UA118833C2

UA118833C2 - Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, який зв'язується з tnfr1

Info

Publication number: UA118833C2
Application number: UAA201401344A
Authority: UA
Inventors: Клер Ешмен; Мері Берчлер; Вілдт Рудолф М Т де; Клер Холланд; Елан Пітер Люіс; Пітер Морлі; Томас Сендел; Майкл Стюард
Original assignee: Ґлаксо Ґруп Лімітед
Priority date: 2011-08-17
Filing date: 2012-08-13
Publication date: 2019-03-25
Also published as: HK1214281A1; JP6297976B2; TW201321405A; EP3339322A2; BR112014003679B1; EP2987806A2; ES2813432T3; CA2845029A1; US10808040B2; CN103917557A; MX2014001883A; EP2744822A2; AU2016277685B2; AU2019201505A1; MA35428B1; NZ621203A; IL230918A0; CO7020851A2; KR20190113996A; JP2018117623A

Abstract

Винахід стосується одиничного варіабельного домену імуноглобуліну, який зв'язується з TNFR1 та який є вибраним з групи, що включає: одиничний варіабельний домен VH імуноглобуліну, що зв’язується з TNFR1 та має амінокислотну послідовність SEQ ID NO 1, або являє собою амінокислотну послідовність, яка є на 99,5%, 99%, 98% ідентичною амінокислотній послідовності SEQ ID NO 1, та яка додатково включає модифікацію, що являє собою С-термінальне подовження, яке є амінокислотним подовженням від 1 до 5 амінокислот; та де вказане С-термінальне подовження складається з амінокислотного подовження, вибраного з (a) A (b) AS, (c) AST (d) ASTK, (e) ASTKG. Винахід також стосується рекомбінантної нуклеїнової кислоти, вектора, клітини-хазяїна, фармацевтичної композиції та пристрою для доставки, що включає зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну.

Description

(54) ОДИНИЧНИЙ ВАРІАБЕЛЬНИЙ ДОМЕН ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ЯКИЙ ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ТМЕВ1 (57) Реферат:

Винахід стосується одиничного варіабельного домену імуноглобуліну, який зв'язується з

ТМЕКІ та який є вибраним з групи, що включає: одиничний варіабельний домен МН імуноглобуліну, що зв'язується з ТМЕК!І та має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО 1, або являє собою амінокислотну послідовність, яка є на 99,5 95, 99 95, 98 95 ідентичною амінокислотній послідовності зЕО ІЮО МО 1, та яка додатково включає модифікацію, що являє собою С-термінальне подовження, яке є амінокислотним подовженням від 1 до 5 амінокислот; та де вказане С-термінальне подовження складається з амінокислотного подовження, вибраного з (а) А (Б) АБ, (с) А5Т (а) АЗТК, (є) АЗТКО. Винахід також стосується рекомбінантної нуклеїнової кислоти, вектора, клітини-хазяїна, фармацевтичної композиції та пристрою для доставки, що включає зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну.

Представлений винахід стосується модифікованих протеїнів та пептидів, такі мають знижену здатність зв'язувати вже існуючі антитіла. Такі модифіковані протеїн/пептидні молекули можуть містити С-термінальні додавання, подовження або маркери та/або певні амінокислотні заміщення. Такі модифіковані протеїн/пептидні молекули (включаючи їх злиття та кон'югати) можуть містити молекли, що зв'язують антиген, такі як антитіла, фрагменти антитіл, та одиничні варіабельні домени, наприклад, одиничні варіабельні домени імуноглобуліну людини (антитіло), та також одиничні варіабельні домени, що походять з нелюдських джерел, таких як лама або верблюд, наприклад, УНН, включаючи Мапободу "м (наприклад, як описано в УМО 94/04678 та

УМО 95/04079 в тому числі). Винахід, крім того, стосується застосувань, препаратів, композицій, які містять такі модифіковані С-термінально подовжені та/або амінокислотно заміщені молекули та, крім того, способів одержання та експресування даних молекул. передумови створення винаходу:

Аутоантитіла, що зустрічаються в природі, існують у людей, які можуть зв'язуватись з протеїнами, наприклад, імуноглобулінами носія або фрагментами імуноглобуліну, наприклад, ревматоїдний фактор (який зв'язує епітопи в Ес ділянці антитіл), анти-ідіотипічні аутоантитіла (які зв'язують варіабельні/СОК ділянки антитіла) та анти-шарнірні аутоантитіла (які зв'язують шарнірну ділянку константного домену Ід в Гар фрагментах).

Дані аутоантитіла можуть бути частиною поліклонального набору аутоантитіла анти- імуноглобуліну (Ід) зі специфічністю до епітопів через Ід молекулу, яка є присутньою як у людей, так і у нелюдиноподібних приматів. На додаток до анти-Ідо аутоантитіл, які зв'язують епітопи в інтактному Ес домені (тобто ревматоїдні фактори (КЕ)), також спостерігалась присутність анти- ідіотипічних аутоантитіл, що зв'язуються з варіабельними СОМ ділянками Ідс, та анти- шарнірних антитіл, що реагують з криптичними епітопами в С-термінальних шарнірних ділянках

Бар або Е(САБУ)» фрагментах. Функціональна роль даних різних анти-ІдО аутоантитіл залишається невизначеною. Ревматоїдний фактор та анти-шарнірні аутоантитіла є пов'язаними з певними патологічними станами, такими як аутоїмуність та певні інфекції, тоді як анти- ідіотипічні антитіла можуть надавати захист від аутоантитіл при певних аутоімунних захворюваннях. Більш того, була запропонована імунорегуляторна роль для анти-Їдас аутоантитіла, де дані аутоантитіла контролюють стимуляцію аутореактивних В-клітин та

Зо регулюють імунні відповіді на чужорідні антигени. Анти-шарнірні антитіла є анти-Ідс аутоантитілами, які реагують з розщепленою, але не інтактною ІдО. Їх висока поширеність в нормальній людській популяції є органічно пов'язаною з попереднім на дос фрагменти, можливо, як результат розщеплення Ідс бактеріальними або ендогенними протеазами.

Разом зі зв'язуванням з ендогенними протеїнами (присутніми в нативних суб'єктах) аутоантитіла також можуть зв'язуватись з протеїнами або пептидами, які вводять суб'єкту для лікування. Вже існуючі антитіла, які зв'язуються з молекулами, такими як терапевтичні протеїни та пептиди, які вводять суб'єкту, можуть впливати на їх ефективність та в результаті можуть призвести до реакцій введення, гіперчутливості, зміненої клінічної відповіді при лікуванні пацієнтів, а також до зміненої біодоступності за рахунок утримання, виведення або нейтралізації молекули. Однак, в деяких випадках наявність даних антитіл може бути менш значною протягом лікування лікарським засобом, ніж в інших випадках. аутоантитіла, що зв'язують терапевтичний протеїн, та антитіла, що по-новому утворюються у відповідь на лікування лікарським засобом (таке як введення терапевтичного протеїну або пептиду) ізагальнено назівають анти-медикаментозні антитіла (АЮСА5). Коли АБА5 описуються по всьому даному документу, ми посилаємось на вже існуючі АБА5, якщо спеціально не вказане інше.

МН и МІ. домен антитіла одержують з повних людських каркасних послідовностей та, хоча, іп 5іїйсо попередні оцінки описують суттєво низьку кількість потенційно імуногенних пептидів, існує можливість, що дані доменні антитіла можуть бути імуногенними у людей, тобто вони могли б виявляти АБА»5, та вони могли б зв'язуватися з вже існуючими АБА5» в залежності від факторів, як залежних від послідовності, так і незалежних від послідовності.

Аналогічним чином, ряд одиничних дАбБ5, що походять з важкого ланцюга верблюда (УНН), піддають дослідженню в клінічних і, в той же час, повідомлялось, що залишається можливість зв'язування з вже існуючими АБА5 без гіперчутливості або інших імунно-опосередкованих побічних ефектів.

Таким чином переважним може бути забезпечення молекул для терапії, які включають протеїни або пептиди, наприклад, молекли, що зв'язують антиген, які мають знижену здатність зв'язуватися з вже існуючими АБАФ5, коли вводять суб'єкту, зокрема суб'єкту - людині.

Суть винаходу:

Ми продемонстрували, як описано в даному документі, що в сироватці деяких здорових нативних суб'єктів-людей є присутніми вже існуючі анти-МН аутоантитіла, які можуть зв'язувати, як МН домен антитіла, так і МНН молекули, а також анти-Мі (наприклад, М каппа (МК)) аутоантитіла, які можуть зв'язувати МІ молекули. Вже існуючі АБАФ5б, які зв'язують МН аАбБ»5 є подібними до анти-шарнірних антитіл тим, що вони зв'язують дС фрагменти, але не такі самі послідовності знайдені іп 5йи на інтактному до.

Розроблено та валідовано, як показано в даному документі, специфічний імуноаналіз для детектування анти-медикаментозного антитіла до МН аАБ рОМ1нН-131-206 (амінокислотна послідовність показана в 5ЕО ІЮО МО 1) у людей. Панель зразків сироватка від 60 здорових людей - донорів скринінгували на фонову реактивність в аналізі. Визначено, що приблизно 45 95 зразків сироватки від даних суб'єктів мали антитіла, що здатні бути виявленими, які були здатні зв'язуватися з ООМІТН-131-206. Дана реактивність виникає специфічною до нео-епітопу, або епітопів, в МН дАбБ каркасній послідовності, оскільки відповідь була перехресно-реактивною з МН каркасами ЯАБ5 зв'язування різних мішенних антигенів, але не з повним Дб людини. Вже існуючі АБА з МІ дАБ5 також спостерігались в зразках сироватки від здорових людей-донорів, але менш поширені, ніж МН.

Приймаючі мутагенезний підхід, ми визначили, що модифікації до МН каркасу могли б зменшити зв'язування з даними вже існуючими АБА5. Застосовуючи даний підхід, ми картували епітоп до С-кінця МН аАБ каркасу, та ми продемонстрували на прикладах ряд підходів, які можуть застосовувати, щоб знизити або усунути зв'язування вже існуючі антитіла з Мі, МН та

МНН молекулами. Зокрема, ми показали, що важливими є модифікації, які змінюють тривимірну конформацію С-кінця ЯАБ, зокрема С-термінального серинового залишку (тобто в Кабат положенні 113) в МН та МНН аАбБ»5. До того ж, тривимірна конформація С-кінця ЗАВ може бути змінена шляхом додавання додаткових амінокислотних залишків (С-термінальне подовження) та/або шляхом заміщення амінокислотних залишків, присутніх в одному або більше положеннях 14, 41, 108, 110 та 112 в ун аАбБз.

Представлений винахід, таким чином, передбачає модифіковані молекули, що мають знижену здатність зв'язуватися з (вже існуючими) АЮБА5 в порівнянні з немодифікованою молекулою та є прийнятними для введення суб'єкту, наприклад, суб'єкуту людині, для лікування

Зо або профілактики. Під зниженою здатністю зв'язуватися мають на увазі те, що молекула зв'язується зі зниженою афінністю або зниженою авідністю з вже існуючим АБбА. Такі молекули містять протеїни або пептиди, наприклад, антиген-зв'язуючі протеїни, наприклад, антитіла, фрагменти антитіл та одиничні варіабельні домени, наприклад, одиничні варіабельні домени (МН або МІ) імуноглобуліну людини (антитіло), та також одиничні варіабельні домени, які походять з нелюдських джерел, таких як лама або верблюд, наприклад, МНН верблюда, включаючи Мапободу "м (описаний, наприклад, в УМО 94/04678 та УМО 95/04079 в тому числі).

Зазначені молекули містять одну або більше модифікацій, вибраних з: (а) С-термінального додавання, подовження, делеції або мітки, та/або (Б) одного або більше заміщень в амінокислотному каркасі.

Крім того, модифіковані молекули, описані в даному документі, та фармацевтичні композиції, що містять дані модифіковані молекули, можуть мати підвищений профіль безпеки та меншу кількість побічних ефектів, ніж немодифіковані молекули, наприклад, немодифіковані аАр5, які не містять С-термінальне подовження, додавання, делецію або мітку та/або іншу модифікацію каркасу, щоб знизити зв'язування вже існуючих АБА. Подібним чином, введення модифікованих молекул, описаних в даному документі, або фармацевтичних композицій, що містять дані модифіковані молекули (які мають знижену здатність зв'язуватися зі вже існуючими

АБА), може призводити до модифікованої імуногенності та може також в результаті призвести до покращення ефективності та покращення профілю безпеки, та, наприклад, може переважно застосовуватись для повторення дозування пацієнтам, у кого могли виявити аутоантитіла до немодифікованих молекул, наприклад, 4АбБ».

Таким чином, в першому аспекті винаходу передбачається: одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ), який містить одну або більше модифікацій, вибрану з: (а) С-термінального подовження, яке включає амінокислотне подовження від однієї амінокислоти до 5 амінокислот; або (Б) одного або більше заміщень в амінокислотному каркасі, де, щонайменше, одне заміщення є заміщенням, вибраним з: РІ4А заміщення, РАТА заміщення та І 108А заміщення.

В одному втіленні, передбачається С-термінальне подовження від одного до 4 амінокислот.

В іншому втіленні зазначене С-термінальне подовження містить амінокислоту, яка є аланіном, та має знижене зв'язування зі вже існуючими АбАФ5в в порівнянні з немодифікованим одиничним 60 варіабельним доменом імуноглобуліну (аАбБ).

В іншому аспекті С-термінальне подовження може бути подовженням з 1-15 амінокислот, наприклад, 1-8 амінокислот або 1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 амінокислот. Зокрема, подовження з від 1 до 8 амінокислот, або 1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 амінокислот, яке містить аланіновий залишок, наприклад, одиничне аланінове подовження, або А5, А5Т, АБТК, АЗ5ТКО, АЗТКОР подовження. Зокрема, передбачається подовження з 1-5 амінокислот або подовження з 1-4 амінокислот. Модифікований одиничний варіабельний домен імуноглобуліну такж може містити делецію амінокислоти. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) може бути вибраний з МН людини, або МІ аАБ людини, або МНН верблюда. С-термінальне подовження може бути присутнім як безпосереднє злиття або кон'югація з С кінцем АБ.

В іншому аспекті, винахід передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ), де (ї) зазначений ЯАБ є МН людини або МНН верблюда, та зазначене С-термінальне подовження включає амінокислотне подовження, вибране з (а) А (Б) АБ, (с) АБ5Т (а) АБ5ТК, (є)

А5БТКО (Ї) ААА або (9) Т; та де (ії) зазначений АБ є Мі. людини (таке як М каппа), та зазначене

С-термінальне подовження включає амінокислотне подовження, вибране з (а) ААА, (Б) А (с) ТМ (4) Т.

Винахід, крім того, передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАбБ), який моновалентно зв'язується з мішенним антигеном, що містить: а) три комплементарності, які визначають (СОК) ділянки специфічні для зазначеного мішенного антигену; таким чином, що зазначений ЯАБ зв'язує зазначений антиген з КД в діапазоні від 5 мікромоль до 1 пікомоль р) чотири каркасних (ЕМ) ділянки; та с) С-термінальну послідовність, що складається з послідовності МТУ5(5)пХ або МЕЇКриАах; та необов'язково а) одне або більше амінокислотних заміщень вположеннях 14, 41, 108, 110 або 112 в порівнянні із зародковою каркасною послідовністю людини, де: п представляє собою ціле число, незалежно вибране з 0 або 1; р та 4 кожен представляє собою 0 або 1, таким чином, що коли р представляє собою 1, 4 може бути 0 або 1, та таким чином, що коли р представляє собою 0, д також представляє собою

Зо 0;

Х може бути присутнім або відсутнім, та якщо присутній, то представляє собою амінокислотне подовження з від 1 до 8 амінокислотних залишків; за додаткової умови, що якщо Х відсутній; ї) п є 0 та/або дАБ кінець в МТ У5(5)п містить одне або більше із зазначених амінокислотних заміщень; ії) р та/або ад є 0, та/або дАБ кінець в МЕІКрКаХ містить одне або більше із зазначених амінокислотних заміщень.

КО стосується константи рівноваги дисоціації. Кваліфікованому фахівцю буде зрозуміло, що чим менше чисельне значення КД, тим сильніше зв'язування.

В одному втіленні даного аспекту зазначений ЯАБ зв'язує зазначений антиген з КД в діапазоні від приблизно 10 пМ до приблизно 50 нМ.

В одному втіленні даного аспекту, зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) має нижчу афінність та/або авідність зв'язування для анти- медикаментозного антитіла (АБВА), ніж еквівалентний АБ, де зазначений еквівалентний ЯАБ має таку саму послідовність як і зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, за виключенням того, що Х є відсутнім, п, р та д є 1 та не існує амінокислотних заміщень.

В наступному втіленні, зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну є таким, де зазначена С-термінальна послідовність складається з послідовності МТУЗ5Х.

В іншому втіленні зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну є таким, де зазначена С-термінальна послідовність складається з послідовності МЕІКЕХ.

В наступному втіленні, зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну має одне або більше амінокислотних заміщень, вибраних з групи, що складається з: РІ4А заміщення,

РАЗА заміщення, І 108А заміщення, Т110А заміщення та 5112А заміщення.

В втіленні, Х є присутнім, та є подовження з 1-8 амінокислот або 1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 амінокислот, зокрема подовження з 1-8 амінокислот, або 1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 амінокислот, що включає аланіновий залишок, наприклад, одиничне аланінове подовження, або

АБ, АБТ, А5ТК, АЗТКОа, АЗТКОР подовження.

В наступному втіленні, зазначений ЯАБ є УН, або МІ аАБ або УНН верблюда.

В ще наступному аспекті винахід також передбачає амінокислотну послідовність, яка є будь- 60 якоюоднією з немодифікованих послідовностей одиничного варіабельного домену імуноглобуліну (дАБ), описану в даному документі (наприклад, 5ЕО І МО: 1-6, 10-13), яку потім модифікують для зниження зв'язування з АБА5, як показано в даному документі, наприклад, немодифікована послідовність одиничного варіабельного домену імуноглобуліну, описана в даному документі, яку модифікують таким чинов, що Х є присутнім, та існує подовження з 1-8 амінокислот, зокрема подовження з 1-8 амінокислот, яке включає аланіновий залишок, наприклад, одиничне аланінове подовження, або А5, А5Т, А5ТК, А5ТКа, АБТКОР подовження, та/або зазначений одиничний варіабельний домен імуноглобуліну має одне або більше амінокислотних заміщень, де зазначене одне або більше амінокислотних заміщень вибирають з групи, що складається з РІ14А заміщення, РАЗА заміщення, І 108А заміщення, Т110А заміщення та 5112А заміщення.

В одному втіленні винахід передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, який є МН людини або МНН верблюда, та зазначене С-термінальне подовження включає амінокислотне подовження, вибране з: (а) А5, (Б) А5Т (с) АЗ5ТК, (а) А5ТКа, (є) ААА або (7) Т, або (9) АБТКОР, та/або де існує амінокислотна делеція з АБ кінця в МТУ5(5)п та зазначена делеція є -5 делецією.

В іншому втіленні винахід передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, який є МІ людини, наприклад, М каппа, та де зазначене С-термінальне подовження включає амінокислотне подовження, вибране з: (а) ААА (Б) А (с) ТМ та (4) Т, та/або де існує амінокислотна делеція з аАБ кінця в МЕЇКЕ, та зазначена делеція є -К делецією.

В одному альтернативному втіленні попередніх аспектів винаходу, коли С-термінальна послідовність для М аАБ є МЕІККААА або МЕЇККТ, конструктами зв'язування антигену, що містить два дАб, розділені Ес ділянкою одинарного ланцюга антитіла, де кожен аАБ є здатним до зв'язування з МЕСЕ, є виключеними.

В одному аспекті АБ, модифікований, щоб знизити зв'язування з АЮБА як показано в даному документі (наприклад, УН, МІ, такі як М каппа та УНН) мають КД зв'язування з АБВА, яка становить 150 95 або більше (наприклад, 200 95, 250 95, 300 95, 350 95, 400 95, 450 95, 500 95, 550 95, 600 95, 650 95 або більше) від КД еквівалентного, але немодифікованої послідовності одиничного варіабельного домену імуноглобуліну (даАБ). Крім того, передбаченим за винаходом є АБ, модифікований як показано в даному документі, щоб мати знижене АБбА зв'язування, та який має знижене зв'язування з АБА5, як визначено, застосовуючи аналіз підтвердження, як описано в прикладі 2, та де зазначений модифікований ЯАБ має середній 95 пригнічення сигналу, який становить менше, ніж 90 95, наприклад, менше, ніж 80 95, наприклад, менше, ніж 70 956, наприклад, менше, ніж 60 95, наприклад, менше, ніж 50 95, наприклад, менше, ніж 40 95, наприклад, менше, ніж 30 956, наприклад, менше, ніж 20 95, наприклад, менше, ніж 10 95, в порівнянні з контрольним аАБ, який має приблизно 98 595-100 95 пригнічення сигналу, зазначений контроль (немодифікований) ЯАБ має таку саму або подібну послідовність, але не є модифікованимдля зниження АБВА зв'язування.

Представлений винахід, крім того, передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) винаходу для застосування в способі лікування, наприклад, для застосування в способі попередження побічних ефектів. Дане застосування може бути особливо корисним, коли ЯАБ є антагоністом мішені, наприклад, мішень вибрана з ТМЕРа, ТМЕ рецептору, ТМЕ рецептору 1 (ТМЕКІ1), МЕСЕ, ІС-1А, 11-68, 1-4, 11 -5, 11-13, 0С-512М, АБОРА, альбуміну та ТОЕВК2. В одному втіленні мішень є рецептором або, зокрема, рецептором, який є полімерним, або рецептором, який димеризується при активації, наприклад, ТМЕ рецептором. В іншому втіленні ЧАЮ, модифікований як показано в даному документі таким чином, що він зменшив зв'язування з АЮБА5, є таким, що застосовується в режимі лікування, який включає повторне дозування.

Винахід передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ), в якому мішенню є ТМЕКІТ, та який є аАБ, вибраним з будь-якої наступної амінокислотної послідовності, яку ідентифіковано як: (а) ООМ10П-131-206 ДАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО

ІО МО 16); (ву ВОМ Н-131-206 аАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці та мутацією

Р14А каркасу (ЗЕО ІЮ МО 17); (с) ООМ1п-131-206 аАБ з мутацією Р14А каркасу (ЗЕО ІЮО МО 18); (4) ООМ1ТН-131-206 АБ з АЗТКО С-термінальним подовженням (ЗЕО ІЮ МО 19); та (є) ООМІН- 131-206 аАБ з АБТКО С-термінальним подовженням та мутацією Р14А амінокислотного каркасу (ЗЕО І МО 20). Винахід, крім того, передбачає (немодифікований) АБ, який є вибраним з послідовності, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 965, 97 95, 96 95, 95 9У5, 90 90, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як: ВОМ п- 131-206 (5ЕО І МО 1), ОМ 1п-131-511 (5ЕО ІЮ МО 2), БОМ 1п-131-202 (ЗЕО ІО МО 3), та який додатково містить будь-яку, в тому числі, наприклад, будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, яка знижує зв'язування з АБА5, наприклад, одиничне аланінове сС- термінальне подовження. аАБр5 за винаходом включає будь-яку одну з АБ амінокислотних послідовностей, описаних в даному документі, або що є частиною молекули, описаною в даному документі (або амінокислотною послідовністю, що є на 100 Фо, 99,5 Уо, 99 95, 98 Уо, 97 Фо, 96 9о, 95 90, 90 Фо, 85 Уо або 80 95 ідентичною до такої дАБ послідовності), наприклад будь-яку одну з дАбБ5, описаних в будь-якому з прикладів в даному документі та, яка, наприклад, містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, що знижують зв'язування з АБАб5, таку як С-термінальне аланінове подовження. Винахід, крім того, охоплює будь-яку одну з молекул, описаних в даному документі (наприклад, в прикладах), що містить дАБ послідовність, як описано вище, яка містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, що знижує зв'язування з АБА5, такими молекулами може бути, наприклад, будь-яка одна з МА-МК аАр-Ес-дАБз» в прикладі 12, або будь- яка з тАБаАБ»5, описаних в даному документі, наприклад, в прикладах даного документу.

Таким чином, винахід передбачає анти-І13 адр, наприклад, ЯАБ з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як: (а) ром10н-53-567 (5ЕБЕО ІЮ МО 13) або (БХ 0Т04-Н-033 (5Е6О ІО МО 12); та де амінокислотна послідовність додатково містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, які знижують зв'язування з АБА5, наприклад, одиничне аланінове С-термінальне подовження.

Винахід, крім того, передбачає анти-ТМЕКЛТаАБ, наприклад, ЯАБ з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як: ВОМ п- 574-208 (5ЕО ІЮО МО 10); та яка додатково містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, яка знижує зв'язування з АБА5, наприклад, одиничне аланінове С-термінальне подовження.

Винахід, крім того, передбачає анти-ТМЕНТаАр-Мі. злиття, наприклад з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як: ВОМ п- 574-208-МІ. злиття (ЗЕО ІЮ МО 11); та яка додатково містить будь-яку з модифікацій, описаних в

Зо даному документі, яка знижує зв'язування з АБА5, наприклад, одиничне (або потрійне) аланінове подовження, присутнє на С-кінці злитої молекули.

Винахід, крім того, передбачає тАралоБ який є анти-ІЇЗтАр: І/-4 М каппа аАБ, що додатково містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, яка знижує зв'язування з АРА5; наприклад, тАБаАр може містити послідовність важкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як: тАбБ-МІ. "735 молекула важкого ланцюга 5ЕО ІЮО МО 30; послідовність легкого ланцюга, ідентифікована як "735 послідовність легкого ланцюга ЗЕО ІО МО 31; та яка додатково містить будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі, яка знижує зв'язування з АОАб5, наприклад, одиничне (або потрійне) аланінове подовження.

Винахід, крім того, передбачає тАбраАБ, який є анти-ІЇ 1ЗтАБ: ІІ -4 М каппа дАб, позначений тАБ-МІ. 15014 модифікований, що знижує зв'язування з АБА»5, як показано в даному документі, де тАБраАБ містить (а) важкий ланцюг-лінкер-М каппа послідовність з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як 5ЕО ІЮ МО 32; та (Б) послідовність легкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 95, 97 Ус, 96 95, 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як ЗЕО ІЮ МО 33.

Винахід, крім того, передбачає тАбраАБ, який є анти-ІЇ 1ЗтАБ: ІІ -4 М каппа дАб, позначений тАБ-МІ. 15019 модифікований, що знижує зв'язування з АСАб5б, як показано в даному документі, де тАБраАБ містить (а) важкий ланцюг-лінкер-М каппа послідовність з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як ЗЕО ІЮ МО 34; та (Б) послідовність легкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 95, 97 Ус, 96 95, 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як 5ХЕО ІЮ МО 35.

Винахід, крім того, передбачає тАбраАБ, який є анти-ІЇ 1ЗтАБ: ІІ -4 М каппа дАб, позначений тАБ-МІ. 15020 модифікований, що знижує зв'язування з АСАб5б, як показано в даному документі, де тАБраАБ містить (а) важкий ланцюг-лінкер-М каппа послідовність з амінокислотною 10) послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як ЗЕО ІЮ МО 36; та (Б) послідовність легкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 95, 97 Ус, 96 95, 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як 5ЕО ІЮ МО 37.

Винахід, крім того, передбачає тАбраАБ, який є анти-ІЇ 1ЗтАБ: ІІ -4 М каппа дАб, позначений тАБ-МІ. 15021 модифікований, що знижує зв'язування з АБАб5б, як показано в даному документі, де тАБраАБ містить (а) важкий ланцюг-лінкер-М каппа послідовність з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як 5ЕО ІЮ МО 38; та (Б) послідовність легкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 95, 97 Ус, 96 95, 95 95, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як ЗЕО ІЮ МО 39.

Винахід, крім того, передбачає МНН послідовність з будь-якою однією з модифікацій, описаних в даному документі, що знижує зв'язування з АБА5, наприклад, МНН з амінокислотною послідовністю, що є на 100 95, 99,5 95, 99 95, 98 96, 97 95, 96 Зо, 95 9Уо, 90 9о, 85 90 або 80 95 ідентичною до будь-якої однієї з амінокислотних послідовностей, ідентифікованих як ЗЕО ІЮ МО 7-9.

Винахід, крім того, передбачає нуклеїнові кислоти, що кодують будь-яку одну з дАБе5 за винаходом, наприклад, будь-яку одну з нуклеїнових кислот, описаних в даному документі, наприклад, будь-яку одну з послідовностей нуклеїнової кислоти, показану на фігурі 9 (ЗЕО ІО

МО 21-23) або фігурі 10 (5ЕО ІЮ МО 24-29). В одному втіленні винахід передбачає нуклеїнову кислоту (ЗЕО ІЮ МО 22), яка кодує ООМ1Тп-131-206 аАр з подовженням одиничного аланіну на

С-кінці, вектор, що містить нуклеїнову кислоту (5ЕО ІЮ МО 22), та, крім того, передбачає клітину-господоря, наприклад, Е.соїї клітину-господаря, що експресує нуклеїнову кислоту (5ЕО

ІО МО 22), або вектор, такий як Рамеб11 (від Еційт Оіозупій), що експресує 5ЕО ІЮ МО 22. Крім того, передбаченим є спосіб одержання ООМ1п-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці, який включає збереження клітини-господаря, такої як Е.соїї, що містить вектор, такий як Раме011 (або нуклеїнову кислоту), що кодує нуклеїнову кислоту (ЗЕО ІЮ МО 22) в умовах прийнятних для експресії подовженого АБ, тим самим продукуванню поліпептиду.

Зо До того ж, аАБ5 за винаходом можуть бути присутніми як злиття або кон'югати з іншими молекулами.

В інших втіленнях за винаходом, описаних протягом даного розкриття, замість застосування "адАр" в злитті за винаходом, очікується, що кваліфікований отримувач може застосовувати домен, що містить СОВА з аАБ, що зв'язує його мішень, та каркас якого містить модифікації, як показано в даному документі, що знижують зв'язування з АОАФв5.

Крім того, передбаченими є фармацевтичні композиції, що містять АБ відповідно до будь- якого аспекту або втілення за винаходом, наприклад, в комбінації з фармацевтично або фізіологічно прийнятним носієм(ями), наповнювачем(ами) або розріджувачем(ами).

Винахід, крім того, передбачає застосування дАБ5 за винаходом для терапії або медицини та застосування, щоб лікувати або попереджувати захворювання або розлади. Наприклад, анти-ТМЕКІ аАБр5 зі зниженим АБА зв'язуванням, наприклад, ООМ1п-131-206 аАБ модифікований як показано в даному документі, щоб зменшити АБбА зв'язування (наприклад, ті з амінокислотних послідовностей, що показані на фігурі ва-ве: БЕО ІЮ МО 16-20).

В одному аспекті винахід передбачає застосування ООМ1п-131-206 АБ з С-термінальним аланіновим подовженням (ЗЕО ІЮ МО 16) для використання в терапії або медицині, або як лікарський засіб, наприклад, для лікування або попередження запального захворювання або розладу, або респіраторного або пульмонального захворювання або розладу, такого як гостре пошкодження легень (АГ) та синдром гострої дихальної недостатності (АКО5) та їх ускладнень.

Винахід, крім того, передбачає нуклеїнові кислоти, що кодують аАр5 за винаходом зі зниженим АБА зв'язуванням, та вектори та клітини-господарі, що містять дані нуклеїнові кислоти. Крім того, передбаченими є способи одержання 4АбБ5 за винаходом, які включають експресування кодуючих векторів та нуклеїнових кислот в клітинах-господарях, наприклад, мікробних клітинах-господарях, таких як Е.соїї.

В наступному аспекті, винахід передбачає препарати, що містять ЗАБ5 за винаходом, зі зниженим АБА зв'язування, наприклад, небулізовані препарати для пульмональної доставки.

Крім того, передбаченими є небулайзери або інгаляційні пристрої, які містять дАБ5 за винаходом, наприклад, будь-який один з анти-ТМЕК! адре, наприклад, той, що з амінокислотними послідовностями, показаними на фігурі ва-Вве: 5ЕО І МО 16-20, наприклад рОМ'1п-131-206 АБ з С-термінальним аланіновим подовженням (ЗЕО ІЮ МО 16).

В іншому аспекті, винахід передбачає немодифікований ООМ1п-131-206 ЯАБ (5ЕО ІЮ МОЇ) або ООМ'1п-131-206 АБ модифікований будь-якими способами, описаними в даному документі, щоб зменшити АБА зв'язування, наприклад, ООМ1П-131-206 дАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІЮ МО 16), щоб лікувати запальний шкірний розлад, наприклад, псоріаз.

Інший аспект розкриття представляє собою спосіб лікування псоріазу у людей, що включає стадії а) виявлення людини з псоріазом; та БЮ) введення терапевтично ефективної кількості домену антитіла (наприклад, немодифікованого ООМ1п-131-206 АБ (ЗЕО ІЮ МОЇ) або ООМ'1П- 131-206 дАБ, модифікованого будь-яким шляхом, описаним в даному документі, щоб зменшити

АБВА зв'язування, наприклад, ООМ1П-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІО МО 16) з псоріатичною плямою у людей з псоріазом; за умови, що псоріаз лікують.

Інший аспект розкриття представляє собою домен антитіла для застосування в лікуванні псоріазу та також режим дозування у випадку використання домену антитіла для застосування в лукуванні псоріазу. Домен антитіла може бути немодифікованим ВОМ п-131-206 АБ (ЗЕО ІЮ

МО1) або ВОМ1п-131-206 аАБ, модифікованим будь-яким зі способів, описаних в даному документі, щоб зменшити АБА зв'язування, наприклад, ООМ1П-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІЮ МО 16).

В наступному аспекті винахід, крім того, передбачає зонд тАб (наприклад, зонд тАб, як описано в прикладі 19 та з амінокислотною послідовністю, наведеною на фігурі 6: БЕО ІЮ МО 14 та 15). Зонд тАБб була згенерована, застосовуючи стандартну технологію мишачого моноклонального антитіла, тобто мишей імунізували ПОМ 1Н-131-206 (5ЕО ІО МОЇ), збтрали селезінки, та генерували гібридомні клітинні лінії, гібридоми, що експресують антитіло, потім клонквали, та одержане в результаті антитіло виділяли та секвенсували, використовуючи стандартні способи. Зонд тАб є однією з тих, що зв'язується з МН АБ каркасом та, та таким чином, знижує зв'язування МН дАБб5 з АБА5. Таким чином, зонд тАр виникає, щоб зв'язати подібний епітоп на МН каркас з людським анти-МН АБА. Таким чином, зонд тАр може бути корисним, наприклад, його застосовують для випробовування модифікованого дАбБз (УН, УНН, ) та для визначення, які модифікації ЗАЬЮ попереджують або зменшують зв'язування аАБ з зондом тАбБ. модифікації МН адре, які попереджують зв'язування із зондом тАр також будуть попереджувати або зменшувати зв'язування МН аАбБз з АБА»5. Таким чином, винахід передбачає будь-які ЗАБ5, які є модифікованими (наприклад, будь-яку з модифікацій, описаних в даному документі), щоб попередити або зменшити зв'язування з зондом тАб. Винахід, крім того, передбачає спосіб застосування зонду тАб (наприклад, зонду тАБб, описаної в прикладі 19, та з амінокислотною послідовністю, наданою в прикладі 19 та також на фігурі 6: 5ЕО ІЮО МО 14 15) в аналізі дослідження ЯАБр5, наприклад, модифікованого аАБ5 (наприклад (УН, УНН), наприклад, будь-які з тих, що описані в даному документі, наприклад, ТМЕКІ1 адб», такі як ті, що описані в даному документі) та для визначення тих, що зі зниженим зв'язуванням з АБА5, наприклад, в одному аспекті ЗАБ5 (наприклад (УН, МНН) є модифікованими так, що знижують зв'язування із зондом тАбр, як показано в даному документі, та мають КД зв'язування із зондом тАб, який становить 150 95 або більша (наприклад, 200 95, 250 95, 300 95, 350 95, 400 95, 450 95, 500 95, 550965, 600 95, 650 95 або більше) від КД еквівалентної АБ послідовності, яка не була модифікованою. Винахід, крім того, передбачає будь-які ЗАБ5, визначені за допомогою даного скрінінг аналізу.

В наступному аспекті винахід, крім того, передбачає застосування зонду тАб (наприклад, зонду тАб, описаної в прикладі 19, та з амінокислотною послідовністю, наданою на фігурі 6:

ЗЕО ІЮО МО 14 та 15) в способі аналізу для кількісного визначення скільки аАБ (наприклад, МН,

МНН) є присутніми в зразку тканини або зразку плазми.

Короткий опис креслень:

Фігура 1: показує концентрацію вже існуючих анти-медикаментозних антитіл в сироватках панелі від здорових суб'єктів людей.

Фігура 2: показує амінокислотні послідовності немодифікованих анти-ТМЕНІ адбрз, визначених як (а) (немодифікований) ООМ 1ТН-131-206 (5ЕО ІЮО МО 1) (Б) (немодифікований)

БОМ 1Н-131-511 (ЗЕО ІО МО 2) (с) (немодифікований) СОМ 1 Н-131-202 (ЗЕО ІО МО 3); та МНН послідовності, визначені як (4) які є біспецифічного формату, що мають ІІ.6Е зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок сс((О5505055 зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини, як описано в М/О2010100135 (5ЕО ІЮ МО 4), (є) є біспецифічного формату, що мають ТМЕ зв'язуючий модуль, зв'язаний зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки, який в свою чергу, зв'язаний з ТМЕ зв'язуючим модулем, використовуючи (з05(0(35(05(3055 як лінкер, як описано в

УМО2010077422 (ЗЕО ІЮ МО 5), (Ї) є бівалентного моноспецифічного формату, що містить дві ідентичні молекули, зв'язані за рахунок АїІа-АІа-Аіа лінкеру, кожна молекула є аАБ, який може 60 зв'язувати АТ домен фактору фон Віллебранда, як показано в М/О2009115614А2 (ЗЕО ІЮ МО 6),

(4) клон МННІ(й) є біспецифічного формату, що має І.бК зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок Осо 50(3(05 зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини, як описано в

УМО2010100135, з аланіновим подовженням (ЗЕО ІЮ МО 7), (п) біспецифічний формат, що має

ТМЕ зв'язуючий модуль, зв'язаний зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки, який в свою чергу, зв'язаний з ТМЕ зв'язуючим модулем, використовуючи со(с(О550505 як лінкер, як описано в УМО2010077422, з аланіновим подовженням (5ЕБО ІЮ МО 8), (ї) бівалентний моноспецифічний формат, що містить дві ідентичні молекули, зв'язані за рахунок АїІа-АІіа-Аіа лінкеру, кожна молекула є дАБ, який може зв'язувати АЇ домен фактору фон Віллебранда, як показано в М/О2009115614А2, з аланіновим подовженням (ЗЕО ІЮ МО 9), () ОМ 1Н-574-208 (ЗЕО І МО 10), (КУ ОМ 1Н-574-208 - МІ. злиття (ЗЕО ІЮ МО 11), () 0Т04-Н-033 (5ЕО І МО 12); (т) Оот10п-53-567 (5ЕО ІЮ МО 13).

Фігура 3: показує модель кристалічної структури ВЮОМІН-131-206 із залишками, які підкреслюють, що впливає на АБВА зв'язування під час мутування. Виконували моделювання залишків на поверхні та одержані в результаті мутації сортували в АБА аналізі щодо зв'язування зі вже існуючими АБА5з (наприклад, як описано в прикладі 2). Знайдено, що залишки, позначені як 14 і "С-кінець"7, мають сильний вплив на АБА зв'язування під час мутування, знайдено, що залишки, позначені як 112, 110, 108 та 41 мають помірний вплив на

АБВА зв'язування під час мутування, та знайдено, що залишки, позначені як 13, 11, 91, 43, 44, 83 та 84 мають слабкий вплив на АБбА зв'язування під час мутування.

Фігура 4: показує аброгацію зв'язування з АБА5, викликану додаванням одиничного аланінового амінокислотного залишку подовження до УНН клонів 2(а), 2(е) та 20).

Фігура 5: показує рівні зв'язування з АБА5 та Мн аАре або Мі аАрз, або молекулами, які містять дані дАбБв.

Фігура ба та 6р: показує амінокислотні послідовності зонду тАбр (М2.3510.10506), фігура ба показує послідовність легкого ланцюга (5ЕО ІЮ МО 14); та фігура 65 показує послідовність важкого ланцюга. СОК5 показані підкресленими на фігурі (ЗЕО ІЮ МО 15).

Фігура 7: показує сигнал конкурентного аналізу (х-вісь) в присутності зразків сироватки від суб'єктів з цілим рядом вже існуючого анти-МН АБВА сигналу. Сироватка від ряду людей-донорів з вже існуючими анти-УН ада конкурує з анти-МН тАБ М2.30210.12406 щодо зв'язування з ПОМ

Зо 1Н-131-206, що в результаті призводить до інгібування сигналу конкурентного аналізу.

Фігура 8: показує амінокислотні послідовності модифікованих ТМЕК1 дАбБ»5, ідентифікованих як: (а) ВОМ1п-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну (5ЕО ІЮ МО 16); (5) ВОМ Н-131- 206 аАБр з подовженням одиничного аланіну та Р14А каркасною мутацією (ЗЕО ІЮ МО 17); (с) рОМ1р-131-206 аАБ з РІ4А каркасною мутацією (5ЕО ІЮО МО 18); (4) ФОМ'І1рп-131-206 АБ з

А5ТКа С-термінальним подовженням (5ЕО ІЮ МО 19); та (еє) ООМІН-131-206 АБ з А5ТКО С- термінальним подовженням та Р14А каркасною мутацією (ЗЕО ІЮ МО 20).

Фігура 9: показує послідовності нуклеїнової кислоти ТМЕК1 адбвз (а) ОЮМ1П-131-206 ЯАБ (ЗЕО ІЮ МО 21), (б) ООМІп-131-206 дАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІЮ

МО 22), (с) ООМІН-131-206 АБ з С-термінальним подовженням АЗТКО (ЗЕО І МО 23).

Фігура 10: показує послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують (а) МНН послідовність, що має амінокислотну послідовність, показану на фігурі 24 (5ЕО І МО 24); (р) УНН послідовність, що має амінокислотну послідовність, показану на фігурі 2е (ЗЕБО ІЮО МО 25); (с). УНН послідовність, що має амінокислотну послідовність, показану на фігурі 27 (ЗЕО ІЮ МО 26), (а)

МНН послідовність, яка є біспецифічного формату, що має ІІ 6В зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок ССС зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини з подовженням одиничного аланіну (ЗЕО ІЮО МО 27), (є) МНН послідовність з амінокислотною послідовністю, показаною в 26, що додатково містить подовження одиничного аланіну (ЗЕО 10 МО 28), () УНН послідовність з амінокислотною послідовністю, показаною в 2ї, що додатково містить подовження одиничного аланіну (5ЕО ІЮ МО 29).

Фігура 11: показує амінокислотні послідовності тАБ:мМІ адрзе (І--1ЗтАБ: ІІЇ-4Мкаппа аАБ молекули): (а) тАБ-МІ. "735 молекула (І -1ЗтАрБ: ІІ -4Мкаппа АБ) (ЗЕО ІО МО 30 та 31), (Б) тАбБ-

МІ. 150154 (5ЕО ІОЮО МО 32 та 33), (с) тАБ-МІ 15019 (5ЕО ІЮО МО 34 та 35), (4)) тАБ-МІ 15020 (ЗЕО ІО МО 36 та 37), (е) тАр-МІ 15021 (ЗЕО ІЮ МО 38 та 39).

Фігура 12: показує амінокислотні послідовності (аДа ЮМ530045: 0ОМ15-26-597 аАБ М- (МЕРКЗЗОК лінкер) та С-термінальний К-044-085 аАБ (ТО О5Р)ХЯ) (5ЕБЕО ІЮО МО 40), (Б) рм530046: 0ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 ЯАБ (ТО О5Р)Х4) (5ЕБЕО ІО МО 41), (с) рмМ530047 (містить модифікований С-кінець): ООМ15-26-597 ДАБ М-"«МЕРКЗЗОК лінкер) та С- термінальний К-044-085 аАр мінус С-термінальний К (ТО О5Р)х4) (5БО ІЮО МО 42), (а) рмМ530048 (містить модифікований С-кінець): ООМ15-26-597 ДАБ М-"«МЕРКЗЗОК лінкер) та С- 60 термінальний К-044-085 аАрА (ТО1О5Р)ХЯ) (ЗЕБЕО ІО МО 43), (в) 0ОМ530049 (містить модифікований С-кінець): ПОПОМ15-26-597 АБ М-(МЕРКЗЗОК лінкер) та С-термінальний К-044- 085 дАржААА ((ТОЇ О5Р)х4) (5ЕО ІЮ МО 44), () 0М530050 (містить модифікований С-кінець): рОМ15-26-597 аАБ М-"(«МЕРКЗБОК лінкер) та С-термінальний К-044-085 ДАВ (ТИ! О5Р)Х4) (ЗЕО ІЮ МО 45), (ду ОМ530051 (містить модифікований С-кінець): ОМ51576 з С-термінальним К- 044-085 АБ мінус С-термінальний К (ТО О5Р)х4) (5БО ІЮ МО 46), (п) 0ОМ530052 (містить модифікований С-кінець): ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 ДАБА (ТагГО5Р)Х4) (5ЕО І

МО 47), () Ю0М530053 (містить модифікований С-кінець): ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 аАрвАдА (ТОГО5Р)Х4) (5БО ІЮ МО 48), () 0М530054 (містить модифікований С-кінець): рМ51576 з С-термінальним К-044-085 дАБ-Т (Та! О5Р)Х4) (ЗЕО І МО 49).

Детальний опис ВИНАХОДУ:

В межах даного опису винахід описується з посиланням на варіанти втілення, в певному сенсі, що забезпечує можливість чіткого та конкретного викладення опису. Мається на увазі та слід приймати до уваги, що варіанти втілення можуть по-різному поєднуватись або розмежовуватися без відокремлення від винаходу.

Якщо не зазначене інше, всі технічні та наукові терміни, які використовують в даному документі, мають ті самі значення, як зазвичай розуміється кваліфікованим фахівцем в даній галузі (наприклад, в клітинних культурах, молекулярній генетиці, хімії нуклеїнових кислот, способах гібридизації та біохімії). Стандартні методики застосовують для молекулярних, генетичних та біохімічних способів (дивись в основному, ЗатьгоокК еї аї., МоїІесшаг Сіопіпд: А

І арога(огу Мапааї, 24 єа. (1989) Со 5ргіпуд Нагрог І арогаїгу Ргез5, Соїй 5ргіпд Нагтог, М.У. та

А!йзибеї еї аї., Зпогі Ргоїосої5 іп Моїесшаг Віоіоду (1999) 4 Еа, допйп УМіеу 5 5опв5, Іпс. які є включеними в даний документ у вигляді посилання) та хімічних способів.

Афінність представляє собою силу зв'язування однієї молекули, наприклад, антиген- зв'язуючого протеїну за винаходом, з іншою, наприклад, його мішенним антигеном, в одиничному сайті зв'язування. Афінність зв'язування антиген-зв'язуючого протеїну з його мішенями може бути визначена, використовуючи стандартні рівноважні способи (наприклад, твердофазний імуноферментний аналіз (ЕГІ5ЗА) або радіоіїмуноаналіз (КІА)), або кінетики (наприклад, ВІАСОВЕ"М аналіз).

Термін "епітоп", як використовується в даному документі, має на увазі, що частина антигену,

Зо яка встановлює контакт з конкретним доменом зв'язування антиген-зв'язуючого протеїну, наприклад, ЯАБ. Епітоп може бути лінійним або конформаційним/переривчастим.

Конформаційний або переривчастий епітоп містить амінокислотні залишки, які є відокремленими іншими послідовностями, тобто не в безперервній послідовності в первинній послідовності антигену. Хоча залишки можуть бути з різних ділянок пептидного ланцюга, вони знаходяться в безпосередній близкості в тривимірній структурі антигену. У випадку мультимерних антигенів, конформаційний або переривчастий епітоп може включати залишки з різних пептидних ланцюгів. Конкретні залишки, включені в епітоп, можуть визначатися, використовуючи програми комп'ютерного моделювання або через тривимірні структури, одержані за допомогою способів, відомих в даній галузі з рівня техніки, таких як рентгенівська кристалографія.

Кон'югат АБ стосується композиції, яка містить АБ, з яким додаткова молекула є хімічно кон'югованою за рахунок ковалентного або нековалентного зв'язку, переважно ковалентного зв'язку. Такий ковалентний зв'язок міг бути безпосереднім пептидним зв'язком або іншими способами, такими як із застосуванням модифікованого бічного ланцюга. Нековалентне зв'язування може бути прямим (наприклад, електроститична взаємодія, гідрофобна взаємодія) або непрямим (наприклад, через нековалентне зв'язування комплементарних зв'язуючих партнерів (наприклад, біотин та авідин), де один партнер є ковалентно зв'язаним з лікарським засобом, та комплементарний зв'язуючий партнер є ковалентно зв'язаним з аАБ'"М). Коли застосовують комплементарні зв'язуючі партнери, один з партнерів зв'язування може бути ковалентно зв'язаним безпосередньо з лікарським засобом або через прийнятний лінкерний фрагмент, та комплементарний зв'язуючий партнер може бути ковалентно зв'язаним з дАБ'М безпосередньо або через прийнятний лінкерний фрагмент.

Як використовується в даному документі, ЧАЮ злиття стосується злитого протеїну, який містить Ар та поліпептидний лікарський засіб. АБ та поліпептидний лікарський засіб є присутніми як дискретні частини (фрагменти) одиничного безперервного поліпептидного ланцюга.

Як використовується в даному документі "фрагмент, " коли використовується по відношенню до поліпептиду, є поліпептидом, що має амінокислотну послідовність, яка є такою ж як частина, але не вся амінокислотна послідовність всього поліпептиду, що зустрічається в природі. бо Фрагменти можуть бути "самостійними" або включеними в більший поліпептид, з якого вони утворюють частину або ділянку, як одиничну безперервну ділянку в одиничному більшому поліпептиді.

Як використовується в даному документі, термін тАрадбоб стосується моноклонального антитіла, зв'язаного з додатковим доменом зв'язування, зокрема одиничним варіабельним доменом, таким як домен антитіла. тАБадбо має, щонайменше, два антиген-зв'язуючих сайти, щонайменше, один з яких є з домену антитіла, та щонайменше, один зі спареного МН/Л/. домену. Такі тАрадАбз» описані, наприклад, в УМО 2009/068649.

Як використовується в даному документі, "пептид" стосується від приблизно двох до приблизно 50 амінокислот, які є зв'язаними разом за рахунок пептидних зв'язків. Як використовується в даному документі, "поліпептид" або "протеїн" стосується, щонайменше, приблизно 50 амінокислот, які є зв'язаними разом пептидними зв'язками. Поліпептиди та протеїни, як правило, містять четвнртинну структуру та згини в функціональних доменах.

Як використовується в даному документі, термін "Ес ділянка одинарного ланцюга антитіла" стосується Ес ділянки одинарного важкого ланцюга Ідс, такого як Ідс1, Ідс2, ІдЗ, іс(4 або

І9С4РЕ, або ІдА антитіла. Ес ділянка одинарного важкого ланцюга може містити один або більше з СНІ, СН2 та СНЗ доменів константної ділянки антитіла, наприклад, всі три домени константні ділянки антитіла або тільки СН2 та СНЗ домени. На додаток до включення одного або більше з СНІ, СН2 та СНЗ доменів константної ділянки антитіла, Ес ділянка одинарного важкого ланцюга антитіла може додатково містити шарнірну ділянку антитіла (таку ділянку, як правило, знаходять між СНІ та СН2 доменами).

