KR20190021334A - 감염성 기관지염 바이러스에 대한 백신 - Google Patents

감염성 기관지염 바이러스에 대한 백신 Download PDF

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뷰어든 스테파누스 요하누스 반
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Abstract

본 발명은 각각 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b가 불활성화된, IBV(infectious bronchitis virus: 감염성 기관지염 바이러스) 및 IBV를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 이러한 대상체에게 본 발명의 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 관한 것이다.

Description

감염성 기관지염 바이러스에 대한 백신
서열목록
본 출원은 37 C.F.R. 1.821 - 1.825에 따른 서열목록을 포함한다. 본 출원에 첨부된 서열목록은 그 전문이 본원에 인용에 의해 포함된다.
본 발명의 배경
조류 코로나바이러스 감염성 기관지염 바이러스(IBV: infectious bronchitis virus)는 코로나바이러스과(family Coronaviridae)의 니도바이러스목(order Nidovirales)의 원형(prototype) 감마 코로나바이러스이다. 감염성 기관지염 바이러스는 주로 닭의 상기도 상피를 감염시키고, 이는 보통 2차 세균성 병원체에 의해 악화되는 호흡기 질환을 야기한다(Cook et al 2012. Avian Pathol. 41:239-250). 몇몇의 IBV 균주는 부가적으로 세뇨관, 난관(oviduct) 및 위장관의 부분에 영향을 미치고, 이는 이들 장기 시스템의 병리학적인 병변 및 임상학적 증상을 유발한다. 상기 바이러스는 상업용 및 뒷마당 닭 모두에 전세계적으로 존재한다. IBV의 높은 게놈 변이성(variability)으로 인하여 IBV는 다양한 유전자형(genotype), 혈청형(serotype) 및 방어형(protectotype)으로 구별된다. IBV는 현재 가금류 산업에서 경제적으로 가장 관련성이 높은 바이러스성 병원체 중 하나로서 간주된다.
감염성 기관지염 바이러스는 27.6kb의 양성 감수성 단일-가닥 RNA 게놈을 갖는 외피보유(enveloped) 바이러스이다(Cavanagh 2007. Vet. Res. 38:281-297). 바이러스 게놈의 처음 2/3는 RNA 복제, 편집 및 전사와 관련된 15종의 비구조적 단백질을 암호화하는 2개의 개방 판독 프레임(open reading frame) 1a 및 1b로 나누어진 큰 암호화 영역(유전자 1로서도 지칭됨)을 포함한다. 바이러스 게놈의 마지막 1/3은 구조적 단백질: 스파이크(spike) 단백질(S, 유전자 2에 의해 암호화됨), 외피(envelope) 단백질(E, 유전자 3c에 의해 암호화됨), 막(membrane) 단백질(M, 유전자 4에 의해 암호화됨) 및 뉴클레오캡시드(nucleocapsid) 단백질(N, 유전자 6에 의해 암호화됨)을 암호화한다. 단백질 S, E 및 M은 바이러스 외피의 부분이고, 한편 단백질 N은 바이러스성 RNA와 함께 리보핵단백질 코어(ribonucleoprotein core)를 형성한다. 스파이크 단백질은 이량체성 또는 삼량체성 막관통(transmembrane) 단백질이고, 이는 단백질분해적으로 2개의 서브유닛 S1 및 S2로 절단된다. 과도하게 당화된(glycosylated) S1 도메인은 스파이크 단백질의 '헤드(head)'를 형성하고 숙주 세포 표면 상의 2,3-링크된 시알산과 상호작용하는 수용체 결합 도메인을 함유한다(Promkuntod et al 2014. Virology. 448:26-32). S2 도메인은 세포외 도메인(ectodomain)의 나머지 부분('줄기(stalk)'), 막관통 도메인 및 세포질에 위치한 세포내 도메인(endodomain)을 함유한다. 코로나바이러스 스파이크 단백질은 주로 숙주 종 친화성(tropism)을 결정한다(Kuo et al 2000. J. Virol. 74:1393-1406).
코로나바이러스 구조적 유전자들 사이에 개재된 것은 위치된 가변적 수의 그룹 특이적 부속(accessory) 유전자이다(Liu et al 2014. Antiviral Res. 109:97-109). 이들 유전자의 대부분은 비구조적이고, 이들의 발현은 발육 계란에서의 또는 세포 배양에서의 바이러스 복제에 필수적인 것은 아니다. IBV 게놈은 각각 단백질 3a 및 3b 그리고 5a 및 5b를 암호화하는 부속 유전자 3 및 5를 함유한다(Britton et al 2006; Adv Exp Med Biol.;581:363-8). 또한, 유전자 4와 5 사이의 유전자간 영역(IR: intergenic region)에 위치하는 개방 판독 프레임이 존재한다(Bentley et al 2013; J.Virol. 87:2128-2136).
유전자 3은 기능적으로 트리시스트론성(tricistronic)이고, 이는 3개의 단백질 3a, 3b 및 3c를 암호화한다. 후자는 IBV의 구조적 E 단백질이다. 유전자 5는 기능적으로 바이시스트론성(bicistronic)이고, 2개의 단백질 5a 및 5b를 암호화한다(Britton et al 2006; Adv Exp Med Biol.;581:363-8). 부속 IBV 단백질 3a 및 3b는 최근 시험관내에서 I형 인터페론 반응의 지연된 활성화를 유도하고 단백질 3a는 부가적으로 IFN에 의해 유도된 세포의 항바이러스 상태에 대한 IBV의 내성에 관여하는 것으로 밝혀졌다(Kint et al 2015: J.Virol. 89:1156-1167; Kint et al 2015: J.Virol. doi: JVI.01057-15.). 부속 단백질 5b는 숙주 차단(shut off)에 기여하고, 다른 것들 중에서도 이에 의해 I형 IFN의 번역을 억제한다(Kint, PhD thesis 2015).
브리턴(Britton) 등[2006(Adv Exp Med Biol.;581:363-8)]은 IBV 3a, 3b 5a 및 5b 단백질의 발현을 결실시켰고, 유전자 생성물 자체가 복제에 필수적인 것은 아니고 이들은 부속 단백질로 간주될 수 있음을 보여주었다. 추가로, 벤틀리(Bentley) 등[2013(PLOS One. 8(6):e67875)]은 hRluc로의 ORF 3a 및 3b의 대체 및 IBV 코돈 최적화된 버전의 hRluc로의 유전자 5의 대체를 개시한다. 그러나, 유전자 3a 및 3b 또는 유전자 5의 대체가 야생형 IBV와는 상이한 임의의 표현형(예를 들면, 약독화(attenuation))을 유발할 수 있음은 밝혀지지 않았거나 제안되지 않았다. 오히려, 벤틀리 등은 마커 유전자가 IBV 게놈에 도입될 수 있는지의 여부에 초점을 맞추고 있다. 이와 관련하여, 벤틀리 등은 재조합 IBV 안정성이 대체되는 게놈 영역에 따라 변하였음을 개시한다.
현재까지 가장 널리 사용되는 생-약독화(live-attenuated) IBV 백신 균주는 1960년대에 네덜란드에서 매사추세츠(Massachusetts)-유사 IBV 균주의 일련의 계대배양(passaging)에 의해 개발되었다(Bijlenga et al 2004; Avian Pathol. 33:550-557). 상기 계대배양 동안, 상기 바이러스는 30번째 계대까지 배아 왜소화(embryonic dwarfing)가 관찰되었고 보다 높은 계대에서 배아 사망이 관찰된 발육란에 적응하게 되었다. 51회 계대 후, 상기 바이러스는 48hpi 내에서 배아 사망을 야기하였지만, 52번째 계대(H52라고 칭함)는 여전히 병아리에 지나치게 맹독성이었다. 다른 68회 계대 후, 상기 바이러스(H120으로서 공지되어 있음)는 여전히 방어 면역 반응을 유도하면서 어린 병아리에서 안전하게 사용되도록 충분히 약독화되었다. 그러나, 전통적인 매사추세츠-유사 백신이 충분히 방어하지 못했던 1970년대에 새로운 IBV 혈청형(serotype)의 출현은 새로운 생-약독화 백신의 개발 및 잠재적으로 다중 혈청형에 대해 방어 면역을 유도하는 다른 백신 유형에 대한 연구를 촉구하였다(Cook et al 2012. Avian Pathol. 41:239-250). 오늘날, 가장 널리 사용되는 IBV 백신은 여전히 발육 계란에서 일련의 계대배양에 의해 약독화되고, 이는 수고롭고 시간이 걸린다. 또한, 이러한 유형의 약독화는 무작위이고 결과는 상당히 예측할 수 없다.
따라서, IBV 백신을 개발하기 위해 일련의 계대배양 이외의 다른 방법이 필요하다. 몇몇의 연구 그룹은 이미 재조합 기술에 의해 IBV 게놈을 조작하는 시스템을 독자적으로 개발하였다(Youn, et al 2005. Virology. 332:206-215; Zhou et al 2013. Vet. Microbiol. 162:53-61). 그러나, 이들 모든 역 유전학 시스템은 비-병원성 세포-배양 적응된 IBV 균주 보우데트(Beaudette) 또는 고도로 약독화된 IBV 백신 균주 H120을 기반으로 한다. 이들 IBV 균주는 비-맹독성이므로(Bijlenga et al 2004. Avian Pathol. 33:550-557), 방어 면역은 병원성 IBV 균주로부터의 맹독성 인자를 도입함으로써 유도될 수 있다. 이러한 접근법은 안전성 우려를 야기할 수 있고, 아직 재조합 IBV 백신의 등록을 유도하지 못했다.
따라서, 신규하고 고도로 효과적인 IBV 백신 및 IBV를 약독화시키기 위한 대안의 전략 각각에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명의 양상을 기술하기 전에, 본원에서 사용되는 바와 같이 그리고 첨부된 청구범위에서와 같이 단수형 "한", "하나" 및 "상기"는 문맥에 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수 언급을 포함함에 주의해야만 한다. 따라서, 예를 들면, "항원"에 대한 언급은 복수의 항원을 포함하고, "바이러스"에 대한 언급은 하나 이상의 바이러스에 대한 언급 및 당해 분야 숙련가들에게 공지되어 있는 이의 등가범위 등이다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 바와 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료를 본 발명의 실행 또는 시험에 사용할 수 있지만, 바람직한 방법, 장치 및 재료는 하기에 기술된다. 본원에 언급된 모든 출판물은 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 출판물에서 보고된 바와 같은 세포주, 벡터 및 방법을 기술하고 개시할 목적을 위해 인용에 의해 본원에 포함된다. 종래 발명이 상기 개시보다 선행하기에 본 발명이 자격이 없음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
문제의 조성물
본 발명은 종래 기술에 내재하는 문제를 해소하고 당해 분야의 현황에 뚜렷한 진보를 제공한다.
일반적으로, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서:
- ORF 3a; 및/또는
- ORF 3b; 및/또는
- ORF 5a; 및/또는
- ORF 5b가 불활성화된, IBV를 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한 IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 제공한다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된, IBV를 제공한다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 제공한다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 제공한다.
추가로, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a; 및/또는
- 상기 ORF 3b; 및/또는
- 상기 ORF 5a; 및/또는
- 상기 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 5a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 5a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 또는 ORF 5a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 또는 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 및 ORF 5a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3b 또는 ORF 5a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3b 또는 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 또는 ORF 3b 또는 ORF 5a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 또는 ORF 3b 또는 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 및 ORF 3a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 5a 또는 ORF 5b 또는 ORF 3a가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 및 ORF 3b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 5a 또는 ORF 5b 또는 ORF 3b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
따라서, 본 발명은 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물은 안전하고 효능성인 것으로 입증되어 왔다.
종래 기술의 IBV 백신에는 몇몇의 단점이 있다. 불활성화된 백신은 일반적으로 단지 체액성 면역 반응만을 제공하고(제한된 세포성 면역 반응 제외) 부스터 백신접종(booster vaccination)은 일반적으로 불활성화된 IBV 백신이 사용되는 경우에 필요하다. 이러한 이유로, 변형된 생 IBV 백신(체액성 및 세포성 면역 반응 포함)은 일반적으로 바람직한 선택일 것이다. 그러나, 현재까지 개발된 변형된 생 IBV 백신에는 상이한 결점이 있다. 보우데트 IBV 균주(비-병원성 세포-배양 적응된 IBV 균주)는 과도하게 약독화되어 있다. H52와 같은 다른 균주들은 충분히 약독화되지 않아 백신접종 후 기도의 손상을 초래할 수 있다. 추가로, 가장 널리 사용되는 변형된 생 IBV 백신은 수고롭고 시간이 걸리는 발육 계란에서의 일련의 계대배양에 의해 약독화되었다. 또한, 이러한 형태의 약독화는 무작위이고, 그 결과는 다소 예측할 수 없다. 닭에서 계대배양되는 동안 맹독성으로 되돌아 갈 위험이 존재한다. 따라서, 안전하고 효능성인 새로운 재조합 변형된 생 IBV 백신에 대한 필요성이 존재한다.
추가로, 다수의 결실/불활성화가 도입되는 경우에 바이러스는 과다 약독화될 수 있고 이는 백신접종된 숙주에서 방어 면역 반응을 유도하기에 불충분한 능력을 초래하기 때문에 이중 돌연변이체(ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화; ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화)는 여전히 과다 약독화되지 않았다는 것이 예측되지 않았다. "과다 약독화"라고도 칭하는 이러한 현상은 낮은 면역 반응을 유도한 한 홍역 바이러스 돌연변이체에 관한 문헌[Rennick et al 2015 (J Virol. 2015 Feb;89(4):2192-200)]의 문헌 예시에 기술되어 있다. 다른 예는 문헌[Chen et al 2016 (Arch Virol. 2016, 161:77-86)]에 의해 제공되었고, 여기서 돼지 생식 및 호흡기 증후군 바이러스가 세포 배양에서 과도하게 자주 계대배양되어 돼지에서 과도하게 낮은 면역성에 의해 나타나는 바와 같은 과다 약독화를 유도하였다. 문헌[Manservigi et al 2010 (Open Virol J. 2010; 4: 123-156)]은 헤르페스 심플렉스(herpes simplex) 바이러스 1의 게놈 내에 다수의 결실이 그 값을 무효로 하는 과다 약독화를 초래할 수도 있다는 우려를 제기하였다. 따라서, 이중 돌연변이체(ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화; ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화)가 여전히 단일 돌연변이체(ORF 3a의 불활성화; ORF 3b의 불활성화; ORF 5a의 불활성화; ORF 5b의 불활성화)에 비하여 방어 면역 반응을 유도할 수 있었음은 놀라운 것이었다. 더욱 더 놀랍게도, 4개의 ORF 전부의 불활성화(ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 및 ORF 5b)를 갖는 결실 돌연변이체는 과다 약독화된 표현형을 나타내지 않았다.
용어 "면역원성 조성물"은 상기 면역원성 조성물이 투여된 숙주에서 면역 반응을 유발하는 적어도 하나의 항원을 포함하는 조성물을 말한다. 이러한 면역 반응은 본 발명의 면역원성 조성물에 대한 세포성 및/또는 항체-매개된 면역 반응일 수 있다. 바람직하게, 상기 면역원성 조성물은 면역 반응을 유도하고, 보다 바람직하게는 IBV 감염의 하나 이상의 임상학적 징후들에 대한 방어 면역을 부여한다. 상기 숙주는 또한 "대상체"로서도 기술된다. 바람직하게는, 본원에 기술되거나 언급된 임의의 숙주 또는 대상체는 조류 또는 가금류이다.
보통, "면역 반응"으로는 하기 영향들 중 하나 이상이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다: 본 발명의 면역원성 조성물에 포함된 항원 또는 항원들에 특이적으로 지시된, 항체, B 세포, 헬퍼(helper) T 세포, 억제성(suppressor) T 세포 및/또는 세포독성 T 세포 및/또는 감마-델타 T 세포의 생산 또는 활성화. 바람직하게, 상기 숙주는 방어 면역 반응 또는 치료학적 반응 중 어느 하나를 나타낼 것이다.
"방어 면역 반응" 또는 "방어 면역(protective immunity)"은 감염된 숙주에 의해 정상적으로 나타나는 임상학적 징후들의 감소 또는 결여, 보다 신속한 회복 시간 및/또는 저감된 감염성의 지속기간 또는 감염된 숙주의 체액 또는 배설물에서의 저감된 병원체 역가 중 어느 하나로 증명될 것이다.
상기 숙주가 방어 면역 반응을 나타내어 새로운 감염에 대한 내성이 향상되고/되거나 질환의 임상학적 중증도가 감소될 경우, 상기 면역원성 조성물은 "백신"으로서 기술된다.
용어 "IBV"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있는 감염성 기관지염 바이러스를 말한다. 용어 "IBV"는 모든 균주, 유전자형, 방어형 및 혈청형의 감염성 기관지염 바이러스를 포함한다.
용어 "ORF 3a" 및 "ORF 3b"는 IBV의 유전자 3에 의해 암호화된 개방 판독 프레임(ORF) 3a 및 3b를 말한다. IBV의 유전자 3은 기능적으로 트리시스트론성이고 3개의 단백질 3a, 3b 및 3c를 암호화한다. 단백질 3c는 또한 E 단백질로 지칭된다. ORF 3a는 서열번호 29에 나타낸 바와 같이 개시 코돈(AUG)으로부터 정지 코돈(UAA)까지 174개의 뉴클레오타이드의 길이를 갖는다. 그러나, ORF 3a의 AUG의 첫번째 뉴클레오타이드(A)는 ORF S(스파이크)의 정지 코돈의 마지막 뉴클레오타이드(A)이고, 따라서 상기 ORF 3a는 하나의 뉴클레오타이드에서 ORF S와 오버랩핑된다(overlap). ORF 3b는 서열번호 30에 나타낸 바와 같이 개시 코돈(AUG)으로부터 정지 코돈(UAA)까지 195개의 뉴클레오타이드의 길이를 갖는다. 그러나, 상기 ORF 3b는 20개의 뉴클레오타이드에서 ORF 3c와 오버랩핑된다.
용어 "ORF 5a" 및 "ORF 5b"는 IBV의 유전자 5에 의해 암호화된 개방 판독 프레임(ORF) 5a 및 5b를 말한다. 유전자 5는 기능적으로 바이시스트론성이고 2종의 단백질 5a 및 5b를 암호화한다. ORF 5a는 서열번호 31에 나타낸 바와 같이 개시 코돈(AUG)으로부터 정지 코돈(UGA)까지 198개의 뉴클레오타이드 길이를 갖는다. 그러나, 상기 ORF 5a는 4개의 뉴클레오타이드에서 ORF 5b와 오버랩핑된다. ORF 5b는 서열번호 32에 나타낸 바와 같이 개시 코돈(AUG)으로부터 정지 코돈(UAG)까지 249개의 뉴클레오타이드의 길이를 갖는다. 그러나, 상기 ORF 5b는 58개의 뉴클레오타이드에서 ORF N과 오버랩핑된다.
용어 "불활성화된"은 ORF 3a, ORF 3b, ORF 5a 및 ORF 5b 내의 돌연변이를 말한다. 용어 돌연변이는 상기 암호화된 단백질의 변경을 유도하는 상기 단백질을 암호화하는 바이러스성 RNA의 변형을 포함한다. 용어 돌연변이는 치환(하나 또는 몇몇의 뉴클레오타이드/염기 쌍의 대체), 결실(하나, 몇몇의 또는 모든 뉴클레오타이드/염기 쌍의 제거) 및/또는 삽입(하나 또는 몇몇의 뉴클레오타이드/염기 쌍의 부가)에 관한 것이지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 따라서, 용어 돌연변이는, 점 돌연변이(point mutation)(단일 뉴클레오타이드 돌연변이) 또는 예를 들면 암호화(및/또는 비-암호화) 뉴클레오타이드/염기 쌍의 부분이 결실(부분 결실)되거나 또는 암호화(및/또는 비-암호화) 뉴클레오타이드/염기 쌍의 전부가 결실(완전 결실)되고/되거나, 치환되고/되거나 추가의 암호화(및/또는 비-암호화) 뉴클레오타이드/염기 쌍이 삽입된 보다 큰 돌연변이를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아닌 돌연변이를 포함한다. 용어 돌연변이는 암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍 내의 돌연변이, 조절성 뉴클레오타이드/염기 쌍 내와 같은 비-암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍 내의 돌연변이 및 암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍 및 비-암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍 둘 다 내의 돌연변이를 포함함을 이해해야만 한다. 추가로, 용어 돌연변이는 또한 뉴클레오타이드/염기 쌍(암호화 및/또는 비-암호화)의 역위, 예를 들면 암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍의 일부 또는 전부의 역위, 또는 비-암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍의 일부 또는 전부의 역위 또는 이들의 조합을 포함한다. 또한, 용어 돌연변이는 또한 뉴클레오타이드/염기 쌍(암호화 및/또는 비-암호화)의 재배치(relocation), 예를 들면 암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍의 일부 또는 전부의 재배치 또는 비-암호화 뉴클레오타이드/염기 쌍의 일부 또는 전부의 재배치 또는 이들의 조합을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 돌연변이는 단일 돌연변이 또는 몇몇의 돌연변이일 수 있고, 따라서 보통 용어 "돌연변이(들)"가 사용되고, 이는 단일 돌연변이 및 몇몇의 돌연변이 둘 다에 관한 것이다. 상기 돌연변이는 암호화 서열 내의 변화로 인한 변형된 발현 단백질을 초래할 수 있다. 그러나, 용어 돌연변이는 당해 분야 숙련가들에게 익히 공지되어 있고, 당해 분야 숙련가는 더 이상의 어려움 없이 돌연변이를 생성시킬 수 있다.
바람직하게, ORF 3b 또는 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화는 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고 E 단백질(ORF 3c에 의해 암호화됨)의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 3b 또는 ORF 3a 및 ORF 3b 발현(3b RNA 또는 3a 및 3b RNA 및/또는 3b 단백질 또는 3a 단백질 및 3b 단백질) 및/또는 단백질의 활성은 감소(또는 제거)되고, 반면 ORF 3c의 발현 및/또는 E 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다. 따라서, 상기 ORF 3c의 개시 코돈(AUG) 및 ORF 3b의 정지 코돈(UAA)의 오버랩핑 영역은 ORF 3c의 발현 및/또는 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는 한 포함된다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a 또는 ORF 3b 및 ORF 3b의 상기 불활성화는 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화는 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
바람직하게, ORF 3a 또는 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화는 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나, 단지 IBV의 S 단백질만을 기반으로 하는 방어 면역 반응에 의해 나타나는 바와 같은 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 3a 또는 ORF 3a 및 ORF 3b 발현(3a RNA 또는 3a 및 3b RNA 및/또는 3a 단백질 또는 3a 단백질 및 3b 단백질) 및/또는 상기 단백질의 활성은 감소(또는 제거)되고, 반면 ORF S의 발현 및/또는 상기 S 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다. 바람직하게, ORF 3a 또는 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화는 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG)과 오버랩핑되는 온전한(intact) 스파이크(S) 단백질의 종결 코돈(UAA)을 남긴다. 이는 ORF 3a의 개시 코돈 AUG의 A를 불활성화시키지 않음으로써 또는 ORF S의 마지막 2개의 뉴클레오타이드(UA)의 3'의 첫번째 뉴클레오타이드가 종결 코돈(UAA 또는 UAG)을 갖기 위해 A 또는 G가 되는 방식으로 ORF 3a 및 ORF 3b를 불활성화시킴으로써 수행될 수 있다. 대안으로, ORF S 내의 새로운 정지 코돈은 결실, 절단, 치환, 삽입, 역위 또는 재배치에 의해 생성되어 UAA, UAG 또는 UGA(정지 코돈)을 판독할 수 있다. 따라서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG) 및 ORF S의 정지 코돈(UAA)의 오버랩핑 영역 내의 결실, 절단, 치환, 삽입, 역위 또는 재배치는 ORF S의 발현 및/또는 활성이 영향을 받지 않는 한 포함된다는 것을 이해해야만 한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a 또는 ORF 3a 및 ORF 3b의 상기 불활성화는 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, ORF 3a 또는 ORF 3a 및 ORF 3b의 상기 불활성화는 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
바람직하게, ORF 5b 또는 ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화는 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질(ORF N에 의해 암호화됨)의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 5b 또는 ORF 5a 및 ORF 5b 발현(5b RNA 또는 5a 및 5b RNA 및/또는 5b 단백질 또는 5a 단백질 및 5b 단백질) 및/또는 상기 단백질의 활성은 감소(또는 제거)되고, 반면 ORF N의 발현 및/또는 N 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다. 바람직하게, ORF 5b 또는 ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화는 온전한 N 단백질의 개시 코돈(AUG)을 남기므로, 또한 ORF N도 남긴다. 그러나, ORF N의 개시 코돈(AUG) 및 ORF 5b의 정지 코돈(UAG)의 오버랩핑 영역 내의 결실, 절단, 치환, 삽입, 역위 또는 재배치는 ORF N의 발현 및/또는 N 단백질의 활성이 영향을 받지 않는 한 포함된다는 것을 이해해야만 한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 5b 또는 ORF 5a 및 ORF 5b의 상기 불활성화는 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5b가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, ORF 5b 또는 ORF 5a 및 ORF 5b의 상기 불활성화는 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 불활성화는 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 5b의 부분 결실, ORF 3a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 3b의 부분 절단 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 5b의 부분 절단, ORF 3a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 3b의 부분 역위 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 5b의 부분 역위, ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 3b의 부분 재배치 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 5b의 부분 재배치, ORF 3a 및 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, ORF 3a 및 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 치환이다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나;
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 불활성화가 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 5b의 부분 결실, ORF 3a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 3b의 부분 절단 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 5b의 부분 절단, ORF 3a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 3b의 부분 역위 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 5b의 부분 역위, ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 3b의 부분 재배치 및/또는 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 5b의 부분 재배치, ORF 3a 및 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, ORF 3a 및 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "불활성화된"은 단백질(및/또는 RNA)의 감소되거나 제거된 발현 및/또는 단백질의 감소된 활성 중 어느 하나를 말한다.
