EA039095B1 - Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния - Google Patents
Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния Download PDFInfo
- Publication number
- EA039095B1 EA039095B1 EA201892251A EA201892251A EA039095B1 EA 039095 B1 EA039095 B1 EA 039095B1 EA 201892251 A EA201892251 A EA 201892251A EA 201892251 A EA201892251 A EA 201892251A EA 039095 B1 EA039095 B1 EA 039095B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- rsv
- protein
- seq
- fusion
- proteins
- Prior art date
Links
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 84
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 66
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 136
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 abstract 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 41
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 29
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 25
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 102200142660 rs7565275 Human genes 0.000 description 17
- 102220082314 rs863224177 Human genes 0.000 description 17
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 15
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 14
- 102220069695 rs794727722 Human genes 0.000 description 14
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 102220320732 rs1554306350 Human genes 0.000 description 7
- 102200083206 rs80338798 Human genes 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 5
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 4
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108700002232 Immediate-Early Genes Proteins 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 241000144282 Sigmodon Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 238000000959 Cochran–Mantel–Haenszel (CMH) test Methods 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102100028712 Cytosolic purine 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940124679 RSV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 241000144290 Sigmodon hispidus Species 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTGGOTYRTOXKMQ-UHFFFAOYSA-K aluminum;potassium;phosphate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O NTGGOTYRTOXKMQ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000005860 defense response to virus Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- -1 enhancer(s) Chemical class 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
- C07K14/135—Respiratory syncytial virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1027—Paramyxoviridae, e.g. respiratory syncytial virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
- C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение предусматривает стабильные F-белки респираторного синцитиального вируса (RSV) до слияния (или их фрагменты), композиции, содержащие указанные белки, и пути их применения для предупреждения и/или лечения инфекции, вызванной RSV.
Description
(57) Изобретение предусматривает стабильные F-белки респираторного синцитиального вируса (RSV) до слияния (или их фрагменты), композиции, содержащие указанные белки, и пути их применения для предупреждения и/или лечения инфекции, вызванной RSV
039095 Bl
Настоящее изобретение относится к области медицины. Настоящее изобретение относится, в частности, к рекомбинантным F-белкам RSV до слияния и путям их применения, например, в вакцинах.
Предпосылки к созданию изобретения
Респираторно-синцитиальный вирус (RSV) является высококонтагиозным патогеном, вызывающим инфекции дыхательных путей у детей, который, как полагают, является причиной ~200000 летальных исходов среди детей ежегодно. У детей младше 2 лет на инфекции, вызванные RSV, приходится примерно 50% случаев госпитализации вследствие инфекций дыхательных путей, причем наибольшее количество случаев госпитализации имеет место в возрасте 2-4 месяца. Сообщалось, что почти все дети перенесут инфекцию, вызванную RSV, к возрасту двух лет, при этом повторное инфицирование на протяжении жизни связывают с пониженным врожденным иммунитетом. У пожилых людей тяжесть заболевания, вызванного RSV, является схожей с тяжестью заболеваний в результате инфекций, вызванных вирусом непандемического гриппа А.
Для инфицирования клетки-хозяина RSV, подобно другим оболочечным вирусам, таким как вирус гриппа и HIV, требуется слияние вирусной мембраны с мембраной клетки-хозяина. Что касается RSV, то консервативный белок слияния (F-белок RSV) сливает вирусную мембрану и клеточную мембрану клетки-хозяина. В современных моделях на основе исследований парамиксовирусов F-белок RSV изначально уложен в конформацию до слияния. Метастабильная структура была выяснена лишь недавно в комплексе со стабилизирующим Fab-фрагментом нейтрализующего антитела (McLellan et al., Science 340(6136): 1113-7, 2013). Во время входа в клетку конформация до слияния претерпевает рефолдинг и конформационные изменения по сравнению с ее конформацией после слияния (McLellan, J. Virol. 85(15): 7788-96, 2010; Swanson, PNAS 108 (23): 9619-24, 2011). Таким образом, F-белок RSV представляет собой метастабильный белок, который управляет слиянием мембран путем сочетания необратимого рефолдинга белка с соприкосновением мембран с помощью исходного фолдинга в метастабильную форму (конформация до слияния), которая в дальнейшем претерпевает дискретные/стадийные конформационные изменения до конформации с более низкой энергией (конформация после слияния). Эти наблюдения позволяют предположить, что F-белок RSV до слияния и после слияния отличается в антигенном отношении (Calder, L.J. et al. Virology 271, 122-131 (2000)). Очевидно, исходя из электронной микроскопии RSV-F, что существуют значительные структурные различия между тримером F до слияния и после слияния, которые недавно были подтверждены с помощью кристаллографии (McLellan J.S. et al. Science 340(6136): 1113-7 (2013) и McLellan J.S. et al. Science 342(6158): 592-8 (2013)), и было показано, что большинство нейтрализующих антител в сыворотке крови RSV-положительных индивидуумов связывают с F до слияния (Ngwuta et al., Science Translational Medicine, 7(309): 309ra162, 1-9).
Вакцины против инфекции, вызванной RSV, в настоящее время не существует, хотя она и является очень востребованной. Кандидаты вакцин на основе F-белка RSV оказались неэффективными вследствие проблем, например, связанных со стабильностью, чистотой, воспроизводимостью и эффективностью. Как указывалось выше, кристаллические структуры выявили значительное конформационное изменение между состояниями до слияния и после слияния. Величина перестройки предполагала, что только часть антител, направленных на конформацию RSV-F после слияния, будет способна к перекрестной реакции с нативной конформацией шиловидного отростка до слияния на поверхности вируса. Соответственно, усилия для получения вакцины против RSV сосредоточивались на разработке вакцин, которые содержат формы F-белка RSV до слияния (см., например, WO 20101149745, wO 2010/1149743, WO 2009/1079796, WO 2012/158613). Однако эти усилия не дали стабильных F-белков RSV до слияния, которые можно было бы использовать в качестве кандидатов для тестирования у людей.
Следовательно, сохраняется потребность в эффективных вакцинах и способах вакцинации против RSV, в частности предусматривающих F-белки RSV в конформации до слияния. Целями настоящего изобретения являются получение таких вакцин и способы вакцинации против RSV безопасным и эффективным способом.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение предусматривает стабильные рекомбинантные белки слияния (F) респираторного синцитиального вируса (RSV) до слияния, т.е. рекомбинантные F-белки RSV в растворимой форме (т.е. не связанные с мембраной), которые являются стабилизированными в конформации до слияния, где F-белок RSV содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 или их фрагментов.
В некоторых вариантах осуществления F-белки RSV или их фрагменты содержат по меньшей мере один эпитоп, который является специфическим для F-белка в конформации до слияния, где по меньшей мере один эпитоп распознается моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 4, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 5, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 7, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID NO: 8 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID NO: 9, и/или моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 10, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 11, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 12 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 13, CDR2-область легкой цепи с SEQ
- 1 039095
ID NO: 14 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID NO: 15.
В некоторых вариантах осуществления F-белки RSV являются тримерными.
Настоящее изобретение также предусматривает молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие Fбелки RSV до слияния, или их фрагменты в соответствии с настоящим изобретением и векторы, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот.
Настоящее изобретение также относится к композициям, предпочтительно иммуногенным композициям, содержащим указанный F-белок RSV до слияния (или его фрагменты), молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный F-белок RSV до слияния, а также к их применению в индуцировании иммунного ответа к F-белку RSV, в частности их применению в качестве вакцины. Настоящее изобретение также относится к способам индуцирования у субъекта иммунного ответа против респираторного синцитиального вируса (RSV), предусматривающим введение субъекту эффективного количества Fбелка RSV до слияния, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный F-белок RSV, и/или вектор, содержащий молекулу указанной нуклеиновой кислоты. Предпочтительно индуцированный иммунный ответ характеризуется выработкой нейтрализующих антител к RSV и/или защитным иммунитетом против RSV. В конкретных аспектах настоящее изобретение относится к способу индуцирования у субъекта выработки нейтрализующих антител к F-белку респираторного синцитиального вируса (RSV), предусматривающему введение субъекту эффективного количества иммуногенной композиции, содержащей F-белок RSV до слияния, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный F-белок RSV, и/или вектор, содержащий молекулу указанной нуклеиновой кислоты.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1. Схематическое представление вариантов F-белка RSV. SCDM - одноцепочечный двойной мутант, SCTM - одноцепочечный тройной мутант, PRQM - преобразованный четверной мутант, и PRPM преобразованный пента-мутант. Секретируемые белки представлены без сигнального пептида и фрагмента р27. Показаны домены F1 и F2, а также пептид слияния (FP), домен тримеризации фибритина (фолдон) и линкер в одноцепочечных белках между F2 и F1 (GSGSG). Три стабилизирующих мутации (N67I, S215P и D386N) (черные ромбы). Две мутации для улучшения антигенного соответствия циркулирующим штаммам (К66Е и I76V) (серые ромбы). Положение остатка пронумеровано, как и полноразмерный белок дикого типа, в том числе сигнальный пептид.
Фиг. 2. Уровни экспрессии белка и стабильность до слияния преобразованных вариантов PR-A2 Fбелка RSV со множественными аминокислотными заменами. Уровни экспрессии белка в супернатантах клеточной культуры тестировали через 72 ч после трансфекции с помощью способа количественного октета (Q-Octet) с использованием CR9501 и CR9503 (полосы слева) и фракцией F-белка RSV, связывающегося со специфическим антителом CR9501 до слияния, в день сбора и после хранения при 4°C в течение указанного периода времени (полосы справа). Полосы представляют среднее значение от 2-4 измерений, линии представляют диапазон значений.
Фиг. 3. Значения температуры плавления (Tm) очищенных F-белков RSV. Каждое измерение представлено точкой.
Фиг. 4. Замены аминокислот K66E и I76V не оказывали эффекта в отношении уровней экспрессии F-белка и стабильности до слияния. Уровни экспрессии белка в супернатантах клеточной культуры тестировали через 96 ч после трансфекции с помощью способа Q-Octet с использованием CR9501 и CR9503 (полосы слева) и фракцией F-белка RSV, связывающегося со специфическим антителом CR9501 до слияния, в день сбора и после хранения при 4°C в течение указанного периода времени (полосы справа). Полосы представляют среднее значение от 2 измерений, линии представляют диапазон значений.
