KR20210084596A - 이종 스파이크 단백질을 갖는 h52 ibv 백신 - Google Patents

이종 스파이크 단백질을 갖는 h52 ibv 백신 Download PDF

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Abstract

본 발명은 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 IBV 감염에 기인하는 임상 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 치료학적 유효량의 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

Description

이종 스파이크 단백질을 갖는 H52 IBV 백신
서열 목록
본 출원은 37 C.F.R. 1.821 - 1.825에 따른 서열 목록을 포함한다. 본 출원에 첨부된 서열 목록은 본 출원에 의해 그 전체가 참조로 포함된다.
조류 코로나바이러스인 전염성 기관지염 바이러스 (infectious bronchitis virus: IBV)는 니도비랄레스 (Nidovirales) 목 코로나비리대 (Coronaviridae) 과의 프로토타입 감마코로나바이러스이다. 전염성 기관지염 바이러스는 주로 닭의 상기도 상피를 감염시켜 일반적으로 2차 세균 병원체에 의해 복잡해진 호흡기 질환을 유발한다 (문헌 [Cook et al. 2012. Avian Pathol. 41:239-250]). 일부 IBV 바이러스주는 신세뇨관, 난관 및 위장관 일부에 추가로 영향을 미쳐 이러한 장기 시스템에서 병리학적 병변 및 임상 증상을 유발한다. 이러한 바이러스는 실용 닭 (commercial chicken) 및 뒷마당 닭 (backyard chicken) 모두에서 전세계적으로 존재한다. 높은 게놈 변이성으로 인해, IBV는 매우 다양한 유전자형, 혈청형 및 방어형에서 구별된다. IBV는 현재 가금류 산업에서 경제적으로 가장 관련된 바이러스 병원체 중 하나로 간주된다.
전염성 기관지염 바이러스는 27.6 kb의 포지티브 센스 단일 가닥 RNA 게놈을 갖는 외피성 바이러스이다 (문헌 [Cavanagh 2007. Vet. Res. 38:281-297]). 바이러스 게놈의 처음 2/3는 RNA 복제, 편집 및 전사에 관련된 15개의 비구조 단백질을 인코딩하는 2개의 오픈 리딩 프레임 1a 및 1b로 분할된 큰 코딩 영역 (유전자 1로도 또한 표시됨)을 포함한다. 바이러스 게놈의 마지막 1/3은 다음의 구조 단백질을 코딩한다: 스파이크 단백질 (S, 유전자 2에 의해 인코딩됨), 외피 단백질 (E, 유전자 3c에 의해 인코딩됨), 막 단백질 (M, 유전자 4에 의해 인코딩됨) 및 뉴클레오캡시드 단백질 (N, 유전자 6에 의해 인코딩됨). 단백질 S, E 및 M은 바이러스 외피의 일부인 반면, 단백질 N은 바이러스 RNA와 함께 리보핵산 단백질 코어를 형성한다. 코로나바이러스 스파이크 단백질은 숙주 종 친화성을 결정한다 (문헌 [Kuo et al. 2000. J. Virol. 74:1393-1406]). 이것은 단백질 가수분해에 의해 2개의 서브유닛 S1과 S2로 절단되는 이량체 또는 삼량체 막 관통 단백질이다. 심하게 글리코실화된 S1 도메인은 스파이크 단백질의 '머리 (head)'를 형성하며 숙주 세포 표면에서 2,3-결합된 시알산과 상호 작용하는 수용체 결합 도메인을 포함한다 (문헌 [Promkuntod et al. 2014. Virology. 448:26-32]). S2 도메인은 세포질에 위치한 엑토도메인 ('몸통 (stalk)'), 막 관통 도메인 및 엔도도메인의 나머지 부분을 포함한다.
지금까지 가장 널리 사용되는 약독화 IBV 생백신 바이러스주는 매사추세츠 유사 IBV 바이러스주의 연속 계대에 의해 1960년대 네덜란드에서 개발되었다 (문헌 [Bijlenga et al. 2004; Avian Pathol. 33:550-557]). 그러나, 1970년대 이후로 전통적인 매사추세츠 유사 백신이 충분히 방어하지 못하는 새로운 IBV 혈청형이 나타났다 (문헌 [Cook et al. 2012. Avian Pathol. 41:239-250]). 따라서, 다른 IBV 혈청형에 대한 신규하고 매우 효과적인 IBV 백신이 필요하다.
IBV 뷰데트 (Beaudette) (문헌 [Geilhausen et al. 1973. Arch Gesamte Virusforsch.: 40 (3) (1973), pp. 285-290]) 및 H120 (문헌 [G. Bijlenga et al. 2004. Avian Pathol.: 33 (6); pp. 550-557])은 약독화 IBV이다. 그러나, 약독화는 면역원성의 손실을 초래할 수 있다.
또한, 재조합 IBV가 생성되었다. 문헌 [Zhou et al. 2016, Arch Virol.; 161:3179-3187]은 뷰데트 (매사추세츠 유전자형) 스파이크 단백질을 갖는 H120 (매사추세츠 유전자형) IBV를 개시하고 있다. 문헌 [Hodgson et al. 2004, J Virol 78: 13804-13811]은 M41 (매사추세츠 유전자형) 스파이크 단백질을 갖는 뷰데트 (매사추세츠 유전자형) IBV를 개시하고 있다. 또한, 문헌 [Armesto et al. 2011, PLoS One: 6(8):e24352]은 4/91 (4/91 유전자형) 유래의 이종 스파이크 단백질을 갖는 IBV 뷰데트 (매사추세츠 유전자형)를 개시하고 있다.
그러나, 문헌 [Zhou et al. 2016] 및 [Hodgson et al. 2004]에 개시된 재조합 IBV는 모두 이종 스파이크 단백질을 갖는 IBV로 간주될 수 없으며, IBV 및 삽입된 스파이크는 동일한 유전자형/혈청형 (매사추세츠)으로부터 유래한다. 또한, 언급된 모든 백신은 뷰데트 기반 백본을 기반으로 하거나 뷰데트 유래의 스파이크 단백질을 갖는다.
또한, 뷰데트가 이미 수십년 전에 기술되었고 뷰데트를 사용하는 재조합 접근법이 각각 10년 이상 공지되어 있지만, 뷰데트 기반 백신 및 이러한 재조합 백신 (이종 스파이크 단백질 포함)은 상업적으로 이용 가능하지 않다. 뷰데트 기반 재조합 IBV는 백신으로 적합하지 않다. 문헌 [Wei et al., 2014, Apl Microbiol Biotechnol 98]은 H120의 S1 서브유닛을 갖는 뷰데트 IBV를 개시하고 있다.
문헌 [Ellis et al., 2018, J. Virol. 92(23)], [Hodgson et al., J. Virol. 78(24)] 및 [Armesto et al., 2011, PLoS One: 6(8):e24352]은 모두 M41 또는 4/91 스파이크 단백질을 갖는 뷰데트 IBV를 개시하고 있다. 그러나, 문헌 [Ellis et al., 2018, J. Virol. 92(23)]은 뷰데트 스파이크 S2 서브유닛과 조합된 M41 또는 QX 유래의 이종 S1 서브유닛을 갖는 키메라 스파이크를 포함하는 재조합 뷰데트가 S1 동종 시험 감염 (challenge)에 대한 충분한 방어를 제공하지 않는다고 기재하고 있다 ("병독성 바이러스주 M41 또는 QX, BeauR-M41(S1) 및 BeauR-QX(S1)의 S1을 발현하는 rIBV에 의한 특정 병원체 부재 닭의 단일 백신 접종은 섬모 활성 및 임상 징후를 기반으로 한 동종 시험 감염에 대해 불완전한 방어를 제공하였다."; 요약서). 또한, 문헌 [Ellis et al., 2018, J. Virol. 92(23)]은 전장 S 유전자 (M41 유래의 S1 및 S2)가 동종 혈청형의 IBV에 의한 시험 감염에 대해 부분적 방어만을 제공하였다고 기재하고 있는데 (12 페이지), 이는 IBV 뷰데트 바이러스주가 재조합 IBV 백신에 대한 백본으로 적합하지 않다는 것을 시사한다. 문헌 [Hodgson et al., J. Virol. 78(24)]은 뷰데트 바이러스주가 "또한 불충분한 면역원성을 갖는 것으로 간주되며", 결과적으로, "백신 바이러스주로서 사용된 적이 없다"는 것을 또한 개시하고 있다 (13802 페이지, 좌측 컬럼, 두 번째 절).
따라서, 각각 신규하고 매우 효과적인 IBV 백신 및 재조합 IBV 백신을 생성하는 것이 필요하다. 또한, 매우 효과적인 IBV 백신 벡터도 필요하다.
본 발명의 양태들을 기재하기 전에, 본 출원 및 첨부된 청구범위에서 사용된 단수 형태는 문맥이 명확히 달리 지시하지 않는다면 복수형에 대한 언급도 포함한다는 것에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "항원"에 대한 언급은 복수의 항원을 포함하며, "바이러스"에 대한 언급은 당해 분야의 통상의 기술자들에게 공지된 1종 이상의 바이러스 및 이의 등가물 등에 대한 언급이다. 달리 정의되지 않는다면, 본 출원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 출원에서 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법들 및 물질들이 본 발명의 실시 또는 테스트에서 사용될 수 있지만, 바람직한 방법들, 장치들 및 재료들은 이하에서 기재될 것이다. 본 출원에 언급된 모든 간행물들은 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 간행물에 보고된 세포주들, 벡터들 및 방법들을 기재하고 개시할 목적으로 본 출원에 참조로 포함된다. 본 출원에서 그 어떤 것도 본 발명이 선행 발명에 의한 이러한 개시 내용보다 선행할 자격이 없다고 인정하는 것으로 해석해서는 안된다.
물질의 조성
본 발명은 종래 기술에 내재되어 있는 문제점을 해결하며 현재 기술 수준에서 뚜렷한 진전을 제공한다.
일반적으로, 본 발명은 이종 IBV S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 제공한다.
"H52 IBV"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. "IBV"라는 용어는 전염성 기관지염 바이러스를 지칭한다. "H52"라는 용어는 특정 IBV 바이러스주를 정의한다. H52 바이러스주는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 매사추세츠 유전자형에 속한다. IBV 바이러스주는 전형적으로 스파이크 단백질의 S1 서브유닛의 코딩 서열에 의해 구별되지만 (문헌 [Valastro et al., 2016. Infect Genet Evol. 39:349-364]), 또한 완전한 뉴클레오타이드 서열 또는 특정 단백질, 예를 들어, 스파이크 단백질, 뉴클레오캡시드 단백질, 외피 (E) 단백질 또는 막 (M) 당단백의 서열에 의해 구별될 수 있다. 스파이크 단백질이 IBV의 숙주 친화성 및 항원성을 결정하기 때문에, IBV 유전자형은 스파이크 단백질의 서브유닛 1의 코딩 서열에 의해 분류된다. 대안으로, IBV 바이러스주는 혈청형으로 구별될 수 있다. 혈청형 분류는 중화 항체에 의한 바이러스의 처리를 포함한다.
또한, H52는 영계에 적용했을 때 보다 높은 병원성으로 H120과 구별될 수 있다.
H52 IBV 바이러스주를 어디서 수득하는지는 당해 분야의 통상의 기술자의 일반 상식 내에 있다. H52 IBV 바이러스주는 예시적인 Nobilis IB H52 (MSD Animal Health), AviPro IB H52 (Lohmann Animal Health GmbH & Co. KG), Bronchovac (Ceva) 등과 같이 상업적으로 구입될 수 있다. 또한, 문헌 [McDonald et al. 1980 (Avain Pathology 9:245-259)]은 H52 IBV가 국립 중앙 수의학 연구소 (Central Veterinary Laboratory)에 의해 수득될 수 있다고 개시하고 있다. 문헌 [Rotterdam, Kusters, J. gen Virol 68:343-352]은 H52 IBV가 네덜란드의 가금류 보건 연구소 도른 (Poultry Health Institute Dorn) (현재 GD Animal Health)에 의해 수득될 수 있다고 개시하고 있으며, 문헌 [Chen et al. 2007, Avian Pathology 36(4):269-274]은 H52 IBV가 중국 수의 약품 감찰소 (China Institute of Veterinary Drug Control)에 의해 수득될 수 있다고 개시하고 있다. 또한, H52 IBV는 수십 년 동안 백신 바이러스주로서 사용되므로 (문헌 [Bijlenga et al. 2004, Avian Pathology 33 (6): 550-557]), 필드 (field)에서 단리될 수 있다. H52 IBV 바이러스주를 단리하고 H52 IBV 바이러스주를 특성화하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예시적인 H52 IBV 바이러스주는 문헌 [Zwaagstra et al. 1992 (J. Clin. Microbiol. 30 (1): 79-84)], [Handberg et al. 1999 (Avian Pathology 28: 327-335)] 또는 [Callison et al. 2006 (Journal of Virological Methods 138: 60-65)]에 기재된 바와 같이 특성화될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Zwaagstra et al. 1992 and Handberg et al. 1999]은 RT-PCR 및 서열 분석을 위한 매사추세츠 특이적인 프라이머 (각각 S 및 N 단백질을 위함) 및 비교를 위한 기준 서열을 개시하고 있다. 또한, H52 IBV는 서열 분석되었으며, EU817497과 같은 게놈 서열이 사용 가능하다. 따라서, 바이러스 게놈은 이의 서열을 합성하여 생성될 수 있으며, 역 유전학 시스템을 적용하여 생성될 수 있다.
"스파이크"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있는 IBV의 특정 단백질을 지칭한다. 스파이크 단백질은 항체 및 방어 면역 반응의 주요 유도 물질이다. 또한, 스파이크 (S) 단백질은 숙주 세포의 세포 수용체에 결합하고 또한 숙주 세포와 바이러스-세포막 융합을 매개함으로써 IBV의 세포 진입을 용이하게 한다. 또한, 이것은 바이러스주의 조직 및 세포 친화성을 결정한다.
"이종 S (스파이크)"라는 용어는, H52 IBV 내에 도입된 스파이크 단백질 또는 이의 단편이 H52 IBV와 상이한 유전자형 또는 혈청형으로부터 유래된다는 것을 의미한다. H52는 매사추세츠 유전자형 및 혈청형이기 때문에, 이종 스파이크는 비-매사추세츠 유전자형 또는 혈청형의 것이다.
"단백질", "아미노산" 및 "폴리펩타이드"라는 용어는 상호 교환적으로 사용된다. "단백질"이라는 용어는 자연 발생 아미노산 뿐만 아니라 이의 유도체로 구성된 아미노산의 서열을 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 생화학의 표준 교과서에 기재되어 있다. 아미노산 서열 내에서, 상기 아미노산은 펩타이드 결합에 의해 연결된다. 또한, 상기 아미노산 서열의 2개의 말단은 카복실 말단 (C-말단) 및 아미노 말단 (N-말단)으로 지칭된다. "단백질"이라는 용어는 정제된 단백질 또는 다른 단백질을 추가로 포함하는 단백질 제제를 본질적으로 포괄한다. 또한, 상기 용어는 또한 단백질 단편에 관한 것이다. 더욱이, 이것은 화학적으로 변형된 단백질을 포함한다. 이러한 변형은 인위적인 변형, 또는 인산화, 글리코실화, 미리스틸화 등과 같은 자연 발생적 변형일 수 있다.
또한, 본 발명은 또한 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 또한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 따라서, 이종 IBV S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물이 제공된다.
"면역원성 조성물"이라는 용어는, 면역원성 조성물이 투여되는 숙주에서 면역 반응을 유도하는, 적어도 1종의 항원을 포함하는 조성물을 지칭한다. 이러한 면역 반응은 본 발명의 면역원성 조성물에 대한 세포성 및/또는 항체 매개성 면역 반응일 수 있다. 바람직하게는 상기 면역원성 조성물은 면역 반응을 유도하고, 보다 바람직하게는 IBV 감염의 임상 징후들 중 1개 이상에 대해 방어 면역력을 부여한다. 상기 숙주는 또한 "대상체"로도 기재된다. 바람직하게는, 본 출원에서 기재되거나 언급된 임의의 숙주 또는 대상체는 조류 또는 가금류이다.
일반적으로, "면역 반응"은 다음 효과들 중 하나 이상을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다: 본 발명의 면역원성 조성물에 포함된 항원 또는 항원들에 대해 특이적으로 유도된, 항체, B 세포, 헬퍼 T 세포, 억제 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포 및/또는 감마-델타 T 세포의 생성 또는 활성화. 바람직하게는, 상기 숙주는 방어 면역학적 반응 또는 치료학적 반응을 나타낼 것이다.
"방어 면역 반응" 또는 "방어 면역력"은 감염된 숙주에 의해 일반적으로 나타나는 임상 징후의 감소 또는 결여, 보다 신속한 회복 시간 및/또는 감염력의 저하된 지속 기간, 또는 감염된 숙주의 조직 또는 체액 또는 분비물의 저하된 병원체 역가에 의해 입증될 것이다.
상기 숙주가 방어 면역 반응을 나타내어 신규한 감염에 대한 내성이 증진될 것이고/이거나 질환의 임상 중증도가 감소될 것인 경우, 상기 면역원성 조성물을 "백신"으로 기재한다.
H52-IBV - 단백질 인코딩 서열에 의한 정의
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 EU817497 (서열 번호 78)에 나타낸 바와 같은 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
"핵산" 또는 "핵산 서열" 또는 "뉴클레오타이드 서열"이라는 용어는 DNA 분자, RNA 분자, cDNA 분자 또는 유도체를 비롯한 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 상기 용어는 단일 및 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드를 포괄한다. 본 발명의 핵산은 단리된 폴리뉴클레오타이드 (즉, 자연 환경으로부터 단리됨) 및 유전적으로 변형된 형태를 포괄한다. 더욱이, 글리코실화되거나 메틸화된 폴리뉴클레오타이드와 같은 자연 발생적으로 변형된 폴리뉴클레오타이드, 또는 바이오티닐화된 폴리뉴클레오타이드와 같은 인위적으로 변형된 폴리뉴클레오타이드를 비롯하여 화학적으로 변형된 폴리뉴클레오타이드도 또한 포함된다. 또한, "핵산" 및 "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 상호 교환 가능하며, 임의의 핵산을 지칭한다. "핵산" 및 "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 또한 구체적으로는 5개의 생물학적으로 발생하는 염기 (아데닌, 구아닌, 티민, 사이토신 및 우라실) 이외의 다른 염기로 구성된 핵산을 포함한다.
"RNA"라는 용어는 임의의 리보핵산을 지칭한다. 상기 용어는 단일 및 이중 가닥 RNA를 포괄한다. 본 발명의 RNA는 단리된 RNA (즉, 자연 환경으로부터 단리됨) 및 유전적으로 변형된 형태를 포괄한다. 더욱이, 메틸화된 RNA와 같은 자연 발생적으로 변형된 RNA, 또는 바이오티닐화된 RNA와 같은 인위적으로 변형된 RNA를 비롯하여 화학적으로 변형된 RNA도 또한 포함된다. "RNA"라는 용어는 또한 구체적으로는 4개의 생물학적으로 발생하는 뉴클레오타이드/염기 (아데닌, 구아닌, 사이토신 및 우라실) 이외의 다른 염기로 구성된 RNA를 포함한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV 바이러스주는 AF352315 (서열 번호 79)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크 (S) 단백질을 갖는다.
