CN109943536B - 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法 - Google Patents

一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109943536B
CN109943536B CN201910233381.0A CN201910233381A CN109943536B CN 109943536 B CN109943536 B CN 109943536B CN 201910233381 A CN201910233381 A CN 201910233381A CN 109943536 B CN109943536 B CN 109943536B
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
hepatitis
vaccine
vero cells
precipitate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910233381.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109943536A (zh
Inventor
黄芬
何秋霞
纪汉斌
禹文海
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming University of Science and Technology
Original Assignee
Kunming University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming University of Science and Technology filed Critical Kunming University of Science and Technology
Priority to CN201910233381.0A priority Critical patent/CN109943536B/zh
Publication of CN109943536A publication Critical patent/CN109943536A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109943536B publication Critical patent/CN109943536B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Abstract

本发明公开了一种戊型肝炎病毒的培养方法，同时还公布了其灭活疫苗制备方法。该病毒可以在Vero细胞上稳定增殖且动物实验已经证实该病毒株具有良好的免疫原性，可以用作生产疫苗的毒种。用该病毒生产戊型肝炎灭活疫苗不仅在安全性方面更可靠，而且具有良好的免疫原性和保护效果，是生产戊型肝炎灭活疫苗的理想毒株。

Description

一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法
技术领域
本发明涉及肝炎病毒技术领域，尤其涉及戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法。
背景技术
戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)，是一种经粪口途径传播，严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。目前，全世界已有约三分之一的人口感染HEV，其中孕妇感染HEV后死亡率高达20％-25％。2015年WHO报道显示，仅亚洲和非洲的9个地区就有近2010万人感染HEV，每年死亡人数到达30万，其中7万人死于HEV感染所引发的重症肝炎，并造成5200胎儿死亡。中国是戊肝高发地区之一，其中1986年在新疆大规模爆发，导致119280例感染，死亡707例。2013年全国重点传染病疫情分析报告表明，病毒性肝炎仍占据甲乙类传染病中发病率的首位，其中HEV名列传染病致死率的前10位，成为我国急性流行性肝炎中的最大杀手。
近年大量临床报道发现戊肝感染可导致慢性化，并在短期内造成肝硬化。更严重的是，戊肝已经证实是一种人畜共患病，生吃猪肉、猪肝，或饮用生牛奶都会导致人类感染HEV，极大的增加了HEV感染的风险。因此，迫切需要对HEV疫苗进行深入的研发。
目前戊肝病毒没有有效的治疗方法。由于HEV缺乏有效的细胞培养体系，阻碍了传统全病毒疫苗的研究。尽管2012年厦门大学针对HEV基因1研制出世界上首支HEV基因工程疫苗“益可宁”，但与我国主要流行基因4型存在一定的差异，并且目前市面上仍无商品化的疫苗出售。此外，由于该重组疫苗只表达HEV基因1型的部分衣壳蛋白，因此其对我国主要流行的基因4型的保护性还有待进一步的评价。而传统的全病毒疫苗不仅保留了病毒刺激机体免疫系统的特性，并且是以完整的病原体作为抗原，具有所有新型基因重组疫苗所不可替代的优势。因此，在HEV可培养的基础上，传统的全病毒疫苗将会是预防HEV最好的策略。
