TWI362931B - Irinotecan formulation - Google Patents

Irinotecan formulation Download PDF

Info

Publication number
TWI362931B
TWI362931B TW094118012A TW94118012A TWI362931B TW I362931 B TWI362931 B TW I362931B TW 094118012 A TW094118012 A TW 094118012A TW 94118012 A TW94118012 A TW 94118012A TW I362931 B TWI362931 B TW I362931B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
preparation
lipid
cpt
concentration
irinotecan
Prior art date
Application number
TW094118012A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200600095A (en
Inventor
Keisuke Yoshino
Shigenori Nozawa
Masashi Isozaki
Seigo Sawada
Ikuo Kato
Takeshi Matsuzaki
Original Assignee
Yakult Honsha Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yakult Honsha Kk filed Critical Yakult Honsha Kk
Publication of TW200600095A publication Critical patent/TW200600095A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI362931B publication Critical patent/TWI362931B/zh

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

1362931 九、發明說明 月所屬之技術領域】 本發明係有關將伊立替康(Irinotecan)及/或其鹽高 載持於封閉小泡載體之伊立替康製劑及含其醫藥組成物。 【先前技術】 使用於癌治療之醫藥品範疇之其一的異構酶阻斷劑, 鲁β有例如喜樹驗(camptothecin)者。喜樹驗係於1996年經 由美國之Wall等,自中國原產之植物:喜樹( Camptotheca acuminate)萃取、單離之五環狀生物鹼,被 發現具有高抗腫瘤活性與廣泛之抗腫瘤光譜(參照非專利 文獻1 )。以往之癌化學療法劑係通常藉阻斷II型異構酶以 表現抗腫瘤活性,與之相比,喜樹鹼係藉由阻斷I型異構 酶,阻斷以複製 '修復DNA、重組基因及轉錄來扮演其角 色之異構酶酵素的作用。
做爲藥劑使用時,喜樹鹼係具有一些問題者,其中有 關不溶水性曾有幾個報告提出改良該問題之水溶性喜樹鹼 類似化合物(例如參照專利文獻1 )。其中,於1 994年曾 經達到,在日本國內市販之喜樹鹼水溶性衍生物之伊立替 康鹽酸鹽(CPT-11)雖然爲藥物前體,但因具有高度之抗 腫瘤活性,在醫療領域受到極大之期待》做爲藥物前體之 伊立替康鹽酸鹽係投予後被代謝爲活性體之SN-38 ’具有 抗腫瘤活性。 另一方面,伊立替康及其鹽,因投予後會顯現出抑制 -5- 1362931 骨髓機能、腸胃障礙等重大副作因,對其使用被施予嚴格 之限制。另外,藉由對喜樹鹼及其類似化合物特有之水性 環境中的感受性,該羥基內酯環會被水解,而有減弱 抗腫瘤活性之問題。 爲解決此等問題,欲使用細胞周期特異性代謝拮抗物 質,以喜樹鹼類似化合物進行最適當之抗癌治療時,必須 長期間維持藥劑之局部濃度》惟這類藥劑事實上在靜脈內 Φ鲁或皮下投予後之半衰期只爲較短之數小時而已。此等藥劑. 係以可將治療性濃度之醫藥送達的控制釋出製劑較爲有用 。可以穩定地且有.效率地送達目的病巢部位,爲使其在目 的病巢部位示有抗腫瘤活性,做爲其一途徑,被考慮的是 載持於封閉泡囊形態之載體。已有幾篇有關喜樹鹼類之脂 質體製劑化被提案,例如有報告提出使喜樹鹼含於脂質體 膜中,以抑制α -羥基內酯環之水解(參照例如專利文獻2 、非專利文獻2等)。又,有人揭示將伊立替康鹽酸鹽活 性本體的SN-38含於脂質體之方法(參照非專利文獻3、非 專利文獻4等)。惟SN-38在脂質體中很難安定化,在血液 中會很快地消失,所以很難長期間維持SN-38之血漿中濃 度。 藉被動地封入方法將水溶性衍生物之伊立替康鹽酸鹽 封閉於脂質體中,靜電性地固化其脂質雙重膜使其安定化 之一般方法(被動負荷製料Passive loading法)製造之例 亦曾被提出報告(參照非專利文獻5 )。 [專利文獻1]特公平3-4077號公報 1362931 [專利文獻2]特公平9-504517號公報 [非專利文獻 l]Am. Chem. Sec., 94(1966),388 [非專利文獻 2]Tomas G. Burke 等、Biochemistry, 32(1993),5352-5364 [非專利文獻 3]W. Gao 等、J. of Chromatography B, 791(2003),85-92 [非專利文獻 4]Joshua Williams 等、J. of Controlled ·· Release,9 1 (2003),167-172 [非專利文獻 5]Yasuyuki Sazuka 等、Cancer Letter 127(1998), 99-106 [發明之揭示] [發明欲解'決之課題] 藉由如上述以往被報告之伊立替康鹽酸鹽封入方法( 被動負荷製料法)可使伊立替康鹽酸鹽包含入脂質體的量 係約0.05 (藥劑(莫耳)/總脂質(莫耳)),以此載持量 很難長時間維持伊立替康鹽酸鹽之血漿中濃度,甚至於長 期間維持其活性代謝物之7-乙基-10-羥基喜樹鹼(SN-38) 之血漿中濃度,就臨床效果言並不是充分之濃度。雖可以 脂質體化而見到改善伊立替康鹽酸鹽之血中滯留性,但因 自血中消失之速度仍然極快,就這點而言,仍然很難長時 間維持活性代謝物之S Ν - 3 8的血漿中濃度。 以長時間維持伊立替康鹽酸鹽之活性代謝物的SN-3 8 在血漿中濃度爲目的,將藥物前體之伊立替康及/或其鹽 -7- 1362931 ,以臨床上適當、充分之封入量內封於封閉泡囊中,且在 抑制α -羥基內酯環水解之狀態下長時間存在於血液中, 可以長時間維持活性代謝物之SN-3 8的血漿中濃度之製劑 至今仍未出現。 有鑑於此情況,本發明係以提供做爲達成封入對臨床 效果而言具有充分之藥劑量的製劑,在封閉泡囊中內封至 少0.07 (藥劑(莫耳)/總脂質(莫耳))之高載持量的伊 φ嫌立替康及/或其鹽,可以長時間維持伊立替康鹽酸鹽之活 性代謝物之SN-3 8的血漿中濃度之伊立替康製劑爲目的者 【發明內容】 本發明人係爲達成上述目的進行檢討之結果,發現做 爲對封閉泡囊藥劑封入伊立替康及/或其鹽之方法,尤其 選擇於封閉泡囊之內側/外側形成離子梯度。藉由透過封 閉泡囊之膜導入藥劑之離子梯度的Remote loading (遠隔 負荷製料)法時’不但可達成以往之被動負荷製料法很難 達成之高濃度封入’還可以比以往方法調製之脂質體更顯 著地提高血中滞留性’結果可以長時間維持伊立替康鹽酸 鹽之活性代謝物SN-38在血中濃度。另外,因選擇遠隔負 荷製料法而發現可以顯著地提高37. °C下之製劑安定性,4 °C下之長期製劑安定性。藉此確認可獲得對臨床效果而言 爲充分之藥劑封入量的0· 07 (藥劑(莫耳)/總脂質(莫耳 ))之商載持量內封於封閉泡囊的伊立替康製劑。以這種 -8- 1362931 濃度內封伊立替康及/或其鹽於封閉泡囊內,可長時間維 持伊立替康之活性代謝物SN-38之血漿中濃度的製劑迄今 仍未有人揭示報告,所以做爲解決上述課題,本發明提供 以下者。 (1) 一種伊立替康製劑,其特徵爲在脂質膜所形成 之封閉泡囊中,以至少0.07莫耳/莫耳(藥劑莫耳/膜總脂 質莫耳)之濃度內封伊立替康及/或其鹽所成者。
較佳之實施形態例爲伊立替康製劑係至少載持較〇. 1 莫耳藥劑/莫耳脂質更高濃度之藥劑。 本發明之伊立替康製劑的平均粒徑係較佳爲0.02〜2 50 μηι。 本發明中高濃度地封入伊立替康及/或其鹽於封閉泡 囊係可藉由利用下述離子梯度之遠隔負荷製料(Remote loading)予以達成。 (2 )如上述(1 )所記載之伊立替康製劑,其中該伊 立替康製劑爲在該封閉泡囊之內水相與外水相之間具有離 子梯度者。藉由該離子梯度可使伊立替康及/或其鹽在離 子化狀態下以上述濃度保持於封閉泡囊內。 (3)如上述(2)所記載之伊立替康製劑,其中該內 水相邊pH値爲具有較外水相邊PH値低之pH値梯度。 (4 )如上述(3 )所記載之伊立替康製劑,其中該PH 値梯度爲藉由銨離子濃度梯度及/或具有可被質子化之胺 基的有機化合物濃度梯度所形成者。 (5 )如上述(1 )〜(4 )之任一所記載之伊立替康製 -9 - 1362931 劑,其中該封閉泡囊爲以含有磷質體做爲主膜材料之脂質 雙重膜所形成的脂質體者。 上述(5)中,主膜材料較佳爲相轉移點50 °C以上之 磷質。 磷脂質係較佳爲例如被氫化之磷脂質及/或神經鞘磷 脂質爲宜。
(6) 如上述(5)所記載之伊立替康製劑,其中該脂 質體可以再含有該磷脂質以外脂質及/或表面改性劑。 其他之脂質以膽固醇較佳。 表面改性劑以例如親水性高分子衍生物較佳。親水性 高分子係具體言可爲分子量50 0〜10,0 00達爾頓之聚乙二醇 ,可以做爲其磷脂質或膽固醇衍生物被導入。 (7) 如上述(6)所記載之伊立替康製劑,其中做爲 表面改性劑含有親水性高分子衍生物之實施形態中,較佳 係只有該脂質體之外表面被親水性高分子所改性者。 (8 )如上述(6 )或(7 )所記載之伊立替康製劑, 其中該表面改性劑亦可包含具有鹼性官能基之化合物。 具有鹼性官能基之化合物以3,5 -兩個十五烷氧基苯甲 脒鹽酸鹽爲宜。 (9) 一種醫藥組成物,其特徵爲含有如上述1〜8所記 載之伊立替康製劑者。 (10)—種疾病之預防及/或治療方法,其特徵爲將 預防及/或治療有效量之上述(1 )〜(8 )所記載任一之伊 立替康製劑投予宿主者。 -10- 1362931 (11) 投予(1) ~(8)之任一伊立替康製劑予宿主 所成,在宿主內釋出有效量之伊立替康及/或其鹽者。 (12) 投予(1)〜(8)之任一伊立替康製劑予宿主 所成,在標的部位曝露有效量之伊立替康及/或其鹽者。 [發明之效果] 本發明提供之伊立替康製劑係以至少0.07 (藥劑(莫 φ鲁耳)/總脂質(莫耳))之載持量內封伊立替康及/或其鹽 ’含有就臨床效果而言充分高濃度之藥劑。又,如後述之 實施例所示,本發明之伊立替康製劑係與以往公知之伊立 替康脂質體製劑相比,可以更顯著地提高血中滞留性,可 以長時間存在於血中。又,更顯著地提高3 7 r下之製劑 安定性,4 °C下之長期製劑安定性者。 [實施發明時之最佳形態]
以下詳細說明本發明。 伊立替康(irinotecan)係以化學名(+) -(4S)·-4,11-一乙基-4-趨基-9-[(4-六氫13比陡基-六氫卩比11定基)鑛 氧基]-111-吡喃[3’,4’:6,7]吲畊基[1,2-1)]喹啉-3,14( 4H,12H )-二酮所表示具有喜樹鹼架構之化合物。伊立替 康及/或其鹽係一種抗惡性腫瘤劑,做爲下述之鹽酸鹽( irinotecan· HCl(hydrochloride))使用之水溶性物質。此 說明書中「伊立替康及/或其鹽」有時僅稱其爲「伊立替 康」或「藥劑」。又,有時將伊立替康鹽酸鹽稱爲「伊立 -11 - 1362931 替康鹽酸鹽」或「CPT-11」。
本發明可提供以0 · 0 7莫耳/莫耳(藥劑莫耳/膜總脂質 ® 莫耳)以上之高載持量內封上述伊立替康及/或其鹽於脂 質膜所形成之封閉泡囊的伊立替康製劑。 封閉泡囊係只要具有可內封藥劑之構造即不必特別限 定’可爲各種形態者,惟可以利用具有其內部可用高濃度 封入之潛在性功能之脂質體、類脂中心體及奈米顆粒等。 此等中以脂質體爲最佳形態。
以下主要以本發明之伊立替康製劑的載體爲最佳之脂 質體的實施態樣爲例如以說明》 脂質體係由磷脂質雙重膜所成,藉由依據脂質之疏水 性基與親水性基之極性生成之膜,具有可形成與外界隔離 之構造的封閉泡囊,其泡囊空間內含有水相(內水相)。 脂質體製劑係以此脂質體爲載體,將藥劑載持於此者。 「磷脂質」係一種活體膜之主要構成成份,在分子內 具有由長鏈烷基所構成之疏水性基與由磷酸基所構成之親 水基群之兩親媒性物質。磷脂質可爲磷脂醯膽鹼(二卵磷 脂)、磷脂醯甘油、磷脂酸、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺 酸、磷脂醯肌醇,更可爲神經鞘磷脂等神經鞘磷脂質、或 -12- 1362931 心磷脂等天然或合成之磷脂質或此等之衍生物,及此等依 常法氫化者等。以下,有時指包含此等在內之「磷脂質」 稱爲磷脂質類。 此等中,尤以氫化大豆磷脂醯膽鹼(HS PC )等被氫 化之磷脂質、神經鞘磷脂(Sphingomyelin,SM )等爲宜。 主膜材料可以只含單一種之磷脂質者,亦可含複數種 磷脂質者。