Як використовується в даному документі, "функціональний" описує поліпептид або пептид, який має біологічну активність, таку як активність специфічного зв'язування. Наприклад, термін "функціональний поліпептид" включає антитіло або його антиген-зв'язуючий фрагмент, що зв'язує мішенний антиген за рахунок його антиген-зв'язуючого сайту.

Як використовується в даному документі, "мішенний ліганд" стосується ліганду, який специфічно або селективно зв'язується поліпептидом або пептидом. Наприклад, коли поліпептид є антитілом, його антиген-зв'язуючим фрагментом або одиничним варіабельним доменом імуноглобуліну, мішенний ліганд може бути будь-яким потрібним антигеном або епітопом. Зв'язування з мішенним антигеном залежить від поліпептиду або пептиду, який є

Зо функціональним.

Як використовується в даному документі антитіло стосується до, ІДМ, ІдА, дО або ІДЕ або фрагменту (такого як аб, Р(аб"», Ем, дисульфідний зв'язаний Ем, 5сЕм, замкнуте конформаційне мультиспецифічне антитіло, дисульфід-зв'язаний 5сЕм, діатіло), який або отриманий з будь-яких видів антитіла, що продукується в природі, або створені за ДНК рекомбінантною технологією; або виділений з сироватки, В-клітин, гібридом, трансфектом, дріжжів або бактерій.

Вираз "одиничний варіабельний домен імуноглобуліну" стосується варіабельного домену антитіла (МН, МНН, МІ), що специфічно зв'язує антиген або епітоп незалежно від інших М ділянок або доменів. одиничний варіабельний домен імуноглобуліну може бути присутнім в форматі (наприклад, гомо- або гетеро-мультимер) з іншими варіабельними ділянками або варіабельними доменами, де інші ділянки або домени не вимагають зв'язування антигену за рахунок одиничного варіабельного домену імуноглобуліну (тобто, де одиничний варіабельний домен імуноглобуліну зв'язує антиген незалежно від додаткових варіабельних доменів). "домен антитіла" або "ЗАБ" є тим самим, що й "одиничний варіабельний домен імуноглобуліну" як термін, що використовують в даному документі. "одиничний варіабельний домен імуноглобуліну" є тим самим, що й "варіабельний одиничний домен імуноглобуліну" як термін, що використовують в даному документі. "одиничний варіабельний домен антитіла" є тим самим, що й "одиничний варіабельний домен імуноглобуліну" як термін, що використовують в даному документі. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну є, в одному втіленні, варіабельним доменом антитіла людини, але також включає одиничний варіабельний домен антитіл з інших видів, таких як МНН аАБ5 гризуна (наприклад, як розкрито в УМО 00/29004, зміст якого є включеним в даний документ у вигляді посиланняв повному об'ємі), вусатої акули-няньки та верблюду. МНН верблюду є одиничним варіабельним доменом імуноглобуліну поліпептидів, що походять з видів, включаючи верблюда, лами, альпака, дромадеру та гуанако, який продукує важкий ланцюг антитіла природно позбавлений легких ланцюгів. МУННможе бути гуманізованим.

Крім того, в межах представленого винаходу знаходяться Абе людини, які були модифікованими таким чином, що є не повністю людськими, наприклад, содифікації, які зроблені, щоб зменшити агрегацію, включаючи мутацію тих самих залишків, які Є мотивами верблюду.

Немодифікований одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (тобто немодифікований

ЯаАБ), наприклад, аАБр, що зв'язує мішень, містить три ділянки, які визначають комплементарність (СОК5), в каркасній структурі. Приймаючи до уваги той факт, що в генетиці

М ділянка імуноглобулінових ланцюгів, що зустрічаються в природі, обмежує на початку СОКУ, із залишком СОКЗ, який забезпечується Ю та У ділянкими (призводячі в результаті до М-0-) злиття), за призначенням представленого винаходу 4АБ включає всі СОКЗ та завершує в каркасі 4 залишок на його С-кінці. МН аАБ завершує в залишках І! МТУ5З5 на його С-кінці. УНН аАБЬ завершує в залишках МТУ55 на його С-кінці. МІ. дар завершує в МЕЇКК на його С-кінці. "модифікований аАБ" є аАБ, як показано в даному документі, який додатково має модифікацію, яка змінює тривимірну конформацію ЯАБ С-кінця. модифікований ЯЗАБ включає аАБ, який містить С-термінальні додавання, подовження або мітки та/або певні амінокислотні заміщення, як розкрито в даному документі.

Представлений винахід, крім того, передбачає одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (або молекули, що містять дАБ, наприклад, тАбБраАБ), як описано вище, який має нижчу афінність та/або авідність зв'язування (наприклад, який має КД зв'язування з АБА, що становить 150 95 або більше (наприклад, 200 95, 250 95, 300 95, 350 95, 400 95, 450 95, 500 95, 550 95, 600 95, 650 95 або більше КД еквівалентної послідовності) для анти-медикаментозного антитіла, ніж еквівалентного 4ЗАр (або молекули, що містить дАБ), де еквівалентний ЗАБ має таку саму послідовність за виключенням того, що Х є відсутнім, п, р та д є 1, та не існує мутацій каркасу. Під цим мається на увазі, що аАбБ, наприклад, ПОМ 1Н-131-206 (ЗЕО ІО МО 1), коли потім модифікований таким чином, що подовжується, щоб містити Х, наприклад, С-термінальне одиничне аланінове подовження, або модифікують, щоб видалити С-термінальний серин, або модифікують шляхом заміщення в каркасі одного або більше залишків 14, 41, 108, 110 та/або 112 (або будь-яка комбінація з таких модифікацій), зв'язується з анти-медикаментозним антитілом (АБА) з нижчою афінністю та/або авідністю зв'язування, ніж ВОМ 1Н-131-206 (5ЕО І

МО 1) без будь-яких таких модифікацій. Це може бути визначено, використовуючи поверхневий плазмонний резонанс, наприклад, на Віасоге ТМ, використовуючи стандартні методики.

Кваліфікованому фахівцю буде зрозуміло, що чим нижче значення КД, тим сильніше зв'язування.

Крім того, передбаченими за винаходом є АБ, модифікований як показано в даному документі, щоб мати знижений АБА зв'язування, та який має знижене зв'язування з АБА5 як визначено, використовуючи аналіз підтвердження, як описано в прикладі 2, та де зазначений модифікований ЯАБ має середній 95 інгібування сигналу, який становить менше, ніж 90 95, наприклад, менше ніж 8095, наприклад, менше ніж 7095, наприклад, менше ніж 60 95, наприклад, менше ніж 5095, наприклад, менше ніж 4095, наприклад, менше ніж 30 95, наприклад, менше ніж 20 95, наприклад, менше ніж 10 95, в порівнянні з контрольним АБ, який має приблизно 98 905-100 95 інгібування сигналу, зазначений контрольний (немодифікований) аАр має таку саму або подібну послідовність, але не є модифікованим для зниження АБА зв'язування.

Вже існуючий АБА є АБбА, вже присутнім у суб'єкта, якому слід вводити лікарський засіб. Вже існуючий АБА може бути присутнім у "наївного" суб'єкта (тобто суб'єкта, якому ніколи раніше не вводили лікарський засіб). "домен" є протеїном складчатої структури, який має третинну структура незалежно від решти протеїну. Як правило, домени несуть відповідальність за дискретні функціональні властивості протеїнів, та в багатьох випадках можуть бути доданими, видаленими або перенесеними іншим протеїнам без втрати функції залишка протеїну та/або домену. "одиничний варіабельний домен антитіла" є складчатим поліпептидним доменом, що містить характеристичні послідовності варіабельних доменів антитіл. Внаслідок цього, він включає повний варіабельний домен антитіл та модифіковані варіабельні домени, наприклад, в яких один або більше петльових фрагментів заміщені на послідовності, які не є характеристичними варіабельного домену антитіл, або варіабельний домен антитіл, які є усіченими або містять М- або С-термінальні подовження, а також складчасті фрагменти варіабельних доменів, які зберігають, щонайменше активність зв'язування та специфічність повнодовжинного домену.

Як використовується в даному документі, термін "доза" стосується кількості злиття або кон'югату, який вводять суб'єкту всю в один час (одинична доза), або в два або більше введень протягом визначеного інтервалу часу. Наприклад, доза може стосуватися кількості злиття або кон'югату, введеного суб'єкту протягом курсу одного дня (24 годин) (денна доза), двох днів, одного тижня, двох тижнів, трьох тижнів або одного, або більше місяців (наприклад, шляхом одноразового введення, або шляхом двох або більше введень). Інтервал між дозами може 60 становити будь-яку потрібну кількість часу.

"Моновалентний" означає зв'язування з одним епітопом.

Вираз, "період напіввиведення, " стосується часу потрібного для зниження на 50 95 концентрації злиття або кон'югату в сироватці або плазмі, іп мімо, наприклад, завдяки розкладанню та/або кліренсу, або секвестрації за природними механізмами. Композиції за винаходом стабілізують іп мімо та їх період напіввиведення зростав за рахунок зв'язування з молекулами альбуміну сироватки, наприклад, альбуміну сироватки людини (НЗА), що протидіє розкладанню та/або кліренсу, або секвестрації. Дані молекули альбуміну сироватки є протеїнами, що зустрічаються в природі, які самі по собі мають довгий період напіввиведення іп мімо. Період напіввиведення молекули підвищується, якщо її функціональна активність зберігається, іп мімо, протягом більш довгого періоду, ніж подібної молекули, яка не є специфічною протягом періоду напіввиведення збільшення молекули.

Як використовується в даному документі, "гідродинамічний розмір" стосується видимого розміру молекули (наприклад, молекули протеїну, ліганду), грунтуючись на дифузії молекули крізь водний розчин. Дифузію, або рух, протеїну крізь розчин можуть піддавати процесу, щоб одержати видимий розмір протеїну, де розмір надають в "радіусах Стокса" або "гідродинамічних радіусах" частинки протеїну. "Гідродинамічний розмір" протеїну залежить як від маси, так і від форми (конформації), таким чином, що два протеїни, які мають однакову молекулярну масу, можуть мати різні гідродинамічні розміри, грунтуючись на загальній конформації протеїну.

Розрахунки "гомологічності", або "іьдентичності", або "подібності" між двома послідовностями (в даному документі терміни використовують взаємозамінно) виконують як наводиться далі.

Послідовності вирівнюють з метою оптимального порівняння (наприклад, гепи можуть бути введені в один або обидва з першої та другої амінокислотної послідовності або послідовності нуклеїнової кислоти для оптимального вирівнювання та негомологічні послідовності можуть не прийматися до уваги для цілей порівняння). У варіанті втілення, довжина еталонної послідовності, яку вирівнюють для цілей порівняння, становить, щонайменше 30 95, або щонайменше 40 95, або щонайменше 50 95, або щонайменше 60 95, або щонайменше 70 95, 80 95, 90 95, 100 95 довжини еталонної послідовності. Потім порівнюють амінокислотні залишки або нуклеотиди у відповідних амінокислотних положеннях або нуклеотидних положеннях. Коли положення в першій послідовності займає той самий амінокислотний залишок або нуклеотид, як і відповідне положення в другій послідовності, тоді молекули є ідентичними в такому положенні (як використовується в даному документі "гомологічність" амінокислоти або нуклеїнової кислоти є еквівалентною "ідентичності" амінокислоти або нуклеїнової кислоти). Відсоток ідентичності між двома послідовностями є функцією кількості ідентичних положень, що приймають участь в послідовності, приймаючи до уваги кількість гепів, та довжину кожного гепа, який необхідно ввести для оптимального вирівнювання двох послідовності. Вирівнювання та гомологічність, подібність або ідентичність амінокислотної та нуклеотидної послідовності, як визначено в даному документі, може бути отримана та визначена, використовуючи алгоритм ВІА5Т 2 послідовності, використовуючи значення параметрів за замовчуванням (Таїизома, Т. А. еї аї.,

ЕЕМ5 Містобіо! І ей, 174:187-188 (1999).

Винахід стосується виділених та/або рекомбінантних нуклеїнових кислот, що кодують композиції за винаходом, які є описаними в даному документі.

Нуклеїнові кислоти, які в даному документі називають як "виділений", є нуклеїновими кислотами, які відокремили від іншого матеріалу (наприклад, інші нуклеїнові кислоти, такі як геномна ДНК, кДНК та/або РНК) в його вихідному навколишньому середовищі (наприклад, в клітинах або в суміші нуклеїнових кислот, таких як бібліотека). Виділена нуклеїнова кислота може бути виділена, як частина вектору (наприклад, плазмід).

Нуклеїнові кислоти, які в даному документі називають як "рекомбінантні", є нуклеїновими кислотами, які одержували, використовуючи рекомбінантну ДНК методологію, включаючи способи, які грунтуються на штучній рекомбінації, такій як клонування в вектор або хромосому, використовуючи, наприклад, реструкційні ферменти, гомологічну рекомбінацію, віруси та подібне, та нуклеїнові кислоти одержують, використовуючи полімеразну ланцюгову реакцію (РСВ).

Винахід, крім того, стосується рекомбінантної клітини-господаря, наприклад, ссавців або мікробної, яка містить (одну або більше) рекомбінантну нуклеїнову кислоту або конструкт експресії, що містить нуклеїнову(і) кислоту(и), що кодують композицію за винаходом, як показано в даному документі, наприклад, ЗАБ модифікований щодо зниження зв'язування з

АБА5. Крім того, передбачається спосіб одержання композиції за винаходом, як показано в даному документі, який включає збереження рекомбінантної клітини-господаря, наприклад, ссавців або мікробної, за винаходом в умовах прийнятних для експресії злитого поліпептиду. 60 Спосіб додатково може включати стадію виділення або відновлення злиття, якщо потрібно.

Наприклад, молекула нуклеїнової кислоти (тобто, одна або більше молекул нуклеїнової кислоти), що кодують молекулу за винаходом, може бути введеною в прийнятну клітину- господар, щоб створити рекомбінантну клітину-господар, використовуючи будь-який спосіб, прийнятний для вибраної клітини-господаря (наприклад, трансформація, трансфекція, електропорація, інфекція), таким чином, що молекула(и) нуклеїнової кислоти є функціонально зв'язаними з одним або більше контрольними елементами експресії (наприклад, в векторі, в створеному конструкті, використовуючи процеси в клітині, інтегрованій в геном клітини- господаря). Одержану в результаті рекомбінантну клітину-господар можуть зберігати в умовах прийнятних для експресії (наприклад, в присутності індуктора, в прийнятній тварині, в прийнятному культуральному середовищі, доповненому прийнятними солями, факторами росту, антибіотиками, поживними добавками, тощо), тим самим одержують кодований пептид або поліпептид. Якщо потрібно, кодований пептид або поліпептид може бути виділеним або відновленим (наприклад, з тварини, клітини-господаря, середовища, молока). Даний процес охоплює експресію в клітині-господарі трансгенної тварини (дивись, наприклад, УУМО 92/03918,

СепРНагт Іпіегпаїйопаї).

Молекули за винаходом, як показано в даному документі, також можуть одержувати в прийнятній іп міо експресійній системі, наприклад, шляхом хімічного синтезу або, використовуючи будь-який інший прийнятний спосіб.

Як описано та проілюстровано в даному документі, молекули за винаходом, як правило, зв'язуються з їх мішенними лігандами з високою афінністю.

Молекули за винаходом, наприклад, модифікований дАбБз» зі зниженим зв'язуванням з АОАв, можуть бути експресовані в Е. соїї або в Ріспіа 5ресіе5 (наприклад, Р. равіогіє). В одному втіленні, ЗА секретуються в Е. соїї або в Ріспіа 5ресієв5 (наприклад, Р. рабвіогів); або в клітинній культурі ссавців (наприклад СНО, або НЕК 293 клітинах). Хоча, молекули, описані в даному документі, можуть бути секретованими, коли експресовані в Е. соїї, або в Ріспіа 5ресіе5, або клітинах ссавців, їх можуть отримувати, використовуючи будь-який прийнятний спосіб, такій як способи хімічного синтезу або способи біологічного продукування, які не застосовують види Е. соїї або Ріспіа. У варіанті втілення нуклеїнова кислота, що кодує дАБ5 за винаходом, наприклад,

ТМЕМКІ1 дАБ»5, описані в даному документі, може бути клонована в прийнятному векторі експресії,

Зо наприклад, Рамеб11 (від Еційт Оіозупій) та потім експресована в мікробному векторі, такому як

Е.соїї.

В одному втіленні винаходу ЯАБб, наприклад, МН, МІ. або УНН, може бути модифікованим, щоб попередити зв'язування з АБА5, таким чином, що модифікація включає присутність тегу на

С-кінці. Даний тег може бути присутнім, як злиття або кон'югат з молекулою. Тег може бути будь-яким тегом, відомим в даній галузі з рівня техніки, наприклад, тегами афінності, такими як тус-теги, ЕГАсС-теги, Ппіб5-теги, хімічною модифікацією, такою як ПЕГ, або доменами протеїну, такими як Ес домен антитіла. Зокрема, представлений винахід передбачає молекулу за винаходом, подовжену тегом, хімічною модифікацією або доменом протеїну для застосування в способі зниження побічних ефектів, як додатково визначено в даному документі.

В іншому втіленні винахід, крім того, передбачає молекулу, наприклад, АБ (такий як УН, або МІ, або УНН), що містить модифікований каркас, що зменшує вже існуючі АБА зв'язування, наприклад, аАбБ (такі як МНН, МН або МІ), що містить амінокислотне заміщення в будь-якому одному з положень 14, 41, 108, 110 або 112. Наприклад, дані заміщення можуть бути однією або більше модифікаціями, вибраними з: Р14А, Р14К, Р140), Р14Т, РАЗА, І/108А, 1108 О, Т110А та

З112А.

В одному аспекті даного втілення ЯаАБ (наприклад, УНН, УН або МІ) містить одну або більше модифікацій, вибрану з: РІ4А, РІ4К, РІ140, Р14Т, РАТА, ІТ108А, Т110А та 5112А; та може додатково містити будь-яке з С-термінальних подовжень, додавань, делецій або тегів, як описано вище.

БО В одному втіленні ЧФАБ (наприклад, МНН, МН або МІ), який містить одну або більше модифікацій, вибрану з: Р14А, Р14К, Р140, Р14Т РА1ТА, І1084А, Т110А та 5112А, також містить амінокислотне подовження на С-кінці аАБ, який вибирають з: (а) аланіну, або (Б) амінокислотної послідовності, що містить або складається з подовження, вибраного з: А5, А5Т, АЗТК, АЗТКО або АБТКОР. Додатково, АБ молекули, описані в даному документі, та фармацевтичні композиції, які містять дані молекули, можуть бути корисними в попередженні або зниженні побічних ефектів. Зв'язування анти-медикаментозного антитіла з ПАБ може призвести до двох адр5, які є реалізованими. За деяких обставин, це може призвести до проблем безпеки.

Наприклад, якщо мішень ЯАБ є рецептором або полімерною мішенню, реалізація разом двох

ЯаАр5 може вводити в дію дві мішені разому. Це може призвести до неочікуваних бо фармакологічних ефектів, наприклад, агонізм замість антагонізму, наприклад, за рахунок димеризації рецептору. Таким чином, представлений винахід передбачає застосування молекули за винаходом в способі попередження побічних ефектів. Під попередженням розуміють, що застосування молекули за винаходом повністю або частково анулює зв'язування вже існуючих анти-медикаментозних антитіл у порівнянні з еквівалентною молекулою, яка не була модифікованою. Зниження зв'язування АБА5 призводить до зниження рівня небажаних фармакологічних ефектів. Таким чином, молекули за винаходом можуть мати підвищений профіль безпеки та менші побічні ефекти, ніж немодифіковані молекули, наприклад, немодифіковані АБ», які не містять С-термінальне подовження, додавання, делецію або тег та/або іншу каркасну модифікацію, щоб знизити вже існуючі АБА зв'язування. Аналогічним чином, введення модифікованих молекул, описаних в даному документі, або фармацевтичних композицій, що містять дані модифіковані молекули (які знизили здатність зв'язуватися з вже існуючим АБА), може призвести до модифікованої імуногенності, це відбувається тому що, коли немодифіковані молекули зв'язуються з АБА5, вони утворюють імунні комплекси, та такі імунні комплекси потім могли б генерувати імунну відповідь. Крім того, введення модифікованих молекул, описаних в даному документі, або фармацевтичних композицій, що містять дані модифіковані молекули, також можуть призвести в результаті до покращеної ефективності та покращеного профілю безпеки та, наприклад, можуть бути переважно застосовані для повторного дозування пацієнтам, у кого могли бути виявлені аутоантитіла до немодифікованих молекул. До того ж, 4АЮБ молекули за винаходом є здатними до того, щоб бути введеними контингенту пацієнтів без необхідності проведення попереднього скринінгу щодо титрів АБА, щоб виявити суб'єктів ризику небажаної реакції. В контексті застосування молекул щодо попередження побічних ефектів, представлений винахід передбачає також застосування одиничного варіабельного домену імуноглобуліну, як визначено в даному документі, в якому Х заміщують на У, де М вибирають з групи, що складається з: тегу, такого як тег афінності, тус- тег, ЕГАсС-тег або Пів-тег, хімічної модифікації, такої як ПЕГ-група, або протеїну, такого як Ес частина антитіла.

Представлений винахід, крім того, передбачає спосіб попередження або зниження побічних ефектів в режимі лікування шляхом введення молекул за винаходом, або молекул за винаходом, в яких Х заміщений на У, як визначено вище. Крім того, передбаченим є спосіб

Зо модифікування молекули, як показано в даному документі, щоб зменшити її зв'язування з АЮА5 та зменшити побічні ефекти.

Винахід, крім того, передбачає композиції, які містять модифіковані молекули, як показано в даному документі, наприклад, композиції, що містять модифікований УНН, МН або Мі. Такі композиції можуть містити модифіковані молекули, присутні як злиття або кон'югат з іншими молекулами, наприклад, іншими протеїнами, молекулами антитіла або фрагментами антитіл.

Наприклад, ЗАБ може бути присутнім, як форматований ЯАр (наприклад, АБ може бути присутнім як аАБ-їс злиття або кон'югат, як описано в, наприклад, УМО 2008/149148) або він може бути присутнім як тАБадб (як описано в УМО 2009/068649) або аАБЬ є присутнім як злиття або кон'югат з протеїнами або поліпептидами з подовженим періодом напіввиведення, наприклад, наступний аАБ, наприклад, аАБ, який зв'язується з альбуміном сироватки (АІридАбБ М) або, наприклад, з поліетиленгліколем ПЕГ або додатковими терапевтичними або активними молекулами. В даному варіанті втілення терапевтичнай(ї) молекула(и), коли присутні як злиття або кон'югат з ЗАБ (наприклад, МНН, МН або МІ) можуть бути зв'язані з або С- термінальним подовженням ЯАБр або М-кінцем ЯАБ. В одному втіленні одна або більше терапевтичних молекул є присутніми як злиття (або кон'югат) на М-кінці АБ.

В одному втіленні, 4Аб5 за винаходом (та також молекули, що містять дАБе, такі як тАрадб»в, які також є частиною винаходу), які зменшують здатність зв'язувати АБА5 зв'язування з мішенним лігандом з високою афінністю, наприклад, вони можуть мати КД як виміряно за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, використовуючи Віасоге "М від приблизно 5

БО мікромолей до приблизно 1 пМ, наприклад від приблизно 500 нМ до приблизно 10 пМ, наприклад, приблизно 200 нМ до приблизно 10рм, наприклад 5ОнМ до приблизно 10 пМ, наприклад, приблизно 10 нМ до приблизно 10 пМ. У варіанті втілення молекула може мати КД від приблизно 10 нМ до приблизно 10-30 пМ, наприклад, вона можуть бути ТМЕКІ1 аАБ зі зниженим зв'язування з АБАФ5б, та та яка має КД приблизно 10-30 пМ, наприклад, приблизно 20

ПМ.

У варіанті втілення Абе за винаходом (та також молекули, які містять аАбр5, такі як тАрадб»в, які також є частиною винаходу), які мають знижену здатність щодо зв'язування АБАФ5, можуть мати рівні експресії, які становлять, щонайменше, З 95, наприклад, 5 95, 10 95, 20 Ор,

ЗО 9о, 40 90, 50 Уо, 60 9, 70 о, 80 90, 90 бо, 100 95 з тих що показані аАб такої самої або подібної 60 амінокислотної послідовності, які не є модифікованими, як показано в даному документі, що знижує зв'язування з АСА5. В наступному втіленні молекули за винаходом (наприклад ЯАБз5 та молекули, що містять ЯАБ5, такі як тАраАбз5), які мають знижену здатність щодо зв'язування

АБА»5, можуть мати рівні експресії, щонайменше, 0,1 г/літр.

У варіанті втілення ЧАБре за винаходом (та також молекули, які містять аАре, такі як тАБраАБ»5, які також є частиною винаходу), які мають знижену здатність щодо зв'язування АОАЗв, мають КД зв'язування з їх мішенним антигеном, яка є приблизно в 50 разів вищою (або більше) (тобто АБЗ: є в 50 разів менш сильним), наприклад, в приблизно 40 разів вищою, приблизно 30 разів вищою, приблизно 20 разів вищою, приблизно 10 разів вищою, приблизно 5 разів вищою, приблизно 4 разів вищою, ніж КД аАБ тієї самої або подібної амінокислотної послідовності, яка не є модифікованою, як показано в даному документі, що знижує зв'язування з АБАЗ5. У варіанті втілення дАбБ5 за винаходом (та також молекули, які містять ЯАбБв5, такі як тАрадбв», які також є частиною винаходу), які мають знижену здатність щодо зв'язування АЮАв5, мають КД з їх мішенним антигеном, яка є по суті такою ж (наприклад, від приблизно в 2 рази вищою до 2 рази нижчою) або більше, ніж в 2 рази нижчою, ніж КД аАБ тієї самої або подібної амінокислотної послідовності, яка не є модифікованою, як показано в даному документі, що знижує зв'язування з АОАв5.

Винахід, крім того, стосується застосування, формуляції, композицій, які містять такі С- термінально подовжені та/або модифіковані молекули, та також способів одержання та експресії даних молекул.

У варіанті втілення винахід передбачає ЯАБ (МН, Мі, або МНН), який має будь-яку з С- термінальних модифікацій, як описано вище, та який зв'язується з мішенню, що вибирають 3:

ТМЕа, ТМЕКІ, МЕСРЕ, 11-18, 1-68, 1-4, 11 -5, 1-13, 0С-5ІОМ, АБОРРЕ, альбуміну та ТОЕВК2.

В одному втіленні винахід передбачає дАБ, який є описаним або розкритим в будь-якому одному з: УМО 2007/049017 (наприклад, анти-ТМЕК1 аАбБ, що називається 2Н-131-511, або аАБ, який є, щонайменше, на 80 95 ідентичним до даного (наприклад, на 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 Фо, 99 95, 100 95 ідентичний), УМО 2008/149144 (наприклад, анти-ТМЕК1 аАБ, вибраний 3: 1п-131-201, 1п-131-202, 1п-131-203, 1п-131-204, 1п-131-205, або аАБ, який є, щонайменше на 80 95 ідентичним до даного (наприклад на 85 95, 90 95, 95 90, 96 о, 97 Зо, 98 бю, 99 Уо, 100 90 ідентичний) та М/О 2008/149148 (зміст яких є однозначно включеними в даний документ як посилання), наприклад будь-який один з анти-ТМЕКІ! адре, зазначених там; та де аАБ додатково містить, щонайменше, одну з модифікацій, описаних в даному документі, щоб зменшити афінність та/або авідність зв'язування з АБА5, наприклад, будь-яку одну з С- термінальних модифікацій, як описано вище, та/або будь-яке одне з амінокислотних заміщень та/або делецій, як описано вище.

В іншому втіленні винахід передбачає немодифікований АБ, який є описаним або розкритим в будь-якому одному з УМО 2007/049017, УМО 2008/149144 та УМО 2008/149148 (наприклад, будь-який один з Ар послідовностей, описаних вище), та де аАр потім модифікують, щоб включити одну або більше каркасних модифікацій, наприклад, вибраних з:

Р14А, Р14К, Р140, Р14Т РАЗА, І 108А, Т110А та 5112А каркасних мутацій, та які можуть також додатково необов'язково містити будь-яку з С-термінальних модифікацій, описаних в даному документі. В одному прикладі немодифікований Я4Ар може бути будь-якою однією з анти-

ТМЕАКТадь послідовностей, описаних або розкритих в будь-якому одному з УМО 2007/049017,

УМО 2008/149144 та УМО 2008/149148. У варіанті втілення немодифікована анти-ТМЕНІ ад послідовність може бути однією з тих, що є, щонайменше, на 80 95 (наприклад, на 85 95, 90 Об, 9596, 96 95, 97 90, 9895, 9995, 100 95) ідентичною до дАБ послідовності, визначеної як або рРОМ'І1п-131-206 (розкрита в МО 2008/149148), ОМ 1п-131-511 (розкрита в МО 2007/049017 та 2008/149144) та ПОМ 1п-131-202 (розкрита в МО 2008/149144).

В іншому втіленні винахід передбачає МЕСЕ АБ, який є описаним або розкритим в УМО 2008/149147, наприклад, ЯАБр, який називається 15-26-593 (амінокислотна послідовність показана на фігурі 5 УМО 2008/149147), (зміст яких є однозначно включеними в даний документ як посилання), та де АБ додатково містить будь-яку одну з модифікацій, описаних в даному документі, щоб зменшити афінність та/або авідність зв'язування з АСА5, наприклад, будь-яку одну з С-термінальних модифікацій, як описано вище, та/або будь-яке одне з амінокислотних заміщень та/або делецій, як описано вище.

Немодифіковані ЗАБ амінокислотні послідовності є наступними: (а) ром 1н-131-206 ЕМО ЕЗОСИЇ МОРОаСБІ ВІ БСААБОЕТЕАНЕТМУМ МАОАРОК

СГЕМУ5НІРРОСОЮОРЕМАОЗУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ М ОММ5І ВАЕОТАМУНСАГ РКАС РМ ЕЮОММУ вості МТУ55 (ЗЕО ІЮО МО 1)

(Б) БОМ 1Н-131-5Б611 ЕМО ЕЗОаСИаї МОРОСБІ ВІ ЗСААЗаЕєТеАНЕТМУМУУВОА РОКИ Е

МУЗНІРРУБООРЕМАОБУКОВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСАГІ РКВАРУЕВУМУСОС

ТІ МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО 2) (с) ОМ 1Н-131-202 ЕМО ЕЗОСИЇ МОРІ ВІ БСААБОЕТЕАНЕТМУМУУВОАРИКаї ЕМ/М

ЗНІРРОБООРЕМАОЗУКИОаВЕТІЗАОМЗКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСАЇ І РКВНАРМУ ЕОМ СОСТІ.

УТУ55 (ЗЕО ІО МО 3) (4) МНН клон 2(9):

ЕМОЇ МЕЗО МОРОИБІ ВІ БСААЗаЗМЕКІМИМАМ УВОАРИКаИвВЕЇ МАСТІ ЗУАОБУК

САЕТІЗАДНККМТІ М ОММ5ЗІ АРЕОТАМУУСАРІТТЕЗОУО СЕ МУСсОСТІ МУТУЗЗБОасС,аИаОСОВ

ЕМОЇ МЕЗО МОРОМ5БІ ВІ БСААЗИаЕЄТЕЗЗеИМОУУАОАРОаКаї ЕМ/УЗБІЗОЗОБЗОТІ МАОБУК

САЕТІЗАДНККТТІ МІ ОММ5І АРЕОТАУМУСТІССВІ 5НЗБОСТІ МТУ55 (ЗЕО ІЮ МО 4) (є) МНН клон 2(6):

ЕМО МЕЗОСИ,Ї МОРО,БІ ВІ БСААЗИаЕТЕБО УМ МУМУВОАРИЕаКаИГ ЕМ УЗЕІМТМапткмМРОБ

УКОавВЕТІЗАДНККМТІ М ОММЗІАРЕОТАУУУСАВЗРЗСаЕМАНИООССТІ УТУЗЗаас,азОСОЯВЕМОЇ М

ЕЗБОСОИЇ МОРОМБІ ВІ БСААБОаЕТЕЗ5ЕИМБЗУМАОАРаКаггєЕМммУз5ІЗОЗИБОТІ МАОБУКОВЕТІВ

АДНККТТІ МГОММ5ГАРЕОТАМУМСТІСЯВІ ЗАЗЗОСТІ УТУБЗОАсас5еТасаавзЕМОЇ МЕЗСаСсИОЇ МО

РааСБІ ВІ БХСААБСЕТЕЗОММУМУМУВОАРИаКаі ЕМУМУ5ЕЇМТМас ІткиРгрзУкКавеЕтІЗзАДНККМТІ МУ

ГОММ5І АВРЕОТАУУУСАВЗРОЗСЕМНООСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО 5) () УНН клон 2)

ЕМОЇ МЕЗО МОРОСБІ ВІ БСААЗаВТЕЗУМРМОа М ЕВОАРОКОаВЕЇ МААХІЗА ТС УУРОБ

МЕСВЕТІЗАДНККАМУМІ ОММ5І ВАЕОТАУУУСААДАСУВАЕРСИВУВТтІ РОЕУТЕУОС,ТОМ ГУБА

ААЕМОЇ МЕЗО МОРОСІБІ ВІ БСААЗИав ТЕЗ УМРМОУМ ЕВОАРОКОВЕЇ МААІЗА ТЗ УМУРОБ

МЕСВЕТІЗАДНККАМУМІ ОММ5І ВАЕОТАУУУСААДАСУВАЕРСИВУВТтІ РОЕУТЕУОСТОМ ТУ (ЗЕО ІЮ МО 6)

В іншому втіленні винахід передбачає модифікований УНН АБ, вибраний з наступних послідовностей: (а) МНН клон 2(4)-А:

ЕМОЇ МЕЗО МОРОИБІІ ВІ БСААЗаЗМЕКІМУИМАМ УВОАРИКаИвВЕЇ МАСТІ

УАрБУКОаВЕТІЗАДНККМТІ МІ ОММ5І АРЕОТАУУМСАРІТТЕЗОУО СВАУУСсОИ,ТІ УТУЗаЦСаСО засцазЕМОЇ МЕЗО МОРОМБ5І ВІ БСААБаєТтЕ55ЕаМЗУУВОАРаТКаі єЕМУЗЗІЗОаЗОИБОТІ У

АРБУКОВЕТІЗАДНККТТІ МІ ОММ5І АРЕОТАМУМСТІСИВІ БАЗБОСТІ МТУБА (ЗЕО І МО 7) (Б) МНН клон 2(е)хА:

ЕМОЇ МЕЗО, МОРОИБІ ВІ БСААЗИаЕТЕБО УМ МУМУВОАРОаКИГ ЕМ МУЗЕЇМТМ

СІТКУРОБМУМКОКЕТІЗАДНККМТ М ОММКРЕОТАМУУСАКЗРОСЕМКООСТІ МГ ГУЗ5ООСОО5О вавзЕМОЇ МЕЗИаСаї МОРОМБ5І ВІ БСААБаєТтЕ5ЗЕамМОУМАОАРОаКаі ЕМУЗЗІЗОаЗаБЗОТІ Ар

ЗМКОКЕТІЗАДНККТТІ МІ ОММ5І КРЕОТАМУУУСТІВСОВІ ЗКЗЗОСТІ МТУЗ5ОООООСОЗЕМОЇ М

ЕЗОСИІ МОРОСБІ ВІ БСААБИаєТтЕ5ОММ МУМ УВОА РОКИ иєммУ5ЕІМТМасй кУРєРОЗУКОаВЕТІЗ

ЕДНККМТС МГ ОММ5І КРЕОТАМУУСАКЗРЗОЕМКООСТІ МТМЗЗА (ЗЕО ІЮ МО 8) (с) МНН клон 2()кА

ЕМОЇ МЕЗО, МОРОСБІ ВІ БСААЗОаВТЕЗУМРМОаМ ЕВОАРОКОИВЕЇ МААХЛІЗА Та

СБТУУРОБМЕСКЕТІЗАЕДНККАМУМГ ОММІ КАЕОТАМУУСАААОУКАБЕОСКУКТІ РІЗЕУ ТЕМОЮ

ТОМТУ5ЗАААЕМОЇ МЕЗОСИЇ МОРИСІБІ ВІ БСААБавВтТЕЗУМРМОаУМ ЕВОАРОКОИ ВЕ МААІЗАТО

ТОМТУ55А (ЗЕО ІЮ МО 9)

В іншому втіленні винахід передбачає модифікований ООМ'І п-131-206 аАБ, який зв'язується з ТМЕК'І та який є вибраним з наступних амінокислотних послідовностей: (а) ООМ1Тр-131-206 аАЬ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці:

ЕМО ГЕЗСОСИЇ МОРОСБІ ВІ ЗСААЗИЕТЕАНЕТМУМУВОАРОКИаї ЕМУЗНІРРОСООРЕМАОВ

УКОавВЕТІЗАВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУНСАГ І РКВА РИ ЕОМ СОСТІ МТУЗЗА (ЗЕО ІО МО 16) (5) ОМ1п-131-206 адь з подовженням одиничного аланіну та Р14А каркасною мутацією:

ЕМО ГЕЗСОСИЇ МОАзСОИБІ ВІ ЗСААЗаЕТЕАНЕТМУМУУВОАРИаКИТг ЕМУУЗНІРРОСОЮРЕМАО5 60 УКОавВЕТІЗАВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУНСАГ І РКВА РИ ЕОМ СОСТІ МТУЗЗА

(ЗЕО ІЮ МО 17) (с) ООМІН-131-206 АБ з Р14А каркасною мутацією:

ЕМО ГЕЗСОСИЇ МОАзСОИБІ ВІ ЗСААЗаЕТЕАНЕТМУМУУВОАРИаКИТг ЕМУУЗНІРРОСОЮРЕМАО5

УКОавВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУНСАГ І РКВА РИ ЕОМ СОСТІ МТУ (ЗЕО ІЮ МО 18) (4) ООМ1Тр-131-206 аАЬ з А5ТКОа С-термінальним подовженням

ЕМО ГЕЗСОСИЇ МОРОСБІ ВІ ЗСААЗИЕТЕАНЕТМУМУУВОАРИаКИТїГ ЕМУУЗНІРРОСОЮРЕМАО5

УКОавВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУНСАГ І РКВА РИ ЕОМ СОСТІ МТУЗЗАЗТКа (ЗЕО ІЮ МО 19) (є) СОМ1й-131-206 аАБ з АБТКО С-термінальним подовженням та Р1і4А каркасною мутацією

УКОавВЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАУУНСАГ І РКВА РИ ЕОМ СОСТІ МТУЗЗАЗТКа (ЗЕО ІЮ МО 20)

Винахід, крім того, передбачає нуклеїнові кислоти, що кодують молекули, описані в даному документі, наприклад, нуклеїнові кислоти, що кодують анти-ТМЕК1! аАБр5, описаний вище. Крім того, передбаченими є клітини-господарі, наприклад, неембріональні клітини-господарі, наприклад, прокаріотичні або еукаріотичні клітини-господарі, такій як Е. соїї або дріжджові клітини-господарі або клітини ссавців, що містять дані нуклеїнові кислоти.

Винахід додатково передбачає ЯАБ, який має знижене зв'язування з АБА в сироватках людини (наприклад не зв'язується з вже існуючими АБВА в сироватках людини), та де епітоп на аАБ, з якими АБВА зв'язується, маскується (тобто епітоп більше не є доступним до зв'язування з

АБА як, наприклад, він є накритий або маскований іншою молекулою, таки чином попереджуючи зв'язування, або його стерична конформація є зміненою, таки чином попереджуючи зв'язування). Епітоп на ЧФАБ може бути маскований будь-якою з модифікацій, описаних в даному документі, щоб зменшити АБВА зв'язування, наприклад, додаванням хімічної структури до С-кінця ЗАВ або каркасними заміщеннями або делеціями, як показано в даному документі. хімічні структури, додані до С-кінця Я4АБ, можуть бути подовженням (наприклад, амінокислотним подовженням), або тегом, або він може бути хімічною модифікацією, такою як пегилюванням або амідуванням. Модифікація до С-кінця може бути, однією з тих, яка або безпосередньо, або опосередковано змінює конформацію епітопу на АБ, який зв'язується з

АБА»5, таким чином знижуючи здатність АБ зв'язуватися з АБАФ5.

Кваліфікованому фахівцю буде зрозуміло, що в результаті одержання молекули, як показано в даному документі, наприклад, ЗАБ, зокрема, що залежить від клітинної лінії, яку застосовують, та конкретної амінокислотної послідовності молекули, наприклад, ЯЗАБ, можуть відбуватися пост-трансляційні модифікації. Наприклад, це може включати розщеплення певних лідерних послідовностей, додавання різних цукрових Фрагментів в різні системи глікозилювання та фосфорилювання, деамідування, окиснення, скремблювання дисульфідного зв'язку, ізоперизацію, обрізання С-термінального лізину та циклізацію М-термінального глутаміну.

Представлений винахід охоплює застосування таких молекул, наприклад дАбБ»5, які піддавали, або представляли, одній або більше пост-трансляційним модифікаціям. Таким чином, ЯАБ за винаходом включає аАб, який піддавали пост-трансляційній модифікації, такій як описана далі: відомо, що глікозилювання антитіл в збережених положеннях в їх константних ділянках має сильний ефект на функцію антитіла, особливо на функціонування ефектору, дивись, наприклад,

Воуа еї а. (1996) Мої. Іттипої. 32: 1311-1318. Розглядаються варіанти глікозилювання антиген- зв'язуючих протеїнів за винахдом, в яких додають, заміщують, видаляють або модифікують один або більше вуглеводневий фрагмент. Введення аспарагін-Х-серин або аспарагін-Х-треонін мотиву створює потенційний сайт для ферментного приєднання вуглеводневих фрагментів та може, в наслідок цього, застосовуватись, щоб маніпулювати глікозилюванням антитіла. У Ка|и еї аї. (2001) Віоспетівігу 40: 8868-8876 термінальне сіалюювання ТМЕК-Ідо імуноадгезину підвищувалось через процес регалактозилювання та/або ресіалілювання, використовуючи бета- 1,4-галактозилтрансферазу та/або альфа, 2,3 сіалілтрансферазу. Вважається, що зростання термінального сіалілювання підвищує період напіввиведення імуноглобуліну. Антитіла, подібно до більшості глікопротеїнів, як правило, одержують як суміш глікоформ. Дана суміш, зокрема, є очевидною, коли антитіла одержують в еукаріотичних клітинах, а саме клітинах ссавців. Ряд способів розрблено для виробництва визначених глікоформ, дивись Папа еї аї. (2004) бсіепсе 303: 371: Зеагз єї аї. (2001) 5сієпсе 291: 2344; Маскег евї а!. (2002) Зсіепсе 298: 1790; Оаміз еї аї. (2002) Спет. Кем. 102: 579; Напо еї а). (2001) Асс. Спет. Кез 34: 727. Антитіла (наприклад, Ідс ізотипу, наприклад, ІДС1) як описано в даному документі можуть містити визначену кількість 60 (наприклад, 7 або менше, наприклад, 5 або менше, стільки як дві або одну) глікоформ;

Деамідування є ферментативною реакцією, в першу чергу, перетворення аспарагіну (М) в ізо- аспарагінову кислоту та аспарагінову кислоту (0) у співвідношенні приблизно 3:1. У значно меншому ступені, деамідування може відбуватися з глутаміновими залишками за подібним способом. Деамідування в СОК в результаті призводить до зміни в заряді молекули, але, як правило, в результаті не призводить ні до зміни в антигенному зв'язування, ні не впливає на

РК/РО; Окиснення може відбуватися під час одержання та зберігання (тобто в присутності окиснюючих умов) та в результаті призводить до ковалентної модифікації протеїну, викликаної або безпосередньо активними формами кисню, або опосередковано реакцією з вторинними побічними продуктами оксидативного стресу. Окиснення відбувається, в першу чергу, з метіоніновими залишками, але іноді можуть відбуватися в триптофані та вільних цистеїнових залишках; скремблювання дисульфідного зв'язку може відбуватися під час одержання таумов основного зберігання. За певних обставин, дисульфідні зв'язки можуть розриватися або утворюватися некоректно, одержуючі в результаті неспарені цистеїнові залишки (-5Н). Дані вільні (неспарені) сульфгідрили (-ЗН) можуть сприяти перемішуванню; Ізомеризація, як правило, відбувається під час одержання, очистки та зберігання (при кислих рН) та, зазвичай, відбувається, коли аспарагінова кислота перетворюється в ізо-аспарагінову кислоту за рахунок хімічного процесу; є підстави вважати, що М-термінальний глутамін у важкому ланцюгу та/або легкому ланцюгу утворює піроглутамат (росіш). Утворення більшості рОЇш відбувається в біореакторі одержання, але він може утворюватися неферментним шляхом, в залежності від рН та температури процесу та умов зберігання. Утворення рОіш розглядається як один з принципових шляхів розкладання для рекомбінантного тАб5; обрізання С-термінального лізину є ферментативною реакцією, яка каталізується карбоксипептидазами, та, зазвичай, спостерігається у рекомбінантних таАб5. Варіанти даного процесу включають видалення лізину з одного або обох важких ланцюгів. Очевидно, що обрізання лізину не впливає на біоактивність та не впливає на функцію тАБб ефектору.

Винахід, крім того, передбачає спосіб продукування молекули за представленим винаходом, що містить амінокислотне подовження, присутнє як безпосереднє злиття, де спосіб включає збереження клітини-господаря, такої як та, що описана вище, що містить рекомбінантну нуклеїнову кислоту та/або конструкт, що кодує злиття за винаходом за умов прийнятних до

Зо експресії зазначеної рекомбінантної нуклеїнової кислоти, за яким одержують злиття.

Винахід, крім того, передбачає фармацевтичні композиції, що містять модифіковані молекули за винаходом. Винахід, крім того, передбачає фармацевтичну композицію за винаходом для застосування в медицині, наприклад, для застосування в лікуванні або попередженні, наприклад, захворювання, або стану, або розладу, та яке включає введення зазначеному індивідууму терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції за винаходом. Як правило, молекули за винаходом будуть застосовувати в очищеній формі разом з фармакологічно або фізіологічно прийнятними носіями. Зазвичай, дані носії можуть включати водні або спиртово/водні розчини, емульсії або суспензії, будь-які, включаючі сольові та/або буферні середовища. Парентеральні носії можуть включати розчин хлориду натрію, декстрозу

Рінгера, декстрозу та хлорид натрію, та лактатний розчин Рінгера. Відповідні фізіологічно прийнятні ад'юванти, які, якщо необхідно, утримують поліпептидний комплекс в суспензії, можуть вибирати з загущувачів, такіх як карбоксиметилцелюлоза, полі вінілпіролідон, желатин та альгінати. Внутрішньовенні носії включають рідину та поживні добавки та електролітні наповнювачі, такі як ті, що грунтуються на декстрозі Рінгера. Консерванти та добавки, такі як протимікробні речовини, антиоксиданти, хелатуючі агенти та інертні гази, також можуть бути присутніми (Маск (1982) Кетіпдіоп'є Рпаптасешіса! Зсіепсе5, 161п Еайоп). Ряд прийнятних препаратів можуть застосовувати, включаючи препарати з подовженим вивільненням.

Винахід, крім того, передбачає спосіб лікування (терапевтично або профілактично) пацієнта або суб'єкта, який має захворювання або розлад, такий як той, що описаний в даному документі, та який включає введення зазначеному індивідууму терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції за винаходом.

Фармацевтичні композиції за винаходом можуть вводити самостійно або в комбінації з іншими молекулами або фрагментами, наприклад, поліпептидами, терапевтичними протеїнами та/або молекулами (наприклад, іншими протеїнами (включаючи антитіла), пептидами або лікарськими засобами з малою молекулою.

Винахід, крім того, передбачає фармацевтичні композиції за винаходом, що містять анти-

ТМЕВІ МН або Мі адрзх, модифіковані як показано в даному документі, наприклад, ті анти-

ТМЕВІ МН або МІ аАБр5, які описані в даному документі, або домени анти-ТМЕВІ МНН, модифіковані як показано в даному документі, для застосування в лікуванні запальних 60 захворювань або розладів, наприклад, псоріазу, артриту, розсіяного склерозу, запального захворювання кишечника, наприклад, захворювання Крона та неспецифічного виразкового коліту; або, наприклад, респіраторного або пульмонального захворювання або розлади, наприклад, вибраного з: хронічного обструктивного захворювання легень, хронічного бронхіту, хронічного обструктивного бронхіту та емфіземи, запалення легень, хронічного обструктивного захворювання легень, астми, пневмонії, гіперчутливого пневмоніту, інфільтрату легень, що супроводжується еозинофілією, захворювання легень, зумовленого умовами навколишнього середовища, пневмонії, бронхоектазу, фіброзно-кістозної дегенерації, інтерстиціального захворювання легень, первинної легеневої гіпертензії, легеневої тромбоемболії, розладів плеври, розладів середостіння, розладів діафрагми, гіповентиляції, гіпервентиляції, апное сну, синдрому гострої дихальної недостатності, мезотеліоми, саркоми, відторгнення трансплантата, реакції "трансплантат проти господаря", раку легень, алергічного риніту, алергії, асбестозу, аспергіломи, аспергільозу, бронхоектазу, хронічного бронхіту, емфіземи, еозинофільної пневмонії, ідіопатичного легеневого фіброзу, інвазивного пневмококового захворювання, грипу, нетуберкульозної мікобактерії, ексудативного плевриту, пневмоконіозу, пневмоцитозу, пневмонії, актиномікозу легень, легеневого альвеолярного протеїнозу, легеневої форми сибірської виразки, набряку легень, легеневої емболії, запалення легень, легеневого гістіоцитозу Х, легеневої гіпертензії легеневого норкадіозу, сухот легень, легеневого оклюзійного захворювання вен, ревматоїдного захворювання легень, саркоїдозу та гранулометозу Вегенера та гострого пошкодження легень (АГ), та також синдрому гострої дихальної недостатності (АВО5), та їх ускладнень, таких як гостра ниркова недостатність.

Винахід, крім того, передбачає застосування фармацевтичної композиції за винаходом, що містить анти-ТМЕКТ адбрз (МН, Мі. або УНН), модифікований як показано в даному документі, у виробництві лікарського засобу для лікування будь-яких конкретних захворювань або розладів, описаних вище.

Винахід, крім того, стосується застосування будь-якої з композицій, описаних в даному документі для застосування в терапії, діагностиці або профілактиці будь-якого із запальних захворювань, або розладів, або респіраторних або пульмональних захворювань або розладів, як описано вище. Винахід, крім того, стосується профілактичного застосування будь-якої з композицій, описаних в даному документі, що попереджують або полегшують будь-яке із

Зо запальних захворювань або розладів, або респіраторних або пульмональних захворювань або розладів, описаних вище.

Композиції, що містять анти-ТМЕКІ1 адбз5, як показано в даному документі, наприклад, ООМ 1Н-131-206 з С-термінальним аланіновим подовженням, можуть вводити для профілактичного та/або терапевтичного лікування та вводять як "терапевтично-ефективну дозу". Кількості необхідні для досягнення даного дозування будуть залежати від важкості захворювання та загального стану власної імунної сиситеми пацієнта, але загалом діапазон становить від 0,005 до 5,0 мг дАБ на кілограм маси, з дозами від 0,05 до 2,0 мг/кг/дозу, яку застосовують більш загально. Для профілактичних застосувань, подібні або дещо нижчі дозування, що попереджують, інгібують або призупиняють початок захворювання (наприклад, для підтримання ремісії або неактивності або щоб попередити активну фазу), можуть застосовувати.

