UA125937C2 - Спосіб видалення домішок з препаратів на основі бактеріальних капсульних полісахаридів - Google Patents
Спосіб видалення домішок з препаратів на основі бактеріальних капсульних полісахаридів Download PDFInfo
- Publication number
- UA125937C2 UA125937C2 UAA201911657A UAA201911657A UA125937C2 UA 125937 C2 UA125937 C2 UA 125937C2 UA A201911657 A UAA201911657 A UA A201911657A UA A201911657 A UAA201911657 A UA A201911657A UA 125937 C2 UA125937 C2 UA 125937C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- polysaccharide
- potassium
- solution
- differs
- impurities
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 164
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 164
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 159
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 106
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 55
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 42
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 39
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 110
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 29
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 16
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 14
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical group [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 229960000800 cetrimonium bromide Drugs 0.000 claims description 12
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N cetyltrimethylammonium ion Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Substances [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 claims description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 claims description 3
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 claims description 3
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229940086066 potassium hydrogencarbonate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 3
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical class CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GLFDLEXFOHUASB-UHFFFAOYSA-N trimethyl(tetradecyl)azanium Chemical class CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C GLFDLEXFOHUASB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SWXVUIWOUIDPGS-UHFFFAOYSA-N diacetone alcohol Natural products CC(=O)CC(C)(C)O SWXVUIWOUIDPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- SDRZXZKXVBHREH-UHFFFAOYSA-M potassium;dihydrogen phosphate;phosphoric acid Chemical compound [K+].OP(O)(O)=O.OP(O)([O-])=O SDRZXZKXVBHREH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 claims 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims 2
- SETMGIIITGNLAS-UHFFFAOYSA-N spizofurone Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)C)=CC=C2OC21CC2 SETMGIIITGNLAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229950001870 spizofurone Drugs 0.000 claims 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims 1
- 102100028735 Dachshund homolog 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101000915055 Homo sapiens Dachshund homolog 1 Proteins 0.000 claims 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 claims 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 claims 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims 1
- ZYXYTGQFPZEUFX-UHFFFAOYSA-N benzpyrimoxan Chemical compound O1C(OCCC1)C=1C(=NC=NC=1)OCC1=CC=C(C=C1)C(F)(F)F ZYXYTGQFPZEUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SSJXIUAHEKJCMH-UHFFFAOYSA-N cyclohexane-1,2-diamine Chemical compound NC1CCCCC1N SSJXIUAHEKJCMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 21
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 67
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 17
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 12
- -1 sodium fatty alcohol sulfates Chemical class 0.000 description 11
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 10
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 10
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical class CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 3
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 3
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960003431 cetrimonium Drugs 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 description 2
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 2
- ONQDVAFWWYYXHM-UHFFFAOYSA-M potassium lauryl sulfate Chemical compound [K+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O ONQDVAFWWYYXHM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 229940070741 purified protein derivative of tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000271 synthetic detergent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- KZKAYEGOIJEWQB-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromopropane;n,n,n',n'-tetramethylhexane-1,6-diamine Chemical compound BrCCCBr.CN(C)CCCCCCN(C)C KZKAYEGOIJEWQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- XQQSWXUDAPLMKD-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylheptadecan-1-amine hydrobromide Chemical compound Br.CCCCCCCCCCCCCCCCCN(C)C XQQSWXUDAPLMKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 229950007870 hexadimethrine bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011016 integrity testing Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000005949 ozonolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010040473 pneumococcal surface protein A Proteins 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920005552 sodium lignosulfonate Polymers 0.000 description 1
- MWZFQMUXPSUDJQ-KVVVOXFISA-M sodium;[(z)-octadec-9-enyl] sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOS([O-])(=O)=O MWZFQMUXPSUDJQ-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000010891 toxic waste Substances 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004711 α-olefin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
Abstract
Винахід стосується удосконаленого процесу очищення бактеріальних капсульних полісахаридів, зокрема капсульних полісахаридів з грамнегативних бактерій. Спосіб включає концентрацію та діафільтрацію зібраної речовини, обробку за допомогою аніонного мийного засобу та міцного лугу, з наступним центрифугуванням, діафільтрацією та осадження бактеріальних полісахаридів на основі катіонного мийного засобу. Спосіб забезпечує значне зменшення вмісту домішок ендотоксину, білка і нуклеїнової кислоти, що дозволяє підвищити ступінь відновлення капсульного полісахариду та зберегти потрібні рівні O-ацетилу. Цей спосіб є раціональним, безензимним та включає меншу кількість етапів очищення.
Description
Галузь техніки
Винахід загалом належить до галузі біотехнологій, і зокрема до отримання та подальшої переробки продукту з метою очищення бактеріальних капсульних полісахаридів.
Рівень техніки
Меївззегіа тепіпойідіє (менінгококу є основною причиною інфікування оболонок (м'яких мозкових оболонок) та спинномозкової рідини (СЕ), що оточує головний мозок та спинний мозок, призводячи до смерті та інвалідності людей у різних країнах світу.
Меїззегіа тепіпойіаї5, також відома як менінгокок, є грамнегативною бактерією. Відповідно до структури капсули полісахариду, було визначено 13 серогруп М. Мепіподйаів, з яких 6 серогруп (А, В, С, МУ, Х та ХУ) здатні викликати епідемії (див.: І ее Наттізоп еї аї. 2011).
Менінгіт зустрічається на обмежених територіях у всьому світі, з сезонними спалахами епідемічного бактеріального менінгіту у різних пропорціях. Найбільш поширений менінгококовий менінгіт на африканському континенті, особливо в країнах Африки на південь від Сахари, у так званому поясі менінгіту. За оцінкою Центрів з контролю та профілактики захворювань (СОС) та
Всесвітньої організації охорони здоров'я менінгококовий менінгіт у 2000 році спричинив 171000 смертей у світі. Крім того, звітом СОС підтверджується, що Меї5зегіа тепіпоуйідіє є основною причиною менінгіту та септицемії у дітей та молоді на території США. Таким чином, Меї5зегіа
Мепіпойіай продовжує бути проблемою в сфері охорони здоров'я як в розвинених країнах, так і в країнах, що розвиваються.
У 1996-97 рр., епідемія, спричинена Меї5зегіа Мепіпойі5, серогрупа А, призвела до більш ніж 250000 випадків захворювання та більш ніж 25000 смертей; це змусило світову медичну спільноту зайнятись розробкою вакцини для боротьби з менінгітом групи А в Африці.
У 2010 р. менінгококова полісахаридна кон'югатна вакцина А, тобто Мепаїїімас, була успішно розповсюджена на Африканському континенті, призвівши майже до повного придушення епідемії, спричиненої Меїззегіа Мепіпойіді5, серогрупа А. Зі зменшенням впливу Меїіззегіа
Мепіпойаї5, серогрупа А, посилюється вплив іншої менінгококової серогрупи, такої як Чоловік-С,
Чоловік-М/, Чоловік-Х та Чоловік-Х. Для усунення цього небажаного впливу були розроблені та введені в обіг різноманітні одновалентні та багатовалентні вакцини, що становлять наведену вище серогрупу. Попри те, що багатовалентні кон'югатні вакцини А, С, М та М/ були ліцензовані з 2005 року (Мепасіга?Ф, МепмеоФ)) для використання дітьми та дорослими в Канаді, США та
Європі; вони доступні на ринку за дуже високою ціною, що робить їх недоступними для решти країн світу.
Капсула серогрупи А складається з повторюваних сегментів О-ацетильованого (а1-6)- пов'язаного М-ацетил-маннозамін-1-фосфату. Капсульні полісахариди серогруп В, С, УМ та У складаються з похідних сіалової кислоти; належних до серогруп В та С прямих (а2--8)- та (а2--9)-пов'язаних гомополімерів сіалової кислоти, а змінні послідовності а-галактози або декстрози і сіалової кислоти представлені серогрупами УМ та М. Домішки в ферментативному бульйоні по-різному взаємодіють з повторюваними частками, присутніми в капсульних полісахаридах. Таким чином, існує потреба у процесі, в якому використовуються ці різні взаємодії з метою ізоляції різних бактеріальних капсульних полісахаридів з різних серогруп.
Відповідно до Серій технічних звітів ВООЗ, присвячених менінгококовій кон'югатній вакцині, ізольовані полісахариди повинні відповідати наступним технічним характеристикам:
Таблиця 1
Параметр контролю здоров'я
РЗ РЗ РЗ розмірів
Класичні процеси очищення бактеріальних капсульних полісахаридів, що використовуються в вакцинах, включають декілька селективних осаджень з етаноловим та/або катіонним мийним засобом з наступним безперервним центрифугуванням, ультра- центрифугуванням, та видалення білків за допомогою фенолу.
Перша робота, присвячена ізоляції полісахариду Меїззегіа Мепіпойіаїв в Серогрупі А, В та С, була опублікована Сої5спіїсп еї аі. (1969). В Соївбспіїсп еї а. описано катіонний мийний засіб
Сеїамоп (гексадецил триметиламміний бромід) для швидкого осадження негативно заряджених полісахаридів з цільної культури з наступною дисоціацією комплексу мийний засіб-полісахарид, використовуючи екстрагування та центрифугування 0,9 М Сасі»;; технологія осадження етанолу використовувалась для видалення нуклеїнової кислоти, білюи видалялись шляхом обробки полісахаридів ацетатом натрію; з наступною гомогенізацією за допомогою бутанолу із вмістом хлороформу, також описується альтернативний спосіб використання гарячої феноло-водної суміші. Метод остаточного очищення передбачав осадженням полісахаридів етанолом (4-5 разів) та ацетоном. Цей метод пов'язаний з такими незручностями як використання хлороформу та великою кількістю етанолу. (Див.: Т.Р. Раю, Мабхіег5 ІПебві5, Іп5ійшо де Опцітіса, Опімегзідаде
Еедегаї до Кіо де дапеїго, Ріо-де-Жанейро, 2003, стор. 95).
У ТапігакКі еї а. описано процес очищення полісахариду Меїззегпа тепіпуйіаі5 С, в якому вилучення фенолу було замінено на гідроліз протеїнази з використанням суміші протеїнази К, нагарсе та трипсину; тангенціальна ультрафільтрація у порожньому волокні з відокремленням на рівні 100 кДа замість ультрафільтраціїї з наступною ретельною діафільтрацією з використанням 100 кДа відокремлювальної мембрани, що виконується у 20 ммоль Ттгі5-НОЇ буферному розчині 0,5 95 дезоксихолату, з метою видалення білків з низькою молекулярною масою та ліпополісахаридів (І РБ). У Тапі?акі еї ам. описано процес очищення полісахариду
Меївззегіа тепіпойідіє С, в якому вилучення фенолу було замінено на гідроліз протеїнази з використанням суміші протеїнази К, нагарсе та трипсину; тангенціальна ультрафільтрація у порожньому волокні з відокремленням на рівні 100 кДа замість ультрафільтрації; з наступною ретельною діафільтрацією з використанням 100 кДа відокремлювальної мембрани, що виконується у 20 ммоль Ттгі5-НСІ буферному розчині 0,5 95 дезоксихолату, з метою видалення білків з низькою молекулярною масою та ліпополісахаридів (І РБ). |Див.: Тапілакі еї аї.; Уоигпаї ої
МісгобіоІодіса! Меїпод5, том 27, випуск 1, вересень 1996 р., стор. 19-23, та сопсаїмез еї аї. 2007;
Еоптаїех; Соттипісайпуд Сиптепі Вевзєагсп апа Едисайопа! Торісз апа Тгепідз іп Арріїєйд
Коо) Містобіоіоду)|.
