CN112094821B - 一种o型口蹄疫病毒株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒株及其应用。本发明首先分离获得了一株病毒滴度高、抗原产能高，生产性能好的O型口蹄疫病毒O/17002株，其次通过灭活所述O型口蹄疫病毒O/17002株制备得到灭活疫苗，用所述的灭活疫苗免疫动物后，通过血清交叉中和试验筛选，意外地发现所述毒株对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用，通过交叉攻毒试验也表明所述毒株具有抗原谱广的特性，是优良的疫苗候选株，具有广阔的应用前景。

Description

一种O型口蹄疫病毒株及其应用
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒株及其应用。
背景技术
口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV)属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，该病毒主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物，具有复制快、高度接触感染且致病性强等特征，尤其在猪群中能引起大范围流行。口蹄疫爆发会使动物及其产品贸易受到限制，造成重大的经济损失和社会影响，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必报病，我国农业部也将其划定为一类动物传染病。
FMDV有O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型七个血清型，各型之间无交叉保护。我国口蹄疫流行历史久远，当前主要流行O型和A型。其中O型流行情况复杂，危害最为严重。FMDV易变异，是其自然属性，也是造成口蹄疫长期流行并难以控制和净化的主要原因。接种疫苗是防控口蹄疫的主要手段，但因境外口蹄疫病毒不断传入，我国免疫防控面临严重挑战，为解决这一难题，依赖于对国内流行毒株的流行特点，变异特点进行系统研究，以筛选、分离、驯化出更合适的优势疫苗候选株，以使口蹄疫防控更具有针对性和有效性。
目前我国流行的O型口蹄疫毒株主要有三个拓扑型的四个毒株，分别是SEA拓扑型的M ya-98毒株、ME-SA拓扑型的PanAsia毒株、Ind-2001毒株和CATHAY拓扑型毒株。鉴于目前国内O型口蹄疫流行的复杂现状，势必要求开发、更新优良的疫苗候选株，能够同时预防多个毒株，疫苗种毒的抗原谱要足够宽，能对当前流行毒株都有效保护。
本发明首先分离获得了一株病毒滴度高、抗原产能高，生产性能好的O型口蹄疫病毒O/17002株；其次通过灭活所述O型口蹄疫病毒O/17002株制备得到灭活疫苗；用所述的灭活疫苗免疫动物后，通过血清交叉中和试验筛选，意外地发现所述毒株对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用，通过交叉攻毒试验也表明所述毒株具有抗原谱广的特性，是优良的疫苗候选株，具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明筛选获得了一株病毒滴度高、抗原产能高，生产性能好的O型口蹄疫病毒O/17002株，所述O型口蹄疫病毒O/17002株鉴定为O型SEA拓扑型Mya98毒株；所述的O型口蹄疫病毒O/17002株分离于发病猪的水疱皮及水疱液，经研磨接种乳鼠后，适应BHK-21细胞，传代稳定后，病变时间短，病毒滴度高；悬浮BHK-21细胞驯化培养，其抗原含量可达8.0μg/mL以上，生产性能好；用O/17002株制备灭活疫苗免疫猪后，通过血清交叉中和试验发现所述毒株对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用；通过交叉攻毒试验也表明所述毒株具有抗原谱广的特性，是优良的疫苗候选株，具有广阔的应用前景。
具体发明内容为：
一种O型口蹄疫病毒O/17002株，所述O型口蹄疫病毒O/17002株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：V202060。本申请中所述的口蹄疫病毒O/17002株是从采集的发病猪水泡皮、水泡液等发病组织中分离，并通过细胞传代适应和驯化，筛选得到的一种口蹄疫病毒株。