용어 "불활성화된"은 ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및/또는 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 감소된(또는 제거된) 발현을 포함한다. 상기 감소된 발현은 감소된 RNA 전사 및 감소된 단백질 발현 둘 다를 포함함을 이해해야만 한다. 바람직하게, ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및/또는 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 발현은 야생형 IBV 바이러스의 발현과 비교하는 경우 본 발명의 IBV에서 RNA 및/또는 단백질이 5 내지 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%, 90 내지 95%, 95 내지 99% 또는 그 이상 감소된다. 보다 바람직하게, ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및/또는 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 발현은 야생형 IBV 바이러스의 발현과 비교하는 경우 본 발명의 IBV에서 RNA 및/또는 단백질이 50 내지 100%, 60 내지 100%, 70 내지 100%, 80 내지 100%, 또는 90 내지 100% 감소된다. 더욱 더 바람직하게는, ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및/또는 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 발현은 야생형 IBV 바이러스의 발현과 비교하는 경우 본 발명의 IBV에서 RNA 및/또는 단백질이 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소된다.
바람직하게, ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및/또는 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 발현은 야생형 IBV 바이러스의 발현과 비교하는 경우 본 발명의 IBV에서 RNA 및/또는 단백질이 대략 1 내지 대략 100배, 대략 5 내지 대략 80배, 대략 20 내지 대략 80배, 대략 1 내지 대략 10배, 또는 대략 1 내지 대략 5배, 또는 대략 40 내지 대략 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100배 감소된다.
용어 "RNA"는 임의의 리보핵산을 말한다. 상기 용어는 단일 및 이중 가닥의 RNA를 포함한다. 본 발명의 RNA는 단리된(즉, RNA의 자연 환경으로부터 단리된) RNA 및 유전적으로 변형된 형태를 포함한다. 또한, 메틸화된 RNA와 같은 천연 발생의 변형된 RNA 또는 비오티닐화된 RNA와 같은 인공의 변형된 RNA를 포함하는 화학적으로 변형된 RNA도 포함된다. 또한, 상기 용어 "RNA"는 구체적으로 4개의 생물학적 발생 뉴클레오타이드/염기(아데닌, 구아닌, 시토신 및 우라실) 이외의 다른 염기로 이루어진 RNA도 포함한다. 본 발명의 RNA는 상기 언급된 바와 같은 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)을 암호화할 것이라는 점에서 특성확인된다.
용어 "핵산" 또는 "핵산 서열"은 DNA 분자, RNA 분자, cDNA 분자 또는 유도체를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 말한다. 상기 용어는 단일 및 이중 가닥의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 본 발명의 핵산은 단리된(즉, 이의 자연 환경으로부터 단리된) 폴리뉴클레오타이드 및 유전적으로 변형된 형태를 포함한다. 또한, 글리코실화된 또는 메틸화된 폴리뉴클레오타이드와 같은 천연 발생의 변형된 폴리뉴클레오타이드 또는 비오티닐화된 폴리뉴클레오타이드와 같은 인공의 변형된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 화학적으로 변형된 폴리뉴클레오타이드도 포함된다. 추가로, 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호교환적이고, 이는 임의의 핵산을 말한다. 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 또한 구체적으로 5개의 생물학적 발생 염기(아데닌, 구아닌, 티민, 시토신 및 우라실) 이외의 다른 염기로 이루어진 핵산도 포함한다.
용어 "단백질", "아미노산" 및 "폴리펩타이드"는 상호교환적으로 사용된다. 용어 "단백질"은 천연 발생 아미노산 및 이들의 유도체로 이루어진 아미노산의 서열을 말한다. 상기 천연 발생 아미노산은 당해 분야에 익히 공지되어 있고 생화학의 표준 교과서에 기술되어 있다. 상기 아미노산 서열 내에서 상기 아미노산은 펩타이드 결합에 의해 연결되어 있다. 추가로, 상기 아미노산 서열의 2개의 말단은 카르복실 말단(C-말단) 및 아미노 말단(N-말단)으로서 언급된다. 용어 "단백질"은 본질적으로 정제된 단백질 또는 다른 단백질을 추가로 포함하는 단백질 조제를 포함한다. 추가로, 상기 용어는 또한 단백질 단편에 관한 것이다. 또한, 이는 화학적으로 변형된 단백질을 포함한다. 이러한 변형은 인공적 변형 또는 천연 발생 변형, 예를 들면 인산화, 글리코실화, 및 미리스틸화 등일 수 있다.
ORF 3a 및/또는 ORF 3b(3a 및/또는 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및 3b 단백질) 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b(5a 및/또는 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 감소된 발현을 측정하기 위한 방법은 당해 분야 숙련가들에게 익히 공지되어 있다. 이러한 방법으로는 RT-PCR, 실시간 RT-PCR, 노던 블롯, 웨스턴 블롯, 방사면역검정, ELISA, 면역형광성, 면역조직화학, 현장 혼성화(in situ hybridization)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
그러나, 용어 "불활성화된"은 또한 상기 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 감소된(또는 제거된) 활성도 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 IBV의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성은 야생형 IBV 바이러스의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성과 비교하는 경우 5 내지 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90%, 90 내지 95%, 95 내지 99% 감소된다. 보다 바람직하게, 본 발명의 IBV의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성은 야생형 IBV 바이러스의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성과 비교하는 경우 50 내지 100%, 60 내지 100%, 70 내지 100%, 80 내지 100% 또는 90 내지 100% 감소된다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명의 IBV의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성은 야생형 IBV 바이러스의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성과 비교하는 경우 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소된다.
바람직하게, 본 발명의 IBV의 단백질(3a 단백질 및/또는 3b 단백질 및/또는 5a 단백질 및/또는 5b 단백질)의 활성은 야생형 IBV 바이러스의 단백질의 활성과 비교하는 경우 대략 1 내지 대략 100배, 대략 5 내지 대략 80배, 대략 20 내지 대략 80배, 대략 1 내지 대략 10배, 또는 대략 1 내지 대략 5배, 또는 대략 40 내지 대략 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100배 감소된다.
부속 IBV 단백질 3a 및 3b는 최근 IFN에 의해 유도된 세포성 항바이러스 상태에 대한 IBV의 내성에 부가적으로 관여하는 단백질 3a와 함께 시험관내 I형 인터페론 반응의 지연된 활성화를 야기하는 것으로 밝혀졌다(Kint et al 2015: J.Virol. 89:1156-1167; Kint et al 2015: J.Virol. doi: JVI.01057-15.). 부속 단백질 5b는 숙주 세포 차단에 기여하고, 다른 것들 중에서도 이에 의해 I형 IFN의 번역을 억제한다(Kint, PhD thesis 2015).
용어 "불활성화된"은 감소되거나 억제된 세포성 인터페론 면역 반응을 갖는 재조합 IBV(세포성 인터페론 면역 반응을 완전히 간섭할 수 있는 것은 아닌 IBV)를 포함한다. 바람직하게, 재조합 IBV는 인터페론 발현 및/또는 활성에 대한 감소되거나 억제된 간섭을 갖는다. 바람직하게, 1 또는 2개의 유형의 인터페론(IFN)의 발현 및/또는 활성은 감소되거나 억제된다. 본 발명의 한 양상에서, 재조합 IBV는 IFN-[알파]의 발현 및/또는 활성에 대한 영향을 야기한다. 다른 양상에서, IFN-[베타]의 발현 및/또는 활성이 영향을 받는다. 다른 양상에서, IFN-[감마]의 발현 및/또는 활성이 영향을 받는다. 바람직하게, IFN-[알파] 및/또는 IFN-[베타] 및/또는 IFN-[감마]의 발현 및/또는 활성은 동일한 조건 하의 IFN-적격(competent) 시스템, 예를 들면 야생형 세포 또는 동물에서 대조군(예를 들면, PBS 또는 인터페론 길항제 활성이 없는 단백질)과 비교하는 경우 인터페론 길항제 활성을 갖는 단백질, 폴리펩타이드 등이 5 내지 10%, 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 80 내지 90% 또는 그 이상 감소된다. 보다 바람직하게, IFN-[알파] 및/또는 IFN-[베타] 및/또는 IFN-[감마]의 발현 및/또는 활성은 동일한 조건 하의 IFN-적격 시스템에서 대조군(예를 들면, PBS 또는 인터페론 길항제 활성이 없는 단백질)과 비교하는 경우 인터페론 길항체 활성을 갖는 단백질, 폴리펩타이드 등이 대략 1 내지 대략 100배, 대략 5 내지 대략 80배, 대략 20 내지 대략 80배, 대략 1 내지 대략 10배, 또는 대략 1 내지 대략 5배, 또는 대략 40 내지 대략 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100배 감소된다. 감소되거나 억제된 인터페론 발현 및/또는 활성을 측정하기 위한 방법은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되어 있고, 여기서 상기 ORF 3b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되어 있다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된"은 완전 또는 부분적 결실, 완전 또는 부분적 치환 및 완전 또는 부분적 역위를 포함한다. 용어 "완전"은 전체 ORF가 ORF의 개시 코돈으로부터 정지 코돈까지 영향을 받음을 의미한다. 바람직하게, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 5a는 완전 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 그러나, 용어 "부분적"은 전체 ORF의 일부만이 영향을 받음을 의미한다. 바람직하게, ORF 3a, ORF 3b, ORF 5a, ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 보다 바람직하게, ORF 3b 및/또는 ORF 5b는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 가장 바람직하게, 상기 ORF 3b 및/또는 ORF 5b는 ORF 3c(E 단백질을 암호화함) 및 ORF N(N 단백질을 암호화함)의 발현 및/또는 E 단백질 및 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않기 위해 부분적으로 결실된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 3b는 부분적으로 결실된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 3b는 부분적으로 결실된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a는 완전 또는 부분적으로 결실되고 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b는 부분적으로 결실된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 개시 코돈이 불활성화된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a; 및/또는
- 상기 ORF 3b; 및/또는
- 상기 ORF 5a; 및/또는
- 상기 ORF 5b는 불활성화되고,
여기서, ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 개시 코돈은 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈 및 ORF 3b의 개시 코돈이 불활성화된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, ORF 3a의 개시 코돈 및 ORF 3b의 개시 코돈은 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)이 불활성화된다. 따라서, 상기 AUG의 불활성화는 상기 AUG 내의 1, 2 또는 3개의 뉴클레오타이드(들)의 불활성화/돌연변이를 포함함을 이해해야만 한다. 따라서, 상기 개시 코돈 AUG의 불활성화는 상기 A의 돌연변이 및/또는 상기 U의 돌연변이 및/또는 상기 G의 돌연변이를 포함한다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)은 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG)의 불활성화는 결실, 치환 또는 역위이다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)은 결실, 치환 또는 역위에 의해 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈이 불활성화된다. 따라서, 본 발명의 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈은 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)이 불활성화된다. 따라서, 상기 AUG의 불활성화는 상기 AUG 내의 1, 2 또는 3개의 뉴클레오타이드(들)의 불활성화/돌연변이를 포함함을 이해해야만 한다. 따라서, 상기 개시 코돈 AUG의 불활성화는 상기 A의 돌연변이 및/또는 상기 U의 돌연변이 및/또는 상기 G의 돌연변이를 포함한다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)은 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG)의 불활성화는 결실, 치환 또는 역위이다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)은 결실, 치환 또는 역위에 의해 불활성화된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "상기 개시 코돈의 5'-말단으로부터 절단되는"은 상기 5'-말단의 ORF의 절단을 말한다. 용어 "5'-말단"은 이미 다른 곳에 기술되어 왔다. 용어 "절단된 또는 절단"은 상기 ORF 내의 하나 이상의 뉴클레오타이드/염기의 결실을 말한다. 따라서, ORF의 3'-말단의 부분은 유지되고, 반면 ORF의 5'-말단 영역의 부분은 결실된다. 그러나, 5'-말단에서의 절단은 상응하는 단백질 내의 하나 이상의 아미노산의 결실을 또는 야생형 단백질과 상이한 암호화 영역을 초래하는 ORF 내의 프레임시프트(frameshift)를 초래할 수 있다. 그러나, 5'-말단에서의 절단은 개시 코돈이 절단되므로 단백질을 전혀 발현시키지 않을 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "개시 코돈의 5'-말단"은 상기 절단은 상기 ORF의 개시 코돈에 영향을 미친다(상기 ORF의 개시 코돈을 포함한다)는 것을 이해해야만 한다. 개시 코돈(AUG)의 5'-말단은 A이고, 반면 상기 AUG의 3'-말단은 G이다. 그러나, 용어 "5'-" 및 "3'-"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 ORF 3a의 개시코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
본 발명에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 ORF 3a의 개시코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "개시 코돈의 A, U 또는 G로부터 절단되는"은 상기 절단이 A 또는 U 또는 G로 개시될 수 있는 것으로 이해되어야만 한다. 상기 절단이 A로 개시되는 경우, 상기 A는 절단된다. 그러나, 상기 A로부터의 절단이 2개 이상의 뉴클레오타이드의 결실을 포함하는 경우, 상기 U도 결실된다. 추가로, 상기 A로부터의 절단이 3개 이상의 뉴클레오타이드의 결실을 포함하는 경우, 상기 A, U 및 G가 결실된다. 그러나, 상기 절단이 U로 개시되는 경우 상기 U는 절단되고, 반면 AUG의 A는 여전히 남아 있음을 이해해야만 한다. 추가로, 상기 절단이 G로 개시되는 경우, 상기 G는 결실되고, 반면 AUG의 A 및 U는 여전히 남아 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되고, 여기서 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b는 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되고, 여기서 상기 ORF 5a 및 ORF 5b는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 친환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "상기 ORF 3a의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 5'-말단으로부터 상기 ORF 3a의 뉴클레오타이드들의 결실, 치환 또는 역위를 말하고, 여기서 상기 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A; 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)는 1번이다. 따라서, 상기 용어는 뉴클레오타이드 1 내지 173, 1 내지 172, 1 내지 171, 1 내지 170, 1 내지 169 등등 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2 및 1 내지 1까지의 5'-말단으로부터의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다. 따라서, 상기 용어 "상기 ORF 3a의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 173개의 변이체를 포함하고, 여기서 모든 173개의 변이체에서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A가 1번으로서 정의된다)는 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다는 것으로 이해해야만 한다.
용어 "상기 ORF 3b의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 5'-말단으로부터 상기 ORF 3b의 뉴클레오타이드들의 결실, 치환 또는 역위를 말하고, 여기서 상기 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A; 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)는 1번이다. 따라서, 상기 용어는 뉴클레오타이드 1 내지 175, 1 내지 174, 1 내지 173, 1 내지 172, 1 내지 171, 1 내지 170 등등 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2 및 1 내지 1까지의 5'-말단으로부터의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다. 따라서, 상기 용어 "상기 ORF 3b의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 175개의 변이체를 포함하고, 여기서 모든 175개의 변이체에서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A가 1번으로서 정의된다)는 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다는 것으로 이해해야만 한다.
바람직하게, 본 발명의 IBV는 상기 ORF 3a의 5'-말단으로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170, 뉴클레오타이드 1 내지 173의 결실, 치환 또는 역위를 포함하고, 여기서 상기 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A; 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)가 1번이고, 바람직하게는 본 발명의 IBV는 상기 ORF 3b의 5'-말단으로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170, 뉴클레오타이드 1 내지 175의 결실, 치환 또는 역위를 포함하고, 여기서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A; 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)가 1번이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "1 내지 171개의 뉴클레오타이드", "1 내지 172개의 뉴클레오타이드", "1 내지 173개의 뉴클레오타이드", "1 내지 174개의 뉴클레오타이드" 및 "1 내지 175개의 뉴클레오타이드"는 상기 제시된 바와 같은 다른 정의에 따라 이해해야만 한다. 따라서, 상기 용어는 171개의 변이체, 172개의 변이체, 173개의 변이체, 174개의 변이체 또는 175개의 변이체를 포함한다. 용어 "개시 코돈의 A로부터", "개시 코돈의 U로부터" 또는 "개시 코돈의 G로부터"는 결실, 치환 또는 역위의 개시점을 정의한다. 예시로 용어 "개시 코돈의 A로부터"는 결실, 치환 또는 역위가 개시 코돈(AUG)의 A로부터 개시되어 A에 영향을 미침을 정의한다.
바람직하게, 본 발명의 IBV는 ORF 3a 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG)의 A, U 또는 G로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "상기 ORF 5a의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 5'-말단으로부터의 ORF 5a의 뉴클레오타이드들의 결실, 치환 또는 역위를 말하고, 여기서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A; 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)는 1번이다. 따라서, 상기 용어는 뉴클레오타이드 1 내지 194, 1 내지 193, 1 내지 192, 1 내지 191, 1 내지 190 등등 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2 및 1 내지 1까지의 5'-말단으로부터의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다. 따라서, 용어 "상기 ORF 5a의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 194개의 변이체를 포함하고, 여기서 모든 194개의 변이체에서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A가 1번으로서 정의된다)는 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다는 것으로 이해해야만 한다.
용어 "상기 ORF 5b의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 5'-말단으로부터의 상기 ORF 5b의 뉴클레오타이드들의 결실, 치환 또는 역위를 말하고, 여기서 상기 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)는 1번이다. 따라서, 상기 용어는 뉴클레오타이드 1 내지 191, 1 내지 190, 1 내지 189, 1 내지 188, 1 내지 187 등등 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2 및 1 내지 1까지의 5'-말단으로부터의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다. 따라서, 용어 "상기 ORF 5b의 개시 코돈의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 191개의 변이체를 포함하고, 여기서 모든 191개의 변이체에서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A가 1번으로서 정의된다)는 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다는 것으로 이해해야만 한다.
바람직하게, 본 발명의 IBV는 ORF 5a의 5'-말단으로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170, 뉴클레오타이드 1 내지 180, 뉴클레오타이드 1 내지 190, 뉴클레오타이드 1 내지 194의 결실, 치환 또는 역위를 포함하고, 여기서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)는 1번이고, 바람직하게는 본 발명의 IBV는 ORF 5b의 5'-말단으로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170, 뉴클레오타이드 1 내지 180, 뉴클레오타이드 1 내지 190, 뉴클레오타이드 1 내지 191의 결실, 치환 또는 역위를 포함하고, 여기서 5'-말단 뉴클레오타이드(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)는 1번이다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "1 내지 189개의 뉴클레오타이드", "1 내지 190개의 뉴클레오타이드", "1 내지 191개의 뉴클레오타이드", "1 내지 192개의 뉴클레오타이드", "1 내지 193개의 뉴클레오타이드", "1 내지 194개의 뉴클레오타이드"는 상기 제시된 바와 같은 다른 정의에 따라 이해해야만 한다. 상기 용어는 189개의 변이체, 190개의 변이체, 191개의 변이체, 192개의 변이체, 193개의 변이체 또는 194개의 변이체를 포함한다. 용어 "개시 코돈의 A로부터", "개시 코돈의 U로부터" 또는 "개시 코돈의 G로부터"는 결실, 치환 또는 역위의 개시점을 정의한다. 예시로 용어 "개시 코돈의 A로부터"는 결실, 치환 또는 역위가 개시 코돈(AUG)의 A로부터 개시되어 A에 영향을 미침을 정의한다.
