TWI711462B

TWI711462B - 二價豬流感病毒疫苗

Info

Publication number: TWI711462B
Application number: TW105105727A
Authority: TW
Inventors: 馬克艾倫艾奇梅爾; 威斯利史考特強森; 艾瑞克馬汀瓦格恩; 蜜雪兒Ｌ瓦茲
Original assignee: 德商百靈佳殷格翰維美迪加股份有限公司
Priority date: 2015-02-26
Filing date: 2016-02-25
Publication date: 2020-12-01
Also published as: US20160250318A1; AU2016222962A1; US20180289795A1; EA201791907A1; BR112017015789A2; CN107250353B; EP3261664A1; CL2017001961A1; US10029005B2; WO2016137929A1; KR20170122786A; US10905756B2; JP6722686B2; TW201701900A; CN107250353A; MX2017010908A; AU2016222962B2; JP2018512388A; PH12017501370A1; CL2018002692A1

Abstract

本發明尤其係關於一種免疫原性組合物，其包括：a)豬流感之經改質活的H3病毒，及b)豬流感之經改質活的H1病毒。此外，本發明係關於對個體實施免疫之方法，其包括向該個體投與本發明之該免疫原性組合物。此外，本發明係關於治療或預防有需要之個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之本發明之免疫原性組合物。

Description

二價豬流感病毒疫苗

豬中之流感感染首次報告於1918年且第一豬流感病毒係在1930年自豬分離(Shope,R.E.,1931,J.Exp.Med.54：373-385)。豬流感(SI)係由A型及C型流感病毒引起之豬急性呼吸疾病。其嚴重程度取決於許多因素，包含宿主年齡、病毒菌株及繼發性感染(Easterday,1980,Philos Trans R Soc LondB Biol Sci 288：433-7)。在1998年之前，在美國，自豬主要分離出「古典」H1N1 SI病毒(SIV)(Kida等人，1994,J Gen Virol 75：2183-8；Scholtissek,1994,Eur J Epidemiol 10：455-8；Olsen等人，2000,Arch Virol.145：1399-419)。在1998年，在美國之多個州分離出亞型H3N2之SIV。

SIV複製限於豬的上呼吸道及下呼吸道之上皮細胞、鼻黏膜、篩骨、扁桃體、氣管及肺，且病毒排泄及傳播排他性地經由呼吸途徑發生。感染性病毒可由此自所提及組織以及扁桃體、支氣管肺泡灌洗(BAL)液及鼻、扁桃體或口咽拭子分離(Kristien Van Reeth及Wenjun Ma,2013,Current Topics in Microbiology and Immunology 370：173-200)。

流感病毒體係由含有單鏈RNA基因組之內部核糖核蛋白核心(螺旋核衣殼)及內襯有基質蛋白(M1)之外脂蛋白包膜組成。流感A病毒之分段基因組係由8個編碼11種多肽之直鏈、負極性、單鏈RNA分子組成，該11種多肽包含：形成核衣殼之RNA依賴性RNA聚合酶蛋白 (PB2、PB1及PA)及核蛋白(NP)；基質膜蛋白(M1、M2)；兩種自含脂質包膜突出之表面糖蛋白：血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA)；非結構蛋白(NS1)、核輸出蛋白(NEP)；及促凋亡因子PB1-F2。

A型流感病毒細分成17 H(血球凝集素)及10 N(神經胺酸酶)亞型，其可產生許多可能組合(指定為H1N1、H1N2、H2N1、H2N2、H5N1、H5N2等)(Tong等人，2012,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,109：4269-4274)。血球凝集素(HA)在病毒至受感染細胞之表面之附接中發揮作用，而神經胺酸酶(NA)在後代病毒自受感染細胞之釋放中發揮作用，NA由此在病毒傳播中發揮作用(Wang等人，2009,Biochem.Biophys.Res.Commun.,386：432-436)。

流感病毒之病原性係由多種病毒及宿主因子調節。在抵抗病毒感染之宿主因子中，I型干擾素(IFN[α]/[β])系統代表強力抗病毒先天防禦機制，其相對較早地確立於真核生物體之進化中(Garcia-Sastre,2002,Microbes Infect 4：647-55)。流感A病毒表現受感染細胞中之非結構蛋白，其係抵抗細胞IFN[α]/[β]反應之NS1蛋白(Garcia-Sastre等人，1998,Virology 252：324-30)。

可利用NS1改質來產生活減毒SIV，如由Solórzano等人，2005(J Virol 79：7535-7543)、Vincent等人，2012(Journal of Virology 19：10597-10605)及WO 2006/083286 A2中所闡述。已使用反向基因學生成表現具有73、99或126個胺基酸(Tx/98 NS1D73、Tx/98 NS1D99及Tx/98 NS1D126)之H3N2 SIV(sw/Texas/4199-2/98,Tx/98)之NS1截短蛋白質之減毒SIV。

然而，當前可用於抵抗豬流感病毒(SIV)之商業疫苗係基於H1N1及/或H3N2及/或H1N2 SIV且用於肌內注射之鈍化、含佐劑全病毒疫苗(Kristien Van Reeth及Wenjun Ma,2013,Current Topics in Microbiology and Immunology 370：173-200)。在針對來自接種疫苗及/ 或天然感染之SIV具有高抗體含量之母豬畜群中，小豬之接種疫苗應延遲至12-16週齡以避免干擾母源抗體(MDA)。

由死病毒疫苗誘導之免疫反應存在兩大缺點。首先，該等疫苗僅誘導血清抗體，黏膜抗體及另外疫苗誘導之血清HI抗體效價在加強接種疫苗之後2週至6週並不快速降低。其次，經鈍化疫苗通常並不進入抗原呈遞之內源性路徑且不能活化病毒特異性CD8+T細胞或CTL反應。

此外，在組合用於生成組合疫苗之不同抗原時，單一組份之效能可受稱為干擾之現象影響。

隨著將大部分SIV疫苗用於母豬接種疫苗以在小豬中產生長期母體SIV抗體，產生另一問題(Markowska-Daniel等人，2011,Veterinary Immunology and Immunopathology,142：81-86)。鑒於此，因延長之母體免疫性，小豬之接種疫苗可難以與母豬之接種疫苗進行組合。

因此，需要高度有效且可在早年投與之SIV疫苗。

在闡述本發明之態樣之前，必須注意，如本文中且如在隨附申請專利範圍中所使用，除非上下文另外清楚地指示，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包含複數個指示物。因此，舉例而言，在提及「抗原」時包含複數個該等抗原，且在提及「病毒」時包含提及彼等熟習此項技術者已知之一或多種病毒及其等效物，等等。除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬領域技術者通常所理解相同之含義。儘管任何類似或等效於彼等本文所述者之方法及材料可用於本發明之實踐或測試中，但目前所述者係較佳之方法、裝置及材料。出於闡述及揭示如結合本發明使用之出版物中所報告之細胞系、載體及方法之目的，本文所提及之所有出版物以引用方式併入本文中。本文中沒有什麼內容應解釋為承認本發明沒有資格早於根據先前發明之此類揭示內容。

本發明解決了先前技術中之固有問題且顯著改進最新技術。通常，本發明提供包括以下之免疫原性組合物：a)豬流感之經改質活的H3病毒，及b)豬流感之經改質活的H1病毒。

有利地，由本發明提供之實驗數據揭示本文所提供免疫原性組合物之安全性及效能及若干有利效應。特定而言，數據提供本文中展示豬流感組份之兩種經改質活的H3及H1病毒之間並無干擾。此外，本文所提供之實驗數據明確證實，豬流感組份之兩種經改質活的H3及H1病毒係協同性地一起作用。

此外，據觀察，本發明二價疫苗具有交叉保護效應。

另外，在投與早年小豬(數天齡)及具有母源抗體之小豬時，由本發明提供之實驗數據揭示本文所提供免疫原性組合物之安全性及效能。因此，據觀察，本文所提供之免疫原性組合物與母源抗體並無干擾。

術語「免疫原性組合物」係指包括至少一種在投與免疫原性組合物之宿主中誘發免疫學反應之抗原之組合物。該免疫學反應可為對本發明之免疫原性組合物之細胞及/或抗體調介之免疫反應。較佳地，免疫原性組合物誘導免疫反應且更佳地賦予抵抗SIV感染之一或多種臨床體徵之保護免疫性。宿主亦闡述為「個體」。較佳地，本文所闡述或提及之任一宿主或個體係動物。

通常，「免疫反應」包含但不限於一或多種下列效應：產生或活化特異性地針對本發明免疫原性組合物中所包含之一或多種抗原之抗體、B細胞、輔助性T細胞、阻抑性T細胞及/或細胞毒性T細胞及/或γ-δ T細胞。較佳地，宿主顯示保護免疫學反應或治療反應。

「保護免疫學反應」或「保護免疫性」顯示為減少或缺乏通常由受感染宿主顯示之臨床體徵、較快恢復時間及/或較低感染性持續時間或受感染宿主之組織或體液或排泄物中之較低病原體效價。

若宿主顯示保護免疫學反應以便對新感染之抗性得以增強及/或疾病之臨床嚴重程度會減小，則將免疫原性組合物闡述為「疫苗」。

術語「感染」或「受感染」係指個體之SIV感染。

熟習此項技術者已知術語「豬流感病毒」。術語豬流感病毒係指來自引起豬流感之正黏液病毒家族之A型或C型流感病毒。儘管正黏液病毒具有三組：A型、B型及C型，但僅A型及C型流感病毒感染豬。豬流感病毒之亞型包含H1N1、H1N2、H3N2及H3N1。H9N2及H5N1亦可發現於豬中。較佳地，豬流感病毒係自豬分離之流感病毒。豬流感病毒含有豬NS1基因。代表性豬NS1基因可參見公開序列數據庫(例如基因庫)且包含但不限於基因庫登錄號：AJ293939(A/豬/Italy/13962/95(H3N2))及基因庫登錄號：AJ344041(A/豬/Cotes d'Armor/1121/00(H1N1))。豬流感病毒變體之實例包含但不限於A/豬/Colorado/1/77、A/豬/Colorado/23619/99、A/豬/Cote d'Armor/3633/84、A/豬/England/195852/92、A/豬/Finistere/2899/82、A/豬/Hong Kong/10/98、A/豬/Hong Kong/9/98、A/豬/Hong Kong/81/78、A/豬/Illinois/100084/01、A/豬/Illinois/100085A/01、A/豬/I11inois/21587/99、A/豬/Indiana/1726/88、A/豬/Indiana/9K035/99、A/豬/Indiana/P12439/00、A/豬/Iowa/30、A/豬/Iowa/15/30、A/豬/Iowa/533/99、A/豬/Iowa/569/99、A/豬/Iowa/3421/90、A/豬/Iowa/8548-1/98、A/豬/Iowa/930/01、A/豬/Iowa/17672/88、A/豬/Italy/1513-1/98、A/豬/Italy/1523/98、A/豬/Korea/CY02/02、A/豬/Minnesota/55551/00、A/豬/Minnesota/593/99、A/豬/Minnesota/9088-2/98、A/豬/Nebraska/1/92、A/豬/Nebraska/209/98、A/豬 /Netherlands/12/85、A/豬/North Carolina/16497/99、A/豬/North Carolina/35922/98、A/豬/North Carolina/93523/01、A/豬/North Carolina/98225/01、A/豬/Oedenrode/7C/96、A/豬/Ohio/891/01、A/豬/Oklahoma/18717/99、A/豬/Oklahoma/18089/99、A/豬/Ontario/01911-1/99、A/豬/Ontario/01911-2/99、A/豬/Ontario/41848/97、A/豬/Ontario/97、A/豬/Quebec/192/81、A/豬/Quebec/192/91、A/豬/Quebec/5393/91、A/豬/Taiwan/7310/70、A/豬/Tennessee/24/77、A/豬/Texas/4199-2/98、A/豬/Wisconsin/125/97、A/豬/Wisconsin/136/97、A/豬/Wisconsin/163/97、A/豬/Wisconsin/164/97、A/豬/Wisconsin/166/97、A/豬/Wisconsin/168/97、A/豬/Wisconsin/235/97、A/豬/Wisconsin/238/97、A/豬/Wisconsin/457/985 A/豬/Wisconsin/458/98、A/豬/Wisconsin/464/98及A/豬/Wisconsin/14094/99。

熟習此項技術者已知術語「H1N1」及「H3N2」。然而，一般而言，A型流感病毒細分成17 H(血球凝集素)及10 N(神經胺酸酶)亞型，其可產生許多可能組合(指定為H1N1、H1N2....H2N1、H2N2....H5N1、H5N2....等)。因此，術語「H1N1」及「H3N2」係指SIV之血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA)亞型之特定組合。

藉由熟習此項技術者已知術語「NS1」。特定而言，「NS1」係指編碼流感中之非結構蛋白(NS1)之基因。NS1係由流感A及其他病毒之分段基因組編碼之8個分子之一。代表性豬NS1基因可參見公開序列數據庫(例如基因庫)且包含但不限於基因庫登錄號：AJ293939(A/豬/Italy/13962/95(H3N2))及基因庫登錄號：AJ344041(A/豬/Cotes d'Armor/1121/00(H1N1))。然而，術語NS1並不僅係指NS1基因，且亦係指由NS1基因編碼之NS1基因產物(例如RNA或蛋白質)。在蛋白質情形下，NS1基因產物係全長且具有野生型NS1活性(例如來自流感A/ 豬/Texas/4199-2/98)。全長野生型豬NS1蛋白質在217至237個胺基酸之間會變化。然而，在大部分情形下，全長野生型豬NS1蛋白質係219個胺基酸。此外，術語「NS1缺失」意指在NS1蛋白質內缺失一或多種胺基酸且在NS1基因或核苷酸序列內分別缺失一或多種核酸。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有選自由以下組成之群之N(神經胺酸酶)亞型：N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8、N9及N10。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒係豬流感之H3N2。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒係豬流感病毒之H1N1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒在NS1基因中具有一或多種突變。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒在NS1基因內具有缺失。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒係減毒豬流感病毒。