Кваліфікований клініцист буде здатний визначити відповідний інтервал дозування для лікування, пригнічення або попередження захворювання. Коли вводять анти- ТМЕР1 адАБ, як показано в даному документі, для лікування, пригнічення або попередження хронічного запального захворювання, то його можуть вводити аж до чотирьох разів на день, двічі на тиждень, один раз на тиждень, один раз кожні два тижні, один раз на місяць або один раз кожні два місяці, в дозуванні, наприклад, від приблизно 10 мкг/кг до приблизно 80 мг/кг, від приблизно 100 мкг/кг до приблизно 80 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 80 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 70 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 60 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 50 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 40 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до

БО приблизно 30 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 20 мг/кг, від приблизно 1 мг/кг до приблизно 10 мг/кг, від приблизно 10 мкг/кг до приблизно 10 мг/кг, від приблизно 10 мкг/кг до приблизно 5 мг/кг, від приблизно 10 мкг/кг до приблизно 2,5 мг/кг, приблизно 1 мг/кг, приблизно 2 мг/кг, приблизно З мг/кг, приблизно 4 мг/кг, приблизно 5 мг/кг, приблизно 6 мг/кг, приблизно 7 мг/кг, приблизно 8 мг/кг, приблизно 9 мг/кг або приблизно 10 мг/кг. В конкретних втіленнях, анти-

ТМЕКІ аАБ можуть вводити для лікування, пригнічення або попередження хронічного запального захворювання один раз кожні два тижні або один раз на місяць в дозі від приблизно 10 мкг/кг до приблизно 10 мг/кг (наприклад, приблизно 10 мкг/кг, приблизно 100 мкг/кг, приблизно 1 мг/кг, приблизно 2 мг/кг, приблизно З мг/кг, приблизно 4 мг/кг, приблизно 5 мг/кг, приблизно 6 мг/кг, приблизно 7 мг/кг, приблизно 8 мг/кг, приблизно 9 мг/кг або приблизно 10 бо мг/кг.)

Лікування або терапію, яку проводять, використовуючи композиції описані в даному документі, вважають "ефективним", якщо один або більше симптомів або ознак знижується або полегшується (наприклад, на, щонайменше, 10 95 або, щонайменше, на одну точку по клінічній шкалі оцінці стану), в порівнянні з такими симптомами, присутніми до лікування, або в порівнянні з такими симптомами у індивідуума (людини або модельної тварини), якого не лікували такою композицією, або іншим прийнятним контролем. Симптоми будуть безумовно варіювати в залежності від точної природи цільового захворювання або розладу, але можуть визначатися звичайним кваліфікованим клініцистом або техніком.

Подібним чином, профілактика, яку проводять, використовуючи композицію, як показано в даному документі, є "ефективною", якщо початок або важкість одного або більше симптомів або ознак затримується, знижується або ліквідується по відношенню до таких симптомів у подібного індивідуума (людини або модельної тварини), якого не лікували такою композицією.

Молекули за винаходом можуть додатково форматувати, щоб мати більший гідродинамічний розмір, щоб, крім того, подовжити період напіввиведення, наприклад, шляхом приєднання ПЕГ групи, альбуміну сироватки, трансферин, рецептору трансферину або, щонайменше, його трансферин-зв'язуючої частини, Ес ділянки антитіла, або шляхом кон'югації з доменом антитіла. Наприклад, дАБ, який зв'язує альбумін сироватки, може бути форматований як більший антиген-зв'язуючий фрагмент антитіла (наприклад, форматований як Раб, Раб",

Каб)», К(аб")», а, всім).

В певних втіленнях, винахід передбачає композицію відповідно до винаходу, яка містить подвійно-специфічний ліганд або мульти-специфічний ліганд, що містить перший АБ, який є модифікованим відповідно до винаходу, наприклад, шляхом С-термінального подовження та/лабо шляхом РІ4А каркасної мутації, та другий АБ, який має таку саму або відмінну специфічність зв'язування з першим ЯАБ та, необов'язково, у випадку мульти-специфічних лігандів, додаткові дДАб5. Другий АБ (або додаткові Абе») можуть, необов'язково, зв'язувати різні мішені та можуть, необов'язково, крім того, містити С-термінальне подовження та/або Р1І4А каркасну мутацію відповідно до винаходу.

В одному аспекті, винахід передбачає молекули та композиції за винаходдом для доставки шляхом парентерального введення, наприклад, шляхом підшкірної, внутрішньом'язової або внутрішньовенної ін'єкції; інгаляційної назальної доставки, трансмукозальної доставки, пероральної доставки, доставки до шлунково-кишкового тракту пацієнта, ректальної доставки або очної доставки. В одному аспекті, винахід передбачає застосування молекул та композицій за винаходом у виробництві лікарського засобу для доставки шляхом підшкірної ін'єкції, інгаляційної, внутрішньовенної доставки, назальної доставки, трансмукозальної доставки, пероральної доставки, доставки до шлунково-кишкового тракту пацієнта, ректальної доставки, трансдермальної або очної доставки.

В одному аспекті, винахід передбачає спосіб доставки пацієнту шляхом підшкірної ін'єкції, пульмональної доставки, внутрішньовенної доставки, назальної доставки, трансмукозальної доставки, пероральної доставки, доставки до шлунково-кишкового тракту пацієнта, ректальної або очної доставки, де спосіб включає введення пацієнту фармацевтично ефективної кількості молекули за винаходом.

В одному аспекті, винахід передбачає пероральний, ін'єкційний, інгаляційний, небулізований препарат, що містить молекулу за винаходом.

Препарат може бути в формі таблетки, драже, капсули, рідини або сиропу.

Термін "суб'єкт" або "індивідуум", як визначається в даному документі, включає тварини, такі як ссавці, включаючи, але не обмежуються цим, примати (наприклад, люди), корови, вівці, кози, коні, собаки, коти, кролики, морські свинки, щури, миші або інші жуйні тварини, овечі, кінські, собачі, котячі види, гризуни або мишині види.

Винахід, крім того, передбачає набір для застосування у введенні молекул та композицій відповідно до винаходу суб'єкту (наприклад, пацієнту людині), який включає молекулу або композицію за винаходом, пристрій для доставки лікарського засобу та, необов'язково, інструкцій для застосування. Композиція можуть бути передбаченими як препарат, такій як ліофілізований препарат або препарат уповільненого вивільнення. В певних втіленнях, пристрій для доставки лікарського засобу вибирають з групи, що складається з шприцю, інгалятору, пристрою для інтраназального або очного введення (наприклад, насадка для дрібнокрапельного введення, очна або назальна піпетка), та пристрій для безголкової ін'єкції.

Молекули та композиції за даним винаходом можуть бути ліофілізованим для зберігання та відновлення прийнятним носієм перед застосуванням. Будь-який прийнятний спосіб ліофілізації (наприклад, висушування при розпиленні, висушування осаду) та/"або методики відновлення бо можуть бути застосовані. Кваліфікованому фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що ліофілізація та відновлення може призвести до різного ступеню втрати активності антитіла, та що застосування рівнів може бути скорегованим для компенсації. В конкретному втіленні, винахід передбачає композицію, що містить ліофілізовану (висушену при заморозці) композицію, як показано в даному документі. Переважно, ліофілізована (висушена при заморозці) композиція втрачає не більше, ніж приблизно 20 95, або не більше, ніж приблизно 25 95, або не більше, ніж приблизно 30 95, або не більше, ніж приблизно 35 95, або не більше, ніж приблизно 40 95, або не більше, ніж приблизно 45 95, або не більше, ніж приблизно 50 95 її активності (наприклад, активності зв'язування альбуміну сироватки) при розбавленні. Активність - це кількість композиції, необхідна для отримання ефекту композиції перед тим як вона була ліофілізованою. Активність композиції можуть визначати, використовуючи будь-який прийнятний спосіб перед ліофілізацією, та активність можуть визначати, використовуючи той самий спосіб після розбавлення, щоб визначити кількість втраченої активності.

Винахід, крім того, передбачає препарати з подовженим або уповільненим вивільненням, які містять молекули за винаходом, такі препарати з подовженим вивільненням можуть містити молекули за винаходом в комбінації з, наприклад, гіалуроновою кислотою, мікросферами або ліпосомами та іншими фармацевтично або фармакологічно прийнятними носіями, наповнювачами та/або розріджувачами.

В одному аспекті, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить молекулу за винаходом, та фармацевтично або фізіологічно прийнятним носієм, наповнювачем або розріджувачем.

В одному втіленні винахід передбачає модифіковані ТМЕКІ аАБр5 за представленим винаходом, які мають знижене зв'язування з АБА5, наприклад, такі як модифікований ООЮМ'І1Н- 131-206 дАБ з модифікацією, як показано в даному документі, що знижує зв'язування з АБАЗ5.

Наприклад, винахід передбачає ВОМ -131-206 дАБ з подовженням одиничного аланіну на С- кінці (ЗЕО ІЮ МО 16), наприклад, як фармацевтичну композицію, наприклад, для застосування в лікуванні захворювання або розладу, наприклад, в лікуванні респіраторного захворювання або розладу, такого як ХОЗЛ, АГІ або АКО5. БОМ1п-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІЮ МО 16) (або фармацевтична композиція, що містить ФОМ1п-131-206 аАБЬ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці), для застосування в лікуванні респіраторного

Ко) захворювання або розладу, такого як ХОЗЛ, АГ або АКО5, можуть вводити суб'єкту, наприклад, суб'єкту-/людині, шляхом ін'єкції (наприклад, шляхом підшкірної, внутрішньовенної або внутрішньом'язової ін'єкції), або її, альтернативно, можуть давати суб'єкту, наприклад, суб'єкту- людині, шляхом пульмональної введення, наприклад, шляхом розпилення, використовуючи стандартний небулайзер, або шляхом інгаляції, наприклад, використовуючи стандартний інгаляційний пристрій. Винахід, крім того, передбачає препарати подовженого вивільнення та/або висушені при заморозці, що містять модифіковані ТМЕКІ адре за представленим винаходом зі зниженим АБА зв'язування, такі як ВОМ1п-131-206 ДАЮ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (5ЕО ІО МО 16). Крім того, передбаченим є пристрій для доставки, наприклад, пристрій інгалятор або небулайзер, який містить модифіковані ТМЕК1 аАБ5 за представленим винаходом, такі як БОМ1п-131-206 АБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці нуклеїнової кислоти (5ЕО ІЮ МО 22).

В аспекті винахід передбачає немодифікований ООМ1п-131-206 АБ (ЗЕБЕО ІЮ МО 1) або рОМ'1р-131-206 АБ модифікований за будь-яким зі способів, описаних в даному документі, щоб зменшити АБА зв'язування, наприклад, ООМ1п-131-206 дАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (5ЕО ІЮ МО 16), для лікування запального шкірного розладу, наприклад, псоріазу, та, крім того, передбаченим є будь-який один з режимів дозування, як описано нижче, для застосування доменного антитіла в лікуванні псоріазу. Доменне антитіло корисне для лікування псоріазу селективно діє той самий домен ТМЕКІ людини, як природній ТМЕ-альфа ліганд людини для даного рецептору, та є специфічним, конкуруючим антагоністом ТМЕК'І, але не ТМЕК2, та попереджує зв'язування ТМЕ-альфа з ТМЕК'І, та активацію сигнального шляху даного ліганду через ТМЕК1. Таке доменне антитіло може містити будь-який анти-ТМЕНІ1 алАб, який є модифікованим так, що знижує зв'язування з АБА5 як розкрито в даному документі.

Зокрема, доменне антитіло може бути доменним антитілом людини, таким як ФбОМ1п-131-206, що містить амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 1, ООМ1п-131-206 з С- термінальним аланіном, що має амінокислотні послідовності, показані в 5ЕО ІЮ МО: 16, або рОМ1рп-131-206 аАБ (5ЕО ІО МО 1), які потім був модифікованим, щоб зменшити АБА зв'язування, як показано в даному документі (тобто будь-яка модифікація, що знижує зв'язування з АБА5), як розкрито в даному документі. Доменне антитіло може передбачатись в флаконі, що містить, наприклад, 100 мг або, наприклад, 40 мг ліофілізату доменного антитіла. бо Ліофілізат може містити цукрозу, гліцин, дигідрогенфосфат натрію та полісорбат 80. Даний ліофілізат доменного антитіла може бути спочатку відновлена в 5 мл стерильної води та потім розбавлена стерильною водою, або іншими фармацевтично прийнятними розріджувачами, щоб зробити фармацевтичні композиції, які містять 20 мг/мл, 5 мг/мл та 1 мг/мл доменного антитіла.

Доменне антитіло можуть застосовувати в лікуванні пацієнтів-людей, яких ідентифіковано як таких, що мають псоріаз. Зокрема, доменне антитіло можуть застосовувати в лікуванні пацієнтів- людей, яких ідентифіковано як таких, що мають хронічний легкий, помірний або важкий, стабільний псоріаз плямистого типу з однією або двома ділянками пліми. Відповідно до

Майопаї Рзогіазіз Еоипаайоп, легкий плямистий тип псоріазу вражає менше, ніж З 96 площі поверхні тіла пацієнта людини, помірний плямистий тип псоріазу вражає від З 95 до 10 95 площі поверхні тіла пацієнта людини, та важкий псоріаз вражає більше, ніж 10 відсотків площі поверхні тіла пацієнта людини. Дивись, наприклад, Кгаїдасіс, 6 (5) З!ирріетепі 6, Віотесппоіоду

Неаксаге, Оесетбег 2009 та Майопаї Рзогіазі5 Еоипаайоп, Ароцї Рзогіавів: гаісііс5. Як точка відліку, бляшка пацієнта людини повинна була б займати приблизно 1 95 від площі поверхні тіла пацієнта. Важкість псоріазу, крім того, можуть визначати, як альтернативну, відповідно до площі псоріазу та індексу важкості за рахунок застосування системи оцінювання, описаної

Фредріксоном (Егеагікзоп), яка грунтується на чотирьох критеріях: почервоніння, потовщення, лускатість та кількість ураження площі поверхні. Дивись, наприклад, РЕгеайгіск5оп, 157

Оептайіодіса 238 (1978). Псоріатичні плями, які лікуватимуть, можуть мати порівнянну товщину інфільтрату, щонайменше, 200 мкм, як оцінено за допомогою ультразвукових вимірювань, коли доменне антітіло вводять вперше. Пацієнти-люди можуть бути суб'єктами чоловічої або жіночої статі, що мають хронічний псоріаз плямистого типу зі стабільною(ими) бляшкою(ами) на верхніх кінцівках, стегнах або тулубі. Дані пацієнти-люди можуть бути віком від пріблізно 18 до пріблізно 70 років. Пацієнти-люди, крім того, може бути віком від 14 до 26 років, а також 14 років або старші. доменне антитіло можуть вводити даним пацієнтам-людям шляхом ін'єкції в псоріатичну пляму. Зокрема, 100 мкл фармацевтичної композиції, що містить 20 мг/мл, 5 мг/мл або 1 мг/мл доменного антитіла можуть вводити шляхом ін'єкції в псоріатичну пляму в глубину, мішенню якої є епідерміс та поверхневі шари дерми в плямі.

Доменне антитіло можуть вводити пацієнту-людині з псоріатичною плямою відповідно до

Зо протоколу лікування, за яким 100 мкл фармацевтичної композиції, що містить 5 мг/мл доменного антитіла, ін'єкційно вводять в псоріатичну пляму один раз на тиждень протягом 28 денного періоду лікування. За таким протоколом лікування пацієнту будуть вводити фармацевтичну композицію чотири рази та пацієнт буде одержувати 0,5 мг доменного антитіла під час кожного введення, таким чином, що загальна доза 2 мг доменного антитіла отримується протягом 28 денного періоду лікування. Це означає, наприклад, що за протоколом лікування протягом 28 днів пацієнт повинен отримати перші 100 мкл ін'єкції, що містить 0,5 мг доменного антитіла, в перший день, другу таку ін'єє-цію на восьмий день, третю таку ін'єкцію на п'ятнадцятий день, та четверту таку ін'єкцію на двадцять другий день. Дози доменного антитіла (наприклад, 100 мкл ін'єкції, що містить 0,5 мг доменного антитіла) в даному протоколі лікування вводять в мг на пацієнта.

Доменне антитіло також можуть вводити пацієнту-людині з псоріатичною плямою відповідно до протоколу лікування, за яким 100 мкл фармацевтичної композиції, що містить 20 мг/мл доменного антитіла, ін'єкційно вводять в псоріатичну пляму один раз на тиждень протягом 28 денного періоду лікування. За таким протоколом лікування пацієнту будуть вводити фармацевтичну композицію чотири рази та пацієнт буде одержувати 2 мг доменного антитіла під час кожного введення, таким чином, що загальна доза 8 мг доменного антитіла отримується протягом 28 денного періоду лікування. Це означає, наприклад, що за протоколом лікування протягом 28 днів пацієнт повинен отримати перші 100 мкл ін'єкції, що містить 2 мг доменного антитіла, в перший день, другу таку ін'єє-цію на восьмий день, третю таку ін'єкцію на п'ятнадцятий день, та четверту таку ін'єкцію на двадцять другий день. Дози доменного антитіла (наприклад, 100 мкл ін'єкції, що містить 2 мг доменного антитіла) в даному протоколі лікування вводять в мг на пацієнта.

Доменне антитіло також можуть вводити пацієнту-людині з псоріатичною плямою відповідно до протоколу лікування, за яким 100 мкл фармацевтичної композиції, що містить 5 мг/мл доменного антитіла, ін'єкційно вводять в псоріатичну пляму два рази на тиждень протягом 28 денного періоду лікування. За таким протоколом лікування пацієнту будуть вводити фармацевтичну композицію вісім разів та пацієнт буде одержувати 0,5 мг доменного антитіла під час кожного введення, таким чином, що загальна доза 4 мг доменного антитіла отримується протягом 28 денного періоду лікування. Це означає, наприклад, що за протоколом лікування бо протягом 28 днів пацієнт повинен отримати перші 100 мкл ін'єкції, що містить 0,5 мг доменного антитіла, в перший день, другу таку ін'єкцію на четвертий день, третю таку ін'єкцію на восьмий день, та четверту таку ін'єкцію на одиннадцятий день, п'яту таку ін'єкцію на п'ятнадцятий день, шосту таку ін'єкцію на вісімнадцятий день, сьому таку ін'єкцію на двадцять другий день та восьму таку ін'єкцію на двадцять п'ятий день. Дози доменного антитіла (наприклад, 100 мкл ін'єкції, що містить 0,5 мг доменного антитіла) в даному протоколі лікування вводять в мг на пацієнта.

Доменне антитіло також можуть вводити пацієнту-людині з псоріатичною плямою відповідно до протоколу лікування, за яким 100 мкл фармацевтичної композиції, що містить 1 мг/мл доменного антитіла, ін'єкційно вводять в псоріатичну пляму два рази на тиждень протягом 28 денного періоду лікування. За таким протоколом лікування пацієнту будуть вводити фармацевтичну композицію чотири рази та пацієнт буде одержувати 0,1 мг доменного антитіла під час кожного введення, таким чином, що загальна доза 0,4 мг доменного антитіла отримується протягом 28 денного періоду лікування. Це означає, наприклад, що за протоколом лікування протягом 28 днів пацієнт повинен отримати перші 100 мкл ін'єкції, що містить 0,1 мг доменного антитіла, в перший день, другу таку ін'єкцію на восьмий день, третю таку ін'єкцію на п'ятнадцятий день, та четверту таку ін'єкцію на двадцять другий день. Дози доменного антитіла (наприклад, 100 мкл ін'єкції, що містить 0,1 мг доменного антитіла) в даному протоколі лікування вводять в мг на пацієнта.

МО 2008/149148 описує способи випробування, виділення та одержання немодифікованого рОМ'1п-131-206 аАБр, та такі способи є прийнятними для модифікованого ТМЕКІ аАБз5 за представленим винаходом зі зниженим зв'язуванням з АСА5, наприклад, з ООМ1п-131-206 ЯАБ з подовженням одиничного аланіну на С-кінці (ЗЕО ІО МО 16), та дане розкриття (включаючи способи випробування, виділення та одержання) є включеними в даний документ.

В додаткових втіленнях 1-36, представлених нижче, винахід, крім того, передбачає: 1. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (4АБ) (наприклад МН, МІ або МНН), наприклад, який зв'язується з мішенню, який містить одну або більше модифікацій, вибраних з: (а) С-термінального додавання, подовження або тегу (Б) одного або більше заміщень в амінокислотному каркасі, де, щонайменше, одне заміщення є заміщенням, вибраним з: Р14А заміщення, РАТА заміщення та І 1084А заміщення;

Зо та які зменшували зв'язування зі вже існуючими АБА5 в порівнянні з немодифікованим одиничним варіабельним доменом імуноглобуліну (аАб). 2. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ) відповідно до 1, зазначеного вище, де згаданий ЯАБ вибирають з людського УН, або МІ. аАБ, або МНН верблюда. 3. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до 1 або 2, який містить

С-термінальне подовження, щонайменше, однієї амінокислоти. 4. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до 3, де зазначене С- термінальне подовження включає амінокислотне подовження від однієї амінокислоти до приблизно 6 амінокислот. 5. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до З або 4, де зазначене

С-термінальне подовження містить амінокислоту, яка є аланіном. 6. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до 5, де зазначене С- термінальне подовження складається з одиничної амінокислоти, яка є аланіном. 7. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (4АБ) відповідно до пункту 5, де зазначене С-термінальне подовження включає амінокислотне подовження вибране з: (а) АБ, (Б)

АБЗТ (с) АЗТК, (4) А5ТКО або (є) АБТКОР. 8. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до будь-якого з 1-2, де С- кінець має тег, вибраний з: тегу афінності, тус-тегу, ЕГАсС-тегу, Пі5-тегів, хімічної модифікації, такої як ПЕГ, або протеїнових доменів, таких як Ес домен антитіла. 9. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до б, де зазначений ЗАБ є МН АБ, та який додатково містить Р14А каркасне заміщення. 10. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до 7, де зазначений дАБ є МН АБ, та який додатково містить Р14А каркасне заміщення. 11. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (4АБ) відповідно до будь-якого з попередніх пунктів, який зв'язується з мішенню, де зазначений вибирають з: ТМЕа, ТМЕКІ,

МЕРЕ, -18, 1-6, ПІ -4, 1-5, 11-13, ОС-5ІСМ, АЗОРЕ, альбуміну, ТОЕВК2. 12. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (дАБ) відповідно до 11, який вибирають з наступних амінокислотних послідовностей, визначених як: (а) БОМ1п-131-206 аАр з подовженням одиничного аланіну (ЗЕО І МО 16), (5 ОМ1рп-131-206 аАБ з подовженням одиничного аланіну та Р1І4А каркасною мутацією (5ЕО ІЮ МО 17), (су ООМ10П-131-206 АБ з 60 Р14А каркасною мутацією (ЗЕО ІЮ МО 18), (4) ФОМІ1р-131-206 АБ з А5ТКО С термінальним подовженням (5ЕО ІЮ МО 19), (е з) ООМ1п-131-206 АБ з А5ТКО С термінальним подовженням та Р14А каркасною мутацією (5ЕО ІЮ МО 20). 13. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до 11 або 12, де мішень є ТМЕКТ, та немодифікований ЯАБ вибирають з амінокислотної послідовності, яка є на 100 95, 95 Фо, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до амінокислоти, визначеної як: ОМ п-131-206 (ЗЕО І

МО 1), ОМ 1п-131-511 (5ЕО ІЮ МО 2), ОМ 1п-131-202 (5ЕО ІО МО 3). 14. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (4АБ) відповідно до будь-якого з попередніх пунктів, де аАБ є присутнім, як злиття або кон'югат з додатковою молекулою. 15. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до 14, де АБ є присутнім як злиття або кон'югат з однією або більше додатковими молекулами, вибраними з: додаткового АБ, протеїну або поліпептиду, або його фрагменту, наприклад, що подовжує період напіввиведення, або, крім того, є терапевтичною або активною молекулою, ПЕГ молекулою, антитілом або його фрагментом, наприклад, Ес ділянкою. 16. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (4АБ) відповідно до 15, де аАБ є присутнім, як тАБадр молекула. 17. Фармацевтична композиція, яка містить одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ) відповідно до будь-якого з попередніх пунктів в комбінації з фармацевтично або фізіологічно прийнятним носієм, наповнювачем або розріджувачем. 18. Фармацевтична композиція відповідно до 17, яка додатково містить терапевтичні або активні агенти. 19. Фармацевтична композиція відповідно до 17 або 18, яка містить анти-ТМЕВ1 ад. 20. Фармацевтична композиція відповідно до 19, яка містить анти-ТМЕК!1 адб відповідно до будь-якого одного з 12-13. 21. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ) відповідно до будь-якого з пунктів 1-16 або композиція відповідно до будь-якого з 17-20, для застосування в медицині. 22. Спосіб лікування або попередження, щонайменше, одного захворювання, або розладу, або стану, вибраного із запального захворювання або розладу, або респіраторного або пульмонального захворювання або розладу шляхом введення суб'єкту терапевтично або профілактично ефективної кількості композиції відповідно до будь-якого одного з 19-20, або дАБ відповідно до 11-13. 23. Спосіб за пунктом 22, де зазначене, щонайменше, одне захворювання, або розлад, або стан вибирають з: псоріазу, артриту, розсіяного склерозу, запального захворювання кишечника, наприклад, захворювання Крона та неспецифічного виразкового коліту; або, наприклад, респіраторного або пульмонального захворювання або розладу, наприклад, вибраного з: хронічного обструктивного захворювання легень, хронічного бронхіту, хронічного обструктивного бронхіту та емфіземи, запалення легень, хронічного обструктивного захворювання легень, астми, пневмонії, гіперчутливого пневмоніту, інфільтрату легень, що супроводжується еозинофілією, захворювання легень, зумовленого умовами навколишнього середовища, пневмонії, бронхоектазу, фіброзно-кістозної дегенерації, інтерстиціального захворювання легень, первинної легеневої гіпертензії, легеневої тромбоемболії, розладів плеври, розладів середостіння, розладів діафрагми, гіповентиляції, гіпервентиляції, апное сну, синдрому гострої дихальної недостатності, мезотеліоми, саркоми, відторгнення трансплантата, реакції "трансплантат проти господаря", раку легень, алергічного риніту, алергії, асбестозу, аспергіломи, аспергільозу, бронхоектазу, хронічного бронхіту, емфіземи, еозинофільної пневмонії, ідіопатичного легеневого фіброзу, інвазивного пневмококового захворювання, грипу, нетуберкульозної мікобактерії, ексудативного плевриту, пневмоконіозу, пневмоцитозу, пневмонії, актиномікозу легень, легеневого альвеолярного протеїнозу, легеневої форми сибірської виразки, набряку легень, легеневої емболії, запалення легень, легеневого гістіоцитозу Х, легеневої гіпертензії, легеневого норкадіозу, сухот легень, легеневого оклюзійного захворювання вен, ревматоїдного захворювання легень, саркоїдозу, та гранулометозу Вегенера та гострого пошкодження легень (АГ), та синдрому гострої дихальної недостатності (АКОЗ5) та їх ускладнень. 24. Спосіб відповідно до 23, де зазначене захворювання є АЇї, та зазначений ЯАБ є АБ відповідно до пункту 13, або зазначена фармацевтична композиція містить ЗАБ відповідно до пункту 13. 25. Спосіб відповідно до будь-якого одного з 22-24, де зазначена композиція або аАБ доставляють суб'єкту шляхом підшкірної, внутрішньовенної або внутрішньом'язової ін'єкції. 26. Спосіб відповідно до будь-якого одного з 22-24, де зазначена композиція або аАБ доставляють суб'єкту шляхом парентеральної, пероральної, ректальної, трансмукозальної, 60 очної, пульмональної доставки або доставки до шлунково-кишкового тракту.

27. Ін'єкційний, пероральний, інгаляційний або небулізований препарат, який містить композицію або дАБ, відповідно до будь-якого одного з 1-20. 28. Препарат з подовженим вивільненням, який містить композицію відповідно до будь-якого одного з пунктів 1-20. 29. Висушений при заморозці препарат, який містить композицію відповідно до будь-якого одного з 1-20. 30. Пристрій доставки, що включає композицію відповідно до будь-якого одного з 1-20. 31. Пристрій доставки, що включає композицію відповідно до будь-якого одного з 1-20, де зазначений пристрій є небулайзером або інгалятором. 32. Виділена або рекомбінантна нуклеїнова кислота, що кодує дАБ відповідно до будь-якого з 1-16. 33. Виділена або рекомбінантна нуклеїнова кислота, що кодує АБ відповідно до будь-якого 3 12-13. 34. Вектор, що містить нуклеїнову кислоту 32 або 33. 35. Клітина-господар, що містить нуклеїнову кислоту за пунктом 32 або 33, або вектор за пунктом 34. 36. Спосіб одержання поліпептиду, який містить ЗА відповідно до будь-якого з 1-16, де зазначений спосіб включає забезпечення фукнкціонування клітини-господаря за пунктом 35 в умовах прийнятний для експресії зазначеної нуклеїнової кислоти або вектору, в результаті чого одержують поліпептид. 37. аАБ відповідно до 1-16, де аАБ зв'язується з АБА з КД, яка становить 150 95 або більше

КД немодифікованого ЯАБ (наприклад, 200 95, 250 95, 300 95, 350 95, 400 Фо, 450 Фо, 500 Фо, 550 9о, 600 95, 650 95 або більше).

Винахід, крім того, передбачає наступні втілення, які перелічені як 16-25р: 15. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ), який не зв'язує (або має понижене зв'язування) вже існуючого АБА людини в сироватках людини, де епітоп на аАбБ, з яким АБА зв'язується, маскується. 26. адАь відповідно до 165 вище, який має КД зв'язування з АбА, яка становить 150 95 або більше (наприклад, 200 95, 250 95, 300 9, 350 95, 400 95, 450 95, 500 90, 550 95, 600 Фо, 650 95 або більше) від КД еквівалентної послідовності, в якій епітоп не маскується.

ЗБ. аАБ відповідно до 1 Б-- 20, де епітоп маскується шляхом: а. додавання хімічної структури до С-кінця; та/або р. одного або більше каркасного(їх) заміщенняць); та/або с. однієї або більше делецій. 4р. аАБ відповідно до ЗБ, де хімічна структура включає одну або більше амінокислоту(), С- термінальний тег або хімічну модифікацію, таку як пегилювання або амідування. 50. аАБр відповідно до ЗБ або 4Б, де (а), (Б) та/або (с) має безпосередній конформаційний ефект на епітоп, опосередкований конформаційний ефект на епітоп, та/або просторові утруднення епітопу. бр. аАБ відповідно до будь-якого з попередніх пунктів, де зазначений епітоп; а. перекривається із залишком Кебата 113 на С-кінці; та/або е. перекривається із залишками Кебата 14, 41, 108, 110, 112 та 113; та/або

Ї. містить поверхню, що піддається дії залишків Кебата 14, 41, 108, 110, 112 та 113, та будь- якого іншого залишку в межах 5 ангстрем від даних положень; та/або 9. містить каркас 4, та петлі між бета-нитками каркасів 1 та 2. 7р. адАь відповідно до будь-якого з попередніх втілень 10-60, який містить одне або більше амінокислотних заміщень в положеннях Кебата 14, 41, 108, 110, або 112 в порівнянні з гаметичною каркасною послідовністю людини. 805. Гуманізований одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (аАБ), який має нелюдську

БО послідовність в одному або більше з наступних залишків: залишки Кебата 14, 41, 108, 110 та/або 112. 9р. аАБ відповідно до 70 або 80, де амінокислотні залишки в зазначеному одному або більше положень є аланіновими залишками. 10р. аАЬ відповідно до будь-якого з попередніх втілень 10-9О, де зазначене маскування досягають шляхом забезпечення амінокислотного подовження до С-кінця аАбБ. 116. аАБ відповідно до 100, де зазначене подовження становить від 1 до 8 амінокислот. 120. аАБ відповідно до 106 або 116, де зазначене подовження містить аланіновий залишок. 13р. аАБ відповідно до 126, де зазначене подовження складається з одиничного аланінового залишку.

14р. аАЬ відповідно до 126, де зазначене подовження вибирають з групи, що складається з:

АБ, АБ5Т, АЗТК, АЗТКО та АЗТКОР. 15р. аАБ відповідно до будь-якого з 165-146, де зазначений АБ є МН, або МІ, або УНН АБ. 160. адр відповідно до будь-якого з 10-1560, де мішенню з якою зв'язується АБ є ТМЕа,

ТМЕНАТ, МЕС, І -18, 1-68, І -4, 1-5, 11-13, ОС-516М, АБОРЕ, альбумін та ТОЕрВК2. 175. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до 16Б, який вибирають з наступних амінокислотних послідовностей, зазначених як: (а) ВООМІТп-131-206 ЯДАЬ з подовженням одиничного аланіну (ЗЕО І МО 16); (б) ПООМ1п-131-206 дАБ з подовженням одиничного аланіну та Р14А каркасною мутацією (ЗЕО ІЮ МО 17) (с) ООМ1п-131-206 АБ з Р14А каркасною мутацією (ЗЕБЕО І МО 18); (4) СОМ1п-131-206 АБ з АБ5ТКО С-термінальним подовженням (5ЕСО ІО МО 19); та (є) 0ОМ1п-131-206 АБ з АБТКО С-термінальним подовженням та з Р14А каркасною мутацією (ЗЕО ІЮ МО 20). 18р. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну (АБ) відповідно до 166 або 176, де мішенню є ТМЕВ'І, та немодифікований ЯАБб вибирають з послідовності, що є на 100 9, 95 Об, 90 95, 85 95 або 80 95 ідентичною до амінокислоти, зазначеної як: БОМ п-131-206 (5ЕО 10 МО 1), БОМ 1п-131-511 (5ЕО І МО 2), ОМ 1п-131-202 (5ЕО ІО МО 3). 19р. Спосіб маскування епітопу на одиничному варіабельному домені імуноглобуліну (аАб), в якому епітоп зв'язується з вже існуючим АБА людини в сироватках людини, який включає стадію модифікування епітопу. 20р. Спосіб зниження зв'язування одиничного варіабельного домену імуноглобуліну (аАБ) зі вже існуючим АБА людини в сироватках людини, який включає маскування епітопу на аАБ, з яким зв'язується АВА. 21р. Спосіб відповідно до 196 або 200, в якому зазначене маскування викликає зниження зв'язування з АБбА, таким чином, що аАБб, який містить маскований епітоп має КД, яка становить 150 95 або більше від КД АБ, в якому епітоп не є маскованим. 225. Спосіб відповідно до будь-якого з 190 - 216, де епітоп є маскованим шляхом:

І. додавання хімічної структури до С-кінця; та/або і. одного або більше каркасного(их) заміщенняць); та/або . однієї або більше делецій.

Ко) 230. Спосіб відповідно до 22, де хімічна структура містить, одну або більше амінокислот, С- термінальний тег або хімічну модифікацію, таку як пегилювання або амідування. 24Б6. Спосіб відповідно до 225 або 23Б, де (а), (Б) та/або (с) має безпосередній конформаційний ефект на епітоп, опосередкований конформаційний ефект на епітоп, та/або просторові утруднення епітопу. 250. Спосіб відповідно до будь-якого з 190-240, вказаних вище, де зазначений епітоп;

К. перекривається із залишком Кебата 113 на С-кінці;

І. перекривається із залишками Кебата 14, 41, 108, 110, 112 та 113; та/або т. містить поверхню, що піддається дії залишків Кебата 14, 41, 108, 110, 112 та 113, та будь-якого іншого залишку в межах 5 ангстрем даної паверхні; та/або п. містить каркас 4, та петлі між бета-нитками каркасів 1 та 2.

В наступних втіленнях 1с-15с нижче, винахід передбачає: 1с. Гуманізований УНН одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, який залишає один або більше гаметичних залишків верблюда в залишках Кебата 14 та/або 108. 26. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 1с вище, який має КД зв'язування з АБА людини в сироватці людини, яка становить 150 95 або більше (наприклад, 20095, 250 965, 300 96, 350 Зо, 400 95, 450 95, 500 96, 550 95, 600 95, 650 95 або більше) від КД еквівалентної послідовності, в якій залишки 14 та/або 108 вже є гуманізованими.

Зс. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 1с або 2с, в якому одну або більше С-термінальних амінокислот видалено. 4с. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до Зс, в якому одну С- термінальну амінокислоту видалено. 5с. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 1с або 2с, який містить С- термінальне додавання, подовження або тег. бс Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 5с, де зазначене додавання, подовження або тег вибирають з групи, що складається з: одного або більше амінокислотного(их) подовження, С-термінального тегу або хімічної модифікації, такої як пегилювання або амідування. 7б. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 5с або бс, в якому зазначене подовження становить від 1 та 8 амінокислот.

8с. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 7с, де зазначене подовження містить аланіновий залишок. 9с. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 8с, де зазначене подовження складається з одиничного аланінового залишку. 10сє. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до 8с, де зазначене подовження вибирають з групи, що складається з: А5, А5Т, А5БТК, АЗТКО, АБТКОР, АЗТКА,

АЗТКАР та АЗТКАРЗ. 11сє. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до будь-якого з попередніх втілень 1с-10с, який додатково містить нелюдські залишки в одному або більше з наступних залишків: залишки Кебата 41, 110 та/або 112. 126. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну відповідно до будь-якого з попередніх втілень, де мішенню, з якою зв'язується АБ, є ТМЕа, ТМЕКТ, МЕС, 1-18, 1-68, 1-4, 1-5, І - 13, 0С-516М, АБОРЕ, альбумін та ТОЕВК2. 1Зс. Спосіб гуманізації верблюжого УНН одиничного варіабельного домену імуноглобуліну, який включає утримування одного або більше верблюжих гаметичних залишків в залишках

Кебата: 14 та/або 108. 14с. Спосіб зниження зв'язування МНН одиничного варіабельного домену імуноглобуліну (ДАЮ) верблюда з вже існуючим АБА, який включає утримування верблюжого гаметичного залишку в залишках Кебата: 14 та/або 108. 15с. Спосіб відповідно до 13с або 14с, в якому зазначене утримання спричиняє зниження зв'язування з АБА таким чином, що МНН, який містить верблюжі залишки в положеннях 14 та/або 108 мають КД зв'язування з людською АБА в сироватці людини, яка становить 150 95 або більше від КД УНН з еквівалентною послідовністю, в якій дані залишки вже є гуманізованими.

Зверніть увагу, що термін дАбБ, як використовується в даному документі, є зареєстрованою торговою маркою.

ПРИКЛАДИ:

Приклад 1: Кількість здорових суб'єктів з вже існуючими АБВА з аАбБ, позначеного ООМ'ІН- 131-206

Методика кількісного аналізу ВОМ Н-131-206 (МН) АБА

Зо рРОМІН-131-206 (5ЕО ІО МО 1) біотинилюють у біотиновому молярному стимулюючому співвідношенні 8:11. Після маркування, біотинильований. ЮОМІН-131-206 (5ЕО ІЮ МО 1) піддають буферо-обміну та зберігають в буфері формуляції, що містить 14 мМ фосфату натрію, 8,4 95 цукрози, 0,35 95 гліцину, 0,014 95 полісорбату 80 при рН 7,4. рРОМІН-131-206 маркують рутениєм у 5!йМо-Тад молярному стимулюючому співвідношенні 5:11. Після маркування, 5!иМо-Тад маркований СОМ Н-131-206 піддають буферо-обміну та зберігають в буфері формуляції, що містить 14 мМ фосфату натрію, 8,4 95 цукрози, 0,35 95 гліцину, 0,014 95 полісорбату 80 при рН 7,4.

Аналіз анти-медикаментозного антитіла (АБА) представляє собою анліз, який проовдять на

М50 м ЕС (електрохемілюмінесцентній) технологічній платформі. М5О "М технологія (доступна від Мезо зсаіє Оізсомегу, Маїуїапа, ОБА) застосовує хелат металу рутенію ЕСІ мітку в поєднанні з вугільними електродами, які розташовують в лунках планшету для мікротитрування, які є покритими стрептавідином. Зв'язування 5йИМо- ТГад "М, що використовують в аналізі, продукує хемілюмінесцентний сигнал, що спрацьовує, коли на прилад подається напруга (Мезо 5саїе рівсомегу бесіог "м |птадег 6000). Одержаний в результаті люмінесцентний сигнал вимірюють в одиницях ЕСІ тм, Інтенсивність сигналу є прямо пропорційною кількості антитіла, виявленого в зразку. Негативний (нормальна людська сироватка; МН) та позитивний (РС; мишаче анти- рОМІ1нН-131-206 ідіотипове антитіло добавлене в точно відміряній кількості в нормальну людську сироватку) контрольні зразки (005) додатково включають в кожен планшет для аналізу.

Короткий опис методик аналізу описано нижче: 1. М50"7мМ стрептавідиновий планшет блокують 150 мкл/лунка блокуючого казеїну в РВ5 (1 95) при кімнатній температурі (к.т.) протягом 1-2 годин. Блокатор видаляють без промивання. 2. Після 1 години попереднього інкубування гомогенну суміш, що містить 0,1 мкг/мл біотинильованого ПОМ Н-131-206 (лікарський засіб), 0,1 мкг/мл рутенільованого ("З,иМо-Тад" тм) рРОМІН-131-206 (лікарський засіб), та 2 95 зразка сироватки в розріджувачі аналізу (1 95 казеїн в

РВ5), переносять в М5О "М планшет та інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. 3. Потім М5О планшет промивають З три рази РВ5Т. 4. Додають 150 мкл/лунка буферу зчитування, та планшет зчитують.

Під час валідації даного конкретного імуноаналізу, панель з 60 зразків сироватки здорових бо донорів-людей піддавали скринінгу щодо фонової реактивності в аналізі. Визначено, що приблизно 45 95 зразків сироватки від даних суб'єктів мали виявлені УН-реактивні аутоантитіла, в більшості до ізотипу, які були здатні зв'язуватися з ПОМ Н-131-206 (результати показані на фігурі 1).

Вільний, немічений ООМІН-131-206 конкурує щодо АБбА зв'язування в даному аналізі, що в результаті призводить до зниженої інтенсивності сигналу (високе 95 сигнальне інгібування)

Даний "Аналіз підтвердження" застосовували для визначення модифікованих версій ООМ'І Н- 131-206, та інше антитіло, що грунтується на молекулах, могло б конкурувати з ПОМ Н-131-206 щодо АБбА зв'язування.

Приклад 2: Амінокислотні заміщення в УН каркасі ООМ1п-131-206

Вільний, немічений ЮОМ1Н-131-206 конкурує щодо АБА зв'язування та в результаті призводить до зниженої інтенсивності сигналу в ФОМ1Н-131-206 АВА аналізі, як описано вище.

Даний "Аналіз підтвердження", відповідно, застосовували для визначення досліджуваних речовин, наприклад, ЮОМ'1Н-131-206, модифікованих версій РОМ'1Н-131-206, або інше антитіло, що грунтується на молекулах ("досліджувана речовина"), могло б також інгібувати зв'язування АБА з ООМІТН-131-206.

Для дослідження яке зв'язування АБбА з МН каркасом могло б зменшуватись, було зроблено ряд амінокислотних заміщень та інших модифікацій каркасу ПООМ'ІН-131-206, використовуючи стандартні сайт-спрямовані методики мутагенезу.

Молекули із заміщеннями (досліджувані речовини) аналізували, використовуючи наступний спосіб (Аналіз підтвердження):

Методика аналізу підтвердження ООМІ1Н-131-206 (яка може бути застосована для скринінгу ун адрзе щодо АВА зв'язування): 1. 10 мкг/мл ВОМ Н-131-206 або іншу досліджувану речовину, таку як модифікований АБ», попередньо інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. з 4 95 АБА позитивною людською сироваткою в розріджувачі аналізу (1 9о казеїн в РВ5). 2. М5О0"М стрептавідиновий планшет блокують 150 мкл/лунка блокуючого казеїну в РВ5 (1 95) при кімнатній температурі (к.т.) протягом 1-2 годин. Блокатор видаляють без промивання. 3. В планшеті для мікротитрування для аналізу, зразок, що містить зразок АБА позитивної людської сироватки та 10 мкг/мл досліджуваної речовини, такої як модифіковані ЗАБр5, додають до гомогенної суміші біотинильованого ООМІТН-131-206 (ЗЕО ІЮ МО 1) (лікарський засіб) та рутенильований ("З!йиМо-Тад'""м) ВОМ Н-131-206 (ЗЕО ІЮО МО 1) (лікарський засіб) в розріджувачі аналізу (1 95 казеїн в РВ5) таким чином, що кінцеві концентрації становлять 2 95 АБА позитивної людської сироватки, 0,1 мкг/мл біотинильованого ООМІН-131-206 (ЗЕО ІО МО 1) (лікарський засіб) та 0,1 мкг/мл рутенильованого ("З!йо-Тад" "м) БОМ'1Н-131-206 (5ЕО ІЮ МО 1) (лікарський засіб), та інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т... 4. Після 1 години інкубування, зразки для аналізу переносять, до блокованого М5О планшету, та планшет інкубують протягом 1 години х 5 хвилин в темряві при к.т. 5. М5О М планшет потім промивають З рази РВ5Т. 6. Додають 150 мкл/лунка буферу зчитування, та планшет зчитують.

Для кожного експерименту зі зразками сироватки людини з різним вихідним клоном (результати показані в таблиці 1) від 10 АВА позитивних суб'єктів досліджували в аналізі підтвердження вище (в прикладі 2): Результати показані в таблиці 160 як і (загальний) середній 95 інгібування сигналу та також 9о суб'єктів з АБА зв'язуванням. Менший 95 інгібування сигналу менш модифікованої сполуки була здатна зв'язуватися АБА5. Зменшення приблизно на 40,5 95 у 95 інгібування сигналу було взяте, щоб показати незначне АБВА зв'язування.

Використовуючи аналіз підтвердження, визначили, що амінокислотні заміщення в наступних положеннях значно зменшували зв'язування вже існуючих АБА з ООМ'І Н-131-206, в той же час, зберігаючи специфічну активність щодо зв'язування з антигеном, тобто зв'язування з ТМЕНІ, як визначено, використовуючи методику аналізу ТМЕКІ! афінності, показану в прикладі 5с (результати показані в таблиці 1): Р14А, РАТА, І 1080.

Приклад 3: Амінокислотне подовження в МН каркасі ФбОМІ1Н-131-206

Для визначення, незважаючи на те, що модифікація С-кінця МН каркасу могла зменшувати

АБА зв'язування, було зроблено ряд С-термінальних модифікацій каркасів, використовуючи сайт-спрямовані способи мутагенезу. Молекули із заміщеннями (досліджувані речовини) аналізували, використовуючи "аналіз підтвердження", як описано раніше в прикладі 2) та результати показані нижче в таблиці 1.

Подовження С-кінця ООМ1Н-131-206 або інших молекул, які досліджували, також значно зменшувало зв'язування вже існуючого АБА (таблиця 1, таблиця 2). Результати показані в таблиці 2 також одержували, використовуючи "аналіз підтвердження", як описано раніше в 60 прикладі 2. Це є проілюстрованим шляхом подовження А, А5, АТ, АЗТК, АБТКО, АЗТКОР,

ААА, та досліджують всі довші подовження. УНН клони, які не є гуманізованими, мають нижчі рівні зв'язування з АБАФ5.

Таблиця 1

Оцінювання АБВА зв'язування з ОПОМІ Н-131-206 мутантами сигналу в аналіз оо суб'єктів з АЮА

Фо інгібування - АБА зв'язування (95 інгібування сигналу, коли наданий протеїн є конкурентним в аналізі утворення зшивання АБбА (аналіз підтвердження)).

Таблиця 2

Оцінювання АБВА зв'язування УНН молекул та МН доменних антитіл з С-термінальними подовженнями

Середній 95 Інгі- шо бування сигналу 95 суб'єктів з ДОА

Вихідний клон послідовно внваня (середнє зв'язуванням реднє (10 суб'єктів) значення з суб'єктів оПасколізумаб-0ТО4-Н-033 |С-термнальниййдА.Х/ | 346: ' Ї 0

Пасколізумаб-0ОТ04-Н-033 |С-лтермнальнийа5т | 344 | 0

С-термінальний ГГАО (послідовність 6 ртонозз амінокислотного 12,80 пептиду

НИ

Продовження таблиці 2

МНН клон 2-40842 (68 18,66

МНН клон 7-40842 (68 21,96

МНН клон 3-40955 (ВАМКІ - Я я

МНН клон 8-41015 (ВАМКІ - Я я

МНН клон 9-41016 (ВАМКІ - Я я

Фо інгібування - АБА зв'язування (95 інгібування сигналу, коли наданий протеїн є конкурентним в аналізі утворення зшивання АБбА).

Послідовність ГГ АС тега може бути знайдена в Маїште Віоїесппоіоду 1988, Мої! 16, рр1204- 1210.

Звертаємо увагу, що (середні) 40 95 інгібування сигналу (або менше ніж 40 95 інгібування сигналу) беруть, щоб показати незначне АБбА зв'язування.

Приклад 4: Комбінація амінокислотних заміщень та С-термінального подовження в УНН каркасі ООМІН-131-206

Для визначення, незважаючи на те, що комбінація амінокислотних заміщень та модифікації

С-кінця МН каркасу могли зменшувати АБА зв'язування, було зроблено ряд С-термінальних модифікацій та/або амінокислотних заміщень в каркасах, використовуючи сайт-спрямовані способи мутагенезу. Молекули із заміщеннями аналізували, використовуючи "аналіз підтвердження", описаний раніше в прикладі 2). Результати показані нижче в таблиці 3:

Таблиця З

Середній 95 інгібування сигналу в аналізі оо суб'єктів з АОА

Вихідний клон модифікація послідовності підтвердження зв'язуванням (середнє значення з 10 (10 суб'єктів) суб'єктів

РОМ тТН-131-206 СтлермнальнийА.////////// 17777771? Ї777777711011 рОМ тТН-131-206 С-термінальний АБТКО 1111110 ром тн-131-206 РІ4А я С-лермнальнийА | 876. ....СУКХАИЇ :(: 0 ДЙХ

Р14А ж С-термінальний ром 1н-131-206 С-термінальний А5Т 34,96 ром 1н-131-206 С-термінальна 5 делеція (АБ) 44,67 ром тн-131-206 РІЯ4Е 47,22 111360

РОМ 1н-131-206 РІК 46,70 ром 1н-131-206 РІ4-О 52,87 080 ром тн-131-206 РІ4Т 68,86 ром тн-131-206 ІТА 97,96

РОМ 1н-131-206 АВАТ 90,96

РОМ 1н-131-206 ІЛО8А 94,30

РОМ 1н-131-206 ТО 78,84 ром тн-131-206 З112А 7711 80 ром тн-131-206 Р14К я С-термінальний А 29,13

Р14К хз С-термінальний роміназтоює 00 РК ові ром 1н-131-206 Р140 к С-термінальний А 29,66

Р140 х С-термінальний ром 1н-131-206 РІ14Т ж С-термінальний А 32,97

Р14Т ж С-термінальний

Приклад 5а та 5р: Афінність ООМ1 Н-131-206 С-термінального подовження

Додаткові дослідження проводили, щоб визначити які модифікації в ООМІТН-131-206, що зменшують зв'язування вже існуючого АБА, в результаті призводили до будь-яких змін в афінності даного ЗАБ щодо його мішені, людського ТМЕК1.