一种O型口蹄疫病毒O/17002株作为口蹄疫疫苗候选株的应用。
一种O型口蹄疫病毒O/17002株在制备用于预防和/或控制动物口蹄疫病毒引起的相关疾病的药物中的用途。
一种O型口蹄疫病毒O/17002株在制备口蹄疫疫苗中的应用。
优选地，所述口蹄疫疫苗为灭活疫苗。
一种口蹄疫疫苗，所述口蹄疫疫苗包括O型口蹄疫病毒O/17002株。在本申请中，所述的口蹄疫疫苗能够激发动物对口蹄疫病毒的免疫活性。
优选地，所述口蹄疫疫苗为灭活疫苗。
优选地，所述灭活疫苗包括灭活后的O型口蹄疫病毒O/17002株。在本申请中，所述“灭活后的O型口蹄疫病毒O/17002株”是指不具备感染性、但是仍然保持其免疫原性，可以引起动物免疫反应的口蹄疫病毒。灭活的口蹄疫病毒可以通过本领域熟知的方法制备，例如，可以通过使用二乙烯亚胺来灭活口蹄疫病毒。
优选地，所述口蹄疫苗还包含药学上可接受的佐剂或载体。本申请所述的口蹄疫病毒疫苗为油包水剂型、水包油包水剂型、水包油剂型或冷冻干燥形式。
优选地，所述佐剂为化学类免疫佐剂、微生物类免疫佐剂、植物类免疫佐剂、生化类免疫佐剂中的一种或几种。本申请中，所述佐剂包括(1)矿物油佐剂：ISA 206、ISA 201；(2)核酸佐剂：免疫刺激序列(ISS)，例如具有一个或更多非-甲基化的CpG单元的寡脱氧核糖核苷酸序列；(3)水包油乳剂，例如SPT乳剂、MF59乳剂等；(4)含有季铵盐的阳离子脂质，例如DDA；(5)细胞因子；(6)铝佐剂：氢氧化铝或磷酸铝；(7)植物性佐剂：皂苷或(8)其任何组合或混合物。
本发明的有益效果是：
(1)本发明发现了一株O型口蹄疫病毒O/17002株，所述毒株O/17002株经驯化后，病变时间短，传代稳定，病毒滴度高，生产性能好。
(2)O型口蹄疫病毒O/17002株经悬浮BHK-21细胞培养驯化后，抗原产能高，其抗原含量可达8.0μg/mL以上，比流行毒O/BY/CHA/2010在悬浮细胞上的产量提高约4倍以上，节约了生产成本。
(3)制备O型口蹄疫病毒O/17002株的灭活疫苗，免疫动物，通过血清交叉中和试验，发现所述灭活疫苗对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用；且通过交叉攻毒试验也表明，所述O型口蹄疫病毒O/17002株具有抗原谱广的特性，对流行毒株能提供完全保护，是优良的疫苗候选株，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1FMDV/O/17002株含VP1基因片段的电泳图，其中1为扩增片段，M为DNA marker。
图2FMDV/O/17002株感染BHK-21细胞后出现的细胞病变(CPE)，其中，A为正常对照BHK-21细胞，B为O/17002株感染BHK-21细胞出现的CPE。
具体实施方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
本发明中相关术语的说明及解释：
以下实施例中所述的实验获得生物安全许可和口蹄疫实验室活动许可：
中国农业科学院兰州兽医研究所根据生物安全3级实验室(BSL-3)和口蹄疫相关生物安全的相关要求，经兰州兽医研究所生物安全委员会、实验动物伦理委员会、中国农业科学院生物安全委员会逐级上报，获得农业部关于开展高致病性FMDV病原及动物研究许可，并已在农业农村部备案，符合国家生物安全等级的要求。
下列实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规条件，如《精编分子生物学实验指南》(F.M.奥斯伯，R.E.金斯顿，J.G.赛德曼等主编，马学军，舒跃龙译，北京：科学出版社，2004)中所述的方法进行。
实施例1O型口蹄疫病毒O/17002株的分离及鉴定
1.1病毒分离
将采集的发病水泡皮、水泡液等发病组织制成悬液经青霉素、链霉素处理后，颈背部皮下接种于3日龄乳鼠，接种量为0.2mL/只，接种后连续观察72h，将出现典型口蹄疫临床症状后濒死和发病死亡的乳鼠在无菌条件下剖检，取其胴体(记为MF1)，加灭菌石英砂研磨，4℃过夜浸毒，4000rpm离心10min，取上清液继续接种乳鼠，进行传代，将出现死亡和发病的乳鼠胴体(记为MF2)继续传代，获得O/17002乳鼠组织毒，同时进行病毒鉴定。提取RNA，用RT-PCR及QRT-PCR等方法鉴定样品中FMDV的纯净性。
1.2病毒鉴定