У ТР Райо еї аІ. (2006) описано змінений процес очищення полісахариду Меї5зегіа тепіпоуйідіє С, що включає безперервне потокове центрифугування культури з метою видалення клітин; концентрацію надосадової рідини шляхом тангенціальної потокової фільтрації (відокремлення на рівні 100 кДа); додавання 0,5 95 БОС, нагрівання до 55 "С мінімум протягом 30 хв. та тангенціальну фільтрацію (відокремлення на рівні 100 кДа); аніонообмінну хроматографію (Джерело 150)) та ексклюзивну хроматографію (Сефароза СІ -4В). |Див.: Т.Р.
Райо в! а). / У. Спготаїйодг. В 832 (2006) 262-267.
У 05 7491517 В2 описано використання броміду цетримонію, етанолу, протеїнази К, активованого вугілля та гуль-фільтрації для видалення домішок під час очищення полісахариду
Меїззегіа тепіпойідіє С. Проте, цей багатоетапний процес зумовлює втрати під час відновлення полісахариду, а використовуване активоване вугілля може призвести до небажаного вимивання продуктів.
У УМО 2017006349 описано використання ацетату цинку/сульфату амонію/цитрату натрію для видалення домішок білку із зібраної витяжки М. тепіпуйіаіє. Крім того, тут описано використання таких ензимів, як бензоназа, протеїназа К або нагарсе для розщеплення залишкових білків та/або матеріалів нуклеїнової кислоти з наступним хроматографічним очищенням.
У УМО 2015128798А1 описано процес видалення домішок з полісахариду Меї5зегіа тепіпойідіє С. Зазначений процес передбачає інкубацію за температури у 50-607С у середовищі з вмістом аніонних мийних засобів, таких як дезоксихолат натрію або НЕРЕ5, діацетилювання сирих полісахаридів з використанням 0,5 - 1,5 М Маон за температури у 507 протягом періоду часу від ЗО хвилин до 10 годин, та з наступним очищенням за допомогою діафільтрації та гідрофобної хроматографії (НІС).
У Тіап еї аІ. описано процес очищення полісахаридів Меїі5зегіа тепіпудйаї5 серогруп С, УМ та
М, що включає використання броміду цетримонію, етанолу, БОС, Саріо АаНеге (багатомодальної аніонообмінної хроматографії), Саріо ОЕАЕ (слабкого аніону) та Зерпадех 025, де вміст ендотоксину становить менше 25 ЕШ/мг, а вміст білку - менше 10 мг/г, вміст нуклеїнової кислоти - 1-7 мг/г Див.: Тіап єї а). 2013 СЕ Неаїйнсаге; Арріїсайоп поїв, 29216880
АД). бо У процедурі, описаній Сої5спіїсп, багатоетапний процес зумовлює втрати продукту під час відновлення на рівні близько 37 95. Крім того, використання фенолу хімічного типу може призвести до небажаних структурних змін у носії полісахариду або білку, та зумовлює утворення небажаних фенольних токсичних відходів.
У процедурі, описаній у 05 7491517 82, МО 2017006349 та ТР Ра еї аї. (2006), застосовуються ензими, які допомагають розщеплювати домішки білку та нуклеїнової кислоти; проте, видалення ензимів та гідролізованого матеріалу є складним процесом, і може відбутись втрата потрібного продукту. Крім того, регуляторні органи обмежили використання тваринних ензимів в продуктах, призначених для людей, через ризик зараження пріонами. Використання ензимів, окрім високої вартості, буде пов'язаним з проблемами регуляторного характеру в рамках СОМР, наприклад, походженням ензимів (тваринним або рекомбінантним), мінливістю активності ензимів від різних постачальників з різних партій тощо.
У МО 2017006349 та 05 4686102 А описано використання сульфату амонію для осадження домішок білку та нуклеїнової кислоти. Натомість, час від часу також відбувається осадження капсульних полісахаридів, що призводить до втрати всього вмісту полісахариду.
Дезоксихолат натрію (БОС) є м'яким мийним засобом та одним з найбільш поширених мийних засобів, що використовується для очищення полісахариду. Дезоксихолат натрію зі стероїдною структурою ядра зумовлює меншу денатурацію та обмежену розчинну здатність, він розриває ендотоксини, не вражаючи хімічну структуру. Таким чином, після видалення дезоксихолату натрію, ендотоксини відновлюють свою біологічну активність. Крім того, процедури на основі БОС не є ефективними у видаленні домішок з полісахаридів, особливо з полісахаридів із вмістом сіалові кислоти. Це пояснюється слабкою мийною здатністю СОС в асоціації ліпосахарид-білок, що утворюється під час процесу виділення та очищення продукту, що зумовлює утворення високих рівнів ендотоксинів та вмісту білку у кінцевому ізольованому полісахариді. Крім того, оскільки дезоксихолат натрію є продуктом тваринного походження, навіть його залишковий вміст у кінцевому продукту може призвести до відмови регуляторних органів та певних релігійних громад прийняти цей продукт.
Технології хроматографії, такі як ексклюзивна хроматографія, іон-обмінна хроматографія та гідрофобна хроматографія успішно використовувались для ізоляції бактеріальних полісахаридів, з ефективним видаленням домішок білку та нуклеїнової кислоти. Попри успішну
Зо ізоляцію бактеріального полісахариду відповідно до технічних умов ВООЗ, використання технологій хроматографії передбачає трудомістку та тривалу підготовку зразка, має обмежені можливості для збільшення обсягів виробництва, пов'язані зі значно зниженням відновленням капсульних полісахаридів, і тому не є прийнятною дешевою альтернативою промисловому виділенню та очищенню продукту.
На виділення та очищення біологічних препаратів припадає 2095 - 8095 сукупної собівартості продукту (Апзе)о апа Раїгіск, 1990), розвиток стратегій виділення та очищення продукту має вирішальний вплив на зниження собівартості та можливість забезпечення вакциною всього населення через державну систему охорони здоров'я.
На сьогодні метод, що використовується для отримання полісахаридів в їхніх очищених формах, включає декілька етапів обробки мийними засобами та диференційне осадження зібраного розчину за допомогою органічного розчинника, такого як етанол.
Проте, наявність наступних двох обмежувальних факторів змушує шукати альтернативний метод очищення.
Наразі, на першому етапі видалення домішок (білки, нуклеїнові кислоти та ендотоксини) використовується аніонний мийний засіб, таких як дезоксихолат натрію (0О0С). БОС - мийний засіб на основі жовчі тваринного походження зі стероїдною структурою ядра. Через свою масивну структуру він має обмежену розчинну здатність та зумовлює меншу денатурацію біологічних молекул. Крім того, можливість його стабільного постачання з потрібною сертифікацією регуляторними органами обмежується одним постачальником/виробником.
Використання значної кількості етанолу та зайві етапи обробки (фільтрація вугіллям) робить процес занадто трудомістким, тривалим та дорогим.
Існує нагальна потреба в альтернативних, простих, практичних та раціональних методах очищення бактеріальних полісахаридів для забезпечення вищого ступеню відновлення полісахаридів. Даний винахід забезпечує надійний та доступний процес виділення та очищення продукту для ізоляції бактеріальних капсульних полісахаридів; зокрема, цей процес забезпечує значне зменшення вмісту домішок ендотоксину, білку і нуклеїнової кислоти, що дозволяє підвищити ступінь відновлення полісахариду та зберегти потрібні рівні О-ацетилу відповідно до технічних умов ВООЗ.
Опис винаходу бо Цей винахід стосується альтернативного процесу очищення бактеріальних капсульних полісахаридів, зокрема капсульних полісахаридів М. тепіпойаів.
Процес включає концентрацію та діафільтрацію зібраної речовини за допомогою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації з наступним додаванням аніонного мийного засобу та міцного лугу для денатурування білків, нуклеїнових кислот та ліпосахаридів. Згодом, біологічний екстракт проходить центрифугування, діафільтрацію та осадження бактеріальних полісахаридів на основі броміду цетримонію. Цей процес забезпечує покращене відновлення полісахаридів, він є практичним, безензимним та раціональним, включаючи меншу кількість етапів очищення.
Зазначений процес забезпечує значне зменшення вмісту домішок ендотоксину, білку і нуклеїнової кислоти, що дозволяє підвищити ступінь відновлення полісахариду та зберегти потрібні рівні О-ацетилу.
Фігури: і. Фіг. 1: Спектри ЯМР для полісахаридів у Чоловіків-О. іі. Фіг. 2: Спектри ЯМР для полісахаридів у Чоловіків- У. ії. Фіг. 3: Спектри ЯМР для полісахаридів у Чоловіків-МУ. їм. Фіг. 4: Спектри ЯМР для полісахаридів у Чоловіків-А. м. Фіг. 5: Спектри ЯМР для полісахаридів у Чоловіків-хХ.
