TWI758852B - 細胞生長輔助劑及應用其的細胞培養基質 - Google Patents

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Abstract

本發明公開一種細胞生長輔助劑及應用其的細胞培養基質。細胞生長輔助劑是在聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物兩端通過酸酐類單體接上具有細胞親和性的胜肽而形成。細胞生長輔助劑以低濃度應用於細胞培養基質中時，能幫助細胞以立體聚集方式生長，並提高細胞增殖和存活率。

Description

細胞生長輔助劑及應用其的細胞培養基質
本發明涉及一種細胞生長輔助劑，特別是涉及一種能提供三維(3D)培養條件的細胞生長輔助劑，以及應用其的細胞培養基質。
通常在使用細胞培養液進行細胞培養時，細胞會在重力作用下沉降於細胞培養裝置的某個區域上，而處於2D細胞培養狀態。
隨著科技的進步，科學家開始使用3D細胞培養技術取代2D細胞培養技術，以反應細胞在活體內的生長情況；現有的3D細胞培養技術包括懸滴培養(hanging-drop culture)、3D細胞培養支架(prefabricated scaffolds)以及膠體包埋培養(gel-embedded culture)等，其中又以膠體包埋培養最為常見。
然而，相較於一般細胞培養液培養，使用膠體進行3D培養之前需要另外配製膠體，導致實驗時間延長以及實驗成本增加。此外，在固態膠體所形成的3D培養環境中，隨著細胞逐漸聚集在一起，養分和氣體將難以傳達到組織中心，而容易造成細胞壞死(necrosis)，在如此狀態下無法進行長時間的細胞培養。且當細胞培養完成後，包埋於膠體的細胞並不好取出，此造成實驗人員在操作上的負擔，以及可能破壞細胞的完整性。
因此，如何通過細胞培養基質的改良，讓體外細胞培養的環境可以貼近細胞在活體內的生長環境，並且讓實驗人員操作便利，是本案欲解決的重要課題之一。
本發明所要解決的技術問題在於，針對現有技術的不足提供一種細胞生長輔助劑用以創造三維培養環境。並且，提供一種應用此細胞生長輔助劑的細胞培養基質。
為了解決上述的技術問題，本發明所採用的其中一技術方案是提供一種細胞生長輔助劑，所述細胞生長輔助劑具有以下結構式：P-L-S-L-P；S表示基底物；L表示連接子；P表示胜肽；其中，所述基底物為一聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，所述連接子各自獨立為一酸酐類單體，所述胜肽的胺基酸序列是各自獨立選自於由甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD)、精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Arg-Gly-Asp，RGD)、精胺酸—麩胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Arg-Glu-Asp-Val，REDV)、白胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Leu-Asp-Val，LDV)、酪胺酸—異白胺酸—甘胺酸—絲胺酸—精胺酸(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg，YIGSR)、脯胺酸—天門冬胺酸—絲胺酸—甘胺酸—精胺酸(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg，PDSGR)、異白胺酸—離胺酸—纈胺酸—丙胺酸—纈胺酸(Ile-Lys-Val-Ala-Val，IKVAV)以及精胺酸—天冬醯胺—異白胺酸—丙胺酸—麩胺酸—異白胺酸—異白胺酸—離胺酸—天門冬胺酸—丙胺酸(Arg-Asn-Ile-Ala-Glu-Ile-Ile-Lys-Asp-Ala，RNIAEIIKDA)所組成的群組。