发明内容
为了解决上述技术问题提，本发明提供一种制备戊型肝炎灭活疫苗的新的戊型肝炎病毒(命名为KM01)的培养方法，该毒株可以在Vero细胞上稳定增殖，且动物实验已经证实KM01具有良好的免疫原性，可以用作生产疫苗的毒种。用该病毒KM01生产戊型肝炎灭活疫苗不仅在安全性方面更可靠，而且具有良好的免疫原性和保护效果，此毒株是生产戊型肝炎灭活疫苗的理想毒株。还提供了利用该病毒制备灭活疫苗的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种戊型肝炎病毒的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)从戊型肝炎急性感染猪粪便中分离得到病毒，经生物学特性鉴定确认为戊型肝炎病毒；其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
(b)在Vero细胞上盲传适应6代，并仍具有较高的病毒滴度(>107)；
(c)在Vero上培养适应过程中逐渐减少培养时间，早代次培养周期为23天，传至10代后病毒繁殖周期由23天缩短到7天；其中，每次培养期满后，将细胞于-80℃反复冻融3次，获得病毒-细胞培养悬液，置-80℃保存备用；
(d)通过蚀斑纯化，获得3株较为单一的HEV克隆株，经PCR和透射电镜鉴定为HEV病毒颗粒，在前6代核苷酸序列中未发现有义氨基酸突变，遗传稳定性较好；
(e)排除HEV阳性的克隆中其他肠道病毒群的感染；
(f)最终获得一株所需的戊型肝炎病毒，该病毒于-80℃保藏，命名为KM01。
一种戊型肝炎灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：
(a)在含有2-10％胎牛血清的DMEM培养基中培养Vero细胞，使细胞浓度达到106-107/mL；
(b)将戊型肝炎病毒接种到上述细胞浓度的细胞基质培养基中，35.5-37.5℃孵育2-3h，后补加含有2％胎牛血清的DMEM培养基，置35.5-37.5℃培养；
(c)将细胞于-60℃至-80℃反复冻融3-5次，获得病毒-细胞培养悬液；
(d)经浓缩纯化、灭活后获得戊型肝炎灭活疫苗。
进一步的，所述DMEM培养基pH为6.8-7.4。
进一步的，所述Vero细胞为自液氮容器内取出经1000rmp离心10min，弃去原保存液后得到的Vero细胞。
进一步的，所述步骤(d)的具体过程是如下：用10％PEG和0.4M的NaCl溶液浓缩，10000rpm离心60min，弃上清，收集沉淀；将收集的沉淀用10μmol/LPBS悬浮后，12000rmp离心30min，弃沉淀，收集上清；经1.5g/mL氯化铯38000rpm梯度离心5h，弃上清，收集沉淀；将收集的沉淀用10μmol/L PBS悬浮，之后柱层析进一步去除残余DNA和杂蛋白，得到的病毒用250μg/ml的甲醛37℃灭活15天，每毫升病毒加0.5mg氢氧化铝佐剂和5μg苯氧乙醇防腐剂，得到戊型肝炎灭活疫苗。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果：
本发明采用戊型肝炎病毒KM01株与Vero细胞培养系统，可进行新型高效精制戊肝灭活疫苗(Vero细胞)的生产，并且，病毒产率高，为大幅度降低生产成本，制备有效、廉价的戊肝灭活疫苗提供了保障。另外，本发明的疫苗为高纯度灭活疫苗，使戊肝灭活疫苗的安全性、有效性得以保证。
附图说明
下面结合附图说明对本发明作进一步说明。
图1是本发明戊型肝炎病毒毒株KM01蚀斑实验纯化结果；
图2是本发明戊型肝炎病毒毒株KM01的PCR鉴定结果；
图3是本发明戊型肝炎病毒毒株KM01透射电镜图；
图4是本发明HEV阳性的克隆进行肠道病毒A群检测结果；
图5是本发明HEV阳性的克隆进行肠道病毒B群检测结果；
图6是本发明HEV阳性的克隆进行肠道病毒C群检测结果；
图7是本发明戊型肝炎病毒灭活疫苗免疫小鼠后小鼠血清ELISA结果。
具体实施方式
本发明的疫苗生产方法使得能利用Vero细胞工业化大规模生产。
戊型肝炎灭活疫苗，从技术根本上解决了戊型肝炎病毒抗原难于大量获取的问题。采用本发明的戊型肝炎病毒KM01毒株(其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示)、Vero细胞基质及相应的方法能大量获取戊肝病毒抗原。与其他戊肝毒株、细胞基质及其工艺技术相比，本发明方法中病毒繁殖的细胞基质为Vero细胞，是世界卫生组织(WHO)准允用于制备人用生物制品的细胞基质。与二倍体细胞相比，Vero细胞具有易培养，并可满足用发酵罐(微载体技术)大规模生产等明显优势，Vero细胞现己被国内外广泛用于生产人用精制狂犬疫苗、乙脑疫苗等升级换代产品。另外，本发明的KM01毒株具有在Vero细胞上高效稳定增殖的特性；动物试验己证明KM01株具有良好的免疫原性。该病毒的分离获得方法为本领域常规方法，很多人也能分离该病毒，但是无法将其培养，及后续制备疫苗。
