох різних
СТР, функціонально зв'язаний з ОМО, функціонально зв'язаного з промотором. Різновид 65037 лінії Кезіогег Вгаззіса пари5 застосовували для Адгобасіегіит-опосредкованої трансформації і вирощували рослини КО в теплиці. Унікальні трансформанти скринували на предмет числа копій трансгена. Рослини КО з однією копією трансгена піддавали самозапиленню, після чого збирали насіння К1.
І0090| Толерантність до дикамби оцінювали із застосуванням рослин КО з однією копією трансгена з векторним каркасом або двома копіями трансгена Толерантність до дикамби визначали при показнику ураженості 2095 рослини або менше, обумовленого дикамбою в умовах теплиці. Трансформантів КО в горщиках поділяли на три групи, а дикамбу (СіатшуфФ) застосовували в одній з трьох кількостей: (1) дикамбу не застосовували, (2) 1 фунт к.е./акр дикамби (кількість 2Х), або (3) 2 фунти к.е./акр дикамби (кількість 4Х). Трансгенні рослини обприскували, а оцінку ураженості проводили через 21 день. Рослини, що містять комбінацію "А" СТР, функціонально зв'язану з ОМО (ЗЕО ІЮ МО: 21), не продемонстрували будь-яких трансформантів, толерантних до дикамби. Рослини, що містять Крос СТР (ЗЕО ІЮО МО: 5), функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІЮО МО: 21), продемонстрували 8 з 9 трансформантів, що характеризуються толерантністю до дикамби в кількості 2Х, і 7 із 7 трансформантів, що характеризуються толерантністю до дикамби в кількості 4х. Рослини, що містять АРОб СТР (ЗЕБЕО ІО МО: 1), функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІЮ МО: 20), продемонстрували 7 із 14 трансформантів, що характеризуються толерантністю до дикамби в кількості 2Х, і 6 із 18 трансформантів, що характеризуються толерантністю до дикамби в кількості 4х. Результати наведені в Таблиці 6.
Таблиця 6
Толерантність рослин роду капусти (Вгаз5іса пари) КО до дикамби
Трансформанти з | Трансформанти з
СТР В) толерантністю до | толерантністю до 2х 4х (А(Конструкція7) 1 ЗБОЮ МО21 | --.( 0 ЇЇ 0
Зо І0091| Толерантність до дикамби оцінювали на рослинах КО з однією копією трансгена. У теплиці рослини обприскували дикамбою (Сіагігу) в кількості 1 фунт к.е./акр (кількість 2Х), а толерантність до дикамби оцінювали через 14-21 день. Рослини, що містять комбінацію АРОб
СТР, функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІО МО: 20), продемонстрували 13 трансформантів із 31, що характеризуються толерантністю до дикамби. Рослини, що містять Кбс5 СТР, функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІО МО: 21), продемонстрували 13 трансформантів із 17, що характеризуються толерантністю до дикамби. Рослини, що містять "А" СТР, функціонально зв'язану з ОМО (5БО ОО МО: 21), продемонстрували 7 трансформантів із 18, що характеризуються толерантністю до дикамби. Результати наведені в Таблиці 7.
Таблиця 7
Толерантність рослин роду капусти (Вгаз5іса пари) КО до дикамби
Трансформанти з (0092) Десять насінин від кожної із 28 рослин К1, що містять СТР АРОб, функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІЮО МО: 20) (АРОб я ОМО), і десять насінин від кожної із 17 рослин К1, що містять Кро5 СТР, функціонально зв'язану з ОМО (5ЕО ІЮ МО: 21) (Кро5 ї- ОМО), вирощували в теплиці. Рослини обприскували дикамбою в кількості 2 фунти к.е./акр (4Х) в день посадки, потім - 1 фунт к.е./акр (2Х) дикамби у фазі МУЗ і 1 фунт к.е./акр дикамби (2Х) при першому цвітінні (цвітіння визначали як » 9095 рослин, що мають бутони, і близько 2595 рослин, що мають щонайменше одну відкриту квітку). Оцінку ураженості проводили через сім днів після кожного обприскування і виражали у вигляді процентного показника ураженості в порівнянні з групами з контрольним обприскуванням. Серед рослин, що містять АРСб я ОМО, було в цілому 9 потомків від 2 трансформантів із показником ураженості дикамбою х 2095 в кожному з трьох періодів оцінки. Серед рослин, що містять Кро5 Ж- ОМО, зареєстровано 77 рослин серед 16 трансформантів з толерантністю до дикамби менше 2095 в кожному з трьох періодів оцінки. 0093) Білок характеризували із застосуванням листя, зібраного від трансформантів КО.
Тканину листя подрібнювали в рідкому азоті і екстрагували двома об'ємами 2х буфера Леммлі (Віокад, Геркулес, штат Каліфорнія), що містить 1095 2-меркаптоетанол і 5мММ ОТТ. Зразки кип'ятили і 10 мкл завантажували в 4-2095 готовий гель Стійегіоп "м (ВіоКкайд, Геркулес, штат
Каліфорнія) і аналізували в буфері Трис/гліцин/505 при 250 В протягом 45 хвилин. Білок в гелі переносили на мембрану РМОЕЄ при 400 мА протягом 30 хвилин в буфері Трис/гліцин, що містить 2095 метанолу. Білок ЮОМО виявляли із застосуванням поликлональної кролячої антисироватки анти-0МО і НЕКР-кон'югованого анти-кролячого вторинного антитіла. Сигнал виявляли із застосуванням хемілюмінесцентного набору Зирегбідпа! 7м УмМеві Рісо (Тпегто
Еізпег Зсіепійс, Гранд-Айленд, штат Нью-Йорк). Для кожного з трьох трансформантів, що містять АРО6-ЮОМО, реєстрували одну смугу близько 38 кДа, яка мала очікуваний розмір для повністю процесованого біль»а ОМО. Для кожного з шести трансформантів, що містять Креое5-
ОРМО, реєстрували дві смуги близько 38 кДа і близько 41 кДа. Смуга 41 кДа відповідає ОМО їж 27, і про неї раніше повідомлялося в сої, що містить ЕБС5-ОМО (патент США Ме7838729).
Реєстрували дуже низький рівень експресії білюка ОМО у всіх трансформантах, що містять "А"
СТР-ОМО, а сигнал, виявлений після тривалого впливу, представляв собою смугу близько 50 кДа і смугу близько 39 кДа. Смуга 50 кДа наближалася до очікуваного розміру непроцесованого "А" СТР-ОМО. Ці результати показують, що АРО6Б-ОМО продукує одну смугу очікуваного
Зо розміру, що відповідає повністю процесованому ОМО.
І0094| Рекомбінантний білок очищали з тканини листя рослин КО, що містять АРОб6-ОМО або КЬрБе5-0ОМО. Аналіз амінокінцевої послідовності проводили за допомогою описаного хімічного аналізу розщеплення за Едманом. Аналіз амінокінцевої послідовності підтвердив наявність ОМО амінокінцевих послідовностей ОМО «ж 27 і ОМО-1, присутніх в рослинах, що містять Кбе5-ОМО, які відповідають розміру смуг ОМО, що реєструються при аналізі вестерн- блот. Аналіз амінокінцевої послідовності підтвердив наявність тільки ЮОМО амінокінцевих послідовностей ОМО-1, присутніх в рослинах, що містять АРО6-ОМО, які відповідають розміру смуг ЮМО, що реєструються при аналізі вестерн-блот. Цей результат підтверджує, що застосування АРОб СТР призводить до повного процесингу функціонально зв'язаного ОМО в рослинах.
Приклад 4. Експресія СТР-ОМО в трансгенній кукурудзі (0095) Експресія конструкцій ДНК, що містять рекомбінантну молекулу ДНК, що кодує один з двох окремих СТР, функціонально зв'язаний з ЮОМО, аналізували в трансгенних клітинах і рослинах кукурудзи.
І0096| Транзієнтну трансформацію протопласта мезофіла кукурудзи застосовували для оцінки відносної експресії ОМО двох комбінацій СТР-ОМО. Зазначені конструкції ДНК були ідентичні, за винятком того, що СТР, функціонально зв'язаний з ЮМО (5ЕБО ІЮ МО: 18), представляв собою або АРОб (5ЕБО ІО МО: 1), або СТРА (ЗЕО ІЮ МО: 4). Протопласти отримували в основному так, як описано в Прикладі 1. Після трансформації клітини збирали, а рівні біле»а ОМО визначали за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА). Протеїн з чотирьох трансформованих зразків протопластів вимірювали для кожної комбінації СТР-ОМО в нанограмах (нг) ОМО на міліграм (мг) загального білка. Протопласти, трансформовані АРОб-
ОМО, мали приблизно в 4 рази вищі рівні ОМО в опорівнянні з протопластами, трансформованими СТРА-ОМО. Дані наведені в Таблиці 8.
І0097| Трансгенні рослини кукурудзи отримували із застосуванням зазначених конструкцій
ДНК, і вирощували рослини КО. Зразки листя збирали з рослин КО, що представляють вісім унікальних однокопійних трансформантів, і застосовували для кількісного ІФА з метою вимірювання рівнів ОМО. Експресія ОМО в тканині листя КО була приблизно в 4 рази вище у трансформантів, що містять АРО6-ЮОМО, в порівнянні з трансформантами, що містять СТРА- 60 РМО. Дані наведені в Таблиці 8.
(0098) Амінокінцеве секвенування проводили для ЮОМО, що експресується в трансгенних рослинах кукурудзи. Білок очищали з трансгенних рослин кукурудзи, що експресують СТРА-
РМО або АРОб-ОМО, і готували для розщеплювального секвенування за Едманом, по суті, як описано в Прикладі 2. Аналіз амінокінцевої послідовності підтвердив наявність ЮОМО амінокінцевих послідовностей ОМО ї- 6, ОМО ях 7 та ОМО «12 в рослинах, що містять СТРА-
ОМО. Аналіз амінокінцевоїй послідовності підтвердив наявність ЮОМО амінокінцевих послідовностей ОМО апа ОМО 41 в рослинах, що містять АРОб6-ОМО. Ці результати показують, що процесинг СТР є повнішим з АРОб в порівнянні з СТРА, про що свідчить менша кількість амінокислот СТР, що залишилися на амінотермінальному кінці ОМО. Дані наведені в Таблиці 8.
Таблиця 8
Експресія білка ОМО в кукурудзі
Рівні ОМО протопласта Рівні ОМО рослини КО інт (Со, (німі (СО)
І0099| Трансгенну кукурудзу генерували за допомогою трансформації, опосередкованої
Адгобрасіегішт, за допомогою способів, відомих фахівцям в цій галузі техніки, з конструкцією
ДНК, що містить молекулу рекомбінантної ДНК, що кодує АРОб6-ОМО або СТРА-ОМО.
Толерантність до дикамби оцінювали у випробуванні в полі для трансгенних гібридних рослин
Е1. Випробування в полі включало чотири обробки в двох місцях з двома повтореннями кожна.
Чотири обробки були наступні: (1) дикамба (Сіагйуфт), що застосовується в кількості 2 фунти к.е./акр (4Х) у фазі М2, потім - М4, і потім - М8; (2) дикамба, що застосовується в кількості 4 фунти к.е./акр (8Х) у фазі М2, потім - МА, і потім - М8; (3) дикамба, що застосовується в кількості 8 фунтів к.е./акр (16Х) у фазі М2, потім - М4, і потім - М8; і (4) дікамба, що застосовується в кількості 16 фунтів к.е/акр (32Х) у фазі М2, потім - М4, і потім - М8. Ураженість культур оцінювали через десять днів після обробки і визначали як відсоток уражених культур на М-фазу (СІРМ2, СІРМА або СІРМ8). В кінці сезону зерно збирали, а урожай вимірювали в бушелях/акр.
Як для оцінки ураженості у фазах СІРУ, так і для оцінки ураженості врожаю розраховували найменшу значущу різницю (НЗР) з ймовірністю 595 (р - 0,05). Найвищі кількості дикамби (16Х і 32Х), що наносяться на гібридні рослини Е1, які містять АРО6Є-ОМО, обумовлювали дещо менше вегетативне ураження і більш високий урожай зерна в порівнянні з рослинами, які містять СТРА-ОМО. Дані наведені в Таблиці 9.
Таблиця 9
Випробування в полі гібридної рослини Е1 на предмет ураженості, викликаної дикамбою, і врожайності 16 фунтів
Приклад 5. Експресія СТР-ОМО в трансгенному бавовнику і сої
І00100| АРРб СТР оптимізували для підвищення ефективності трансляції білка (синтез білка) і збільшення накопичення білка. Оптимізована композиція АРОб СТР (5ЕБЕО ІЮ МО: 2)
характеризується зміною амінокислоти треоніну (Т) на серин (5) в положеннях З і 4 АРРб СТР (ЗЕБЕО ІО МО: 1). Були створені конструкції ДНК для порівняння двох СТР, кожен з яких є функціонально зв'язаним з ОМО в сої. 001011) Трансгенні рослини сої створювали за допомогою двох конструкцій ДНК, які були ідентичні, за винятком АРОб СТР. Перша конструкція ДНК містила АРОб (ЗЕБЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаний з ОМО (5ЕО ІЮО МО: 18). Друга конструкція ДНК містила оптимізований
АРОб (ЗЕО ІЮ МО: 2), функціонально зв'язаний з ОМО (5ЕО ІЮ МО: 18). Кожну конструкцію ДНК застосовували для трансформації сої АЗ555 за допомогою способів трансформації, опосередкованих Адгобасіегішт. Після трансформації, трансгенні рослини КО, що містять одну копію трансгена, ідентифікували за допомогою аналізу ПЛР. Рослини КО з однією копією трансгена вирощували в теплиці, а насіння К1!1 збирали. Десять насінин Кі! на один трансформант для 4 трансформантів, згенерованих за допомогою кожної з двох конструкцій
ДНК, ії насіння АС3555 висаджували для оцінки толерантності культури до післясходової обробки дикамбою в стандартних тепличних умовах вирощування. Дикамбу (Сіагйу) застосовували у фазі М4 в кількості 1120 г аї/га. Оцінку ураженості культури проводили через 10 днів після обробки. Зразки листя від толерантних до дикамби рослин сої відбирали для вимірювань рівня рекомбінантного білка та аналізу амінокінцевої послідовності. Рівень білка
ОМО, який визначається за допомогою ІФА, становив 13,35 х 2,7 нг/мг для однокопійних рослин
КІ трансгенної сої, толерантних до дикамби, з АРОб СТР (ЗЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕО ІЮО МО : 18). Рівень білка ОМО, який визначається за допомогою ІФА, становив 18,55 ж 3,1 нг/мг для однокопійних рослин К1! трансгенної сої, толерантних до дикамби, з оптимізованою АРОбЄ СТР (5ЕО ІЮО МО: 2). У тканині листя сої АЗ555 з групи негативного контролю ніякого білл«а ЮОМО не виявляли. Показник ураженості, обумовленої дикамбою, у однокопійних рослин К1! трансгенної сої з АРОб СТР (5БО ІЮО МО: 1), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕБО ІО МО: 18), визначали на рівні 3,695. Показник ураженості, обумовленої дикамбою, у однокопійних рослин КІ трансгенної сої з оптимізованою
АРОб СТР (ЗЕО ІО МО: 2), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕО ІО МО: 18), визначали на рівні 2,795. У сої АЗ555 з групи негативного контролю показник ураженості, обумовленої дикамбою, склав 99,895. Зразки листя від однокопійних рослин К! трансгенної сої, толерантних до
Зо дикамби, застосовували для амінокінцевого секвенування (як описано в Прикладах 2 і 4). Аналіз амінокінцевої послідовності підтвердив, що процесинг АРО6-ОМО і оптимізованої АРО6-ОМО призводить до повного процесингу СТР з амінокінця білюа ОМО. Рівні ЮОМО, показник ураженості, обумовленої дикамбою, і процесинг АРО6-ОМО продемонстрували, що як АРСб, так і оптимізований АРОб, якщо вони функціонально зв'язані з ОМО, забезпечують толерантність до дикамби, і обидва СТР піддаються повному процесингу в рослинах. Дані наведені в Таблиці 10.
Таблиця 10
Тестування сої КІ в теплиці
Рівні ОМО листя Ураженість, викликана АРСВ-ОМО
СТР дикамбою (нг/мг) фаза мА процесинг
АРОб о
Оптимізований АРОб о 00102) Трансгенні рослини бавовнику створювали за допомогою двох конструкцій ДНК, які були ідентичні, за винятком АРОб СТР. Перша конструкція ДНК містила АРОб (5ЕО ІЮО МО: 1), функціонально зв'язаний з ОМО (5ЕО ІО МО: 18). Друга конструкція ДНК містила оптимізовану
АРОб СТР (ЗЕО ІО МО: 2), функціонально зв'язану з ОМО (ЗЕО ІЮ МО: 18). Кожну конструкцію
ДНК трансформували в бавовник за допомогою способів трансформації, опосередкованих
Адгобасіегіцт, і відомих в цій галузі техніки. Після трансформації, трансгенні рослини бавовнику
КО, що містять одну копію трансгена, ідентифікували за допомогою аналізу ПЛР, вирощували в теплиці, і збирали насіння К1. Десять насінин КІ на один трансформант для 10 трансформантів для кожної конструкції і насіння бавовнику ОРЗ93 висаджували для оцінки толерантності культури до післясходової обробки дикамбою. Дикамбу (Сіагйу) застосовували у фазі М4 в кількості 1120 г аі/га. Оцінку ураженості культури проводили через 9 днів після обробки. Зразки листя толерантних рослин бавовнику використовували для вимірювання рівня білка і аналізу амінокінцевої послідовності АРО6Є-ЮОМО і оптимізованої АРО6-ОМО. Рівень білка ОМО, який визначається за допомогою ІФА, склав 176,2 ж 103 нг/мг для однокопійних рослин К1 трансгенного бавовнику, толерантних до дикамби, з АРОб СТР (5ЕО ІЮО МО: 1), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕО ІЮ МО: 18 ). Рівень білка ОМО, який визначається за допомогою ІФА, склав 136,5 ї 58,6 нг/мг для однокопійних рослин К1 трансгенного бавовнику, толерантних до дикамби, з оптимізованою АРОб СТР (ЗЕО ІЮО МО: 2). У тканині листя сої АЗО9З з групи негативного контролю ніякого білел«а ЮОМО не виявляли. Показник ураженості, обумовленої дикамбою, у однокопійних рослин КТ трансгенного бавовнику з АРОб СТР (5ЕБЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕБО ІО МО: 18), визначали на рівні 2,695. Показник ураженості, обумовленої дикамбою, у однокопійних рослин КІ! трансгенного бавовнику з оптимізованою АРОб СТР (5ЕО ІО МО: 2), функціонально зв'язаною з ОМО (5ЕО ІО МО: 18), визначали на рівні 2,295. Показник ураженості бавовнику ОРЗ393 з групи негативного контролю склав 8595. Зразки листя від однокопійних рослин КІ, толерантних до дикамби, застосовували для амінокінцевого секвенування (як описано в Прикладах 2 і 4). Аналіз амінокінцевої послідовності підтвердив, що процесинг АРО6-ОМО і оптимізованої АРО6Є-ЮОМО призводить до повного процесингу СТР з амінокінця білка ОМО. Рівні експресії білюабМоО, показник ураженості, обумовленої дикамбою, і процесинг АРО6Є-ЮОМО і оптимізованої АРО6-ОМО продемонстрували, що як АРСб, так і оптимізований АРСб, якщо вони функціонально зв'язані з ОМО, забезпечують толерантність до дикамби, і обидва СТР піддаються повному процесингу в рослинах. Дані наведені в Таблиці 11.
Таблиця 11
Тестування бавовнику КІ в теплиці
Рівні Ураженість, викликана (нг/мг) фаза м4
АРОб о,
Оптимізований АРОб (5ЕО о
Приклад 6. Експресія СТР-РРО в трансгенній кукурудзі 00103) Нові РРО, які є толерантними до гербіцидів РРО, ідентифікували за допомогою скринінгової системи, що використовує гербіциди і бактерії. Ця скринінгова система аналізувала ріст нокаутного штаму Е. соїї в рідкому середовищі І В з гербіцидом РРО для ідентифікації РРО,
Зо які не чутливі до гербіциду РРО. 00104) Нокаутний штам Е. соїї трансформували бактеріальним експресійним вектором, що містить підтверджену активність РРО, і культивували в рідкому середовищі І В. До середовища додавали очищену кристалічну форму одного з п'яти різних гербіцидів РРО (ацифлуорфен (1
ММ), флуміоксазин (0,5 мМ), лактофен (0,5 мМ), фомесафен (1 мМ) і 5-3100 (100 мкм), що представляють три різних хімічних підкласи РРО. Рекомбінантні білки експресували і вимірювали темпи росту. соїї. Криві росту (20600) аналізували для різних варіантів в присутності і відсутності гербіцидів РРО в обраних моментах часу від моменту часу "0" до моменту часу "24 години". Ріст трансформованого нокаутного штаму БЕ. соїї в середовищі І В в присутності гербіциду РРО вказує на те, що ген, який застосовується для трансформації Е. соїї, кодував несприйнятливу до гербіцидів протопорфіриногеноксидазу (РРО).
ІЇ00105)| Виявлено, що десять РРО, представлені як 5ЕБЕО ІЮ МО: 40-49, забезпечують нормальні темпи росту нокаутного штаму Е. соїї в середовищі І В в присутності гербіциду РРО, що вказує на те, що ці білки є несприйнятливі до гербіцидів протопорфіриногеноксидази (ІРРО).
Нокаутний штам Е. сої), який експресує М/Н РРО (ЗЕО ІЮО МО: 60), був чутливий до всіх п'яти гербіцидів РРО, підтверджуючи те, що аналіз був здатний розрізняти чутливі і нечутливі РРО для кожного з гербіцидів. 00106) Були створені чотири вектора трансформації рослин для експресії РРО Н М10 (ЗЕО
ІО МО: 43) в умовах поля. Конструкції трансформації 1 і 11 мали таку ж комбінацію промотора плюс лідер плюс інтрон, таку ж послідовність З'ТЕ, такий же РРО Н М10 (5ЕО ІЮ МО: 43), але відрізнялися послідовностями СТР і застосовувалися для трансформації сої. Конструкції трансформації б і 16 мали таку ж комбінацію промотора плюс лідер плюс інтрон, таку ж послідовність З'ОТК, такий же РРО Н М10 (5ЕО ІЮО МО: 43), але відрізнялися послідовностями
СТР ії застосовувалися для трансформації кукурудзи. У Таблиці 12 наведена конфігурація конструкцій трансформації рослин РРО НН М10.