為了解決上述的技術問題，本發明所採用的另外一技術方案是提供一種細胞培養基質，其特徵在於，所述細胞培養基質包含0.5 wt%至5 wt%的一細胞生長輔助劑，且所述細胞生長輔助劑具有以下結構式：P-L-S-L-P；S表示基底物；L表示連接子；P表示胜肽；其中，所述基底物為一聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，所述連接子各自獨立為一酸酐類單體，所述胜肽的胺基酸序列是各自獨立選自於由甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD)、精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Arg-Gly-Asp，RGD)、精胺酸—麩胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Arg-Glu-Asp-Val，REDV)、白胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Leu-Asp-Val，LDV)、酪胺酸—異白胺酸—甘胺酸—絲胺酸—精胺酸(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg，YIGSR)、脯胺酸—天門冬胺酸—絲胺酸—甘胺酸—精胺酸(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg，PDSGR)、異白胺酸—離胺酸—纈胺酸—丙胺酸—纈胺酸(Ile-Lys-Val-Ala-Val，IKVAV)以及精胺酸—天冬醯胺—異白胺酸—丙胺酸—麩胺酸—異白胺酸—異白胺酸—離胺酸—天門冬胺酸—丙胺酸(Arg-Asn-Ile-Ala-Glu-Ile-Ile-Lys-Asp-Ala，RNIAEIIKDA)所組成的群組。
在本發明的一實施例中，所述細胞培養基質還包含95 wt%至99.5 wt%的一細胞培養液。
在本發明的一實施例中，所述細胞生長輔助劑用於使細胞聚集懸浮於所述細胞培養液中。
在本發明的一實施例中，所述基底物為普朗尼克F127 (Pluronic ®F-127，F127)，且所述酸酐類單體為順丁烯二酸酐(Maleic anhydride，MA)、丁二酸酐(Succinic anhydride)或4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐(4-Methacryloxyethyl trimellitic anhydride，4META)。
在本發明的一實施例中，所述酸酐類單體為順丁烯二酸酐，且所述胜肽的胺基酸序列為甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD)。
在本發明的一實施例中，所述酸酐類單體為4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐(4-Methacryloxyethyl trimellitic anhydride，4META)，且所述胜肽的胺基酸序列為甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD)。
本發明的其中一有益效果在於，本發明所提供的細胞生長輔助劑，其中聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物兩端通過酸酐類單體接上具有細胞親和性的胜肽，能於培養液中形成吸附細胞的微結構載體，讓細胞懸浮於細胞培養液中生長，從而提高細胞增殖和存活率。
更進一步地說，由於聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物具有溫感性，本發明的細胞培養基質在室溫(約25
Figure 02_image001
C)或培養溫度(約37
Figure 02_image001
C)下會有接近水凝膠狀的微結構載體形成，其能攜帶細胞並讓細胞始終處於分散懸浮狀態，進而在分裂後呈球狀聚集。值得注意的是，這些微結構載體可以在低溫下(低於10
Figure 02_image001
C)變回液狀，方便進行細胞收集或更換細胞培養基質。藉此，可以提供培養在體外的細胞與體內細胞基本相同的生長條件，並讓實驗人員的操作更加方便靈活；且不需要另外配製3D膠體，降低了實驗成本。
更進一步地說，本發明的細胞生長輔助劑，其利用酸酐類單體連結聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物與具有細胞親和性的胜肽，可以提高結構穩定性，胜肽更容易幫助細胞聚集懸浮。
為使能更進一步瞭解本發明的特徵及技術內容，請參閱以下有關本發明的詳細說明與圖式，然而所提供的圖式僅用於提供參考與說明，並非用來對本發明加以限制。