Детальний опис винаходу
Відповідно до другого аспекту винаходу одна з цільових бактеріальних серогруп вирощувалась у прийнятному середовищі та інактивувалась з використанням формальдегіду або будь-якого загальновідомого методу попереднього рівня техніки; з наступним виділення та очищенням продукту з метою ізоляції очищеного капсульного полісахариду. Цільова бактерія для ізоляції капсульного полісахариду в рамках цього винаходу була отримана з грамнегативної бактерії, відібраної з відповідного роду, включаючи, без обмежень, Е5сПегіспіа, Меїів5з5егіа,
Наеторпійн5, Рб5епдотопах, тощо; переважно з капсульного полісахариду, вираженого серогрупою Меїіззегіа тепіпуйіаі5. В іншому аспекті винаходу полісахарид можна отримати з групи, яка включає Неїїсобасіег руїогі, СпІатуаіа рпештопіає, Спіатуаїйа Ігаспотаїйй5, Огеаріаєта игеаїуїйсит, Мусоріазта рпештопіає, біарпуіососсив зрр., тарпуіососсив5 ашгеийв, Зігеріососсив5 5рр., Зігеріососси5 Групи А, Зігеріососсиз Іа, ІБ, ПІ, ПІ, М, МІ, або МІ! Групи В; Зігеріососси5 Групи
С, знеріососсиз руодепе5, Зігеріососси5 адаїасіає, Зігеріососси5 ауздаїасцає, Зігеріососси5
Зо рпеитопіає, Зігеріососси5 міпдап5, Епіегососси5 Таесаїї5, Меїбззепа тепіпдйаїв5, Меїівззега допоїтпоєає, Васійй5 апінгасі5, ЗаІтопеїа 5рр., Заітопеїа їурнпі, Мірпйо споіегає, Разієцгеїа резіїз, Реейдотопаз аєгидіпоза, Сатруіобасієї 5рр., Сатруіобрасієг |єЇшпі, Сіовійаішт 5рр.,
Сіозіаіт аїйісіе, Мусобасіетлит 5рр., Мусобасіегішт гШбегсціовів, Тееропета зрр., Воїтеїїа в5рр.,
Воїтеїйа ригоддопетгі, ІГеріозріга врр., Неторпйи5 дисгеуїі, Согупебасієгішт аїрпіНегіа, Вогае!еїа репив5ів5, Вогаєїе!Пйа рагарепиввів, ВогаеєїеПНа Бгопспізеріїса, Неторпіїи5 іпПнепгає, ЕвсПегіснпіа соїї, зпідеїПа 5рр., Еппіспіа 5рр., та КісКейбіа 5рр. Полісахариди 5ігеріососси5 рпештопіає типу 1,2, 3, 4, 5, бА, 68, 7Е, 8, 9А, 9Е, 9М, 9МУ, 10А, 11А, 12, 14, 15А, 158, 15С, 17Е, 180, 19Е, 19А, 20, 22, 238, 2ЗЕ, 24, ЗЗЕ, 358, 38 і 45; Полісахариди Меїі5зегіа тепіпойідіє серогрупи А, В, С,
О, М/135, Х, У, 2, 29Е; і Н. іпшшепає типу б.
Під час експериментів використовувався наступний біологічний матеріал:
Полісахариди ізолювались від:
Таблиця 2
Вільний білок-носій, тобто СЕМ197 або ТТ. СКМ197, був отриманий з рекомбінантного штаму С5463-003 (МВ101) Рзейидотопах ПЙпогезсеп5 з Ріепех ОБА. ТТ був отриманий з
Сіозігідішт Теїапі (Нагмага Мо 49205) від СКІ, Державного контрольного органу, Касаулі,
Хімачал-Прадеш, Індія. СКІ отримав цей штам від ММІ, Нідерланди.
Відповідно до першого варіанту втілення винаходу, бактеріальний капсульний полісахарид очищався від інактивованої зібраної речовини центрифугуванням; а до надосадової рідини застосовували діафільтрацію за допомогою пристрою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації. Цілком зрозуміло, що фахівцями у цій галузі може використовуватись будь-який інший прийнятний метод замість центрифугування та діафільтрації для концентрації бактеріального капсульного полісахариду. В одному з переважних аспектів цього варіанту втілення капсульний полісахарид отримувався з Меїззегіа Мепіпоййаі5, Серогрупа А, С, М, М та
Х.
Відповідно до другого варіанту втілення винаходу, ультраконцентрат отриманий в рамках першого варіанту втілення, оброблявся за допомогою аніонної поверхнево-активної речовини/мийного засобу. Аніонний мийний засіб вибирається з групи, до складу якої входять: алкілсульфати, додецилсульфат натрію, дезоксихолат натрію, додецилсульфонат натрію, сульфати натрієвого с-алкілсульфату, поліоксіетиленові ефір сульфати натрій жирного спирту, олеїлсульфат натрію, М-олеоїл полі (амінокислота) натрію, сульфонати алкілбензолу натрію, сульфонати альфа-олефін натрію, алкілсульфонати натрію, ефіри альфа-сульфо монокарбонової кислоти, сульфоалкількні ефіри жирної кислоти, сульфонат сукцинату, сульфонати алкіл нафталіну, сульфонати алкану натрію, лігносульфонат натрію Фі алкілглицериловий ефір сульфонату натрію.
В оптимальному варіанті зазначена аніонна поверхнево-активна речовина є алкілсульфатом, бажаніше додецилсульфат натрію у кінцевій концентрації в діапазоні від 0,1 95 до 495, переважно 1 95, зазначена речовина додавалась до ультраконцентрату; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Амфіпатичні властивості 505 роблять його сильною хаотропною речовиною, що не лише руйнує білки, а й розчиняє їх.
В іншому аспекті другого варіанту втілення інактивовану зібрану речовину можна безпосередньо обробляти аніонною поверхнево-активною речовиною 3 наступною концентрацію капсульного полісахариду, призводячи до достатнього зменшення вмісту домішок, таким чином роблячи необов'язковим наступний етап з використання катіонного мийного засобу.
Відповідно до третього варіанту втілення винаходу, міцний луг додавався до суміші, отриманої в описаному вище варіанті втілення, і його було кориговано до рН 9-11; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години; зазначені міцні луги відбирали з групи, що включає: гідроксид натрію, гідроксид калію, карбонат натрію, гідроксиламін, тріетиламін та гідроксид літію.
Зо Відповідно до переважного аспекту третього варіанту втілення винаходу, міцний луг, тобто гідроксид натрію, додавався у кінцевій концентрації на рівні 5-20 гМ до суміші, отриманої в описаному вище варіанті втілення, і його було кориговано до рН 10,5; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години.
В іншому аспекті третього варіанту втілення винаходу, замість лугу ЕДТК ацетат натрію додавався до суміші, отриманої у другому варіанті втілення; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години;
Відповідно до четвертого варіанту втілення винаходу, розчин, отриманий в описаному вище варіанті втілення, був нейтралізований (рН 7,0) шляхом додавання неміцної органічної кислоти.
Зазначена неміцна органічна кислота є сумішшю однієї чи кількох кислот, включаючи мурашину кислоту, оцтову кислоту, пропіонову кислоту, щавлеву кислоту. До цієї нейтралізованої суміші було додано гідрофільний спирт, переважно етанол, до досягнення кінцевої концентрації у 30- 3595; розчин інкубувався протягом кількох годин за кімнатної температури з постійним перемішуванням. Гідрофільний спирт вибирається з-поміж метанолу, етанолу, н-пропілового спирту, ізопропілового спирту, ацетону та т-бутилового спирту; або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин; концентрація становить «65 95 або »95 95.
Відповідно до п'ятого варіанту втілення винаходу, надлишок аніонного мийного засобу видаляється із розчину. Розчин, отриманий в описаному вище варіанті втілення, центрифугувався і збиралась надосадова рідина. 0,1 Гм калієвої солі додавалось до надосадової рідини; і після розчинення суміш інкубувалася протягом »3 годин за температури 2- 8 "С. Калієва сіль вибирається з таких речовин, як хлорид калію, калій ацетат, сульфат калію, карбонат калію, гідрокарбонат калію, фосфат калію, фосфат гідрогенфосфату калію, дигідрофосфат калію, селітра калію, та інших калієвих солей, або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин. На цьому етапі використовується слабка розчинність додецилсульфату калію. Після додавання калієвої солі, переважно КСІ, 5О5 у розчині перетворюється на додецилсульфат калію, який маж меншу розчинну здатність і легко осаджується, обумовлюючи повне видалення 505.
Цілком зрозуміло, що фахівці у цій галузі можуть змінювати концентрацію КСІ для отримання бажаного результату. Протокол, зазначений у цьому варіанті втілення винаходу, може бути за потреби змінений фахівцями у цій галузі. бо В іншому аспекті п'ятого варіанту втілення винаходу, надлишок аніонного мийного засобу може видалятись із розчину за допомогою гель-фільтрації, осадження етанолу та іон-обмінних смол/амберлітових колонок.
Відповідно до шостого варіанту втілення винаходу, розчин, отриманий в описаному вище варіанті втілення, центрифугувався і збиралась надосадова рідина. Надосадова рідина пропускалась через 0,2 мкм фільтр, і ультраконцентрат діафільтрували за допомогою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації.
Відповідно до сьомого варіанту втілення винаходу, ультраконцентрат, отриманий в рамках зазначеного варіанту втілення, діафільтрували з використанням 25 ммоль Ттгіб5-НСІ буферної рідини до досягнення кінцевої концентрації у 0,25 Гм. Після цього додавався катіонний мийний засіб до досягнення кінцевої концентрації у 1-2 95; розчин інкубували протягом 1 години за кімнатної температури, постійно перемішуючи. Катіонний мийний засіб обирається з таких речовин, як цетил-триметиламонієва сіль, тетрабутиламонієва сіль, міристил-триметиламонієва сіль та гексадиметрин бромід; або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин. Цілком зрозуміло, що фахівці у цій галузі можуть змінювати концентрацію з 0,195 до 4 95, для отримання бажаного результату. В оптимальному варіанті, катіонний мийний засіб це - бромід цетримонію.
Відповідно до восьмого варіанту втілення винаходу, розчин, отриманий в описаному вище варіанті втілення, може центрифугуватися, і осаджений бромід цетримонію-полісахарид збирався і розчинявся у 30-64 95 етанолі. Розчинену суміш можна додатково центрифугувати для видалення нерозчинених залишків.
Відповідно до дев'ятого варіанту втілення винаходу, до надосадової рідини, отриманої в описаному вище варіанті втілення, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,1
Гм, з постійним перемішуванням. Осаджений полісахирид збирався та розчинявся у 1 Гм Масі з наступним осадженням спиртом (30-64 9б).
Відповідно до десятого варіанту втілення винаходу, розчин, отриманий в описаному вище варіанті втілення, ретельно діафільтрувався УМЕЇ (водою для ін'єкцій) з використанням 100 кДа тангенціального потокового фільтру і пропускався через 0,2 мкм фільтр. Після цього його зберігали за температури не вище -20 "С у якості кінцевого продукту.
Відповідно до одинадцятого варіанту втілення винаходу, очищений капсульний полісахарид
Зо М. Мепіпойіаїв, Серогрупа С, М/ та ХУ отримували з дотриманням описаної нижче процедури:
М. тепіпойідіє серогрупи С, М/ та М з М, відповідно, вирощувалась у прийнятному середовищі та інактивувалась з використанням формальдегіду;
Додецилсульфат натрію було додано до цієї неактивованої зібраної речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 95; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
Гідроксид натрію було додано до кінцевої концентрації у 05-20 ммоль і скориговано до рн 10,5; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години;
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, був нейтралізований шляхом додавання неміцної органічної кислоти, тобто оцтової кислоти.