磷脂質係爲使保存時或在血液等活體中,所封入之藥 劑不致於極易漏出,做爲主膜材料以使用相轉移點爲較活 體內溫度(35〜37 °C)高之磷脂質較爲適宜。另外,製造 這種脂質體時,有時會被曝露於較活體溫度更高溫度。即 ,有時會在5G t〜70 °C左右,例如60 t左右之溫度條 件下被製.造。對於藉由熱形成脂質體的影響較大,所以最 好係使用具有較此等溫度更高之相轉移點的主膜材料。具 體言,以主膜材料之相轉移點係5 0 °C以上之磷脂質爲宜 脂質體可以與上述主膜材料一起含有其他之膜成份。 以含有磷脂質以外之脂質或其衍生物(以下有時稱爲其他 脂質),與上述磷脂質一起,藉由混合脂質形成膜爲宜。 「磷脂質以外之脂質」係分子內具有藉由長鏈烷基等 所構成之疏水性基,於分子內不含磷酸基之脂質,雖不予 特別限制,但可爲甘油糖脂質、神經鞘糖脂質及做爲安定 劑之後述的膽固醇等膽固醇類等及此等之氫化物等衍生物 。膽固醇衍生物係具有環戊烷氫菲環之酯醇類,雖不特別 -13- 1362931 限定,但可爲膽固醇。 混合脂質可含其他脂類各單一種,亦可含複數種。 伊立替康製劑在血漿中的釋出率可由膽固醇之量來調 • 節,欲壓低釋出率時以含有〇~20莫耳%之量爲宜,相反地 ,欲提高釋出率時係以含30~50莫耳%,較佳含40~50莫耳 %。 本發明中之脂質體係可與上述膜構成脂質一起保持上 φ鲁述膜構造者,可以在不影響本發明之目的範圍內含有可以 含在脂質體之其他的膜成份。做爲其他之膜成份可爲使脂 質物性變化,可對載體之膜成份賦予所希望之特性的表面 改性劑。表面改性劑雖不特別限定,但可爲帶電物質、親 水性高分子之衍生物、水溶性多糖類之衍生物等。 帶電物質雖不特別限制,但可爲具有胺基、脒基、脈 基等鹼性官能基之化合物,具有酸性官能基之化合物等。 鹼性化合物有特開昭61-161246號所揭示之DOTMA、 特表平5-508 626號所揭示之DOTAP、特開平2-292246號所 揭示之Transfectam、特開平4-108391號所揭示之TMAC、 國際公開第97M2166號所揭示之3,5-兩個十五烷氧基苯甲 脒鹽酸鹽、DOSPA、TfxTM-50、DDAB 、 DC-CHOL、 DMRIE 等。 具有酸性官能基之化合物有油酸、磷脂酸等脂肪酸、 神經節苷酯GM1、神經節苷酯GM3等具有唾液酸之神經節 苷酯等、N -醯基-L -麩胺酸等酸性胺基酸系界面活性劑等 -14- 1362931 上述帶電物質爲脂質中結合具有鹼性官能基之化合物 的物質時,被稱爲陽離子化脂質。陽離子化脂質之脂質部 份係被安定化於脂質體之脂質雙重膜中,鹼性官能基部份 則可存在於載體之脂質雙重層的膜表面上(外膜表面上及 /或內膜表面上)。藉由陽離子化脂質改性膜,而可以提 高脂質體膜與細胞間之黏著性。 水溶性糖類雖不特別限制,但可爲例如尿甘酸、唾液 _籲酸、糊精、黏多醣、直鏈澱粉、支鏈澱粉、脫乙醯殼多糖 、甘露聚糖、環糊精、果膠、角鹿菜等水溶性多醋類等。 親水性高分子雖不予特別限定,但可爲聚乙二醇、 Ficoll(商品名)、聚乙烯醇、苯乙烯-順丁烯二酸酐交互 共聚物、二乙烯醚-順丁烯二酸酐交互共聚物、聚乙烯吡 咯烷酮、聚乙烯甲醚、聚乙烯甲基哼唑啉、聚乙基Of唑啉 、聚羥丙基腭唑琳、聚羥丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯 醯胺、聚二甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯酸羥丙酯、聚丙烯 酸羥乙酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚天冬胺醯胺 、合成聚胺基酸等。 親水性高分子係以具有改性脂質的構造爲宜。尤其在 親水性高分子鏈之一端具有該構造爲宜。即,改性所用之 親水性高分子係由親水性高分子之本體部份,與改性脂質 用之構造部份所成爲宜。該構造爲脂質等疏水部份時,該 疏水性部份係以插入脂質體膜之形態,親水性高分子之本 體部份會被固定爲自脂質體外表面突出,該構造爲若具有 可以與脂質體膜構成成份共價鍵之反應性官能基時,可以 -15- 1362931 與露出於脂質體外表面之磷脂質等脂質體膜構成份共價鍵 ,藉此親水性高分子之本體部份會被固定化爲自脂質體外 表面上突出。 其次’對於與親水性高分子本體結合以形成親水性高 分子-疏水性高分子化合物所用之疏水性化合物說明如下 〇 該疏水性化合物並不特別被限定,惟例如可爲具有疏 Φ鲁水性領域之化合物(疏水性化合物)。疏水性化合物可爲 例如後述之構成混合脂質的磷脂質,或脂醇等其他之脂質 類’或長鏈脂肪族醇、甘油脂肪酸酯等。其中以磷脂質爲 較佳態樣之一。又,此等疏水性化合物亦可具有反應性官 能基。藉由反應性官能基所形成之結合係以共價鍵爲宜,具 體言可爲醯胺、酯鍵、醚鍵、硫醚鍵、二硫醚鍵等,惟並不 特別限定。 上述磷脂質所含醯鍵係以飽和脂肪酸爲宜。醯鍵之鏈長 係C14〜C2Q爲宜,更以C16〜C18爲最佳。醯鍵可爲二軟脂醯基 、二硬脂醯基、軟脂醯基硬脂醯基。 磷脂質並不特別限制。做爲磷脂質可例如使用具有與 上述親水性高分子可以反應之官能基者。這種具有與親水 性高分子可以反應之官能基的磷脂質,具體言可爲具有胺 基之磷脂醯乙醇胺,具有羥基之磷脂醯甘油,具有羧基之磷 脂醯絲胺酸。以使用上述之磷脂醯乙醇胺爲較佳態樣之一 〇 親水性高分子之脂質衍生物係由上述親水性高分子與 -16- 1362931 上述脂質所成。上述親水性高分子與上述脂質之組合係並 不特別限定者。可以配合目的使用適當組合者。例如可爲 至少一個選自磷脂質、脂醇等其他脂質類、長鏈脂肪質醇、 甘油脂肪酸酯,與至少一個選自PCG、PG、PPG結合之親水 性高分子衍生物。具體言可爲聚氧化丙烯烷基等,尤其親 水性高分子爲聚乙二醇(PEG )時,選擇磷脂質、膽固醇 做爲脂質係較佳態樣之一。這種組合所成之PEG的脂質衍生 φ鲁物係有PEG之磷脂質衍生物或PEG之膽固醇衍生物。 親水性高分子之脂質衍生物可藉由脂質之選擇,可選 擇帶正電、帶負電、中性。例如選擇DSPE爲脂質時,因磷 酸基之影響會成爲帶負電之脂質衍生物,又,做爲脂質選擇 膽固醇時會成爲中性之脂質衍生物。可以視其目的選擇脂 質。 PEG之分子量並不被特別限制。PEG之分子量係通常爲 500〜10,000達爾頓,較佳係1000~7000達爾頓,更佳係 2000-5000達爾頓》 PG之分子量並不特別限制PG之分子量通常係100~1〇〇〇〇 達爾頓,較佳係200〜7000達爾頓,更佳係400〜5000達爾頓。 PPG之分子量並不特別限制。PPG之分子量係通常爲 1 00-1 0000達爾頓,較佳係200〜7000達爾頓,更佳係 1 000~5000達爾頓。 此等中’ PEG之磷脂質衍生物係較佳態樣之一。PEG之 磷脂質衍生物有例如聚乙二醇·二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺( PEG-DSPE) 。PEG-DSPE係廣泛被用之化合物極易取得, -17- 1362931 所極佳® 上述親水性高分子係可以各自單獨或組合二種以上使 用。 這類親水性高分子之脂質衍生物係可依以往公知之方 法製造。親水性高分子之脂質衍生物其中一例之PEG的磷 脂質衍生物之合成方法有例如使用觸媒,使具有對PEG可 反應之官能基的磷脂質,與PEG反應之方法。該觸媒可爲 __例如氰尿醯氯、碳化二亞胺 '酸酐、戊二醛。藉由此種反 應,使上述官能基與PEG爲共價鍵,得PEG之磷脂質衍生 物。 使用此等親水性高分子之脂質衍生物被表面改性之脂 質係可以防止血漿中之調理素蛋白質等吸附至該脂質體之 表面,提高該脂質體在血中之安定性可避免在RES截留, 可提高送達藥物爲目的之對組織或細胞之送達性。 上述藉由親水性高分子脂質衍生物之膜脂質(總脂質 )的改性率係對膜脂質的比率爲通常0.1〜20莫耳%,較佳 係〇」~5莫耳%,更佳係0.5~5莫耳%。 另外,本發明中之「總脂質」係指構成膜之脂質中除 去親水性高分子脂質衍生物之總脂質,具體而言,包含磷 脂質類及其他脂質類(包含膽固醇),另含有親水性高分 子脂質衍生物以外之表面改性劑時亦含此表面改性劑,惟 並不包含親水性高分子脂質衍生物中所含磷脂醯乙醇胺( PE)等磷脂質 '膽固醇等。 本發明中藉由如上述之脂質體的親水性高分子脂質衍 -18- 1362931 生物(PEG-PE)之膜改性係可爲將親水性高分子(PEG) 分佈於脂質雙重膜之內/外雙方,亦可爲選擇性地分佈於 外膜側。具體言,在調製後述之脂質體製劑時,預先均勻 地混合脂質體形成脂質與PEG-PE,使之形成脂質體(先導 入),亦可使用混合不含PEG-PE之脂質體形成脂質所得混 合脂質,依常法形成爲脂質體後,再導入PEG-PE (後導入 )’尤其以形成脂質雙重膜之未改性脂質體後,自外部以 φ鲁親水性高分子改性膜表面(後導入),選擇性地僅表面改 性劑脂質雙重膜之外膜的脂質體爲宜。這時導入親水性高 分子用之改性劑若使用親水性高分子脂質衍生物時,親水 性高分子部份會以向外方突出之狀態,疏水性部份之脂質 部份會進入脂質體之脂質雙重膜中被安定地保持,在脂質 體之脂質雙重膜之外膜表面上存在並分佈結合於脂質之親 水性高分子。 脂質體形成步驟後之脂質體受到溫度、時間之影響會 引起凝聚等不安定化現象。此不安定化係視脂質體之脂質 組成之不同而有所不同,所以已知係每一種脂質組成會有 不同之溫度、時間。爲規避因脂質組成之不同而有所不同 之不安定化,於脂質體形成步驟後設定親水性高分子改性 步驟爲宜。 添加親水性高分子步驟中添加親水性高分子之時期係 以脂質體形成步驟之後愈快愈好。具體言,只要爲1 80分 鐘以內,對膜成份或內封物之熱影響較少爲宜,更佳係 1 20分鐘以內,最佳係4 5分鐘以內,脂質體形成步驟後即 -19- 1362931 爲最理想。更具體言之,亦可將脂質體形成步驟後之脂質 體分散液直接投入親水性高分子溶液中,又可相反地,將 親水性高分子溶液加入脂質體形成步驟後之脂質體分散液 之方法。又,可以將脂質體分散液與親水性高分子溶液同 時移至另一容器再予混合的方法。這時就濃度均一性及溫 度均一化之觀點,採用攪拌器等攪拌之步驟較理想。 親水性高分子改性步驟中添加親水性高分子後,最好 Φ籲以相轉移溫度以上,以所定時間,加溫攪拌爲宜。加熱攪 拌之時間係以0〜120分鐘,較佳係〇〜60分鐘,更佳係0〜45 分鐘爲宜。 又,上述之外,亦可以依常法製造含具有反應活性之 官能基的磷脂質等膜構成脂質之脂質體後,添加一邊末端 活化之PEG於脂質體外液,使之與具有官能基之磷脂質等 膜構成脂質結合,藉此製造脂質體》 又,上述方法以外,脂質體還可以混合上述各構成成 份,藉由高壓排出型乳化機使其高壓排出亦可製得。此方 法係被具體記載於「Life Science中之脂質體」(寺田、吉 村等:Springer-Verlag Tokyo (1992))中者,引用此記載 做爲本說明書中所記載。 上述中,爲使脂質體定尺寸爲所希望之大小,可以利 用幾個技術(G. Gregoriadis 編「Liposome Technology Liposome Preparation and Related Techniques 」 2nd edition, Vol. I-III > CRC Press )。可引用此記載做爲本說 明書之記載。 -20- 1362931 脂質體之脂質雙重膜構造係習知者有單層泡囊( Small Unilamellar Vesicle, SUV, Large Unilamellar Vesicle, LUV )及複數枚所成多層泡囊(Multilamellar Vesicle, MLV)等。 本發明有關脂質體係其任一膜構造均可以單層泡囊之 脂質體爲宜,具體言以LUV脂質體爲最佳。 脂質體分散液係使用擠製機,強制通過濾器複數次, φ鲁使其成單層化。通常濾器係具有較所要粒徑大之孔徑者, 使用二種以上不同於最後希望得之粒徑的孔徑者。使用這 樣之擠製機,通過不同孔徑之濾器次數愈多單層泡囊化率 會愈高,可以成爲實質上爲單層泡囊之脂質體。實質上爲 單層泡囊之脂質體係具體言指構成脂質體製劑之全體載體 (泡囊)中,單層泡囊所佔比率以整體而言爲50%以上之 存在比率即可,以80%以上更佳。 如上述之脂質體中係其外膜表面的親水性高分子鍵爲 向著脂質體外側分佈,另一方面,脂質雙重膜之內水相側 內膜係未被表面改性者,所以內水相內係實質上沒有分佈 親水性商分子鍵。只要爲這種分佈構造,即使內水相之pH 値低,亦比雙重膜之內外膜兩側上分佈有親水性高分子者 更能確保膜之安定性。又,與雙重膜之內外膜兩側上所分 佈者相比,只要以整體量較少之親水性高分子即可得血中 安定性之效果。 又’本發明中’ 「血中滯留性」係指投予載體於宿主 時’被內封於載體之狀態下的藥劑存在於血液中的性質。 -21 - 1362931 自載體釋出藥劑後,自血中快速地消失,對於藥劑曝露之 部位發生作用。血中滯留性較佳時可以只投予少量之藥劑 本發明之載體可採用球狀或近乎其形態者,其粒徑( 粒子外徑之直徑)雖不特別限定,但以0.02-25 0 μιη,較 佳以0.03〜0.4 μπι’更佳以0.05〜0.2 μιη爲宜。粒子外徑之 直徑係藉由動態光散射法所測定之脂質體製劑全粒子直徑 I鲁之平均値,具體言可以使用粒徑分析儀(Zetasizer (Malvern Instruments 300 OHS 或 SZEM 5002)測定。 本發明之伊立替康製劑還可以配合其投服形態再含有 醫藥上可被容許之安定化劑及/或防氧化劑者。安定化劑 雖不予特別限制,但可爲甘油或蔗糖等糖類。防氧化劑雖 不予特別限制,但可爲抗壞血酸、尿酸、或生育酚同族體 之例如維生素E等。生育酚中有α、0、r、δ之4種異構物 ,本發明中均可使用。
視其投予形態可再含有醫藥上可被容許之添加物。這 種添加物可爲例如水、生理食鹽、醫藥上可被容許之有機 溶媒 '膠原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯聚 合物、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鈉、藻朊酸鈉、水溶性 糊精、羧甲基澱粉鈉、果膠、甲基纖維素、乙基纖維素、 漢生膠、阿拉伯橡膠、酪蛋白、明膠、瓊脂 '甘油去水縮 合體、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂 酸、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、 PBS、活體內分解性聚合物、無血清培養基、做爲醫藥添 -22- 1362931 加物可被容許之界面活性劑或活體內可被容許之生理上pH 値緩衝液等。所用添加物可以視其劑型自上述中適當地選 擇或組合,惟並不限定於此》 本發明中可將含有此等添加物之態樣的伊立替康提供 做爲醫藥組成物。本發明之醫藥組成物可用一般之方法, 例如可在0~8 °C之冷藏或1〜30 t室溫保存。
本發明中之脂質體可採用內封CPT-1 1之形態。習知者 ’ CPT-11係在較中性條件高之pH値領域中會發生α-羥基 內酯環之水解。爲此本發明之脂質體即使脂質雙重膜中倂 入有CPT-11,即使內水相中倂入有CPT-1 1,爲抑制α -羥 基內酯環之水解,脂質體之內水相必須保持爲酸性。 習知者,脂質通常會因溫度,pH値而引起水解。尤其 Sn-1與Sn-2位之脂肪酸的羧酸酯係極易受到水解,而分解 爲溶血脂質及脂肪酸亦爲人所知(Grit等,Chem. Phys. Lipids,64,3- 1 8, 1 993 ),這種分解物會擾亂原來之脂質 膜組成,提高脂質膜之透過性,因而損害脂質體之安定性 。針對此欲保持內水相爲酸性時,就脂質之安定性觀點, 外水相之P Η係以中性附近較適宜。 此等相反之兩個條件會被最嚴厲地限制之狀況係在藥 物導入步驟。藥物導入步驟必須加溫爲脂質膜之相轉移溫 度以上者,會顯著地促進脂質之水解。爲抑制脂質之水解 ,雖將外水相之pH値設定爲中性附近較適宜,惟將外水相 之pH値設定爲中性附近時會促進CPT-1 1之α -羥基內酯環 的水解。有鑑於此等相反之兩個條件,藥物導入步驟中之 -23- 1362931 外水相的pH値係以4.0〜8.0爲宜,更佳係4.0~7.0,最佳係 5.0 〜7.0 〇 本發明之高載持量伊立替康製劑係在形成載體脂質體 後可利用其膜內外之離子梯度,藉由導入藥劑之被稱爲遠 隔負荷製料(Remote loading)的方法予以達成。遠距離 塡裝法係可用在被溶解爲適當之水性媒體時,可以存在於 帶電狀態下之慣用藥劑者。藉由在脂質體之內側/外側形成 φ鲁離子梯度,藥劑係依所形成之梯度透過脂質體膜而可以將 藥劑封入。 隔著脂質體膜被形成之離子梯度有Na + /K+濃度梯度。 對Na + /K +濃度梯度之藉由遠隔負荷製料,預先形成之脂質 體中添加藥劑之技術係記載於美國專利5077056號者,可 參照其施行。又,引用其記載可做爲本說明書之記載。 本發明中係做爲離子梯度以質子濃度梯度可謂較佳, 可爲具有脂質體膜內側(內水相)pH値較外側(外水相) pH値低之pH値梯度的態樣。具體言,pH値梯度係可藉由 銨離子濃度梯度及/或可質子化之具有胺基之有機化合物的 濃度梯度等形成。 藉由銨離子濃度梯度,將藥劑(伊立替康及/或其鹽 )封入脂質體內之方法,其具體例可爲首先在含有 0_1〜0.3 Μ銨鹽的水性緩衝液中預先形成脂質體,與外部媒 體之不含銨離子之媒質,例如蔗糖溶液交換,在脂質體膜 之內/外形成銨離子梯度。內部銨離子係藉由氨及質子予以 平衡化、氨會透過脂質膜擴散,而自脂質體內部消失。隨 -24- 1362931 著氨之消失,脂質體內之平衡會連續地移動向質子生成之 方向》結果脂質體內會蓄積質子,脂質體之內側/外側會形 成pH値梯度。添加藥劑予具有此梯度之脂質體分散液時, 藥劑可藉此被內封於脂質體中。 可形成上述銨離子濃度梯度之銨鹽並不特別限制,可 爲硫酸銨、氫氧化銨、乙酸銨、氯化銨、磷酸銨、檸檬酸 銨、琥珀酸銨、乳糖酸銨、碳酸銨、酒石酸銨及草酸銨等