在本发明的戊型肝炎灭活疫苗的制备方法中：
步骤(a)细胞基质为Vero细胞，该细胞培养基为含10％胎牛血清的DMEM培养基，培养温度通常为35.5-37.5℃。
步骤(b)的培养基为含2％胎牛血清的DMEM培养基，培养温度通常为35.5-37.5℃。
步骤(d)的纯化病毒制备疫苗可采用本领域常规的方法，例如可采用如下方法进行：首先，将选择经步骤(b)细胞于-60℃至-80℃反复冻融3-5次，获得病毒-细胞培养悬液。随后8000rmp离心30-50min，收集上清。用10％PEG(分子量6000)和0.4M的NaCl溶液浓缩，10000rpm离心50-80min，弃上清，收集沉淀。将收集的沉淀用PBS悬浮后，12000rmp离心30-50min，弃沉淀，收集上清。经1.5g/mL氯化铯38000rpm梯度离心5-8h，弃上清，收集沉淀。将收集的沉淀用PBS悬浮，之后柱层析进一步去除残余DNA和杂蛋白。得到的病毒用250μg/ml甲醛37℃灭活15-20天。每毫升加0.5-1mg氢氧化铝佐剂和5-8μg苯氧乙醇防腐剂，由此制成戊型肝炎灭活疫苗。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容；实施例中主要采用常规的分子生物学方法，这些方法是本领域普通技术人员所熟知的。按照以下实施例，不难根据具体情况略作修改和变换而成功实施本发明，这些修改和变换均落在本申请权利要求的范围内。
实施例1：戊型肝炎病毒毒株KM01的培养方法
(a)从戊型肝炎急性感染猪粪便中分离得到病毒，经生物学特性鉴定确认为戊型肝炎病毒。
具具体分离方法为：
取戊型肝炎急性感染猪粪便于50ml离心管中，加入DEPC水搅拌后12000rmp，4℃离心15min，取上清分别经0.45um和0.22um微孔滤器过滤，随后1：1000含有400U/mL青霉素和1000U/mL链霉素的双抗溶液，于4℃处理2h得到病毒悬液，经生物学特性鉴定确认为戊型肝炎病毒。
(b)在Vero细胞上盲传适应6代，并仍具有较高的病毒滴度(>107)。
(c)在Vero上培养适应过程中逐渐减少培养时间。早代次培养周期为23天，传至10代后病毒繁殖周期由23天缩短到7天。其中，每次培养期满后，将细胞于-80℃反复冻融3次，获得病毒-细胞培养悬液，置-80℃保存备用。
(d)通过蚀斑纯化，获得3株较为单一的HEV克隆株(参见图1)，经PCR和透射电镜鉴定为HEV病毒颗粒(参见图2和图3)，在前6代核苷酸序列中未发现有义氨基酸突变，遗传稳定性较好。
(e)并已经排除HEV阳性的克隆中其他肠道病毒A、B、C群的感染(参见图4、图5和图6)。
(f)最终获得一株所需的戊型肝炎病毒毒株，命名为KM01，该毒株于-80℃保藏。
实施例2：戊型肝炎灭活疫苗的制备
自液氮容器内取出Vero细胞，1000rmp离心10min，弃去原保存液，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，置37℃培养至细胞长成单层，用PBS洗涤，胰酶消化，加入上述培养基，继续传代培养，直至获得足够细胞。
将上述细胞培养于浓度达到106/ml时，在pH 7的培养基中加入实施例1获得的戊型肝炎病毒毒株KM01，于37℃培养7天。培养期满后，将细胞于-80℃反复冻融3次，获得病毒-细胞培养悬液。随后8000rmp离心30min，收集上清。用10％PEG(分子量6000)和0.4M的NaCl溶液浓缩，10000rpm离心60min，弃上清，收集沉淀。将收集的沉淀用10μmol/L PBS悬浮后，12000rmp离心30min，弃沉淀，收集上清。经1.5g/mL氯化铯38000rpm梯度离心5h，弃上清，收集沉淀。将收集的沉淀用10μmol/L PBS悬浮，之后柱层析进一步去除残余DNA和杂蛋白。得到的病毒用250μg/ml的甲醛37℃灭活15天。每毫升病毒加0.5mg氢氧化铝佐剂和5μg苯氧乙醇防腐剂，由此制成戊型肝炎灭活疫苗。
实施例3：将甲醛灭活的病毒液免疫小鼠
将经本发明实施例1、实施例2制备的戊型肝炎灭活疫苗免疫小鼠，进行小鼠体内效力测试，计算半数有效稀释倍数
一、材料
1、经本发明实施例1、实施例2制备的戊型肝炎灭活疫苗
2、氢氧化铝佐剂、生理盐水
3、实验动物
SPF级BALB/c小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
二、实验方法
用疫苗稀释液将灭活疫苗原液进行2倍系列稀释，共4个稀释度：原液、1：2、1：4和1：8。将SPF级BALB/c小鼠随机分成4组，每组12只。
第一组：6只注射150μL灭活疫苗原液+150μL生理盐水；6只尾静脉注射150μL灭活疫苗原液+150μL氢氧化铝佐剂。
第二组：6只尾静脉注射150μL 1：2稀释的灭活疫苗+生理盐水；6只尾静脉注射150μL 1：2稀释的灭活疫苗+氢氧化铝佐剂。
第三组：6只尾静脉注射150μL 1：4稀释的灭活疫苗+生理盐水；6只尾静脉注射150μL 1：4稀释的灭活疫苗+氢氧化铝佐剂。
第四组：6只尾静脉注射150μL 1：8稀释的灭活疫苗+生理盐水；6只尾静脉注射150μL 1：8稀释的灭活疫苗+氢氧化铝佐剂。