상기 스파이크 단백질 또는 핵산 서열은 임의의 IBV 바이러스주가 H52 기원인지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 그러나, 상기 H52 IBV는 백본으로서 사용되고 상기 H52 스파이크 단백질 또는 핵산 서열은 이종 스파이크 또는 이의 단편으로 대체되기 때문에, 이종 스파이크를 갖는 최종 IBV는 상기 H52 스파이크의 어떤 것도 포함하지 않거나 나머지 부분만을 포함한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV 바이러스주는 서열 번호 1에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크 (S) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 AY044185 (서열 번호 80)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 상기에서 언급된 서열 중 적어도 하나와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 AF352310 (서열 번호 81)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 서열 번호 2에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 AF317210 (서열 번호 82)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 외피 (E) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 서열 번호 3에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 외피 (E) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질 (M) 단백질을 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 H52 IBV는 서열 번호 4에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질 (M) 단백질을 갖는다.
"동일성" 또는 "서열 동일성"이라는 용어는 당해 분야에 공지되어 있으며, 2개 이상의 폴리펩타이드 서열들 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열들, 즉, 기준 서열과 당해 기준 서열과 비교되는 주어진 서열 사이의 관계를 지칭한다. 서열 동일성은, 이러한 서열들의 문자열 (string) 사이의 일치로 결정될 때, 최고 정도의 서열 유사성을 생성하기 위해 서열을 최적으로 정렬한 후에, 주어진 서열을 기준 서열과 비교함으로써 결정된다. 이러한 정렬시, 서열 동일성은 위치별 기준으로 확인되며, 예를 들어, 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기가 특정 위치에서 동일하면, 서열은 해당 위치에서 "동일하다". 그 다음, %의 서열 동일성을 수득하기 위해 이러한 위치 동일성의 총 수를 기준 서열 내의 뉴클레오타이드 또는 잔기의 총 수로 나눈다. 서열 동일성은 문헌 [Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988)], [Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York (1993)], [Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994)], [Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987)], [Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991)] 및 [Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)]에 기재된 것들을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 공지된 방법에 의해 용이하게 계산될 수 있으며, 이들 문헌의 교시 내용은 본 출원에 참조로 포함된다. 서열 동일성을 결정하기 위한 바람직한 방법은 테스트되는 서열들 사이에서 최대 일치를 제공하도록 설계된다. 서열 동일성을 결정하기 위한 방법은 주어진 서열들 사이의 서열 동일성을 결정하는 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 프로그램으로 명문화되어 있다. 이러한 프로그램의 예로는 GCG 프로그램 패키지 (문헌 [Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)]), BLASTP, BLASTN 및 FASTA (문헌 [Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)]가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. BLASTX 프로그램은 NCBI 및 다른 출처로부터 공개적으로 이용 가능하다 (문헌 [BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894], [Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)], 이들 문헌의 교시 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). 이들 프로그램은 주어진 서열과 기준 서열 사이에 최고 수준의 서열 동일성을 생성하기 위해 디폴트 갭 가중치를 사용하여 서열을 최적으로 정렬한다. 한 예시로서, 기준 뉴클레오타이드 서열과, 예를 들어, 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 "서열 동일성"을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오타이드란, 주어진 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 기준 서열과 동일하지만, 주어진 폴리뉴클레오타이드 서열이 기준 뉴클레오타이드 서열의 각 100개의 뉴클레오타이드 당 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 보다 더 바람직하게는 5개 이하의 점 돌연변이를 포함할 수 있는 것으로 의도된다. 환언하자면, 기준 뉴클레오타이드 서열에 비해 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오타이드에서, 기준 서열 내의 뉴클레오타이드의 15%, 바람직하게는 10%, 보다 더 바람직하게는 5% 이하가 결실되거나 또 다른 뉴클레오타이드로 치환될 수 있거나, 기준 서열 내의 총 뉴클레오타이드의 15%, 바람직하게는 10%, 보다 더 바람직하게는 5% 이하의 뉴클레오타이드 수가 기준 서열 내에 삽입될 수 있다. 기준 서열의 이러한 돌연변이는 기준 뉴클레오타이드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 또는 이러한 말단 위치들 사이에 어디에서나 일어날 수 있거나, 기준 서열 내의 뉴클레오타이드들 중에서 개별적으로 또는 기준 서열 내의 하나 이상의 연속 그룹으로 산발적으로 일어날 수 있다. 유사하게, 기준 아미노산 서열과, 예를 들어, 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 서열 동일성을 갖는 주어진 아미노산 서열을 보유하는 폴리펩타이드란, 폴리펩타이드의 주어진 아미노산 서열이 기준 서열과 동일하지만, 주어진 폴리펩타이드 서열이 기준 아미노산 서열의 각 100개의 아미노산 당 15개 이하, 바람직하게는 10개 이하, 보다 더 바람직하게는 5개 이하의 아미노산 변경을 포함할 수 있는 것으로 의도된다. 환언하자면, 기준 아미노산 서열과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 서열 동일성을 갖는 주어진 폴리펩타이드 서열을 수득하기 위해, 기준 서열 내의 아미노산 잔기의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 보다 더 바람직하게는 5% 이하가 결실되거나 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있거나, 기준 서열 내의 아미노산 잔기의 총 수의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하, 보다 더 바람직하게는 5% 이하의 아미노산 수가 기준 서열 내에 삽입될 수 있다. 기준 서열의 이러한 변경은 기준 아미노산 서열의 아미노 또는 카복시 말단 위치에서 또는 이러한 말단 위치들 사이에 어디에서나 일어날 수 있거나, 기준 서열 내의 잔기들 중에서 개별적으로 또는 기준 서열 내의 하나 이상의 연속 그룹으로 산발적으로 일어날 수 있다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치들은 보존적 아미노산 치환에 의해 달라진다. 하지만, 보존적 치환은 서열 동일성을 결정할 때 일치로서 포함되지 않는다.
"동일성", "서열 동일성" 및 "% 동일성"이라는 용어는 본 출원에서 상호 교환적으로 사용된다. 본 발명의 목적상, 2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 %의 동일성을 결정하기 위해서는 서열을 최적의 비교 목적을 위해 정렬시킨다는 것이 본 출원에서 정의된다 (예를 들어, 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산의 서열에 갭을 도입할 수 있다). 그 다음, 상응하는 아미노산 또는 뉴클레오타이드 위치에서 아미노산 또는 뉴클레오타이드 잔기를 비교한다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 또는 뉴클레오타이드 잔기에 의해 점유될 때, 분자들은 해당 위치에서 동일하다. 2개의 서열들 사이의 %의 동일성은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, %의 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총 수 (즉, 중첩 위치) × 100). 바람직하게는, 2개의 서열은 동일한 길이이다.
서열 비교는 비교되는 2개의 서열들의 전체 길이 또는 2개의 서열들의 단편에 대해 수행될 수 있다. 전형적으로, 비교는 비교되는 2개의 서열의 전체 길이에 대해 수행될 것이다. 그러나, 서열 동일성은, 예를 들어, 20, 50, 100개 또는 그 이상의 연속 아미노산 잔기의 영역에 걸쳐 수행될 수 있다.
통상의 기술자는 2개의 서열 사이의 상동성을 결정하기 위해 상이한 컴퓨터 프로그램이 이용 가능하다는 사실을 인식할 것이다. 예를 들어, 2개의 서열 사이의 서열의 비교 및 %의 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 2개의 아미노산 또는 핵산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 Accelrys GCG 소프트웨어 패키지 (http://www.accelrys.com/products/gcg/에서 이용 가능)의 GAP 프로그램 내에 통합된 니들만 및 운치 알고리즘 (문헌 [Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)])을 사용하고, Blosum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 결정된다. 통상의 기술자라면, 이러한 모든 상이한 파라미터가 약간 상이한 결과를 산출하지만, 2개의 서열들의 전반적인 %의 동일성이 상이한 알고리즘을 사용할 때 유의하게 변화되지 않는다는 것을 인식할 것이다.
본 발명의 단백질 서열 또는 핵산 서열은, 예를 들어, 다른 계열 구성원 또는 관련 서열을 확인하기 위해서 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "질의 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌 [Altschul, et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 BLASTN 및 BLASTP 프로그램 (버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 발명의 단백질 분자와 상동인 아미노산 서열을 수득하기 위해 BLASTP 프로그램, 점수 = 50, 단어 길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 수득하기 위해, Gapped BLAST는 문헌 [Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402]에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 때, 각각의 프로그램 (예를 들어, BLASTP 및 BLASTN)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/에 있는 미국 국립생물정보센터 (National Center for Biotechnology Information)의 홈페이지를 참조한다.
본 출원에서 사용되는 바와 같이, 특히 "서열 번호 X의 서열과 동일한"이라는 용어는 각각 "서열 번호 X의 길이에 걸쳐 서열 번호 X의 서열과 동일한"이라는 용어 또는 "서열 번호 X의 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 X의 서열과 동일한"이라는 용어와 동등한 것으로 이해된다. 이러한 맥락에서, "X"는 1 내지 85로부터 선택되는 임의의 정수이므로, "서열 번호 X"는 본 출원에서 언급되는 서열 번호들 중 임의의 서열 번호를 나타낸다.
이종 S 단백질
IBV 바이러스주
IBV 바이러스주는혈청형 및 유전자형으로 분류될 수 있다. 혈청형 분류는 중화 항체에 의한 바이러스의 처리를 포함하는 반면, 유전자형 분류는 일반적으로 S1 (스파이크) 단백질의 서열을 검사하는 것을 포함한다. 그러나, 상기 상이한 IBV 바이러스주는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 전염성 기관지염 바이러스는 1930년대 미국에서 최초로 발견되었다. 확인된 최초의 IBV 혈청형은 매사추세츠이었지만, 미국에서 아칸소 (Arkansas)와 델라웨어를 비롯한 몇개의 혈청형이 최초 확인된 매사추세츠 유형에 추가하여 확인되었다.
IBV 바이러스주 뷰데트는 매사추세츠 유형이며, 병아리 배아에서 적어도 150회 계대 후에 유도되었다. IBV 바이러스주 뷰데트는 뷰데트와 허드슨 (문헌 [Beaudette and Hudson, J. Am. Vet. Med. A. 90, 51-60, 1937])에 의해 최초로 단리되었으며, 닭 배아에서 계대되었다. 뷰데트 이외의 다른 매사추세츠 유형 IBV 바이러스주는 H120, H52 및 M41이다. H120 바이러스주는 120회 계대되었다.
IBV QX는 중국에서 최초로 단리된 IBV의 병독성 필드 분리주로서 기술되어 있다. 그러나, 상기 바이러스는 유럽으로 확산되었으며, 서유럽의 일부, 주로 네덜란드 뿐만 아니라 독일, 프랑스, 벨기에, 덴마크 및 영국에서도 확인되었다. 또한, QX 유전자형 또는 혈청형은 아시아와 아프리카의 여러 국가에서 기술되어 있다.
흔히 "793B"로도 또한 불리는 IBV 4/91은 90년대 초 영국에서 최초로 보고되었으며, 현재 세계 여러 지역에 전파되고 있다. CR88은 이러한 유전자형에 속하며 백신으로서 시판되는 약독화 바이러스주이다.
"이탈리엔-02"또는 "이탈리아-02"로 명명된 바이러스주는 1990년대 후반 이탈리아에서 단리되었다. 이러한 분리주 중 하나의 서열 분석은 2002년에 발표되었다 (NCBI-BLAST, 번호 AJ457137). 그러나, 연구에 따르면, 이러한 이탈리안-02 바이러스주는 유럽에서 널리 퍼져 있으며, IBV 변이 바이러스주 4/91을 제외하고, 영국, 스페인, 프랑스 및 네덜란드에서 가장 우세한 유전자형 중 하나가 되었다.
1996년 이후, Q1로 지칭되는 신규 전염성 기관지염 바이러스 (IBV) 유전자형이 중국에서 유포되었으며, 2011년 이탈리아에서 최초로 보고되었다. Q1은 사망률, 신장 병변 및 전위염 (proventriculitis)의 증가와 관련이 있다.
또한, 바이러스주 D274, B1648/D8880, D1466, V13977 및 아칸소는 유럽에서도 확인되었다.
임의의 IBV 바이러스주를 어디서 수득하는지는 당해 분야의 통상의 기술자의 일반 상식 내에 있다. IBV 바이러스주를 상업적으로 구입하거나 과학 연구소로부터 입수할 수 있거나, IBV 바이러스주가 서열 분석되고 서열이 공개되어 이용 가능하기 때문에 게놈을 상보성 DNA로서 합성적으로 합성할 수 있다. 또한, IBV 바이러스주는 필드로부터 단리될 수 있다. IBV 바이러스주를 단리하고 IBV 바이러스주를 특성화하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 문헌 [Valter Leonardo de Quadros 2011, Dissertation, Das Infektiose Bronchitis Virus (IBV): Molekularbiologische Untersuchungen zur Diagnostik und zum Vorkommen sowie zur Pathogenitat des Genotyps IBV QX in spezifisch pathogenfreien (SPF) Broilern, Freie Universitat Berlin], [Worthington et al. 2009, Avian Pathology 37(3), 247-257], [Liu et al. 2009, Virus Genes 38: 56-65], [Dolz et al. 2006, Avian Pathology 35 (2): 77-85], [Farsang et al. 2002, Avian Pathology 31: 229-236] 및 [Feng et al. 2014, Virus Genes 49: 292-303]은 상이한 IBV 바이러스주를 단리하고 구별하는 방법을 기재하고 있다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 스파이크는 비-매사추세츠 유전자형 또는 혈청형이다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 아칸소 (예를 들어, 아칸소 99), 브라질 (예를 들어, BR-1, BR-2, 23/2013, IBV/브라질/351/1984), 캘리포니아 (예를 들어, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어 (예를 들어, 델라웨어 98), 네덜란드 (예를 들어, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아 (예를 들어, 조지아 GA-07, GA-08, GA-12, GA-13), 그레이 (Gray), 홀테 (Holte), 아이오와 (예를 들어, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아 (예를 들어, 이탈리아 02), JMK, LDT3, 메인 (Maine) (예를 들어, 메인 209), 펜실베이니아 (예를 들어, 펜실베이니아 1220/98, 펜실베이니아 울그 (Wolg)/98), PL84084, Qu (예를 들어, Qu-mv), QX (예를 들어, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2 (예를 들어, IS/1494/06, IBV/Ck/EG/CU/4/2014, 감마CoV/Ck/폴란드/G052/2016) 및 4/91 (793B, CR88)로 이루어진 목록으로부터 선택된 유전자형 또는 혈청형을 갖는 IBV로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 4/91, QX, Q1, 이탈리아 02, 아칸소, 코네티컷, 조지아, LDT3, PL84084, 변이체 2 또는 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택된 IBV로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택된 IBV로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 4/91 바이러스주는 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 약독화 4/91, IB4-91 및 CR88로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 QX 바이러스주는 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03 및 GB341/96으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 Q1 바이러스주는 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21 및 칠레-295-10으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 아칸소 바이러스주는 Ark99, ArkGA, ArkDPI, AL/5364/00, ARKDPI11, AL/0803/01, AL/7149/00, ArkDPI101, AL/1221/01, AL/1793/01 및 AL/4614/98로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 변이체 2 바이러스주는 IS/1494/06, IBV/Ck/EG/CU/4/2014, 감마CoV/Ck/폴란드/G052/2016, Eg/CLEVB-2/IBV/012, D1344/2/4/10_EG, TR8 및 IB VAR2-06으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 브라질 바이러스주는 BR-1, BR-2, 23/2013 및 IBV/브라질/351/1984로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 4/91 유전자형 또는 혈청형으로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 5 또는 6과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 4/91로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 7 또는 8과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 QX로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 9 또는 10과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 Q1로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 11 또는 12와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 아칸소로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 13 또는 14와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 변이체 2로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 15 또는 16과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 브라질로부터 유래한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편은 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15 또는 16으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질은 전장 스파이크 단백질이다.
본 발명의 실험 데이터는 스파이크 단백질의 엑토도메인과 같은 스파이크 단백질 서열의 단편이 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 그러나, 전장 스파이크 단백질 서열도 또한 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 N- 말단으로부터 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는다.
"N-말단"이라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. N-말단은 또한 아미노-말단, NH2-말단, N-말단 또는 아민-말단으로 불린다. 단백질이 전령 RNA로부터 번역될 때, 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 생성된다. 따라서, N-말단은 상기 아민기 (-NH2)를 포함하는 아미노산 쇄 (단백질 또는 폴리펩타이드)의 출발점이다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 적어도 1000개 아미노산의 길이를 갖는다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 스파이크 단백질의 엑토도메인이다.
"엑토도메인"이라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 스파이크 단백질은 기능적 부분, 신호 서열, 엑토도메인, 막 관통 도메인 및 엔도도메인 (N-말단에서 C-말단까지)을 포함한다. 따라서, 신호 서열의 절단 후, 스파이크 단백질의 N-말단은 엑토도메인으로 시작된다. IBV 스파이크 엑토도메인은 약 1077개 아미노산의 길이를 가지며, IBV 바이러스주에 따라 아미노산 길이가 수개까지 상이하다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편은 상동 S 단백질 또는 이의 단편을 대체한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편은 자연 발생 S 단백질 또는 이의 단편을 대체한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편은 H52 IBV에서 S 단백질 또는 이의 단편을 대체한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 약독화된다.
"약독화된"이라는 용어는 야생형 분리주와 비교하여 감소된 병독성을 갖는 병원체를 지칭한다. 본 발명에서, 약독화 IBV는, 비-약독화 IBV로 감염되고 약독화 바이러스를 제공받지 않은 동물의 "대조군"과 비교하여, 병독성이 감소하여 표적 동물에서 IBV 감염의 임상 징후를 일으키지 않지만 면역 반응을 유도할 수 있을 뿐만 아니라, 약독화 IBV로 감염된 동물에서 발병률 또는 중증도의 임상 징후가 감소한다는 것을 의미할 수도 있는 것이다. 이러한 맥락에서, "감소한다/감소된"이라는 용어는 상기에서 정의된 바와 같이 비-약독화 IBV로 감염된 대조군과 비교하여 적어도 10%, 바람직하게는 25%, 보다 더 바람직하게는 50%, 보다 더 바람직하게는 60%, 보다 더 바람직하게는 70%, 보다 더 바람직하게는 80%, 보다 더 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%, 가장 바람직하게는 100%의 감소를 의미한다. 따라서, 약독화 IBV 바이러스주는 변형된 생 IBV를 포함하는 면역원성 조성물 내에 혼입하기에 적합한 것이다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 불활성화된다.