另外,對銨離子濃度梯度之藉由遠隔負荷裝料法預先 所形成之脂質體中導入藥劑之技術,其本身係記載於美國專 利5 1 92549號中,可參照其進行,又,可引用此記載做爲本 說明之記載。 可質子化之具有胺基的有機化合物係以低分子者爲宜, 具體言可爲甲基胺、乙基胺、丙基胺、二乙基胺、乙二胺等 ’惟並不限定於此。
本發明中,藉由使用銨離子濃度梯度的遠隔負荷製料 法’內封伊立替康或其鹽之態樣係較佳者。 本發明之伊立替康製劑係在如上述之載體中,以較 0.07莫耳/莫耳(藥劑莫耳/膜總脂質莫耳),較佳較0.1莫 耳/莫耳高之濃度內封伊立替康或其鹽所成者。 本發明中所稱「內封」係指載體內部中藥劑被封入之狀 態而言。還可爲載體之構成成份的脂質層內含有一部份或全 部之狀態。本發明之載體可藉由凝膠過濾、透析、膜分離及 離心分離等一般所用方法予以精製,以除去未被內封於載體 -25- 1362931 內之藥劑。 藥劑係經過除去未被內封之藥劑之階段而被提供者。所 以載體之內部與載體之外部介著脂質雙重層而產生濃度梯 度。本發明之載體係較佳爲在調製後脂質雙重層之外部不 具有未內封之藥劑。然後自內部將被內封於載體之藥劑釋 出至外部環境。本發明之載體係在內封藥劑之狀態下到達 標的部位,結果可將內封之藥劑送達至標的部位。送達藥 Φ·劑至標的部位可爲將被載持於載體之藥劑倂入標的部位, 亦可爲即使不被倂入標的部位只要可使藥劑影響及於標的 部位或其近鄰。 又,本發明中所稱「釋出」係指載體中所內封之藥劑 可藉由通過構成載體之脂質膜,或藉由脂質膜之一部份構 造改變而出來至封閉泡囊之外部而言。在血漿中伊立替康 鹽酸鹽係被代謝爲活性代謝物之SN-38,長時間高濃度下 曝露於標的部位,示有極強之抗腫瘤活性,所以控制釋出 係極重要者。伊立替康製劑在血漿中之釋出率可用膽固醇 之量予以調節,調節膽固醇之量可期待得較佳效果。「釋 出率」係指載體之構成成份與自載持伊立替康鹽酸鹽之載 體向封閉泡囊外部出來之藥劑,與被載體所載持藥劑之比 率(重量比或莫耳比)。「釋出率低」係指每單位時間向 • 封閉泡囊外部出來之藥劑量少而言。 本發明中所稱「標的部位」係指內封於載體之藥劑被 釋出予以作用之特定部位,每一部位被特定之細胞、組織 、器官或內臓、器官及此等內部而言者。細胞、組織、器 -26- 1362931 官或內臟、器官及此等內部等的標的部位係可成爲藉由藥 劑治療之對象的部位,藉由曝露所釋出之藥劑,而發揮其 效果。標的部位並不特別限定,惟可爲腫瘤。 做爲治療對象的腫瘤雖不特別限制,但爲固體腫瘤, 具體言可爲食道癌、胃癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、胰 臟癌、肝臟癌、喉癌、肺癌、攝護腺癌、膀胱癌、乳癌、 子宮癌或卵巢癌。標的部位係腫癌之細胞、組織、器官或 Φ·內臟、器官及此等內部等。所以本發明中所稱病症係指上 述腫瘤、藥劑係對此等可期待具有抗腫瘤效果。 本發明中所稱「曝露」係指被釋出至載體外部的藥劑 可影響及於外部環境之作用而言。具體而言,被釋出之藥 劑係接近於標的部位,經由接觸,而發揮其作用之抗腫瘤 效果。經由藥劑作用於標的部位、局部性地作用於進行標 的部份之DNA合成之細胞周期的細胞,顯示被期待之效果 。爲顯示此等效果,自載體之藥劑釋出率與載體之血中滯 留性必須保持均衡。 本發明之載體係以較佳之釋出速度釋出伊立替康及/或 其鹽而被釋出之伊立替康及/或其鹽係被代謝物成爲活性 代謝物之SN-38。本發明係使用其而使SN-38可長時間曝露 於所希望之標的部位。因此本發明中可以爲預防及/或治療 宿主之疾病,投予內封有效量之伊立替康及/或其鹽之載體 予宿主,在宿主內釋出有效量之伊立替康及/或其鹽,或使 有效量之SN-38長時間高濃度曝露於標的部位,所以可以 對宿主非口服性地投予全身或局部。投予對象之宿主可爲 -27- 1362931 哺乳動物,較佳係人、猴、鼠、家畜等。 非口服性投予的途徑可選擇例如點滴等靜脈內注射( 靜脈注射)、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射等,可 依病人之年齡、症狀適當地選擇投予方法。本發明之載體可 以對於已被疾病困擾之病人治療病人之症狀,或至少爲阻擋 其一部份而投予十足之量。例如被封閉於載體之藥劑的有效 投予量係選擇每天每kg體重爲O.Olmg至lOOmg範圍。惟本 發明之載體並不是限定此等投予量者。投予時期可在病症發 生後投予,或被預測病人之病症會發病時爲緩和發病時之症 狀而預防性地投予。又,投予期間可視病人之年齡、症狀而 適當地選擇。 具體的投予方法可爲以注入器或點滴投予醫藥組成物。 又,將導管插入病人或宿主體內,例如管腔內,例如血管內 ,將其先端引導至標的部位附近,通過該導管投予所希望之 標的部位或其鄰近或標的部位之可期待血流之部位。
如實施例所示,針對本發明之載體測定被內封之藥劑 的釋出率時,確認爲低釋出率。釋出率可以使本發明之載體 離心地沈澱,測定上澄液存在之藥劑量與載體即可計算出。 【實施方式】 其次舉實施例更詳細地說明本發明’惟本發明並不被 此等實施例、試驗例所限定者。 各例中所調製之封入藥劑脂質體的各濃度及粒徑係依 以下求得者。 -28- 1362931 •磷脂質濃度(mg/ml ):使用磷脂質定量套組(磷 脂質C試和光’和光純藥工業公司)所定量之脂質體分散液 中之磷脂質(HSPC)濃度。 •總脂質濃度(莫耳/ <):自上述磷脂質濃度所算出 之膜構成成份的混合脂質合計莫耳濃度(mM)。此總脂質 中係含有做爲混合脂質被調製之表面改性中的脂質成份, 惟不含爲導入PEG而用之PEG衍生物中之脂質(實施例中 0·係PEG-ΡΕ中之PE (碟脂酿乙醇)或Chol-PEG中的Choi ( 膽固醇)。 •藥劑濃度(mg/ml ):將上述所得製劑稀釋爲生理 食鹽水40倍後,取其50 L,加入2ml甲醇,針對此溶液以 分光螢光光度計測定求得激勵波長:3 60nm,螢光波長: 43 5ηιη下之螢光強度。以藥劑量(mg) /製劑全量(ml )表 示所內封之伊立替康鹽酸鹽濃度。 •藥劑載持量(藥劑/總脂質莫耳比):自上述總脂 質濃度的上述藥劑濃度之比,以藥劑/總脂質之莫耳比表 示被內封於載體之伊立替康鹽酸鹽濃度。 •粒徑(nm):以3ml生理食鹽水稀釋20 μΐ脂質體 分散液,以 Zetasizer3000HS ( Malvern Instruments )測定 之平均粒徑。 以下示使用之各成份略稱及分子量。 HSPC:氫化大豆磷脂醯膽鹼(分子量790、Lipoid公司 製 SPC3)
Choi :膽固醇(分子量3 86.65、Solvay公司) -29- 1362931 ?£05()()()-?£:聚乙二醇(分子量5 00 0)磷脂醯乙醇胺( 分子量5938、Genzyme公司) PEG2Q()()-PE:聚乙二醇(分子量2000 )磷脂醯乙醇胺( 分子量2725、日本油脂公司) PEGi6〇〇-Chol :聚乙二醇(分子量1600 )膽固醇(分子 量1 982、日本油脂公司) 0?丁-11:伊立替康鹽酸鹽(分子量677.1 9 )
R-DHPE :若丹明二個十六烷醯基磷脂乙醇胺(分子 量:1 3 3 3.8 1、Molecular Probes公司) 丁艮又-20:3,5-二個十五烷氧基苯甲脒鹽酸鹽(分子量 6 0 9.4 1、常興藥品) 實施例1 爲確認可達成伊立替康鹽酸鹽高載持脂質體製劑之方 法,藉由遠隔負荷製料法(Remote Loading法)(調劑例1 )或被動負荷製料法(比較調劑例1)試著導入高濃度藥 劑。除導入方法不同以外,各伊立替康鹽酸鹽載持脂質製 劑(以下,稱CPT-11製劑)均以PE-PE (後導入)脂質做 爲載體。 (調劑例1 ) <遠隔負荷製料法) (1 )調製混合脂質.:將〇.422g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC )及〇_176g膽固醇(Choi),溶解於加熱爲60 t之25ml正丁醇(關東化學公司)後予以冰冷、凍結乾燥 -30- 1362931 ,調製爲HSPC: Chol = 54: 46 (莫耳比)之混合脂質》 (2 )調製脂質體:在0.5 98g上述調製之混合脂質中 ,加入10ml 250mM硫酸銨溶液,充分膨潤後,旋渦攪拌器 攪拌,依序通過於68 °C裝備擠製機(The Extruder T. 10, Lipex Biomembranes Inc·)濾器(孔徑 0.2 μιηχ5 次,0.1 μηιχΙΟ次,Whatman公司),調製脂質體分散液。 (3 )導入PEG-PE :在上述脂質體分散液中加入 φ·1·21πι1聚乙二醇500-磷脂醯乙醇胺(PEG5QQQ-PE)之蒸餾 水溶液(36_74mg/ml )(相當於0.7 5莫耳%混合脂質之總 脂質量),於60 °C加溫30分鐘,導入PEG5〇〇〇-PE。 以10mM組織胺/10%蔗糖溶液(PH6.0)予以溶媒取代 之凝膠管柱進行外水相取代。 使用磷脂質定量套組HSPC濃度。自HSPC濃度求得 總脂質量mM。 (4)封入藥劑:調製l〇mg/ml濃度之伊立替康鹽酸 鹽(CPT-1 1 ) /RO水(逆滲透膜淨水)溶液。 對上述 HSPC 濃度(mg/ml)可使 CPT-ll/HSPC = 〇.2( w/w )之量加入此伊立替康鹽酸鹽溶液於脂質體分散液, 於60 °C攪拌60分鐘,導入伊立替康鹽酸鹽。導入後冰冷 試樣品。以l〇mM組織胺/10%蔗糖溶液(ΡΗ6·5 )取代之凝 膠管柱,自封入伊立替康鹽酸鹽後之脂質體分散液除去未 封入之藥劑。 將上述所得CPT-11製劑之組成及粒徑示於表1。 得到本發明之高載持CPT-1 1製劑。 -31 - (比較調劑例1) <被動負荷製料(Passive loading)法> 在0.2992g以調製例1—樣之方法調製之混合脂質( HSPC : Chol = 54 : 46 (莫耳比)中,加入5ml伊立替康鹽 酸鹽溶液(l〇mg/ml濃度之CPT-11 10%蔗糖溶液),使 其充分地膨潤。以旋渦攪拌機攪拌,與調劑例1 一樣依序通 過於68 °C裝在擠製機之濾器(〇·2μιηχ5次,Ο.ΙμιηχΙΟ次) ,調劑封入伊立替康鹽酸鹽之脂質體。 與調劑例1之(3 ) —樣,在此脂質體中加入相當於混 合脂質之總脂質量0.75莫耳%的0.61ml PEG5Q(){)-PE,於60 °C加溫30分鐘,導入PEG5()()()-PE,繼而以10mM組織胺/10% 蔗糖溶液(PH6.5)取代之凝膠管柱除去未封入之藥劑。 將上述所得CPT-1 1製劑之組成及粒徑示於表1。 雖以調劑例1一樣之之藥劑量導入藥劑,但以被動負 荷製料法時無法達成獲得高載持CPT-1 1製劑。 實施例2 在遠隔負荷製料法中,調查爲得本發明之高載持CPT-U製劑所需之塡充量。 (調劑例2 ) 除將調劑例1之(4 )封入藥劑中,與(1 )〜(3 ) — 樣調製之PEG_PE後’加入導入脂質體分散液中之l〇mg/ml CPT-11/RO水溶液之量改爲 〇·1、0.2' 0.4、0.8 之 CPT- -32- 1362931 1 l/HSPC ( w/w )比之量以外,其他則與調製例1 一樣得 CPT-11製劑。將所得CPT-11製劑之組成及粒徑示於表1。 如表1所示,以遠隔負荷製料法時可以提高藥劑塡裝 量(藥劑/HSPC之比),而可達成獲得臨床效果上十足濃 度之高載持CPT-1 1製劑。
-33- 1362931
粒徑 n m 120.9 120.8 125.2 124.8 123.1 126.5 藥劑 載持量 藥劑m ο 1 / 總脂質 m ό 1 (N 卜 t—H o m o o 0.073 0.132 0.266 寸 o 藥劑濃度 m g /m L 寸 (N CN o 1 1.32 1.88 〇\ Os (N VO ON CN 藥劑 塡裝量 CPT-1 1 /HSPC w/ w (N 〇 (N 〇 ο CN 〇 寸 〇 OO o 脂質濃度 總脂質 mo 1 /L 〇 o 0.032 0.027 0.02 1 1_ 卜 T—H o o 1-H o o 磷脂質 (HSPC) mg/mL VO (N m r- m 卜 r-H oo Ch OO oo o 卜 寸 in 寸 塡裝膜組成 (mol 比) PEG-PE 卜 o 脂質 HSPC /Choi 54/46 調製例 調製例1 比較調製例1 調製例2-(1) -(2) /-*—*N 1 -(4) -34- 1362931 (試驗例1)37 t下之製劑加速安定性 於3 7 °C加溫實施例1調製之各C P T · 1 1製劑經所定時間 。加溫完後在CPT-1 1製劑中加入生理食鹽水稀釋20倍後予 以超離心(1 xlO5,2小時,10 °C ),使CPT-1 1製劑(封 入有伊立替康鹽酸鹽之脂質體)沈澱,測定上澄液中存在 之伊立替康鹽酸鹽量的螢光強度,算出自CPT-11製劑之伊 立替康鹽酸鹽之釋出率(%)。結果示於圖1。
比較調製例1調製之C P T -1 1製劑係在3 7 °c下加溫7天 時示有約60%之伊立替康鹽酸鹽釋出率,與之相比,以調 製例1之遠隔負荷製料法調製之C P T -1 1製劑係於3 7 °C下加 溫7天後亦幾乎未釋出伊立替康鹽酸鹽。由此可知,藉由 遠隔負荷製料法封入脂質體時可調製爲高載持且製劑安定 性極優之CPT-1 1製劑。 (試驗例2)37 °C下之製劑安定性
於37 °C加溫實施例2調製之各CPT-1 1製劑經所定時間 。加溫完後,與試驗例1 —樣,針對加溫後之C P T -1 1製劑 測定伊立替康鹽酸鹽之釋出率。結果,各CPT-11製劑係於 3 7 °C加溫1 4天後釋出率仍爲1 %以下。 由此可知’以遠隔負荷製料法所調製之CPT-11製劑的 釋出率係不會受到藥劑載持量(藥劑/總脂質比)極大影 響,既使爲高載持之CPT-11製劑亦具極優之製劑安定性。 實施例3 -35- 1362931 做爲載體用膜構成與調製例1不同之脂質體,調製 CPT-1 1製劑。即,膜成份爲使用由以下所示混合脂質所成 PEG-PE後導入脂質體(調製例3),或PEG-ΡΕ先導入脂質 體(參考調製例1) ’與調製例1 一樣依遠隔負荷製料法進 行伊立替康鹽酸鹽之封入操作。 (調製例3 )