Зо

Приклад ба: Оцінювання ТМЕКІ зв'язування ПООМ1Н-131-206 мутантів, використовуючи

ЕИПЗА

Здатні модифіковані варіанти БОМ 1Н-131-206 (дослідження ЯАБр5), що зв'язуються з людським ТМЕК1 визначали, використовуючи ЕГІ5ЗА. Спостерігалось, що каркасна мутація та С- термінальні модифікації, які, як показано, зменшують зв'язування вже існуючого АБА, в основному, мали співставиме зв'язування з ТМЕК'Т, в порівнянні з вихідним ВОМ Н-131-206 аАБ. Виключенням було ПООМ'ІТН-131-206 з С-термінальним подовженням А5ТКОР, який мав приблизно в 5 разів менший ЕС5О щодо ТМЕКІ зв'язування в порівнянні з вихідним аАБ роОМІнН-131-206.

Протокол ЕГІ5А аналізу зв'язування ТМЕНВІ1: 1. Рекомбінантний людський ТМЕК1-Рс (КО Зувзіет5) додають до 96б-лункових ЕГІЗА планшетів в кінцевій концентрації 0,1 мкг/мл в карбонат-бікарбонатному буфері рн 9,4 (Ріегсе). 2. Після інкубування протягом ночі при 4 "С, надлишок ТМЕКІ1:Рс видаляють шляхом промивання три рази промивочним буфером (промивочний буфер - 0,1 95 Гуееп-20/РВ5) та три рази РВ5.

З. Планшети блокують 1 95 ВЗА в РВ5 протягом 1 години при кімнатній температурі. Блок видаляють промиванням, як описано вище, та потім зразки аАБ, які досліджують, розбавлені в розріджувачі для аналізу (0,1 95 В5Ач-0,05 95 Тмееп-20/РВ5), додають до планшету та інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. 4. Після промивання, як описано вище, додають поліклональний кролячій анти-людський Ід (Ми специфічний) в розбавленні 1:1000 в розріджувачі для аналізу та інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. 5. Після промивання, як описано вище, додають мишаче анти-кроляче НКР кон'югатне антитіло в розбавленні 1:10,000 в розріджувачі для аналізу та інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. 6. Після промивання, як описано вище, до кожної лунки додають 100 мкл субстрату 5игеВіне

ТМВ. Після того, як проявився блакитний колір, ферментну реакцію зупиняють 100 мкл 1М НСІ та планшет зчитують на 450 нм. 7. Криві дози відповіді для кожного досліджуваного ЧАБ одержують шляхом побудови

Зо графіка концентрація проти значень поглинання. ЕС50 значення для аАБ зв'язування з ТМЕК1 визначають, використовуючи сгарпраай Ргізт.

Таблиця 4а

Оцінювання зв'язування з ТМЕКТ для ПООМ'І1Н-131-206 мутантів й М 2, . . Середнє значення ЕС5О для ромін-язі-20о6 7777777 (няЯ 77777777 1777171717171717171717110961СсС2СС нн ншинниннншшшшш

Таблиця 4р

Оцінювання зв'язування з ТМЕНІ для ВОМ Н-131-206 мутантів й М 2, . . Середнє значення ЕС5О для

РОМ тТН-131-206 ром тТн-131-206 РІ14А «з С-термінальний А

Р14А з С- нний

С-термінальний

С-термінальна 5

РОМ тТН-131-206 РІЯЕ

РОМ тТН-131-206 РІЯК

РОМ тТН-131-206 РІО

РОМ тТН-131-206 РІЯТ

РОМ тТН-131-206 ІА

РОМ тТН-131-206 АВАТ

РОМ тТН-131-206 ІОВА

РОМ тТН-131-206 ТОА

РОМ тТН-131-206 З112А

Р14К «з С-

Р140 я С-

Р14Т я С-

Таблиця 4с

Оцінювання зв'язування з ТМЕНТ для ВОМ Н-131-206 мутантів й М 2, . . Середнє значення ЕС5О для

РОМ тТН-131-206

Р14А я С-

РОМ 1Н-131-206 С-термінальний АЗТКО

Р14А я С-

Приклад 4р: методика аналізу ТМЕКІ афінності з використанням Віасоге "м

Афінність модифікованого ООМ1Н-131-206 аАБ з С-термінальним А подовженням визначали шляхом поверхневого плазмонного резонансу, використовуючи Віасоге"м Т100.

Анти-людське ідо антитіло імобілізували на СМА4 чипі, та людський ТМЕКІТ:ЕРс фіксували на даній поверхні до рівня приблизно 60 відносних одиниць. Досліджувані речовини, розбавлені в буфері до кінцевих концентрацій від 25 нМ до 0,024 нМ (в 4 кратному діапазоні розбавлень) ін'єкційно вводили над ТМЕКТ:Ес. Утворені криві зв'язування двічі посилались на криву 0 нм досліджуваної речовини та на дані, встановлені щодо моделі зв'язування 1:1, щоб отримати кінетичні дані. Зв'язування досліджуваної речовини з ТМЕКІ макаки-крабоїда визначали тим самим способом. Кінетичні дані зв'язування показані нижче в таблиці 44 далі.

Насамкінець, кінетики зв'язування модифікованого (тобто з додаванням С-термінального А) та немодифікованого ТМЕКТаАБ» були подібними.

Таблиця 4а 11111111 Кінетикизв'язування//:/.:К7Я6./С:( ромітн- Ка (М-1.5-1) ка (5-1) КО (М) 131-206 модифікація х105 х107 х10-1!

Потап ПІ

ТМЕНІ макаки- . - 11111111 |СстермінальнийА//// | 960 | 789 | 197 (без помилок розраховані вище дані)

Приклад 6: Фармакокінетики ПООМ'І Н-131-206 С-термінального подовження

Наступні дослідження виконували, щоб визначити які модифікації ПООМІТН-131-206, що зменшують зв'язування вже існуючого АБА, в результаті призводять до будь-яких змін у фармакокінетиках даного аАБ.

Фармакокінетична процедура

Системний вплив СОМ 1Н-131-206 та РОМ 1Н-131-206 з С-термінальним аланіновим подовженням визначали у макак-крабоїдів. Окремим групам з 5 макак-крабоїдів дозували досліджувані речовини шляхом 30 хвилинної внутрішньовенної інфузії. Зразки плазми збирали аж до 48 годин опісля дозування та визначали рівні двох досліджуваних речовин, використовуючи імуноаналіз. Коротко кажучи, біотинильоване антитіло специфічне до досліджуваної речовини додавали до покритого стрептавідином 9б-лункового планшету для мікротитрування, після чого додавали зразки плазми макак. Додавали мічені дигоксигеніном людські ТМЕКТ: Ес, після чого додавали пероксидазу з хріну, кон'юговану з анти- дигоксигеніновим антитілом. Додавали кінцевий ТМВ субстрат (доступний з КО систем), та кількість досліджуваної речовини визначали шляхом зворотного розрахунку калориметричного стгналу зі стандартної кривої досліджуваної речовини.

Незначні (22-рази) зміни спостерігали щодо гендерно-усереднених параметрів системного впливу, коли БОМ-1Н131-206 порівнювали з 0ОМ-1Н131-206-А у макак-крабоїдів після внутрішньовенної інфузії. Ми дійшли висновку, що модифікації ООМ1Н-131-206 за рахунок додавання С-термінального подовження (А) не впливають на фармакокінетики ЯАБ (показані в таблиці 5).

Таблиця 5

Фармакокінетики ООМІ1 Н-131-206 мутантів після одиничної внутрішньовенної дози у макак-крабоїдів

Період напів- Об'єм шо виведення з Кліренс розподіленн є, модифікація плазми я

Вихідний клон й й (мл/хв/кг послідовності ні ) ні допустиме допустиме відхилення відхилення ром 1н- : . 2,80 1,48 0,25 ром 1н- : . 2,57 2,31 0,34

Коо)

Приклад 7а: Експресія ООМ'І Н-131-206 варіантів

Для визначення чи модифікації МН каркасу, що зменшують зв'язування з вже існуючим АБВА, мають вплив на експресію анти-ТМЕК!1 ад, порівнювали вихід панелі модифікованих варіантів анти-ТМЕВТ РОМ'ІН 131-206 аАрз» з вихідним клоном після росту в 1 літрових ферментаційних ємностях. Досліджуваним ЯАБбБ5 вводили С-термінальне подовження (ЖА або «АЗТКО), з або без каркасного заміщення (Р14А). Досліджувані ЧАБ5 експресували в тому самому штамі Е. СоїїЇ, використовуючи той самий мікробний вектор експресії (раме011 (Амесіа)) як немодифікований

БОМІН 131-206 (ЗЕО ІО МО 1). В малому масштабі рівня експресії (1л), загальний вихід для аАр5 з С-термінальним подовженням ЖЖА або АБТКО був подібним до немодифікованого вихідного клону. Вихід для 4АБ5 з РІ14А заміщенням та С-термінальним подовженням (тА або

УАЗТКО) зменшувався в порівнянні з немодифікованим вихідним клоном (Таблиця ба).

Методика експресії

Стадія "сіяння подовження" завершували шляхом інокуляції в 100 мл колбу перемішування з флакону Е. Соїї клітин, що експресують ЯАБ конструкт, в мікробний вектор експресії.

Через приблизно 10 годин росту колбу сіянні застосовують, щоб інокулювати 1 л ферментер. Процес продукування проводять аж в три стадії, закладка серії, підживлення та індукування. Початкова фаза закладки триває протягом приблизно 13 годин, протягом якого часу культура росте експоненціально при 37 "С (зі зниженням до 30 "С протягом останніх 4 годин) до тих пір, доки первинне джерело карбону, гліцерин, не буде вичерпано. В той час, коли гліцерин вичерпано, відбувається сплеск розчиненого кисню (00) та вступають в дію поживні речовини (стадія підживлення). Приблизно через 5 годин після початку подачі поживних речовин (при ОЮОвоо 75) культуру індукують ІРТО (стадія індукування) та під час даної фази продукт процесу утворюється та вивільняється в середовище. Серію зупиняють приблизно через 48 годин після індукування та кількісно визначають кількість ЧАБ в супернатанті, використовуючи ВЕРХ.

Таблиця ба

Експресія титрів ФОМ'І Н-131-206 варіантів

Висновки з даного експерименту були наступними: 17) бом Нн-131-206-А, рОМ1Н-131-206-4А5ТКО та немутантного типу мутанти продемонстрували дуже гарну АБ експресію.

Найвищий титр становив приблизно 3000 мг/л. 2) ВОМІН-131-206 Р14-А, та ПООМІН-131-206 р144-А5ТКа мутанти не змогли експресувати аАБ в процесі.

З) Як правило, ООМІТН-131-206-4А та РОМ1Н-131-206-А5ТКО були співставимими з

Зо немутантним типом за показниками рівня експресії АБ.

Приклад 7Бр: Стабільність ПОМ'І Н-131-206 з С-термінальним аланіном

Стабільність С-термінального аланінового подовження ОМ 1Н-131-206-А визначали в людській сироватці, легеневому гомогенаті або печінковому гомогенату, яку вимірювали, використовуючи валідований імуноаналіз, для ОМ 1Н-131-206 (описано нижче), який детектує

РОМ 1Н-131-206, але є дуже слабким перехресно-реактивним до БОМ 1Н-131-206-А. Це відбувається завдяки тому, що детектоване антитіло М2.32110.10306 сильно зв'язується з ООМ 1Н-131-206, але слабо з ПООМ 1Н-131-206--А. Формат аналізу застосовує людське ТМЕВІ:Ес, як фіксуючий реагент, та вважається, що він, таким чином, є специфічним для інтактного, функціонального АБ.

Спостерігалось, що плазма мічена 2 мкг/мл БОМ 1Н-131-206-4А давала зчитування -6,4 нг/мл в даному аналізі, тоді як буфер, мічений 2 мкг/мл 55К2862277 давав зчитування 11,3 нг/мл. Таким чином, перехресна реактивність ПООМ 1Н-131-2064А в СОМ 1Н-131-206 аналізі становила 0,25-0,5 965.

Для вивчення перетворення в цільну кров людини, легеневий гомогенат людини (10 мг протеїн/мл), або печінковий гомогенат людини (1Омг протеїн/мл) вводили 1 мкг/мл або ПООМ 1ТН- 131-206, ПОМ 1Н-131-206-А або буферу (без додавання лікарського засобу). Після інкубування протягом або 0, З год., 6 год. або 24 год., плазму/супернатант збирали центрифугуванням та зразки заморожували до аналізу на ПОМ 1Н-131-206, використовуючи валідований імуноаналіз (робочий діапазон від 0,1 до 10 нг/мл).

Понад 24 год. не було свідчень щодо значного перетворення ПООМ 1Н-131-206-А до ООМ 1Н-131-206 в будь-якій матриці, які повинні були б доводити шляхом збільшення сигналу в імуноаналізі (завдяки утворенню СОМ 1ТН-131-206). Це означає, що додатковий С-термінальний аланін не є схильним до швидкого протеолітичного розщеплення.

Протокол для БОМ 11Н-131-206 валідованого імуноаналізу

Біотинильований анти-МН тАбр (М2.3510.1506) розбавляють в буфері для аналізу (10 мМ

Тгі5, 150 мМ масі, 0,195 В5А, 0,195 Тмееп20, рН 7,5) та додають 100 мкл в кінцевій концентрації 10 нг/мл до кожної лунки нейтравідин-покритого планшету (Ріегсе). Планшет герметично закривають та інкубують протягом 1 години при 3720.

Планшет для мікротитрування промивають 5 разів по 300 мкл промивного буферу (10 мМ

Тгі5, 150 мМ Масі, 0,1 95 Тмееп 20, рН 7,5), використовуючи промивач для планшету. 100 мкл на лунку стандартів, та додають зразки, розбавлені в матриці, та планшет герметично закривають та інкубують з постійним перемішуванням протягом приблизно 2 годин при 37 "С.

Планшет для мікротитрування промивають 5 разів по 300 мкл промивного буферу. додають по 100 мкл на лунку маркованого дигоксигеніном ЯТМЕКТ:Ес (1:40,000), та планшет герметично закривають та інкубують з постійним перемішуванням протягом приблизно 2 годин при 37 "С.

Планшет для мікротитрування промивають 5 разів по 300 мкл промивного буферу. додають по 100 мкл на лунку НКР;-маркованого мишачого анти-дигоксигенінового антитіла (Абсат)(1:20,000), та розчин, герметично закривають асептичною герметизуючою стрічкою, та планшет герметично закривають та інкубують з постійним перемішуванням приблизно приблизно 2 годин при 37 "С.

Планшет для мікротитрування промивають 5 разів по 300 мкл промивного буферу. додають по 100 мкл на лунку ТМВ субстрату (ТПепто), та планшет інкубують з постійним перемішуванням протягом приблизно 5 хвилин при кімнатній температурі. додають по 100 мкл на лунку ТМВ субстрат зупиняючого розчину (Зідта), та зчитують поглинання на 450 нм для кожної лунки, використовуючи планшетний рідер. Апроксимують, що стандартна крива відповідає 1/х зваженому логістичному алгоритму чотирьох параметрів,

Зо використовуючи 5М52000 та невідомі зразки інтерполюють з кривої.

Приклад 7с: Здатність ООМІН-131-206 з С-термінальним аланіновим подовженням (ЖА) інгібувати ТМЕК!І сигнал трансдукції:

ТМЕа передає сигнал через МЕкВ шляхи та в результаті призводить до секреції різних цитокінів, включаючи І/-8. В нестимульованих клітинах І/-8 тЕМА швидко розкладається.

Однак, в присутності ТМЕса, активація МЕКВ шляху призводить до стабілізації І -8 теМА. Дана стабілізація в результаті призводить до зростання тЕМА та робить внесок в індукцію 1-8 секреції. Тому, визначають, що в даному аналізі індукція секретованого І/-8 є такою, що додавання С-термінального подовження впливає на здатність ФОМ1Н-131-206 або ООМІН-131- 206А (тобто С-термінальне аланінове подовження) інгібувати ТМЕКІ1 сигнальну трансдукцію.

Дані дослідження проводили на клітинних лініях людини та макаки-крабоїда, та також на цільній крові людини та макаки-крабоїда. Порівняння значень ІСвсо демонструють, що подовження С- кінця ООМІН-131-206, яке зменшує зв'язування з вже існуючим АБбВА, негативно не впливає на здатність ЮОМ1Н-131-206 інгібувати сигнальну трансдукцію через ТМЕКІ в клітинах або людини, або макаки-крабоїда (таблиця 65).

Протокол визначення інгібування ТМЕс-індукованого 1./-8 в людських легеневих фібробластах

Здатність ПООМ'1ТН-131-206 або ЮОМ1Н-131-206-4А попереджувати зв'язування людського

ТМЕа з людським ТМЕК1 та інгібувати І/-8 секрецію визначали, використовуючи клітини людської легеневої фібробласти МКСОС-5 (АТСС). МАСО-5 клітини інкубували з досліджуваних зразків протягом однієї години, після чого додавали ТМЕРа (220 пг/мл). Після інкубування при 372С та 595 СО» протягом 24 годин супернатанти збирали та зберігали при -202С до тих пір, доки не виконували М5О М аналіз на І/-8 відповідно до протоколу виробника для зразків культур тканин. перед аналізом супернатанти розбавляли 1 до 12 в калібровочному розріджувачі, що постачається. Апроксимацію кривої проводили в сгарпРай Ргізт з метою визначення ІСво.

Протокол визначення інгібування ТМЕа-індукованого ІІ--8 в А549 клітинах

А549 клітини висівали в 96-лункові планшети з густиною 2 х 107 клітин/лунка та інкубували протягом ночі при 372С та 5 95 СО», що давало прилипання. Потім клітини інкубували протягом однієї години в присутності ФВОМІН-131-206 або ООМ'ІН-131-206-А при різних концентраціях в бо діапазоні 0,01 нмМ-1000 нМ. Кожну концентрацію досліджували в дублюючих лунках. Після інкубування при 372С та 5 95 СО» протягом 24 годин супернатанти збирали та зберігали при - 202С до тих пір, доки не виконували М5О "М аналіз на 1-8 відповідно до протоколу виробника для зразків культур тканин. перед аналізом супернатанти розбавляли 1 до 5 в калібровочному розріджувачі, що постачається. Параметри кривої та іІСво значення розраховували, використовуючи ХІ РІЇ.

Протокол визначення інгібування ТМЕсс-індукованого 1-8 в СУМОМ-КІ1 клітинах

СУМОМ-КІ клітини інкубували протягом однієї години в присутності ОПОМІН-131-206 або рОМІН-131-206ж4А при різних концентраціях, починаючи з 100 нМ. Після чого відбувалась стимуляція ТМЕа при кінцевій концентрації 1 нг/мл. Після інкубування при 372С та 595 СО» протягом 24 годин супернатанти збирали та зберігали при -202С до тих пір, доки не виконували

М5О М аналіз на І/-8 відповідно до протоколу виробника для зразків культур тканин. перед аналізом супернатанти розбавляли 1 до 12 в калібровочному розріджувачі, що постачається.

Апроксимацію кривої проводили в сгарпРаа Ргіз5т з метою визначення ІСво.

Протокол визначення інгібування ТМЕа-індукованого ІІ--8 в цільній крові людини

Кров від здорових волонтерів-донорів (за відповідної згоди, що не протирічить ОК Нитап

Тіззце Асі) збирали в гепарин натрію. Середовище для аналізу готували шляхом додавання 1 95

ВЗА до КРМІ-1640 середовища (без фенолу червоного). ПООМ1Н-131-206 або ВОМ Н-131- 206А та Мн контрольний дослід АБ розбавляли в 96-лункових планшетах в середовищі для аналізу таким чином, що кінцева концентрація після додавання крові становила 800 нМ, та серійно розбавляли 1 до 2 аж до 0,01 нМ. Додавали 130 мкл крові на лунку, та планшети інкубували протягом однієї години (372С, 5 95 СО2), що дозволяло зв'язування з ТМЕКІ1. Потім зразки крові стимулювали 10 мкл ТМЕРа, розбавленими в середовищі для аналізу таким чином, що кінцева концентрація становила 10 нг/мл. Кожну умову досліджували в повторі. Після наступних 24 годин інкубування (372С, 595 СО2), додавали 110 мкл РВ5 на лунку, що збільшувало об'єм зразків, які потім перемішували на планшетному шейкері протягом 10 хвилин на 500 обертах на хвилину та центрифугували на 1500 обертах на хвилину протягом 5 хвилин.

Плазму переносили до нового планшету та зберігали при -802С до тих пір, доки не виконували

І -8 М50"М аналіз відповідно до протоколу виробника для зразків сироватки та плазми.

Параметри кривої та значення ІСво розраховували, використовуючи ХІ РІЇ.

Зо Протокол визначення інгібування І Ро-індукованого ІІ -8 в цільній крові макаки-крабоїда 12 мл крові від 4 макак-крабоїдів збирали в гепарин натрію. Середовище для аналізу готували шляхом додавання 195 ВБА до КРМІ-1640 середовищ (без фенолу червоного). рОМІ1Н-131-206 або СОМ1Н-131-206-А та Мн контрольний дослід АБ розбавляли в 96- лункових планшетів в середовищі для аналізу до 15Х кінцевої концентрацію. Кожну концентрацію досліджували в трьох повторах. Додавали по 130 мкл крові на лунку, та планшети інкубували протягом однієї години (3720, 595 СОг2) перед стимулюванням 10 мкл ІРБ, розбавленим в середовищі для аналізу таким чином, що кінцева концентрація становила 94 нг/мл. Планшети потім інкубували протягом додаткових 24 годин (372С, 595 СОг). Після інкубування, додавали по 110 мкл РВ5З на лунку, щоб збільшити об'єм зразків, які потім перемішували на планшетному шейкері протягом 10 хвилин на 500 обертах на хвилину та центрифугували на 2000 обертах на хвилину протягом 5 хвилин. Плазму переносили до нового планшету та зберігали при -802С до тих пір, доки не вимірювали 1-8, використовуючи М5О тм аналіз для людського ІЇ-8, який виконували відповідно до протоколу виробника для зразків сироватки та плазми. Плазму в аналізі не розбавляли. Параметри кривої та ІСво значення розраховували, використовуючи ХІ РІЇ.

Таблиця бр короткий висновок щодо ефективності ВОМ Н-131-206 в порівнянні з ООМІ Н-131-206--А в аналіах на основі клітин людини та макаки: 11 онсмітдтевідютеня 00000001 ромінляюв | ромінавизових

Приклад 74: Застосування ООМ1п-131-206 доменного антитіла для лікування псоріазу

В даних дослідженнях БОМ1п-131-206 доменне антитіло (що має амінокислотну послідовність, показану 5ЗЕО ІО МО: 1) застосовували, а також ортологи гризунів даного доменногое антитіла. Одержані дані з цими молекулами застосовували для вибору доз, та протоколи лікування, описані в даному документі, слід застосовувати для лікування псоріазу, та псоріатичних плям, пацієнтам-людям слід вводити або ООМ'І-131-206 (що має амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 1), або ЮООМ1п-131-206 АБА фіксовану молекулу з термінальним аланіном (що має амінокислотну послідовність, показану в ХЕО ІЮ МО: 16), або ром1п131206 АВА фіксовану молекулу, що містить будь-який фіксований АБВА (тобто будь-якої модифікації, що зменшує зв'язування АБ з АБАФ5), як є розкритим в даному документі.

Наприклад, фармакокінетики, одержанні з досліджень іп мімо з макаками-крабоїдами, показали, що ПООМІ1п-131-206 доменне антитіло (з амінокислотною послідовністю, показаною в

ЗЕО ІЮО МО: 1) мають кліренс плазми 2,4 мл/хв/кг, які наближаються до рівня гломерулярної фільтрації (СЕК) у макак та дають період напіввиведення виділення приблизно З години. Об'єм розподілення для даного доменного антитіла становив 0,26 л/кг, який прирівнюють приблизно до екстраваскулярного об'єму та пропонують розподіл поза центральним/плазмовим компартментом. Коли ООМ1п-131-206 доменне антитіло вводили в екстраваскулярний компартмент (наприклад, коли інгаляційно вводять в легені), то існує тільки невелика зміна в періоді напіввиведення виділення, що спостерігається, яка відображає швидкість абсорбції, що обмежує кінетику.

Більш того, при наступному внутрішньошкірному дозуванні ортолога гризуна анти- ТМЕВ1 аАВ ("Вботіт-15-12") мишам спостерігати навіть більш довге відставання абсорбції. Це може бути пов'язано з більшою різницею між СЕК та кліренсом швидкості абсорбції після дозування внутрішньошкірним шляхом. Швидкість кінцевого виділення, яка спостерігалась, в плазмі миші становила приблизно 40 хвилин, яка була більшою, ніж та, що після внутрішньовенної доставки (приблизно 20 хвилин). Повільніша швидкість виведення (Ке), яку спостерігають в плазмі після внутрішньошкірної доставки, була підтвердженою РК дермальної тканини, яка показала швидкість кінцевого виділення 5-7 годин (Ке 0,1-0,14 год."), хоча оцінювали, що фракція дози, що приводить в дію очевидну пролонговану швидкість виділення була невеликою (0,5 95).

Швидкість дермальної абсорбції (Ка) в плазму визначали з дослідження на щурах з внутрішньошкірного дозування ЯАБ ортолога гризуна, та була відносно швидкою (Ка-4,1 год. 7), що в результаті призводить до спостережуваного Т тах приблизно через 1 годину після введення дози. Встановлено, що 10 95 від доменного антитіла утримувалось в дермальному компартменті у щура з допустимою швидкістю виділення з шкіри подібної до миші. Таким чином, складається враження, що після внутрішньошкірної ін'єкції бОМ1п-131-20б6 доменне антитіло розподіляється до васкуляризованих тканин в шкірі (наприклад, дерму), де швидко екстрагується в плазму та виводиться за рахунок ниркової фільтрації. Початкова фаза розподілення та абсорбції через тканини шкіри відображається в латентний час абсорбції перед дією плазми, щоб стати здатною для вимірювання. Враховуючи анатомічні відмінності між шкірою гризуна та людини, очікувалось, що швидкість абсорбції у людей є довшою, що, в свою чергу, призвело б до зменшеної/невимірюваною дією плазми на ЮОМ1п-131-206 доменне антитіло. Це означає, що прогнозована дія плазми людини грунтується на спостереженнях з досліджень на гризунах та, тому, служить як консервативна оцінка дії плазми у людей. рОМ'І1п-131-206 доменне антитіло (що має амінокислотну послідовність, показану в ХЕО ІЮ

МО: 1) також дозували здоровим волонтерам шляхом внутрішньовенної інфузії (аж до З годин тривалістю) аж до 2 мг/кг та в тривалому дослідженні шляхом інгаляції здоровим волонтерам.

Отримані фармакокінетичні параметри, як правило, дуже добре узгоджувалися з доклінічними даними у макак-крабоїдів. Після внутрішньовенного введення кліренс становив 0,6-1,5 мл/хв/кг (СЕК у людини приблизно 1,8 мл/хв/кг)у з одержаним в результаті період напіввиведення виділення 5 годин. Об'єм розподілення, приблизно 0,3 л/кг, був подібним до екстраваскулярного об'єму. Швидке розподілення БОМ'1Н-131-206 доменного антитіла в екстраваскулярному компартменті було підтверджене шляхом вимірювання бронхоальвеолярного зрошення (легневі епітеліальні рідини вистилки) після ЇМ введення. Рівні легеневої екстраваскулярної рідини становили приблизно 4-14 95 рівнів плазми, які вимірювали через 5 годин від початку дозування через З години інфузії.

Прогнози щодо ефективності у людей встановлювали, грунтуючись на даних оцінки впливу, що спостерігається та передбачається, в дермальному компартменті та іп міго клітинної лінії людини. ІСво знаходиться в діапазоні (8-40 нг/мл) в даних іп міго системах (різної складності та типу клітин) застосовували для мінімальних рівнів мішеней в дермальному компартменті та полегшеному виборі доз доменного антитіла, та протоколів лікування для лікування псоріазу, та псоріатичних плям, у пацієнтів-людей, описаних в даному документі. Наприклад, вихідну дозу 0,5 мг вибирали, щоб досягти дію плазми, припускаючі найгірший випадок системного впливу, нижчий, ніж даний досягнутий при ЕТІН внутрішньовенному досліджені у АБА позитивних суб'єктів. На даній вихідній початковій дозі очікується, що ТМЕКІТ опосередкований сигналінг інгібується в дискретній зоні навколо місця ін'єкції («2 см? площі поверхні) на рівні 2 90 95 безпосередньо після дозування. ТМЕМК1 інгібування протягом часу залежить від кількості лікарського засобу, який доставляється, утримується та потім виділяється з дермального компартменту. Припускаючи мінімум (10 95 дермальне затримання та Ке 0,1-0,14 год." як у

Зо щура), очікується, що рівні будуть підтримуватися 2 ІСбво (в зоні ін'єкції/дослідження) протягом мінімум З днів після інтрадермальної ін'єкції 0,5 мг ФОМ1п-131-206 доменного антитіла.

Для вибору доз доменного антитіла та передбачення протоколів лікування вивчали дію людської плазми після інтрадермального дозування ПООМ1п-131-206 доменного антитіла. Дані передбачення припускали максимально можливу дію, яка могла б досягатися для інтрадермальної ін'єкції. Фактична дані концентрація-час в людській плазмі від внутрішньовенно введенного ЮООМ1п-131-206 доменного антитіла застосовували в людській дермальній РК моделі з фіксованою швидкістю абсорбції (масштабується від дермальної абсорбції гризунів) та 100 95 біодоступності. Профіль концентрація-час в людській плазмі для максимальної(их) дози() домену та протоколи лікування, описані в даному документі (2 мг щотижня «т 0,5 мг один раз в два тижні) потім перевіряли. Дані виявлені передбачені пікові концентрації плазми швидко досягаються Ттах в межах 30 хв після дози, та рівні швидко падали до рівнів нижчих поточного аналізу плазми, нижчих обмеження кількісного визначення (0,1 нг/мл) в межах 24 годин.

Ненакопичення повторного дозування очікували в плазмі навіть, використовуючи дане передбачення максимальної можливої дії. Однак, дане передбачення представляє собою найвищу можливу дію плазми та можливі дії могли б бути значно нижчими, ніж передбачені, та навіть такими низькими, що дія плазми не може бути виміряною. Використовуючи мішенні рівні інгібування (грунтуючись на основних аналізах клітин іп міго) передбачалось, що ІСоо (відразу після введення дози) або ІСво (поглиблення) рівні в шкірі в протоколах лікування, описаних в даному документі, будуть знаходитись в діапазоні 30-80 нг/мл або 8-40 нг/мл, відповідно.

Грунтуючись на зазначеній вище інформації передбачувані дії плазми (Стах та АОС) для першої дози, максимальна денна доза та накопичена доза, протягом 28 днів, показана в наступній таблиці 66 разом з межами безпеки протягом протягом доклінічного дослідження.

Таблиця бр (Максимальна доза -2 мгщотижня 50,5 мгразвдватижні

АОСогвю 012800 |нсод/ььо;со- ::./:// | 7 / 89.4.ССсСсС2СшС

За 14 днів повторюють дозу макакам-крабоїдам відповідно до належної лабораторної практики токсикологію досліджують у самців мавп (20 мг/кг/дау), грунтуючись на середніх значеннях для ссавців (днів 1, 4 та 14) дій (Стах та АОСуо-глю 48,5 мкг/мл та 249 мкг"год./мл, відповідно).

Нарешті, інформацію, представлену вище з досліджень іп міго, досліджень іп мімо та відповідних аналізів застосовували для вибору доз доменного антитіла та протоколів лікування, прийнятних для лікування псоріазу у пацієнтів-людей.

Введення доменного антитіла відповідно до протоколу лікування, як розкрито в даному документі, є корисним в лікуванні псоріазу. Ефективність доменного антитіла в лікуванні псоріазу, наприклад, в конкретному протоколі лікування, може бути підтверджена шляхом або вимірювання сонографією та/або клінічним оцінюванням.

Сонографічні, високочастотні ультразвукові вимірювання можуть виконувати, використовуючи 20 МГЦ високочастотний сонограф (0ОВ О5В, Тарегпа рго Меаїісит,

Ї лепебригд). Послідоні А-скани можуть бути комбінованими та представлені на моніторі як частина шкіри. Латеральна роздільна здатність приблизно 200 мкм та аксіальна роздільна здатність 80 мкм є можливими та переважними. В залежності від ехоструктур, присутніми є компоненти епідермісу, дерми та субкутису, та точне вимірювання товщини шкіри є можливим.

Запальний псоріатичний інфільтрат в місці псоріатичної плями має вигляд чітко визначеної ехо смуги просвітлення нижче вхідного ехо. Товщину псоріатичної ехо смуги прсовітлення можуть визначати та документувати перед введенням доменного антитіла та після введення доменного антитіла. Товщину можуть вимірювати в мкм. Зменшення товщини псоріатичної ехо смуги превітлення після введення доменного антитіла демонструє, що введення доменного антитіла, наприклад, відповідно до протоколу лікування, розкритого в даному документі, є ефективним в лікуванні псоріазу та псоріатичної плями у пацієнта-людині. Дивись, наприклад, Вапопйа еї аї.,9

ЗКіп Рпагтасої. 298 (1996).

Клінічні оцінювання можуть виконувати, використовуючи 5-бальне визначення шляхом порівняння клініки псоріатичної плями, що лікується, в якій доменне антитіло ін'єційно вводили,

Зо щонайменше, з однією нелікованою плямою поблизу псоріатичної плями, яку лікують.

Відповідно до даного порівняння призначали наступні бали клінічного оцінювання (бали клінічного оцінювання становлять О при визначенні перед першим введенням доменного антитіла): -1 х погіршився

О - не змінився (без ефекту) 1 - незначне покращення 2 чітке покращення, але не повністю вилікувався

З - повністю вилікувався.

Таким чином, на основі цього, підвищений бал клінічного оцінювання після введення доменного антитіла відповідно до протоколу лікування, як розкрито в даному документі, демонструє ефективність в лікуванні псоріазу та псоріатичної плями у пацієнта-людини.

Приклад 8: Одиничне аланінове подовження до МНН клонів.

АБА зв'язування з МНН спостерігали, використовуючи аналіз підтвердження, який застосовували в прикладі 2 (для ЮОМ1Н-131-206). З метою підтвердження, що подібне інгібування АБА зв'язування могло б досягатися шляхом модифікування МНН послідовності, досліджували три МНН клони з амінокислотними послідовностями, як показано на фігурі 2 (а), (є) та Ф:

Клон УННІ(4) є біспецифічного формату, що має ІбК зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок Осо 50(3(05 зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини, як описано в

МО2010100135. (Амінокислотна послідовність показана на фігурі 2 а: ЗЕО ІЮО МО 4)

Клон МННа(е) є біспецифічного формату, що має ТМЕ зв'язуючий модуль, зв'язаний зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки, який в свою чергу, зв'язаний з ТМЕ зв'язуючим модулем, використовуючи (3(3(3(3505(053(035 як лінкер, як описано в УМО2010077422. (Амінокислотна послідовність показана на фігурі 2 е: ЗЕО ІЮ МО 5)

Клон МНН2(Ї є бівалентного моноспецифічного формату, що містить дві ідентичні молекули, зв'язані за рахунок АІа-Аіа-АЇіа лінкеру, кожна молекула є аАБ, який може зв'язувати АТ домен фактору фон Віллебранда, як показано в УУМО2009115614А2. (Амінокислотна послідовність показана на фігурі 2 7. ЗЕО ІЮ МО 6)

Всі три клони, зазначені вище, були модифіковані шляхом додавання С-термінального аланіну в кінець серинового залишку, та модифіковані й немодифіковані клони порівнювали, використовуючи аналіз з прикладу 2. Як може бути видно нижче в таблиці 7 та на фігурі 4, результати показують, що С-термінальне подовження одиничним аланіновим амінокислотним залишком знижує АБВА зв'язування.

Таблиця 7

Середній 95

Приклад 9: Кількість здорових суб'єктів зі вже існуючим АБА до низки молекул на основі Мн там адь

АБА методика аналізу

Подібно до методики, описаної в прикладі їТ для ВОМ Н-131-206, досліджувані молекули (РОМ 1Н-131-206 (5ЕО І МО 1), ОМ 1ТН-131-206-С-термінальне аланінове подовження (ЗЕСО

ІО МО 16), тАБ-МН (ЗЕО ІЮ МО), пептидна-Ммі послідовність, МН-МІ (5ЕО ІЮО МО 11), "735 молекула (ЗЕО ІЮ МО 30 та 31), біотинилювали, проводили обмін буферу та зберігали в буфері для формулювання. Дані досліджувані молекули, до того ж, мітили рутенієм та потім проводили обмін буферу та зберігали в буфері для формулювання.

Аналіз щодо утворення зшивки анти-медикаментозного антитіла (АБА) для кожної молекули виконують на МБО 7м ЕСІЇ (електрохемілюмінесценція) технологічній платформі, як описно

Зо раніше.

Коротке викладнння методики аналізу, яку застосовують в даному експерименті, описується нижче: 1. М50"7мМ стрептавідиновий планшет блокують 150 мкл/лунка блокуючого казеїну в РВ5 (1 95) при кімнатній температурі (КТ) протягом 1-2 годин. Блокатор видаляють без промивання. 2. Після 1 години попереднього інкубування, гомогенна суміш, що містить 0,1 мкг/мл біотинильованої досліджуваної молекули, 0,1 мкг/мл рутенильованої ("ЗйиМо-Тад' тм) досліджуваної молекули, та 2 9о зразок сироватки в розріджувачі для аналізу (1 95 казеїн в РВ5) переносять в М5О "М планшет та інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. 3. М5О планшет потім промивають З рази РВ5Т. 4. додають 150 мкл/лунка буферу зчитування та планшет зчитують.

Зазначені вище концентрації та часи інкубування застосовували для ВОМ1Н-131-206 молекули.

Кваліфікованому фахівцю буде зрозуміло, що точні концентрації та часи інкубування будуть оптимізовувати, наприклад, ЮООМ'ІН-131-206 (та модифікованих версій) може мати дещо відмінні концентрації та часи інкубування в порівнянні з, наприклад, ООМ1ТОН-53-567 або пептидною-Уї. послідовністю.

Панель зразків сироватки від 100 здорових донорів-людей скринінгували щодо реактивності в аналізі. Вже існуючі антитіла (АСА) щодо варіабельного легкого ланцюга (М), каркас також детектували в нормальних зразках сироватки люди, хоча при нижчій величині та частоті, ніж ті, що раніше спостерігались щодо Мн та Мнн доменів (дивись, фігура 4). Результати показані на фігурі 5, де У вісь показує рівні зв'язування з АБАв5, та Мн дАбБ5 мали найнижчий показник АОА зв'язування.

Висновками були: результати показані на фігурі 5, демонструють рівні вже існуючих АБА5 зв'язування з БОМ 1Н-131-206 та ефект від додавання С-термінального подовження на зв'язування модифікованого ООМ 1Н-131-206 з АБА5. Також на фігурі 5 може спостерігатись,

що вже існуючі АБА5 зв'язування з МН аАБ також спостерігались, коли він зливається з тАБ (тАБ-УН). Фігура 5, крім того, показує, що мають місце зв'язування вже існуючих АБАЗ з М каппа (УК) (М) дАБ»5, та показані приклади включають пептид:Ммі, МН-МІ. злиття та тАБр-МІ. злиття.

Приклад 10: Амінокислотне подовження до Мі. каркасу

Оскільки вже існуючі антитіла щодо МІ (МК) каркасу також були виявлені в нормальних зразках сироватки людини, хоча, як правило, на нижчому рівні, ніж спостерігали щодо УНН каркасу (дивись, фігуру 5), то визначали які модифікації С-термінальної ділянуи МК дАБр5 могли б знижувати вже існуючі АБВА зв'язування, як було доведено для молекул, що містять МН.

Грунтуючись на тАБ:лінкер:Мі молекула (визначена "735 - дана молекула є "тАрадр" - це є

І. -1ЗтАбБ:лінкер':І-4 (м Каппа) дАБ), панель досліджуваних тАб:лінкер: Мі молекули генерували за стандартним сайт-спрямованим мутагенезом, та які містили однакову МІ аАБ послідовність, але мали різні С-термінальні модифікації МІ аАБ. Дані досліджувані речовини, визначені як "15014", "15019", "15020" та "15021", створювали так, щоб мати С-термінальне подовження (-ААА, «Т або «ТМ), або щоб мати С-термінальну делецію (-К) (показану нижче в таблиці 8).

Досліджувані речовини аналізували, використовуючи "аналіз підтвердження", як описано нижче, подібно до того, що описано раніше для Мн дАБ5. Дослідження сполуки виконували шляхом оцінювання здатності окремих сполук конкурувати з міченими аналіз-специфічними сполуками щодо зв'язування з вже існуючими антитілами. Будь-які потенційні зниження сигналу в аналізі представляли як 95 інгібування. Рівні відсотку інгібування більші, ніж попередньо визначені підтверджуючі точки перетину для такого конкретного аналізу, передбачає, що досліджувана сполука конкурує зі специфічною сполукою аналізу щодо зв'язування з анти-УкК антитіла, та таким чином може розділяти епітоп(и) зі специфічною сполукою аналізу.

Методика "735 АБА аналізу підтвердження ргоседиге, яку застосовують для вимірювання частоти вже існуючого АВА з М каппа: 1. В планшеті для мікротитрування аналізу інкубують зразок 2 95 АБА позитивної сироватки в розріджувачі для аналізу (1 95 казеїн в РВ5) протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. з кінцевою концентрацією 10 мкг/мл "735 або іншої досліджуваної речовини, такої як модифіковані аАбв5. 2. Після 1 години попереднього інкубування, гомогенну суміш, що містить 0,05 мкг/мл біотинильованого "735 та 0,05 мкг/мл рутенильованого ("ЗиМо-ТГад" 7) "735, в розріджувачі

Зо аналізу (1 95 казеїн в РВ5) додають до планшету аналізу та інкубують протягом ночі при к.т.

З. Після інкубування, МО планшет потім промивають тричі РВ5Т, зразки аналізу переносять в М5О планшет, та планшет інкубують протягом 1 години х 5 хвилин в темряві при кт. 4. М50 м планшет потім промивають тричі РВ5Т. 5. додають 150 мкл/лунка буферу зчитування та планшет зчитують.

Результати скринінгу даних сполук представлені в таблиці 8. Всі з досліджуваних С- термінальних модифікацій (кААА, «т, «ТМ та -В) показали знижене інгібування в "735 аналізі підтвердження. Це передбачає, що С-термінальні модифікації МІ аАБ5 знімають зв'язування вже існуючих антитіл (АБА5) подібним способом з УН аАБв».

Таблиця 8

Оцінювання АБбА зв'язування тАБ:МІ. "735 мутантів

Модифікація послідовності Фо інгібування в аналіз Фо суб'єктів з

Клон (зроблена з ДАЮ компонентою підтвердження (середнє АПА тАрадр молекули) значення з 7 донорів-суб'єктів зв'язуванням 15020 | 77777771 М11111117 11111185 |у

ШЕ ТР В ПО ПОЛОН ПОЕТ Кг: ПОН ПО ПОН

Приклад 11: Амінокислотне подовження до УН каркасного ФООМІ1ОН-53-567 (анти-ІІ -13 АБ)

Оскільки С-термінальні модифікації анти-ТМЕВІ МН аАБ ОМ 1Н-131-206 зменшували зв'язування вже існуючого АБА, визначали яка модифікація С-кінця могла зменшити АБА зв'язування з відмінною МН молекулою. С-термінальні модифікації робили в МН каркасі рОМ10Н-53-567, використовуючи сайт-спрямовані способи мутагенезу. Молекули із заміщеннями (досліджувані речовини) аналізували, використовуючи "аналіз підтвердження", описаний раніше.

Подовження С-кінця ОВОМ1ОН-53-567 також значно зменшувало зв'язування вже існуючого

АБА (результати показані нижче в таблиці 9). Це ілюструється шляхом подовження А, А5, А5Т,

АБТК, АЗТКО та А5ТКО. Дані модифікації не демонструють негативний вплив на здатність рОМ10Н-53-567 клонів зв'язувати та інгібувати його мішенний антиген 1-13 як підтверджується аналізом щодо активності Ії -13 АБ, описаним нижче, та результати показані в таблиці 9р.

Таблиця 9а

Оцінювання АБбА зв'язування ПОМ1ОН-53-567 мутантів

Фо інгібування в аналізі

Вихідний клон Модифікація підтвердження (середнє Фо суб'єктів з АОА послідовності значення від 10 донорів зв'язуванням суб'єктів

Протокол аналізу щодо 1-13 ДАБ активності:

Біоаналіз застосовували для вимірювання здатності варіантів ПООМ1ОН-53-567 молекули, щоб інгібувати продукування рекомбінантної людської ІІ -13-стимульованої лужної фосфатази в

НЕКВІне-5ТАТВв клітинах іп міго. НЕК-5ТАТб клітини (Іпмімодеп) (які експресують секретовану ембріональну лужну фосфатазу (ЗЕАР) під контролем 5ТАТб-залежного промотеру) висівали в 9б-лункові планшети. людський ІІ -13 в концентрації З нг/мл та серії розбавлення ООМ1-Н-53- 567 молекул попередньо врівноважували протягом 1 години при кімнатній температурі, та потім додавали до клітин протягом 24 годин при 37 "С. Після інкубування, концентрації ЗЕАР, продукованого клітинами, в супернатанті, як результат 1-13 стимуляції, визначали шляхом додавання Опцапіі-Вісе (Іпмімодеп) та одержання оптичної густини, зчитуючи на 640 нм. ІС5О значення розраховували за кривими дози відповіді, використовуючи сгарпрай Ргібзт.

Таблиця 9р

Оцінювання активності для ООМ1ОН-53-567 мутантів

Середнє значення ІС5О (НМ) для й М 2, . . інгібування ІІ-13, індукованого БЕАР

Вихідний клон Модифікація послідовності (середнє значення від 2 та 4 експериментів)

Подовження С-кіння ОЮОМ1ТОН-53-567, яке зменшувало зв'язування вже існуючого АБА, не демонструвало негативний вплив на здатність ФбОМ1ОН-53-567 АБ» зв'язувати та інгібувати їх мішенний антиген (людський І1І--13).

Приклад 12а: Клонування анти-МЕСЕ МН/УК адьЬ-Рс-дАБ молекул з модифікованими С- кінцями

Мп-УкК адр-Рс-дАр5 з модифікаціми, зробленими до С-кінця МК дАр частини: ОМ530047- 30054 були сконструйовані шляхом генерування послідовностей УК аАБ варіанту за допомогою

РСК та потім шляхом переклонування в 0М530045 (5ЕО ІЮ МО 40) та 0ОМ530046 (5ЕО ІЮ МО 41), відповідно, щоб згенерувати модифіковані вектори експресії ссавців. З ЮОМ530045: (ії) С-

Зо термінальний аргініновий залишок видаляли, щоб утворити 0ОМ530047 (0М530037-Р), (ії) С- термінальний аланін додавали, щоб утворити ОМ530048 (який є ОМ530037-А) (5ЕО ІЮ МО 43), (ії) три С-термінальні аланіни додавали, щоб утворити ОМ530049 (0ОМ530037ААА) (5ЕО ІЮ МО

44), та С-термінальний треонін додавали, щоб утворити ОМ530050 (0М530037-Т) (ЗЕО ІЮ МО 453. 3 ЮМ530046 (5ЕБО ІЮО МО 41): (ї) С-термінальний аргініновий залишок видаляли, щоб утворити ОМ530051 (0М530038-К) (5ЕО ІЮ МО 46), (і) С-термінальний аланін додавали, щоб утворити ОМ530052 (0ОМ530038А) (5ЕБО ІО МО 47), (ії) три С-термінальні аланіни додавали, щоб утворити ЮМ530053 (0М530038-ААА) (ЗЕБЕО ІЮ МО 48), та С-термінальний треонін додавали, щоб утворити ОМ530054 (0М530038-Т) (5ЕО ІЮ МО 43).

Описи молекул, зазначених вище є наступними: рм530045: РОМ15-26-597 аАБ М-(МЕРКЗЗОК лінкер) 5 С-термінальний К-044-085 ЧАБ (ТО О5Р)х4), ОМ530046: ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 АБ (Та! О5Р)х4), ОМ530047 (містить модифікований С-кінець): ООМ15-26-597 АБ М-"МЕРК5ЗЗОК лінкер) 4 С-термінальний

К-044-085 аАБ мінус С-термінальний К (ТО О5Р)х4), ЮОМ530048 (містить модифікований С- кінець): БОМ15-26-597 АБ М-"(МЕРК5БОК лінкер) 4 С-термінальний К-044-085 аАБТА (ТО О5Р)х4), ОМ530049 (містить модифікований С-кінець): ПОМ15-26-597 АБ М-(МЕРКЗЗОК лінкер) 5 С-термінальний К-044-085 ДАБ-ААДА (Та! О5Р)Х4), ОМ530050 (містить модифікований

С-кінець): БОМ15-26-597 аАБ М-(МЕРК5ЗОК лінкер) 5 С-термінальний К-044-085 аАБ-АТ (ТОГО5Р)Хх4), ОМ530051 (містить модифікований С-кінець): ОМ51576 з С-термінальним К-044- 085 аАБ мінус С-термінальний К (ТО О5Р)Х4), Ю0М530052 (містить модифікований С-кінець):

ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 ДАБЖА (ТО О5Р)Х4), ОМ530053 (містить модифікований

С-кінець): ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 ДАБААДА (ТО О5Р)х4), ЮОМ530054 (містить модифікований С-кінець): 0ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 аАБ-Т (ТОагО5Р)Х4) (амінокислотні послідовності молекул показані на фігурі 12 та ЗЕО ІЮ МО 40-49).

Приклад 128: Модифікації С-термінальної ділянки МЕСЕ Мк аАБ гантельних молекул рмМ530037 та ОМ530038 зменшували зв'язування з вже існуючими антитілами

Методика М каппа АВА аналізу підтвердження, яку застосовують для вимірювання кількості вже існуючого АБВА з М каппа: 1. В планшеті для мікротитрування аналізу, зразок 1095 АБА позитивної сироватки в розріджувачі для аналізу (1 95 казеїн в РВ5) інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. З кінцевою концентрацією 10 мкг/мл досліджуваної речовини, такої як модифіковані аАбБв. 2. Після 1 години попереднього інкубування, АБА позитивну сироватку/досліджувану

Зо речовину додають до планшету аналізу з гомогенною сумішшю, що містить біотинильований М каппа аАБбБ (немодифікований) та рутенильований ("З!йиМо-Тад' 7) "М каппа аАБ (немодифікований) з кінцевою концентрацією приблизно 0,025 мкг/мл біотинильованого аАБ, приблизно 0,0125 мкг/мл рутенильованого ("Зціто-Тад' тпм) аАБ, та 595 АБА позитивної сироватки в розріджувачі аналізу (1 95 казеїн в РВ5). Планшет інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. 3. М507М стрептавідиновий планшет блокують 150 мкл/лунка блокуючого казеїну в РВ5 (1 95) при кімнатній температурі (КТ) протягом 1-2 годин. Блокатор видаляють без промивання. 4. Після 1 години попереднього інкубування, гомогенну суміш додають до М5О тм стрептавідинового планшету аналізу та інкубують протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. 5. Після 1 години інкубування, МБО планшет далі тричі промивають РВЗТ, зразки аналізу переносять в М5О планшет, та планшет інкубують протягом 1 години х 5 хвилин в темряві при кт. 6. М5О "М планшет потім тричі промивають РВЗТ 7. Додають 150 мкл/лунку буферу зчитування та планшет зчитують.

Кваліфікованому фахівцю буде зрозуміло, що точні концентрації та часи інкубувань в аналізах підтвердження будуть оптимізовані, наприклад 1Н-131-206 (та модифіковані версії) може мати незначну різницю в концентраціях та часах інкубувань в порінянні з бОМ1ТОН-53-567.