血清型鉴定：具体操作方法按照《口蹄疫诊断技术标准》(GB18935-2003)和《口蹄疫防治技术规范》进行；将原始病料和乳鼠组织毒经抗原定型ELISA、反向间接血凝实验鉴定，结果均为口蹄疫病毒O型抗原阳性。
基因型鉴定：根据口蹄疫病毒VP1基因，设计合成一对通用扩增引物：
VP1-F：(5'-ATAACACACGGGAAAGCC-3'，SEQ ID NO：2所示)；
VP1-R：(5'-TCAACCAGATGCAGGAGGACATGTC-3'，SEQ ID NO：3所示)。
用RNAeasy Mini Kit(Qiagen)提取乳鼠组织毒MF2的总RNA，用引物oligNot I(5’-tttt ctagagcggccgct38-3’)反转录合成第一链cDNA，用具有极强延伸能力的PrimeScript Reverse Tr anscriptase(TaKaRa公司)反转录酶，按照产品说明书配制20μL反应体系，于42℃反应1h备用，以反转录的第一链cDNA为模板，用引物VP1-F和VP1-R与制备好的cDNA核酸混合，以扩增获得该毒株的VP1基因。扩增用兼具高保真性和高扩增效率的
Figure BDA0002707471030000041
HS DNA聚合酶(TaKaRa公司)，按照产品说明书配制50μL反应体系，扩增条件为：94℃3min，94℃30s，57℃30s，72℃50s，35个循环后，72℃10min，纯化回收PCR扩增产物并送测序，扩增产物的电泳结果如图1所示，测序结果显示是SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
将VP1序列进行分析发现分离得到的病毒株为O型SEA拓扑型Mya98毒株，命名为O型口蹄疫病毒O/17002株，缩写为FMDV/O/17002株。
申请人已根据《布达佩斯条约》的规定，将FMDV/O/17002株保藏于中国典型培养物保藏中心。FMDV/O/17002株的具体保藏信息如下：微生物保藏号：CCTCC NO:V202060；分类命名：口蹄疫病毒O/17002株(FMDV/O/17002株)；保藏地址：中国武汉，武汉大学；保藏时间：2020年9月17日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心。
实施例2O型口蹄疫病毒O/17002株的分离培养与毒价测定
将实施例1中获得O/17002乳鼠组织传代毒研磨，反复冻融后，4℃，5000rpm离心10min，收集上清，经0.22μm滤器过滤，按病毒培养液的10％含量接入形成单层的口蹄疫病毒易感细胞BHK-21细胞或IBRS-2细胞中，37℃孵育1h，加MEM培养基，于37℃培养，期间观察细胞形态，根据细胞病变(CPE)情况收获病毒液，经3次反复冻融后，继续连续传代培养。结果显示，接种O/17002毒株后细胞可出现典型的变圆，聚集成葡萄状，最终崩解成碎片的病变现象。如图2所示，其中，A为正常对照BHK-21细胞，B为O/17002株感染BHK-21细胞；结果表明，接种O/17002毒株可使细胞出现典型的病变现象。
将O/17002株在BHK-21细胞上连续传代，结果显示病变时间可缩短至11h以内，且传代稳定。按照常规方法消化BHK-21细胞，加入含10％胎牛血清的MEM完全培养基，将细胞铺于12孔板中，于37℃含有5％CO2的培养箱中培养，待细胞单层长到80％-90％时备用。用MEM以10倍倍比稀释病毒液，将各稀释度(10-6.0-10-9.0)的病毒液分别加入细胞板中，每个稀释度4孔，放入37℃含有5％CO2的培养箱中进行培养，观察3天，用Reed-Muench氏法测定病毒对B HK-21细胞的半数感染量(TCID50)。按照该法测定O/17002株在BHK-21细胞上的病毒滴度，其TCID50为10-8.0/mL。
Reed-Muench计算方法是本领域的已有技术，现有文献“Reed,L.J.and Muench,H.(1938)."A Simple Method of Estimating Fifty Percent Endpoints".The AmericanJournal of H ygiene 27:493–497”中对此已经进行了详细地描述，该文献在此通过引用方式并入本申请用作参考。
实施例3O型口蹄疫病毒O/17002株在悬浮BHK-21细胞上的驯化培养
用透气三角摇瓶(优选Corning 125ml)接种悬浮BHK-21细胞初始密度为0.5×106cell/mL，在温度为37℃、pH为7.0时，摇床转速分别设定为100rpm、CO2浓度为5％，培养摇床为阿道夫科耐ISF1-X型箱式温控摇床，接种O型口蹄疫病毒O/17002株适应驯化。