До цього нейтралізованого розчину було додано етанол до досягнення кінцевої концентрації у 30-35 95; розчин інкубувався протягом кількох годин з постійним перемішуванням.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали надосадову рідину. 01 Гм хлориду натрію додавалось до надосадової рідини; розчин інкубувався протягом не менш ніж З годин за температури 2-8 76.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугувався і збиралася надосадова рідина. Надосадова рідина пропускалась через 0, мкм фільтр, і ультраконцентрат діафільтрували з використанням 25 ммоль Ттгіз-НСІ буферної рідини за допомогою 100 кДа
МУУСО (номінальне відокремлення за молекулярною масою) тангенціальної потокової фільтрації.
Тіів-НСІ буферна рідина додавалася до ультрафільтрату, отриманого на описаному вище етапі, до досягнення кінцевої концентрації у 0,2 Гм; з наступним додаванням броміду цетримонію до досягнення кінцевої концентрації у 2 95; розчин інкубувався протягом мінімум 1 години за кімнатної температури.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали осад, розчинений у 30-64 96 етанолі. Розчинену суміш додатково центрифугували для видалення нерозчинених залишків.
До надосадової рідини, отриманої на описаному вище етапі, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,1-0,3 Гм. Осаджений Р5 розчиняється у 1 Гм Масі з наступним осадженням з використанням 30-64 Фо спирту.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, ретельно діафільтрувався УМР!Ї з бо використанням 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації і пропускався через 0,2 мкм фільтр. (с;
Після цього його зберігали за температури -20 "С у якості кінцевого продукту.
Відповідно до дванадцятого варіанту втілення винаходу, процес очищення, описаний у одинадцятому варіанті втілення, передбачає:
Полісахарид М. тепіпойіді5, Серогрупа С, з відновленням на рівні 60-80 95, де вміст ендотоксину становить менше 50 ЕШ/мг, вміст білку - менше 0,50 95, ф вміст нуклеїнової кислоти - менше 0,20 95.
Полісахарид М. тепіпуйіді5, Серогрупа М, з відновленням на рівні 60-80 95, де вміст ендотоксину становить менше 50 ЕШ/мг, вміст білку - менше 0,50 95, ф вміст нуклеїнової кислоти - менше 0,30 95.
Полісахарид М. тепіпойіаі5, Серогрупа МУ, з відновленням на рівні 60-80 95, де вміст ендотоксину становить менше 50 ЕШ/мг, вміст білку - менше 0,5 95, ф вміст нуклеїнової кислоти - менше 0,2 95.
Відповідно до тринадцятого варіанту втілення винаходу, очищений капсульний полісахарид
М. Мепіпойай5, Серогрупа А та Х отримували з дотриманням описаної нижче процедури:
М. тепіподйіаї5 серогрупи А та Х, відповідно, вирощувалась у прийнятному середовищі та інактивувалась з використанням формальдегіду;
Додецилсульфат натрію було додано до цієї зібраної неактивованої речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 95; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
ЕДТК та ацетат натрію було додано до цієї зібраної неактивованої речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 90; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
Було додано етанол для досягнення кінцевої концентрації у 30-35 95; розчин інкубувався протягом кількох годин з постійним перемішуванням.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали надосадову рідину. 01 Гм хлориду натрію додавалось до надосадової рідини; розчин інкубувався протягом 23 годин за температури 2-8 76.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугувався і збиралась надосадова рідина. Надосадова рідина пропускалась через 0,2 мкм фільтр, і ультраконцентрат концентрували та діафільтрували з використанням 25 ммоль Ттгі5-НСЇІ рідини за допомогою 100 кДа МУУСО (Номінальне відокремлення за молекулярною масою) тангенціальної потокової
Зо фільтрації.
Бромід цетримонію додавався до досягнення кінцевої концентрації у 1-2 905; розчин інкубувався протягом не менші ніж 1 години за кімнатної температури.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали осад, розчинений у 30-64 96 етанолі. Розчинену суміш додатково центрифугували для видалення нерозчинених залишків.
До надосадової рідини, отриманої на описаному вище етапі, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,1-0,3 Гм. Осаджений Рб5 розчиняється у 1їГм Масі з наступним осадженням з використанням 30-64 Фо спирту.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, ретельно діафільтрувався УМР!Ї з використанням 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації і пропускався через 0,2 мкм фільтр.
Після цього його зберігали за температури не вище -20 "С у якості кінцевого продукту.
Відповідно до чотирнадцятого варіанту втілення винаходу, процес очищення, описаний у тринадцятому варіанті втілення, передбачає:
Полісахарид М. тепіпоуйіді5, Серогрупа А, з відновленням на рівні 60-80 95, де вміст ендотоксинів становить менше 50 ЕШ/мг, вміст білку - менше 0,50 95, ф вміст нуклеїнової кислоти - менше 0,20 95.
Полісахарид М. тепіпуйіді5, Серогрупа Х, з відновленням на рівні 60-80 95, де вміст ендотоксинів становить менше 50 ЕМ/мг, вміст білку - менше 0,50 95, а вміст нуклеїнової кислоти - менше 0,30 95.
Відповідно до п'ятнадцятого варіанту втілення винаходу, зазначений очищений полісахарид було кон'юговано з білком-носієм. Цілком зрозуміло, що білком-носієм, який використовується для кон'югації з полісахаридами, може бути будь-який білок-носій, відомий з рівня техніки, відповідно до вимог фахівця у цій галузі. Неконкретні приклади білків-носіїв включають білок- носій, що належить до наступної групи, але не обмежуючись цим: СКМ 197, дифтерійний анатоксин, анатоксин правця, коклюшний анатоксин, кишкова паличка ІТ, кишкова паличка 51, екзотоксин А з Рзхепидотопах аегидіпоза, зовнішня мембрана комплексу с (ОМРС), поріни, перенесення зв'язувальних білків, пневмолізин, пневмококовий поверхневий білок А (Р5рА), пневмокок адгезиновий білок (РзаА), пневмококові поверхневі білюи ВМН-3 та ВМН-11, захисний антиген (РА) Васійи5 апійгасіх, детоксифікований фактор набряку (ЕЕ), летальний фактор (І Є) 60 ВасШив» апійнгасі5, овалбумін, гемоціанін фісурелла (КІ Н) альбумін сироватки людини, альбумін сироватки великої рогатої худоби (В5А) та очищений білковий похідний туберкуліну (РРО).
В іншому аспекті п'ятнадцятого варіанту втілення винаходу, перед кон'югацією полісахарид, очищений миттєвим методом, оброблявся хімічними або механічними засобами, включаючи, без обмежень, ультразвук, мікрохвилі, озоноліз, іонізуюче випромінювання, руйнування клітин високим тиском, гомогенізатор, мікрофлюїдизатор, ацетат натрію, метаперіодат натрію, нагрівання у вакуумі тощо.
У іншому аспекті п'ятнадцятого варіанту втілення винаходу полісахарид, очищений миттєвим методом, може бути кон'юговано з білком-носієм за допомогою відновлювального амінування, ціанілювання, кон'югації карбодіїміду.
Відповідно до шістнадцятого варіанту втілення винаходу, було підготовлено імуногенну композицію. Композиція включає: (а) кон'югат (і) капсульного сахариду Меїіз5зегіа тепіпойіадіб5, серогрупа А, та (ії) анатоксину правця; (р) кон'югат (і) капсульного сахариду Меї55егіа тепіпойіаі5, серогрупа С, та (ії) СКЕМ197; (с) кон'югат (і) капсульного сахариду М. Мепіпойаї5, серогрупа У, та (її) СЕМ 197; (а) кон'югат (ії) капсульного сахариду Меї5зегіа тепіпойіаі5, серогрупа УМ135, та (ії) СЕМ197; і (є) кон'югат (і) капсульного сахариду Меїіз5зегіа тепіпойідіє, серогрупа Х, та (ії) анатоксину правця.
Відповідно до сімнадцятого варіанту втілення винаходу, вміст ендотоксинів можна визначити за допомогою "Тесту на вміст бактеріальних ендотоксинів в рамках кінетичного турбідометричного аналізу (КТА)" або Тесту на пірогенність серед кроликів; вміст білку можна визначити за допомогою методу Лоурі; а вміст нуклеїнової кислоти можна визначити за допомогою спектрофотометрії. Цілком зрозуміло, що для визначення вмісту ендотоксину, білків та нуклеїнової кислоти може використовуватись будь-який прийнятний метод.
В іншому аспекті сімнадцятого варіанту втілення винаходу діапазон молекулярних розмірів очищеного полісахариду Меїі55егіа тепіпойідіє, Серогрупа А, С, МУ, М та Х може було визначено за допомогою ексклюзивної високоефективної рідинної хроматографії.
В іншому аспекті шістнадцятого варіанту втілення винаходу, вміст о-ацетилу можна визначити за допомогою колориметричного аналізу Гестрина.
Приклади:
Приклад 1: Виробництво бактеріальних полісахаридів (Процес отримання первинного продукту М. Мепіпойідіє, Серогрупа С)
За допомогою описаного нижче процесу ферментації були отримані полісахариди.
Шкала ферментації: 300 літрів
Виконувалось миття без розбирання (СІР), випробування на цілісність фільтру методом падіння тиску (ЗІР) ферментера.
Після завершення 5ІР стерильне середовище ферментації було в стерильних умовах переміщено у ферментер.
Середовище формування композиції
Середовище ферментації Серогрупи С
Таблиця З
Харчове середовище Серогрупи С
Таблиця 4
Рівень розчиненого кисню коригувався до потрібних рівнів.
Середовище ферментації інокулювалось культурним організмом. Ферментер експлуатувався в режимі підпитки протягом 11-14 годин.
Після досягнення культурою потрібного ОО при 590 нм, культура була інактивована з використанням формальдегіду.
Після завершення інкубації, температура встановлювалась на рівні 10ж5 "С і здійснювалось відокремлення біомаси за допомогою центрифугування.
Надосадова рідина збиралась та проходила глибоку фільтрацію; освітлена речовина фільтрувалася за допомогою 0,2 мкм фільтру і передавалася на очищення.
Результати:
Таблиця 5
Приклад 2: Виробництво капсульних полісахаридів (Процес отримання первинного продукту
М. Мепіпойіайв5, Серогрупа А, МУ, Х та У)
Відповідно до протоколу, описаного у прикладі 1, вироблявся капсульний полісахарид М.
Мепіпойнаі5, Серогрупа А, МУ, Х та У.
Середовище ферментації Серогрупи У
Таблиця 6
Харчове середовище Серогрупи У
Таблиця 7
Середовище ферментації Серогрупи У
Таблиця 8
Харчове середовище Серогрупи У
Таблиця 9 (Хлоридамонію.у/////777711111111111111Ї111111111081сСсС1С
Результати:
Таблиця 10
За даними аналізу освітлена зібрана речовина Р5 (полісахариду) спостерігалася на рівні 1-6 г/л. Освітлена речовина піддавалася додатковому очищенню.
Приклад 3: Очищення капсульних полісахаридів (Процес виділення та очищення продукту М.