以下是通過特定的具體實施例來說明本發明所公開有關“細胞生長輔助劑及應用其的細胞培養基”的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所公開的內容瞭解本發明的優點與效果。本發明可通過其他不同的具體實施例加以施行或應用，本說明書中的各項細節也可基於不同觀點與應用，在不背離本發明的構思下進行各種修改與變更。另外，本發明的附圖僅為簡單示意說明，並非依實際尺寸的描繪，事先聲明。以下的實施方式將進一步詳細說明本發明的相關技術內容，但所公開的內容並非用以限制本發明的保護範圍。另外，本文中所使用的術語“或”，應視實際情況可能包括相關聯的列出項目中的任一個或者多個的組合。
[第一實施例]
本發明第一實施例提供一種細胞生長輔助劑，其具有以下結構式P-L-S-L-P；S表示基底物(substrate)；L表示連接子(linker)；P表示胜肽(peptide)。實際應用時，本發明的細胞生長輔助劑的劑型可以粉末或濃縮液的形式存在，但不以此為限。
進一步而言，本發明的細胞生長輔助劑中的基底物為一聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(poloxamer)，具體是一種由中心為疏水性鏈的聚氧丙烯側接兩個親水性的聚氧乙烯所構成的非離子型三嵌段共聚物；聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的長度可以根據實際需要做調整，故有性質些微不同的型態存在。在本實施例中，基底物為普朗尼克F127 (Pluronic® F-127，F127)，普朗尼克F127為溫感性材料，處於低溫環境(約4
Figure 02_image001
C至10
Figure 02_image001
C)時呈液狀，處於接近室溫(約25
Figure 02_image001
C)或體溫(約37
Figure 02_image001
C)的環境時呈水凝膠狀，且在低溫下又可以轉變回液狀。
本發明的細胞生長輔助劑中的連接子各自獨立為一酸酐類單體，並分別與聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物的兩個親水端相連接。在本實施例中，連接子可為順丁烯二酸酐(Maleic anhydride，MA)、丁二酸酐(Succinic anhydride)或4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐(4-Methacryloxyethyl trimellitic anhydride，4META)，但不以此為限；連接子用於將基底物與胜肽穩定連結在一起。從結構穩定性和可靠性方面考量，連接子優選為4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐(4-Methacryloxyethyl trimellitic anhydride，4META)或順丁烯二酸酐，且更優選為順丁烯二酸酐。
值得注意的是，4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐的由於分子結構較大(分子量為304.25)，會增加基底物與胜肽的間距，導致同一單位容積內的胜肽的數量較少；相比之下，順丁烯二酸酐(分子量為98.06)的分子結構較小，可以縮短基底物與胜肽的間距，進而增加同一單位容積內的胜肽的數量。因此，相較於以4-甲基丙烯醯氧乙基偏苯三酸酐作為連接子的細胞生長輔助劑，以順丁烯二酸酐為連接子的細胞生長輔助劑更能夠讓細胞聚集懸浮。
進一步而言，本發明細胞生長輔助劑中的胜肽具有細胞親和性，其可選自由三至十個胺基酸所組成的寡肽(Oligopeptide)。在本實施例中，胜肽的胺基酸序列可各自獨立為甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD)、精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Arg-Gly-Asp，RGD)、精胺酸—麩胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Arg-Glu-Asp-Val，REDV)、白胺酸—天門冬胺酸—纈胺酸(Leu-Asp-Val，LDV)、酪胺酸—異白胺酸—甘胺酸—絲胺酸—精胺酸(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg，YIGSR)、脯胺酸—天門冬胺酸—絲胺酸—甘胺酸—精胺酸(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg，PDSGR)、異白胺酸—離胺酸—纈胺酸—丙胺酸—纈胺酸(Ile-Lys-Val-Ala-Val，IKVAV)或精胺酸—天冬醯胺—異白胺酸—丙胺酸—麩胺酸—異白胺酸—異白胺酸—離胺酸—天門冬胺酸—丙胺酸(Arg-Asn-Ile-Ala-Glu-Ile-Ile-Lys-Asp-Ala，RNIAEIIKDA)，但不以此為限。