임의의 통상적인 불활성화 방법이 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 따라서, 불활성화는 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 화학적 및/또는 물리적 처리에 의해 수행될 수 있다. 바람직한 불활성화 방법은, 바이너리 (binary) 에틸렌이민 (BEI)으로 사이클화된, 2-브로모에틸렌아민 하이드로브로마이드 (BEA)의 용액의 첨가를 비롯하여 사이클화된 바이너리 에틸렌이민 (BEI)의 첨가를 포함한다. 바람직한 추가의 화학적 불활성화제로는 트리톤 (Triton) X-100, 나트륨 데옥시콜레이트, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드, β-프로피오락톤, 티메로살, 페놀 및 포름알데하이드 (포르말린)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 그러나, 불활성화는 또한 중화 단계를 포함할 수 있다. 바람직한 중화제로는 나트륨 티오설페이트, 나트륨 바이설파이트 등이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
바람직한 포르말린 불활성화 조건은 약 0.02% (v/v) ~ 2.0% (v/v), 보다 바람직하게는 약 0.1% (v/v) ~ 1.0% (v/v), 보다 더 바람직하게는 약 0.15% (v/v) ~ 0.8% (v/v), 보다 더 바람직하게는 약 0.16% (v/v) ~ 0.6% (v/v), 가장 바람직하게는 약 0.2% (v/v) ~ 0.4% (v/v) 사이의 포르말린 농도를 포함한다. 인큐베이션 시간은 IBV의 내성에 좌우된다. 일반적으로, 불활성화 과정은 IBV의 성장이 적합한 배양 시스템에서 검출되지 않을 때까지 수행된다.
바람직하게는, 본 발명의 불활성화 IBV는 포르말린으로 불활성화되며, 바람직하게는 상기에서 기재된 바와 같은 농도를 사용한다.
본 발명의 불활성화 IBV는 문헌 [Nature, 1974, 252, 252-254] 또는 [Journal of Immunology, 1978, 120, 1109-13]에 기재된 것과 같은 공지된 기술을 사용하여 리포솜내로 혼입될 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 불활성화 IBV는 다당류, 펩타이드, 단백질 등 또는 이들의 조합과 같은 적합한 생물학적 화합물에 컨쥬게이트될 수 있다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 유전적으로 조작된다.
"유전적으로 조작된"이라는 용어는 "역 유전학" 접근법을 사용하여 돌연변이된 IBV를 지칭한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 IBV는 유전적으로 조작되었다. 역 유전학 기술은 합성 재조합 바이러스 RNA의 제조를 포함한다. 그러나, "역 유전학" 기법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 재조합 IBV이다.
본 출원에서 사용되는 "재조합"이라는 용어는 상응하는 RNA 게놈 (또는 RNA 서열, cDNA 서열 또는 단백질)에 자연적으로 발생하지 않는 임의의 변형을 갖는 RNA 게놈 (또는 RNA 서열, cDNA 서열 또는 단백질)에 관한 것이다. 예를 들어, RNA 게놈 (또는 RNA 서열, cDNA 서열 또는 단백질)이, 예를 들어, 사람의 개입에 의해, 인위적으로 도입된 삽입, 결실, 역위, 재배치 또는 점 돌연변이를 포함하는 경우, 이는 "재조합체"로 간주된다. 따라서, 상기 RNA 게놈 서열 (또는 RNA 서열, cDNA 서열 또는 단백질)은 이것이 자연적으로 연관된 서열 (또는 RNA 서열, cDNA 서열 또는 단백질)의 전부 또는 일부와 연관되지 않는다. 바이러스와 관련하여 사용되는 "재조합체"라는 용어는 바이러스 게놈의 인위적인 조작에 의해 생성된 바이러스를 의미한다. "재조합 바이러스"라는 용어는 유전적으로 변형된 바이러스를 포괄한다.
본 발명에 따른 IBV 또는 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 키메라이다.
"키메라"라는 용어는 또 다른 코로나바이러스, 바람직하게는 또 다른 IBV 바이러스주로부터 유래된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IBV를 지칭한다. 예시적으로, 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 IBV H52는 키메라 IBV이다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 백신이다. "백신"이라는 용어는 본 출원의 다른 곳에서 이미 기재되었다. 그러나, 숙주가 방어 면역 반응을 나타내어 신규 감염에 대한 내성이 향상될 것이고/이거나 질환의 임상 중증도가 감소될 것인 경우, 상기 면역원성 조성물은 "백신"으로 기재된다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다.
"약제학적으로 허용되는 담체"라는 용어는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 안정화제, 희석제, 보존제, 항균제, 항진균제, 등장화제, 흡착 지연제, 아쥬반트, 면역 자극제 및 이들의 조합을 포함한다.
"희석제"로는 물, 식염수, 덱스트로오스, 에탄올, 글리세롤 등이 포함될 수 있다. 등장화제로는 특히 염화나트륨, 덱스트로오스, 만니톨, 소르비톨 및 락토오스가 포함될 수 있다. 안정화제로는 특히 알부민 및 에틸렌디아민테트라아세트산의 알칼리염이 포함된다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 포스페이트 완충 식염수이다.
바람직하게는, 상기 면역원성 조성물은 수크로오스 젤라틴 안정화제를 추가로 포함한다.
바람직하게는, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 키토산이다.
키토산은 갑각류 (예를 들어, 새우, 게), 곤충 및 기타 무척추 동물의 키틴으로부터 유래된 천연 탈아세틸화 다당류이다. 최근, 문헌 [Rauw et al., 2009, Vet Immunol Immunop 134:249-258]은 키토산이 뉴캐슬병 생백신의 세포성 면역 반응을 증진시키고 이의 방어 효과를 촉진시켰다는 것을 입증하였다. 또한, 문헌 [Wang et al., 2012, Arch Virol (2012) 157:1451-1461]은 약독화 인플루엔자 생백신에 사용하기 위한 아쥬반트로서 키토산의 잠재력을 보여주는 결과를 밝혀냈다.
바람직하게는, 상기 면역원성 조성물은, 예를 들어, 인터루킨, 인터페론 또는 다른 사이토카인과 같은 하나 이상의 다른 면역 조절제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서 유용한 아쥬반트 및 첨가제의 양 및 농도는 통상의 기술자가 용이하게 결정할 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 아쥬반트를 함유한다. 본 출원에서 사용되는 "아쥬반트"로는 수산화 알루미늄 및 인산 알루미늄, 사포닌, 예를 들어, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), 유중수형 에멀젼, 수중유형 에멀젼, 수중유중수형 에멀젼이 포함된다. 에멀젼은 특히 경질 액체 파라핀 오일 (유럽 약전 유형); 스쿠알란 또는 스쿠알렌과 같은 이소프레노이드 오일; 알켄, 특히, 이소부텐 또는 데센의 올리고머화에 의해 생성되는 오일; 선형 알킬기를 함유하는 산 또는 알코올의 에스테르, 보다 특히, 식물 오일, 에틸 올리에이트, 프로필렌 글리콜 디(카프릴레이트/카프레이트), 글리세릴 트리(카프릴레이트/카프레이트) 또는 프로필렌 글리콜 디올리에이트; 분지형 지방산 또는 알코올의 에스테르, 특히, 이소스테아르산 에스테르를 기본으로 할 수 있다. 오일은 유화제와 함께 사용되어 에멀젼을 형성한다. 유화제는 바람직하게는 비이온성 계면활성제, 특히, 소르비탄의 에스테르, 만나이드의 에스테르 (예를 들어, 안하이드로만니톨 올리에이트), 글리콜의 에스테르, 폴리글리세롤의 에스테르, 프로필렌 글리콜의 에스테르 및 올레산, 이소스테아르산, 리시놀레산 또는 하이드록시스테아르산의 에스테르 (이들은 임의로 에톡시화됨), 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 특히, 플루로닉 (Pluronic) 제품, 특히, L121이다. 문헌 [Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.), JohnWiley and Sons, NY, pp51-94 (1995)] 및 [Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997)]을 참조한다. 예시적인 아쥬반트로는 문헌 ["Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" edited by M. Powell and M. Newman, Plenum Press, 1995]의 147 페이지에 기재된 SPT 에멀젼 및 동 문헌의 183 페이지에 기재된 MF59 에멀젼이 있다.
아쥬반트의 추가의 예로는 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체, 및 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체로부터 선택된 화합물이 있다. 유리한 아쥬반트 화합물은 특히 당류 또는 다가 알코올의 폴리알케닐 에테르와 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체이다. 이들 화합물은 카보머라는 용어로 공지되어 있다 (문헌 [Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996]). 당해 분야의 통상의 기술자는 또한 적어도 3개, 바람직하게는 8개 이하의 하이드록실기를 가지며 적어도 3개의 하이드록실기의 수소 원자가 적어도 2개의 탄소 원자를 갖는 불포화 지방족 라디칼로 대체되어 있는 폴리하이드록실화 화합물과 가교된 이러한 아크릴계 중합체를 기재하고 있는 미국 특허 US 2,909,462를 참조할 수 있다. 바람직한 라디칼로는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 라디칼, 예를 들어, 비닐, 알릴 및 기타 에틸렌계 불포화기가 있다. 상기 불포화 라디칼은 그 자체에 메틸과 같은 다른 치환체를 함유할 수 있다. 카보폴 (CARBOPOL) (BF Goodrich, Ohio, USA)의 명칭으로 시판되는 제품이 특히 적절하다. 이들은 알릴 수크로오스 또는 알릴 펜타에리트리톨과 가교되어 있다. 이들 중에서도, 카보폴 974P, 934P 및 971P가 언급될 수 있다. 카보폴 971P의 사용이 가장 바람직하다. 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체 중에서도, 말레산 무수물과 에틸렌의 공중합체인 EMA 공중합체 (Monsanto)가 있다. 면역원성 조성물, 면역학적 조성물 또는 백신 조성물 자체가 혼입될 아쥬반트 용액을 수득하기 위해서, 이러한 중합체가 물에 용해되면, 바람직하게는 생리학적 pH로 중화될 산 용액이 생성된다.
추가의 적절한 아쥬반트로는 다수의 다른 것들 중에서도 RIBI 아쥬반트 시스템 (Ribi Inc.), 블록 공중합체 (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), 모노포스포릴 지질 A, 아비리딘 지질-아민 아쥬반트, 이. 콜라이 (E. coli) (재조합체 또는 기타)로부터 유래된 열 불안정성 장독소, 콜레라 독소, IMS 1314 또는 뮤라밀 디펩타이드, 또는 자연 발생 또는 재조합 사이토카인 또는 이의 유사체 또는 내인성 사이토카인 방출 자극제가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
아쥬반트는 약 100 μg 내지 약 10 mg/용량의 양으로, 바람직하게는 약 100 μg 내지 약 10 mg/용량의 양으로, 보다 바람직하게는 약 500 μg내지 약 5 mg/용량의 양으로, 보다 더 바람직하게는 약 750 μg 내지 약 2.5 mg/용량의 양으로, 가장 바람직하게는 약 1 mg/용량의 양으로 첨가될 수 있는 것으로 예상된다. 대안으로, 아쥬반트는 최종 생성물의 약 0.01 부피% 내지 50 부피%의 농도, 바람직하게는 약 2 부피% 내지 30 부피%의 농도, 보다 바람직하게는 약 5 부피% 내지 25 부피%의 농도, 보다 더 바람직하게는 약 7 부피% 내지 약 22 부피%의 농도, 가장 바람직하게는 10 부피% 내지 20 부피%의 농도로 존재할 수 있다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 IBV 감염에 기인하는 임상 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후의 치료 및/또는 예방에 효과적이다. "치료 및/또는 예방", "임상 징후" 및 "~을 필요로 하는"이라는 용어는 다른 곳에서 정의되었다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 이종 스파이크 단백질의 유전자형 또는 혈청형의 IBV 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어한다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변형 2 또는 브라질 유전자형의 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어한다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 4/91 유전자형의 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어한다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 단일 용량 투여를 위해 제형화된다.
단일 용량을 위한 부피는 본 출원의 다른 곳에서 정의되어 있다.
본 발명의 면역원성 조성물의 1회 용량은 이러한 면역원성 조성물의 1회 용량의 투여 후에 효과적인 것으로 추가로 밝혀졌다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 피하로, 근육내로, 경구로, 난내로 (in ovo), 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해 투여된다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 1 내지 10 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 2 내지 5 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 2 내지 4 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
키트
상기 조성물은, 필요에 따라, 활성 성분을 함유하는 1종 이상의 단위 투여 형태 (dosage form)를 포함할 수 있는 팩 또는 디스펜서 장치로 제공될 수 있다. 상기 팩은 금속 또는 플라스틱 호일, 예를 들어, 블리스터 팩을 포함할 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치는 투여하기 위한, 바람직하게는 대상체, 특히, 가금류에게 투여하기 위한 설명서를 수반할 수 있다. 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 통지서는 이러한 용기(들)와 관련되어 있으며, 이러한 통지서는 사람 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매에 대한 기관의 승인을 반영한다.
따라서, 본 발명은 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명에 따른 키트의 하나의 구체적인 양태에서, 상기 키트는 조류의 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 키트의 하나의 구체적인 양태에서, 상기 키트는 가금류의 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 키트의 하나의 구체적인 양태에서, 상기 키트는 IB (전염성 기관지염)의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함한다.
치료 방법
또한, 본 발명은 본 출원에서 기재된 바와 같은 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법을 제공한다.
"면역화시키는"이라는 용어는 면역화되는 대상체에게 면역원성 조성물을 투여하여 이러한 면역원성 조성물에 포함되어 있는 항원에 대하여 면역학적 반응을 유발시키는 능동 면역화에 관한 것이다.
바람직하게는, 면역화는 한무리에서 특정 IBV 감염의 발생률을 감소시키거나, 특정 IBV 감염에 기인하거나 이와 관련된 임상 징후의 중증도를 감소시킨다.
또한, 본 출원에서 제공된 바와 같은 면역원성 조성물에 의한 IBV 감염의 예방을 필요로 하는 대상체의 면역화는 IBV 감염에 의한 대상체의 감염의 예방을 초래한다. 보다 더 바람직하게는, 면역화는 IBV 감염에 대해 효과적이면서 장기간 지속되는 면역학적 반응을 초래한다. 상기 기간은 1개월 초과, 바람직하게는 2개월 초과, 바람직하게는 3개월 초과, 보다 바람직하게는 4개월 초과, 보다 바람직하게는 5개월 초과, 보다 바람직하게는 6개월 초과로 지속될 것이다는 점을 이해해야 할 것이다. 면역화는 면역화된 모든 대상체에서 효과적일 수 없다는 것을 이해해야 한다. 그러나, 상기 용어는 한무리의 대상체 중 상당 부분이 효과적으로 면역화된다는 점을 필요로 한다.
바람직하게는, 일반적으로, 즉, 면역화 없이, 일반적으로 IBV 감염에 기인하거나 이와 관련된 임상 징후를 발생시킬 한무리의 대상체가 이러한 맥락에서 예상된다. 한무리의 대상체가 효과적으로 면역화되는지 여부는 당해 분야의 통상의 기술자가 지체 없이 결정할 수 있다. 바람직하게는, 주어진 한무리의 대상체 중 적어도 33%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 100%에서의 임상 징후가, 비면역화되거나 본 발명 이전에 이용가능했던 면역원성 조성물로 면역화되지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염된 대상체와 비교하여, 발병률 또는 중증도에서 적어도 10%까지, 보다 바람직하게는 적어도 20%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 40%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%까지, 가장 바람직하게는 100%까지 감소된다면, 면역화는 효과적일 것이다.
또한, 본 발명은 IBV에 기인하는 임상 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료학적 유효량의 본 출원에서 기재된 바와 같은 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
"치료 또는 예방하는 (preventing)"이라는 용어는 한무리에서 특정 IBV 감염의 발생률을 감소시키거나, 특정 IBV 감염에 기인하거나 이와 관련된 임상 징후의 중증도를 감소시키는 것을 지칭한다. 따라서, "치료 또는 예방하는 (preventing)"이라는 용어는 또한 특정 IBV로 감염되는 한무리에서 대상체 수의 감소 (= 특정 IBV 감염의 발생률 감소), 또는 IBV 감염과 통상적으로 관련되거나 이에 기인하는 임상 징후의 중증도 감소, 또는 특정 IBV에 의한 감염 후 바이러스 배출의 감소, 또는, 대상체가 본 출원에서 제공된 바와 같은 면역원성 조성물을 투여받지 않은 대상체 그룹과 비교하여, 대상체가 유효량의 상기 면역원성 조성물을 투여받은 대상체 그룹에서 특정 IBV에 의한 감염 후 산란계에서 산란 저하의 예방 또는 감소를 지칭한다.
"치료 또는 예방하는 (preventing)"은 일반적으로 유효량의 본 발명의 면역원성 조성물을 이러한 치료/예방을 필요로 하거나 이로부터 이득을 얻을 수 있는 대상체 또는 한무리의 대상체들에게 투여하는 것을 포함한다. "치료"라는 용어는, 대상체 또는 한무리의 적어도 일부 대상체들이 이러한 IBV로 이미 감염되면, 유효량의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 지칭하며, 여기서, 이러한 대상체는 이러한 IBV 감염에 기인하거나 이와 관련된 일부 임상 징후를 이미 나타내고 있다. "예방 (prophylaxis)"이라는 용어는 IBV에 의한 이러한 대상체의 임의의 감염 전에, 또는 적어도 이러한 대상체 또는 대상체 그룹 중 어떠한 대상체도 이러한 PEDV에 의한 감염에 기인하거나 이와 관련된 임의의 임상 징후를 나타내지 않는 경우에 대상체에게 투여하는 것을 지칭한다. "예방 (prophylaxis)" 및 "예방하는 (preventing)"이라는 용어는 본 출원에서 상호 교환적으로 사용된다.
본 출원에서 사용되는 "유효량"이라는 용어는 대상체에서 면역 반응을 유도하거나 유도할 수 있는 항원의 양을 의미하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 유효량은 한무리에서 특정 IBV 감염의 발병률을 감소시키거나, 특정 IBV 감염의 임상 징후의 중증도를 감소시킬 수 있다.
바람직하게는, 임상 징후는, 미처리되거나 본 발명 이전에 이용 가능했던 면역원성 조성물로 처리되지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염되는 대상체와 비교하여, 발병률 또는 중증도에서 적어도 10%까지, 보다 바람직하게는 적어도 20%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 40%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%까지, 가장 바람직하게는 100%까지 감소된다.
본 출원에서 사용되는 "임상 징후"라는 용어는 IBV로 인한 대상체의 감염 징후를 지칭한다. 감염의 임상 징후는 선택된 병원체에 좌우된다. 이러한 임상 징후에 대한 예로는 호흡 곤란, 신염, 난관염, 비정상적인 난 생산, 헝클어진 깃털 (ruffled feather), 우울증, 성장률 감소 및 식욕 감소가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 호흡 곤란의 징후는 가쁜호흡, 기침, 재채기, 기관 수포음, 비강 및 안구 분비물, 기관 병변 및 기관내 섬모 정체 (ciliostasis)를 비롯한 호흡 징후를 포함한다. 신염의 징후는 신장 병변 및 물 설사를 포괄한다. 비정상적인 난 생산의 징후는 산란 저하, 작은 크기의 난, 열등한 껍질, 내부 난의 질의 감소, 얇은 난백의 난, 및 난관의 섬모 정체를 포괄한다. 그러나, 상기 임상 징후는 살아 있는 동물로부터 직접적으로 관찰 가능한 임상 증상을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 살아 있는 동물에서 직접 관찰할 수 있는 임상 징후에 대한 예로는 비강 및 안구 분비물, 기침, 가쁜호흡, 재채기, 기관 수포음, 헝클어진 깃털, 결막염, 체중 감소, 성장률 감소, 식욕 감소, 탈수, 물 설사, 파행, 기면, 쇠약 및 수척 등이 포함된다.