術語「減毒」係指病原體具有減小之毒力。在本發明中，「減毒」與「無毒」同義。在本發明中，減毒SIV係毒力已降低從而不會引起豬流感感染之臨床體徵但能夠在目標哺乳動物中誘導免疫反應者，但亦可意指與感染非減毒SIV且未接受減毒病毒之動物之「對照組」相比在感染減毒SIV之動物中臨床體徵之發生率或嚴重程度會降低。在此上下文中，術語「降低(reduce/reduced)」意指與如上文所定義之對照組相比降低至少10%、較佳地25%、甚至更佳地50%、仍更佳地60%、甚至更佳地70%、仍更佳地80%、仍更佳地90%、甚至更佳地95%及最佳地100%。因此，減毒、無毒SIV菌株係適於納入包括經改質活的SIV之免疫原性組合物中者。

因此，本發明提供一種免疫原性組合物，其包括a)豬流感之減毒經改質活的H3病毒及b)豬流感之減毒經改質活的H1病毒。

較佳地，如本文所提及之術語「減毒」尤其係關於基因組序列中之基因改造變化(例如藉由截短NS1基因或蛋白質)，其尤其在受感染宿主中產生生長至顯著低於野生型豬流感病毒之效價之病毒(在相同條件下繁殖及/或具有缺陷IFN拮抗劑活性時)。

在本發明之另一態樣中，將本發明之豬流感H3及H1病毒鈍化，從而產生全鈍化病毒。因此，本發明亦涉及包括以下之免疫原性組合物：a)豬流感之鈍化H3病毒及b)豬流感之鈍化H1病毒。較佳地，豬流感之經改質活的H3病毒係豬流感之H3N2且豬流感之經改質活的H1病毒係豬流感病毒之H1N1。

任一習用鈍化方法皆可用於本發明目的。因此，可藉由熟習此項技術者已知之化學及/或物理處理來實施鈍化。較佳鈍化方法包含添加環化二乙烯亞胺(BEI)，其包含添加2-溴乙烯胺氫溴酸鹽(BEA)(環化成二乙烯亞胺(BEI))之溶液。較佳其他化學鈍化藥劑包括但不限於Triton X-100、去氧膽酸鈉、鯨蠟基三甲基溴化銨、β-丙內酯、硫柳汞、酚及甲醛(福爾馬林(Formalin))。然而，鈍化亦可包括中和步驟。較佳中和劑包含但不限於硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉及諸如此類。

較佳福爾馬林鈍化條件包含福爾馬林濃度介於約0.02%(v/v)-2.0%(v/v)、更佳地約0.1%(v/v)-1.0%(v/v)、仍更佳地約0.15%(v/v)-0.8%(v/v)、甚至更佳地約0.16%(v/v)-0.6%(v/v)及最佳地約0.2%(v/v)-0.4%(v/v)之間。培育時間取決於H3N2及H1N1 NS1缺失突變體之抗性。一般而言，實施鈍化製程直至可在適宜栽培系統中檢測到H3N2及H1N1 NS1缺失突變體不再生長為止。

較佳地，將豬流感之鈍化H3及H1病毒福爾馬林鈍化(較佳地使用如上文所闡述之濃度)。

可使用已知技術(例如闡述於Nature,1974,252,252-254或Journal of Immunology,1978,120,1109-13中者)將本發明之豬流感之鈍化H3及H1病毒納入脂質體中。在本發明之另一實施例中，本發明之豬流感之鈍化H3及H1病毒可偶聯至適宜生物化合物(例如多糖、肽、蛋白質或諸如此類或其組合)。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒係誘變病毒或重組病毒。

術語「誘變病毒」係指具有突變之病毒。在本發明上下文中，術語「突變」應理解為基因組序列、尤其豬流感病毒之RNA序列之變化。舉例而言，可藉由天然變化、暴露於UV輻照、暴露於化學誘變劑、藉由在非允許宿主中傳代、藉由重組(亦即藉由使用另一具有期望抗原之菌株共感染減毒分段病毒)及/或藉由基因改造(例如使用「反向基因學」)來生成突變體病毒。

較佳地，突變係SIV之NS1基因或蛋白質之缺失。

術語「重組」係指豬流感病毒中之基因組區段交換為豬流感病毒之另一菌株或亞型。豬流感病毒A具有分段基因組，因此，可藉由重組將減毒表型轉移至另一菌株中(亦即藉由共感染減毒病毒及期望菌株，且選擇顯示兩種表型之重組病毒)。因此，可使用重組技術將減毒表型自親代豬流感病毒菌株(天然突變體、誘變病毒或基因改造病毒)轉移至不同病毒菌株(野生型病毒、天然突變體、誘變病毒或基因改造病毒)。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒經基因改造。

術語「基因改造」係指藉由使用「反向基因學」方式對豬流感病毒實施突變。較佳地，本發明之NS1缺失突變體已進行基因改造。反向基因學技術涉及製備含有豬流感病毒RNA中對於病毒聚合酶識別及包裝所需生成成熟病毒體之信號較為重要之非編碼區域之合成重組病毒RNA。重組RNA係自重組DNA模板合成且在活體外使用純化病毒聚合酶複合物重構以形成可用於轉染細胞之重組核糖核蛋白(RNP)。若在活體外或活體內轉錄合成RNA期間存在病毒聚合酶蛋白，則達成更有效轉染。合成重組RNP可恢復成感染性病毒顆粒。前述技術已為熟習此項技術者所熟知。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有受損干擾素拮抗劑表型。

術語「受損干擾素拮抗劑表型」係指具有減小或抑制之細胞干擾素免疫反應之豬流感病毒。較佳地，豬流感病毒具有減小或抑制之干擾素表現及/或活性。較佳地，干擾素(IFN)之一或兩種類型之表現及/或活性得以減小或抑制。在本發明之一態樣中，IFN-[α]之表現及/或活性受到影響。在另一態樣中，IFN-[β]之表現及/或活性受到影響。在另一態樣中，IFN-[γ]之表現及/或活性受到影響。較佳地，在與IFN-勝任系統(例如相同條件下之野生型細胞或動物)中之對照(例如PBS或不含干擾素拮抗劑活性之蛋白質)相比時，IFN-[β]及/或IFN-[γ]之表現及/或活性由具有干擾素拮抗劑活性之蛋白質、多肽等減小5-10%、10-20%、20-30%、30-40%、40-50%、50-60%、60-70%、70-80%、80-90%或更高。更佳地，在與相同條件下之IFN-勝任系統中之對照(例如PBS或不含干擾素拮抗劑活性之蛋白質)相比時，IFN-[β]及/或IFN-[γ]之表現及/或活性由具有干擾素拮抗劑活性之蛋白質、多肽等減小大約1至大約100倍、大約5至大約80倍、大約20至大約80倍、大約1至大約10倍或大約1至大約5倍或大約40至大約80倍或1、2、3、4、5、7、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍。

因此，在本發明之另一態樣中，免疫原性組合物包括a)豬流感之減毒經改質活的H3病毒及b)豬流感之減毒經改質活的H1病毒，其中兩種組份中NS1基因產物拮抗細胞干擾素反應之能力會減弱。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒在NS1蛋白質之羧基末端處具有一或多種突變。

熟習此項技術者已熟知術語「羧基末端」。羧基末端亦稱為羧基-末端、C-末端、C-末端尾、C-末端端或COOH-末端。在蛋白質自信使RNA轉譯時，其係自N-末端至C-末端產生。因此，羧基末端係胺基酸鏈(蛋白質或多肽)中由自由羧基(-COOH)封端之一端。

術語「突變」已闡述於上文中。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有羧基末端截短NS1蛋白質。

術語「羧基末端截短」係指截短羧基末端之NS1蛋白質。術語「羧基末端」已闡述於上文中。術語「截短(truncated或truncation)」係指在NS1蛋白質內缺失一或多種胺基酸或在NS1基因或核苷酸序列內缺失一或多種核酸。因此，NS1基因產物之胺基末端區域部分得以保留，而NS1基因產物之羧基末端區域部分發生缺失。

較佳地，本發明之減毒豬流感病毒包括在NS1基因中含有突變之基因組，該突變使得自NS1之羧基末端缺失5、較佳地10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、100、105、110、115、119、120、121、125、130、135、140、145、146、147、148、150、155、160、165、170或175個胺基酸殘基或自羧基末端缺失5-170、25-170、50-170、100-170、90-160、100-160或105-160、90-150、5-75、5-50或5-25個胺基酸殘基。

更佳地，本發明之減毒豬流感病毒包括在NS1基因中含有突變之基因組，該突變使得缺失NS1基因產物中除以下外所有之胺基酸殘基：胺基酸殘基1-130、胺基酸殘基1-129、胺基酸殘基1-128、胺基酸殘基1-127、胺基酸殘基1-126、胺基酸殘基1-125、胺基酸殘基1-124、胺基酸殘基1-123、胺基酸殘基1-122、胺基酸殘基1-121、胺基酸殘基1-120、胺基酸殘基1-115、胺基酸殘基1-110、胺基酸殘基1-100、胺基酸殘基1-99、胺基酸殘基1-95、胺基酸殘基1-85、胺基酸殘基1-80、胺基酸殘基1-75、胺基酸殘基1-73、胺基酸殘基1-70、胺基酸殘基1-65或胺基酸殘基1-60，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

因此，在本發明之另一態樣中，免疫原性組合物包括a)豬流感之減毒經改質活的H3病毒及b)豬流感之減毒經改質活的H1病毒，其中兩種病毒具有包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

來自羧基末端之缺失包含自NS1蛋白質之羧基末端缺失85至100、更佳地90至95及甚至更佳地91至94個胺基酸殘基。最佳地，自NS1蛋白質之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基。更佳地，自NS1蛋白質之羧基末端缺失93個胺基酸殘基。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒具有來自A/豬/Texas/4199-2/98之NS1基因或蛋白質。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之另一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒編碼自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒係A/豬/Texas/4199-2/98。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒係TX/98/del 126。

術語「TX/98/del 126」係指具有編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質之NS1缺失突變體之A/豬/Texas/4199-2/98菌株，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒含有來自A/豬/Texas/4199-2/98之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98。

術語「HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M」係指豬流感病毒之基因區段或基因。一般而言，流感A基因組含有8個編碼11種蛋白質之基因區段。該等蛋白質包含形成核衣殼之RNA依賴性RNA聚合酶蛋白(PB2、PB1及PA)及核蛋白(NP)；基質膜蛋白(M1、M2)；兩種自含脂質包膜突出之表面糖蛋白：血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA)；非結構蛋白(NS1)、核輸出蛋白(NEP)及PB1-F2。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體，其闡述於WO 2006/083286 A2中且指定為TX/98/del126。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒 a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質。

較佳地，豬流感之經改質活的H3病毒之特徵在於包括具有如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或在於包括具有編碼具有如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或在於包括具有如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

然而，豬流感之經改質活的H3病毒應亦涵蓋豬流感病毒之變體。該等變體與如上文所描述之豬流感之特異性經改質活的H3病毒(特徵在於SEQ ID NO1-4)具有基本上相同之免疫學性質。流感A病毒中之HA及NA表面糖蛋白分別涉及疫苗誘導之免疫性且擁有免疫學性質。術語「具有基本上相同之免疫學性質」涵蓋(但不限於)，該等變體基本上有效治療或預防如下文所闡述由豬流感病毒感染引起之臨床體徵或改良如下文所闡述之效能參數。

此外，必須理解，本發明所提及之變體應包括如下豬流感之經改質活的H3病毒： a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括具有與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

熟習此項技術者已熟知術語「基因或基因區段」。然而，如上文所陳述，流感A基因組(例如SIV之基因組)含有8個編碼11種蛋白質之基因區段。

術語「NA及HA」已定義於上文中。HA(血球凝集素)及NA(神經胺酸酶)係流感A病毒(例如SIV)中之表面糖蛋白。此外，NA係中和抗體之主要抗原性靶。

術語「核酸序列」係指包含DNA分子、RNA分子、cDNA分子或衍生物之多核苷酸。該術語涵蓋單鏈以及雙鏈多核苷酸。本發明核酸涵蓋經分離多核苷酸(亦即自其天然背景分離)及基因改質形式。此外，亦包括化學改質之多核苷酸，包含天然改質之多核苷酸(例如糖基化或甲基化多核苷酸)或人工改質者(例如生物素化多核苷酸)。此外，必須理解，因基因代碼退化，如上文所提及之NA及HA蛋白質可由大量多核苷酸編碼。此外，術語「核酸」及「多核苷酸」可互換使用且係指任一核酸。術語「核酸」及「多核苷酸」亦具體而言包含由除5個生物鹼基(腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶及尿嘧啶)外之鹼基構成之核酸。

術語「cDNA」係指互補DNA，其係自信使RNA(mRNA)模板以由酶反轉錄酶催化之反應來合成。然而，熟習此項技術者已熟知術語「cDNA」。

術語「胺基酸序列」、「多肽」及「蛋白質」可互換使用。術語「胺基酸序列」係指由天然胺基酸以及其衍生物構成之胺基酸序列。天然胺基酸在業內已眾所周知且闡述於生物化學之標準教科書中。在胺基酸序列內，胺基酸由肽鍵連結。此外，胺基酸序列之兩端稱為羧基末端(C-末端)及胺基末端(N-末端)。