按常规悬浮BHK-21细胞培养方法将悬浮细胞逐级扩大至10L机械搅拌式动物细胞培养反应器(默克密理博)中，细胞培养阶段，反应器pH值设定7.0-7.1，反应器溶氧40％，搅拌转速40rpm，温度37℃，细胞培养至24小时后不定时进行台盼蓝染色细胞计数及活力检查。细胞接毒阶段，反应器pH值调至7.4-7.6，搅拌转速按照实际细胞数调整至50-60rpm左右，按细胞培养液体积的0.1-0.5％的比例，将已知抗原含量的O型口蹄疫种毒液接种到反应器中，从接毒后定时在无菌条件下取样，进行台盼蓝染色细胞计数及活力检查，于-40℃保存待用，当细胞活力≤15％，且显微镜下观察病变至90％以上后，收获病毒液，统一测定口蹄疫病毒抗原含量，结果如表1所示，O/17002株的有效抗原含量146S可达8.0μg/mL以上，而对照组O/BY/CHA/2010株的有效抗原含量仅为2.0μg/mL左右。
表1不同毒株悬浮BHK-21细胞培养后抗原含量测定
Figure BDA0002707471030000051
实施例4疫苗制备和免疫效果评价
4.1.疫苗制备
将由悬浮BHK-21细胞制备的O/17002株灭活，用3mmol/l的二乙烯亚胺(Binaryethyleni mine,BEI)(Sigma公司)30℃灭活30h，加入阻断剂硫代硫酸钠溶液，4℃过夜，保存备用。经过安检的灭活抗原与ISA206佐剂(法国SEPPIC)以1：1比例混合制备疫苗。具体按照《中华人民共和国药典》中兽用生物制品的口蹄疫灭活疫苗规程制备。
4.2.疫苗免疫
实验用猪购自非疫区，并经国家口蹄疫参考实验室生产的FMD液相阻断ELISA(LPB-EL ISA)检测O型抗体均＜1：4。FMD非结构蛋白3ABC-ELISA抗体检测为阴性。
将得到的安检合格的O型口蹄疫病毒O/17002疫苗分别21头猪，同时设6头非免疫对照，测定其免疫保护率。攻毒方法及结果判定方法均按照《Manual of diagnostic testsand v accines for terrestrial animals》(2009年版，世界动物卫生组织(OIE))中所述。
4.3.血清交叉中和试验
将上述免疫O/17002后28d的阳性血清分别与口蹄疫国家参考实验室保存的O/Mya98、O/PanAsia、O/Ind-2001和O/Cathay 4种主要流行变异毒株进行病毒中和试验，具体毒株包括以下10个：BY/2010(Mya98)、13152(Mya98)、14064(Mya98)、16045(Mya98)、17016(M ya98)、17002(Mya98)、15126(PanAsia)、17009(Ind-2001)、17042(牛)(Ind-2001)、18074(Cathay)，根据r值(r≤1)判断交叉中和效果，其中r值越高，交叉中和作用越好。实验结果如表2所示，通过血清交叉中和试验发现，O型口蹄疫病毒株O/17002对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用。
表2 O/17002株免疫血清交叉中和试验结果
Figure BDA0002707471030000061
通过血清交叉中和试验筛选，发现所述毒株对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用。
4.4.免疫交叉攻毒保护试验
口蹄疫病毒株O/17002免疫猪28天后，分别用Mya-98、PanAsia、Cathay的流行代表毒O/BY/CHA/2010、O/0834、O/0718进行攻毒，每组7头，攻毒剂量为1000倍SID50，每组设2头对照，攻毒方式为肌肉注射。连续观察10天，根据舌面、齿龈、蹄出现水泡等口蹄疫症状判定动物发病情况，动物发病即判为不保护。结果表明，用O/17002株制备灭活疫苗免疫猪后，免疫动物均没有临床症状，对Mya-98、PanAsia、Cathay口蹄疫流行毒的攻击可提供完全保护。
表3 O/17002疫苗免疫猪攻毒后临床症状和保护情况
Figure BDA0002707471030000071
注：临床症状评分，0表示无症状，1-5表示临床症状严重程度。
以上所述的实施例仅表述了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可做出其它改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所
<120> 一种O型口蹄疫病毒株及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 639
<212> DNA
<213> 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus)
<400> 1
accacttcga caggcgagtc cgctgacccc gtgactgcca ccgttgagaa ctacggcggc 60
gagacacaga tccagaggcg ccaccacaca gacgtctcat ttatactgga cagatttgtg 120
aaagtcacac caaaaggccc aataaatgta ctggacctga tgcaggcccc cccccacact 180
ctagtagggg cgctcctccg cgctgccact tactatttcg ctgacctaga ggtggcagtg 240
aaacacgagg gagaccttac ctgggtgcca aacggcgcgc ctgaagcagc cttggacaac 300
accaccaacc caacggcgta ccataaggcg ccgcttaccc ggctcgcatt gccctacacg 360
gcaccacacc gtgttttggc caccgtttac aacgggaact gcaaatacac cgggggccca 420
ctgcccaacg tgagaggcga tctccaagtg ttggcgccga aggcggcgag gccgctgcct 480
acttctttca actacggtgc catcaaagcc actcgggtga cagaactgct gtaccgcatg 540
aagagggccg agacgtactg tcctcggccc ctattgactg tccacccgag tgaggctaga 600
cacaaacaga aaatagtggc acctgtgaaa cagtccttg 639
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ataacacacg ggaaagcc 18
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcaaccagat gcaggaggac atgtc 25

Claims (8)

1.一种O型口蹄疫病毒O/17002株，所述O型口蹄疫病毒O/17002株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202060。
2.如权利要求1所述的O型口蹄疫病毒O/17002株作为口蹄疫疫苗候选株的应用。
3.如权利要求1所述的O型口蹄疫病毒O/17002株在制备用于预防和/或控制动物口蹄疫病毒引起的相关疾病的药物中的应用。
4.如权利要求1所述的O型口蹄疫病毒O/17002株在制备口蹄疫疫苗中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述口蹄疫疫苗为灭活疫苗。
6.一种口蹄疫疫苗，其特征在于，所述口蹄疫疫苗包含灭活后的如权利要求1所述的O型口蹄疫病毒O/17002株。
7.根据权利要求6所述的口蹄疫疫苗，其特征在于，所述口蹄疫疫苗还包含药学上可接受的佐剂或载体。
8.如权利要求7所述的口蹄疫疫苗，其特征在于，所述佐剂为化学类免疫佐剂、微生物类免疫佐剂、生化类免疫佐剂中的一种或几种。
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CN109536461B (zh) * 2018-11-23 2020-07-03 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种o型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用
RU2699671C1 (ru) * 2019-05-31 2019-09-09 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная

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