Результати скринінгів даної сполуки представлені в таблиці 9В нижче. Всі з досліджених С- термінальних модифікацій на М каппа дАбБз (УТ, кА, хААА та -К) показали знижене інгібування в наведеному вище "697 аналізі підтвердження. Це передбачає, що С-термінальні модифікації даних М каппа 4ЗАБ5 зменшують зв'язування вже існуючих антитіл (АБА5) подібним способом з

Мп аАбрз.

Таблиця 9р

Оцінювання АБбВА зв'язування ОМ53007 та ОМ53008 мутантів

РМ | меюннитеннс ДОКЕКТЕ т ня

Вихідний М 2. . й сигналу в аналізі підтвер- зв'язуванням одифікація послідовності клон дження (середнє значення з | (середнє значення з 6 суб'єктів 6 суб'єктів додавання нини

Приклад 13 - Експресія анти-МЕСЕ УН/УК ДАрБ-ЕРс-дАЮр молекул з модифікованими С-кінцями (0М530047-30054) плазміди експресії, що кодують відповідні анти-МЕСЕ адБ-Ес-дАБЬ молекули, описані вище в прикладі 12а тимчасово трансфікували в НЕК293 бЕ клітини та експресували в 500 мл масштабі, щоб отримати молекули фрагментів антитіл, використовуючи спосіб, описаний нижче в даному прикладі. Рівні експресії 230 мг/л супернатанту досягали в становленому порядку. аАБ послідовності клонували в М- або С-кінці багатофункціонального Ес людського Ідс1 ізотипу в ссавцевому векторі експресії. ДАр5 зв'язувалися з Ес, використовуючи лінкерну послідовність: М-термінальним лінкером був або АДАб5, або ТМААР5 та С-термінальним лінкером був або (С5(ТМААРЗО5)Х3), або альбуміновий домен 3.

Приклад 14 Очистка анти-МЕСЕ УН/УК аАБ-Ес-дАБЬ молекул з модифікованими С-кінцми аАр-Ес-дАБЬ молекули афінно чистили з супернатантів, як описано для прикладувище.

Приклад 15 Молекулярний аналіз, використовуючи гель-хроматографію (5ЕС) анти-МЕСЕ

Уп/Ук аАр-Рс-дАБВ молекул з модифікованими С-кінцями

Молекулярна цілісність, гомогенність та 96 чистоти анти-МЕС(НЕ адАр-Ро-дАБ молекул, які очищували, потім аналізували, використовуючи 505-РАСЕ та аналітичну гель-хроматографію (ЗЕС). Таким чином, підтверджено, що протеїни є »95 956 чистим мішенним протеїном за 505-

РАСЕ та 5ЕС до наступного аналізу в біологічних аналізах.

Приклад 16 Зв'язування анти-МЕСЕ Уп/УкК ДАрБ-ЕРс-дАЮр молекул з модифікованими С-кінцями

З МЕСЕ на Віасоге.

Афінність зв'язування певних анти-МЕСЕ аАБ-Рс-дАБ молекул (з невеликими сС- термінальними модифікаціями) для МЕСЕївє5 визначали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (РК), використовуючи Віасоге Т100. Протеїн А імобілізували на С1 чіпі шляхом сполучення первинного аміну та даної поверхні, потім застосовували, щоб покрити анти-МЕСЕконструкти. Людський рекомбінантний МЕС 65 (від джерела "в домі" від перехідної трансфекція з НЕК293 клітинами) застосовували як аналіт від 32 нМ до 0,03125 НМ в 4 кратних серіях розбавлення. Всі криві зв'язування двічі посилалися на буфер для ін'єкцій (тобто 0 нМ) та

Зо дані характеризували 1:1 модель властиву 7100. Регенерацію виконували, використовуючи 50 мМ Ммаон. Пробіг здійснювали при 37 "С, використовуючи НВ5-ЕР, буфер перебігу. Одержані дані показані в таблицях 10А, 108 5 10С. За даними в таблиці 10А, поведінка ОМ530037 та декількох варіантів, модифікованих на С-кінці: 0ЮМ530037-А (0М530048), ЮОМ530037ААА (0М530049) та ОМ530037-Т (0М530050) (дивись приклад 12а, для наступної деталізації даних молекул) відображає співставимі на Віасоге, та С-термінальні модифікації не з'являються для зниження ефективності в порівнянні з вихідною.

Додатковий набір даних є показаним в таблиці 108, де ефективність як ОМ530037, так і рмМ530038 порівнювали з варіантами, модифікованими на С-кінці: ОМ530037-К, (маркованими як АК (0М530047), ОМ530037 -Т (0М530050) та ОМ530038-Е, (маркованими як 4 (0М530051) та бевацизунаб (Авастин) в Віасоге. В цьому наборі даних, до того ж, поведінка всіх молекул відображається співставимою на Віасоге, та С-термінальні модифікації не з'являються для зниження ефективності в порівнянні з вихідною. Важливі дані могли не охоплювати інші ніж ті,

що розглядаються кривою для авастину. Додатковий набір даних є показаним в таблиці 10С, в якій молекули ОМ530037 та ОМ530038 порівнювали з варіантами, модифікованими на С-кінці: рм530037-8, (0М530047), ОМ530037-1 (0М530050), ОМ530038-К, (0М530051) та рм530038-Т (0М530054) та бевацизунаб (Авастин). До того ж, поведінка всіх ЗАБ-Рс-аАЬ молекул відображається співставимою на Віасоге, та С-термінальні модифікації не з'являються для зниження ефективності в порівнянні з вихідною. Стосовно цього набору даних, дивись таблицю 10С, дані щодо бевацизунабу (Авастину) не могли, належним чином, вимірюватись завдяки швидкості дисоціації, яка є занадто стійкою.

Таблиця 10А

Зв'язування анти-МЕСЕ аАр-Ес-дАЮ молекули: ОМ530037 з

С-термінальними модифікаціями з МЕСЕ:в5 та в порівнянні з ОМ530037

Таблиця 108: Зв'язування анти-МЕСЕ аАр-Рсо-ДАБ молекули: ОМ530037 та ОМ530038 з С- термінальними модифікаціями з МЕСЕ:ієх та в порівнянні з вихідним аАБр-Рс-дАБ та бевацизунабом (Авастином).

Таблиця 108

Таблиця 10С: Зв'язування анти-МЕСЕ адбБ-Ес-дАЮ молекули: ОМ530037 та ОМ530038 з С- термінальними модифікації з МЕСІЕ:в5 та в порівнянні з вихідним ЗАБ-Ес-дАЬ та бевацизунабом (Авастином).

Таблиця 10С

Приклад 17 Аналіз зв'язування з рецептором МЕСЕ Н2 анти-МЕСЕ Мп/УкК алдб-Ес-аАБ молекул з модифікованими С-кінцями

Ефективності анти-МЕСШЕ Мп/ЛУК адр-Рсо-дАр молекул, що грунтується на ЮМ530037 та 0ОМ530038, але з С-термінальними модифікаціями, порівнювали як з немутантним типом молекули, так і з бевацизунабом (Авастином), в аналізі зв'язування з МЕСЕ рецептором 2, (К2), використовуючи модифікований спосіб, тобто з попереднім інкубуванням, як описано нижче в даному прикладі. Дані показані в таблиці 11А, всі досліджувані аАБ-Ро-дАБ молекули: рм530037, ЮМ530037-1 (0М530050), ЮМ530037-А (0М530047), ОМ530038, ЮМ530038-8 (0М530051), представлено, що є співставимими за ефективністю, та мають значно більшу

Зо ефективність, ніж бевацизунаб (Авастин), Таблиця 11А. незначна зміна існувала в максимальному відсотку інгібування, який досягався молекулами в аналізі зі всіма молекулами, досягаючи 93-98 95 максимальне інгібування, (дані не показані).

Наступні дані отримували порівнянням ЗАБ-Рсо-ЯдДАБв5: ОМ5З30038, ЮОМ530038.--1, (0М530050) та ЮОМ530038-К, (0М530051) з бевацизунабом (Авастином), в тому самому форматі аналізу, дані представлені в таблиці 118. За даними ЮМ530038 та його С-термінальні варіанти, (таблиця 118), мають подібні ефективності, які оцінюють за ЕС50О значеннями в КВА аналізі, та представлено, що є значно більш ефективним, ніж бевацизунаб (Авастин) за даними критеріями. незначна зміна існувала в максимальному відсотку інгібування, який досягався молекулами в аналізі зі всіма молекулами, досягаючи »94 95 максимальне інгібування, (дані не показані).

Аналіз зв'язування з рецептором МЕСЕ К2: Ефективності аналізували в аналізі зв'язування з рецептором МЕСЕ в порівнянні з бевацизунабом (Авастином). Даний аналіз вимірює зв'язування МЕСЕ165, з або МЕСЕ КІ, або МЕСЕ К2 та здатність досліджуваних молекул блокувати дану взаємодію. М5О стандартний для зв'язування 96-лунковий планшет (І 11ХА-3) накривали 0,25 мкг/мл МЕСЕ КІ (К850О системи 321-РЇ) або МЕСЕ К2 (К80 357-КО) в букарбонатному буфері (50 мкл/лунку), поуривали планшетним герметиком та інкубували протягом ночі при 4 "С. Наступного дня М5О планшет промивали З х 300 мкл/лунку Ттгі5 промивним буфером та фарбували над шаром тканини, щоб видалити надлишок промивного буферу з лунок. МБО планшет потім блокували З 95 В5А в РВ5З (250 мкл/лунку) та інкубують, перемішуючи (750 обертах на хвилину) при кімнатній температурі протягом 1 години. МБО планшет промивали знову перед додавання 2х концентрації анти-МЕСОЕ молекули (25 мкл/лунку) та інкубували з перемішуванням (750 обертах на хвилину) при кімнатній температурі протягом 10 хвилин перед додавання 2х концентраці ППМЕСЕ, 25 мкл/лунку, КО системи (293-

МЕ/СЕ, робили в клітинах комах, використовуючи бакуловірус) або С5К "внутрішнє" джерело

МЕСБЕ (зроблене з НЕК293 клітин ссавців, останні дані не представлені, за виключенням таблиці

ЗА). Анти-МЕСЕ молекули та МЕСЕ одержували, використовуючи 0,1 95 ВЗА в РВ5. Початковий аналіз виконували зі стадією, в якій анти-МЕСЕ молекула попередньо інкубували з МЕСБЕ.

Попередні інкубування проводили шляхом додавання однакового об'єму 2х концентрації анти-

МЕСЕ молекули до однакового об'єму 2х концентрації МЕСЕ (К80О, 293-МЕ/СЕ) протягом 30

Зо хвилин при кімнатній температурі. Кінцева МЕСЕ концентрація, яку застосовували, становила 10 нг/мл. Без МЕСЕ та МЕСЕ самостійні контролі також включали. М5О планшет інкубули з перемішуванням (750 обертах на хвилину) при кімнатній температурі протягом 2 годин після чого його промивали знову перед додаванням реагенту для детектування (50 мкл/лунку, козине анти-людське МЕСЕ біотинильоване антитіло - КО системи ВАЕ293) з 0,25 мкл/мл в 1 95 В5А в

РВ5 та інкубували з перемішуванням (750 обертах на хвилину) при кімнатній температурі протягом 1 години. МБО планшет промивали знову перед додавання стрептавідину 5зийо-ТАС (50 мкл/лунку, МБО КЗ32АО-1) в 2 мкл/мл в 1 95 ВЗА в РВ5 та інкубували з перемішуванням (750 обертах на хвилину) при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. Перед вимірюванням електрохемілюмінесценції в М5О Зесіог Ітадег 6000, М5О планшет промивали та додавали 150 мкл/лунку 2х буферу зчитування Т (М5О КУ2ТС-1). Апроксимацію кривої та розрахунки ЕС5О виконували, використовуючи сгарпРаай Ргіз5т. Здатність досліджуваних анти-МЕСЕ молекул та бевацизунабу (Авастину) інгібувати МЕСЕ зв'язування з МЕСЕКІ та МЕСЕК2 визначали, як описано.

Модифікований спосіб: Другий аналіз виконували у відповідності з чим анти-МЕСЕ агент та

МЕСЕ попередньо не інкубували перед додаванням до покритого М5О планшету з МЕСЕ рецептором. Даний аналіз проводили та застосовували тільки МЕСЕ джерело від КО систем, (293-МЕ/СЕ). Здатність анти-"МЕСЕ молекул та бевацизунабу (Авастину) інгібувати МЕСЕ зв'язування з МЕСЕКІ та МЕСЕК2 визначали, як описано вище, але без стадії попереднього інкубування.

Таблиця 11А: ЕС»5о значення анти-МЕСЕ адр-Рс-дДАБ5 з С-термінальними модифікаціями порівнювали з бевацизунабом (Авастином) в аналізі зв'язування з рецептором МЕСЕК2:

Апроксимацію кривої та ЕСво розрахунки виконували, використовуючи СсгарпРаа Ргізт.

Таблиця 11А 000 МЕоРваввА (А - - - - - --- -- 255. 2 ЬЬ- 4 ---2525-- -

Ж КА лому му давастин//////77777 17771711 111111 121207 | 80642 ом530037 77777777 29909 | 77777281 оме30о37юТ 77777771 298е09 | 77777281 ом530037-8.7777777 17777171 11111 266Б09 | -::К 25...:(С(Н ом530038..777777777171717117117111111111111111111111111111337209. | 32

ПоІТеК ТЯ 5 ПИ ПОНІ НО: КИ ПО У ДОП

Таблиця 118: ЕСво значення анти-МЕСЕ адр-Рс-дАре з С-термінальними модифікаціями порівнювали з бевацизунабом (Авастином) в аналізі зв'язування з рецептором МЕСЕР2:

Таблиця 118

Приклад 18 - проліфераційний аналіз ендотеліальних клітин пупочної вени людини:

Інгібування анти-МЕСЕ Мп/УК аАр-ЕРс-дАВ молекулами, які містять С-термінальні модифікації:

Здатність ЧФАБ-Ро-ДАр молекул, що грунтуються на ЮОМ530037 та ЮМ530038, але з С- термінальними модифікаціями: ОМ530037-А (0М530047) а ЮОМ530037-1 (0М530050), рм530038-К (0М530051) а ОмМ530038-1 (0М530054), пригнічувати проліферацію ендотеліальних клітин пупочної вени людини порівнювали з бевацизунабом (Авастином), використовуючи спосіб, описаний нижче з наступними відхиленнями (ії) замість того, щоб залишати зовнішні лунки вільними від клітин, застосовували цілий 96-лунковий планшет, та (ії) дані аналізували, використовуючи СгарпРай Ргіхт, використовуючи Зідтоаіа! підбір кривої, змінний нахил сії нелінійної регресії (змінний нахил). Досліджені сполуки незалежно оцінювали на окремих планшетах проти молекули порівняння, бевацизунабу (Авастину); аналіз виконували, щонайменше, для трьох окремих випадків, із загальним набором даних на молекулу бевацизунаба (Авастину): 155 ОМ530037: 7; ЮОМ530038: 8; ОМ530037-8 (0М530047):

З; ЮМ530037-1 (0М530050): 4; ЮОМ530038-8 (0М530051): 4 5 ЮМ530038-1 (0М530054): 4, (дані не показано). Акцент був зроблений на аналіз як ступеню максимального інгібування так і відносного значення ЕС5О в аналіз, сформованими певними молекулами порівнянні з бевацизунабом (Авастином).

Дані аналізували, використовуючи сгарпРаай Ргіхт, використовуючи Зідтодіаї! підбір кривої, змінний нахил сії нелінійної регресії (змінний нахил). Окремі параметри кривої встановлювали для кожної молекули та кожного дня. Через дещо недосконалий підбір, було прийняте рішення ввести обмеження для кривої, зякими не спостерігалось плато при більш низькій концентрації.

Один планшет був виключений з аналізу через недосконалу апроксимацію кривої, незважаючи

Зо на обмеження. Дане обмеження буде дорівнювати середньому значенню точок при найнижчій концентрації. Дані вибирали вручну, відносно того чи мінімум був обмеженим чи ні, та форма і параметри кривої автоматично оновлювались на основі цього критерію відбору. Оцінки максимумів кривої та стандартної помилки були проаналізовані, використовуючи зважену змішану модель дисперсійного аналізу, використовуючи 1/(стандартна помилка)", ІЗЕЇ, як зважування. Аналіз пристосовували щодо варіабільності між планшетами та днями, використовуючи терміни випадкових ефектів. З цього аналізу, передбачені середні значення оцінювалися, та робили порівняння повертаючись до Авастину (контроль) (дивись, таблицю 12А). Той же аналіз потім проводили за шкалою 0910 для ІС5О, та результати назад перетворювали. Виходячи з цього, сформульовували оцінки середніх геометричних значень та проводили порівняння повертаючись до авастину у вигляді відношення до авастину (контроль), тобто відношення 0,5 означатиме 50 95 менше від авастину (дивись таблицю 128).

Проліфераційний аналіз ендотеліальних клітин пуповини (НОМЕС):

Анти-МЕСЕ молекули аналізували щодо їх здатності пригнічувати проліферацію ендотеліальних клітин пупочної вени людини в порівнянні з бевацизунабом (Авастином). Даний аналіз вимірює ступінь проліферації ендотеліальних клітин, яка індукується певною концентрацією МЕСЕ:65, та здатність МЕСЕ антагоністів блокувати даний ефект. НОМЕС висівали по 5000 клітин на лунку в 96-лункові покриті желатином планшети, залишаючи зовнішні лунки вільними від клітин, та інкубують протягом декількох годин, щоб доти можливість адгезії.

Досліджувані молекули аналізували в еквімолярних концентраціях (тах 3,33 х 1098М) з 2- кратним серійним розбавленням, кожен в трьох повторах. МЕСЕ:65 готували в базальному середовищі, щоб досягти кінцеву концентрацію 75 нг/мл. середовищі видаляли вручну з клітинних моношарів, та додавали 50 мкл базальних середовищ, щоб попередити висихання клітин. 25 мкл середовища, що містить МЕСЕ:і6є5, та 25 мкл базального середовища або середовища, що містить досліджуване антитіло, додавали як відповідне. Клітини інкубували протягом 72 годин, часу після якого визначали загальну кількість клітин, використовуючи протокол Сей Тйге біо. Обробка НОМЕС з МЕСЕ:65 в результаті призвела до очікуваного зростання загальної кількості клітин через 72 години, коли порівнювали з необробленими

МЕС, 65 клітинами (дані не показані). Дане МЕСЕ-опосередковане зростання інтерпретують як відображаючий кумулятивні ефекти МЕСЕ як щодо НОМЕС проліферації, так і попередження

НОМЕС клітинної смерті. Досліджувані сполуки незалежно оцінювали на окремих планшетах п відношенню до молекули порівняння, бевацизунабу (Авастину).

Таблиця 12А: Прогнозовані середні геометричні значення максимального відсотку інгібування С-термінально модифікованого анти-МЕСкЕ аАБ-Рс-аАре з 9595 довірчими інтервалами (СІ) в порівнянні з вихідним та бевацизумабом (Авастином) в аналізі НОМЕС:

Таблиця 12А

Прогнозовані середні значення Мах 95 інгібування

З цього аналізу представлено, що молекули ОМ530037, Ю0ОМ530037-ї та ОМ530037-К, в результаті призводять до найбільш максимального інгібування в аналізі НОМЕС, та вони перевершували групу авастину, довірчий інтервал не перекривав нульову точку відліку таким чином, що дані були статистично суттєвими від такого авастину, дані не показані (дивись таблицю 12А).

Зо Таблиця 128: Середні геометричні значення ІС50 для С-термінально модифікованих анти-

МЕРЕ аАр-Рсе-дАр5 з 9595 довірчими інтервалами (Сі) в порівнянні з вихідним та бевацизумабом (Авастином) в аналізі:

Таблиця 128

Середні геометричні значення ІС5О

Подібний аналіз середніх геометричних значень ІС5О з 95 95 довірчими інтервалами, (СІ), показав, що майже всі дАБ-Ес-дАБ молекули ОМ530037, ОМ530037 -Т, ОМ530038, ОМ530038-7 та ОМ530038-Е мали статистично значно менші значення І/С50, ніж авастин, дані не показані (дивись таблицю 188). Набір даних від ОМ530037-Е був високо варіабельним з низьким числом п (3).

Загальна дані дозволяють припустити, що С-термінальні модифікації як адБ-Ро-аАБрв: рм530037 5 0М530038 мають дуже схожі значення ІС50 та рівні максимального інгібування в аналізі НОМЕС щодо вихідних молекул, та відображають більшу ефективність, ніж бевацизунаб (Авастин), як стосовно максимального відсотку інгібування, так і нижчого ІС50, (дивись таблиці 12А та 128).

Приклад 19 (Зонд тАБб): Застосування анти-МН тАБ для визначення епітопу для зв'язування вже існуючого анти-МН АВА:

Моноклональне антитіло (анти-МН тАБ М2.30510.10506) зв'язується з МН каркасом СОМ'І Н- 131-206, та визначено, що даний тАБб має набагато знижене зв'язування з ООМ1Н-131-206-4А; в наслідок цього дане антитіло виступає, щоб зв'язати подібний епітоп зі вже існуючим людським анти-МН АБВА.

СОК послідовності анти-МН тАр М2.30510.1506: СОК послідовності анти-МН тАБ

М2.30510.1506 ампліфікували та секвенсували з гібридомною клітинною лінією. Важкий та легкий ланцюг послідовності для тАБ М2.3010.1506 є опоказаними в (Цамінокислотні послідовності є показаними на фігурі ба та 6Б). Послідовності клонували в людському (991 таб векторі експресії та трансфікували в клітинах ссавців для експресії ідентифікованого тАб.

Одержане в результаті антитіло чистили від клітинного супернатанту та досліджували щодо його здатності зв'язувати УН аАБ каркас.

Специфічність анти-МН тАр М2.30510.1506: Специфічність тАБб М2.30510.1506 щодо зв'язування з УН адАБ каркасом (з або без модифікації, що анулює зв'язування вже існуючого

АБА) визначали шляхом вимірювання зв'язування тАб М2.3510.10506 в аналізі ТМЕК1:аАр зв'язування, що виконують на М5О 7м платформі (дивись приклад 1 щодо деталей М5О "м платформи). Аналіз ТМЕКІ1:ЯДАр зв'язування є деталізованим нижче. Продемонстровано, що рутенильований анти-МН тАр М2.30510.1506 має знижене зв'язування з УН каркасом до 85 95, коли С-кінець є модифікованим шляхом подовження аланіном (від 1 до 15 95 залишкового зв'язування) (результати показані в таблиці 13).

Зо Конкуренція між вже існуючим анти-МН АБВА та тА М2.30510.1506: Для підтвердження того, що анти-МН тАБ М2.3010.1506 зв'язує той самий епітоп, як вже існуючий анти-МН АБА сироватки, виконували аналіз щодо конкуренції. Встановлено, що сироватка від ряду людей- донорів з вже існуючим анти-МН АбБА могла конкурувати з анти-МН тАБб М2.30510.1506 щодо зв'язування з ООМІН-131-206 (дані показані на фігурі 7). Ми дійшли висновку, що вже існуючий людський анти-МН АБА та анти-МН тАБб М2.30510.1506 приймають участь в перекриванні епітопу на МН каркасі.

Модифікації МН аАбБ5, які перешкоджають епітопу зв'язування щодо вже існуючого АБВА, можуть бути передбаченими на основі зв'язування анти-МН тА М2.30510.1506. Зв'язування анти-МН тАр М2.30510.10506 можуть, в наслідок цього, застосовувати для аналізу щодо модифікації, що призводить до зниженого зв'язування вже існуючого АБА.

Способи, які застосовують:

Протокол аналізу ТМЕК1:дАБ зв'язування 1. ТМЕКТ:Ес утримуються у високо зв'язуючому М5О планшеті протягом ночі при 4 "С. М5О планшет потім промивають З рази М5О/ТРІ5 промивним буфером. 2. Планшет блокують З 95 ВЗА в РВЗ протягом 1,5 години при кімнатній температурі. МБО планшет потім промивають З рази М5О/ТРІ5 промивним буфером. 3. Серії розбавлення досліджуваного ДАВ (БОМ 1Н-131-206 (5ЕО І МО 1) або СОМ 1Н-131- 206 з С-термінальним аланіновим подовженням (ЗЕО ІО МО 16)) додають протягом 2 годин при к.т. М5О планшет потім промивають З рази М5О/ТРІ5 промивним буфером. 4. Рутенильований тАБ М2.3010.10506 з кінцевою концентрацією 1 мкг/мл додають протягом 1 години при кімнатній температурі. М5О планшет потім промивають З рази М5О/ТКІЗ5 промивним буфером. 5. Додають 150 мкл/лунка буферу зчитування, та планшет зчитують.

Протокол конкурентного аналізу щодо вже існуючого анти-МН АБА та тАБб М2.30510.1506 1. 0,2 мкг/мл біотинильованої досліджуваної молекули (дАБ), яка була ОМ 1Н-131-206 (ЗЕО ІО МО 1), та зразок 20 95 сироватки в розріджувачі для аналізу (195 казеїн в РВ5) інкубують в круглодонному планшеті для аналізу протягом 1 години х 5 хвилин при к.т. 2. Рутенильований анти-МН тАБ М2.3010.10506 в кінцевій концентрації 0,5 мкг/мл додають протягом 1 години при кімнатній температурі.

3. М507М стрептавідиновий планшет блокують 150 мкл/лунка блокуючого казеїну в РВ5 (1 Фо) при кімнатній температурі (к.т.) протягом 1-2 годин. 4. Зразки переносять до МОЮ "М стрептавідинового планшету та інкубують при кімнатній температурі (к.т.) протягом 1-2 годин. 5. М5О планшет потім промивають З рази РВ5Т. 6. Додають 150 мкл/лунка буферу зчитування, та планшет зчитують.

Таблиця 13: Диференційне зв'язування анти-МН тАБ з ВОМІН-131-206 або ВОМ Н-131- 206, модифікованим С-термінальним подовженням

Таблиця 13 концентрація Відносне зв'язування з досліджуваного аАЬ СЕЕлн БОМН-133 206 роМІнІ31-206- С- 90000 | 1078743517931 | 6602053207. | 6 нини пи У т ВИ СУ У ПО

Даний тАБ зв'язує каркас МН адАБ5, наприклад, ООМ 1Н-131-206 (5ЕО ІЮ МО 1), але зв'язування є суттєво зниженим в 4АБ5 з А С-термінальною модифікацією, наприклад, ООМ 1Н-131-206 з С-термінальним аланіновим подовженням (ЗЕО І МО 16). Н 4 Ї ланцюг послідовності визначали з гібридоми, яка зберігається в Віосаї. Існувала тільки одна ІС послідовність, але дві НС послідовності: одна функціональна (дивись нижче) та одна нефункціональна послідовність, включаючи стоп-кодони та зсуви рамок.

Експресія тАбр та підтвердження зв'язування по відношенню до двох молекул, зазначених вище, грунтуючись на передбаченій функціональній послідовності нижче дозволить нам підтвердити, що ми маємо коректну тАбБ послідовність для реєстрації. Спосіб, за яким формують рТТ5 конструкти, означає, що тільки послідовність не курсивом є з гібридоми, курсивом є химерна з рт вектору, її клонували (це не вимагається для аналізу зв'язування).

Легкий ланцюг

РІММТО5ОКЕМЗРТІУаОВУБІТСКАБОММИаТАМАМ УООКРООБРКИ ІМЗАЗМАУТИаУРОВЕТа завзатовЕ т ТІМММОЗЕОІ АМЕСООМавзуРІ ТЕДСОИТКІ ЕІКАТМААРЗМУРІЕРРРЗОЕОЇ КЗатАБУ

МСГПЯММЕМРАЕАКМОМКУДНКІ О5Д2М5ОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТН

ОСІ 5ББРУТК5ЕМАСОСЕС

Важкий ланцюг

ЕМО! ОО5ОаРМІ УКРОАЗУКМЗСКАБаИхтІі ТЕЗММНУУКОЗНИакКВІ ЕУЛОамМІЗРУМОС,ТЗУМОК

ЕКОКАТІ ТМОКОЗЗЗТАУМЕЇ МІ Т5ЕОБАУУУСТАВСаММОРБУМУ ГАМ СОСТІ МГМ5ААКТТРРОМЕ

Зо РГАРБ5ЗКЗТЗаИасСТААЇ СІ МКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ Та УНТЕРАМІ О55Д(2І 51 55УМТУРБББІ

СТОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇТЇ СС РЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТС

МУУМВУЗНЕОРЕУМКЕМУУУрамМЕМНМАКТКРАЕЄОММЗ ТИВ ТМ НОБУЛ МЕКЕУКСКУЗМК

АЇ РАРІЕКТІЗКАКЕОРАЕРОММУТІ РРОВОЕЇ ТКМОУБІ ТС УКЕМРЗВІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТ

РРМ'ОБОрав5зЕРІ ЗК ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І ЗРОК

Варіабельна ділянка в нормальному типі.

СОК5 підкреслена/жирним шрифтом

Химерна послідовність для Ес курсивом.

Ес є людським ІдДО1.

Послідовності для зонду тАБб показані на фігурі 6 (ЗЕО ІЮО МО 14 та 15). 5О0

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1102 ГЛАКСО ГРУП ЛІМІТЕД

Морлі Нітер

Люіс Еллан

Сендел Томас

Ешмен Клер

Стюврд Майкп

Де Віядт Рудолю

Хопланд Клер

Берчлер Мері «1202 МОДИФІКОВАНІ ПРОТЕЇНИ ТА ПЕПТИДИ «1302 РВб4743мо «150» ЦЕ 6Б1/524 488 «1512 ШОУ «18502 8 11219953 «18» 2011-12-12 «15025585 1121233.9. «1512 2013-12-19 «150 ЗВ 1191936, «1512 2013-19-12 «1502 РОСТЕКОО12084632 «151» 2012-07-95 1502 45 «170» Баві5 БО г пасту мегвіоп Я о «1051 «ЕЛ ТІВ «9125 КТ «13 Штучна поспідовність «об» «га» пемодисікований ЧА БОМ 1Н-131-206 Танти-ТМЕВу «00» 1 сві ма сіпіес без сш Зег у Спу Су бец Ма! іп го Сну Оу 1 5 ю 15

Бегіец Аго Ге Бег Сує Аа Аз Зег Сіу Рре тис Ріє Аіа Нів Су 20 25 Зо

Так Ме Уві Ттр Уві Ата Зп Аа Рго Оу уз Оу Гей 0 Тр Уві 35 43 45

Бе Нів Це Рго Рго АЛер Су бів Авр Ро Рне Тук Аа Авр Зет Ма) 5О 55 бо

Гув Су Ага Ре Тит Пе бег Арго Авр Авп Зег ув Ав Тог Ге Туго 65 70 75 80 їец Сів МегАвзп Зог Ге Аго Ада іш Ар Тог Аа Ма! Туг Вів Су ! до 90 95

Аа б еціви Ргоії уз Ага Зіу Рію тр Ре Авр о Тус тер ЗУ іп Су то Болю

Тнгіео Уа ТЕ Ма! Заг Заг нь «2 «в 119 «2122 РЕ «213» Штучна послідовність «202 «8232 Немодифікований ЗАВ СОМ Н-Т31-511 (анти-ТМЕВ) «400» 2

СІЮ Ма! Сіп і еу еп сі Бег біу Су Оу ви Ма! Сі Рго Су Сі»

І 5 10 15 зЗегбешгАгз бец шег Суб Ав Аа Зег СОІУ Ре Тні Ре Аіа Нів ОЦ го бо 30 ,

Тяг Ме Майур МабАгта Сл Ага Рто Бу ув СУ Сво Он Тер Ма! 35 40 45

Зег Міз Не Рго Рго Мав! Су Оп Авр.Рго Ре Туг Лів Авр Зег Ма! 50 55 що

Гуз у Ага Ре ТС Пе Зег Ага Авр.Авп о Звї був Ав тт бе Туг б г ле Во мец Сіп Мег Ап Заг ей Аго Аа Сід Авр Пт Аа ма Тут Тут Суз 90 95

Аа ей сец Ро ув Аг ЗУ Ро Тгр Ре Авр Туг ТероОїУ С Ох о 105 110

Тигрес ма) Тег Уві Зет Зег 115 «1055 «рів 11о .

«2122» РВТ «Р132 Штучна послідовність «0» «2232 Немодифікований ЧА СОМ 1Н-131-209 (анти МЕ) кА» З сі Уа сій без гео С ЗегСЯу СТУ Су ви Ма! Сів го Су Су

З 5 то 15

Бег Гец Ага Сеи Бег Сувз Аа Аа Бег Су Ре ТП Ре Аїа Нів Су

Зо

Тв Меєма! Тер Ма Ага іп Ада то су Був ВІУ ви БИ Тр Уві

Бег Ніз ПесРго Рго Авро Су іп Авр Рго бле Туї Аа Авр Бег Уа

БО 55 60

Гуз СУ Ага Рне Тіг Пе бБег Аг Авр Авп Зегі ув Ал Тргїеи Туг во та 75 во і ви бів Меї Аво бБегі еп А Ав и Ава Тиг Ав Ма! Туг Тут Сув

За що 95 дае се го ув Ага Су Рго То Ре Аво тує ТПеросчу п сх 100 105 то

Твгі ви ма ТНе Ма! бег Бег 115 «21024 ка» 245 «во» РЕТ «23» Штучна послідовність «Ех Я ше кре» УНН «МЮ» й

Сію Маї Сів без Уві сту Зег Сіу Сх Сіу кеи мага Рео у Зі 1 Ні ю 15

БегіегАтщіви Баг Сув Ада Дів Бег Сіу Бег Ма! Ре ув Це Ав 20 25 0

Уа Маг Ав Тв ТуєАг ів Аа Рго сну Гуз СУ Ага сі бец Уа!

ЗБ о есдво То

Ага Су Не Це Бег Оу су Зег Тр Бек тус Ага Ар беїг Ма у о 55 о. іх Ага Рпе Тв Те бегАгу Ар Авп Ав ув Ав ТА ен Тугуей 65 7 73 що

Сіп Мет Азп о Бегі еи Агу Рго біц Авр Тиг Аа Уві Туг Туг Сув Ада 85 90 95 рпе це ТА Тег СО бег Ар ТУ Авв і ви СЛУ Аг Аг туї То Оу то 105 110 віп Сіу Тигрец Уа! Тнг Ма! Зег Заг Су Сіу сту Сіу Вег Сіу Су 115 120 125 су Вег Сію Ма ій еш Уві СІ Зег С1У СУ Су цво Ма! іп Ро 130 135 140 «У Авп о Зег Бец Ага Гей зег Сувз Аа Аа Бег су Ре Ти РА бог 145 150 185 150 зегРНе бі Ме сег Тер Маг Аго Вій Аа Рго Су ув СУ Гей Зі 155 170 175

Тер Уа! Зег Зег Ме Зег Зіу Бек Лу Зег Авр Тиг Гей Туг Ав Авр т80 785 то

Бег Уа Гуз Су Аго Рне Тнт Не Зег Ап Авр Авп Аа Г ув ТВ ТВг 95 200 205 і ви Тугі єм Сін Меї Авп Бегіец Агу Рго Он лар ТИ Аа Ма Туг 210 215 220

ТукСув ТАС Пе ЗІу Су Зег 1 во Вег Аг Зег Заг сп у Тс ген 225 230 235 240 уа Ти мві Зег Бег

ЯЗ

«21055 «113 «122 РЕТ «013» Штучна паслідовність Ко. гі. | ! кри» «ра УНН «00» 5 сі ма бій Це Уві Сію Вег ЗУ Су Оу ви Маг сій Ро Су спу 1 5 10 5

Зегіеи Аг ви Зег Су Аа Аа бег су Ре Тіг Ріе Зег Авр Туг 23 25 Зо

Тр МегТуг Тгр. Ма Ага Стій Аа Ро (іх Гуз у бе и тера! 6. Ах ли. 00 В

Зег о Пе Авп Тег Авл У Сец Пе Тег уз Ту Рто-Авр Бег Ма! во ук Оу Аго Ріє Ти Це Заг Агу Ар Авп Аа ув Авп те Ге тут 95 70 ге: В

Ївц Сіп Меє Ав бегі ви Ага Рго Сій Авр ТА Ага ма Тут Туг Сув 85 90 95

Діа Аг баг Рго Зег Оу Ре Авп Ага Су іп Сіу ТАг бе ма! Тег 100 105 1ю

Ма! Бег бБег Сіу Су ЗіУ Спу Баг Су Су Оу Бе ОЇ Уа! біп ви 115 120 125

Уві бій бег ом ОМ СЛУ бец Ма! бів Рго біу Азп бБег Ге Ащі ви

130 135 140

Ваг Сув Ав Аа Бег Сіу Ре Тк Рне Зег бек Ре Су Мег баг Тр 145 150 155 180

Уа Ага Зіп Аа Рго Су був (у Гео З Тр Ма) бБег Заг Пе Заг 165 170 175

Сіубег Сіу 5ег Авзр Тргі єец Туг Аа Авр Бег Ма! був СІ Аг Ре 180 185 150

Тег Це Бег Агу Авр.Авп Аа Гув Твг лк бец Туг бен ій МегАви 195 200 205

Бег ви Ага Ро СНИ Аво ТАК Аа Ма! Тує ТУуг Сув Тв Пе Су Зіу 210 215 220

Бегіви ВегАгу Бог Зег Зіп Су Тнг і ви Ма! Тих Уа! Зег Вег Оу 228 230 235 249 сіу Сіу Сім Заг Су Су Су баг Зі Ма! Сп бе Ма! Єін Заг Оу 245 250 255

Оу су беци Майї іп го Су СНУ бег Гец Ага Сео Бег Суз Ага Аа 260 285 270 зегоіу Рне Тн" Рпе бек Авр Туг Тв Ме Тут Тер Ма! Ага іп. Аа 50 «во 285

Ро у Туз Сіу Ге СЯц Ттр Уа! Зег Си Не Авл Те Ази Оу Ге 290 295 З00

Пе Таг був Туг Рго Авр Зег Маг ув СУ Аго РНе ТНг Пе Зег Аго 305 З зі5 За

Авр Авп Аа ув Ав ТВг без Туг Бей іп МегАвп бег Гей Ага Рго 325 330 з35

СІ Авр ТАг Аа Уа! Туг Тук Сув Аа Ага Зег Рго бег ЗУ Ре Ав ев) За з5а

Ага Су Зп Оу Тег Ге ма! Пг Ма! бБег зе 355 3650 «102 6 «2112 258 «2125 РАТ «13» Штучна послідовність «йод «ВЗ УНН «о» 6 Й сти Ма іп сео Ма! Зі Зег ну СПУ у беп Уаі Зій Рго Су Су 1 5 ю 15

Зегіеи Аг ви баг був Ага Ла Бег СУ Ага Те Ре Заг Туг Авп

Зо

Рго Меї Су Тер Епе Ага Сп Аа Рго С1у був СПУ Аг Си Гей Ма!

Аа Аа Це Баг Ага Тг Оу Оу зег ТП Туг Тук Рго Авзр Бег Уа!

50 55 650

Сі Су Агу РНе Твг Не бег Ага Дер Авп Ав ув Ато Меї Ма! Туг 85 70 75 Во цецшоій Ме Авп Бег Ген Аго Аа СТИ Авр ТИ Аа Ма! Тук Ту був 55 90 95

Аа Да Аа СЗіу Уа! Ага дів СИ Аво ЗУ Ак Ма! Ага ТА ец Рго та 105 10

Бек Тугє Тпг Ре Тгр ЗУ бій Сіу ТНе Сів Ма! Тег Уві Бег бег 115 т2а 155

Діва Аза Ав Сів магів цви Уа! Сім Зег Сіу Сіу Сбіу ви асп ї3а 135 140

Ро Зіу Сіу бегі ви Аг ї.ви Зег Сув Аа Аа Беє СПу Агу Тег Ре 145 1500000015500000000Т18в0с

Зег ТугАви Рго Ме Оу Тгр Ре Агу бій Аа Рео сту ув у Аго 155 то 75 сіб Сей маї Ав Ага Не бет Аго Ті Су Сіу Век ог Туг Тук ЕТО 180 185 150

Авр Бег Уа с су Ага Ре ТП Це бЗег Ага Авр Авп Аа І ув Аг 95 200 205 ме: маг тугі єв СІЙ Меї Аби ЗегіецАгуо Аа ою Авр Ті Ага Ма 219 215 аа

Туг Ту Суб Ага Ага Аа БУ Ма Аг Ав Сів Ар. Су Агу Уа Аго 225 230 235 240

Тег ен Рг Бегсіц Туг Тиг Рне Ттв Ох бін біу ТА Сп Маі ТНг 285 250 55

Уа! бег Бег «10 «211» 364 «10» РЕТ «13» Штучна поспідовність «ДИ» «ваз» МН «400» 7 си Ма сій сец Ма! СНО Зег СУ Оу іу її ец Уві Сп Рто Оу Су й Б фр й

Бегуен Аг ви Заг Су Діва Ав Бегоіу Ре Тит Ре бег Авр Туг 55 Зо

Тез МеєТуг Тв. агАгу іп Аа Рго су Буз Сіу і вени 0 Ттр Узі 35. 40 45

Бегосіи Пе Азп Тл Аби Оу Гецз Це ТТ ув Тут Ру Авр. Зег Ма! во був Зіу йо пе Те Не Бег Агу мер Аза Аїв цу Аби лі бе Туг

65 70 75 БВ) їеи бій Мей Ава бег (Гей Акго Рго СІ Ар Тг Аза Ма! Тут Туг Суї 85 бо 95

Аа Аг бег го бег Зіу ре Ап Аг ЗУ іп СУ ТА Сен Ма! Тег о ТОБ 110

Уа! Вег бек Су Сіу Сіу Су Зег Оу Зіу СІуУ Зег Сі Узі Сп ев не 120 125 чаї! Сі Зег сі Зіу ЗМУ Сей ма! т Рго у АвпоЗег гео Ага Деу 130 135 140

Бег Сув Аа Аа Бек сіу Ре Тит Рів бег Заг Ре Су Меї баг тр 145 150 155 150

Уа Ага Сіп Ага Рго Су 1 ув Су Гей (і тр Уа! Зег бег Не бег 165 170 175

Слу бек Оу Зег Авр ТНг і ви Тут Аа Авр.бег мані ух СЛУ Аго Рве т80 185 150

Те Пе Бег Аг Авр Азп Аа Гуз ТТ Сен Тугіви бів Меї Або 195 200 205

Бегцей Аг Рто Си Авр Трг Аа Маї Туг Тут Сув ТВг Не су Су 210 215 290 зеагієец Зег Ат бег Заг іп Сіу Тиг Гей Уа! Твг Ма! Баг Зеї Су 22о 230 235 240

Су біу Су Зег Лу Сіу СИу Зег Си Ма! біп ви Маг спо Вег бу 245. 250 255 су іх цво Уа! іо Рго Сіу Су Зегі о Ага Гецбег Сув Аа Аа 280 2655 270

Зегсопу Ріне ТЯг РНе бег Абр Тут То Меї тує То Уа Агу ій Аа 215. 250 285.

Рга Сіу був СУ Гец Си тр ма! Зег ою Пе Авп Тв Ап Сіу Сви -9О 255 300

МПесбаг уз Гуго АзроЗег Маргуз Лу Ага. не Тег Пе сег Аг 305 З. З5 320

Авр Авп Аа Гуз Авп Тіг без Тут бец іл Ме Ази Зег беп Ага Рго 325 ЯЗ 335 -

ОСІ Ар ТАг Аа Ма Тут Тут Сув Аа Ага ЗегРго Бег Су ве Ав

За0 45 З50 .

Ага Сіу Сіп Оу Трг ви Ма! Трг Ма! Зег Вег Ав

Зо ЗВО: «о» В «ВМ». ше . ни нн «122 РКТ «2132 Штучна поспідовність ! «2 ! «2332 УНН

«400» 8 сю Уа Сі беч Магоїю Зег су сту Су Гео Маї бій Рго Су су 1 5 0 "78

Бегіеи Ага цец бег Суз Аа. Аа Вег Зіу Ре Тиг Ре Зег Аер Туг

Тр Ме Туг ттр Маї Ага Зіп Аа Рго СУ Гуз Су ії ви ОС Тгр Ма! «0 45.

Заг СІн Не Ав ТАг Авп Су Ге Пе Те уз Тує Рго Авр Бег Уа!

Бо 55 во

Мув Ту Ага Ріе ТНг Пе бег.Ага Ар Ав Аа у Азпо ТАгТец Тує 65 79 75 во

Се сій МесАвп бек їеи Аг Рго Ов Авр Ти Ав Ма! Тук Тут був 85 о 95

Аа Аго Зег Рго Заг СІу Рпе Ап Аго сіу сій Су ТАг Гео ма! Тиг 100 105 о

Уа! Бегзег Оу Бу су Су Бег Зіу Сну Су Бег СЮ Ма! С бец 115 120 125

Уа ош Зег бі ОМ ОМ во ма! бів Рго у Ай бег Ге Ага еу 130 135 140.

Бег Суз Діва Аа баг СІ РНе Тнг Рне Вег Зег Рпе Сіу Меї Бег Тр 145 15 1585 180

Уа! Аг бій Аа Рго сну ув Су Се Сів Ттр Уаї Бег Зег Це Баг 155 170 175

Сту бег у Зог Лвр ТАгі го Тут Аа лер зе Ма! ув Су Агу Рпе 180 185 1950

Тне Не Баг Аг Авр Ап Аа Ту ТА Ток Сен Тут беп іп МесАвт 155 200 205

Бегі ви Агу Рго и Ар ТАг Аа Уа! Туг Туг Сув Тиг Те Оу Су 210 тв тай х

Бегіец бег Агуо Баг Бег іп Су Тог Гео Уві Тиг Уві бег Зег Су 225 230 235 240

Оу Су Сіу бег Су Су Сіу Бег іи Ма! Сіп і ви Ма! Сію бег Су 245 250 285

Су Су ем Ма! Сп Рго СІу Су Заг Ге Ага цез Зег Су Аа дід . З. 2555. й. -970 шою,

Зег Су Рне Тег Ре Бег Авр Туг Тр МегТує Тр Уві ло сів Аа 275 280 255

Рго Су був Су во Сн Ттр Ма бег сть Це Авло тег Авп Су бе 290 295 00

Пе твг Суб Тут Рго Авр Зег Магсув Сі г Ре Тег Це Зег Ага 305 810 ЗБ 320

Авр Ав Аа Гу Авп Тл дей Туг Гео Сі Ме Авп Баг Гео Аг Ро , 325 330 З35

Зі Авр ТАг Аа Уа Тук Тут Сув Аа Аг Вег Рго бег Су Ре Авп

Зо 345 350

Ага су сп Сх Пт ей Ма! Тиг ув! бег бБег Аа 355 ЗО

«2112 260 «102 РК «213» Штучна послідовність «20» «2232 УНН «4005 8 сш Уа! Оп ей маї Сію Бег С1уУ СПУ Су Се Уаї Сіп Рго Су Су 1 5 10 15

Зегі ви Аг Ген Бег Суб Аа Ліва Зег Бу Ага тАг Рне Зег Туг Авп 70 25 ЗО

Рга Меї Су Ттр Ре Ага іп Ав Рго Су Гув СІуУ Аго бій ви Ма 35 А 45

Аа Ав Пе 5ег Ага те Оу Сім бБег Тиг Тує Тут Рго Авр Зег Уа! 50 55 бо

Сіц Зіу Аго Ре Тк Пе бБег Аго Авзр.Авп Аїда уз Ато МесУузі Туг 655 79 75 о

Геш біо Ме Ап бегі во Аг Аа Сі Авро Тг Аа Маг Тук Тут був 85 90 95

Аза Ага Ав Зіу Ма! Ага Аа Сі Авр СЛУ Агу УагАга Тіт ви го 100 то5 13а ! !

Зег оц Туг ТигРВе Тгр Су Зп С1у Тег Зп маї Тнг Уа! бегбег 115 120 125

Аїа Ав Аа Сію Маї іп Гей Ма! Зо бег Зіу Су Су г ву Уаї Сів 135. 340 | !

Рго-Сіу Сіу бег Гек Аго ес бог Су Аа Аа Зег Су Аку Ті Ре 155. 150 155 160

Чер Туг Авп Рго Меї С3у Тр Ре Ага Сай Аа Рто Су Гув Су Ага 165 170 175 ше Ма! Аа Аа Не Зег Аг ТАг Оу Су Баг Тег Туг Тут Рго 180 | 185. 199

Авр Зег Ма! іш у Аг Ре. ТНг Не Зег Ага Ар Авп Аа і ув Ага 195 2500 205

Мег Уа! тугі еи ій Ме Авп о Зег і ес Ага Аа Он Авр. ТА Аа Маї 210 2715 220

Туг Гу Суз Авіа Аа Аа С1у Уа Аго Аа сни Авзр СПУ Аг Уа! Аг 225 230 35 240

ТАигі во Рго Баг и Тут ТОг Ре Тр Су Сбор Зіу ТАг Оа Уа т 245 250 255 уаг Зег зег Аа 250 '

«0» «112 ТВ «2125 РКЕТ «213» Штучна поснідовність «гвах «2» от 15-574-208 «400» 10

Сів Ма! Зі Гей ей Сію Зег ЗУ ОЗ Оу ви Уа ой Рго Су Су 1 5 10 15

Зегіец Аг ец Бег був Аа Аа Зег Су Ре Тиг Ре Авр і уз Туг 20 25 30

БегМеї су Тер Маг Аг ів Ав Рго Су СГув Су Ген Б То Уаї 35 40 45

Бегіп Пе баг Аво ТАЇа Авр Ага Тог Туг Туг Ав Нів Аа Уві 5О 55 во

Су СТУ Ага Рпе Тк Пе Зег Агу Авр Авп Зег Гуз Авп Тк ви Туг 05 70 75 Во

Гец Сіп Ме Аєп Зег Іва Ага Аа и Авр Тег Ага ма! Туг Туг Сув 85 90 95

Аа не тує Тег ОМ Агу Тер Ма! Рто Рне си Туг Тер пу Зп Су 00000015 то

Тигец Маг Тік Маї бег бег

Уа «11» 230 ' «ої» РА «913» Штучна послідовність «да» «23» Вот 1п-57А-208-М злиття кад» 11

Спи Маїс ес бео і Зегоу СУ Ох Сео Магоїв Рго у Спу ! 5 10 15

Зегі ву Ага Ге бег Сув Аа Аа Баг Су Ре Ті Рне Арі ув Туг

Зег Ме Су Тр ма! Агу іп Аа Ро Сіу ув Су сво іш Тгр Ма!