바람직하게, 본 발명의 IBV는 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG)의 A, U 또는 G로부터 뉴클레오타이드 1 내지 10, 뉴클레오타이드 1 내지 20, 뉴클레오타이드 1 내지 30, 뉴클레오타이드 1 내지 40, 뉴클레오타이드 1 내지 50, 뉴클레오타이드 1 내지 60, 뉴클레오타이드 1 내지 70, 뉴클레오타이드 1 내지 80, 뉴클레오타이드 1 내지 90, 뉴클레오타이드 1 내지 100, 뉴클레오타이드 1 내지 110, 뉴클레오타이드 1 내지 120, 뉴클레오타이드 1 내지 130, 뉴클레오타이드 1 내지 140, 뉴클레오타이드 1 내지 150, 뉴클레오타이드 1 내지 160, 뉴클레오타이드 1 내지 170, 뉴클레오타이드 1 내지 180, 뉴클레오타이드 1 내지 189의 결실, 치환 또는 역위를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 5'-말단으로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 174 내지 200개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 174 내지 200개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 174 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 173 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 172 내지 346개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 174 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 173 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 172 내지 346개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 195 내지 250개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 350개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 195 내지 250개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 350개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 195 내지 385개의 뉴클레오타이드, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 194 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 193 내지 383개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 195 내지 385개의 뉴클레오타이드, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 194 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 193 내지 383개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
일반적으로, 용어 "ORF 3a/3b/5a/5b의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 상기 ORF 내의 어느 곳에서나 발생할 수 있는 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위를 말한다. 따라서, 뉴클레오타이드의 상기 결실, 치환 또는 역위는 상기 ORF의 5'-말단에만, 상기 ORF의 3'-말단에만 또는 상기 ORF의 나머지 뉴클레오타이드(5'-말단 및 3'-말단 제외)에 또는 이들의 임의의 조합(예를 들면, 예시의 상기 ORF의 5'-말단 및 추가의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF의 3'-말단 및 추가의 뉴클레오타이드)에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 예시의 어구 "ORF 3a/3b/5a/5b의 적어도 25개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 상기 25개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 내의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위의 위치결정(localization)에 대한 제한 없이 상기 ORF 내의 어느 곳에서나 결실되거나, 치환되거나 또는 역위될 수 있음을 의미한다. 추가로, 예시의 어구 "상기 ORF 3aDML 1 내지 173개 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다"는 상기 뉴클레오타이드가 상기 ORF 내의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위의 위치결정에 대한 제한 없이 상기 ORF 내의 어느 곳에서나 결실되거나, 치환되거나 또는 역위될 수 있음을 의미한다. 또한, 상기 제시된 바와 같이, 용어 "1 내지 173개의 뉴클레오타이드"는 173개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 171, 172 또는 173개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함함을 이해해야만 한다. 따라서, 용어 "1 내지 175개의 뉴클레오타이드"는 175개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 173, 174 또는 175개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함하고, 용어 "1 내지 194개의 뉴클레오타이드"는 194개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 192, 193 또는 194개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함하고, 용어 "1 내지 90개의 뉴클레오타이드"는 1, 2, 3, 4 등등 88, 89 또는 90개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함하고, 용어 "1 내지 191개의 뉴클레오타이드"는 191개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 189, 190 또는 191개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함하고, 용어 "1 내지 348개의 뉴클레오타이드"는 348개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 346, 347 또는 348개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함하고, 용어 "1 내지 385개의 뉴클레오타이드"는 385개의 변이체(1, 2, 3, 4 등등 383, 384 또는 385개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위)를 포함함을 이해해야만 한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 여기서 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되는, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내"는 상기 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위가 상기 ORF 3a의 개시 코돈에 영향을 미칠 수 있고(상기 ORF 3a의 개시 코돈을 포함할 수 있고), 여기서 상기 ORF 3c의 개시 코돈은 영향을 받지 않음(제외됨)을 이해해야만 한다. 따라서, ORF 3c의 발현 및/또는 E 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다. 따라서, 용어 "상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내"는 상기 ORF 3c의 개시 코돈이 영향을 받지 않는 한 상기 ORF 내의 어느 곳에서나 발생할 수 있는 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위를 말한다. 따라서, 상기 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위는 ORF 3a의 5'-말단에만, ORF 3b의 3'-말단에만(ORF 3c의 개시 코돈에는 영향을 미치지 않음) 또는 상기 ORF의 나머지 뉴클레오타이드(상기 5'-말단 및 3'-말단 제외)에 또는 이들의 임의의 조합에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 상기로부터 용어 "176 내지 348개의 뉴클레오타이드"는 176, 177, 178 등등 346, 347 또는 348개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위를 포함함을 이해해야만 한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 및 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴크레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 따라서, ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화는 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 발현(3a 및 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및 3b 단백질) 및/또는 상기 단백질의 활성은 감소되고(또는 제거되고), 반면 ORF 3c 발현 및/또는 E 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 따라서, ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화는 ORF 3c의 발현에 그리고/또는 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 발현(3a 및 3b RNA 및/또는 3a 단백질 및 3b 단백질) 및/또는 상기 단백질의 활성은 감소되고(또는 제거되고), 반면 ORF 3c의 발현 및/또는 E 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
본 발명에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내"는 상기 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위는 상기 ORF 5a의 개시 코돈에 영향을 미칠 수 있고(포함할 수 있고), 여기서 상기 ORF N의 개시 코돈은 영향을 받지 않음(제외됨)을 이해해야만 한다. 따라서, ORF N의 발현 및/또는 N 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다. 따라서, 용어 "상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내"는 상기 ORF N의 개시 코돈이 영향을 받지 않는 한 상기 ORF 내의 어느 곳에서나 발생할 수 있는 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위를 말한다. 따라서, 상기 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위는 ORF 5a의 5'-말단에만, ORF 5b의 3'-말단에만(상기 ORF N의 개시 코돈에 영향을 미치지 않음) 또는 상기 ORF의 나머지 뉴클레오타이드(상기 5'-말단 및 3'-말단 제외)에 또는 이들의 임의의 조합에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 상기로부터 용어 "195 내지 385개의 뉴클레오타이드"는 195, 196, 197 등등 383, 384 또는 385개까지의 뉴클레오타이드의 결실, 치환 또는 역위를 포함함을 이해해야만 한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 따라서, ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화는 ORF N의 발현에 그리고/또는 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 발현(5a 및 5b RNA 및/또는 5a 단백질 및 5b 단백질) 및/또는 상기 단백질의 활성은 감소되고(또는 제거되고), 반면 ORF N의 발현 및/또는 N 단백질의 활성은 영향을 받지 않는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348로부터의 ORF 3a 및 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348로부터의 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열은 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%의 동일성을 갖는 RNA 서열은 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%의 동일성을 갖는 RNA 서열은 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
용어 "동일성" 또는 "서열 동일성"은 당해 분야에 공지되어 있고, 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 관계, 즉 기준 서열(reference sequence) 및 상기 기준 서열과 비교될 주어진 서열 사이의 관계를 말한다. 서열 동일성은 기준 서열 및 주어진 서열의 스트링(string) 사이의 매치(match)에 의해 측정시 상기 서열들이 최고 정도의 서열 유사성을 생성시키도록 최적으로 정렬된 후 기준 서열에 대해 주어진 서열을 비교함으로써 결정된다. 이러한 정렬시, 서열 동일성은 위치-대-위치(position-by-position) 기준으로 확인되고, 예를 들면 특정 위치에서 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기가 동일하면 상기 서열은 해당 특정 위치에서 "동일하다". 이어서, 이러한 위치 동일성의 총 수를 기준 서열의 뉴클레오타이드 또는 잔기의 총 수로 나누어 서열 동일성 백분율(%)로 제공한다. 서열 동일성은 문헌의 교시가 본원에 인용에 의해 포함되는 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988), Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987); Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991); 및 Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)]에 기술된 것들을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아닌 공지의 방법에 의해 쉽게 계산할 수 있다. 서열 동일성을 측정하기 위한 바람직한 방법은 시험되는 서열들 사이의 최대 매치를 제공하도록 고안된다. 서열 동일성을 측정하기 위한 방법은 주어진 서열들 사이의 서열 동일성을 측정하는 공공의 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 성문화된다. 이러한 프로그램의 예로는 GCG 프로그램 패키지(Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN 및 FASTA(Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. BLASTX 프로그램은 NCBI 및 기타 공급원으로부터 공공으로 이용가능하다(BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), 상기 문헌의 교시는 본원에 인용에 의해 포함된다). 이들 프로그램은 주어진 서열과 기준 서열 사이에 최고 수준의 서열 동일성을 생성시키기 위해서 디폴트 갭 중량(default gap weight)을 이용하여 서열을 최적으로 정렬한다. 일례로서, 기준 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도, 예를 들면 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 "서열 동일성"을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의하면, 주어진 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열은 상기 주어진 폴리뉴클레오타이드 서열이 기준 뉴클레오타이드 서열의 각 100개의 뉴클레오타이드당 15개까지, 바람직하게는 10개까지, 보다 더 바람직하게는 5개까지의 점 돌연변이를 포함할 수 있음을 제외하고는 상기 기준 서열과 동일한 것으로 의도된다. 즉, 상기 기준 뉴클레오타이드 서열에 비하여 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 기준 서열의 뉴클레오타이드의 15%, 바람직하게는 10%, 보다 더 바람직하게는 5%까지가 결실되거나 또는 다른 뉴클레오타이드로 치환될 수 있거나, 또는 상기 기준 서열의 총 뉴클레오타이드의 15%, 바람직하게는 10%, 보다 더 바람직하게는 5%까지의 다수의 뉴클레오타이드가 상기 기준 서열에 삽입될 수 있다. 상기 기준 서열의 이들 돌연변이는 기준 뉴클레오타이드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 또는 상기 기준 서열 내의 하나 이상의 인접한(contiguous) 그룹에서 또는 상기 기준 서열의 뉴클레오타이드들 사이에서 개별적으로 산재된(interspersed) 이들 말단 위치 사이의 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 유사하게, 기준 아미노산 서열과 적어도, 예를 들면 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 서열 동일성을 갖는 주어진 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드에 의하면, 상기 폴리펩타이드의 주어진 아미노산 서열은 상기 주어진 폴리펩타이드 서열이 기준 아미노산 서열의 각 100개의 아미노산당 15개까지, 바람직하게는 10개까지, 보다 더 바람직하게는 5개까지의 아미노산 변경을 포함할 수 있음을 제외하고는 상기 기준 서열과 동일한 것으로 의도된다. 즉, 기준 아미노산 서열과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 서열 동일성을 갖는 주어진 폴리펩타이드 서열을 수득하기 위해서, 상기 기준 서열의 아미노산 잔기의 15%까지, 바람직하게는 10%까지, 보다 더 바람직하게는 5%까지가 결실되거나 다른 아미노산으로 치환될 수 있거나, 또는 상기 기준 서열의 아미노산 잔기의 15%까지, 바람직하게는 10%까지, 보다 더 바람직하게는 5%까지의 다수의 아미노산이 상기 기준 서열에 삽입될 수 있다. 상기 기준 서열의 이들 변경은 상기 기준 아미노산 서열의 아미노 또는 카르복시 말단 위치에서 또는 상기 기준 서열 내의 하나 이상의 인접한 그룹에서 또는 상기 기준 서열의 잔기들 사이에서 개별적으로 산재된 이들 말단 위치 사이의 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 바람직하게, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환에 의해 상이하다. 그러나, 보존적 치환은 서열 동일성을 결정할 때 매치로서 포함되지 않는다.
용어 "동일성", "서열 동일성" 및 "동일성 백분율"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본 발명의 목적을 위해, 2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 동일성 백분율을 측정하기 위해서는 상기 서열들을 최적의 비교 목적으로 정렬시킴(예를 들면, 제1 아미노산 또는 핵산의 서열에 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적의 정렬을 위해 갭(gap)이 도입될 수 있음)이 본원에 정의된다. 이어서, 상응하는 아미노산 또는 뉴클레오타이드 위치의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 잔기를 비교한다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 또는 뉴클레오타이드 잔기로 점유되면, 해당 분자는 해당 위치에서 동일하다. 2개의 서열들 사이의 동일성 백분율(%)은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 동일성 백분율(%) = 동일한 위치의 수/위치(즉, 오버랩핑 위치)의 총 수 x 100). 바람직하게는, 상기 2개의 서열이 동일한 길이이다.
서열 비교는 비교될 2개의 서열의 전체 길이에 걸쳐 또는 2개의 서열의 단편에 걸쳐 수행될 수 있다. 전형적으로, 상기 비교는 비교될 2개의 서열의 전장에 걸쳐 수행될 것이다. 그러나, 서열 동일성은 예를 들면, 20, 50, 100 또는 그 이상의 인접한 아미노산 잔기의 영역에 걸쳐 수행될 수 있다.
당해 분야 숙련가는 2개의 서열 사이의 상동성을 측정하기 위해 상이한 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다는 사실을 인지할 것이다. 예를 들면, 2개의 서열들 사이의 동일성 백분율의 측정 및 서열의 비교는 수학적 알고리즘(algorithm)을 이용하여 달성될 수 있다. 한 바람직한 실시형태에서, 2개의 아미노산 또는 핵산 서열들 사이의 동일성 백분율은 블로섬(Blosum) 62 매트릭스 또는 PAM520 매트릭스 중 어느 하나, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 중량을 이용하여, 액설리스(Accelrys) GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(http://www.accelrys.com/products/gcg/에서 입수가능함)에 통합된 니들먼 및 분쉬(Needleman and Wunsch)(J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)) 알고리즘을 이용하여 측정된다. 당해 분야 숙련가는 이들 상이한 파라미터 전부가 약간 상이한 결과를 얻을 것이지만, 상이한 알고리즘을 이용하는 경우 2개의 서열들의 전체 동일성 백분율(%)이 현저하게 변하지 않음을 이해할 것이다.
본 발명의 단백질 서열 또는 핵산 서열은 추가로 예를 들면, 다른 패밀리 구성원 또는 관련 서열을 확인하기 위해 공공의 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "질의 서열(query sequence)"로서 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌[Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 BLASTN 및 BLASTP 프로그램(버전 2.0)을 이용하여 수행할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 BLASTP 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3으로 수행하여 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적으로 갭이 삽입된(gapped) 정렬을 얻기 위해, 갭이 삽입된 BLAST를 문헌[Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402]에 기술된 바와 같이 이용할 수 있다. BLAST 및 갭이 삽입된 BLAST 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램(예를 들면, BLASTP 및 BLASTN)의 디폴트 파라미터가 사용될 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/의 내셔널 센터 포 바이오테크놀로지 인포메이션(the National Center for Biotechnology Information)의 홈페이지를 참조한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385의 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385의 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열은 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%의 동일성을 갖는 RNA가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%의 동일성을 갖는 RNA 서열은 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된다. 따라서, 본 발명은 IBV 또는 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5b 및 ORF 5b가 불활성화되고,
여기서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 E 단백질은 유전자형 QX, 보우데트, H120 또는 H52의 아미노산 서열 또는 상기 언급된 유전자형 중 적어도 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 E 단백질은 KM586818(QX), AJ311317(보우데트), FJ807652(H120) 또는 서열번호 38(H52)에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 상기 언급된 서열 중 적어도 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 IBV가 약독화된다.
용어 "약독화된"은 야생형 단리물과 비교하여 감소된 맹독성을 갖는 병원체를 말한다. 본 발명에서, 약독화된 IBV는 IBV 감염의 임상학적 징후를 야기하지 않도록 맹독성이 감소되었지만 표적 동물에서 면역 반응을 유도할 수 있는 IBV이지만, 또한 상기 임상학적 징후는 비-약독화된 IBV로 감염되고 약독화된 바이러스를 투여받지 않은 동물의 "대조군 그룹"과 비교하여 약독화된 IBV로 감염된 동물의 발병률 또는 중증도가 감소됨을 의미할 수도 있다. 이러한 문맥에서, 용어 "감소된다/감소된"은 상기 정의된 바와 같은 비-약독화된 IBV로 감염된 대조군 그룹과 비교하여 적어도 10%, 바람직하게는 25%, 보다 더 바람직하게는 50%, 더욱 더 바람직하게는 60%, 보다 더 바람직하게는 70%, 더욱 더 바람직하게는 80%, 더욱 더 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100%의 감소를 의미한다. 따라서, 약독화된 IBV 균주는 변형된 생 IBV를 포함하는 면역원성 조성물에의 혼입에 적합한 것이다.
따라서, 본 발명은 약독화된 IBV 또는 약독화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, 약독화된 IBV 또는 약독화된 IBV를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
따라서, 본 발명은 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된, 약독화된 IBV 또는 약독화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물를 제공한다.
따라서, 본 발명은 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, 약독화된 IBV 또는 약독화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물를 제공한다.
본 발명은 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, 약독화된 IBV 또는 약독화된 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물를 제공한다.
불활성화된 바이러스
본 발명의 한 양상에서, 본 발명의 IBV는 불활성화되어 전체 불활성화된 바이러스를 초래하였다. 따라서, 본 발명은 또한 불활성화된 IBV를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a; 및/또는
- 상기 ORF 3b; 및/또는
- 상기 ORF 5a; 및/또는
- 상기 ORF 5b가 불활성화된, 불활성화된 IBV를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양상에서, 본 발명의 IBV는 불활성화되어 전체 불활성화된 바이러스를 초래하였다. 따라서, 본 발명은 또한 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된, 불활성화된 IBV; 또는
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, 불활성화된 IBV; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, 불활성화된 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물에 관한 것이다.
임의의 종래의 불활성화 방법을 본 발명의 목적에 사용할 수 있다. 따라서, 불활성화는 당해 분야 숙련가에게 공지되어 있는 화학적 및/또는 물리적 처리에 의해 수행될 수 있다. 바람직한 불활성화 방법으로는 이원 에틸렌이민(BEI: binary ethylenimine)으로 환화된 2-브로모에틸렌아민 하이드로브로마이드(BEA: bromoethyleneamine hydrobromide)의 용액의 부가를 포함하는 환화된(cyclized) 이원 에틸렌이민(BEI)의 부가가 포함된다. 바람직한 추가의 화학적 불활성화제로는 트리톤(Triton) X-100, 나트륨 데옥시콜레이트, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드, β-프로피오락톤, 티메로살, 페놀 및 포름알데하이드(포르말린)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 그러나, 불활성화는 또한 중화 단계도 포함할 수 있다. 바람직한 중화제로는 나트륨 티오설페이트 및 나트륨 바이설파이트 등이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
바람직한 포르말린 불활성화 조건으로는 약 0.02%(v/v) 내지 2.0%(v/v), 보다 바람직하게는 약 0.1%(v/v) 내지 1.0%(v/v), 보다 더 바람직하게는 약 0.15%(v/v) 내지 0.8%(v/v), 더욱 더 바람직하게는 약 0.16%(v/v) 내지 0.6%(v/v), 그리고 가장 바람직하게는 약 0.2%(v/v) 내지 0.4%(v/v)의 포르말린 농도가 포함된다. 인큐베이션(incubation) 시간은 IBV의 내성에 의존한다. 일반적으로, 인큐베이션 프로세스는 적합한 배양 시스템에서 IBV의 성장이 검출될 수 없을 때까지 수행된다.
바람직하게, 본 발명의 불활성화된 IBV는 바람직하게는 상기 본원에 기술된 바와 같은 농도를 이용하여 포르말린 불활성화된다.
본 발명의 불활성화된 IBV는 문헌[Nature, 1974, 252, 252-254 or Journal of Immunology, 1978, 120, 1109-13]에 기술된 바와 같은 공지의 기술을 이용하여 리포솜에 혼입될 수 있다. 본 발명의 다른 실시형태에서, 본 발명의 불활성화된 IBV는 폴리사카라이드, 펩타이드, 또는 단백질 등 또는 이들의 조합과 같은 적합한 생물학적 화합물에 접합될 수 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 IBV는 유전적으로 조작된다.
용어 "유전적으로 조작된"은 "역 유전학(reverse genetics)" 접근법을 이용함으로써 돌연변이된 IBV를 말한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 IBV는 유전적으로 조작되었다. 역 유전학 기술은 합성 재조합 바이러스성 RNA의 조제를 포함한다. 그러나, "역 유전학" 기술은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 IBV는 재조합 IBV이다.
본원에서 사용되는 용어 "재조합"은 상응하는 RNA 게놈(또는 RNa 서열 또는 단백질)에 자연 발생하지 않는 임의의 변형을 갖는 RNA 게놈(또는 RNA 서열 또는 단백질)에 관한 것이다. 예를 들면, RNA 게놈(또는 RNA 서열 또는 단백질)은 예를 들면, 사람 개입에 의해 인공적으로 도입된 삽입, 결실, 역위, 재배치 또는 점 돌연변이를 포함하는 경우 "재조합"인 것으로 간주된다. 따라서, RNA 게놈 서열(또는 RNA 서열 또는 단백질)은 이와 사실상 결합되어 있는 서열(RNA 서열 또는 단백질의 아미노산 서열)의 전부 또는 일부와 관련되어 있지 않다. 바이러스와 관련하여 사용되는 용어 "재조합"은 바이러스 게놈의 인공적 조작에 의해 생성되는 바이러스를 의미한다. 용어 "재조합 바이러스"는 유전적으로 변형된 바이러스를 포함한다.
IBV 균주
IBV 균주는 혈청형 및 유전자형으로 분류될 수 있다. 혈청형 분류는 중화 항체로 바이러스를 치료함을 포함하고, 반면 유전자형 분류는 S1(스파이크) 단백질의 서열을 조사함을 포함한다. 그러나, 상이한 IBV 균주가 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 감염성 기관지염 바이러스는 1930년대에 미국에서 처음 발겨되었다. 확인된 최초의 IBV 혈청형은 매사추세츠(Massachusetts)였지만, 미국에서는 최초로 확인된 매사추세츠 유형에 추가하여 아칸사스(Arkansas) 및 델라웨어(Delaware)를 포함하는 몇몇의 혈청형들이 확인되었다.
IBV 균주 보우데트는 매사추세츠 유형이고, 닭 배아에서 적어도 150회 계대 후 유도되었다. IBV 균주 보우데트는 보우데트 및 허드슨(Hudson)에 의해 최초로 단리되었고(J. Am. Vet. Med. A. 90, 51-60, 1937) 흔히 로서 닭 배아에서 수백회 계대배양되었고, 이는 흔히 "적응된(adapted) 닭 배아" 또는 "적응된 계란"으로서 나타낸다. 보우데트 이외의 다른 매사추세츠 유형 IBV 균주는 H120, H52 및 M41이다.
IB QX는 중국에서 최초로 단리된 IBV의 맹독성 현장(field) 단리물로서 기술되어 왔다. 그러나, 상기 바이러스는 유럽으로 퍼져 나갔고, 서유럽 부분, 주로 네덜란드에서 확인되었고, 또한 독일, 프랑스, 벨기에, 덴마크에서 그리고 영국에서도 확인되었다. QX 혈청형은 아시아 및 아프리카의 몇몇 국가에서 기술되어 왔다.
다른 IBV 균주는 흔히 793B라고도 칭하는 4/91 유전자형이다.
"이탈리안(Italien)-02" 또는 "이탈리아(Italy)-02"라고 명명한 균주는 1990년대에 이탈리아에서 단리되었다. 이들 단리물 중 하나의 서열 분석은 2002년에 공개되었다(NCBI-BLAST, 번호 AJ457137). 그러나, 연구는 이러한 이탈리안(Italian)-02 균주가 유럽에서 널리 퍼져 있고, IBV 변이체 균주 4/91과는 다르게 영국, 스페인, 프랑스 및 네덜란드에서 가장 우세한 유전자형 중 하나가 되었음을 밝혔다.
또한, 균주 D274, B1648/D8880, D1466, V1397 및 아칸사스는 또한 유럽에서도 확인되었다.
본 발명의 한 양상에서, IBV는 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(Dutch)(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(Georgia)(예를 들면, 조지아 GA-08, GA-12, GA-13), 그레이(Gray), 홀테(Holte), 아이오와(Iowa)(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(Maine)(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(Pennsylvania)(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 QX 유전자형은 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, 매사추세츠 유전자형은 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, 4/91 유전자형은 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, Spain/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, Q1 유전자형은 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레(Chile)-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, 이탈리아 02 유전자형은 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, Spain/05/866, Spain/04/221, Spain/00/337, Spain/155/09, Spain/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 IBV는 매사추세츠 유전자형 균주 H52이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 H52는 H52U이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 H52는 EU817497에 대해 나타낸 바와 같은 뉴클레오타이드 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 본 발명은 AF352315에 대해 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 스파이크(S1) 단백질을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 H52 균주는 AY044185 또는 AF352310에 대해 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 상기 언급된 서열의 적어도 하나에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오캡시드(N) 단백질을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 H52 균주는 AF317210에 대해 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 외피(E) 단백질을 갖는다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 H52 균주는 AF286185에 대해 나타낸 바와 같은 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질(M) 단백질을 갖는다.
IBV 균주를 어디서 얻을 수 있는지는 당해 분야 숙련가의 일반적 지식범위 내이다. IBV 균주는 상업적으로 구입하거나 또는 과학 연구소로부터 수득할 수 있거나, 또는 게놈은 IBV 균주가 서열분석되고 서열이 공개되어 있어 입수가능하므로 상보적 DNA로서 합성될 수 있다. 또한, IBV 균주는 현장으로부터 단리될 수 있다. IBV 균주를 단리하고 IBV 균주를 특성확인하는 방법은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 문헌[Valter Leonardo de Quadros 2011 (Dissertation, Das Infektiose Bronchitis Virus (IBV): Molekularbiologische Untersuchungen zur Diagnostik und zum Vorkommen sowie zur Pathogenitat des Genotyps IBV QX in spezifisch pathogenfreien (SPF) Broilern, Freie Universitat Berlin), Worthington et al 2009 (Avian Pathology 37(3), 247-257), Liu et al 2009 (Virus Genes 38: 56-65), Dolz et al 2006 (Avian Pathology 35 (2): 77-85), Farsang et al 2002 (Avian Pathology 31: 229-236) 및 Feng et al 2014 (Virus Genes 49: 292-303)]은 상이한 IBV 균주들을 단리하고 분화시키는 방법을 기술한다.
예시로, IBV H52를 얻을 수 있는 곳은 일반적으로 당해 분야 숙련가의 지식범위 내이다. IBV H52 균주는 예시의 Nobilis IB H52(MSD Animal Health), AbiPro IB H52(Lohmann Animal Health GmbH & Co. KG), 및 Bronchovac(Ceva) 등과 같이 상업적으로 구매할 수 있다. 추가로, 문헌[McDonald et al 1980 (Avain Pathology 9:245-259)]은 IBV H52가 Central Veterinary Laboratory Rotterdam에 의해 수득될 수 있음을 개시하고, 문헌[Kusters (J. gen Virol 68:343-352)]은 IBV H52가 the Poultry Health Institute Dorn in the Netherlands(현재 Deventer Institute임; IBV H52는 Deventer에서 수득할 수 있음)에 의해 수득될 수 있음을 개시하고, 문헌[Chen et al 2007 (Avian Pathology 36(4):269-274)]은 IBV H52가 the China Institute of Veterinary Drug Control에 의해 수득될 수 있음을 개시한다. 또한, IBV H52는 수십년간 백신 균주로서 사용되고 있고(Bijlenga et al 2004, Avian Pathology 33 (6): 550-557), 따라서 현장에서 발견 및 단리될 수 있다. IBV H52 균주를 단리하고 IBV H52 균주를 특성확인하는 방법은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 예시로, IBV H52 균주는 문헌[Zwaagstra et al 1992 (J. Clin. Microbiol. 30 (1): 79-84), Handberg et al 1999 (Avian Pathology 28: 327-335) 또는 Callison et al 2006 (Journal of Virological Methods 138: 60-65)]에 기술된 바와 같이 특성확인될 수 있다. 문헌[Zwaagstra et al 1992 and Handberg et al 1999]은 예를 들면 RT-PCT을 위한 (각각 S 및 N 단백질에 대한) 매사추세츠 특이적 프라이머 및 서열분석 및 비교를 위한 기준 서열을 개시한다.
추가로, 용어 "IBV"는 B/D207/84; B/D274/84; B/UK 167/84; B/UK142/86; E D3S96/84; E/UK 123/82; 브라질(Brazil)/BRl/USP-73/09; 793B/4-91/91; FR/CR88121 88; 차이나(China)/Q1/98; Chka/LDL971 97 aaz09202; CAV/CAV9437/95; CAV/CAV1 86/95; CAV/CAV56b 91; PA/Wolgemnth/98; PA/i 71/99; C /557/03 SI; JAA/04 SI 백신; HN99 SI; N1/62/SI; GAGS SI GU301925; Ark/ArkDPI 81 SI; Ark/Ark99/73; CAL99/CAL99/99 SI; CAL99/NE15172/95 SI; 홀테/홀테/54; JMK/JMK/64; 그레이/그레이/60; lowa/lowa609/56; Ca 1737/04 SI; DMA/5642/06 SI; GA07/GA07/07 Si; QX/QXIBV/99; Mass/H52/ SI; Mass/Hi 20/ SI; Mass/Mass41/4l SI; Cofln/Corm46/51 SI 백신: FL/FL i 8288/71; DE DE072/92 SI 백신; GA98/Q470/98 SI; 및 더치/D 1466/81을 포함하는(그러나 이들에 한정되는 것은 아니다) 단리되고 특성확인된 IBV의 다수의 혈청형을 포함하는 것을 의미한다.