Мепіподйаї5, Серогрупа С) з використанням 505 та наступним осадженням спиртом.
Сирий полісахарид, отриманий відповідно до прикладу 1, змішувався з 505 змінної концентрації. Згодом, етанол додавався до кінцевої концентрації, яка приблизно на 10 95 менше концентрації за якої починається осадження полісахариду. Після цього отриманий розчин фільтрувався.
Концентрація аналізованого 505: 0,1 96,0,5 90,1 90,2 о, З о, 4 90, 5 о, 6 У, 7 о, 8 9, 9 до та 10 95
Усі наведені вище концентрації ХО5 виявились ефективними стосовно зменшення вмісту домішок. При концентрації понад 4 95 505, не спостерігалось суттєвих відмінностей у вмісті домішок.
При концентрації 1 95 505 відбувалось оптимальне усунення домішок, особливу білків.
Очищений полісахарид мав вміст домішок ендотоксинів на рівні 2100 ЕО/мкг полісахариду, У той час як граничне значення, дозволенне ВООЗ, становить «100 ЕМ/мкг полісахариду.
Приклад 4: Очищення капсульних полісахаридів (Процес виділення та очищення продукту М.
Мепіпойнаі5, Серогрупа С)
Протокол:
Було проведено два різних комплекси експериментів, за 5-літровою та 300-літровою шкалою ферментації.
За допомогою описаного нижче процесу очищення були очищені полісахариди.
Сирий полісахарид, отриманий відповідно до прикладу 1, помістили у колбу.
Концентрація сирого полісахариду була збільшена у 3-6 разів за допомогою ТЕЕ з використання касети у 100 кДа.
Зо Додецилсульфат натрію було додано до цієї неактивованої зібраної речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 95; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
Гідроксид натрію було додано до кінцевої концентрації у 0,8 - 20 ммоль і скориговано до рн 10,5; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години;
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, був нейтралізований шляхом додавання оцтової кислоти.
До цього нейтралізованого розчину було додано етанол до досягнення кінцевої концентрації у 33 90; розчин інкубувався протягом кількох годин з постійним перемішуванням.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали надосадову рідину.
Концентрацію етанолу було збільшено до 40 95. 01 Гм хлориду натрію додавалось до надосадової рідини; розчин інкубувався протягом не менш ніж З годин за температури 2 - 8 "С.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугувався і збиралась надосадова рідина. Полісахарид осаджували збільшуючи кінцеву концентрацію етанолу до 65 95.
Гранула полісахариду розчиняли у 1 Гм Масі. Надосадова рідина пропускалась через 0,2 мкм фільтр, і ультраконцентрат діафільтрували з використанням 25 ммоль Тгіз-НСІ буферної рідини за допомогою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації для отримання очищеного полісахариду (Стадія І).
Додавався бромід цетримонію до досягнення кінцевої концентрації у 2 95; розчин інкубувався протягом 1 години за кімнатної температури.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали осад, розчинений у 9695 етанолі. Розчинену суміш додатково центрифугували для видалення нерозчинених залишків.
До надосадової рідини, отриманої на описаному вище етапі, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,2 Гм. Осаджений Р розчиняється у 1 Гм Мас! з наступним осадженням РБ з використанням 65 95 спирту.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, ретельно діафільтрувався на 0,5 Гм масі, з наступним МУ/РІ з використанням 100 кД тангенціальної потокової фільтрації і пропускався через 0,2 мкм фільтр. Після цього його зберігали за температури -20 "С у якості кінцевого продукту.
Результати:
Таблиця 11
Серогрупа С полісахарид Етап | Етап ЇЇ
ОбємР5 | 1 | 50 | 065 | 30 | 06 | 18 (мг/мл) (грамів)
Домішки білку(96) | 93,79 | 109,47 | 06 | 052 | 025 | оз кислоти (96)
Домішки ендотоксин
Ступінчасте
Молекулярний розмір за методом високоефективної нЗ нЗ 434 450 392 376 рідинної хроматографії
Вміст О-ацетилу відновлення (95)
Примітка: Не застосовується
Було проведено два різних комплекси експериментів, за 5-літровою та 300-літровою шкалою ферментації.
Встановлено, що комбіноване використання аніонного мийного засобу та лугу мало значний вплив на зменшення вмісту домішок. Рівень домішок на етапі очищення І та етапі очищення ІІ набагато нижчий за граничні значення, визначені ВООЗ для полісахаридів у Чоловіків-О.
За шкалою у 5 літрів та 300 літрів, Домішки білку (95) - «1 95; Домішки нуклеїнової кислоти (90) - «0,3 95; Домішки ендотоксину (Еб/мкг РБ) - «40 ЕЄП/мкг Р5.
В обох шкалах та на етапі очищення | та етапі очищення ІЇ відновлення очищеного полісахариду становило на 60 95 більше, ніж у сирого зразка.
Приклад 5: Очищення капсульних полісахаридів (Процес виділення та очищення продукту М.
Мепіпойаій5, Серогрупа М та ХУ)
Протокол:
Було проведено два різних комплекси експериментів, за 5-літровою та 300-літровою шкалою ферментації.
За допомогою описаного нижче процесу очищення були очищені полісахариди.
Сирий полісахарид, отриманий відповідно до прикладу 2, помістили у колбу.
Концентрація сирого полісахариду була збільшена у 3-6 разів за допомогою ТЕЕ з використання касети у 100 кДа.
Додецилсульфат натрію було додано до цієї неактивованої зібраної речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 95; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
Гідроксид натрію було додано до кінцевої концентрації у 08 - 20 ммоль і скориговано до рн
Зо 10,5; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години;
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, був нейтралізований шляхом додавання оцтової кислоти.
До цього нейтралізованого розчину було додано етанол до досягнення кінцевої концентрації у 33 90; розчин інкубувався протягом кількох годин з постійним перемішуванням.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали надосадову рідину. 0,1 Гм хлориду натрію додавалось до надосадової рідини; розчин інкубувався протягом близько 8 годин за температури 2-8 76.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугувався і збиралась надосадова рідина.
Надосадова рідина пропускалась через 0,2 мкм фільтр, і ультраконцентрат діафільтрували з використанням 25 ммоль Ттіз-НСІ буферної рідини за допомогою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації для отримання очищеного полісахариду (Стадія І).
Додавався бромід цетримонію до досягнення кінцевої концентрації у 295; розчин інкубувався протягом 1 години за кімнатної температури.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали осад, розчинений у 9695 етанолі. Розчинену суміш додатково центрифугували для видалення нерозчинених залишків.
До надосадової рідини, отриманої на описаному вище етапі, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,25 Гм. Осаджений Р5 розчиняється у 1 Гм Масі з наступним осадженням РБ з використанням 65 95 спирту.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, ретельно діафільтрувався УУБІ з використанням 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації і пропускався через 0,2 мкм фільтр.
Після цього його зберігали за температури -20 "С у якості кінцевого продукту (Етап І).
Результат:
Таблиця 12
М. Мепіподйнаїв Сирий зібраний Очищений полісахарид | Очищений полісахарид
Серогрупа У полісахарид Етап | Етап ЇЇ
Шкала ферментації 300 літрів 300 літрів 300 літрів
Об'єм Р 125 | 50 | 075 | 35 | 08 | 295
Концентрація Р вв 723 723 7,88 5.39 вл (мг/мл
Сукупний вміст Р 708 361,5 Бо 275,8 4,81 248 (грамів)
Домішки білку (95) 38,62 38,03
Домішки нуклеїнової кислоти (95) 1,94 3,31 0,25 0,11 0,71
Домішки ендотоксину (ЕО/МКГ РЗ) нЗ нЗ 50 56 44 45 відновлення (95
Молекулярний розмір за методом високоефективної нЗ нЗ 620 68 543 рідинної хроматографії
Вміст О-ацетилу Ліміт: зозмиюли 9 |на 1оовв | ово о
Загальне остаточне з нЗ 76,50 76,29 60,83 68,62 відновлення (95)
Таблиця 13
М. Мепіподйнаїв Сирий зібраний Очищений полісахарид | Очищений полісахарид
Серогрупа М/ полісахарид Етап | Етап ЇЇ
Шкала ферментації 300 літри 300 літри 300 літри
Об'єм Р 71 1 39 | 08 | 285 | 08 | 165
Концентрація Р дов 5,65 3,5 6,01 325 8,75 (мг/мл)
Сукупний вміст РБЗ у 26 220 2,8 171 2,6 144 (грамів)
Домішки білку (95) 60,53
Домішки нуклеїнової кислоти (95) 7,98 12 0,85 1,16 0,1
Домішки ендотоксину
ЕЦ/МКг Ре нЗ нЗ -30 -40 -20 -10
Ступінчасте
Молекулярний розмір за методом високоефективної нЗ нЗ 400 420 395 80 рідинної хроматографії
Вміст О-ацетилу
Загальне остаточне
Було проведено два різні комплекси експериментів, за 5-літровою та 300-літровою шкалою ферментації.
Для порівняння, рівень домішок на етапі очищення | та етапі очищення ІІ був набагато нижчий за граничні значення, визначені ВООЗ для полісахаридів у Чоловіків-У та Чоловіків-МУ.
Встановлено, що комбіноване використання аніонного мийного засобу та луги мало значний вплив на зменшення вмісту домішок. Рівень домішок на етапі очищення І та етапі очищення ІІ набагато нижчий за граничні значення, визначені ВООЗ для полісахаридів у Чоловіків-О.
За шкалою у 5 літрів та 300 літрів, Домішки білку (95) - «3,5 95; Домішки нуклеїнової кислоти (90) - «1,5 95; Домішки ендотоксину (ЕбО/мкг РБ) - «60 ЕЄП/мкг Р5.
В обох шкалах та на етапі очищення І та етапі очищення ІЇ відновлення очищеного полісахариду становило на 60 95 більше, ніж у сирого зразка.
Приклад 6: Очищення капсульних полісахаридів (Процес виділення та очищення продукту М. Мепіпоййаі5, Серогрупа А та Х)
Протокол:
Було проведено два різні комплекси експериментів, за 5-літровою та 300-літровою шкалою ферментації.
За допомогою описаного нижче процесу очищення були очищені полісахариди.
Сирий полісахарид, отриманий відповідно до прикладу 2, помістили у колбу.
Концентрація сирого полісахариду була збільшена у 3-6 разів за допомогою ТЕЕ з використання касети у 100 кДа.
Додецилсульфат натрію було додано до цієї неактивованої зібраної речовини до досягнення кінцевої концентрації у 1 95; розчин перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин;
Ацетат натрію, ЕДТК та додецилсульфат натрію було додано до кінцевої концентрації у 6 95, 2 ммоль і 1 95, відповідно; розчин постійно перемішували за кімнатної температури протягом 1 години;
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали надосадову рідину. 0,1 Гм хлориду натрію додавалось до надосадової рідини; розчин інкубувався протягом
Зо близько З годин за температури 2-8 76.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугувався і збиралась надосадова рідина.
Надосадова рідина пропускалась через 0,2 мкм фільтр, і ультраконцентрат діафільтрували з використанням 25 ммоль Ттіз-НСІ буферної рідини за допомогою 100 кДа тангенціальної потокової фільтрації для отримання очищеного полісахариду (Стадія І).
Додавався бромід цетримонію до досягнення кінцевої концентрації у 295; розчин інкубувався протягом 1 години за кімнатної температури.
Таблиця 14
М. Мепіпойідів Серогрупа А Сирий зібраний | Очищений полісахарид | Очищений полісахарид полісахарид Етап | Етап ІІ
Шкала ферментації
Об'єм Р
Концентрація Р5 (мг/мл) 11,44
Сукупний вміст Р (грамів) 298,35 292,5
Домішки білку (95) 19,31
Домішки ендотоксину (ЕО/МКГ РЗ) нЗ 29,08 35
Залишковий 505 стро НЗ -5 -5 служби (мкг/дм3
Ступінчастевідновлення(95)|й // НЗ | 77777752 77777777 Ї77777771717987121С
Молекулярний розмір за методом високоефективної нЗ 350 306 рідинної хроматографії
Вміст О-ацетилу Ліміт: » 2 НЗ 2,69 2.65
ММоль/г
Загальне остаточне
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, центрифугували і збирали осад, розчинений у 9695 етанолі. Розчинену суміш додатково центрифугували для видалення нерозчинених залишків.
До надосадової рідини, отриманої на описаному вище етапі, додавався Масі до досягнення кінцевої концентрації у 0,2 Гм. Осаджений Р розчиняється у 1 Гм Мас! з наступним осадженням з використанням 65 95 спирту.
Розчин, отриманий на описаному вище етапі, ретельно діафільтрувався УМР!Ї з використанням 100 кД тангенціальної потокової фільтрації і пропускався через 0,2 мкм фільтр.
Після цього його зберігали за температури -20 "С у якості кінцевого продукту (Етап І).
Результати:
Таблиця 15
М. Мепіподйнаїв Сирий зібраний | Очищений полісахарид | Очищений полісахарид
Серогрупа Х полісахарид Етап | Етап ЇЇ
Шкала ферментації
Об'єм Р
Концентрація Р 5,05 5.23 6,21 (мг/мл)
Сукупний вміст Р 27715 209,2 186,30 (грамів)
Домішки білку (95) 18,21 771171176066 | 054 2 щ
Домішки нуклеїнової кислоти (95) 1,16 0,76 0,14
Домішки ендотоксину
ЕШ/мкг Р) нЗ 30 13,79
Залишковий 505 стро НЗ -5 -5 служби (мкг/дм3
Ступінчасте
Продовження таблиці 15
БМолекулярний розмір за методом високоефективної Нз 485 473 рідинної хроматографії
Загальне остаточне
Для порівняння, рівень домішок на етапі очищення | та етапі очищення ІІ був набагато нижчий за граничні значення, визначені ВООЗ для полісахаридів у Чоловіків-А та Чоловіків-Х.
Встановлено, що використання аніонного мийного засобу мало значний вплив на зменшення вмісту домішок. Рівень домішок на етапі очищення І та етапі очищення ІІ набагато нижчий за граничні значення, визначені ВООЗ для полісахаридів у Чоловіків-А та Чоловіків-Х.
За шкалою у 5 літрів та 300 літрів, Домішки білку (95) - «2,5 95; Домішки нуклеїнової кислоти (90) - «1 У; Домішки ендотоксину (Еб/мкг РБ) - «40 ЕЄП/мкг Р5.
В обох шкалах та на етапі очищення | та етапі очищення Ії відновлення очищеного полісахариду серогрупи Х становило на 60 95, а полісахариду серогрупи А становило на 50 95 більше, ніж у сирого зразка.
Приклад 7:
Структурна міцність ізольованих полісахаридів (РБ5)
Спектри ЯМР представлені на Фіг. 1-5.
Структурна цілісність ізольованих полісахаридів М. Мепіпойіаіє, Серогрупа А, С, МУ, М та хХ була перевірено за допомогою ядерного магнітного резонансу (ЯМР).
Зафіксовані спектри ЯМР були співставними, і підтвердились їх належність до частково О- ацетильованого менінгококового полісахариду серогрупи А, С, УМ, та У; ї М-ацетильованого полісахариду серогрупи Х.
Приклад 8:
Порівняльний аналіз процесу очищення на основі дезоксихолату натрію (БОС) та заявленого процесу очищення полісахаридів.
Процес на основі дезоксихолату натрію (0ОС) "Вдосконалений метод очищення полісахариду менінгококу" Тапігакі еї аІ. (Сопіпдаєє апі Роїузасспагіде Массіпе5, Ровієг 79, пер'//пеівзегіа.ога/рпс/1996/Меі51996-спар4. раю" було оптимізовано наступним чином:
Збирання продукту через 100 кД. Обробка БОСАЕОТА-МаОАс ж- етанолом (40 95);
Центрифугування, збирання надосадової рідини та фільтрація через 0,2 мкм фільтр;
Концентрація та діафільтрація Обробка бромідом цетримонію (3 95) за кімнатної температури;
Зо Центрифугування та збирання гранул бромід цетримонію-полісахариду; Розчинення гранул бромід цетримонію-полісахариду у 96 95 етанолі та осадження з використанням 0,1 Гм Масі;
Розчинення осаду у 4095 етанолі та додавання 1 Гм Масі (2-8 7С); Центрифугування та збирання надосадової рідини; Фільтрація вугіллям; Осадження Р5З5 шляхом підвищення концентрації етанолу; Розчинення гранул полісахариду у УМРІ і концентрація та діафільтрація за допомогою УМРІ, і зберігання за -20 "С після фільтрації через 0,2 мкм фільтр.
Процес на основі БОС широко використовується в галузі для очищення полісахаридів, призначених для застосування у якості вакцинного антигену.
Рівень вмісту домішок у полісахариді, отриманому за методом БОС, було порівняно із отриманим у процесі за заявленим винаходом.
Результати:
Таблиця 16
СТ ее не шо ВЛ . о білку відновлення кислоти (Е/мкг РБ)
Чоловік-А
Чоловік-С
Чоловіку! 895----59----08-- 1-0 --
Чоловіку 895-59-00 --
Чоловік-Х
Метод за винаходом на основі 505 та метод на основі СОС дав аналогічні результати для серогруп А та С, у той час, як метод 505 для серогруп МУ, ХУ та Х 505 дав покращене кінцеве відновлення у порівнянні із методом БОС.
Як видно з наведених вище результатів, змінений процес 505 має однозначні переваги з огляду на простоту використання, а також декілька інших переваг, таких як те, що рос - компонент тваринного походження і не відповідає Халяльним вимогам до виробництва. ПОС виробляється та постачається єдиним виробником у світі, у той час, як 505 це - синтетичний мийний засіб, сертифікований на відповідність Халяльним вимогам до виробництва, який можна замовити у декількох постачальників у світі. ПОС руйнує ендотоксини без впливу на хімічний склад, і після видалення мийного засобу він може поновити свою біологічну активність, у той час, яка 505 завдяки своїм амфіпатичним властивостям та більшому агрегаційному числу добре денатурує та розчиняє протеїни, а також остаточно розщеплює ендотоксини до їхніх монометричних одиниць.
Завдяки використанню 505 зменшене споживання хімікатів та розхідних матеріалів (етанолу, ульрафільтрів, вугільних фільтрів тощо) є безумовною перевагою. Крім того, використання 505 у якості замінника не мало впливу на структурну цілісність полісахаридів.
Приклад 9:
Представлену нижче імуногенну композицію було підготовлено та протестовано на імуногенність.
Композиція включає: (а) кон'югат (і) капсульного сахариду Меїіз5зегіа тепіпойіадіб5, серогрупа А, та (ії) анатоксину правця; (Б) кон'югат (і) капсульного сахариду Меїі5зегіа тепіпойаї5, серогрупа С, та (і) СКМ197; (с) кон'югат (ії) капсульного сахариду М. Мепіпойаїй5, серогрупа У, та (її) СЕМ 197; (а) кон'югат (ії) капсульного сахариду Меї5зегіа тепіпойіаі5, серогрупа УМ135, та (ії) СЕМ197; і (є) кон'югат (і) капсульного сахариду Меїіз5зегіа тепіпойіадіє, серогрупа Х, та (ії) анатоксину правця.
Зо Результати:
Імуногенність імуногенної композиції було встановлено.
Переваги винаходу
Процес забезпечує значне зменшення вмісту домішок ендотоксину, білку і нуклеїнової кислоти, що дозволяє підвищити ступінь відновлення капсульного полісахариду та зберегти потрібні рівні О-ацетилу. Як вбачається із наведених вище результатів, заявлений процес має однозначні переваги з огляду на простоту використання, а також декілька інших переваг, таких як:
Регуляторні питання; ОС - мийний засіб тваринного походження і не відповідає Халяльним вимогам до виробництва. Він виробляється та постачається єдиним виробником у світі, у той час, як 505 - це синтетичний мийний засіб, сертифікований на відповідність Халяльним вимогам до виробництва, який можна замовити у декількох постачальників у світі.
Функціональне питання: БОС руйнує ендотоксини без впливу на хімічний склад, і після видалення мийного засобу він може поновити свою біологічну активність, у той час, яка 505 завдяки своїм амфіпатичним властивостям та більшому агрегаційному числу добре денатурує та розчиняє протеїни, а також остаточно розщеплює ендотоксини до їхніх монометричних одиниць.
Завдяки використанню 505 зменшене споживання хімікатів та розхідних матеріалів (етанолу, ульрафільтрів, вугільних фільтрів тощо) становить однозначну перевагу.
Процес за винаходом в рамках цієї патентної заявки забезпечує значне зменшення вмісту інших клітинних домішок. Крім того, процес забезпечує ефективне видалення реагентів, використаних під час отримання первинного продукту, а також виділення та очищення кінцевих продуктів
Крім того, процес за винаходом в рамках цієї патентної заявки не має впливу на структурну цілісність полісахаридів, тим самим зберігаючи імуногенність.
З огляду на широке коло можливих конструктивних рішень, до яких можуть бути застосовані принципи представленого винаходу, слід визнати що проілюстровані конструктивні втілення є лише переважними прикладами винаходу і не можуть розглядатися, як фактор обмеження галузі застосування винаходу.
Claims (37)
1. Спосіб ізоляції полісахариду з Меї55егіа Мепіпойіаі5, вибраної з серотипу С, серотипу М/ та серотипу У, який включає етапи: а) додавання мийного засобу, що містить додецилсульфат натрію (505), до розчину сирого полісахариду; р) додавання гідроксиду натрію (Маон) до розчину; с) рН-нейтралізацію розчину; а) осадження розчину за допомогою спирту з наступним центрифугуванням та збиранням надосадової рідини; е) видалення мийного засобу, що міститься у надосадовій рідині; та І) концентрацію та діафільтрацію полісахариду; при якому одержаний полісахарид має ступінь очищення 60-80 95.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що також включає наступні етапи: 9) змішування розчину полісахариду з катіонним мийним засобом; Р) центрифугування розчину та збирання гранул; та Зо ї) розчинення гранул у спирті з наступним осадженням полісахаридів солями.
3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що: () очищений полісахарид з Меїззегіа Мепіпойіай»5 серотипу С має профілі О-ацетилювання 21,5 ммоль/г, домішки білка «1 95, домішки нуклеїнової кислоти «0,3 95 та домішки ендотоксину «50 ЕШ/мкг; (ії) очищений полісахарид з Меїззегіа Мепіпойіаї»в5 серотипу У має профілі О-ацетилювання 50,3 ммоль/г, домішки білка «5 95, домішки нуклеїнової кислоти «2 95 та домішки ендотоксину «60 ЕМШ/мкг; та (ії) очищений полісахарид з Меїі5зегіа Мепіпойідіє серотипу УМ має профілі О-ацетилювання 20,3 ммоль/г, домішки білка «5 95, домішки нуклеїнової кислоти «2 956 та домішки ендотоксину «50 ЕОПО/мкг.
4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що кінцева концентрація мийного засобу (505) у розчині складає 0,1-4,0 95, краще менше 1 95.
5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що кінцева концентрація гідроксиду натрію (Маон) у розчині складає 5-50 ммоль, краще 5-20 ммоль, найкраще 8-15 ммоль.
6. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що рН розчину після додавання гідроксиду натрію (мМаон) складає 9-11 рН, краще 10,5 рн.
7. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що розчин нейтралізований (рН 7,0) шляхом додавання неміцної органічної кислоти.
8. Спосіб за п. 7, який відрізняється тим, що неміцна органічна кислота є мурашиною кислотою, оцтовою кислотою, пропіоновою кислотою, щавлевою кислотою, краще оцтовою кислотою.
9. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що видалення мийного засобу здійснюють з використанням принаймні одного або кількох з наступних процесів: обробка калієвою сіллю, гель-фільтрація, обробка етанолом та іонобмінними смолами/амберлітовими колонками.
10. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що видалення мийного засобу здійснюють осадженням мийного засобу з використанням калієвої солі.
11. Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що калієва сіль є однією з таких речовин як хлорид калію, калію ацетат, сульфат калію, карбонат калію, гідрокарбонат калію, фосфат калію, фосфат гідрогенфосфату калію, дигідрофосфат калію, селітра калію та інші калієві солі або є бо сумішшю двох чи кількох зазначених речовин.
12. Спосіб за п. 11, який відрізняється тим, що калієва сіль є хлоридом калію.
13. Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що кінцева концентрація калієвої солі у розчині складає не менше концентрації, за якої мийний засіб достатньо осаджується.
14. Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що кінцева концентрація калієвої солі у розчині складає менше 300 ммоль, краще менше 100 ммоль.
15. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що полісахирид є полімером залишків сіалової кислоти.
16. Спосіб за п. 13, який відрізняється тим, що катіонний мийний засіб вибираний з таких речовин як цетилтриметиламонієва сіль, тетрабутиламонієва сіль, міристилтриметиламонієва сіль та гексадиметрину бромід або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин.
17. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що катіонний мийний засіб є бромідом цетримонію (СТАВ).
18. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що концентрація катіонного мийного засобу становить менше 3 95, краще 1 905.
19. Спосіб за пп. 1 та 2, який відрізняється тим, що спирт є гідрофільним спиртом.
20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що гідрофільний спирт вибрано з метанолу, етанолу, н-пропілового спирту, ізопропілового спирту, ацетону та т-бутилового спирту або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин; концентрація становить «65 95 або »95 95.
21. Спосіб за пп. 1 та 2, який відрізняється тим, що спирт є етанолом.
22. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що концентрацію та діафільтрацію полісахариду здійснюють за допомогою тангенціальної потокової фільтрації з 100 кКДа ММУ/СО мембраною.
23. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що сіль, використовувана для осадження, є хлоридом натрію, хлоридом амонію, хлоридом калію або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин.
24. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що калієва сіль, використовувана для осадження, є хлоридом калію.
25. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що кінцева концентрація солі складає 0,25-2 М.
26. Спосіб ізоляції полісахариду з Меї55егіа Мепіпойаі5, вибраної з серотипу А та серотипу Х, який включає етапи: Зо а) додавання мийного засобу, що містить додецилсульфат натрію (505), до розчину сирого полісахариду; Юр) додавання ЕДТК та ацетату натрію до розчину; с) осадження розчину за допомогою спирту з наступним центрифугуванням та збиранням надосадової рідини; а) видалення мийного засобу, що міститься у надосадовій рідині; та е) концентрацію та діафільтрацію полісахариду; при якому одержаний полісахарид має ступінь очищення 60-80 95.
27. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що спосіб також включає наступні етапи: а) змішування розчину бактеріального полісахариду з катіонним мийним засобом; р) центрифугування розчину та збирання гранул; та с) розчинення гранул у спирті з наступним осадженням солями.
28. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що: () очищений полісахарид з Меїззегіа Мепіпойіаі5 серотипу А має профілі О-ацетилювання 22 ммоль/г, домішки білка «3 95, домішки нуклеїнової кислоти «1 95 та домішки ендотоксину «50 ЕО/мкг; та (ії) очищений полісахарид з Меї55егіа Мепіпойідіє серотипу Х має домішки білка «1 95, домішки нуклеїнової кислоти «1 95 та домішки ендотоксину «50 ЕШ/мкг.
29. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що кінцева концентрація додецилсульфату натрію (505) у розчині складає 0,1-4,0 95, краще менше 1 95.
30. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що видалення додецилсульфату натрію (505) здійснюють з використанням принаймні одного або кількох з наступних процесів: обробка калієвою сіллю, гель-фільтрація, обробка етанолом та іонобмінними смолами/амберлітовими колонками.
31. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що видалення додецилсульфату натрію (505) здійснюють осадженням додецилсульфату натрію з використанням калієвої солі.
32. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що кінцева концентрація калієвої солі у розчині складає не менше концентрації, за якої додецилсульфат натрію (505) достатньо осаджується.
33. Спосіб за п. 31, який відрізняється тим, що калієва сіль є однією з таких речовин як хлорид калію, калію ацетат, сульфат калію, карбонат калію, гідрокарбонат калію, фосфат калію,
фосфат гідрогенфосфату калію, дигідрофосфат калію, селітра калію та інші калієві солі або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин.
34. Спосіб за п. 27, який відрізняється тим, що катіонний мийний засіб вибираний з таких речовин як цетилтриметиламонієва сіль, тетрабутиламонієва сіль, міристилтриметиламонієва сіль та гексадиметрину бромід або є сумішшю двох чи кількох зазначених речовин.
35. Спосіб за п. 27, який відрізняється тим, що катіонний мийний засіб є бромідом цетримонію (СТАВ).
36. Спосіб за п. 35, який відрізняється тим, що кінцева концентрація СТАВ у розчині складає 0,5-3,0 95, краще менше 1 95.
37. Спосіб за п. 1 або 26, який відрізняється тим, що ізольований полісахарид застосовують для отримання імуногенної композиції, яка містить: а) кон'югат (ї) капсульного полісахариду Меїіз5зегіа тепіподійаїй5, серогрупа А, та (ії) анатоксину правця; р) кон'югат (ї) капсульного полісахариду Меїз5зегіа тепіпойіаді5, серогрупа С, та (ії) СЕМ197; с) кон'югат (ії) капсульного полісахариду Меїззегіа тепіподаі5, серогрупа У, та (ії) СКМ197; а) кон'югат (ї) капсульного полісахариду Меїз5зегіа тепіпойіаді5, серогрупа М/135, та (і) СКЕМ197; та е) кон'югат (ї) капсульного полісахариду Меїіз5зегіа тепіподййаїй5, серогрупа Х, та (ії) анатоксину правця. Спектри ЯМА для папісвхаридів у Чоловіківс ! : с 18 : і спек чан чи пенею шин ше ни ше ни ши и НО я є їх | ' ще - с
Фіг. 1
Спектри ЯМР для попювхаридів у Чопловнвеу де ї ЯВЕШЕИоНТТУЕнссиВяЕЗЕ» ВЕ Я є Б : ее І 7 МА кн нов ії І І : ; їх : Ії :
Й. ; : Я ! Е 1 й їх ї БЕ ! і : ЗЕ В ; НЕ : вті 1 | ! і ГК | : ї ї ТЕ г 3 х х Н З і МЕНЯ і ; НУК ї . Р ох НО і х Ж. : КУ ІЧ Е КІ КЯ В т х (З Ек я кдд А. Е вЖя й КО дяк я ек, Дб Ки В Крималил АХА С вен лини кп уже поноваі нн анаанненнннняя и о ен пами поли ос вн кс ненні Еояа ж ще я за за зяй 23 ва но око вв края : меди ШЕ че КА і ек У В ї и ши ши шш щ
Фіг. 2 Спектри ЯМР дла повісвкаридів у Чоловік Уу Аж ЖААКХААТ КТ ОВ де АК АААААКААЛАКЛАААКА КК КН АМКУ ЛКАКА ТТ КК НнКТЖнКмевесе у . щ ВЕ ВХВспівцехух Є г ЩЕ ї й Е шиши : шшшши шин ше Е ї х хуй кох ї Не ва 5 ; В у | Н і і ; З : Н Ї і і: ЕІ ї ; і ! ще
Е. . ї Кк - У КЕ ї ! ; | З ї : ! ї Б їі : С. к : КУ й Мак Я З ЕЕ З : Н ше ж ше ш ЩА й ще ше пед я не шини З р ан ва я зе в я А зво Де ДАЧ Си ШИ о М же оч ший :
Фіг. З спекти ЯМР для полювхаридів у Чоловікв-А і сне НН НН КТК НН Ян КК КН Я Я акт схов песо о есе нннн око ккюкктосюееесооооесюееве се сесесте кЖсововАетт ! ІНН Ве ЕЕ ЕВ КН ТВО Й Н ОК НН НИ ; ши ше о СИ І т КУ 3 і і 3 З
З . і х У М хо й По ок п Я Я А п я НН КН ска Еккі замі рова проник рококо кросу рого россии нрчя уки нн нта носу оте срчетесрня "в 23 5 мс ще вх КК ЗК КОМИ Я щ вх зо в ВО дак сей се Небесне кни й ЕВ В ВЕ ВОеК Ко сх с: ШИ
Фіг. 4 Спектри ЯМР для попісвхаридів у Человіківнх з я порося соснова скскомстисжееик ЗУ тилу вався Б те м ВВ: і ц Її і КІ Мона ШИК сій ШУ: ши с: нн а ПН ; ! | : . Е ! ї З ! ї ї З В Бо й . : Е М: КОН : '
п . . Щі : і що пвх пси мк! оркестру речення чесне вно нннкодрнннкенннктенинння, ва о а а за за за я 38 зе ва й ен ТЕ й Ко АУДИ АКА РО ЕП еЦеЕ ПО ов й; шесеилЕавх ЕЕЗЕОН ЩІ ее вевяв ее с: / ЩщЩШ: її
Фіг. 5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN201721015961 | 2017-05-05 | ||
| PCT/IB2018/053069 WO2018203268A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-05-03 | Method for removal of impurities from bacterial capsular polysaccharide based preparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA125937C2 true UA125937C2 (uk) | 2022-07-13 |
Family
ID=62705619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201911657A UA125937C2 (uk) | 2017-05-05 | 2018-05-03 | Спосіб видалення домішок з препаратів на основі бактеріальних капсульних полісахаридів |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11739356B2 (uk) |
| EP (1) | EP3619241A1 (uk) |
| JP (2) | JP7319929B2 (uk) |
| KR (1) | KR102565771B1 (uk) |
| CN (1) | CN110831980B (uk) |
| AU (1) | AU2018262438B2 (uk) |
| BR (1) | BR112019022868A2 (uk) |
| CA (1) | CA3062399A1 (uk) |
| CU (1) | CU20190090A7 (uk) |
| EA (1) | EA201992636A1 (uk) |
| GE (1) | GEP20227408B (uk) |
| MD (1) | MD20190088A2 (uk) |
| UA (1) | UA125937C2 (uk) |
| WO (1) | WO2018203268A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201908038B (uk) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL255106B2 (en) * | 2015-05-04 | 2023-04-01 | Pfizer | Protein-polysaccharide conjugates of group b streptococcus, methods for preparing conjugates, immunogenic preparations containing conjugates and their uses |
| AU2018328036B2 (en) * | 2017-09-07 | 2024-03-07 | Merck Sharp & Dohme Llc | Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates |
| JOP20200214A1 (ar) * | 2019-09-03 | 2021-03-03 | Serum Institute Of India Pvt Ltd | تركيبات مولدة للمناعة ضد الأمراض المعوية وطرق لتحضيرها |
| KR102370468B1 (ko) * | 2020-03-18 | 2022-03-03 | 재단법인대구경북과학기술원 | 생체 시료 내 잔존하는 음이온 계면 활성제와 이와 결합한 지질 또는 단백질 결합체, 및 마이셀을 제거하는 조성물, 방법 및 이의 용도 |
| EP4150104A1 (en) * | 2020-05-14 | 2023-03-22 | Serum Institute Of India Private Limited | Methods for simultaneous fragmentation and purification of bacterial polysaccharides |
| WO2022084852A1 (en) * | 2020-10-22 | 2022-04-28 | Pfizer Inc. | Methods for purifying bacterial polysaccharides |
| CN112521520A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-03-19 | 苏州微超生物科技有限公司 | 脑膜炎球菌荚膜多糖的制备方法 |
| CN115561190B (zh) * | 2022-12-01 | 2023-04-07 | 南京大学 | 一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4686102A (en) | 1984-04-12 | 1987-08-11 | American Cyanamid Company | Multivalent pneumococcal vaccine and preparation thereof |
| JP2001527388A (ja) | 1997-01-24 | 2001-12-25 | シュバイツ ゼールム− ウント インフインスティテュト ベルン | 多糖類の新規単離方法 |
| ATE468403T2 (de) * | 1997-12-23 | 2010-06-15 | Baxter Healthcare Sa | Verfahren zur extraktion und isolierung von bakteriellen hüllpolysacchariden zur verwendung als vakzine oder, an proteine gekoppelt, als konjugierte vakzine |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0502096D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
| US7491517B2 (en) | 2006-07-19 | 2009-02-17 | Jeeri R Reddy | Method of producing meningococcal meningitis vaccine for Neisseria meningitidis serotypes A,C,Y, and W-135 |
| CN102653565A (zh) * | 2011-03-03 | 2012-09-05 | 天津康希诺生物技术有限公司 | 一种从荚膜细菌发酵液纯化荚膜多糖的方法 |
| CN104302315B (zh) | 2012-01-30 | 2018-02-06 | 印度血清研究所私人有限公司 | 免疫原性组合物及其制备方法 |
| CN102660603B (zh) * | 2012-04-17 | 2015-03-25 | 江苏康泰生物医学技术有限公司 | 一种快速纯化细菌荚膜多糖的方法 |
| BR112015007126A2 (pt) | 2012-10-02 | 2017-08-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | composição, método para induzir uma resposta imune, e, uso de uma composição |
| BR112015011722B1 (pt) * | 2012-11-21 | 2022-08-09 | Serum Institute Of India Ltd | Método para preparar um polissacarídeo capsular de neisseria meningitidis x |
| MY186874A (en) * | 2014-02-25 | 2021-08-26 | Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt Ltd | A novel downstream process for purifying polysaccharides |
| CN104592408A (zh) * | 2015-01-11 | 2015-05-06 | 云南沃森生物技术股份有限公司 | 一种荚膜多糖的纯化方法 |
| EP3316903A4 (en) | 2015-07-04 | 2019-01-09 | Bharat Biotech International Limited | POLYSACCHARIDE VACCINE FORMULATIONS AND METHOD FOR THE INDUSTRIAL MANUFACTURE OF BACTERIAL POLYSACCHARIDES |
-
2018
- 2018-05-03 MD MDA20190088A patent/MD20190088A2/ro unknown
- 2018-05-03 KR KR1020197035993A patent/KR102565771B1/ko active IP Right Grant
- 2018-05-03 US US16/611,137 patent/US11739356B2/en active Active
- 2018-05-03 CU CU2019000090A patent/CU20190090A7/es unknown
- 2018-05-03 WO PCT/IB2018/053069 patent/WO2018203268A1/en active Application Filing
- 2018-05-03 CN CN201880045050.8A patent/CN110831980B/zh active Active
- 2018-05-03 EP EP18733329.9A patent/EP3619241A1/en active Pending
- 2018-05-03 UA UAA201911657A patent/UA125937C2/uk unknown
- 2018-05-03 CA CA3062399A patent/CA3062399A1/en active Pending
- 2018-05-03 JP JP2019560644A patent/JP7319929B2/ja active Active
- 2018-05-03 BR BR112019022868A patent/BR112019022868A2/pt unknown
- 2018-05-03 EA EA201992636A patent/EA201992636A1/ru unknown
- 2018-05-03 GE GEAP201815229A patent/GEP20227408B/en unknown
- 2018-05-03 AU AU2018262438A patent/AU2018262438B2/en active Active
-
2019
- 2019-12-03 ZA ZA2019/08038A patent/ZA201908038B/en unknown
-
2022
- 2022-11-07 JP JP2022178040A patent/JP2023017929A/ja active Pending
-
2023
- 2023-06-22 US US18/212,815 patent/US20240026405A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112019022868A2 (pt) | 2020-05-19 |
| EP3619241A1 (en) | 2020-03-11 |
| CN110831980A (zh) | 2020-02-21 |
| ZA201908038B (en) | 2021-06-30 |
| AU2018262438B2 (en) | 2022-07-14 |
| US11739356B2 (en) | 2023-08-29 |
| CU20190090A7 (es) | 2020-10-20 |
| WO2018203268A1 (en) | 2018-11-08 |
| US20200190549A1 (en) | 2020-06-18 |
| CN110831980B (zh) | 2022-09-27 |
| KR20200015524A (ko) | 2020-02-12 |
| CA3062399A1 (en) | 2018-11-08 |
| EA201992636A1 (ru) | 2020-04-17 |
| US20240026405A1 (en) | 2024-01-25 |
| JP2020518707A (ja) | 2020-06-25 |
| AU2018262438A1 (en) | 2020-01-02 |
| GEP20227408B (en) | 2022-08-25 |
| MD20190088A2 (ro) | 2020-04-30 |
| KR102565771B1 (ko) | 2023-08-10 |
| JP7319929B2 (ja) | 2023-08-02 |
| JP2023017929A (ja) | 2023-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA125937C2 (uk) | Спосіб видалення домішок з препаратів на основі бактеріальних капсульних полісахаридів | |
| RU2567003C2 (ru) | МЕНИНГОКОККОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ fHBP | |
| CN103917245B (zh) | 用于制备糖‑蛋白质糖缀合物的方法 | |
| CN103687612B (zh) | 无去污剂制备革兰氏阴性细菌外膜泡囊的方法 | |
| KR20150021127A (ko) | 스트렙토코커스 뉴모니아 협막 다당류를 제조하기 위한 단축 정제 방법 | |
| WO2014080423A2 (en) | Production of high yields of bacterial polysaccharides | |
| US10011662B2 (en) | Downstream process for purifying polysaccharides | |
| WO2011148382A1 (en) | An improved process for the purification of capsular polysaccharides of haemophilus influenza - b, neisseria meningitis such as serotypes a, c, y and w-135, and other similar related capsular polysaccharides produced from both gram negative and gram positive microorganisms using aluminium phosphate with alcohol. | |
| EP2155244B1 (en) | Antigenic polysaccharides and process for their preparation | |
| CN108135167A (zh) | 脂化psa组合物和方法 | |
| US20210070890A1 (en) | Method for obtaining purified bacterial polysaccharides | |
| WO2019010080A1 (en) | PURIFICATION OF POLYSACCHARIDES FOR THE PRODUCTION OF VACCINES USING LYTIC ENZYMES, TANGENTIAL FILTRATION AND MULTIMODAL CHROMATOGRAPHY | |
| Zanardo et al. | Development of a new process for purification of capsular polysaccharide from Streptococcus pneumoniae serotype 14 | |
| US20200247911A1 (en) | Purification of Bacterial Polysaccharides | |
| EA041065B1 (ru) | Способ удаления примесей из препаратов на основе бактериальных капсулярных полисахаридов | |
| RU2283135C1 (ru) | Способ выделения очищенных полисахаридов менингококков серогрупп а и с | |
| KR20200021933A (ko) | 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 x 캡슐 다당류의 급속 고수율 정제 방법 | |
| WO2024062494A1 (en) | Method for the purification of capsular polysaccharides | |
| US20230183765A1 (en) | Methods for simultaneous fragmentation and purification of bacterial polysaccharides | |
| KR20010054032A (ko) | 세균성 이질균의 오스피시픽항원의 분리 정제 |