Фиг. 5. Стабильность до слияния вариантов F-белка в супернатанте клеточной культуры СНО. Уровни экспрессии белков в супернатантах клеточной культуры тестировали через 96 ч после трансфекции с помощью способа Q-Octet с использованием CR9501 и CR9503 и фракцией F-белка RSV, связывающегося со специфическим антителом CR9501 до слияния, в день сбора и после хранения при 4°C в течение указанного периода времени. Полосы представляют среднее значение от 2 измерений, линии представляют диапазон значений. PRQM - PR-A2 с N67I, S215P, K66E и I76V; PRPM - PR-A2 с N67I, S215P, K66E, I76V и D486N.
Фиг. 6. F-белки RSV по настоящему изобретению остаются инактными в супернатанте клеточной культуры СНО при рН 5. Значение рН супернатантов клеточной культуры, содержащих варианты Fбелка, доводили до рН 5 и образцы инкубировали в течение 7 дней с ингибиторами протеазы или без них. Образцы анализировали на SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. Первая полоса каждого геля представляет собой стандартный маркер молекулярной массы; указан размер стандартных белков. Образцы: 1 - образец в 0-й день; 2 - образец на 7-й день, инкубированный при 4°C; 3 - образец на 7-й день, инкубированный при 4°C с ингибиторами протеазы; 4 - образец на 0-й день; 5 - образец на 7-й день, инкубированный при комнатной температуре; 6 - образец на 7-й день, инкубированный при комнатной температуре с ингибиторами протеазы; 7 - образец на 0-й день; 8 - образец на 7-й день, инкубированный при 37°C; 9 - образец на 7-й день, инкубированный при 37°C с ингибиторами протеазы. В обработанных образцах белка нижняя полоса представляет домен F1, а верхняя полоса представляет частично обработанный белок (F1+p27) или необработанный белок (F1+F2). В образце одноцепочечного белка полоса
- 2 039095 представляет домены F1+F2. PRQM - PR-A2 с N67I, S215P, K66E и I76V; PRPM - PR-A2 с N67I, S215P, K66E, I76V и D486N. LNR: K683-065.
Фиг. 7. Термостабильность F-белков RSV в супернатанте клеточной культуры СНО. Образцы супернатантов подвергали термообработке в течение 30 мин при значениях температуры 45-65°C. Количество белка до слияния в образце измеряли в ELISA с использованием антител CR9501. Значения нормализовали по необработанному образцу (20°C). Кривые показаны для каждого белка отдельно, а также наложение всех кривых (в правом нижнем углу). Каждая точка представляет воспроизводимое измерение. Два анализа проводили в 2 технических повторах для каждого. Кривые подбирали с использованием уравнения нелинейной регрессии с переменным наклоном (GraphPad Prism); при этом значения температуры плавления (Tm) рассчитывали как значения IC50. PRQM - PR-A2 с N67I, S215P, K66E и I76V; PRPM PR-A2 с N67I, S215P, K66E, I76V и D486N.
Фиг. 8. Титры RSV в легких и носу через 5 дней после контрольного заражения с помощью А2 RSV. Титры RSV в легких (верхняя секция) и носу (нижняя секция) через 5 дней после контрольного заражения с помощью А2 RSV. Нижний уровень обнаружения (LOD) обозначен пунктирной линией. Средние титры (log10 БОЕ на грамм ткани) обозначены горизонтальными полосами. Адъювантные и неадъювантные группы PRPM сравнивали по дозе с помощью теста Кохрана-Мантеля-Хензеля, и статистические различия указаны на фигуре. i.m.: внутримышечный; i.n.: интраназальный.
Фиг. 9. RSV-нейтрализующие титры против A Long RSV в сыворотке крови хлопковых крыс на 49-й день после примирования. RSV-нейтрализующие титры (IC50 (log2)) против A Long RSV с использованием считывания на основе ELISA определяли в сыворотке крови хлопковых крыс на 49-й день после примирования. Среднее значение для каждой группы обозначено горизонтальной полосой. Предел обнаружения (LOD) установлен на 3.0 (log2 и обозначен пунктирной линией). Титры VNA, индуцированные адъювантным и неадъювантным PRPM, сравнивали по дозе с помощью ANOVA, и результаты показаны на фигуре. i.m.: внутримышечный; i.n.: интраназальный.
Подробное описание изобретения
Белок слияния (F) респираторного синцитиального вируса (RSV) вовлечен в слияние вирусной мембраны с мембраной клетки-хозяина, которое требуется для инфицирования. mRNA F-белка RSV транслируется в белок-предшественник из 574 аминокислот, обозначенный F0, который содержит последовательность сигнального пептида из 26 аминокислот на N-конце, которая удаляется сигнальной пептидазой в эндоплазматическом ретикулуме. F0 расщепляется по двум сайтам (между аминокислотными остатками 109/110 и 136/137) с помощью клеточных фурин-подобных протеаз в транс-Гольджи с удалением короткой гликозилированной вставочной последовательности (также обозначенной как область р27, содержащая аминокислотные остатки 110-136) и образованием двух доменов или субъединиц, обозначенных F1 и F2. Домен F1 (аминокислотные остатки 137-574) содержит гидрофобный пептид слияния на своем N-конце, и С-конец содержит трансмембранную (ТМ) (аминокислотные остатки 530-550) и цитоплазматическую области (аминокислотные остатки 551-574). Домен F2 (аминокислотные остатки 27109) ковалентно связан с F1 двумя дисульфидными мостиками. Гетеродимеры F1-F2 подвергаются сборке в вирионе в виде гомотримеров.
Вакцины против инфекции, вызванной RSV, в настоящее время не существует, хотя она и является очень востребованной. Одним потенциальным подходом к получению вакцины является субъединичная вакцина на основе очищенного F-белка RSV. Однако для данного подхода требуется, чтобы очищенный F-белок RSV находился в конформации, которая подобна конформации F-белка RSV в состоянии до слияния и которая стабильна в течение продолжительного периода и может быть получена в достаточных количествах. Кроме того, для вакцины на основе субъединицы необходимо осуществить усечение Fбелка RSV путем делеции трансмембранной (ТМ) и цитоплазматической областей с получением растворимого секретируемого F-белка (sF). Поскольку область ТМ отвечает за заякоривание в мембране и тримеризацию, то незаякоренный растворимый F-белок является в значительной степени более лабильным, чем белок полной длины, и будет с легкостью подвергаться рефолдингу в конечное состояние после слияния. Для получения растворимого F-белка в стабильной конформации до слияния, который демонстрирует высокие уровни экспрессии и высокую стабильность, необходимо, таким образом, стабилизировать конформацию до слияния.
Несколько мутаций, стабилизирующих F-белок RSV в конформации до слияния, ранее были описаны в WO 2014/174018 и WO 2014/202570. F-белки RSV в соответствии с настоящим изобретением содержат уникальное и специфическое подмножество мутаций, описанных ранее в комбинации с двумя другими мутациями. В соответствии с настоящим изобретением было показано, что данная уникальная комбинация мутаций по настоящему изобретению приводит в результате к повышению уровней экспрессии F-белка RSV и стабильности конформации до слияния.
Настоящее изобретение, таким образом, предусматривает новые стабильные растворимые F-белки RSV до слияния, т.е. растворимые F-белки RSV, которые являются стабилизированными в конформации до слияния, или их фрагменты. F-белки RSV в соответствии с настоящим изобретением содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3.
- 3 039095
В исследовании, которое привело к настоящему изобретению, была введена уникальная комбинация мутаций вместе с гетерологичным доменом тримеризации для получения указанных стабильных растворимых F-белков RSV до слияния. Стабильные F-белки RSV до слияния по настоящему изобретению находятся в конформации до слияния, т.е. они содержат (имеют) по меньшей мере один эпитоп, который является специфическим для F-белка в конформации до слияния. Эпитоп, который является специфическим для F-белка в конформации до слияния, представляет собой эпитоп, который не представлен в конформации после слияния. Не желая ограничиваться конкретной теорией, полагают, что конформация F-белка RSV до слияния может содержать эпитопы, которые являются такими же, как эпитопы на Fбелке RSV, экспрессируемые на природных вирионах RSV, и таким образом может предоставлять преимущества для вызывания выработки защитных нейтрализующих антител.
В некоторых вариантах осуществления F-белки RSV до слияния (или их фрагменты) по настоящему изобретению содержат по меньшей мере один эпитоп, который распознается моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 4, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 5, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 7, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID NO: 8 и CDR3область легкой цепи с SEQ ID NO: 9 (далее в данном документе называемым CR9501), и/или моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 10, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 11, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 12 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 13, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID NO: 14 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID NO: 15 (называемым CR9502). CR9501 и CR9502 содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей и, таким образом, специфичности связывания антител 58С5 и 30D8 соответственно, которые, как было показано ранее, специфично связываются с Fбелком RSV в его конформации до слияния, а не в конформации после слияния (как раскрыто в WO 2012/006596).
В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные F-белки RSV до слияния являются тримерными.
Как используется по всей настоящей заявке, нуклеотидные последовательности представлены в направлении от 5'- к 3'-концу, и аминокислотные последовательности представлены от N-конца к С-концу, как принято в данной области.
Как указано выше, настоящим изобретением также охватываются фрагменты F-белка RSV до слияния. Фрагмент может представлять собой результат какой-либо одной или обеих из аминотерминальной (например, путем отщепления сигнальной последовательности) и карбокситерминальной делеций. Может быть выбран такой фрагмент, который включает иммунологически активный фрагмент F-белка, т.е. часть, которая будет приводить к иммунному ответу у субъекта. Его можно легко определить с применением способов in silico, in vitro и/или in vivo, все из которых хорошо известны специалисту.
В некоторых вариантах осуществления кодируемые белки в соответствии с настоящим изобретением содержат сигнальную последовательность, также называемую лидерной последовательностью или сигнальным пептидом, соответствующую аминокислотам 1-26 из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3. Сигнальные последовательности обычно являются короткими (например, 5-30 аминокислот в длину) аминокислотными последовательностями, присутствующими на N-конце большинства вновь синтезированных белков, которые предназначены для секреторного пути и обычно отщепляются сигнальной пептидазой с образованием свободного сигнального пептида и зрелого белка.
В некоторых вариантах осуществления белки в соответствии с настоящим изобретением не содержат сигнальную последовательность.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие F-белки RSV до слияния, или их фрагменты, в соответствии с настоящим изобретением.