전형적인 참조 균주 및 이들의 스파이크 유전자 서열의 뉴클레오타이드 서열 데이터베이스 수탁 번호의 추가의 예는 M41 (Massachusetts serotype; X04722), NUD274/78 (D274 serotype; X15832), USA/Arkansas 99 (Ark 99 serotype; L10384), Belgium/B1648 (B1648 serotype; X87238), USA (DE)/072/92 (DE072 serotype; U77298), US (GA)/0470/98 (Georgia 98 serotype; AF274437), Ut14/91 (793B1 serotype; AF093794), USA/Connecticut (Connecticut serotype; L18990) and NL/D1466 (D1466 serotype; M21971)이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역학적 조성물은 백신이다. 용어 "백신"은 본원의 다른 곳에 이미 기술되어 있다. 그러나, 숙주가 방어 면역 반응을 나타내어 새로운 감염에 대한 내성이 향상될 것이고/이거나 질환의 임상학적 중증도가 감소되는 경우, 상기 면역학적 조성물은 "백신"으로서 기술된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다.
용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 안정화제, 의석제, 보존제, 항균제 및 항진균제, 등장화제, 흡수 지연제, 항원보강제(adjuvant), 면역 자극제, 및 이들의 조합을 포함한다.
"희석제"로는 물, 염수, 덱스트로스, 에탄올, 및 글리세롤 등이 포함될 수 있다. 등장화제로는 그 중에서도 나트륨 클로라이드, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨, 및 락토스가 포함될 수 있다. 안정화제로는 그 중에서도 알부민 및 에틸렌디아민테트라아세트산의 알칼리염이 포함된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 포스페이트 완충된 염수이다.
바람직하게, 상기 면역학적 조성물은 슈크로스 젤라틴 안정화제를 추가로 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 키토산이다.
키토산은 갑각류(예를 들면, 새우, 게), 곤충 및 기타 무척추동물의 키틴 유래의 천연 탈아세틸화된(deacetylated) 폴리사카라이드이다. 최근 문헌[Rauw et al. 2009 (Vet Immunol Immunop 134:249-258)]은 키토산이 뉴캐슬(Newcastle) 질환 생백신의 세포 면역 반응을 향상시켰고 이의 방어 효과를 촉진시켰음을 입증하였다. 추가로, 문헌[Wang et al., 2012 (Arch Virol (2012) 157:1451-1461)]은 생 약독화된 인플루엔자 백신에 사용하기 위한 항원보강제로서의 키토산의 잠재력을 보이는 결과를 밝혔다.
바람직하게, 상기 면역학적 조성물은 하나 이상의 다른 면역조절제, 예를 들면 인터류킨, 인터페론 또는 다른 사이토카인을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서 유용한 항원보강제 및 부가제의 양 및 농도는 당해 분야 숙련가에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
몇몇의 양상에서, 본 발명의 상기 면역학적 조성물은 항원보강제를 함유한다. 본원에서 사용되는 "항원보강제"는 알루미늄 하이드록사이드 및 알루미늄 포스페이트, 사포닌, 예를 들면 Quil A, QS-21(Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), 유-중-수(water-in-oil) 에멀전, 수-중-유(oil-in-water) 에멀전, 수-중-유-중-수 에멀전을 포함할 수 있다. 상이 에멀전은 특히 경 유동 파라핀 오일(European Pharmacopea type); 스쿠알란 또는 스쿠알렌과 같은 이소프레노이드 오일; 알켄, 특히 이소부텐 또는 데센의 올리고머화로부터 초래된 오일; 산의 또는 선형 알킬 그룹을 함유하는 알콜의 에스테르, 보다 구체적으로는 식물성 오일, 에틸 올레에이트, 프로필렌 글리콜 디-(카프릴레이트/카프레이트), 글리세릴 트리(카프릴레이트/카프레이트) 또는 프로필렌 글리콜 디올레에이트; 분지쇄형(branched) 지방산 또는 알콜의 에스테르, 특히 이소스테아르산 에스테르에 기초할 수 있다. 상기 오일을 유화제와 함께 사용하여 에멀전을 형성한다. 유화제는 바람직하게는 비이온성 계면활성제, 특히 소르비탄의 에스테르, 만나이드(예를 들면, 안하이드로만니톨 올레에이트)의 에스테르, 글리콜의 에스테르, 폴리글리세롤의 에스테르, 프로필렌 글리콜의 에스테르 및 임의로 에톡실화된 올레산, 이소스테아르산, 리시놀레산 또는 하이드록시스테아르산의 에스테르, 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 특히 플루로닉(Pluronic) 제품, 특히 L121이다. 문헌[Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.), JohnWiley and Sons, NY, pp51-94 (1995) 및 Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997)]을 참조한다. 예시의 항원보강제는 문헌[M. Powell and M. Newman, Plenum Press, 1995]에 의해 편집된 "Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach"의 147 페이지에 기술된 SPT 에멀전, 및 이 동일한 책의 183 페이지에 기술된 에멀전 MF59이다.
항원보강제의 추가의 예로는 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체 및 말레산 무수물 및 알케닐 유도체의 공중합체로부터 선택된 화합물이 있다. 이로운 항원보강제 화합물은 특히 당 또는 다가 알콜의 폴리알케닐 에테르와 가교-결합된(cross-linked) 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체이다. 이들 화합물은 용어 카보머(carbomer)에 의해 공지되어 있다(Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996). 당해 분야 숙련가는 또한 적어도 3개, 바람직하게는 8개 이하의 하이드록실 그룹, 적어도 2개의 탄소 원자를 갖는 불포화 지방족 라디칼에 의해 대체되는 적어도 3개의 하이드록실의 수소 원자를 갖는 폴리하이드록실화된 화합물과 가교-결합된 이러한 아크릴 중합체를 기술하는 U.S. 특허 제2,909,462호를 참조할 수 있다. 바람직한 라디칼은 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 라디칼, 예를 들면 비닐, 알릴 및 기타 에틸렌성으로 불포화된 그룹이다. 불포화된 라디칼은 자체에 다른 치환체, 예를 들면 메틸을 함유할 수 있다. 제품명 카르보폴(Carbopol) 하에 판매되는 제품; (BF Goodrich, Ohio, USA)이 특히 적절하다. 이들은 알릴 슈크로스와 또는 알릴 펜타에리트리톨과 가교-결합된다. 그 중에서, 카르보폴 974P, 934P 및 971P가 언급될 수 있다. 카르보폴 971P의 사용이 가장 바람직하다. 말레산 무수물 및 알케닐 유도체의 공중합체 중에서, 말레산 무수물 및 에틸렌의 공중합체인 공중합체 EMA(Monsanto)가 있다. 물에서의 이들 중합체의 용해는 면역원성, 면역학적 또는 백신 조성물 자체가 혼입될 항원보강제 용액을 제공하기 위해, 바람직하게는 생리 학적 pH로 중화될 산 용액을 유도한다.
추가의 적합한 항원보강제로는 다른 다수의 것들 중에서도, RIBI 항원보강제 시스템(Ribi Inc.), 블록 공중합체(CytRx, Atlanta GA), SAF-M(Chiron, Emeryville CA), 모노포스포릴 지질 A, 아브리딘 지질-아민 항원보강제, 이.콜라이(E. coli)(재조합 또는 기타) 유래의 이열성(heat-labile) 장내독소, 콜레라 독소, IMS 1314 또는 뮤라밀 디펩타이드 또는 천연 발생 또는 재조합 사이토카인 또는 이들의 유사체 또는 내인성 사이토카인 방출의 자극제가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
항원보강제는 용량당 약 100μg 내지 약 10mg의 양으로, 바람직하게는 용량당 약 100μg 내지 약 10mg의 양으로, 보다 바람직하게는 용량당 약 500μg 내지 약 5mg의 양으로, 보다 더 바람직하게는 용량당 약 750μg 내지 약 2.5mg의 양으로, 그리고 가장 바람직하게는 용량당 약 1mg의 양으로 부가될 수 있는 것으로 예상된다. 대안으로, 상기 항원보강제는 최종 생성물의 용적에 따라 약 0.01 내지 50%의 농도로, 바람직하게는 약 2% 내지 30%의 농도로, 보다 바람직하게는 약 5% 내지 25%의 농도로, 더욱 더 바람직하게는 약 7% 내지 22%의 농도로, 그리고 가장 바람직하게는 약 10% 내지 20%의 농도로 존재할 수 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방에 효과적이다. 용어 "치료 및/또는 예방", "임상학적 징후" 및 "치료 및/또는 예방을 필요로 하는"은 다른 곳에 정의되어 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 상동성 챌린지(homologous challenge)에 대해 방어한다. 용어 "방어한다" 및 "예방" 및 "방지"는 본 출원에서 상호교환적으로 사용된다. 그러나, 이들 용어는 다른 곳에 정의되어 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 M41을 이용한 챌린지에 대해 방어한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 단일-용량 투여를 위해 제형화된다(formulated).
단일-용량을 위한 용적은 본원의 다른 곳에 정의되어 있다.
또한, 본 발명의 면역원성 조성물의 1회 투약은 이러한 면역원성 조성물의 단일 용량의 투여 후에 효과적임이 밝혀졌다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 피하, 근육내, 경구, 난내(in ovo), 분사(spray)를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 IBV의 용량당 1 내지 10 log10 EID50/ml를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 IBV의 용량당 2 내지 5 log10 EID50/ml를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 IBV의 용량당 2 내지 4 log10 EID50/ml를 포함한다.
키트
상기 조성물은 필요에 따라 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투약형(dosage form)을 함유할 수 있는 팩(pack) 또는 디스펜서(dispenser) 장치로 제시될 수 있다. 팩은 예를 들면 금속 또는 플라스틱 포일(foil), 예를 들면 블리스터(blister) 팩을 포함할 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치는 투여, 바람직하게는 대상체, 특히 가금류에게의 투여를 위한 지침에 따라 달성될 수 있다. 이러한 컨테이너(들)와 약제 또는 생물학적 생성물의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 정한 양식으로의 통지가 결합될 수 있고, 이러한 통지는 사람 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 상기 기관에 의한 승인을 반영한다.
따라서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 키트는 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 키트는 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 키트는 IB(감염성 기관지염)의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함한다.
치료 방법
추가로, 본 발명은 대상체에게 본원에 기술된 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는 대상체를 면역화시키기 위한 방법을 제공한다.
용어 "면역화"는 면역화될 대상체에게 면역원성 조성물을 투여함에 의해 이러한 면역원성 조성물에 포함된 항원에 대한 면역학적 반응을 야기함에 의한 활성 면역화에 관한 것이다.
바람직하게, 면역화는 무리(flock)에서 특정 IBV 감염의 발병률의 경감을 초래하거나 특정 IBV 감염에 의해 야기되거나 이러한 감염과 관련된 임상학적 징후의 중증도의 감소를 초래한다.
추가로, 본원에서 제공되는 바와 같은 면역원성 조성물을 필요로 하는 대상체의 면역화는 IBV 감염에 의한 대상체의 감염을 예방한다. 보다 더 바람직하게는, 면역화는 IBV 감염에 대해 효과적이고 오래 지속되는 면역학적 반응을 초래한다. 상기 기간은 1개월 초과, 바람직하게는 2개월 초과, 바람직하게는 3개월 초과, 보다 바람직하게는 4개월 초과, 보다 바람직하게는 5개월 초과, 보다 바람직하게는 6개월 초과로 지속될 것임이 이해될 것이다. 면역화는 면역화된 모든 대상체에서 효과적인 것은 아닐 수 있음을 이해해야만 한다. 그러나, 상기 용어는 한 무리의 대상체의 유의한 부분이 효화적으로 면역화됨을 필요로 한다.
바람직하게, 이 문맥에서 통상적으로, 즉 면역화시키지 않고 IBV 감염에 의해 통상적으로 야기되거나 상기 감염과 관련된 임상학적 징후를 발병할 한 무리의 대상체들이 예상된다. 한 무리의 대상체들이 효과적으로 면역화되는지의 여부는 당해 분야 숙련가에 의해 어려움없이 결정될 수 있다. 바람직하게, 주어진 무리의 대상체의 적어도 33%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95% 그리고 가장 바람직하게는 100%에서 임상학적 징후가 발병률 또는 중증도에 있어서 면역화되지 않거나 또는 본 발명 전에 이용가능한 면역원성 조성물로 면역화되었지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염된 대상체와 비교하여 적어도 10%, 보다 바람직하게는 적어도 20%, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95% 그리고 가장 바람직하게는 100%만큼 경감된 경우에 면역화가 효과적일 것이다.
추가로, 본 발명은 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 본원에 기술된 바와 같은 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법을 제공한다.
용어 "치료 및/또는 예방"은 특정 IBV 감염의 발병률의 경감 또는 특정 IBV 감염에 의해 야기되거나 이러한 감염과 관련된 임상학적 징후의 중증도의 감소를 말한다. 따라서, 용어 "치료 및/또는 예방"은 또한 본원에서 제공되는 면역원성 조성물을 투여받지 않은 대상체의 그룹과 비교하여 이러한 면역원성 조성물의 유효량을 투여받은 대상체의 그룹에서 특정 IBV로 감염된 한 무리에서의 대상체의 수의 감소(= 특정 IBV 감염의 발병률의 경감) 또는 통상적으로 IBV 감염과 관련되거나 IBV 감염에 의해 야기된 임상학적 징후의 중증도의 감소 또는 특정 IBV로의 감염 후 바이러스 쉐딩(shedding)의 감소 또는 특정 IBV로의 감염 후 산란하는 닭에서의 산란 저하의 방지 또는 경감을 말한다.
"치료 및/또는 예방"은 일반적으로 이러한 치료/예방을 필요로 하거나 이러한 치료/예방으로부터 이로울 수 있는 대상체 또는 대상체의 무리에게 본 발명의 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 일단 대상체 또는 무리의 적어도 몇몇의 대상체가 이미 이러한 IBV로 감염되면 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 것을 말하고, 여기서 이러한 대상체는 이미 이러한 IBV 감염에 의해 야기되거나 이러한 IBV 감염과 관련된 몇몇의 임상학적 징후를 나타낸다. 용어 "예방"은 이러한 대상체의 IBV로의 임의의 감염 전의 대상체의 투여를 말하거나, 또는 적어도 이러한 대상체 또는 적어도 대상체들의 한 그룹의 대상체 중 어느 대상체도 이러한 IBV에 의한 감염에 의해 야기되거나 이러한 IBV에 의한 감염과 관련된 임의의 임상학적 징후를 나타내지 않는 경우를 말한다. 용어 "예방" 및 "방지"는 본 출원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "유효량"은 대상체에서 면역 반응을 유발하거나 면역 반응을 유발할 수 있는 항원의 양을 의미하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이러한 유효량은 한 무리에서 특정 IBV 감염의 발병률을 경감시키거나 특정 IBV 감염의 임상학적 징후의 중증도를 감소시킬 수 있다.
바람직하게, 임상학적 징후는 발병률 또는 중증도에 있어서 치료되지 않았거나 본 발명 전에 이용가능한 면역원성 조성물로 치료되었지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염된 대상체와 비교하여 적어도 10%, 보다 바람직하게는 적어도 20%, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 보다 더 바람직하게는 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95% 그리고 가장 바람직하게는 100%만큼 경감된다.
본원에서 사용되는 용어 "임상학적 징후"는 IBV로부터의 대상체의 감염의 징후를 말한다. 감염의 임상학적 징후는 선택된 병원체에 의존한다. 이러한 임상학적 징후에 관한 예로는 호흡 곤란, 신장염, 난관염, 비정상적 계란 생산, 주름진 깃털, 우울증, 감소된 성장률 및 감소된 식욕이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 호흡 곤란의 징후는 숨가쁨, 기침, 재채기, 기관 수포음, 비강 및 안구 분비물(discharge), 기관 병변 및 기관 내의 섬모정체를 포함하는 호흡기 징후를 포함한다. 신장염의 징후는 신장 병변 및 수성 설사를 포함한다. 비정상적 계란 생산의 징후는 산란 저하, 보다 작은 크기의 계란, 하급의 껍질(chell), 감소된 내부 계란 품질, 얇은 알부멘 및 난관 내의 섬모정체를 갖는 계란을 포함한다. 그러나, 임상학적 징후로는 또한 살아있는 동물로부터 직접 관찰가능한 임상학적 징후가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 살아있는 동물로부터 직접 관찰가능한 임상학적 징후의 예로는 비강 및 안구 분비물, 기침, 숨가쁨, 재채기, 기관 수포음, 주름진 깃털, 결막염, 체중 손실, 감소된 성장률, 감소된 식욕, 탈수, 수성 설사, 파행, 무기력, 소모 및 수척 등이 포함된다.
바람직하게, 치료되지 않았거나 본 발명의 전에 이용가능한 면역원성 조성물로 치료되었지만 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염된 대상체와 비교하여 치료된 대상체에서 발병률 또는 중증도에 있어서 경감된 임상학적 징후는 섬모정체의 감소, 수포음의 감소, 산란 저하의 감소, 신장 병변의 감소, 수성 설사의 감소, 체중 손실의 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩, 또는 이들의 조합을 말한다.
본원에서 사용되는 "필요로 하는(in need 또는 of need)"은 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 투여받은 대상체의 건강 또는 임상학적 징후 또는 건강에 대한 임의의 기타 긍정적인 의학적 효과의 부스팅(boosting) 또는 향상과 관련되어 있음을 의미한다.
용어 "감소되는" 또는 "감소된" 또는 "감소" 또는 "저하"는 본 출원에서 상호교환적으로 사용된다. 용어 "감소"는 임상학적 징후가 치료되지 않았지만(면역화되지 않았지만) 후속적으로 특정 IBV에 의해 감염된 대상체와 비교하여 적어도 10%, 보다 바람직하게는 적어도 20%, 보다 더 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 100%만큼 감소됨을 의미한다.
추가로, 본 발명은 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 본원에 기술된 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법을 제공한다.
실시예에 나타내는 바와 같이, 본원에 제공되는 면역원성 조성물은 섬모정체를 감소시키는데 효능성인 것으로 증명되었다.
용어 "섬모정체"는 기관 내의 섬모의 감소된 움직임을 말한다. 따라서, 섬모정체는 섬모의 움직임에 대해 기관륜의 내벽(inner lining)을 조사함으로써 측정할 수 있다. 기관 내의 섬모의 움직임을 측정하는 방법은 당해 분야 숙련가의 일반적 지식범위 내이다.
바람직하게, 섬모의 움직임은 IBV로의 챌린지 또는 감염 후 10일째부터, 보다 바람직하게는 챌린지 또는 감염 후 5일째부터, 보다 바람직하게는 챌린지 또는 감염 후 4일째부터, 보다 바람직하게는 챌린지 또는 감염 후 3일째부터 그리고 가장 바람직하게는 챌린지 또는 감염 후 1 또는 2일째부터 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 감소되지 않는다.
용어 "섬모정체의 감소"는 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 20%, 보다 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100% 만큼 감소됨을 의미한다. 섬모 정체의 감소를 측정하는 방법은 당해 분야 숙련가의 일반적 지식범위 내이다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 대상체는 조류이다.
용어 "조류"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 용어 "조류"는 가금류를 포함한 모든 새가 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 대상체는 가금류이다.
용어 "가금류"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 용어 "가금류"는 닭, 칠면조, 메추라기, 꿩, 뿔닭, 거위 및 오리를 포함한다. 추가로, 용어 "닭"은 브로일러(broiler), 산란계, 및 브리더(breeder)로서도 나타내는 상기 둘 다에 대한 생식 스톡(stock)을 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 대상체는 닭, 칠면조, 꿩 또는 메추라기로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 1회 투여된다.
단일-용량은 1회만 투여되는 것으로 이해해야만 한다. 실시예에 나타낸 바와 같이, 본원에서 제공되는 면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게의 단일 용량의 투여 후 효능성인 것으로 증명되었다.
가금류당 투약 용적은 가금류의 백신접종 경로 및 연령에 의존한다.
전형적으로, 점안제 백신은 임의의 연령에서 용량당 1 내지 100μl의 용적으로 투여된다. 바람직하게, 점안제 백신을 위한 단일-용량은 약 5μl 내지 70μl, 그리고 보다 바람직하게는 약 20μl 내지 50μl의 총 용적을 갖고, 단일 20μl, 25μl, 30μl, 35μl, 40μl, 45μl, 또는 50μl 용량이 바람직하다. 가장 바람직하게는, 점안제 백신을 위한 단일-용량은 약 30μl 내지 50μl의 총 용적을 갖고, 단일 30μl, 35μl, 40μl, 45μl 또는 50μl 용량이 바람직하다.
분사제 백신은 초생(day-old) 가금류에 대해 25 내지 1000μl의 용적으로의 용량을 함유할 수 있다. 바람직하게, 분사제 백신을 위한 단일-용량은 약 50μl 내지 5000μl, 보다 바람직하게는 약 75μl 내지 2000μl, 보다 바람직하게는 약 100μl 내지 1000μl, 더욱 더 바람직하게는 약 200μl 내지 900μl, 더욱 더 바람직하게는 300μl 내지 800μl, 더욱 더 바람직하게는 약 400μl 내지 700μl의 총 용적을 갖고, 단일 400μl, 425μl, 450μl, 475μl, 500μl, 525μl, 550μl, 575μl, 600μl, 625μl, 650μl, 675μl 또는 700μl 용량이 바람직하다.
난내 백신접종을 위한 백신은 50 내지 100μl, 바람직하게는 50μl의 용적으로의 용량을 함유할 수 있다. 바람직하게, 난내 백신을 위한 단일-용량은 약 10μl 내지 250μl, 보다 바람직하게는 약 15μl 내지 200μl, 더욱 더 바람직하게는 약 20μl 내지 150μl, 더욱 더 바람직하게는 약 30μl 내지 100μl, 더욱 더 바람직하게는 약 30μl 내지 75μl의 총 용적을 갖고, 단일 30μl, 35μl, 40μl, 45μl, 50μl, 55μl, 60μl, 65μl, 70μl 또는 75μl 용량이 바람직하다. 가장 바람직한 단일-용량은 40μl, 45μl, 50μl, 55μl 또는 60μl 갖는다.
근육내 또는 피하 백신접종을 위한 백신 또는 음용수 백신의 1회 용량은 30μl 내지 1000μl의 용적으로의 용량을 함유할 수 있다. 바람직하게, 단일-용량은 30μl 내지 1000μl, 보다 바람직하게는 약 50μl 내지 500μl, 보다 바람직하게는 약 75μl 내지 250μl, 더욱 더 바람직하게는 약 100μl 내지 200μl의 총 용적을 갖고, 단일 100μl, 110μl, 120μl, 125μl, 130μl, 135μl, 140μl, 145μl, 150μl, 160μl, 170μl, 175μl, 180μl, 190μl, 155μl 또는 200μl 용량이 가장 바람직하다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 2회 이상의 용량으로 투여된다.
그러나, 상기 면역원성 조성물은 2회 이상의 용량으로 투여될 수 있고, 제1 용량은 제2(부스터) 용량의 투여 전에 투여된다.
2-회 투여 용법의 바람직한 양상에서, 면역원성 조성물의 제1 및 제2 용량 둘 다는 동일한 양으로 투여된다. 바람직하게, 각각의 용량은 상기 명시된 바람직한 양 내이다. 제1 및 제2 용량 용법 이외에도, 대안의 실시형태는 추가로 후속 용량을 포함한다. 예를 들면, 제3, 제4 또는 제5 용량은 이들 양상에서 투여될 수 있다. 바람직하게, 후속적 제3, 제4 및 제5 용량 용법은 제1 용량과 동일한 양으로 투여되고, 투약 사이의 시간 프레임(time frame)은 상기 언급된 제1 용량과 제2 용량 사이의 시점과 일치한다.
바람직하게, 백신의 제1 투여는 하기 기술되는 방법에 의해 처음 3주령 내에, 보다 바람직하게는 제1주령 내에, 그리고 가장 바람직하게는 1일령에 수행된다. 제2 투여는 처음 20주령 내에, 바람직하게는 16 내지 18주령 내에, 보다 바람직하게는 6 내지 12주령 내에 수행될 수 있다. 예시로, 개시(제1) 백신접종은 1 내지 10일령에 수행되고, 제2 백신접종(부스터)은 6 내지 12주령 또는 16 내지 18주령에 생백신 또는 불활성화된 백신으로 수행된다. 보다 바람직하게, 개시(제1) 백신접종은 1일령에 수행되고, 제2 백신접종(부스터)은 6 내지 12주령 또는 16 내지 18주령에 생백신 또는 불활성화된 백신으로 수행된다.