Вег Сіп Не Зег Авр.Трг Аа Авр Ак ТА о гуУг Тук Авіа Нівс Аа Ма во

Гу Су Ага Ре Ті Ме Бег Аго Авр Ави бег ув Ап тег Бей Туг 55 то їт5 що

Ген біп Меї Авп бегі ви Ага Аа 0 Аво ТНг Ага Маг тТуг Туг Сув бо

85 во 95

Ага пе Туг Тв Оу Ага Тр Ма! Рго Ре ін Туг Тр У Ів у 100 505 70

Тигр еи Уа Тит ма! бег бБег Аа бег ТАг Аво Пе Сп Меї Тиг Сп 1250 125 бегРго Зег Бегі ви Баг Аа Бег Ма! Су Авр Ага Ма! Ти Пе Тиг 330 135 140

Сув Аго Ага БегАгу Рго Не Сіу Тег тт ви Зег Тр Туг бій Сів 145 150 158 тво ме Рго Оу Суб Аа Рг бук во Се Пе Гео Тер АвлоЗег Ага Сеу 185 170 175

Сіп зе сіу МагРто Бег Ага Ре бБег СУ Зег Су Бег Оу ТАигАвр 180 185 180 бне Тег Сец Тиг Не БегоЗег бе Сів РОЗ Авр-Рпе Аа ТНг Тут 195 20а 708

Туг Суз Аа біп Аа СУ ТАг Нів Ро Тит ТАг Ре біу Сію Су Ти 210 215 220

Гук Уа! со Пе Гуз Ага 225 230 «8108 19 «11» 119 «212» РВТ «213: Штучна поспідовність «Ра0» «2252 ЮТО4-Н.ОЗЗ (вихідний Н.-13 АБ) «4005 12

Сі Ма бітів) сечу бБегсіу Су іу ви Ма! Сію Рго Су Су 1 5 10 15

Бег ен Ага ви Бег Сув Аа Аа Зег Су Ре Тиг Ре Лів Дер Туг 2-0 25 ЗО

Спіу Меї Аїа Тгр Уаї Аго Зп Аа Рго Сіу Був Су бе) Со Тер Уа! дО 45

Зег ТНг Пе бег Тут Авп СУ ви Туг ТЕ Туг тує Аа Азр зег Уа! во

Гуз. СУ го Тит Пе бег Ага Ар Авп Зегі уз Доп ТАг І еи Тугі во ва то 75 5о ій Ме Авп Зегі вен Ага Аа Сн Авр Тіг Аа ма! Туг Туг Сув Ав 85 5 95 ув Туг су Туг баг Ро Сн Бег Авр Ре Авр Тут Тгтр ЗУ бій Оу 190 105 110

Тиг во Уа Ті Ма! Зег Зег 115

«10» 13 «11 118 ке1а2 РЕ «135 Штучна послідовність «Род» «Ро2В» Вот 10п-53-567 «дО» 13 ! Ї

Зі ма Зійльео ев ОВ Зег Оу Ом ОЗІУ еп уві ій Рго СУ Су 1 5 10 15

ВЗегієч Ап і ви бек Сув Лів Аа Заг (Му Ре УагРре Аа Ттр Туг го 25 Зо

Аве Ма су то Уа Ага Оп Аа Ро у уз Су во со Тева

За 40 55

Беї Зег Не Авр тр Нів Сіу ІІ ма) Тит Туг Тут Аа Авр Вег Ма! 50 55 бо (ув 'у Ага Рре Тс Пе Зег Аго Ар Авп Зегі уз Азп ТВг бец Туг б5 що Т5 во

Ге МегАвп Бегі єн Аг Аа СІ Авр ТНг Ав Уві Туг Тут Сує 85. во 85

Аа ТА Ага сти Аво Рг у Туг Аво ТУуг Тер чу и СУ Тк - 100 195. 730

Гец уві Тиг Маї Зех Заг 115 «105 14 «115 07 «81975 РЕТ кої13х Штучна послідовність ' ад» «а» вити Мн тА МА ЗОЛОТО «Фо» 14

Аво Пе Ма Мествх бій бег Зв Сув Ре Меї Бех Рго Тйг Уа! Сну і 5 Ше 15

Авр.Аг Ма Бегне Ті Сув ув Аа Зег Ст дп уві Су Таг Ав 2 сі ЗО ма Аа Ттр Туг бій іп уз Рго Су Сій бег Рго ув Ген еи Не 0 45

ТУї Бег Аа Бер лей Аг Туг Те Су Магбто Ар Ага Ре Тек су 50. 55 50 его сатсу ПАЮ пе тв бо ті Авп АБ МЕ о баг то 78 80

СІВ Азр еу ла Азо Тут Рне Сук ЗИ сій Туг СУ Зег Тут Рто Се 85 90 95

Тит РНе сіу Су (у Тк ув ви Си Це Суб 100 МУ ее 18 «и 191 «122 РК «2132 Штучна послідовність «20» «ред» анти-МН пдв М2.3510.16505 «ат іш ма! Сів во в ів бег ВіІу Рго Маі Сей Уа ув Ро Су Аа 1 З о 15

Бег Уа! ув Меї Зег Сув і ув Ав Зег Оу Тут ТАг І ев Тк Сію Бег 50 25 30

Ту Меї Ніз Тгр Маі ув Сів бег Ні Сім Гуз бегі ец і ТтрЦе 35 40 45 слу маї Ме бег Рго Тут АвпосЯу Су тіг бег Туг Авг Сів Гув Ре 5О0 55 во

Гуз Авр Гуз Аа Тиг Сец Тег Маг Авзр уз зе бег Заг Ти Аа Туг 79 75 80

Маїс во Авп ет ей ТигоЗег цу Ар Зег Аа Ма! Тук Туг Суб

Во о 95 :

Тік Аг Аго Су Пе Туї ТугАвр Рго Баг Тр. Ріе Аа Туг Ттр Су 190 | ТОБ мо

Ой Оу Тг ге Маєте Ма! бБег Ай 115 120 «ЙО» 16 «Иі» 120 ; ко125 РЕТ «213» Штучна послідовність «вах к«е3» ВОМ в-131-2065 ЗА «дО» 16

Сі магот епі ез Со бек Су Сім Су бен ма! сій Ро Су Су 1 5 10 15

Заг Гей Аг ви Бег Су Діа Аа Заг Су Ре. ТАг РНе Аа Нів. Су га 5 КП тТагмМе( ма їто МагАта Ом Аа Ро Сну ув Оу їв ЗШ Тр Маї

35 щі) 45

Зек Нів Пес его Рго АврзІу сій Ав Рго Рпе Туг Аа Азр бег Ма ко 55 во

Був СІ Аг Ре Твг Не Зетг Ага Авр Ап бег Гуз Авп ТВгГец Туг 55 то 75 ва

Гви Сів Меї Авп Зегі ву Ага Ав ЗИ Ар Тег Аа Ма! Тут Ні Су 90 -55

Аве ец сен Рго Був Ага пу то Прпе Авр Гук Тр Оу іп Оіу та 105 1.

ТЕ Гей ма! Тиг Уві бег Баг Аа 120 «210517 «2112 120 «2122 КТ «213» Штучна послідовність «дв» «вра» ООМІВ-131-208 ЗА «4005 17

Сів ува бів бе в ео сів Зекоу Оу Сім Сей магов Аа у су 1 5 Не! 15

Бегі ви Ага (сви Заг Сув Аа дів Заг Оу Ре Тім Рне діа Нів Сів

За

Тег Меса! Тр Уві Ага іп Аа Рго у Су Су без СІЧ Тр Ма!

Зег Ні Пе Ро Рго Авр СПУ ЗІп Ар Рго Ре Туг Аа Ар. бБег Ма! 519)

Гуз СУ Аг "Не Тит Ле Зег Аг Авр Авп.вег Був Авп Тег Гео Туг 655 70 75 80

Гецоів Меї Ап баг ви Аго Аа Сію Авр Тог Аа Ма! Туг Ні Суб 85 90 95

Ав еи ец Рг ув Ага Су его Тер ве Авр ТУг Ттр СУ Со Су

Кві; 105 о

Тк гема тат ма! Бек ве АМа 115 120 «21» 18 «215 118 «2122 КТ «213» Штучна послідовність кох «ве35 ПОМ В-Т31-205.ЗАБ

«00 18

Сію Ма! Сп Сей ви і Бесоу іму су Сеш ма! ЗіпАа Оу у і 5 1 15

Бегієч Аг і ви Зег Су АЛіа Ав Бег ЗУ РНе Тиг Ре Аа Ні Он

Тег Мега! Тер Уа! Аг Зп Аа Рго Спу ув Су Гео Сі Тер Ма

Зег Ні Пе Рго Рго Авр Сім іп Авр Рго Рає Туг Аа Авр Веї Уа

Бо 55 50

І ув (пу Аго Рне Тпг Пе Зег Аг Азр Авп Бег ув Авп ТигГеу Тут 65 70 75 ВО

Гео біп Ме Аза Зег Гео Ага Аа Сію Аво ТА: Аа Ма! Туг Ніз був 8. 90 о

Аа енерго ув Аг пу Ро Тр Рпе АвроТуг Ттр Зіу бів бу 100 105 150

ТАгі ву Уаї Тиг Уа! Зег бег 115 «049 «2 124 «1 ВАТ «13» Штучна послідовність «9205 «2235 ДОМ1н-131-206 а «коро

Сів Уайт езі во біо Зег Сіу Су Су Ген Ма! Сів Рго Сну Су 1 5 10 15

Зегіец Ага (ен Зег Сув Ав Ага 5ет ЗМУ Ріе-Тнг Ре Аза Нів С 20 25 30

Тік Ме Ма! Тр Уві Ага іп Аа Рго Зіу Гуз Оу бео іш Ттр Маї 35 40 45

Бег Ні Не Рго Ро Авр у Сп Авр Рго Ре Тує Аа Дер Зеє Уві бо

Гув Су Аг РНе ТВі Пе бе Ага Ар Ав бегі ув Ав Пец туї 65 70 75 80 кепі Мей Ап Зегі ви Аг ЛІ СЯЦ Авр Тв Аа ма! Туг НІВ Сув 85 90 95

Аіаіеніви Рео Гуз Аг Су Рго То РПе Авр Тут Тр ЗУ біп у 100 105 ' 1

Тигец Уа Тиг Уа Бег Бег Аа Бег Ти Г ув Су а 126

«05 20 «112 124 «122 РТ «213» Штучна послідовність «вад «232 ВОМИп-131-206 АБ «4005 20

Ома! Сів еи беш о Зегу ОМ ЗУ її во Ма! св Аа Су Су 3 5 7 15 бегі еп Аг і ец Бег був Аа Дів Зег Су Ре Тит Ре Дів Ніз СІШ

Зо

ТА Меї Ма Ттр Уа Аг іп Ав Рго сіу був СУ Се што Ма

Зег Ніє Ме Ріо Рго Авр Сіу Сів Авр Ріо Рне Туг Лів Авр. Бег Уа 60

І ув (чу Аго Ре Тнг Пе Зег Аго Авр Авп бег ув Ав ТНг Ге Туг 55 70 75 80

Меч іп Мес Авп Бегієу Аг Аа. Зіи Ар. Тог Аів Ма! Туг Ні Суб 55 9о 95

Ага гец і еи Рго | ув Аг Оу Рів Ттр Ре Аво Туг Тр Су іп су . 103 105 ..- 1.

ТтАагієвий ма! ТлеУВі Зег БВег Ав Вег ТАгі ув СТУ 115 120 «віха «а» ЗО «212» ДНК ке 13» Штучна поспідовність «290» «ва» ВОМ 15206 ар «005 21 дагагасвас ссізогозо сдаіодесдоє сідоцсвас сддцідане седсовою бо їссідідспо саісідачЕ сасонсоса сасозазасда відіо ісоссаадє 120 ссддасазау дссідавію одіавдссво айссіссво аюдссадоа сосайствй 180 дсаацанесо Наазооціся сшассай Ісісуідата асіссваааа сасосідтає 240 сідсвчаюва асісссідсо сассчачаа асюсаащі ассандшщс девеассї з00 азасцідчес соїчонсда Насідоаоо! садуоасіс юдісассуєааосаде 357 «Й102 92 «вх 360 ши «о ДНК «213» Штучна послідовність

«Над» «виз» Вотів-131-206 «400» 22 озацдіасває юсіддачаз содідденос сідойсаас сдадіоане ссідсоссію 60 їссіосцда свістюаі сассцсоуса сасдазасоа діода сассвадсь 120 ссадосааво дсосвааа ооіазассас анссісеза аїддсесвода сесайеває 180 осовансса пазовасз сжассай сісцічав асіссзазаа сассощіає 240 сідсвдаюа асісссіщдсоа соссоаода? асщедаюі ассановє чсідсшщесі 300 авасатшиосс суідачнодча Часічдарі саддатасію юдзісасові аадсазсоса 380 «210» 93 «11» 372 «212» ДНК «и15» Штучна послідавність ках «аа Воптів131-208 «400» 23 чазоїасаас юстюцвавад содівосодс сідансаає садащаене ссідсаєсіо 50 1ссідічедо саїсізой сасонсоса сасдазасда дідів їсоссавоасі 120 сежиювсааво дссідоааю оодіаноссає айосіссво аїйоссадда сосайетаї 180 осозацссо Чаасдаюво сщассац ісоова асіссазаза сассоідіас 240 сідсадаща асісссюсо суссдвода! асідсодіц ассаноюдс адсдедесї з0о азасдівасс соідсисса Касідадаї садодіасіс дд'саесої гадсадсосо 360 іїсіассваво ві 372 «ТО» 24 «1» 735 «ла» ДНК «213» Штучна послідовність «вв . і «реа» анти-ц в УНН «4005 74 ! озаціосаде їдаповаєс масутад сщаонезас содащонооюєвіею во їснасасав свісіціау саннсава асаасащда шоечовіа кесадоєі 120 ссоздіваво дістовасі доносуцої вісашісєю опсоіаосає чсстасоса 180 дасіссоца аводціса сассаіраде соасоасавасо соазавасає сеїдіассід 240 сазашазеї сісідоцієс дозацдасс дедошасі андсасей саїассасо З00 цаавісюве асдасоюво іссісоча! юдовісада чЕеасісюді засооіаєс 300 іодоа сідонсіво аюсиссдавоїасаде Здіодавіс осоціцої 420 сооіасадс содаіавсіс (сс пдіюсоо спешоцЕ сарстсісс 480 аченсосіа Нснода сцісадоса сєвоціаааа вісгодавіо ооіавос 540 вістіювса дсооноюа гасосідіас дсічасіссв ідазаздієд нсасівіс 800

Ісссдсцаса асосазазас сасссідіає сідсадаїа асістіюсо іссудааоає 880 ассасіни астасіюсає саісзаювці аассіцесс аиснсса зашасссв 790. снасюгюва до | 735 «210225 «21121089 «вах ДНК «18» Штучна поспідовність кеВ» «223» вити МЕ альфа УНН «АЦО» 25 чазоюсаце юдацазіс юдсодію сюдіасвос содцівнне ісідсоюю бо 1снососад сисідюєй сасонстоє часіасідда юіаноооі сдісавосо 120. седодіавад сісосаа ад юаз аісвасаєся всоцдссіда: сассзавіао 180 ссоцасіссо давааацієц Кісассвіс ісссусоаса зсясдазаза сасостіає 240 сіюсаздаюа асісісюсо Юсодавов ассосуац асіайоіос сонеюсо 300 ісщунса зесаїзаїса доастасеєвю окасотаз осістщаца вагове зво часодічач соааонса дсщенщаз адсафзаєв чісщааса чосодовас 420

Ісісїдсціє іона ює восисівос нсабсної ссгщеоо асо 480 знсцсана сассодаїва аадсеюзааюоансої саїсісто заосооне 40 дасзсесідї асосщасіс шназадде сзснсвоса ісісссціда саасосдава 600 ассасесіюі аїсіюсацаї дзасієссі соіссуовад агассасіці агастаєтає 660 ассацоаію асісісідіє ісансЧсії садодіассс ідюпассої аісіадсоці 720 вощаюцах ссодідосоо гадсовавї саосівсто авісіадсоо (вас ва овадссочаю чисісщса сіДісНа! осавсовеїв асбсассі саосданас 9849 тздащіас! одонсціса уздсассода! вавоцісіва вайщаціє Юаавісває 900 ассаасаціє юднісассавз агасссодаєс засошаваао оісдщсає свісаоссої 960 дасвасосца аваасасосї стасєсювєав ащдаасісіс юсціссода адасасідсо 1920 діЖанасі дсосасойс ссціста! йсавссо дісвудаає ссюонасі 1080 дівс | 1089 «210» 28 «11» 777 «й1а» ДНК ки13» Штучна послідовність ! «ге» «823» анти-фон Віппебранд УНН «005 26 давоіасвос ісоідазазу сусіда сіданогвоє сооашоне сюсвісю 50 ісйососад снсідоссо басспсадо тасаасссоа даної ссвісадосі 120 ссодаєава чісвюваседопоасацсо агсісісцута ссоцідуею сассасівї 180 ссодасіссо їдозадаісо Шеавосаіс ссосдаса асодсдаваса хаодіагас 240 сідсадаюа асадссюсо сосідаадас ассосовій асіаноідє дсадсадає 300 писоюсо зарасавісо юнсогасе сідссдієса авізсвосі сідордієво 360 адасссвда Насеоцс пощсазса зсадаааюе аоасеосива агівасоца 420 дасотас зассчдаща негсідсві семою сіусенсюд 'ісдсаєсно 480

Іссіасавос содаіюдоцо анесвісаго дсассоооіа адосісоїда асіоотадсо 540 осавісісіс осасіванюао сіассіасіасосодасі сюйцазоз осоасісасо 600 асісісто асаасосова асагаіацію гассідсада Югвасісссї дсощеоова 560

Часассосад Шанасю сосцдсадсї ваїчнсвю садаадасод їсціюнен 720 асесюссза дедааінсас снсідаціЕ седдотассс аддіаассог асо 777 «027 кої» 738 «122 ДНК «о 132 Штучна послідовність «970» «ваз анти ве Уч «400557

Чазащсаде Іонузає дсзта саднсавоє сададане сао 80 їсносусао сага сошщисзаа аїсаасаща Щосощоа їсасадоас 120 ссодагвазао пісоїдаасс аанасової аїсашев дсадіадсає Несіасося 180 часіссаца задає сассвієвос сосдасвасо ссазвавсас ссідіассід 250 сацдадаає сісюсаєс дозадаїасс дочащшасі апосусой саїбассасе 300 давісічасі асвассвщац їсдісонаї юодосацча віасісіщає зассогаієс 360 їсквіваю чесонсво шощанес даадіасаде юіюсавіс юрсацоці 420 содасває содцівасіс ісюсчююФ снадсда сЯасіюдн сасспсісс 480 зоаснсаціа Іщіснцдасці свісадоса ссдаціааво чістаааюв ааіісівас 540 аїсісідаса дсодновща тасосідтас усідасіссо дааводцісд шсасівіс 800 ісссусцаса асосдаааасє сасесідіас сіосадаюа асідса ссодавцає 560 ассосюй зсіасіосас саісооічої адосідієсс вцонеса доціасосія 720 «пасідіда осісюсо. 738 «Щ105 28 «ві» 1095 ! «й12» ДНК кр» Штучна пюспідовність «вод «ІЗ» анти ТМЕ альфа УНІ «4005 28 .

Зазащсаде юдіадавіс Ізоасодівоі сіддіасвос соадіаане оса 60 1скосасад сесідосу сасенеїсс дастасюда канат ісцісавося 120 ссодаїзаао сюда ооіцієюаа зісвзасасса асодссідає сассяватає 180 ссдцдасієсу двавоцієд Нсассаіс ісссдсдаса асусдавава сесосюіає 240 сідсадаюа асісісюсо іссодаачаї ассдсвач асіанате ясоноюсо 00 свв ассадаса вдогасісіз онассціаа дсісюдіаа вадваасс 360 зосодіввії сізаванся зсівувава васадіаві вісюсаса дссузоаво 450 1снлосаістасноє часно ксвосНної ссістоцво гаіоіснов 480 ансоаєсадо сасорадіаа задссіддаав Ішадціосі сівісіста ізосаацеї 540 дасасссіді асосідасіс дизаводо сосисасса тоссоіда савасоссаава 60 ассасссід! вісідсаові дазсісссію соіссдцазо в'ассосюї візстайтос 560 вссагсца чес оце саддагасос щонассої аібадеоаі 729 чзеюаосаг ссатющасов саасовазії саосівачо ааісідасесо ючи 80 садессова опсісіюса сщЕсної дсавосцією дспсасон свасдацає 840 тддаюасі ддонсцієса досассвдої ааадаієта азіддоніс юзаавісаас 900 ассаасодіє двісассва агасссодас адсотювазо дісовісас свісвоссої 960. дасвасабоа вазасасосії отасоюгсаз аідзасісіс їзсціссова авасасіюдса 1050 сашщанасі цедсасано ссцісовЕ нсаассцід чісвуддатає ссщанасі 1080 часа со 1092 «10» 29 «11» 780 «ра» ДНК «2132 Штучна послідовність «вах ' «реа» анти-фон Віплебранд УНН ! «00» 29 аводіасває сдішазаво совістоі сізансвоає соддаюне ісоогею 50 ісбасосво сисідоосо гасснсадстасавесода (Фа сецісводеї 120 ссодціаача ціссіочасі сопасоосо аісісісота ссоцідасіс Тассівсіц 190 ссочасієсо давоафсо шжсассає ісссдсдвса асусдавасо (ащдіаас 240 сюсазада асзудссівсу сосідаацас зосусодій асізноатщстосадсадої 00 ччецосо зааасацієв юнетасо сідссціюся засасасой сіюдоцісна 350 пагвоссада йассоціє Нсідсаосо пдсоовавідс азсювзиоа аклтддсові 420 чено васссовіза несе сема сщтецевщо ісосасено 480 іссівсвасс совівдону зностево усассвцчава засвісаюа зодегваса 540 дсзасюєе асасюдціда сісіассас зсссодасі сютувадо ссосисасо 500 вістісців всвасасова асоївічею тассідсавда щазсісосі чедідсцова 8 азсассдсво щанасо сосдосадсї вощиеці садзавассо (сою йевї 720 асостюссаз зсдавіасає сисівдові садасіассс аодівасосі агсопсюса 780 «10» За . . : «11» 581 ' «122 в «й» Штучна послідовність 30.5» ше. . ще кад «293» тАВ-М. 735 молекула ПІ -1 ЗАВ: П.Я МУканта АБ)

735 молекула «4002 30

Сів ма! іп сен Маї Сі Зег Су Аа іш Уві Гуз бух Ріо Су Зег 106. 0.21, 15

Бета! Гуз Уві Зег був і уз Аа Заг СІу Ре Туг Пе Гуз Авр ТА 20 25 30

Тут Меї Нів Ттр Ма! Ага Сіп Аа Рго Сіу Зіп Оу ви Сію Тгр Меї

Зо «0 45

Су ТНг Пе Авр Рго Аа Авп біу Ав Те Суб Туг Маг го бує РНе 5О 55 50

Сів бу Ага ма! Твг Пе Тег Аа Аво сін Бег Те Бег ТА Ада Тут 65 70 75 80

Ме сі ей Зегбегі о Аго Бег ін Ар Тнг Аа Ма! Тут ТУг Сув 85 2) 95

Аа Ага бег Не Туг Ар Аво Туг Ні Уві Азр.Аво Туг Туг Ав Мей! 1600 105 ча

Авр Туг Тр ЗУ Сів Сіу ТЬгі ву Ма! ТАг Маї Зег бег Дія бег Тиг 120 125

Гук Су Рго Бег Ма! Рне Рго бен Аа Рго Заг Зегі ув Зег Ти бег 130 135 140 сму слу тТг Аа Аа беи Зіу Сув ви Ма! Гу Ар туг Ре Ро с 145 150 155 150

Ріго Уві Твг Маї Зег Ттр Ази бег С3у Аа Бе Тг Бег Су Уві Нів 185 170 175 тк Реве Рго Ага Ма! Сем Зегоег у Гео Тугбегі ен Бег бег 180 185. 1950 маг Уа їт Уві Рго бБег Бег Ваг ер Су Тпг Сію ТНг Туг Пе Сув 200 205 ! !

Авп Ма! Депп Ніб Гу Рго Заг Ап ТВ Гуз аг Авр Гу був Уві СЮ 210 215 220

Рго ув бег Суз Аврі ув ТП Ні Тег Суз Рго Рію був Рго Ада Рід 225 230 235 240 бішгеий сен сіу у Рго Зег Ма Не Ге Не Рга го Гух ро ув 245. 250 255

Авр Те бец Ме пе БегАго Тиг Ро З ма! Тиг Сув Уа! Ма! Уві 260 255 270 !

Авр'уві Бег Чі С Авр Рто БІ Ма ув Ра Авп Тр Туг Ма Авр ау еВ г: со Ї ше

Оу ма сій магів Аби Аа Сув Тв бух Рго Аго ів си ст Тут 290 295 «З

Авп о бег ТАг Туг Аго Ма! Маї Бег Уві Гео ТАг Уа! Ге Ні Сіп Авр 305 Зо 315 320

Ттрівгцу Авп Сіу Гу Сію Туг був Сув Суб Маі ЗегАвп 1 ув Аа ви 395 30 35

Рго Аа Рго Це Сію ув Тнг Пе бег ув Ага був СУ Сп Рго Аго 340 За5 Зо іш бто сію Ма! Туг ТА? ен Рго бго Бог Ага Авр СО ей тик ув

З85 360 зЗв5

Авп Сйп Ма! Бег і еи Ті Суз Гец Ма! ув Сіу Ре Туг Рго ЗегАвр зл 375 З8о

Ме Аа Маг Тер Зег Авт у Сп Рго Ін Авп Ави Туг Гув 385 390 395 АОО

ТАг ТвгРго Рго Уайі ей Азр Баг Азр ЗУ Зег пе Ре ву тує Вег 405 о 5

Гувеи Тв Уа Азвіхв Зег Ага Тр ій іп. сну Ап Ма! РНе Бе 420 428 430

Сув Зег Ма! Меї Нів Си. Аа Гви Ні Авп Нів Тут Тег Ів ув Зет 435 440 445

Гео бег ен Зег Рго Су Сув Су Зег ТАг Маї Ага Аза Ро бог Су 450 455 аво0

Зег Тік Уаї Авіа Авіа Ріо Берг Сіу Беї Авр Це біп Меї Тиг Сів бог 455 , 470 475 480

Рго Бек ВЗег ІГеви Бег Аа Бег МагОїУ Авр Аго Уа! Таг Це Тиг Сув 485 490 495

Ага Аа заг Аг Рго Пе Зег Авр То Гей Нів Тр Тут іп Оп Гуз 50 5О5 510

Рго у ув Аа Рго Суб ви Бен Пе Дів Ттр Аа бег Баг бец іп

Бо ! 525 . су Оу Маі Ріо Беглка Ре Заг Сіу бег (зіу Зег су ТНг Авр. Ріє 530 535 5

ТАггец тн Не зЗег Зегі ей ої Ро біц Авр. ле Ага ТАг оту Туг 55 550 55. 5

Сув Сів біт Сі спу Ттр ЗУ Рго го Тк рпе- у Зв Су Тиг І ув 5ОВ 570 575 . ма бін Не був Аг

Б) «иа . що «рії 219 ! ше кв125 РТ «2132 Штучна послідовність «280 «реВх За молекула «8005 31.

Авр Пе ма Мах Ти Ой бег Рго Сен бзег ен Ро Ма! Тв Рго Оу 1 5 10 15 сти Рго А бе Не Вагу Аго Баг Зег Суп деп Не Уві Ніз Не 29 зо деп Оу Ав Тиг тугі ей Сн Ттр Туг бен іп ув Рго у біп бег его Аго бе ей Це Туг бує Не бег Ар Ага Рпе Заг (Му Уа! Рго 5О 55 во

Авр Ага Рне баг Су бБег Су Беїг СОІУ ТНг Авр Ре Тигі ви ув Це 70 75 во

ЗегАга Маг сіб. Аа Ар Ар Маг слу Не туг Туг був пе іп су 85 оо ще бег Нів Маі Рто То Те ее су Зі У Тег був беи Су Не ув 100 105 110

Ага Ти Ма! Аіа Аза Рго бег Уві Ре Не Ре Ро Рго Бег Авр Зій 5 120 125

Сів Се і ув Бек у ТНг Аа Зег Уві Ма! Суб вої ву Ап Або Ре 130 735 140

Туг Рте Ата іш Ага Гув Ма! сій Ттрі уз Ма! Азр Ав Аа вип 145 т50 55 160

Зег пу Авп. баг Сіп (и Зег уаї Торг ін Сіп Азр бег Гу Авр Зег 185 170 175

Тег Тугбег Геи Бег бе Ти Сеч ТВг Ген Бег Су Авіа Авр тує Січ 180 185 190

Гув Нів Гуз Ма! Тут Аз Суб СЯ Уа! Трг Нів Сп у Гец Бе Зег 195 20 205

Ртго Ма! Те Суз ет РНе Авп Ага у ОК бує 2 215 «10 32 «115 871 «9125 РАТ «213» Штучна поспідовніств «20» «232 15014 «400» 32 сій Ма! ти ес Ага о Зег СОІУ Рго Ага беш Уа! Суб Рго Тнг іп 1 5 10 15

Тегец твгец Тит Сув Твг Рпе бег Сіу Ре бег і ец Зег ТАгЗег 28 Зо

Су мМегсіу Уа! Заг Тр Пе Аг Зі ето Рго у Гу оу Ге 1 а 45

Тв ген Аа Нів Че Тут Тр Авр Авр Авр Гуз Ато Туг Або Рго Бег

Бо 55 во

Геш Сух бегАга Деу ТА Не Бегі уз Азр Тиг Бег Аг Авп іп Уа! 05 79 75 80

Уві Кеи ТиЕ Мей Тит Ази Мет Авзр. Рго чаї Авр Те Аза Те Туг Туг 85 90 5.

Сув Аа Ага Аго сін ТТН Ма! Ре Туг Ттр Туг Ре Авр Уа! Ттр ЧУ 100 105 о

Ак Су ТАКТ еи ма! Тег Уві Зег Зег Аа Зег ТАг Гу Су Рго Зег 115 120 125 ма Рве Рго ей Аа Рго Зег Бег ув Баг Те зегоїу Су Ти Ав 130 135 140

Аайец су був Ге Уа! СугАвр.Туг Ре Рго Од Ртго Уа! Тег Маї 145 150 155 150

Заг Тгр Авп Баг Бу Ага Геи Ти Бе Су Ма! Ні Тк Ре Ро Аа 165 то 178

Уа цец бів бБег Зег (у Сей Туббегі ви Зег Бек Уа Ма! Тис ма. тво 185 190

РгзЗег Бег Зег бец Су Тиг ій ТАг Туєк Пе Сбуз Авп Ма! Авп нів 195 200 205

Мув Рго Ваг Авп Тит Гуз Уа! Авр Гуз ув Уа Сію Рго був Бег Сув 210 215 229

Авр ув Тиг Ні Тл Суз Ро Рго Сув Рго Аа Рго СІ Її ее су 225 230 235 240 слу Рго Зег Ма! Рпе бе Рпе Ро Рго (ув. Рго Гуз Авр.ТНг Гей Меї 285 250 255

Че бЗег Аго ТВг Ро и Уа! ВГ Сув уаі Уа! Уа! Азр Ма! Бех Нів 250 285 270

Ів Авр Рто С Ма! Муз Рне Авп Ттр Руг Уві! Авр. Оу Ма! сли Ма! 278 280 285

Нів Авп Аа І ув Тв Гуз Ро Ага і и Сп Туг Авп Зег Твг Тує 290 285 00

Ат Ма! Ма! Заг Ма! Ге Тр Магкец Нів Сіп Ар Тр Бе Аби су

ЗО5 З10 Зв 320

Був Сім Туг ув Суб Гув Уаі Зег Ап ув Аа ви Ро Аа Рго Пе 325: з 335

Сіц ув ТНг Пе бег Гуз Да Гуз Сну Зп Рго Ага Сі Рго біп Уві 385 ЗО

Ту Тл Сеи Ріо Рго ЗегАку Авр СІ Се п уз Авп Сію ма Бег 355 З6о Зб

Геи тн Сувіви Май ув су Ре Туг Рго Зег Авр Це Ав Ма! І 370 375 зво

Тер Сі Вег Авп Су бій Рго Су АвлоАвп Тут Гув Тиг т Ро Ро зв5 зЗ90 395 400

Уа гей Ар ЗегАвр Су ет Ре Пе г ви Тут Зегі ув беи Тиг ма

ОВ. а 415

Аво уз Зег Ага Тр біп біп Су Авл ча! Ре Зег буз Зег Ма! Меї 420 425 430

Ні СБеАа ен Ні Ази Ні Тут Тер оівз уз бегіен Зегіец бег 435 40 «45 го Оу Гуз СЛУ бег Тиг Маї Ав Аа Рго Зег Тиг Або Пе Ой Ме 450 455 4650

Тег Осіп Заг Рго Бег Зегіви Бег Аз бег Узі СІК Авр Ак Уа Тег 465 470 475 АВО

Не ТагСув Ага Аа Бег Ага Рго Не бег Авр то цей Нів Тр Тут

485 490 495

Сіп Сіп Сув Рго Оу ув Аа Рго Гуз Сен Сео Це Авіа тр Аа Бег

БОЮ 505 5ІВ

Зегіеи сп Су у Ма! Рго Зег Агу Ре Вег (Му Зег Зіу Ваг Оу 515 520 вав

ТигАвр Ре ТНг бе г Пе зегЗег бе Оп Рго Фі Авр РНЄ Дів 530 3 540

ТЕг Туг Тут Су Сів іп Зо у Тр Су Рго Рго Тпг Ре Су. Зп 545 550 555 550

СУ Тр Еув Маг сти Ме уз Ага Аа Аза Ага

Бо 570 «210533 «11218 «122 РАТ «рід» Штучна поспідовність «2202 «еЗ 15914 «400» 33

Авр Не Уа! Геи Тиг Сн Зег Руб бек Зегіеци Зег Ав бЗег Уа! Су 1 5 10 15

Дер Ага Ма Тит Це Твг був ув Ага Зег сій Баг Уві Ар ТугсАвр

Сіу Авр бБег Туг Ме! Авп Тер Туг Сіо бій Гуз Ро Спу І ув Аа Рго

Гу ви бво Не Туг Ав Ав Бег Ап Ге Сію Зег сіу Не Рго бег

БО 55 50

Агу Рне Зег СТУ бБег Су Зег СІК Ті Авр Рне Ті Ре Тег Не бег 65 7а 75 во

Бегі ви бій Рго Си Авр Пе Аа Ту Туг Тугбуз ЗІп іп бег Авп 85 о 95

С Аврорго Рго Ти РАе у Сів біу Тег був Ма! сів Пе її ув Ага 100 то 110

ТНг Уві! Аа Аа Рго бег Уа пе Пе Рпе Рго Рто Зег Авр.юи Сп 115 120 125

Геціув Беру ТЕГ Ав Зег Ма! Маг Суб Бе Свв Ави Авп Рпе Туг 130 135 140

Рго Ага Січ Аа Гуз Ма! Сі Тер ув Уві Ар Авп Аа і ви сів Зег ч145 0150 55 тво

ОЖАвп Бег іп ОЇ Бек Ма! Тг Бій Сів Аво Зегі ув Авр Бе Тиг 185 170 175

ТугЗег і ец бегбаг Тгі ви Ти Геи Зег Суз Аа Авр Туг ІН Гуз 180 385 180

Нів Гуз Ма! Туг Аа Сув СЮ Ма! ТАг Міз сій бу Сец Зег бе Ро

155 200 205

Уа! Ти уз Бег Ре Авп Ага біу 1 Суз 210 215 «21023 «2112559 «2122 РК «13 Штучна послідовність «0» «ре» тА. 15019 «400» 34

С Маї Твгі ви Агу Сн Зег Су Рго Ав Ів Ма! був Рго Те Сп 1 5 10 75

ТАг бев Тік бец ТА Сув Тік Ре Зег Су Ре ЗегЕ еи бег Тиг Ваг 28 25 Зо

ОСіу Ме сту Маг бБегїтр Не Ага бій Рго Рго ту С ув Су бе Од

Тер Ген Аа Нів Це Туг Тр Авр Авр Авр був Ага Туг Авп Рго Бег

БО 55 60

І ви був Зег Ага Цви Тпг Пе Зег (ув Азр Те бЗег Агу Азп Зп Уві 65 70 75 во

Уа ецу Тнг Ме Тег Азп МесАвр Ртго ма! Авр Ти Аа Тк Тут Тут 85 9о 5

Сув Аз Ага Аг іш Тіг Уві Рпе Тут Ттр Тут Рпе Авр Маї Тр біу 100 105 110

Ага Зіу Ту ви Ма! Тог Маї Зег баг Аа Зег ТАг ув у Рго бег 115; 120 125

Уа Рре бо ви Аа Рго Зег Зег Гуз Зег Тит Заг Лу ЗіІу Трг Аа 130 Тт35 140

Аве Сі Су Сем Маї Гуз Ар. Туг Ре Рго С Рго Уа! ТАиг Уа 145 ч5о0 155 180

Берг Тр Ази Зег у Аа Ге Тв бег Оу Маї Ні Тиг РНе Ро АВ ! - 165 в. 175

Уа ей сСіп Зег бЗег СУ Гео Тут Зегіеу Зег бЗег Ма! Ма! Тиг Уа! 180 185 193

Рго Зег бег Зег Гей СУ Тл в ТТН Тут Не був Азп Уа! Авп Нів 195 200 295 (ув Ро бег Авп ТТГ ух Ма! Авр Гуз був Уа! су Ро ув Бег був мо 215 220

Авр ув Пи Ні Те Сув Рео Рго Сух Рго Ав Рто іш бе бе Оу 225 230 235 240

Сіу Рго бег уві Ре Гео Ре то Рго Гуз Рго Гуз Ар ТНг і ви Меї 245 250 255

Ме зег Ат Тл Рго іш Ма! Ти Суз Ма! Ма! Ма! Авр Ма! Бег Ні

280 285 270 сім Авр Рго Су Ма! бух Ріпа Авп Тр Тут Ма! Авр у Ма! іо Ма! 275 280 285

Нів-Авп Аа і ув Ті ув Рго Аго Си Сію іп ТугАвп бег Тв Туг 290 295 зо0

Ага Уві Уві Бек Уві беш ТВг Ма! Бе Нів Сів Авр Тервио Ап у 305 Зо 85 320

Гуз бір Туг Гуз був і уз Ма! Заг Аво Гуз Аа Гео Рго Аа Рго Пе 325 КІС 335 су Су Так Ме бег і уз Аа Гуз Су Сіп Рго Ага и Рго Сів ма! 340 345 З5БО

Тує Тиг Се Рго Рго Зег Ат Аво Сію Сеш Тл уз Авп іа Уві бег 355 з5о0 365

Гец Тпг Суз без Ма! Гуз Сну Ре Туг Рго баг Авр Ме Аа Ма! бін 70 375 ЗВО

Тер ЗегАвп СУ Зп Рго Сід АвБп Ав тугу ТАЄ ТВ Рг Ріо 385 зво 395 оо

Уаї Ген Авр бег Авр Су Бог Рпе Ре Ген Туг Зег Гує це Те Ма! 405 ща 815

Авр. Гуз Бег Агу Тгр біо біп Сіу Авп Ма! Рпе Заг Суз Зег Ма! Ме 420 425 «30

Нів Сім Аа Сви Ніз Аза Ні Туг ТАг ій був бек Се) Бе Ге ет 435 440 445

Рго-Сіу цу Сіу бБег Тнг Ма Аа Аа Рго Зег ТНгАвр Пе Сів Меї 450 455 460

ТАг біп-Зег Рго Бег бБег йеу бБег Аа бег Уві СЛУ Авр Аго Ма! ТВг 455 470 475 480

Не Таг Су Агу Ав Бег Аго Рго Це Заг АвБр Ттр.Г.еи Нів Тер Туг 485 450 495 сі ій ув Его Су був Аа го Су без ец е Айа Тер Ав ве 5ОЮ 55 що

Зег Гей сій су Су Маг Рго Зег Агу Ре Зег Су Зег Су Бег Оу 520 5258

Тег Авр Ре: Тег сей Тпг Пе Бе Зег Цей іп Рго Со Аво Рне Ав 530 55 ай

Тег туєтуг бувлзів а Ош іх Тгр/ну Рто го Тиг Ре у вій 545 5БО БО 5БО

Сіу Тг уз Уві Сі Неї хе Ага ТАго 5655 ко10» 35 «21ї» 218 «8125 ВВТ «3» Штучна послідовність «ох

«3» тд. Т501О «4002 35

Авр Пе мМагіечу ТНг Сіп бБег Рго бек бегіви бег Лів бег Уа Оу 1 5 що 15

Азр Аго Ма! Тнг Це Тне Сув Гуз Аз Заг бій Бек Ма Авр Тут Ар су АвроЗег Туг Меї Авп Тгр Туг Сп. іп був Рго Су ув Аа Ро

ЗВ 40 ав

ГЦувієц ее Туг Аа Аа Бег Ав І ви 19 Зег Су Не Рто бег 5О 55 БО

Ага Рпе Зег Сіу Зег Сі Бег Су Тіг Авр.Рпе Тиг Рпе ТАг Пе бег 65 70 75 во

Баг ви Оп Рго І Авр Пе Аа Тиг Туг Туг був Сп ів бе? Азп 85 о 95

Си Авр Рго Рго Ті Ре Сіу Сіп у ТАгі ув Ма! Си Пе г ув Ага 100 105 110

Те Ма! Аа Аа Рго Вег Маі Рне Па Рпе Рго Рго Заг Авр (и Зіп 115 120 125

Гец Гуз Бег бі Тиг Аз Баг Ма! ма! був бе ев Ап Авп Не Туг 150 т35 140

Рг Ат Сі Ав Був Маї сій Ттрі ув Ма! Авр.Ави АВ ви іп ет 145 15 155 160

Су Авп Заг Сп ів Зех Ма! Тр Сію Сп Ар Зег ув Авро бег ТАг 185 170 175

Тук Бег Гени Заг Зек Тиг Гей Тпгіеи Зег ув Аа Або Туг и Сув 180 185 190

Нів С ув Ма! Тут Ав був СТ Уві Тиг Нів Сів СЛУ Бен Зег зе Ріо 195 200 705 уаї Ти ув Зег РНе Авп Ага СУ СІМ Су о 215 «р10» 38 «112570 «газ РТ к2132 Штучна поспідовність «9202 «оа3» тТАВ-М 15090 «400» 36 сніп ма! Тис ец Агу біо Зег Зіу Рго Аа Гео уаї був Рго Ти бів 1 5 10 15

Лиєтбео Твгієи Тпг Сув То Ре Баг О3у Рпе Заг беу бег Тит Зег 20 28 З

Сіу Меєсту Ма! бег Тр Не Ага Зв Рго Рго Су Гуз Слу бен СІШ

Ттрцец Аа Нів Не Туг Тгр Авр Ар Авр Суб Агу Туг Ави Рго Зег

Ба 55 60

Ге ув БегАго Ген тлг Не Баг І ув Ар ТРг Бег Аго Або іп Уаї б5 70 75 80

Маг Се тт Ме тк Азп Ме Авр Рго Уа! Авр Тл Ага Тег Ту Туг 85 що 95

Сув Ліва Ага Ага С ТВг марне Тут Ттр Тут Ре Авр Ма! Ттр у то то5 о

Ата сі Тиггец Ма! Тк Уві Заг бег Ага Баг Тпгі ув Су Ро бег 115 120 125

Уа! Рне Рг ем Ав Рго Зег Зег ув Зег ТР Зег Су СУ Тис Дів 150 135 140

Аа бе Су був Гей Уа ув Авр ТугеВе Рго СМ Рго Ма! То Маї 145 50 155 160 бег Тр Аза зе Оу Ав Сей Торг бег Су Ма! Ні Те РАе Рго Ав 155 170 175

Уа ви Сп Бег бег Су Ге ТугЗег І ву Зег бег Ма! Уві Ти Ма! 180 тВ5 1580

Рто Зег заг ект еи СЯу Тигю Тр туге Суб Авп Уа! деп Нів 195 200 205

Гув Рго Заг Авп г був Ма Або ув ув Мао Рго ув Зег Сув 210 215 о

Авр Су ТАг Ні тяг Сув Рго Рго Сув Рго Ага Рго ін Те во у 225 230 235 240

Су Рго бег Уаі Ре Ген Рне Рго Рго ув Рго Гуз Авр ТНг Гео Ме! 245 250 285

МПезЗегАгу Тег Рго біо Маг Тнг був Ма! Ма! Ма Авр Маї Бег Нів 260 255 то

Сіш Дер Ро Сію Маї був Ре АБИ тр Ттуг Уа! Азр су Маг ой Ма 275 280 285

Нів Авп Ага Гув Тег ув Рго Аго ів б іп Тут Ав вес ТП Туг 290 2795 зо0

Ага Уа! Ма! Зег Уа! меч Тег Уві Ге Ні Сп Авр То Сем Авп Суу 305 310 315 320 ув Сію Туг ув був цу Ма! бег Авп ув Авіа ви Ро Аа Рго Це 325 330 335

Січ ув Тс Не Бег Сув Ага її ув СІЖ Сп Рго Аг у Рго іп Уа 40 З45 з50

Тугстигувр Рго Рго бег Ага Авр іш ви ТНг був Авп от Уа! бег 355 ЗО збо меч Тиг Суз Ге Ма уз Зі Ре Тут Рго бЗег Авр Пе Аів Ма! Сі 370 375 з80

Та» БегАвп Су Вій Рго Су Авп Ав Туг був Тг Те его Ро 385 30 395 00

Уві ец АзроЗег Ар оу Бег Ре РНе Гео Туг бек був беи ТАг Ма! 405 410 415

Авр Гуз бег Аг Тр біп бій Су Ап Уві Рпе Зег був бБег Уві Ме! 420 425 430

Нів Сіш Ав ви Нів Авп Ні Тує Тег ові бух Зег ес баг ви Бег 435 440 445

Рго Су був Сіж Баг Тиг Уа! Аа Аа Рго бЗег Трг Авр Пес Меї 450 455 4650

Тигр ЗегРго ЗегЗегієий Зег Хід Зег уві Су Авр Атщ Уа! ТАг 405 за 475 4во

Не Те Сув Аго Ага Заг Аг Рго Ме Зег Азр Тер і ей Нів Ттр Тут 485 490 455 іп Сів Сув Ре Є Гуз Аа Рго Гуві ей Геу Не Ага То Ага Зег 500 505 5а

Баг це) бій Су Спу Ма! Рго БегАго Ре Бегоу Зег Сіу Бег (Ту 515 520 525

Тег Авр Рве ТР Ге Тпх Не Бег Заг ву іп Рго Ср Азр РНе Аза 530 535 5ай

ТАг Туг Тук Сув сій іп сли (іх Тер Су Рго го Ти не Су Сп 545 5БОЙ 555 500

Оу тяг уз Маре Пе ув Ага ТАг Маї 555 57 «2102 37 «1-18 «122 РТ «213» Штучна послідовність «0» «риЗ» тАБ-МІ. 15020 «4005 37

Агар Пе Уві бе Тиг Зір бег Ро Зег Бег ів Зег Аа Заг Ма! Су 1 5 10 15

Авр Ага Ма! Тнг Пе ТП Сув Сув Аа баг іп Зег Уа! Авр Туг Авр ше 25 Зо су Авр бБег Ту Мег Ав Тер Туга іа ув Рг у ув Ада Ро і увів гене Туг Аа Аа бег Авпі ви Сію Баг Сіу Це Рго бег 50

Аг Рне бБег Су Зеє СОІУ Бег сну Тиг Авр.Рпе Тіг РНе ТНг Не Зег 655 70 75 ва

Зегі ви ій Рго ОВ: Авр Пе Аа ТЕ Тут Туг був біп Сі бег Ав 85 о 95 сін Агро Рго Рго Таг Ре Сіу іп (Чу. ТНг ув Ма! Сім Пе ув Аг 100 105 1юЮ

Ти Уаг Аа А! Рго Зег Уві ве Ле Ра Рго бо Бег Авр. СІ ОІВ 115 120 125 був Рго Ргб Сув Ріо Аа Рго С Гец еп СУ СТу Рго Бег Маї Ре 155 200 205

Мец Ре Рго Рго Гу Рго І ув'Авр Тпг Гео Мей Це бег Аго Тег Ро о 215 220 іш Уві Тіни Суз Мві Уа! УаІ Авр ма! Зег Ні СІШ Авр Рг і Уві 225 230 35 240 уз Ре Ази То Туг Маі Авр СЗіу Уаіси Маї нів Авп Ав ув Те 245 250 255

Гу Ріє Аг СВТ СИ Тук Авп о Бег ТАг Туг Ага Уа! Уві бЗег Уа! 250 255 270

Гей т мані ви мів СітАвр тТтргец Авп у | ув бін Туг сук Сув 275 280 тУ85 ув Ма! бБегАвп Суб Лія ви Рго Аа Рго Пе Си Гув ТНг Це бег 290 295 З00

Гуз Аа Гуз Сіу Сіп Ріо Аго СТ Ро Зій Ма! Туг Тиг Ге Рео Рго

З05 10 15 320 бегАго Ар біш і еи Те ув Авп Сі Уа! бегі во Те був Ге Ма 325 З30 335 ув ЗУ Ре Туг Рго бег Ар. Пе Аза Ма! Сін Тер. Сів бег Ав Оу 340 за5 350 іп Рго ін АвпАви Туг був ТА ТНг Рго Рго Ма! Ге Авр баг Ав 355 збо З65 су БегРне неї ви ТугЗагіує Бе Тег ма Авріув Зег Аг То кУдВ 375 ЗО

Сів бір Су Авп Уа! Рпе Зег Сув Зег Ма! Ме! Нів СІЮ Аа І.еи Ні за5 з90 395 а

Авп На Туг ТОГО був Зег бец Зег с ецбег Рго у Суб у Зег 410 415 тТееУаї Ага Аа Рто бег Тег Авр Че Сій Меї Пи СіпозЗег то Баг 420 25 430

Бегі ви Бег Лід Зег Уа! Су Ар Ак Ма Те Ме Тег Суз Аго Аа 435 440 445 баг Ага Рго Не бег Авр Тр. Се Нів тро Туг ул сій був Рго сту ай 455... 460. а

Гув Аз Ріо ув с еоїец Це Аа Тер. Аа Зег бегі ви іп Су Су 485 чо 475 480

Уа бго ЗегАго Ре бег і бегоу Загзу ТИ Ар пе ТВгец 485 490 455

Твг Це бег Зегіви Зі Рго біо Авр Рпє Аа Ті Туг Тут Сув бій 500 55 Вів бі бі Оу Тер Су Рго Рго Тлг РБеа ту бій Су ТЬг Гуз Уаі ОМ 515 52 525

Пе сув 5ЗО «2102 39

«ві» 218 «212 РВТ «213» Штучна послідовність «0» «ваЗ» гаАВ-М. 15021 «4002 39

Авр Пе Ма) ен Трг Сіп Ваг Рго бег Зег І ви Зег Лів Зег Уа! ту 1 5 10 15

Авр.Ага Уа Тиг Пе Тег Суз'ї ув Ав Заг СіІя бег Уа! Авр Туг Авр

Зо

Спу Авр Зег Тут Ме! Авп тр Туг Сів Ой уз Рго Сіу був Аза Ріо ув Генні ви Це Туг Аа Аа Заг Авп бе Сів бег су Пе Рго Зег

БО

Ага Ріе Зег Оу Бег слу Зегсіу Тнг Авр Рне ТНг Ре Таг Не бег 65 7 75 во зег Ге Сіп Рго Сію Авр Це Аа Тнг Тує ТугСув Сів Сп бег Авп 85 90 95

Сів Авр.Рго Рго Тнг Рне СТу Сіп Су Тиг ув Уа! Со Пе Гу5 Аг 100 105 110

ТАг Уа! Ага Ав Ро Бег Ма! Рне Не. Ре Ріо Ріо Зег Авр.ЗіІн Сп

В 120 125

Гео ув зе Оу Тйг Ага Бек Ма! Уа! Суб Ге Гец. Ап Авп Ре Тут 13а 135. 140

Рго Ага Су Аа Сух Мао Тер Муз Уа! Азр.Авп Ав Св іп Заг 145 150 . її тва

СОУ Авп зегоат ш бег Уа! Твої іп Авр бег Гуз Авр бег ТНг 155 то 175

ТугЗегіеи зе Бег ТНГ Гей Ті ен бегі ув Аа Авр Туг Зі ув 180 185 150

Нів Гув Уві Туг Аіз Суз Сію Маї Тнг Нів Сій Су ви баг баг Рів 195 200 205

УагПигіує Баг Рне Аеп Ага су Зіш Сув 210 15 «о» 40 «ат» В «аа» РКТ «2135 Штучна послідовність «ро» «2232 ЮМ530045; 0ОМ15-285-597 ДАВ МА МЕРКВБОК лінкер) 8

С-термінальний К-044-085 ЗА (ТОГОБРІХО)

«АО» 40

Сію Ма! бій Гей цей Ма! Зег Су Су Су ео Ма! Сів Рго Зіу Сіу 1 5 то 15 багіви Аг ву Бег Суз Ліва Лів бег СЗІу Ра тнг Рне (ув Ав Тут 20 25 Зо

Рго Меї Меї Ттр. Уа! Ага біп Аа Рго Су І ув Су Гео бів Тгр Уа! 35 40 45

Бег січ Пе Бе Рго Заг Оу. Зег Авп То Туг Туг Аа Авр Зег Уві 5О 56 во

Муз СІ Аг Ре Тіг Ме Зег Аг Азр АвпоБегі уз Авп Тиг Ге тує б5 70 75 во цео Сів Ме! Авп бегі ви Ага Аа Зі Ар Тиг Аза Уаї Тут Гуг буз

Ве 90 95

Аа туз Азр Рго Аг Гуз Сви Авр Туг Тр су біп сЯу Тгі ен ма! 00 "ОБ то

ТОг Уа! бегЗег Ма! іш Рго Гу бег баг Авр Був ТА Нів Та Сув 120 125

Рго Рго Суб Рго Аа Рго Січ Мей Гей сіу у Рго Зег Уві Рів Гец. 130 135 140

Епе Рго Рго Г ув Рго Суб Авр. Тр Гви Мег Не Бе Аг Тг Рго ОМ 145 50 155 180

Ма! Тиг Сув Уві Уа Ма Авр Ма! бег Нів ій Авр Рго Сів Маг ув 165 1 175

Рпе Авп Ттр Тух Уа! Азр біу Ма! сію Ма! Ні Авп Аа ув Твг ув 180 185 190

Рго Аг ОМ СПЦу си Туг Ав Бег Те Туг Агу Уві Ма! Зег Уа Кей 185 200 205

Тиг Уві уеи Нів іп Авр Тр ев Ап СіУ Був Зі Туг су був Г ув 210 ів 299

Ма! Бег Авп Гуз Аа Сез Рго Аа Рго Нео Гуз Те Не Бег був 275 230 238 240

Аа Суз Су іп Рго Ага Сі Река іп Маї Туг ТВг беу Ро Рто Зег 245 2 255

Аго Аво Зіц бе г ув Авп Зіп Уві багі во Тв Су беи Маг ув 260 265 27

СЯу Ре Туг РгоЗег Авр Ме Лід Ма! СЮ То іш Заг Авп Оу Сп о 280 285

Рг сін Авп Ав тує Сув ТАг ТВг Рго Ріо Уві Се Ар ЗегАвр у 2790 295 00

ЗегРне РпеГец Тугоегі уві ви Тиг уавАвр ув Зег Аго Тр іп

З05 Зв З15 320

Сіп Сіу Авп Узі Рпе ЗегСув бБег Уа! Меї Ні Сім Ав во. Нів Авп 325 З30 з3В

Нів Тут Тиг Сів уз Заг ез бег во бег Ріо Су був ТНг Оу (ев 340 345 З50

Авр ЗегРго Та суУ Гей Авр Бек Ро ТП ОМ ви Авр бег го ТНг 355 зво 365

ЗІ ей Авр Зег го Авр Це ів Мет ЗіпЗегРго Зег Зег Гец 370 375 ЗВО

БегАйазег Уа! біу Азр Ага Ма! Пг Не ТАг Суз Ага Ага бег (іп

ЗБ З9О0 395 400

Тер Бе Су Розі ен ув Тр Ту іп Зв ув Ро пу 1 ув Аза 405 410 15

Рго Гуз Беці во Пе Туг Ніз СМ Зег Це Се іп бег І Март 420 425 30 бЗег Ага Рпе Бес Су Зег СУ Ваг біу ТНг Авр Ре Тіг Бенц Тире 435 440 445 зЗег Бегіеи Сі Рго сти Авр Ре Аа ТНг Туг Туг Суб СН Зв Туг 450 455 аво

Меї Туг Туг Рго Нів Те Ре. Сіу Сіп (іх Тег Гуз Ма! Сім Пе був 4655 470 475 480

Аг «2102 41 «211». 475 «125 РТ «135 Штучна послідовність си» «раз» ОМО30048: ЮМ81578 з С-термінальним К-044-085 дАБ

ЦТОСОБРхІ) «400» 41 ві ма-сів ер без Уа! Заг Су Лу у бец Уа! біл Рго Оу су

З 5 то 15 зегі ей Аг ецу Зег Сув Аа Аа Зег су Рне Тіт Рпе був Ав Туг 2о0 25 ЗО

Ро Меї Мей Ттр Ма! Ага іп Аза Рго у Гуз у ео Сх Тер ма чо 40 45

Ваг Си Пе Зег Рго Зегу Зег Авп ТА Тут Туг Ага Авр Бег Уа 5О 55 во

ГУБ бу Ага пе ТА це Зег Аг Авр Авп баг Був Авт Тиг Сей Тує 65 то 75 80

Ге бій Ме АбБп бег і еи АгуУ Аа СЮ Дер тн; Аа Ма! Туг Тут Сув 85 0 95

Аа ув Авр Рго Агу Гуз ви Авр Туг Ттр СПУ іп Сіу ТнгГеи Ма! 100 105 но

Тиг Уві -Бег БегАйв бЗег Тпг нів Тпг був Ро Рго був Рго Ага Рго 115 128 125

Січі еч ем Оу Ро бЗег Уа Ріеїви Рне Рго Ргб (ув Рго був 130 135 140

Азот Се Мене Зег Ага Тит Рго и Уві Тиг Суз Уа! Маг Маї

145 150 155 1650

Аер Ма! Зег нів С Аврора Б Ма! Су Ре Авп Тгр Туг Маг Авр 165 170 175 біу ма! Св Ма! Ні Авп Аа Був ТНе ув Рто Аго и сне Сіл ут 180 т85 90

Ава бег Тс Туг Ага Уа! Маг бег Ма! бец Те Уві Сей Нізосій Авр 195 200 205

Терен Авп СУ був СЯ Тук Був був ув Уа Бег Авп ув Аа ви 2 215 250

Рго Ада Ро Пе сій Гуз Те Не бег Су Ага Був СУ іп Рго Аг 925 230 235 240 сі его с Ма тує Тег Сей Ріо Ро БегАгУ Авром Се Тег ув 245 250 255 .