В предпочтительных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие Fбелки RSV в соответствии с настоящим изобретением, являются кодон-оптимизированными для экспрессии в клетках млекопитающих, предпочтительно клетках человека. Способы оптимизации кодонов известны и были описаны ранее (например, WO 96/09378). Последовательность считается кодоноптимизированной, если по меньшей мере один кодон, не являющийся предпочтительным, по сравнению с последовательностью дикого типа замещен кодоном, который является более предпочтительным. В данном документе кодон, не являющийся предпочтительным, представляет собой кодон, который используется в организме с меньшей частотой, чем другой кодон, кодирующий такую же аминокислоту, и кодон, являющийся более предпочтительным, представляет собой кодон, который используется в организме более часто, чем кодон, не являющийся предпочтительным. Частоту использования кодонов для конкретного организма можно найти в таблицах частоты использования кодонов, как, например, на сайте http://www.kazusa.or.jp/codon.
Предпочтительно более одного кодона, не являющегося предпочтительным, предпочтительно большинство или все кодоны, не являющиеся предпочтительными, замещают кодонами, которые являются более предпочтительными. Предпочтительно в кодон-оптимизированной последовательности используют кодоны, наиболее часто используемые в организме. Как правило, замещение предпочтитель
- 4 039095 ными кодонами приводит к более высокой экспрессии.
Специалисту в данной области будет понятно, что несколько различных полинуклеотидов и молекул нуклеиновой кислоты могут кодировать один и тот же белок в результате вырожденности генетического кода. Также понятно, что специалисты в данной области с помощью традиционных методик могут осуществлять нуклеотидные замены, которые не влияют на последовательность белка, кодируемую молекулами нуклеиновой кислоты, для отражения частоты использования кодонов в любом конкретном организме-хозяине, в котором белки будут экспрессироваться. Следовательно, если конкретно не указано иное, то выражение нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность включает все нуклеотидные последовательности, которые являются вырожденными версиями друг друга и которые кодируют одну и ту же аминокислотную последовательность. Нуклеотидные последовательности, которые кодируют белки и РНК, могут включать в себя или могут не включать в себя интроны.
Последовательности нуклеиновых кислот можно клонировать с помощью стандартных методик молекулярной биологии или получать de novo с помощью синтеза ДНК, который можно осуществлять с использованием стандартных процедур с участием компаний, предоставляющих услуги в области синтеза ДНК и/или молекулярного клонирования (например, GeneArt, GenScripts, Invitrogen, Eurofins).
В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты содержат нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 21, 22 или 23.
Настоящее изобретение также предусматривает векторы, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, которая описана выше. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты в соответствии с настоящим изобретением является частью вектора. С такими векторами можно легко производить манипуляции с помощью способов, хорошо известных специалисту в данной области, и их, например, можно разрабатывать так, чтобы они были способны к репликации в прокариотических и/или эукариотических клетках. Кроме того, для трансформации эукариотических клеток можно использовать многие векторы, и при этом они будут интегрироваться целиком или частично в геном таких клеток, что приведет в результате к стабильным клеткам-хозяевам, содержащим в своем геноме требуемую нуклеиновую кислоту. Используемым вектором может быть любой вектор, который подходит для клонирования ДНК и который можно применять для транскрипции нуклеиновой кислоты, представляющей интерес. Специалист в данной области способен выбрать подходящие векторы экспрессии и вставить последовательности нуклеиновых кислот по настоящему изобретению функциональным образом.
Клетки-хозяева, содержащие молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие F-белки RSV до слияния, также образуют часть настоящего изобретения. F-белки RSV до слияния можно получать с помощью технологии рекомбинантной ДНК, включающей экспрессию молекул в клетках-хозяевах, например клетках яичников китайского хомячка (СНО), линиях опухолевых клеток, клетках ВНК, клеточных линиях человека, таких как клетки HEK293, клетки PER.C6, или клетках дрожжей, грибов, насекомых и т.п. или трансгенных животных или растений. В некоторых вариантах осуществления клетки происходят из многоклеточного организма, в некоторых вариантах осуществления они происходят из позвоночных или беспозвоночных. В некоторых вариантах осуществления клетки представляют собой клетки млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления клетки представляют собой клетки человека. В целом, получение рекомбинантных белков, таких как F-белки RSV до слияния по настоящему изобретению, в клетке-хозяине предусматривает введение гетерологичной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок в экспрессируемом формате, в клетку-хозяин, культивирование клеток в условиях, способствующих экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты и обеспечение экспрессии белка в указанной клетке. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок в экспрессируемом формате, может находиться в форме кассеты экспрессии, и для нее обычно требуются последовательности, способствующие экспрессии нуклеиновой кислоты, такие как энхансер(ы), промотор, сигнал полиаденилирования и т.п. Специалист в данной области осведомлен о том, что для достижения экспрессии гена в клетках-хозяевах можно использовать различные промоторы. Промоторы могут быть конститутивными или регулируемыми, и их можно получать из разных источников, в том числе вирусов, прокариотических или эукариотических источников, или разрабатывать искусственным путем.
Среды для выращивания клеточных культур доступны от различных поставщиков, и подходящую среду можно в рабочем порядке выбрать для клетки-хозяина для экспрессии белка, представляющего интерес, в данном случае F-белков RSV до слияния. Подходящая среда может содержать или может не содержать сыворотку.
Гетерологичная молекула нуклеиновой кислоты (также называемая в данном документе трансгеном) представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая в природе не присутствует в клеткехозяине. Ее вводят, например, в вектор с помощью стандартных методик молекулярной биологии. Трансген обычно функционально связан с последовательностями, контролирующими экспрессию. Это можно осуществить, например, путем помещения нуклеиновой кислоты, кодирующей трансген(ы), под контроль промотора. Можно добавлять дополнительные регуляторные последовательности. Для экспрессии трансгена(ов) можно использовать многие промоторы, и они известны специалисту, например,
- 5 039095 такие промоторы могут включать промоторы вирусов, млекопитающих, синтетические промоторы и т.п. Неограничивающим примером подходящего промотора для получения экспрессии в эукариотических клетках является промотор гена CMV (US 5385839), например промотор предраннего гена CMV, например содержащий нуклеотиды от -735 до +95 из энхансера/промотора предраннего гена CMV. Сигнал полиаденилирования, например сигнал полиА гена бычьего гормона роста (US 5122458), может располагаться позади трансгена(ов). В качестве альтернативы в данной области техники доступны несколько широко используемых векторов экспрессии, и их получают из коммерческих источников, например серия векторов pcDNA и pEF от Invitrogen, pMSCV и pTK-Hyg от BD Sciences, pCMV-Script от Stratagene и т.д., которые можно использовать для рекомбинантной экспрессии белка, представляющего интерес, или для получения подходящих промоторов и/или последовательностей терминаторов транскрипции, полиАпоследовательностей и т.п.
Клеточная культура может представлять собой любой тип клеточной культуры, в том числе адгезивную клеточную культуру, например клетки, прикрепленные к поверхности культурального флакона или к микроносителям, а также суспензионную культуру. Манипуляции с суспензионными культурами в наиболее крупном масштабе проводят в периодическом процессе или процессе с подпиткой, поскольку они являются наиболее простыми для управления и масштабирования. В настоящее время непрерывные процессы на основе принципов перфузии становятся более распространенными, и они также являются подходящими. Подходящие питательные среды хорошо известны специалисту в данной области и могут, как правило, быть получены из коммерческих источников в больших количествах или произведены по заказу в соответствии со стандартными протоколами. Культивирование можно осуществлять, например, в чашках, роллер-флаконах или в биореакторах, с использованием периодических, подпитываемых, непрерывных систем и т.п. Известны подходящие условия для культивирования клеток (см., например, Tissue Culture, Academic Press, Kruse and Paterson, editors (1973) и R.I. Freshney, Culture of animal cells: A manual of basic technique, fourth edition (Wiley-Liss Inc., 2000, ISBN 0-471-34889-9)).
Настоящее изобретение также предусматривает композиции, содержащие F-белок RSV до слияния, и/или молекулу нуклеиновой кислоты, и/или вектор, которые описаны выше. Настоящее изобретение также предусматривает композиции, содержащие F-белок RSV до слияния, имеющий эпитоп, который присутствует в конформации F-белка RSV до слияния, однако отсутствует в конформации после слияния, или его фрагмент. Настоящее изобретение также предусматривает композиции, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты и/или вектор, кодирующие такой F-белок RSV до слияния или его фрагмент. Композиции предпочтительно представляют собой иммуногенные композиции, содержащие F-белок RSV до слияния, и/или молекулу нуклеиновой кислоты, и/или вектор, которые описаны выше. Настоящее изобретение также предусматривает применение стабилизированного F-белка RSV до слияния или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный F-белок RSV в соответствии с настоящим изобретением, для индуцирования у субъекта иммунного ответа на F-белок RSV. Дополнительно предусмотрены способы индуцирования у субъекта иммунного ответа на F-белок RSV, предусматривающие введение субъекту F-белка RSV до слияния, и/или молекулы нуклеиновой кислоты, и/или вектора в соответствии с настоящим изобретением. Также предусмотрены F-белки RSV до слияния, молекулы нуклеиновой кислоты, и/или векторы в соответствии с настоящим изобретением для индуцирования иммунного ответа у субъекта на F-белок RSV. Также предусмотрено применение F-белков RSV до слияния, и/или молекул нуклеиновой кислоты, и/или векторов в соответствии с настоящим изобретением для изготовления лекарственного препарата для применения в индуцировании у субъекта иммунного ответа на F-белок RSV.
F-белки RSV до слияния, молекулы нуклеиновой кислоты или векторы по настоящему изобретению можно использовать для предупреждения (профилактики) и/или лечения инфекций, вызванных RSV. В некоторых вариантах осуществления предупреждение и/или лечение может быть направлено на группы пациентов, которые восприимчивы к инфекции, вызываемой RSV. Такие группы пациентов включают без ограничения, например, пожилых (например, в возрасте >50 лет, в возрасте >60 лет и предпочтительно в возрасте >65 лет), молодых (например, в возрасте <5 лет, в возрасте <1 года), госпитализированных пациентов и пациентов, которые получали лечение противовирусным соединением, однако продемонстрировали неудовлетворительный противовирусный ответ.
F-белки RSV до слияния, молекулы нуклеиновых кислот и/или векторы в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы, например, в самостоятельных лечении и/или профилактике заболевания или состояния, вызываемого RSV, или в комбинации с другими профилактическими и/или терапевтическими средствами лечения, такими как (существующие или будущие) вакцины, противовирусные средства и/или моноклональные антитела.
Настоящее изобретение дополнительно предусматривает способы предупреждения и/или лечения у субъекта инфекции, вызванной RSV, с использованием F-белков RSV до слияния, молекул нуклеиновых кислот и/или векторов в соответствии с настоящим изобретением. В конкретном варианте осуществления способ предупреждения и/или лечения у субъекта инфекции, вызванной RSV, предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества F-белка RSV до слияния, молекулы
- 6 039095 нуклеиновой кислоты и/или вектора, которые описаны выше. Терапевтически эффективное количество относится к количеству белка, молекулы нуклеиновой кислоты или вектора, которое является эффективным для предупреждения, облегчения и/или лечения заболевания или состояния, возникшего в результате инфекции, вызванной RSV. Предупреждение охватывает ингибирование или уменьшение распространения RSV или ингибирование или уменьшение проявления, развития или прогрессирования одного или нескольких симптомов, связанных с инфекцией, вызванной RSV. Облегчение, как используется в данном документе, может относиться к уменьшению видимых или ощутимых симптомов заболевания, виремии или других поддающихся измерению проявлений инфекции гриппа.
Для введения субъектам, таким как люди, в настоящем изобретении могут применяться фармацевтические композиции, содержащие F-белок RSV до слияния, молекулу нуклеиновой кислоты и/или вектор, которые описаны в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. В настоящем контексте термин фармацевтически приемлемый означает, что носитель или вспомогательное вещество в используемых дозировках и концентрациях не вызовет каких-либо нежелательных или неблагоприятных эффектов у субъектов, которым их вводят. Такие фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества хорошо известны из уровня техники (см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.R. Gennaro, Ed., Mack Publishing Company [1990]; Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins, S. Frokjaer and L. Hovgaard, Eds., Taylor & Francis [2000] и Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd edition, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press [2000]). F-белки RSV или молекулы нуклеиновой кислоты предпочтительно составляют и вводят в виде стерильного раствора, хотя также возможно использование лиофилизированных препаратов. Стерильные растворы получают с помощью стерилизующей фильтрации или с помощью других способов, известных per se из уровня техники. Затем растворы лиофилизируют или заполняют ними контейнеры, предназначенные для лекарственных форм. Значение рН раствора обычно находится в диапазоне рН от 3,0 до 9,5, например рН от 5,0 до 7,5. F-белки RSV обычно находятся в растворе, содержащем подходящий фармацевтически приемлемый буфер, и композиция также может содержать соль. Необязательно может присутствовать стабилизирующее средство, такое как альбумин. В некоторых вариантах осуществления добавляют детергент. В некоторых вариантах осуществления F-белки RSV могут быть составлены в виде инъекционного препарата.
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Как известно из уровня техники, адъюванты дополнительно повышают иммунный ответ на применяемую антигенную детерминанту. Термины адъювант и иммуностимулятор используются в данном документе взаимозаменяемо, и их определяют как одно или несколько веществ, вызывающих стимуляцию иммунной системы. В данном контексте адъювант используют для усиления иммунного ответа на F-белки RSV по настоящему изобретению. Примеры подходящих адъювантов включают соли алюминия, такие как гидроксид алюминия и/или фосфат алюминия; композиции на основе масляных эмульсий (или композиции типа масло в воде), в том числе сквален-водных эмульсий, таких как MF59 (см., например, WO 90/14837); составы с сапонинами, такие как, например, QS21 и иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS) (см., например, US 5057540; WO 90/03184, WO 96/11711, WO 2004/004762, WO 2005/002620); производные бактерий или микроорганизмов, примерами которых являются монофосфориллипид A (MPL), 3-O-деацилированный MPL (3dMPL), олигонуклеотиды, содержащие мотив CpG, ADP-рибозилирующие токсины бактерий или их мутантные формы, такие как термолабильный энтеротоксин LT E. coli, холерный токсин СТ и т.п.; белки эукариотов (например, антитела или их фрагменты (например, направленные против самого антигена или CD1a, CD3, CD7, CD80) и лиганды к рецепторам (например, CD40L, GMCSF, GCSF и др.), которые стимулируют иммунный ответ при взаимодействии с реципиентными клетками. В некоторых вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению содержат в качестве адъюванта алюминий, например, в форме гидроксида алюминия, фосфата алюминия, фосфата алюминия-калия или их комбинации, в концентрациях, составляющих 0,05-5 мг, например 0,075-1,0 мг алюминия на дозу.
F-белки RSV перед слиянием можно также вводить в комбинацию или конъюгировать с наночастицами, такими как, например, полимеры, липосомы, виросомы, вирус-подобные частицы или самоорганизующиеся белковые частицы. F-белки до слияния могут быть комбинированы с наночастицами, инкапсулированы в наночастицах или конъюгированы с наночастицами с адъювантом или без него. Инкапсулирование в липосомы описано, например, в документе US 4235877. Конъюгирование с макромолекулами раскрыто, например, в документах US 4372945 или US 4474757.
В других вариантах осуществления композиции не содержат адъюванты.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение представляет способы получения вакцины против респираторного синцитиального вируса (RSV), предусматривающие обеспечение композиции в соответствии с настоящим изобретением и помещение ее в фармацевтически приемлемую композицию. Термин вакцина относится к средству или композиции, содержащим активный компонент, эффективный для индуцирования у субъекта определенной степени иммунитета к определенному патогенному или болезнетворному микроорганизму, которая приведет, по меньшей мере, к снижению (включительно до полного отсутствия) тяжести, продолжительности или другого проявления симптомов,
- 7 039095 связанных с инфицированием патогенным или болезнетворным микроорганизмом. В настоящем изобретении вакцина содержит эффективное количество F-белка RSV до слияния, и/или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей F-белок RSV до слияния, и/или вектор, содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты, что вызывает формирование иммунного ответа в отношении F-белка RSV. Это обеспечивает способ предупреждения тяжелого заболевания нижних дыхательных путей, приводящего к госпитализации, и снижает частоту возникновения осложнений, таких как пневмония и бронхиолит, у субъекта вследствие инфицирования и репликации RSV. В соответствии с настоящим изобретением термин вакцина подразумевает, что она представляет собой фармацевтическую композицию и, таким образом, обычно включает фармацевтически приемлемые разбавитель, носитель или вспомогательное вещество. Она может содержать или не содержать дополнительные активные ингредиенты. В некоторых вариантах осуществления она может представлять собой комбинированную вакцину, которая дополнительно содержит другие компоненты, индуцирующие иммунный ответ, например, против других белков RSV и/или против других инфекционных агентов. Введение дополнительных активных компонентов может быть осуществлено, например, путем отдельного введения или путем введения комбинации продуктов из вакцин по настоящему изобретению и дополнительных активных компонентов.
Композиции можно вводить субъекту, например субъекту-человеку. Суммарная доза F-белков RSV в композиции для однократного введения может составлять, например, от приблизительно 0,01 мкг до приблизительно 10 мг, например 1 мкг - 1 мг, например 10-100 мкг. Определение рекомендуемой дозы будет осуществляться в процессе эксперимента и является стандартным для специалистов в данной области.
Введение композиций в соответствии с настоящим изобретением может осуществляться с использованием стандартных путей введения. Неограничивающие варианты осуществления включают парентеральное введение, такое как внутрикожное, внутримышечное, подкожное, чрескожное введение или введение через слизистые, например интраназальное, пероральное и т.п. В одном варианте осуществления композицию вводят путем внутримышечной инъекции. Специалисту известны различные возможности введения композиции, например вакцины для индуцирования иммунного ответа к антигену(ам), присутствующему(им) в вакцине.
Как используется в данном документе, субъект предпочтительно представляет собой млекопитающее, например грызуна, например мышь, хлопкового хомяка, или примата, отличного от человека, или человека. Предпочтительно субъектом является субъект-человек.
Белки, молекулы нуклеиновых кислот, векторы и/или композиции также можно вводить в виде примирования или в виде усиления в гомологичном или гетерологичном режиме примирования/усиления. При осуществлении бустерной вакцинации, как правило, такую бустерную вакцину будут вводить одному и тому же субъекту с промежутком времени от одной недели до одного года, предпочтительно от двух недель до четырех месяцев, после введения композиции субъекту в первый раз (что в данном случае называется примирующей вакцинацией). В некоторых вариантах осуществления введение предусматривает примирование и по меньшей мере одно бустерное введение.
Кроме того, белки по настоящему изобретению могут применяться в качестве диагностического средства, например, для тестирования иммунного статуса индивидуума путем установления способности антител в сыворотке крови такого индивидуума к связыванию с белком по настоящему изобретению. Таким образом, настоящее изобретение также относится к in vitro диагностическому способу выявления у пациента наличия инфекции, вызванной RSV, при этом указанный способ включает стадии а) приведения биологического образца, полученного от указанного пациента, в контакт с белком в соответствии с настоящим изобретением и b) выявления присутствия комплексов антитело-белок.
Примеры
Пример 1. Получение стабильных F-белков RSV до слияния.
Были получены несколько вариантов F-белка RSV до слияния, которые схематически представлены на фиг. 1. Все кандидаты включали домен тримеризации фибритина (фолдон) (GYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL; SEQ ID NO: 20), связанный с аминокислотным остатком 495 домена F1 A2 RSV.
В преобразованных версиях F RSV (т.е. в версиях, которые расщеплены с удалением области р27) замена N67I оказала наиболее сильный эффект как в отношении уровня экспрессии, так и в отношении стабильности, однако полностью стабильный F-белок до слияния был получен лишь тогда, когда замены 67 и 215 были объединены, что привело к 20-кратному увеличению уровня экспрессии (фиг. 2). Добавление третьей замены аминокислоты не улучшало уровень экспрессии или стабильность, как измерено посредством стабильности при хранении при 4°C. Однако в случае, когда F-белки RSV были очищены и дополнительно охарактеризованы, оказалось, что дополнительная третья замена значительно стабилизировала F-белок до слияния, как измерено с помощью более жесткого теста на термостабильность (методом дифференциальной сканирующей флуориметрии - DSF) (фиг. 3).
Поскольку штамм А2, который использовался в качестве родительской последовательности для описанных ранее вариантов F-белка RSV (WO 2014/174018 и WO 2014/202570), представлял собой лабораторный штамм, адаптированный на уровне клеточной линии, который накопил две уникальные и ред
- 8 039095 кие мутации в верхушке K66 и I76), было решено подвергнуть мутации эти два остатка в соответствии с природными клиническими изолятами (K66E, I76V). Мутации K66E и I76V были включены в новую преобразованную конструкцию белка, чтобы сделать последовательность ближе к природным изолятам вируса. Замены K66E+I76V тестировали в выбранных стабилизированных вариантах, чтобы продемонстрировать то, что аминокислотные замены не оказывали отрицательного влияния на экспрессию или стабильность белка. Было показано, что белки были стабильны в супернатантах клеточной культуры более 2 недель. Какого-либо отрицательного влияния на уровень экспрессии F-белков не было, напротив, Fбелок RSV с мутациями N67I, S215P, K66E и I76V экспрессировался на более высоком уровне, чем белок только с N67I и S215P (фиг. 4).
Преобразованные F-белки RSV с N67I, S215P, K66E и I76V (названные PRQM для преобразованного четверного мутанта) и с N67I, S215P, K66E, I76V и D486N (называемые PRPM для преобразованного пента-мутанта) были очищены и дополнительно охарактеризованы.
Скрининг стабилизирующих мутаций для F-белка RSV осуществляли в суспензионных клетках HEK (Freestyle 293F). Эти клетки удобно использовать в исследовательской лаборатории, поскольку они адаптированы к протоколу простой трансфекции и экспрессируют белки на высоком уровне. Для крупномасштабного производства и продуцирования белка GMP клетки СНО часто являются предпочтительной клеточной линией. Следовательно, экспрессию и стабильность нескольких предпочтительных конструкций F-белка тестировали в суспензионных клетках СНО (Freestyle CHO-S). Клетки CHO-S трудно трансфицировать, а следовательно ожидается, что общие уровни экспрессии будут ниже, чем в клетках HEK. Следовательно, во время анализа авторы данного изобретения сосредоточились на относительной экспрессии белков и их стабильности.
Для теста были выбраны пять преобразованных белков. Все 5 вариантов содержали замены K66E, I76V, N67I и S215P. Как описано выше, последние 2 необходимы для стабилизации белка в конформации до слияния; первые две были включены, чтобы приблизить последовательность к изолятам, встречающимся в природе (как описано в предыдущем разделе). Белки отличались дополнительными мутациями Е161Р, D486N и E487Q. Они были выбраны из-за высокого уровня экспрессии, стабильности при хранении и низкого влияния на антигенность. Все белки были экспрессированы в клетках СНО и характеризовались сопоставимой стабильностью при хранении. F-белки RSV были стабильны в конформации до слияния при хранении в супернатантах клеточных культур в течение 2 недель при 4°C (фиг. 5). Также была протестирована стабильность F-белков RSV в супернатанте клеточной культуры СНО при рН 5. Как показано на фиг. 6, не было обнаружено какой-либо деградации после инкубации образцов белка в течение 7 дней при разных значениях температуры.
В заключение, F-белки RSV по настоящему изобретению экспрессировались в клетках СНО и были стабильны в супернатантах клеточных культур. Также тестировали термостабильность белка. Супернатанты клеточных культур подвергали термообработке и количество белка до слияния в образцах измеряли в ELISA с помощью антитела CR9501 (фиг. 7).
Вариант с D486N (белок PRPM) был наиболее устойчивым к температурному стрессу. Добавление мутации K498R, казалось, не имело каких-либо преимуществ по сравнению с белком с минимальным количеством модификации (PRQM). Варианты с мутацией Е161Р характеризовались наиболее высокими уровнями экспрессии (данные не показаны). Однако недостатком этой аминокислотной замены было то, что остаток 161 расположен на поверхности белка и на краю эпитопа для антитела CR9501.
В соответствии с настоящим изобретением было показано, что PRPM (F-белок RSV с доменом фолдон тримеризации фибритина и с мутациями N67I, S215P, K66E, I76V и D486N, SEQ ID NO: 1) и PRQM (F-белок RSV с доменом фолдон тримеризации фибритина и с N67I, S215P, K66E и I76V, SEQ ID NO: 2) в качестве преобразованного белка до слияния с минимальными необходимыми модификациями последовательности, а также вариант PRQM+S46G или PRPM+S46G, все стабилизированы в конформации до слияния и демонстрируют высокое значение Tm (табл. 1). Последние варианты с заменой S46G характеризовались значительно более высоким уровнем экспрессии.
- 9 039095
Таблица 1
| ID белка | Стабильность при замораживании/размо раживании | Тш (°C) |
| PRQM S46G | Стабильный в течение 3 циклов, агрегация после 5 циклов | 56, 2 |
| PRPM S46G | Стабильный в течение 5 циклов | 63, 6 |
| PRPM | Стабильный в течение 5 циклов | 65, 0 |
Пример 2. Иммуногенность и защита, индуцированные PRPM с адъювантом и без него.
Был проведен эксперимент по определению иммуногенной и профилактической эффективности рекомбинантного белка PRPM в присутствии или отсутствие адъюванта в гомологичной модели контрольного заражения А2 RSV хлопкового хомяка. Животных иммунизировали i.m. в 0-й и 28-й дни с помощью 2 доз PRPM (5 и 0,5 мкг), неадъювантного или адъювантного, со 100 мкг Adjuphos. Животных подвергали контрольному заражению на 49-й день с помощью 105 (БОЕ) А2 RSV. Животных умерщвляли через 5 дней после заражения, и титры измеряли в легких и носу.
Результаты.
Иммунизация адъювантным PRPM вызвала полную защиту в легких и носу, за исключением 1 животного, у которого выявили прорыв в носу. У большей части животных, получавших 5 и 0,5 мкг неадъювантного PRPM, выявляли прорыв в легких и носах, а также была значительная разница между группами, получавшими адъювантный и неадъювантный белки (фиг. 8). Адъювантный белок индуцировал значительно более высокие титры VNA по сравнению с неадъювантным белком на 49-й день после иммунизации (фиг. 9).
Таблица 2
Последовательности антител
| Антитело | VH-домен | CDR1 VH | CDR2 VH | CDR3 VH |
| CR9501 | Аминокислоты 1-125 из SEQ ID NO: 16 | GASINSDNYYWT (SEQ ID NO :4) | HISYTGNTYYTP SLKS (SEQ ID NO: 5) | CGAYVLISNCGW FDS (SEQ ID NO: 6) |
| CR9502 | Аминокислоты 1-121 из SEQ ID NO:18 | GFTFSGHTIA (SEQ ID NO :10) | WVSTNN GNTEYAQKIQG (SEQ ID NO:11) | EWLVMGGFAFDH (SEQ ID NO:12) |
| Антитело | VL-домен | CDR1 VL | CDR2 VL | CDR3 VL |
| CR9501 | Аминокислоты 1-107 из SEQ ID NO: 17 | QASQDISTYLN (SEQ ID NO: 7) | GASNLET (SEQ ID NO: 8) | QQYQYLPYT (SEQ ID NO: 9) |
| CR9502 | Аминокислоты 1-110 из SEQ ID NO: 19 | GANNIGSQNVH (SEQ ID NO :13) | DDRDRPS (SEQ ID NO :14) | QVWDSSRDQAVI (SEQ ID NO:15) |
- 10 039095
Последовательности
SEQ ID NO: 1: PRPM
MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITI ELSNIKEIKCNGTDAKVKLIKOELDKYKNAVTELOLLMOSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAK KTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSV LTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSIPNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYM LTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWK LHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEV NLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVS NKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSNEFDASISQVNEKINQSLAFIR KS DE LL SAIGGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL
SEQ ID NO: 2 PRQM
MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITI ELSNIKEIKCNGTDAKVKLIKOELDKYKNAVTELOLLMOSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAK
KTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSV LTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSIPNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYM LTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWK LHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEV NLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVS NKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIR KSDELLSAIGGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLS T FL
SEQ ID NO: 3 PRPM+S46G
MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLGALRTGWYTSVITI ELSNIKEIKCNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAK KTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSV LTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSIPNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYM LTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWK LHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEV NLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVS NKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSNEFDASISQVNEKINQSLAFIR KSDELLSAIGGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLS T FL
CR9501, тяжелая цепь (SEQ ID NO: 16):
QVQLVQSGPGLVKPSQTLALTCNVSGASINSDNYYWTWIRQRPGGGLEWIGHISYTGNT YYTPSLKSRLSMSLETSQSQFSLRLTSVTAADSAVYFCAACGAYVLISNCGWFDSWGQGTQVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
CR9501, легкая цепь (SEQ ID NO: 17):
EIVMTQSPSSLSASIGDRVTITCQASQDISTYLNWYQQKPGQAPRLLIYGASNLETGVP SRFTGSGYGTDFSVTISSLQPEDIATYYCQQYQYLPYTFAPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CR9502 тяжелая цепь (SEQ ID NO:18):
EVQLLQSGAELKKPGASVKISCKTSGFTFSGHTIAWVRQAPGQGLEWMGWVSTNNGNTE YAQKIQGRVTMTMDTSTSTVYMELRSLTSDDTAVYFCAREWLVMGGFAFDHWGQGTLLTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC
CR9502, легкая цепь (SEQ ID NO: 19):
QSVLTQASSVSVAPGQTARITCGANNIGSQNVHWYQQKPGQAPVLWYDDRDRPSGIPD RFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSRDQAVIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPP
- 11 039095
SSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQ WKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTIAPTECS
Нуклеотидная последовательность, кодирующая PRPM (SEQ ID NO: 20):
ATGGAACTGCTGATCCTGAAGGCCAACGCCATCACCACCATCCTGACCGCCGTGACCTT CTGCTTCGCCAGCGGCCAGAACATCACCGAGGAATTCTACCAGAGCACCTGTAGCGCCGTGTCC AAGGGCTACCTGAGCGCCCTGAGAACCGGCTGGTACACCAGCGTGATCACCATCGAGCTGAGCA ACATCAAGGAAATCAAGTGCAACGGCACCGACGCCAAGGTCAAGCTGATCAAGCAGGAACTGGA CAAGTACAAGAACGCCGTGACCGAGCTGCAGCTGCTGATGCAGAGCACCCCCGCCACCAACAAC CGGGCCAGACGCGAGCTGCCCCGGTTCATGAACTACACCCTGAACAACGCCAAAAAGACCAACG TGACCCTGAGCAAGAAGCGGAAGCGGCGGTTCCTGGGCTTCCTGCTGGGCGTGGGCTCTGCCAT TGCTAGCGGCGTGGCCGTGTCTAAGGTGCTGCACCTGGAAGGCGAAGTGAACAAGATCAAGAGC GCCCTGCTGAGCACCAACAAGGCCGTGGTGTCCCTGAGCAACGGCGTGTCCGTGCTGACCAGCA AGGTGCTGGATCTGAAGAACTACATCGACAAGCAGCTGCTGCCCATCGTGAACAAGCAGAGCTG CAGCATCCCCAACATCGAGACAGTGATCGAGTTCCAGCAGAAGAACAACCGGCTGCTGGAAATC ACCCGCGAGTTCAGCGTGAACGCTGGCGTGACCACCCCCGTGTCCACCTACATGCTGACCAACA GCGAGCTGCTGAGCCTGATCAACGACATGCCCATCACCAACGACCAGAAAAAGCTGATGAGCAA CAACGTGCAGATCGTGCGGCAGCAGAGCTACTCCATCATGAGCATCATCAAAGAAGAGGTGCTG GCCTACGTGGTGCAGCTGCCCCTGTACGGCGTGATCGACACCCCCTGCTGGAAGCTGCACACCA GCCCCCTGTGCACCACCAACACCAAAGAGGGCAGCAACATCTGCCTGACCCGGACCGACCGGGG CTGGTACTGCGATAATGCCGGCTCCGTGTCATTCTTTCCACAGGCCGAGACATGCAAGGTGCAG AGCAACCGGGTGTTCTGCGACACCATGAACAGCCTGACCCTGCCCTCCGAAGTGAACCTGTGCA AC G T G GAGAT С T T СAAC С С TAAG TAG GAG T G CAAGAT CAT GAC CAG CAAGAC C GAC G T G T С CAG CTCCGTGATCACCTCCCTGGGCGCCATCGTGTCCTGCTACGGCAAGACCAAGTGCACCGCCAGC AACAAGAACCGGGGCATCATCAAGACCTTCAGCAACGGCTGCGACTACGTGTCCAACAAGGGGG TGGACACCGTGTCCGTGGGCAACACCCTGTACTACGTGAACAAACAGGAAGGCAAGAGCCTGTA CGTGAAGGGCGAGCCCATCATCAACTTCTACGACCCCCTGGTGTTCCCCAGCAACGAGTTCGAC GCCAGCATCAGCCAGGTCAACGAGAAGATCAACCAGAGCCTGGCCTTCATCAGAAAGAGCGACG AGCTGCTGTCCGCCATCGGCGGCTACATCCCCGAGGCCCCTAGAGATGGCCAGGCCTACGTGCG GAAGGACGGCGAGTGGGTGCTGCTGTCTACCTTCCTG
Нуклеотидная последовательность, кодирующая PRQM (SEQ ID NO: 21):
ATGGAACTGCTGATCCTGAAGGCCAACGCCATCACCACCATCCTGACCGCCGTGACCTT CTGCTTCGCCAGCGGCCAGAACATCACCGAGGAATTCTACCAGAGCACCTGTAGCGCCGTGTCC AAGGGCTACCTGAGCGCCCTGAGAACCGGCTGGTACACCAGCGTGATCACCATCGAGCTGAGCA ACATCAAGGAAATCAAGTGCAACGGCACCGACGCCAAGGTCAAGCTGATCAAGCAGGAACTGGA
- 12 039095
CAAGTACAAGAACGCCGTGACCGAGCTGCAGCTGCTGATGCAGAGCACCCCCGCCACCAACAAC CGGGCCAGACGCGAGCTGCCCCGGTTCATGAACTACACCCTGAACAACGCCAAAAAGACCAACG TGACCCTGAGCAAGAAGCGGAAGCGGCGGTTCCTGGGCTTCCTGCTGGGCGTGGGCTCTGCCAT TGCTAGCGGCGTGGCCGTGTCTAAGGTGCTGCACCTGGAAGGCGAAGTGAACAAGATCAAGAGC GCCCTGCTGAGCACCAACAAGGCCGTGGTGTCCCTGAGCAACGGCGTGTCCGTGCTGACCAGCA AGGTGCTGGATCTGAAGAACTACATCGACAAGCAGCTGCTGCCCATCGTGAACAAGCAGAGCTG CAGCATCCCCAACATCGAGACAGTGATCGAGTTCCAGCAGAAGAACAACCGGCTGCTGGAAATC ACCCGCGAGTTCAGCGTGAACGCTGGCGTGACCACCCCCGTGTCCACCTACATGCTGACCAACA GCGAGCTGCTGAGCCTGATCAACGACATGCCCATCACCAACGACCAGAAAAAGCTGATGAGCAA CAACGTGCAGATCGTGCGGCAGCAGAGCTACTCCATCATGAGCATCATCAAAGAAGAGGTGCTG GCCTACGTGGTGCAGCTGCCCCTGTACGGCGTGATCGACACCCCCTGCTGGAAGCTGCACACCA GCCCCCTGTGCACCACCAACACCAAAGAGGGCAGCAACATCTGCCTGACCCGGACCGACCGGGG CTGGTACTGCGATAATGCCGGCTCCGTGTCATTCTTTCCACAGGCCGAGACATGCAAGGTGCAG AGCAACCGGGTGTTCTGCGACACCATGAACAGCCTGACCCTGCCCTCCGAAGTGAACCTGTGCA AC G T G GACAT С T T СAAC С С TAAG TAG GAC T G CAAGAT CAT GAC CAG CAAGAC C GAC G T G T С CAG CTCCGTGATCACCTCCCTGGGCGCCATCGTGTCCTGCTACGGCAAGACCAAGTGCACCGCCAGC AACAAGAACCGGGGCATCATCAAGACCTTCAGCAACGGCTGCGACTACGTGTCCAACAAGGGGG TGGACACCGTGTCCGTGGGCAACACCCTGTACTACGTGAACAAACAGGAAGGCAAGAGCCTGTA CGTGAAGGGCGAGCCCATCATCAACTTCTACGACCCCCTGGTGTTCCCCAGCGACGAGTTCGAC GCCAGCATCAGCCAGGTCAACGAGAAGATCAACCAGAGCCTGGCCTTCATCAGAAAGAGCGACG AGCTGCTGTCCGCCATCGGCGGCTACATCCCCGAGGCCCCTAGAGATGGCCAGGCCTACGTGCG GAAGGACGGCGAGTGGGTGCTGCTGTCTACCTTCCTG
Нуклеотидная последовательность, кодирующая PRPM+S46G (SEQ ID NO: 22):
ATGGAACTGCTGATCCTGAAGGCCAACGCCATCACCACCATCCTGACCGCCGTGACCTT CTGCTTTGCCAGCGGCCAGAACATCACCGAGGAATTCTACCAGAGCACCTGTAGCGCCGTGTCC AAGGGCTATCTGGGCGCCCTGAGAACCGGCTGGTACACCAGCGTGATCACCATCGAGCTGAGCA ACATCAAAGAAATCAAGTGCAACGGCACCGACGCCAAAGTGAAGCTGATCAAGCAGGAACTGGA CAAGTACAAGAATGCCGTGACCGAACTGCAGCTGCTGATGCAGAGCACCCCCGCCACCAACAAC CGGGCCAGAAGAGAACTGCCCAGATTCATGAACTACACCCTGAACAACGCCAAAAAGACCAACG TGACCCTGAGCAAGAAGCGGAAGCGGCGGTTCCTGGGCTTTCTGCTGGGAGTGGGAAGCGCCAT TGCTAGCGGAGTGGCCGTGTCTAAGGTGCTGCACCTGGAAGGCGAAGTGAACAAGATCAAGAGC GCCCTGCTGAGCACCAACAAGGCCGTGGTGTCTCTGAGCAACGGCGTGTCCGTGCTGACCAGCA AGGTGCTGGATCTGAAGAACTACATCGACAAACAGCTGCTGCCCATCGTGAACAAGCAGAGCTG CAGCATCCCCAACATCGAGACAGTGATCGAGTTCCAGCAGAAGAACAACCGGCTGCTGGAAATC ACCCGCGAGTTCAGCGTGAACGCTGGCGTGACCACCCCCGTGTCCACCTACATGCTGACCAACA
- 13 039095
GCGAGCTGCTGTCCCTGATCAACGACATGCCCATCACCAACGACCAGAAAAAGCTGATGAGCAA CAACGTGCAGATCGTGCGGCAGCAGAGCTACTCCATCATGAGCATTATCAAAGAAGAGGTGCTG GCCTACGTGGTGCAGCTGCCTCTGTACGGCGTGATCGACACCCCCTGCTGGAAGCTGCACACCA GCCCTCTGTGCACCACCAACACCAAAGAGGGCAGCAACATCTGCCTGACCCGGACCGACAGAGG CTGGTACTGCGATAATGCCGGCTCCGTCTCATTCTTTCCACAAGCCGAGACATGCAAGGTGCAG AGCAACCGGGTGTTCTGCGACACCATGAACAGCCTGACCCTGCCCTCCGAAGTGAATCTGTGCA ACGTGGACATCTTCAACCCTAAGTACGACTGCAAGATCATGACCTCCAAGACCGACGTGTCCAG CTCCGTGATCACAAGCCTGGGCGCCATCGTGTCCTGCTACGGCAAGACCAAGTGCACCGCCAGC AACAAGAACCGGGGCATCATCAAGACCTTCAGCAACGGCTGCGACTACGTGTCCAACAAGGGGG TGGACACCGTGTCTGTGGGCAACACCCTGTACTACGTGAACAAACAGGAAGGCAAGAGCCTGTA CGTGAAGGGCGAGCCCATCATCAACTTCTACGACCCCCTGGTGTTCCCCAGCAACGAGTTCGAC GCCAGCATCAGCCAAGTGAACGAGAAGATCAACCAGAGCCTGGCCTTCATCAGAAAGTCCGATG AGCTGCTGAGCGCCATCGGCGGCTACATCCCTGAGGCCCCTAGAGATGGCCAGGCCTATGTGCG GAAGGACGGCGAATGGGTGCTGCTGTCTACCTTTCTG
Claims (3)
1. Применение рекомбинантного белка слияния (F) респираторного синцитиального вируса (RSV) до слияния, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 для профилактики инфекции, вызванной RSV.
2. Применение по п.1, где F-белок RSV до слияния содержит по меньшей мере один эпитоп, который является специфическим для F-белка в конформации до слияния, где по меньшей мере один эпитоп распознается моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 4, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 5, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 7, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID NO: 8 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID NO: 9, и/или моноклональным антителом, специфичным в отношении конформации до слияния, содержащим CDR1-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 10, CDR2-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 11, CDR3-область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 12 и CDR1-область легкой цепи с SEQ ID NO: 13, CDR2-область легкой цепи с SEQ ID NO: 14 и CDR3-область легкой цепи с SEQ ID NO: 15.
3. Применение по п.1 или 2, где белок является тримерным.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16163810 | 2016-04-05 | ||
| PCT/EP2017/057962 WO2017174568A1 (en) | 2016-04-05 | 2017-04-04 | Stabilized soluble pre-fusion rsv f proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201892251A1 EA201892251A1 (ru) | 2019-03-29 |
| EA039095B1 true EA039095B1 (ru) | 2021-12-03 |
Family
ID=55752165
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201892251A EA039095B1 (ru) | 2016-04-05 | 2017-04-04 | Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния |
| EA202191622A EA202191622A1 (ru) | 2016-04-05 | 2017-04-04 | Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA202191622A EA202191622A1 (ru) | 2016-04-05 | 2017-04-04 | Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11155583B2 (ru) |
| EP (2) | EP3808374A1 (ru) |
| JP (2) | JP7088841B2 (ru) |
| KR (2) | KR20220041966A (ru) |
| CN (2) | CN116063551A (ru) |
| AU (2) | AU2017248021B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018070013A2 (ru) |
| CA (1) | CA3018941A1 (ru) |
| CL (1) | CL2018002826A1 (ru) |
| CY (1) | CY1124019T1 (ru) |
| DK (1) | DK3439672T3 (ru) |
| EA (2) | EA039095B1 (ru) |
| ES (1) | ES2858315T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20210113T1 (ru) |
| HU (1) | HUE053027T2 (ru) |
| IL (2) | IL291604B2 (ru) |
| LT (1) | LT3439672T (ru) |
| MA (2) | MA52910A (ru) |
| MD (1) | MD3439672T2 (ru) |
| MX (2) | MX2018012094A (ru) |
| MY (1) | MY190320A (ru) |
| PE (1) | PE20190420A1 (ru) |
| PH (1) | PH12018501962A1 (ru) |
| PL (1) | PL3439672T3 (ru) |
| PT (1) | PT3439672T (ru) |
| RS (1) | RS61456B1 (ru) |
| SG (1) | SG11201807913XA (ru) |
| SI (1) | SI3439672T1 (ru) |
| WO (1) | WO2017174568A1 (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2988780B1 (en) * | 2013-04-25 | 2018-12-26 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble prefusion rsv f polypeptides |
| US9630994B2 (en) | 2014-11-03 | 2017-04-25 | University Of Washington | Polypeptides for use in self-assembling protein nanostructures |
| MX2018012095A (es) | 2016-04-05 | 2019-01-10 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Vacuna contra vrs. |
| WO2017174568A1 (en) * | 2016-04-05 | 2017-10-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble pre-fusion rsv f proteins |
| DK3464331T3 (da) | 2016-05-30 | 2021-01-18 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Stabiliserede præfusions-rsv f-proteiner |
| SG11201908999QA (en) | 2017-04-04 | 2019-10-30 | Univ Washington | Self-assembling protein nanostructures displaying paramyxovirus and/or pneumovirus f proteins and their use |
| AU2019228551A1 (en) | 2018-02-28 | 2020-10-15 | University Of Washington | Self-assembling nanostructure vaccines |
| MX2021005607A (es) | 2018-11-13 | 2021-06-30 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Proteinas f de prefusion del vrs estabilizadas. |
| KR20220164543A (ko) | 2020-04-02 | 2022-12-13 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 안정화된 백신 조성물 |
| BR112022026408A2 (pt) | 2020-06-29 | 2023-01-17 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Combinação vacinal contra infecção pelo vírus sincicial respiratório |
| WO2022175479A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vaccine combinations against respiratory syncytial virus strain a and b infections |
| WO2022175477A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv fb antigens |
| WO2023198815A1 (en) | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Sequential administration of adenoviruses |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014174018A1 (en) * | 2013-04-25 | 2014-10-30 | Crucell Holland B.V. | Stabilized soluble prefusion rsv f polypeptides |
Family Cites Families (86)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
| US4372945A (en) | 1979-11-13 | 1983-02-08 | Likhite Vilas V | Antigen compounds |
| IL61904A (en) | 1981-01-13 | 1985-07-31 | Yeda Res & Dev | Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same |
| DE3584341D1 (de) | 1984-08-24 | 1991-11-14 | Upjohn Co | Rekombinante dna-verbindungen und expression von polypeptiden wie tpa. |
| US5168062A (en) | 1985-01-30 | 1992-12-01 | University Of Iowa Research Foundation | Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence |
| US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
| NZ230747A (en) | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
| CA2017507C (en) | 1989-05-25 | 1996-11-12 | Gary Van Nest | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| FR2705686B1 (fr) | 1993-05-28 | 1995-08-18 | Transgene Sa | Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes. |
| JP3816518B2 (ja) | 1994-06-10 | 2006-08-30 | ジェンベク、インコーポレイティッド | 相補的なアデノウイルスベクター系と細胞系 |
| US5851806A (en) | 1994-06-10 | 1998-12-22 | Genvec, Inc. | Complementary adenoviral systems and cell lines |
| US5965541A (en) | 1995-11-28 | 1999-10-12 | Genvec, Inc. | Vectors and methods for gene transfer to cells |
| US5846782A (en) | 1995-11-28 | 1998-12-08 | Genvec, Inc. | Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs |
| US5559099A (en) | 1994-09-08 | 1996-09-24 | Genvec, Inc. | Penton base protein and methods of using same |
| US5786464C1 (en) | 1994-09-19 | 2012-04-24 | Gen Hospital Corp | Overexpression of mammalian and viral proteins |
| AUPM873294A0 (en) | 1994-10-12 | 1994-11-03 | Csl Limited | Saponin preparations and use thereof in iscoms |
| US5837520A (en) | 1995-03-07 | 1998-11-17 | Canji, Inc. | Method of purification of viral vectors |
| KR100449181B1 (ko) | 1995-06-15 | 2005-01-24 | 크루셀 홀란드 비.브이. | 유전자요법에사용할수있는사람의재조합아데노바이러스패키징시스템 |
| US5837511A (en) | 1995-10-02 | 1998-11-17 | Cornell Research Foundation, Inc. | Non-group C adenoviral vectors |
| US5891690A (en) | 1996-04-26 | 1999-04-06 | Massie; Bernard | Adenovirus E1-complementing cell lines |
| US6485958B2 (en) | 1996-07-01 | 2002-11-26 | Gencell Sa | Method for producing recombinant adenovirus |
| FR2751343B1 (fr) | 1996-07-16 | 1998-12-18 | Transgene Sa | Procede de conservation de virus recombinants infectieux, suspension aqueuse virale et utilisation comme medicament |
| AU4255397A (en) | 1996-09-06 | 1998-03-26 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Chimpanzee adenovirus vectors |
| US7732129B1 (en) | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
| JP4492826B2 (ja) | 1996-11-20 | 2010-06-30 | イントロジェン セラピューティクス，インコーポレイテッド | アデノウイルスベクターの産生および精製のための改良された方法 |
| US6261823B1 (en) | 1996-12-13 | 2001-07-17 | Schering Corporation | Methods for purifying viruses |
| EP0973866A4 (en) | 1997-03-04 | 2000-04-19 | Baxter Int | ADENOVIRUS E1-COMPLEMENTING CELL LINES |
| US6020191A (en) | 1997-04-14 | 2000-02-01 | Genzyme Corporation | Adenoviral vectors capable of facilitating increased persistence of transgene expression |
| US6210683B1 (en) | 1997-09-05 | 2001-04-03 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers containing recombinant human serum albumin for live virus vaccines |
| WO1999041416A2 (en) | 1998-02-17 | 1999-08-19 | Schering Corporation | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |
| US5981225A (en) | 1998-04-16 | 1999-11-09 | Baylor College Of Medicine | Gene transfer vector, recombinant adenovirus particles containing the same, method for producing the same and method of use of the same |
| US6113913A (en) | 1998-06-26 | 2000-09-05 | Genvec, Inc. | Recombinant adenovirus |
| ATE421337T1 (de) | 1998-11-16 | 2009-02-15 | Introgen Therapeutics Inc | Adenovirus-formulierungen zur gentherapie |
| US6225289B1 (en) | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
| KR100741247B1 (ko) | 1999-05-17 | 2007-07-19 | 크루셀 홀란드 비.브이. | 아데노바이러스 타입 35의 적어도 하나의 구성성분을포함하는 아데노바이러스 유래 유전자 전달체 |
| US6913922B1 (en) | 1999-05-18 | 2005-07-05 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| US6492169B1 (en) | 1999-05-18 | 2002-12-10 | Crucell Holland, B.V. | Complementing cell lines |
| DE19955558C2 (de) | 1999-11-18 | 2003-03-20 | Stefan Kochanek | Permanente Amniozyten-Zelllinie, ihre Herstellung und Verwendung zur Herstellung von Gentransfervektoren |
| AU4346101A (en) | 2000-03-07 | 2001-09-17 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| JP2004519204A (ja) | 2000-05-08 | 2004-07-02 | ダビスコ フーズ インターナショナル インコーポレーテッド | 抗高血圧ペプチドの生成のための乳漿タンパク質の酵素処理、得られた産物、および哺乳動物における高血圧の処置 |
| AUPR878401A0 (en) | 2001-11-09 | 2001-12-06 | Biota Holdings Ltd | Methods for identifying or screening anti-viral agents |
| WO2003049763A1 (en) | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Fh Faulding & Co Limited | Composition for the preservation of viruses |
| CN1617745A (zh) | 2002-01-18 | 2005-05-18 | 舍林股份公司 | 稳定的腺病毒配方 |
| US20030180936A1 (en) | 2002-03-15 | 2003-09-25 | Memarzadeh Bahram Eric | Method for the purification, production and formulation of oncolytic adenoviruses |
| DK1497438T3 (da) | 2002-04-25 | 2010-01-04 | Crucell Holland Bv | Midler og fremgangsmåder til fremstilling af adenovirusvektorer |
| PL208588B1 (pl) | 2002-04-25 | 2011-05-31 | Crucell Holland Bv | Rekombinowane adenowirusy, wyizolowane kwasy nukleinowe, komórki pakujące oraz sposoby zwiększania stabilności i/lub pojemności upakowania rekombinowanego adenowirusa |
| DE60313451T2 (de) | 2002-05-14 | 2008-01-03 | Merck & Co., Inc. | Verfahren zur reinigung von adenovirus |
| SE0202110D0 (sv) | 2002-07-05 | 2002-07-05 | Isconova Ab | Iscom preparation and use thereof |
| US20040106184A1 (en) | 2002-08-28 | 2004-06-03 | Introgen Therapeutics Inc. | Chromatographic methods for adenovirus purification |
| SE0301998D0 (sv) | 2003-07-07 | 2003-07-07 | Isconova Ab | Quil A fraction with low toxicity and use thereof |
| PL2163260T3 (pl) | 2004-01-23 | 2017-12-29 | Msd Italia S.R.L. | Szympansie adenowirusowe nośniki szczepionek |
| JP2007522814A (ja) | 2004-02-23 | 2007-08-16 | クルセル ホランド ベー ヴェー | ウイルスの精製方法 |
| ES2317517T5 (es) | 2005-04-11 | 2016-01-21 | Crucell Holland B.V. | Purificación de virus usando ultrafiltración |
| US20100143302A1 (en) | 2006-03-16 | 2010-06-10 | Crucell Holland B.V. | Recombinant Adenoviruses Based on Serotype 26 and 48, and Use Thereof |
| EP1998804B1 (en) | 2006-03-27 | 2014-04-16 | Crucell Holland B.V. | Compositions comprising a recombinant adenovirus and an adjuvant |
| WO2008133663A2 (en) | 2006-11-30 | 2008-11-06 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, | Codon modified immunogenic compositions and methods of use |
| US7901388B2 (en) | 2007-07-13 | 2011-03-08 | Bacoustics, Llc | Method of treating wounds by creating a therapeutic solution with ultrasonic waves |
| EP4219566A3 (en) | 2007-12-24 | 2023-09-06 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Recombinant rsv antigens |
| MX2011004292A (es) | 2008-11-03 | 2011-05-31 | Crucell Holland Bv | Metodo para la produccion de vectores adenovirales. |
| KR101763093B1 (ko) | 2009-02-02 | 2017-07-28 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 시미안 아데노바이러스 핵산- 및 아미노산-서열, 이를 포함하는 벡터 및 이의 용도 |
| US8889146B2 (en) | 2009-06-24 | 2014-11-18 | Glaxosmithkline Biologicals, Sa | Vaccine |
| PT2445526T (pt) | 2009-06-24 | 2016-08-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antigénios de rsv recombinantes |
| RU2585227C2 (ru) | 2009-07-15 | 2016-05-27 | Новартис Аг | Композиции белка f rsv и способы их получения |
| KR101778317B1 (ko) | 2009-08-13 | 2017-09-13 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 사람 호흡기 세포융합 바이러스(ｒｓｖ)에 대한 항체 및 이용 방법 |
| PL2488636T3 (pl) | 2009-10-15 | 2014-07-31 | Crucell Holland Bv | Sposób oczyszczania cząsteczek adenowirusów z hodowli o wysokim zagęszczeniu komórkowym |
| AU2010305768B2 (en) | 2009-10-15 | 2015-05-14 | Crucell Holland B.V. | Process for adenovirus purification from high cell density cultures |
| US20120315270A1 (en) | 2009-10-21 | 2012-12-13 | The United States Of America, As Represented By The | Rsv immunogens, antibodies and compositions thereof |
| ES2578514T3 (es) | 2010-02-15 | 2016-07-27 | Crucell Holland B.V. | Método para la producción de vectores adenovíricos |
| BR112012031638B1 (pt) | 2010-07-09 | 2021-01-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | anticorpo anti-rsv ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, anticorpo multivalente, composição farmacêutica, uso de anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, método de detectar infecção por rsv, e, ácido nucleico isolado |
| SG194755A1 (en) | 2011-05-13 | 2013-12-30 | Novartis Ag | Pre-fusion rsv f antigens |
| NZ628385A (en) | 2012-03-12 | 2016-09-30 | Crucell Holland Bv | Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends |
| US8932607B2 (en) | 2012-03-12 | 2015-01-13 | Crucell Holland B.V. | Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends |
| NZ630649A (en) | 2012-03-22 | 2016-12-23 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Vaccine against rsv |
| WO2014005643A1 (en) | 2012-07-05 | 2014-01-09 | Okairos Ag | Novel prime-boosting regimens involving immunogenic polypeptides encoded by polynucleotides |
| US9738689B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-08-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Prefusion RSV F proteins and their use |
| AU2014243756B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-09-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Prefusion RSV F proteins and their use |
| US9060975B2 (en) * | 2013-03-14 | 2015-06-23 | Mucosis Bv | Heat-stable respiratory syncytial virus F protein oligomers and their use in immunological compositions |
| EP2975052B1 (en) * | 2013-03-15 | 2020-09-23 | Xiamen University | Epitope of rsv fusion protein and antibody identifying same |
| WO2014170257A1 (en) | 2013-04-15 | 2014-10-23 | Crucell Holland B.V. | Human antibodies binding to rsv g protein |
| EA035846B1 (ru) | 2013-04-15 | 2020-08-20 | Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. | Антитела человека, связывающиеся с g-белком rsv |
| CN105408348B (zh) * | 2013-06-17 | 2021-07-06 | 扬森疫苗与预防公司 | 稳定化的可溶性融合前rsv f多肽 |
| US10125172B2 (en) | 2013-07-25 | 2018-11-13 | Calder Biosciences Inc. | Conformationally stabilized RSV pre-fusion F proteins |
| HUE041791T2 (hu) | 2013-09-19 | 2019-05-28 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Javított adenovírus-készítmények |
| WO2017174568A1 (en) * | 2016-04-05 | 2017-10-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble pre-fusion rsv f proteins |
| MX2018012095A (es) * | 2016-04-05 | 2019-01-10 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Vacuna contra vrs. |
| EP3681533A1 (en) | 2017-09-15 | 2020-07-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Method for the safe induction of immunity against rsv |
-
2017
- 2017-04-04 WO PCT/EP2017/057962 patent/WO2017174568A1/en active Application Filing
- 2017-04-04 ES ES17715692T patent/ES2858315T3/es active Active
- 2017-04-04 EA EA201892251A patent/EA039095B1/ru unknown
- 2017-04-04 MA MA052910A patent/MA52910A/fr unknown
- 2017-04-04 EP EP20201970.9A patent/EP3808374A1/en active Pending
- 2017-04-04 KR KR1020227009874A patent/KR20220041966A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-04-04 MX MX2018012094A patent/MX2018012094A/es unknown
- 2017-04-04 JP JP2018552227A patent/JP7088841B2/ja active Active
- 2017-04-04 MY MYPI2018703623A patent/MY190320A/en unknown
- 2017-04-04 CN CN202210915265.9A patent/CN116063551A/zh active Pending
- 2017-04-04 IL IL291604A patent/IL291604B2/en unknown
- 2017-04-04 EA EA202191622A patent/EA202191622A1/ru unknown
- 2017-04-04 PE PE2018001917A patent/PE20190420A1/es unknown
- 2017-04-04 DK DK17715692.4T patent/DK3439672T3/da active
- 2017-04-04 IL IL262108A patent/IL262108B2/en unknown
- 2017-04-04 BR BR112018070013A patent/BR112018070013A2/pt unknown
- 2017-04-04 SG SG11201807913XA patent/SG11201807913XA/en unknown
- 2017-04-04 LT LTEP17715692.4T patent/LT3439672T/lt unknown
- 2017-04-04 AU AU2017248021A patent/AU2017248021B2/en active Active
- 2017-04-04 CN CN201780021720.8A patent/CN109069616A/zh active Pending
- 2017-04-04 MD MDE20190180T patent/MD3439672T2/ro unknown
- 2017-04-04 SI SI201730579T patent/SI3439672T1/sl unknown
- 2017-04-04 PT PT177156924T patent/PT3439672T/pt unknown
- 2017-04-04 US US16/091,344 patent/US11155583B2/en active Active
- 2017-04-04 CA CA3018941A patent/CA3018941A1/en active Pending
- 2017-04-04 HU HUE17715692A patent/HUE053027T2/hu unknown
- 2017-04-04 EP EP17715692.4A patent/EP3439672B1/en active Active
- 2017-04-04 KR KR1020187031418A patent/KR102506895B1/ko active IP Right Grant
- 2017-04-04 PL PL17715692T patent/PL3439672T3/pl unknown
- 2017-04-04 RS RS20210212A patent/RS61456B1/sr unknown
- 2017-04-04 MA MA43763A patent/MA43763B1/fr unknown
-
2018
- 2018-09-12 PH PH12018501962A patent/PH12018501962A1/en unknown
- 2018-10-03 MX MX2022015257A patent/MX2022015257A/es unknown
- 2018-10-04 CL CL2018002826A patent/CL2018002826A1/es unknown
-
2021
- 2021-01-22 HR HRP20210113TT patent/HRP20210113T1/hr unknown
- 2021-02-25 CY CY20211100159T patent/CY1124019T1/el unknown
- 2021-07-27 AU AU2021209185A patent/AU2021209185B2/en active Active
- 2021-10-08 US US17/450,348 patent/US20220089652A1/en active Pending
-
2022
- 2022-03-28 JP JP2022052138A patent/JP7362819B2/ja active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014174018A1 (en) * | 2013-04-25 | 2014-10-30 | Crucell Holland B.V. | Stabilized soluble prefusion rsv f polypeptides |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DATABASE Geneseq [online] 18 December 2014 (2014-12-18), "RSV fusion protein N67I S215P, RSV CL57-v224, fibritin, SEQ: 74.", XP002761983, retrieved from EBI * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021209185B2 (en) | Stabilized soluble pre-fusion RSV F proteins | |
| AU2022204267A1 (en) | Vaccine compositions | |
| JP2018527897A (ja) | 安定化された可溶性融合前ｒｓｖ ｆポリペプチド | |
| KR102421049B1 (ko) | 안정화된 융합-전 rsv f 단백질 | |
| US20220017574A1 (en) | Stabilized pre-fusion rsv f proteins | |
| KR20230107621A (ko) | 메타뉴모바이러스에 대한 단백질-기반 나노입자 백신 | |
| WO2023047349A1 (en) | Stabilized coronavirus spike protein fusion proteins | |
| EA045858B1 (ru) | Стабилизированные растворимые f-белки rsv до слияния | |
| NZ785677A (en) | Stabilized soluble pre-fusion rsv f proteins | |
| OA18879A (en) | Stabilized soluble pre-fusion RSV F proteins | |
| WO2023236822A1 (zh) | H5n6禽流感广谱性疫苗的开发及其应用 | |
| WO2023047348A1 (en) | Stabilized corona virus spike protein fusion proteins |