바람직하게는, 미처리되거나 본 발명 이전에 이용 가능했던 면역원성 조성물로 처리되지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염되는 대상체와 비교하여, 처리된 대상체의 발병률 또는 중증도에서 감소된 임상 징후는 섬모 정체의 감소, 수포음의 감소, 산란 저하의 감소, 신장 병변의 감소, 물 설사의 감소, 체중 감소의 감소, 바이러스 부하의 저하, 바이러스 배출의 감소 또는 이들의 조합을 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "~을 필요로 하는" 또는 "~이 필요한"이라는 용어는, 투여/치료가 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 투여받는 대상체의 건강 또는 임상 징후의 증진 또는 개선, 또는 이러한 대상체의 건강에 대한 다른 긍정적인 의료 효과와 관련된다는 것을 의미한다.
"감소하는" 또는 "감소된" 또는 "감소" 또는 "저하시키다"라는 용어는, 본 출원에서 상호 교환적으로 사용된다. "감소"라는 용어는, 미처리되지만 (비면역화되지만) 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염되는 대상체와 비교하여, 상기 임상 징후가 적어도 10%까지, 보다 바람직하게는 적어도 20%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 40%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%까지, 가장 바람직하게는 100%까지 감소된다는 것을 의미한다.
또한, 본 발명은 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 섬모 정체를 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료학적 유효량의 본 출원에서 기재된 바와 같은 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
실시예에서 나타낸 바와 같이, 본 출원에서 제공된 바와 같은 면역원성 조성물은 섬모 정체의 감소에 효과적인 것으로 입증되었다.
"섬모 정체"라는 용어는 기관에서 섬모의 운동 감소를 지칭한다. 따라서, 섬모 정체는 섬모의 운동을 위한 기관환의 내막 (inner lining)을 검사하여 결정될 수 있다. 기관에서 섬모의 운동을 측정하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자의 일반 상식 범위 내에 있다.
바람직하게는, 섬모의 운동은 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 IBV에 의한 시험 감염 또는 감염 후 10 일차부터, 보다 바람직하게는 상기 시험 감염 또는 감염 후 5 일차부터, 보다 바람직하게는 상기 시험 감염 또는 감염 후 4 일차부터, 보다 바람직하게는 상기 시험 감염 또는 감염 후 3 일차부터, 가장 바람직하게는 상기 공격 또는 감염 후 1 또는 2 일차부터 감소하지 않는다.
"섬모 정체의 감소"라는 용어는, 섬모 정체가 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 적어도 10%까지, 바람직하게는 적어도 20%까지, 보다 바람직하게는 적어도 30%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 40%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%까지, 가장 바람직하게는 100%까지 감소된다는 것을 의미한다. 섬모 정체의 감소를 측정하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자의 일반 상식 내에 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 대상체는 조류이다.
"조류"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. "조류"라는 용어는 가금류를 비롯한 모든 새를 포괄한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 대상체는 가금류이다.
"가금류"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. "가금류"라는 용어는 닭, 칠면조, 메추라기, 꿩, 호로새, 거위 및 오리를 포괄한다. 또한, "닭"이라는 용어는 육계, 산란계, 및 육종계로도 또한 지칭되는 둘을 위한 번식 가축을 포괄한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 대상체는 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 대상체는 닭이다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 1회 투여된다.
단일 용량은 단 1회만 투여되는 것으로 이해된다. 실시예에서 나타낸 바와 같이, 본 출원에 제공된 바와 같은 면역원성 조성물은 이의 투여를 필요로 하는 대상체에 대한 단일 용량의 투여 후에 효과적인 것으로 입증되었다.
가금류 당 용량 부피는 백신 접종의 경로 및 가금류의 연령에 따라 좌우된다.
전형적으로, 점안약 백신은 연령에 관계없이 용량 당 1 내지 100 μl의 양으로 투여된다. 점안약 백신을 위한 단일 용량은 바람직하게는 약 5 μl 내지 70 μl, 보다 바람직하게는 약 20 μl 내지 50 μl의 총 부피를 가지며, 20 μl, 25 μl, 30 μl, 35 μl, 40 μl, 45 μl 또는 50 μl의 단일 용량이 바람직하다. 점안약 백신을 위한 단일 용량은 가장 바람직하게는 약 30 μl 내지 50 μl의 총 부피를 가지며, 30 μl, 35 μl, 40 μl, 45 μl 또는 50 μl의 단일 용량이 바람직하다.
스프레이 백신은 상기 용량을 일령의 가금류 당 25 내지 1000 μl의 부피로 포함할 수 있다. 스프레이 백신을 위한 단일 용량은 바람직하게는 약 50 μl 내지 5000 μl, 보다 바람직하게는 약 75 μl 내지 2000 μl, 보다 바람직하게는 약 100 μl 내지 1000 μl, 보다 더 바람직하게는 약 200 μl 내지 900 μl, 보다 더 바람직하게는 약 300 μl 내지 800 μl, 보다 더 바람직하게는 약 400 μl 내지 700 μl의 총 부피를 가지며, 400 μl, 425 μl, 450 μl, 475μl, 500 μl, 525 μl, 550 μl, 575 μl, 600 μl, 625 μl, 650μl, 675 μl 또는 700 μl의 단일 용량이 바람직하다. 가장 바람직한 단일 용량은 400 μl, 450 μl 500 μl, 550 μl, 600 μl, 650 μl 또는 700 μl의 총 부피를 갖는다.
난내 백신 접종을 위한 백신은 상기 용량을 50 내지 100 μl, 바람직하게는 50 μl의 부피로 함유할 수 있다. 난내 백신을 위한 단일 용량은 바람직하게는 약 10 μl 내지 250 μl, 보다 바람직하게는 약 15 μl 내지 200 μl, 보다 더 바람직하게는 약 20 μl 내지 150 μl, 보다 더 바람직하게는 약 30 μl 내지 100 μl, 보다 더 바람직하게는 약 30 μl 내지 75 μl의 총 부피를 가지며, 30 μl, 35 μl, 40 μl, 45μl, 50 μl, 55 μl, 60 μl, 65 μl, 70 μl 또는 75 μl의 단일 용량이 바람직하다. 가장 바람직한 단일 용량은 40 μl, 45 μl, 50 μl, 55 μl 또는 60 μl의 총 부피를 갖는다.
근육내 또는 피하 백신 접종을 위한 백신이나 1회 용량의 음용수 백신은 상기 용량을 30 μl 내지 1000 μl의 부피로 함유할 수 있다. 단일 용량은 바람직하게는 약 30 μl 내지 1000 μl, 보다 바람직하게는 약 50 μl 내지 500 μl, 보다 더 바람직하게는 약 75 μl 내지 250 μl, 보다 더 바람직하게는 약 100 μl 내지 200 μl의 총 부피를 가지며, 100 μl, 110μl, 120 μl, 125 μl, 130 μl, 135 μl, 140 μl, 145 μl, 150 μl, 160 μl, 170 μl, 175 μl, 180 μl, 190 μl, 155 μl 또는 200 μl의 단일 용량이 가장 바람직하다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 2회 이상의 용량으로 투여된다.
그러나, 상기 면역원성 조성물은 2회 이상의 용량으로 투여될 수 있으며, 제1 용량은 제2 (부스터 (booster)) 용량의 투여 전에 투여된다.
2회 투여 요법의 바람직한 양태에서, 상기 면역원성 조성물의 제1 용량과 제2 용량 둘 다는 동일한 양으로 투여된다. 바람직하게는, 각각의 용량은 상기에서 명시된 바람직한 양이다. 상기 제1 용량 및 제2 용량 요법에 추가하여, 대체 실시 형태는 추가의 후속 용량을 포함한다. 예를 들어, 제3, 제4 또는 제5 용량이 이러한 양태에서 투여될 수 있다. 바람직하게는, 후속 제3, 제4 및 제5 용량 요법은 제1 용량과 동일한 양으로 투여되며, 상기 용량들 사이의 기간은 상기에서 언급된 제1 용량과 제2 용량 사이의 시기와 일치한다.
바람직하게는, 상기 백신의 제1 투여는 하기에서 기재되는 바와 같은 방법에 의해 생후 첫 3주 이내에, 보다 바람직하게는 생후 첫 1주 이내에, 가장 바람직하게는 생후 1일에 수행된다. 제2 투여는 생후 첫 20주 이내에, 바람직하게는 생후 16~18주 이내에, 보다 바람직하게는 생후 6~2주 사이에 수행될 수 있다. 예를 들어, 초기 (제 1) 백신 접종은 생후 1~10일에 수행되며, 제2 백신 접종 (부스터)은 생후 6~12주 또는 16~18주에 생백신 또는 불활성화 백신으로 수행된다. 보다 바람직하게는, 초기 (제 1) 백신 접종은 생후 1일에 수행되며, 제2 백신 접종 (부스터)은 생후 6~12주 또는 16~18주에 생백신 또는 불활성화 백신으로 수행된다.
난내 백신 접종이 사용되는 경우, 상기 제1 투여는 배아가 15 내지 19 일령, 바람직하게는 17, 18 또는 19 일령, 가장 바람직하게는 18 일령일 때 수행되는 것이 바람직하다. 제2 투여는 생후 첫 3주 이내에, 바람직하게는 생후 첫 10일 이내에 수행될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 피하로, 근육내로, 경구로, 난내로, 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해 투여된다.
상기 면역원성 조성물은 바람직하게는 국소 또는 전신으로 투여된다. 통상적으로 사용되는 적합한 투여 경로는 경구 또는 비경구 투여, 예를 들어, 비강내, 정맥내, 진피내, 경피, 근육내, 복강내, 피하 뿐만 아니라 흡입, 난내, 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해서이다. 그러나, 화합물의 성질과 작용 방식에 따라, 상기 면역원성 조성물은 다른 경로로도 투여될 수 있다. 예를 들어, 이러한 다른 경로는 피내, 정맥내, 혈관내, 동맥내, 복강내, 척수강내, 기관내, 피내, 심장내, 폐엽내, 엽내, 척수내, 폐내, 직장내 및 질내가 포함된다. 그러나, 상기 면역원성 조성물은 피하로, 근육내로, 경구로, 난내로, 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해 투여되는 것이 가장 바람직하다.
IBV 생백신은 바람직하게는 점안약에 의해, 비강내로, 근육내로 또는 피하로 개별적으로 투여된다.
보다 바람직하게는, 음용수 및 에어로졸 스프레이 백신 접종을 비롯한 대량 적용 방법이 사용된다. 하기에서 추가로 기재되는 바와 같은 배아 백신 (소위 난내 백신)으로서 백신을 사용하는 것이 또한 바람직하다.
예를 들어, 육계는 특히 높은 수준의 MDA를 갖는 육계에 대해, 생후 1일 또는 생후 1~3 주에 백신 접종될 수 있다. 산란 가축 또는 번식 가축은 초기에 생후 1~10 일에 백신 접종되고 생후 7~12주 또는 16~18주에 부스터될 수 있다.
난내 투여
상기에서 개략적으로 서술된 바와 같이, 본 발명은 또한 난내 경로를 통해 안전하게 투여될 수 있고 동시에 방어 면역 반응을 유도할 수 있는 IBV 백신을 제공한다. 난내 투여는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 당해 분야의 통상의 기술자는 지체 없이 난내 투여를 수행할 수 있다. 백신의 난내 투여는 난에 함유된 상태에서 조류 배아에 백신을 투여하는 것을 포함한다 (난내 백신 접종에 대한 검토를 위해 문헌 [Ricks et al., Advances in Vet. Med. 495-515, 1999] 참조). 백신은 당해 분야 (문헌 [Sharma; Am. J. Vet. Res. 45 1619-1623,1984])에 기술된 바와 같이 난의 임의의 적합한 구획 (예를 들어, 요막액, 난황낭, 양막, 기실 또는 배아내)에 투여될 수 있다. 백신은 껍질 (기실) 막 및 융모 요막 아래에 투여되는 것이 바람직하다.
백신은 배아 형성의 후기 단계 동안, 일반적으로는 인큐베이션 기간의 마지막 분기 동안, 바람직하게는 부화 전 3~4일 동안 발육란에 주입되는 것이 바람직하다. 상기 투여는 배아가 15 내지 19 일령, 바람직하게는 17, 18 또는 19 일령, 가장 바람직하게는 18 일령일 때 수행되는 것이 바람직하다. 이어서, 백신 접종된 발육란은 부화를 위해 인큐베이터로 옮겨진다. 난내 투여 과정은 종래 기술에서 기술된 바와 같이 로봇 주입 과정을 사용하여 자동화될 수 있다.
일반적으로, 가금류의 부화후 백신 접종을 위한 통상의 백신은 난내 백신 접종에 사용될 수 없는데, 이는 후기 단계 배아가 검사되는 대부분의 백신 바이러스로 감염되기 매우 쉽기 때문이다. 그러나, 국제공개공보 WO 01/64244는 IBV 백신이 매우 낮은 용량으로 적용된다면 난내 투여에 사용될 수 있다는 것을 개시하고 있다. 또한, 문헌 [Wakenell et al. 1986, Am. J. Vet. Res., 47 933-938]은 조직 배양에서 IB 백신 바이러스를 계대하는 것이 상기 바이러스를 배아에 대해 무병원성으로 만들었다는 것을 개시하고 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 점안약을 통해 투여된다.
전형적으로, 부화후 투여를 위한 생백신은 약독화 IBV를 용량 당 101 내지 108 EID50 (50% Egg Infective Dose: 50% 난 감염 용량)의 농도, 바람직하게는 용량 당 102 내지 105 EID50의 농도, 보다 바람직하게는 용량 당 102 내지 104 EID50의 농도, 보다 더 바람직하게는 용량 당 102 내지 103 EID50의 농도로 포함한다.
난내 투여를 위한 생백신은 전형적으로는 약 102 내지 107 EID50/배아, 바람직하게는 102 내지 103 EID50/배아의 양의 약독화 IBV를 50 내지 100 μl, 바람직하게는 50 μl의 부피로 포함한다.
바람직하게는, 본 발명의 면역원성 조성물은 본 발명의 IBV를 용량 당 약 1 내지 약 10 log10 EID (난 감염 용량)50, 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 8 log10 EID50의 양으로, 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 7 log10 EID50의 양으로, 보다 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 6 log10 EID50의 양으로, 보다 더 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 5 log10 EID50의 양으로, 보다 더 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 4 log10 EID50의 양으로, 가장 바람직하게는 용량 당 약 2 내지 약 3 log10 EID50의 양으로 포함한다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 면역원성 조성물은 본 발명의 IBV를 용량 당 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5 또는 log10 EID50의 양으로 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 1 내지 10 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 2 내지 5 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 용량 당 2 내지 4 log10 EID50의 IBV를 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 생후 첫 1주 이내에, 생후 첫 3일 이내에 또는 생후 첫 2일 이내에 또는 생후 첫 1일 이내에 대상체에게 투여된다.
바람직하게는, 면역화되는 상기 대상체는 생후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일이다. 보다 바람직하게는, 면역화되는 상기 대상체는 생후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일이다. 보다 바람직하게는, 면역화되는 상기 대상체는 생후 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일이다.
그러나, 생후 수일의 대상체의 백신 접종 후, 가금류의 면역계는 IBV 감염에 대해 면역력을 형성하는데 수일이 필요하다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 상기 대상체는 생후 첫 24 시간 이내에 면역화되는 것이 바람직하다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 생후 1일 이내에 대상체에게 투여된다. 실시예에서 나타낸 바와 같이, 본 출원에서 제공된 바와 같은 면역원성 조성물은 1 일령 가금류에게 투여될 때 안전하고 효과적인 것으로 입증되었다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 방법은 동일한 종의 미처리된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 물 설사의 예방 또는 감소, 체중 감소의 예방 또는 감소, 바이러스 부하의 저하, 바이러스 배출의 감소 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 효능 파라미터의 개선을 초래한다.
"치료 및/또는 예방 (prophylaxis)"이라는 용어는 다른 곳에서 정의되었으며, "예방 (prophylaxis)" 및 "예방하는 (preventing)" 또는 "예방 (prevention)"이라는 용어는 본 출원에서 상호 교환 적으로 사용된다. 또한, "배출"이라는 용어도 역시 다른 곳에서 정의되었다.
"감소시키는", "감소된", "감소" 또는 "저하"라는 용어는, 미처리되지만 (비면역화되지만) 후속적으로 특정 PEDV에 의해 감염되는 대상체와 비교하여, 효능 파라미터 (섬모 정체, 수포음, 산란 저하, 신장 병변, 물 설사, 체중 감소, 바이러스 부하, 바이러스 배출)가 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 적어도 10%까지, 바람직하게는 적어도 20%까지, 보다 바람직하게는 적어도 30%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 40%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%까지, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%까지, 가장 바람직하게는 100%까지 감소된다는 것을 의미한다. 효능 파라미터의 개선을 측정하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자의 일반 상식 내에 있다.
"바이러스 부하"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 바이러스 부하라는 용어는 본 출원에서 바이러스 역가라는 용어와 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 바이러스 부하 또는 바이러스 역가는 활성 바이러스 감염의 중증도의 척도이며, 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법으로 측정될 수 있다. 이러한 측정은 바이러스 단백질에 대한 항체의 결합 및 추가의 검출에 의하거나, 다르게는 RT-PCR과 같은 증폭 방법에 의한 바이러스 RNA의 검출에 의한 것과 같은 바이러스 단백질의 검출에 기반할 수 있다. 핵산 증폭 방법에 의한 혈장 중 비리온 결합 바이러스 RNA의 모니터링은 레트로바이러스 질환의 상태 및 진행을 평가하고, 예방학적 및 치료학적 개입의 유효성을 평가하는데 널리 사용되는 파라미터이다. 예를 들어, 바이러스 부하 또는 바이러스 역가는 혈장 1 밀리리터 당 RNA 카피 수와 같은 관련 체액 중 생바이러스의 양을 추정하여 계산될 수 있다.
"섬모 정체"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 기관의 표면은 특수한 상피 세포로 덮여 있으며, 섬모로 호칭되는 수많은 운동성 모발 유사 구조가 늘어서 있다. "섬모 정체"라는 용어는 섬모의 감소 또는 손실 및/또는 섬모 활성의 손실 또는 부분 손실을 포괄한다. 섬모 정체는 당해 분야의 통상의 기술자가 지체 없이 결정할 수 있다.
"수포음"이라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 그러나, "수포음"이라는 용어는 기관 수포음을 포괄하며, 기관지로부터 나오는 소리를 지칭한다. 수포음은 당해 분야의 통상의 기술자가 지체 없이 결정할 수 있다.