Таблиця 12
Конфігурація конструкції з РРО Н.М10
Кушруда 00000005 оре ЕТО МО
І00107| Ферменти РРО експресували в трансгенних рослинах кукурудзи, а трансгенні рослини аналізували на предмет толерантності до гербіциду РРО. Були сконструйовані вектори трансформації рослин, що містять рекомбінантну молекулу ДНК, яка кодує один з ферментів
РРО, представлених як 5ЕО ІЮ МО: 40-59. Послідовність ДНК, що кодує фермент РРО, може включати на 5'-кінці кодон для метіоніну, зазвичай відомий як стартовий кодон, або цей кодон можна виключити з метою полегшення функціонального зв'язку послідовності транзитного пептиду хлоропластаста з 5-кінцем кодувальної послішщшдовності. Приклади білкових послідовностей ферменту РРО, що містять метіонін на амінокінці, представлені як зЕО ІЮ МО: 40-49. Приклади білкових послідовностей ферменту РРО, що не містять метіонін на амінокінці, представлені як БЕО ІЮ МО: 50-59. Для трансформації рослин, нуклеотидні послідовності, що кодують передбачувані ферменти РРО, оптимізували кодоном з метою або дводольної, або однодольної експресії. У Таблиці 2 наведені 5ЕБЕО ІЮ МО, що відповідають білковим і нуклеотидним послідовностям ферментів РРО у векторах трансформації.
І00108| При тестуванні кукурудзи в умовах поля кукурудзу (І Н244) трансформували, застосовуючи Адгорасіегішт Іштеїасіеєп5 і стандартні способи, відомі в цій галузі техніки.
Трансгенні рослини Е1, отримані в результаті ауткросингу однокопійних рослин КО, що експресують Н М10 (ЗЕО ІЮ МО: 43) в одній з двох конфігурацій конструкції, були протестовані в теплиці на предмет толерантності до гербіциду. Рослини обробляли гербіцидом 5-3100 в кількості 40 г/га у фазі росту М3, і через сім днів після обробки оцінювали показник ураженості.
Серед трансгенних рослин кукурудзи, що експресують Н М10 (ЗЕБЕО ІЮ МО: 43) в конфігурації конструкції 6 (АРОб (5ЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаної з РРО Н М10 (5ЕО ІО МО: 43)),
Зо отримали 13 із 18 трансформантів, які продукують рослини з високою толерантністю (1095 або менше уражень), тоді як в результаті застосування конфігурації конструкції 16 (125088600ТР (ЗЕБЕО ІЮ МО: 38), функціонально зв'язаної з РРО Н М10 (5ЕБО ІЮО МО: 43)), не отримали трансформантів, які продукують рослини з високою толерантністю.
І001091| Трансгенні рослини Н1, отримані в результаті ауткросингу однокопійних рослин КО, що експресують Н М10 (ЗЕО ІО МО: 43) в одній з двох конфігурацій конструкції (конструкції 6 і 16), були протестовані в полі на предмет толерантності до гербіциду. Ця популяція Е1 була сегрегованою (5095 гемізиготних і 5095 нульових), причому селекцію для трансгенних рослин до оцінки ураженості не проводили. Очікується, що загальний середній показник ураженості для такої популяції буде вище, ніж для гомогенної трансгенної популяції, оскільки нетрансгенні рослини серед трансгенних рослин виявити важко. Випробування проводили в двох місцях з двома повтореннями і З обробками на кожну конструкцію. В якості негативного контролю застосовували нетрансгенні рослини кукурудзи. Обробки з нанесенням гербіцидів проводили наступним чином: Обробку 1 здійснювали гербіцидом 5-3100 в кількості 0,036 фунтів аі/акр, що наноситься в М2, потім - в М4, а потім - М8; Обробку 2 здійснювали гербіцидом 5-3100 в кількості 0,072 фунтів аї/акр, що наноситься в М2, потім - в М4, а потім - М8; Обробку З здійснювали гербіцидом 5-3100 в кількості 0,144 фунтів аї/акр, що наноситься в М2, потім - в М4, а потім - У8.
Процентний показник ураженості культури оцінювали у фазі росту М2 (СІРМ2) і у фазі росту М4 (СІРМА4) на 5-7 день після обробки (помилка М2 і помилка М4 складають половину найменшої значущої різниці (НЗР)). Оцінку ураженості культури комбінували для обох місць. Всі нетрансгенні рослини і рослини з трансформантами, що генеруються за допомогою конструкції 16 (125088600ТР (ЗЕО ІЮ МО: 38), функціонально зв'язаної з РРО Н М10 (ЗЕО ІЮ МО: 43)),
продемонстрували показник ураженості від 94,6 до 99,595 після застосування гербіциду як у фазі М2, так і у фазі М4 для кожної з трьох обробок. Всі рослини з трансформантами, що генеруються за допомогою конструкції б (АРОб (5ЕО ІО МО: 1), функціонально зв'язаної з РРО
Но М10 (5ЕО ІС МО: 43)), продемонстрували тільки 3095 -5095 ураженість після застосування гербіциду у фазі М2 і відсутність ураженості після застосування гербіциду у фазі М4. Дані наведені в Таблиці 13.
Таблиця 13
Польове випробування ефективності кукурудзи ЕТ, що містить РРО Н М10 (ЗЕО ІО МО: 43)
СТР
Обробка | Конструкція СТР ЗЕО | сіру | сіруд | Помилка ) Помилка
ІО м2 уд
МО: негативний р 581 АРОб 1.197511 0 1 86 | 2 ч2гсоввбоотР | 38 | 96,3 | 985 | 86 | л2е
ЖИ о ревно во обр контроль 6 | АРОБб 11975 0 1 54 0 ч2гсоввбоотР | 38 | 995 | 995 | 54 | 0
ЖИ о ревно го обр гв6 АРОБб 1. | 50 0 щ 0 1 о чгсоввбоотР | 38 | 995 | 995 | 0 | 0
І00110) Дані досліджень трансгенної кукурудзи Е1 в теплиці і в полі продемонстрували, що
АРОб (5ЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаний з РРО Н М10 (ЗЕО ІО МО: 43)), призводив до зниження показників ураженості при експресії в трансгенних рослинах у порівнянні з показниками ураженості, які спостерігаються, коли 1205088600ТР (5ЕБО ІЮ МО: 38), функціонально зв'язаний з РРО Н М10 (5ЕО ІО МО: 43), експресувався в трансгенних рослинах.
Див. Фігуру 1. 00111) Були створені вектори трансформації рослин для експресії в умовах поля або РРО
Н М40 (ЗЕО ІО МО: 54), або РРО Н М90 (ЗЕО ІО МО: 50), функціонально зв'язаних з АРОб (ЗЕБЕО ІО МО: 1), СТР О або СТР Е. Кукурудзу (010КО2) трансформували, застосовуючи
Адгобасієегішт ішптегасієеп5 і стандартні способи, відомі в цій галузі техніки. Зразки листя, взяті з отриманих рослин КО, аналізували за допомогою ПЦР для визначення кількості копій трансгенної вставки. Рослини КО, кожна з яких містила унікальний трансформант, обприскували гербіцидом 5-3100 в кількості 40 г аі/га або 80 г аі/га приблизно у фазі росту М5, і через 4-7 днів після обробки здійснювали оцінку ураженості. Реєстрували кількість рослин з «1095 ураженістю (висока толерантність) або «2095 ураженістю (толерантність) від загальної кількості обприсканих рослин. Рослини, які були визначені як однокопійні трансформанти і після обприскування характеризувалися ураженістю «2095, піддавалися самозапиленню і ауткросингу. Дані наведені в Таблиці 14.
Таблиця 14
Оцінка толерантності трансгенної кукурудзи до гербіцидів СТР-РРО
Конфігурація СТР Кількість 531001. 109, ураженість |х 2095 ураженість конструкції (г аі/га) 0/46 1/46 0101 13/101 55/112 63/112 45/112 6б/112 9/112 36/112 12/56 23/56 зЗл12 9/112
І00112| Отримані результати демонструють, що АРОб (5БО ІЮ МО: 1) послідовно продукував більш високу толерантність до гербіцидів у порівнянні з рослинами,
Б трансформованими СТР 0 або СТР Е, коли вони функціонально зв'язані з Н М40 (5ЕО ІЮО МО: 54) або Н МО (ЗЕБЕО ІЮ МО: 50). АРОСб, коли він був функціонально зв'язаним з Н М40, призводив до того, що від 21,495 до 40,295 трансгенних рослин характеризувалися високою толерантністю, і від 41,195 до 58,995 трансгенних рослин були толерантними до 5-3100 при застосуванні в кількості 80 г айга. АРОб, коли він був функціонально зв'язаним з Н МО0, призводив до того, що 49,195 трансгенних рослин характеризувалися високою толерантністю, і 56,395 трансгенних рослин були толерантними до 5-3100 при застосуванні в кількості 40 г аї/га.
СТР б, коли він був функціонально зв'язаним з Н М40, призводив до того, що 095 трансгенних рослин характеризувалися високою толерантністю, і 2,290 були толерантними до 5-3100 при застосуванні в кількості 80 г айга. СТР Е, коли він був функціонально зв'язаним з Н М40, призводив до того, що від 095 до 8905 трансгенних рослин характеризувалися високою толерантністю, і від 12,995 до 32,195 були толерантними до 5-3100 при застосуванні більш низької кількості гербіциду 40 г аї/га. 00113) Трансгенну гібридну кукурудзу Е1, що експресує АРСб, функціонально зв'язаний з
РРО Н МІ10, оцінювали на предмет толерантності до семи різних гербіцидів РРО: 5-3100, фомесафену, ацифлуорфену, лактофену, флуміоксазину, сульфентразону, і сафлюфенацилу.
Зібране разом насіння, що представляє 5 унікальних трансформантів, висаджували в горшки в теплиці разом з гібридним насінням кукурудзи в якості негативного контролю. 00114) Для аналізу досходової толерантності до гербіцидів, гербіциди РРО застосовували індивідуально в одній з двох кількостей з шістьма повтореннями на обробку в такий спосіб: 5- 3100 (80 або 160 г аі/га), фомесафен (Рефлексф), 840 або 1680 г аї/га), флуміоксазин (Валоре
ЗХ, 210 або 420 г аї/га), сульфантразон (Спартанф 41, 840 або 1680 г аї/га) і сафлуфенацил (ШарпенФ, 200 або 400 г аї/га). Рослини оцінювали на предмет процентного показника ураженості культури через 20 днів після обробки, а насіння кукурудзи були включені в якості негативного контролю. Трансгенні рослини з АРОб, функціонально зв'язаним з РРО Н М10,
Зо характеризувалися показником ураженості для різних застосувань гербіцидів РРО до появи сходів в межах від 095 до 5,895, що вказує на те, що АРОб, функціонально зв'язаний з РРО
Н М10, забезпечує відмінну досходову толерантність кукурудзи при обох кількостях гербіцидів для всіх п'яти гербіцидів РРО. Рослини кукурудзи з групи негативного контролю характеризувалися показником ураженості від 17,595 до 94,295, за винятком застосування сафлуфенацилу, що було очікуваним, оскільки цей гербіцид продається для застосування на звичайних рослинах кукурудзи. Дані зі стандартною помилкою, позначеною як ч/-, наведені в
Таблиці 15.
Таблиця 15
Показники ураженості кукурудзи в результаті досходового застосування гербіцидів РРО
Ме Об Хімі Кількість з ураженості до ураженості о Обр імічна речовина (г аї/га) в групі негативного РРО Н. МО контролю -- 81-55 и 6 | у 78 | 7 Р 8 00115) Для аналізу післясходової (від МЗ до М4) толерантності до гербіцидів, гербіциди РРО застосовували індивідуально в одній з трьох кількостей з шістьма повтореннями на обробку в такий спосіб: 5-3100 (40, 80 або 160 г аї/га), фомесафен (РефлексФф), 420, 840 або 1680 г аї/га), ацифлуорфен (Ультра Блазерф), 420, 840 або 1680 г аї/га), лактофен (Кобраф, 220, 440 або 880 г аі/га), флуміоксазин (ВалорФ 5Х, 105, 210 або 420 г аі/га), сульфантразон (Спартанф 41, 840 або 1680 г аї/га) і сафлуфенацил (Шарпенф), 100, 200 або 400 г аї/га). Рослини оцінювали на предмет процентного показника ураженості культури через 14 днів після обробки, а звичайне гібридне насіння кукурудзи було включено в якості негативного контролю. Трансгенні рослини з
АРОб, функціонально зв'язаним з РРО Н М10, характеризувалися процентним показником ураженості для різних застосувань гербіцидів РРО після появи сходів у межах від 0,595 до 5,890, за винятком застосування фомесафену в кількості 1680 г аї / га, при якому процентний показник ураженості склав 13,895, що вказує на те, що АРОб, функціонально зв'язаний з РРО Н М10, забезпечує відмінну післясходову толерантність кукурудзи при будь-яких кількостях гербіцидів для всіх семи гербіцидів РРО. Рослини кукурудзи з групи негативного контролю характеризувалися процентним показником ураженості від 36,79 до 10095. Дані зі стандартною помилкою, позначеною як ч-/-, наведені в Таблиці 16.
Таблиця 16
Показники ураженості кукурудзи в результаті досходового застосування гербіцидів РРО ваю 0000 в ЛвгЮ 2 212 во ово 5-3100 77777171717807777771717171717717171717171711лобьняо 777 7777777 38036083 44 таж 00 ов
Фомесафен лює 00 Гл ро 2 вФеою лактофен спяююио 00 Ге рови я
Флуміоксазин
Приклад 7. Експресія СТР-РРО в трансгенній сої
00116) Ферменти РРО, функціонально зв'язані з різними СТР, експресували в трансгенних рослинах сої, а трансгенні рослини аналізували на предмет толерантності до гербіциду РРО.
ІЇ00117| Були створені вектори трансформації рослин для експресії в умовах поля 122088600ТР (ЗЕО ІЮ МО: 38), функціонально зв'язаного з РРО Н М10 (ЗЕО ІЮ МО: 43), або
АРОб (5ЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаного з РРО Н М10 (ЗЕО ІЮ МО: 43). Сою АЗ555 трансформували за допомогою цих векторів трансформації рослин і Адгобасіегішт шптегасіепв, застосовуючи при цьому стандартні способи, відомі в цій галузі техніки. Регенеровані КО трансгенні паростки вирощували в теплиці, піддавали самозапиленню, і збирали насіння К1.
Трансгенні рослини К1 обприскували в теплиці, застосовуючи одну з трьох обробок гербіцидом у фазі М4 ї КІ: (1) 5 г айга 5-3100, (2) 10 г аї/га 5-3100, або (3) 30 г айга 5-3100. Оцінку ураженості культури проводили через 10 днів після обробки. Трансгенні рослини, які експресують АРОб (5ЕО ІЮ МО: 1), функціонально зв'язаний з РРО Н М10 (ЗЕО ІЮО МО: 43), характеризувалися показником ураженості від 4,290, 7,895 і 9,495 у фазі М4 і 395, 6,595 до 15,790 у фазі К1, при застосуванні кількості гербіциду 5, 10 ії 30 г аі/га, відповідно. Трансгенні рослини, які експресують 125088600ТР (5ЕО ІЮ МО: 38), функціонально зв'язаний з РРО Н М10 (ЗЕО ІЮ
МО: 43), характеризувалися середнім показником ураженості від 82,795, 92,795 до 98,295 при застосуванні кількості гербіциду 5, 10 ї 30 г аї/га, відповідно, і не доживали до проведення оцінки у фазі К1. Рослини з групи негативного контролю характеризувалися подібними середнім показником ураженості 8995, 9895 і 10095 при застосуванні кількості гербіциду 5, 10 і 30 г аї/га, відповідно, і не доживали до проведення оцінки у фазі К1. Дані наведені в Таблиці 17.
Таблиця 17
Тестування впливу гербіцидів РРО на сою К1 00118) Були створені вектори трансформації рослин для експресії в умовах поля РРО
Но М90 (5ЕО ІО МО: 47), функціонально зв'язаного з одним з трьох різних СТР, АРОб (5ЕО ІЮ
МО: 1) СТР Е ї СТР Н. Сою АЗ555 трансформували за допомогою цих векторів трансформації рослин і Адгобасіеєегішт штегасіеп5, застосовуючи при цьому стандартні способи, відомі в цій галузі техніки. Регенеровані трансгенні паростки КО вирощували в теплиці, а зразки листя, взяті з отриманих рослин КО, аналізували за допомогою ПЦР для ідентифікації рослин, що містять одну копію трансформанта. Трансгенні однокопійні рослини КО, кожна з яких являє собою
Зо унікальний трансформант, обприскували в теплиці гербіцидом 5-3100 в кількості 20 г аї/га, що застосовувався приблизно в фазі УЗ. Оцінку ураженості проводили через 14 днів після обробки і виражали кількістю рослин, визнаних високотолерантними (їх 1095 ураженість) або толерантними (х 2095 ураженість). Серед трансгенних рослин, які експресують АРОб (5ЕО ІЮ
МО: 1), функціонально зв'язаний з РРО Н М90 (5ЕО ІО МО: 47), отримали 21,495 унікальних високотолерантних трансформантів і 57,1906 толерантних трансформантів. Серед трансгенних рослин, які експресують СТР Е, функціонально зв'язаний з РРО Н МО0О (ЗЕО ІЮО МО: 47), отримали 11,795 унікальних високотолерантних трансформантів і 41,195 толерантних трансформантів. Серед трансгенних рослин, які експресують СТР Н, функціонально зв'язаний з
РРО Н М90 (ЗЕО ІЮ МО: 47), не отримали жодного унікального високотолерантного або толерантного трансформанта. Дані наведені в Таблиці 18.
Таблиця 18
Оцінка ефективності 5-3100 для сої КО 11 СТР | 7 РРО | л1О9бураженість.д/ | «2096ураженість.:/З (00119) Ці дані продемонстрували, що специфічний СТР, який є функціонально зв'язаним з ферментом РРО, має вирішальне значення для досягнення толерантності до гербіциду, тим самим демонструючи важливість вибору СТР і несподівану перевагу СТР АРОб в порівнянні з іншими СТР для застосування при продукуванні толерантних до гербіцидів трансгенних рослин.
Приклад 8. Експресія СТР-РРО в трансгенному бавовнику 00120) Були створені вектори трансформації рослин для експресії АРОб (5ЕО ІО МО: 1), функціонально зв'язаного з РРО Н М10 (5ЕО ІО МО: 43), в трансгенних рослинах бавовнику, після чого трансгенні рослини були проаналізовані на предмет толерантності до гербіцидів
РРО. Бавовник ОРЗОЗ трансформували за допомогою цих векторів трансформації рослин і
Адгобрасіегішт іцптеїасіеєп5, застосовуючи при цьому стандартні способи, відомі в цій галузі техніки. Регенеровані трансгенні паростки КО вирощували в теплиці, а зразки листя, взяті з отриманих рослин КО, аналізували за допомогою ПЦР для ідентифікації рослин, що містять одну копію трансформанта. Трансгенні однокопійні рослини КО, кожна з яких являє собою унікальний трансформант, обприскували в теплиці гербіцидом 5-3100 в кількості 20 г аї/га, що застосовувався у фазі М2. Крім того, трансгенні мультикопійні рослини (22 копії/рослина) обприскували в теплиці гербіцидом 5-3100 в кількості 20 г аї/га, що застосовувався у фазі М2.
Оцінку ураженості проводили через три дні після обробки.
І00121| Негативний контроль, бавовник ОРЗ393, характеризувався 10095 ураженістю через три дні після обробки гербіцидом 5-3100 в кількості 20 г аї/га. Навпаки, у 21 однокопійної рослини КО середній показник ураженості склав 26,795. Розподіл ураженості для 21 однокопійної рослини КО був наступним: З рослини не мали уражень; З рослини мали 1095 ураженість; З рослини мали 1595 ураженість; 2 рослини мали 2095 ураженість; 7 рослин мали 30905 ураженість; і З рослини мали 4095 ураженість. Серед мультикопійних рослин КО, 14 рослин піддавалися обробці гербіцидом, при цьому середній показник ураженості склав 10,495.