實際應用時，可以根據欲細胞的培養需求來選擇合適的胜肽，例如，為使細胞分裂後形成球狀聚集，本發明細胞生長輔助劑可具有GRGD胜肽。
在一些實施例中，細胞生長輔助劑的可實施結構(P-L-S-L-P)包括：GRGD-MA-F127-MA-GRGD、GRGD-Succinic anhydride-F127-Succinic anhydride-GRGD、GRGD-4META-F127-4META-GRGD、RGD-MA-F127-MA-RGD、RGD-4META-F127-4META-RGD、RGD-Succinic anhydride-F127-Succinic anhydride-RGD。
[製備例]
以製備細胞生長輔助劑為GRGD-MA-F127-MA-GRGD (又稱，F127-Maleic- GRGD)為例。
首先，參閱式(1)所示，將F127 (10 g，0.787 mmol)溶於200 mL的無水二氯甲烷(Dichloromethane，DCM)中，得到一溶液，並在室溫氮氣下逐滴添加三乙醇胺(Triethanolamine，TEA) (956 mg，9.444 mmol)以及順丁烯二酸酐(Maleic anhydride，MA) (617 mg，6.296 mmol)至溶液中。持續於室溫下攪拌反應混合物16小時以後，用水清洗兩次，收集一有機層並使用硫酸鎂(MgSO 4)將其乾燥。過濾有機層，並以旋轉蒸發儀去除大部分溶劑。最後，使用過量的乙醚使產物沉澱，經過收集過濾沉澱物後，得到F127-順丁烯二酸酐(F127-Maleic)(67%)。
式(1)
Figure 02_image003
接下來，參閱式(2)所示，將所得的F127-順丁烯二酸酐(1.0 g，0.078mmol)溶於9 mL的四氫呋喃 (tetrahydrofuran，THF)中，得到一溶液，並在室溫氮氣下，將N-羥基琥珀醯亞胺(N-Hydroxysuccinimide，NHS) (72 mg，0.624 mmol)、二環己基碳二亞胺(N,N'-dicyclohexylcarbodiimide，DCC) (129 mg，0.624 mmol)以及4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine，DMAP)加入溶液中。持續於室溫下攪拌反應混合物16小時以後，用水清洗兩次，收集一有機層並使用硫酸鎂(MgSO 4)將其乾燥。過濾有機層，並以旋轉蒸發儀去除大部分溶劑。最後，使用過量的乙醚使產物沉澱，經過收集過濾沉澱物後，得到640 mg的F127-順丁烯二酸酐-N-羥基琥珀醯亞胺(F127-Maleic-NHS)(64%)。
式(2)
Figure 02_image005
最後，參閱式(3)所示，將所得的F127-Maleic-NHS (500 mg，0.039 mmol)以及甘胺酸—精胺酸—甘胺酸—天門冬胺酸(Gly-Arg-Gly-Asp，GRGD) (45 mg, 0.129 mmol)胜肽溶於3 mL的二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide，DMF)中，得到一溶液，並在室溫氮氣下，將N,N-二異丙基乙基胺(N,N-Diisopropylethylamine，DIPEA) (25 mg, 0.195 mmol)加入溶液中。持續於室溫下攪拌反應混合物16小時以後，將混合物冷凍乾燥以除去DMF。最後，使用冷卻的甲醇使產物沉澱，經過收集過濾沉澱物後，在高真空下乾燥，得到295 mg F127-順丁烯二酸酐-GRGD (F127-Maleic- GRGD) (59%)。
式(3)
Figure 02_image007
以上製備例為本發明細胞生長輔助劑的其中一種示範，並不以此為限。
[第二實施例]
參閱圖1所示，本發明的第二實施例提供一種細胞培養基質M (Cell culture medium)，其包含0.5 wt%至5 wt%的如第一實施例所述的細胞生長輔助劑10以及95 wt%至99.5 wt%的一細胞培養液20 (Cell culture solution)。本發明的細胞培養基質M可以提供細胞C一3D環境培養環境，讓細胞始終處於分散懸浮狀態下生長，並在分裂後呈球狀聚集。
進一步而言，細胞培養液可採用基於平衡鹽溶液(Balanced salt solution，BSS)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(Phosphate buffered saline, PBS)，但不限於此的等張溶液，並在其中進一步添加有待培養細胞所需的營養成分(如胺基酸、維生素、血清等)及/或抗生素。
在一些實施例中，細胞培養液可為基礎培養基(minimal essential medium，MEM)、DMEM培養基(Dulbecco's modified minimal essential medium，DMEM)、RPMI-1640培養基(Roswell Park Memorial Institute-1640 medium，RPMI-1640)、IMDM培養基(Iscove’s modified DMEM，IMDM)或無血清細胞培養基(Serum free medium，SFM)，但不以此為限。
在一些實施例中，本發明的細胞培養基質可以是將細胞生長輔助劑混入市售的基礎培養基(minimal essential medium，MEM)而製得；例如，可將1 ml的細胞生長輔助劑的分散液混入99 ml的基礎培養基而製得細胞培養基質。然而，本發明不以上述所舉的例子為限。
值得注意的是，使用時，由於普朗尼克F127為溫感性材料，可以在溫度接近體溫(約37
Figure 02_image001
C)的細胞培養液中形成接近水凝膠狀的微結構載體，其能吸附細胞並使其分散懸浮於細胞培養液中。且在完成細胞培養後，可將細胞培養基質置於低溫環境中，以使微結構載體變回為液狀，方便進行細胞收集或或更換細胞培養基質。
[第三實施例]
使用含有不同濃度的本發明的細胞生長輔助劑的細胞培養基質培養人類毛囊間質幹細胞(human hair follicle Mesenchymal stem cells, hfMSCs) 7天，並觀察其聚集型態及其存活率。
將細胞培養基質分為五組，分別為控制組(C)、實驗組(1)、實驗組(2)、實驗組(3)以及實驗組(4)。其中，所有組別的細胞培養液為皆為市售的基礎培養基。各組的差別在於細胞生長輔助劑在細胞培養基質中的濃度不同。詳細而言，細胞生長輔助劑在控制組(C)的細胞培養基質中的濃度為0%；細胞生長輔助劑在實驗組(1)的細胞培養基質中的濃度為0.05%；細胞生長輔助劑在實驗組(2)的細胞培養基質中的濃度為0.1%；細胞生長輔助劑在實驗組(3)的細胞培養基質中的濃度為0.25%；細胞生長輔助劑在實驗組(4)的細胞培養基質中的濃度為0.5%。
將1 x 10 6細胞數目的hfMSCs分別種入96孔細胞盤中，其含有不同細胞生長輔助劑濃度的細胞培養基質，並放置於37
Figure 02_image001
C、二氧化碳濃度5%的培養箱中培養7天，每2天更換一次細胞培養基質。其中，分別於第1天、第4天以及第7天時，觀察細胞聚集型態及其存活率及增殖率。
將細胞進行螢光染色，其中，綠色螢光為活細胞，紅色螢光為死細胞。參閱圖2所示，隨著細胞生長輔助劑的濃度提高，細胞呈現球狀聚集的效果越好。
參閱圖3及圖4所示，含有細胞生長輔助劑的實驗組，其細胞存活率均有70%。
本實施例的結果顯示，本發明的細胞培養基質因為含有細胞生長輔助劑，而可於體外創造出三維培養環境，幫助細胞以立體聚集方式生長，達到提高細胞增殖和存活率的效果。
[第四實施例]
使用含有不同濃度的本發明的細胞生長輔助劑的細胞培養基質培養人類乳腺癌細胞株(Michigan Cancer Foundation-7,MCF-7) 7天，並觀察其聚集型態及其存活率。
將細胞培養基質分為五組，分別為控制組(C)、實驗組(1)、實驗組(2)、實驗組(3)以及實驗組(4)。其中，所有組別的細胞培養液為皆為市售的基礎培養基。各組的差別在於細胞生長輔助劑在細胞培養基質中的濃度不同。詳細而言，細胞生長輔助劑在控制組(C)的細胞培養基質中的濃度為0%；細胞生長輔助劑在實驗組(1)的細胞培養基質中的濃度為0.05%；細胞生長輔助劑在實驗組(2)的細胞培養基質中的濃度為0.1%；細胞生長輔助劑在實驗組(3)的細胞培養基質中的濃度為0.25%；細胞生長輔助劑在實驗組(4)的細胞培養基質中的濃度為0.5%。
將5 x 10 3細胞數目的MCF-7分別種入96孔細胞盤中，其含有不同細胞生長輔助劑濃度的細胞培養基質，並放置於37
Figure 02_image001
C、二氧化碳濃度5%的培養箱中培養7天，每2天更換一次細胞培養基質。其中，分別於第1天、第4天以及第7天時，觀察細胞聚集型態及其存活率及增殖率。
參閱圖5所示，隨著細胞生長輔助劑的濃度提高，細胞呈現球狀聚集的效果越好。
參閱圖6所示，含有細胞生長輔助劑的實驗組，其細胞存活率均有70%。
本實施例的結果顯示，本發明的細胞培養基質因為含有細胞生長輔助劑，而可於體外創造出三維培養環境，幫助細胞以立體聚集方式生長，達到提高細胞存活率的效果。
[實施例的有益效果]
本發明的其中一有益效果在於，本發明所提供的細胞生長輔助劑，其中聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物兩端通過酸酐類單體接上具有細胞親和性的胜肽，能於培養液中形成吸附細胞的微結構載體，讓細胞懸浮於細胞培養液中生長，從而提高細胞增殖和存活率。
更進一步地說，由於聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物具有溫感性，本發明的細胞培養基質(含有GRGD胜肽)在室溫(約25
Figure 02_image001
C)或培養溫度(約37
Figure 02_image001
C)下會有接近水凝膠狀的微結構載體形成，其能攜帶細胞並讓細胞始終處於分散懸浮狀態，進而在分裂後呈球狀聚集。值得注意的是，這些微結構載體可以在低溫下(低於10
Figure 02_image001
C)變回液狀，方便進行細胞收集或更換細胞培養基質。藉此，可以提供培養在體外的細胞與體內細胞基本相同的生長條件，並讓實驗人員的操作更加方便靈活；且不需要另外配製3D膠體，降低了實驗成本。
更進一步地說，本發明的細胞生長輔助劑，其利用酸酐類單體連結聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物與具有細胞親和性的胜肽，可以提高結構穩定性，胜肽更容易幫助細胞聚集懸浮。
以上所公開的內容僅為本發明的優選可行實施例，並非因此侷限本發明的申請專利範圍，所以凡是運用本發明說明書及圖式內容所做的等效技術變化，均包含於本發明的申請專利範圍內。
M: 細胞培養基質 C: 細胞 10: 細胞生長輔助劑 20: 細胞培養液
圖1為本發明第二實施例的細胞培養基質的示意圖。
圖2為本發明第三實施例的細胞培養結果的顯微影像。
圖3為本發明第三實施例的細胞存活率的直條圖。
圖4為本發明第三實施例的細胞存活率(吸光值)的折線圖。
圖5為本發明第四實施例的細胞培養結果的顯微影像。
圖6為本發明第四實施例的細胞存活率的直條圖。
M: 細胞培養基質 C: 細胞 10: 細胞生長輔助劑 20: 細胞培養液

Claims (4)

  1. 一種細胞生長輔助劑，其特徵在於，所述細胞生長輔助劑具有以下結構式：P-L-S-L-P；S表示基底物；L表示連接子；P表示胜肽；其中，所述基底物為一聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，所述連接子各自獨立為一酸酐類單體，所述酸酐類單體為順丁烯二酸酐，且所述胜肽的胺基酸序列為甘胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸。
  2. 一種細胞培養基質，其特徵在於，所述細胞培養基質包含0.05wt%至0.5wt%的一細胞生長輔助劑，且所述細胞生長輔助劑具有以下結構式：P-L-S-L-P；S表示基底物；L表示連接子；P表示胜肽；其中，所述基底物為一聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，所述連接子各自獨立為一酸酐類單體，所述酸酐類單體為順丁烯二酸酐，且所述胜肽的胺基酸序列為甘胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸。
  3. 如請求項2所述的細胞培養基質，其還包含95wt%至99.5wt%的一細胞培養液。
  4. 如請求項3所述的細胞培養基質，其中，所述細胞生長輔助劑用於使細胞懸浮於所述細胞培養液中。
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