EA023079B1 - Способ получения липосомальной формы иринотекана (варианты) - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к фармацевтике. В общем виде заявленные варианты получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме предполагают получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом, и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде. Заявленные варианты направлены на повышение качества получаемого продукта, технологичности процесса получения и стабильности препарата при хранении.

Description

В настоящее время известно применение препаратов группы камптотецинов, природных пентациклических алкалоидов с пирроло[3,4-Ъ]хинолиновым ядром, сконденсированным с 2-пиридоновым кольцом [1,2], в частности иринотекана, как активного фармацевтического ингредиента для лечения онкологических заболеваний [3,4], таких как местно-распространенный или метастатический колоректальный рак. Каптотецин извлекается из дерева Сатр1о1йеса аситша1а, ΝοίαροάνΙοκ Гоейба [5,6]. Иринотекан представляет собой полусинтетическое соединение с брутто-формулой С₃₃Н₃^₄О₆. Терапевтическое действие иринотекана и его метаболита §N-38 проявляется за счёт стабилизации ковалентного комплекса топоизомеразы I с ДНК, в котором одна из цепей ДНК разорвана, что препятствует ее репликации. Кроме противораковой активности, наиболее значимый фармакологический эффект препарата - ингибирование ацетилхолинэстеразы.

Однако, несмотря на достоинства в клинике, применение иринотекана ограничивается из-за высокой токсичности [7,8,9,10]: гематологической, кардиоваскулярной и реакциях со стороны желудочнокишечного тракта и печени.

Стабильность иринотекана находится в границах рН от 2 до 5. Учитывая, что рН крови составляет 7,37-7,44, при введении иринотекан частично деградирует на неактивные компоненты, которые, однако, могут проявлять признаки токсичности. В экспериментах ίη-νίΐΓο уже через 30 мин нахождения при рН 7,4 (рН крови) в фосфатном буфере от начальной концентрации иринотекана остаётся 89,7%, а через 2 ч изменению подвергается около 50% активного вещества [11].

Одним из современных методов преодоления проблемы преждевременной деградации активного ингредиента, снижения токсичности и повышения целенаправленности терапии при лечении онкологических заболеваний является использование липидных транспортных систем - липосом [12,13]. Преимуществом липосом является нахождение активного вещества инкапсулированным внутри фосфолипидной везикулы, в благоприятной среде, в которой вещество не проявляет признаков деградации, или в фосфолипидном бислое. Липосомы, имея размер 50-150 нм способны к пролонгированному циркулированию в организме, повышая период нахождения лекарственного средства в кровеносной системе, и тем самым, улучшая терапевтические показатели.

Опухолевые клетки имеют особенность в строении кровеносных капилляров - их эндотелиальные клетки не плотно прилегают друг к другу, давая возможность частицам до 200 нм проникать в межклеточное пространство. Этот факт, а так же замедленный лимфатический дренаж внутри опухоли создаёт возможности для целевого накопления липосом с цитотоксическим лекарственным средством внутри опухолей, с последующим высвобождением содержимого. Такой эффект даёт повышение концентрации активной субстанции в органе, нуждающемся в терапии, в сравнении с остальным организмом, и ведёт к снижению токсичности.

Инкапсуляция активного вещества в липосому возможна несколькими путями, такими как пассивная инкапсуляция на стадии формирования липидного бислоя, химическая адсорбция за счёт образования связи липид-вещество, создание мембранных градиентов на поверхности мембраны, которые позволяют веществу проникать через мембрану липосомы во внутреннюю среду. При этом заряд, сообщённый аминогруппе вещества способствует более выгодному термодинамическому состоянию, и активному накоплению лекарственного средства в наночастице. При таком подходе инкапсуляция может достигать 80-100%. Метод трансмембранных градиентов хорошо зарекомендовал себя при создании ряда липосомальных препаратов - таких как Сае1ух, МуосеГ', ОеросуГ'. Отличительной особенностью активных ингредиентов данных препаратов является наличие свободной аминогруппы, которая обеспечивает необходимое протонирование вещества внутри липосомы и его удержание в инкапсулированном состоянии.

Известен способ получения липосомальной формы иринотекана [14] предусматривающий формирование раствора липидов, с соотношением иринотекан-липиды 1 : 2-5, упаривание в вакууме на роторном испарителе, затем непосредственное гидратирование полученной плёнки буферным раствором, экструзию при 1000 атм, замена буфера и формирование градиента концентрации протонов на мембране, загрузку активного компонента иринотекана с последующей инкубацией при 60°С, добавление регулятора осмотического давления в концентрации до 5%, стерилизующую фильтрация с последующим розливом жидкого препарата или лиофилизацией. При этом рН препарата, согласно данным таблицы в блоке 0100, согласно нумерации [14] составляет 6,38-6,47. Размер липосом составляет 10-220 нм, в зависимости от эксперимента.

Однако в [14] используются операции, составы и условия, затрудняющие реализацию способа и способствующие снижению качества получаемой композиции. Во-первых, указывается на непосредственный переход от упаривания раствора липидов и получения плёнки к гидратированию буферным раствором. Опыт, однако, показывает, что на данной стадии необходим этап длительной (не менее 10 часов) сушки под вакуумом около 0,05 атм. Это обусловлено тем, что компоненты раствора липидов, а именно этиловый спирт и хлороформ плохо улетучиваются из полученной плёнки, и далее, являются остаточными органическими растворителями, которые могут проявлять токсические эффекты при терапии (в частности хлороформ), при этом этанол, проявляя свойства детергента, уменьшает стабильность липидной

- 1 023079 мембраны. Во-вторых, в [14] указывается на необходимость нагрева до 60°С для улучшения инкапсуляции. Воспроизводство метода [14] показывает, что даже на сочетании яичный фосфатидилхолин : холестерин 4 : 1 происходит ухудшение инкапсуляции при данной технологической операции. Так же, не учтена необходимость обработки липидной плёнки на стадии гидратирования ультразвуком, поскольку смеси фосфолипидов с холестерином имеют высокие значения фазового перехода (выше 50°С), и не гидратируются при обычном перемешивании даже в случае высокой длительности. В-третьих, в [14] не указана концентрация криопротектора, а указана концентрация осмотического регулятара - вещества группы сахаров в районе до 5%. Выявлено, однако, что концентрация криопротектора крайне важна для предотвращения укрупнения липосом после проведения лиофильного высушивания и регидратации. Вчетвертых, в [14] указывается на рН липосомальной композиции в диапазоне 6,38-6,47, однако, воспроизводство данного параметров, а так же работа [11], указывает, что уже при рН 6,0 за 30 мин происходит деградация иринотекана до 94,5% от начальной концентрации, что соответствует 5,5% примесей и является неприемлемым для качества получаемого лекарственного средства.

Приведенные недостатки снижают эффективность способа прототипа в процессе его воспроизводства, а также стабильность и качество получаемого продукта как лекарственного средства. Задача заявляемого способа сводится к устранению указанных недостатков, при этом результат, полученный при решении поставленной задачи, состоит в повышении качества получаемого продукта, повышении технологичности процесса получения и стабильности препарата при хранении.

Для достижения поставленного результата предлагаются варианты способа получения липосомальной системы на основе фосфолипидов (яичный фосфатидилхолин, гидрогенезованый соевый фосфатидилхолин, фосфатидилглицерол), холестерина и иринотекана.

Так, первый из заявленных вариантов способа получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме включает получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляют добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии, или после добавления иринотекана.

Такой вариант может предполагать использование при гидратировании цитратного буферного раствора, при этом создание градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом проводят путем его замены на фосфатный буферный раствор, при этом рН раствора на стадии замены составляет не более 5,2. Кроме того, в качестве криопротектора может быть использована лактоза, трегалоза, сахароза, мальтоза или их смеси в количестве не менее 6 обьёмно-массовых %, а в качестве фосфолипидов - фосфатидилхолин, или фосфатидилглицерол, или их семи.

Второй из заявленных вариантов способа получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме включает получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм. до достижения размеров липосом 80-120 нм, и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляют добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии.

Второй вариант также предполагает использование в качестве криопротектора лактозы, трегалозы, сахарозы, мальтозы или их смеси в количестве не менее 6 обьёмно-массовых %, а в качестве фосфолипидов - фосфатидилхолина или фосфатидилглицерола или их смеси.

В общем виде первый из вариантов предусматривает получение липидной смеси фосфолипиды : холестерин в соотношении 4:1, соответственно, путём их растворения в хлороформе, упаривание при пониженном давлении до образования плёнки, хранение в течении 10 ч в вакуум-сушильном шкафу при давлении 0,05 атм и температуре 20°С, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане (мощность генератора 100 Вт) при 30°С в течении 90 мин, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом, и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляли добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии, или после добавления иринотекана.

Второй из вариантов предусматривает получение липидной смеси фосфолипиды : холестерин в соотношении 4:1, соответственно, путём их растворения в хлороформе, упаривание при пониженном давлении до образования плёнки, хранение в течении 10 ч в вакуум-сушильном шкафу при давлении 0,05 атм и температуре 20°С, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане (мощность гене- 2 023079 ратора 100 Вт) при 30°С в течении 90 мин, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80120 нм, лиофилизацию полученной липосомальной эмульсии и соединение при перемешивании лиофильно высушенной эмульсии и раствора иринотекана непосредственно перед введением, при этом осуществляли добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии.

Способ иллюстрируется графиками фармакокинетических профилей иринотекана в печени, мозге, почках и сердце крыс (рис. 1-4, соответственно).

Качество полученного продукта оценивалось методом гель-фильтрации на колонке Тпсот 5 мм на 150 мм в среде 0,1М фосфатного буфера с рН 5,0 для определения инкапсуляции. Количественное определение и определение состава примесей проводили высокоэффективной жидкостной хроматографией на колонке заполненной октадецилсиликагелем (на приборе δΐιίιηηάζιι ЬС-20, при длине волны 220 нм).

Размер частиц оценивался на приборе фирмы Ма1уегп ΖοΙαδίζοΓ папо Ζδ, методом фотонной корелляционной спектроскопии. Размер частиц измерялся при помощи полупроводникового лазера при длине волны 375 ни.

Приведенные конкретные примеры иллюстрируют процесс получения липосомальной композиции согласно заявленному способу, примеры 1-5, и способу согласно прототипу 6, 7.

Пример 1. 4 г смеси (яичный фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при температуре при 36°С до получения липидной плёнки. Далее колбу с липидной плёнкой помещали в вакуумсушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.

Липидную плёнку гидратировали стерильным раствором нитратного буфера с рН 2,0 с 4,5 г криопротектора лактозы на ультразвуковой бане при температуре 30°С в течении 90 мин в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгойшДюк М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером не менее 85 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5 и 4,5 г криопротектора лактозы, что создавало градиент ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом отсечения 30 КЭа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 150 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составил 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида (в пересчёте на безводное основание). Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.

По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 86%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в среде инертного газа (азота). Продукт представлял собой лёгкую бело-жёлтую аморфную массу с характерным запахом. Основная масса частиц после регидратации продукта представлена размером - 98 нм. Частицы крупнее 200 нм отсутствовали. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,8%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : холестерин : лактоза - (1:8:2:30)

Пример 2.

г смеси (гидрогенезованный соевый фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при температуре при 36°С до получения плёнки при 36°С. Далее колбу с липидной плёнкой помещали в вакуум-сушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.

Липидную плёнку гидратировали стерильным раствором цитратного буфера с рН 2,0 на ультразвуковой бане при температуре 30°С в течении 90 мин в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгойшДюк М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером не менее 67 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом отсечения 30 КЭа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 120 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составил 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида (в пересчёте на безводное основание). Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин, затем добавляли хлорид натрия до концентрации 9 г/л. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.

По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 85%. Эмульсию разливали во флаконы и герметизировали в среде инертного газа (азота). Продукт представлял собой лёгкую светложёлтую опалесцирующую эмульсию. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 мес продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,6%. Увеличения частиц при хранении по данным корреляционной спектро- 3 023079 скопии не происходило. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : гидрогенезованый соевый фосфатидилхолин : холестерин : натрия хлорид - (1:8:2:30).

Пример 3.

г смеси (яичный фосфатидилхолин : яичный фосфатидилглицерол : холестерин в соотношении 3,5 : 0,5 : 1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при 36°С до получения липидной плёнки. Далее липидную плёнку помещали в вакуумсушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.

Плёнку гидратировали стерильным цитратным буфером с рН 2,0, на ультразвуковой бане в течении 90 мин при 30°С в присутствии азота. Полученную липидную эмульсию подвергали экструзии на приборе МэстойшФск М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с основной массой частиц размером 94 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 Μίη1т 2, на кассете с порогом отсечения 30 КОа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 120 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составлял 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида, в пересчёте на безводное основание. Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин, затем добавляли 9 г безводной трегалозы в качестве криопротектора. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.

По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 97%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа. Продукт представлял собой лёгкую беложёлтую аморфную массу с характерным запахом. Основная масса липосом после регидратации представлена частицами с размером - 108 нм. Частицы крупнее 220 нм отсутствовали. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,7%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : фосфатидилглицерол : холестерин : трегалоза (1:7:1: 2 : 30).

Пример 4.

г смеси (яичный фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через фильтр 0,22 мкм, и упаривали в вакууме при 36°С до получения липидной плёнки. Далее плёнку помещали в вакуум-сушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа. Липидную плёнку гидратировали на ультразвуковой бане стерильным цитратным буфером с рН 2,0 в течении 90 мин при 30°С в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгоЛшбЖ М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером 98 нм (основная масса). Проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5, на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом разделения 30 КДа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 140 нм отсутствуют. Объем полученной эмульсии составлял 150 мл, к эмульсии добавляли 9 г безводной лактозы в качестве криопротектора.

Эмульсию разливали во флаконы по 10 мл, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа. Одновременно готовили раствор иринотекана 20 мг/мл в пересчёте на безводное основание, с содержанием лактозы 1%, фильтровали через фильтр 0,22 мкм, разливали во флаконы вместимостью 10 мл по 1 мл, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа.

К высушенному раствору иринотекана одноразовым шприцем прибавляли 10 мл воды, размешивали, не доставая шприц. Далее, этим же шприцем, отбирали 10 мл раствора и переносили во флакон с лиофилизированной эмульсией. Полученный раствор интенсивно перемешивали в течение 15 мин и выдерживали 20 мин при комнатной температуре. По данным гель фильтрации степень инкапсуляции составляла 89%.

Размер частиц после регидратации - 111 нм (основная масса частиц). Частицы крупнее 220 нм отсутствовали. Хранение лиофильно высушенного препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, после смешивания с водой для иньекций и лиофильно высушенной эмульсией по данным ВЭЖХ составляла 99,72%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : холестерин : лактоза - (1:8:2:31).

Пример 5.

Аналогичен примеру 1 за исключением добавления после стадии ультрафильтрации 5% безводной лактозы. По данным корреляционной спектроскопии, после регидратации появлялись частицы крупнее 4 мкм, что делало невозможным иъекционное применение препарата. Это доказывало необходимость в добавлении криопротектора в концентрации не менее 6%.

Пример 6.

- 4 023079

Аналогичен примеру 1 за исключением стадии инкубации с иринотеканом, которую проводили при 60°С, согласно прототипу. По результатам гель-фильтрации степень инкпсуляции составляла 24%, при этом раствор становился мутным и по результатам корреляционной спектроскопии появлялись частицы с размером более 4 мкм, что исключало инъекционное применение препарата.

Пример 7.

Аналогичен примеру 1 за исключением того, что рН фосфатного буфера на стадии ультрафильтрации согласно прототипу, составляло 6,4. После проведения стадии инкапсуляции, по данным гель фильтрации, степень инкапсуляции составляла 93 %. По данным ВЭЖХ, хроматографическая чистота иринотекана составляла 92,3 %, что не соответствовало требованиям к чистоте готовой лекарственной формы и делало невозможным использование препарата.

Пример 8. Исследование фармакокинетики липосомального и нелипосомального иринотекана.

При однократном инъекционном введении крысам наблюдается быстрое выведение иринотекана из плазмы крови с максимальной концентрацией около 500 нг/мл. Уровни концентраций в плазме липосомального и нелипосомального иринотекана существенно не различались.

Существенные различия наблюдались при определении иринотекана в печени крыс. С_тах для липосомальной формы составляла около 37,5 мкг/г (Т_тах - 0,25 ч), для нелипосомальной - около 105 мкг/г (Т_тах - 8 ч). Липосомальный иринотекан практически полностью выводился из печени к 72 ч, в отличие от нелипосомального, который сохраняется в печени к 72 ч после введения на уровне 84 мкг/г, причем наблюдается тенденция к его кумуляции.

Также различия наблюдались для мозга - липосомальный иринотекан практически не проникал через ГЭБ и обнаруживался в небольших не позднее 2 ч после введения. Нелипосомальный иринотекан обнаруживался в мозге крыс даже спустя 72 ч после введения в диапазоне концентраций 800-3500 нг/г).

Схожие фармакокинетические профили наблюдались для почек: для липосомального иринотекана С_тах составила около 57 мкг/г, для нелипосомального - 45 мкг/г (Т_тах - 0,25 ч в обоих случаях).

Аналогичная, как и для почек, картина наблюдалась и для сердца. Для липосомального иринотекана С_тах составила около 27 мкг/г, для нелипосомального - 17 мкг/г (Т_тах - 0,25 ч в обоих случаях). При этом в отличие от нелипосомальной формы, фармакокинетический профиль у липосомального иринотекана в сердце наблюдался второй максимум (около 5,3 мкг/г) спустя 24 ч после введения.

Таким образом, в связи с низким проникновением липосомального иринотекана в печень и мозг, можно предположить о его потенциально низкой гепатотоксичности и нейротоксичности.

Список литературы

1. Ла11 Μ. Е., Лаш М. С, Соок С. Е., ек а1. // Т Ат. Скет. 8ос. - 1966. -Р. 3888.

2. Ли Т. 8.; Ьеи У.-Ь.; На: Н.-С.; ек а1. // Ркукоскет1зкгу - 1995. - Р. 383.

3. Ьибу1д Р1зскег уои Ле1кегз1ка1к, Апбгеаз 8ска1кота, ек.а1.// Еигореап 1оигпа1 ок Сапсег // - 2011/ уо1.47 (2), Р. 206-214.

4. Р1ойз А. бе 1опд, Ма.)а ТА. бе 1опде, ек а1. // Ко1е ок ркаттасодепейсз ίη тпокесап ккегару // Сапсег 1еккегз - 2006/ -уо1.234 (1), Р. 90-106.

5. Соушбаскап Т. К.; У1зуапаккап N. // Ркукоскет1зкгу - 1972. - Р. 3529.

6. Эаз В.; Афат С.;Казк1паккат А.; ек а1. // №к Ргоб. Ьей. - 1998. - Р. 285.

7. М1уа Т., Риркауа К., РикизЫта Т ек а1. // Вгабусагб1а шбисеб ку тпокесап: а сазе герогк // 1рп. Т Сйп. Опсо1. 1998. Уо1. 28 (11). Р. 709-711.

8. Матяш М.Г., Кравчук Т.Л, Высоцкая В.В., Чернов В.И., Гольдберг В.Е. // Неантрациклиновая токсичность // Сибирский Онкологический Журнал, - 2009. -№5 (35). Стр.73-82.

9. Эшетапе К\уееке1а, НепкЧап Сиске1аага, Напз Се1бегк1отк // СИтса1 апб ркагтасодепейс каскогз аззоаакеб уйк тпокесап кохкйу // Сапсег Тгеактепк Ке\ае\уз. -2008. Уо1. 34(7). Р 656-669.

10. Апбгеа Айтопйа, А1аш Оейккегк, 1ба Рауезе // №у арргоаскез ко ртеуепк ткезйпа1 кохкйу ок тпокесап-казеб гедитепз // Сапсег Тгеактепк Ке\ле\уз. -2004. Уо1. 30(6). Р 555-562.

11. Леп Уеп П К, Кокегк Т. Коба // 8каЫ1йу ок тпокесап кубгоск1опбе т ациеоиз 8о1ийои8. Ат. Т Неа1кк-8узк Ркагт. -2002. -Уо1. 59 Р. 539-544.

12. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Технологические аспекты получения липосомальных препаратов в условиях СМР. Биофармацевтический журнал. 2009. 1. № 3. С. 18-29.

13. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Липидная технологическая платформа для создания новых лекарственных форм и транспорта фармацевтических субстанций. Биофармацевтический журнал. 2011.Т. 3.№2, сс. 10-18.

14. Хтуопд Топд, Сиокепд Ье1, Скпдх1а Уи, Папд Скеп // Прозоте ок тпокесап ог йз кубгосЫойбе апб ртерагайоп теккоб ккегеок // № публикации И8 2012/0282325 А1, дата публикации 08 ноября 2012 прототип.

Claims (6)

1. Способ получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме, включающий полу- 5 023079 чение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм, с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией, асептическим розливом во флаконы и лиофильной сушкой, при этом осуществляют добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии, или после добавления иринотекана гидрохлорида, при этом при гидратировании используют цитратный буферный раствор, а создание градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом проводят путем его замены на фосфатный буферный раствор, при этом рН раствора на стадии замены составляет не более 5,2.

2. Способ по п.1, в котором в качестве криопротектора используют вещество, выбранное из группы лактоза, трегалоза, сахароза, мальтоза или их смеси.

3. Способ по п.1, в котором в качестве фосфолипидов используют фосфатидилхолин или фосфатидилглицерол или их смеси.

4. Способ получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме, включающий получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм, с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом при гидратировании используют цитратный буферный раствор, а создание градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом проводят путем его замены на фосфатный буферный раствор, при этом рН раствора на стадии замены составляет не более 5,2.

5. Способ по п.4, в котором в качестве фосфолипидов используют фосфатидилхолин или фосфатидилглицерол или их смеси.

- 6 023079

Фиг. 4