Розподіл ураженості для 14 мультикопійних рослині був наступним: 5 рослин не мали уражень;
З рослини мали 595 ураженість; 1 рослина мала 1095 ураженість; 2 рослини мали 1595 ураженість; 1 рослина мала 2095 ураженість; 1 рослина мала 3095 ураженість; і 1 рослина мала
Зо 4095 ураженість. Ці дані показують, що трансгенний бавовник КО, який експресує АРОб (ЗЕО ІЮ
МО: 1), функціонально зв'язаний з РРО Н М10 (5ЕБО ІЮО МО: 43), характеризується толерантністю до застосування гербіциду 5-3100 в кількості 20 г аі/га, що застосовується у фазі
Маг.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» Мопзапіо Тесппоіоду І І С «1205 КОМПОЗИЦІЇ І СПОСОБИ ДЛЯ ЕФЕКТИВНОГО НАЦІЛЮВАННЯ ТРАНСГЕНІВ -1305. МОМ5:389м0 -1505 05 62/270,180 «1515 2015-12-21 -1505 05 62/364,715 -1515 2016-07-20 -1605 102 -170» РаїепіНп версія 3.5
-2105 1 -2115» 68 «212» РВАТ -213» Агарідорвів ІНаїпапа «4005 1
Меї Ага Тнг Ага Тиг Тнг Тнг Аа Тниг Аа Аїа РНе 5ег Сіу Маї Маї 1 5 10 15 зЗег Ма! Спу Тнг Сім ТНг Агу Ага Іе Туг Зег РНе 5ег Нів ГГ еи Сп 20 25 зо
Рго 5ег Аа Аа РНне Рго Ага Гуз Рго 5ег бег РнНеє І уз 5ег І єи І ув 35 40 45
Ї еи Гуз Сіп Зег АЇа Ага ГІ єи ТНиг Агу Ага Геи Азр Ніз Агу Рго Рпе 50 55 бо маї Ма! Ак Суз (65 -2105 2 -2115» 68 00 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна
З5 «-4005 2
Меї Ага 5ег Зег ТНиг Тниг ТАг Аа Тнг Аа Аа Рне 5ег Спу Ма! Маї 1 5 10 15 40 зЗег Ма! Спу Тнг Сім ТНг Агу Ага Іе Туг Зег РНе 5ег Нів ГГ еи Сп 20 25 Зо 45
Рго 5ег Аа Аа РНне Рго Ага Гуз Рго 5ег бег РнНеє І уз 5ег І єи І ув
Ї еи Гуз Сіп Зег АЇа Ага ГІ єи ТНиг Агу Ага Геи Азр Ніз Агу Рго Рпе 50 55 бо маї Ма! Ак Суз 65 «2105» З «2115 61 60 0о«212» РАТ
-213» Агарідорвів ІНаїпапа «4005 З /Меї Ага Рго Аа ГІ еи Зег Агу Зег І єи Туг Тиг Зег Рго І єи Тиг Бег 1 5 10 15
Маї Рго Іе Тнг Рго Маї Зег 5ег Ага І еи 5ег Ніз І єи Агу 5ег 5ег 20 25 зо
Ре І єи Рго Ні Спу Спу Аа І ей Ага Тнг Сіпу Маї Зег Суз Зег Пр 35 40 45
Авп Гей Сіи Гуз Агод Суз Авзп Агу РНеє Аїа Маї Гуз Су 50 55 60 «-210» 4 «-2115 72 «2125» РВАТ «213» Решпіа пубгіда «400» 4
Меї Аа Сп Пе Авп Авзп Меї Аа Сп Спу Пе Сіп ТАг Гей Авп Рго 1 5 10 15
Зо
Авп Зег Авп Ре Ніз Гуз Рго Сіп Маї Рго Гуз бег Зег Зег Рпє І єи 20 25 Зо маї Рне сту зЗег Гуз Гуз Геи Гуз Авзп Зег Аіа Авп 5ег Меї І єи Маї 35 40 45
Ї еи Гуз Гуз Авр 5ег Пе Рпе Меї Сіп Гуз Рпе Суз 5ег Ре Ага Пе 50 55 60 зЗег Аа 5ег Маї Аа Тнг Аа Суз 65 70 «2105» 5 «2115 57 «212» РАТ «213» Різит 5аймит «4005» 5 /Меї Аа 5ег Ме! Пе Зег 5ег Зег Аа Ма! ТНиг Тиг Маї Зег Аго Аа 1 5 10 15 зЗег Агу Сіу Сп бЗег Аа АІа Меї Аа Рго Рне Спу Спу Гей Гуз бег бо 20 25 Зо
Меї Тиг Су Рне Рго Маї Агу Гуз Маї Авп Тнг Ар ІПе ТАг Зег Пе 35 40 45
ТАг Зег Авп Стпу Спіу Агу Ма! Гуз Суз 50 55 «-2105» 6 «2115 77 «2125» РАТ «213» Огула заїїма «-4005» 6
Меї Аїа Аа І еи Тнг Тнг бег Сіп І єи Аа Тниг 5ег Аа ТНиг Спіу Рне 1 5 10 15
Сіу Пе Аа Ар Ага 5ег Аїа Рго 5ег Зег І еи Г еи Агу Нів Спу Ре 20 25 зо
Сіп Спу І єи Гуз Рго Агу 5ег Рго Аїа Сіпу Спіу Авр Аа Тнг Зег Гей 35 40 45
ЗБег Ма! Тиг ТАг Зег Аа Аго Аа Тпг Рго Гуз Сіп Сп Ага 5ег Маї 50 55 бо
Сіп Агоа Спу Зег Агу Ага РНе Рго 5ег Маї Ма! Ма! Суз 65 70 75 -2105 7 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 7 аддссассд ссассасіас сдссассдсі дсдйсіссу дсададідад соїсддсасі бо дадасосдса ддаїсіасіс снсадссас сіссадссії сідсідсуй ссссдсіаад 120 ссдіснеді Іісаададссії даадсідааа садіссдсас дссЦасссу дсодссіддас 180 саіаддссаї Ісоїдісад чідс 204 «-2105» 8 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність бо
«223» Рекомбінантна «4005» 8 аддсдасодо сіасдасдас їдсіасддса дсоашавдід ддіадісад діаддаасд бо дадасісдаа ддашанс дннсїсаї сісаассії сідсддсій Ііссддсдаад 120 ссіаднссі Ісаааїсісї сааапааад сададсдсда дасісасасод дсдосідаї 180 саїсддссоді ісонодісса аїді 204 -210» 9 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 9 адосіасід сіасіассас адсіассдсі дсансісію дідсноюад югКддаасс бо дадасасдіа даашасіс Шсісасас Ндсаассіа дсдсадссії сссідссаад 120 ссаїсаїссі Наадіссії даадсідааа садісддсда ддснасдад дсодссісдаї 180 саїадасссі Ноіддіссу адс 204
Зо -2105 10 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 10 аддсаассд сдасіассас сдсаасддаса дсецсіссуд дддіадшс адісдддасд бо дааасссдса ддаїсіанс дисадссаї Посаассії ссдсдудсснісссдссааа (120 сесісдісії Наааїсдсі дааасісааа садісадсас ддндасссоя ааданддас 180 сассдсссаї НаїТадщдад відс 204 «2105 11 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 11 аддссасдуд ссасдассас ддсаасадса дсстіс9дд асопаїаїс сдісдддаса бо бо дааассадас дсаїаїаїад сісісасас сідсаассіа дідссудсшіссддсосааа 120 ссіадсісді Паааїсдсі даадсісааа сададсодсіс дднНаасіадасдасіддас 180 саїйаддссаї Ндїсдіссу сідс 204 «2105» 12 «2115 204 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 12 адоснесі ссасдасдас їдсіасддса дсоашавдід ддіадісад діаддаасд бо дадасісдаа ддашанс дннсїсаї сісаассії сідсддсій Ііссддсдаад 120 ссіаднссі Ісаааїсісї сааапааад сададсдсда дасісасасод дсдосідаї 180 саїсддссоді ісонодісса аїді 204 -2105 13 -2115 183 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Рекомбінантна -4005 13 адосіссід сіндадіад аацдісісіас асаїсіссії шаснсаді іІссааїсасі бо ссідісісії сісдісісіс іІсаїсідада адсісдціс іІсссасас9ду сддсасша 120 адаассддсуд Шсодщіад сіддаайсіс даааададаї діаассдай сдссдадаад 180 щі 183 «210» 14 -2115 183 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 14 адодсіссдод сісісадссд сісссісіас ассадсссіс ісассіссої дсссаїсасс бо ссддіціссі сссдссісіс ссассіссдс іссіссНес Ісссісасд9 сдодсодсусіс 120 сдсассддса ідіссідсіс сіддаассід дадаадсдсі дсаассдсії сдассдадаад 180 їдс 183 бо
-2105 15 «2115 216 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 15 аддсссада ісаасаасаї ддсссадддс аїссадассс Іаасссіаа сісіааснс бо сасаадссдс аадідсссаа дісіадсісс Несісдщі Ісддсіссаа даадсісаад 120 ааіадсдсса анссаїдсі ддіссідаад ааадасісда ісйсаїдса даасійсідс 180 їссшесдса ісадідснс даносдасі дссдс 216 -2105 16 «2115 171 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 16 адодснсїа Юаїаїссіс Пссосідід асаасадіса дссдідссіс їадддддсаа бо
Зо іссдссдсаа іддсіссаїї сддсддссіс аааїссаїда сюдайссс адідчаддаад 120 дісаасасід асацасіїс санасаадс ааіїддюддаа дадчіааадчю с 171 35 «2105» 17 «2115 231 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність 40 «220» «223» Рекомбінантна «4005 17 45 адодсддсіс ісассасдіс ссадсісдсс ассісддсса ссддсіс9до саїсдссдас бо ааддісддсдс сдісдісдсі дсіссдссас ддайссадод дссісаадсс ссдсадсссс 120 дссддс9додсу асдсдасодіс дсісадсодїд асдассадсу сдсдсудсдас дсссаадсад 180 50 садсддісда дсадсоїідд садссддаду йссссіссо ісдісдіа с 231 -2105» 18 55 «2115 340 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» 60 «223» Рекомбінантна
«4005» 18
Меї І єи Тнг Рне Маї Агу Азп Аа Тр Туг Маї Аа Ага ГІ єи Рго Сі 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агу Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Іе 35 40 45
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 50 55 бо
Ні Геи Сп Сув Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рне Авр Спіу Спіу Спу Сп 65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95
Ммаї Аг 5ег РНе Рго Маї Маї Сім Агу Азр Аа І єи Іе Тр Іе Ттр 100 105 110
Зо
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
З5
Суз Агу Маї Ар Рго Аїа Туг Ага Тнг Маї Спу Спу Туг Спу Ні Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аїа Сп Тиг Авр Аа Ре Авр Ага 165 170 175
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тниг Рго 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РнНе І єи Аг9 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220 60 Маї Бег АІа Меї І еи Авп Ре Пе Аїа Маї Аа Рго Спи Спу ТНиг Рго
225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
ТАиг Си Аа бег Суз Ні Туг Рне РНеє Су Зег бег Агу Азп Рне Сіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Аа І єи Маї! Гуз Сіш Азвр Гуз Маї Ма! Ма! Спи Аа Пе Спи Ага Аг 290 295 00
Аг Аа Туг Маї Спи Аа Азп Су Пе Аг Рго Аа Меї І єи Зег Суб 305 з10 315 з20
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335
Ї ви Спи Аїа Аа 340
Зо 2105» 19 «2115 339 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 19
Меї Тиг РНе Маї Аг Авп Аїа Тгр Туг Маї Аа Аїа ГІ ви Рго Спи Спи 1 5 10 15
Ї еи Зег Спи Гуз Рго І еи Слпу Аг Тит Пе Геи Авр Тнг Рго Геи Аіа 20 25 Зо
Ї еи Туг Аг Сп Рго Авр ау Маї Маї Аа Аа І єи І еи Авр Пе Сув 35 40 45
Рго Ніз Ага Рне Аїа Рго І єи Зег Ар Су Іе І єи Маї Авп Су Нів 50 55 60
Ї еи Сп Сузв Рго Туг Ніз Сіпу Ї ви Спи Рпе Авр Спіу Спу Спіу Сп Сув 65 70 75 80 60
Маї Ні Авп Рго Нів Сіпу Авп Су Аа Ага Рго Аа 5ег І єи Азп Маї 85 90 95
Агу Зег РНе Рго Маї Маї Спи Агу Авр Аа ГІ єи Іе Тгр Ге Тур Рго 100 105 110 сапу Авр Рго Айа І єм Аа Авр Рго Сіу Аа Пе Рго Авр РНе Сіу Сув 115 120 125
Аго Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тиг Ма! Спу Спу Туг Спу Нів Ма! Авр 130 135 140
Суз Авп Туг І уз І єи І єи Маї Азр Авп І єи Меї Авр І єи Сіу Нів Аа 145 150 155 160
Сіп Туг Маї Ні Агу Аїа Авзп Аїа Сіп ТАг Азр Аа РНе Азр Аг І! єи 165 170 175
Сім Ага Сім Маї Пе Ма! Спу Авр Сіу Спи Пе Сіп Аа Геи Меї Г ув 180 185 190
Пе Рго Спу Спу ТНг Рго 5ег Маї! І єи Меї Аїа Гуз РНе Геи Агу Сіу 195 200 205
Аа Ав5п Тпг Рго Маї Азр Аа Тгр Азп Авр Пе Ага Тр Авп Гуз Маї 210 215 220 зЗег Аіа Меї І єи Азп Ре Іе Аїа Маї Аа Рго Спи Спу ТНг Рго Гуз 225 230 235 240 сій Сп бег Пе Ні Зег Агу Спу Тнг Ні Пе І еи Тниг Рго Спи ТНг 245 250 255
Сім Аа бег Сув Ні Туг Рне Рпє Стіу бег Зег Агу Авп Ріє Спу Пе 260 265 270
Авр Авр Рго Спи Меї Авр ау Маї І еи Ага 5ег Тр Сп Аа Сіп Аа 275 280 285
Ї еи Ма! Гуз Спи Азр Гуз Маї Маї Ма! Сім Аа Пе Спи Агу Аг Ага 290 295 00
Аа Туг Ма! Спи Аа Азп Су Пе Агу Рго Аа Меї І єи Зег Суз Авр 305 з10 315 320 60
Сім Аа Аа Маї Агу Маї Зег Агу Спи Пе Спи Гув еи сти (и Гей 325 330 335
Сім Аїа Аа «-2105» 20 «2115 340 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 20
Меї І єи Тнг Рне Маї Агу Азп Аа Тр Туг Маї Аа Ага ГІ єи Рго Сі 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Ага ТАг Пе Г еи Ар Тнг Рго Гей 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агду Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе
Зо
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 60
З5
Ні Геи Сп Суз Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рне Авр Спу Спіу Спу Сіл 65 70 75 80 40 Суз Маї Ні Авп Рго Ні Спу Авп Сту Аа Агу Рго Аа 5ег І єи Авп 85 90 95 маї Аг 5ег РНе Рго Маї Маї Сім Агу Азвр Аа І еи Іе Тгр Іе Ттр 45 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125 50
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140 55
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160 60 Аа іп Туг Маї Ніз Ага Айа Авп Аа Сіп Тнг Авр Айїа РНе Азр Ага
165 170 175
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу бег 5ег Ага Авп Рпе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Зо
Аа І єи Маї! Гуз Сіш Азвр Гуз Маї Ма! Ма! Спи Аа Пе Спи Ага Аг 290 295 З00
З5
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб 305 з10 315 з20 40 Авр Си Аа Аа Маї Агу Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335
Ї ви Спи Аїа Аа 45 340 «2105 21 «2115 340 50 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна 55 «4005» 21
Меї Ага Тниг Рне Маї Агу Авп Аа Тр Туг Маї Аа Аа ГІ єи Рго Стій 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агу Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аїйа І еи І еи Авр Пе 35 40 45
Сув Рго Ні Агу РНеє Аїа Рго І єи 5ег Авр СУ Пе І єи Маї Авп Стпу 50 55 бо
Ні Геи Сп Сув Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рпе Азр Сіу Спу Спу Сп 065 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95 маї Ага 5ег РНе Рго Маї Ма! Спи Агу Авр Аа І еи Пе Тр Пе Суз 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
Суз Аго Маї Авр Рго Аа Туг Агоу Тниг Маї Спу Спу Туг Спу Ні Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аїа Сп ТАг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190
І уз Пе Рго Сіу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Аг9 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго
ДЦ225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255 60
Зб
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу бег 5ег Ага Авп Рпе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Аа еи Маї Гуз Сі Авр Гуз Маї Маї Ма! Спи Аа Пе Спи Ага Аг 290 295 00
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб 305 з10 315 320
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335
Ї ви Спи Аїа Аа 340 -2105 22 «2115 340 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Рекомбінантна «4005» 22
З5
Меї І єи Тнг Рне Маї Агу Азп Аа Тр Туг Маї Аа Ага ГІ єи Рго Сі 1 5 10 15 сій еи бег СМП Гуз Рго Гей Спу Агу ТНг Пе Геи Авр Тнг Рго І єи 20 25 зо
Аа Гей Туг Агду Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе 35 40 45
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 60 50
Ні Геи Сп Суз Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рне Авр Спу Спіу Спу Сіл 65 70 75 80 55
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95 60 маї Ага 5ег РНе Рго Маї Ма! Спи Ага Азвр Аа І еи Пе Тгр Пе Суб
100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Аа Пе Рго Азр Рпе Спіу 115 120 125
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140
А5р Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аа Сіп ТНг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
Ї еи Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Стп Аїйа І єи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп Гуз 210 215 220
Зо маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго 225 230 235 240
З5
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Агу Спіу ТНиг Ніз Пе Гей ТНг Рго Си 245 250 255
Тиг ан Айва бег Суз Нів Туг Рне РНе Сіу Зег Зег Агу Азп РНе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Азр ау Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Ага Геи Маї Гуз СІм Авр Гуз Маї Ма! Маї Спи Аа Пе Спи Аго Ага 290 295 00
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Спу Пе Ага Рго Аа Меї І єи Зег Сувз 305 з10 315 320
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335 60 Гей Си Аа Аа
Зв
«2105» 23 «211» 340 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 23
Меї Ага Тниг Рне Маї Агу Авп Аа Тр Туг Маї Аа Аа Геи Рго Сіи 15. 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей
Зо 20
Аа Гей Туг Агду Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе 35 40 45 25
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 50 55 60
Ні Геи Сп Суз Рго Туг Ні Спу Геи Спи Рпе Авр Спіу Спу Спу Сип 65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95 маї Ага 5ег РНе Рго Маї Ма! Спи Ага Азвр Аа І еи Пе Тгр Пе Суб 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аа Сіп ТНг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190 60
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220
Маї бЗег Аіа Меї Геи Азп РНе Пе Аїа Маї Аїа Рго См СПу ТАг Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу Зег 5ег Ага Авп Рпе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Аа І єи Маї Гуз Сіш Авр Гуз Маї Ма! Ма! Спи Аа Пе Спи Агу Ага 290 295 00
Аго Аа Туг Маї Спи Аа Азп Су Пе Аг Рго Аа Меї І єи Зег Суб 305 з10 315 з20
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сім Гуз Гей См Сип 325 330 335
Ї ви Спи Аїа Аа 340 «2105» 24 «2115 340 «212» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «400» 24
Меї Ага Тниг Рне Маї Агу Авп Аа Тр Туг Маї Аа Аа Г єи Рго Си 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей 20 25 Зо 60 Аа Геий Туг Аг Сп Рго Азр Сіу Маї Маї Аа Аа І єи І ви Азр Пе
35 40 45
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 50 55 бо
Ні І еи Сп Суз Рго Туг Нів Спу Геи Спи Рпе Авр Сіу Спу Спу Сп 65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95 маї Аг 5ег РНе Рго Маї Маї Сім Агу Азвр Аа І еи Іе Тгр Іе Ттр 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Зо
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аа Сіп ТНг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
З5
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу бег 5ег Ага Авп Рпе Спіу 260 265 270 60 Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп ді
275 280 285
Аа І єи Маї! Гуз Сіш Азвр Гуз Маї Ма! Ма! Спи Аа Пе Спи Ага Аг 290 295 00
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб 305 З10 315 320
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335
Ї ви Спи Аїа Аа 340 «2105» 25 «2115 340 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 25
Зо Меї І єи Тнг Рне Маї Агу Азп Аа Тр Туг Маї Аа Ага ГІ єи Рго Сі 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агду Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе 35 40 45
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Ап Спу 50 55 60
Ні Геи Сп Суз Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рне Авр Спу Спіу Спу Сіл 65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Ні Спу Авп Сту Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95 маї Ага 5ег РНе Рго Маї Ма! Спи Ага Азвр Аа І еи Пе Тгр Пе Суб 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Аа Іе Рго Авр Ре Сіу 115 120 125 60
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Азп І єи Меї Авр І еи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сп Туг Маї Ні5 Агу Аа Авп Аїа Сп ТНг Авр Аа РНе Авр Ага 165 170 175
Ї еи Спи Аг Си Ма! Пе Маї Спу Азр Стпу Сім Пе Стп Аа І еи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Ттр Авп Азр Іе Аго Тр Авп ГГ ув 210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Бе Пе Нів 5ег Ага Спіу ТАг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу бег 5ег Ага Авп Рпе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Ага Геи Маї Гуз СІм Авр Гуз Маї Ма! Маї Спи Аа Пе Спи Аго Ага 290 295 00
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб 305 з10 315 з20
Авр Си Аа Аа Маї Агу Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп 325 330 335
Ї еи Сім Аа Аа 340 «-2105» 26 «2115 340 60 0о«212» РАТ
213» Штучна послідовність «223» Рекомбінантна «4005» 26
Меї Ага Тниг Рне Маї Агу Авп Аа Тр Туг Маї Аа Аа Геи Рго Сіи 1 5 10 15 сій Геи Бег Сім Гуз Рго І еи СПу Агу ТНг Пе Гей Авр Тнг Рго Гей 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агду Сп Рго Азр Сту Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе 35 40 45
Сув Рго Ні Агу РНеє Аїа Рго ГІ єи 5ег Авр СУ Пе І єи Маї Авп Су 50 55 бо
Ні Геи Сп Суз Рго Туг Ніз СПУ Гей Спи Рне Авр Спу Спіу Спу Сіл (65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго Нів Спу Авп Сіу Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95
Зо маї Аг 5ег РНе Рго Маї Маї Сім Агу Азвр Аа І еи Іе Тгр Іе Ттр 100 105 110
З5
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
Суз Агу Маї Авр Рго Аа Туг Аг ТАг Ма! Спу Спу Туг Спу Ні Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аа Сіп ТНг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
Ї ви Спи Аг Си Маї Пе Маї Сіу Азр Стпу Сім Пе Сіп Аа І еи Меї 180 185 190
І уз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Айа Гуз РНе І еи Ат 195 200 205 бо Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув
210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аа Рго Спи Спу Тк Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
Тиг ам Аа 5ег Суз Ні Туг Рне РНе Сіу Зег Зег Агу Авп Рпе Спу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Аа еи Маї Гуз Сі Ар Гуз Маї Маї Маї Спи Аа Пе Спи Агу Ага 290 295 00
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб :З05 з10 315 320
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Спи Гуз І еи СПми Сп 325 330 335
Зо
Ї еи Сім Аа Аа 340
З5 «2105» 27 «2115 340 «2125» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 27
Меї І єи Тнг Рне Маї Агу Азп Аа Тр Туг Маї Аа Ага ГІ єи Рго Сі 1 5 10 15 сім еи бег СМП Гуз Рго Гей Спу Агу ТНг Пе Геи Авр Тнг Рго І єи 20 25 Зо
Аа Гей Туг Агу Сп Рго Азр Сіу Маї Маї Аа Аа Г єи І єи Ар Пе 35 40 45
Сув Рго Ніз Агу Ре Аа Рго І ви Зег Авр Су Пе Геи Маї Азп Стпу 50 55 60 60
Ні І еи Сп Суз Рго Туг Нів Спу Геи Спи Рпе Авр Спіу Спу Спу Сип 65 70 75 80
Суз Маї Ні Авп Рго І єи Стпу Авп Су Аа Агу Рго Аа 5ег І еи Авп 85 90 95
Маї Агу 5ег Ріє Рго Маї Маї Сім Агу Азр Аїа І єи Іе Тр Іе Ттр 100 105 110
Рго Стпу Авр Рго Аа І ви Аа Авр Рго Сіу Ага Пе Рго Азр Рпе Стпу 115 120 125
Суз Агу Маї Ар Рго Аа Туг Ага Тнг Маї Сіу Сіу Туг Спу Ніз Маї 130 135 140
Авр Суз Авп Туг І уз І еи І єи Маї Авр Авп І еи Меї Ар І єи Су Нів 145 150 155 160
Аа Сіп Туг Ма! Ні Агу Аа Авп Аа Сіп ТНг Авр Аїа Ре Авр Ага 165 170 175
Гей Сі Агу Спи Маї Пе Гу Спу Азр Стпу Спи Пе Сп Айа І еи Меї 180 185 190
Гуз Пе Рго Спу Спіу Тнг Ро 5ег Маї І єи Меї Аїпа Гуз РНе І єи Агу 195 200 205
Сіу Аіа Азп Тнг Рго Маї Авр Аа Тгр Авп Азр Іе Ага Тр Авп ГГ ув 210 215 220 маї Зег Аа Меї І еи Азп Рне Пе Аїа Маї Аїа Рго СП СПу ТАг Рго 225 230 235 240
Гуз Спи Сп Зег Пе Нів 5ег Ага Спіу ТНиг Нів Пе Гей ТНг Рго Спи 245 250 255
ТАиг ан Айва бег Суз Нів Туг Рне РНе Сіу Зег Зег Агу Азп РНе Спіу 260 265 270
Пе Ар Авр Рго Сім Меї Авр Су Маї І єи Агу 5ег Тгр Сп Аа Сіп 275 280 285
Ага Геи Маї Гуз СІм Авр Гуз Маї Ма! Маї Спи Аа Пе Спи Аго Ага 290 295 00 60
Аг Аа Туг Ма! Спи Аа Авп Су Пе Аг Рго Аїа Меї І єи Зег Суб 305 З10 315 з20
Азр Сли Аїа Аїа Маї Ага Маї Зег Агу Спи Пе Сіи Гуз Геи СПИ Сп з2г5 330 335
Ї еи Си Аїа Аа 340 -2105» 28 «2115 1023 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005» 28 адсісасії ісанадааа сусцддіас дносідсас Нссдадода дідадсдад бо аадссісіад даадаасіаї ссісдаїасі ссасіадсіс ісіаїсдіса ассюасдда 120 анаїсосід сссідсіїда ташоіссу саїсодснсо сіссундадідасодіай 180 сіадісаасд дасаїсісса дідіссаїаї сасодісідд аашодасда аддідассая 240
Зо
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддадсс сдсссідсії сісідаасоаі дсдаїсанс 300 ссідісдща ааададасос айдаїсідд аїсюдссід дадаїссадс асісдсадаї 360
З5 сссдддста ісссщасії дддідісаї дндаїссад снассдіас ідісддаддаі 420
Тасддаїсасд ддасідсаа сіасаадсіс спдіддаїа ассісадда снпддасас 480 дсісадіасд ідсассдсдс іаасдсссаа асадасодссі ісдаїадасі дадсодад 540 дюаїсано дсдасддсда даїссадодсо сісаїдаада ісссіддідо сасасссіса 600 дисісащда сіааднсії дсоаїодідсі аасасассад Пдасоссід даасдасаїс 660 сддаюдаага адаїдісддс їагдсідаас саїсдс9д9 Іісдсдссдудда адддасодсся 720 ааддадсаді сааїссасіс ссдаддаасс саїаїсснца сіссідадас с сдаддсаадс 780 тдссанасі Ісйсддіад носсдсаас Нсодіагад асдаїссада даддасоаді 840 дисісадда дсіддсаадс Ісаадсссід дідааддадо асааацдчіодісонддаадсі 900 аїсдааадас ддаддосна сдісдаадсд аасдддайса дасссоссаї дпдіссідс 960 дасдаддсад ссдісаддаї аїссадддад айдадаадс ісдаасаасіадаадсядся 1020 ща 1023 бо «2105» 29
«2115 1020 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 29 адассіїсу іссдсааїдс сіддіаюю оасддсосідс ссдаддаасі діссдаааад бо ссдсісддсс ддасдансі сдасасассу сісдсдсісі ассдссадсс сдасддідід 120 дісдсдасас ідсісдасаї сідіссдсас сдсісдсодс сдсідадсда сддсаїссіс 180 дісаасодсс аїсіссааїд ссссіаїсас дддсіддааї Ісдаддасда сддосадідс 0240 діссаїаасс сдсасддсаа Іддсдсссдс ссддсійсодс ісаасдіссоу сісснсосу 300 аюдіддадс дсдасососі даїсіддаїс дасссдаса аіссддсосі ддссдаїссї 360 дддасдаїсс ссдасіїсдд сідссдсодіс даїсссодссі аїсддассді сдасддсіа!ї 420 ддасащісд асідсаасіа саадсідсід дісдасаасс іІдаїддассісдудссасудсс 480 сааїаїдісс аїсдсдссаа сдсссадасс дасдсснсо ассдасідда дсосдадат 540 аїсдісддсу асддідадаї асаддсосід аїдаадайс ссдоасоддсас дссдадсуюд 600 сідаюасса аднссідсд сддсдссааї асссссдісу асдсцддаа сдасаїссдс 660
Зо
Іддаасаадд дадсосодаї дсісаасне аїсосодідо9 сдссддаада сассссдаая 720 дадсададса Іссасісдсду сддіасссаї аїссдассс ссдадасдда досдадсідс 780
З5 санашсі ісддсіссіс дсдсаацшіє ддсаїсдасо аіїссодада ддасоддсоюд 840 сідсдсадсі ддсаддсіса ддсодсідаїс ааддаддаса аддісдісдісдадосдаїс 900 дадсдссодсс дсоссіайії сдаддсдааї ддсаїссосс садсдасі дісаїдсдас 960 даадссдсад іссдідісад ссдсдадаїс дадааасцод адсадсісда адссдссіда 1020 -2105» 30 «2115 1023 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 30 адсісассі ісдпаддаа сдссіддіас дісдссдсіс ісссюдадда дсддадсдад бо аадсссіду дісдсассаї ссіадасасі ссуйадссс Шассдсса дссідасдас 120 діадщдос9д сссдсйоа саїсідсссу саїадойнсуд сіссдсісад сдасддсаєс 180 сісдісааса ддсаїсіса дідсссдіас сасддасщо аашдасда сддідддсая 0240 бо
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддсдса сддссадсії сссісаасдііаддісдне 300 ссіднадїсу адсдсдасодс асдагсіда аїсіддссід дсдасссадс ісіддссдаї збо ссаддадсса йсссдасії сддандссдс діддасссаяд ссіаїсддас ддісдасоаді 420 тТасдддсасо іІсданодіаа сіаїаадсіс сндіддаса ассцада Шодоссас 480 дсісадіасд дсассддодс їаасосісад асідасоссі йдассдісі сдааадддад 540 "7 дісаїсцісЯ дсдасддада дайсаддсу стаюаада ісссіддадоу сасдсссісї 600 дюсісащдо сдаадшцсї сададдсдсу аасасосссо їддасоссід даасдасаїс 660 сдсюддааїйа адздісіссдс даїдсідаас йсаїсдссоу НОдсдсссда ддодсасассс 720 ааададсаді сааіссасад сададддасс саїайснца сассддааас сдадосіаді 780 дссасіасі Існсоддсіс дісасддааї Нсоддатад асдаїссдда даддасдаї 840 7 оанснсдаї сіддсаадс дсааадсісіс дісааддаад аїааддоідді союдадосі 900 аїсдадсоїа ддсодсоссіа саїдадосо аасдаїана ддсссодсдаї дсідіссіюдс 960 дасдаддсса саднадавдії дісдсдсдад аїадаааадс юдадсадсіададдссдсес 1020 ща 1023 «2105 31 «2115 1023 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 31 аддссасії ісданадааа содсіддіас дапосідсас йссідадда чпдадсдад бо 7 аадссісіад даадаасіаї ссісдаїасі ссасіадсіс ісіаїсдіса ассюасдда 120 анаїсосід сссідсіїда ташцісса саїсдсісо сіссундад дасоадіай 180 сіадісаасд дасаїсісса дідіссаїаї сасодісідд аашодасда аддідассая 240
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддадсс сдсссідсії сісідаасоаі дсдаїсанс 300 ссідісдща ааададасос айдаїсідд аїсідсссід дадаїссадс асісдсадаї 360 7 сссдддста ісссщасії дддідісаї дндаїссад снассдіас ідісддаддаі 420
Тасддаїсасд ддасідсаа сіасаадсіс спдіддаїа ассісадда снпддасас 480 дсісадіасд ідсассдсдс іаасдсссаа асадасодссі ісдаїадасі дадсодад 540 дюаїсано дсдасддсда даїссадодсо сісадаада ісссіддідуд сасасссіса 600 дисісащда сіааднсії дсоаїодідсі аасасассад Пдасоссід даасдасаїс 660 60 сддаюдаага адаїдісддс їагдсідаас саїсдс9д9 Іісдсдссдудда адддасодсся 720 ааддадсаді сааїссасіс ссдаддаасс саїаїссна сіссідадас сдаддсаадс 780 тдссанасі Ісйсддіад носсдсаас Нсодіагад асдаїссада даддасоаді 840 дисісадда дсіддсаадс Ісаадсссід дідааддадо асааацдчіодісонддаадсі 900 аїсдааадас дааддосна сдісдаадсд аасдддайса дасссоссаї дпПдіссідс 960 "7 дасдаддсад ссдісаддаї аїссадоадад айдадаадс ісдаасаасіадаадсядся 1020 ща 1023 -2105 32 «2115 1023 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 32 адсісасії Іісднадааа сусіддіас дпосідсас Нссдадода одадсдад бо аадссісіад даадаасіаї ссісдаїасі ссасіадсіс ісіаїсдіса ассюасдда 120 анаїсосід сссідсіїда ташціссо саїсдсисо сіссдйдад'дасодіан 180 7 сіадісаасд дасаїсісса дідіссаїаї сасодісідд аашдасда аддіддссад 240
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддадсс сдсссідсії сісідаасоаі дсдаїсанс 300 ссідісдща ааададасос айдаїсідд аїсідсссід дадаїссадс асісдсадаї 360 сссдддста ісссщасії дддідісаї дндаїссад снассодіас ідісддаддаі 420
Тасддаїсасд ддасідсаа сіасаадсіс спдіддаїа ассісадда снпддасас 480 7 дсісадіасд ідсассдсдс іаасдсссаа асадасодссі ісдаїадасі дадсодад 540 дюаїсано дсдасддсда даїссаддсо сісаїдаада ісссіддідо сасасссіса 600 дисісащда сіааднсії ачсаїодідсі аасасассад йдасоссід даасдасаїс 660 сддаюдаага адаїдісддс їагдсідаас саїсдс9д9 Іісдсдссдудда адддасодсся 720 ааддадсаді сааїссасіс ссдаддаасс саїаїссна сіссідадас с сдаддсаадс 780 7 тдссанасі Ісйсддїад носсдсаас Нсодіагад асдаїссада чаїддасуді 840 дисісадда дсіддсаадс Ісаадсссід дідааддадо асааацдчіодісонддаадсі 900 55 аїсдааадас дааддосна сдісдаадсд аасдддайса дасссоссаї дпПдіссідс 960 дасдаддсад ссдісаддаї аїссадддад айдадаадс ісдаасаасіадаадсядся 1020 ща 1023
«2105» З3 «2115 1023 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 33 адодссассі ісдіссдсаа ідссіддіаї аддсоддсас їдсссдадда асідіссдаа бо аадссдсісд дссддасдаї ісісдасаса ссдсісосос іІсіассдсса дсссдасодді 120 дюдісас99 сосідсісда саїсідієсо сассдснсо сдссасщад сдасддсаїс 180 сісдісаася оссаїсісса аїдссссіаї сасдддсідо аайсдацд соадсдадсад 240
Ідсдіссаїа асссдсасдд сааїддсодсс сдсссодсії сдсісаасдіссодсісснс 300 ссдащаї99 адсдсдасодс асідаїсідо асідісссу дсдаїссдас дсіддссдаї 360 ссідддасда іссссдасії сддсідссдс дісдаїсссо ссіаїсодас сдісддсддс 0420 тададсаїд Ісдасюсаа сіасаадсід сіддісдаса ассюдацда ссісддссас 480 дсссааїаїд іссаїсдсдс саасдсссад ассдасдссі ісдассддсі ддадсдсдад 540 дюаїсаїсод дсдасддіда даїасадодсу сідаїдаада Нсссддсда сасдссдадс 600
Зо дюсідаїщдаод ссааднссї дсасддсосс ааїасссссо ісдасосіду даасдасаїс 660 сдсіддааса аддідадсдс даїдсісаас йсаїсдсда ддсодссдда аддсассссд 720
З5 ааддадсада дсаїссасіс дсоасддіасс саїаїссіда сссссдадас ддаддсдадс 780 тдссанай іІсйсддсіс сісдсдсааї Псдосаїсо асдаїссдда даїддасддс 840 дюсідсодса дсіддсаддс ісаддсосід дісааддадо асааддісді сдісдадася 900 аїсдадсдсс дссдсдссіа щісдадосо аадасаїсс дсссдасдаї осідісдідс 960 дасдаадссяд садіссдіді садссдсдад аїсдадаадс Пдадсадсі сдаадссдсс 1020 ща 1023 «2105» 34 «2115 1023 -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 34 аддссасії ісданадааа содсіддіас дапосідсас йссідадда чпдадсдад бо аадссісіад даадаасіаї ссісдаїасі ссасіадсіс ісіаїсдіса ассюасдда 120 бо анаїсосід сссідсіїда ташціссо саїсдсисо сіссдйдад'дасодіан 180 сіадісаасд дасаїсісса дідіссаїаї сасодісідд аашодасда аддідассая 240
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддадсс сдсссідсії сісідаасоаі дсдаїсанс 300 ссідісдща ааададасодс андаїсідд аїсідассю дадаїссадс асісдсадаї збо сссдддста ісссщасії дддідісаї дндаїссад снассдіас ідісддаддаі 420 "7 Тасддаїсасд ддасідсаа сіасаадсіс спдіддаїа ассісадда снпддасас 480 дсісадіасд (дсассдсдс іаасдсссаа асадасодссі ісдаїадасідадсаїдад 540 дюаїсано дсдасддсда даїссаддсо сісаїдаада ісссіддідо сасасссіса 600 дисісащда сіааднсії дсоаїодідсі аасасассад Пдасоссід даасдасаїс 660 сддаюдаага адаїдісддс їагдсідаас саїсдс9д9 Іісдсдссдудда адддасодсся 720 7 ааддадсаді сааїссасіс ссдаддаасс саїаїссна сіссідадас с сдаддсаадс 780 тдссанасі Ісйсддіад носсдсаас Нсодіагад асдаїссада даддасоаді 840 дисісадда дсіддсаадс Ісаадсссід дідааддадо асааацдчіодісонддаадсі 900 аїсдааадас ддаддосна сдісдаадся аасдддаїса дасссдссаї дідіссідс 960 дасдаддсад ссдісаддаї аїссадддад айдадаадс ісдаасаасіадаадсядся 1020 7 ща 1023 «2105 35 «2115 1023 «212» ДНК 213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 35 адсісассі ісдіссдсаа Ідссіддіаї адддсддсдс їдсссдадда асідіссдаа бо аадссдсісд дссддасдаї ісісдасаса ссдсісосос іІсіассдсса дсссдасодді 120 дідаїсос99 сусідсісда саїсщіссу сассусіїсуд сдссдсідад сдасддсаїс 180 сісдісаася оссаїсісса аїдссссіаї сасдддсідо аайсдацд соадсдадсад 240 7 Ідсдіссаїа асссдсасдд сааїддсдсс сдсссддсії сдсісаасді ссосіссне 300 ссдащаї99 адсдсдасодс асідаїсідо асідісссу дсдаїссдас дсіддссдаї 360 ссідддасда іІссссдасії сддсідссдс дісдаїсссо ссіаїсуддас сдісддсддс 0420 тададсаїд Ісдасіюсаа сіасаадсід сіддісдаса ассюдацда ссісддссас 480 дсссааїаїд іссаїсдсдс саасдсссад ассдасдссі ісдассддсі ддадсдсдад 540 60 дюаїсаїсод дсдасддіда даїасаддсу сідаїдаада Псссдосоу сасоссдадс 600 дюсідаїщдаод ссааднссї дсасддсосс ааїасссссо ісдасосіду даасдасаїс 660 сдсіддааса аддідадсдс даїдсісаас Нсаїсдсда ддсодссдда аддсассссд 720 ааддадсада дсаїссасіс дсоасоддіасс саїаїссіда сссссдадас ддаддсдадс 780 тдссанай іІсйсддсіс сісдсдсааї Псдосаїсо асдаїссдда даїддасддс 840 "7 дюсідсодса дсіддсаддс ісаддсосід дісааддадо асааддісді сдісдадосо 900 аїсдадсдсс дссдсдссіа щісдадосо аадасаїсс дсссдасдаї осідісдідс 960 дасдаадссяд садіссдіді садссдсдад аїсдадаадс Ндадсадсі сдаадссдеос 1020 ща 1023 20. «2105» 36 «2115 1023 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 36 аддссассі ісдунпаддаа сдссіддіас дісдссосіс Ісссідадда дясідадсдад бо 7 аадсссіщда дісдсассаї ссіадасасі ссойадссс Шассдсса дссідасддс 120 діадщдос9д сссдсйоа саїсідсссу саїадойнсуд сіссдсісад сдасддсаєс 180
З5 сісдісааса ддсаїсіса дідсссдіас сасддасщо аашодасод содіддосад 240
Ідіщіссаса асссдсасдд саасддсдса сддссадсії сссісаасдііаддісдне 300 ссідндісаЯ адсдсдасдс асщда!йсіда аїсіддссід дсдасссадс ісіддссдаї збо 7 ссаддадсса йсссдасії сддандссдс діддасссаяд ссіаїсддас ддісдасоаді 420 тТасдддсасо іІсданодіаа сіаїаадсіс сндіддаса ассцада Шододссас 480 дсісадіасд Ідсассддодс їаасосісад асідасдссі пдассдісі сдааадддад 540 дісаїсцісЯ дсдасддада дайсаддсу стаюаада ісссіддадоу сасдсссісї 600 дюсісащдод сдаадшцсї сададдсдсд аасасдсссу юдасоссід даасдасаїс 660 7 сдсюддааїйа адздісіссдс даїдсідаас йсаїсдссо Нудсдсссда ддосасассс 720 ааададсаді сааіссасад сададддасс саїайснца сассддааас сдадосіаді 780 двссасіасі існсоддсіс дісасддааї Нсоддатад асдаїссдда даддасоді 840 оанснсдаї сіддсаадс дсааадсісіс дісааддаад аїааддоідді союдадосі 900 аїсдадсоїа ддсососсіа соаїдадосо аасодіаца дасссодсдаї дсідіссідс 960 60 дасдаддсса саднадавдії дісдсдсдад аїадаааадс юдадсадсіададдссдсес 1020 ща 1023 «2105 37 «2115 1020 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 37 адсісасії ісанадааа сусцддіас дносідсас Нссдадода дідадсдад бо аадссісіад даадаасіаї ссісдаїасі ссасіадсіс ісіаїсдіса ассідасдда 120 анаїсосід сссідсіїда ташціссо саїсдсисо сіссдйдад'дасодіан 180 сіадісаасд дасаїсісса дідіссаїаї сасодісідд аашодасда аддідассая 240
Ідіщіссаса асссдсісда саасддадсс сдсссідсії сісідаасді осдаїсайс зо ссідісдща ааададасос айдаїсідд аїсюдссід дадаїссадс асісдсадаї 360 сссдддста ісссщасії дддідісаї дндаїссад снассдіас ідісддаддаі 420
Тасддаїсасд ддасідсаа сіасаадсіс спдіддаїа ассісадда снддасас 480
Зо дсісадіасд ідсассдсдс іаасдсссаа асадасодссі ісдаїадасі дадсодад 540 діюаїсааад дсдасдасода даїссаддсо сісаюдаада ісссіддідоа сасасссіса 600 дисісащда сіааднсії дсоаїодідсі аасасассад Пдасоссід даасдасаїс 660 сддаюддааїа аддіщдісддс їаїдсідаас Псаїс9с99 Ісдсдссодда ададдасоссд 720 ааддадсаді сааїссасіс ссдаддаасс саїаїссна сіссідадас с сдаддсаадс 780 тдссанасі Ісйсддіад носсдсаас Нсодіагад асдаїссада даддасоаді 840 дисісадда дсіддсаадс Ісаадсссід дідааоддадо асааадіддаі соайдаадсі 900 аїсдааадас дааддосна сдісдаадсд аасдддайса дасссоссаї дпПдіссідс 960 дасдаддсад ссдісаддаї аїссадддад айдадаадс ісдаасаасіадаадсядся 1020 -2105» 38 «-2115 35 «2125» РАТ «213» Созвуріит гаітопоаії -4005» 38
Меї ГГ ем Авп Їе Аїа Рго 5ег Суз Ма! І еи Аа бег СпПу Пе Зег ГГ ув 1 5 10 15 бо
Рго Маї Тниг Гуз Меї Аа 5ег Тнг Спи Авп І уз Ар Авр Нів 5ег 5ег 20 25 Зо
АаГуз5 Аг 35 «2105» 39 «-2115 105 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 39 адснааса Ндсдссдад Ново дссадсдодда ісісіаадсс сдодассаад бо атюдаосіадса сддадаасаа ддасдассас адсадсдсса адада 105 -2105» 40 «2115 179 «212» РАТ «213» Епіегобасівг сіоасає «4005» 40
Меї Гуз Аа Г еи Маї! І єи Туг Зег Тиг Агу Авр Стпу Сп Тнг Ні Аіа 1 5 10 15
Пе Аїа 5ег Туг Пе Аіа бег Суз Меї Гуз Сім І уз АІа Спи Суз Авзр 20 25 Зо ма! Ме Авр І єи Тнг Ні5 Стпу Сім Нів Маї Авп І єи Тиг Сп Туг Азр 35 40 45
Сіп Ма! І єи Пе Стпу Аа 5ег Пе Аго Туг Сіу Ні Рпє Авп Аїа Маї 50 55 бо
І ейи Авр Гуз Ре Пе Гуз Агу Авп Маї Авр Сп І єи Авп Авп Меї Рго 65 70 75 80
Бег АІа Ріпе РНе Суз Маї Авп Геи ТНг Аїа Аго Гуз Рго Сім Гуз Аг9 85 90 95
Тиг Рго Сп Тнг Авп Рго Туг Маї Агу Гуз РнНе І єи ГГ еи Авіа Тнг Рго 100 105 110
Тр Сп Рго Аа І еи Сув Стпу Ма! Рне Аїа Сту Аа І еи Аго Туг Рго 115 120 125 60
Аго Туг Ага Ттр Іе Азвр Гуз Ма! Ме! Пе Сп І еи Пе Меї Ага Меї 130 135 140
Тиг сапу Спу Спи ТНг Авр ТНг Зег Гуз Спи Маї Спи Тук ТАг Авр Ттр 145 150 155 160 сім Сип Маї Гуз Гуз Ре Аа Сіи Авр РНе Аа Гуз І еи Зег Туг Гув 165 170 175
Гуз Ага І єи «2105 41 «2115 178 «212» РАТ «213» Рапіоєа апапаї5 «4005 А1
Меї Гуз Аа Г еи Іе І еи Рне Зег Тнг Ага Ар Стпу Сіп ТАг Сп Гув 1 5 10 15
Пе Аїа 5ег Аа Пе Аа Авр Си Пе І ув пу Сіп Сп бег Суз А5р 20 25 Зо ма! Ме Авп Іе Сіп Ар Аїа ГІ уз ТНг І еи Авр Тгр Сп Сп Туг Азр
З5
Аго Маї Геи Пе Сіу Аа 5ег Пе Ага Туг Сіу Ні Рне Сіп Рго Маї 60 40 маї Авп Спи Рне Маї Гуз Нів Авп І єи І еи Аа І ви Сп Стп Аго Маї 65 70 75 80 45 Зег Сіу Ріпе РНе З5ег Маї Авп ГІ єи ТНг Аїа Аго Гуз Рго Си Гуз Аг9 85 90 95 зЗег Рго Сім ТАг Азп Аа Туг Тниг Ма! Гуз РНе Геи Аа Сп 5ег Рго 50 100 105 110
Тр Сп Рго Авр Суз Суз Аа Маї Рнє Аїа Сіу Аа ГІ еи Туг Туг Рго 115 120 125 55
Аго Туг Ага Тгтр Ре Азр Ага Маї Меї Іе Сіп Рне Пе Меї Агу Меї 130 135 140 60
Тиг сапу Сну Спи ТНг Авр Аїйа 5ег Гуз Сім Маї Спи Туг ТАиг Авр Тр 145 150 155 160 ап Сп Маї Сип Агу Ре Аїйа Агу Азвр РНеє Аїа Сп ГГ еи Рго Сіу Гуз 165 170 175 зег Туг «2105» 42 «2115 177 15. «212» РАТ «213» Рапіова 5іемагаії «4005» 42
Меї Гуз Аа Г еи Іе І еи Туг Зег ТАг Агу Авр Стпу Сп Тнг Ага Гуз 1 5 10 15
Пе Аа бег 5ег Пе Аїа Азвр Маї Іе Агу Сп Сип Сп (и Суз Авр 20 25 Зо ма! І еи Авп Пе І уз Азр Аа 5ег І єи Рго Ар Тр Аа Сп Туг Азр
Зо
Аго Маї Геи Пе Сіу Аа 5ег Пе Ага Туг Спу Ні Рне Сіп Рго Маї бо
З5 маї Авр Гуз РНе Маї Гуз Сіп Нів І еи Ніз Сіи Ї еи Сп сій Агу ТНг 65 70 75 80 40 Зег сіу Ріпе РНе Зег Маї Авп ГІ єи ТНг Аїа Аго Гуз Рго Си Гуз Аг9 85 90 95 зЗег Рго Сім ТАг Азп Аа Туг Тниг Сп Гуз РнНе І єи Аїа Ні 5ег Рго 45 100 105 110
Тр Сп Рго Авр Суз Суз Аа Маї Рнє Аїа Сіу Аа ГІ еи Туг Туг Рго 115 120 125 50
Аго Туг Ага Тр Ріє Авр Ага Маї Меї Іе Сіп І еи Пе Меї Агу Меї 130 135 140 55
Тиг сапу Сну Спи ТНг Авр Зег Тит Гуз Спи Маї Спи Тук ТАг Авр Ттр 145 150 155 160 60 Сп Сп МаїЇ Зег Тнг РНе Аа Авп Азвр РНє Аа ап Геи Рго Спу Гуз
165 170 175 зег «210» 43 «2115 181 «212» РАТ «213» ЕзвсПегісніа сої «4005» 43
Меї Гуз Тит І еи Пе Геи РНе Зег ТНг Агу Авр Стпу Сп ТНг Агу Сі 1 5 10 15
Пе Аа 5ег Туг І єи Аа бЗег Спи Г еи Гуз Спи ГГ еи СПу Пе Сп Аа 20 25 Зо
Азр Маї Авіа Авп Маї Ніз Ага Пе Спи Спи Рго Сіп Тгр Спи Авп Туг 35 40 45
Азр Аг Маї Ма! Пе Спу Аа Зег Пе Агу Туг Спу Ні Туг Ні 5ег 50 55 60
Зо
Аа РНе Сіп Сім РНе Маї Гуз Гуз Ні Аа Тнг Ага Гей Азп Зег Меї 65 70 75 80
Рго 5ег Аа РНе Туг Зег Маї Авп Геи Маї Аа Ага Гуз Рго Сім Гув 85 90 95
Агу Тнг Рго Сп Тнг Авп 5ег Туг Аа Аго Гуз Рпє І єи Меї Авп 5ег 100 105 110
Сіп Тр Аг Рго Авр Агу Суз Аа Ма! Пе Аа Су Аа І єи Ага Туг 115 120 125
Рго Агу Туг Аг9 Тр Туг Азр Агу Рпе Ме Пе ГГ уз І ви Пе Меї Гуз 130 135 140
Меї Зег СПу Спу Спи Тиг Ар ТАг Агу Гуз Сім Маї Ма! Туг Тиг Азр 145 150 155 160
Пр аїш ап Маї Аіа Азп Рне Аїйа Аг Си Іе Аїйа Нів І еи Тит А5р 165 170 175
Гуз Рго Ти єи Гу бо 180
«2105» 4А «2115 178 00о«212» РАТ «213» Егміпіа юієїапа «4005» 44
Меї Гуз Аа Г еи Іе І еи Рне Зег Зег Агу Спи Сіу Сп ТНг Ага Спи 1 5 10 15
Пе Аїа 5ег Туг Пе Аа Азп 5ег Пе І уз Сіи Сіи Меї Спи Сув Авр
Зо
Маї Рне Авп Іе І єи Агу Маї Спи Сіп Пе Авр Ттр 5ег Сп Туг Азр 35 40 45 20
Аго Ма! Геи Пе Сіу Спу Бег Пе Ніз Туг Стпу Ні РнНе Ні Рго Аіа 50 55 60 25
Ммаї Ага Гуз РНе Маї Гуз Ага Нів І еи Нів Спи Геи Сп Сіп Ага Зег 65 70 75 80
Бег сіу Рпе Ріе Суз Маї Авп ГГ еи Тнг Аа Ага Гуз Аа Авр Гуз Ага 85 90 95
Тиг Рго Сп Тнг Авп Аа Туг Меї Аго Гуз РнНе Г еи І єи Сп бег Рго 100 105 110
Тр Сп Рго Авр Суз Суз Аа Маї Ріє Аїа Сіу Аа І ви Аго Тут ТНг 115 120 125
Аго Туг Ага Тр Ріє Авр Ага Маї Меї Іе Сіп І еи Пе Меї Агу Меї 130 135 140
Тиг сапу Спу Спи ТНг Авр ТНг Зег Гуз Спи Маї Спи Тук ТАг Авр Ттр 145 150 155 160
ТАг Сп Маї Аа Ага Рнеє Аїа Сіп Спи РНе Аїа Ні І еи Рго Су І уз 165 170 175
Тиг ап «2105» 45 «2115 179 60 0о«212» РАТ
«213» Ресіобасівєлит сагоїомогит «4005» 45
Ме! Гуз Аа еи Іе Маї Рпе 5ег Зег Агу Азр Стпу Сп ТНиг Агу Аа 1 5 10 15
Пе Аїа 5ег Туг Пе Аа Азп ТНг І єи Гуз СПУ ТНг ЇЇ ви Сіи Суз Азр 20 25 Зо маї Ма! Азп Маї І єи Авп Аа Авп Ар Іе Авр І еи 5ег Сп Туг Азр 35 40 45
Аг Маї Аа Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Су Агу Ре Нів Рго Аа 50 55 бо
Маї Авп СіІп Ре Пе Ага Гуз Нів І еи ТАг Зег І еи Сп Сіп І еи Рго 65 70 75 80
Зег Аа Рпе РНе 5ег Маї Авп І єи ТАг Айїа Аго Гуз Рго Сім Гуз Аг9 85 90 95
Тит Пе Стп Тнг Авп Аїйа Туг ТНиг Агу Гуз РНе Геи І еи Авп 5ег Рго 100 105 110
Тр Сп Рго Авр І єи Суз Сувз Маї Ріє Аїа Сіу Аа ГІ еи Аго Туг Рго 115 120 125
З5
Аго Туг Ага Тгтр Ре Азр Ага Маї Меї Іе Сіп Гей Пе Меї Ага Пе 130 135 140
Тиг сапу Спу Спи ТАг Авр Зег Тит Гуз Спи Пе Спи Тук ТНг Авр Тр 145 150 155 160 ап Сп Маї Аіа Агу Ріє Аа Сіп Авр РнНе Аа сСіп І єи Аа Аа ГГ ув 165 170 175
Авп Рго Аа «2105» 46 «2115 179 «212» РАТ «213» ЗпітуеїІа біайає «4005» 46 60 Меї Гуз ТНг І еи Пе Гей РНе Зег ТНиг Агу Авр Сту Сп ТНг Нів Гуз
1 5 10 15
Пе Аа Агу Ніз Пе Аїа Стпу Ма! І еи Спи СтТи Сп Су І ув Аіа Суз 20 25 Зо
Си І еи Маї Авр І єи Геи Сп Рго Спіу Спи Рго Авр Ттр 5ег Тнг Маї 35 40 45
Сім Суз Маї Маї І еи Стпу Аа 5ег Пе Агу Туг Сіпу Ні РнНе Нів Гуз 50 55 60 зЗег РНе Іе Агу РНе Маї Азп Тнг Ніз Аїа Сіп Аго І еи Авп Азп Меї 65 70 75 80
Рго Сіу Аа І еи Ре Тнг Маї Авп І єи Маї Аа Агу Гуз Рго Сі ГГ ув 85 90 95
Сіп Зег Рго Сп ТНг Авп Зег Туг ТНг Ага Гуз РнНе І єи Аа Аа 5ег 100 105 110
Рго Ттр Сп Рго Сп Агу Суз Сіп Маї Рне Аїа Сіу Аа Геи Аг9 Туг 115 120 125
Зо
Рго Ага Туг Зег Тр Туг Азр Агу Меї Ме! Пе Агоу ГІ єи Пе Меї ГГ ув 130 135 140
З5
Меї Аа Спу Спу Спи Тиг Авр Тнг Аго Гуз Спи Маї Спи Туг ТАг Азр 145 150 155 160
ТПграїп 5ег Ма! Тниг Агу Рнеє Аїа Аго Си Пе Аа Сіп І ви Рго Спу 165 170 175 сій Тег Аг9 «2105» 47 «2115 178 «212» РАТ «213» Рапова 5іємагаії «4005» 47
Меї Гуз Аа Г еи Іе І еи Ре Зег Зег Агу Авр Спу Сіп ТАг Сп Гей 1 5 10 15
Пе Аїа 5ег 5ег Пе Аа Гуз Спи Ї єи Си Спіу Гуз Сп Аа Суз Ар бо 20 25 Зо ма! І еи Авп Пе Гей Авр Тниг ТНг Азп Маї Спи Тер ТАг Сп Туг А5р 35 40 45
Аго Маї Геи Пе Сіу Аа 5ег Пе Ага Туг Спу Нів РНе Ні Рго Аа 50 55 60 маї Аа Сіи РНе Маї Гуз Ага Нів Сип Ага Спи Геи Сп Сіп Агу Зег 65 70 75 80
Зег Спу Рне РНе 5ег Маї Авп ГІ єи ТНг Айїа Аго Гуз Рго Си Гуз Аг9 85 90 95 зЗег Рго Сім ТАг Азп Аа Туг Тнг Аа Гуз РНе Геи Авп Сп 5ег Рго 100 105 110
Тр Сп Рго Авр Суз Суз Аа Маї Рнє Аїа Сіу Аїа І еи Аго Туг Рго 115 120 125
Аго Туг Ага Ттр Ріе Азр Ага Іе Меї Пе Сіп Гей Пе Меї Ага Меї 130 135 140
Зо
Тиг сапу Спу Спи ТНг Авр 5ег Зег Гуз Сім Маї Сім Туг Тнг Авр Тр 145 150 155 160
Сп Сп Маї ТНиг Ага Рне Аїа Сіп Спи Рнеє Аа Агу Гей Рго Су І уз 165 170 175
Тпиг Зег «2105» 48 -2115 180 «212» РАТ «213» Епівегорасієг сіоасає «4005» 48
Меї Гуз Тит І еи Пе Геи РНе Зег ТНг Агу Авр Стпу Сп ТНг Агу Сі 1 5 10 15
Пе Аїа Аа Рнеє І єм Аа 5ег Сі І єи Гуз Спи Сп СПУ Пе Туг Аа 20 25 Зо
Азр Маї Іе Авп І єи Авп Аго ТАг Спи Сі Пе Аїа Тр Сп Спи Туг 35 40 45 60
Азр Аг Маї Ма! Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Спу Ні РНе Нів Рго 50 55 60
Аа Маї Азр Агу РНе Маї Гуз Гуз Нів ТАг Спи ТАг І еи Авп зег І єеи 65 70 75 80
Рго Стпу АІа РНе РнНе 5ег Маї Азвп І єи Маї Аїа Аго Гуз Аа Си І ув 85 90 95
Агу Тнг Рго Сп Тит Авп 5ег Туг ТНг Аго Гуз Рпє І єи Гей Авп 5ег 100 105 110
Рго Тр Гуз Рго Аа Аа Суз Аа Маї РНе Аїа Сту Аа І єи Ага Туг 115 120 125
Рго Агу Туг Аго9 Тр Туг Азр Агу Рпе Меї Іе Агу І еи Пе Меї ГГ уз 130 135 140
Меї Тиг Спу Спу Спи Тк Ар ТАг Аг Гуз Спи Маї Маї Туг Тиг Азр 145 150 155 160
Тер бег Сп Маї Аа 5ег Ріє Аїа Аго Сти Іе Маї Сіп І еи ТНг Ага 165 170 175 зЗег 5ег Агу І еи 180 «210» 49 «2115 177 «212» РАТ «213» Епівегорасієг тогі «4005» 49
Меї Гуз Іе І еи Пе Гей Ре 5Бег Тиг Агу Ар Стпу Сіп Тг Агу Спи 1 5 10 15
Пе Аїа Айа 5ег І єи Аа Зег Спи І єи Гуз СПи Сп Аа Рне Ар Маї 20 25 Зо
Азр Маї Маї Авп Г еи Ні Агу Аа Спи Авп Те Аа Ттр Сіи Спи Туг 35 40 45
Азр Сту Маї Ма! Пе Спу Аїа 5ег Пе Аго Туг Су Ні РНе Нів Зег 50 55 60 60
ТигГеи Авп 5ег РНе Маї Гуз Гуз Ні Сіп Сп Айа І єи Гуз Гув І еи 65 70 75 80
Рго Сту Аа Ре Туг Зег Маї Авп Геи Маї Аїа Аг Гуз Рго Сім ГГ ув 85 90 95
Агу Тнг Рго Сп Тит Авп 5ег Туг ТНг Агу Гуз Рпє ГГ єи Гей Авр 5ег 100 105 110
Рго Ттр Сп Рго Авр Геи Зег АЇа Маї Рне Аїа Сіу Аа Геи Аг9 Туг 115 120 125
Рго Агу Туг Азп Ттр Туг А5р Ага Іе Меї Іе Агу І еи Пе Меї Гуз 130 135 140
Пе Тиг Спу Спу Си ТАг Авр Тнг Ага Гуз Сім Маї Маї Туг Тиг Азр 145 150 155 160
Праїпаїп Маї Тиг Ні Рне Аа Ніз Спи Пе Маї Сіп І еи Ма! Ага 165 170 175
Гуз
Зо «2105» 50 «2115 178 0«212» РАТ «213» Епівегорасієг сіоасає «4005 50
Гуз Аа ГІ еи Маї І еи Туг 5ег Тиг Агу Авр Су Сіп Тнг Ні Айїа Пе 1 5 10 15
Аа 5ег Туг Пе Аа Зег Суз Меї Гуз Сім Гуз АІа Сіи Суз Авр Маї 20 25 Зо
Пе Авр Гей Ти Ніз Спу Спи Нів Маї Авп І єи ТАг Сп Туг Авр Сп 35 40 45 маї Геи Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Сіпу Ні РНе Авп Аїа Маї І еи 50 55 бо
Азр Гуз Ре Іе Гуз Агу Азп Маї Авр Сп І еи Авп Авзп Меї Рго 5ег 65 70 75 80 60 Аа Рпе РНе Суз Маї Авп І єи ТАг Аїа Аго Гуз Рго Си Гуз Аг ТНг
85 90 95
Рго Сп Тнг Авп Рго Туг Маї Аго Гуз Рпє І єи Геи Аа Тнг Рго Тр 100 105 110
Сп Рго Айа І єи Суз Сіпу Маї РНе Аїа Сту Аа І єи Агу Туг Рго Аг9 115 120 125
Туг Агу Тр Іе Азр Гуз Маї Ме! Пе Сп І еи Пе Меї Агу Меї Тнг 130 135 140
Сіу Спу Спи ТНг Авр Тпг 5ег Гуз Спи Маї Спи Туг Тиг Авр Тр Сі 145 150 155 160
Сп Маї Гуз Гуз Рне Аа Спи Авр Рне Аа Г уз І єи 5ег Туг І уз І уз 165 170 175
Ада Гей «2105 51 «2115 177 00 «212» РАТ «213» Рапіоєа апапаї5 «4005 51
Гуз Аа І еи Пе Геи РНе 5ег ТНг Агу Азр Стпу Сп ТАг Сп Гуз Пе 1 5 10 15
Аа 5ег Аа Іе Аа Азр Си Пе Гуз Су Сіп Сіп бег Сувз Азр Маї 20 25 Зо
Пе Авп Пе Сп Авр Аа Гуз ТНиг Гей Авр Тгр Сп Сп Туг А5р Ага 35 40 45 маї Геи Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Спу Ні РНе Сп Рго Маї Маї бо 50
Азп Спи РНе Маї Гуз Нів Авп І ви І єм Айа І єи Сп Сіп Агу Ма! бег 65 70 75 80 55 Сапу Рпе РНе 5ег Маї Авп І єи ТНг Аа Агу Гуз Рго Си Гуз Ага зег 85 90 95
Рго Си Тнг Авп Аїа Туг Тнг Маї Гуз РнНе ГГ еи Аа Сіп з5ег Рго Тр бо 100 105 110
Сіп Рго Авр Суз Суз Аа Маї РНе Аїа Су Аа ! єм Туг Туг Рго Агд 115 120 125
Туг Агу Тр Рне Азвр Агу Маї Ме! Пе Сіп Рпе Пе Меї Агу Меї ТНг 130 135 140
Сіу Спу Спи Тиг Авр Аа 5ег Гуз Сім Маї Спи Тук Тиг Авр Ттр Сп 145 150 155 160 ап Маї Сип Ага РНе Айїа Агу Азр Ріє Аїа Сп Геи Рго Спу Гу Зег 165 170 175
Туг «-2105 52 -2115 180 «212» РАТ «213» ЕзвсПегісніа сої «-4005 52
Гуз ТНиг Геи Пе І еи РнНе 5ег Тиг Агу Авр Сіу Сп Тнг Ага Спи Пе 1 5 10 15
Аа 5ег Туг І єи Аа бег Спи Г еи Гув Си ви СПУ Пе Сп Аа Азр 20 25 Зо маї Аіа Азп Маї Ніз Агу Пе Сіи Спи Рго Сип Тер Сіи Авзп Туг Азр 35 40 45
Аго Маї Ма! Пе Спу Аа 5ег Пе Аг9 Туг Спу Нів Туг Нів 5ег Аа 50 55 60
Рпє Сп Спи Рне маї Гуз Гуз Ні Аа Тнг Ага Геи Авп 5ег Меї Рго 65 70 75 80
ЗБег Аа РНе Туг Зег Маї Авп І еи Маї Аа Агу Гуз Рго Сім Гуз Ага 85 90 95
Тиг Рго Сп Тнг Авп 5ег Туг Аа Аго Гуз РНе ГІ еи Меї Авп 5ег Сп 100 105 110
Тр Аго Рго Авр Аг Суз Аїа Маї Іе Аа Сіпу Ага Гей Агу Туг Рго 115 120 125 60
Ага Туг Агу Тр Туг Азр Агу Ре Меї Іе Гуз І еи Пе Меї Гуз Меї 130 135 140 зЗег Сіу Сіу Спи ТНг Авр Тнг Ага Гуз Сім Маї Ма! Тук Тнг Авр Ттр 145 150 155 160
Си Сп Маї Аіа Азп РНе Аїа Аго Си Іе Аїа Ні Геи ТНг Авр Гуз 165 170 175
Рго ТигГеи Гу 180 «2105 53 «2115 177 «212» РАТ «213» Егміпіа юієїапа «4005 53
Гуз Аа ГІ еи Пе Геи РНе 5ег Зег Агу Спи СПТу Сп ТАг Агу Спи Пе 1 5 10 15
Аа 5ег Тут Пе Аа Авп 5ег Пе І уз Спи СТіи Меї Спи Суз Авр Маї 20 25 Зо
Рпе Авп Іе Геи Агу Маї Сім Стп Пе Авр Тр 5ег Сп Туг Азр Ага
З5 маї Гей Пе Спу Спу 5ег Пе Ні Туг Стпу Ні РНе Нів Рго Аїа Маї 60 40
Аа І уз РНеє Маї Гуз Агу Ніз І єи Ніз Спи Ї еи Сп Сп Ага бег 5ег 65 70 75 80 45 ау Рпе РНе Суз Маї Авп ГІ єи ТАг Аа Аго Гуз Аа Авр Гуз Ага ТНг 85 90 95
Рго Сп Тнг Авп Аа Туг Меї Ага Гуз Ре Геи І ви Сп Зег Рго Ттр 50 100 105 110
Сіп Рго Авр Суз Суз Аа Маї РНе Аїа Сту Аа ГІ єи Ага Туг ТАг Аг 115 120 125 55
Туг Агу Тр РНе Азвр Агу Маї Ме! Пе Сп Гей Пе Меї Агу Меї ТнНг 130 135 140 60
Сіу Спу Спи ТНг Авр Тпг 5ег Гуз Спи Маї Спи Туг Тиг Авр Тр ТНг 145 150 155 160 ап Маї Аіа Агу РНеє Аїа Сіп Сім РНе АЇа Нів І єи Рго Стпу Гув ТНг 165 170 175
Сіп «2105» 54 «2115 178 15. «212» РАТ «213» Ресіобасівєлит сагоїомогит «4005 54
Гуз Аа ГІ еи Пе Маї РНе 5ег Зег Агу Авр Спу Сип Тнг Аго Аа Пе 1 5 10 15
Аа 5ег Туг Пе Аа Авп ТНг І єи Гуз Спу ТигГеи Спи Сувз Авр Маї 20 25 Зо
Маї Авп Маї Геи Авп Аа Авп Ар Пе Авр І єи 5ег Сп Туг Авр Аг9
Зо маї Ага Іе Сту Аа 5ег Пе Аго Туг Спу Ага Ре Нів Рго Аїа Маї бо
З5
Азп Сп РНе Іе Ага Гуз Нів І еи Тнг Зег І еи Сп Стп Гей Рго Зег 65 70 75 80 40 Аа Рпе РНе 5ег Маї Авп ГГ еи ТНиг Аа Аго Гуз Рго Спи Гуз Аг9 Тиг 85 90 95
Пе Сп Тнг Авп Аа Туг Тниг Аго Гуз РНе Г еи ГГ еи Авп з5ег Рго Тр 45 100 105 110
Сіп Рго Авр І еи Суз Суз Маї РНе Аїа Су Аїа ГІ єи Ага Туг Рго Ага 115 120 125 50
Туг Агу Тр РНе Азвр Агу Маї Ме! Пе Сп Геи Пе Меї Ага Іе ТНг 130 135 140 55 сСіу Спу Спи ТНг Авр Зег ТНиг Гуз Спи Пе Сім Туг ТАг Авр Тр Сп 145 150 155 160 60 ап Маї Аіа Агу РНе Аїа Сіп Азвр Ріє Аїа аСіп ГГ еи Аа Айа Гуз Авп
165 170 175
Рго АїІа «2105 55 «2115 178 «212» РАТ «2135» ЗПпітме!їїа біанає «4005 55
Гуз ТигГеи Пе Геи Рне 5ег Тпг Агу Азр Спу Сип Тнг Нів Гуз Пе 1 5 10 15
Аа Ага Ні Іе АїІа Спу Ма! Ї єи Спи Сіи Сп Спу Гуз Аа Сув Спи 20 25 Зо
Ї еи Маї Авр Г еи ГГ еи Сп Рго Сіпу Сім Рго Авр Тгр 5ег ТНг Маї Спи 35 40 45
Суз Маї Маї І ви Сіпу Аа Зег Пе Агу Туг Стпу Ні Ре Ні Гуз Зег 50 55 бо
Зо
Ре Іе Аг РНе Маї Авп ТНг Ні Аа Сіп Агу ГГ еи Ап Авп Меї Рго 65 70 75 80 ау Аа І єи Ріе Тнг Маї Авп ГІ єм Маї Аїа Ага Гуз Рго Сім ГГ ув Сп 85 90 95 зЗег Рго Сп ТАг Авзп 5ег Туг Тиг Ага Гуз Рне Геи Аїа Аа 5ег Рго 100 105 110
Тер Сп Рго Сп Агу Су Сп Маї Рне Аїа Сіу Ага ГІ еи Агу Туг Рго 115 120 125
Аго Туг Зег Тр Туг Азр Ага Меї Меї Іе Аго І єи Пе Меї Гуз Меї 130 135 140
Аа Спу Спу Спи ТАг Авр Тнг Ага Гуз Спи Маї Спи Туг ТАг Авр Тр 145 150 155 160 ап Бег Ма! Тиг Ага РНе Аїа Аг Спи Пе Аа Сіп Гей Рго Сіу Спи 165 170 175
Тк Аг 60
«2105 56 «2115 179 00о«212» РАТ «213» Епівегорасієг сіоасає «4005 56
Гуз ТНигГеи Пе Геи РНе 5ег Тпг Агу Азр Сіу Сп ТНг Аг Спи Пе 1 5 10 15
Аа Аа РНе І єм Аа 5ег Спи І еи Гуз Спи Си Спу Пе Туг АІа Азр
Зо ма! Ме Авп Гей Азп Ага Тиг СПи Спи Пе Аїа Ттр Сип Спи Туг А5р 35 40 45 20
Аго Ммаї Ма! Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Слу Нів Ре Ні Рго Аіа 50 55 60 25
Маї Азр Аг Ре Маї Гуз Гуз Нів Тнг Сім ТНг Гей Авп 5ег Г еи Рго 65 70 75 80 сапу Аа РНе РнНе 5ег Маї Авп Геи Маї Аїа Аг Гуз Аа Си ГГ ув Аг9 85 90 95
Тиг Рго Сп Тнг Авп 5ег Туг Тниг Аго Гуз РНе І єи Геи Авп 5ег Рго 100 105 110
Тр Гуз Рго Аа Аа Суз Аа Маї Ріє Аїа Су Аа І єи Ага Туг Рго 115 120 125
Ага Туг Агу Тр Туг Азр Агу Ре Меї Іе Аг І ви Пе Меї Гуз Меї 130 135 140
Тиг сапу Спу Спи Тиг Авр Тнг Аго Гуз Сіи Маї Ма! Туг Тнг Авр Тр 145 150 155 160
Бег ап Маї Аа бЗег РНе Аа Аго Си Пе Маї Сіп Гей ТНг Агу Зег 165 170 175 зег Аг І ей «2105» 57 «2115 178 60 0о«212» РАТ
213» Штучна послідовність «223» Рекомбінантна «4005 57
Гуз Аа ГІ еи Маї І еи Туг 5ег Тиг Агу Авр Су Сп ТНг Ні Айва Іе 1 5 10 15
Аа 5ег Туг Пе Аа Зег Суз Меї Гуз Сім Гуз АІа Сіи Суз Авр Маї 20 25 Зо
Пе А5р Гей ТНг Ні СПу Спи Нів Маї Авп ГГ еи Тнг Сп Туг Авр Сп 35 40 45
Ма! І еи Пе Стпу Аа Авп Іе Аго Туг Сіу Ні Рне Авзп Аїа Маї І єи 50 55 бо
Азр Гуз Ре Іе Гуз Агу Азп Маї Авр Сп І еи Авп Авп Меї Рго 5Бег (65 70 75 80
Аа РНе Рне Суз Маї Авп Геи ТНг Аїа Аго Гуз Рго Сіи Гуз Аго Тиг 85 90 95
Зо
Рго Сп Тнг Авп Рго Туг Маї Агу Гуз Рне Геи ГГ еи Ага Тнг Рго Тр 100 105 110
З5
Сп Рго Айа І єи Суз Сіпу Маї РНе Аїа Сту Аа І єи Агу Туг Рго Аг9 115 120 125
Туг Агу Тр Пе Авр І уз Ма! Ме! Пе Стій І єи Пе Меї Ага Меї Тнг 130 135 140 сСіу Спу Сім Тит Авр Тпг 5ег Гуз Спи Маї Спи Туг Тиг Авр Ттр Си 145 150 155 160
Сп Ма! Гуз Гуз Рне Аа Спи Азвр Рне Аа Г уз І єи 5ег Туг І уз І уз 165 170 175
Аза І еи «2105 58 «2115 172 «212» РВАТ 213» Штучна послідовність 60
«223» Рекомбінантна «4005 58
Гуз Аа ГІ еи Маї І еи Туг 5ег Тиг Агу Авр Су Сп ТНг Ні Айва Іе 1 5 10 15
Аа бег Тут Пе Аа бег Суз Меї Гуз Сім Гуз АІа Спи Суз Авр Маї 20 25 Зо
Пе А5р Гей ТНг Ні СПу Спи Нів Маї Авп ГГ еи Тнг Сп Туг Авр Сп 35 40 45 маї Геи Пе Спу Аа 5ег Пе Аг Туг Спу Ні РНе Авп Аа Маї І ви 50 55 бо
Азр Гуз Ре Іе Гуз Агу Азп Маї Авр Сп І еи Авп Авп Меї Рго 5Бег 65 70 75 80
Аа Рне Рне Суз Маї Авп Геи ТНг Аїа Аг Гуз Рго Сім Гуз Ага ТНг 85 90 95
Зо Рго Сп Тнг Авп Рго Туг Маї Агу Гуз Рне Геи ГГ еи Ага Тнг Рго Тр 100 105 110
Сп Рго Айа І єи Суз Сіу Маї Рне Аїа Су Аа Геи Агу Туг Рго Агд 115 120 125
Туг Агу Тр Іе Авр Гуз Ма! Ме! Пе Сіп Гей Пе Меї Агу Меї Тнг 130 135 140
Сіу Спу Спи Тит Авр Тпг 5ег Гуз Спи Ма! Спи Туг Тиг Авр Тр Сі 145 150 155 160
Сіп Ма! Гуз Гуз РНе Аїа Сім Ар Рне Аа І уз І ви 165 170 «2105 59 «2115 179 «212» РВАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 59 60 Гуз ТНиг Геи Пе І еи РнНе 5ег Тиг Агу Авр Сіу Сп ТНг Аг Спи Пе
1 5 10 15
Аа Аа РНе І єм Аа 5ег Спи І еи Гуз Спи Си Спу Пе Туг АІа Азр 20 25 Зо ма! Ме Авп Гей Азп Ага Тиг СПи Спи Пе Аїа Ттр Сип Спи Туг А5р 35 40 45
Аго Ма! Ма! Пе Спу Аа 5ег Пе Аг9 Туг Сіу Нів Ре Ні Рго Аїа 50 55 60
Маї Азр Аг Ре Маї Гуз Гуз Нів Тнг Сім ТНг Гей Авп 5ег Г еи Рго 65 70 75 80 ау Аіа РНе РнНе 5ег Маї Авп Геи Маї Аїа Аг Гуз Аа Сім Гуз Аго 85 90 95
Тиг Рго Сп Тнг Авп 5ег Туг Тниг Аго Гуз РНе І єи Геи Авп 5ег Рго 100 105 110
Тр Гуз Рго Аа Аа Суз Аа Маї Ріє Аїа Сіу Ага Геи Агу Туг Рго 115 120 125
Зо
Ага Туг Агу Тр Туг Азр Агу Ре Меї Іе Аг І ви Пе Меї Гуз Меї 130 135 140
З5
Тиг сапу Сспу Спи Тиг Авр Тнг Аго Гуз Спи Маї Маї Туг Тиг Авр Ттр 145 150 155 160
Зег Сп Пе Аа 5ег Рнеє Аа Агу Спи Пе Маї Сіп Гей ТНг Агу Зег 165 170 175 зег Аг І ей «210» 60 «2115 504 «212» РАТ «213» Атагапіпив їшрегсшашв5 «400» 60
Мет аїу Авп Пе бег Сім Агу Сім Си Рго ТАг Зег Ага Гуз Аг Маї 1 5 10 15
Аа Маї Маї Сіпу Аа Спу Маї бег Су Геи Аа Айа Аа Туг Гуз І ви бо 20 25 Зо
Гуз Зег Ні Сту І єи Зег Ма! ТАг І ви Рпе Спи Аа Авр 5ег Аг Аа 35 40 45
Сіу Спу Гуз І єи Гуз Тниг Маї Гуз Гуз Авр Стпу РНе Іе Тр Ар Си 50 55 60
Сіу Аіа Азп Тиг Меї Тниг Сім Зег См Аа Спи Маї Зег Зег І ви Пе 65 70 75 80
Ар Азр І єи С1у Гей Аг Сі Гуз Сп Сп І єи Рго Пе бег Сп Авп 85 90 95
Гуз Аго Туг Пе Аїа Агу Авр Су ГГ еи Рго Маї І еи ГГ еи Рго бег Авп 100 105 110
Рго Аїа Ага І ей І еи Тнг 5ег Азп ІІе І єи 5ег Аа І уз бе! І уз І єи 115 120 125
Сіп Пе Меї Г еи Спи Рго РНе Геи Тгр Ага Гуз Нів Авп Аа Тниг Спи 130 135 140
Зо
Ї еи Зег Авр Сім Ні Маї Сип Спи Зег Ма! Спу Спи Рне РНе Сіи Аг9 145 150 155 160
Ні РНе Су Гуз Сім Ре Маї Ар Туг Ма! Пе Ар Рго РНе Маї Аіа 165 170 175
Спу ТАиг Суз Спу Сіу Авр Рго Сіп бег І еи 5ег Меї Нів Нів ТНг Рпе 180 185 190
Рго Сіи Маї Ттр Авп Пе Спи Гуз Агу РНе Сіу Зег Маї Рне Аа Спу 195 200 205
Ї еи Пе Сп Зег ТАг І єи Гей Зег Гуз Гуз Спи Гуз СПу Спіу Спи Авп 210 215 220
Аа 5ег Пе Гуз Гуз Рго Ага Маї Ага сіу Зег Рпе 5ег Рпе Сп Спу 225 230 235 240 сапу Меї Сіп ТНг І єи Ма! Азр Тнг Меї Суз Гуз Сп Гей Сіу Спи Авр 245 250 255 сій Ї еи Гуз Геи Сп Суз Сім Ма! Г еи 5ег Гей Зег Туг Авп ап Гув бо 260 265 270
Су Пе Ро 5ег І єи Спу Авп Тр 5ег Ма! Бег Зег Меї 5ег Авп Авп 275 280 285
Тиг Зег Спи Авр ап Зег Туг Азр Аїа Маї Маї Маї Тниг Ага Рго Іе 290 295 оо
Агу Азп Маї Гуз СПи Меї Гуз Пе Меї Гуз Рне Су Авп Рго Рпе 5ег 305 з10 315 320
І еи Авр РНе Іе Рго Спи Ма! Тниг Туг Маї Рго Геи Зег Ма! Ме! Пе 325 330 335
Тиг Авіа Рне Гуз Гуз Авзр Гуз Маї Гуз Аго Рго І ви Спи Сіу Рпе Спу 340 345 350 ма! І еи Ме Рго 5ег Гуз Спи Сп Нів Авп Су І єи ГГ ув ТАг ЇЇ еи Спу 355 360 365
Тип єи РнНе 5ег 5ег Меї Меї Рне Рго Авр Агу Аїа Рго бег Ар Меї 370 375 380
Зо
Суз І еи Рпе Тпиг Тиг Рпе Маї Спу Спу 5ег Агу Авп Ага Гуз І еи Аа 385 390 395 400 /Авп Аа бег ТАг Авр Сім І еи Гуз С1п Пе Маї Зег Зег Авр І ви Сп 405 до 415
Сіп Гей Геи Спу ТАг Си Авр Спи Рго Зег РНе Маї Авп Нів І єи Рпе 420 425 430
Тр Зег Авп Аа Рне Рго Г єи Туг Сіпу Ні5 Авп Туг Азр 5ег Маї Гей 435 440 445
Ага Аа Іе Авр Гуз Меї Спи Гуз Авр І еи Рго Спіу Рне РНе Туг Аіа 450 455 460
Сіу Авп Ніз ГГ уз СПу СПУ Г еи Зег Маї Су Гуз Аа Меї Аа 5ег Спу 465 470 475 480
Сувз Гуз Аа Аа Си І еи Ма! Пе 5ег Туг І еи Авр 5ег Ні Пе Туг 485 490 495 маї Гуз Меї Азвр Си Гуз Тнг Аа бо 500
«2105 61 «2115 537 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 61 адааадсдс дщосющіа іадсасссдс даїддссада сссаюдсодаї їдсдадсіаї бо ацйдсдадсі дсаїдааада аааадсддаа юсдашдіда Ндаїсідас ссаддсдаа 120 сащдідаасс ідасссадіа аїсадою сідайоддсо сдадсансо сіаїддссаї 180
Шаасодс9до дсіддаїаа ашанааа содсаасодао аїсадсідаа саасадссуд 240 аадсасоаїй шосаїдаа ссдассдсд сдсааасс9ду ааааасдсас сссдсадасс 300 аасссоїаїд дсодсаааїй ісідсіддсу ассссдідас адссодсосідідсдодсою 360 шасадоса сосідсдсіа Іссдсдстаї сасіддацо агааадідаї дайсадсід 420 ацадсдса щассддсда сдааассдаї ассадсааад аадіддаагаіассдайцудуд 480 даасаддщда ааааашос ддаадації дсдааасіда дсіаїааааа адсосід 537
Зо -2105» 62 «2115 534 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 62 адааадсдс ідансіюїйїї їадсасссдс даддссада сссадааааї дсдадсоса бо анпдсддаїд ааанйааадо ссадсададс юдсдащдіда Паасанса ддаїсдааа 120 асссюддаї! ддсадсадіа даїсодсоюд сданододсо сдадсайсяо сіаддсосаї 180 шсадссда юддщдаасда ашодааа саїаассідс їддсосідса дсадсосаїд 240 аадсадсні нНадсдадаа ссідассдсду сдсааассдо ааааасосад сссуддааасс /-з00 аасосдіата ссущдаааїй іІсіддсдсад адсссаїддс адссоддано сідсдсоддід 360 шасадоса сосідтана іссососіаї сосіддашо аїсосоюдаї дайсадш 420 ацаїдсдса дассддсда сдааассдаї дсдадсааад аадіддааіаассдайод 480 садсадащдс адсусцндс дсдсдації дсдсадсідс сдддсаааад сіаї 534 «-2105» 63 60 -2115 531
«2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 63 адааадсдс ідансіюдїа іадсасссдс даддссада сссдсааааї дсдадсадс бо андсддаїдщдайсодсса дсадсадсад ідсдаїдідс Юаасайаа адаїдсдадс 120 сідссддай ддососадіа Ідаїсдсоїд сідацйодсо сдадсансо сіаїддссаї 180 шсадссда ддіддагаа ашощааа садсаїсідс аїдаасідса дсадсудсасс 240 аадсадсні нНадсдадаа ссідассдсду сдсааассдо ааааасосад сссуддааасс /-з00 аасосдіата сссадаааї! ісїіддсдсаї адсссаїддс адссддано сідсосоддід збо шасадаоса сосідтана іссосоусіаї сдсіддша аїсосдуюдаї дайсадсід 420 ацадсдса щассддсда сдааассдаї адсассааад аадіддаагаіассдайцудд 480 садсаддіюда дсассцодс даасданії дясдсадсідс сддасаааад с 531 «2105» 64 «2115 546 «2125 ДНК
Зо 213» Е5сепПегіспіа сої «4005» 64 доаааасаї іданснії сісаасаадод дасддасааа сдсдсдадаї юдссіссіас бо
З5 сіддснода аасідааада асіддддаїс саддсодда!д ісдссааі дсассдсай 120 даадаассас адідддаааа сіадассої діддісано дідсИсіайісдсіацддаї 180 сасіассайї садсдйсса ддаашціє ааааааса!д сдасосодосі даансдаю 240 ссдадсоссі Шасіссаї даасіддід дсдсдсааас сддадаадсоу асіссасад 300 ассаасадсі асдсдсдсаа ашсщаїз аасісосааї ддсдісссда сдсідсудсу 360 дісандсса ддоасосідсу Насссасоді їаїсдсідої асдассуш їаїдаїсаад 420 сіданаїда адаїщісадд сддідааасд даїасдсдса аадааднці сіаїассдаї 480 ададсадао дасоааїйй сдсссдадаа аїсосссаїї їіаассдасаа ассдасусід 540 аааїаа 546 «210» 65 «2115 534 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» 60 «223» Рекомбінантна
-4005 65 адааадсдс ідансіійї їІадсадссдс дааддссада сссдсдааа! дюсдадсіаї бо ацйдсдааса дсайааада адаааддаа юсоаїдіої Наасансі дсосоїддаа 120 садайноаї!ї ддадссадіа даїсодсоід сідайддсоу дсадсайса Паддссаї 180 шсаїссда садіддсдаа ашдідааа соссаїсідс аїдаасідса дсадсосадс 240 аадасадсни шосаїдаа ссідассдсу сдсааадсод аїааасдсас сссдсадасс 300 аасосдіата юсаосаааї іІсідсідсад адсссдідас адссодайо сідсдсдат 360 шасадосо сосідсдсіа їасссдетаї сасідаща аїсосдідаї дансадсід 420 ацадсдса щассддсда сдааассдаї ассадсааад аадіддаагаіассдайцудуд 480 асссадаща сдсдспщос дсаддаані дсдсаїсідс сдддсаааас ссад 534 «-2105» 66 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна
Зо -4005» 66 адааадсдс їдандій їадсадссдс даїдддссада сссдсдсдаї дсдадсіаї бо анпдсдааса сссідааадд сасссіддаа дсдаїди иду ідаасадідсі даасдсдаас 120
З5 дагайодаїс дадссадіа іІдаїсдсою осдайодосо сдадсайсо сіаддссдс 180 шсаїссд9 соадідаасса дшШаїйсос ааасаїстюа ссадссідса дсадсідссу 240 адсасоаі нНадсдюдаа ссідассдсд сдсааассо99у ааааасдсас сайсадасс /-з00 аасосдіата сссдсааай ісідсідаас адсссдіддс адссододаїсі дідсідсуд 360 шасадоса сосідсдсіа Іссдсдстаї сасідаща аїсосдідаї дансадсід 420 ацадсдса Нассдоасо99 сдааассдаї адсассааад ааайодаагаіассданда 480 садсадаща сдсусцодс дсаддації аясдсадсюдд сддсдааааа сссддса 537 «2105» 67 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 67 адаадассі Юаїссіайї сіссассадд дасддссааа сасасаадаї сдсааддсас бо бо аїсдсаддад іІссісдаада дсаддадаад дссідсдаді ддісдаїсі днасадссс 120 додсдаассад асіддадіас сондаас дісднсіад ддодссадсаї їадайацд9аї 180 саснссаїа адісшсаї садднсодіа аасасісасд сдсадсосії дааїаатаду 240 ссаддсодссс Шсасаді іІаасцнадіс дсссдааадс ссдадаадса дадіссасад, 300 асдаасісії асасссдсаа дшсісдсс дссіссссії ддсадссаса дсдадссаа 360
Яішсоас9да дсдстдаяд аїасссіадад їасісдідді асдасадаа! даїдаасдї 420 пдаїааюа ададдссдо дддсдадасі дасасаадда аддадунода діасасідас 480 їдосадісєдуд Юдасісддії сдсдадддад аїіїсдсісадс (дссдддада дасдс9дад 537 -2105» 68 «2115 534 -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 68 адааадсдс ідансіюйї їадсадссдс даддссада сссадсідаї щсдадсадс бо ацйдсдааад аасіддаада сааасаддсд юсдащіос даасайсі ддаїассасс 120
Зо аасоаддааї ддасссадіа щдаїсдсдю сщайоодсо сдадсайсо сіаїддссаї 180 шсаїссдд садіддсодда ашдідааа соссаїсадс дсдаасідса дсадсодсадс 240 аасадсні нНадсдадаа ссідассдсу сдсааассдо ааааасосад сссуддааасс 300 аасосдіата ссдсдаааї! Іісідаассад адсссаїддс адссодано сідсдсоддід 360 шасадаоса сосідсусіа Іссдсдстаї сасіддщша аїсосанаї дайсадсід 420 ацадсдса дассддсда сдааассдаї адсадсааад аадіддааіаассдайод 480 садсаддаюда сссдещуодс дсаддаац дсдсдссідс сдддсаааас садс 534 -210» 69 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 69 адаааассс щдансюі! іадсасссдс да(ддссада сссдсдаааї юсддасані бо сіддсдадсду аасідааада асадддсай їаїдсдда! іІдайаассі даассдсасс 120 даадаааняо сдідасадда аїатдаїсодс діддідаца дсосдадсат ісосіаддс 180 бо сашісаїс сддсддаідда Ісдсшо9ю аааааасаїа ссдааасссі даасадссід 240 ссддасасаї нШадсої даассідад дсодсдсааад содааааасуд сассссдсая. 300 ассаасадсі аїасссдсаа ашсідсід аасадсссодї ддааассддс додсдідсусу 360 аащосо9а дсосодсідсо сіаїссдсос їаїсдсідої аїдаїсосі аданйсос 420 сідацаїда ааадассодд сддсдааасс даїасссоса аадаацчіоді діаїассдаї 480 тддадссадд ддсдадсії дсдсдсдаа андідсадс ІФасссдсад садссдссід 540 -2105 70 -2115 531 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 70 адаааайс щдайнсції їадсасссдс даддссада сссдсдаааї (дсдасдадс бо сюдсдадсо аасдааада асадасдайй дадюда дадюаассі дсаїсдсдсд 120 даааасайцо союаддаада агатдадодс дюдщайно дсосдадсай ісдсіаддс 180 сашісаїа дсасссдаа садсшо9ю аааааасайс адсаддсосі даааааасід 240
Зо ссддасасаї Шаїадсодї даассіддід дсдсдсааас сддааааасуд сассссдсад 300 ассаасадсі аїасссдсаа ашсідсід дагадсссді ддсадссдда ісідадсояся 360
З5 аащо9с9да дсососідсо стаїссдсдс їаїаасідді ааїсосаїадайсос 420 сіданаіда ааацассо99 сддсдааасс даїасссоса аадаадідаді діатассдаї 480 тодсадсадо ЮДасссаш ідсдсаюаа андідсадс юдідсдсаа а 531 «2105 71 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 71 адааддссі даїасюїа сісдас9дс9д9 дасддссада сссасдсааї (дснсаїас бо аїсдссіссї дсаїдаадда дааддссдаа дсдасодіда ісдассісас ссасддадад 120 сасдюдаасс іІсасссааїа сдаїсаддід сіааісддід сдадіайсоу Пасддссас 180 нсаасосся дсідасаа дісаїсаад адааасощао аїсадсідаа саасадсса 240 аасасойсі Ісідсдіааа ссісасадса аддаадсссу адаадсдіасіссссадаса 300 бо аассснаїд іІссдааааїй! спдсійдсі асссссіддс адсссодсой аїдсоддадчід 360 псодсаддад сссісддіа сссдсдаїас сдаїддаїсо асаадаїдаї даїссадсіа /-420 аїаа(дсдда щдасідддду ададасадас асдадсаадд аддісдадіа сасддандяа 480 дадсадона адаадіїсдс ддаддації дсааадсіаї сдіасаадаа ддсссісіад 540 -2105 72 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 72 адааддссі даїссщії сісїасасдс дасддасада сасадаадаї сдсаїсідсс бо аїсоасідаі(д адаїаааддо дсадсааїсу їдсдасдіда Наасаїаса ддадссааа 120 асссісдасі ддсадсадіа сдассодддіа сісаїсддсо ссіссансо Масддосаї 180 пссадсссу нНадаагда Ящшодісаад сасаассісі ддсссіаса дясадададі 240 іссддансі іІсіссддаа спдасадсс сдааадссад адааодсодад ссссдадасі 300 аасоснага садісааай снпддсдсад іІсасссіддс аассодасід сідсосідй 360
Зо шщшаса9999 сссідїасіа сссасддіас содідонсо агаддоідаї дайасадне 420 аїааїддсдаа щас9д9499949 ададассдас дсаїсдааад адоаддадіа сасідасюд 480
З5 садсадащдс адсуднедс дсдадасіїс дсдсаднас сддаїаацдіє сіїіасюда 537 -2105 73 «2115 534 -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 73 адааддсдс ідаїсцодіа сісаассаду дасддісада сісдсаадаї (дсаадіадс бо андсддасу іІсаїсаддса дсадсадсад дсодасцдісі іааасанаа адасдсаїса 120 сіпссідасі дддсссааїа щдассдадія сісаїсддад сіадсаїссод Пасдддсаї 180 пссадсссу Ндїадасаа діисдщдаад садсаснос асдадсіса дсадсуддасс 240
Іссдуснсі ісіссдюдаа ссідасддсу аддаадссід ааааааддад сссідадасс 300 аадссіаса сссадаааїй сіддсдсас ісссснддс адсссдана сідідссоай 360 псодс99999 сссШасіа ссссаддіас сойподісо ассдддюаї даїссадну 420 бо ацадсдса щшасщаї99 ададассдас іІсіассааду аадіддадіа сасідасюдд 480 садсаддюда діассіїсдс саасдації дсссадсне саддсаадад сіаа 534 «210» 74 «2115 546 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 74 адаадассі дайсіайї! сіссасаадод дасддссада сіадддадаї судсіссіас бо сіддссадсд адсіааадда дсіддсаїй саддсадасо Ідосіаасді дсассдаай 120 даддадссдс адідддадаа сіасдаїсо99 дісдідаїсд дсдссадсаї ссддіадда 180 сасіассаса дсосоайсса ддаднсою ааааадсаса сдасссдісі даайадсаюд 240 ссаїсадсді іІсіасісдді саассісодід дсісаїаадс ссдадааосо дасассссая 300 ассаасісої аддссаддаа діссцаїд аасісдсаді ддсдассдда ссудсідсЯасЯа 360 дюаїсоссо дідсодсісад діасссісді їаїаддідаї асдасаддніаюдайцааа 420 сНагааіда ааададсдо сддададасс дасассадаа аададдіддаі Пасасадас 480
Зо щдададсадо їадсааасії сдсіадддад айдсісасс ісассдасаа дссдассня 540 аадіаа 546 -2105 75 «2115 537 «2125 ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 75 адааддссс Нагасщії садіїссада дааддссада сдадддадаї адсдаднас бо андссаасі сдаїааадда ддаааюддаа двсдасдющі ісаасаїссі ісдщіадад 120 садаїсдасі ддісісааіа сдассдсдіс сідаїсд999 осісдаїаса сіасддссаї 180 пссасссад сддіддсааа ашцдісаад аддсассісс ададійдса асададаїсі 240
ІссддсНи Ісідсдісаа ссідасддсес аддаадодссо асаадсодасіссссадасс 300 аадссіаса дадааадії снуносад іІссссаддс аасссдано сідсоссоїд 360 шаса9999 сссПаддіа сасссунНас аддадоанса асадоддіааї дайсадсід 420 аїсададда щасддос9д9у ададасідас асаїсдаадо аддюдадіа сасадасіда 480 бо асдсаддісуд сссдсіїсдс дсаддадіїс дсссашодс ссддсаааас їісадщда 537 -2105 76 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 76 адааддсіс Наїсдіай!ї сіснсдаду чаддссааа сссдадсдаї сосдіснНаї бо андсіаайа сссісааадод дасссіадад (дсдасодісу ісаасдіссі саадсіаас 120 дасайдан дадссадіа сдассдаїдю дссанддсо ссіссансо сіасддаада 180 пссасссад сіднНаасса дшШаїсс9до аадсассца сдадссісса дсадсіасса 240