连续免疫3次，每次间隔28天。从第一次免疫后定期尾静脉采血，离心分离血清，-20℃保存备用。随后用ELISA法检测抗HEV抗体。
三、结果
将经本发明实施例1、实施例2制备的戊型肝炎灭活疫苗免疫小鼠，第二次加强免疫后100％受试动物血清转阳性，攻毒实验证实免疫后的动物对HEV具有100％的保护性(参见图7、表1、表2和表3)，并且抗体持续存在9个月仍具有较好的保护性。动物攻毒试验证实KM01株具有良好的免疫原性。
表1戊型肝炎病毒灭活疫苗第一次免疫小鼠效力实验结果
Figure GDA0002017238830000081
表2戊型肝炎病毒灭活疫苗第二次免疫小鼠效力实验结果
Figure GDA0002017238830000082
Figure GDA0002017238830000091
表3戊型肝炎病毒灭活疫苗第三次免疫小鼠效力实验结果
Figure GDA0002017238830000092
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Figure IDA0002017238870000011
Figure IDA0002017238870000021
Figure IDA0002017238870000031
Figure IDA0002017238870000041
Figure IDA0002017238870000051
Figure IDA0002017238870000061

Claims (4)

1.一种基因4型戊型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)在含有2-10％胎牛血清的DMEM培养基中培养Vero细胞，使细胞浓度达到106-107/mL；
(b)将戊型肝炎病毒接种到上述细胞浓度的细胞基质培养基中，35.5-37.5℃孵育2-3h，后补加含有2％胎牛血清的DMEM培养基，置35.5-37.5℃培养；所述的戊型肝炎病毒核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
(c)将步骤（b）培养后的细胞于-60℃至-80℃反复冻融3-5次，获得病毒-细胞培养悬液；
(d)经浓缩纯化、灭活后获得戊型肝炎灭活疫苗。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述DMEM培养基pH为6.8-7.4。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Vero细胞为自液氮容器内取出经1000rmp离心10min，弃去原保存液后得到的Vero细胞。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)的具体过程是如下：用10％PEG和0.4M的NaCl溶液浓缩，10000rpm离心60min，弃上清，收集沉淀；将收集的沉淀用10μmol/L PBS悬浮后，12000rmp离心30min，弃沉淀，收集上清；经1.5g/mL氯化铯38000rpm梯度离心5h，弃上清，收集沉淀；将收集的沉淀用10μmol/L PBS悬浮，之后柱层析进一步去除残余DNA和杂蛋白，得到的病毒用250μg/ml的甲醛37℃灭活15天，每毫升病毒加0.5mg氢氧化铝佐剂和5μg苯氧乙醇防腐剂，得到戊型肝炎灭活疫苗。
CN201910233381.0A 2019-03-26 2019-03-26 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法 Active CN109943536B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910233381.0A CN109943536B (zh) 2019-03-26 2019-03-26 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910233381.0A CN109943536B (zh) 2019-03-26 2019-03-26 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109943536A CN109943536A (zh) 2019-06-28
CN109943536B true CN109943536B (zh) 2021-09-14

Family

ID=67010971

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910233381.0A Active CN109943536B (zh) 2019-03-26 2019-03-26 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109943536B (zh)

Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004040398A2 (en) * 2002-05-06 2004-05-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of a computer to design a molecule
WO2005035556A3 (en) * 2003-05-06 2005-07-07 Iguazu Biosciences Corp Sars-coronavirus virus-like particles and methods of use
CN101007167A (zh) * 2007-02-07 2007-08-01 薛平 脑膜炎球菌多价联合疫苗
CN101280292A (zh) * 2008-05-13 2008-10-08 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株、其弱毒疫苗株及其应用
CN101507814A (zh) * 2009-03-16 2009-08-19 薛平 多组分抗原无细胞百日咳疫苗及其制备方法
CN101525597A (zh) * 2008-03-08 2009-09-09 江苏延申生物科技股份有限公司 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法
CN101861165A (zh) * 2007-10-12 2010-10-13 麻省理工学院 疫苗纳米技术
CN102066415A (zh) * 2007-10-29 2011-05-18 弗吉尼亚科技知识产权有限公司 猪DC-SIGN、ICAM-3和LSECtin及其用途
CN102574897A (zh) * 2009-07-07 2012-07-11 动物健康研究院 嵌合蛋白
CN102839159A (zh) * 2012-09-07 2012-12-26 江苏康淮生物科技有限公司 一种CoxA16病毒株和人用CoxA16灭活疫苗
CN103442730A (zh) * 2011-01-05 2013-12-11 巴拉特生物技术国际有限公司 组合七价疫苗
CN103642761A (zh) * 2013-12-10 2014-03-19 北京交通大学 一种呼吸道合胞病毒样颗粒及其制备方法和应用
CN104388399A (zh) * 2014-08-18 2015-03-04 张澍 一种能诱导猪体较早产生干扰素和中和抗体且具有广谱免疫原性的prrsv减毒株及其疫苗
CN104862287A (zh) * 2015-05-21 2015-08-26 中国医学科学院医学生物学研究所 一种基因工程重组甲戊肝炎联合疫苗的制备方法
CN105062979A (zh) * 2015-08-21 2015-11-18 昆明理工大学 一种培养戊型肝炎病毒的方法
WO2016061549A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Sirnaomics, Inc. Compositions comprising small interfering rna molecules for prevention and treatment of ebola virus disease
CN105671004A (zh) * 2016-03-23 2016-06-15 昆明理工大学 一种培养戊型肝炎病毒的方法
KR101713026B1 (ko) * 2015-09-23 2017-03-07 강원대학교산학협력단 크리신 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 콕사키 바이러스 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물
EP3184119A1 (en) * 2015-12-23 2017-06-28 Themis Bioscience GmbH Chromatography based purification strategies for measles scaffold based viruses
CN106929482A (zh) * 2015-12-31 2017-07-07 北京大学 定点突变的流感病毒、其活疫苗及其制备方法和应用
CN108601825A (zh) * 2015-07-16 2018-09-28 巴拉特生物技术国际有限公司 疫苗组合物
CN109641955A (zh) * 2016-03-22 2019-04-16 国家医疗保健研究所 人源化抗claudin-1抗体及其用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101009321B1 (ko) * 2008-03-06 2011-01-18 (주)바이오니아 미지시료 내 감염성 미생물을 신속하게 검출하는 방법
GB201011502D0 (en) * 2010-07-08 2010-08-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