(1)調製混合脂質:將1.5317g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC ) ,0.6419g 膽固醇(Choi),及 0.005g 若丹明兩 個十六烷醯基磷脂醯乙醇胺(R-DHPE )溶解於加溫爲60 °C之5 0ml第三丁醇後,冰冷、凍結乾燥,調製爲H S PC : Choi : R-DHPE = 54 : 4 6 : 0.1 (莫耳比)之混合脂質。 (2)調製脂質體:除使〇.37g上述調製之混合脂質 以外,與調製例1—樣,添加10ml 250mM硫酸銨溶液,以 旋渦攪拌機攪拌,使其通過裝有擠製機之濾器(0.2 μιη><5 次,0.1 μηιχΙΟ次),得脂質體分散液。 繼而以10mM組織胺/10%蔗糖溶液(ρΗ6.0)進行外水 相取代。 (3 )導入PEG」PE :在上述脂質體分散液中,加入相 當於2_8莫耳%總脂質量之聚乙二醇2000-磷脂醯乙醇胺( PEG2 0 0 0 -PE )之蒸餾水溶液(3 6.74mg/ml ),於 60 °C 加 溫30分鐘,導入PEG2Q00-PE。 (4 )與調製例1之封入藥劑一樣,在脂質體分散液中 加入對於 CPT-11/HSPC = 0.2 ( w/w )所需量之 10mg/ml -36- 1362931 CPT-l 1/R0水溶液,導入伊立替康鹽酸鹽後,冰冷,繼而 以10mM組織胺/10%蔗糖溶液(ρΗ6·5)除去未封入之藥劑 。所得之CPT-11製劑示於表2。 (參考調製例η 除將調製例3之(3)添加之PEG2()()()-PE,改爲預先在 (2)中添加膜材料之混合脂質,製作內外膜兩側分佈有 PEG-PE之脂質體以外,其他則與調製例3—樣調製CPT-l 1 製劑。如以下。 在與調製例3之(1 )—樣調製之0.3 7g混合脂質( HSPC : Choi : R-DHPE = 54 : 46 : 0.1 (莫耳比))及相當 於調製例3之倍量(5.6莫耳%)之〇.〇94g PEG2〇〇〇-PE中, 加入lml乙醇,於65 °C攪拌3 0分鐘,使之完全溶解。 經由攪拌確認已完全溶解後之乙醇溶液中,加入10ml
調製爲25 OmM之硫酸銨溶液,其後則與調製例3之(2 )— 樣,藉由進行旋渦狀攪拌機及擠製機操作,進行使用10% 蔗糖溶液所得脂質體分散液之外水相取代》 與調製例3之(4)—樣,加入可使CPT-11/HSPC量 = 0_2(w/w)所需量之10mg/ml CPT-11/ro水溶液於脂質體 分散液,導入伊立替康鹽酸鹽。導入後與調製例3之(4) —樣,冰冷’除去未封入之藥劑。所得C P T -1 1製劑示於表 -37- 2 ° 1362931
(N^ 粒徑 ε C 123.8 102.3 藥劑 載持量 藥劑m ο 1 / 總脂質mol 寸 〇 0.107 藥劑濃度 m g/m L CN <N 脂質濃度 總脂質 m ο 1 / L ON o o o o 磷脂質 6 ε (N oo oo 00 VO Πτ} 1 -1 PEG-PE 00 CN VO in ¢¢(— Μ £ 脂質 HSPC : Choi : R-DHPE o v〇 寸 寸 54 : 46 : 0. 1 cn 匡 m θϋ iliis 參考調製例1 -38- 1362931 (試驗例3)37 t下之製劑加速安定性
於37 °C加溫1個月,對實施例3調製之各CPT-11製劑 進行加速試驗。每一個禮拜採取一部份加溫之CPT-11製劑 ,加入生理食鹽水稀釋爲20倍後,以超離心(1 xl 05g,2 小時,10 t )使CPT-1 1製劑沈澱。定量上液中存在之伊 立替康鹽酸鹽量之螢光強度,算出自脂質體之釋出率(% )。結果示於圖2。又,每一週測定加溫後之脂質體分散 液之粒徑,結果示於圖3。 由上述圖2及圖3可知,調製例3調製之脂質體係於37 °C經1個月後亦未釋出藥劑(圖2 ),粒徑亦大約固定(圖 3),是爲製劑安定性極優之脂質體。又,於參考調製例1 調製之PEG-PE先導入脂質體係於37 °C下第3週即開始釋 出,第4週所示極高之釋出率(圖2)。又,由於粒徑係第 3週以後即增大(圖3 ),所以顯示第3週以後,已引膜之 破壞。 由此等結果可知,本發明之高載持CPT-11製劑中,形 成脂質體後添加PEG-PE的PEG-PG後導入脂質體係爲較佳 之形態。 [實施例4] 爲試驗本發明之高載持CPT-1 1製劑之長期保存安定性 及血中安定性,藉由以下調製例4〜5調製CPT-1 1製劑。 (調製例4 ) -39- 1362931 調製例1.之(3 )中,除以l〇mM MES/10%蔗糖溶液( PH6.0 )取代peg-PE後導入脂質體之分散液的外水相予以 Μ代以外’其他則均與調製例i一樣,藉由遠隔負荷製料 法藥劑導入,調製高載持CPT-1 1製劑。組成示於表3。 (調製例5 ) 以下述(1)調製之混合脂質做爲膜成份以外,其他 則與調製例4一樣,調製含有帶電物質之3,5-兩個十五烷氧 基苯甲脒鹽酸鹽之高載持CPT-11製劑。示於以下》 (1)調製混合脂質:將〇.4561g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC) ,0.1876g 膽固醇(Choi),及 0.0563g3,5-兩 個十六烷氧基苯甲脒鹽酸鹽(TRX-20 )溶解於加溫爲60 °C之25ml第三丁醇後,冰冷、凍結乾燥,調製爲HSPC : Choi : TRX-20 = 5 0 : 42: 8(莫耳比)之混合脂質。 使用〇.7〇〇g上述調製之混合脂質,與調製例1之(2 )—樣調製脂質體分散液。 除在上述脂質體分散液中添加相當於0.75莫耳%混合 脂質之總脂質量之1.42ml PEGsoqo-PE的蒸餾水溶液( 36.74mg/ml )導入 PEG5〇〇〇-PE後,以 10mM MES/10%蔗糖 溶液(pH6.0 )進行脂質體分散液之外水相取代以外,其 他則與調製例1之(3) —樣,藉由遠隔負荷製料法導入藥 劑,調製高載持CPT-11製劑。組成示於表3。 (試驗例4) 4 °C下之長期保存安定性試驗 -40- 1362931 於4 °C,保存上述所得各C Ρ Τ -1 1製劑經所定時間。經 所定時間後測定CPT-1 1製劑之粒徑,及與調製例1樣測定 佳CPT-1 1製之伊立替康鹽酸鹽的釋出率(% )。結果如表 3所示。 表3
調製例4 -— 1 調製例5 塡裝之膜組成 m ο 1比 脂質 HSPC/Chol HSPC/Chol/ TRX-20 54/46 50/42/8 PEG-PE 0.75 0.75 脂質濃度 磷脂質(HSPC) mg/mL 12.02 11.77 總脂質m ο 1 / L 0.028 0.03 藥劑濃度 mg/mL 2.67 2.4 1 _劑載持量 m ο 1藥劑/ mol總脂質 0.136 0.119 粒徑 _ nm 初期 126.3 123.3 保存6個月後 122.2 125.4 釋出率 -% 初期 0.63 0.12 保存6個月後 0.38 0.17 上述實施例4調製之各CPT-1 1製劑係保存於4 °C下6個 月後’粒徑及釋出率均未見有所變化。由此可知,藉由遠 -41 - 1362931 隔負荷製料法調製之CP T-l 1製劑係長期間之保存安定性極 佳。 (試驗例5)血中滯留性 對於小鼠(BALB/c,雌,5週齡,日本Clea公司)尾 靜脈注射做爲伊立替康鹽酸鹽量爲l〇mg/kg (做爲伊立替 康量爲8.77g/kg)之實施例4(調製例4及5)調製之各CPT_ 11製劑或伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液(做爲伊立替康 鹽酸鹽爲1 mg/ml )。 注射後於1、6、24小時後抽血,經離心分離( 3000rpm,10分鐘,4 °C )採取血漿,藉由測定螢光強度 予以測定各血漿中之伊立替康鹽酸鹽濃度》血漿係測定前 保管於冷凍庫者。結果示於表4及圖4。 實施例4之各CPT-1 1製劑係血漿中之伊立替康鹽酸鹽 濃度在尾靜脈注射後2 4小時爲止均被檢測出,但伊立替康 鹽酸鹽生理食鹽水溶液時則僅在尾靜脈注射後1小時檢測 出而己。 由此可知,藉由遠隔負荷製料法所調製之CPT-11製劑 可以長期間以高濃度維持伊立替康鹽酸鹽之血漿中濃度。 -42- 1362931 表4
血中濃度(Pg/mL ) 經過時間(小時) 1 6 24 C P T -1 1製劑(調製例4) 189.41 128.03 13.18 含TRX-20之CPT-1 1製劑(調製例5) 185.29 84.67 3.38 伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液 0.39 ND ND
[實施例5] 爲試驗本發明之高載持CPT-1 1製劑之藥效,依以下調 製例6〜9調製CPT-1 1製劑。 (調製例6 ) 除以下述(1)調製之混合脂質做爲膜成份以外,其 他則與調製例4一樣,調製含帶電物質之3,5 -兩個十五烷氧 基苯甲脒鹽酸鹽之高載持CPT-1 1製劑。示如以下。
(1 )調製混合脂質:將4.562g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (118?(3)’1.876§膽固醇(〇!11〇1),〇.564§3,5-兩個十 五烷氧基苯甲脒鹽酸鹽(TRX-20 )溶解於加溫爲60 〇c之 5 Oml第三丁醇後’冰冷、凍結乾燥,調製爲HSPC : Choi : TRX-20 = 5 0 : 42 : 8 (莫耳比)之混合脂質。 除使用7.002g上述調製之混合脂質以外,其他則與 調製例1 一樣調製脂質體分散液。 在上述脂質體分散液中,加入相當於〇 . 7 5莫耳%總脂 質量之聚乙二醇5000·磷脂醯乙醇胺(peGmqo-PE)之蒸餾 -43- 1362931 水溶液(36.74mg/ml ),於60 °C加溫3 0分鐘導入PEG5〇00-PE後,與調製例1之(4) 一樣,藉由遠隔負荷製料法導入 藥劑,調製高載持CPT-11製劑,組成示於表5。
-44- 1362931
粒徑 ε C 134.3 藥劑載持量 藥劑mol/ 總脂質m ο 1 Ο 藥劑濃度 S ', bO B ν〇 m 脂質濃度 總脂質 mol/L 0.047 磷脂質 s ', 00 ε ν〇 cn 00 r—Η 塡裝之膜組成 (m ο 1 比) PEG-PE 卜 ο 脂質 Ο <Ν >< ^ Η 〇Η Ο Λ υ 00 CN 寸 調製例6 -45 - 1362931 調製例7 除以下述(1)調製之混合脂質做爲膜成份以外’其 他則與調製例4 —樣,調製含有帶電物質之3,5之兩個十五 烷氧基苯甲脒之高載持CPT-1 1製劑。示如以下。 (1 )調製混合脂質:將4.5 62g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC ) ,1.518g 膽固醇(Choi ) ,1 . 1 2 6 g 3,5 -兩個十 五烷氧基苯甲脒鹽酸鹽(TRX-20)溶解於加溫爲60 °C之 50ml第三丁醇後,冰冷、凍結乾燥,調製爲HSPC: Choi: TRX_20 = 5 0 : 34 : 1 6 (莫耳比)之混合脂質。 除使用7.2 07g上述混合脂質以外,其他則與調製例1 一樣調製脂質體分散液。 除在上述脂質體分散液中,加入相於2.0莫耳%總脂質 量之聚乙二醇1 600-膽固醇(PEG16G()-Chol)之蒸餾水溶液 (36.74mg/ml) ’於 60 °C 加溫 3 0分鐘,導入 PEGi 6〇〇-Chol 後,以1 OmM MES/10%蔗糖溶液(pH6.0 )以外,其他則與 調製例1之(4 ) 一樣,遠隔負荷製料法導入藥劑,調製高 載持CPT-11製劑。組成示於表6 ^ -46 - 1362931
粒徑 n m 133.7 藥劑載持量 藥劑m ο 1 / 總脂質m ο 1 ON o 藥劑濃度 mg/mL VO (N m 脂質濃度 總脂質 mol/L 1_ 1 0.041 磷脂質 mg/mL oo 卜 塡裝之膜組成 (mol 比) Chol- PEG CN 1 I 脂質 HSPC : Choi : TRX-20 v〇 寸 〇 卜 眠 11ΪΓ3 -47- 1362931 (調製例8 ) 除以下述(1)調製之混合脂質做爲膜成份以外,其 他則與調製例4一樣,調製含帶電物質之3,5-兩個十五烷氧 基苯甲脒鹽酸鹽之高載持CPT-11製劑。示如以下。 (1 )調製混合脂質:將4.5 62g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC ) ,1.876g 膽固醇(Choi) ,〇.564g3,5-兩個十 五烷氧基苯甲脒鹽酸鹽(TRX-20 )溶解於加溫爲60 °C之 50 ml第三丁醇後,冰冷、凍結乾燥,調製爲HSPC: Choi: TRX-20 = 5 0 : 42 : 8 (莫耳比)之混合脂質。 除使用7.002g上述調製之混合脂質以外,其他則與 調製例1一樣調製脂質體分散液。 在上述脂質體分散液中,加入相當於0.75莫耳%總脂 質量之聚乙二醇5000-磷脂醯乙醇胺(PEGsooo-PE)之蒸餾 水溶液(3 6.74mg/ml ),於60 °C加溫3 0分鐘導入P E G 5 〇 〇 〇-PE後,與調製例1之(4)—樣,藉由遠隔負荷製料法導入 藥劑,調製高載持CPT-11製劑,組成示於表6。 (調製例9 ) 除以下述(1 )調製之混合脂質做爲膜成份以外,其 他則與調製例4一樣,調製含帶電物質之3,5-兩個十五烷氧 基苯甲脒鹽酸鹽之高載持CPT-1 1製劑。示如以下。
(1 )調製混合脂質:將4.940g氫化大豆磷脂醯膽鹼 (HSPC ) ’ 2.〇60g膽固醇(Choi )溶解於加溫爲60 °C 之50ml第三丁醇後,冰冷、凍結乾燥,調製爲HSPC : -48 - 1362931
Chol = 5 4 : 46 (莫耳比)之混合脂質。 除使用7.002g上述調製之混合脂質以外,其他則與 調製例1 一樣調製脂質體分散液。 在上述脂質體分散液中,加入相當於0.75莫耳%總脂 質量之聚乙二醇5 000-磷脂醯乙醇胺(PEGsooo-PE)之蒸餾 水溶液(3 6.74mg/ml ),於60 °C加溫3 0分鐘導入P E G 5 〇 〇 〇-PE後,與調製例1之(4) 一樣,藉由遠隔負荷製料法導入 藥劑,調製高載持CPT-11製劑,組成示於表7。
-49- 1362931
L % 粒徑 nm Ό (Ν Os σ\ 藥劑載持量 藥劑mol/ 總脂質ϊπ ο 1 0.098 0.107 藥劑濃度 m g/mL CN CN m 00 CN C^J 脂質濃度 總脂質 mol/L 0.049 0.045 磷脂質 mg/mL 寸 ο ο v〇 v〇. ON t-H 塡裝之膜組成 (mol 比) PEG-PE 卜 ο 卜 O 脂質 ° 〇 ^ CN U . .. X pi ^ Η 00 οο (Ν 寸 Ο ιη o 寸 寸 調製例8 ON 卿 ΙΪ1Ϊ3 -50- 1362931 [實施例6] 檢測證明對外水相pH之藥劑封入率的影響。 (調製例1 〇 ) (1)調製混合脂質:秤量7.01g HSPC及2.93g Cho卜 於此等中加入l〇ml無水乙醇,於68 °C加溫溶解。確認已 完全溶解後加入90ml硫酸銨溶液(250mM ),於68 。(:加 溫攪拌。 (2 )製作脂質體:加溫攪拌後,使用加溫爲68 °C之 擠製機,5次通過孔徑0.2 μιη之濾器,其後改換爲孔徑0.1 μηι之濾器,通過5次。導入PEG 5 0 0 0 -DSPE :力□入20.4ml PEG5Q()()-DSPE溶液( 3 6.74mg/ml)於擠製後之樣品使其成 爲具有所定含率(莫耳% )之PEGsoqo-DSPE,於60 °C加 溫攪拌30分鐘,導入PEGsooo-DSPE。冰冷導入後之樣品。 (3 )外水相取代:分別取8ml冰冷之樣品,使用以不 同 pH (pH4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)外水相溶液,具 體言爲卩1^.0'5.0(1〇111]\/1乙酸/10%蔗糖溶液)' pH6.〇 ( 1〇1111^組織胺/10%蔗糖溶液)、pH7.0、8.0、9.0 ( 10»ιΜ Tris/10%蔗糖溶液)充分取代之凝膠管柱,進行外水相取 代。外水相取代後之脂質體分散液磷脂質定量套組’ $量 HSPC濃度。自HSPC濃度求得總脂質量mM。 (4 )封入藥劑:調製10mg/ml濃度之伊立替康鹽酸 鹽(CPT-1 1 ) /RO水(逆滲透膜淨水)溶液。以對上述總 脂質量(mM)可成爲CPT-11/總脂質量=0.16(莫耳/莫耳 -51 - 1362931 )之量,將此伊立替康鹽酸鹽溶液加入脂質體分散液中, 於60 °C攪拌60分鐘,導入伊立替康鹽酸鹽。冰冷導入後 之樣品。以1 QmM組織胺/1 〇%蔗糖溶液(ρΗ6·5 )取代之凝 膠管柱除去封入伊立替康鹽酸鹽後之脂質體分散液中的未 封入藥劑。 上述所得各CPT-11製劑之脂質(HSPC)濃度、藥劑 (CPT-11製劑)濃度及粒徑示於表8。
(藥劑封入率) 依以下式,針對上述各CPT-11製劑,自對於0.16(莫 耳/莫耳)藥劑塡裝濃度之最後藥劑濃度CPT-11之比’算 出藥劑封入效率(%)。 CPT-1 1之封入效率(%) = 最後C/T _ 11 /總脂質(莫耳/莫耳)叫nn 最先C/T _ 11 /總脂質(莫耳/莫耳)
結果示於表8及圖5。如表及圖所示’外水相之PH爲 8.0以下時,CPT-11之封入效率(%)係可以極高達90 %以 上,惟比8.0高時則CP T-1 1之封入效率(% )會降低。 -52- 1362931
8撇 粒徑 (nm) <N 123.8 122.6 124.0 123.5 122.9 124.7 122.4 124.1 123.8 寸 (N 124.1 封入效率 (%) ON o 寸 ON a\ 102.5 98.1 cn Ό On 寸 寸 Os 00 oo On m CN σ\ ON CN CTn 〇 卜 On 卜 Η Μ- 5 ^ Ϊ rrri 、 •N _时 ^ " Μ m ^ 0.163 as in o 0.164 卜 ^T) r— H o 0.154 f—^ o OO V) o 0.148 0.147 0.148 0.120 〇 ^ /—\ H W 5 ^ μ tii! •N ^ W-® C Μ m w \〇 r ·Η o C P T -1 1 製齊!J (mg/mL) On <N (N m m m cn CN m 寸 cn cn <N cn r—Η m <N m 寸 CN rn CN HSPC濃度 (mg/mL) 寸 m (N 卜 CN f H i〇 CN o m CO 寸 <N 卜 cn cn cn 〇 m 寸 <N 00 CN 外水相 pH 寸 v〇 卜 oo ON -53- 1362931 [實施例7 ] 檢測證實外水相pH對藥劑安定性之影響。 在調製例10之(3)使用之各pH的外水相溶液(ρΗ4·0 5 0 ' 60 ' 7.0 ' 8.0 > 9.0 ),具體言 ρΗ4·0、5.0 ( lOmM 乙酸/10%蔗糖溶液),pH6.0 ( 10mM組織胺/10%蔗糖溶液 )’ PH7_0、8.0、9.0 ( lOmM Tris/ΙΟ%蔗糖溶液)之各 lml 中’加入0.7 ml 10mg/ml濃度之伊立替康鹽酸鹽(CPT-11 ) /RO水(逆滲透膜淨水)溶液,於60 °C攪拌60分鐘。 以各外相溶液稀釋上述所得CPT-11溶液爲20倍後,對 5 μΐ試料溶液測定高速液體層析,由以下式算出CPT-1 1之 羥基內酯環之水解率(開環體存在率)(%)。 CPT-1 1 開環體存在率. l〇2xAel()se)}xl〇〇 Aope^CPT-ll開環體巔峰面積 Acl()se = CPT-ll閉環體巔峰面積
結果於圖5。 獲知外水相之pH爲8.0以上時’ CPT-1 1開環體存在率 (%)會增加爲95%以上極爲高。爲維持〇?7'-11之活性, 欲抑制α -羥基內酯環之水解,必須將PH保持爲4.0以下’ 惟由一種安定性(脂質之水解)之觀點,PH係以6·0~7·〇附 近爲宜。有鑑於實施例6之結果可知’導入藥物時之外水 相的pH係以4·0〜7.0爲宜。 -54- 1362931 [實施例8] (調製例1 1 ) (1 )形成脂質體: 秤量70.87g HSPC及29.13g Cho卜於此等中加入100ml 無水乙醇,於68艺加溫溶解。確認已完全溶解後加入 900ml硫酸銨溶液( 25 0mM),於68 °C加溫攪拌。
(2 )製作脂質體 控制脂質體之粒徑:加溫攪拌完後,使用加溫爲68 °C之擠製機,通過5次孔徑l〇〇nm之濾器。
PEG5〇c)()-DSPE 之導入:加入 200ml PEG5〇〇q-DSPE 溶液 (3 6.74mg/ml),使擠製後之樣品成所定之PEG5GG()-DSPE 含有率(莫耳% ),加溫爲6 0 °C攪拌3 0分鐘,導入 PEG5〇〇〇-DSPE。 ( 3 )外液取代 使用錯流過濾系統,對於外水相溶液(l〇mM組織胺 溶液/10%蔗糖溶液(莫耳6.5 ))進行外液取代。外液取 代後之脂質體分散液使用高速液體層析,定量HSPC濃度 及膽固醇濃度以HPSC濃度及膽固醇濃度之總和爲總脂質 濃度’求得封入之伊立替康鹽酸鹽量。 (4 )封入藥劑 調製例10mg/ml濃度之伊立替康鹽酸鹽(cPT_n) -55- 1362931 /R0水(逆透膜淨水)溶液。以對於上述總脂質j 可成爲CPT-11/總脂質量=0.16(莫耳/莫耳)之量 立替康鹽酸鹽溶液加入脂質體分散液,於50 °c 鐘,導入伊立替康鹽酸鹽。導入後之樣品立即冰: I ( mM ) ,將此伊 攪拌20分 (5)除去未封入之藥物 在封入伊立替康鹽酸鹽後之脂質體分散液中 相液’使用錯流過濾系統,除去未封入藥物。 ,加入外 (6)調整濃度 使用高速液體層析定量除去未封入藥物後之 散液中之伊立替康鹽酸鹽,調整爲5.Omg/ml之伊 酸鹽濃度。 脂質體分 立替康鹽
(7)過濾殺菌 使用0.2 μιη之殺菌濾器,對調整濃度後之脂 液進行過據殺菌,塡充於小藥瓶中。 將上述所得CPT-1 1製劑之組成及粒徑示於表 質體分散 9 〇 -56- 1362931
粒徑 B C (N 卜 OS 藥劑載持量 藥劑m 〇 1 / 總脂質mol 1—^ o 藥劑濃度 mg/mL cs ON 寸 脂質濃度 總脂質 e 卜 寸 磷脂質 (HSPC) mg/mL Ο <Ν 塡裝之膜組成 (mol 比) PEG- DSPE 卜 Ο 脂質 t HSPC : Choi 寸 調製例11 -57- 1362931 (調製例6)抗腫瘤效果 將2.5 χΙΟ6細胞/小鼠之人攝護腺癌細胞(PC-3)移植 至小鼠(BALB/c nude、雄、6週齡、日本 Charluse liver公 司)之左鼠蹊部皮下。腫瘤移植後,等到以1/2 · ab2 ( a係 腫瘤之長度,b係短度)所求得之推定腫瘤體積達到4 0mm3 左右(〇天)之翌日開始,每4天計3次(第1、5、9天), 尾靜脈注射調製例1 1調製之CPT-1 1或伊立替康鹽酸鹽生理 食鹽水溶液。以未注射藥劑之小鼠做爲對照群。 求得第1、5、9、12、16、22天之推定腫瘤體積及小 鼠體重。 又,於第22天切出腫瘤測定重量後’依以下算出腫瘤 增殖阻斷率I. R ( % )。 I.R%= ( 1-投予群之平均腫瘤重量/對照群之平均腫瘤 重量)X 1 00
將結果示於表10及圖6與圖7。 對於人攝護腺癌,CPT-n製劑及伊立替康鹽酸鹽生理 食鹽水溶液係與對照群比均示有顯著之腫瘤抑制效果(表 10,圖6)。又,CPT-11製劑係與伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水相比較,具有高抗腫瘤效果。又’兩藥劑均對於小鼠 之體重未予以影響(圖7) ° -58- 1362931
褂一 σ\ cn Ο ο 〇 m Μ ^ 1 卜 00 〇\ 0\ 00 (Ν s w CN ^ 〇s 寸寸 ν〇 N Q oo — ο ο Vi〇 CO Ο zn ώτη] ~t! Pi) G 1 < o 丄| ο ο ο ο ο ο +丨 +1 +1 CS 一 CM o o 〇 +1 +1 +1 锲 S 十1 \〇 γ〇 CN — 寸 v〇 oo l Λ V Ormi S s (N QJ? Ο Ο Ο so so o o 〇 CO rnlmll ^ r-> ¢-¾ 啊 ^ 蘅 ω 1 mo (NO mo 〜 π = B 擦 琺 -½ m 鹌 mi) 脚 05* ϋΐίΒ 胡 V—✓ m 蒙 in 饵 陛 Η f>\ m Pm u m -59- 1362931 (試驗例7 )藥物動態 對於食蟹猿(雄,4~5 齡,Guangxi Research Center of Primate Laboratory Animal)之頭皮靜脈持續投予4分鐘調製 例1 1調製之CPT-1 1製劑或伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液 ,使其做爲伊立替康鹽酸鹽可爲l〇mg/kg。 投予完畢後立即及投予開始後10、30分鐘,及1、6、 24、48、72、168、3 3 6、504小時後抽血,以離心分離得 血漿。在50ml血漿中加入550 μΐ內標溶液B (內標物質之 甲醇溶液)予以離心,以甲醇稀釋1 0 0倍上澄液者做爲總 CPT-11濃度測定用試料。另一方面,在50ml各血漿中加入 200ml內標溶液A (內標物質之0.147莫耳"Η3Ρ04溶液) ,離心分離(l〇〇,〇〇〇xg,30分鐘,1〇 °C )其中之200ml ,自上層部分離100ml予以固相萃取,以萃取液做爲游離 CPT-11 濃度 SN-38 濃度及 SN-38C ( SN-38 10-0 -葡糖苷酸) 濃度測定用試料。所得試料以LC/MS/MS分別測其各濃度 。結果示於圖8 -1 1。 結果’總CPT-1 1濃度係在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水 溶液時係投予後急速地減少,至1小時即減少爲未達定量 下限値(< 1 m g / m 1 ) 。C P T -1 1製劑係投予後1小時至4 8小時 爲止時大約以指數函數地減少,與伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水溶液相比,可以看出顯著地延長了滞留時間(圖8) 〇 游離CPT-11濃度係在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液 時係投予完立即爲最高濃度,其後過6小時爲止時係比較 -60- 1362931 快,其後才緩慢地減少。另一方面CPT-11製劑係開始投予 後1小時達最高濃度,其後再緩慢地減少(圖9)。 SN-38濃度係在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液中係 投予後立即爲最高濃度,其後快速地減少,至24小時即成 爲未達定量下限(<〇.〇〇〇5mg/ml )。另一方面CPT-1 1製劑 係投予完後立即達最高濃度,其後維持1小時後才減少,6 小時至48小時之間大約維持爲一定(圖1 0 )。
SN-38G濃度係投予CPT-11製劑,伊立替康鹽酸鹽生 理食鹽水溶液時均在投1小時後爲止急速增加,其後一邊 維持濃度僅稍爲減少而已(圖1 1 )。 (試驗例8 )血液毒性 使調製例11調製成爲伊立替康鹽酸鹽量3、10及 30mg/kg,使伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液成爲30mg/kg ,對大鼠(CD ( SD ) IGS鼠,雄,7週齡,日本Charlus Hver)尾靜脈投予。 在藥物投予前,及投予後第2、4、6、13、20、27天(4 週),自頸靜脈抽取〇.4ml之血,以血液自動分析裝置( Sysmex XT-2000i,Sismex)測定嗜中性白血球數及淋巴細胞 數。結果示於圖12及圖13。 嗜中性白血球係投予藥劑後均在投予後立即見到暫時性 之減少,但其後就很快地恢復。減少之程度係10及3 Omg/kg 者較3mg/kg爲大,而恢復期則30mg/kg可見到急速之增加。 兩個投予劑之30mg/kg中,在嗜中性白血球之變化上並沒有 -61 - 1362931 見到顯著之差異(圖12)。淋巴細胞數係投予後_LL即見到有 減少傾向,但其程度不大,未.見到各投予量之間之差異(圖 13)。 由以上結果可知,在CPT-1 1製劑雖可見到對嗜中性白 血球有暫時性之極弱的血液毒性,但只與同用量之伊立替康 鹽酸鹽生理食鹽水溶液之血液毒性大約同程度而已。 [實施例9] (調製例1 2 ) (1 )形成脂質體 秤量 65.250g HSPC 及 26.800g Choi 及 8.000g TRX-20 . 於此等中加入100ml無水乙醇,於68 °C加溫溶解。確認已 完全溶解後加入900ml硫酸銨溶液( 250mM),於68 °C加 溫攪拌。 ( 2 )製作脂質體 加溫攪拌後,使用加溫爲68 °C之擠製機,5次通過孔 徑 100nm之濾器。導入 PEG5〇()()_DSPE :加入 200ml PEG 5 000 -DSPE溶液( 3 6.74mg/ml)於擠製後之樣品使其成爲具有所 定含率(莫耳% )之PEG5QQQ_DSpE,於6〇 。(:加溫攪拌30 分鐘。 (3 )外液取代 使用錯流過濾系統,對冰冷之樣品進行外水相溶液( -62- 1362931 10mM組織胺/10%蔗糖溶液(ρΗ6·5))之外液取代。使用 高速液體層析定量外液取代後之脂質體分散液的膽固醇濃 度及TRX-20濃度。以HPSC濃度,膽固醇濃度,及trx-20濃度之總和做爲總脂質濃度,求得欲封入之伊立替康 鹽酸鹽量。 (4 )封入藥劑
調製10mg/ml濃度之伊立替康鹽酸鹽(CPT-11) /R0 水(逆滲透膜淨水)溶液。以對上述總脂質量(mM )可 成爲CPT-11/總脂質量=0.16 (莫耳/莫耳)之量,將此伊立 替康鹽酸鹽溶液加入脂質體分散液中,於50 。(:攪拌20分 鐘,導入伊立替康鹽酸鹽。立即冰冷導入後之樣品。 (5)除去未封入之藥物 在封入伊立替康鹽酸鹽後之脂質體分散液中加入外水 •I®相,使用錯流過濾系統除去未封入之藥物。 (6 )調整濃度 使用高速液體層析定量除去未封入藥物後之脂質體分 散液中之伊立替康鹽酸鹽,調整爲5.Omg/ml之伊立替康鹽 酸鹽濃度。 (7 )過濾殺菌 使用0.2 μιη之殺菌濾器,對調整濃度後之脂質體分散 -63- 1362931 液進行過濾殺菌,塡充於小藥瓶中。 將上述所得CPT-11製劑之組成及粒徑示於表11。
-64 - 1362931
粒徑 nm o <N ON 藥劑載持量 1藥劑mol/ 總脂質mol 〇 藥劑濃度 ε to B v〇 寸 脂質濃度 總脂質 2 a 寸 寸 磷脂質 (HSPC) mg/mL oo 塡裝之膜組成 (m ο 1 比) I PEG- DSPE 卜 ο 脂質 HSPC : Choi : TRX-20 oo (N 寸 ο 調製例1 2 -65 - 1362931 (試驗例9)抗腫瘤效果 將2xl06細胞/小鼠之人大腸癌細胞(HCT 116)移植 至小鼠(BALB/c nude、雄、6週齡、日本 charluse liver公 司)之左鼠蹊部皮下。腫瘤移植後,等到以1/2 · ab2 ( a係 腫瘤之長度,b係短度)所求得之推定腫瘤體積達到90mm3 左右(〇天)之翌日開始,每4天計3次(第1、5、9天), 尾靜脈注射調製例12調製之CPT-11或伊立替康鹽酸鹽生理 食鹽水溶液。以未注射藥劑之小鼠做爲對照群。 注射後’於第5、8、1 2、1 6、2 1天後求得推定腫瘤體 積及小鼠之體重。又,注射第2 1天後切割腫瘤測出重量後 ,依試驗例6中所示式,算出腫瘤增殖阻斷率I.R. ( % )。 結果示於表12及圖14與圖15。 對於人大腸癌,CPT-11製劑及伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水溶液係與對照群比較均示有顯著之腫瘤抑制效果(表 12,圖Η )。又,CPT-1 1製劑係與伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水相比較,具有高抗腫瘤效果。又,兩藥劑均對於小鼠 之體重未予以影響(圖15)。 -66- 1362931
褂一 ^ 〇〇 o o 寸寸 V J 1 — 〇 00 os m 卜 l〇 t—^ oo ro 寸 w"> Q Γπτπΐί V〇 — 卜 CO Ό 〇〇 寸 _i GO \|τττΐ| 調 C r H o +1 — o o o o o +1 +1 +1 CZ5 CZ5 *—< o o o +1 +1 +1 锲 S ^s.1 — VO 寸 v〇 f—« rn unnJ S 画 C N Cm o o 〇 1、 1、 v j o o 〇 cc V_✓ /-N mind] in iT) 啊 y | 卜 · IT) 觀 w 1 00^0 — m -^ ^ s 柴 狭 /*—s (N m 鸲 鏘 mil 勘 Fffg ιϋι3 傷 蘅 跏 仁i 雜 r-Η m H 氍 Ph u 顬 -67- 1362931 (試驗例1 ο)單次投予時之藥物動態 對於麻醉下,大腿靜脈及大腿靜脈施予套管後,裝在 Bollmancage之大鼠(CD ( SD) IGS大鼠,雄,7週齡,日 本Charluse liver),以調製例12調製的CPT-11製劑或伊立 替康鹽酸鹽生理食鹽水稀釋溶液做爲伊立替康鹽酸鹽可成 爲3、10及30mg/kg,自大脈靜脈套管投予靜脈內。 投予後經2、10、30分鐘,1、3、6、9、24及30小時, 自大腿動脈套管抽血,離心分離採取50mi血漿,以內標液 200ml予以稀釋。在50ml此內標液稀釋血漿中加入500ml甲 醇,經攪拌後,以0.146M H2P〇4稀釋爲10倍者做爲總CPT-11濃度測定用試料。另一方面,超離心分離(100, OOOxg, 30分鐘,10 °C ) 20 0ml內標液稀釋血漿,自上層部分離 50ml並以0.146M H3P〇4稀釋爲10倍者做爲測定游離CPT-11 濃度,SN-38濃度及SN-38G濃度測定用試料。所得試料 依 Kurita 等之方法(J. Chromatogr B 724,p3 3 5 -3 44,1999 ),於PROSPEKT-HPLC分別測定其各濃度,結果示於圖 16~ 1 9。 總CPT-11濃度在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液中係 在各投予量(3、10及30mg/kg)下,投予後均急速地減少 ,自0.5 ~9小時爲止係指數函數地減少。另一方面,CPT-11製劑則投予10分鐘後至30小時爲止大約以指數函數地減 少,與伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液相比,確認可顯著 地延長滯留時間(圖1 6 ) ^ CPT-1 1製劑投予後之游離CPT-11濃度係投予後均爲自 -68- 1362931 10分鐘後至30小時爲止,大約以指數函數地減少,確認與 伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液相比顯著地延長了滯留時 間(圖1 7 )。 SN-3 8濃度在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液中係各 投予量下均爲投予後立即急速減少,惟1小時以後之消失 變成緩慢,30mg/kg時係3小時後爲止大約維持一定之濃度 。另一方面,CPT-11製劑係3及10mg/kg時投予後3〜6小時 可達最高濃度,然後緩慢地減少。30mg/kg時係投予後立 即達最高濃度’其後1小時爲止爲急速減少,惟其後9小時 爲止,大約可維持一定之濃度(圖18)。 SN-3 8G濃度在伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液時, 各投予量均可在投予10分鐘後達最高濃度,其後至1小時 爲止較爲快速,其後則緩慢地滅少。另一方面,CPT-1 1製 劑則投予後1小時爲止’濃度係增加,其後維持該濃度僅 稍爲減少(圖19)。
[實施例10] 針對做爲本發明高載持CPT-1 1製劑之調製例9調製的 CPT-1 1製劑試驗。 (試驗例11)抗腫瘤效果 以移植針移植2~3mm四方形之人大腸癌細胞(HT-29 )於小鼠(BALB/c nude ’雄,6週齡,日本Clea公司)之 鼠蹊部皮下。移植腫瘤後,以1/2 . ab2 ( a係腫瘤之長度, -69- 1362931 b係短距)求得之推_定腫瘤體積達到100mm3左右時(第1天 )與4日後(第5天)及8日後(第99天)之計3次,尾靜脈 注射調製例9調製之CPT-1 1製劑或伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水溶液。以未注射藥劑之小鼠做爲對照群。 首次注射後,於4、8、12、17、21天後求得推定腫瘤 體積及小鼠之體重。首次注射後第21天取出腫瘤測定重量 後,藉由試驗例6所示式,算出腫瘤增殖阻斷率I.R. (%)
結果不於表13,圖20及圖21。 對人大腸癌,CPT-1 1製劑及伊立替康鹽酸鹽生理食鹽 水溶液均較對照群示有更強之腫瘤增殖抑制效果。又, CPT-1 1製劑係與伊立替康鹽酸鹽比較,示有高抗腫瘤效果 (表13,圖20)。又,兩種藥劑均對小鼠之體重沒有影響 (圖 21 )。 -70- 1362931
ει撇 抑制率 1 69.4 84.1 92.0 CN ON Ο 〇〇 寸寸 r〇 CN 寸 /—N Q 剩 〇〇 ι|τττ]| 調 ΰ 徵 α> tirmi S bO 0.58±0.29 0.1 8±0.15 0.09±0.06 0.05±0.03 0.36±0.41 0.44±0.36 0.3 3±0.32 劑量 (mg/kg ) 1 25 50 100 25 50 100 對照群 CPT-1 1製齊!((調製例9) 鹽酸伊立替康生理食鹽水溶液 -71 1362931 (試驗例1 2 )由單次投予時之藥物動態 將2.5 X105細胞/小鼠之小鼠纖維肉瘤(Meth A )移至 小鼠(BALB/c,雄,7週齡,日本S.L.C)之鼠蹊部皮 下。腫瘤移植後放置20天,使腫瘤增殖後,使調製例9調 製之CPT-11製劑或伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液做爲 l〇mg/kg之伊立替康鹽酸鹽濃度,投予鼠靜脈。 投予後經10、30分鐘及1、3、6、12、24、48、96小時 後心臟抽位,經離心分離(1 5,000pm,1分鐘,0 °C )得 到血漿。測定投予CPT-11製劑之動物的血漿中CPT-11濃度 係以0.146M 1^?04稀釋所得血漿爲50倍後,以加入等量之 內標液者做爲測定用試枓。投予CPT-11製劑之動物的血漿 中SN-38及SN-38G濃度,及投予伊立替康鹽酸鹽生理食 鹽水溶液之動物的血漿中藥物濃度係以0.146M H3P04稀釋 所得血漿爲4倍後,以加入等量內標液者爲測定用試料。 心臟抽血後,自鼠蹊部割出腫瘤,以生理食鹽水洗淨 後,測定腫瘤重量。加入5倍量之冰冷內0.146M 113?04後 ,以特弗龍勻漿器使之成均質物。在20 0ml均質物中加入 50ml內標液及0.75ml甲醇予以懸濁後,以-20°C放置一夜, 遠心分離(1 5,000rpm、3分鐘、0°C )後,在0.1ml上澄液中 加入0.4ml 0.146M H3P04,做爲測定HPLC用試料。所得測 定用試料係依Kurita等之方法(J. Chromatogr B 724, P3 3 5 -3 44, 1 999 ) > 以 P R Ο S P E K T - Η P L C 測定各濃度。結果 示於圖22~27。 CPT-1 1之血漿中濃度係因藉由脂質體製劑化之關係, -72- 1362931 CPT-l 1製劑係與與伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液相比較 ,血漿中濃度-時間曲線下面積爲增302倍,平均滯留時間 爲增加4.4倍(圖22)。另一方面,SN-3 8之血漿中濃度係 藉由脂質體製劑化之關係,血漿中濃度-時間曲線下面積 增加至2.5倍,亦延長了平均滯留時間(圖23 )。又SN-3 8 G之濃度係因藉由脂質體化之關係而血漿中濃度-時間曲 線下面積增加至1.8倍,平均滯留時亦被延長(圖24)。
伊立替康鹽酸鹽之腫瘤組織內藥物濃度係在伊立替康 鹽酸鹽生理食鹽水溶液中係投予後0.5小時達到最高腫瘤 組織中濃度後,以2、3小時之半衰期即減少。另一方面, CPT-1 1製劑係投予後濃度會慢慢增加,1 2小時後達最高腫 瘤組織中濃度,其後較伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液緩 慢地減少,腫瘤組織中濃度-時間曲線下面積係增加爲9.0 倍(圖2 5 )。 SN-3 8之腫瘤組織內藥物濃度係伊立替康鹽酸鹽生理 食鹽水溶液時爲投予後經10鐘達最高腫瘤組織中濃度後慢 慢減少。CPT-l 1製劑係投予後約6小時爲止係慢慢上昇, 其後至48小時爲止係大約維持爲一定。其後大約與伊立替 康鹽酸鹽生理食鹽水溶液一樣以消失半衰期減少,腫瘤組 織中濃度-時間曲線下面積係增加3.9倍(圖26)。 SN-3 8 G之腫瘤組織內藥物濃度係在伊立替康鹽酸鹽生 理食鹽水溶液時爲投予後經10分鐘達最高腫瘤組織中濃度 後慢慢減少。CPT-1 1製劑時則投予後慢慢上昇,投予後1 2 小時達最高腫瘤組織濃度,其後慢慢減少(圖27 )。 -73- 1362931 由此可知’ CPT-11製劑係較伊立替康鹽酸鹽生理食鹽 水溶液具更高之血中滯留性及腫瘤移行性》 [實施例11] 做爲本發明之高載持CPT-11製劑,測試調製例7調製 之CPT-1 1製劑。 (試驗例13)藉由投予藥劑3次所得抗腫瘤效果 將2.5 xl05cell/小鼠之小鼠纖維肉瘤(Meth A)移植 於小鼠(BALB/c,雌,7週齡,日本Clea公司)之鼠溪部 皮下。移植腫瘤後第7、9、11天,或第7、11、15天計3次 ,尾靜脈注射調製例7調製之CPT.1 1製劑或伊立替康鹽酸 鹽生理食鹽水溶液。以未注射藥劑之小鼠爲對照群。 注射後第2 1天切割出腫瘤予以測定後,依試驗例6所 示式’算出腫瘤增殖阻斷率I.R ( %)。結果示於表14。
針對小鼠纖維肉瘤’ CPT-11製劑及伊立替康鹽酸鹽生 理食鹽水溶液係均與對照群相比具有顯著之腫瘤增殖抑制 效果。又’ CPT-1 1製劑係比伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶 液具有更高之抗腫瘤效果。又,兩種藥劑均對小鼠之體重 沒有任何影響。 -74- 1362931
掛 一 〇\ cs 〇\ ο v〇 m Q 寸 1 ON VO VO ν〇 ON <N Γ- 00 ON (Ν 〇〇 Os m /<—N Q _ GO 〇 m r*·** < — o OO CN — 寸 Γ-- CN 寸一 Γ— ON 寸寸 獅 C o +1 o o +1 +1 Ο Ο +1 +1 o o +l +l Ο ο +ι +ι 擊 ω 〇 oo ΛΪ /—s 卜 οο ΛΟ — Ό ΟΝ Ό /Tv. rvl tlmil S s (N V N o o ν Ν — <ζ> o o \J\ C N y—^ bO ΠΙ r-H in ^ u-i in • H mil 勸 1 ON On Os 0's n 卜卜 卜卜 Λ Λ 卜卜 r\ r> 卜卜 /—N mlml] 如 /-¾ ¢-¾ 啊 ^ .—, ^ 1 ^ 〇 ° ο ° ο ° ° T~H B 's—✓ 燦 璨 链 独 * ,*—\ m /*—Ν m 鸲 鉍 mt1 棚 mil st1 0Η» mia ffig πη3 舷 Ν—✓ 舷 蘅 龅 蘅 撕 m 仁1 r—Η w Η 陛 Η 氍 Η A 氍 Ρη U 劚 Ρη U m -75- 1362931 (試驗例14)投予1次或2次藥劑之抗腫瘤效果 將2.5 xl05cell/小鼠之小鼠纖維肉瘤(Meth A)移植 於小鼠(BALB/c,雌,7週齡,日本Clea公司)之鼠蹊部 皮下。移植腫瘤後第7、11天,計1次或2次,尾靜脈注射 調製例7調製之CPT-1 1製劑或伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水 溶液。以未注射藥劑之小鼠爲對照群。 注射後第2 1天切割出腫瘤予以測定後,依試驗例6所 示式,算出腫瘤增殖阻斷率I.R(%)。結果示於表15。 針對小鼠纖維肉瘤,CPT-1 1製劑及伊立替康鹽酸鹽生 理食鹽水溶液係除去一部份伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶 液以外,其他均與對照群相比具有顯著之腫瘤增殖抑制效 果。又,CPT-11製劑係比伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液 具有更高之抗腫瘤效果。又,兩種藥劑均對小鼠之體重沒 有任何影響。
-76- 1362931
>01 撇 (0/{>) (·Crs+IIGSUI ”3) (se/MUI)褂蕋臣 s_锲麵 0刮蜮 _蘅 卜 oo — CN O 卜 00 CN ' <0 OO Ο Ό 寸 — CN 1 寸 σ\ ο 寸寸卜 ο Ό m <N <N m —〇 in v〇 (N 寸 m 寸 寸寸 — 寸》η 〇〇 ON 寸 — (N m 寸 CS Ον 一 〇〇 〇3 v〇 cn '—1 CD Γ^~ ί〇 寸 H '—· CN oo 寸 寸 1〇 卜 寸 ON ON CO CO < ON CN CO CM VO 寸 〇 +1 m o o o +1+1+1 m 卜 v〇 σ\ t> a> 〇 〇 〇 +1 +1 +1 (N — 寸 〇〇 v〇 m ο ο +丨 +1 ο — 卜寸 Ο 〇 +1 +1 〇 00 寸 ON 〇 〇 〇 +1 +1 +1 ^ m m 0Λ V〇 V〇 〇 〇 〇 +1 +1 +1 on m oo 寸 m o cn t-H CN (N (N τ-Η CN '―< > ^ ^ c^b (N (N (N 1 卜 卜卜 卜卜卜 τ—H t—Η 1—^ T-H T < 4 卜卜卜 ι-H i—H r—H y-^ 卜卜卜 1 • o (N cn »n r*H • in o <N 〇j i〇 们 〇 cn 〇 cn .l〇 o CN 〇sj vn 〇 (N OJ … 對照群 /—s 卜 E \\m s—✓ W 鏘 1 H Plh ϋ 鹽酸伊立替康生理食鹽水溶液 CPT-1 1製劑(調製例7) 鹽酸伊立替康生理食鹽水溶液 CPT-1 1製劑(調製例7) 鹽酸伊立替康生理食鹽水溶液 -77- 1362931 [實施例12] 做爲本發明之高載持CPT-11製劑,測試調製例8調製 之CPT-I 1製劑。 (試驗例15)抗腫瘤效果 將2~3mm方形之人肺癌細胞(QG56)以移植針移植於 小鼠(BALB/c nude,雄,6週齡,日本Clea公司)之鼠暖 部皮下。移植腫瘤後,藉由1/2· ab2 (a係腫瘤之長度,b 係寬度)所求得之推定腫瘤體積達到1mm3左右之時間(第 1天)與其4天後(第5天)及8天後(第9天)計3次,尾靜 脈注射調製例8調製之CPT-1 1製劑或伊立替康鹽酸鹽生理 食鹽水溶液。未注射藥劑之小鼠做爲對照群。 第一次注射後,於4、8、12、16、21天後求得推定腫 瘤體積及小鼠之體重。又,第一次注射後第21天取出腫瘤 ,測定重量後,依試驗例6所示式算出腫瘤增殖阻斷率I.R. φβ ( % )。結果示於表16,圖28及圖29。 CPT-11製劑及伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液係對於 人肺癌均比對照群更具有顯著之腫瘤增殖抑制效果。又, CPT-1 1製劑係比伊立替康鹽酸鹽生理食鹽水溶液具有更高 之抗腫瘤效果(表16,圖28)。又,兩種藥劑均對小鼠之 體重沒有影響(圖29)。 78- 1362931
褂一 〇 m (N Ό 卜 (N 嘉 ^ 1 Os 〇\ 0\ to 00 卜 S Cs ON Cn m 寸 v〇 /<—*s Q ¢3 cn 1 < Cvl CN O 〇 〇 〇 CO y—i OO 寸 l〇 — ιίτττ]| nllm G 〇 〇 〇 〇 o o o crt +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 锲 S 1—H Λν m (N cn i«*s j^k /«—*. oo m tlmil S S VN CN o o o oo on r-Ή DO v_/ mljn]] 如 r-s —» 、 1 π O (N ^ ° 〇 <N 敕 ω ε T—H 燦 -½ m 冕 舭 m m" 脚 @F iii® S—✓ m m 龅 m t H 陛 H 氍 u m -79- 1362931 【圖式簡單說明】 圖1示實施例1調製之CPT-11製劑在37 °C的製劑加速 安定性試驗之結果(釋出率)圖。 圖2示實施例3調製之CPT-11製劑在37 °C的製劑加速 安定性試驗之結果(釋出率)圖。 圖3示實施例3調製之CPT-11製劑在37 °C的製劑加速 安定性試驗之結果(粒徑)圖。
圖4示血中滯留性試驗中於注射後採血時間之血漿( Plasma)中伊立替康鹽酸鹽濃度圖。 圖5示對CPT-11封入效率(%)與開環體存在率(%) 下之外水相pH値之關係圖。 圖6係本發明之實施例8調製之CPT-1 1製劑的抗腫瘤效 果,以推定之腫瘤體積的經久變化予以表示之圖。 圖7係本發明之實施例8調製之CPT-11製劑的抗腫瘤效 果,以體重之變化予以表示之圖。
圖8示實施例8中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血漿 中總CPT-1 1濃度變化圖。 圖9示實施例8中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血漿 中游離CPT-1 1濃度變化圖。 圖10示實施例8中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血 漿中SN-38濃度變化圖。 圖1 1示實施例8中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血 漿中SN-38G濃度變化圖。 圖12示實施例8調製之CPT-1 1製劑的血液毒性(淋巴 -80- 1362931 細胞)圖。 圖13示實施例8調製之CPT-11製劑的血液毒性(嗜中 性白血球)圖。 圖14係本發明之實施例9調製之CPT-1 1製劑的抗腫瘤 效果,以推定之腫瘤體積之經久變化予以表示之圖。 圖15係本發明之實施例9調製之CPT-11製劑的抗腫瘤 效果,以體重變化予以表示之圖。
圖16示實施例9中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之血 漿中總CPT-1 1濃度變化圖。 圖17示實施例9中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血 漿中游離CPT-1 1濃度變化圖。 圖18示實施例9中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血 漿中SN-38濃度變化圖。 圖19示實施例9中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之血 漿中SN-38G濃度變化圖。 圖2 0係本發明之實施例10調製之cpt-1 1製劑的抗腫瘤 效果’以推定之腫瘤體積之經久變化予以表示之圖。 圖21係本發明之實施例10調製之CPT-11製劑的抗腫瘤 效果,以體重變化予以表示之圖。 圖22示實施例1〇中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之血 漿中CPT-11濃度變化圖。 圖23示實施例10中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之血 漿中SN-38濃度變化圖。 圖24示實施例10中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之血 -81 - 1362931 漿中SN-38G濃度變化圖。 圖25示實施例10中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之腫 瘤中CPT-1 1濃度變化圖。 圖26示實施例1〇中CPT-1 1製劑的藥物動態試驗中之腫 瘤中SN-38濃度變化圖。 圖27示實施例1〇中CPT-11製劑的藥物動態試驗中之腫 瘤中SN-38G濃度變化圖。
圖28係本發明之實施例12調製之CPT-11製劑的抗腫瘤 效果,以推定腫瘤體積之經久變化予以表示之圖。 圖29係本發明之實施例12調製之CPT-1 1製劑的抗腫瘤 效果,以體重變化予以表示之圖。 -82-

Claims (1)

1362931 杏禾·: 丨〇ύ年'月(1日修(更)正本 第094118012號專利申請案中文申請專利範圍修正本 民國101年1月19日修正 十、申請專利範園 1· 一種伊立替康製劑,其特徵爲,以含有磷脂質做爲 主膜材料之脂質雙重膜所形成,僅外表面以含有親水性高 分子之表面改性劑所改性而成之脂質體上,於該脂質體之內 水相與外水相之間使用離子梯度,將伊立替康及/或其鹽, φ 以至少0.1莫耳/莫耳(藥劑莫耳/總脂質量莫耳)之濃度內 封者。 2.如申請專利範圍第1項之伊立替康製劑,其中該離子 梯度爲質子濃度梯度,具有該內水相側之pH値爲較外水相 側之pH爲低之pH梯度者。 3.如申請專利範圍第2項之伊立替康製劑,其中該pH 梯度係藉由銨離子濃度梯度及/或具有可被質子化之胺基的 有機化合物濃度梯度所形成者。
4 ·如申請專利範圍第1〜3項中任一項之伊立替康製劑, 其中該脂質體爲進而含有該磷脂質以外脂質及/或表面改性 劑者。 5. 如申請專利範圍第4項之伊立替康製劑,其中該表面 改性劑係含有具鹼性官能基之化合物者。 6. —種醫藥組成物’其特徵爲含有如申請專利範圍第1 〜3項中任一項之伊立替康製劑者。 7 .如申請專利範圍第1項之伊立替康製劑,其中於3 7 °C 1362931 下1個月 8. 項中任 9. 項中任 以上,4°C下6個月以上爲穩定。 -種醫藥組成物,其特徵爲含有如申請專利範圍第4 -項之伊立替康製劑者。 -種醫藥組成物,其特徵爲含有如申請專利範圍第5 -項之伊立替康製劑者。
-2-
TW094118012A 2004-06-01 2005-06-01 Irinotecan formulation TWI362931B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004163742 2004-06-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200600095A TW200600095A (en) 2006-01-01
TWI362931B true TWI362931B (en) 2012-05-01

Family

ID=35462721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW094118012A TWI362931B (en) 2004-06-01 2005-06-01 Irinotecan formulation

Country Status (24)

Country Link
US (1) US7846473B2 (zh)
EP (1) EP1752150B1 (zh)
JP (1) JP4885715B2 (zh)
KR (1) KR100889139B1 (zh)
CN (1) CN1960729B (zh)
AP (1) AP2255A (zh)
AR (1) AR049137A1 (zh)
AU (1) AU2005249314B2 (zh)
BR (1) BRPI0511753A (zh)
CA (1) CA2567857C (zh)
CR (1) CR8768A (zh)
EA (1) EA011612B1 (zh)
EC (1) ECSP067041A (zh)
ES (1) ES2594621T3 (zh)
GE (1) GEP20094620B (zh)
IL (1) IL179558A0 (zh)
MX (1) MXPA06013874A (zh)
NO (1) NO20066074L (zh)
NZ (1) NZ551748A (zh)
TN (1) TNSN06395A1 (zh)
TW (1) TWI362931B (zh)
UA (1) UA85099C2 (zh)
WO (1) WO2005117878A1 (zh)
ZA (1) ZA200610204B (zh)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101376895B1 (ko) 2004-05-03 2014-03-25 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
US20090196918A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-06 University Of Kentucky Research Foundation Liposomal formulations of hydrophobic lactone drugs in the presence of metal ions
AU2009249403A1 (en) * 2008-05-19 2009-11-26 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions comprising novel cationic lipids
JPWO2010058840A1 (ja) * 2008-11-20 2012-04-19 テルモ株式会社 リポソームからの薬物放出手段および放出性評価法
RU2526114C2 (ru) 2009-12-03 2014-08-20 Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. Липосомы иринотекана или его солей, способ их получения
CN103120645B (zh) * 2009-12-03 2015-03-11 江苏恒瑞医药股份有限公司 伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法
US10980798B2 (en) 2011-11-03 2021-04-20 Taiwan Liposome Company, Ltd. Pharmaceutical compositions of hydrophobic camptothecin derivatives
CA2850955C (en) 2011-11-03 2019-11-19 Taiwan Liposome Company, Ltd. Pharmaceutical compositions of hydrophobic camptothecin derivatives
KR101842279B1 (ko) * 2012-03-29 2018-03-26 우석대학교 산학협력단 이리노테칸의 안정성증진을 위한 주사제용 조성물
US9717724B2 (en) 2012-06-13 2017-08-01 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies
AU2013202947B2 (en) 2012-06-13 2016-06-02 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan
EA023079B1 (ru) * 2012-12-24 2016-04-29 Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" Способ получения липосомальной формы иринотекана (варианты)
CN104906586A (zh) * 2014-03-10 2015-09-16 中国科学院上海药物研究所 一种盐酸伊立替康复合磷脂组合物、制备方法及其应用
CN105796495B (zh) * 2014-12-29 2020-10-23 南京绿叶制药有限公司 一种盐酸伊立替康脂质体药物组合物及其制备方法
CN105982857B (zh) * 2015-02-09 2019-03-08 湖南科伦药物研究有限公司 一种盐酸伊立替康脂质体组合物及其制备方法
ES2589320B2 (es) * 2015-04-14 2017-06-01 Universidad Politécnica de Madrid Sistema de compartimentación de espacios con membranas enrollables
US11318131B2 (en) 2015-05-18 2022-05-03 Ipsen Biopharm Ltd. Nanoliposomal irinotecan for use in treating small cell lung cancer
KR101646181B1 (ko) 2015-08-18 2016-08-05 한양대학교 에리카산학협력단 이리노테칸 함유 이중역상 온도감응성 수용성 겔 조성물
CA2992789A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Ipsen Biopharm Ltd. Combination therapy using liposomal irinotecan and a parp inhibitor for cancer treatment
EP3791876A1 (en) 2015-08-21 2021-03-17 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating metastatic pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan and oxaliplatin
MX2018004328A (es) 2015-10-16 2018-08-01 Ipsen Biopharm Ltd Composiciones farmaceuticas estabilizantes de camptotecina.
SG11201903615WA (en) * 2016-11-02 2019-05-30 Ipsen Biopharm Ltd Treating gastric cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan, oxaliplatin, 5-fluoruracil (and leucovorin)
KR102066402B1 (ko) * 2017-12-22 2020-01-15 대화제약 주식회사 이리노테칸 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 경구투여용 약제학적 조성물
CN109260155B (zh) 2018-11-05 2021-04-06 杭州高田生物医药有限公司 伊立替康脂质体制剂及其制备与应用
KR102185475B1 (ko) * 2019-06-20 2020-12-02 대화제약 주식회사 이리노테칸 자유 염기를 포함하는 경구투여용 약학 조성물
AU2022367142A1 (en) * 2021-10-15 2024-03-28 Kunshan Xinyunda Biotech Co., Ltd. Composition containing antitumor drug, and preparation method therefor and use thereof

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6019790A (ja) 1983-07-14 1985-01-31 Yakult Honsha Co Ltd 新規なカンプトテシン誘導体
IL91664A (en) 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
EP0721328A4 (en) 1993-09-27 1997-09-17 Smithkline Beecham Corp CAMPTOTHECIN FORMULATIONS
US5827533A (en) 1997-02-06 1998-10-27 Duke University Liposomes containing active agents aggregated with lipid surfactants
US6090407A (en) 1997-09-23 2000-07-18 Research Development Foundation Small particle liposome aerosols for delivery of anti-cancer drugs
DK1121102T3 (da) 1998-09-16 2003-08-11 Alza Corp Liposomindesluttede topoisomeraseinhibitorer
ES2327025T3 (es) 1999-06-25 2009-10-23 Terumo Kabushiki Kaisha Liposomas.
JP2001064158A (ja) * 1999-06-25 2001-03-13 Terumo Corp リポソーム
US6352996B1 (en) 1999-08-03 2002-03-05 The Stehlin Foundation For Cancer Research Liposomal prodrugs comprising derivatives of camptothecin and methods of treating cancer using these prodrugs
ATE309787T1 (de) * 2000-06-30 2005-12-15 Inex Pharmaceuticals Corp Verbesserte liposomale camptothecine und deren verwendungen
JP4778679B2 (ja) * 2001-10-03 2011-09-21 セレーター ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 併用薬剤を送達するための組成物
IL161187A0 (en) 2001-10-03 2004-08-31 Celator Technologies Inc Liposome compositions containing metal ions and therapeutic agents
JP4555569B2 (ja) * 2001-11-13 2010-10-06 セレーター ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド 増強された血中安定性を有する脂質キャリア組成物
DE60222580T2 (de) * 2001-11-13 2008-06-12 Celator Pharmaceuticals, Inc. Lipidträgerzusammensetzungen und verfahren zur verbesserten wirkstoffzurückhaltung
EP1608338A1 (en) * 2003-04-02 2005-12-28 Celator Technologies Inc. Pharmaceutical compositions containing active agents having a lactone group and transition metal ions
KR101376895B1 (ko) 2004-05-03 2014-03-25 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain

Also Published As

Publication number Publication date
EA011612B1 (ru) 2009-04-28
EA200602246A1 (ru) 2007-04-27
ES2594621T3 (es) 2016-12-21
JP4885715B2 (ja) 2012-02-29
AU2005249314A1 (en) 2005-12-15
CR8768A (es) 2007-08-28
KR20070037440A (ko) 2007-04-04
EP1752150A1 (en) 2007-02-14
CA2567857A1 (en) 2005-12-15
ZA200610204B (en) 2008-01-30
BRPI0511753A (pt) 2008-01-02
US7846473B2 (en) 2010-12-07
AU2005249314B2 (en) 2008-09-11
GEP20094620B (en) 2009-02-25
AP2255A (en) 2011-07-21
AR049137A1 (es) 2006-06-28
AP2006003837A0 (en) 2006-12-31
KR100889139B1 (ko) 2009-03-17
TNSN06395A1 (en) 2008-02-22
CA2567857C (en) 2009-12-22
CN1960729B (zh) 2012-04-11
JPWO2005117878A1 (ja) 2008-04-03
WO2005117878A1 (ja) 2005-12-15
ECSP067041A (es) 2006-12-29
US20080069868A1 (en) 2008-03-20
EP1752150A4 (en) 2012-06-20
NO20066074L (no) 2007-02-28
CN1960729A (zh) 2007-05-09
IL179558A0 (en) 2007-07-04
EP1752150B1 (en) 2016-08-31
NZ551748A (en) 2010-02-26
TW200600095A (en) 2006-01-01
UA85099C2 (en) 2008-12-25
MXPA06013874A (es) 2007-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI362931B (en) Irinotecan formulation
US7901707B2 (en) Biodegradable biocompatible implant and method of manufacturing same
CN103479578B (zh) 一种马来酸匹杉琼的脂质体制剂及其制备工艺
CN103370055B (zh) 缓释性脂质体组合物及其制造方法
WO2011066684A1 (zh) 伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法
US8241663B2 (en) Liposome preparation
TW201907908A (zh) 包含弱酸藥物之脂質體組成物及其用途
EP1807051A2 (en) Compositions and methods for stabilizing liposomal camptothecin formulations
CN102188377A (zh) 包载药物脂质体的制备方法
JP6230538B2 (ja) 安定なオキサリプラチン封入リポソーム水分散液及びその安定化方法
WO2008038291A1 (en) Combination of liposomal anti-cancer drugs and lysosome/endosome ph increasing agents for therapy
JP4874097B2 (ja) 水難溶性カンプトテシン含有リポソーム製剤
Hao et al. In-vitro cytotoxicity, in-vivo biodistribution and anti-tumour effect of PEGylated liposomal topotecan
JPWO2005021012A1 (ja) ゲムシタビン封入薬剤担体
US20220296518A1 (en) Lipid-based nanoparticle delivery system for hydrophilic charged compound
JP7232530B2 (ja) 超安定リポソームによる有糸分裂細胞の標的化の増加
US10925831B2 (en) Liposomal formulations of platinum-acridine anticancer agents and methods thereof
KR100768265B1 (ko) 혈액내 순환시간을 향상시키기 위한 헤파린이 수식된리포솜 및 이의 제조방법
Woo Thermosensitive liposomal cisplatin: formulation development, in vitro characterization and in vivo plasma elimination studies
JPWO2009125858A1 (ja) 2−インドリノン誘導体を含有する脂質分散体製剤
JP2011246421A (ja) リポソーム製剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees