UA126192C2 - Інсектицидний білок та спосіб його застосування - Google Patents

Інсектицидний білок та спосіб його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA126192C2
UA126192C2 UAA201704587A UAA201704587A UA126192C2 UA 126192 C2 UA126192 C2 UA 126192C2 UA A201704587 A UAA201704587 A UA A201704587A UA A201704587 A UAA201704587 A UA A201704587A UA 126192 C2 UA126192 C2 UA 126192C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
polypeptide
zhk
retr
oto
zeo
Prior art date
Application number
UAA201704587A
Other languages
English (en)
Inventor
Дженіфер К. Беррі
Дженифер К. Берри
Дебора В. Кларк
Дэбора В. Кларк
Джеймс Дж. Інгліш
Джэймс Дж. Инглиш
Азалія Онг
Азалия Онг
Ерік Дж. Шеперс
Эрик Дж. ШЕПЕРС
Джулі Ци
Джули ЦИ
Джанет А. РАЙС
Original Assignee
Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк.
Пионир Хай-Брэд Интэрнэшнл, Инк.
Е. І. Дю Пон Де Немурс Енд Компані
Э. И. Дю Пон Де Немурс Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк., Пионир Хай-Брэд Интэрнэшнл, Инк., Е. І. Дю Пон Де Немурс Енд Компані, Э. И. Дю Пон Де Немурс Энд Компани filed Critical Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк.
Publication of UA126192C2 publication Critical patent/UA126192C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A01N37/46—N-acyl derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/04—Pteridophyta [fern allies]; Filicophyta [ferns]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/145—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus, Duvenhage virus, Mokola virus or vesicular stomatitis virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)

Abstract

Винахід стосується композиції та способу контролю шкідників. Спосіб включає трансформацію рослин послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує інсектицидний білок. Композиція являє собою інсектицидні нуклеїнові кислоти та білки з видів бактерій. Послідовності знаходять застосування під час конструювання векторів експресії для подальшої трансформації рослин, що становлять інтерес, як зонди для виділення інших гомологічних (або частково гомологічних) генів. Пестицидний білок знаходить застосування у контролі, пригніченні росту або знищенні совки кукурудзяної (Helicoverpa zea).

Description

Офіційна копія даного переліку послідовностей надіслана в електронному вигляді за допомогою ЕЕ5-Уер як відформатований під АЗСІЇ перелік послідовностей у файлі з назвою "6584МУОРСТ зедиепсе Іівіїпд", що був створений 14 вересня 2015 року та має розмір 255 кілобайтів, і подана одночасно з описом. Перелік послідовностей, що міститься в даному документі у форматі АЗСІЇ, є частиною опису та включений у даний документ за допомогою посилання у своєму повному обсязі.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Дане розкриття стосується галузі молекулярної біології. Представлені нові гени, що кодують пестицидні білки. Ці пестицидні білки та послідовності нуклеїнових кислот, що їх кодують, застосовують у приготуванні пестицидних складів та в одержанні трансгенних рослин, стійких до шкідників.
ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ
Біологічний контроль комах-шкідників, що мають сільськогосподарське значення, із застосуванням мікробного агента, такого як гриби, бактерії або інші види комах, являє собою альтернативу синтетичним хімічним пестицидам, що не чинить негативного впливу на навколишнє середовище та є комерційно привабливою. Загалом можна сказати, що застосування біопестицидів викликає менший ризик забруднення та несприятливих впливів на навколишнє середовище, та біопестициди забезпечують більшу специфічність щодо мішені порівняно зі специфічністю, характерною для традиційних хімічних інсектицидів широкого спектра дії. Крім того, зазвичай виробництво біопестицидів коштує дешевше, та внаслідок цього поліпшується економічно ефективний вихід продукції для широкого спектра сільськогосподарських культур.
Певні види мікроорганізмів роду Васіш5, як відомо, мають пестицидну активність проти ряду комах-шкідників, включаючи Іерідорієга, Оірієга, СоІеорієга, Нетірієгта та інших. ВасіПшв5
Ішгіпдієпвіє (ВО та Васійй5 рорійає належать до найбільш успішних засобів біологічного контролю, виявлених на сьогодні. Патогенність щодо комах також приписували штамам В.
Іаглає, В. Іепійтогрив, В. 5рпаєгісиз та В. сегеив. Мікробні інсектициди, зокрема одержані зі штамів Васійн5, відіграли важливу роль у сільському господарстві як альтернатива хімічному контролю шкідників.
Зо Були розроблені культурні рослини з підвищеною стійкістю до комах за допомогою генної інженерії культурних рослин для одержання пестицидних білків, що походять від ВасіПшв5.
Наприклад, за допомогою генної інженерії були створені рослини кукурудзи та бавовнику для одержання пестицидних білків, виділених зі штамів Ві. Ці сільськогосподарські культури, створені за допомогою генної інженерії, на сьогодні широко застосовуються у сільському господарстві та забезпечують фермера альтернативою традиційним способам контролю комах, що не чинить негативного впливу на навколишнє середовище. Незважаючи на те, що вони були визнані дуже успішними з комерційного погляду, ці культурні рослини, створені за допомогою генної інженерії, стійкі до комах, передбачають стійкість тільки до вузького діапазону важливих в економічному сенсі комах-шкідників. У деяких випадках комахи можуть розвивати стійкість до різних інсектицидних сполук, що підвищує необхідність в ідентифікації альтернативних засобів біологічного контролю для контролю шкідників.
Відповідно, залишається необхідність у нових пестицидних білках із різними діапазонами інсектицидної активності проти комах-шкідників, наприклад інсектицидних білках, які є активними проти ряду комах із ряду ГІ ерідорієга та ряду СоіІеоріега, у тому числі без обмеження комах-шкідників, що розвинули стійкість до існуючих інсектицидів.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Представлені композиції та способи забезпечення пестицидної активності у бактерій, рослин, рослинних клітин, тканин та насіння. Композиції включають молекули нуклеїнових кислот, що кодують послідовності пестицидних та інсектицидних поліпептидів, вектори, що містять такі молекули нуклеїнової кислоти, та клітини-хазяї, що містять вектори. Композиції також включають послідовності пестицидних поліпептидів та антитіла до таких поліпептидів.
Послідовності нуклеїнових кислот можна застосовувати у ДНК-конструкціях або касетах експресії для трансформації та експресії в організмах, включаючи мікроорганізми та рослини.
Нуклеотидні або амінокислотні послідовності можуть являти собою синтетичні послідовності, що були сконструйовані для експресії в організмі, включаючи без обмеження мікроорганізм або рослину. Композиції також включають трансформовані бактерії, рослини, рослинні клітини, тканини та насіння.
Зокрема, передбачені виділені або рекомбінантні молекули нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди інсектицидного білка-96 (РИР-96) Ріегідорпуїа і Іусородіорпуїа, включаючи 60 амінокислотні заміни, делеції, вставки, їхні фрагменти. Додатково охоплюються амінокислотні послідовності, що відповідають поліпептидам РІР-96. Представлені виділені або рекомбінантні молекули нуклеїнових кислот, що здатні кодувати поліпептиди РІР-96 під ЗЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮ
МО: 7, БЕО ІО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 9, 5БО ІО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5БО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО 10 МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІЮО МО: 38, 5ЕО І МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО ІО МО: 44, 5БО І МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО І МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮО МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮО МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІЮО МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЕБО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІЮО МО: 108, а також амінокислотні заміни, делеції, вставки, їх фрагменти та їх комбінації. Також охоплюються послідовності нуклеїнових кислот, що є комплементарними послідовності нуклеїнових кислот згідно з варіантами здійснення або які гібридизуються з послідовністю згідно з варіантами здійснення. Також представлені виділені або рекомбінантні поліпептиди РІЇР-96 під БЕО 10 МО: б, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5БЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14,
ЗЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО ІЮО МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО І МО: 26;
ЗЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО І МО: 38,
ЗЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО І МО: 46, БО ІЮО МО: 48, 5ЕО І МО: 50,
ЗЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО І МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62,
ЗЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74,
ЗЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО І МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО І МО: 86,
ЗЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО І МО: 90, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98,
ЗЕО ІО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, БО ІЮ МО: 104, 5ЕО І МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, а також амінокислотні заміни, делеції, вставки, їх фрагменти та їх комбінації.
Представлені способи одержання поліпептидів та застосування даних поліпептидів для контролю або знищення шкідників з групи лускокрилих, твердокрилих, нематод, грибів та/або двокрилих. Трансгенні рослини згідно з варіантами здійснення експресують одну або декілька пестицидних послідовностей, розкритих у даному документі. У різних варіантах здійснення трансгенна рослина додатково містить один або декілька додаткових генів стійкості до комах, наприклад один або декілька додаткових генів для контролю шкідників із групи твердокрилих, лускокрилих, напівтвердокрилих або нематод. Фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що трансгенна рослина може містити будь-який ген, що забезпечує агрономічну ознаку, що становить інтерес.
Також включені способи виявлення нуклеїнових кислот та поліпептидів згідно з варіантами здійснення у зразку. Представлений набір для виявлення наявності поліпептиду РІЇР-96 або виявлення наявності полінуклеотиду, що кодує поліпептид РІР-96, у зразку. Набір може бути представлений разом з усіма реагентами та контрольними зразками, необхідними для здійснення способу виявлення передбачуваного засобу, а також з інструкціями із застосування.
Композиції та способи згідно з варіантами здійснення є придатними для одержання організмів із підвищеною стійкістю до шкідників або переносимістю шкідників. Ці організми та композиції, що містять організми, є бажаними для сільськогосподарських цілей. Композиції згідно з варіантами здійснення також є застосовними для одержання змінених або поліпшених білків, що мають пестицидну активність, або для виявлення наявності поліпептидів РИР-96.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
На фігурі ТА - 1К показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РІЇР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТФ: РИР-96Аа (5ЕО І МО: 9); РІР-96АБ (5ЕО ІО МО: 12); РІИР-96Ас (ЗЕО ІО МО: 14); РІИР-96Аа (ЗЕО І МО: 16); РИР-96Ае (ЗЕО ІО МО: 18); РИР-96АТ (5ЕО І МО: 20); РІИР-96Аа (ЗЕО ІЮО МО: 22); РІИІР-96АН (5ЕО ІО МО: 24); РІИР-96Са (5ЕО ІО МО: 26); РИР-96СЬ (5ЕО ІО МО: 28); РИР-96Сс (5ЕО ІО МО: 30); РІР- 96Са (5ЕО І МО: 32); РІИР-96Се (5ЕО ІО МО: 34); РИР-96СІ (5ЕО І МО: 36); РИР-96Са (5ЕО І
МО: 38); РІИР-96СП (ЗЕО ІО МО: 40); РІИР-960ба (5ЕО І МО: 42); РИР-9605Б (ЗЕО ІО МО: 44); РІР- 96Ос (ЗЕО І МО: 46); РИР-960а (5ЕО ІЮ МО: 52); РІР-96Ое (ЗЕО ІО МО: 48); РИР-960 (5ЕО 10
МО: 50); РІР-96Еа (ЗЕО ІО МО: 7); РІР-96ЕБ (ЗЕО ІО МО: 8); РІИР-96Ес (5ЕО І МО: 6); РІР- 96ЕЯ (ЗЕО І МО: 54); РІИР-96Ее (ЗЕО ІЮ МО: 56); РІИР-96ЕТ (5ЕО І МО: 58); РІИР-96ЕЯ9 (ЗЕО І
МО: 60); РІИР-96ЕН (5ЕО ІО МО: 62); РІПР-96ЕЇ (ЗЕО ІО МО: 64); РИР-96Е) (5ЕО ІО МО: 66); РІР- 96ЕК (ЗЕО ІЮ МО: 68); РИР-96ЕЇ (ЗЕО ІО МО: 70); РИР-96Єт (5ЕО І МО: 72); РІИР-96Еп (5ЕО І
МО: 74); РІПР-96Ео (ЗЕО ІЮ МО: 76); РІПР-96Ер (ЗЕО ІЮ МО: 78); РИР-96Еа (ЗЕО ІО МО: 80); РИР- 96Ег (ЗЕО ІО МО: 82); РИР-96Ез (5ЕО І МО: 84); РИР-96ЕЇ (ЗЕО І МО: 86); РІИР-96Єи (ЗЕО І бо МО: 88); РІПР-96Ем (5ЕО ІЮ МО: 90); РІІР-96На (ЗЕО ІО МО: 10); РІИР-96На (5ЕО ІО МО: 96); РІР-
96Не (5ЕО ІО МО: 98); РИР-96НІ (З5ЕО ІО МО: 100); РІР-96На (ЗЕО І МО: 102); РІР-96НА (5ЕО
ІО МО: 104); РИІР-96НІ (ЗЕО ІО МО: 106); РИР-96НІ (ЗЕО ІЮО МО: 108). Виділені положення консервативних амінокислот із гомологів поліпептиду РІЇР-96 (2. Виділена різниця за неконсервативними амінокислотами між гомологами поліпептиду РИР-96 (Д).
На фігурі 2А - 18 показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РИР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТІФ: РИР-96Аа (5ЕО І МО: 9); РІИР-96АБ (5ЕО ІЮ МО: 12); РИР-96Ас (5ЕО 10 МО: 14); РІИР-96Аа (5ЕО 10 МО: 16); РИР-96Ае (ЗЕО ІО МО: 18); РИР-96АГ (ЗЕО ІЮ МО: 20); РІИР-96АЯ (ЗЕО ІЮ МО: 22) та РІР-96АН (5ЕО ІО МО: 24). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду
РИР-96.
На фігурі ЗА - 18 показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РИР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТФ: РІИР-96Са (5ЕО ІО МО: 26); РІИР-96СЬ (5ЕО ІО МО: 28); РИР-96Сс (5ЕБО ІО МО: 30); РИР-96Са (5ЕО ІО МО: 32); РИР- 96Се (З5ЕО І МО: 34); РІИР-96СІ (ЗЕО І МО: 36); РІИР-96С9 (5ЕО ІО МО: 38) та РИР-96СП (5ЕО
ІЮ МО: 40). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду РИР-96.
На фігурі 4А - 40 показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РИР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТФ: РИР-96Еа (5ЕО І МО: 7); РІР-96ЕБ (ЗЕО ІО МО: 8); РІР-96Ес (5ЕО ІО МО: 6); РІР-96ЕЯ (5ЕО ІО МО: 54); РИР-96Ее (ЗЕО ІО МО: 56); РИР-96ЕТ (5ЕО І МО: 58); РИР-96Еа (ЗЕО ІО МО: 60); РІІР-96ЕН (5ЕО ІО МО: 62); РИР-96ЕЇ (З5ЕО 10 МО: 64); РИР-96ЕЇ (5ЕО 10 МО: 66); РИР-96ЕК (ЗЕО І МО: 68); РИР-96ЕЇ (ЗЕО ІО МО: 70); РІИР-96ЕЄт (5ЕО І МО: 72); РІР-96Еп (ЗЕО І МО: 74); РИР-96Ег (ЗЕО І МО: 82); РІИР-96Е5 (ЗЕО І МО: 84); РІПР-96ЕЇ (5ЕО ІО МО: 86); РИР-96Еи (ЗЕО ІО МО: 88) та РИР- 9бЕм (ЗЕБЕО ІО МО: 90). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду РИР-96.
На фігурі 5 показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РІИР-96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТІФ: РИР-96Ео (5ЕО ІЮ МО: 76);
РИР-9бЕр (ЗЕБЕО ІО МО: 78) та РИР-96Ед (5ЕБО І МО: 80). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду РИР-96.
Зо На фігурі бА - 68 показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РИР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТФ: РІИР-96На (5ЕО ІО МО: 10); РІР-96НЬ (5ЕО І МО: 92); РИР-96Нс (5ЕО ІО МО: 94); РИР-96На (5ЕО ІО МО: 96); РІИР- 96Не (5ЕО ІО МО: 98); РИР-96НІ (З5ЕО ІО МО: 100); РІР-96На (ЗЕО І МО: 102); РІР-96НА (5ЕО
ІО МО: 104); РИІР-96НІ (ЗЕО ІЮ МО: 106) та РІР-96Н|І (ЗЕО ІО МО: 108). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду РИР-96.
На фігурі 7А - 7В показане вирівнювання амінокислотних послідовностей поліпептидів РИР- 96 із використанням модуля АГІСМХФ програмного пакета Месіог МТФ: РИР-96ба (5ЕО ІО МО: 42); РІИР-9606 (5ЕО І МО: 44); РИР-96Ос (5ЕО І МО: 46); РИР-960а (5ЕО ІО МО: 52); РІИР- 96Ое (5ЕО ІЮО МО: 48) та РИР-9601 (5ЕО ІЮО МО: 50). Виділена відмінність за амінокислотними послідовностями між гомологами поліпептиду РІЇР-96.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
Слід розуміти, що дане розкриття не обмежується конкретними описаними методиками, протоколами, лініями клітин, родами та реагентами, у зв'язку з цим вони можуть варіювати.
Також слід розуміти, що термінологія, застосовувана у даному документі, призначена тільки для опису конкретних варіантів здійснення та не призначена для обмеження обсягу даного розкриття.
Застосовувана у даному документі форма однини включає посилання на множину, якщо у контексті явно не вказано інше. Так, наприклад, посилання на "клітину" включає множину таких клітин, а посилання на "білок" включає посилання на один або декілька білків та їхніх еквівалентів, відомих фахівцям у даній галузі, тощо. Усі технічні та наукові терміни, застосовувані у даному документі, мають те ж саме значення, що звичайно зрозуміле фахівцю в галузі техніки, до якої належить дане розкриття, якщо явно не вказано інше.
Дане розкриття стосується композицій та способів контролю шкідників. Способи включають трансформацію організмів послідовностями нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди РІІР- 96. Зокрема, послідовності нуклеїнових кислот згідно з варіантами здійснення є застосовними для одержання рослин та мікроорганізмів, які мають пестицидну активність. Таким чином, представлені трансформовані бактерії, рослини, рослинні клітини, тканини рослин та насіння.
Композиції являють собою пестицидні нуклеїнові кислоти та білки з видів бактерій.
Послідовності нуклеїнових кислот знаходять застосування у конструюванні векторів експресії 60 для подальшої трансформації організмів, що становлять інтерес, як зонди для виділення інших гомологічних (або частково гомологічних) генів та для одержання змінених поліпептидів РИР-96 за допомогою способів, відомих із рівня техніки, таких як сайт-спрямований мутагенез, заміна доменів або ДНК-шафлінг. РІИР-96 знаходять застосування у контролі або знищенні популяцій шкідників із групи лускокрилих, твердокрилих, двокрилих, грибів, напівтвердокрилих та нематод, а також для одержання композицій із пестицидною активністю. Комахи-шкідники, що становлять інтерес, включають без обмеження види з ряду І ерідоріега, зокрема без обмеження: совку кукурудзяну (СЕММ) (Неїїсомегра 7леа), вогнівку кукурудзяну (ЕСВ) (Овігіпіа пибіаїв5), міль капустяну, наприклад, Неїїсомегра 2є6а Водаїйє; совку соєву, наприклад, Рзецйдоріивзіа іпсічдеп5
УмаїКег; та совку бархатних бобів, наприклад Апіїсагзіа деттаїйаїй5 Ніабпег, а також види з ряду
СоіІеорієга, зокрема без обмеження західного кукурудзяного жука (Оіаргоїфса мігдітега) - САМ, південного кукурудзяного жука (Оіабгоїїса ипдесітрипсіайа ПпПоуага)) - ЗСКУМ та північного кукурудзяного жука (Оіабгоїїйса багбегі) - МСВМУ.
Під "пестицидним токсином" або "пестицидним білком", використовуваними у даному документі, мають на увазі токсин, що має токсичну активність проти одного або декількох шкідників, у тому числі без обмеження представників ряду І ерідоріега, Оірієга, Нетірієега та
СоІеорієга або типу Метаїйода, або білок, який характеризується гомологією з таким білком.
Пестицидні білки були виділені з організмів, у тому числі, наприклад, Васіїи5 5р., Ргеендотопав 5р., Рпоїогпардив з5р., Хепогпардиб 5р., СіІовзігідішт рітептепіап5 та РаепірасшШи5 рорійає.
Пестицидні білюи включають без обмеження інсектицидні білки із Рхендотопав 5р., такі як
РБЗЕЕМЗ174 (Мопаїувіп; (2011) Рі о5 Раїподепв5 7:1-13); зі штаму СНАО та РІ-5 Реейдотопав ргоїедепо (у минулому Пиогезсепв5) (Респу-Таїт, (2008) Епмігоптепіа! Містобіоіоду 10:2368-2386;
Мо доступу в сСепВапк ЄО400157); із Рхеендотопах Таїмапепбвівз (ій, еї аї!., (2010) 9. Адгіс. оса
Спет., 58:12343-12349) та з Рзепдотопав рзецйдоаїсіїдепев (2папо, еї аї., (2009) Аппаї5 ої
Містобіоіоду 59:45-501і Ії, єї аї., (2007) Ріапі Сеї! Тівв. Огдап Сиїї. 89:159-168); інсектицидні білки із Рпиоюгнавадиз зр. і Хепотаваиз зр. (Ніпспійе, єї а!., (2010) Тне Ореп Тохісоіоду Уоишгпаї, 3:101- 118 ї Могдап, еї аї., (2001) Арріїєд апа Епміг. Місто. 67:2062-2069); патенту США з номером 6048838 та патенту США з номером 6379946; поліпептид РІР-1 із публікації патенту США 0520140007292; поліпептид АТПР-1А та/або АТР-1В із публікації патенту США 0О520140033361; поліпептид РНІ-4 із патентного документу США з порядковим номером 13/839702; поліпептид
Ко) РІР-47 із заявки РОСТ із порядковим номером РСТ/О514/51063, поліпептид РІР-72 із заявки РСТ із порядковим номером РСТ/О514/55128 та б-ендотоксини, включаючи без обмеження класи генів Сту!, Стуг, Сту3, Сту4, Стуб5, Стуб, Сту7, Стув8, Сту9, Сту10, Сту11, Сту12, Сту13, Стуї14,
Сту15, Сту16, Сту17, Сту18, Сту19, Стуго, Сту21, Стуг22, Стуг23, Стуг4, Стуг25, Сту26, Стуг27, Сту 28,
Сту 29, Сту 30, Сту31, СтуЗ2, Сту33, Сту34, Сту35,СтуЗ36б, Сту37, СтуЗ38, Сту39, Сту40, Сту41, Студ42, Сту43, Студ4, Студ5, Сту 46, Сту47, Сту49, СтубО, Стубі, Стуб2, Стуб53, Сту 54, Стуб5, Стубб,
Сту57, Стуб58, Стуб59, Стубо, Стуб1, Стуб2, Стуб3, Стуб4, Стуб5, Стубб, Стуб7, Стуб8, Стуб9, Сту70,
Сту/1 і Сту 72 б-ендотоксинів та гени цитолітичних токсинів суй і суї2 В. Шигіпдієпв5ів.
Представники цих класів інсектицидних білків із В. Іпигіпдіеєпвіз добре відомі фахівцю в даній галузі (див. СтісКтоге, еї аї., "Васіїйе ІПигіпдіепвіз їохіп потепсіайте" (2011) на сайті
Ібезсі.зивзех.ас.ик/поте/Меї! Стісктоге/Ву/, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі
Інтернет за допомогою префікса "м/млми").
Приклади б-ендотоксинів також включають без обмеження білки СтуТА із патентів США МоМо 5880275 та 7858849; токсин 0БІС-3З або 0ІС-11 (варіанти з М-кінцевою делецією а-спіралі 1 та/або а-спіралі 2 білків сгу, таких як СтутА, СтузЗА) із патентів США МоМо 8304604, 8304605 та 8476226; Сту1В із публікації заявки на патент США із порядковим номером 10/525318; Сту1бС із патенту США Мо 6033874; Стуї1Е із патентів США МоМо 5188960 та 6218188; химера СтуїтА/Е із патентів США МоМо 7070982; 6962705 та 6713063); білок Стуг, такий як білок СтугАБ із патенту
США Мо 7064249); білок СтуЗА, у тому числі без обмеження створений за допомогою генної інженерії гібридний інсектицидний білок (еНІР), одержаний шляхом злиття унікальних комбінацій варіабельних ділянок і консервативних блоків щонайменше двох різних білків Сту (публікація заявки на патент США Мо 2010/0017914); білок Сту4; білок Стуб; білок Стуб; білки Стув8 із патентів
США МоМо 7329736, 7449552, 7803943, 7476781, 7105332, 7378499 та 7462760; білок Сту9, наприклад представники родин СтуЗА, Сту9В, Сту9О, Сту9О, Сту9Е та Сту9Е; білок Сту15 із публікації Маїтом, єї аї., (2008) Арріїей апіа Епмігоптепіа! Місгобіоіоду, 74:7145-7151; Стгуг2, білок СтуЗ4АБІ із патентів США МоМо 6127180, 6624145 та 6340593; білок СТУЕТЗЗ та стуєЕТЗ34 із патентів США МоМо 6248535, 6326351, 6399330, 6949626, 7385107 та 7504229; гомологи
СтУЄТЗЗ та СтуЕТЗ34 із публікації заявок на патент США МоеоМо 2006/0191034, 2012/0278954 та публікації згідно з РСТ Мо МО 2012/139004; білок СтуЗзБАБІ із патентів США МоМо 6083499, 6548291 та 6340593; білок Сту46б, білок Сту 51, бінарний токсин Сту; ТІС901 або споріднений 60 токсин; ТІС807 із публікації заявки на патент США Мо 2008/0295207; ЕТ29, ЕТЗ37, ТІС809,
ТІС810, ТІС812, ТІС127, ТІС128 з РСТ 5 2006/033867; АХМІ-027, АХМІ-036 та АХМІ-038 з патенту США Ме 8236757; АХМІ-031, АХМІ-039, АХМІ-040, АХМІ-049 із патенту США Ме 7923602;
АХМІ-018, АХМІ-020 та АХМІ-021 із УМО 2006/083891; АХМІ-010 із МО 2005/038032; АХМІ-003 із
МО 2005/021585; АХМІ-008 із публікації заявки на патент США Ме 2004/0250311; АХМІ-006 із публікації заявки на патент США Ме2004/0216186; АХМІ-007 із публікації заявки на патент США
Мо2004/0210965; АХМІ-009 із публікації заявки на патент США Мо 2004/0210964; АХМІ-014 із публікації заявки на патент США Мо 2004/0197917; АХМІ-004 із публікації заявки на патент США
Мо 2004/0197916; АХМІ-028 та АХМІ-029 з МО 2006/119457; АХМІ-007, АХМІ-008, АХМІ-0080Н2,
АХМІ-009, АХМІ-014 та АХМІ-004 з МО 2004/074462; АХМІ-150 із патенту США Мо 8084416;
АХМІ-205 із публікації заявки на патент США Мо 2011/0023184; АХМІ-011, АХМІ-012, АХМІ-013,
АХМІ-015, АХМІ-019, АХМІ-044, АХМІ-037, АХМІ-043, АХМІ-0О33, АХМІ-034, АХМІ-022, АХМІ-023,
АХМІ-041, АХМІ-063 та АХМІ-064 із публікації заявки на патент США Мо 2011/0263488; АХМІ-В1 та споріднені білки із публікації заявки на патент США Мо 2010/0197592; АХМІ2217, АХМІ2222,
АХМІ2237, АХМІ2247 та АХМІ2257 з МО 2011/103248; АХМІ218, АХМІ219, АХМІ220, АХМІ226,
АХМІ227, АХМІ228, АХМІ229, АХМІ230 та АХМІ231 з МО 2011/103247; АХМІ-115, АХМІ-113,
АХМІ-005, АХМІ-163 та АХМІ-184 з патенту США Мо 8334431; АХМІ-001, АХМІ-002, АХМІ-0ОЗО,
АХМІ-035 та АХМІ-045 із публікації заявки на патент США Мо 2010/0298211; АХМІ-066 та АХМІ- 076 із публікації заявки на патент США Мо 2009/0144852; АХМІ128, АХМІ130, АХМІ131, АХМІ133,
АХМІ140, АХМІТ4А1, АХМІ142, АХМІ143, АХМІ144, АХМІ146, АХМІ148, АХМІ149, АХМІ152,
АХМІ153, АХМІ154, АХМІ155, АХМІ156, АХМІ157, АХМІ158, АХМІ162, АХМІ165, АХМІ166,
АХМІ167, АХМІ168, АХМІ169, АХМІ170, АХМІ171, АХМІ172, АХМІ173, АХМІ174, АХМІ175,
АХМІ176, АХМІ177, АХМІ178, АХМІ179, АХМІ180, АХМІ181, АХМІ182, АХМІ185, АХМІ186,
АХМІ187, АХМІ188, АХМІ189 із патенту США з номером 8318900; АХМІО79, АХМІОВ8О, АХМІО81,
АХМІО82, АХМІ0ОЗІ, АХМІОЗ2, АХМІ0О9б6, АХМІОЗ97, АХМІ0ОЗ98, АХМІО99, АХМІ1Т00, АХМІ1О1,
АХМІТ102, АХМІТОЗ3, АХМІ104, АХМІТ07, АХМІ1О8, АХМІ109, АХМІ110, АХМІ111, АХМІ112,
АХМІ114, АХМІ1Т16, АХМІ117, АХМІ118, АХМІТ19, АХМІ1Т20, АХМІ121, АХМІ122, АХМІ123,
АХМІ124, АХМІТ1257, АХМІ1268, АХМІ127, АХМІ129, АХМІ164, АХМІ151, АХМІ161, АХМІ183,
АХМІ132, АХМІ138, АХМІ137 із публікації заявки на патент США з номером 2010/0005543, білки сгу, такі як СтутА і СтузА, що мають модифіковані сайти для протеолітичного розщеплення, із
Зо публікації на патент США з номером 8319019; білки-токсини СтуїтАс, СтгугАа і СгуїСа зі штаму
УвТ5 2528 ВасШив ШВигіпдіепві5 із публікації заявки на патент США з номером 2011/0064710.
Інсектицидна активність білків Сту добре відома фахівцю в даній галузі (для огляду див. мап
ЕгапоКеппцугеп, (2009) 9. Іпмеп. Раїй. 101:1-16). Застосування білків Сгу як ознак трансгенної рослини добре відоме фахівцю в даній галузі, та трансгенні рослини з Стгу, включаючи без обмеження рослини, які експресують СтгутАс, СтутАсжСтугАВ, СтутАб, СтутА.105, СтуїЕ,
СтуїРаг2, Сту1їРа-СтутАс, СтугАБ, СтузА, тОСтгузА, СтуЗзВр1, СтуЗзаАБІ, СтузБАБІ, МірзА, тотузА,
Стгубс та СВІ-ВІ, були дозволені органами контролю (див. Запапціа, (2011) Ріапі Віоїесп Удошмгпаї 9:283-300 та СЕРА. (2010) ОМ Стор Оагаразе Сепіег тог Епмігоптепіа! ВізК Авзез5тепі (СЕВА),
ІСБІ Кезеагсп Еошипаацйоп, Умазпіпдіоп О.С. на сайті сега- дтс.огд/іпаех.рпр?асіоп-дт сгор даїаразе, доступ до яких можна одержати у всесвітній мережі Інтернет за допомогою префікса "млум/"). У рослинах також можуть експресуватися більше ніж один із пестицидних білків, добре відомих фахівцю в даній галузі, наприклад МірзАБ та Стуїба (052012/0317682); Сту1!ВЕ та Сту1Б (052012/0311746); Сту1СА та СтутАВ (052012/0311745); Стуї1б та СгуСа (052012/0317681); СгуїОА та Сту1ВЕ (0052012/0331590);
СтуТбА та СтуїРа (052012/0331589); СтутАВ та Сту!ВЕ (0052012/0324606); СтуїРа і Сгуг2Аа та
Ст ї СТУТЕ (052012/0324605); СтузаАБ/З5АБр та СтубАа (0520130167269); СтузаАБ//СтузвАЬ та СтузАа (и520130167268), а також СгузЗА та СтутАБ або МірзАа (0520130116170). Пестицидні білки також включають інсектицидні ліпази, включаючи ліпідацил-гідролази з патенту США Мо 7491869 та холестериноксидази, наприклад, з Бігеріотусе5 (РигсеїЇ еї аї. (1993) Віоспет
Віорпуз Нев Соттип 15:1406-1413). Пестицидні білки також включають токсини МІР (інсектицидні білки вегетативної фази) з патентів США МоМо 5877012, 6107279, 6137033, 7244820, 7615686 та 8237020 тощо. Інші білки МІР добре відомі фахівцю в даній галузі (див.
Іїезсі.вивзех.ас.ик/поте/Меї! СпісКтоге/Ві/мір.піті, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет із застосуванням префікса "ммли"). Пестицидні білки також включають білки токсинового комплексу (ТС), які можна одержати з організмів, таких як Хепогпараив,
РПпоїогпардив та Раепірасійй5 (див. патенти США МоМо 7491698 та 8084418). Деякі ТО-білки мають "самостійну" інсектицидну активність, а інші ТС-білки підвищують активність самостійних токсинів, що виробляються тим самим представленим організмом. Токсичність "самостійного"
ТО-білка (з Рпототабдив, Хепогппарди5 або Раєпібасійи5, наприклад) може підвищуватись за 60 допомогою одного або декількох ТС-білків, "підсилювачів", одержаних із організму-джерела з іншого роду. Існують три основних типи ТС-білків. Як викладено у даному документі, білки класу
А ("білок А") являють собою самостійні токсини. Білки класу В ("білок В") та білки класу С ("білок
С") посилюють токсичність білків класу А. Приклади білків класу А являють собою ТебБА, ТсаА, хріА! та ХріА2. Приклади білків класу В являють собою ТсасС, Тсав, хХріВІХЬ та хХрісту.
Приклади білків класу С являють собою ТссС, ХріСІ1хХЬ та ХріВвтУМі. Пестицидні білки також включають білки отрути павуків, змій та скорпіонів. Приклади пептидів отрути павуків включають без обмеження пептиди лікотоксин-1 та його мутантні форми (патент США Мо 8334366).
У деяких аспектах поліпептид РІР-96 включає амінокислотні послідовності, виведені з послідовностей нуклеїнових кислот повної довжини, розкритих у даному документі, та амінокислотні послідовності, які Є коротшими за послідовності повної довжини, або одержані у результаті застосування альтернативного сайту ініціації, розміщеного нижче, або у результаті процесингу, що надає більш короткий білок із пестицидною активністю. Процесинг може відбуватися в організмі, в якому експресується білок, або у шкіднику після проковтування білка.
Таким чином, у даному документі представлені нові виділені або рекомбінантні послідовності нуклеїнових кислот, які забезпечують пестицидну активність. Також представлені амінокислотні послідовності поліпептидів РІЇР-96. Білок, одержаний у результаті трансляції генів цих поліпептидів РІЇР-96 у клітинах, забезпечує можливість контролю або знищення шкідників, які проковтують їх.
Молекули нуклеїнових кислот, а також їхні варіанти та фрагменти
Один аспект стосується виділених або рекомбінантних молекул нуклеїнових кислот, що містять послідовності нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди РІИР-96 або їхні біологічно активні частини, а також молекул нуклеїнових кислот, що є придатними для застосування як гібридизаційні зонди для ідентифікації молекул нуклеїнових кислот, що кодують білки з ділянками гомології послідовностей. Використовуваний у даному документі термін "молекула нуклеїнової кислоти" відноситься до молекул ДНК (наприклад, рекомбінантної ДНК, кДНК, геномної ДНК, пластидної ДНК, мітохондріальної ДНК) та молекул РНК (наприклад, мРНК), а також аналогів ДНК або РНК, отриманих із застосуванням аналогів нуклеотидів. Молекула нуклеїнової кислоти може бути одноланцюговою або дволанцюговою, але переважно являє собою дволанцюгову ДНК.
Зо "Виділена" молекула нуклеїнової кислоти (або ДНК) використовується у даному документі для позначення послідовності нуклеїнової кислоти (або ДНК), яка більше не знаходиться у своїх природних умовах, наприклад, знаходиться іп міго. "Рекомбінантна" молекула нуклеїнової кислоти (або ДНК) застосовується у даному документі для позначення послідовності нуклеїнової кислоти (або ДНК), яка знаходиться у рекомбінантній бактеріальній або рослинній клітині-хазяїні. У деяких варіантах здійснення "виділена" або "рекомбінантна" нуклеїнова кислота не містить послідовності (переважно, кодувальні послідовності), які у природних умовах фланкують нуклеїнову кислоту (тобто послідовності, що знаходяться на 5- та 3'-кінцях нуклеїнової кислоти) у геномній ДНК організму, з якого одержана нуклеїнова кислота. У контексті даного розкриття терміни "виділені" або "рекомбінантні" під час використання для позначення молекул нуклеїнової кислоти виключають виділені хромосоми. Наприклад, у різних варіантах здійснення рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептиди РІІР- 96, може містити менше приблизно 5 т.п.о., 4 т.п.о., З т.п.о., 2 т.п.о., 1 т.п.о., 0,5 т.п.о. або 0,1 т.п.о. послідовностей нуклеїнових кислот, які у природних умовах фланкують молекулу нуклеїнової кислоти у геномній ДНК клітини, з якої одержана нуклеїнова кислота.
Передбачається, що виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептиди РІР-96, має одну або декілька змін у послідовності нуклеїнової кислоти порівняно з нативною або геномною послідовністю нуклеїнової кислоти. Зміна у нативній або геномній послідовності нуклеїнової кислоти включає без обмеження: зміни в послідовності нуклеїнової кислоти внаслідок виродженості генетичного коду; зміни в послідовності нуклеїнової кислоти внаслідок амінокислотної заміни, вставки, делеції та/або додавання порівняно з нативною або геномною послідовністю; видалення одного або декількох інтронів; делецію однієї або декількох регуляторних ділянок, розташованих вище або нижче; та делецію 5'- та/або 3'-нетрансльованої ділянки, асоційованої з геномною послідовністю нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІИР-9б, являє собою послідовність, що відрізняється від геномної.
Передбачається ряд полінуклеотидів, які кодують поліпептиди РІЇР-96 або споріднені білки.
Такі полінуклеотиди є застосовними для одержання поліпептидів РИР-96 у клітинах-хазяїнах, якщо вони функціонально пов'язані з придатним промотором, термінатором транскрипції та/або послідовностями поліаденілювання. Такі полінуклеотиди також є застосовними як зонди для 60 виділення гомологічних або фактично гомологічних полінуклеотидів, які кодують поліпептиди
РІИР-96 або споріднені білки.
Полінуклеотиди, які кодують поліпептиди РИР-96
Одним джерелом полінуклеотидів, які кодують поліпептиди РІР-96 або споріднені білки, є вид папоротей або інших примітивних рослин, який містить полінуклеотид РІЇР-96 під 5ЕО І
МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 15, 5ЕО ІЮО МО: 11, 5ЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО І МО: 15, 5ЕО ІО МО: 17, 5ЕО ІЮО МО: 19, 5ЕО ІЮ МО: 21, БО ІЮО МО: 23, 5ЕО ІЮО МО: 25; 5ЕО І МО: 27; 5ЕО 10 МО: 29, 5ЕО І МО: 31, 5ЕО ІЮ МО: 33, 5ЕО І МО: 35, 5ЕО І МО: 37, 5ЕО І МО: 39, 5ЕО 10 МО: 41, 5ЕО І МО: 43, 5ЕО ІЮ МО: 45, 5ЕО ІЮО МО: 47, 5ЕО ІЮ МО: 49, 5ЕО ІЮ МО: 51, 5ЕО ІО МО: 53, 5ЕО ІО МО: 55, 5ЕО ІЮ МО: 57, 5ЕО ІЮО МО: 59, 5ЕО І МО: 61, 5ЕО ІЮО МО: 63, 5ЕО І МО: 65, 5ЕО ІЮО МО: 67, 5ЕО ІЮ МО: 69, 5ЕО ІО МО: 71, 5ЕО ІЮ МО: 73, БО ІЮ МО: 75, 5ЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО ІЮО МО: 79, 5ЕО ІЮО МО: 81, 5ЕО І МО: 83, 5ЕО І МО: 85, 5ЕО ІЮ МО: 87, 5ЕО І МО: 89, 5ЕО ІЮО МО: 91, 5ЕО ІЮ МО: 93, 5ЕО ІО МО: 95, 5ЕО ІЮ МО: 97, 5ЕО І МО: 99, 5ЕО ІЮ МО: 101, 5ЕО І МО: 103, 5ЕО І МО: 105, 5ЕО ІО МО: 107 або 5ЕО
ІО МО: 109, що кодує поліпептид РІЇР-96 під 5ЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІО МО: 8, 5ЕО І
МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО І МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І
МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22, 5ЕО ІО МО: 24, 5ЕО І МО: 26; 5ЕО ІЮО МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО 10
МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО ІЮО МО: 42, 5ЕО І
МО: 44, 5ЕО ІО МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48, 5ЕО І МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО 10
МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО 10
МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО 10
МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО 10
МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО І
МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108. Полінуклеотиди під 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО 10 МО: 2,
ЗЕО ІЮО МО: 3, 5БЕО ІЮ МО: 4, 5БО ІО МО: 15, 5ЕО ІО МО: 11, 5ЕБЕО ІЮ МО: 13, 5БЕО ІО МО: 15,
ЗЕО ІЮ МО: 17, 5ЕО ІО МО: 19, 5ЕО ІЮ МО: 21, 5ЕО ІЮО МО: 23, 5ЕО І МО: 25; 5ЕО ІО МО: 27;
ЗЕО ІЮ МО: 29, 5ЕО ІО МО: 31, 5ЕО ІЮ МО: 33, БО І МО: 35, 5ЕО ІО МО: 37, 5ЕО ІО МО: 39,
ЗЕО ІЮ МО: 41, 5ЕО ІЮО МО: 43, 5ЕО ІЮ МО: 45, 5БЕО ІЮ МО: 47, 5ЕО ІО МО: 49, 5ЕО ІЮО МО: 51,
ЗЕО ІЮ МО: 53, 5ЕО І МО: 55, 5ЕО ІЮ МО: 57, 5ЕО ІО МО: 59, 5ЕО ІО МО: 61, 5ЕО ІО МО: 63,
ЗЕО ІЮ МО: 65, 5ЕО І МО: 67, 5ЕО ІЮ МО: 69, 5БЕО ІЮО МО: 71, 5ЕО ІО МО: 73, 5ЕО ІО МО: 75,
Зо ЗЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО ІЮО МО: 79, 5ЕО ІЮ МО: 81, 5ЕО І МО: 83, 5ЕО ІО МО: 85, 5ЕО ІО МО: 87,
ЗЕО ІЮ МО: 89, 5ЕО І МО: 91, 5ЕО ІЮ МО: 93, 5ЕО ІЮ МО: 95, 5ЕО ІО МО: 97, 5ЕО ІЮ МО: 99,
ЗЕО ІЮ МО: 101, 5ЕО ІЮО МО: 103, 5ЕО ІЮ МО: 105, 5ЕО ІО МО: 107 або 5ЕО ІЮ МО: 109 можна застосовувати для експресії поліпептидів РІР-96 у бактеріях-хазяїнах, які включають без обмеження бактеріальні клітини-хазяї Адгорасієгйт, Васій5, ЕвсПегіспіа, ЗаІтопеїа,
Рзепдотопавз та ВПі2гобішт. Полінуклеотиди також є застосовними як зонди для виділення гомологічних або фактично гомологічних полінуклеотидів, які кодують поліпептиди РІР-96 або споріднені білки. Такі зонди можна застосовувати для ідентифікації гомологічних або фактично гомологічних полінуклеотидів, одержаних із видів РієгідорНуїа та І усородіорпуїа.
Полінуклеотиди, які кодують поліпептиди РІЇР-96, також можна синтезувати де помо з урахуванням послідовності поліпептиду РІЇР-96. Послідовність гена полінуклеотиду можна вивести на основі послідовності поліпептиду РИР-96 із застосуванням генетичного коду.
Комп'ютерні програми, такі як "ВасКТгапвзіаге" (Сом РасКаде, Ассіегу5, Іпс., Сан-Дієго,
Каліфорнія), можна застосовувати для перекладу пептидной послідовності у відповідну нуклеотидну послідовність, що кодує пептид. Приклади послідовностей поліпептиду РІР-96, які можна застосовувати для одержання відповідних нуклеотидних кодувальних послідовностей, включають без обмеження поліпептиди РІИР-96 під 5БЕО ІО МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІО МО: 8,
ЗЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО 10 МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО І МО: 18,
ЗЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5БЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІЮО МО: 30,
ЗЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО І МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42,
ЗЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5БЕО І МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54,
ЗЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66,
ЗЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78,
ЗЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5БЕО І МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90,
ЗЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІЮ МО: 94, 5БЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІЮ МО: 98, БО ІЮ МО: 100, 5ЕО І МО: 102, ЗЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108. Крім того, можна сконструювати синтетичні послідовності полінуклеотиду РІЇР-96 згідно з даним розкриттям таким чином, що вони будуть експресуватися у рослинах. У патенті США Мо 5500365 описаний спосіб синтезу генів рослини для поліпшення рівня експресії білка, що кодується синтезованим геном. Цей спосіб стосується модифікації послідовностей структурних генів екзогенного трансгена, що бо спричиняє їхню більш ефективну транскрипцію, процесинг, трансляцію й експресію в рослині.
Характерні особливості генів, які добре експресуються у рослинах, передбачають видалення послідовностей, які можуть викликати небажаний сплайсинг інтронів або поліаденілювання у межах кодувальної ділянки генного транскрипту, при цьому значною мірою зберігається амінокислотна послідовність токсичної частини інсектицидного білка. Аналогічний спосіб для одержання посиленої експресії трансгенів в однодольних рослинах розкритий у патенті США Мо 5689052.
Молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІИР-96б, може являти собою полінуклеотид із послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 3,
ЗЕО ІО МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 15, 5ЕО 10 МО: 11, 5ЕО ІО МО: 13, 5ЕО ІО МО: 15, 5ЕО ІЮ МО: 17,
ЗЕО ІО МО: 19, 5ЕО ІЮО МО: 21, 5ЕО ІЮ МО: 23, 5ЕО ІЮО МО: 25; 5ЕО І МО: 27; 5ЕО ІО МО: 29,
ЗЕО ІЮ МО: 31, 5ЕО І МО: 33, 5ЕО ІЮ МО: 35, 5БЕО І МО: 37, 5ЕО ІО МО: 39, 5ЕО ІО МО: 41,
ЗЕО ІЮ МО: 43, 5ЕО І МО: 45, 5ЕО ІЮ МО: 47, 5ЕО І МО: 49, 5ЕО ІО МО: 51, 5ЕО ІО МО: 53,
ЗЕО ІЮ МО: 55, 5ЕО І МО: 57, 5ЕО ІЮ МО: 59, 5БЕО І МО: 61, 5ЕО ІО МО: 63, 5ЕО І МО: 65,
ЗЕО ІЮ МО: 67, 5ЕО І МО: 69, 5ЕО ІЮ МО: 71, 5ЕО ІЮ МО: 73, 5ЕО ІО МО: 75, 5ЕО ІО МО: 77,
ЗЕО ІЮ МО: 79, 5ЕО І МО: 81, 5ЕО ІЮ МО: 83, 5ЕО І МО: 85, 5ЕО ІО МО: 87, 5ЕО ІО МО: 89,
ЗЕО ІО МО: 91, 5ЕО ІЮ МО: 93, 5ЕО ІЮ МО: 95, 5ЕО ІО МО: 97, 5ЕО ІО МО: 99, 5ЕО ІЮ МО: 101,
ЗЕО ІО МО: 103, 5ЕБО ІО МО: 105, 5ЕО ІО МО: 107 або 5ЕО ІО МО: 109, та його варіанти, фрагменти та комплементарні йому послідовності. "Комплементарна послідовність" використовується у даному документі для позначення послідовності нуклеїнової кислоти, яка достатньою мірою комплементарна заданій послідовності нуклеїнової кислоти, так що вона може гібридизуватися з заданою послідовністю нуклеїнової кислоти з утворенням, тим самим, стабільного дуплекса. "Варіанти полінуклеотидної послідовності" використовується у даному документі для позначення послідовності нуклеїнової кислоти, яка за винятком виродженості генетичного коду, кодує один і той самий поліпептид.
Молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІИР-96б, може являти собою послідовність нуклеїнової кислоти, що відрізняється від геномної. Застосовувані в даному документі "послідовність нуклеїнової кислоти, що відрізняється від геномної", або "молекула нуклеїнової кислоти, що відрізняється від геномної", або "полінуклеотид, що відрізняється від геномного" стосуються молекули нуклеїнової кислоти, яка має одну або декілька змін у послідовності нуклеїнової кислоти порівняно з нативною або геномною послідовністю нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах здійснення зміна щодо нативної або геномної молекули нуклеїнової кислоти включає без обмеження зміни в послідовності нуклеїнової кислоти, зумовлені виродженістю генетичного коду; оптимізацію кодонів послідовності нуклеїнової кислоти для експресії у рослинах; зміни в послідовності нуклеїнової кислоти для введення щонайменше однієї амінокислотної заміни, вставки, делеції та/або додавання порівняно з нативною або геномною послідовністю; видалення одного або декількох інтронів, асоційованих із геномною послідовністю нуклеїнової кислоти; вставку одного або декількох гетерологічних інтронів; делецію однієї або декількох розташованих вище або нижче регуляторних ділянок, асоційованих із геномною послідовністю нуклеїнової кислоти; вставку однієї або декількох гетерологічних регуляторних ділянок, розташованих вище або нижче; делецію 5'- та/або 3- нетрансльованої ділянки, асоційованої з геномною послідовністю нуклеїнової кислоти; вставку гетерологічної 5'- та/або 3'-нетрансльованої ділянки та модифікацію сайту поліаденілювання. У деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти, що відрізняється від геномної, являє собою кДНК. У деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти, що відрізняється від геномної, являє собою синтетичну послідовність нуклеїнової кислоти.
У деяких варіантах здійснення молекули нуклеїнової кислоти, що кодують поліпептид РІЇР- 96, являють собою нуклеотидну послідовність, що відрізняється від геномної, яка щонайменше на 5095, 51 95, 52 95, 53 Уо, 54 95, 55 95, 56 96, 57 У, 58 бю, 59 о, 60 90, 61 Фо, 62 9о, 63 Уо, 64 Об, 65 Фо, 66 95, 67 95, 68 9, 69 90, 70 о, 71 90, 72 90, 73 У, 74 90, 75 о, 76 о, 77 о, 78 9о, 79 Фо, 80 Фо, 81 96, 82 95, 83 95, 84 9о, 85 Фо, 86 о, 87 о, 88 90, 89 90, 90 90, 91 Фо, 92 Фо, 93 9о, 94 95, 95 Фо, 96 9, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична послідовності нуклеїнової кислоти під ЗЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО І МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 15, 5ЕО ІО МО: 11, 5ЕО ІО МО: 13, 5ЕО І МО: 15,
ЗЕО ІЮ МО: 17, 5ЕО ІО МО: 19, 5ЕО ІЮ МО: 21, 5ЕО ІЮО МО: 23, 5ЕО ІО МО: 25; 5ЕО ІЮО МО: 27;
ЗЕО ІЮ МО: 29, 5ЕО ІО МО: 31, 5ЕО ІЮ МО: 33, БО І МО: 35, 5ЕО ІО МО: 37, 5ЕО ІО МО: 39,
ЗЕО ІЮ МО: 41, 5ЕО ІЮО МО: 43, 5ЕО ІЮ МО: 45, 5БЕО ІЮ МО: 47, 5ЕО ІО МО: 49, 5ЕО ІЮО МО: 51,
ЗЕО ІЮ МО: 53, 5ЕО І МО: 55, 5ЕО ІЮ МО: 57, 5ЕО І МО: 59, 5ЕО ІО МО: 61, 5ЕО ІО МО: 63,
ЗЕО ІЮ МО: 65, 5ЕО І МО: 67, 5ЕО ІЮ МО: 69, 5БЕО ІЮО МО: 71, 5ЕО ІО МО: 73, 5ЕО ІО МО: 75,
ЗЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО ІЮО МО: 79, 5ЕО ІЮ МО: 81, 5ЕО І МО: 83, 5ЕО ІО МО: 85, 5ЕО ІО МО: 87,
ЗЕО ІЮ МО: 89, 5ЕО І МО: 91, 5ЕО ІЮ МО: 93, 5ЕО І МО: 95, 5ЕО І МО: 97, 5ЕО ІО МО: 99, 60 ЗЕО ОО МО: 101, 5ЕО ІЮО МО: 103, 5ЕО ІО МО: 105, 5ЕО ІО МО: 107 або 5ЕО ІО МО: 109, де поліпептид РІІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти кодує поліпептид РІЇР-96, що містить амінокислотну послідовність під ФЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, БЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО І МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО І МО: 20, ЗЕОЮО МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32,
ЗЕО ІО МО: 34, 5ЕО ІЮО МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО ІО МО: 44,
ЗЕО ІО МО: 46, 5ЕО ІЮО МО: 48, 5ЕБЕО ІО МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО І МО: 54, 5ЕО І МО: 56,
ЗЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО І МО: 68,
ЗЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80,
ЗЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО І МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92,
ЗЕО І МО: 94, 5ЕО ІЮО МО: 96, 5ЕО ІЮО МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО І МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, яка має 1,2,3,4,5,6,7,8,9, 10 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, А8, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотних замін порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІО МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО І МО: 10, 5ЕО І
МО: 12, БЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО І
МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО І
МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО І
МО: 48, БЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО І
МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО І
МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮО МО: 76, 5ЕО І МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО І
МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІОЮ МО: 94, 5ЕО І
МО: 96, 5ЕО ІЮО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮО МО: 106 або
ЗЕО ІЮ МО: 108.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей відділу Рієгпдорнуїа або з іншої примітивної рослини відділу
І усородіорпуїа. Використовувана в даному документі філогенія базується на класифікації сучасних папоротей за А. К. Зтійй еї аії, ТАХОМ, 55:705-731 (2006). Консенсусна філогенія, що
Зо базується на класифікації за А. К. 5тійй, показана на фігурі 1. Інші філогенетичні класифікації сучасних папоротей відомі фахівцю в даній галузі. Додаткову інформацію, що стосується філогенії папоротей, можна знайти на сайті торої.ога/уМмоОовВО /гезеагоп/АРмеб/ (доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса "млум/") та в публікації Зспиейреї? Е. апа Ргуег К. М.,
ТАХОМ 56: 1037-1050 (2007), та вона базується на трьох пластидних генах. Додаткові види папоротей та інших примітивних рослин можна знайти на сайті
Ппотерадез.самегосК.пеї.п2/--БіЛегпЛіві.піт (доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса пер://).
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РИР-96, одержують із виду папоротей класу РозіПоіорзіда. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІИР-9б, одержують із виду папоротей класу
Рзіоїорзіда, ряду РзііоїаІе5. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей класу Розіоіорзіда, ряду Орпіодіоззаїев.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІР-96, одержують із виду папоротей класу Ро5йоїорзіда, ряду ОрпіодіоззаІе5, родини Рзіїюїасеає. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РИР-96, одержують із виду папоротей класу Ро5іогорзіда, ряду ОрпіодіоззаІе5з, родини Орпіодіоззасеає.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІР-96, одержують із виду папоротей роду Орпіодіоззит Ї., Воїгуспішт, Воїгурив, Неїтіпіповіаснувз,
Орпіодента, Спеїгодіозза, Зсерігідінт або МапКуца. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РИР-96б, одержують із виду папоротей роду
Орпіодіозбзит 1., вибраного без обмеження із Орпіодіозбзит саїйогпісит, Орпіодіоззит сопасецт, Орпіодіозбзит совіайт, Орпіодіозбвит сгоїаіорпогоїдез5, Орнпіодіозвит епдеїтапгпії,
Орпіодіозвит Таісаїт, Орпіодіоввит дотегіапит, Орпіодіоввит дгатіпеит, Орпіодіовзит
Каулатигає, Орпіодіозбит Ізйапіснт, ОрНіодіоззит патедаїає, Орпіодіозбвит пиаісаціє,
Орпіодіоззит раітайшт, ОрНіодіозвит раг/шт, Орпіодіоззит редипсиозит, Орпіодіоззит репашціит, ОрНіодіоззит реїййоіайшт, ОрНпіодіоззит ривйит, ОрНіодіозвзит геїйсшацшт,
Орпіодіоззит гіснагазіає, Орпіодіозвит ШТептаїе та Орпіодіоззит мцЇдашт.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІІР-96, одержують із виду папоротей ряду Роїуродіаіез, родини Роїуродіасеае роду Сатруїопешгит, бо роду Огупага, роду Іерізоги5, роду Містодгатта, роду Містозогит, роду Меицгодіит, роду
Мірпідінт, роду Ресішта М.б., роду РпІеродішт, роду Рпутаїйозогих5, роду Ріаїусегішт, роду
Ріеорейі5, роду Роїуродіит ГІ. або Сепиз Соїувів.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РИР-96, одержуються з виду папоротей роду Соїузі5, вибраного без обмеження із Соїузі5 атріа, Соїувів аїідйага, Соїузів аімег:ітоїїа, Соїузі5 єЇїєдапе5 Соїувів еїПіріїса, Соїузіз Пехіоба, Соїувів петіопітавєа,
Соіувів Нетйота, Соїузів ПНепгуї, Соїузів іпбзідпіз, Соїувзів іпіептєдіа, Соїувів Іемейеї, Соїувів
Іопаіре5, Соїузіз редипсціайа, Соїузіз репіарнуПа, Соїузів роїйпітоїйа, Соіузів ріегорив, Соїувів 5ПпПіпТепепві5, Соїувів зітріїсйтопв5, Соїувзів їгірпуПа, Соїувів мідні та Соїузіб5 х5піпіепепвів.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, вибирають із виду папоротей роду Роїіуродіаїзх, родини Ріегідасеає, роду Ааіапіасеає, вибраного без обмеження із Адіапічт аеїПпіорісит, Ааіапічт аіешісит, Адіапічт Бропайапит,
Адіапішт са|еппепзе, Адіапішт саріПи5-|іипопів, Адіапішт сарійн5-мепегі5, Адіапішт сацшдашт,
Адіапшт спіепії, Адіапішт спіепзе, Адіапішт сипеайцшт, Адіапішт сиппіпдпатії, Адіапішт дамівії,
Адіапішт аіарпапит, Адіапішт едепішит, Адіапішт еддеужоппії, Адіапішт ехсізит, Адіапішт
Тепдіапит, Адіапішт Птбгіайт, Адіапішт Пабеїшіатшт, Адіапішт їоптозапит, Адіапішт
Топтозут, Адіапічт їшмит, Адіапішт дгамевії, Адіапішт Пізрідшит, Адіапіит іпаигайшт, Адіапішт огдапії, Адіапішт |ихіарозішт, Адіапішт Іаїйоїйшт, Аадіапішт ІемеїЇІеї, Адіапішт (Іапхіапепве,
Адіапішт таїезіапит, Адіапішт тапїіевії, Адіапішит топоспіатуз, Адіапішт тугіозогит, Адіапійт обіїднит, Адіапішт одазаумагепбе, Адіапішт редаїшт, Адіапішт репіадасіуюп, Адіапшт репміапит, Адіапішт рпПіїррепзе, Адіапішт рііпсер5, Адіапішт рибезсеп5, Адіапшт гадаіапит,
Адіапішт гадаіапит, Аадіапішт гепіїопте, Аадіапішт горогом/5Кії, Адіапішт зегтаюдепашт,
Адіапішт віпісит, Адіапішт 5оброїїекит, Адіапішт з5ибсогдаїшт, Адіапішт їепегит, Адіапішт іІептіпайт, Адіапішт ейнгарпуПит, Аадіапішт мепизійшт, Адіапішт мігідезсеп5 та Адіапішт міпдітопіапит.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Роіуродіа(езх, родини Огуоріеєегідасеає, роду Роїузійспит, вибраного без обмеження із Роїузіїспит асапіпорпуїїшт, Роїуєсііспит асговіїспоіїдев5, Роїузіспит асціваїшт, Роїувіспит асшідеп5, Роїувіспит асшіріппиїШшт, Роїувіїспит аїсісогпе, Роїувіспит аіешісит, Роїузіїспит апаегїзопії, Роїувіїспит аїКіпвопії, Роїувзіїспит аийвіганйепвзе, Роїувіснит
З0 БаКепапит, Роїувзіснит бБіагізіашт, Роїувіспит Ботієпзе, Роїувіспит бБопвзеуї, Роїувіснит
Бгаспурієтит, Роїувіспит Бгашйпії, Роїувіспит Бгаспурієгит, Роїувіспит саІдегопепв5е,
Роїузіїспит саїйогпісшт, Роїувіспит саріїйїре5, Роїувзіснпит савіапейт, Роїувіспит спіПепзе,
Роїувіїспит спгівії, Роїувіспит сПипії, Роїувіспит стазредозогит, Роїувіспит сусіоїорит,
Роїувіїспит сувіобвієдіа, Роїувіспит деподоп, Роїувзіїспит аїеївії, Роїувіспит аівстешт,
Роїувіїспит агерапит, Роїувіснпит ацаеуії, Роїувіїспит ашієї, Роїувзіспит еспіпайшт,
Роїузіїспит егозит, Роїувіспит ехсеїПепв5, Роїувзіснпит ехітішт, Роїувіснпит Таісайріппит,
Роїувіїспит ТаїЇсіпеПшШт, Роїувіїспит ГТаїйах, Роїувіспит Топтозапит, Роїувіїспит діапаціовзит,
Роїузіїспит допдроепзе, Роїувіспит агапайтоп5, Роїузіснпит дутпосагрішт, Роїувіснит
НаІєакаієепвзе, Роїувзіспит НапсоскКії, Роїувіспит Песаїюрієгоп, Роїувіспит Пегбасеийт,
Роїузіїспит ітбгісап5, Роїувіїспит іпсопдагиит, Роїувіїснит КгисКебегадії/, Роїувіїснит Куакішції,
Роїузіїспит Іаспепепзе, Роїувіспит Іапсеоіаїйт, Роїувіснит Іеттопії, Роїувіснит Іепішт,
Роїузіїспит Іопспйй5, Роїувіспит Іопдідеп5, Роїувіспит Іопадіраієайт, Роїувіїснит Іопдірев,
Роїувіїспит Ісішобит, Роїувіїспит тасієає, Роїувіспит тасгоспіаепит, Роїувіїспит такіпої,
Роїузіїспит тапіпі, Роїувзіспит тауебрагає, Роїувіснпит теадіосте, Роїузіснпит тедодепзе,
Роїувіїспит тістоспіатув5, Роїувіспит топПгіоідеб5, Роїувіспит тоїїввітит, Роїувіспит топіїсоїа, Роїувіспит тоогеї, Роїувіїспит тогії, Роїувіїспит тоиріпепзе, Роїувіспит типйит,
Роїувіїспит тигісаїт, Роїузіспит паКепепзе, Роїувіїспит пеоіІобаїшт, Роїувіїспит пераїепвзе,
Роїувіїспит піпд5пепепзе, Роїувіїспит обБіїднит, Роїувіспит отевіепзе, Роїузіспит огаіпаюшт,
Роїузіїспит огпіепіаійірейсит, Роїувзіспит рагатоиріпепбсе, Роїувзіспит рагіріппиЇшт,
Роїувііспит рісеораІєасешт, Роїувіїспит роїуріерпагит, Роїувіїспит ргезсоЦапит, Роїувіспит ріопоїері5, Роїувіїспит ргоїйегит, Роїувіспит рвбепйдосавіапецт, Роїувіспит рзепдотакіпої,
Роїувіїспит рипсійєгит, Роїувіспит рипдепб5, Роїузіспит датаоепбе, Роїувіспит гемозораІєасецт, Роїувіспит гпотбріїопте, Роїувіснит пПпотброідеа, Роїувіспит "піснагаїйї,
Роїувіїспит гідеп5, Роїувіїспит гоїшпайобрит, Роїувіспит 5сориїїпит, Роїувіспит 5етітепіе,
Роїувіїспит зеййегит, Роїувіїспит зеїїдегит, Роїувіспит 5Пепвзівепзе, Роїувзіїспит вімаїйсит,
Роїувіїспит 5ітріїсіріппит, Роїувіспит б5іпепбе, Роїувіспит здиатовзит, Роїувіспит вівпорпуПит, Роїувзіїспит в5ійїтшиіап5, Роїувіспит 5Ииртіїє, Роїувіїспит іасіїсорієгит, Роїувіснпит
ТШотвопі, Роїувіїспит їреїїсит, Роїувіїспит іїгапзуааІепзе, Роїувіїспит мірієгоп, Роїувіїспит ївив- вітеп5е, Роїувзіїспит мевійцт, Роїувіспит уації, Роїувіснпит м/піеїІєддеї, Роїувіснит 60 хірпорпуПит, Роїувіїспит уадопдепзе та Роїувіїспит уиппапепве.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Роіуродіаїєзх, родини Огуорієгідасеає, роду Супотішйт, вибраного без обмеження із Супотішт аєдиіравзіз, Супотішт Баіапзає, Супотійт
Бгемісипеайншт, Супотішт саїсісоїа, Супотішт сагуоіїідент, Суйотішт сацдашт, Супйотійт сопіеййоїйшт, Супотішт сопіогте, Супотійшт согіасешт, Супотішт сипеайт, Супотійт демехізсаршає, Супотішт аибрішт, Супотіцт Гаісайшт, Супотішт аісіріппит, Супотійт
Тепдіапит, Супотішт їопипеї, Супотішт їахіпейшт, Супотішт оці, Суйотішт іпівдгит,
Супотішт Іаеїемігепе, Супотіцт Іайїаісашт, Супотішт Іопсийоідез, Супотішт Іопдірев,
Супотішт тасгорпуїїшт, Супотішт тахітит, Супотішт тедіосте, Супотішт тедарпуїшт,
Супотішт тісгорієтит, Супотішт тоиріпдепоє, Супотішт пеосагуоіїійдент, Супотійт перпгоіеріоїде5, Супотішт пегуозит, Супотішт обіїднит, Супотішт отеїепзе, Супотіит омаї!е,
Супотішт рзецйдосацйадіріппит, Суйотішт гесигуит, Супйотішт геїозораІеасеит, Супотіт заїїсіріппит, Супотішт зеташт, Супотішт 5папаопдепзе, Супотіцт 5ітіїє, Супотіцт віпісит,
Супотішт звіппіпдепзе, Супотішт зресіаріє, Супотішт іаїжмапіапит, Супотішт (іакивісоїа, Супотішт їепдії, Супйотішт (і гарегоіїдент, Супйотішт І5іпдіпдепве, Супотішт ипізегіа!е,
Супотішт игорпуйшт, Супйотішт мат, Супотішт мапдіапит, Супотішт уїапдзпапепве,
Супотішт усапит та Супотішит уиппапепзе.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Роїуродіаі(е5х, родини Роїуродіасєає, роду Ріаїусепит, вибраного без обмеження із Ріаїусепйит апаіпит, Ріаїусегішт аїсісогпе, Ріаїусепцт рітшгсайшт,
Ріатусепит согопагіит, Ріаїусегпит еІерпапіої5, Ріаїусепитє еїЇІївії, Ріаїусегішт дгапає, Ріаїусейит
Р, Ріаїусегішт поШитії, Ріаїусепйцт тададавсагєпзе, Ріайусепйцт диадгідісноютит,
Ріаїусепит гіаІєуї, Ріаїусейит віетагніа, Ріаїусегпт 5!Грегбит, Ріаїусепит меїйбснії, Ріаїусегійт маїїснії, Ріаїусегпійт мапаає, Ріаїусепит улІнеІтіпае-тедіпає та Ріаїусетіт міПпкії.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Роіуродіаі(езх, родини Роїуродіасеає, роду Адіаотогрна, вибраного без обмеження із Адіаотогрпа аситіпайа, Адіаотогтрна бБгоокзії, Адіаотогрна согписоріа, Адіаотогрпа согопапв, Адіаотогрна агупагісідез5, Адіаотогрна Пегасієа, Адіаотогрна
Піегопуті, Адіаотогрпна Іаїїріппа, Адіаотогтрпа теуеєпіапа, Адіаотогрна песіапіега, Аді'аотогрна
Зо помодиіпеепвіз, Адіаотогрна рагїкКкіпзопі, Адіаотоїрна ріїоза та Адіаотогрна 5ріепаепв.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Суаїйнеєаієзх, родини Суаїйеасеає, роду Суаїнєа, підроду
Суаїнеа, вибраного без обмеження із Суаїйнеа асшідепв, Суаїнеа аєтшиіа, Суаїнеа аїіаза, Суаїнєа аіротагаіпайїа, Суаїнеєа аіІрпопзіапа, Суаїнеа аїізюпії, Суаїнеа атагопіса, Суаїнєа апаїпа, Суаїнєа атбогєа, СуаШшеєа аптаїа, Суаїнєа агх, Суаїнєа азрега, Суаїнеа айапиаїра, Суаїнєа аїепіта,
Суаїнеа аїгомігеп5, Суаїнеєа ашзігаїй5 Суамеа бБаїгтіпдіопії, Суаїйеа х Бегпагаїї, Суа(еа Беціпає,
СуаїШшеа бБістепаїа, Суаїнеа бБіріппаїа, Суаїйеа Боїїміапа, Суаїйнеєа Богіпдоепа, Суаїнеа Бгадбві,
СуашШеа Бгемізіре5, СуаїШеа ргиппеб5сеп5, СуаїШеа х саіІоІері5, СуаШйеа сагасазапа, Суашйеа сісанісоза, Суаїнеєа сопсогаїа, Суаїнеа сопіогтів, Суаїнеа сопішдаїа, Суаїнєа согайїНега, Суайтеа созіагісепзіз5, Суаїйнеа стаппатії, Суаїйнеа суаїйеоїіде5, Суаїйеєа сусіодішт, Суаїнеа сузіоіерів,
Суаїнеа дагієпепвзі5, Суаїнєеа десотрозіїа, Суаїнеа десогаїа, Суаїнеа деситепв, Суаїнєа ае!дадії,
Суашеа детізза, СуаШшеа айіспготаїйоіеріх, Суаїнєа аіввітіїйв, СуаШйеєа аіззоіша, Суаїнєа дімегдеп5, Суаїнеса дотреуї, Суаїнеса аиаїєуї, Суаїнеа ерепіпа, Суаїнєа езівіає, Суаїнєа аїісаїа,
СуаїШйеа їідіда, Суаїйеа Шшіма, Суаїйеа Шнпигасєа, Суаїнеєа дагапетгі, Суаїйеа дірбоза, Суаштеа діаиса, Суаїйеа дгасіїх, Суаїйеєа Паопаїа, СуаїШеа пПаїтізі, СуаШшеєа Пацоднії, Суашеа
Ппетіеєерірнуїіса, Суаїйнеєа Ніша, Суаїйеа Ноддеапа, СуаШшеєа Поідгіддеапа, Суайеєа Поужеапа,
Суаїнеа ітраг, СуаїНеєа іпігатагодіпаїї5, Суаїнеєа іатаісепвіз, Суаїнеєа Каїбгеуєгі, Суаїнеєа Іазіозога,
СуаїШеа Іаіемадепо, Суаїнеа Іеспіегі, Суаїнеа Іеисоїї5, Суашеа х Іем/і5ії, Суаїпеа ІосКуооаїйапа,
СуаШшеа тасгосагра, Суаїйеєа тасгозога, Суаїйеєа тагадіпаїїх, СуаШеа тістгодопіа, СуашШшєа тісторпуїа, Суаїнеа тісторпуПа, Суашйеа тисііадіпа, Суаїєа тийШога, Суаїйеєа тийізедтепіа,
Суашеа туозигоїде5, Суаїйеєа паппа, Суаїнєа пезіоїїса, Суаїйеа підпіре5, Суаїйнеєа поаційега,
СуашШшеа поїабіїз, Суаїййнєа опивіа, Суаїйеа раїасіовзії, Суаїйнеа раїадепзі5, Суаїйнеа раїезсепв,
СуашШшеа рагпіапепвзіз, Суаїйєа рагла, СуаШшеа рагуціа, Суайеа райсійога, Суаїйеа реїоіаїйа,
СуаїШшеа рНаїіаєпоїіеріз, Суаїнеа рНаїегага, Суаїйнеа рпедорієгоїдез5, Суаїнєа ріюовзіззіта, Суаїнєа ріппша, Суаїнєа ріаїуіеріх, Суаїнеа роеррідії, Суаїнеа ргаєсіпсіа, Суаїнеа рзейдопаппа, Суаїйнєа рибепо, Суаїнеса рипсіаіа, Суаїнеа рипдепв, Суаїнеа гобегізіапа, Суаїнеа пита, Суаїнеа гпиігіапа,
СуашШшеа задінноЇйа, Суаїйеєа з5сНпіедеапа, СуаШшеа зспНіітії, Суаїйнеа зепіїї5, Суаїйеа взітрієх,
СуашШшеа взірароєпзі5, СуаШшйеєа з5ресіоза, Суаїшйеа здиатиоза, Суаїнєа 5іеуєптагккії, Суаїнєа зіїршагіх, Суаїнєа зіоКевії, СуаШеа ві0іІ276вї, СуаШшеа 5ігатіпеа, Суаїйеєа 5! Брігоріса, Суаїйеа 60 зиргавзігідоза, Суаїнєа зигіпатепвів, Суаїнеа іепега, Суаїнеа іопиоза, Суаїнеєа ігіспіаза, Суаїйнеа муопогит, Суаїнеа игзіпа, Суаїнєа маідестепаїа, Суаїнеа мепегицвіепзі5, Суаїнеа міоза, Суаїтеа мжеаїйегтуапа, СуаїНеа мепаїапайї, СуаїНеа уетпіії, Суаїнеа міПатвії.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду Роіуродіаіеєз, родини РамаїІйасеєає, роду РамаїІа, вибраного без обмеження із Оамаїїйа апдивіага, Оамаїа аззатіса, Рамаїа Бгавзвії, Оамаїйа Бгемірез, Оамаїа сапаглепвзі5, ЮОамайЦа согтісціаїа, ОамайЦа аепіїсшаїа, ОРамаїїйа етброіозіедіа, Оамаїа ТаїісіпеПа,
Рамаїйа дгаєйеї, ОамайЦіа дпійнйніапа, Оамаїйа ПеїегорпуїПа, Вамаїйа Іеріосагра, ОамаїПа рагуцшіа,
Рамаїа ресііпата, бамаїа репіарпуПа, Оамаїа гереп5, Оамаїа гоиПаєтієпвіз, ОамаїПа зегатепвів,
Рамаїсйа зезвіїїоЇйа, ОамаїІйа з5езвіїноїйсіде5, Оамаїйа з5оїїда, Оамайа з5ресіоза, Оамаїа їазтапії,
ОРамайЦа піспотапоїдез5, ЮОамаЦШа рнуПйа, ОамаййШа ипашіага, Оамаїйа мадпегпапата Оамаїйа уппапепвів.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду папоротей ряду 5спігаєаез, родини І удодіасєає, роду І удодіит, вибраного без обмеження із ІГудодійт айит, Іудодішт апісшіацшт, Гудодійт бБоїміпі Кийп, Гудодійит Ботеепзе АїЇдепму., Гудодішт сіксіппайшт, Гудодішт соїапіає, Гудодіит сопіогте, Іудодіит сирепзе, І удодіит дітогтрпит, І удодійт Яехиозит, Гудодіит дідапівит, І удодіит Пе(егодохит,
Гудодішт ПНіап5, Гудодішт |аропісит, Іудодішт Кегзіепії, Гудодіит Іапсеоїайт, ГІ удодійт
Іопайойшт, Гудодійт теп, Гудодішт тісторпуйчт, Гудодішт оїЇїдобвіаспуйт, Гудодійт раітаїшт, Іудодішт реадісеПайт, Гудодішт роїузіїаспушт, Гудодішт гадіашт, Гудодійт гейсшіаййт, Іудоадіцт заїїсйоЇййт, Гудодішт 5тіШіапит, Іудодіит зибБагеоіашт, Гудодійт їїисаїшт, Гудодішт мепибвійт, Гудодіит мегеїеедії, Гудодійт моїШріє, Гудодішт х Тауає,
Гудодіот х ІапсейІапит, та І удодіит умппапепзе.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду класу Ізоеіорзіда або класу І усородіорзіда.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду класу Ізоєїорзіда, ряду ЗеїІадіпаІез. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду класу Ізоєїорзіда, ряду
ЗеїЇадіпа(євх, родини беїЇадіпейасеає. У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду плаунів роду беїЇадіпеМПа. У деяких
Зо варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду 5еїЇадіпеМйа, вибраного без обмеження із беїЇадіпейа асапіпопоїа, 5еїадіпеМа арода,
ЗеїЇадіпейа агривсшіа, ЗеїадіпеПа агепісоіа, ЗеіадіпеПа агі2опіса, 5еїіадіпеМПа аптаїа, беїіадіпеПйа азргейа, беїадіпейа Бітогтів, 5еїЇадіпеїйа бБідейїомії, беїіадіпейа Бгайпії, ЗеїіадіпеМПа сіпегазсепв,
ЗеїЇадіпейа согайоЇйа, Зеїіадіпейа дейеха, ЗеїадіпеМПа аеїїсашіа, 5еїадіпеМйа депза, беїЇадіпеПа доцдіавії, беіадіпейа єаюпії, ЗеіадіпеМПа есіїре5, Зеіадіпейа егеторпіїа, беїіадіпейа егуїйпгорив, зЗеїІадіпейа ПабрейПага, Беїадіпейа апзепії, Зеїадіпейа Пеїегодопіа, ЗеїадіпеМйа Кгаизвіапа, зеїІадіпеїіа Кгидії, ЗеїадіпеПа Іахітоїїа, ЗеїІадіпеїіа ІерідорнуПа, зеїадіпеЇПа Іеисобгуоідевз, ЗеїіадіпеїПа
Індомісіапа, ЗеїіадіпейПа тиїйїса, 5еїадіпеМПа огедапа, беїЇадіпейа омітоїйа, беїадіпеПа раїІезсепв, зЗеїІадіпейа региміапа, ЗеїадіпеММа ріїїега, ЗеїІадіпеМйа ріапа, ЗеїадіпеМйа ріштовза, зЗеїЇадіпеїа риїсНегіта, ЗеїадіпеМйа гиревзійв, Зеїадіпейа гиріпсоїа, Зеїадіпена в5сорийогит, зЗеїадіпеїМа зеіадіпоїде5, ЗеїадіпеМа вірігіса, Зеїадіпейа віапаІєуі), ЗеїадіпеМйа віеЇМайа, ЗеїадіпеПа зирсашцезсепв, ЗеіадіпеПа зибвіїрнана, беїіадіпеїІа їепеїЇа, 5еїіадіпеїПа іогіїріїа, Зеїіадіпеїіа цідіпоза, зЗеїЇадіпеПа штбргоза, 5еїіадіпеПа ипсіпайа, беіадіпейа ипадегмоодії, ЗеіадіпеПа шанепвів, ЗеЇадіпеПа місіогіає, ЗеїІадіпеїІа мігідіввіта, ЗеіадіпеПа маїасеї, ЗеіадіпеПа уаїзопії, 5еїіадіпеїа меаїпегріапа,
ЗеїадіпеЇа м/іїдепомііїї, ЗеіадіпеїПа мідній та ЗеіІадіпеїа Х пеотехісапа.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду класу Іусородіорзіда, ряду Гусородіаїезх, родини Ниреггіасеає, родини
Нирегїгіа, вибраного без обмеження із Ниреггіа асегоза, Ниреггіа арргезза, Нирегліа агсіїса,
Нирег!гіа ацепиаїа, Ниреггіа аизігаійапа, Ниреггіа рбаіапзає, Ниреггіа ріПагаїетгі, Ниреггіа Бгаспіаїа,
Нирег!гіа ргадеогит, Ниреггіа ргемігоїїа, Ниреггіа сатріапа, Нирегїгіа сареїІає, Ниреггіа саріїакгів,
Нирег!гіа сагіпаїа, Ниреггіа спатає!єоп, Ниреггіа сотрасіа, Ниреггіа стазза, Нирегїгіа ситіпдії,
Ниреггіа сипейоійа, Ниреггіа сигмойа, Ниреггіа дасгудіоїде5, Ниреггіа аепіаїа, Ниреггіа діснаєсіде5, Ниреггіа діспоїота, Ниреггіа епісіоїйа, Ниреггіа емегза, Ниреггіа Пйпогтів, Ниреггіа
Тоїїасеа, Ниреггіа тогаї, Ниреггіа їмпіоптів, Ниреггіа Навіаїа, Ниреггіа Пеїегосійа, Ниреггіа
Пірритідеа, Ниреггіа Пірригіз, Нирег!7іа поїтапгпії, Ниреггіа Ної!вій, Ниреггіа потосагра, Ниреггіа
Погігопіа|й5, Ниреггіа Нувііх, Ниреггіа ІапсітоЇйа, Ниреггіа Іпаепії, Ниреггіа ІпіоїЇа, Ниреггіа
ІосКуєті, Ниреггіа Іссідша, Нирегїгіа таппії, Ниреггліа тедавіаспуа, Нирег!гіа тезоатегісапа,
Ниреггіа тіпдспеепвів, Ниреггіа тоїйсота, Ниреггіа тугзіпіте5, Ниреггіа питтиїагіюїа, Ниреггіа пшапв, Нирег!гіа орпіодіо55оїЇде5, Нирегїгіа ріПапгії, Ниреггіа рпієдтагіа, Ниреггіа рпієдтагіоідев, 60 Нирег!гіа ріпусдев, Нирег!гіа ріцієті, Ниреггіа роїуусагров, Нирег!гіа роїудасіуїа, Ниреггіа рогорніа,
Ниреггіа ргпоїїега, Ниреггіа геПйеха, Ниреггіа гозепвіосКіапа, Ниреггіа гиїезсеп5, Ниреггіа взаміпіоїде5, Ниреггіа загтепіоза, Нирег!гіа зеіадо, Ниреггіа зегтаїа, Ниреггіа віероїаїйї, Ниреггіа здцатовза, Ниреггіа зиршіайа, Ниреггіа іаїатапсапа, Ниреггіа їашгі, Ниреггіа їахітоїїа, Ниреггіа
Іепиів, Нирегїгіа Іемадопа, Нирегліа їеїгазіїсна, Ниреггіа шриоза, Нирег!гіа ипдиісціаїа, Ниреггіа мапа, Ниреггіа мепісПагїа та Ниреггіа м/ії5оп.
У деяких варіантах здійснення молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІЇР-96, одержують із виду класу Іусородіорзіча, ряду Іусороадіаі(ез, родини Гусородіасеає, роду
Гусородішт, вибраного без обмеження із Іусородішт аїріпит Г., Гусородіит аппоїпит ЇГ.,
Гусородішт сіамайшт Г., Гусородішт сотріапайшт ., Гусородішт депагоїдент Місрх.,
Гусородіит аіднкаєгшт, Гусородіцшт хпарбегегі, Гусородіит ПпісКеуї, Гусородічт хізвієгі, Гусородінт
Іадорив, І усородіит орзсигит Г.., Г усородіит рпІедтагніа Г.., Гусородіит забіпіоїїшт, І усородійт віспепбзе, І усородішт Мібвїаспушт, І усородійт мепивіцит, Іусородійт мепивіцит маг. мепивішішт, І усородіит мепивішішт маг. мепіса!е, І усородіит моїшбіїє та Гусородіит х2ейегі.
Також представлені молекули нуклеїнових кислот, які кодують продукти транскрипції та/або трансляції, які потім піддаються сплайсингу з утворенням, зрештою, функціональних поліпептидів РІР-96. Сплайсинг може здійснюватися іп міїго або іп мімо, та він може включати цис- або транс-сплайсинг. Субстратом для сплайсингу можуть бути полінуклеотиди (наприклад,
РНК-транскрипти) або поліпептиди. Прикладом цис-сплайсингу полінуклеотиду є ситуація, коли інтрон, вставлений у кодувальну послідовність, видаляється та дві фланкувальні екзонні ділянки з'єднуються з утворенням послідовності, що кодує поліпептид РІИР-96. Прикладом транс-сплайсингу буде ситуація, коли полінуклеотид кодується з розділенням кодувальної послідовності на два або більше фрагменти, які можуть транскрибуватися роздільно, а потім з'єднуватися з утворенням пестицидної кодувальної послідовності повної довжини.
Застосування послідовності енхансера сплайсингу, яку можна вводити у конструкцію, може полегшувати сплайсинг як під час цис-, так і трансо-сплайсингу поліпептидів (патенти США МоМо 6365377 та 6531316). Таким чином, у деяких варіантах здійснення полінуклеотиди безпосередньо не кодують поліпептид РІИР-9б повної довжини, а кодують фрагмент або фрагменти поліпептиду РИР-96. Ці полінуклеотиди можна застосовувати для експресії функціонального поліпептиду РИР-96 за допомогою механізму, що включає сплайсинг, при
Зо цьому сплайсинг може відбуватися на рівні полінуклеотиду (наприклад, інтрон/екзон) та/або поліпептиду (наприклад, інтеїн/екстеїн). Це можна застосовувати, наприклад, під час регуляції експресії пестицидної активності, оскільки функціональний пестицидний поліпептид буде експресуватися тільки у тому випадку, якщо всі необхідні фрагменти експресуються у середовищі, яке забезпечує можливість процесів сплайсингу з утворенням функціонального продукту. В іншому прикладі введення однієї або декількох послідовностей вставок у полінуклеотид може полегшувати рекомбінацію з полінуклеотидом з низькою гомологією; застосування інтрона або інтеїна для послідовності вставки полегшує видалення встановленої послідовності, що тим самим відновлює функцію варіанта, що кодується.
Молекули нуклеїнових кислот, які Є фрагментами цих послідовностей нуклеїнових кислот, що кодують поліпептиди РІР-96, також охоплюються варіантами здійснення. Застосовуваний у даному документі "фрагмент" стосується частини послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІЇР-96. Фрагмент послідовності нуклеїнової кислоти може кодувати біологічно активну частину поліпептиду РИР-9б6, або він може являти собою фрагмент, який можна застосовувати як гібридизаційний зонд або ПЛР-праймер із застосуванням розкритих нижче способів. Молекули нуклеїнових кислот, які є фрагментами послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІІР-96, містять щонайменше приблизно 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 або 360 суміжних нуклеотидів або до кількості нуклеотидів, наявних у послідовності нуклеїнової кислоти повної довжини, що кодує поліпептид РІИР-96, розкритий у даному документі, залежно від передбачуваного застосування. "Суміжні нуклеотиди" використовується у даному документі для позначення нуклеотидних залишків, які безпосередньо прилягають один до одного.
Фрагменти послідовностей нуклеїнової кислоти згідно з варіантами здійснення будуть кодувати фрагменти білка, які зберігають біологічну активність поліпептиду РІИР-96Аа та внаслідок цього зберігають інсектицидну активність. "Зберігає інсектицидну активність" застосовують у даному документі для позначення поліпептиду, що характеризується щонайменше приблизно 10 95, щонайменше приблизно 30 95, щонайменше приблизно 50 956, щонайменше приблизно 70 95, 80 9», 90 Фо, 95 95 або більшою інсектицидною активністю поліпептиду РІР-9бАа повної довжини (ЗЕО ІО МО: 9). У деяких варіантах здійснення інсектицидна активність являє собою активність проти І ерідорієга. В одному варіанті здійснення інсектицидна активність являє собою активність проти видів твердокрилих. У деяких варіантах здійснення інсектицидна активність являє собою бо активність проти одного або декількох комах-шкідників із групи кукурудзяного жука: західного кукурудзяного жука, Оіабгоїїса мігдіїега; північного кукурудзяного жука, О. Багбрегі: південного кукурудзяного жука або жука-блошки одинадцятикрапкового; Оіабгоїїса ипаесітрипсіава поулагаї та мексиканського кукурудзяного жука, ОО. мігдіїега 7еае. В одному варіанті здійснення інсектицидна активність являє собою активність проти виду Оіабгоїїса.
У деяких варіантах здійснення фрагмент послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІИР-96, який кодує біологічно активну частину білка, буде кодувати щонайменше приблизно 15, 20, 30, 50, 75, 100, 125 суміжних амінокислот або до загальної кількості амінокислот, наявних у поліпептиді РІИР-96 повної довжини згідно з варіантами здійснення. У деяких варіантах здійснення фрагмент характеризується М-кінцевим та/або С-кінцевим укороченням на щонайменше приблизно 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 або більше амінокислот з М-кінця та/або С-кінця відносно ЗЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮО МО: 7, ЗЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, БО І МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22, ЗЕО І МО: 24, 5ЕО 10 МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО 10 МО: 38, 5ЕО І МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО 10 МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО І МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІЮО МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО ІЮО МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІО МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІЮО МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІЮ МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО І МО: 104, 5ЕО І
МО: 106 або 5ЕО ІЮ МО: 108 або їх варіантів, наприклад, шляхом протеолізу, вставки старт- кодона, делеції кодонів, що кодують амінокислоти, що видаляються, з одночасною вставкою стоп-кодона або шляхом вставки стоп-кодона в кодувальну послідовність.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 кодується послідовністю нуклеїнової кислоти, яка в достатній мірі гомологічна послідовності нуклеїнової кислоти під ЕС ІО МО: 1,
ЗЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4, 5ЕО ІО МО: 15, 5ЕО ІЮО МО: 11, 5ЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО
ІО МО: 15, 5ЕО ІО МО: 17, 5ЕО ІЮО МО: 19, 5ЕО ІО МО: 21, 5ЕО І МО: 23, 5ЕО І МО: 25; 5ЕО
ІО МО: 27; 5ЕО ІЮО МО: 29, 5ЕО ІО МО: 31, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО І МО: 35, 5ЕО ІЮО МО: 37, 5ЕО
ІО МО: 39, 5ЕО ІО МО: 41, 5ЕО І МО: 43, 5ЕО ІЮО МО: 45, 5ЕО ІЮ МО: 47, 5ЕО ІЮО МО: 49, 5ЕО
Зо ІО МО: 51, 5ЕО ІО МО: 53, 5ЕО ІЮ МО: 55, 5ЕО ІО МО: 57, 5ЕО І МО: 59, 5ЕО ІО МО: 61, 5ЕО
ІО МО: 63, 5ЕО ІО МО: 65, 5ЕО І МО: 67, 5ЕО ІО МО: 69, 5ЕО І МО: 71, 5ЕО ІЮО МО: 73, 5ЕО
ІО МО: 75, 5ЕО ІО МО: 77, 5ЕО ІЮ МО: 79, 5ЕО ІО МО: 81, 5ЕО І МО: 83, 5ЕО І МО: 85, 5ЕО
ІО МО: 87, 5ЕО ІЮО МО: 89, 5ЕО І МО: 91, 5ЕО ІО МО: 93, 5ЕО І МО: 95, 5ЕО ІО МО: 97, 5ЕО
ІО МО: 99, 5ЕО ІО МО: 101, 5ЕО ІО МО: 103, 5ЕО ІО МО: 105, 5БО І МО: 107 або 5ЕО І МО: 109. "Достатньою мірою гомологічний" використовується у даному документі для позначення амінокислотної послідовності або послідовності нуклеїнових кислот, послідовність якої щонайменше на приблизно 50 95, 55 95, 60 95, 65 95, 70 95, 75 95, 80 90, 81 Зо, 82 95, 83 о, 84 бо, 85 95, 86 Фо, 87 Уо, 88 90, 89 о, 90 90, 91 У, 92 90, 93 У, 94 90, 95 90, 96 о, 97 Уо, 98 У, 99 95 або більше гомологічна еталонній послідовності із застосуванням однієї з програм вирівнювання, описаних у даному документі, із застосуванням стандартних параметрів. Фахівцю в даній галузі техніки буде зрозуміло, що ці значення можна відповідним чином скорегувати для визначення відповідної гомології білків, що кодуються двома послідовностями нуклеїнової кислоти, беручи до уваги виродженість кодонів, подібність амінокислот, розташування рамки зчитування тощо. У деяких варіантах здійснення гомологія послідовностей визначається щодо послідовності повної довжини полінуклеотиду, що кодує поліпептид РІР-96, або щодо послідовності повної довжини поліпептиду РІЇР-96.
У деяких варіантах здійснення нуклеїнова кислота, яка кодує поліпептид РІЇР-96, вибрана із будь-якої під БЕО ІО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО 10 МО: 4, 5ЕО 10 МО: 15, 5ЕО ІЮ
МО: 11, 5ЕО ІЮО МО: 13, 5ЕО ІО МО: 15, 5ЕО І МО: 17, 5ЕО ІО МО: 19, 5БЕО ІО МО: 21, 5ЕО І
МО: 23, 5ЕО ІО МО: 25; 5ЕО ІО МО: 27; 5ЕО І МО: 29, 5ЕО ІО МО: 31, 5ЕО ІО МО: 33, 5ЕО 10
МО: 35, 5ЕО ІО МО: 37, 5ЕО ІО МО: 39, 5ЕО ІО МО: 41, 5ЕО ІЮО МО: 45, 5ЕО ІО МО: 45, 5ЕО 10
МО: 47, 5ЕО ІО МО: 49, 5ЕО ІО МО: 51, 5ЕО ІО МО: 53, 5ЕО ІЮО МО: 55, 5ЕО ІО МО: 57, 5ЕО ІО
МО: 59, 5ЕО ІО МО: 61, 5ЕО ІО МО: 63, 5ЕО І МО: 65, 5ЕО ІЮО МО: 67, 5ЕО ІО МО: 69, 5ЕО 10
МО: 71, 5ЕО ІО МО: 73, 5ЕО ІО МО: 75, 5ЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО ІЮО МО: 79, 5ЕО ІО МО: 81, 5ЕО 10
МО: 83, 5ЕО ІО МО: 85, 5ЕО ІО МО: 87, 5ЕО ІО МО: 89, 5ЕО ІЮО МО: 91, 5ЕО ІО МО: 93, 5ЕО І
МО: 95, 5БЕО ІЮ МО: 97, 5ЕО ІО МО: 99, 5ЕО ІО МО: 101, 5ЕО ІО МО: 103, 5ЕО ІО МО: 105, 5ЕО
ІО МО: 107 або 5ЕО ІО МО: 109.
У деяких варіантах здійснення нуклеїнова кислота кодує поліпептид РІЇР-96, що характеризується щонайменше приблизно 5095, 55 95, 6095, 65, 7090, 7590, 80 о, 81 бо, бо 82 Фо, 83 95, 84 95, 85 90, 86 Фо, 87 Фо, 88 9, 89 90, 90 90, 91 9, 92 Фо, 93 Фо, 94 9, 95 95, 96 Фо, 97 Фо,
98 95, 99 95 або більшою ідентичністю послідовності порівняно з ХЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО І МО: 7,
ЗЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, БО ІО МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5БЕО ІЮ МО: 14, 5БО І МО: 16,
ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО ІЮО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 26; 5ЕО ІЮО МО: 28;
ЗЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5БЕО І МО: 36, 5ЕО І МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40,
ЗЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5БЕО І МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52,
ЗЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5БЕО І МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64,
ЗЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО 10 МО: 72, 5ЕО ІЮО МО: 74, 5ЕО І МО: 76,
ЗЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО ІО МО: 86, 5ЕО І МО: 88,
ЗЕО ІЮО МО: 90, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІЮ МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100,
ЗЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮО МО: 106 або 5ЕО І МО: 108.
У деяких варіантах здійснення ідентичність послідовностей розраховують із застосуванням алгоритму СіивіаМуУ у модулі АГІСМХФ комплекту програм Месіог МТФ Ргодгат Бийе (Іпийгодеп
Согрогайоп, Карлсобад, Каліфорнія) з усіма параметрами за замовчуванням. У деяких варіантах здійснення ідентичність послідовностей розраховують за повною довжиною поліпептиду із застосуванням алгоритму СіивіаїМУ в модулі АГІСЯМХ комплекту програм Месіог МТІ Ргодгат зЗийе (Іпийгодеп Согрогаййоп, Карлсобад, Каліфорнія) з усіма параметрами за замовчуванням.
Для визначення відсотка ідентичності двох амінокислотних послідовностей або двох послідовностей нуклеїнових кислот здійснюють вирівнювання послідовностей 3 метою оптимального порівняння. Відсоткова ідентичність двох послідовностей є функцією кількості ідентичних положень, що мають послідовності (тобто відсоткова ідентичність-кількість ідентичних положень/загальна кількість положень (наприклад, положень, що перекриваються)х100). В одному варіанті здійснення дві послідовності мають однакову довжину. В іншому варіанті здійснення порівняння проводять за повною довжиною еталонної послідовності (наприклад, за всією довжиною 5ЕО І МО: 1). Відсоткову ідентичність двох послідовностей можна визначити із застосуванням методик, аналогічних описаним нижче, які допускають наявність гепів або їхню відсутність. Під час розрахунку відсоткової ідентичності здебільшого підраховують точні збіги.
Іншим необмежувальним прикладом математичного алгоритму, застосовуваного для порівняння послідовностей, є алгоритм за Меєдієтап апа М/ипзей, (1970) 9. Мої. Віої. 48(3):443-
Зо 453, у якому застосовується програмне забезпечення (С31АР, версії 10, для визначення ідентичності або подібності послідовностей із застосуванням наступних стандартних параметрів: ідентичності табь подібності для послідовності нуклеїнової кислоти із застосуванням штрафу за відкриття гепа 50, і штрафу за продовження гепа 3, і матриці замін пмздарапа.стрії; о ідентичності або подібності для амінокислотної послідовності із застосуванням штрафу за відкриття гепа 8, і штрафу за продовження гепа 2, і матриці замін
ВГОБОМб2. Також можна застосовувати еквівалентні програми. "Еквівалентна програма" використовується у даному документі для позначення будь-якої програми для порівняння послідовностей, яка для будь-яких двох досліджуваних послідовностей генерує вирівнювання, що характеризується ідентичними співпадіннями нуклеотидів та ідентичним відсотком ідентичності послідовності при порівнянні з відповідним вирівнюванням, створеним за допомогою САР версії 10.
Варіанти здійснення також охоплюють молекули нуклеїнових кислот, що кодують варіанти поліпептиду РІИР-96. "Варіанти" послідовностей нуклеїнових кислот, що кодують поліпептид
РІИР-96, включають послідовності, які кодують поліпептиди РІР-96, розкриті у даному документі, але які відрізняються консервативними замінами, зумовленими виродженістю генетичного коду, а також послідовності, які є достатньо ідентичними, як обговорювалось вище. Алельні варіанти, що зустрічаються в природі, можна ідентифікувати із застосуванням добре відомих методик молекулярної біології, таких як полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) та методика гібридизації, викладених нижче. Варіантні послідовності нуклеїнових кислот також включають синтетично одержані послідовності нуклеїнових кислот, які були одержані, наприклад, із застосуванням сайт-спрямованого мутагенезу, але які все ще кодують розкриті поліпептиди РІЇР-96, які обговорюються нижче.
Дане розкриття передбачає виділені або рекомбінантні полінуклеотиди, які кодують будь-які з поліпептидів РІР-96, розкритих у даному документі. Фахівці в даній галузі техніки легко зрозуміють, що внаслідок виродженості генетичного коду існує багато нуклеотидних послідовностей, що кодують поліпептиди РІЇР-96 за даним розкриттям.
Також фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що заміни можна вводити шляхом введення мутацій у послідовності нуклеїнових кислот, що спричиняє зміни в амінокислотних послідовностях кодованих поліпептидів РІЇР-96 без зміни біологічної активності білка. Таким бо чином, варіантні молекули нуклеїнових кислот можна створювати шляхом введення однієї або декількох нуклеотидних замін, додавань та/або делецій у відповідну послідовність нуклеїнової кислоти, розкриту у даному документі, так що одна або декілька амінокислотних замін, додавань або делецій вводяться у кодований білок. Мутації можна вводити за допомогою стандартних методик, таких як сайт-спрямований мутагенез та ПлЛР-опосередкований мутагенез. Такі варіантні послідовності нуклеїнових кислот також охоплюються даним розкриттям.
Альтернативно варіантні послідовності нуклегїнових кислот можна одержувати шляхом випадкового введення мутацій у всій або частині кодувальної послідовності, як, наприклад, шляхом сайт-насичувального мутагенезу, та одержаних мутантів можна піддавати скринінгу щодо здатності забезпечувати пестицидну активність для ідентифікації мутантів, які зберігають активність. Після мутагенезу кодований білок можна експресувати рекомбінантним способом, та активність білка можна визначати із застосуванням стандартних методик аналізу.
Полінуклеотиди за даним розкриттям та їхні фрагменти необов'язково застосовують як субстрати для ряду реакцій рекомбінації та рекурентної рекомбінації додатково до стандартних способів клонування, викладених, наприклад, в А!йзибре!, Вегдег апа батргооК, тобто для одержання додаткових гомологів пестицидних поліпептидів та їхніх фрагментів із необхідними властивостями. Відомий ряд таких реакцій, включаючи розроблені авторами даного винаходу та їхніми співробітниками. Способи одержання варіанта будь-якої нуклеїнової кислоти, наведеної у даному документі, включають рекурентну рекомбінацію такого полінуклеотиду з другим (або більшою кількістю) полінуклеотидом, таким чином, одержання бібліотеки варіантних полінуклеотидів також являє собою варіанти здійснення за даним розкриттям, як і одержані бібліотеки, клітини, що містять бібліотеки, та будь-який рекомбінантний полінуклеотид, одержаний такими способами. Додатково такі способи необов'язково включають відбір варіантного полінуклеотиду з таких бібліотек на основі пестицидної активності, як відбувається, коли таку рекурентну рекомбінацію здійснюють іп міїго або іп мімо.
Ряд протоколів одержання різноманіття, включаючи протоколи рекурентної рекомбінації нуклеїнових кислот, доступна та повністю описана у рівні техніки. Методики можна застосовувати окремо та/або в комбінації для одержання одного або декількох варіантів нуклеїнової кислоти або набору нуклеїнових кислот, а також варіантів кодованих білків. Окремо
Зо та разом ці методики забезпечують надійні, широко застосовувані шляхи одержання диверсифікованих нуклеїнових кислот та наборів нуклеїнових кислот (включаючи, наприклад, бібліотеки нуклеїнових кислот), що застосовують, наприклад, для конструювання або швидкої еволюції нуклеїнових кислот, білків, метаболічних шляхів, клітин та/або організмів із новими та/або поліпшеними характеристиками.
Хоча протягом наступного обговорення для чіткості роблять розмежування та класифікацію, буде взято до уваги, що методики часто не є взаємовиключними. До того ж різні способи можна застосовувати окремо або в комбінації, одночасно або послідовно для досягнення різних варіантів послідовностей.
Результатом здійснення будь-якої з методик створення різноманіття, описаних у даному документі, може бути створення однієї або декількох нуклеїнових кислот, які можна піддавати відбору або скринінгу щодо нуклеїнових кислот, що мають необхідні властивості або надають їх, або нуклеїнових кислот, які кодують білки з необхідними властивостями або надають їх. Після диверсифікації за допомогою одного або декількох способів, описаних у даному документі або іншим чином доступних фахівцю в даній галузі, будь-які нуклеїнові кислоти, які одержують, можна піддавати відбору щодо необхідної активності або властивості, наприклад, пестицидної активності або такої активності за бажаного показника рН тощо. Це може включати ідентифікацію будь-якої активності, яку можна виявити, наприклад, в автоматизованому форматі або форматі, що автоматизується, за допомогою будь-якого з аналізів, відомих із рівня техніки, див., наприклад, обговорення скринінгу щодо інсектицидної активності нижче. Можна оцінювати низку пов'язаних (або навіть непов'язаних) властивостей послідовно або одночасно на розсуд фахівця-практика.
Описи ряду методик створення різноманіття для одержання модифікованих послідовностей нуклеїнової кислоти, наприклад, послідовностей, що кодують поліпептиди з пестицидною активністю або їхні фрагменти, можна знайти у наступних публікаціях та літературі, процитованій у них: Зоопао, еї аї., (2000) Маї Сепеї 25(4):436-439; стеттет, єї а!., (1999) Титог
Тагаеїйпа 4:1-4; Мев5, єї аї., (1999) Маї Віоїеснпої! 17:893-896; СНапо, єї а!., (1999) Маї Віотеснпої 17:793-797; Міпепші апа біеттег", (1999) Сит Оріп Спет Віо! 3:284-290; СНгівііапв, єї а!., (1999)
Маї Віоїєснпої 17:259-264; Статеті, єї аї., (1998) Майштге 391:288-291; Статеті, єї а!., (1997) Маї
Віоїеснпої 15:436-438; 7Напа, єї аї., (1997) РМАБ5 ОБА 94:4504-4509; Рацеп, вї аї., (1997) Си 60 Оріп Віоїеснпої 8:724-733; Статеті, єї аї., (1996) Маї Мей 2:100-103; Статег!!і, еї а!., (1996) Маї
Віотесппої 14:315-319; Сагев, єї аї., (1996) У Мої Віої 255:373-386; 5іеттег", (1996) "Беха! РСОВ апа Аззетбріу РОК" у: Тне Епсусіоредіа ої МоіІесшаг Віооду. МСН Рибіїзпегтв, Мем МоїК. рр. 447- 457; Статеті апа біеттег, (1995) ВіоТесппідне5 18:194-195; Бїеттетг, єї а!., (1995) Сепе, 164:49- 53; біеттег, (1995) бсівєпсе 270: 1510; біеттег, (1995) Віо/Гесппоіоду 13:549-553; біеттег, (1994) Маїште 370:389-391 та етітег, (1994) РМАБ ОА 91:10747-10751.
Мутаційні способи створення різноманіття включають, наприклад, сайт-спрямований мутагенез (І іпо, еї аї., (1997) Апа! Віоспет 254(2):157-178; Ваїе, єї аї., (1996) Меїпод» Мої! Віо)! 57:369-374; тії, (1985) Апп Нем Сепеї 19:423-462; Воївівїп апа попе, (1985) З5сієпсе 229:1193-1201; Сапег, (1986) Віоснет У 237:1-7 та Кипкеї, (1987) "Ппе ейісіепсу ої оїїдописіеоїіде дігесіеєд тшадепевів" у Мисієїс Асіах 4. МоіІєсшціаг Віоіоду (ЕскКзвівїп апа І Пеу, єдв., Зргіпдег Мепад,
Вепійп)); мутагенез із застосуванням матриць, що містять урацил (КипкКеї, (1985) РМАБ ОБА 82:488-492; Кипкеї, еї аї., (1987) Мешоайв Епгутої!ї 154:367-382 та Ваз5, єї аї., (1988) Зсієпсе 242:240-245); олігонуклеотид-спрямований мутагенез (20оІег апа 5тійй, (1983) Мешйоад5 Епгутої 100:468-500; 7оПег апа тії, (1987) Меїйод5 Еплутої 154:329-350 (1987); 70Пег апа ті, (1982) Мисівїс Асід5 Не5 10:6487-6500), мутагенез фосфоротіоат-модифікованої ДНК (Тауїог, еї а!., (1985) Мис! Асіаз Не5 13:8749-8764; Тауїог, єї а!., (1985) Мисі Асіа5 Нез 13:8765-8787 (1985);
МаКатаує апа ЕскКзівіп, (1986) Мисі Асіаз Ве 14:9679-9698; Зауегз, єї а!., (1988) Мисі Асіазх Ве 16:791-802 та Зауег5, еї аї., (1988) Мис! Асід5 Нев 16:803-814); мутагенез із застосуванням дуплексної ДНК з проміжком (Кгатег, еї а!., (1984) Мис! Асіах ВНез 12:9441-9456; Ктатег апа Ей, (1987) Меїнпод5 Епгутої! 154:350-367; Ктатет, єї аї., (1988) Мис! Асіаз Нез 16:7207 та Егйя, еї аї., (1988) Мисі Асіа5 Нез 16:6987-6999).
Додаткові придатні способи включають точкову репарацію помилково спарених основ (Кгатег, єї аї.,, (1984) Се! 38:879-887), мутагенез із застосуванням штамів-хазяїнів із недостатністю репарації (Сапег, еї аї., (1985) Мис! Асід5 Не5 13:4431-4443 та Сапег, (1987)
Меїтоавз іп Епгутої 154:382-403), делеційний мутагенез (Едпіедагадей апа Непікоїй, (1986) Мисі
Асіаз Нез 14:5115), рестрикцію-відбір та рестрикцію-очистку (УМеїЇ5, еї а!ї., (1986) РН Тгапо АВ бос
Гопа А 317:415-423), мутагенез шляхом повного синтезу гена (Матріаг, еї аї., (1984) бсієпсе 223:1299-1301; ЗаКатаг апа Кногапа, (1988) Мис! Асіаз5 Вез 14:6361-6372; МУ/еїЇ5, єї а!., (1985)
Сепе 34:315-323 та ОСгипабігбт, еї аї., (1985) Мисі Асідхє Не 13:3305-3316), репарацію двониткових розривів (Мапаескі, (1986) РМАБ О5А, 83:7177-7181, та Агпоїд, (1993) Си Оріп
Віоїесп 4:450-455). Додаткові відомості щодо багатьох вищезгаданих способів можна знайти у
Меїнподе Епгутої, том 154, у якому також описані корисні засоби контролю для пошуку та усунення проблем у випадку різних способів мутагенезу.
Додаткові відомості щодо різних способів створення різноманіття можна знайти у наступних патентах США, публікаціях та заявках за РСТ та публікаціях ЕРО: патент США Мо 5723323, патент США Мо 5763192, патент США Мо 5814476, патент США Мо 5817483, патент США Мо 5824514, патент США Мо 5976862, патент США Мо 5605793, патент США Мо 5811238, патент
США Мо 5830721, патент США Мо 5834252, патент США Мо 5837458, МО 1995/22625, МО 1996/33207, МО 1997/20078, МО 1997/35966, УМО 1999/41402, МО 1999/41383, МО 1999/41369,
МО 1999/41368, ЕР 752008, ЕР 0932670, М/О 1999/23107, УМО 1999/21979, МО 1998/31837, МО 1998/27230, МО 1998/27230, МО 2000/00632, УМО 2000/09679, МО 1998/42832, МО 1999/29902,
МО 1998/41653, МО 1998/41622, УМО 1998/42727, МО 2000/18906, МО 2000/04190, МО 2000/42561, УМО 2000/42559, УМО 2000/42560, УМО 2001/23401 та РСТ/О5О1/06775.
Нуклеотидні послідовності за варіантами здійснення можна також застосовувати для виділення відповідних послідовностей із видів папоротей відділу РієгідорНуїа або видів плаунків роду Зеїадіпеа. Таким чином, такі способи, як ПЛР, гібридизація тощо, можна застосовувати для ідентифікації таких послідовностей з урахуванням гомології їхньої послідовності з послідовностями, викладеними у даному документі. Варіантами здійснення охоплюються послідовності, вибрані на основі ідентичності послідовності повним послідовностям, викладеним у даному документі, або їхнім фрагментам. Такі послідовності включають послідовності, які є ортологами розкритих послідовностей. Термін "ортологи" стосується генів, що походять від спільного предкового гена та виявляються у різних видів унаслідок видоутворення. Гени, знайдені у різних видів, вважаються ортологами, якщо їхні нуклеотидні послідовності та/або білкові послідовності що кодуються ними, мають суттєвий ступінь ідентичності, як визначено в інших розділах у даному документі. Функції ортологів часто є висококонсервативними серед видів.
У підході, основаному на ПЛР, олігонуклеотидні праймери можна сконструювати для застосування у ПЛР-реакціях для ампліфікації відповідних послідовностей ДНК з кКДНК або геномної ДНК, екстрагованих з будь-якого організму, що становить інтерес. Способи бо конструювання ПЛР-праймерів та ПЛР-клонування загалом відомі з рівня техніки та розкриті в затргоокК, єї а!., (1989) Моїесшаг Сіопіпд: А Іарогаюгу Мапиа! (24 єйд., Соїд бргіпд Нагброг
І арогаїогу Ргезв5, РіІаіпмієм, Мем мМогКк), пегеіпапнег "затргоокК". Див. також Іппів, еї аї., єдв5. (1990)
РОСА Ргоїюсоїв: А Сшіде о Меїпод5 апа Арріїсайопе (Асадетіс Ргебз5, Мем/ Мої); Іппів апа
Сеапа, єдз. (1995) РСВ 5ігагедієз (Асадетіс Ргезв, Мем МогК); та Іппіз апа Сеїапа, єдв. (1999)
РСА МейШосдвз Мапиа! (Асадетіс Ргез5, Мем МоКк). Відомі способи ПЛР включають без обмеження способи із застосуванням парних праймерів, гніздових праймерів, окремих специфічних праймерів, вироджених праймерів, ген-специфічних праймерів, вектор- специфічних праймерів, праймерів, що частково не збігаються тощо.
Для ідентифікації потенційних поліпептидів РІИР-96 з колекцій папоротей або мохів лізати клітин папоротей або мохів можна піддавати скринінгу за допомогою антитіл, що виробляються до поліпептидів РІЇР-96 та/або поліпептидів РІЇР-96 із застосуванням способів вестерн-блотингу талабо ЕГІБА. Цей тип аналізів можна проводити високопродуктивним способом. Позитивні зразки можна додатково аналізувати за допомогою різних методик, таких як очищення та ідентифікація білків за допомогою антитіл. Способи одержання антитіл добре відомі з рівня техніки, як обговорюється нижче.
Альтернативно для ідентифікації гомологів поліпептидів РІЇР-96 можна застосовувати спосіб ідентифікації білків на основі мас-спектрометрії із застосуванням протоколів із літературних джерел (5соїйї Рацегзоп, (1998), 10.22, 1-24, Сцтепі Ргоїосої іп МоіІесціаг Віоіоду, опублікований
Уопп Уміеу 8. оп Іпс). Конкретніше спосіб ідентифікації білків на основі Ї С-М5/М5 застосовують для встановлення зв'язку М5-даних вказаних лізатів клітин або зразків, збагачених молекулами з необхідною молекулярною вагою (вирізаних із гелю 505-РАСЕ зі смугами з молекулярною вагою, відповідною поліпептидам РІІР-96), з інформацією про послідовності поліпептидів РІЇР- 96 під БЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІО МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12,
ЗЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІО МО: 24,
ЗЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36,
ЗЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48,
ЗЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮО МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІЮО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60,
ЗЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72,
ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84,
Коо) ЗЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІЮО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96,
ЗЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІЮО МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І
МО: 108 та їхніх гомологів. Будь-який збіг у пептидних послідовностях вказує на можливість наявності гомологічних білків у зразках. Додаткові методики (способи очищення білка та методики молекулярної біології) можна застосовувати для виділення білка та ідентифікації послідовностей гомологів.
У способах гібридизації для скринінгу КДНК або геномних бібліотек можна застосовувати всю або частину послідовності пестицидної нуклеїнової кислоти. Способи для конструювання таких кКДНК та геномних бібліотек загалом відомі з рівня техніки та розкриті в ЗатьбгоокК апа
Киззеї, (2001), вище. Так звані гібридизаційні зонди можуть являти собою фрагменти геномної
ДНК, фрагменти кКДНК, фрагменти РНК або інші олігонуклеотиди, та вони можуть бути поміченими групою виявлення, такою як 32Р, або будь-яким іншим маркером виявлення, таким як інші радіоактивні ізотопи, флуоресцентною сполукою, ферментом або кофактором ферменту.
Зонди для гібридизації можна одержувати шляхом мічення синтетичних олігонуклеотидів, що базуються на відомій послідовності нуклеїнових кислот, що кодує поліпептид РІЇР-96, розкритій у даному документі. Додатково можна застосовувати вироджені праймери, сконструйовані на основі консервативних нуклеотидів або амінокислотних залишків у послідовності нуклеїнових кислот або кодованій амінокислотній послідовності. Зонд здебільшого містить ділянку послідовності нуклеїнової кислоти, яка гібридизується за жорстких умов щонайменше з приблизно 12, щонайменше з приблизно 25, щонайменше з приблизно 50, 75, 100, 125, 150, 175 або 200 суміжними нуклеотидами послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІІР- 96, згідно з даним розкриттям або його фрагмент або варіант. Способи одержання зондів для гібридизації загалом відомі з рівня техніки та розкриті в ЗатьгоокК апа Киззеї|, (2001), вище, включеному в даний документ за допомогою посилання.
Наприклад, повну послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид РІИР-96, розкриту у даному документі, або одну або декілька її частин можна застосовувати як зонд, що здатний специфічно гібридизуватися з відповідними послідовностями нуклеїнової кислоти, що кодують послідовності, подібні до поліпептиду РІИР-96, та матричними РНК. Для досягнення специфічної гібридизації за різних умов такі зонди включають послідовності, які є унікальними, та переважно мають довжину щонайменше приблизно 10 нуклеотидів або щонайменше приблизно 20 60 нуклеотидів. Такі зонди можна застосовувати для ампліфікації відповідних пестицидних послідовностей із вибраного організму за допомогою ПЛР. Цю методику можна застосовувати для виділення додаткових кодувальних послідовностей із необхідного організму або як діагностичний аналіз для визначення наявності кодувальних послідовностей в організмі.
Методики гібридизації включають гібридизаційний скринінг висіяних ДНК-бібліотек (або бляшок, або колоній; див., наприклад, Затогоок, еї аї., (1989) МоїІесшаг СіІопіпд: А Гарогайгу Мапцчиаї (24 ед., Соїа ргіпд Нагбог І арогайогу Ргевз, Соїд 5рііпд Нагбог, М.М .).
Гібридизацію таких послідовностей можна проводити у жорстких умовах. "Жорсткі умови" або "жорсткі умови гібридизації" застосовуються у даному документі для позначення умов, за яких зонд буде гібридизуватися зі своєю цільовою послідовністю у явно більшому ступені, ніж з іншими послідовностями (наприклад, щонайменше у 2 рази більше порівняно з фоном). Жорсткі умови залежать від послідовності і будуть відрізнятися за різних обставин. Шляхом регулювання жорсткості умов гібридизації талабо відмивання можна ідентифікувати цільові послідовності, які на 10095 комплементарні зонду (гібридизація з гомологічним зондом).
Альтернативно умови жорсткості можна регулювати для забезпечення деякого помилкового спарювання в послідовностях, щоб виявляти більш низькі ступені подібності (гібридизація з гетерологічним зондом). Загалом, довжина зонда становить менше приблизно 1000 нуклеотидів, переважно менше 500 нуклеотидів.
Білки, а також їхні варіанти та фрагменти
Поліпептиди РІЇР-96 також охоплені даним розкриттям. Терміни "інсектицидний білок-96
Ріетідорпуїта", "поліпептид РІР-96" та "білок РИР-96" застосовуються в даному документі взаємозамінно для позначення поліпептиду з інсектицидною активністю, включаючи без обмеження інсектицидну активність проти однієї або декількох комах-шкідників із рядів
І ерідоріега та/або СоіІеорієга, та достатньо гомологічного білку під ЗЕО І МО: 10.
Передбачається ряд поліпептидів РІИР-96. Джерела поліпептидів РІЇР-96 або споріднених білків являють собою види папоротей або інші примітивні рослини, вибрані без обмеження із видів папоротей відділу Рієегідорпуїа або видів плаунків роду 5еїЇадіпеїйа. "Достатньо гомологічний" використовується у даному документі для позначення амінокислотної послідовності, яка щонайменше на приблизно 40 95, 45 95, 50 905, 51 95, 52 95, 53 96, 54 95, 55 96, 56 95, 57 Ув, 58 95, 59 У, 60 90, 61 У, 62 У, 63 У, 64 У, 65 У, 66 У, 67 У, 68 9,
Зо 69 9, 70 оо, 71 дю, 729, 73 о, 74 о, 75 о, 76 о, 77 Чо, 78 Уо, 79 Ус, 80 Фо, 81 9о, 82 95, 83 Фо, 84 о, 85 95, 86 У, 87 бо, 88 95, 89 95, 90 У, 91 95, 92 95, 93 У, 94 У, 95 90, 96 95, 97 У, 98 90, 99 956 або більше гомологічна еталонній послідовності, із застосуванням однієї з програм вирівнювання, описаних у даному документі, із застосуванням стандартних параметрів. У деяких варіантах здійснення гомологію послідовності визначають відносно послідовності повної довжини поліпептиду РИР-96. У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 характеризується послідовністю, яка щонайменше на приблизно 40 95, 45 95, 50 95, 51 9, 52 о, 53 95, 54 о, 55 Уо, 56 96, 57 95, 58 У, 59 95, 60 У, 61 95, 62 У, 63 95, 64 У, 65 У, 66 У, 67 Зо, 68 У, 69 У, 70 У, 71 У, 7290, 73 ую, 74 до, 7590, 76 о, 77 Чо, 78 Уо, 79 Чо, 80 Фо, 81 Уо, 82 Ус, 83 Фо, 84 95, 85 95, 86 Фо, 87 Уо, 88 то, 89 то, 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 то, 99 у5 або більше ідентична послідовності порівняно з ФЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, ЗЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО І МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО І МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО І МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІО МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, ЗЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО ІЮО МО: 96, 5ЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО ІЮО МО: 100, 5ЕО ІЮО МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО І
МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108. Фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що ці значення можна відповідно скорегувати для визначення відповідної гомології білків, беручи до уваги подібність амінокислот тощо. У деяких варіантах здійснення ідентичність послідовностей розраховують із застосуванням алгоритму СіивіаіМуУ у модулі АГІСМХФ комплекту програм Месіог МТ Ргодгат
Зийе (Іпийтодеп Согрогаїйоп, Карлсобад, Каліфорнія) з усіма параметрами за замовчуванням. У деяких варіантах здійснення ідентичність послідовностей розраховують за повною довжиною поліпептиду із застосуванням алгоритму СіивіаМу в модулі АГІСМХФ комплекту програм Месіог
МТД Ргодгат бБийе (Іпийгодеп Согрогайоп, Карлобад, Каліфорнія) з усіма параметрами за замовчуванням.
Використовувані у даному документі терміни "білок", "пнептидна молекула" або "поліпептид" включають будь-яку молекулу, яка містить п'ять або більше амінокислот. Із рівня техніки добре 60 відомо, що білок, пептидні або поліпептидні молекули можуть піддаватися модифікаціям,
включаючи посттрансляційні модифікації, такі як без обмеження утворення дисульфідних зв'язків, глІКОЗИЛЮВання, фосфорилювання або олігомеризація. Таким чином, використовувані у даному документі терміни "білок", "пептидна молекула" або "поліпептид" включають будь-який білок, який є модифікованим за допомогою будь-якого біологічного або небіологічного способу.
Терміни "амінокислота" та "амінокислоти" відносяться до всіх І -амінокислот, що зустрічаються в природі.
Термін "рекомбінантний білок" використовується у даному документі для позначення білка, який більше не перебуває у своєму природному середовищі, наприклад, перебуває іп міго або в рекомбінантній бактеріальній або рослинній клітині-хазяїні. Поліпептид РІР-96, який фактично не містить клітинний матеріал, включає препарати білка, що мають менше приблизно 30 95, 20 96, 10 95 або 5 95 (за сухою вагою) білка, що не є пестицидним (який також називається у даному документі "забруднювальним білком"). "Фрагменти" або "біологічно активні частини" включають фрагменти поліпептиду, що містять амінокислотні послідовності, які достатньо ідентичні поліпептиду РІИР-96 та які виявляють інсектицидну активність. "Фрагменти" або "біологічно активні частини" поліпептидів РІИР-96 включають фрагменти, що містять амінокислотні послідовності, достатньо ідентичні амінокислотній послідовності, викладеній під 5ЕО 10 МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ
МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І
МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ
МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО І МО: 38, 5ЕО ІЮО МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО І
МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮО МО: 48, 5ЕО І МО: 50, 5ЕО ІЮО МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО І
МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО Ір
МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО І МО: 74, БО ІЮО МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО І
МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО І МО: 86, БО І МО: 88, 5ЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО І
МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО ІЮ
МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, де поліпептид РІР-96 характеризується інсектицидною активністю. Такі біологічно активні частини можна одержувати за допомогою рекомбінантних методик та оцінювати щодо інсектицидної активності. У деяких варіантах здійснення фрагмент поліпептиду РИР-9бхарактеризується М-кінцевим та/або С-кінцевим укороченням на щонайменше приблизно 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 або більше амінокислот з М-кінця та/або С-кінця відносно 5ЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮО МО: 9, ЗЕО ІЮ МО: 10, ЗЕО І МО: 12, З5ЕО І МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, ЗЕО ІЮО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІЮО МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО І МО: 72, ЗЕО Ір МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІО МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО Ір МО: 86, 5ЕО ІЮО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, ЗЕО ІЮ МО: 98, ЗЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, ЗЕО ІЮО МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або ЗЕО
ІО МО: 108, наприклад, шляхом протеолізу, шляхом вставки старт-кодона, шляхом делеції кодонів, що кодують амінокислоти, що видаляються, та одночасної вставки старт-кодона та/або вставки стоп-кодона.
Використовувані в даному документі "варіанти" означають білки або поліпептиди з амінокислотною послідовністю, яка щонайменше на приблизно 50 95, 55 90, 60 95, 65 90, 70 о, 7590, 80 9, 81 Фо, 82 95, 83 У, 84 95, 85 У, 86 95, 87 У, 88 У, 89 У, 90 Ус, 91 У, 92 Ус, 93 У, 94 о, 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 95 або 99 95 ідентична вихідній амінокислотній послідовності.
Поліпептиди РІЇР-96
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 95, 62 Фо, 63 Фо, 64 95, 65 У, 66 Уо, 67 90, 68 У, 69 Фо, 70 о, 71 о, 72 90, 73 90, 7490, 75 Чо, 76 Уо, 77 Уо, 78 Чо, 79 Фо, 80 90, 81 Ус, 82 Уо, 83 90, 84 Фо, 85 Фо, 86 Уо, 87 Ус, 88 Фо, 89 90, 90 90, 91 Фо, 92 90, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО І МО: 14, ЗЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22, 5ЕО ІЮО МО: 24, 5ЕО І МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, ЗЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО І МО: 60 74, ЗЕО Ір МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО:
86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО ІЮО МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, де поліпептид РІІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 9, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ОО МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО І
МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 24, де поліпептид РІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 26; 5ЕО ІО МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО 10
МО: 38 або 5ЕО ІО МО: 40, де поліпептид РІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 42, 5ЕО ІО МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50 або 5ЕО ІЮО МО: 52, де поліпептид РІІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
Зо МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО І МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО ІЮО МО: 84, 5БО ІО МО: 86, 5ЕО ІЮО МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90, де поліпептид РІІР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 76, 5ЕО І МО: 78 або 5ЕО ІО МО: 80, де поліпептид РІИР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО І МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5БЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО І МО: 78, 5ЕО ІО МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90, де поліпептид РІЇР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 40 зо, 45 то, 50 то, 51 то, 52 то, 53 то, 54 Зо, 55 9б, 56 Зо, 57 9, 58 то, 59 то, 10) то, 61 96, 62 95, 63 95, 64 90, 65 9, 66 о, 67 о, 68 90, 69 90, 70 90, 71 Фо, 72 о, 73 Уо, 74 90, 75 Фо, 76 Фо, 77 Ууо, 78 Уо, 79 9о, 80 Уо, 81 Фо, 82 Фо, 83 9, 84 95, 85 90, 86 90, 87 Фо, 88 Фо, 89 9, 90 9, 91 Фо, 92 9, 93 9, 94 95, 95 95, 96 95, 97 9, 98 95 або 99 95 ідентична амінокислотній послідовності під «ЕО 10
МО: 10, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІЮ
МО: 102, 5ЕО І0О МО: 104, 5БО ІЮО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, де поліпептид РІЇР-96 характеризується інсектицидною активністю.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка 10) щонайменше на приблизно 80 то, 81 то, 82 то, 83 то, 84 то, 85 то, 86 то, 87 то, 88 то, 89 то, 90 то,
9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під ЗЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО 10 МО: 7, БЕО ІО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО
ІО МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО
ІО МО: 22, ЗЕО ІО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 26; 5ЕО ОО МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32, 5ЕО
ІО МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО
ІО МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО
ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО ІЮО МО: 68, 5ЕО
ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74, 5ЕО ОО МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІЮО МО: 80, 5ЕО
ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІО МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО
ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІЮО МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5БЕО І МО: 104,
ЗЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІЮ МО: 108.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 95, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під 5ЕО 10 МО: 9, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16,
ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 20, 5ЕО І МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 24.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 95, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під «ЕО ІЮО МО: 26; 5ЕО ІЮО МО: 28; 5ЕО ІЮО МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32,
ЗЕО ІО МО: 34, БЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38 або 5ЕО ІО МО: 40.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 95, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під «ЕО ІЮО МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮО МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48,
ЗЕО ІЮ МО: 50 або 5ЕО ІО МО: 52.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 95, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині
Ко) амінокислотної послідовності під 5ЕО 10 МО: 7, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56,
ЗЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68,
ЗЕО ІО МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80,
ЗЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІЮО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88 або 5ЕО І МО: 90.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 то, 81 то, 82 то, 83 то, 84 то, 85 то, 86 то, 87 то, 88 то, 89 то, 90 то, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під 5ЕО 10 МО: 7, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО І МО: 56,
ЗЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68,
ЗЕО ІО МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО І МО: 86,
ЗЕО ІЮ МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 95, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під зБЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78 або 5ЕО ІО МО: 80.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІР-96 містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на приблизно 80 925, 81 Фо, 82 95, 83 95, 84 95, 85 95, 86 95, 87 Зо, 88 95, 89 о, 90 бо, 9195, 9295, 9396, 94965, 95965, 9696, 9795, 9895 або 99595 ідентична повній довжині амінокислотної послідовності під «ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО ІЮО МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО ІЮО МО: 96,
ЗЕО ІО МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І
МО: 108.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, БО ІО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО
ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22, 5ЕО ІО МО: 24, 5ЕО
ІО МО: 26; 5ЕО ІО МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ОО МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО
ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО ІО МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48, 5ЕО
ІО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО
ІО МО: 62, ЗЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО
ІО МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО
ІО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО ІЮО МО: 96, 5ЕО 60 ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І МО:
108і31,2,3,4,5,6,7,8,9,1011, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під 5ЕО ІО МО: 6,
ЗЕО ІО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5БЕО 10 МО: 9, БО І МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО
ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІО МО: 26; 5ЕО
ІО МО: 28; 5ЕО ІЮО МО: 30, 5ЕО І МО: 32, БО ІО МО: 34, 5ЕО І МО: 36, 5ЕО І МО: 38, 5ЕО
ІО МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО І МО: 44, БО ІО МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО І МО: 50, 5ЕО
ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5БО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО ІЮО МО: 62, 5ЕО
ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО ІЮО МО: 74, 5ЕО
ІО МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО
ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО
ІО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20,
ЗЕО ІО МО: 22 або 5ЕО ІЮО МО: 24 із31,2,3,4,5,6, 7,8,9, 1011, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, Зб, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, АБ, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під 5ХЕО І МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІЮ МО: 14, 5БО ІЮ МО: 16, 5ЕО І МО: 18,
ЗЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 24.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5БЕО ІО МО: З6,
ЗЕО ІО МО: 38 або 5ЕО ІЮО МО: 40 із1,2,3,4,5,6, 7,8,9, 1011, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, Зб, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, А4, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59,60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під 5ЖЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34,
ЗЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38 або 5ЕО ІО МО: 40.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО І МО: 50 або 5ЕО ІО МО: 52і31,2,3,4,5,6,7,8,9,10 11, 12, 13, 14,15, 16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, АЗ, 44, 45, Аб, 47, А8, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57,58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під ФЕО ІЮ МО: 42,
ЗЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50 або 5ЕО ІО МО: 52.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5БО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5БЕО І МО: 58, 5БО ІО МО: 60,
ЗЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72,
ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО 10 МО: 80, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО І МО: 84,
ЗЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО І МО: 88 або 5ЕОІО МО: 90 із1,2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, АВ, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під ЗЕО 10 МО: 7, 5ЕО ІО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО ІЮ
МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО І МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68, 5ЕО 10
МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО ІО МО: 80, 5ЕО 10
МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5БО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5БЕО І МО: 58, 5БО ІО МО: 60,
ЗЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72,
ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО І МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО І МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90і31,2,3,4,5,6,7,8,9,1011, 12,13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57,58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під 5ЕО ІЮО МО: 7,
ЗЕО ІО МО: 8, 5ЕО І МО: 54, 5ЕО 10 МО: 56, 5ЕО ІЮО МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО І МО: 62,
ЗЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО ІО МО: 74,
ЗЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІЮО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88 або 5ЕО І МО: 90. 60 У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78 або 5ЕО ІО МО: 80 із 1,2, 3,4,5,6, 7,8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, АВ, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під зхЕО ІО МО: 76, 5ЕО ОО МО: 78 або 5ЕО ІЮ МО: 80.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІЮ МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100,
ЗЕО ІО МО: 102, БО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108 із 1,2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, З6, 10 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, АБ, 46, 47, А8, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 або більше амінокислотними замінами порівняно з нативною амінокислотою у відповідному положенні в поліпептиді під ЗЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО
ІО МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104,
ЗЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108.
У деяких варіантах здійснення ідентичність послідовностей розраховують за повною довжиною поліпептиду із застосуванням алгоритму Сіивіаї(мМ/ в модулі АГІОМХФ комплекту програм Месіог МТД Ргодгат Зийе (Іпимйгодеп Согрогайоп, Карлсобад, Каліфорнія) з усіма параметрами за замовчуванням.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕОІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО
ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІО МО: 24, 5ЕО
ІО МО: 26; 5ЕО ІЮО МО: 28; 5ЕО І МО: 30, БО ІО МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО І МО: 36, 5ЕО
ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО ІО МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО
ІО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО І МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО
ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5БЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІЮО МО: 72, 5ЕО
ІО МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО
ІО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО І МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО
ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5БЕО І МО: 106 або 5ЕО І МО: 108.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 12, 5ЕО 10 МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20,
ЗЕО ІО МО: 22 або 5ЕО ІО МО: 24.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО І МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34, 5ЕО І МО: 36,
ЗЕО ІО МО: 38 або 5ЕО ІО МО: 40.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮО МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО І МО: 50 або 5ЕО ІО МО: 52.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5БО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5БО ІЮ МО: 58, 5БО І МО: 60,
ЗЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72,
ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5БЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84,
ЗЕО ІО МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88 або 5ЕО ІО МО: 90.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІЮ МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100,
ЗЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І МО: 108.
Філогенетичний аналіз, аналіз мотивів послідовності та структурний аналіз родин інсектицидних білків
Застосовуваний спосіб аналізу послідовності та структури складається з чотирьох компонентів: побудова філогенетичного дерева, виявлення мотивів білкової послідовності, прогнозування вторинної структури та вирівнювання білкових послідовностей та вторинних структур. Деталі про кожний компонент проілюстровані нижче. 1) Побудова філогенетичного дерева
Філогенетичний аналіз здійснювали із застосуванням програмного забезпечення МЕСА5.
Білкові послідовності піддавали аналізу СіиеїамМму версії 2 (ІагКкіп М.А еї аї (2007) Віоіптогтайсв5 23(21): 2947-2948) для множинного вирівнювання послідовностей. Потім визначали еволюційну історію за допомогою способу максимальної правдоподібності з урахуванням моделі на основі
ЛтТ-матриці. Одержували дерево з найвищою логарифмічною правдоподібністю, експортували його у формат Мем/скК та додатково обробляли для витягання ІЮ послідовностей у тому ж 60 порядку, як вони з'являються на дереві. Деякі клади, які представляють підродини,
ідентифікували вручну для кожної родини інсектицидних білків. 2) Виявлення мотивів білкової послідовності
Білкові послідовності перегрупували згідно з раніше побудованим філогенетичним деревом та передавали в інструмент для аналізу МОТИВІВ МЕМЕ (Мийіріє ЕМ ог МОТІРЕ Еїсйайоп) (Ваївєу Т.Г.., апа ЕІКап С., Ргосеєдіпд5 ої Ше бесопа Іпіегпайопаї! Сопіегепсе оп Іпівйіїдепі Зузівєт5 ог Моїесшціаг Віоіоду, рр. 28-36, АААЇ Ргез5, Мепіо Рагк, СаїШогпіа, 1994.) для ідентифікації ключових мотивів послідовності. Початкові установки МЕМЕ були наступними: мінімальна кількість сайтів 2, мінімальний розмір мотиву 5 та максимальна кількість мотивів 30. Мотиви послідовності, унікальні для кожної підродини, ідентифікували за допомогою візуального спостереження. Розподіл МОТИВІВ по всій родині генів можна було візуалізувати на НТМІ - вебсторінці МОТИВИ пронумерували згідно з розташуванням Е-значення для кожного
МОТИВУ. 3) Прогнозування вторинної структури
РБІРКЕбО, провідний спосіб прогнозування вторинної структури (допез ОТ. (1999) 9. Мої. Віої. 292: 195-202), інсталювали на локальному Гіпих-сервері та застосовували для прогнозування вторинної структури білка. Інструмент забезпечує точне прогнозування структури із застосуванням двох нейронних ланцюгів прямого зв'язку з урахуванням результату РЗІ-ВІ А5Т.
Базу даних для РБІ-ВГА5Т створювали шляхом видалення ділянок низької складності, трансмембранної ділянки та ділянок суперспіралі в Опіге100. Результати РБЗІРКЕО містять вторинну структуру РІИР. (альфа-спіраль: Н, бета-тяж: Е та клубок: С) та відповідний ступінь упевненості для кожної амінокислоти в даній білковій послідовності. 4) Вирівнювання білкових послідовностей та вторинних структур
Розробляли індивідуальний скрипт для створення вирівнювання вторинних структур із гепами згідно з множинним вирівнюванням білкових послідовностей зі стадії 1 для всіх білків.
Усі білкові послідовності та структури, які було піддано вирівнюванню, комбінували в єдиний
ЕАЗТА-файл та потім імпортували в МЕСА для візуалізації та ідентифікації консервативних структур.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІИР-96 характеризується модифікованою фізичною властивістю. Як застосовується у даному документі, термін "фізична властивість"
Зо стосується будь-якого параметру, який підходить для опису фізико-хімичних характеристик білка. Як застосовується в даному документі, терміни "фізична властивість, що становить інтерес" та "властивість, що становить інтерес" застосовуються взаємозамінно для позначення фізичних властивостей білків, що підлягають дослідженню та/або модифікації. Приклади фізичних властивостей включають без обмеження сумарний поверхневий заряд та розподілення зарядів на поверхні білка, сумарну гідрофобність та розподілення гідрофобних залишків на поверхні білка, щільність поверхневого заряду, щільність гідрофобності поверхні, загальну кількість поверхневих груп, здатних до іонізації, поверхневий натяг, розмір білка та його розподілення у розчині, температуру плавлення, теплоємність та другий віріальний коефіцієнт. Приклади фізичних властивостей також включають без обмеження розчинність, фолдинг, стабільність та засвоюваність. У деяких варіантах здійснення поліпептид РІИР-96 характеризується підвищеною перетравністю фрагментів, одержаних у результаті протеолітичного розщеплення, у кишечнику комахи. Моделі для перетравлювання за допомогою штучного шлункового соку відомі спеціалісту в даній галузі техніки (Рисп5, К.Г. апа у.Ю. Авіжшоса. Роса Тесппоіоду 50: 83-88, 1996; Авімоосд, -.0., еї а! Маїшге Віотесппоіоду 14: 1269- 1273, 1996; Ри ТУ еї а! 9. Адгіс Роса Спет. 50: 7154-7160, 2002).
У деяких варіантах здійснення варіанти включають поліпептиди, які відрізняються за амінокислотною послідовністю внаслідок мутагенезу. Варіантні білки, охоплені даним розкриттям, є біологічно активними, тобто вони продовжують мати необхідну біологічну активність (тобто пестицидну активність) нативного білка. У деяких варіантах здійснення варіант буде характеризуватися щонайменше приблизно 1095, щонайменше приблизно 30 95, щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 80 95 або більшою інсектицидною активністю нативного білка. У деяких варіантах здійснення варіанти можуть характеризуватися посиленою активністю порівняно з нативним білком.
Бактеріальні гени доволі часто мають декілька метіонінових кодонів ініціації трансляції безпосередньо біля стартового сайту відкритої рамки зчитування. Зазвичай ініціація трансляції за одним або декількома з цих старт-кодонів буде викликати утворення функціонального білка.
Ці старт-кодони можуть включати кодони АТО. Однак бактерії, такі як ВасіШи5 5р., також розпізнають кодон СТО як старт-кодон, та білки, трансляція яких ініціюється за кодонами сто, що як першу амінокислоту містять метіонін. Рідко трансляція у бактеріальних системах може бо ініціюватися за кодоном ТО, хоча у цьому випадку ТТО кодує метіонін. Крім того, зазвичай апріорі не визначають, який із цих кодонів звичайно застосовується у бактерії. Таким чином, зрозуміло, що застосування одного з альтернативних метіонінових кодонів може також спричиняти утворення пестицидних білків. Ці пестицидні білки охоплюються даним розкриттям та можуть застосовуватися у способах за даним розкриттям. Буде зрозуміло, що під час експресії у рослинах необхідною буде зміна альтернативного старт-кодона на АТО для повноцінної трансляції.
В іншому аспекті поліпептид РИР-96 може експресуватися у вигляді білка-попередника із вставленою послідовністю, яка каталізує багатостадійний посттрансляційний сплайсинг білка.
Сплайсинг білка включає вирізання вставленої послідовності з поліпептиду з одночасним з'єднанням фланкувальних послідовностей з одержанням нового поліпептиду (Спопо, еї аї., (1996) 9. Віої. Спет., 271:22159-22168). Ця вставлена послідовність або елемент сплайсингу білка, що називаються інтеїнами, які каталізують своє власне вирізання за допомогою трьох узгоджених реакцій на М-кінцевій та С-кінцевій межах сплайсингу: ацильного перегрупування М- кінцевого цистеїну або серину; реакції переестерифікації між двома кінцями з утворенням розгалуженої естерної або тіоестерної проміжної сполуки та розщеплення пептидного зв'язку, пов'язаного з утворенням кільця за участю С-кінцевого аспарагіну з вивільненням інтеїну (Емапв, єї аї., (2000) У. Віої. Спет., 275:9091-9094. З'ясування механізму сплайсингу білка призвело до появи ряду застосувань, пов'язаних з інтеїнами (Сотбр еї аїЇ., патент США Мо 5496714; Сотр еї аіІ., патент США Мо 5834247; Сатагего апа Миїг, (1999) 9). Атег. Снет. 5ос. 121:5597-5598; Спопо, еї аї!., (1997) Сепе 192:271-281, Спопа, єї аї., (1998) Мисівіс Асіав Вев. 26:5109-5115; Спопо, еї аї., (1998) у. Віої. Спет. 273:10567-10577; Соцоп, еї аї., (1999) 9). Ат.
Спет. ос. 121:1100-1101; ЕЄмапв, єї аї., (1999) 9. Віої. Спет. 274:118359-18363; Емапв, вї аї., (1999) 9. Віої. Спет. 274:3923-3926; Емапв, евї аї., (1998) Ргоївїп 5сі. 7:2256-2264; Емапв, еї аї., (2000) У. ВіоІ. Спет. 275:9091-9094; Імаї апа РінсКкіпип, (1999) РЕВ5З І ей. 459:166-172; Маїнуз, єї 252 2 аї., (1999) Сепе 231:1-13; МІіЇв, єї а!., (1998) Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 95:3543-3548; Миїг, еї аї., (1998) Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 95:6705-6710; Оюто, вії а!., (1999) Віоспетівігу 38:16040-16044;
Оюто, еї аї., (1999) 9. Віоїтої. ММА 14:105-114; 5сой, еї аї!., (1999) Ргос. Маї). Асад. осі. ОБА 96:13638-13643; бемегіпом апа Миїг, (1998) 9. Вісі. Спет. 273:16205-16209; Зпіпдієдескег, еї аї., (1998) Сепе 207:187-195; БошНмопи, еї аї., (1998) ЕМВО У. 17:918-926; 5ошпУопи, еї аї!., (1999)
Зо Віотесппіднев 27:110-120; Мооа, еї а!., (1999) Маї. Віоїесппої. 17:889-892; Ми, єї аї., (1998а) Ргос.
Май. Асад. осі. ОБА 95:9226-9231; Ми, єї аї., (19985) Віоспіт Віорпуз Асіа 1387:422-432; Хи, єї а!., (1999) Ргос. МаїЇ. Асад. Зсі. ОБА 96:388-393; Мата?гакі, єї а!., (1998) У. Ат. Спет. 5ос., 120:5591-5592). Відносно застосування інтеїнів у рослинних трансгенах див. Уапд, єї аї., (Ттапздепе Нез 15:583-593 (2006)) та Емапв, єї а!., (Аппи. Кем. Ріапі Віої. 56:375-392 (2005)).
В іншому аспекті поліпептид РІЇР-96 може кодуватися двома окремими генами, при цьому інтеїн білка- попередника бере початок від двох генів, він називається спліт-інтеїн, та дві частини попередника з'єднуються під час утворення пептидного зв'язку. Це утворення пептидного зв'язку здійснюється за допомогою трансо-сплайсингу, опосередкованого інтеїном. Для цієї мети перша та друга касети експресії, що містять два окремих гени, додатково кодують інтеїни, що здатні опосередковувати транс-сплайсинг білків. За допомогою транс-сплайсингу білки та поліпептиди, що кодуються першим та другим фрагментами, можуть бути з'єднані шляхом утворення пептидного зв'язку. Інтеїни для транс-сплайсингу можна вибирати з ядерного геному та геному органел різних організмів, включаючи еукаріоти, архебактерії та еубактерії. Інтеїни, які можна застосовувати, перераховані на сайті пер.сот/пер/іпіеіп5.пІті, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет із застосуванням префікса "м/млу"). Нуклеотидну послідовність, що кодує інтеїн, можна розділяти на 5'- та 3"--частини, які кодують 5'- та 3-частини інтетну відповідно. Частини послідовності, які не є необхідними для інтеїн-сплайсингу (наприклад, домен хомінг-ендонуклеази), можуть бути видалені. Послідовність, що кодує інтеїн, розщеплюється, так що 5- та 3'і-ч-астини можуть піддаватися транс-сплайсингу. Для вибору придатного сайту розщеплення послідовності, що кодує інтеїн, можна додержуватись рекомендацій, опублікованих Боцїйу"огій, еї аї.,, (1998) ЕМВО .. 17:918-926. Під час конструювання першої та другої касет експресії 5'- послідовність, що кодує інтеїн, з'єднують із 3'- кінцем першого фрагмента, що кодує М-кінцеву частину поліпептиду РІЇР-96, а 3'-послідовність, що кодує інтеїн, з'єднують із 5'-кінцем другого фрагмента, що кодує С-кінцеву частину поліпептиду РІЇР-96.
Загалом, партнерів для трансо-сплайсингу можна конструювати із застосуванням будь-якого спліт-інтеїна, включаючи будь-які спліт-інтеїни, що зустрічаються у природі або є штучно розщепленими. Відомі декілька спліт-інтеїнів, що зустрічаються в природі, наприклад: спліт- інтеїн гена ОпаЕ РССб6803 Зупеспосубвії5 5р. (див. УМи, єї аї., (1998) Ргос Маї! Асай сі О5А. 60 95(16):9226-31 та Емапв, єї аї., (2000) У Віої Спет. 275(13):9091-4 та гена ЮОпає з Мов5іос рипсійогте (див. Гмаї, еї а!., (2006) РЕВЗ І ей. 580(7):1853-8). Інтеїни, що не належать до спліт- інтеїнів, були штучно розщеплені у лабораторії зі створенням нових спліт-інтеїнів, наприклад, штучно розщеплений інтеїн 55р ОпаВ (див. Уи, єї аї!., (1998) Віоспіт Віорпуз Асіа. 1387:422-32) та розщеплений інтеїн 5се ММА (див. Вгепгеї, еї а!., (2006) Віоспетівігу. 45(6):1571-8) та штучно розщеплений міні-інтеїн грибного походження (див. ЕІПеийсне, еї аї., (2007) Віоспет Віорпу5 Нез боттип. 355(3):830-4). Також доступні бази даних інтеїнів, в яких перераховані відомі інтеїни (див., наприклад, базу даних, доступну онлайн на сайті ріоіптогітайісв5 меі2тапп.ас.йріеїго/Іпіеіп5/Іпіеіпеїаріє.піт!І, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет із застосуванням префікса "м/млму").
Інтеїни, що зустрічаються в природі та не належать до спліт-інтеїнів, можуть характеризуватися ендонуклеазною або іншою ферментативною активністю, яку здебільшого можна усувати під час конструювання штучно розщепленого спліт-інтеїну. Такі міні-інтеїни або мінімізовані спліт-інтеїни добре відомі з рівня техніки, та здебільшого вони складаються з менше 200 амінокислотних залишків (див. УУи, еї а!., (1998) Віоспіт Віорпу5 Асіа. 1387:422-32).
Придатні спліт-інтеїни можуть мати інші поліпептидні елементи, що забезпечують очищення, які додаються до їхньої структури, за умови, що такі елементи не інгібують сплайсинг спліт-інтеїну або їх додають таким чином, що забезпечується їх видалення перед сплайсингом.
Повідомлялося про сплайсинг білка із застосуванням білків, які включають бактеріальні інтеїн- подібні (ВІЇ) домени (див. Атіїаї, еї аї., (2003) Мої! Містобіо!. 47:61-73) та домени педденод, що піддаються самопроцесингу (Ноя) (останні разом з інтетнами називають надродиною Нод/інтеїн або родиною НІМТ (див. Оазза, єї а!., (2004) У Віої Спет. 279:32001-7), та такі домени, які можна також застосовувати для одержання штучно розщеплених інтеїнів. Зокрема, представників таких родин, що не піддаються сплайсингу, можна модифікувати за допомогою методик молекулярної біології для введення або відновлення активності сплайсингу у таких споріднених різновидах. Останні дослідження показують, що сплайсинг можна спостерігати, коли забезпечують реакцію М-кінцевого компонента спліт-інтетїну з С-кінцевим компонентом спліт- інтеїну, при цьому у природних умовах він не є його "партнером"; наприклад, сплайсинг спостерігали при використанні партнерів, які всього на 30-50 905 гомологічні "природному" сплайсинг-партнеру (див. Оазза, еї а!., (2007) Віоспетівігу. 46(1):322-30). Було показано, що інші
Зо такі суміші несумісних партнерів спліт-інтеїнів не реагують одна з одною (див. Вгеп7еї, еї аї., (2006) Віоспетівігу. 45(6):1571-8). Однак фахівець у даній галузі техніки може визначати, чи може конкретна пара поліпептидів зв'язуватися одна 3 одною із забезпеченням функціонального інтеїну, із застосуванням стандартних способів та без застосування винахідницьких навичок.
В іншому аспекті поліпептид РІЇР-96 являє собою варіант із круговими перестановками. У певних варіантах здійснення поліпептид РиИР-9б являє собою варіант з круговими перестановками поліпептиду під 5ЕО ІЮО МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО
ІО МО: 10, БЕО ІО МО: 12, 5ЕБЕО І МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО
ІО МО: 22, БЕО ІО МО: 24, БО І МО: 26; 5ЕО ІО МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32, 5ЕО
ІО МО: 34, БЕО І МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО 10 МО: 42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО
ІО МО: 46, БЕО ІО МО: 48, БО ІО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО
ІО МО: 58, БЕО ІО МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО 10 МО: 66, 5ЕО ІО МО: 68, 5ЕО
ІО МО: 70, БЕО ІО МО: 72, 5ЕБЕО І МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76, 5ЕО 10 МО: 78, ЗЕО ІО МО: 80, 5ЕО
ІО МО: 82, БЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО 0 МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО
ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104,
ЗЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І МО: 108.
Розробка способів із застосуванням рекомбінантної ДНК забезпечила можливість досліджувати ефекти транспозиції послідовностей на фолдинг, структуру та функцію білка.
Підхід, що застосовується під час створення нових послідовностей, походить на ситуацію, що трапляється серед пар білків, що зустрічаються в природі, які зв'язуються за допомогою лінійної реорганізації їхніх амінокислотних послідовностей (Сиппіпдпат, еї аї., (1979) Ргос. Май). Асад.
Зсі. 0.5.А. 76:3218-3222; Теаїйег апа Епіє, (1990) 9. Васієгіо!. 172:3837-3841; Зспіттіпо, еї аї., (1992) Єиг. У. Віоспет. 204:13-19; Матіисні апа Міпатікажа, (1991) РЕВ5 Гей. 260:127-130;
Масатгеоог, єї аїІ., (1996) РЕВ5 Гей. 378:263-266). Перше застосування іп мій даного типу перегрупування у білків описали Соідепрегу апа Стеіднпоп (9. Мої. Віої. 165:407-413, 1983). Під час створення варіанта з круговими перестановками новий М-кінець вибирають у внутрішньому сайті (точковий розрив) оригінальної послідовності, при цьому нова послідовність має такий самий порядок амінокислот, що й оригінальна, починаючи від точкового розриву доти, доки вона не досягає амінокислоти, яка знаходиться в оригінальному С-кінці або поблизу нього. У цій точці 60 нова послідовність з'єднується або безпосередньо, або через додаткову частину послідовності
(лінкер) з амінокислотою, яка розташовується на оригінальному М-кінці або поблизу нього, та нова послідовність продовжується такою ж послідовністю, що й оригінальна, доти, доки вона не досягне точки, яка розташовується на місці амінокислоти, що була М-кінцевою відносно сайту точкового розриву оригінальної послідовності, або поблизу нього, причому цей залишок утворює новий С-кінець ланцюга. Довжину амінокислотної послідовності лінкера можна вибирати емпірично, або з урахуванням інформації про структуру, або шляхом застосування комбінації цих двох підходів. Якщо інформація про структуру є недоступною, можна одержати невеликі серії лінкерів для тестування із застосуванням конструкції, довжина якої варіює для охоплення діапазону від 0 до 50 А та послідовність якої вибрана таким чином, щоб відповідати доступності поверхневих груп (гідрофільність, Норр апа УУоодз, (1983) Мої. Іттипої. 20:483-489;
Куїє апа Оооїїше, (1982) 9. Мої. Віої. 157:105-132; площі поверхні, доступної для дії розчинника,
Ї ее апа Віснагав, (1971) 9. Мої. Віої. 55:379-400) та здатності набувати необхідної конформації без порушення конфігурації пестицидного поліпептиду (конформаційно гнучкого; Кагріи5 апа
Зеспці7, (1985) Маїшгпміззепеоспайеп 72:212-213). За умови, що під час трансляції середня довжина залишку становить 2,0-3,8 А, це буде означати, що довжина, що підлягає тестуванню, буде становити від 0 до 30 залишків, при цьому переважним діапазоном є 0-15 залишків.
Прикладом такої емпіричної серії буде конструювання лінкерів із застосуванням касетної послідовності, такої як Сіу-Сіу-Сіу-Зег, що повторюється п раз, де п дорівнює 1, 2, З або 4.
Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що існує багато таких послідовностей, які варіюють за довжиною або складом, які можуть виступати як лінкери з таким основним міркуванням, що вони не є ні надто довгими, ні надто короткими (див. також, Запапи, (1992) Стііса! Неу. Віоїтесн. 12:437-462); причому якщо вони є надто довгими, ентропійні ефекти, ймовірно, будуть дестабілізувати тривимірне згортання і також можуть робити фолдинг кінетично нездійсненним, а якщо вони є надто короткими, вони, ймовірно, будуть дестабілізувати молекулу внаслідок деформації скручування або стеричної деформації. Фахівцям, що знаються на аналізі інформації про структуру білка, буде зрозуміло, що відстань між кінцями ланцюгів, що визначається як відстань між с-альфа атомами вуглецю, можна застосовувати для визначення довжини застосовуваної послідовності або щонайменше для обмеження числа можливостей, які необхідно протестувати під час емпіричного відбору лінкерів. Вони також будуть розуміти,
Зо що іноді трапляється випадок, коли положення кінців поліпептидного ланцюга є нечіткими у структурних моделях, одержаних за допомогою даних рентгеноструктурного аналізу або ядерної магнітно-резонансної спектроскопії, та у разі такої ситуації, відповідно, її необхідно враховувати для правильної оцінки довжини необхідного лінкера. На основі залишків, положення яких чітко визначене, вибирають два залишки, які близькі за послідовністю кінцям ланцюга, та відстань між їхніми с-альфа атомами вуглецю застосовують для розрахунку приблизної довжини лінкера між ними. Із застосуванням розрахункової довжини як попередніх даних далі відбирають лінкери у межах діапазону кількості залишків (з розрахунку довжини залишку 2-3,8 А). Ці лінкери можна складати з оригінальної послідовності, вкороченої або подовженої, у разі необхідності, та у випадку подовження можна вибирати додаткові залишки, які є гнучкими та гідрофільними, як описано вище; або необов'язково оригінальна послідовність може бути заміщена із застосуванням серії лінкерів, причому одним прикладом є підхід із застосуванням касети Сіу-Ссіу-Сіу-5ег, згаданої вище; або необов'язково можна застосовувати комбінацію оригінальної послідовності та нової послідовності, що має придатну загальну довжину. Послідовності пестицидних поліпептидів, здатних до фолдингу з утворенням біологічно активних станів, можна одержувати шляхом відповідного відбору початкових (аміно- кінець) та кінцевих (карбоксильний кінець) положень всередині оригінального поліпептидного ланцюга, при цьому застосовуючи лінкерну послідовність, описану вище. Аміно- та карбоксильні кінці вибирають із загального відрізка послідовності, що називається ділянкою точкового розриву, із застосуванням рекомендацій, описаних нижче. Нову амінокислотну послідовність, таким чином, одержують шляхом відбору аміно- та карбоксильних кінців із такої ж ділянки точкового розриву. У багатьох випадках вибір нових кінців буде таким, що оригінальне положення карбоксильного кінця безпосередньо передує положенню аміно-кінця. Однак фахівцям у даній галузі техніки буде зрозуміло, що вибір кінців на будь-якому місці у межах ділянки може спричинювати вплив та що він фактично буде призводити до або делецій, або додавання до аміно- або карбоксильних частин нової послідовності. Основним принципом молекулярної біології є те, що первинна амінокислотна послідовність білка зумовлює фолдинг у тривимірну структуру, необхідну для вияву його біологічної функції. Фахівцям у даній галузі відомі способи одержання та інтерпретації інформації про тривимірну структуру із застосуванням рентгеноструктурного аналізу одиночних кристалів білка або ядерної магнітно- бо резонансної спектроскопії розчинів білка. Приклади інформації про структуру, яка є придатною для ідентифікації ділянок точкового розриву, включають розташування та тип вторинної структури білка (альфа та 3-10 спіралі, паралельні та антипаралельні бета-шари, обертання та повороти ланцюга та петлі; Карбеспй апа бЗапаег, (1983) Віороїутетв 22:2577-2637; ступінь доступності для розчинника амінокислотних залишків, масштаб та тип взаємодій залишків один з одним (Споїпіа, (1984) Апп. Веу. Віоспет. 53:537-572) та статичне та динамічне розподілення конформацій вздовж поліпептидного ланцюга (АІрег апа Маїпему5, (1987) МеїШод5 Епгутої. 154:511-533). У деяких випадках відома додаткова інформація про доступність залишків для розчинника; причому одним прикладом є сайт посттрансляційного приєднання вуглеводу, який обов'язково знаходиться на поверхні білка. Якщо експериментальна інформація про структуру не доступна або її неможливо одержати, також доступні способи для аналізу первинної амінокислотної послідовності для того, аби прогнозувати третинну та вторинну структури білка, доступність для розчинника та наявність поворотів та петель. Для емпіричного визначення доступності поверхневих груп також іноді застосовують біохімічні способи, якщо прямі способи визначення структури є неможливими; наприклад, застосування ідентифікації сайтів деполімеризації після обмеженого протеолізу для того, щоб дійти висновку про доступність поверхневих груп (Сепійе апа Заїмаюге, (1993) ЕЄиг. У. Віоспет. 218:603-621). Таким чином, шляхом застосування або інформації про структуру, одержану експериментальним шляхом, або прогностичних способів (наприклад, Згіпімзап апа Козе, (1995) Ргоїеїп5: бігисі., Еипсі. 8
Сепеїїсв 22:81-99у проводять дослідження вихідної амінокислотної послідовності для класифікації ділянок щодо того, чи важливі вони для підтримання вторинної та третинної структур. Наявності послідовностей у ділянках, які, як відомо, залучені у періодичну вторинну структуру (альфа та 3-10 спіралі, паралельні та антипаралельні бета-шари), варто уникати.
Аналогічно, ділянки амінокислотної послідовності, які, як спостерігається або прогнозується, мають низький ступінь доступності для дії розчинника, найбільш ймовірно, являються частиною так званого гідрофобного ядра білка, та їх варто також уникати при виборі аміно- або карбоксильних кінців. На противагу цьому, ділянки, які, як відомо або прогнозується, знаходяться у поверхневих поворотах або петлях, та, зокрема, ділянки, про які відомо, що вони не є необхідними для біологічної активності є переважними сайтами для розміщення протилежних кінців поліпептидного ланцюга. Неперервні нитки амінокислотної послідовності,
Зо що є переважними на підставі вищенаведених критеріїв, називають ділянкою точкового розриву. Полінуклеотиди, що кодують поліпептиди РІЇР-96 з круговими перестановками з новим
М-кінцем/С-кінцем, які містять лінкерну ділянку, що відокремлює оригінальний С-кінець та М- кінець, фактично можна одержувати відповідно до методу, описаного у Миїйїйп5, еї аї., (1994) у.
Ат. Спет. бос. 116:5529-5533. Декілька стадій ампліфікації полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) застосовують для перегрупування послідовності ДНК, що кодує первинну амінокислотну послідовність білка. Полінуклеотиди, які кодують поліпептиди РІИР-96б з круговими перестановками з новим М-кінцем/С-кінцем, які містять лінкерну ділянку, що відокремлює оригінальні С-кінець та М-кінець, можна одержувати на основі способу тандемних повторів, описаного в НогіїсК, еї аї.,, (1992) Ргоївіпй Епд. 5:427-431. Ампліфікацію за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) генів із новими М-кінцем/С-кінцем проводять із застосуванням ДНК-матриці з тандемними повторами.
В іншому аспекті представлені білки злиття, в амінокислотну послідовність яких включена амінокислотна послідовність, що містить поліпептид РІЇР-96, зокрема без обмеження поліпептид під ФЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12,
ЗЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО І МО: 24,
ЗЕО ІО МО: 26; 5ЕО ІЮО МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО І МО: З6,
ЗЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮО МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІО МО: 48,
ЗЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО І МО: 60,
ЗЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІЮО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72,
ЗЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84,
ЗЕО ІО МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96,
ЗЕО ІЮ МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІЮО МО: 104, 5ЕО ІО МО: 106 або 5ЕО І
МО: 108 та його активні фрагменти.
Способи розробки та конструювання білків злиття (та нуклеотидів, що їх кодують) відомі фахівцям у даній галузі. Полінуклеотиди, які кодують поліпептид РІЇР-96, можуть бути злитими із сигнальними послідовностями, які будуть спрямовувати локалізацію поліпептиду РИР-96 у конкретних компартментах прокаріотичної або еукаріотичної клітини та/або керувати секрецією поліпептиду РІЇР-96 згідно з варіантами здійснення із прокаріотичної або еукаріотичної клітини.
Наприклад, у Е. сої може знадобитися спрямування експресії білка у периплазматичний бо простір. Приклади сигнальних послідовностей або білків (або їхніх фрагментів), з якими можна зливати поліпептид РІИР-9б для того, аби спрямовувати експресію поліпептиду в периплазматичний простір бактерій, включають без обмеження сигнальну послідовність реї!В, сигнальну послідовність білка, що зв'язує мальтозу (МВР), МВР, сигнальну послідовність отраА, сигнальну послідовність В-субодиниці периплазматичного термолабільного ентеротоксину Е. соїї та сигнальну послідовність лужної фосфатази. Для конструювання білків злиття комерційно доступними є декілька векторів, які будуть керувати локалізацією білка, такі як серія векторів рРМАГЇ (зокрема, серія рМАїЇ-р), доступна від Мем/ Епдіапа Віоіїар5. У конкретному варіанті здійснення поліпептид РІЇР-96 можна зливати із сигнальною послідовністю пектатліази ре!В для збільшення ефективності експресії та очищення таких поліпептидів грамнегативних бактерій (див. патенти США МоМо 5576195 та 5846818). Злиття пластидний транзитний пептид рослини/поліпептид добре відомі з рівня техніки (див. патент США Мо 7193133). Апопластні транзитні пептиди, такі як сигнальна послідовність для секреції альфа-амілази рису або ячменю, також добре відомі з рівня техніки. Пластидний транзитний пептид здебільшого зливають з М-кінця з поліпептидом, що підлягає націлюванню (наприклад, партнером злиття). В одному варіанті здійснення білок злиття складається фактично з пластидного транзитного пептиду та поліпептиду РІЇР-96, що підлягає націлюванню. В іншому варіанті здійснення білок злиття складається з пластидного транзитного пептиду та поліпептиду, що підлягає націлюванню. У таких варіантах здійснення пластидний транзитний пептид переважно знаходиться на М-кінці білка злиття. Однак додаткові амінокислотні залишки можуть знаходитися з М-кінця відносно пластидного транзитного пептиду за умови, що білок злиття щонайменше частково націлюється на пластиду. У конкретному варіанті здійснення пластидний транзитний пептид знаходиться на М-кінцевій половині, М-кінцевій третині або М-кінцевій четвертині білка злиття. Більша частина або весь пластидний транзитний пептид здебільшого відщеплюється з білка злиття після потрапляння в пластиду. Положення сайту відщеплення може незначно варіювати у різних видів рослин на різних стадіях розвитку рослини у результаті специфічних внутрішньоклітинних умов або конкретної комбінації застосовуваного транзитного пептиду/партнера злиття. В одному варіанті здійснення сайт відщеплення пластидного транзитного пептиду є гомогенним, так що сайт відщеплення є ідентичним у групі білків злиття.
В іншому варіанті здійснення сайт відщеплення пластидного транзитного пептиду не є
Зо гомогенним, так що сайт відщеплення варіює у межах 1-10 амінокислот у групі білків злиття.
Пластидний транзитний пептид можна рекомбінантно зливати з другим білком із застосуванням одного з декількох шляхів. Наприклад, сайт розпізнавання рестрикційної ендонуклеази можна вводити у нуклеотидну послідовність транзитного пептиду у положенні, що відповідає його С- кінцевому кінцю, та такий же або сумісний сайт можна вводити за допомогою методик генної інженерії у нуклеотидну послідовність білка, що підлягає націлюванню, з його М-кінцевого кінця.
Під час конструювання цих сайтів необхідно переконатися у тому, що кодувальні послідовності транзитного пептиду та другого білка містяться "у рамці" для забезпечення синтезу необхідного білка злиття. У деяких випадках переважним може бути видалення ініціаторного метіонінового кодона другого білка під час введення нового сайту рестрикції. Введення сайтів розпізнавання рестрикційної ендонуклеази в обидві вихідні молекули та їх подальше зв'язування за допомогою методик із застосуванням рекомбінантної ДНК може призводити до додавання однієї або декількох додаткових амінокислот між транзитним пептидом та другим білком. Це здебільшого не впливає на активність щодо націлювання, оскільки сайт розщеплення транзитного пептиду залишається доступним, та функція другого білка не зміниться після додавання цих додаткових амінокислот на його М-кінці. Альтернативно фахівець у даній галузі техніки може створювати точний сайт відщеплення між транзитним пептидом та другим білком (з ініціаторним метіоніном або без нього) із застосуванням синтезу генів (біетіпег, еї аї.,, (1995) Сепе 164:49-53) або аналогічних способів. Додатково злиття транзитного пептиду може цілеспрямовано включати амінокислоти нижче від сайту розщеплення. Амінокислоти на М-кінці зрілого білка можуть впливати на здатність транзитного пептиду націлювати білки на пластиди та/або ефективність відщеплення після імпорту білків. Це може залежати від білка, що підлягає націлюванню. Див., наприклад, Сотаї, єї аї., (1988) 9. Вісі. Спет. 263(29):15104-9.
У деяких варіантах здійснення представлені білки злиття, які містять поліпептид РІЇР-96 та інсектицидний поліпептид, з'єднані амінокислотним лінкером. У деяких варіантах здійснення забезпечуються білки злиття, представлені формулою, вибраною з групи, що складається з:
ВА -82, ВІ -В, В'-8? або К2-В/, де К" являє собою поліпептид РіІЇР-96, Н2 являє собою білок, що становить інтерес.
Поліпептид К' злитий із поліпептидом Кгабо безпосередньо, або через лінкерний (І) сегмент.
Термін "безпосередньо" означає злиття, у яких поліпептиди з'єднані без пептидного лінкера. 60 Таким чином, "І" являє собою хімічний зв'язок або поліпептидний сегмент, з яким і КЕ", і Б2 злиті
Зо у рамці, при цьому найбільш часто І. являє собою лінійний пептид, з яким К"' та КЗ з'єднані за допомогою амідних зв'язків, що зв'язують карбоксильний кінець К' з аміно-кінцем Її та карбоксильний кінець ГІ. з аміно-кінцем К-. Під "злиті у рамці" мається на увазі, що між рамками зчитування КК! та Б: відсутні сайти термінації трансляції або розрив. Зв'язувальна група (Г) здебільшого являє собою поліпептид довжиною від 1 до 500 амінокислот. Лінкери, що з'єднують дві молекули, переважно конструюють так, (1) щоб вони давали можливість двом молекулам згортатися та діяти незалежно одна від одної, (2) щоб вони не характеризувалися схильністю до розвитку впорядкованої вторинної структури, яка може негативно впливати на функціональні домени двох білків, (3) щоб вони мали мінімальну гідрофобну або зарядну характеристику, яка впливає на функціональні домени білка, та (4) щоб вони забезпечували стеричне розділення К' та НК-, так щоб К! та К2 могли одночасно взаємодіяти зі своїми відповідними рецепторами на одній клітині. Здебільшого поверхневі амінокислоти в гнучких ділянках білка включають су, Абп та Зег. По суті, будь-яке поєднання амінокислотних послідовностей, що містять су, Авп та Зег, як очікується, буде задовольняти вищевказані критерії для лінкерної послідовності. Інші нейтральні амінокислоти, такі як ТПг та АїЇаЙ також можна застосовувати у лінкерній послідовності. Додаткові амінокислоти також можна включати у лінкери, оскільки додавання унікальних сайтів рестрикції у лінкерну послідовність полегшує конструювання злиттів.
У деяких варіантах здійснення лінкери містять послідовності, вибрані з групи формул: (Спузбепп, (Спіу«зегп, (Спузбег, (Спіупбег)п або (АіІасіузег)», де п являє собою ціле число. Одним прикладом надзвичайно гнучкого лінкера є спейсерна ділянка, багата на (сСіузег), що наявна в білку рії! ниткоподібних бактеріофагів, наприклад, бактеріофагів М1З або га (Зспайег, еї аї., 1975). Ця ділянка забезпечує довгу гнучку спейсерну ділянку між двома доменами поверхневого білка рії. Також включеними є лінкери, у склад яких входить послідовність розпізнавання ендопептидази. Такий сайт розщеплення може бути необхідним для розділення індивідуальних компонентів злиття для визначення того, чи є вони належним чином згорнутими та активними іп міго. Приклади різних ендопептидаз включають без обмеження плазмін, ентерокіназу, калікреїн, урокіназу, тканинний активатор плазміногену, клострипаїн, хімозин, колагеназу, протеазу отрути гадюки Рассела, фермент розщеплення постпроліну, протеазу М8, тромбін та фактор Ха. У деяких варіантах здійснення лінкер одержують з мультигенного експресійного "провідника"
Зо (МОЕМ), який розщеплюється вакуолярними протеазами, як розкрито у публікації заявки на патент США Мо 2007/0277263. В інших варіантах здійснення пептидні лінкерні сегменти з шарнірної ділянки важкого ланцюга імуноглобулінів дос, ІА, І9М, дО або ІДЕ забезпечують кутову взаємодію між прикріпленими поліпептидами. Зокрема, застосовуваними є такі шарнірні ділянки, у яких цистеїни заміщені на серини. Лінкери за даним розкриттям включають послідовності, одержані з шарнірної ділянки (до гама 20 миші, у якій цистеїни були замінені на серини. Білки злиття не обмежуються формою, розміром або кількістю застосовуваних лінкерних послідовностей, а єдиною вимогою для лінкера є те, що функціонально він не впливає негативним чином на фолдинг та функцію окремих молекул злиття.
В іншому аспекті представлені химерні поліпептиди РІР-96, які одержують шляхом з'єднання двох або більше частин генівРі!Р-96, які первісно кодують окремі білкиРі!Р-96, зі створенням химерного гена. Трансляція химерного гена спричиняє єдиний химерний поліпептидРіЇР-96 з ділянками, мотивами або доменами, одержаними з кожного з вихідних поліпептидів. У певних варіантах здійснення химерний білок містить частини, мотиви або домени поліпептидів РІР-96 під 5ЕО ІЮО МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО
ІО МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО
ІО МО: 22, ЗЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІО МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО
ІО МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО
ІО МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52, 5ЕО ІО МО: 54, 5ЕО ІЮ МО: 56, 5ЕО
ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО І МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО
ІО МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮО МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІЮО МО: 80, 5ЕО
ІО МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО
ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104,
ЗЕО ІО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108) у будь-якій комбінації.
Зрозуміло, що послідовності ДНК можна змінювати різними способами, та що ці зміни можуть призводити до створення послідовностей ДНК, що кодують білки з амінокислотними послідовностями, які відрізняються від тих, які кодують пестицидний білок дикого типу (або нативний). У деяких варіантах здійснення поліпептидРІЇР-96 можна змінювати різними шляхами, зокрема за допомогою амінокислотних замін, делецій, укорочень та вставок однієї або декількох амінокислот, включаючи до 2, 3,4,5,6, 7,8,9, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 60 80, 85, 90, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145 або більше амінокислотних замін,
делецій та/або вставок або їхніх комбінацій порівняно з послідовністю під будь-яким із БЕО ІЮ
МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО І МО: 14, ЗЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО І МО: 36, 5ЕО І МО: 38, ЗЕОІО МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, ЗЕО Ір МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО І МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108.
Способи здійснення таких маніпуляцій здебільшого відомі з рівня техніки. Наприклад, варіанти амінокислотної послідовності поліпептиду РІИР-96 можна одержувати за допомогою мутацій у ДНК. Це також можна здійснювати за допомогою однієї з декількох форм мутагенезу та/або шляхом спрямованої еволюції. У деяких аспектах заміни, закодовані в амінокислотній послідовності, не будуть суттєво впливати на функцію білка. Такі варіанти будуть мати необхідну пестицидну активність. Проте зрозуміло, що здатність поліпептиду РІЇР-96 забезпечувати пестицидну активність можна поліпшувати шляхом застосування таких методик у композиціях за даним розкриттям.
Наприклад, можна здійснювати консервативні амінокислотні заміни за одним або декількома несуттєвими амінокислотними залишками РІІР. "Несуттєвий" амінокислотний залишок являє собою залишок, який можна змінювати відносно послідовності дикого типу поліпептиду РІЇР-96 без зміни біологічної активності. "Консервативна амінокислотна заміна" являє собою заміну, при якій амінокислотний залишок заміщений на амінокислотний залишок, що має аналогічній бічний ланцюг. Родини амінокислотних залишків, які мають аналогічні бічні ланцюги, були визначені у рівні техніки. Ці родини включають амінокислоти з основними бічними ланцюгами (наприклад, лізин, аргінін, гістидин); кислотними бічними ланцюгами (наприклад, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту); полярними негативно зарядженими залишками та їхніми амідами (наприклад, аспарагінову кислоту, аспарагін, глутамінову кислоту, глутамін); незарядженими полярними бічними ланцюгами (наприклад, гліцин, аспарагін, глутамін, серин, треонін, тирозин,
Зо цистеїн); невеликими аліфатичними неполярними або слабополярними залишками (наприклад, аланін, серин, треонін, пролін, гліцин); неполярними бічними ланцюгами (наприклад, аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, триптофан); великими аліфатичними неполярними залишками (наприклад, метіонін, лейцин, ізолейцин, валін, цистин); бета- розгалуженими бічними ланцюгами (наприклад, треонін, валін, ізолейцин); ароматичними бічними ланцюгами (наприклад, тирозин, фенілаланін, триптофан, гістидин); великими ароматичними бічними ланцюгами (наприклад, тирозин, фенілаланін, триптофан).
Амінокислотні заміни можна проводити у неконсервативних ділянках, які зберігають функціонування. Загалом, такі заміни не слід проводити для консервативних амінокислотних залишків або для амінокислотних залишків, що розташовуються в консервативному мотиві, де такі залишки є суттєвими для активності білка. Приклади залишків, які є консервативними та які можуть бути суттєвими для активності білка, включають, наприклад, залишки, які є ідентичними у всіх білків, що містяться у вирівнюванні аналогічних або споріднених токсинів із послідовностями згідно з варіантами здійснення (наприклад, залишки, які є ідентичними під час вирівнювання гомологічних білків). Приклади залишків, які є консервативними, але які можуть забезпечувати можливість консервативних амінокислотних замін та все ще зберігати активність, включають, наприклад, залишки, які характеризуються тільки консервативними замінами у всіх білків, що містяться у вирівнюванні аналогічних або споріднених токсинів з послідовностями згідно 3 варіантами здійснення (наприклад, залишки, які характеризуються тільки консервативними замінами у всіх білків, що містяться у вирівнюванні гомологічних білків). Однак фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що функціональні варіанти можуть мати незначні консервативні або неконсервативні зміни за консервативними залишками. Інструкції щодо придатних амінокислотних замін, які не впливають на біологічну активність білка, що становить інтерес, можна знайти у моделі за Баупоїй, єї аї., (1978) АйМав ої Ргоїєїп Зедиєпсе апа Біписішиге (Майї. Віотей. Нев5. Рошипа., Умазпіпдаїоп, О0.С.), включеній у даний документ за допомогою посилання.
Під час здійснення таких змін можна враховувати індекс гідропатичності амінокислот.
Важливість індексу гідропатичності амінокислот для забезпечення узгодженої біологічної функції білка загалом зрозуміла з рівня техніки (Куїе апа Оооїїше, (1982) У Мої Віої. 157(1):105- 32). Прийнято вважати, що відносна гідропатичність амінокислоти робить внесок у вторинну бо структуру одержаного у результаті білка, що так само визначає взаємодію білка з іншими молекулами, наприклад, ферментами, субстратами, рецепторами, ДНК, антитілами, антигенами тощо.
З рівня техніки відомо, що певні амінокислоти можна заміщати іншими амінокислотами, що мають аналогічний індекс або показник гідропатичності, та у результаті це все ще викликає білок з аналогічною біологічною активністю, тобто, як і раніше, одержують білок з еквівалентною біологічною функцією. Кожній амінокислоті був наданий індекс гідропатичності на основі її характеристики гідрофобності та зарядної характеристики (Куїе апа ОооїїшШе, там же). Вони є наступними: ізолейцин (4,5); валін (44,2); лейцин (13,8); фенілаланін (12,8); цистеїн/цистин (12,5); метіонін (41,9); аланін (1,8); гліцин (-0,4); треонін (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролін (-1,6); гістидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамін (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагін (-3,5); лізин (-3,9) та аргінін (-4,5). Під час здійснення таких змін переважною є заміна амінокислот, індекси гідропатичності яких розташовуються у межах до -2, особливо переважною з індексами у межах до 41 та найбільш переважною з індексами у межах до «0,5.
З рівня техніки також зрозуміло, що заміну подібних амінокислот можна ефективно проводити на підставі гідрофільності. У патенті США Мо 4554101 заявляється, що найбільша локальна середня гідрофільність білка, що визначається гідрофільністю прилеглих амінокислот, корелює з біологічною властивістю білка.
Як детально описано у патенті США Мо 4554101, амінокислотним залишкам були надані наступні значення гідрофільності: аргінін (-3,0); лізин (43,0); аспартат (ї3,0.-0,1); глутамат (ї3,0.-0,1); серин (10,3); аспарагін (10,2); глутамін (140,2); гліцин (0); треонін (-0,4); пролін (-0,5.-0,1); аланін (-0,5); гістидин (-0,5); цистеїн (-1,0); метіонін (-1,3); валін (-1,5); лейцин (-1,8); ізолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенілаланін (-2,5); триптофан (-3,4).
Альтернативно зміни можна здійснювати у білковій послідовності багатьох білків на аміно- або карбоксильному кінці без суттєвого впливу на активність. Вони можуть включати вставки, делеції або зміни, введені за допомогою сучасних молекулярних способів, таких як ПЛР, включаючи ампліфікації за допомогою ПЛР, які змінюють або подовжують послідовність, що кодує білок, за допомогою включення послідовностей, що кодують амінокислоти, в олігонуклеотиди, застосовувані під час ампліфікації за допомогою ПЛР. Альтернативно додані білкові послідовності можуть включати послідовності, що кодують увесь білок, наприклад такі,
Зо які зазвичай застосовуються у рівні техніки для одержання злиття білків. Такі білки злиття часто застосовують для (1) посилення експресії білка, що становить інтерес, (2) введення зв'язувального домену, ферментативної активності або епітопу для полегшення або очищення білка або виявлення білка або інших експериментальних застосувань, відомих із рівня техніки, (3) спрямування секреції або трансляції білка у внутрішньоклітинну органелу, таку як периплазматичний простір грамнегативних бактерій, мітохондрії або хлоропласти рослин або ендоплазматичний ретикулум еукаріотичних клітин, причому останнє зазвичай спричиняє глікозилювання білка.
Варіантні нуклеотидні та амінокислотні послідовності за даним розкриттям також охоплюють послідовності, одержані за допомогою процедур, пов'язаних із мутаціями та рекомбінаціями, такими як шафлінг ДНК. За допомогою такої процедури одну або декілька різних ділянок, що кодують поліпептидРІЇР-96, можна застосовувати для створення нового поліпептидуРІР-96, що має бажані властивості. Таким чином, бібліотеки рекомбінантних полінуклеотидів створюють із групи споріднених за послідовностями полінуклеотидів, що містять ділянки послідовностей, які характеризуються суттєвою ідентичністю послідовності та можуть піддаватися гомологічній рекомбінації іп мйго або іп мімо. Наприклад, із застосуванням цього підходу мотиви з послідовностями, що кодують домен, що становить інтерес, можна піддавати шафлінгу між пестицидним геном та іншими відомими пестицидними генами з одержанням нового гена, що кодує білок з поліпшеною властивістю, яка становить інтерес, такою як підвищена інсектицидна активність. Стратегії такого ДНК-шафлінгу відомі з рівня техніки. Див., наприклад, 5беттег, (1994) Ргос. Маїй!. Асад. сі. ОБА 91:10747-10751; бїеттег, (1994) Маїйге 370:389-391; Статеті, еї а!., (1997) Маїшге Віоїеснп. 15:436-438; Мооге, еї аї., (1997) 9. Мої. Віої. 272:336-347; 7папао, єї а!І., (1997) Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 94:4504-4509; Статеті, єї аї!., (1998) Маште 391:288-291; та патенти США з номерами 5605793 і 5837458.
Заміна доменів або шафлінг являє собою інший механізм одержання змінених поліпептидів
РИР-96. Можна проводити заміну доменів між поліпептидами РІЇР-96б, що дає гібридні або химерні токсини з поліпшеною інсектицидною активністю або розширеним спектром мішеней.
Способи одержання рекомбінантних білків та тестування їх щодо пестицидної активності добре відомі з рівня техніки (див., наприклад, Маїтом, еї а!., (2001) Аррі. Епмігоп. Містобіо!. 67:5328- 5330; де Маадое), еї аї., (1996) Аррі. Епмігоп. Містобіої. 62:1537-1543; Се, єї аї., (1991) 9. Віо!. 60 Спет. 266:17954-17958; 5сппері, еї аї., (1990) 9. Віої. Снет. 265:20923-20930; Вапа, еї аї.,
91999) Аррі. Епмігоп. Містобіо!. 65:2918-2925).
Вирівнювання гомологів РІЇР-96 (фігура 1) забезпечує можливість ідентифікації залишків, які є висококонсервативними серед природних гомологів у даній родині.
Композиції
Також охоплені композиції, які містять поліпептид РІИР-96 згідно з даним розкриттям. У деяких варіантах здійснення композиція містить поліпептид РІР-96б під 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО І
МО: 7, ЗЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО І МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; ЗЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, ЗЕО ІРР МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО І МО: 58, 5ЕО ІО МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО І МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮО МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО І МО: 76, ЗЕО І МО: 78, 5ЕО ІЮО МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО ІО МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО І МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮО МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108. У деяких варіантах здійснення композиція містить білок злиття РІР-96.
Антитіла
Також охоплені антитіла до поліпептидуРіІІР-96 згідно з варіантами здійснення або до його варіантів або фрагментів. Антитіла за даним розкриттям включають поліклональні та моноклональні антитіла, а також їхні фрагменти, які зберігають їхню здатність зв'язуватися з поліпептидомРІЇР-96, виявленим у кишечнику комахи. Вважається, що антитіло, моноклональне антитіло або його фрагмент здатні зв'язувати молекулу, якщо вони здатні специфічно взаємодіяти з молекулою, тим самим зв'язуючи молекулу з антитілом, моноклональним антитілом або його фрагментом. Мається на увазі, що термін "антитіло" (АБ) або "моноклональне антитіло" (Мар) включає інтактні молекули, а також їхні фрагменти, або зв'язувальні ділянки, або домени (такі як, наприклад, фрагменти Рар та К(ар)2), які здатні зв'язувати гаптен. Такі фрагменти здебільшого одержують за допомогою протеолітичного розщеплення, наприклад, за допомогою папаїну або пепсину. Альтернативно гаптен- зв'язувальні фрагменти можна одержувати шляхом застосування технології рекомбінантних
ДНК або за допомогою синтетичної хімії. Способи одержання антитіл за даним розкриттям здебільшого відомі з рівня техніки. Наприклад, див. Апііродіє5, А І арогаюгу Мапиаї, Ей Нагохм апа Оамій І апе (єд».) Со 5ргіпд Натотг І абогаїюгу, М.У. (1988), а також процитовані у ньому літературні джерела. Стандартні довідкові видання, що викладають загальні принципи імунології, включають: КіІеїп, у. Іттипоїоду: Те Зсієпсе ої СеїІ-Мопсеї! Оізспітіпайіоп, доп УМїеу а Боп5, М.У. (1982); Оеппеїйї, єї аЇ., Мопосіопа! Апіїбодіе5, Нубгідота: А Мем Оітепвіоп іп
Віоіодіса! Апаіузев, Ріеєпит Ргезз, М.У. (1980) та СатрьеїІ, "Мопосіопа! Апіїбоду Тесппоіоду", у
І арогаїогу Тесппіднез іп Віоспетівігу апа МоїІесшіаг Віоіоду, Мої. 13, Вигкаоп, еї аї., (вав5.), ЕІбвемівг,
Атвіегдат (1984). Див. також патенти США МоМо 4 196 265; 4 609 893; 4 713 325; 4 714 681; 4 716 111; 4 716 117 та 4 720 459. Антитіла до поліпептиду РІЇР-96 або їхні антиген-зв'язувальні частини можна одержувати за допомогою ряду методик, включаючи традиційні методики із застосуванням моноклональних антитіл, наприклад, стандартної методики гібридизації соматичних клітин за Копіег апа Міївівіп, (1975) Маште 256:495. Також можна застосовувати інші методики одержання моноклонального антитіла, такі як вірусна або онкогенна трансформація
В-лімфоцитів. Система для одержання гібридом із застосуванням тварини являє собою систему із застосуванням мишей. З рівня техніки відомі протоколи та методики виділення спленоцитів імунізованих тварин для злиття. Також відомі партнери для злиття (наприклад, клітини мієломи миші) та процедури злиття. Антитіло та моноклональні антитіла за даним розкриттям можна одержати шляхом застосування поліпептиду РІЇР-96 як антигенів.
Представлений набір для виявлення наявності поліпептиду РІЇР-96 або виявлення наявності нуклеотидної послідовності, що кодує поліпептид РІР-96, у зразку. В одному варіанті здійснення у наборі представлені реагенти на основі антитіл для виявлення наявності поліпептиду РІР-96 у зразку тканини. В іншому варіанті здійснення у наборі представлені мічені зонди нуклеїнової кислоти, застосовувані для виявлення наявності одного або декількох полінуклеотидів, які кодують поліпептид РІИР-96б. У наборі також представлені відповідні реагенти та контрольні зразки для проведення способу виявлення, а також інструкції для застосування набору.
Ідентифікація та виділення рецепторів
Також охоплені рецептори до поліпептиду РІИР-96 згідно з варіантами здійснення або до його варіантів або фрагментів. Способи ідентифікації рецепторів, добре відомі з рівня техніки (див. Ноїпаптп, еї. аї., (1988) Єиг. У. Віоспет. 173:85-91; СІ, єї аї!., (1995) 9. ВіоІ. Снет. 27277- бо 27282), можна застосовувати для ідентифікації та виділення рецептора, який розпізнає поліпептид РІЇР-96 за допомогою мембранних везикул щіткової облямівки чутливих комах. На додачу до способу радіоактивного мічення, наведеного у процитованих літературних джерелах, поліпептид РІИР-96 можна мітити за допомогою флуоресцентного барвника та інших загальноприйнятих міток, таких як стрептавідин. Мембранні везикули щіткової облямівки (ВВМУ) чутливих комах, таких як соєва совка та щитники, можна одержувати відповідно до протоколів, наведених у літературних джерелах, та розділяти у гелі ХО5-РАСЕ і переносити на придатну мембрану. Мічені поліпептиди РІР-96 можна інкубувати з підданою блотингу мембраною ВВМУ, та при цьому мічені поліпептиди РІР-96 можна ідентифікувати за допомогою мічених репортерів. Ідентифікацію білкової смуги (смуг), які взаємодіють з поліпептидами РІЇР- 96, можна виявляти за допомогою секвенування М-кінцевих амінокислотних залишків у газовій фазі або способу ідентифікації білків на основі мас-спектрометрії (Ранегхоп, (1998) 10.22, 1-24,
Ситепі Ргоїюосої іп Моїесшіаг Віоіоду риріїзпей Бу Чдопп УМіеу 5 оп Іпс). Після ідентифікації білка відповідний ген можна клонувати з бібліотеки геномної ДНК або кДНК чутливих комах, та спорідненість зв'язування можна виміряти безпосередньо за допомогою поліпептидуРІР-96.
Рецепторну функцію щодо інсектицидної активності поліпептиду РІЇР-96 можна підтвердити шляхом здійснення способу нокауту гена КМАЇі-типу (ВНа)адораї, єї аї., (2002) 9. Віої. Спет. 277:46849-46851).
Нуклеотидні конструкції, касети експресії та вектори
Застосування терміна "нуклеотидні конструкці"! у даному документі не призначене обмежувати варіанти здійснення нуклеотидними конструкціями, що містять ДНК. Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що нуклеотидні конструкції, зокрема полінуклеотиди та олігонуклеотиди, що складаються з рибонуклеотидів та комбінацій рибонуклеотидів та дезоксирибонуклеотидів, також можна застосовувати у способах, розкритих у даному описі.
Нуклеотидні конструкції, нуклеїнові кислоти та нуклеотидні послідовності згідно з варіантами здійснення додатково охоплюють усі комплементарні форми таких конструкцій, молекул та послідовностей. Крім того, нуклеотидні конструкції, нуклеотидні молекули та нуклеотидні послідовності відповідно до варіантів здійснення охоплюють усі нуклеотидні конструкції, молекули та послідовності, які можна використовувати в способах відповідно до варіантів здійснення для трансформації рослин, у тому числі без обмеження які складаються з дезоксирибонуклеотидів, рибонуклеотидів та їхніх комбінацій. Такі дезоксирибонуклеотиди та рибонуклеотиди передбачають як молекули, що зустрічаються в природі, так і синтетичні аналоги. Нуклеотидні конструкції, нуклеїнові кислоти та нуклеотидні послідовності згідно з варіантами здійснення також охоплюють усі форми нуклеотидних конструкцій, включаючи без обмеження одноланцюгові форми, дволанцюгові форми, шпильки, структури "стебло-та-петля" тощо.
Додатковий варіант здійснення стосується трансформованого організму, такого як організм, вибраний з рослинних клітин та клітин комах, бактерій, дріжджів, бакуловірусу, найпростіших, нематод та водоростей. Трансформований організм містить молекулу ДНК згідно з варіантами здійснення, касету експресії, що містить молекулу ДНК, або вектор, що містить касету експресії, які можуть бути стабільно вбудованими у геном трансформованого організму.
Послідовності згідно з варіантами здійснення представлені у складі ДНК-конструкцій для експресії в організмі, що становить інтерес. Конструкції будуть включати 5'- та 3- регуляторні послідовності, функціонально пов'язані з послідовністю згідно з варіантами здійснення. Термін "функціонально зв'язані? використовуваний у даному документі, відноситься до функціонального зв'язку між промотором та другою послідовністю, де послідовність промотора ініціює та опосередковує транскрипцію послідовності ДНК, що відповідає другій послідовності.
Загалом "функціонально зв'язаний" означає, що зв'язані послідовності нуклеїнових кислот є суміжними та за необхідності з'єднують дві ділянки, що кодують білок, у одній рамці зчитування.
Конструкція може додатково містити щонайменше один додатковий ген, що підлягає введенню в організм шляхом котрансформації. Альтернативно додатковий(додаткові) ген(и) може забезпечуватися на множинних ДНК-конструкціях.
Така ДНК-конструкція оснащена декількома сайтами рестрикції для вставки послідовності гена поліпептиду РІЇР-96, транскрипція якої буде регулюватися регуляторними ділянками. ДНК- конструкція може додатково містити гени селектованих маркерів.
У напрямку транскрипції 5-3 ДНК-конструкція здебільшого буде включати ділянку ініціації транскрипції та трансляції (тобто промотор), послідовність ДНК згідно з варіантами здійснення та ділянку термінації транскрипції та трансляції (тобто ділянку термінації), що функціонують в організмі, який слугує як хазяїн. Ділянка ініціації транскрипції (тобто промотор) може бути нативною, аналогічною, чужорідною або гетерологічною відносно організму-хазяїна та/або бо послідовності згідно з варіантами здійснення. Крім того, промотор може бути природною послідовністю або альтернативно синтетичною послідовністю. Застосовуваний у даному документі термін "чужорідний" вказує на те, що промотор відсутній у нативному організмі, у який введений промотор. Якщо промотор є "чужорідним" або "гетерологічним" відносно послідовності згідно з варіантами здійснення, передбачається, що промотор не є нативним або таким, що зустрічається в природі, промотором для функціонально пов'язаної послідовності згідно з варіантами здійснення. Застосовуваний у даному документі "химерний ген" містить кодувальну послідовність, функціонально пов'язану з ділянкою ініціації транскрипції, яка є гетерологічною для кодувальної послідовності. Якщо промотор є нативною або природною послідовністю, експресія функціонально пов'язаної послідовності є зміненою порівняно з експресією дикого типу, що викликає зміну фенотипу.
У деяких варіантах здійснення ДНК-конструкція може також включати послідовність транскрипційного енхансера. Використовуваний у даному документі термін "енхансер" відноситься до послідовності ДНК, яка може стимулювати активність промотора та яка може являти собою характерний елемент промотора або гетерологічний елемент, вставлений для підвищення рівня активності або тканинної специфічності промотора. З рівня техніки відомі різні енхансери, наприклад, також можуть застосовуватися інтрони з властивостями покращення генної експресії в рослинах (публікація заявки на патент США Мо 2009/0144863, інтрон убіквітину (тобто інтрон 1 убіквітину маїсу (див., наприклад, послідовність МСВІ 594464)), омега-енхансер або омега-штрих-енхансер (Сагїіе, еї а!., (1989) МоіІєсшаг Віоіоду ої ВМА єд. Сесі (І ів5, Мем
МоїКк) 237-256 та Саїе, еї аіІ., (1987) Сепе 60:217-25), енхансер Самм 355 (див., наприклад,
Веп'іеу, єї аї!., (1990) ЕМВО 4). 9:1685-96) та енхансери з патенту США Мо 7803992, кожний із яких включений за допомогою посилання. Наведений вище перелік транскрипційних енхансерів не призначений для обмеження. У варіантах здійснення можна застосовувати будь-який придатний транскипційний енхансер.
Ділянка термінації може бути нативною щодо ділянки ініціації транскрипції, може бути нативною щодо функціонально пов'язаної послідовності ДНК, що становить інтерес, може бути нативною щодо рослини-хазяїна або може бути одержана з іншого джерела (тобто чужорідна або гетерологічна для промотора, послідовності, що становить інтерес, рослини-хазяїна або будь-якої їхньої комбінації).
Придатні ділянки термінації доступні з Ті-плазміди А. Штегїасієпв5, такі як ділянки термінації генів октопінсинтази та нопалінсинтази. Див. також Сиегіпеаиц, еї аї., (1991) Мої. Сеп. Сепеї. 262:141-144; Ргоцагоої, (1991) Сеї! 64:671-674; Запіасоп, єї аї., (1991) Сепе5 Юем. 5:141-149;
Модеп, єї аї., (1990) Ріапі Сеї!І 2:1261-1272; Мипгое, вї а!., (1990) Сепе 91:151-158; ВаїІав, єї аї., (1989) Мисієїс Асіа5 Нев. 17:7891-7903 та Одовні, єї а!., (1987) Мисівєїс Асіа Нез. 15:9627-9639.
За необхідності нуклеїнову кислоту можна оптимізувати для посилення експресії в організмі- хазяїні. Таким чином, якщо організм-хазяїн є рослиною, для посилення експресії можна синтезувати синтетичні нуклеїнові кислоти із застосуванням кодонів, переважних для рослин.
Див., наприклад, Сатрбей апа Сом/лі, (1990) Ріапі РНувзіоЇ. 92:1-141 стосовно обговорення застосування кодонів, переважних для хазяїна. Наприклад, хоча послідовності нуклеїнової кислоти відповідно до варіантів здійснення можуть експресуватися як у видів однодольних, так і дводольних рослин, послідовності можна модифікувати з урахуванням специфічних переваг кодонів та переваг за вмістом 5С в однодольних або дводольних, якщо було показано, що переваги відрізняються (Миїтау еї аї. (1989) Мисієїс Асіа5 Нев. 17:477-498). Таким чином, кодон, переважний для маїсу, для конкретної амінокислоти можна одержати з відомих генних послідовностей маїсу. Дані щодо частоти застосування кодонів у маїсу для 28 генів із рослин маїсу наведені у таблиці 4 за Миїтау, єї а)., вище. З рівня техніки доступні способи синтезу генів, переважних для рослин. Див., наприклад, патенти США МоМо 5380831 та 5436391, та Миггау, єї а!., (1989) Мисієїс Асіа5 Нев. 17:477-498, та Гіи Н еї а. Мої Віо Кер 37:67 7-684, 2010, включені в даний документ за допомогою посилання. Таблицю використання кодонів 7еа таїге також можна знайти на сайті Кагиза.ог.|р/содоп/сді-біп/5пом/содоп.сді?зресіез-4577, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса мили.
Таблиця частоти використання кодонів Сіусіпе тах показана у вигляді таблиці 4, та її також можна знайти на сайті Кализа.ог.|Ір/содоп/сді-біп/'5помсодоп.сді?вресіеєз-38478аа- 1 8віуїе-М, доступ до якого можна одержати із застосуванням префіксу млуму.
У деяких варіантах здійснення рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІЇР-96, має кодони, оптимізовані для маїсу.
Відомі додаткові модифікації послідовності для посилення експресії гена в клітинному хазяїні. Вони включають вилучення послідовностей, що кодують хибні сигнали поліаденілювання, сигнали сайту сплайсингу екзонів та інтронів, транспозон-подібні повтори та 60 інші добре вивчені послідовності, які можуть здійснювати шкідливий вплив на експресію гена.
Вміст СС у послідовності можна скорегувати до рівнів, середніх для даного клітинного хазяїна, розрахованих з урахуванням відомих генів, що експресуються у клітині-хазяїні. Застосовуваний у даному документі термін "клітина-хазяїн" стосується клітини, яка містить вектор та яка підтримує реплікацію та/або експресію передбачуваних векторів експресії. Клітини-хазяї можуть бути прокаріотичними клітинами, такими як Е. соїї, або еукаріотичними клітинами, такими як клітини дріжджів, комах, амфібій або ссавців, або клітинами однодольних або дводольних рослин. Прикладом клітини-хазяїна, що належить до однодольної рослини, є клітина-хазяїн маїсу. Якщо можливо, послідовність модифікують, аби запобігти утворенню прогнозованих шпилькових вторинних структур МРНК.
Касети експресії можуть додатково містити 5'-лідерні послідовності. Такі лідерні послідовності можуть сприяти підсиленню трансляції. З рівня техніки відомі трансляційні лідерні послідовності, та вони включають лідерні послідовності пікорнавірусів, наприклад, лідерну послідовність ЕМСМ (5'-чекодувальна ділянка геному вірусу енцефаломіокардиту) (ЕіІгоу-51вїп єї а!., (1989) Ргос. Маї)!. Асад. сі. ОБА 86:6126-6130); лідерні послідовності потивірусів, наприклад лідерну послідовність ТЕМ (вірус гравірування тютюну) (Саїе, єї а!., (1995) Сепе 165(2):233- 238), лідерну послідовність МОММ (вірус карликової мозаїки кукурудзи), білок, що зв'язує важкий ланцюг імуноглобуліну людини (ВіР) (Масе)ак, єї а!., (1991) Маїште 353:90-94); нетрансльовану лідерну послідовність мРНК білка оболонки вірусу мозаїки люцерни (АММ ЕМА 4) (Чобіїпа, єї аї., (1987) Майте 325:622-625); лідерну послідовність вірусу тютюнової мозаїки (ТММ) (Саїіе, еї аї., (1989) в Моїесшаг Віоюду ої АМА, єй. Сеси (1ів5, Мем МогКк), рр. 237-256) та лідерну послідовність вірусу хлоротичної плямистості маїсу (МСММ) (Готтеї, еї аї., (1991) Мікоіоду 81:382-385). Див. також ОеїПа-Сіорра, єї аї., (1987) Ріапі РНузіої. 84:965-968. Такі конструкції можуть також містити "сигнальну послідовність" або "лідерну послідовність" для полегшення котрансляційного або посттрансляційного транспорту пептиду у певні внутрішньоклітинні структури, такі як хлоропласт (або інша пластида), ендоплазматичний ретикулум або апарат
Гольджі.
Використовувана у даному документі "сигнальна послідовність" відноситься до послідовності, яка, як відомо або як очікується, призводить до котрансляційного або посттрансляційного транспорту пептиду через клітинну мембрану. У еукаріотів це здебільшого
Зо передбачає секрецію в апараті Гольджі, при цьому відбувається деяке глікозилювання.
Інсектицидні токсини бактерій зазвичай синтезуються у вигляді протоксинів, які активуються під дією протеолізу у кишечнику цільового шкідника (Спапо, (1987) Мешйоаз5 Епгутої. 153:507-516).
У деяких варіантах здійснення сигнальна послідовність розміщена у нативній послідовності або може бути одержана з послідовності згідно з варіантами здійснення. Використовувана у даному документі "лідерна послідовність" відноситься до будь-якої послідовності, яка при трансляції призводить до утворення амінокислотної послідовності, здатної запускати котрансляційний транспорт пептидного ланцюга у внутрішньоклітинну органелу. Таким чином, це включає лідерні послідовності, що здійснюють націлювання транспорту та/або глікозилювання шляхом переходу в ендоплазматичний ретикулум, переходу у вакуолі, пластиди, включаючи хлоропласти, мітохондрії тощо. Кодовані в ядрі білки, націлені на компартмент порожнини тилакоїда хлоропластів, мають характерний подвійний транзитний пептид, що складається із сигнального пептиду, що націлюється на строму, та сигнального пептиду, що націлюється на порожнину.
Інформація для націлювання на строму розташована в найближчій до аміно-кінця частині транзитного пептиду. Сигнальний пептид, що націлюється на порожнину, розташований у найближчій до карбоксильного кінця частині транзитного пептиду та містить всю інформацію для націлювання на порожнину. Нещодавні дослідження з протеоміки хлоропластів вищих рослин досягли успіху в ідентифікації численних білків порожнини, що кодуються в ядрі (КіезеіІрасі еї а. РЕВ5 І ЕТТ 480:271-276, 2000; Реег еї аї. Ріапі Сеї! 12:319-341, 2000; ВгісКег еї аї. Віоспіт. Віорпуз Асіа 1503:350-356, 2001), при цьому їхній сигнальний пептид, що націлюється на порожнину, може потенційно застосовуватися відповідно до даного розкриття.
Про приблизно 80 білків із Агарідорзів, а також гомологічні білки зі шпинату та гороху посівного повідомляється в Кієзеїраси еї аї., Рпоїозупіпевзіз Незеагсіи, 78:249-264, 2003. Зокрема, у таблиці 2 цієї публікації, яка включена в даний опис за допомогою посилання, розкрито 85 білків із порожнини хлоропласта, ідентифікованих за їхнім номером доступу (див. також публікацію заявки на патент США 2009/09044298). На додачу опублікована нещодавно попередня версія геному рису (СОЇ еї аїЇ, Зсіепсе 296:92-100, 2002) є придатним джерелом для інформації про сигнальний пептид, що націлюється на порожнину, який можна застосовувати відповідно до даного розкриття.
Придатні транзитні пептиди хлоропластів (СТР), добре відомі фахівцю в даній галузі, також 60 включають химерні СТР, які містять без обмеження М-кінцевий домен, центральний домен або
С-кінцневий домен СТР із 1-дезокси-0О ксилоза-о--фосфатсинтази Огула взаїма, супероксиддисмутази Огула заїїма, синтази розчинного крохмалю Огула заїїма, МАО Р-залежного ферменту, що діє на яблучну кислоту, Огула займа, фосфо-2-дегідро-З-дезоксигептонат- альдолази 2 Огула заїїма, І -аскорбат-пероксидази 5 Огула заїїма, фосфоглюкан-вода-дикінази
Огула займа, 556ВОВІЗСО 7веа Мауз, бета-глюкозидази 7єа Мауз, малат-дегідрогенази 7єа Маув, тіоредоксину М-типу 7єа Мауз із патентної публікації США 2012/0304336).
Ген поліпептиду РІР-96, який підлягає націлюванню в хлоропласт, можна оптимізувати для експресії в хлоропласті з урахуванням відмінностей із застосування кодонів між рослинним ядром та цією органелою. Таким чином, нуклеїнові кислоти, що становлять інтерес, можна синтезувати із застосуванням кодонів, переважних для хлоропласта. Див., наприклад, патент
США Мо 5380831, включений у даний документ за допомогою посилання.
Під час одержання касети експресії з різними фрагментами ДНК можна проводити маніпуляції так, щоб одержати послідовності ДНК у належній орієнтації та за необхідності в належній рамці зчитування. Для цього для з'єднання фрагментів ДНК можна застосовувати адаптери або лінкери або можна залучати інші маніпуляції для забезпечення прийнятних сайтів рестрикції, видалення надлишкової ДНК, видалення сайтів рестрикції тощо. Для цього можна залучати мутагенез іп міго, репарацію за допомогою праймерів, рестрикцію, гібридизацію, повторні заміни, наприклад, транзиції та трансверсії.
При практичному здійсненні варіантів здійснення можна застосовувати низку промоторів.
Промотори можна вибирати з урахуванням необхідного результату. Нуклеїнові кислоти можна комбінувати з конститутивними, переважними для тканини, індукованими або іншими промоторами для експресії в організмі-хазяїні Придатні конститутивні промотори для застосування в рослинній клітині-хазяїні включають, наприклад, коровий промотор промотора
Ез5уп7 та інші конститутивні промотори, розкриті в УМО 1999/43838 та патенті США Мо 6072050; коровий промотор Самм 355 (Оаеї, еї аї!., (1985) Маїште 313:810-812); промотор актину рису (Меєіеоу, еї а!., (1990) Ріапі Сеї! 2:163-171); убіквітину (Спгізепзеп, єї аї., (1989) Ріапі Мої. Віо|. 12:619-632; та СНгівієпзеп, єї аї., (1992) Ріапі Мої. ВіоІ. 18:675-689); РЕМИ (Гаві, вї аї., (1991)
ТНеог. Аррі. Сепеї. 81:581-588); МА5 (Мепеп, єї аї., (1984) ЕМВО 3. 3:2723-2730); промотор гена
АІЇ 5 (патент США Мо 5659026) тощо. Інші конститутивні промотори включають, наприклад,
Зо розкриті в патентах США МоМео 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142 та 6177611.
Залежно від бажаного результату може бути корисним експресувати ген за допомогою індукованого промотора. Особливий інтерес для регуляції експресії нуклеотидних послідовностей згідно з варіантами здійснення у рослин становлять індуковані пораненням промотори. Такі індуковані пораненням промотори можуть реагувати на пошкодження, спричинене живленням комахи, та вони включають ген інгібітора протеїнази картоплі (ріп Ії) (Вуап, (1990) Апп. Нем. Рпутораїй. 28:425-449; Юцап, еї а!., (1996) Маїшге Віоїесппоіоду 14:494- 498); мипі та улп2, патент США Мо 5428148; м/іп!1 та міп2 (еїапіога, єї а!., (1989) Мої. Сеп.
Сепеї. 215:200-208); системін (Мсашії, єї аї., (1992) 5сіепсе 225:1570-1573); МІРІ (КоПптеівг, єї а!., (1993) Ріапі Мої. Вісі. 22:783-792; ЕсКеІКатр, єї аї., (1993) РЕВ5 І ецег5 323:73-76); ген МРІ (СогаєгокК, єї а!., (1994) Ріапі У. 6(2):141-150) тощо, включені в даний документ за допомогою посилання.
Крім того, у способах та нуклеотидних конструкціях згідно з варіантами здійснення можна застосовувати індуковані патогеном промотори. Такі індуковані патогеном промотори включають промотори з патоген-зв'язаних білків (РЕ-білки), які індукуються після зараження патогеном; наприклад, РЕ-білки, ЗАК-білки, бета-1,3-глюканаза, хітиназа тощо. Див., наприклад, Веодої!її, єї а!., (1983) Меїйй. У. Ріапі Раїйої. 89:245-254; ОКпезв, ві а!., (1992) Ріапі Сеї! 4: 645-656 та Мап І ооп, (1985) Ріапі Мої. Мікої. 4:111-116. Див. також УМО 1999/43819, включений у даний документ за допомогою посилання.
Становлять інтерес промотори, які експресуються локально у місці зараження патогеном або поряд з ним. Див., наприклад, Магіпеаи, єї аї., (1987) Ріапі Мої. Віої!. 9:335-342; Мацноп, в! аї., (1989) МоїІесшаг Ріапі-Містобе Іпіегасіюп5 2:325-331; 5отвівси, еї а!., (1986) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі.
БА 83:2427-2430; 5отвівси, єї аї!., (1988) Мої. Сеп. Сепеї. 2:93-98 та Мапо, (1996) Ргос. Маї).
Асад. сі. ОБА 93:14972-14977. Див. також Спеп, еї аї., (1996) Ріапі 9. 10:955-966; 7Напо, еї аї., (1994) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 91:2507-2511; Матгпет, єї а!., (1993) Ріапі 9. 3:191-201; 5іерепа, еї а!., (1989) Ріапі Сеї! 1:961-968; патент США Мо 5750386 (індукований нематодами) та літературні джерела, процитовані в них. Особливий інтерес становить індукований промотор для гена маїсу РІАт5, експресія якого ініціюється патогеном Ризагішт топіїйопте (див., наприклад, Согаего, еї а!., (1992) РНузіої. Мої. Ріапі Рай. 41:189-200). бо Регульовані хімічними речовинами промотори можна застосовувати для модуляції експресії гена у рослині за допомогою внесення екзогенного хімічного регулятора. Залежно від мети промотор може бути індукованим хімічною речовиною промотором, у даному випадку застосування хімічної речовини індукує експресію гена, або репресованим хімічною речовиною промотором, у даному випадку застосування хімічної речовини пригнічує експресію гена.
Індуковані хімічними речовинами промотори відомі з рівня техніки та включають без обмеження промотор Іп2-2 маїсу, який активується антидотами до бензолсульфонамідних гербіцидів, промотор С5Т маїсу, який активується гідрофобними електрофільними сполуками, які застосовуються як досходові гербіциди, та промотор РЕ-їа тютюну, який активується саліциловою кислотою. Інші регульовані хімічними речовинами промотори, що становлять інтерес, включають чутливі до стероїдів промотори (див., наприклад, індукований глюкокортикоїдом промотор у Зспепа, еї аї!., (1991) Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 88:10421-10425 та
Мемеїйїв, еї аї!., (1998) Ріапі 9. 14(2):247-257), а також індуковані тетрациклінами та репресовані тетрациклінами промотори (див., наприклад, саї?, еї аї., (1991) Мої. Сеп. Сепеї. 227:229-237 та патенти США МоМо 5814618 та 5789156), включені у даний документ за допомогою посилання.
Для цілеспрямованого впливу на посилену експресію поліпептиду РІЇР-96 в конкретній тканині рослини можна застосовувати переважні для тканини промотори. Тканинопереважні промотори включають промотори, що розглядаються в Уататоїо, еї аї., (1997) Ріапі 9. 12(2):255-265; Кажатана, вї а!., (1997) Ріапі Сеї! Рнузіої!. 38(7):792-803; Напзеп, евї а!ї., (1997) Мої.
Сеп Сепеї. 254(3):337-343; Визвеї, єї а!., (1997) Тгтапздепіс Вев. 6(2):157-168; ВіпеНан, еї аї., (1996) Ріапі Рпузіої. 112(3):1331-1341; Мап Сатр, єї аї., (1996) Ріапі РНувзіої. 112(2):525-535;
Сапемавсіпі, єї а!., (1996) Ріапі РНузіої!. 112(2):513-524; Мататоїйо, вї а!., (1994) Ріапі Сеї! Рнпузіо|. 35(5):773-778; І ат, (1994) Везиїйв Ргобрі. Сеї!! Оійег. 20:181-196; Огосо, єї аї., (1993) Ріапі Мої
ВіоІ. 23(6):1129-1138; МаїзцоКа, еї аЇ., (1993) Ргос Маї). Асад. сі. ОБА 90(20):9586-9590 та
Сюпемага-Сагсіа, єї аї., (1993) Ріапі У. 4(3):495-505. У разі потреби такі промотори можна модифікувати з одержанням слабкої експресії.
Промотори, переважні для листка, відомі з рівня техніки. Див., наприклад, Мататоїйо, еї аї., (1997) Ріапі 9. 12(2):255-265; Куоп, еї аї., (1994) Ріапі Рпувзіої. 105:357-67; Мататоїйо, еї аї., (1994) Ріапі Сеї! Рнузіо!. 35(5):773-778; Схоїог, вї аї., (1993) Ріапі у). 3:509-18; Ого2со, вї аї., (1993)
Ріапі Мої. Віої. 23(6):1129-1138 та МаїзцокКа, вї а!., (1993) Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 90(20):9586-
Коо) 9590.
Відомими є промотори, активні переважно в коренях, або промотори, специфічні щодо кореня, та їх можна вибирати з багатьох доступних з літератури або виділених де помо з різноманітних сумісних видів. Див., наприклад, Ніге, єї аї., (1992) Ріапі Мої. Вісі. 20(2):207-218 (специфічний по відношенню до кореня сої ген глутамінсинтетази); КеПег апа Ваитоданйнпег", (1991) Ріапі Сеї! 3(10):1051-1061 (специфічний по відношенню до кореня регуляторний елемент у гені САР 1.8 квасолі); Заподетг, еї аї., (1990) Ріапі Мої. Віої. 14(3):433-443 (специфічний по відношенню до кореня ген маннопінсинтази (МА5) Аагобасієтішт іштеїасіеп5) та Міао, еї аї., (1991) Ріапі СеїІ 3(1):11-22 (клон кКДНК повної довжини, що кодує цитозольну глутамінсинтазу (аб), яка експресується в коренях та кореневих бульбочках сої). Див. також Водива2 вї аї. (1990)
Ріапі Сеї! 2(7):633-641, де описані два промотори, специфічні щодо кореня, виділені з генів гемоглобіну з рослини Рагазропіа ападегзопії, що не належить до бобових та не є такою, що фіксує азот, та спорідненої рослини Ттета Отепіоза, що не належить до бобових та не є такою, що фіксує азот. Промотори цих генів були пов'язані з репортерним геном Вр- глюкуронідази та введені як в Місоїапа їарасит, що не відноситься до бобових, так і у бобову
Гоїш5 сотісшіацве, та при цьому в обох випадках специфічна по відношенню до кореня активність промотора зберігалась. І еасії апа Асуаді (1991) описують свій аналіз промоторів, що забезпечують високий рівень експресії генів гоЇС та го1О0 Адгобрасієгійт ппігодепев5, що індукують розростання коренів (див. Ріапі 5сієпсе (Гітегіск) 79(1):69-76). Автори дійшли висновку, що в цих промоторах енхансер та переважні для тканини ДНК-детермінанти розділені. Теегїі еї аї. (1989) застосовували злиття гена з Ііас7 для того, аби показати, що ген з Т-ДНК Адгобасієгіит, що кодує октопін-синтазу, є особливо активним в епідермісі кінчика кореня та що ген ТВ2' є специфічним щодо кореня в інтактній рослині та стимулюється пораненням тканини листа, що є особливо бажаною комбінацією характеристик для застосування з інсектицидним або ларвіцидним геном (див. ЕМВО 3). 8(2):343-350). Ген ТК! злитий з прі (неоміцинфосфотрансфераза І!І), продемонстрував аналогічні характеристики. Додаткові переважні для кореня промотори включають промотор гена МЕМОЮ-СЕРЗ (Кизвівг, евї аї!., (1995)
Ріапі Мої. Вісі. 29(4):759-772) та промотор гоІВ (Сарапа, сеї аї., (1994) Ріапі Мої. Віої. 25(4):681- 691. Див. також патенти США МоМо 5 837 876; 5 750 386; 5 633 363; 5 459 252; 5 401 836; 5 110 732 та 5 023 179. Переважні для коренів регуляторні послідовності Агарідорвів ІПайійапа розкриті (510) в 0520130117883.
"Переважні для насінини" промотори включають як промотори, "специфічні щодо насінини" (промотори, які є активними під час розвитку насінини, такі як промотори запасних білків насінини), так і промотори "проростання насінини" (промотори, які є активними під час проростання насінини). Див. Тпотрзоп, еї аї., (1989) ВіоЕззауб5 10:108, включений в даний документ за допомогою посилання. Такі промотори, переважні для насінини, включають без обмеження Сіті! (індукований цитокініном транскрипт); сС219В1 (19 кДа зеїн маїсу) та тіїр5 (міо- інозитол-1-фосфатсинтаза); (див. патент США Мо 6225529, включений у даний документ за допомогою посилання). Гама-зеїн та (6-1 являють собою специфічні щодо ендосперму промотори. У випадку дводольних рослин промотори, специфічні щодо насінини, включають без обмеження промотор гена інгібітора трипсину Кунітца З (КТіЗ) ФоїтиКи апа сСоїідбего, (1989) Ріапі
Се 1:1079-1093), В-фазеоліну бобів, напіну В-конгліциніну, гліциніну 1, лектину «сої, круциферину тощо. В однодольних рослин промотори, специфічні щодо насіння, включають без обмеження промотори генів 15 кДа зеїну, 22 кДа зеїну, 27 кДа зеїну, д-зеїну, жаху, 5пгипкеп 1, 5пгипКеп 2, глобуліну 1 маїсу тощо. Див. також включений у даний документ за допомогою посилання документ УМО 2000/12733, де розкриті промотори, активні переважно в насінні, з генів епаї та епа2. У дводольних рослин промотори, специфічні щодо насінини, включають без обмеження промотор гена білків насіннєвої шкірки з Агарідорзі5, рРВАМ; а також промотори генів раннього розвитку насіння з Агарідорвзі5, раб, рб3 та рбЗіг (патенти США МоМео 7294760 та 7847153). Промотор, що характеризується "переважною" експресією у конкретній тканині, експресується в такій тканині більшою мірою, ніж щонайменше у одній іншій рослинній тканині.
Для деяких переважних для тканини промоторів показана експресія майже виключно у конкретній тканині.
Якщо потрібен низький рівень експресії, будуть застосовуватися слабкі промотори. Зазвичай використовуваний у даному документі термін "слабкий промотор" стосується промотора, який керує експресією кодувальної послідовності на низькому рівні. Під низьким рівнем експресії мають на увазі рівні від приблизно 1/1000 транскриптів до приблизно 1/100000 транскриптів, до приблизно 1/500000 транскриптів. Альтернативно зрозуміло, що термін "слабкі промотори" також охоплює промотори, які керують експресією тільки в деяких клітинах та не керують в інших, що призводить до загального низького рівня експресії. Якщо промотор керує експресією з
Зо неприйнятно високими рівнями, частини промоторної послідовності можна видаляти або модифікувати для зниження рівнів експресії.
Такі слабкі конститутивні промотори включають, наприклад, коровий промотор промотора
Кзуп7 (МО 1999/43838 та патент США Мо 6072050), коровий промотор 355 Самм тощо. Інші конститутивні промотори включають, наприклад, розкриті в патентах США МоМо 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142 та 6177611, включених у даний документ за допомогою посилання.
Наведений вище перелік промоторів не призначений для обмеження. У варіантах здійснення можна застосовувати будь-який придатний промотор.
Здебільшого касета експресії буде містити ген селектованого маркера для відбору трансформованих клітин. Гени селектованих маркерів застосовують для відбору трансформованих клітин або тканин. Гени маркерів включають гени, що кодують стійкість до антибіотиків, такі як гени, що кодують неоміцинфосфотрансферазу | (МЕО) та гігроміцинфосфотрансферазу (НРТ), а також гени, що забезпечують стійкість до гербіцидних сполук, таких як глуфосинат амонію, бромоксиніл, імідазолінони та 2,4-дихлорфеноксиацетат (2,4-0)0. Додаткові приклади генів придатних селектованих маркерів включають без обмеження гени, що кодують стійкість до хлорамфеніколу (Негтега ЕзігеїПІа, єї аі!., (1983) ЕМВО 3. 2:987-992); метотрексату (Негтега ЕзігеїПа, еї а!ї., (1983) Маїшге 303:209-213 та Меїйег, еї аї., (1991) Ріапі Мо).
Віо!. 16:807-820); стрептоміцину (опев, евї а!., (1987) Мої. Сеп. Сепеї. 210:86-91); спектиноміцину (Вгеїадпе-Задпаго, еї аї., (1996) Тгтапздепіс Вез. 5:131-137); блеоміцину (НіїЇе, єї аї., (1990) Ріапі
Мої. Віої. 7:171-176); сульфонаміду (Спиегіпеац, єї аї., (1990) Ріапі Мої. ВіоЇ. 15:127-136); бромоксинілу (ЗіаїКег, єї а!., (1988) 5сіепсе 242:419-423); гліфосату (Зпаму, вї аї!., (1986) Зсієпсе 233:478-481 та патентні заявки США із порядковими номерами 10/004357 та 10/427692); фосфінотрицину (ОевВіоскК, еї а!., (1987) ЕМВО 3. 6:2513-2518). Див., в цілому, Матапіоп, (1992)
Ситт. Оріп. Віотесн. 3:506-511; СпіівіорНегзоп, еї аї., (1992) Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА 89:6314- 6318; Мао, єї аї., (1992) Сеї! 71:63-72; Вегпікоїй, (1992) Мої. Містобріоі!. 6:2419-2422; Ватіву, вї аї., (1980) в Те Орегоп, рр. 177-220; Ни, єї а!., (1987) Сеї!! 48:555-566; Вгом/п, єї а!., (1987) Сеї! 49:603-612; Рідає, єї а!., (1988) СеїІ 52:713-722; Юеизспіє, єї а!., (1989) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. ОБА 86:5400-5404; Ецегві, єї а!., (1989) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. ОБА 86:2549-2553; ОеизсенНіе, єї аї., (1990)
Зсіепсе 248:480-483; Соз5еп, (1993) РИ.О. Тнезів, ОпімегеПйу ої НеїдеЇбегао; Веїіпезв, евї аї., (1993) 60 Ргос. Май. Асай. осі. ОБА 90:1917-1921; Іаром, еї аї!., (1990) Мої. СеїІ. ВіоІ. 10:3343-3356;
7атьгенці, еї аї!., (1992) Ргос. Май). Асад. бсі. ОБА 89:3952-3956; Ваїіт, єї аї., (1991) Ргос. Маї!).
Асад. 5сі. ОБА 88:5072-5076; Мурогекі, єї аї., (1991) Мисівїс Асіа5 Вез. 19:4647-4653; НіІПепапа-
Муіввтап, (1989) Торісв Мої. Бігис. Віої. 10:143-162; Оєдепко!б, еї аї!., (1991) Апіітістоб. Адепів
Спетоїнег. 35:1591-1595; КіІвєїпзесНпіаії, єї аї., (1988) Віоспетівігу 27:1094-1104; Вопіп, (1993)
Р.О. ТНевзів, Опімегейу ої НеїдеІрега; Соззеп, еї аї!., (1992) Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 89:5547- 5551; Оїїма, єї аї., (1992) Апіітісгтоб. Адепіє Спетоїйег. 36:913-919; Ніаука, еї аї., (1985)
Напароок ої Ехрегітепіа! Ріпагтасоїоду, Мої. 78 (Зрігіпдег/-Мепаяд, Венпіп) та сіїЇЇ, еї аї., (1988)
Маїшцге 334:721-724. Такі розкриття включені в даний документ за допомогою посилання.
Вищенаведений перелік генів селектованих маркерів не призначений для обмеження. Будь- який ген селектованого маркера можна застосовувати у варіантах здійснення.
Трансформація рослин
Способи згідно з варіантами здійснення включають введення поліпептиду або полінуклеотиду в рослину. Застосовуване у даному документі "введення" означає включення в рослину полінуклеотиду або поліпептиду таким чином, що послідовність потрапляє всередину клітини рослини. Способи згідно з варіантами здійснення не залежать від конкретного способу введення полінуклеотиду або поліпептиду в рослину, необхідно тільки, щоб полінуклеотид або поліпептиди потрапляли всередину щонайменше однієї клітини рослини. Із рівня техніки відомі способи введення полінуклеотиду або поліпептидів у рослини, включаючи без обмежень способи стабільної трансформації, способи тимчасової трансформації та способи трансформації, опосередкованої вірусами.
Застосовувана в даному документі "стабільна трансформація" означає, що нуклеотидна конструкція, введена в рослину, інтегрується в геном рослини та може успадковуватися її потомством. Застосовувана у даному документі "тимчасова трансформація" означає, що полінуклеотид вводиться у рослину та не інтегрується у геном рослини або в рослину вводиться поліпептид. Використовувана у даному документі "рослина" відноситься до цілих рослин, органів рослини (наприклад, листків, стебел, коренів і т. д.), насіння, рослинних клітин, частин рослини для вегетативного розмноження, зародків та їх потомства. Рослинні клітини можуть бути диференційованими або недиференційованими (наприклад, клітинами калюсу, клітинами суспензійних культур, протопластами, клітинами листків, клітинами коренів, клітинами флоеми
Зо та пилком).
Протоколи трансформації, а також протоколи для введення нуклеотидних послідовностей у рослини можна змінювати залежно від типу рослини або рослинної клітини, тобто однодольної або дводольної рослини, що призначена для трансформації. Придатні способи введення нуклеотидних послідовностей у рослинні клітини та подальшої вставки в геном рослини включають мікроін'єкцію (Стозвуау, еї аї., (1986) Віоїеснпідцез 4:320-334), електропорацію (Відов, еї а!., (1986) Ргос. Маї!. Асай. осі. ОБА 83:5602-5606), трансформацію, опосередковану
Адгобасієгпйт (патенти США МеМе 5563055 та 5981840), пряме перенесення генів (Раз2Кому5кКі, еї аі., (1984) ЕМВО 3. 3:2717-2722) та балістичне прискорення частинок (див., наприклад, патенти США МоМо 4945050; 5879918; 5886244 та 5932782; Тотев, єї аї!., (1995) в Ріапі СеїЇ,
Тіввиє, апа Огдап Сийште: Еппдатепіа! Меїйпод», ей. Сатброгу апа Рніїїїр5, (Зргіпдег-Мепад,
Вепіп) та МесСаре, еї аї., (1988) Віоїесппоіоду 6:923-926) та трансформацію гена І есі (УМО 00/28058). Стосовно трансформації картоплі див. Ги, єї а!., (1998) Ріапі МоїІесшіаг Віоіоду 37:829- 838 та Спопо, єї аї., (2000) Тгтапздепіс Везеагсй 9:71-78. Додаткові процедури трансформації можна знайти у М/еїзвіпдег, еї аї., (1988) Апп. Нему. Сепеї. 22:421-477; БЗапіога, еї аї., (1987)
Рапісшаїйе 5сієпсе апа ТесппоЇоду 5:27-37 (цибуля); Спгізіои, еї а!., (1988) Ріапі Рнпузіо!. 87:671- 674 (соя); МеСаре, єї аї., (1988) Віо/Гесппоіоду 6:923-926 (соя); Ріпег апа МеМиїйеп, (1991) Іп
Міо Сеї! Оєм. Вісі. 27Р:175-182 (соя); зіпдуп, еї аї., (1998) Тнеог. Аррі. Сепеї. 96:319-324 (соя);
Баца, єї а!., (1990) Віотесппоїоаду 8:736-740 (рис); Ківєїп, єї а!., (1988) Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 85:4305-4309 (маїс); Кієїп, еї аї., (1988) Віоїесппоіоду 6:559-563 (маїс); патенти США МеМо 5240855; 5322783 та 5324646; КіІеєїп, єї а!., (1988) Ріапі Рпувіої. 91:440-444 (маїс); Еготт, еї аї., (1990) Віоїесппоіоду 8:833-839 (маїс); Нооукааз-Мап біодієгеп, еї аї., (1984) Маштгтє (І опаоп) 311:763-764; патент США Мо 5736369 (злаки); Вуїебіег, єї а!., (1987) Ргос. Май). Асад. осі. ОБА 84:5345-5349 (І ійасеає); Оє М/еї, еї аї., (1985) іп Тне Ехрегітепіа! Мапіршаїйоп ої Омшіе Тівз5иев, ед. Спартанп, єї аї., (Гопдтап, Мем МоїКк), рр. 197-209 (пилок); Каерріеєг, єї аї., (1990) Ріапі СеїЇ
Верогів 9:415-418 апа Каерріеєг, єї а!., (1992) Тниеєог. Аррі. Сепеї. 84:560-566 (трансформація, опосередкована віскерами); О'Наїчіп, єї а!., (1992) Ріапі СеїІ 4:1495-1505 (електропорація); | і, еї а!., (1993) Ріапі Сеї! Веротгів 12:250-255 та СНгівіои апа Рога, (1995) Аппаї5 ої Воїапу 75:407-413 (рис); О5іода, еї аї., (1996) Майшге Віоїесппоіоду 14:745-750 (трансформація маїсу за допомогою
Адгорасієтгійт їштегасіеєпв); усі з яких включені в даний документ за допомогою посилання. 60 У конкретних варіантах здійснення послідовності згідно з варіантами здійснення можна вводити в рослину із застосуванням ряду способів тимчасової трансформації. Такі способи тимчасової трансформації включають без обмеження введення полінуклеотиду Ше РІЇР-96 або його варіантів та фрагментів безпосередньо в рослину або введення транскрипту поліпептиду
РИР-96б в рослину. Такі способи включають, наприклад, мікроін'єкцію або бомбардування частинками. Див., наприклад, Сто55улау, єї а!., (1986) Мої Сеп. Сепеї. 202:179-185; Мотига, еї аї., (1986) Ріапі 5сі. 44:53-58; Неріег, вї а!., (1994) Ргос. Маї). Асад. бсі. 91:2176-2180 та Низ, єї аї., (1994) Тне Чоцта!Ї ої СеїЇ Зсієпсе 107:775-784, усі з яких включені в даний документ за допомогою посилання. Альтернативно рослину можна тимчасово трансформувати за допомогою полінуклеотиду для поліпептиду РІР-96 із застосуванням методик, відомих з рівня техніки. Такі методики включають застосування вірусної векторної системи та осадження полінуклеотиду в такий спосіб, що виключає подальше вивільнення ДНК. Таким чином, може відбуватися транскрипція ДНК, зв'язаної з частинками, але частота, з якою вона вивільняється для інтеграції в геном, значною мірою знижена. Такі способи включають застосування частинок, покритих поліетиленіміном (РЕЇ; Зідта, кат. Мо РЗ3143).
Із рівня техніки відомі способи націленої вставки полінуклеотиду в специфічне місце розташування в геномі рослини. В одному варіанті здійснення вставку полінуклеотиду в необхідне місце розташування в геномі здійснюють із застосуванням системи сайт-специфічної рекомбінації. Див., наприклад, УУО 1999/25821, УМО 1999/25854, МО 1999/25840, УМО 1999/25855 та МО 1999/25853, усі з яких включені в даний документ за допомогою посилання. Коротко, полінуклеотид згідно з варіантами здійснення може міститися в касеті для перенесення, фланкованій двома неідентичними сайтами рекомбінації. Касету для перенесення вводять у рослину, що має у своєму геномі стабільно вбудований цільовий сайт, фланкований двома неідентичними сайтами рекомбінації, які відповідають сайтам касети для перенесення.
Забезпечують відповідну рекомбіназу, та касета для перенесення інтегрується в цільовий сайт.
Полінуклеотид, що становить інтерес, таким чином, інтегрується у визначене хромосомне положення в геномі рослини.
Вектори для трансформації рослин можуть складатися з одного або декількох ДНК-векторів, необхідних для досягнення трансформації рослини. Наприклад, загальноприйнятою практикою з рівня техніки є застосування векторів для трансформації рослин, які складаються з більш ніж
Зо одного суміжного сегмента ДНК. У рівні техніки ці вектори зазвичай називають "бінарними векторами". Бінарні вектори, а також вектори з плазмідами-помічниками найчастіше застосовуються під час трансформації, опосередкованої Адгобасіегішт, при цьому розмір та складність сегментів ДНК, необхідних для досягнення ефективної трансформації, є дуже великими, та переважним є розділення функцій на окремих молекулах ДНК. Бінарні вектори, як правило, містять плазмідний вектор, який містить послідовності, що діють у цис-положенні, бажані для переносу Т-ДНК (як, наприклад, лівої границі та правої границі), селектовний маркер, який розробляють таким чином, що він може експресуватися в рослинній клітині, та "ген, що представляє інтерес" (ген, розроблений таким чином, що він може експресуватися в рослинній клітині, з якої бажано одержати трансгенні рослини). Також у цьому плазмідному векторі присутні послідовності, необхідні для реплікації в бактеріях. Послідовності, що діють у цис-положенні розміщені так, щоб забезпечити можливість ефективного переносу в рослинні клітини та експресії в них. Наприклад, ген селектованого маркера та пестицидного гена розміщені між лівою та правою межами. Часто другий плазмідний вектор містить фактори, що діють у транс-положенні, які опосередковують перенос Т-ДНК з Адгобрасіегішт в рослинні клітини. Ця плазміда часто містить функції вірулентності (гени Міг), що забезпечує можливість зараження рослинних клітин Адгобасіегішт та перенесення ДНК шляхом розщеплення у межових послідовностях та перенесення ДНК, опосередкованого міг, як зрозуміло з рівня техніки (Нейеп5 апа Миїйпеайх, (2000) Тгтепіав іп Ріапі бсіепсе 5:446-451). Декілька типів штамів
Адгорасієгішт (наприклад, І ВА4404, (з3М3101, ЕНАТО1, ЕНА1ТО5 тощо) можна застосовувати для трансформації рослин. Другий плазмідний вектор не є необхідним для трансформації рослин іншими способами, такими як бомбардування мікрочастинками, мікроїін'єкція, електропорація, за допомогою поліетиленгліколю тощо.
Загалом, способи трансформації рослин включають перенесення гетерологічної ДНК у цільові рослинні клітини (наприклад, незрілі або зрілі зародки, суспензійні культури, недиференційований калюс, протопласти тощо) з наступним застосуванням відповідного відбору з максимальним пороговим значенням (залежно від гена селектованого маркера) для виділення трансформованих рослинних клітин із групи нетрансформованої клітинної маси.
Після інтеграції гетерологічної чужорідної ДНК в рослинні клітини потім застосовують відповідний відбір з максимальним пороговим значенням у середовищі для знищення бо нетрансформованих клітин та розділення та розмноження ймовірно трансформованих клітин,
які переживають цю обробку з відбором, за допомогою регулярного перенесення на свіже середовище. За допомогою тривалого пасирування та перевірки за допомогою відповідного відбору ідентифікують та розмножують клітини, які є трансформованими плазмідним вектором.
Потім можна застосовувати молекулярні та біохімічні способи для підтвердження наявності інтегрованого гетерологічного гена, що становить інтерес, у геномі трансгенної рослини.
Експлантати здебільшого переносять на свіжу порцію такого ж середовища та культивують звичайним способом. Потім трансформовані клітини диференціюються у пагони після розміщення у середовищі для регенерації, доповненому засобом відбору з максимальним пороговим значенням. Пагони потім переносять на селективне середовище для вирощування рослин з одержанням укорінених пагонів або саджанців. Потім трансгенний саджанець вирощують до зрілої рослини та одержують фертильне насіння (наприклад, Ніевї, еї аї., (1994)
Ріапі Уоштта! 6:271-282; Ізпіда, еї аїІ., (1996) Маїште Віоїесппоіоду 14:745-750). Експлантати здебільшого переносять на свіжу порцію такого ж середовища та культивують звичайним способом. Загальний опис методик та способів для одержання трансгенних рослин наведений у
Аугез апа Раїк, (1994) Стйса! Вемієм5 іп Ріапі бсіепсе 13:219-239 та Воттіпепі апа Чданшнаг, (1997) Маудіса 42:107-120. Оскільки трансформований матеріал містить багато клітин, як трансформовані, так і нетрансформовані клітини наявні в будь-якій частині підданого впливу цільового калюсу, або тканини, або групи клітин. Можливість знищувати нетрансформовані клітини та забезпечувати розмноження трансформованих клітин викликає у результаті трансформовані рослинні культури. Зазвичай можливість видалення нетрансформованих клітин є обмежувальним фактором для швидкого виділення трансформованих рослинних клітин та успішного вирощування трансгенних рослин.
З клітин, які були трансформовані, можна вирощувати рослини згідно з традиційними способами. Див., наприклад, МеСогтіскК, єї аї., (1986) Ріапі Сеї! Верогів 5:81-84. Ці рослини потім можна вирощувати та піддавати запиленню або із застосуванням такого ж трансформованого штаму, або іншого штаму та ідентифікувати одержаний гібрид із конститутивною або індукованою експресією необхідної фенотипічної характеристики. Можна виростити два або більше поколінь для того, щоб переконатися у тому, що експресія необхідної фенотипічної характеристики стабільно підтримується та успадковується, а потім зібрати
Зо насіння, щоб переконатися у тому, що експресія необхідної фенотипічної характеристики була досягнута.
Нуклеотидні послідовності згідно з варіантами здійснення можна забезпечити у рослині за допомогою контакту рослини з вірусом або вірусними нуклеїновими кислотами. Зазвичай такі способи передбачають вбудовування нуклеотидної конструкції, що становить інтерес, у вірусну молекулу ДНК або РНК. Зрозуміло, що рекомбінантні білки згідно з варіантами здійснення можна спочатку синтезувати як частину вірусного поліпротеїну, який пізніше можна піддавати процесингу шляхом протеолізу іп мімо або іп міго з одержанням необхідного поліпептиду РІЇР- 96. Також зрозуміло, що такий вірусний поліпротеїн, що містить щонайменше частину амінокислотної послідовності РІР-96 згідно з варіантами здійснення, може мати необхідну пестицидну активність. Такі вірусні поліпротеїни та нуклеотидні послідовності, які їх кодують, охоплені варіантами здійснення. Способи забезпечення рослин нуклеотидними конструкціями та одержання білків, що кодуються, у рослинах, які включають молекули вірусної ДНК або РНК, відомі з рівня техніки. Див., наприклад, патенти США МоМо 5889191; 5889190; 5866785; 5589367 та 5316931; включені у даний документ за допомогою посилання.
Способи трансформації хлоропластів відомі з рівня техніки. Див., наприклад, Змаб, еї аї., (1990) Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 87:8526-8530; 5маб апа Маїїда, (1993) Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 90:913-917; мав апа Маїїда, (1993) ЕМВО .. 12:601-606. Спосіб базується на доставці генною гарматою ДНК, яка містить селектований маркер, та націлюванні ДНК на геном пластид за допомогою гомологічної рекомбінації. Крім того, трансформацію пластид можна здійснювати трансактивацією мовчазного трансгена, що розташовується в пластидах, шляхом здійснюваної переважно в певній тканині експресії РНК-полімерази, що кодується ядерним геномом та функціонує в пластиді. Про таку систему повідомляли у МеВгіде, еї аї!., (1994) Ргос. Маїй!. Асаа. зЗсі. ОБА 91:7301-7305.
Варіанти здійснення додатково стосуються матеріалу для розмноження трансформованої рослини згідно з варіантами здійснення, зокрема без обмеження насіння, бульб, бульбоцибулин, цибулин, листів та живців коренів та пагонів.
Варіанти здійснення можна застосовувати для трансформації будь-яких видів рослин, включаючи без обмеження однодольні та дводольні. Приклади рослин, що становлять інтерес, включають без обмеження кукурудзу (7еа таубх), Вгазвіса 5р. (наприклад, В. паривх, В. гара, В. 60 |шпсеа), зокрема види Вгазвзіса, придатні як джерела олії з насіння рослин, люцерну (Медісадо заїїма), рис (Огула заїїма), жито (Зесаїе сегеавє), сорго (Зогупит бБісоїог, Зогапит миїЇдаге), просо (наприклад, африканське просо (Реппізеїшт діайисит), просо культурне (Рапісит тіасеит), мишій італійський (зеїагіа йаїїса), просо пальчасте (ЕІеизіпе согасапа)), соняшник (Неїїапіпи5 аппии5з), сафлор (Сагіпатиз ііпсіогіиз), пшеницю (Ттйісит аевіїмит), сою (СіІусіпе тах), тютюн (Місойапа їарасит), картоплю (Зоіапит їибегозит), різновиди арахісу (Агаспіз Ппуродаєа), бавовник (Соззурішт Багбадепзе, Со55урішт Піг5шшт), солодку картоплю (Іротоєа бБаїайшв), маніок (Мапіпйої езсціепіа), кавове дерево (СоПеа 5рр.), кокосову пальму (Сосо5 писігега), ананас (Апапа5 сотозив), цитрусові дерева (Сіїги5 5рр.), шоколадне дерево (ТПеобгота сасао), чайний кущ (Сатеїа 5іпепві5), банан (Миза 5рр.), авокадо (Регхеа атегісапа), інжир (Ріси5 савзіса), гуаву (Рзідіит диаізама), манго (Мапоіїега іпаіса), маслину (Оїєа еигораєа), папаю (Сагіса рарауа), кеш'ю (Апасагаіїшт оссідепіаіє), макадамію (Масадатіа іпіедгігїйа), мигдаль (Ргипив5 атудаа|йв5), різновиди цукрового буряку (Веїа мцідагіє), цукрову тростину (ЗБасспагит 5рр.), різновиди вівса, ячмінь, овочі, декоративні рослини та хвойні дерева.
Овочі включають томати (Гусорегвісоп езсцепійт), латук (наприклад, іІасіиса бзаїїма), квасолю звичайну (Рпазеоіив5 миїЇдагів), лімську квасолю (Ріазеоіив5 Ітепвів), різновиди гороху (Гайугиз врр.) та представників роду Сиситів, таких як огірок (С. заїїми5), канталупа (0. сапіаїйнрепвзізї) та диня омускусна (С. тео). Декоративні рослини включають азалію (Впододепаюп 5рр.), гортензію (Масгорнуїїа Нуагапаоєа), гібіскус (Нірізсив гозазапепвів), троянди (Коза 5рр.), тюльпани (Тиїїра 5рр.), нарциси (Магсіззив 5рр.), петунії (Реїшпіа пубгіда), гвоздику (Оіапіпих сагуорпуїПи5), пуансетію (Еирпогбіа риїспегіта) та хризантему. Хвойні дерева, які можна застосовувати під час практичного застосування варіантів здійснення, включають, наприклад, види сосни, такі як сосна ладанна (Ріпив іаєда), сосна Еліота (Ріпизх еїоїй), сосна жовта (Ріпи5 ропаегоза), сосна широкохвойна (Ріпиє сопіопйа) та сосна промениста (Ріпивб гадіаіа); псевдотсугу Мензіса -(Реоецйдоївида тепгіевії); тсугу канадську (Т5ида сападепвів); ялину сизу (Рісєа діайса); секвою (Зедиоіа зетрегмігеп5); види ялиці, такі як ялиця миловидна (Арієзх атабіїїз) та ялиця бальзамічна (Абієз раізатєа), та кедри, такі як туя гігантська (Тнціа ріїссаїа) та кипарисовик нутканський (Спатаєсурагі5 пооїКаїепвів5). Рослини згідно з варіантами здійснення включають культурні рослини (наприклад, кукурудзу, люцерну, соняшник, Вгаввіса, сою, бавовник, сафлор, арахіс, сорго, пшеницю, просо, тютюн тощо), такі як рослини кукурудзи 0) та сої.
Різновиди газонної трави включають без обмеження: тонконіг однорічний (Роа аппиа); райграс однорічний (І от тийШогит); тонконіг стиснутий (Роа сотргевзза); кострицю червону (Еевішса гибга); мітлицю тонку (Ааговіїв їепиців); мітлицю болотну (Адговіїв раїЇивігв); житняк пустельний (Адгоругоп девепогит); житняк гребінчастий (Адгоругоп сгівіайт); кострицю довголисту (Резіиса Іопдіїоіа); товконіг лучний (Роа ргаїєпвів); грястицю збірну (Оасіуіїв5 діотегаїа); пажитницю багаторічну (І оїїшт регеппе); кострицю червону (Резійса гибга); мітлицю білу (Адговії5 аіІра); товконіг звичайний (Роа Іііміаіїїз); кострицю овечу (Ревійса оміпа); стоколос безостий (Вготизв іпептів); кострицю очеретяну (Резійса агпипаіпасеа); тимофіївку лучну (Рнієит ргаїєпзе); мітлицю собачу (Аагозіїз сапіпа); покісницю розставлену (РиссіпеїПа аівїапв); пирій
Сміта (Адгоругоп 5тіїпії); свинорий (Суподоп 5рр.); траву св. Августина (5ієпоїарпгит весипаайшт); зойсію (7оузіа зрр.); гречку помітну (Разраїшт поїаїшт); аксонопус афинський (Ахопорих айіпів); стоніг (Егетоспіса орпішгоіде5); кийкую (Реппізейшт сіапдезіпит); паспалум піхвовий (Разраїшт мадіпаїшт); москітну траву (Вошеїоца агасіїїв); бізонову траву (Висніоє дасу!оїа5); граму (Вошеїоца сипірепашціа).
Рослини, що становлять інтерес, включають зернові рослини, які дають насіння, що становить інтерес, олійні рослини та бобові рослини. Насіння, яке становить інтерес, включає насіння зернових культур, таких як кукурудза, пшениця, ячмінь, рис, сорго, жито, просо тощо.
Олійні рослини включають бавовник, сою, сафлор, соняшник, Вгаззіса, маїс, люцерну, пальму, кокосову пальму, льон, рицину, оливу тощо. Бобові рослини включають різновиди бобів та різновиди гороху. Різновиди бобів включають гуар, ріжкове дерево, гуньбу, сою, різновиди квасолі звичайної, вігну китайську, золотисту квасолю, лімську квасолю, стручкову квасолю, різновиди сочевиці, турецький горох тощо.
Оцінка трансформації рослин
Після введення гетерологічної чужорідної ДНК в рослинні клітини трансформацію або інтеграцію гетерологічного гена в геном рослини підтверджують за допомогою різних способів, таких як аналіз нуклеїнових кислот, білків та метаболітів, пов'язаних з інтегрованим геном.
ПЛР-аналіз являє собою швидкий спосіб скринінгу трансформованих клітин, тканини або пагонів щодо наявності вбудованого гена на ранній стадії перед висаджуванням у грунт (бБатргоокК апа ВиззеїЇ, (2001) Моїесшаг Сіопіпд: А Іарогаїгу Мапиа). Соїй бргіпд Нагтбог 60 І арогайїогу Ргезз, Соїд бргіпд Нагрог, МУ). ПЛР проводять із застосуванням олігонуклеотидних праймерів, специфічних до гена, що становить інтерес, або до вихідних послідовностей вектора на основі Адгобасіегійт тощо.
Трансформацію рослин можна підтвердити за допомогою Саузерн-блот аналізу геномної
ДНК (ЗатргооК апа КизхзеїЇ, (2001), вище). Загалом, загальну ДНК екстрагують (із трансформанта, розрізують відповідними ферментами рестрикції, фракціонують в агарозному гелі та переносять на нітроцелюлозну або найлонову мембрану. Потім мембрану або "блот" аналізують за допомогою зонда, наприклад, цільового фрагмента ДНК з радіоактивною міткою
З2Р для підтвердження інтеграції введеного гена у геном рослини відповідно до стандартних методик (затьгоок апа Киззеїї, (2001), вище).
Під час нозерн-блот аналізу РНК виділяють зі специфічних тканин трансформанта, фракціонують в агарозному гелі, що містить формальдегід, та переносять на найлоновий фільтр відповідно до стандартних методик, які звичайно застосовують у рівні техніки (ЗатргоокК апа Ривзеїї, (2001) вище). Експресію РНК, що кодується пестицидним геном, потім тестують за допомогою гібридизації фільтра з радіоактивним зондом, одержаним з пестицидного гена, за допомогою способів, відомих з рівня техніки (ЗатьгоокК апа Киззеїї, (2001) вище).
Вестерн-блот, біохімічні аналізи тощо можна проводити щодо трансгенних рослин для підтвердження наявності білка, що кодується пестицидним геном, за допомогою стандартних процедур (затрьгоокК апа КиззеїЇ, 2001, вище) із застосуванням антитіл, які зв'язуються з одним або декількома епітопами, що наявні на поліпептиді РИР-96.
Пакетування ознак у трансгенній рослині
Трансгенні рослини можуть містити пакет з одного або декількох інсектицидних полінуклеотидів, розкритих у даному документі, з одним або декількома додатковими полінуклеотидами, що спричиняють продукування або супресію декількох поліпептидних послідовностей. Трансгенні рослини, що містять пакети з послідовностей полінуклеотидів, можна одержати або за допомогою традиційних способів схрещування, або за допомогою способів генної інженерії, або із застосуванням і того, і іншого. Ці способи включають без обмеження схрещування індивідуальних ліній, при цьому кожна містить полінуклеотид, що становить інтерес, трансформацію трансгенної рослини, що містить ген, розкритий у даному документі, із додатковим геном та котрансформацію генами однієї рослинної клітини.
Зо Застосовуваний у даному документі термін "пакетований" включає стан, при якому декілька ознак присутні у одній рослині (тобто обидві ознаки введені в ядерний геном, одна ознака, введена у ядерний геном та одна ознака, введена у геном пластиди, або обидві ознаки введені у геном пластиди). В одному необмежувальному прикладі "пакетовані ознаки" включають молекулярний пакет, де послідовності фізично прилягають одна до одної. Застосовувана у даному документі "ознака" стосується фенотипу, зумовленого конкретною послідовністю або групами послідовностей. Котрансформацію генів можна проводити із застосуванням одиночних векторів для трансформації, що містять декілька генів, або декількох векторів, які несуть окремі гени. Якщо послідовності пакетовані за допомогою генетичної трансформації рослин, то полінуклеотидні послідовності, що становлять інтерес, можна комбінувати в будь-який час та в будь-якому порядку. Ознаки у протоколі котрансформації можна вводити одночасно з полінуклеотидами, що становлять інтерес, представленими будь-якою комбінацією касет для трансформації. Наприклад, якщо будуть вводитися дві послідовності, то ці дві послідовності можуть міститися в окремих касетах для трансформації (транс) або міститися в одній касеті для трансформації (цис). Експресія цих послідовностей може керуватися тим же самим промотором або різними промоторами. У певних випадках може бути необхідним введення касети для трансформації, яка буде пригнічувати експресію полінуклеотиду, що становить інтерес. Її можна комбінувати з будь-якою комбінацією інших касет для супресії або касет для надекспресії для одержання необхідної комбінації ознак у рослині. Крім того, вважається, що полінуклеотидні послідовності можна пакетувати в необхідному місці розташування в геномі із застосуванням системи для сайт-специфічної рекомбінації. Див., наприклад, УМО 1999/25821, МО 1999/25854,
УМО 1999/25840, УМО 1999/25855 та УМО 1999/25853, усі з яких включені в даний документ за допомогою посилання.
У деяких варіантах здійснення полінуклеотиди, які кодують поліпептид РІЇР-96, розкриті в даному документі, окремо або пакетовані з однією або декількома ознаками стійкості до комах, можна пакетувати з однією або декількома додатковими введеними ознаками, що впливають на витрати (наприклад, стійкість до гербіциду, стійкість до грибів, стійкість до вірусів, переносимість стресів, стійкість до захворювань, чоловіча стерильність, міцність стебла тощо), або ознаками, що впливають на вихід (наприклад, підвищена врожайність, модифіковані різновиди крохмалю, поліпшений профіль масел, збалансовані амінокислоти, високий вміст бо лізину або метіоніну, підвищена перетравність, поліпшена якість волокон, стійкість до посухи тощо). Таким чином, варіанти здійснення полінуклеотиду можна застосовувати для забезпечення повного комплексу агротехнічних ознак, що забезпечують поліпшену якість сільськогосподарської культури, з можливістю гнучкого й економічно ефективного контролю будь-якої кількості сільськогосподарських шкідників.
Трансгени, придатні для пакетування, без обмеження включають наступні. 1. Трансгени, які забезпечують стійкість до комах або захворювань та які кодують наступне. (А) Гени стійкості рослини до захворювань. Захисні механізми рослин зазвичай активуються за допомогою специфічної взаємодії між продуктом гена стійкості до захворювань (К) у рослині та продуктом відповідного гена авірулентності (Ам) в патогені. Різновид рослин можна трансформувати за допомогою клонованого гена стійкості для розробки рослин, які є стійкими до специфічних штамів патогену. Див., наприклад, дЧопе5, еї аїЇ., (1994) Зсіепсе 266:789 (клонування гена СІ-9 томата, що забезпечує стійкість до СІіадозрогішт ТиЇмит); Магііп, еї аї., (1993) Зсіеєпсе 262:1432 (ген Ріо томата, що забезпечує стійкість до Рзенидотопазх з5угіпдає ру. томата, кодує протеїнкіназу); Міпагіпо5, еї аї., (1994) Сеїї 78:1089 (ген К5Р2 Агарідорзів, що забезпечує стійкість до Р5зеидотопа5 зугіпдає), Месромеїї апа УмМопйепаеп, (2003) Ттепав
Віотесппої. 21(4):178-83 та Тоуода, еї аї., (2002) Тгапздепіс Кев. 11(6):567-82. Рослина, стійка до захворювання, являє собою рослину, яка є більш стійкою до патогену в порівнянні з рослиною дикого типу. (В) Гени, що кодують білок Васіїйи5 ІпПигіпдіеп5і5, його похідне або синтетичний поліпептид, змодельований на його основі. Див., наприклад, публікацію Сеізег, еї аї., (1986) Сепе 48:109, в якій розкривають клонування та нуклеотидну послідовність гена дельта-ендотоксину ВІ. Крім того, молекули ДНК, що кодують гени дельта-ендотоксину, можна придбати в Американській колекції типових культур (Роквілл, Меріленд), наприклад, за номерами доступу АТССе 40098, 67136, 31995 та 31998. Інші необмежувальні приклади трансгенів ВасшШи5 Вигіпдіепбвів, розроблених за допомогою методик генної інженерії, наведені в наступних патентах та заявках на патент та тим самим включені за допомогою посилання для цієї мети: Патенти США з номерами 5188960; 5689052; 5880275; 5986177; 6023013, 6060594, 6063597, 6077824, 6620988, 6642030, 6713259, 6893826, 7105332; 7179965, 7208474; 7227056, 7288643, 7323556, 7329736, 7449552, 7468278, 7510878, 7521235, 7544862, 7605304, 7696412, 7629504, 7705216, 7772465, 7790846, 7858849 та УМО 1991/14778; УМО 1999/31248; УМО 2001/12731; УМО 1999/24581 та УМО 1997/40162.
Гени, що кодують пестицидні білки, можна також пакетувати, зокрема без обмеження: з інсектицидними білками із Рзеидотопа5 5р, такими як РОЕЄЕМЗ174 (Мопаїувіп, (2011) Рі о5
Раїйодепв, 7:1-13), зі штаму СНАО та РІ-5 Рзейдотопав ргоїедеп5 (у минулому Пиогезсепв5) (Ресну-Таїт, (2008) Епмігоптепіа! Містобіоіоду 10:2368-2386: Мо доступу в сепВапк ЄО400157); із
Реєндотопаз Таїмжмапепвів (іш, еї аїЇ., (2010) 9. Адгісє. ЕБРоод СНнет. 58:12343-12349) та з
Рзепдотопазх рзешйдоаїсіїдепез (2Напа, еї аї., (2009) Аппаї5 ої Місторіооду 59:45-50 та |, єї аї., (2007) Ріапі Сеї! Ті5. Огдап Си. 89:159-168); з інсектицидними білками із Рпоїогнараиз зр. і
Хепотаваиз зр. (Ніпспіїне, еї аї!., (2010) Тне Ореп Тохіпоіоду 9дошигпаї 3:101-118 та Могаап, еї аї., (2001) Арріїєд апа Епміг. Місто. 67:2062-2069); патенту США з номером 6048838 та патенту США з номером 6379946; з поліпептидом РіР-1 із публікації патенту США 0520140007292; з поліпептидом АТЯР-ТА та/або АПР-18В із публікації патенту США 0О520140033361; з поліпептидом
РНІ-4 із патентного документу США з порядковим номером 13/839702; з поліпептидом РІР-47 із заявки РОСТ із порядковим номером РСТ/О514/51063, з поліпептидом РІР-72 із заявки РСТ із порядковим номером РСТ/О514/55128 та з б-ендотоксинами, включаючи без обмеження класи генів Сту!, Сту2, Сту3, Сту4, Стуб5, Стуб, Сту7, Стув, Сту9, Сту10, Сту11, Сту12, Сту13, Стуї4,
Сту15, Сту16, Сту17, Сту18, Сту19, Стуго, Сту21, Стуг22, Стуг23, Стуг4, Стуг25, Сту26, Стуг27, Сту 28,
Сту 29, Сту 30, Сту31, СтуЗ2, Сту33, Сту34, СтуЗ35,СтуЗ36, Сту37, Сту38, Сту39, Сту40, Сту41, Студ2,
Сту43, Сту44, Сту45, Сту 46, Сту47, Сту49, СтубО, Стубі, Стуб2, Стуб3, Сту 54, Стуб5, Стубб,
Стуб7, Стуб8, Стуб9, СтубОо, Стуб1, Стуб2, Стуб3, Стуб4, Стуб5, Стубб, Стуб7, Стуб8, Стуб9, Сту70,
Сту/1 ії Сту 72 б-ендотоксинів та гени цитолітичних токсинів Сун і Суї2 В. Шипіпдієпвів.
Представники цих класів інсектицидних білків із В. Іпигіпдіеєпвіз добре відомі фахівцю в даній галузі (див. СтісКтоге, еї аї., "Васіїйе ІПигіпдіепвіз їохіп потепсіайте" (2011) на сайті
Іїезсі.вивзех.ас.ик/поте/МеїЇ СпсКтоге/Ву, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі
Інтернет за допомогою префікса "м/млми").
Приклади б-ендотоксинів також включають без обмеження білки СтуТА із патентів США МоМо 5880275 та 7858849; токсин 0БІС-3З або 0ІС-11 (варіанти з М-кінцевою делецією а-спіралі 1 та/або а-спіралі 2 білків Сту, таких як СтутА) із патентів США МоМо 8304604 та 8304605, Сту1В із публікації заявки на патент США із порядковим номером 10/525318; Сту1!С із патенту США Мо 60 6033874; СтуїЕ із патентів США МоМо 5188960, 6218188; химера СтутА/Е із патентів США МоМо
7070982; 6962705 та 6713063); білок Стуг, такий як білок СтугАБ із патенту США Ме 7064249); білок СтуЗА, у тому числі без обмеження створений за допомогою генної інженерії гібридний інсектицидний білок (еНІР), одержаний шляхом злиття унікальних комбінацій варіабельних ділянок і консервативних блоків щонайменше двох різних білків Сту (публікація заявки на патент
США Мо 2010/0017914); білок Сту4; білок Стуб5; білок Стуб; білки Стув із патентів США МоМо 7329736, 7449552, 7803943, 7476781, 7105332, 7378499 та 7462760; білок СтуЗ9, наприклад представники родин СтуЗА, Сту9В, Сту9С, Сту9О, Сту9Е та Сту9Е; білок Сту15 із публікації
Маїтом, еї аї., (2008) Арріє4й апа ЄЕпмігоптепіа! Містобіоіоду, 74:7145-7151; Стуг2, білок
СтуЗзаАВрІ із патентів США МоМо 6127180, 6624145 та 6340593; білок СТУЕТЗЗ та СтуЕТЗ4 із патентів США МоМо 6248535, 6326351, 6399330, 6949626, 7385107 та 7504229; гомологи
СтУЄТЗЗ та СтуЕТЗ34 із публікації заявок на патент США МоеМо 2006/0191034, 2012/0278954 та публікації згідно з РСТ Мо МО 2012/139004; білок СтуЗзБАБІ із патентів США МоМо 6083499, 6548291 та 6340593; білок Сту46б, білок Сту 51, бінарний токсин Сту; ТІС901 або споріднений токсин; ТІС807 із патентного документу США Мо 2008/0295207; ЕТ29, ЕТЗ37, ТІС809, ТІС810,
ТІС812, ТІС127, ТІС128 з РСОТ 5 2006/033867; АХМІ-027, АХМІ-036 та АХМІ-038 з патенту США
Мо 8236757; АХМІ-031, АХМІ-039, АХМІ-040, АХМІ-049 із патенту США Мо 7923602; АХМІ-018,
АХМІ-020 та АХМІ-021 із М/О 2006/083891; АХМІ-010О із МО 2005/038032; АХМІ-00ОЗ із МО 2005/021585; АХМІ-008 із О5 2004/0250311; АХМІ-006 із 5 2004/0216186; АХМІ-007 із 05 2004/0210965; АХМІ-009 із О5 2004/0210964; АХМІ-014 із О5 2004/0197917; АХМІ-004 із 005 2004/0197916; АХМІ-028 та АХМІ-029 з МО 2006/119457; АХМІ-007, АХМІ-008, АХМІ-0080Н2,
АХМІ-009, АХМІ-014 та АХМІ-004 з М/О 2004/074462; АХМІ-150 із патенту США Мо 8084416;
АХМІ-205 із О5 20110023184; АХМІ-011, АХМІ-012, АХМІ-013, АХМІ-015, АХМІ-019, АХМІ-044,
АХМІ-037, АХМІ-043, АХМІ-0О33, АХМІ-034, АХМІ-022, АХМІ-023, АХМІ-041, АХМІ-063 та АХМІ- 064 із О5 2011/0263488; АХМІ-Н1 та споріднені білки із О5 2010/0197592; АХМІ2217, АХМІ2227,
АХМІ2237, АХМІ2247 та АХМІ2257 з МО 2011/103248; АХМІ218, АХМІ219, АХМІ220, АХМІ226,
АХМІ227, АХМІ228, АХМІ229, АХМІ230 та АХМІ2391 із ММО11/103247; АХМІ-115, АХМІ-113, АХМІ- 005, АХМІ-163 та АХМІ-184 з патенту США Мо 8334431; АХМІ-001, АХМІ-002, АХМІ-030, АХМІ- 035 та АХМІ-045 із 5 2010/0298211; АХМІ-06б6 та АХМІ-076 із О520090144852; АХМІ128,
АХМІ130, АХМІ131, АХМІ133, АХМІ140, АХМІ141, АХМІ142, АХМІ143, АХМІ144, АХМІ146, АХМІ148, АХМІ149, АХМІ152, АХМІ153, АХМІ154, АХМІ155, АХМІ156, АХМІ157, АХМІ158,
АХМІ162, АХМІ165, АХМІ166, АХМІ167, АХМІ168, АХМІ169, АХМІ170, АХМІ171, АХМІ172,
АХМІ173, АХМІ174, АХМІ175, АХМІ176, АХМІ177, АХМІ178, АХМІ179, АХМІ180, АХМІ181,
АХМІ182, АХМІ185, АХМІ186, АХМІ187, АХМІ188, АХМІ189 із патенту США з номером 8318900;
АХМІО79, АХМІОВО, АХМІОВІ, АХМІОВ2, АХМІОЗЇ, АХМІ0О92, АХМІ0О9б, АХМІО97, АХМІО98,
З5 АХМІ0О99, АХМІТ0О0, АХМІТО1, АХМІ102, АХМІТО3, АХМІ104, АХМІТ07, АХМІ10О8, АХМІ109,
АХМІ110, АХМІТ11, АХМІ112, АХМІ114, АХМІТ16, АХМІ1Т17, АХМІ118, АХМІ119, АХМІ120,
АХМІ121, АХМІ122, АХМІ123, АХМІ124, АХМІ1257, АХМІ1268, АХМІ127, АХМІ129, АХМІ164,
АХМІ151, АХМІ161, АХМІ183, АХМІ132, АХМІ138, АХМІ137 із 2010/0005543 та білки Стгу, такі як
СтутА і СтуЗзА, що мають модифіковані сайти для протеолітичного розщеплення, із патенту США з номером 8319019; та білки-токсини Сту1їАс, СтугАа і СтуїСа зі штаму МВТ5 2528 ВасіПш5
ТІигіпдієпвів із публікації заявки на патент США з номером 2011/0064710. Інші білки Сту добре відомі фахівцю в даній галузі (див. СтісКтоге, єї аї!., "Васійив5 ІПигіпдіеєпвів їохіп потепсіаїшге" (2011) на сайті ІМезсі.виззех.ас.ик/поте/Меї! СтісКтоге/Ві/, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет за допомогою префікса "м/мли"). Інсектицидна активність білків Сту добре відома фахівцю в даній галузі (для огляду див. мап ЕгаппКепішпугеп, (2009) У). Іпмей. Раїй. 101:1-16). Застосування білків Сту як ознак трансгенної рослини добре відоме фахівцю в даній галузі техніки, та трансгенні рослини з Сту, зокрема без обмеження з Сту1їАс, Сту! Ас-СтугАБ,
СтутАБр, СтутА.105, СтуїЕ, СтуїРаг2, Сту! Ра-СтутАс, СтугАБ, СтузА, тОгузА, СтуЗзВЬт, СтузаАбІ1,
СтузБАБІ, МірзА, тОСтузА, Студс та СВІ-ВІ, одержали дозвіл органів контролю (див. Запапціа, (2011) Ріапі Віоїєсн дошгпаї 9:283-300 та СЕВА (2010) СМ Стор Оагаразе Сепіег ог Епмігоптепіаї!
Вік Аввеззтепі (СЕНА), І/5І Аезеагсі Роцйпаайоп, УМавзпіпдюп О.С. на сайті сега- дте.ого/Іпаєх.рпр?асіоп-дт стор даїабазє, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет із застосуванням префікса "м/мли"). У рослинах також може експресуватися більше одного пестицидного білка, добре відомого фахівцю в даній галузі, наприклад, МірзАЬ та СтуїРа (052012/0317682) Сту!ВЕ та Стуїб (052012/0311746) Су!СА та СтутАВ (0052012/0311745), Стуї1Е та СтуСа (052012/0317681), Сту1рА та Сту1!ВЕ (0052012/0331590),
Сту1бА та СтуїРа (052012/0331589), СтутАВ та Стуї! ВЕ (052012/0324606) і СтуїРа та СтугАа,
СтутІ або СтутЕ (0052012/0324605). Пестицидні білки також включають інсектицидні ліпази, включаючи ліпідацил-гідролази з патенту США Мо 7491869 та холестериноксидази, наприклад, з 60 зігеріотусевз (РигсеїЇ єї аІ. (1993) Віоспет Віорпуз ВНе5 Соттип 15:1406-1413).. Пестицидні білки також включають токсини МІР (вегетативні інсектицидні білки) із патентів США МоМо 5877012, 6107279, 6137033, 7244820, 7615686 та 8237020 тощо. Інші білки МІР добре відомі фахівцю в даній галузі (див. Іевзсі.зивзех.ас.ик/поте/Меї! Стісктоге/Вумір.піті, доступ до якого можна одержати у всесвітній мережі Інтернет із застосуванням префікса "ммлиу"). Пестицидні білки також включають білки токсинового комплексу (ТС), які можна одержати з організмів, таких як Хепогпардив, РПпоїопардиб та Раєепірасіш5 (див. патенти США МоМо 7491698 та 8084418). Деякі ТО-білки мають "самостійну" інсектицидну активність, а інші ТО-білки підвищують активність самостійних токсинів, що виробляються тим самим представленим організмом. Токсичність "самостійного" ТО-білка (з Рпоїотпардив, Хепотараиз або РаепірасіПмв, наприклад) може підвищуватись за допомогою одного або декількох ТО-білків, "підсилювачів", одержаних із організму-джерела з іншого роду. Існують три основних типи ТС-білків. Як викладено у даному документі, білки класу А ("білок А") являють собою самостійні токсини.
Білки класу В ("білок В") та білки класу С ("білок С") посилюють токсичність білків класу А.
Приклади білків класу А являють собою ТебБА, ТсаА, ХріАт та ХріАг2. Приклади білків класу В являють собою Тсас, Тсав, хХрів'хрЬ та ХрісСтТМі. Приклади білків класу С являють собою Тесс, хрісСі1хЬ та ХріВ1Т ММ. Пестицидні білки також включають білки отрути павуків, змій та скорпіонів.
Приклади пептидів отрути павуків включають без обмеження пептиди лікотоксин-ї та його мутантні форми (патент США Мо 8334366). (С) Полінуклеотид, що кодує специфічний щодо комах гормон або феромон, такий як екдистероїд та ювенільний гормон, його варіант, міметик на його основі або його антагоніст або агоніст. Див., наприклад, розкриття в публікації Наттоск, еї аї., (1990) Маїшцге 344:458, що стосується бакуловірусної системи експресії клонованої естерази ювенільного гормону, деактиватора ювенільного гормону. (ОС) Полінуклеотид, що кодує специфічний щодо комах пептид, який під час експресії порушує фізіологію комахи, на яку чинять вплив. Наприклад, див. розкриття в публікації Кедап, (1994) 9. ВіоЇ. Спет. 269:9 (експресійне клонування дає в результаті ДНК, що кодує рецептор діуретичного гормону комах); Ргай, еї аїІ., (1989) Віоспет. Віорпуз. Неб5. Сотт. 163:1243 (алостатин, ідентифікований у Оіріорієга рипіаїа); Спайораднуау, еї а!., (2004) Стйіса! Веміємув іп
Місторіоіоду 30(1):33-54; йаміопу, (2004) У Маї Ргод 67(2):300-310; Сапіпі апа Стовві-де-за,
Коо) (2002) Тохісоп 40(11):1515-1539; Ов55иї, еї а!., (2001) Си Зсі. 80(7):847-853 та МазсопсеЇоз апа
Оїїмеїга, (2004) Тохісоп 44(4):385-403. Див. також патент США Мо 5266317, Тотаї!»5Кі, еї аї., в якому розкриваються гени, що кодують специфічні щодо комах токсини. (Е) Полінуклеотид, що кодує фермент, що відповідає за гіпернакопичення монотерпену, сесквітерпену, стероїду, гідроксамової кислоти, похідного фенілпропаноїду або іншої небілкової молекули з інсектицидною активністю. (Є) Полінуклеотид, що кодує фермент, залучений у модифікацію, зокрема посттрансляційну модифікацію, біологічно активної молекули; наприклад, гліколітичний фермент, протеолітичний фермент, ліполітичний фермент, нуклеаза, циклаза, трансаміназа, естераза, гідролаза, фосфатаза, кіназа, фосфорилаза, полімераза, еластаза, хітиназа та глюканаза, або натуральні, або синтетичні. Див. заявку за РСТ УМО 1993/02197 на ім'я Зсой, еї аїЇ., в якій розкрита нуклеотидна послідовність гена калази. Молекули ДНК, які містять послідовності, що кодують хітиназу, можна одержати, наприклад, з АТСС? під номерами доступу 39637 та 67152. Див. також Кгатег, еї аї., (1993) Іпзесі Віоспет. Моїес. ВіоЇ. 23:691, де показана нуклеотидна послідовність КДНК, що кодує хітиназу тютюнового бражника, та Камайеск, еї аї., (1993) Ріапі
Моїес. Віої. 21:673, де представлена нуклеотидна послідовність гена поліубіквітину ирі4-2 петрушки, та патенти США МоМо 6563020; 7145060 та 7087810. (б) Полінуклеотид, що кодує молекулу, яка стимулює сигнальну трансдукцію. Наприклад, див. розкриття в ВоїеїЇа, еї аї., (1994) Ріапі Моїес. ВіоІ. 24:757 нуклеотидних послідовностей клонів КДНК кальмодуліну машу та Сгіе55, еї аї., (1994) РіІапі Рпузіої. 104:1467, де представлена нуклеотидна послідовність клону кКДНК кальмодуліну магїсу. (Н) Полінуклеотид, що кодує пептид із гідрофобним моментом. Див. заявку за РСТ УМО 1995/16776 та патент США Мо 5580852, що розкривають пептидні похідні тахіплезину, які інгібують грибні патогени рослин, та заявку за РСТ УМО 1995/18855, а також патент США Мо 5607914 (в якому розкриті синтетичні протимікробні пептиди, які надають стійкості до захворювань). (І) Полінуклеотид, що кодує мембранну пермеазу, каналоутворювач або блокатор каналів.
Наприклад, див. розкриття в Чдаупев5, еї аї., (1993) Ріапі 5сі. 89:43 гетерологічної експресії аналога цекропін-бета літичного пептиду для надання трансгенним рослинам тютюну стійкості до Рхепдотопах з5оЇапасеагит. бо (У) Ген, що кодує вірусний інвазивний білок або складний токсин, одержаний з нього.
Наприклад, накопичення білків вірусної оболонки в трансформованих рослинних клітинах надає стійкості до вірусної інфекції та/або розвитку захворювання, зумовленого вірусом, з якого одержаний ген білка оболонки, а також спорідненими вірусами. Див. Веаспу, еї аї., (1990) Апп.
Кем. РпуораїйоІЇ. 28:451. Стійкість, опосередковану білком оболонки, надавали трансформованим рослинам щодо вірусу мозаїки люцерни, вірусу мозаїки огірка, вірусу смугастості тютюну, вірусу Х картоплі, вірусу У картоплі, вірусу гравірування тютюну, вірусу тютюну "реттл" та вірусу тютюнової мозаїки. Там же. (К) Ген, що кодує антитіло, специфічне щодо комахи, або імунотоксин, одержаний із нього.
Таким чином, антитіло, націлене на критичну метаболічну функцію у кишечнику комахи, буде інактивувати фермент, на який здійснюється вплив, зі знищенням комахи. СТ. Тауїог, еї аї.,
Арзігасі 254497, ЗЕМЕМТН ІМТ" ЗММРОБЗІМ ОМ МОГ ЕСОЦІ АК РІ АМТ-МІСВОВЕ ІМТЕВАСТІОМ5 (Едіпригй, ЗсоЦапа, 1994) (ферментативна інактивація у трансгенному тютюні за допомогою продукції одноланцюгових фрагментів антитіл). () Ген, що кодує антитіло, специфічне щодо вірусу. Див., наприклад, Таміаадогакі, еї аї., (1993) Маїшге 366:469, де показано, що трансгенні рослини, які експресують гени рекомбінантного антитіла, захищені від ураження вірусом. (М) Полінуклеотид, що кодує білок, який зупиняє розвиток, що продукується в природі патогеном або паразитом. Таким чином, грибні ендо-альфа-1,4-О-полігалактуронази полегшують грибну колонізацію та вивільнення поживних речовин рослини шляхом солюбілізації гомо-альфа-1,4-О-галактуронази клітинної стінки рослини. Див. І атр, еї аї., (1992)
Віо/ГесппоІоду 10:1436. Клонування та визначення характеристик гена, який кодує білок, що інгібує ендополігалактуроназу бобів, описаний у Тоибагі, еї а!., (1992) Ріапі 9. 2:367. (М) Полінуклеотид, що кодує білок, який зупиняє розвиток, що виробляється в природі рослиною. Наприклад, І одетапп, еї аї!., (1992) Віо/ТесппоІоду 10:305 показали, що трансгенні рослини, які експресують ген ячменю, що інактивує рибосоми, мали підвищену стійкість до грибних захворювань. (0) Гени, залучені в реакцію системної набутої стійкості (ЗАК), та/або гени, пов'язані з патогенезом. Вгіддв, (1995) Ситепі Віоіоду 5(2), Рієїетзе апа Мап Гооп, (2004) Си. Оріп. Ріапі
Віо. 7(4):456-64 та Ботввісн, (2003) Сеї! 113(7):815-6.
Зо (Р) Протигрибкові гени (Согпеїїззеп апа МеїсНегз, (1993) РІ. Рпузіої. 101:709-712 та Рагі|в, єї а!., (1991) Ріапіа 183:258-264, а також ВизвНпеїїЇ, єї аї., (1998) Сап. у. ої Ріапі Рай. 20(2):137-149.
Також див. заявки на патент США МоМо 09/950933; 11/619645; 11/657710; 11/748994; 11/774121 та патенти США МоМо 6891085 та 7306946. Кінази, подібні до рецептора Гу5М, для розпізнавання фрагментів хітину як перша стадія в захисній реакції рослини проти грибів- патогенів (05 2012/0110696). (0) Гени системи детоксикації, такі, що кодують фумонізин, беауверицин, моніліформін та зеараленон, та їхні структурно споріднені похідні. Наприклад, див. патенти США МоМо 5716820; 5792931; 5798255; 5846812; 6083736; 6538177; 6388171 та 6812380. (ЮК) Полінуклеотид, що кодує цистатин та інгібітори цистеїнової протеїнази. Див. патент США
Мо 7205453. (5) Гени дефензинів. Див. ММО 2003/000863 та патенти США МоМо 6911577; 6855865; 6777592 та 7238781. (Т) Гени, що забезпечують стійкість до нематод. Див., наприклад, заявку за РСТ УМО 1996/30517; заявку за РСТ УМО 1993/19181, МО 2003/033651 та Огміп, еї аї., (1998) Ріапіа 204:472-479, МПатвоп, (1999) Сит Оріп Ріапі Віо. 2(4):327-31; патенти США МоМо 6284948 та 7301069 та гени тік164 (МО 2012/058266). (/) Гени, які забезпечують стійкість до кореневої гнилі, спричиненої Рпуорінвога, такі як Ер 1, Рро 1-а, Вр 1-6, Рро 1-с, Вр 1-й, ВАро 1-є, ВРрз 1-К, Ар 2, Врзо З3-а, Нр 3-6, Нро 3-с, Врз 4,
Крз 5, Крз 6, Крз 7 та інші гени Кр5. Див., наприклад, Зпоетакег, еї аї., Рнуїорпіпога Ноої Ної
Везізіапсе Сепе Марріпа іп 5оуреап, Ріапі Сепоте ІМ Сопіегепсе, Зап Оіедо, Саїї. (1995). (М) Гени, які забезпечують стійкість до бурої стеблової гнилі, такі як описані в патенті США
Мо 5689035, включеному за допомогою посилання для цієї мети. (УМ) Гени, які забезпечують стійкість до СоїІейфїгіспит, такі як описані в публікації заявки на патент США З 2009/0035765, включеної за допомогою посилання для цього. Вони включають локус Ксд, який можна застосовувати як конверсію одного локусу. 2. Трансгени, які забезпечують стійкість до гербіциду, наприклад: (А) полінуклеотид, що кодує стійкість до гербіциду, який інгібує конус наростання або меристему, такого як імідазолінон або сульфонілсечовина. Ілюстративні гени у цій категорії кодують мутантний фермент АЇ 5 та АНАФБ, як описано, наприклад, у Г ее, еї а!., (1988) ЕМВО 3. 60 7:124А41 та МІКІі, еї аї., (1990) Тпеог. Аррі. Сепеї. 80:449 відповідно. Див. також патенти США МоМо
5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 та 5378824; заявку на патент США Мо 11/683737 та публікацію міжнародної заявки М/О 1996/33270. (В) Полінуклеотид, що кодує білок для стійкості до гліфосату (стійкості надають мутантні гени 5-енолпірувіл-3-фосфошикіматсинтази (ЕРБР) та агоА відповідно) та до інших сполук із фосфоновими групами, таких як глуфосинат (гени фосфінотрицин-ацетилтрансферази (РАТ) та фосфінотрицин-ацетилтрансферази (Баг) бігеріотусе5 Пудгоз5соріси5), та до піридинокси- або феноксипропіонових кислот та циклогексонів (гени, що кодують інгібітор АСсСази). Див., наприклад, патент США Мо 4940835, ЗПап, еї аІ., в якому розкрита нуклеотидна послідовність форми ЕРБР5, яка може надавати стійкості до гліфосату. У патенті США Мо 5627061, Вагу, еї аІ.,, також описані гени, що кодують ферменти ЕРБР5. Див. також патенти США МоМо 6566587; 6338961; 6248876; 6040497; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 5094945, 4940835; 5866775; 6225114; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448; 5510471; Не. 36449;
ЕЕ 37287 Е та 5491288, а також публікації міжнародних заявок ЕР 1173580; УМО 2001/66704; ЕР 1173581 та ЕР 1173582, які включені в даний документ за допомогою посилання для цієї мети.
Стійкість до гліфосату також надається рослинам, які експресують ген, що кодує фермент гліфосат-оксидоредуктазу, як більш детально описано в патентах США МоМо 5776760 та 5463175, які включені в даний документ за допомогою посилання для цього. Крім того, стійкість до гліфосату може надаватися рослинам шляхом надекспресії генів, що кодують гліфосат-М- ацетилтрансферазу. Див., наприклад, патенти США МоМо 7462481; 7405074 та публікацію заявки на патент США Ме 5 2008/0234130. Молекулу ДНК, що кодує мутантний ген агоА, можна одержати під номером доступу АТССО 39256, а нуклеотидна послідовність мутантного гена розкрита в патенті США Мо 4769061, виданому Сотаї. У заявці ЕР Мо 0333033, Киптада, еї аї., та патенті США Мо 4975374, виданому Сосбсатанп, еї аї., розкриті нуклеотидні послідовності генів глутамінсинтетази, що надають стійкості до гербіцидів, таких як І -фосфінотрицин. Нуклеотидна послідовність гена фосфінотрицин-ацетилтрансферази представлена в заявках ЕР МоМо 0242246 та 0242236, І еетап»5, еї аіІ.; Ое Огееї, еї аї., (1989) Віо/ТесппоЇоду 7:61, де описано одержання трансгенних рослин, які експресують химерні гени Баг, що кодують фосфінотрицин- ацетилтрансферазну активність. Див. також патенти США МоМо 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675; 5561236; 5648477; 5646024; 6177616 та 5879903, які включені в даний документ за допомогою посилання для цієї мети. Ілюстративні гени, що надають стійкості до феноксипропіонових кислот та циклогексонів, таких як сетоксидим та галоксифоп, являють собою гени Асс1-51, Асс1-52 та Асс1-53, описані в Магегпаї, еї аї., (1992) Тпеог. Аррі. Сепеї. 83:435. (С) Полінуклеотид, що кодує білок, що забезпечує стійкість до гербіциду, який інгібує фотосинтез, до такого як триазин (гени р5БА та дж) та бензонітрил (ген нітрилази). РігібіМа, еї а!., «1991) Ріапі Сеї! 3:169 описують трансформацію Спіатудотопах за допомогою плазмід, що кодують мутантні гени р5БА. Нуклеотидні послідовності генів нітрилази розкриті в патенті США
Мо 4810648, виданому 5аІКег, та молекули ДНК, що містять ці гени, доступні під номерами доступу АТССО 53435, 67441 та 67442. Клонування та експресія ДНК, що кодує глутатіон-5- трансферазу, описана у Науєзв, вї а!., (1992) Віоспет. У). 285:173. (ОС) Полінуклеотид, що кодує білок, який забезпечує стійкість до синтази ацетогідроксикислот, яка, як було виявлено, робить рослини, що експресують цей фермент, стійкими до декількох типів гербіцидів, був введений у ряд рослин (див., наприклад, Найогі, еї а!., (1995) Мої Сеп Сепеї. 246:419). Інші гени, які надають стійкості до гербіцидів, включають ген, що кодує химерний білок цитохрому Р.4А507А1 щура та МАОРН-цитохром Р450-оксидоредуктази дріжджів (Зпіоїа, еї аї., (1994) Ріапі Ріпузіо! 106:17), гени, що кодують глутатіонредуктазу та супероксиддисмутазу (Аопо, еї аї., (1995) Ріапі СеїїЇ РпузіоІ36:1687), та гени, що кодують різні фосфотрансферази (Баца, еї аї., (1992) РіІапі Мої Віої! 20:619). (Е)У Полінуклеотид, що кодує стійкість до гербіциду, що цілеспрямовано діє на протопорфіриноген-оксидазу (ргоїох), яка є необхідною для одержання хлорофілу. Фермент ргоїох виступає в ролі мішені для ряду гербіцидних сполук. Ці гербіциди також пригнічують ріст усіх наявних різних видів рослин, викликаючи їх повне руйнування. Розробка рослин, що характеризуються зміненою ргоїох-активністю, які є стійкими до цих гербіцидів, описана в патентах США МоМо 6288306; 6282837 та 5767373 та в публікації міжнародної заявки УМО 2001/12825. (ЕР) Ген аад-1 (походить зі брпіпдобішт Пегбісідомогап5) кодує білок арилоксиалканоат- діоксигеназу (ААО-1). Ознака забезпечує переносимість гербіцидів на основі 2,4- дихлорфеноксиоцтової кислоти та арилоксифеноксипропіонату (які звичайно називаються "фоп'"-гербіциди, такі як квізалофоп). Як такий ген аад-1, що забезпечує переносимість бо гербіциду у рослин, вперше був розкритий у УУО 2005/107437 (див. також О5 2009/0093366). Ген 5О0 аад-12, одержаний із ОеїЇДіа асідомогап5, який кодує білок арилоксиалканоат-діоксигеназу (ААЮО- 12), що спричиняє переносимість гербіцидів на основі 2,4-дихлорфеноксиоцтової кислоти та піридилоксиацетату за допомогою інактивації деяких гербіцидів з арилоксиалканоатним фрагментом, зокрема фенокси-ауксину (наприклад, 2,4-О, МОСРА), а також видів піридилокси- ауксинів (наприклад, флуроксипіру, триклопіру). (б) Полінуклеотид, що кодує стійку до гербіциду дикамба монооксигеназу, розкриту в публікації заявки на патент США 2003/0135879, для надання переносимості дикамби. (Н) Полінуклеотидна молекула, що кодує бромоксинілнітрилазу (Вхп), розкрита в патенті
США Мо 4810648 для надання переносимості бромоксинілу. (І) Полінуклеотидна молекула, що кодує фітоен (сгії), описаний у Мізама, еї аї., (1993) Ріапі у. 4:833-840 та у Мізама, еї а!1., (1994) Ріапі 9. 6:481-489, для переносимості норфлуразону. 3. Трансгени, які забезпечують змінені характеристики зерна або роблять у них внесок
Такі як наведені нижче. (А) Змінені жирні кислоти, наприклад, за допомогою наступного. (1) Пригнічення стеароїл-АСР для підвищення вмісту стеаринової кислоти у рослині. Див.
Кпийгоп, еї аї., (1992) Ргос. Май. Асад. 5сі. ОА 89:2624 та УМО 1999/64579 (Гени для зміни ліпідних профілів у кукурудзі ("Сепез (о АкКег І іріа Ргойез іп Согп")). (2) Підвищення вмісту олеїнової кислоти за допомогою модифікації гена БАО-2 та/або зниження вмісту ліноленової кислоти за допомогою модифікації гена ЕАО-3 (див. патенти США
МоМо 6063947; 6323392; 6372965 та УМО 1993/11245). (3) Зміни вмісту кон'югованої ліноленової або лінолевої кислоти, наприклад, як у УМО 2001/12800. (4) Зміни ГЕС1, АСР, ект, Зирега!1, тії! р5, різних генів Іра, таких як Іра, ІраЗ, прі або пд. Наприклад, див. УМО 2002/42424, МО 1998/22604, УМО 2003/011015, УУО 2002/057439, УМО 2003/011015, патенти США МоМо 6423886, 6197561, 6825397 та публікації заявок на патенти
США МоМо 05 2003/0079247, 005 2003/0204870 та Кімега-Маангід, єї а!., (1995) Ргос. Маї). Асад. осі. 92:5620-5624. (5) Генів, що кодують дельта-8-десатуразу для одержання довголанцюгових поліненасичених жирних кислот (патенти США МоМо 8058571 та 8338152), дельта-9 десатуразу
Зо для зниження вмісту насичених жирів (патент США Мо 8063269), Аб-десатуразу примули для поліпшення профілів омега-З-жирних кислот. (6) Виділених нуклеїнових кислот та білків, асоційованих із регуляцією метаболізму ліпідів та цукрів, зокрема білка ліпідного метаболізму (МР), застосовуваних у способах одержання трансгенних рослин та модуляції рівнів запасних речовин насіння, зокрема ліпідів, жирних кислот, видів крохмалю або запасних білків насіння, та їх застосування в способах модуляції розміру насіння, кількості насіння, ваги насіння, довжини коренів та розміру листків рослин (ЕР 2404499). (7) Зміни експресії білка, індукованого цукрами 2 (Н5БІ2), з високим рівнем експресії у рослині для підвищення або зниження експресії Н5ОІ2 у рослині. Посилення експресії НБЗІ2 підвищує вміст олії, тоді як зниження експресії Н5І2 знижує чутливість до абсцизової кислоти та/або підвищує стійкість до посухи (публікація заявки на патент США Мо 2012/0066794). (8) Експресії цитохрому 55 (СЬ5) окремо або разом з ГАЮ2 для модуляції вмісту олії в насінині рослини, зокрема, для підвищення рівнів омега-З-жирних кислот та поліпшення співвідношення омега-б6- та омега-З-жирних кислот (публікація заявки на патент США Мо 2011/0191904). (9) Молекули нуклеїнової кислоти, що кодують мгіпкіед1-подібні поліпептиди для модуляції метаболізму цукрів (патент США Мо 8217223). (В) Змінений вміст фосфору, наприклад, за допомогою наступного. (1) Введення гена, що кодує фітазу, при цьому буде поліпшуватися розпад фітату, що збільшує кількість вільного фосфату в трансформованій рослині. Наприклад, див. Мап
Напіпдзмеїаї, еї а!., (1993) Сепе 127:87 щодо розкриття нуклеотидної послідовності гена фітази
АзрегоїПив5 підег. (2) Модуляції гена, який знижує вміст фітату. У випадку маїсу це, наприклад, можна здійснювати за допомогою клонування, а потім повторного введення ДНК, асоційованої з одним або декількома алелями, такими як алелі ГРА, ідентифіковані у мутантів маїсу, що характеризуються низькими рівнями фітинової кислоти, як, наприклад, у УУО 2005/113778, та/або за допомогою зміни активності інозитол-кінази, як у УМО 2002/059324, публікації заявки на патент США Мо 2003/0009011, УМО 2003/027243, публікації заявки на патент США ЖМо 2003/0079247, МО 1999/05298, патенті США Мо 6197561, патенті США Мо 6291224, патенті США (510) Мо 6391348, УМО 2002/059324, публікації заявки на патент США Мо 2003/0079247, УМО
1998/45448, МО 1999/55882, МО 2001/04147. (С) Змінені вуглеводи, на які здійснювали вплив, наприклад, шляхом зміни гена, що кодує фермент, який впливає на патерн розгалуження крохмалю, або гена, що змінює тиоредоксин, такого як МТК та/або ТЕХ (див. патент США Мо 6531648, який включений за допомогою посилання для цієї мети), та/або нокауту гамма-зеїну або застосування мутанта, такого як с527, або ТО5С27, або еп27 (див. патент США Мо 6858778 та публікацію заявки на патент США Мо 2005/0160488, публікацію заявки на патент США Мо 2005/0204418, які включені за допомогою посилання для цієї мети). Див. Зпіго7а, еї аї., (1988) 9. ВасіегіоІЇ. 170:810 (нуклеотидна послідовність мутантного гена фруктозилтрансферази Зігеріососсив5), зіеіптеїя, еї аї., (1985)
МОЇ. Сеп. Сепеї. 200:220 (нуклеотидна послідовність гена левансахарази ВасшШиз зиБі5), Реп, еї аї., (1992) Віо/Тесппоїоду 10:292 (одержання трансгенних рослин, які експресують альфа- амілазу Васійи5 Іспепітогіпів), ЕПШої, еї аї.,, (1993) Ріапі Моїес. ВіоїЇ. 21:515 (нуклеотидні послідовності генів інвертази томата), 5вдаагй, еї аї., (1993) 9. ВіоїЇї. Спет. 268:22480 (сайт- спрямований мутагенез гена альфа-амілази ячменю) та РізПег, еї аї., (1993) Ріапі РпНузіо). 102:1045 (фермент розгалуження крохмалю ендосперму маїсу І), МО 1999/10498 (поліпшена перетравність та/або екстракція крохмалю завдяки модифікації ОФОР-ЮО-ксилоза-4-епімерази,
Егадієе 1 та 2, Кей, НСНІ, С4Н), патент США Мо 6232529 (спосіб одержання насіння з високим вмістом олії шляхом модифікації рівнів крохмалю (АСР)). Гени модифікації жирних кислот, згадувані у даному документі, також можна застосовувати для впливу на вміст та/або склад крохмалю завдяки взаємозв'язку шляхів метаболізму крохмалю та олії. (0) Змінений вміст або склад антиоксидантів, як, наприклад, зміна токоферолу або токотриенолів. Наприклад, див. патент США Мо 6787683, публікацію заявки на патент США Мо 2004/0034886 та МО 2000/68393, що передбачають маніпуляцію з рівнями антиоксидантів, та
УМО 2003/082899, завдяки зміні гомогентизатгераніл-геранілтрансферази (п990. (Е) Змінені незамінні амінокислоти насіння. Наприклад, див. патент США Мо 6127600 (спосіб підвищення накопичення незамінних амінокислот у насінні), патент США Мо 6080913 (бінарні способи підвищення накопичення незамінних амінокислот у насінні), патент США Мо 5990389 (високий вміст лізину), УМО 1999/40209 (зміна амінокислотного складу насіння), УМО 1999/29882 (способи зміни вмісту амінокислот у білках), патент США Мо 5850016 (зміна амінокислотного
Зо складу насіння), УМО 1998/20133 (білки з підвищеними рівнями незамінних амінокислот), патент
США Ме 5885802 (високий вміст метіоніну), патент США Мо 5885801 (високий вміст треоніну), патент США Мо 6664445 (рослинні ферменти біосинтезу амінокислот), патент США Мо 6459019 (підвищений вміст лізину та треоніну), патент США Мо 6441274 (бета-субодиниця рослинної триптофан-синтази), патент США Мо 6346403 (ферменти метаболізму метіоніну), патент США Мо 5939599 (високий вміст сірки), патент США Мо 5912414 (підвищений вміст метіоніну), УМО 1998/56935 (рослинні ферменти біосинтезу амінокислот), МО 1998/45458 (розроблений білок насінини, що має більш високий відсотковий вміст незамінних амінокислот), УМО 1998/42831 (підвищений вміст лізину), патент США Мо 5633436 (підвищення вмісту сірковмісних амінокислот), патент США Мо 5559223 (синтетичні запасні білки з визначеною структурою, що містять програмовані рівні незамінних амінокислот для поліпшення поживної цінності рослин),
УМО 1996/01905 (підвищений вміст треоніну), УМО 1995/15392 (підвищений вміст лізину), публікацію заявки на патент США Мо 2003/0163838, публікацію заявки на патент США Мо 2003/0150014, публікацію заявки на патент США Мо 2004/0068767, патент США Мо 6803498, МО 2001/79516. 4. Гени, що регулюють чоловічу стерильність
Доступними є декілька способів забезпечення генетичної чоловічої стерильності, як, наприклад, декілька мутантних генів в окремих положеннях у межах геному, які надають чоловічу стерильність, як розкрито в патентах США МоМо 4654465 та 4727219, Вгаг, еї аї., та хромосомні транслокації, як описано Райегзоп у патентах США МоМо 3861709 та 3710511. На додаток до цих способів АїЇрегізеп, еї аІ. у патенті США Мо 5432068 описують систему ядерної чоловічої стерильності, яка включає: ідентифікацію гена, який є важливим для чоловічої фертильності; сайленсинг цього нативного гена, який є важливим для чоловічої фертильності; видалення нативного промотора з гена, важливого для чоловічої фертильності, та заміщення його на індукований промотор; вставку цього одержаного за допомогою методик генної інженерії гена назад у рослину та, таким чином, створення рослини, яка характеризується чоловічою стерильністю, оскільки індукований промотор не є "включеним", у результаті чого ген чоловічої фертильності не транскрибується. Фертильність відновлюють за допомогою індукування або "включения" промотора, який, у свою чергу, забезпечує транскрипцію гена, який надає чоловічу фертильність. бо (А) Введення гена деацетилази під керуванням промотора, специфічного щодо тапетуму, та із застосуванням хімічного М-Ас-РРТ (УМО 2001/29237). (В) Введення різних промоторів, специфічних щодо тичинок (М/О 1992/13956, УМО 1992/13957). (С) Введення барнази або гена барстара (Раші, еї а!., (1992) Ріапі Мої. Віої. 19:611-622).
Додаткові приклади систем та генів ядерної чоловічої та жіночої стерильності див. також у патентах США МоМо 5859341; 6297426; 5478369; 5824524; 5850014 та 6265640, усі з яких таким чином включені за допомогою посилання. 5. Гени, які створюють сайт для сайт-специфічної інтеграції ДНК
Передбачається введення сайтів ЕКТ, які можна застосовувати в системі БІ Р/ЕКТ, та/або сайтів І ох, які можна застосовувати в системі Сте/І охр. Наприклад, див. І угпік, еї аї., (2003)
Ріапі Сеїї Вер 21:925-932 та МО 1999/25821, які включені в даний документ за допомогою посилання. Інші системи, які можна застосовувати, включають рекомбіназу Сіп з фага Ми (Маєзег, еї аї., (1991) Міскі Снапаієї, Те Маіге Напароок си. 118 (бргіпдег-Мепад 1994), рекомбіназу Ріп з Е. соїї (Епотоїйо, еї аї!., 1983) та систему Е/К5З із плазміди рокі (Агакі, еї аї., 1992). 6. Гени, які впливають на стійкість до абіотичного стресу
У тому числі без обмеження на цвітіння, розвиток початку та насінини, підвищення ефективності використання азоту, змінену реактивність щодо азоту, стійкість до посухи або її переносимість, стійкість до холоду або його переносимість, а також стійкість до засолення або його переносимість та підвищену врожайність при стресі. (А) Наприклад, див. МО 2000/73475, де ефективність споживання води змінена через зміну малату; патенти США з номерами 5892009, 5965705, 5929305, 5891859, 6417428, 6664446, 6706866, 6717034, 6801104, М/О 2000/060089, М/о 2001/026459, МО 2001/035725, МО 2001/034726, МО 2001/035727, МО 2001/036444, МО 2001/036597, МО 2001/036598, МО 2002/015675, МО 2002/017430, МО 2002/077185, МО 2002/079403, МО 2003/013227, МО 2003/013228, МО 2003/014327, МО 2004/031349, МО 2004/076638, МО 199809521. (В) УМО 199938977, в якому описані гени, включаючи гени СВЕ, та фактори транскрипції, ефективні під час послаблення негативних ефектів заморожування, високого вмісту солей та посухи щодо рослини, а також ті, що спричиняють інші позитивні ефекти щодо фенотипу
Зо рослини. (С) Публікація заявки на патент США Мо 2004/0148654 та МО 2001/36596, де в рослинах змінюється вміст абсцизової кислоти, що дає в результаті поліпшений фенотип рослини, такий як підвищена врожайність та/або підвищена переносимість абіотичного стресу. (0) УМО 2000/006341, УМО 2004/090143, патенти США МоМо 7531723 та 6992237, де експресія цитокініну модифікується, що викликає рослини з підвищеною переносимістю стресів, як, наприклад, переносимістю посухи, та/"або підвищеною врожайністю. Також див. УМО 2002/02776,
МО 2003/052063, УР 2002/281975, патент США Мо 6084153, УМО 2001/64898, патент США Мо 6177275 та патент США Мо 6107547 (покращення застосування азоту та змінена реактивність щодо азоту). (ЕХ) Щодо зміни вмісту етилену див. публікацію заявки на патент США Мо 2004/0128719, публікацію заявки на патент США Мо 2003/0166197 та УМО 2000/32761. (Р) Щодо рослинних факторів транскрипції або транскрипційних регуляторів, пов'язаних із реакцією на абіотичний стрес, див., наприклад, публікацію заявки на патент США Мо 2004/0098764 або публікацію заявки на патент США Мо 2004/0078852. (С) Гени, які підвищують експресію вакуолярної пірофосфатази, такі як АМР1 (патент США
Мо 8058515), для підвищеної врожайності; нуклеїнова кислота, що кодує поліпептиди НЗЕА4 або
Н5БА5 (фактор теплового шоку класу А4 або А5), поліпептид, подібний до білка транспортера олігопептидів (ОРТ4-подібний); пластохрон-2-подібний (РІГ А2-подібний) поліпептид або
Муи5спе!І-споріднений гомеобокс-1-подібний (МИОХ1-подібний) поліпептид (публікація заявки на патент США Мо ОЗ 2011/0283420). (Н) Пригнічення полінуклеотидів, що кодують білки полі--(АДФ-рибоза)-полімерази (РАКР), для модуляції запрограмованої гибелі клітин (патент США Мо 8058510) для підвищення потужності. (ЇЇ) Полінуклеотид, що кодує поліпептиди ЮТР21, для забезпечення стійкості до посухи (публікація заявки на патент США Мо 05 2011/0277181). (У) Нуклеотидні послідовності, що кодують білюи АСС-синтази З (АС53), для модуляції розвитку, модуляції реакції на стрес та модуляції переносимості стресів (публікація заявки на патент США Мо 05 2010/0287669). (К) Полінуклеотиди, які кодують білки, що забезпечують фенотип переносимості посухи бо (ОТР), для забезпечення стійкості до посухи (МО 2012/058528).
(3 Гени токоферолциклази (ТС) для забезпечення переносимості посухи та засолення (публікація заявки на патент США Мо 2012/0272352). (М) Білки родини протеаз, націлені на СААХ-кінцеві амінокислоти, для надання переносимості стресів (патент США Мо 8338661). (М) Мутації в гені, що кодує ЗАГ, характеризувалися підвищеною переносимістю стресів, зокрема, характеризувалися підвищеною стійкістю до посухи (публікація заявки на патент США
Мо 2010/0257633). (0) Експресія послідовності нуклеїнових кислот, що кодує поліпептид, вибраний із групи, яка складається з: поліпептиду СКЕ, КАА1-подібного поліпептиду, поліпептиду 5УК, поліпептиду
АРКІ. та поліпептиду УТР, що посилюють ознаки, пов'язані з врожайністю (публікація заявки на патент США Мо 2011/0061133). (Р) Модуляція експресії в рослині нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид трегалозо- фосфатфосфатазу (ТРР) класу ІІЇ для поліпшення ознак, пов'язаних із врожайністю, у рослин, зокрема підвищення врожайності насіння (публікація заявки на патент США Мо 2010/0024067).
Інші гени та фактори транскрипції, які впливають на ріст та агротехнічні ознаки рослин, такі як врожайність, цвітіння, ріст рослини та/або структура рослини, можна вводити або інтрогресувати в рослини, див., наприклад, УУО 1997/49811 (І НУ), УМО 1998/56918 (Е5О4), УМО 1997/10339 та патент США Мо 6573430 (ТР), патент США Мо 6713663 (ЕТ), УМО 1996/14414 (СОМ), МО 1996/38560, МО 2001/21822 (МАМІ), УМО 2000/44918 (МАМ2), МО 1999/49064 (С),
УМО 2000/46358 (ЕК), УМО 1997/29123, патент США Мо 6794560, патент США Мо 6307126 (БАЇ),
УМО 1999/09174 (08 та КИ) та УМО 2004/076638, а також УМО 2004/031349 (фактори транскрипції). 7. Гени, які забезпечують підвищену врожайність (А) Трансгенна культурна рослина, трансформована за допомогою нуклеїнової кислоти, що кодує 1-аміноциклопропан-1-карбоксилатдезаміназа- подібний поліпептид (АССОР), де експресія послідовності нуклеїнових кислот у культурній рослині викликає підвищений ріст коренів, та/або підвищену врожайність, та/"або підвищену переносимість стресів під впливом факторів середовища у рослини порівняно з різновидом рослини дикого типу (патент США Мо 8097769).
Зо (В) Надекспресія гена білків "цинкових пальців" маїсу (2т-2ЕРІ) із застосуванням промотора, активного переважно в насінні, як було показано, посилює ріст рослини, збільшує кількість зерен та загальну вагу зерен на рослину (публікація заявки на патент США Мо 2012/0079623). (С) Конститутивна надекспресія білка з доменом меж латеральних органів (ОВ) (7т-
ГОВОРІ) маїсу, як було показано, збільшує кількість зерен та загальну вагу зерен на рослину (публікація заявки на патент США Мо 2012/0079622). (р) Поліпшення ознак, пов'язаних із врожайністю, у рослин за допомогою модуляції експресії у рослини нуклеїнової кислоти, що кодує МІМ1-(варіант із метилюванням 1) подібний поліпептид, або МТС2-подібний (50ОР-І -галактоза-фосфорилаза) поліпептид, або поліпептид
РИОГЕ1685, або АКЕб-подібний (чутливий до ауксину фактор) поліпептид (М/О 2012/038893). (Е) Модуляція експресії у рослині нуклеїнової кислоти, що кодує 5іе20-подібний поліпептид або його гомолог, дозволяє рослинам давати підвищений врожай відносно контрольних рослин (ЕР 24931472). (Є) Гени, які кодують поліпептиди нуклеозиддифосфаткінази (МОК) та їхні гомологи для модифікації будови кореня рослини (публікація заявки на патент США Мо 2009/0064373). 8. Гени, які забезпечують перетравність рослини (А) Зміна рівня ксилану, наявного в клітинній стінці рослини, за допомогою модуляції експресії ксилансинтази (патент США Мо 8173866).
В іншому варіанті здійснення пакетована ознака може являти собою ознаку або об'єкт, що
БО одержали дозвіл від органів контролю, у тому числі без обмеження об'єкти з дозволом від органів контролю, добре відомі фахівцю в даній галузі, та їх можна знайти на сайті Центру оцінки ризику для навколишнього середовища (сега-дтс.огд/?асіоп-дт сгор дайаразе, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса м/млм/) та на сайті Міжнародної служби з придбання агробіотехнологічних додатків (ізааа.огоа/дтарргомаІдагаразе/деташназр, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса м/млм).
Сайленсинг генів
У деяких варіантах здійснення пакетована ознака може являти собою форму, що застосовується для сайленсингу одного або декількох полінуклеотидів, які становлять інтерес, що спричиняє супресію одного або декількох цільових поліпептидів шкідника. У деяких бо варіантах здійснення сайленсинг досягається завдяки застосуванню супресорної ДНК-
конструкції.
У деяких варіантах здійснення один або декілька полінуклеотидів, що кодують поліпептиди із поліпептиду РІИР-96 або їхніх фрагментів або варіантів, можуть бути пакетовані з одним або декількома полінуклеотидами, що кодують один або декілька поліпептидів, які характеризуються інсектицидною активністю або агрономічними ознаками, викладеними вище, та необов'язково може додатково передбачати один або декілька полінуклеотидів, передбачених для сайленсингу генів одного або декількох цільових полінуклеотидів, як обговорюється нижче. "Супресорна ДНК-конструкція" являє собою рекомбінантну ДНК-конструкцію, яка під час трансформації або стабільної інтеграції в геном рослини спричиняє "сайленсинг" цільового гена у рослині. Цільовий ген може бути ендогенним або трансгенним щодо рослини. Термін "сайленсинг", застосовуваний у даному документі щодо цільового гена, зазвичай стосується супресії рівнів МРНК або білка/ферменту, що експресуються цільовим геном, та/або рівня активності ферменту або функціонування білка. Термін "супрессія" включає в себе зниження, заниження, погіршення, зменшення, інгібування, вилучення та запобігання. "Сайленсинг" або "сайленсинг генів" не вказує на механізм, а включає без обмеження антисенсову супресію, косупресію, вірусну супресію, шпилькову супресію, супресію типу "стебло-петля", підходи, засновані на ЕКАЇ, та підходи, засновані на малих РНК.
Супресорна ДНК-конструкція може містити ділянку, одержану з цільового гена, що становить інтерес, та може містити всю послідовність нуклеїнових кислот сенсової нитки (або антисенсової нитки) цільового гена, що становить інтерес, або її частину. В залежності від підходу, який буде використовуватися, ділянка може бути на 100 95 ідентичною або менше ніж на 100 95 ідентичною (наприклад, щонайменше на 50 95 або на будь-яке ціле число від 51 95 до 100 95 ідентичною) всій сенсовій нитці (або антисенсовій нитці) гена, що становить інтерес, або її частині.
Супресорні ДНК-конструкції добре відомі з рівня техніки, легко конструюються одразу після вибору цільового гена, що становить інтерес, та включають без обмеження косупресорні конструкції, антисенсові конструкції, вірусні супресорні конструкції, шпилькові супресорні конструкції, супресорні конструкції типу "стебло-петля", конструкції, що виробляють двониткові
Зо РНК, та у більш загальному сенсі конструкції для ЕМАїЇ (РНК-інтерференції) та конструкції на основі малих РНК, такі як конструкції на основі 5ікМА (коротких інтерферувальних РНК) та тікМА (мікроРНК). "Антисенсове інгібування" відноситься до створення антисенсових РНК-транскриптів, здатних супресувати експресію цільового білка. "Антисенсова РНК" відноситься до РНК-транскрипту, який є комплементарним всьому або частині цільового первинного транскрипту або мРНК та який блокує експресію фрагмента цільової виділеної нуклеїнової кислоти (патент США Мо 5107065). Комплементарність антисенсової РНК може бути з будь-якою частиною конкретного генного транскрипту, тобто з 5'- некодувальною послідовністю, 3З'-некодувальною послідовністю, інтронами або кодувальною послідовністю. "Косупрессія" відноситься до продукування сенсових РНК-транскриптів, здатніх супресувати експресію цільового білка. "Сенсова" РНК відноситься до РНК-транскрипту, який включає мРНК та може транслюватися в білок у клітині або іп міго. Раніше конструкції косупресії у рослин розробляли з фокусуванням на надекспресії послідовностей нуклеїнової кислоти, що мають гомологію з нативною мРНК, у сенсовій орієнтації, що викликає зниження рівнів усіх РНК, що мають гомологію з надекспресованою послідовністю (див. Маиспегеї, еї аї., (1998) Ріапі .. 16:651-659 та Сига, (2000) Маїштге 404:804-808).
В іншому варіанті описується застосування послідовностей рослинних вірусів для керування супресією проксимальних послідовностей, що кодують мРНК (публікація за РСТ М/О 1998/36083).
У нещодавно опублікованій роботі було описане застосування "шпилькових" структур, які включають всю або частину послідовності, що кодує мРНК, у комплементарній орієнтації, що призводить до потенційної структури "стебло-петля" у експресованій РНК (публікація за РСТ
МО 1999/53050). У даному випадку стебло формується полінуклеотидами, відповідними гену, що становить інтерес, у сенсовій або в антисенсовій орієнтації щодо промотора, а петля формується декількома полінуклеотидами гена, що становить інтерес, які не мають комплементарної послідовності в конструкції. Це підвищує частоту косупресії або сайленсингу в регенерованих трансгенних рослинах. Для огляду шпилькової супресії див. Умезієу, еї аї., (2003)
Меїносд3з іп Моїіесшіаг Віоіоду, Ріапі Рипсіопа! Сепотісв: Меїподз апа Ргоїосоїв 236:273-286. бо Конструкція, у якій стебло формується щонайменше 30 нуклеотидами з гена, який підлягає супресії, та петля формується випадковою нуклеотидною послідовністю, також ефективно застосовувалась для супресії (публікація за РСТ ЛО 1999/61632).
Також було описане застосування послідовностей полі-Т та полі-А для одержання стебла у структурі "стебло-петля" (публікація за РСТ УМО 2002/00894).
Ще один варіант включає застосування синтетичних повторів, що сприяють формуванню стебла у структурі "стебло-петля". Було показано, що трансгенні організми, одержані з такими фрагментами рекомбінантної ДНК, характеризуються зниженими рівнями білка, що кодується нуклеотидним фрагментом, який утворює петлю, як описано в публікації згідно з РСТ УМО 2002/00904.
РНК-інтерференція стосується процесу, специфічного для послідовності посттранскрипційного сайленсингу генів у тварин, який опосередкований короткими інтерферувальними РНК (5ікМА) (Ріге, еї аї., (1998) Маїйге 391:806). Відповідний процес у рослин зазвичай називають посттранскрипційним сайленсингом генів (РТО5) або РНК- опосередкованим сайленсингом та також називають придушенням у випадку грибів. Процес посттранскрипційного сайленсингу генів вважається еволюційно консервативним механізмом клітинного захисту, що застосовується для запобігання експресії чужорідних генів, та він широко розповсюджений серед різних представників рослинного світу і таксономічних груп рослин (Ріге, еї а!., (1999) Ттепавз Сепеї. 15:358). Такий захист від експресії чужорідних генів міг розвинутися у відповідь на продукування дволанцюгових РНК (а5КМА), одержаних у результаті вірусної інфекції або у результаті випадкової інтеграції транспозонних елементів у геном хазяїна шляхом клітинної відповіді, яка опосередковує специфічне руйнування гомологічної одноланцюгової
РНК вірусної геномної РНК. Наявність а5КМА у клітинах викликає КМАЇ-відповідь за допомогою механізму, який повністю ще не охарактеризований.
Наявність довгих 45КМА у клітинах стимулює активність ферменту рибонуклеази ІШ, що називається дайсер. Дайсер залучений у процесинг а5ЕКМА з утворенням коротких фрагментів а5КМА, що називаються короткими інтерферувальними РНК (5зікМА) (Вегеїеїп, еї аї., (2001)
Маїцге 409:363). Короткі інтерферувальні РНК, одержані в результаті активності дайсера, здебільшого мають довжину від приблизно 21 до приблизно 23 нуклеотидів та містять дуплекси з приблизно 19 пар основ (ЕїІбазпіг, еї аї., (2001) Сепе5 ЮОем. 15:188). Крім того, дайсер
Зо залучається у вирізання 21- та 22-нуклеотидних малих тимчасових РНК (5ІКМА) з РНК- попередника консервативної структури, які залучені в регуляцію на рівні трансляції (Ниїмадпег, еї аї., (2001) Зсієпсе 293:834). Для ЕМАЇ-відповіді також характерним є ендонуклеазний комплекс, що звичайно називається комплексом РНК-індукованого сайленсингу (КІЗС), який опосередковує розщеплення одноланцюгової РНК, послідовність якої комплементарна антисенсовій нитці дуплекса 5ікМА. Розщеплення цільової РНК відбувається всередині ділянки, комплементарної антисенсовій нитці дуплекса 5іеМА (Еїбабзпіг, еї аї., (2001) Сепез Юеємум. 15:188).
Крім того, РНК-інтерференція також може включати сайленсинг генів, опосередкований малими
РНК (наприклад, тікМА), ймовірно за допомогою клітинних механізмів, які регулюють структуру хроматину і таким чином запобігають транскрипції послідовностей цільових генів (див., наприклад, АЇЇ5йіге, (2002) Зсієпсе 297:1818-1819; Моіре, еї аї., (2002) бсіеєпсе 297:1833-1837;
Уепимеїп, (2002) Зсієпсе 297:2215-2218 та Наї, еї аї., (2002) бсіепсе 297:2232-2237). Таким чином, молекули тікМА за даним розкриттям можна застосовувати для того, щоб опосередкувати сайленсинг генів шляхом взаємодії з РНК-транскриптами або альтернативно взаємодії з конкретними генними послідовностями, де така взаємодія викликає сайленсинг генів або на транскрипційному, або на посттранскрипційному рівні.
Додатково представлені способи та композиції, які забезпечують можливість збільшення рівня КМАЇї, одержаної за допомогою елемента сайленсингу. У таких варіантах здійснення у способах та композиціях застосовується перший полінуклеотид, що містить елемент сайленсингу для цільової послідовності шкідника, функціонально пов'язаний з промотором, активним у рослинній клітині; та другий полінуклеотид, що містить елемент, який посилює супресію, що містить цільову послідовність шкідника або її активний варіант або фрагмент, функціонально пов'язані з промотором, активним у рослинній клітині. Комбінована експресія елемента сайленсингу з елементом, що посилює супресію, викликає збільшення ампліфікації інгібіторних РНК, що продукуються на основі елемента сайленсингу вище від того рівня, який досягається під час експресії тільки елемента сайленсингу самого по собі. На додачу до збільшеної ампліфікації специфічних видів КМАЇ самих по собі способи та композиції додатково забезпечують можливість продукування відмінної групи видів ЕМАЇї, які можуть підвищувати ефективність порушення експресії цільового гена. Таким чином, коли елемент, що посилює супресію, експресується в рослинній клітині в комбінації з елементом сайленсингу, способи та бо композиції можуть забезпечувати можливість системного продукування КМАї у рослині,
продукування більших кількостей КМАЇ, ніж можна було б спостерігати у випадку тільки конструкції елемента сайленсингу окремо та підвищене навантаження КМАЇї у флоемі рослини, таким чином, забезпечується кращий контроль комах, що харчуються флоемою, за допомогою підходу із застосуванням КМАЇї. Таким чином, різні способи та композиції передбачають покращені способи доставки інгібіторних РНК у цільовий організм. Див., наприклад, публікацію заявки на патент США 2009/0188008.
Використовуваний у даному документі "елемент, що посилює експресію, " містить полінуклеотид, що містить цільову послідовність, що підлягає супресії, або її активний фрагмент або варіант. Зрозуміло, що елемент, який посилює супресію, не має бути ідентичним цільовій послідовності, а ймовірніше, елемент, що посилює супресію, може містити варіант цільової послідовності за умови, що послідовність елемента, що посилює супресію, достатньою мірою ідентична цільовій послідовності, щоб забезпечити можливість підвищеного рівня КЕМАЇї, що продукуються на основі елемента сайленсингу, вище від того рівня, який досягається під час експресії тільки елемента сайленсингу. Аналогічно елемент, що посилює супресію, може містити фрагмент цільової послідовності, де фрагмент має достатню довжину, щоб забезпечити можливість підвищеного рівня ЕМАЇї, що виробляються на основі елемента сайленсингу, вище від того рівня, який досягається під час експресії тільки елемента сайленсингу.
Зрозуміло, що можна застосовувати декілька елементів, що посилюють супресію, з однієї цільової послідовності, або з різних цільових послідовностей, або з різних ділянок однієї цільової послідовності. Наприклад, застосовувані елементи, що посилюють супресію, можуть містити фрагменти цільової послідовності, одержані з іншої ділянки цільової послідовності (тобто з З'ЮТК, кодувальної послідовності, інтрона та/(або 5'ШТЕ). Крім того, елемент, що посилює супресію, може міститися в касеті експресії, як описано у другій частині даного документа, та у певних варіантах здійснення елемент, що посилює супресію, знаходиться у тому ж або в іншому ДНК-векторі або конструкції щодо елемента сайленсингу. Елемент, що посилює супресію, може бути функціонально пов'язаний з промотором, розкритим у даному документі. Зрозуміло, що елемент, що посилює супресію, може експресуватися конститутивно, або альтернативно він може продукуватися специфічним щодо стадії чином із застосуванням різних індукованих, або переважних для певної тканини, або регульованих у процесі розвитку
Зо промоторів, які розглянуті у другій частині даного документа.
У конкретних варіантах здійснення під час застосування як елемента сайленсингу, так і елемента, що посилює супресію, системне продукування ЕМАЇ відбувається у всій рослині. У додаткових варіантах здійснення рослина або частини рослини за даним розкриттям мають підвищене навантаження КМАЇ у флоемі рослини порівняно з тим, яке можна було спостерігати під час експресії конструкції елемента сайленсингу окремо, та, таким чином, забезпечується кращий контроль комах, що живляться флоемою, за допомогою підходу з КМАЇїі. У певних варіантах здійснення рослини, частини рослини та рослинні клітини за даним розкриттям можна додатково охарактеризувати як такі, що забезпечують можливість продукування різноманітних видів ЕМАЇ, які можуть підвищувати ефективність порушення експресії цільового гена.
У конкретних варіантах здійснення комбінована експресія елемента сайленсингу та елемента, що посилює супресію, підвищує концентрацію інгібіторної РНК у рослинній клітині, рослині, частині рослини, рослинній тканині або флоемі вище від того рівня, який досягається під час експресії елемента сайленсингу окремо.
Використовуваний у даному документі "підвищений рівень інгібіторних РНК" включає будь- яке статистично значуще підвищення рівня ЕМАї, що виробляються у рослині, що характеризується комбінованою експресією при порівнянні з придатною контрольною рослиною.
Наприклад, підвищення рівня КМАЇї у рослині, частині рослини або рослинній клітині може включати щонайменше приблизно 1 95, приблизно 1 95-5 95, приблизно 5 95-10 95, приблизно 10 96-20 95, приблизно 20 95-30 95, приблизно 30 95-40 95, приблизно 40 95-50 95, приблизно
БО 50 У0-60 965, приблизно 60-70 95, приблизно 70 95-80 95, приблизно 80 95-90 95, приблизно 90 95- 100 95 або більше підвищення рівня КМАї у рослині, частині рослини, рослинній клітині або флоемі під час порівняння з відповідним контролем. В інших варіантах здійснення підвищення рівня КМАї у рослині, частині рослини, рослинній клітині або флоемі може передбачати щонайменше приблизно 1-кратне, приблизно 1-кратне - 5-кратне, приблизно 5-кратне - 10- кратне, приблизно 10-кратне - 20-кратне, приблизно 20-кратне - 30-кратне, приблизно 30-кратне - 40-кратне, приблизно 40-кратне - 50-кратне, приблизно 50-кратне - б0о-кратне, приблизно 60- кратне - 70-кратне, приблизно 70-кратне - 80-кратне, приблизно 80-кратне - 90-кратне, приблизно 90-кратне - 100-кратне або більше підвищення рівня КМАї у рослині, частині рослини, рослинній клітині або флоемі при порівнянні з відповідним контролем. Приклади бо комбінованої експресії елемента сайленсингу з елементом, що посилює супресію, для контролю щитників та представників роду Гуди5 можна знайти в публікації заявки на патент США 2011/0301223 та публікації заявки на патент США 2009/0192117.
Деякі варіанти здійснення стосуються пригнічення експресії цільових генів у видів комах- шкідників за допомогою молекул інтерферувальної рибонуклеїнової кислоти (РНК). У публікації за РСТ МО 2007/074405 описані способи пригнічення експресії цільових генів у безхребетних шкідників, включаючи колорадського жука. У публікації за РСТ УМО 2005/110068 описані способи пригнічення експресії цільових генів у безхребетних шкідників, включаючи, зокрема, у західного кукурудзяного жука, як засоби контролю зараження комахами. Крім того, у публікації за РСТ УМО 2009/091864 описані композиції та способи супресії цільових генів видів комах-шкідників, включаючи шкідників роду Гуди5. Молекули нуклеїнових кислот, включаючи КМАї для націлювання на Н-субодиницю вакуолярної АТФ-ази, є застосовними для контролю популяції твердокрилих шкідників та зараження ними, як описано в публікації заявки на патент США 2012/0198586. У публікації за РСТ УМО 2012/055982 описана рибонуклеїнова кислота (РНК або дволанцюгова РНК), яка інгібує або пригнічує експресію цільового гена, який кодує: рибосомальний білок комахи, такий як рибосомальний білок 119, рибосомальний білок І 40 або рибосомальний білок 527А; субодиницю протеасоми комахи, таку як білок Ерпб, Рго5 25, білок
Ерп2, білок бета 1 субодиниці протеасоми або білок бета 2 Рго5; В-коатомер СОРІ-везикули комахи, у-косатомер СОРІ-везикули, Д'-коатомерний білок або с-коатомер СОРІ-везикули; білок тетраспанін 2 А комахи, який являє собою ймовірний білок трасмембранного домену; білок комахи, що належить до родини актину, такого як актин 5С; білок убіквітин-5Е комахи; білок бЗес23 комахи, який являє собою активатор ГІФ-ази, залученої у внутрішньоклітинний транспорт білків; білок "сгіпківй" комахи, який являє собою нестандартний міозин, який залучений у рухову активність; білок "сгооКей песк" комахи, який є залученим у регуляцію ядерного альтернативного сплайсингу мРНК; білок С-субодиниці вакуолярної Ні-АТф-ази комахи та Трр-1 комахи, такий як Таї-зв'язувальний білок. У публікаціях заявок на патент США 2012/029750, 05 20120297501 та 2012/0322660 описані інтерферувальні рибонуклеїнові кислоти (РНК або дволанцюгова РНК), які функціонують під час поглинання видами комах-шкідників із пригніченням експресії цільового гена у вказаної комахи-шкідника, де РНК містить щонайменше один елемент сайленсингу, де елемент сайленсингу являє собою ділянку дволанцюгової РНК,
Зо що містить гібридизовані комплементарні ланцюги, з яких один ланцюг містить послідовність нуклеотидів, яка щонайменше частково комплементарна цільовій нуклеотидній послідовності у межах цільового гена, або складається з неї. У публікації заявки на патент США 2012/0164205 описані потенційні мішені для інтерферувальних дволанцюгових рибонуклеїнових кислот для пригнічення безхребетних шкідників, зокрема: гомологічна послідовність Спаз, гомологічна послідовність бета-тубуліну, гомологічна послідовність 40 кДа М-АТфФази, гомологічна послідовність ЕЕТа, гомологічна послідовність субодиниці р28 протеосоми 265, гомологічна послідовність епоксидгідролази ювенільного гормона, гомологічна послідовність білка хлоридних каналів, залежних від набухання, гомологічна послідовність білка глюкоза-6-фосфат- 1-дегідрогенази, гомологічна послідовність білка Асі42А, гомологічна послідовність фактора 1
АДФ-рибозилювання, гомологічна послідовність білка фактора транскрипції ІВ, гомологічні послідовності хітинази, гомологічна послідовність ферменту, який кон'югує убіквітин, гомологічна послідовність гліцеральдегід-3-фосфат-дегідрогенази, гомологічна послідовність убіквітину В, гомолог естерази ювенільного гормона і гомологічна послідовність альфа-тубуліну.
Застосування для контролю за допомогою пестицидів
З рівня техніки відомі загальні способи застосування штамів, що містять послідовність нуклеїнової кислоти згідно з варіантами здійснення або її варіант, для контролю за допомогою пестицидів або під час розробки інших організмів як пестицидних засобів. Див., наприклад, патент США Мо 5039523 та ЕР 0480762А2.
Можуть бути вибрані мікроорганізми-хазяї, які, як відомо, заселяють "фітосферу" (філоплан, філосферу, ризосферу та/або ризоплан) однієї або декількох сільськогосподарських культур, що становлять інтерес. Такі мікроорганізми вибирають таким чином, щоб вони могли успішно конкурувати в конкретному навколишньому середовищі з мікроорганізмами дикого типу, забезпечувати стабільне підтримання та експресію гена, що експресує поліпептид РІР-96, і бажано забезпечувати покращений захист пестициду від руйнування та інактивації в навколишньому середовищі.
Альтернативно поліпептид РІЇР-96 одержують шляхом введення гетерологічного гена в клітину-хазяїна. Експресія гетерологічного гена призводить, прямо або опосередковано, до вироблення та зберігання пестициду всередині клітини. Ці клітини потім обробляють в умовах, які продовжують активність токсину, що продукується в клітині, у випадку внесення клітини в бо середовище, що оточує цільового(цільових) шкідника(шкідників). Одержаний продукт зберігає токсичність токсину. Такі інкапсульовані природним чином поліпептиди РІЇР-96 потім можна складати відповідно до традиційних методик для застосування щодо середовища, населеного цільовим шкідником, наприклад грунту, води та листя рослин. Див., наприклад, ЕРА 0192319 та літературні джерела, процитовані у ньому.
Пестицидні композиції
У деяких варіантах здійснення активні інгредієнти можна вносити у формі композицій та можна вносити у посівну площу або наносити на рослину, що підлягає обробці, одночасно або послідовно з іншими сполуками. Ці сполуки можуть являти собою добрива, засоби боротьби з бур'янами, кріопротектори, поверхнево-активні речовини, детергенти, пестицидні мила, масла, застосовувані під час стану спокою, полімери та/або склади з носієм з уповільненим вивільненням або біорозкладаним носієм, який забезпечує довготривале дозоване внесення у цільові площі після одноразового внесення складу. Вони також можуть являти собою селективні гербіциди, хімічні інсектициди, віруциди, мікробоциди, амебоциди, пестициди, фунгіциди, бактерициди, нематоциди, молюскоциди або суміші з декількох цих препаратів за необхідності разом з додатковими прийнятними з погляду сільського господарства носіями, поверхнево- активними речовинами або допоміжними засобами, що сприяють нанесенню, традиційно застосовуваними в галузі техніки, пов'язаній з одержанням складів. Придатні носії та допоміжні засоби можуть бути твердими або рідкими та відповідати речовинам, звичайно застосовуваними у технології складання, наприклад, природним або регенерованим мінеральним речовинам, розчинникам, диспергаторам, змочувальним засобам, речовинам, що надають клейкості, зв'язувальним речовинам або добривам. Аналогічно, склади можна одержувати у вигляді їстівних "приманок" або формувати у "пастки" для шкідників, що забезпечує живлення або поглинання цільовим шкідником пестицидного складу.
Способи нанесення активного інгредієнта або агрохімічної композиції, яка містить щонайменше один із поліпептидів РІИР-96, що продукуються штамами бактерій, включають нанесення на листя, покриття насіння та внесення в грунт. Кількість застосувань та норма застосування залежать від інтенсивності зараження відповідним шкідником.
Композицію можна складати у вигляді порошку, дусту, пелети, гранули, розпилюваного розчину, емульсії, колоїдної речовини, розчину тощо, та її можна одержувати за допомогою
Зо таких традиційних способів, як сушка, ліофілізація, гомогенізація, екстракція, фільтрація, центрифугування, осадження або концентрація культури клітин, що містять поліпептид. У всіх таких композиціях, які містять щонайменше один такий пестицидний поліпептид, поліпептид може бути наявним у концентрації від приблизно 1 95 до приблизно 99 95 за вагою.
Лускокрилих, двокрилих шкідників, шкідників справжніх клопів, нематодних, напівтвердокрилих або твердокрилих шкідників можна знищувати або зменшувати їхню кількість на вказаній площі за допомогою способів за даним розкриттям, або засоби можна профілактично вносити на площу навколишнього середовища для запобігання зараженню чутливим шкідником. Переважно шкідник поглинає пестицидно ефективну кількість поліпептиду або контактує з ним. Використовувана у даному документі "пестицидно ефективна кількість" відноситься до кількості пестициду, яка може призводити до загибелі щонайменше одного шкідника або до помітно зниженого зросту, живлення або нормального фізіологічного розвитку шкідника. Ця кількість буде варіювати залежно від таких факторів, як, наприклад, конкретні цільові шкідники, що підлягають контролю, конкретне навколишнє середовище, місце розташування, рослина, культура або сільськогосподарська ділянка, що підлягає обробці, умови навколишнього середовища та спосіб, норма, концентрація, стабільність та кількість застосувань пестицидно ефективної поліпептидної композиції. Склади також можуть варіювати в залежності від кліматичних умов, екологічних міркувань, та/або частоти застосування, та/або тяжкості зараження шкідниками.
Описані пестицидні композиції можна одержувати шляхом складання або суспензії
БО бактеріальних клітин, кристалів та/або спор або виділеного білкового компонента з бажаним, прийнятним з погляду сільського господарства носієм. Композиції можна складати перед введенням за допомогою відповідних способів, таких як ліофілізація, сублімаційне висушування, висушування, або у водному носії, середовищі або в придатному розріджувачі, такому як сольовий розчин або інший буфер. Складені композиції можуть знаходитися у формі дусту, або гранульованого матеріалу, або суспензії в маслі (рослинній або мінеральній), або водних емульсій, або емульсій масло/вода, або у вигляді змочувального порошку, або в комбінації з будь-яким іншим матеріалом-носієм, придатним для сільськогосподарського застосування. Придатні носії, прийнятні з погляду сільського господарства, можуть бути твердими або рідкими та добре відомі з рівня техніки. Термін "прийнятний з точки зору 60 сільського господарства носій" охоплює усі допоміжні засоби, инертні компоненти,
диспергатори, поверхнево-активні речовини, речовини, що надають клейкості, зв'язувальні речовини і т. д., які звичайно застосовують у технології складання пестицидів; при чому вони добре відомі спеціалістам зі складання пестицидів. Склади можна змішувати з одним або декількома твердими або рідкими допоміжними засобами та одержувати за допомогою різних способів, наприклад, шляхом рівномірного перемішування, змішування та/або розмелювання пестицидної композиції з придатними допоміжними засобами із застосуванням традиційних методик складання. Придатні склади та способи нанесення описані у патенті США Мо 6468523, включеному в даний документ за допомогою посилання. Рослини можна також обробляти однією або декількома хімічними композиціями, включаючи один або декілька гербіцидів, інсектицидів або фунгіцидів. Ілюстративні хімічні композиції включають наступні. Гербіциди для фруктів/овочів: атразин, бромацил, діурон, гліфосат, лінурон, метрибузин, симазин, трифлуралін, флуазифоп, глуфосинат, галосульфурон від Соулап, паракват, пропізамід, сетоксидим, бутафенацил, галосульфурон, індазифлам. Інсектициди для фруктів/овочів: альдикарб, Васійи5 (Ппигіепдіепбі5, карбарил, карбофуран, хлорпірифос, циперметрин, дельтаметрин, діазинон, малатіон, абамектин, цифлутрин/бета-цифлутрин, есфенвалерат, лямбда-цигалотрин, ацеквіноцил, біфеназат, метоксифенозид, новалурон, кромафенозид, тіаклоприд, динотефуран, флуакрипірим, толфенпірад, клотіанідин, спіродиклофен, гамма- цигалотрин, спіромезифен, спіносад, ринаксипір, ціазипір, спінотерам, трифлумурон, спіротетрамат, імідаклоприд, флубендіамід, тіодикарб, метафлумізон, сульфоксафлор, цифлуметофен, ціанопірафен, імідаклоприд, клотіанідин, тіаметоксам, спіноторам, тіодикарб, флонікамід, метіокарб, емамектин-бензоат, індоксакарб, фортіазат, фенаміфос, кадусафос, пірипроксифен, фенбутатин-оксид, гекстіазокс, метоміл, 4-((б-хлорпіридин-3-ілуметилі|(2,2- дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он. Фунгіциди для фруктів/овочів: карбендазим, хлороталоніл,
ЕВОС, сірка, тіофанат-метил, азоксистробін, цимоксаніл, флуазинам, фосетил, іпродіон, крезоксим-метил, металаксил/умефеноксам, трифлоксистробін, етабоксам, іпровалікарб, трифлоксистробін, фенгексамід, окспоконазола фумарат, ціазофамід, фенамідон, зоксамід, пікоксистробін, піраклостробін, цифлуфенамід, боскалід. Гербіциди для злаків: ізопротурон, бромоксиніл, іоксиніл, фенокси-сполуки, хлорсульфурон, клодинафоп, диклофоп, дифлуфенікан, феноксапроп, флорасулам, флуроксипір, метсульфурон, триасульфурон,
Зо флукарбазон, йодосульфурон, пропоксикарбазон, піколінафен, мезосульфурон, бефлубутамід, піноксаден, амідосульфурон, тифенсульфурон-метил, трибенурон, флупірсульфурон, сульфосульфурон, пірасульфотол, піроксулам, флуфенацет, тралкоксидим, піроксасульфон.
Фунгіциди для злаків: карбендазим, хлороталоніл, азоксистробін, ципроконазол, ципродиніл, фенпропіморф, епоксиконазол, крезоксим-метил, квіноксифен, тебуконазол, трифлоксистробін, симеконазол, пікоксистробін, піраклостробін, димоксистробін, протіоконазол, флуоксастробін.
Інсектициди для злаків: диметоат, лямбда-цигалотрин, дельтаметрин, альфа-циперметрин, ВД- цифлутрин, біфентрин, імідаклоприд, клотіанідин, тіаметоксам, тіаклоприд, ацетаміприд, динетофуран, хлорпірифос, метамідофос, оксидеметон-метил, піримікарб, метіокарб. Гербіциди для маїсу: атразин, алахлор, бромоксиніл, ацетохлор, дикамба, клопіралід, (5-)диметенамід, глуфосинат, гліфосат, ізоксафлутол, (5-)метолахлор, мезотрион, нікосульфурон, примісульфурон, римсульфурон, сулькотрион, форамсульфурон, топрамезон, темботрион, сафлуфенацил, тієнкарбазон, флуфенацет, піроксасульфон. Інсектициди для маїсу: карбофуран, хлорпірифос, біфентрин, фіпроніл, імідаклоприд, лямбда-цигалотрин, тефлутрин, тербуфос, тіаметоксам, клотіанідин, спіромезифен, флубендіамід, трифлумурон, ринаксипір, дельтаметрин, тіодикарб, В-цифлутрин, циперметрин, біфентрин, люфенурон, трифлуморон, тефлутрин, тебупіримфос, етипрол, ціазипір, тіаклоприд, ацетаміприд, динетофуран, авермектин, метіокарб, спіродиклофен, спіротетрамат. Фунгіциди для маїсу: фенітропан, тирам, протіоконазол, тебуконазол, трифлоксистробін. Гербіциди для рису: бутахлор, пропаніл, азимсульфурон, бенсульфурон, цигалофоп, даїмурон, фентразамід, імазосульфурон, мефенацет, оксазикломефон, піразосульфурон, пірибутикарб, квінклорак, тіобенкарб, інданофан, флуфенацет, фентразамід, галосульфурон, оксазикломефон, бензобіциклон, пірифталід, пеноксулам, біспірибак, оксадіаргіл, етоксисульфурон, претилахлор, мезотрион, тефурилтрион, оксадіазон, феноксапроп, піримісульфан. Інсектициди для рису: діазинон, фенітротіон, фенобукарб, монокротофос, бенфуракарб, бупрофезин, динотефуран, фіпроніл, імідаклоприд, ізопрокарб, тіаклоприд, кромафенозид, тіаклоприд, динотефуран, клотіанідин, етипрол, флубендіамід, ринаксипір, дельтаметрин, ацетаміприд, тіаметоксам, ціазипір, спіносад, спіноторам, емамектин-бензоат, циперметрин, хлорпірифос, картап, метамідофос, етофенпрокс, триазофос, 4-((б-хлорпіридин-3-іл)уметил|(2,2-дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он, карбофуран, бенфуракарб. Фунгіциди для рису: тіофанат-метил, азоксистробін, карпропамід, бо едифенфос, феримзон, іпробенфос, ізопротіолан, пенцикурон, пробеназол, піроквілон, бо трициклазол, трифлоксистробін, диклоцимет, феноксаніл, симеконазол, тіадиніл. Гербіциди для бавовнику: діурон, флуометурон, М5МА, оксифлуорфен, прометрин, трифлуралін, карфентразон, клетодим, флуазифоп-бутил, гліфосат, норфлуразон, пендиметалін, піритіобак- натрій, трифлоксисульфурон, тепралоксидим, глуфосинат, флуміоксазин, тидіазурон.
Інсектициди для бавовнику: ацефат, альдикарб, хлорпірифос, циперметрин, дельтаметрин, малатіон, монокротофос, абамектин, ацетаміприд, емамектин бензоат, імідаклоприд, індоксакарб, лямбда-цигалотрин, спіносад, тіодикарб, гамма-цигалотрин, спіромезифен, піридаліл, флонікамід, флубендіамід, трифлумурон, ринаксипір, бета-цифлутрин, спіротетрамат, клотіанідин, тіаметоксам, тіаклоприд, динетофуран, флубендіамід, ціазипір, спіносад, спіноторам, гама-цигалотрин, 4-І(б-хлорпіридин-3-іл)метилі(2,2- дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он, тіодикарб, авермектин, флонікамід, піридаліл, спіромезифен, сульфоксафлор, профенофос, триазофос, ендосульфан. Фунгіциди для бавовнику: етридіазол, металаксил, квінтозен. Гербіциди для сої: алахлор, бентазон, трифлуралін, хлоримурон-етил, хлорансулам-метил, феноксапроп, фомесафен, флуазифоп, гліфосат, імазамокс, імазаквін, імазетапір, (5-)метолахлор, метрибузин, пендиметалін, тепралоксидим, глуфосинат. Інсектициди для сої: лямбда-цигалотрин, метоміл, паратіон, тіокарб, імідаклоприд, клотіанідин, тіаметоксам, тіаклоприд, ацетаміприд, динетофуран, флубендіамід, ринаксипір, ціазипір, спіносад, спіноторам, емамектин-бензоат, фіпроніл, етипрол, дельтаметрин, В-цифлутрин, гама- та лямбда-цигалотрин, 4-((б-хлорпіридин-3- іл)уметил)|(2,2-дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он, спіротетрамат, спінодиклофен, трифлумурон, флонікамід, тіодикарб, бета-цдцифлутрин. Фунгіциди для сої: азоксистробін, ципроконазол, епоксиконазол, флутриафол, піраклостробін, тебуконазол, трифлоксистробін, протіоконазол, тетраконазол. Гербіциди для цукрового буряку: хлоридазон, десмедифам, етофумезат, фенмедифам, триалат, клопіралід, рлуазифоп, ленацил, метамітрон, квінмерак, циклоксидим, трифлусульфурон, тепралоксидим, квізалофоп. Інсектициди для цукрового буряку: імідаклоприд, клотіанідин, тіаметоксам, тіаклоприд, ацетаміприд, динетофуран, дельтаметрин,
В-цифлутрин, гамма/лямбда-цигалотрин, 4-І(б-хлорпіридин-3-іл)метилі(2,2- дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он, тефлутрин, ринаксипір, ціаксипір, фіпроніл, карбофуран.
Гербіциди для каноли: клопіралід, диклофоп, флуазифоп, глуфосинат, гліфосат, метазахлор,
Зо трифлуралін, етаметсульфурон, квінмерак, квізалофоп, клетодим, тепралоксидим. Фунгіциди для каноли: азоксистробін, карбендазим, флудіоксоніл, іпродіон, прохлораз, вінклозолін.
Інсектициди для каноли: карбофуранові фосфорорганічні сполуки, піретроїди, тіаклоприд, дельтаметрин, імідаклоприд, клотіанідин, тіаметоксам, ацетаміприд, динетофуран, ВД- цифлутрин, гамма- та лямбда-цигалотрин, тау-флувалеріат, етипрол, спіносад, спіноторам, флубендіамід, ринаксипір, ціазипір, 4-((б-хлорпіридин-3-іл)уметил|(2,2-дифторетил)аміно|фуран- 2(5Н)-он.
У деяких варіантах здійснення гербіцид являє собою атразин, бромацил, діурон, хлорсульфурон, метсульфурон, тифенсульфурон-метил, трибенурон, ацетохлор, дикамбу, ізоксафлутол, нікосульфурон, римсульфурон, піритіобак-натрій, флуміоксазин, хлоримурон- етил, метрибузин, квізалофоп, 5-метолахлор, гексазинон або їхні комбінації.
У деяких варіантах здійснення інсектицид являє собою есфенвалерат, хлорантраніліпрол, метоміл, індоксакарб, оксаміл або їхні комбінації.
Пестицидна та інсектицидна активність "Шкідник" включає без обмежень комах, гриби, бактерії, нематод, кліщів, іксодових кліщів і т. п. Комахи-шкідники включають комах, вибраних з рядів СоіІеоріега, Оіріега, Нуптепоріега,
І ерідорієга, МаПорнада, Ноторіега, Нетірієга, ОпНгорієга, Тнузапорієга, Оептаріега, Ізорівга,
Апорісшига, зірпопаріега, Тгіспорієга тощо, зокрема ГІ ерідорієга та СоІеоріега.
Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що не усі сполуки однаково ефективні проти всіх шкідників. Сполуки відповідно до варіантів здійснення проявляють активність проти комах- шкідників, які можуть включати економічно важливих агрономічних, лісових, тепличних шкідників, шкідників розплідників, декоративних рослин, їжі та тканин, здоров'я людей та тварин, домашньої та комерційної інфраструктури, домашнього господарства та продуктів, призначених для зберігання.
Личинки з ряду І ерідорієга включають без обмеження совок, підгризаючих совок, п'ядунів та геліотин родини Мосіцідае Зродоріега їтидірегда УЕ тій (совка трав'яна); 5. ехідча Нарпег (совка мала); 5. ІШига Рабгісіи5 (тютюнова совка, гусінь, що пожирає суцвіття); Матевіга сопіїдигаїа УмаІКег (совка Берта); М. ргаззісає І іппаєиз (совка капустяна); Аадгоїї5 ірхіоп Ниїпадеї (совка-іпсилон); А. огійподопіа Могтізоп (совка прямокутна); А. 5!,ибБіегтапеа РаБгісіи5 (совка зерниста); АіІабата агдйПасеа Ніирпег (совка бавовняна); Тгіспоріибіа пі Нарпег (совка ні); бо Рзецйдоріивзіа іпсіцадеп5 УмаїЇКег (соєва совка); Апіісагзіа деттагаїї5 Набрпег (совка оксамитових бобів); Нурепа 5сабга Рабгісіни5 (совка конюшинова); Неїйоїйпі5 мігезсеп5 РаБбгісіи5 (тютюнова листовійка); Рзеида|єйа ипірипсіа Науогій (совка лугова); АщШеїз тіпдага Вагпевз апа
Мсаиппоцой (шорстка совка); Єихоа теззогіа Наїті5 (чорнобока совка); Еагіах5 іп5шапа Воізаимаї! (совка бавовняна єгипетська); Е. мЩеїІа Рабгісіи5 (совка плямиста); Неїїсомегра аппідега Набпег (совка бавовняна американська); Н. леа Водаіїє (кукурудзяна совка або бавовняна совка);
Меїапсига рісіа Нагїті5 (совка); Едіга (Хуїотудев5) сигіайв (згоїе (цитрусова совка); вогнівок, чохлоносок, гусениць, які будують павутинні гнізда, конусних метеликів та шкідників, які скелетують листя, із родини Ругаїїйає Об5ігіпіа пибійайс Ніирпег (метелик стебловий кукурудзяний); Атуеїоі5 їгапойейПйа УмаїЇКег (гусениця, що вражає рубчик цитрусових); Ападавіа
Киеппіва 2ейПег (вогнівка вітрякова); Садга сацшіеМйа МУМаїКег (вогнівка сухофруктова); Спо зирргеззаїїз УМаІКег (жовта рисова вогнівка); С. рагіейПйиз5 (соргова вогнівка); Согсуга серпаІопіса зЗіаіпіоп (вогнівка рисова); Статривх саїїдіпозейи5 СІетеп5 (вогнівка кукурудзяна); С. ТеїтеггеПи5 гіпсоКеп (гусінь тонконога); Спарпа|йосгосі5 теаїпаїї5 сцепее (листовійка рисова); Оезтіа Типегаїїб
Набпег (виноградна листовійка); Оіарпапіа Буаїїпага Гіппаєеиз (динна вогнівка); О. пйідаїййв ОЇ (огіркова вогнівка); Оіайгаєа дгападіозенйа Оуаг (вогнівка кукурудзяна південно-західна), 0. засопагаїї5 Рабгісіи5 (вогнівка цукрової тростини); Еогепта Іойіпі ЮОуаг (мексиканська рисова вогнівка); Ерпезійа еішеїйПа Нарпег (вогнівка зернова (какас)); Сайегіа теїопеїа І іппаєиз5 (велика воскова міль); Негреїодгатта Іісагвізаїі5 УмаїКег (вогнівка-трав'янка); Нотоеозота еїесіейИт
Ниві (вогнівка соняшникова); ЕІазтораїриз ІдпозейПив5 2ейПег (мала кукурудзяна вогнівка); Аспгоїа дгізеМПа Рабгісіи5 (мала воскова міль); І охозіеде 5іїсіїсаїї5 Гіппаеи5 (луговий метелик); Огіпада
Іпугізаїїє УмаїЇКег (чайна міль); Магиса іезішаїї5 Сеуег (вогнівка акацієва); Ріодіа іптегрипсіеПйа
Ноабрпег (міль індійська мучна); Зсігрорпада іпсегішіах5 УмаїЇКег (стеблова рисова вогнівка); Одеа гибідаїїє («зцепее (вогнівка іржаво-коричнева); та листовійок, гусениць листовійок-брунькоїдів, плодожерок та гусениць-шкідників плодів із родини Тогігісідає Асієегіє діомегапа У/аізіпдапат (західна чорноголова листовійка); А. магіапа Регпаїд (східна чорноголова листовійка); Агспірз агдугозріїа УмаІКег (листовійка плодових дерев); А. гозапа Гіппаєиз (європейська листовійка) та інші види Агсойпір5, Адохорпуе5 огапа Різспег моп Козвіегвіатт (листовійка сітчаста); Соспуїї5 позре5 Умаїбіпайпат (смугаста соняшникова міль); Суадіа Іайегеапа Ум/аізіпайат (лощинна плодожерка); С. ротопеМйа Гіппаєих (яблунева плодожерка); Ріаїупоїа Памедапа Сіетеп5
Зо (листовійка мінлива); Р. зішШапа УмМаїзіпдпат (листовійка всеїдна); ГоБрезіа роїгапа Оепіз 8 зспійептйПег (листовійка європейська виноградна); Зріюпоїа осеПапа Оепіз 5 5спшШептиішШег (листовійка брунькова); Епаоріга міеапа Сіетепвз (листовійка виноградна); Еироесіїа атріднеїйа
Ноарпег (листовійка гронова); Вопадоїа заїЇцбгісоїа Меугіск (листовійка бразильська яблунева);
Сгарпоїйа тоїезіа ВизсК (плодожерка східна персикова); Зцйцієїта ПеІйапіпапа Кіїеу (листовійка соняшникова); Агдугоїаепіа зрр.; Спогізопецга 5рр.
Інші вибрані сільськогосподарські шкідники з ряду І ерідоріеєга включають без обмеження
АІ5орпйа ротеїагіа Наїтіз (осінній плодовий черв'як); Апагзіа Іпеагейа 72ейПег (міль фруктова смугаста); Апізоїа 5епайогіа У.Е. Зтійй (сатурнія оранжева дубова); Апіпегаєа регпуї пцегіп-
Мепемійе (китайський дубовий шовкопряд); Вотбрух тогі Гіппаєи5 (шовковичний шовкопряд);
Виссшіагіх Тигбегівеа Ви5скК (кривовуса бавовняна міль); Соїїа5 еигуїпете Воізаима! (люцернова жовтяниця); Юайапа іпіедегіта Сгоїе 8 Кобіпхоп (чубатка горіхова); Оепагоїйтив в5ібрігіси5
Т5спеїмегіком (сибірський шовкопряд), Еппото5 5!йбБ5ідпагіа Набпег (п'ядун ільмовий); Егаппів
Шіатпа Наїгтіз (п'ядун липовий); Еиргосії5 спгузоппоеа І іппаєи5 (шовкопряд золотистий); На!тізіпа атегісапа Сиегіп-МепеміШе (піроморфіда американська); Нетіїеиса оїїмае Соскгеї! (гусінь сатурнії); Нурпапігіа сипеа Огигу (американський білий метелик); Кеїїегіа Іусорегзісеї|Ма умаівіпдапат (томатна міль); Гатбаіпа йзсейПагіа ї5сейПагіа Ниїбї (п'ядун тсуговий східний); І.
ТієсеМПапа Ішдиргоза Ниїбї (п'ядун тсуговий західний); ІГейсота звзаїїсі5 ІГіппаєи5 (шовкопряд вербовий); І утапігіа діхраг І іппаєи5 (непарний шовкопряд); Мапдиса диіпдиетасиіага Нажмогпій (бражник п'ятиточковий, томатний бражник); М. зехіа Науогій (томатний бражник, тютюновий бражникю); Орегорічега Бгитаїа ІГіппаєи5 (п'ядун зимовий); РаїЇеасгійа мегпаїа РесК (п'ядун весняний); Рарійо сгезрпопіе5з Статег (вітрильник кресфонтес, косатець велетенський);
РПигудапідіа саїйогпіса РасКкага (коконопряд кільчастий каліфорнійський); РНуїПоспівіїв сйгейПйа зЗіаіпіоп (цитрусова муха-мінер); РПуїопогусіег ріапсагаеїйа Рабгісіи5 (міль-строкатка плодова нижньостороння); Ріеєгі5 ргаззісає І іппаєиз (білан капустяний великий); Р. гарає І іппаєиз (білан капустяний малий); Р. парі Ііппаєи5 (білан бруквяний); Ріафуріййа сагацідасіуїа КіПеу (пальцекрилка артишокова); РішеПа хуїозієЇПа Гіппаєиз (міль капустяна); Ресііпорпога доззуріеНа
Зацйпдег5 (рожевий коробковий черв'як); Ропійа ргоїодісе Воіхдима! апа І есопіє (клітчастий білан); Забшодев аедгоїаїа сСцепее (всеїдний п'ядун); 5спігига сопсіппа У.Е. тій (чубатка);
Зйоїгода сегеаіеПа Оїїміег (міль ячмінна ангумуазька); Тпаштейроеа ріуосатра бЗспйептиїйетг бо (похідний шовкопряд сосновий); Тіпеоїа різзеПейПна Ниттеї (міль кімнатна); Тиша арзоїша Меугіск
(томатна міль); Мропотешіа радейа Ііппаєи5 (горностаєва міль плодова); Неїоїпіз 5зибПеха
Сцепее; Маіасозота 5рр. та Огдуїа 5рр.
Становлять інтерес личинки та імаго з ряду СоіІеорієга, у тому числі довгоносики з родин
Апіпгірідає, Вгиспідає та Сигсцііопідає (зокрема, без обмеження: Апіпопоти5 дгапаі5 Вопетап (довгоносик бавовниковий); І і55огпоріги5 огулорпйи5 Ки5спе! (довгоносик рисовий водяний);
Зйорпйи5 дгапагіи5 ІГіппаєи5 (довгоносик амбарний); 5. огу/ає ІГіппаєи5 (довгоносик рисовий);
Нурега рипсіавда Рабгісіи5 (довгоносик точковий); Суїїпагосоріигиз адзрегзиз І еСопіе (довгоносик соняшниковий стебловий); Зітісгопух їшіми5 ІесСопіе (червоний довгоносик соняшника); 5. зогаіди5 ГеСопіє (сірий довгоносик соняшнику); 5рпепорпоги5 таїдіз Спшепадеп (довгоносик маїсовий)); земляні блішки, блішки, кореневі черви, листоїди, картопляні жуки та листові мінери родини СпПгузотеїїдає (зокрема без обмеження: І ерііпоїагха десетіїпеаїа Зау (колорадський жук); Оіабгоїїса мігуїега мігуїєга ГеСопіє (західний кукурудзяний жук); О. Багрегі Зтій апа
ІЇамжтепсе (північний кукурудзяний жук); 0. ипаесітрипсіаїа Поулагаі Вагрег (південний кукурудзяний жук); Спаеіоспета риїїсагіа МеІ5пеійтег (земляна кукурудзяна блішка); РпуПоїгеїа сгисітегае Соее (блішка хрестоцвітна); Рпуїоїгега 5ігіоїаза (смугаста блішка); СоЇазрі5 Бгиппеа
Еабгісіиє (листоїд виноградний); Ошета теіапорих І іппаєи5 (п'явиця червоногруда); гудодгатта ехсіатайопів Рабгісіи5 (соняшниковий листоїд)); жуки родини СоссіпеїПаає (у тому числі без обмеження: ЕрПйасппа магімевії5 Миїзапі (мексиканська квасолева корівка)); хрущі та інші жуки з родини Зсагараєїдає (зокрема без обмеження: Рорійа іаропіса Меултап (хрущик японський); Сусіосерпаїа рогеаїї5 Атом (дупляк північний, хрущ); С. іттасшіа(а Оїїміег (дупляк південний, хрущ); КПпі2гоїгоди5 тацаїй5 Калоштом5Ку (хрущ звичайний); РпуПорпада сгіпйа
Вигтеїєег (хрущ); Гідуги5 діррози5 ЮОе Сеег (жук морквяний)); шкіроїди з родини Оептезіідаєеє; дротяники з родини Еїаїегідає, ЕІеоде5 5рр., МеїІапоїи5 зрр.; Соподеги5 5рр.; Гітопій5 5рр.;
Адгіоїе5 5рр.; СтІепісега 5рр.; Аеоїш5 5рр.; короїди з родини Зсоїуйдає та жуки з родини
Тепебрііопідає.
Становлять інтерес імаго та незрілі особи ряду Оірієта, у тому числі листові мінери
Адготу?ла рагмісотів І оєм (кукурудзяний листовий мінер); галиці (у тому числі без обмеження:
Сопіагіпіа зогопісоїа Содийей (галиця соргова); Мауєїйоїа девігисіог Зау (гессенська муха); зЗйоаіріозіз тозейапа Сепіп (помаранчева зернова галиця); Меоіазіорієга типеїднапа Геї,
Зо (соняшникова галиця)); плодові мушки (Терпгйідає), ОзсіпеПа її Ііппаєив5 (плодові мушки); квіткові мухи (утому числі без обмеження: Оєїйа ріашта Меїдеп (муха паросткова); 0. соагсіаїа
ЕаІеп (муха озима) та інші Оеєїїа 5рр., Меготулга атегісапа Ріїсй (американська мероміза); Мизса дотевіїса І іппаєишз (кімнатні мухи); Раппіа сапісціагів І іппаєив, Е. Тетогаїї5 5івїп (малі кімнатні мухи); бЗіотоху5 саїЇсйгапе Ііппаєиб5 (жигалки осінні))х мухи польові, жигалки, мухи м'ясні,
Спгузотуа зрр.; Рпотптіа 5рр. та інші мухи-шкідники надродини Мизсоїдеа, гедзі Тарбапизв 5рр.; носоглоткові оводи Сіазігторпійй5 5рр.; Оевігпив 5рр.; бичачі оводи Нуродепта 5рр.; пістряки
Спгузорзо врр.; Меіорпадив оміпи5 І іппаєив (вовноїд овечий) та інші Вгаспусега, комари Аєдез 5рр.; Апорпеєїе5 5рр.; Сшціех 5рр.; мошки Ргозітиййшт врр.; бітийт врр.; мокриці, москіти, сціариди та інші Метаїосега.
Як комахи, що становлять інтерес, включені імаго та личинки з рядів Нептіріега та
Ноторіега, такі як без обмеження хермеси з родини Адеїдідає, сліпняки з родини Мігідає, цикади з родини Сісадідає, цикадки, Етроазса 5рр.; з родини Сісадеїїїдає, комахи надродини
ЕчІдогоїдеа із родин Сіхіїдає, Ріайдає, Ецідогоїдеа, Із5ідаеє та ОеїІрпасідає, горбатки з родини
Метьгасідає, листоблошки з родини Рбзуїїйдаеє, білокрилки з родини АЇПІеугодідає, попелиці з родини Арпідічае, філоксери з родини РпНуїЇохегідае, борошнисті червеці з родини
Рзепидососсічає, червеці з родин АбвіегоІесапідає, Соссідає, бБасіуІоріїдає, Оіазрідідає,
Егіососсідає Огіпеліїддає, Рпоепісососсідає та Магдагодідаеє, мереживниці з родини Тіпдідає, щитники з родини Репіаютіадає, клопи-черепашки, Віїз5и5 5рр.; та інші земляні клопи з родини
Гудаєїдає, пінявки з родини Сегсорідає, клопи-ромбовики з родини Согеіїдає, а також червоноклопи та червоноклопи бавовняні з родини Руггпосогідає.
Важливі з погляду сільського господарства представники ряду Ноторіега додатково включають без обмеження: Асугіпізірпоп різит Наїтіх (попелиця горохова); Аргпі5 сгассімога
Косі (попелиця люцернова); А. Тарбає Зсороїї (попелиця бобова); А. доз5урії сіомег (попелиця бавовняна, попелиця баштанна); А. таїйдігадісіє Богре5 (попелиця кукурудзяна коренева); А. роті Ое Сеег (попелиця яблунева); А. 5рігаесоїа Раїсй (попелиця зелена цитрусова);
Ашасогійит 5оїапі Капепбрасії (попелиця звичайна картопляна); Спаєїозірпоп тадаєйоїї СоскКетгеїЇ (попелиця сунична американська); Оішигарпіх похіа Кигаїштом/Могаміко (попелиця пшенична російська); Бузарпі5 ріапіадіпеа Раазегіпі (попелиця яблунева рожева); Егіозхота Іапідегит
Наихтапп (попелиця яблунева кров'яна); Вгемісогупе Бгаззісає І іппаєи5 (капустяна попелиця); бо НуаїпІоріеги5 ргипі Сеойгоу (попелиця обпилена сливова); І ірарйпі5 егузіті КамКепрасії (попелиця псевдокапустяна); МероіІорпішчт аїтподит УмаїкКег (попелиця злакова); Масгозірпит еирпогбріає
Тпотаз (попелиця картопляна листкова); Му7и5 регзісає ЗиціІ7ег (попелиця картопляно-листкова, попелиця персикова зелена); Мазопоміа гірізпідгі Мозіеу (попелиця латукова зелена); Ретрпіди5 5рр. (коренева попелиця та галова попелиця); Кпораіозірпит таїаді5 Ейсп (попелиця соргова);
К. раді Сіппаєи5 (попелиця черемхова звичайна); Зспігарпіз дгатіпит Копаапі (попелиця злакова звичайна); 5ірпа Пама Рогре5 (попелиця жовта цукрової тростини); ЗйобБіоп амепає
ЕРабгісіи5 (попелиця листова); Тпегіоарпіз тасціага ВисКіоп (попелиця люцернова плямиста);
Тохорієга ацгапій Воуег де Ропзсоїотре (попелиця чайна) та Т. сіїгісіда Кігкаду (попелиця цитрусова); Адеїде5 5рр. (хермеси); Рпуїїохега аемазіаїйгіх Регдапає (філоксера гікорі); Ветівіа арасі Сеппадіи5 (білокрилка тютюнова, білокрилка батату); В. агдепійоїйї Веїому5 апа Ре!тіпд (білокрилка магнолієва); Оіаієцигоде5 сіті Абптеай (білокрилка цитрусова); ТтгіаІєигодев5 аршйопеи5 (білокрилка полосатокрила) та Т. марогагпогит Умезіжмоой (білокрилка теплична);
Етроазса їТарає Наїтіз (цикадка картопляна); І аодеІрнах зігіагейи5 РаПйеп (мала коричнева цикадка); МасгоїЇезіеє5х диаайгійпеайи5 Богреб5 (цикадка астрова); Мерпоїеніх сіпіїсер5 Опіег (цикадка зелена); М. підгорісїи5 513 (рисова цикадка); Міарагмайа Ішдеп5 518 (цикадка коричнева); Регедгіпи5 таїдіє Азптеай (цикадка кукурудзяна); Бодайенйа Тигсїега Ногмуаїй (цикадка білоспинна); Зодаїодез огілісоїа Миїг (дельфацида рисова); Турпіосуба ротагіа МсАїее (цикадки яблуневі); Егуїпгопеошга 5рр. (цикадки виноградні); Мадісісада зеріепаєсіт Гіппаеєи5 (періодична цикада); Ісегуа ригспазі МахКке (червець австралійський жолобчастий);
Оцаагазрідіовшв регпісіози5 СоптвіоскК (щитівка каліфорнійська); Ріапососси5 сіїгі Кіззо (червець виноградний мучнистий); Рхейдососсиз 5рр. (інші мучнисті червеці); СасорзуїПа ругісоїа ЕоегеТег (мідяниця грушева); Тгіо7а аіозругі АзпПтеай (мідяниця хурмова).
Види, що становлять інтерес з погляду сільського господарства, з ряду Нептіріега включають без обмеження: Асго5іегпит Піаге Зау (клоп-щитник зелений); Апавза ігісіїх ЮОе Сеег (гарбузовий клоп); Віїз5и5 Іеисоріеги5 Іеисоріегиз Зау (клоп-черепашка); Согуїйиса доззурії
Еабгісідє (мережевниця бавовняна); Супореніє тодевіа Рієапі (клоп томатний); Оузаегсив5 зшішгейи5 Не!їтісп-5спапйег (червоноклоп бавовняний); Еиб5спібїи5 5егми5 бЗау (клоп-щитник коричневий); Е. магіоїагіи5 Раїїзої де Веаймої5 (щитник одноплямистий); ОСгаріовзіе(йи5 5рр. (різновиди земляних клопів); Геріодіоз5и5 согоци5 Зау (клоп-крайовик сосновий); І удиз Іпеоїагіб5
Зо Раїїзої ае Веашймої5 (клоп луговий); Г. пезреги5 Кпідні (сліпняк західний матовий); І. ргаїепвів
Гіппаєиз (клоп польовий); Г. гидиїїреппі5 Роррісив (клоп трав'яний); Гудосогі5 рариїйпи5 Гіппаєи5 (зелений сліпняк); Ме7ага мігідціа І іппаєи5 (зелений овочевий клоп); Оебра|ш5 ридпах РаБбгісіи5 (клоп-щитник рисовий); Опсоренйив5 Тазсіай5 Оайахє (клоп молочайний великий);
Рзецдаютозвзсеїї5 зегіаїш5 Кешіег (блішка бавовняна).
Крім того, варіанти здійснення можуть бути ефективними проти Нептірієга, наприклад
Саїосогів погуедісиз Сітеїїп (клоп картопляний); Оппорз сатревзігіз І іппаєив; Ріезіосогів гидісої 5
Еаїїєп (клоп яблуневий північний); Супорейів тодевзійив Оівіапі (томатний клоп); Супорепйів поїаїшв Оівіапі (клоп-сліпняк); Зрападопісиз аїроїтазсіайе Вешег (сліпняк білокрапковий);
Біарнпосогів сНіогіопів ау (клоп-сліпняк гледичії); І ароріаісоїа аїййї Кпідні (сліпняк цибулевий);
Рзепдаютозвзсеїїв зегіашв Нешіег (сліпняк бавовняний); Аде!Ірпосогів гарідиє Зау (клоп швидкий);
Роесіосарзив пеаїше Рабгісіиє (сліпняк чотирилінійний); Музіиє егісає ЗспіШпу (нізіус вересовий); Мувзіиє гтарпапив Ноага (нізіус вересовий); Мегага міпдша Ііппаєи5 (зелений овочевий клоп); Еигудавієї 5рр.; Согєіїдає 5рр.; Ругппосогідає 5рр.; Тіпідає 5рр.; Віозіотаїйаає 5рр.; Недиміідає 5рр. та Сітісідає рр.
Також включені імаго та личинки із ряду Асагі (кліщі), такі як Асегіа іо5зіспеїа Кеїїег (галовий кліщ пшеничний); Реїгоріа Іаїеп5 МіШег (петробія багатоїдна); кліщики павутинні та кліщики червоні родини Теїгапуспідає, Рапопуспи5 ціті Косп (червоний плодовий кліщ); Тейгапуспи5 ипісае Косп (звичайний павутинний кліщ); (Т. тсдапієїї МсоСгедог (кліщик Макданієла); Т. сіппарагіпих Воізаима! (червоний павутинний кліщик); Т. їшгКевїапі Одагом 5 Мікої5Кі (туркестанський павутинний кліщик); пласкі кліщі родини ТепиїіраїІрідає, ВгеміраІри5 Іем/ізі
МесСгедог (оранжевий кліщ); галові та брунькові кліщі родини Егіорпуідає та інші кліщі, що живляться листям, та кліщі, небезпечні для здоров'я людини та тварин, тобто пилові кліщі родини Ерідегторійає, залізниці родини Оеїтодісідає, зернові кліщі родини Сіусурпадідає, іксодові кліщі ряду Іходідае. ІЇходе5 5саршціагіх Зау (чорноногий кліщ); І. поїосусіи5 Мештапп (австралійський паралітичний кліщ); Оегтасепіог магіаріїйє Зау (кліщ іксодовий собачий);
Атбріуотта атегісапит Гіппаєи5 (іксодовий кліщ Атбріуотіта) та кінські та коростяні кліщі родин Рзогоріідає, Руетоїідає та Загсоріідає.
Комахами-шкідниками з ряду Тпузапига, що становлять інтерес, є, наприклад, І ерізта засопагіпа І іппаєеиз (лусочниця); Тпептобіа дотевіїса РаскКага (термобія домашня). 60 Додаткові охоплені шкідники-артроподи включають: павуків з ряду Агапеає, таких як
ГохозсеЇе5 гесіиза Сегізсп апа МиїаіК (бурий павук-самітник) та І аїйгодесіи5 тасіап5 РаБбгісіи5 (чорна вдова), та багатоніжок з ряду Зсціідеготогріа, таких як бсціїдега соіІеорігайа І іппаеи5 (звичайна мухоловка).
Комаха-шкідник, що становить інтерес, включає надродину щитників та інших споріднених комах, у тому числі без винятку види, що належать до родини Репіатідає (Мелага мігіашіа,
Наїуотогрна Паїуз5, Рівгодогив адиїйаіпі, ЕЄибспівіи5 5егми5, Асгобівттит Пійаге, Еив5співти5 Негов,
Еизспівтив5 ігізідтив5, Асго5іегпит Піаге, біспеІор5 Тигсаї5, Оіспеор5 теїасапіпи5 та Вадгада
Ніагіє (клоп із роду Вадгада)), родини Ріагазрідаеє (Медасоріа сгіргага - напівшароподібний щитник) та родини Суапідаеє (Зсаріосогіз сабзіапеа - коричневий клоп-землекоп), та види
І ерідорієга, у тому числі без обмеження: міль капустяна, наприклад, Неїїсомегра 7є6єа Водбаіе; соєва совка, наприклад, Рзецадорісизіа іпсіцдепо5 УмаїКег, та гусениця, що живиться оксамитовими бобами, наприклад Апіїсагзіа деттагаїїє Нарпег.
Способи вимірювання пестицидної активності добре відомі з рівня техніки. Див., наприклад,
Сгаріа апа Гапо, (1990) У. Есоп. Епіотої. 83:2480-2485; Апагемув, еї аї., (1988) Віоснет. .. 15. 252:199-206; Ма!топе, еї аї., (1985) У. ої Есопотіс Епіотоїоду 78:290-293 та патент США Мо 5743477, усі з яких включені в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.
Здебільшого білок змішують та застосовують в аналізах з годуванням. Див., наприклад,
Ма!топе, єї аї., (1985) У. ої Есопотіс ЕпіотоЇоду 78:290-293. Такі аналізи можуть включати приведення рослин у контакт з одним або декількома шкідниками та визначення здатності рослини виживати та/або спричинювати загибель шкідників.
Нематоди включають паразитичних нематод, таких як галові, такі, що утворюють цисти, та такі, що призводять до поранень, нематоди, включаючи Неїегодега 5рр., МеіІоідодупе 5рр. та
СіІородега 5рр.; зокрема представників нематод, що утворюють цисти, включаючи без обмеження, Неїегодега діусіпез (соєва нематода, що утворює цисти); Неїегодега 5спаснії (нематода буряку, що утворює цисти); Неїегодега амепає (нематода злаків, що утворює цисти) та СіІородега го5іоспіепбоіз і Сіородега раїййа (нематоди картоплі, що утворюють цисти).
Проникні нематоди включають Ргаїуепспиз5 5рр.
Засіб для обробки насіння
Для захисту та для підвищення врожайності, а також для поліпшення технологій
Ко) удосконалення ознак додаткові засоби для обробки насіння можуть забезпечувати додаткову пристосовність культурних рослин та економічно ефективний контроль комах, бур'янів та захворювань. Насінний матеріал можна обробляти, здебільшого обробляти поверхню, за допомогою композиції, що містить комбінації хімічних або біологічних гербіцидів, антидотів гербіцидів, інсектицидів, фунгіцидів, інгібіторів та посилювачів проростання, поживних речовин, регуляторів та активаторів росту рослин, бактерицидів, нематоцидів, авіцидів та/або молюскоцидів. Ці сполуки здебільшого складають разом з додатковими носіями, поверхнево- активними речовинами або допоміжними засобами, що сприяють нанесенню, традиційно застосовуваними в галузі техніки, пов'язаної з одержанням складів. Покриття можна наносити за допомогою просочення матеріалу для розмноження рідким складом або за допомогою покриття комбінованим вологим або сухим складом. Приклади різних типів сполук, які можна застосовувати як засоби для обробки насіння, представлені у Те Ребзіїсіде Мапиа!: А Умогіа
Сотрепаїічт, С.0.5. Тотіїп Еа., Рибіїзпеа Бу Вгйбп Стор Ргодисійп Соипсії, включеному в даний документ шляхом посилання.
Деякі засоби для обробки насіння, які можна застосовувати для насіння культур, включають без обмеження один або декілька з абсцизової кислоти, ацибензолар-5-метилу, авермектину, амітролу, азаконазолу, азоспірилуму, азадирахтину, азоксистробіну, Васійй5 5рр. (включаючи один або декілька з видів сегей5, йгти5, тедаїегішт, ритіїї5, 5рпаєгісиб5, 5!ИбБійб та/або
ІШигіпдіепвів), Бгадугпігобішт 5рр. (включаючи один або декілька з Беїає, сапагієпзе, еїКапії, ігііотоїепзе, |аропісит, Іаопідепбе, распугпігі та/або упаптіпдепое), каптану, карбоксину, хітозану, клотіанідину, міді, ціазипіру, дифеноконазолу, етидіазолу, фіпронілу, флудіоксонілу, флуоксастробіну, флуквінконазолу, флуразолу, флуксофеніму, білка гарпіну, імазалілу, імідаклоприду, іпконазолу, ізофлавеноїдів, ліпохітоолігосахариду, манкозебу, марганцю, манебу, мефеноксаму, металаксилу, метконазолу, міклобутанілу, РСМВ, пенфлуфену, пінецилуму, пентіопіраду, перметрину, пікоксистробіну, протіоконазолу, піраклостробіну, ринаксипіру, 5-метолахлору, сапоніну, седаксану, ТСМТВ, тебуконазолу, тіабендазолу, тіаметоксаму, тіокарбу, тираму, толклофос-метилу, тріадименолу, триходерми, трифлоксистробіну, тритиконазолу та/або цинку. Засіб для покриття насіння РСМВ під реєстраційним номером ЕРА 00293500419 містить квінтозен і теразол. ТСМТВ має назву 2- (тіоціанометилтіо)бензотіазол. бо Сорти насіння та насіння зі специфічними трансгенними ознаками можна тестувати для визначення того, які додаткові засоби для обробки насіння та норми внесення можуть доповнювати такі сорти та трансгенні ознаки для підвищення врожайності. Наприклад, сорт з доброю потенційною врожайністю, але чутливістю до сажки може вигравати від застосування засобу для обробки насіння, який забезпечує захист від сажки, сорт із доброю потенційною врожайністю, але чутливістю до нематод, що утворюють цисти, може вигравати від застосування засобу для обробки насіння, який забезпечує захист від нематоди, що утворює цисту, тощо. Аналогічно сорт, що включає трансгенну ознаку, яка забезпечує стійкість до комах, може вигравати від другого механізму дії, що надається засобом для обробки насіння, сорт, який включає трансгенну ознаку, що надає стійкість до гербіциду, може виграти від засобів обробки насіння з антидотом, який підвищує стійкість рослин до такого гербіциду тощо. До того ж добре укорінення та рання поява проростків, які є результатом правильного застосування засобів для обробки насіння, можуть викликати більш ефективне застосування азоту, кращу здатність переносити засуху та загальне підвищення потенційної врожайності сорту або сортів, що містять певну ознаку, у комбінації із засобом для обробки насіння.
Способи знищення комахи-шкідника та контролю популяції комах
У деяких варіантах здійснення представлені способи знищення комахи-шкідника, які включають приведення в контакт комахи-шкідника, одночасно або послідовно, з інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного поліпептиду РІИР-96б. У деяких варіантах здійснення представлені способи знищення комахи-шкідника, що включають приведення в контакт комахи- шкідника з інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного пестицидного білка під 5ЕО І
МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО І МО: 14, ЗЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІО МО: 32, 5ЕО ІЮО МО: 34, 5ЕО І МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, ЗЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІО МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО І МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, ЗЕО Ір МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІЮО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО ІО МО: 104, 5ЕО І МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108 або
Зо його варіант.
У деяких варіантах здійснення представлені способи контролю популяції комахи-шкідника, які включають приведення в контакт популяції комахи-шкідника, одночасно або послідовно, із інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного поліпептиду РІИР-96. У деяких варіантах здійснення представлені способи контролю популяції комахи-шкідника, що включають приведення в контакт популяції комахи-шкідника з інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного поліпептиду РІР-96 під БЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО І МО: 9, БЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО І МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16, 5ЕО І МО: 18, 5ЕО І МО: 20,
ЗЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО ІЮО МО: 24, 5ЕО І МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО І МО: 32,
ЗЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮО МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО І МО: 44,
ЗЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮО МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО ІО МО: 56,
ЗЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮО МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІО МО: 66, 5ЕО І МО: 68,
ЗЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІО МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80,
ЗЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92,
ЗЕО І МО: 94, 5ЕО ІЮО МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІЮО МО: 100, 5ЕО І МО: 102, 5ЕО І МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108 або його варіант. Застосовувані в даному документі терміни "контроль популяції шкідника" або "контролювати шкідника" стосується будь-якого ефекту щодо шкідника, який призводить в результаті до обмеження пошкодження, яке спричиняє шкідник. Контроль шкідника включає без обмеження знищення шкідника, пригнічення розвитку шкідника, зміну плодовитості або росту шкідника таким чином, що шкідник спричиняє менше пошкодження рослини, зниження кількості створюваного потомства, одержання менш пристосованих шкідників, одержання шкідників, більш чутливих до нападу хижаків, або стримування шкідників від поїдання рослини.
У деяких варіантах здійснення представлені способи контролю популяції комахи-шкідника, стійкої до пестицидного білка, які включають приведення в контакт популяції комахи-шкідника, одночасно або послідовно, із інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного поліпептиду
РИР-96. У деяких варіантах здійснення представлені способи контролю популяції комахи- шкідника, стійкої до пестицидного білка, що включають приведення в контакт популяції комахи- шкідника з інсектицидно ефективною кількістю рекомбінантного поліпептиду РІЇР-96 під ЗЕО ІЮ
МО: 6, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, 5ЕО ІО МО: 10, 5ЕО ІЮО МО: 12, 5ЕО І МО: 60 14, ЗЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО ІЮ МО:
26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІО МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, ЗЕО ІЮО МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮО МО: 54, 5ЕО І МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО І МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО І МО: 68, 5ЕО І МО: 70, 5ЕО І МО: 72, 5ЕО І МО: 74, ЗЕО Ір МО: 76, 5ЕО ІЮО МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО ІО МО: 90, 5ЕО ІО МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО І МО: 98, ЗЕО ІЮ МО: 100, ЗЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО ІЮО МО: 104, 5ЕО ІЮО МО: 106 або 5ЕО ІЮ МО: 108 або його варіант.
У деяких варіантах здійснення представлені способи захисту рослини від комахи-шкідника, що включають експресію в рослині або її клітині щонайменше одного рекомбінантного полінуклеотиду, який кодує поліпептид РІР-96б. У деяких варіантах здійснення представлені способи захисту рослини від комахи-шкідника, що включають експресію в рослині або її клітині рекомбінантного полінуклеотиду, який кодує поліпептид РІР-96 під БЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7,
ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО І МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16,
ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28;
ЗЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40,
ЗЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮО МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО І МО: 52,
ЗЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64,
ЗЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮО МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76,
ЗЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО І МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО І МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88,
ЗЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО І МО: 100,
ЗЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, або його варіанти.
Стратегії боротьби зі стійкістю комах (КМ)
Було доведено, що експресія б-ендотоксинів В. ІПигіпдіепзіз у трансгенних рослинах кукурудзи є ефективним засобом контролю важливих з погляду сільського господарства комах- шкідників (Регіак, еї аї!., 1990; 1993). Однак виникли комахи, які є стійкими до б-ендотоксинів В.
ІШигіпдіепвзі5, що експресуються у трансгенних рослинах. Така стійкість, якщо вона стане широко розповсюдженою, буде явно обмежувати комерційну цінність ідіоплазми, що містить гени, які кодують такі б-ендотоксини В. Шигіпдіепвів.
Зо Одним шляхом підвищення ефективності трансгенних інсектицидів проти цільових шкідників та одночасного зниження розвитку стійких до інсектицидів шкідників є застосування одержаних нетрансгенних (тобто з неінсектицидним білком) рефугіумів (розділ неінсектицидних сільськогосподарських культур/ кукурудзи) для застосування трансгенних сільськогосподарських культур, що виробляють один інсектицидний білок, активний проти цільових шкідників.
Агентство З охорони навколишнього середовища Сполучених Штатів (ера.дом/оррборраїріорезіїсідев/рір5/рі согп гейде 2006.піт, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса /- мм) публікує вимоги із застосування трансгенних сільськогосподарських культур, що виробляють один Ві-білок, активний проти цільових шкідників. На додачу Національна асоціація кукурудзівників на своєму веб-сайті: (псда.сот/іпзесі-гебізтапсе-тападетепі-Ттасі-5пееї-БІі-согп, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса улим) також представляє аналогічні інструкції, що стосуються вимог до рефугіумів. Через втрати, зумовлені комахами у межах зони рефугіумів, більші рефугіуми можуть знижувати загальну врожайність.
Іншим шляхом підвищення ефективності трансгенних інсектицидів проти цільових шкідників та одночасного зниження розвитку стійких до інсектицидів шкідників буде наявність вмістилища інсектицидних генів, які є ефективними проти груп комах-шкідників та які виявляють свої ефекти за допомогою відмінних механізмів дії.
Експресія у рослині двох або більше інсектицидних композицій, токсичних для одного виду комах, при цьому кожен інсектицид експресується на ефективних рівнях, буде являти собою інший шлях досягнення контролю розвитку стійкості. Це базується на принципі, що розвиток стійкості до двох окремих механізмів дії є значно менш імовірним, ніж тільки до одного. Коші, наприклад, описує стратегію двох токсинів, яка також називається "створення піраміди" або "пакетування", для керування інсектицидними трансгенними сільськогосподарськими культурами. (Те Коуаї Зосієїу. РП. Тгап5. К. 50с. І опа. В. (1998) 353:1777-1786). Пакетування або створення піраміди з двох різних білків, кожен з яких є ефективним проти цільових шкідників, та при цьому відсутня перехресна стійкість або вона є незначною, може забезпечувати можливість застосування меншого рефугіуму. Агентство з охорони навколишнього середовища США потребує суттєво менш структурований (здебільшого 5 95) рефугіум для висаджування кукурудзи, що не є Ві-кукурудзою, ніж для продуктів 3 одною бо ознакою (здебільшого 20 95). Існують різні шляхи забезпечення ефектів ІЕМ рефугіуму,
включаючи схеми посадки різної геометрії в полях та суміші насіння "у мішку", що додатково обговорюються у Кои5.
У деяких варіантах здійснення поліпептид РІЇР-96 за даним розкриттям застосовують як стратегії боротьби зі стійкістю комах у комбінації (тобто у складі піраміди) з іншими пестицидними білками, що включають без обмеження Ві-токсини, інсектицидні білки
Хепотпабрадизх 5р. або Рпоїогпараиз 5р. тощо.
Представлені способи контролю зараження(заражень) комахами ряду ІГерідорієега та/або
СоІеорієга трансгенної рослини, які забезпечують керування стійкістю комах, що передбачають експресію у рослині щонайменше двох різних інсектицидних білків, що мають механізми дії, які є відмінними.
У деяких варіантах здійснення способи контролю зараження комахами з ряду І ерідоріега та/або СоІеорієга трансгенної рослини та сприяння керуванню стійкістю комах щонайменше до одного з інсектицидних білків включають поліпептид РІІР-96, інсектицидний щодо комах з ряду
І ерідорієга та/або СоіІеоріега.
У деяких варіантах здійснення способи контролю зараження комахами з ряду І ерідоріега та/або СоІеорієга трансгенної рослини та сприяння керуванню стійкістю комах щонайменше до одного з інсектицидних білків включають поліпептид РІЇР-96 під 5ЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮО МО: 7,
ЗЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІО МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО І МО: 16,
ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО ІО МО: 26; 5ЕО І МО: 28;
ЗЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40,
ЗЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІЮО МО: 50, 5ЕО ІО МО: 52,
ЗЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІЮО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64,
ЗЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮО МО: 68, 5ЕО ІЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІО МО: 76,
ЗЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІЮО МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮ МО: 86, 5ЕО ІО МО: 88,
ЗЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО І МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100,
ЗЕО ІЮО МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО І МО: 106 або 5ЕО ІЮ МО: 108, або його варіанти, інсектицидні щодо комах з ряду І ерідорієга та/або СоіІеорієга.
У деяких варіантах здійснення способи контролю зараження комахами з ряду І ерідоріега та/або СоІеорієга трансгенної рослини та сприяння керуванню стійкістю комах включають
Зо експресію в трансгенній рослині поліпептиду РІІР-96 та білка Сгу, інсектицидних щодо комах із ряду Г ерідорієга та/або СоіІеорієга, причому вони мають відмінні механізми дії.
У деяких варіантах здійснення способи контролю зараження комахами з ряду І ерідоріега та/або СоІеорієга трансгенної рослини та сприяння керуванню стійкістю комах включають експресію в трансгенній рослині поліпептиду РІЇР-96 під БЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІО
МО: 8, БЕО І МО: 9, БЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО І МО: 20, 5ЕО ІО МО: 22, 5ЕО І МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО І МО: 30, 5ЕО ІЮ МО: 32, 5ЕО І МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО І МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, ЗЕО ІЮ МО: 44, 5ЕО І МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІЮ МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІРР МО: 56, 5ЕО ІЮО МО: 58, 5ЕО І МО: 60, 5ЕО ІО МО: 62, 5ЕО ІО МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮ МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70, 5ЕО ІО МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО І МО: 78, ЗЕО І МО: 80, 5ЕО ІО МО: 82, 5ЕО І МО: 84, 5ЕО ІО МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО І МО: 90, 5ЕО ІЮ МО: 92, 5ЕО ІЮО МО: 94, 5ЕО ІО МО: 96, 5ЕО ІО МО: 98, 5ЕО ІО МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЗЕО ІО МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, або його варіантів та білка Стгу, інсектицидних щодо комах з ряду І ерідорієга та/або СоіІеорієга, причому вони мають відмінні механізми дії.
Також представлені способи зниження ймовірності появи стійкості у комах із ряду
І ерідоріега та/або СоІеоріеєга до трансгенних рослин, що експресують рослинні інсектицидні білки для контролю видів комах, що включають експресію поліпептиду РІІР-96, інсектицидного щодо видів комах, у комбінації з другим білком, інсектицидним щодо видів комах, причому вони мають відмінні механізми дії.
Також представлені засоби для ефективного керування стійкістю комах з ряду І ерідорієга та/або СоіІеорієга до трансгенних рослин, що включають спільну експресію на високих рівнях у рослинах двох або більше інсектицидних білків, токсичних для комах із ряду І ерідорієга та/або
СоІеоріега, але при цьому кожний характеризується відмінним механізмом здійснення його активності щодо знищення, де два або більше інсектицидних білків включають поліпептид РІЇР- 96 та білок Сту. Також представлені засоби для ефективного керування стійкістю комах з ряду
І ерідоріега та/або СоІеоріеєга до трансгенних рослин, що включають спільну експресію на високих рівнях у рослинах двох або більше інсектицидних білків, токсичних для комах із ряду
І ерідорієга та/або СоІеорієга, але при цьому кожний характеризується відмінним механізмом 60 здійснення його активності щодо знищення, де два або більше інсектицидних білків містять поліпептид РІЇР-96 під ЗЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10,
ЗЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІО МО: 20, 5ЕО ІЮ МО: 22,
ЗЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІЮ МО: 30, 5ЕО І МО: 32, 5ЕО ІО МО: 34,
ЗЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІЮО МО: 38, 5ЕО ІЮ МО: 40, 5ЕО ІЮ МО: 42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО ІЮ МО: 46,
ЗЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІЮО МО: 50, 5ЕО ІЮ МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО ІЮО МО: 56, 5ЕО ІО МО: 58,
ЗЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІЮО МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮ МО: 66, 5ЕО ІЮО МО: 68, 5ЕО ІО МО: 70,
ЗЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ МО: 74, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО ІЮ МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82,
ЗЕО ІО МО: 84, 5ЕО ІО МО: 86, 5ЕО ІЮ МО: 88, 5ЕО І МО: 90, 5ЕО І МО: 92, 5ЕО ІО МО: 94,
ЗЕО ІО МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІЮ МО: 102, 5ЕО ІЮ МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, або його варіанти та білок Стгу.
На додачу представлені способи одержання дозволу регулювальних органів для вирощування або комерційної реалізації рослин, що експресують білки, інсектицидні щодо комах з ряду І ерідорієга та/або СоІеорієга, що включають стадію посилання, надання або опирання на дані аналізів зв'язування білків комах, які демонструють, що поліпептид РІЇР-96 не конкурує із сайтами зв'язування білків Сгу у таких комах. Крім того, представлені способи одержання дозволу регулювальних органів для вирощування або комерційної реалізації рослин, що експресують білки, інсектицидні щодо комах з ряду І ерідоріега та/або СоіІеоріега, що включають стадію посилання, надання або опирання на дані аналізів зв'язування білків комах, які демонструють, що поліпептид РІЇР-96 під ЗЕО ІЮО МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ
МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16, 5ЕО ІО МО: 18, 5ЕО І
МО: 20, 5ЕО І МО: 22, 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ МО: 26; 5ЕО ІЮ МО: 28; 5ЕО ІО МО: 30, 5ЕО ІЮ
МО: 32, 5ЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 40, 5ЕО І МО: 42, 5ЕО І
МО: 44, БЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО ІЮ МО: 48, 5ЕО ІО МО: 50, 5ЕО І МО: 52, 5ЕО ІЮ МО: 54, 5ЕО І
МО: 56, 5ЕО ІЮ МО: 58, 5ЕО ІЮ МО: 60, 5ЕО ІЮ МО: 62, 5ЕО ІЮ МО: 64, 5ЕО ІЮО МО: 66, 5ЕО І
МО: 68, 5ЕО ІОЮ МО: 70, 5ЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 78, 5ЕО І
МО: 80, 5ЕО ІЮ МО: 82, 5ЕО ІЮ МО: 84, 5ЕО ІЮО МО: 86, 5ЕО І МО: 88, 5ЕО ІЮ МО: 90, 5ЕО І
МО: 92, 5ЕО І МО: 94, 5ЕО ІЮ МО: 96, 5ЕО І МО: 98, 5ЕО ІЮ МО: 100, 5ЕО ІО МО: 102, 5ЕО І
МО: 104, 5ЕО ІЮ МО: 106 або 5ЕО ІО МО: 108, або його варіант не конкурує із сайтами зв'язування для білків Сгу у таких комах.
Зо Способи підвищення врожайності рослини
Представлені способи підвищення врожайності. Способи включають одержання рослини або рослинної клітини, що експресує полінуклеотид, який кодує пестицидну поліпептидну послідовність, розкриту у даному документі, та вирощування рослини або її насінини у полі, зараженому шкідником, щодо якого поліпептид характеризується пестицидною активністю. У деяких варіантах здійснення поліпептид характеризується пестицидною активністю проти лускокрилого, твердокрилого, двокрилого, напівтвердокрилого або нематодного шкідника, та поле заражене лускокрилим, напівтвердокрилим, твердокрилим, двокрилим або нематодним шкідником.
Як визначено у даному документі, "урожайність" рослини стосується якості та/або кількості біомаси, що продукується рослиною. Застосовуваний у даному документі термін "біомасса" стосується будь-якого виміряного рослинного продукту. Збілошенням продукування біомаси є будь-яке покращення врожайності виміряного рослинного продукту. Збільшення врожайності рослини має декілька комерційних застосувань. Наприклад, збільшення біомаси листків рослини може викликати збільшення врожайності листових овочів для вживання людиною або тваринами. Крім того, збільшення біомаси листків можна застосовувати для підвищення одержання фармацевтичних або промислових продуктів рослинного походження. Збільшення врожайності може включати будь-яке статистично значуще збільшення, включаючи без обмеження щонайменше 1 95 збільшення, щонайменше 395 збільшення, щонайменше 5 95 збільшення, щонайменше 10 95 збільшення, щонайменше 20 95 збільшення, щонайменше 30 95
БО збільшення, щонайменше 50 95 збільшення, щонайменше 70 95 збільшення, щонайменше 100 95 або більше збільшення врожайності порівняно з рослиною, яка не експресує пестицидну послідовність.
У конкретних способах урожайність рослини збільшується в результаті покращеної стійкості до шкідника рослини, що експресує поліпептид РІЇР-96, розкритий у даному документі.
Експресія поліпептиду РІЇР-96 спричиняє знижену здатність шкідника до зараження рослини або живлення на рослині з покращенням, таким чином, врожайності рослини.
Способи переробки
Додатково представлені способи переробки рослини, частини рослини або зерна з одержанням харчового або кормового продукту з рослини, частини рослини або зерна, що 60 містять поліпептид РІЇР-96. Рослини, частини рослини або насіння, представлені у даному документі, можна переробляти з одержанням олії, білкових продуктів та/або побічних продуктів, що є похідними, одержаними шляхом переробки, які мають комерційне значення.
Необмежувальні приклади включають трансгенне насіння, що містить молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид РІЇР-96, яке можна переробляти з одержанням соєвої олії, соєвих продуктів та/або соєвих побічних продуктів. "Переробка" стосується будь-яких фізичних та хімічних способів, застосовуваних для одержання будь-якого соєвого продукту, та вони включають без обмеження кондиціонування нагріванням, вальцювання та подрібнення, екструзію, екстракцію розчинником або вимочування у воді та екстракцію цільного або подрібненого насіння.
Наступні приклади представлені для ілюстрування, а не для обмеження.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА
Приклад 1. Ідентифікація активного інсектицидного білка із ЗеіадіпеПа Кгаи55іапа
Амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮО МО: 9 було ідентифіковано за допомогою ВІ А5Т (засіб пошуку основного локального вирівнювання; Айб5сапйиї, еї аі., (1993) У. Мої. Віої. 215:403- 410; дивись також пебі.піт.піп.дом/ВІ АЗТ/, доступ до якого можна одержати із застосуванням префікса м/м/м/) при здійснюванні пошуку полінуклеотидних послідовностей, що кодують інсектицидні поліпептиди РІЇР-65 із публікації за РОСТ УМО2015/120270, щодо транскриптома зЗеїІадіпеїЇІа Кгаиззіапа у внутрішній базі даних ФПОРОМТ РІОМЕЕК. Послідовності транскриптомів застосовували для розробки праймерів для клонування послідовності КДНК РІР-96Аа. Даний клон одержували за допомогою полімеразної ланцюгової реакції із застосуванням набору для
ПЛР КОЮ Ної іа ОМА роїутегазе?Ж (Момадеп, МегокК КоСаА, Дармштадт, Німеччина) та загальної РНК із ЗеїіІадіпеїІа Кгаизз5іапа (Іа зразка Р5З-8780) як матриці. Клонований продукт ПЛР підтверджували шляхом секвенування На основі результатів секвенування ДНК полінуклеотидна послідовність РИР-9бАа показана як ЗЕО ІЮ МО: 4, а поліпептидна послідовність, яка кодується, як ХЕО ІЮ МО: 9.
Біологічні аналізи щодо трьох видів шкідників, совки соєвої (З5ВІ) (Спгузодеїхів5 іпсішдепв), совки кукурудзяної (СЕММ) (Неїїсомегра 7еа) та вогнівки кукурудзяної (ЕСВ) (О5ігіпіа пибіаїїв), проводили із застосуванням екстракту білків рослинної тканини із зразка РІЗ-8780 5еїЇадіпеПа
Кгаиз5зіапа, розміщеного на поживному середовищі для І ерідорієга на основі агару (ЗошПйіІапа
Зо Ргодисів Іпс., Лейк-Вілідж, Арканзас) у форматі 96-лункового планшета. Застосовували по шість повторностей на кожний зразок. Зразки залишали висихати на поверхні поживного середовища та від двох до п'яти новонароджених комах поміщали в кожну лунку обробленого планшета.
Після чотирьох днів інкубації при 27 "С личинок оцінювали щодо смертності або тяжкості зупинки росту. Бали реєстрували кількісно як загиблі (3), зі значною зупинкою росту (2) (незначний ріст або відсутність росту, але живі та еквівалентні личинкам 172 віку), із зупинкою росту (1) (ріст до другого віку, але не еквівалентні контролям) або нормальні (0). Дія на зразок протеїнази К та теплова обробка викликали втрату активності, що вказує на те, що речовина, яка діяла, була білковою за своєю природою. Результати біологічних аналізів показані в таблиці 1.
Таблиця 1 нин с З ТЯ ПОН У ої: ЗНО ПОЛО ЗТ ОО
Приклад 2. Транскриптомне секвенування зеїадіпеїІа Кгайив55іапа
Транскриптом для 5беїЇадіпейПа Ктайвевіапа із зразка з й РБ-8780 одержували наступним чином. Загальні РНК виділяли із заморожених тканин шляхом застосування набору ОіадепФ
АМеазую для виділення загальної РНК. Бібліотеки для секвенування з одержаних загальних
РНК одержували із застосуванням набору для секвенування мРНК Тгиибед'"м та протоколу від
Шитіпає), Інс. (Сан-Дієго, Каліфорнія). Коротко, мРНК виділяли шляхом приєднання до гранул з оліго(0Т), фрагментували до середнього розміру 180 нт, піддавали зворотній транскрипції в
КДНК за допомогою випадкових гексамерних праймерів, піддавали репарації кінців, додавали 3'
А-хвіст та лігували за допомогою пронумерованих адаптерів Ттибед'м від ШитіпаФф). Ліговані фрагменти кКДНК піддавали ПЛР -ампліфікації із застосуванням праймерів Тибед"м від ПитіпаФ та очищені продукти ПЛР перевіряли щодо якості та кількості на чипі Адіїепі Віоапаіуулекю ОМА 7500. Після оцінки якості та кількості по 100 нг бібліотек транскриптів нормалізували шляхом обробки за допомогою дуплекс-специфічної нуклеази (0О5М) (ЕмгодепФ, Москва, Росія).
Нормалізацію завершували шляхом додавання 200 мМ буфера Нерезв, після якого здійснювали теплову денатурацію та п'ятигодинний відпал при 68 "0. Піддану відпалу бібліотеку обробляли за допомогою 2 мкл ферменту О5М протягом 25 хвилин, очищували за допомогою колонок
ОіадепФ МіпЕІшефФ згідно з протоколами виробника та ампліфікували протягом дванадцяти циклів із застосуванням специфічних щодо адаптера праймерів від Шитіпаф) Кінцеві продукти очищували за допомогою гранул АтригеФ ХР (ВесКтап Сепотісв, Данверс, Массачусетс) та перевіряли щодо якості та кількості на чипі Адііепі Віосапаіулеке ОМА 7500.
Нормалізовані бібліотеки транскриптів секвенували згідно з протоколами виробника на
ШитіпаФ Сепоте Апаїуег Їх. Кожну бібліотеку гібридизували в проточних комірках із двома доріжками та ампліфікували, блокували, лінеаризували та гібридизували з праймером із застосуванням процесу одержання клональних кластерів на сВоїФ від Питіпафє. Секвенування завершували на Сепоте Апаїулег Їх, який давав шістдесят мільйонів ридів зі спареними кінцями із 75 п.о. на нормалізовану бібліотеку.
Приклад 3. Ідентифікація гомологів поліпептиду РІР-96
Визначення генної ідентичності, яке проводили за допомогою ВІ АЗТФ у внутрішній базі даних транскриптомів папоротей та інших примітивних рослин ОИОРОМТ РІОМЕЕК, ідентифікували гомологи поліпептиду РІИР-9бАа (5ЕО ІЮО МО: 4). Гомологи поліпептиду РИР- 9бАа та організм, в якому вони були ідентифіковані, показані в таблиці 2. У деяких випадках гомологи ідентифікували з об'єднаних ізолятів папороті та/або видів, ідентифікованих у таблиці 2 як "суміш 1", "суміш 3" та "суміш 4". Папороті в об'єднаних зразках показані в таблиці 3.
Таблиця 2
Послідовність .
В Амінокислотна
ІО зразка Назва нуклеїнових й : послідовність кислот
РБЗ-9145 Орпіодіозвит репашит РИР-96Ес ЗЕОЮО МО: 1 ЗЕ ПО МО: 6
РБЗ-9427 Соїувів мідній "Мопзвійега" РИР-96Еа ЗЕОІЮ МО: 2 ЗЕ О МО: 7
РБ-7897 Соїувів мідії РИР-96ЕБ ЗЕОЮО МО: З ЗЕО І МО: 8
РБЗ-7896 зЗеїЇадіпеїа місіогіає РІИР-96На ЗЕОІЮО МО: 5 ЗЕО ПО МО: 10 ре-8780 | Зеіадіпейна кгайзвіапа РИР-обда |5ЕОІ0МО:4 0 |5ЕО 0 МО:9
Магіедаїа ре-в7восЕ | Зеіадіпена кгайззіапа РИР-Я6АЬ |5ЕОІ0 МО:11 00 |58ЕОО МО: 12
Магіедаїа ре-в7восЕ | Зеіадіпена кгайззіапа РИР-обдс |5ЕОІ0 МО:13 0 |5ЕО о МО: 14
Магіедаїа ре-в7восЕ | Зеіадіпена кгайззіапа РИР-обАЯ |5ЕОІ0 МО:15 | ЗЕО І МО: 16
Магіедаїа ре-в7восЕ | Зеіадіпена кгайззіапа РИР-обде |5ЕОІ0 МО:17 |5ЕО О МО: 18
Магіедаїа ре-в7восЕ | Зеіадіпена кгайззіапа РИР-обАЄ |5ЕОІ0МО:19 | 5ЕО О МО: 20
Магіедаїа
Ре-12342-2 | лаїапіит гайдіапит РИР-9бдЯ |5ЕОІ0МО:21 | 5ЕО Ю МО: 22
Стасптит рРБ-2-2 Суаїнеа ашзігаїїв РИР-96Ап ЗЕО ІЮ МО: 23 ЗЕО І МО: 24
Адіатит/Супотіцт РИР-96Са 5ЕОІ0 МО:25 |5ЕО1Ю МО: 26
Адіатит/Супотіцт РИР-96СЬ 15ЕОІ0 МО:27 |5ЕОЮ МО: 28
Адіапшт гадаіапит о о
Ре-12342-1 РИР-ебсСс |ЗБОІ0МО:29 | 8БОЮ МО: 30
Ре-12342-4 | Лаїапіит гайдіапит РИР-Я6СЯ |8ЕОІ0МО:31 /|5ЕО О МО: 32
Стасітит
РБЗ-2-3 Адіапішт гадаіапит "Ргадгапв' | РІИР-96Се ЗЕО ІЮ МО: 33 ЗЕО ІЮ МО: 34
Ре-3-1 рсаиттасовлит тя вив-евсє |8ЕОІОМО:35 |8ЕО Ю МО: 36
Ре-3-2 роамиттасовлит тя вИР-евся |8ЕОІО МО:37 |8ЕО Ю МО: З8
РО-3-3 рсамиттасовлит тя внвевсь |вЕОІО МО:39 |8БО 0 МО: 40
РБ-11707 Супотішйт Гаісаїйт РИР-960ба ЗЕО ІО МО: 41 ЗЕО ІЮ МО: 42
РБІ-5-1 Суаїнеа ашзігаїїв РИР-960р ЗЕО ІЮ МО: 43 ЗЕО ІЮ МО: 44
РБ-5-2 Суаїнеа ашзігаїїв РИР-96Ос ЗЕО ІО МО: 45 ЗЕО ІЮ МО: 46
Таблиця 2
Послідовність . с знисжя ЯЕЗ послідовність кислот
Таблиця З
Суміш 1: РБЗ-12343 /Адіапишт гадаіапит "Расіїіс Маїс!
РБ-8570 Адіапішт сарі ив5-мепегіз І.
РБЗ-12344 /Адіапшт Нізрідшит
РБ-12353 Супотіит їопипвї
Суміш 3: РБ-9135АЕ Ріаїусегішт рітитсашт
РБЗ-9141АЕ Нирегліа заміпіоіде5
РБ-9092АЕ Ріаїусегішт жапаає
Суміш 4: РБЗ-10890 Зеїадіпеїіа місюгіає
РБЗ-10887 Зеїадіпеїіа місюгіає
РБЗ-78960ОЕ Зеїадіпеїіа місюгіає
КДНК одержували із джерела організмів із індетифікованими гомологами шляхом зворотної транскрипції загальної РНК та синтезу на основі послідовності, отриманої з транскриптома.
Гени, одержані з КДНК, що кодують гомологи РІІР-96, піддавали ПЛР-ампліфікації за рахунок їхніх відповідних кКкДНК із застосуванням праймерів, розроблених для кодувальних послідовностей кожного гомолога, та субклонували у вектор для тимчасової експресії у рослині.
Клоновані продукти ПЛР підтверджували шляхом секвенування
Значення ідентичності амінокислотної послідовності гомологів поліпептидів РІИР-96 у відсотках розраховували із застосуванням алгоритму Нідлмана-Вунша, реалізованого в програмі Мееаіе (набір інструментів ЕМВО55), показані в таблицях 4а - 4е. Порожня частина матричної таблиці не показана.
Таблиця 4а
РІИР- | РІИР- РІР- РІИР- РІР- РІИР- обда | о9бдь | РЧР.) обдо | РЧР. | овде | БОР | овдн | РР) овсь | БОР. 96Ас 96Ае 96Ад 96Са 96Сс
ЗЕО | ЗБО Бор ЗО вою ЗБ БОЮ, ЗО БОЮ ЗО і6БО о
ІО МО:ІО МО: чи ІО МО: 2 ІО МО: Мо ІО МО: мо ІО МО: я 91 32 МОЯ 36 МОВІ 23 МО:22| 24 |МО:26І 8 МО: 30
ОАоЕ зво| зв те во то зо за з5 зве зво, оо воза в тою зе|юе тат те.
РИР-96АБ 5ЕО кома 07 | с |евеовею ве вза вва ваг твя | тви | 765
РИР-96Ас 5ЕО кома 07 || с вва |вво зов) вво вв тає | тая | тв
РИР-96Аа 5ЕО бкомб 07 | 7 | 70 рве овов вва вве тв | ге | во
РИР-96Аеє 5ЕО бкоме 07 | 7 || с звеврвво вв тав | тя | тв
РИР-96АЇ 5ЕО кого 07 | 7717 с ревеню тв | т | тво
РИР-96Ад 5ЕО око» 71711 во тва | ти | тво
РИР-96АЙ 5ЕО вк 1711111 рва| тв | тво
РІИР-96Са 5ЕО бо 7 | 717171: вви| вв
РИР-96СБ 5ЕО око 7 | 111-11-11 | ви
Таблиця 4р
РІИР- | РІИР- РІР- РІИР- РІР- РІИР- о6са | а96Се | РЧР | овса | РР обра | РЧР. | овос | РОБ. | обре | РР. 96сї 96Сп 9606 96ра 960
ЗЕО | 5ЕО ЗЕ ЗЕ ЗЕ ЗЕ , «БЕ І ЛЕО І ЛЕО І ЛЕО І ЛЕО І
ІО МО:ІО МО: МО: 36 ІО МО: МО: 40 ІО МО: МО: 44 ІО МО: МО: 52 ІО МО: МО: 50 32 34 " 38 І 42 І 46 І 48 І ооо то зо то зо зв хз зл зве.
РИР-96Аа 5ЕО мое 0762 760) 76о| тя |воо то1 вее ваа| ме 709 оо тет то/то те то|те тил! то т ог ти тяе/те те те о/з тс ва ло тг оо те лот те ти те зу те вл ло те с то тег те те во ти везе ло та
РИР-96АЇ 5ЕО
РИР-96Ад 5ЕО охо» 759 | 762 | 760 | 76 | тая | зав | том | ва | 699 | 715 | гол
Таблиця 4р
РИР- ТТ РПР- РІР- РЕР- РЕР- РЕЇР- 96Са 96Се | РР- | двсд | Р) обра | РЧР. | обро РР. | овре | РР: 96сї 96сп 960Ь 960 960
ЕО | ЗО ЕО ЗЕО ЕО ЗЕО
ВЕОО вЕОЮ усе ЕОЮ усне ю мо:по мо: сво Мо: со долю мое ою Мо: опо Мо: сю іо 32. 34 361 зв 40) до 4 в 52) 48
РІР-96Ай 5ЕО мо | 759 765| 762 762| 734 воз| 701 | ва вве та| ло
РИР-96Са 5ЕО сома
РИР-О6СЬ ЗЕО вок Вс
РР-96Сс ЗЕО
ЩЕ
РИР-96Са 5ЕО моз» | 700982 |879|979| 959 618692 ва во вва | 657.
РИР-96Се 5ЕО моз | 700070 897897 |еви ває) 6ез | ваз ви вво| вію
РІТР-О6СТ5ЕО моз | 70007017 |995|е5е вом | ва вве вв | вів
РПР-96С9 5ЕО в А І В ЕХ ССС
РІИР-96СП ЗЕО мою 7071 вові влі|елввв о вам| вія
РИР-96ба 5ЕО охо 70710 639 |з вав вва | вів
РИР-9605 5ЕО охо с рвевовав вові) вав
РИР-96Ос ЗЕО охо 77111 с вав вові вав
РИР-9609 5ЕО мова вав | вою
РИР-9606 5ЕО оо 71111111 вв
Таблиця 4с
РЕР-
ОБЕА | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- | РИР- ска | обЕЬ 96ЕО 96Бе 96Е 96Бо обЕй БЕ | 96Е) | 96ЕК | 96Е!
МО. ЗЕО ОВЕС 1О5ЕО ІО5ЕО ІОБЕО ІО5ЕО ІОБЕО ІОБЕО 1О5ЕО ОБО 10
БО: ГМО: 8 МО: БА|МО: 56 МО: 58 МО: 60|МО: 62 МО: 64 МО: 66|МО: 68 МО: 70
РИР-О6Ес 5ЕО моє | 839 | 83 73з| 953992 960) 960953 96 955| 858 онко м то жене не тв ве яерне юк ве. 5 МаЕЗЕЗЕЗЕЗЕЗЕЗЕЗЕЗ ЗЕ тен вх ери я веною нер о ни не жене ни ва во ве но на ва, вок еле ВЕ
РІТР-О6АЕ5ЕО од
РПР-96А9 5ЕО
Ще
Таблиця 4с
Де ее
ЗЕО ОбЕБ | 96ЕЯ | 96Ее | 96ЕЇ | 96Ед | 96ЕНй | 96ЕЇ | 96Е) | 96ЕК | 96ЕЇ
ІЮ МО: ЗЕО ОБЕО 1О5ЕО І0БЕО ІОБЕО ТО5ЕО ІОБЕО ОБЕО 1О5ЕО 1О5ЕО ІЮ 7 МО: 8 МО: 54|ІМО: 56|МО: 58|МО: 60|1МО: 621МО: 64|МО: 66|МО: 68|МО: 70 зомогах |За во 606 в 6о6 ве 8о0в в/в єм ва змогу | села вая | ває вав ва ва ва вав мов | 7007775 ва |8аа вав вав ва ває вав во юмомо | 70107) 879 тет те тм те тав юмо | 70107055 вели о 89 вва вв юмо. | 17) 707 свв рев ев еве вва ово юю | 717 | 70770 ревя вел взяв вв юки | 717 | 71770 веиревя вве во юки | 71771710 с ревмио вва вон юмив. || 70771710 сореве вва юки | 17 | 1 11111 рев
Таблиця 4а ше 9бЕт | 96Еп ) 96Ео | 96Ер | 96Бд | 96Ег | 96Е5 | 96ЕЇ | 96Би | 96Ем
ЗЕО ІО|5ЕО І0|5ЕО ІС |5ЕО ІЮ|5ЕО І0|5ЕО І |5ЕО ІС |5ЕО ІБ |5ЕО І0І5ЕО ІЮ
МО: 72|МО: 74| МО: 76 | МО: 78| МО: 80 | МО: 82 | МО: 84 | МО: 86 | МО: 88 | МО: 90 змов ве во вв ваз вва 0 763 0 лає вве ее вве ломогаг бо вва ва ват 5о5 0 вви ває ве вве змова |в вва во вве во во вва вл вве
Таблиця 4а
РИР- І РЕИР- ОЇ РЕР- ОЇ РИР- ОЇ РИР- ОЇ РИР- ОЇ РЕР- | РЕР- Ї РІР- Ї РІЇР- 96Ет | 96Еп | 96Бо | 96Ер | 96Ед | 96Е: | 96Е5 | 96ЕЇ | 96Єми | 96ЕУ 5ЕО 10 |5ЕО 10 |5ЕО 10 |5ЕО 10 |ЗЕО ІО|ЗЕО 10 5ЕО І ЕС 10 5ЕО 10 |ЗЕО 1 мо: 72 |МО: 74 |МО: 76 | МО: 78|МО: 80| МО: 82. МО: 84 | МО: 86 | МО: 88 | МО: 90
МоРбЕе БО 877) 997) 5Б2 | 534 | 560 | 772 | 754 848 978 | 848
І МО: 56
РИР-96Е! 5ЕО ей
РИР-96Е9 ЗЕО онов,
РИР-96ЕН 5ЕО ве
РИР-О6ЕЇ ЗЕО че
РИР-96Е| ЗЕО ще
РИР-О6ЕК ЗО омоєа се зве вва ває вва 769 751 вав зве ва
РИР-96Е! ЗЕО че
РИР-96Ет ЗЕО око? 71875 | вва ває вбо 0 т6е 0 тв вва вве вва
РИР-96Еп ЗЕО оком 171 реве вам во ла свя вав вив вав
РИР-96Ео ЗЕО окол 717 рев рвао вія ву вве вва вве
РИР-96Ер ЗЕО око 171 реви вого во вал вам вав
РИР-96Е4 ЗЕО кові 717 рея ває вки вва вв
РИР-96Ег ЗЕО ом | 7 | 7171 вле| вно тв) во
РИР-96Е5 ЗЕО окові 71111 ремуртво ем
РИР-96ЕЇ ЗО оковв 171111
РИР-96Би ЗЕО око 1 1111-11-11 р
Таблиця 4е
РИР- І РЕИР- ОЇ РЕР- ОЇ РИР- ОЇ РИР- ОЇ РИР- ОЇ РР. Ї РЕР- Ї РІР- Ї РІЇР- 96на | 96НЬ | 96нНс | 96на | 96Не | о6не 96бно | 96ни / о6Ні | 9бн) 5ЕО 10 |5ЕО 10 |5ЕО 10 |5ЕО 10 |ЗЕО ІО|8ЕО 10 5ЕО І ЕС 10 5ЕО 10 |5ЕО 10 мо: 10 | МО: 92 | МО: 94 | МО: 96 | МО: 98 ЇМО: 100МО: 102МО: 104МО: 106ІМО: 108
КЕШ ша ее пе пе
РИР-обде ЗЕО ще
Таблиця 4е
Ши 9бНа | 96НЬ | 96Нс | 96На | 96Не ) 96НІ | 96Нда | 96Ни | 96НІі | 9Б6Ні
ЗЕО І |5ЕО ІО5ЕО ІС |5ЕО І |5ЕО І |5ЕО ІС |5ЕО ІЮ|5ЕО ІС |5ЕО І І5ЕО І
МО: 10|М0: 92 | МО: 94 | МО: 96 | МО: 98 МО: 100МО: 102ІМО: 104МО: 106ІМО: 108
Таблиця 4е
РИР- | РИР- | РЕИР- | РЕИР- | РИР- | РЕР- | РЕР- | РИР- | РЕИР- | РІЦР- 96На | 96НЬ | 9бНс | 96На | 96Не | У6НІ | 96бно | 96Ни | 96НІі | 96Ні
ЗЕО ІО|5ЕО ІБІЗЕО ІС |5ЕО І ІЗЕО ІС |5ЕО І І5ЕО ІС 5ЕО ІОЇ5ЕО ІС 5ЕО І
МО: 10|М0: 92 | МО: 94 | МО: 96 | МО: 98 МО: 100ІМО: 102ІМО: 104ІМО: 1061МО: 108
РИР-96ЕК 5ЕО
РИР-96ЕІ 5ЕО
РИР-96Ет 5ЕО
РИР-96Еп 5ЕО
РИР-96Ео 5ЕО
РИР-96Ер 5ЕО
РИР-96ЕЯ 5ЕО
РИР-96Ег 5ЕО
РИР-96Е5 5ЕО
РИР-96ЕЇ 5ЕО
РИР-96Єи 5ЕО
РИР-96Ем 5ЕО
РИР-96На 5ЕО
РІИР-96НЬ 5ЕО
РИР-96Нс 5ЕО
РИР-96На 5ЕО
РИР-96Не 5ЕО
РИР-96НІ 5ЕО
РИР-96НЯ 5ЕО
РИР-96НИ 5ЕО
РИР-96НІі 5ЕО
Приклад 4. Ідентифікація гомологів РІЇР-96 за допомогою очищування білків
Гомологи поліпептиду РІИР-96 можна також ідентифікувати за допомогою очищування білків, мас-спектроскопії (М5) та ПЛР-клонування із беЇадіпейа Кгаихзіапа або інших плаунів або папоротей.
Рослинну тканину збирали, піддавали швидкому заморожуванню в рідкому М» та зберігали при -80 "С. Після зберігання її подрібнювали в дрібний порошок за температури рідкого М» за допомогою кульового млина бепо Ваї! Мії (5РЕХ, Метачен, Нью-Джерсі). Для екстрагування білка до кожних 5 г ваги сирої тканини додавали 20 мл 50 мМ буфера Тгі5, рН 8,0, 150 мМ КСІ, 2,5 ММ ЕОТА, 1,595 полівінілполіпіролідону (РМРР) та суміш інгібіторів протеаз (Коспе
ОРіадповіїс5, Німеччина). Гомогенат центрифугували для видалення клітинного дебрису,
фільтрували крізь 0,22 мкм фільтри та піддавали знесоленню із застосуванням 10 мл колонки для знесолювання 2еба 5ріп (Тпегто зсіепійіс, Іллінойс)
Для очищування рослинний матеріал подрібнювали в дрібний порошок за температури рідкого Мо за допомогою кульового млина Сепо Ваї! Мі (5РЕХ, Метачен, Нью-Джерсі). Білок екстрагували в 100 мМ буфері Ттгі5, рН 8,0, 150 мМ КСІ, 2,5 мМ ЕОТА, 1,5 95 РУРР та суміші інгібіторів протеаз (Коспе Ріадповіїс5, Німеччина). Екстрагований матеріал центрифугували для видалення клітинного дебрису, фільтрували крізь МігасіоїтФ (Саїріоспет) і потім додавали до 35 96 сульфату амонію та давали відстоятися. Суспензію центрифугували та одержаний осадок ресуспендували в малому об'ємі 20 мМ буфера Ттіх5, рН 8. Після просвітлення шляхом центрифугування його піддавали знесоленню із застосуванням колонки Зерпадех 525 (СЕ,
Піскатавей, Нью-Джерсі), урівноваженої в 20 мМ буфері Ттгі5, рН 8. Об'єднану знесолену білкову фракцію завантажували в 1 мл колонку Мопо О (СЕ, Піскатавей, Нью-Джерсі) та елюювали за допомогою лінійного (60 СМ (об'ємів колонки) градієнта від 0 М до 0,7 М Масі у 20 мМ Ттгі5, рн 8,0. Фракції, активні проти ЗВІ та ЕСВ, об'єднували та піддавали знесоленню в 25 мМ МОР5, рН 6,7. Активну фракцію завантажували в 4 мл колонку Мопо Р (буфер А: 25 мМ МОР, рН 6,7; буфер В: Роїубийег 74, рН 4) із застосуванням 4 СМ лінійного градієнта (0 95 буфера В), за яким йшло відмивання за допомогою 15 СМ 100 95 буфера В.
Ідентифікацію білка проводили шляхом М5-аналізу після розщеплення білка за допомогою трипсину. Білки для ідентифікації за допомогою М5 одержували після розділення зразка на гелі
ГО5-РАСЕ, пофарбованому за допомогою барвника діамантовий синій (5-250. Смужки, що становлять інтерес, вирізали із гелю, видаляли барвник, відновлювали за допомогою дитіотреїтолу та потім алкілували за допомогою йодоацетаміду. Після розщеплення за допомогою трипсину протягом ночі зразки аналізували за допомогою нанорідинної хроматографії/тандемної мас-спектрометрії з іонізацією електророзпиленням (нано-Ї С/Е5-
М5М5) на мас-спектрометрі Тпегто 0 Ехасіїме Огрігар (Тпегто Рі5пег зсіепійіс), сполученої із системою для нанорідинної хроматографії ЕКзідепі МапоЇ С ОКга 1-О Ріи5 та автодозатором папоїс-аз2 (АВ Зсіех). Ідентифікацію білків проводили шляхом пошуку даних нано-І С/УМОМ5 порівняно із внутрішньолабораторною базою даних транскриптомів, яка містить транскрипти з матеріалів рослинних джерел та відкритої бази даних білків Зм/і55-Ргої із застосуванням засобу
Зо для пошуку Мазсої (Маїгіх зсіепсе).
Приклад 5. Тимчасова експресія в листках та біологічний аналіз на комахах
Поліпептиди РІИР-96 експресували в системі для тимчасової експресії під контролем вірусного промотора ОММУ та/або АШВОТ10О (Вам, вії. а!., (1999) Ріапі Мої. Віої. 40:771-782; Моїтів
ЗА еї аї (1993) Ріапі Мої Віої. 21(5):895-906). З рівня техніки добре відомий спосіб інфільтрації агробактеріями шляхом введення клітинної суспензії Адгобасієгішт в рослинні клітини інтактних тканин для того, щоб можна було виміряти або вивчити відтворювані інфікування та подальшу експресію трансгена, одержаного із рослини (Карійа, єї. аї!., (1997) Ріапі бсіепсе 122:101-108).
Коротко кажучи, квасолю кущову(квасолю звичайну, Рпазеоіи5 мцідагів) або сою(Сіусіпе тах) на стадії одного листа піддавали інфільтрації агробактерями за допомогою нормалізованих культур бактеріальних клітин тестованих та контрольних штамів. Через 4-7 днів із кожного проростка вирізали листові диски та заражали їх окремо 2 новонародженими особами совки соєвої (ЗВІ) (Спгузодеїхіз іпсіндеп5), 2 новонародженими особами совки кукурудзяної (СЕМ) (Неїїсомегра леа) або 4 новонародженими особами вогнівки кукурудзяної (ЕСВ) (Ов5ігіпіа пибіїаіїй5). Контрольні листові диски одержували із Адгорасіегішт, що містять тільки вектор експресії флуоресцентного маркера О5Кеа2 (Сіопіесп"М, 1290 Теїгга Веїа Аме. Маунтін-В'ю,
Каліфорнія 94043). Листові диски від не підданих інфільтрації рослин включали як другий контроль. Споживання зелених тканин листа оцінювали через два (СЕММ) або три (ЕСВ, 5ВІ,
ЕАМІ) дні після зараження. Тимчасово експресовані поліпептиди РИР-96 захищали листові диски від споживання комахами, якими їх заражали, водночас повне споживання зеленої тканини спостерігали для тканини від'ємного контролю та необробленої тканини (таблиця 5). па - не визначено
Таблиця 5 . Ідентифікатор
РИР-Ябда ЗБОЮ МО9 | 777льнн | я-н | я | -
РИР-Ябде |5ЕОІ0МО:18 | я | - | пі | па
Таблиця 5 . Ідентифікатор
РИР-Я6Ор 0000 ЗБОЮ МО44 7 | 777льн | з- | па | -
РИР-ЯбОе 0 ЗБОЮ МО48 | 777. | я | щ па | -
РИР-ЯБОЇ 00 ЗБОЮ МО50 | 777ля Їж | дпа | -
РИР-ЯбЕЮ 0 ОІЗЕОІЮ МОВ | 77/па/ | з- | - | зх
РИР-ЯбЕа ЗБОЮ МО:7 | па | з- | - | х-
РИР-ЯбЕЯ 00 ЗБОЮ МО54.7/ | 7777-11 ЇЇ я-н || ян
РИР-ЯБ6НО 0 ІЗЕ0ОІЮМОг92 | 7 - | т | па | па
РИР-ЯбНС 0 ЗБОЮ МО94 | 7777 - Їж | па | па
РИР-ЯбНО 0 ІЗЕОІЮМО96. | 7 - | т | па | па
РИР-ЯбНе ЗБОЮ МО98.7 77177 - 1777 | па | па
РИР-ЯБНІ 0 ІЗЕОЮМОс100 | 7 - | т | па | па
РИР-ЯбНО 0 ІЗЕОІЮМОс102 | («5 Ї /ля | па | па
РИР-ЯБ6НИ 0 ІЗЕОІЮМОс104 | 77-х | па | па
РИР-ЯБНІ 0 ІЇЗЕОІЮМОс106 | /- | т | па | па
РИР-Я6НІ 0 ЗБОЮ МОс108 | 7-7 | 7 - | па | па
Приклад 6. Опосередкована Адгобасієгішт трансформація маїсу та регенерація трансгенних рослин
Для трансформації маїсу, опосередкованої Адгобасіегіит, із використанням полінуклеотидів
РІИР-96 згідно з даним розкриттям, використовували спосіб за 7пао (патент США Мо 5981840 і
РСТ публікація патентної заявки УМО 1998/32326; змісти яких включено в даний документ за допомогою посилання). Коротко кажучи, незрілі зародки виділяли з маїсу та зародки приводили в контакт із суспензією Адгорасіегішт в умовах, за яких бактерії були здатними переносити нуклеотидну послідовність щонайменше в одну клітину щонайменше одного з незрілих зародків (стадія 1: стадія інфікування). На цій стадії незрілі зародки занурювали в суспензію з
Адгорасіегішт для ініціації інокуляції. Зародки протягом певного часу культивували разом із
Адгобрасієгішт (стадія 2: стадія сумісного культивування). Незрілі зародки можна культивувати на твердому середовищі після стадії інфікування. Після періоду спільного культивування передбачалася необов'язкова стадія "спокою". На цій стадії спокою зародки інкубували в присутності щонайменше одного антибіотика, який, як відомо, інгібує ріст Адгобасіегішт, без додавання засобу для відбору до рослинних трансформантів (стадія 3: стадія спокою). Незрілі зародки культивували на твердому середовищі з антибіотиком, але без селективного засобу для елімінації Адгобасіегічт їі протягом фази спокою для інфікованих клітин. Потім інокульовані зародки культивували на середовищі, яке містить засіб для відбору, та виділяли трансформований калюс, що росте (стадія 4: стадія відбору). Незрілі зародки культивували на твердому середовищі з засобом для відбору, що призводило до вибіркового росту трансформованих клітин. Потім калюс регенерували з одержанням рослин (стадія 5: стадія регенерації) та калюси, вирощені на селективному середовищі, культивували на твердому середовищі для регенерації рослин.
Приклад 7. Трансформація та регенерація сої (СіІусіпе тах)
Трансгенні лінії сої були одержані способом бомбардування генною гарматою (Кіевїп еї аї., Майшге (Гопдоп) 327:70-73 (1987); патент США Мо 4945050) із застосуванням інструмента
ВІОКАЮ Віоїїстіс РОБЗІ1000/Не та або плазміди, або фрагмента ДНК. Для трансформації та регенерації рослин сої застосовують наступні вихідні розчини та середовище:
Вихідні розчини:
Вихідний розчин сульфатів 100 Х: 37,0 г Ма5О4:7 НО, 1,69 г Мп5О. НО, 0,86 г 2п504:7 НО, 0,0025 г Си5О 5 Нг2О
Вихідний розчин галогенідів 100 Х: 30,0 г Сасі»-2 НО, 0,083 г КІ, 0,0025 г СосСіІ» б НгО
Вихідний розчин Р, В, Мо 100 Х: 18,5 г КНгРО», 0,62 г НзВО»з, 0,025 г МаагМоО:2 Н2О
Вихідний розчин Бе ЕОТА 100Х: 3,724 г МагЕеЕОТА, 2,784 г Ре5О4:7 Нг2О
Вихідний розчин 2,4-0: 10 мг/мл витаміна 1000Х вихідний розчин вітамінів В5: 100,0 г міо-інозитолу, 1,0 г нікотинової кислоти, 1,0 г піридоксину-НСІ, 10 г тіаміну. НС.
Середовище (на літр):
Тверде середовище 58199: 1 упаковка М5 солей (Сібсо/ ВК! - Саї. 11117-066), 1 мл вихідного 1000Х розчину вітамінів
В, 30 г сахарози, 4 мл 2,4-О (кінцева концентрація 40 мг/л), рН 7,0, 2 г сеїше
Тверде середовище 581: 1 упаковка М5 солей (бірсо/ ВКІ - Саї. 11117-066), 1 мл вихідного1000Х розчину вітамінів
В, 31,5 г глюкози, 2 мл 2,4-О (кінцева концентрація 20 мг/л), рН 5,7, 8 гагару ТС
ЗВ196: по 10 мл кожного з вищезазначених вихідних розчинів 1-4, 1 мл вихідного розчину вітамінів
Ко) В5, 0,463 г (МНа)2 50», 2,83 г КМО»з, 1 мл вихідного розчину 2,4 0, 1 г аспарагіну, 10 г сахарози, рн 5,7
ЗВ71-4: солі Гамборга В5, 20 г сахарози, 5 г агару ТС, рН 5,7.
ЗВ103: 1 упаковка суміші солей Мигазпіде 5 5КОо0д, 1 мл вихідного розчину вітамінів В5, 750 мг
Масі»г гексагідрату, 60 г мальтози, 2 г Сеїгйе м, рН 5,7.
ЗВ166:
ЗВ103 доповнена 5 г на літр активованого вугілля.
Ініціація ембріогенної суспензійної культури сої:
Боби з незрілими насінинами з доступних рослин сої збирали через 45-55 днів після висаджування, очищали від оболонок і вміщали в стерильний контейнер Мадепіа. Насіння сої стерилізували, струшуючи його протягом 15 хвилин у 5 95 розчині Сіогох? із 1 краплею мила
Імогу "М(тобто 95 мл кип'яченої дистильованої води плюс 5 мл СіогохФ та 1 крапля мила, добре перемішаних). Насіння споліскували, використовуючи 2 л стерильної дистильованої води, і насінини, менші за З мм, розміщували на окремі предметні стекла. Малий кінець насінини відрізали, і котиледони вичавлювали із оболонки насінини. Сім'ядолі перенесли до чашок, що містять 58199 середовище (25-30 сім'ядолей на чашку), на 2 тижні, потім перенесли до 5В1 на 2-4 тижні. Чашки обгортали волокнистою стрічкою. Після цього вторинні зародки розрізали та помістили на 5В196 рідке середовище на 7 днів.
Культуральні умови
Ембріогенні суспензійні культури сої (сорт 93У21) підтримували у 50 мл рідкого середовища 58196 на ротаційному шейкері, 100-150 об./хв., 26 "С з фотоперіодом 16:8 годин день/ніч за інтенсивності світла 80-100 мкерг/м2/с. Культури пересівали через кожні 7-14 днів шляхом інокуляції кількості тканини розміром до 72 десятицентової монети (скупчення, що ростуть разом) в 50 мл свіжого рідкого середовища 58196.
Підготовка ДНК для бомбардування:
У методиках гарматного бомбардування частинками можна застосовувати очищені 1) повну плазмідну ДНК; або 2) ДНК-фрагменти, що містять тільки експресувальну(експресувальні) касету(касети) рекомбінантної ДНК, що становить інтерес. Для кожних сімнадцяти бо трансформацій за допомогою бомбардуванням готували 85 мкл суспензії, що містить 1-90 пікограм (пг) плазмідної ДНК на пару основ кожної плазмідної ДНК. Плазмідні ДНК або фрагменти осаджували-разом на частинках золота наступним чином. ДНК у суспензії додавали до 50 мкл суспензії із 10-60 мг/мл 0,6 мкм частинок золота та потім об'єднували з 50 мкл Сасі2 (2,5 М) та 20 мкл спермідину (0,1 М). Суміш перемішували на вихровому змішувачі протягом 5 с., крутили на мікроцентрифузі протягом 5 с. і поверхневий розчин видаляли. Потім покриті
ДНК-частинки промивали один раз 150 мкл 10095 етанолу, струшували та знову центрифугували в мікроцентрифузі, а потім ресуспендували в 85 мкл безводного етанолу. Потім п'ять мкл покритих ДНК-золотих частинок навантажували на кожний диск макроносія.
Тканинний препарат та бомбардування з ДНК:
Приблизно 100 мг двотижневої суспензійної культури помістили у порожню 60 мм Х 15 мм чашку Петрі та залишкову рідину видалили з тканини із застосуванням піпетки. Тканину помістили на приблизно 3,5 дюймів від стримуючого екрану та кожну чашку з тканиною бомбардували один раз. Тиск розриву мембрани встановили на 650 фунтів на квадратний дюйм та камеру вакуумували до -28 дюймів ртутного стовпчика. Після бомбардування тканину з кожної чашки розділили між двома колбами, помістили назад у рідке середовище та культивували, як описано вище
Відбір трансформованих зародків та регенерація рослин:
Після бомбардування тканину із кожної підданої бомбардуванню чашки розділяли та розміщали у дві колби з рідким середовищем для підтримки культури 58196 на чашку з підданої бомбардуванню тканини. Через сім днів після бомбардування рідке середовище в кожній колбі замінювали свіжим середовищем 58196 для підтримки культури з додаванням 100 нг/мл селективного засобу (селективного середовища). Для відбору трансформованих клітин сої застосовують селективний засіб може являти собою сполуку сульфонілсечовини (5) з хімічною назвою 2-хлор-М-(4-метокси-б метил-1,3,5-триазин-2-ілламінокарбоніл) бензолсульфонамід (звичайні назви: ОРХ-М/4189 та хлорсульфурон). Хлорсульфурон являє собою активний інгредієнт гербіциду на основі сульфоніл сечовини СІ ЕАМФт' від ЮиРопі.
Селективне середовище, що містить 5), замінювали через кожні два тижні протягом 8 тижнів.
Після 8-тижневого періоду відбору спостерігали, що осередки зеленої, трансформованої тканини ростуть із нетрансформованих, некротичних ембріогенних кластерів. Такі ймовірні
Зо трансгенні об'єкти виділяли та підтримували в рідкому середовищі ЗВ196 з З) з розрахунку 100 нг/мл протягом ще 5 тижнів, при цьому середовище змінювали кожні 1-2 тижні з одержанням нових, трансформованих ембріогенних суспензійних культур, що клонально розмножуються.
Зародки проводили сумарно приблизно 13 тижнів у контакті з ЗИ). Суспензійні культури пересіювали та підтримувати як кластери незрілих зародків і також регенерували в цілі рослини шляхом дозрівання і проростання окремих соматичних зародків.
Соматичні зародки ставали придатними для проростання після чотирьох тижнів у середовищі для дозрівання (1 тиждень у 5В166, потім З тижні в 58103). Потім їх вилучали із середовища для дозрівання та підсушували в пустих чашках Петрі до семи днів. Потім висушені зародки висадили у середовище 5В71-4, де їм дозволили прорости за тих самих умов світла та температури, як описано вище. Пророслі зародки перенесли до горшкового середовища та вирощували до зрілості для продукування насінин.
Приклад 8. Трансформація шляхом бомбардування частинками та регенерація трансгенних рослин
Назрілі зародки маїсу від тепличних рослин-донорів бомбардували плазмідою, яка містить нуклеотидну послідовність, що кодує інсектицидний білок. Качани очищали від листяної обгортки та піддавали поверхневій стерилізації в 30 95 вибілювачі Сіогохб разом з 0,595 мийного засобу Місго протягом 20 хвилин, та обполіскували два рази стерильною водою.
Незрілі зародки вирізали та розміщали рубчиком вниз (щитком догори), 25 зародків на чашку
Петрі, на середовище 560У на 4 години та потім вирівнювали в межах цільової зони 2,5 см, готуючись до бомбардування. ДНК плазмідного вектора, що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує інсектицидний білок, функціонально пов'язаний із промотором, осаджували на 1,1 мкм (середній діаметр) вольфрамові гранули із застосуванням процедури преципітації з Сасі»г наступним чином: 100 мкл підготовлених частинок вольфраму у воді; 10 мкл (1 мкг) ДНК в буфері Тті5з ЕОТА (1 мкг загальної ДНК); 100 мкл 2,5 М Сасі» та 10 мкл 0,1 М спермідину.
Кожний реагент додавали послідовно до суспензії частинок вольфраму, при цьому вона перебувала на вихровій мішалці для множини пробірок. Кінцеву суміш піддавали нетривалій ультразвуковій обробці та забезпечували інкубацію під час постійного перемішування на вихровій мішалці протягом 10 хвилин. Після періоду осадження пробірки центрифугували протягом нетривалого періоду часу, рідину видаляли, промивали за допомогою 500 мл 100 95 бо етанолу та центрифугували протягом 30 секунд. Рідину знову видаляли та до кінцевого осаду частинок вольфраму додавали 105 мкл 100 95 етанолу. Для бомбардування генною гарматою частинки вольфраму/ДНК піддавали нетривалій ультразвуковій обробці, і вносили 10 мкл на центр кожного макроносія, і забезпечували підсихання приблизно 2 хвилини перед бомбардуванням Чашки зі зразками бомбардували за допомогою генної гармати на рівні Мо 4.
Усі зразки одержували однократний постріл із розрахунку 650 фунтів на квадратний дюйм, при цьому загальна кількість аліквот, взятих з кожної пробірки з одержаними частинками з ДНК, становила десять.
Після бомбардування зародків тримали на середовищі 560 протягом 2 днів, потім переносили на середовище для добору 560К, що містило З мг/літр біалафосу, та пересівали кожні 2 тижні. Через приблизно 10 тижнів добору калюсні клони, стійкість яких була виявлена в результаті добору, переносили на середовище 288. для ініціювання регенерації рослин. Після дозрівання соматичних зародків (2-4 тижні) добре розвинені соматичні клони переносили в середовище для проростання та переносили в освітлену кімнату для культивування. Через приблизно 7-10 днів сіянці, що розвивалися, переносили на безгормональне середовище 272 у пробірках на 7-10 днів до належного вкорінення сіянців. Потім рослини переносили до вставок у лотках (еквівалентні горщику на 2,5"), що містили грунтову горщикову суміш, та вирощували протягом 1 тижня у вегетаційній камері, потім вирощували протягом додаткових 1-2 тижнів в теплиці, потім переносили до горщиків Сіазвіс 600 (1,6 галона) та вирощували до зрілості. За рослинами вели спостереження та проводили оцінку щодо експресії поліпептиду РИР-96 за допомогою аналізів, відомих із рівня техніки, таких як, наприклад, імунологічні аналізи та вестерн-блот.
Трансгенні рослини маїсу, позитивні щодо експресії інсектицидних білків, тестували щодо пестицидної активності із застосуванням стандартних біологічних аналізів, відомих з рівня техніки. Такі способи включали, наприклад, біологічні аналізи з вирізанням кореня та біологічні аналізи цілої рослини. Див., наприклад, публікацію заявки на патент США Мо 05 2003/0120054 та міжнародну публікацію Мо М/О 2003/018810.
Середовище для бомбардування (560) містило 4,0 г/л основних солей Мб (БІОСМА С-1416), 1,0 мл/л вітамінної суміші Ерікссона (1000-кратної БІСМА-1511), 0,5 мг/л тіаміну-НСЇІ, 120,0 г/л сахарози, 1,0 мг/л 2,4-О та 2,88 г/л І -проліну (доведених до об'єму за допомогою 0-І НгО після доведення рН до 5,8 за допомогою КОН); 2,0 г/л Сеїгйе (доданого після доведення до об'єму за допомогою О-І НгО) та 8,5 мг/л нітрату срібла (доданого після стерилізації середовища і охолодження до кімнатної температури). Селективне середовище (560К) містило 4,0 г/л основних солей Мб (5ІСМА С-1416), 1,0 мл/л вітамінної суміші Ерікссона (1000-кратної БІАМА- 1511), 0,5 мг/л тіаміну-НСІ, 30,0 г/л сахарози та 2,0 мг/л 2,4-Ю (доведених до об'єму за допомогою 0-І НгО після доведення рН до 5,8 за допомогою КОН); 3,0 г/л СеїшШе (доданого після доведення до об'єму за допомогою О-І НгО) та 0,85 мг/л нітрату срібла і 3,0 мг/л біалафосу (обидва з яких додано після стерилізації середовища і охолодження до кімнатної температури).
Середовище для регенерації рослин (288.)) містило 4,3 г/л солей М5 (СІВСО 11117-074), 5,0 мл/л вихідного розчину вітамінів М5 (0,100 г нікотинової кислоти, 0,02 г/л тіаміну-НСІ, 0,10 г/л піридоксину-НСЇ та 0,40 г/л гліцину, доводили до об'єму за допомогою очищеної О-Ї НегО) (Мигазпіде апа ЗКосод, (1962) Рпузіої. Ріапі. 15:473), 100 мг/л міоінозитолу, 0,5 мг/л зеатину, 60 г/л сахарози та 1,0 мл/л 0,1 мМ абсцизової кислоти (доводили до об'єму за допомогою очищеної р-І НО після доведення рН до 5,6); 3,0 г/л СеїшШе (додавали після доведення до об'єму за допомогою 0-Ї НгО), і 1,0 мг/л індолілоцтової кислоти, і 3,0 мг/л біалафосу (додавали після стерилізації середовища та охолодження до 60 "С). Безгормональне середовище (272) містило 4,3 г/л солей за М5 (СІВСО 11117-074), 5,0 мл/л вихідного розчину вітамінів за М5 (0,100 г/л нікотинової кислоти, 0,02 г/л тіаміну-НСЇ, 0,10 г/л піридоксину-НСГ. та 0,40 г/л гліцину, доведених до об'єму за допомогою очищеної 0-І НгО), 0,1 г/л міоінозитолу та 40,0 г/л сахарози
БО (доведених до об'єму за допомогою очищеної О-І Н2О після доведення рН до 5,6); та 6 г/л бактоагару (доданого після доведення до об'єму за допомогою очищеної ЮО-І Нео), її стерилізували та охолоджували до 60 "С.
Приклад 9. Ефективність контролю комах у стабільно трансформованих рослин сої та кукурудзи проти широкого спектра лускокрилих комах
Із трансформованих рослин вирізали листові диски та тестували їх щодо інсектицидної активності поліпептидів РІИР-9б проти совки соєвої (З5ВІ) (Спгузоаеїхіб5 іпсішдеп5), совки кукурудзяної, (СЕМУМ) (Неїїсомегра 7еа), вогнівки кукурудзяної (ЕСВ) (Овігіпіа пибіаїйв), совки оксамитових бобів (УВС) (Апіісагсіа деттайаїїв) та совки трав'яної (5родорієга їгидірегаа).
Передбачається, що вищенаведений опис різних ілюстративних варіантів здійснення даного 60 розкриття не є вичерпним або обмежує обсяг точної форми, що розкрита. Хоча специфічні варіанти здійснення та приклади, що стосуються даного винаходу, описані у даному документі для ілюстративних цілей, у межах обсягу даного винаходу можливі різні еквівалентні модифікації, як буде зрозуміло фахівцям у даній галузі. Представленні в даному документі ідеї можна застосовувати для інших цілей, відмінних від прикладів, описаних вище. У світлі вищенаведених ідей можливі численні модифікації та зміни, і тому вони входять у межі обсягу формули винаходу, що додається.
Ці та інші зміни можуть бути виконані у світлі вищенаведеного детального опису. Загалом, у нижченаведеній формулі винаходу, використовувані терміни не повинні тлумачитись як такі, що обмежують обсяг конкретних варіантів здійснення, розкритих в описі та формулі винаходу.
Повне розкриття кожного цитованого документа (у тому числі патентів, заявок на патенти, журнальні публікації, реферати, посібники, книги або інші розкриття) у рівні техніки, детальному описі й прикладах повністю включено в даний документ за допомогою посилання.
Були здійснені спроби забезпечити точність щодо застосовуваних чисел (наприклад, кількості, температури, концентрацій тощо), але можуть передбачатися деякі експериментальні помилки та відхилення. Якщо не вказано інакше, частини являють собою частини за вагою, молекулярна вага являє собою середню молекулярну вагу; температура наведена в градусах за Цельсієм та тиск є атмосферним або практично атмосферним.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 ПІОНІР ХАЙ-БРЕД ІНТЕРНЕШНЛ, ІНК.
Е. І. ДЮПОН ДЕ НЕМУР ЕНД КОМПАНІ
Беррі, Дженіфер
Кларк, Дебора
Інгліш, Джеймс
Онг, Азалія
Шеперс, Ерік
Ци, Джулі
Райс, Джанет
Зо «1205 ІНСЕКТИЦИДНІ БІЛКИ ТА СПОСОБИ ІЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «1305 6584-МЖМО-РСТ
З5 «1505 2 62/064810 «1515 2014-10-16 «1605 109 «1705 РабепсІпПп версія 3.5 «2105 1 «2115» 1065 «2125 ДНК «213» Орпіодіоввиют репаціцит «4005 1 аєдеЕСсдсеєдда єєЄсадасасс саєдеаєсдесс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасссасс (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содадчаєсда доадсЕдсдддадс ддаддсдадесдд 120 саассдсдсуд дааєссодсуаєЄ деддаєдасу додасассдаса ссссудссас єЕсСсодсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседа басасдссса ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо ччдЕЄЕСЕСЕсСЕ єссаєаааає дасаєсссдда ддсссСасааа ссдадтаєсс аассдасчаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЕЕЕсдДЕесСС саадаассає адсасссдсе сообаєдаєса асдєаадсса ссстассетвд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєоодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддєсд садаадсдад СддададеЕсс ддвасдоаєстд Есадедсаєс єддодасстає 720 (516) дсаассасес аададдааад Ссддаассста асеЕсдддаасс аассгддаас сстрададссе 78о0 чадсааєдда єсЕеЕсасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕєе дсеЕдЕССсОдда асчассєсесс аасаєсдссає ссссестаєд 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас бєадедсддає асаассааса ссддаассад адсаєссадає 960 саєдеєдадуд Есудаадссас Єдадсаасаа дЕссаадддд Есааадаєса аадедсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕСЕсвдсвд аагаа 1065 «2105 2 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Со1увів мгіднсїї «4005 2 аєддсЧдєєдЕ аєсадасасс єдеЕЧдсасдеєд аєсодаддаддс аададєдасаа сЕСсЯаеессСасе (216)
Басдаєсада дсаддаасодд даадаєдссд асддаачаєссд доадсдсдддадс сддадсдадесдд 120 садссдсдсд дсаєсссдодддає сСсддаєрдеЕсе додсеЕссдара дсссдассас сЕсгсддсаса 180 десЕСЯддУСсСЄ сЕСасеЕСссдда агбасасаєсвєє дсадседдсуд адсодсаєсас ссдеЕєдесе 240 гєЧдЕЧддддодса асоаодеЕдсьда басодсддЕссс ддадссаєсса дассссасас дасаассдда Зоо дасеЕСаєЄЕвЄ Єсссааааає дасаєсссда дасссааада ссдадсаєсс аассдаєсдвед 3З6о чдсаєссуддеЕС ЄЕЄЕЧДЕЧдЕеЕЧдод даєсасадда сддадссадесд ссдасаєєсда Єссаєссдд9аад 420 гЕваєвєдеЕеєс єсадаассає адсаєсеЕєсе содсаєдаєса аєдсаадста сссаассеєд 480
ЧдасЕсЄададс аадсгддаає Саєссссудєс асуасстєдасе сдбасаасуда сЕССааєаає 540 чсаддеЕєста єсесСсаадаа ЄсОЧдасессс сссддсадсес даасадессас аасаєссаєса 60
Есаєддасас ЄсасеЕєсадуд даєсададдса сасдссадсд Сдассудеєсса адсаддааєсс 6бо сссссддссд садаадсдад содадчадеЕсє ддаєддеєсад єдадедсаад єддаадстас 720 асаадсассс аададдадад Єсдаасссос асссддаасс аасссддаас ссгададсса 78о0 чддасааєддда єеєсСссассса адссассасе соодададдаа ссаєсассеєс дссстаєссад 840 чадассаєдуд адаєсасссеє асаасссдда ассдсдеЕссс аасассстає асссестаєд 900 баєєссододеЕд єддаєсаєас садедссдас асаассааса ссддаассад адсаєссдаад 960 саадеєдадуд Ессаадссас єЄдаєсаасаа Есссаддаад дадаєсасаа Єдеасаассе 1020 чаєааадаад Єсдаадааад аааадессьс ЄЕБгасєдаді ад 1062
Зо «2105 З «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Со1увів мгіднсїї «4005 З аєддсЧдЕєєдЕ аєсадасасс єдЕЧдваєсдесд ассодадддс ааддсддсаа сссдЯдсстасес (216)
Басдаєсада дсаддаасодд даадаєдссд асддаачаєссд доадсдсдддадс сддадсдадесдд 120 садссдсдсд дсаєсссдодддає сСсддаєрдеЕсе додсеЕссдара дсссдассас сЕсгсддсаса 180 десЕСЯДддУУСЄСС сЕсСасеЕСссдда агбасасасвєє дсадсєддсуд адсодсаєсас ссудеЕєдесе 240 гєЧдЕЧддддодса асоаодеЕдсьда басодсддЕссс ддадссаєсса дассссасас дасаассдда Зоо
ЧдасеЕсаєвєеєєє єсссааааає дасаєсссдд дасеєсааада седчадстаєсс ааєєдваєчед 3З6о чдсаєссуддеЕС ЄЕЄЕЧДЕЧдЕеЕЧдод даєсасадда сддадссадесд ссдасаєєсда Єссаєссдд9аад 420 гЕваєдеЕеєс єсадаассає адсаєссссє сдасаєдаєса асдсаадсса сссаассесєд 480
ЧдасЕсЄададс аадсгддаає Саєссссудєс асоуасстєдасеє сдбасаасуда сЕєЕССааєаає 540 чсаддеЕєста єсесСсаадаа ЄсОЧдасессс сссддсадсес даасадессас аасаєссаєса 60
Есаєддасас Єсасеєєсадуа дасададдса сасдссадсд Єдассдсєсса адсаддессес 6бо сссссддссд садаадсдад содадчадеЕсє ддаєддеєсад єдадедсаад єддаадстас 720 асаадсассс аададдадад Єсдаасссеєс асесддаасс ааєсссоодаас сссададсса 78о0 чддасааєддда єеєсСссассса адссассасе соодададдаа ссаєсассеєс дссстаєссад 840 чадассаєдуд адаєсасссеє асааєссддда ассдсдеЕссс аасассстає асссестаєд 900 баєєссоодед єддаєставас гадедссдас асаассааса ссддаастад адсаєєдаад 960 саадеєдадуд Ессаадссас єЄдаєсаасаа Есссаддаад дадаєсасаа Єдеасаассе 1020 чаєааадаад Ссдаадааад аааадессес ЄЕсасеєдачі ад 1062 «2105 4 «2115» 1203 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа бо «4005 4 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс саєдасссос ассддаддаа даддсддадс ддсдЕссасд (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд ссоадсассссд аддаддаєсд дадсаєсдддс сддсдоаддаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 сссаасдєсд дсссссасса ддадссєсасс ЕЕЕссаддаєд дсдадсудбає сассадессес 240
ЕСсСЕСсаєдод дсааєсддадс аддсасасос адеЕддеЕддса ЄсСаддсєсса сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЄЄЕЄСсСсасса саєдассссс сддддсесссда адсаададса сссадессдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсаєдеЕдсЯає адодсеЕсдасо ддааддсадд дсдссдасає сзасдсесесд 420 чдасЕєсаєдеЕ єссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сеЕсддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдссадсс ссасєєссаа дасссоддеЕсс СсЕССсСааддаа дссададуас дассдвєаєсс 60
ЕссеЕСсСсвєдда дсассассас доддсаєєдад сессаєдсда дсаєсассє аєсоддсаддад 6бо аєсссЕСсЕєсЯд ЕєддссааєдЕ сдаадддсаа басддаєсддуд ссассадсас аадссссасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс сессадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 сссддессадс ддассссссс дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саадссасса Сдсаааєсас сссссадаас ддсассдєЕс Есасстассс аарсаседсь 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсудес дадаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 часЕСЕДдаєс ассгддссає саасааддає деЕссдссаса ЕсдсЕдсвдс сааєсддеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гаасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд аасссдєсаа дЕЕсадсудса ддеЕдсаасьї асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасєсадуд аадесдасас басєдсадсс ассадедедуа аададссвас ссеЕсСЧдєсдасас 1200 сад 1203 «2105 15 «2115» 1188 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 15 аєдсаасаєд дссеЕддссаа басеєдаадса адсссссода Ссдадаадесс ссаадсесста (216)
Зо асддаадодсд дсасачаєда дадсаєсстє дсддастаадс ЄСЯєсдЯавЯдс Едаадчвадає 120
ЧдсЕєсСЕСАЄЄ Єдссассасс єддададасдд сссадсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсЕдсвадед єсасддсессс ЄсеЕдсдсссс асаддсддес ссоддесдддеЕс дсаасдеЕєсс Зоо
ЧдЕССсСЧдаддає ддассаасдд садддссасс ассаддаєдс деЕдЕСТтасад ддсссоадоадд 3З6о асстаєсааад сусассадає сеЕддсЕсаса дассстдссс сссадасеса ГоОдеЕЧЕССсСЕ 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасасдссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 седсддддаа асододаасддд сасссодродсеЕ ддаєддаєсу адзеЕссдадас дадсеЕсдоадіс 540 чдчдааачеЕвесє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссесассс сдЕсдасдес 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕеЕЧдод стасасєсссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо
ЄЕссСЕЧддЕвЕєсС єсаассасає Сдадсаддсесс дадсссасса асдєдаддєа Ессдасесстье 720 ччдаєєсєдаса соддсаддрає єдсасссасуд дсссрддавра ссеЕЕссуддеЕс садааасаас 780
Есаєссасдс саададасед ддасеЕссадс сддаасаєда дсаддадсас Сдадсддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда Єсадесаєсдда сСдоаодадаєссд доддсдасоада ссаєєсссоаа 960 асаасадада сусссддадса счдассєдадс Содадсочоєсєдоа дсдодачадс ссадсссд9дд 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асзчаєддаєда Єдчаддаєдад аааєддеЕдсс сссЕссадсеЕ аєдссудєдс Еддаассстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасаааваєа аасдасаасе саасесвгаа 1188 «2105 6 «2115 354 «212» Білок «213» Орпіодіоввиют репаціцйт «4005 6
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Ап Аза Рпе ТПг Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30 (516) Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а с1іу сій Тер сіп Тей Агуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег 50 55 бо
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тем Тер б1у АвБп с1у Аїа сіу ТБг Агуд бек сіу с1у І1е Агуд РоПе Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у Гей біц біп Аїа с1іу І1е І1їе Рго Уаі ТПг Гей Авр бек Рре Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сіу бі Рпе сіу Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
А1їа ТПг Тбг о біп бі бій бек Агуд Тпс о Гей ТБПг Тгр АвБп о біп бек с1Уу 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1ї1е ТПг Іец Іей
Зо 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг б1у ТПпг Агуд Аза бБег Авр 305 310 315 320
Нів УМаії сій Уаі бій Аїа ТПг о біц біп сбіп Уа1і! сбіп с1у Уаї Пув Авр 325 330 335 біп бек Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБПг Гец Іецй РБе 340 345 350
А1а сіц «2105 7 «2115 353 «212» Білок «213» Со1увів мгіднкгїії «4005 7
Меє Аїа гей Тук біп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 5 10 15
Авп обБек Рпе ТПг Туг Авр біп бек Агуд Авп біу Ппув Маії Гечп ТПг Туз 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє бек с1у Бек Авр бек Рго ТПг ТПг Рбе сіу ТПг Аза бек с1у 5бег 50 з9 бо
Тук Бек бій Тук ТПг Рре Аїа Аза сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек с1іу Аїа І1е Агкд Рое Туг 85 90 95 (516) ТПЕ Трпг Тпк о сіу біу Бек Рре Рпе Рго Ппув Меє ТПг бек Тгр Авр Іец 100 105 110
Тпув ТпПгЕ бій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
І1Іе с1у Агуд Аїа бек Азїа Авр І1е АвБр бек Іїеп сіу Рпе Меє РіПе Гей 130 135 140
Агуд ТпПг о Іїе Аза бек бек Акуд Меє І1їе Авп Уаї бек Тук Рго Тібг Іецй 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза біу бек І1е бек Гув АвБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр ТПг Гей ТПг Бек с1у Те 195 200 205 бі Аза Нів Аза бек Уа1і ТПг Уаі сіп Аїа сіу І1їе Рго бек Уаії А1а 210 215 220 сій Маї бек сб1іу бій Рбе сіу Ткгр бек Уаі! бек Уаі бек сбіу бек Туг 225 230 235 240
ТПг Бек ТПг сбіп біц біц бек Агуд ТБг Іец ТПг Тер АБп біп Бех Щ1У 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1е бек І1е сбіп Аїа ТПг ТПг Агуд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Ту сбіп сіу ТП Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек с1і1у ТПг Уаі Рре біп Туг Рго І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тук ТПг бек Уаії Авр чІ1е ТПг АвБп ТПг б1іу ТПг Агуд Аїа Геч Тув 305 310 315 320 біп Уаі бій Уаі сбіп Аїа ТПг Авр біп біп бек біп біц с1у Авр Нів 325 330 335
Ап оУаі1 сбіп Рго Авр Гув бій Уаії біц бій Агд Гув Уаії Гей Рпе ТЕГ
Зо 340 345 350 січ «2105 8
З5 «2115 353 «212» Білок «213» Со1увів мгіднсїї «4005 8
Меє Аї1а Гей Тук сбіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 5 10 15
АвпобБек РПе ТПг Туг Авр біп бег Агуд АвБп обіу Гув Уаї Гей ТПг Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє бек с1у Бек Авр бек Рго ТПг ТПг Рбе сіу ТПг Аза бек с1у 5бег бо
Тук Бек бій Тук ТПг Рре Аїа Аза сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80 50 Тем Тер б1у АвБп с1у Аїа сіу ТБг Агуд бек б1іу Аїа І1е Агуд РоПпе Туг 85 90 95
ТПг Тпк ТБкг сіу с1іу бек Рбе Рбе Рго пуб Меє ТПг бек Тгр АБвр ГІецй 100 105 110
Тпув ТпПгЕ бій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 55 115 120 125
І1Іе с1у Агуд Аїа бек Азїа Авр І1е АвБр бек Іїеп сіу Рпе Меє РіПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Аза бек бек Агкуд Месє І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 (516) с1у Гей біц біп Аїа с1іу І1е І1їе Рго Уаі ТПг Гей Авр бек Тукг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза біу бек І1е бек Гув АвБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр ТПг Гей ТПг Бек с1у Те 195 200 205 сі Азїа Ні Аїа бек Уа1і ТіПг Уаі! сбіп А1ї1а сіу Гей Ркго бек Уаії А1їа 210 215 220 бі Маї бек сіу бі Рпе сіу Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек сіу бек Туг 225 230 235 240
ТПг Бек ТПг сбіп біц біц бек Агуд ТБг Іец ТПг Тер АБп біп Бех Щ1У 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1е бек І1е сбіп Аїа ТПг ТПг Агуд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Ту сбіп сіу ТП Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек б1у ТбПг Маї Рпе сбіп Туг Рго І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаії Авр І1е ТБПг АвБп ТП б1у Тпг Агуд Аїа Гей Гув 305 310 315 320 біп Уаі бій Уаі сбіп Аїа ТПг Авр біп біп бек біп біц с1у Авр Нів 325 330 335
Ап оУаі1 сбіп Рго Авр Гув бій Уаії біц бій Агд Гув Уаії Гей Рпе ТЕГ 340 345 350 січ «2105 19 «211» 400 «212» Білок «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа
Зо «4005 9
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 5 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд
З5 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у сі1у бек біп Те Агуд с1іу Іїе Агд Уа1і1 Тгр
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У бо 40 зек Тук біп бій Рпе ТПг Рпе сбіп Авр с1іу бій Агуд чІ1е ТПг бек Іеєцй 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Ні Нів Меє ТПг б5Бег Тер С1У 45 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Уаі1і Авр Уаі Уаі Авр сіу Уа1! Сув Уаі 1У 115 120 125
Тецп ТПпг сб1у Агкуд біп сб1у Аза Авр Іїе АвБр Аїа Гей сіу Рре Меє РБПе 130 135 140 50 Тем Агуд Тк Меє ТПг бек Аза Акуд Меєс І1е Авп Уаі Пув Тук Рго Тіг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Ггец Авр Рое Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп Аза бек бек І1е бек Гув ТПг Тгр Бек Ропе сіп 55 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Уа1 бек Бек Бек Тер бек ТПг ТПг Тс о1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220 (516) А1а Авп Уаі біц сб1у сбіп Тук сб1у Тер Аїа І1е Бек ТПг бек бек ТПг 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап о Нів бек біц ТПг Агуд ТБг Гец біп Тер б1п Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї тей сій Рго сбіу біп Тгр Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Агуд с1у Тс Іїе ТПг Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 бі1у век Авр Нів Гей Аїа Іїе Авп Гпув Авр Уаі1і Агуд Туг І1е Аза А1а 325 330 335
Аза Авп о сіу Аїа Аза Уа1ії б1у ТБПг ТБг ТБ ТБ АБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Маії Нів Рго Іїе Агкгуд сбіу Аїа Рго Іїе Уа1і бій Ркго Уаї Ппув Ріе 355 3З6о 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг 385 390 395 400 «2105 10 «2115 395 «212» Білок «213» Бе1адіпе1і1а уісбогіає «4005 10
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 5 10 15
Зо Рпе сіп Аїа їей Месє сіц сіу с1у Іїе Авр бій бек Іїе Гей Аїа ТПг 20 25 30 пуб ІТеп Уаї сС1у Аїа біш с1іу Авр Аза Бек Нів Гей Рго Рго Рго 01Уу біц ТЕ Рго Бек бій Авр сіу Аїа с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц б5ег
З5 50 з9 бо
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі1і бій бій Нів Аза Авр Авр бБег пуб Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу 85 90 95 40 зек біп Акуд бек Уаі Агуд с1іу Тер ТПг Авп б1у Агуд Уаі І1е ТБг Агд 100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Тук бі1іп ІШе Тгр 115 120 125
Тецп ТПг Авр бек Аза Рго сіп ТПг Нів сіу Уа1і1 Рго с1у Авп б5Бег Авр 45 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у Авп сіу Меє сіу ТПг Агуд Аїа сіу Тегр І1е біц Рое с1ц 165 170 175
ТПг Бек Гей с1у бі1у Акуд Рре бек Тук сіу Меє бек Нів Тгр бек Гец 180 185 190
Акуд ТЕ Рго Туг Рго Уаі Авр Уа! Сіу бек б1у Іїе Гей Уа1і с1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Азї1а бій Гец ТБг Авп о Уаі Агуд Тук Рго ТПг Ієец 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255 (516) Рпе Агд Ап Авп обекг бек ТПг Рго Агуд Авр Тгр АвБр Рпе бег Аг Авп 260 265 270
Меє бек Агуд Бек ТПг сій Агуд ТПг Тер бег І1е ТПг Уаї Авр Іец ТПг 275 280 285
Уаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї Бек Аза сіу Робе Рго б1у І1е Аї1а Авп 290 295 300
Уаї бек сб1іу біп Тук біу Тер бій І1е сіу Уаії ТБг с1у Ні Рпе с1ци 305 310 315 320
ТПг ТпПкЕ бій ТБг бек біц Нібв Авр Гей бег Тер бек Уаі б1у С1у Аг4д 325 330 335
Ууаї біп Рго с1і1у Авр Уа1! Уаї Авр Гей ТПг Аза Гец ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гей Авп о І1е Рго Туг біц сіу ТБг Мес Уа! Уаї Агд Меє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук Тпк с1у ТБг Гпув І1е АвБп АвБр АвБп бек Тіг 385 390 395 «2105 11 «2115 1200 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 11 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдасссос ассодаддаа дчаддсоддадс ддсдеЕссасд (216) басаасдсад дсдсдадсудд ссоосаєсссу адччадчаєсо дадеасдоадс соддсододаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 сссаасдєсд дсссссасса ддадсссасс ЕЕсссаддаєд дсдадсдрає сассадессес 240
ЕсЕСваєддд дсааєддадс аддесасасодс адсддсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЄЄЕЄСсСсасса саєдассссс сддддсесссда адсаададса сссадессдас 3З6о
Зо чдсачедчдаєд дсдсдЕдсЯє адоадссєдасе дооааддсадуд дсдссдасає сасдссевд 420 чдасЕєсаєдеЕ Еєсстрасдсас саєдассесс дсеЕСсСЧдсаєда єсааєдедаа драссстасс 480 сеЕсддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдсеЕддсеЕ ссаєєєссаа дасеЕсєддссс ссссааддаа дссдададді дассдбаєссс 60
ЕссеЕсСсвєдда дсассассас додадсасєсдад ссссасдсда дсассассає аєсоддсаддад 6бо ассссссьсуд гддссаасудє содаадддсаа Сасодддаєдду ссаєсадсас аадсессасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс сессадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 сссддессадс ддассссссо дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсудес дадаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 дасЕСЕДдаєс асссддссає саасааддає деЕссдссаса Єсдсєдсвдс сааєсодеЕдва 1020
ЧдсЕдЕєддва саассасаас баасдсассд ссссасврасу Ессассссає ссдаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд аасссдєсаа дЕЕсадсудса ддеЕдсаасьї асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басєдсадсс ассадеЕдеду аададсеєвас ссЕсдесдсас 1200 «2105 12 «2115 400 «212» Білок «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 12
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 в) 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а сіу сіу бек сбіп Тей Агкгуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У 50 з9 (210) зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей (516) 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє
85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Ні Нів Меє ТПг б5Бег Тер С1У 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Уаі1і Авр Уаі Уаі Авр сіу Уа1! Сув Уаі 1У 115 120 125
Тецп ТПпг сб1у Агкуд біп сб1у Аза Авр Іїе АвБр Аїа Гей сіу Рре Меє РБПе 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тем б1у Геп біц ТПг Аїа сіу І1е УМаї Рго Уаї ТПг Тей Авр Рре Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АБп Азї1а сіу бек І1е бек Гув ТПг Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Уа1 бек Бек Бек Тер бек ТПг ТПг Тс о1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Аза Авп о Уаі біц с1і1у біп Тук біу Тгр Аї1а І1е бек ТПг Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240
Тук ТП ТПг Авп Нів бек бій ТПг Агуд Тпс Гей біп Тгр біп Авп бег 245 250 255 сі1у Маї тей сій Рго сбіу біп Тгр Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е ТБПг ІТец Рго Туг біп А1ї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320
Зо сіу бек Авр Ні Гей Аза І1їе Авп Гуз Авр Уаі Агуд Туг І1їе Аз1а Аїа 325 330 335
Аза Авп о сіу біу Аїа Уа1ії б1у ТБПг ТБг ТБ ТБ АБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Агкд сб1у Аза Рго І1е Уаі! бій Рко Уаї Ппув РПе
З5 355 360 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг 385 390 395 400 «2105 13 «2115 1200 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 13 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс саєдасссос ассддаддаа даддсддадс ддсдЕссасд (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд ссоадсассссд аддаддаєсд дадсаєсдддс сддсдоаддаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 ссргаасуєсд дсЕССсСсСасса ддадеЕссасс сЕєСсСададаєд дсдадсудбає сассадесесес 240
ЕсЕСваєддд дсааєддадс аддесасасодс адсддсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЄЄЕЄСсСсасса саєдассссс сддддсесссда адсаададса сссадессдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсочаєдеЕдсЯає аддсеЕсдасс ддааддсадд дсдссдасає сзчасдссеє9д 420 чдасЕєсаєдеЕ дссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сЕСддДсссду адасоуддсадуда саєсдсдаса деЕсасоудссду асеєссаєдад сдасадсаас 540 ааєдстадсеЕ ссаєєєссаа дасадєддссс ссссааддаа дссдададді дассдбаєссс 60
ЕссеЕСсСсвєдда дсассассас доддсаєєдад сессаєдсда дсаєсассє аєсоддсаддад 6бо аєсссЕСсЕєсЯд ЕєддссааєдЕ сдаадддсаа басддаєсддуд ссассадсас аадссссасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс асссадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 (516) сссддЕСсСадеЕ ддаєсссесс дсаадссссс асдсоодадад даассаєсас ссстассстас 840 саадссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсудес дадаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 чдасЕСЕДдаєс ассгддссає саасааддає деЕссдссаса ЕсдсєЕдседс аааєсддеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас баасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд аасссдєсаа дЕЕсадсудса ддеЕдсаасьї асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасєсадуд аадесдасас басєдсадсс ассадедедуа аададссвас ссеЕсСЧдєсдасас 1200 «2105 14 «211» 400 «212» Білок «213» Бе1адіпе1і1а Кгацйввіапа «4005 14
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 5 10 15
А1ї1а Аза Рпе ТПг Туг АБп Аїа сіу Аїа бек б1у Агд І1е Гей Агд Агд
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у сі1у бек біп Те Агуд с1іу Іїе Агд Уа1і1 Тгр
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У 20 50 з9 бо зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95 25 Тук ТПг Тпс ТБг б1у Агуд Агуд Рбе Рпе Нів Нів Мес ТрПг бек Тгр 01Уу 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Уаі1і Авр Уаі Уаі Авр сіу Уа1! Сув Уаі 1У 115 120 125
Тецп ТПпг с1у Агуд біп сб1іу Аза Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу Рое Меє Сув
Зо 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сі ТПг Аїа сіу Іїе Уаі ТПг Уа1 Тбг Гей Авр Рое Меє 165 170 175 35 век Авр бек АвБп АБп Аза бек бек І1їе бек Гув ТПг Тер бек Ріе сіп 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Уа1 бек Бек Бек Тер бек ТПг ТПг Тс о1У 195 200 205
І1е сбіц Гец Ні Аза бек І1ї1е ТПг Уаії бек Аза сі1у Іїе Рго Іец Уаї 40 210 215 220
Аза Авп о Уаі біц с1і1у біп Тук біу Тгр Аї1а І1е бек ТПг Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240
Тук ТпПкг ТПг Авп о Нів бек б1іцп ТБПг Агуд ТБ І1е б1іп Тер біп Авп б5ег 245 250 255 45 сіу Маії теп біц Ркго с1іу біп Ткр І1е бек Гей сіп Аїа Тей ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг Ії1е ТБПг ІТец Рго Туг біп Аїа ТПг Меє сіп І1е ТПг Іей 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сбі1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 бі1у век Авр Нів Гей Аїа Іїе Авп Гпув Авр Уаі1і Агуд Туг І1е Аза А1а 325 330 335
А1а Авп с1іу Аїа А1їа Уаї с1іу ТПг ТПг ТБг ТЕ АвБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Агкд сб1у Аза Рго І1е Уаі! бій Рко Уаї Ппув РПе 355 3З6о 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг Авр Авп ч11е ТПг біп б1й (516) 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг
385 390 395 400 «2105 15 «2115 1200 «2125» ДНК «213» бЗе1адіпеії1їа Кгайв5іапа «4005 15 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс саєдасссос ассддаддаа даддсддадс ддсдЕссасд (216) басаасдсад дсдсдадсудд ссоосаєсссу адччадчаєсо дадеасдоадс соддсододаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 сссаасдєсд дсссссасса ддадсссасс ЕЕсссаддаєд дсдадсдрає сассадессес 240
ЕсЕСваєддд дсааєддадс аддесасасодс адсддсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЄЄЕЄСсСсасса саєдассссс сддддсесссда адсаададса сссадессдас 3З6о чдсачедчдаєд дсдсдЕдсЧЕ адоадссєдасеЕ ддааддсадда дЕдссдасає счасдсссс9 420 чдасЕєсаєдеЕ дссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сеЕсддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдстадсеЕ ссаєеєєссаа дасдєддесс сСсСссааддаа дссдададді дассдтаєсс 60
ЕссеЕсСсвєдда десассассас доадсассдад ссссасдсда дсаєссассдс ассддсад4дад 6бо ассссссьсуд гддссаасудє содаадддсаа Сасодддаєдду ссаєсадсас аадсессасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс сессадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 сссддессадс ддассссссо дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саадссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсудес дадаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 дасЕСЕДдаєс асссддссає саасааддає деЕссдссаса Ссудсєдсеєдс сааєддаєдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гбаасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд ааассдеЕсаа дЕЕсадсудса ддеЕдсаасьїє асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басєдсадсс ассадеЕдеду аададсеєвас ссЕсдесдсас 1200
Зо «2105 16 «2115 400 «212» Білок «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 16
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 в) 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1ї1е Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а сіу сіу бек сбіп Тей Агкгуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПкг Рго Авп Уаї с1У 50 з9 (210) зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а с1у ТПг Агуд бек сіу с1і1у І1е Агд РБПе 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Ні Нів Меє ТПг б5Бег Тер С1У 100 105 110
Тем пув біп бій Тук Рко Уаі Авр Уаії Уаії Авр с1у Уаї Сув Уа1 01У 115 120 125
Тецп ТПпг с1у Агуд біп сб1іу Аза Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу Рое Меє Сув 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє І1ї1е Авп Уаї Гув Тук Рго ТПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Ггец Авр Рое Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп Аза бек бек Іїе Бек Ппув ТПг Тер бек Рое сіп 180 185 190 (516) сіу бек Акд біц Уа1і ТБПг Уа! бек бек бек Тгр бек ТПг ТПг ТЕ 1У 195 200 205
І1е сбіц Гец Ні Аза бек І1ї1е ТПг Уаі Бек Аза сіу І1е Рго Іей Уаї 210 215 220
Аза Авп о Уаі біц с1і1у біп Тук біу Тгр Аї1а І1е бек ТПг Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240
Тук ТП ТПг Авп Нів бек бій ТПг Акуд Тк Гей біп Тер б1іп Ап 5ег 245 250 255 сі1у Маї тей сій Рго сбіу біп Тгр Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е ТБПг ІТец Рго Туг сбіп Аїа ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц І1е Уа1! бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 сіу бек Авр Ні Гей Аза І1їе Авп Гуз Авр Уаі Агуд Туг І1їе Аз1а Аїа 325 330 335
Аза Авп о сіу Аїа Аза Уа1ії б1у ТПг ТБг ТБ ТБ АБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Агкуд сб1іу Аза Рго І1е Уаі біцп ТПпг Уаї пув РПе 355 360 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АвБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг 385 390 395 400 «2105 17 «2115 1200 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа
Зо «4005 17 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс саєдасссос ассддаддаа даддсддадс ддсдЕссасд (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд ссоадсассссд аддаддаєсд дадсаєсдддс сддсдоаддаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасс ддсссддасс сссссаєссас ссасддсасе 180 ссргаасуєсд дсЕССсСсСасса ддадеЕссасс ЕсєсСсаддаєдд дсддадсуабає сассадесес 240
ЕсЕСваєдддд дсааєддадс аддесасасодс адссдсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо чддааддсудЕ ЄЕЕЕСсСсасса саєдассессо сддддсссда адсаададса Сссадссдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсаєдеЕдсЯає адодсеЕсдасо ддааддсадд дсдссдасає сзасдсесесд 420 чдасЕєсаєдеЕ дссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сЕСддДсссду адасоуддсадуда сасєсдсдсса деЕсасоудссду асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдстадсеЕ ссаєеєєссаа дасдеєддеЕсс ЕЕсСсааддаа дссдададде дассдтаєсс (21040)
ЕссеЕсСсвєдда десассассас доадсассдад ссссасдсда дсаєссассдс ассддсад4дад 6бо аєсссЕСсЕєсЯд ЕєддссааєдЕ сдаадддсаа басддаєсддуд ссассадсас аадссссасс 720
Басасврасса ассасеєсдда дасесдсасс ссссадсддс адаасєсоддда сдєсеЕєддвад 78о0 сссддЕСсСадеЕ ддаєсссесс дсаадссссс асдсоддадад даассаєсас сстассстас 840 саадссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасссад дадсддасса сСассадсудес дадаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 часЕСЕДдаєс ассгддссає саасааддає деЕссдссаса ЕсдсЕдсвдс сааєсддеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гбаасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртасєєдеЕсд аасссудеЕСсаа дЕЄсадсодса ддЕдсаасеє асассааєсда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басеєдсадсє асєадсдєдуа аададсесас ссеЕрдеЕдвас 1200 «2105 18 «2115 400 «212» Білок «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 18
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 60 1 в) 10 15
Аза Аза Ріпе ТПг Туг АБп А1ї1а с1іу Аза бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд
20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у сі1у бек біп Те Агуд с1іу Іїе Агд Уа1і1 Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У 50 з9 (210) зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек Сув б1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТПг Тпс ТБг б1у Агуд Агуд Рбе Рпе Нів Нів Мес ТрПг бек Тгр 01Уу 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Уаі1і Авр Уаі Уаі Авр сіу Уа1! Сув Уаі 1У 115 120 125
Тецп ТПпг с1у Агуд біп сб1іу Аза Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу Рое Меє Сув 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Ггец Авр Рое Меє 165 170 175 век Авр бек АвБп АБп Аза бек бек І1їе бек Гув ТПг Тер бек Ріе сіп 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Уа1 бек Бек Бек Тер бек ТПг ТПг Тс о1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Аза Авп о Уаі біц с1і1у біп Тук біу Тгр Аї1а І1е бек ТПг Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап о Нів бек біц ТПг Агуд ТБг Гец біп Тер б1п Авп 5ег 245 250 255
Зо сіу Маії теп біц Ркго с1іу біп Ткр І1е бек Гей сіп Аїа Тей ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е ТБПг ІТец Рго Туг біп А1ї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг бек 01У 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 бі1у век Авр Нів Гей Аїа Іїе Авп Гпув Авр Уаі1і Агуд Туг І1е Аза А1а 325 330 335
А1а Авп с1іу Аїа Аїа Уаії сіу ТПг ТПг Тбг ТБг АБоп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Агкд сб1у Аза Рго І1е Уаі! бій Рко Уаї Ппув РПе 355 360 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг 385 390 395 400 «2105 19 «2115 1200 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 19 асдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдасссес аєсоодаддаа дадодасддадс додсдЕєсасдч (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд ссоадсассссд аддаддаєсд дадсаєсдддс сддсдоаддаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 сссаасдєсд дсссссасса ддадсссасс ЕЕсссаддаєд дсдадсдрає сассадессес 240
ЕсЕСваєддд дсааєддадс аддесасасодс адсддсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо (516) чддааддсоддЕ ЕЕСссСсасса саєдассссе ЄддоддссеЕда адсаададта Сссадеєдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсаєдеЕдсЯає адодсеЕсдасо ддааддсадд дсдссдасає сзасдсесесд 420 чдасЕєсаєдеЕ дссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сесддсссдд адасддсадд сассдедсса десасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдстадсеЕ ссаєєєссаа дасадєддссс ссссааддаа дссдададді дассдбаєссс 60
ЕссеЕсСсвєдда десассассас доадсассдад ссссасдсда дсаєссассдс ассддсад4дад 6бо ассссссьсуд гддссаасудє содаадддсаа Сасодддаєдду ссаєсадсас аадсессасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс ссссадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 сссддессадс ддассссссо дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саадссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсудес дачаєєсдеда дссадддаас аададаєсєсса 960 дасЕСЕДдаєс асссддссає саасааддає деЕссдссаса Єсдсєдсвдс сааєсодеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гбаасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд аасссдєсаа дЕЕсадсудса ддеЕдсаасьї асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басєдсадсс ассадеЕдеду аададсеєвас ссЕсдесдсас 1200 «2105 20 «2115 400 «212» Білок «213» бЗе1адіпеії1а Кгайв5зіапа «4005 20
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 в) 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а сіу сіу бек сбіп Тей Агкгуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У з9 (210) зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей
Зо 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Ні Нів Меє ТПг б5Бег Тер С1У 100 105 110 35 Тем пув біп біц Тук Рко УМаі Авр Уаї Уаії Авр сіу Уа1і Сув Уаі Щ1У 115 120 125
Тецп ТПпг с1у Агуд біп сб1іу Аза Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу Рое Меє Сув 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 40 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Ггец Авр Рое Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп Аза бек бек І1е бек Гув ТПг Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190 45 сіу бек Акд біц Уа1і ТБПг Уа! бек бек бек Тгр бек ТПг ТПг ТЕ 1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Аза Авп о Уаі біц с1і1у біп Тук біу Тгр Аї1а І1е бек ТПг Бек Бек ТЕПг 50 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап о Нів бек біц ТПг Агуд ТБг Гец біп Тер б1п Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї тей сій Рго сбіу біп Тгр Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Агуд с1у Тс Іїе ТПг Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей (516) 305 310 315 320 бі1у век Авр Нів Гей Аїа Іїе Авп Гпув Авр Уаі1і Агуд Туг І1е Аза А1а
325 330 335
Аза Авп о сіу Аїа Аза Уа1ії б1у ТБПг ТБг ТБ ТБ АБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Агкуд сіу Аза Рго І1ї1е Уаії бій Ркго Уаї Гпув Ре 355 360 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц Гец ТБПг Іец Уа1! Туг 385 390 395 400 «2105 21 «2115 1200 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 21 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс саєдасссос ассддаддаа даддсддадс ддсдЕссасд (216)
Басааєдсад дсодсдадсдд ссодсасєсссд аддадчдаєсу дадеаєдддс соддсоддаєсд 120 садссдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 ссргаасуєсд дсЕССсСсСасса ддадеЕссасс ЕсєсСсаддаєдд дсддадсуабає сассадесес 240
ЕсЕСваєддд дсааєддадс аддесасасодс адсддсддса Ссаддессста сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЄЄЕЄСсСсасса саєдассссс сддддсесссда адсаададса сссадессдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсаєдеЕдсЯає адодсеЕсдасо ддааддсадд дсдссдасає сзасдсесесд 420 чдасЕєсаєдеЕ єссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сЕСддДсссду адасоуддсадуда сасєдедсса деЕсасудссду асеєсаєдад сддасадсаас 540 ааєдстадсеЕ ссаєєєссаа дасеЕсєддссс ссссааддаа дссдададді дассдбаєссс 60
ЕссеЕсСсвєдда десассассас доадсассдад ссссасдсда дсаєссассдс ассддсад4дад 6бо аєсссЕСсСЕсЯд ЕддссааєдеЕ сдаадддсаа Сасодасддад дсассадсас аадсессасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс сессадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0
Зо сссддЕСсСадеЕ ддаєсссесс дсаадссссс асдсоддадад даассаєсас сстассстас 840 саадссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдєсс ссасстассс аассастдсе 900 садсасдсад дадсддаєсса сСассадсдсс дадчаєєсдесда дссадддаас аададаєєеста 960 часЕСЕДдаєс ассгддссає саасааддає деЕссдссаса ЕсдсЕдсвдс сааєсддеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гаасдсассс ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртасєєдеЕсд аасссудЕСсаа дЕЄсадсодса ддЕдсаасесє асаєсааєда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басєдсадсс ассадеЕдеду аададсеєвас ссЕсдесдсас 1200 «2105 122 «2115 400 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 Д 22
Меє бек чІ1ї1е Нів біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е сі1іу б1у Акд б1у У 1 в) 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у сі1у бек біп Те Агуд с1іу Іїе Агд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Тер ТПг с1у Гей Авр бек Рго І1їе ТПг Тук біу ТПг Рго Авп Уаі1 с1Уу 50 з9 (210) зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Ні Нів Меє ТПг б5Бег Тер С1У 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Уаі1і Авр Уаі Уаі Авр сіу Уа1! Сув Уаі 1У 115 120 125 (516) Тем ТПг б1у Агд сбіп с1у Аїа Авр І1е АБр Аїа Гей сіу Роре Меєсє Ріє 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сі ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Гей Авр Рпе Меє 165 170 175 век Авр бек АвБп АБп Аза бек бек І1їе бек Гув ТПг Тер бек Ріе сіп 180 185 190 бі1у бек Агуд бі Уа1і ТПг Уа1! Бек Бек бек Тер бег ТПг ТПг ТП щ1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Аза Авп Уаі біц сі1у біп Тук біу Ткр б1у І1е бек ТПг бек бек ТЕГ 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап о Нів бек біц ТПг Агуд ТБг Гец біп Тер б1п Авп 5ег 245 250 255 сіу Маії теп біц Рго с1і1у біп Ткр І1е бек Гецп біп Аїа Гей ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е ТБПг ІТец Рго Туг біп А1ї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп Авп о сбіу ТпПг Уаі1і Рпе ТПг Туг Рго Іїе ТПг Аза сіп Туг Аїа щЩ1У 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 бі1у век Авр Нів Гей Аїа Іїе АвБп Гпув Авр Уаі Агуд Ту Іл1е Аза Аїа 325 330 335
А1а Авп с1іу Аїа Аїа Уаії сіу ТПг ТПг Тбг ТБг АБоп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Уа1 Нів Рго І1їе Акуд сіу Аза Рго І1е Уаі сій Рго Уа1 Гпув Ріе 355 360 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій
Зо 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аза ТПг бек Уаі біцш бій Гей ТПг Гей Уа1! Туг 385 390 395 400 «2105 23
З5 «2115 1200 «2125 ДНК «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 23 асдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдасссес аєсоодаддаа дадодасддадс додсдЕєсасдч (216)
Басааєдсад дсодсдадсдд ссдсаєсєсдд аддаддаєсд дадсаєсдддс сддсдоаддаєсд 120 саассдсдад дсаєсссдадс дсддсддасеЕ додссгрддарс сссссаєтас Есасдддсасе 180 сссаасдєсд дсссссасса ддадсссасс ЕЕсссаддаєд дсдадсдрає сассадессес 240
ЕсЕСваєдодуд дсааєддадс аддсрасасодс адсддсддса єгаддеЕсєста сасдассасд Зоо чддааддсоддЕ ЕЕСссСсасса саєдассеєся содддсссда адсаададса єссадесдас 3З6о чЧчЕадеддаєд дсаєдеЕдсЯає адодсеЕсдасо ддааддсадд дсдссдасає сзасдсесесд 420 чдасЕєсаєдеЕ єссвасдсас саєдассосс дсссдсаєда Ссааєсдесдаа дсассстасс 480 сеЕсддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдсеЕддсеЕ ссаєєєссаа дасеЕсєддссс ссссааддаа дссдададді дассдбаєссс 60
ЕссЕССсСгудда деассассас додадсаєсдад сЕєсаєдсда дсаєсассує аєсддсадад 6бо аєсссЕСсСЕсд ЕддссааєдеЕ сдаадддсаа басдодаєддуд ссаєсадсас аадсессасс 720
Басасвасса ассасєсодда дасеєсдсасс сессадсддс адааєссдодда сЯяссеЕсддад 78о0 сссддессадс ддассссссо дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсассдеєес сасстассс аассастсдсо 900 садсасодсад дадеддаєса гассадсуєс даааєсдеЕда дссадодадаас аачадаєеса 960 часЕСЕДдаєс ассгддссає саасааддає деЕссассаса ЕсдсЕдсвдс сааєсддеЕдса 1020 чЧсЕдЕєддва саассасаас гбаасдсассуд ссссассасу Ессасссврає ссддаддадсд 1080 ссртаєєдеЕсд аасссдєсаа дЕЕсадедна дудєдсаасеє асаєсєсааєда сассдасаає 1140 аєсасеєсадд аадесдасас басєдсадсс ассадеЕдеду аададсеєвас ссЕсдЕсссас 1200 бо «2105 24
«211» 400 «212» Білок «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 24
Меє бек І1їе Тук біп ТПг Рго Уаі ТПг Гей І1е с1у С1у Агд 01у Щ1У 1 5 10 15
Аза Аза Рпе ТПг Туг АБп А1ї1а сіу Аїа бек б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тгр А1ї1а сіу сіу бек біп Те Агуд с1іу І1е Агуд Уа1ї Тер 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Уаі1і Щ1У 50 55 бо зек Тут біп біц Роре ТПг Рпе біп Авр б1у бій Агуд І1е ТБг бек Іей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг б1у Агд Агуд Робе Рбе Нів Нів Меє ТПг бег Тер с1У 100 105 110
Тем пув біп біц Тук Рко УМаі Авр Уаї Уаії Авр сіу Уа1і Сув Уаі Щ1У 115 120 125
Тецп ТПпг сб1у Агкуд сбіп б1у Аза Авр І1їе АвБр Аїа Іїец б1у Рпе Меє РіГе 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1! Ппув Тук Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе УМаї Ркго Уаі ТПг Іецй Авр Рпе Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АБп Азї1а сіу бек І1е бек Гув ТПг Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190
Зо сіу бек Агкд бій Уаії ТБг Уаї Бек бек бек Тгр бек ТПг ТПг Тбг о1Уу 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Аза Авп Уаії сіц сі1у біп Тук б1у Тгр Аїа Іїе Бек ТПг бек бек ТЕГ 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап о Нів бек біц ТПг Агуд ТБг Гец біп Тер б1п Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї теп сій Рго сбіу біп Тер І1їе бек Гей сбіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Агуд с1у Тс Іїе ТПг Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп Авп о біу ТПпг о Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Бек Уа1! сіц Іїе Уа1 бек біп сб1у ТПг Агуд Авр Гей 305 310 315 320 біу век Авр Нів Гей Аїа Іїе Авп Гпув Авр Уа1 Нів Туг І1е Аза А1а 325 330 335
Аза Авп о сіу Аїа Аза Уа1ії б1у ТБПг ТБг ТБ ТБ АБп Аза Рго Рго Нів 340 345 350
Тук Маії Нів Рго Іїе Агкгуд сіу Аїа Рго Іїе Уа1ї бій Ркго Уаї Ппув Ріе 355 3З6о 365 зек Уаії сі1у Аїа ТПг Тук І1їе АБп Авр ТПг АБр АБп ч11е ТПг сбіп сій 370 375 380
Уаї Авр ТпПг ТпПг Аза Аїа ТПг Бек Уа1 сій біц їец ТПг Іецп Уаї Туг 385 390 395 400 «2105 25 «211» 1161 «212» ДНК 60 «213» Невідомо
«223» Суміш АдЗіапсит гачдЗаіїапиют, АдЧіапсит сарі1ї11й5-муепегів, АдЧіапЕеЕйтш пПіврідціцт та Суєбоштшіцт гогбцпеї «4005 25 аєдеЕсдасдд ссаєсеєсєсєса аасасссдбд сасдсдасад даддссаадда соддаєстсдад (216) бЕСЕсесаса аєдсаддсоас дадсоддсдоас ассссдадда ддаєссдоададі дЕдддсдадас 120 аддеЕсдЕєсс єдоодаддсає ссаєеєсссдда Сддасаддсес Сддасссссс саєссасстас 180 чдасасеЕсста асеЕссддсеєс сгасададад Сссасссссд аадаєсддсда дсдсаєсасс 240 адеЕсЕєСсЕєссс гасдддддсаа СдддаасадчЕ асасдсадсу дсдадсаєтад дЕсСсаасасс Зоо адсасдддаа доадсадеЕсєсесє ссассасаєд ассссссдда дсссдсадса ададсасдса 3З6о аєсдчаєдеад сдєссоЯадсеЕє аєдсодєаддадс сеЕдеЕдоаддадаа дасасоадсЯє двдаааєсвчає 420
ЕссЕєдддсеЕ ЄсаєдеЕсєсся дсодссссасба дсссссдссс дсаєдаєсаа сСдсдадаєсає 480 ссбрассссад дсссддадас ддсаддсаєє дегдссадсса сдсрддасес саєдадсдас 540 адсаасааєс седссессає дсссаадаає ЄддасЄсаєссс ааддсадссу ачасдедасс 60 асаєссеЕссеЕ сЕєЧддадеає сасеєдсдддс ассдадсесссасдсесосссає саасдєсєсссд 6бо чдсаддадддЕєсс стаєдседдс сааєдсддас дсдсаасаєд дасддассає садсадсасс 720
Есдеєссврава дсассадсса сесддадасс сдсадсссса деЕсддсадаа ЕсссддасдеЕс 78о0
Еєддадссвд деЕсадедддеЕ сеЕсСЕСсдсаа дсссоісасдс ддададдаас саєссассста 840 ссссассаддуд ссассаєбдса аасСсасссес садаасддсу ЄсуссвеЕеЕсСас ссасссааєс 900
ЧдсЕдсЕСадЕ асодсаддадеЕ ддаєєссаса адсдссдада сСсдсдадссо адддасаааа 960 чаєдеаддсЕ сеЕддеЕсасесс ддссассаас ааддаєдесд дссдсаєсдє Єдссааєсоде 1020 асадсвтасаа срадсусасс дссссаасає деЕссдсссвд ЕсаадеЕсаад ЕдеЕаддадса 1080 асеЕбасаєса аєдасассаа баасаєсассі саддаадесєд асадсасадс гассадедка 1140 даададссєва сссесаєдса Є 1161 «2105 26 «2115 387 «212» Білок
Зо «213» Невідомо «2205 «223» Суміш АдЗіапсит гачдЗаіїапиют, АдЧіапсит сарі1ї11й5-муепегів, АдЧіапЕеЕйтш пПіврідціцт та Суєбоштшіцт гогбцпеї «4005 26
Меє бек ТПг Аїа Іїе Рбе сіп ТПг Ркго Уаї Нів Уаі І1е сС1у С1у сіп 1 в) 10 15 сбі1у б1у бек сій Рпе Рпе Туг АвБп Аза сіу Аїа бек сіу Агд І1е Іей 20 25 30
Акуд Агуд ч1І1е сіу Уаі Тер А1ї1а сіу Агд бек Рпе Гей с1у с1у І1їе Агд 35 40 45 зек Тер Тер ТПг б1у ІТецй Авр бек Рго І1е ТПг Тук с1у ТПкг Рго Авп 50 з9 (210)
Ззек б1іу бек Туг Агкуд бій Рпе ТПг Рбе бій Авр сб1у бій Агуд І1е ТПг 65 70 75 80 зек Гец бек ІТец Тгр б1у АвБп сбі1у І1е сб1у ТПпг Агуд Бек с01у СШ1у Те 85 90 95
Акуд Рпе Авп о ТПг бек ТПг о б1у Агуд біп Рбе Рпе Нів Нів Меє ТПг 5ег 100 105 110
Тер Бек Гей сіп біп сбіц Туг Аїа Іїе Авр Уаі А1ї1а бек с1Уу Гей Сув 115 120 125
Ууаї с1у гейш Тер с1у Акуд Нів сіу Уа1 сіц І1їе Авр бек Іеп с1у Ріе 130 135 140
Меє Рпе гейш Агуд Рго І1їе А1їа бек А1ї1а Агуд Меє І1їе АвБп Уаі Агд Туг 145 150 155 160
Ркго ТПг Гец сіу Іїец бій ТПг Аза сб1у І1е Уаї Рго Уа1і ТПг Гей Авр 165 170 175 зек Меє бБег Авр бек АвБп Авп бег Аза бек Меє Рго Гпув Авп Тер б5ег 60 180 185 190
Рпе сіп біу Бек Агд Авр Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр Бех І1е ТЕПг
195 200 205
Аза сі1у І1е біц Іец Нів Аза бег І1е АБп Уаі бек Аїа с1іу Уа1 Рго 210 215 220
Меє гей Аза Ап Уаі1 Авр Уаї сбіп Тук с1іу Тер ТПг І1їе Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240 зек бек Тук бек ТПг бек Нів бек біцп ТПг Агуд бек Гей бек Тер сіп 245 250 255
АвпобБек сіу Уаії Іец біц Ркго біу біп Тгр Уаї бек Гей сіп Аїа Іей 260 265 270
ТПЕ Агд Акуд с1у ТПг І1е ТП Гецй Рго Тук біп Аїа ТПг Меє сіп І1е 275 280 285
ТПг Ггеш біп Авп біу Уаії Маії Робе ТПг Туг Рго Іїе Аза Аза сіп Туг 290 295 300
А1їа сіу Маії Авр Рбе ТПг бек Уаії біц І1е Уаї бек Гей с1у ТПг Гув 305 310 315 320
Авр Уа1 сіу бек біу Нів бек Аза ТПг Авп пув Авр Уаї С1у Агд І1е 325 330 335
Ууаї Аза Авп сіу ТПг АТа ТПг ТпПг бек Аза Рго Рго біп Тук Уа1і Аг4д 340 345 350
Рго Уаії Пув Гей бек Уаії с1у Аїа ТПг Туг І1їе Авп Авр ТПг АБп Авп 355 360 365
І1е ТБг біп біц Уаї Авр бек ТПг Аза ТПг бек Уаі бій бій Гей ТПг 370 375 380
Тен Меє Нів 385 «2105 27 «2115» 1161 «2125 ДНК
Зо «213» Невідомо «2205 «223» Суміш АдЗіапсит гачдЗаіїапиют, АдЧіапсит сарі1ї11й5-муепегів, АдЧіапЕеЕйтш пПіврідціцт та Суєбоштшіцт гогбцпеї «4005 27 аєдеЕсдасдд ссаєсеєсєсєса аасасссдбд сасдсдасад даддссаадда соддаєстсдад (216) бЕСЕсесаса аєдсаддсодс дадсоддасас аєсссдадса ддаєссдоаодаді дЕдддсдадас 120 аддеЕсСЯдЕєсс єдодаддасає ссаєєсссда сддасаддес бддасссссс саєсасстас 180 чдасасссста ассссоуддсеЕсС сгасададад СЕСасЕєсс9д аадчаєсєддсда дсдсаєсасс 240 адеЕСсСЕСсЕєссс гаєддддсаа єддаасадді асасдсадсд деЕддсаєстад деЕссаасасс Зоо адсасдддаа доадсадеЕсєсесє ссассасаєд ассссссдда дсссдсадса ададсасдса 3З6о аєсдаєдеад садєссоадсеЕє аєдсоасбаддс ссдсддддаа ддсасддсдасє ддаааєссчає 420
ЕссЕєдддсеЕ ЄсаєдеЕсєсся дсодссссасба дсссссдссс дсаєдаєсаа сСдсдадаєсає 480 ссрасеЕСссад дсседдадчас доадсаддсаєс дедссадесса соссдчдассс саєдадсвас 540 адсаасааєє седссЕссає дсссаадаає сСддссасссс ааддсадссуд адаєсдедасс 60 асаєссеЕссеЕ сЕєЧддадеає сасеєдсдддс ассдадсесссасдсесосссає саасдєсєсссд 6бо чсаддадддЕсс стаєдседдс сааєдсддас дедсаасаєд чдчаєддассає садсадсасс 720
Есдеєссврава дсассадсса сесддадасс сдсадсссса деЕсддсадаа ЕсссддасдеЕс 78о0
Есдодадссвд дЕСадеддудЕ сЕСССсСЕєдсаа дсссоісасдс ддадчаддаас сассассста 840 сссбассадд ссассасбдса аассасссес садаасуддсуд ЕсСдЕЕЕеЕЕссас стасссааєс 900
ЧдсЕдсЕСадЕ асодсаддадеЕ ддаєєссаса адсдссдада сСсдсдадссо адддасаааа 960 чаєдеаддсЕ сеЕддеЕсасесс ддссассаас ааддаєдесу дссдсаєсде ЕдссааєддЧе 1020 асадсвтасаа срадсусасс дссссаасає деЕссдсссвд ЕсаадеЕсаад ЕдеЕаддадса 1080 асеєсасаєса аєдасассаа Єаасаєсасе саддаадссєд асадсасадс бастадесдса 1140 чаачдадсеЕва сссеЕсаєдса Є 1161 «2105 28 «2115 387 60 «212» Білок «213» Невідомо
«223» Суміш АдЗіапсит гачдЗаіїапиют, АдЧіапсит сарі1ї11й5-муепегів, АдЧіапЕеЕйтш пПіврідціцт та Суєбоштшіцт гогбцпеї «4005 28
Меє бек ТПг Аїа Іїе Рбе сіп ТПг Ркго Уаї Нів Уаі І1е сС1у С1у сіп 1 5 10 15 сбі1у б1у бек сій Рпе Рпе Туг АвБп Аза сіу Аїа бек сіу Агд І1е Іей 20 25 30 зек Агуд І1е сіу Уаі Тгр Аї1а с1у Агд бек Рпе Гей сі1у с1у І1їе Агд 35 40 45 зек Тер Тер ТПг б1у ІТецй Авр бек Рго І1е ТПг Тук с1у ТПкг Рго Авп 50 55 бо
Ззек б1іу бек Туг Агкуд бій Рпе ТПг Рбе бій Авр сб1у бій Агуд І1е ТПг 65 70 75 80 зек Гец бек ІТец Тгр б1у АвБп сбі1у І1е сб1у ТПпг Агуд Бек с01у СШ1у Те 85 90 95
Акуд Рпе Авп о ТПг бек ТПг о б1у Агуд біп Рбе Рпе Нів Нів Меє ТПг 5ег 100 105 110
Тер Бек Гей сіп біп сбіц Туг Аїа Іїе Авр Уаі А1ї1а бек с1Уу Гей Сув 115 120 125
Ууаї с1у гейш Тер с1у Акуд Нів сіу Уа1 сіц І1їе Авр бек ІТеп с1Уу РПе 130 135 140
Меє Рпе гейш Агуд Рго І1їе А1їа бек А1ї1а Агуд Меє І1їе АвБп Уаі Агд Туг 145 150 155 160
Ркго ТПг Гец сіу Іїец бій ТПпг Аза сб1у І1е Уаії Рго Уа1і ТПг Гей Авр 165 170 175 зек Меє бБег Авр бБекг АвБп Авп бег Аза бек Меє Рго Ппув Авп Тер 5ег
Зо 180 185 190
Рпе сіп біу Бек Агд Авр Уаі! ТПг І1е бек бек Бек Тгр Бех Ії1е ТЕГ 195 200 205
Аза с1у І1е біц Іец Нів Аза бБег І1е АвБп Уаі бек Аза с1у Уаї Рго 210 215 220
Меє теп Аза Ап Уаі Авр Уа! сбіп Тук с1іу Тер ТіПг І1е Бек бек ТПг 225 230 235 240 зек бек Тук бек ТПг бек Нів бек біц ТПг Агуд бек Гей бег Тгр сіп 245 250 255
АвпобБек сіу Уаії Іец б1іц Ркго біу біп Тгр Уаї бек Гей сбіп Аїа Гей 260 265 270
ТПгЕ Агуд Агуд с1іу ТБг І1е ТБг Гей Рго Туг біп Аї1а ТПг Меє сіп т1е 275 280 285
ТПг Ггеш біп Авп сіу Уаї Уаії Рбпе ТПг Туг Рго І1е Азї1а Аз1а сіп Туг 290 295 300
А1їа сіу Уаі Авр Рпе ТПг бек Уаії сій І1їе Уаї бек Іейп с1у ТрПкг Гув 305 310 315 320
Авр Уа1 сіу бек біу Нів бек Аза ТПг АвБп о Гув Авр Уа1і о1у Агд Те 325 330 335
Ууаї Аза Авп сбіу ТПг АТа ТБПг ТПг бек Аза Рго Рго сбіп Туг Уа1 Агд 340 345 350
Ркго Уаї Ппув Іїец бек Уаї с1у Аїа ТПг Тук І1ї1е Авп Авр ТПг Авп о Авп 355 3З6о 365
І1е ТБг біп біц Уаї Авр бек ТПг Аза ТПг бек Уа1 сій бі Гец Тс 370 375 380 їеч Меє Нів 385 «2105 29 «211» 1155
Гс10) «2125» ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит
«4005 29 аєдеЕсдаєсс аєсааасасс содєдсаєдесд асаддаддсс ааддсддаєс Єдадесссесес (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасаєссссд аддаддаєсд дадсдсдддс дддсаддаессд 120
ЕссСседоддад дсасссусеЕсС сеЕддсдддаса досссдчдасеЕ сссссаєсас сеасддсасе 180 сссаассссд дсссссасад ададссєсасе єЕссдаадаєд дсдадсдсає сассадессес 240
Есссраєддад дсааєддаає аддсасасдс адсуддеддса єгаддеєссаа сассадсасд Зоо чддааддсадеЕ єЄсЕеЕєЄссасса баєдассосс содадсссдс адсаададса сдсааєссчає 3З6о чЧЕадсдеєсся дсЕсаєдсає аддсссдсда ддааддсасу дсдсддааає сздзасєсссєсд 420
ЧдасЕєсавудс ЕСсСссдсудсесс сагадссесс дсеЕсдсаєда ЄсааєдеЕчад агбассстасе 480 сстаддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 аавеєседссе ссаєдсссаа дааєєддасса Сссссааддса дссдадаєсдс дассагаєссс 60
ЕЄссЕСЕєдда деаєвсаседс доадсаєсдад ссссасдсесо ссаєсєсаасдЯяє сссддсдоад9д494д 6бо
ЧдЕССсСсСтраєдс єддссааєдЕ ддасдєдсаа сасддасдда ссассадсад сассесдессс 720 басадсасса дссасесдда дасссодсадс сЕгбадеЕєддс адааєсєсссод саєсєсеЕєдвдвад 78о0 сседдссадс доддсЕсссссс дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас додсдЕсЯдссЕс ссассстассс аассдЯастсдсе 900 садсасдсад дадсддассс сСасаадсудес дадчаєєсдесда дссгадддас аааачаєдатга 960 часЕСЕддЕсС асссддсессас саасааддає деЕсддссдса ЕсдЕєЄдссаа Еддсасадсе 1020 асаассадсуд сассдсессса асаєдессдс сссдссаадеі Єаадсдсадда адсаасеЕсас 1080 аєсааєдаса ссаасаасає сасєсаддаа деЕсдасадса садсстасвад ЕдЕадаадад 1140 сЕбасссеса гдсає 1155 «2105 30 «2115 385 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 30
Зо Меє бек Іїе Нів сіп ТПг Рго Уаії Нів Уаі! Іїе с1у с1у сіп с1у 01Уу 1 в) 10 15 зек біц Рбе Робе Туг АБп Аза сі1у Аїа бек б1у Агд Іїе Гей Агд Агд 20 25 30
ІІе сі1у Уаї Тгр А1ї1а сб1у Агкуд Бек Рпе Гей сіу сіу І1е Агд бБег Тгр
З5 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Бех Щ1У 50 з9 (210) зек Тут Агд біц Роре ТПг Рпе сій Авр с1іу бій Агуд І1е ТБг бек Іей 65 70 75 80 зек Гей Тер б1у АБп с1іу І1їе с1іу ТПг Акд бек сбіу с1у І1е Акд РіПе 85 90 95
АвпоТПг бек ТПг б1у Акд біп Рпе Рпе Нів Нів Меє ТПг бек Тгр 5ег 100 105 110
Тец бі1іп бі1іп сій Тук Аїа Іїе Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У 115 120 125
Тецп Тер б1у Акуд Нів сіу Уаі1 сій І1їе Авр бек Гей сіу Роре Меє РБПе 130 135 140
Тец Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Агкуд Меє Іїе Авп Уаі1і Агд Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тем б1у Геп біц ТПг Аїа сіу І1е Маї Рго Уаї ТПг Тей Авр Бек Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп бек Аза бек Меє Рго Гув Авп Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190 біу век Агуд Авр Уа1і ТПг Іїе бек Бек Бек Тгр бек Іїе ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1Іе сбіц Гец Ні Аза бек І1їе АБп Уа! бек Аї1а сіу Уа1і Рго Меє Іец 210 215 220
Аза Авп о Уаії Авр Уа1і біп Тук біу Тгр ТПг І1е бек Бек ТПг бек б5ег 225 230 235 240 (516) Тук Бек ТПг бек Нів бек бій ТПг Агуд бек Гей бек Тгр біп Авп бег 245 250 255 сі1у Маї гей сій Рго сбіу біп Тер Уаі Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е ТБПг ІТец Рго Туг біп А1ї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 сіп Авп о сбіу Маї Уаії Рбе ТБПг Туг Рго І1е Аза Аїа сіп Туг Аїа щЩ1У 290 295 300
Уаї Авр Рпе ТПг бек Уа1 сій Іїе Уа1і Бек Гей сіу ТПг Гпув Авр Уаї 305 310 315 320 бі1у бек бі1у Нів Бек Аїа ТПг Авп Гпув Авр Уа1 с1іу Агд І1е Уаї А1а 325 330 335
Ап осіу ТБг Аза ТБПг Тпг бек Аза Рго Рго біп Туг Уаі Агд Рго Уаї 340 345 350
Тпув ТГецп бек Уаі с1у Аїа ТПг Туг Іїе Авп Авр ТПг Ап Ап Т1е ТЕПг 355 360 365 сіп бій Маії Авр бек ТПг Аза ТПг бек Уаі бій сій Теш ТПг Гей Меє 370 375 380
Нів 385 «2105 31 «2115» 1206 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 31 аєдеЕсдасдд ссаєсеєсєсєса аасасссдбд сасдсдасад даддссаадда соддаєстсдад (216) бЕСЕсесаса аєдсаддсоас дадсоддсдоас ассссдадда ддаєссдоададі дЕдддсдадас 120 аддеЕсСЯдЕєсс єдодададсає ссаєєсссда сддасаддес бддасссссс саєсасстас 180 чдасасеЕсста асеЕссддсеєс сгасададад Сссасссссд аадаєсддсда дсдсаєсасс 240
Зо адеЕсЕєСсЕєссс гасдддддсаа СдддаасадчЕ асасдсадсу дсдадсаєтад дЕсСсаасасс Зоо адсасдддаа доадсадеЕсєсесє ссассасаєд ассссеєсодда дсесдсадса ададсасаса 3З6о аєсдаєдеад садєссоадсеЕє аєдсоасбаддс ссдсддддаа ддсасддсдасє ддаааєссчає 420
ЕссЕєдддсеЕ ЄсаєдеЕсєсся дсодссссасба дсссссдссс дсаєдаєсаа сСдсдадаєсає 480 ссбрассссад дсссддадас ддсаддсаєє дегдссадсса сдсрддасес саєдадсдас 540 адсаасааєс седссессає дсссаадаає СдодаєЄсаєссс ааддсадссдуд адаєдедасс 60 асаєссеЕссеЕ сЕєЧддадеає сасеєдсдддс ассдадсесссасдсесосссає саасдєсєсссд 6бо чдсаддадддЕєсс стаєдседдс сааєдсддас дсдсаасаєд дасддассає садсадсасс 720
ЕсдеєсСстрава дсассадсса сеЕсдуддадасе сдсадссеєтга дЕєддсадаа ЕЕсСсддседЕс 78о0
Еєддадссвд деЕсадедддеЕ сеЕсСЕСсдсаа дсссоісасдс ддададдаас саєссассста 840 ссссассаддуд ссассаєбдса аасСсасссес садаасддсу ЄсуссвеЕеЕсСас ссасссааєс 900
ЧдсЕдсЕСадеЕ асодсаддадеЕ ддаєєссаса адсдссдада сСсдесдадссо адодасаааа 960 чаєдеаддсЕ сеЕддеЕсасесс ддссассаас ааддаєдесу дссдсаєсде ЕдссааєддЧе 1020 асадсвтасаа срадсусасс дссссаасає деЕссдсссвд ЕсаадеЕсаад ЕдеЕаддадса 1080 асеЕбасаєса аєдасассаа баасаєсассі саддаадесєд асадсасадс гассадедка 1140 чаачадсеєва сссеЕсСооєЄооса ссадасевєудеЕ ссаєсеЕєсссу даєєддсессаа сеєааєеаає 1200 чЕаєда 1206 «2105 32 «2115 387 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 32
Меє бек ТПг Аїа Іїе Рбе сіп ТПг Рго Уа1і Нів Уаі І1е с01у с1у сіп 1 в) 10 15 сбі1у б1у бек сій Рпе Рпе Туг АвБп Аза сіу Аїа бек сіу Агд І1е Іей 20 25 30
Агуд Агуд ч11е сіу Уаі Тгр А1ї1а сіу Агд бек Рпе Гей сСіу сі1у І1е Агд 35 40 45 (516) зек Тер Тегр ТПг с1у Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук с1у ТПг Рго Авп 50 з9 (210)
зек сіу бек Туг Агкд біцп Рпе ТПг Робе бій Авр с1у сій Агд І1е ТЕПг 65 70 75 80 зек Гец бек ІТец Тгр б1у АвБп сбі1у І1е сб1у ТПпг Агуд Бек с01у СШ1у Те 85 90 95
Агуд Рпе Ап ТПг бек ТПг с1у Агд біп Рпе Рпе Нів Нів Меєс ТПг 5ег 100 105 110
Тер Бек Гей сіп біп сбіц Туг Аїа Іїе Авр Уаі А1ї1а бек с1Уу Гей Сув 115 120 125
Ууаї с1у гейш Тер с1у Акуд Нів сіу Уаі б1іцп І1їе Авр Бек Гей с1у Ріе 130 135 140
Меє Рпе гей Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Акуд Мес І1е АвБп Уаі Агд Туг 145 150 155 160
Ркго ТПг Гец сіу Іїец бій ТПг Аза сі1у Іїе Уа1 Ркго Уаї ТіПг Іецй Авр 165 170 175 зек Меє бек Авр бБег Авп Авп бек Аїа бек Мес Рго Ппув Авп Тгр 5ег 180 185 190
Рпе сіп біу Бек Агд Авр Уа! ТПг Іїе Бек бек бек Тгр бег І1е ТЕПг 195 200 205
Аза сі1у І1е біц Іец Нів Аза бег І1е АБп Уаі бек Аїа с1іу Уа1 Рго 210 215 220
Меє гей Аза Ап Уаі1 Авр Уаї біп Тук б1у Тер ТПг І1їе Бек Бек ТЕПг 225 230 235 240 зек бек Тук бек ТПг бек Нів бек біцп ТПг Агуд бек Гей бек Тер сіп 245 250 255
Авп о бек сіу Маі! Гецп бій Рго с1у біп Ткр Уаї Бек Гецп сіп Аїа Іецй 260 265 270
ТПгЕ Агуд Агуд с1іу ТБг І1е ТБг Гей Рго Туг біп Аї1а ТПпг Меє сіп Ше 275 280 285
ТПг Ггеш біп Авп сіу Уаї Уаії Рпе ТПг Туг Рго І1е Азї1а Аз1а сіп Туг
Зо 290 295 300
А1їа сіу Маії Авр Рбе ТПг бек Уаії біц І1е Уаї бек Гей с1у ТПг Гув 305 310 315 320
Авр Уа1 сіу бек біу Нів бек Аза ТПг АвБп о Гув Авр Уа1і о1у Агд Те 325 330 335
Уа1ї А1їа АвБп сіу ТБг Аза ТПг ТБПг бек Аза Рго Рго біп Тук Уаі Агкд 340 345 350
Ркго Уаї Ппув Іїец бек Уаї с1у Аїа ТПг Тук І1ї1е Авп Авр ТПг Авп о Авп 355 360 365
І1е ТБг біп біц Уаї Авр бек ТПг Аза ТПг бек Уаі бій бій Гей ТПг 370 375 380
Тец Уаї Туг 385 «2105 33 «2115 1155 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 33 асдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдсаєсдед агаддаддаєс ааддсодадаєс єдадеЕесесве (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасаєссссд аддаддаєсд дадсдсдддс дддсаддаессд 120
БбЕССсСЕєдоодад дсаєссЯдєеєс седдеддаса ддсссддасс сссссаєссас стасддсасео 180 сссаассссд дсссссасад ададссєсасе єЕссдаадаєд дсдадсдсає сассадессес 240
Есссвраєддад дсааєддаає аддесасасдс адсддсддса Ссаддесссаа сассадсасд Зоо чддааддсадс ЕСсСсСсссасса Саєдассеєсе сСодадсеєєсдс адсаачадта сдсааєсдає 3З6о чЧЕадсдеєсся дсЕсаєдсає аддсссдсда ддааддсасу дсдсддааає сздзасєсссєсд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ ЕЄссЕдсдссс сабадссосс дсссдасаєда Ссаасдєдад асбсаєссстасес 480 сстаддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 аавеєседссе ссаєдсссаа дааєєддасса Сссссааддса дссдадаєсдс дассагаєссс 60 (516) ЄссЕССсода деастассддс доадсаєсдад сеЕєЄсаєдссе ссаєсаасує сеЕСддсоад9ао9ад 6бо
ЧдЕССсСсСтраєдс єддссааєдЕ ддасодєдсаа сасддаєсдда ссассадсад сассесдессс 720
Баєадсасса дссасеєсдудда дасесдсадс сеЕгадеЕсддс адааєєссодд сдЕСЕєддвад 78о0 сседдссадс доддсЕсссссс дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдЕсдЕЕсЕ ссасстассс аарсдстдсь 900 садсасдсад дадсддассс сасаадсудеєс дачаєєсдеда дссгадддас аааачдаєдага 960 дасЕСЕДдЕсС асссддссас саасааддає деЕсддссдса ЕЄсдЕсдссаа єддасасадсе 1020 асаассрадсд сассдсссса асаєдеЕссдс сссдссаадеі ЕЄаадедсадуд адсаасесас 1080 аєсааєдаса ссаасаасає сасєсаддаа деЕсдасадса садсстасвад ЕдЕадаадад 1140 сЕбасссеса гдсає 1155 «2105 34 «211» 385 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 34
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уаі Нів Уаі І1е сі1у сС1у бі1іп б1у щЩУ 1 в) 10 15 зек біц Рбе Робе Туг АБп Аза сі1у Аїа бек б1у Агд Іїе Гей Агд Агд 20 Іїе с1у Уаі! Тгр Аї1а с1у Акуд бек Рпе Іей сі1у с1іу І1е Акуд бек Тгр
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Бех Щ1У з9 (210) зек Тут Агд біц Ропе ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 25 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у І1е с1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
АвпоТПг бек ТПг б1у Акд біп Рбе Робе Ні Нів Ме ТПг Бек Тер 5ег 100 105 110
Зо Те біп біп бі Тук Аїа Іїе Авр Уаії Аїа бек с1у Ге Сув Уаі Щ1У 115 120 125
Тецп Тер б1у Акуд Нів сіу Уаі сій Іїе Авр бек Гей сіу Роре Меє РБПе 130 135 140
Тец Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Агкуд Меє Іїе Авп Уаі1і Агд Тукг Рго ТЕПг 35 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Гец Авр бек Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп бек Аза бек Меє Рго Гув Авп Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190 40 сіу бек Агуд Авр Уаі ТПг І1ї1е бек бек бек Тгр бек І1е ТПг Аї1а щЩ1У 195 200 205
І1Іе сбіц Гец Ні Аза бек І1їе АБп Уа! бек Аї1а сіу Уа1і Рго Меє Іец 210 215 220
Аза Авп о Уаії Авр Уа1і біп Тук біу Тгр ТПг І1е бек Бек ТПг бек б5ег 45 225 230 235 240
Тук Бек ТПг бек Нів бек біц ТПг Агуд бег Гец бег Тгр бі1іп Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї гей сій Рго сбіу біп Тер Уаі Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270 50 Агуд с1у Тс Іїе ТПг Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп Авп о сбіу Уаії Уа1і Рпе ТПг Туг Рго Іїе Аїа Аза сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Рпе ТПг бек Уа1 сій Іїе Уа1і Бек Гей сіу ТПг Гпув Авр Уаї 305 310 315 320 бі1у бек бі1у Нів Бек Аїа ТПг Авп Гпув Авр Уа1 с1іу Агд І1е Уаї А1а 325 330 335
Ап осіу ТБг Аза ТБПг Тпг бек Аза Рго Рго біп Туг Уаі Агд Рго Уаї 340 345 350 (516) пув Гей бек УМаї с1у Аїа ТПг Туг І1їе АБп Авр ТПг Ап АБп І1е Тіг 355 360 365 біп бій Маї Авр Бек ТПг Аїа ТПг бек Уаі бій сій Гец ТБПг Іец Меє 370 375 380
Нів 385 «2105 35 «2115 1155 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 35 аєдеЕсдаєсє аєсааасасс содєдсаєдесд асаддаддсс ааддсддаєс Єдадесссесес (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасаєссссд аддаддаєсд дадсдсдддс дддсаддаессд 120
БбЕССсСЕєдоодад дсаєссЯавєеєс седдеЕддаса ддсссддасс сссссаєссас стасддсасео 180 ссргаасессу дсЕССсСсСасад ададеєсасе СЕЄдаачаєсд дсдадсдсає сассадссес 240
Есссвраєддад дсааєддаає аддесасасдс адсддсддса Ссаддесссаа сассадсасд Зоо чддааддсадеЕ єЄсЕеЕєЄссасса баєдассосс содадсссдс адсаададса сдсааєссчає 3З6о чЧЕадсдеєссу дсЕгаєдсдє аддсссдсдоа ддааддсасд дсоадсддааає сцдарєсєссевд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ ЕЄссЕдсдссс сабадссосс дсссдасаєда Ссаасдєдад асбсаєссстасес 480 стаддсссду адасдуддсадуд сасєсдсдсса деЕсасоудссдуд асессаєдад сдасадсаас 540 аавеєседссе ссаєдсссаа дааєєддасса Сссссааддса дссдадаєсдс дассагаєссс 60
ЕЄссЕСЕєдда деаєвсаседс доадсаєєдад ссссаєсдсесо ссаєсєсаасдЯяє сссддсдоад9д494д 6бо
ЧдЕССсСсСтраєдс єддссааєдЕ ддасодєдсаа сасддаєсдда ссассадсад сассесдессс 720
Баєадсасса дссасеєсодда дасеєсдсадс сссадессддс адааєссссод сдЯассеЕсддад 78о0 ссЕддЕСсСадЕ дддЕСЕСсСЕСсСС дсаадсссос асдсоодадад даассаєсас ссстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдЕсдЕЕсЕ ссасстассс аарсдстдсь 900 садсасдсад дадсддассс сСасаадсудес дадчаєєсдесда дссгадддас аааачаєдатга 960 часЕСЕддЕсС асссддсессас саасааддає деЕсддссдса ЕсдЕєЄдссаа Еддсасадсе 1020 асаассрадсд сассдсссса асаєдеЕссдс сссдссаадеі ЕЄаадедсадуд адсаасесас 1080
Зо аєсааєдаса ссаасаасає сасєсаддаа деЕсСдасадса садссасвтад єдеадаадад 1140 сЕбасссеса гдсає 1155 «2105 36 «2115 385
З5 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 36
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уаі Нів Уаі І1е сі1у сС1у бі1іп б1у щЩУ 40 1 в) 10 15 зек біц Рбе Робе Туг АБп Аза сі1у Аїа бек б1у Агд Іїе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а сб1у Агуд бек Ропе Іїецп с1у с1у Іїе Агуд Бек Тгр 45 Тер ТПг с1у Гей Авр бек Рго І1їе ТПг Тук бі1у ТПг Рго Авп бек 0о1Уу з9 (210) зек Тут Агд біц Ропе ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у І1е с1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 50 85 90 95
АвпоТПг бек ТПг б1у Акд біп Рбе Робе Ні Нів Ме ТПг Бек Тер 5ег 100 105 110
Тец бі1іп бі1іп сій Тук Аїа Іїе Авр Уаі Аїа Бек Уа1 Гей Сув Уаі 1У 115 120 125
Тем Тгр б1у Агуд Нів сіу Маї бій І1їе Авр бек Гей біу Роре Меє Ріе 130 135 140
Тец Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Агкуд Меє Іїе Авп Уаі1і Агд Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Гец Авр бек Меє 60 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп бек Аза бек Меє Рго Гув Авп Тгр Бек Рпе сіп
180 185 190 біу век Агуд Авр Уа1і ТПг Іїе бек Бек Бек Тгр бек Іїе ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1е сбіц Гец Ні Аза бек І1ї1е АБп Уа! бек Аї1а сіу Уа1і Рго Меє Іей 210 215 220
Аза Авп о Уаії Авр Уа1і біп Тук біу Тгр ТПг І1е бек Бек ТПг бек б5ег 225 230 235 240
Тук Бек ТПг бек Нів бек б1іцп ТБПг Агд бек ІТец бек Тгр біп Авп б5ег 245 250 255 сіу Маії гецп бій Ркго с1і1у біп Ткр Уаї бек Гей сіп Аїа Тей ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг Ії1е ТБПг ІТец Рго Туг біп Аїа ТПг Меє сіп І1е ТПг Іей 275 280 285 біп Авп о сбіу Уаії Уа1і Рпе ТПг Туг Рго Іїе Аїа Аза сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Рпе ТПг бек Уаї сіц Іїе Уа1 бек Гец с1у ТПг Ппув Авр Уаї 305 310 315 320 бі1у бек бі1у Нів Бек Аїа ТПг Авп Гпув Авр Уа1 с1іу Агд І1е Уаї А1а 325 330 335
Авп обіу ТПг Аза ТПг Того бек Аза Рго Ркго біп Туг Уа1 Агуд Рго Уаї 340 345 350
Тпув ТГецп бек Уаі с1у Аїа ТПг Туг Іїе Авп Авр ТПг Ап Ап Т1е ТЕПг 355 360 365 біп бій Маї Авр Бек ТПг Аїа ТПг бек Уаі біц біцш Тейп ТПпг Геи Меє 370 375 380
Нів 385 «2105 37
Зо «2115 1155 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 37 асдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдсаєсдед агаддаддаєс ааддсодадаєс єдадеЕесесве (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасаєсссд аддаддаєсд дадсдсдддс дддсаддаессд 120
БбЕССсСЕєдоодад дсаєссЯавєеєс седдеЕддаса ддсссддасс сссссаєссас стасддсасео 180 сссаассссд дсссссасад ададссєсасе єЕссдаадаєд дсдадсдсає сассадессес 240
Есссраєддад дсааєддаає аддрасасдс адсоддеддса єгаддеєєссаа сассадсасд Зоо чддааддсадс Есссссасса Саєдассеєсе сСодадсеЕсдс адсаададса содсааєсдає 3З6о чЧЕадсдеєсся дсЕсаєдсає аддсссдсда ддааддсасу дсдсддааає сздзасєсссєсд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ ЕЄссЕдсдссс сабадссосс дсссдасаєда Ссаасдєдад асбсаєссстасес 480 сстаддсссдд адасддсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 аавеєседссе ссаєдсссаа дааєєддасса Сссссааддса дссдадаєсдс дассагаєссс 60
ЄссЕССсоода асастассдс доадсаєсдад сеЕєЄсаєдссе ссаєсаасує сеЕСддсоад9ао9ад 6бо
ЧдЕССсССсСтраєдс єддссааєдеЕ ддасудєдсаа баєддаєдда ссаєсадсад сассесдесс 720
Баєадсасса дссасеєсодда дасеєсдсадс сссадессддс адааєссссод сдЯассеЕсддад 78о0 сседдссадс доддсЕсссссс дсаадсссос асдсддадад даассаєсас сстассстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдЕсдЕЕсЕ ссасстассс аассдЯастсдсо 900 садсасодсад дадеддавєсс гасаадсуаєс дадаєсдеЕда дсссадддас аааадаєдаса 960 часЕСЕддЕсС асссддсессас саасааддає деЕсддссдса ЕсдЕєЄдссаа Еддсасадсе 1020 асаассрадсд сассдсссса асаєдеЕссдс сссдссаадеі ЕЄаадедсадуд адсаасесас 1080 аєсааєдаса ссаасаасає сасєсаддаа деЕсдасадса садстасвад ЕдЕадаадад 1140 сЕбасссеса гдсає 1155 «2105 38 «2115 385 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит бо «4005 38
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уаі Нів Уаі1і І1е с1у сС1у біп 01у щу 1 в) 10 15 зек біц Рбе Робе Туг АБп Аза сі1у Аїа бек б1у Агд Іїе Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тер А1ї1а с1у Акуд бек Рпе Іей сіу с1іу І1е Агуд Бек Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук б1у ТПг Рго Авп Бех Щ1У 50 з9 (210) зек Тут Агд біц Роре ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТБг бек Іей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у І1е с1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
АвпоТПг бек ТПг б1у Акд біп Рбе Робе Нів Нів Меє ТПг бек Тгр 5ег 100 105 110
Те біп біп бі Тук Аїа Іїе Авр Уаії Аїа бек с1у Ге Сув Уаі Щ1У 115 120 125
Тецп Тер б1у Акуд Нів сіу Уаі сій Іїе Авр бек Іїец б1у Рпе Меє РіГе 130 135 140
Тец Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Агкуд Меє Іїе Авп Уаі1і Агд Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе УМаї Ркго Уа! ТПг Іецй Авр бек Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АвБп бек Аза бек Меє Рго Гув Авп Тгр Бек Ропе сіп 180 185 190 сіу бек Агуд Авр Уаі ТіПг І1е Бек бек бек Тгр АБп Іїе ТПг Аїа с1Уу 195 200 205
І1Іе сбіц Гец Ні Аза бек І1їе АБп Уа! бек Аї1а сіу Уа1і Рго Меє Іец 210 215 220
Аза Авп о Уаії Авр Уаії біп Тук с1у Тер ТПг Іїе Бек бек ТПг бек 5ег
Зо 225 230 235 240
Тук Бек ТПг бек Нів бек біц ТПг Агуд бег Гец бег Тгр бі1іп Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї гей сій Рго сбіу біп Тер Уаї Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Агуд с1у Тс Іїе ТПг Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп Авп о сбіу Уаії Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе Аїа Аза сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Рпе ТПг бек Уа1 сій Іїе Уа1і Бек Гей сіу ТПг Гпув Авр Уаї 305 310 315 320 бі1у бек бі1у Нів Бек Аїа ТПг Авп Гпув Авр Уа1 с1іу Агд І1е Уаї А1а 325 330 335
Ап осіу ТБг Аза ТБПг Тпг бек Аза Рго Рго біп Туг Уаі Агд Рго Уаї 340 345 350 пув Гей бек УМаї с1у Аїа ТПг Туг І1їе АБп Авр ТПг Ап АБп І1е Тіг 355 360 365 біп бій Маї Авр Бек ТПг Аїа ТПг бек Уаі бій сій Гец ТБПг Іец Меє 370 375 380
Нів 385 «2105 39 «211» 1161 «212» ДНК «213» АдЗіапсиют гадаіапит «4005 39 аєдеЕсдасдд ссаєсеєсєсєса аасасссдбд сасдсдасад даддссаадда соддаєстсдад (216) бЕСЕсесаса аєдсаддсоас дадсоддсдоас ассссдадда ддаєссдоададі дЕдддсдадас 120 (516) аддЕсдЕЕєсс гдоодаддсає ссусссссдуа Єддасаддсс гддареєсссс саєсасстас 180 чдасасеЕсста асеЕссддсеєс сгасададад Сссасссссд аадаєсддсда дсдсаєсасс 240 адеЕСсСЕСсЕєссс баєддддасаа Єддаасадді асасдсадсуд дседдсаєсад деЕссаасасс Зоо адсасдддаа доадсадеЕсєсесє ссассасаєд ассссссдда дсссдсадса ададсасавса 3З6о аєсдаєдеад садєссоадсеЕє аєдсоасбаддс ссдсддддаа ддсасддсдасє ддаааєссчає 420
ЕссЕєдддсеЕ ЄсаєдеЕсєсся дсодссссасба дсссссдссс дсаєдаєсаа сСдсдадаєсає 480 ссрасеЕСссад дсседдадчас доадсаддсаєс дедссадесс сооссддассс сседадссас 540 адсаасааєеє седссЕсссЕ дсссаадаає сддссасссс адддсадссс аааддддасс 60 асаєссеєссеЕ сЕєЧддадеає асеєдодсдддс ассдадсессс ссдссесссає саасдєсєсссд 6бо чдсаддадддЕєсс стаєдседдс сааєдсддас дсдсаасаєд дасддассає садсадсасс 720
Есдеєсстрава дсассадсса сесддадасс сдсадссста деЕєддсадаа ЕЕсСсддседЕс 78о0
Есдодадссвд дЕСадеддудЕ сЕСССсСЕєдсаа дсссоісасдс ддадчаддаас сассассста 840 сссбассадд ссассасбдса аассасссос садаасуддсд ЕсСдЕЕЕеЕссас стасссааєс 900
ЧдсЕдсЕСадЕ асодсаддадеЕ ддаєєссаса адсдссдада сСсдсдадссо адддасаааа 960 чаєдеаддсЕ сеЕддеЕсасесс ддссассаас ааддаєдесу дссдсаєсде ЕдссааєддЧе 1020 асадсвтасаа срадсусасс дссссаасає деЕссдсссвд ЕсаадеЕсаад ЕдеЕаддадса 1080 асеєсасаєса аєдасассаа Єаасаєсассі саддаадесд асадсасадс гассадедга 1140 чаачдадсеЕва сссеЕсаєдса Є 1161 «2105 40 «2115 387 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 40
Меє бек ТПг Аїа Іїе Рбе сіп ТПг Ркго Уаї Нів Уаі І1е сС1у С1у сіп 1 в) 10 15 сбі1у б1у бек бій Рпе Рпе Туг Авхп Аза сіу Аїа бек сіу Агд І1е Іей 20 25 30
Акуд Агуд ч1І1е сіу Уаі Тер А1ї1а сіу Агд бек Рпе Гей с1у с1у І1їе Агд
Зо зек Тер Тегр ТПг с1у Гей Авр бек Рго І1е ТПг Тук с1у ТПг Рго Авп з9 (210) зек сіу бек Туг Агкд бій Рпе ТПг Рбе бій АвБр с1у бій Агд І1е ТЕГ 65 70 75 80 зек Гец бек ІТец Тгр б1у АвБп сбі1у І1е сб1у ТПпг Агуд Бек с01у СШ1у Те
З5 85 90 95
Акуд Рпе Авп о ТПг бек ТПг о б1у Агуд біп Рбе Рпе Нів Нів Меє ТПг 5ег 100 105 110
Тер Бек Гей сіп біп сбіц Туг Аїа Іїе Авр Уаі А1ї1а бек с1Уу Гей Сув 115 120 125 40 Уаї б1у Гешп Тер с1у Агкуд Ні сіу Маії сій Іїе Авр бек Гецп с1у Ріе 130 135 140
Меє Рпе гей Агуд Рго Іїе Аза бБег Аза Акуд Мес І1е АвБп Уаі Агд Туг 145 150 155 160
Ркго ТПг Гец сіу Іїец бій ТПпг Аза сб1у І1е Уаї Рго Уаі1і Рго Гей Авр 45 165 170 175 зек Гей бек Нів бек АвБп Авп бБег Аза бек Гей Рго Гув Авп Тер Рго 180 185 190
Рпе сіп біу бек Ркго Кпув бі1у ТПг І1е бек бек Бек Тгр Бек Іїе ГІец 195 200 205 50 А1ї1а с1у Іїе бій Гей Рго Аїа бек І1їе Авп Уаі! Бек Аїа с1іу Уа1ї! Рго 210 215 220
Меє гей Аза Ап Уаі1 Авр Уаї біп Тук с1іу Тер ТПг І1е бек бек ТПг 225 230 235 240 зек бек Тук бек ТПг бек Нів бек біцп ТПг Агуд бек Гей бек Тер сіп 245 250 255
АвпобБек сіу Уаії Іец б1іц Ркго біу біп Тгр Уаї бек Гей сбіп Аїа Гей 260 265 270
ТПгЕ Агуд Агуд с1іу ТБг І1е ТБг Гей Рго Туг біп Аї1а ТПпг Меє сіп Ше 275 280 285 (516) ТПЕ Гецп біп Азп сбіу Маї Маії Рпе ТПг Тук Рго Іїе Аїа Аза сіп Туг 290 295 300
А1їа сіу Маії Авр Рбе ТПг бек Уаії біц І1е Уаї бек Гей с1у ТПг Гув 305 310 315 320
Авр Уа1 сіу бек біу Нів бек Аза ТПг АвБп о Гув Авр Уа1і о1у Агд Те 325 330 335
Уа1ї А1їа АвБп сіу ТБг Аза ТПг ТБПг бек Аза Рго Рго біп Тук Уаі Агкд 340 345 350
Ркго Уаї Ппув Іїец бек Уаї с1у Аїа ТПг Тук І1ї1е Авп Авр ТПг Авп о Авп 355 360 365
І1е ТБг біп біц Уаї Авр бек ТПг Аза ТПг бек Уаі бій бій Гей ТПг 370 375 380
Тен Меє Нів 385 «2105 41 «2115 960 «2125 ДНК «213» Сукбоштшіцт таісаєЄит «4005 41 асдеЕСссаєвд гасааєсасс саєссасодєа аєсоодаддсесе садодсддаєс адсдеЕєссса (216)
Басааєдсад деасдаасодд Єсдсаєсєсссд аддаддаєсд дадсдсдддадс аддсдоаддає4949 120
БбЕСсСсЕєдоодад дсаєссоддас деЕдадєддаса ддссссдаса асссадеЕссе дЕссддсасд 180 чдссааєдеад дсеЕСсСстасаа ддадеЕссасс єссдададаєд дсдадсдсає сасдадссес 240
ЕсЕСЕСєЧддуд дсаасоддеєдс аддеєасдсЯасє сссддсддса Ссаддесссд сасдассасс Зоо чддааддчдадс ЄЕСсСсссаста саєдасаєса СододдсЕеЕсда аасаададса сссдаєсдає 3З6о чЧЕадсЧдєсодд дсЕєдеЕдсЧє додсеЕсдаса ддсаддсаєсд дсдадсасає єдагадсстд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ Єссвасодсес саєадсдссс дсссдсаєда Ссаасдсдад стсасссдасс 480
Еєдоддссвєдоа адасоддсодда саєсдсдссс дсесасдссдуа ассссаєбдад саасаасаас 540 аарєсодддва дссЕссссеЕс даасеєдддса Ссссдаддса дссдададді дасааєсдесс 60
Зо ЕссассєдудЄ соодессасадс аддсасбадад седсаєдсса дсодЕсассуає дасдоддсдадоад 6бо аєсссдасодд ЕЄдсодададе дсааддссад сСасддаєсдду садсдадсас садссссасс 720
БбЕСсСЕСаасса сссасасоода аасеєсдсадс ссдсадсдда аддедссддда адесессасад 78о0 сседдєдадс ддассссссс асаадсесьсс асгаддадад дддессасаєс сседссстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаає додсодсЕдеЕдЕ Есасстассс аастаседсье 900 асдгасдсед дчадсодасста сассадсуєе даасстдессс ассЕсєстода Еєддссаасье 960 «2105 42 «2115 320 «212» Білок «213» Сукбоштіцют таісаєЄит «4005 42
Меє бек Іїе Уа1і Ссіп бек Рго Іїе Нів Уа1і! І1їе сіу с1у бек б1у ЩУ 1 в) 10 15 зек Аїа РібПе бек Туг Авп Аїа сіу ТПг Авп б1у Агд І1е Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у с1у Тгр Рпбе Іешп с1у сС1у Іїе Агуд Аїа Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПк с1і1у Гец Авр АвБп о Рго Уаії Гец Роре б1у ТПпг Аза Авп Уаі1і Щ1У 50 з9 (210) зек Тут Мпув біц Робе ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Агуд ТПг о Тбг ТБг б1у Агуд бій Рбе Рпе Нів Туг Месє ТрПг бек Тгр 01У 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У 115 120 125
Тец І1ї1е с1у Акуд Нів сіу сій Нів Іїе Авр бек Гей сіу Рре Меє РБПе (516) 130 135 140
Тец Акуд бек Іїе Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг
145 150 155 160
Тец б1у Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 Тбг Гец Авр бек Меє 165 170 175 век Авп Авп АвБп о Авп обек біу бек ТІецй Рго бек Авп Тгр Аїа Рпе Аг4д 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Меє бек бек ТПг Тер бек Уа1і! ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Уаі ТПг Уаі! ТПпг Аза с1у Іїе Рго ТПг Уаї 210 215 220
А1ї1а сій Уаі біп сб1у сбіп Тук сб1у Тер Аїа Уаї Бек ТПг бек бек ТПг 225 230 235 240
Рпе бек ТПг ТПг Ні Тпг бій Тс Агуд бек Те сбіп Тгр бій Уа1 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тер Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1іу Уаї І1е бек Іїец Рго Туг біп Аї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп Авп о сбі1іу Аза Уа1і Рпе ТпПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа Меє Туг Аза 01Уу 290 295 300
Уа1 Авр Тук ТПг бек Уаї сбіш Гей Уаї Ні Гей Іей Авр Тгр Рго ТПг 305 310 315 320 «2105 43 «2115 1221 «2125 ДНК «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 43 аєдеЕСтаєсеєЕ єєсадасодсс саєдсаєдесд асаддаддадсс аддадсддадда дасЯасссесд (216)
Зо басаасдсад дсдсдадсодд дсодосдєсевоа адччадчасєсо дсЕдЕдсдоадс доаддсодседа 120
Бассеєдддад дсаєссояодеЕє деЕддеЕддаса ддсссддаєд ассссаєсас ссасддсасео 180 дсЕаасеєссд дсЕСсСстасад ддадеЕссасс сссоааддаєд дсдадсдсає сассадессес 240
ЕсссесСебддуд дсаасоодадс аддесасасдс адсддсддса Ссаддесссд сассассдд9дд Зоо чдаадоададеЕ єсЕеЕєЄссаста саєдассеєсе єдоддодссеєсс адсаадчадса сссаасачває 3З6о чдсадсдЕєсодд дсссодЕдсЯє додсдЕСаєс досаддсасу доддаєсасає єдасєссстод 420 чЧдасЕєсаєдеЕ єссЕдсдсас саєсадссосс дсссдсаєда Ссааєсдссад стасссаасс 480 ссддасссдуд адассдсадд сассдердсса десасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдссддса ссаєсєссаа даасєддаса сСссддаддса дсадаадсдс дассагаєссс 60
ЕссеЕСсСсвєддд сбаєсассояс аддсаєсдад ссссасдсса дсаєссассдс сасадссд9д4949д 6бо асссссасоуд гддсодадчдЕ дсааддддаа СбСасоддаєддЕ ссаєсадсад садсессасс 720
Басассасва дссаєдадда дасеєсдсасс сеЕсадссддда адааєссссод адссссдсад 78о0 сссддсдадс ддассссссо дсаадсссос асасоддадад даассаєрсес ссрдссстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдсссЕсЕ сасстаєсс даєсассдсе 900 сеЕссасдссд дадссдаєсса сассаасудсс садаєєсдесда дсасддддас садасаєста 960 чаєстасдаєс асдедсдссс адсєддсддс содоссдаєтад бассддесає садсаасааа 1020 часадсеЕєдс сдассуседс сасвасессе деЕдаєсєдсдс сдссссддрєса ЕдЕсСсассся 1080 дЕсаасаєбас садсадесдсс Есасасуєсті деЕсаєєдаас садеЕсааадеі ЕдЕддссасд 1140 ачдадсадсас срассадсає Єааєдасдас аасасааадс аддаассесь адгадстасс 1200 чаачадсдна судсЕєсдсаєва с 1221 «2105 144 «2115 407 «212» Білок «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 44
Меє бек Іїе Рпе сіп ТПг Рго Уаі Нів Уаі І1е с1у сС1у біп 01у щу 1 в) 10 15 б1у А1а Рпе бБег Туг Авп Аїа сіу Аїа Бек с1іу Акд Уаії Гей Агд Агд 60 20 25 30
І1Іе сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у с1у Тгр Тук Геш сіу сіу І1е Агд Іецй Тгр
35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Ггец Авр Авр бек І1е ТПг Тук б1у ТПпг Аза Ап Бех Щ1У 50 з9 (210) зек Тут Агд біц Роре ТПг Рпе бій Авр с1іу бій Агуд І1е ТБг бек Іей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Акуд ТЕ ТБ біу б1у Акд бій Рпе Рпе Нів Тук Меє ТПг бег Тгр с1У 100 105 110
Те біп біп біц Тук Ркго І1їе Авр Уаії Аїа бек с1у Ге Сув Уаі Щ1У 115 120 125
Ууаї Іе с1у Акуд Нів сіу Авр Нів І1е Авр бек Гей с1у Рпе Меє Ріє 130 135 140
Тец Агкуд ТПпг І1е Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец Авр їейп сій ТПг Аїа сіу Іїе УМаї Ркго Уа! ТПг Іецй Авр бек Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АБп Азїа с1у ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг РпПе С1У 180 185 190 сіу бек Агуд Бек Уаі ТПг І1їе бек бек бек Тгр Аїа І1е ТПг Аїа щЩ1У 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уа! ТПпг Аза с1у Іїе Рго ТПг Уаї 210 215 220
Аїа сій Уаії сбіп с1у б1іцп Тук с1у Тгр бек І1е Бек Бек Бек бек ТПг 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПг бек Нів біц біц ТБг Агуд ТБг Гец бек Тер 611 Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тер Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Зо Агуд с1іу ТВбг Іїе бек Гей Рго Тук сіп Аїа ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп АвБп о сбі1іу Аїа Гей Рпе ТПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа Гей Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Авп Уа1! сіп І1їе Уа1 бек ТПг б1у ТПг Агуд Нів Іецй 305 310 315 320
Авр Тут Авр Нів Уаі Агуд бек Аїа біу б1у Агкуд Агд Гей Уаі1і бек Аїа 325 330 335
ІТ1е Бек Авп Гув біу бек Гей Рго ТПг Аза Аза ТПг ТПг бек Уаі1і Пе 340 345 350
АТа Рго Рго Акуд Тук Маії Нів Рго Уаі Авп І1е Рго Аїа Уаї Рго Туг 355 360 365
ТПг Бек Уа1! Іїе сіц Рко Уаі пув Уаії Уаі Аза ТПг Агуд Аза Аза Рго 370 375 380
ТПг Бек Іїе Авп Авр Авр АБп чІ1е пуб біп біц Рго Іец Уаі Аїа ТПг 385 390 395 400 бі бій Агуд ТП Гей Уа1 Туг 405 «2105 45 «2115 1221 «2125 ДНК «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 45 асдеЕСсаєсс єєСадасдсес содєдсаєдед агаддадаєс адодасєддадда дасЯагЕсесд (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасассссд аддаддаєсд деЕдсдсдддадс даддсоадсегдд 120
Бассеєдддад дсаєссояодеЕє деЕддеЕддаса ддсссддаєд ассссаєсас ссасддсасео 180 чдсЕаасеєссд дсЕСсСгасад ддадеЕсєсасс єссдададаєд дсдадсудсає сассадесес 240
ЕсссесСебддуд дсаасоодадс аддесасасдс адсддсддса Ссаддесссд сассассдд9дд Зоо (516) чддаадддадс ЕсСсСсссаста саєдассеєсе сСоддддссссс адсаададеса сссааєадає 3З6о чЧЕадсЧдєсодд дсЕєдеЕдсЧає додедссаєсс ддсаддсасд доддаєсєсасає єдарєссстд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ єссЕдсдсас саєсадссосс дсссдсаєда Ссааєсдссад стасссаасс 480 седдасссдд адассдсадд сассдердсса дегсасудсрдда асессаєдад сдасадсаас 540 ааєдссддса ссаєсєссаа даасєддаса сСссддаддса дсадаадсдс дассагаєссс 60
ЕссеЕСсСсвєддд сбаєсассояс аддсаєсдад ссссасдсса дсаєссассдс сасадссд9д4949д 6бо асссссасоуд гддсодадчдЕ дсааддддаа СбСасоддаєддЕ ссаєсадсад садсессасс 720
Басассасва дссаєдадда дасеєсдсасс сссадссдда адааєсссодд адссссдсад 78о0 сссддсдадс ддассссссс дсаадсссос асасддадад даассассєс ссгрдссстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдсссЕсЕ сасстаєсс даєсассдсе 900 сЕссасдссд дадссдаєсса сассаасудсс садаєсдесда дсасддддас садасаєста 960 чаєстасдаєс асдедсдссс адсєддсддс содоссдаєтад бассддесає садсаасааа 1020 часадсеЕєдс сдассуседс сасвасессе деЕдаєсєдсдс сдссссддрєса ЕдЕсСсассся 1080 дЕсаасаєбас садсадесдсеЕ Есасасуєсті деЕсаєєдаас садеЕсааадеі ЕдЕДдссасд 1140 ачдадсадсас срассадсає Єааєдасдас аасасааадс аддаассесь адгадстасс 1200 чаачадсдна судсЕєсдсаєва с 1221 «2105 46 «2115 407 «212» Білок «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 46
Меє бек Іїе Рпе сіп ТПг Рго Уаі Нів Уаі І1е сі1у сС1у бі1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15 б1у А1а Рпе бБег Туг Авп Аїа сіу Аза Бек с1іу Акд Уаії Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у с1у Ткр Тук Іецп с1у с1у Іїе Агд Гей Тгр
ТЕр ТпПкг с1іу Ггец Авр Авр бек І1е ТПг Тук б1у ТПпг Аза Ап Бех Щ1У з9 (210)
Зо зек Тук Акуд бій Рпе ТПг Рпе бій Авр с1іу бій Агуд чІ1е ТПг бек Іеєцй 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Акуд ТЕ ТБ біу б1у Акд бій Рбе Робе Ні Тук Меє ТПг бБег Тер СО1У
З5 100 105 110
Тец біп біп сій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У 115 120 125
Ууаї Іе с1у Акуд Нів сіу Авр Нів Іїе Авр бБег Іец б1у Рпе Меє РБПе 130 135 140 40 Тем Агуд ТПг Іїе Аїа бек Аза Акуд Меєс І1е Авп Уаі бек Тук Рго Тіг 145 150 155 160
Тец Авр їейп сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 ТБПг Гец Авр бек Меє 165 170 175 век Авр бБег АвБп АБп Азїа с1у ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг РпПе С1У 45 180 185 190 біу бек Агкуд Бек Уа1і ТПг Іїе бек Бек бБег Тгр Аїа І1е ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уа! ТПпг Аза с1у Іїе Рго ТПг Уаї 210 215 220 50 А1ї1а сій Уаі біп сб1у бій Тук с1у Тер бек І1е Бек бек бек бек ТПг 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПг бек Нів біц біц ТБг Агуд ТБг Гец бек Тер 611 Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тер Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБг І1е бек Іїец Рго Туг біп Аї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп АвБп о сбі1іу Аїа Гей Рпе ТПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа Гей Туг Аїа 01Уу 290 295 300 (516) Уа1 Авр Тук ТПг Авп Уа! сіп І1е Уаії бек ТПг сб1іу ТПг Агуд Нів Іец 305 310 315 320
Авр Тут Авр Нів Уаі Агуд бек Аїа біу б1у Агкуд Агд Гей Уаі1і бек Аїа 325 330 335
ІТ1е Бек Авп Гув біу бек Гей Рго ТПг Аза Аза ТПг ТПг бек Уаі1і Пе 340 345 350
АТа Рго Рго Акуд Тук Маії Нів Рго Уаі Авп І1е Рго Аїа Уаії Іеч Туг 355 360 365
ТПг Бек Уа1! Іїе сіц Рко Уаі пув Уаії Уаі Аза ТПг Агуд Аза Аза Рго 370 375 380
ТПг Бек Іїе Авп Авр Авр АБп чІ1е пуб біп біц Рго Іец Уаі Аїа ТПг 385 390 395 400 бі бій Агуд ТП Гей Уа1 Туг 405 «2105 47 «2115» 1182 «2125 ДНК «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 47 асдеЕсдаєсс аєсааасасс сдєдадсстуд аєсоддаддас ааддсддаас додсдЕєсасдч (216)
Басааєдсад дсдададсодд дсоасаєсссд аддадчаєссда доаодсЕдсдддс сдассдасесд 120 чЧдсЯдЕєдсдад дсаєссддадеЕ деЕддеЕддаса ддсссддасс ссссссосас ссасдадсасе 180 дсЕаасеєсс дсЕєЄстасаа ддвадеЕссссс ссссаддаессд дсдадсдсає сассадессес 240
Есссраєддад дсааєддадс аддрасасдс адсддедсса ЕгаддеЕсєесва сассадсасд Зоо чддаадддадс ЕсСсСсссаста саєдассєсе сСодддсссда адсаададса Ессааєєсдає 3З6о чЧчЕадеддаєд дсЕєдЕеЕдсЯє аддсодєдаса ддааддсасуд дсассдасає сзасдссесд 420 чдасЕєсаєдеЕ єссвасдсас саєдассосс дсссдсаєдуа Єсдаєдедас дсаєссстасс 480 седддссссд асасддсадд сассдсдсса ассасудсрдда асесстасад сдасдссаас 540 саасссддсс ссассссдаа даассддесд Ессдааддса дссдададде дассдтаєсс 60
Зо ЄссЕССсода деЕдссассоудсо додааєсдаа СЕЄСасоудсса дсдЕсСассує сесддсдоад9доад 6бо аєсссодсеЕдд єдсЕСЧдасЧає ддаєдодасдад ЄЄсоддаєдуа ссаєсадердс аадсдссасс 720
Басассасса асеєссеєсдда дасеєсдсасс сссаадсдда асаассссод сЯсеЕссддад 78о0 сссддессаасє ддассссссо дсаддссудсс асдсддаадд даассаєсаа сагассетас 840 саддссааса Сдсааассас сссссадаас ддсдесареєсє єсасстасодс асссдассодде 900 садсасоудссу дадеддасса сассдаєдес саддеЕєдесда аєдасодддас саадаасодсс 960 чдадаєсасуєдЕ саассассдс Едссаааддс асдаседдса саасстаседс Едссаддаєд 1020 часдсссрад ссааєсессдє ссудссаєдес судадсадсудє сваєєссьад асссдессаад 1080 бЕсадедсад дадсаасеса саєсааєдас ассассааса абаєсасеса адаадесесас 1140 адеадеЕдсас сгассддеЕдЕ ддаададсес асссЕсддесе ас 1182 «2105 148 «2115 394 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 48
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уаі Бек гей І1е с1у сС1у біп 01у щу 1 в) 10 15
ТПг АТа Рпе ТПг Туг Авп Аїа сіу сій бек б1і1у Агд Уаі Іецй Агд Аг4д 20 25 30
І1Іе сі1у Уаї Тгр А1ї1а Уаї Авр 5ег Аза Іїецй Агкуд сіу І1е Агкд Уа1! Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Гей Авр бек Рго Гец ТПг Тук б1у ТПпг Аза Ап Бех Щ1У 50 з9 (210)
Рпе Тук Ппув бій Рре бек Рпе сбіп Уаі с1і1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек с1у Аїа Іїе Агкд Ріє 85 90 95
Тук ТПг Бек ТПг б1у Акд біш Рбе Робе Нів Туг Меє ТПг бег Тгр с1У 60 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Іїе Авр Уаі Уаі Авр с1іу Гей Сув Уаі с1У
115 120 125
Ууаї ТП б1у Акуд Нів с1іу ТБг Авр І1е АБр Аї1а Гей с1у Рпе Меє Ріє 130 135 140
Тец Агкуд ТПг Меє ТПг о бБег Аза Акуд Меє Уаі Авр Уа1! ТПг Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец б1у Рпе Авр ТПг Аїа сіу Іїе Аза Рго І1е ТПг Іецй Авр бек Туг 165 170 175 век Авр Аза АвБп обіп бек біу бек І1е бек Гув Авп Тгр Бек Рпе сіц 180 185 190 сіу бек Агкд бій Уаії ТБг Уаї Бек бек бек Тгр бек Уа! ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1Іе біц Рре Ні Аза бек Уаі ТПг Уаії бек Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
Тец Авр Уаії Авр с1у бій Рпе сіу Тер Аїа І1е б5ег А1їа бек Аїа ТПг 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Ап обек бек біц ТПг Агуд ТБг Гец Гув Тер АвБп Авп бег 245 250 255 сі1у Маї гей сій Рго сбіу біп Тер І1їе Бек Гей сіп Аїа Уаї ТБбг Агд 260 265 270 пув біу ТПЕ Іїе Ап І1їе Рго Туг біп А1ї1а Авп Меє сіп І1е ТПг Гей 275 280 285 біп Авп о сбіу Уаі Іїе Рпе ТпПг Туг Аза гейш Аїа сіу сіп Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Авр Уаї біп Уаі1і Уаі1і Авп Авр б1і1у ТПг Гув АБп Аїа 305 310 315 320 бі1у Нів Уаї Бек ТПг ТПг Аза Аза Ппув с1у ТПкг ТПг с1у ТБг Тс Тс 325 330 335
Аза Аза Акуд Месє с1у А1ї1а їецй Аза АвБп бек Уаі Агуд Нів Уаі Агудуд Аї1а 340 345 350
Зо А1їа бек І1їе Рго Агуд Рго Уаі Пув Рпе бек Аїа с1у Аїа ТПг Тук І1е 355 360 365
Авп о Авр оТБПг ТБг Авп о АБп о І11е ТБг о біп бій Уаї Нів Бек бБег Аза Рго 370 375 380
ТП сі1у Уа1 сіц біц ІТец ТПг Гец Уаї Туг
З5 385 390 «2105 49 «2115 1190 «2125 ДНК «213» Адіапсиют гадаіапит «4005 49 аєдеЕсдчасеє деЕссаєсеЕсєсє сааасасссду Сдадсссдає сддаддасаа ддсддаас4д4д (216) сдЕссасдба саасдсаддс дададсдддс дсЯдссссдад дадчдаєсдда дЕдсддавдссд 120
Есдасссодс дЕсСдсддаддс аєссдадесдЕ доаєддасадда сседдареєсс ссссеЕрастье 180 асддсасєдс ЄаасеЕссддс ЕЄСгасаадда адзсссссссс ссаддессддес дадсдсаєса 240 ссадессссс сссрасоддддс аасддадсад дсасасдсад гддеЕдссаєє аддеЕсссаса Зоо ссадсасддд аадддадесс ссссастаса єдассеєсесвд доддсседаад саададтаєс 3З6о сааєсдаєдс адсодасддс сСсдсдсодрад дсодсдасадда ааддсасуде ассдасаєсд 420 асдссссоддд сеЕссаєдесеєс стасдсасса СдассеЕссдс ЄсдсаєсдЧаєс дчасдеЕдчасЧе 480 аєсстасссеЕ доддсЕєсдає асоддсаддса Єсдсдссааєс сасдссддас сссгасадсд 540 асдссаасса аєсєддсесс аєєсеєсдаада ассддссдсс сдааддсадс сддададдаєдва 60 ссдбсасєссєс сссссодадс дссассдсдд дааєєдаарс ссасдссадс десассдерсе 6бо сддсддддає сссдссддєд сссдасодоєдд аєддсдадеЕс сдодасдддасс ассадесдсаа 720 дсдссасста сассассаас Сссссоудада сеЕсдсасссеЕ Саадсддаає аассссддсд 78о0 гЕєєдддадсс содесааєдуа аєсеЕсссстдс аддссдссас дсддааддда ассаєссааса 840
Бассеєвсасса додссаасаєд саааєсассс сссадаасддуд сдесасрсссс ассгсасдсас 900
Еєдседдеєса десасодссоода деддассаса ссдаєсдссса ддссдсдаас дасдддасса 960 ачдаасдссдд ЄсасдєдеЕса ассассдссд ссаааддсас дассддсаса асстассдссд 1020 (516) сеаддаєддда сдсесссадсс ааєсссддЕєсс дссаєдеЕссу адсадсуєсє аєссстгадас 1080 сЕдЕСаадеЕ садсдсадда дсаасесаса Ссааєсдасас сассаасаає ассасссаад 1140 аадеєсасад бадедсассе асеЕддеЕдеєдда аададсеєвас ссЕрдЕСТас 1190 «2105 50 «2115» 396 «212» Білок «213» АдЗіапсит гадаіапит «4005 50
Меє бек ТПг Аїа Іїе Рбе сіп ТПг Ркго Уаї бек їец І1е сС1у С1у сіп 1 в) 10 15 сбі1у б1у ТпПг Аза Рпе ТПг Туг АвБп Аза сіу бій бек с1іу Агкд Уаї Іей 20 25 30
Агуд Агуд ч11е сбіу Уаі Тгр А1ї1а Уаї Авр 5ег Аї1а ей Агуд с1у І1ї1е Агд 35 40 45
Уаї Тер Тер ТпПкК с1у Гей Авр бек Рго Гей ТПг Туг сб1у ТПг Аїа Авп 50 55 бо зек с1іу Ропе Тук Гпув бій Рпе бек Роре біп Уаі с1у бій Агуд І1е ТЕПг 65 70 75 80 зек Гец бек ІТец Тгр б1у АБп б1у Аї1а б1у ТПпг Агуд Бек с01у Аїа Те 85 90 95
Акуд Рпе Тук ТіПг бек ТПг б1у Акд біц Рре Рпе Нів Туг Меєс ТіПг 5ег 100 105 110
Тер б1у Гей пув біп біц Тук Рго І1їе Авр Уа! Уаї Авр с1Уу Гецй Сув 115 120 125
Уа1ї б1у Маії ТпПк с1у Акуд Нів с1у ТПг Авр Іїе Авр Аїа Гей сіу РіПе 130 135 140
Меє Рпе гей Агуд ТПг Меє ТПг бБег Аза Акуд Мес Уаії Авр Уа1ії ТПг Туг 145 150 155 160
Ркго ТПг Гец біу Рпе АвБр ТПг Аза с1у І1е Аза Рго І1е ТПг Іецй Авр
Зо 165 170 175 зек Тук Бек Авр Азїа АБп обіп бек біу бек І1е Бек КПув Авп Тер б5ег 180 185 190
Рпе сіц біу Бек Агкд біц Уа1ї ТПг Уаї бек бек бек Тгр бек Уа1ї! ТЕПг 195 200 205
А1ї1а с1у Іїе бій Рпе Ніз Аїа бек Уаі ТБг Уаї Бек Аїа с1у І1е Рго 210 215 220
Тец Маї гей Авр Уаі Авр сіу бій Рпе сіу Тер Аї1а І1е бек Азїа 5ег 225 230 235 240
Аза ТПг Тук ТіПг ТЕ Авп обек бек біц ТПг Агуд ТП Гей Ггув Тер Авп 245 250 255
АвпобБек сіу Уаії Іец бій Рго біу біп Тер Іїе бек Гец сіп А1їа Уаї 260 265 270
ТПгЕ Агуд пув с1у ТБг І1е АБп чІ1е Рго Туг біп А1ї1а АБп Меє сіп Ше 275 280 285
ТПЕ Гецп біп Авп сбіу Маії Іїе Рпе ТБПг Туг Аза Гей Аїа сіу сіп Туг 290 295 300
А1їа сіу Маії Авр Туг ТПг Авр Уаії біп Уаі Уаії АБп Авр с1у ТПг Гув 305 310 315 320
Ап Аза сіу Нів Уаії бек ТПг ТПг Аза Аїа пув с1у ТПг ТПг с1у ТЕ 325 330 335
ТПг ТпПг Аза Аза Агкуд Месє с1у Аїа Гец Аза АвБп бек Уаі Агуд Нів Уаї 340 345 350
Агуд Аза Аза бБег І1е Рго Агуд Рго Уаі Ппув Рпе бег Аза с1у Аїа ТЕПг 355 3З6о 365
ТУук І1їе Авп Авр ТПг ТЕ АвБп АБп о ї11е ТпПг о біп бій Уаї Нів бек 5ег 370 375 380
Аза Рго ТПг сіу Уаі біц бій Гей ТПг Гей Уа1 Туг 385 390 395 60 «2105 51 «2115» 1221
«2125 ДНК «213» Суаєпеа ацйвЕсга1їії5в «4005 151 асдеЕСсаєсс єєСадасдас содєдсаєдед агаддадаєс адодасєдддадда дасЯагЕсесд (216)
Басааєдсад дсодсдадсдд дсодсуєссвоа аддадчаєсу ЧЕЧдЕЧдЕдоаадс доадсоаодст9У 120
Бассеєдддад дсаєссояодеЕє деЕддеЕддаса ддсссддаєд ассссаєсас ссасддсасео 180 дсЕаасеєссд дсЕСсСстасад ддадеЕссасс сссоааддаєд дсдадсдсає сассадессес 240
ЕсссеЕсСбддуд дсаасоодадс аддсасасдс адсддсддса Ссаддссссуд сассасс9д9дд Зоо чддаадддадс ЕсСсСсссаста саєдассеєсе сСоддддссссс адсаададеса сссааєадає 3З6о чЧЕадсдєсодд дсЕєдЕдсЯєЄ доадеЕдссаєсс ддсаддсасду ддадаєсасає Єдасєсссстд 420 чЧдасЕєсаєдеЕ єссЕдсдсас саєсадссосс дсссдсаєда Ссааєсдссад стасссаасс 480 седдасссдуд адассдсадд сассдсдсса дссасдссдуда ассссаєбдад сдасадсаас 540 ааєдссддса ссаєсєссаа даасєддаса сСссддаддса дсадаадсдс дассагаєссс 60
ЕссЕССЄддд сеаєссассуус адодсаєсдад сеЕссаєбдсса дсаєсасьудс сасадссо9д9дд 6бо аєссссасдд ЕддсододадЧдеЕ дсааддддаа Сасододасдді ссассадсад садсессасс 720
Басассасва дссаєдадда дасеєсдсасс сссадссдда адааєсссодд адссссдсад 78о0 сссддсдадс ддассссссо дсаадсссос асасоддадад даассаєрсес ссрдссстас 840 саддссасса Сдсааассас сссссадаас ддсдсссЕсЕ сасстаєсс даєсассдсе 900 сЕЕєсСасооссу дадесдаєса сассаасуєс садаєсдеЕда дсасддддадас садасаєсса 960 чаєстасдаєс асдеЕдсдссс адсєддсддес судссдаєтад баєсддесає садсаасааа 1020 часадсеЕєдс сдассуседс сасвасессе деЕдаєсєдсдс сдссссддрєса ЕдЕсСсассся 1080 дЕєаасаєбас садсадесдсес Евавасуєст деЕСсаєсдаас садессаааді сдесддссасда 1140 ачдадсадсас срассадсає Єааєдасдас аасасааадс аддаассесь адгадстасс 1200 даададсдра содсеЕєдсаєва с 1221 «2105 щЛщ52 «2115 407 «212» Білок
Зо «213» Суаєйеа айзсга1їів «4005 52
Меє бек Іїе Рпе сіп ТПг ТБПг Уа1і Нів Уа1і І1е сі1у сС1у бі1іп б1у щЩУ 1 в) 10 15 с1у Аїа Рпе бек Тугк Авп Аїа с1іу Аїа бек б1у Акуд Уа1їі Іей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у с1у Ткр Тук Іецп с1у с1у Іїе Агд Гей Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПкг с1іу Ггец Авр Авр бек І1е ТПг Тук б1у ТПпг Аза Ап Бех Щ1У 50 з9 (210) зек Тут Агд біц Ропе ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Агуд ТПг Тпг біу б1у Агд бій Рпе Рпе Нів Туг Месє ТрПг бек Тгр 01У 100 105 110
Тец біп біп сій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У 115 120 125
Ууаї Іе с1у Акуд Нів сіу Авр Нів Іїе Авр бБег Іец б1у Рпе Меє РБПе 130 135 140
Тец Агкуд ТПпг І1е Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец Авр їейп сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1і1 ТБПг Гец Авр бек Меє 165 170 175 век Авр бек АБп АБп Аза с1іу ТПг І1їе бек Гув АБп Тер ТПг Рібе 0С1Уу 180 185 190 біу бек Агкуд Бек Уа1і ТПг Іїе бек Бек бБег Тгр Аїа І1е ТПг Аїа 01Уу 195 200 205
І1Іе біц Гец Ні Аза бек Іїе ТПг Уа! ТПпг Аза с1у Іїе Рго ТПг Уаї (516) 210 215 220
А1їа сій Уаії біп с1у б1іцп Тук біу Тгр бек І1е Бек Бек Бек бек ТПг
225 230 235 240
Тук ТПкг ТПг бек Нів біц біц ТБг Агуд ТБг Гец бек Тер 611 Авп 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тер Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБг І1е бек Іїец Рго Туг біп Аї1а ТПг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 біп АвБп о сбі1іу Аїа Гей Рпе ТПг Туг Рго Іїе ТПг Аїа Гей Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уа1 Авр Тук ТПг Авп Уа! сіп І1е Уаії бек ТПг сб1іу ТПг Агуд Нів Іец 305 310 315 320
Авр Тут Авр Нів Уаі Агуд бек Аїа біу б1у Агкуд Агд Гей Уаі1і бек Аїа 325 330 335
ІТ1е Бек Авп Гув біу бек Гей Рго ТПг Аза Аза ТПг ТПг бек Уаі1і Пе 340 345 350
Аза Ркго Рго Агкд Тук Уаії Нів Рго Уаі АвБп І1е Рго Аїа Уа1і Рго Туг 355 360 365
ТПг Бек Уа1! Іїе сіц Рко Уаі пув Уаії Уаі Аза ТПг Агуд Аза Аза Рго 370 375 380
ТПг Бек Іїе Авп Авр АвБр АБп І1е Ппув5 біп бій Рго Гей Уаі Аїа Тбг 385 390 395 400 бі бій Агуд ТП Гей Уа1 Туг 405 «2105 53 «2115» 1083 «2125 ДНК «213» Гудодіцйт Е1їехцовитш
Зо «4005 53 аєдеЕСсСЧдЕеЕєдЕ аєсадасасс сдєдасааса ассодддддсесс адддсддсаа сссасєссссс (216)
Басдадсада дсадааасодд даачаєсссд аддаачаєсд доадсЕдсдддадс ддаддсдаає9д 120 саассдсдад дсасссдсає ссддаєдадс додсеЕссдаса дсесадссас ссасддсаса 180 чдссааєдедда дсЕСЕсасаа ддадсасдад СсСсааддаєд дсдадсдсає басссд9аєєссд 240
ЕСЕеєсаєооду дсааєддсдс аддсасасує Сседдаддса Єсадасеєсста сассасааса Зоо чддаддссадеЕ єєессСсаєвта саєдасасєсі соддддсссаа адсаададса сссааєссдчає 3З6о чЧЕЧдДдсаєссу дЯдЕСЕЕЕЧЕеЕЧЕ доддаєсссдд ддаададсса асдссдасбає сдаєсдсаєса 420 чЧадЕєЄсСтавєє єсстааадеЕс саєбадсаєсєсі дсссдсаєда Ссаасдсаад ссассстаса 480
ЕЕєДдадсесад адасадсеєдуа ааєсассссс дессасодсссдд асссасасад Єдассссаає 540 ааєдсаддудсс стасєєсааа даассоодаса СЕСССсССдЧдєа дЕСЯОддаадеЕ даадаєссса 60
Есаєсаєдда соддеЕСсассас доаддаєсдад бассаєсдсса дсасаассдс Ссаадсад4дад 6бо авєссссеЕвд єєЧдсодааде деЕСаддадад СсСсоддасдаді сододесдадсдс сасаддаадс 720
Басасаасса содсаєдадда дасеєсдаасс сссадссдду ассаасссдда аасссоссаа 78о0 ссадддсадс ддаєсссссасє ссаадссрасс асессддадад дааасаєсас адгсассстас 840 садддаасса Сддадаєтас сссссадеЕсс ддссаадесс ЕЕсСсаврассс саєссссьса 900 аєдваєєстьд дсодєддаєса бассадсдсс дааасаасса асассддаас Сааадсадса 960 аассаадеєсуд аєдаєсаадс Едсєдаєсса адссесасса сграсаасєда бассааддає 1020 чаєдаддбас ЄЕдадсадсс адаєсааадаа дЕссаададеі сеєааасеєсає ссаєссстадс 1080 да 1083 «2105 54 «2115 360 «212» Білок «213» Гудодіцйт Е1їехцовитш «4005 МЯ54
Меє бек Гей Тук біп ТПг Рго Уаі ТПг Іїе І1е сі1іу сС1у бі1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
АвпобБек РіПе бек Туг біц біп бек Агд Авп обіу Гув І1е Гей Агд Гув 60 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд сС1у Іїе Агд І1е Тгр
35 40 45
Меє бек с1іу Бек Авр бек бек Уа1і ТПг Тук сі1у ТБПг Аза АБп Уа1і У 50 з9 (210) зек Тут Мпув біц Тук бій Рпе Губв Авр б1у бій Агуд І1е ТПг Аг9д Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Тук ТпПкг ТПг ТБг біу б1у біп Рбе Рбе Ні Тук Меє ТПг бБег Тер С1У 100 105 110
Тем пув біп біц Тук Ркго І1їе Авр Уаії Аїа бек с1у Ге Сув Уаі Щ1У 115 120 125
І1е гец с1у Агд А1ї1а АБп Аза АБр І1е АБр Аїа Гей с1у Рпе Тук Ріє 130 135 140
Тец Гпув бек Іїе Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец бек Геп сі ТПг Аїа сіу Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг 165 170 175 век Авр бБег АвБп АБп Азї1а сіу бек І1е бек Гув Авп Тгр ТПг Ропе 5ег 180 185 190 сіу бек Акуд біц Уаї Пув І1е бек бек бек Тгр ТПг Уа1і ТПг ТЕ 1У 195 200 205
І1Іе сіц Тук Ніб5 Аза бек Іїе ТПг Уаі! сбіп Аза с1у Іїе Рго Іец Уаї 210 215 220
А1їа сій Уаї бек бі1у б1іцп Рпе сіу Тгр бек Уаії бек Уаі ТПг с1у б5ег 225 230 235 240
Тук ТПкг ТПкг Тбг Нів біц біц ТБг Агуд ТБг ТГец бег Тгр АвБр сіп 5ег 245 250 255 сбі1у ТПпг Гей сбіп Рго сбіу біп Тгр І1їе Бек Іїе сіп Аїа ТПг ТБбг Агд 260 265 270
Зо Агуд б1у Авп І1е ТПг УМаії Рго Тук сіп с1іу ТПг Месє бій І1їе ТБг Іеєцй 275 280 285 біп бек б1у сбіп Уа1і Ррпе бек Туг Рго Іїе Бек бек Меє Туг бег 01У 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг бек Уаї біц Іїе ТБг Авп ТПг б1у Тс ув Аза Аїа 305 310 315 320
Авпобіп Уаії Авр Авр біп Аза Аза АвБр Рго бек Гей ТПг ТПг Тпг Тк 325 330 335
Авр ТК пув Авр о біу біц Маї Гец біц біп Рго Авр Гпув бій Уа1 сіп 340 345 350 сій бек Ппув Геп І1е Тук Рго 5ег 355 360 «2105 55 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 55 аєдеЕСдседд єєЄсадасасс саєдсаєсдсс ассододадддс ааддаддсаа Єдсасессасе (216) басдаєсєсада дсадааасуд даддаєссту сочадчаєссо доаодЕдсдоадс ддоадсвадес да 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседд басасдєєса ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо чЯдЕЄСЕСЕсСЕ Єссаєаааає дасаєсссда ддсссасааа ссдадсаєсс аассдасдаєд 3З6о чсаєссдЧчеЕС ЕЕсСЯєЧосодоа даєсаєддада садстаасоо ЄсодаєдеЕодда ЕЄсСаєєдаче 420
ЧЕЄЕЕвЕДЧЕЄсСЕ бааддассає адсаєссдсс содасаєсдаєса аєдсаадста ссстассетд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс бо (516) сссасдуаєсу садаадеєчад єддачачеає двдаєдуаєсьд гаадеЕдчсаєс Сддддасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕєе дсадеЕсвєдда асчарєсеЕєеєс аагаєдссає сеЕссесааєд 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас єадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєссадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 сссааєсааад аадсєааада деЕдсасассс сеЕссеЕсдсвд аа 1062 «2105 56 «2115 354 «212» Білок «213» Ріаєусекіцют рігцгсаєит «4005 МЯ56
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Авп о Аїа Рпе ТПг Туг Авр біп бек Акуд АБп о б1іу Агд І1е Тей Агд Агд
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр
Меє ТпПг с1у ТПг Авр Тс Рго Аїа ТПг Рпе с1у ТПг Аза ТПг с1у б5ег 20 50 з9 бо
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тец Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд бек біу бі1у І1е Агд Рпе Туг 85 90 95 25 ТПЕ Трпг Тпк о сіу біу Бек Рпе Рпе Нів Ппув Меє ТПг бек Тгр с1У ГІец 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уа1і Аїа бек с1у Іец Сув Уаі с1у Ше 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей
Зо 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Аза бек Азїа Агкуд Меє Іїе Авп Уа1і бек Тук Рго ТіПг Іей 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175 35 Авр бек Авп АвБп Азїа с1у ТПг Іїе бек Пув АвБп о Тгр ТПг Рпе бек 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уа1і сіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 40 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Те Азї1а Тгр АвБр сбіп Бех щЩ1У 245 250 255 45 ТП Гецп біп Рго сбіу сбіп Тгр І1е Бек Гей сбіп Аїа ТПг ТП Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аїа ТПг Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг біу бБег Агуд Аїа Гей Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 сбіп Авп о Уаії біп Рго Авп Гув біц Аїа Ппуз бій Сув ТБг Гей Гей РБГе 340 345 350
А1а сіц 60 «2105 157 «211» 1062
«2125 ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 57 асдеЕСсСдсвдд ЕєСсСадасасс саєсстаєдіс ассодаддадс ааддаддсаа СосуєЕвссеЕ (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содаддасад доадсдсдддас ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас сЕЄгбддсасд 180 чдссасдддсеЕ сеЕгагадеда агсагассссс асодаєсддсд адсдсаєсас ссдсеЕрдеЕсс 240 гєЧдЕЧддддодса асодддседа басасдсссо ддаддсаєсса дассссасас сасаасадда Зоо чадЕЕСЕЕВЕС єСсСсСабаааає дасассссодуд досссасада ссдадсаєсс аассоаєсоатд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420
ЧЕЄЕЄЕДЧЕЄсСЕ Єаадаассає адсаєсєдсе соасаєсєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чЧдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асссесдасс сдасбасааєсда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даасадсдас аасаєссаєса 60
ЕсаєддеЕсдс єсасеєсаду даєсададаса саєдсаадсд Сдадсудєдса адсадоачаєсс 6бо сссаєсддєсд садаадсдад СддададеЕсс ддвасдоаєстд Есадедсаєс єддодасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссста асссддаасс аасссддаас сссададссс 78о0 чадсааєдда єсЕеЕсасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕсєе дсеЕдЕССсОдда асчассєсесс аасаєсдссає ссссестаєд 900 басеЕссдудед гддаєтасас садсдеддає агбгаастааса ссддаасстад адсаєсадає 960 саєдеєдадуд Есудаадссас Єдадсаасаа дЕссаадддд Есааадаєса аадедсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕСЕсСтдссд аа 1062 «2105 58 «2115 354 «212» Білок «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 58
Зо Меє бек Ггецп Уаї сіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 в) 10 15
Ап Аза Ріпе бек Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр
З5 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Роре ТПг Авр с1іу біц Агуд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тем Тер б1у АвБп с1у Аїа сіу ТБг Агуд бек сіу с1у І1е Агуд РоПе Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у Гей біц біп Аїа с1іу І1е І1їе Рго Уаі ТПг Гей Авр бек Тукг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сіу бі Рпе сіу Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240 (516) А1їа ТПг Тбг о біп бі бій бек Агуд Тпс о Гей ТБПг Тгр АвБп о біп бек с1Уу 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1ї1е ТПг Іец Іей 275 280 285
Ззек б1у ТПг І1їе Рпе сіп Туг Аїа І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг б1у ТПпг Агуд Аза бБег Авр 305 310 315 320
Нів Уаі сій Уа1і сіц Аза ТП бій біп біп Уаі біп сб1у Уаї Гпув Авр 325 330 335 біп бек Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБПг Гец Іецй РБе 340 345 350
А1а сіц «2105 59 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Невідомо «2205 «223» Суміш Ріасусегіцют рБітїцгсаєцют, Нирекліа ваі1уіпіоїдев та Ріаєбусегіцт мапаае «4005 59 аєдеЕСдседда єєЄсадасасс саєстаєсдсс ассодадддс ааддаддсаа Сдсдасессссе (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содаддасад доадсдсдддас ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдс дсддаєдасу ддсассдаса ссссддссас єсссдадсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
Зо ЕсдЕдддоаса асоддоддссду Сасасуєсса додаддсаєса дасеєссасас сасаасадва Зоо ччдЕЄЕСЕСЕсСЕ єссаєаааає дасаєсссдда ддсссСасааа ссдадсаєсс аассдвасаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддсбаста ЕЕсСссааааа СгЕдддасьсєсс єсоддудасбадсс даассуєЄдас аагаєссаєса бо
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасес аададдааад Єсдаасссста дсасдддасс аасссддаас сссасадссе 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєдуд ааассассеєеє дсадсссдда асчассеЕссс аасаєсдссає сеЕссЕсааєда 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас єадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєссадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕсЕЕсдсвд аа 1062 «2105 6560 «2115 354 «212» Білок «213» Невідомо «2205 «223» Суміш Ріасусегіцют рБітїцгсаєцют, Нирекліа заіуіпіоїдев та Ріаєбусегіцт мапаае «4005 60
Меє бек Ггецп Уаї сіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 в) 10 15
Ап Аза Ріпе бек Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 60 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег
50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє б1у Агд Аїа Авп Уаії Авр Уаії Авр бек Гей біу Уаї Гей РіПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 сій Тк Ні Азїа бек Уа1і! бек Уаі! сбіп Аза с1іу І1їе Ркго Меєс Уаї А1їа 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд ТБг Іец Азї1а Тгр АБр сбіп Бек 01У 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПпг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТПг Іс сіп 275 280 285
Зо Ззек б1у ТПг І1їе Рпе сіп Туг Аїа І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБг АвБп о ТПг о біу бек Агуд Аза Іецй Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр
З5 325 330 335 біп Авп о Уаї сбіп Рго Авп пув сі Аза пув бій Сув ТП Гей Ге Ріе 340 345 350
А1а сіц «2105 61 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Невідомо «2205 «223» Суміш Ріасусегіцют рБітїцгсаєцют, Нирекліа заіуіпіоїде5 та Ріаєбусегіцют мапаае «4005 61 аєдеЕСсдседда єєЄсадасасс саєдеаєдсс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасстасс (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содадчаєсда доадсЕдсдддадс ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 чдссасдддсеЕ сеЕгасадеда агсагассссс дсодаєддасд адсдсаєсас ссудсеЕрдесс 240
ЕсдЕдддоаса асоддоддссду Сасасуєсса додаддсаєса дасеєссасас сасаасадва Зоо чЯдЕЄСЕСЕсСЕ Єссаєаааає дасаєсссда ддсссасааа ссдадсаєсс аассдасдаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 (516) чдсаддсбаста ЕЕсСссааааа СгЕдддасссеєс сСсоддеадсс даассдєдас аасаєсаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд даєсададаса саєдсаадед єдадсудеєдса адсаддадаєс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чадсааєдда єсЄсасесса адсбассасс сааададдаа ссассасаєсс асссеЕсессаа 840 дсаассаєдуда аааєсасеЕсєе дсадеЕСсдда асчассєссс аасаєсдссає ссссссааєд 900 басеЕссдудед гддаєтасас садсдеддає агбгаастааса ссддаадсад адсаєтсадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасасьс сЕсЕеЕсдсвд аа 1062 «2105 562 «2115 354 «212» Білок «213» Невідомо «220» «223» Суміш Ріасусегіцют рБітїцгсаєцют, Нирекліа заіуіпіоїде5 та Ріаєбусегіцют мапаае «4005 62
Меє бек Геи Уаі сіп ТПг Рго Уаі Тук Уаі1 І1е сС1у сС1у біп 01у щу 1 в) 10 15
Ап Аза Рпе ТПг Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1Іе сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд сіу І1е Агкд Уа1! Тгр 35 40 45
Меє ТП с1у ТПг Авр ТБПг Рго Аїа ТП Рпе с1іу ТБг Аза ТП с1у 5бег 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Рре Аз1а Авр сіу бій Агуд І1е ТБбг Агд Гец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг
Зо 85 90 95
ТПЕ ТпПкг ТБкг сіу біу Бек Рпе Робе Нів Ппув Меє ТПг бек Тгр С1Уу Іей 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє б1у Агд Аїа Авп Уаі! Авр Уаії Авр бек ІТецй сіу УМаї Гей Рібе Іецй 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1у Іїе Іїе Рго Уаї ТБПг Іец Авр бек Рпе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1ї1е бек бек Бек Тгр бек Гей ТПг бек С1у І1е 195 200 205 сій Тк Ні Азїа бек Уа1і! бек Уаі! сбіп Аза с1іу І1їе Ркго Меєс Уаї А1їа 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1і1у Тер бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Те Азї1а Тгр АвБр сбіп Бех щЩ1У 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1е бек Гец біп Аїа ТПг ТПпг біп Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285
Ззек с1у ТПг І1їе Рпе сіп Туг Аїа І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг біу бБег Агуд Аїа Гей Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаї пув ТПг ТП бій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 60 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе
340 345 350
А1а сіц «2105 63 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 63 аєдеЕСсдсеєдда єєЄсадасасс саєдеаєсдесс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасссасс (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содадчаєсда доадсЕдсдддадс ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддасдасд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕсдЕдддоаса асоддоддссду Сасасуєсса додаддсаєса дасеєссасас сасаасадва Зоо ччдЕЄЕСЕСЕсСЕ єссаєаааає дасаєсссдда ддсссСасааа ссдадтаєсс аассдасчаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддсбаста ЕЕсСссааааа СгЕдддасссеєс сСсоддеадсс даассдєдас аасаєсаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасес аададдааад Єсдаассста дсаєдоадасс ааєссддаас сссасадссе 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєдуд ааассассеєеє дсадсссдда асчассеЕссс аасаєсдссає сеЕссЕсааєда 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас сєадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєсавває 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕсЕЕсдсвд аа 1062
Зо «2105 64 «2115 354 «212» Білок «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 64
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уаї Тук Ма1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Ап Аза Рпе ТПг Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а с1іу сій Ткгр біп Тей Агуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза АБр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Робе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 сіп Тк бі Тук Рго І1їе Авр Уаі Аїа бек с1іу Гей Сув Уаії сб1у Ше 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 (516) зек Акад ТПг Уаї ТПг Іїе бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у І1е 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
А1їа ТПг Тбг о біп бі бій бек Агуд Тпс Гей Аїа Тгр Авр сіп бек 01Уу 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг біу бБег Агуд Аїа Гей Авр 305 310 315 320 сіп Маі біц Маї Ппув ТБг ТПг бій біп біп Уаії сій с1і1у Уаї бій Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе 340 345 350
А1а сіц «2105 55 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріаєусекіцют рігцгсаєит «4005 65 аєдеЕСсдсеєдда єєЄсадасасс саєстаєсдсс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасссасс (216)
Басдаєсада дсадааасдд дадчаєсссд содадчассдя двоаодсдсддаддс дадсвадчедд 120
Зо саассдсдсуд дааєссдсуає деЕддасдасд додсассдаса ссссддссас ссеЕсСддсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседа басасдссса ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо чЯдЕЄСЕсЕсСЕ Єссаєаааає дасаєсєсєдоа доасесасааа ссдадсаєсс аассдасдаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЕЕЕсдДЕеЕсСС саадддассає адсасссдсе сообаєдаєса асдєаадсса ссстассетвд 480 чЧдасЕсададс аадссоддаає саєссссдсс асасесдасєс ссессааєда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасес аададдааад Ссдаассста дсасдддчасс ааєссддаас сссасадссяе 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕєе дсеЕдЕССсОдда асчассєсесс аасаєсдссає ссссестаєд 900 басеЕссддеЕд Єддаєсаєас сєадедсддає асаассааса седдаадсад адсаєсавває 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 сссааєсааад аадсєааада деЕдсасассс сеЕссеЕсдсвд аа 1062 «2105 6566 «2115 354 «212» Білок «213» Ріаєсусегіцю рієцегсаєбит «4005 66
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Авп о Аїа Рпе ТПг Туг Авр біп бек Агд Авп б1іу Агд чІ1е Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег 60 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег
65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей 130 135 140
Агуд ТпПг о Іїе Аїа б5ег Аза Акуд Меє І1їе Авп Уаї бек Тук Рго Тібг Іецй 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 сій Маії бек сб1у бій Тук біу Тер бек Уаі! бек Уаі бек сб1і1у ТПгЕ Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Те Азї1а Тгр АвБр сбіп Бех щЩ1У 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1ї1е ТПг Іец Іей 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Зо Авр Тук ТПг бек Уаії Авр І1е ТПг Ав5п ТБг сбіу Бек Агуд Аїа Іецй Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе
З5 340 345 350
А1а сіц «2105 67 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 6567 асдЕСдссдд ЕєСадасасс соаєстасдеЕс аєсоодадддс ааддаддсаа ГЄдсдЕЕсессе (216)
Басдаєсада дсадааасдд дадчасєсссд содадчасад додеЕЧдеЕдоддс доадсдвадедо 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас сЕЄгбддсасд 180 дссасдддсеЕ сЕсаєадеда асаєсассссс асодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240 гєЧдЕЧддддодса асоддддседоа басасдсссо ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо чадЕЕСЕЕВЕС єСсСсСабаааає дасассссодуд досссасада ссдадсаєсс аассоаєсоатд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕДЧЕЄсСЕ Єаадаассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чЧдасЕсададс аадссоддаає саєсссеЕдеЕс асссеЕєдаєс соасасааєда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
ЕсаєддеЕсСеєсС єсасеєсаду дасададаса саєдсаадсд ЄдадсдЕдса адсадоадаєс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддаєдаєстд гаадедраєс сдддасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєдуда аааєсасеЕсєе дсадеЕСсдда асчассєссс аасаєсдссає ссссссааєд 900 (516) басеЕссдудед гддаєтасас садсдеЕдддає агбгаастааса ссддаадсад адсаєтсадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕсЕЕсдсвд аа 1062 «2105 68 «2115 354 «212» Білок «213» Ріабусекгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 68
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Ап Аза Ріпе бек Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє ТП с1у ТПг Авр ТБПг Рго Аїа ТП Рпе с1іу ТБг Аза ТП с1у 5бег 50 55 бо
Тук Бек бій Тук ТПг Роре ТПг Авр с1іу біц Агуд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє б1у Агд Аїа Авп Уаії Авр Уаії Авр бек Гей біу Уаї Гей РіПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп
Зо 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 сій Тк Ні Азїа бек Уа1і! бек Уаі! сбіп Аза с1іу І1їе Ркго Меєс Уаї А1їа 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд ТБг Іец Азї1а Тгр АБр сбіп Бек 01У 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПпг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТПг Іс сіп 275 280 285
Ззек б1у ТПг І1їе Рпе сіп Туг Аїа І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБг АвБп о ТПг о біу бек Агуд Аза Іецй Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 біп Авп о Уаї сбіп Рго Авп пув сі Аза пув бій Сув ТП Гей Ге Ріе 340 345 350
А1а сіц «2105 659 «211» 1062 «212» ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт 60 «4005 69 аєдеЕСдседда єєЄсадасасс саєстаєсдсс ассодадддс ааддаддсаа Сдсдасессссе (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содаддасад доадсдсдддас ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас сЕЄгбддсасд 180 дссасдддсеЕ сЕсаєадеда асаєсассссс асодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕсдЕдддоаса асоддоддссду Сасасуєссєсе дооаддсаєса дассстасас сасаасаддвда Зоо чЯдЕЄСЕСЕсСЕ Єссаєаааає дасаєсссда ддсссасааа ссдадсаєсс аассдасдаєд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддсбаста ЕЕсСссааааа СгЕдддасссеєс сСсоддеадсс даассдєдас аасаєсаєса 60
Есаєддеєсес єсасеЕєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сдодададсає ддасоддсссд Саадсдсаєс сдддасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєдуд ааассассее дсадсссдда асчассеЕссс аагсасдссає сеЕСССсаає 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас єадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєссадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕсЕЕсдсвд аа 1062 «2105 70 «2115 354 «212» Білок «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 710
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Ап Аза Ріпе бек Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1е Гей Агд Агд 20 25 30
Зо Іїе с1у Уаі! Тер Аї1а с1іу сій Тер сіп Тей Агуд сб1іу І1їе Акуд Уа1 Тгр
Меє ТпПг с1у ТПкг Авр Тс Рго Аїа ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПг с1у б5ег з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Роре ТПг Авр с1іу біц Агуд І1е ТПг Агд Іец 5ег 35 65 70 75 80
Тец Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сбіу с1у І1їе Агд Рпе Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 40 сбіп Тк бі Тук Рго І1їе Авр Уаі Аза бек с1іу Гечп Сув Уаії с1у І1е 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Аза бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаї бек Тук Рго ТіПг Іей 45 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув Авп Тер ТПг Рібе бег 01У 180 185 190 50 зек Акад ТПг Уаї ТПг Іїе бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у І1е 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сі1у І1е Ркго Меє Уаї Аїа 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд ТПпг Гей Аїа Тер Авр сбіп бег 01У 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 (516) сіу ТБПг І1е ТПг Гей Рго Рбе біп Аїа ТпПк Меє сій І1е ТПг Гей сіп 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТПг Авп ТПг сіу бБег Агуд Аїа Іецй Авр 305 310 315 320 сіп Маі біц Маї Ппув ТБг ТПг бій біп біп Уаії сій с1і1у Уаї бій Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп о пув бій Аїа пув біц Сув ТП Гей Ге Ріе 340 345 350
А1а сіц «2105 71 «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріаєусекіцют рігцгсаєит «4005 71 аєдеЕСдседд єєЄсадасасс саєстаєсдсс ассодададддс ааддаддсаа СЄдсасесессе (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содаддасад доадсдсдддас ддаддсдадесдд 120 саассдсдсуд дааєссдсуає деЕддасдасд додсассдаса ссссддссас ссегддсасд 180 дссасдддсеЕ сЕсаєадеда асаєсассссс асодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240 гєЧдЕЧддддодса асоддддседа басасЧчдєєсе ддаддсаєсса дассссасас сасаасадда Зоо чЯсЕЄЕСЕСЕЕЄ єсСсаєаааає дасаєсссда ддсссасада ссдадсаєсс аассзчаєсдаед 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЕЕЕсдДЕеЕсСС саадаассає адсасссдсе собаєдчаєсса аєдсаадсста ссссассосд 480 чЧдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асссесдасс сдасбасааєсда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даасадсдас аасаєссаєса 60
Есаєддеєсдс Єсасеєсадуд дасададаса сасдсаадсд Сдадсдсдса адсадддаєсс бо сссаєсддєсд садаадсдад СддададеЕсс ддвасдоаєстд Есадедсаєс єддодасстає 720
Зо дсаассасес аададдааад Ссддаассста асеЕсддаасс ааєссддаас сссададсся 78о0 чадсааєдда єсЕеЕсасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕсе дсЕдеЕСЕЧдда асчаєсеЕєеєс аагаєдссає сеЕссЕсааєд 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас єадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєссадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 сссааєсааад аадсєааада деЕдсасассс сеЕссеЕсдсвд аа 1062 «2105 172 «2115 354 «212» Білок «213» Ріаєусекіцют рігцгсаєит «4005 Д 7Л12
Меє бек Ггеи Уаі1і! сіп ТПг Рго Уа1і Тук Уа1і І1е сі1у сС1у б1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
Авп о АЗїа Рпе бек Туг Авр біп Бек Агкуд АБп б1іу Агд І1е Тей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє ТпПг с1у ТПг Авр Тс Рго Аїа ТПг Рпе с1у ТПг Аза ТПг с1у б5ег 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Роре ТПг Авр с1іу біц Агуд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тец Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд бек біу бі1у І1е Агд Рпе Туг 85 90 95
ТПЕ Трпг Тпк о сіу біу Бек Рпе Рпе Нів Ппув Меє ТПг бек Тгр с1У ГІец 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уа1і Аїа бек с1у Іец Сув Уаі с1у Ше 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уа1і Авр бек Ггец сіу Уаії Іецп РПе Гей (516) 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Аза бек Азїа Агкуд Меє Іїе Авп Уа1і бек Тук Рго ТіПг Іей
145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1ї1е Бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уа1і сіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 сій Маї бек б1іу бій Рбе сіу Ткгр бек Уаі! бек Уаі бек сб1і1у ТПгЕ Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс ІТец ТПг Тер АБп біп Бех Щ1У 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аїа ТПг Меє сій І1ї1е ТПг Іец Іей 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тук ТПг бек Уаії Авр І1е ТПг Ав5п ТБг сбіу Бек Агуд Аїа Іецй Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе 340 345 350
А1а сіц «2105 73
Зо «2115» 1062 «2125 ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 7Л173 асдеЕСсСдседд ЕєСсСадасасс соєдсаєдесс ассодаддадс ааддаддсаа СодсуаєсЕтасе (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содадчаєсда доадсЕдсдддадс ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 чдссасдддсеЕ сеЕгасадеда асагассссс дсодаєсддадсд адсдсаєсас ссдсеЕрдеЕсс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседа басасдссса ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо чдаЕЕСЕЕЕСсСС єСсСсагбаааає дасассссодуд доаосссасааа ссдадсаєсс аассоасоатд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420
ЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄсСЕ Єааддассає адсаєсєдсе соасаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чдасЕсададс аадссддаає саєссссдсс асасесдасс ссессааєсда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
ЕсаєддеЕсСеєсС єсасеєсаду даєсададаса саєдсаадсд Сдадсудєдса адсадочаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чадсааєдда єсЕесасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєдуда аааєсасеЕсєе дсадеЕСссдда асчассєсесс аасаєсдесесає сессссааєд 900 басеЕссдудед гддаєтасас садсдеддає агбгаастааса ссддаадсад адсаєтсадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕСЕсСтдссд аа 1062 «2105 174 «2115 354 «212» Білок «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт «4005 ч174 (516) Меє бек Ггецп Уаї сіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 в) 10 15
Ап Аза Рпе ТПг Туг Авр біп бБег Агд АБп о б1у Агд І1їе Гей Агд Агд 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє ТП с1у ТПг Авр ТБг Рго Аїа ТП Рпе с1іу ТБг Аза ТП с1у 5бег 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95
ТПг Тпкг ТБкг сіу сіу бек Ррбе Рбе Нів пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє б1у Агд Аїа Авп Уаії Авр Уаії Авр бек Гей біу Уаї Гей РіПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 сій Тк Ні Азїа бек Уа1і! бек Уаі! сбіп Аза с1іу І1їе Ркго Меєс Уаї А1їа 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Те Азї1а Тгр АвБр сбіп Бех щЩ1У
Зо 245 250 255
ТПг Гей біп Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285
Ззек б1у ТПг І1їе Рпе сіп Тук Уаії І1їе бек бек Меє Тук бек сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБПг АвБп о ТПпг біу бБег Агуд Аїа Гей Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе 340 345 350
А1а сіц «2105 75 «2115» 1248 «2125 ДНК «213» Ро1їувбіспіцют Євив-вішепве «4005 75 аєдеЕСтаєсе ассадасасс дае еєсадсд ассодаддса содддсддаєс адсдсссссс (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасассссд аддаадчаєсд дадсдсдддадс аддсдоаддає4949 120
Бассеєддоддад дсаєссоддає деЕдоадєддаса ддссссдаса ссссгтадсас сеЕссддсасд 180 чдссааєсдесду дссссрасаа ддаасасасс сЄсСсооаддасду дододадсдсає сассадесесс 240
ЕсЕСЕСєЧддуд дсаасоддеєдс аддеєасдсЯасє сссддсддса Ссаддесссд сассассаад Зоо чдчдаадедадеЕ єєессСсаста саєдасаєса содддддссда адсаададса сссаасддає 3З6о чЧЕадсдєсодд дссеЕдеЕдсЧає додедсдаєсс ддсаддсаєсд дсдаасасає счасеєссстд 420
ЧдасЕєсаєдеЕ ЄссЕдсдсЕеЕсС сабадссссс дсссдсаєда Ссаасдсдад сгсасссдасс 480 (516) Есдодсссесуд адасододссду барсдеЕдссс деЕСсасоуссду асессседас соуасаасаас 540 ааєдсдддеа ссаєсдссаа даасєдддса Ссасдаддса дсЕсдададді дасааєсдесс 60
ЕссасседдЕеЕ сододеЕсасаєс доадсаєсадад сессаєсдсса дсдссассддсє дасддсдадд9д4д94д 6бо
ЧдЕСсСсрасодд ЕЄЄдссдадде дсаадддвдад Сссоддасдда аадсдадсас садсдсдасс 720
Басеєсдасса сЕсассадда аасеєсддадс ссЕссадсддда адсадссдддда адесессасад 78о0 ссгддадаасє ддассссстає асаадсессс асдаддадад даассасаад ссрдссстас 840 садддсасса Сдсаааєтас сссссааєсу ддсассдеЕдс Єсасстассс ааєсадедсье 900 седсасдссд дадсддасса сассадсдєс дадасадсаа ассесдддаас єсаєдгаєса 960
Єссааєсааса сассаддада адсбаєсссс аддсааєстас ссдЕСсадсад сеЕЕСадсевд 1020 ссддсрасса асасеєдсааа єддддсоддсес ЕдддссоддЕд ссааєдсааа Єдаддадссевд 1080 чдсддссддба сЕСЧдадсесе аассаасдудд дадсстаєса аассеєсаєса садсааєдес 1140 сЕсссасаса сессаассас єссдсаддає саддаєсаєс адссдсссдє саєсааассяе 1200 саєвасаааа асаєсссеЕєда асеЕсдеЕсСсає сЕЄСсСєддавєє доассаась 1248 «2105 76 «211» 416 «212» Білок «213» Ро1їувбіспіцют Євив-вішепве «4005 76
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уа1і бек Уа1і І1е сі1у сС1у ТП б1у У 1 в) 10 15 зек Аїа РібПе бек Туг АБп Аза б1у А1ї1а бек с1у Агуд Іїе Гей Агд Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у с1у Ткр Тук Іецп с1у с1у Іїе Агд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Тер ТПг с1у Гей Авр ТПг Рго бек ТПг Рбе сіу ТПг Аза Авп Уа1! с1Уу 50 з9 (210) зек Тут Мпув біц Тук ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє
Зо 85 90 95
Акуд Тк ТБкг пув біу бек б1іп Рбе Робе Ні Тук Меє ТПг бБег Тер СО1У 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Меє Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У 115 120 125
Уаї І1е с1у Акуд Нів сіу біц Нів І1їе Авр бек Іїей сб1у Рпе Меє Ріє 130 135 140
Тец Акуд бек Іїе Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец Аї1а Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1 ТПг Гей Авр 5бекг Іей 165 170 175
ТПЕ Авр Ап Авп Авп Аза біу ТПг І1е Аза пуб АБп Тгр А1а Гей Аг4д 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Меє бек бБег ТПг Тер бек Уа1і! ТПг бек с1У 195 200 205
Іїе сій Гей Туг А1їа бек Уаії ТпПк Уаії ТБг Аїа сіу Уа1і Ркго ТіПг Уаї 210 215 220
А1їа сій Уаії біп сб1у б1п Рпе сіу Тгр Гув Уаї бек ТПг Бек Аїа ТЕГ 225 230 235 240
Тук Бек ТПг ТПг Тук біп біц ТБг Агуд бег Гец біп Тер бій сіп 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тгр І1їе Бек Іїе сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у ТБЕг І1е бек Іїец Рго Туг біп б1у ТПпг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 сСіп бек с1у ТПпг Уаії Робе ТПг Туг Рго І1е Бек Аїа Гей Туг Аїа щЩ1У 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг бек Уа1і сіц Іїе Уаі1 Авп Гец сіу ТПг Тук Уаї 5ег 305 310 315 320 век Авп АвБп о І1е бек б1у бій Аїа І1е Рго Агкд сіп Гей Рго Уа1і1 5ег 60 325 330 335 зек РПе бек Іец Рго Азї1а ТПг АБп І1е Аза АБп сС1у Аза Аїа Тер Аї1а
340 345 350 б1у А1ї1а АБп Аза Ап сіу Аза еп Аза Аїа сіу ТПг Агуд Аза Іец І1е 355 360 365
Ап осіу біц Рго І1е Гпув Рго Нів Туг Бек Авп Уаії Гей Рго Нів ТЕПг 370 375 380
Тецп ТП ТПг Рго біп Авр біп Авр Нів біп Гей бек Уаї І1е Гув5 Рго 385 390 395 400
Нів Тук Ппув Авп І1е Гец біц Гей Уаї Нів Гец Іецй Авр Тгр Рго ТПг 405 410 415 «2105 177 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Ро1їувбіспіцют Євив-вішепве «4005 7177 аєдеЕСтаєсе ассадасасс дае еєсадсд ассодаддса содддсддаєс адсдсссссс (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасассссд аддаадчаєсд дадсдсдддадс аддсдоаддає4949 120
Бассеєддоддад дсаєссоддає деЕдоадєддаса ддссссдаса ссссгтадсас сеЕссддсасд 180 чдссааєсдесду дссссрасаа ддаасасасс сЕСсСдаддасдуд доодадсдсає сассадесесс 240
ЕсЕСЕСєЧддуд дсаасоддеєдс аддеєасдсЯасє сссддсддса Ссаддесссд сассассаад Зоо чдчдаадедадеЕ єєессСсаста саєдасаєса содддддссда адсаададса сссаасддає 3З6о чЧЕадсдєсодд дссеЕдеЕдсЯаєЄ доадеЕдсдаєсс ддсаддсаєсд дсдаасасає сзасєсссстд 420
ЧдасЕєсаєдеЕ ЄссЕдсдсЕеЕсС сабадссссс дсссдсаєда Ссаасдсдад сгсасссдасс 480
Есдодсссесуд адасододссду барсдеЕдссс деЕСсасоуссду асессседас соуасаасаас 540 ааєдсдддеа ссаєсдссаа даасєдддса Ссасдаддса дсЕсдададді дасааєсдесс 60
ЕссасседдЕеЕ соддеЕсасаєс додадсасадад сестаєдсса дсдеєсассає дасоддсод9д9ад 6бо
ЧдЕСсСсрасодд ЕЄЄдссдадде дсаадддвдад Сссоддасдда аадсдадсас садсдсдасс 720
Басеєсдасса сЕсассадда аасеєсддадс ссЕссадсддда адсадссдддда адесессасад 78о0
Зо ссЕддачаає ддаєссстає асаадсессс асдаддадад даассаєаад сссдссстас 840 садддсасса Сдсаааєссас сссссааєсуд ддсаседсдеЕ ссасстассс аассадесдсе 900 седсасдссд дадсддасса сассадсдєс дадасадсаа ассесдддаас єсаєдгаєса 960
Єссааєсааса сассаддада адсбаєсссс аддсааєстас ссдЕСсадсад сеЕЕСадсевд 1020 ссддсрасса асасеєдсааа єддддсоддсс ЕдддссоддЕд ссааєдсааа Єдаддадссевд 1080 дсддссддба сеЕСсСдадсеЕсеЕ ааєсаасдад дадсстаєса аассссаєса садсааєдеЕс 1140 сеЕєссасаса сессаассас Ессдсаддає саддаєсаєс адссдесссдс саєсааасся 1200 саєвасаааа асаєссесєда єддддасаає асеааєсаєс адссссадсс ссадссссад 1260 ччадеЕдЧдЕсда аададсдрас асЕсєдесдсьс садасеЕсдеЕс сасєсеЕєсьд асеЕддссаас 1320
ЄЕааєєсааєд баєсєдаааєаа аадд 1344 «2105 78 «2115» 430 «212» Білок «213» Ро1їувбіспіцют Євив-вішепве «4005 7Я18
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Уа1і бек Уа1і І1е сі1у сС1у ТП б1у У 1 в) 10 15 зек Аїа РібПе бек Туг АБп Аза б1у А1ї1а бек с1у Агуд Іїе Гей Агд Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у с1у Ткр Тук Іецп с1у с1у Іїе Агд Уа1і1 Тгр 35 40 45
ТЕр ТпПк с1іу Гец Авр ТПг Рго бек ТПг Роре б1у ТПпг Аза Авп Уаі1і Щ1У 50 з9 (210)
Ззек Тук Мпув бій Тук ТПг Рпе бій Авр с1іу бій Агуд чІ1е ТПг бек Ієцй 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сі1у ТПг Агуд бек сі1у с1у Іїе Акд Ріє 85 90 95
Акуд Тк ТБкг пув біу бек б1іп Рбе Робе Ні Тук Меє ТПг бБег Тер СО1У 60 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Меє Авр Уаі Аїа бек сіу Гей Сув Уаі с1У
115 120 125
Ууаї Іе с1у Акуд Нів сіу біц Нів Іїе Авр бБег Іец б1у Рпе Меє РБПе 130 135 140
Тец Акуд бек Іїе Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец Аї1а Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1 ТПг Гей Авр 5бекг Іей 165 170 175
ТПЕ Авр Ап Авп Авп Аза біу ТПг І1е Аза пуб АБп Тгр А1а Гей Аг4д 180 185 190 сіу бек Акд біц Уа1і ТПг Мес бек бек ТПг Тгр бек Уа1і ТПг бек Щ1У 195 200 205
І1Іе сбіц Гец Туг Аза бек Уаі ТПг Уаі! ТПпг Аза сіу Уа1 Рго ТПг Уаї 210 215 220
А1їа сій Уаії біп сб1у б1п Рпе сіу Тгр Гув Уаї бек ТПг Бек Аїа ТЕГ 225 230 235 240
Тук Бек ТПг ТПг Тук біп біц ТБг Агуд бег Гец біп Тер бій сіп 5ег 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тгр І1їе Бек Іїе сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Агуд с1іу ТВбг Іїе бек Гей Рго Тук сіп с1іу ТПг Месє сбіп І1е ТБбг Іеєцй 275 280 285 біп бек сбі1у ТПг Уаі Рпе ТпПг Туг Рго Іїе Бек Аза Гей Туг Аїа 01Уу 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг бек Уа1і сіц Іїе Уаі1 Авп Гец сіу ТПг Тук Уаї 5ег 305 310 315 320 век Авп АвБп о І1е бек б1у бій Аїа І1е Рго Агкд сіп Гей Рго Уа1і1 5ег 325 330 335 зек РПе бек Іец Рго Азї1а ТПг АБп І1е Аза АБп сС1у Аза Аїа Тер Аї1а 340 345 350
Зо с1у Аїа АБп Аза Ап сіу Аїа їеш Аїа А1їа сіу ТПг Акуд Азїа Гей Те 355 360 365
Ап осіу біц Рго І1е Гпув Рго Нів Туг Бек Авп Уаії Гей Рго Нів ТЕПг 370 375 380
Тецп ТП ТПг Рго біп Авр біп Авр Нів біп Гей бек Уаї І1е Гув5 Рго 385 390 395 400
Нів Тук Ппув Авп І1е Гец Авр с1іу Авр Авп ТПг АвБп Тук біп Рго сіп 405 410 415
Рго біп Рго біп бі1у Уаі Уаі біц бій Агкуд ТП Гей Уаі1ї Іец 420 425 430 «2105 179 «2115 1242 «2125 ДНК «213» Рахуаі1ї1їа Ге)еепвів «4005 79 аєдеЕСтаєсеє аєсадасасс саєєєсадед ассодаддса содддсддаєс адсесесссссс (216)
Басааєдсад дсодсдадсодд дсоасассссд аддаачаєсд дадсдсдддадс даддсдаддаддавс 49 120
Бассеєддоддад дсаєссоддає деЕдоадєддаса ддссссдаса ссссгтадсас сеЕссддсасд 180 чдссааєсдесду дссссрасаа ддаасасасс сЕСсСдадчдасу доодадсдсає сассадесесс 240
ЕсЕСЕСєЧддуд дсаасоддеєдс аддеєасдсЯасє сссддсддса Ссаддесссд сассассаад Зоо чдчдаадеєдадеЕ єєессСсаста саєдасаєса содддддссда аасаададса сссааєссзчає 3З6о чЧЕадсддсдд дссеЕдеЕдсЯаєЄ доадедсдаєсс ддсаддсаєсд дсдаасасає сзасєсссстд 420
ЧдасЕєсаєдеЕ ЄссЕдсодсЕСсС саєадсдссс дсссдсаєда Ссаасдсдад сгсасссдасс 480
Есдодсссесуд адасододссду барсдеЕдссс деЕСсасоуссду асессседас соудасадсаас 540 ааєдсаддеєа ссаєсєссаа даасєдддса Ссдсдаддса дсЕсдададді дасчдаєсдесс 60
ЕссасседдЕеЕ соддеЕсасаєс додадсасадад седраєдсса дсдєдассдє дасоддс9д9а9д 6бо
ЧдЕСсСсрасодд ЕЄЄдссдададе дсаадчдддад Сссоддаєсдда дадсдадсас садсдсдасс 720
Басеєсдасса сеЕсасасоддда аасеєсдсасдд ссЕссадсддуда аасадссдда адесдесасад 78о0 (516) ссЕддачадЕ ддаєсссеЕсс асаадсессд асдаддадад дааасаєаад ссеЕдссстас 840 садддсасса Сдсааассас сссдсааєсдуд ддсаседесдеЕ єсасстассс аассадесдсе 900 седсасдссд дадсддасса сассаасуєє дадасадсаа ассгсдддаас ЄЕЕЕсдгадса 960
Ессааєсааса сассадссду адааєсваєс сссадудсаас ссаєсадсеЕ дссддсоддсе 1020 асбасраава сеааєсдсааа Еддддсседуд асеааєдсад доддссЕєддс содргассась 1080 сдадсеЕднаа Есаасдадда асссаєсааа ссеЕсаєсаса ссадеааєса ддаєсаєсад 1140 сЕДдЕСЕДдДЕсСа єсааассяєса Єсасааааає асаааєсаєсс аддаєдодда саасастасе 1200 баєсадсссс адддадсддЕ сдаададсудс Ссасесвдесь се 1242 «2105 80 «211» 414 «212» Білок «213» Рахуаі1ї1їа Ге)еепвів «4005 80
Меє бек Іїе Тук біп ТПг Рго Іїе Бек Уа1і І1е сі1іу сС1у ТП б1у У 1 в) 10 15 зек Аїа РібПе бек Туг АБп Аїа сіу Аїа бек с1іу Агуд І1е Іецй Агд Гу
І1е сі1у Уаї Тгр А1ї1а с1у с1у Ткр Тук Іецп с1у с1у Іїе Агд Уа1і1 Тгр 20 Тер ТПг с1у Гей Авр ТПг Рго бек ТПг Ропе сіу ТПг Аза Авп Уаі 1У бо зек Тут Мпув біц Тук ТПг Рпе біц Авр б1у бій Агуд І1е ТПг бек Гей 65 70 75 80 зек Гей Тгр б1у АвБп б1у Аї1а сіу ТПг Агуд бек сіу с1і1у І1е Агд РБПе 25 85 90 95
Акуд Тк ТБкг пув біу бек б1іп Рбе Робе Ні Тук Меє ТПг бБег Тер СО1У 100 105 110
Те гув біп сій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аїа Аїа сіу Гей Сув Уаі с01У 115 120 125
Зо Уаї І1е с1у Акуд Нів сіу біц Нів І1їе Авр бек Іїей сб1у Рпе Меє Ріє 130 135 140
Тец Агкуд бек Іїе Аза Бек Аза Акуд Меє Іїе Авп Уа1 бек Тукг Рго ТЕПг 145 150 155 160
Тец Аї1а Гей сій ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго Уа1 ТПг Гей Авр 5бекг Іей
З5 165 170 175
ТПЕ Авр Бек Авп Авп Аза біу ТПг Іїе бек пув АвБп Тгр А1а Гей Аг4д 180 185 190 біу век Акуд сій Уа1і ТПг Меє бек бБег ТПг Тер бек Уа1і! ТПг бек с1У 195 200 205 40 Іїе сій Гей Туг А1їа бек Уаії ТПк Уаії ТБг Аїа сіу Уа1і Ркго ТіПг Уаї 210 215 220
А1їа сій Уаії біп сб1у б1п Рпе сіу Тгр Акуд Уаії бек ТПг Бек Аїа ТЕГ 225 230 235 240
Тук Бек ТПг ТПг Нів ТПг біц ТБг Агуд ТБг Гец біп Тер бій сбіп 5ег 45 245 250 255 сі1у Маї Гей сіп Рго сбіу бій Тер Іїе Бек Гей сіп Аїа Гец ТПг Агд 260 265 270
Акуд с1у Авп І1е бек ІТецй Рго Туг біп б1у ТПпг Меє сіп І1е ТПг Ієц 275 280 285 50 сСіп бек с1у ТПпг Уаії Робе ТПг Туг Рго І1е Бек Аїа Гей Туг Аїа щЩ1У 290 295 300
Уаї Авр Тук ТПг Авп Уаії біц Іїе Уаі1і Авп Гец біу ТПг Рпе Уаї Аїа 305 310 315 320 век Авп АвБп І1е бек Аї1а с1у біц Роре І1е Рго Агуд сбіп Рго І1їе 5ег 55 325 330 335
Тец Рго Аї1а Аза ТПг ТПг Ап ТпПг Авп Аза Ап с1у Аза Тгр ТПг Авп 340 345 350
Аза сі1у Аїа Гецшц Аза б1у ТПг ТБг Агуд Аї1а Уаі І1е АБп бі бій Рго 355 3З6о 365 (516) Іїе Ппув Рко Нів Тук ТПг бек Авп сбіп Авр Нів сіп Гей бек Уаі1ї! І1е 370 375 380
Тпув Ркго Нів Туг Ппув Авп Іїе АБп І1е біп Авр с1у Авр АвБп ТПг Тс 385 390 395 400
Тук біп Ркго сбіп сіу Уаі Уаі сіц біц Агд бек ІТецп Уаї РПе 405 410 «2105 81 «2115 1059 «2125 ДНК «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 81 аєддсдсеЕдЕ аєсадасасс єЄдеЕЧдЕСТаєс ассодадддс ааддесдасас ассасессасе (216)
Баєдаєсада дсссдаасодд даачаєсаєд аддаачаєссд доадЕссдддас; Єддадсдадесдд 120 саассдсдєд дсасссдсає асдддеЕссст додсессдасуд асссаассас сЕсгсддсаса 180 десЕСЯддУдСсСЄ сЕсСаєааєда деасасасеєс дсодаєддасу адассаєсас садеЕседессс 240 гєЧдЕЧддддодса аєддеєдсадд басасдссссо ддадссаєсса дассссасас сссаасадда Зоо дасеЕСаєЄЕвЄ Єсссааааає дасчдєсссда ддсссааада сададсаєсс аассдаєсдвед 3З6о чсаєсдддеЕСсС ЄЕЄЕЧЯЕЧдЕеЕЧдодЧ даєсаєддада сддадссддаєд асдасаєсда сдясЕссд9д9аадд 420
БбЕСЕвсаєєсс баадаассає аасаєссдсс сгаєдаєса ардсаасста сссаассеєд 480
ЧдасЕсЄададуд аадседсаає СаєрссссдеЕс асассеєдасе сабасааєда соассаасаає 540 чдсаддеєасвта єсесСсаадад ЄсодасеЕссс сссддсадесс даасадесдас адсаєссадад 60
ЕсЕєддасодс єсасеєдсдддд дасададдса сасдссассуд Єдадсдссса адсадддаєсс 6бо ссЕсСссдссд сададдсдаа сододададтає ддаєддесає єдадсасаас аддаадстає 720 дсаассассс аадаададад ссдсасссста адссддаасс аасссддаас сссддадсса 78о0 чаддсааєсддда єЕсСссассса адссассасе сдаададдаа ссабаасаєс ассстассаа 840 чддаассаєдуд адаєсасссеє асадеЕСсСєддс ассаадеЕссс аасассссає асссессаса 900
Басаседдеєд єддаєсасас бадеЕдессдас асадессадса сСсодаєссад адсаєссдаає 960 саадсєаадуд Есдаадссас Єаасаааааа дсЕсЄсадаад дадаєссааа ЄдЕССадссе 1020 адсааадаад ЄЕсаадааєсуд сааасеєсста басаєсеєдаа 1059
Зо «2105 82 «2115 353 «212» Білок «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 82
Меє Аїа гей Тук біп ТПг Рго Уа1і бек Іїе І1е сіу с1у бі1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
ТПг Бек Рпе ТПг Тукг Авр біп бек Рго АвБп сіу Ппув Іїе Меє Агд ув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд сС1у Іїе Агд І1е Тгр 35 40 45
Уаї бек с1у Бек Авр Авр Рго ТПг ТПг Рпе б1у ТПг Аза Бек с1іу б5ег 50 з9 (210)
ТУук Авп обіц Туг ТПг Рпе Аза АвБр сіу бій ТПг І1е ТПг Бек Гей 5ег 65 70 75 80
Тец Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд бек біу Аї1а І1е Агкд Рпе Туг 85 90 95
ТПг Бек ТПг сіу сіу бек Рбе Рбе Рго пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110
Тпув ТпПгЕ бій Тук Рго Іїе Авр Уа1і Аїа бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє с1у Агуд Аїа с1іу Авр Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу РпПе Іецп РПе Гей 130 135 140
Агуд ТпПг о Іїе ТБг б5ег Аза Акуд Меє Іїе Авп Уаї! ТПг Тук Рго Тібг Іецй 145 150 155 160 с1у теп бій сіш Аза Аїа Іїе І1їе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп 165 170 175
Авр Аза Авп АвБп Аза б1і1у ТПг І1їе бек пуб бек Тгр ТПг Рпе Бех 0щ1У 60 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг Уаї бек біц бек Тер ТПг Гей ТПг Аза с1у Те
195 200 205 бі Маї Нів Азїа ТПг Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Гец Уаї А1а 210 215 220 бі Маії АвБп сіу бі Тук с1у Тер Бек Гей бек ТПг ТПг сі1у бек Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Іец бек Тгр АБп біп Бех Щ1У 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1е бек І1е сбіп Аїа ТПг ТПг Агуд Агд 260 265 270 сіу ТПг І1е ТПг Гей Рго Туг біп біу ТПг Меє сій І1е ТПг Іец сіп 275 280 285 зек сб1у ТПг Гуз Рпе біп Туг Рго І1е бек бек ТПг Туг ТПг сі1у Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е Уа! бек І1е с1у бек Агуд Уа1і Гей Авп 305 310 315 320 біп А1ї1а Гпув Уаі біш Аза ТПг Авп о Гпув пув Аїа Гей сбіц с1у АБр Рго 325 330 335
Ап оУаі1! сбіп Ркго бек Гпув бій Уаії біп б1п Сув Ппув Гей Гей Туг І1е 340 345 350 січ «2105 83 «2115 1059 «2125 ДНК «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 83 аєддсдсеЕдЕ аєсадасасс ЄдеЕЧдЕСТаєє аєссодаддаддс ааддсдасас ассасессасе (216)
Зо баєдчаєссада дсссдаасод даадаєсаєудд адддаачассо додЕсСсдодоас гддсвадес до 120 саассдсдєд дсасссдсає асдддеЕссст додсессдасуд асссаассас сЕсгсддсаса 180 дессЕСЯОдУдсСЕ сЕгаєааєда деаєсасассс дсодаєсддсдд адассаєсас садесссдесс 240 гєЧдЕЧддддодса аєддеєдсадд басасдсссс ддадссаєсса дассссасас сссаасадда Зоо дасеЕСаєЄЕвЄ Єсссааааає дасдєсссда дасссааада сададсаєсс аассдаєсдвед 3З6о чсаєсдоддЕС ЕЕСсСЯєЧосСодоа даєсаєддада садседоааєд асдасаєєда сасеЕгсєдоа9а 420
БбЕСЕвсаєєсс баадаассає аасаєстєдсеЕ счдраєдаєса ардсаасста сссаассеєд 480 чдасЕсададуд аадсеєдсаає баєссссдссасасессдаєсс сасасааєсда сдссааєсааєс 540 чдсаддеєасвта єсесСсаадад ЄсодасеЕссс сссддсадесс даасадесдас адсаєссадад 60
ЕсЕєддасодс єсаседсддуд даєсадчаддса сасдссассдя СдадедеЕсса адсаддадаєс 6бо ссЕССвЧЧЄсУд сададдедаа соодачадчеає ддаєддсєсає єдчадсасаас аддаадстсає 720 дсаассассс аадаададад ссдсасссста адссддаасс аасссддаас сссддадсса 78о0 чадсааєдда єсЕесСсаєсса адсбассасс сдаададдаа ссасаасасс ассстассаа 840 чддаассаєдуда адаєсасссяє асадсссддс ассаадесссс аасассссає ассссстаса 900
Басаседдеєд єддаєсасас бадеЕдессдас асадессадса сСсодаєссад адсаєссдаає 960 саадсєаадд Есдаадссас баасаааага дсЕсЄсадаад дадаєссааа ЄдЕсСсадссе 1020 адсааадаад ЄЕсаадааєсуд сааасеєсста багаєсдаа 1059 «2105 84 «2115 353 «212» Білок «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 84
Меє Аїа гей Тук біп ТПг Рго Уа1і бек Іїе І1е сіу с1у бі1іп С1у щЩУ 1 в) 10 15
ТПг Бек Рпе ТПг Тукг Авр біп бек Рго Авп о біу Гув І1е Меє Агд Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд сС1у Іїе Агд І1е Тгр 35 40 45 (516) Уа1ї бек сбіу Бек Авр Авр Рго ТПг ТПг Рпе с1іу ТПг Аза бек с1у бег 50 з9 (210)
Тук Авп бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц ТБПг І1е ТПг бек Іеци 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа с1іу ТПг Агуд Бек с1іу Аїа І1е Агкд Рое Туг 85 90 95
ТПг Бек ТпПк с1у біу Бек Рре Рпе Рго Ппув Меє ТПг бек Тгр Авр Іец 100 105 110
Тпув ТпПгЕ бій Тук Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Меє с1у Агуд Аїа с1іу Авр Авр Іїе Авр Аїа Гец сіу РпПе Іецп РПе Гей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е ТБг б5ег Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уа! ТПг Тук Рго ТПг Ієц 145 150 155 160 с1у теп бій сіш Аза Аїа Іїе І1їе Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп 165 170 175
Авр Аза Авп АвБп Аза с1іу ТПг І1їе бек Пув бек Тгр ТПг Рпе бек 01Уу 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг Уаї бек біц бек Тер ТПг Гей ТПг Аза с1у Те 195 200 205 бі Маї Нів Азїа ТПг Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Гец Уаї А1а 210 215 220 бі Маії АвБп сіу бі Тук с1у Тер Бек Гей бек ТПг ТПг сі1у бек Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Іец бек Тгр АБп біп Бех Щ1У 245 250 255
ТПЕ Ггецп бій Рго сіу сбіп Тгр І1е бек Іїе сбіп Аїа ТПг ТП Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Ту сбіп сіу ТП Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек сб1у ТПг Гуз Рпе біп Туг Рго І1е бек бек ТПг Туг ТПг сі1у Уаї
Зо 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е Уа! бек І1е с1у бек Агуд Уа1і Гей Авп 305 310 315 320 біп А1ї1а Гпув Уаі біш Аза ТПг Авп о Гпув пув Аїа Гей сбіц с1у АБр Рго 325 330 335
Авп оУаії сіп Ркго Бек Ппув бій Уаії сіп біц Сув Ппув Гечп Гей Тук І1е 340 345 350 січ «2105 85 «2115 1059 «2125 ДНК «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 85 аєддсдсеЕдЕ аєсадасасс єдЕЧдваєдеЕс аєсоддадддс ааддсддсаа сссдЕсссаса (216)
Баєдаєсада дсаддаасоад даадаєсссд аддаачассд деЕдсдсдддадс; сддавсдадсда 120 саассдсдсд дсасссодддає асддаєдеЕсе ддссссдавра дсссадссас сеЕссддсаса 180 дессЕСЯОдДУдсСЕ сЕгаєааєда деавасассс дсадасддесд адсдсаєсас ссср десс 240
ЕсЯдЕдддоса аєддеЕдссоод Сасасуаєсєссе додддсаєсєса дасеєссасас сасдассдва Зоо дасЕСАДЄЕЄЕЕЄ ЄЄдсвєаааає дасаєсссда ддсссасааа ссдадсаєсс аассзчаєсдаед 3З6о чдсаєсЕддеєс ЄЄЕЧЕЧДЕеЕєЯд9 даєсассдддчда сдадссааєсд Ссдасаєсда сссаєссдвдає 420
ЕЕСаєдеЕєсс єЄсСдаассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадесса сссаасаєсд 480 чЧдасЕсададс аадсеєддаає ЄдЕеЕЧдсссдЕссС асддсссдасс сддсасаасда Ссссаасаає 540 чдсаддсасаа ЕЕСсСсСсаадаа СЕдддасссеєс сСссоодаадсс даасадедас аасаєсаєся 60
Есаєддасдс ЄсасеЕєсєсодддда саєсададдса саєдстасьд єдадедеЕсса адсододдоадаєс 6бо ссесЕсоддссдЯ садаадсдад содададеЕсс ддаєддеєсає гаадедеєсас аддаадстас 720 асаассассс аададдадад Єсдаасассс асдсддаасс аасссддаас сссададсса 78о0 чадсааєдда єсЕЄсСссеЕсСса адсдассасс сдсададдсра ссассассеєс ассстаєсаа 840 (516) чоадассаєдуд ачасаасссе асадсссдда аседсаєсєсєс аагсассссає сеЕСсСЕЕСТаєд 900
БаєдссоддеЕд Єддаєсаєвас бадедссдас ассассааса ссддаассад адсаєссдаає 960 сдддєЕєдада ссдаадссає єЄдаєсаасаа дсссдєдаад дадассадаа ЄдЕССсСаассе 1020 адсааадасд Єссаддааєсуд сааасеєссеєс Есгасеєдає 1059 «2105 86 «2115 353 «212» Білок «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 86
Меє Аї1а Гей Тук сбіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 5 10 15
АвпобБек РПе ТПг Туг Авр біп бег Агд Авп обіу Гув Уаї Гей Агд Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє бек с1іу Бек Авр бек Рго Аїа ТПг Рбе сіу ТПг Аза бек с1у 5бег 50 55 бо
Тук Авп бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тем Тер б1у АвБп с1у Аїа сіу ТБг Агуд бек сіу с1у І1е Агуд РоПе Туг 85 90 95
ТПг Тпг ТБкг сіу сіу бек Роре Рпе Аїа пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Тец б1у Акуд Аза Авп Уаі Авр Іїе Авр Бек Гей сіу РіПе Меєсє РПе Іей 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160
Зо с1у Гей біц біп Аїа с1іу І1їе Уа1і Рго Уаі ТП Гей Авр бек Тукг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр ТПг Гей ТПг Бек с1у Те
З5 195 200 205 бі Аза Нів Азїа ТПг Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Гец Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сіу бій Рпе сіу Тер Бек Гей бек Уа1! ТПг сіу бек Туг 225 230 235 240
ТПЕ ТрПг Тпс о біп бій бі бек Агуд Тпг Гей ТБПг Тгр Авп о біп бек о1Уу 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Ту сбіп сіу ТП Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек с1і1у ТПг Уаії Рре біп Туг Рго І1е бек бек Меє Туг Аїа сі1у Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБг АвБп о Тпг б1у ТПпг Агуд Аїа Гей Авп 305 310 315 320
Агуд Уаї сій ТБг бі Аза І1їе Авр сіп сбіп Аза Агд бій с1у Авр сіп 325 330 335
Ап оУа1! сбіп Ркго бек Гув Авр Уаі біп б1цп Сув Ппув Гей Гей Рпе ТЕГ 340 345 350
Авр «2105 87 «211» 1098 «212» ДНК (516) «213» Адіаотогрпа штеуепіапа
«4005 87 аєддсдсеЕдЕ аєсадасасс саєдеаєсдсс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасссасс (216)
Басдаєсада дсадааасодд дадчаєсссд содадчаєсда доадсЕдсдддадс ддаддсдадесдд 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 дссасддусєсс сЕсСасадсда агасассссс дсодаєсдоасду адсдсаєсас ссуасстуєсс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседа басасдссса ддаддсаєса дассссасас сасаасадда Зоо чЯдЕЄСЕСЕсСЕ Єссаєаааає дасаєсссда ддсссасааа ссдадсаєсс аассдасдаєд 3З6о чдсаєсЕдадєс ЄЕЄЕЧЕЧЄеЕЧЧодЧ даєсаєддада сдадссааєсдд Єсдаєсдсдда Єссаєєсоваає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480
ЧдасЕсададс аадссоудаає сарссссдеЕє асассеєдчасеє ссеЕєсааєда сеЕссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
Есаєддеєсес єсасеєсадуд даєсададаса саєдсаадсд Сдадсдесдса адсадддаєсс 6бо сссаєсддссд садаадсдад Сддададтає ддасдоаєстд гаадедсаєс єдодасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссса дсасдддасс аасссддаас сстсасадссєо 78о0 чаддсааєддда єЄсСсасссса адссассасе сдаададдаа ссассасаєє ассссвесаа 840 дсаассаєдуда аааєсасеЕсєе дсадеЕСсдда асчассєссс аасаєсдссає ссссссааєд 900
БасеЕссддеЕд Єддаєсаєас єадедсддає асаассааса ссддаадсад адсаєссадає 960 саддеЕєдадуд Есаааассас Єдадсаасаа дЕЕдааддддд Есчдаддаєса аааєдсасаа 1020 ссбааєааад аадстааада деЕдсасассс сеЕсЕеЕсдсвд ааддсдсадсес Єгасссагас 1080 чаєдедссад аєсаєдсье 1098 «2105 88 «2115 360 «212» Білок «213» Адіаотокгріа шеуепіапа «4005 88
Меє Аїа гей Тук біп ТПг Рго Уаі Тук Уаі І1е с1у сС1у біп 01у щу 1 в) 10 15
Зо Авп о Аїа Рпе ТПг Туг Авр біп бек Агд Авп б1іу Агд чІ1е Гей Агд Агд 20 25 30
І1Іе сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тер сбіп гей Агуд с1іу І1е Агд Уа1ї! Тгр
Меє ТпПг с1у ТПг Авр ТБбг Рго Аза ТПг Рбе сіу ТПг Аза ТПпгЕ с1у 5ег
З5 50 з9 (210)
Тук Бек бій Тук ТПг Робе Азї1а АвБр с1у бій Агуд І1е ТБПг Агд Гец 5ег 65 70 75 80
Тецп Тер б1у АБп с1у Аїа сіу ТПг Агуд Бек сіу с1у І1їе Акд Рое Туг 85 90 95 40 ТПЕ ТрПг Тпс о сіу біу бек Рпе Рпе Нів Ппув Меє ТпПг бек Тгр 01Уу Гецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 115 120 125
Мен с1у Агуд Аїа Авп Уаі1і Авр Уаії Авр бек Гец сіу Уаії Іецп РПе Гей 45 130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1і1у Іїе Іїе Рго Уаі ТПг Гей Авр бек Робе Авп 165 170 175
Авр бек Авп АвБп Азїа с1у ТПг І1їе бек Пув АвБп о Тгр ТПг Рпе бек 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1ї1е бек бБег бек Тгр бек Гей ТПг бек с1у Те 195 200 205 бі ТпЕ Нів Аза бек Уа1 бек Уаі сбіп Аїа сіу Іїе Рго Меєс Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сі1у бі Тук с1у Тер Бек Уа1і Бек Уа1 бек с1у ТПг Туг 225 230 235 240
Аза ТПг ТБг біп біц біц бек Агуд Тс Те Азї1а Тгр АвБр сбіп Бех щЩ1У 245 250 255 (516) ТП Гецп біп Рго сбіу сбіп Тгр І1е Бек Гей сбіп Аїа ТПг ТП Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Рпе сіп Аза ТПг Меє сій І1е ТБПг Іец сіп 275 280 285 зек с1іу ТПг І1е Рпе біп Туг Аза І1е бек бек Меє Тукг бек с1іу Уаї 290 295 300
Авр Тук ТПг бек Уаії Авр І1е ТПг Ав5п ТБг сбіу Бек Агуд Аїа Іецй Авр 305 310 315 320 біп УМаі бій Уаії пув ТПг ТбПкг сій біп біп Уа1 сій с1і1у Уаї б1іц Авр 325 330 335 біп Авп о Уаії сбіп Рго Авп пув сі Аза Ппув бій Сув ТБг Гец Іецй РБе 340 345 350
Аза сіц с1у Аза Аза Тук Рго Туг 355 360 «2105 89 «2115 1059 «2125 ДНК «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 89 асдоасдсеЕдс аєсадасасс сСодогасасдеЕс аєсоодадддс ааддеєддсаа сЕСдЕєсСаса (216)
Баєдаєсада дсаддаасодд дааддссевд аддаачаєєд чЕЧ9дЕЧЯдЕЧдодс гдЧавеЕЧадчедво 120 саассдсдсд дсасссодддає асддаєдеЕсе ддссссдавра дсссадссас сеЕссддсаса 180 дессЕСЯдУдсСЕ сЕсбаєааєда десаєсасаєссс дсадаєсддаєд адсдсаєсас сс єсессдеЕсс 240 гЕЧдЕЧЧоддоаса аєддеЕдседа басасЯдсссо дддддсаєса дассссасас сасдассода Зоо дасЕСВАЕЕЕСЄ Еєдстаааає дасассссоддд доаосссасааа ссдадсаєсс аассоаєсоатд 3З6о чдсаєсЕддеєс ЄЄЕЧЕЧДЕеЕєЯд9 даєсассдддчда сдадссааєсд Ссдасаєсда сссаєссдвдає 420
ЕЕСаєдеЕєсс єЄсСдаассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадесса сссаасаєсд 480 чЧдасЕсададс аадсеєддаає ЄдЕеЕдсСсСЕДЧЕС асоаосеЕсдаєсс сдасбасаасда Ссссаасаає 540 чдсаддеєасаа ЄЄЄСсСсСаадаа ЄєОддасеЕссссссддаадесс даасадсдас аасаєсаєсе 60
Зо Есаєддасоудс єсасеЕєсдду саєбададдса саєдстассод ЄдадедеЕєса адсддоадаєс 6бо ссесеЕсоддссдЯ садаадсдад содададеЕсєє ддаєддеєсає гаадсдессас аддаадстас 720 асаассассс аададдадад Єсдаасассс асдсддаасс аасссддаас сссададсса 78о0 чадсааєдда єсЕесСссеЕсСса адсдассасс сдсададдсра ссассасссєс ассстаєссаа 840 чадассаєдуд адаєаасеєсе асадеЕСсдда ассдсассєсс аасассссає сессесстаєд 900 баєдссоддеЕд гддаєтасас садедеЕсдас ассассааса ссддаастад адсаєєдаає 960 сдддєЕєдада ссдаадссає єЄдаєсаасаа дсссдєдаад дадассадаа ЄдЕССсСаассе 1020 адсааадасд Єссаддааєд сааасеєссьс сЕсааєдає 1059 «2105 90 «2115 353 «212» Білок «213» Адіаоштогрпа шеуепіапа «4005 90
Меє Аї1а Гей Тук сбіп ТПг Рго Уаї Тук Уаії Іїе сСіу с1у сб1іп с1у У 1 в) 10 15
АвпобБек РПе ТПг Туг Авр біп бег Агд Авп обіу Гув Уаї Гей Агд Гув 20 25 30
І1е сі1у Уаї Тгр Аї1а с1у бій Тгр біп Те Агуд с1у Іїе Агуд Уа1і1 Тгр 35 40 45
Меє бек с1іу Бек Авр бек Рго Аїа ТПг Рбе сіу ТПг Аза бек с1у 5бег 50 з9 (210)
Тук Авп бій Тук ТПг Ррбе Аза Авр сіу біц Агд І1е ТПг Агд Іец 5ег 65 70 75 80
Тем Тер б1у АвБп с1у Аїа сіу ТБг Агуд бек сіу с1у І1е Агуд РоПе Туг 85 90 95
ТПг Тпг ТБкг сіу сіу бек Роре Рпе Аїа пуб Меє ТПг бек Тгр с1У Іецй 100 105 110 біп Тпг бій Тує Рго Іїе Авр Уаі Аза Бек сіу Гей Сув Уаї с1у І1е 60 115 120 125
Тец б1у Акуд Аза Авп Уаі Авр Іїе Авр Бек Гей сіу РіПе Меєсє РПе Іей
130 135 140
Акуд ТЕ І1е Азїа бек Азїа Агкуд Мес І1е АвБп Уаії бек Тук Рго ТПг Ієец 145 150 155 160 с1у тей бій сіп Аза с1іу Іїе Уаі Рго Уа1і ТПг Гей Авр бек Туг Авп 165 170 175
Авр Бек Авп АвБп Аза б1іу ТПг І1е бек Гув АБп Тгр ТПг Рпе Бех 01У 180 185 190 зек Агуд ТПг Уаі! ТПг І1е бек бек бек Тгр ТПг Гей ТПг Бек с1у Те 195 200 205 сі Азїа Ні Аза ТПг Уа1ї бек Уаі! сбіп Азї1а с1у І1їе Ркго Іецй Уаї А1а 210 215 220 бі Маї бек сіу бій Рпе сіу Тер Бек Гей бек Уа1! ТПг сіу бек Туг 225 230 235 240
ТПЕ ТпПкЕ Тбкг біп біц біц бек Агуд ТБг Іец ТПг Тер АБп о біп бБег б1Уу 245 250 255
ТПгЕ гейш бій Рго сіу біп Тгр І1їе бек Гец біп Аїа ТПг ТПг Агд Агд 260 265 270 бі1у ТПпг І1ї1е ТПг Гей Рго Туг біп сіу ТП Меє сій І1е ТПг Іс сіп 275 280 285 зек б1у ТбПг Маї Рпе сбіп Туг Рго І1їе бек бек Меє Тук Аїа сіу Уаї 290 295 300
Авр Тут ТПг бек Уаі Авр І1е ТБг АБп о ТПг б1у ТПпг Агуд Аза Гец Авп 305 310 315 320
Акуд Уа1 сіц ТБг біц Аза І1е АвБр біп бі1іп Аза Агуд бі о1у Авр сіп 325 330 335
Ап оУа1 сбіп Ркго бек Гув Авр Уаі біп б1іцп Сув ГПув Гей Гец Робе Авп 340 345 350
Авр
Зо «2105 91 «2115 1185 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 191 аєдсаасаєд дссеЕддссаа баєддаадса адсссссода Ссдадаадесс ссааєссеєста (216) аєддааддеєд дсаєсадаєда дадсаєсстєє дсдассаадс СсДЯдссддсдс Сдааддадає 120 дсЕєсСЕСАаЄЄ Єдссассасс єддададасдд сссадсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєдаає сдсЕддачас Едаачаєдса даддадсаєд седаєчасад сааадсссде 240
ЕсЕдсвадед єсаєддсссс ЕСсСЕддсдссссС асаддсддес ссодедддеЕс дсаасдуєсс Зоо
ЧдЕССсСЯЧдаддає ддассаасодд садддссаєсс ассаддаєсдс дедсссасад ддсссдоададд 3З6о асбраєсааад сдбассадає седдсссаса дассссдссс сссадассса Соддесдессссе 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасасдссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 сЕдЧчсдодддаа асочааєддуд сасеЕсдЕдсс додаєддаєсд адсседчадас дадссеєдоадве 540 чдчдааачеЕвесє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссесассс сдЕсдасдес 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕеЕЧдод стасасєсссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо гЕСЕЧдЧдЄсесС єсаассасає єдадсаддес дадсеєсасса асєдедаддаба Єссдаасессес 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есаєссасудс саадачасьсуд ддассєсадс суддаасаєда дсаддадсас гдадсоддаса 840
БЕддеєсСдаєса ссодєддаєсє басеєдсссає дсдадсаєса соддесдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда єсадеаєсдда сСдддадчаєссд дддсдасддда дсаєссссддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддададс ссадсссд4949 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєдда Єдаддаєдад аааєддсєдсес єСсСссЕСадсе аєдссдєдсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 1392 «2115 395 60 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє
«4005 192
Меє сбіп Тук с1у Ггеш Аза Авп Меє сі Аза бек Рго Іїеп І1е сій Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп бек ІГей Месє сій сіу с1у Іїе Авр бій бек Іїе Гей Аїа ТПг 20 25 30
Тїув ІТеп Уаї сС1у Аїа сбіц сіу Авр Аїа бек Нів Іецп Рго Рго Рго 1У 35 40 45 біц ТЕ Рго Бек бій Авр сіу Аїа с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц б5ег 50 з9 бо
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза АвБр Авр бек Гув Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі Меєсє Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу 85 90 95 зек біп Акуд бек Уаі Агуд с1іу Тер ТПг АБп б1іу Акуд Уа1ї І1е ТПг Агд 100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Тук бі1іп ІШе Тгр 115 120 125
Тецп ТПг Авр бек Аїа Рго біп ТПг Нів сіу Уаі Ркго б1у Авп бБег Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АвБп сіу Меє сіу ТПг Агуд Аїа сіу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей с1у бі1у Акуд Рре бек Тук сіу Меє бек Нів Тгр бек Гец 180 185 190
Акуд ТЕ Рго Туг Ркго Уаі Авр Уаії сіу Бек с1іу Іїе Гей Уаї сі1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей
Зо 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Аї1а бій Гей ТПг Авп Уаі Агуд Тукг Рго ТіПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Ап Авп обекг бек ТПг Рго Агуд Авр Тгр Авр Рпе бег Аг Авп 260 265 270
Меє бек Агуд Бек ТПг сій Агуд ТПг Тер бег І1е ТПг Уаї Авр Іец ТПг 275 280 285
Уаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї бек Аза сіу Робе Рго б1у І1е Аї1а Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПг ТпПкЕ бій ТБг бек біц Ні Авр Гей бег Тгр бек Уаі бек с1у Аг4д 325 330 335
Уаї біп Рго с1у Авр Уа! Уаї Авр Геш ТПг Аза Те ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гей Авп о І1е Рго Туг біц сіу ТБг Мес Уа! Уаї Агд Меє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТпкЕ с1іу ТБкг пув І1е АвБп Авр Авп бек ТЕГ 385 390 395 «2105 93 «211» 1185 «212» ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 193 (516) асдсаасаєд дсссддссаа Саєддаадса адссссссда ЄсдадаадеЕс ссааєсесста (216) аєддааддеєд дсаєадаєда дадсаєссєє дсдассєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 дсЕєсСЕСАаЄЄ Єдссассасс єддададасдд сссадсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсЕдсвадед єсасуддсессс єЕСсСЕдсдссссС асаддсддса ссодадеЕдддеЕс дсаасдуєсс Зоо
ЧдЕССсСЯЧдаддає ддассаасодд садддссаєсс ассаддаєсдс дедсссасад ддсссдоададд 3З6о асстаєсааад судсасаддає сеЕддсЕсСаса дассстдудсєс ссдадасеса ГоОдЕЧЕССсСЕ 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасассссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 седсддддаа асддаассдд сасссодрдсеЕ ддаєддаєсд адеЕссдадас садсеЕсдоадве 540 чдчдааачеЕвесє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссесассс сдЕсдасдес 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕЧод Єсасасєсссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо
ЄЕссСЕддЕвЕєсС єСсСаассасає Ссадсаддсесс дадсесасса аєдсдаддра Сссдасессе 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есаєсаасдс саададасед ддасеЕссадс сддаасаєда дсаддадсас Сдадсддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда єсадеаєсдда сСдддадчаєссд дддсдасддда дсаєссссддаа 960 асаасадада сусссддадса счдассєдадс Содадсочоєда дсдодачадс ссадсссд9дд 1020 чааєеєєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєда Єдаддаєдад аааєддеєдсесс ЕссесЕсадсе аєдссдедсдя сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 194 «2115 395 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 94
Меє сбіп Тук б1у Агуд Аїа Авп Меє сі Аза бек Рго Гец І1їе сій Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп бек Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30
Зо ув Гей УМаії с1у Аїа біц сб1у Авр Аїа Бек Нів Гей Рго Рго Рго с1Уу біц ТЕ Рго Бек бій Авр сіу Аїа с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц б5ег з9 (210)
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бек Гув Аїа Агд 35 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у сС1у ТПєЕ с01у ЩУ 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АБп о біу Акуд Уаії І1е ТБг Агд 100 105 110 40 Меє Акуд Уаії Тук Акуд Аїа Агуд с1у ТПг чІ1їе пув Аїа Туг Агд І1е Ткгр 115 120 125
Тецп ТПгЕ Авр бек с1у Рго бій ТПг Нів сбіу Уаії Ркго б1у Авп бБег Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 45 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АБп с1у Іїе сіу ТПг Агуд Аїа сіу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей сіу с1у Агкд РібПе бек Тук біу Меєс бек Нів Тер бек Іец 180 185 190 50 Агуд ТПг о Рго Туг Рго Маі Авр Уа1і сСіу бек с1у Іїе їеп Уаї с1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей 210 215 220
Ап оНів І1е біп біп Аї1а бій Гей ТПг Авп Уаі Агуд Тукг Рго ТіПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агуд Авр Тер Авр Рібе бег Агд Авп 260 265 270 (516) Меє бек Агуд бек ТПг бій Агуд ТБг Тер бек І1їе ТПг Уаї Авр Гей ТЕПг 275 280 285
Ууаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї бек Аїа б1у Рпе Рго с1у Іїе Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПЕ Трпг бій ТБг бек бі Ні Авр Гей бек Тгр бек Уаї бек с01у Агк4д 325 330 335
Ууаї біп Рго сбіу бій Рбе Уаї Авр Гей ТПг Аза Гец ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гей Авп о І1е Рго Туг біц бі1у ТБг Мес Уа! Уаї Агд Меє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТпкЕ с1іу ТБкг пув І1е АвБп Авр Авп бек ТЕГ 385 390 395 «2105 195 «2115 1185 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 95 аєдсаасаєд дссеЕддссаа басеєдаадса адсссссода Ссдадаадесс ссаадсесста (216) аєддааддсуд дсаєадаєда дадсаєссеєє дсдассєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 чдсаєсеЕсдед Єдссассасс єддададасдд сссадсдаддв асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєдаає сдсЕддачас Едаачаєдса даддадсаєд седаєчасад сааадсссде 240
ЕсЕдсвадед єсасуддсессс єЕСсСЕдсдссссС асаддсддса ссодадсдоддесс дсаасдуєсс Зоо
ЧдЕССсСЯЧдаддає ддассаасодд садддссаєсс ассаддаєсдс дедсссасад ддсссдоададд 3З6о асбраєсааад сдєбасаддає седдсссаса дассссддесс ссдадассса Соддесдессссе 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасассссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480
Зо сЕдЧчсдодддаа асоодчааєсоуд сасеЕсдсдсс додаєддаєсу адсседчадас садссеєдоаде 540 чдчдааачеЕвесє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссесассс сдЕсдасдес 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕЧод Єсасасєсссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо гЕСЕдЧдєсесС єсаассасає єсадсаддес дадсссасса аєдедаддадаєа Єссдаасессес 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есаєсаасус саадачасьсуд ддассєсадс суддаасаєда дсаддадсас гдадсоддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда єсадеаєсдда сСдддадчаєссд дддсдасддда дсаєссссддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддададс ссадсссд4949 1020 чааєеєєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєдда Єдаддаєдад аааєддсєдсес єСсСссЕСадсе аєдссдєдсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 96 «2115 395 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 96
Меє сбіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е бі Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп Аїа Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30
Тув ІТеп Уаї сС1у Аїа сбіц с1іу Авр Аїа бек Агд Уаї Рго Рго Рго Щ1У 35 40 45 бій ТБг Рго Бек бій Авр біу Аїа сіу пуб Авр Рго Рго АБп сій 5ег 50 з9 (210)
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бек Гув Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у сС1у ТПєЕ с01у ЩУ 60 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АБп о б1у Агкуд Уаї І1е ТБг Агд
100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Туг Агд Ше Тгр 115 120 125
Тецп ТПгЕ Авр бек с1у Рго бій ТПг Нів сіу Уаі Ркго б1у Авп бБег Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АБп с1у Іїе сі1іу ТПг Агуд Аїа сіу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей с1у бі1у Акуд Рре бек Тук сіу Меє бек Нів Тгр бек Гец 180 185 190
Акуд ТЕ Рго Туг Ркго Уаі Авр Уаї сіу Бек с1іу Іїе Гей Уаї сі1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей 210 215 220
Ап оНів І1е біп біп А1ї1а бій Гей ТПг Авп Уаі Агуд Тукг Рго ТіПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Ап Авп обекг бек ТПг Рго Агуд Авр Тгр Авр Рібе бег Агд Авп 260 265 270
Меє бек Агуд Бек ТПг сій Агуд ТПг Тер бег І1е ТПг Уаї Авр Іец ТПг 275 280 285
Ууаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї бек Аїа б1у Рпе Рго с1у Іїе Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПЕ ТпкЕ бій ТБг бек біц Ні Авр Гей бБег Тгр бек Уа1! бек с1у Агд 325 330 335
Зо Уаї біп Рго сіу бій Ррбе Уаії Авр Геш ТПг Аза Те ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гей Авп о І1е Рго Туг біц бі1у ТПг Мес Уа! Уаї Агд Меє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТпкЕ с1іу ТБкг пув І1е АБп АвБр Авп бек ТЕГ 385 390 395 «2105 397 «2115» 1188 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 597 асдсаасаєд дсссддссаа Сассдаадса адссссссда ЄсдадаадеЕс ссаадсесста (216) аєддааддсуд дсаєадаєда дадсаєссеєє дсдассєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 дсЕєсСЕСАаЄЄ Єдссассасс єддададасдд сссадсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсеЕдсвадеа деЕдеЕСасоддс сссеЕССдсдс сссасаддсд дсассоддедда деЕсасаасає Зоо
Ессдєссодад часддассаа соддсадддес ассассадда ЄдсодоєсєдЕСса саддодасссод 3З6о чадасваєса аадсдєасад даєсєддссс асадасссстд дсЕсссдадас Ссасодедсс 420 ссгдддааса дсдассссдс сдадсасасе Есссдсассу дададсдеєсе гбасаадаєта 480 асасеєдедодд дааасооадаає соддсасеєсЯє дседдаєсдда СсдадеЕссда дасдадсесд 540 чЧаєддваадЧдє ЄЄЄСсСаєаєдда саєдадссає сддссдссда даассссеєса ссседссдас 60 дЕСЧОДЯДЕЄСсСвд дсасссссдє додссасаюреє сеЕсааєдссо дадчаддаддс сдаєдсасас 6бо дасЕЄєсСЕддЄ єЄсСЕСсСаасса саєєсадсад дссдадссса ссааєдедад дсаєсссдвасе 720 сЕсддасссд асасддсадд бассдрассс асддсесстдуда агассесссу деЕссадааас 78о0 аасеєсаєсаа сдссаадада седоддасссс адссддааса Сдадсаддад сассдадсда4д 840 асаєддеєсда Єсассдєдда єсЕсассдесс сасдсдадса Ссасоддсдад ЄдсададеЕєес 900 (516) ссаддсаєсд сааасдєдчад ЕддЕсадває одаєддодача Єгдоддоасдас дддасаєстесс 960 чааасаасад адасдеєссда дсасдчасссд адссддадсд Сдадсдддад адсссадссєо 1020 ччачаєдеЕвд Єсдаєсссас Едсдсеєсассі соуудаседдаа сЕСЕсаасає Ессестгасдаа 1080 чабасчдаєдда ЄддЕЧдаддає дадаааєдує дссеєссеЕєсса дсваєдссує дсдеЕддаасс 1140 басададдсесс Єгадсвраврас сддсасаааа абааасдаса асесаась 1188 «2105 198 «2115» 396 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 98
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 5 10 15
Рпе сіп Аїа Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30 ув Гей УМаії с1у Аїа біц сб1у Авр Аїа Бек Нів Гей Рго Рго Рго с1Уу 35 40 45 біц ТЕ Рго Бек бій Авр сіу Аїа с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц б5ег 50 55 бо
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бБег пув Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек бек Уа! ТПг Аза Рго Іецй Агд Рпе І1е сСіу с1у ТПгЕ щу 85 90 95 бі1у бек біп Акуд Бек Уаі Агуд с1у Тер ТПг Авп с1у Акд Уаі ІШе ТПг 100 105 110
Агуд Меє Акуд Уа1! Туг Агд Аїа Агуд сіу ТБг І1їе пуз Аїа Туг Агкд І1є 115 120 125
ТЕр Гей ТПг Авр бек біу Рго біц ТБПг Ні б1у Уаї Рго с1у Авп 5ег 130 135 140
Авр Рпе Аїа біц Туг ТПг Рпе Агд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агуд Гей
Зо 145 150 155 160
ТПг гейш Тер с1у Авп біу І1е сіу ТБг Агуд Аїа с1у Тгр І1е сій Ріе 165 170 175 бі Тс бек Гей с1іу с1у Акуд Рпе бБег Тук сіу Меє бек Нів Тгр 5ег 180 185 190
Тем Агуд ТПЕ Рго Тук Рко Уаі Авр Уаї сіу бек сб1у Іїе Гей Уа1 с1Уу 195 200 205
Туг Іїе Рбе Азхп Аїа сіу біц сіц УМаії Авр Аза Ні б1у Рпе Тгр РіПе 210 215 220
Тец АБп Нів Іїе сбіп біп Аїа сій Гей ТБг Авп Уаі Агд Тук Рго ТПг 225 230 235 240
Тец б1у Рпе Авр ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гец Авр ТПг РіГе 245 250 255
Акуд Рпе Агуд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агуд Авр Тер Авр Робе 5ег Агд 260 265 270
Авп оМеє бек Акуд бек ТПг бій Агуд ТБПс Тер о бег І1е ТПг Уаї Авр Іецй 275 280 285
ТПг Уаі1 Нів Аїа бек І1е ТПг Уаії бек Аї1а сі1у Рпе Рго с1у Іїе Аї1а 290 295 300
Ап оУаі1! бек сбіу біп Тук б1у Тгр б1ш І1е с1у Аза ТПг с1у Нів Ре 305 310 315 320 бі Тс Тпг обі ТПг бек бій Нів Авр Іецй бек Тгр бек Уаі Бех щу 325 330 335
Акуд Уа1 сбіп Ркго б1у Авр Уаї Уаї Авр їецй ТПг Аза Гей ТПг Агдд Тбг 340 345 350 сіу ТБг Ггец Авп І1е Рго Туг біц сіу ТПг Меє Уа1! Уаії Агд Меє Агд 355 3З6о 365
Ап осіу Аїа бек РПе бек Туг Аїа Уаі Агкуд сб1у ТПг Туг Агуд с1Уу Іец 370 375 380
Зек Тук ТПг біу ТПг Гув І1е Авп Авр Авп бег ТПг (516) 385 390 395
«2105 99 «2115 1185 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 99 аєдсаасаєд дссеЕддссаа басеєдаадса адсссссода Ссдадаадесс ссаадсесста (216) аєддааддсуд дсаєадаєда дадсаєссеєє дсдассєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 чдсаєсеЕсдед Єдссассасс єддададасдд сссддсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєдаає сдсЕддачас Едаачаєдса даддадсаєд седаєчасад сааадсссде 240
ЕсЕдсвадед єсасуддсессс єЕСсСЕдсдссссС асаддсддес ссодсдодадес дсаасдрєсс Зоо
ЧдЕССсСЯЧдаддає ддассаасодд садддссаєсс ассаддаєсдс дедсссасад ддсссдоададд 3З6о асбраєсааад сдбассадає седдсссаса дассссддесс ссдадассса Соддесдессссе 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасассссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 сЕдЧчсдодддаа асоодчааєсоуд сасеЕсдсдсеЕ додаєддаєсд адсседчадас дадсседоадве 540 чдчдаааддчдеЕвеє саєаєддасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссссассс сдссдасдаєс 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕеЕЧдод срасассссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо гЕСЕЧдЧєсесС єсаассасає єдадсаддсес дадсссасса асєдедаддаба Єссдаасессес 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
ЕсдЕСсСаасудс саадачасьіуд ддассєсадс суддаасаєда дсаддадсас гдадсоддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда єсадеаєсдда сСдддадчаєссд дддсдасддда дсаєссссддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддасадс ссадсссд4949 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєдда Єдаддаєдад аааєддедсс ЕєСсСссЕСадсе аєдссдєдсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 100 «2115 395
Зо «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 100
Меє сбіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е бі Гув
З5 1 в) 10 15
Рпе сіп Аїа Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30
Тув ІТеп Уаї сС1у Аїа сбіц с1іу Авр Аїа бек Агд Уаї Рго Рго Рго Щ1У 40 бій ТЕ Рго б1у бій Авр б1іу Аїа сіу пуб Авр Рго Рго АБп сій 5ег з9 (210)
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бек Гув Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу 45 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АБп о б1у Агкуд Уаї І1е ТБг Агд 100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Тук бі1іп ІШе Тгр 115 120 125 50 Тем ТПг Авр бек с1у Рго бій ТБг Нів с1і1у Ма1 Рго сб1у Авп бек Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АБп с1у Іїе сі1іу ТПг Агуд Аїа сіу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей сіу с1у Агкд РібПе бек Тук біу Меєс бек Нів Тер бек Іец 180 185 190
Акуд ТЕ Рго Туг Ркго Уаі Авр Уаї сіу Бек с1іу Іїе Гей Уаї сі1у Туг 195 200 205 (516) І1їе Рпе Авп Азїа с1у бій Авр Уаії Авр Аза Нів сіу Рпе Тер Ріе Іецй 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Азї1а бій Гей ТПг Авп Уаі Агуд Тукг Рго ТіПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Ап Авп обекг бек ТПг Рго Агуд Авр Тгр Авр Рібе бег Агд Авп 260 265 270
Меє бек Агуд Бек ТПг сій Агуд ТПг Тер бег І1е ТПг Уаї Авр Іец ТПг 275 280 285
Ууаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї бек Аїа б1у Рпе Рго с1у Іїе Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПг ТпПкЕ бій ТБг бек біц Нібв Авр ІТецй бек Тгр бек Уаі Бек с1у І1е 325 330 335
Уаї біп Рго с1у Авр Уа! Уаї Авр Геш ТПг Аза Те ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гей Авп о І1е Рго Туг біц бі1у ТПг Мес Уа! Уаї Агд Меє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТпкЕ с1іу ТБкг пув І1е АБп АвБр Авп бек ТЕГ 385 390 395 «2105 101 «2115 1185 «2125 ДНК «213» Бе1адіпеї1їа «4005 101
Зо асдсаасаєд дсссддссаа Сассдаадса адссссссда ЄсдадаадеЕс ссаадсесста (216) аєддааддсуд дсаєадаєда дадсассссєс дсдассаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 чдсаєсеЕсдед Єдссассасс єддададасдд сссддсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсЕдсвадед єсасддсессс ЄсеЕдсдсссс асаддсддес ссоддесдддеЕс дсаасдеЕєсс Зоо
ЧдЕссдаддає ддассаасудуд садддесаєс ассадчасдс дсдЕССасад ддсссоадоа9а 3З6о асбраєсааад сдбассадає седдсссаса дассссддесс ссдадассса Соддесдессссе 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасассссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 седсддддаа асододаассод сасссдсдсс ддаєсодаєсд адсссдадас дадсессдадаєс 540 чдчдаааддчдеЕвеє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа сЕссссассс сдссдасдаєс 60 даЕЕССддса ЕСсССсСЕгЧЯсСддуа стасаєєсєєсааєдседдад аддасдеЕсда гєдсасасддас 6бо гЕСЕдЧдєеесС єсаассасає єдадсаддсес дадсссасса асдесдаддса Єссдасессес 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есдеєсаасудс саададасед ддасеЕссадс сддаасаєда дсаддадсас Сдадсддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєсдсаа асдєдчадсду Ссадсаєдда Соддачасєсдд дддсдасодда дсаєсеєсддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддасадс ссадсссд4949 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєда Єдаддаєдад аааєддеЕдсс ЄссЕєсадсе аєдссдедсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 102 «2115 395 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 102
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп Аїа Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 60 20 25 30 пуб ІТеп Уаї сС1у Аїа біш с1у Авр Аза Бек Агуд Уа1і Рго Рго Рго 01Уу
35 40 45 бі ТЕ Рго с1у бій Авр с1іу Аза с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц бег 50 з9 (210)
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бек пуб Аза Аг4д 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АБп о б1у Агуд Уаі І1ї1е ТБбг Агд 100 105 110
Меє Акуд Уаії Тук Акуд Аїа Агуд с1у ТПг чІ1е пув Аїа Туг біп І1е Ткгр 115 120 125
Тецп ТПгЕ Авр бек с1у Рго бій ТПг Нів сіу Уа1і1 Рго с1у Авп бБег Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АБп с1у Іїе с1іу ТПг Агуд Аїа сіу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей сіу с1у Агкд РібПе бек Тук біу Меєс бек Нів Тер бек Іец 180 185 190
Агуд ТПгобек Туг Рго Маі Авр Уаії сіу бек біу Іїе їеп Уаї с1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Азї1а бій Гец ТБг Авп о Уаі Агуд Тукг Рго ТПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агд Авр Тер Авр Ріе бег Агд Авп 260 265 270
Зо Меє бек Агуд бек ТПг бій Агуд ТБг Тер бек І1їе ТПг Уаї Авр Гей ТЕПг 275 280 285
Ууаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї Бек Аза б1у Рпе Рго с1у Іїе Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПг ТпПкЕ бій ТБг бек біц Нібв Авр ІТецй бек Тгр бек Уаі Бек с1у І1е 325 330 335
Ууаї біп Рго с1і1у Авр Уа1! Уаї Авр Гей ТПг Аза Гец ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гецп Ап ІТ1е Рго Тук бій с1і1у ТБг Мес Уаї Уаі Акуд Меєсє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТП с1у ТБПкг пув І1е АБп Авр АБп бег ТПг 385 390 395 «2105 103 «2115 1185 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпе11а уісвогіає «4005 103 аєдсаасаєд дссеЕддссаа баєддаадса адсссссода Ссдадаадесс ссааєссеєста (216) аєддааддеєд дсаєадаєда дадсассссєс дсдасеєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 дсЕЕєСсСсСсСаєс гдссассасс содададасу ссрадедчадуа асддєдссодд саадчаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсЕдсвадед єсасддсессс ЄсеЕдсдсссс асаддсддес ссоддесдддеЕс дсаасдеЕєсс Зоо
ЧдЕССсСЯЧдаддає ддассаасодд садддссаєсс ассаддаєсдс дедсссасад ддсссдоададд 3З6о асбраєсааад сдбассадає седдсссаса дассссдссс сссадассса Соддесдессссе 420 (516) чдоадаасадсд ассссоууссда деасасусеєс сддсассоуодад адсудєсєвас аадаєсааса 480 седсддддаа асододаасддд сасссдсдсс ддаєсодаєсд адсссдадас дадсессдадаєс 540 чдчдааачеЕвесє саєаєдоасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссесассс сдЕсдасдес 60 дЯдЕЕєСЕддса ЕЄссЕЄЧЕеЕЧдод стасасєсссс аасдссддад аддасдссда Сдсасасддс 6бо гЕСЕдЧдєеесС єсаассасає єдадсаддсес дадсссасса асдесдаддса Єссдасессес 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есаєссасудс саадачасьсуд ддассєсадс суддаасаєда дсаддадсас гдадсоддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдаєсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900 часаєєдсаа асчдєдадеда єсадеаєддва сСдоддадчаєссд дддсдасддда дсаєссссддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддададс ссадсссд4949 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєдда Єдчаддаєдад аааєддедсс ЄссЕєЄСсСадсе аєдссдєдсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 104 «2115 395 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 104
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп Меє сі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп бек Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30 пуб ІТеп Уаї сС1у Аїа біш с1іу Авр Аза Бек Нів Гей Рго Рго Рго 01Уу 35 40 45 бій ТБг Рго Бек бій Авр біу Аїа сіу пуб Авр Рго Рго АБп сій 5ег 50 з9 (210)
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі сбішц бій Нів Аза Авр Авр бБег пуб Аїа Аг4д 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу
Зо 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АБп о б1у Агуд Уаі І1ї1е ТПг Агд 100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Тук бі1іп ІШе Тгр 115 120 125
Тем ТПг Авр бек Аза Рго біп ТБПг Нів сіу Маї Рго с1у Авп бек Авр 130 135 140
Рпе Аїа біц Тук ТП Рпе Агуд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агд Гей Тбг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АвБп сіу Меє сіу ТПг Агуд Аїа с1іу Тер І1е сб1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей сіу с1у Агкд РібПе бек Тук біу Меєс бек Нів Тер бек Іец 180 185 190
Акуд ТЕ Рго Туг Ркго Уаі Авр Уаї сСіу бек б1у І1їе Гей Уаї сСі1у Туг 195 200 205
І1їе Рпе Авп Азїа с1у бій Авр Уаії Авр Аза Нів сіу Рпе Тер Ріе Іецй 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Азї1а бій Гец ТБг Авп о Уа1і Агуд Тукг Рго ТПг Іей 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агд Авр Тер Авр Ріе бег Агд Авп 260 265 270
Меє бек Агуд Бек ТПг сій Агуд ТПг Тер бег І1е ТПг Уаї Авр Іец ТПг 275 280 285
Уаї Ні Аза Іїе І1їе ТПг Уа! бек Аза с1іу Рбе Рго с1у І1е Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПЕ ТпкЕ бій ТБг бек біц Ні Авр Гей бБег Тгр бек Уа1! бек с1у Агд 60 325 330 335
Ууаї біп Рго с1і1у Авр Уа1! Уаї Авр Гей ТПг Аза Гец ТПг Агд ТП щ1У
340 345 350
ТПЕ гей Авп І1І1е Рго Тук біц б1у ТПпг Меє Уаі Уаі1 Агд Меєс Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТП с1у ТБПкг пув І1е АБп Авр АБп бег ТПг 385 390 395 «2105 105 «2115 1185 «2125 ДНК «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 105 асдсаасаєд дсссддссаа Саєддаадса адссссссда ЄсдадаадеЕс ссааєсесста (216) аєддааддеєд дсаєадаєда дадсассссс дсдасеєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 дсЕєсСЕСАаЄЄ Єдссассасс єддададасдд сссадсдадда асддсдссдда сааддаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсЕдсвадед єсасддсессс ЄсеЕдсдсссс асаддсддес ссоддесдддеЕс дсаасдеЕєсс Зоо
ЧдЕссдаддає ддассаасудуд садддесаєс ассадчасдс дсдЕССасад ддсссоадоа9а 3З6о асбраєсааад сдбассадає седдсссаса дассссддесс ссдадассса Соддесдессссе 420 чдадаасадсуд асеЕєсдссда десасассссс сдсассддад адсдссссас аадаєссааса 480 седсддддаа асододаассод сасссдсдсс ддаєсодаєсд адсссдадас дадсессдадаєс 540 чдчдаааддчдеЕвеє саєаєддасає дадссассдда Ссдссдадаа ссссссассс сдссдасдаєс 60 даЕЕССддса ЕСсССсСЕгЧЯсСддуа стасаєєсєєсааєдседдад аддасдеЕсда гєдсасасддас 6бо гЕСЕЧдЧдєсесС єсаассасає єдадсаддсес дадсссасса асдсдаддса Єссдчасесесе 720 ччдаєєсєдаса соддсаддбєає єдсасссасу дсссгддаса ссеЕсссуддеЕс садааасаас 78о0
Есдеєсаасудс саададасед ддасеЕссадс сддаасаєда дсаддадсас Сдадсддаса 840
Еддеєсдаєса ссдєддаєсеє баседсссає дсдадсаєса соддсдадесдс адддДдеЕсссса 900
Зо часаєсдсаа асдєдчадсду Ссадсаєдда Соддачаєссод дддсдасодда дсаєсеєсддаа 960 асаасадада сдєссдадса счасеЕсдадс сддадсодєда дсдддасадс ссадсссд4949 1020 чаєдеЕєдеЕсдд аєсеЕСсаседс дсеЕСсСасесудд ассддаасеєс Еєаасаєьєсс Есасддаадачіе 1080 асчаєддаєда Єдаддаєдад аааєддеЕдсс ЄссЕєсадсе аєдссдедсд сддаасстас 1140 ачаддссЕва дссасассду сасааааагра аасудасаасе саасе 1185 «2105 106 «2115 395 «212» Білок «213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «4005 106
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп Меє сі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп бек Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30 пуб ІТеп Уаї сС1у Аїа біш с1іу Авр Аза Бек Нів Гей Рго Рго Рго 01Уу 35 40 45 біц ТЕ Рго Бек бій Авр сіу Аїа с1у Ппув Авр Рго Рго АвБп біц б5ег з9 (210) 50 Тем бій ТПЕ біц Авр Уаі! бій бійц Нів Азїа Авр Авр бек Гув А1а Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек Уаі ТПг Аза Рго їец Агд Рпе І1е сСі1у с1у Рго б01у щу 85 90 95 зек біп Агд бек Уаі Агуд б1у Тгр ТПг АвБп о б1у Агуд Уаі І1ї1е ТПг Агд 100 105 110
Меє Агуд Уаі Туг Агуд Аїа Акуд сіу ТПг Іїе пув Аїа Тук бі1іп ІШе Тгр 115 120 125
Тецп ТПгЕ Авр бек с1у Рго бій ТПг Нів сіу Уа1і1 Рго с1у Авп бБег Авр 130 135 140 (516) Рпе Аїа сій Туг ТПЕ Рпе Агуд ТПг сіу бій Агуд Гей ТПг Агуд Тей ТПг 145 150 155 160
Тецп Тер б1у АБп с1у Іїе с1іу ТПг Агуд Аїа с1іу Тер І1е б1п Рпе сі1ци 165 170 175
ТПг Бек Гей сіу с1у Агкд РібПе бек Тук біу Меєс бек Нів Тер бек Іец 180 185 190
Агуд ТПг о Рго Туг Рго Маі Авр Уаії сіу бек біу І1е їеп Уаї с1у Туг 195 200 205
І1Іе Рбе АвБп Аза б1у бій Авр Уаії АБр Аї1а Нів сіу Рпе Тер РіПе Гей 210 215 220
Ап оНів І1е біц біп Аї1а бій Гец ТБг Авп о Уаі Агуд Тукг Рго ТПг РБе 225 230 235 240 б1у Рпе Авр ТПг Аїа с1і1у Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гей Авр ТПг Робе Агд 245 250 255
Рпе Агд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агд Авр Тер Авр Ріе бег Агд Авп 260 265 270
Меє бек Агуд бек ТПг бій Агуд ТБг Тер бек І1їе ТПг Уаї Авр Гей ТЕПг 275 280 285
Ууаї Нів АїТа Бек Іїе ТПг Уаї Бек Аза б1у Рпе Рго с1у Іїе Аїа Авп 290 295 300
Уаї Бек с1у біп Тук сіу Тер бій Іїе сіу Аїа ТПг с1у Нів Рпе сіцй 305 310 315 320
ТПг ТпПкЕ бій ТБг бек біц Нібв Авр Іецй бек Тгр бек Уаі Бек с1у І1е 325 330 335
Ууаї біп Рго с1і1у Авр Уа1! Уаї Авр Гей ТПг Аза Гец ТПг Агд ТП щ1У 340 345 350
ТПЕ Гецп Ап ІТ1е Рго Тук бій с1і1у ТБг Мес Уаї Уаі Акуд Меєсє Агд Авп 355 360 365 б1у А1а бек Рпе бБег Туг Аїа Уаі Агуд с1іу ТПг Туг Акуд сіу Іец 5ег 370 375 380
Тук ТП с1у ТБПкг пув І1е АБп Авр АБп бег ТПг
Зо 385 390 395 «2105 107 «2115» 1188 «2125 ДНК «213» бЗе1адіпе11а уісвогіає «4005 107 аєдсаасаєд дссеЕддссаа басеєдаадса адсссссода Ссдадаадесс ссаадсесста (216) аєддааддсуд дсаєадаєда дадсассссс дсдасеєаадс ЄсЯєсоЯодесЯдс Єдаадчачває 120 дсЕЕєСсСсСсСаєс гдссассасс содададасу ссрадедчадуа асддєдссодд саадчаєсса 180 сссааєсдаасє сдссддадас Сдаадаєдса даддадсаєд седаєдаєсрад сааадсссдеі 240
ЕсеЕдсвадеа деЕдеЕСсСасодддс сссеЕССдсдс сссасаддсда дсассоддесдда деЕсдсаасдо Зоо
Ессдєссдад даєддассаа содсадддсс ассассадда бдсдсдЕссСса садддссс9д4д 3З6о чадасваєса аадсдєасад даєсєддссс асадасссстд дсЕсссдадас Ссасодедсс 420 ссЕдддааса дсдассеєсудс сдадрасассі єсСссодсассу дададсусєсеЕ Сасаадаєса 480 асасеєдедодд дааасоодаає соддсасесЧдЕеЕ дседдчаєдда єсчадеЕсєєда дасдадсевд 540 чЧаєддваадЧдє ЄЄЄСсСаєаєдда саєдадссає сддссдссда даассссеєса ссседссдас 60 дЕСЯЧДЧЕЄСвЧд дсаєссеЕвєдеЕ доадстасасєс сссаасдссд дададдадді сдаєсдсасас 6бо
ЧдасЕЄєсСЕддЄ єЄсСЕСсСаасса саєєсадсад дссдадссса ссааєсдесдад дсаєссдвасе 720 сЕєЧДдаєссд асасдуддсадд бассдсассс асддсесстдуд абассесєссу десеєсадааас 78о0 аасеєсаєсаа сдссаадада седоддасссс адссддааса Сдадсаддад сассдадсда4д 840 асаєддеєсда Єсассдєдда єсЕсассдесс сасдсдадса Ссасоддсдад ЄдсададеЕєес 900 ссаддсаєсєсд сааасдсєдад Сддссадсає ддаєдодада єсдодддасдас дддадасаєьес 960 чааасаасад адасдеєссда дсасдчасссд адссддадсд Сдадсдддад адсссадссєо 1020 ччачаєдеЕвєд Єсдаєсссас єдсдсєсассі содасєддаа сеЕСЕсСаасає єссестгасдаа 1080 чабасчдаєдда ЄддЕЧдаддає дадаааєдує дссеЕссьсса дсваєдссує дсдеЕддаасс 1140 басададдсесс Єгадсвраврас сдасасаааа асааасдаса асесаась 1188 «2105 108 60 «2115» 396 «212» Білок
«213» беі1адіпеі1ї1а уіссогіаеє «400» 108
Меє сіп Тук с1у Ггеш Аза Авп ТПг бі Аза бек Рго Гец І1е б1ц Гув 1 в) 10 15
Рпе сіп Аїа Іїец Меє б1іп сі1у б1у І1е АвБр бій бек Іїе гейш Аза ТЕГ 20 25 30 пуб ІТеп Уаї сС1у Аїа біш с1іу Авр Аза Бек Нів Гей Рго Рго Рго 01Уу 35 40 45 бій ТБг Рго Бек бій Авр біу Аїа сіу пуб Авр Рго Рго АБп сій 5ег 50 55 бо
Тец бій ТПпг бій Авр Уаі1і бій бій Нів Аза Авр Авр бБег пуб Аїа Агд 65 70 75 80 зек Аїа бек бек Уа! ТПг Аза Рго Іецй Агд Рпе І1е сСіу с1у ТПгЕ щу 85 90 95 бі1у бек біп Акуд Бек Уаі Агуд с1у Тер ТПг Авп с1у Агд Уаї І1е ТПг 100 105 110
Акуд Меє Агуд Уа! Туг Агуд Аї1а Акуд сб1і1у ТПпг І1е Гув Аза Туг Агд Іе 115 120 125
Тер Гецп ТПг Авр бек сб1у Рго біц ТпПг Нів сіу Маї Рго с1у Авп 5ег 130 135 140
Авр Рпе Аїа біц Туг ТПг Рпе Агд ТПг б1у бій Агд Гей ТПг Агуд Гей 145 150 155 160
ТПг гейш Тер с1у Авп біу І1е сіу ТБг Агуд Аза с1у Тгр І1їе сій Ріе 165 170 175 бі Тс бек Гей с1іу с1у Акуд Рпе бБег Тук сіу Меє бек Нів Тгр 5ег 180 185 190
Тец Акуд ТПг Рго Тук Рго Уаі Авр Уаі1і сіу бек сб1і1у Іїе Ге Уаі1 Щ1У 195 200 205
Зо ТУук Іїе Рпе А5п Аїа с1у бі біц Маії Авр Аза Нів сі1у Рпе Тер Ріє 210 215 220
Тец АБп Нів Іїе сбіп біп Аїа сій Гей ТПг Ап Уаії Агд Тук Рго ТПг 225 230 235 240
Тец б1у Рпе Авр ТПг Аїа сіу Іїе Уаі Рго ТПг Аїа Гец Авр ТПг РіГе
З5 245 250 255
Акуд Рпе Агуд Авп о Авп о бек бек ТПг Рго Агд Ар Тер Авр Ріе 5ег Агд 260 265 270
Авп оМеє бек Агд бек ТПг бій Агуд Тс Тер бек І1їе ТПг Уаі1і! Авр Іец 275 280 285
ТП Маії Нів Аїа бек І1е ТПг Уаї бек Аїа с1у Рпбе Рго с1у І1їе А1а 290 295 300
Ап оУаі1! бек сбіу біп Тук б1у Тгр б1ш І1е с1у Аза ТПг с1у Нів Ре 305 310 315 320 бі Тс Тпг обі ТПг бек бій Нів Авр Іецй бек Тгр бек Уаі Бех щу 325 330 335
Акуд Уа1 сбіп Ркго б1у Авр Уаї Уаї Авр їецй ТПг Аза Гей ТПг Агдд Тбг 340 345 350 бі1у ТПпг Гей Авп о чІ1е Рго Тук сій сіу ТБПг Месє Уаї Уаії Агкд Меє Аг4д 355 3З6о 365
Авп осіу Аїа бек РіПе бек Тук Аїа Уаі Акуд біу ТПг Тук Акуд с1Уу Іецй 370 375 380
Зек Тук ТПг Авр ТП Гув І1е АвБп Авр Авп бек ТЕПг 385 390 395 «2105 109 «211» 1065 «212» ДНК «213» Ріабусегкгіцют рітгцгсаєЄцт 60 «4005 109 аєдеЕСсдсеєдда єєЄсадасасс саєстаєсдсс ассодадддс ааддаддсаа СдсдЯасссасс (216)
Басдаєсада дсадааасдд дадчасєсстд содадчаєєда додеЕЧдеЕдоддс доадсдвадедо 120 саассдсдсд даасссдсдас дсддаєдасуд ддсассдаса ссссддссас ЕЕссоддсасд 180 чдссасдддсеЕ сЕсбасадеєда асаєсассссс дсодаєсддсдуд адсдсаєсас ссдудсесдесс 240
ЕєЧдЕдддддодса асоддддседа басасдссса ддаддсаєса дассссасас сасаасадва Зоо чдаЕЕСЕЕЕСсСС єСсСсагбаааає дасассссодуд доаосссасааа ссдадсаєсс аассоасоатд 3З6о чдсаєсЕдадеєс ЄЕЄЕЧЄЕеЕЧДЕеЕЧдод даєсаєддада сдадссааєсда Ссдаєсдсдда сссаєссдвдає 420 чЧЕЄЕЄЕЯЧЕЄєсСЕ Єааддассає адсаєссдсс содабсаєдаєса асдсаадсса ссстассесєд 480 чЧдасЕсададс аадссоддаає саєсссеЕдеЕс асасеєєдаєс ссеЕссааєда ссссаасаає 540 чдсаддеєасва єсесСсааааа ЄєодасеЕсссссоаоаддсадсесс даассдсєдас аасаєссаєса 60
ЕсаєддеЕсдс єсасеєсаду дасададаса саєдсаадсд ЄдадсдЕдса адсадоаоадаєс 6бо сссаєсддєсд садаадсдад СддададеЕсєє додасдаєстд Есадесдсаєс сдддасстає 720 дсаассасеєс аададдааад Єсдаасссста асссддаасс аасссддаас сссададссс 78о0 чадсааєдда єсЕеЕсасесса адсбассасс сдаададдаа ссассасасс ассссссаа 840 дсаассаєддуда аааєсасеЕєе дсеЕдЕССсОдда асчассєсесс аасаєсдссає ссссестаєд 900 басеЕссдудед гддаєтасас садсдеєддає агбаастааса ссдчдаасстад адсаєсадає 960 саєдеєдадуд Есудаадссас Єдадсаасаа дЕссаадддд Есааадаєса аадедсасаа 1020 ссбааєааад аадсгааада деЕдсасассс сЕСЕсвдсвд аагаа 1065 91 1 во

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Рекомбінантний поліпептид РІЇР-96 з послідовністю, щонайменше на 80 95 ідентичною амінокислотній послідовності під 5ЕО ІО МО: 26 або 5ЕО ІО МО: 42, де поліпептид РІЇР-96 має Зо інсектицидну активність проти совки кукурудзяної (Не/ісомегра 7еа).
2. Рекомбінантний поліпептид РІИР-96 за п. 1, де послідовність поліпептиду РІР-96 щонайменше на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності під 52ЕО ІЮ МО: 26 або 5ЕО ІЮО МО: 42.
3. Рекомбінантний полінуклеотид, який кодує поліпептид РІЇР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2.
4. Рекомбінантний полінуклеотид за п. З, де полінуклеотид являє собою полінуклеотид, що відрізняється від геномного.
5. Рекомбінантний полінуклеотид за п. 4, де полінуклеотид являє собою кДНК.
б. Рекомбінантний полінуклеотид за п. 4, де полінуклеотид являє собою синтетичний полінуклеотид.
7. Рекомбінантний полінуклеотид за п. б, де полінуклеотид має кодони, оптимізовані для експресії в культурі, важливій з погляду сільського господарства.
8. ДНК-конструкція, яка містить полінуклеотид за будь-яким із пп. 3-7, функціонально пов'язаний із гетерологічним регуляторним елементом.
9. Трансгенна рослина або рослинна клітина, що містить полінуклеотид за будь-яким із пп. 3-7 або ДНК-конструкцію за п. 8.
10. Інсектицидна композиція, яка містить поліпептид РІЇР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2.
11. Білок злиття, який містить поліпептид РІЇР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2.
12. Спосіб контролю популяції комахи-шкідника, який включає згодовування популяції комахи- шкідника поліпептиду РІЇР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2 або трансгенної рослини або рослинної клітини за п. 9, де комаха-шкідник являє собою кукурудзяну совку (Не/Ісоуегра 7еа).
13. Спосіб контролю зараження трансгенної рослини комахами з ряду Іерідорієега та/або СоІеорієга та забезпечення керування стійкістю комах, який включає експресію в рослині поліпептиду РІТР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2.
14. Спосіб пригнічення росту або знищення комахи-шкідника, який включає згодовування комасі-шкіднику композиції, яка містить поліпептид РІИР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2, або трансформування рослини чи рослинної клітини за допомогою ДНК-конструкції за п. 8, який додатково включає згодовування комасі-шкіднику трансгенної рослини або рослинної клітини, де комаха-шкідник являє собою кукурудзяну совку (Не//сомегра 7еа).
15. Спосіб за будь-яким із пп. 13 або 14, де комаха-шкідник або популяція комах-шкідників є стійкими щонайменше до одного Ві-токсину. 60 16. Застосування поліпептиду РИР-96 за будь-яким із пп. 1 або 2 для пригнічення росту або знищення комахи або популяції комах.
БЕІрР-Звда. фу осжежютю юттюютеють юю в жк з з ю к зе юю тет клю тк клю рЕХР-ЗЕДЬ (фі оохжжюжтжжеююєттетєтють ттютютокот вт в ж хек жетстютето ос его оо пе вв зо по о жов жо як ж ЗЕІВв- ЗА: Др о сеенееетют тютюн т хх хкюткюте твететю че м в ве че ча ве ках в о о ж хх ж п п т хх ою че чвертю че втр-ЗЕай (фронт тютюн вет ож сто зосктесктя вети-збде. ДДроснкеннювжтктк жж ккюетют в ють вт хх жк хх кою сю че ес чо ов ось крос ох нх вх хх ВеТЕ-аЕаЕ (Дурень ню нь нь зх зх хх леж те мете ж жі вето веевютеть ве да вк вх пк п лк зх з з зх все мене ее ротІв-ЗбАд В пек няно не вк вант вовк я вно кю вояк я Не зн ЗК ЯК ЯКЕ УВА НЕ ЗК КЕ КА КР ВА ІК КК А КАК НК чт. Я КН ЧК; Че ях чне нь вехв-ЗЕАн. фонова нювютюєве вот те о оо оо вон вв во вх ць зх чо зок вк з зе дере де тю во вв то оо в во вс ва вЕХв-ЗБСВ. ФУ, пкехквювюв ях ян ях ях ях яке ян ях чн чн цих кох ав КА ВХ ВР ік кю ЗА ВАЯК ЯК Я ЧА, ЯН ЗД ЯК: ЯН, ЧАЮ ЧА ЗК КА КАЧКА КК я вЕТв-Звсь фронт цю в п пк вч з че че зво вет те ть те ее во в о в вх вх зкжючю че че ве рРЕТв-Збсе Дрова в нетютеветтетететет т к нн нен ж ж ж же жене ее деле етан ВЕЖА (фронти няняюняняятятняяяняннннжжттттютттят ВеЕхв-зБсе ДІД пкт т я як клю чне че чн яки ки чн окопи ство, кю я то жк чке ко чо чо вх че чні свй ях ко вк т спокою як я вехв-зсЕ френч тет тт тт тт тю ок т пе о ох п з с з зх яю же ж че ви»-зесе ДДропееннне не пювювютть ток як яю лю яке че оч як яєчок й чн ях я тя як як як т я чо як тк тк тт чн чн че ч ветв-Есв ши В в рехр-ЗЕре фронт жюжлюютетттюттютююстютт т ко снютю тм тючю четю че пвх пвх плюс тк пк пкт БЕХВАВЕЮ (рон тт тт тт РЕТР-ЗЕОЄ роя тютюн т нтттттт тю тет т тетютють т тю мк тк жк не те тютюн те БвЕїІв-зЕВА ЕІ звдолгва ВА ВТ. МУ Му З. Зв. Мбк пек Лв Ме г, ЧАР МВ МЕ, ВЕУ В, ВМ. ВЕУ ВЕ, ВАВ «дк А АВК МВ ЗК МК ЛВ МАЄ ЗА ЧАЄ. ЧАЄ, М, ВЕ, ЧА ха оо ох ле 2 реХв-ЗЕВе фронт тт т тютьтктютттют як як жетю тет тю тю я вояк ях тя кт кс як як я вете-ЗЕаЕ фур оожожжжожжежеежвююввю в в вве вою ме м жо хо жо жо вового вв вв вк вх вк зх ок ох ох зок мох мк зЕтР-ЗКа фронт т т вюжютетть тече ет тет веь вк вк жк вк з як як хх жк че че че че РЕІр-ЗЕЕЬ фЩ)р ож тттттттьютютттьть ть тю як тю юю тн юю тет окт ттть лють ветв-ЗЕКе фронт ттттьттттютттт тт тт т те ять окуттют кот тт рЕХр-ЗвЕв Фронт юю як не вк кет яке чу чне ек янь янх зх хх хх мк як як як ко як хек ке чн че вехр-зЕЕ фронт ке ютьать нь ть ве вх ла з зх пк з зх ж ее ве же зе о зво вк ов вк вьх ветв-аБнУ (Ду оскннжожаежжж юю т тю ють хо вх хх ях хост яю ях с сечо сх бо сь осока ох ж ж РЕТВв-ЗЕЕВ фронт вве т т я кою юю тт зв зв зх зх ях ях ях жк жк зх хк хек ее РЕТр-ЗЕВІ (рон южжюжжжежюттюттюттттттт тт ж тю тт веЕтв-ЗЕЕ3 фронт вою тютт тт тю естжютет юю з ов чок зве ове ж везе вето ве ее юю овес нес пес по о вете- ЗЕ. Яр окол як яко яю дю дю ях чне чн, чн ся «ки качки ж як дв А, КК КК ЯК ЯК КК КУ ЯК ЯК, ЧК, ЧНУ ЧЖ» ЧА Ки ЗК, КК КН хи ки Ки Кв Ж Ж хх ях хх ветв-ЗЕБі1 фронт тт ють ють тютютєттвтетевєвє тт т тю тютюн о, оон т звечече егвєчнєе рЕхр-ЗЕна фун ною юю нею лю тю зе че ве тт кю з чек вк як хх як як ях ж чю як тю тю ке зе чее веЕхр-ЗБЕв. фронт ню тв жовчю тютюн тюль реХв-ЗЕВо Дн ж тюттетю тю тютюн як як як кет як чне зво тю яю сх кс як я Ве -ЗОБЕ (31 сх мА МАЄ МАЄ УРЕ ЧА МАЄ ЧАР МАВ, МАЕ, АРМ АВ.САР, РР, РК АВС ЛВ В МЕ МА МУ МАЄ МАЄ. ЗВЕР. ЧР АФ, АВ, АР, Р, МВ А, АР. Р. ЛА АР Р А МАЄ МР ТМ ЕЕ, ветв-е фронт жк тютю те юю тютю тут тую т зо тю хх як як як жк як жк як ню чк чо чо кю ск пс хх БЕТВ-ЗБЕЕ ЕК завів ве ВЕ, ВЕК и ех Ех МК Мк ЛВС ВСЕ Є М З ЗЕ Є, ОРЕСТ РЕ РЕ РК Р ок А ЛРС ВЕ М МОЄ УВС ЗВ Є. МОЄ Є ЗУЄ Є, РЕ вв ВЕ РЕ Ре вехв-З6К5 фронт ето ють очи нх м'нк як як як як желе тече ос со с о ох ооо о як ж ж ях як ях ретв-оєке ффроянянняннянятттттттттттютт тт тт ттттовтктютовттттт Рето-Щ вв фронти т жене тет тт зо т зо то со а я до я ж як як хм хе чк шк кю че тю ов со рРЕтВ-ЗЕВ фронт тт тютюн меттют тт тож чне пвх пня пствсжтнсттк т тт рев зна її) МОжсоАМТБАЯТЬІВ КОСМОСІ АКТУ ОАЗНОСЕРОВХ ветв-зЗЕНИа із метан КОН ЕХ АТКСУЗАКСОАЗНУВЕРОКУ Ер ЗБНа: і МетОосанТВАЗИЬ ЕКОЛО ІК АХКЬУСАКООСАЛНЬЕРРОКЕ БЕТРрР-ЗБНЕ вії нс рАМтТЕАЗрРІТЕКРОвІНЕСсІОеиІБАТКОУСАКООаНУвикоКХ ветр-ЗЕНЕ іі неснкнтР: пиромМие нове пак свиооАваУ роко РЕІР-ЗЕВХ їі ноусоАМнЕАСРІТЕКРОВІ МОСКВІ САКЕ УСАВООАЯНООРЕСКЕ ВБЕХрР-ЗЕНІ і) МНОХССАМТЕАЗРІЕКЕОНСМНЕОСІОЕОІСАТЕБУСАЕСОАНРВиОЕХ
Фіг. ТД сек Бі РЕТЕ- оба ЦДронненяея і ВТРУ Є ретР- АБО ронн» некнннннннненяннянянннян» МВЦВДТІЙ ща о ВВ ЦК же мх як як МКК ЖКУКК «КК КК КК Ж Ж СКК ЖК ХК Кк Й Св ти ЩЕ нт сома -Я кою й ж жк яки жк жк ЖК жк: ск СО Же ек зе про х вок жк. че чо ах мк з ск мк нюокк хкохюе скеск ЗИМ МО ВХ ВоКРе ке У ше че ван ж хх вон хоч засво, оч чо ве кож ш Ше: те ново їх» РЕІРАЯЄНЄ 1) знненчнннтннннчтнннння питан т тво осдн до. (рр ожеежженеж сук межи гав ХК СТАН ЛЕ ВКА РЕТР-ЗБАУ ЦП же хе ою же ножх хохете я Жоже деле кож нин осно х РЕІРеФЕМІ (р зеченннчннянннннчь, Пелютнх посноод Вктв-ЗБСе І пнятжжтнжжтьттттттттттютттюь «нЕХНОТТІЙ хх вехв-зБсВ а ин "ЖДбДПпПи І іш роко хх РЕР'ВВСВ 0) сптнтттнтнтнтнннтя сп -мЕ? з інн оте во ев А я хе жк чо чккчкксжх, жк ОМА НОМ СК зе й мк же й ож юю Бони ОК ККУ мв-асСе (і ох ель МУ ХХ Хе зх ох му ох Хе юе в натжжжнивіЕ і сірій де Ки вот нетнваннт ЯК но НО ОО Я вже ЗбСЕ йурозжнняяок де пежьтютт жк зх ххх плести мо жв св МЕ м ней тод, їх вв. за ца сек М МК Ми Мк мЖ МЖкму Ж жк МК Ж МУ м жом мк сш Менні не що за ї «же днів. ; «ж жк жжоєюх юх жк жж ЖЖ жк «жу жк деко мм кож МК ШАХ ЗМ а НИ ЕЕ ІЗ тен явсв Юр ях до сх юкжю тю ож жк сх стеж пит НВ ОТ вМ до вка. ще ;: кож ж НО кю юю ююх жк ож жк ююх окх ох» пох ЕКЗ За - й Ме З ї мств ее шкожчк же пк жено жи вклю з око и ЕК, М свой си н ож 5 ж жд чок ж Же жж кох ЖК й зах ШИ З ун, КУ . й ак, ЛА. АСАД ААЄ М МА А. мА лд ММ режі аж. ВК Мо Май кл СКК У РЕтв-обое пі» может юю чттк лють пн МІРІ вАх .хЖх КАЛ, КА ДЖ Лі. КІ М. Ох ій Ж МВВ ЛА ЯАДУМА: ЛА АДА УМАСА. АЛ АД МД ААЛАМ ШК МК ВОК Ка як вктв-ЗЕпе й пек лк чо об з че чо ак че чсоі нена ІЗ шк й рова Па я | коня че вого своє осн я ШІ ОТРУМУне не ях РЕІР'ЯЄДЄ (0) сеолтнтетнттттнтннтя Ше. і-й Деодем й шк їЗ І ко жю ек чжюх жк юс кю, Б УЖ ТІК Ка Ветв-зЕшЕ і птнтжтннтетюттнтнтжтяятя і се ий ве у и ЖЖ ЖЖ «КОЖ КОЖ ЖЖ «Ж дж, ЖЖОХЖО ХК ЖЖ ЖЖ, ее овсоюс хо кю сок: жк я, тов: Я З ек ж реїве ШЕВО (1) яння ПТУ тиви а А шо не Шини пн мое» влв-зеаа нн оте сок вехр-зеке роятяняяттннянняя шечквю люлючю с жк хо ВВНЕ У ПАК Б а вето-ЗЕЕЕ (рон пня С осв ов ретв.обве фррояннне пекан тля плете тп св ма Ом Хв еЗЕКа ГКД ехо юс ооо свое осо, об, ох сою се сх шк ть ше: кості еко ЇЩу ож жежете зо хо Піо ТО І БЕРЕЖЕ Р питатяннтяжнттяннняя ТІ т г ощен водо у Я як ЖК ЖКЖК я ККАКК ЖК ЖЖ ХК ЯК ММ Мк УК М ЯМ мкм ке мем Ж ож мент А й РЕІВ-ЯЦ) ПРомененяннннннннннинння Ши нам ха че ою Ж ЖК А свй ср нвр в. Ве Ж Ко и Зо. СЕ СК З вЕХР-аКії НА ших ню ко яко кине сяк ках ше ве. щі я в жк щк жк жк Й ОК Ж Ж ЕК ОКХ с х. ниж х ле х же мя як Й дк Во дев. Ва у ММ» Й й ху м й раї? зеКа рон хек ов кв зх хе оо охо св св ооо Що 7 й освося Я їх я в.о у ххх Кок КОЖ ЯК» ЖК ЖЖ ЖК Ккке «Хе п . і по нах в їве ЗЕКо ГК жкожке кю кою КЄХКУ Кн Жх МЖК» КК Кн КОЖ КК КК, КОЖ ЖКкке Ж й Ше ве ій й сового хх Щі КІ вв ще г) жк: о Ж Ж ЖЖ ЖЖ Ж ЖЖ ЖЖ Ж кю Ко КК ЖК. М не ОО КИ Ме. щи рРЕЗ Ше ЗК й Щі ко ЯЖУ КН ЖХ ЖЖОЖК, ХЖх ЖК ЖК ЖЖ ЖЖ СКУ «ЖК ЖЖ ЖЖ» ЯЖе Же ЖЖ. кам и юк «НЕТУ наді: т ши З хх х с ». жк Ж ХЕ з ОХ и БЕХ» ЗБЕ й й 3 ЖЖежю Ки ЖЖ ЖЖ КЖИ КА КОЖ ЖК Кк ЖК: ж яж кЖк ЖЖ ЖЖ ЖЖ САЖУ З ж ЖЖ ЖЖ, «ВЕК й ема с Й ї ков Є РетР-дек ї пон пе зок жк ок ВЕК В п ще ДЕ рЕТР-ВЕК фррозяянннннняюкняя ПИТУТТТЕ Є тет пи Ах ветв. ск о ск и | мАттОт щі пон я За у поко й жк еВ дв в х ре У хх, ї КІ У МЖК Ж М МК хе мом мук уко м м Ум оух мом мух кю М Ух Я, чо щі і їх КАХ жі ве шо ЕІ як жк же ж ? ЖУК МКМ Мих МОЖ Ми ко Жм КМ ом Мк Що : БАН Медок їі ЕЗ жи х 7 кн ккж Ж ЖЖ ЖЖ ож жк» ск н січ ЖИ Ух стР-ббНа 51) РЕЕОС ТПМ8МТУМИМУМЛПВ Ко хе веХхв-ЗаВа зі В зЕрОАЕКО р КК КУ КУКИ . пон ев я рук Бик 51) РЕЖОСВ ТМЕСІКТЕОСУЄЕНАВОСКА магтотеУтиннеови о вЕхр-ЗЕ е Її; РЕБООДОЮ . УНК тЕВуУВЕНаВО КВ Зі: йон шінееокеоОй вВЕХВ- ЗВ: І РОБ стук навосиан А ут Ше о ва 83; воКОСХ та КТК МОВИ вки Ж ко ЯК ох ЖЕК я. У сс витв-зЕєНн (І ревоовако его твом ен вет кави и ши. біс жа ВДЕ ЇВ. ем Бе ЖЕКеХ ши їе СТУК НАВОКИАВ ЗМЕН шо м а рЕтр-вв ще 8) векосАско сАсКОРоНЕКЕТКО Мини роскАвево УААН сов їх в: | ОсАсКОРеНЕНЕК УК М; че ж У ЕК Шо Ж МК Ка й рихв-зЕНі (3) в ОсАСКРЕТНЕНЬК? інн КЕНАВОЗКАНИСЮ С РІ осв і вкослскорен ся ТЕОУККНА ака зва ен ше в С
Фіг. 18 АровкАаненя АРОК
143 Й ї850 фетв-аа 3 ее ет ооо пескнохнуднтсовьх киш вЕти-аяае жОР тумаск зВІБнВІо Мас вет несБови тт Ов вЕТЕ-аЕвни 6203 ТУМАН КВ звинІс МА сосВоІВУ ВТОЄРІТУ ТИовУ РЕЇВ-ЯВЕВІ 420) ТУМАОВОКНІБНВІОВ Я - НН НН Х он о кн Ки сІе-зййа обі тУушАоВ ВІН НО Є ие и п: юн КІ вете-зшАає (20) тЕВасв СВІ ВВІОВ еп тОКноТво Нео Етно я всте-ЗЕла (50; ТУВаСА тВІ ЦО и яинсснетвУ нехоеВТ ін зо вЯе я вехв-ЗбАвн (З тА ВІСІ НВ кюопомастко нове кое ее тетР-явся 00) Шенаса ев плвтоциАсь ПІдстАНуНтоове т ДТ Косовж ЦЕ в-тв-ась (3 Бена зво л нас сх осв з нео ВЕІР-ЯЯСВ 50 АВК КЛОКВЛОЦ КВ Епосторит ши вЕте-анся (й гБумава сВтБнато КАН Є Тк рисове кн ее В рете-аса (ло пБОЛол В тіввтснасі ств дних потр тут оон тЕЇВ-ВАЄСЕ (20) ен ВІН фмась пмтв уитсцовь з дтЕнеову вже не 9 ще ук не я й ев тудт нос веїе-ЯЄвМ (22; БжНАЄВ сВБІСВВХОНВ шу ве ове тус тенет Бетр-З6Ва (З ЗУБНІ О ВОК ах тЕХР-ЗЕВЬ 30; вуУНАСАЄ ВУЦАВІО НВ в ответ Оитоцоріі ту тАнооєУНя вЕХРеЯЗШОо 2ОЮ зумМасА ЕВУСВАЖОЮВ Фен ун ання МРЕВ НОК БеІв-ЩЯОи 30) вумає. селен Іс нас з оотво та ехо танееа вВЕТе-аяОа (2ОР ТУМАВО ВУ БИВІОЮ М кусвсноІ ку нтогов тут РЕТК-ОШОЕ (а2Р тумАашн зву нАтОрМА ОВО НтсЬоши У ТАНЕ КЕНЕ тЕЩ-аЄВа 20 ТОК Кор мас Осо ткУ Меса евеех ОБ теТО-аЕЕ» (30 Те ек Не оо носову неомоероннет» шах вежа 2 те о ее вуз ато нас овес соб ета тая вежхр-аєва об) В о еконо снАє Ото Вх воло кеУ тА ЗЕ БеІР-ЗЕЕе 30) ТтУОО Навіс НАСОС НОоХНУ НО ОТУТ АТ ТОВ вехр-ЗЕКе (З Ух с авто асо о о хиА и а я вЕжР-ЗШЕв (30) ТО івІ:БнВІс ис ОцЄтО мо Оотратт і тА тосх веїе-зЯкі 20; мів масо ко ом отя ВУ я вІз-єшз зо в хм ее он мен та тов я РЕЖВ-ФЕЕК (20) вУБО НОЖІ кАЗОЦмАСННОМАОТВУ НМОРОРЬАУК тА ТОВХ Й БеХВ-ЗБЖ3 450 БУОО МЕ на Осн но От ОВ я ВеБІР-ЯЄВа ФК ВО мене вас нас осно ко сототванета гої веЖР-ВажА: 20 ТО МеВ ВВІо насос необ ватк ета ТОК я ветР-ЗяКо (50; кун свІекІі нас єв не ОогкоткетаАнмУї ТЕХР-ЗЕКео 4303 вуМАайА ВІСК ТО НЕ диесткУ те ис тк ване вЕЇР-ЗаЖжУ (450) вумацаосвІБвКтОКа ЗНОСУ НТСБОТРНТУ ТАМУСеЖК У тет авЕ ОЇ туВцнен кІМАХІЄ ХАСЕНОМАЄТАХ МКСБОВРОТЕ тА БО З Веше-аава бю ЗУБ НО КУ МВКХ у кАСВНОМАСІВІ Пес ПОРТ? ТА зовн Ретв-зЕЕ» (20) М сю а шІВотВУ во освае ТА Во вЕЇВ-аЕж: 30 тТж ме БІЗ ВНІ нас нон НВО ог ТОВ вехв-яЖЕУ (20) тУООо Ето наОо оОБнетвУ Моск Все я РЕТР-аБНнА 1300) БЕВСЮТю кУТТИНЕ тНАНО РУКАНОХ ТВБА РотНС МВ НеОтА СУ ши ше іш ШОН с а а а Б РЕІР-ЗЄНЕ 00) фею кет ВМ ДИВО ІжА ту о Ред отих Веже-аань меня Аді мі ее неня же Мен нен мМ Бежлезавну сю зве ов рт м о я
Фіг. 1С всІР-ЗЕАЮ С що я ті ВЕХВ-ЗБДЕ о КО КК НО о Комо І В-ЯвАе Ст ; око : и у тен и дк Як ху Й 5 ей ЖЕ 5 : вухах Й М У еВ КК : РЕЕе ЗЕ й З.
ТЕ ККУ З й Коневодетио З ай. я її : КЕ - й» ; з со Е; ск? й «нн їй МКК ку є ККУ Б». же РЕІР-ЗЕАЯ ізо) тав: теднеоно дет хе тек отнно: вони й УКВ с іх КЕ жк УНК КК ве ТАКА ОКУ ак НК У УКХ а Кох рехр-ВЕде по мВ ЕХ А тн та своя см к по їх: деко В мо за еекппе нот ен Й хх ретр-авкь По) т рев Е ой сей вени а й і.
Н Хле Ш ВМ і.
В я КУ рик ! тс І ошенонс, ше о с З З й ах ЗК й Ко Ве, ОКХ Есе пл М х ОЕМ ВТ Я КОКО КАВУ як Як КУ пе 2) реве НА денсвовстя ; ни «й ще КТК КО Іва СН Ме кока В КМ сих Я ооони те тк втедсниоких ретр-ЗБої (12) тон Твоеено тд ші тк нау рові вие-е сп това текенево тин ори кефтев Ки: за ца ; | В зе іа ри й й: Х В най и 5. КУ що Й ; а РЕІВ-ЯБСЕ з о пр ун неоо ее гер коки: еВ докт дено отЯ їх пан яву, Мов кр Ж пе) зер вснснн Мити й ів не щен «й Ж ре ще ІЗ йо щи Ме м ув їн : п з нагек хі: векхв-ЗзОпх Ж І: Іа И : вод е жо ому Ве А Вс і ОН пе ай ща із З АК пу у З ОТ йо в Ж ве: же: ретр-звое ос контор януте ою зі: ІК | то) зе зе пекдіноводета в ш ж «й м Я КК: с зах Я ЗЕ ен Ще че :--ЗДОВИИИ Ух й св Є ско най . ку ІК 7 то) і ще : педеневодоти жи ЖЖ КК КВ ях ЗК Са я х я що то кос УК Гей но Он есе их ОКХ З КУ «ни Е: ше.
АХ ж Бе У : ка Іжа М ож я есони я ой ще та сон: вЕЇВ-ЗБОЕ КЕ: і ЗОЗ Як и й МЖК ЗО Я шк КК КИ ЗЕ п з вв у кое м КО се ПО КЕ яри ї Фктр-аєва м В шЗ тро ненско тя ее фе денту торт ретртаєва (ЕВ т ск воронок ве При уоукоєи пон я ; й: ЖК Ме ще КК МКК «ет ж а коки» рЕТв-ВЕВ вв зав й підсномойот га не : ак ж Ф Її окре: зе є ; сей ки МеКТКВХ у А У СКК й Ка Ж: шт (в т деяке що Вт ке о ек а ще ПЕ св) пе ї Іде К а «Кн о Бех ОК, вх се ве Я й ; щу ех пе КА кт Я хх ; хе х лина я Х ретр-аєже (6) ТЛО Кодески -я цеови й рете-ЗЕЕ ЕІ то я со пос вінснс ота і ті я : Є нм З й Не НИХ Сеня Ж КК ХА: еко ок є ПЕ ; вв) ії сх Е підожев ша МУК. і х Кн Ме ХО я ї ек: с | ; ск тв.
ЗЕ в їв ве 5 свосов, п хі ЗХ СЯ КУ що й а Х я се В Б як о чу З КОХ УБІК п мой І ї ше гав » хх «В пе сІР-ЗбЕЬ (Б м. я : т ренски ев осв не ме, ее Во йо реЕїв-З х БеЯе і ТА З щ" ОП Уеорхм я ши КК Я що Жим й ка ж: КД ЕХ ше ТМ ів . син горе л реїхрв- ВЕ ся т всей : тасденсво дет а «оон м в кое їх й АЗК а ки ох КВ СОКИ бек ох і РЕХв-ЗЕВІ М ок твіденено дет та шт хе «кфтеуотиех рЕтв-ЗєБа (69) Мо тенет осв нн го Кфеевавтя і: Я ак я Те не ЯЗ ие си кн той ще ЕЕ ср зе | ян Ше СК, Х ВЕ КЕЕ дум «ее й УЖхя х УКХ оф Я Й й ОО ше М мис века й 2) з ке м й «ей, онодотанетя: м іній Ох. же СЕН х хо З УКХ ХК, У Мука ЖК. : Жов те Е рЕХв-ЗЕЖхХ т З се ве с.
Я о дснсвойстеня п плн гичитеу ко вк ня Ех їі ще нй БВ : тА новой ж снейн Я й я ши у я ПЕ Фа тс: ї в, інст Ви ПУ ож яр я і ов пдсненохо отв, й щу це тре ник в ОК ЕКЯ рЕтр-ЗЄЕх ів; зоб тосденено дет не пе я. есте М З й К.
ОХ МК ве ВХ АК УКХ КК КК ЗЕ Ж вЕтр-ЗЕНа і (68) Кит» тис конснодотя овен г пк тку м м, «щі її з Б СОВА ЗБЕ т для Щ ба ие тЕ: сш те ї т : рехв-ЗЕВе По яка ше й Ко с пев кір: - їв ті Ку ох ще о ЗАС с ше УКВ те зба пз З я 1 пяти свой у, в соки КІ ве ЯбВУ уе й ОЗ як: од за ОВ вом ши за ОО ке "а пеня ТР-Зєна 049) 1 гека нене й Ян конів ке со реІв. ен (149) й и ік: У. ново стад га ех ож пе врехв-аЕня 348) тео тво ново ст шу шо ви . ії збиі (150 Є Ви асо тий есе они, . о в вон пи ко вн.
ЗеОчоУ М С З З Я хх ще Є поковок ох . ї е не ІКТ Я АЖ М Ма ; в її шЕ ща Єльс Кн. і сн піз кант те й ї С ох же ; Я о Бех ЗИ Яка ЗУ о и я Ео купе в Фіг 10 с зн енех з | 250 вел 1120) КВ около кми тт Ким тет ГІР-оєАє го) ВеМ кеАосаот окт стен БІвовАя 20) реф Ас певне векр-Вєва лою щу ес своюаех ух Кум іме вні зт роУ Вете-вда ПЗ С свое ох Кум Затнтє мн Кк ст ЕтиоУ сети вАє ПСО ду сс а тен дн ен тет ке РеЕТЕсВвАУ ПО фу Усе КОВО де дим тіктмте аміно т стжтой ретвевадь ПЯФб вро ов от ни вртле ану ств БЕЖеЯсв жЯ» реве Кк де ден «Мертас анти ет ЗА Бтв-все П80) росі ннв сти ван у ет ББІР-ЯОє (120) АВ Кс дня у і а ян у М вете-вЕся асо, фло ев сЕеМЕ вРІАННВНІК по сіж я мінсрвея П2оІ Дос: нення орд о у Дт рЕЖТЕеЯОСВ СЯ» диву НИ а гме алі ВнІНОЯО кт СУ птоз По, Вони тА еВ, ен кни ши ще птніванев т сіот гоовоє 22) Вир ость нам во си пе юн во нн вени я а щі тІАвОВНІВО В в Нх вБІР-ЯКЕю 035) усві тонА пот БенНИК тАвлаНІВНи лев вве 182) Дракона титану ввів веХв-Ябке 339, шувесхоренови УВО жіктІав вні ке кое : пе 015) Врослий все (п Косово ен вехетввв Б» умеоссудінови под ен адек ев вехр-ЕКА 1119) фАвовсу пнованиру віру втілені В дісьнойск терени 19) осв тмоанн и клен те В Ретв-аЄЕк 1215) увоссувтмсвАниок ви» тт сну дестя А: решновка СЕ ур овен аеде оту лох реттнаєже 285 щувеве вн є ся тілодннх ес ки ошІ Ретр-ЯнЕА (1393 дАеввсуриновАНисУХ Поеднтал дент тн о шен шк Мене кн ік Кон МЕН рет-ЗєКе ав ой вої СМ тесвант ве «Кемеів ттледннту ес РеТР-ІЕЕЄ 119) ДАесо пісввннот дека по ней ВЕЖ ЕЕЄ (39 Б суд воВ ор ще й б. Мехін ЕВ. тес ее ретв-Звна 099) ДоВотН КтТИНАСЕОУ ДАН РЕ ЗНЕХВоАЕЕ ть дово кіна ОЗ ех ня «Фе стот ов» рівне 0 т і ев ан рихв-аБнЕ пе респ ве ос м, ей о ШИ а ней буре тн кон» ветв-зЕнь ев» реал о вн АН пхосл те еототдУ рЕхв-ЗаНа 00 шо ходе т вно БК кА В ОО ОКО
Фіг. 1Е з 7 шо оо ветреавАв в сот ре унАсеТяК у Оле УТУВАНцЕ т ВЕНА ТЦВА РСІВ-ЗвАєЄ (10 РУТ ИМООЯ МАСЗІЗКИ рисовкаутувво о ше РЕХР-ЗЄАЄ (170) РУТ НОВІ МАСЕТУКІ ВКОЗВВЕТИ в ткінцвтт ув, ветвевесь ПЛ ве осневАвн кує ПЕ тав ттАСТ ВВА КА ВН нн нн і в М рев абсСе СБ тиме тваїм ккуін сЕв УТІВВЕАВІТАСІВІ я. ше БеТР-ЗБСЕ (РРО) вет увнЕов ивАВМКН ЗК ОКА УТІВЕ китАтківу та ветвизвся ТОР РУТ денво с унзАлнЕ Ки у оБА тва тв у РЕТР-Овра (170) етнос ВЕН АУНоВВІ утнЕет сУтАСТЕСЯ ЕТ РЕІР-ОЄТЬ (170) тетфенеов уст кни ЗАСТ В АТТАСТЕСИ ДТ вЕзв-Звре (70 83 он ни нка пізні івідініни фін ї. «кі й й В ей нн нн нн ТЕХР-ЗЕВа Б НАС ін нин кінні ні нету у БЕтР-зре 169 мийелюс наст ю тот вес тоотк тс РЕВА БК вн нн ві . свв ік ветрувке 168) рутфемовукАСТТВКН ТЕ СБАТУТТЕВЕ у ВТЕОтЕ ВИК РЕХР-ЗЕЕЄ (169) т пер осунАсттвкк тк юВАТУТТВВ ї нн а а ж нн в Б ветр-авЕВ (159) Рут ев унАСТІЗКНИТР СЗАТУтІВВ вто НАЗВИ у НН он не нн теІР-ЗЕКІ (БО) вази ан и Ак ТеІР-ЗЕБЕК (159) Рут осуньстІВКК тк СоВІУТІВВЕ ВВЕ В иа ветрсаБкі БЕ); мли учАСТІвКА ТК БАТУТІ вт ВУ тетв-аєЮе (169) РОТ АСЗУОВ В ріст ні сібнннідвейнініннкр воткт ниву РЕреОЕКо 170) вето еАсттАКК В НоЕКЕтМЕ т еУте тк у бЕІР-ЗЕЕР (170) РетввІтОК КАТІВ КК А ГАоВВНУтМе т сут тт ветреввва СТО) вт тов онасттяк ук Зав тмазт тво тво ТИ о ж ен і ме ен еВ и рей й ан нен ТЕТВеЗЄЕ (169) РУТЖУВТНОСОВ воттВКНуЕ сЕВТУтТІВВяутЬтВС, Ясон й гірки 159. рев касти ти ооат тт вватест нн й веХВ-ЯЄЕУ (Зб ВТМ юЮвОК АОтІвВ вус ОвВ ій кебон інді їт Ск витвевена с ве ре я те, соффо у іст жи моли: змесеомтютсню міом ми мн я вів-збні а ее ке ето оо о ен то
Фіг. ТЕ з | | | | зва РЮХІрР-ВБаа (ИтО) ВІ АВИ ВО Істоти акти НО ОК ВО І РЕЇрР-зБА: (220 БОМОВи НО о ВІТ ав в ОН ВО РЕХР-ЗБАС (250 БТОУАНИ ОС ВІТ ОТУТ КУ Вих ОНЕУ ОВО веХР-зЕАЯ 250) ІА ОО АІвтВО ретвть де су Ох БеТР-ЗБАе (220 ЗеАНО, с У АТО ТО ВТ он и Он РЕХР-ЗБАЄ ї820Ь КУА ОВ АТО тд еЕтЕти у ВИ Є ЕЕ, РЕХР-ЗБАУ іш БЕБКУАНО ЗОМ Хе еУВи ОМ кОм Техив-зЕАв (90; Біла Оу вів тут те смкот в Онх О жені Ж ШНЕК юка КК КИ ВА МО А З КК вехв-васв ОХ Корслнуртя межу: Свт МЕжф ква НК ВО ТО НКУ Бехав-абсе (ОЇ в о ЕН ви зе ЗК БО ЕС во ЕВ вЕХР-ЯСЯ (ЗОЗ В Яма ов З КЕ Ка ОА ро ЕВ, вЕІР-ВбОв 220) сла уд Іва т ето нЕтво «й УС Б ОонУНЬ БЕХР-ВЕСТ 50) в гне пре тету светавьоу помер вРехе-ЗБСе ЛОЮ САН ОХ НО ТО У В НВ КВ ОМ ЗЕ ОКО РЕХР-ЯБСВ ї8Яй) ЗО ЕАНОН НУ ВО ТтВа ХУ УВО ТВО ОКУ МВ ОКОМ У рЕТВ-ЯйОа (220 ББОРОАЕНО ОС оАУВТВТЕВН ВВ В ЗОН ВО рЕХВ-ЗНО» (52Оо) єогАюООсеУв ев Ок Сех рехреаос ЖОВ Бут АКООНК ох УТ ВІ яке ви ос ке аЕЖ а они І не ше мА а НІ З РЕХВ-ВОЖХ ооо) БНО ОБР АХОВЕАТ УТ ОТТО кесй КЕ тееК Ву ВЕТО Ежа 29) ДУДИАНД КЕ дув во ев Ен, шо век шо ши о а о и вх РБІР-ЗБШа: о ї2і3Р БЕОМУТАВО ОКЕ ОСУСТ говкввті у. ВО ях рЕЇР-ЯВЖО сс БО УАВИ ОБЕ Б ВУЄ УТОВуУТВІ Кут ОБ еконо РЕХР-ЩЯОЖе (ЩІ вЕОМУАЕН соку УЮ ТВЕКО Ве тя тео Же ОНХявО РЕІВ-ЗЕЖЯ ОО БІОМУдКО ОКУ УВУ КВ лено ООФКК ЗНЕНЕЖ У, реже-айкУ (34а» КОМ АКО сКУк; ВУБ УВО нКеВ пев сх веХв-ЗЕЕВ (ЗО) вому ККУ о УБУЄОТИВи С ВЕН ВКЬА о Ек феХе-ЯЕК: (Ж; во ОМУжее СБУ ув ка дня на сх вЕТ-ЗЕКЕІ (230) сту ОБУ ТУСУВОТ УВО ОВ ИТЬХ «Ето, вне о ва В вЕХР-ЗЕЖЕ 8239; ІМУННІ ОВУє сУКУЗОГТУВОО КВ Ян ж ОМВО рехр-зкЕЗ Фа ІсОНуАВОООХУк свое ка Я тес ОІВ рехв-аяше (213 БІОМУАВОсвКе ВОБУЄСТУА говкент но Ох РЕІР-ЗбЖа «213 БЕСМУАВИ ОКУ УМОВ КНТ ОЕМ ОВ вЕХР-ЯЗЕже о у СУДЕН СКК КУВЕНАТУВИХ зоктавно Ек СЕК РЕХВеВЕЖв що Кд ит шу ке се с ве ЕК РЕжв-обка (22О» БУдтУАЄДЯКЕ УЮ ТЕАТТОДК ТЕТВ о о ЗАКОН ЕХ БеЖе-ЗБЕХ (ЗО) ІЛИК ВОВ МО РеСОКВ ен ЕН ОнІ ВО веХхе-аЄЖжа (233) рн еВОеЗ соту вне нот кона рете-оєж 1219) Бі пл осюти «реутовут еонеентев но тек онтной БЕХР-ЗЕЕ ба ЗУБНА ЖУК тУвТЮстТуАНт тент мевонх комі ВЕХВ-ЗЕЖже (29 БІО АЮЦ ОК твитсеттнт вксвт но мово Вств-ЗБНи (298) ДЕДОХАНЕ ОХ Котов носи В у Ретв-звна 238) ду АНІ и они Дт на, Ед, Ретв-ЯБне СНИ Вед отАаєуною ді є Атени дек на ши А Ретр-оєна 298» ду А о о у шу Бетвоаєйь 3) Шу коди ветхр-ЗЕНі (298) Брпюурог и етсатовтввтктанно з ша у
Фіг. 15
КЕ | | | КУ веЕХР-ЗЕва 8270) івент зом ото р мутААВ НО суку ОВО ВЕХР-ЗБАВ Я З КрветІті окопі Кен ЕТАЦНАТУЮ Уа УК І вЕТв-яиАє 80 рве: ІТ Ов о где УТАЦАТУЮУ нОУКІЗ ОСТВО рсІв-замі ЯЗ З Кор: ХТО ІТ ОВ ти в ве Ват ОТ РЕІР-ЯЕдє (070 3 та тт тов от твома ут тА в ВУЄ У СТВ РЕХР-ЗЕАЄ (57 авт І А СЕЗ шЕ рРІТАЦНА ЕМВ УКІУ ВОВНИ Рехреабаа АТО певветхти й щої ХТБЕ г б ВК МАЕ УВУ КУ рехрв-ЗЕКа 270) тав З ОХтОВ вд Рута зееУувІт с ТЕХР-ЗНСя 072 Її Кеветтт ЗчОХ тот нку хАА че ока от вежхв-ЗЕСВ ав: Хвееттт реж зим екв ие тав пенсУк тк веЕТР-ОБСе ал я веут У атйоття Як ше ве «о ев се вехровЕца ад: Квіт деовквотт БЕ ІВАНА ТЮТЬЯ чт рехв-засе (0 Трее тов Он, ще яв ТУ: ши ТЕО НЕСЕ (З Жов: ее ун кеи є вм й У. М АЕУрК ЕУЮТУВ СТВО техр-жася В з Медкттті пиоахуоттьоме нути поатоок УКТУВСТКО РЕВА 5 з Конні же коАтт са нщ пІЖх ше пе УКІУ ОКО вехееаяра ОЗ пввеитев я ЗАТ ОХ соні ща ун зУвеУКиУ НЕ рЕхР-ОЄОЬ 70 х Кевитха ОО твою ок кеутнекта, «в зи то ств вехр-оноє ат: Каветте фот зе ІТК АСОЮ зо те сте рехр-зЕОой 210 пенейттви това нен РЕТАЦАЄ опт фЕХР-ЗКОВС (ЗО З Крут доки рохтоне утри аа т рі ВеЛР-ЗЕОЄ Та З Макети зом тонку ге ви АХ ЗО УчНОсеК зехв-зЕва Б вба и в мне чу Ів реБе-нЕВ за тло» мис пою; пари ДО ОТ реже-не (еВ тва г Доти с ев онов рихв-зака ОЇ т авт ОстекттьоВ ее рхевние УоУ тУКІТНТОТКА Фкїр-ЗЕЖе 1260) ІОНЕЕТІТІ РОАТО ІОВ тТІ о Дівен в ру тУрІТНтОВВА тЕТРАОЕЕЕ ОБ тіннет Іо ней вп уатвание ВЕН Ота ретрРеЗЕЖО (ЗВ тенет РОБ ІК ше се ох ретр-зЕни 255 тео вектто ті т вІхЕНОСЕОруНеУрІтн і сева ветр-аЕКі ав певне ТЕ одетоввт сих: снення то веХв-ЗЕЕЯ ге Тіват Ом вну в пкевкоте тм нонех вехв-аяЕЕ Б с киска кажи Се У БЕ УК в рете-абві еВ те мом мо хе тено тя вес рехв-зєве (260 та "ІТ РОВТе ІМ тт) о атеенов ох вУрІтнтовва реже-ЗЕка В Ін нивМмовв Я нтеснн се ооо теІВ- ЗВО І Кан ТІВ зх я а тдту в КА ек От тЕХР-ЗЕВ:В 270 ЄрретІв: в зетжттю де УТретнА ПАК вису от тЕХРЗЕНа ТО: Зоре: деострт З оте дет НАТО ОККО я Вете-аЕшх (а Якнах ТІ деостуеть з ду уехее дерти сек вЕХрРеЗЕЕУ а тенет попри ко га с: Он упвІ У ОН резв-ЗБЕЄ ЕВ пря и а В т РеХВ-яЕЕа (69 ЗЕВВетІТ ОА Т У пра тав нас» Уа ооу она Ретр-обна 348) пдктатмн льоту ВЕК де кино: днде туди нет. ретро 3 провело дво дви увАивС т див вокоте- ретр-ОЕне 349 ОВТ же них Ен доя ов з РЕТР-ЗЕНЯ (368) 5 ботан У вом ша: ши МОХ ОВ Оєе» с ШО и нм м ни вехееобнв 34 де мл ее им нене овоя Шен меш нон же И реТР-ЗЄНа 4398 здат тм ДУвохО иннан са дедАиНН Ех кино за вехе-зЕні ЗЕ среди ер чн о» и ме а ННяе
Фіг. 1Н ча чка веЕХР-ЗЕва іїЗ20 БезОноАтниЕСУВутАЗАнОВАУЄТТТТНАвТнуУ ВІВСА ІКвУКХВ шеЇР-ЗЕА» 30 осо АдНКОУВУТАЗАНОСАЧСТттВАрвоВУчВоІВсА річ рУКЕ ВЕХВ-ЯЗка: ЗНЬ ЗБЕОНОАЛНКОУВУ АЛАНА ЧАСОВУ УНІАН КЕ реЇв-зкаа (ЗО БоЗОоВЬАХНКОУВУХАВеНОВАВТ МАР НИчУНРІВСАВІУЮТКТВ РЕХІрР-Яшає і350 пспнОАІНКрУНУХВВАНОВАУСВТТТТМАРРЕУНЕІВОАРІУКВЧКИВ РЕХВ-ВЕАЄ (350 ЗОБОнСАХТНВОУВУХВАЛНАВУЄТТ ТАРТУ НОАВІЧЕВУЮТЕ рехе-зйду і3же: соБоньАтНЕОоУВУІВААНОААУСуІнАрРНУ УВІ НОАВІЧКРУЮЕВ РЕХР-ВЕВВ Ї3Ж0) зееоньвІМНЕСУНтхВАлНОАКУЄТТТТНЬРНуУУНеХВОВрІЖВУКЕЕ БЕХР-ВЕСя (332) УВО АК УОВХА ян ВН ВО АБЕ ОК В нн в ВВ БЕХР-ВЕСЬ» 4388) УСІОВОАТИКОЗ ОВТ ОА «ее ОВО АВК нн ве МВВ БЕХВ-ЗЕСе (З20Р УВО АТЯКОУВ ВЗ УВК я ВВ ОНИ тн в КВ ВЕЇТР-ЗЕСЯ (322) ТОВ АТНКОУ ВЕУ АН ен ВВ А У ренжкнн нею РЕХР-ЗОСе ІЗЯО УМО АТНКОМ КУ ОАН ее ВВА АВЮ ОУН нен в КВ ВЕТВ-ЯВСЯ (ЗЛО ЗОВ ОВОАТЕКОУ НЕОН. ее ВЕУ АРІ У не В Риже-ЗЕсСУ (330 УЕОНИОА ЕКО СКК ВК АВК КУ нн КВ РЕХІВ-ЗБСВ (02 тоБЦЦАОНКОУ ХНА ех ЗУ АТО ВАРРОУУН тн УК ВВ РЕЖЕеВЕОВА (ДЖФр фехонхеютютттттттюттьююєттю ть ххх хотею ють нсюютстю о оо ххх жежютюте зе о» ЕІ НО й шиншшни ВБЕРЕ (ЗО ЕКО КОС ен ВВ п КО КЕ ТА ВЕН РЕХРеОЕОМ 8320) ООН об рек» ВО ПО НО веХРеовОов (ЗО й НК ОН ее АН НН НН вечеря аж КО БОКОВИМ в ВЦКЯ ФЕХВ-ЗЖа 31 ММ МОБ тт тет пк отут тесвктнктю попе т чнктх вехв-ЗЕКВ ії ВКШУКУЦО ВОД т т тю тт пкт тот пк пкт тин РЕІВ-ВЕЖЕ (3 ВЕБ по у бн н жжтттюттт жженютете ють як жест течютюте РУХВ-ЗЕКЯ (330; НО но бу юнннннняяяннняяжжжктнжжжннь вежа ВЕК (З БЕК УКЕТВ ур юн жттт ют хоюет в ою жест око вЕхв-ВКЕЕ 39 ДОБУ УК Ер нюють ж тт жо же вето че ТЕТР-ЗЕКУ (310) МУКОЮ ення няжнижннянниня фТЕХРЗБЖШИ 4319 МІК ЦО юною тт зехююют тю кт хною тю жене БЕХР-ЗЕЖІ 4319) БИФУЦУКТ ВВОДУ тю т тетететтетют жеетететесвтвт я оеетететесвов же веХР-ЗБЖЯ ЗМ ЗОБУ Ор тет т тет тю тт тет те зо четете вЕїв-аЕЖх За ЗОМ УВО ОС т нене пкт тент ях вот з яеренооте тр четх звест, рих в-зве 319 БОФУВУВТ ТВО т ня тет тт ж тв жжтх як хо хе тюте те РеХВеВЕКе (ЗЗР ШО КУ пуб вв тт тт тт тт ж же» РЕХРеабва 2 а НН НН І НО ВежтРеВЕва Зб кН ов КВ ек ев БК ЕТ ВЕЖХЕ ЗШ 319 МО ИК ЦЮ рекет т тт екю зо вин ж зененю те ою жкткс ВЕТР-ЗЕЕХ (319 ВИДОВИМ ВТ Кр ет жететететете ееететете в ж жетете вовк жене ТЕХВ-ЯЕЕЕ (333 МНК подане тт ють кн вЕїв-ЗбЕа мому ОО» пк и п РЕХВ-ФБЕЖ (312) МИ ру урн люттю ють ск ле тенет ключ чютюнюн ее и Ше З о и ФЕХР-ЗЕНО (ЗЕ; ст тт тт ттттють жовт тет тю тоже ее ветествтю те жовто т еесевтю пе, тек ФЕЖХВ-АЗЕНЕ ЗУ сосною хсттью зуоктютх хо сеютьт окт ую сеютьть вхо ую свв вхо ях хх сеть око ДВЕТВ-ЗЕЄ НЕ (ЗА р сен оюте тт т жмут заяча дю дю ще зо за-аа-юх хх хх ою хе зо-валн зм, хх де хв вва в ла лю хе ФЕТРеЗЕНО (ЗБ) сет тт тт зе юс же те тю хх кож зе суки зе ть кю хх хе ФЕХРЯЕШН ЗБ) сееоекютстютовтюттоюют тт ов ююох юсюют сут кю хх потют оо юю ють кю хто ВЕХВ-АЗЕВХ ІЗ55і дм УК й МЖК УЖ У МК й КУ УМХ М м я УК ЗХ У і У УЖ МУ УМ Ж М УЖ УЖ У Мт Ж Зм, Ух дм Ух м плям ВЕЖВ-ЯННЯ (Р р сеть тттьтьтетьст т в теттьте жов еевететь зо вою еееесввсвю те есте ев
Фіг. І яхі за ВЕ ЗА. і зт З ЗАТЕ ДМК кое чною як хкояке кю че лю на ях нкояк ян ях чне ля зна ях хх ян дя склянки В В ФеІБ-ЗЕАБ (370 УОАТУТНОТОЩ тт жк» Вр РеЇР-ЗаКо (3 УСАТЕІНВООЮ» яю южнютю тютюн» М ВЕ РЕІВ-ЗЕАЙ (370) УСАТУІНОТОМ снення ТОВ ВТ ФЕХІВ-ЗЕАЄ 6370) МОДЖУ ХВО ТИ ен тт ю кю жають тютнстя око пов туя ФЕЇР-ЗБАЄ (370) МПДТУХНОТОЮ » ект тв ж т зеок ж ж ТОК ТЕЇР-ЗЕАУ Ї370Р МОДУ ХВО» ен кжнетютю зюв вктю те он вежею сю яко як тех Др в КІ ВЕТВ-ЗБАВ (ЗЛОЇ УПАТУХМОТІще ск жене кжжжжюююююжжжжеютвжежее Кр РЕЇВ-ОЖКА ІЗ5БЩІ ЗОАТУХМО ТИН сс юю кою квот оо тосненно у ВВ ВК ВЕХВ-ЯЕСЄЬ 358 ЗОЖТЖТМО ТІ» ох яккнюв вче юн як якнечк зелен Ко В КВ РЕЇБ-ЗБСЯ (308р УСМТУХНВЩК. хе н жют жтттттетют жнстенех » КІТ ВЕХВ-ЗйСе і1ЗЩЕ) УСАТУТНОВНК. яння жжтнюююттнкон» ПЕВНЕ ВЕЕ ФЕЇР-ЗЯСЕ (356) УСАФУІЩОУММ тю тт тт т тот осн» КОМЕТИ ТЕІВ-ЗЕСЕ (355) УПАТУХНОУЄМК» яю тт тт ТТН ШЕЖЕВ-ЗБСВ «358 ЗДО УВУ ВН о хоть же юю як хх кот о зо о ях зх хх ТЕ ВЕ КН БЕТЕеЗбОв (381) зехихкхнжиннннннянинннннинжнннк ники книжки ТЕХР-ЗБОЮ (ЗБ МОВА жЕ В ее В пре КАН ВВА НО КО РЕХВ-ЯБВО (ЗБ НО екв ве НН АН НЕ вах СОНЯ НО Ненсі Він НО В Є РЕХР-ЗЕе (363) ШАТУНІВ снення» ВОКОНИЯ РЕІР-ЗЕВЕ (345) ВАТУ ОБОВ нтютяянннян- я ВОЕННИ: іа Шк нн ФЕХВ-ЗЕЕБ (333) сет тт тт тт люттю тстсксх т В ВВЕ рЕхв- ЗЕ ї З жо ЖЖ ККУ ЗКУ Ж. СЖВСЖЖОЖА ЖКОМЖ КА Ж Ж КМ, Ж.О ЖЖУ АЖ А ЧА ЖКСЖАОЖАСХАО ХК пет вк люттю тет ж же ВВ ТЕТР-ЗЕЕА (338) яееннефоофеннннняккнянюжжежкюттюттяенкх ПОЕТИ ВЕДЕ ЗЕЖЕ 433) ект тт тт т ж ють хокею есте «Бош ФЕІВ-ЗШЕЄ (334) сен ттютьтьт тт тт льтьть тт кою в нн КВН ВЕЖІ ВЕЕО (Ер ознннтннтжююттютттьюттттттт тт» ПЕВНЕ ФЕЖВ-ЗЕКВ (554 сення юю вт тю тю тт кох кт тя тт ххх тк як чк яке скккя вх ккд ях зх зн» «м ВЕХБ-ЯЩВА (ЗА) секс ееюютт тю тт вет» МОВИ ВЕЖВ-ЗЕЕМ (Я34) сення тютттт тютюн тт кю» ІВОВМЕ ФЕЖВеВЕЖО 4334. ян нею ях якою ке юн ях кою че чі віх ях око юо я че дол поко ко че люлі я ок, шо ФЕХВОЗБЩЕ (З34р сен як тютюн хх лк лю зютюлютх як люте золю» як хе КО ВН БЕЖВУВЕЕа (334) зятя тт тт тт тт тт них же ВОЮ вехееаєва ЗБ НН НН Реве аЯЕе (ЗБ он НН КН ЕН вовка ЗЕ НО ВВ МО І ОО ВЕЖВАВЕЕК (ДЖ; зекєтюттттжяююєтют тт тт тт тютюн жк ОК ВЕЖА (Яр сект як лют юю хх хк дя тк хх ях хх хх лк ххх хх хокею лк «БОБ ФЕХР-ВЕЕЕ (333) селення нннннянннннтюнтннятютєтн кн» ВИВОННО ВЕХВ-ЗЕБО (Я34) злет тт жк чеюеет кювет ФЕВ ЯЗ33р ясен ях якою екв ях яко дк че тк кві я ак дк екон як як дк як че Ко кв ня ях кн шо рЕхво Зх ЗБ ох М МЖК ЖК ЧК ЗСЖ ЖЖ ХК. МКУ УЖ СТІК ЖЖ ЖЖ УЖ ЧО ЧК ЖЖ ХО АСУ ЖК КИСТІ ЖЖ Ж ЖЖ ККУ ЗКУ Чо СА ЖЖ ЖЖ МЖК ЧУ ЧК. ЖЖ ЖЖ лк ТЕІВ-ЗБЩЯ (33; ст тттттютютт юю тт тт пост тет т тост стос соте етос» ВЕЖТВ-ЯЕЩЕ (ЗУр зт тт кт т жовт охткох жк кот зккоютх тет ВЕЖВ-ЗЕНЕ 8355 сек тт тт м м ж ж ютт ктктм жжмоюмм мтюм чх вумст хх мех ме кокс. ВЕЖР-ЗЕЇНУ (ДОДРр зняттю тю тть т тт т тт вою тя зв якою кю яке зе ВЕІВ-ЗЕНВ (ЗБЕр снтттжжноютютттттттютю тт тю юн з ктт тил жене Ів ЗІ Я осо хюют мм ку ух ух моди зх хх хх хх ух ух мус, хх хх УК Ух УК Код ХУ УЮ ХК УК УКоєМ, сх, хх ЗК ХХ ХХ МОЖУ М ком ВеЖЕВеЗЕНЯ (В); схжжютетюттв житт тт ж жест в жжсвеееть ою а ж жесть сеть
Фіг. 19
«81 го ВЕХР-ЯЯАВ (ЗО ДАТЕУВВІТІДУ кокетеют БЕЗР-ЕХв (383) ААОБУВЦОВЦЦУ У єння РЕХР-ЗбАо (303) ВАЖВУВЩВІДТ ян РЕТР-З6А (388) ВАХВУВВЩІЮД ння РЕХР-ЗБАа (389) ЗАТЕ Т ння РЕХЕ-ЗЕВЕ (389) дАатЕУЮЕІТЮУХ ення рЕтр«ЗбАа (389) ДАТЕУЕВІДІДЛЕ етно БЕТО-ЗБАВ (383) ВАТЕУЮЕБТІДЕ сен БЕІВ-ЯбСа (37?) ЗАТЕУЮЕВТІНО есе РІВ-ЗЕСВ (ЗК «АТБУВВІВІМИ се ВСІВ-ббсСо 1395) -АТЗУВНОВЦ ння БВеХР-З6СЯ (377) -АВВУБКЮЮУ. няння вЕЩО-ЗЕСе (375) -АЕВОУВЕВМ яння БЕТА! (335) "ЗАФЕУЮЖЕТОМ ення РЕТЕ-ЗБСЬ (393) "АТЕСЕЕОТІНЦ кн ке ТОЖ ї ЗІ зеожжоюютю ке - ск мех мк Ух ххх веХР-ЗБОВ (ЗБ) Вб нняння РЕІР-ОБОо (ЗО5) МОЖЕ ТІДЕ ення РЕІР-ЗВА СМР ОН НОЮ ВеІв-бЕбВа (363 ОБ ДА нет ВеХО-ЗШОЕ (385) ОБОВ В ння рете-яажа (340) ННЦ ння ТЕТР-ОЄЕЬ (380) ПК ОУБК ох тЕТВ-ЗЕКЕ (341) КЕКС рЕТР-аБКе (341) НД ню БЕТО-ЗБЕЕ (383) НБН СТІ нння РБІР-ВОВУ СНІ) КОТ ретр-вежв (41) ОН ння РЕХР-ЯШЕВ МІ); б НОЮ ення ВЕЩ-ЗЕЖЯ (341) НОСОК ння вЕтрР-ЗЕЕЕ (341) ВИЩ БО БЕТР-ЗЕКІ (385) ПАН НСТЬЬЕНЕняяяя тЕТВ-ОБКа (З41) КЕ ОРІ рЕЇВ-ОЄЮЄ (341) ПНТ ння БЕЖЕ-ОБШО (4) нетто БеТе-ЗбЕо (313) ПОПРКЕНВІнннння БеТР-ВОЖа (405 З 0 УКВ Е ення Безе (НО НОВ» РЕХЮ-ЯЯЕЄ (ЗАВ ВОМ І ення вете-яаЕє СО МК ОК ення РЕтр-ябЕа (341) никЕАНЕ тету ВНИН І ОНКО р ну, РЕЖВ-ЗБНа (39б)р яння БЕХВ-ЗЕНИ (ЗД) ст БЕХВ-ЗЕЩа (ЗКУ; нннняннтюттютьтттття ВЕТВ-ЯЕНЕ (ЗД; зт БЕТР-ЯЕНУ (ЗЕ); яенннннннннняяжжнняя БЕЦТВ-ЗБЦВ О(ЗОЕ)р яеннннннннняжтжжнятт ВЕТв-ЗВ Іза же ое об вмх Же беюю ве оо о б мх Же те оо ех
Фіг. 1К і о РЕХвВ-ЗБАВ і3) нахоттУтТ: то ВОоСВАтТЕМАСАВОВІБВВІСУНЬООООСВОІВУННХ вехв- зада їі) МмаЗхНОТРУТЬТООНОСАВЕТУМАСАВСВЕ СИНІ УА рЕтрР-ЗЕмі із) матвоееУтьтосвосавиттнасвасвІ м ВІсУуВасовО ав ех зва її МУХхНОотТеУТЬІССВИСВАКЕ НОВІ ІСУСУ ни вБЕХВ-ЗБАХ Ї3» МОХНОтТРУТІТООНОСЛАК ТУ МАСА ИВІБНВІСУ НАВС ВУМИХ РЕІв-зЗБАя й МІ НОТВУТЬ ТОМІВ ОСВІТУ МАСОВУ МНЕ рЕтв-ВЕАВ (із мехтоОтеетьтОосвВсосАЛЕТУНАСАООВХТАВІСТВАЮОВОБВСІВУННЕ щі Ка вет Зва ІБ ЯСОБРЕТУОТеМУЄ УК КРОКІВ МОМОТ ОІНЕиТКХ ЕЕІК- ЗВ і звозвІТУОТрМус онов ІвЕ веТвР- ав Бе ЕН кв ек З ЕК ЕК НВ МАЕ ВЕ Ки М ВК Кк фак й ВЕЇБ- ЗА іа) ЗБОРІ ТУСтТрМУуса ЕТО, ситного ІВ КЕ веІв- аа ща сЬОВКІТХОТРНУСОХОКИ ООН ОМОАСТОСІАТ УТ вехв-заде 155 спваРІТУСТЕНУСОХОВТТКОССПОАІТЗСОСИОСМНОвОТВО ОТВРЖетЕ ВЕТР-ЗБАЄ і55 сьому кита оАо ВОК ФсІвР-ЗБАЄ 153) ФБОЗРІТУСЄТРНУЄСЧОВРТРОВСЕВІТВІ І НОМСАСтТЕЗОостВЕУтТя вже 158 ве заз 0103 СБУ КО РУВУ УВО ЕМЕиТМуВ РЕЇР-ЗБВа 1303; спЕРУцННОТЗНСцОКУРУВУУВСТУСУВСТОВОСАСТОВОСУМРСиТНІВ щеІв-Заве ЇцЦН сатин кОовУ УВУ Усось вовк ьвемеа Фев абає (303) Бити ЬКОКУРУВ ЛЮ В тОоВОпаОтоАСОМНС ВТМ КВ ветв-ЯбвЕ (01) сметннНе несе кОокт вус во вАвтОвоовМ БеТНея 185 тай БВЕТР-Зайа іі» вимі ьЕТАастУувУТЬСЕМОрОМа ІКТ РОиКУ Туя тЕХе-ЯБАЮВ (151) АВМІМКУРТІСЬКТАСТУВУТСОУМООЗНиАОЗІНКТИВУОСНВЕУ ТИВ вете-обдє (153) двмІНУКУРТО І ЕТАСТУТУТЬОТМНООСВММНАОСОІВКТНЕКОсСОВКУ ТОВ вЕхв-аачі іі» вимір асо тУувУ ОЕМ ово Кума Уа ЕЕТЕ-ЗОде БІ) АеМЕМУКУРТОСЬКТАСТУВУТЬОКМЕВОММАЗІ ЧНТУ ТУ БвБеІВ-ЦЗАЄ 01153) АЕМІМУКУРІТІОСВТАСТУРУТЬОТМНМОВЗОММАВВІВКТНОКОСІВЕУ ТУ В РЕХР-ЯБАВ (151) АВМІМУКУРТЬСЬКТАСТУВУТЬОУМООЗНИАИЗІКТИВУОСВВЕУ ТИВ
Фіг. 2А
РЕТВ-ЗбАа 101) КОТ ТОІКЬНАОЕТУВАСІВСУАНУКВОВУСНАТЯТВО ТУ ТИМИ КТК БЕТВ-8ЕАВ БО ЯВЕБТТТОТЕСВАТТУВАСІВОУАНУЮСОУСНВАІЗтВТУ ГУМКУ БЕІР-ВБАВ 501) ВЕНеТТУСІВЬНАЗІТУЛАСІРОчАНУВОСУСНАТНТООТУ У ННЯЕТНТ РЕХВ-Ябву (2915 азнетесотвонАаветУаАотемоВнУкоОокитта ат ннК РЕЖХР-ЯЄВС (Я ВеНЕТТОУСІБСНАВІТУВАСІРЬУВМУ ВО УСНАТНТВО ТУ ТУНИНЕТИТ ретвевавАа (Я) ВеНЕРИВУККОНАВІТУ АОС ВЬУАКУВООУОНАТаТВА ТУ ТИНИ БеЕХВ-обаье НМ зВнеттТтТоІкьнанттТУВАСТВОУВНУЮООУСНАТВТвО УК ТТННОКТКу вРЕТв-ЗБАЖ СО3 ЗБНеТТТОХЕБНАВТТУЯАВІВОУАНОВОО ТОМАТ ТНТУ РЕІР-ЗЄву (201) зянетттохвВенАавІтУаотвооокоОтсн тата тенноЕтаХ ТтЕІР-ВБАЮВ (20) ВяКЕТТУСІЕЬНАВІТУВАСІРВСУАНУВООТСН ТВ ТУТУМНОЕТВУХ а щю БЕХ бла (53 БОМОМВЕТБЕРООВС ВОАС ТВНОКТЬРОАТНО ТОВ УВІ ТА БЕТР-ВБАвВ Бі) ОХОНООУСКРОЦНІ ЗБ ОАЬТВВОТІТЬОВТМОТОМОТУК Твіт вЕТв-ВаАвВ Я СБОБЦМОСУСЕРОДМІЗСЬОА СТАТІ ТЬМА ТОР УКТУРІТ ВІВ-ЗЕА (251) СОБНОМОСУБЕРООНІВС ОАСТКВОТІТЬУХОАТНО ТОНУ КТК РІТА БЕЇВ-Ябас (2853 ОМОБОСУБЕРООНІВС ОВ ТННОТІТЬеТОА ТО ТТ БОВО го ТуРТ КА РЕТЕ-ЯБлЯ Ві) БОМОМеОУСЕРОМНЕВБОАБТВНОТУТЬВТОАТНО ТТБ ТА вЕТР-Вбда Бі) ОБО УЧ СКРОЦНІЗСОЛЬТВАОТІТСРУЦА ТО ТОМ ТУКТЕВІТЬ БЕХВ-еАЖ СЕ сБОБОМеСУСЕРООМІЗБОАСТВАОТІТЬРУЦАТМО ГТ ТСОВСТУЮТУРЕТА всІВ-Збло (251) БОМОМОСТЬЕРООНІВС ОА ТИВНОСТІ ХОТІВ УУТУ РЕА РЕЇВ-ЯБАВ СБ) ОМОМОСУСЕРООИКВСОАБТКНОРІТЬРЕОАТНОТТООМСТУЮКТУРЕКА з Зяо шщІв-айАв МН шва УЮУТаУЮТУВМ УМО ВОВОНЬАНКОУВУ ТАЛАНОВАУОТТТ УМА; веІв- ЗАВ (301) охасУЮТттВоВвІУВОСТВОБсВОНнНОвІНКОУВУТАЛАНО АСТМА Є ТтеІР-ЗЕн: іЇЗ0ї; ОхасУвттвУВтТтВОстиоБОовонЬАІнКо цеха аАнОовлУСТТТТНВе РЕБР-ЗВлУ КМ ОЗАЮТВУТВУВТУВОСТКОБОВОВСАТНЕСТУКУТАВАНОЛАУСТТТЕНАВ веБЕеЯЕАЄ ММ ОКВОУВУТаУЕТУ ОКО БОВОВЬАІНКОУКУХАЛАМОВАЧСТЕТЕМАВ БЕХВ-ЯЕАЕ НМ) ОЖВСУВТУТО УТ УЧ ОТУЮТОВОНЬАХНКОУКУ ТАЛАМНОЛАУОТТТУНАР РЕЇР-бвде (301) ОУВОУОВУТВУЮТУВОСТВОЬСВОНСАТНКОУВХТВААНСАКУЄТТТТНВе РЕТР-НЕАЯ СЮ ОАЕ УВО ТВОООНЬАТНКО УВУ АААНОААТОТТСТНАВ вЕХР-ВЗИАЧ (501) уВОУЮХТЕУКВКУВО СВОИ ВОНА НКУ ХАВВМОВАУЗІТТКНАВ ветв-аєав 301» ОтАсУВУТяУВІУВОСТВОС СВОИ МКОУНУТАЛА НОВАЧОК ТЕМАЄ Зі 495 РЕЖЕ-бЄлЛа (553) ВНУУНРІВСАРІЧВИУКНУ ОВТ ІНОТОМІТОКУТТААТНУВЕЬТОУХ ВЕХЕ-ЗБАЮ ЗБ) РИЖУНРІНСВКЕУККУККЯ ЧАСТО ТОМІ ТОМАТІВ ЮХ БТв-ЗЕАВ (351) ВНЖУНРІБОВЕТУЮРОКУВУСАТТІНОТОВІТОВУЮТТААТВУВВКОУХ РІВ 353) ВНЖУНРІВСАРХУЮКУВКВУ САТ ІМОТОНЕТОКУСТТАЛТВУВЕСТЬУХ РЕТЕ-ОаАЄ (53 РЕЖУНРІВСАРІУУЮРУКРУВУЄАТК МНОГО РОКУ ТАТКО Х тЕТР-бЯбаа (35) РиЖУНВІНСОАРЕУВРУКРНУСАТУХНОТО ІОВ тА Кох реТр-ОБАє (351) рРЕУУНРІВОВРІУНРУЮРЗУСАТУТНОТОВМІТОБУВТТАВІВУ НЕО Х БТЕХВ-ЗБАЄ (351) БНУУИРІВОАВТУКРУЮТВООАТУ НОГО ТОКУЮТТААТНОУВВЬТЬУХ РЕТР-ЗОБа (35) РНЕХУМРТІВСАРТУКРУКИЗУВАТУ ОТО ТОКУЮТТВАТЯУВЕСТЬУХ РЕБР-ЗБАЙ (ЗБ) РЕУУНВХВСАРІУВРУКУЧЗУСАТУІНОТОМІ ТТ ЦЄЧОТТВАТІУЕОТЬТХ
Фіг. 28 ії те РЕВЕ ЗБСа (1) Мет КОТРУНОТОСОСОЗКУКУМАСАЯСВІБННІСТНАСВаКІДОСТАВИ рЕхв-З6СЬ фі) мМметаттогеУВУХОСОссВЕттунВСсЬВОоВІБОВІСУНАЄВЕТЬССтВЯМ вРЕІв-ЗБсе (і) ««МеІНОтТРоНУтОСОсОосЕттХМАсАВОВІТСВВІСТНАСКЯКЬОСОТКОЄ реїтв-зеса (1) МмебдІРОтеУНУХОСОСОЗЕРТуМАСЛАОСНІТННІСУНАСВОКЬОСІВЯЄ вЕХв-босе їй) --МеІХКОтТЕонетсоОсссЕттунАсАановІтвВІсУнаси и ооо рРЕХР-ЗБСЯ й) «мг ОТеУнУТОООСОпЕКТуМАСАЯСВІСВНІСУМНАСВОТЬССТВОМ весхв-Зсу (іх --наВхІтОтТвУВЮТТОСОСОЗЕТтуМНАСАсОВІСВВІОТНАСВяУЬОСІ Ка РЕХВ-ЗСВ (1) мебттОотТеУнУтссОсссЕРтуУМАсАосВІСВНІСТНАВВОКЬОсІВОН і 100 РЕЇВ-ЗбСа (51; нТеБОВРІТХСТРНООЗУВЕКТиВОсСКИІТВЬНІНОМОтСТнВаСІНиМ веїв-З6сСь (5) нТСЬОЕРІТУСТРНОСЗУНЕтТУВОсЕВІТВЗЬСІМНОМНСІСТВООСІВИНУ РЕЇВ-ЗЯСе (49) ЯТОБОЗРІТХОТРИЗОСХВЕЕТиКОСВАІТ БНО ООІНИМЕ тТЕТвР-ЗБСЙ (50 НЕСБОЗРІТУСТРНЗОЗУВАРТТКОСКВІТВЬЗЬНОМОІСТАОСІВКНе ТЕХР-ВОСе аб яшБОоВРІТТСТРМОСсОУКЕтТуВОСсВАІ ТТ ИСМНсІСТвоСсІВиНе РЕТР-ЗБСЇ (40 БТСсБООРІТУСТРНОЗОВУВЕКТРВОСКНІТВ БВ НОМОСТиВОСІНИМт ветев-Зесе (48) нтсБОВРІТЖСТЕМОсВУКАКТИКОСпВІТ МН НСНСІОТВОсІВИНЕ РЕХР-ЗЯСЬ (51); БІСКОВРІТУСТТНООСтТВЕРКТУКОСИВІТЗБОСКОМОТОТВаОСІНЕМУ 101 180 БЕхв-ЗбсСа ї105: зтсБОогЕНнинІЗнЗс ОО АІвовасьстсвисВНоУКІОоВЬсвМтьЬКеї ТтЕІВ-ВБСВ (301) ЗТЄВОгТЕНиМтено ОБУ лІВУВаСЬСТОБСНсВНСУКІВЛЬСЕНТВеї РЕЇР-ЗбСс (59 ЗТсорОКтННМтЗи ОКУ ОССУЄСМНОВИСУКІОНЕМКСВеХ всІв-ЗаСа (МН; ТТ ЕНННІВн В ОБУ ВІВУАЛОССУСОМНОВНОУВІСВИОИМКИРІ ВЕХР-ВБСе (99) ЗТСВОККНИМТЕнВ ОКХ АТОУВОССЬСУСЬЯОВНСУКІОСЬСТМНУСВОХ РстІР-ЗБСЕ (99) ятоВОкуНинтЗна С ООКувІВУАя НТ СУСЬКОВНОУЮІОВОСЕМЕСНРІ вРЕЇР-ЗБ5СеЯ (90) ЗТОВОКеНиМІчИЗ ОКУ АТОУАаСЬСУЄТИОВНОУВІВВБОКМКЬАВХ РЕЇР-З6СВ (101: еТсвОогРуНННТсна ОБУ АІВводосьЬсСУЄТВСВНОУВІОВІСТМиЬНОї 181 20 всІв-ЗБсСа (151) АЗАКМІНУВЮЕИТЬСЬКТАСІУРУТЬОЗМООВЗИМОАоМЕКМИЗКОСОВОУ РЕХР-ЗБСЬ (151) АсАВМІМУВУРТЬСЬКТАСІУРУТЬРІНОСОМННОАЯМРКЕНИОТОВЛВрУТ рЕїв-Збсс (149 АзвинІНУВЖЄТЬСТЕТАСТУВТТЬООМЗОоВЗниВАЗНРЕМНИЗРОСЯвОУЄ тРЕЇР-ЗБСО (242) АВАКМІМУВТВТЬСІКТАСІУРУТТЬОВНОСЕННОАсМРЮННОКОСІВОУТ рЕЇр-ЗБСе (149); зЗавМІБУВХРТЬСЬСТАСТУВБУУТЬСООМООЗМИсАЯМРЕНИЗКООЛИВУТ БеТХР-ЗСЯ (149) АеАиМІМНУЮТРТЬСТИТАСІУРУТСОЯМНООЗНМОВдОМеКМиНКОЗаВОВУЄ РЕХР-ЗОСЯ (145; збАимІнНтВуРТьЬсЬКтАСІУВУТЬСОМОООМипАЯМРЮНИО КОС НОУТ веІвВ-о6Сьв (1515 АЗАННІНУВТРОЧ ст ЕтТАСІУРУВО ВО Ко нзнноА арки Оосо В:
Фіг. ЗА гої 250 ехе-обсСя (203; ХбооноутАСтВЬНАВІнНУВАССТНЬАМНОоВУУусн ТІВ Тасуве вив вЕІв-ЗбсСьЬ (201; ХВеЗнеХтТАстТЕСНАлІнтУАСУВМоАНВо С тонтТІвотовУвеВииХ рехв-абСе (195; хазенІтТАсІК:нАавІнНТВАОУВМ АНТ ОТОНтТІВИтТаЕУВтТаноВе Шехе-вБса (203; ХхезонаутАстВЬоаоунУ ВСТАНОВ УСНІ Вот шЕІв-ЗбсСе (183; хвали тастЕиаІнтУАатьмьАнТвВостонтІватевуатвинКу ТРЕТР-З6СЕ (199) тавеЗнЕХТАСТЕЬНАВІНУВАСУРНСАНУ ВУ УОНТІВНТОВУВТВНВЕУ шете-ббСа (івНе хевомнутасІкьнасІнУуВаєтть А новУсуснтІватвстотвнове БІВ-ЯЕСв с0і) хВоВкОтіАстЕЬНАлЛІНТОВОРМоАНУВУТОКТІВОтОоВХОтВНяКу «81 Зо БЕЇР-ЗбсСя (251) ВеБОНОМОСУС КОРОК УВЬОВЬНИСТІТЬРУОЛЕМОХ ТОМУ ЮТВХ тТежхв-ЯБсЬ Іі; нарононвоУтЕРОоОнУВЬОВ Тео тТІтТЬОТНОттЬОМеУУКтТУвХ веХе-ОбсСс (245) зеБоиОмеосУусарРОсИТВЬОВЬТВВОотІТЬетОАТНОтТЬОМСУчЕ ВХ тБЕХв-ЗБСЯ г23і) веБІНОНесУС Ерос ОАтНВОетІТЬРУОАтМОхтТІОНОТУютТтвх РЕІв-ЯСе (24 нею мост нео нУвЬОАетистТІТЬеУОАТНОТ ТОМУ ТЕХР-ЯБСЯ (2459: ВЕБоМОмесУСВРСОНУЗЬОЛОЬТВеСТІТЬРТОАТНОТТЬОМСУУЮТКВХ вехв-ЗБСЯ (ж4З)» шЕБІНОНЕСТУСВРООНУВ ОВТ ТНВОТІТЬРУОВТМОТТІОНОТУЮтТтВХ РЕІР-ЗБС» (251); ВеБОНОМОСУТНРООНУВЬОВОТВВСТІТЬРУСАТМНОТЬОМОУУК РІ зо за РЕХР-ЯбСя (303 ЗАОХАСУПЕТВУЮТУСЬСТКОУСОСНВАТНКОВУСВІАНОТАТУВАРРОХ СееІрв-оБСЬ (30) лАСтТАСУВРТВУЄТУСОТКОУОВСНЗАТНКОУСКІУАНОСТАТТВАРВОХ РЕХР-ЗбСе (298) АВОХАСУЮРТВУЮТУВСОТКОУСООНЗАТМКОУ ВНТУ АНОТАТТВАВКОХ РЕХР-ЯБСЯ (303) БАОХАСУСКТЕУЮІТСЬСТКОУЮЄВОНІАТНКОУСВІЗАНОТАТТУАРВОХ теХв-ббСе (299 БАОХАСУБВЕТЕКТУЄСОТКОУСЗСОВЗАТНКНВУСВІАНОТАТТВАРРОХ тТБІв-ЗБСЕ (283) адотасоритТеуУютУВсОоткрУЄСЄВОНОАТНЮОУСВТУаНОТАТТОАРРОХ РЕТР-ВаС (290) ЗАОТАСУВРТВУКТУВиОТКОУСВОНОАТМКОУ ОВТ ТАНОТАТТВАРООХ ТЕХВ-ЯБСВ (301 БАОХАСУПВЕТЕУЕТУССЬОСТКОУСОСНОАТНКОУСВІУАНОТАТТЧАРРОХ З зва тетрР-ЗбсСа (351) ФВРУКОВУСАТУІМОТННІ ОКУ ТА ТОК ТЬМИ. РЕЇР-ЗБОВ (351) УВРУКООУСАТУТНОТННІТОВУВОТАТЯУЮТЬТМИ- ТРЕХР-ВБОс (3491 УБРУКЬОУСАТУТНОТМННІТОКУРВОТАТаУКЕЬТІНВ- вЕєЇІВ-ЗЯсСЯа (351) ТВВУКБОУСАТТІНОТМНІ ОВ УВиТАТеВВь т. РЕТР-ЗбСе (343) УВРУКСОУСАТУТНОТНМІТЕУВОТАТЯУЮЕКЬТМИ- рРЕЖР-НЕСЕ (34Ш ТБРУКОООСАТУХНОТЕИНІТОКУВОТАТВУКЕСТЬМИ- тЕХв-обБсСЯ Ї349; УКРУКЬОУВАТТХМОТМНІТОКУВОТАТОУЮВИТЬМИ- теІв-абсСв (351) ЗаРОКЬаУСАТУХНОВННІЕ ТОКУВО ТА ТЕКИ ТОМИ
Фіг. ЗВ ї о РЕТВ-ЗБЕа (1; мастответетососонаетувосвис ост оснаскоовно ем веЕХВ-і ВЕК п) Мат РУ ХО Ом ит ОВО т ХУ МОВО мн БІВ ЗБ її) меотвУетОосоєєНаттувоввновт авт наскноввстнУННе рЕТе-ЯЕКЕ (із мнестотвехо ооо ОО ВІ вв соМАСсВНОСНОСтНУЮМЕ вЕХВ-ЗВЕх (і натр УВ ХОСОСсСТтОРтУООв вот тсУнасЕнОоБНОхВ НО ТтетР-ЗБЕЄ (0) МАБТОТРУВТТОСОВСТОКтТУОВОВоМОКІМАКТСУНАСККОМАВТАТИН вехр-ЕКє гі» малотвУТТОВОВОВ У ТУПОВВНО КОСІ СУМАСЕНОвВОТУКН ветВ-ЗЕЕх (1Б настотрУтУХОСОСОМОКТУООсВНОЇ ант ОоУМаАсенОовнОоКеюМ вет Заша (0) Мет РУЖУХОЦОВОМАКОУОСЗВМОВІСВВІСУНВОВНОГСВОХВУМНІ рРЕЇР-ЗОЖЕ іі; милу хутотосовАат урВрОосиновІснвІоУнасенОосистечнне вехв-ЗЕЕї Ії) МмаБУтеУХУХОсООсНаАК ооо КАЕНОСКОКВУЮМУ вехв-Зове (Їх нео тРУХУІОСООВОСМВАТВУООССВМОВТІВВІСУНАСЕНОСВОХВУЮМУ веЕЩе- ЕКЗ (3 нееамтУ ОВВОМАТТУВОГАНОВЛІВВІ СУЧАС НОСВОТНУННЕ веЕхрР- Кі (1; меслотвУхУтосоєонаттурвОосиностьнаІснасенОосБистеУнне ех ЗБЕ п; миоствУтттосОоснатттОовнноВІ сват нАсЕнОовновУКМХ вх ЗажВ 1» нем УТ єснаттУОосввмовті ви тсУНАОСКИОВВСТВУННЄ реЕїрР-ЗБКа 1» млюмвУХУтТОотСОоМАТтТурОСВМОВІ с нВІСчиОсВНОСВСоТеУВне веЕхе- Вже ІЗ неБтОтеУХТХОСОсОнАКтТУВОЗ НОВІ ВАСУ МАСЕНОБЕОККУНМЕ щі 15 тСЕВ-ЯбЕ: 51) сорВсреєРТОоТАОсоУВЕУТтАВСКВІТВЬМОМОВСТАВО ІНК БеЇВ-ЗБЕШЬ 881) бООарРттТУОТО Осо У ВУ ОІВ МОМОТ ВОІВ Те вЕХР-аБЕс З)» ОтОтФРвАатТКстТе ак ттАОсВи КК НОНОМОвооОТВКУ о ФЕХВ-ВЕЖЕЕ (51) ОтотратествтТовУввуУТИ ТОНН ІТВО В нОМОоВвОотТнООстВКт то єхе-зешЕ (513; шОреБсвота сем уУтТтаАОСЕ ВІ ть мОо вот те о оо ВИШ КВШЕЕ жі: шен ЖІ СОКИ ЧнН Нб И ет НЕК ве РЕЇВ-ЗЕЕЄ (53) ппопрРАТРОЗВ Оу АВС ВІТНЬСЬЯКМОДОТВІОСІАКЖТ ТВО Ежен і НН з козу Ж. ши ен жи и ЕК та ЕНН Кв ва Теїв-ОЯв: З) охОтвАттОоаеолУ ву осв веноновотноот Усе тЕІЇІР-ЗБЕК (31) сототРАтТКоТВАтТоВУВКУТК ОсКВІТВТКОВНОСМОЛСТВОССТВК УТ їетр-ааКі (50) ототраттотатовУввутм освіт ноновотазовІ нео 5еІВ-ЗяЖаУ їі) стотРАтТСТАТОВУчЕуТКАОСЮВІТВОВНОНОМОВОУКОІО ІНК КУТ БЕІе-ЯЕКі (831) ОтОтРАТЕСТВОСоУВКутТвАВСВВНІТВЬНСНОНОАоТВООсІ Ве ФЕТР-ЯЕКІ (50) ототраттОотТатовУвВу танін. ноноветввосвт о Вето-ЗЕЕо ї51) ЗТтОотевеРотАаоовун У ЕаОсСКВТтаСЯс МОМОВотиВОІВК НО ТІВ аЯЖь 50 охОБАтТтотаУовУиуаосвву вен онОово нос е вЕТО-ЯБЕа (31) отОотеРАтТтОВВОСоУВЕУТКАрВСКВІТВОЧОВОМОЛОТВООСТаК у ето Яке (81) стотеаевотАтоЗУВ МОВІ та ие но вот ооо
Фіг. 4Д
101 150 тете-ЯбЕа (100; сажкевнтонес ект еІвувна сет сова ота снневатІв ай вежв-а6нв (100) озетекнеТзиоктТЕуРІОоУВасСЬСУВК ВАВ ЬКТКАВЕ РЕІР-ЗЕЕс (101) сатКВКМеВНССОТЕУВІОУВВОБСУСІМНОВАНУЮТЮВЬСТЬКІВтТІАВА тТР-ЗОЕЯ (О1) обКРВКНІЗНОвОТКЕУРІвУвасЬсУрІМоВАнНоВУВВь УС иТТАВА ТЕІР-ЗЯЕх (101) О5КРЕКНТВОССКТЕХРІВУЗВСЬСУОВІМОВАНОВ ОО КСТБЕТІ ОА РЕІрР-ЗЕЕє (101; сег юн нтЕХМовУуВосІсУсІнНоВА о піс ства ветев-ЗЄшЕ (101) ОоБКтакНтТянОоБОтЕЖеІОтаносХ Се охо тхАВА ехе-ашУ 101) ОВ ВОНО ІТ ЧОІ ов ом БА ттава еЕТв-ЗйЕ: (101) сЗкРНеМтТЗНСОТКувІВвУвО СУвІМОВаАНрУуВВ УА ТІВ БеІР-ІОЕК (101) ОЯКтВКНтЗиО КОТУ РІС УАНВСЬСУВІ МОВУ ЮВЬСУБТЬКТАНА РЕЇР-ЗЕНІ (1015 ство ВУ РІВУАНОССУВІНОВАНОУВУВВЬОУВКЬВТТАВА -ІР-З6БУ 301) созКУВКМТЗнОС ОВУ РІВУАЯСЬСУВІМОВАНУ ВУС ТІАВА тТБІБ-ЗЯЕЇ 301) ОЗКРВКНІВиССОТЕуРІСТАВОЬСУВІНОКАНУВУЄВЬОТЬТБЬКТХАВА РЕЇР-ЗЕЕІ (101) сегтнНюмтонНИиОотЕТВІВУВОВІСТОІНОВАМОУВУВВІ СУТ ТВ ТІАВА ветр-Зако (101) спгтеюетенстотиувІвУувасьсІ ма новУєоьИУЄтьн тА РЕЇР-ЗБЕВ (101 СЗЕЕНЕМОеВНОСОТЕУРІОТАВОБСУВІМНОВАНУрУВВОТСТ Би ТАВА РЕХР-ЗяШа (101) сВУТиКМТВНоМ Ву вІВУВяс свІнНоВАН УВО а тІАяХ веїе-З6Еш: (301); ояктнкнНевас ну РІВОУВОСЬСУВІМОВАНУВУЮЄВЬСТУЄТЬН ТВА тЕТР-ЗЄна (150) зміну ЕОАсСтІвотТоО нове МасвІскнитТтОвоввтотхая РеТе-ЗОЕВ (50) вмІнУЄУРТЬОССКОВОТІВ УТ ОВОМНОсНиАО ІЗЕНиТЕВОоЗнТУ ТІВ Беїв-абЕс сі51); ВненестТетсс ково она КнистосавТ УТ РЕТР-ЗЕНУ (131) ямІМобУВТМИи КОАстІвотТЬОВ новим АстІ кни косо тТТ тая тетв-яОшХ ІІ) веІНФОТеТЬОБЕ АЛЕТВУТ ОВО А Оо ТІК нти ОоантУ КЕ РЕХР-ЗБЕа (І151); вен чеетохнНВАВІТВУТСОВ МОЛинНаАстІаКк не ВоввТУЄОї теІв-ЗбиЄ (і51); вмІНУВЗУВТОСТЬКОВОТчВУТТЬОВІ МОНУ стТІВКНМТКОовитУ ТІВ БеІр-зБие (І51) ВМІНУТРТЬОТКОДОТчеУТТ ОВО МОМОТ ІЗКМНиТиЗОоЗАТУТІ В РЕІР-ЗБЕ (151) НСНУ ВОМС ТІВ БОВУНОвиМнАСТІЗКНИТТОсВВТУТІаВ реТе-ЗЕЕЕ (151) ВМІНУВУрРТСТВОВОоТтео тові нОовниАСТІ КНТ еВОвНТУ ТЕО БеІР-ЗЕЕЇ с(і151) ВнІжнУЄТЬТМИНОВБсттеоУіОоЕУМОВОМНасСтТІВКМитивсВАТУ КІВ РЕТХР-ЗБНЯ (151; ВМІНУБУрРТІССЬКОДОХІвУТЬОВУНОСиМАСТІВКНИТЕВОСВТУТІВВ теІв-ВаЕі (151) ВМІНУВУРТОСІКОВОТІВУТСОВЕМОЗМНиАСТІЗКНИТЕЗОоЗНТУ ТІВ РЕЇІР-ЗКВі (151) БНІМУЄТРТІСЬКОЛОСІТРУТЬОЗЕМНООМНиВОсТІСКМНИТКОсВвТУТІВЕ рРеТО-ЗбвО (151; ВМІнУбУРТьОсоВОвОТІВУТСООеНОдНМАСТІчКНитТвООовтуУТІ Ва БЕІВ-ОЯЕ» (ії151) ВНІНУСТТТЬСТКОМОТІВУТСЬОВЕНОСМОИВОТІЮМНИ Тон ТУТІНО РЕХР-ЗББа (351) ЗМІМУБУРЕСБОСКОЛОТІВУТСОБЕНОВННАСТІЗЕНИТКУВОВВТУТІЯВ тстр-Вбке (151) ВМІНУВУРТОСІВОВОХТРУТСОВЗЕМОСМиАСТІЗКНИТЕВОВНтТУТІВО
Фіг. АВ
203 25а вести абже (200, вететевтейнааееюте ко чУк вв Все оччас В Мов каа» ветв-занЬ (200) зитотестІванаотоовосеотанУСсКВОМІУВУ СТУ ТОВЖоККЬ РЕХРВ-ОвЕЄс (291) НОРОК ТНАТУВУВОТРМУВКУВОВ ОНОУ НУО ХАТТОВКОКТЬ ВЕХЕ-ЗБЕЖ (201) ЯНЕБТОСТЕТНАЗУНУОАСІРНУАНУВОВ СНИБУЗУЗСТТАТТОВКОВТЇ, ветеР-абнЕх 30; ветеуастечна тво тв ум УВСЯТОМ В с АТ ТОБи НК РеТе-ЗЄвЕ (203 ВИТЬЕАСТЕ НАРУВОСКСТВО УВУ Ото УАСТОКВО В, вЕхІВ-ЗєЖЕ (203) ЗМ ітОсСІВаНнАТУВУОАсІВ ЗАКУЗОКНВОМО ЗУ с У ОВКАТ вехв-ЯшЕе (201) зебтостеани овУовств умеУсВ оно У се ток еоить веїв-зЯве: (281) ЗЕЗетоотетнНазУаУОвстемоВноЗов нут УА ОВ ВВаВ, рЕжР-ЗЕШЕ (301) зМестастетнаАвУоОвотенУвнУвовУсноУВУВСТТА ТОНН БеТе-ЗБЖЕ) (901) ВиБОВОСІЕТНАСУВУОЬСТРНОУАНУВОВУСНОУВУ СТАТОК, ЕХВ-ЯЄвВа (201) вет оститнАлУВУОЬСТРМОВКОВОВУСНВУ ОВС ТуА ТОВ, РЕЇР-ВЕНІ (2501) внеБтостЕтТнАнВУНТОвАствНУАнУ Сун УВУ СКУ АТТОВНОНКЬ ЕР аШЕі (201) ВиЗОТООтЕтНАНУВУАСТОМУВКУВСВ НО УВС АСТОВКО В, РЕЇР-ЗЕЕи (231) зМЗБТОсІстТнАЗУТОаАСТвНОУВнУВСВУСнОУВУВСАТТОВиВиТ вЕТР-ЗБЕв (201) Вест сІвтТВАУЗУОАСІРМУАЕУВсЕУснОУВУВСТХАТТОВЕВИТЬ теІв-зяВе ї201) везе отетТнАТУВУВСТРМУВВУВОВУСНВУ ЧУ ЧОТХАТ ТОВ, вЕЇР-ЗБне (901) янеБтостТитнавуВУЗОТВНОВЕТОсВуУСНОУВУВОТУАТТОВНВВТ ах З втв-яєша їй250)» зеозсто воОнІн ОБ твВОогІТЬрІО І МКІТЬОСЯСТУКОХехВаМ ТЕХВ-ЗЕЕЬ (ЯЗ0О; пеозот РОСНІЗ САтТУВЕСтТІТЬР ОО ТМЕхТЬОВотТ ТОхБІВЯМ теже-аБЕе (553) зноость РОоОНІЗоОВттнвОотутТьеКОвТНІТЬ отв ОКах ви етв-зяВЕ 2) тНюозотоЬ ОоОнІЗс ОвттвВосІТЬиОн Метт оті РОК иа ні КУН ж ий ж ВІ зак забій. ж в ою. ее в; в ветв-ЯЄЖе (551; еюозотлвосмІн ОовтевВотІ тво тот гони вяє теІв-ЗЕВЕ (253) нео оомпао Овни р Оо пеоОвст Оу вом РЕТв-ЗЕЖт (35а НеОНеВЕ Росте сов еекво т те то НЕ с твОовОоке там РЕТР-аЕЕе (Іі бюнозотенеоонІвс овес тхт ето тмеІТЬ кос тТІкОуА тн реЕХрРАЗЕЕК (251 АнОсВОтОРООНІЗСОВТТеВОТІТЬВКОВІМКЕІТСОЗСТІКОТАТЗОМ РЕІР-ЗЕЕІ (251) зибОвет ОВО оветВаотІТЬеТОвТМЕІТьОовОотІкОХаІМ РЕХР-ЯЕКУ (251) АМООБОТЬОРООМНІЗС ОВТТАОСТІТЬСКОВТМКІТЬОЗсСтТІРОХАТВВН екжв-Ззяші (251 вності ОО НІВсОАттеВОТІТЬевОАтКІ М ОСТІ РОКАХЗОМ РЕХР-аЕНі (35 диООсотіОвОоуНІЗв ОВТ тІтТьеКОА те ТЬОВОТІ КОТА ІВ ВЕТО: (251) АНбОЗОТООРООНІВС ОТТО ТРАТ УБОВОТ КОТАТВВМ тЕЇВ-ЗБЕь (251) АиООвотьОвОНт а Ов ет оті ТЬеРОА КІТ ООстІ КОТ РЕХР-ЯЕЖа (35 диво ттОовоОнІВт ОТТО т еКОАтМЕІТЬОВОтІКОУ Вам РеЕБР-Яшве (251); АиООВОМ ОБОВ ОВтТеНОІТСР ОА НІ ТІ ОВСТІРОТАТОВН фіг. С зн ІІІ о ВО БЕІР-РбЕС (300) УЗСУРУТВУВІТИТОВКА КО ВАТОЮ ВООННУ РОК ЕТ ее шкі СКУ нею не І о. шик ок МНН веІв-аЕже (301) темах тис ВАВ ОКО гос ОО оон нс ТтСТР-ВЕЕ 1301) ХеСУПУТВУВІТНТС КА ОНУЖУВАТЕОСУЮ УКООПУОРМКЖАКИСТЬ ветв-еянк (ЗО желе тюєиВ еванновея ТНК КА со де Кос яс, тстР-ВОЕйЕ (301) ЖАОЮЄТВУЮЄТТВ КАНЕВА ПОДАНО ор КОМ РЕТв-ЗБЕ (303) УВотрЖтТетУрІТнто ВАННОЮ о пом воно Кк Кс ветв-Збже (301) ХОВсУВУТиУВІТОВВАСООУКУКТТВОСУКСУКВОСНУОВСНККАКНСТ БетІвВ-ЗЖЕ (301) торт тТВоУрІ несла УКУЮТТВОСУЮСУВООМУеНКВАКЕСТ, веІР-ЗБЕі (301; УВоУВУТВУВІТНТОВВАСООУКУКТТВОСУВСУКООНУСНКНАКЕСТ, БЕТВ-ЗЕКУ (301) тОСУБУТВУрІ МТА ООУКУЮТСТВОСУКСУКООМУСРНКНАКНСЯ, вСІв-ЗБЕЯ (301) ХВСУПУТЕУРВІТНТОВИАБООТКУЮСТЮООУВСТУКООНТУОРНКВАКЕСТЬ вете-ЯБКі НМ) ХебУуруТВУВІНТОВВАСООУЖУКТВОСУЮСУВООНУОРНККАКНСТЯІ, вЕЇвВ-З6Жи (301) твору теУрІтНсоВАОдУЮУЮТТВОСТВСТВОСНТеНКВАКЕСТ есІР-ЯЕВ (301: ХОбУВУТОУВІТНТОВНАСООУВУКТТВООУЮОУКООНУеНКВАКНОСТІ. РЕХв-ОЄЖ: (1301) УБОУБТТОУрІТМНТСЗВАЦООУКУКЮТТВОСТКСУВООМУСРНККАКНСТ РЕТР-ЗБЖе (301, ХВСУПВуУТеУВІТНТОВВАСВОУКУЮТТКОСТУВСТВООНУ ЗРНИВАКЕСТЬ Зі СЕТВ-О6Же (350) БК нне» ВЕХІВБ-ЗБЕЕ (3532 БЕДЖеннняя ВЕТВ-ЗБЕЖ (3512 БЕдженяняя ВЕХВ-ЗЄЕЕ (ЗНМ Шен ВЕТЕ-ЯКа (30 Два ТЕІВ-ЯбЕЖ (ЗО) Шен» ВЕЇВ-ЗБЕ (350 БЕ яняя ВЕТР-ЗаКе (351) БЕДже ння БЕХВ-ЗБЕК ЇЗБ1Ю БЕ ВБІР-ЗЕЕЇ (331) БЕдЕеннняя БЕТВ-ЗЄКа (351 ША.» ВЕІР-ЗБЕЯ (383 БЕДЖеняняя БЕТОНІ (351) БЕАй ння веЕївР-збжи (353; БЕБАЕОНН Є ВЕТР-ЯШЕВ (ЗВ Ед БЕХВ-ЗЄКИ (351 БЕК нняяя вет аЗБКае ЗБ ЕВ ох хекксю
Фіг. 40 і во вет ЗеКа (і) МеІТОТвУВУуХОСТОООАКЕНАСВОСВІ ВИТ ОУМаАССН ОО ІВУННХ РЕЇР-ВЕЕФб її) МмехтОтТРУВУХТОСТОСВАРВуУМАСАВСВІСВКТСУМЮАОСТТЬОСІВУНИТ РЕХР-ЗЄКУ (й) нахустрізттостосватвунасьяовІсвктсУВаАОСНУВОстКОНне ра зве ВЕТВ-ВОКе І5іБ ОбОиТеагуСАНУСУККУ УВО ВІТЬ ЕІ ВОКр ЗІР МБО ЕТЕееАНУУККУ Ки Вь МОЛІ ВЕТВ-ЗОЕ іЇбБіР спситеатТКстАМУуЄвуККуТЕтКОсев ьо 101 150 БВЕІР-ЗБКеаЇ СБК ОББУКНУМУВисСЬКОкУ МОУ СУКА НсВиІЮВБОНТЬАО АВ ТЕХР-ВЕЮе (1031) ОЗБУКВУМТОВОСКОВУЄМОгАВОССУСУТСВНОКИТОВІСРМУЬВОХА В РЕКЕ-З6ЖОЯ (1501) ОЗЕР ЕНУМТОНСЬКОВУКІОовНОСБСУСТТТОВНОКИСООБОКМИНЯКАВ
15. 200 ВЕХЕ-ЗБЖЕе 1555) аиМІНУБТРТОАЕТаОТУРУТЬОІМ ТОМАТІ ЛЕНА ОВНЕУ НЕ РОІР-ВЯЕв 353) АВМІНУВУРТЬВОВТАС УВУ МОВО ТОМНМАСТТАКНИАЬНОВНКУТНОЯ 201 250 вЕТр-ЗбЖе Се0ЬР ТИ БУТОСІВВУАУТУ ТА УА У СОМ ТАКУ ТТЕОЕТКВ тсІВ-ВОЖ;р (201) ЗТиОУТОІКОУАВУТУТАСТРТУАКТОСЕТОнНКУВтВАТУсТТХОКТВВ 281 зоо РЕХВ-ЗБНО еВ) БУМБОБОУСеВсКнІВТОА ВНІ МІТОК турів вхв-абЕе Се МОНЕОВОУБОРОВНЕ ВАТА ВБР ТЬОВОТУКТІ ХО РЕТР-ЗЕКУ 9381 кОжОовсУуСОВОСВОТ ОВО МІ Ви ОБО УРЕ зах 350 РЕТрР-ВБЕе (305; БІДСУСЖТМУКВІУМНОСТІУВІННІВ СВАТИ КВЬРАТНІВНОВ. ветхР-оєжа (305) севсУтТТВтУНОСТ нених вто тема» зві 400 РЕХР-ЗБЕО (ЗО) диБсанаВсльААСстТвА ІМК ІКРНВМУСНИТЬТ ТРОЇ ТРЕТР-З6Е;в 350) кИХсАНАНОЛІЛАСТЕАСТООКРІКРНУВНУЄ ВТ ТТРОРОВВОБНУТК Бехр-аЕва (347) ВОНА коло К ех В КВ нн нн ВИОВНОВУСТХ зп ам РЕХР-ФЕКО (400) РЕЖКА-КІСЕКЦННО ВЕР К ення» вехв-обЮрв (400) внук Іо т того Опов атья» вехв-ЗЯКа 388) вик хо сонтехово- Оу УВЕН ОК.
Фіг. 5
1 «а вет ЗБНа (З МетоБАнтТЕдДОРЬьІКККОАСМКОСІОКВІСАТКУСАКООВАВНЬРИКОКХ вЕтв-ВНЬ (їйх метсьанниАяРотЕККОВІнЕсОсІвЕаІБАТК У АВООВАЗНЬРСЕТ РІВ ЗЕне (іх нууспаниваоотвкУОвемеосток тт АТ ОСсАКОВАЗНОВерОКт вехе- зна й; мехсрантказвотЕкрови носова тТквУсавсовоВеееоех ВЕІв-ЗЕВЕ (іх нт лнтЕасовьтЕККОодінносІвЕатоаАтТквУсАнОврАн ев оку вете-зана (Б МмохссантЕАНРтЕКРОвОМЕООІОКатЬАТЕОУВАНООВО ее РОВЕ РЕЇБ-З8ВВ її»; нетссанниасрьтЕктОо нострЕататкУсаАноваАзньеввоКт ветв-ЗБНі їі мохоБбанМмеаавьтЕКРО МЕССІ рЕлІБАТКУСТСЕСОВЯНЬсиРОК рЕХв-Збца і» тсоанткааРьтжКтОови мес Оок хат УсакОовАЗВБевеСЕ веЕтв-ЗБНі (зі мебантеааРьІЕКтОві нео тОкоІБАтТК УСВА і 100 рЕЇВ-ЗЯНаЕ (505 РеОБОСАСКОРеМЕЛЬКТЕОУВЕНАСОЗКАВоАя- тУТаАрРоВЕТОсрОвООВ всхв-ЗЕИЬ (51; еавослокОовемЕцІктеоУвенаовІкАаволо УМА ІОсгОООВ РеІв-ЗЕНнс (ів вежослаокОовенЕасетеотУвенАВоонАВОВІ отри ОВОСВОВ веІв-ЗБНЯ (535 воБОсАоКОРенЕССКТООУВЕНАОВОКАнОАО УТАРЬКРІОСТОСВОВ ФеІвВ-ВЯНЯ їБ3Б венмаокОовевваькткокенаоранааза з УтаеиитосвоввоВ веїв-Збна (535 вОесвскорРеЕ в тео вино ваканаАа УТА ТСОВОСНОВ ФЕїЇв-ЗаН.» (5Ь; вашЕОСсСаАСКОГвеМЕсоБЕТКОУКЕНаАрозКАВсоа УТЬВІВЕТОСТОСВОВ веІР-ВіНі 1535 РЕЖОСВОКОРеМНиОЬКтТЕОУВинАрОВКА нава ттТАРЬнКІсОвОСОВ теЇв-Збне ЗіБ реБОосаокОоренЕЗоетТВОоУВЕнНАвракава тав ни тоСв осо всІв-ЗБНі 51» еежООоЗоКОовеМЕЬктТеОУуЄКНАОНвІКАнЗАЗ УТАРОВКІООТООВОВ 1 шо 150 Фехв-ЗянНа (100 бувшетновухтвивУтВАВОСТІКАОТИЛОсАрРОТНСУрРОМОПЕВКХТ всІвр-ЗЕНЬ ої пу твМмаочкАнОІКА НОВА роту рОМавивну тетв-ЗбнНе 1005 шУВОМТ ВУХ ВНЕУтВАНсТІКАУВІНСТОВОВетТВсовОВОНвЕАн реЕте-ЗБНЯ 00» сузоМтТнСоКУХТеМАотнАНОТІКАУ ІМС ТОВОвЕтТВОоОосМовВивну ТЕХВ-ЗБНЯ (зобі шен нсвУхтенУВАсІКа оо ово ОвАКЕЕ РЕХІР-ЗБНаУ (300) зУузСНІМОМВУТТИМВУУВАВОТІКАТТНОТОЗОРЕТВОУвОМООвАКХх веІв-ЗаНнв (300 ЗУ вВетевнаУчаввстІка нти лтоза ет НсУвонНоОеАн вЕІРБ-ЗБНі (100; вУВОНТМСВУХТВМИтВАВОТІКАТОТНІТОООгЕТНСУрРОМООЕВЕУХ вЕХР-ЗБНЄе (ї101Р зУОМТМОВУТТВНЕУУВАВСТІКАТОІНОТОВОТЕТНОСУРОНОСКАКХТ тЕІв-ЗБНЯ 01» УВО вУс темно нАВОТІКАУКІНСТОЗСРЕТНСУВОоМОвЕаиХ ї15ї о тете- она (1505 тетожнотВвІ нен тво Е тт осв тсМаВеа ев вУю веЕЇв-Зань (150; кБВтовнитвотонОоменетТиЗонІжуЕтТа осв уснениЗ аву вЕЇТВ-ЗБНе її: вВтТсокВІтВІтТімНоМотОотВаонІЖТЕТВІОосВеВОМОВиВо Нв вуЮ рЕХв-ЗяНА (БО БЕЛЛ ОТО ВОНІЕТИТВІ СОМ ВУСМОНиВБИТРУВУЮ тТІв-ЗБНЯ (350 вВтовве т тмМенОсХотаАонІвтЕтВІ осно ниЗ ие виЮ вЕІв-ЗбнНо ібБ0ої вето номететиаонткуктІ оса оМони а иеУюВ теТв-ЗЕНЬ (1505 БегожаиствітТонНОнНОоотнАснтЕВТавОоситоУуснонеа нев вУВ вЕїЇв-ЗЯні (150; ВЕТО НОТ ноВОотОоТаОнІвтВ т Осока -те-ОбБнНе іїї5ії гвЕтовБасувІтнюонстОотваовІнУ ВІВ остова ее гЕЇв-З8Ві 6143» тУБТОоХВтнОтО ОМС тотАОНІКРЕтВІ ОВУ УЄНаННя Бару вуУє
Фіг. А ча о вЕТВ-ЗЕНа (00 УСБСТЬУСТІКЧАСКВВУОСАНСОВТЯК:МИІКОЗЕБТМУВІВТЬСТОТАСЕУВ жене 200) Сапа ЕМАсВОУрАНОСВнтННнІВОВЗЕВТМУВІ ВТ СКОМАСКУЄ вЕІР-ЗЕНе (200; УСБСІБОСТІКНаАСВОУЮАНСТНК:МНІ ОЗЕБТМУВУРТЬСТОТАСІЧВ еетв-ЗЕНа (500) Сас УЄттУМАСКОУВАНОСТМКННІСОСАНЬТМУВУВТОСТОТАВТУЄ ВЕЇВ-ЗЕНЕ (500 ЧОБОХБУСТТЕВАСВНУВАНСКНКІМНІВОАЕСТМУВІРТ стОТАСІУВ тЕІВ-ЗЕНЯ (200) СОЗСІБУСУТЕМНАСЕВОУВАНОВМЕСННІВБОВЕІ ТУТ ОТОТАКУВ рРЕХВ-ЗОНВ СЕ УСШЯВІСУЗУХТМАСВИУВАНСТНЕМННІКОАВОТ УВС КОТАВЕУЕ еЕтР-ЗЕНі ї200) тОоВоХБУсттЖМАСКВУЄВАНСУНТСННІКОВНЕТНУВТРТВСКЮТАСКУВ ВеТВ-ОЄнНа їо0Ь) УСОЄТБУЄТІЖМАСВЕУЮАНСВНЕ МИТ ОО ТМуУВЕРТОТОТАВЕУВ вЕтР-ЗЕні (201 сах хОоХІЕнАСнЕУрАНСТВТУ ВНІ ОВВІТНУЮТЬТЬСТВТВО ТВ «г зай ВЕЇВ-ЗЯнНа (19550) ТАБСБТЕВЕВННІЗТРВОМОКчННМОТЕНТИВІТУВЬТУНАВІТУЗАСЕ тЕІв-ЗЕНЬ (250) ТАпОТЕКЕННИЗсТРИНВОВЗКОВММОВОТЕНТНОІ ТУ ТТНАНІТУЧАСЕ ВЕТР-ЗЕНЕ ОО тАБотТтВКтВНиОстВВОонОоК нема АТисІТУВЬТНАВІТУ ВОК РЕХР-ЗЕНЯ (250) ТАБОТЕБЕННЧВВТРИВИОВРТОВНМОВІЯТЕНТНОІТУВСТУНАНІТУВАЕ вЕІВ-ЗЕНЯ (1350) таБоткВуВнисауверОоК вина Кит ІТУВвиТУНАВІТУВАСКЕ ветв-абна 50 ТАБОБтВРКЕМО Тео АТЗ ТУТ АВІТУВАВЄ веїТе-ЗЕнь» (350) звовеКВРВиОкевоивеЗнимМово ТЕНТИ КЛ ТУнА ВІТ РЕХР-ВЗЕНі (а) ТАБОотТРЕКНЧаОтТеВОнОКаВНМОоватТЕвТнОІТУВЬ УВІ ТУЧВАНЕ веХе-ЗаНеа їх5і) ТтаКОТЕВУВННЕ ТОНОМ ТАТІ ТУЮЬЕУНАЯІТ УВА Зах й Зо вЕЇВ-Зана (1380) рохвнузроунЕІс сте тТЕВОон УВУ У УТА РКІР-ЯЕНЬ (300; РОТАНУВОСТСНВІСАТОНРЕТТЕТВЕНО,ОНОУ СВУ УУЮВЬТАЄТ Бете-Збне (300) ВОхАнУВБСОТОНЕІОВТОНЕТТЕТаЕНОСОнВУВСВУОВОЮ ВОАС ЕКІР-ЗБНОЯ (300) РОХАМУЗСОТУСИВІСАТОНТЕТТЕТЗЕНОСМчУВОВУМРОНН УТА РЕТР-ЗБНЕ (300) РОСХТАМУЄСОХСМВІСАТОНКНТТЕТНЕНОСЕНЕУВСТ ЧОРНУ УТА веІР-ЗЯнНЕ (300) РОХАНУЧЗСОУСМЕІСАТОНРЕТТЕТЗЕНОЬсСИЧУВОТЧОВОВУУЮЬТАЮ вете-З6нНв (300) вохАМмУуБсОтснЕІСсАТОоНЕВтТТЕтакнО она ОроВУ вт ВЕЇІР-ЗЕНі (300) РОХАНУЗСОУСНЕІОЛТСНТЕТТЕТВЕНОБІнУВОСВОРОВУ ЮА РЕБВ-ЯбНе (301) РОБХАМУБСОТОНеІСАТОНЕЕТТЕТОВНОВЬИВУВСКУ РОВУ рРЕЖХВ-ДЗБНЯ (136; РОКАНЧУВООТОНВІСАТОНРІВУТЕТОКНОСОМОУ ВУ РОВУ ВКА За 396 вена 1350) ВТС ВОТМУКМЕМОВЗКВуАУ ВИТІВОК ВУ КІНОМЯТ вЕКІВ-ЗИНЬВ і1350); ВТОТЬМІРТВСТМУУВНЕНОЗОІКЗІВаУВсТУВСсСЬЯУТсТКІНОМЕТ вете-аєнНе 350) ВОСТЬМІРУВОСТМУТНМАНОАЛКОХАУКОТІНСсЬВУТОТКІНОМОТ рЕТР-ЗЕНИ 350) ВТотОМІРТЖСТМуУУВНенСсАоКотУАовотВс: вет КІНОМЕХ тетв-ЗЕНЕ 350) ЕТСТІМІРТУЕСТМУТИМАМОАЯКЗУАУВСТНИІЬУТСТКІНОМОТ ВЕТР-ЗбНаЕ ЗО Тит мІРТУНОТМУУВМЕМОАОКОТАУВСТХВОо токах вЕІР-ЗЕНИ (350) БТСТОНІРУВОТМУТННЕНОСАЗЕХАТНСТУНСЬВУТОТКІНОМЯТ БЕХВ-ЗЕНі 350) ВТстТОнНІРТУВОТМоУВМЕНОЛОКВУАУВОТВСІ УСТ ІНОиМОХ ВЕТР-ЯЗКНа (353 ВТСТЬМІРХВСТМУУВНЕНСАЛЕВУЛУМСТУВСЬВУТОТКІНОНЯТ Бежв-Ені (353; нестонтвтТюсТМмУвненсАаоУАУВОТЕВСІ ст ТОЄКІМОМЕХ
Фіг. 68 ї 59 ВЕХР-ЗЕва (2; «меті тов сова зумас сн сс УМООСНТЬОоСІВщИ вехв-обВе І «мет отрРУ мосОсОогаттенао скоб УМНА У пот ветв-ЗКОЄ (і) нееаттотво Ісссюєтак масок освуХ ВНІСТУМА ТВ А СВОСХВОХ ветв-ЗбОе (із --МеттутвУНУТОВОСОСЛЬТЯУНАСА ШНКОБНАІОУНООСВУ БОЦІ ВОЮ рете-зЗЕВЬ (1); «-МеВЕРОТРУНТОСООСОАтЗУМАСА СВУ ВІСТМАССНТЬОВІНКИ вехе-зава іо «еВ ТУнНУХОСОСОСАТЯТНАСАО СМЮТВВІСТУМАОСНОВІИЯ зі 189 Ттехв-З6Оа 49) вуссонНеестотанусаукеЕктинОоскнІТтаьог омовВотТнаасІВКАт РЕТе-ЗБОае ї49; шеронзетанаснУка о сен аю нсАСТВО ВТК вЕЖе-З6ВЯ (51); нео стаАнес ки Ост СисМовотВ ОКУ РЕЇІР-ЗБОс (45) ШшСБОБОІТУОТАНОЗУВеРТКВООсНІтВЗБОМсСАСТАОСІвКиХ РЕТР-З6ОЬ (45) нТБоОБІКУСТАМОсВУКЕКТуВОсКВІТЗЬнонСАСТВЗОСІвНА ветв-єва (4з) шжеореттуотаноовуветтт Есе нововотвасотаКах 181 | ї15а БеТВ-ЗНО. (59) тесектКНУМТННО ОБТеІВтТВоовСоТс ІОВнс ТОВ сУМУєН вета-аОє 38; снетжнУнтанос ов смс енно ХОЛсеМеБеМ веТв-ОЗЕВЕ 0101) овен еезеськовевхвУ сс єевевас т тов ем ем РЕІР-айОєс (39) тоснятжнУнт Но оку тота оннОоонІ омани вЕТе-З60» (99) ТОбВЕКтНУМесНОБООКтРІВУВоС УВУ тнВоВитОВиоемМиС ат РЕЇР-ЗБОА (93) ТОсВитЕНунНТяНсоЬООКтрІВУВаОовСсеУвУхсВНсовнтОоВовМтВАТх ї8і Й ЖОВ РЕЇІР-ЗЕШОК (145) АвавнІНУЄТРО СКТастУвУТСЬОЗМОННОЗсЗ ми совиУх РЕТО-З6Ое (145); Зам ехетЬ Ота стает ть зОанозоатакинОкв еВ УЄ БЕІВ-ЗБВЕЯ сгі51) тав осв ть ки отАСТарІТЬОВУВОовНОВоВІ КМ КОХ РЕТО-ЗБОс (149; аяАавнІНУЄТУРТО М ЕТАрІУвУтТОвноВонНивотІ аю ТКОсовоо? РЕХВ-ЗБВ: (і43) аЗАВМІМОВХРТЬОСБЕТАСІТРУТЬООМОВОММАСТІЗКМНТУСОВАВУТ РЕХР-ЗБОі (145) двавнІнУЄТЬТ ОС КтТаОтУКУТЬОВНМНООеНМАСТІсКННИТКОСЯВВУт 28 25о вете-ЗКОв (199) нецбностьствоввазетеУтаотетУдичОовотонА нео ваних тете-ЯщОє їі93); свавнветаственалУт Вот вовкові ВехрР-ЗЕОЕ (201; вне мас НАНОВО ант оон снА хат Ко БЕТе-З6Ос (159) хата КБНАЗІТУТВСІрТУАНУО СКМ ОБОХ РЕТР-ЗБОБ (195) ХЗ5ОНАТТАСІКСНАВІТУТАСТРТУАНУЧСОСКУСНОІ ЗВІТ ВНЕКЕ вете-ЗЕОа (180); хаБеНаІТЬОТКЕСНАЛІТУТАЬОІРТУАНТ СЕТИ Інна тТОНнИ?
Фіг. 7А
-- ЗД Й о зю тЕІВ-ВбВ.а (249) ВисрнкУєсУСБОРОВНІЗЬОАСТВВОУХ ЗРО ТНОТТЬОНСАЧЕтТуРх тхв-обОє (2495 нти нимасую вробнІЗБОВОтЕКСтТІ вул ВО хтЬОмо М Кт всІВ-ЗЯВЕ (251) вто ро І Іо тат рхОКІ ТО НО кт теХР-обре (245) ВТеВНЕМНОСУСОРСЕНІЗЬОВІТИВСТІЗ У ОЛУМОХТ КВ Тур вехв-яяОв (348; втеаннес тонни ові твистІч ВО О тт ОоНОодоеечвІ тЕтхР-ОЄра (249) ВтТеонЕНОСУСОРСКНІЗЬОМІТВВСТІЗБРУСАТМОТ ТЬМИ МТУ РІ з щини з3о ВСТЕ-ВбОв (298) ТАНУАОУВУЕНУЄ УНН сек нен ик нини кни ня ТеТе-Збре (299) Воджвемаетеан ота сне пан п раАвСАНОНЕ ВТР-ВЯОЖ (301) Водхасовуттедтостк ан прАКФОВ НААН НАННХ вЕЖХв-Зае ОСИзР ТАБУ у ТУТ ВНОСИВ АХ РЕХРв-ЗАЮвВ ОСОБ ТАСІВСУВУХМУМІУВТОТиНЬОХОнУВ ЛОВУ АКЯНКСВЬРСВААХ ветр-Заі (295) ТАБТАСУВЕУТНУВКТУВТСТВНІ ОТО АОСНВСУВАКОНКОВЬЕТААТ з а0о ВЕХЕ-ЯВОВ (Б) кенунеккнннкиннкни нини нен жини вехе-Яюв (349) нак лі вк Ов НН НН А НК РЕІВ-ОЯОЕ (351) НУБААНІННІУКЕНАСЬТІ НОСТІ ТОВАРУ ЕНІ ТК веЖР-9Єрс (349) Т5УТАРРВУУНРУМІРАУВУТВУТЕРУКУЧУАТНААРТВІМНООНІКОВТЬО РЕЇВБ-ЗБОВ (349) ТЕУТАТЕНУУЙВУНІРАУТВ УВУ КУ УАТВААКВТ НІНО ОМІКОКВИХ тЕТЕ-За (За ТтЕУХАВРНиХУНРУМІРАУРЕКУІВ УКУТАТИ АРЕУВЕНОПНІКОВНЬУ з ФЕТЇВ-ОВВИ (321) ення ТЕЖВ-ОЕОВ (395) яння ФЕХВ-ЯЯВЕ (ЯР; сення тЕХР-ОЄре (399) АтЕЕЕТЬОХ- ВЕХВ-БОЮЬ (390) АтТЕБВТКУт- ТСТР-ЗНІ (339; АТЕЕКТЬУХ-
Фіг. 78
UAA201704587A 2014-10-16 2015-10-14 Інсектицидний білок та спосіб його застосування UA126192C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462064810P 2014-10-16 2014-10-16
PCT/US2015/055502 WO2016061206A1 (en) 2014-10-16 2015-10-14 Insecticidal proteins and methods for their use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126192C2 true UA126192C2 (uk) 2022-08-31

Family

ID=54396965

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201704587A UA126192C2 (uk) 2014-10-16 2015-10-14 Інсектицидний білок та спосіб його застосування

Country Status (12)

Country Link
US (4) US10435706B2 (uk)
EP (1) EP3207143B1 (uk)
CN (2) CN113372421B (uk)
AR (1) AR102293A1 (uk)
BR (1) BR112017007932A2 (uk)
CA (1) CA2963558C (uk)
MX (1) MX2017004745A (uk)
PH (1) PH12017500694A1 (uk)
RU (1) RU2733898C2 (uk)
UA (1) UA126192C2 (uk)
WO (1) WO2016061206A1 (uk)
ZA (1) ZA201702161B (uk)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3102684B1 (en) 2014-02-07 2020-05-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA3046226A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3622076A1 (en) * 2017-05-11 2020-03-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CN111629587A (zh) * 2017-12-22 2020-09-04 先锋国际良种公司 具有改善的活性谱的杀昆虫多肽的组合及其用途
WO2019178042A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
EP3764796A4 (en) * 2018-03-14 2021-12-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. INSECTICIDAL PROTEINS FROM PLANTS AND METHOD OF USING THEM
WO2020046701A1 (en) 2018-08-29 2020-03-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US20220056469A1 (en) * 2018-09-11 2022-02-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US20220015372A1 (en) 2018-12-14 2022-01-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Biologicals and their use in plants
CN109456976B (zh) * 2018-12-26 2021-09-28 菏泽学院 舞毒蛾JHAMT基因、其编码蛋白及其dsRNA在害虫防治中的应用
US20220089658A1 (en) * 2019-01-10 2022-03-24 Syngenta Crop Protection Ag Compositions and methods for controlling insect pests
EP3708669A1 (en) * 2019-03-13 2020-09-16 Genective Pesticidal genes and methods of use
WO2021076346A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack
TW202142114A (zh) 2020-02-04 2021-11-16 美商陶氏農業科學公司 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關之方法
EP4182466A2 (en) 2020-07-14 2023-05-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CN116096903A (zh) 2020-08-10 2023-05-09 先锋国际良种公司 植物调节元件及其使用方法
CN111965353B (zh) * 2020-08-18 2022-08-19 四川农业大学 绵羊痒螨半胱氨酸蛋白酶抑制剂的应用以及一种elisa试剂盒
TW202345696A (zh) 2022-05-18 2023-12-01 美商科迪華農業科技有限責任公司 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關的方法

Family Cites Families (418)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US435701A (en) 1890-09-02 Folding stair-chair
US3710511A (en) 1971-04-21 1973-01-16 Univ Illinois Procedures for use of genic male sterility in production of commercial hybrid maize
US3861709A (en) 1973-07-12 1975-01-21 Amsted Ind Inc Shiftable fifth wheel construction
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US5094945A (en) 1983-01-05 1992-03-10 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase, production and use
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US4713325A (en) 1983-06-14 1987-12-15 The Regents Of The University Of California Hybridomas producing monoclonal antibodies specific for FeLV p27
US5380831A (en) 1986-04-04 1995-01-10 Mycogen Plant Science, Inc. Synthetic insecticidal crystal protein gene
US4716117A (en) 1984-10-26 1987-12-29 Chiron Corporation Monoclonal antibodies to factor VIIIC
CA1207852A (en) 1984-02-29 1986-07-15 William D. Cornish Non-resonant microwave frequency halver
US5331107A (en) 1984-03-06 1994-07-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US5304732A (en) 1984-03-06 1994-04-19 Mgi Pharma, Inc. Herbicide resistance in plants
US4761373A (en) 1984-03-06 1988-08-02 Molecular Genetics, Inc. Herbicide resistance in plants
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
DE3587548T2 (de) 1984-12-28 1993-12-23 Bayer Ag Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann.
DE3685968T2 (de) 1985-01-22 1993-07-01 Mycogen Corp Zellulare einkapselung biologischer pestizide.
US4720459A (en) 1985-02-14 1988-01-19 Medical College Of Wisconsin Research Foundation, Inc. Myelomas for producing human/human hybridomas
DE3590766T (uk) 1985-03-30 1987-04-23
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
US5569597A (en) 1985-05-13 1996-10-29 Ciba Geigy Corp. Methods of inserting viral DNA into plant material
US4654465A (en) 1985-07-18 1987-03-31 Agracetus Genic male-sterile maize
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
CA1313830C (en) 1985-08-07 1993-02-23 Dilip Maganlal Shah Glyphosate-resistant plants
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
US4810648A (en) 1986-01-08 1989-03-07 Rhone Poulenc Agrochimie Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene
ES2018274T5 (es) 1986-03-11 1996-12-16 Plant Genetic Systems Nv Celulas vegetales resistentes a los inhibidores de glutamina sintetasa, preparadas por ingenieria genetica.
US4975374A (en) 1986-03-18 1990-12-04 The General Hospital Corporation Expression of wild type and mutant glutamine synthetase in foreign hosts
US5107065A (en) 1986-03-28 1992-04-21 Calgene, Inc. Anti-sense regulation of gene expression in plant cells
US5273894A (en) 1986-08-23 1993-12-28 Hoechst Aktiengesellschaft Phosphinothricin-resistance gene, and its use
US5605011A (en) 1986-08-26 1997-02-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5378824A (en) 1986-08-26 1995-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5268463A (en) 1986-11-11 1993-12-07 Jefferson Richard A Plant promoter α-glucuronidase gene construct
US4727219A (en) 1986-11-28 1988-02-23 Agracetus Genic male-sterile maize using a linked marker gene
US5608142A (en) 1986-12-03 1997-03-04 Agracetus, Inc. Insecticidal cotton plants
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5316931A (en) 1988-02-26 1994-05-31 Biosource Genetics Corp. Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes
EP0333033A1 (en) 1988-03-09 1989-09-20 Meiji Seika Kaisha Ltd. Glutamine synthesis gene and glutamine synthetase
US5990387A (en) 1988-06-10 1999-11-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Stable transformation of plant cells
US5039523A (en) 1988-10-27 1991-08-13 Mycogen Corporation Novel Bacillus thuringiensis isolate denoted B.t. PS81F, active against lepidopteran pests, and a gene encoding a lepidopteran-active toxin
US5023179A (en) 1988-11-14 1991-06-11 Eric Lam Promoter enhancer element for gene expression in plant roots
BR9007159A (pt) 1989-02-24 1991-12-10 Monsanto Co Genes sinteticos de plantas e processo para a preparacao dos mesmos
US5110732A (en) 1989-03-14 1992-05-05 The Rockefeller University Selective gene expression in plants
US5240855A (en) 1989-05-12 1993-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Particle gun
US5879918A (en) 1989-05-12 1999-03-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Pretreatment of microprojectiles prior to using in a particle gun
US5188960A (en) 1989-06-27 1993-02-23 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins
US5310667A (en) 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5322783A (en) 1989-10-17 1994-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean transformation by microparticle bombardment
US5187091A (en) 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
ES2187497T3 (es) 1990-04-12 2003-06-16 Syngenta Participations Ag Promotores preferentemente en tejidos.
US6297426B1 (en) 1990-06-12 2001-10-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of mediating female fertility in plants
US5432068A (en) 1990-06-12 1995-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Control of male fertility using externally inducible promoter sequences
US5824524A (en) 1990-06-12 1998-10-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating fertility and method of using same
US5478369A (en) 1990-06-12 1995-12-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same
US5498830A (en) 1990-06-18 1996-03-12 Monsanto Company Decreased oil content in plant seeds
AU655197B2 (en) 1990-06-25 1994-12-08 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant plants
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5266317A (en) 1990-10-04 1993-11-30 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Insect-specific paralytic neurotoxin genes for use in biological insect control: methods and compositions
CA2051562C (en) 1990-10-12 2003-12-02 Jewel M. Payne Bacillus thuringiensis isolates active against dipteran pests
US5932782A (en) 1990-11-14 1999-08-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles
US5459252A (en) 1991-01-31 1995-10-17 North Carolina State University Root specific gene promoter
AU1202192A (en) 1991-02-07 1992-09-07 Plant Genetic Systems N.V. Stamen-specific promoters from corn
DE69233636D1 (de) 1991-02-08 2006-08-17 Bayer Bioscience Nv Staubblatt spezifische promotoren aus reis
MX9200621A (es) 1991-02-14 1993-02-01 Du Pont Gen de una proteina con alto contenido de azufre de una semilla y metodo para aumentar el contenido de azufre en aminoacidos de las plantas.
USRE36449E (en) 1991-03-05 1999-12-14 Rhone-Poulenc Agro Chimeric gene for the transformation of plants
FR2673642B1 (fr) 1991-03-05 1994-08-12 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate.
FR2673643B1 (fr) 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
US5399680A (en) 1991-05-22 1995-03-21 The Salk Institute For Biological Studies Rice chitinase promoter
GB9115909D0 (en) 1991-07-23 1991-09-04 Nickerson Int Seed Recombinant dna
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
WO1993003160A1 (en) 1991-08-09 1993-02-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Synthetic storage proteins with defined structure containing programmable levels of essential amino acids for improvement of the nutritional value of plants
DE69230290T2 (de) 1991-08-27 2000-07-20 Novartis Ag, Basel Proteine mit insektiziden eigenschaften gegen homopteran insekten und ihre verwendung im pflanzenschutz
EP0612208B1 (en) 1991-10-04 2004-09-15 North Carolina State University Pathogen-resistant transgenic plants
TW261517B (uk) 1991-11-29 1995-11-01 Mitsubishi Shozi Kk
DE69233118T2 (de) 1991-12-04 2004-04-15 E.I. Du Pont De Nemours And Co., Wilmington Fettsäure-desaturase gene aus pflanzen
US5324646A (en) 1992-01-06 1994-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same
US5773691A (en) 1992-03-19 1998-06-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Chimeric genes and methods for increasing the lysine and threonine content of the seeds of plants
DK39692D0 (da) 1992-03-25 1992-03-25 Danisco Biologisk materiale
US5428148A (en) 1992-04-24 1995-06-27 Beckman Instruments, Inc. N4 - acylated cytidinyl compounds useful in oligonucleotide synthesis
US5401836A (en) 1992-07-16 1995-03-28 Pioneer Hi-Bre International, Inc. Brassica regulatory sequence for root-specific or root-abundant gene expression
AU670316B2 (en) 1992-07-27 1996-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. An improved method of (agrobacterium)-mediated transformation of cultured soybean cells
US5743477A (en) 1992-08-27 1998-04-28 Dowelanco Insecticidal proteins and method for plant protection
US6372965B1 (en) 1992-11-17 2002-04-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes for microsomal delta-12 fatty acid desaturases and hydroxylases from plants
US5496714A (en) 1992-12-09 1996-03-05 New England Biolabs, Inc. Modification of protein by use of a controllable interveining protein sequence
US5834247A (en) 1992-12-09 1998-11-10 New England Biolabs, Inc. Modified proteins comprising controllable intervening protein sequences or their elements methods of producing same and methods for purification of a target protein comprised by a modified protein
IL108241A (en) 1992-12-30 2000-08-13 Biosource Genetics Corp Plant expression system comprising a defective tobamovirus replicon integrated into the plant chromosome and a helper virus
US5607914A (en) 1993-01-13 1997-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic antimicrobial peptides
CA2161881C (en) 1993-01-13 2001-03-27 A. Gururaj Rao High lysine derivatives of alpha-hordothionin
IL108814A0 (en) 1993-03-02 1994-06-24 Du Pont Improved feedcrops enriched in sulfur amino acids and methods for improvement
US5877012A (en) 1993-03-25 1999-03-02 Novartis Finance Corporation Class of proteins for the control of plant pests
US5814618A (en) 1993-06-14 1998-09-29 Basf Aktiengesellschaft Methods for regulating gene expression
US5789156A (en) 1993-06-14 1998-08-04 Basf Ag Tetracycline-regulated transcriptional inhibitors
US6107547A (en) 1993-10-06 2000-08-22 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
WO1995015392A1 (en) 1993-11-30 1995-06-08 E.I. Du Pont De Nemours And Company Chimeric geens and methods for increasing the lysine content of the seeds of corn, soybean and rapeseed plants
US5580852A (en) 1993-12-17 1996-12-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Derivatives of tachyplesin having inhibitory activity towards plant pathogenic fungi
US5689052A (en) 1993-12-22 1997-11-18 Monsanto Company Synthetic DNA sequences having enhanced expression in monocotyledonous plants and method for preparation thereof
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US6335160B1 (en) 1995-02-17 2002-01-01 Maxygen, Inc. Methods and compositions for polypeptide engineering
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
IL113685A0 (en) 1994-05-13 1995-08-31 Du Pont Nucleic acid fragments chimeric genes and methods for increasing the methionine content of the seeds of plants
US5633363A (en) 1994-06-03 1997-05-27 Iowa State University, Research Foundation In Root preferential promoter
US5767373A (en) 1994-06-16 1998-06-16 Novartis Finance Corporation Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms
AU2963695A (en) 1994-07-08 1996-02-09 E.I. Du Pont De Nemours And Company Chimeric genes and method for increasing the threonine content of the seeds of plants
US5736369A (en) 1994-07-29 1998-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method for producing transgenic cereal plants
US5792931A (en) 1994-08-12 1998-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Fumonisin detoxification compositions and methods
US5608144A (en) 1994-08-12 1997-03-04 Dna Plant Technology Corp. Plant group 2 promoters and uses thereof
GB9422083D0 (en) 1994-11-02 1994-12-21 Innes John Centre Genetic control of flowering
US5659026A (en) 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
US5994627A (en) 1995-03-31 1999-11-30 Common Wealth Scientific And Industrial Research Organisation Genetic sequences conferring nematode resistance in plants and uses therefor
BR9604993B1 (pt) 1995-04-20 2009-05-05 dna mutante codificando uma proteìna ahas mutante de sìntese de ácido acetohidróxi e proteìnas ahas mutantes.
US5853973A (en) 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
HUP9900864A3 (en) 1995-05-31 2001-11-28 Pioneer Hi Bred Int Methods of increasing accumulation of essential amino acids in seeds
EP0828835A1 (en) 1995-06-02 1998-03-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. HIGH THREONINE DERIVATIVES OF $g(a)-HORDOTHIONIN
GB9511196D0 (en) 1995-06-02 1995-07-26 Innes John Centre Genetic control of flowering
EP0832235A1 (en) 1995-06-02 1998-04-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. HIGH METHIONINE DERIVATIVES OF alfa-HORDOTHIONIN
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
FR2736929B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie Sequence adn isolee pouvant servir de zone de regulation dans un gene chimere utilisable pour la transformation des plantes
US5837876A (en) 1995-07-28 1998-11-17 North Carolina State University Root cortex specific gene promoter
GB9518731D0 (en) 1995-09-13 1995-11-15 Innes John Centre Flowering genes
US5689035A (en) 1995-09-26 1997-11-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brown stem rot resistance in soybeans
GB9602796D0 (en) 1996-02-12 1996-04-10 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of plant growth and development
US6084153A (en) 1996-02-14 2000-07-04 The Governors Of The University Of Alberta Plants having enhanced nitrogen assimilation/metabolism
US5850016A (en) 1996-03-20 1998-12-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of amino acid compositions in seeds
US6096548A (en) 1996-03-25 2000-08-01 Maxygen, Inc. Method for directing evolution of a virus
US6083499A (en) 1996-04-19 2000-07-04 Mycogen Corporation Pesticidal toxins
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
GB9613132D0 (en) 1996-06-21 1996-08-28 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of flowering
US5850026A (en) 1996-07-03 1998-12-15 Cargill, Incorporated Canola oil having increased oleic acid and decreased linolenic acid content
US6177275B1 (en) 1996-07-24 2001-01-23 New York University Plant nitrogen regulatory P-PII genes
US6706866B1 (en) 1996-09-04 2004-03-16 Michigan State University Plant having altered environmental stress tolerance
US5892009A (en) 1996-09-04 1999-04-06 Michigan State University DNA and encoded protein which regulates cold and dehydration regulated genes
US6417428B1 (en) 1996-09-04 2002-07-09 Michael F. Thomashow Plant having altered environmental stress tolerance
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US6080913A (en) 1996-09-25 2000-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Binary methods of increasing accumulation of essential amino acids in seeds
EP0946729A2 (en) 1996-11-01 1999-10-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Proteins with enhanced levels of essential amino acids
US6713063B1 (en) 1996-11-20 2004-03-30 Monsanto Technology, Llc Broad-spectrum δ-endotoxins
US6232529B1 (en) 1996-11-20 2001-05-15 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of producing high-oil seed by modification of starch levels
US6017534A (en) 1996-11-20 2000-01-25 Ecogen, Inc. Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity
CA2272554C (en) 1996-11-22 2001-08-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Moniliformin detoxification compositions and methods
US5846812A (en) 1996-11-22 1998-12-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Zearalenone detoxification compositions and methods
US5798255A (en) 1996-11-22 1998-08-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Beauvericin detoxification compositions and methods
US5942664A (en) 1996-11-27 1999-08-24 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants
DE19652284A1 (de) 1996-12-16 1998-06-18 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Neue Gene codierend für Aminosäure-Deacetylasen mit Spezifität für N-Acetyl-L-Phosphinothricin, ihre Isolierung und Verwendung
US5986177A (en) 1997-01-10 1999-11-16 Agricultural Genetic Engineering Research Institute Bacillus thuringiensis isolates with broad spectrum activity
US6326204B1 (en) 1997-01-17 2001-12-04 Maxygen, Inc. Evolution of whole cells and organisms by recursive sequence recombination
DK1717322T3 (da) 1997-01-17 2012-10-22 Codexis Mayflower Holdings Llc Udvikling af hele celler og organismer ved rekursiv sekvensrekombination
US5981840A (en) 1997-01-24 1999-11-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for agrobacterium-mediated transformation
GB9703146D0 (en) 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
BR9808368A (pt) 1997-03-18 2000-05-23 Novo Nordisk As Processos para a construção de uma biblioteca de polinucleotideos homólogos recombinados, para a identificação um polipeptìdeo de interesse, e, para a produção de um polipeptìdeo de interesse.
ATE418608T1 (de) 1997-03-18 2009-01-15 Novozymes As Methode zur herstellung einer bibliothek mittels dna-shuffling
US5948653A (en) 1997-03-21 1999-09-07 Pati; Sushma Sequence alterations using homologous recombination
US6153410A (en) 1997-03-25 2000-11-28 California Institute Of Technology Recombination of polynucleotide sequences using random or defined primers
KR20010005645A (ko) 1997-03-27 2001-01-15 메리 이. 보울러 식물 종자의 라이신 함량을 증가시키기 위한 키메라 유전자 및 방법
US6040497A (en) 1997-04-03 2000-03-21 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US7105724B2 (en) 1997-04-04 2006-09-12 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
ZA981569B (en) 1997-04-08 1999-08-25 Du Pont An engineered seed protein having a higher percentage of essential amino acids.
AU746521B2 (en) 1997-04-08 2002-05-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Soybean plant producing seeds with reduced levels of raffinose saccharides and phytic acid
ID22425A (id) 1997-05-05 1999-10-14 Dow Agrosciences Llc Toksin-toksin protein insektisida dari xenorhabdus
CA2292778A1 (en) 1997-06-06 1998-12-10 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant amino acid biosynthetic enzymes
WO1998056935A2 (en) 1997-06-12 1998-12-17 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant amino acid biosynthetic enzymes
GB9712415D0 (en) 1997-06-13 1997-08-13 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of flowering
ATE376592T1 (de) 1997-07-22 2007-11-15 Pioneer Hi Bred Int Gene, welche den phytat-metabolismus kontrollieren und daraus entstehende anwendungen
US6197561B1 (en) 1997-07-22 2001-03-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes controlling phytate metabolism in plants and uses thereof
US6291224B1 (en) 1998-07-17 2001-09-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes controlling phytate metabolism in plants and uses thereof
GB9717192D0 (en) 1997-08-13 1997-10-22 Innes John Centre Innov Ltd Genetic control of plant growth and development
TR200000547T2 (tr) 1997-08-27 2001-05-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lignin biyosentezi için enzimleri kodlayan genler ve bunların kullanımı.
US5929305A (en) 1997-10-14 1999-07-27 Michigan State University Plant material containing non-naturally introduced binding protein for regulating cold and dehydration regulatory genes
WO1999021979A1 (en) 1997-10-28 1999-05-06 Maxygen, Inc. Human papillomavirus vectors
EP1030861A4 (en) 1997-10-31 2001-09-05 Maxygen Inc MODIFICATION OF VIRAL TROPISM AND THE DIVERSITY OF HOST SPECIES BY RECOMBINATION OF THE VIRAL GENOME
US6218188B1 (en) 1997-11-12 2001-04-17 Mycogen Corporation Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins
NZ504300A (en) 1997-11-18 2002-06-28 Pioneer Hi Bred Int A method for directional stable transformation of eukaryotic cells using non-identical recombination sites
ATE317440T1 (de) 1997-11-18 2006-02-15 Pioneer Hi Bred Int Neuartige methode zur integration von fremd-dna ins eukaryotische genom
WO1999025853A1 (en) 1997-11-18 1999-05-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Targeted manipulation of herbicide-resistance genes in plants
DE69841438D1 (de) 1997-11-18 2010-02-25 Pioneer Hi Bred Int Mobilisierung eines viralen genoms aus t-dna durch ortsspezifische rekombinationssysteme
EP1036198B1 (en) 1997-12-08 2012-09-26 California Institute Of Technology Method for creating polynucleotide and polypeptide sequences
AR017831A1 (es) 1997-12-10 2001-10-24 Pioneer Hi Bred Int Metodo para alterar la composicion de aminoacidos de una proteina nativa de interes, proteina elaborada, y polinucleotido
US6060594A (en) 1997-12-18 2000-05-09 Ecogen, Inc. Nucleic acid segments encoding modified bacillus thuringiensis coleopteran-toxic crystal proteins
DK1040192T3 (da) 1997-12-18 2006-12-18 Monsanto Technology Llc Insekt-resistente transgene planter og fremgangsmåder til forbedring af delta-endotoksin-aktivitet mod insekter
US6023013A (en) 1997-12-18 2000-02-08 Monsanto Company Insect-resistant transgenic plants
US6077824A (en) 1997-12-18 2000-06-20 Ecogen, Inc. Methods for improving the activity of δ-endotoxins against insect pests
US6063597A (en) 1997-12-18 2000-05-16 Monsanto Company Polypeptide compositions toxic to coleopteran insects
US7053282B1 (en) 1998-02-09 2006-05-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of amino acid compositions in seeds
EP1053343A2 (en) 1998-02-11 2000-11-22 Maxygen, Inc. Targeting of genetic vaccine vectors
EP1054973A1 (en) 1998-02-11 2000-11-29 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
ES2273127T3 (es) 1998-02-26 2007-05-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Promotor alfa-tubulin 3-18 del maiz.
WO1999043819A1 (en) 1998-02-26 1999-09-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Family of maize pr-1 genes and promoters
CA2324515A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Plant Bioscience Limited Plant control genes
PT1068311E (pt) 1998-04-08 2011-07-20 Commw Scient Ind Res Org Processos e meios de obter fenótipos modificados
US6225530B1 (en) 1998-04-15 2001-05-01 The Salk Institute For Biological Studies Flowering locus T (FT) and genetically modified plants having modulated flower development
EP1071789A1 (en) 1998-04-24 2001-01-31 E.I. Du Pont De Nemours And Company Phytic acid biosynthetic enzymes
US6284948B1 (en) 1998-05-18 2001-09-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes and methods for control of nematodes in plants
EP0959133A1 (en) 1998-05-22 1999-11-24 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro-Dlo) A process for inhibiting expression of genes
US7008664B1 (en) 1998-06-11 2006-03-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for improving the carcass quality of an animal
CN1308683A (zh) 1998-06-29 2001-08-15 菲洛斯公司 用于产生高多样性文库的方法
US6538177B1 (en) 1998-07-15 2003-03-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for fumonisin detoxification
US6693185B2 (en) 1998-07-17 2004-02-17 Bayer Bioscience N.V. Methods and means to modulate programmed cell death in eukaryotic cells
GB9816681D0 (en) 1998-07-31 1998-09-30 Minnesota Mining & Mfg Cleaning pads formed from non-woven abrasive web material,especially for domestic use
FR2782323B1 (fr) 1998-08-12 2002-01-11 Proteus Procede de production in vitro de sequences polynucleotidiques recombinees, banques de sequences et sequences ainsi obtenues
US7179955B2 (en) 1998-08-17 2007-02-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases genes and uses thereof
US6930225B2 (en) 1998-08-17 2005-08-16 Pioneer Hi-Bred Int'l Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
US20040068767A1 (en) 1998-08-17 2004-04-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
ES2296405T3 (es) 1998-08-17 2008-04-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Celulosas sintasa del maiz y su utilizacion.
ATE309362T1 (de) 1998-08-20 2005-11-15 Pioneer Hi Bred Int Samen-bevorzugende promotoren
AU5788299A (en) 1998-08-28 2000-03-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred promoters from (end) genes
US6346403B1 (en) 1998-09-08 2002-02-12 E.I. Du Pont De Nemours And Company Methionine metabolic enzymes
US20030041356A1 (en) 2001-03-27 2003-02-27 Lynne Reuber Methods for modifying flowering phenotypes
US6717034B2 (en) 2001-03-30 2004-04-06 Mendel Biotechnology, Inc. Method for modifying plant biomass
US20050086718A1 (en) 1999-03-23 2005-04-21 Mendel Biotechnology, Inc. Plant transcriptional regulators of abiotic stress
US6664446B2 (en) 1999-03-23 2003-12-16 Mendel Biotechnology, Inc. Transgenic plants comprising polynucleotides encoding transcription factors that confer disease tolerance
JP2002537758A (ja) 1998-09-29 2002-11-12 マキシジェン， インコーポレイテッド コドン変更された遺伝子のシャッフリング
ES2264283T3 (es) 1998-10-23 2006-12-16 Mycogen Corporation Polinucleotidos optimizados de plantas que codifican proteinas pesticidas de aproximadamente 15kda y aproximadamente 45kda.
US6468523B1 (en) 1998-11-02 2002-10-22 Monsanto Technology Llc Polypeptide compositions toxic to diabrotic insects, and methods of use
US6489542B1 (en) 1998-11-04 2002-12-03 Monsanto Technology Llc Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids
JP2002529096A (ja) 1998-11-09 2002-09-10 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド 転写アクチベータｌｅｃ１核酸、ポリペプチドおよびそれらの使用
US6825397B1 (en) 1998-11-09 2004-11-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. LEC1 trancriptional activator nucleic acids and methods of use thereof
DE69935243T2 (de) 1998-11-20 2007-11-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Verfahren zur verringerung der cholesterinkonzentration in tierprodukten
AU2349500A (en) 1998-11-25 2000-06-19 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Ethylene-response-factor1 (erf1) in plants
US6531648B1 (en) 1998-12-17 2003-03-11 Syngenta Participations Ag Grain processing method and transgenic plants useful therein
US6436675B1 (en) 1999-09-28 2002-08-20 Maxygen, Inc. Use of codon-varied oligonucleotide synthesis for synthetic shuffling
EP1151409A1 (en) 1999-01-18 2001-11-07 Maxygen, Inc. Methods of populating data stuctures for use in evolutionary simulations
AU3210100A (en) 1999-01-19 2000-08-01 Maxygen, Inc. Methods for making character strings, polynucleotides and polypeptides having desired characteristics
GB9901927D0 (en) 1999-01-28 1999-03-17 John Innes Foundation Methods and means for modification of plant characteristics
GB9902660D0 (en) 1999-02-05 1999-03-31 Plant Bioscience Ltd Plant gene
US6323392B1 (en) 1999-03-01 2001-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Formation of brassica napus F1 hybrid seeds which exhibit a highly elevated oleic acid content and a reduced linolenic acid content in the endogenously formed oil of the seeds
US6531316B1 (en) 1999-03-05 2003-03-11 Maxyag, Inc. Encryption of traits using split gene sequences and engineered genetic elements
CA2364997A1 (en) 1999-03-05 2000-09-08 Maxygen, Inc. Encryption of traits using split gene sequences
US6835540B2 (en) 2001-03-16 2004-12-28 Mendel Biotechnology, Inc. Biosynthetic pathway transcription factors
AU3733000A (en) 1999-03-24 2000-10-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize chitinases and their use in enhancing disease resistance in crop plants
AU4452800A (en) 1999-04-07 2000-10-23 Michael Fromm Genetic trait breeding method
US6992237B1 (en) 1999-04-16 2006-01-31 Pioneer Hi-Bred International Inc. Regulated expression of genes in plant seeds
US7531723B2 (en) 1999-04-16 2009-05-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of cytokinin activity in plants
WO2000066748A1 (en) 1999-04-29 2000-11-09 Syngenta Limited Herbicide resistant plants
CZ20013856A3 (cs) 1999-04-29 2002-04-17 Syngenta Ltd. Herbicidně rezistentní rostliny
MXPA01010930A (es) 1999-04-29 2003-06-30 Syngenta Ltd Plantas resistentes a herbicidas.
US6855865B2 (en) 1999-05-07 2005-02-15 E.I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acids encoding plant defensins and methods of use thereof
CA2372687A1 (en) 1999-05-07 2000-11-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phytyl/prenyltransferase nucleic acids, polypeptides and uses thereof
US6653535B1 (en) 1999-05-28 2003-11-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for modulating water-use efficiency or productivity in a plant by transforming with a DNA encoding a NAPD-malic enzyme operably linked to a guard cell or an epidermal cell promoter
US6441274B1 (en) 1999-06-16 2002-08-27 E. I. Du Pont De Nemours & Company Plant tryptophan synthase beta subunit
AU6082600A (en) 1999-07-12 2001-01-30 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plant inositol polyphosphate phosphatase homologs
US6388171B1 (en) 1999-07-12 2002-05-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for fumonisin detoxification
CA2381927A1 (en) 1999-08-13 2001-02-22 Syngenta Participations Ag Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase
DE60043701D1 (de) 1999-08-16 2010-03-04 Du Pont Verfahren zur herstellung von calendulasäure, einer fettsäure mit delta-8,10,12 konjugierten doppelbindungen und dimorphekolinsäure, einer fettsäure mit einer 9-hydroxyl-gruppe und delta-10,12 konjugierten doppelbindungen
WO2001012731A1 (en) 1999-08-19 2001-02-22 Ppg Industries Ohio, Inc. Hydrophobic particulate inorganic oxides and polymeric compositions containing same
US6423886B1 (en) 1999-09-02 2002-07-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Starch synthase polynucleotides and their use in the production of new starches
GB9922071D0 (en) 1999-09-17 1999-11-17 Plant Bioscience Ltd Methods and means for modification of plant characteristics
BR0014750A (pt) 1999-10-12 2002-07-02 Mendel Biotechnology Inc Vegetal transgênico, e, método para alterar o tempo de florescimento ou a exigência de vernalização de um vegetal
US6384304B1 (en) 1999-10-15 2002-05-07 Plant Genetic Systems N.V. Conditional sterility in wheat
AU774837B2 (en) 1999-10-21 2004-07-08 Fluor Technologies Corporation Methods and apparatus for high propane recovery
US20020178464A1 (en) 1999-11-10 2002-11-28 Whitehead Institute For Biomedical Research Proton transporters and uses in plants
MXPA02004932A (es) 1999-11-17 2003-02-27 Pioneer Hi Bred Int Modulacion de la respuesta de plantas a acido abscisico.
MXPA02004884A (es) 1999-11-17 2004-04-05 Mendel Biotechnology Inc Genes de tolerancia a patogenos.
US6248535B1 (en) 1999-12-20 2001-06-19 University Of Southern California Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens
US7049115B2 (en) 2000-02-29 2006-05-23 E. I. Du Pont De Nemours & Company Genes encoding denitrification enzymes
DE60111613T2 (de) 2000-03-09 2006-05-18 Monsanto Technology Llc. Verfahren zum herstellen von glyphosat-toleranten pflanzen
US6777592B2 (en) 2000-04-14 2004-08-17 E.I. Du Pont Denemours And Company Arthropod defensins of Scolopendra canidens, Vaejovis carolinianus, and Argiope spp.
WO2001079516A2 (en) 2000-04-14 2001-10-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize cellulose synthases and uses thereof
WO2002000904A2 (en) 2000-06-23 2002-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Recombinant constructs and their use in reducing gene expression
WO2002000894A2 (en) 2000-06-30 2002-01-03 Cropdesign N.V. Gene silencing vector
CN1137265C (zh) 2000-07-06 2004-02-04 中国科学院微生物研究所 一种提高植物氮素同化效率的方法
US6801104B2 (en) 2000-08-22 2004-10-05 Paratek Microwave, Inc. Electronically tunable combline filters tuned by tunable dielectric capacitors
EP2410060A1 (en) 2000-08-22 2012-01-25 Mendel Biotechnology, Inc. Genes for modifying plant traits IV
US6713259B2 (en) 2000-09-13 2004-03-30 Monsanto Technology Llc Corn event MON810 and compositions and methods for detection thereof
US7605304B2 (en) 2000-10-24 2009-10-20 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding novel bacillus thuringiensis proteins with pesticidal activity against coleopterans
EP1346035A2 (en) 2000-10-24 2003-09-24 E. I. du Pont de Nemours and Company Plant transcription factors
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
US6858778B1 (en) 2000-11-07 2005-02-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plants transformed with a DNA construct comprising a nucleic acid molecule encoding an 18 kD α-globulin
US20050160488A1 (en) 2000-11-07 2005-07-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Grain quality through altered expression of seed proteins
US7741533B2 (en) 2000-11-07 2010-06-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Grain quality through altered expression of seed proteins
US20030024005A1 (en) 2000-11-17 2003-01-30 Hillyard Jeanna R. Cotton event PV-GHBK04 (757) and compositions and methods for detection thereof
US7122658B1 (en) 2000-11-22 2006-10-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred regulatory elements and uses thereof
CA2434602C (en) 2001-01-12 2014-01-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel inositol polyphosphate kinase genes and uses thereof
US6812380B2 (en) 2001-03-27 2004-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods of zearalenone detoxification
JP2002281975A (ja) 2001-03-28 2002-10-02 Yamaguchi Technology Licensing Organization Ltd 大豆のナイトレートトランスポーター１遺伝子ファミリーに属する遺伝子
AR035799A1 (es) 2001-03-30 2004-07-14 Syngenta Participations Ag Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos.
US6891085B2 (en) 2001-04-20 2005-05-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleic acid encoding the FUS6 antimicrobial polypeptide of Agrotis ipsilon and its use to enhance disease resistance in a plant
WO2002090540A1 (en) 2001-05-10 2002-11-14 The Salk Institute For Biological Studies Ethylene insensitive plants
AU2002322388A1 (en) 2001-06-22 2003-01-08 E.I. Du Pont De Nemours And Company Defensin polynucleotides and methods of use
US7294759B2 (en) 2001-06-29 2007-11-13 E. I. Du Pont De Nemours And Company Alteration of oil traits in plants
US7189889B2 (en) 2001-08-02 2007-03-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for improving seed characteristics
WO2003013227A2 (en) 2001-08-09 2003-02-20 Mendel Biotechnology, Inc. Yield-related polynucleotides and polypeptides in plants
US7230167B2 (en) 2001-08-31 2007-06-12 Syngenta Participations Ag Modified Cry3A toxins and nucleic acid sequences coding therefor
AU2002331897A1 (en) 2001-09-27 2003-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phytate polynucleotides and methods of use
WO2003033651A2 (en) 2001-10-16 2003-04-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for promoting nematode resistance in plants
US7087810B2 (en) 2001-11-07 2006-08-08 Muller Mathis L Isolated nucleic acids encoding proteins with chitinase activity and uses thereof
US7145060B2 (en) 2001-11-07 2006-12-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleic acid encoding a chitinase and methods of using it to make fungal resistant plants
US7262038B2 (en) 2001-12-14 2007-08-28 Nitrate Elimination Co., Inc. Simplified eukaryotic nitrate reductase
US7154029B2 (en) 2002-03-22 2006-12-26 E.I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods for altering tocotrienol content
US20040128719A1 (en) 2002-06-21 2004-07-01 Klee Harry J. Materials and methods for tissue-specific targeting of ethylene insensitivity in transgenic plants
US7462760B2 (en) 2002-06-26 2008-12-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genes encoding plant protease-resistant pesticidal proteins and method of their use
AU2003279760A1 (en) 2002-06-26 2004-01-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding proteins with pesticidal activity
US7705216B2 (en) 2002-07-29 2010-04-27 Monsanto Technology Llc Corn event PV-ZMIR13 (MON863) plants and compositions and methods for detection thereof
US20040078852A1 (en) 2002-08-02 2004-04-22 Thomashow Michael F. Transcription factors to improve plant stress tolerance
EP2272962B1 (en) 2002-09-18 2017-01-18 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
CN1751125A (zh) 2003-01-21 2006-03-22 美国陶氏益农公司 混合并匹配tc蛋白质用于病虫害防治
US7355099B2 (en) 2003-02-20 2008-04-08 Athenix Corporation AXMI-004, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US7351881B2 (en) 2003-02-20 2008-04-01 Athenix Corporation AXMI-008, a delta-endotoxin gene and methods for its use
ATE412054T1 (de) 2003-02-20 2008-11-15 Athenix Corp Delta-endotoxin gene und verfahren zu ihrer verwendung
US20040197917A1 (en) 2003-02-20 2004-10-07 Athenix Corporation AXMI-014, delta-endotoxin gene and methods for its use
US20040210965A1 (en) 2003-02-20 2004-10-21 Athenix Corporation AXMI-007, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US20040216186A1 (en) 2003-02-20 2004-10-28 Athenix Corporation AXMI-006, a delta-endotoxin gene and methods for its use
US20040210964A1 (en) 2003-02-20 2004-10-21 Athenix Corporation AXMI-009, a delta-endotoxin gene and methods for its use
AU2004225483B2 (en) 2003-03-28 2009-07-23 Monsanto Technology, Llc Novel plant promoters for use in early seed development
CA2521497C (en) 2003-04-04 2012-11-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of cytokinin activity in plants
MXPA05011795A (es) 2003-05-02 2006-02-17 Dow Agrosciences Llc Evidencia de maiz tc1507 y metodos para deteccion del mismo.
BRPI0412390A (pt) * 2003-07-07 2006-09-19 Monsanto Technology Llc proteìnas inseticidas secretadas de espécies bacillus e uso dessas proteìnas
US7253343B2 (en) 2003-08-28 2007-08-07 Athenix Corporation AXMI-003, a delta-endotoxin gene and methods for its use
WO2005030967A2 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Crop plant cystatin proteinase inhibitors and methods of use
US20050183161A1 (en) 2003-10-14 2005-08-18 Athenix Corporation AXMI-010, a delta-endotoxin gene and methods for its use
CA2547933C (en) * 2003-12-16 2014-08-12 Monsanto Technology Llc Secreted insecticidal protein and gene compositions from bacillus thuringiensis and uses therefor
CA2450000A1 (en) 2003-12-18 2005-06-18 Alberta Research Council Inc. Method of creating plants with reduced level of saturated fatty acid in seed oil
US7629504B2 (en) 2003-12-22 2009-12-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis cry9 nucleic acids
AR047811A1 (es) 2004-02-20 2006-02-22 Du Pont Lipasas y metodos de uso en plantas
CN101671680B (zh) 2004-02-25 2012-11-28 先锋高级育种国际公司 新的苏云金芽孢杆菌晶体多肽、多核苷酸及其组合物
ES2743789T3 (es) 2004-03-26 2020-02-20 Dow Agrosciences Llc Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento
CN102524294B (zh) 2004-04-09 2018-04-06 孟山都技术有限公司 用于在植物中控制昆虫侵袭的组合物和方法
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
EP2308977B2 (en) 2004-04-30 2017-04-26 Dow AgroSciences LLC Novel herbicide resistance gene
CA2567267C (en) 2004-05-20 2013-04-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize multidrug resistance-associated protein polynucleotides and methods of use
ATE482281T1 (de) 2004-06-09 2010-10-15 Pioneer Hi Bred Int Plastiden transit peptide
CA2567764A1 (en) 2004-06-16 2006-01-19 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid molecules encoding wrinkled1-like polypeptides and methods of use in plants
WO2006085966A2 (en) 2004-06-30 2006-08-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of protecting plants from pathogenic fungi and nematodes
BR122015026849C8 (pt) 2004-07-02 2017-06-20 Du Pont cassete de expressão, microorganismo transformado, método para indução de resistência a patógeno de planta em uma planta, composição anti-patogênica e método para proteção de uma planta contra um patógeno de planta
EP1779155A2 (en) 2004-08-10 2007-05-02 Cardinal CG Company Lcd mirror system and method
KR101337016B1 (ko) 2004-09-29 2013-12-05 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 옥수수 이벤트 ｄａｓ-59122-7 및 그의 탐지 방법
RU2286385C2 (ru) * 2004-11-23 2006-10-27 Центр "Биоинженерия" Ран РЕКОМБИНАНТНАЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩАЯ УНИКАЛЬНЫЙ ТРАНСФОРМАЦИОННЫЙ АКТ МЕЖДУ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ КОНСТРУКЦИЕЙ, ВКЛЮЧАЮЩЕЙ ГЕН cryIIIa, И ГЕНОМНОЙ ДНК КАРТОФЕЛЯ СОРТА ЕЛИЗАВЕТА, ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ И СОДЕРЖАЩИЕ ЭТУ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТКА, ТРАНСГЕННОЕ РАСТЕНИЕ И ЕГО ПОТОМСТВО
EP1844064B1 (en) 2005-01-31 2013-01-30 Athenix Corporation Axmi-018, axmi-020, and axmi-021, a family of delta-endotoxin genes and methods for their use
EP1859037A2 (en) 2005-03-08 2007-11-28 BASF Plant Science GmbH Expression enhancing intron sequences
US7601498B2 (en) 2005-03-17 2009-10-13 Biotium, Inc. Methods of using dyes in association with nucleic acid staining or detection and associated technology
CA2601857A1 (en) 2005-04-01 2006-10-12 Nadine Carozzi Axmi-027, axmi-036 and axmi-038, a family of delta-endotoxin genes and methods for their use
EP1874935B2 (en) 2005-04-04 2023-10-18 E. I. du Pont de Nemours and Company Polynucleotides and methods for making plants resistant to fungal pathogens
WO2006119457A1 (en) 2005-05-02 2006-11-09 Athenix Corporation Axmi-028 and axmi-029, family of novel delta-endotoxin genes and methods for their use
WO2007003660A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Cropdesign N.V. Plant yield improvement by ste20-like gene expression
MX2008000429A (es) 2005-07-18 2008-03-10 Basf Plant Science Gmbh Aumento del rendimiento en plantas con sobreexpresion de los genes accdp.
AP2008004392A0 (en) 2005-08-24 2008-04-30 E I Du Pomt De Nemours And Com Compositions providing tolerance to multiple herbicides and methods of use thereof
PT2275562E (pt) 2005-09-16 2016-01-26 Devgen Nv Métodos com base em plantas transgénicas para infestações em plantas utilizando arn de interferência¿
EP1929017B1 (en) 2005-09-16 2011-12-07 Bayer CropScience AG Transplastomic plants expressing lumen-targeted protein
US7449552B2 (en) 2006-04-14 2008-11-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis cry gene and protein
US7329736B2 (en) 2006-04-14 2008-02-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis cry gene and protein
NZ572795A (en) 2006-05-25 2011-06-30 Hexima Ltd Multi-gene expression vehicle
AR061467A1 (es) 2006-06-14 2008-08-27 Athenix Corp Axmi-031 axmi-039 axmi-040 y axmi-049 una familia de nuevos genes de delta-endotoxinas y metodos para usarlos
EP3800198A1 (en) 2006-06-15 2021-04-07 Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc A family of pesticidal proteins and methods for their use
AR062019A1 (es) 2006-07-21 2008-08-10 Pioneer Hi Bred Int Gen de bacillus thuringiensis con actividad contra lepidopteros
KR20090054965A (ko) 2006-07-21 2009-06-01 파이어니어 하이-브레드 인터내셔날 인코포레이티드 신규한 유전자를 동정하는 방법
BRPI0715354A2 (pt) 2006-08-07 2015-06-23 Univ Missouri Quinases semelhantes a receptor lysm para melhora da resposta de defesa de plantas contra fungos patogênicos
BRPI0720135A2 (pt) 2006-12-08 2012-11-06 Pioneer Hi Bred Int molécula de ácido nucleico isolada, vetor, cassete de expressão, célula hospedeira, planta transgênica, semente, molécula de ácido nucleico, vetor, poliptìdeo, método para produzir uma planta com resistência a insetos aumentada, polinucleotìdeo isolado, cassete de expressão recombinante, polipeptìdeo isolado, célula hospedeira transformada, planta transformada, semente transformada
CA2671341A1 (en) 2006-12-15 2008-06-19 Cropdesign N.V. Plants having enhanced seed yield and method of making the same comprising expressing a class iii tpp polypeptide
AU2008232826B2 (en) 2007-03-28 2011-06-02 Syngenta Participations Ag Insecticidal proteins
US7790156B2 (en) 2007-04-10 2010-09-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Δ-8 desaturases and their use in making polyunsaturated fatty acids
US8609936B2 (en) 2007-04-27 2013-12-17 Monsanto Technology Llc Hemipteran-and coleopteran active toxin proteins from Bacillus thuringiensis
CN101802190A (zh) 2007-06-20 2010-08-11 澳大利亚国立大学 提高植物胁迫抗性的方法和材料
US7772465B2 (en) 2007-06-26 2010-08-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
AU2008277735A1 (en) 2007-07-13 2009-01-22 Basf Plant Science Gmbh Transgenic plants with increased stress tolerance and yield
BRPI0818941A2 (pt) 2007-08-29 2014-10-07 Pioneer Hi Bred Int "planta, métodos de alteração da arquitetura de raízes em plantas, de avaliação da arquitetura de raízes em plantas, de determinação de alteração de uma característica agronômica em uma planta, de transformação de células, de produção de plantas, polinucleotídeo, vetor e reconstrução de dna recombinante"
CA2699066A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Basf Plant Science Gmbh Plants having increased yield-related traits and a method for making the same comprising expression of a growth-regulating factor (grf) polypeptide
EP2201030A2 (en) 2007-10-16 2010-06-30 Athenix Corporation Axmi-066 and axmi-076: delta-endotoxin proteins and methods for their use
US8173866B1 (en) 2008-01-11 2012-05-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Modulation of plant xylan synthases
US20090188008A1 (en) 2008-01-17 2009-07-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides
US8809625B2 (en) 2008-01-17 2014-08-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from Lygus
AU2009262153B2 (en) 2008-06-25 2014-02-27 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Toxin genes and methods for their use
PE20110310A1 (es) 2008-07-02 2011-05-29 Athenix Corp Axmi-115, axmi-113, axmi-005, axmi-163 y axmi-184: proteinas insecticidas
EP2184752B1 (en) 2008-10-08 2011-02-02 Research In Motion Limited Dual-action single-key mechanism
UY38535A (es) 2008-12-23 2020-11-30 Athenix Corp Gen de delta-endotoxinas axmi-004 y métodos de uso del mismo
US8319019B2 (en) 2009-01-23 2012-11-27 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
CA2750007A1 (en) 2009-01-28 2010-08-05 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
MX2011008246A (es) 2009-02-05 2011-09-06 Athenix Corp Genes de delta endotoxina variante axmi.r1 y metodos de uso de los mismos.
MX2011008955A (es) * 2009-02-27 2011-09-30 Athenix Corp Proteinas pesticidas y metodos de uso de las mismas.
MX2011009496A (es) 2009-03-11 2011-10-14 Athenix Corp Axmi-001, axmi-002, axmi-030, axmi-035 y axmi-045: genes de toxina y metodos para su uso.
US8033349B2 (en) 2009-03-12 2011-10-11 Ford Global Technologies, Inc. Auto-seek electrical connection for a plug-in hybrid electric vehicle
US8987553B2 (en) 2009-04-14 2015-03-24 Pioneer Hi Bred International Inc Modulation of ACC synthase improves plant yield under low nitrogen conditions
ES2532145T3 (es) 2009-04-17 2015-03-24 Dow Agrosciences Llc Toxinas Cry insecticidas DIG-3
US8334366B1 (en) 2009-04-29 2012-12-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Mutant lycotoxin-1 peptide sequences for insecticidal and cell membrane altering properties
WO2010135813A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 National Research Council Of Canada Increased seed oil and abiotic stress tolerance mediated by hsi2
KR20120039625A (ko) 2009-06-16 2012-04-25 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 살충성 ｄｉｇ-11 ｃｒｙ 독소
PL2449109T3 (pl) 2009-07-02 2017-04-28 Athenix Corporation Gen pestycydowy AXMI-205 i sposoby jego stosowania
BR112012005407A2 (pt) 2009-09-11 2019-09-24 Valent Bioscences Corp cepa bacteriana, composição pesticida, e, método para controlar pragas
WO2011050675A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences Genes conferring drought and salt tolerance and uses thereof
US8916746B2 (en) 2009-10-30 2014-12-23 Japan Tobacco, Inc. Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding DTP21 polypeptides
CN107177627A (zh) 2009-12-16 2017-09-19 陶氏益农公司 用于控制欧洲玉米螟的包含CRY1Ab和CYR2Aa的杀虫蛋白组合
NZ601097A (en) 2009-12-16 2014-10-31 Dow Agrosciences Llc Insect resistance management with combinations of cry1be and cry1f proteins
BR122019001711B8 (pt) 2009-12-16 2022-10-11 Dow Agrosciences Llc Composição e método para o controle de pragas de lepidópteros
JP5969920B2 (ja) 2009-12-16 2016-08-17 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 昆虫の抵抗性を管理するためのＣｒｙ１ＣＡとＣｒｙ１ＡＢタンパク質との併用
CA2782636A1 (en) 2009-12-16 2011-06-23 Dow Agrosciences Llc Methods and compositions comprising vip3ab and cry1fa polypeptides for c ontrol of fall armyworm
CA2782548A1 (en) 2009-12-16 2011-06-23 Dow Agrosciences Llc Combined use of cry1ca and cry1fa proteins for insect resistance management
BR112012014727B1 (pt) 2009-12-16 2019-09-03 Dow Agrosciences Llc método de controle de um inseto lagarta-do-cartucho
US8653328B2 (en) 2009-12-17 2014-02-18 The Curators Of The University Of Missouri Plant genes associated with seed oil content and methods of their use
MX2012009634A (es) 2010-02-18 2012-09-28 Athenix Corp Genes delta-endotoxinicos axmi218, axmi219, axmi220, axmi226, axmi227, axmi228, axmi229, axmi230, y axmi231 y metodos para sus uso.
MX2012009632A (es) 2010-02-18 2012-09-28 Athenix Corp Genes delta-endotoxinicos axmi221z, axmi222z, axmi223z, axmi224z, axmi225z y metodos para su uso.
WO2011133896A1 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Dow Agrosciences Llc Combinations including cry3aa and cry6aa proteins to prevent development of resistance in corn rootworms (diabrotica spp.)
CA2799453A1 (en) 2010-06-04 2011-12-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for insecticidal control of stinkbugs
UA111592C2 (uk) 2010-07-07 2016-05-25 Сінгента Партісіпейшнс Аг Спосіб контролю над твердокрилими комахами-шкідниками
US9447423B2 (en) 2010-07-09 2016-09-20 Monsanto Technology Llc Regulatory polynucleotides and uses thereof
CA2812506A1 (en) 2010-09-24 2012-03-29 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
US20120079622A1 (en) 2010-09-24 2012-03-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Yield Enhancement in Plants by Modulation of a ZM-LOBDP1 Protein
US8772024B2 (en) 2010-09-27 2014-07-08 Pioneer Hi Bred International Inc Yield enhancement in plants by modulation of a ZM-ZFP1 protein
WO2012055982A2 (en) 2010-10-27 2012-05-03 Devgen Nv Down-regulating gene expression in insect pests
WO2012058528A2 (en) 2010-10-28 2012-05-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding dtp6 polypeptides
US20140007295A1 (en) 2010-10-29 2014-01-02 Syngenta Participations Ag Overexpression of Plant Mirnas for Parasite Control
EP2651967A4 (en) * 2010-12-13 2014-05-14 Syngenta Participations Ag CRY1I PROTEINS AND GENES TO FIGHT INSECT
US8987552B2 (en) 2010-12-30 2015-03-24 Dow Agrosciences, Llc. Nucleic acid molecules that target the vacuolar ATPase H subunit and confer resistance to coleopteran pests
AU2012214420B2 (en) 2011-02-11 2017-03-02 Monsanto Technology Llc Pesticidal nucleic acids and proteins and uses thereof
CN111269921B (zh) 2011-04-07 2023-12-05 孟山都技术公司 具有对抗半翅目和/或鳞翅目昆虫的活性的昆虫抑制毒素家族
EP2699685B1 (en) 2011-04-20 2018-03-14 Devgen NV Down-regulating gene expression in insect pests
US9150625B2 (en) 2011-05-23 2015-10-06 E I Du Pont De Nemours And Company Chloroplast transit peptides and methods of their use
MX351264B (es) * 2011-12-28 2017-10-06 Council Scient Ind Res Proteína quitinasa insecticida novedosa, su nucleótido codificador y su aplicación.
US9688730B2 (en) * 2012-07-02 2017-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
AR091910A1 (es) * 2012-07-26 2015-03-11 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos de uso
US9475847B2 (en) 2012-07-26 2016-10-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US9403881B2 (en) * 2013-03-14 2016-08-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods of use
EP3102684B1 (en) 2014-02-07 2020-05-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use

Also Published As

Publication number Publication date
CN107108705B (zh) 2021-05-25
BR112017007932A2 (pt) 2018-01-23
EP3207143A1 (en) 2017-08-23
US20170233440A1 (en) 2017-08-17
CA2963558C (en) 2023-04-04
MX2017004745A (es) 2017-10-20
WO2016061206A1 (en) 2016-04-21
PH12017500694A1 (en) 2017-10-09
CN113372421B (zh) 2024-08-06
US20200399653A1 (en) 2020-12-24
US10435706B2 (en) 2019-10-08
CN113372421A (zh) 2021-09-10
US10781458B2 (en) 2020-09-22
US20230056043A1 (en) 2023-02-23
CN107108705A (zh) 2017-08-29
AR102293A1 (es) 2017-02-15
US20200010514A1 (en) 2020-01-09
RU2017116790A (ru) 2018-11-19
RU2733898C2 (ru) 2020-10-09
ZA201702161B (en) 2018-05-30
RU2017116790A3 (uk) 2019-05-17
EP3207143B1 (en) 2023-11-22
CA2963558A1 (en) 2016-04-21
US11492641B2 (en) 2022-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126192C2 (uk) Інсектицидний білок та спосіб його застосування
US11015208B2 (en) Insecticidal proteins from plants
UA120608C2 (uk) Очищений поліпептид ptip-83 та спосіб його застосування
CN107635396B (zh) 杀昆虫蛋白及其使用方法
UA120598C2 (uk) Днк-конструкція та спосіб її застосування
UA124495C2 (uk) Інсектицидний білок рослинного походження та спосіб його застосування
CN108064233B (zh) 杀昆虫蛋白及其使用方法
US20240076688A1 (en) Insecticidal proteins from plants and methods for their use
EA030896B1 (ru) Инсектицидные белки и способы их применения
CN105473605A (zh) Phi-4多肽及其使用方法
UA122657C2 (uk) Ген пестициду axmi279 та спосіб його застосування
CN111032683A (zh) 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
CN112020302B (zh) 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
CN110621780A (zh) 杀昆虫蛋白及其使用方法
CN111867377A (zh) 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
ES2966742T3 (es) Proteínas insecticidas y métodos para su uso
CN112867796A (zh) 杀昆虫蛋白及其使用方法
CN111629587A (zh) 具有改善的活性谱的杀昆虫多肽的组合及其用途
RU2666914C2 (ru) Новые инсектицидные белки и способы их применения
JP2019501628A (ja) Ａｘｍｉ５５４デルタ−エンドトキシン遺伝子およびその使用方法
US12054729B2 (en) Use of CRY14 for the control of nematode pests
US20170233758A1 (en) Herbicide tolerant triple gene insecticidal cotton and other plants
CN115867564A (zh) 杀昆虫蛋白及其使用方法
US11286498B2 (en) Use of BP005 for the control of plant pathogens
WO2015077525A1 (en) Use of axmi-011 for the control of hemipteran insects