"산란 저하"라는 용어는 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. "산란 저하"라는 용어는 난 생산의 감소를 포괄한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명은 치료학적 용도를 위한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 약제로서 사용하기 위한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 약제의 제조를 위한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 대상체에서 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 본 출원에서 기재된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물을 추가로 제공하며, 여기서, 상기 H52 IBV는 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, AY044185 (서열 번호 80), AF352310 (서열 번호 81), AF317210 (서열 번호 82) 또는 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질, 외피 (E) 단백질 또는 막 당단백질 (M)을 포함하고, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 및 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택된다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질은 전장 스파이크 단백질이다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 N-말단으로부터 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 스파이크 단백질의 엑토도메인이다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 IBV는 약독화된다.
본 발명은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 추가로 제공한다:
a.) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, AF352315 (서열 번호 79), AY044185 (서열 번호 80), AF352310 (서열 번호 81), AF317210 (서열 번호 82) 또는 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크 (S) 단백질, 뉴클레오캡시드 (N) 단백질, 외피 (E) 단백질 또는 막 당단백질 (M)을 포함하는 H52 IBV를 제공하는 단계; 및
b.) 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 및 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택된 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 제공하는 단계; 및
c.) a)의 H52 IBV의 상기 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 b)의 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편으로 대체하여 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 H52 IBV를 갖도록 하는 단계; 및
d.) 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV를 수득하는 단계; 및
e.) 약제학적으로 허용되는 담체를 첨가하는 단계.
"수득하는"이라는 용어는 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV의 수확, 단리, 정제 및/또는 제형화 (예를 들어, 마무리, 불활성화 및/또는 블렌딩)을 포함한다.
"수확"이라는 용어는 형질 감염되거나 감염된 세포 또는 세포주로부터 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV를 수집 또는 회수하는 것을 지칭한다. 당해 분야에 공지된 임의의 통상적인 방법, 예를 들어, 임의의 분리 방법을 사용할 수 있다. 당해 분야에 널리 공지된 방법으로는 특정 기공 크기를 갖는 반투과성 막을 사용하는 것과 같은 여과 또는 원심 분리가 포함된다.
"단리"라는 용어는 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV의 단리 단계를 포함한다. 형질 감염되거나 감염된 세포 또는 세포주로부터 단리하는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 이러한 방법은 동결 해동 주기, 초음파 처리 등을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 물리적 및/또는 화학적 방법을 포함한다.
분리주로부터 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV를 "정제"하는 방법은, 예를 들어, 문헌 [rotein purification methods - a practical approach, E.L.V. Harris and S. Angel, eds., IRL Press at Oxford University Press]에 기재된 방법에 의해 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 이러한 방법으로는 원심 분리 및/또는 여과에 의한 분리, 침전, 크기 배제 (겔 여과) 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 금속 킬레이트 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 공유 결합 크로마토그래피, 소수성 상호 작용 크로마토그래피 등이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 벡터는 정제된 순수 형태로 수득될 수 있거나, 다른 세포 물질 또는 배양 배지 등이 없거나 실질적으로 없을 수 있다. 상기 분리 및/또는 정제 후, 항원은 적어도 80%, 바람직하게는 80%~90%, 보다 바람직하게는 90%~97%, 가장 바람직하게는 97% 초과 내지 어떠한 오염도 없는 절대적인 순수 형태까지의 순도를 나타낸다.
추가의 양태에 따르면, 본 출원에서 사용되는 "수득되는"은 또한 완충제 첨가, 불활성화, 중화 단계 등과 같은 최종 제형화 과정의 일부로서 추가의 마무리 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물을 제조하는 방법의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편은 스파이크 단백질의 엑토도메인이다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 용매, 분산매, 코팅제, 안정화제, 희석제, 보존제, 항균제, 항진균제, 등장화제, 흡착 지연제, 아쥬반트, 면역 자극제 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물을 제조하는 방법의 또 다른 구체적인 양태에서, 상기 이종 S 단백질은 전장 스파이크 단백질이다.
본 발명은 또한 이종 IBV S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편, 예를 들어, pUC57-s H52 rIBV CR88 S Ecto 공여체 플라스미드 (서열 번호 21)를 포함하는 부분적인 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스) 게놈을 인코딩하는 핵산을 포함하는 플라스미드에 관한 것이다.
하기의 항목들도 또한 본 출원에서 기재된다:
1. 이종 전염성 기관지염 바이러스 (IBV) S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV.
2. 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1의 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
IBV H52 - 단백질 인코딩 서열에 의한 정의
4. 항목 1 내지 3 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 EU817497 (서열 번호 78)에 나타낸 바와 같은 뉴클레오타이드 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV 바이러스주가 AF352315 (서열 번호 79)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크 (S1) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV 바이러스주가 서열 번호 1에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크 (S) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 AY044185 (서열 번호 80) 또는 AF352310 (서열 번호 81)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 서열 번호 2에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 AF317210 (서열 번호 82)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 외피 (E) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 1 내지 9 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 서열 번호 3에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 외피 (E) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질 (M) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 H52 IBV가 서열 번호 4에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질 (M) 단백질을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
이종 S 단백질
13. 항목 1 내지 12 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 스파이크가 비-매사추세츠 유전자형 또는 혈청형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 아칸소 (예를 들어, 아칸소 99), 브라질 (예를 들어, BR-1, BR-2, 23/2013, IBV/브라질/351/1984), 캘리포니아 (예를 들어, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어 (예를 들어, 델라웨어 98), 네덜란드 (예를 들어, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아 (예를 들어, 조지아 GA-07, GA-08, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와 (예를 들어, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아 (예를 들어, 이탈리아 02), JMK, LDT3, 메인 (예를 들어, 메인 209), 펜실베이니아 (예를 들어, 펜실베이니아 1220/98, 펜실베이니아 울그/98), PL84084, Qu (예를 들어, Qu-mv), QX (예를 들어, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2 (예를 들어, IS/1494/06, IBV/Ck/EG/CU/4/2014, 감마CoV/Ck/폴란드/G052/2016) 및 4/91 (793B, CR88)로 이루어진 목록으로부터 선택된 유전자형 또는 혈청형을 갖는 IBV로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 이탈리아 02, 아칸소, 코네티컷, 조지아, LDT3, PL84084, 변이체 2 또는 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택된 IBV로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택된 IBV로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 16에 있어서, 상기 4/91 바이러스주가 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 약독화 4/91, IB4-91 및 CR88로 이루어진 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 16에 있어서, 상기 QX 바이러스주가 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03 및 GB341/96으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, BV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 16에 있어서, 상기 Q1 바이러스주가 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21 및 칠레-295-10으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, BV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 16에 있어서, 상기 아칸소 바이러스주가 Ark99, ArkGA, ArkDPI, AL/5364/00, ARKDPI11, AL/0803/01, AL/7149/00, ArkDPI101, AL/1221/01, AL/1793/01 및 AL/4614/98로 이루어진 목록으로부터 선택되는, BV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 16에 있어서, 상기 변이체 2 바이러스주가 IS/1494/06, IBV/Ck/EG/CU/4/2014, 감마CoV/Ck/폴란드/G052/2016, Eg/CLEVB-2/IBV/012, D1344/2/4/10_EG, TR8 및 IB VAR2-06으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, BV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 16에 있어서, 상기 브라질 바이러스주가 BR-1, BR-2, 23/2013 및 IBV/브라질/351/1984로 이루어진 목록으로부터 선택되는, BV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91 유전자형 또는 혈청형으로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 5 또는 6과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 4/91로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 5 또는 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 7 또는 8과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 QX로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 7 또는 8에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 9 또는 10과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 Q1로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 9 또는 10에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 1 내지 26 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 11 또는 12와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 아칸소로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 11 또는 12에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 1 내지 27 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 13 또는 14와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 변이체 2로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 13 또는 14에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 1 내지 28 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 15 또는 16과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 유전자형 또는 혈청형 브라질로부터 유래하거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 1 내지 29 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15 또는 16로 이루어진 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 1 내지 30 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S 단백질이 전장 스파이크 단백질인, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 31 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 1 내지 32 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 N-말단으로부터 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
34. 항목 1 내지 33 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 적어도 1000개 아미노산의 길이를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
35. 항목 1 내지 34 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 상기 스파이크 단백질의 엑토도메인인, IBV 또는 면역원성 조성물.
36. 41항목 1 내지 35 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편이 동종 S 단백질 또는 이의 단편을 대체하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
37. 항목 1 내지 36 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편이 자연 발생 S 단백질 또는 이의 단편을 대체하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
38. 항목 1 내지 37 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편이 H52에서 상기 S 단백질 또는 이의 단편을 대체하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
39. 항목 1 내지 38 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 IBV가 약독화되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
40. 항목 1 내지 39 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 IBV가 불활성화되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
41. 항목 1 내지 40 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 IBV가 유전적으로 조작되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
42. 항목 1 내지 41 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
43. 항목 2 내지 42 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
44. 항목 2 내지 43 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
45. 항목 44에 있어서, 상기 약학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충 식염수인, 면역원성 조성물.
46. 항목 2 내지 45 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 기인하는 임상 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후의 치료 및/또는 예방에 효과적인, 면역원성 조성물.
47. 항목 2 내지 46 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 이종 스파이크 단백질의 혈청형의 IBV 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
48. 항목 2 내지 47 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 또는 브라질 유전자형의 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
49. 항목 2 내지 48 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 4/91 유전자형의 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
50. 항목 2 내지 49 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일 용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
51. 항목 2 내지 50 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하로, 근육내로, 경구로, 난내로, 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
52. 항목 2 내지 51 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 1 내지 10 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
53. 항목 2 내지 52 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 2 내지 5 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
54. 항목 2 내지 53 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 2 내지 4 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
55. 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
56. 항목 55에 있어서, 상기 키트가 조류의 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함하는, 키트.
57. 항목 55에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함하는, 키트.
58. 항목 55에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 설명서를 추가로 포함하는, 키트.
59. 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 따른 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법.
60. IBV에 기인하는 임상 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 따른 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
61. 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 섬모 정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 따른 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
62. 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, 대상체를 면역화시키는 방법에 사용하기 위한 것으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 상기 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물.
63. 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, IBV에 기인하는 임상 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후를 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 것으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 상기 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물.
64. 항목 2 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 섬모 정체를 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 것으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 상기 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물.
65. 항목 59 내지 64 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
66. 항목 59 내지 65 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
67. 항목 59 내지 66 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
68. 항목 59 내지 67 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 대상체가 닭인, 방법 또는 용도.
69. 항목 59 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
70. 항목 59 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
71. 항목 59 내지 70 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하로, 근육내로, 경구로, 난내로, 스프레이를 통해, 음용수를 통해 또는 점안약에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
72. 항목 59 내지 71 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안약을 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
73. 항목 59 내지 72 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 1 내지 10 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
74. 항목 59 내지 73 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 2 내지 5 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
75. 항목 59 내지 74 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 용량 당 2 내지 4 log10 EID50의 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
76. 항목 59 내지 75 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물을 생후 첫 1주 이내에, 생후 첫 3일 이내에 또는 생후 첫 2일 이내에 또는 생후 첫 1일 이내에 대상체에게 투여하는, 방법 또는 용도.
77. 항목 59 내지 76 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 면역원성 조성물을 생후 첫 1일 이내에 대상체에게 투여하는, 방법 또는 용도.
78. 항목 59 내지 77 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 물 설사의 예방 또는 감소, 체중 감소의 예방 또는 감소, 바이러스 부하의 감소, 바이러스 배출의 감소 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 효능 파라미터의 개선을 초래하는, 방법 또는 용도.
79. 항목 59 내지 78 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
80. 항목 59 내지 79 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
81. 항목 59 내지 80 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 미처리 대조군의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
82. 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, 치료학적 용도를 위한, IBV 또는 면역원성 조성물.
83. 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한, IBV 또는 면역원성 조성물.
84. 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목에 있어서, 약제로서 사용하기 위한, IBV 또는 면역원성 조성물.
85. 약제의 제조를 위한, 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
86. 대상체에서 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한, 항목 1 내지 54 중 어느 한 항목의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
87. 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 H52 IBV가 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, AY044185 (서열 번호 80), AF352310 (서열 번호 81), AF317210 (서열 번호 82) 또는 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는 뉴클레오캡시드 (N) 단백질, 외피 (E) 단백질 또는 막 당단백질 (M)을 포함하고, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 및 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되거나, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, 면역원성 조성물.
88. 항목 87에 있어서, 상기 이종 S 단백질이 전장 스파이크 단백질인, 면역원성 조성물.
89. 항목 87에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 N-말단으로부터 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는, 면역원성 조성물.
90. 항목 87 또는 89에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 상기 스파이크 단백질의 엑토도메인인, 면역원성 조성물.
91. 항목 87 내지 90 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 IBV가 약독화되는, 면역원성 조성물.
92. 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 면역원성 조성물을 제조하는 방법:
a.) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, AF352315 (서열 번호 79), AY044185 (서열 번호 80), AF352310 (서열 번호 81), AF317210 (서열 번호 82) 또는 AF286185 (서열 번호 83)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖거나 이로 이루어지거나 이를 포함하는 스파이크 (S) 단백질, 뉴클레오캡시드 (N) 단백질, 외피 (E) 단백질 또는 막 당단백질 (M)을 포함하는 H52 IBV를 제공하는 단계; 및
b.) 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 및 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택된 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 제공하거나, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 제공하는 단계; 및
c.) a)의 H52 IBV의 상기 스파이크 단백질을 b)의 상기 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편으로 대체하여 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 H52 IBV를 갖도록 하는 단계; 및
d.) 이종 S 단백질 또는 이의 단편을 갖는 상기 H52 IBV를 수득하는 단계; 및
e.) 약제학적으로 허용되는 담체를 첨가하는 단계.
93. 항목 92에 있어서, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 상기 스파이크 단백질의 엑토도메인인, 방법.
94. 항목 92 또는 93에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 용매, 분산 매질, 코팅제, 안정화제, 희석제, 보존제, 항균제, 항진균제, 등장화제, 흡착 지연제, 아쥬반트, 면역 자극제 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
95. 항목 92 또는 94에 있어서, 상기 이종 S 단백질이 전장 스파이크 단백질인, 방법.
도 1은 재조합 야생형 바이러스 H52 및 CR88과 비교한 H52 rIBV CR88 S ecto에 대한 난내 복제 동력학을 도시한 것이다. 하나의 데이터 포인트는 시점 당 5개 샘플의 평균을 나타낸다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 2는 섬모 정체 점수의 요약을 도시한 것이다. 한 동물의 10개의 환에 대한 10개의 개별 점수의 합계를 계산하고 그래프에서 하나의 점으로 표시한다. 최대 섬모 정체는 40의 점수에 상응하는 반면, 섬모 정체의 부재는 0의 점수로 표시된다. 평균 및 유의성은 GraphPad Prism 및 일반적인 일원 ANOVA 검정 (p<0.007)을 사용하여 계산된다.
도 3은 신장 조직의 RT-qPCR 결과의 요약을 도시한 것이다. 각각의 개별 새는 하나의 데이터 포인트로 표시된다.
도 4는 후비공 면봉 용출물의 RT-qPCR 결과의 요약을 도시한 것이다. 각각의 개별 새는 하나의 데이터 포인트로 표시된다.
도 5는 섬모 정체 점수의 요약을 도시한 것이다. 한 동물의 10개의 환에 대한 10개의 개별 점수의 합계를 계산하고 그래프에서 하나의 점으로 표시한다. 최대 섬모 정체는 40의 점수에 상응하는 반면, 섬모 정체의 부재는 0의 점수로 표시된다. 평균 및 유의성은 GraphPad Prism 및 일반적인 일원 ANOVA 검정 (p<0.0001)을 사용하여 계산된다.
서열 개요
서열 번호 1: H52 IBV 스파이크 (S) 단백질.
서열 번호 2: H52 IBV 뉴클레오캡시드 (N) 단백질.
서열 번호 3: H52 IBV 외피 (E) 단백질.
서열 번호 4: H52 IBV 막 당단백질 (M) 단백질.
서열 번호 5 및 6: 유전자형 또는 혈청형 4/91 유래의 이종 S 단백질 또는 단편.
서열 번호 7 및 8: 유전자형 또는 혈청형 QX 유래의 이종 S 단백질 또는 이의 단편.
서열 번호 9 및 10: 유전자형 또는 혈청형 Q1 유래의 이종 S 단백질 또는 이의 단편.
서열 번호 11 및 12: 유전자형 또는 혈청형 아칸소 유래의 이종 S 단백질 또는 이의 단편.
서열 번호 13 및 14: 유전자형 또는 혈청형 변이체 2 유래의 이종 S 단백질 또는 이의 단편.
서열 번호 15 및 16: 유전자형 또는 혈청형 브라질 유래의 이종 S 단백질 또는 이의 단편.
서열 번호 17: IBV CR88 스파이크 핵산 코딩 서열.
서열 번호 18: IBV H52 스파이크 엑토도메인 핵산 코딩 서열.
서열 번호 19: pUC57-s H52 rIBV 공여체 플라스미드.
서열 번호 20: IBV CR88 스파이크 엑토도메인 핵산 코딩 서열.
서열 번호 21: pUC57-s H52 rIBV CR88 S Ecto 공여체 플라스미드.
서열 번호 22 내지 서열 번호 77: 프라이머.
서열 번호 78: EU817497 (H52 IBV 뉴클레오타이드 서열).
서열 번호 79: AF352315 (H52 IBV S 단백질 아미노산 서열).
서열 번호 80: AY044185 (H52 IBV N 단백질 아미노산 서열).
서열 번호 81: AF352310 (H52 IBV N 단백질 아미노산 서열).
서열 번호 82: AF317210 (H52 IBV E 단백질 아미노산 서열).
서열 번호 83: AF286185 (H52 IBV M 단백질 아미노산 서열).
서열 번호 84 및 서열 번호 85: 프라이머.
실시예
하기 실시예들은 본 발명의 구체적인 실시 형태들을 설명하기 위해 하기에 제시된다. 이러한 실시예들은 단지 예시를 위한 것이지, 본 발명의 범위 또는 근본적인 원리를 한정하지 않는 것으로 이해된다.
실시예 1:
재조합 IBV H52 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인에 대한 코딩 서열이 이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인에 대한 코딩 서열로 대체되는 재조합 IBV H52의 생성
공여체 플라스미드 작제
CR88 엑토도메인에 의한 H52 스파이크 엑토도메인의 예시적인 대체를 상세히 기재한다: IBV CR88 스파이크 핵산 코딩 서열 (서열 번호 17)은 상업적 공급자가 합성한다. 이것은 pUC57-s H52 rIBV 공여체 플라스미드 (서열 번호 19)로서 이후에 지칭되는, 문헌 [van Beurden et al., Virol J. 2017;14(1):109]에 기재된 pUC57-s IBV-5-1b-S-SIR-3T 공여체 플라스미드에서 IBV H52 스파이크 엑토도메인 핵산 코딩 서열 (서열 번호 18)을 대체하기 위한 주형으로 사용된다. 서열 번호 19의 1717 내지 4941번 염기를 이에 상응하는 IBV CR88 스파이크 엑토도메인 핵산 코딩 서열 (서열 번호 20)로 대체하며, 이는 각각 서열 번호 15의 55 내지 3285번 염기에 상응한다. 이것은 IBV CR88 스파이크 엑토도메인이 1717 내지 4947번 염기에 의해 인코딩되는 pUC57-s H52 rIBV CR88 S Ecto 공여체 플라스미드 (서열 번호 21)를 생성한다. 이를 위해, H52 스파이크 코딩 서열에 가까운 고유한 제한 부위 5' (EcoRV) 및 3' (PmlI)을 사용하여 pUC57-s H52 rIBV 공여체 플라스미드 (서열 번호 19)를 분해하여 플라스미드를 선형화하고 H52 스파이크 및 플랭킹 서열 (flanking sequence)을 제거한다. QIAquick 겔 추출 키트 (Qiagen)를 사용하여 H52 스파이크 코딩 서열 없이 pUC57-s IBV H52 백본에 상응하는 밴드를 정제한다. CR88 스파이크 엑토도메인 핵산 코딩 서열 및 플랭킹 5' 및 3' IBV H52 서열을 Q5® High-Fidelity DNA 폴리머라아제 (NEB; 프라이머에 대해 표 1 참조)로 3개의 개별 PCR 반응에서 증폭시킨다. PCR 산물을 QIAquick 겔 추출 (Qiagen)에 의해 정제하고, 키트 프로토콜에 따라 NEBuilder® HiFi DNA 어셈블리 클로닝 키트 (NEB)를 갖춘 Gibson 어셈블리에 사용하여 pUC57-s H52 rIBV CR88 S Ecto 공여체 플라스미드를 생성한다.
Figure pct00001
재조합 IBV의 표적화 RNA 재조합 및 구제
재조합 IBV의 생성을 위해, 문헌 [van Beurden et al., Virol J. 2017;14(1):109]에 기재된 바와 같은 표적화 RNA 재조합 방법을 적용한다. 간단히 말하자면, H52 쥐과 동물화 (m) IBV를 기재된 바와 같이 생성한다. H52 rIBV CR88 S Ecto의 생성을 위해, LR7 세포를 H52 mIBV로 감염시키고, pUC57-s H52 rIBV CR88 S Ecto 공여체 플라스미드로부터 생성된 시험관내 전사물로 전기 천공한 후, 8일령 SPF 발육 계란 (VALO BioMedia)에 주사한다. 37.5°C 및 60% 습도에서 최대 9일의 인큐베이션 후, QIAamp 바이러스 RNA 미니 키트 (Qiagen) 및 Platinum™ Taq DNA 폴리머라아제를 갖는 SuperScript™ III 1단계 RT-PCR 시스템 (ThermoFisher)을 사용하여 RNA 분리 후 재조합 IBV의 구제를 위해 모든 계란의 요막액을 개별 분석한다. mIBV가 아닌 재조합 IBV에 특이적인, H52 IBV 1ab 및 CR88 IBV S 엑토도메인에서 결합하는 PO1323 및 PO1729 프라이머를 사용한다 (표 2). LR7 세포의 최고 희석으로 접종된 계란의 양성 요막액을 8 일령 SPF 계란에서 2회 엔드 포인트 희석을 위해 선택한다. KingFisher™ Duo Prime Purification System (ThermoFisher)을 갖춘 MagMAX™ Core Nucleic Acid Purification Kit (ThermoFisher)를 사용하여 한계 희석 샘플의 핵산 분리를 수행한 후, 상기에서 기재된 RT-PCR에 의해 rIBV의 존재에 대해 분석한다. 제2 한계 희석 후, 최고 희석으로 접종된 계란의 양성 테스트된 요막액을 10 일령 SPF 발육 계란의 번식에 사용한다. 요막액을 1xPBS에서 1:1000으로 희석하고, 계란 당 100 μl를 주사한다. 요막액을 접종 후 48 시간에 수확하고, 잔해물을 제거하고, -80°C에서 보관한다. 생성된 rIBV에서 공여체 플라스미드로부터 유래된 서열을 확인하기 위해, QIAamp 바이러스 RNA 미니 키트에 이어서 표 3에서 열거된 프라이머를 사용하는 SuperScript III 1단계 RT-PCR, QIAquick PCR 정제 및 상업적 공급자에 의해 수행된 동일한 프라이머를 갖는 후속 Sanger 서열 분석으로 바이러스 핵산을 분리한다.
Figure pct00002
Figure pct00003
H52 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인에 대한 코딩 서열이 또 다른 IBV 유전자형 유래의 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인에 대한 코딩 서열로 대체된 H52 재조합 IBV의 생성 및 특성화
H52 rIBV CR88 S Ecto의 생성에 대해 기재된 바와 동일한 방법을 적용하여, H52 스파이크 코딩 서열 (서열 번호 19에서 1663 내지 5151번의 염기) 또는 H52 스파이크 엑토도메인 코딩 서열 (서열 번호 19의 1717 내지 4941번 염기)이 표 4에서 열거된 혈청형 및 유전자형의 IBV 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인에 대한 코딩 서열로 대체된 재조합 H52 IBV를 생성하고 특성화한다.
Figure pct00004
Figure pct00005
표 2 및 3에서의 프라미머는 식별 및 상이한 재조합 바이러스의 서열 분석에 사용되며, 필요에 따라 각각의 스파이크 서열에 맞게 조정된다.
실시예 2:
난내 복제 동력학
8 일령 발육 계란에 rIBV 및 각각의 대조군의 102 EID50을 접종한다. 계란을 37.5°C, 60% 습도에서 인큐베이션하고, 접종 후 0, 8, 24, 34, 48 및 72 시간에 매일 캔들링 (candle)하고 배아 사망률을 기록한다. 샘플 및 시점 당 예비 선택된 5개의 계란을 제거하고, 적어도 2 시간 동안 4°C로 옮긴다. 이어서, 요막액을 수확하고 -80°C에서 보관한다. 분석을 위해, 샘플을 해동하고, Ca 및 Mg를 함유하지 않은 1xPBS로 1:10 희석하고, Hamilton Starlet 피펫 로봇을 사용하여 운반 RNA를 추가하여 QIAamp DNA Blood Mini 키트 (Qiagen)로 핵산을 추출한다. 추출된 핵산을 문헌 [Callison et al. (J Virol Methods. 2006;138(1-2):60-5]으로부터 맞게 조정된 프로토콜에 의해 IBV RNA의 상대량에 대해 RT-qPCR로 분석한다. 간단히 말하자면, 동일한 프라이머 및 프로브를 사용하며, 열 프로파일을 TaqMan® Fast Virus 1-Step Master Mix (ThermoFisher) 및 ABI™ 7900HT Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)의 사용에 맞게 조정한다. IBV H52의 10배 희석 시리즈를 기준으로서 사용하여 모든 핵산 샘플을 삼중으로 분석한다.
H52 rIBV CR88 S Ecto의 경우, 재조합 야생형 바이러스 H52 및 CR88과 비교하여 약간 유사한 복제 동력학이 초기 시점에서 관찰된다. 그러나, 32 시간 후, 모든 바이러스는 비슷한 ct 값에 도달한다. 모든 배아는 접종 후 32 시간에서 살아 있는 반면, 감염 후 48 시간 시점에서는 남아 있는 모든 배아가 모든 샘플에 대해 사망하였다. 그러므로, H52 rIBV CR88 S ecto의 복제는 야생형 바이러스와 비교하여 동등하게 효율적인 것으로 간주된다 (도 1 참조).
실시예 3:
백신 및 시험 감염 바이러스의 제조
닭에서 이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인을 갖는 H52 rIBV의 효능을 입증하기 위해, 바이러스 스톡의 분취량을 해동하고, 1xPBS로 10배 희석하고, 희석물 당 5개의 8 일령 발육 계란에 100 μl를 접종하여 50% 배아 감염 용량 (EID50)을 결정한다. 접종 후 7일까지 계란을 37.5°C, 60% 습도에서 인큐베이션한다. 24 시간 후 사망한 배아를 갖는 계란을 실험에서 제외한다. 접종 후 7일에 사망한 배아를 갖는 다른 모든 계란은 양성으로 간주된다. 살아 있는 배아를 갖는 모든 계란을 접종 후 7일에 바닥으로부터 캔들링하여 양성으로 간주되는 왜소증 (dwarf)을 식별한다. EID50/ml를 리드 및 무엔치 식 (문헌 [Reed and Muench, Am J Epidemiol,1938; 27(3):493-497])으로 계산한다. 백신 접종을 위해, 바이러스 스톡을 1xPBS로 희석하여 104.3 EID50/ml의 역가를 수득한다 (50 μl에서 닭 당 103 EID50).
유전자형 및 혈청형 793B, QX, Q1, Ark, 변이체 2 및 브라질에 대한 시험 감염 바이러스를 10 일령 SPF 발육 계란에서 번식시킨다. 접종 후 24 시간에 계란을 적어도 2 시간 동안 4°C로 옮긴다. 요막액을 수확하고, 분취하고, -80°C에서 보관한다. 바이러스 역가를 상기에서 기재된 바와 같이 결정한다. 역가를 1xPBS에 의한 희석으로 104.3 내지 105.3 EID50/ml로 설정한다 (50 μl에서 닭 당 103 내지 104 EID50).
실시예 4:
백신 효능의 결정
수정된 SPF 계란을 99.7°F 및 50% 습도의 계란 세터에서 시간 당 1회전으로 18일 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 18 일차에, 계란을 캔들링하고, 수정된 계란을 부화기로 옮기고, 부화할 때까지 99°F 및 70% 습도에서 인큐베이션한다. 임상 징후 또는 기형이 없는 병아리를 각 치료군에 무작위로 분배하고, 별도의 분리기로 옮긴다. 적어도 2 마리의 병아리는 엄격한 음성 대조군 (strict negative control: SNC) 그룹의 역할을 하고, 5 마리의 병아리를 시험 감염 대조군 (challenge contro: CC)에 등록하고, 그룹들 중 적어도 10 마리의 병아리를 이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인을 갖는 재조합 IBV로 백신 접종한 후 시험 감염시킨다. 동물 복지 권고 사항에 대한 지역 및 국가 요구 사항에 따른 주거 조건하에 동물을 유지한다. 조명 체계를 하루 16 시간 광으로 조정한다. 사료 및 물을 무제한으로 제공한다. 분리기로 옮긴 후, 점안약 (총 부피 50 μl, 안구 당 25 μl)을 통해 병아리를 닭 당 103 EID50으로 (1 일령) 백신 접종하는 반면, SNC 및 CC 그룹은 미처리 상태로 유지된다. 백신 접종 후 21일에, CC 및 백신 접종 그룹의 닭을 점안약 (총 부피 50 μl, 안구 당 25 μl)을 통해 각 스파이크 동종 시험 감염 바이러스주 (793B, QX, Q1, Ark, 변이체 2 또는 브라질)의 닭 당 103 내지 104 EID50으로 시험 감염시킨다. 시험 감염 후 7일에, 모든 닭을 안락사시키고, 후비공 면봉을 채취하고, 신장을 제거하고, IBV 특이적 RT-qPCR 분석을 위해 4°C에서 RNAlater 안정화 용액 (ThermoFisher) 중에 보관한다. 또한, 기관을 제거하고, 따뜻한 세포 배양 배지를 함유하는 50 ml 튜브로 옮긴다. 이후, 결합 조직으로부터 기관을 청소하고, 세포 배양 배지로 플러싱한다. 0.6~0.8 mm 슬라이스 두께로 설정된 McIlwain 조직 초퍼 (chopper)를 사용하여, 기관을 기관환으로 절단한다. 기관 당 상부 부분의 3개의 환, 중간 부분의 5개의 환 및 하부 부분의 3개의 환을 광학 현미경 검사로 섬모 박동에 대해 분석하고, 섬모 정체에 대해 점수를 매긴다 (표 4 참조). 내부 환 중 50% 초과가 격렬한 섬모 운동을 나타내는 경우, 환을 정상으로 기록한다 (점수 2 이하). 섬모 중 50% 미만이 박동하고 있는 경우, 환을 섬모 정체에 양성으로 기록한다 (점수 3 및 4). IBV 특이적 RT-qPCR 분석을 위해, 신장 조직 조각을 실온으로 가온하고, 각각 배지 및 PBS로 충전되는 별도의 2 ml Precellys 튜브로 옮긴다. 신장을 6800 rpm으로 1x 20 초 동안 Precellys® 조직 균질화기 (Bertin Instruments)로 균질화한다. 후비공 면봉을 2 ml 1x PBS 중에 용출시킨다. MagMAXTM Core Nucleic Acid Purification Kit (ThermoFisher) 및 KingFisher™ Duo Prime Purification System (ThermoFisher)을 사용하여, 각각 200 μl의 용출액 및 조직 균질물로부터 핵산을 단리한다. 분석을 위한 StepOnePlus™ Real-Time PCR System (ThermoFisher)을 중복으로 사용하는 것을 제외하고는, RT-qPCR을 상기에서 난내 동력학에 대해 기재된 바와 같이 수행한다.
Figure pct00006
실시예 5:
이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인을 인코딩하는 재조합 IBV H52의 효능
연구의 목적은 이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인을 인코딩하는 재조합 IBV H52 (Mass 유전자형)가 스파이크 동종 시험 감염 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어를 제공할 수 있다는 것을 입증하는 것이다.
IBV CR88 (4/91 유전자형)의 스파이크 엑토도메인을 인코딩하는 재조합 IBV H52가 인코딩된 IBV CR88 스파이크 엑토도메인에 대한 동종 시험 감염으로서 및 IBV H52 백본을 고려하여 이종 시험 감염으로서 간주되는 병독성 793B 바이러스주 (4/91 유전자형)에 의한 시험 감염에 대해 방어를 제공할 수 있는지를 분석한다. 모든 닭을 임상 징후에 대해 매일 관찰한다. 백신 접종 또는 시험 감염 후 어떠한 임상 징후도 기록되지 않는다. 생후 1일에 H52 rIBV CR88 S Ecto에 의한 백신 접종에 대한 역 적정은 각각 백신 접종 후 21일에 적용된 793B 시험 감염 바이러스에 대해 104.13 EID50/ml (표적 104.3 EID50/ml) 및 104.69 EID50/ml (표적 104.3 EID50/ml)의 역가를 결정한다. 섬모 정체는 상기에서 기재된 바와 같이 점수를 매기고, 결과는 도 2에 도시되어 있고, 표 6에 요약되어 있다.
Figure pct00007
엄격한 음성 대조군의 모든 동물은 정상적인 섬모 운동을 나타내는 반면, 시험 감염 대조군 중 80% 동물은 섬모 정체에 대해 양성이다. 대조적으로, H52 rIBV CR88 S Ecto로 백신 접종된 동물 중 82%가 방어된다. 또한, H52 CR88 S Ecto로 백신 접종된 동물의 신장 및 후비공 면봉에서의 바이러스 부하는 시험 감염 대조군의 동물과 비교하여 감소한다 (도 3 및 도 4).
더욱이, IBV QX의 스파이크를 인코딩하는 재조합 IBV H52가 인코딩된 IBV QX 스파이크에 대한 동종 시험 감염으로서 및 IBV H52 백본을 고려하여 이종 시험 감염으로서 간주되는 병독성 D388 QX 바이러스주에 의한 시험 감염에 대해 방어를 제공할 수 있는지를 분석한다. 모든 닭을 임상 징후에 대해 매일 관찰한다. 백신 접종 또는 시험 감염 후 어떠한 임상 징후도 기록되지 않는다. 생후 1일에 H52 rIBV QX S에 의한 백신 접종에 대한 역 적정은 104 EID50/ml의 역가를 결정하는 반면, QX 백신은 105 EID50/ml (표적 104.3 EID50/ml)의 역가를 초과한다. 104.83 EID50/ml (표적 104.3 EID50/ml)의 역가는 각각 백신 접종 후 21일에 적용된 D388 QX 시험 감염 바이러스에 대해 결정된다. 섬모 정체는 상기에서 기재된 바와 같이 점수를 매기고, 결과는 도 5에 도시되어 있고, 표 7에 요약되어 있다.
Figure pct00008
엄격한 음성 대조군의 모든 동물은 정상적인 섬모 운동을 나타내는 반면, 시험 감염 대조군의 모든 동물은 섬모 정체에 대해 양성이다. 대조적으로, H52 rIBV QX S 또는 QX 백신으로 백신 접종된 동물 중 100%가 방어된다.
유사한 결과가 이종 스파이크 또는 스파이크 엑토도메인을 갖는 다른 H52 rIBV로 수득된다.
상기 결과는 이종 스파이크를 갖는 재조합 IBV의 생성을 위한 강력한 백본으로서 IBV 4/91 바이러스주의 적합성을 강조하며, 특히, IBV 뷰데트 백본에 대한 선행 기술 데이터와 비교될 때 우수한 결과를 나타낸다.
<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH <120> H52 IBV VACCINE WITH HETEROLOGOUS SPIKE PROTEIN <130> 01-3344 <160> 85 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1162 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 1 Met Leu Val Thr Pro Leu Leu Leu Val Thr Leu Leu Cys Ala Leu Cys 1 5 10 15 Ser Ala Ala Leu Tyr Asp Ser Ser Ser Tyr Val Tyr Tyr Tyr Gln Ser 20 25 30 Ala Phe Arg Pro Pro Asp Gly Trp His Leu His Gly Gly Ala Tyr Ala 35 40 45 Val Val Asn Ile Ser Ser Glu Ser Asn Asn Ala Gly Ser Ser Ser Gly 50 55 60 Cys Thr Val Gly Ile Ile His Gly Gly Arg Val Val Asn Ala Ser Ser 65 70 75 80 Ile Ala Met Thr Ala Pro Ser Ser Gly Met Ala Trp Ser Ser Ser Gln 85 90 95 Phe Cys Thr Ala Tyr Cys Asn Phe Ser Asp Thr Thr Val Phe Val Thr 100 105 110 His Cys Tyr Lys His Gly Gly Cys Pro Ile Thr Gly Met Leu Gln Gln 115 120 125 His Ser Ile Arg Val Ser Ala Met Lys Asn Gly Gln Leu Phe Tyr Asn 130 135 140 Leu Thr Val Ser Val Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Lys Ser Phe Gln Cys 145 150 155 160 Val Asn Asn Leu Thr Ser Val Tyr 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Gly Gly Leu Ala Ile Leu Asp Thr Ser Gly Ala Ile Asp Ile Phe 450 455 460 Val Val Gln Gly Glu Tyr Gly Phe Asn Tyr Tyr Lys Val Asn Pro Cys 465 470 475 480 Glu Asp Val Asn Gln Gln Phe Val Val Ser Gly Gly Asn Leu Val Gly 485 490 495 Ile Leu Thr Ser Ile Asn Gln Thr Gly Ser Gln Ser Ile Glu Asn Gln 500 505 510 Phe Tyr Val Lys Leu Thr Asn Gly Ser Arg Arg Ser Arg Arg Ser Val 515 520 525 Ser Glu Asn Val Thr Ser Cys Pro Tyr Val Ser Tyr Gly Lys Phe Cys 530 535 540 Ile Lys Pro Asp Gly Ser Leu Ser Thr Ile Val Pro Lys Glu Leu Glu 545 550 555 560 Gln Phe Val Ala Pro Leu Leu Asn Val Thr Glu His Val Leu Ile Pro 565 570 575 Asp Ser Phe Asn Leu Thr Val Thr Asp Glu Tyr Ile Gln Thr Arg Met 580 585 590 Asp Lys Val Gln Ile Asn Cys Leu Gln Tyr Val Cys Gly Asn Ser Phe 595 600 605 Glu Cys Arg Lys Leu Phe Gln Gln Tyr Gly Pro Val Cys Asp Asn Ile 610 615 620 Leu Ser Val Val Asn Ser Val Gly Gln Lys Glu Asp Met Glu Leu Leu 625 630 635 640 Ser Phe Tyr Ser Ser Thr Lys Pro Ser Gly Ile Ser Gln Pro Leu Phe 645 650 655 Asn 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Ser Val Leu Ala Ser Ala Lys Gln Ser Glu Tyr Ile Ala Val 865 870 875 880 Ser Gln Gln Arg Ala Leu Ala Thr Gln Lys Ile Asn Glu Cys Val Lys 885 890 895 Ser Gln Ser Thr Arg Tyr Ser Phe Cys Gly Asn Gly Arg His Val Leu 900 905 910 Thr Ile Pro Gln Asn Ala Pro Asn Gly Ile Val Phe Ile His Phe Thr 915 920 925 Tyr Thr Pro Glu Ser Phe Val Asn Val Thr Ala Ile Val Gly Phe Cys 930 935 940 Val Lys Pro Pro Asn Ala Ser His Tyr Ala Ile Val Pro Val Asn Gly 945 950 955 960 Arg Gly Ile Phe Ile Gln Val Asn Gly Thr Tyr Tyr Ile Thr Ser Arg 965 970 975 Asp Met Tyr Met Pro Arg Asn Ile Thr Ala Gly Asp Ile Val Thr Leu 980 985 990 Thr Ser Cys Gln Ala Asn Tyr Val Ser Val Asn Lys Thr Val Ile Ser 995 1000 1005 Thr Phe Val Glu Asp Asp Asp Phe Asp Phe Asp Asp Glu Leu Ser 1010 1015 1020 Lys Trp Trp Asn Asp Thr Lys His Glu Leu Pro Asp Phe Asp Glu 1025 1030 1035 Phe Asn Tyr Thr Ile Pro Val Leu Asn Ile Ser Asn Glu Ile Asp 1040 1045 1050 Arg Ile Gln Gly Val Ile Gln Gly Leu Asn Asp Ser Leu Ile Asp 1055 1060 1065 Leu Glu Thr 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tactaatcat tctttagtta aggataggtt tattgtatat 780 cgagaaagta gcactaacac tactttaaag ttaactaatt tcagttttac taatgtaagt 840 aatgcttctc ctaattcagg tggcgttgat actttccaat tatatcaaac aagtactgct 900 caggatggtt attataattt taatttatca tttctgagta gttttgtgta taaaccatct 960 gattttatgt atgggtcata ccacccacat tgtaagttta gaccagagaa tattaataat 1020 ggcttatggt ttaattcatt atctgtgtca cttacttacg gacccattca aggtggttgt 1080 aagcaatctg tttttagtaa tagagcaact tgttgctatg cttattctta tcaagggcct 1140 agtagatgta agggtgttta tagaggggag ctaacgcaat actttgaatg tggacttcta 1200 gtttacgtaa ctaagagtga tggctctcgt atacaaacta gaagtgaacc actggtgtta 1260 actcaatata attataacaa cattacttta aataagtgtg ttgagtataa tatatatggt 1320 agggttggtc aaggttttat tactaatgta actgaagcaa ctgctaatta tagttatcta 1380 gcagatggtg gtttagctat tttagatacc tcaggagcca tagacatatt tgttgttcaa 1440 ggtgcatatg gtcttaatta ttataaggtt aatccctgtg aagatgttaa ccaacagttt 1500 gtagtgtctg gtggcaactt agttggcatt cttacatctc ataatgaaac aggttctgaa 1560 tctattgaga accagtttta catcaaactc 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gaagggttta aaagtacttc tctagcatta 2460 caacagattc aagatgttgt taataaacag agttctattc ttacagagac tatgcaatca 2520 cttaataaaa attttggtgc tatttcctct gtaattcaag acatttacca gcaactagat 2580 gctattcagg cagatgctca ggttgatcgt cttattacag gtagactctc ttcactatct 2640 gttttagctt ctgctaaaca ggcagagtat catagagtgt cacaacagcg tgagttggcc 2700 actcagaaaa ttaatgagtg tgttaagtct cagtctaata ggtattcatt ttgtggtaat 2760 ggtagacatg ttctaaccat accacagaat gcacccaatg gcatagtgtt tatacacttt 2820 acatacactc cagagagttt tgttaatgtt acggcaatag tagggttttg cgtaaaccca 2880 gctaatgcta gtcattatgc aatagtgcct gttaatggca ggggtgtttt tatagaagtt 2940 aatggtagtt actatatcac tgctcgtgat atgtatatgc caagagatat tactgcagga 3000 gacatagtca ctttgacttc ttgtcaagca aactatgtta atgtaaataa aaccgtcatt 3060 aacacttttg tggaagatga cgattttgat ttttatgatg aattgtcaaa atggtggaat 3120 gatactaagc atgagctacc agattttgat gaattcaatt ataccgttcc agttttaaat 3180 attagtaatg aaattgacag aattcaacag gttattcagg gattaaatga ttccctaata 3240 gaccttgaaa cactctcaat tctcaaaact tatattaaat ggccttggta tgtgtggctt 3300 gccattgcat tccttaccat tatttttatt ctggtacttt gttggatatt tttcatgacc 3360 ggttgttgcg gttgttgttg tggatgcttt ggtatcatac cgttaatgag taagtgtggt 3420 aagaaatctt cttactacac gacttttgat aatgatgtgg taacttaaca atacagacct 3480 aaaaagtctg tttaa 3495 <210> 18 <211> 3225 <212> DNA <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 18 gctttgtatg actcgagttc ttacgtgtac tactaccaaa gtgccttcag accacctgat 60 ggttggcatt tacatggggg tgcgtatgcg gttgttaata tttctagtga atctaataat 120 gcaggctctt catctgggtg tactgttggt attattcatg gtggtcgtgt tgttaatgct 180 tcttctatag ctatgacggc accgtcatca ggtatggctt ggtctagcag tcagttttgt 240 actgcatact gtaacttttc agatactaca gtgtttgtta cacattgtta taaacatggt 300 gggtgtccta taactggcat gcttcaacag cattctatac gtgtttctgc tatgaaaaat 360 ggccagcttt tctataattt aacagttagt gtagctaagt accctacttt taaatcattt 420 cagtgtgtta ataatttaac atccgtatat ttaaatggtg atcttgttta cacctctaat 480 gagaccacag atgttacatc tgcaggtgtt tattttaaag ctggtggacc tataacttat 540 aaagttatga 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tgttgttaaa atatcattgt tgctggtatc actgcttgtt 660 ttgccgtgtc tcactttata catccgttgc ttgggctacc tagtatccag cgtcctacgg 720 gcgccgtggt cggttcgagt gcgaaggacc tctggttcat ctagcggtag gcgggtgtgt 780 ggaagtagcg cttcagacgt actggttctg ttgcgtgaaa cgcggggtca cctcccccca 840 catacctcta agggcttttg agcctagcgt tgggctacgt tctcgcacaa ggtcggctat 900 acgacgtttg tagggggtag tgccaaacaa cccctgaggt gacaggttct ggtggtgttt 960 cgaaaacaac aatgtgtgtg ccgcataata tgcgcgttat gcattttgga gcaggtagtg 1020 ataaaggagt ggcgcctggt agtactgttc ttaaacagtg gctccccgaa ggaacactcc 1080 ttgtcgataa tgatattgta gattatgttt ctgacgcaca cgtttctgtg ctttcagatt 1140 gcaataaata taagacagag cacaagtttg atcttgtgat atctgatatg tatacagaca 1200 atgattcaaa aagaaagcat gaaggcgtga tagccaataa tggcaatgat gacgtcttca 1260 tatacctttc aagttttcta cgcaataatt tggctctggg aggcagtttt gctgtaaaat 1320 taacagagac aagttggcat gagagtttat atgacattgc acaggattgt gcatggtgga 1380 caatgttttg tacagcagtg aatgcatctt cttcagaagc attcctgatt ggtgttaatt 1440 acttgggtgc aagtgcaaag gttaaagtta 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gatgttattt tgtgtgatgg gtcacctaga 2340 ggcttgttag catgccagta taatactggc aatttttcag atggctttta tccttttact 2400 aatagtagtt tagttaagca gaagtttatt gtctatcgtg aaaatagtgt taatactact 2460 tttacgttac acaatttcac ttttcataat gagactggcg ccaacccaaa tcctagtggt 2520 gtccagaata ttcaaactta ccaaacacaa acagctcaga gtggttatta taattttaat 2580 ttttcctttc tgagtagttt tgtttataag gagtctaatt ttatgtatgg atcttatcac 2640 ccaagttgta attttagact agaaactatt aataatggtt tgtggtttaa ttcactttca 2700 gttagtattg cttacggtcc tcttcaaggt ggttgcaagc aatctgtctt tagtggtaga 2760 gcaacctgtt gttatgctta ctcatatgga ggtcctttgc tgtgtaaagg tgtttattca 2820 ggtgagttag atcataattt tgaatgtgga ctgttagttt atgttactaa gagcggtggc 2880 tctcgtatac aaacagccac tgaaccgcca gttataactc aacacaatta taataatatt 2940 actttaaata cttgtgttga ttataatata tatggcagaa ctggccaggg ttttattact 3000 aatgtaaccg actcagctgt tagttataat tatctagcag acgcaggttt ggctatttta 3060 gatacatctg gttccataga catctttgtc gtacaaagtg aatatggtct taattattat 3120 aaggttaacc cttgcgaaga tgtcaaccag 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aaacacagaa gtatttgacc cctttgacta ttgttattac agaggaggta atttttggga 24120 aatagagtca gctgaagatt gttcaggtga tgatgaattt attgaataag tcgctagagg 24180 aaaatggaaa ttttctaaca gcgctttaca tatttgtagg atttttagca ctttatcttc 24240 taggtagagc acttcaagca tttgtacagg ctgctgatgc ttgttgttta ttttggtata 24300 catgggtagt aattccagga gctaagggta cagcctttgt atacaagtat acatatggta 24360 gaaaacttaa caatccggaa ttagaagcag ttattgtcaa cgagtttcct aagaacggtt 24420 ggaataataa aaatccagca aattttcaag atgtccaacg agacaaattg tactcttgac 24480 tttgaacagt cagttgagct ttttaaagag tataatttat ttataactgc attcttgttg 24540 ttcttaacca taatacttca gtatggctat gcaacaagag gtaagtttat ttatatactg 24600 aaaatgatag tgttatggtg cttttggccc cttaacattg cagtaggtgt aatttcatgt 24660 atatacccac caaacacagg aggtcttgtc gcagcgataa tacttacagt gtttgcgtgt 24720 ctgtcttttg taggttattg gatccagagt attagactct ttaagcggtg taggtcatgg 24780 tggtcattta acccagaatc taatgccgta ggttcaatac tcctaactaa tggtcaacaa 24840 tgtaattttg ctatagagag tgtgccaatg gtgctttctc caattataaa gaatggtgtt 24900 ctttattgtg agggtcagtg gcttgctaag tgtgaaccag accacttgcc taaagatata 24960 tttgtttgta caccggatag acgtaatatc taccgtatgg tgcagaaata tactggtgac 25020 caaagcggaa ataagaaaag gtttgctacg tttgtctatg caaagcagtc agtagacact 25080 ggcgagctag aaagtgtagc aacaggtgga agtagccttt acacataaat gtgtgtgtgt 25140 agagagtatt taaaattatt cttcaatagt gcctctattt taagagcgcg gaagagtatt 25200 tgttttgagg atattaatat aaatcctctt tgttttgtac tctctttaca agagttatta 25260 tttaagcaac agtttttcct ttcctttgtt tggaagaaag ttgttgttaa tggtgtagaa 25320 ttccaagtag aaaatggaaa agtccactac gaaggaaacc ccattttcta aaaaggttgt 25380 tgtaggttgt ggtcccatta taagaaggat taaatggatt aaaccaccta cactacttac 25440 ttgtaataag ggcgtttgga cttacaagcg cttaacaaat acagacgatg aaatggctga 25500 ctagttttgg aagagcagtt atttcttgtt ataaagccct actattaact cagttaagag 25560 tattagatag gttaatttta gatcacggac caaaacgcgt cttaacgtgt ggtaggcgag 25620 tgcttttatc tcaattagat ctagtttata ggttggcata tacgcccacc caatcgctgg 25680 tatgaataat agtaaagata atccttttcg cggagcaata gcaagaaaag cgcgaattta 25740 tctgagagaa ggattagagt gtgtttactt tcttaacaaa gcaggacaag cagagtcttg 25800 tcccgcgtgt acctctctag tattccaggg gaaaacttgt gaggaacaca aagataataa 25860 taatcttttg tcatggcaag cggtaaggca actggaaaga cagatgcccc aactccagtc 25920 atcaaactag gaggaccaaa gccacctaaa gttggttctt ctggaaatgt atcttggttt 25980 caagcaataa aagccaagaa gttaaattca cctccgccta agtttgaagg tagcggtgtt 26040 cctgataatg aaaatctaaa accaagtcag cagcatggat attggagacg ccaagctagg 26100 tttaagccag gtaaaggtgg aagaaaacca gtcccagatg cttggtattt ttactatact 26160 ggaacaggac cagccgctaa cctgaattgg ggtgatagcc aagatggtat agtgtgggtt 26220 gctggtaagg gtgctgatac taaatttaga tctaatcagg gtactcgtga ctctgacaag 26280 tttgaccaat atccgctacg gttttcagac ggaggacctg atggtaattt ccgttgggat 26340 ttcattcctc tgaatcgtgg taggagtgga agatcaacag cggcttcatc agcagcatct 26400 agtagagcac cgtcgcgtga tggctcgcgt ggacgtagaa gcggagctga agatgatctt 26460 atagctcgtg cagcaaagat cattcaggat cagcagaaga agggttctcg cattactaaa 26520 gctaaggccg atgaaatggc tcatcgccgg tattgtaagc gtactatccc acctggttat 26580 aaggttgatc aagtatttgg tccccgtact aaatgtaagg agggaaattt tggtgatgac 26640 aagatgaatg aggagggtat taaggatggg cgcgttacag caatgctcaa cctagtccct 26700 agcagccatg cttgtctttt tggaagtaga gtgacgccca aacttcaacc agatgggctg 26760 cacttgagat ttgaatttac tactgtggtt tcacgtgatg atccgcagtt tgataattat 26820 gtgaaaattt gtgatcagtg tgtcgatggt gtagggacgc gtccaaaaga cgatgaaccg 26880 agaccaaagt cacgcccaaa ttcaagacct gctacaagaa caagttctcc agcgccaaga 26940 caacagcgtc aaaagaagga gaagaagtca aagaagcagg atgatgaagt agataaggca 27000 ttgacctcag atgaggagag gaacaatgca cagctggaat ttgatgatga acccaaggtg 27060 attaactggg gggagtcagc acttggagag aatgagttgt aaagctagat ttccaactta 27120 acatcatgga cgtgcgtatg ctgtttttcc ctactataga ctttttagca tattattttt 27180 tgctatttgt atggtttatt acaggtgaag attgtatgta tttgttgtac actcgtatgt 27240 tctatattat gttttctgta gttgttatta gtgttgttct tgttcttact ctactgttct 27300 cttttcttta ttttagagta tcaataagaa tcaaggaaga taggcatgta gtttgattac 27360 ctacatgtct atcgccaggg aaatgtctaa tctgtctact tagtagcctg gaaacgaacg 27420 gtagaccctt agattttaat ttagtttaat ttttagttta gtttaagtta gtttagagta 27480 ggtataaaga agccagtgcc ggggccacgc ggagtacgat cgagggtaca gcactaggac 27540 gcccattagg ggaagagcta aattttagtt taagttaagt ttaataggct atgtatagtt 27600 aaaatttata ggctagtata gagttagagc aaaaaaaaaa aaaaaa 27646 <210> 79 <211> 1162 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 79 Met Leu Val Thr Pro Leu Leu Leu Val Thr Leu Leu Cys Ala Leu Cys 1 5 10 15 Ser Ala Val Leu Tyr Asp Ser Ser Ser Tyr Val Tyr Tyr Tyr Gln Ser 20 25 30 Ala Phe Arg Pro Pro Asp Gly Trp His Leu His Gly Gly Ala Tyr Ala 35 40 45 Val Val Asn Ile Ser Ser Glu Ser Asn Asn Ala Gly Ser Ser Ser Gly 50 55 60 Cys Thr Val Gly Ile Ile His Gly Gly Arg Val Val Asn Ala Ser Ser 65 70 75 80 Ile Ala Met Thr Ala Pro Ser Ser Gly Met Ala Trp Ser Ser Ser Gln 85 90 95 Phe Cys Thr Ala Tyr Cys Asn Phe Ser Asp Thr Thr Val Phe Val Thr 100 105 110 His Cys Tyr Lys His Val Gly Cys Ser Leu Thr Gly Met Leu Gln Gln 115 120 125 His Ser Ile Arg Val Ser Ala Met Lys Asn Gly Gln Leu Phe Tyr Asn 130 135 140 Leu Thr Val Ser Val Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Lys Ser Phe Gln Cys 145 150 155 160 Val Asn Asn Leu Thr Ser Val Tyr Leu Asn Gly Asp Leu Val Tyr Thr 165 170 175 Ser Asn Glu Thr Thr Asp Val Thr Ser Ala Gly Val Tyr Phe Lys Ala 180 185 190 Gly Gly Pro Ile Thr Tyr Lys Val Met Arg Glu Val Arg Ala Leu Ala 195 200 205 Tyr Phe Val Asn Gly Thr Ala Gln Asp Val Ile Leu Cys Asp Gly Ser 210 215 220 Pro Arg Gly Leu Leu Ala Cys Gln Tyr Asn Thr Gly Asn Phe Ser Asp 225 230 235 240 Gly Phe Tyr Pro Phe Thr Asn Ser Ser Leu Val Lys Gln Lys Phe Ile 245 250 255 Val Tyr Arg Glu Asn Ser Val Asn Thr Thr Phe Thr Leu His Asn Phe 260 265 270 Thr Phe His Asn Glu Thr Gly Ala Asn Pro Asn Pro Ser Gly Val Gln 275 280 285 Asn Ile Gln Thr Tyr Gln Thr Gln Thr Ala Gln Ser Gly Tyr Tyr Asn 290 295 300 Phe Asn Phe Ser Phe Leu Ser Ser Phe Val Tyr Lys Glu Ser Asn Phe 305 310 315 320 Met Tyr Gly Ser Tyr His Pro Ser Cys Asn Phe Arg Leu Glu Thr Ile 325 330 335 Asn Asn Gly Leu Trp Phe Asn Ser Leu Ser Val Ser Ile Ala Tyr Gly 340 345 350 Pro Leu Gln Gly Gly Cys Lys Gln Ser Val Phe Ser Gly Arg Ala Thr 355 360 365 Cys Cys Tyr Ala Tyr Ser Tyr Gly Gly Pro Leu Leu Cys Lys Gly Val 370 375 380 Tyr Ser Gly Glu Leu Asp His Asn Phe Glu Cys Gly Leu Leu Val Tyr 385 390 395 400 Val Thr Lys Ser Gly Gly Ser Arg Ile Gln Thr Ala Thr Glu Pro Pro 405 410 415 Val Ile Thr Gln His Asn Tyr Asn Asn Ile Thr Leu Asn Thr Cys Val 420 425 430 Asp Tyr Asn Ile Tyr Gly Gly Ile Gly Gln Gly Phe Ile Thr Asn Val 435 440 445 Thr Asp Ser Ala Val Ser Tyr Asn Tyr Leu Ala Asp Ala Gly Leu Ala 450 455 460 Ile Leu Asp Thr Ser Gly Ser Ile Asp Ile Phe Val Val Gln Ser Glu 465 470 475 480 Tyr Gly Leu Asn Tyr Tyr Lys Val Asn Pro Cys Glu Asp Val Asn Gln 485 490 495 Gln Phe Val Val Ser Gly Gly Lys Leu Val Gly Ile Leu Thr Ser Arg 500 505 510 Asn Glu Thr Gly Ser Gln Leu Leu Glu Asn Gln Phe Tyr Ile Lys Ile 515 520 525 Thr Asn Gly Thr Arg Arg Phe Arg Arg Ser Ile Thr Glu Ser Val Glu 530 535 540 Asn Cys Pro Tyr Val Ser Tyr Gly Lys Phe Cys Ile Lys Pro Asp Gly 545 550 555 560 Ser Ile Ala Thr Ile Val Pro Lys Gln Leu Glu Gln Phe Val Ala Pro 565 570 575 Leu Leu Asn Val Thr Glu Asn Val Leu Ile Pro Asn Ser Phe Asn Leu 580 585 590 Thr Val Thr Asp Glu Tyr Ile Gln Thr Leu Met Asp Lys Val Gln Ile 595 600 605 Asn Cys Leu Gln Tyr Ile Cys Gly Asn Ser Leu Glu Cys Arg Asn Leu 610 615 620 Phe Gln Gln Tyr Gly Pro Val Cys Asp Asn Ile Leu Ser Val Val Asn 625 630 635 640 Ser Val Gly Gln Lys Glu Asp Met Glu Leu Leu Asn Phe Tyr Ser Ser 645 650 655 Thr Lys Pro Ala Gly Phe Asn Thr Pro Val Leu Ser Asn Val Ser Thr 660 665 670 Gly Glu Phe Asn Ile Ser Leu Phe Leu Thr Thr Pro Ser Ser Pro Arg 675 680 685 Arg Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Thr Ser Val Glu Ser Val 690 695 700 Gly Leu Pro Thr Asp Asp Ala Tyr Lys Asn Cys Thr Ala Gly Pro Leu 705 710 715 720 Gly Phe Leu Lys Asp Leu Val Cys Ala Arg Glu Tyr Asn Gly Leu Leu 725 730 735 Val Leu Pro Pro Ile Ile Thr Ala Glu Met Gln Thr Leu Tyr Thr Ser 740 745 750 Ser Leu Val Ala Ser Met Ala Phe Gly Gly Ile Thr Ala Ala Gly Ala 755 760 765 Ile Pro Phe Ala Thr Gln Leu Gln Ala Arg Ile Asn His Leu Gly Ile 770 775 780 Thr Gln Ser Leu Leu Leu Lys Asn Gln Glu Lys Ile Ala Ala Ser Phe 785 790 795 800 Asn Lys Ala Ile Gly His Met Gln Glu Gly Phe Arg Ser Thr Ser Leu 805 810 815 Ala Leu Gln Gln Ile Gln Asp Val Val Asn Lys Gln Ser Ala Ile Leu 820 825 830 Thr Glu Thr Met Ala Ser Leu Asn Lys Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser 835 840 845 Val Ile Gln Glu Ile Tyr Gln Gln Leu Asp Ala Ile Gln Ala Asn Ala 850 855 860 Gln Val Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu 865 870 875 880 Ala Ser Ala Lys Gln Ala Glu Tyr Ile Arg Val Ser Gln Gln Arg Glu 885 890 895 Leu Ala Thr Gln Lys Ile Asn Glu Cys Val Lys Ser Gln Ser Ile Arg 900 905 910 Tyr Ser Phe Cys Gly Asn Gly Arg His Val Leu Thr Ile Pro Gln Asn 915 920 925 Ala Pro Asn Gly Ile Val Phe Ile His Phe Ser Tyr Thr Pro Asp Ser 930 935 940 Phe Val Asn Val Thr Ala Ile Val Gly Phe Cys Val Lys Pro Ala Asn 945 950 955 960 Ala Ser Gln Tyr Ala Ile Val Pro Ala Asn Gly Arg Gly Ile Phe Ile 965 970 975 Gln Val Asn Gly Ser Tyr Tyr Ile Thr Ala Arg Asp Met Tyr Met Pro 980 985 990 Arg Ala Ile Thr Ala Gly Asp Ile Val Thr Leu Thr Ser Cys Gln Val 995 1000 1005 Asn Tyr Val Ser Val Asn Lys Thr Val Ile Thr Thr Phe Val Asp 1010 1015 1020 Asn Asp Asp Phe Asp Phe Asn Asp Glu Leu Ser Lys Trp Trp Asn 1025 1030 1035 Asp Thr Lys His Glu Leu Pro Asp Phe Asp Lys Phe Asn Tyr Thr 1040 1045 1050 Val Pro Ile Leu Asp Ile Asp Ser Glu Ile Asp Arg Ile Gln Gly 1055 1060 1065 Val Ile Gln Gly Leu Asn Asp Ser Leu Ile Asp Leu Glu Lys Leu 1070 1075 1080 Ser Ile Leu Lys Thr Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu 1085 1090 1095 Ala Ile Ala Phe Ala Thr Ile Ile Phe Ile Leu Ile Leu Gly Trp 1100 1105 1110 Val Phe Phe Met Thr Gly Cys Cys Gly Cys Cys Cys Gly Cys Phe 1115 1120 1125 Gly Ile Met Pro Leu Met Ser Lys Cys Gly Lys Lys Ser Ser Tyr 1130 1135 1140 Tyr Thr Thr Phe Asp Asn Asp Val Val Thr Glu Gln Tyr Arg Pro 1145 1150 1155 Lys Lys Ser Val 1160 <210> 80 <211> 409 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 80 Met Ala Ser Gly Lys Ala Thr Gly Lys Thr Asp Ala Pro Thr Pro Val 1 5 10 15 Ile Lys Leu Gly Gly Pro Lys Pro Pro Lys Val Gly Ser Ser Gly Asn 20 25 30 Val Ser Trp Phe Gln Ala Ile Lys Ala Lys Lys Leu Asn Ser Pro Pro 35 40 45 Pro Lys Phe Glu Gly Ser Gly Val Pro Asp Asn Glu Asn Leu Lys Pro 50 55 60 Ser Gln Gln His Gly Tyr Trp Arg Arg Gln Ala Arg Phe Lys Pro Gly 65 70 75 80 Lys Gly Gly Arg Lys Pro Val Pro Asp Ala Trp Tyr Phe Tyr Tyr Thr 85 90 95 Gly Thr Gly Pro Ala Ala Asn Leu Asn Trp Gly Asp Ser Gln Asp Gly 100 105 110 Ile Val Trp Val Ala Gly Lys Gly Ala Asp Thr Lys Phe Arg Ser Asn 115 120 125 Gln Gly Thr Arg Asp Ser Asp Lys Phe Asp Gln Tyr Pro Leu Arg Phe 130 135 140 Ser Asp Gly Gly Pro Asp Gly Asn Phe Arg Trp Asp Phe Ile Pro Leu 145 150 155 160 Asn Arg Gly Arg Ser Gly Arg Ser Thr Ala Ala Ser Ser Ala Ala Ser 165 170 175 Ser Arg Ala Pro Ser Arg Glu Val Ser Arg Gly Arg Arg Ser Gly Ser 180 185 190 Glu Asp Asp Leu Ile Ala Arg Ala Ala Arg Ile Ile Gln Asp Gln Gln 195 200 205 Lys Lys Gly Ser Arg Ile Thr Lys Ala Lys Ala Asp Glu Met Ala His 210 215 220 Arg Arg Tyr Cys Lys Arg Thr Ile Pro Pro Asn Tyr Lys Val Asp Gln 225 230 235 240 Val Phe Gly Pro Arg Thr Lys Gly Lys Glu Gly Asn Leu Gly Asp Asp 245 250 255 Lys Met Asn Glu Glu Gly Ile Lys Asp Gly Arg Val Thr Ala Met Leu 260 265 270 Asn Leu Val Pro Ser Ser His Ala Cys Leu Phe Gly Ser Arg Val Thr 275 280 285 Pro Arg Leu Gln Pro Asp Gly Leu His Leu Lys Phe Glu Phe Thr Thr 290 295 300 Val Val Pro Arg Asp Asp Pro Gln Phe Asp Asn Tyr Val Lys Ile Cys 305 310 315 320 Asp Gln Cys Val Asp Gly Val Gly Thr Arg Pro Lys Asp Asp Glu Pro 325 330 335 Arg Pro Lys Ser Arg Ser Ser Ser Arg Pro Ala Thr Arg Gly Asn Ser 340 345 350 Pro Ala Pro Arg Gln Gln Arg Pro Lys Lys Glu Lys Lys Pro Lys Lys 355 360 365 Gln Asp Asp Glu Val Asp Lys Ala Leu Thr Ser Asp Glu Glu Arg Asn 370 375 380 Asn Ala Gln Leu Glu Phe Asp Asp Glu Pro Lys Val Ile Asn Trp Gly 385 390 395 400 Asp Ser Ala Leu Gly Glu Asn Glu Leu 405 <210> 81 <211> 409 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 81 Met Ala Ser Gly Lys Ala Ala Gly Lys Thr Asp Ala Pro Thr Pro Val 1 5 10 15 Ile Lys Leu Gly Gly Pro Lys Pro Pro Lys Val Gly Ser Ser Gly Asn 20 25 30 Val Ser Trp Phe Gln Ala Ile Lys Ala Lys Lys Leu Asn Ser Pro Pro 35 40 45 Pro Lys Phe Glu Gly Ser Gly Val Pro Asp Asn Glu Asn Leu Lys Pro 50 55 60 Ser Gln Gln His Gly Tyr Trp Arg Arg Gln Ala Arg Phe Lys Pro Gly 65 70 75 80 Lys Gly Gly Arg Lys Pro Val Pro Asp Ala Trp Tyr Phe Tyr Tyr Thr 85 90 95 Gly Thr Gly Pro Ala Ala Asn Leu Asn Trp Gly Asp Ser Gln Asp Gly 100 105 110 Ile Val Trp Val Ala Gly Lys Gly Ala Asp Thr Lys Phe Arg Ser Asn 115 120 125 Gln Gly Thr Arg Asp Ser Asp Lys Phe Asp Gln Tyr Pro Leu Arg Phe 130 135 140 Ser Asp Gly Gly Pro Asp Gly Asn Phe Arg Trp Asp Phe Ile Pro Leu 145 150 155 160 Asn Arg Gly Arg Ser Gly Arg Ser Thr Ala Ala Ser Ser Ala Ala Ser 165 170 175 Ser Arg Ala Pro Ser Arg Glu Val Ser Arg Gly Arg Arg Ser Gly Ser 180 185 190 Glu Asp Asp Leu Ile Ala Arg Ala Ala Arg Ile Ile Gln Asp Gln Gln 195 200 205 Lys Lys Gly Ser Arg Ile Thr Lys Ala Lys Ala Asp Glu Met Ala His 210 215 220 Arg Arg Tyr Cys Lys Arg Thr Ile Pro Pro Asn Tyr Lys Val Asp Gln 225 230 235 240 Val Phe Gly Pro Arg Thr Lys Gly Lys Glu Gly Asn Phe Gly Asp Asp 245 250 255 Lys Met Asn Glu Glu Gly Ile Lys Asp Gly Arg Val Thr Ala Met Leu 260 265 270 Asn Leu Val Pro Ser Ser His Ala Cys Leu Phe Gly Ser Arg Val Thr 275 280 285 Pro Arg Leu Gln Pro Asp Gly Leu His Leu Lys Phe Glu Phe Thr Thr 290 295 300 Val Val Pro Arg Asp Asp Pro Gln Phe Asp Asn Tyr Val Lys Ile Cys 305 310 315 320 Asp Gln Cys Val Asp Gly Val Gly Thr Arg Pro Lys Asp Asp Glu Pro 325 330 335 Arg Pro Lys Ser Arg Ser Ser Ser Arg Pro Ala Thr Arg Gly Asn Ser 340 345 350 Pro Ala Pro Arg Gln Gln Arg Pro Lys Lys Glu Lys Lys Pro Lys Lys 355 360 365 Gln Asp Asp Glu Val Asp Lys Ala Leu Thr Ser Asp Glu Glu Arg Asn 370 375 380 Asn Ala Gln Leu Glu Phe Asp Asp Glu Pro Lys Val Ile Asn Trp Gly 385 390 395 400 Asp Ser Ala Leu Gly Glu Asn Glu Leu 405 <210> 82 <211> 109 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 82 Met Met Asn Leu Leu Asn Lys Ser Leu Glu Glu Asn Gly Ser Phe Leu 1 5 10 15 Thr Ala Leu Tyr Ile Phe Val Gly Phe Leu Ala Phe Tyr Leu Leu Gly 20 25 30 Arg Ala Leu Gln Ala Phe Val Gln Ala Ala Asp Ala Cys Cys Leu Phe 35 40 45 Trp Tyr Thr Trp Leu Val Ile Pro Gly Val Lys Gly Thr Ala Phe Val 50 55 60 Tyr Lys Tyr Thr Tyr Gly Arg Lys Leu Asn Asn Ser Glu Leu Glu Ala 65 70 75 80 Val Val Val Asn Glu Phe Pro Lys Asn Gly Trp Asn Asn Lys Asn Pro 85 90 95 Ala Asn Phe Gln Asp Val Gln Arg Asn Lys Leu Tyr Ser 100 105 <210> 83 <211> 225 <212> PRT <213> Avian infectious bronchitis virus <400> 83 Met Ser Asn Glu Thr Asn Cys Thr Leu Asp Phe Glu Gln Ser Val Glu 1 5 10 15 Leu Phe Lys Glu Tyr Asn Leu Phe Ile Thr Ala Phe Leu Leu Phe Leu 20 25 30 Thr Ile Ile Leu Gln Tyr Gly Tyr Ala Thr Arg Ser Lys Phe Ile Tyr 35 40 45 Ile Leu Lys Met Ile Val Leu Trp Cys Phe Trp Pro Leu Asn Ile Ala 50 55 60 Val Gly Val Ile Ser Cys Ile Tyr Pro Pro Asn Thr Gly Gly Leu Val 65 70 75 80 Ala Ala Ile Ile Leu Thr Val Phe Ala Cys Leu Ser Phe Val Gly Tyr 85 90 95 Trp Ile Gln Ser Ile Arg Leu Phe Lys Arg Cys Arg Ser Trp Trp Ser 100 105 110 Phe Asn Pro Glu Ser Asn Ala Val Gly Ser Ile Leu Leu Thr Asn Gly 115 120 125 Gln Gln Cys Asn Phe Ala Ile Glu Ser Val Pro Met Val Leu Ser Pro 130 135 140 Ile Ile Lys Asn Gly Val Leu Tyr Cys Glu Gly Gln Trp Leu Ala Lys 145 150 155 160 Cys Glu Pro Asp His Leu Pro Lys Asp Ile Phe Val Cys Thr Pro Asp 165 170 175 Arg Arg Asn Ile Tyr Arg Met Val Gln Lys Tyr Thr Gly Asp Gln Ser 180 185 190 Gly Asn Lys Lys Arg Phe Ala Thr Phe Val Tyr Ala Lys Gln Ser Val 195 200 205 Asp Thr Gly Glu Leu Glu Ser Val Ala Thr Gly Gly Ser Ser Leu Tyr 210 215 220 Thr 225 <210> 84 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 84 ctttggatca ttaaacagac tttttaggtc tg 32 <210> 85 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 85 gtctgtttaa tgatccaaag tcccactag 29

Claims (15)

  1. 이종 전염성 기관지염 바이러스 (infectious bronchitis virus: IBV) S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV.
  2. 이종 S (스파이크) 단백질 또는 이의 단편을 인코딩하는 H52 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
  3. 제1항의 IBV (전염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 아칸소 (Arkansas) (예를 들어, 아칸소 99), 브라질 (예를 들어, BR-1, BR-2, 23/2013, IBV/브라질/351/1984), 캘리포니아 (예를 들어, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어 (예를 들어, 델라웨어 98), 네덜란드 (예를 들어, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아 (예를 들어, 조지아 GA-07, GA-08, GA-12, GA-13), 그레이 (Gray), 홀테 (Holte), 아이오와 (예를 들어, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아 (예를 들어, 이탈리아 02), JMK, LDT3, 메인 (Maine) (예를 들어, 메인 209), 펜실베이니아 (예를 들어, 펜실베이니아 1220/98, 펜실베이니아 울그 (Wolg)/98), PL84084, Qu (예를 들어, Qu-mv), QX (예를 들어, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2 (예를 들어, IS/1494/06, IBV/Ck/EG/CU/4/2014, 감마CoV/Ck/폴란드/G052/2016) 및 4/91 (793B, CR88)로 이루어진 목록으로부터 선택된 유전자형 또는 혈청형을 갖는 IBV로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택된 IBV로부터 유래하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 S 단백질 또는 이의 단편이 4/91, QX, Q1, 아칸소, 변이체 2 및 브라질로 이루어진 유전자형 또는 혈청형의 목록으로부터 선택되거나, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.2%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95%, 99.98% 또는 99.99%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지거나 이를 포함하는, IBV 또는 면역원성 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 S 단백질이 전장 스파이크 단백질이거나, 상기 이종 S (스파이크) 단백질의 단편이 적어도 500, 750, 1000 또는 1077개 아미노산의 길이를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IBV가 약독화되거나, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
  11. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법.
  12. IBV에 기인하는 임상 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 임상 징후를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  13. 동일한 종의 비면역화된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체 (ciliostasis)의 감소를 필요로 하는 대상체에서 섬모 정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법이 치료학적 유효량의 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 미처리된 대조군의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 물 설사의 예방 또는 감소, 체중 감소의 예방 또는 감소, 바이러스 부하의 감소, 바이러스 배출의 감소 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 효능 파라미터의 개선을 초래하는, 방법 또는 용도.
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