CN102370977B (zh) * 2010-08-06 2014-02-26 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 一种新型疫苗佐剂及应用
CN102210860B (zh) * 2011-05-31 2012-11-21 昆明理工大学 一种结核分枝杆菌tb10．4-f1融合蛋白疫苗及制备方法
CN106148289A (zh) * 2016-08-10 2016-11-23 昆明理工大学 一种纯化戊型肝炎病毒的方法
CN110927374A (zh) * 2019-12-02 2020-03-27 昆明理工大学 检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条及其制备方法
CN110878378A (zh) * 2019-12-02 2020-03-13 昆明理工大学 用于检测体液中戊型肝炎病毒的引物组合及其应用

Patent Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004040398A2 (en) * 2002-05-06 2004-05-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of a computer to design a molecule
WO2005035556A3 (en) * 2003-05-06 2005-07-07 Iguazu Biosciences Corp Sars-coronavirus virus-like particles and methods of use
CN101007167A (zh) * 2007-02-07 2007-08-01 薛平 脑膜炎球菌多价联合疫苗
CN101861165A (zh) * 2007-10-12 2010-10-13 麻省理工学院 疫苗纳米技术
CN102066415A (zh) * 2007-10-29 2011-05-18 弗吉尼亚科技知识产权有限公司 猪DC-SIGN、ICAM-3和LSECtin及其用途
CN101525597A (zh) * 2008-03-08 2009-09-09 江苏延申生物科技股份有限公司 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法
CN101280292A (zh) * 2008-05-13 2008-10-08 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株、其弱毒疫苗株及其应用
CN101507814A (zh) * 2009-03-16 2009-08-19 薛平 多组分抗原无细胞百日咳疫苗及其制备方法
CN102574897A (zh) * 2009-07-07 2012-07-11 动物健康研究院 嵌合蛋白
CN103442730A (zh) * 2011-01-05 2013-12-11 巴拉特生物技术国际有限公司 组合七价疫苗
CN102839159A (zh) * 2012-09-07 2012-12-26 江苏康淮生物科技有限公司 一种CoxA16病毒株和人用CoxA16灭活疫苗
CN103642761A (zh) * 2013-12-10 2014-03-19 北京交通大学 一种呼吸道合胞病毒样颗粒及其制备方法和应用
CN104388399A (zh) * 2014-08-18 2015-03-04 张澍 一种能诱导猪体较早产生干扰素和中和抗体且具有广谱免疫原性的prrsv减毒株及其疫苗
WO2016061549A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Sirnaomics, Inc. Compositions comprising small interfering rna molecules for prevention and treatment of ebola virus disease
CN104862287A (zh) * 2015-05-21 2015-08-26 中国医学科学院医学生物学研究所 一种基因工程重组甲戊肝炎联合疫苗的制备方法
CN108601825A (zh) * 2015-07-16 2018-09-28 巴拉特生物技术国际有限公司 疫苗组合物
CN105062979A (zh) * 2015-08-21 2015-11-18 昆明理工大学 一种培养戊型肝炎病毒的方法
KR101713026B1 (ko) * 2015-09-23 2017-03-07 강원대학교산학협력단 크리신 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 콕사키 바이러스 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물
EP3184119A1 (en) * 2015-12-23 2017-06-28 Themis Bioscience GmbH Chromatography based purification strategies for measles scaffold based viruses
CN106929482A (zh) * 2015-12-31 2017-07-07 北京大学 定点突变的流感病毒、其活疫苗及其制备方法和应用
CN109641955A (zh) * 2016-03-22 2019-04-16 国家医疗保健研究所 人源化抗claudin-1抗体及其用途
CN105671004A (zh) * 2016-03-23 2016-06-15 昆明理工大学 一种培养戊型肝炎病毒的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Complete Genome Sequence of Swine Hepatitis E Virus Prevalent in Southwest China";Wenhai Yu等;《Genome Announcements》;20140413;第1-2页 *
"Swine hepatitis E virus isolate KM01, complete genome";Yu,W.等;《Genbank Database》;20140324;Accession NO：KJ155502.1 *
"戊型肝炎病毒之研究进展";曲立春等;《中国农学通报》;20060831;第22卷(第8期);第26-29页 *
"戊型肝炎病毒在人胚肺二倍体细胞KMB17等传代细胞中的繁殖";乐耕耘等;《中国医学科学院学报》;20011231;第23卷(第6期);第591页左栏第4段-右栏第4段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109943536A (zh) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100968141B1 (ko) 세포 배양물에서 바이러스의 증식 방법
CN104099301B (zh) 柯萨奇病毒a16型病毒株、用途、疫苗及其制备方法
KR20180097558A (ko) 지카 바이러스 백신
JP5095685B2 (ja) 日本脳炎ウイルス群感染症に対する不活化ワクチンのための増強免疫原およびその製造方法
JP2009297036A (ja) 高張塩溶液を用いた培養細胞からのウイルス回収法
CN101695570A (zh) 一种手足口病单、双价灭活疫苗及其制备方法
CN110170048B (zh) 一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法
CN109536460A (zh) 一种cv-a10病毒毒种及其人用灭活疫苗
WO2023246621A1 (zh) 柯萨奇病毒a10型毒株及其应用
WO2023045426A1 (zh) 柯萨奇病毒a16型毒株及其免疫原性组合物和应用
CN110452889B (zh) 一种表达bvdv-e0的重组牛肠道病毒的构建方法与初步应用
CN109609467A (zh) 一种cv-a6病毒毒种及其人用灭活疫苗
CN102671192A (zh) 一种人二倍体细胞狂犬病疫苗及其制备方法
CN111073862B (zh) 一种牛病毒性腹泻2型减毒毒株及应用
CN109943536B (zh) 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法
CN104350066A (zh) 施马伦贝格病毒(sbv)疫苗、其制备方法及用途
CN103160475B (zh) 一种肠道病毒71型病毒株及其用途、疫苗和制备方法
CN102671194B (zh) 一种人用预防狂犬病和破伤风的疫苗
Buckley et al. Production of hemagglutinin by dengue virus in HeLa cells
CN112094821B (zh) 一种o型口蹄疫病毒株及其应用
CN117070476B (zh) 一株牛疱疹病毒4型毒株及其在灭活疫苗制备中的应用
KR102623114B1 (ko) 구제역 바이러스 백신 항원의 순도 증가 방법
CN116286679B (zh) 一株经分离得到的猪流行性腹泻病毒变异株及其应用
RU2708326C1 (ru) Штамм О N2344/Монголия/2017 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О
RU2423520C1 (ru) Штамм вируса - возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом для изготовления вакцинных препаратов (варианты)

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant