UA126548C2 - Вакцинна композиція для профілактики абровірусних інфекцій - Google Patents

Вакцинна композиція для профілактики абровірусних інфекцій Download PDF

Info

Publication number
UA126548C2
UA126548C2 UAA201801513A UAA201801513A UA126548C2 UA 126548 C2 UA126548 C2 UA 126548C2 UA A201801513 A UAA201801513 A UA A201801513A UA A201801513 A UAA201801513 A UA A201801513A UA 126548 C2 UA126548 C2 UA 126548C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
virus
item
composition according
zika
zika virus
Prior art date
Application number
UAA201801513A
Other languages
English (en)
Inventor
Кандашвамі Суматхі
Кандашвами Суматхи
Крішна Муртхі Елла
Кришна Муртхи ЭЛЛА
Original Assignee
Бхарат Біотек Інтернешнл Лімітед
Бхарат Биотек Интернешнл Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=57757129&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA126548(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Бхарат Біотек Інтернешнл Лімітед, Бхарат Биотек Интернешнл Лимитед filed Critical Бхарат Біотек Інтернешнл Лімітед
Publication of UA126548C2 publication Critical patent/UA126548C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/5555—Muramyl dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/14011—Baculoviridae
    • C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
    • C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24161—Methods of inactivation or attenuation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Представлений винахід розкриває вакцинні композиції, які містять антигени віруса Зіка для профілактики та лікування вірусних інфекцій Зіка у ссавців. Винахід також розкриває стабільні вакцинні композиції, які містять антигени віруса Зіка з одним або декількома антигенами арбовірусу, такими як вірусні агенти Чикунгунья та/або Японського енцефаліту. Представлений винахід також стосується способів одержання, формулювання та застосування даного засобу для одночасного викликання імунної відповіді до кожного із зазначених вище патогенів у ссавців, та прийнятного для імунізації суб'єктів-людей.
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
На даний час в світі не існує доступної вакцини для профілактики або лікування проти вірусних інфекцій Зіка. Таким чином, не існує ніяких даних з попереднього рівня техніки, релевантних до винаходу, розкритого в даній заявці. Проте, для загального розуміння передумови та завдання, які лежать в основі даного винаходу, обговорюються далі в даному документі в параграфах нижче.
Автори винаходу даної патентної заявки передбачали епідемічний потенціал вірусу Зіка в регіонах з високою поширеністю комарів Аеде5, зокрема Аеєдех аедурії, які передають вірус.
Інтерес до ініціювання проекту вакцини «Зіка» на ранній стадії, за кілька місяців до того, як причинний зв'язок вірусної інфекції Зіка з синдромом Гієлла Берра та мікроцефалією став загальнодоступним в грудні 2015 року, полягав у тому, що не було ні готовності в жодній країні світу, ні заходів, ініційованих будь-ким в той час для розробки вакцини, щоб зупинити триваючу передачу вірусу в таких країнах, як Бразилія, та запобігти подальшій передачі в країнах, що знаходяться під загрозою вірусу Зіка. Збільшення міжнародних поїздок в регіони та з регіонів з яких продовжується передача вірусу, створює серйозний ризик розпочати спалах захворювання у країнах з високою поширеністю комарів Аеде5, зокрема Ае.едиурії, та тих, які мають велике наївне населення, яке не піддавалося дії вірусу. Клінічна картина вірусної інфекції Зіка на ранніх стадіях з характерною високою температурою, макулопапулярними висипами та артралгією напрочуд схожа на ранні симптоми вірусних інфекцій Чикунгунья та денге, що робить диференціальну діагностику особливо складною.
Проект вакцини проти вірусу Зіка був започаткований у той час, коли дуже мало чи ніякої
Зо інформації не було про вірусний патогенез, генетичну різноманітність, передачу, діагностику, серологічні кореляти для захисту або моделі тварин для дослідження концепцій вакцини. З точки зору вакцини, не було відомостей про те, чи можна вірус культивувати іп міго на клітинних субстратах, та якщо так, то які клітинні субстрати є найбільш прийнятними, механізм адаптації до клітин, потенційні титри вірусів та можливість здійснення виробництва вакцинного продукту для людського введення, як опублікована інформація на той час стосувалася проходження вірусу в мозок миші, що не є прийнятним для виробництва вакцини. Впагаї Віоїесп розпочав кроки, щоб започаткувати проект вакцини Зіка наприкінці 2014 року, та найближчим часом розпочав експериментальну роботу, що в результаті призвела до заявленої патентної заявки.
Інфекції арбовірусу (які поширюються членистоногими) є викликаними вірусами, які поширюються членистоногими, такими як комарі. Вони викликають значні захворювання людей, починаючи від м'якої, безсимптомної інфекції до гострого енцефаліту або геморагічної лихоманки, що може виявитися фатальним. Найбільш значні арбовіруси, що спричиняють захворювання людини, належать до трьох вірусних родин, Тодамігідає, Ріамімігідає, та
Випуамігідає. Арбувірусні інфекції є «буйними» в країнах, що розвиваються, та викликають серйозну захворюваність, особливо у людей похилого віку. Серед інших характерна особливість арбовірусної інфекції, викликаної вірусами Денге, Чикунгунья, Зікою, японським енцефалітом та
Західного Нілу, серед інших: лихоманка, головний біль, міалгія, болі в суглобах з набряком та макулопапулярні висипання під час гострої фази вірусної інфекції. Артралгії є особливо характерною ознакою лихоманка вірусу Чикунгунья, денге та Зіка. Спів-інфекції є загальними, оскільки арбовіруси в основному поширюються однаковими комарами-переносниками, такі як, наприклад, віруси денге, Чикунгунья та Зіка, які передаються комарами Аеєдевз. Вірус японського енцефаліту та віруси Західного Нілу передаються переважно комарами Сшіех. Проблема гостро стоїть в розвиваючих країнах, де програми боротьби з комарами-переносниками були неефективними та в основному невдалими. Проблема ускладнюється тим, що не існує надійних способів діагностики для діагностики захворювання, що викликається вірусами з упевненістю.
Міжнародні подорожі сприяли широкому поширенню даних інфекційних агентів, та захворювання, такі як денге та Чикунгунья, які досі обмежувалися лише тропічними країнами, тепер розповсюджуються географічно на нові райони та в регіон з помірним кліматом. Як повідомляється, вірус Зіка поширюється в більше ніж 65 країнах за останні два роки. бо Профілактика аутохітних епідемій, про які повідомляють у кількох країнах у цих регіонах,
підтримується місцевою популяцією комарів-переносників.
Вірус Зіка (24ІКМ) представляє собою виникаючий зоонозний арбовірус, який належить до родини Ріамімігідає. Подібно до вірусів Денге та Чикунгуйя, вірус Зіка також може передаватися комарами Аєдевз, зокрема А. Тигсітег, А. їауїогі, А. ІЛеосерпа!їнз5, А. африканськогоив, А. аІрорісіи5 та переважно А. аедурії. Туристичні поїздки до країн, де повідомлялося про недавні епідемії, такі як Полінезія, сприяли географічному поширенню вірусної інфекції в Бразилію, Колумбію,
Італію та інші країни. Повідомлялося про автохтонний спалах вірусу в Ігалії, викликаний через локалізованих комарів Аеєдев. В Азії вірусна інфекція Зіка спостерігалася епізодично в Камбоджі,
Таїланді, Індонезії, Малайзії та Бангладеш, хоча в даних регіонах не повідомлялося про великі епідемічні спалахи.
Вірус Чикунгунья (СНІКМ) представляє собою АїІрпавірус родини Тодамігідаеє. Вірус викликає самообмежуючу фебрильную інфекцію, яка характеризується гострим початком з високою температурою, головним болем, міалгією, артралгією, набряками суглобів ("та макулопапулярним висипом. Сильні симптоми, такі як геморагія, грипчастий гепатит та неврологічні симптоми, були зареєстровані в останніх епідеміях. Вірус Чикунгунья передається як комарами Аедезаеєедурії, так і Аеєде5 аїІрорісіи5. Вірус японського енцефаліту (ЕМ) також представляє собою флавівірус родини Ріамімігідає та передається переважно комарами Сшех.
УЕМ є пов'язаним з Денге, вірусом жовтої лихоманки, вірусами Зіка та Західного Нілу. Інфекція
УЕМ є дуже безсимптомною, але в цілому вона спричиняє нездужання з лихоманкою, головним болем та іншими грипоподібними симптомами. Рідко клінічна інфекція розвивається до енцефаліту з нападами, спастичним паралічем, комою та смертю. Діти є особливо чутливими. В країнах, ендемічних для ЧЕМ, більшість дорослих мають природний імунітет після дитячої інфекції. Дорослі, які не піддавались інфекції в дитинстві, є чутливими в будь-якому віці.
Частота смертності в УЕМ, викликана енцефалітом, може становити аж до 3095. Неврологічні ускладнення або психіатричні симптоми виникають у великій частині випадків з енцефалітом. В усьому світі приблизно З мільярди населення перебувають під загрозою зараження ОЕМ.
Декілька вакцин для профілактики інфекції ОЕМ були успішно продаються. Вірус денге (ОЕММ) є членом родини Ріамімігідає. Арбовірусна інфекція більше не може розглядатися як специфічна для регіону, оскільки вона зараз є широко географічно поширеною та є значною проблемою
Зо громадського здоров'я в багатьох частинах світу. Захворюваність, спричинена згаданими вище арбовірусними інфекціями, зазвичай висока, та артралія, зокрема, несприятливо впливає на фізичну мобільність пацієнтів. Вірус Зіка викликає більш серйозні вроджені деформації при народженні під час інфікування під час вагітності, та Зіка, пов'язані з синдромом Гієлла Берра, були підтверджені в поточних епідеміях. Як і будь-які інші вірусні інфекції, не існує спеціальних терапевтичних засобів. Профілактична вакцинація може ефективно переривати передачу вірусу
Зіка, та вакцина буде фронтом захисту від вірусного захворювання Зіка.
З огляду на це була розроблена ефективна стратегія запобігання подальшій передачі вірусу
Зіка для захисту наївного населення, в країнах, де спостерігається епідеміка, та в країнах, де ще не було повідомлено про активну передачу вірусу Зіка. Комбінована вакцина для арбовірусних інфекцій представляє собою гарну стратегію захисту вразливих груп населення від виснажливих захворювань, спричинених Денге, Чикунгунья, Зіка, японським енцефалітом, вірусами Західного Нілу та жовтої лихоманки. Вакцини для УЕМ, жовтої лихоманки та одного з серотипів денге є в продажу, та вакцини для Західного Нілу та СНІКМ знаходяться в клінічній розробці. Ще не існує вакцини для вірусної інфекції Зіка, та в даному винаході розкриваються способи розробки першої вакцини кандидата Зіка.
Проте вибір антигенів для включення в такий комплект вакцини залежить від декількох чинників. Залежне від антитіла посилення вірусу, спричинене серотипами лихоманки Денге, є добре досліджуваним та опублікованим, та також крос-реактивність флавівірусних антитіл. Але незрозумілим є те, як б така інтерференція або перехресна реактивність поширеності антитіл
Чикунгунья в одній і тій самій популяції, зазнала експозиції вірусу Зіка. Аналогічним чином не було відомо, чи антитіла до вірусу японського енцефаліту можуть викликати антигенні втручання у розвиток імунітету до вірусу Зіка, та було цікаво думати про те, що вони так само вивчаються. Запропонована робота також дає уявлення про будь-яку можливу імунну інтерференцію, спричинену поширеними антитілами ЧЕ та СНІКМ до вакцини кандидата Зіка.
У даному винаході вакцини з вірусом кандидата Зіка були розроблені та випробувані щодо ефективності з використанням різних композицій для виявлення відповідного рівня імунної відповіді для захисту від вірусного захворювання Зіка. Оскільки відсутність значної антигенної інтерференції до Зіка викликаної імунною реакцією вакцини проти вірусу японського енцефаліту та вакцини проти вірусу Чикунгуні при одночасному введенні або комбінації як комбінованої бо вакцини, препарати були ефективними для виявлення високого рівня нейтралізуючих антитіл,
здатних забезпечити захист проти кожного з вірусів.
ЗАДАЧІ ВИНАХОДУ
Одна із задач винаходу полягає у забезпеченні стабільних імуногенних композицій для профілактики та лікування вірусних інфекцій Зіка.
Інша задача винаходу полягає у забезпеченні способів адаптації та росту вірусу Зіка в клітинах Веро.
Інша задача винаходу полягає у забезпеченні способів одержання інактивованої вакцини проти вірусу Зіка та очищення вірусного об'ємного антигену Зіка.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні способів інактивації вірусу Зіка хімічними засобами з формаліном, бета-пропіолактоном і пероксидом водню.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні способів інактивації вірусу Зіка фізичними засобами, такими як нагрівання, гамма-випромінювання та ультрафіолетове випромінювання.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні способів одержання та формулювання рекомбінантних вірусних антигенів Зіка, що включають протеїн ргіМЕ, та дослідження щодо імуногенності у тварин.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні способів формулювання антигенів вірусу
Зіка з різними ад'ювантами та оцінці імунної відповіді на композиції у тварин.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні кінетики імунної відповіді до однієї дози, двох та трьох доз формаліну та ВР'І. інактивованої вакцини проти вірусу Зіка у тварин.
Ще одна задача винаходу полягає у забезпеченні імуногенних композицій для профілактики вірусних інфекцій Зіка та Чикунгунья.
Інша задача винаходу полягає у забезпеченні імуногенних композицій для профілактики вірусних інфекцій Зіка, Чикунгунья та японського енцефаліту.
СУТЬ ВИНАХОДУ е Представлений винахід стосується композицій та способів виготовлення вакцинних композицій для профілактики та лікування вірусних інфекцій Зіка, а також інфекцій, викликаних іншими арбовірусами, такими як вірус Чикунгунья та вірус японського енцефаліту. е В одному аспекті, винахід стосується вакцинних композицій для профілактики та лікування вірусних інфекцій Зіка, де зазначені композиції містять антигени віруса Зіка в імуногенних
Зо композиціях та також можуть містити один або більше антигенів арбовірусу, такого як вірус
Чикунгунья та антигени вірусу японського енцефаліту, разом з прийнятними ад'ювантами та ексципієнтами. е В іншому аспекті, винахід стосується способу одержання вакцинних композицій відповідно до процесу, який включає: (а) Застосування клітинної лінії Мего як клітинного субстрату для культивування вірусу Зіка (б) Масштабування культивування вірусу Зіка аж до об'єму збору клітин 10 л (с) Інактивування вірусної культури (4) Очистка вірусної культури (є) В іншому аспекті, рекомбінантне клонування та експресування протеїну рЕМЕ вірусу
Зіка. е В одному варіанті здійснення винаходу, клітинну лінію Мего використовували як клітинний субстрат для культивування вірусу Зіка та вирощували в культуральному середовищі з або без застосування сироватки. е В іншому варіанті здійснення винаходу, вірус Зіка був адаптований шляхом повторного серійного пасажу в клітинах Мего для отримання більш високих титрів. е В іншому варіанті здійснення винаходу, вірус Зіка були пасировані в клітини Сб/36 Ае.
АІрорісіи5 з наступним ростом в клітинах Мего для збільшення титру. е В іншому варіанті здійснення винаходу, розкритими є способи масштабування вірусної культури та подальшої очистки масштабованих вірусних культур, причому об'єм збору клітин становив приблизно 8-10 л. Зібрані вірусні клітини були інактивованими з використанням різних способів. Вірус потім чистили. е В іншому варіанті здійснення винаходу, спосіб інактивації вибирають із групи інактивації формаліном, інактивації бета-пропіолактоном (ВРІ), інактивації нагріванням, інактивації УФ, гама-інактивації, в присутності або за відсутності стабілізуючих агентів та амінокислот. е В переважному варіанті здійснення винаходу, амінокислоти були відібрані індивідуально або в комбінації з групи І -гістидину, І -глутамінової кислоти, І -гліцину та І -аспарагінової кислоти та І-глютаміну та альбуміну сироватки людини. е В іншому переважному варіанті здійснення даного винаходу, спосіб очистки вибирають за допомогою використання целюфінсульфату, ОБЕАЕ-сефадекс СМ-сефадекс з градієнтом солі, з бо використанням гель-фільтрації на Саріосоге-700, Зерпагозе СІ -4В, керамічній гідроксіапатитній колонці з градієнтом від 0,2 М до 0,8 М фосфату, з наступною діафільтрацією та ультрацентрифугуванням на 20-6095 градієнта сахарози, найбільш переважно з використанням колонки Саріо соге 700. е|Інший варіант здійснення винаходу стосується рекомбінантного клонування, та передбачається експресія протеїну рКМЕ вірусу Зіка. Спосіб рекомбінантного клонування використовує сайт-специфічну транспозіцію експресійної касети з клонованими вставками в бакуловірусний шаттл-вектор, який поширюється в Е.соїї та експресується в клітинах комах. е В іншому варіанті здійснення винаходу, передбаченими є вакцинні композиції. Вакцина може містити один або декілька антигенів арбовірусу, вибраних з вірусу Зіка, вірусу Чикунгунья та вірусів японського енцефаліту. е В іншому варіанті здійснення, ад'юванти можуть бути вибраними з групи з алюмінієвих солей, інуліну, альгамуліну, комбінації з інуліну та алюмінію гідроксиду, монофосфорилліпіду А (МР), резиквімоїду, мурамілдипептиду (МОР), М-гліколілдипептиду (ЗМОР), полі ІС, Сро олігонуклеотиду, резиквімоду, алюмінію гідроксиду з МРІ., будь-якої емульсії вода-в-олії, будь- якої емульсії олія-у-воді, що містить один або декілька з наступних компонентів: сквален або його аналоги, або будь-яку фармацевтично прийнятну олію, твін-80, сорбітану триолеат, альфа- токоферол, холекальциферол або будь-який з аналогів та похідних їх молекул, або фосфату кальцію або будь-якої комбінації ад'ювантів. е«е В іншому варіанті здійснення винаходу, композиції отримують з ексципієнтами та консервантами. еВ іншому варіанті здійснення винаходу, стабілізуючі агенти у вакцинному препараті використовувались індивідуально або в комбінаціях з сорбіту, І -гліцину, маніту, І-глутамінової кислоти та альбуміну сироватки людини в різних концентраціях використовувались для дослідження вакцинного препарата. еВ іншому варіанті здійснення винаходу, ефективність вакцинних композицій досліджувалась в моделях на тваринах, щоб показати повний захист від вірусемії в широкому діапазоні дозування. еВ іншому варіанті здійснення винаходу, комбіновані вакцинні композиції були також ефективними для забезпечення адекватного захисту проти японського енцефаліту, а також
Зо вірусів Чикунгунья. е В іншому варіанті здійснення винаходу, антисироватки надає пасивний імунітет у кролика проти інфекції вірусу Зіка, щоб забезпечити повний захист від вірусемії, тоді як вірусемія була детектована у контрольованих тварин, яка персистувала аж до 6 днів після виявлення вірусу. е В іншому варіанті здійснення винаходу, вакцина з кандидатним інактивованим вірусом Зіка може вводитись або як одноразова доза, або двома або більше дозами внутрішньом'язовим способом. е« В іншому варіанті здійснення винаходу, аналізи щодо нейтралізації титрів антитіл проводили для перевірки рівней антитіла по відношенню до вакцинних композицій за представленим винаходом, які, як показано, викликають високий рівень нейтралізуючих антитіл. е В іншому варіанті здійснення винаходу, дослідження крос-нейтралізації демонстрували, що інактивовані вакцинні композиції за представленим винаходом були б однаково захисними та ефективними проти будь-якого штаму вірусу Зіка. «В іншому переважному варіанті здійснення винаходу, титри антитіл як для ВРІ інактивованих, так і інактивованих формаліном Зіка вакцинних композицій були вищими з алюмінію гідроксидом, ніж з антигеном самостійно. е В іншому варіанті здійснення винаходу, якість відповіді антитіл до вакцинної композиції за представленим винаходом за допомогою аналізів авідності антитіл, показала, що антитіло з високою афінністю були розроблені протягом часу з повторними імунізаціями.
Відповідно, винахід забезпечує стабільну вакцинну композицію, яка містить один або декілька антигенів арбовірусу, вибраних з вірусу Зіка, вірусу Чикунгунья та вірусу японського енцефаліту, причому зазначені антигени формулюються з або без ад'юванта в фармацевтично прийнятному буфері, де вакцинна композиція викликає захисну імунну відповідь до кожного з вірусів у ссавців. Вірусний антиген Зіка композиції є ефективним для лікування, діагностики та профілактики по відношенню до будь-якого генотипу/генотипних варіантів/штамів вірусу Зіка, причому композиція Є ефективною проти будь-якого генотипу/генотипних варіантів/штамів/синтетичних вірусів Зіка, які розповсюджуються будь-де від 5095 до 100905 ідентичності на амінокислотному рівні в будь-якій ділянці генома. Композиція за винаходом містить антигени віруса Зіка будь-якого генотипу/генотипного варіанта/штамів/синтетичного вірусу Зіка, причому антитіла проти будь-якого із зазначених вище типів вірусу Зіка перехресно бо нейтралізують гомологічний вірус або будь-який гетерологічний штам вірусу Зіка, які розповсюджуються щонайменше за 5095 -10095 амінокислотною ідентичністю в будь-якій ділянці його всього геному, зокрема протеїну оболонки Е.
Антигени вірусу Зіка, вірусу Чикунгунья та вірусу японського енцефаліту композиції є інактивованими цілими віріонними (вірусними) антигенами. В свою чергу, антигени вірусу Зіка та
Чикунгунья представляють собою очищені рекомбінантні антигени.
Вірусний антиген Зіка за винаходом отримують з використанням клітин Мего, як клітинного субстрату шляхом адаптації вірусу до клітин Мего.
Вірусний антиген Зіка композиції за винаходом представляє собою очищений та концентрований антиген, отриманий за одним або декількома способами, вибраними з: а. ультрацентрифугування; р. центрифугування за градієнтом щільності; с. освітлювання зібраних вірусних клітин з використанням мембранної фільтрації, з наступною очисткою з використанням колоночної хроматографії; апа д. тангенціальна поточна фільтрація з використанням мембран з відсіканням від 100 кДа до 300 кДа, причому тангенціальну фільтрацію здійснюють або перед, або після інактивації вірусу.
При цьому очистка з використанням колоночної хроматографії включає гель-фільтрацію, колоночну хроматографію із змішаним режимом смоли, іонообмінну колоночну хроматографію, афінну матричну хроматографію та хроматографію з гідрофобними взаємодіями. Колоночна хроматографія елюює переважну більшість вірусного антигену в потоці, такому як Саріо Соге 700, найбільш переважно Саріо Соге 700, де зразок вірусу є очищеним на Саріо Соге 700 колонці та є елюйованим в потоці.
Вірус Зіка композиції є інаккивованим щонайменше одним або декількома з хімічного інактивуючого агента, фізичного інактивуючого агента та опромінюючого агента, де інактивацію віруса Зіка здійснюють перед або після очистки вірусу. В ілюстративному варіанті здійснення вірус Зіка є інактивованим з використанням хімічного інактивуючого агента, вибраного з формаліну (формальдегіду), бета-пропіолактону (ВРІ) та пероксиду водню.
В одному переважному варіанті здійснення вірус Зіка є інактивованим будь-яким одним з наступних способів, вибраних з: а. Обробки формаліном при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1: 500 аж до 1: 4000 об./о0б. формалін : вірус, при від 8"С до 37"С, переважно 25ж23"С, протягом щонайменше від 1 до 7 днів; р. Обробки формаліном при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 аж до 1: 4000 об./о0б. формалін : вірус, при від 2"С до 8"С протягом щонайменше від 10 до 30 днів; с. Бета-пропіолактону (далі ВРІ)) при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 аж до 1: 4000 об./06. ВРІ : вірусу, протягом щонайменше від 24 до 48 годин при температурах, які знаходяться в діапазоні від 8"С до 30"С, переважно 25:53"С, протягом 48 годин; а. Бета-пропіолактону при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1: 500 аж до 1:4000 (ВРІ : вірусу, об./об.), при від 2"С до 8"С протягом щонайменше 3-7 днів; е. Комбінації з ВРІ та формаліну при будь-яких із зазначених вище умов, переважно інактивація ВРІ. при 1:3000 (ВРІ : вірусу, об./06.) протягом 24 годин з наступною інактивацією формаліном при 1: 3000 (формалін : вірус, об./06.) протягом від 24 до 48 годин при від 157С до
З30"С, переважно 255370;
І. Пероксиду водню при будь-якій концентрації, від 0,1 до 395, переважно від 0,1 до 195 при будь-якій температурі від 20 до 30"С протягом від 5 хвилин до 120 хвилин.
В одному варіанті здійснення, інактивація вірусу Зіка з використанням опромінюючого агента включає інактивацію гамма-опроміненням шляхом експозиції від 20 кГр «(Кіло Грей) аж до 35 кГр, переважно від 25 кГр до 30 кГр з 99Со джерела.
В іншому варіанті здійснення, інактивація вірусу Зіка з використанням опромінюючого агента включає інактивацію опроміненням УФ шляхом експозиції до 254 нм протягом 30 - 60 хвилин.
В наступному варіанті здійснення, вірус є інакгивованим шляхом термічної обробки при температурі від 507С до 65"7С протягом 30 хвилин до 2 годин.
Буфер, який використовується в даному винаході, може бути вибраний із переліку, який включає фосфатний буфер, цитратний буфер, фосфатно-цитратний буфер, боратний буфер, буфер, який містить три(гідроксиметил)амінометан (Тіз), сукцинатний буфер, буфери, які містять гліцин або гістидин, як один з буферуючих агентів, де фосфатний буфер представляє собою натрій-фосфатний буфер при концентрації від 5 мМ аж до 200 мМ фосфатних іонів з будь-яким рН від 6,50 до рнН 9, та необов'язково які містять натрію хлорид при концентрації від 50 до 200 мМ. Буфер підтримує рН у рідкій композиції вище рН 6,5, переважно вище рн 7,0 бо протягом всього біологічного процесу від вірусної культури аж до одержання очищеного інактивованого вірусу.
В одному варіанті здійснення, інактивація вірусу Зіка здійснюють в присутності стабілізуючого агента, вибраного з лактози, сахарози, трегалози, мальтози, манози, ізо- мальтози, рафінози, стахіози, лактобіози, сорбіту, маніту, лактобіонової кислоти, декстрану, 1 - гліцину, І-гістидин, І-глутамінової кислоти, І -аспарагінової кислоти та альбуміну сироватки людини або їх комбінацій. Однак, в одному переважному варіанті здійснення, стабілізуючий агент може бути вибраним з: а. 295 сорбіту та 195 І -гліцину; р. 195 сорбіту та 0,5 95 І -гліцину; с. 195 маніту та 0,595 І -гліцину; й. 195 маніту та 0,595 І -глутамінової кислоти; та е. 195 сорбіту та 0,595 І -гліцину, 195 альбуміну сироватки людини.
В ілюстративному варіанті здійснення, інактивація вірусу Зіка включає інактивацію будь- якого генотипу/штаму, живого ослабленого вірусу Зіка, дезактивованого вірусу, вірусоподібних частинок, химерних вірусних частинок, які несуть будь-які антигени віруса Зіка, зокрема, протеїн
Е в будь-якому гетерологічному вірусному скелеті, в векторних вакцинах та інфекційних синтетичних вірусних частинок, отриманих іп міго або іп мімо, використовуючи послідовність будь-якого геному вірусу Зіка.
Очищений рекомбінантне вірус Зіка за винаходом містить антигени вірусу Зіка, який містить протеїн оболонки (Е), мембранний (М) протеїн та необов'язково неструктурний 1 (М51) протеїн як вакцинні антигени для індукування імунної відповіді для профілактики вірусних інфекцій Зіка, причому вірус Зіка має структурні протеїнові послідовності, як розкрито в 5ЕО. ІЮ Мо. З та ЗЕО.
ІО Мо. 4, що відповідає нуклеотидним послідовностям ЗЕО ІЮ. Мо. 1 та БЕО ІО Мо. 2 відповідно, для застосування як вакцинних антигенів проти вірусних інфекцій Зіка, викликаних генотипами або їх варіантами. Рекомбінантні ДНК конструкти містять (ї) вектор, (ї) щонайменше один фрагмент нуклеїнової кислоти, що відповідає ЗЕО ІЮ МО. 1 або 5ЕО ІЮ МО. 2, що кодує амінокислотну послідовність протеїнів ЗЕО І МО.3, 5ЕБО ІЮ МО. 4, відповідно, який є застосовуваним до будь-якої протеїнові послідовності вірусу Зіка, яка має щонайменше 7095 амінокислотну ідентичність до зазначених вище 5ЕО ІЮ МО. З та 5ЕО ІЮО МО. 4. Композиція за
Зо винаходом містить рекомбінантний ДНК конструкт, причому вектор представляє собою еукаріотичний плазмідний вектор, який є клонованим в еукаріотичному господарі, такому як бакуловірус для експресії в клітинах комах як вірусоподібних частинках (Мі Р).
Рекомбінантний протеїн вірусу Зіка отримують за способом, який включає наступні стадії: а. трансфекція рекомбінантної плазмідної ДНК в клітинах комах; р. збір клітин та виділення рекомбінантного протеїну з них; с. очистка протеїну за способом, вибраним з іонообмінної хроматографія, гель-фільтрації, афінної хроматографії, гідрофобної колоночної хроматографії, хроматографії зі змішаним режимом смол, діафільтрації, ультрацентрифугування, центрифугування за градієнтом щільності та фракціонування з сіллю.
Структурні антигени вірусу Зіка експресуються в будь-якій прокаріотичній або еукаріотичній системі експресування, що включає експресію, опосередковану бакуловірусом в клітинах комах.
Вакцинна композиція за винаходом одержується за способом, в якому нейтралізуючі антитіла значною мірою є індукованими проти протеїну оболонки, такого як оптимально інактивований вірус, живий ослаблений вірус, дезактивований вірус, ДНК вакцина, вірусоподібні частинки, химерні вірусні частинки, які показують протеїн Е вірусу Зіка в будь-якому гетерологічному вірусному скелеті, таку як в векторних вакцинах та синтетичних вірусних частинках, отриманих з будь-якої геномної РНК послідовності вірусу Зіка.
Вакцинна композиція за винаходом може додатково містити ад'ювант, причому ад'ювант є вибраним з групи, яка складається з а) солей алюмінію, які містять алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат, алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну, який представляє собою комбінацію інуліну та алюмінію гідроксиду; 4) монофосфорилліпіду А (МРІ); е) резиквімоду; У) мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); Й) полі-ІС; ї) Сраа олігонуклеотиду; |) алюмінію гідроксиду з МРІ; К) будь-якої емульсії вода-в-олії; І) будь-якої емульсії олія-у-воді, яка містить один або декілька з наступних компонентів: сквалену, або його аналогів, або будь-якої фармацевтично прийнятної олії, твіну-80, сорбіантриолеату, альфа- токоферолу, холекальциферолу та водного буфера, або будь-якого з аналогів та похідних їх молекул ї) двох або більше комбінацій з будь-якого із зазначених вище ад'ювантів, коли формулюються з антигенами віруса Зіка, викликає імунну відповідь проти вірусу. В одному переважному варіанті здійснення композиція містить алюмінію гідроксид в концентрації в 60 діапазоні від 0,1 мг до 1,5 мг алюмінію на дозу вакцини, переважно від 0,25 мг до 0,5 мг б алюмінію на дозу вакцини.
Ад'ювант композиції за винаходом забезпечує мукозний імунітет та системний імунітет при введенні ссавцям.
Вакцинна композиція з антигеном вірусу Зіка вводиться у будь-якій дозі, яка знаходиться в діапазоні від 0,125 мкг до 100 мкг на дозу з або без ад'юванта, або у вигляді одноразової дози або двох або більше доз для індукування імунної відповіді у ссавця.
В одному варіанті здійснення винахід передбачає спосіб індукування захисної імунної відповіді у ссавців, включаючи людей, який включає введення вакцинної композиції за пунктом 1 будь-яким способом, який включає внутрішньом'язовий, інтрадермальний, підшкірний, внутрішньовенний, пероральний, інтраназальний або крізшкірний способи введення.
Композиція за винаходом може вводитись будь-яким способом, який включає голки та шприци, включаючи попередньо заповнені шприці, мікроголюовий пластир, безголковий пластир, інгаляційні та назальні спреї.
Винахід також передбачає спосіб іп мійго або іп мімо застосування антитіл вірусу Зіка композиції для приготування ої іммунодіагностичних та імунотерапевтичних агентів для вірусних інфекцій Зіка.
В одному варіанті здійснення вакцинна композиція містить вірус Зіка та антигени вірусу японського енцефаліту в комбінованій вакцині, яка викликає захисну імунну відповідь у ссавців проти кожного з вірусів, причому вірусний антиген Зіка та інактивовані антигени вірусу японського енцефаліту є присутніми в комбінованій вакцині при концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 5 мкг до 50 мкг кожного антигена в фармацевтично прийнятному препараті без ад'юванта, або з ад'ювантом.
Ад'ювант може бути вибраним з групи, яка складається з а) солей алюмінію, які містять алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат, алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну, який представляє собою комбінація інуліну та алюмінію гідроксиду; 4) монофосфорилліпіду А (МР); е) резиквімоду; ї) мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); М) полі-ІС; ії)
Сро олігонуклеотиду; Ї) алюмінію гідроксиду з МРІ; К) будь-якої емульсії вода-в-олії; І) будь-якої емульсії олія-у-воді, яка містить один або декілька з наступних компонентів: сквалену або його аналогів або будь-якої фармацевтично прийнятної олії, твіну-80, сорбіантриолеату, альфа-
Зо токоферолу, холекальциферолу та водного буфера, або будь-якого з аналогів та похідних їх молекул ї) двох або більше комбінації будь-якого із зазначених вище ад'ювантів, коли формулюються з антигенами віруса Зіка, викликає імунну відповідь проти вірусу. В одному переважному варіанті здійснення, ад'ювант представляє собою алюмінію гідроксиду з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,0 мг на вакцинну дозу.
В іншому варіанті здійснення, вакцинна композиція містить вірус Зіка та антигени вірусу
Чикунгунья в комбінованій вакцині, яка викликає захисну імунну відповідь у ссавців проти кожного з вірусів, причому антигени вірусу Зіка та Чикунгунья є присутніми в комбінованій вакцині в концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 5 мкг до 50 мкг кожного антиген в фармацевтично прийнятному препараті без ад'юванта, або з ад'ювантом.
Ад'ювант може бути вибраним з групи, яка складається з а) солей алюмінію, які включають алюмінію гідроксиду, алюмінію фосфат, алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну, який представляє собою комбінацію з інуліну та алюмінію гідроксиду; 4) монофосфорилліпіду А (МРІ)); є) резиквімоду; ї) мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); М) полі-ІС; і)
Сро олігонуклеотиду; Ї) алюмінію гідроксиду з МРІ ; К) будь-якої емульсії вода-в-олії; І) будь-якої емульсії олія-у-воді, яка містить один або декілька з наступних компонентів: сквалену або його аналогів, або будь-якої фармацевтично прийнятної олії, твіну-80, сорбіантриолеату, альфа- токоферолу, холекальциферолу та водного буфера, або будь-якого з аналогів та похідних їх молекул ії) двох або більше комбінації з будь-якого із зазначених вище ад'ювантів, коли формулюються з антигенами віруса Зіка, викликає імунну відповідь проти вірусу. В одному переважному варіанті здійснення, ад'ювант представляє собою алюмінію гідроксиду з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,5 мг на вакцинну дозу.
В іншому варіанті здійснення, вакцинна композиція містить вірус Зіка, вірус Чикунгунья та антигени вірусу японського енцефаліту в комбінованій вакцині, яка викликає захисну імунну відповідь у ссавців проти кожного з вірусів, причому вірус Зіка, вірусу Чикунгунья та антигени вірусу японського енцефаліту є присутніми в комбінованій вакцині при концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 5 мкг до 50 мкг кожного антигена в фармацевтично прийнятному препараті без ад'юванта, або з ад'ювантом.
Ад'ювант може бути вибраним з групи, яка складається з а) солей алюмінію, які включають алюмінію гідроксиду, алюмінію фосфат, алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну, бо який представляє собою комбінацію з інуліну та алюмінію гідроксиду; 4) монофосфорилліпіду А
(МР); е) резиквімоду; ї) мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); М) полі-ІС; ії)
Сро олігонуклеотиду; Ї) алюмінію гідроксиду з МРІ ; К) будь-якої емульсії вода-в-олії; І) будь-якої емульсії олія-у-воді, яка містить один або декілька з наступних компонентів: сквалену або його аналогів або будь-якого фармацевтично прийнятної олії, твіну-80, сорбіантриолеату, альфа- токоферолу, холекальциферолу та водного буфера, або будь-якого з аналогів та похідних їх молекул ї) двох або більше комбінації будь-якого із зазначених вище ад'ювантів, коли формулюються з антигенами віруса Зіка, викликає імунну відповідь проти вірусу. Переважно, ад'ювант представляє собою алюмінію гідроксид з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,0 мг на вакцинну дозу.
Вакцинна композиція за винаходом необов'язково містить 2-феноксіетанольний консервант в концентрації від 2,5 до 5 мг/мл.
Вакцинна композиція при введенні в одноразовій дозі або двома або більше дозами у ссавців викликає як ТИ, так ії ТП2 імунну відповідь проти будь-якого з антигенів арбовірусу, що містить вірус Зіка, вірус Чикунгунья та вірус японського енцефаліту та є прийнятними для введення людям.
В одному варіанті здійснення винахід передбачає спосіб отримання вакцинної композиції, яка містить один або декілька антигенів арбовірусу, вибраних з вірусу Зіка, вірусу Чикунгунья та вірусу японського енцефаліту, де спосіб включає одну або декілька стадій інактивації, продукування рекомбінантного протеїну, експресування структурних антигенів, очистки та концентрації вірусного антигена, причому зазначені очистка та концентрація вірусу Зіка включає одну або декілька стадій, вибраних з: а. ультрацентрифугування; р. центрифугування за градієнтом щільності; с. освітлювання зібраних вірусних клітин з використанням мембранної фільтрації; а. очистки з використанням колоночної хроматографії; е. тангенціальної поточної фільтрації з використанням мембран з відсіканням від 100 кДа до 300 кДа, причому тангенціальну фільтрацію здійснюють або перед, або після інактивації вірусу.
Спосіб колоночної хроматографії включає гель-фільтрацію, колоночну хроматографію із змішаним режимом смоли, будь-яку іонообмінну колоночну хроматографію, афінну матричну
Зо хроматографію та хроматографію з гідрофобними взаємодіями, причому колоночний хроматографічний спосіб елюює більшість вірусного антигену в потоці, такому як Саріо Соге 700, найбільш переважно Саріо Соге 700, причому вірусний зразок є очищеним на колонці
Саріо Соге 700 та є елюйованим в потоці.
Вірус Зіка є інактивованим одним або декількома інактивуючими агентами, вибраними з хімічного інактивуючого агента, фізичного інактивуючого агента та опромінюючого агента.
Спосіб отримання включає інактивацію вірусу Зіка, яка може бути здійснена перед або після очистки вірусу, причому вірус Зіка може бути інактивованим хімічним інактивуючим агентом, вибраним з формаліну (формальдегіду), бета-пропіолактону (ВР) та пероксиду водню.
В одному варіанті здійснення, спосіб отримання включає інактивацію об'ємного вірусу Зіка, який є інактивованим будь-яким одним з наступних способів, вибраних з: а. Обробки формаліном при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1: 500 аж до 1: 4000 об./0б. формалін : вірус, при від 8"С до 37"С, переважно 25537С, протягом щонайменше від 1 до 7 днів; р. Обробки формаліном при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 аж до 1: 4000 об./об. формалін : вірус, при від 2"С до 8"С протягом щонайменше від 10 до 30 днів; с. Бета-пропіолактону (далі ВРІ) при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 аж до 1: 4000 об./об. ВРІ: вірусу, протягом щонайменше від 24 до 48 годин, якщо не більше, при температурах, які знаходиться в діапазоні від 8"С до 30"С, переважно 25:53"С, протягом 48 годин; а. Бета-пропіолактону при будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1: 500 аж до 1:4000 (ВРІ:: вірусу, об./об.), при від 2"С до 8"С протягом щонайменше від З до 7 днів; е. комбінації ВРІ та формаліну при будь-якого із зазначених вище умов, переважно ВРІ. інактивація при 1:3000 (ВРІ : вірусу, об./06.) протягом 24 годин з наступною інактивацією формаліном при 1: 3000 (формалін : вірус, об./06.) протягом від 24 до 48 годин при від 157С до 30"С, переважно 25:53"7С;
Її. пероксиду водню при будь-якій концентрації, від 0,1 до 395, переважно від 0,1 до 195 при будь-якій температурі від 20 до 30"С протягом від 5 хвилин до 120 хвилин.
У варіанті здійснення способу отримання, вірус є інактивованим гамма-опроміненням шляхом експозиції від 20 кГр (Кіло Грей) аж до 35 кГр, переважно від 25 кГр до 30 кГр від 60 джерела 90Со.
В іншому варіанті здійснення способу отримання, вірус Зіка є інактивованим опроміненням
УФ шляхом експозиції на 254 нм протягом 30 - 60 хвилин.
В іншому варіанті здійснення способу отримання, вірус Зіка є інактивованим шляхом термічної обробки від 507"С до 657С протягом від 30 хв. аж до 2 годин, переважно, при 6570 протягом 1 години.
В одному варіанті здійснення способу отримання, інактивацію здійснюють в присутності стабілізуючого агента, вибраного з лактози, сахарози, трегалози, мальтози, манози, ізо- мальтози, рафінози, стахіози, лактобіози, сорбіту, маніту, лактобіонової кислоти, декстрану, 1 - гліцину, І-гістидину, І-глутамінової кислоти, І-аспарагінової кислоти та альбуміну сироватки людини або їх комбінацій. В одному переважному варіанті здійснення стабілізуючий агент є вибраним з: а. 295 сорбіту та 195 І -гліцину; р. 195 сорбіту та 0,5 95 І -гліцину; с. 195 маніту та 0,595 І -гліцину; й. 195 маніту та 0,595 І -глутамінової кислоти; та е. 195 сорбіту та 0,595 І -гліцину, 195 альбуміну сироватки людини.
Способи інактивації, описані вище в даному документі, є застосовуваними до вірусу Зіка будь-якого генотипу/штаму, живого ослабленого вірусу Зіка, дезактивованого вірусу, вірусоподібних частинок, химерних вірусних частинок, які несуть будь-які антигени віруса Зіка, зокрема, Е протеїн в будь-якому гетерологічному вірусному скелеті, в векторних вакцинах та інфекційних синтетичних вірусних частинках, отриманих іп мйго або іп мімо з використанням послідовності будь-якого геному віруса Зіка.
В одному варіанті здійснення винахід розкриває спосіб продукування рекомбінантного протеїну, який включає стадії: а. трансфекції рекомбінантної плазмідної ДНК в клітинах комах; р. збирання клітин та виділення рекомбінантного протеїну з них; с. очистку протеїна за щонайменше одним зі способів, який включає іонообмінну хроматографію, гель-фільтрацію, афінну хроматографію, гідрофобну колоночну хроматографію, хроматографію зі змішаним режимом смол, діафільтрацію, ультрацентрифугування,
Зо центрифугування за градієнтом щільності, фракціонування з сіллю.
В іншому варіанті здійснення, винахід розкриває спосіб експресування структурних антигенів вірусу Зіка, який включає систему експресування, яка представляє собою будь-яку прокаріотичну або еукаріотичну систему експресування, що включає експресію, опосередковану бакуловірусом, в клітинах комах.
В іншому варіанті здійснення винахід розкриває спосіб, причому спосіб включає нейтралізуючі антитіла, які переважно індукуються проти протеїну оболонки, такого як в оптимально інактивованому вірусі, живому ослабленому вірусі, дезактивованому вірусі, ДНК вакцині, вірусоподібних частинках, химерних вірусних частинках, які демонструють протеїн Е вірусу Зіка в будь-якому гетерологічному вірусному скелеті, такому як в векторних вакцинах та синтетичних вірусних частинках, отриманих з будь-якої геномної РНК послідовності вірусу Зіка.
Вакцинна композиція за винаходом може вводитись в прайм-буст стратегії, причому первинною є кандидатна інактивована вакцина, та вторинною є або така ж сама вакцина або будь-яка інша вакцина, така як ДНК вакцина, вакцина химерного вірусу Зіка, вірусоподібні частинки, дезактивована Зіка вакцина, вакцина з живим ослабленим вірусом, рекомбінантна субодинична вакцина, векторна вакцина або будь-яка вакцина, отримана з синтетичного вірусу
Зіка, причому нейтралізуючі антитіла в кожній з них індукуються проти протеїну оболонки вірусу
Зіка.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фігура 1: Фіг. Очищений вірус Зіка маса в 12,595 5О5-РАСЕ гелі, виявлений з використання фарбування сріблом. Протеїн оболонки (Е) та мембранні (М) протеїни є основними протеїнами, виявленими в очищеному антигені.
Фігура 2: Фіг. 2А - Кінетика інактивації вірусу Зіка формаліном в концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 1:1000 об./0б6. формалін : вірус аж до 1:4000 об./о6б. формалін : вірус при 25:53"С. Фіг. 28 - кінетика інактивації вірусу Зіка бета-пропіолактоном в концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 1:1000 аж до 1:3500 об./0б. ВРІ : вірусу при 255370. В обох процедурах інактивації як стабілізатори додавали 195 сорбіту та 0,595 І-гліцину (кінцева концентрація), які не мали експозиції на кінетику інактивації. Інактивовані зразки серійно ампліфікували три рази іп міо в клітинах Мего, та аналізували в кінці трьох пасажей за допомогою ТСІО50. 60 Фігура 3: Фіг. ЗА: 2,1 т.п.н. гена рІМЕ вірусу Зіка 5ЕО ІЮ МО. 1 ампліфікували ру ген-
специфічними праймерами для ініціювання клонування в рЕазіВас вектор для експресії в клітинах комах. Фіг. ЗВ: зразок 519 клітинний лізат досліджували вестерн-детектуванням експресії протеїну ріМЕ з використанням Зіка кролячої поліклональної антисироватки за стандартними процедурами. Протеїн оболонки «- 55 кДа може бути виявлений як основна смуга.
Фігура 4: Оцінка нейтралізуючих титрів антитіл, індукованих вакцинними композиціями Зіка з різними ад'ювантами. Ад'юванти скорочуються наступним чином: ріС (полі-ІС); б- холекальциферол; МЕРІ. (ліпід А; монофосфорил); КР (резиквімоїд ж полі-ІС); ЕМ (резиквімоїд
ОМУЕМ); І (інулін); ОМУЕМ2 (емульсія олія-у-воді 2); А! (алюмінію гідроксид ж інулін); МОР (мурамілдипептид); ОМУЕМІ (емульсія олія-у-воді 1). Жодні значні титри антитіл не можуть бути виявленими у відповідних контрольних групах та тому не показані на фігурі. В усіх випадках, 10 мкг двох доз вакцинного антигена Зіка був формульованим для введення мишам Ваїр/с в.м. способом.
Фігура 5: Фіг. 5А: Оцінка нейтралізуючих титрів антитіл з використанням РЕМТ5о в дослідженні дозою, яка знаходиться в діапазоні від 0,125 мкг аж до 40 мкг на дозу ад'ювантного алюмінію гідроксидом інактивованого формаліном вакцини вірусу Зіка, яку вводять в.м. способом мишам ВаїБр/с у двох дозах. Фіг. 5В: вакцинованих тварин піддавали контрольному зараженню внутрішньовенно 10е5 РЕО / вірусу Зіка штаму на тварину через 7 днів після бустерної дози, та вірусемію контролювали кожні 24 години протягом 7 днів (зображено на графіку протягом 6 днів). Всі тварини продемонстрували повний захист від вірусемії, тоді як тварини, яким вводили контрольне плацебо показали вірусемію, яка зберігалася аж до 6 днів.
Інфекційний вірус оцінювали в зразках крові за допомогою ТСІЮОз5о.
Фігура 6: Вірусне контрольне зараження мишей Ваїр/с віком 4 - 6 тижнів після введення від 1 мкг до 40 мкг ВР'І. інактивованої, алюмокалієвими квасцями адсорбованої вакцини вірусу Зіка.
Тварини з усіх груп вакцинної дози та групи плацебо піддавали контрольному зараженню 10е5
РЕ вірусу Зіка МК76б штаму через 7 днів після введення бустерної дози. Вірусемію контролювали кожні 24 години після вірусного контрольного зараження, та титри інфекційних частинок в крові оцінювали за допомогою ТСІЮО5о. Кандидатна вакцина Зіка надавала повний захист від вірусного контрольного зараження в усіх групах дози.
Фігура 7: Пасивна імунізація, яка здійснювала повний захист проти вірусемії та інфекційного
Зо вірусу, не могла бути виявленою з використання ТСіЮхо у тварин, які отримали внутрішньочеревинно кролячу поліклональну антисироватку Зіка та були контрольно заражені 24 потому 10е5 РЕШ вірусу Зіка. Інфекційні вірусні частинки не могли бути виявленими з використання ТСІЮв5о в крові, при контролюванні кожні 24 години протягом б днів, тоді як контрольні тварини, які отримували однаковий об'єм РВЗ показали стійку вірусемію аж до 6 днів, коли були контрольно заражені однаковою дозою вірусу.
Фігура 8: Інактивовані формаліном, адсорбована на алюмокалієвих квасцях антисироватки вакцини вірусу Зіка з вакцинованих мишей, нейтралізованих гомологічним штамом вірусу Зіка
МЕ 766 (Фіг. 88) та перехресно нейтралізованих гетерологічним штамом 13025 Е55 азіатського генотипу (Фіг. в8А) з однаковою ефективністю з титрами РЕМТ»5о 18105 та 18325, відповідно.
Значення для плацебо (алюмокалієві квасці тільки) також є зображеними на графіку рядом.
Фігура 9: Титри антитіл, виражені як 0910 зворотних розбавлень сироватки від дози, яка знаходиться в діапазоні досліджень (Фіг. 9А) з одноразовою дозою (Фіг. 98), двома дозами (Фіг. 9С), трьома дозами інактивованої формаліном вакцини, яка вводиться мишам Ваїр/с віком 4 - 6 тижнів, як описано в прикладі 7. Фіг. 90 представляє собою титри антитіл з однією, двома та трьома дозами 10 мкг вакцинного антигена без алюмокалієвих квасців. Всі значення виражаються як геометричні середні титри з 9595 ДІ. На 9А-90, нанесено окремі дані тварин.
Вірусний антиген Зіка був імуногенним навіть без ад'юванта. Дані з інших діапазонів доз оцінювалися, але не були включені в графік.
Фігура 10: Антитіла високої афінності можуть бути виявлені з використанням одноразової дози інактивованої формаліном адсорбованої на алюмокалієвих квасцях вакцини вірусу Зіка у мишей Ваїр/с навіть при низьких дозах вакцинного антигену аж до 1 мкг. Авідність антитіл виражається як індекс авідності та оцінюється за способами, описаними в прикладі 12.
Фігура 11: Оцінка ТА1 цитокінів (Фіг. 11А) ІЕМ гама, та (Фіг. 118) І--2 у мишей, вакцинованих вакцинними композиціями Зіка з різними ад'ювантами. В усіх випадках вона становила 10 мкг вакцинного антигена на дозу. Ад'юванти скорочуються наступним чином: ріс (полі-ІС); б- холекальциферол; МЕРІ. (ліпід А; монофосфорил); КР (резиквімоїд ж полі-ІС); ЕМ (резиквімоїд їж
ОМУЕМ); І (інулін); ОМУЕМ2 (емульсія олія-у-воді 2); А! (алюмінію гідроксиду їж інулін); МОР (мумарилдипептид); ОМУ/ЕМ'І (емульсія олія-у-воді 1) як описано в прикладі 5. Ад'юванти на основі олії та полі-ІС індукували сильну ТИ1 відповідь в порівнянні з іншими випробуваними 60 ад'ювантами.
Фігура 12: Оцінка Тп2 цитокінів (Фіг. 12А) ІІ -4, та (Фіг. 128) 1-10, у мишей, вакцинованих вакцинними композиціями Зіка з різними ад'ювантами. В усіх випадках вона становила 10 мкг вакцинного антигена на дозу. Ад'юванти скорочуються наступним чином: ріс (полі-ІС); б- холекальциферол; МЕРІ. (ліпід А; монофосфорил); КР (резиквімоїд ж полі-ІС); ЕМ (резиквімоїд
ОМЕМ); І (інулін); ОМЕМО2 (емульсія олія-у-воді 2); АІЇ (алюмінію гідроксид ж інулін); МОР (мумарилдипептид); ОМУЕМІ1 (емульсія олія-у-воді 1), як описано в прикладі 5. Ад'юванти на основі олії та полі-ІС індукували сильну ТП2 відповідь на додаток до ТП1 відповіді.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Дане розкриття стосується формулювання імуногенних композицій. Винахід розкриває, зокрема, отримання та формулювання вакцинних антигенів вірусу Зіка в моновалентних композиціях та в комбінації з іншими арбовірусами, такими як віруси Чикунгунья та /або японського енцефаліту. Зокрема, винахід розкриває композиції для профілактики та лікування вірусних інфекцій Зіка.
Один із аспектів винаходу полягає в тому, що способи одержання, формулювання та застосування антигенів Зіка, як вакцини для індукування імунної відповіді, застосовують до будь-якого генотип, генотипних варіантів або будь-якого штаму вірусу Зіка причому один генотип вірусу Зіка ефективно перехресно нейтралізує гетерологічний штам. Вірус Зіка може бути вибраним з азіатського, західноафриканського або східноафриканського генотипу вірусу.
Тому способи, описані в представленому винаході в даному документі є застосовуваними до вірусу Зіка будь-якого генотипу/штаму, живого ослабленого вірусу Зіка, дезактивованого вірусу, вірусоподібних частинок, химерних вірусних частинок, які несуть будь-які антигени віруса Зіка, зокрема, Е протеїн та М протеїн в будь-якому гетерологічному вірусному скелеті, в векторних вакцинах та інфекційних синтетичних вірусних частинках, отриманих іп мійго або іп мімо з використанням послідовності будь-якого геному вірусу Зіка. Химерний вірус має нуклеїнову кислоту гетерологічного вірусу та нуклеїнову кислоту вірусу Зіка.
В контексті імуногенних композицій, розкритих в даному документі, зокрема, основний антиген, який використовується для одержання імуногенних композицій, способи одержання, формулювання та застосування вакцинних антигенів Зіка є застосовуваними до будь-якого із зазначених вище типів віруса Зіка, які мають щонайменше від 5095 амінокислотної ідентичності та аж до 10095 амінокислотної ідентичності по всій будь-якій ділянці генома. В контексті імуногенних композицій, розкритих в даному документі, послідовність штаму МК766 вірусу Зіка африканського генотипу (ЗЕО ІО МО. 5 для геномної нуклеотидної послідовності та ЗЕО ІЮ МО. б для повного ОКЕ) має більше, ніж 96,595 амінокислотну ідентичність за структурним протеїном оболонки зі штамом Е5513025 азіатського генотипу, та чия послідовність є розкритою в 5ЕО ІЮ МО. 7 та 5ЕО ІО МО. 8 для нуклеотидних та протеїнових послідовностей відповідно. Вакцина антисироватки штаму МК766 перехресно нейтралізувала штам Е5513025 зі 10095 еквівалентною ефективністю, як гомотипний штам МЕК766. Крім того, в контексті розкриття в даному документі, антисироватка вірусу Зіка ргіМЕ (5ЕО ІЮ МО. 3) ефективно перехресно нейтралізувала штам МК766б, що підтверджує, що всі віруси Зіка є серотипово подібними. В контексті розкриття в даному документі, способи отримання вакцини, розроблені з використанням будь-якого одного штаму вірусу Зіка є застосовуваними до гомологічних та будь- яких гетерологічних штамів вірусу Зіка для застосування як кандидатної вакцини.
Клітинна лінія, яка може бути поширеною іп міто в культурі, може використовуватись як господар для вірусної культури Зіка. Рог ргорадаїйіпд вірус Зіка штами, переважно вибраними можуть бути пермісивні клітини, які дозволяють вірусу добре рости. Наприклад, можуть використовуватись диплоїдні клітинні лінії, такі як МКС-5 та УМІ-38, та серійно пасировані клітинні лінії, такі як Мего, ВНК-21, СНО клітини тощо. Наприклад, клітини Мего (АТСС Мо. ССІ - 81), ВНК-21 (АТС Мо. ССІ-10), С6б/С3 (АТС Мо. СВІ -1660) тощо. В переважному варіанті здійснення, одна така клітинна лінія, використовувана в представленому винаході, представляє собою клітини Мего (АТСС Мо. ССІ -81), які були валідованими для застосування як клітини- господаря для отримання вакцини. Валідовані клітинні лінії Мего відповідають вимогам для біологічних речовин Мо. 50 щодо вимог щодо використання клітин для виробництва біологічних препаратів, рекомендованих Всесвітньою організацією охорони здоров'я (ВООЗ), тим самим підтверджуючи, що дані клітинні лінії є належної якості для отримання вакцини (М/НО Тесппісаї герогі бепев, Мо. 878, рр 19-52, 1998).
В одному аспекті винаходу, спосіб адаптації вірусу Зіка до клітин Мего збільшує титр вірусу.
Повторно пересіяний вірус Зіка в клітинах Мего збільшує титр вірусу. В контексті росту вірусу в клітинах Мего, розкритих в даному документі, вірус Зіка первинно пасирували в мишачий мозок або клітини Ае.аіІрорісіи5 Сб/36 (АТСС Мо. СКІ-160) та потім адаптували до клітин Мего, що бо збільшує титри вірусу, прийнятні для отримання вакцини.
Для підтримання клітинної культури зазначених вище клітинних ліній, адаптованими можуть бути клітини Мего, зокрема, стаціонарна культура в моношарах, культура перфузионної системи, колби для струшування, культура ролера для пробірок/флакона, суспензійна культура з та без мікроносіїв, клітинні фабрики та клітинні стеки, біореактори та одноразові біореактори, хвильові біореактори та подібні. Наприклад, різні типи мікроносіїв є комерційно доступними.
Комерційно доступні пристрої для тваринної клітинної культури можуть використовуватись для полегшення росту клітин до високої щільності клітин.
В одному аспекті винаходу та як розкрито в даному документі, вірус Зіка є очищеним для застосування як кандидатна вакцина. Очистка досягається комбінацією як фізичних, так і хімічних способів або перед або після інактивації вірусу. Фізичні способи включають будь-яку з наступних технік, але не обмежується цим: ультрацентрифугування, центрифугування за градієнтом щільності, ультрафільтрацію, діафільтрацією та концентрацію з використанням напівпроникних мембран з прийнятними розмірами молекулярного відсіку. Очистка хімічними засобами використовує способи, такі як адсорбція/десорбція за рахунок хімічних або фізико- хімічних реакцій, таких як іонообмінна хроматографія, афінна хроматографія, хроматографія з гідрофобними взаємодіями, гель-фільтраційна хроматографія, така як наприклад
Сарюсоге700 "М, гідроксіапатитна матриця, сольвація з неорганічними солями, одним з таких прикладів є сульфат амонію.
В переважному варіанті здійснення, вірус є очищеним з використанням колоночної хроматографії на Саріо соге 700 (СЕ Неайсаге І Ше 5сієпсев5). Інактивація вірусу досягається або перед очисткою, або після очистки на колонці Саріо соге 700. Зібрані вірусні клітини перед колонкою Саріо соге 700 можуть бути освітленими з використанням мембранних фільтрів з різними розмірами пор, переважно не менше, ніж 0,45 мкМ для зв'язування на мембрані нижчих протеїнів. В переважному варіанті здійснення, вірусні зібрані клітини можуть бути освітленими з використанням подвійних мембран з двома різними розмірами пор, наприклад 1,2 мкМ з наступною 0,45 мкМ, або 0,8 мкМ з наступною 0,45 мкМ. Освітлені вірусні зібрані клітини є прийнятними для очистки на колонці Саріо Соге 700. Буфери, використовувані для очистки на
Саріо соге 700, мають оптимальний рівень рН та іонну силу, щоб максимізувати зв'язування домішок на колонці та елюювати вірус в потоці. Вірусний зразок додатково концентрують з
Зо використанням діафільтрації перед або після інактивації вірусу. Діафільтраційний зразок вірусу після інактивації видаляє вірус інактивуючого агента з основного антигену, та є прийнятним для формулювання.
В одному варіанті здійснення винаходу, вірус Зіка є інактивованим (убитий) для застосування як вакцинний антиген. Інактивацію можуть здійснювати або перед, або після очистки вірусу. В переважному варіанті здійснення, інактивацію вірусу Зіка здійснюють після очистка вірусу.
Вірус Зіка може бути інактивований або з використанням нагрівання, гамма-опроміненням, ультрафіолетового світла або хімічних засобів. В переважному варіанті здійснення, розкритий в даному документі, вірус Зіка є хімічно інактивованим. Хімічні інактивуючі агенти були вибрані з наступного переліку, який включає, але не обмежується цим: формалін, бета-пропіолактон, глутаральдегід, М-ацетилетиленімін, бінарний етиленімін, третинний етиленімін, аскорбінову кислоту, каприлову кислоту, псоларени, детергенти, які включають неїонні детергенти, тощо, причому хімічний інактивуючий агент додається до вірусної суспензії для того, щоб інактивувати вірус.
В переважному варіанті здійснення винаходу, хімічний інактивуючий агент вибирають з формаліну та/або бета-пропіолактону (ВР). Формалін використовують в будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:1000 до 1:4000 об./о06б. формалін : вірус. Бета-пропіолактону використовують в будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:1000 до 1:4000 об./06б. ої ВРІ : вірус. Температура та тривалість інактивації є оптимізованими для повної інактивації вірусу з мінімальним шкідливим впливом на імуногенність. Це може бути досягнуто при більш короткій тривалості експозиції мінімальною кількістю інактивуючого агента. В контексті інактивації вірусу, розкриття в даному документі описує концентрацію, температуру та час експозиції на вірус Зіка формаліном та ВРІ. В переважному варіанті здійснення винаходу, температура інактивації становить 25:53"С, найбільш переважно - 227С протягом 7 днів. При більш низьких температурах від 2"С до 8"С, тривалість експозиції формаліну є довшою, ніж 7 днів для того, щоб досягти повну інактивацію вірусу при зазначених вище діапазонах концентрації. Тривалість експозиції на вірус формаліном може бути зменшена до менше 48 годин за рахунок підвищення температури експозиції аж до 37"С. Отже, ефективна інактивація формаліном вірусу Зіка може бути досягнута при будь-якій концентрації, в діапазоні формаліну 60 від 1:1000 об./о6. формалін : вірус аж до 1:4000 об./о06. формалін : вірус за рахунок вибору будь-
якої температури в діапазоні від 2"7С до 37"С та варіюючи час експозиції від 24 годин до більше, ніж 10 днів при будь-якій із зазначених вище концентрацій, часу та температури експозиції.
В одному варіанті здійснення розкриття, ВРГІ. використовують як вірусний інактивуючий агент для вірусу Зіка В переважному варіанті здійснення винаходу, ВРІ використовують в концентраціях, яка знаходиться в діапазоні від 1:1000 об./06. ВРІ : вірус аж до 1: 4000 об./о6.
ВР: вірус. При більш низьких температурах від 2 до 8 "С, тривалість експозиції ВРІ. становить переважно від З до 7 днів для того, щоб досягти повну інактивацію вірусу при зазначених вище діапазонах концентрацій. Тривалість експозиції вірус ВРІ. може бути зменшена до 48 годин або менше шляхом підвищення температури експозиції аж до 2553 "С або навіть аж до 37 "С. Отже, ефективна інактивація ВРІ вірусу Зіка може досягатись за рахунок будь-якої концентрації в діапазоні ВРІ. від 1:1000 об./об6. ВРІ : вірус до 1:4000 об./о06. ВРІ : вірус за рахунок вибору будь- якої температури в діапазоні від 2 до 37 "С та варіюючи часом експозиції від 24 годин до більше, ніж 10 днів при будь-яких зазначених вище концентраціях, часу та температури експозиції.
Один з варіантів здійснення представленого винаходу, розкритого в даному документі представляє собою застосування комбінації ВРІ та формаліну при будь-яких із зазначених вище умов, переважно ВРІ. інактивація при 1:3000 об./06б. ВРІ : вірус протягом 24 годин з наступною інактивацією формаліном при 1: 3000 об./06. формалін : вірус протягом від 24 до 48 годин при від 15 "С до 30 "С, переважно 25:53 "С. Застосування комбінації ВРІ та формаліну для інактивації вірусу Зіка полягає в тому, що механізм інактивації є різним для формаліну та
ВРІ, їх комбіноване застосування знижує їх загальну концентрацію та експозицію як інактивуючими агентами, так і також застосування низьких концентрацій формаліну, сприяє стабільності основного вірусу, сприяючи перехресному зв'язуванню вірусних епітопів. В іншому варіанті здійснення винаходу, пероксид водню використовують для інактивування вірусу Зіка в концентраціях, яка знаходиться в діапазоні від 0,1 до 395, переважно від 0,1 до 195 при будь-якій температурі від 20 "С до 30 "С протягом від 5 до 120 хвилин, якщо не більше.
Варіант здійснення представленого винаходу розкриває застосування антиген ргМЕ вірусу
Зіка як антигена кандидатної вакцини для індукування імунної відповіді проти вірусу Зіка.
Розкриття є застосовуваним до будь-якого способу розробки вакцини, причому ргіМЕ або Е
Зо протеїн експресується таким способом, що нейтралізуючі антитіла Зіка є спрямованими проти зазначених антигенів. В переважному варіанті здійснення винаходу, ргіМЕ протеїн експресується як рекомбінантні вірусоподібні частинки (МІР) в експресії, опосередкованої бакуловірусом в клітинах комах. Кожен кваліфікований фахівець в даній галузі буде отримувати додаткові варіанти здійснення з використанням описаного вище розкриття, щоб розробити кандидатну вакцину з використанням протеїна ргМЕ як мішенного антигена Зіка, такого як ДНК вакцина, вірусоподібні частинки, які містять протеїни ргМЕ, субодинична вакцина, яка містить антиген оболонки (Е), живі векторні вакцини, химерні вакцини з використанням ргМЕ Зіка на гетерологічному скелеті нуклеїнової кислоти, причому всі зазначені вище анти-Зіка антитіла є спрямованими проти Е протеїна.
В представленому винаході, розкритому в даному документі, є імуногенні композиції, які містять очищені рекомбінантні антигени віруса Зіка, які містять протеїн оболонки (Е), мембранний (М) протеїн та необов'язково неструктурний 1 (М51) протеїн як вакцинні антигени для індукування імунної відповіді для профілактики вірусних інфекцій Зіка. В переважному варіанті здійснення, застосування вірусу Зіка, який має ген ргМЕ послідовності зЕО ІЮО МО. 1 та
ЗБЕО ІЮО МО. 2, що кодує структурний протеїн 5ЕО. ІЮ МО. З та 5ЕО. ІЮ МО. 4 відповідно, причому експресований та очищений протеїн ргіМЕ може використовуватись як вакцинний антиген для профілактики вірусних інфекцій Зіка.
В переважному варіанті здійснення, ген ргМЕ віруса Зіка використовують для генерування рекомбінантного генного конструкта, який може використовуватись для того, щоб експресувати протеїн рІімМЕ в прокаріотичній або еукаріотичній системах експресування як вірусоподібних частинок (МІ Р5х), переважно експресія, опосередкована бакуловірусом в клітинах комах.
Способи, розкриті в даному документі є застосовуваними до будь-якого штаму віруса Зіка, який має щонайменше 7095 амінокислотну ідентичність до зазначених вище 5ЕО ІЮО МО. З та 5ЕО ІЮ
МО. 4
Варіант здійснення представленого розкриття представляє собою вибір фармацевтично прийнятного буферу протягом біопроцесу, причому буферний агент вибирають з переліку, який складається з будь-якого одного або декількох з наступних, але не обмежується цим: фосфатний буфер; цитратний буфер; фосфатно-цитратний буфер; боратний буфер; буфер, який містить три(гідроксиметил)амінометан (Ттгі5); сукцинатний буфер; буфери, які містять бо гліцину або гістидин як один з буферних агентів. В найбільш переважному варіанті здійснення використовують фосфатний буфер, причому фосфатний буфер представляє собою натрій- фосфатний буфер в концентрації від 5 мМ аж до 200 мМ фосфатних іонів, переважно від 10 мМ до 100 мМ фосфатний буфер, найбільш переважно від 10 мМ до 50 мМ фосфатний буфер будь-якого рН вище 6,50 до рН 9, переважно від рН 6,8 до рН 7,8 використовують для процесів в зворотному напрямку та в прямому напрямку. В переважному варіанті здійснення, 10 мМ натрій-фосфатний буфер рН 7,4240,2 використовують в отриманні очищеної інактивованої вакцини основного вірусуного антигена Зіка, та, необов'язково які містять натрію хлорид в концентрації від 50 до 200 мМ. В іншому переважному варіанті здійснення, сорбіт та І -гліцин необов'язково додають до кінцевої концентрації 195 та 0,595, відповідно.
Варіант здійснення представленого винаходу також розкриває вибір ад'ювантів, які є сумісними для формулювання з вірусним антигеном Зіка.
Антигенні композиції вірусу Зіка як моновалентна вакцина, та з вірусом Чикунгунья та вірусами японського енцефаліту в комбінованій вакцині були сформульованими в фармацевтично прийнятному носії для імунізації. Застосування ад'юванта(ів) може зменшити кількість антигена, необхідного для формуляції. Крім того, для ад'ювантної вакцинної композиції, прийнятний) ад'ювант(и) були вибрані з наступного переліку, який включає, але не обмежується цим: алюмокалієві квасці, такі як алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат, або аморфний алюмінію сульфатфосфат; фосфат кальцію; інулін будь-якої поліморфної форми, переважно гама інулін; ад'юванти, які містять інулін в комбінації з іншими органічними та неорганічними сполуки, такі як алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат, алюмінію сульфатфосфат та фосфат кальцію; ліпосоми, хітозан та складні вуглеводи, такі як декстран, декстрини, крохмаль, маннани та глюкоманнани, галактоманнани, бета-глюкани, гепарин, целюлоза, геміцелюлоза, пектини та пектинити, лектини та будь-які інші вуглеводи або синтетичні, або отримані з будь-якого джерела, будь-які здатні до біологічного розкладання та біосумісні полімери, така як полілактид та полілактид співгліколіди, (РІ о або РІ СА); будь-які емульсії, які включають, але не обмежується цим, емульсії олія-у-воді, причому одним таким прикладом є сквален або аналоги сквалену, які містять олію у воді ад'юванти, емульсії олія-у-воді, які містять рослинні олії; будь-які емульсії вода-в-олії; ліпосоми, отримані з холекальциферолу як одному з інгредієнтів разом з іншими ліпідними розчинними сполуками; ліпосоми інших композицій; КІВІ
Зо ад'ювантні системи, сапоніни, які включають, але не обмежується цим, 25-21, ОЦІА, томатин,
ІЗСОМ, ІЗСОМАТКІХ, тощо, ліпопептиди, глікопептиди та їх аналоги, резиквімоїіду, ліпополісахариди, ліпід А, мурамілдипептиди або їх аналоги та будь-які ад'юванти на основі пептиду, олігонуклеотиди, будь-які ТІ ЕК ліганди та їх аналоги як ад'юванти, будь-який цитокін, вітаміни та нетоксичні бактеріальні токсини, фактично будь-які аналоги всіх зазначених вище ад'ювантів та комбінація з двох або більше із зазначених вище ад'ювантів або їх аналогів, які є сумісними у вакцинній композиції(ях) та досліджені щодо підвищеної імуногенності. На додаток до зазначеного вище, будь-які інші органічні та неорганічні речовини, які мають гарну імунопотенційну активність є прийнятними для застосування як ад'юванта або самостійно, або в ад'ювантних комбінаціях для того, щоб підвищити імуногенність арбовірусних антигенів.
Застосування ад'юванта у вакцинних композиціях може зменшити необхідну кількість антигену.
В переважному варіанті здійснення винаходу, алюмінію гідроксид використовували для дослідження діапазону дозування як формаліну, так і ВР, інактивованих антигенів Зіка, а також в вакцинних комбінаціях вакцин Зіка, СНІКМ та УХЕМ через їх профіль безпеки для застосування у цільовій популяції. Емульсії на основі олії та полі-ІС давали гарний імунопотенційний ефект щодо антигену Зіка, коли використовували як ад'юванти. В одному варіанті здійснення винаходу, полі-ІС та інші ад'юванти які здійснюють системний мукозний імунітет, є особливо переважними для захисту проти захворювання, викликаного вірусною інфекцією Зіка. Полі-ІС та на олійній основі емульсії та ад'ювантні комбінації, розкриті у винаході індукували як ТИ, так і
Т2 відповіді, оцінені шляхом вимірювання цитокінів ТА1 та Тп2 після вакцинації.
В одному варіанті здійснення представленого винаходу, вакцинний консервант використовують у вакцинних композиціях. Переважний варіант здійснення представляє собою 2-феноксіетанол в концентрації від 2,5 до 5 мг на дозу.
В одному аспекті представленого винаходу, розкритого в даному документі, застосовуються стабілізуючі агенти, вибрані з одного або декількох з наступних, але не обмежується цим: лактози, сахарози, трегалози, мальтози, манози, ізо-мальтози, рафінози, стахіози, лактобіози, сорбіту, маніту, лактобіонової кислоти, декстрану, І -гліцину, І-гістидин, І -глутамінової кислоти,
І -аспарагінової кислоти, альбуміну сироватки людини та їх комбінацій, в будь-якій прийнятній концентрації, яка використовується для забезпечення стабільності під час інактивації вірусу Зіка будь-яким із зазначених вище способів. В переважному варіанті здійснення, стабілізуючі агенти 60 є вибраними з будь-якої з наступних комбінацій, але не обмежується цим: 295 сорбіту та 195 І -
гліцину; 195 сорбіту та 0,5 95 І -гліцину; 195 маніту та 0,595 І-гліцину; 195 маніту та 0,595 1- глутамінової кислоти; 195 сорбіту, 0,595 І-гліцину, 190 альбуміну сироватки людини. В переважному варіанті здійснення, комбінація з 195 сорбіту та 0,595 І-гліцину та 195 маніту та 0,595 І -гліцину представляють собою переважні комбінації, найбільш переважно, 195 сорбіту та 0,595 І -гліцину. Кваліфікований фахівець в даній галузі буде приймати до уваги додаткові варіанти здійснення, які грунтуються на зазначених вище розкриттях.
Ліофілізовані композиції є одним із способів отримання вакцинного продукту. Ліофілізовані препарати вакцини проти вірусу Зіка, як правило, містять очищений інактивований вірус Зіка, цукрові поліоли, переважно сорбіт та маніт, найбільш переважно сорбіт в комбінації зі склоутворюючим цукром, який переважно представляє собою дисахариди або олігосахариди.
Переважні дисахариди є вибраними з наступного переліку, але не обмежується цим: сахарози, трегалози, мальтози, манози, лактози, рафінози, ізомальтози, стахіози тощо. Переважний варіант здійснення розкриття представляє собою комбінацію з 195 сорбіту з 595 сахарози, 195 маніту з 595 сахарози, та 395 сахарози та 295 трегалози, 195 маніту з 195 І -гліцину та або 295 трегалози. Будь-який звичайний фахівець у даній галузі розробить додаткові варіанти здійснення, грунтуючись на розкриттях, зазначених вище.
Ліофілізовані композиції можуть бути повторно суспендовані у воді для ін'єкцій або у водному буфері, який є фармацевтично прийнятним для введення, наприклад, як ін'єкційна рідина для суб'єкта людини. Ліофілізована композиція також може використовуватися як інгаляційний порошок, який буде прийнятним для індукування мукозного імунітету. Крім того, ліофілізована композиція вірусу Зіка може містити ад'ювант, який забезпечує мукозний імунітет переважно з переліку тих ад'ювантів, які були досліджені в представленому винаході для вірусу
Зіка, такого як, наприклад, полі-ІС.
В представленому винаході, розкриття, представлене в даному документі, щодо оптимального використання вірусуного антигена Зіка для індукування сильної імунної відповіді, вакцинний антиген може використовуватись в кількості від 0,10 мкг аж до 100 мкг на дозу, причому переважний варіант здійснення представляє собою будь-яку концентрацію від 0,125 мкг аж до 40 мкг на дозу, таким чином, що введені вакцинні дози індукують титри антитіл, які можна виміряти за допомогою аналізів, таких як ЕГІ5ЗА та РЕМТ»о. Вакцина може вводитись з та
Зо без ад'юванта, оскільки як інактивована вакцина, так і ад'ювантні композиції індукують гарну імунну відповідь.
В ще одному розкритті винаходу, інактивовані кандидатна вакцина Зіка, інактивована за будь-яким з розкритих способів може вводитись як одноразова доза або двома або більше дозами для індукування імунної відповіді. Способи, розкриті у винаході забезпечують кінетику імунної відповіді після кожної дози вакцини, в дозах в діапазоні від 0,125 мкг аж до 40 мкг на дозу, що забезпечує гнучкість у виборі дози вакцини в діапазоні концентрацій та кількості доз для відповідності цільовій популяції для вакцинації.
Шлях введення вакцини може бути будь-яким шляхом, вибраним з, але не обмежується цим, внутрішньом'язового, інтрадермального, підшкірного, внутрішньовенного, перорального, інтраназального та крізшкірного способів введення. В переважному варіанті здійснення винаходу, переважним шляхом введення вакцини є внутрішньом'язовий (в.м.) шлях.
Вакцинні композиції бути представлені в скляних флаконах та вводитись за допомогою голки та шприців, представлені у заздалегідь заповнених шприцах у вигляді готової до використання презентації або введених шляхом електропорації, мікроголюових пластирях, безголкового пластиря, у вигляді інгаляційного або назального спреїв.
Представлений винахід розкриває способи отримання та застосування композицій, які містять один або декілька антигенів арбовірусу, вибраних з переліку, який включає вірус Зіка, вірус Чикунгунья (СНІКМ), та вірус японського енцефаліту (ЕМ). При застосуванні у вакцинній комбінації, вакцина може індукувати імунну відповідь проти кожного з вірусів, присутнього в комбінованій вакцині. В переважному варіанті здійснення винаходу, який включає вакцинну композицію, причому антигени віруса Зіка та антигени вірусу японського енцефаліту є присутніми в комбінованій вакцині в концентраціях, які знаходяться в діапазоні від 5 мкг до 50 мкг кожного антигена в фармацевтично прийнятній композиції без ад'юванта, або переважно з ад'ювантом, вибраним з переліку ад'ювантів, розкритих в представленому винаході, переважно алюмінію гідроксиду з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,5 мг на вакцинну дозу є розкритими. В ще одному переважному варіанті здійснення винаходу розкритою є вакцинна композиція, яка містить антигени віруса Чикунгунья та Зіка в композиції, яка містить від 5 мкг до 50 мкг кожного антигена в фармацевтично прийнятній композиції без ад'юванта, або переважно з ад'ювантом, вибраним з переліку ад'ювантів, розкритих в представленому винаході, переважно алюмінію 60 гідроксиду з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,5 мг на вакцинну дозу.
В ще одному переважному варіанті здійснення винаходу, розкритою є вакцинна композиція, яка містить антигени вірусу Чикунгунья, Зіка та УХЕМ в композиції, яка містить від 5 мкг до 50 мкг кожного антиген в фармацевтично прийнятній композиції без ад'юванта, або переважно з ад'ювантом, вибраним з переліку ад'ювантів, розкритих в представленому винаході, переважно алюмінію гідроксиду з вмістом алюмінію від 0,25 мг до 1,5 мг на вакцинну дозу. Застосування вакцинної комбінації забезпечує виняткову економічну перевагу для виробництва та розподілу вакцин, за умови, що імунна відповідь індукується проти кожного з антигенів в композиції та ніякої антигенної інтерференції не спостерігається ні до одного з антигенів за наявності додаткового антигену. Вакцинні антигени можуть або вводитись з однієї композиції, або вводитись окремо в один і той же час або в прийнятні часові інтервали, таким чином, щоб індукувати імунну відповідь на спільний антиген.
Представлений винахід також розкриває застосування антитіл до вірусу Зіка для виявлення вірусу Зіка за допомогою ЕГІ5А або будь-якими іммунодіагностичними способами, де антитіла знаходять застосування для виявлення або діагностики вірусних інфекцій Зіка.
Представлений винахід також розкриває в даному документі застосування антитіл до вірусу
Зіка для профілактики та лікування вірусного захворювання Зіка.
Скорочення, які використовуються у винаході: в.м. - внутрішньом'язовий; мкг - мікрограм;
ТСІЮ5БО - 5095 інфекційна доза культури тканини; РЕ - Бляшкоутворююча одиниця.
ПРИКЛАДИ
Приклад 1: Вірусна культура Зіка в клітинах Мего
Клітинна лінія Мего (АТСС Мо. ССІ-81) використовувалася як клітинний субстрат для культивування вірусу Зіка. Широко охарактеризовані клітини Мего, отримані від ВіоКеїїапсе,
ОБА, використовувалася в напівпромислових масштабах виробництва. Клітини Мего вирощували в ОМЕМ (Середовище Ігла модифіковане за способом Дульбекко; Зідта-Аїагісн
Сагаіюод Ж 05523, та використовували відповідно до інструкцій виробника) або ЕМЕМ (Мінімальне поживне середовище Ігла), яке містить 595 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5) або сироватки новонародженого теляти (МВС) та інкубували при 357С - 37"С до досягнення 80 - 100 95 злиття моношару. Після інфікування, використовували таке ж саме середовище, яке містить 195 сироватку, або альтернативно вірус культивували в клітинах Мего, адаптованих до
Зо вільного від сироватки середовища. Вірус Зіка також може бути вирощений в моношарі клітин
МАС-5, який отримували в середовищі для росту, яке складається з ЕМЕМ, буферного до нейтрального рН буфером Нерез з 595 сироваткою та статично інкубували при від 357С до 37"7С протягом від 6 до 8 днів. Вірус Зіка культивували звичайним чином в клітинах Мего. Вірус Зіка
МАК766б штаму (АТСС МК-84) був адаптований до клітин Мего за допомогою безпосередньої інокуляції в клітинах Мего. Альтернативно, вірус був адаптований в клітинах Сб/36 Ае. аІрорісіи5 двічі за рахунок серійного пасажування, та вірус Зіка в супернатанті культури з даних клітин використовувався для інфікування клітин Мего. Серійний пасаж вірусу Зіка в клітинах Сб/36 культивували при від 257С до 28"С, що збільшувало титр вірус вище, ніж 10е8,0 ТСІОво/мл або 1бе8,0 РЕШ/мл. Це також виключає необхідність наступних повторних пасажів в клітинах Мего для того, щоб отримати високі титри. Адаптація вірусу за даним способом є корисною для досягнення високих титрів та наступного більш високого виходу у виробництві. Після культивування в Сб/36 клітинах, вірус був серійно плямово двічі очищений від клітин Мего, та вірус з однієї лунки, виділеної плями ампліфікували та широко характеризували, щодо відсутності занесеного агента (всі відомі РНК та ДНК віруси, бактерії, гриби, мікоплазми, тощо) з використанням МОБ (Мехі Сепегайоп Зедцепсіпд) платформи. Вірусна геномна РНК була секвенована з використанням МО5 платформи, та повна нуклеотидна послідовність штаму
МЕ 766 представлена в 5ЕО ІО МО. 5 та відповідна розшифрована амінокислотна послідовність представлена в 5ЕБО ІЮ МО. 6. Секвенування показало сайт інтактного глікозилування в протеїновій оболонці, який інакше втрачається, якщо клітини є екстенсивно пасировані клітинах ссавців. Вірус Зіка продукує цитопатичний ефект (СРЕ) в клітинах Мего, та при оптимальній кратності інфекції (Мої), та умовах збору клітин, титри вірусів вище 10е8,5 ТСІО5О/мл або 10е8,5
РЕШ/мл можуть бути досягнуті.
Приклад 2: Очистка вірусу Зіка
Для вірусної культури Зіка в напівпромисловому масштабі, вірусна культура була систематично масштабована з колб Т-175 в С51 (клітинний стек 1), С510 (клітинний стек 10) та
С540 (клітинний стек 40). Кількості 540 одночасно інфікованих вірусом в стандартизованому
Мої, використовували для масштабування виробництва. Використання коефіцієнтів С540 дозволяє швидко та лінійно масштабувати аж до бажаних обсягів виробництва. Об'єм збору клітин з кожного С540 становив приблизно 8-10 л. Вірус збирали через 4-6 днів або коли було 60 досягнуто більше, ніж 9095 СРЕ. Альтернативно, одноразові біореактори в добре стандартних умовах температури від 35"С до 37"С, рН не менше, ніж 7,0, та оптимально при рН 7,4, при розчиненому кисні в кількості від 45 до 75 м.ч., переважно 60 об./хв. та перемішуванні від 240 до 280 об./хв. та оптимально контрольованій швидкості вхідного потоку та вихідного потоку, оптимізованій відповідно до шкали об'єму культури від 1 л до 100 л використовувалися для
Збільшення щільності клітин та збирання вірусу. Зібрані вірусні клітини освітлювали або застосовуючи мікрофільтрацію або з використанням подвійних фільтрів з відсіканням 1,2 мкМ та 0,45 мкМ. Освітлені вірусні зібрані клітини потім пропускали через колонку Саріо Соге700 (СЕ
Ппеанйсаге І їє Зсіепсе5) в фосфатному буферному сольовому розчині, рН 7,4. Фракції, які містять вірус Зіка в потоці необов'язково концентрували, застосовуючи діафільтрацією з використанням або 100 кДа, або 300 кДа відсікання мембран. Концентровану вірусну фракцію використовували для інактивація вірусу. За альтернативним способом, освітлені вірусні зібрані клітини були інактивованими або ВРІ або формаліном відповідно до способів, описаних у наступних розділах, та потім завантажували в колонку. Чистоту вірусу перевіряли на 12,595
ЗО5-РАСЕ. Відсутність суттєвої різниці у виході або в чистоті при інактивуванні вірусу перед та після очистки. Вірус також може бути очищений з використанням целюфінсульфату, ОЕАЕ-
Сефадекс СМ-сефадекс з градієнтом солі та з використанням гель-фільтрації на сефарозі СІ - 48, керамічної гідроксіапатитної колонки з градієнтом від 0,2 М до 0,8 М фосфату та в усіх випадках з наступною діафільтрацією з використанням мембран з відсіканням 100 або 300 кДа.
Чистоту препарату вірусу перевіряли за допомогою фарбування сріблом зразку вірусу в 12,5950
ЗО5-РАСЕ елі (дивіться фігуру 1). Вірус Зіка з використанням зазначених вище способів може бути очищений до високої чистоти, прийнятної щоб бути використаною як вакцинний основний антиген. Вірус також може бути очищений шляхом ультрацентрифугування на 20-6095 градієнті сахарози з використанням ротора Р285 Ніїаспі НІМАСийнгасепігтиде після центрифугування при 100 000 х 9 протягом від 6 до 8 годин.
Приклад 3: інактивація вірусу Зіка
Зразок вірусу Зіка був інактивованим (вбитим) різними способами для застосування як вакцинних антигенів. Інактивацію формаліном досліджували при різних концентраціях, яка знаходиться в діапазоні від 1:1000 (формалін : вірус, об./06.) до 1: 4000 (формалін : вірус, об./06.) при температурі 25:25 "С, більш конкретно при 22 "С та кінетику інактивації вірусу
Зо контролювали кожні 24 години протягом аж до 10 днів, та звичайним чином інактивацію вірусу здійснювали при 25 ж З "С, переважно при 22 "С протягом 7 днів. Інактивація вірусу була ефективною при всіх концентраціях від 1:1000 об./06б. формалін : вірус, аж до 1:3500 об./о6б. формалін : вірус, при зазначених вище температурах та часових інтервалах. Співвідношення 1:4000 об./0б. формалін : вірус було ефективним при інактивації вірусу при більш високих температурах аж до від 30 до 37"С протягом від З до 7 днів. інактивація формаліном була ефективною при всіх зазначених вище співвідношеннях формаліну до вірусу при температурах, які знаходиться в діапазоні від 2 до 8 "С, коли інкубували протягом часових інтервалів довших, ніж 10 днів. Отже, інактивації формаліном забезпечує гнучкість інактивації вірусу при будь-якій температурі від 2 "С до 37 "С, в часових інтервалах, які знаходяться в діапазоні від 24 годин до більше, ніж 10 днів в залежності від умов, використовуваних для інактивації. Інактивація вірусу
Зіка бета-пропіолактоном (ВРІ) досліджувалася в різних умовах. Вірус Зіка був повністю інактивованим при концентраціях ВРІ, які знаходяться в діапазоні від 1:11000 (ВРІ : вірус, об./об.) аж до 1: 3500 (ВРІ : вірус, об./06.) при температурі 25:55 "С протягом від 24 до 48 годин.
При більш високій концентрації ВРІ. або при більш високих температурах аж до 37 "С, повна інактивація досягалась через 24 години або менше, та може використовуватись як спосіб для швидкої інактивації вірусу. Вірус Зіка міг також бути інактивований при зазначених вище концентраціях ВРІ,, коли інкубували при від 2 до 8 "С протягом від З до 7 днів. Інактивація комбінацією ВРІ. при 1:3500 (ВРІ : вірус, об./06.) при 22-25 "С протягом 48 годин, з наступною обробкою з низькими концентраціями формаліну від 1:3000 до 1: 4000 об./об. формалін : вірус протягом 24 годин була ефективною як при інактивуванні, так і стабілізації вірусу. Будь-яка концентрація ВРІ та формаліну могла б використовуватись як для інактивації, так і стабілізації вірусу, за умови, що інактивація є повною без негативного впливу на імуногенність. Інактивацію досліджували від 0,00595 аж до 395 кінцевої концентрації пероксиду водню при від 20 "С до 25 "С протягом періоду часу 2 години. Не існувало ніякого негативного впливу на імуногенність вірусу при більш низьких концентраціях пероксиду водню з буже короткими часами експозиції в межах хвилин, але негативний вплив існував при тривалій концентрації при більш високих дозах досліджуваних діапазонів. Інактивовані вірусні зразки після експозиції протягом різного часу, та концентрації дози титрували щодо інфекційних вірусних частинок, якщо такі були, за ТСІО5О/мл від 5 хвилин аж до 6 годин з інтервалами 5, 10, 20, 30 та 60 хвилин та при 2, 4 та 6 годин. При бо більш високих концентраціях, вірус був інактивованим в межах секунд. В кожний момент часу реакція була зупинена шляхом додавання 10 од./мл каталази, яка швидко гідролізує пероксид водню. Оптимальна концентрація для інактивації становила 0,0195 кінцевої протягом тривалості 60 хвилин або менше, як визначалося титруванням для інфекційних частинок з використанням
ТСІО5О/мл та подальшої імуногенності. Інактивація віруса Зіка пероксидом водню забезпечує гнучкість тривалості експозиції в різних концентраціях протягом різних часових точок відповідно до концентрації вірусних частинок в зразку.
Зразок очищеного вірусу Зіка був інактивований нагріванням при температурах від 50"7С до 65"С протягом аж до 60 хв. Інактивацію вірусу УФ здійснювали експозицією УФ при 254 нм протягом аж до 120 хвилин.
Вірус Зіка був інактивованим гамма-опроміненням шляхом експозиції від 20 кГр (Кіло Грей) аж до 35 кГр з 99Со джерела в Сатта Адго Медісаї Ргосез5іпд Расіїку в Нудегабраай. Всі зазначені вище способи інактивації здійснювали в присутності та за відсутності стабілізуючих вірус агентів, таких як різні концентрації цукрів, таких як сахароза, лактоза, трегалоза, мальтоза, маноза серед інших. Цукрові спирти, використовувані для забезпечення стабілізуючого ефекту, представляли собою сорбіт та маніт. Досліджувані амінокислоти були вибраними з І -гістидину, -глутамінової кислоти, І --гліцину та І -аспарагінової кислоти та І-глютаміну та також альбуміну сироватки людини та комбінації з одним або декількома із зазначених вище стабілізуючих агентів. Найбільш ефективні стабілізуючі агенти представляли собою сорбіт при від 0,595 до 295, переважно 1,095 в комбінації з І-гліцином від 0,595 до 295, переважно при 0,595. Маніт та І1- гліцин в комбінації були ефективними щодо стабілізуючого вірусного зразка під час інактивації на відміну від маніту та І -гліцину самостійно.
Зразки вірусу Зіка, інактивовані всіма зазначеними вище способами для застосування вакцинних антигенів, досліджували щодо завершеності інактивації шляхом серійного пасирування інактивованих зразків три рази серійно в клітинах Мего та дослідження щодо інфекційного вірусу в кінці періоду інактивації за допомогою ТСІЮ»хо. Крім того, зразок інактивованого вірусу після трьох серійних пасажів іп мйго вводилися ін'єкційно внутрішньочерепно мішам віком 2 дні та спостерігали за смертністю або аномаліями росту протягом 21 дня та вважалися повністю інактивованими, коли вони не показували ніяких несприятливих ефектів в дослідженні іп міїго та іп мімо. Ніяка інфекційність не спостерігалась з
Зо інактивованими формаліном та бета-пропіолактоном віріонами при зазначених вище в діапазоні концентрацій та впродовж різних досліджуваних періодів часу. Кінетика інактивації вірусу Зіка формаліном та ВРІ як репрезентативний приклад одного зі способів, розкритих вище, представлена на Фігурі 2 (Фіг. 2А та Фіг. 28В).
Приклад 4:Рекомбінантне клонування та експресія протеїну РЕМЕ вірусу Зіка
Синтетичний ген нуклеотидної послідовності ЗЕ ІО МО. 1 яка кодує відкриту рамку зчитування (ОКЕ) рІімМЕ протеїну ЗЕО ІЮО МО. З вірусу Зіка, був синтезований в Сепзогірі, Му,
БА. Ген ПЛР ампліфікували з використанням праймерів, перерахованих нижче для одержання т-2,1 т.п.н. фрагмента 5ЕО ІО МО. 1 що кодує протеїн ргМЕ 5ЕО ІО МО. 3. Дивіться фігуру ЗА.
ЕМЕР: ТААСТОСТОСОАСОСААТТСОСАТССААС 3
ЕМЕР: 5 ААТОСОСАТОССТОСАсОоСсоОСсСсОсТте 3
Ампліфіковані ПЛР фрагменти були розщеплені рестрикційними ферментами ЕсоК1 та Мой та клоновані в сайтах ЕсоК!1 та Мой плазмідного вектора рЕазіВас (Ііте Тесппоїодіе5, Сагізраа,
СА, ОБА) під контролем поліедроїдного промотора за способами, описаними в посібнику користувача Вас - Вас бакуловірусної системи експресування (Ап еййсіепі 5йе-5ресіїіс їапвзровйіоп 5убієт Ю депегаїє расиомігив ог підн-Іеме! ехргезвіоп ої тесотрбріпапі ргоївїнп5, Те
Тесппоіодіех, ШЗА). Коротко кажучи, спосіб використовує сайт-специфічну транспозіцію експресійної касети, такої як рекомбінантний вектор рЕБазіВас з клонованими вставками, як описано вище, в бакуловірусний шаттл-вектор (растій), що поширюється в Е(.соїї.
Рекомбінантний вектор рЕавзіВас, який містить одну зі вставок ЗЕО ІЮО МО. 1 або 5ЕО ІЮ МО. 2, клонованих під контролем полієдроїдного промотора, трансформується в компетентні клітини
Е.сої з максимальною ефективністю ЮОНІТОВас"М, який містить бакуловірусний шаттл-вектор (БМОМ14272) та хелперну плазміду (РМОМ7124), яка полегшує транспозицію, щоб дозволити ефективне повторне отримання рекомбінантної Бастій Рекомбінантні Бастій були вибрані щодо ампіциліну, гентаміцину та канаміцину, які містять планшети з використанням блакитного/білого відбору з використанням бБіно-да! або Х-даї, та ІРТО. Рекомбінантні Бастіде після підтвердження з використанням ПЛР щодо присутності генних вставок були виділені за стандартними протоколами, описаними в зазначеному вище посібнику користувача. Приблизно 1 мкг Ббастій ДНК використовували для трансфекції з ліпофектаміном в Ззродорієга Пидірегда 919 клітинах комах (І їе Тесппоїіодіез, Сагізрай, О5А), вирощених в сироватці вільного від клітин бо комах середовища. Способи, використовувані для трансфекції, виділення та титрування Р1 вірусних вихідних розчинів є точно описаними в посібнику користувача щодо Вас-Вас бакуловірусної системи експресування, як зазначено вище. Рі вихідні розчини серійно ампліфікували двічі, щоб отримати РЗ вихідні розчини з високим титром для експресії рекомбінантних ргМЕ протеїнів в 519 клітинах. Бакуловірусні вихідні розчини з високим титром для експресії протеїну ргМЕ 5ЕО ІО Мо. З експресували в 25 мл суспензія культури 519 клітини та потім масштабували систематично аж до 125 мл на 500 мл колбу. Бакуловірусні інфіковані клітини з кількох колб збирали через 72 години після інфікування, об'єднували, промивали один раз 1 х РВ5, рН 7,6 та лізували буфером для лізису клітин, який містить 10 мМ фосфату, рН 7,6 з 50 мМ Масі, 1 мМ РМ5БЕ та 5 мм ЕДТО. Клітинний лізат центрифугували при 20 000 об./хв. протягом 30 хвилин, щоб видалити клітинний дебріс, та супернатант концентрували з використанням протеїнових концентраторів з 10 кДа мембранним відсіканням. Концентрований зразок шарували на попередньо урівноваженому градієнті сахарози від 2095 до 609 та центрифугували при 100000 х д протягом 6-8 годин. Фракції, які містять рекомбінантний мембранний протеїн та протеїн оболонки виділяли та підтверджували застосовуючи вестерн- блоттинг (Фіг. ЗВ) з використанням кролячої МК766 поліклональної антисироватки. Очищений рекомбінантний протеїн представляє собою послідовність сучасного азіатського генотипу вірусу
Зіка, експресованого з використанням гена послідовності ЗЕО ІЮ МО. 1, що кодує протеїн 5ЗЕО
ІО Мо. 3. Рекомбінантний МЕ протеїн перехресно взаємодіяв з МК766б антитілами в Вестерн- блоттингу та в ЕГІ5А та був сформульованим як вакцинний антиген для дослідження на мишах
Ва!р/с як описано в розділах нижче.
Приклад 5: Вакцинні композиції
Антиген вакцина протийи віруса Зіка будь-якого із зазначених вище способів в попередніх прикладах досліджувався щодо імуногенності на лабораторних тваринах з та без ад'ювантів.
Спостерігався високий рівень зв'язування (» 9595) з алюмінію гідроксидом (АІпудгодеке 2965,
Вгеппіад) як ад'ювантом, використовуваним в дозі в діапазоні від 0,1 мг до 1,5 мг алюмінію (представлений як алюмінію гідроксид) на дозу навіть у дослідженні з високою дозою антигену 40 мкг. Зв'язування було повним в усіх концентраціях антигенів віруса Зіка, а також вакцинних комбінаціях з СНІКМ та ШЕ антигенами, які обговорюються в наступних розділах, які використовувались для дослідження на мишах. Зв'язування з алюмінію гідроксидом
Зо здійснювали протягом трьох годин при температурі навколишнього середовища. Аліквоту композиції центрифугували при 5000 х д протягом 5 хв., та супернатант досліджували щодо повноти зв'язування антигеном ЕГІ5ЗА. Зв'язування антигену було повним, оскільки не був виявленим в супернатанті з використанням ЕГІЗА. Буфер для ад'ювантних композицій представляв собою 10 мМ фосфатний буфер, який містить 154 мМ Масі, рН 7,40 50,2 та необов'язково який містить 195 сорбіту та 0,595 І-гліцину. Інші буфери, які використовуються для специфічних композицій є наведеними нижче. Ад'юванти, представлені нижче досліджувалися щодо порівняльної імуногенності та в усіх випадках концентрації є передбаченими на дозу вакцини. Інактивований вірусний антиген Зіка досліджували при 10 мкг на дозу: а) Інулін (Огапі-НРХ, Вепео) досліджували при 0,5 мг на дозу; гама інуліну одержували за способами, описаними в (Соорег та 5іееіе, 1988). р) Комбінація алюмінію гідроксиду та інуліну. Комбінація інуліну та алюмінію гідроксиду, альгамуліну одержували у співвідношенні 10:11 (1Омг /мл інуліну : 1 мг/мл алюмінію у вигляді алюмінію гідроксиду) досліджували при 0,5 мг на дозу. с) Мумарилдипептид (І18-МОР) (и-Ітар, Іпмімодеп) при 10 мкг на дозу. 9) МР. (ліпід А, монофосфорил з ЗаІтопеїа епіегіса, І -6895-1 МГ, Зідта Аїагісп) при 25 мкг на дозу. е) Комбінація з 0,25 мг алюмінію (у вигляді алюмінію гідроксиду) та 25 мкг МРІ. на дозу.
І) Емульсія олія-у-воді (ОЕМ), яка містить 9,75 мг сквалена (53626-100МІ., бідта Аїпапсн), 11,86 мг альфа-токоферолу (Т13251-50, 5ідта Аїагісп), 4,58 мг Твін-80 (61771205001730, Мегеск) в 10 мМ фосфатного буфера, рН 7,4:50,2. 9) Емульсія олія-у-воді З (ОММЕМ2), яка містить 9,75 мг сквалена, 1,175 мг твін-80, 1,175 мг
Зрап-85 (57135-250МІ, Зідта Аїагісп) в 10 мМ цитратному буфері, рН 7,0.
І) Полі-ІС (поліінозинова поліцитидилова кислота, калієва сіль, Саї. МО. РО582-5МГ, Зідта
Аїайгісі) при 25 мкг на дозу. ії) Холекальциферол (Агаспйо!, АББод при 0,75 мг на дозу.
Ї) Резиквімод (52МЛО196-10МГ, 5ідта Аїагісп) я Полі ІС, 25 мкг кожного.
К) Резиквімод (25 мкг) ї Емульсія олія-у-воді 2, яка містить 9.75 мг сквалена, 1,175 мг твін- 80, 1,175 мг рап-85 (57135-250МЛ, Зідта Аїагіс!) в 10 мМ цитратному буфері, рН 7,0. 60 І) Алюмінію 0,25 мг та 0,5 мг на дозу, надану у вигляді алюмінію гідроксиду.
Всі зазначені вище композиції індукували високий рівень нейтралізуючих антитіл, та результати зображені на Фігурі 4. Окремі компоненти зазначених вище ад'ювантів та будь-якого з їх аналогів, похідних, бічних ланцюгових заміщень та будь-яких модифікацій будь-якого із зазначених вище компонентів при варіюванні концентрацій можуть використовуватись як нетоксичні вакцинні ад'ювантні компоненти за умови, що вони мають імунопотенційний ефект.
Інактивовані формаліном та рекомбінантні вакцинні антигени Зіка, як описано в зазначених вище розділах, кожен в концентрації від 10 мкг на дозу були ліофілізовані в комбінації з одним з наступних ексципієнтів: 195 маніт та 0,595 гліцин, 595 сахароза та 195 трегалоза, 595 сахароза та 196 мальтоза та 295 маніт та 0,595 гліцин. Суха ліофілізована композицію може бути легко відновлена у водному розчині з водою, нормальним сольовим розчином та 10 мМ фосфатним буферним сольовим розчином, рН 7,4ж20,2. Стабільність композиції досліджували при 37 "С протягом двох тижнів. Ніяких змін в характеристиках коржа не спостерігалося, що свідчить про стабільність композицій. Вміст вологи становив нижче 195.
Приклад 6: Вплив стабілізуючих агентів
Стабільність інактивованої формаліном вакцини, основної для застосування як неад'ювантного вакцинного антигена досліджували щодо стабільності з наступною концентрацією стабілізуючих агентів: а) 295 сорбіт та 195 І -гліцин; Б) 195 сорбіт та 0,5 95 І -гліцин с) 195 маніт та 0,595 І -гліцин; 4) 195 маніт та 0,595 І -глутамінова кислота; є) 195 сорбіт та 0,595 І - гліцин, 195 альбумін сироватки людини. Дослідження стабільності здійснювали при 37 "С протягом 2 тижнів, та концентрацію антигену досліджували з використанням ЕГІ5ЗА перед та після експозиції при 37 "С. 1 мкг та 10 мкг неад'ювантної композиції з 195 сорбіту та 0,595 І-
Гліцину досліджували щодо імуногенності на мишах Ваїр/с, як обговорювалось в наступних розділах.
Приклад 7: Дослідження ефективності вакцинних композицій в моделях на тваринах
Вакцинний антиген Зіка, інактивований зазначеними вище способами, досліджували на мишах ВаїЇБрБ/с з дозами в діапазоні від 0,125 мкг аж до 40 мкг антигена на дозу з 0,25 мг алюмінію на дозу (у вигляді алюмінію гідроксиду) в об'ємі 100 мкл (ін'єкції в два місця по 50 мкл на місце) внутрішньом'язовим способом в дні 0, 14, 28. Початкове дослідження щодо ефекту алюмінію (представленого у вигляді алюмінію гідроксиду) показало, що адсорбована на
Зо алюмокалієвих квасцях вакцина давала більш високий титр нейтралізуючих антитіл, ніж неад'ювантна вакцина. Приблизно 1 та 10 мкг інактивованого вакцинного антигена без алюмокалієвих квасців містив 195 сорбіту та 0,595 І -гліцину як ексципієнти, щоб забезпечити стабільність вакцинних антигенів. Кров забирали з ретро-орбітального сінуса на 13, 21 та 35-ий день для оцінки титрів нейтралізуючих антитіл з використанням РЕМТ»о, загальний АБ титр з використанням ЕГІ5ЗА, Ар авідність та профілі цитокінів. Відбір крові та дослідження після кожної дози давало дані щодо ефективності та безпеки одноразового введення, двох доз та трьох доз вакцинних препаратів. Тварин в кожному випадку були контрольно заражені на 36-ий день 10е5 РЕШ вірусом Зіка внутрішньовенним способом. Зразки крові контролювали протягом аж до 7 днів з 24 годинними інтервалами для груп формаліну та в двох точках в 48 годин та 96 годин для груп інактивації ВРІ для захисту від вірусемії ТСІОвзо (5095 Доза інфекції культури тканини) та вірусні титри, якщо будь-який присутній, були виражені як ТСІОво/мл. Дослідження контрольного зараження тварин показали повний захист від вірусемії при від 1 мкг до 40 мкг дози в досліджуваних групах. Отже, інактивовані ВРІ та формаліном вакцинні композиції додатково досліджували в кількості 0,5 мкг, та 0,25 мкг, 0,125 мкг на дозу в.м. способом мишам
ВаїІр/с та, як було виявлено, є імуногенними навіть при малих розведеннях. Для ад'ювантних алюмокалієвими квасцями композицій, 0,25 мг алюмінію (у вигляді алюмінію гідроксиду) на дозу використовувалася як контроль-плацебо та для неад'ювантних композицій, 10 мМ фосфатний буфер, який містить 154 мМ Масі, 195 сорбіту та 0,595 І -гліцину, рН 7,40 використовувався як контроль носієм. Всі інактивовані формаліном та ВРІ. композицій індукували високий рівень нейтралізуючих антитіл та захищали від вірусемії як показано на Фіг. 5А, Фіг. 58 та Фігура 6.
Тільки антигенні композиції також індукували високий рівень нейтралізуючих антитіл та захищали при вірусному контрольному зараженні. Рекомбінантний протеїн рІМЕ, експресований в клітинах комах, був сформульований у двох дозах 10 та 20 мкг на дозу з 0,25 мг алюмінію (у вигляді алюмінію гідроксиду) на дозу у ВаІр/с (8 мишей) та ін'єкційно вводили внутрішньом'язово на 0-ий день та 21-ий день індукували нейтралізуючі антитіла та дані представлені в таблиці 1. Гама опромінені та інактивовані пероксидом водню вірусний антиген
Зіка в дозовій концентрації 10 мкг та сформульовані з 0,25 мг алюмінію (у вигляді алюмінію гідроксиду) на дозу ін'єкційно вводили в.м. способом мишам Ваїр/с на 0-ий день та 21-ий день, та кров відбирали на 28-ий день для оцінки нейтралізуючих антитіл за допомогою РЕМТ 50. бо Інактивований формаліном вірусний антиген в кількості 10 мкг був сформулиованим з кожним з ад'ювантів, розкритих в Прикладі 5 та ін'єкційно вводили внутрішньом'язово мишам Ваїр/с віком 4 - 6 тижнів (5 мишей на группу дозування), та кров відбирали через 21 день після введення вакцини для оцінки нейтралізуючих антитіл та цитокінів. Контрольні групи були включені для кожного з ад'ювантів, та ніякі нейтралізуючі антитіла (х 10 за РЕМТ»0о) не могли бути детектовані,
Б та дані не відображаються. Нейтралізуючі титри антитіл за РЕМТ»5о різних ад'ювантних композицій, використані згруповані сироватки з кожної групи є представленими на Фігурі 4.
Високий рівень нейтралізуючих антитіл був індукований зазначеними вище ад'ювантними композиціями.
Комбіновані вакцині антигенів арбовірусу одержували з наступними концентраціями та досліджували на мишах Ваїр/с: а) 10 мкг інактивовані формаліном вірусний антиген Зіка, 20 мкг інактивованого ВРІ. антигена вірусу Чикунгунья та 6 мкг інактивованого формаліном антигена
УЕ в тривалентній вакцинній комбінації; Б) 10 мкг інактивованого формаліном вірусного антигена
Зіка та 20 мкг інактивованого ВР'І. антигена вірусу СНІКМ; с) 10 мкг інактивованого формаліном вірусного антигену Зіка та 6 мкг антигена вірусу УЕ. Всі перераховані вище вакцинні комбінації досліджували з 0,25 мг алюмінію (у вигляді алюмінію гідроксиду) на дозу мишам Ваїр/с (8 мишей кожна) з відповідними контролями, в які включені або зазначені вище антигени самостійно, та також контрольні тварини, які отримували еквівалентну кількість алюмокалієвих квасців. Тварин повторно імунізували на 14-ий та 21-ий день після першої імунізації. Кров забирали через 7 днів після останньої ін'єкції. Зразки сироватки використовували для оцінки нейтралізуючих антитіл за допомогою РЕКМТ»о для Зіка, СНІКМ та УЕМ. Буфер, який використовувався у всіх композиціях, представляв собою 10 мМ фосфатний буфер, рнН від 7,2 до 7,6, який містить 154 мМ Масі. Всі способи, розкриті вище, є застосовуваними до будь-якого генотипу/генотипних варіантів/серотипів та штамів вірусу Чикунгунья, вірусу Зіка та вірусів японського енцефаліту.
Дивіться таблицю 1 щодо результатів.
Таблиця 1
Нейтралізуючі антитіла індукували з використанням різних антигенних композицій, як розкрито в прикладах. пееенєветв в 11 2 дози " гдз 3,22 2 дози певен 01030310 - 2,6 антиген Зіка - 10 мкг х 2 дози пеня в Го 1 мкг х 2 дози "
Зіка адсорбований на алюмокалієвих квасцях - 10 мкг х З 3,06 дози
Чикунгунья адсорбований на алюмокалієвих квасцях - 20 мкг х З 2,808 дози пон квасцях -- 6 мкг х З дози дози
Зіка(1О мк) -ОЕ(бмк)охЗдози | 280 | 7777-7717Ї177717111528 мкг) х З дози
Таблиця 1 Легенда: Очищений рекомбінантний ріМЕ антиген вірусу Зіка та інактивовані пероксидом водню та гама опромінені антигени віруса Зіка, сформульовані з 0,25 мг алюмінію на дозу, індукували нейтралізуючі антитіла у мишей Ваїр/с. Титри виражаються як значення
Зо ГоатОРАМТ»о. Вакцинні комбінації індукували нейтралізуючі антитіла, коли два або більше антигенів були введені в одну композицію, та ніякої значної антигенної інтерференції не спостерігалось між вірусами ЧЕ, Зіка та СНІКМ.
Приклад 8: Дослідження пасивної імунізації
Доказ концепції, що нейтралізуючі антитіла є важливими імунними корелятами захисту проти вірусної інфекції Зіка був продемонстрований одноразовою ін'єкцією кролячої поліклональної антисироватки Зіка з відомим титром, приблизно 200 мкл антисироватки розбавленого 1:1 м/йп РВ5 ін'єкційно вводили внутрішньочеревинно мишам ВаїЇр/с та були контрольно заражені через 8-24 години після 10е5 РЕИШ вірусу Зіка внутрішньовенним способом в об'ємі 100 мкл. Однакова кількість контрольних тварин отримувала РВ5, рН 7,4 та отримувала ін'єкцію вірусу як досліджувані тварини. Кров збирали через 24, 48, 72, 96 та 144 годин після вірусного контрольного зараження для виявлення вірусемії в обох групах тварин. Пасивна імунізація здійснювала повний захист проти вірусемії, та інфекційний вірус не міг бути виявлений з використанням ТСІО5О. Дивіться фігуру 7. Вірусемія була виявленою у контрольних тварин, які зберігалися протягом аж до б днів після вірусного контрольного зараження. Антитіла Зіка можуть використовуватись як терапевтичні засоби для пом'якшення, знищення або запобігання вірусних інфекцій Зіка.
Приклад 9: Аналізи титрів нейтралізуючих антитіл
Сироватки з тварин з усіх зазначених вище досліджень вакцини у мишей, описаних в
Прикладі 7, які включають всі моновалентні вакцини Зіка, інактивовані різними інактивуючими агентами та сформульовані з різними ад'ювантами, вакцинні антисироватки з дози, яка знаходиться в діапазоні від досліджень, а також комбіновані вакцини з СНІКМ та ОЕМ, описаними в попередніх розділах, аналізували для нейтралізуючих антитіл щодо 5095 реакції нейтралізації бляшкоутворення (РЕМТ»5о) за стандартизованими процедурами. Коротко кажучи, за один день до аналізу б-лункові планшети висівали з 2,5 х 103 клітинами Мего (АТСС СС -81) на лунку, та планшети інкубували при 37"С в 595 СО» інкубаторі. До 4-кратних розбавлень зразків сироватки в МЕМ, які містять однаковий об'єм стандартизованого штаму вірусу Зіка (105 ріш/мл) додавали та інкубували при 37"С з 595 СО» протягом 90 хвилин. Клітини промивали двічі 1 х РВЗ рН 7,4 (10 мМ фосфату з 150 мМ Масі), та додавали 0,30 мл кожного розбавлення суміші сироватка-вірус до відповідних лунок та інкубували протягом 90 хвилин при 37"С в 595
Со» інкубаторі. Кожний аналіз здійснювали в трьох повторах. Клітини були накладеними на 2 мл 0,85956 метилцелюлози в МЕМ з 195 пеніциліну-стрептоміцину та 195 І -глютаміну. Планшети
Зо інкубували при 37"С в 595 СО»2 інкубаторі протягом 4 днів. Наприкінці інкубування, бляшки фіксували 1095 формаліну, промивали 1 х РВ5, рН 7,4 та візуалізували з 0,195 кристалічним фіолетовим. Найвище розбавлення сироватки, що призводило до 5095 зменшення кількості бляшок, сформованих контрольним зразком вірусу оцінювали як титр РЕМТ»0о. Анти-СНІКМ та анти-УЕ антитіла з вакцинних комбінацій також оцінювали РЕМТ о. Всі зазначені вище вакцинні антигени індукували високий рівень нейтралізуючих антитіл як зображено на фігурах 5 та 6.
Приклад 10: дослідження перехресної нейтралізації вірусу Зіка
Інактивовані формаліном вакцинні антисироватки перехресно нейтралізовані гомологічним штамом вірусу МК766 африканського генотипу та штамом Е5513025 вірусу Зіка (СепВапк Асс
Мо. УМ860885) азіатського генотипу з однаковою ефективністю титрів РЕМТ»5о 18105 та 18325 проти штамів МК76б та Е513025, відповідно. (Дослідження В5-3018 були передбачені контрактом ІВТ Віозегмісе5, Сбайпегериго, МО, ОБА). Коротко кажучі, як МК766б, так і штами
Е513025 вірусу Зіка розбавляли до - 250 РЕ в середовищі без сироватки. Як вакцинні антисироватки, так і контрольні сироватки (плацебо) серійно розбавляли в дворазових розділеннях. Вірусні зразки змішували 1:1 з серійно розбавленими сироватковими зразками та інкубували при 37"С протягом 2 годин. Клітини Мего, висіяні в 24-лункові планшети, інфікували розбавленнями протягом 1 години, та 0,8595 метилцелюлози додавали до кожної лунки та інкубували протягом З днів. Клітини фіксували та аналізували з використанням аналізу бляшок.
Планшети сканували, та кількість бляшок використовували для розрахунку титрів РКМТ»5о з використанням кривої 4РІ. Отже, спосіб отримання вакцинного антигена, формуляції та дослідження є цілком перехресно застосовуваними до будь-якого генотипу вірусу Зіка, як вакцини з одним генотипом 10095 перехресно нейтралізують гетерологічний штамм, та це також доводить, що ніяких серотипів вірусу Зіка не існує та що інактивована вакцина Зіка з використанням будь-якого штаму буде однаково захисною та ефективною як вакцина, одержана з використанням будь-якого генотипа, та генотипного варіанта або, більш того, будь-якого штаму вірусу Зіка. Цей факт був додатково підтверджений, коли антитіла, індуковані проти рекомбінантного протеїну, експресованого як ргМЕ (протеїн 5ЕО ІЮО Мо. 3) в клітинах комах перехресно нейтралізованих вірусом МК766 з високою ефективністю. Протеїн 5ЕО ІЮО Мо. З є отриманим з ргМЕ африканського генотипу штаму вірусу Зіка Н/РЕ/013, який є більш сучасним штамом азіатського генотипу. Перехресна нейтралізація вакцинної антисироватки гомологічного 60 штаму МЕК76б нуклеотидної ЗЕО ІО МО. 5, яка кодує повний ОКЕ з 5ЕО ІЮ МО. 6 та гетерологічний ЕЗ513025 з ЗЕО ІО Мо. 7, яка кодує повний ОКЕ з ЗЕО ІЮ МО. 8 є зображеним на Фігурі А та Фіг. 88.
Приклад 11: ЕГІ5А для антитіл
Коротко кажучи, вірусний антиген Зіка був нанесений зі стандартизованою концентрацією в буфері для покриття в 96-лункових планшетах протягом ночі при від 2 до 8"С. Вміст планшета відкидали, та лунки блокували блокуючим буфером та інтенсивно промивали перед додаванням вакцинних антисироваток при серійних розбавленнях. Кожну вакцинну антисироватку аналізували в трьох повторах. Планшети інкубували протягом 90 хв. при 37"С, перед додаванням вторинного антитіла (анти мишачий-Ідо НКРО кон'югат) розбавленого 1:2500 в буфері для розбавленння антитіла. Кожну з лунок промивали п'ять разів промивним буфером (РВЗТ, рН 7,4) та три рази РВ5 (рН 7,4), кожні 30 секунд. Додавали приблизно 100 мкл /лунку свіжо отриманого субстратного розчину та інкубували при температурі навколишнього середовища протягом 10 хвилин для розвитку кольору. Розвиток кольору зупиняли додаванням 50 мкл /лунку розчину для зупинки. Поглинання зчитували на 492 нм, та результати були записані. Для кожного аналізу були включеними антигенний контроль, контролі первинного та вторинного антитіла, як контролі. Значення відсікання сероконверсії - середній титр перед експозицією «я (3 х стандартне відхилення). Ідентифікованими були розбавлення кінцевої точки позитивно сероконвертованого зразка, який показує титр еквівалентний до рівня перед експозицією. Зворотня залежність передостаннього розбавлення кінцевої точки позитивно сероконвертованого зразка інтерпретували як титр кінцевої точки антитіла. Титри антитіл як інактивованих ВРІ, так і інактивованих формаліном вакцинних композицій Зіка біли більш високими з алюмінію гідроксидом, ніж з антигенами самостійно. Вакцинні композиції, інактивована формаліном вакцина в усіх дозах (Фіг. 9А-9С) та всі дози інактивованої ВРІ. вакцини (дані не показані), індукували високий рівень антитіла, після введення кожної дози вакцини, що підтверджує те, що вакцина може вводитись як одноразова доза або двома або більше дозами для індукування надійної імунної відповіді проти вірусу Зіка.
Приклад 12: Авідності антитіл
Якість антитільних відповідей на вакцину оцінювали з використанням аналізів авідності антитіл. Авідності зв'язування антиген-антитіло представляють собою ступінь дозрівання
Зо афінності в В-клітинах. Більш високі авідності антитіла корелюють з нейтралізуючими антитілами в декількох вакцинних дослідженнях. Перед визначенням індексу авідності, проводили титрування ізотіоціанатом натрію (мазсм) концентрацією від 0 М до 6 М в 0,25 М ступені від 0 до 2,0 М. Після додавання та інкубування первинної антисироватки до планшетів, покритих антигеном, планшети інкубували з каліброваними концентраціями МазсмМ протягом 15 хв. із періодичним перемішуванням, промивали та розвивали як у звичайному ЕГ І5А. Отримані оптичні густини для кожної з концентрацій наносили на графік. Найвищий показник ОО (А) був нанесений на графік та поділені пополам (А/2), та відстань між кривими ОО при А/2 вимірювалась як значення зсуву МазсМ. Зсув Мазсм був більш високим після першої бустерної дози в порівнянні з основною дозою та залишалася статичною або трохи збільшувалася після введення другої бустерної дози, що свідчить про те, що антитіла з високою афінністю розвиваються з плином часу та з ін'єкціями бустерів. Референтною точкою в титруванні ЕГІЗА була взята для обчислення індексу авідності, (АІЇ), яка представляє собою співвідношення концентрації антитіла (вимірюваного поглинанням) в ЕГІ5А, детектували зразки сироватки, обробляли з та без агента, який викликає дисоціацію комплексів МазсМ. Навіть при найнижчій концентрації одноразової дози 1 мкг інактивованої формаліном вакцини Зіка, детектували антитіла з високою афінністю зв'язування з антигеном, що свідчить про те, що вакцина є сильною навіть при низьких концентраціях вакцинного антигена (Дивіться фігуру 10).
Приклад 13: Профілювання цитокінів
Як ТИ, так і Тп2 цитокіни оцінювали в мишачих сироватках після введення двох доз інактивованого формаліном антигена Зіка, сформульованого з різними ад'ювантами, які включають алюмінію гідроксиду та тільки в антигенних контролях для порівняння. Мишачий набір ЕГІЗА - ТН1 / ТН2 (Саїа!од Мо. 88-7711-44, еВіозсіепсе) використовувалася для оцінки ЇЇ -2,
ІЕМ гама, 1-4 та І1/-10 за способами точно такими, як в протоколах до набору з використанням стандартів, які надаються в наборі. Концентрація цитокінів виражається в пг/мл. Результати щодо рівнів цитокіну ТАТ є зображеними на фігурі 11А та Фіг. 118 та цитокінів ТН2 на Фіг. 12А та
Фіг. 128.
Приклад 14: Оцінка титрів вірусів
Кількість інфекційних вірусних частинок в зразках біопрцесу в зворотному напрямку та в прямому напрямку, титри вірусу Зіка для досліджень контрольного зараження тварин бо вимірювали застосовуючи аналіз ТСІЮ50О (5095 доза інфекції культури тканини). Даний аналіз вимірює розбавлення зразку вірусу, який генерує цитопатичний ефект (СРЕ) у 5095 клітин.
Клітини Мего висівали в 96-лункові мікропланшети та інкубували в 595 СО2 при 37"С протягом ночі. Клітини інфікували 10-кратними серійним розбавленнями зразку вірусу, з наступним інкубування протягом 5 днів в 595 СО2 при 33"С. Клітини візуально обстежували щодо СРЕ, та титр ТСІО50 розраховувався відповідно до способу Ріда та Мюнча (посилання). Результати є представленими як 0910 титра (10хТСІ0О5О одиниці/мл). Альтернативно використовували аналізи бляшки, та титри виражали як бляшкоутворюючі одиниці, РЕО /мл.
ПОСИЛАННЯ
1. Соорег РО, 5іевіє Е). Те адіимапійсйну ої датта іпип. Іттипої Сеї! Віо!. 1988, 66:345-52. 2. Нева ГГ). Миепспи Н. А взітріє теШйой ої евійтайпо їпйу регсепі епароїіпі5. Ат. /.
Еріаетіо!. (1938) 27 (3): 493-497

Claims (56)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Імуногенна композиція, яка містить антиген вірусу Зіка або антиген вірусу Зіка з одним або обома антигенами арбовірусу, вибраними з вірусу Чикунгунья та японського енцефаліту, та фармацевтично прийнятний буфер, причому зазначений антиген стає неінфекційним через неприродну інактивацію, таку як інактивація хімічними засобами, інактивація фізичними засобами або інактивація шляхом опромінення, де неприродну інактивацію проводять в присутності стабілізуючого агента, вибраного з групи, що складається з лактози, сахарози, трегалози, мальтози, манози, ізомальтози, рафінози, стахіози, лактобіози, сорбіту, маніту, лактобіонової кислоти, декстрану, І -гліцину, І -гістидину, 1- глутамінової кислоти, І-аспарагінової кислоти, людського сироваткового альбуміну та їх комбінацій, та де композиція викликає захисну імунну відповідь на інфекцію вірусу Зіка у ссавців.
2. Композиція за пунктом 1, в якій вірус Зіка являє собою цілий віріон (вірус).
3. Композиція за пунктом 1, в якій вірус Зіка є вирощений на клітинах Мего. Зо
4. Композиція за пунктом 1, де композиція є ефективною проти будь-якого генотипу/генотипних варіантів/штамів/синтетичних вірусів Зіка, які мають від 50 до 100 95 ідентичності на рівні амінокислот у будь-якій ділянці геному.
5. Композиція за пунктом 4, яка містить антигени вірусу Зіка будь-якого генотипу/генотипного варіанта/штаму/синтетичного вірусу Зіка, де антитіла проти будь-якого з вищезазначених типів вірусу Зіка перехресно нейтралізують гомологічний вірус або будь-який гетерологічний штам вірусу Зіка, що має щонайменше 50-100 95 амінокислотну ідентичність у будь-якій ділянці всього його геному, зокрема оболонкового Е-протеїну.
6. Композиція за пунктом 1, де неприродну інактивацію здійснювали шляхом піддавання цілого вірусу дії одного або декількох агентів, вибраних з групи, яка складається з хімічного інактивуючого агента, фізичного інактивуючого агента та опромінюючого агента.
7. Композиція за пунктом 6, де вірус Зіка є очищеним, де неприродну інактивацію здійснюють перед або після очистки вірусу.
8. Композиція за пунктом 6, де хімічний інактивуючий агент є вибраним із групи, яка складається з формаліну (формальдегіду), бета-пропіолактону (ВРІ) та пероксиду водню.
9. Композиція за пунктом б, де опромінюючий агент включає гамма-опромінення або опромінення УФ.
10. Композиція за пунктом 1, де вірус Зіка є неприродно інактивованим шляхом термічної обробки.
11. Композиція за пунктом 1, де антиген містить один або декілька антигенів, вибраних з протеїну оболонки (Е) та мембранного (М) протеїну вірусу Зіка.
12. Композиція за пунктом 1, де антиген містить один або декілька антигенів, вибраних з групи, яка складається з протеїну оболонки (Е), мембранного (М) протеїну та неструктурного 1 (М51) протеїну вірусу Зіка.
13. Композиція за пунктом 1, де антиген містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: З або 5ЕО ІЮО МО: 4.
14. Композиція за пунктом 1, де антиген містить амінокислотну послідовність, кодовану нуклеїновою кислотою з послідовністю, яка відповідає ЗЕО ІЮ МО: 1 та/або 5БЕО ІЮО МО: 2, або амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: З та 5ЕО ІЮО МО: 4.
15. Композиція за пунктом 1, в якій антиген експресується як вірусоподібні частинки в бо прокаріотичній системі експресування.
16. Композиція за пунктом 1, в якій антиген експресується як вірусоподібні частинки в еукаріотичній системі експресування.
17. Композиція за пунктом 1, де композиція викликає захисний імунітет ТА1.
18. Композиція за пунктом 1, де композиція викликає захисний імунітет Тп2.
19. Композиція за пунктом 1, в якій буфер вибирають із групи, яка складається з фосфатного буфера, цитратного буфера, фосфатно-цитратного буфера, боратного буфера, буфера, який містить три(гідроксиметил)амінометан (Ттгі5), сукцинатного буфера та буферів, які містять гліцин або гістидин як один з буферних агентів.
20. Композиція за пунктом 19, де фосфатним буфером є фосфат натрію в концентрації від 5 до 200 мМ фосфатних іонів при рН від 6,5 до 9.
21. Композиція за пунктом 20, в якій буфер додатково містить хлорид натрію в концентрації від 50 до 200 мМ.
22. Композиція за пунктом 1, де композиція додатково містить ад'ювант.
23. Композиція за пунктом 22, де ад'ювант є вибраним із групи, яка складається з: а) солей алюмінію, які включають алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат або алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну; а) монофосфорилліпіду А (МР); е) резиквімоду; У мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); МР) полі-ІС; ї) Сро олігонуклеотиду; |) алюмінію гідроксиду з МРІ; К) емульсії вода-в-олії; І) емульсії олія-у-воді; та т) їх комбінації.
24. Композиція за пунктом 23, причому композиція містить алюмінію гідроксид в концентрації від 0,1 до 1,5 мг алюмінію на вакцинну дозу.
25. Композиція за пунктом 23, причому композиція містить алюмінію гідроксид в концентрації від 0,25 до 0,5 мг алюмінію на вакцинну дозу.
26. Композиція за пунктом 22, причому композиція містить 2-феноксіетанол в концентрації від 2,5 до 5 мг/мл.
27. Композиція за пунктом 1, причому композиція знаходиться в рідкій або ліофілізованій формі.
28. Застосування композиції за пунктом 1 для отримання лікарських засобів для індукування захисної імунної відповіді у ссавців, включаючи людей, при цьому лікарські засоби вводять будь-яким способом, який включає внутрішньом'язовий, інтрадермальний, внутрішньошкірний, підшкірний, внутрішньовенний, пероральний, інтраназальний або черезшкірний шляхи.
29. Застосування антитіл до вірусу Зіка композиції за пунктом 1 для отримання імунодіагностичних та імунотерапевтичних засобів проти інфекцій вірусу Зіка.
30. Композиція за пунктом 1, причому композиція міститься в попередньо заповненому шприці, мікроголковому пластирі, безголковому пластирі та/або інгаляційному або назальному спреї.
31. Стабільна імуногенна композиція, яка містить: рекомбінантно сконструйований антиген, отриманий або який походить з нуклеїнової кислоти вірусу Зіка, та фармацевтично прийнятний буфер, де композиція викликає захисну імунну відповідь на зараження вірусом Зіка у ссавців.
32. Композиція за пунктом 31, де рекомбінантний антиген містить один або декілька антигенів, вибраних з протеїну оболонки (Е), мембранного (М) протеїну та неструктурного 1 (М51) протеїну вірусу Зіка.
33. Композиція за пунктом 31, де рекомбінантний антиген містить амінокислотну послідовність, кодовану нуклеїновою кислотою з послідовністю ЗЕ І МО: 1 та/або ЗЕОІЮ МО: 2, або амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: З та 5ЕО ІЮО МО: 4.
34. Композиція за пунктом 31, де рекомбінантно сконструйований антиген експресується як вірусоподібні частинки в прокаріотичній системі експресування.
35. Композиція за пунктом 31, де рекомбінантно сконструйований антиген експресується як вірусоподібні частинки в еукаріотичній системі експресування.
36. Композиція за пунктом 31, яка викликає захисний імунітет ТИ1 та/або ТІ2 у ссавця.
37. Композиція за пунктом 31, де буфер вибирають із групи, яка складається з фосфатного буфера, цитратного буфера, фосфатно-цитратного буфера, боратного буфера, буфера, який містить три(гідроксиметил)амінометан (Ттгі5), сукцинатного буфера та буферів, які містять гліцин або гістидин як один з буферних агентів.
38. Композиція за пунктом 37, де фосфатним буфером є фосфат натрію в концентрації від 5 до 200 мМ фосфатних іонів при рН від 6,5 до 9.
39. Композиція за пунктом 31, де буфер містить хлорид натрію в концентрації від 50 до 200 мМ.
40. Композиція за пунктом 31, де композиція містить ад'ювант.
41. Композиція за пунктом 40, де ад'ювант є вибраним із групи, яка складається з: а) солей алюмінію, які включають алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат або алюмінію сульфатфосфат; Б) інуліну; с) альгамуліну; а) монофосфорилліпіду А (МР); е) резиквімоду; У мурамілдипептиду (МОР); 9) М-гліколілдипептиду (ЗМОР); МР) полі-ІС; ї) Сро олігонуклеотиду; |) алюмінію гідроксиду з МРІ; К) емульсії вода-в-олії; І) емульсії олія-у-воді; та т) їх комбінації.
42. Композиція за пунктом 40, причому ад'ювант містить алюмінію гідроксид в концентрації від 0,1 до 1,5 мг алюмінію на вакцинну дозу.
43. Композиція за пунктом 40, причому ад'ювант містить алюмінію гідроксид в концентрації від 0,25 до 0,5 мг алюмінію на вакцинну дозу.
44. Композиція за пунктом 40, причому ад'ювант містить 2-феноксіетанол в концентрації від 2,5 до 5 мг/мл. Зо
45. Композиція за пунктом 31, причому композиція знаходиться у водній або ліофілізованій формі.
46. Композиція за пунктом 31, яка міститься в попередньо заповненому шприці, мікроголковому пластирі, безголковому пластирі та/або інгаляційному або назальному спреї.
47. Композиція за пунктом 1, яка являє собою вакцину.
48. Композиція за пунктом 31, яка являє собою вакцину
49. Композиція за пунктом 8, де неприродна інактивація включає одну або декілька з наступних обробок: а) обробку формаліном у будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 до 1:4000 об./06б. формалін:вірус при температурі від 8 до 37 "С, переважно 25ж3 "С, протягом щонайменше 1-7 днів; р) обробку формаліном у будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 до 1:4000 об./о06. формалін:вірус при температурі від 2 до 8"С, протягом щонайменше 10-30 днів; с) обробку бета-пропіолактоном (ВРІ) у будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 до 1:4000 об./06. ВРІ вірус, протягом щонайменше 24-48 годин, якщо не більше, при температурах, які знаходяться в діапазоні від 8 до 30 "С, переважно 25:23 "С, протягом 48 годин; а) обробку бета-пропіолактоном у будь-якій концентрації, яка знаходиться в діапазоні від 1:500 до 1:4000 об./об. ВРІ вірус, при температурах, які знаходяться в діапазоні від 2 до 8 "С, протягом щонайменше 3-7 днів; е) обробку комбінацією ВРІ та формаліну в будь-яких із вищезазначених умов, переважно інактивацію ВРІ при 1:3000 (ВРІ вірус, об./06.) протягом 24 годин з наступною інактивацію формаліном при 1:3000 (формалін:вірус, об./06.) протягом 24-48 годин при 15-30 "С, переважно 2553 С; І) перекис водню в будь-якій концентрації від 0,1 до З 95, переважно від 0,1 до 1 95, при будь-якій температурі 20-30 "С протягом від 5 хвилин до 120 хвилин.
50. Композиція за пунктом 9, де гамма-опромінення або УФ-опромінення включає гамма- опромінення за рахунок експозиції від 20 до 35 кГр (кілогрей) або від 25 до 30 кГр з 60бо- джерела.
51. Композиція за пунктом 9, де гамма-опромінення або УФ-опромінення включає УФф- опромінення протягом 30-60 хвилин.
52. Композиція за пунктом 10, де термічна обробка становить від 50 до 65 "С протягом від 30 хвилин до 2 годин.
53. Композиція за пунктом 1, де неприродну інактивацію здійснюють в присутності стабілізуючого агента, вибраного з групи, яка складається з: а) 2 95 сорбіту та 1 95 І -гліцину; Б) 1 95 сорбіту та 0,5 95 І -гліцину; с) 1 95 маніту та 0,5 95 І -гліцину; 9) 1 95 маніту та 0, 595 І -г лутамінової кислоти; та е) 1 95 сорбіту та 0,5 95 І -гліцину плюс 1 95 альбуміну сироватки людини.
54. Композиція за пунктом 31, у якій рекомбінантно сконструйований антиген піддають неприродній інактивації.
55. Імуногенна композиція, яка містить антиген, отриманий або який походить з вірусу Зіка, та фармацевтично прийнятний буфер, причому зазначений антиген стає неінфекційним через неприродну інактивацію, таку як інактивація хімічними засобами, інактивація фізичними засобами або інактивація шляхом опромінення; в присутності стабілізуючого агента, вибраного з групи, що складається з лактози, сахарози, трегалози, мальтози, манози, ізомальтози, рафінози, стахіози, лактобіози, сорбіту, маніту, лактобіонової кислоти, декстрану, І-гліцину, І-гістидину, І-глутамінової кислоти, І- аспарагінової кислоти, людського сироваткового альбуміну та їх комбінацій, та/або є рекомбінантно сконструйованим з нуклеїнової кислоти вірусу Зіка; та де зазначений антиген містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: З та/або 5ЕО ІО МО: 4.
56. Композиція за пунктом 55, яка являє собою вакцину.
бкда кош звкда Ілон ідкда-я по Фігура 1 є я в 2А «чреі в 1040 ї М «нії в 806 й «ок д ЗВО ! в, ї б заре дв ВВ ! Є 2 і з зей в ЗВО в зо яв 73 95 323 ма а Години після доданання формаліну | ! « В сере в Й Я вх 2В сені в 1500 ях сяенав НКЮ й 4 Кк сеї в ЗОВ щ з х зоні в ЗО 8 М зей в 8500 В ноу фуннннчн ча фрунчннннякні І і ! г. 25 Б 2 зе ї20 їж тодини після додавання ВР Фігура 2
ЗА ЗВ і Пов і ВО і с | с ооо шо с що 3 | с - '
' 0. : 00000077 Епротеїн ' нят 000 ит 3то. с і віт - | с '
ТО. о. і І ооо ооо Е ОХ : , я ОВ ї не и Я У її М Фігура 3
КВаСЦі Об ваг. вовною ох вон Ка пе МЕ ЗВО ОН о ОО Ов Во в НВ я Не ня І МЕ зквасці ЕК В В В В ОО ФК неону ван ення Ж У о ФО Ме екавзсці вена вену ! я ЇМАЛЕВЯИЯ венеоехванаех екв век ее ване нена К ДО нимохоууоооу око оо : ВЛШМР зеехваваиа ав вх ЯААЛЕВЯХ - незооохоововооООО В оо о В а Бе ї а З 4. КОБРА Фігура 4
Е а. 8 с ше ! ше з 3 се св ; е ен тЗ я ВЕ ! і ре : 5 зх «й хх 3
: Я. : і. г Ф : і і Ж ї а КІ З ша і і Х ї - Я я МВ в з і ! в 2 ак . х в 5 мок із о іі, в. і З зо хо о о що : ! Доза вн | ! ' т «еф влвцебо : і 5 бе докооюкно й КОНТ і і Її ши щі я ЕКО : І х З і; в, : : ' З Ї й : ! : ЖЕ Х З ї Ї ї ух Її я й шо ї і ! : З ї кдд ак : ; ' ех ї : :
і щ. ї ї і ! 4 т : : хх : і ! ї и і дк Х : з ! ї че В МНЕ: ! ; 5 Вююююо онко сосок Ко осоососонн рою ооо кжнкккюсо В : ЖЕ : Ї години авая інфінування ! і - Фігура 5 в й ! Жак ВВ ! в
БЕ.
ща . : ва Зак вав й" я аа я
5. дезімні ! Фігура 6
UAA201801513A 2015-07-16 2016-07-15 Вакцинна композиція для профілактики абровірусних інфекцій UA126548C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN3652CH2015 2015-07-16
PCT/IN2016/050241 WO2017009873A1 (en) 2015-07-16 2016-07-15 Vaccine compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126548C2 true UA126548C2 (uk) 2022-11-02

Family

ID=57757129

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201801513A UA126548C2 (uk) 2015-07-16 2016-07-15 Вакцинна композиція для профілактики абровірусних інфекцій

Country Status (16)

Country Link
US (2) US10588956B2 (uk)
EP (1) EP3322441A4 (uk)
JP (2) JP6896700B2 (uk)
KR (2) KR20180036987A (uk)
CN (1) CN108601825B (uk)
AU (2) AU2016291836A1 (uk)
BR (1) BR112018000862A2 (uk)
CA (2) CA3209607A1 (uk)
CO (1) CO2018001534A2 (uk)
EA (1) EA035921B1 (uk)
MX (1) MX2018000689A (uk)
MY (1) MY187459A (uk)
PH (1) PH12018500127A1 (uk)
UA (1) UA126548C2 (uk)
WO (1) WO2017009873A1 (uk)
ZA (1) ZA201801035B (uk)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10201606635SA (en) 2012-02-16 2016-10-28 Vlp Therapeutics Llc Virus like particle composition
US9637532B2 (en) 2013-07-12 2017-05-02 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising PD-1 antigen or PD-1 ligand antigen
TWI720946B (zh) 2014-08-08 2021-03-11 美商Ｖｌｐ醫療股份有限公司 包含改質套膜蛋白質ｅ３之類病毒粒子
US10385101B2 (en) 2014-08-08 2019-08-20 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising modified envelope protein E3
US10098943B2 (en) 2014-09-11 2018-10-16 Vlp Therapeutics, Llc Flavivirus virus like particle
EP3031923A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-15 Institut Pasteur Lentiviral vector-based japanese encephalitis immunogenic composition
WO2017109225A1 (en) * 2015-12-23 2017-06-29 Valneva Austria Gmbh Zika virus vaccine
US10837963B2 (en) 2016-02-22 2020-11-17 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika Ag Immunoassay for the diagnosis of viral infections
JP7012365B2 (ja) 2016-02-25 2022-03-04 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア ジカウイルスに対する新規のワクチン
WO2017150683A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-08 Vlp Therapeutics, Llc Zika virus virus like particle
US9771623B1 (en) * 2016-03-15 2017-09-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Molecular typing system for flavivirus diagnostics
US20170354729A1 (en) * 2016-03-16 2017-12-14 Novavax, Inc. Vaccine compositions containing modified zika virus antigens
WO2017210215A1 (en) * 2016-05-31 2017-12-07 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Zika virus vaccine and methods of production
EP3463445A1 (en) * 2016-06-02 2019-04-10 GlaxoSmithKline Biologicals SA Zika viral antigen constructs
BR112018075440A2 (pt) 2016-06-09 2019-04-02 Beth Israel Deaconess Medical Center composições e métodos para prevenir e tratar a infecção por zika vírus
CA3026807A1 (en) 2016-06-13 2017-12-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nucleic acids encoding zika virus-like particles and their use in zika virus vaccines and diagnostic assays
WO2017223090A1 (en) * 2016-06-21 2017-12-28 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Whole-cell based vaccine against zika virus
KR20240090525A (ko) * 2016-09-19 2024-06-21 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 지카바이러스에 대항하는 신규한 백신 및 지카바이러스에 대해 사용하기 위한 dna 항체 작제물의 조합
EP3579869A4 (en) * 2017-02-14 2020-10-21 The Board of Regents of the University of Texas System LIVE ATTENUATED CIKAVIRUS WITH 3'-UTR DELETION, VACCINE WITH IT AND USE OF IT
BR112019022384A2 (pt) 2017-04-26 2020-05-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Polipeptídeo apropriado para detecção de anticorpos contra vírus zika, métodos de produção de polipeptídeo, de detecção de anticorpos específicos para vírus zika e de detecção de anticorpos contra vírus zika, uso de polipeptídeo do vírus zika e kit de reagentes
US20200121780A1 (en) * 2017-04-26 2020-04-23 Cedars-Sinai Medical Center Methods to reduce the likelihood of maternal and fetal zika virus disease
WO2018231690A1 (en) * 2017-06-12 2018-12-20 Washington University Zika virus strains for treatment of glioblastoma
WO2019042555A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Humabs Biomed Sa MULTISPECIFIC ANTIBODIES SPECIFICALLY BINDING TO ZIKA VIRUS EPITOPES AND USES THEREOF
CN111511395B (zh) * 2017-11-03 2024-10-15 武田疫苗股份有限公司 用于将寨卡病毒灭活和用于确定灭活完全性的方法
EP3710046A4 (en) * 2017-11-10 2021-11-17 The Research Institute at Nationwide Children's Hospital RECOMBINANT VECTORS CODING FOR ZIKA VIRUS PROTEIN SUB-UNITS
JP2021505549A (ja) * 2017-11-30 2021-02-18 タケダ ワクチン, インコーポレイテッドTakeda Vaccines, Inc. ジカワクチン及び免疫原性組成物、ならびにその使用方法
US11491217B2 (en) 2017-12-06 2022-11-08 Emory University Chimeric viruses encoding mutant zika virus envelope glycoproteins
CN108187036A (zh) * 2017-12-08 2018-06-22 北京科兴中维生物技术有限公司 一种寨卡病毒与乙脑病毒联合灭活疫苗
WO2019186199A1 (en) * 2018-03-29 2019-10-03 Emergex Vaccines Holding Limited Vaccine compositions
EP3773477A1 (en) * 2018-04-03 2021-02-17 Vaxess Technologies, Inc. Microneedle comprising silk fibroin applied to a dissolvable base
EP3773548B1 (en) * 2018-05-16 2023-08-09 Provectus Pharmatech, Inc. In vitro and xenograft anti-tumor activity of a halogenated-xanthene against refractory pediatric solid tumors
KR102253190B1 (ko) * 2018-07-18 2021-05-18 (주)진매트릭스 지카 바이러스 변이주와 이를 포함한 지카 백신 조성물
EP3870208A4 (en) 2018-10-26 2022-10-26 New York Blood Center, Inc. IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF THE ZIKA VIRUS
KR101966841B1 (ko) 2018-12-12 2019-04-08 대한민국 지카바이러스 e 단백질 유래의 재조합 항원 및 이의 용도
CN109943536B (zh) * 2019-03-26 2021-09-14 昆明理工大学 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法
WO2020226831A1 (en) * 2019-05-08 2020-11-12 Takeda Vaccines, Inc. Inactivated virus compositions and zika vaccine formulations
CA3149919A1 (en) * 2019-08-09 2021-02-18 Valneva Se Chikungunya vaccine formulations
AU2020328159A1 (en) * 2019-08-09 2022-01-27 Valneva Se Single shot Chikungunya virus vaccine
US20240050557A1 (en) * 2020-08-21 2024-02-15 Bharat Biotech International Limited Coronavirus vaccine and method for preparation thereof
BR112023004799A2 (pt) * 2020-09-15 2023-04-18 Bharat Biotech Int Ltd Formulação de vacina de agonista de receptor do tipo toll (tlr)
TWI782362B (zh) * 2020-12-04 2022-11-01 臺中榮民總醫院 小黑蚊過敏無針貼片式疫苗
CN114456241B (zh) * 2021-03-01 2023-11-21 成都威斯克生物医药有限公司 抗SARS-CoV-2感染的蛋白及疫苗
WO2023017536A1 (en) * 2021-08-12 2023-02-16 Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. Immunogenic compositions for sars- cov-2
WO2023047419A1 (en) * 2021-09-24 2023-03-30 Bharat Biotech International Limited A vaccine for coronavirus and influenza virus, and method for preparation thereof
CN114594257B (zh) * 2022-05-09 2022-08-05 北京生物制品研究所有限责任公司 含CpG ODN的吸附型疫苗的解吸附组合物及其应用
WO2024050486A2 (en) * 2022-08-31 2024-03-07 The Regents Of The University Of California Peptide-loaded antigen presenting cell-derived extracellular blebs as a molecularly targeted vaccine
WO2024102703A2 (en) * 2022-11-07 2024-05-16 The Regents Of The University Of California Zikv-based gene delivery system
CN115645523B (zh) * 2022-12-22 2023-03-21 深圳大学总医院 聚合物脂质杂化纳米粒作为免疫佐剂的应用以及一种免疫制剂

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4993301B2 (ja) * 2004-10-20 2012-08-08 サノフィ パスツール バイオロジクス リミテッド ライアビリティ カンパニー 日本脳炎ウイルスおよび西ナイルウイルスに対するワクチン
WO2008026225A2 (en) * 2006-09-01 2008-03-06 Bharat Biotech International Limited A vaccine for chikungunya virus infection
KR20160003301A (ko) * 2007-12-26 2016-01-08 기타사토 다이이치 산쿄 백신 가부시키가이샤 안정하게 장기간 보존할 수 있는 일본뇌염 백신의 제조방법 및 그 백신의 용도
MX2011002071A (es) * 2008-08-29 2011-04-05 Boehringer Ingelheim Vetmed Vacuna para el virus del nilo occidental.
WO2011119716A2 (en) * 2010-03-24 2011-09-29 Research Development Foundation Flavivirus host range mutations and uses thereof
CN102512685B (zh) * 2010-12-21 2016-01-20 成都生物制品研究所有限责任公司 一种疫苗保护剂、麻疹乙型脑炎联合疫苗及其制备方法
EP2720715B1 (en) * 2011-06-17 2017-08-09 Bharat Biotech International Limited Vaccine composition comprising an inactivated chikungunya virus strain
CN104043117B (zh) * 2013-03-11 2018-02-13 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
US10799575B2 (en) * 2015-06-25 2020-10-13 Technovax, Inc. Flavivirus and alphavirus virus-like particles (VLPS)
WO2017070624A1 (en) * 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
WO2017109225A1 (en) * 2015-12-23 2017-06-29 Valneva Austria Gmbh Zika virus vaccine
CN105749268B (zh) * 2016-04-11 2020-09-11 北京科兴中维生物技术有限公司 一种灭活的寨卡病毒疫苗

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201801035B (en) 2019-01-30
CN108601825A (zh) 2018-09-28
EA035921B1 (ru) 2020-08-31
JP2018527317A (ja) 2018-09-20
US20170014502A1 (en) 2017-01-19
KR20180036987A (ko) 2018-04-10
WO2017009873A1 (en) 2017-01-19
CA2992531A1 (en) 2017-01-19
MX2018000689A (es) 2018-09-06
BR112018000862A2 (pt) 2018-09-11
CA2992531C (en) 2023-09-26
EA201800108A1 (ru) 2018-08-31
US20210187093A1 (en) 2021-06-24
US10588956B2 (en) 2020-03-17
EP3322441A1 (en) 2018-05-23
JP2021138745A (ja) 2021-09-16
US11406698B2 (en) 2022-08-09
JP6896700B2 (ja) 2021-06-30
AU2016291836A1 (en) 2018-03-08
CN108601825B (zh) 2023-06-20
KR20220144415A (ko) 2022-10-26
AU2022204267A1 (en) 2022-07-07
MY187459A (en) 2021-09-23
CA3209607A1 (en) 2017-01-19
CO2018001534A2 (es) 2018-07-10
PH12018500127A1 (en) 2018-07-23
EP3322441A4 (en) 2018-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126548C2 (uk) Вакцинна композиція для профілактики абровірусних інфекцій
US6309650B1 (en) Attenuated Japanese encephalitis virus adapted to Vero cell and a Japanese encephalitis vaccine
US20200360505A1 (en) Zika Vaccines and Immunogenic Compositions, and Methods of Using the Same
EA039095B1 (ru) Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния
CN107050445A (zh) 灭活登革热病毒疫苗
KR20110132379A (ko) 알루미늄-비함유 아주반트를 포함하는 불활성화 뎅기 바이러스 백신
US20240050557A1 (en) Coronavirus vaccine and method for preparation thereof
WO2012073257A2 (en) Vaccine formulation for prophylaxis and treatment of chandipura virus infections in mammals
US20240350611A1 (en) Recombinant antigen for inducing an immune response against the zika virus
EP4378475A1 (en) Recombinant antigen for inducing an immune response against the zika virus
EP4305156A1 (en) Bovine viral diarrhea virus immunogenic compositions and methods of use thereof