난내 백신접종이 사용되는 경우, 바람직하게는 배아가 15 내지 19일령, 바람직하게는 17일령, 18일령 또는 19일령, 가장 바람직하게는 18일령일 때에 제1 투여가 수행된다. 제2 투여는 처음 3주령 내에, 바람직하게는 처음 10일령 내에 수행될 수 있다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여된다.
면역원성 조성물은 바람직하게는 국소적으로 또는 전신적으로 투여된다. 종래에 사용된 적합한 투여 경로는 비강내, 정맥내, 피부내, 경피, 근육내, 복강내, 피하뿐만 아니라 흡입, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제를 통해서와 같은 경구 또는 비경구 투여이다. 그러나, 화합물의 성질 및 작용 방식에 따라 상기 면역원성 조성물은 또한 다른 경로에 의해서도 투여될 수 있다. 예를 들면, 이러한 다른 경로로는 피내, 정맥내, 혈관내, 동맥내, 복강내, 척추강내, 기관내, 피내, 심장내, 엽내(intralobally, intralobarly), 수질내, 폐내, 직장내, 및 질내가 포함된다. 그러나, 가장 바람직하게는 면역원성 조성물은 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여된다.
IBV 생백신은 개별적으로 점안제에 의해, 비강내, 근육내 또는 피하 투여되는 것이 바람직하다.
보다 바람직하게, 음용수 및 에어로졸 분사 백신접종을 포함하는 다량 적용(mass application) 방법을 사용한다. 또한, 하기에 추가로 기술되는 배아 백신(소위 난내 백신)으로서의 백신 사용도 바람직하다.
예를 들면, 브로일러, 구체적으로는 높은 수준의 MDA를 갖는 브로일러는 1일령 또는 1 내지 3주령에 백신접종될 수 있다. 산란 스톡 또는 생식 스톡은 1 내지 10일령에 최초로 백신접종될 수 있고, 7 내지 12 또는 16 내지 18주령에 백신으로 부스팅될 수 있다.
난내 투여
상기 개요된 바와 같이, 본 발명은 또한 난내 경로를 통해 안전하게 투여될 수 있고 동시에 방어 면역 반응을 유도할 수 있는 IBV 백신을 제공한다. 난내 투여는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있고, 당해 분야 숙련가는 어려움없이 난내 투여를 수행할 수 있다. 백신의 난내 투여는 계란(egg)에 함유되어 있는 동안 조류 배아에 백신을 투여함을 포함한다(난내 백신접종에 대한 검토를 위해 문헌[Ricks et al., Advances in Vet. Med. 495-515, 1999]을 참조한다). 백신은 당해 분야에 기술되어 있는 바와 같은(Sharma; Am. J. Vet. Res. 45 1619-1623,1984) 계란의 임의의 적합한 구획(compartment)(예를 들면, 요막 액, 난황낭, 양막, 기실(air cell) 또는 배아에)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 상기 백신은 껍질(기실) 막 및 장뇨막 아래에 투여된다.
바람직하게는, 배아의 후기 단계 동안, 일반적으로 인큐베이션 기간의 마지막 1/4 동안, 바람직하게는 부화 3 내지 4일 전에 백신을 발육 계란에 주입한다. 바람직하게, 투여는 배아가 15 내지 19일령, 바람직하게는 17일, 18일 또는 19일령, 가장 바람직하게는 18일령인 때에 수행한다. 후속적으로, 백신접종된 발육 계란을 부화시키기 위해 인큐베이터로 이동시킨다. 난내 투여의 프로세스는 당해 분야에 기술되어 있는 바와 같은 로봇 주입 프로세스를 이용하여 자동화할 수 있다.
보통, 가금류의 부화-후 백신접종을 위한 종래의 백신은 후기 단계의 태아가 검사된 대부분의 백신 바이러스에 감염되기 매우 쉽기 때문에, 난내 백신접종에 사용할 수 없다. 그러나, 국제 특허 출원 WO 01/64244는 IBV 백신이 난내 투여에 사용될 수 있고, 단 매우 낮은 용량으로 적용됨을 개시한다. 추가로, 문헌[Wakenell et al. 1986 (Am. J. Vet. Res., 47 933-938)]은 조직 배양물에서 IB 백신 바이러스를 계대배양하는 것은 바이러스가 배아에 대해 비병원성이 되게 하였음을 개시한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 점안제를 통해 투여된다.
전형적으로, 부화-후 투여를 위한 생백신은 약독화된 IBV를 단위 용량당 101 내지 108 EID50(50% 계란 감염 용량)의 농도로, 바람직하게는 단위 용량당 102 내지 105 EID50의 농도로, 보다 바람직하게는 단위 용량당 102 내지 104 EID50의 농도로, 더욱 더 바람직하게는 단위 용량당 102 내지 103 EID50의 농도로 포함한다.
난내 투여를 위한 생백신은 50 내지 100μl, 바람직하게는 50μl의 용적 중에 전형적으로 102 내지 107 EID50/배아, 바람직하게는 102 내지 103 EID50/배아의 약독화된 IBV의 양을 포함한다.
바람직하게, 본 발명의 면역원성 조성물은 본 발명의 IBV를 용량당 약 1 내지 약 10 log10 EID(계란 감염 용량)50/ml의 양으로, 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 8 log10 EID50/ml의 양으로, 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 7 log10 EID50/ml의 양으로, 보다 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 6 log10 EID50/ml의 양으로, 더욱 더 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 5 log10 EID50/ml의 양으로, 더욱 더 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 4 log10 EID50/ml의 양으로, 가장 바람직하게는 용량당 약 2 내지 약 3 log10 EID50/ml의 양으로 포함한다. 보다 바람직하게, 본 발명의 면역원성 조성물은 본 발명의 IBV를 용량당 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5 또는 log10 EID50/ml의 양으로 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 1 내지 10 log10 EID50/ml의 IBV를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 2 내지 5 log10 EID50/ml의 IBV를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 2 내지 4 log10 EID50/ml의 IBV를 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 면역원성 조성물은 대상체에게 제1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에 또는 1일령 내에 투여된다.
바람직하게, 면역화될 대상체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일령이다. 보다 바람직하게, 면역화될 상기 대상체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일령이다. 가장 바람직하게, 면역화될 상기 대상체는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일령이다.
그러나, 수일령인 대상체의 백신접종 후, IBV 감염에 대한 면역성을 증강(build up)하기 위해서 가금류의 면역계에 수일을 필요로 한다. 따라서, 바람직하게는 상기 대상체는 처음 24h령 내에 면역화된다.
본 발명의 한 양상에서, 면역원성 조성물은 상기 대상체에게 제1일령 내에 투여된다. 실시예에 나타내는 바와 같이, 본원에서 제공되는 면역원성 조성물은 1일령 가금류에 투여될 때 안전하고 효능성인 것으로 증명되었다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 방법은 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모 정체의 방지 또는 감소, 수포음의 방지 또는 감소, 산란 저하의 방지 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩, 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래한다.
용어 "치료 및/또는 예방"은 다른 곳에 정의되어 있고, 여기서 용어 "예방' 및 "방지하는" 또는 "방지"는 본 출원에서 상호교환적으로 사용된다. 추가로, 용어 "쉐딩"도 다른 곳에 정의되어 있다.
용어 "감소되는", "감소된", "감소" 또는 "저하"는 효능 파라미터(섬모정체, 수포음, 산란 저하, 신장 병변, 수성 설사, 체중 손실, 바이러스 부하, 바이러스 쉐딩)가 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 20%, 보다 바람직하게는 적어도 30%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95% 그리고 가장 바람직하게는 100% 만큼 감소됨을 의미한다. 효능 파라미터의 향상을 측정하는 방법은 당해 분야 숙련가의 일반적 지식범위 내이다.
용어 "바이러스 부하"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 용어 바이러스 부하는 본원에서 용어 바이러스 역가(viral titer)와 상호교화적으로 사용된다. 바이러스 부하 또는 바이러스 역가는 활성 바이러스 감염의 중증도의 측정값이고, 당해 분야 숙련가에게 공지되어 있는 방법에 의해 측정될 수 있다. 상기 측정은 예를 들면 바이러스 단백질에 대한 항체 결합 및 추가의 검출에 의한 바이러스 단백질의 검출 또는 대안으로 RT-PCR과 같은 증폭 방법에 의한 바이러스성 RNA의 검출에 기초할 수 있다. 핵산 증폭 방법에 의한 혈장 내의 비리온 관련 바이러스성 RNA의 모니터링은 레트로바이러스성 질환의 상태 및 진행을 평가하기 위해 그리고 예방학적 및 치료학적 개입의 유효성을 평가하기 위해 널리 사용되는 파라미터이다. 예시로, 바이러스 부하 또는 바이러스 역가는 혈장 밀리리터당 다수의 RNA 카피와 같은 관련 체액 중의 살아 있는 바이러스의 양을 추산함으로써 계산할 수 있다.
용어 "섬모정체"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 기관의 표면은 분화된(specialised) 상피 세포로 덮여 있고, 이는 섬모(cilia)라고 칭하는 다수의 운동성 모발-유사 구조로 라이닝되어 있다. 용어 "섬모정체"는 섬모의 감소 또는 손실 및/또는 섬모 활성의 손실 또는 부분적 손실을 포함한다. 섬모정체는 당해 분야 숙련가에 의해 어려움 없이 측정될 수 있다.
용어 "수포음"은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 그러나, 용어 "수포음"은 기관 수포음을 포함하고, 기관지로부터 나오는 소리를 말한다. 수포음은 당해 분야 숙련가에 의해 어려움 없이 측정될 수 있다.
용어 "산란 저하(egg drop)"는 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 용어 "산란 저하"는 감소된 계란 생산을 포함한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명의 한 양상에서, 상기 치료 또는 예방은 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래한다.
본 발명은 추가로 치료학적 사용을 위한 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 의약으로서 사용하기 위한 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 의약의 제조를 위한 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 본원에 기술된 바와 같은 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도를 제공한다.
추가로, ORF 3a의 단일 불할성화 또는 ORF 3b의 단일 불활성화 또는 ORF 5a의 단일 불활성화 또는 ORF 5b의 단일 불활성화는 또한 IBV의 약독화도 유도함을 이해해야만 한다. 따라서, ORF 3a의 단일 불활성화 또는 ORF 3b의 단일 불활성화 또는 ORF 5a의 단일 불활성화 또는 ORF 5b의 단일 불활성화를 갖는 IBV는 면역원성 조성물을 조제하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 이러한 면역원성 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 영향(예를 들면, IBV 챌린지 감염에 대한 방어)을 갖는다.
또한, 이러한 단일 불활성화(ORF 3a 또는 ORF 3b 또는 ORF 5a 또는 ORF 5b)를 생성시키는 경우, 정지 코돈을 포함하는 서열을 ORF의 다운스트림에 삽입하여 상기 ORF의 번역의 정지를 확보할 수 있음을 이해해야만 한다. 이는 2개의 ORF가 오버랩핑되고 하나의 ORF의 불활성화가 다른 ORF의 정지 코돈을 불활성화시킬 수 있는 경우에 필요할 수 있다.
실시형태들
하기 항목들은 또한 본원에 기술된다:
1. IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV.
2. IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서:
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화되거나; 또는
- 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 항목 2에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실 및 상기 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 3b의 부분 절단 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 5b의 부분 절단, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 3b의 부분 역위 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 5b의 부분 역위, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 3b의 부분 재배치 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b가 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b가 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b가 부분적으로 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분적으로 결실되고, 상기 ORF 3b가 부분적으로 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분적으로 결실되고, 상기 ORF 5b가 부분적으로 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분적으로 결실되고, 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b가 부분적으로 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈 및 ORF 3b의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 13 또는 항목 14에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG)의 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 16 또는 항목 17에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG)의 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되고, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열버노 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
34. 항목 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
35. 항목 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
36. 항목 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 174 내지 200개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
37. 항목 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 174 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 173 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 172 내지 346개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
38. 항목 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 195 내지 250개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 350개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
39. 항목 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 195 내지 385개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 194 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 193 내지 383개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
40. 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
41. 항목 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
42. 항목 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
43. 항목 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
45. 항목 1 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
46. 항목 1 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
47. 항목 1 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
48. 항목 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
49. 항목 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
50. 항목 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
51. 항목 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 3의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
52. 항목 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348의 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
53. 항목 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 1에 제시된 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
54. 항목 1 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
55. 항목 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385의 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
56. 항목 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
57. 항목 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
58. 항목 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
59. 항목 1 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전적으로 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
60. 항목 1 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
61. 항목 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-O8, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu, (예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
62. 항목 1 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
63. 항목 62에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
64. 항목 62에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
65. 항목 62에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
66. 항목 62에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
67. 항목 62에 있어서, 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
68. 항목 1 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
69. 항목 2 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
70. 항목 2 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
71. 항목 70에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
72. 항목 2 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 이를 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방에 효과적인, 면역원성 조성물.
73. 항목 2 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
74. 항목 2 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
75. 항목 2 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화된, 면역원성 조성물.
76. 항목 2 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
77. 항목 2 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
78. 항목 2 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
79. 항목 2 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
80. 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
81. 항목 80에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
82. 항목 81에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
83. 항목 82에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
84. 상기 대상체에게 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법.
85. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
86. 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
87. 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
88. 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 있어서, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 상기 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
89. 항목 2 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 상기 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
90. 항목 84 내지 89 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
91. 항목 84 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
92. 항목 84 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
93. 항목 84 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
94. 항목 84 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
95. 항목 84 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
96. 항목 84 내지 95 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
97. 항목 84 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
98. 항목 84 내지 97 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
99. 항목 84 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
100. 항목 84 내지 99 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 제1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에 또는 제1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
101. 항목 84 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 제1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
102. 항목 84 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여, 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
103. 항목 84 내지 102 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교시 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
104. 항목 84 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교시 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
105. 항목 84 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교시 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
106. 치료학적 사용을 위한 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물.
107. 면역원 또는 백신으로서의 사용을 위한 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물.
108. 의약으로서의 사용을 위한 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물.
109. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
110. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 79 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
추가로, 하기 항목들은 또한 본원에 기술된다:
1. IBV를 증식시키고 게놈 변형시키는 방법으로서:
a) IBV의 바이러스성 RNA를 세포에 형질감염시키는 단계;
b) 단계 a)로부터의 상기 세포를 제1 부분 IBV 바이러스성 RNA와 공동형질감염시키는 단계(여기서, 상기 제1 부분 IBV 바이러스성 RNA는 상이한 코로나바이러스의 표면 단백질을 암호화한다);
c) 상기 부분 IBV 바이러스성 RNA의 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질에 대해 양성인 키메라 감염성 IBV 클론을 선택하는 단계;
d) 단계 c)의 키메라 감염성 IBV 클론에 대해 양성인 세포주에 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA를 형질감염시키는 단계(여기서, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA는 IBV의 표면 단백질을 암호화하고, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA는 추가의 변형을 지닌다);
e) 조류의 발육란에 단계 d)로부터의 상기 세포를 접종시키는 단계;
f) 단계 e)의 상기 조류 발육란으로부터 게놈 변형된 IBV를 선택하는 단계(여기서, 상기 게놈 변형된 IBV는 IBV의 표면 단백질을 갖고, 상기 게놈 변형된 IBV는 상기 추가의 변형을 지닌다)
를 포함하는, IBV를 증식시키고 게놈 변형시키는 방법.
2. 항목 1에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, 방법.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-O8), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120 correct?), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, 방법.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 형질감염이 마이크로인젝션(microinjection)인, 방법.
5. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 형질감염이 전기천공인, 방법.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 a)에서의 상기 형질감염 및 항목 1의 단계 b)에서의 상기 공동-형질감염이 동시에 이루어지는, 방법.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포가 포유동물, 조류 또는 척추동물 기원을 갖는, 방법.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포가 BHK(baby hamster kidney: 새끼 햄스터 신장)-21, Vero(아프리카 녹색 원숭이 신장 상피 세포), Cos-7(아프리카 녹색 원숭이 세로피테쿠스 애티오프스(Cercopithecus aethiops) 섬유아세포-유사 신장 세포), CK(닭 신장), CEF(chicken embryo fibroblast: 닭 배아 섬유아세포), 닭 배아 간 세포(CELC: chicken embryo liver cell), 닭 배아 피부 세포(CED: chicken embryo dermal cell), Vero 세포, 및 293T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포가 제2 유형의 세포와 공동-배양되고, 여기서 상기 제2 유형의 세포는 상기 종 특이성이 상기 상이한 코로나바이러스 유래인 것보다 동일한 종으로부터 기원하는, 방법.
10. 항목 9에 있어서, 공동-배양을 위한 상기 제2 유형의 세포가 마우스, 고양이, 돼지, 사람 또는 칠면조로부터 기원한 세포인, 방법.
11. 항목 9 또는 10에 있어서, 공동-배양을 위한 상기 제2 유형의 세포가 마우스 LR7, 마우스 L2R, 마우스 L2, 마우스 mTAL(mouse medullary thick ascending limb: 마우스 수질성 두꺼운 상지), 고양이 FCWF(Felis catus whole fetus: 펠리스 캐터스 전체 태아), ST(swine testis: 돼지 고환) 또는 LLC-PK(Pig Kidney Epithelial cell: 돼지 신장 상피 세포)인, 방법.
12. 항목 9 또는 10에 있어서, 공동-배양을 위한 상기 제2 유형의 세포가 마우스 LR7인, 방법.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 b)에서의 공동 형질감염 단계가 코로나바이러스 뉴클레오캡시드 단백질(N 단백질)을 암호화하는 RNA의 공동 형질감염을 추가로 포함하는, 방법.
14. 항목 13에 있어서, 코로나 바이러스 N 유전자를 암호화하는 RNA가 상기 IBV N 단백질, MHV N 단백질, FIPV N 단백질 또는 SDCV N 단백질인, 방법.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 표면 단백질이 수용체 결합 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 표면 단백질이 스파이크 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 표면 단백질이 상기 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인인, 방법.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 b)의 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV, FIPV, PEDV 또는 SDCV 표면 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
19. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 b)의 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV, FIPV, PEDV 또는 SDCV 수용체 결합 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 b)의 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV, FIPV, PEDV 또는 SDCV 스파이크 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
21. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 단계 b)의 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV, FIPV, PEDV 또는 SDCV 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인인, 방법.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 IBV 이외의 다른 코로나바이러스 유래인, 방법.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV 스파이크 단백질 또는 이의 일부인, 방법.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상이한 코로나바이러스의 상기 표면 단백질이 MHV 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인인, 방법.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 감염성 IBV 클론이 MHV, FIPV, PEDV 또는 SDCV의 스파이크 단백질 또는 이의 일부를 포함하는, 방법.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 감염성 IBV 클론이 MHV, FIPV, PEDV, 또는 SDCV의 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인을 포함하는, 방법.
27. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 감염성 IBV 클론이 MHV 스파이크 단백질 또는 이의 일부를 포함하는, 방법.
28. 항목 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 감염성 IBV 클론이 MHV 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인을 포함하는, 방법.
29. 항목 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 상기 조류의 발육란이 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩 유래인, 방법.
30. 항목 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 조류의 발육란이 계란인, 방법.
31. 항목 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 감염성 IBV 클론을 선택하는 것이 RT-PCR, 실시간 RT-PCR, 노던 블롯(Northern Blot), 웨스턴 블롯(Western Blot), 방사성 면역검정, ELISA 검정, 면역형광성, 면역조직화학, 동일반응계내 하이브리드화(in situ hybridization)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 방법을 포함하는, 방법.
32. 항목 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 부분 IBV 바이러스성 RNA가 재조합 바이러스성 RNA인, 방법.
33. 항목 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 부분 IBV 바이러스성 RNA가 합성 바이러스성 RNA인, 방법.
34. 항목 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA가 IBV 스파이크 단백질 또는 이의 일부를 암호화하는, 방법.
35. 항목 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 항목 1의 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA가 IBV 스파이크 단백질 또는 이의 일부의 엑토도메인을 암호화하는, 방법.
36. 항목 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA에서의 상기 변형이 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열의 결실, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열의 부분 결실, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열의 절단, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열의 역위, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열의 재배치, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열 내의 핵산의 삽입, 유전자, ORF, 프로모터 또는 임의의 비-암호화 서열 내의 핵산의 치환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
37. 항목 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA에서의 상기 변형이 상기 3a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실 및 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단 및 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 3b의 부분 역위 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위 및 ORF 5b의 부분 역위, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 3b의 부분 재배치 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치 및 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 또는/상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고 또는/상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, 방법.
38. 항목 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA에서의 상기 변형이 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실, 치환 또는 역위, 상기 ORF 3b의 부분 결실, 치환 또는 역위 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실, 치환 또는 역위 및 상기 ORF 5b의 부분 결실, 치환 또는 역위인, 방법.
39. 항목 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 부분 IBV 바이러스성 RNA에서의 상기 변형이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 그리고/또는 ORF 5a 및 ORF 5b의 절단인, 방법.
40. 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 발육 계란으로부터 게놈 변형된 IBV를 선택하는 것은 RT-PCR, 실시간 RT-PCR, 노던 블롯, 웨스턴 블롯, 방사성 면역검정, ELISA 검정, 면역형광성, 면역조직화학, 동일반응계내 하이브리드화, 종점 희석(end point dilution)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 방법을 포함하는, 방법.
41. 항목 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 게놈 변형된 IBV가 재조합 IBV인, 방법.
42. 항목 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 게놈 변형된 IBV가 약독화된, 방법.
43. 항목 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 발육 계란에서 상기 게놈 변형된 코로나바이러스를 선택하는 것이 제한 희석에 의해 이루어지는, 방법.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 따른 방법을 포함하는, 약독화된 IBV 백신을 조제하는 방법.
45. 항목 44에 있어서, 상기 약독화된 IBV를 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합함을 포함하는, 방법.
46. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 따른 IBV를 포함하는 세포.
47. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 따른 IBV를 포함하는 조류의 발육란.
48. 항목 1 내지 42 중 어느 하나에 따른 IBV를 포함하는 발육 계란.
49. 항목 1 내지 42 중 어느 하나에 따른 방법에 의해 수득된 약독화된 IBV.
추가로, ORF 3a 불활성화에 관한 하기 항목들도 본원에 기술된다:
1. IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 3a가 불활성화된, IBV.
2. IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 ORF 3a의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 불활성화가 ORF 3b의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 3b 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 절단, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 역위, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치, 상기 ORF 3a 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 8 또는 항목 9에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 173의 상기 ORF 3a가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 33에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 3a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 33에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열 이 상기 ORF 3a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전자 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-08, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 26에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 26에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 26에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 26에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 26에 있어서, 상기 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 2 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
34. 항목 2 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
35. 항목 34에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
36. 항목 2 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하고/하거나 예방하는데 효과적인, 면역원성 조성물.
37. 항목 2 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
38. 항목 2 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
39. 항목 2 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
40. 항목 2 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
41. 항목 2 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
42. 항목 2 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
43. 항목 2 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
45. 항목 44에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
46. 항목 45에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
47. 항목 46에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
48. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 방법.
49. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
50. 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
51. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
52. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
53. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
54. 항목 48 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
55. 항목 48 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
56. 항목 48 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
57. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
58. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
59. 항목 48 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
60. 항목 48 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제를 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
61. 항목 48 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
62. 항목 48 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
63. 항목 48 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
64. 항목 48 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에, 또는 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
65. 항목 48 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
66. 항목 48 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
67. 항목 48 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
68. 항목 48 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
69. 항목 48 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
70. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 치료학적 용도를 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
71. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
72. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
73. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
74. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
ORF 3b 불활성화에 관한 하기 항목들도 본원에 기술된다:
1. IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 3b가 불활성화된, IBV.
2. IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3a의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 3a 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3b의 부분 결실, 상기 ORF 3b의 부분 절단, 상기 ORF 3b의 부분 역위, 상기 ORF 3b의 부분 재배치, 상기 ORF 3b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 8 또는 항목 9에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348의 상기 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 34에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 34에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열 이 상기 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전자 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-08, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 26에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 26에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 26에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 26에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 26에 있어서, 상기 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 2 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
34. 항목 2 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
35. 항목 34에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
36. 항목 2 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하고/하거나 예방하는데 효과적인, 면역원성 조성물.
37. 항목 2 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
38. 항목 2 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
39. 항목 2 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
40. 항목 2 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
41. 항목 2 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
42. 항목 2 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
43. 항목 2 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
45. 항목 44에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
46. 항목 45에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
47. 항목 46에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
48. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 방법.
49. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
50. 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
51. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
52. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
53. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
54. 항목 48 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
55. 항목 48 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
56. 항목 48 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
57. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
58. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
59. 항목 48 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
60. 항목 48 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제를 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
61. 항목 48 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
62. 항목 48 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
63. 항목 48 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
64. 항목 48 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에, 또는 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
65. 항목 48 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
66. 항목 48 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
67. 항목 48 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
68. 항목 48 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
69. 항목 48 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
70. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 치료학적 용도를 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
71. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
72. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
73. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
74. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
추가로, ORF 5a 불활성화에 관한 하기 항목들도 본원에 기술된다:
1. IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 5a가 불활성화된, IBV.
2. IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 ORF 5a의 불활성화가 ORF 5b의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 5b 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실, 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단, 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위, 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치, 상기 ORF 5a 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 5a 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 7 또는 항목 8에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 7 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실인, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 194의 상기 ORF 5a가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 35에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 35에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열 이 상기 ORF 5a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전자 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-08, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 26에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 26에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 26에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 26에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 26에 있어서, 상기 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 2 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
34. 항목 2 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
35. 항목 34에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
36. 항목 2 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하고/하거나 예방하는데 효과적인, 면역원성 조성물.
37. 항목 2 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
38. 항목 2 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
39. 항목 2 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
40. 항목 2 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
41. 항목 2 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
42. 항목 2 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
43. 항목 2 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
45. 항목 44에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
46. 항목 45에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
47. 항목 46에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
48. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 방법.
49. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
50. 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
51. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
52. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
53. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
54. 항목 48 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
55. 항목 48 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
56. 항목 48 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
57. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
58. 항목 48 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
59. 항목 48 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
60. 항목 48 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제를 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
61. 항목 48 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
62. 항목 48 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
63. 항목 48 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
64. 항목 48 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에, 또는 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
65. 항목 48 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
66. 항목 48 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
67. 항목 48 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
68. 항목 48 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
69. 항목 48 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
70. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 치료학적 용도를 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
71. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
72. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
73. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
74. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 43 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
추가로, ORF 5b 불활성화에 관한 하기 항목들도 본원에 기술된다:
1. IBV(감염성 기관지염 바이러스)로서, 상기 ORF 5b가 불활성화된, IBV.
2. IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5b가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 불활성화가 ORF 5a의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 5a 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 5b의 부분 절단, 상기 ORF 5b의 부분 역위, 상기 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 8 또는 항목 9에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 90개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 90개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 89개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 88개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 1 내지 90개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 284의 상기 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 36에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 36에 제시된 바와 같은 RNA 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열 이 상기 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, TRS(transcription regulating sequence: 전사 조절 서열)이 상기 ORF N의 5'에 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 25에 있어서, 상기 TRS가 서열 CUUAACAA를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 25 또는 26에 있어서, 상기 TRS(전사 조절 서열)이 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않기 위해서 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 정지 코돈을 포함하는 서열이 상기 ORF N의 TRS의 5'에 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 28에 있어서, 상기 정지 코돈을 포함하는 서열이 서열번호 37에 제시된 바와 같은 서열을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전자 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-08, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu(예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
34. 항목 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
35. 항목 34에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
36. 항목 34에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
37. 항목 34에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
38. 항목 34에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
39. 항목 34에 있어서, 상기 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
40. 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
41. 항목 2 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
42. 항목 2 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
43. 항목 42에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
44. 항목 2 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하고/하거나 예방하는데 효과적인, 면역원성 조성물.
45. 항목 2 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
46. 항목 2 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
47. 항목 2 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
48. 항목 2 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
49. 항목 2 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
50. 항목 2 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
51. 항목 2 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
52. 항목 1 내지 51 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
53. 항목 52에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
54. 항목 53에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
55. 항목 54에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
56. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 방법.
57. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
58. 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
59. 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
60. 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
61. 항목 2 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
62. 항목 56 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
63. 항목 56 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
64. 항목 56 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
65. 항목 56 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
66. 항목 56 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
67. 항목 56 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
68. 항목 56 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제를 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
69. 항목 56 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
70. 항목 56 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
71. 항목 56 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
72. 항목 56 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에, 또는 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
73. 항목 56 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
74. 항목 56 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
75. 항목 56 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
76. 항목 56 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
77. 항목 56 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
78. 항목 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 치료학적 용도를 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
79. 항목 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
80. 항목 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
81. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 51 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
82. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 51 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
하기 항목들이 또한 본원에 기술된다:
1. IBV(infectious bronchitis virus: 감염성 기관지염 바이러스)로서,
- ORF 3a; 및/또는
- ORF 3b; 및/또는
- ORF 5a; 및/또는
- ORF 5b는 불활성화된, IBV.
2. IBV(infectious bronchitis virus: 감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서,
- ORF 3a; 및/또는
- ORF 3b; 및/또는
- ORF 5a; 및/또는
- ORF 5b는 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 상기 ORF 3a의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 결실 및/또는 ORF 3b의 부분 결실 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 결실 및/또는 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 절단 및/또는 ORF 3b의 부분 절단 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 절단 및/또는 ORF 5b의 부분 절단, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 역위 및/또는 ORF 3b의 부분 역위 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 역위 및/또는 ORF 5b의 부분 역위, 상기 ORF 3a의 완전 또는 부분 재배치 및/또는 ORF 3b의 부분 재배치 및/또는 상기 ORF 5a의 완전 또는 부분 재배치 및/또는 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 절단, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 역위, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, IBV 또는 면역원성 조성물.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a 및/또는 ORF 3b 그리고/또는 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 상기 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
9. 항목 8에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
10. 항목 8에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
13. 항목 12에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
14. 항목 12에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실인, IBV 또는 면역원성 조성물.
15. 항목 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
16. 항목 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
17. 항목 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
18. 항목 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
19. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
20. 항목 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
21. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
22. 항목 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
23. 항목 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
24. 항목 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 173의 상기 ORF 3a가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
25. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 33에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 3a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
26. 항목 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 33에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
27. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
28. 항목 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 완전 또는 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
29. 항목 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
30. 항목 29에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
31. 항목 29에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
32. 항목 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
33. 항목 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
34. 항목 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b가 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
35. 항목 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
36. 항목 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
37. 항목 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
38. 항목 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
39. 항목 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
40. 항목 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
41. 항목 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348의 상기 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
42. 항목 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 34에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
43. 항목 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 34에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
44. 항목 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
45. 항목 1 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
46. 항목 1 내지 45 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
47. 항목 46에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
48. 항목 46에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실인, IBV 또는 면역원성 조성물.
49. 항목 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
50. 항목 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
51. 항목 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
52. 항목 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
53. 항목 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
54. 항목 1 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
55. 항목 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
56. 항목 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
57. 항목 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 194의 상기 ORF 5a가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
58. 항목 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 35에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
59. 항목 1 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 35에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5a 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
60. 항목 1 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
61. 항목 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 완전 또는 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
62. 항목 1 내지 61 중 어느 하나에 있어서, ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
63. 항목 62에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
64. 항목 62에 있어서, 상기 개시 코돈의 상기 불활성화가 결실인, IBV 또는 면역원성 조성물.
65. 항목 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
66. 항목 1 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
67. 항목 1 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b가 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
68. 항목 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
69. 항목 1 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
70. 항목 1 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 90개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
71. 항목 1 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
72. 항목 1 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 90개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 89개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 88개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
73. 항목 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
74. 항목 1 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 90개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
75. 항목 1 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 1 내지 90개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
76. 항목 1 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
77. 항목 1 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 284의 상기 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
78. 항목 1 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 36에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
79. 항목 1 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 36에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
80. 항목 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, TRS(전사 조절 서열)이 상기 ORF N의 5'에 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
81. 항목 80에 있어서, 상기 TRS가 서열 CUUAACAA를 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
82. 항목 80 또는 81에 있어서, 상기 TRS(전사 조절 서열)이 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 상기 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않기 위해서 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
83. 항목 1 내지 82 중 어느 하나에 있어서, 정지 코돈을 포함하는 서열이 상기 ORF N의 TRS의 5'에 삽입된, IBV 또는 면역원성 조성물.
84. 항목 83에 있어서, 상기 정지 코돈을 포함하는 상기 서열이 서열번호 37에 제시된 바와 같은 서열을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
85. 항목 1 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
86. 항목 1 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
87. 항목 1 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
88. 항목 1 내지 87 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
89. 항목 1 내지 88 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나, 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
90. 항목 1 내지 89 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 346개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
91. 항목 1 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
92. 항목 1 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 385개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 383개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
93. 항목 1 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
94. 항목 1 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
95. 항목 1 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
96. 항목 1 내지 95 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
97. 항목 1 내지 96 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
98. 항목 1 내지 97 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 346개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
99. 항목 1 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
100. 항목 1 내지 99 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 385개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 383개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
101. 항목 1 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
102. 항목 1 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
103. 항목 1 내지 102 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
104. 항목 1 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
105. 항목 1 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
106. 항목 1 내지 105 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
107. 항목 1 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
108. 항목 1 내지 107 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
109. 항목 1 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
110. 항목 1 내지 109 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
111. 항목 1 내지 110 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
112. 항목 1 내지 111 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
113. 항목 1 내지 112 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
114. 항목 1 내지 113 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
115. 항목 1 내지 114 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, IBV 또는 면역원성 조성물.
116. 항목 1 내지 115 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
117. 항목 1 내지 116 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
118. 항목 1 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b가 부분 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
119. 항목 1 내지 118 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a가 완전 또는 부분 결실되고, 상기 ORF 3b가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
120. 항목 1 내지 119 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실되고, 상기 ORF 5b가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
121. 항목 1 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 상기 ORF 5a가 완전 또는 부분 결실되고 상기 ORF 3b 및 상기 ORF 5b가 부분 결실된, IBV 또는 면역원성 조성물.
122. 항목 1 내지 121 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈 및 ORF 3b의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
123. 항목 1 내지 122 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
124. 항목 122 또는 123에 있어서, ORF 3a 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
125. 항목 1 내지 124 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈 및 ORF 5b의 개시 코돈이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
126. 항목 1 내지 125 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 195 내지 197)이 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
127. 항목 125 또는 126에 있어서, ORF 5a 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG)의 상기 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, IBV 또는 면역원성 조성물.
128. 항목 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
129. 항목 1 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
130. 항목 1 내지 129 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
131. 항목 1 내지 130 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
132. 항목 1 내지 131 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 절단되고, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3) 및 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 절단되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
133. 항목 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
134. 항목 1 내지 133 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
135. 항목 1 내지 134 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
136. 항목 1 내지 135 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 A, U 또는 G로부터 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
137. 항목 1 내지 136 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174 내지 176)의 5'-말단으로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
138. 항목 1 내지 137 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 172개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 171개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 174)로부터 1 내지 175개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 175)로부터 1 내지 174개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 176)로부터 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
139. 항목 1 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195 내지 197)의 5'-말단으로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
140. 항목 1 내지 139 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 1 내지 194개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 1 내지 193개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 1 내지 192개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 195)로부터 1 내지 191개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 196)로부터 1 내지 190개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5b의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 197)로부터 1 내지 189개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
141. 항목 1 내지 140 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
142. 항목 1 내지 141 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 174개의 뉴클레오타이드, 적어도 175개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
143. 항목 1 내지 142 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
144. 항목 1 내지 143 중 어느 하나에 있어서, ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 A, U 또는 G로부터 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 196개의 뉴클레오타이드, 적어도 197개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 210개의 뉴클레오타이드, 적어도 220개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 325개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
145. 항목 1 내지 144 중 어느 하나에 있어서, ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 174 내지 200개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 174 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
146. 항목 1 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1)로부터 174 내지 348개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 2)로부터 173 내지 347개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 3)로부터 172 내지 346개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
147. 항목 1 내지 146 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단으로부터 195 내지 250개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 300개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 350개의 뉴클레오타이드 또는 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
148. 항목 1 내지 147 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 A(AUG의 A, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1)로부터 195 내지 385개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 U(AUG의 U, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 2)로부터 194 내지 384개의 뉴클레오타이드 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈의 G(AUG의 G, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 3)로부터 193 내지 383개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
149. 항목 1 내지 148 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
150. 항목 1 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
151. 항목 1 내지 150 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 1 내지 173개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 3b의 1 내지 175개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
152. 항목 1 내지 151 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 1 내지 194개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되고, 상기 ORF 5b의 1 내지 191개의 뉴클레오타이드가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
153. 항목 1 내지 152 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
154. 항목 1 내지 153 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 176 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
155. 항목 1 내지 154 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
156. 항목 1 내지 155 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b의 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
157. 항목 1 내지 156 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
158. 항목 1 내지 157 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 195 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
159. 항목 1 내지 158 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
160. 항목 1 내지 159 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
161. 항목 1 내지 160 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348의 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
162. 항목 1 내지 161 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 1에 제시된 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
163. 항목 1 내지 162 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 1에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
164. 항목 1 내지 163 중 어느 하나에 있어서, 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385의 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
165. 항목 1 내지 164 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
166. 항목 1 내지 165 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 2에 제시된 바와 같은 RNA 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 RNA 서열이 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, IBV 또는 면역원성 조성물.
167. 항목 1 내지 166 중 어느 하나에 있어서, 상기 E 단백질이 유전자형 QX, 보우데트, H120 또는 H52의 아미노산 서열 또는 상기 언급된 유전자형들 중 적어도 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
168. 항목 1 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 상기 E 단백질이 KM586818(QX), AJ311317(보우데트), FJ807652(H120) 또는 서열번호 38(H52)에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 상기 언급된 유전자형들 중 적어도 하나에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
169. 항목 1 내지 168 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
170. 항목 1 내지 169 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 유전적으로 조작된, IBV 또는 면역원성 조성물.
171. 항목 1 내지 170 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 재조합 IBV인, IBV 또는 면역원성 조성물.
172. 항목 1 내지 171 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 아칸사스(예를 들면, 아칸사스 99), 캘리포니아(예를 들면, 캘리포니아 1734/04, 캘리포니아 99), 코네티컷, 델라웨어(예를 들면, 델라웨어 98), 더치(예를 들면, D207, D212, D274, D3128, D3896, D8880, D1466), 플로리다, 조지아(예를 들면, 조지아 GA-O8, GA-12, GA-13), 그레이, 홀테, 아이오와(예를 들면, 아이오와 97 및 아이오와 69), 이탈리아(예를 들면, 이탈리아 02), JMK, 메인(예를 들면, 메인 209), 매사추세츠(예를 들면, M41, 보우데트, 246 G, D 580, H52, H120), 펜실베니아(예를 들면, 펜실베니아 1220/98, 펜실베니아 Wolg/98), Qu, (예를 들면, Qu-mv), QX(예를 들면, GB341/96), Q1, SE 17, 변이체 2(예를 들면, IS/1494/06) 및 4/91(793B)을 함유하는 균주의 목록으로부터 선택되는 유전자형을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
173. 항목 1 내지 172 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 QX, 매사추세츠, 4/91, Q1 또는 이탈리아 02 유전자형인, IBV 또는 면역원성 조성물.
174. 항목 173에 있어서, 상기 QX 유전자형이 FR-L1450T-05, FR-L1450L-05, NL-L1449T-04, NL-L1449K-04, IBV/Ck/SP/170/09, IBV/Ck/SP/79/08, IBV/Ck/SP/248/09, HBN, IBVQX, LX4, BJQ, CK/CH/LGD/03, GB341/96을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
175. 항목 173에 있어서, 상기 매사추세츠 유전자형이 H120, H52, 스페인/98/308, IBMA5-1, SD/97/01, 보우데트, 스페인/96/334, M41-M21883을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
176. 항목 173에 있어서, 상기 4/91 유전자형이 스페인/98/328, 스페인/92/35, IR-3654-VM, FR-CR88061-88, FR-85131-85, UK-1233-95, UK/3/91, 스페인/00/336, UK/7/91, 4/91-병원성, 4/91약독화, IB4-91을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
177. 항목 173에 있어서, 상기 Q1 유전자형이 CK/CH/LDL/98I, CK/CH/LSD/08-10, J2, Q1, AR08ER22, AR08BA21, 칠레-295-10을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
178. 항목 173에 있어서, 이탈리아 02 유전자형이 스페인/99/316, 이탈리아-02, UK-L633-04, It-497-02, 스페인/05/866, 스페인/04/221, 스페인/00/337, 스페인/155/09, 스페인/03/08을 함유하는 목록으로부터 선택되는, IBV 또는 면역원성 조성물.
179. 항목 1 내지 178 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV가 매사추세츠 유전자형 균주 H52인, IBV 또는 면역원성 조성물.
180. 항목 1 내지 179 중 어느 하나에 있어서, 상기 H52 유전자형이 H52U인, IBV 또는 면역원성 조성물.
181. 항목 1 내지 180 중 어느 하나에 있어서, 상기 H52 가 EU817497 에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5% 의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 뉴클레오티드 서열을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
182. 항목 1 내지 181 중 어느 하나에 있어서, 상기 H52 균주가 AF352315에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5% 의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 Spike (S1) 단백질을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
183. 항목 1 내지 182 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물에 있어서, 상기 H52 균주가 AY044185 또는 AF352310에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 상기 언급된 서열중 적어도 하나의 서열의 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5% 의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 Nucleocapsid (N) 단백질을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
184. 항목 1 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 상기 H52 균주가 AF317210에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5% 의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 Envelope (E) 단백질을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
185. 항목 1 내지 184 중 어느 하나에 있어서, 상기 H52 균주가 AF286185에 대해 나타낸 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 99.5% 의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 막 당단백질(M) 단백질을 갖는, IBV 또는 면역원성 조성물.
186. 항목 1 내지 185 중 어느 하나에 있어서, 상기 IBV는 N1/88, Q3/88, V18/91 또는 V6/92 이 아닌 상기 IBV 또는 상기 면역원성 조성물.
187. 항목 2 내지 186 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 백신인, 면역원성 조성물.
188. 항목 2 내지 187 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 면역원성 조성물.
189. 항목 188에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 포스페이트 완충된 염수인, 면역원성 조성물.
190. 항목 2 내지 189 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하고/하거나 예방하는데 효과적인, 면역원성 조성물.
191. 항목 2 내지 190 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 상동성 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
192. 항목 2 내지 191 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 M41로의 챌린지에 대해 방어하는, 면역원성 조성물.
193. 항목 2 내지 192 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 단일-용량 투여를 위해 제형화되는, 면역원성 조성물.
194. 항목 2 내지 193 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 면역원성 조성물.
195. 항목 2 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
196. 항목 2 내지 195 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
197. 항목 2 내지 196 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 면역원성 조성물.
198. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
199. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
200. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
201. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
202. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
203. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 5a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
204. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
205. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 및 ORF 5a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
206. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
207. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
208. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
209. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
210. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 및 ORF 3a 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
211. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 및 ORF 3b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
212. 항목 1 내지 197 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV 또는 면역원성 조성물.
213. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
214. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3b 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
215. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물
216. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5b 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물
217. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
218. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
219. 항목 1 내지 212 중 어느 하나의 IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 상기 ORF 5a 및 ORF 5b 가 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
220. 항목 1 내지 219 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물을 포함하는 키트.
221. 항목 220에 있어서, 상기 키트가 조류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
222. 항목 221에 있어서, 상기 키트가 가금류의 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
223. 항목 222에 있어서, 상기 키트가 IB의 치료 및/또는 예방을 위한 지침서를 추가로 포함하는, 키트.
224. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 방법.
225. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
226. 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 방법.
227. 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키기 위한 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
228. 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
229. 항목 2 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에게 상기 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체를 감소시키는 방법에 사용하기 위한, 면역원성 조성물.
230. 항목 224 내지 229 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 조류인, 방법 또는 용도.
231. 항목 224 내지 230 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 가금류인, 방법 또는 용도.
232. 항목 224 내지 231 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 닭, 칠면조, 메추라기 또는 꿩으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
233. 항목 224 내지 232 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1회 투여되는, 방법 또는 용도.
234. 항목 224 내지 232 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법 또는 용도.
235. 항목 224 내지 234 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내, 분사를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여되는, 방법 또는 용도.
236. 항목 224 내지 235 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 점안제를 통해 투여되는, 방법 또는 용도.
237. 항목 224 내지 236 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1 내지 10 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
238. 항목 224 내지 237 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 5 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
239. 항목 224 내지 238 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 2 내지 4 log10 EID50의 상기 IBV를 포함하는, 방법 또는 용도.
240. 항목 224 내지 239 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1주령 내에, 처음 3일령 내에, 처음 2일령 내에, 또는 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
241. 항목 224 내지 240 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 1일령 내에 대상체에게 투여되는, 방법 또는 용도.
242. 항목 224 내지 241 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소, 수포음의 예방 또는 감소, 산란 저하의 예방 또는 감소, 신장 병변의 예방 또는 감소, 수성 설사의 예방 또는 감소, 체중 손실의 예방 또는 감소, 보다 낮은 바이러스 부하, 감소된 바이러스 쉐딩 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효능 파라미터의 향상을 초래하는, 방법 또는 용도.
243. 항목 224 내지 242 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
244. 항목 224 내지 243 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 신장 병변의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
245. 항목 224 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 또는 예방이 동일한 종의 비-치료된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 산란 저하의 예방 또는 감소를 초래하는, 방법 또는 용도.
246. 항목 1 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 치료학적 용도를 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
247. 항목 1 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 면역원 또는 백신으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
248. 항목 1 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IBV 또는 면역원성 조성물.
249. 의약의 제조를 위한 항목 1 내지 219 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
250. 대상체에서의 IBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 항목 1 내지 219 중 어느 하나의 IBV 또는 면역원성 조성물의 용도.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 특정 실시형태들을 설명하기 위해 하기에 제시된다. 이들 실시예는 단지 예시적인 것이고 본 발명의 범위 또는 기본 원리를 제한하지 않는 것으로 이해된다.
실시예 1:
플라스미드의 작제
IBV 공여자 플라스미드의 작제
균주 IBV-H52(Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Germany)를 사용하였다. 공여자 플라스미드의 고안은 주로 문헌[Kuo et al. 2000 (J. Virol. 74:1393-1406)]에 따른 것이었다. 공여자 플라스미드 p-IBV는 5개의 서브플라스미드: p-IBV-5, p-IBV-1b, p-IBV-S, p-IBV-SIR 및 p-IBV-3T(표 1)의 후속적 라이게이션(ligation)으로부터 작제되었다.
Figure pct00001
플라스미드 IBV-5는 거의 전장의 5'-비번역 영역(UTR)을 포함한다. 플라스미드 IBV-1b는 스파이크 유전자와의 50nt 오버랩핑을 포함하는 pol 1b 유전자의 마지막 754nt 및 스파이크 단백질 신호 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 스파이크 유전자의 처음 66nt를 포함한다. 플라스미드 IBV-S는 길이 3211nt의 스파이크 유전자의 거의 전장의 엑토도메인을 함유한다. 플라스미드 IBV-SIR은 스파이크 유전자(막관통 및 엔도도메인), 부속 유전자 3, 외피 유전자, 막 유전자 및 유전자간 영역(IR: intergenic region)의 절반의 마지막 212nt를 포함한다. 플라스미드 IBV-3T는 IR의 제2 절반, 부속 유전자 5, 뉴클레오캡시드 유전자, 3'-UTR 및 100nt 폴리-A 서열을 포함하는 IBV 게놈의 3'-말단 영역을 포함한다.
모든 플라스미드 접합부(junction)는 잠재적으로 도입된 p-IBV-1b와 p-IBV-S를 연결하는 XhoI 부위를 제외하고는 자연적으로 존재하는 제한 효소 절단 부위(RES: restriction enzyme cleavage site)이다. RES는 공여자 플라스미드에 포함된 바이러스 게놈의 다른 부분으로부터 이들 RES을 조용히 제거함으로써 고유하게 만들어졌다(표 2).
Figure pct00002
또한, 준-고유한(semi-unique) RES는 부속 유전자 3 및 5의 업스트림 및 다운스트림의 200nt 내의 잠재적 돌연변이에 의해 도입되어 이들의 조작이 가능하게 되었다. 마지막으로 폴리-A 서열 후에 고유한 RES MssI 및 PacI가 포함되어 단일 제한 효소 절단에 의해 플라스미드의 선형화(linearization)를 허용하였다. 모든 플라스미드는 GenScript(Piscataway, NJ, USA)에 의해 생성되었고 폴리링커(polylinker)가 제거된 표준 클로닝 플라스미드인 플라스미드 pUC57-simple에 제공되었다.
모든 게놈 단편을 표 1에 명시된 제한 효소를 사용하여 단계별로 p-IBV-5에 라이게이션하고, 후속적으로 HB101 적격 세포를 사용하여 형질전환시켰다. 최종 플라스미드는 현재 p-IBV라고 칭하는 p-IBV-5-1b-S-SIR-3T로 구성되었다. 플라스미드의 조성은 PCR, 제한 효소 소화(digestion) 및 삽입물(insert)의 서열분석(sequencing)(Macrogen, Seoul, Korea)에 의해 각각의 단계에서 확인하였다.
mIBV 공여자 플라스미드의 작제
문헌[Vennema et al., 1996 (EMBO J. 15:2020-2028)]으로부터의 MHV 스파이크 암호화 유전자의 엑토도메인은 XhoI 오버행(overhang)을 갖는 프라이머를 이용한 PCR에 의해 pTUG/pTUMS로부터 증폭되었고(표 3), pJet1.2에 라이게이션하여 p-MHV-S를 수득하였다. Q5 SDM 키트(New England Biolabs, Ipswich, USA)로 부위 지정 돌연변이 유발(site directed mutagenesis)(SDM)을 사용하여 EcoRI 및 XhoI RES를 잠재적으로 제거하여 후속 클로닝 단계를 간섭하였다(표 3).
Figure pct00003
MHV 스파이크의 엑토도메인은 p-IBV-51b에 라이게이션되었고, IBV 단편 SIR 및 3T에 의한 후속적 클로닝 단계가 이어졌고, 이는 현재 p-mIBV라고 칭하는 p-IBV-5-1b-mhvS-SIR-3T를 수득하였다.
3ab 및 5ab를 암호화하는 유전자의 2배 및 4배 결실을 갖는 델타 플라스미드의 작제
부속 유전자 3 및 5가 결실되었다. 델타 3ab 단편(Δ3ab)의 인 실리코(in silico) 고안은 스파이크 유전자의 정지 코돈과 3a 유전자의 ATG-코돈 사이의 1nt 오버랩이 스파이크 유전자의 정지 코돈과 외피 유전자의 ATG-코돈 사이의 오버랩에 의해 대체되도록 하였다. 따라서, 3b-유전자의 3'-말단과 외피 유전자 사이의 비-암호화 20nt 오버랩이 남아있게 되었다. 유전자 3a로 시작하는 서브게놈 RNA를 형성하기 위한 스파이크 유전자의 3'-말단에 위치한 TRS(transcription regulating sequence: 전사 조절 서열)는 여전히 기능성이지만, 이제는 외피 유전자로 시작되는 것으로 예상된다. 델타 5ab 단편(Δ3ab)의 고안은 5a 유전자의 ATG-코돈이 뉴클레오캡시드 유전자의 ATG-코돈이 되도록 하였다. 따라서, 5b-유전자의 3'-말단과 뉴클레오캡시드 유전자 사이의 비-암호화 58nt 오버랩이 남아있게 되었다. 뉴클레오캡시드 유전자를 포함하는 서브게놈 RNA를 형성하기 위한 5b 유전자의 3'-말단에 위치한 TRS는 유전자 5b와 함께 제거되었지만, IR의 3'-말단의 TRS는 기능성을 유지하고 이제는 뉴클레오캡시드 유전자로 시작하여 서브게놈 RNA를 형성하는데 사용되는 것으로 예상된다.
상기 기술된 바와 같이 고안된 결실(Δ3ab 및 Δ5ab)을 갖는, 부속 유전자 3 및 5 주위의 준-고유한 RES에 걸친 DNA 단편을 생성시켰고, Genscript에 의해 pUV57-simple로 라이게이션시켰다. 델타3ab를 NheI-PmlI 이중 소화 후 p-IBV-5-1b-S-SOR에 라이게이션시켜 3ab 유전자를 제거하였고, 현재 p-IBV-Δ3ab라고 칭하는 p-IBV-5-1b-S-SIRΔ3ab-3T를 형성하기 위한 3T 영역이 이어졌다. 델타 5ab를 AfeI-NheI 이중 소화 후에 p-IBV-3T에 라이게이션하여 5ab 유전자를 제거하였다. 단편 3TΔ5뮤는 후속적으로 p-IBV-5-1b-S-SIR 또는 p-IBV-5-1b-S-SIRΔ3a 후에 라이게이션되어 각각 현재 p-IBV-Δ5ab 및 p-IBV-Δ3ab5ab라고 칭하는 p-IBV-5-1b-S-SIR-3TΔ5ab 및 p-IBV-5-1b-S-SIRΔ3ab-3TΔ5ab를 형성하였다.
N 전사체 플라스미드의 작제
IBV-H52 균주의 뉴클레오캡시드 유전자 및 3'-UTR 서열을 포함하는 RNA 전사 플라스미드는 프라이머 IBV-H52.N.ATG.FW 및 IBV-M41.2.IR.RV를 사용하여 각각의 영역을 RT-PCR 증폭시킴으로써 생성되었다(표 3). 상기 앰플리콘(amplicon)을 pJet1.2에 라이게이션시켜 p-IBV-N을 수득하였고, 이를 서열분석에 의해 확인하였다.
실시예 2:
약독화된 IBV의 생성
시험관내 전사
캡핑된(capped), 런-오프(run-off) 공여자 전사체는 mMessage mMachine T7 키트(Thermo Fisher Scientific에 의한 Ambion)를 사용하여 p-IBV, p-mIBV 및 p-IBV-N으로부터 합성하였다. 요약하면, p-mIBV는 PacI-선형화되었고, p-IBV 및 p-IBV-N은 MssI-선형화되었다. 선형화 된 플라스미드 DNA를 에탄올 침전시켰다. 전사 반응은 p-(m)IBV 및 p-IBV-N 각각에 대해 10ul 반응당 1.5 및 0.5μg의 선형화된 DNA를 사용하여 제조업자의 지침에 따라 제조하였다. 37℃에서 1시간의 인큐베이션 후, 겔 전기영동을 사용하여 반응 용적 1μl를 분석함으로써 RNA 생산을 시험하였다. 총 2h의 인큐베이션 후, 반응 튜브를 얼음상에 이동시킴으로써 반응을 정지시켰다.
표적 RNA 재조합 및 mIBV의 구조(rescue)
IBV 스파이크 유전자는 문헌[Kuo et al. 2000 (J. Virol. 74:1393-1406)]의 전에 본질적으로 기술된 바와 같이 p-mIBV 생성된 공여자 RNA와 수용자(recipient) 바이러스(IBV) RNA 사이의 표적화된 RNA 재조합에 의해 IBV 게놈 내의 키메라 MHV-IBV 스파이크 유전자로 대체되었다. 대부분의 IBV 감염이 연속 세포주에서 가능하지 않았으므로, IBV 바이러스 RNA는 세포 배양-적응된 IBV 균주 보우데트의 복제를 지원하는 것으로 공지되어 있는 세포주인 BHK-21 세포로 대신 형질감염되었다.
Gene pulser 전기천공 장치(Bio-Rad)에서 850V 및 25μF로 2개의 펄스(pulse)를 사용한 전기천공에 의해 p-mIBV 및 p-IBV-N의 10㎕ 전사 반응 혼합물과 함께 20마이크로리터의 IBV-H52 바이러스성 RNA를 BHK-21 세포에 형질감염시켰다. 형질감염됨 BHK-21 세포를 LR7 세포의 단일층에 씨딩하였고 37℃에서 인큐베이션하였다.
형질감염 후 2일째에, LR7 단일층의 융합세포(syncytia)가 관찰되었을 때, 상청액을 수거하고 바이러스를 LR7 세포에 대해 2회 플라크 정제함으로써 정제하였다. 표 4에 명시된 프라이머 세트를 사용하여 후보 재조합체의 게놈의 마지막 1/3의 특성확인을 RT-PCR 및 생어(Sanger) 서열분석에 의해 수행하였다. 뮤린화된(murinzed) IBV (m)IBV 균주 #1B3-IIA로부터의 스톡을 성장시키고 LR7 세포에 대해 적정하였다.
표적화된 RNA 재조합 및 재조합 IBV의 구조
재조합 IBV(rIBV-wt)는 p-IBV-생성된 공여자 RNA와 수용자 바이러스 mIBV 사이의 표적화된 RNA 재조합에 의해 IBV 스파이크 엑토도메인을 mIBV 게놈 내로 다시 도입함으로써 생성되었다. LR7 세포를 4시간 동안 0.4의 MOI(multiplicity of infection: 감염 다중도)로 mIBV로 감염시켰다. p-IBV로부터의 캡핑된 런오프 공여자 전사체를 850V와 50μF로의 2개의 펄스를 사용하여 mIBV에 감염된 LR7 세포로 형질 감염시켰다. 전기천공된 LR7 세포를 따뜻한 DMEM에서 2ml로 희석시켰고, 100 내지 10-3의 10배 희석액을 제조하였다. LR7 세포 현탁액 200 마이크로리터를 희석당 5개의 계란, 10일령의 배아 SPF 계란에 요막내 주입하였다. 계란은 매일 2회 촛불어 비추어 관찰하였고(candled) 배아 사망에 대해 점수를 매겼다. 사망시 또는 7일 후에 계란을 4℃로 이동시켰고 16 내지 24h 후에 AF를 RT-qPCR에 대해 무작위로 수집하였고, 각가의 계란의 장뇨막(CAM)을 IHC를 위해 10% 포르말린으로 고정시켰다. 바이러스가 RT-qPCR 및 IHC에 의해 검출된 전기천공된 LR7 세포의 최고 희석물로 접종된 계란으로부터의 AF는 8일령 ECE에서 추가의 2회의 종점 희석을 행하였다. 후보 재조합체의 유전적 특성확인은 표 4에 명시된 프라이머 세트를 사용하여 RT-PCR 및 생거 서열분석에 의해 수행되었다.
Figure pct00004
Figure pct00005
IBV, mIBV 및 MHV에 대한 면역형광성 이중 염색
mIBV의 키메라 성질에 대한 생물학적 특성확인은 IBV 및 MHV에 대한 면역형광성 이중 염색에 의해 수행되었다. BHK-21 및 LR7 세포를 커버슬립(coverslip) 상에서 증식시켰고, 각각 IBV 보우데트, 및 MHV A59 및 mIBV #1B3-IIA를 1.0의 MOI로 접종하였다. 제1라운드의 감염 동안, IBV, MHV 및 mIBV에 대해 각각 8, 5¼ 및 10hpi 후 RT에서 PBS 4% 파라포름알데하이드(Aurion, Wageningen, The Netherlands)로 20분 동안 세포를 고정시켰다. 세포를 0.1 % Triton X-100을 함유하는 PBS로 침투시키고, 정상 염소 혈청(NGS)과 함께 인큐베이션하고, 1:400으로 희석된 NGS:토끼 항-MHV 폴리세럼(polyserum) k134[Rottier et al, 1981, J. Virol. 38:20-26], 1:400으로 희석된 닭 항-IBV-H120 혈청 또는 1:200으로 희석된 마우스 MAb Ch/IBV 26.1[Thermo Fisher Scientific]에서 2개의 1차 항체의 조합과 함께 45 내지 60분 동안 인큐베이션하였다. 닭 항-IBV-H120 혈청은 IBV 균주 H120을 이용한 SPF 닭의 반복된 면역화 후에 수득되었다. 세포를 PBS 0.05% Tween-20으로 3회 세척하고 NGS: Alexa Flour 488 염소 항-닭 IgY 및 Alexa Fluor 568 염소 항-토끼 IgG 또는 Alexa Fluor 488 염소 항-마우스 IgG 및 Alexa Fluor 568 염소 항-토끼 IgG[Invitrogen as part of Thermo Fisher Scientific]에 1:200으로 희석된 2개의 형광색소-표지된 2차 항체의 조합과 함께 45분 동안 암소에서 인큐베이션하였다. 세포를 3회 세척하였고, 핵을 암소에서 PBS 중의 300nM DAPI로 5 내지 10분 동안 염색하였다. 세포를 milliQ로 1회 세척하였고, Fluorsave로 마운팅하였다(Calbiochem by Merck Millipore, Billerica, MA, USA). 슬라이드는 Leica DFC425C 컬러 CCD 및 Leica LAS-AF 소프트웨어(Leica Microsystems, Wetzlar, Germany)를 사용하여 필터 I3, A 및 N2.1이 장착된 Olympus BX60 현미경을 사용하여 보았다.
재조합 IBV 변이체의 난내 성장 곡선
8일령의 ECE에 103 ELD50의 IBV-H52, 재조합 IBV 야생형(rIBV-wt)(이 바이러스의 아미노산 서열은 IBV H52의 아미노산 서열과 동일하지만 소위 게놈 서열에서의 잠재적 돌연변이로 인하여 뉴클레오타이드 서열이 상이하다), rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab 또는 rIBV-Δ3ab5ab를 접종하였다. 계란을 매일 2회 촛불에 비추어 관찰하였고 0, 12, 24, 36, 48, 60, 72시간의 인큐베이션 후에 바이러스 균주당 5개의 소정의 계란을 16 내지 24시간 동안 4℃로 이동시켰고, AF를 무작위로 수확하여 -80℃에 보관하였다. 바이러스 균주당 1개 이상의 배아가 소정의 수집 시점보다 12시간 이상 전에 사망한 경우, 해당 시점은 추가의 분석에서 제외되었다. 요막액 샘플을 Ca 및 Mg가 없는 PBS에서 10-배 희석하였고 핵산을 QIAamp DNA Blood Mini 키트(Qiagen)로 추출하였고 Hamilton Starlet 파이펫 로봇(Reno, Nevada, USA)을 사용하여 담체 RNA를 부가하였다. 추출된 핵산은 문헌[Callison et al. 2006 (J. Virol. Methods. 138:60-65)]으로부터 채택된 프로토콜을 이용한 IBV RNA의 양에 대한 RT-qPCR로 분석하였다. 간략하게, 동일한 프라이머 및 프로브를 적용하였고, 써모프로파일(thermoprofile)은 ABI TaqMan Fast Virus 1-Step Master Mix(Thermo Fisher Scientific에 의한 Applied Biosystems)와 Roche 480 LightCycler의 사용을 위해 조정되었다. 모든 핵산 샘플을 실행하였고, 참조로서 10배 희석 시리즈의 IBV-H52를 사용하여 삼중으로 분석하였다.
실시예 3:
백신 및 챌린지 바이러스의 조제:
동물 실험을 위해, 5개의 IBV, 야생형 IBV-H52, rIBV-wt, rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab 및 rIBV-Δ3ab5ab를 시험하였다. 모든 바이러스는 8일령 발육 SPF 난(GD, Deventer, Netherlands)에서 증식되었다. 요막액을 수거하고, 분획하여 추가의 사용까지 -80℃에서 보관하였다. 바이러스 역가는 멸균 포스페이트 완충된 염수(PBS) 10배 희석된 바이러스를 사용하여 결정하였다. 각 희석에 대해 5개의 계란에 8일령 발육 SPF 난의 요막강 내로 100㎕를 접종하였고, 계란을 밀봉하였고, 37 ℃에서 인큐베이션하였다. 접종 후 처음 24h 내에 사망한 배아는 비특이적인 것으로 간주되었다. 접종 후 7일째까지 계란을 매일 촛불에 비추어 관찰하였다. 사망한 배아 및 IBV에 대해 특이적인 징후(배아의 위축(curling)과 왜소화(dwarfing), 하지의 클러빙(clubbing of down), 적색 또는 출혈성 배아, 및 신장에서의 백색 요산 침전물)를 나타낸 배아 양성으로서 간주되었다. 계란 감염 용량 50%(EID50)은 문헌[Reed and Muench [Reed, L.J., and H. Muench (1938) A simple method of estimating fifty percent endpoints. Am J Epidemiol 27:493-497]의 방법에 따라 산출되었다. 백신접종을 위해 바이러스를 멸균 PBS로 희석하여 103 EID50/0.1ml의 역가를 수득하였다. 매사추세츠 혈청형(GD Deventer, Deventer, The Netherlands로부터 수득함)의 챌린지 바이러스 M41을 11일령 발육 SPF 난(VALO BioMedia GmbH, Osterholz-Scharmbeck, Germany)에서 증식시켰다. 요막액을 접종 24시간 후에 수거하고, 분획화하고, 추가의 사용시까지 -80℃에서 보관하였다. 바이러스 역가는 11일령의 발육 SPF 난을 사용한 것을 제외하고는 상기 기술한 바와 같이 측정하였다. 챌린지 감염을 위해, IBV 균주 M41을 멸균 PBS에 희석하여 103 EID50/0.1ml의 표적 역가를 수득하였다.
실시예 4:
Δ3ab, Δ5ab, Δ3ab5ab에 대한 백신 효능 데이터 1
재료 및 방법: 이 연구에 사용된 닭은 SPF 계란(GD, Deventer, Netherlands)에서 부화시켰다. 닭은 7개의 그룹으로 나뉘었다. 그룹 1 내지 6은 15마리의 닭을 포함하였고 10마리의 닭은 그룹 7에 할당되었다. 1일령에 닭은 HEPA 여과된 공급 및 습도(40 내지 70%) 및 온도(20 내지 21℃) 조절된 배기 공기를 갖는 아이솔레이터(isolator)로 이동되었다. 동물들은 동물 복지 권고에 대한 지역 및 국가의 요구사항을 준수하는 하우징(housing) 조건 하에 유지되었다. 광 체계(light regime)는 1일 12시간 암(dark) 및 12시간 명(light)으로 조정되었다. 사료와 물은 자유롭게 제공되었다. 아이솔레이터로의 이동 후, 그룹 1 내지 5의 닭에게 1일령에 희석된 백신(103 EID50/0.1ml) 0.1ml를 점안제 경로(0.05ml/눈)fmf 통해 백신접종하였다. 희석 배수는 바이러스 적정 후에 수득된 역가를 기준으로 결정하였다. 그룹 1의 닭에게 IBV-H52를 백신접종하였고, 한편 그룹 2 내지 5의 닭에게는 rIBV-wt(그룹 2), rIBV-Δ3ab(그룹 3), rIBV-Δ5ab(그룹 4), rIBV-Δ3ab5ab(그룹 5)를 백신접종하였다. 그룹 6의 닭은 백신접종을 받지 않았고 챌린지 대조군으로서 적용되었다. 그룹 7의 닭은 엄격한 음성 대조군(SNC: strict negative control)으로서 적용되었고, 백신접종도 받지 않았고 챌린지도 받지 않았다. 백신접종 후 7일째에 그룹 1 내지 6으로부터 5마리의 닭을 제거하여 안락사시켰고 각 닭으로부터 기관을 취하였다. 그룹 1 내지 6의 닭은 상기 기술된 바와 같이 점안제 경로를 통해 103-EID50/0.1mL의 챌린지 바이러스 M41로 백신접종 후 21일째에 챌린지되었다. 챌린지 후 7일째에 모든 닭을 안락사시키고 기관을 제거하였다. 백신접종 후 7일째 및 챌린지 감염 후 7일째에 회수한 기관을 10개의 횡단면으로 잘라내었다. 기관은 상부의 3개의 횡단면, 중간부의 4개의 횡단면 및 하부의 3개의 횡단면으로 슬라이스하였다. 절편을 미리 데워진 PBS로 세정하였고, 샘플링 후 2시간 이내에 섬모 활성을 저배율 현미경으로 검사했다. 주어진 기관 절편의 경우, 내부 환의 50% 이상이 활발한 섬모 운동을 나타낼 때 섬모 활성이 정상적인 것으로 간주된다. 닭은 10개의 환 중 9개 이상이 정상 섬모 활성을 나타내는 경우 백신접종 후 7일째에 백신접종에 사용된 바이러스로부터 영향을 받지 않거나 챌린지 감염 후 7일째에 이로써 챌린지로부터 방어된 챌린지 바이러스로부터 영향을 받지 않는 것으로 간주된다.
결과: 각 그룹의 닭은 백신접종 후 그리고 챌린지 감염 후 임상학적 징후에 대해 관찰되었다. 백신접종 후 닭은 백신접종과 관련된 질환의 징후를 나타내지 않았다. 백신접종 후 2일째에 그룹 3에서 1마리의 새가 죽은 채로 발견되었다. 수행된 부검은 난황낭 감염을 밝혔다. 챌린지 감염 후 백신접종된 그룹 1 내지 5, 및 SNC 그룹 7에서 임상학적 징후가 관찰되지 않았다. 그룹 1(IBV-H52)에서 1마리의 새가 제거되었고 챌린지 감염 후 1일째에 안락사되었음이 언급될 필요가 있다. 그러나, 이 새는 챌린지 감염 3일 전인 백신접종 후 18일째에 이미 침체되어 있었다(depressed). 부검은 소화 장애를 나타내는 경미한 소화 소견 및 과부하된 모이(overloaded crop)를 밝혔다. 대조적으로, 챌린지된 비-백신접종된 그룹으로부터의 4마리의 새들은 챌린지 감염 후 2일 내지 3일째에 감염성 기관지염에 전형적인 호흡기 징후를 나타냈다.
각 바이러스의 병원성은 섬모 스코어의 분석에 의해 평가되었다. 섬모 활성은 스코어가 2인 내부 환의 50% 이상이 활발한 섬모 운동을 나타내는 경우에 주어진 기관 절편에 영향을 미치지 않는 것으로 정의된다. 스코어는 0 내지 4의 규모였고, 0은 섬모의 100%가 운동성인 것이다. 스코어 1은 기관 섬모의 대략 75%가 운동성을 나타냄을 의미한다. 섬모 운동의 50%, 25%, 그리고 25% 미만은 각각 2, 3, 4의 스코어를 초래한다. 최고 기관 병변 스코어는 40이고 이는 4의 스코어를 갖는 10개의 기관 절편의 총합이다. 닭당 각 스코어의 합을 평균계산하였고, 차이점을 분석하였다. 상이한 그룹의 평균 기관 병변 스코어는 표 5에 열거된다. 이러한 연구의 결과는 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)의 각각이 안전하게 투여될 수 있음을 나타냈다. 이는 결실 돌연변이체(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)의 1회 용량의 투여 후 7일째의 평균 섬모정체 스코어가 수일령 SPF 산란계에게 투여된 경우 재조합 모 바이러스(rIBV-wt)의 투여 후 7일째의 평균 기관 병변 스코어보다 유의하게 더 낮았다(p<0.05). 결실 돌연변이체(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)를 IBV-H52와 비교하는 경우 유사한 효과가 관찰되었다. 또한, 바이러스 게놈에 결실을 포함하는 3개의 시험 항목 중 하나의 투여 후에 IB의 주목할만한 임상학적 징후를 나타냈거나 시험 항목에 기인한 원인으로 사망한 닭은 없었다. 종합하면, 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab) 전부가 상기 언급된 결실 돌연변이체 IBV에 결실을 포함하지 않은 대조군(rIBV-wt 또는 IBV-H52)으로서 보다 안전하였다.
Figure pct00006
또한, 게놈에 결실을 포함하는 재조합 IBV(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)가 맹독성의 IBV 균주 M41을 사용하여 챌린지 감염으로부터 방어를 유도할 수 있는지를 분석하였다. 표적의 챌린지 용량은 점안 방법에 의해 각 눈에 50㎕로 희석된 바이러스 100㎕ 중의 적용된 닭당 103 EID50이었다. 챌린지 바이러스의 역 적정은 챌린지 용량이 103.78EID50/100㎕였고, 계획된 바보다 거의 10배 더 높았음을 밝혔다.
Figure pct00007
모든 챌린지된 대조군 닭이 40의 평균 스코어로 나타내어지는 바와 같이 섬모 활성의 활력의 극심한 손실을 나타냈으므로, 이 시험은 유럽 약전(European Pharmacopoea) EP 0442에 따른 모든 유효성(validity) 기준을 만족시켰다. 또한, 백신접종과 챌린지 사이의 관찰 기간 동안 백신접종된 닭 또는 대조군 닭의 10% 이하가 비정상적 임상학적 징후를 나타냈거나 시험된 백신에 기여하지 않은 원인으로 사망하였다. 이 연구의 결과는 백신접종된 새들 중 어느 누구도 IBV 균주 M41로의 챌린지 후에 사망하였거나 임상학적 징후를 나타내지 않았으므로 바이러스 게놈(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)에 결실을 포함하는 3개의 시험된 재조합 IBV 각각의 효능을 나타냈다.
시험 항목 rIBV-Δ3ab의 경우, EP 0442(10개의 기관륜 중 9개는 정상적인 섬모 활성을 나타냄)에 언급된 효능에 관한 챌린지 후 9마리의 새(67%) 중 6마리가 시험을 준수하였다. 시험 항목 rIBV-Δ5ab의 경우 10마리 새 중 10마리(100%) 그리고 시험 항목 rIBV-Δ3abΔ5ab의 경우 10마리의 새 중 3마리(30 %)가 챌린지 감염에 대해 방어되었다. 흥미롭게도, 야생형 바이러스 IBV-H52로의 백신접종 후 9마리 새 중 4마리(44%)가 방어되었고, 한편 10마리의 새 중 7마리(70%)가 rIBV-wt로의 백신접종 후 챌린지 감염으로부터 방어되었다. 예상하지 못한 낮은 방어율은 IBV-H52가 90% 이상의 방어를 유도할 수 없기 때문에 사용된 챌린지 바이러스의 다소 높은 역가로 인해 야기될 수 있다. 종합하면, 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab 및 rIBV-Δ3abΔ5ab) 전부는 대조군(rIBV-wt 또는 IBV-H52)로서 보다 안전하게 투여할 수 있지만, 모든 돌연변이체는 적어도 대조군만큼 효능성이다.