АвпоЗій Уа бБег Ге Тпг Сув і ец Ма! Гуз Сіу Рпе Тут Ро бег Дер 260 765 27

Не Аїв Ма! 3 Ттр. и Бег Ави СІу й РгозовАви Авп Туг ув 280 285

ТиеТаеРго Рга Уві бем Авр Зег Авр Зіу Заг Рів Ре Ге тує Ваг 90 295 00 ув бе Пу УагАвр цу Зег Ага Тер Біб Суп СУ Авл. Ма! Ре Зег 306 о З15 20

Сув бег Уві Ме Вів Ст Ав Ге Ні Авл Нв Туг Тлг іп Гу ег 325 Зо 335

Ген бег Ген БегРго бу ув ТАг су Гей Авр.зег Рго Ти; біх Ге

З зав 350

Авр зег Рго Ті Спу ей Авр бег бо Тег Сіу Гей Авр Зег Рго Аво 355 Зо З655

Пе сій Местне іп ЗегРго Бегвеген Бег Ав Зег Уві пу Авр 370 378 ЗВО

Ага ма! Тег Те Тиг Сув Аку Аа Баг іп Ттр Пе Су Рго і Гео

З85 390 95 40а ув Ттр Туг ій Сій уз Рго- Су Був Аа Ро І увіеи бе Пе Туг 05 410 : 415 '

Нів СТУ бег Че Тен Сів Заг Оу Ма Ріо бег Аг Ре бег у бег аго 425 430

Сіу Бегоіу ТАг Ар Ре Тит бен Тв пе 5ег Бег ес бій Рго СИ 435 440 445

Азр Ре Аа Те Туг Туг Суз 31 (іл Туг Меї Туг Тут Ро Нів Тог ко 455 «во

Рне Су Са Му Тисі ув Ма! Сі Пе ув Ак 65 470 475 «ай: : ' «рії» 480 «212» РКТ «13» Штучна послідовність

«Вей «реа» 0ОМО30047 (містить модифікований Секінець):

БОМ15-26-5857 АБ МА МЕРКОЗОЮК, лінкер) С-термінальний

К-044-085 А мінус С-термінальний К (ТО ОЗР)ХЯ) «400542

Сію Ма! Сп вн Гей Уві Зег у См у бе Уа ой то Су Су 1 5 10 15

Зегі ен Ага Ген зег був Ага Аа заг оїу РпеТнеРНе уз Ага туг 20. 258 Зо

Рео Ме! Метр. Уві Агар іп Ага Рго СНУ І ув ЗУ Се Си Ттр Мав! 35 40 45 "Бегоц Це бе Рго Бег оту ЗегАвп ТВ ТУг Туг Аа Авр Бег Маї 5О 95 ва

Гуз Сіу Ага Ре Тнг Пе бЗег Ага Авр Аеп бегіув Ав ТАг Сец Туг 65 то 75 80 цей бів Меї Ап беї І и Ага Аа ЗІШ Аво Тис Аа Ма! Туг Тук Суб 85 9о 95

Ав ув Аво Ріо Ага ув ви Авр Туг Тв Оу спа ОМ Тв ен а 100 105 110

Тв Ма! бБег Зег Уві Сію. Рго ув бег Зег Авр.Гув ТП Нів ТНге Сув 115 120 125

Рго Ро Сує Рго:Аіа Рго бів ец бе) Су біу Ріо бег Ма РвВе ви т30 135 140

Ре Рго Ро ув. Рго ув Авр Тег беи Мей Пе бег Аг Тео Сів 155 : ї85о -.155 тво ма! Тиг Суб Ма! Маг Ма! Азр Ма! Зег Ніє Су Ар Рго ОЇ Уві Гуз 155 170 175

РпеАвп То Туг Ма! Аєр Су Ма! СПО Ма! Нів Ал Аіа ув ТНгО уз 180 185 180

Рго Ага сі іо бій ТугАвп зег ТНе Тут Ага Уа! Ма! Зег Уві (ви 95 2 295

Те Уа Се Нів Оп АвроТрр бе Авп Су ув СПИ Туг Гуз Суз Гуз 210 215 ей

Уві баг Ави Гуз Ага бе Рто Ада Рго Не СИ Був Таг Пе Заг ув 225 230 235 240

Ав ув СІК сів Рго Ага Си Рг Суп Маг тТук т цей Рго Рго бег 245 250 255

Ага Авр Сін ви ТВг був Авп Сп Уа! Зег ен Твг Суб еп ма ув 250 265 270

Сіу Ре Тут Рго Баг Авр Пе Ага Уві Су То бін бег Авп Су бір 280 285

Рго Б Ави Авп о туг був Твг Тег Ро Рго Ма! Гео Авр. Зег Авр ЗУ 290 2-3 00 бегРпе неї ви Ту Баг ув Геш ТНг Ма! Авр ув За Аг р віп 305 Зо З15 20 сип сну Ав УдЕ Ре бег Су Зег Уа! Меї Ніз СВ Ага ей Нів Ав зга 330 335

Ні Тугтнг Сів ув Зег Сецо Зег Ге Зег Ро ЗУ Гуз Ті Оу Гей 346 345 350

Аво бе Ро ТОЖ ії ей Авр баг Ріо Тиг Оу Гез Авр бег Рго ТАг

З55 360 ЗО

Су ге АвроЗег Рго Авр Пе іп Меї Те іо бег Рго Бег Бегі ей з7а З75 З80

Бег Ав Бег Уа! СУ Авр.Агу ма! пе Не Те Суб Ага Аа Зег оп

ЗБ 390 395 400

Терів су Рез си бе ув Тер Тугє Віл ій Сув Рго Су Гуз Аа 405 19 15

Рго був бен Гец не Тут Нія пу Бег Ме Гви Сп Бе Сіу Ма! Ро 420 425 480

Бег Аг Рне Бег сіу Зег у Баг ЗУ ТО Авр Ре Тиг Се Те Пе 435 440 445

Баг Береш бій Рго ВІ Авр Ре Аа ТА тує Ту Суб З С ТУг 450 «55 460

МеєтТуг Туг Ре Нів Тіг Ре у іп у ти ув маг Пе | ув 465 470 45 ВО «10» 43 2112482 ка19з РЕ «213» Штучна послідовність «рах «аа» ПБМОЗ30О048 (містить модифікований С-кінець);

БОМ15-26-597 АБ МАМЕРКОВОК лінкер) кс С-термічальний

К-044-085 Я4АВ А ТО ЦОБРхА «ка» 43

Си Ма! Зіп гео беи Ма! бег Су Біу ЗУ ви Ма! За Рго Сіу Су 1 5 юю 15

Зегіец Агрі еп Зек був Ага Аа Бег СОІУ Ре Твг Рпе ув Авіа Туг 20 25 30

Рго Ме Ме! Тр Ма! Ага сій Ав Рто Су був у Ге сію тр Ма! 35 40 45

ЗегСсім Пе бек Ріо Зег Су 5ег Авп Тг Тут Тут Аа Азр Зег Уа!

Бо БО

Гув'Іу Агу Ре Тк Пе Зег Ага Ар Авп бегі уз Авп Ті Гей Туг 85 7 75 о

Сецбіп Ме Ап бог Тео Ага Аа Зо Дер ТА Дів Ма! Туг Туг був 85 50 95

Ав уз Ар Ріо Аг І ув Геу Ар Туг Тр Оу Сп Су ТНгієй Ма! о 5. "о

Ти Маї Зег баг Уа! іш Рго ув. Зег Заг Авр ГСує ТА Нів Те був 120 125

Рго Ро Сув Рго Ага Рго Сім ец бец Сіу Сіу Ро Зег Маі Рне Ге

ЛО 00000795 0, ши вне рто Рго ув Рто Гуз-Авр ТАг еи Мей Пе бег Аго Тнг Ро бін 145 150 155 тво

Маг тім Сув Ма! Уа! Уа Авр Уа Заг Ні і Аво Рго Зі Уа ув 185 470 175

Рне Авп То Туг Ма! Авр Сіу Ма! Сл Уа! Ні Авп Ага ув Туз 180 185 190

Рто Аг бій Сів іт ТугАвп зе Тл Туг Ага Уа ма! бег ан ви 95 200 205

Ти Уа) Сеш Нів бій Авор Тгр ви Авп су бує іш Туг ув Суб Гув 210 215 220 маг Заг Авп Гуз Аа їец его Аа Рго Пе с був ТА Небег сув 225 230 235 240

Ав був Оу іп Ргб Аг ій Рго іп ма! туг тк ей бго Рго бег 245 250 ВВ

Аг Авр и ен ТРг ув Авп Сп Магбег і ец Тиг Сув Ге Уві ув 280 2855 270 су Ре Туг Рго Зег Авр. Ме Аа Уа! І Тр. Зо Вег Авп Су Зір 275. 280 285

Рго бій Авп Аза Туг був Тег тк его Рто Уві бен Ар бегАвр Оу 290 295 300 зЗегепе Ре ей ТугЗег ув се Тг уагАвр ув Зег Аг Перо 305 Зо З5 320

Сі Оу Ава Уа Не Заг Су бег Узі Ме Нів Си Ага Геи Нів Авп 325 330 з

Нів Туг Ти біпі ув зег це Бег еу Бек Рг Оу був ТАС Оу Гей

З40 345 350

Агов БегРгто Тит бі бе Авр Бег Рго Тиг Оу ви Або Бег Рго Тег 355 Зо зЗ65

СУ Ген Авро Бег Рео Авр Пе Зіп Меї Ти іп Зет Рго ЗегЗегі ву 370 375 зво бег Ага Зег Масу Дер.Аго ма! ТА Пе Те Су Аго Аа Зег іп

З85 зо 395 400

Тв Не Су Рго Сію Гео ув Тр Туг Оп З уз Ре Сіу Гуз Ав

Й 405.00 810000000 45,

Рг ув еи ву Це Тут Ні СУ Зеї Пе Ген іп Бег бу Ма! Рго 420 25 430

Зег Ат Ре зе Су Зег ЗУ Зег СУ Трг Авр.Ре тат це Тв Не 435 440 445

ВегЗег і еш Оп Рго 0 Авр Ре Аа Тис Туг Тут Сув Сп іп Туг 450 455 або

Меї Туг Тух Рго Нів Тит Ре Су Сп слу Тигі уз уаі СЮ Пе уз 4955 а7а 475 480

Ага Аа

«10» АА «211»484 «2122 РАТ «913» Штучна поспідовність «вай» «раз» ГІЛМЗ0О049 (містить модифікований С-кінець: рОомМ15-28-557 АБ М (МЕРКОБВОК лінкер) я С-термівальний к-о44-085 ДАВ ЗААА (ТОЇ ПаР)ХЯ) «йо» 44

Сів Ма і бе беу Ма! Зег біу Біу Су Гео Ма! сія Рго Сіу Су 1 5 10 15 багі ви Аг і ви Зег Сув Аа Аа баг Сіу Рпе Тнг Ре | ув Ав Туг

Зо

Рго Меї Меї Тр Ма Ага ій Ага Рго Сіу Суз СУ Гео сів тр Уа зо 40 де

БегОі Пе Зег Ріо бег Сіу ЗегАвп ТАг Туг Туг Аа Ар Зег Уа!

БО 55 Бо ув СУ Аг Ре ТА Пе бег Аго Авр.Авп Баг ув Авп Тк Ген Туг то 75 8О0

Гви Сл Меї Ап. Заг бен Аг Ага сію Аво Тег Аа Уа! Тут Тут буз 05 0 5

Аа Суб Абр Рго Ата ув Ге Або Тут Тр Оу Сів У Пре Ма 100 105 110

Тит Ма! Вег бег ма! Сі Рго Гуз Бег Бег Авр ув Тит Нів Тік Сух тв 120 125

Рго Рго Сув Рго Аа Ргто Спи Генні ви Зіу Спу Рго Вег Ма! Рне Ген 130. 155 140 :

Ре Рго Рго ув Рго Гув Авр ТАг во Меєне бБегАта ТНг Рго ОЦ 145 150 155 160

Уа Тг Су Уа! Ма! Уа! Азр Ма! бег Ні Си Авр Рго Сто Уа ув 165 170 175

Рпе Авп Тр Туг Ма! Авр Су Ма! Сі Ма Ніз-Авп Ага бує Тег ув 180 185 190

Рго Ага См зів ОЮ Туг Авп бег Тиг Туг Ага Уа! Ма! Зег Ма! Ге 195 200 205

Ти ма! бец Ні Сп Авр То бе Авп Су Гу Зі Туг і ув Сув ув 210 215 220

УВІ Бег Ап І ув Аа Гео Ріо Аїа Рго Ме Си Гуз Тр Не Бег І ув 225 230 235 740

Ага Суб Сіу Сіп Рго Ага біб Рто Сп Уві Туг Так беи Рго Рго Зег 245 280 255

Ага Ар Сі ей ТАС Гуз Ав Сіп Ма Бег бе) ТП Сув Ге ма ув

260 255 273 су Рпв Туг Рго Зег Авр Не Авіа Ма! Сів Ттр Сів Зег Авп Сіу іп 275 280 985 й го С Авп АвлоТук Гув ТТ Рго Рго Ма ей Авр Зег Авр (Му 290 295 00

Зег Рпе Рпе беи Туг бегі ув Бен Тиг маї до ув Вег Ата тт Сі 305 о 315 320

Сп. Сіу Ави Ма! Рпе бег Су Заг Уа Меї Нів СІЮ Аа ец Ні Авп 325 330 З35

Нів Тук ТВг Сі бує Баг еи Бегі во Зег Ріо Оу ув Тл Оу Гей, зай 345 ЗО

Авробег Рго Тог Зіу Се Авр Зеє Рго Тіт ЗУ бецпАзр Бег Рго ТНг

ЗБ зво 365

Оу с еу Авр Зег Ріо Авр Пе бій Меє ТНг біп Баг Рго Заг Заг Ге 370 375 Зв ! ! бег Аа Зег Ма! Су Авр.Аго Ма! ТНг Не Тог Сув Агу Аа бег бів

З85 390 395 400

Ти Пессім Рго сп Ге був Ттр Туг С Ів І ув Рео Су був Аа 405 аю ді15

Рго Суз бен Кеш ле Туг Ні СУ Бег Пе ви іп Зег ЗУ Ма Ро 420 425 430

БегАгаРнНе зе Су ЗегОіу Зег Оу Тг Ар бе Трт во Тек Не 435 440 445 щЗегБекіецй іп Ро С Авр.РНе АВ Ти Туг тує Сув Іа п Туг 50 455 460

Ме Тує Тут Рго Нв ТНе Ре су Стій у ТА Сувз Ма! ню Не ув 455 470 475 480

Ага Ав Аа Ага «ах 5 «115485 «12» РКК «2135 Штучна послідовність «ооо «ага» ОМБЗООБО (містить модифікований С-кінець): рОом'5-26-597 АБ МАМЕРКВЗОК плінкер) 5 С-термінальний к-044-085 АБ «т (ТО ПР хІ) «400245

Сі маг бій сечі ецоуа! Зег Оу у у беч масі Рго су су 1 5 Но: 15

Зегіеи Агу Кен Заг Сук Аа Аа Заг Су Рне Те Рпе Цув Ага Тут

Зо

Рго Ме Ме Тез Уді Агар іп Ав Ро слу Гу СУ сво Си Тер Ма

За 40 45 заго ПезегРго зЗег у ЗегАвп Тр Туг Туг Дів Аво Бех Уаї 5 50

Був Сіу Аг Ре ТНг Пе Бег Ага АвроАвп Бег Гуз Ап ТА Ге Туг то 75 80

Ге бій Меє Авп о Зег ви Аго Аа Сі Аво ТВ Ада Ма! Туг Туг Суз 85 за 95 ла Гуз Авр Рго Аго ув Гви Авро Тут Тер СУ Сів Су Тигеш Ма 100 105 10

Те Уа Заг Заг Мао Рго Гуз Зег Зег Авр ув ТЕ Нів Тнк Сув 115 120 125

Рго Рго був Рго Аа Рг о Гей ви сту Су Рго-Беїг Уа! Рне Цву 1330 135 140

Рне Рго Рго (ув Рго ув Авр.ТАг ви Меї Це Зег Ага Тг Рго Січ 145 150 155 1680

Уа! ТЕГ Суз Ма: Ма! ча АврУаі зЗег Ні ОМ АвБр.РТО СИ Уа! Суб 165 1 175

Ріпе Ав Тр Туг Уа! Авр Су Маї СН Ма! Ніз Ап Аа ув Тит Гу 180 185 190

Рго Ага Сів Спи сій ТугАєп бат Тіт Тут Агу Ма! Ма! Зег Ма! ец 195 200 205 тіж Мав нів сів Авр То Гей Ал су Суз СІЧ Тук Гуз ув Гуз 210 215 220 ма Заг Авп Гуз Аа ви Рго Ав Ро Це СП ув ТИг Не бег Гу 225 230 235 240

Ав Сук Су Зі Ріо Ага Сі Ро ій Ма! Тут Тк Гей Рго Рго Зег 245 250 255

Ага Авр Сім бецу Тпг Гуз Авп ЗіІп Маг бегі єн ТВ Суз Гец Уагі ув 250 255 270 сіу вве Тут Рго-бег Авр Пе Аа Ма З Трон 587 Авл. сну (іп 275 280 285

Ргб и Авп Ав Туг бує Пк пе Ро го Ман'ео Авр' баг Авр Оу 290 295 Зоо

Бег Ре Рів ви Туг Зег Гуз їви ТНг Уа! Авр ув Бег Ага Ттроой 305 10 315 320

СЗіп іх Авп Уві Ре Зет Суб Зег Ма! Меї Ніч Аа ви Нв Ап 325 330 335

Нів Туг Ті чл ув бегі ви Зег Ге баг го Сну був Тег Оу Се 340 5 З50

Авр ЗегРго тін су Геи Авр Зв Рго ТНг Оу ви Авр бег Ро Ти 355 збо 365

Сіу Мей Ар Бег Рго Авр Пе бів Ме Тест зе Ро Зегет ви 370 375 ЗВО

Бег Ав Заг Уа! СЛУ Авр Аг Уа! Твг Не Тв Суз Агу Аа бег ій 355 З50 395. 400 тре БУ Рго Сі їец у Тер Туг іп Ссіп Гуз Рез су Був Аа 405 45 415

Рго Сув-бец бен Не Тут Ні СУ бБег Пе Гео Зег у ма! Ро 420 425 430

Бег Ага Рпе бБег Оу бБег слу зегоіу ТВ Авр'рпе Тр ви Тве Ве 435 440 я

Ваг Зегіені бів Рго- біз Авр'бе Аа Твг тує Туг Су Сів іп туг 450 456 450

МегтТуєтТує Рго-Нів Тег Рпе слу ій Сіу ТАг був Ма! СІ Ще Суз 465 470 475 «80

Ага ТАг «210546 «2115474 «212» РА «213» Штучна послідовність «о0» «аа» ГПМОЗО051 (містить модифікований С-кінець): ЮМ51578 я С-термінальним К-044-055 ЗА мінус С-термінальний М (ТОЦОВРІХЯ) «Ох 46 і Ма! сти Сер ви Ма! Зег Сіу Су Зіу ен масі Ро сну Су 1 5 то 15

Зегієвеи Ага Гец Бек був Аа Аа Баг Су Ре Тіг Ре І ув Ав Туг

З

Рго Мег Мей Тгр Уа! Ат іп Аа Рга Су Гуз Су і во СІНн Тр Уві 0 «5 бег іш Пе Зег Рго Бег ЗУ бег Авп Тпг Туг Рут Аа лЛер.Зег Уа

БО

Гуз Сі Аг Рів Тнг Не Бег Аго Авр.Аво Бег І ув Авпо Тег Гец Туг 65 70 75 80

Геч бів МесАво бег і еи Аг Аа Сію Авр ТА Ав Ма! Тут Тут був 85 90 95

Аа ув Авр Рго Ага був Гей Азр Туг Тр СУ Сп Оу Ні ез Уа! 100 5 10

Тиг Маі Бех Зе: Дів Вег Тиг Нів Тв Су Рго Рго Суб Рго Ада Рго че 20 125

С бенієй Му СУ Ріо Бе Уа! бе бе пе Рго Рго ув Рго був 130 135 140

Авр Те ен Мей (Це Зег Аг ТА Рго сту Ма! Тис Су Уа Уаі Ма 145 150 155 16о

Аво Уві Бег Нів Сі Або Рго Сію Уа ув Ре Аби Тр Туг аз Авр 185 150 175 сту ма! Си Ма! Міз Азл Аза був ТАС Дух Рго Ага Бі ШО Туг 180 т85 190

Авп Бек Трг Туг Аго Уа! Ма! Зег Уа! Кеи Тег Уві Ген Нів Сів Авр 195 200 205

Тер ев Ап Ох Сук МИ Туг ув Сує Суб Маї Зег Авп ув Аа цей 210 215 220

Рго Ага РгоіПе Сі Гуз ТВг Пе Зег І уз Авіа ув ЗУ Зп Ріб Агу 225 230 235 250

Ою Рго в Маг тує Пт екего Рго Бег Ага Авр ІН Гей ТТН Суг 245 250 255 еп ой Уві Заг Ге Пр Су бец ма! Суз Сіу Рне Тут Рго Бек Ар 280 ва 270

Пе Аа Ма! Сі Тр Сі бег Ав СВУ біо Ро ІЧ АвпоАвп Туг був 275 280 285

Тис ТАг Рго Ріо Уа! Сеи Авр Зег Азр Су Зег Ре Ре ей Туг Баг 290 295 оо ув ви ТНг Ма! Авр ув Бег Ага Тр сій іп Су Авп Маг Ре бег 305 Зо ЗІБ 320

Сув Бех Ма: Мег Не І Аз ес Ні Авп Мі ТУ ТВ був Бег 325 330 335

Іешбегі ви бег Рго (ЗУ Гуз ТП Су ец АвБ Бег Рго ТИ Оу Г ец 340 345 ЗО

Аво бег Рго Тіг Су Гео АзробегРго Те бу Гео АзробБег Ро Авр 355 360 355

Пе сіІп Мей Те Сіп Бег Рго Зег Зег Ге Зег Лів бег Уві Су Абр 370 375 З80

Ат ма! ТВг Пе Ттпг Суз Агу Аа зег бір Тер. Пе у Рго ЗШ бен 385 за 9 400 і ув Тер Тук Со Сів ув Ро Су ув Аа Ро 1 ув ей ей Ме Туг 405 «10 5

Нів Су Бег Не. Геви бів баг Су Уа! Рго баг Аго Ре бег Су Бег 420 А28 ЗО сіубег Оу ТнгАвр Ре Ти Се Те бЗегЗег ву ів Рго Сію 435 440 445

Авр Ре Аа Трт Тує Туг був біл сів Ту? Ме Туг Тут Рга Ні ТАг 450 455 4650

Рпе Сіу іп Су Тиг ув Ма! СИ Пе ув 455 ато кр 47 «2115 476 «12 РЕТ «2135 Штучна послідовність «20» «29232 ОМ530052 (містить модифікований С-кінець ОМ51576 з С-термічальним К-044-085 АВ А (ТО ОБР) хЯ)

«400» 47 сі ма! спі еціви маг бег Сіу Сіу СЗіу тен Максі Рго Сну Су ні 5 10 15

Бегі ви Аг Гец бег Сув Аа Ав бегоїу Ре ТА пе Гуз Аа Туг 20 25 30

Рго Мем Тр Ма! Ага Сів Аа то Сіу Гу СМ і во Ів Тв Ма!

Зо ча 45

Зег Сі ПесзегРго Зег Зіу Бег Ап ТНг Туг Туг Ага Авр Зег Уві 50 55 бо

Гув СІМ Агу ве Тиг Не ет Ага Ар Авп Зег ув Авп Тег Гей Туг 65 70 7 Во

Гец Зп МесАвп Зег І. ви Аг Аа іш Авр. ТНг Аа Ма! Тут Туг був 85 90 5

Аа цу Авр Ро Аго Гуз Сец Ар Тує Ттроіу ій су Тк беи Ма 100 105 тло

ТНг Маг зЗег Зег Ав Зег Ти Нів Те був Рго Рг був Рго Ада Рів 120 125 бін Геу Сей Су чу Рго Бег Уа! пе бец Рів Ріо Рго ув Рго ув 130 135 140

Аво Тиг ей Мег Пе Бег Ага Тбг го о Ма! Тог Сув Ма! Уа! Маї 145 150 155 тво

Авр Уа! Бег Нів СН. Авр Рго іш Маї Гу Ре Аве Ттр Туг Ма! Авро 185 170 175 сх Уві ВІ Уа! Нів Авп Аа Гуз Тв ув Рго Аг Ів і зів Тут 180 185 130

Авпозег ГАС ТУуг Ага Ма! Магбег Уа еи Тв Уві Гео Ніз п Авр 195 рані 205

Тв тешцАвп біу ук Сн Туг був був і ув Ма! 5ег Ав ув Аа ес 210 815 220

Різ Ага Ро Це ЗІ ув Те Це Зег Гуз Аа ув ОМ СА Рг Аго 225 230 9735 24 іш Рго бій ма! тує Ти це Рго Ро Бег Аго Авр бін ви Тр Сув 245 250 255

Авп сій Уа бегівцн ТигСувівн Уаі ук СІУ Ре ТугРго Зег Авр 250 255 270

Не Аа Маг сію Тр зегАвиа Оу іп Рго Си Авп Ази Туг гу 275 280 285.

ТВгТиеРго Бгто Уа! ей Аво Баг Авр Су Заг РНе Рпе Гец Туг бег 90 295 з00

Гує цеи Тпг Уві Ар ув Бег Аго Тер обі сій Су Авп уві Рпе Ве 305 310 Зі5 320

Суз Зег Уа! Меї Ні Січ Аа Сец Ні Двл Нів Туг Тит Зій Гуз бег 325 за 335

ГешбегецБегРго СУ ув ТАССуУ ви Авр бег Рго ТНг Су Ге 340 345 З50

Авзр бБег Рго Тиг СТУ їец Авр Зег Рго Тиг Сіу Мен Авр. Заг Рго Авр 355 360 365

Не Сіп Мей Тит біп'бег го Бег баг ви бек Аа Бег Уа! Зіу Авр 370 375 з80

Ага ма! тик Не тег оСув Авз Ага Заг СЯ Тр Пе у Ро б ец 385 390 395 400 і ув тр гуг Сі ну уз го Су ув Ада Рго ув Сей ей Ше Туг 405 0 А15

Нів.Сіу Зег Пеїецп іп бег ЗУ Ма! Ро Бег Ага Ре Бег Су баг 420 425 430

Сіу Бегоїу ТигАвр Ре тТіг бец ТАК Це Зег Зег ви Си Рго Сід 435 4340 445

Авр Ре Аа Пт Туг Туг Сув Оп (ів Тує Меї Туг Туг-Рео Ні ТАС 450 455 450

Рне Су іп у ТАиг Сув Ма! (ЗИ Не уз Ага Аа 485 ато 475 «2148 «2115 АВ «2125 РКТ «132 ЦІучна поспідовність . ково» «вва» ПМБЗ0055 (містить модифікований С-хінецьх ПМ51576 з С-термінальним К-044-085 ЧАБ З ААА ЧТО О5РІХА) «4005 АВ сСіь Магоів Геу Це ма! бег Сіу Су Оу бе Ма! ів Рго Су Су 1 5 10 15 бегІегАго її ез Зег Су Аа Аа бег Су РНе Тіт Ре І ув Аа Туг 0

Рго Мег МЕ Тгтр МагАга ов Аа Рго- іх Гу Су Се Ві Тер Уаї

Бек Си Пе Баг Ріо Зег Су Бег Авп Тиг Туг Туг Аза Азр Зег Ма!

Бо 55 бо ув су Аго Ре Тиг Пе бег Ага Авр Авп бег Цуз Ап Те бе Тут

Б5 7 75 80

Безу біп МЕС Авп 5ег Ге Аго Ага біб Ар ТНг Аа Ма! Тут Туг був

Б ща 95 діа гувАвр Рго Аг уз Ге Авр ГИ Тр Оу в слу ГА ве Ма! 160 105 110

ТЕГ Ма! Зег бег Аа Бе ТНг Нів Те Сув Рго Рг був Рго Аа Рго 175 120 125 сів Се бе оіу Сіу Ріо Зег Ма Ре Сем Рів Рго Рго ув Рго ув 130 135 140

Авр ТИР ви Меї Не бег Аго Тит Рго Сію Уві Ти Сув Ма! Уві Ма! 145 150 55 160

АвВо ма бат Ні С Авр его и Ма ув Рпе Ав Тр Туг Уві Авр

165 173 175

Су Ма! Сій Уа! Нів Авп Ага Гук ТАг І ув Рго Агу сін ін Їй Тут 180 т85 180

АвпоЗег Трпг тує Ага Уа! Ма! Бех Уа бе Торг Уаі бе Ен іп Авр 195 200 205

Ті Гец Аза Сім ув Зи Тугіув буз Гу Ма! Баг Авп Гуз Аа ви 21 215 220

Рго Аа Рго Це Сі Сув Тк Не Зег Суз Аа Гув Сіу Сів Рго Аго 225 230 235 240

Сім Рго Сів Уа тує Тит Гей Рго Ро бег Аго Авоо ій Гео Тог бує 250 255

Авп сіп Уа! Зегец ТА Сувієи Уа ук (Зіу Рпе Туг Рго Зег Авр 280 255 ето

Бе Ага Уа! сій Троси бег Ап ОМ іп Рг о Авп Ав тугі ув 275 280 295

ТЕТ Рго Рго Ма Бенц Азр Бег Азр Оу Зег Ре РНе Бей Туг оег 290 295 00

Гув бе Тпг Маїі Авр Гуз Баг Агу Ттроіп ів Оу Авп Уві Рпе бег 305 зло 315 320

Сув Зег Уві Ме Ні СТИ Аа бе Нів Авл мів тус ТВ Ой Гук вег 325 Зо 335 ви бегі ви бБег Ріо у ув ТР Оу і ец Авр Зег Ро ТВг Оу Сец 340 З45 350

Авр ЗегРго Тиг Су Се АвроЗег Рго ТАг Оу Сец Азр. Баг Рго Авр 355 зво З65

Не іп Мей Тнг Сіп Заг Рго.Зег Зег Г.ви Заг Аз Вег Уві! Сіу Авр

ЗО 375 зво

Ага Уа! Тр Не ТигСув Аго Аа Зег ов Тор Песіу Рго Со Сец 385 90 395 406 ув Тер-Тує СІЙ Ів ув Ро су Гуз Аів Рго Суз ви ме Пе Туг 405 ща 415

Нів Спу-Вег Пе Ге іп бег Су Ма! Рго Зег Аг Рне Вег Су Бег 420 425 430

Ох бег Сіу ТНг Авр Рів Тигі ви Тре Не бег Зегі еп ів Ро сіб 435 440 445

Авр Рі Аа Тит Туг Туг був 1 СЮ Ту Меї Ту Тує Рго нів ТС 458... 455 4650 . !

Рпе сСпу Об М ТАг був Ма! си Це ув Ага Аза Аа Ага 405 470 75 «2102 45 «8112475 «12» РТ «135 Штучна поспідовність «ро

«раз» ДМОЗ0054 (містить Модифікований С-кнецьх ОМ51576 з С-термінальним К-044-085 АБ КТ КТС О5РХЯ) «49 сін ма сла бен ії еи Уа! Бех лу СІУ Су Ген Уаї Сп Єто У СУ 1 5 10 15

Зегіеч Ат ви Бег Суз Діва Аа бег Су Ре Ті РНе Гув- Аа Туг

Зо

Ріо Ме( Ме! Тгтр Маг Аг Сп Аіа Рго Сіу Суб МУ Гео и Ттр а!

Бегоїц Пезег Рго Зег Сту Зег Авп Тг Туг Туг Аа Авр Зег Уа! ба ув у Агу Ре Трг Не Зег Ага Азр'Азп Бег був Ав Тигуеи Ту 55 70 75 80

Гей біп МесАвлозег бец Аг Аа Су Авр Ті Ада Ма! Тує Туг був 85 50 95

Аа ув Авр Рг Ага Суб Ге Авр Туг Тер сіу сп (У Те Сеи май 100 105 і

Тиема! Хек Беї Аз Бек ТАг Нів Тіт Сув Рго Рго Суб Рго Аа Ріо 00115. 120 125 сіні во Ген су Су Рго Зег уві еле ї ви РНе Рго Рго ув Рго Був 130 135 140

Авр Таг Гец Мей Пе бЗег Аго Тит Рго Сід Ма! Тит Сув Ма! Ма! Уві 145 5 155 1650

Авр Уа! Зег Нів Сі Авр Рго Си Ма! був Рне Авп Тер Тут Ма! Авр 1655 то 175 сту Марсі ма Нів Аби Ага Су Тегі ув Рго Аго СІ Си Сп Ту 180 185 90

Авп БегТиг Туг Ага Уві Магбег Уві Ме тиг Ма ей Нів ст Авр 185 240 205

Тт бе) Авп ОХ ув СМ Туг Гуз Сув Гуз Уві Баг Ав І ув Аа Бей й 215 о

Ріо Аа Рго Пе біо ув ТА Не бег С ув Ага СГ ув СУ біп Рго Ага 225 230 235 250 сій Рго сів Маї Тук Ти бец Рго Ріо Бег Аг Авр СІ Гео тик Су 245 258 255

Авп бій Уві Зег ву Тигр був сей Май ув Су Рпе Тук Рго Зег Авр 260 265 270

Пе Ата МУаї Си Ттр З Бег Авп Су Зій Рео Си Авл Авп Ту Гу 215 ВО 285

ТА Тв Рго го Маї Сеп Авр бе Аво Оу бег Рпе Ре Гео Туг Бег 290 295 00

Кубі во Те УВІ Ар Гуз Зег Ага То сі сі ОК Ав Мазі Ре Бег 305 З 5 320 був бБег Уа! Мег Ні бій Ав Ге Нів Ав Рв Туг Твг бій бує ес 325 330 335

Бешбегі ву баг Рго Сіу Гуз Тг Су ГегАвр Зег Рго ТАг Оу веи

340 345 350

Авр бБег Ріо Тиг Сіу Се Авр. Зег Рго Ті Оу Ге Авр Бег Рго Авр 355 З00 3605

Пе сій Ме тнг сій ЗегРго Бег Зег і во бег Аа Вег Уа Оу Авр

З70 375 ЗВО

Ага Ма! тик Не Тег Суз Аго Аа Заг Зп Тр Не бу Рго ве 385 Зо 3955 400 ув Тер Туг бів іп бує Рго сіу був Аза Рго Гув ви Сей Не Туг 405 А1О 415

Мів сту бег Не бец бій Баг у УагРго Зег Ага Ре бег Су Баг 420 425 430

Сіу бегспу Тит Авр Рпе Тіт Бей Ти Не бег Зегі ве Зп Рго Од 435 440 445

Авр Рпе Аа Трг Тує Туг був Сп Стп Тує Мей Тук Туї Рго Нів ТНг 450 4585 460

Рпє Су Сів су Тег уз Магне Пе уз Аг. Тиг

Claims

445 47 475 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну, який зв'язується з ТМЕКІ та який є вибраним з групи, що включає: одиничний варіабельний домен МН імуноглобуліну, що зв'язується з ТМЕКІ та має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1, або являє собою амінокислотну послідовність, яка є на 99,5 95, 99 95, 98 95 ідентичною амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО: 1, та яка додатково включає модифікацію, що являє собою С-термінальне подовження, яке є амінокислотним подовженням від 1 до 5 амінокислот; та де вказане С-термінальне подовження складається з амінокислотного подовження, вибраного з (а) А (Б) АБ, (с) АБ5Т (4) АЗТК, (є) АБТКОа.

2. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за пунктом 1, який є вибраним з наступних амінокислотних послідовностей: а) ХЕО ІО МО: 16; (Б) 5ЕО ІО МО: 19.

3. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким попередніх пунктів, де він є присутнім як злитий білок або кон'югат з додатковими молекулами.

4. Фармацевтична композиція, що містить одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким з попередніх пунктів у комбінації з фармацевтично або фізіологічно прийнятним носієм, наповнювачем або розріджувачем.

5. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну у відповідності з пунктами 1-3 або фармацевтична композиція у відповідності з п. 4 для застосування у виробництві лікарського засобу для лікування або запобігання принаймні одного захворювання або розладу або стану, вибраного із: запального захворювання або розладу, або респіраторного захворювання або розладу, або пульмонального захворювання або розладу.

6. Одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за п. 2, де модифікований домен має амінокислотну послідовність, представлену у БЕО ІЮО МО: 16, для застосування у виробництві лікарського засобу для лікування або профілактики принаймні одного захворювання або розладу, або стану, який вибирають з: артриту, псоріазу, запального захворювання кишечника (наприклад) хвороби Крона та неспецифічного виразкового коліту; або, наприклад, респіраторних або пульмональних захворювань або розладів, наприклад, вибраних з: астми, хронічного обструктивного захворювання легень, запалення легень, пневмонії, раку легень, алергічного риніту, алергії, пульмонального запалення та гострого пошкодження легень (А |), а також гострого респіраторного дистрес-синдрому (АКОЗ) та їх ускладнень.

7. Композиція у відповідності з пунктом 4 або одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким з пунктів 1-3 у вигляді ін'єкційної, пероральної, інгаляційної, небулізованої композиції, композиції пролонгованого вивільнення або висушеної заморожуванням композиції.

8. Пристрій для доставки, що включає композицію у відповідності з пунктом 4 або одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким з пунктів 1-3.

9. Пристрій для доставки, що включає композицію у відповідності з пунктом 4 або одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким з пунктів 1-3, де вказаний пристрій являє собою небулайзер або інгалятор.

10. Ізольована або рекомбінантна нуклеїнова кислота, що кодує одиничний варіабельний домен імуноглобуліну за будь-яким з пунктів 1-3.

11. Вектор, що включає ізольовану або рекомбінантну нуклеїнову кислоту за п. 10.

12. Клітина-хазяїн, що містить ізольовану або рекомбінантну нуклеїнову кислоту за п. 10 або ізольований вектор за п. 11. Фнува 1: Кількість вже юмуючих вити-медикоюентозних знитита в сироватквя зЗдопових суб'єктів ню ж в. я - 390 жа о ш Ь.: Ж то тури 5 | тк жи гу е і я й! с й ми МЯКІ р е в і З 5 2 Я ек За ї ве Бе г ТЕ се Е ж ше 5 ох Ж ра - я я я

Фігура 2: амінокислатні послідовності: (8) Немодифікований ДАЮ БОМ ТН-131-206 (анти-ТМЕКТУ ЕМО ЕВ ОСІ УОРООВІВЕЗСААВОЕТРАНЕТМУЛІМВОАРОКОЕУУВНІРРОСОЮРЕТ АДОУКОАРТЗАОМВКМТЬ МУ ОММВІКАЕВОТАУУНСАК РКЕВОРМУЕОСТУУСОЗТ МТУ (ЗЕСТО КО 1) (в) Немодифікований 4АБ БОМ ТН-1 31-51 авти 1 МЕКЛ) ЕМО СЕБСОСІ УОРСОЗЕВІ ЗСЛАЗОЕТЕАНЕТМУМУВКОАДРОКОСЕУУУЗНІРРУСОЮРЕУ АОБУКОКЕТПОВОМеКМТЬКОММВСВАЕОТАУУКСАЦ-РКВНОРМЕ СУ МУСОСТІ УТУВА (5ЕОО МО 2) (0 Немодифікований ЗАВ РОМ 1Н-131-202 (вити ТПМЕ В) ЕМСН ГЕЗВОСІ МОРОЗІ НІ ЗСААЗОЕТЕАНЕТМУУУУВОАРОКОЦЕМУВНЕРООООРЕХ АрЗУКОКЕТІЗКОМОКМТЕУ СОМ ВАБОТАУТСАЦ РКАСРАКОТИУ ОСТ.

УТУЗВ І5ЕВІВ МО 3) (З) Клов УНН) в. біспецифічного формату, що має БЕК зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок ШО(СКОБО(ОО5 зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини, як описано в УМО2010100135: ЕМО УББОВСТ МОРС НІ ЗСААБОВУККІМУМАУУУОДРОКОКЕЇ МАСНЗООЗТОХАВ БУКОКЕТІБЕДНККМТ СТІ СММБІ АРЕВТАМУЧЄСАРІТТЕВОХОСОКЕХУ ОСТ.

УТУЗБОВ в;оБОБЕУВ уві МаРОМБ ВЕ ЗСЛАЗОЕТВЗКОМБУУВОАРОКОЕЛУВВІВ вЗВОТЬУАреКОвАТЯВДНККТТ М ОММВЕКРЕОТАМУУСТІВОСВІ БИББОСТ УТУВ З (БОЮ МО 8) (в) Клов.

МАНОЄ) є біспецийичного формату, що має ТМ зв'язуючий модуль, зв'язаний зі зн'язлочим модулем альбуміну сироватки, який, в свою чергу; зв'язаний З ТМЕ зв'язуючим модулем, використовуючи СО 500055 як лінкер, як описано є МО2010077422: ЕМО ЛЕВООСІМОРОСВІ ЛІ ЗСААБОЕТЕВО МАМУ ХУВОАРОКОГЕУУУВВІНТМОСТКУ РОБУКОВЕТІЗЕДНЕКМТЕМ ОМ АРЕВТАУСУСАКБРОСЕМВИООСТІ.

УТУВББОСОСВОо СВБЕУЧЦУєВОааа МУРОМ НІ ЗОААЗОЕТВВЕОМОМУВОдДРОКОЇ ЕУУУВВІЗОВОВ ОотіжхАреукснЕпаеДднекКтТ М ами АРЕОТАУТУСТОСТЇ ЗН5ЗОСТ УТУВЗОВО ЗБОБОБЕМО МЕБОВОГ УРОК ЗОЛАБОРТБОУУУМИЛУКОАРОКОГЕМАЗЕНМТ МОЇЦТКУРЮОБУКОКЕТІВНДНККМТІ МІ ОМ ВРЕОТАУЧСАВОЕВОЕМАЗОСТІ УТУВ (ЗЕФІО МО 5)

Фігура 2 продовження; ГК) Клон МНН) є бівалентного моноспецуикффічного формату, що містить дві ідемтичні мопекули, зв'язані за рахунок Аіа-АїІв-Аїв пінкеру, кожна молекупа є «АБ, який може зв'язувати А! домен фактору фон Вілпебранда, як показано а УУСгООЯТ1 5834; ЕМО УЕБООБІ МОРБОЗЕНЕЗСЛАЗОКТЕБУМРМОМЕНОАРОКОВЕ УААІВКТООВТ КУ РІЗЗУЄСВКАЕТІЗАДНККАМУЧ ОММБІКАБЕОТАМХУСАААВУКАЄВОВУКТ РЕВЕНЮ ОТОМТУВБАААЕМОЕУЕБОСОІ МОРОК ЗСААВОКТЕВУМРМОМЕКОАРОКОКЕСУ АДІБНТОВОГСТРОБУВОКЕТІЗЕДНККАМУУ СОМ КАЕВТАУХУСАААВУВАвОСКУВ ТЛ РЗЕЖТЕУУВОВТОМТУВО (ЗЕ МО Є) (9) Клон-МННаа) є біспецифічного формату, що має П.А зв'язуючий модуль, зв'язаний за рахунок ОСОБИС зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки людини, як списано в МО2О10100135 з аланіновим. подовженням: ЕМО МЕВОСОСІ МОРОЗОВ ВІ ЗСААБОБЗМЕКІМУМАУУУЯОАРОКОВЕСМАСИЗООВТОЖАЮ ЗУКОКЕТІБеДНККМТІ М ОММЗІКРЕОТАМУУСАРТТЕВОМОЇ ОККУАООВТЕУТУВОВО СОВОБОВЕМОЇ УББ! МОРОМІІ ВІ ЗСЛАВСЕТЕЗ5ЕОМБУУМАОДР ОКО ЕУУУВНІЮ ВОІВ УКОВЕТІВАДНККТТ М ОММЗІКРЕОТАУУУСТЬЮОВІ ЗК ЗВОЗТ УТУВ ЗА (ЗЕСНЕ ВО 7) (п) Кпон МАННІ(е) є біспецифічного формату, що мае ТМЕ зв'язуючий модуль, зв'язаний зі зв'язуючим модулем альбуміну сироватки, який, в свою чергу, зв'язаний з.

ТЕ зв'язуючим. модулем, використовуючи СОБО5ОО905 як лінкер, як описано в МКО2ОТ0077422 з вланіночим подовженням: ЕМО МЕЗСОО УСТРОСБІ ВІ ЗСААЗОЕ ТВО УАМУЛУВОАРОКОЕМУЗЕМТНОШТКУ РОБМКОКЕТІБЕДНЕКМТІ МІОМІ АРЕОТАМУУСАКВеЗОЕМНОЇССТІ.