Істдсо сі ісіссоїдаа ссісасадсі сддаадсссо адаададдасіаїасааасс 300 аасосдіаса сіаддааації істасідаас іІсдссаїддс адссоддассі дідсідсую 360 псодсоаддад сссісдсіа ІссссуНас аддщдащша ассдадідаї данйсаасіс 420 аїаадсодса їаасддд999 сдадасадас іссассааду адаїсдадіа сассдасіда 480 садсаддісд сдсдайсдс ссаддації дсасадсцу ссдсааадаа сссддсаюа 540
Зо «2105 77 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 77 адаадассі Юаїссіайї сіссассадд дасддссааа сасасаадаї сдсааддсас бо аїсдсаддад іІссісдаада дсаддадаад дссідсдаді ддісдаїсі днасадсос 120 додсдаассад асіддадіас сондаас дісднсіад ддодссадсаї їадайацд9аї 180 саснссаїа адісшсаї садднсодіа аасасісасд сдсадсосії дааїаатаду 240 ссаддсодссс Шсасаді іІаасцнадіс дсссдааадс ссдадаадса дадіссасад, 300 асдаасісії асасссдсаа дшсісдсс дссіссссії ддсадссаса дсдаїдссаа 360
Яішсоас9да дсдстдаяд аїасссіадад їасісдідді асдасадаа! даїдаасдї 420 пдаїааюа ададдссдо дддсдадасі дасасаадда аддадунода діасасідас 480 щдасавдісдо Ідасісоддії сдасдадддад аїісдсісадс їідссдддада дасосудіаяд 540 бо -2105» 78
«2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 78 адааддссс іїіааншайк садіадіадд дасддссада сссадснаї адсаїсдісі бо аїсдссаадод адсісдаадду даадсадосо дсдасдщі дааассі сдасасдасі 120 аашдіддаді ддасссадіа сдассдсдід сідайнудад саїссаїссо діасдддсас 180 шсасссід сддісдссда дісдіааад сдїсассадс дададсіаса дясададааді 240 апдасни ісісюідаа сідасддсс сдіаадсс9д9 аааададдісє ссссдадасі /-з00 аасоссіаїа ссдосаадії сснаассаа адіссаїдас адссідасія Посоусідія 360 псосщада сшодсдаїа сссісддіас сосідднсод асадаацаї даїссадсіа /-420 аїсаїдсдда щдасід9999 дадасадаї Існсааадод аддісдадіа сассдасідд 480 садсаддюда сссдсісдс дсаададнс дссаддснс сдддааадас садіюа 537 -2105» 79 «2115 543
Зо -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 79 адаадассс іааіасціїї сісїасссдс дасдддсада саадддадаї сдссдсунс бо сндссісдо адсідаадда дсаддддаїй їіасдсюдасо ісаїааассі ідассддасд 120 даддадаїад спддсадда діаїдацйада дісдіааїсод ддосдісдаї ссдатасодда 180 сашссасс сідсіщдісда ссдснсодід аадаадсаса сададасасі саасісасід 240 сссдасуссі ШсСІсСІ ааассндії дсссддааад ссдадаададаасдссдсад 300 асдаасісаї асассаддаа діссіаца аасадсссдї ддаадссадс дассідсоасаЯа 360 дісшосід дддсссіссо сіасссіада їассусіддї асдасадудн саатасда /- 420 сіданада аааїдасадао сддддадасод даїасссдаа аддаддіаді сіасасідас 480 тдаїсоасадао ісдсдісдн дссададад аїадіссаді дассаддіс аїсдсуснЯ 540 ща 543 -2105» 80 «2115 534 бо -212» ДНК
-213» Штгтучна послідовність «223» Рекомбінантна -4005 80 адаадагїаї іааїссції сіссасссді дасддссааа сссдідадаї юсддсадісс бо пдосдіссЯ аасісаадда дсаддсайс дасдіддасо ісдісаассіїсассддудсс 120 дадаасаїсд саїдддадда діасдасдді діщдісаїсо дадсдіссаї саддіасдас 180 сасшсаїа діасссюдаа сісашцоіс аадаадсаїс адсадодсісіїаадаадсн 240 сссдодоси ісіасадсої даассісдіс дсссддаадс сідадаадсо сасассдсая /-З00 ассаагадсі асасссдсаа діссісно дайссссодї ддсадсссда ссШісадсс 360 дюйсосса ддосасісад діасссісд9 їасааноді асдассдіаї саїданцада 420 снасаюа адацасадду сддсдадасі даїассадда аддаадіадісіасасадас /- 480 тдодсадсада ісасісасії Ідсісасдад аїісдіссадс іІсдідсоддаа діад 534 «2105 81 «2115 537 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Рекомбінантна «4005 81 аадассітщ99 їасідіасіс дасдсдддас ддссадассс асдсаандс Нсаїасаїс бо дссіссідса щшааддадаа ддссдаадс дасдідаїсо ассісассса сддддадсас о 120 дюаассіса сссааїасда ісадаіосіа аісддідсода діайсоНа сддссаснис 180 аасоассдідс Ндасаації саїсаадада аасоаїддаїс адсідаасаа саїдссаадс 240 одсонснсі дсдїааассі сасадсаадду аадсссдада адсдіасісс с ссадасааас. 300 сеНаїщісс даааансії дсносіасс сссіддсадс ссасайог сддадіанс збо дсаддадссс йсдоїассс дсдагассодо ддаїсдаса адаїдаїдаї ссадсіааїа /- 420 адсддащда сіюддоддада дасадасасу адсааддадо ісдадіасас ддандадая 480 саддіаада аднсодсдда дданнодса аадсіаїсді асаадааддс ссісіад 537 -2105» 82 «2115 534 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» 60 «223» Рекомбінантна
-4005» 82 аадассіда іссіднсіс їІасасдсдас ддасадасас адаадаїсос аїсідссаїс бо дсдаїдада іаааддддса дсааїсддс дасодідана асайасадда дссаааасс 120 сісдасдадс адсадіасда ссдддіасіс аіїсддсдссі ссайсуна сдддасашес 180 садсссуна даадацдії щісаадсас аассіснодд сссіасадса дададшсс 240 ддайсійсі ссдідаасії дасадсссда аадссадада адсддадссс сдадасіаас 300 дсНаїасад ісааайнсії ддсосадіса сссіддсаас сддасіосід сдсіяши 360 дсддаадодссс ідіасіассс асддіассода одісодаїа дадідадаїасадинсаїа /-420 адсдаащда сдаддоддада дассдасоса ісдааададо юдадіасасідасіддсад 480 саддідсадс ддйсдсодсд адаснсдсуд саднассод діаадієсіа сюда 534 -2105» 83 «2115 543 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна
Зо -4005» 83 аадассіда Нсїайнсіс сасаадддас ддссадасіа дддадаїсдс Неосіассід бо дссадсдадс іаааддадсі юдсансад дсадасоща сіаасуідса ссдаандад 120
З5 дадссдсаді дддадаасіа сдаїсодддіс дідаіїсддсу ссадсаїссд діаддасас 180
Тассасадсод сунссадда дчнсдщдааа аадсасдсда сссдісюааїадсаюдсса 240 їсадсонсі асісддісаа ссісдіддсі сдіаадсссо адаадсуддасассссадасс 300 аасісдіа ссаддаацдії сспПадаас ісодсадіддс дассддассо сідсдсдаюд збо аїсдссодід содсісаддіа сссісонНаї аддаідаїасу асаддшаї дайаааси 420 аїаадаааа щдадсддсда ададассдас ассадаааад аддаюддша сасадасіда 480 дадсаддіад саааснсдс іадддадайн дсісассіса ссдасаадсс дассідаад 540
Іаа 543 «2105» 84 «2115 534 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна бо «4005» 84 ааддсссна іасідйсад пссададаа ддссадасда дададаїадс даднасаїй бо дссаасісда Іаааддадда ааюддааюдс дасудунса асаїсснсд щіддадсад 120 аїсдасідді сісааіасда ссдсдісєсію аїсдаддаосі сдаїасасіа сддссащшс 180 сасссадс9ду ддсаааай щісаададод сассіссаїд адідсааса дадаїсцсс 0240 дусНшсї дсдісаассі дасддссадду ааддссдаса адсодасісс ссадассааї 300 дссіасада даааднсії апдсадісс ссаїддсаас ссдацодсід сассоюш 360 дсддаадссс Паддіасас ссопасадо юдднсдаса додоїаадаї ісадсідаїс 420 ащаддаюа сддосоддада дасідасаса Іісдааддадо юддадіасасадасіддасу 480 саддісдссс дснсдсдса ддадісодсс сашодсссд дсаааасіса дщда 534 «-2105 85 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 85 аадасісца ісаїансіс Псдадддаї ддссааассс дадсдаїсдс дісНаїаїй бо
Зо дсіааїассс Ісааадддас ссіададідс дасдісдіса асдіссісаа дсіаасдас 120 андашоа дссадіасда ссдідюдсс айддсоссі ссайсосіа сдддаддне 180
З5 сасссадсід Наассацдії Іаїссддаад сассцНасда дссіссадса дсіассаїсі 240 дсонсйсі ссоаїдаассі сасадсісдуд аадсссдада ададдасіаїасааассаас /- 300 дсдіасасіа ддаадшсї асдаасісд ссоддсадс сддассідід сідсуінс 360 дсдддадссс йсдсіаїсс ссуйпасада юошоасс дадюдаїдаї їсаасісаа 420 адсодсаїаа сдддадосда дасадасісс ассааддада іІсдадіасас сдасіддсад 480 саддісдсдс дайсдссса дданноса садсідссу сааадаассс ддсаюа 537 -2105» 86 «2115 537 -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 86 аадассіа іссіайсіс сассадддас ддссааасас асаадаїсдс ааддсасаїс бо дсаддадісс Ісдаададса ддддааддсс юсдадннодо ісдаїсіНасадсссядс 120 бо даассадасі ддадіассді ааїдсдіс чисіадддоу ссадсанад аїаіддісас 180 псосаїааді сісаїсад діисаїааас асісасдсдс адсусндаа аайаідсса 240 дасдсссій Ісасадіаа спадісдсс сдааадсссу адаадсадад іссасадасод 300 аасісцаса сссдсаади іІсісдссдсс Іссссіддс адссасадсо аїдссааді 360 псодсадосо сфпдадаоіа сссіаддіас ісдіддіасо асадаашцдаї даїасошЯ 420 аіаадаада ддссдддда сдадасідас асааддаадо адайдадіа сасідасіда 480 садісддща сісдунсодс дадддадаїс дсісадсідс сдддададас дсдаїад 537 2105» 87 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 87 аадасссіаа іасідйсіс їасссдсдас ддасадасаа дддадаїсдс сдсонНссії бо дссісддадс Юааддадса ддддащшас дсідасдіса іааассіаа ссддасдддад 120 дадаїадсії ддасаддадіа даїадацдіс діааіїсдоада содісдаїссо аїйасдддсаї 180
Зо пссасссід сіцісдассд сисддаад аадсасасад адасасісаа сісасідссс 240 дусуссці ісісщіааа сспуносс сддааадссоу адаададаас дссдсадасу 300 аасісаїаса ссаддаації ссіацЦааас адсссуюда адссадсддс сідсоасоадіє 360 шасідада сссіссосіа сссіадаїтас сдсіддіасу асадднсаї дайасдасід 420 ацадаааа щдасадосод9у ддадасддаї асссдааадо аддіадісіа сасідасідд 480
Ісдсадаїсо сдісдшос садададагїа діссадіїда ссаддісаїс дсосноїда 540 -2105» 88 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 88 аадассітщ99 їасідіасіс дасдсдддас ддссадассс асдсаандс Нсаїасаїс бо дссіссідса щшааддадаа ддссдааїдс дасдщдаїсо ассісассса сддддадсас о 120 дюаассіса сссааїасда ісадаіосіа аісддідсода діайсоНа сддссаснис 180 аасоассдідс Ндасаації саїсаадада аасоаїдчдаїгс адсідаасаа саїдссаадс 240 бо одсонснсі дсдїааассі сасддсаадду аадсссдада адсдіасісс сссадасааас 300 сеНаїщісс даааансії дсносіасс сссіддсадс ссасайог сддадіанс збо дсаддадссс йсдоїассс дсдагассодо ддаїсдаса адаїдаїдаї ссадсіааїа /-420 адсоддащда сюддоддада дасадасасу адсааддадо ісдадіасас ддандоддад 480 саддіаада аднсодсдда дданнодса аадсіаїсді асаадааддс ссісіад 537 -210» 89 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 89 аадассітщ99 їасідіасіс дасдсдддас ддссадассс асдсаандс Нсаїасаїс бо дссіссідса щшааддадаа ддссдаадс дасдідаїсо ассісассса сддддадсас о 120 дюаассіса сссааїасда ісадаіосіа аїсддідсода айайсоца сддссаснис 180 аасоассдідс Ндасаації саїсаадада аасоаїдчдаїгс адсідаасаа саїдссаадс 240 дсонснсі дсдіааассі сасадсаада аадсссдада адсдіасісс ссадасааас 300
Зо сеНаїщісс даааансії дсносіасс сссіддсадс ссасайог сддадіанс збо дсаддадссс йсдоїассс дсдагассодо ддаїсдаса адаїдаїдаї ссадсіааїа /-420
З5 адсоддащда сюддоддада дасадасасду адсааддадо іІсдадіасас ддайдддад 480 саддіаада аднсодсдда дданнодса аадсіаїсді асаадааддс ссісіад 537 «-2105 90 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 90 аадассіщ99 їасідіасіс дасдсдддас ддссадассс асдсаанос Нсаїасаїс бо дссіссідса щшааддадаа ддссдаадс дасдідаїсо ассісассса сддддадсас о 120 дюаассіса сссааїасда ісадаіосіа аісддідсода діайсоНа сддссаснис 180 аасоассдідс Ндасаації саїсаадада аасоаїдчдаїгс адсідаасаа саїдссаадс 240 одсонснсі дсдїааассі сасадсаадду аадсссдада адсдіасісс с ссадасааас. 300 сеНаїщісс даааансії дсносіасс сссіддсадс ссасайог сддадіанс збо бо дсаддадссс йсдоїассс дсдагассодо ддаїсдаса адаїдаїдаї ссадсіааїа /-420 адсддащда сіюддоддада дасадасасд адсааддадао ісдадіасас ядайдодая 480 саддіаада аднсодсдда дданндса аадсіаїаді асаадааддс ссісіад 537 «2105 91 «2115 534 -212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 91 аадассіда іссіднсіс їІасасдсдас ддасадасас адаадаїсдс аїсідссаїс бо дсдаїдада іаааддддса дсааїсддс дасодідана асайасадда дссаааасс 120 сісдасдадс адсадіасда ссдддіасіс аіїсддсдссі ссайсуна сдддасашес 180 садсссуна даадацвії щісаадсас аассісндод сссіасадса дададшсс 240 ддайсійсі ссдідаасії дасадсссда аадссадада адсддадссс сдадасіаас 300 дсНаїасад ісааайнсії ддсосадіса сссіддсаас сддасіосід сдсіяши 360 дсддааодссс ідіасіассс асддіассода одісодаїа дадідаїдаїасадійсаа 420
Зо адсдаащда сдададдода дассдасоса ісдааададо юдадіасас дасіддсад 480 саддідсадс ддйсдсодсд адаснсдсуд саднассод діаадієсіа сюда 534 -2105» 92 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 92 аадасссіаа іїіасіднсіс Тасссдсдас дддсадасаа дддадаїсдс сдсонесії бо дссісддадс ЮШааддадса ддддащшас одсідасдіса іааасснаа ссддасддад 120 дадаїадсії ддасаддадіа даїадацдіс діааіїсдоада содісдаїссо аїйасдддсаї 180 пссасссід сіцісдассд снисддаад аадсасасад адасасісаа сісасідссс 240 дусуссці ісісщіааа сспуносс сддааадссоу адаададаас дссдсадаса 300 аасісаїаса ссаддаації ссіацЦааас адсссуюда адссадсддс сідсоасоадіє 360 шасідада сссіссосіа сссіадаїтас сдсіддіасу асадднсаї дайасдасід 420 ацадаааа щдасадосод9у ддадасддаї асссдааадо аддіадісіа сасідасідд 480 бо
Ісдсадаїсд сдісдшос садададагїа діссадіда ссаддісаїс дсосноїда 540 2105» 93 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 93 адааддсодс ісдідсісіа садсасасдс дасддссада сісаїдсдаї сдссіснНас бо аїсосдіссі діадаадда дааддссдад ідсдасодіса ісдаїсісас дсасддуддад 120 сасудюдааїс Насдсадіа сдассаадід сідаїадосо ссісіаїссо Пасддсосаї 180
Шаасодсся іссісдасаа ансаїсаад сосаащдіад ассадсідаа саасаїдссс 240 їссдсонНсІ Шодсодаа ссдасодсі сддаадссід адаадсдаас ассісадасс 300 аасссаїасд Ідсддаааїй! ссіасісдса асдссаїддс адсссдсссі аїдсадоди 0360 псдсаддад сосіасодсіа ІссдсоНас сосюдаїсо агаадаїдаї даїссадсіа 420 аїааїдсдса щассо99дс9до сдадасадас асаїсдааду аадісдаата сасадасідд 480 даасаддіюда адаадшос ададдацше дссаасдсісі саїасааааа ддсайдіда 540
Зо «2105» 94 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 94 адааддсдс Наїасшції сісдасасдс дасддісада сдсадааааї сдссісадсс бо аїсдссдасд адаїсаадодад ссадсададс дсодаїдіда Ісааіайса ддасдссааа. (120 асісісдасі ддасадсадіа дассодсодід сісандосу саїсааїссу сіасдддсаї 180 пссадссаяд ісдісааїда дндідааа саїаассісі юдсайоса дсадсоддоаю 240
Істдуснсі ісіссоїдаа сспасадсі адаааассад адааодсоддіс дсссдадасі 300 аасоссіаса ссонаацдії сспдсдсад ісассоїддс адссідацо сідсудсудаіє 360 псдссдодо сасідіасіа сссісдаїас слдаюданшо агаддаїааї даїссадниє 420 аїааїдсдса щдассодідд ддадассдас дсаадіааад ааопйдадіассасддайцод 480 садсаддідс ааадуднсодс асдсдасне дсдсадсісс сдддсаадіє Пасіда 537 бо -2105» 95
«2115 534 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 95 адааадссс Юдаїссісіа Нссассадуд дасддссада сссдсаадаї адссіссісс бо аїсоасідаїд ісаїссдсса дсадсадсад юсдасоуц іааасанаа ддасдснса 120 сідссюаїй дддсссадіа дассодсадіс сідаїсддсо содісдайсо діасддссас. 180 пссадссід ддідасаа ойсдісаад садсассідс аїдадсідса дсадсудаасі 240 аасадансі ісадідідаа ссідасадсі ададаадсссу аааададаїссссадааасс /- З00 аасоссіаїа сдсадаааїй! ссідсісас ісасссіддс адссідасіо Поідссдіє /З36о0 псосоадосо ссідіасіа Іссссосіас сдсідднод аїаддодаї даїссадсід 420 ацашдадаа дасодддада ддадассдаї Ісдассаадод аддіададіа сасідасіда 480 саасаддщі саасшсдс ааасдасіїс дсасаасіас ссудіаадіє їда 534 -2105» 96 «2115 546
Зо -212» ДНК 213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 96 адаааассс іааіасщії сісдасссдс дасддссада сдсдададаї юсдадсіас бо сіддссіссу адсісаадда дсіддодаїс саадссдаю ісдсдаасді дсассдсай 120 даддадссдс адідддадаа Пасдаїсдс дндідагад дддссадсаї ссдсіаюдс 180 сасіассасі сддссшса ддадшоіа аадааасасу ссасаадай ааасіссад 240 ссіадсодссі ісіасіссді саассійдіс дсдсдсаадс сддадаадсо дасассісад 300 асдаасіссї асдсдсддаа айссідаїд аасадссаді ддсдодссода садайідсі 360 оанацйдсдо дадсссщдад аїасссдадао їассдаїдої асдайадоаніацанааа 420 сцанаюа адаїшісщао ддддадасі дасассадда аддадоідіайаасадас 480 щададсадо ісдссаайії сосісдодаа аїісососаїс Ідасадасаа дссіасасід 540 аадіад 546 «2105» 97 «2115 537 бо -212» ДНК
-213» Штгтучна послідовність «223» Рекомбінантна «4005» 97 адааддссс юдаїссісії Тадсісїі499 дадддссада сссдсдадаї сосдісаїаї бо асодсдаайкї ссаїааадда ддадаюдаяд юдсдаїющі НКаасаїссі їаддадаюдад 120 саааїадасі ддісісадіа Ідассдідід сісаїаддд9 ддадсаїсса сіасддссас 180 шсасссдд ссдідоасдаа айсдісаад сдасассісс асдадснса дсадсосісс 0240 іїсаддонсї Іісюсдісаа ссдасадса адаааддсад аїааасдсас сссдсадасод оо аасоссіаса дадааації ссісідсад ісісснодс адсссдацо сідсдсдат 360 псоссддіа сасідсдсіа їасдсдсіаї адаїддщша агадацдісаї дайсадсіс 420 аїсаїдсдда щшассоддс9до ддааасдадаї асіадіаадчоу аддіддадіа сасддасіда 480 асссададао сасдшесдс ссаддадіїї дсасаїсно сюддаадас ссааїшда 537 -2105» 98 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність
Зо «220» «223» Рекомбінантна -4005 98 адааддсдс їіаанцієїї садсіссаду даїддссада сдадддсіаї адсаїссіаї бо аїсдссааїа ссідааада аасдсісдад щідасоїдо ісаасдісн даасдссааї (120 дасайдасс Шсссадіа сдассдадії дссаїадосо сдісдаїссд сіасдддсда 180 шсасссід садісаасса дшШаїгасо99 аадсашоа ссісосідса дсадсіссся 240 їсадсснсі ісісюідаа Шаассосо сддаадссід адааасддас даїссаааса 300 аасоссіаїа сссдааації ссіссідаас адсссаїддс адссадассі дідсідідіє збо псодссдоса сайдсодіа Іссссдсіас аддідансо агададчідаї даїссадсіс 420 аїсададда ісасс9ддд9 ададассодаї адіассаадо адаїсдадіа сасддасідд 480 садсадаїда9 сісдснсдс ссаддаснс осісадійду ссдсааадаа іссадсаїаа 540 210» 99 «2115 540 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» 60 «223» Рекомбінантна
«-4005 99 адаадасас ідаїссіцдії сісдасісда даддссада сісаїіааааї (дсдсдссас бо айдс9д99949 іІссіддадда дсаддасааа дсодідсдадс ісдюдасц асіссадссс 120 даддадссда асіддадсас ддіддадідс дісансіду дсдсіссаї асонас994 180 сашссаса ааадшсаї ссдунсодіс аасасссасо сісаасдусі даасаасад 240 ссіддсдсдс їайсасіді іІааснадід дсісдїаадс ссдадаадса дісіссдсая /-з00 асіаасіссї асасааддаа ашсіадса дсаадсссаї ддсаассдса дсдаїдссая 360 аюйсосід дадсісідсо сіаїссіаду їасаунодаї асдасадаа! даїдаасод 420 пдайнащда ададодсадо сддддадасод дасассадда аададдісда айасасідас 480 дасааїсад ісасісдудн дсіададад аїсососааї їассаддіда дасдсддіаа 540 -2105 100 «2115 537 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна
Зо «-4005 100 адааддсіс ісаїасщі!ї садсісдада дасддоасада сссадсідаї сдссіссісс бо аїадсааадд адсіададду саадсаадсс Ідсдасдідс іІсаайайсі сдасасаасс 120
З5 аасоадздаві ддасісадіа сдасададіс сіааісддсу садїссаїсад аїасддссас 180 нсосаїсссо ссдісодсіда айсдідааа содссассадс дідадсісса дсадсосадс 240 аадсоадснсі Ісадсдідаа ісцасідсуд адааадссдуд аааадсоддадісссдадасі 300 аасоснага сддсааації ссісаассаа ісісссіддс аассадасід сідїдссодїд 360 псосщада сасідаддіа Іссодсосіаї сддюднса агадаагсаї даїасадсід 420 агаагдвсодіа щасіддща ддадасдодаї іІссадіааад аддіададіаасідандяа 480 садсададіса сіадднНсдс дсаддацдіїї асіаддсідс сдддсаадас аїссіда 537 «2105 101 «2115 543 «212» ДНК -213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 101 адаааассі їааїсцок садсасссдс дасддссада сдсддаааї сдсадсуне бо бо сісдснс99 адсісаадда асадддаай їасдссдасяо іІсайаассіааассдіасс 120 даададано сдідасадда діадассдс дідащдана ососісіаї ссдсіаддс 180 саснсосасс сддсіднода ссодійсоїд аадаадсаса суддадассії даасісасід 240 ссддаддасаї Ісшадсої аааіїстао9д дсдсдсаада ссдадаадсу сассссссад 300 асдаасадсі асасссдсаа айшШасії аасіссссаї ддааассідс ддссідсдса 360 дюйсосад дадсісіссод сіаїссісдс їаїсдаїдої асдасодай саїдайсод 420 сіданада ааадасодао сддсдадасоу даїасдсдаа аддаадноді сіасасідас 480 тдаїсссадо іддссісдії дсаадддазд асаїасадс іІсасісдаїсіадіадоасіс 540 ща 543 -2105 102 «2115 534 «212» ДНК 213» Штгтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 102 адаадаїйс іІсаїснНай Несасссда дасддссааа сссдсдадаї дсодсаїсс бо
Зо сісдссіссуд адндаадда дсадодсдій дашюдаїй ддісаассі ссассдсдса 120 даааасаїад судщддодадада діасдацда дісдісаїсо дадсдісааї ссдсіасдда 180
З5 сашссасі саасдсдаа нсашою аадаадсасс аасаадсодсі саадаадсія 240 сссддадсаї іІсіасадсодї саассісодід асісддаадс сддаааадсуд сассссдсаа 300 асааасадсі асасасдсаа аШсідсіс дасісдсссі ддсаасссда ссідадідсс 360 дішсоссо дадсасідсод сіаїіссссді їІасаасідді асдаїсосаї аадансда 420 сідаїсаюда адапйасада сддддааасс даїасісдда аддачдаїдоді діаїайсадас 480 їддсадсада НМасссасії сдсссасдад аїсдіссадс ісдйсдіаа дда 534
Claims (27)
1. Молекула рекомбінантної ДНК, яка містить послідовність ДНК, що кодує транзитний пептид хлоропласта (СТР), функціонально зв'язану з послідовністю ДНК, що кодує дикамба- монооксигеназу (МО) або протопорфіриногеноксидазу (РРО), при цьому СТР містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1-3.
2. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що послідовність ДНК, яка кодує СТР, містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 7-14.
3. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що ОМО або РРО містить поліпептидну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 18-27 і 40-59.
4. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 3, яка відрізняється тим, що послідовність ДНК, яка кодує ОМО або РРО, містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 28- 37 і 61-102.
5. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що СТР є функціонально зв'язаним з білком ОМО, при цьому СТР містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1-3.
6. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що СТР є функціонально зв'язаним з білком РРО, при цьому СТР містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕОІЮО МО: 1 і 2.
7. Конструкція ДНК, що містить молекулу ДНК за п. 1, функціонально зв'язану з гетерологічним промотором, функціональним в клітині рослини.
8. Трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина, що містять молекулу ДНК за п. 1.
9. Трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина за п. 8, які відрізняються тим, що рослина є однодольною рослиною.
10. Трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина за п. 9, які відрізняються тим, що рослина є рослиною кукурудзи або пшениці.
11. Трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина за п. 8, які відрізняються тим, що рослина є дводольною рослиною.
12. Трансгенна рослина, клітина рослини, частина рослини або насінина за п. 11, які відрізняються тим, що рослина є рослиною сої, бавовнику або роду капусти (Вгазвіса).
13. Спосіб продукування толерантної до гербіциду рослини, що включає наступні етапи: а) трансформування клітини рослини зазначеною конструкцією ДНК за п. 7, |і Б) регенерування рослини із трансформованої клітини рослини, яка містить зазначену конструкцію ДНК.
14. Спосіб за п. 13, який відрізняється тим, що регенерована рослина є толерантною до гербіциду, вибраного з групи, що складається з дикамби та інгібітору РРО.
15. Спосіб продукування толерантної до гербіциду рослини, що включає наступні етапи: а) забезпечення популяції рослин, які включають рослину, яка містить молекулу ДНК за п. 1; і р) відбір рослини, що містить зазначену молекулу ДНК.
16. Спосіб за п. 15, який відрізняється тим, що відібрана рослина є толерантною до гербіциду, вибраного з групи, що складається з дикамби та інгібітору РРО. Зо
17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що відібрана рослина є толерантною до гербіциду - інгібітору РРО, вибраного з групи, що складається з 5-3100, фомесафену, ацифлуорфену, лактофену, флуміоксазину, сульфантразону і сафлуфенацилу.
18. Спосіб експресії дикамба-монооксигенази (ОМО) або протопорфіриногеноксидази (РРО), що включає введення молекули ДНК за п. 1 у клітину рослини.
19. Спосіб за п. 18, який відрізняється тим, що введення включає трансформацію клітини рослини.
20. Спосіб контролю росту бур'янів в середовищі вирощування сільськогосподарських культур, що включає наступні етапи: а) посадку рослини або насінини за п. 8 в середовище вирощування сільськогосподарських культур; і БЮ) застосування в середовищі вирощування сільськогосподарських культур такої кількості гербіциду дикамби або інгібітору РРО, яка є ефективною для контролю росту бур'янів.
21. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що гербіцид не уражає рослину або насінину.
22. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що рослина або насінина є однодольною рослиною або насіниною.
23. Спосіб за п. 22, який відрізняється тим, що рослина є рослиною кукурудзи або пшениці.
24. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що рослина або насінина є дводольною рослиною або насіниною.
25. Спосіб за п. 24, який відрізняється тим, що рослина є рослиною сої, бавовнику або рослиною роду капусти (Вгаззіса).
26. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що зазначений гербіцид є дикамбою.
27. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що зазначений гербіцид є інгібітором РРО.
,.. с . її, С: ОК КО КО КН о КО ОВ В КВ М В ЗХ ВК о. кіз З Ох УЗ ОК о СОУ ОО В Х.
п. с п. і; Зо КО М о В В о о о. ни о. о. о. ї с : є В з З та с па М, Се хі ОК ОК КК о
5 п. С ОК КМ с о. ЯК К КО с З ОО: У КОНЯ КК В АВК КК КК ОО УК ОК з Ох КО В КО З КК ОКО ОКХ ОК ОО М М В ОО В В с ОО КИ ОВ ок КО ОКО В В а
5. о НН с с с МКУ МИ КВ КК КАК КК КК с а с ВК ОК В Я с о ЕМО КОН М В Ж КОХ ШК о. . с 5 ОВ В ВО с се . КУМ КМ МО ВН ї- п ОО ше чЧнг. 1
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562270180P | 2015-12-21 | 2015-12-21 | |
| US201662364715P | 2016-07-20 | 2016-07-20 | |
| PCT/US2016/067531 WO2017112589A1 (en) | 2015-12-21 | 2016-12-19 | Compositions and methods for efficient targeting of transgenes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA126554C2 true UA126554C2 (uk) | 2022-11-02 |
Family
ID=59065936
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201808061A UA126554C2 (uk) | 2015-12-21 | 2016-12-19 | Композиція і спосіб для ефективного націлювання трансгенів |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10563220B2 (uk) |
| EP (2) | EP3394272B1 (uk) |
| JP (2) | JP6961611B2 (uk) |
| KR (1) | KR20180089518A (uk) |
| CN (2) | CN108463554B (uk) |
| AU (2) | AU2016377487B2 (uk) |
| BR (1) | BR102016029899A2 (uk) |
| CA (1) | CA2950803A1 (uk) |
| CO (1) | CO2018007568A2 (uk) |
| DK (1) | DK3394272T3 (uk) |
| EC (1) | ECSP18054745A (uk) |
| ES (1) | ES2941913T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20230311T1 (uk) |
| HU (1) | HUE061632T2 (uk) |
| MX (1) | MX2018007705A (uk) |
| PE (2) | PE20240226A1 (uk) |
| PH (1) | PH12018501317A1 (uk) |
| PL (1) | PL3394272T3 (uk) |
| PT (1) | PT3394272T (uk) |
| RS (1) | RS64091B1 (uk) |
| RU (1) | RU2751238C2 (uk) |
| UA (1) | UA126554C2 (uk) |
| UY (1) | UY37040A (uk) |
| WO (1) | WO2017112589A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201803723B (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HRP20240421T1 (hr) | 2015-08-03 | 2024-06-21 | Monsanto Technology Llc | Postupci i pripravci za otpornost biljaka na herbicide |
| US10378023B2 (en) | 2015-09-01 | 2019-08-13 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for herbicide tolerance in plants |
| BR112019001645B1 (pt) | 2016-07-29 | 2022-10-04 | Basf Se | Método para controlar o crescimento de ervas daninhas resistentes a ppo, uso dos compostos e uso da composição |
| PE20240136A1 (es) | 2016-07-29 | 2024-01-30 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para la expresion genica en plantas |
| CA3026528A1 (en) * | 2017-12-15 | 2019-06-15 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for ppo herbicide tolerance |
| AU2017319643B2 (en) | 2017-12-20 | 2024-01-25 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Method for controlling harmful organisms in crops |
| CA3057917A1 (en) | 2018-10-16 | 2020-04-16 | Monsanto Technology Llc | Brassica event mon94100 and methods of use thereof |
| WO2023044364A1 (en) | 2021-09-15 | 2023-03-23 | Enko Chem, Inc. | Protoporphyrinogen oxidase inhibitors |
| WO2023137309A2 (en) | 2022-01-14 | 2023-07-20 | Enko Chem, Inc. | Protoporphyrinogen oxidase inhibitors |
| US20240229063A1 (en) * | 2022-12-20 | 2024-07-11 | Monsanto Technology Llc | Transgenic corn event zm_csm63715 and methods for detection and uses thereof |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5939602A (en) * | 1995-06-06 | 1999-08-17 | Novartis Finance Corporation | DNA molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase and inhibitor-resistant mutants thereof |
| US5659114A (en) | 1996-05-10 | 1997-08-19 | Asgrow Seed Company | Soybean cultivar 88154622393 |
| US6252148B1 (en) | 1999-12-06 | 2001-06-26 | Holden's Foundation Seeds Llc | Inbred corn line LH244 |
| US20090100536A1 (en) * | 2001-12-04 | 2009-04-16 | Monsanto Company | Transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| US7166779B1 (en) | 2003-03-07 | 2007-01-23 | Monsanto Technology, L.L.C. | Plants and seeds of variety I294213 |
| US20060048240A1 (en) | 2004-04-01 | 2006-03-02 | Nickolai Alexandrov | Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby |
| US6930228B2 (en) | 2003-10-16 | 2005-08-16 | D&Pl Technology Holding Company, Llc | Cotton cultivar DP 393 |
| EP2316953A3 (en) | 2003-10-20 | 2011-10-05 | CropDesign N.V. | Identification of novel E2F target genes and use thereof |
| AU2007204056B2 (en) * | 2006-01-06 | 2013-01-17 | Rijk Zwaan Zaadteelt En Zaadhandel B.V. | Screening method for selecting plants that show a reduced wound-induced surface discolouration and plant and plant parts thus obtained |
| WO2007146703A2 (en) | 2006-06-06 | 2007-12-21 | Ud Technology Corporation | Process for coating a shear thickening fluid onto a material |
| US7855326B2 (en) | 2006-06-06 | 2010-12-21 | Monsanto Technology Llc | Methods for weed control using plants having dicamba-degrading enzymatic activity |
| US7884262B2 (en) * | 2006-06-06 | 2011-02-08 | Monsanto Technology Llc | Modified DMO enzyme and methods of its use |
| MX2008015742A (es) | 2006-06-06 | 2008-12-19 | Monsanto Technology Llc | Metodo de seleccion de celulas transformadas. |
| CN101522023B (zh) | 2006-10-16 | 2014-03-12 | 孟山都技术公司 | 改善植物健康的方法和组合物 |
| US7939721B2 (en) | 2006-10-25 | 2011-05-10 | Monsanto Technology Llc | Cropping systems for managing weeds |
| US7838729B2 (en) * | 2007-02-26 | 2010-11-23 | Monsanto Technology Llc | Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof |
| US7700846B2 (en) | 2008-05-07 | 2010-04-20 | Monsanto Technology Llc | Soybean variety D5245143 |
| KR20140107334A (ko) * | 2011-12-30 | 2014-09-04 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 합성 양방향성 식물 프로모터 ｕｂｉ１을 위한 구축물 및 방법 |
| US10041087B2 (en) | 2012-06-19 | 2018-08-07 | BASF Agro B.V. | Plants having increased tolerance to herbicides |
| AR091489A1 (es) * | 2012-06-19 | 2015-02-11 | Basf Se | Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo) |
| UA123757C2 (uk) | 2013-08-12 | 2021-06-02 | Басф Агро Б. В. | Мутована протопорфіриногеноксидаза, що надає рослинам стійкості до ппо-інгібуючого гербіциду |
| US9957524B2 (en) * | 2014-03-28 | 2018-05-01 | Monsanto Technology Llc | Pesticidal toxin proteins active against coleopteran insects |
| HRP20240421T1 (hr) | 2015-08-03 | 2024-06-21 | Monsanto Technology Llc | Postupci i pripravci za otpornost biljaka na herbicide |
| US10378023B2 (en) | 2015-09-01 | 2019-08-13 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for herbicide tolerance in plants |
| PE20240136A1 (es) | 2016-07-29 | 2024-01-30 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para la expresion genica en plantas |
| CA3026528A1 (en) | 2017-12-15 | 2019-06-15 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for ppo herbicide tolerance |
-
2016
- 2016-12-02 US US15/368,410 patent/US10563220B2/en active Active
- 2016-12-07 CA CA2950803A patent/CA2950803A1/en active Pending
- 2016-12-19 EP EP16879934.4A patent/EP3394272B1/en active Active
- 2016-12-19 ES ES16879934T patent/ES2941913T3/es active Active
- 2016-12-19 RU RU2018124597A patent/RU2751238C2/ru active
- 2016-12-19 MX MX2018007705A patent/MX2018007705A/es unknown
- 2016-12-19 PE PE2023001714A patent/PE20240226A1/es unknown
- 2016-12-19 PT PT168799344T patent/PT3394272T/pt unknown
- 2016-12-19 DK DK16879934.4T patent/DK3394272T3/da active
- 2016-12-19 UA UAA201808061A patent/UA126554C2/uk unknown
- 2016-12-19 JP JP2018551894A patent/JP6961611B2/ja active Active
- 2016-12-19 HU HUE16879934A patent/HUE061632T2/hu unknown
- 2016-12-19 KR KR1020187020666A patent/KR20180089518A/ko unknown
- 2016-12-19 CN CN201680078294.7A patent/CN108463554B/zh active Active
- 2016-12-19 BR BR102016029899-7A patent/BR102016029899A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-12-19 EP EP22211351.6A patent/EP4219729A3/en active Pending
- 2016-12-19 RS RS20230248A patent/RS64091B1/sr unknown
- 2016-12-19 HR HRP20230311TT patent/HRP20230311T1/hr unknown
- 2016-12-19 CN CN202310343885.4A patent/CN116355928A/zh active Pending
- 2016-12-19 AU AU2016377487A patent/AU2016377487B2/en active Active
- 2016-12-19 PL PL16879934.4T patent/PL3394272T3/pl unknown
- 2016-12-19 PE PE2018001186A patent/PE20181540A1/es unknown
- 2016-12-19 WO PCT/US2016/067531 patent/WO2017112589A1/en active Application Filing
- 2016-12-20 UY UY0001037040A patent/UY37040A/es active IP Right Grant
-
2018
- 2018-06-05 ZA ZA2018/03723A patent/ZA201803723B/en unknown
- 2018-06-20 PH PH12018501317A patent/PH12018501317A1/en unknown
- 2018-07-19 CO CONC2018/0007568A patent/CO2018007568A2/es unknown
- 2018-07-20 EC ECSENADI201854745A patent/ECSP18054745A/es unknown
-
2020
- 2020-12-06 AU AU2020281170A patent/AU2020281170C1/en active Active
-
2021
- 2021-10-13 JP JP2021168223A patent/JP7312805B2/ja active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA126554C2 (uk) | Композиція і спосіб для ефективного націлювання трансгенів | |
| CN108235709B (zh) | 用于植物的除草剂耐受性的方法和组合物 | |
| RU2763534C2 (ru) | Способы и композиции для экспрессии генов в растениях | |
| EA027914B1 (ru) | Сконструированные посадочные площадки для направленного воздействия на ген в растениях | |
| US20090165165A1 (en) | Transgenic plants with enhanced agronomic traits | |
| JP2003527080A (ja) | 除草剤耐性植物 | |
| AU2020273330B2 (en) | Methods and compositions for selective regulation of protein expression | |
| CN111433363B (zh) | 非生物胁迫耐性提高的植物和提高植物非生物胁迫耐性的多聚核苷酸及方法 | |
| US20140090101A1 (en) | Transgenic plants with enhanced agronomic traits | |
| CN111295445B (zh) | 非生物胁迫耐性提高的植物和提高植物非生物胁迫耐性的多聚核苷酸及方法 | |
| CN110093325B (zh) | 烟草线粒体的原卟啉原氧化酶突变体及其编码基因和应用 | |
| OA18737A (en) | Compositions and methods for efficient targeting of transgenes | |
| DE60028751T2 (de) | Herbizidresistente pflanzen | |
| US20220275384A1 (en) | Abiotic stress tolerant plants and methods | |
| US20220186245A1 (en) | Abiotic stress tolerant plants and methods |