실시예 5
Δ3ab Δ5ab, Δ3ab5ab에 대한 백신 효능 데이터 2
재료 및 방법: 실험 결과를 입증하기 위해서, 상기 실험(실시예 1 내지 4)을 처음부터 반복하여 2차 독립 데이터 세트를 얻었다. 작제물은 상기 이미 기술된 바와 같은 방법에 따라 두 번째로 생성되었다. 대조군과 동일한 유전자 결실(Δ3ab, Δ5ab, Δ3ab5ab) 및 비변형 바이러스(IBV-H52, rIBV-WT)를 함유하는 바이러스를 사용하여 백신접종 및 챌린지 실험을 수행하였다. 실험은 실시예 4에 기술된 바와 같이 고안되었다. 명확하게 하기 위해, 그룹 1의 닭에게 IBV-H52를 백신접종하였고, 한편 그룹 2 내지 5의 닭에는 rIBV-wt(그룹 2), rIBV-Δ3ab(그룹 3), rIBV-Δ5ab(그룹 4) 및 rIBV-Δ3ab5ab(그룹 5)를 백신접종하였다. 그룹 6의 닭들은 백신접종을 받지 않았고 챌린지를 받지 않았고 챌린지 대조군으로서 적용되었다. 그룹 7의 닭은 엄격한 음성 대조군(SNC)으로서 적용되었고, 백신접종도 받지 않았고 챌린지도 받지 않았다. 닭은 1일령에 103 EID50/닭으로 백신접종을 받았고, 103 EID50/닭으로의 백신접종 후 21일째에 맹독성 IBV 균주 M41을 챌린지 받았다. 바이러스 접종 둘 다는 점안제를 통해 수행하였다. 바이러스의 안전성을 분석하기 위해서, 그룹 1 내지 5의 각각 5마리의 닭 및 그룹 7(SNC)의 5마리의 닭에서 백신접종 후 7일째에 실시예 4에 기술된 바와 같이 기관의 섬모 활성을 조사하였다. 챌린지 감염 후 기관 손상을 방어하는 바이러스의 능력을 조사하기 위해, 나머지 닭의 기관을 챌린지 감염 후 7일째에 이들의 섬모 활성에 대해 분석하였다. 기관의 섬모 활성은 실시예 4에 기술된 바와 같이 조사하였다. 실험 과정 동안, 모든 닭은 임상학적 징후에 대해 매일 관찰되었다.
결과: 백신 투여와 관련된 임상학적 관찰은 백신접종 후에도 또는 챌린지 감염 후에도 어떠한 그룹에서도 보고되지 않았다. 기관 병변 스코어는 한 예외를 제외하고는 실시예 4에 기술된 바와 같이 조사하였다. 백신접종 후 7일째에, SNC의 5마리의 새가 동물 복지의 이유로 기관 섬모에서의 병변의 스코어링에 대한 음성 대조군으로서 사용되었다. 간단히 말해 기관의 최고 스코어는 40이고 이는 기관 섬모에 가능한 가장 큰 손상을 나타낸다. 표 7에 백신접종 후 7일째에 그룹 1당 5마리 새의 평균 병변 스코어를 나타낸다. 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)은 모두 평균 병변 스코어에 의해 나타낸 바와 같이(표 7) 대조군(rIBV-wt 또는 IBV-H52)으로서 보다 안전하게 투여될 수 있다. 따라서, 상기 언급된 결과는 입증되었다. 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)은 IBV-H52 및 rIBV-wt와 비교하는 경우 보다 안전하였다.
Figure pct00008
또한, 게놈 결실을 포함하는 재조합 IBV(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab)가 맹독성 IBV 균주 M41을 이용한 챌린지 감염으로부터 방어를 유도할 수 있었는지를 시험하였다. 시험된 챌린지 용량은 점안 방법에 의해 각 눈에 50㎕로 희석된 바이러스 100㎕ 중의 적용된 닭당 103 EID50이었다. 챌린지 바이러스의 역 적정은 챌린지 용량이 103.36EID50/100㎕였고, 이는 예상 범위 내였음을 밝혔다.
챌린지 감염은
모든 챌린지된 비 백신접종된 대조군 닭(그룹 6)은 챌린지 감염 후 7일째에 39의 평균 스코어(표 8)로 나타낸 바와 같이 섬모의 활성의 활력의 극심한 손실을 나타냈으므로 챌린지 감염은 유효했다. 또한, 백신접종과 챌린지 사이의 관찰 기간 동안 상기 닭에서 백신 적용에 기여한 임상학적 징후는 관찰되지 않았다.
종합하면, 3개의 재조합 IBV 시험 항목(rIBV-Δ3ab, rIBV-Δ5ab, 및 rIBV-Δ3abΔ5ab) 모두는 대조군(rIBV-wt 또는 IBV-H52)으로서 백신으로서 적용 후 더 안전하지만, 모든 돌연변이체는 적어도 대조군만큼 효과적이다.
Figure pct00009
실시예 6
단일 결실 돌연변이체의 생성 및 시험
Δ3a, Δ3b, Δ5a, Δ5b
재료 및 방법:
유전자 3a, 3b, 5a 또는 5b 중 어느 하나의 단일 결실을 갖는 플라스미드의 작제. 단일 단백질 3a, 3b, 5a 또는 5b가 IBV의 독성에 영향을 미치는지 분석하기 위해, 단백질의 발현은 단일 결실 돌연변이체에 의해 불활성화되었다. 이를 위해, 3a, 3b, 5a 또는 5b 중 어느 하나의 결실을 함유하는 cDNA-단편을 합성으로 생성하고, Genscript에 의해 pUC57-simple(pUC57-Δ3a; pUC57-Δ3b, pUC57-Δ5a, pUC57-Δ5b)에 라이게이션시켰다. 플라스미드 pUC57-Δ3a은 제한 효소 NheI 및 PmlI로 절단되었고, 적절한 IBV-특이적 cDNA 서열을 NheI/PmlI 절단된 플라스미드 p-IBV-5-1b-S-SIR(또한 표 1을 참조한다)에 라이게이션시켜 p-IBV-5-1b-S-SIR-Δ3a를 얻었다. 다음 단계에서, 플라스미스 p-IBV-3T(또한 표 1을 참조한다)는 EcoRI로 절단되었고, cDNA-단편은 EcoRI 절단된 p-IBV-5-1b-S-SIR-Δ3a에 라이게이션시켜 현재 p-IBV-Δ3a라고 칭하는 p-IBV-5-1b-S-SIR-Δ3a-3T를 얻었다. p-IBV-Δ3b의 생성을 위해 플라스미드 pUC57-Δ3b의 단편을 사용한 것을 제외하고는 동일한 전략을 사용하였다. 5a 또는 5b 중 어느 하나의 결실을 포함하는 플라스미드의 생성을 위해, 상이한 클로닝 절차가 선택되었다. 이를 위해, 플라스미드 pUC57-Δ5a는 2개의 제한 효소(AfeI, NheI)로 절단되었고, 용출된 c-DNA-단편을 적절하게 절단된 p-IBV-3T에 라이게이션시켜 p-IBV-Δ5a-3T를 얻었다. 플라스미드 p-IBV-Δ5a-3T는 EcoRI로 절단되었고, 용출된 cDNA-단편은 EcoRI-절단된 p-IBV-5-1b-S-SIR에 라이게이션시켜 현재 p-IBV-Δ5a라고 칭하는 표적 플라스미드 p-IBV-5-1b-S-SIRΔ5a-3T를 얻었다. p-IBV-Δ5b의 생성을 위해 플라스미드 pUC57-Δ5b를 사용한 것을 제외하고는 동일한 전략을 사용하였다.
부속 단백질 3a, 3b, 5a 및 5b의 단일 결실을 갖는 재조합 IBV의 생성. 3a, 3b, 5a 또는 5b 중 어느 하나의 암호화 영역의 결실을 함유하는 IBV를 상기 기술한 바와 같이 생성시켰다. 간단히 말하면, 선형화된 플라스미드 p-IBV-N 및 플라스미드 p-IBV-Δ3a, p-IBV-Δ3b, p-IBV-Δ5a, 또는 p-IBV-Δ5b 중 어느 하나로부터 런-오프-전사체를 실시예 2에 기술된 바와 같이 생성시켰다. 재조합 IBV의 생성은 mIBV로 감염된 LR7 세포를 이용하여 실시예 2에 기술된 바와 같이 수행하였고, 후속적으로 4개의 조합(cRNA-IBV-N, cRNA-IBV-Δ3a; cRNA-IBV-N, cRNA-IBV-Δ3b; cRNA-IBV-N, cRNA-IBV-Δ5a; cRNA-IBV-N, cRNA-IBV-Δ5b)의 cRNA로 형질감염시켰다. 재조합 바이러스(rIBV-Δ3a, rIBV-Δ3b, rIBV-Δ5a, rIBV-Δ5b)는 후속적으로 실시예2에 기술된 바와 같이 구조하였고, 실시예 3에 기술된 바와 같이 증식시켰다. 최종 바이러스 스톡의 EID50에서의 바이러스 역가는 문헌[the Reed and Muench [Reed, L.J., and H. Muench (1938). A simple method of estimating fifty percent endpoints. Am J Epidemiol 27:493-497]을 이용하여 희석당 5개의 난을 사용하여 8일령 발육 SPF 난에서 측정되었다.
동물 실험: 동물 실험은 실시예 4에 기술된 바와 같이 수행하였다. 그룹당 15마리의 SPF 닭에게 점안제 경로를 통해 IBV-H52(그룹 1), rIBV-wt(그룹 2), rIBV-Δ3a(그룹 3), rIBV-Δ3b(그룹 4), rIBV-Δ5a(그룹 5), 또는 rIBV-Δ5b(그룹 6) 중 어느 하나에 100μl 중의 103 EID50/닭을 백신접종하였다. 그룹 7 및 그룹 8의 10마리의 닭은 백신접종되지 않았다. 그룹 8의 닭은 백신접종도 또는 챌린지도 받지 않은 엄격한 음성 대조군(SNC)으로서 적용되었다. 모든 새는 그룹 간의 바이러스 전염을 제거하기 위해 아이솔레이터 내에 두었다. 백신접종 후 7일째에, 그룹 1 내지 6의 5마리의 새 및 그룹 8의 5마리의 새는 실시예 4에 기술된 바와 같은 기관의 섬모 활성의 평가를 위해 제거하였다. 맹독성 IBV 균주 M41 100μl 중의 103 EID50/닭을 이용한 백신접종 후 21일째에 그룹 1 내지 7의 닭으로 챌린지 감염을 수행하였고, 한편 그룹 8의 닭은 챌린지되지 않은 상태로 두었다. 모든 그룹의 나머지 닭을 안락사시켰고, 챌린지 감염 후 7일째에 실시예 4에 기술된 바와 같이 기관의 섬모 활성의 분석을 위해 기관을 제거하였다.
표 9에 백신접종 후 7일째에 섬모 활성의 기관 스코어의 평균을 나타낸다. 통계학적 분석은 실험 그룹 3 내지 6(rIBV-Δ3a, rIBV-Δ3b, rIBV-Δ5a, rIBV-Δ5)의 병변 스코어가 그룹 2(rIBV-wt)의 스코어보다 통계학적으로 더 낮았음(p<0.05)을 밝혔다. 결실 돌연변이체(rIBV-Δ3a, rIBV-Δ3b, rIBV-Δ5a, rIBV-Δ5)를 IBV-H52와 비교하는 경우 유사한 효과가 관찰되었다.
Figure pct00010
모든 챌린지된 대조군 닭(그룹 7)은 챌린지 감염 후 7일째에 36의 평균 스코어(표 10)로 나타내어지는 바와 같이 섬모 활성의 활력의 극심한 손실을 나타냈으므로 챌린지 감염은 유효한 것이었다.
대조군 IBV(IBV-H52, rIBV-wt) 또는 결실 돌연변이체(rIBV-Δ3a, rIBV-Δ3b, rIBV-Δ5a, 및 rIBV-Δ5b)로 백신접종된 닭은 섬모 활성의 평균 병변 스코어가 백신접종되지 않았지만 챌린지된 닭의 병변 스코어(그룹 7)보다 실질적으로 더 낮았으므로 챌린지 감염이 방어되었다. 종합하면, 유전자 3a, 3b, 5a 또는 5b 중 어느 하나의 결실을 포함하는 IBV는 영계에서 약독화되지만, 매사추세츠 혈청형(여기서 균주 M41)의 맹독성 IBV로 챌린지되는 경우 이들의 모 (IBV-H52) 및 재조합 모 균주(rIBV-wt)와 비슷한 유의한 방어를 유도할 수 있다.
Figure pct00011
본원에 개시되고 청구된 모든 조성물 및 방법은 본 개시에 비추어 과도한 실험 없이 제조되고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 바람직한 실시형태의 관점에서 기술되었지만, 당해 분야 숙련가에게 본 발명의 개념, 취지 및 범위로부터 벗어나지 않는 한 조성물 및 방법, 본원에 기술된 방법의 단계들 또는 단계들의 순서에 변형이 적용될 수 있음은 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 동일하거나 유사한 결과가 달성되는 한, 화학적으로 그리고 생리학적으로 관련되어 있는 소정 제제가 본원에 기술된 제제로 대체될 수 있음은 명백할 것이다. 당해 분야 숙련가에게 명백한 이러한 유사한 치환 및 변형은 모두 하기 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 취지, 범위 및 개념 내인 것으로 간주된다.
SEQUENCE LISTING <110> BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA GMBH <120> VACCINE AGAINST INFECTIOUS BRONCHITIS VIRUS <130> P01-3188 <150> EP 16174857.9 <151> 2016-06-16 <160> 38 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 348 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 1 augauccaaa gucccacguc cuucuuaaua guauuaauuu ugcuuuggug uaaacuugua 60 cuaaguuguu uuagagaguu uauuauagcg cuucaacaac uaacacaagu uuuacuccaa 120 auuaucgaua guaauuuaca gucuagacug acccuuuggc acagucuaga cuaauguuaa 180 acuuagaagc aauuauugaa acuggugauc aagugauuca aaaaaucagu uucaauuuac 240 agcauauuuc aaguguauua aacacagaag uauuugaccc cuuugacuau uguuauuaca 300 gaggagguaa uuuuugggaa auagagucag cugaagauug uucaggug 348 <210> 2 <211> 385 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 2 augaaauggc ugacuaguuu uggaagagca guuauuucuu guuauaaagc ccuacuauua 60 acucaguuaa gaguauuaga uagguuaauu uuagaucacg gaccaaaacg cgucuuaacg 120 ugugguaggc gagugcuuuu aucucaauua gauuuaguuu auagguuggc auauacgccc 180 acccaaucgc ugguaugaau aauaguaaag auaauccuuu ucgcggagca auagcaagaa 240 aagcgcgaau uuaucugaga gaaggauuag aguguguuua cuuucuuaac aaagcaggac 300 aagcagagcc uugucccgcg uguaccuccc uaguauucca agggaaaacu ugugaggaac 360 acacagauaa uaauaaucuu uuguc 385 <210> 3 <211> 34 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 3 ctcgagttat attggtgatt ttagatgtat ccag 34 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 4 ctcgagccaa ggccatttca catacatttc 30 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 5 agcttgtgaa ctcaaacggt g 21 <210> 6 <211> 27 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 6 ggatacatct aaaatcacca atataac 27 <210> 7 <211> 22 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 7 ttactataag ttcgagactg cc 22 <210> 8 <211> 18 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 8 caccctgcat taatgcac 18 <210> 9 <211> 19 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 9 accatggcga gcggtaaga 19 <210> 10 <211> 37 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 10 tttttttttt tttttttttg ctctaactct atactag 37 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 11 ggtgtaacac cagagataaa tg 22 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 12 atttacgacg tcaagagcgt c 21 <210> 13 <211> 22 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 13 gacttagtcc tctccttgat tg 22 <210> 14 <211> 19 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 14 ccagtaagca ataatgtgg 19 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 15 tcagcatgga cgtgtggtta 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 16 ccccatgtaa atgccaacca 20 <210> 17 <211> 18 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 17 taaatggtga tcttgttt 18 <210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 18 cgctcttagt aacataaac 19 <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 19 tgctgcttcc tttaataag 19 <210> 20 <211> 18 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 20 ctgcgacaag acctcctg 18 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 21 tcagcatgga cgtgtggtta 20 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 22 cccaggcctt gtgaaacttc 20 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 23 accctccgct actacgtttt 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 24 aggcaggtat catgtgacca 20 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 25 ggatgggttt gatgcaacca 20 <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 26 gagaaagcac cattggcaca 20 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 27 tgttgtaggt tgtggtccca 20 <210> 28 <211> 19 <212> DNA <213> infectious bronchitis virus <400> 28 ctgaggtcaa tgccttatc 19 <210> 29 <211> 174 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 29 augauccaaa gucccacguc cuucuuaaua guauuaauuu ugcuuuggug uaaacuugua 60 cuaaguuguu uuagagaguu uauuauagcg cuucaacaac uaacacaagu uuuacuccaa 120 auuaucgaua guaauuuaca gucuagacug acccuuuggc acagucuaga cuaa 174 <210> 30 <211> 195 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 30 auguuaaacu uagaagcaau uauugaaacu ggugaucaag ugauucaaaa aaucaguuuc 60 aauuuacagc auauuucaag uguauuaaac acagaaguau uugaccccuu ugacuauugu 120 uauuacagag gagguaauuu uugggaaaua gagucagcug aagauuguuc aggugaugau 180 gaauuuauug aauaa 195 <210> 31 <211> 198 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 31 augaaauggc ugacuaguuu uggaagagca guuauuucuu guuauaaagc ccuacuauua 60 acucaguuaa gaguauuaga uagguuaauu uuagaucacg gaccaaaacg cgucuuaacg 120 ugugguaggc gagugcuuuu aucucaauua gauuuaguuu auagguuggc auauacgccc 180 acccaaucgc ugguauga 198 <210> 32 <211> 249 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 32 augaauaaua guaaagauaa uccuuuucgc ggagcaauag caagaaaagc gcgaauuuau 60 cugagagaag gauuagagug uguuuacuuu cuuaacaaag caggacaagc agagccuugu 120 cccgcgugua ccucccuagu auuccaaggg aaaacuugug aggaacacac agauaauaau 180 aaucuuuugu cauggcgagc gguaagacaa cugggaagac agacgcccca gcgccaguca 240 ucaaacuag 249 <210> 33 <211> 173 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 33 augauccaaa gucccacuag uuucuuaaua guauuaauuu ugcuuuggug uaaacuugua 60 cuaaguuguu uuagagaguu uauuauugcc cuucaacaac uaacacaagu uuuacuccaa 120 auuaucgaua guaauuuaca gucuagacug acccuuuggc acagucuaga cua 173 <210> 34 <211> 175 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 34 auguuaaacu uagaagcaau uauugaaacc ggugaucaag ugauucaaaa aaucaguuuc 60 aauuuacagc auauuucaag uguauuaaac acagaaguau uugaccccuu ugacuauugu 120 uauuacagag gagguaauuu uugggaaaua gagucagcug aagauuguuc aggug 175 <210> 35 <211> 194 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 35 augaaauggc ugacuaguuu uggaagagca guuauuucuu guuauaaagc ccuacuauua 60 acucaguuaa gaguauuaga uagguuaauu uuagaucacg gaccaaagcg agucuuaacg 120 ugugguaggc gagugcuuuu aucucaauua gauuuaguuu auagguuggc auauacgccc 180 acccaaucgc uggu 194 <210> 36 <211> 90 <212> RNA <213> infectious bronchitis virus <400> 36 augaauaaua guaaagauaa uccuuuucgc ggagcaauag caagaaaagc gcgaauuuau 60 cugagagaag gauuagagug uguuuacuuu 90 <210> 37 <211> 15 <212> RNA <213> Artifical RNA <400> 37 uuaaauaaau aguaa 15 <210> 38 <211> 109 <212> PRT <213> infectious bronchitis virus <400> 38 Met Met Asn Leu Leu Asn Lys Ser Leu Glu Glu Asn Gly Ser Phe Leu 1 5 10 15 Thr Ala Leu Tyr Ile Phe Val Gly Phe Leu Ala Phe Tyr Leu Leu Gly 20 25 30 Arg Ala Leu Gln Ala Phe Val Gln Ala Ala Asp Ala Cys Cys Leu Phe 35 40 45 Trp Tyr Thr Trp Leu Val Ile Pro Gly Val Lys Gly Thr Ala Phe Val 50 55 60 Tyr Lys Tyr Thr Tyr Gly Arg Lys Leu Asn Asn Ser Glu Leu Glu Ala 65 70 75 80 Val Val Val Asn Glu Phe Pro Lys Asn Gly Trp Asn Asn Lys Asn Pro 85 90 95 Ala Asn Phe Gln Asp Val Gln Arg Asn Lys Leu Tyr Ser 100 105

Claims (18)

  1. IBV(infectious bronchitis virus: 감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물로서,
    - ORF 3a; 및/또는
    - ORF 3b; 및/또는
    - ORF 5a; 및/또는
    - ORF 5b는 불활성화된, IBV를 포함하는 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    - 상기 ORF 3a의 불활성화가 ORF S의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 S 단백질의 활성에 영향을 미치지 않고,
    - 상기 ORF 3b의 불활성화가 ORF 3c의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 E 단백질의 활성에 영향을 미치지 않고,
    - 상기 ORF 5b의 불활성화가 ORF N의 발현에 영향을 미치지 않고/않거나 N 단백질의 활성에 영향을 미치지 않는, 면역원성 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 불활성화가 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 결실, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 절단, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 역위(inversion), 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 부분 재배치, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 삽입, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b 내의 핵산의 치환인, 면역원성 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, ORF 3a 및/또는 ORF 3b 및/또는 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 개시 코돈이 불활성화된, 면역원성 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 개시 코돈의 불활성화가 결실, 치환 또는 역위인, 면역원성 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 3a의 개시 코돈 및 상기 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되거나, 또는 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 1 내지 348개의 뉴클레오타이드가 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, 면역원성 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 3a 및/또는 ORF 3b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 176개의 뉴클레오타이드, 적어도 180개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 340개의 뉴클레오타이드가 ORF 3a의 개시 코돈 및 ORF 3c의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 또는 상기 ORF 3a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 1의 뉴클레오타이드 348 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, 면역원성 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위되거나, 상기 ORF 5a 및/또는 ORF 5b의 1 내지 385개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, 면역원성 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b의 적어도 1개의 뉴클레오타이드, 적어도 2개의 뉴클레오타이드, 적어도 3개의 뉴클레오타이드, 적어도 4개의 뉴클레오타이드, 적어도 5개의 뉴클레오타이드, 적어도 10개의 뉴클레오타이드, 적어도 15개의 뉴클레오타이드, 적어도 20개의 뉴클레오타이드, 적어도 25개의 뉴클레오타이드, 적어도 50개의 뉴클레오타이드, 적어도 75개의 뉴클레오타이드, 적어도 100개의 뉴클레오타이드, 적어도 125개의 뉴클레오타이드, 적어도 150개의 뉴클레오타이드, 적어도 170개의 뉴클레오타이드, 적어도 190개의 뉴클레오타이드, 적어도 195개의 뉴클레오타이드, 적어도 200개의 뉴클레오타이드, 적어도 225개의 뉴클레오타이드, 적어도 250개의 뉴클레오타이드, 적어도 300개의 뉴클레오타이드, 적어도 350개의 뉴클레오타이드, 적어도 380개의 뉴클레오타이드가 상기 ORF 5a의 개시 코돈 및 상기 ORF N의 개시 코돈의 5'-말단 내에서 또는 상기 ORF 5a의 개시 코돈(AUG, 서열번호 2의 뉴클레오타이드 1 내지 3)의 5'-말단 내지 서열번호 2의 뉴클레오타이드 385 내에서 결실되거나, 치환되거나 또는 역위된, 면역원성 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IBV가 약독화된, 면역원성 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IBV가 재조합체인, 면역원성 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b가 불활성화된, IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ORF 3a 및 ORF 3b 및 ORF 5a 및 ORF 5b가 불활성화된, IBV(감염성 기관지염 바이러스)를 포함하는 면역원성 조성물.
  15. 대상체를 면역화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물을 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법.
  16. IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서의 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, IBV에 의해 야기된 임상학적 징후의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서의 IBV에 의해 야기된 임상학적 징후를 치료하거나 예방하는 방법.
  17. 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체(ciliostasis)의 감소를 필요로 하는 대상체에서의 섬모정체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체에게 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 동일한 종의 비-면역화된 대조군 그룹의 대상체와 비교하여 섬모정체의 감소를 필요로 하는 대상체에서의 섬모정체를 감소시키는 방법.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 피하, 근육내, 경구, 난내(in ovo), 분무를 통해, 음용수를 통해 또는 점안제에 의해 투여된, 방법.
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