術語「一致性」已為業內所習知且係指兩個或更多個多肽序列或兩個或更多個多核苷酸序列、亦即參考序列與擬與參考序列進行比較之給定序列之間之關係。藉由在將序列最佳地比對以產生最高序列相似性程度之後比較給定序列與參考序列來測定序列一致性，如藉由該等序列串之間之匹配所測定。在該比對時，基於逐個位置來確定序列一致性，舉例而言，若在一個位置處核苷酸或胺基酸殘基一致，則該等序列在該位置處「一致」。然後將該等位置一致性之總數除以參考序列中之核苷酸或殘基之總數以得到序列一致性%。序列一致性可易於藉由已知方法來計算，包含但不限於彼等闡述於以下文獻中者：Computational Molecular Biology,Lesk,A.N.編輯，Oxford University Press,New York(1988),Biocomputing：Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.編輯，Academic Press,New York(1993)；Computer Analysis of Sequence Data，部分I，Griffin,A.M.及Griffin,H.G.編輯，Humana Press,New Jersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinge,G.,Academic Press(1987)；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.及Devereux,J.編輯，M.Stockton Press,New York(1991)；及Carillo,H.及Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48：1073(1988)，其教示內容以引用方式併入本文中。設計用於測定序列一致性之較佳方法以得到所測試序列之間之最大匹配。將測定序列一致性之方法編成測定給定序列間之序列一致性之公開獲得之電腦程式。該等程式之實例包含但不限於GCG程式包(Devereux,J.等人，Nucleic酸Research,12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.,215：403-410(1990)。BLASTX程式可自NCBI及其他來源公開獲得(BLAST Manual,Altschul,S.等人，NCVI NLM NIH Bethesda,MD 20894；Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.,215：403-410(1990)，其教示內容以引用方式併入本文中)。該等程式最佳地使用默認空位權重比對序列以在給定序列與參考序列之間產生最高序列一致性程度。作為闡釋，對於多核苷酸具有與參考核苷酸序列具有至少(例如)85%、較佳地90%、甚至更佳地95%「序列一致性」之核苷酸序列而言，預計給定多核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致，只是給定多核苷酸序列可包含最高15、較佳地最高10、甚至更佳地最高5個點突變/參考核苷酸序列之100個核苷酸。換言之，在具有相對於參考核苷酸序列具有至少85%、較佳地90%、甚至更佳地95%一致性之核苷酸序列之多核苷酸中，參考序列中最高15%、較佳地10%、甚至更佳地5%之核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或參考序列中全部核苷酸中最高15%、較佳地10%、甚至更佳地5%數量之核苷酸可插入參考序列中。參考序列之該等突變可發生在參考核苷酸序列之5’或3’末端位置或在彼等末端位置之間之任何位置，其係個別地散佈在參考序列中之各核苷酸之間或在參考序列內呈一或多個鄰接基團形式。類似地，對於多肽具有與參考胺基酸序列具有至少(例如) 85%、較佳地90%、甚至更佳地95%序列一致性之給定胺基酸序列而言，預計多肽之給定胺基酸序列與參考序列一致，只是給定多肽序列可包含最高15、較佳地最高10、甚至更佳地最高5個胺基酸改變/參考胺基酸序列之100個胺基酸。換言之，為獲得與參考胺基酸序列具有至少85%、較佳地90%、甚至更佳地95%序列一致性之給定多肽序列，參考序列中最高15%、較佳地最高10%、甚至更佳地最高5%之胺基酸殘基可缺失或經另一胺基酸取代，或參考序列中全部數量胺基酸殘基之最高15%、較佳地最高10%、甚至更佳地最高5%數量之胺基酸可插入參考序列中。參考序列之該等改變可發生在參考胺基酸序列之胺基或羧基末端位置或在彼等末端位置之間之任何位置，其係個別地散佈在參考序列中之各殘基之間或在參考序列內呈一或多個鄰接基團形式。較佳地，不同殘基位置因保守胺基酸取代而不同。然而，在測定序列同源性時，並不包含保守取代作為匹配。

必須理解，較佳地，在整個序列中測定上文以百分比(%)形式所引述之序列一致性值。然而，可在包括任一上文所提及核酸序列之至少20、至少50、至少100、至少250或至少500個連續核苷酸之片段中或在包括任一上文所提及胺基酸序列之至少20、至少30、至少50、至少80、至少100或至少150個連續胺基酸之片段中測定上文以百分比(%)形式所引述的序列一致性值。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒係嵌合病毒。

術語「嵌合病毒」係指包括豬流感之經改質活的H1病毒或H1N1豬流感病毒之一或多個核苷酸序列或基因區段及並非來自豬流感之經改質活的H1病毒或H1N1豬流感病毒而是來自另一病毒之一或多個核苷酸序列或基因區段的病毒。較佳地，豬流感之經改質活的H1病毒或H1N1 NS1缺失突變體豬流感病毒包括來自H1N1亞型之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段，但所有其他基因區段皆係來自另一具有不同(非H1N1)HA及NA亞型之豬流感病毒。更佳地，該其他病毒係H3N2豬流感病毒。

特定而言，可使用重組技術將減毒表型自親代豬流感病毒菌株(例如上文所闡述H3N2 SIV菌株之羧基末端截短NS1)轉移至不同病毒菌株(例如H1N1野生型病毒)。因此，藉由該技術，可生成基因組區段已交換為豬流感病毒之另一菌株或亞型之豬流感病毒基因組。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒包括H3 SIV菌株之羧基末端截短NS1、較佳地H3N2 SIV菌株之羧基末端截短NS1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之另一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒編碼自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒係A/豬/Texas/4199-2/98。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒包括來自H1N1亞型之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒包括來自A/豬/Minnesota/37866/1999之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒含有來自A/ 豬/Minnesota/37866/1999(H1N1)之HA及NA及來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之PB2、PB1、PA、NP、M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒係A/豬/Minnesota/37866/1999及TX/98/del 126之嵌合體。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H1病毒 a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有大於70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

較佳地，豬流感之經改質活的H1病毒之特徵在於包括具有如由SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6陳述之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或在於包括編碼具有如由SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8陳述之胺基酸序列之NA及HA蛋白質之NA及HA基因的核酸序列，或在於包括具有如由SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8陳述之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

然而，豬流感之經改質活的H1病毒應亦涵蓋豬流感病毒之變體。該等變體與如上文所描述豬流感之特異性經改質活的H1病毒(特徵在於SEQ ID NO5至8)具有基本上相同之免疫學性質。流感A病毒中之HA及NA表面糖蛋白分別涉及疫苗誘導之免疫性且擁有免疫學性質。術語「具有基本上相同之免疫學性質」涵蓋(但不限於)，該等變體基本上有效地治療或預防如下文所闡述由豬流感病毒感染引起之臨床體徵或改良如下文所闡述之效能參數。

此外，必須理解，如本發明所提及之變體應包括如下豬流感之經改質活的H1病毒a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

因此，在本發明之另一態樣中，免疫原性組合物包括a)豬流感之減毒經改質活的H3N2病毒及b)豬流感之減毒經改質活的H1N1病毒，其中兩種病毒具有包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

此外，在本發明之另一態樣中，免疫原性組合物包括a)豬流感之減毒經改質活的H3N2病毒及b)豬流感之減毒經改質活的H1N1病毒，其中豬流感之經改質活的H3N2病毒含有來自A/豬/Texas/4199-2/98之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M且NS1-126基因係來自A/豬 /Texas/4199-2/98，且其中豬流感之經改質活的H1N1病毒含有來自A/豬/Minnesota/37866/1999(H1N1)之HA及NA及來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之PB2、PB1、PA、NP、M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)。

另外已展示，在投與本發明之免疫原性組合物之一個劑量之後，該免疫原性組合物之該單一劑量較為有效。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物皆調配用於單一劑量投與。

較佳地，單一劑量之總體積介於約0.2ml與2.5ml之間，更佳地介於約0.2ml與2.0ml之間，甚至更佳地介於約0.2ml與1.75ml之間，仍更佳地介於約0.2ml與1.5ml之間，甚至更佳地介於約0.4ml與1.25ml之間，甚至更佳地介於約0.4ml與1.0ml之間，其中單一0.5ml劑量或1.0ml劑量最佳。最佳者係總體積為0.5ml、1ml、1.5ml或2ml之單一劑量。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物係經鼻內投與。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物對於懷孕及哺乳期間之母豬較為安全。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物對於前兩週齡內之豬較為安全。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物對於第一週齡內之豬較為安全。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物對於第一天齡內之豬較為安全。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物對於第0天齡之豬較為安全。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物進一步包括醫藥上可接受之載劑。

術語「醫藥上可接受之載劑」包含任何及全部溶劑、分散介質、塗覆劑、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌及抗真菌劑、等滲劑、吸附延遲劑、佐劑、免疫刺激劑及其組合。

「稀釋劑」可包含水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油及諸如此類。等滲劑可尤其包含氯化鈉、右旋糖、甘露醇、山梨醇及乳糖。穩定劑尤其包含白蛋白及乙二胺四乙酸之鹼金屬鹽。

在本發明之一態樣中，醫藥上可接受之載劑係磷酸鹽緩衝鹽水。

較佳地，免疫原性組合物進一步包括蔗糖明膠穩定劑。

在本發明之一態樣中，醫藥上可接受之載劑係幾丁聚醣。

幾丁聚醣係天然去乙醯化多糖，來自甲殼類動物(例如蝦、螃蟹)、昆蟲及其他無脊椎動物中幾丁質。最近，Rauw等人，2009(Vet Immunol Immunop 134：249-258)證實，幾丁聚醣可增強活的新城雞瘟疫苗之細胞免疫反應且促進其保護效應。此外，Wang等人，2012(Arch Virol(2012)157：1451-1461)所展示之結果揭示幾丁聚醣作為用於活的減毒流感疫苗中佐劑之潛在性。

較佳地，免疫原性組合物可進一步包含一或多種其他免疫調節劑，例如介白素、干擾素或其他細胞介素。可用於本發明背景中之佐劑及添加劑之量及濃度可輕易地由熟習此項技術者測定。

在一些態樣中，本發明免疫原性組合物含有佐劑。本文所用之「佐劑」可包含氫氧化鋁及磷酸鋁；皂苷，例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech公司，Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals公司，Birmingham,AL)；油包水乳液；水包油乳液；水包油包水乳液。該乳液可尤其基於輕質液體石蠟油(European Pharmacopea類型)；類異戊二烯油，例如角鯊烷或角鯊烯；由烯烴(尤其為異丁烯或癸烯)寡聚產生之油；含有直鏈烷基之酸或醇之酯，更特定而言為植物油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；具支鏈脂肪酸或醇之酯，尤其為異硬脂酸酯。油可與乳化劑組合使用以形成乳液。乳化劑較佳為非離子型表面活性劑，特定而言為山梨醇酐、二縮甘露醇(例如無水甘露醇油酸酯)、二醇、聚甘油、丙二醇與油酸、異硬脂酸、蓖麻油酸或羥基硬脂酸之視情況經乙氧基化之酯，以及聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物嵌段，特定而言為普流尼克(Pluronic)產品，尤其L121。參見Hunter等人，The Theory and Practical Application of Adjuvants(Ed.Stewart-Tull,D.E.S.),JohnWiley and Sons,NY,pp51-94(1995)及Todd等人，Vaccine 15：564-570(1997)。實例性佐劑係闡述於M.Powell及M.Newman編輯(Plenum Press,1995)之「Vaccine Design,The Subunit and Adjuvant Approach」之第147頁上之SPT乳液及闡述於該同一本書第183頁上之乳液MF59。

佐劑之另一實例係選自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物及馬來酸酐與烯基衍生物之共聚化合物。較佳之佐劑化合物係丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物，其尤其與糖類或多元醇之聚烯基醚交聯。此等化合物稱為術語聚羧乙烯製劑(carbomer)(Pharmeuropa，第8卷，第2期，1996年6月)。熟習此項技術者亦可參照美國專利第2,909,462號，其闡述與聚羥基化化合物交聯之該等丙烯酸系聚合物，該聚羥基化化合物具有至少3個(較佳不多於8個)羥基，至少3個羥基之氫原子由具有至少2個碳原子之不飽和脂肪族基團代替。較佳基團係彼等含有2至4個碳原子者，例如乙烯基、烯丙基及其他乙烯系不飽和基團。不飽和基團自身可含有諸如甲基等其他取代基。以名稱卡波姆(Carbopol)(BF Goodrich,Ohio,USA)出售之產品尤其適合。其可與烯丙基蔗糖或與烯丙基異戊四醇交聯。其中可提及者係卡波姆974P、934P及971P。最佳使用卡波姆971P。共聚物EMA(Monsanto)屬馬來酸酐與烯基衍生物之共聚物，其為馬來酸酐與乙烯之共聚物。將該等聚合物溶於水中會產生酸性溶液，較佳將其中和至生理pH以得到佐劑溶液，將免疫原性的、免疫的或疫苗組合物本身併入至該佐劑溶液中。

其他適宜佐劑尤其包含但不限於RIBI佐劑系統(Ribi公司)、嵌段共聚物(CytRx,Atlanta GA)、SAF-M(Chiron,Emeryville CA)、單磷醯脂質A、阿夫立定(Avridine)脂質-胺佐劑、來自大腸桿菌(E.coli)(重組的或其他性質的)之不耐熱腸毒素、霍亂毒素、IMS 1314或胞壁醯二肽或天然或重組之細胞因子或其類似物或內源細胞因子釋放之刺激物。

預期佐劑可以約100μg至約10mg/劑量、較佳以約100μg至約10mg/劑量、更佳以約500μg至約5mg/劑量、甚至更佳以約750μg至約2.5mg/劑量及最佳地以約1mg/劑量之量添加。另一選擇係以最終產物之體積計，佐劑之濃度可為約0.01至50%，較佳為約2%至30%，更佳為約5%至25%，仍更佳為約7%至22%，及最佳地為10%至20%。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之經改質活的H3病毒。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之經改質活的H3病毒。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之經改質活的H3病毒。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物係疫苗。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物係二價疫苗。

在本發明之一態樣中，免疫原性組合物有效治療及/或預防有需要之個體中由SIV引起之臨床體徵。

術語「治療及/或預防」係指減小畜群中特定SIV感染之發病率或減小由特定SIV感染引起或與其有關之臨床體徵之嚴重程度。因此，術語「治療及/或預防」亦係指與動物尚未接受如本文所提供之免疫原性組合物之動物群相比，在動物已接受有效量之該等免疫原性組合物之動物群中，減小畜群中感染特定SIV之動物數量(=減小特定SIV感染之發病率)或減小通常與SIV感染有關或由其引起之臨床體徵之嚴重程度。

「治療及/或預防」通常涉及將有效量之本發明之免疫原性組合物投與需要此一治療/預防或可自其獲益之個體或個體畜群。術語「治療」係指在個體或畜群之至少一些動物已感染該SIV且其中該等動物已展示一些由該SIV感染引起或與其有關之臨床體徵後，投與有效量之免疫原性組合物。術語「預防」係指在患有SIV之該個體之任一感染或至少該動物或動物群中沒有動物並不展示任一由該SIV感染引起或與其有關之臨床體徵之前，投與個體。術語「預防(prophylaxis及preventing)」可在本申請案中互換使用。

本文所用之術語「有效量」意指但不限於誘發或能夠誘發個體中之免疫反應之抗原量。該有效量能夠減小畜群中特定SIV感染之發病率或減小特定SIV感染之臨床體徵之嚴重程度。

較佳地，與未治療或使用可在本發明之前獲得之免疫原性組合物治療但隨後感染特定SIV之個體相比，臨床體徵之發病率或嚴重程度減小至少10%、更佳地至少20%、仍更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、仍更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、仍更佳地至少 70%、甚至更佳地至少80%、仍更佳地至少90%、仍更佳地至少95%及最佳地100%。

本文所用之術語「臨床體徵」係指個體中來自SIV之感染體徵。感染之臨床體徵取決於所選病原體。該等臨床體徵之實例包含但不限於呼吸窘迫、耳炎、被毛粗亂、微熱、抑鬱症及食慾減小。然而，臨床體徵亦包含但不限於可自活動物直接觀察到之臨床體徵。可自活動物直接觀察到之臨床體徵之實例包含流鼻涕與眼淚、嗜睡、咳嗽、哮鳴、重擊、高熱、失重、去水、跛行、消瘦、皮膚蒼白、羸弱及諸如此類。

較佳地，與未治療或使用可在本發明之前獲得之免疫原性組合物治療但隨後感染特定SIV之個體相比，經治療個體中臨床體徵之發病率或嚴重程度減低係指重量損失降低、較低病毒負荷、肺病灶減少、減少病毒脫落、直腸溫度降低或其組合。

術語「個體」係指動物，較佳地係指哺乳動物，例如小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、倉鼠、豬、綿羊、狗、貓、馬、猴或牛，且亦較佳地係指人類。更佳地，個體係豬。

本文所用之術語「有需要(in need或of need)」意指，投與/治療涉及加強或改良健康或臨床體徵或對於接受本發明之免疫原性組合物之動物之健康的任一其他陽性醫學效應。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒係協同性地一起作用。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3及H1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比減小。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒增加了對抗異源刺激之保護，提供交叉保護效應。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒增加了對抗H1刺激之保護。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒增加了對抗H1N1刺激之保護。

在本發明之一態樣中，經改質活的H3病毒係H3N2病毒，較佳係如本文所闡述之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

本發明亦係關於對個體實施免疫之方法，其包括向個體投與如本文所闡述之任一免疫原性組合物。

術語「實施免疫」係關於藉由以下方式達成之主動免疫化：向擬實施免疫之個體投與免疫原性組合物，由此引起針對該免疫原性組合物中所包含之抗原之免疫學反應。

較佳地，免疫化使得減小畜群中特定SIV感染之發病率或減小由特定SIV感染引起或與其有關之臨床體徵之嚴重程度。

此外，使用如本文所提供之免疫原性組合物對有需要之個體進行免疫化使得可預防由SIV感染之個體之感染。甚至更佳地，免疫化針對SIV感染產生有效、長效、免疫學反應。應理解，該時間段將持續大於2個月、較佳地大於3個月、更佳地大於4個月、更佳地大於5個月、更佳地大於6個月。必須理解，免疫化不能在實施免疫之所有個體中皆有效。然而，該術語需要畜群之大部分個體有效免疫。

較佳地，在此上下文中設計通常(亦即並無免疫化)發生通常由SIV感染引起或與其有關之臨床體徵之個體畜群。熟習此項技術者可易於測定畜群個體是否有效免疫。較佳地，若與未實施免疫或使用可在本發明之前獲得之免疫原性組合物實施免疫但隨後感染特定SIV之個體相比，給定畜群中至少33%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、仍更佳地至少95%及最佳地100%個體之臨床體徵之發病率或嚴重程度減小至少10%、更佳地至少20%、仍更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、仍更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、仍更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、仍更佳地至少90%、仍更佳地至少95%及最佳地100%，則免疫化應較為有效。

本發明亦係關於治療或預防有需要之個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如本文所闡述之免疫原性組合物。

術語「治療或預防」、「臨床體徵」、「個體」、「有需要」及「有效量」已定義於其他地方。

本發明亦係關於與相同物種之未經免疫對照組之個體相比減小有需要個體中病毒脫落的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如本文所闡述之免疫原性組合物。

術語「減少」意指，與未治療(未實施免疫)但隨後感染特定SIV之個體相比，病毒脫落減少至少10%、更佳地至少20%、仍更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、仍更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、仍更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、甚至更佳地至少90%、仍更佳地至少95%、最佳地100%。熟習此項技術者熟知如何量測病毒脫落。

本發明亦係關於與相同物種之免疫化對照組之個體(使用包括豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒之免疫原性組合物實施免疫)相比會減少有需要個體中病毒脫落的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如本文所闡述之免疫原性組合物。

術語「減少」意指，與使用包括豬流感病毒之單價NS1缺失突變體之免疫原性組合物實施免疫但隨後感染特定SIV之個體相比，病毒脫落減少至少10%、更佳地至少20%、仍更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、仍更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、仍更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、仍更佳地至少90%及最佳地至少95% 及最佳地100%。熟習此項技術者熟知如何量測病毒脫落。

術語「病毒脫落」係指諸如鼻涕等分泌物且另外係指藉由咳嗽或噴嚏產生之氣體微粒。因此，可藉由檢驗鼻拭子中之病毒效價或藉由肺中之病毒效價來測定病毒脫落。術語「病毒脫落」另外涵蓋病毒轉移至易感動物中(亦即哨點)。熟習此項技術者熟知如何量測病毒脫落。

術語「豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒」係指具有H3及H1且為經改質活的病毒之任一SIV病毒。較佳地，術語「豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒」係指在NS1蛋白質中具有缺失之任一SIV病毒。此外，術語單價等效於一價且僅係指與多價疫苗(例如二價或三價疫苗)相比之單一SIV NS1缺失突變體。較佳地，豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒係本文所闡述之豬流感病毒之H1N1或H3N2缺失突變體。最佳地，豬流感病毒之單價NS1缺失突變體係本文所闡述之豬流感病毒之H1N1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒係如本文所闡述之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒係如本文所闡述之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

本發明克服了先前技術之缺陷且提供用於提供針對SIV之增加之豬保護的新穎方法。特定而言，本發明提供向母豬及/或出生後數天內之幼小小豬投與免疫學有效量之疫苗以針對SIV對其實施免疫之方法。

本發明亦係關於對具有抗SIV抗體之個體接種疫苗之方法，其包括向該動物投與單一有效劑量之如本文所闡述之免疫原性組合物之步驟。

術語「抗SIV抗體」係指特異性針對SIV之抗體。該等抗SIV抗體之實例包括但不限於藉由使用SIV疫苗對母豬接種疫苗獲得之母源抗體或藉由母豬之SIV感染獲得之母源抗體。此外，小豬中之抗SIV抗體可因應於小豬之SIV感染而出生。術語「抗SIV抗體」應另外意指但不限於，小豬已暴露於或暴露於(母體抗體之被動轉移)較佳地至少1：10、更佳地大於1：20、甚至更佳地大於1：40、甚至更佳地大於1：80、甚至更佳地1：160、甚至更佳地大於1：320及最佳地大於1：640之可檢測抗SIV抗體效價。較佳地，抗SIV抗體效價在特異性抗SIV免疫分析中可檢測且可量化。

較佳地，小豬中之抗SIV抗體係因應於小豬SIV感染而產生。然而，更佳地，彼等抗SIV抗體係因應於使用SIV疫苗對母豬接種疫苗或因應於母豬之SIV感染而產生之母源抗體。母源抗體經由初乳及乳液被動轉移至小豬中。

使用疫苗抗原干擾母源抗體可減小或甚至消除針對活以及鈍化疫苗之免疫反應。已針對活疫苗以及非複製型(亦即鈍化或亞單位疫苗)報導母源抗體之疫苗誘導性免疫反應之不同干擾程度(Markowska-Daniel等人，2011,Veterinary Immunology and Immunopathology,142：81-86)。最佳地，動物接種疫苗應始於恰在母體抗體消失時，但此方式可能因個體之間之高度可變性而不可行(Monteil等人，1997)。

因此，用於針對SIV進行免疫化之當前接種疫苗策略涉及向僅兩週至三週齡及更老之豬投與疫苗，此乃因小於此年齡組之小豬因先前母豬暴露或接種疫苗而具有關於SIV呈陽性母體抗體。在本發明方法之前，據信，存在母體抗體或其他催乳激素可潛在干擾該等小豬中接種疫苗之效能，此乃因母體抗體能夠在小豬免疫系統可識別疫苗且開始分泌其自身抗體之前中和疫苗。因此，在母體免疫性前，應避免幼小小豬之接種疫苗。

面對此問題，若干接種疫苗策略預測出用於幼小動物之兩次性接種疫苗方案：第一接種疫苗係在早年給予以保護彼等具有低母源抗體之動物。眾所周知，此第一接種疫苗在具有高母源抗體效價之動物中可能因干擾疫苗抗原而並不有效。為亦保護該等動物，在高母源抗體含量預計已降低時，需要第二接種疫苗。

有利地，由本發明提供之實驗數據揭示本文所提供之免疫原性組合物在投與具有母源抗體之數天齡小豬時之安全性及效能。實際上，與未經接種疫苗之小豬相比，如本文所闡述在出生之後數天內接種疫苗之小豬具有減少之與疾病有關之臨床體徵。

本發明亦係關於預防或減少個體之早期SIV感染之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如本文所闡述之免疫原性組合物。

有利的是，由本發明所提供之實驗數據揭示本文所提供之免疫原性組合物在投與數天齡小豬及具有母源抗體之小豬時的安全性及效能。然而，當前針對SIV進行免疫化之接種疫苗策略涉及向僅兩週至三週齡及更老之豬投與疫苗，此乃因小於此年齡組之小豬可因先前母豬暴露或接種疫苗而具有關於SIV呈陽性母體抗體。因此，本發明另外涉及預防或減少個體之早期SIV感染之方法。

較佳地，擬實施免疫之豬為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天齡。更佳地，擬實施免疫之該豬為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天齡。最佳地，擬實施免疫之該豬為1、2、3、4、5、6或7天齡。

然而，必須理解，在對數天齡小豬接種疫苗之後，小豬之免疫系統需要數天來建立針對SIV感染之免疫性。因此，較佳地，在前24h齡內對小豬實施免疫。

然而，更佳地，在分娩之前至少使用本文所闡述之免疫原性組合物對懷孕母豬接種疫苗一次，且另外，在數天內(較佳地在第一週齡內或在前24h齡內)使用本文所闡述之免疫原性組合物對出生小豬接種疫苗。因此，小豬已由母源免疫性保護且另外由疫苗誘導性免疫性保護。

術語「早期SIV感染」係指豬早年之SIV感染。早年SIV感染係指動物在前四週齡內、更佳地在前三週齡內、最佳地在前兩種週齡之間具有SIV感染。

術語「減少」意指，與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，早期SIV感染減少至少10%、更佳地至少20%、仍更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、仍更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、仍更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、仍更佳地至少90%及最佳地至少95%及最佳地100%。

在本發明之另一態樣中，該個體係選自由豬、牛、貓及狗組成之列表。

在本發明之一態樣中，投與免疫原性組合物一次。

應理解，單一劑量僅投與一次。如實例中所展示，如本文所提供之免疫原性組合物已證實在向有需要之個體投與單一劑量之後較為有效。

在本發明之一態樣中，以兩個或更多個劑量投與免疫原性組合物。

然而，可以兩個或更多個劑量投與免疫原性組合物，其中在投與第二(加強)劑量之前投與第一劑量。較佳地，在第一劑量之後至少15天投與第二劑量。更佳地，在第一劑量之後15天與40天之間投與第二劑量。甚至更佳地，在第一劑量之後至少17天投與第二劑量。仍更佳地，在第一劑量之後17天與30天之間投與第二劑量。甚至更佳地，在第一劑量之後至少19天投與第二劑量。仍更佳地，在第一劑量之後19天與25天之間投與第二劑量。最佳地，在第一劑量之後至少21天投與第二劑量。在二時次投與方案之一較佳態樣中，免疫原性組合物之第一及第二劑量係以相同量投與。較佳地，每一劑量使用上文所指定之較佳量，其中1ml劑量之第一及第二劑量最佳。除第一及第二劑量方案外，替代實施例包括其他後續劑量。舉例而言，可在該等態樣中投與第三、第四或第五劑量。較佳地，以與第一劑量相同之量投與後續第三、第四及第五劑量方案，其中各劑量之間之時間範圍與上文所提及第一及第二劑量之間之時間一致。

在本發明之另一態樣中，經鼻內投與該免疫原性組合物。

較佳地，局部或全身性投與免疫原性組合物。常用之適宜投與途徑係經口或非經腸投與，例如鼻內、靜脈內、肌內、腹膜腔內、皮下以及吸入。然而，端視化合物之性質及作用模式，亦可藉由其他途徑投與免疫原性組合物。然而，最佳地，經鼻內投與免疫原性組合物。

在本發明之一態樣中，個體係豬流感病毒母體抗體陰性。

熟習此項技術者熟知如何量測母源抗SIV抗體。

在本發明之一態樣中，將免疫原性組合物在懷孕及哺乳期間投與母豬。

有利的是，由本發明所提供之實驗數據揭示免疫原性組合物在懷孕母豬中之有效性及安全性。

因此，提供藉由以下方式針對SIV對豬接種疫苗之方法：在分娩之前向懷孕母豬投與本發明SIV疫苗至少次，較佳地在分娩之前投與兩次且最佳地在分娩之前投與三次(「重複劑量」)。然而，較佳地，在分娩之前使用本發明SIV疫苗利用該疫苗之單一劑量對懷孕母豬接種疫苗一次。然而，在向母豬投與疫苗三次時，第一投與應發生於在分娩之前50天與60天之間，較佳地在分娩之前52天與58天之間，且最佳地在分娩之前54天與56天之間。第二投與應發生於在分娩之前30天與40天之間，較佳地在分娩之前32天與38天之間，且最佳地在分娩之前34天與36天之間。最終投與應發生於在分娩之前10天與20天之間，較佳地在分娩之前12天與18天之間，且最佳地在分娩之前14天與16天之間。

另外發現，出人意料地，母體免疫性並不干擾出生後不久之小豬之成功接種疫苗，且實際上，如本文所闡述在出生之後約一個月內接種疫苗之小豬與未經接種疫苗小豬相比具有減少的與疾病有關之臨床體徵。特定而言，已展示，在小豬已於前三週齡內、在第一週齡內、在一天齡內及在前24小時齡內接種疫苗時，並不干擾小豬之成功接種疫苗。

在本發明之一態樣中，在第一月齡內向豬投與免疫原性組合物。

較佳地，擬實施免疫之豬介於1天齡至40天齡、1天齡至30天齡、1天齡至21天齡之間，更佳地，擬實施免疫之該個體介於1天齡至10天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至9天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至8天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至7天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至6天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至5天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至4天齡之間、甚至更佳地介於1天齡至3天齡之間、甚至更佳地1或2天年齡及最佳地1天齡或0天齡。

更佳地，擬實施免疫之該豬為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天齡。

有利的是，由本發明提供之實驗數據揭示免疫原性組合物在約3週齡及更幼小小豬中之有效性。

在本發明之一態樣中，在前兩週齡內向豬投與免疫原性組合物。

在本發明之一態樣中，在第一週齡內向豬投與免疫原性組合物。

在本發明之另一態樣中，在1天齡時向豬投與免疫原性組合物。

有利的是，由本發明提供之實驗數據揭示免疫原性組合物在1天齡小豬中之有效性。

在本發明之另一態樣中，在前24h齡內向豬投與免疫原性組合物。

有利的是，由本發明提供之實驗數據揭示免疫原性組合物在前24h齡內之豬中之有效性。

必須理解，前24h齡內之豬為24h齡或更幼小。較佳地，擬實施免疫之該豬介於1h齡至24h齡、2h齡至24h齡、4h齡至24h齡、6h齡至24h齡、8h齡至24h齡、10h齡至24h齡、12h齡至24h齡、14h齡至24h齡、16h齡至24h齡、18h齡至24h齡、20h齡至24h齡、22h齡至24h齡之間。更佳地，擬實施免疫之該豬為1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h齡。

在本發明之一態樣中，個體為豬流感病毒母體抗體陽性。

熟習此項技術者熟知如何量測母源抗SIV抗體。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²pfu(蝕斑形成單位)至約10⁸pfu/劑量、較佳地約10³pfu至約10⁷pfu/劑量之量、甚至更佳地以約10⁴pfu至約10⁷pfu/劑量之量、最佳地以約10⁴pfu至約10⁶pfu/劑量之量包括豬流感之經改質活的H1病毒或本發明H1N1 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²、5×10²、10³、5×10³、10⁴、5×10⁴、10⁵、5×10⁵、10⁶、5×10⁶、10⁷、5×10⁷或10⁸pfu/劑量之量包括豬流感之經改質活的H1病毒或本發明H1N1 SIV。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²pfu(蝕斑形成單位)至約10⁸pfu/劑量、較佳地約10³pfu至約10⁷pfu/劑量之量、甚至更佳地以約10⁴pfu至約10⁷pfu/劑量之量、最佳地以約10⁴pfu至約10⁶pfu/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3病毒或本發明H3N2 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²、5×10²、10³、5×10³、10⁴、5×10⁴、10⁵、5×10⁵、10⁶、5×10⁶、10⁷、5×10⁷或10⁸pfu/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3病毒或本發明H3N2 SIV。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²pfu(蝕斑形成單位)至約10⁸pfu每一組份/劑量、較佳地約10³pfu至約10⁷pfu每一組份/劑量之量、甚至更佳地以約10⁴pfu至約10⁷pfu每一組份/劑量之量、最佳以約10⁴pfu至約10⁶pfu每一組份/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3及H1病毒或本發明之H1N1及H3N2 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約10²、5×10²、10³、5×10³、10⁴、5×10⁴、10⁵、5×10⁵、10⁶、5×10⁶、10⁷、5×10⁷或10⁸pfu每一組份/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3及H1病毒或本發明之H1N1及H3N2 SIV。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1至約10 log₁₀ FAID₅₀/ml(螢光抗體感染劑量)/劑量、較佳地約2至約8 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、較佳地以約2至約7 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、更佳地以約2至約6 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、甚至更佳地以約2至約5 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、最佳以約2至約4 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量包括豬流感之經改質活的H1病毒或本發明H1N1 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量包括豬流感之經改質活的H1病毒或本發明H1N1 SIV。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1至約10 log₁₀ FAID₅₀/ml(螢光抗體感染劑量)/劑量、較佳地約2至約8 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、較佳地以約2至約7 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、更佳地以約2至約6 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、甚至更佳地以約2至約5 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量、最佳地以約2至約4 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3病毒或本發明H3N2 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3病毒或本發明H3N2 SIV。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1至約10 log₁₀ FAID₅₀/ml(螢光抗體感染劑量)每一組份/劑量、較佳地約2至約8 log1₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量、較佳地以約2至約7 log₁₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量、更佳地以約2至約6 log₁₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量、甚至更佳地以約2至約5 log₁₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量、最佳地以約2至約4 log₁₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3及H1病毒或本發明之H1N1及H3N2 SIV。更佳地，本發明之二價免疫原性組合物以約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或log₁₀ FAID₅₀/ml每一組份/劑量之量包括豬流感之經改質活的H3及H1病毒或本發明之H1N1及H3N2。

在本發明之一態樣中，與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

術語「減小(reducing、reduced、reduction)」或「降低」意指，與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，效能參數(重量損失、病毒負荷、肺病灶、病毒脫落、直腸溫度)減低至少10%、較佳地至少20%、更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、甚至更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、甚至更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、甚至更佳地至少90%、甚至更佳地至少95%及最佳地100%。熟習此項技術者熟習如何量測效能參數之改良。

有利的是，由本發明提供之實驗數據揭示免疫原性組合物藉由降低病毒負荷、減小肺病灶及減少病毒脫落所達成之有效性。

在本發明之一態樣中，與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

熟習此項技術者已熟知術語「病毒負荷」。術語病毒負荷在本文中可與術語病毒效價互換使用。病毒負荷或病毒效價係活動性病毒感染之嚴重程度之量度，且可藉由熟習此項技術者已知之方法來測定。該測定可基於(例如)藉由至病毒蛋白之抗體結合來檢測病毒蛋白及另外或另一選擇為藉由擴增方法(例如RT-PCR)來檢測病毒核酸。藉由核酸擴增方法監測血漿中之病毒體相關性病毒RNA係廣泛用於評價逆轉錄病毒疾病之狀態及進展及評估預防性及治療性干預之有效性之參數。可藉由估計所涉及體液中之活病毒量(例如RNA拷貝數/毫升血樣血漿)來計算實例性病毒負荷或病毒效價。

在本發明之一態樣中，治療或預防使得與相同物種之未經治療對照組之動物相比病毒負荷期縮短。

在本發明之一態樣中，治療或預防使得自刺激或感染之後第5天病毒脫落會減少。

在本發明之另一態樣中，治療或預防使得自刺激或感染之後第1天病毒脫落會減少。

在本發明之另一態樣中，治療或預防使得自刺激或感染之後第2天病毒脫落會減少。

有利的是，由本發明提供之實驗數據揭示在刺激之後接受本文所闡述免疫原性組合物之豬中SIV病毒的脫落會減少。

較佳地，與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，自使用SIV刺激或感染之後第5天、更佳地自刺激或感染之後第4天、更佳地自刺激或感染之後第3天及最佳地自刺激或感染之後第1或2天SIV病毒之脫落會減少。

術語「病毒脫落減少」意指，與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，脫落減少至少10%、較佳地至少20%、更佳地至少30%、甚至更佳地至少40%、甚至更佳地至少50%、甚至更佳地至少60%、甚至更佳地至少70%、甚至更佳地至少80%、甚至更佳地至少90%、甚至更佳地至少95%及最佳地100%。熟習此項技術者熟知如何量測脫落減小。

在本發明之一態樣中，與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，使用較低濃度之如本文所闡述之免疫原性組合物對個體實施免疫。

術語「較低濃度」意指，在與豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒或豬流感病毒之單價NS1缺失突變體相比時，如本文所闡述豬流感之經改質活的H3及H1病毒或H1N1及豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體在本發明之二價免疫原性組合物中的濃度減低大約1倍至大約100倍、大約5倍至大約80倍或大約20倍至大約80倍或1、2、3、4、5、7、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、72、75、80、85、90、95或100倍。熟習此項技術者熟知如何量測病毒濃度。實例係蝕斑形成單位分析、焦點形成分析、終點稀釋分析(例如TCID50或FAID50)、蛋白質分析、血球凝集分析、雙金雞寧酸分析、單一放射免疫擴散分析、透射電子顯微術、可調式阻性脈衝感測、流式細胞術、定量聚合酶鏈式反應、酶聯免疫吸附分析及諸如此類。

較佳地，本發明之二價免疫原性組合物分別以約1至約4 log₁₀ FAID₅₀/ml(螢光抗體感染劑量)/劑量、約2至約4 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量、最佳地約2至約3 log₁₀ FAID₅₀/ml/劑量之量包括本發明之豬流感之經改質活的H3及H1病毒或SIV的H1N1 NS1及H3N2 NS1缺失突變體。

本文所闡述之二價免疫原性組合物係協同組合，其以有效誘導保護個體免受有毒SIV菌株之後續刺激之量包括：i)如本文所闡述豬流感之經改質活的H1病毒或豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體及ii)如本文所闡述豬流感之經改質活的H3病毒或豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。特定而言，與僅包括豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒或豬流感病毒之NS1缺失突變體之免疫原性組合物相比，需要較低濃度之如本文所闡述之二價免疫原性組合物來誘導個體保護。因此，與豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒或豬流感病毒之NS1缺失突變體相比，包括豬流感之經改質活的H3及H1病毒或豬流感病毒之H1N1 NS1及H3N2 NS1缺失突變體之二價疫苗產生較大保護。

在本發明之一態樣中，豬流感之經改質活的H3病毒係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感之單價經改質活的H3病毒係如本文所闡述之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

本文所提供之實驗數據中展示，豬流感之經改質活的H3及H1病毒或豬流感病毒之H1N1 NS1及H3N2缺失突變體一起之組合令人吃驚地其效力大於個別組份之聚集效應。

本發明二價疫苗之協同效應極其清楚地顯示為其能夠在以遠低於單價H1N1疫苗所需含量之內容物含量投與時提供保護。本發明二價疫苗以僅3.13 log₁₀ FAID₅₀/mL之總劑量投與即提供保護，與之相比，單價疫苗在以4.99 log₁₀ FAID₅₀/mL之劑量(約大於二價疫苗之總劑量72倍)投與之後展示類似保護程度。此外，Vincent等人，2012(Journal of Virology 19：10597-10605)已展示，1×10⁶ TCID₅₀(對應於6 log₁₀ FAID₅₀)之單價H3N2會提供保護(約大於二價疫苗之總劑量741倍)。因此，二價疫苗中之H1及H3組份之濃度顯著小於單價疫苗中所需之濃度。此係令人吃驚之意外協同效應。

另外亦存在證據證實在考慮刺激病毒之量時二價疫苗之協同效應。單價疫苗即使以較高劑量投與亦對小於相同刺激分離株大約3倍之刺激僅提供類似保護程度。

自該等研究中所生成之數據得出以下的結論：當疫苗以二價產物投與時與其作為單價產物投與時相比遠低之抗原劑量下，自鼻道脫落之病毒量會減少、肺部呈病毒分離株陽性會減少且主要效能參數泛總肺病灶會減少。總而言之，數據指示，單一鼻內劑量之二價疫苗比在該等研究中幼稚豬中所使用之較高劑量單價疫苗更為有效。

本發明協同組合較為有利，此乃因不良效應之機會得以減低。另外，含有低於個別組份之濃度之二價疫苗之製造亦明顯較為容易且較為便宜。

此外，除上述協同濃度效應外，存在另一令人吃驚之有利協同效應。H3組份與H1組份協同作用。二價疫苗之協同效應極其清楚地顯示為其能夠提供對於異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株之保護。因此，存在交叉保護效應。此效應另外具有協同性，此乃因本發明二價疫苗係如上文所闡述以遠低於單價疫苗所需含量之內容物含量投與。

在本發明之一態樣中，豬流感病毒之單價NS1缺失突變體係豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感病毒之單價NS1缺失突變體係如本文所闡述之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感病毒之單價NS1缺失突變體係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

在本發明之一態樣中，豬流感病毒之單價NS1缺失突變體係如本文所闡述之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

本發明亦係關於如本文所闡述之免疫原性組合物之用途，其用於治療及/或預防個體之豬流感病毒感染。

本發明亦係關於如本文所闡述之免疫原性組合物之用途，其用於製造藥劑。

本發明亦係關於如本文所闡述之免疫原性組合物，其用作藥劑。

本發明亦係關於如本文所闡述之免疫原性組合物，其用於治療及/或預防個體之豬流感病毒感染之方法。

本發明提供下列實施例：

1.一種免疫原性組合物，其包括：a)豬流感之經改質活的H3病毒，及b)豬流感之經改質活的H1病毒。

2.如實施例1之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的 H3及H1病毒具有選自由以下組成之群之N(神經胺酸酶)亞型：N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8、N9及N10。

3.如實施例1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒係豬流感之H3N2及/或豬流感之該經改質活的H1病毒係豬流感病毒之H1N1。

4.如實施例1至3中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒在NS1基因中具有一或多種突變。

5.如實施例1至4中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒在該NS1基因內具有缺失。

6.如實施例1至5中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒係減毒豬流感病毒。

7.如實施例1至6中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒係誘變病毒或重組病毒。

8.如實施例1至7中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒經基因改造。

9.如實施例1至8中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有受損干擾素拮抗劑表型。

10.如實施例1至9中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒在該NS1蛋白質之羧基末端處具有一或多種突變。

11.如實施例1至10中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有羧基末端截短NS1蛋白質。

12.如實施例1至11中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

13.如實施例1至12中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質。

14.如實施例1至11中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有自NS1之羧基末端之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基截短NS1蛋白質。

15.如實施例1至14中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒具有來自A/豬/Texas/4199-2/98之NS1基因或蛋白質。

16.如實施例1至15中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

17.如實施例1至16中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

18.如實施例1至15中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒編碼自NS1之羧基末端之羧基缺失91、92、93或94個胺基酸殘基末端截短NS1蛋白質。

19.如實施例1至18中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒係A/豬/Texas/4199-2/98。

20.如實施例1至19中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒係TX/98/del 126。

21.如實施例1至20中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒含有來自A/豬/Texas/4199-2/98之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M且該NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199- 2/98。

22.如實施例1至21中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質。

23.如實施例1至22中任一項之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體，其中豬流感之該經改質活的H3病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

24.如實施例1至23中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係嵌合病毒。

25.如實施例1至24中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括H3 SIV菌株之羧基末端截短NS1、較佳地H3N2 SIV菌株之羧基末端截短NS1。

26.如實施例1至25中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

27.如實施例1至26中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

28.如實施例1至25中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

29.如實施例1至28中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係A/豬/Texas/4199-2/98。

30.如實施例1至29中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括來自H1N1亞型之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

31.如實施例1至30中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括來自A/豬/Minnesota/37866/1999之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

32.如實施例1至31中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒含有來自A/豬/Minnesota/37866/1999(H1N1)之HA及NA及來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之PB2、PB1、PA、NP、M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)。

33.如實施例1至32中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係A/豬/Minnesota/37866/1999及TX/98/del 126之嵌合物。

34.如實施例1至33中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H1病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有大於70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

35.如實施例1至34中任一項之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體，其中豬流感之該經改質活的H1病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

36.如實施例1至35中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物經調配用於單一劑量投與。

37.如實施例1至36中任一項之免疫原性組合物，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

38.如實施例1至37中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於在懷孕及哺乳期間之母豬較為安全。

39.如實施例1至38中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於前兩週齡內、較佳地第一週齡內之豬較為安全。

40.如實施例1至39中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於第0天齡之豬較為安全。

41.如實施例1至40中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物進一步包括醫藥上可接受之載劑。

42.如實施例1至41中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

43.如實施例1至41中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

44.如實施例1至41中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

45.如實施例1至44中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物係疫苗。

46.如實施例1至45中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物係二價疫苗。

47.如實施例1至46中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物有效治療及/或預防有需要之個體中由SIV引起之臨床體徵。

48.如實施例1至47中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒係協同性地一起作用。

49.如實施例1至48中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比減小。

50.如實施例1至49中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗異源刺激之保護。

51.如實施例1至50中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗H1刺激之保護。

52.如實施例1至51中任一項之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗H1N1刺激之保護。

53.一種對個體實施免疫之方法，其包括向該個體投與如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物。

54.一種治療或預防有需要之個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物。

55.一種與相同物種之未經免疫對照組之個體相比會減少有需要個體中病毒脫落之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物。

56.一種與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種免疫化對照組之個體相比會減少有需要個體中病毒脫落的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物。

57.一種對具有抗SIV抗體之個體接種疫苗之方法，其包括向該動物投與單一有效劑量之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物之步驟。

58.一種預防或減少個體之早期SIV感染之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物。

59.如實施例53至58中任一項之方法，其中該個體選自由豬、牛、貓及狗組成之列表。

60.如實施例53至59中任一項之方法，其中投與該免疫原性組合物一次。

61.如實施例53至59中任一項之方法，其中以兩個或更多個劑量投與該免疫原性組合物。

62.如實施例53至61中任一項之方法，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

63.如實施例53至62中任一項之方法，其中該個體係豬流感病毒母體抗體陰性。

64.如實施例53至63中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與在懷孕及哺乳期間之母豬。

65.如實施例53至64中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第一個月齡內之豬。

66.如實施例53至65中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與前兩週齡內、較佳地第一週齡內之豬。

67.如實施例53至66中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第1天齡之豬。

68.如實施例53至67中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與前24h齡內之豬。

69.如實施例53至62及64至68中任一項之方法，其中該個體呈豬流感病毒母體抗體陽性。

70.如實施例53至69中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log1₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

71.如實施例53至69中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log1₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

72.如實施例53至69中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

73.如實施例53至72中任一項之方法，其中與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

74.如實施例53至72中任一項之方法，其中與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

75.如實施例53至74中任一項之方法，其中該治療或預防使得與相同物種之未經治療對照組之動物相比病毒負荷期縮短。

76.如實施例53至75中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第5天病毒脫落會減少。

77.如實施例53至76中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第1天或第2天病毒脫落會減少。

78.如實施例53至77中任一項之方法，其中與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該個體係使用較低濃度之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物實施免疫。

79.如實施例56、74或78中任一項之方法，其中豬流感之該單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

80.如實施例79之方法，其中豬流感病毒之該H1N1 NS1缺失突變體係如實施例1至52之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

81.如實施例56、74或78中任一項之方法，其中豬流感之該單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

82.如實施例81之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體係如實施例1至52之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

83.如實施例53至82中任一項之方法，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒係協同性地一起作用。

84.如實施例53至83中任一項之方法，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比係減低的。

85.如實施例53至84中任一項之方法，其中豬流感之該經改質活的H3病毒會增加對抗異源刺激之保護。

86.如實施例53至85中任一項之方法，其中豬流感之該經改質活的H3病毒會增加對抗H1刺激之保護。

87.如實施例53至86中任一項之方法，其中豬流感之該經改質活的H3病毒會增加對抗H1N1刺激之保護。

88.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於對個體實施免疫之方法中，該方法包括向該個體投與該免疫原性組合物。

89.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於治療或預防有需要個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法中，該方法包括向該個體投與治療有效量之該免疫原性組合物。

90.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於與相同物種之未經免疫對照組之個體相比會減少有需要個體中之病毒脫落之方法中，該方法包括向該個體投與治療有效量之該免疫原性組合物。

91.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種免疫化對照組之個體相比會減少有需要個體中病毒脫落的方法中，該方法包括向該個體投與治療有效量之該免疫原性組合物。

92.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於對具有抗SIV抗體之個體接種疫苗之方法中，該方法包括向該動物投與單一有效劑量之該免疫原性組合物之步驟。

93.如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物，其用於預防或減少個體中之早期SIV感染之方法中，該方法包括向該個體投與治療有效量之該免疫原性組合物。

94.如實施例88至93中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該個體係選自由豬、牛、貓及狗組成之列表。

95.如實施例88至94中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物係投與一次。

96.如實施例88至94中任一項所使用之免疫原性組合物，其中以兩個或更多個劑量投與該免疫原性組合物。

97.如實施例88至96中任一項所使用之免疫原性組合物，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

98.如實施例88至97中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該個體係豬流感病毒母體抗體陰性。

99.如實施例88至98中任一項所使用之免疫原性組合物，其中將該免疫原性組合物投與在懷孕及哺乳期間之母豬。

100.如實施例88至99中任一項所使用之免疫原性組合物，其中將該免疫原性組合物投與第一月齡內之豬。

101.如實施例88至100中任一項所使用之免疫原性組合物，其中將該免疫原性組合物投與前兩週齡內、較佳地第一週齡內之豬。

102.如實施例88至101中任一項所使用之免疫原性組合物，其中將該免疫原性組合物投與第1天齡豬。

103.如實施例88至102中任一項所使用之免疫原性組合物，其中將免疫原性組合物投與前24h齡內之豬。

104.如實施例88至97及99至103中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該個體呈豬流感病毒母體抗體陽性。

105.如實施例88至104中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

106.如實施例88至104中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

107.如實施例88至104中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒及/或2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H3病毒。

108.如實施例88至107中任一項所使用之免疫原性組合物，其中與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

109.如實施例88至108中任一項所使用之免疫原性組合物，其中與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

110.如實施例88至108中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該治療或預防使得與相同物種之未經治療對照組之動物相比病毒負荷期縮短。

111.如實施例88至110中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第5天病毒脫落會減少。

112.如實施例88至111中任一項所使用之免疫原性組合物，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第1天或第2天病毒脫落會減少。

113.如實施例88至112中任一項所使用之免疫原性組合物，其中與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該個體係使用較低濃度之如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物實施免疫。

114.如實施例91、109或113中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

115.如實施例114所使用之免疫原性組合物，其中豬流感病毒之該H1N1 NS1缺失突變體係如實施例1至52之豬流感病毒之H1N1 NS1缺失突變體。

116.如實施例91、109或113中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該單價經改質活的H3或H1病毒係豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

117.如實施例116所使用之免疫原性組合物，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體係如實施例1至52之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

118.如實施例88至117中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒係協同性地一起作用。

119.如實施例88至118中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3及H1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比減小。

120.如實施例88至119中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗異源刺激之保護。

121.如實施例88至120中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗H1刺激之保護。

122.如實施例88至121中任一項所使用之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3病毒增加了對抗H1N1刺激之保護。

123.如實施例1至52中任一實施例之免疫原性組合物，其用作藥劑。

124.一種如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物之用途，其用於治療及/或預防個體之豬流感病毒感染。

125.一種如實施例1至52中任一項之免疫原性組合物之用途，其用於製造藥劑。

126.一種豬流感之經改質活的H1病毒。

127.如實施例1之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒具有選自由以下組成之群之N(神經胺酸酶)亞型：N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8、N9及N10。

128.如實施例126或127之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係豬流感病毒之H1N1。

129.如實施例126至128中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒在NS1基因中具有一或多種突變。

130.如實施例126至129中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒在NS1基因內具有缺失。

131.如實施例126至130中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係嵌合病毒。

132.如實施例126至131中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括H3 SIV菌株、較佳地H3N2 SIV菌株之羧基末端截短NS1。

133.如實施例126至132中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

134.如實施例126至132中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

135.如實施例126至132中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒編碼自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

136.如實施例126至135中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒之該NS1基因或蛋白質係來自A/豬/Texas/4199-2/98。

137.如實施例126至136中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括來自H1N1亞型之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

138.如實施例126至137中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒包括來自A/豬/Minnesota/37866/1999之血球凝集素及神經胺酸酶基因區段。

139.如實施例126至138中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒含有來自A/豬 /Minnesota/37866/1999(H1N1)之HA及NA及來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之PB2、PB1、PA、NP、M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)。

140.如實施例126至139中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒係A/豬/Minnesota/37866/1999及TX/98/del 126之嵌合體。

141.如實施例126至140中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有大於70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

142.如實施例126至141中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒，其中豬流感之該經改質活的H1病毒a)包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b)包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c)包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

143.一種免疫原性組合物，其包括如實施例126至142中任一項之豬流感之經改質活的H1病毒。

144.如實施例143之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物經調配用於單一劑量投與。

145.如實施例143或144之免疫原性組合物，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

146.如實施例143至145中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於在懷孕及哺乳期間之母豬較為安全。

147.如實施例143至146中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於前兩週齡內、較佳地第一週齡內之豬較為安全。

148.如實施例143至147中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物對於第一天齡內之豬較為安全。

149.如實施例143至148中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物進一步包括醫藥上可接受之載劑。

150.如實施例143至149中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

151.如實施例143至149中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

152.如實施例143至149中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

153.如實施例143至152中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物係疫苗。

154.如實施例143至153中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物有效治療及/或預防有需要之個體中由SIV引起之臨床體徵。

155.一種對個體實施免疫之方法，其包括向該個體投與如實施例143至154中任一項之免疫原性組合物。

156.一種治療或預防有需要之個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例143至154中任一項之免疫原性組合物。

157.一種與相同物種之未經免疫對照組之個體相比會減少有需要個體中病毒脫落之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例143至154中任一項之免疫原性組合物。

158.一種對具有抗SIV抗體之個體接種疫苗之方法，其包括向該動物投與單一有效劑量之如實施例143至154中任一項之免疫原性組合物之步驟。

159.一種預防或減少個體之早期SIV感染之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如實施例143至154中任一項之免疫原性組合物。

160.如實施例155至159中任一項之方法，其中該個體係選自由豬、牛、貓及狗組成之列表。

161.如實施例155至160中任一項之方法，其中投與該免疫原性組合物一次。

162.如實施例155至160中任一項之方法，其中以兩個或更多個劑量投與該免疫原性組合物。

163.如實施例155至162中任一項之方法，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

164.如實施例155至163中任一項之方法，其中該個體係豬流感病毒母體抗體陰性。

165.如實施例155至164中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與在懷孕及哺乳期間之母豬。

166.如實施例155至165中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第一月齡內之豬。

167.如實施例155至166中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與前兩週齡嗎、較佳地第一週齡內之豬。

168.如實施例155至167中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第1或2天齡之豬。

169.如實施例155至168中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第一天齡內之豬。

170.如實施例155至163及165至169中任一項之方法，其中該個體呈豬流感病毒母體抗體陽性。

171.如實施例155至170中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

172.如實施例155至170中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

173.如實施例155至170中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感之該經改質活的H1病毒。

174.如實施例155至173中任一項之方法，其中與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

175.如實施例155至174中任一項之方法，其中該治療或預防使得與相同物種之未經治療對照組之動物相比病毒負荷期縮短。

176.如實施例155至175中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第5天病毒脫落會減少。

177.如實施例155至176中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第1或2天病毒脫落會減少。

178.一種對個體實施免疫之方法，其包括在前兩週齡內向個體投與包括豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體之免疫原性組合物。

179.一種治療或預防有需要之個體中由豬流感病毒引起之臨床體徵之方法，該方法包括在前兩週齡內向該個體投與治療有效量之包括豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體之免疫原性組合物。

180.一種與相同物種之未經免疫對照組之個體相比會減少有需要個體中病毒脫落之方法，該方法包括在前兩週齡內向該個體投與治療有效量之包括豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體之免疫原性組合物。

181.一種對具有抗SIV抗體之個體接種疫苗之方法，其包括在前兩週齡內向該動物投與單一有效劑量之包括豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體之免疫原性組合物的步驟。

182.一種預防或減少個體之早期SIV感染之方法，該方法包括在前兩週齡內向該個體投與治療有效量之包括豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體之免疫原性組合物。

183.如實施例178至182中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

184.如實施例178至182中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體編碼包括NS1胺基酸1至126之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。

185.如實施例178至182中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體編碼自NS1之羧基末端缺失91、92、93或94個胺基酸殘基之羧基末端截短NS1蛋白質。

186.如實施例178至185中任一項之方法，其中流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體豬之NS1基因或蛋白質係來自A/豬/Texas/4199-2/98。

187.如實施例178至186中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體係TX/98/del 126。

188.如實施例178至187中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體含有來自A/豬/Texas/4199-2/98之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98。

189.如實施例178至188中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體係闡述於WO 2006/083286 A2中且指定為TX/98/del126之豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

190.如實施例178至189中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或包括胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質。

191.如實施例178至190中任一項之方法，其中豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或具有與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。

192.如實施例178至191中任一項之方法，其中該個體選自由豬、牛、貓及狗組成之列表。

193.如實施例178至192中任一項之方法，其中投與該免疫原性組合物一次。

194.如實施例178至192中任一項之方法，其中以兩個或更多個劑量投與該免疫原性組合物。

195.如實施例178至194中任一項之方法，其中經鼻內投與該免疫原性組合物。

196.如實施例178至195中任一項之方法，其中該個體係豬流感病毒母體抗體陰性。

197.如實施例178至196中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與在懷孕及哺乳期間之母豬。

198.如實施例178至197中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第一週齡內之豬。

199.如實施例178至198中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第1天或第2天齡之豬。

200.如實施例178至199中任一項之方法，其中將該免疫原性組合物投與第一天齡內之豬。

201.如實施例178至195及197至200中任一項之方法，其中該個體呈豬流感病毒母體抗體陽性。

202.如實施例178至201中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體。

203.如實施例178至201中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至6 log₁₀豬流感病毒之該H3N2 NS1缺失突變體。

204.如實施例178至201中任一項之方法，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至4 log₁₀豬流感病毒之H3N2 NS1缺失突變體。

205.如實施例178至204中任一項之方法，其中與相同物種之未經免疫對照組之個體相比，該方法產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。

206.如實施例178至205中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第5天病毒脫落會減少。

207.如實施例178至206中任一項之方法，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第1天病毒脫落會減少。

208.如實施例178至207中任一項之方法，其中該方法提供針對異源刺激之保護。

209.如實施例178至208中任一項之方法，其中該方法提供針對H1刺激之保護。

210.如實施例178至209中任一項之方法，其中該方法提供針對H1N1刺激之保護。

實例

下列實例僅意欲闡釋本發明。其不應以任一方式限制申請專利範圍之範圍。

實例1： 用於繁殖經改質活的疫苗分離株且用於調配二價疫苗之方法。

可使用不同系統來繁殖經改質活的疫苗分離株。在此實例中，闡述兩種用於生成抗原且最終生成二價疫苗之所評估不同系統之材料及方法。

二價疫苗中經改質活的疫苗分離株之一般特徵。

使用反向基因學，生成各自編碼羧基截短NS1蛋白質之H1N1 NS1突變體及H3N2 NS1突變體。H3N2 NS1突變體已闡述於Solórzano等人，2005(J Virol 79：7535-7543)、Vincent等人，2012(Journal of Virology 19：10597 to 10605)及WO 2006/083286 A2中。

對於H1N1而言，將來自親代H1N1(A/豬/Minnesota/37866/1999)之血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA)基因與來自(A/豬/Texas/4199-2/98)之PB2、PB1、PA、NP、M及NS-126基因進行組合。所生成H1N1 NS1突變體由此含有2種來自親代H1N1之基因及6種來自親代H3N2之基因。

對於H3N2而言，組合來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M及NS-126基因，並且將所得病毒指定為TX98 H3N2 NS1 SIV。

雞胚蛋中經改質活的疫苗分離株之生長及二價疫苗之調配。

藉由將一種或其他經改質活的病毒注射至尿囊液中來接種(尿囊接種)6至7天之雞胚蛋。使用單獨預先標記蛋群組來培養H1N1 NS1分離株及H3N2 NS1分離株。在使用各別病毒接種之後，將蛋培育三至四天，然後冷凍至少4小時，隨後收穫含有病毒之尿囊液。等分試樣係由含有高濃度之各別經改質活的病毒之所收穫尿囊液組成。將所有含有病毒之等分試樣儲存於-40℃下或低於-40℃下，直至需要其用於疫苗調配為止。

在疫苗調配之前，將每一含有病毒之尿囊液之等分試樣解凍且實施滴定以測定病毒濃度，從而可作出疫苗調配之計畫。測定病毒原料之病毒量後，在接種疫苗之前，可將兩種分離株以及磷酸鹽緩衝鹽水直接摻和一起，以達到用於動物研究所期望的內容物。

基於細胞之組織培養液中之經改質活的疫苗分離株之生長及二價疫苗的調配。

藉由在更換培養基且添加含胰蛋白酶培養基之後，向器皿中添加一種或其他經改質活的病毒來接種含有6至8天齡EVERO細胞培養液之器皿。使用單獨預先標記器皿群組來培養H1N1分離株及H3N2分離株。在使用其各別病毒接種之後，將器皿培育最長7天，然後收穫。等分試樣係由含有高濃度之各別經改質活的病毒之所收穫培養基組成。將所有病毒等分試樣儲存於-40℃下或低於-40℃，直至需要其進行疫苗調配為止。

在疫苗調配之前，將每一含病毒培養基之等分試樣解凍且實施滴定以測定病毒濃度，從而可作出疫苗調配之計畫。測定病毒原料之病毒量後，可將兩種分離株以及穩定劑(蔗糖明膠穩定劑)及磷酸鹽緩衝鹽水(僅視需要)直接摻和一起，然後凍乾。控制每一病毒原料之體積以達到用於將來動物研究所期望的內容物含量。在摻和後，將二價疫苗材料無菌轉移至無菌玻璃瓶中，然後將瓶載入凍乾器中。然後使凍乾器經受冷凍乾燥循環以製備儲存於約4℃下直至用於動物研究中之疫苗。

在即將接種疫苗之前，使用適當體積之磷酸鹽緩衝鹽水將含於玻璃瓶內之凍乾二價疫苗進行再水合，以達成用於動物研究之期望效價。

實例2： 單一不同劑量經鼻內投與1-6天齡呈母體免疫性陰性反應豬隻導致鼻 中病毒脫落減少、來自肺之分離株減少及肺病灶減少

研究設計考慮、疫苗調配、投藥資訊及效能彙整。

研究1

在研究之第0天，使用蛋繁殖疫苗病毒以表1中所指示之內容物含量對小豬(按組安置於中單獨屋中)施打疫苗。在接種疫苗之前，一如藉由健康檢查所測定，僅約一週齡或更小之健康豬才容許招募至研究中。使用2mL個別疫苗藉由施加1mL至每一鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

在刺激之前，將小豬斷奶且移動至接種室中，然後約於研究之第36天，使用2mL異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株以7.10 log₁₀/mL之效價藉由氣管內接種方式刺激麻醉下的小豬。每天自刺激處收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分，並在屍體剖檢時收集肺組織。藉由其減少鼻拭子中及來自肺組織之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中之肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表2中所顯示，一如藉由來自鼻拭子及來自肺組織之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，以較高劑量及較低劑量接種疫苗之動物得以保護而免受異源刺激影響(當與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行相比較時)。

表2.研究1：疫苗效能彙整

自此研究中所生成之數據得出結論，自鼻孔脫落之病毒量會減少，肺中病毒負荷會減少且主要效能參數泛總肺病灶會減少，其綜合指示，使用此研究中所使用兩種內容物含量之單一鼻內劑量對於在一至六天齡內接種疫苗之幼稚豬較為有效。

研究2

在研究之第0天，使用重構凍乾組織培養液(EVERO細胞)繁殖之疫苗病毒以表3中所指示之內容物含量對小豬(按組安置於單獨屋中)接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅約一週齡或更小之健康豬才容許招募至研究中，。使用1mL個別疫苗藉由將完整體積施加至一個鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

在刺激之前，將小豬斷奶且移動至接種室中，然後約於研究之第25天，使用2mL異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株以7.96 log₁₀/mL之效價藉由氣管內接種在麻醉下刺激小豬。每天自刺激收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分且在屍體剖檢時收集肺灌洗液。藉由其減少鼻拭子中及來自肺灌洗液之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中之肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表4中所顯示，一如藉由來自鼻拭子及來自肺灌洗液之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，以所有劑量接種疫苗之動物得以保護而免受異源刺激影響(在與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行比較時)。

自此研究中所生成之數據得出結論，自鼻孔脫落之病毒量會減少，肺部呈病毒分離株陽性會減少且主要效能參數泛總肺病灶會減少，其綜合指示，使用此研究中所使用三種內容物含量之單一鼻內劑量對於在一至六天齡內接種疫苗之幼稚豬較為有效。

研究3

在研究之第0天，使用重構凍乾組織培養液(EVERO細胞)繁殖之疫苗病毒以表5中所指示之內容物含量對小豬(按組安置於單獨屋中)接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅約一週齡或更小之健康豬才容許招募至研究中。使用1mL個別疫苗藉由將完整體積施加至一個鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

在刺激之前，將小豬斷奶且移動至接種室中，然後約於研究之第30天，使用2mL異源H3N2(A/豬/Nebraska/97901-10/2008)SIV分離株以6.09 log₁₀/mL之效價藉由氣管內接種在麻醉下刺激小豬。每天自刺激收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分且在屍體剖檢時收集肺灌洗液。藉由其減少鼻拭子中及來自肺灌洗液之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中之肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表6中所展示，一如藉由來自鼻拭子及來自肺灌洗液之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，以所有劑量接種疫苗之動物得以保護而免受異源刺激影響(在與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行比較時)。

實例3： 對三週齡母體免疫性陰性豬之單一劑量鼻內投與

研究設計考慮、疫苗調配、投藥資訊及效能彙整。

研究4

在研究之第0天，使用蛋繁殖疫苗病毒以表7中所指示之內容物含量對豬(按組安置於單獨屋中)接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅約三週齡之健康豬才容許招募至研究中。使用4mL疫苗藉由將2mL施加至每一鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

約於研究之第28天，使用2mL異源H1N1(A/豬/Indiana/1726/88)SIV分離株以6.63 log₁₀/mL之效價或使用2mL異源H3N2(A/豬/Nebraska/97901-10/2008)SIV分離株以7.58 log₁₀/mL之效價藉由氣管內接種在麻醉下刺激小豬。每天自刺激收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分且在屍體剖檢時收集肺組織。藉由其減少鼻拭子中及來自肺組織之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表8中所展示，一如藉由來自鼻拭子及來自肺組織之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，接種疫苗之動物得以保護而免受異源H1N1刺激影響(在與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行對比時)。對於經肌內使用相同疫苗接種疫苗之豬而言，看到類似結果(數據未展示)。亦在表8中展示，一如藉由來自肺組織之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，接種疫苗之動物得以保護而免受異源H3N2刺激影響(在與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行對比時)。自刺激之日(在刺激之前)直至屍體剖檢之日收集鼻拭子。因並無二價接種疫苗動物在H1N1刺激之後脫落病毒且未經接種疫苗動物在刺激後兩天才開始脫落(數據未展示)，所以二價疫苗可防止經接種疫苗豬隻在刺激後兩天之刺激病毒的脫落。

自此研究中所生成之數據得出結論，在H1N1後自鼻孔脫落之病毒量會減少，且肺中之病毒負荷會減少以及在使用任一病毒刺激之後主要效能參數泛總肺病灶會減少。以此研究中所使用內容物含量給予之單一鼻內劑量對於在三週齡時接種疫苗之幼稚豬較為有效。

實例4： 單一劑量鼻內投與在懷孕期間之安全性

研究設計考慮、疫苗調配物、投藥資訊及安全性彙整。

研究5

約於研究之第-28天，使用蛋繁殖疫苗病毒以表9中所指示之內容物含量對8個小母豬接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅健康懷孕小母豬容許招募至研究中。使用2mL疫苗藉由將1mL施加至每一鼻孔中來對每一小母豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

在接種疫苗之後，藉由每天觀察且記錄每一接種疫苗小母豬之臨床體徵來評估疫苗之安全性。對於接種疫苗時與分娩時之間之任一小母豬而言，並未記錄有重大臨床體徵。然而，在三隻小母豬中記錄有一些微小臨床體徵，但並未觀察到體徵直至在接種疫苗之後第五天，且並無體徵持續超過於4天。

自此研究中所生成之數據得出結論，在以此研究中所使用之內容物含量投與小母豬時且在懷孕之大約第90天接種疫苗時，疫苗較為安全。

實例5： 單一劑量經鼻內投與1-8天齡呈母體免疫性陽性之豬隻

研究設計考慮、疫苗調配、投藥資訊及效能彙整。

研究5

約於研究之第-28天，使用蛋繁殖疫苗病毒以表1中所指示之內容物含量對8個小母豬接種疫苗以誘導母體免疫性。使用2mL疫苗藉由將1mL施加至每一鼻孔中來對每一小母豬接種疫苗。所有小母豬皆係在研究之第0天之前分娩，在第0天時使用蛋繁殖疫苗病毒以表10中所指示之內容物含量對小豬接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅約一週齡或更小之健康豬才容許招募至研究中。使用2mL個別疫苗藉由施加1mL至每一鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

在刺激之前，將小豬斷奶且移動至接種室中，然後約於研究之第42天，使用2mL異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株以7.61 log₁₀/mL之效價藉由氣管內接種在麻醉下刺激小豬。每天自刺激收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分且在屍體剖檢時收集肺灌洗液。藉由其減少鼻拭子中及來自肺灌洗液之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中之肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表11中所顯示，一如藉由來自鼻拭子及來自肺灌洗液之病毒分離株之減少以及肺病灶之減少所證實，使用二價疫苗接種疫苗之動物得以保護而免受異源刺激影響(在與在未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行對比時)。

自此研究中所生成之數據得出結論，自鼻孔脫落之病毒量會減少，肺中之病毒負荷會減少且主要效能參數泛總肺病灶會減少，其綜合指示，使用此研究中所使用兩種內容物含量之單一鼻內劑量對於一至八天齡內接種疫苗之呈母體免疫性陽性之豬隻較為有效。

實例6： 單一劑量經鼻內投與二價疫苗較單價疫苗具有利效應

研究設計考慮、疫苗調配、投藥資訊及效能彙整。

研究6及研究1

在兩個各別研究之研究之第0天，使用組織培養液(EVERO細胞)繁殖之疫苗病毒以表12中所指示之內容物含量對小豬(按組安置於單獨屋中)接種疫苗。一如藉由在接種疫苗之前之健康檢驗所測定，僅約一週齡或更小之健康豬容許招募至研究中。在研究1中，使用1mL單價疫苗藉由施加½mL至每一鼻孔中來對每一豬接種疫苗。在研究6中，使用1mL二價疫苗藉由施加全部體積至左鼻孔中來對每一豬接種疫苗。根據設施標準操作程序，針對測試動物之年齡及條件提供適當飼料比例。在整個研究中，水是隨時自由地提供給測試動物。

N/A=不適用

在兩個各別研究中之刺激之前，將小豬斷奶且移動至接種室中，然後約於研究之第25天，使用2mL異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株以7.44 log₁₀/mL(在研究6中)及7.92 log₁₀/mL(在研究1中)之效價藉由氣管內接種在麻醉下刺激小豬。每天自刺激收集鼻拭子直至屍體剖檢為止，且然後對肺病灶進行評分且在屍體剖檢時收集肺灌洗液。藉由其減少鼻拭子中及來自肺灌洗液之病毒分離株數量之能力以及其減少接種疫苗組中之肺病灶之能力來評估疫苗效能。

如表13中所顯示，研究6中使用單價疫苗接種疫苗之動物需要4.99 log₁₀ FAID₅₀/mL H1N1疫苗病毒之劑量，然後其得以保護而免受異源刺激影響。保護可藉由以下各項證實：在與在該相同研究中未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行對比時，來自鼻拭子及來自肺灌洗液之病毒分離株會減少且肺病灶會減少。

在表2中亦顯示，當以含有2.84 log₁₀ FAID₅₀/mL H3N2疫苗病毒之二價疫苗投與時，研究1中之動物僅需要2.81 log₁₀ FAID₅₀/mL H1N1疫苗病毒之劑量便可保護其免於異源刺激。保護性二價疫苗中所包含之抗原之計算總劑量為3.13 log₁₀ FAID₅₀/mL，此時將每一抗原之量加至一起。保護可藉由以下各項證實：當與在該相同研究中未接受接種疫苗之後接受刺激之豬組進行對比時，來自鼻拭子及來自肺灌洗液之病毒分離株會減少且肺病灶會減少。

本文所提供之實驗數據顯示，豬流感病毒之H1N1 NS1及H3N2缺失突變體一起之組合令人吃驚地其效力係大於個別組份之聚集效應。

本發明二價疫苗之協同效應極其清楚地顯示是當其能夠在以遠低於單價H1N1疫苗所需含量之內容物含量投與時提供保護。本發明二價疫苗以僅3.13 log₁₀ FAID₅₀/mL之總劑量投與即提供保護，與之相比，單價疫苗在以4.99 log₁₀ FAID₅₀/mL之劑量(約大於二價疫苗之總劑量72倍)投與之後才能顯示類似保護程度。此外，Vincent等人，2012(Journal of Virology 19：10597-10605)已證實，1×10⁶ TCID₅₀(對應於6 log₁₀ FAID₅₀)之單價H3N2才會提供保護(約大於二價疫苗之總劑量741倍)。因此，二價疫苗中之H1及H3組份之濃度顯著低於單價疫苗中所需之濃度。此係令人吃驚之意外協同效應。

另外亦存在證據證實在考慮攻擊病毒之量時二價疫苗之協同效應。單價疫苗即使以較高劑量投與時，亦僅能提供相同刺激分離株大約低3倍之刺激所產生的類似保護程度。

自該等研究中所生成之數據得出結論，當以二價產物形式投與疫苗時之抗原劑量遠低於以單價產物形式投與時之劑量下，自鼻孔脫落之病毒量會減少，肺部呈病毒分離株陽性會減少且主要效能參數泛總肺病灶會減少。總而言之，數據指示，單一劑量經鼻內投與二價疫苗更有效於在該等研究中之幼稚豬中所使用之較高劑量單價疫苗。

本發明協同組合較為有利，此乃因不良效應之機會會減小。另外，含有低於個別組份之濃度之二價疫苗之製造亦明顯較為容易且較為便宜。

此外，除上述協同濃度效應外，存在另一令人吃驚之有利協同效應。H3N2組份與H1N1組份協同作用。二價疫苗之協同效應極其清楚地顯示是其能夠提供對於異源H1N2(A/豬/North Carolina/001169/2006)SIV分離株之保護。因此，存在交叉保護效應。此效應另外具有協同性，此乃因本發明二價疫苗係如上文所闡述以遠低於單價疫苗所需含量之內容物含量投與。

伴隨此申請案之序列之全部內容以引用方式併入本文中： H3N2(A/豬/Texas/4199-2/98)之NA之SEQ ID NO：1核苷酸序列：

H3N2(A/豬/Texas/4199-2/98)之HA之SEQ ID NO：2核苷酸序列：

H3N2(A/豬/Texas/4199-2/98)之NA之SEQ ID NO：3胺基酸序列：

H3N2(A/豬/Texas/4199-2/98)之HA之SEQ ID NO：4胺基酸序列：

H1N1(A/豬/Minnesota/37866/1999)之NA之SEQ ID NO：5核苷酸序列：

H1N1(A/豬/Minnesota/37866/1999)之HA之SEQ ID NO：6核苷酸序列：

H1N1(A/豬/Minnesota/37866/1999)之NA之SEQ ID NO：7胺基酸序列：

H1N1(A/豬/Minnesota/37866/1999)之HA之SEQ ID NO：8胺基酸序列：

<110> 美商百靈佳殷格翰家畜藥品公司

<120> 二價豬流感病毒疫苗

<130> P10-0169

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1496

<212> DNA

<213> 豬流感病毒

<400> 1

<210> 2

<211> 1791

<212> DNA

<213> 豬流感病毒

<400> 2

<210> 3

<211> 469

<212> PRT

<213> 豬流感病毒

<400> 3

<210> 4

<211> 566

<212> PRT

<213> 豬流感病毒

<400> 4

<210> 5

<211> 1487

<212> DNA

<213> 豬流感病毒

<400> 5

<210> 6

<211> 1806

<212> DNA

<213> 豬流感病毒

<400> 6

<210> 7

<211> 469

<212> PRT

<213> 豬流感病毒

<400> 7

<210> 8

<211> 566

<212> PRT

<213> 豬流感病毒

<400> 8

Claims

一種免疫原性組合物，其包括：a)豬流感之經改質活的H3N2病毒，及b)豬流感之經改質活的H1N1病毒，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒編碼包括NS1胺基酸1至124、1至125、1至126、1至127或1至128之羧基末端截短NS1蛋白質，其中胺基末端胺基酸係編號1。
如請求項1之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒係經減毒的。
如請求項1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3N2病毒係含有來自A/豬/Texas/4199-2/98之HA、NA、PB2、PB1、PA、NP及M之TX/98/del 126且NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98，及其中豬流感之該經改質活的H1N1病毒含有來自A/豬/Minnesota/37866/1999(H1N1)之HA及NA及來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)之PB2、PB1、PA、NP、M且該NS1-126基因係來自A/豬/Texas/4199-2/98(H3N2)。
如請求項1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3N2病毒a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所陳述之核酸序列具有至少70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括具有與如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所陳述之胺基酸序列具有至少70%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質，及/或其中豬流感之該經改質活的H1N1病毒：a.包括具有cDNA與如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中所陳述之核酸序列具有大於70%一致性之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或b.包括具有編碼胺基酸序列與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之NA及HA蛋白質之NA及HA基因之基因區段的核酸序列，或c.包括具有與如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所陳述之胺基酸序列具有大於70%一致性之胺基酸序列之NA及HA蛋白質。
如請求項1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒係協同性地一起作用。
如請求項1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比係減低的。
如請求項1或2之免疫原性組合物，其中豬流感之該經改質活的H3N2病毒會增加對抗異源刺激、H1刺激及/或H1N1刺激之保護。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造用於對豬隻實施免疫之藥劑。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造用於治療或預防有需要豬隻中由豬流感病毒引起之臨床體徵之藥劑。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造用於與相同物種之未經免疫之對照組之個體相比會減少有需要豬隻中之病毒脫落的藥劑。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造與使用豬流感之單價經改質活的H3或H1病毒實施免疫之相同物種之免疫對照組之個體相比會減少有需要豬隻中病毒脫落的藥劑。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造用於針對具有抗SIV抗體之豬隻預防接種疫苗之藥劑。
一種如請求項1至7中任一項之免疫原性組合物之用途，其用以製造用於預防或減少豬隻中早期SIV感染之藥劑。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該免疫原性組合物係投與一次。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該免疫原性組合物係經鼻內投與。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該免疫原性組合物係投與在懷孕及哺乳期間之母豬。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該免疫原性組合物係投與第一月齡內、前兩週齡內或第一週齡內之豬。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該豬隻呈豬流感病毒母體抗體陽性。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該免疫原性組合物包括2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H1N1病毒及/或2 log₁₀至8 log₁₀豬流感之該經改質活的H3N2病毒。
如請求項8至13中任一項之用途，其中與相同物種之未經免疫之對照組之個體相比，投與該藥劑產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。
如請求項8至13中任一項之用途，其中與使用單價經改質活的H3 或H1流感病毒實施免疫之相同物種之個體相比，投與該藥劑產生選自由以下組成之群之效能參數改良：減少重量損失、較低病毒負荷、減少肺病灶、減少病毒脫落、降低直腸溫度或其組合。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該治療或預防使得與相同物種之未經治療之對照組之動物相比病毒負荷期縮短。
如請求項8至13中任一項之用途，其中該治療或預防使得自刺激或感染之後第2天病毒脫落減少。
如請求項8至13中任一項之用途，其中與使用單價經改質活的H3或H1流感病毒實施免疫之相同物種之個體相比，該豬隻係使用較低濃度之如請求項1至4中任一項之免疫原性組合物實施免疫。
如請求項8至13中任一項之用途，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒係協同性地一起作用。
如請求項8至13中任一項之用途，其中豬流感之該等經改質活的H3N2及H1N1病毒之濃度與單價免疫原性組合物中豬流感之H3病毒濃度及單價免疫原性組合物中豬流感之H1病毒濃度相比係減低的。
如請求項8至13中任一項之用途，其中豬流感之該經改質活的H3N2病毒會增加對抗異源刺激、H1刺激及/或H1N1刺激之保護。