МТУЗЗООООВО ЗОЗЕМОЇМЕЗООВСЬМОРОМВСВ ЗСААВаєтТе ВВЕ ОМАР ОКОЇ ЕМЛ/ЗБІЗОЗО ДТ УКОВЕТІЗАДНККТЙ У ОММБЯРЕЮТАУУУСТЬЮСВІ ЗНББОСТ УТУВООВ са уУВі МЕВБОСОСІЇ МОРОЗ АЕБСААВаЕТЕ ОО УАМУМУВОАРОКО ЕМО маг КУ РОБУКОВЕТІВЕДНЕКИМТІ МІ ОММІКРЕОТАУТУСАКВиЗОКМАВОЗТ МТУ А ІЕС МО В) (0 Клов МНН) є бівалентного момоспецифічного формату, що містить дві ідентичні молекули, зв'язані за рахунон Аіва-Аіа-Аів лінкеру, кожна молекула є Ар, який може зв'язувати А! домен фактору фон Біллабранда, як показано в МО2009115614 з апаніновим подовженням: ЕМО ВООЗ РОЗВІ ВІ ЗСААЗОКТЕЗУМРМОМЕНОАРОКОВЕСМАЛІВВТСОБТТУ РОБУЕСКЕТІЗАДНККАМУУСОММБЕКАКОТАМУУСАААСВУКАВОСКУВТІВБЕЖТЕ УВО ЗТОМТУЗВАААЕМО УЕВООБСУОРОСВІКІЗСААЗОЗЕТЕВХМРМОМЕНОАРОКОВЕСУ ААІБАТОСБТИУРОЗУЕЗКЕТІВЕДНККАМУУ ОММЕКАКОТАУТУСАААОМВАЕООКУВ ТЕРБЕЖТРУУВОСТОУТУВВА ІЗЕСНО МО 9)

Фігура 2 продовження: ром 1н-Б4-208 ЕМОЦ ЕВ УОРСОВІЦ ВІ БСААБОЕТЕОКХЗМОУУУВОАРОКОЇ БУМ ВОІВОТАСВТУХ АНАУКСОКЕТІЗКОМЗКУТІ УОММИЗЕКАЄОТАМУКСАТТанкуУуРКЕЧУУВЗОСТЬУТУВО (КОЮ МО 10) (ю ВОМ 1-574-208-МЬ ЗЛИТТЯ: ЕМО ЕВБСОВІ МОРІВ ЗСААВОЕТЕрКУЗМОУУУНОДРОКОЇ ВІДЛ/ВОЇВОТАрНТУХ АНАМКОВЕТІЗВОМВКМТ М ОМ ВАЕОТАУУУСАГТОВУУМРЕЕ МАО УТУ ЗАВ ТОЮМТОБРББІ БАЗУСОНУПТОВАВАРІСТ Т.З ООКРОКАРКИІ УУМЗКЕСІВОУРОВ ЕБОБИБОТОЕТІТЗВЕОРЕОБАТУУСАВАСТНРТТЕОООТКУВІКА (ВЕСНОЮ МО 1) 0 СтОо4-Н.ОЗа (вихідний ПЗ Я4АБУ ЕМОНЕБОЗОЇ МОРООВІ ВІ ЗСААООЕТЕАОСТ МАМ УВО ОКОСЕМЛІВТІВ МОУ АОБМКОВТІВКОМЗКМТІ КОМУ БАЕОТАМТУСАКУЕХЗРЕБОКОТ УМО СТІ УТУВ іББЕа о МО 12) т) ООМОН-А5І3-567 УСС ЕЗОССІМОРООВІ ВІ ЗСААБОРУБАМУОМОУУУВОАРОКОСЕ МУ ЗВІД НОВМТУ ХАОБМКОВЕТІВВОМВКМТ СОМ ВАЕОТАУУУСАТАЕОЄРОТЮУУУВОСТ УТУВе І5ЕСЇЛО МО 13, Фкура 3; й ОЖ дк ее а І ус щік Й - З Я щи Й Я спр т й ПА, Ба її п і ві 7" з цех Ж. 1 ! І 1 ше вл чі Сялвт Я.О у ки в я ше Не Е : І Я в й 14 ши 44 84 дО шк ві 43: шЕ:: І

Фігура 4: Вплия одиничного злавінового подовження на-"УнНи клони зо «ще о снце св зір: р во. , - - г Ж є 9 й в Б 8 р ч М оте ВАН В НК с Ж «, ; -и е | Б шЕ р фе «е. хи Я т за м че 2 «г п - Гея - с па я р; ЖЕ У у ше ши ж ши и я ше я ЕЕ 5 ж т и: "ши 5 ж 5 5 х Фіура 5: Вплив зв'язування з АБА: Доті31-206 нижче стосується Вот пе ТЗ» 206 ва но003 Мн і Мк «і 10904 » і 7 «ї і що 104 ; пі о з че. - її Я се КОШНН: ува, С о Як ук равнни СНИ тав воза вСТАН. діапазон 4 8 Ї їй свй : ще ЗК я точки відсічення й м й й спро Е ж ї ж а сх о Е Е - - ка г Е - р Е ве 5 Б Кк 8 Е б а Фігура ба та: 85: Варіабельні послідовності легкого та важкого ланцюга анти-Ун пдв М2-3510.1606 ЇСОБ. ділянки підхоеслені): ві Легкий павшюог ОІММТОБОКЕМЕРТМСОВУВІТОКАВОМУСТАУАУКИОКРООВАКІ УВАЗМАУТОУРОВ ЕТОБОБОТОКТІ ТІМММОЗЕР дрУксСОдхОБУРЕТЕОСОТКСВК І3ЕО Ю МО 14)

р). Важкий панцюг ЕУОГООЮВатА УКУОАВУКИЗОКАЗОУПЛЕБУМНУУКОВНОКВІ ЕУЛОМЗРУМОСТВУ МОКЕКОКАТЕТУОКОБОТАУМЕ! МІ Т5ЕОБАУХ УСТА ВСУ ХОРВАТИ СОСТ УТУВА ІБЕСИЮ МО 15)

Фіура у: Кавютренція міх вже існуючим анти УНН АОСА та тАБ Ме. З010.1506 яку По 1800о до, 5 з КЕ в та03 з а Кі з «в З мова ще ? ЕЗ і-й ч я в . В ща ; во і ск. «У «В ; птн є Ко а є К. Середній сигнал аналізу конкуренції (КЕСІ)

Фігура 8: показує амінокиспотні послідовності медифнкованих анти ТМ.

Ар: (з) БОМ п-131-205 АБ з подовженням одиничного апаніву: ЕМОМ ЕВ УОРОСВІ РІ ЗСААЗСЕТЕАНЕТМУЛУВОДЕ ОКО ЕМЛУВНРЕЮООЮе ЕУАОБУКОКЕТІВКОМЗКМ ТІ У ОММЗСКАЕОТАУУНСАЦ,РККОРУУКО УМОВ ОТУТ ЗА (ЗЕ0 Ір МО 15) (Б БОМ'нп-131-206 ЗАБ оз подовженням одиничного аланіну та Р14А каркасною мутацією ЕУОЦ Е5ОБОСІ МОАСОВІ КЕ ЗСААВОСВ ТРАНЕТМУ ЛУ КОАРОКОСЕДМИЗНІРРОВОЮЕ ЕУАРОМКОВЕТІЗВОМОКМТЕУ ОМ ЯАЕОТАУХУНСА РКО МЕС МОСТІ УТ 5ЗА (ЗЕ МО 17) - : (г) БОМ р-т31-206 ЗАВ з РТЯА каркасною мутацією й ЕМОНЕЗОБОСЬМОЛООВЕНІЯСААЗСЕТРАНЕТМУМИКОАРОКОЕУУУЗНІЕРОВОЮР ЕУАОБУКОВЕТІВВОМеКМТМ ОМ НАЄОТАУ НСАРКВОРЖЕО УМ ОВСТЬМТУ

(ЗЕ о МО 18) (а) ВОМ Н-131-206 АБ з АВТКО С-термінальним подовженням ЕУОЕВООВІМОРООВІ КЕ ВСЛАЗСЕТЕАНЕТМУАМТОДРОКОСЕМУЗНІРРОВОЮР ЕУАВБУКОВЕТІЗВОМОКМТ ЛИ ОММЗ КАЕОТАУУНСАЦРКАБРИЖЕОУУМО ОСТІ МТУ ЗВАТКа (ЗЕШЮ МО 19) (є) ПОМ1й-131-206 АБ з АВТКО С-термінальним подовженням та РА. каркасною мутацією ЕУОЦЕВОССГ УСС ЗСААБСЕТЕАНЕТМУУУУКОАРОКО ЕМАЛУВНІРРОСОрР ЕКАОБУКОВЕТІЗКОМВКМТ М ОМ БАБОТАМУ НСАС.РКВОРУУЕЮТМУВОСТІ МТУ озАеТКО І5ЕО І МО 20)

Фігура 9: показує послідовності нуклеїнової киспоти ТМЕВ Аве (а) БОМ Н-131-206 ПА СААСТАСААСТОСТОСАСАССВОТОВССОССТОатТСААсСОостТооттоСстТоСосо татостатосвасАТСТОТТТСАССТТСОСАСАСОАААСОАТООстТО тат ТСОССАА БСТОСОООБСАААВОССТОВААТООВТААОССАСАТТОСТОСАСАТОВССАОВАСОСАТ: ТЄСТАТОСОВАТТОСОТТААОВОТСОСТТТАССАТТТОТООВТОВАТААСТОСАААААСАССС ТОТАССТОаСАВАТОААСТОССТИСВОВССОАОВАТАСТООСООТОТАССАТТОТОСОСТ ОСТОССТАААСОетТОовеСОСОТОТТОВАТТАСТОВООТСАсСОоОТАСТОТООСТСАСОЗТАА ЗСАОоС

(ВЕ ІЮ МО 21) (5) боті н-131-206 з. подовженням одиничного аланіну БААСТАСААСТОСТОВАСАВСОСТОВСВОССТОВГТСААССВОоЗТОоСТТСоОоСТасаЄо тотестотсвОСАТетОаТТвАССТТОВСАСАСВАААСОАТОСТОТОСОСТТОВОССАА ВосТеевОБсСААдаОСсСтТОВААТИОСТААВССАСАТТОСТОСАСАТООССАООАСССАТ ТОТАТОСОБАТТОСОТТААВООСТСОСТТТАССАТТСТСОТОЗАТААСТОСАААААСАССЮ ТатАССтОСАВАТОААСТОССТОСОСОССОВАОСАТАСТОСОВТОТАССАТТОТОСОСТ всСТОСссСтТАлАССсТООСсСоЗТОЗТгОВАТТАСТОвОБОТСАОБатАСттааТСАССОСТАА аодОоСсосо

(ЗЕСФІЮ МО 22, торротін-131-206:3 АТО С-термінальним подовженням СААСТАСААСТОСТОВАвАОСОоСТОвСОовСсоТтасттрАДОоСаостови оостововос тетестатасоосАТСТОВТТСАССТТСОСАСАСОАЛААСОАТасттОвОТТСОСсСАД Стос ВОоБСАААОаССтТООААТОВОТААВОСАСАТТОСТОСАСАТОСССАВОАСССАТ ТСТАТОСОБАТТОСОТТААООВТСОСТІТАССАТТТСТООТОАТААСТОСАААААСАСОС ТОТАБСТОСАСАТОААСТСОСТОСОСОССВАССАТАСТОСОБТОТАССАТТОТОСОСТ ВБСТОССТАААССТОвсСоСтООаТТОБАТТАСТОСООСТСАВООТАСТОТОБТСАССОТАА аСАЗСОСОТОТАССААдООТ

(ЗБ МО 23)

Фігура 10: показує послідовності нуклеїнової кисясти МНН молекули:

(а) анти-Її-5 МНЕ ЗААстТОасАсстТОовТТадАТСсТОвСсоотТОовтотовттоАассооватвотстотосате ТаТСТТОСОСАСООТСТОСТАЗСОТТТТСАДААТСААСОТОАТООСОТОСТАТОВТСАВ СТОоСООСТАААСОотТОоСтТаААСТОоСТ СО ОТАТСАТ ТОСТОБСОСТАОСАСТТОСТА СОСОБАСТОСОТТАААООТОВТ ТОАССАТСАВОССОССАСААСОСОСАДАААСАСССТОТ АССТОСАСАТОСААСТСОТСТОСОТССОБОААСАТАССОСООТТТАСТАТТОСОСОТТСАТС АССАССбБААТСТОАСТАСОАОСТООСИТОвТООТТАТТОЗОоОТСАпОСТАСТСТОВТАДО СОатАТОСТОТВОТООТОвТОоВвтеотОовтаВТвОТТОСОААСТАСАВСТООТОВААТОТО есостоототобтТАСсАасСоватАаєтсттеасвтотототтотвовасттстваттте АССТТСТОСАВСТТСОаТАТОТСТТВООТТОБТСАООСАССОаСОТААДВОТСТООААТО вЕТОТСТАОСАТСТОТОВОСАВСООТТСТОАТАСССТОТАСОСТОАСТОСВТОАЛАВОТе СТТТСАСТАТОТОССОСОАСААСОССАЛАКАССАСССТОТАССТОСАСАТОЛАСТОТСТО ССТОСОБААВАСАССОСТОТТАСТАСТОСАССАТОВОТООСТАОССТОТОССОТТСТ тгАСОСТАСССтОаттАСТОТВАВСТСТ (ЗЕ ПО МО 24)

(вранти: МЕ альфа УНН вААВТасАастТОСтТАВААТСТОВвСОСтТОСТотТОСТАСАвоСсОовТОоВТоТСТОоСоТе ТОТСТТОСОСАССТТСТОВСТТСАЄСТТСТОСОАСТАСТОВАТОТАТТОООТІСОТСАС вВвОоООССаСаТАААОВТСТОСААТОВОТОТСТОАААТСААСАССААСОООСТЗАТСАССА ААТАСИСООБАСТОСатАААООТОСТТ ПСАССАТСТОССТЗСОАСААСОСІЗДАДААСАСС СТОТАССТОСАБАТВААСТОТСТООТОСОСААВАТАССОСООТТТАСТАТТОТОСОСО ттстоовБТстТООТ г ТААсСовТООТСАВООВТАСТОТОВТТАССОТААОСТСОТОаСТОСТО атввАтТСссвосвстовТТстААОВТТОоАДОаСТОвтТТОАААосОотОостООТстООтТАСА восСОбЗТААвТСТотТОосСотототсттосвостотООосттсАССТтОТСТТтТса стататттавоттсатсАВасрсАерзЗОоОтТААЛАООССТОВААТОват ТСТСТАТСТОТ БОТАаСОСТТСТВАСАСССТОТАСОСТОАСТОТОТТАААвОССОСТТСАССАТОТОССВ ТОАБААСОСБААААССАСССТОИТАТСТИаСАВАТОААСТОССТОСОВТОСОВААВАТАССО СТОТАТАСТАСТОСАССАТоОвОТООСТОТСТОТСТоВТТСТТОоТСАССОТАСОССТОаВТТА БСОТАТСТАВСОСТОСТОСТОБАТОСОСТОвСООТАОСОВААОТТСАССТОСТТОААТе тавссвтовтотовттодассовоотовттстотТасСотетотстотОСАоСсотостове ТТСАССТТСАСООВАТТАСТОВАТОТАСТОООТТОСТОАОСАССВОСТААДАОСОТСТОВА АТОООТОТСТОАААТСААСАСПААСООТСТОАТСАССАААТАСССОВАСАОСОТОААДО ВТСВТТТСАССАТСАВОССВТЗАСААСассАААДАСАСССТВТАССТОСАСАТОААСТСТ СсТОбОТоСОБААВАСАСТОСООТТТАТТАСТОСОСАСОТІСТССОТСТООТГТСААСОВ.

ТОБТСАСООТАСССТООТТАСТОТАТОСТСТ

(ЗБОЮ МО 25)

(с) антих:фон Віппебрано МНИ АООТАСАССТОСТОвААДАССсОоСстОостТОостотовттсАсСссвостовтІстотОосОото тетоттвеасАесттотавоссатАСєттСАОоСтТАСААСССОАтТОІВОТТООтТоСсОтодО СТО ТААЛАВСТОВТОАЛАСТОоВвТТОовОоСОАТСТотТОТАСоостОоСстоТАССТ АСТАТОСОБАСТОСОТОВААВОТСЗТТТСАССАТОТОСОССАСААСОСОАЛАСОТАТО ОТАТАССТОСАВАТОВААСАОСССТОСІСОСТААВАСАССОВСВОИТТТАСТАТТСТОСТОВО АвсвОостТаТТоОсТастоААСАСООЗТОТОТТОСТАСОСТОССОТОССААТАСАССТТСТ звастодоватТАСССАВСТТАСССТТТОТТСТасСАССвОоСзоСАдатосАестОстТА АтстТовсовотаатставтАСАвосСосотестІстотаювтотототтатастасотосто ОТОБСАССТІСТОСТАСААСССВАТОВО ТОБТТССОБТСАВОСАСОЗООТАААВОТСаТ СААСТООТАССООСААТСТСТОВСАСТООТООСТОТАССТАСТАСССБСАЄТСТОТТВА АСОССОСТТСАОСАТСТСТОВТЗАСААСОВОБАДЛАСОТАТОСТОТАССТОСАВАТОДАСТ БеСТОСОТОСООААВАСАССОСАСТГТАТТАСТОСОСВОСАОСТОВТОТТоОТОСАбБА Авдезатсатот ТОТАСССТассвАОСсВААТАСАССТТОТООСОТСАЗООСТАСОССАЄ ОТААССОТАТОТТСТ

(ЗБОЮ МО 26)

Фігура 13 продовження: (0) анти-1(6 МНЕ з подовженням одиничного вланіну БААОТОСАОсСтТООТТОдАТСТООСОстТООТеТОвТТоАвОоСвОостоотстСтасСОоТоТ ОТСТТОСОСАОССОТСстоатАВСОтТТТТСААААТСААССТЗАТООСОТООТАТООТСАОоВО ТОСОВОТАААСОТСОТОАЛАСТООТТОСООВОТАТСАТТТСТОВСООТАССАС ТГОСТАСОоС ВОАСТОСОТТАААВаТоОТТ ТсАССАТСАВССОВОВАСААСОВСОВАААААСАССОТОТАССТ ЗСАСАТОААСТСТСТОСОТОСОБААСАТАССОСОСТТ ТАСТАТТОСОСОТТСАТСАЄСАЄ СИААТСТОАСТАСВАССТОСОТСОоТОаТТАТТОВОаТСАВСОТАСТСТОВТААССЗТАТО сттвосетоставтооттстастоСтТООТТсоСбБААОТАСАОСТОВТОЗААТСТОоССОТО ТСТООТАСАВСОбОВТААСТОТСТОСЗТОоТОатттОтОСаост стат ТсАССТТСТ ЄСАОСТТОЗОТАТВО ТС ТОБОТТОВТСАВОСАССВООТАДАЗОТСТООААТОООТОТОТА ВСАТСТСТООСАВСОВОТСТаАТАСССТОТАСОСТОАСТООСВТАААСОТСОТТТСАСТА ТЕТОССВОБАСААСОСОААДАССАСОСТОТАССТОСАСАТОААСТОТСТОСВТОСОСААО АСАССОСТОТТТАСТАСТОСАССАТОВаТОСТАаССТаИтссОет Ст стсАвватАССо тасттАСТОтаАОСТОТОСО (5ЕОЮ МО 27) (в)акнти-ТМЕ альфа МНН з подовженням одиничного аланіну ЗААВТОСАВСТОСТАВААТОТВОСОБТОС СТОВТАСАВОСООСОСТОСТ ПОТ СОТОТ БТСТТОСООоАОСТОТООСтТІСАССТТСТОСОАСТАСТОСАТОТАТТОООТТОовТАВОС ОСОББОТАААВОТСТОВААТОООТОТСТОАААТОКАСАССААСООССТОАТСАОСАДАТА СССОББАСТОСОТОВАДОСТСОТТТСАССАТСТОССВСПАСЛАС,аСОАААААСАСОСТаТА ССТОСАВАТОАДАСТОТСТОСОТОСООВААСАТАСТІВСОат ТАСТАТТОТОоСОСОоТсТтоо ІСТОТ тСААсСОтатсАсООТАСТОТООТТАССОтТААвСТоТОСтТОовтТастабАТО совсеогаетТсСтЗААВТТСАСТОовТ т ОАлАвСсОовТООоТОСТСТООТАСАВСОЗВОТА АСТОТСТОСОТСОТОТСТТатасвасттєтОоООСттОАСотстОоСтттТсвОатТАТОоТСТТо ЗОТТСБТСАВОСАССВОСТАААСОССТООААТОСОТТТОСТОТАТСТСТОСТАвСсооТТо ТОАСАСОСТОТАСОСТОАСТОТОТТАААВОССОСТТСАССАТСТОССОСТОАСААСОСОАА ААССАСОСТОТАТСТОСАБАТОААСТОССТОСВТОСООААСАТАССОСТОТАТАСТАЄТО САССАТОВОТОЗСТОТОТОТСТОВТТСТТСТСАСавтАССстасттТАОСЄСТАТСТАВООО. товтовтовАТОСОвТавСООТАВОСОААВТТСАВСТОВТТВААТСТООСсОТОвІСТОо ТСАвосоооТОаБТ стос ТстОТоттОТОСАССОТСТОВСТТСАССТТСАВСВАТТ АСТООАТОТАСТОВОТТООТОАООСАСОБИОТАААОСТСТОСААТООСТОТОТВАААТСА АСАССААСОВТСТОАТСАССАААТАСССООВАСАВСОЗТЗАЛАВСТООІ ГТ САССАТСАССО СТОАСААСІВСВАААААСАСОСТО ГАССТОСАСАТОААСТСТСТОСИТССВОСДАСАСАСТО СОТ ТАТТАСТОСОСАСОТТОТОСОТСТОВТ ГРСААССОТ ОТ САВОВТАСОСТОВТТА сТатТАТОостТоТтосСе (БЕ МО 28) (І) анти-фом Віплебрани: МНН з подовженням одиничного аланіну вАСОТАСАЗОТОоСВТОААЛОоСОоСТОоСТОоВвТСтТООТТСсАССсСовстосттотстосСатот ОТСТТОоСОСАОСТІСТЕОСОСТАССТТСАОСТАСААСССВАТОвСТТаТСООТ САС ТеСОБОБТАААСОТОЗТОААСТЕСТТОСОВБСОАТСТЕТСОТАССВОТООСТОТАССТАСТА ТОСООАСТОСОТОСААООТОСТТТСАССАТСТОССОСВАСААСОСОСАЛАСОТАТОСТАТА ОССТОСАЗАТОААСАВССТОСОСОСТОААОАБАССОСОСТІ ТАСТАТТатТОСТтІЗСАОСОВ ЗУ ОТОСТОААОАСЗатовтТОТтООТАСССТОССОВТСОВААТАСАССТІСТОСОВТ АВВИТАСССАСОТТАССОТТІСТТОТЗСАЗСООБСОбААСТЗСАОСТООТОААТСТООС ватазтстТОоСстТАСАвсозоотоотІстотсоттатюттатастосатстовтсОосАС СТТСТССТАСАдССОВАТОСОТТОБТТССОТСАООСАССВООТАААООСТОВТОААСТОСТ АВСООСААТСТСТСОСАСТООТООСТОТАЮСТАСТАСССОВАСТОТОИ ТОлАСОССОСТІ САССАТСТСТОЗТОДОААССССАААСОТАТОСТОТАССТОСАСАТВААСТОССТОСОоТОС (ЗВАДВАСАССОЗСАСТТТАТТАСТОСОССАВСТІЗО ОТТО ОСАСААВАСОВТСОТО ТТеВТАСОСТОССОВАОСОААТАСАССТТЮТОВОВТСАВОСТАСОССАВОТААСССТАТОТТ сїцоеосо (ЕС ЛО МО 29)

Фігура 11: амінокислотні послідовності тАБлЛИ ЯАБа (а) ТАБЛ 735 молекула (П-13тАЮ: ЦЯ Укаппа ЗАВ);

(З. Послідовність важкого ланцюга 735 молекули ОМОЇ МОЗСАЕУККРОВБУКУВСКАБОЕЧКОТ УМА МАСАРОООІЕЛММОПОРАМОМТ КХУРКРОСТУПТАРЕБТОТАУМЕСЗБІКБЕОТАУУУСАКО ХООУНУВОУТАМОУМВО БТМТУВЗВАЗТКОРОУКРЕАРБОКВТЗООСТААСОСТУКОХЕРЕРУТУВУУМВОСАСТеОУНТ ЕРАМІОББСЇ БІ ББУМТУРВОБСОТОТХКОМУМНКРОМТКУРККМЕРКОСОКТНТОРЕЄ РАРЕЦ СОРОУКГЕРРКРКОВ МІЗЕТРЕУТСУУУОУЗНЕВРЕУКЕ МУ УрДОУЕМНМАКТ КРЕЕБОУМЕТ УК УУЗУЮТ НОВУ. МОКЕЧКСКУВМКАСРАРІЕКТІЗКАКООРКЕРОМУ ТЕРРЯКОБЕТКМОУВТСЇ УКОКУРОЛАМЕУТЕВМООРЕММУКТТРРУСКОВООБЕРІ УВК ГТУОКВАУУОВОСМУРБСЗУМНЕАНМНУТОКВІ ВІ БРОКОБТУАЛАРЗОБЗТУААРЗОВОГО МТОБРОВІ ЗАБУСОКУПТОВАЗАРІЗВУМ НУ КОСКРОКАРКСЛАМЧАВВСОВОУРБАЕ БОБОВОТОЕТІ ТПІВВГОРЕВРАТУУ СОСБСУУРРТЕСОСТКМВІКА (ЗЕ І МО 50) (В Поспідовність легкого ланцюга "735 молекули ОТУМТО5РІ ЗРУТРВЕРАВІЗСКОВОМУНМОМТ У ЕМГУОКеООВРАСРИКІВОКЕ У УРОКУ БОВОБСТОВ ТКВКУВАВОМОГУУСКОвОНУРУЛЕВаСТКЕКЕТУААРОМНЕ РРЗВЕССКВОТАЗУМСТІ ММЕУРАБАКУСМКУДНКІ ОБОМБОЄБУТЕСЮВКОВТ УЗВІЗ ТС ЗКАВУЕКНКУУАСЕМТНОСІ ЗВРУТКБЕМНОЕС (БЕСНО МО 31) (ТАБ, 15015 (й Песнідовність важкого ланцюга 15014 молекули ОМТЕРЕБОСРАЄМКРТОТЬТ ТОТЕБОКВСВТЗОМОМБУЛНОРРОКОКЕУМ АНІМАЛЮЮК ЯУМРЕСКОКСТЕКОТВАМОЛМ ТМТММОРМОТАТУУСАВКЕТУЄ ПАЧЕ СУМНО Т МТ УБЗАБТКОРЕМУЕР АРЕБКВТОООТАА ОСІ УКОУЕРЕРУТУВУУМВОАІ ТЕОМАТЕРАМІ ОБОЇ УВІ З5БУМТУРОВ ОТОТМСМУМНКРУМЕКМОКАУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЇ. ГОР БУВКЕРЕКРКОТМЕКТРЕМТОЛЛУЗМУНЕОРЕКЕМА МОВУ УНМАКТЕРКЕ ЕСЖМОУТУКУУВУ ТУ НООЛЛМСКЕУКСОКУВМКАСРАРІЕКТІВКАКООРКЕРОУХТЬ РР. ЗКОБСТКМОУВТС УКОУРЗОТАУЕ МЕ ЗМООРЕММУКТТРРИА ОБООБЕРІ УВК УЮ КБАМЛІСЮСЬМКЗСВУМНЕАІНМНУТОКОЦ В ЗРОКОЗТААДРОЗТОЮМТОВРОБІВАБУ ОБУ ПТОВКАЗАРІБОУУНУУОВКРОКАРКИЛАУМАВВСОСОУРВКЕЗОВОВОТОЕТІТІ ЗБОР ЕОБАТУУСОСЕСУМУОРРТЕООБТКУЄІККААА (5ЕО Ю МО 32) (5 Послідовністе легкого ланцюга 15014 молекули

ГІ. ТО БРІВ ЗАБУЗОВУТТ СКАБОВУСУ ОСОБУ ММУУФООКРОКАРКО І МААЗМІ ЕВ СіРБНЕБОБОБОТОЄТЕТОВІ ОРЕВІАТУУСООЗМЕОРЕТЕСОВТКМЕКЕТУААВЗУНЕ РЕБВЕСЦЬКООСТАВУМСЦММЕУРЕЕАКУСТМКУДНК ОБОМВОЕВМТЕСЮВКРО ОТ УВІВ ЗТЛІ5КАВТЕКНКУХАСЕУТНОВІ ББРУТКВЕМИОЕС (5ЕСІЮ МО 33)

Фігура 31 продовження: (СТ) пАВОЛ. 15019 (3 Послідовність важкого ланцюга тав компонент є показаним підрасленим, лінкар є показаним курсивом, У ЗАБ'компонент слідує за лінкером та є показаним жирним шрифтом) ОМТСВЕЗБРАБМКЕТОТІ Т.ТСТЕБОКБІЗТООМОУВУ ІОВА ОКО КУМ АНИОСОК ВМеБІКОАСТІВКОТВАМО МЛ ТМТУМОРУЮТАТУУСАКВЕТМ ЮЛУКОМАСВОТУТ МУБВАВТКОРОУЕРЦСАРВЯКОТВОСТАДЬОСТЬМКОХЕРЕРУТУВУУМЗОАТОСУНТЕРАМІЇ, О5БББІ БІ 5БУМТУРВБВатТОТМОСМУМАКРОМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕ ЕОРБМЕСЕВРРКРКЕТЬМІЗЕТРЕМТСУУУЮУЯНЕВРЕУКЕ МУ ЄУОСУЕЄМИНВАКТКРКЕ ЕОУНБТУКУУВУЄ ТУ НОВУ МОКЕКОКУВМКАКРАРЕКТІЗКАКООРКЕРОУЄТЬВР ЗНОЕСТКМОМВІ ТС УКСЕУРОПВІДУЄМЕВМНОСОРЕММЖК ЕТ РЕМ ОБОСБЕБІВКІ ТУЮ КВАМОООСМУЄВСВУМНЕЛЕНМНИТОКВІ БІЕБРОКОЗТУААРОТОВІИМТОБРІВІ АБУ БОКУПТТСВАЗКРІБОММ НМУ УДОКРОКАРКІ ПАМЖАББІОСОМРОВЕБОВОВОТОВТ. ТІЗ5І ОРЕОЕАДТУХСОСЕОМОРРТЕСаСТКМЕКАТ (8ЕО 0 МО За) (І) пад 15019 послідовність Іпанцюга ОГМСТОЗеЗБІВАБУВОВЛТТОКАВОВУСУ ВОЛО УМО ОКРОКАРКІСТУААБМ ЕЕ ВІРЗВЕБОБОБОТОЕТЕТВВОРЕТАТУСОСЗМЕОРРТЕВОБТКМЕЇКЕТМАДЕВМКЕ РАЕБОБЕОІЇ КВБЕТАБУМУСЬСММЕУРВЕАКУОАКУДНК ОБОМОШЕЗУТЕОПВОКОВІХВІ В ТТЕВКАДУЕКНКУУАСЕУТ НОВ ЕЗРУТКВЕМАСЕС (ЗЕОЛО МО 35) (9У) тАвБ-М Т5020

(В. Послідовність важхого панцюга(таАв компонент є показаним підресленим, лінкер є показаним курсивом; У ЗАЮ компонент слідує за лінкером та є показаним жирним швифтом): ОУТСЕЕВСРАЇ УКРТОТ ТІ. ТСТЕВОЕБІ БТ ЗОМОУВУМВОРРОКСОЇ ЕД АНТМУУЮВК БУМРБІКОВАТІВКОТЗАМСОЛАТМТММОРУБТАТУУСАВВЕТМЕ ДЖЕ УУУСВОТ УТ МЗВАЗТКОРБЗУЕРІ АРОВКЕТОООТЛАІСССУКОУЕРЕРМТ УМОВА ТЗОМНТЕРАУЇ, саз5іУЗузВУУ Ми ЗО ТО УеЕМУМАКРУМТКУОККМЕРКОСОКТНТСРРОРАРЕ І ОарРЗУВ ЕРРКРЕКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУУДУВНЕВРЕУКЕ МА УУрВОМУЕУНМАКТКРЕЕ ЕОУМБТ УВУ ЯМІ ТУКНОСМИ МОКЕУКОХУВМКАЇРАРІЕКТІВКАКООРВЕРОМУТЬРЕ БКОЕЕТКМОМВІ ТС МКОКУРЕЛАМЕМЕВМООРЕМННУКТТРА М Пер ОБЕР УВКЕТУВ КОВМОВОМУРОСВУМНЕАЦНМНУТОКВІ БІВРОКОБТУДАРЗТОЮМТОБРОВЕ АБУ СОКУТІТСВАВЕРІЗОМ НУ СДОКРОКАРКПАМАЗБІ ОСОУРЗВЕБСВОВОСТОЕТІ. ТІЗ8ГОРЕОКАТУУСООДЕОМСРЕТЕСОСТКУВКВТУ (5ЕСНЮ МО 36)

Фігура 71 продовження: (Я тАБ-М 15020 послідовність «ланцюга

ІМ. ТОБРБВІ ЗАБУВ ТТ ОКАВОБУВУЮСОВ'УММУУУВОКРОКАРКИ ЖААБМЕВОЇ РЕКеБОБОВОТОРТЕТІВВ ОРЕТАТУУСООБМНЕВРРЕТЕ ССОСТКУЄІКАТУААРБУКІЕРРЬ РЕ КВИТАВММСЦН ММЕХРЕБАКУЄИКУДНКІОВСМБОЕВУТЕООЗКОВТУВІ 55ТІЛІ 5 КАОЖЕКНКУХАСЕУТНОСІ З5РУТКВЕМКОВО ІЗЕО ІЮ МО 37) (е)) тА. 15021 () Послідовність важкого ланцюга (тАЮ компонент є показаним підресленим; лінкер є показаним курсивом, Мі. АБ компонент слідує за пінкереом та є показаним жирним прифтому: ОУТВЕБОВАКУКРТОТЕТЕТСТЕБОЕБІЗТ5ОМОУБУЛАСРРОКОЇ БУМ АНІУУМВОКАХ МРЕБЕКЗАЕТВКО ТАМ УМ ТМ ТИМОРУВТАТУХСАНВЕТМЕ УЧ ОМУОВОТЬМТ УВА, ВІКОРОМЕРЕ АРЗБКВТ ОСТ ЛАСОСІУКОХЕРЕРУТУБМИНВОАСТЗОУНТЕРАМ ОЗБИЇ, ХБЦОБУМТУРЕББЕОТИТМИСМУВНКРУМТКУВККУЕРКВСОКТНТСРРОСВАРЕНЇ СОРБЗУЄ. ГЕРРКРКОТЬМІЗЕ ТЕЕУТОУУУВУВНЕОРЕУКЕМУУУЮСМУЕУННАКТКРКЕЕОКМВТУКУ УВУ ТМ НОПУМ МОКЕУКСКУВНЕАІ РАРМЕКТВКАКООРВЕРОМУУТИ РРЗВОЕСТКМОМВ КТССУКСЕУРЗОІАМЕМЕЗНООРЕМНМНХКТТРРУСЮБВОБЕЕЕУ ВК ТУОКБАМУСОБМУЄВС ЗММНЕЛЕНМНУТОКВІ ВІ 5РЕКОЗТУААРБТОЮМТОВРБВІ БАБУСОВУТТСКАБКРІВО МЛИНИ ООКРОКАРКІ МАМА ОССУРОВЕВОВОБСТОСТІ ТІВ ОРЕОБАТУУСОСЕ ОМОРРТЕВОСТКУВІК (ЗЕФОІЮ МО ЗВ) (Б тАБ-МІ. 15021 послідовність І -ланцюта ОРЛА. ТОБРОБІ БАВМОрРЯМТТСКАВОБУЮУОСОБУММАХООКРОКАРКІ ЛУДАЗМЕЕВОЇ РОНЕЗОВОБОТОЕТЕТІЗВІ ОРЕСТАТУУСООЗМЕОРРТЕВОСТКУВІКЕТУААРБУВІЕРИВ ОЕСТКВОТАБУУСИ НМР ЖРЕБАКУСУУКУДНКІ ОБОМБОБЯУТЕОЮВКОВТУВІ БТ КАПЖЕКНКМУАСЕУТНОСІ З5РУТКВЕМВОЕС (ЗЕ ІЮ МО 39)

Фігура 12: амінокислетні послідовності УВК ЧАр-їочАр мопекул (8) ОМ530045: 0ОМ15-28-597 ЯАВ МА(УЕРКОВОК лінкер) 8: С-термінальний К-044-085 ЗАВ ЦТаСОБР)ХЯ) ЕМО УВО МИРООВІ ВІЗСААБОЕТЕКАУРММУУУКОАРОКОГЕМУЗЕЇБРБОБМТ У АОБУКОВЕТІВВОМКМТЬМ ЗОМБІ ВАЕОТАУУУСАКОРЕКІ ОХОТУ ТВЕР 5ОКТНТСРРОРАРЕЦ БОРЗМЕЕКЕРКРКОТІ МІЗАТРЕМТОЛЛИВУЗНЕОРЕУКЕМИ УМО ОУЕМАМАКТКРКЕ ЕОМ ТЕМ ВУСТ УСНОРУЛ МОКЕУКСКУЗМКА РАРІЕКТІЗКАКОЮ РЕЕРОМУТІ РРЕКОЕСТКМОУВСТО КО УРЗЕТАМЕМЕВКООРЕМЧУКТТРРУ ОВО ЕРІУБКОСТУЮДКОВУУСО МУК СОММНЕАЬНМНУТОКВІ БІ ЗРОКТОЇ ОБРТОЇ О5РТОЇ ОВ РТОГОБРОЮМТОБРББІЗАВУСОКУТТСВАВОУМОРЕ КТУХООКРОКАРКІ СРИНКІЗНО БОМРЕВЕБОЗОВБОТОЕТЕТІВВЦОРЕОКАТУХУСОСУМУУРНТЕСОВТКУЄКА

(ЗЕ Ю МО 40

(в) ОМ5ЗООле: рМ51575 з С-тармінальним К-О44-055 АБ ТО.

ОБР )хАХ ЕМО УВО РОЗОВІ ВІЗСААЗЕЕТЕКАУРМУМУУВОАРОКОГЕУУУВЕІВРЕСОМТУ У АрРБУКОВЕПОВОМБКМТ ІМ ОМ ААВОТАМУ «САКОРЕКЦОУЛМСОСТІ МТУББАВТНТ СРРОРАРЕЦІЗОРОУМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУУОУЗНЕВРЕМКЕ МУ УМОСМЕМНИМ АКТКРЕЕБЕОУМВТ УВУ МВ ТУ НОСА МОКЕУКОСКУЗМКАГ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМ ЯТІ ВРЕБОВБІТКМОУВ ТОЇ МКОЕУРОТАМЕМЕЗНООРЕМНМУКТТРРУЇ ОБООБЕБІ УВК, ТУДКВВУТОВОМУВЯСОУМНЕАНМНУТОКВІ ЗЕБРОКТО ОБРІЗ ОБРТСТ ОВРТОО РОПОМТО5РОЗВІ БАВУМОДРВМ ТТ СКАБОМІОРЕ КУУТООКРОКАРКЕ ЛУ НОБНИ ОВОМРБЕ.

ЕБОБОБОТОЕТЬТОВОРЕВЕАТУУСОСТМУУНТЕВООТКУвІКА

(ЗЕ Ю МО Я

(3 ОМ530047 (містить модифікований С-юнецьу 7 ПОМ15-28-597 Ар М- (МЕРКОЗБОК лінкер) 8 С-термінальний КОО4А-О85 аАр о мінує С-термінальний К ЦОГО хе)

ЕМО УВО ОБЕУОРБЗОБЕНЬЗСААЗОЕТЕКАУЕ ММУУУВОАДРІЗКОКЕМЛІВЕІБЕО ЗКТУУАОВУКОВЕПЕКОМОКМТІ М ОММВІВАЕОТАМУТУУСАКОРЕКІ ОМУУООВТ УТУВВ УЕРКОЗОКТНТСРЕСРАРЕЦСОБРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІБА ТРЕМТСУУУВУВЗНЕОРЕМКЕМ М УМОВУЄУНМАКТКРЕЕБОХ МТ УК УВУ НОРМУ МОКЕХКОКУЗМКАЇРАРІЕКТІВ КАКОСОРВЕРОУЧТРРОВОЕСТКМОУВІ ТС УКОЕУРБВІАУЕУУЕВМООРЕМНМНУКТТЕРМ.

ПеООБЕБІ БК ТМОКОВУООСМУКЕСБУМНЕАСНМІНУТОКОІ ЗБОРОКТОСОБРТОЇІ ОВ РІЗБО5РТОСОБРОЮМТОБР БВ ЗАВУСОВУ ТТ СНАЗОМИІРЕЇ КУУЄОСКРОКАРКЬЦЄ НОБІОВОМРУВЕБОВОВОТОЄТЬТВЗОРЕВЕАТТСООУМУХРНТЕВОВТКУЄТ

(ЗЕСИО МО 42)

Фігува 12 продовження:

(Ф.Ф ОМ530048 (містить модифікований О-кінецьк БбОМ'5-25-597 АБ М. (МЕРКБОЗОЖК лінкер) 5 С:термінальний К-О44-085 ЗАБ Ж А ПТО ОР )хЯ) ЕМО УБСООІ МОРОЗІ КІ ЗСААЗОЗЕТЕКАУРММУУУВОАРОКОГ ЕМУУЗЕІБРаАО БМТЖУАЗИКОВЕТІВНОМеКМТІ М ОММВІЛАЕОТАУУСАКОРАКОУАВОСТІ ТУ МЕРКЗБОКТНТСРРОРАРЕ ГОСРЕОМЕЇ ГРРКЕКОТІ.МІЗЕТРЕУТСУМУЮВУВНЕОРЕУКЕМ МУУОБМЕУНМАКТКРАБЕОУ МЕТУ ВУЗУ ТУЕНОРУМ МОКЕУКСКУЗМКАКРАРІЕКТІВ КАКСОРКЕРОМУУТЕРОКОВСТКМОМВІ ТСЬУКСЕХРОПІАУЕУМЧЕБЗНОВРЕММУКТТР М, раОСБЕЕСУЗКІ ТОК МОССМУВСЯМУМНЕАІНюТНУТОКВБЕВРОКТОЦОЗРТОСОВ РТОЕОЮБРТСІВЗРОЮМТИавРЗБІЗАБМОРВЕУ ТТ СВАВОУМЛОРЕЇ КУУТООКРОКАРКЦУ НОВ О5ОУРБВЕВОВО5СТОЕТЬТІЗЗСОРЕВЕАТУУСОСУМУУРНТЕСВОСТКУВКНА (ЗЕ ЩО 43) (2) ЮМ530049 (містить модифікований С-юнецьр ПБОМ15-25-597 АБ М. (МЕРКЗЗОК лінкер) Б С-термінальний К-045-095 АБ хААА ТО ЦОБРКІ) ЕУМОГЕМБООбІ МОРООБІ МІ ЗСААБОЕТЕКАТММАМКОАРОКОЕУУУВЕІВРІО ЗМТУТАОВУКОВЕТІЗВОМОКМТІ М ОММОВАЄОТАУУУСАКОРЕКЦСЛУВСОСТ УТУВЕ МЕРКОЗІОЖТНТСРРОРАРЕ ГОСРЗМЕСЕРРКРКОТСМІЗЕТРЕУТСУУУВУЗНЕОРЕУКЕ М МУУОСУЄМАМАКТЕРКЕЕ ОТ УКМУ ЗМІ ТМНОВУЧ МОКЕУКСКУЗМКАГ РАРІЕКТІВ КАКОСОРВЕРОУУТЕРРВКОВЕТКМОМВІ ТСІЛИКОЕУРЗНАМЕ МЕ ЗМООРЕММУКТТРАМІ рБОСВЕРІ КІ ТУОКОВУОООМУЄЗСОУМНЕАІНМНеТОКЕБВРОКТОСОБРТО ОЗ ЕТБІЦОБРТОЇ ОБРОЮМТОБЕББІЗАБМОДАМТ ТТ СВАБОУМОРЕМКУ СООКРОКАРКЦІМ НОЗНОЗОУРОКЕБОБОВОТОЕТІ ТІЗВІ ДРЕВКРАТУУСОСУМУХРНТЕВОСТКУЕККАЛА, (ЕС О МО 44) (Щ ОМ530050. (містить модифікований С-кінецьх ОМ 2559И аАвБ М (МЕРКБЗОК лінкер) в С-термінальний К-А0О44-085 ДАВ кт КТОБОБРКЯ) ЕМОМ УВО ВО МОРООВЕВІ ЄСААЗОЕТЕКАХУРММУУПОАРОКОІ ЕУУЗЕІБРОО БМТИТАОВУКОВЕТІВКОМОКМТІ М ОММЗІВАВЕОТАМУУСАКОРЕКОХУуУВОСТІ УуТУВЕ МЕРКОВІКТНТОСРРОРАРЕЦ ОСОБУ КРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТОУУУПВУВНЕВРЕУКЕМ ДМОЗУЄУНМАКТКРВЕБЕОУ МТ УВУХВЗМІ ТЛОМ МОКЕУКСКУЗМКАКРАРІЕКТІВ КАКОСЕКЕРОУЄТРЕБНОБСТКМОУ ВТС УКОРРБДТАМЕУЕВМОСОРЕМНМУКТТЕРМІ. ОБООБЕЕСУ КТК ВМО ВОСЗУМНЕАНМНУТОКВІ Б БРОКТОЦОЮЗеЕТОО РТС! СБРТОЦ ОБРОЮМТОВРУБІ ЗАБУВОВМ ТТ ОВАЗСУМОРЕ КУТ ОСКРОКАРКІ У НОЗПОБСУРБКЕВОВОБСТОЕ ТІ ЛІВБСОРЕОГАТУЧОООУМУУРАИТЕООСТКУВКАТ І(ЗЕО р МО АБ)

Фігура 12 продовження:

(б) ЮОМ330051 (містить модифікований С-анець): БМ51576 з С-термінальним К- 044-085 ПАБ мінус С-термінальний ВОСТІ ОБР хХА

ЕУС УВООСІ МО РОВІ ВІ ЗСААВОЕТЕКАУРММАУКОАРОКОТЕМЛЗЕІВеВО МТ УАОВУКОВЕТІВНОМВКМ ТМ ОМ ВАЕВТАУУУСАКОРАК ОУУСОСТ МТУ АЗТНТСРРСРАРЕЦ ОБРЕМЕГЕРРКРКЮТІ МІВ ТРЕУТОСУУМОМОНЕПРЕУКЕМУМТУЮССЯ ЕУНМАКТКРЕЕЕСТМОТУКММВМІ ТУ НОБУЛ.МОКЕУКСКУВНКАСРАРІЕКТІЗКАКООРЕ: ЕРОУЖТ РРІНРВЕЕТКМОМВСТО.МКОЕХРЗБІДУВЕУУЕВМООРЕММУКТТРРУС ОВО УК ТУрКЗКЛОСМУєВОУМНЕЛНМНУТОКВІ В ОРОКТОСОБРТООБРТОСОВБРТ ВІ ОБРОЮМТОВРЕВІ ЗАВУСОВУТІТ СВАБОУДОРЕНКУХООКРОКАРКІ У НОЗНОЗО МРЕВЕБСЗОБОТОЕТТЗЗЕОРЕОРАТОСОСУМУУРНТЕЗЦОТКУВК.

(ЕС Ю МО 45)

(в) 0М530052. (містить модифікований С-кінецьк ОМ51578 з б-термінальним К- 044-085 Ар А ТОРИ

ЕУСЦ УВО УВРОБЗБЕВЕЗСААВОЕТЕКАУРММУУУКИАРОКОГЕМЛВЕІВРВО ЗАТ ТАрРБУКОКЕТІЗВОМВКТ УГОММЗ ВАЕОТАМЖУСАКОРАКС СТУ УУСОВТ ТИВ АБТНТОРРСРАРЕЦ ООРБУРКЕРЕКРКОТЬМІЗЕТРЕУТСМУУОМЗНЕПРЕМКЕМУУЧУОСМ ЕМНМАКТКРКЕБОУМУТУКМУВУЄ ТМ НОДУТМОКЕУКСКУВМКАСРАРІЕКТІЗКАКООРК ЕВСОМ УТ АРВВОЕСТКМОУВІ ТС УКОСЕХРЗУЗІЛАУЄМЕЗМООРЕММУКТТРРУБОВОСОЕКІ УВК УСКВААЮВИМУЄ СУМНЕ ЯМНОТОКВСВІ БРОИКТОГОВеТОЯЇ ОБРТОЦОВРТ ЗГОБРОЮМТОВРОБІ ЗАБМООВМТІТСНАВОМДОРЕСКУТООКРОКАРКСОЦУНОВІ ОВО МРЕВЕБСЗОВСТОЕТІ ТІЗВТОРЕПЕАТУУСООУМУУРНТЕВОСТКУЕКНА

І(5ЕСИЮ МО 47)

() ОМ530053 бмістить модифікований С-снецьи: ВМО1576 з С-термінальним К- О44-085-ВАБ ААА КТОСО5РЖІО

БУС УВО ОРССЗІВІ БСААБОКТЕКАУЕММУУУКаАРОКОСГ ЕУУУЗЕІВРІОЗ ЗКАТУХАВЕМКОМЕТІ В КОМВКМТ М ОММЗІВАЕВОТАМУУСАКрРАКО ОВУ УВОСТ УТУВа АБТНТСРРОРАРЕ І СОРОМ КРеЕКЕКОТЕМІЗЕТРЕУТСЛЛАЛЛЛМЗНЕВРЕУКЕ НУ У УВОМ ЕУНМАКТКРЕЕЕОУМаТУВМУВЗУ ТУ НОБУЛ МОКЕУКСКУВМКАСРАРІЕКТІЗКАКООРЕ.

ЕРОМ'ЄТЕ РЕВНО ТКМОМО ТС УКОСЕХРЗОІАМЕУЕБВМООРЕММУКТТРРУСОВОСВЕРІ.

УВКІТУрквиаааеМмУЕЗОСВУМНЕАСНМНУТОКВІ І ОРОКТОЇ О5РТОЇ О5РТОГБЕРТ ОГОЗРОЮМТОБРББІ ЗАБМООНУ ПТОВАБОУЛОРЕ КУМ ОДКРОКАРКЦУНОВІОВО УРБВЕБОБОВОТОЄТЕ ПЗВ ОРЕВРАТУТСООУМУХУРНТЕВОСТКМЕКВАДА.

ізо о Мо 48)

Фігура 12 продовження:

(Ф ОМ530054 (містить модифікований С-кінецьк ЮОМ51576 з С-термінальним К- сАА- ОВ ЗАВ КТ ТО ОБР)ХЯІ)

ЕС УВООВОЇ МОРОСВІ ВІ ЗСААБОЕТЕКАУРММУУОАРОКОГЕЛМВЕІВРВО ТУКА УКОНЕТОКОМЗКМТЬ КОМ ВАЕВТАУСТСАКОРЕКООЮЧУВОБТМТУВО.

АБТНІСРРСРАРЕЦ ЗОРБУВІ ЕРРКРКОТЬМІБВТРЕМТОТАЮУВНЕОРЕУМКЕ НАКУЮСМУ ЕМАМАКТКРЕЕЕОУМОТУКУУ ВМ РУСНОСУУ МОКЕУКСКУЗМКАСРАРІЕКТІВКАКОВОРА ЕРОУМЄТ.РЕБЕОБІСТКМОМВІ ТС УКОЕУРБОТАУВЕЛЕБВМОСРЕММУКТТЕРМ ОЗСКБЕВ УБКІЛУДКВАМУОДОМУЄВСВУМНЕАСНМНУТОКВІ БІ БРОКТОСОБРТОЦОВРТОСОБРТ БІО МТОИВРОБЬБАВУСВОВУТТСНАБОУМОРЕСКАХООКРОКАРКІЦУНОВІ 05 УМРОВЕВОЗОВОТОВИТІЗВОРЕОБАТУТСОСУМУУНТЕвОТКУВІКВТ

(ВЕС ОО МО 49)